Universitatea Maritm din Constana

Facultatea de Electromecanic Naval

Specializarea: Ingineria i Protecia Mediului












ECOLOGIA MICROORGANISMELOR
IMPLICATE N POLUARE MARIN



Coordonator tiinific: Absolvent:
Lector Dr. Ghi Simona Stan Elena







Constana 2014
2


3

Cuprins

Lista figurilor
Lista tabelelor
Introducere

CAPITOL 1
1.1. Descrierea conceptului de poluare
1.2. Impactul polurii marine la nivel naional i internaional
1.3. Clasificarea nivelelor de poluare
1.4. Msuri adoptate pentru prevenirea polurii marine
1.4.1. Polurile minore onshore
1.4.1.1.Msuri de prevenire n cazul exploatrii conductelor de transfer de iei
1.4.1.2.Msuri de prevenire n cazul bunkerajului i operaiunilor de ncrcare-descrcare a
tancurilor petroliere
1.4.1.3.Msuri de prevenire n cazul terminalelor petroliere
1.4.1.4.Msuri de prevenire n cazul antierelor navale:
1.4.2. Polurile majore offshore
1.4.2.1.Msuri de prevenire n cazul antierelor navale:
1.4.2.2.Msuri de prevenire n cazul terminalelor petroliere
1.5. Efectele ecologice rezultate n urma polurii (doc 2 + ce mai gasesi i tu)
1.5.1. Zona rmurilor stncoase i falezelor
1.5.2. Zona plajelor nisipoase
1.5.3. Zona de rm mltinoase cu pante line

CAPITOL 2. Managementul interveniei n cazul polurii marine cu
hidrocarburi
2.1. Descrierea planului de intervenie n caz de poluare marin
2.2. Echipamente i metode folosite pentru limitarea efectelor polurii

CAPITOL 3. Rolul bacteriilor n procesul de bioremediere la nivelul
sedimentelor
3.1. Studiul proceselor de sedimentare la litoralul romnesc al Mrii Negre (DOC 3)
3.1.1. Procese de sedimentare litoral
3.1.2 Curenii i transportul de sedimente
3.1.3 Tendine de eroziune a zonei costiere n sectorul Cap Midia Vama Veche
3.1.3.1. Plaja cuprins intre promontoriile Cap Midia i Cap Ivan
3.1.3.2. La sud de Capul Ivan
3.1.3.3.Sectorul de plaj Nvodari - Tabra de copii
3.1.3.4. Cordonul litoral dintre Tabra Nvodari i Mamaia Nord
3.1.3.5. Plajele de la Mamaia
3.1.3.6. Sectorul Eforie Costineti
3.1.3.7. Zona Eforie Sud
3.1.3.8. Sectorul Olimp
3.1.3.9. Sectorul Saturn Mangalia 3.1.3.10. Zona 2 Mai Vama Veche
3.1.4 Concluzii
3.2. Bacteriobentosul marin
3.3. Strategii de supravieuire ale bacteriilor n mediul natural

4



CAPITOL 4. Evaluarea structural i funcional a microbiotei (DOC 4)
4.1 Prelevarea probelor i montarea experimentului conceptul de microcosmos
4.2. Metode microscopice utilizate pentru distingerea fraciilor celulare vii-moarte
4.2.1. Coloraia acridine orange (numr total)
4.2.2. Coloraia aniline blue (celule cu capsul)
4.2.3. Coloraia cu iodura de propidium (celule permeabilizate)
4.3. Determinarea numrului de microorganisme folosind softul CellC
4.4. Msurarea cantitii de azot i fosfor din microcosmosuri
4.5. Calculul densitii celulelor i creterea procentual

CAPITOL 5. Utilizarea nanocristalelor semiconductoare pentru vizualizarea
microbiotei
5.1. Proprietile nanocristalelor semiconductoare
5.2. Proprieti legate de fenomenul de fotoluminescen
5.2.1. Excitarea luminoas
5.2.2. Absorbia
5.2.3. Emisia
5.3. Fotostabilitatea nanocristalelor
5.4. Biotoxicitatea nanocristalelor
5.5. Msurtori efectuate pe nanocristale CdSe/ZnS (520 nm i 600 nm)

CAPITOL 6. Calculul tehnico-economic al procesului de bioremediere
6.1. Calculul economic al analizelor din laborator
6.2. Norme de protecia muncii n laborator

CONCLUZII

BIBLIOGRAFIE
5

Lista figurilor


1.1 Surse de polare marin 12
1.2 Descrierea celor trei nivele de poluare n cazul transportului naval 14
1.3 Zonele cu intensiti maxime de accidente petroliere 15
4.1 41
4.2 41
4.3 41
4.4 41
4.5 Microcosmosul 42
4.6 Tip de microcosmos folosit pentru sisteme cu flux-reflux (Oviatt & all. 1980 ) 44
4.7 Evoluia n timp a microbiotei la nivelul sedimentelor ntre martor i proba poluat 46
4.8 48
4.9 Calibrarea grilei ocularului: latura ptratului mic este de 10 m 48
4.10 Imagine din camp microscopic A-martor; B- proba poluat (coloraie AO) 48
4.11 Numrul total de celule moarte pentru ambele eantioane 50
4.12 Aspecte microscopice A- martor, B- proba poluat (coloraie ioduca de propidiu) 50
4.13A Un exemplu de imagini din programul CellC, cu bacterii din microcosm2 unde s-a
adugat colorantul AO
51
4.13B Analiza numrului total de celule din panoul A folosind software-ul CellC 51
4.14 The Image J spaiul de calibrare dimensional 51
4.15 Analiza n timp a consumului de fosfat din cele 2 microcosmosuri 52
4.16 Analiza n timp a consumului de azot din cele 2 microcosmosuri 53
5.1 Dimensiunea nanocristalelor 55
5.2 Cele trei procese ale fotoluminiscienei 57
5.3 Spectru electromagnetic n funcie de energie 57
5.4 Spectrul de absorbie 58
5.5 Spectru de absorbie al unei soluii de nanocristale cu defecte 59
5.6 Spectru de emisie pentru CdSe 59
5.7A.B A-dor 490 nm; B- dor 600 nm 62

6


7

Lista tabelelor


1.1 Pentru nivelul 1, accidente soldate cu deversri mai mici de 7 tone 14
1.2 Pentru nivelul 2, accidente soldate cu deversri cuprinse ntre 7 i 700 tone 14
1.3 Pentru nivelul 3, accidente soldate cu deversri de peste 700 tone 14
1.4 Exemple de accidente navale soldate cu deversri de petrol 15
1.5 Descrierea efectelor pe termen lung i scurt a polurii cu hidrocarburi pentru
principalele specii marine
18
4.1 Numrul total de celule 46
4.2 Numrul de celule permeabilizate 49
4.3 LCK 338 52
4.4 LCK 338 A 52
4.5 LCK 338 B 52
4.6 MicroCap C 52
4.7 LCK 338 D 52
4.8 Rata de cretere procentual zilnic calculat n cele dou microcosmosuri 54
4.9 Rata de cretere procentual realizat ntre recoltri n cele dou microcosmosuri 54
4.10 Rata de cretere ntre recoltri i rata de cretere n 24 de ore pentru eantioanele M1 i
rspectiv M2
54
5.1 Valorile densitii celulelor n urma colorrii cu dot 490, i 600 nm 62

8


9


Introducere

Poluarea reprezint contaminarea mediului nconjurtor cu materiale care interfereaz
cu sntatea uman, calitatea vieii sau funcia natural a ecosistemelor (organismele vii i mediul
n care triesc).
Privit istoric, poluarea mediului a aprut odat cu omul, dar s-a dezvoltat si s-a diversificat pe
msura evoluiei societii umane, ajungnd astzi una dintre importantele preocupri ale
specialitilor din diferite domenii ale tiinei tehnicii, ale statelor guvernelor, ale specialitilor
din diferite domenii ale tiinei i tehnicii, ale statelor i guvernelor, ale ntregii populaii a
Pmntului. Aceasta, pentru c primejdia reprezentat de poluare a crescut i crete nencetat,
impunnd msuri urgente pe plan naional i internaional, n spiritul ideilor pentru combaterea
polurii.
Etimologic, termenul poluare provine din latinescul polluere = a murdri a pngri, a polua i s-
a folosit iniial pentru a defini numai rezultatul unei aciuni umane a crei consecin a fost
degradarea propriului mediu de via. Ulterior sensul a fost extins i asupra unor procese naturale al
cror efect este identic. Prin urmare, poaluarea poate fi natural i artificial, ultima deinnd cea
mai mare pondere.
O prim definiie a polurii a fost dat la Conferina Mondial ONU asupra mediului (1972),
definiie ce consider poluarea drept modificarea componentelor naturale sau prezena unor
componente strine, ca urmare a activitii omului i care provoac prin natura lor,
princoncentraia n care se gsesc i prin timpul ct acioneaz, efecte nocive asupra
sntii,creaz disconfort sau mpieteaz asupra diferitelor utilizri ale mediului la care acesta
putea servi n forma sa anterioar. Prin aceast definiie se recunoate oficial faptul c cea mai
intens poluare este consecina activitii antropice.
Scopul lucrrii este de a puncta detaliile i a compara performanele referitoare la proprietile
microorganismelor implicate n poluarea marin.
n primul capitol al lucrrii se disting noiunile introductive ale conceptului de poluare, precum
i msuri de prevenire n diferite cazuri de poluare.
n capitolul al doilea se exemplifica managementul interveniei n cazul polurii marine cu
hidrocarburi, prin ntocmirea unui plan de intervenie i determinarea echipamentelor i metodelor
utilizate.
n cel de-al treilea capitol se trece n revist procesele de sedimentare la litoralul Mrii Negre,
descrierea bacteriobentosului marin i a tehnicilor de supravieuire ale bacteriilor n mediul natural.
n capitolul patru se descriu procesele de prelevare a probelor i de colorare cu diferite soluii
pentru determinarea unui anumit numr de celule ( numr total, celule permeabilizate, celule cu
capsul). De asemenea se realizeaz msurarea cantitii de azot i fosfor, densitii celulelor i
creterea procentual.
n capitolul cinci au fost analiate proprietile nanocristalelor din diferite puncte de vedere, i de
asemenea au fost realizate msurtori asupra nanocristalelor.
n ultimul capitol este compus un calcul economic necesar pentru analizele de laborator, i un
set de norme de protecia muncii ce trebuiesc respectate cnd se lucreaz n laborator.








10


11

CAPITOL I. Descrierea conceptului de poluare

1.1.Impactul polurii marine la nivel naional i internaional

La modul general, poluarea poate fi definit ca totalitatea proceselor prin care se introduc
n mediu, direct sau indirect, materie sau energie cu efecte dunatoare sau nocive care altereaz
ecosistemele, diminueaz resursele biologice i pun n pericol sntatea omulu. n sensul definit
mai sus, prin poluant se nelege un factor (materie sau energie) care introdus n mediu ntr - o
cantitate care depete o limit care poate fi suportat de una sau mai multe specii de vieuitoare,
sau de ctre om, mpiedic dezvoltarea normal a acestora.
Poluarea mediului nconjurtor se produce de regul pe dou ci:
Artificial care se datoreaz activitilor umane;
Natural care survine n urma activitii vulcanice, erupiilor de gaze, etc.
Activitatea uman produce poluare, indiferent de domeniul n care se desfoar. n perioada
anterioar revoluiei industriale, aproape toate produsele care produceau poluare erau de natur
organic i relativ reduse cantitativ, deci puteau fi uor transformate prin procesul de biodegradare.
Numeroasele procese industriale actuale, tehnicile de cultur agricol, zootehnia, cercetarea
stiinific, aglomerrile urbane, toate sunt surse de poluare.
Apa este unul din factorii de mediu cel mai afectat d epoluare. Calitatea apei are un rol
primordial pentru existena i dezvoltarea uman. Criteriile de calitae ale apei se ncadreaz n trei
categorii de parametrii:
Parametrii de baz: temperatura, pH, oxigenul dizolvat, conductivitate i coninut de colibacili;
Parametrii de poluare: coninut ridicat de Ca, Mg, uleiuri minerale i compui organo-halogenai
Indicatori opionali:consum biochimic de oxigen, detergeni ionici, metale grele, arsenic, clor,
Na
+
, cianuri, uleiuri totale, streptococi i carbon organic total;
Toi acei parametri trebuie supravegheai att pentru apele de suprafa, subterane i tratate.

Poluarea apelor marine
n ultimul deceniu, efectul singular i global al poluanilor chimici i petrochimici a devenit
o problem major pentru mri i oceane. Poluarea marin (mri i oceane) are un impact de mediu
n special asupra utilizrii zonelor litorale i a resurselor biologice din zonele costiere i a celor
adiacente rmurilor mrilor i oceanelor.
Poluarea marin afecteaz pescuitul, creterea algelor marine, transporturile marine,
exploatrile mineralelor i a utilizrilor actuale i de perspectiv, precum i progresele tehnologice
n acest domeniu.
Surse de poluare marin (figura 1.1):
Platformele offshore de foraj i extracie;
Transport naval de mrfuri i persoane;
Coliziuni, euri, incendii, alte accidente;
Instalaii utilizate n operaiunile de ncrcare/descrcare marf;
Surse provenite de la rm: scurgerile pluviale i deversrile de ape uzate, provenite din:
- aglomerrile urbane,
- activitile desfurate pe platformele de producie ale unitilor
deprelucrare/rafinare ale produselor petroliere,
- activitile desfaurate n porturi, antiere navale, etc.
Surse provenite din atmosfer;
Sursele provenite din cauze naturale se refer la erupiile naturale de gaze sau hidrocarburi;
12


Figura 1.1. Surse de polare marin

Cantitatea medie anual de hidrocarburi descrcat n mediul acvatic este de aproximativ
2.400.000 Mt din care :
Descrcri de la rm (50% - 1 175 000 tone):
- scurgeri pluviale, deversri ape uzate,
- procesare hidrocarburi: rafinare, prelucrare,
- activiti portuare: antiere navale.
Transport naval (24% - 564 000 tone):
- ncrcare descrcare,
- bunkeraj,
- coliziuni,
- esuri,
- sprturi n coca navei, incendii.
Atmosfera (13% - 305 000 tone):
- gaze, fum, eliminate n atmosfera n urma arderilor hidrocarburilor.
Naturale ( 11% - 258 000 tone):
- erupii naturale de gaze/hidrocarburi n mediul acvatic.
Platformele offshore ( 2% - 47 000 tone):
- accidente n operaiunile de foraj, extracie, transfer marf.

Dac la poluarea aerului imaginea-simbol este oferit de arborii perforai de ploile acide, la
poluarea apei expresia caracteristic ar putea fi considerate-mareele negre, adic poluarea, practic
continu, cu petrol a mrilor i oceanelor lumii, avnd efecte dezastruoase asupra florei i faunei
marine.
n acord cu multitudinea de beneficii pe care o aduce dezvoltarea industriei petrolului, trebuie
avut n vedere i ameninrile emanaiilor aprute ca urmare a exctraciei i asocierea cu impactul
negativ pe care l are asupra ecosistemului. Activitile miniere din zonele de ap din apropierea
coastei, precum i extraciile de petrol sunt principalele surse de poluare cu hidrocarburi, datorate,
n principal, fisurilor produse n evile de forare, infiltrarea acestora n soluri i deversarea lor n
ap..
Poluarea cu petrol este una dintre cele mai frecvente ipuri de poluare marin i cu efectele cele
mai nocive. Fiind purtate de curenii marini, scurgerile petroliere, afecteaz apele, zonele de locuit
din apropierea coastei i de asemenea i alte regiuni care nu sunt productoare de petrol.

Tipuri de impact al polurii marine:
Economic:
Surse de poluare
Transport
Deversari de la tarm
surse naturale
Plarforme offshore
Din atmosfera
13

Impactul economic se refer la efectele negative induse activitilor economice, n cazul unei
poluri accidentale sau cronice. Tipuri de activiti intreprinse ce vor fi afectate n caz de poluare
marin:
- Industriale
- Turistice
- Pescuit(industrial,sportiv,acvacultur)
- Transport naval
- Extracie/Foraj
Ecologic: efectele induse depind de urmtorii factori:
- Volumul deversrii i caracteristicile fizico-chimice ale poluantului;
- Condiiile hidro-meteo;
- Anotimpul n care se produce dezastrul;
- Prezena structurilor hidrotehnice de aprare, a resurselor de hran, prezena zonelor
populate aflate n calea deplasrii poluantului;
- Topografia i geomorfologia rmului i a fundului apei
- Relaia poluant-sediment din punct de vedere al gradului de amestecare al acestora;
n funcie de prezena acestor factori, efectele ecologice ce reult n urma unei poluri
includ:
- Schimbri fizice i chimice n cadrul ecosistemului;
- Schimbri n ceea ce privete dezvoltarea, psihologia i comportamentul individual ale
organismelor i speciilor;
- Creterea mortalitii, distrugerea sau modificarea unui ntreg ecosistem datorit efecului
combinat toxicitate-sufocare-nbuire;
Impactul poate fi introdus fie prin aciunea direct sau indirect a poluantului, fie prin
activitatea de depoluare.
Social:
Poluarea zonelor populate poate avea efecte negative de imagine asupra comunitii respective
sau efecte negative asupra organismului uman, asupra strii de sntate a populaiei, putnd
determina chiar evacuarea zonei, n cazuri extreme.
Politic:
Se discut despre impact politic n cazul n care poluarea depete granie sau frontiere i
produce pagube ce pot implica reclamaii sau despgubiri ntre cele dou sau mai multe state
implicate.
Impactul politic este mai accentuat n cazul n care rile respective nu sunt membre ale
organizaiilor i conveniilor internaionale care s le acorde asisten n caz de poluare.
Studierea tipurilor de impact ce se pot produce ntr-o zon poluat este necesar pentru
stabilirea gradului de vulnerabilitate al zonei.

1.2.Clasificarea nivelelor de poluare

Au fost stabilite trei nivele de gravitate de poluare din punct de vedere al cantitii de
hidrocarburi deversate n timpul unei poluri:
Nivelul 1 (poluare minor): mai mic de 7 tone;
Nivelul 2 (poluare medie): ntre 7 i 700 tone;
Nivelul 3 (poluare major): peste 700 tone;
Cauzele polurii datorate transportului naval provin, cantitativ, din aciuni de caurire a
tancurilor, ncrcare sau descrcare, accidente ale navelor petroliere, deversri de santin, .a.m.d.
Cantitile de petrol deversate accidental de o singur nav pot depi uneori celelalte surse de
poluare din anul respectiv.
14

O analiz pe cele trei nivele de poluare n funcie de sursele care le-au cauzat este necesar n
vederea ierarhizrii zonelor cu risc de poluare. Diferite cauze de poluare produc un nivel diferit de
poluare, dup cum se poate observa n figura 1.2:




Fig.1.2. Descrierea celor trei nivele de poluare n cazul transportului naval


Cauze principale Procent (%)
ncrcare/descrcare 77.5
Bunkeraj 14.4
Euare 5
Coliziune 3.1

Tabel 1.1. Pentru nivelul 1, accidente soldate cu deversri mai mici de 7 tone

Cauze principale Procentaj (%)
ncrcare/descrcare 43.5
Coliziune 26.6
Euare 26
Bunkeraj 3.9

Tabel 1.2. Pentru nivelul 2, accidente soldate cu deversri cuprinse ntre 7 i 700 tone

Cauze principale Procentaj (%)
Euare 50.6
Coliziune 40.6
ncrcare/Descrcare 8.8

Tabel 1.3.. Pentru nivelul 3, accidente soldate cu deversri de peste 700 tone

n ciuda faptului c sunt mai rare, din punct de vedere al contextului general, atunci cnd se
produc, polurile majore (de peste 700 tone) pot afecta grav ecosistemul, economia, starea de
sntate a populaiei deoarece cantitatea de petrol deversat depete cantitatea provenit din toate
celelalte surse de poluare n anii respectivi.

15


Numele navei Anul Locatia Petrol deversat
Atlantic
Empress
1979 Tobago 287.000
ABT Summer 1991 La distanta de 700 Mm de Angola 260.000
Castillo de
Bellver
1983 Golful Saldanha, Sud Africa 252.000
Amoco Caduz 1978 Bretania, Franta 223.000
Haven 1991 Genoa, Italia 144.000
Odyssey 1988 La distanta 700 Mm de Noua Scotie,
Canada
132.000

Torrey Canyon 1967 Insulele Scilly , Anglia 119.000
Urquiola 1976 La Coruna, Spania 100.000
Hawaiian Patriot 1977 La distanta de 300 Mm de Honolulu 95.000
Independena 1979 Bosphor, Turcia 95.000
Jakob Maersk 1975 Oporto, Portugalia 88.000
Braer 1993 Shetland Islanda, Anglia 85.000
Khark 5 1989 La distanta de 120 Mm la Atlantic
coasta Morocco
80.000

Aegean Sea 1992 La Coruna, Spania 74.000
Sea Empress 1996 Milford Haven, Anglia 72.000
Katina P. 1992 Maputo, Mozambic 72.000
Assimi 1983 55 Mm distanta de Muscat, Oman 53.000
Metula 1974 Stramtoarea Magellan, Chile 50.000
Wafra 1971 Cap Agulhas, Sud Africa 40.000
Exxon Valdez 1989 Prince William Sound, Alaska, USA 37.000

Tabel 1.4. Exemple de accidente navale soldate cu deversri de petrol

n cazul zonelor cu trafic intens, probabilitatea producerii accidentelor majore este deosebit de
ridicat (ex., Coasta de Est a Atlanticului de Nord, Sudul Africii) - figura 1.3.



Fig.1.3. Zonele cu intensiti maxime de accidente petroliere



16


Factorii care contribuie la creterea numrului de accidente nsoite de poluri majore sunt:
Creterea cantitii de petrol transportat,
Caracteristicile locale defectuase de navigaie: densitatea traficului, condiiile hidro-meteo,
adncimea apei, vizibilitatea, comunicaiile radio defectuase,
Organizarea defectuas a operaiunilor de: intrare /ieire din port, ncrcare-descrcare marf,
bunkeraj,
Lipsa sistemelor de avertizare.

