FIZIOLOGIA BACTERIILOR.

METABOLISMUL MICROBIAN.
NUTRIIA I RESPIRAIA
BACTERIILOR
Fiziologia bacterian studiaz viaa i activitile
bacteriilor nutriia, respiraia, creterea i
multiplicarea, condiiile de cultivare a bacteriilor.
Metabolismul bacterian reprezint ansamblul de
reacii biochimice care au loc n celula vie.
- Catabolism reacii chimice de descompunere a
substanelor complexe n elemente simple, nsoit
de degajarea energiei (metabolism energetic)
- Anabolism reacii chimice de sintez a
substanelor complexe din elemente simple,
necesit energie (metabolism constructiv, de
sintez)
Particularitile metabolismului bacterian:
1. Este un metabolism unicelular, necompartimentat
(toate procesele metabolice se desfoar intr-o
singur celul)
2. Este foarte flexibil, realizndu-se prin diverse ci
metabolice (bacteriile se adapteaz rapid la
condiiile mediului)
3. Este foarte intens (viteza reaciilor este mare)
4. Produsele intermediare din procesele catabolice pot
fi utilizate direct n calitate de precursori pentru
reaciile anabolice (amfibolism)
n toate reaciile metabolice intervin catalizatori proteici
specifici - enzimele

Enzimele bacteriene. Caractere generale:
- Substane proteice
- Active n limite largi de temperaturi (0-65C) i
de pH (2-9)
- Specificitate de substrat i de aciune
(reacioneaz cu un substrat cataliznd un tip
de reacie)
- Specificitatea este determinat de centrul
activ al enzimei, complementar cu receptorul
de pe substrat
- Nu se modific n cursul reaciei
Clasificarea enzimelor
I. Constitutive, permanente
II. Inductive, adaptive, se sintetizeaz n prezena
substratului (ex.: lactaza)
III. Represive, sinteza lor este inhibat de acumularea n
exces a produsului reaciei catalizate
Dup locul de aciune (exoenzime, endoenzime)
Dup tipul reaciei catalizate (oxido-reductaze,
hidrolaze, transferaze, liaze, izomeraze, ligaze)
Dup impactul asupra ma/o
- Enzime metabolice
- Enzime de patogenitate, responsabile de modificri
patologice ale esuturilor, celulelor ma/o :
hialuronidaza, colagenaza, plasmocoagulaza,
hemolizina, fibrinolizina, lecitinaza, proteaze, etc.
Importana practic a studierii enzimelor
1. Rol n identificarea i clasificarea bacteriilor
(enzimele determin activitatea biochimic
specific a bacteriilor)
2. Unele substane chimice, antibiotice
interfereaz cu activitatea unor enzime,
inhibnd creterea bacteriilor (tratament)
3. Determinarea mecanismelor patogenezei
infeciilor (unele enzime sunt responsabile de
producerea leziunilor n esutul gazdei)
4. Aplicarea industrial a enzimelor

