Analiza farmacognostic a unui fitopreparat cu aciune antiulceroas
Ceai gastric
Zamfir Teodora Gr.13, an III Prof.coord.conf.univ. Dutu Ligia Elena
Bucureti 2014 2
Cuprins
Capitolul 1:Date generale privind produsele vegetale component ale amestecului 1.1 Calendula flos .......pag 3 1.2. Hyperici herba ..............pag 4 1.3. Symphyti radix. pag 6 Capitolul 2:Analiza farmacognostic a produselor vegetale componente ale fitopreparatului ...................................................................................pag 8 2.1.Examen macroscopic.........pag 8 2.1.1 Calendula flos... pag 8 2.1.2 Hyperici herba.. pag 8 2.1.3 Symphyti radix.. pag 9 2.2 Examen microscopic.... pag 10 2.2.1 Calendula flos.. pag 10 2.2.2 Hyperici herba pag 11 2.2.3. Symphyti radix. pag 12 2.3. Analiza chimic calitativ a soluiei extractive apoase.. Pag 13 2.4 Determinarea cantitativ a APFC-urilor...... pag 23 2.5. Determinarea cantitativ a flavonelor. pag 26 Capitolul 3:Stabilirea formulei de fitopreparat.. pag 28 3.1 Raportul dintre produsele vegetale componente ale fitopreparatului.. pag 28 3.2 Analiza chimic calitativ a fitopreparatului... Pag 29 3.3 Determinarea cantitativ a flavonelor din fitopreparat pag 33 3.4 Determinarea cantitativ a APFC-urilor din fitopreparat pag 33 Capitolul 4:Corelaii ntre principiile active identificate i potenialele efecte terapeutice induse .......................................................................pag 34 Capitolul 5:Concluzii......... pag 35
3
Capitolul 1 Date generale privind produsele vegetale component ale amestecului
1.1 Calendula flos Reprezint inflorescena cu sau fr receptacul, uscat dup recoltare de la specia Calendula officinalis L., glbenele(Asteraceae).Trebuie sa conin cel puin ;23% substane solubile sau cel puin 0,4% flavonoide exprimate n hiperozid. Compoziie chimic : n produsul vegetal predomin saponozidele triterpenice pentaciclice (2-10%), representative fiind calendulozidele (A-H) (Calendulozidele sunt mono- i bidesmozidele acidului oleanolic) Steroli Derivai flavonici ( glucozidele izoramnetolului i cvercetolului) Carotenoide ( licopina, i carotene, luteina, violaxantina, flavoxantina, crizantemxantina); Compui poliinici (acid calendulic); Cumarine (umbeliferona, esculetol, scopoletol); APFC-uri reprezentate de acid clorogenic; Tanin; Mucilagii; 0,2-0,3% ulei volatile cu derivai sesquiterpenici ( -cadinol, constituent majoritar)
Aciune: Cicatrizant prin saponozide, carotenoide, flavone; Antiinflamatoare; Antiedematoas; Antibacterian prin saponozide, flavone, tanin, ulei volatil; Coleretic prin acid clorogenic, umbeliferon; Acid calendulic Fig.33 (1) 4
Imunostimulatoare; Mucoprotectoare prin mucilagii; Antispastic prin flavone i cumarine; Capilaroprotectoare prin flavone; Antioxidant prin flavone;(3)
ntrebuinri : n tratamentul plgilor, arsurilor, gastritei colecistitei, cistitei, ulcerului gastro-duodenal i varicose, tulburari menstruale, n special n dismenoree; n dermatocosmetic. Mod de administrare : Infuzie obinut dintr-un gram de produs vegetal la 150 de ml ap; Tinctur diluat n ap(2-4 ml tinctur la 250-500 ml ap); Unguent (Pentru ungent se prevede un coninut n principia active corespunztoare la 2-5 g produs vegetal);(3) 1.2. Hyperici herba
Reprezint somitile florale uscate dup recoltare de la specia Hypericum perforatum L., suntoare, pojarni; conine cel puin 0,08% hipericine, exprimate n hipericin.
