Lucrri practice - Fiziologie I

LP-3 (2010-2011)

1. Fenomene bioelectrice celulare: potenialul de repaus i potenialul de aciune simulare. 2. Demonstraii privind excitabilitatea : experimentul lui Galvani ; experimentul lui Matteucci ; determinarea pragului de excitabilitate; sumaia temporal ; gradarea r spunsului.

1. Fenomene bioelectrice celulare: potenialul de repaus i potenialul de aciune simulare

!otenialul electric exist "n toate celulele organismului viu# dar mecanismul electrogene$ei nu este identic "n toate celulele. %e vor pre$enta "n continuare &enomenele electrice &undamentale ale membranei celulare potenialul de repaus i potenialul de aciune# care stau la ba$a excitabilit ii esuturilor. 'ele mai excitabile celule sunt cele ale sistemului nervos# ale muc(ilor i ale glandelor. Msurarea potenialelor membranare "n repaus i "n activitate celular a &ost posibil pentru axonul gigant de sepie prin utili$area a doi microelectro$i de sticl # unul &iind introdus "n spaiul intracelular# iar cel lalt meninut "n lic(idul extracelular. )paratul de m surat di&erena de sarcini electrice *volta+ul, este voltmetrul. -n absena activit ii celulare# "n momentul introducerii microelectrodului "n mediul intracelular# acul voltmetrului indic -70 mV. )ceasta dovedete c membrana celular este polari$at electric: are un pol negativ *&aa membranei care are un exces de ioni negativi, i un pol po$itiv *&aa membranei care are un exces de ioni po$itivi,. %emnul volta+ului indic "ntotdeauna sarcina electric de pe &aa intern a membranei polari$ate. -n acest ca$# valoarea ./0 m1 arat c di&erena de potenial este de /0 m1# iar interiorul membranei este negativ "n raport cu &aa sa extern care este po$itiv . )ceast polaritate a membranei "n absena activit ii celulare *. la interior i 2 la exterior, este denumit poten ial mem!ranar "e repau# sau simplu poten ial "e repau# *!3,. -n momentul aciunii unui agent excitant# m surarea di&erenei de potenial pe &eele membranei# cu aceeai electro$i i acelai voltmetru# arat micarea acului c tre $30 mV. )ceast valoare indic o di&eren de potenial de 40 m1# dar i &aptul c interiorul membranei a devenit po$itiv# "n raport cu exteriorul care s.a "nc rcat negativ. )ceast modi&icare a polarit ii membranei celulare "n urma activ rii sale se numete poten ial "e ac iune *!),. Potenialul de repaus i de aciune reprezentare grafic. 5rice variaie a potenialului membranar dintr.o celul se poate "nregistra gra&ic cu a+utorul unui o#cilo#cop. -n stare de repaus# &iecare tip de celul are o anumit valoare a potenialului membranar# care se menine constant : ./ m1 pentru membrana eritrocitar ; .40 m1 pentru celula muscular neted ; ./0 m1 pentru neuron; . 60 m1 pentru celula muscular striat . -nregistrarea gra&ic a potenialului de repaus al neuronului evidenia$ o linie izoelectric la ./0 m1. !rin aplicarea unui stimul electric su&icient de puternic pentru a atinge pragul de excitabilitate# "nregistrarea gra&ic evidenia$ o oscilaie *und , cu un volta+ de 100.120 m1 *de la ./0 m1 se "nregistrea$ o linie ascendant # care odat ce atinge potenialul de prag# trece rapid de linia 0# apoi a+unge "n $ona valorilor positive# atinge un v7r& la 2 40 sau 280 m1# apoi revine la potenialul de repaus,.