NUTRIIA BACTERIAN
Nutriia modalitile prin care bacteriile
asimileaz din mediu substanele necesare
pentru metabolism.
Modul (tipul) de nutriie la bacterii este absorbtiv.
Nutrieni substane, soluiile crora pot traversa
MCP pentru a fi antrenate n metabolismul celulei.
Se obin din alimente prin solvire (sruri minerale,
CO
2
, O
2
) sau dup o digestie prealabil (proteine,
polizaharide, lipide).
La bacterii digestia este extracelular (la
bacteriile G- n spaiul periplasmic)
Nutrienii servesc n calitate de material
de construcie i surs de energie pentru
sinteza compuilor i meninerea vieii
bacteriei.
Transportul transmembranar
1. Difuzie simpl (conform gradientului de
concentraie, fr utilizarea energiei): O
2
,
CO
2
, acizi grai, nutrieni liposolubili
2. Difuzie facilitat (conform gradientului de
concentraie) permite transportul
transmembranar al moleculelor mari prin
intermediul proteinelor de transport
specifice - permeaze.
3. Transport activ (contra gradientului de
concentraie, necesit energie). Particip
permeazele i alte proteine de transport
specifice. Nutrienii nu suport modificri.
4. Translocaie substratul este modificat
(ex.: fosforilat) n timpul transportului
membranar; necesit energie
Substanele care au ptruns n citoplasm
sunt descompuse de ctre enzimele
bacteriene conform cilor metabolice
proprii fiecrei specii bacteriene (ex.:
Embden-Meyerhof, Entner-Doudoroff, ciclul
pentozelor, ciclul Krebs, etc). Celula obine
energie i precursori care vor fi antrenai n
biosintez (anabolism).
Excreia metaboliilor difuzie, proteine de
transport, liza bacteriei
Necesitile nutritive ale bacteriilor
- Necesiti elementare, de baz: C, H, O, N n
cantiti importante, S, P, Fe, Ca, Mg, K n
cantiti mici i urme de Co, Cu, Zn, Mo
- Necesiti specifice. Bacteriile prototrofe sunt
capabile a-i realiza integral sinteza
metaboliilor eseniali. Unele bacterii
auxotrofe - solicit suplimentar compui
organici preformai (factori de cretere), care nu
pot fi sintetizai de bacterie (ex.: AA, baze
purinice, pirimidinice, vitamine). Prezena lor n
mediul de cultur este indispensabil creterii
acestor bacterii.
Clasificarea bacteriilor dup sursa de carbon
Bacterii autotrofe utilizeaz CO
2
ca unic surs de
carbon (nepatogene)
Bacterii heterotrofe utilizeaz carbonul din
compuii organici (glucide, acizi grai, alcooli, etc)
- Bacteriile care utilizeaz materia organic moart
sunt saprofite (reciclarea materiei organice)
- Bacteriile parazite (obligate, facultative) triesc pe
contul organismelor vii, aducndu-le prejudicii
- Bacteriile patogene reprezint parazite care
afecteaz grav gazda, provocnd maladie sau
moarte.

Surse de azot
- AA sau acizi nucleici
- Sruri de amoniu, nitrii, azot atmosferic

Surse de substane minerale:
- S - din AA, sulfuri, sulfai;
- P - din fosfai;
- K, Mg, Ca, Na - din sruri minerale;
- Zn, Cu, Mn, Mo din ap
Clasificarea bacteriilor dup sursa de energie
Bacterii fototrofe utilizeaz energia solar (fotosint)
Bacterii chemotrofe folosesc energia degajat din
reaciile chimice de oxido-reducere. Ele necesit un
substrat donor de hidrogen (e
-
i H
+
) i un substrat
acceptor de hidrogen. n transfer particip
transportori intermediari de electroni (lanul
respirator, NAD, NADH, FAD, etc.)
- Bacteriile chemolitotrofe donorul de H este o
substan anorganic
- Bacteriile chemoorganotrofe donorul de H este o
substan organic (glucoza, lipide...)
Bacteriile patogene sunt chemoorganotrofe
Mecanismele de obinere a energiei la
chemoorganotrofe n funcie de acceptorul
final de H :
Respiraie aerob. Acceptorul final este
oxigenul gazos. Implic lanul respirator de
transport al electronilor asociat MCP. Produs
final H
2
O sau H
2
O
2
.
Respiraie anaerob. Acceptori finali
compui anorganici (nitrat, sulfat, S).
Transportul de electroni prin lanul respirator.
Produse finale nitritul, amoniacul, sulfura (n
prezena O H
2
O
2
).
Fermentaie. Substratul organic este
metabolizat fr intervenia unui agent
oxidant extern. Const n procese de ox-red
care realizeaz numai o oxidare parial a
substratului, donorul i acceptorul de H
+
fiind
substane organice. Astfel se ajunge de la un
substrat mai redus la o molecul mai oxidat
(ex.: fermentare lactic, fermentare alcoolic,
acid mixt, acetoinic, etc). Fermentaia se
poate desfura n prezena O2, dar fr
intervenia acestuia.
Conservarea energiei
O parte din energia eliberat se pierde sub form
de cldur sau poate fi utilizat direct sub form
de energie electro-chimic (fpm) la nivelul MCP
(ex.: rotaia flagelilor, transport transmembranar)
sau stocat n compui chimici macroergici
bogai n energie: ATP (sintetizat prin fosforilare
oxidativ sau fosforilare la substrat), fosfoenol-
piruvat, acetilfosfat i acetil-CoA.
n procesele de respiraie se elimin mai mult
energie dect din fermentaie (n glicoliz dintr-un mol
de glucoz - 38 moli ATP, prin fermentaie - 2 moli
ATP). n procese de fermentare se formeaz deeuri
rejetate de ctre celul.