Compoziie chimic :
0,10-0,505 naftodiantrone, reprezentate de hipericina i pseudohipericin, localizate in punctele negre de pe petale; 0,1-0,3% ulei volatile bogat n hidrocarburi monoterpenice ; Hipericin Fig.34(2) 5
4-5% flavone reprezentate de hiperozid, rutozid, isocvercotrozid, biflavone; Xantone (1,3,6,7 tetrahidroxixantona) Proantociani; 6-15% tanin de tip catehic; APFC-uri reprezentate de acid cafeic i clorogenic; Carotenoide 2-4% hiperforin (derivat de floroglucinol)(3)
Actiune : Colagog coleretic - prin acid cafeic i clorogenic; Cicatrizant prin flavone, carotenoide, tanin; Antipruriginoas prin ulei volatile; Antidepresiv i fotosensibilizatoare prin hipericin i pseudohipericin; Antibacterian prin hiperforin si ulei volatile; Capilaroprotectoare, diuretic prin flavone, cateholi; ntrebuinri: Intern in tratamentul : - Colitei; - Colicistitei; - Ulcerului gastro-duodenal; - Stri depressive ( la vrsta a III-a) Extern - n arsuri. Mod de administrare: Infuzie - obinut din 2-4 g produs vegetal la 150 ml de ap; Pseudoipericin 6
- se administreaz 1-2 cni de infuzie proaspt preparat/zi, de preferat dimineaa i seara; ulei de suntoare (obinut prin macerarea produsului vegetal ntr-un ulei vegetal) extract standardizat in hipericin;
1.3. Symphyti radix Reprezint rdcinile si rrizomii proaspei sau uscai dup recoltare de la specia Symphytum officinale L., ttneas, iarba lui Tatin(Boraginaceae) Compozitie chimic: Produsul vegetal conine : 0,6-0,8% alantoin; Alantoin Poliholozide; 4-6% tanin; 0,2-0,6 % alcalozi pirolizidinici; Derivai triterpenici; Aminoacizi; Asparagin 1-3% asparagin; Aciune : Cicatrizant prin alantoin i poliholozide; Antiulceroas prin alantoin; Antipruriginoas prin poliholozide; Antiinflamatoare prin acizi polifenolici; Astringent, antimicrobian prin tanin. ntrebuinri: n medicina tradiional produsul vegetal este frecvent utilizat n tratamentul ulcerului, gastritelor, afeciuni respiratorii (bronit, tuse de diferite etiologii) 7
Extern se folosete sub form de cataplasme sau unguente; se ntrebuineaz in tratarea plgilor infectate n curs de cicatrizare, arsurilor, ulcerului varicos, furunculozei;
Mod de administrare: Infuzie obinut din 4-5 g produs vegetal la 250 de ml ap; timpul de infuzare este de 10-15 min; se administreaz 2-3 cani de infuzie pe zip e o durat limitat de tratament; Extern, se recomand ca preparatele s se aplice pe dermul integru;
Durata limitat de tratament este datorat alcaloizilor pirolizidinic care, la administrarea ndelungat a produsului vegetal, induc hepatotoxicitate; Doza zilnic de alcaloizi pirolizidinic nu trebuie s depeasc 100 de micrograme; Durata tratamenului nu trebuie s depeasc 4-6 sptmni. Se presupune c administrarea timp de un an a unei cantitai de 1 microgram de alcaloizi pirolizidinici pe zi ar putea avea efect cancerigen.(4)
8
Capitolul 2 Analiza farmacognostic a produselor vegetale componente ale fitopreparatului 2.1.Examen macroscopic Prin acest examen, se urmrete stabilirea caracterelor morfologice (observate cu ochiul liber sau la lup) i a caracterelor organoleptice ale produselor vegetale. Examinarea presupune stabilirea aspectului, dimensiunilor, culorii, mirosului si gustului (3). 2.1.1 Calendula flos Aspectul produsului vegetal: produsul vegetal prezint un aspect neomogen, sub form de concissum. Florile au corola galben, galben-portocalie sau galben roiatic. Culoarea produsului vegetal: este predominant galben datorit florilor de glbenele. Mirosul produsului vegetal: este specific glbenelelor, acestea prezentnd un miros balsamic puternic. Gustul produsului vegetal: gust amrui- srat, uor mucilaginos
2.1.2 Hyperici herba Aspectul produsului vegetal: produsul vegetal prezint un aspect neomogen, sub form de concissum. Pe toat suprafaa frunzei se observ punctuaii translucide corespunztoare pungilor secretoare, care i confer un aspect perforat. Florile sunt dispuse in dichazii;dichaziul terminal, mpreun cu ramurile laterale terminate in dichazii formez un corimb, sau mai rar o panicul.Caliciul este format din 5 sepale lanceolate, ascuite, Fig 11.Produs vegetal de tip concissum Hyperici herba
Fig 10.Produs vegetal de tip concissum Calendula flos 9
glabre, cu punctuaiuni translucide i rare punctuaiuni negre.Corola este format din 5 petale galben-aurii , care prezint pe margini mici puncte brun-negricioase. Culoarea produsului vegetal: este galben-verzuie, culoare datorat mrunirii prilor aeriene ale suntoarei; Mirosul produsului vegetal: miros caracteristic Gustul produsului vegetal: aromat, amar, astringent. 2.1.3 Symphyti radix Aspectul produsului vegetal: produsul vegetal prezint un aspect neomogen, sub form de concissum. Culoarea produsului vegetal: este gri-brun, culoare datorat mrunirii rizomului si a rdcinii; Mirosul produsului vegetal: produsul vegetal uscat nu prezint miros characteristic; Gustul produsului vegetal: amar. Concluzie : n urma examenului macroscopic, a fost identificat fiecare produs vegetal menionat de productor, un factor important reprezentndu-l forma de concissum sub care sunt prezentate plantele medicinale mrunite.