1.3.Msuri adoptate pentru prevenirea polurii marine

1.3.1. Polurile minore onshore
Poluarea de la rm poate fi prevenit sau controlat prin adoptarea unor msuri :
Amplasarea n zonele cu risc a unor baze de interventie,
Sisteme de siguranta n exploatare, intretinere, inspectii periodice , etc,
Construirea i monitorizarea statiilor de epurare,
Adoptarea unui adru legislativ adoptat situaiilor din zon
Instruirea i specializarea personalului de intervenie
Exist o serie de msuri de prevenrire, n funcie de situaia n caz:

1.3.1.1.Msuri de prevenire n cazul exploatrii conductelor de transfer de iei
1 Echiparea conductelor cu robinete automate de siguran care acioneaz n caz de depire a
presiunilor maxime prescrise sau de cderi de presiune posibile n caz de avarie;
2 Echiparea conductelor cu un sistem de tip S.C.A.D.A. (sistem centralizat de achiziii de date i
avertizare) care const n montarea unor debimetre care pot sesiza apariia avariilor n sistem.
Principiul de funcionare se bazeaz pe realizarea bilanului masic sau de presiune.
3 Echiparea cu robinei de secionare pentru zonele cu nivel hidrostatic ridicat.
4 Existena n sistem a staiilor de lansare-primire, curare de parafin
5 Inspecia periodic prin godevilare cu godevile pentru ntreinere
6 Testarea periodic a conductei la presiune dup golirea ei prealabil de hidrocarburi i umplerea
cu ap.
7 Supravegherea permanent cu echipe de liniori a traseului conductelor terestre
8 Supravegherea permanent cu mijloace aeriene i navale a zonei de trecere a conductelor
subacvatice
9 Pregtirea i antrenarea periodic a personalului de supraveghere i de intervenie

1.3.1.2.Msuri de prevenire n cazul bunkerajului i operaiunilor de ncrcare-descrcare a
tancurilor petroliere
1 Inspectarea tuturor robinetelor care nu au legtur sau nu sunt utilizate n operaiunile de bunkeraj
i ncrcare-descrcare, verificarea i poziionarea acestora pe poziia nchis;
2 Inspectarea i blocarea scurgerilor de punte;
3 Verificarea tvilor de recuperare aflate sub robineii de cuplare;
4 Protejarea tancului petrolier aflat n operaiuni ncrcare-descrcare prin amplasarea unui baraj
flotant antipetrol n jurul acestuia;
5 Capetele barajului trebuie s fie cuplate de cheu prin dispozitive speciale etane;
6 Pregtirea i utilizarea absorbanilor n orice situaie n care apar bli, pete de petrol pe punte sau
n zona baraj-cheu;
7 Supravegherea permanent a operaiunilor i oprirea lor n caz de pericol;
8 Pregtirea i antrenarea periodic a personalului implicat n operaiunile curente de supraveghere
i intervenie;

17


1.3.1.3.Msuri de prevenire n cazul terminalelor petroliere
n cazul terminalelor petroliere, accidentele de poluare pot aprea din cauza avarierii
echipamentelor sau nstalaiilor, a greelilor de proiectare sau din cauza unei erori umane n
exploatare.
Msurile de prevenire ce trebuiesc asigurate sunt:
1. Inspectarea periodic a instalaiilor, nlocuirea celor defecte i modernizarea celor depite;
2. ncadrarea n parametrii de funcionare conform cerinelor specificate n documentaia de
proiectare a instalaiilor i echipamentelor;
3. Cunoaterea i supravegherea permanent de ctre personalul calificat, a instalaiilor i
echipamentelor din dotare;
4. Formarea i antrenarea periodic a personalului de exploatare i intervenie;
5. Supravegherea permanent a zonei, operaiunile nav-rm i invers implicnd un risc de poluare
mrit;
6. Protejarea permanent a zonei cu baraje antipetrol;
7. Pregtirea i utilizarea rapid a substanelor absorbante;

1.3.2. Polurile majore offshore
Polurile majore provenite din transportul naval nu pot fi controlate (ca cele minore) dar pot fi
prevenite prin aplicarea unor masuri de prevenire:
Adoptarea unui cadru legislativ i aderarea la convenii inernaionale i organisme cu preocupri
n domeniul prevenirii combaterii polurii cu hidrocarburi(IMO,OPRC,IOPC Fund);
Respectarea normelor speciale de construcie a navelor, utilizarea tancurilor de transport marf
prevzute cu dublu fund i dublu bord, perei despritori etani ntre magazii, utilizarea n
magaziile de marf a instalaiilor de gaz inert, dotarea cu aparatur modern de navigaie i
comunicare;
Dotri corespunztoare cu echipamente specializate pentru depoluare ;
Instruirea i atestarea personalului de coordonare i intervenie;

1.4. Efectele ecologice rezultate n urma polurii

Din punct de vedere biologic, efectele polurii marine cu hidrocarbuti se caracterizeaz prin
manifestri complexe pe termene diferite:
Pe termen scurt (sptmni);
Pe termen mediu (luni, sezoane);
Pe termen lung (ani);

Poluantul care plutete poate contamina psrile i mamiferele care se deplaseaz pe
suprafaa apei. n zona offshore, suprafeele poluare pot fi evitate; n schimb n apropierea rmului
acestea sunt adevrate capcane n care organismele marine sunt prinse i infestate. Cantitatea i
gradul de persisten a poluantului care rmne pe sol depinde n mare msur de geomorfologia i
de caracteristicile sedimentelor zonei de rm poluate.

1.4.1. Zona rmurilor stncoase i falezelor
Datorit efectului de abraziune produs de aciunea valurilor care se sparg, pelicula de
poluant se scindeaz n picturi din ce n ce mai mici, fiind antrenat de ap. Din cauza acestui
fenomen, poluarea rmului este minim, afectnd pe termen scurt organismele din zon. n unele
cazuri, poluantul se depune pe stnci sub form de benzi la nivelul superior al rmului la care ajung
cele mai nale valuri. Avnd n vedere c cele mai frecvente forme de via sunt coloniile de psri
aflate n zona superioar a rmului, i acumulrile de epibioz de la baza acestuia, impactul unei
18

poluri este redus. Recolonizarea cu plante i animale a zonei se produce rapid odat cu antrenarea
poluantului n masa apei i ndeprtarea acestuia prin efectul curenilor marini;
1.4.2. Zona plajelor nisipoase
Poluantul este mpins de valuri n interiorul rmului, rmnnd pe suprafaa acestuia, avnd
tendina de a se amesteca cu nisipul sau de a se infiltra n substrat. Poluantul se depune sub form
de benzi paralele cu malul sau poate acoperi ntreaga plaj. Cu ct granulaia stratului de sediment
este mai mare, cu att poluantul se infiltreaz mai rapid i ntr-o cantitate mai mare n substrat.
Adncimea maxim la care poluantul poate penetra datorit aportului de nisip este de aproximativ
30 cm (pentru nisip fin) i de aproximativ 60 cm (pentru plaje cu nisip grosier). n aceste condiii
poluarea este masiv, persistena afectnd grav ecosistemul. Acest tip de rm, n funcie de
expunerea la valuri, permite dezvoltarea algelor, molutelor, scoicilor, constituind zone de
reproducere a psrilor i petilor;

1.4.3. Zona de rm mltinoase cu pante line
Poluantul este mpins de valuri adnc n zon producnd poluarea unor suprafee ntinse.
Din cauza umiditii ridicate a solului, poluantul plutete pe rm, migrnd n diverse direcii, n
funcie de panta acestuia, i nu se infiltreaz n substrat. Fauna i flora acestor zone este bogat i
variat, fiind n acelai timp foarte expus n cazul unei poluri de orice tip. Intervenia n astfel de
zone este foarte dificil, existnd pericolul amplificrii efectelor negative induse ecosistemului.
Organismele care supravieuiesc impactului letal cauzat de evaporarea din prima faz a
polurii, acumuleaz n continuare componente toxice (att din ap ct i din sedimente i hrana
contaminat), care se depoziteaz n esuturi. Concentraiile acumulate pot avea valori ridicate cu
impact negativ asupra dezvoltrii organismelor afectate. n tabelul 1.5 sunt menionate efectele pe
termen scurt i lung la o serie de specii:

Sensibilitate Efecte imediate Efecte pe termen lung
Alge Slab Degradarea esuturilor
n zona de contact
Refacere lent n timp
Molute Puternic Asfixie Acumulare n organisme
Forme fixate pe
roci
Puternic Asfixie Acumulare n organismele
filtratoare n funcie de
timpul de contact
Peti Slab pentru
aduli,
puternic
pentru larve i
juvenili
La contact direct
asfixie prin
contaminarea
branhiilor
Prsirea zonei poluate;
influen deosebit de grava
pentru petii bentonici prin
contaminarea sedimentelor
Mamifere Variabil,
puternic
pentru cele
acvatice
Contaminarea extern,
indigestie, hipotermie,
intoxicare
Decimarea populaiilor,
dispariia surselor de hran
Psri Variabil,
puternic
pentru plonjori
Contaminarea
penajului, inroxicare
prin indigestie,
distrugerea oulor
Decimarea populaiei,
prsirea zonei

Tabel 1.5.Descrierea efectelor pe termen lung i scurt a polurii cu hidrocarburi pentru
principalele specii marine

19

Existena zonelor de reproducere, zonelor protejate (diferite rezervaii), a coloniilor de psri, a
bancurilor de peti se constituie n factori ecologici de risc, care sunt cuantificai din punct de
vedere valoric pentru fiecare zon n parte, urmnd a fi luai n calcul mpreun cu ceilali factori
(economici, sociali, politici, tipul rmului) n vederea stabilirii gradului de vulnerabilitate.
Refacerea ecologic a unei zone poluate nu depinde numai de cantitatea ci i de compoziia
componentelor toxice care persist dup deversare. Repopularea necesit desfurarea unor etape.
Rata de refacere depinde de dinamica populaiilor i de interaciunea ntre specii.
20


21

CAPITOL II. CAPITOL 2. Managementul interveniei n cazul
polurii marine cu hidrocarburi
Pe zi ce trece simim tot mai puternic poluarea. Aerul irespirabil, apele murdare, pmntul
nefertil i lista animalelor pe cale de dispariie, care se mrete simitor n fiecare an, au efecte
devastatoare asupra Pmntului i, implicit, a omului. Iar problema major se resimte n singurele
surse de alimentare cu ap: oceanele. Oceanele ocup peste 70% din suprafaa Pmntului,
adpostind un numr mare i o larg varietate de plante i specii de animale marine. De asemenea,
ele alimenteaz cu ap ptabil ntreaga planet. n concluzie, oceanele sunt cea mai mare surs de
supravieuire a tuturor vieuitoarelor, inclusiv a omului.
Cu toate acestea, de-a lungul anilor, activitile umane excedentare au afectat negativ viaa
marin, prin poluare. Cele mai grave tipuri de poluare au fost nregistrate n urma aciunilor
precum: scurgeri de petrol, deversrile deeurilor industriale n apele oceanelor, a gunoaielor
menajere i a materialelor toxice.
Scopul planului este de a stabili un mecanism de asistenta reciproca, in cadrul caruia
autoritatile nationale competente ale partilor contractante vor coopera cu scopul de a coordona si
integra interventia lor la incidentele privind poluarea marina, care afecteaza sau poate afecta zonele
de coasta, marea teritoriala si zonele economice exclusive (denumite in continuare zone de
responsabilitate) ale partilor contractante sau la incidente care depasesc capacitatea disponibila de
interventie a fiecareia dintre partile contractante.
Obiectivul general al planului este organizarea unei interventii prompte si rapide in cazul
deversarilor majore de produse petroliere care afecteaza sau care pot afecta zona de responsabilitate
a unia sau mai multor parti contractante si de a facilita cooperarea in domeniul pregatirii si
interventiei in cazul poluarii cu produse petroliere.
In acest scop, au fost definite urmatoarele obiective specifice:
a. stabilirea extinderii cooperarii pentru implementarea planului intre autoritatile nationale
competente, la nivel operational;
b. mpartirea responsabilitatilor si anticiparea transferului de responsabilitate de la o parte
contractanta la alta;
c. stabilirea principiilor de comanda si cooperare si definirea structurilor corespunztoare;
d. adoptarea intelegerilor privind utilizarea navelor si a aparatelor de zbor din dotarea uneia dintre
partile contractante in zona de responsabilitate a altor parti;
e. specificarea tipului de asistenta care ar putea fi furnizata si conditiile in care aceasta este
acordata;
f. stabilirea in prealabil a conditiilor financiare si a modalitatilor administrative asociate actiunilor
de cooperare in situatii de urgenta.

2.1. Descrierea planului de intervenie n caz de poluare marin

Fiecare caz de poluare este tratat in mod diferit in functie de imprejurarile in care se
produce. Exist totusi o anumit grupare a metodelor si mijloacelor de interventie in functie de zona
de actiune. Aceast grupare/clasificare reflect nu numai diferentierile tehnologice corespunztoare
conditiilor specifice din fiecare zon, dar si limitele operationale aferente.

Exist astfel trei mari categorii de interventii:
- n zona de larg (offshore);
- n zona de rad si port ;
- n zona de tarm (onshore).



22

Interventii n zona de larg

DELIMITARE
Desi nu exist o delimitare strict a termenului, se accept unanim de ctre specialisti drept
zon de larg sau de mare deschis, zona de peste 5 Mm deprtare de trm, situat n afara golfurilor
sau a intrndurilor adpostite. Zona de larg cuprinde limita de larg a apelor teritoriale (12 Mm) si
zona contigua (12Mm) a statului respectiv.

ACTIVITATI
In afara navigatiei libere, zona de larg constituie pentru multe alte state locul unei intense
activitti economice legate de prospectarea si exploatarea petrolului. Acestea sunt de altfel si
principalele surse de poluare cu hidrocarburi. Intr-adevr, activitatea de foraj marin poate genera
att accidente importante cum ar fi eruptiile scpate de sub control, nsotite sau nu de incendierea
peliculei de petrol, ct si deversri mai mici produse n timpul unor probe de productivitate la
sonde, n urma unor manevre gresite de transfer combustibil de la navele de aprovizionare la
platforme sau a evacurii santinei, a splrii puntii murdare etc.
In cazul platformelor de productie petrolier, desi exist un ntreg lant tehnologic al
sistemului de sigurant si de prevenire a polurii, chiar n situatii de limit, practica a demonstrat c
si acesta este depsit uneori de adversitatea conditiilor dure de pe mare, de greseala omeneasc sau
de reaua intentie (sabotaje, distrugeri provocate de rzboi etc.). S nu uitm bogata retea de
conducte petroliere submarine care se pot sparge din diferite cauze cum ar fi: coroziune natural;
avarii tehnologice (depsiri ale presiunii maxime admise); montaje defectuoase, nerezistente la
conditiile de mediu; manevre gresite de fixare a platformelor mobile etc. Sistemele de transfer titei,
indiferent de tip, ele sunt supuse uneori acelorasi erori tehnice sau umane, adesea accentuate de
duritatea factorilor de mediu.

CARACTERISTICI
Zona de larg este caracterizat, n general, prin:
- adncime relativ mare de ap, comparativ cu celelalte zone;
- valuri nalte si vnturi puternice, acoperind, practic toat scara Beaufort;
- curenti puternici de suprafat
Toate acestea necesitand: echipamente /metode de interventie, adaptate conditiilor dure de
lucru (echipamente cu caracteristici tehnico-functionale ridicate ). Totodat, deprtarea mare fata de
mal, face ca fiecare punct din zon s se gseasc izolat de orice baz de aprovizionare si sustinere
logistic, mijloacele de interventie trebuind s aib n consecint o autonomie ridicat si o viteza
mare de deplasare.
O circumstant favorizant a interventiilor de depoluare n zona de larg o constituie
gravitatea redus a impactului ecologic. De fapt, cu ct deprtarea de trm este mai mare si
conditiile hidro-meteo sunt mai vitrege, probabilitatea ca pelicula s scape actiunii degradrii
naturale si s ajung la mal (acolo unde impactul ecologic este maxim) este mai mic
O alt caracteristic a zonei de larg o constituie variabilitatea n timp a conditiilor de mediu
Aceasta face ca orice interventie n larg s fie pregtit pentru cele mai nefavorabile situatii,
cu att mai mult cu ct (prin amploarea lor) accidentele de poluare n aceast zon reclam multe
zile de lucru.
T oate cele de mai sus influenteaz profund att metodele, dar mai ales mijloacele tehnice de
interventie.

METODE DE INTERVENTIE
Cele mai recomandate metode de interventie utilizate in aceasta zona sunt: degradarea
naturala, dispersarea, arderea controlat si recuperarea mecanic.
23

Degradarea naturala se aplica in cazul in care conditiile hidro-meteo sunt nefavorabile sau
poluarea se deplaseaza spre larg.
Dispersia - dat fiind distanta mare fat de trm, pentru a cstiga timpul pierdut cu
alarmarea, cercetarea zonei si pregtirea interventiei, plus drumul lung al fortelor de interventie, se
recomand folosirea mijloacelor aeropurtate pentru mprstierea dispersantilor. Avantajele acestora
sunt nete:
rapiditate mare de interventie;
raz mare de actiune;
capacitate sporit de lucru chiar si n conditii hidro-meteo grele pentru aeronave;
productivitate si eficient foarte bun n special n cazul polurilor de mare amploare ;
protejarea tarmului, pelicula dispersata in masa apei nu se va depune pe litoral.
Arderea controlat ( avand in vedere distanta mare pana a tarm ) se efectueaz prin traulare
de suprafat n sistem U, cu ajutorul unor baraje antifoc de lungime (min.300 m) si capabile s
reziste conditiilor dure de vnt si val (starea marii <3 B).
Un caz aparte l constituie situatiile cnd pelicula se aprinde spontan si arde necontrolat,
ngreunnd operatiunile de salvare (accidentele platformelor IXTOC-1 din Golful Mexic-
1979,PIPER ALPHA din Marea Nordului 1987).
In astfel de cazuri stingerea incendiului este foarte dificil si periculoas, avnd prioritate
fat de problemele de combatere a polurii, care se vor rezolva abia mai trziu.

Interventii n zona de rad si port

DELIMITARE
Zona de rad si port este cuprins n marea teritorial. Ea constituie un punct de convergent
al traficului naval, cuprinzand trasee de navigatie, ancoraje, porturi. Din nefericire, cu toate
msurile de dirijare si supraveghere a traficului naval, nu o dat s-au produs grave accidente urmate
de poluri cu hidrocarburi.

ACTIVITATI
Ca principale activitati desfasurate in aceasta z ona enumeram: activitati urbane, portuare,
transport naval, santiere navale, oil terminale etc.

SURSE DE POLUARE
Ca principale surse de poluare cronic n zona de rad si port pot fi ntlnite:
activitatea de navigatie (deversri de santine, splri de tancuri, aruncarea rezidurilor de
hidrocarburi etc.);
evacurile urbane neepurate, mai ales cele provenind din zonele industriale prelucrtoare de
hidrocarburi (rafinarii,oil terminale etc.);
scurgerile pluviale provenind de pe platforma portuar (santiere navale, intreprinderi de exploatare
si transport portuar, dane murdare cu hidrocarburi etc.).
Ca surse de poluare accidental, cele mai frecvente sunt urmtoarele:
- accidentele navale (esuri, coliziuni, explozii, scufundri de nave etc.);
- erori grave de operare la terminalele petroliere;
- situatii speciale (sabotaje, bombardamente etc.).

CARACTERISTICI
In privinta conditiilor geografice si de mediu, zona de rad si port nu este asa de dur
precum cea de larg. Intruct porturile sunt amplasate n locuri adpostite natural, iar prin
constructiile hidrotehnice aferente (diguri, dane etc.) se asigur un adpost suplimentar pentru nave,
caracteristicile hidrologice sunt favorabile desfsurrii permanente a activittilor indiferent de
sezon. Lipsesc curentii, valurile sunt relativ mici, chiar pe vnt puternic, iar adncimea apei este
24

suficient de mare ca s permit interventia oricrui mijloc plutitor. Accesul se poate realiza usor si
rapid, att de pe ap ct si de pe uscat, n orice zon. Totodat, datorit configuratiei danelor,
operatiunile de limitare a zonei poluate se pot efectua foarte rapid, usurndu-se operatiunile
ulterioare de recuperare si de curtire. In schimb, prezenta navelor amarate la cheu, uneori n dan
dubl sau chiar tripl, ngreuneaz considerabil procesul si manevrabilitatea mijloacelor de
recuperare n toate zonele portului. Mai mult, o pelicul plutitoare care se rspndeste printre nave,
creeaz un pericol potential de incendiu, deosebit de grav pentru securitatea navelor respective 4si a
portului n ansamblu. Ca s nu mai vorbim de emanatiile de vapori ale fractiunilor volatile din titei
care, purtate de vnt ctre aglomeratiile urbane adiacente portului, pot agrava impactul social al
accidentului.
Din punct de vedere al impactului in zona se pot face urmatoarele aprecieri:
- impactul ecologic este de nivel mediu datorita existentei reduse a bancurilor de pesti, numarului de
pasari, alge, epibioza;
- impactul economic este de nivel major datorita incarcarii deosebite d.p.v. al activitatilor
economice din zona;
- impactul social este de nivel major datorat existentei aglomerarilor urbane.

METODE DE INTERVENTIE
Particularittile zonei de rad si port determin metodele si mijloacele de interventie
specifice. Ca metode, arderea controlat este evident, prohibit, lsnd locul recuperrii mecanice si
dispersrii. Pentru constructiile hidrotehnice, instalatiile portuare si navele murdrite de
hidrocarburi se aplic metode specifice interventiilor n zona de trm (splare, curtire mecanic cu
dispersanti, cu substante absorbante sau cu substante biodegradabile).

Interventii n zona trmului

DELIMITARE
Zona de tarm cuprinde portiunea de uscat si apa, adiacenta liniei de baza (stabilita conform
legislatiei in vigoare ca fiind linia celui mai mare reflux de-a lungul tarmului). O delimitare stricta
pe mare (d.p.v. al responsabilitatilor in cazul unei interventii) nu a fost inca stabilita.

ACTIVITATI
In aceasta zona omul desfsoar o serie de activitti economice: pescuit, turism, acvacultur,
exploatare de resurse minerale, la care se adaug zonele locuite, de la micile sate de pescari la
marile aglomerri urbane din jurul porturilor importante.
Consecintele unei poluri cu hidrocarburi sunt maxime pentru aceast zon, eforturile de
prevenire si combatere fiind concentrate in vederea protejarii trmului.
oluarea cronic are un impact slab cu trmul; n schimb poluarea accidental creeaz mari
probleme.

SURSE DE POLUARE
Ca surse principale de poluare, cronica pot fi: evacuarile urbane, pluviale etc. Ca surse principale de
poluare accidentala pot fi: accidentele navale, esuari, etc.
Sunt consemnate: esurile unor tancuri petroliere si situatiile n care, n ciuda tuturor eforturilor,
pelicula din larg ajunge la mal.