Clasificarea bacteriilor dup
sursele de energie i carbon
I. Bacterii fotoautotrofe (energie solar, CO
2
)
II. Bacterii fotoheterotrofe (en. sol., subst.org)
III. Bacterii chemoautotrofe
IV. Bacterii chemoheterotrofe
(chemolitoheterotrofe,
chemoorganoheterotrofe)

CRETEREA I MULTIPLICAREA BACTERIILOR
Creterea mrirea coordonat a masei i
volumului structurilor bacteriene ca rezultat al
proceselor de sintez
Multiplicarea creterea numrului de celule
pe o unitate de suprafa sau de volum
- Diviziune binar
- nmugurire (levuri, ciuperci levuriforme)
- Autoreproducere (virusuri)
- Spori (micete)
- Fragmentare (actinomicete)
Ciclul celular procesele care au loc de
la formarea celulei pna la urmtoarea
diviziune
1. Faza C replicarea ADN
2. Faza G de laten, segregarea
cromozomilor
3. Faza D de diviziune, formarea septului
Replicarea ADN depinde de masa critic a
celulei, iar separarea cromozomilor i
diviziunea intervin n momentul cnd
celula atinge o lungime - limit
Perioada dintre 2 diviziuni reprezint timpul
(perioada) de generaie (T
G
).
Durata T
G
depinde de specie i de condiiile de
cretere (condiii optime vitez maxim)
Bacteria T
G
in vitro
(min)
T
G
in vivo
(ore)
Escherichia coli 20-40 5
Staphylococcus
aureus
40 3-5
Vibrio cholerae 10 2-3
Mycobacterium
tuberculosis
120-240 24-48
Creterea bacteriilor n laborator cultivare.
Se cultiv bacteriile pentru izolarea lor din
medii naturale (prelevate patologice,
alimente, ap, etc).
Izolarea bacteriilor se realizeaz pentru:
1. Identificarea mi/o (scop de diagnostic)
2. Testatea sensibilitii lor fa de antibiotice
3. Obinerea unor produi de biosintez
(antibiotice, AA), bioconversie (hormoni
steroizi), fermentare (alcooli, acizi organici,
etc), producerea vaccinurilor, probioticelor...
Pentru cretere bacteriile au nevoie de
nutrieni i condiii fizico-chimice adecvate.
Condiiile (principiile) de cultivare
- Surs nutritiv adecvat
- Surs de energie
- Ap
- Temperatura potrivit
- pH adecvat
- Concentraie optim a oxigenului i a CO2
- Presiune osmotic adecvat
Temperatura de cretere
Exist temperaturi minime, maxime i optime
de dezvoltare a bacteriilor. n raport cu
temperatura optim deosebim:
1. Bacterii psichrofile t optim 10-20 C.
Cresc i la 0 C.
2. Bacterii mezofile optimum 30-37 C
(limite 15-45 C)
3. Bacterii termofile optimum 50-60 C
(pn la 95 C)
4. Bacterii hipertermofile (cresc la 70110 C)
pH
1. Bacterii neutrofile (majoritatea, inclusiv cele
patogene) pH 6-7,5
2. Bacterii acidofile pH 2-6 (Lactobacillus)
3. Bacterii alcalofile pH >8 (Pseudomonas,
Vibrio)
Presiunea osmotic
1. Bacterii halotolerante (osmotolerante) cresc
n concentraii reduse de NaCl (mediu izotonic
cu mediul intern al gazdei) mi/o patogene
2. Bacterii halofile prefer concentraii mari de
NaCl (1-30%) stafilococi, vibrioni (Vibrio
parahaemolyticus)
Oxigenul
1. Bacterii strict aerobe cresc doar n prezena O
2
. Obin
energia prin respiraie aerob
2. Bacterii microaerofile necesit concentraii reduse de O
2
i
2-10% CO2. Obin energia prin respiraie sau fermentaie
(Neisseria, Brucella, Campylobacter)
3. Bacterii strict anaerobe cresc doar n absena O
2
. Obin
energia prin fermentaie sau uneori respiraie anaerob.
Toxicitatea O
2
formarea H
2
O
2,
a radicalilor superoxizi O
2
-
,
sau peroxizi O
2
2-
pe care anaerobii nu le pot descompune
(absena catalazei, superoxid dismutazei, peroxidazei)
Clostridium, Bacteroides
4. Bacterii anaerobe aerotolerante pot crete n prezena O
2
,
obin energia prin fermentaie, posed peroxidaz
(Lactobacillus, streptococi)
5. Bacterii facultativ anaerobe cresc n orice condiii, obin
energia prin respiraie sau fermentaie
Mediile de cultur soluii sau substrate solide care
asigur nutrienii i condiiile fizico-chimice necesare
cultivrii bacteriilor. Ele pot fi utilizate pentru
cultivarea (izolarea) bacteriilor, testarea sensibilitii la
antibiotice, stocarea sau transportul culturilor
bacreiene.
Cerinele fa de mediile de cultur
- S asigure necesitile nutritive i energetice ale
bacteriilor
- Umiditate optimal
- pH optimal (7,2-7,4) i constant (caracter de tampon)
- Potenial de oxido-reducere optimal (anaerobi - rH
2
<5,
aerobi rH
2
>10)
- S fie izotonice (0,5% NaCl)
- S fie sterile i transparente
CLASIFICAREA MEDIILOR DE CULTUR
Dup provenien
1. Empirice, naturale. Au la baz produse de
origine animal sau vegetal (snge, ser,
lapte, ou, cartof, extracte din carne,
cord, creier, ficat, pete, levuri, etc).
Compoziia lor chimic precis nu poate fi
controlat
2. Sintetice includ ingrediente chimice
pure, compoziia chimic este cunoscut
cu exactitate
3. Semisintetice
Dup consisten
1. Medii lichide (bulion) utilizate pentru obinerea
biomasei bacteriene i a produselor lor
(antibiotice, enzime, toxine)
2. Medii solide conin 10-15% gelatin sau 2-3%
agar-agar (polizaharid extras din alge roii, t topire
80-100C, solidificare 42C). Placa de geloz n
cutii Petri este utilizat pentru izolarea culturilor
pure, geloza nclinat (n pant) pentru
acumularea culturilor pure
3. Medii semisolide 0,2 0,5 % agar-agar. Se
utilizeaz pentru studierea activitii biochimice
sau a mobilitii bacteriilor.