Fig 12.Produs vegetal de tip concissum Symphyti radix
10
2.2 Examen microscopic
Examenul micoscopic are ca scop stabilirea esuturilor i elementelor anatomice caracteristice unui anumit tip de produs vegetal. Se poate realiza pe seciune, preparat superficial (concissum) i pulbere (3). n cazul de fa examenul microscopic se realizeaz pe pulbere clarificat cu cloralhidrat. Dup pulverizarea unei mici cantiti din produsul brut, din pulbere se presar cu un ac spatulat peste o lam de microscop peste care se aduce iniial cteva picturi de cloralhidrat 800g/l. Preparatul rezultat se trece cu micri succesive prin flacra unui bec de gaz, prin micri circulare, pn se percepe un miros slab caracteristic de reactiv i se observ degajarea unor vapori albicioi rezultai prin descompunerea claralhidratului. Nu se insist cu nclzirea deoarece claralhidratul poate cristaliza pe lama ceea ce mpiedic obinerea unui preparat microscopic corespunztor. Apoi se oprete nclzirea, se mai adaug cteva picturi de cloralhidrat dac este nevoie i floroglucin clorhidric pentru evidenierea elementelor lemnoase, se pune lamela peste preparat, i apoi se examineaz la microscop 2.2.1 Calendula flos Caractere microscopice : n urma examenului microscopic am regsit majoritatea elementelor specifice unui preparat de tip flos: Grauncioare de polen; Peri glandulari specifici fam.Asteraceae Fragmente de endoteciu ; Fragmente de epiderm cu aspect variat; Parenchim clorofilian ; Vase de lemn de calibru mic; Fig 1.Gruncior de polen observate la Calendulae flos
11
2.2.2 Hyperici herba n urma examenului microscopic am regsit majoritatea elementelor specifice unui preparat de tip herba:
Elementele comune pentru produse vegetale de tip folium : epiderma cu stomatele;- fragmente de parenchim clorofilian;-fragmente de tesut palisadic si lacunar; si elementele comune pentru produse vegetale de tip flores. Elemente comune de flores : fragmente de endoteciu, grauncioare de polen, fragmente de epiderma cu aspect variat, parenchim clorofilian provenit de pe sepale, vase de lemn de calibru mic;
Fig 2. Fragment de endoteciu observat la Calendulae flos
Fig 3. Peri glandulari specifici fam Asteraceae Fig 4.Pungi secretoare cu hipericin observate la Hyperici herba Fig 6.Vase de lemn de calibru mic observate la Hyperici herba Fig 5. Anter observat la Hyperici herba 12
2.2.3. Symphyti radix n urma examenului microscopic am regsit majoritatea elementelor specifice unui preparat de tip radix: Vase de lemn de calibru mare; Suber; Parenchim cortical;
Fig 7. Gruncioare de polen observate la Hyperici herba
Fig 9. Suber observat la Symphyti radix
Fig 8. Vase de lemn de calibru mare observate la Symphyti radix
13
2.3. Analiza chimic calitativ a soluiei extractive apoase
Examenul chimic calitativ are ca scop stabilirea principalelor grupe de principii active, prin reacii chimice specifice. Realizarea acestui obiectiv are la baz dou etape: produsul vegtal este supus unor extracii succesive cu solveni de polariti diferite, de la apolar spre polar (n general eter etilic, metanol, ap etc.) n fiecare soluie extractiv se efectueaz reacii chimice specifice diferitelor clase de principii active. Aceste reacii de identificare vor fi descrise n continuare. n prima faz este necesar obinerea unei infuzii conform specificaiilor productorului: se iau 2 linguri de produs vegetal peste care se adaug 250 ml ap fierbinte i se las la infuzat timp de 15 minute, la temperatura camerei, apoi se strecoar (3). Indentificarea compuilor reductori: Reacia cu reactivul Fehling Principiul reaciei: are la baza proprietatea ozelor de a reduce reactivul Fehling (hidroxid amino-cupric) la oxid cupros. Tehnica de lucru: peste soluia extractiv se aduce reactiv Fehling (obinut extempore din Fehling I + Fehling II n cantiti egale). Amestecul se ncalzete la flacr mic. Rezultate: a) Calendula flos : precipitat rou- crmiziu cum se poate observa n Fig. 13 (3).
b) Hyperici herba : precipitat rou- crmiziu cum se poate observa n Fig. 14 (3).
c) Symphytum radix: precipitat rou- crmiziu cum se poate observa n Fig. 15 (3).