CARACTERISTICI
Tipul tarmului
In functie de geomorfologia litoralului, din punctul nostru de vedere se ntlnesc patru grupe
distincte de trmuri:
- cu plaje nisipoase;
25

- cu faleze stncoase;
- cu zone mlstinoase ( de tip deltaic sau de tip intermareic);
- lacuri litorale.

In functie de adversitatea conditiilor hidro-meteo se intalnesc tarmuri:
- expuse actiuniii valurilor
- adapostite golfuri, estuare, acolo unde datorita conformatiei tarmului marea este calma actiunea
valurilor fiind foarte slaba.
Toate acestea influenteaza alegerea tipului interventiei si nivelul de degradare a poluantului.
Dup cum se vede, aceast clasificare nu poate acoperi n ntregime diversitatea situatiilor care pot
exista faptic, ns ea ncearc s grupeze particularittile specifice de interventie.
Printre caracteristicile lor comune acestor zone, putem aminti:
- Adncimea mic a apei, mpiedicnd accesul dinspre mare a multor tipuri de utilaje plutitoare;
- Valuri deferlante, ngreunnd pn la nefunctionare utilizarea barajelor flotante si a
recuperatoarele mecanice;
- Prezenta vegetatiei acvatice, a stncilor submarine, a gheturilor plutitoare, dup caz, creind
probleme de dispunere, manevrare si functionare a dispozitivelor plutitoare;
- Accesul adesea dificil de pe trm pentru utilajele terestre, la care se adaug uneori si deprtarea
fat de centrele urbanistice sau de cile rutiere, producnd dificultti de transport n asigurarea
interventiei.

O alta particularitate a zonei o reprezinta gradul de incarcare care poate fi ridicat din punct
de vedere: al biodiversitatii, economic, social, etc.
Din punct de vedere al biodiversitatii, zona trmului prezint o serie de caracteristici speciale, care
o fac deosebit de sensibil la orice agresiune extern.
Astfel, aici se ntlneste cea mai mare diversitate si densitate de forme de viat de pe toat
ntinderea mrii. Aici este locul predilect de hrnire si de reproducere pentru numeroase specii de
vietuitoare marine, att acvatice, ct si terestre.
Acolo unde exist obiective economice speciale, acestea trebuie protejate cu orice pret:
ferme de maricultur, captri de ap, uzine de desalinizare, santiere navale, oil terminale, etc.
Din punct de vedere al impactului in zona se pot face urmatoarele aprecieri:
- impactul ecologic - major - bancuri de pesti, mamifere, pasari, alge, epibioza
- impactul economic - major - activitati economice
- impactul social - major - asezari urbane

METODE DE INTERVENTIE
In functie de tipul trmului, si de elementele sale specifice locale, metodele si mijloacele de
interventie vor trebui s protejeze zonele senzitive si sa limiteze pe ct posibil la o zon minim
dezastrul.
Ca metode de interventie utilizate in zona tarmului sunt: degradarea naturala, protejarea
zonelor sensibile sau limitarea si recuperarea poluantului.
In primul rnd, se va urmri mpiedicarea deplasrii peliculei de hidrocarburi de-a lungul
trmului, sub actiunea vntului sau a curentilor, folosind att baraje flotante, ct si orice
neregularitate din linia malului (golfuri, intrnduri etc.).
In faza urmatoare se va interveni att de pe mare, ct si de pe uscat pentru recuperarea
hidrocarburilor plutitoare sau a celor scurse de pe mal n urma splarii acestuia cu jeturi de ap
cald, fr a utiliza dispersanti.
Curtirea trmului poluat se realizeaza in trei etape care constau in:
- Depoluarea primara recuperarea petrolului care balteste;
26

- Recuperarea propriuzisa colectarea poluantului de pe suprafata solului, a resturilor de petrol
vascos ( petrol ramas dupa evaporarea fractiilor usoare), a celui infiltrat in substrat, curatirea
platformelor poluate, etc.;
- Depoluarea finala, care consta in ndeprtarea, splarea, dispersia, ultimelor ramasite, irizatii de pe
sol.
Nu ntotdeauna utilajele pot face fat acestor operatiuni de amploare, astfel c de multe ori
curtirea se face manual, prin aportul voluntarilor.
In final se aplic dac este posibil, un tratament cu substante biodegradante pentru
accelerarea refacerii biologice a mediului.
O atentie deosebit se va acorda salvrii vietuitoarelor marine murdare de hidrocarburi
(psri si mamifere), att prin prinderea si splarea lor, ct si prin hrnirea fortat, tinnd cont c
sursele lor de hran natural au fost afectate. De asemenea, cadavrele vietuitoarelor moarte trebuie
strnse si incinerate pentru a nu da nastere la alte complicatii.
Mult timp dup ce interventia de combatere a polurii a fost ncheiat, va trebui urmrit
refacerea mediului marin pentru a constata eventualele modificri ecologice si a le corecta, pe
msura posibilittilor.

Fazele interventiei

Operatiunile de interventie in caz de poluare au fost impartite in patru faze distincte:
- Faza I Notificarea
- Faza II Evaluarea si activarea planului
- Faza III Operatiunile comune de interventie pe mare
- Faza IV Operatiunile comune de interventie la tarm

Se intelege de la sine ca, in functie de imprejurari, unele faze sau parti ale acestora se pot
suprapune.

Faza I
Notificarea si verificarea informatiilor privind poluarile accidentale se vor face la nivel
national, in conformitate cu dispozitiile PNI.
Indiferent de necesitatea activarii planului, autoritatea operationala a partii contractante in a
carei zona de responsabilitate s-a produs accidentul, dupa primirea si verificarea raportului
incidentului, va informa imediat autoritatile operationale ale celorlalte parti prin intermediul
punctelor nationale de contact ale acestora.Autoritatea operationala alerteaza, de asemenea, celelalte
autoritati implicate din propria tara, inclusiv CNE, in conformitate cu dispozitiile PNI.

Faza a II-a
Autoritatea operationala a partii contractante afectate de un incident sau partea contractanta
care ar putea fi afectata prima, va evalua si va determina, luand in considerare gravitatea
incidentului, inclusiv factori precum zona de producere a poluarii, natura si cantitatea poluantului
deversat si alte elemente relevante, nivelul de interventie necesar si daca este necesara activarea
planului.Inainte de activarea planului, autoritatea operationala a partii in cauza isi activeaza PNI.
Decizia de activare a planului se ia de catre autoritatea operationala a partii contractante
afectate sau a celei care ar putea fi afectata prima de incident.
Dupa luarea unei astfel de decizii, autoritatea operationala a partii contractante afectate sau a
celei care ar putea fi afectata prima de incident isi asuma rolul de autoritate lider si:
- informeaza autoritatile operationale ale celorlalte parti prin intermediul punctelor nationale de
contact , asupra activarii planului si asupra faptului ca propriul CNE si-a asumat rolul de CSE;
- activeaza propriul CIU, care isi va asuma rolul de CCIU;
- activeaza propria echipa de sprijin;
27

- desemneaza CSE care, in legatura cu autoritatea lider si propria echipa de sprijin, formuleaza
strategia de urmat si evalueaza necesitatea solicitarii de asistenta de la alte parti contractante.
CSE initiaza fazele III si IV ale interventiei;
- solicitarea asistentei din partea celorlalte parti contractante, pe baza cerintelor si a necesitatilor
exprimate de CSE;

Faza a III-a
Obiectivele de baza ale operatiunilor comune de interventie pe mare sunt stoparea deversarii
poluantului la sursa, restrangerea ariei de raspandire a acestuia si inlaturarea unei cantitati cat mai
mari de poluant de pe suprafata apei marii, inainte ca acesta sa ajunga pe tarmul uneia dintre parti.
Operatiunile comune de interventie pe mare se realizeaza in conformitate cu procedurile
descrise in PNI al partii contractante lider. Comanda operationala a operatiunilor comune de
interventie este exercitata de autoritatea lider prin intermediul CSE. Se utilizeaza in primul rand
resursele nationale, care vor fi suplimentate, daca este necesar, cu personal si mijloace de la
celelalte parti contractante, oferite ca asistenta, la cererea autoritatii lider. Personalul si mijloacele
partilor asistente functioneaza sub control operational direct si sub comanda tactica a propriilor
CNE si a comandantilor de unitati sau a sefilor de echipe.
In cursul operatiunilor comune de interventie, CIU al statului lider, care si-a asumat rolul de
CCIU, serveste ca principal centru de comunicatii si ca baza a CSE.

Faza a IV-a
Obiectivele principale ale operatiunilor comune de interventie la tarm sunt de a proteja
zonele de coasta sensibile din punct de vedere ecologic si alte resurse vulnerabile la poluare
impotriva efectelor poluantilor si de a-i inlatura pe cei care au atins tarmul pentru a preveni
recontaminarea altor zone de coasta.
Aceasta faza include si actiunile de tratare si eliminare finala a poluantilor colectati si/sau a
materialului contaminat din structura plajelor.
Principiile enuntate in faza a III-a se aplica si pe intreaga durata a acestei faze.
Pentru cresterea eficientei operatiunilor comune de interventie pe tarm, CCIU poate fi
transferat, la alegerea autoritatii lider, in locatii alternative adecvate, mai apropiate de locul
operatiunilor (conform pct. 3.3). In asemenea cazuri, autoritatea lider informeaza imediat
autoritatile operationale ale partilor contractante asistente.

Incheierea operatiunilor comune de interventie si dezactivarea planului

CSE incheie operatiunile comune de interventie atunci cand:
masurile de interventie in caz de poluare s-au finalizat, iar poluantul nu mai ameninta
interesele vreunei parti contractante si
masurile de interventie in caz de poluare s-au derulat pana la un punct de la care resursele si
capacitatile de interventie ale partii lider sunt suficiente pentru finalizarea lor cu succes.
Atunci cand decide incheierea operatiunilor comune de interventie, CSE ia in considerare in mod
deosebit consecintele financiare ale continuarii acestora. Dupa luarea deciziei de incheiere a
operatiunilor comune de interventie, CSE informeaza imediat CNE ai celorlalte parti contractante si
autoritatile lor operationale despre decizia luata si despre dezactivarea planului.
Dupa dezactivarea planului, intregul personal, echipamentele, produsele ramase neutilizate
si celelalte mijloace implicate in operatiunile comune de interventie se intorc sau sunt returnate in
tarile lor de origine. Partea care a solicitat asistenta ia masurile necesare pentru repatrierea rapida a
personalului partilor asistente, desi coordonarea si pregatirea formalitatilor necesare pentru
repatriere acestuia raman in responsabilitatea autoritatilor lor operationale.
Partea care a solicitat asistenta raspunzatoare de inapoierea in tara de origine a intregului
28

echipament oferit ca asistenta si a tuturor produselor pentru tratare neutilizate. Intregul echipament
si celelalte mijloace sunt inapoiate curate si in cea mai buna stare de functionare posibila.
Autoritatile operationale ale partilor implicate pot decide prin contacte directe ca produsele
de tratare neutilizate sa ramana in tara care a solicitat asistenta, in conformitate cu legislatia
nationala a partii contractante.
Unitatile autonome (vapoare, aparate de zbor) se intorc in tara lor de origine utilizandu-si
propria capacitate de deplasare. Partea contractanta care a solicitat asistenta este raspunzatoare de
facilitarea formalitatilor privind parasirea teritoriului/apelor teritoriale/spatiului aerian de catre
unitatile oferite ca asistenta. Partea contractanta care a solicitat asistenta pregateste un raport asupra
eficientei personalului, echipamentului, produselor si a altor mijloace primite ca asistenta. Aceste
rapoarte sunt transmise celorlalte parti contractante

2.2. Echipamente i metode folosite pentru limitarea efectelor polurii

Detinatorii de lucrari cu rol de aparare impotriva polurii marine ii constituie stocuri de
materiale si mijloace de interventie operative, numai din sortimentele i in cantitatile necesare, in
functie de amplasarea zonei, gradul de amenajare al acesteia, tipul de lucrari cu rol de aparare
existente.
Fondurile necesare pentru constituirea stocurilor de materiale si mijloacelor de aparare
vor fi asigurate din bugetul de stat, din bugetele locale i din sursele proprii ale operatorilor
economici implicati in gestionarea situatiilor de urgen. Fondurile alocate de la bugetul de stat vor
fi prevazute distinct in bugetele Ministerului Mediului i PAdurilor i Ministerului Agriculturii i
Dezvoltrii Rurale, iar cele alocate de la bugetele locale, in bugetele comunelor, omelor i judetelor,
dup caz.
Unele mijloace care presupun o continuitate in folosire pot deservi activitatea general de
intretinere a constructiilor cu rol de aparare impotriva inundatiilor. Acelai regim au si mijloacele
de calcul, masurare, transmisie i avertizare.
Operatorii economici care au objective inundabile sau potential poluatori, precum primarii
municipiilor, oraselor Si comunelor vor stabili in planurile de aparare modul de asigurare a
materialelor i mijloacelor de interventie sj locurile de depozitare.

Limitare i recuperare n zona de larg

Recuperarea mecanic, se realizeaz cu utilaje recuperatoare de capacitate mare, n sistemul
V, J, W, U de traulare de suprafat cu baraje flotante de tip offshore. Aceste baraje trebuie s aib o
jup de cel putin 0,8 m, un bord liber de cel putin 0,6 m, s urmreasc bine valul, s fie stabile in
plan vertical, la tractiune transversal si la oscilatii pe valuri, s aib o bun rezistent mecanic si o
andurant corespunztoare solicitrilor dure din zona de larg (mare de pn la 3 -40 Beaufort,
curent de pn la 1,5-2 Nd, vnt de 10 15 Nd, val max 2-3 m etc.).
Recuperatoarele trebuie s nu fie influentate in functionare de valuri, trebuie s aib
capacitti si randamente mari, s poat fi manevrate n orice conditii hidro-meteo.
De regul, echipamentele de interventie sunt montate pe nave mari (preferabil trawlere)
capabile s actioneze pe mare agitata si s le asigure suportul functional necesar (energie, mijloace
de manevr, spatii de lansare/recuperare echipamente, spatii de depozitare pentru hidrocarburile
recuperate etc.).
In situatii speciale (pierderi la conductele submarine de transport titei), recuperarea se poate
efectua cu ajutorul unor corturi submarine sau rezervoare flotante, 3dispersia realizanduse cu
ajutorul unor dispozitive de injectie submarin (n cazul eruptiilor), pentru obtinerea unei mai bune
amestecri cu hidrocarburile.


29

Limitare n zona de rad si port

Limitarea zonei poluate se poate face fie cu baraje flotante de tip harbour, tractate de
regul cu salupe, fie cu baraje submarine prin perdele de bule, n special pentru danele petroliere.
Barajele flotante protejaza, preventiv, navele petroliere aflate n operatiuni de ncrcare-descrcare.
Eventualele variatii de nivel produse de maree sau valuri sunt compensate la capetele barajului prin
dispozitive de etansare la cheu prin glisiere verticale. Lansarea la ap si recuperarea barajelor se
face de obicei de pe mal, n perimetre special amenajate.
Recuperarea hidrocarburilor, tinnd cont att de resturile plutitoare ce le nsotesc, ct si de
consistenta lor, se realizeaz cu recuperatoare cu discuri, cu band, cu tamburi, cu parm, sau cu
discuri dintate. Acestea au capacitti medii, iar reziduurile sunt evacuate periodic fie ntr-o nav
colectoare, fie ntr-un tanc special.
Pentru a ptrunde n toate zonele si n spatiile restranse dintre nave, salupele colectoare
trebuie s aib dimensiuni relativ mici si s fie foarte manevrabile.Se poate lucra si cu utilaje
independente, manevrate de pe mal (dig, cheu, dan) cu macaralele de cheu sau cu alte mijloace
mobile.
Dispersanti, pot fi mprstiati cu ajutorul unor dispozitive speciale montate pe salupe si chiar
pe brci pneumatice. De regul, pentru zona de rad si port se folosesc salupe complexe care pot s
ntind un baraj mic, pot s recupereze dinamic prin traulare de suprafat n sistem V sau J (cu una
sau dou aripi mici de baraj sustinute de tangoane) sau pot pulveriza dispersanti etc. Aceste salupe
au caracteristicile principale cuprinse astfel:
5lungimea total 6-24 m;
deplasament 4-20 tone;
capacitate stocare 0,6-2,0 m3;
productivitate 5-20 t/or;
vitez maxim 4-10 Nd.

Se pot aplica deasemenea tehnici speciale, cum ar fi de exemplu tratarea peliculei cu substante
absorbante sau cu substante coagulante, urmat de colectarea aglomerrilor rezultate.

Limitare n zona de rm

Curtirea trmului poluat se realizeaza in trei etape care constau in:
Depoluarea primara recuperarea petrolului care balteste;
Recuperarea propriuzisa colectarea poluantului de pe suprafata solului, a resturilor de petrol
vascos ( petrol ramas dupa evaporarea fractiilor usoare), a celui infiltrat in substrat, curatirea
platformelor poluate, etc.;
Depoluarea finala, care consta in ndeprtarea, splarea, dispersia, ultimelor ramasite, irizatii de
pe sol.
Nu ntotdeauna utilajele pot face fat acestor operatiuni de amploare, astfel c de multe ori
curtirea se face manual, prin aportul voluntarilor.In final se aplic dac este posibil, un tratament
cu substante biodegradante pentru accelerarea refacerii biologice a mediului.
O atentie deosebit se va acorda salvrii vietuitoarelor marine murdare de hidrocarburi
(psri si mamifere), att prin prinderea si splarea lor, ct si prin hrnirea fortat, tinnd cont c
sursele lor de hran natural au fost afectate. De asemenea, cadavrele vietuitoarelor moarte trebuie
strnse si incinerate pentru a nu da nastere la alte complicatii.
Mult timp dup ce interventia de combatere a polurii a fost ncheiat, va trebui urmrit refacerea
mediului marin pentru a constata eventualele modificri ecologice si a le corecta, pe msura
posibilittilor.


30

Utilizarea agentilor de dispersie

Fiecare parte contractanta isi defineste strategia privind utilizarea agentilor de dispersie in
combaterea poluarilor cu produse petroliere si le descrie in PNI. In acest scop, partile contractante
respecta Liniile directoare privind utilizarea agentilor de dispersie.
Fiecare parte contractanta informeaza celelalte parti contractante asupra strategiei privind
utilizarea agentilor de dispersie. Informatiile includ cel putin enumerarea agentilor de dispersie
aprobati spre utilizare in apele teritoriale ale partii contractante si zonele in care utilizarea acestora
este permisa, restrictionata sau interzisa.
In cazul operatiunilor comune de interventie, partile contractante respecta principiul
autorizarii prealabile a utilizarii agentilor de dispersie. Autorizatia poate fi emisa numai de catre
CSE sau de catre o alta persoana desemnata de acesta.
In zona de responsabilitate a fiecarei parti contractante, agentii de dispersare se utilizeaza
intotdeauna in conformitate cu dispozitiile PNI al partii contractante implicate. Daca nu s-a decis
altfel in contactele directe dintre CSE si CNE ai partilor contractante care participa la operatiunile
comune de interventie, acelasi principiu se aplica si in zonele de responsabilitate ale partilor
contractante.
Daca o parte contractanta a interzis utilizarea agentilor de dispersie in apele sale teritoriale,
celelalte parti contractante care participa la operatiunile comune de interventie trebuie sa respecte
aceasta decizie.

a) Recuperatoare mici: sunt reprezentate de salupele recuperatoare de pn la 10 m lungime,
autopropulsate, cu unul sau dou dispozitive recuperatoare si avnd, eventual, dou aripi mici de
baraj sustinute de tangoane. Caracteristicile tipice de operare sunt:
- v = 0,25 la 0,75 Nd (0,5-1,5 km/h);
- W = 1,5 la 8,0 m;
- R = 50% la 75%;
- P = 400 l/min.

b)Recuperatoare medii: sunt reprezentate de ambarcatiuni ceva mai mari, autopropulsate, cu unul
sau dou dispozitive recuperatoare si care lucreaz prin traulare cu ajutorul uneia sau a dou aripi de
baraj. Caracteristicile tipice de operare sunt:
- v= 0,50 la 1,00 Nd (1,0 2,0 km/h);
- W = 15,0 la 60,0 m;
- R= 50% la 75%;
- P = 1.200 l/min.

c)Recuperatoare mari: sunt reprezentate de nave adaptate sau special concepute pentru lupta
antipoluare, dispunnd de agregate puternice de recuperare si pompare, tancuri de reziduuri,
instalatii complexe de manevrare a unor baraje flotante lungi si opernd n sistem de traulare V, U,
W, J. Caracteristicile tipice de operare sunt:
- V = 1,00 la 2,00 Nd (2,0 4,0 km/h);
- W = 50,0 la 150,0 m;
- R= 50% la 75%;
- P = 2.200 l/min.

DISPERSIE
d)Imprstietoare de dispersanti montate pe nave: sunt reprezentate de acele nave sau ambarcatiuni
care au montate n borduri dou tevi cu dze sau pulverizatoare de dispersanti. Caracteristicile
tipice de operare sunt:
- v= 5,00 la 10,00 Nd (,0 20 km/h);
31

- W = 10 la 30 m;
- D= 20% la 70%;
- P = 75 l/min.

e)Imprstietoare de dispersant montate pe aeronave mici: sunt reprezentate de helicoptere sau
avioane mono sau biloc care au montate pe ele instalatii de mprstiat dispersantii, similare celor
folosite n agricultur pentru mprstiat amendamente. Caracteristicile tipice de operare sunt:
- v = 75 la 150 Km/h;
- W = 15 la 20 m;
- D= 20% la 70%;
- P = 500 l/min.

f)Imprstietoare de dispersant montate pe aeronave mari: sunt reprezentate de sistemele de mare
capacitate de mprstiere montate pe avioane cargo speciale, similare celor folosite pentru stingerea
incendiilor n pduri. Caractersiticile tipice de operare sunt:
- v = 200 la 350 km/h;
- W = 30 la 60 m;
- D = 20% la 70%
- 10P = 3.500 l/min.

