Biosenzori

Biosenzori
Bibliografie
1.
B. Eggins, Biosensors. An Introduction, Ed. Willey

Teubner, 1996.
2.
L. Kekedy, Senzori elecrochimici metalici

ionselectivi, Ed. Academiei, Bucureti, 1987.
3.
X. Zhang, H. JU, and J. Wang, Electrochemical

Sensors,
Biosensors
and
Their
Biomedical
Applications, Ed. Elsevier, 2008.
Biosenzori
1. Introducere
1.1. Definiia biosenzorului. Structura. Parametrii.
Biosenzorul este un circuit analitic care convertete un
rspuns biologic ntr-un semnal electric.
Este folosit pentru determinarea concentraiilor
substanelor i a unor parametri biologici.
Este alctuit din trei pri: elementul biologic sensibil,
traductorul i electronica pentru prelucrarea semnalelor.
12/3/2010
Biosenzori
r Structura unui biosenzor
(a) bio-reacie transform substratul (S) n produs (P);

(b) traductor determin reacia i o transform ntr-un semnal
electric;
(c) amplificator amplific semnalul electric;
(d) circuit de prelucrare a semnalelor - prelucrarea semnalului
electric amplificat;
(e) dispozitiv de afiare afiarea rezultatului prelucrrii semnalului.
12/3/2010
Biosenzori
r Exemplu de biosenzor : nasul

Structura
nazal
sistemului
olfactiv
Nrile preiau un eantion de miros, care este apoi sesizat de membrana

olfactiv (elementul biologic). Rspunsurile membranei olfactive sunt
convertite de ctre celula nevoas olfactiv (traductorul) n semnale
electrice, care sunt transmise dealungul fibrelor nervoase creierului
pentru interpretare. Astfel, creierul se comport ca un microprocesor
(circuit de prelucrare a semnalelor), transformnd semnalul ntr-o
senzaie, pe care o numim miros.
12/3/2010
Biosenzori
m Substratul (analitul)
Orice substan care este consumat sau produs ntr-un proces
biochimic poate fi, n principiu, analizat de un bisenzor construit n
acest scop.
Exemple: zaharuri, urea, creatina, etanolul, acidul glutamic, acidul
lactic, fosfatul, colesterolul, penicilina, paracetamolul, aspirina, TNT,
diferii aminoacizi.
m Elementul biologic sensibil

Importana elementului biologic const n faptul c interaciunea sa
cu substratul este n cea mai mare parte realizat doar cu acesta,
fr influena (interferena) altor substane. Elementul biologic poate
cataliza o reacie implicnd substratul (enzima) sau se poate lega
selectiv cu substratul (anticorpi).
Exemple: enzime sau componente care conin enzime (microorganisme
i esuturi), anticorpi, acizi nucleici.
12/3/2010
Biosenzori
m Traductoare
- Electrochimice:
(a) Poteniometrice
Implic msurarea potenialului unei celule la curent egal cu
zero. Potenialul este proporional cu logaritmul concentraiei
substanei care trebuie determinat.
(b) Voltametrice
O cretere (descretere) de potenial este aplicat celulei pn
la oxidarea substanei analizate. n acest situaie apare o
cretere (descretere) a curentului prin celul. nlimea
vrfului de curent este proporional cu concentraia
materialului electroactiv.
Dac potenialul corespunztor oxidrii este cunoscut, mrimea
analizat este curentul. Acest mod este cunoscut sub numele
de amperometric.
(c) Conductimetrici
Soluiile care conin ioni conduc electricitatea. Valoarea
conductivitii depinde de reacia chimic sau biologic. Relaia
dintre concentraie i conductan depinde de natura reaciei.
12/3/2010
Biosenzori
- Senzori bazai pe tranzistoarele cu efect de cmp (FET Field Effect