Fig 13.Reacia cu FeCl 3 Fig 15.Reacia cu FeCl 3 Fig 14.Reacia cu FeCl 3 14
Observaii: n cazul n care reacia este pozitiv, dar se obine o cantitate mic de precipitat, poate demonstra c infuzia nu conine compui reductori n cantitate foarte mare. I dentificarea ozelor si poliholozidelor: Reacia Molish Principiul reaciei: sub aciunea acidului sulfuric concentrat, ozele i poliholozidele se deshidrateaz, cu formarea furfuralului (pentoze) sau hidroximetil-furfuralului (hexoze); acetia, prin cuplare cu timol, formeaz compui colorai n rou-purpuriu. Tehnica de lucru: 3 5 ml soluie extractiv se concentreaz n capsul. Peste reziduu se aduce 1 ml acid sulfuric concentrat i se menine n repaus cel puin 5 minute. Apoi se trateaz cu 1-2 picturi timol 1%. Rezultate: rezult un compus colorat n rou-violaceu sau rou-portocaliu pentru Calendula flos i Symphytum radix a) Calendula flos : se observ apariia unui precipitat rou-crmiziu cum se poate observa n Fig. 16 (3).
b) Hyperici herba :nu se observ apariia unui precipitat rou-crmiziu cum se poate observa n Fig. 17 (3).
c) Symphytum radix: se observ apariia unui precipitat rou- crmiziu cum se poate observa n Fig. 18 (3).
Fig.16 Reacia Molish
Fig.18 Reacia Molish
Fig.17 Reacia Molish
15
Observaii: n urma reacei s-a format un compus rou-portocaliu, reacia fiind pozitiv pentru Calendula flos i Symphytum radix. I dentificarea mucilagiilor: Reacia de precipitare n alcool Principiul reaciei: mucilagiile precipit n prezena alcoolului sau a acetonei. Tehnica de lucru: ntr-o eprubet ce conine 10 mL metanol sau aceton se toarn n fir subire, sub continu agitare 2- 3 mL soluie extractiv concentrat. Rezultate: a) Calendula flos : se formeaz un precipitat voluminos, dup cum se observ n fig.20 b) Hyperici herba : se formeaz un precipitat voluminos, dup cum se observ n fig.21 c) Symphytum radix: se formeaz un precipitat voluminos, dup cum se observ n fig.22
Observaii : reacia este pozitiv pentru toate produsele vegetale. I dentificarea ODP-urilor: Reacia cu reactivul Arnow Principiul reaciei: n prezena acidului azotos (format in situ n sistem din reacia azotitului de sodiu cu acidul clorhidric), acidul cafeic formeaz nitrozoderivai. Acetia, n mediu alcalin, tautomerizeaz la izonitrozoderivai, compui colorai n rou intens. Tehnica de lucru: 1 mL soluie extractiv se trateaz cu 1 mL acid clorhidric 0,5 N, 1 mL reactiv Arnow i 1 mL hidroxid de sodiu 0,5 N. Apare o coloraie roie ca urmare a formrii oximei acidului cafeic. Fig. 39. Reacia Molish formarea rezidului Fig. 42. Reacia Molish formarea compusului rou-portocaliu Fig.20 Fig.22 Fig.21 16
Rezultate: a) Calendula flos : se formeaz coloraie roie, dup cum se observ n fig.20 b) Hyperici herba : se formeaz coloraie roie, dup cum se observ n fig.20 c) Symphytum radix: se formeaz coloraie roie, dup cum se observ n fig.20
Observaii: intensitatea coloraiei este dependent de cantitatea de ODP-uri din produs vegetal (3). n aceast situaie reaciile sunt pozitive. I dentificarea proantocianilor : Reacia Bath-Smith Principiul metodei: n mediu acid i la cald se transform n antociani. Tehnica de lucru :la 1 ml soluie extractiv se adaug 1 ml soluie de acid clorhidric 3 mol/l. proba astfel obinut se menine 30 de minute pe baia de ap n fiebere. Fig.23 Fig.24 Fig.25 17
clorur de cianidol Rezultate : se obine o coloraie , mai intens n mediu de alcool n-butilic pentru Hyperici herba.
I dentificarea flavonelor: 1. Formarea fenoxizilor Principiul reaciei: flavonozidele i agliconii formeaz n mediu alcalinfenoxizi colorai n galben. Tehnica de lucru: la 1 ml soluie extractiv apoas se adaug 0,5 ml soluie de hidroxid de sodiu 100 g/l. Rezultate: se observ intensificarea coloraiei galbene pentru toate cele trei produse vegetale (3).