Dup compoziia chimic (complexitate) i
destinaie
A. Medii uzuale (universale, simple)
1. Ap peptonat (ap+1% pepton+0,5% NaCl)
2. Bulion peptonat BP (extract apos din carne +
1% pepton+0,5% NaCl)
3. Geloza nutritiv (BP + 2-3% agar-agar)
4. Gelatina nutritiv (BP + 10-15% gelatin)
Sunt utilizate pentru creterea bacteriilor
nepretenioase la cultivare
Sterilizarea prin autoclavare: 120C, 20 min
B. Medii complexe
I. Medii elective formate din medii simple cu
adaos de componente care permit creterea
mi/o exigente nutritiv (bulion-ser, bulion
glucozat, geloz-snge streptococi,
neisserii; ser coagulat corinebacterii, etc)
II. Medii selective medii solide cu adaos de
componente sau cu condiii fizico-chimice
particulare care stimuleaz creterea unor
specii i inhib creterea altor specii (geloza
salin - stafilococi, geloza alcalin - vibrioni,
mediul Ploskirev - Salmonella, Shigella, etc)

Mediile de mbogire reprezint medii selective
lichide, utilizate pentru mbogirea florei
patogene i inhibarea florei de asociaie dintr-
un prelevat plurimicrobian (ex: materii fecale)
- Mediul Muller (BP+Lugol+CaCO
3
+hiposulfit )
- Mediul Kauffmann (mediul Muller+bil+verde
de briliant) Salmonella
- Bulion cu selenit Shigella, Salmonella
- Ap peptonat alcalin (pH=8) Vibrio
cholerae
- Kitt-Tarrozzi (BP+0,5% glucoz+buci de
ficat) pentru anaerobi
III. Medii diferenial-diagnostice (DD) permit
diferenierea speciilor bacteriene n baza activitii
lor biochimice (zaharolitice, proteolitice, lipolitice,
de oxido-reducere)
Sunt construite dup urmtoarea schem:
Baz nutritiv+substrat+indicator (la necesitate)
Medii DD pentru izolarea culturii pure
Studierea proprietilor zaharolitice
Endo (geloz+lactoz+fucsin+hiposulfit de Na)