ARDERE
g)Baraje antifoc: sunt reprezentate de sistemul de izolare a unei pete de hidrocarburi n vrful
concavittii unui baraj antifoc care opereaz n sistemul U de traulare. De regul, deschiderea
traulului reprezint cam o treime din lungimea barajului, iar acumularea hidrocarburilor se
realizeaz n treimea din vrful concavittii acestuia. Caracteristicile tipice de operare sunt:
- v= 0,25 la 0,75 Nd (0,5 la 1,5 km/h);
- W = 50 la 100 m;
- A= 80% la 98%;
Viteza de ardere a hidrocarburilor variaz, de obicei ntre 1-2 l/min/m2, functie de tipul
hidrocarburii, grosimea peliculei si conditiile de mediu.
Acoperirea zonei de lucru Alegerea unuia sau altuia dintre sistemele descrise mai sus
depinde de mai multi factori printre care si mrimea suprafetei peliculei de hidrocarburi asupra
creia se intervine. Timpul n care aceast suprafat este necesar a fi depoluata trebuie s fie ct mai
redus cu putint, att din motive economice ct mai ales ecologice. Alegnd o durat rezonabila (de
scurta) a interventiei si cunoscnd caracteristicile tipice de operare ale fiecrui sistem, se poate
proceda att la alegerea metodei ct si a numrului necesar de utilaje. Invers, n cazul n care se
dispune de un anumit numr din fiecare categorie de utilaje, se poate determina timpul de operare.
Viteza de acoperire a zonei se obtine nmultinnd ltimea de lucru a fiecrui utilaj cu viteza sa.

Solicitarea asistentei suplimentare de la alte parti contractante

In cazul unui incident de poluare cu o anvergura si de o natura la care, in opinia autoritatii
lider, resursele si capacitatile comune ale partilor contractante nu pot face fata, partea lider poate
solicita asistenta suplimentara din partea altor parti contractante.
In asemenea imprejurari si dupa consultari cu autoritatea lider, alte parti contractante pot
solicita, de asemenea, in conformitate cu nevoile lor, asistenta suplimentara. Daca mai multe parti
contractante solicita asistenta de la alte parti contractante, coordonarea acestor actiuni intre partile
contractante se realizeaza la nivelul autoritatilor lor operationale.



32


33

CAPITOL III. Rolul bacteriilor n procesul de bioremediere la nivelul
sedimentelor

3.1. Studiul proceselor de sedimentare la litoralul romnesc al Mrii Negre

Zona costier a Romniei este supus permanent proceselor de eroziune, fenomenul
accentundu-se n ultimii 30 de ani ca urmare a construirii lacurilor de baraj Porile de Fier I i II, n
acest fel cantitatea de sedimente adus de Dunre n Marea Neagr reducndu-se la jumtate i
dereglnd echilibrul sedimentar costier. Acestei cauze i se pot aduga i scderea aportului de
sedimente pe suprafeele de plaj, pierderea de sediment ctre larg datorit construirii digurilor
portuare, prbuirea falezelor datorit instabilitii geotehnice a zonelor situate n partea superioar
a pantelor i/sau aciunii valurilor la baza falezelor etc. Amploarea eroziunii costiere difer de la un
sector la altul.

3.1.1. Procese de sedimentare litoral
Procesele de sedimentare litoral sunt controlate, n principal, de micarea apei. Cel mai
important element l reprezint valurile, mai precis, energia lor. La fel de importani sunt curenii
litorali, de la cel de transfer litoral la cel de retur. Att valurile ct i curenii sunt generai i
controlai de condiiile meteorologice, n primul rnd de vnt.
Sedimentele sunt deplasate de cureni prin trre pe fund (bedload), sau n semisuspensie
sau suspensie, i acumulate n funcie de orientarea general a coastei, micarea lor putnd fi
transversal sau longitudinal fa de rm. Morfologia zonei costiere i nclinarea pantei submarine
a plajei reprezint alte elemente care influeneaz procesele de acumulare/erodare a zonei de coast.
n lungul zonei de deferlare a valurilor se nregistreaz o micare a materialului nisipos spre coast,
cu o component n lungul litoralului. n zona barei, transportul sedimentelor n suspensie i
semisuspensie, este deosebit de activ, pe bar rmnnd particulele grosiere care nu pot fi preluate
de curent. n zona de surf se produce o segregare a materialului dup caracteristicile sale
morfologice i fizice (cum ar fi dimensiune sau greutate specific).
Din punct de vedere hidraulic raportul dintre debitul solid transportat de un curent litoral i
capacitatea acestuia de transport definete gradul de saturare al curentului. Cnd raportul este
subunitar exist posibilitatea apariiei fenomenului de eroziune. Componenta principal a
echilibrului dinamic al unei zone litorale o reprezint bugetul sau balana materialului
sedimentar. n procesul evoluiei coastei, materialul detritic grosier se consum prin tocire i
framiare, sedimentele putnd fi transportate n alte zone ale litoralului. Refacerea stocului de
sedimente litorale se poate realiza prin alimentarea zonei costiere cu aluviuni aduse de cursuri de
ap, prin eroziunea falezelor, a materialelor provenite prin transferul de sedimente din zone vecine
ale litoralului sau de pe fundul mrii. Interceptarea i micorarea debitelor solide, precum i
exploatarea materialelor sedimentare de pe plaj, stric
echilibrul sedimentar al litoralului, genernd eroziuni intense ale acestuia.
O alt cauz de prim importan a modificrilor litoralului o prezint furtunile foarte
puternice care, cel mai adesea au loc de 2-3 ori pe an. n timpul acestor furtuni, energia valurilor i
capacitatea de transport a curentului litoral de sedimente crete cu cteva ordine de mrime. Astfel,
se produce o foarte intens eroziune a litoralului. n cazul unui litoral n care balana de material
sedimentar este deficitar, transformrile determinate de furtunile foarte puternice sunt uneori
ireversibile.
Un alt factor care determin schimbri majore ale morfologiei litoralului este modificarea
nivelului apelor mrii. Oscilaiile nivelului mrii, care pot fi sezoniere, multianuale sau de natur
eustatic, pot genera fenomene de eroziune a zonelor de coast. La Constana, unde msurtorile
nivelului mrii au fost fcute din anul 1933, se constat o cretere a nivelului mediu anual de
34

aproximativ 2,2 mm/an. Nivelul Mrii Negre este dependent de schimbrile globale de clim i de
nivel al Oceanului Mondial, dar i de aportul lichid i solid al Dunrii.
n trecutul geologic al Mrii Negre, modificrile de nivel ale apei au fost generate de
schimbri climatice majore rciri pronunate datorate glaciaiunilor, urmate de inclziri ce au dus
la topirea calotelor glaciare. Ultima glaciaiune din Pleistocenul superior a determinat o scdere a
nivelului apei pan la aproximativ 120 m. Toate aceste schimbri ale nivelului mrii au determinat
i schimbri majore n poziia liniei rmului i structura zonei costiere.
Ali factori care pot influena procesele costiere sunt: temperatura aerului, regimul
precipitaiilor, direcia i viteza vanturilor i variaiile presiunii barometrice.

3.1.2 Curenii i transportul de sedimente
Pe litoralul romnesc al Mrii Negre, datorit direciei vnturilor dominante i morfologiei
fundului bazinului marin, curenii paraleli cu rmul sunt orientai predominant nord-sud. n
perioadele de calm atmosferic valoarea msurat a curentului longitudinal nord-sud este de 3-50
cm/s (Bondar, Roventa, 1967). n timpul vnturilor din nord i nord-est (14-
15 m/s), viteza curentului poate ajunge la 1 m/s la suprafa i 0.2-0.3 m/s la fund (Bondar,
Roventa, 1967). Curenii n sens contrar apar n perioadele vnturilor din direcia sud i sudest.
La gurile de vrsare ale Dunrii exist i curenii de ap dulce care se disperseaz n evantai
spre larg i pot ajunge (Gastescu, 1986) pn la 3 kilometri deprtare de rm. Teoriile anterioare
care menionau existena unui curent compensator sud-nord pe sub curentul longitudinal nord-sud
au fost infirmate.

3.1.3 Tendine de eroziune a zonei costiere n sectorul Cap Midia Vama Veche

3.1.3.1. Plaja cuprins ntre promontoriile Cap Midia i Cap Ivan, evolueaz n condiii
naturale, intervenia uman n acest sector fiind nesemnificativ. Acest sector costier se menine
intr-o stare de echilibru dinamic. Aportul de material sedimentar de origine danubian echilibreaz
balana proceselor sedimentare, ceea ce confer stabilitate liniei rmului.

3.1.3.2. La sud de Capul Ivan, zona costier a suferit importante modificri prin construirea
platformei industriale Midia precum i a acvatoriului portuar Midia - Nvodari. Digurile de larg ale
acestui acvatoriu au generat modificri majore ale circulaiei litorale, barand i deviind spre larg
curentul litoral de sedimente. Ca urmare plaja Mamaia - Nvodari, situat imediat la sud de acestea,
evolueaz n condiiile unui aport foarte redus de material sedimentar.

3.1.3.3. n sectorul de plaj Nvodari - Tabra de copii se constat o situaie staionar a liniei
rmului, dar stocul de sedimente al plajei emerse este mult diminuat. Aportul masiv de cochilii se
reflect n granulometria sedimentelor de plaj.

3.1.3.4. Cordonul litoral dintre Tabra Nvodari i Mamaia Nord continu s fie afectat de
procese erozive. Efectele deficitului de sedimente sunt aici puternic resimite; retragerea liniei
rmului este general, dar cu valori diferite, mai lent n partea nordic i mai accentuat spre sud.

3.1.3.5. Plajele de la Mamaia aparin complexului de plaje barier, fiind delimitat la nord de
Portul Midia i de Capul Singol la sud. Acestea au fost contruite de valuri i cureni de-a lungul
ultimei faze de transgresiune a Mrii Negre, izolnd n spate laguna Siutghiol. nainte de 1975,
Portul Midia a fost extins pn la 6 m adancime. n 1975 digul de tip jetty a fost adncit spre
offshore pan la 12 m. Concomitent, s-a remarcat o eroziune sever a plajelor sudice. n scopul
realizrii unei protecii costiere, n faa Hotelului Parc au fost amplasate epiuri n form de Y i a
fost dragat nisip adiional din Lacul Tbcrie n vederea alimentrii artificiale pentru nou creata
plaj. Curenii locali au dispersat sedimentele nspre nord. n decursul urmtorilor ani, eroziunea s-a
35

deplasat ctre sud, ntre hotelurile Dacia i Perla. n 1984 un nou epiu a fost construit n fa
Capului Singol n vederea diminurii eroziunii. ntre anii 1974 1984 se remarc o reducere
important a aportului de sedimente. Dup 1980, s-a observat o retragere a liniei rmului cu valori
ntre 15-70 m n zona Mamaia (Raport JICA). Sedimentele au devenit mai grosiere datorit
adaosului de cochilii versus fracia terigen, care a fost transportat nspre larg. Datorit acestei
eroziuni severe, ntre 1989 1990, partea sudic a plajei de la Mamaia cunoate o alimentare
artificial executat cu sedimente dragate din Lacul Siutghiol, concomitent cu realizarea a ase
diguri sparge - val, care au indus cteva celule de circulaie litoral, n care se manifest o
acumulare de sedimente de tip tombolo n spatele digurilor cu mai multe canale ntre ele.
Operaiunile de dragare au fost efectuate fr un studiu litologic al sedimentelor din Lacul Siutghiol
n prealabil. Consecutiv, o important cantitate de silt i argil siltic a fost introdus n circulaia
costier, contribuind i mai mult la inrutirea calitii plajei i a siguranei hidrogeologice.

3.1.3.6. Sectorul Eforie Costineti a fost influenat de o serie de construcii: extinderea portului
Constana n anii 70, extinderea digului sudic de tip jetty n 1978 i construcia Yacht Club Europa
in 1986. Construcia digului a fost executat n acelai timp cu lucrrile de dragare pe canalul
Dunre-Marea Neagr. Digul de tip jetty din partea sudic a Portului Constana a redus mult
intensitatea aciunii valurilor din partea nordic a sectorului Eforie Nord prin procesul de difracie a
valurilor.

3.1.3.7. Zona Eforie Sud este puternic afectat de procesele de alunecare a falezelor, datorit
excesului de ap din stratele superioare. Baza falezei este protejat de plaje i de ziduri de protecie
(seawalls), ceea ce face ca splarea acesteia de ctre valuri s fie destul de redus. Valoarea medie a
retragerii rmului n ultimii 25 ani a fost de 10-20 m, mai mare n partea sudic a barei litorale
Techirghiol (Constantinescu, 2005). Plaja Costineti prezint o eroziune redus n partea nordic i
o depunere uoar n partea sudic, fiind destul de stabil. Eroziunea din partea nordic a aprut ca
rezultat al unor lucrri de denisipare, n vederea folosirii materialului la construirea fundaiilor
caselor din zon. De remarcat este i momentul septembrie 2005 cand au avut loc importante
inundaii n toat zona Dobrogei de Sud, acestea afectnd foarte sever i staiunea Costineti.
Excesul de ap, ca rezultat al ploilor toreniale, a fcut ca nivelul lacului de la Costineti s creasc
spland tot nisipul de pe plaj n mare. Se ateapt, totui, ca plaja sa fie recuperat n mod natural
cu ajutorul valurilor i a curenilor.

3.1.3.8. Sectorul Olimp Venus cuprinde n cea mai mare parte plaje antropice, excepie fcand
bariera natural situat n faa Lacului Tatlageac i Balta Neptun, n partea nordic a zonei mai sus
menionate. Plajele au fost alimentate artificial i protejate cu ajutorul multor diguri de tip jetty i
sparge val construite la finalul anilor 70. Originea acestui nisip utilizat la nnisiparea artificial
nu este cunoscut din cauza lipsei de date, dar se poate presupune c ar fi putut fi adus de pe plajele
naturale din vecintate, fie din Balta Mangalia, fie din Olimp. Datorit proteciei acestor plaje
artificiale cu ajutorul jettis-urilor i a breakwater-urilor, nu a fost semnalat nc eroziune n zon.

3.1.3.9. Sectorul Saturn Mangalia cuprinde cinci plaje protejate de opt jettis-uri i de un dig
sparge val. Expansiunea Portului Mangalia nceput n anii 60, nceput prin tierea unor canale
de navigaie ctre Lacul Mangalia i extinderea digului sparge val din nord, a dus la o retragere a
liniei de rm cu o rat de 0,7 m/an.

3.1.3.10. Zona 2 Mai Vama Veche este reprezentat de un sector cu falez, la Limanu, i dou
sectoare cu plaje nisipoase la 2 Mai i Vama Veche, care includ i poriuni de falez. ntre anii 1979
2002 au fost executate importante lucrri de ntreinere portuar, ceea ce a generat majore
modificri ale liniei rmului. n acest sector retragerea liniei rmului s-a manifestat extrem de
activ. Cauza principal a eroziunii este datorat construirii digurilor de tip jetty din Portul Mangalia.
36

Stadiul actual de evoluie al rmului romnesc scoate n eviden o serie de concluzii
majore, dup cum urmeaz: retragerea generalizat a liniei rmului, ndeosebi n avalul structurilor
hidrotehnice majore (acvatorii portuare), pierderea unor cantiti importante de nisip, dirijate pe
timp de furtun spre larg, care sunt scoase astfel din circuitul costier (proces determinat de creterea
pantei subacvatice pe fondul unui input de sedimente drastic diminuat), intervenia direct antropic
asupra sedimentelor de plaj, care const, n principal, n ndeprtarea n timpul verii a fraciei
organogene grosiere de pe plajele turistice.
innd seama de tendina global de cretere eustatic a nivelului mrii i, implicit, de toate
fenomenele conexe, se impune cu stringen adaptarea strategiilor de protecie costier la noile
condiii hidrodinamice.

3.2. Bacteriobentosul marin

Distribuia bacteriilor bentale este determinat de mai muli factori. Adncimea la care se
gsesc n coloana de sediment influeneaz accesul la nutrieni i oxigen. Densitatea maxim este
atins la interfaa dintre sediment i ap.
Localizarea geografic a sedimentelor este i ea important. n regiunile mai apropiate de
rm, densitatea bacteriobentosului crete datorit cantitii mai mari de compui organici rezultai
prin depunerea resturilor vegetale i animale. Ca factori nefavorabili, apar variaii de salinitate i
temperatur i hidrodinamismul.
De asemena, tipul de sediment influeneaz abundena bacteriilor. Mlurile, mluriile cu
argile, sedimentele detritice sunt foarte bogate n nutrient organici, deci i n microorganisme, spre
deosebire de nisipuri.
Prin metode de numrare direct, densitile microbiotei bentice litorale determinate de
diveri autori n diferite zone ale lumii se ncadreaz n limitele de aproximativ

celule
per

, cu variaii circadiene i sezoniere.

Trebuie menionat faptul c dintre celulele bacteriene vizualizate prin metode de numrare
direct rareori mai mult de 60% sunt vii, iar cele cultivabile pot reprezenta sub 1.
Bacteriile colonizeaz doar o mic parte din suprafaa sedimentelor (sub 1%), prefernd
spaii adpostite (fisuri, crpturi) fa de abraziune, micrile apei i consumatori. Depunerile de
detritus favorizeaz, evident, colonizarea microbian.
n general, numrul procariotelor este maxim n regiunile litorale ( mai ales n cele vecine cu
marile colectiviti urbane), n estuare i scade progresiv n zonele pelagive pe msura ndeprtrii
de rm i odat cu adncimea. Numrul acestora este, de asemenea, crescut n zonele de ridicare a
apelor reci de la adncime ( upwelling zones) i n primii centimetri ai sedimentelor marine unde
pot ajunge la valori ridicate. Acesta scade mult odat cu profunzimea sedimentelor datorit
anaerobiozei i lipsei nutrienilor din aceste zone.
Microorganisemele au un rol esenial n ecosistemele marine avnd un rol cheie n relaiile
trofice din acest tip de ecosisteme, ele reprezint att miroorganismele (microbiota) care descompun
zpadamarin, dar i valorific substana organic dizolvat i n acelai timp iniiaz formarea
epibiozelor.
Bacteriile marine cresc optim la concentraii saline ntre 33-35% i nu se dezvolt sau se
dezvolt slab n absena NaCl, sunt psichotrofe sau psichrofile cu excepia celor din apele tropicale
de suprafa. n funcie de habitat sunt barofobe (la suprafaa mrii), barotolerante sau barofile.
Prezint un pleomorfism accentuat determinat, probabil, de oligotrofie i de efectele presiunilor
hidrostatice cu valori ridicate. Cele mai multe, 80-95 % sunt Gram negative, mobile (75-85%),
aerobe, facultativ anaerobe, iar cele din adncul sedimentelor obligat anaerobe.
Bioremedierea reprezint procesul de reconstrucie ecologic prin care microbiota natural
este utilizat pentru a reduce concentraie, ntr-un anumit mediu, sau toxicitatea unor poluani, prin
biodegradarea lor. Dei prezint anumite limitri, bioremedierea rmne o modalitate extrem de
atractiv de reconstrucie ecologic, datorit costurilor sale sczute.
37

Una din cele mai frecvente i mai periculoase forme de poluare a ecosistemelor marine o
constituie deversarea de produse petroliere. Petrolul i produsele derivate sunt amestecuri complexe
coninnd diferite tipuri de hidrocarburi.: alcani, cicloalcani, alchene, hidrocarburi aromatice i
poliaromatice, asfaltene, hidrocarburi sulfurate. Unele microorganisme posed ci metabolice prin
care astfel de compui pot fi oxidai ( de obicei aerob), de regul cu formarea de acizi grai. n
general, fiecari dintre speciile sau tulpinile de microorganisme hidrocarbon-oxidante este
specializat strict pe un numr restrns de hidrocarburi.
Diveri factori de mediu pot influena modul n care decurge procesul de bioremediere:
starea fizic a poluantului, solubilitatea acestuia, suprafaa disponibil pentru interaciunea ntre
acesta i microorganisme, concentraia sa, eventualele poluri anterioare (care favorizeaz
microbiota hidrocarbon-degradativ), temperatura, nutrienii (azot, fosfor), oxigenul, salinitatea i
presiunea hidrostatic.
Pornind de la cunoaterea principiilor procesului i a factorilor favorizai sau inhibitori,
bioremedierea natural poate fi dirijat de ctre om n sensul unei eficiene superioare, prin
biostimulare (adaosul de nutrieni n mediu) sau bioaugumentare (adaosul de organisme
degradative). S-a demonstrat c biostimularea poate da rezultate foarte bune n diverse medii.
Tehnicile de simulare include suplimentarea surselor de azot i fosfor, oxigenarea artificial
(unde este cazul) i adiia de sufractani.
Sedimentele marine litorale sunt unul dintre mediile cele mai de afectate de poluare cu
hidrocarburi, efectele acesteia difer n funcie de tipul de sediment.
Similare ca efecte cu acesti tip de poluare sunt i contaminrile cu mixturi lipidice de origine
biologic (n special vegetal), din ce n ce mai frecvente odat cu utilizarea pe scar tot mai extins
a acestor uleiuri n producia de biocombustibili i n alte ramuri industriale.
Uleiurile vegetale (mai ales de floarea-soarelui, rapil, in, palmier) reprezint una din cele
mai frecvente surse de poluare n multe state ale lumii. Uleiurile vegetale difer foarte mult n ceea
ce privete compoziia lor i mai ales raportul ntre acizii grai saturai i nesaturai i lungimea
catenelor acestora. Compoziia, alturi de diveri factori de mediu, determin rata de biodegradare a
acestora.