I dentificarea antocianilor:
Reacia virajului de culoare: Principiul reaciei: prin variaia pH-ului au loc modificri structurale nsoite de modificarea culorii. Tehnica de lucru: la 1 ml soluie extractiv apoas se adaug 1-2 picturi soluie de acid clorhidric 1 mol/l i se observ intensificarea coloraiei roii. Rezultate: schimbrile nu au fost vizibile ; cvercetol Conc. Cl
18
I dentificarea taninurilor: Reacia cu clorur feric (III) Principiul reaciei: n prezena cationului Fe +3 taninurile catehice formeaz precipitate i/sau coloraie verde-negricioas, iar cele galice precipitate i/sau coloraie albastr-negricioas. Tehnica de lucru: la 1 ml soluie extractiv se adaug 0,5 ml soluie de clorur de fer (III) 10 g/l Rezultate: se obine un precipitat i/sau coloraie diferit n funcie de tipul de tanin. a) Calendula flos : - se obine o coloraie verde -negricioas
b) Hyperici herba : - se obine o coloraie verde -negricioas
c) Symphytum radix: - se obine o coloraie verde -negricioas
Observaii: dac n soluia extractiv se gsesc att taninuri catehice ct i galice, aceast reacie de culoare nu este concludent i se impune separarea acestora (3). Proba analizat conine tanin catehic.
Fig.26 Fig.27 19
I dentificarea saponozidelor: Proba de spumefiere Principiul reaciei: o soluie apoas coninnd saponozide, prin agitare energic timp de 15 secunde, formeaz o coloan de spum persistent cel puin 15 minute. Tehnica de lucru: 5 ml soluie extractiv apoas se agit timp de 15 secunde, apoi se las n repaus. Rezultate:
Observaii: proprietile spumefiante, detergente ale saponozidelorlor se explic prin tensioactivitatea; poliholozidele se comport asemntor, dar spuma nu este persistent (3).
a) Calendula flos : existena unei spume persistente i dupa 15 minute, denot prezena saponozidelor b) Hyperici herba : existena unei spume persistente i dupa 15 minute, denot prezena saponozidelor c) Symphytum radix: Nu se formeaz spuma persistent reacia este negativ => nu sunt prezente saponozide
Fig. 28. Proba de spumefiere
Fig. 29. Proba de spumefiere
20
I dentificarea carotenoidelor:
Reacia cu reactivul Carr-Price Principiul reaciei: la tratare cu triclorura de stibiu, carotenoidele formeaz compui colorai n albastru, care trec n rou-purpuriu i apoi n rou-brun. Tehnica de lucru: 1-2 mL soluie extractiv apoas se aduce la reziduu, ntr-o capsul de porelan, pe baie de apa. Peste reziduu se adaug 1-2 picturi reactiv Carr-Price. Rezultate: n cazul unei reacii pozitive se observ apariia unei coloraii albastre, care vireaz rapid n rou-purpuriu i apoi n rou-brun (4). Observaii: n cazul acestui preparat reacia este negativ pentru toate cele trei produse vegetale.
I dentificarea alcaloizilor: Reacii generale de precipitare Principiul reaciei: n prezena reactivului (R. Mayer, R. Bertrand), alcaloizii sruri formeaz precipitate. Tehnica de lucru: Peste 1 ml soluie apoas acid se adaug treptat reactivul de precipitare (1-2 picturi) i se urmrete modificarea aspectului soluiei n raport cu o soluie martor. Rezultate: n cazul unei reacii pozitive se formeaz un precipitat (4). Observaii: n cazul reaciilor cu reactivii Mayer i Bertrand se formeaz precipitate albe sau alb-glbui, solubile n exces de reactiv; n cazul n care proba are un coninut mic de alcaloizi, se va observa doar o opalescen, nu un precipitat. Reacia relizat pe probele de analizat este pozitiv pentru Symphyti radix.
21
Nr. Crt. Principiul activ cutat Reacia chimic realizat Produs vegetal Rezultat Observaii 1 Compui reductori Reacia cu reactiv Fehling Calendula flos Pozitiv (+) Precipitat rou- crmiziu Hyperici herba Pozitiv (+) Precipitat rou- crmiziu Symphyti radix Pozitiv (+) Precipitat rou- crmiziu 2 Oze Reacia Molish Calendula flos Pozitiv (+) Compus rou- portocaliu Hyperici herba Negativ (-) Compus rou- portocaliu Symphyti radix Pozitiv (+) Compus rou- portocaliu 3 Mucilagii Reacia de precipitare n alcool Calendula flos Pozitiv (+) Precipitat voluminos Hyperici herba Pozitiv (+) Symphyti radix Pozitiv (+) 4 ODP-uri Reacia cu reactivul Arnow Calendula flos Pozitiv (+) Compus rou Hyperici herba Pozitiv (+) Symphyti radix Pozitiv (+) 5 Proantociani Reacia Bath-Smith Calendula flos Negativ (-) Hyperici herba Pozitiv (+) Coloraie mai intens dect a martorului Symphyti radix Negativ (-) 6