Lucrri practice - Fiziologie I

LP-3 (2010-2011)

-nversarea polarit ii membranei "n urma stimul rii determin un &lux de curent electric *o deplasare de sarcini, din regiunea excitat "n regiunea membranar "nvecinat . )cest curent local generea$ un nou potenial de aciune# care se propag "n toat membrane celular . Factorii de meninere a potenialului de repaus. !olaritatea electric a membranei "n stare de repaus este meninut de urm torii &actori: 1. %eparti ia "i&erit a ionilor "e 'a$ (i )$ pe cele "ou &e e ale mem!ranei (i permea!ilitatea "i&erit a mem!ranei pentru ace(ti ioni. 'oncentraia de 9a2 pe &aa extern a membranei este de 1:0 mmoli;l# de 10 ori mai mare dec7t pe &aa intern . 1: mmoli;l. 'oncentraia de < 2 pe &aa intern a membranei este de 1:0 mmoli;l# iar pe &aa extern de : mmoli;l# de 48 de ori mai mare "n interiorul celulei. 'oncentraia anionilor de 'l. predomin pe &aa extern a membranei celulare# &iind de 110mmoli;l# &a de 10 mmoli; pe &aa intern . Membrana celular "n repaus are permeabilitate ridicat numai pentru ionii de < 2 care di&u$ea$ la exterior "n sensul gradientului de concentraie# asigur7nd un exces de sarcini positive pe &aa extern a membranei. !ermeabilitatea pentru 9a2 este redus sau c(iar absent "n stare de repaus. )st&el# ionii de 9a 2 nu pot p trunde "n celul pentru a compensa pierderea ionilor de <2. -n plus# anionii de 'l. nu p trund "n celul deoarece sunt respini de anionii organici pre$eni "n num r mare "n mediul intracelular. 2. Func ionarea pompei "e 'a$- )$. -n repaus# pompa de 9a2.<2 &uncionea$ permanent pentru a readuce "n celul ionii 2 de < # care di&u$ea$ liber datorit di&erenei de concentraie "ntre mediul intracellular i cel extracelular. Dar se tie c pompa 9a2.<2 reali$ea$ un trans&er inegal de ioni# &iind pompai la exterior 4 ioni de 9a2# iar la interior 2 ioni de <2. De aici result iar i un exces de sarcini positive la exteriorul celulei. 4. *ec+e#trarea ,n celul a anionilor organici. )nionii organici cu molecul mare *%5:.# !5:.# '55., sunt atrai de ionii po$itivi de la exteriorul membranei# dar r m7n sec(estrai "n celul deoarece nu pot traversa membrane celular . De aici result excesul de ioni negative de pe &aa intern a membranei celulare. Rolul canalelor ionice n generarea i propagarea potenialului de aciune -n membrane celular exist mai multe tipuri de canale ionice de 9a 2 i <2 care reacionea$ prin "nc(idere sau desc(idere la stimuli sau la anumite valori ale potenialului membranar. Membrana celular dispune de: 'anale de 9a2 sensibile la stimuli# puine dintre ele desc(ise "n stare de repaus; 'anale de 9a2 volta+.dependente# care se desc(id la atingerea pragului de depolari$are membranar pentru o perioad extreme de scurt de timp *1 ms "n ca$ul neuronului,; 'anale de <2 desc(ise "n stare de repaus; 'anale de <2 volta+.dependente# care r spund# de asemenea# la atingerea potenialului de prag# dar se desc(id mai lent dec7t cele de 9a2. 'analele de <2 desc(ise "n stare de repaus asigur permeabilitatea crescut membranei celulare pentru ionii de <2# care vor di&u$a spre exteriorul celulei. a

Lucrri practice - Fiziologie I

LP-3 (2010-2011)