Transistor )
Miniaturizarea poate fi obinut prin realizarea unora dintre senzorii
precizai anterior (cel mai adesea senzorii poteniometrici, dar
i pentru cei voltametrici sau conductimetrici) pe cipul unui tranzistor
FET.
- Optice
Sunt bazate pe tehnicile: absoia spectroscopic, spectroscopia
fluorescent, spectroscopia luminicent, spectroscopia reflexiei
interne, mprtierea luminii.
- Piezoelectrice
Acestea implic generarea unor cureni electrici ntr-un cristal
care vibreaz. Frecvena vibraiei este afectat de masa
materialului absorbit n suprafaa sa, care poate fi legat la o
reacie biochimic activ.
- Unde acustice de suprafa
- Metode termice
Procesele chimice i biochimice implic producerea sau absoia
de cldur. Aceasta poate fi msurat cu termistoare i, astfel,
legat de o parte a reaciei.
12/3/2010
Biosenzori
r Parametrii unui biosenzor

- Selectivitatea: - indic abilitatea de a deosebi diferite substraturi. Este,
n principal, o funcie a elementului biologic.
- Domeniul de sensibilitate: - n general este ordinul sub-milimolar, dar
poate cobor, n cazuri speciale, la ordinul femtomolar (10-15 M).
- Precizia: - n general este n jurul valorii de 5 %.
- Natura soluiei: - condiii precum indicele pH, temperatura, fora
ionic, care trebuie considerate.
- Comportarea dinamic:
- timpul de rspuns timpul necesar pentru a ajunge la 95% din
rspuns (poate fi 30 s sau mai mare);
- timpul de revenire timpul necesar biosenzorului pentru a putea fi
gata pentru analizarea unui nou eantion (nu trebuie s depeasc
cteva minute);
- durata de funionare este determinat de instabilitatea
elementului biologic (poate varia de la cteva zile la cteva luni).
Exemplu: biosenzorul pentru msurarea glucozei n snge 1 an.
12/3/2010
Biosenzori
r Metode de imobilizare a elementului biologic de traductor

Elementul biologic trebuie s fie conectat ct mai bine
de traductor.
Sunt mai multe metode de realizare a acestui lucru:
- Metoda adsoriei la suprafa
este cea mai simpl metod
- Microncapsularea
prinderea se face ntre membrane. Este cea mai veche
metod (este folosit pentru biosenzorii de msurare a glucozei i
ureii).
- Prinderea n capcan
elementul biologic este prins ntr-o structur de gel, de past
sau de polimer. Este cea mai des folosit metod.
12/3/2010
Biosenzori
- Ataare covalent
- ntre elementul biologic i traductor se realizeaz legturi
chimice covalente.
- Legtur ncruciat
- este utilizat un agent bifuncional pentru realizarea unei legturi
ntre traductor i elementul biologic. Se utilizeaz, adesea,
mpreun cu metoda adsoriei i a prinderii n capcan.
12/3/2010
Biosenzori
10
1.2. Primii biosenzori

m Poart denumirea de biosenzori bazai pe enzime (enzyme-based
biosensors).
r Biosenzorul pentru determinarea glucozei n snge

m Primul biosenzor bazat pe enzime a fost senzorul pentru determinarea
glucozei n snge descris de Clark i Lyons (1962).
Glucoza este foarte important deoarece este implicat n procesul
metabolic. La bolnavii de diabet nu se produce suficient insulin n
pancreas pentru a controla adecvat nivelul de glucoz n snge. Pentru
a elimina acest neajuns se administreaz o doz de insulin. De
asemenea, este necesar ca bolnavii s-i verifice n mod regulat nivelul
glucozei n snge.
Biosenzorul pentru determinarea glucozei n snge este cel mai
utilizat i, ca urmare, cel mai studiat biosenzor. Cu acest biosenzor
pacientul i extrage o mic pictur de snge, care apoi este analizat
pentru determinarea concentraiei de glucoz, iar n final rezultatul este
afiat pe un dispozitiv. Durata analizei aproximativ 1 minut.
12/3/2010
Biosenzori
Biosenzorul se bazeaz pe faptul c enzima

glucozoxidaza (GOD Glucose OxiDase) catalizeaz
oxidarea glucozei n acid gluconic
GOD
Glucoz + O2 + H2O
Acid gluconic + H2O2
m n cadrul primilor biosenzori oxigenul a fost utilizat ca agent

de oxidare. Consumul de oxigen a fost urmat de o reacie
de reducere chimic la electrodul de platin, ca n cazul
electrodului de oxigen a lui Clark. La acest electrod reacia
este:
O2 + 2e- + 2H+ = H2O2