ODP-urile sunt esterii monocafeilchinici (acidul clorogenic i izomerii si), dicafeilchinici (cinarina i izomerii si), esteri ai acidului cafeic cu acizii tartric i 2-hidroxi-dihidrocafeic sau derivai glicozidai ai acidului cafeic. n aceast clas sunt inclui de asemenea esteri ai acizilor p-cumarinici, ferulic, sinapic (esteri ntre dou sau mai dou sau mai multe molecule de astfel de acizi, identici sau diferii). Determinarea cantitativ a ODP-urilor se realizeaz pe o soluie extractiv apoas, conform productorului. Tehnica de lucru: - Prepararea probei de analizat: ntr-un balon cotat de 10 ml se introduc 2 ml soluie extractiv, 1 ml soluie acid clorhidric 0,5 N, 1 ml reactiv Arnow, 1 ml soluie hidroxid de sodiu 10%. Se campleteaz la volum cu ap. - Prepararea probei-martor: ntr-o eprubet se introduce 2 ml soluie extractiv, 1 ml soluie de acid clorhidric 0,5 N, 1 ml soluie hidroxid de sodiu 10%. Se campleteaz la volum cu ap. Se citete absorbana probei de analizat, fa de proba-martor, la lungimea de unda de 510 nm. Coninutul n ODP-uri corespunztor la 100 ml soluie se calculeaz conform formulei:
Unde: c% = coninutul de ODP-uri al soluiei E p = absorbia probei E et = absorbia soluiei de acid cafeic, de concentraie C et din curba etalon (tabel III) C et = concentraia soluiei de acid cafeic, rezultat din curba etalon (tabel III) C p = (m p.v. -u%):50 *1/10; u%= umiditatea produsului vegetal
24
Rezultate : a) Calendula flos : n urma masurrii absorbanei probei n funcie de martor, E p = 0,352 de unde rezult c se va alege E et = 0,385, astfel se determin i C et = 26,72
b) Hyperici herba : n urma masurrii absorbanei probei n funcie de martor, E p = 0,893 de unde rezult c se va alege E et = 0,963, astfel se determin i C et = 55,80
c) Symphytum radix n urma masurrii absorbanei probei n funcie de martor, E p = 0,207, de unde rezult c se va alege E et = 0,193, astfel se determin i C et = 13,36.
c% = 0,617 g ODP-uri, exprimate n acid cafeic / 100 ml
c% =1,388725 g ODP-uri, exprimate n acid cafeic / 100 ml
c% = 0,306 g ODP-uri, exprimate n acid cafeic / 100 ml
Concluzie : n soluia apoas extractiv se gseste o cantitate destul de mare de acizi polifenolcarboxilici.
Fig. 30. Dozarea ODP-urilor a- martor; b-prob de analizat a. b. 25
g acid cafeic/ mL Absorbanta 13,36 0,193 26,72 0,385 40,08 0,578 53,44 0,762 55,80 0,963 Tabelul II: variaia extincei n funcie de concentrarea soluiei de acid cafeic 26
2.5. Determinarea cantitativ a flavonelor
Determinarea cantitativ a flavonelor se realizeaz pe o soluie extractiv apoas, conform productorului. Tehnica de lucru: - Prepararea probei de analizat: ntr-un balon cotat de 10 ml se introduce 1 ml soluie extractiv i 1 ml soluie clorur de aluminiu 25 g/l. Se completeaz la volum cu ap. - Prepararea probei-martor : ntr-un balon cotat de 10 ml se introduce 1 ml soluie extractiv. Se completeaz la volum cu ap. Dup 30-45 minute se citete absorbana probei de analizat, fa de proba-martor, la lungimea de und de 427nm. Coninutul n flavone corespunztor la 100 ml soluie se calculeaz conform formulei:
Unde: c% = coninutul de flavone al soluiei E p = absorbia probei E et = absorbia soluiei de rutozid, de concentraie C et din curba etalon (tabel III) C et = concentraia soluiei de rutozid, rezultat din curba etalon (tabel III) C p = (m p.v. -u%):50 *2/10; u%= umiditatea produsului vegetal
C et (g/ml) E et 1,00 0,137 2,00 0,354 3,00 0,584 4,00 0,799
Tabelul III: Variaia extinciei n funcie de concentraia soluiei de rutozid 27
Rezultate a) Calendula flos : n urma masurrii absorbanei probei n funcie de martor, E p = 0,310, de unde rezult c se va alege E et = 0,354, astfel se determin i C et = 2,0
b) Hyperici herba : n urma masurrii absorbanei probei n funcie de martor, E p = 0,508, de unde rezult c se va alege E et = 0,584, astefel se determin i C et = 3,0.
c) Symphytum radix n urma masurrii absorbanei probei n funcie de martor, E p = 0,202, de unde rezult c se va alege E et = 0,137, astefel se determin i C et = 1,0.
c% = 0,035018 g flavone, exprimate n rutozid / 100 ml soluie
c% = 0,02213 g flavone, exprimate n rutozid / 100 ml soluie
c% = 0,01579 g flavone, exprimate n rutozid / 100 ml soluie
Concluzie : n soluia apoas extractiv se gseste o cantitate destul de mic de flavone.