3.3. Strategii de supravieuire ale bacteriilor n mediul natural

Supravieuirea a fost definit ca fiind abilitatea de meninere a viabilitii n consiii
nefavorabile. Ambiguu este in ce anume constituie termenii viabilitatei nefavorabil. Printre
mecanismele de supravieuire ale microorganismelor se numr i formarea sporilor i chisturilor de
ctre microorganisme de sol. Exist microorganisme care nu ndeplinesc niciuna din aceste
activiti, ns reuesc s se izoleze de mediul nconjurtor nefavorabil. Aceste microorganisme
rezist ca celule vegetative, dar i folosesc rezerva de energie foarte ncet ca rezultat al activitii
metabolice sczut.
Exist anumii factori de stres, cum a fi nfometarea, care conduc bacteriile s s micoreze
dimensiunea i activitatea pn cnd acel factor de stres va fi eliminat. (Stevenson, 1978).
Multiplicarea microbial n habitate naturale trebuie s fie presupus c ar alterna cu perioada de
hibernare (dormancy). Acest punc de vedere nu ia n considerare schimbrile de metabolism ca
rspuns la schimbrile de nivel de nutrieni, ci propune doar aceste dou stri (Jannasch, 1966).
Observarea comun fcut asupra habitatelor cu nivele sczute de nutrieni a numrului mare de
bacterii microscopice unde ar fi trebuit s existe un numr sczut de bacterii msurat de metode de
cultur, sugereaz faptul c o proporie mare din populaia microbial sunt ntr-adevr n starea de
hibernare(dormant) sau sunt supuse unei schimbri n metabolism ca rspuns la schimbrii
condiiilor de mediu. A fost demonstrat faptul c populaii naturale de microorganisme din apa de
mare tind s rspund la mbogirea organic a mediului n aproximativ 12 ore.
Abilitatea de a reduce rapid rata metabolic endogen poate fi o condiia primordial pentru
supravieuire dac bacteriile sunt nevoite sa ndure condiii de nfometare. Multe investigaii
38

sugereaz c respiraia redus i metabolismul endogen redus sunt mecanisme ce sporesc
supravieuirea n condiii de nutriie slab. Folosind izolatori, cum ar fi ramuri ale speciei selectate
pentru longevitate folosind tampon fosfat.
Abilitaea de a funciona la o rat metabolic foarte sczut nu aparine doar bacteriilor
marine, ci a fost observat i la bacteriile din sol i este considerat a fi un mecanism de adaptare
prin care bacteriile din sol supravieuiesc n condiii de nutriie extrem de sczut.
Forma latent a diferitelor grupuri de bacterii cum ar fi speciile din genul Myxococcus,
Azotobacter, Streptomyces, Thermoactinomyces, Bacillus i Costridium dezvolt sub condiii de
limitare a nutrienilor. Limitarea carbonului, nitrogenului sau fosforului duc la dezvoltarea sporilor,
ceea ce nu e o condiie de reproducere, ci una de supravieuire. Aceast stare este foarte rezistent la
agenii distructivi cum ar fi temperatura, deshidratarea, pesticide, antibiotice sau colorani.
Coninutul de ap a sporilor este foarte sczut i metabolismul este redus la nul ct timp celulele
rmn viabile, cum este demonstrat de aciunea de germinaie la apriia condiiilor favorabile. Sporii
n stare latent au o ncrcare energetic sczut i o concentraie mic de trifosfai nucleozidici,
coenzima acetil A i nucleotide pirimidinice. Fosfogliceratul i proteine de baz par a fi sursele de
energie primare pentru sinteza ATP, n primele minute ale germinaiei, cnd ATP este sintetizat
rapid nainte ca sinteza macromolecular s poat fi observat. Germinaia sporilor variaz, fiind
influenat de condiiile ce au declanat sporularea i condiiile n forma sporular. Totui, agenii
implicai n iniierea germinrii sunt nutriionali, enzimatici, chimici, i fizici : zaharuri, aminoacizi,
purine, sruri, detergeni, calciu, acid dipicolinic, lizozime. Un stadiu interesant al germinrii este
activarea sporului. Sporii abia formai au nevoie de condiii de stres, spre exemplu radiaii, pH
sczut sau temperaturi ridicate pentru ca iniierea s aib loc, chiar dac acele condiii optime sunt
ndeplinite. Totui, sporii vechi vor germina fr activare. Odat activate, celulele n stare latent
pot genera ATP, sintetiza ARN, i asambla aminoacizi n proteine, iniial cu preul compuilor
stocai. Sporularea este o tranziie ntre celula vegetativ i spor i nu se ntmpl brusc ci ca un
transfer n urma evenimentelor aprute ca rspuns la privarea nutriional. Concomitent cu forma
sporular apar o serie de evenimente ce odat complete, previn ntoarcerea. Punctul fr ntoarcere
reprezint acumularea a sufieciente evenimente succesive de supravieuire. Aceste evenimente bine
stabilite pentru bacteriile ce formeaz spori, pot fi similare stadiului de laten observat la celulele
viabile, singura deosebire real fiind lipsa unei condiii evidente de morfologice diferit.
A fost demonstrat faptul c unele specii de bacterii autohtone mediului marin pot suferi o
diviziune reductiv ca reacie la lipsa carbonului i nitrogenului, astfel producnd o populaie de
celule proporional reduse n dimensiune i mrite ca volum. Consecina modulrii respiraiei
endogene este o rat sczut a metabolismului i iniierea degradrii macromoeculare.
n condiii de lips de nutrieni, energia necesar ntreinerii trebuie s fie furnizat de
substraturile endogene. Din acest motiv, o rat sczut a metabolismului endogen poate ajuta la
prelungirea vieii unui organism n condiii precare. Bacteriile care au cea mai mare capacitate din
punct de vedere al longevitii s-au dovedit a fi de dimensiuni reduse n comparaie cu ramurile
dezvoltate n laborator i cu rate ale metabolismului considerabil mai sczute. Aceast caracteristic
de metabolism sczut este mprtit cu sporii ce manifest o bun capacitate de supravieuire i au
o rat a metabolismului abia detectabil. Ipoteza este c aceste rspunsuri la condiii precare de
via reprezint strategii de supravieuire a bacteriilor n mediul marin i c abilitatea de a manifesta
asemenea reacii aduc bacteriilor un avantaj selectiv.
De vreme ce substanele dizolvate organice sunt prezente n ocean n concentraii de numai
cteva micrograme de carbon per litru, celule mici i rotunde pot nsemna o stare morfologic i
fiziologic normal n acest mediu. Anumite specii par s dein informaie genetic necesar
pentru a face fa la perioade prelungite de condiii de nutriie redus, tipic celei ntlnite la
bacteriile din ocean(Carlucci, 1974).
Un fenomen de rotunjire precum i o scdere concomitent n volum la expunerea iniial
la condiii lipsite de compui nutritivi. Fenomenul de rotunjire la specia Vibrio a fost
39

remarcat prin faptul c celule mici au fost observate adaptndu-se la condiii precare impuse de
mediul natural.( Guelin, 1979; Felter, 1975)
Schimbrile morfologice ce au loc n interiorul celulei atunci cnd unele celule se
rotunjesc i scad n volum au fost raportate ca fiind rspunsuri fiziologice tipice ale unor bacterii
la expunerea la condiii de absen a nutrienilor. a afirmat c bacteriile mici de form oval,
observate n general n sisteme naturale prin microscopie, reprezint forme latente n dezvoltarea
trzie, ca rspuns la condiii fizice sau chimice ale mediului. Dei este o explicaie acceptabil,
aceasta poate fi extins, si se poate afirma c este o form latent , asemenea sporulrii pentru
bacterii ce nu formeaza spori(Stevenson, 1978).
n largul oceanului mediul este n permanen oligotrof, cu perioade foarte scurte de aport de
nutrieni, astfel celulele bacteriene se vor comporta conform timpului petrecut ntr-un astfel de
mediu. n timp ce celulele cu expunere recent la un anumit tip de mediu pot avea o reacie mai
conservativ la condiii de absen a nutrienilor, acelea cu expunere ndelungat la acelai condiii
vor aborda strategii mai extreme pentru supravieuire. Exist multe mecanisme ce permit
supravieuirea n ,sistemele naturale instabile, i totui fluctuaii ale numrului de bacterii n
sistemele acvatice naturale asociate cu distribuia geografic i sezonier arat tipare consecvente
ce coreleaz cu parametrii fizici i chimici. Aceste tipare sugereaz c bacteriile exist n form
latent n anumite perioade ale anului. Acestea ns rmn viabile i atunci cnd condiiile sunt
oportune, bacteriile se ntorc la forma n care se pot reproduce.
40


41

CAPITOL IV. Evaluarea structural i funcional a microbiotei

4.1. Prelevarea probelor i montarea experimentului conceptul de microcosmos

Am prelevat proba natural din zona Portul Tomis. Ulterior, proba din Bodengreifer a fost
transferat n sticl de polietilen (PET) considerat de noi ca microcosmos ( am adus-o n laborator
timp de o sptmn). Apoi experimentele vizate de noi au urmrit fracia bacterian de la interfa
sediment-ap).
Mostre de ap au fost colectate n Martie 2014 din Marea Neagr (la o adncime de 0.5 m;
portul Tomis, 44
o
10

44

N; 28
o
39

32

E) ce au fost folosite pentru ansamblul de microcosmos

realizat n sticle transparente de polietilen. n experimentul nostru, microcosmosul format cu
ajutorul unui volum de 300mL de ap de mare natural i sedimente au fost meninute la o
temperatur de 18
o
C i iluminat artificial timp de o lun (din Martie pn n Aprilie).


Fig.4.1: Fig.4.2:

Au fost realizate dou tipuri de microcosmosuri: Au fost realizate trei tipuri de
microcosmosuri: eantion cu ap din Marea Neagr ce va servi drept control (M3); control
suplimentat cu benzin (0.5% v/w) (M2) i eantionul de control suplimentat cu benzin (0.5%
v/w) i nutrieni (nitrat de amoniu) (M1). A fost folosit i un filtru Milipore de 0.45 m.


Fig.4.3: Fig.4.4:

Astfel vom avea 2 microcosmosuri din care vor fi 4 recoltri (subprobe) la 1,14,30,50 zile.
n ultimii doi ani, s-a experimentat cu mictocosmosuri de mrimi intermediare, ce se
intenioneaz a tine locul unui ecosistem marin de coast. Microcosmosurile conin comuniti
42

cuplate planctonice i bentonice, i au fost administrate i eantionate intensiv i continuu pentru
mai bine de un an (C.A. Oviatt, H. Walker and M.E.Pildon, 1989)
n studiul ntregilor ecosisteme, nu a fost nc posibil realizarea unor msurtori singulare
sau alte metode acceptate pentru a compara condiiile i strile ecosistemelor. Fiecare ecosistem
este un complex de mai multe variabile i procese ce se schimb n timp.
Abordarea cu microcosmosuri este relativ nou, i nu au fost dezvoltate criterii adecvate ce
pot fi utilizate pentru a evalua starea acestor ecosisteme nchise. Exist tendina de a se cuta tipare
similare n ciclul sezonier al diferitelor variabile pentru a considera posibile similitudini holistice,
dar nu se cunoate o modalitate exact de a defini aceste similariti.
n primele experimente cu microcosmosuri a fost folosit analiza multivariat pentru a
studia cum un set de variabile cu o interaciune complex ntre ele poate fi redus la un numr mai
mic de dimensiuni expunnd diferenele n comportamentul microcosmosurilor, i diferene ntre
comportamentele microcosmosurilor i cel al sistemului natural (Oviat et all, 1977, Oviatt et al.,
1979, Pilson et. Al., 1979).
Valoarea experimental a microcosmosurilor a fost documentat (Whittaker, 1961; Gorden,
1969, Wilhm, 1970; /ferens&Beyers,k 1972; Kersting, 1975, Cooke, 1977, Reed, 1978;
Bryfogle&McDiffett, 1979; Giddings&Eddlemon, 1979).
Microcosmosurile, n general, nu modeleaz ecosisteme specifice dar mai degrab simuleaz sub
condiii de laborator anumite proprieti fundamentale ale sistemului natural ca i metabolsim de
comunitate, interaciuni la niveluri trofice, succesiune de comunitate, mineralizare nutritiv i
reciclare i stabilitate. Aplicaiile abordrii cu microcosmosuri la sisteme acvatice nu numai ajut la
nelegerea mai profund a acestor procese ecologice dar n acelai timp faciliteaz manipularea
experimental ceea ce nu este controlat cu uurin n sistemul natural. n plus, este studiat un
sistem ecologic, cu toate c este artificial i mai complex dect echivalentul natural.
n prezentul studiu, a fost fcut o ncercare de a realiza un microcosmos acvatic autonom?
(self-maintaining) Dinamica populaiei i interaciunile la nivelul trofic descriu caracterul biologic
al sistemului. Comportamentele nutriionale au fost monitorizate cu ajutorul unor analize chimica
standard i tehnici de urmrire radio (radiotracer).

Proiectul microcosmosului
Microcosmosul (figura 4.1) este modelat dup proiectul multicomportamental i de
dimensiuni mari al lui Ringelberg&Kersting (1978). Trei nivele trofice sunt separate fizic dar totui
conectate printr-un flux continuu prin ntubare Tygon (7.9 mm). Este meninut un debit de 350 ml

. Ratele de diluare corespunztoare pentru uniti erbivore, alge i de descompunere sunt 22.4
zile, 0.9 zile i 5.8 zile.


Fig.4.5. Microcosmosul: A=rezervorul autotrof; H= rezervorul erbivor; D= rezervorul de
descompunere; P= pomp;
43


Unitatea de alge (190 litri) este amestecat de o pomp centrifug ce recircul o parte din
fluxul de fund. Turbulena de suprafa este minim. Unitile erbivore i de descompunere baloane
de sticl de ap din polipropilen inversate. O plas nitex din rezervorul de erbivore (7.6 l) previne
ca zooplanctonul s intre n unitatea de descompunere. Rezervorul de descompunere (4.39 l) are un
strat de 18 cm de pietri nontoxic ce se comport ca un substrat bacterian 17
o
C sub o photocycle de
15:9 L:D. Dou lumini albe fluorescente ( de 15 i 20 watt), la o distan de 24 cm, ofer unitii de
alge o iluminaie de

la suprafaa apei. Unitatea erbivor primete o iluminare n mod

indirect de 6

. Unitatea de descompunere i tubul de conexiune sunt inute la ntuneric

total.

Iniierea microcosmosului
Microcosmosul a fost umplut cu un mediu definit chimic (Rees, 1979), o variant modificat
a mediului Woods Hole ( Nichols, 1973), cu un pH ajustat de 7.2. Nu au fost adugate vitamine sau
un buffer Tris( Jassby et al., 1977). Concentraiile mediului de nitrogen i fosfor au fost de 19 i
respectiv
Bacteriile au putut coloniza substratul de pietri de descompunere pentru dou sptmni
naintea adugrii de alge i zooplankton (Spott, 1979). Nu a fost fcut nicio ncercare de a
identifica aceste bacterii.

Metoda microcosmosului
Microcosmosul acvatic din acest studiu modeleaz prototipul de dimensiuni mari al lui
Ringelberg&Kersting (1978). Natura multicomportamental a ambelor sisteme faliciteaz starea de
auto-ntreinere prelungit. Sunt asigurate mineralizare suficient i reciclarea nutritiv i, n acelai
timp, este prevenit hrnirea excesiv a erbivorelor. Se presupune c mineralizarea se produce
predominant n rezervorul de descompunere, la nivelul substratului de pietri n particular., aa cum
a fost evideniat de nivelurile mai sczute de oxigen dizolvat i pH fa de nivelurile din celelalte
dou uniti, regenerarea evident a amoniacului i ortofosfat, i ocaziunal de niveluri ridicate de
alcalinitate, concentraia carbonului inorganic dizolvat fiind un indicator al activitii heterotrofice
(Bruning et. al., 1978). Filtrul pune la dispoziie o suprafa de dimensiuni mari, important,
disponibil pentru ataarea bacteriilor, un factor important pentru nutriie ( Spotte, 1979). Un debit
nedirecional extras de sub substrat permite recilarea nutritiv. Hrnirea excesiv a erbivorelor este
prevenit prin separarea nivelurilor trofice.
Un microcosmos delimiteaz spaial o poriune reprezentativ a unui ntreg ecosistem. n
interiorul granielor fizice, chimice i biologice ale acestui mictrosistem, proceduri interente
identificabile se produc n ecosistemul natural. Mineralizarea, reciclarea nutritiv, metabolismul
comunitii i succesiunea, interaciunea ntre nivelele trofice, i transferul de energie sunt cteva
din proprietile care susin microcosmosul ca o subunitate ecologic viabil ce este mai maleabil
din punct de vedere al controlului i manipulrii experimentale. nainte ca aceste microcosmosuri s
poat deveni cobaii (Cooke, 1977) cercetrilor acvatice, reprezentarea solid a ecosistemului
natural trebuie demonstrat. n prezenta investigaie, n ciuda ctorva neajunsuri, tiparele biologice
i chimice caracteristice gsite n natur au fost evidente, susinnd i mai departe cercetarea
potenialului microcosmosurilor acvatice.
Odum H.T. este recunoscut ca pionier n utilizarea ecosistemelor mici, nchise i deschise de
predare n clas. Aceste mici ecosisteme au fost adesea construite din acvarii sau sticle i au fost
denumite, microcosmosuri. Studiile lui Odum pe diferite microcosmosuri influenat proiectarea
biosferei (Beyers, 1964). Microcosmosul i mesocosmosul sunt acvarii utilizate ca instrumente care
s permit studiul experimental al ecosistemelor acvatice. Cercetrile din ultimele decenii au
demonstrat capacitatea de a efectua experimente pe modele funcionale ecosistemului acvatic ntr-
un laborator. Aceste microcosmosuri pot avea capacitatea de civa litri, cnd sunt vizate studii
44

asupra microorganismelor, pn la acvarii de capaciti mari daca se fac studii asupra unor
comuniti de organisme macroscopice (peti, diferite nevertebrate, etc).
Din momentul cnd a fost descoperit rolul procariotelor heterotrofe n circuitul biogeochimic
din ecosistemele acvatice i capacitatea lor de supravieuire ntr-un mediu extrem, au fost propuse
diferite protocoale pentru a experimenta statusul lor fiziologic i efectele la variabilele de mediu.
Capacitatea microorganismelor de a degrada compui xenobiotici (sintetizai industrial) la compui
ce nu prezint pericol biologic, se ncearc a fi exploatat ct mai eficient i constituie obiectul unor
investigaii tiinifice din ce n ce mai aprofundate (Head & all., 2006).
n experimentele noastre am utilizat microcosmosuri ca model experimental (ex situ) pentru
standardizarea unor metode de izolare i cuantificare a bacterioplanctonului marin (cuantificarea /
enumerarea bacteriilor din mediul marin natural i contaminat cu hidrocarburi prin metode
independente de cretere i multiplicare celular). Prin utilizarea acestor modele experimentale
avem n vedere i experimente de simulare n laborator privind atenuarea gradului de poluare
utiliznd microorganisme hidrocarbon-tolerante/oxidante (Medina-Bellver & all., 2005).
Modelul vasului propus de Williams & Lenton (2007) simuleaz un vas ce conine un lichid
neutru (matrice), n care este suspendat o populaie microbian. Compoziia mediului lichid
determin mediul microorganismelor. Anumite substane chimice prezente n mediu sunt numite
nutrieni ce pot fi consumai ca hran i convertii n biomas, n timp ce alte elemente nu sunt
consumate i formeaz mediul abiotic. Mediul se presupune a avea proprieti, precum temperatura,
pH, salinitate, etc, care pot afecta sau pot fi afectate de activitatea microbian. Elementele
neconsumate i proprietile fizice ale mediului din vas, sunt denumite n continuare factori
abiotici, pentru a se distinge de nutrieni. Mediul lichid din fiecare vas se presupune c este bine
omogenizat, astfel nct n absena unei perturbri, compoziia mediului din fiecare vas va ajunge la
o stare de echilibru. Microorganismele influeneaz nivelul factorilor abiotici, cum ar fi, prin
aciunea produilor lor metabolici proporional cu cantitatea de biomas format.
Prin acestea rezumm importana bioremedierii n ecologia microbian care a permis
identificarea anumitor populaii microbiene eficiente n degradarea hidrocarburilor n mediile
naturale. Pentru a cultiva microorganisme oligotrofe (care exist n mediul natural), Button & all.
(1993) au folosit ap de mare natural (cu concentraie foarte mic de carbon organic) ca mediu,
pentru a estima numrul microorganismelor (Gregori & all., 2003).
Numeroase studii care vizeaz procesul de biodegradare a hidrocarburilor din mediul
acvatic, folosesc ca model experimental microcosmosul. De exemplu, Sayler & all. (1983) au
utilizat microcosmosuri n acvarii de sticl care conin 13-15 cm sediment i cca. 57 litri ap; aceste
acvarii au fost ulterior meninute la temperatura de 15
o
C pstrnd un ciclu diurnal de lumin (12
ore). Alte studii care au vizat prelevarea de probe din mediu cu sistem maree, au fost concepute
microcosmosuri cu o curgere a apei la fiecare 6 ore, sistemul de scurgere a apei fiind situat la1 m de
la suprafaa apei(figura 4.2).

Fig.4.6. Tip de microcosmos folosit pentru sisteme cu flux-reflux (Oviatt & all. 1980 )

45

Alt experiment, dezvoltat de Teira & all. (2007) a constat n utilizarea a 10 microcosmosuri
constnd n sticle PET de 5 litri, cu o deschidere larg, fiind inute la temperatura camerei n care n
opt au fost adugate hidrocarburi policiclice aromatice iar dou meninute ca martor. Experimente
n care au fost utilizate astfel de microcosmosuri, au fost dezvoltate de numeroi autori (Cragg and
Fry, 1984; Elstad, 1986; Sanchez & all., 2006).
n diferite experimente au fost utilizate ecosisteme artificiale pentru a crea comuniti
microbiene capabile de a ndeprta poluani precum 3-cloroanilina (Swenson & all., 2000). Recent,
s-a argumentat teoretic faptul c un caz cu selecie multipl poate avea un efect semnificativ n
natur (Goodnight, 2005). Prezena n funcionalitatea unui ecosistem a unor fenomene precum
dependena metabolic i circuitul nutrienilor, nseamn c selecia ecosistemului se bazeaz pe
diferene calitative ale grupului clasic de selecie. Mediul reprezint parte integrant a unui
ecosistem dinamic. Williams & Lenton (2007) au prezentat un model experimental de selecie n
cazul ecosistemelor artificiale de simulare a unui microcosmos bacterian experimentat n containere
izolate. Ecosistemele selectate permit evoluia interaciunii comunitilor microbiene cu mediul lor
abiotic, cu selecia asupra proprietilor sistemului biotic-abiotic. Modelul permite evidenierea
adaptrii individuale i presiunea seleciei naturale generat de interaciunile ecologice, pentru a fi
incluse alturi de selecia ecosistemului impus artificial asupra comunitilor din mediu abiotic.
Aceste microcosmosuri ne ajut foarte mult n dezvoltarea unor protocoale de lucru care vizeaz
punerea n eviden a anumitor dinamici a celulelor bacteriene n diferite condiii de mediu, pentru a
deslui modul cum reacioneaz aceast component important la factorii perturbatori care pot
interveni n mediul natural, referindu-m la poluarea cu diferite hidrocarburi n mediul marin, de
exemplu.
Numrul total de celule (AO; DAPI). Numrul total de bacterii din eantioanele naturale a
fost calculat folosind coloraia acridine orange (Luna et al., 2002; Lunau et al., 2005; Manini &
Danovaro, 2006). Pentru fiecare eantion procesat concentraia de fluorocrom a fost standardizat
(spre exemplu, pentru coloraia AO au fost folositi ntre 20 i 40 l) n func n funcie de cantitatea
de ap ce a fost filtrat.
Pentru AODC (numrul direct de celule) au fost colorate subeantioane timp de 5 minute i
au fost filtrate cu ajutorul unor filtre Milipore de 0.22m. Filtrele de colorare au fost splate cu 10
ml de ap distilat .
Este necesar distingerea celulelor din punct de vedere al morfologiei deoarece fluorocromul
este specific becteriilor.
Coloraia acridine orange nu numai c interacioneaz cu ADN-ul i ARN-ul ci se i unete
cu alte componente celulare. Atunci cnd coloraia AO se unete cu ADN, acesta este foarte similar
din punct de vedere spectral cu fluoresceina, cu o excitaie maxim la 502 nm i o emisie maxim la
525 nm (verde). Atunci cnd se asimileaz cu RNA, excitaia maxim se deplaseaz la 460 nm
(albastru) i emisia maxim se deplaseaz la 650 nm (rou).
Numrul de celule moarte (PI+). A fost folosit coloraia cu iodura de propidiu (eantion de 5
l/ml) pentru colorarea celulelor moarte n microcosmosul aflat n discuie. PI se impregneaz n
membran i n general este exclus din celulele vii. Atunci cnd este excitat cu o lumin de
lungime de und de 488nm, acesasta capt culoarea roie i poate fi detectat cu un filtru trece
band de 562-588 nm. Eantioanele au fost filtrate de un filtru Milipore cu porii de diminesiuni de
0,22m i vizualizate la un microscop epifluorescent (N-400FL, lamp Hg 100 W, 450-480 nm).
Numrul de celule ncapsulate (AB+). O fraciune important a nivelului de polizaharide
depistat n nveliul celuar al bacteriilor este mparit n bacterii marine libere i bacterii asociate
particulelor (Heissenberger et al., 1996) i reprezint bacteriile active (Stoderegger & Herndl,
2002). Alicotele recoltate din microcosmosuri au fost tratate cu coloraia aniline blue (20 g/ml
concentraie final) timp de 5 minute i filtrate cu filtru Milipore de 0,22m.
Pentru toate fluorocromurile folosite n determinarea variatelor fraciuni celulare a fost
realizat un control la fiecare 20 de sectoare, dup care am determinat numrul de bacterii prin
procesare electronic a imaginilor fotografice ale fiecrui sector.
46

Filtrul Milipore a fost poziionat la scurt timp pe suportul microscopului. A fost folosit o
cantitate mic de ulei de imersiune a fost plasat deasupra filtrului.