Levin (geloz+lactoz+eozin+albastru metilen)
Ploskirev (geloz+lactoz+rou neutru+sruri de acizi
biliari+verde de briliant)
Coloniile lactozo-pozitive vor fi colorate (roii pe Endo,
Ploskirev, albastru-violete pe Levin)
Studierea proprietilor de oxido-reducere
Mediul cu sulfit de Bi pentru Salmonella
(colonii negre reducerea sulfitului n sulfura
de Bi)
Mediul Klauberg (geloz-snge cu telurit de
K) pentru Corynebacterium diphtheriae
Studierea proprietilor lipolitice
Geloza cu glbenu de ou bacteriile cu
lecitinaz formeaz un halou opac n jurul
coloniei
Studierea proprietilor hemolitice
Geloza-snge (geloza+5-15% snge defibrinat)
n cazul hemolizei n jurul coloniilor apare o
zon clar


Medii DD multitest pentru acumularea culturii
pure i identificare preliminar
Russel geloz+1% lactoz, 0,1% glucoz, indicator
Kligler identic Russel+sulfat de Fe (detectarea H
2
S)
Olkeniki identic Kligler+1% zaharoz+uree
Indicatorul Andrede fucsin+NaOH
Scindarea glucidelor (acid - A, acid i gaz - AG) duce
la modificarea pH i virajul culorii mediului din rou
n galben.
n pant se apreciaz lactoza/zaharoza (oxidare), n
coloan-glucoza (fermentare).
Producerea H
2
S nnegrirea mediului

Medii DD pentru identificarea final
a culturii pure
- irul pestri Hiss (lichid sau semi-solid) un ir de
tuburi ce conin soluii 0,5% de diferite glucide i
indicator.
Aprecierea dup modificarea culorii (acid - A) i
apariia bulelor de gaz (acid i gaz - AG)
- Medii cu AA (lizin, arginin, ornitin) i indicatori
IV. Medii speciale pentru izolarea unor anumite
bacterii (Finn, Popescu, Lowenstein-Jensen
pentru agenii tuberculozei, Sabouraud fungi)

V. Medii de transport destinate transportrii
sau stocrii unui material (prelevat), care va fi
examinat ulterior.
Menine n via bacteriile, fr a favoriza
multiplicarea lor.
- Mediul cu glicerin 30%
- Soluie tampon-fosfat
- Soluie NaCl 3%
- Mediul Cary-Blair
- Mediul Stuart (NaCl, 0,5% agar, tioglicolat de
Na, albastru de metilen) pentru anaerobi,
neisserii, etc
Pentru cultivarea bacteriilor o cantitate mic de
material ce conine bacterii (inoculum) se
ntroduce ntr-un mediu de cultur
(nsmnare, inoculare), care ulterior va fi
incubat n termostat (pentru asigurarea
temperaturii optime).
n timpul incubrii (18-24-48 ore..) bacteriile
cresc i se divid, formnd o cultur bacterian
(totalitatea bacteriilor acumulate prin
multiplicare intr-un mediu).
M.tuberculosis 3-5 sptmni
V.cholerae 6-12 ore
Cultur pur format din bacterii de
aceeai specie (indispensabil identificrii)
Cultur mixt compus din bacterii de
specii diferite
Tulpin populaie microbian constituit
din descendenii unei singure izolri n
cultur pur, care va fi studiat ulterior.
Clon populaie care rezult din
multiplicarea unei singure celule

Manifestarea creterii i multiplicrii
bacteriilor
n mediu lichid
- Turbiditate uniform
- Formarea unei pelicule la suprafaa mediului
(vibrioni, yersinia - agentul pestei)
- Formarea unui sediment
la fundul tubului sau pe perei
(streptococi, Bacillus anthracis)
n mediu solid formarea coloniilor
Colonie o aglomerare de bacterii care se
dezvolt dintr-o singur celul sau un grup
de celule (UFC - unitate formatoare de
colonii) pe suprafaa unui mediu solid
Fiecare specie bacterian formeaz colonii
specifice (caracter util n identificare)