Modi&icarea sensibilit ii canalelor de 9a2 i <2 la aciunea stimulilor# apoi la variaia potenialului membranar# constituie suportul declan rii potenialului de aciune. =tapele potenialului de aciune sunt: 1. *e "e#c+i" canalele"e 'a #en#i!ile la #timuli i ionii de 9a p trund "n interiorul celulei. 'rete ast&el num rul de sarcini po$itive pe &aa intern a membranei i potenialul membranar de repaus de la ./0 a+unge treptat la .:0 m1. 3educerea potenialului negativ de pe &aa intern a membranei se numete depolari$are. Fiecare tip de celul pre$int un prag "e "epolarizare (poten ial "e prag). Ma+oritatea celulelor ating acest prag la .:0 m1# dar neuronul# &iind mai excitabil are acest prag la .86 m1. 2. >a atingerea pragului de depolari$are# #e "e#c+i" canalele "e 'a volta-"epen"ente# ast&el "nc7t 9a p trunde masiv "n celul i determin inversarea polarit ii pe cele dou &ee ale membranei. -ntrarea sodiului "n celul determin un exces de sarcini po$itive la interior# r m7n7nd mai muli ioni negativi pe &aa extern a membranei. )st&el# potenialul a+unge de la .:0 m1 la 240 sau 280 m1. )cest proces de inversare a polarit ii repre$int "epolarizarea propriu.$is a membranei. 4. 1aloarea maxim a potenialului de aciune *de 240 sau 280 m1, repre$int poten ialul "e v.r& (#pi/e potential,. >a atingerea potenialului de v7r&# se "nc(id canalele de 9a *care au &ost desc(ise doar pentru 1 ms, i #e "e#c+i" canalele "e ) volta- "epen"ente. %e produce ast&el o di&u$iune masiv de ioni de < la exteriorul celulei# iar potenialul membranar revine "n $ona valorilor negative. Fenomenul se numete repolarizare. :. 'analele de 9a volta+ dependente r m7n desc(ise mai mult timp# de aceea ies la exterior mai muli ioni de < dec7t sunt necesari pentru re&acerea potenialului de repaus. )st&el apare o #curt perioa" "e +iperpolarizare *./8 sau 60 m1,. 8. 3estabilirea potenialului de repaus i a concentraiei normale a ionilor de 9a si < pe &eele membranei este asigurat de &unc ionarea pompei "e 'a).

2. Demonstraii privind excitabilitatea : experimentul lui Galvani ; experimentul lui Matteucci ; determinarea pragului de excitabilitate ; sumaia ; gradarea r spunsului.
A. Demonstraia potenialului de repaus (PR) i de aciune (PA): A.1. Experimentul lui Galvani (PR) %e prepar o lab galvanoscopic de la o broasc spinali$at . !entru aceasta# se "ndep rtea$ pielea din regiunea unui membru posterior# apoi se i$olea$ nervul sciatic de la origine pe toat lungimea sa. !entru p strarea integrit ii &i$iologice a preparatului# acesta se umectea$ permanent cu ser &i$iologic 0#/ ?. Dup secionarea nervului la origine# se i$olea$ complet membrul posterior de organism prin secionarea musculaturii i a osului &emural deasupra articulaiei &emuro.tibio.patelare. %e obine ast&el laba galvanoscopic care se aea$ pe o lam de sticl . 'u o bag(et de sticl se ridic nervul sciatic al labei i se las s cad ast&el "nc7t s ia contact "n acelai timp cu supra&aa intact i supra&aa secionat a musculaturii. %e observ contracia musculaturii labei# & r ca ea s &ie supus unei excitaii.

Lucrri practice - Fiziologie I

LP-3 (2010-2011)

=xplicaia &enomenului este existena unei di&erene de potenial electric "ntre interiorul i exteriorul &ibrei musculare *!3,# di&eren pe care nervul o percepe ca pe o excitaie electric de intensitate mic . A.2. Experimentul lui atteucci (PA)