Fig. 31. Spectrofotometrul cu care s-au citit absorbanele dozrilor
28
Capitolul 3 Stabilirea formulei de fitopreparat 3.1 Raportul dintre produsele vegetale componente ale fitopreparatului
n urma rezultatelor obinute la determinrile cantitative ale flavonelor i ODP-urilor am stabilit mpreun cu coordonatorul de proiect urmtorul raport dintre produsele vegetale studiate :
suntoare 5 pri; glbenele 4 pri; ttneas 1 parte;
Fig.32 Amestec produse vegetale conform raportului stabilit 29
3.2 Analiza chimic calitativ a fitopreparatului
Indentificarea compuilor reductori: Reacia cu reactivul Fehling Identificarea compuilor reductori se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3 Rezultate: se observ apariia unui precipitat rou-crmiziu Observaii: n cazul n care reacia este pozitiv, dar se obine o cantitate mic de precipitat, poate demonstra c infuzia nu conine compui reductori n cantitate foarte mare.
I dentificarea ozelor si poliholozidelor: - Identificarea ozelor si poliholozidelor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3
Reacia Molish Rezultate: rezult un compus colorat n rou-violaceu sau rou-portocaliu Observaii: n urma reacei s-a format un compus rou-portocaliu, reacia fiind pozitiv.
I dentificarea mucilagiilor: Identificarea mucilagiilor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3
Reacia de precipitare n alcool Rezultate: Observaii : reacia este slab pozitiv, dup cum se poate observa n Fig. 43.
I dentificarea ODP-urilor: Identificarea ODP-urilor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3
Rezultate: Observaii: intensitatea coloraiei este dependent de cantitatea de ODP-uri din produs vegetal (3). n aceast situaie reaciile sunt pozitive.
I dentificarea proantocianilor : Identificarea proantocianilor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3 Rezultate : se obine o coloraie , mai intens n mediu de alcool n-butilic (3). Observaii : n acest caz reacia este pozitiv.
I dentificarea flavonelor: Formarea fenoxizilor Identificarea flavonelor prin formarea fenoxizilor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3 Rezultate: se observ intensificarea coloraiei galbene.
I dentificarea antocianilor: Identificarea antocianilor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3
Reacia virajului de culoare: Rezultate: nu se observ schimbri:
I dentificarea taninurilor: Identificarea taninurilor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3
Reacia cu clorur feric (III) Rezultate: se obine un precipitat de culoare verde-negricioas. Observaii: dac n soluia extractiv se gsesc att taninuri catehice ct i galice, aceast reacie de culoare nu este concludent i se impune separarea acestora (3).
31
I dentificarea saponozidelor: Identificarea saponozidelor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3 Proba de spumefiere Rezultate: existena unei spume persistente i dupa 15 minute, denot prezena saponozidelor. Observaii: proprietile spumefiante, detergente ale saponozidelorlor se explic prin tensioactivitatea; poliholozidele se comport asemntor, dar spuma nu este persistent (3).
I dentificarea carotenoidelor: Identificarea carotenoidelor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3
Reacia cu reactivul Carr-Price Rezultate: n cazul unei reacii pozitive se observ apariia unei coloraii albastre, care vireaz rapid n rou-purpuriu i apoi n rou-brun (4). Observaii: n cazul acestui preparat reacia este negativ.
I dentificarea alcaloizilor: Identificarea alcaloizilor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.3 Reacii generale de precipitare
Rezultate: n cazul unei reacii pozitive se formeaz un precipitat (4). Observaii: n cazul reaciilor cu reactivii Mayer i Bertrand se formeaz precipitate albe sau alb-glbui, solubile n exces de reactiv; n cazul n care proba are un coninut mic de alcaloizi, se va observa doar o opalescen, nu un precipitat. Reacia relizat pe proba de analizat este pozitiv.