4.2. Metode microscopice utilizate pentru distingerea fraciilor celulare vii-moarte

Microbii sunt organisme importante ce ndeplinesc procesul de transformare din materie
organic n soluri sau medii acvatice. Ei reprezint punctul central al analizei n domeniile
respiraiei solului, mineralizrii, emisiilor de gaze, sau veriga trofic foarte important numit i
bulca microbian. Analizele asupra activitii microbiene au devenit proceduri standard n diferite
programe de monitorizare a mediului n agricultur i biotehnologie, tratare de deeuri,
monitorizarea polurii sau proiecte de remediere. Acestea adesea includ analize detaliate asupra
comunitilor microbiene, concentrandu-se asupra diferenelor dintre organisme individuale, forme
de cretere, clase de mrimi, semnturi metabolice sau alte proprieti ecologice speifice ce sunt
legate de parametrii ce descriu activitatea microbian, sntatea solului sau alte caracteristici proprii
ale solului. n acest context, numrul i biomasa microorganismelor (bacterii, drojdii, fungi,
cianobacterii, alge, protozoare), precum i descrierea i monitorizarea microorganismelor sunt
cerine primordiale n nelegerea proceselor microbiologice, astfel ele fiind n misiunea de
cercetare ecologic.
S-a pus mult accent pe determinarea diferenelor ntre celulele active i cele n stare latent,
sau n distingerea celulelor vii de cele moarte. Unele din aceste abordri presupun determinarea
fercvenei de diviziune (fdc), determinarea creterii active, determinarea celulelor ce respir cu
ajutorul celulelor ce reduc tetrazoliu, monitorizarea asimilrii de substane etichetate

de ctre
micro-autoradiografie, parial cu ajutorul tehnicilor epifluorescente, sau determinarea ratelor de
cretere i produciilor de biomas prin msurarea micro-coloniilor.
Vizualizarea microorganismelor n general necesit proceduri de colorare. Contrastul
celulelor bacteriene n condiii de iluminat normale este prea sczut pentru a le distinge de un fundal
luminat, procedeu i mai dificil n cazul apei. Exist o serie ntreag de colorani i modaliti de
colorare. Aceast afirmaie este adevrat n special n cazul coloranilor fluoresceni a cror
folosin a crescut enorm de la introducerea sondelor moleculare n ecologia microbian. Tehnicile
din ziua de azi prefer coloranii fluoresceni deoarece prezint o sensibilitate mai mare, spre
exemplu DAPI sau acridine orange (AO). Dei aceste tehnici sunt dedicate deteciei bacteriilor, au
existat mai multe ncercri de a se folosi i asupra fungilor sau drojdiilor.

4.2.1. Coloraia acridine orange (numr total)
Acridine Orange manifest o afinitate crescut pentru organite acide. Poate fi folosit n
colorarea eucariotelor i procariotelor deopotriv. AO nu numai c se intercaleaz ntre ADN i
ARN dar i se unete cu ali consitueni celulari, ca de exemplu detritus i argil. Colorantul ia
culoarea verde fluorescent atunci cnd e fixat n ADN. AO este un colorant cationic, ce se absoarbe
n mod normal la argil ncrcat negativ, compui din clei vegetal, polizaharide acide,
glicozaminoglicani (mucopolizaharide), lipozomi sau fosfolipide ncrcate negativ. Astfel, un factor
important pentru fluorescen pare a fi valoarea pH-ului. Acesta poate face diferena ntre celulele
vii i cele moarte. Aceast analogie a fost atribuit diferitelor culori fluorescente prezente (verde i
rou) n momentul n care se fixeaz n ADN i ARN. A fost demonstrat faptul c celulele n faz
latent prezint fluorescen verde, iar cele active prezint fluorescen roie. Mai mult, a fost
posibil distincia ntre sporii viabili i cei ce nu mai sunt viabili i s-a efectuat monitorizarea
activitilor fiziologice.
AO i DAPI sunt cei mai folosii colorani pentru calcularea numrului total de bacterii n
eantioane de sol sau ap. Numrarea microorganismelor este mai dificil n sol dect n ap din
cauza prezenei particulelor de sol i alt colorare puternic de fond nespecific. Folosind
microscopul confocal cu laser i analiza automat a imaginii, au fost comparate diferite metode. S-
au observat diferene majore n folosirea colorantului AO, FITC i DTAF. Au fost raportate colorri
47

de fond puternice cu AO a unui sol ce avea o concentraie mai mare de argil i lut dect nisip. De
asemenea, s-a constatat o colorare de fond puternic folosind i DAPI, iodura de propidiu, iodura de
etidiu, fapt ce se poate datora structurii lor cationice. Coloranii ationici FITC i DTAF au afiat o
colorare de fond mult mai puin perceptibil i imagini cu un contrast bun. DTAF are o puritate mai
ridicat fa de FITC.
Numrul total de bacterii din eantioanele naturale au fost determinate folosind acridine
orange orange (Luna et al., 2002; Lunau et al., 2005; Manini & Danovaro, 2006). Pentru fiecare
eantion procesat am standardizat cu concentraie de fluorocrom (de exemplu, pentru vopseaua AO
a fost folosit ntre 20 i 40 l) dependent de eantionul filtrat.
Pentru AO (concentraiile finale de vopsea fiind de 5 g/ml) au fost colorate subeantioane
(reprezentnd cele patru recoltri) tip de 5 minute i apoi au fost diltrate pe Milipore negru cu
mrimea porilor de 0.22m. Filtrele au fost apoi curate cu 10 ml de ap distilat.
Este necesar diferenierea celulelor din punct de vedere al morfologiei pentru c niciun
fluorocrom nu este cu adevrat specific bacteriilor.
Colorantul AO nu numai c se mbin cu AND-ul i ARN-ul, ci i cu celelalte componente
celulare. Atunci cnd AO se unete cu AND-ul, este foarte similar fluoresceinei, cu o excitaie
maxim la 502 nm i o emisie maxim la 525 nm (verde). Atunci cnd se asociaz cu ARN-ul,
excitaia maxim se schimb la 460 nm (albastru) iar emisia maxim la 650 nm (rou).

Probe M1 (densitatea celulelor /mL) M2
1 zi 5,65 x 10
3
4,98 x 10
3
7 zile 7,1 x 10
3
5,42 x 10
3

14 zile 7,56 x 10
3
6,32 x 10
3

20 zile 9,98 x 10
3
6,15 x 10
3


Tabel 4.1 Numrul total de celule



Fig 4.7 Evoluia n timp a microbiotei la nivelul sedimentelor ntre martor i proba poluat

Msurtorile s-au efectuat utiliznd o gril ocular calibrat anterior tipului de microscop
(suprafaa 0,01mm
2
), iar imaginile digitate au fost supuse analizei automate pentru numrarea
bacteriilor (cu programul CellC).
0
2
4
6
8
10
12
1 zi 7 zile 14 zile 20 zile
M1
M2
48



Fig.4.8:


Fig. 4.9. Calibrarea grilei ocularului: latura ptratului mic este de 10 m

T=

unde:
- T- numr bacterii per unitate de volum;
- N- numr bacterii per aria graticulei;
- A
f
- aria de filtrare;
- V-volumul probei filtrate;
- aria graticulei;

Etalonarea ptratului grilei de msurare s-a fcut astfel:
10 x10 : 1000m x1000m / 10 x 20: 480 m x480m
10 x 40: 260 m x 260 m
9 x 100: 100m x 100m- adic 10.000 m
2

10 x 100: 100m x 100m- adic 10.000 m
2

A B
Fig.4.10. Imagine din camp microscopic A-martor; B- proba poluat (coloraie AO)
49

Se observ un numr mai mare de celule n martor comparativ cu proba poluat deoarece
impactul poluantului la nivel de sediment este mult mai mare afectnd microbiota prin reducerea
densitii celulare. Acest aspect reiese i din calculul creterii procentuale descris la subpunctul 4.5.

4.2.2. Coloraia aniline blue (celule cu capsul)
Bacterioplanctonul este principalul mediator n transformarea carbonului organic n biomas
i dioxid de carbon(Azam & Cho 1987) . Astfel, bacterioplanctonul joac un rol principal n lanul
trofic din ocean, direcionnd o parte considerabil a produciei de fitoplancton (planctonul vegetal)
n veriga trofic microbian. Abundena si productivitatea bacterioplanctonului rmn relativ
constante pentru o raz ntins a sistemelor acvatice s (Cole et al. 1988, Ducklow & Carlson 1992).
Aparent, respiraia bacterian este i mai constant fa de producie sau abunden, ducnd la o
eficien n creterea numrului de bacterii de la sisteme oligotrofice la eutrofices (Del Giorgio &
Cole 1998).
Bacteriile cu o structur intracelular intact, considerate aadar bacterii potenial active,
sunt nvelite ntr-un un strat capsulat, n vreme ce marea majoritate a celulelor cu o structur
intracelular deteriorat nu prezint o astfel de capsul e (Heissenberger et al. 1996). Astfel, se
presupune imediat c bacteriile cu metabolism activ prezint un strat de ncapsulare, n vreme ce
bacteriile inactive se elibereaz rapid de capsul. Bacteriile active i rennoiesc n permanen
nveliul capsular i elibereaz o fraciune destul de mare din stratuul polizaharidic n apa ce
constituie mediul nconjurtor. Aceste polizaharide derivate din capsul ce sunt eliberate n ap s-au
dovedit a fi foarte rezistente la utilizarea ulterioar de ctre bacterii (Stoderegger & Herndl 1998).
Metoda de colorare ce este folosit n cazul celulelor cu capsul este de regul o metod de
combinare a dou tehnici de colorare, unde celula bacterian este colorat cu un colorant bazic i
fondul cu un colorant acid, lsnd capsula necolorat. Aceast metod de colorare negativ a
permis distingerea ntre bacteriile cu capsul i cele fr capsul n cazul n care dimensiunile
capsulei depesc 150nm n diametru. Capsulele sunt clar vizibile ca o aur alb (necolorat,
transparent), n jurul celulei bacteriene.
Nu a fost gsit nicio legtur ntre dimensiunea bacteriilor i prezena capsulei n cazul
bacterioplanctonului natural. Chiar i cele mai mici bacterii sunt capabile s dezvolte o capsul
suficient de mare nct s poat fi vzut folosind microscopie optic.
n continuare vom trece datele obinute de noi n probele recoltate pe colorantul AB. Apoi
interpretarea datelor.

4.2.3. Coloraia cu iodur de propidiu (celule permeabilizate)
Iodura de propidiu este un colorant rou fluorescent ce coloreaz ADN-ul att la celule
procariote ct i la eucariote. Are o eficien crescut i este cunoscut drept un indicator al celulelor
moarte. Datorit puterii sale de a se fixa de ADN, este folosit de asemenea pentru determinarea
concentraiilor de ADN din sol. Acestea nu se fixeaz de pereii celulelor sau de materiale inerte,
astfel putnd fi folosit la colorarea n materiale complexe cum ar fi solurile cu o concentraie
ridicat de argil sau nmol. Membranele au permeabilitate sczut la iodura de propidiu.
Detecia celulelor i obinerea informaiei cu privire la activitatea acestora sau la
proprietile fiziologice sau taxonomice au atins o importan destul de major n ecologia
microbian. Dezvoltarea echipamentelor cu ajutorul crora a devenit posibil diferenierea celulelor
vii de cele moarte, obinerea caracteristicilor structurii peretelui sau alte proprieti, a permis
mbuntirea numrului de instrumente capabile n ecologia microbian. Detecia simultan a
celulelor moarte i vii a devenit posibil prin folosirea coloranilor ce se bazeaz pe diferenele ntre
permeabilitatea pereilor celulelor a substanelor organice. Colorantul nucleic verde SYTOX trece
de pereii celulari ai celulelor Gram-pozitive i Gram-negative, dar nu poate penetra pereii
celulelor vii. Excitaia poate fi efectuat de lumin la 470-490 nm; bacteriile moarte capt o
culoare verde aprins. Coloranii SYTOX oranj i SYTOX albastru pot genera alte culori.
50

Celulele vii sunt de asemenea impermeabile la colorani pe baz de cianuri dimer sau
monomer. Acei colorani au aplicaii pentru cianobacterii, bacterii i chiar virusuri. Sunt folosii de
exemplu pentru colorarea Gram a bacteriilor, datorit penetrrii uoare n majoritatea celulelor, dar
concentraia final din interiorul celulei depinde de capacitatea lor de asimilare. Acestea se fixeaz
de asemenea i de acizii nucleici.
Am folosit iodura de propidiu ( eantioane de 3,3 i respectiv 5 l/ml) pentru coloranmrea de
celule moarte din microcosmosul nostru. Iodura de propidiu este nu poate ptrunde de membran i
va fi n general exclus din celulele vii. Cnd este excitat de o lumin de lungime de und de 488
nm, devine fluorescent de culoare roie i poate fi detectat cu un filtru trece-band de 562-588
nm. Eantioanele au fost filtrate de un filtru Milipore cu pori de mrime 0,22m i vizualizate la un
microscop epifluorescent (N-400FL, lamp Hg 100 W, tip de filtru albastru, 450-480 nm).
Cu privire la numrul de celule moarte obinute dup colorarea cu iodur de propidiu (figura 4.6) , a
fost obinut un numr relativ sczut de celule moarte raportate la numrul total.
Celulele colorate cu iodura de propidiu s-au distins de celelalte categorii celulare prin
fluorescena roie, care ptrunde doar n celulele a cror membran plasmatic i-a pierdut,
permeabilitatea selectiv (Manini i Danovaro, 2006; Falcioni i colab., 2008).


Fig.4.11. Numrul total de celule moarte pentru ambele eantioane
probe M1 (densitatea celulelor /mL) M2
1 zi 0,54 x 10
2
0,59 x 10
2
7 zile 0,50 x 10
2
0,47 x 10
2

14 0,52 x 10
2
0,68 x 10
2

20 0,61 x 10
2
0,76 x 10
2


Tabel 4.2. Numrul de celule permeabilizate

Numrul total de celule moarte sunt 0.0061 % pentru M1 i respectiv 0.012 % pentru M2
din numrul total de celule.
A B
Fig. 4.12. Aspecte microscopice A- martor, B- proba poluat (coloraie ioduca de propidiu)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
M1 M2
n
r
.

c
e
l
l

/
m
l


51

4.3. Determinarea numrului de microorganisme folosind softul CellC

Analiza automat a imaginii pentru epifluorescen
Calculul numrului de celule a fost realizat folosind dou softuri de imagine digital pentru
masurarea dimensiunilor unei celule ( CellC i Image J soft). n literatur se menioneaz c este
necesar cuantificarea a cel puin 400-600 de celule pentru fiecare filtru; acest numr de celule a
fost transformat n celule/mL folosind ecuaia clasic. (Fry, 1990; Sherr et al., 2001), folosind un
dispozitiv dreptunghiular calibrat (calibrated square eye piece), (suprafa 0.01mm
2
). Calibrarea la
scara fost realizat inndu-se cont de dimensiunile dispozitivului/obiectivului i de cantitatea de
ap filtrat, necesar pentru identificarea zonelor cheie luate n considerare fa de aria total a
filtrului (Millipore, filtru de 0.22m ). n final se va face corecia pentru fiecare diluare a
eantionului.
Abordarea automat nu numai c va elimina necesitatea unei analize foarte lungi i
obositoare ci i va permite biologitilor s msoare caracteristicile celulare ce nu reueau cu
tehnicile standard (Sellinummi, 2008).
Microfotografiile realizate cu ajutorul camerei digitale Sony DSC-P200 (Cyber-shot, 7,2
megapixeli) au fost folosite pentru analiza automat a imaginilor i pentru calculul numrului de
celule heterotrofice (Selinummi et al., 2005), CellC fiind un software de analiz a imaginilor uor
de utilizat ce permite analiza multiplelor imagini digitale microscopice.
(http://www.cs.tut.fi/sgn/csb/cellc/).
Figura 4.8 dezvluie modalitatea de calcul automat al numrului de celule cu ajutoarul
software-ului CellC folosind imaginile digitale microscopice obinute expreimental n studiul
microcosmosurilor.
Programul CellC poate realiza totodat i segmentarea i analiza imaginii de calcul al
numrului total, i apoi segmentarea celulelor din fundal i extragerea grupurilor de celule
individuale (Selinummi et al., 2005).

A. B.


Fig. 4.13. Un exemplu de imafini sin programul CellC, cu bacterii din microcosm2 unde s-a adugat
colorantul AO (A); Analiza numrului total de celule din panoul A folosind software-ul CellC (B)
Programul Image J este al doilea software folosit n msurarea automat a proprietilor
celulelor (mrime, form, analiza imaginilor microscopice pentru determinarea numrului de
celule).
Programul Image J prezint abilitatea de a susine funcii standard de procesare a imaginilor
digitale i de asemenea poate face modificri precum scalarea geometric, rotaie, etc. Imaginea
poate fi astfel mrit pn la o scar de 32:1 sau micorat pn la 1:32. Programul suport un
numr limitat de imagini, proporional cu memoria disponibil. Calibrarea dimensional a spaiului
poate oferi msuratorile n diferite uniti de msur: pixeli, milimetri, micrometri, (figura 4.9).
Pentru studiul bacteriilor heterotrofice din imagini, a fost folosit programul ImageJ pentru
msurarea celulelor i a statisticilor bazate pe pixeli definite cu ajutorul selectiilor fcute de
52

utilizator, realiznd histograme de densitate i grafice liniare, suport funcii de procesare a
imaginilor cum ar fi modificarea constrastului, detecia de margini, filtrare, etc.



Fig. 4.14. The Image J spaiul de calibrare dimensional

Combinarea celor dou programe ne ajut s stabilim numrul corect de celule din
eantioanele naturale, prin separarea cu succes a celulelor cu ajutorul programului ImageJ i apoi
efectuarea calculelor automate cu programul CellC, obinnd astfel numrul de celule.

4.4. Msurarea cantitii de azot i fosfor din microcosmosuri

Msurarea nitrogenului i fosfatului din trei microcosmosuri. A fost folosit metoda himic
Hach Lange pentru determinarea totalului de nitrogen i fosfatului. Eantioanele examinate (ap de
mare) i reageni vor trebui adui la temperatura camerei (15-25
o
C) pentru a obine valorile
corecte. Rezultatele pentru nitrogeni au fost citite de Spectophotometric DR 2800, o lungime de
und de 345 nm iar pentru fosfat au fost citite 890 nm.
Testele biochemicale au fost efectuate pentru a observa cantitile de nitrogen i fosfat
parial consumate de fiecare microcosmos.
Principiul metodei biochimice pentru determinarea fosfatului const n urmtorul proces:
ionii reacioneaz cu fosfatul i ioni molybdate intr-o soluie acid antimonil formnd un complex
antimonil fosfomolibdic ce va fi redus de acidul ascorbic n fosfomolibden albastru. De asemena,
principiul metodelor pentru determinarea totalului de nitrogen este: nitrogen anorganic i organic
este oxidat pn la nitrat prin digestia cu peroxodisulfat. Ionii de nitrat reacioneaz cu 2.6-
dimetilfenol n o soluie de acid sulfuric i acid fosforic pentru a forma nitrofenol.

4.4.1 Metoda de lucru Hach Lange pentru determinarea fosfatului
Ionii de fosfat reacioneaz cu ionii molibdat i antimonil ntr-o soluie acid formnd un
complex antimonil fosfomolibdat, care este redus cu acid ascorbic la albastru fosfomolibden.
Proba de analizat trebuie s fie la temperatura camerei.
Se ndeprteaz cu grij folia de pe capacul DosiCap Zip (cuveta este prevazut cu un cpcel
ce conine o substan ce va reaciona cu proba noastr de analizat).
Se desfileteaz capacul DosiCap Zip .
Adugm cu pipeta 0,4 ml prob.
nfiletm capacul DosiCap Zip la loc.
Agitm energic.
Se introduce la termostat HT 200 S , n programul standard HT timp de 15 min.
n cuveta racit , se adaug cu pipeta 0,5 ml reactiv B .
nfiletm un capac gri DosiCap C pe cuvet.
Agitm cuveta de cteva ori.
Dup 10 min. mai agitm de cteva ori , curm bine exteriorul cuvetei i msurm.