12/3/2010
Biosenzori
Structura electrodului oxigen realizat de Clark (1953)
12/3/2010
Biosenzori
m O tensiune egal cu 0,7 V este aplicat ntre catodul de

platin i anodul de argint, suficient pentru a reduce
oxigenul, iar apoi curentul prin celul, care este
proporional cu concentraia de oxigen, este msurat.
Concentraia de glucoz este astfel proporional cu
scderea curentului (concentraia de oxigen).
12/3/2010
Biosenzori
Schema biosenzorului cu electrodul oxigen realizat de Clark
Electrodul oxigen are o membran permeabil de oxigen (de

exemplu polietilen sau celofan) care acoper electrozii. Un strat de
enzim (glucozoxidaz) este plasat deasupra acestei membrane,
urmat de o alt membran din teflon.
12/3/2010
Biosenzori
Schema straturilor biosenzorului cu electrodul oxigen realizat de Clark
M1 = membran din celofan;

M2 = membran din teflon.
Substratul (soluia de glucoz) i oxigenul pot penetra prima

membran. Acestea reacioneaz cu enzima i formeaz produii.
Numai oxigenul care rmne poate penetra a doua membran.
Acesta este msurat cu ajutorul electrodului.
12/3/2010
Biosenzori
r Biosenzorul pentru determinarea ureii

m A fost realizat pentru determinarea ureii, care este componenta
major a urinei. Primul biosenzor a fost realizat de Guibault i
Montalvo (1969).
m Ureea este hidrolizat de enzima ureeaz formnd amoniacul i
dioxidul de carbon
CO(NH2)2 + H2O
12/3/2010
ureeaz
Biosenzori
CO2 + 2NH3
m Concentraia de amoniac este monitorizat prin

intermediul unui electrod sensibil la ioni de amoniu.
Tensiunea electrodului este msurat la un curent apropiat
de zero. Aceast tensiune este proporional cu logaritmul
concentraiei de amoniac, care este proporional cu
concentraia de uree.
m Electrodul sensibil de amoniu este un electrod pH din sticl
modificat. Enzima este amestecat cu un gel i dispus pe
o membran de nailon care acoper electrodul. Aceasta
este urmat de o a doua membran.
12/3/2010
Biosenzori
1.3. Domenii de aplicaii ale biosenzorilor

m Medicin
-
Este principalul domeniu de aplicaie.

Se utilizeaz n msurri ale sngelului, gaze, ioni i diferii produi
metabolici. Acestea sunt necesare pentru determinarea strii
metabolice a pacientului n special pentru pacienii din spitale i mai
ales pentru cei aflai la terapie intensiv. Prin utilizarea biosenzorilor
se evit efectuarea analizelor de laborator care dureaz foarte mult
ore sau chiar zile.
m Controlul proceselor industriale

Biosenzorii pot fi utilizai n diferite stadii ale proceselor de
fermentaie: - off-line n laborator;
- off-line, dar apropiat de operaia efectuat;
- on-line, n timp real.
- Monitorizrile n timp real pentru indicele pH, temperatur, CO2 i O2.
- Biosenzori utilizai pentru monitorizarea diferiilor reactani: diferite
zaharuri, drojde, mal i alcool. Aplicaii n industria alimentar.
12/3/2010
Biosenzori
m Monitorizarea mediului nconjurtor

Biosenzorii sunt folosii, de regul, pentru analiza aerului, apei i
solului. Sunt analizate: aciditatea, pesticidele, ngrmintele
chimice, deeurile industriale i menajere.
- n plus, biosenzorii sunt folosii i n alte aplicaii precum: agricultur
(lucrri asupra pmtului), grdinrit, domeniul veterinar i minerit.
12/3/2010
Biosenzori
10
10
2. Elemente biologice
2.1. Introducere
m Elementele biologice furnizeaz elementul selectiv principal ntr-un
biosenzor. Ele trebuie s fie substane care se ataeaz ele nsele cu o
substan particular i nu cu altele. Materiale care pot realiza acest
lucru se mpart n patru grupe: enzimele, anticorpii, acizii nucleici i
receptorii.
r Enzimele
Se folosesc cel mai adesea ca elemente biologice.