Caracteristica coloniilor
Dimensiuni colonii mici (0,1-1mm), medii (1-
2mm), mari (2-3mm)
Contur (margini) neted, ondulat, zimat, lobat,
etc
Suprafa plat, bombat, convex, ombilicat,
etc
Form punctiform, circular, filamentoas,
neregulat
Culoare (pigmentaie) alb, galben, aurie, etc
Densitate opac, transparent, etc
Consisten cremoas, untoas, uscat, mucoid

Tipurile de colonii
Colonii S (smouth) rotunde, netede, umede,
lucioase
Colonii R (rough) margini neregulate,
suprafaa uscat, rugoas

Caracterele de cultur ale bacteriilor
reprezint exigenele nutritive (medii,
temperatur, pH, aerare, etc), viteza i
manifestarea creterii pe medii lichide
i solide

Dinamica multiplicrii bacteriilor n culturi

n funcie de modul de dezvoltare a culturilor
bacteriene se disting:
- Culturi discontinue
- Culturi continue
- Culturi sincrone

Culturile discontinue se obin la cultivarea
bacteriilor n volum limitat de mediu. Astfel
de culturi sunt obinute i utilizate n
laboratorul microbiologic

Fazele dezvoltrii unei culturi discontinue
I. Faza de lag faza de adaptare la condiiile
mediului, bacteriile sunt active metabolic,
cresc n dimensiuni, dar nu se divid.
Durata este variabil (2-4 ore); depinde de
starea bacteriei, condiiile mediului, etc
II. Faza logaritmic bacteriile cresc i se divid
cu vitez maximal constant, curba
evolueaz exponenial. Bacteriile sunt foarte
sensibile la ageni antimicrobieni (culturi utile
pentru testarea sensibilitii la antibiotice).
Durata 8-10 ore
III. Faza staionar rata celulelor care se
multiplic scade treptat, numrul celulelor vii
rmne constant mai multe ore.
Cauza consumarea nutrienilor, acumularea
metaboliilor toxici.
Morfologia bacteriilor este tipic speciei, apar
incluziuni, spori (culturi utile pentru
identificare). Sensibilitatea la agenii
antimicrobieni scade. Durata 10-12 ore
IV. Faza de declin (letalitate) bacteriile mor
progresiv


Cultura continu se realizeaz cnd mediul
de cultur este continuu rennoit i
mbogit cu oxigen cu evacuarea unei
cantiti de cultur. Se realizeaz n
chemostate sau turbidostate, cultura
aflndu-se permanent n faza
exponenial. Se utilizeaz n microbiologia
industrial.
n intestin culturi continue.
Culturi sincrone culturi n care bacteriile se
divid n acelai timp