53


Fig. 4.15. Analiza n timp a consumului de fosfat din cele 2 microcosmosuri

4.4.2. Metoda de lucru Hach Lange pentru determinarea azotului total
Azotul legat anorganic i organic este oxidat la nitrat prin digestie cu peroxodisulfat. Ionii de
nitrat reacioneaz cu 2,6 dimetilfenol ntr-o soluie de acid sulfuric si fosforic pentru a forma un
nitrofenol.

Compozitia chimic privind reactivii. Coninutul cuvetei

Nr. CE Componente Greutate
231-639-5 Acid sulfuric 60%
231-633-2 Acid fosforic, acid ortofosforic 33%
231-791-2 Ap 7%
Tabel 4.3. LCK 338

Nr. CE Componente Greutate
231-791-2 Ap > 98%
215-185-5 Sod caustic, hidroxid de sodiu < 2%
Tabel 4.4. LCK 338 A

Nr. CE Componente Greutate
231-781-8 Peroxodisulfat dipotasiu, persulfat de
potasiu
65%
231-891-6 Metaborat de sodiu 20%
Tabel 4.5. LCK 338 B

Nr. CE Componente Greutate
231-821-4 Sulfit de sodium > 70%
247-852-1 Azida de sodiu < 0,7%
Tabel 4.6. MicroCap C

Nr. CE Componente Greutate
231-791-2 Ap > 75%
200-661-7 Propan-2-ol, izopropil alcool,izopropanol 20%
209-400-1 2,6 xylenol < 1%
204-662-3 Acetat de izopentyl < 1%
Tabel 4.7. LCK 338 D
1.1
1.15
1.2
1.25
1.3
1.35
7 zile 14 zile
m
g
/
L

fosfat total
M1
M2
54

- Proba de analizat (ap rezidual), precum i reactivii trebuiesc adui la temperatura camerei (15-
25 C) pentru obinerea unor valori corecte.
- ntr-o eprubet de reacie uscat adugm n succesiune rapid 0,2 ml prob, 2,3 ml soluie A
(LCK 338 A), 1 tablet B (LCK 138/238/338 B).
- nchidem imediat eprubeta de reacie i nu amestecm.
- l nclzim imediat n termostatul HT 200 n programul standard 15 minute.
- Lsm s se rceasc pn la temperatura camerei i adugm un MicroCap C (LCK
138/238/338 C).
- nchidem eprubeta de reacie i o agitm de cteva ori pn cnd coninutul este dizolvat
complet din MicroCap C i proba nu prezint precipitat.
- Picuram 0,5 ml din eprubeta de reacie cu eantionul preparat n recipientul de testare.
- Picurm apoi cu atenie 0,2 ml de soluie D (LCK 138/238/338 D).
- nchidem imediat recipientul i rsturnm de cteva ori pn se uniformizeaz.
- Lsm 15 minute s reacioneze , curm exteriorul cuvetei i msurm cu ajutorul
spectofotometrului DR 2800.

Not special
- Dup adugarea reactivilor soluia de hidroxid de sodiu A, tableta B, MicroCap C eprubetele
de reactivi trebuiesc nchise imediat.
- Eprubetele de reacie nu trebuie utilizate mai mult de 13 ori. Dup utilizare se cur bine cu o
perie i apa de la robinet, apoi se cltete cu ap distilat fr azot.


Fig. 4.16.Analiza n timp a consumului de azot din cele 2 microcosmosuri

4.5. Calculul densitii celulelor i creterea procentual

Pentru a calcula aceti parametri am folosit programul Image J pe un eantion de 200 de
celule; dimensiunile celulelor au fost convertite ulterior la biovolum (utiliznd formulele de mai jos
i raportnd n cele din urm media pentru cele trei microcosmosuri), astfel n final putnd s
calculm biomasa corespunztoare (Blter i colab., 1993; Paul i colab., 1999). Pentru a calcula
biomasa bacterian, pentru fiecare bacterie numrat, a fost evaluat /clasificat tipul morfologic al
acesteia (coci i respectiv bacili). Pentru fiecare celul s-a msurat diametrul i lungimea prin
raportare la grila micrometrului, utiliznd analiza de imagine digital. Volumul bacililor s-a calculat
prin aplicarea formulei pentru un cilindru cu capete emisferice (Fry, 1990; Sherr i colab., 2001;
Popovici i Ardelean, 2010):
|
.
|

\
|
=
3 4
2
d
l x d V
t
unde: - l= lungimea celulei;
- d=diametrul celulei;
0
1
2
3
4
7 zile 14 zile
m
g
/
L

azot total
M1
M2
55

Volumul cocilor s-a calculat aplicnd urmtoarea formul:
6
3
d
V
t
=
Ulterior volumul celular a fost convertit n biomas celular uscat utiliznd formula propus
de Loferer-Krssbacher i colab., (1998):
86 , 0
435 xV m
u
= unde:
- m
u
=masa uscat (exprimat n femtograme);
- V=volumul celulei (exprimat n micrometri cubi);
Biomasa uscat a fost calculat pentru fiecare celul, dup care am fcut media pentru fiecare
clas de mrimi n parte, pentru ca n final s aflm media pentru fiecare microcosmos.
Am analizat n termeni de rat de cretere, numrul total de celule din microcosmosurile
poluate cu hidrocarburi. Am ales s calculm creterea procentual de la o recoltare la alta folosind
media geometric a creterii procentuale, datorit faptului c nu este clar dac toate celulele
prezente n fiecare microcosmos sunt capabile de cretere celular i diviziune (Polyanskaya i
colab., 2008).
n tabelul 4.8. este reprezentat rata de cretere procentual zilnic calculat n cele dou
microcosmosuri utiliznd datele obinute prin coloraia cu acridin orange.

Rata de cretere procentual / zi
M1 M2
7 zile 4,28 1,47
14 zile 0,93 2,37
20 zile 5,33 -0,44

Tabelul 4.8. Rata de cretere procentual zilnic calculat n cele dou microcosmosuri

Rata de cretere procentual zilnic, a fost utilizat pentru a calcula media geometric pentru
primele 50 zile, rezultatele obinute fiind urmtoarele: M1 (2,192); M2 (1,503).
n tabelul 4.9 este prezentat rata de cretere realizat dup fiecare recoltare a probelor din
cele dou microcosmosuri cu ap de mare filtrat.

Rata de cretere ntre recoltri
M1 M2
7 zile 125,7 108,84
14 zile 106,5 116,61
20 zile 132,0 97,31

Tabelul 4.9. Rata de cretere procentual realizat ntre recoltri n cele dou microcosmosuri


Rata de cretere ntre recoltri Rata de cretere (%) / 24h
M1 M2 M1 M2
7 zile 125,7 108,84 4,28 1,47
14 zile 106,5 116,61 0,93 2,37
20 zile 132,0 97,31 5,33 -0,44

Tabel 4.10 Rata de cretere ntre recoltri i rata de cretere n 24 de ore pentru eantioanele M1 i
rspectiv M2

56


57

CAPITOL V. Utilizarea nanocristalelor semiconductoare pentru
vizualizarea microbiotei (490, 520 nm i 600 nm)

5.1. Proprietile nanocristalelor semiconductoare

Nanocristalele semiconductoare aparin unei clase intermediare, ce face trecerea ntre
sistemele microscopice (atomi, nuclee, electroni) i cele macroscopice (materiale masive), denumit
mezoscopic pentru prima dat n 1981 de von Kampen. De aceea nu trebuie s mire faptul c
ntlnim proprieti comune cu cele 2 mari categorii amintite mai sus. Astfel, nanocristalele
pstreaz structura cristalin a materialului din care provin, dar n acelai timp o dat cu micorarea
dimensiunilor i confinarea cuantic a purttorilor de sarcin, proprietile optice i electrice se
modific n sensul asemnrii cu atomii i moleculele.
Putem observa o deplasare a spectrului spre albastru (Blue Shift), o dat cu o mrire a
dimensiunii benzii interzise i apariia nivelelor energetice discrete. n ceea ce privete proprietile
electrice, adugarea sau ndeprtarea unui singur electron (prin tunelare) din componena quantum
dot-ului, ncepe s aib efecte notabile, n plus intervenind i o cuantizare a sarcinii (ca i n cazul
lumii n care se putea accepta sau ceda energie sub form de cuante (fotoni) i n acest caz unitatea
de referin devine sarcina unui electron ).
Nu se poate face o tratare individual a fiecrei proprieti fr a face referire la alta,
existnd o interdependen ntre acestea. De exemplu dimensiunea nanostructurii e direct legat de
lrgimea benzii interzise; aceasta la rndul ei definete absorbia i emisia. i astfel un fenomen se
va explica cu ajutorul altuia, n final rezultnd o imagine de ansamblu asupra caracteristicilor
quantum dot-urilor. Proprietile principale ale nanocristalelor constau n:
Dimensiunea QD. Raportul Suprafa/Volum mare
Dac dorim dimensiunea n sens strict vom considera doar miezul (core) i stratul protector
(shell). Acetia au diametre e aproximativ 3-10 nm (minim emisie albastr, maxim - rou). ntr-o
abordare mai puin strict se consider i cei 1-2 nm ai stratului organic (coat).
Mai exist i o ultim dimensiune, cea hidrodinamic, care consider i solventul aderat n
timpul sintezei, ajungndu-se la dimensiuni comparabile cu cele ale unei proteine.
n figura de mai jos (fig.5.1) se compar dimensiunile nanocristalelor cu agenii de etichetare
(markere) folosii n mod obinuit i alte structuri biologice ca bacterii sau celula animal.

Fig. 5.1.Dimensiunea nanocristalelor

58

Lund n calcul al treilea criteriu, nanocristalele au dimensiuni de la cele mai mici (albastru),
la cele mai mari (rou), ntre 10-20 nm. Ca referin sunt prezentate 2 proteine: proteina cu
fluorescen verde (GFP - Fig. 5.1) i ficoeritrina (pigment rou) cu dimensiune mai mare.
n ceea ce privete raportul suprafa/volum n nanocristalele cu dimensiuni mici ( ),
mai mult de jumtate din atomii constitueni pot fi coninui de parte exterioar a structurii. De aici
importana mrit a suprafeei de contact i a proprietilor acesteia, n direct legtur cu
producerea trapelor energetice i fenomenelor e fotoluminescen.

Nivele discrete de energie. Densitatea de stri de energie
Nivele discrete de energie sunt o consecin direct a fenomenului de confinare cuantic a
electronilor. Este ntlnit i la gropile sau firele cuantice, dar aici cuantizarea are loc pe toate cele 3
direcii dup formula:
- pentru cub:

unde

este vectorul de und;

masa efectiv;
constanta Planck redus;
- pentru sfer:

unde R este raza sferei i

zerourile funciei Bessel de ordin1

Variaia benzii interzise(Eg) cu dimensiunea. Fenomenul de Blue Shift
Una dintre caracteristicile principale ale unui semiconductor este lrgimea benzii interzise
(Eg Energy gap) ce influeneaz proprietile luminoase n mod direct. Aceasta poate fi
controlat foarte precis prin varierea dimensiunii nanocristalelor. n cazul QD-urilor, ele fiind
oricum foarte mici, adugarea sau ndeprtarea unui singur atom se va concretiza ntr-o modificare
sesizabil a organizrii la nivel energetic. Acest lucru nu este posibil pentru materialele
semiconductoare masive, un atom reprezentnd o cantitate infim, de aceea ele au o BI fix n
general, ce nu depete 3 eV.
Dac se folosete modelul quantum dot-urilor sferici se gsete o dependen a BI invers
proporional cu dimensiunea razei conform relaiei

n care se nlocuiete

, particula luat n discuie fiind excitonul n acest caz.

n msurarea benzii interzise se consider recombinarea pentru stare minim de energie (cea
mai probabil) i pentru care

pentru care

, dac se consider

referin sau

, fa de nivelul energetic minim posibil.

Nanodot-urile fac trecerea de la atomi la macrosisteme. Ele preiau structura discret de energii
de la microsisteme i pstreaz benzile interzise din cadrul semiconductoarelor.
Distana dintre nivelele energetice (E) i valoarea

cresc o dat cu micorarea dimensiunii

quantum dot-ului care va avea banda interzis mai mare dect a materialului din care provine.

Proprieti legate de fenomenele de absorbie/emisie luminoas
Acestea sunt de fapt proprietile care aduc, atta popularitate quantum dot-urilor i nu neaprat
pentru c ar fi cele mai importante, dar deocamdat aplicaiile care le folosesc au rspndirea cea
mai mare. i acesta poate fi i din cauza evidenierii lor foarte uoar. Aceste proprieti vor fi
discutate n detaliu n urmtorul subcapitol 5.2:
- Excitarea luminoas
- Absorbia
- Emisia
- Fotostabilitatea. Fenomenul de fotodecolorare (bleaching)
59

Biotoxicitatea nanocristalelor
n legtur cu acest subiect au fost fcute numeroase cercetri [], care ne avertizeaz asupra
faptului c n urma expunerii la radiaie UV, n soluiile pe baz de ap pot avea loc oxidri care
produc ionii de Cd+2 (toxici). Acest subiect va fi discutat n detaliu n subcapitolul 5.4.

5.2. Proprieti legate de fenomenul de fotoluminescen

n cadrul fotoluminescenei intervin trei procese: stimularea probei, absorbia radiaiei
excitatoare, emisie luminoas. n aceast ordine logic se vor prezenta i proprietile remarcabile
ce survin n cadrul fiecrui fenomen.

Fig.5.2 Cele trei procese ale fotoluminiscienei

5.2.1. Excitarea luminoas
Un material semiconductor are n general banda interzis ntre . Datorit
miniaturizrii se mai adaug, n medie, un surplus de energie de aproximativ

. Suntem
deci ntr-o gam orientativ . ntre aceste limite trebuie s se situeze energia radiaiei
stimulatoare pentru a obine emisie. Conform figurii urmtoare ne situm n zona spectrului vizibil
i ultraviolet apropiat:


Fig.5.3 Spectru electromagnetic n funcie de energie

Spectrele de excitaie sunt generate scannd spectrul de absorbie n timp ce se
monitorizeaz emisia pentru un singur maxim (lungime de und). Se gsete astfel lungimea de
und optim pentru iluminare. Dac analizm spectrul de absorbie (Fig.5.3) se observ prezena
unui maxim n apropierea maximului de emisie i apoi spre ultraviolet o cretere aproape
exponenial. n mod uzual pentru aplicaiile comune se va folosi o surs cu radiaie ultraviolet,
dar nu foarte deprtat de spectrul vizibil pentru a nu suprasatura probele (electronii pot absorbi o
cantitate puin mai mare de energie dect cantitatea necesar tranziiei, surplusul transformndu-se
n energie termic sau vibraie (fonon) transmis reelei cristaline).
Principalul avantaj al quantum dot-urilor n faa de structurilor obinuite (e.g. pigmeni
organici) reprezint faptul c nanocristale cu dimensiuni diferite pot fi stimulate n acelai timp, cu
aceeai surs de excitaie ultraviolet. De aici deriv: costul minim pentru sursele de radiaie mult
simplificate, efectuarea msurtorilor simultane pe mai multe specii diferite (analize multiplex), n
60

biologie: posibilitatea utilizrii soluiilor compuse care conin mai multe tipuri de NC-le cu roluri i
afiniti pentru diverse esuturi i substane, observarea organelor fiind fcut n paralel, aceeai
soluie poate emite lumin din tot spectrul vizibil.

5.2.2. Absorbia
Legea general care descrie fenomenul de absorbie a fost gsit experimental i
fundamentat teoretic de ctre Bouguer (1729). Se gsea o legtur astfel ntre cantitatea de lumin
absorbit de proprietile materialului pe care-l strbtea.
Dac se ia o prob spre analiz, se va observa c fiecare molecul adugat contribuie la
mrirea cantitii de lumin absorbit; din acest motiv eantioanele concentrate sunt colorare mai
intens dect cele diluate. Pe de alt parte dac se pstreaz constant concentraia i se variaz doar
volumul, absorbia va crete cu acesta. Combinnd conceptele de absorbie cuantizat pentru
lungimi de und discrete (specifice qd-urilor) cu efectele legate de concentraie i volum se poate
scrie o relaie pentru anticiparea cantitii de lumin absorbit la o lungime de und dat:

O alt form poate mai uor de neles a legii Beer-Lambert este:

Unde:
- - absorban;
- - absorbtivitatea mediului sau coeficient de extincie. Este proporional cu numrul de
molecule absorbante din unitatea de volum i invers proporional cu lungimea de und a
radiaiei ce strbate substana. (notat deseori i cu ). Coeficientul de extincie este o msur
direct a capacitii unei molecule de a absorbi lumin.
- l - dimensiunea (lungimea, grosimea) stratului de soluie strbtut de lumin ;
- c - concentraia componentei care absoarbe radiaia (a soluiei) c;
-

- intensitatea luminii incidente (asociat cu intensitatea maxim a luminii transmise pentru

apa distilat) ;
-

- intensitatea luminii transmise (emergente) ;

- T transmitana;
Spre deosebire de spectrul uniform al materialelor semiconductoare masive, n cazul quantum
dot-urilor spectrul de absorbie apare sub forma unor suiuri i coboruri, cu maxime din ce n ce
mai pronunate o dat ce ne deplasm spre lungimi de und mai mici.



Fig.5.4. Spectrul de absorbie

61

Figura 5.4. este preluat de pe site-ul celor de la Evident Technologies i reprezint spectrul
de absorbie al unui set de 6 eantioane (6 spectre de absorbie). Unitile arbitrare pot fi: numr de
tranziii efectuate n urma excitrii ntr-un interval de timp, intensitatea de lumin, etc. Este
irelevant unitatea de msur pe ordonat, ceea ce intereseaz este alura spectrului.
Dac s-ar fi reprezentat i spectrul de absorbie al materialului semiconductor din care
provin respectivele nanoparticule, s-ar fi observat o deplasare spre lungimi de und mai mici ale
acestora din urm.
Proprietatea nanocristalelor de a absorbi radiaie ntr-un spectru foarte larg (absorbia
corespunztoare materialelor din care provin se ntinde pe o gam mult mai restrns), se poate
explica n felul urmtor: nivelele de energie n QD-uri sunt discrete; lumina absorbit trebuie s
corespund diferenei de energie dintre cele 2 nivele implicate n tranziie. n BV exist electroni
aflai n foarte multe stri energetice (degenerarea mare a nivelelor energetice datorit fenomenului
e confinare cuantic discretizarea energiei pe toate cele 3 axele). n BC exist destule nivele
libere, astfel nct este o probabilitate foarte mare ca o radiaie cu energia mai mare dect lrgimea
BI s gseasc o combinaie de nivele BV-BC cu diferena energetic potrivit.
O alt proprietate a nanocristalelor semiconductoare este mrirea probabilitii de absorbie
a luminii cu adugarea fiecrui atom (de Cd sau Se) conform Legii Bouguer - Lambert - Beer. Din
moment ce anumite nanodot-uri pot avea n componen i mii de atomi identici, absorbia va
deveni foarte mare. Coeficientul de extincie poate ajunge pn la valori de (

.
Informaii ce se pot deduce cu ajutorul unui spectru de absorbie:
- msurnd deviaia spectrului de absorbie se poate calcula raza quantum dot-ului cu modelul
benzii hiperbolice i putem afla informaii despre confinarea cuantic.
- alungire considerabil a spectrului n partea inferioar (tail) ne d informaii asupra unei
inomogenitii pronunate a soluiei sau defecte la nivelul reelei cristaline ala
nanostructurilor, din cauze diverse ca dopare sau iradiere

Fig.5.5. Spectru de absorbie al unei soluii de nanocristale cu defecte

- existena unor maxime ascuite n spectrul de absorbie reprezint o absorbie excitonic ce
corespunde unei tranziii de tip

(nivelul inferior BV nivelul superior BC). Tranziiile

ce implic nivele energetice superioare sunt rar ntlnit i caracterizeaz mostrele extrem de
pure.