Pot fi utilizate fie n form pur, fie prezente n microorganisme sau
n pri din esuturi intacte.
Sunt catalizatori biologici pentru reacii specifice i se pot lega ele
nsele cu substraturi specifice. Aciunile catalizatoare sunt utilizate
n cadrul biosenzorilor.
12/3/2010
Biosenzori
r Anticorpii
Se leag cu antigenii corespunztori n scopul eliminrii acestora din

sfera de aciune, dar nu au un efect catalizator.
Sunt capabile s dezvolte o sensibilitate foarte ridicat n cadrul
biosenzorilor.
r Acizii nucleici
Au fost utilizai mai rar pn n prezent.
Opereaz selectiv datorit caracteristicilor lor de formare de perechi
de baz (base-pairing).
Au un mare potenial de utilizare n identificarea dezordinii genetice, n
special la copii.
r Receptorii
nuntrul membranei de plasm cu dou straturi a lipidei, care
nconjoar o celul, sunt proteine care traverseaz ntreaga lime a
membranei i care au proprieti de recunoatere molecular. Acestea
se numesc receptori.
Sunt dificil de izolat, dar realizeaz o legtur a dizolvanilor cu un
grad de afinitate i o potrivire specific a anticorpilor.
12/3/2010
Biosenzori
11
2.2. Enzimele
m Enzima este o macromolecul complex cu coninut mare de
protein, uzual coninnd un grup proteic, care include adesea
unul sau mai muli atomi de metal.
m La multe enzime, n special la cele utilizate n biosenzori,
modul de aciune implic reacii de oxidare sau de reducere,
care pot fi detectate electrochimic.
12/3/2010
Biosenzori
m Reacia catalitic la care particip o enzima E i substratul S
k1
S+E
ES
k2
E+P
k-1
k1, k-1, k2 = constante de vitez chimic de reacie

La ciocnirea (cu o anumit vitez i sub un anumit unghi) unei
moleculei de enzim E cu o molecul de substrat S se formeaz o
molecul de compus intermediar enzim-substrat notat ES
(enzima se ataeaz substratului). Moleculele ES pot da natere
unui produs P cu eliberarea enzimei E. Enzima joac, astfel, rolul
de catalizator pentru transformarea substratului S n produsul P.
12/3/2010
Biosenzori
12
m Exemplu:
Glucoz + O2 + GOD
ES
S = Glucoz + O2
E = Glucozoxidaz (GOD)
P = Acid gluconic + H2O2
12/3/2010
Biosenzori
m Modelul matematic al reaciei enzimatice este constituit dintrun sistem neliniar cu dou ecuaii difereniale, neliniaritatea
fiind de tip biliniar.
m Pentru rezolvarea sistemului se consider ipoteza:
concentraia complexului enzim-substrat este constant.
Astfel, viteza de formare a complexului din componentele sale
este echilibrat de viteza de descompunere napoi n enzim i
nainte n produs.
m Ipoteza este plauzibil dac avem o concentraie mult mai
mare a substratului n raport cu enzima, ceea ce este n
concordan cu realitatea.
12/3/2010
Biosenzori
13
Viteza de formare a complexului = k1[S][E] k-1[ES]

Viteza de descompunere a complexului = k2[ES]
Datorit ipotezei avem:
k1[S][E] k-1[ES] k2[ES] = 0

Vom descrie concentraia enzimei n termeni totali:
[E0] = [E] + [ES]

k1[S][E0] k1[S] [ES] k-1[ES] k2[ES] = 0
12/3/2010
Biosenzori
[ES ] =
k1 [E 0 ][S ]
k 1 + k 2 + k1 [S ]
KM = (k-1 + k2)/k1 constanta Michaelis
[ES ] = [E0 ][S ]