32
Nr. Crt. Principiul activ cutat Reacia chimic realizat Rezultat Observaii 1 Compui reductori Reacia cu reactiv Fehling Pozitiv (+) Precipitat rou-crmiziu 2 Oze Reacia Molish Pozitiv (+) Compus rou-portocaliu 3 Mucilagii Reacia de precipitare n alcool Pozitiv (+) Precipitat voluminos 4 ODP-uri Reacia cu reactivul Arnow Pozitiv (+) Compus rou 5 Proantociani Reacia Bath-Smith Pozitiv (+) Coloraie mai intens dect a martorului 6
Flavone
Formarea fenoxizilor
Pozitiv (+) Intensificarea coloraiei galbene
7 Antociani Reacia de viraj de culoare Negativ (-) 8 Taninuri Reacia cu FeCl 3 Pozitiv (+) Coloraie verde-negricioas (tanin catehic) 9 Saponozide Proba de spumefiere Pozitiv (+) Strat de spum persistent 15 min (>1cm) 10
Carotenoide
Reacia cu reactiv Carr-Price
Negativ (-) Coloraie albastr 11 Alcaloizi Reacii generale de precipitare Pozitiv (+) Precipitat alb/alb-galbui
Tabel IV rezultate analiz chimic calitativ pe produse vegetale 33
3.3 Determinarea cantitativ a flavonelor din fitopreparat
Determinarea cantitativ a flavonelor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.5 Se obin urmtoarele rezultate : n urma masurrii absorbanei probei n funcie de martor, E p = 0,503, de unde rezult c se va alege E et = 0,0,584, astfel se determin i C et = 3,0=> c% = 0,02583 g flavone, exprimate n rutozid / 100 ml soluie
3.4 Determinarea cantitativ a APFC-urilor din fitopreparat
Determinarea cantitativ a APFC-urilor se realizeaz conform tehnicii de lucru prezentate n capitolul 2.4 Se obin urmtoarele rezultate : n urma masurrii absorbanei probei n funcie de martor, E p = 0,130, de unde rezult c se va alege E et = 0,193, astfel se determin i C et = 13,36=> c% = 0,08998 g ODP-uri, exprimate n acid cafeic / 100 ml
34
Capitolul 4 Corelaii ntre principiile active identificate i potenialele efecte terapeutice induse
Fitopreparatul obinut prin amestecarea celor trei produse vegetale conine urmtoarele principii active: compui reductori, oze, mucilagii, ODP-uri, proantociani, flavone, antociani, taninuri, saponozide, alcaloizi. Astfel, fitopreparatul poate avea urmtoarele aciuni: Antibacterian prin saponozide, flavone, tanin Coleretic prin Apfc-uri Mucoprotectoare prin mucilagii; Antispastic prin flavone Capilaroprotectoare prin flavone; Antioxidant prin flavone; Cicatrizant prin flavone, carotenoide, tanin; Antiinflamatoare prin acizi polifenolici; Astringent, antimicrobian prin tanin. innd cont i de raportul n care cele trei produse vegetale au fost combinate, putem afirma faptul c este posibil ca unele efecte terapeutice s predomine.Suntoarea i florile de glbenele, predominnd in fitopreparat, contribuie prin flavone, tanin la aciunea cicatrizant, prin mucilagii la aciunea mucoprotectoare, prin saponozide la aciunea antibacterian,iar ttneasa prin poliholozide i alantoin la aciunea antiulceroas
35
Capitolul 5 Concluzii
Fitopreparatul, obinut prin amestecarea a cinci pri de suntoare, patru pri de glbenele si o parte de ttneas, poate fi folosit cu succes drept adjuvant n terapia afeciunilor gastro-intestinale precum: ulcer gastric, gastrit cronic, esofagit de reflux.Dar, innd cont i de principiile active identificate i de corelaia lor cu efectele terapeutice, recomand acest fitopreparat drept adjuvant in tratamentul ulcerului gastric.
36
Bibliografie
1. https://www.google.ro/search?q=ceai+de+galbenele+stef+mar&tbm=isch&emsg=NCSR &noj=1&ei=_Fx1U5viB8aVO- ThgJgB#facrc=_&imgdii=_&imgrc=J1a_ueV4YxAfhM%253A%3BpJ5fVEsO4WdQoM%3Bhtt p%253A%252F%252Fwww.leacul.ro%252Fcs- photos%252Fproducts%252Foriginal%252Fceai-galbenele-flori- 50gr_2308_1_1337346601.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fwww.leacul.ro%252Fproduse- naturale%252Fceai%252Fceai-vrac%252Fceai-galbenele-flori-50gr-stefmar- 1032.html%3B1000%3B1500 2. https://www.google.ro/search?noj=1&tbm=isch&sa=1&q=ceai+de+sunatoare+stefmar&o q=ceai+de+sunatoare+stefmar&gs_l=img.3...35965.35965.0.36450.1.1.0.0.0.0.88.88.1.1.0....0...1 c.1.43.img..1.0.0.c4w7MQIqXQk#facrc=_&imgdii=_&imgrc=3ZNb9QXnJjOksM%253A%3BA 1J9woaXrmFXZM%3Bhttp%253A%252F%252Fnature.costu.ro%252Fimage%252Fcache%252 Fdata%252Fstefmar%252FUNIVERSALA-MEDIE- 500x500.jpg%3Bhttp%253A%252F%252Fnature.costu.ro%252Findex.php%253Froute%253Dp roduct%252Fproduct%2526path%253D63%2526product_id%253D254%3B500%3B500 3. Grd C.E., Duu L.E., Popescu M.L., Tudor I., Iordache A.T., Costea T. Bazele teoretice i practice ale analizei farmacognostice, vol. I, Ed. Curtea Veche,Bucureti, 2008, p. 4. Grd C.E., Duu L.E., Popescu M.L., Costea T., Iordache A.T., Tudor I. Bazele teoretice i practice ale analizeifarmacognostice, vol. II, Ed. Curtea Veche, Bucureti, 2008, p. 37