%e prepar o lab galvanoscopic *ca "n experimental anterior,. 9ervul sciatic al labei ia contact# "n cel puin dou puncte# cu supra&aa intact a musculaturii altei labe. Folosind ca agent excitant curentul electric provenit dintr.un circuit prev $ut cu trans&ormator# c(eie "ntrerup toare i bobin de inducie# se reali$ea$ excitarea nervului celei de a doua labe. %e observ contracia ambelor labe galvanoscopice. =xplicaia este propagarea undei de depolari$are *!), de la locul excit rii "n lungul nervului *-,# apoi "n muc(iul deservit *-,. 9ervul *--, ae$at pe musculatura intact *-, percepe di&erena de sarcini ce exist la un moment dat "ntre punctele de contact i o transmite i musculaturii proprii *--,. !. Determinarea pra"ului de excita#ilitate. $umaia. Gradarea r%spunsului. %e obine de la o broasc spinali$at un preparat muscular *muc(iul gastrocnemian,. Muc(iul r m7ne inserat proximal la nivelul articulaiei &emuro.tibio.patelare# dar este de$inserat distal i ligaturat de tendonul lui )c(ile cu un &ir de a . !reparatul ast&el obinut# umectat cu ser &i$iologic# se introduce "ntr.un miogra& vertical# &ix7ndu.l cu &irul de a la p7rg(ia =ngelman i aplic7ndu.i o contragreutate. 17r&ul peniei "nscriitoare se apropie de supra&aa "nnegrit a cilindrului unui @imogra&. Muc(iul se introduce "ntr.un circuit electric prev $ut cu trans&ormator# bobin de inducie# c(eie "ntrerup toare i semnal electromagnetic. !enia semnalului electromagnetic se apropie de supra&aa cilindrului# av7nd acelai punct de pornire ca i penia miogra&ului. 'ilindrul @imogra&ului se rotete cu vite$ mic . Aobina de inducie o&er posibilitatea variaiei intensit ii curentului electric prin "ndep rtarea bobinei primare de cea secundar *se reduce intensitatea curentului, sau prin apropierea bobinei primare de cea secundar *crete intensitatea curentului,. >a "nceput se "ndep rtea$ mult bobinele pentru a obine un curent #u!liminal *sub prag,. >a "nc(iderea circuitului electric muc(iul nu se contract . Blterior# se apropie bobinele cu c7te 1 cm i se "nc(ide circuitul de &iecare dat . >a atingerea curentului de prag * liminal,# muc(iul de$volt o contracie minim . )st&el# excitantul de cea mai mic intensitate care determin un r spuns speci&ic din partea unui esut repre$int pragul "e e0cita!ilitate. Dup obinerea pragului de excitabilitate# se "ndep rtea$ bobinele cu 0#8 cm i se aplic excitaii repetate cu acest excitant subliminal. >a un num r oarecare de repet ri# datorit &enomenului de #uma ie temporal *a"i ie latent,# se atinge pragul i se declanea$ un r spuns din partea muc(iului. -n continuare# se apropie bobinele cu c7te 1 cm i se excit nervul cu e0citan i #upraliminari. %e obin contracii musculare de amplitudine din ce "n ce mai mare gra"area r#pun#ului. )cest r spuns gradat depinde de variaia excitabilit ii &ibrelor musculare care intr "n alc tuirea muc(iului. -niial se contract &ibrele musculare &oarte excitabile# care au un prag de excitaie sc $ut# apoi intr pe r7nd "n activitate i &ibrele musculare mai puin excitabile# pe m sura creterii intensit ii excitantului aplicat. Fenomenul de gradare a r spunsului este "nt7lnit la muc(i# nu "ns i la &ibra muscular i$olat sau la neuron. -n ultimele dou situaii se aplic legea tot #au nimic *r spunsul minim i maxim au aceeai valoare; o &ibr musculara sau un neuron r spunde cu toat &ora odat ce pragul de excitabilitate este atins,. :

Lucrri practice - Fiziologie I

LP-3 (2010-2011)

&erine ' (P) 1. 3epre$entai sc(ematic m surarea potenialului membranar de repaus i de aciune *voltmetru,. 2. 3epre$entai sc(ematic gra&icul !3 i !) *osciloscop,. 4. =videniai &actorii care determin !3 desen celul . :. 3epre$entai etapele !) i notai po$iia on;o&& a canalelor ionice "n &iecare etap . 8. Desenai labele galvanoscopice i preci$ai r spunsul ateptat "n experimentul Galvani i Matteuci. C. Desenai "nregistr rile gra&ice care evidenia$ pragul de excitabilitate# sumaia# gradarea r spunsului.