K M + [S ]
Viteza chimic total de reacie (viteza de formare a
produsului) este dat de ecuaia Michaelis Menton:
12/3/2010
k [E ][S ]
d [P ]
d [S ]
=
= k 2 [ES ] = 2 0
dt
dt
K M + [S ]
Biosenzori
14
Dac [S] >> KM, atunci viteza chimic de reacie este maxim:
V max = k 2 [E 0 ]
Dac [S] = KM, atunci = Vmax/2
12/3/2010
Biosenzori
Pentru a obine grafic o dreapt se determin inversa ecuaiei

Michaelis Menton:
1 / =
K M + [S ]
KM
K
1
=
+
= M
k 2 [E0 ][S ] k 2 [E0 ][S ] Vmax Vmax
1
1
+
[S ] Vmax
Graficul 1/ = f(1/[S]) este o dreapt cu panta KM/Vmax i

decalajul 1/Vmax. Ca urmare, valorile pentru KM i Vmax pot fi
determinate.
12/3/2010
Biosenzori
15
10
2.2.1. Exemple de biosenzori bazai pe enzime
r Ureea
Reacia de descompunere hidrolitic a ureii este catalizat de
enzima ureeaz, obinndu-se amoniacul i dioxidul de carbon:
CO(NH2)2 + H2O
ureeaz
CO2 + 2NH3
Reacia este, n general, urmrit n funcie de potenial cu

ajutorul unui electrod sensibil la ioni de amoniac, care poate
detecta 10-6 M de amoniac.
12/3/2010
Biosenzori
11
m Performane:
Domeniu: 3 x 10-5 5 x 10-2 M;
Timpul de rspuns: 1 5 minute;
Timpul de revenire: 5 10 minute;
Durata de funcionare: 60 zile.
12/3/2010
Biosenzori
16
12
r Glucoz
Reacia de oxidare a glucozei de ctre oxigenul molecular,

catalizat de enzima glucozoxidaz (GOD), care conduce la
obinerea acidului gluconic i a apei oxigenate:
GOD
Glucoz + O2
Reacia a fost iniial urmrit cu ajutorul electrodului oxigen a

lui Clark, care monitorizeaz pe baza curentului descreterea
concentraiei de oxigen.
12/3/2010
Biosenzori
13
m Performane:
Domeniu: < 1 - 30 mM;
Timpul de rspuns: 1 1,5 minute;
Timpul de revenire: 30 secunde;
Durata de funcionare: cteva luni.
12/3/2010
Biosenzori
17
14
2.2.2. Avantajele i dezavantajele enzimelor

m Avantaje:
Se leag de substrat.
Au o sensibilitate ridicat.
Acioneaz ca i catalizatori, ceea ce conduce la creterea
sensibilitii.
Aciunea lor este relativ rapid.
Sunt cele mai utilizate componente biologice.
12/3/2010
Biosenzori
15
m Dezavantaje:
Sunt scumpe. Preul de extragere, izolare i purificare a
enzimelor este foarte ridicat, iar uneori i preul sursei de
provenien este ridicat. Cu toate acestea, un numr mare
de diferite enzime este disponibil pe pia.
Imobilizarea cu traductorul conduce la o pierdere a aciunii
lor.
ntr-un interval de timp relativ scurt aciunea lor tinde s se
piard conducnd la dezactivare.
12/3/2010
Biosenzori
18
16
2.3. esuturile
m esuturile din plante i animale pot fi utilizate direct, fiind
necesar doar o minim preparare.
m n general esuturile conin mai multe enzime, i de aceea, nu
pot fi aa de sensibile ca i enzimele purificate. Cu toate
acestea, enzimele se gsesc n starea lor natural i, astfel,
sunt mai puin supuse la degradare. Ca urmare, biosenzorii
care folosesc esuturile ca element biologic au un timp de
funcionare mai mare.
m Rspunsul lor este mai lent atunci cnd se folosete o cantitate
mai mare de esut pentru substrat. n acest caz cantitatea de
esut dilueaz (reduce) efectul enzimelor.
m Sunt mai stabile la aciunea dizolvanilor si la modificrile de
temperatur i pH.
12/3/2010
Biosenzori
m Avantaje:
Enzimele sunt meninute n mediul lor natural.
Activitatea enzimei este stabilizat.
Uneori pot funciona acolo unde enzimele purificate nu pot
funciona.
Sunt mai ieftine dect cele care utilizeaz enzime purificate.
m Dezavantaj:
Poate avea loc un proces de interferen, care conduce la
reducerea sensibilitii.
12/3/2010
Biosenzori
19
m Exemple:
1.
Arginina este un amino acid complex care este, adesea,