EXAMENUL BACTERIOLOGIC
Examenul bacteriologic const n
inocularea prelevatelor pe medii de cultur
pentru izolarea culturilor pure de bacterii
(tulpinilor) care vor fi ulterior identificate,
testate vis-a-vis de antibiotice, eventual
conservate.
Examenul bacteriologic const din cteva
etape succesive, de la prelevarea
(recoltarea) probelor biologice pn la
remiterea rezultatelor.
Faza pre-analitic (responsabilitatea
medicului)
Prescrierea investigaiei (n funcie de datele
examenului clinic i paraclinic). n ordonan
se fixeaz identitatea medicului, a
pacientului, scopul analizei, manifestrile
patologice, locul, data apariiei, alte date:
imunosupresie, tratament cu antibiotice,
graviditate, etc.
Prelevarea probelor
- Alegerea prelevatului (de la poarta de
intrare, locul multiplicrii sau/i din cile de
eliminare a agentului patogen)
Materiale de examinat (prelevate) de la
pacieni:
- Secreii rino-faringiene
- Sput
- Puroi
- Exudate
- Snge
- LCR
- Urin
- Mase fecale
- Bioptate
- Material cadaveric
Materiale de examinat din mediul
extern:
- Ap
- Alimente
- Sol
- Aer
- Lavaje
- Vectori, etc
Modul de prelevare (recoltare)
- n recipiente sterile
- Respectnd regulile de autoprotecie
- La debutul bolii
- Pn la administrarea antibioticelor
Transportarea
- Imediat sau utiliznd medii de transport, cu
respectarea condiiilor speciale dup necesitate
- n ambalaj special (cutii metalice, pungi din plastic...)
- n fia de nsoire s fie indicat identitatea
pacientului, vrsta, sexul, natura prelevatului, data,
ora prelevrii, scopul investigaiei)
EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU
CULTURILE AEROBE
- Prelevatul este supus examenului
macroscopic (modificarea aspectului, a
mirosului, etc) - orientare n diagnostic
- Dup necesitate, probele sunt supuse
pregtirii pentru investigaie (diluare,
omogenizare, centrifugare, etc)
- Examinarea microscopic (preparate native,
Gram, Ziehl-Neelsen, Burri-Hinss...)
prezena mi/o, forma, cantitatea, G+/-.
I etap IZOLAREA CULTURILOR PURE
Scopul izolrii - de a obine o cultur pur dintr-un
melanj de celule bacteriene sau dintr-un produs
patologic. O colonie separat constituie o cultur
pur.
Tehnici utilizate:
1. Prin epuizarea inoculului pe suprafaa gelozei din
cutia Petri (nsmnare n striuri paralele,
nsmnare n cadrane, etalarea consecutiv pe
trei cutii).
2. Metoda diluiilor logaritmice a inoculului n geloz
topit i rcit la 50 C (10
-1
, 10
-2
,...), apoi turnate
n cutii Petri sau eprubete.
Incubare n termostat la 37 C, 18-24 h (n funcie de
T
G
).

Metode speciale de izolare n culturi pure:
- A bacteriilor sporulate: nclzirea prealabil a
prelevatului 80 C 20 min
- A bacteriilor acido-rezistente: tratarea
prealabil cu acid a prelevatului i
neutralizarea ulterioar cu o baz
- A bacteriilor din asociaii cu numr minim de
mi/o patogene: mbogirea prealabil a florei
patogene utiliznd medii de mbogire
- A bacteriilor cu virulen nalt i pretenioase
la cultivare: inocularea la animalele de
laborator sensibile

II etap ACUMULAREA CULTURII PURE
- Examinarea macroscopic a coloniilor
crescute (form, culoare, dimensiuni, etc)
- Examinarea microscopic (frotiu Gram) a
coloniilor suspecte, confirmarea puritii
culturii
- Repicarea coloniilor suspecte pe geloz n
pant (nclinat) pentru acumularea culturii
pure
- Termostat, 37 C, 18-24 ore
III etap IDENTIFICAREA CULTURII PURE
- Verificarea puritii culturii (frotiu Gram)
- Identificarea culturii pure const n evidenierea
unor caractere specifice ale acestei culturi pentru a
o include ntr-o familie, gen, specie, variant
Se studiaz caracterele:
- Morfologice
- Tinctoriale
- De cultur
- Biochimice
- Antigenice (seroidentificarea)
- De patogenitate
- Sensibilitatea la bacteriofagi (fago-identificarea)
- Sensibilitatea la antibiotice