5.2.3. Emisia
Electronii ce au fcut tranziia din BVBC vor reveni, n mod natural dup un scurt timp,
n BC. Alt tendin natural este ca aceast trecere dintr-o stare n alta s se fac cheltuind o
energie minim. Astfel tranziiile radiative dominante vor fi ntre nivelul minim al benzii de
conducie (

) i nivelul maxim al benzii de valen (

) (denumite i tranziii 1s-1s sau 0-0), adic

62

exact lrgimea benzii interzise (

). Dac purttorii de sarcin se afl pe un nivel superior acetia

vor ajunge pe

cednd energia suplimentar reelei cristaline. Procese tocmai descrise definesc

spectrul de emisie prezentat n figura de jos:



Fig.5.6. Spectru de emisie pentru CdSe

Analiznd graficul se observ c:

Spectrul de emisie nu prezint maxime secundare.Aceasta se ntmpl din 2 motive:
- datorit efectelor cuantice emisiile de tipul 1s -1s sunt foarte eficiente i domin celelalte
tranziii. Componentele vibronice rmase sunt aadar foarte slabe;
- nivelele vibraionale existente sunt foarte apropiate de

sau

, deci contribuia lor nu va

lrgi foarte mult spectrul ;
Spectrul de emisie este ngust (pentru considerarea unui eantion cu maximum de omogenitate
realizabil - diferene ntre constitueni de pn la 4-5%) .Este o consecin a primei caracteristici
prezentate. Qd-urile sufer totui o lrgire a spectrului, dar este de alt natur fa de pigmenii
organici (tranziii vibraionale). Emisia de radiaie este dependent de mrimea nanocristalelor.
n procesul de fabricaie nu se pot obine structuri perfect identice; chiar dac diferenele sunt
foarte mici, spectrul unei mixturi va fi mai larg dect al unui singur constituent (1 qd emite o
singur linie ngust).
Se micoreaz substanial zonele de suprapunere a spectrelor vecine mrind performanele n
cadrul analizei de tip multiplex (metod prin care mai muli parametrii sunt testai i procesai
simultan). Aadar culori diverse pot fi folosite n acelai timp fr interferene;
n aplicaiile medicale nanocristalele vor avea o senzitivitate mrit la stimuli diveri;
Un spectru mai ngust va da o culoare de saturaie mrit, ochiul percepnd o puritate, o
claritatea i o intensitate mrit a culorii;
Din punct de vedere cantitativ se emite mai mult radiaie din urmtoarele considerente:
- avnd un spectru ngust, se vor elimina sau n orice caz diminua foarte tare metodele
(inexacte) de compensare a pierderilor de radiaie. n plus fiind necesar o singur surs de
excitare, nu mai prezint interes reglrile adiionale de intensitate;
- n cazul coloranilor organici tradiionali, mare parte din lumina emis era nlturat datorit
interferenei maximelor secundare cu spectrul altor culori. n cazul Qd-urilor acest fenomen
nu mai are loc;
- se pot folosi filtre mai nguste cu performan mrit, ce pot rejecta mai bine zgomotele
sau interferenele fluorescente;
Uurina separrii spectrului de absorbie de cel de emisie;

63

5.3. Fotostabilitatea nanocristalelor

Fotostabilitatea se refer de obicei la proprietatea nanocristalelor de a-i pstra
caracteristicile fluorescente ct mai mult posibil (chiar i ore n anumite condiii [], fa de minute n
cazul pigmenilor organici). Perioada la care se face referire a fost numit n literatura de specialitate
fluorescence lifetime (timpul de via al fluorescenei) i este un parametru important, considerat
mai ales n aplicaiile biologice de durat.
Fotodecolorarea reprezint distrugerea fluoroforilor de ctre lumina intens, diverse procese
chimice, interaciuni mecanice de suprafa sau variaii ale ph-ului soluiei gazd. n microscopie
acest fenomen ngreuneaz observarea moleculelor fluorescente deoarece chiar lumina folosit pentru
excitare sau observarea diverselor zone, produce stricciuni iremediabile. Astfel mostrele nu vor mai
putea fi reexaminate mai trziu; de obicei procesul este ireversibil.
Ca msuri se ncerc o expunere mai mic a probelor prin baleiaj laser, o cretere a
concentraiei fluoroforilor, scznd-o pe cea a oxigenului sau introducerea substanelor cu rezisten
mai mare la stimuli luminoi (cum sunt Quantum Dot-urile).
Nanodot-urile sunt mai bune din toate punctele de vedere (fiind fluorofori aproape ideali):
au stabilitate mai mare (aproape 100% n condiii optime de lucru), senzitivitate mai mare,
luminozitate mrit i o siguran sporit n analize. Acestea sunt calitile principale ce ies n
eviden la o prim examinare.
O degradare uoar poate aprea pentru excitare din zona ultraviolet (<300nm). Pe de alt
parte se prefer acest overcloacking. Dac se va iradia cu o lumin mai puternic va fi i o
intensitate mult mrit a emisie. Frecvent se accept aceste compromisuri pentru a mbunti
calitatea; de fapt distrugerile structurale serioase apar pentru fascicule foarte intense de radiaie
stimulatoare.
Stabilitatea nanocristalelor este influenat de foarte muli factori: conteaz n primul rnd
materialul din care sunt confecionate, dac sunt sau nu protejate de un strat suplimentar (shell) sau
dac prezint conjugri cu molecule biologice. Trebuie luat n calcul mediul gazd: n uzualele soluii
ce conin ap, nanodot-urile ce au la suprafa tiol (pentru protecie) pot experimenta instabilitate
chimic n 3 etape: oxidare fotocatalitic a liganzilor din tiol, foto-oxidarea nanodot-urilor i n final
precipitarea acestora, ce duce la formarea unor aglomeraii mai mari (clustere), ce ngreuneaz
deplasarea sau penetrarea membranelor celulare. Cu toate acestea nanocristalele sunt o alternativ
bun pentru nlocuirea tradiionalilor pigmeni organici, singurul lucru ce rmne n discuie fiind
toxicitatea acestora.

5.4. Biotoxicitatea nanocristalelor

Datorit proprietilor remarcabile, nanodot-urile au nceput s fie folosite din ce n ce mai
mult n aplicaiile in vivo. Ambiguiti cu privire la toxicitatea nanocristalelor vin din cauz c
toxicitatea deriv din factori multiplii variabili cum ar fi: proprietile fizico-chimice, condiiile de
mediu (durata expunerii, intensitatea radiaiei), dimensiunea, structura quantum dot-urilor, dac sunt
sau nu cptuite (unele mostre s-au dovedit toxice doar dup degradarea stratului protector).
Pentru o expunere de 30 min la aer sau iradiere ndelungat (2-8 ore), chiar i o concentraie
de 0.0625 mg/mL a nanocristalelor n soluie, este toxic.
n prezent, toxicitatea potenial, manifestat n anumite condiii, exclude folosirea QD-
urilor ca mobile n distribuirea medicamentelor (n organisme), dei au un potenial foarte mare mai
ales dac sunt aduse modificri la nivelul de suprafa (Mihrimah Oykan, 2004).
Preri recente ne aduc aminte c doar miezul (core) conine cadmiu, restul de straturi
adiionale au rolul de a proteja organismul de eventualele pericole. Exist exemple destul de clare
care certific faptul c funcionarea normal a moleculelor nu a fost influenat de marcarea lor cu
nanocristale (celulele erau stabile i dup 12 zile de la dopare).
64

Cu privire la introducerea qd-urilor in organism aceasta se poate face n diverse moduri:
injectare, fagocitoz sau mecanisme asemntoare contaminrii cu virui. Studiul eliminrii lor este
abia la nceput, n prezent. S-a observat ns c nanoparticulele sunt recunoscute imediat de ctre
organism ca fiind strine i se elimin prin cile excretorii primare (ficat, splin, sistem limfatic).
Cu toate c nu au fost fcute pn acum cercetri numeroase pentru a determina toxicitatea
fa de organismul uman sau mediul nconjurtor, se poate concluziona c aceste structuri nu sunt
foarte toxice. Riscuri exist totui n anumite condiii.

5.5. Msurtori efectuate pe nanocristale CdSe/ZnS (490, 520 nm i 600 nm)

n urma coloraiei probelor cu cele dou doturi cunatice am obinut urmatoarele date (tabel 5.1):

proba M1 M2
20 zile (la final de
experiment)
0,24 x 10
2
0,43x10
2

Tabel 5.1 Valorile densitii celulelor n urma colorrii cu dot 490, i 600 nm
A B
Fig.5.7. A-dor 490 nm; B- dor 600 nm
Se observ faptul c densitatea numeric se apropie de numrul celulelor colorate cu iodura
de propidiu, ceea ce ne face s deducem c aceste doturi pun n valoare fracia celulelor mosrte.


65

CAPITOL VI. Calculul tehnico-economic al procesului de
bioremediere

6.1. Calculul economic al analizelor din laborator

66

6.2. Norme de protecia muncii n laborator
Dotarea cu echipament individual de protecie
Art. 13. Toi lucrtorii din laboratoarele de analize fizico-chimice sunt obligai s utilizeze
echipamentul de protecie adecvat, conform "normativului cadru de acordare i utilizare a
echipamentului individual de protecie" emis de MMPS.
Art. 18. - Cile de acces ale laboratoarelor vor fi meninute libere i curate, ndeprtndu-se imediat
materialele i scurgerile czute pe pardoseal.
Art. 35. - La executarea lucrrilor de laborator vor participa cel puin dou persoane.
Art. 41. - Este obligatorie acoperirea prului i purtarea hainelor incheiate.

Tehnica de lucru n laboratoare
Art. 91. - Toate analizele fizico-chimice de laborator trebuie s fie executate cu cantitile i
concentraiile de substane strict necesare, precis cntrite sau msurate, i cu repsctarea integral a
instruciunilor de manipulare i a instruciunilor proprii de securitate a muncii.
Art. 93. - Pentru lucrrile cu cantiti mici de substane (de ordinul a 2-5 mg) se vor folosi, de
regul, tuburi capilare nchise la un capt, n care introducerea substanelor se va face cu o
microspatul sau cu o pipet capilar. Pentru ca substanele s ajung la fundul tubului capilar,
acestea se centrifugheaz.
Art. 94. Instalaiile utilizate la efectuarea de analize se vor monta nainte de a introduce n
diversele lor pri componente, substanele cu care se va lucra.
Art. 98. - Lucrrile cu substane nocive i acizi concentrai sau de nclzire a substanelor toxice, n
vas deschis, trebuie executate numai sub ni, al crei tiraj se va verifica n prealabil, pentru ca s
corespund gradului admis de toxicitate al substanelor cu care se lucreaz.
Art. 103. - Este interzis s se lucreze cu substane necorespunztoare sau care nu sunt precis
identificate i a cror compoziie nu este indicat pe baz de buletine de analiz.
Art. 104. - Atunci cnd se lucreaz dup o reet dat, aceasta trebuie aplicat cu strictee, fr nicio
modificare sau improvizaie.
Art. 108. - Dac se ntrevede apariia unui pericol n una din fazele lucrrii ce se efectueaz,
executantul este obligat s ntrerup lucrarea.
Art. 110. - Pentru a mirosi o substan, gazul sau vaporii trebuie ndreptai spre manipulant, prin
micarea minii, cu foarte mari precauiuni, neaplecnd capul deasupra vasului i fr a inspira
profund.
Art. 111. - Eprubeta n care se nclzete un lichid se va ine cu deschiztura ntr-o parte i nu spre
operator sau spre alt persoan; eprubeta se va nclzi pe toat suprafaa ei.
Art. 112. - Pentru nclzirea vaselor de reacie cu becuri infraroii, acestea din urm nu se vor aeza
sub vas; ele se vor aeza lateral.
Art. 117. - Este interzis deversarea coninutului aparatelor direct n reeaua de canalizare sau
evacuare a gazelor prin trompa de la canal, cu excepia cazurilor n care canalizarea este legat la
reeaua de ape chimic impure. nainte de deversarea n sistemul normal de canalizare, substanele
vor fi obligatoriu neutralizate.
Art. 118. - Splarea aparaturii se va face imediat dup terminarea lucrrii de laborator, dar numai
dup ce s-a efectuat neutralizarea adecvat; splarea se va executa numai cu solveni specifici
pentru impuritile respective. numai dup 10 minute de la terminarea tuturor operaiilor de
neutralizare i splare se poate opri ventilatorul.

Principii de aplicare a metodologiei de lucru
Art. 119. - Se interzice lucrul fr aparate de masur, control, calitate i precizie corespunztoare.
Art. 120. Toi compuii organici care conin carbon, hidrogen, oxigen i azot trebuie manipulai
cu grij cu att mai mare, cu ct procentul n oxigen i azot este mai ridicat.
Art. 122. - Se va evita n toate mprejurrile, contactul cu combinaii ca alcooli, esteri, hidrocarburi
clorurate i hidrocarburi aromatice i alifatice, care acioneaz ca narcotice.
67

Art. 123. - Se va evita contactul epidermei cu amine, fenoli i nitroderivai, n prezena acizilor
concentrai i a bazelor tari.
Art. 127. - Toate substantele oxidante (apa oxigenat, acidul cromic, permanganatul de potasiu,
acidul azotic, acidul percloric, etc.) trebuie manipulate cu atenie; riscul se poate reduce prin
diluarea lor cu ap. Se vor evita, pe ct posibil, reaciile cu compui organici sau cu alte mijloace de
reducere, sau se vor lua msuri deosebite.

Prelevarea probelor pentru analize
Art. 130. - Deplasarea la locul de prelevare a probelor se va face numai pe cile normale de acces.
Locurile de luare a probelor i cile de acces la ele trebuie s fie bine iluminate.
Art. 131. - Aparatura utilizat pentru recoltarea probelor de analiz trebuie s fie n stare perfect:
sondele s fie rotunjite la capt, s nu fie crpate, iar borcanele de prob s fie curate, uscate i s
aib dop rodat.
Art. 133. - Dup caz, vasele n care urmeaz s se ia probe la care exist pericolul formrii
amestecurilor explozive vor fi inertizate.
Art. 138. Recipienii cu probe se transform n laborator cu mijloace adecvate (crucioare);
sticlele i borcanele se transport aezate n couri de protecie sau ldie speciale.
Art. 140. - Verificarea nivelurilor n vase se va face cu ajutorul aparatelor de msur i control.

Manipularea aparaturii de laborator
1. Aparatura acionat electric
Art. 252. - Aparatele electrice de nclzit (cuptoare, etuve, bi electrice etc.) trebuie aezate pe
mese protejate cu tabl de oel i foi de azbest.
Art. 254. - Se interzice conectarea mai multor aparate electrice la o singur priz.
Art. 256. - Se interzice folosirea aparatelor la care se observ scntei sau care prezint scurtcircuite.
Art. 258. - Se interzice manipularea cu minile libere neprotejate cu mnusi electrizolante, a
aparatelor i a instalaiilor electrice aflate sub tensiune.
2. Dispozitive de inclzire
Art. 274. - La aprinderea becurilor de gaz, deschiderea robinetului trebuie s se faca treptat; mai
inti se va aduce flacra la gura becului, dup care se va deschide gazul. Dac becul se aprinde n
interior, se va ntrerupe imediat alimentarea cu gaz.
Art. 275. - nainte de utilizare se va controla tubul de legatur cu care este racirdat becul, care nu
trebuie s fie prea larg la capete. Tubul nu trebuie s ajung n contact cu vase fierbini sau s fie n
apropierea flcrii.
Art. 276. - Nu se va lucra cu tuburi nvechite sau defecte.
Art. 277. - La ntrebuinarea becurilor sau lmpilor n care combustibilul lichid vine sub presiune se
vor respecta urmtoarele:
- nu se va utiliza benzina la lmpile care sunt destinate pentru petrol;
- lampa va fi meninut permanet curat; nainte de fiecare aprindere, gaura pentru trecerea
vaporilor inflamabili va fi curatat i se va controla dac exist o cantitate suficient de combustibil;
- nu este permis arderea ntregii cantiti de combustibil;
- se va urmri ca presiunea n rezervor s nu depeasc presiunea normal, iar rezervorul s nu fie
prea nclzit (peste 35C);
- alimentarea lmpii se va face numai dup oprirea flcrii;
Art. 278. - La folosirea lmpilor cu spirt se vor lua urmtoarele msuri:
- se va observa ca lampa s nu se rstoarne;
- nu se vor utiliza lmpi defecte;
- nu se va permite o nclzire prea mare a rezervorului;
- nu se va aprinde lampa aplecndu-se spre alt lamp care funcioneaz.
3. Sticlrie de laborator
68

Art. 279. - La recepie i nainte de utilizare sticlria de laborator se va verifica bucat cu bucat.
Vasele care prezint zgrieturi, crpturi, tensiuni interne sau alte defeciuni se vor restitui magaziei
sau se vor intrebuina exclusiv pentru operaii nepericuloase.
Art. 280. - Dopurile din cauciuc sau plut trebuie potrivite nainte de introducere in gtul vaselor de
sticl prin pilire sau la polizor; ele trebuie s intre prin presare uoar. n momentul introducerii
dopului, vasul trebuie s fie inut de gt.
Art. 281. - Tuburile de sticl care urmeaz s fie introduse n gurile dopurilor sau n tuburi de
cauciuc trebuie tiate drept, iar marginile ascuite ale sticlei vor fi rotunjite la flacr.
Art. 282. - Cnd tuburile au pereii prea subiri, se vor nveli ntr-un material textil umed pentru a fi
rupte.
Art. 283. - n momentul ruperii, tuburile de sticl se vor ine aproape de cresttur.
Art. 284. - Tubul de sticl care se introduce n orificiul unui dop sau al unui tub de cauciuc se in
ct mai aproape de captul care se introduce; se recomand nvelirea minilor care in dopul i a
tubului cu material textil umed, tubul fiind uns cu glicerin sau cu ap.
Art. 287. Recipienii mari de sticl nu se vor aeza direct pe mas, ci pe o plac din azbest sau alt
material elastic.
Art. 288. - nclzirea vaselor de sticl se va face progresiv, fie pe bi, fie pe o sit de fier acoperit
cu azbest.
Art. 289. - La inclzirea unui lichid in eprubet, gura eprubetei nu trebuie s fie ndreptat spre nici
o persoan.
Art. 290. - Pentru a evita suprancalzirea lichidelor se vor folosi bucele de piatr ponce sau
porelan poros; acestea se vor introduce ntotdeauna cnd lichidul este nc rece.
Art. 291. - Baloanele cu fund rotund se vor aeza pe masa de lucru sprijinindu-se pe inele din
material elastic, de dimensiuni potrivite.
Art. 292. - Vasele ce conin substane solide n suspensie trebuie agitate n timpul nclzirii.
Art. 293. - Baghetele folosite pentru amestecare trebuie s fie rotunjite la capete cu ajutorul flcrii;
agitarea se va face printr-o micare circular de-a lungul pereilor vasului. Pentru transvazarea
precipitatelor se vor folosi baghete de sticl avnd aplicat pe unul din capete o bucat de tub din
cauciuc.
Art. 295. - Aparatura fierbinte se va apuca fie cu o carp uscat, fie cu un clete de lemn sau de
metal n cazul creuzetelor sau capsulelor supuse calcinrii.
Art. 296. - Aparatura de sticl fierbinte se va feri de ocuri termice, respectiv nu se va aeza pe un
loc ud sau rece i nu se vor turna lichide reci n interior.
Art. 297. - Se interzice nclzirea aparaturii de sticl cu flacra direct.
Art. 298. - Cletele cu care se apuc aparatura fierbinte de sticl sau porelan se va nclzi puin
nainte.
Art. 299. - Sitele utilizate pentru nclzirea aparaturii de sticl vor fi izolate cu azbest pe toat
poriunea de contact ntre sit i vasul de sticl.
Art. 300. - Se va verifica ntotdeauna ca aparatura de sticl supus nclzirii s aib asigurat un
orificiu de ieire a vaporilor degajai n timpul inclzirii.
Art. 303. - Transportul vaselor din sticl se va face astfel nct s fie asigurate mpotriva
spargerilor. Paharele i alte vase mici din sticl trebuie inute cu toat palma i nu apucate sau inute
de margine. Recipienii sau vasele cu gt lung trebuie s se in cu o mn de fund i cu cealalt de
gt. Transportul pe distane mai lungi se va face numai n cutii sau couri amenajate corespunztor.
Art. 304. - Splarea vaselor de sticl se va face imediat dup terminarea analizei, cu lichide
potrivite, n care impuritile respective sunt solubile. Este interzis curarea cu nisip sau alte
materiale solide.




69

BIBLIOGRAFIE

[1] D. B. Roszak and R. R. Colwell, Survival Strategies of Bacteria in the Natural Environment,
Microbiological Reviews Sept. 1987;
[2] Stevenson, L.H. 1978. A case for bacterial dormancy in aquatic systems. Microb. Ecol.4:127-
133;
[3] 22. Carlucci, A. F. 1974. Nutrients and microbial response to nutrients in seawater, p. 245-248.
[4] In R. R. Colell aind R. Y.Morita (ed.). Effect of the ocean enviironnient on microbial activities.
University Park Press. Baltimolr-e;
[5] Guelin, A. M., I. E. Mishustina, L. V. Andreev, M. A. Bobyk, and V. A. Lambina. 1979. Some
problems of the ecology and taxonomy of marine microvibrios. Biol. Bull. Acad. Sci. USSR 5:336-
340;
[6] Casida, L. E. 1965. Abundant microorganisms in soil. Appl. Microbiol. 13:327-334;
[7] Conn, H. J. 1948. [Ihe most abundant groups of bacteria in soil. Bacteriol. Rev. 12:257-273;
[8] Daley, R. J., and J. E. Hobbie. 1975. Direct counts of aquaticbacteria by a modified
epifluorescence technique. Limnol.Oceanogr. 20:875-882;
[9] Dawes, E. A. 1976. Endoguenous metabolism aild the survival of starved prokarvotes. Symp.
Soc. Gen. Microbiol. 26:19-53;
[10] Delpy, L. P., G. Beranger, and M. Kaweh. 1956. Bacterial growsth phases. Ann. Inst. Pasteur
(Paris) 91:112-115;
[11] Drlica, K. 1984. Biology of bacterial DNA topoisomerases. Microbiol. Rev. 48:273-289.
[12] Azam F, Cho BC (1987) Bacterial utilization of organic matter in the sea. In: Fletcher M (ed)
ecology of microbial communities. Cambridge University Press, Cambridge, p 261281;
[13] Azam F, Cho BC (1987) Bacterial utilization of organic matter in the sea. In: Fletcher M (ed)
Ecology of microbial communities. Cambridge University Press, Cambridge, p 261281;
[14] Azam F, Cho BC (1987) Bacterial utilization of organic matter in the sea. In: Fletcher M (ed)
Ecology of microbial communities. Cambridge University Press, Cambridge, p 261281;
[15] Stoderegger K, Herndl GJ (1998) Production and release of bacterial capsular material and
its subsequent utilization by marine bacterioplankton. Limnol Oceanogr 43:877884;
[16] C.A.Oviatt, H. Walker and M.E.Q. Pilson, An exploratory Analysis of Microcosm and
Ecosystem Behavior Using Multivariate Techniques, Marine Ecology, April 20 1980;
[17] Oviatt, C. A., Nixon, S. W., Perez, K. T., Buckley, B. (1979). On the season and nature of
perturbations in microcosm experiments. In: Dame, R. (ed.) Marsh-estuarine systems simulations.
ighth Belle W. Baruch Inst. Mar. Biol. and Coastal Research Symposium, Georgetown, South
Carolina. January 1977, pp. 143-164;
[18]Oviatt, C. A., Perez, K. T., Nixon, S. W (1977). Multivariate analysis of experimental marine
ecosystems: results for Narragansett Bay. Helgolander wiss. eeresunters. 30: 30-46;
[19] [18]Rees, M. J. Mon. Not. R. astr. Soc. 176, 483 (1976).
[20] Carter, B. Large Numbers in Astrophysics and Cosmology Paper presented at Clifford
Centennial Meet., Princeton (1970).
[21] Salpeter, E. E. Astrophys. J. 115, 326 (1952); Phys. Rev. 107, 516 (1967).
[22] Kahn, F. D. in Emerging Universe (eds Jacobs, K. C. & Saslaw, W. C.) 71 (Virginia
University Press, 1972).
[23] Weinberg, S. Phys. Rev. Lett. 19, 1264 (1967): Salam, A. in Elementary Particle Theory (ed.
Svartholm, N.) (Almquist and Wiksell, Stockhohn, 1968).
[24] Wheeler, J. A. in Gravitation Ch. 44 (1971)
[25] Bruenn, S. W., Arnett, W. D. & Schamm, D. N. Astrophys. J. 213, 213 (1977).
[26] Luna, G.M., Manini, E., and Danovaro, R. 2002. Large fraction of dead and inactive bacteria
in coastal marine sediments: comparison of protocols for determination and ecological
significance. Appl. Environ. Microbiol. 68(7): 35093513. doi:10.1128/AEM.68.7.3509-3513.2002.
PMID:12089035.
70

[27] Lunau, M., Lemke, A., Walther, K., Martens-Habbena, W., and Simon M. dead and inactive
bacteria in coastal marine sediments:2005. An improoved method for counting bacteria from
sediments and turbid environments by epifluorescence microscopy. Environ. Microbiol. 7(7): 961
968. doi:10.1111/j.1462-2920.2005.00767.x. PMID:15946292.