STUDIEREA ACTIVITII
BIOCHIMICE A BACTERIILOR
1. Activitatea zaharolitic (irul Hiss,
coagularea laptelui, etc)
2. Activitatea proteolitic
- Degradarea proteinelor native
(lichefierea gelatinei sau a serului
coagulat, peptonizarea laptelui, etc)
- Evidenierea enzimelor specifice (ureaz,
decarboxilaze, dezaminaze, etc) prin
detectarea produsele finale ale reaciilor:
H
2
S, NH
3
, indol
Depistarea producerii H
2
S: formarea sulfurii
de fer de culoare neagr n mediile multitest
Kligler, Olkeniki, etc; plasarea unei benzi
de hrtie de filtru mbibat cu acetat de Pb
deasupra BP n care crete cultura studiat
(formarea sulfurii de Pb nnegrete hrtia)
Depistarea indolului (produs al metabolizrii
triptofanului) benzi de hrtie mbibate cu
acid oxalic. n prezena indolului indicatorul
vireaz n roz.
Depistarea amoniacului (ureaza) hrtia de
turnesol se coloreaz n albastru.
Depistarea catalazei (H
2
O
2
.... H
2
O + O
2
)
(cultura se amestec cu o pictur de ap
oxigenat apariia bulelor de gaz)
Depistarea oxidazei (detectarea prezenei
citocromoxidazei din lanul respirator)
Reactiv di (tetra)metil-parafenilen-diamin
(benzi sau rondele de hrtie mbibate cu
reactiv, creioane, etc)
Oxidarea reactivului culoare violet-neagr
Oxidazo+ : Neisseria, Vibrio, Pseudomonas
Oxidazo- : Enterobacteriaceae
Depistarea lecitinazei mediu cu glbenu
de ou 10% - formarea unui halou opac n
jurul coloniilor
Depistarea lipazei mediu cu Twin 80 1%
halou opac n jurul coloniilor (precipitarea
acizilor grai)
Depistarea hemolizinei geloz-snge 5-
10% - zon clar n jurul coloniei
Depistarea ADNazei, fosfatazei, etc
Probele sunt incubate la 37 C, 18-24 h
Identificarea rapid
Utilizarea galeriilor miniaturizate standarde
(economie de timp, spaiu, material)
Sistemul API o galerie din plastic format
din numeroase alveole care conin fiecare
un mediu deshidratat diferit (glucide, AA,
etc). Alveolele sunt inoculate cu o
suspensie bacterian testat i incubate.
Ulterior la necesitate se adaug reactive
pentru detectarea metaboliilor particulari.
Lectura conform unui cod de cifre sau
computerizat
IV etap EVALUAREA REZULTATELOR,
FORMULAREA SI ELIBERAREA
RSPUNSULUI
- Compararea rezultatelor obinute cu
caracterele speciilor bacteriene cunoscute
pentru a gsi asemnri.
- Exemplu de rspuns: Din proba examinat a
fost izolat tulpina de Corynebacterium
diphtheriae, biovar gravis, tox+, sensibil la
...., rezistent la .....
EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU CULTURI
ANAEROBE (clostridiene, neclostridiene)
Condiia principal cultivare n absena oxigenului
1. Utilizarea mediilor anaerobe (Kitt-Tarrozzi
regenerat - 100 C, 20 min, rcit, acoperit cu
vazelin; nsmnarea n geloz n coloan)
2. Crearea condiiilor de anaerobioz
- Metoda fizic utilizarea anaerostatului
- Metoda chimic n exicator se ntroduc substane
ce fixeaz oxigenul (pirogalol+baz); utilizarea
gas-pachetelor
- Metoda biologic Fortner cultivarea concomitent
a aerobilor i anaerobilor
Recoltarea cu precauie, evitnd contactul
cu aerul (n seringi, utiliznd medii speciale)
I etap MBOGIREA ANAEROBILOR
- nsmnarea prelevatului n 2 eprubete cu
mediul Kitt-Tarrozzi regenerat
- nclzirea unui tub la 80 C, 20 min
distrugerea florei nesporogene
- Incubarea la 37 C, 24-48 h (va avea loc
nmulirea anaerobilor)

II etap - IZOLAREA CULTURII PURE
DE ANAEROBI
- Studierea caracterelor de cultur tulburarea
mediului, descompunerea bucilor de ficat,
etc
- Izolarea culturii pure de anaerobi prin
metoda Zeissler (nsmnarea a 0,1 ml din
mediul K-T pe 3 cutii cu geloz-snge
glucozat consecutiv). Incubarea n
anaerostat/exicator/gas-pack, 24-48 h
- Metoda Weinberg diluii succesive a culturii
n geloz glucozat lichefiat i aspirarea n
tuburi lungi i nguste, nchise ermetic.
Incubarea n termostat, 24 h
III etap - ACUMULAREA CULTURII PURE
- Studierea macroscopic a coloniilor
- Examinarea microscopic (frotiu Gram) a
coloniilor suspecte
- Repicarea n mediul K-T regenerat pentru
acumularea culturii pure
- Incubarea n termostat, 24 h
IV etap - IDENTIFICAREA CULTURII
PURE DE ANAEROBI
- Verificarea puritii culturii pure (frotiu
Gram)
- Studierea caracterelor culturii pure izolate
(cu respectarea condiiilor de anaerobioz)

V etap - EVALUAREA REZULTATELOR,
FORMULAREA I ELIBERAREA
RSPUNSULUI