gsit n form activ (sau catalitic) n proteine i enzime.
Cu toate c este considerat un amino acid esenial, care
se obine din diet, acest lucru este adevrat doar n
perioada juvenil. Arginina se afl n proteine n procent de
aproximativ 4,7% ntr-o cantitate egal cu un mol. Surse
naturale de arginin: orez brun, nuci, popcorn, struguri i
toate produsele din gru.
12/3/2010
Biosenzori
Arginina
12/3/2010
Biosenzori
20
Arginina este descompus, folosind un esut din ficat de

bovin, n uree i ornitin. Ureea este, apoi, determinat cu
ajutorul unui biosenzor poteniometric care utilizeaz
enzima ureeaz.
ficat de bovin
arginin
uree + ornitin
ureeaz
uree + 2H2O
12/3/2010
2.
2NH4+ + HCO3-
Biosenzori
Glutamina este cel mai abundent amino acid liber n corpul

uman. Ea constituie 50-60% din totalul amino acizilor liberi
din muschiul scheletic i aproximativ 20% din plasma de
amino acizi.
Ea este esenial n multe funcii homeostatice, care includ
echilibrul pH i al fluidului corpului, reglarea temperaturii i a
ritmului cardiac, precum i n funcinarea optim a mai multor
esuturi ale corpului, n particular sistemul imun i intestinul.
Glutamina este implicat n transportul nitrogenului de la un
organ la altul i influeneaz direct balana de sintez a
proteinelor i degradare a proteinelor.
Glutamina se gsete n majoritatea surselor de protein din
animale i plante.
12/3/2010
Biosenzori
21
Locurile
de
producere
i
de
utilizarea
a glutaminei n
corpul uman
12/3/2010
Biosenzori
Glutamina este descompus, folosind un esut din ficat de

porc, n amoniac i acid glutamic. Amoniacul este, apoi,
msurat folosind un electrod sensibil la ioni de amoniac.
ficat de porc
glutamina + H2O
12/3/2010
NH3 + glutamat
Biosenzori
22
3.
Determinarea nivelului de dopamin din creier. Dopamina

este un derivat catecol.
12/3/2010
Biosenzori
esutul din banan (la fel ca i esuturile din mr,

castravete i ciuperc) conin polifenolaza. Aceasta
catalizeaz oxidarea moleculelor, care conin grupuri
catecol, n o-chinon.
Biosenzorul pentru msurarea dopaminei este bazat pe un
esut din banan. Enzima polifenol oxidaz din esutul din
banan catalizeaz oxidarea formei dihidroxid a dopaminei
n forma chinon utiliznd oxigenul din mediul ambiant.
Reacia de reducere a chinonei napoi n forma dihidroxid
conduce la apariia unui curent, care este proporional cu
concentraia de dopamin.
Biosenzorul conine un electrod de past de carbon. La
acest electrod se realizeaz un amestec de pulbere de
grafit cu ulei de parafin (Nujol) i se formeaz o past
dens. n plus, la acest biosenzor, esutul din banan este
amestecat cu aceast past. Aceast past este, apoi,
introdus n suportul n care se afl electrodul.
12/3/2010
Biosenzori
23
10
Structura biosenzorului
12/3/2010
Biosenzori
11
m Alte exemple n care se utilizeaz esuturile:
12/3/2010
Biosenzori
24
12
2.4. Microorganismele
m Microorganismele joac un rol important n multe procese
biotehnologice, cum ar fi de exemplu: producerea berii, sinteza
farmaceutic, realizarea produselor alimentare, tratarea apei
reziduale i producerea energiei. Pentru monitorizarea acestor
procese au fost realizai mai muli biosenzori, bazai pe
microorganisme imobilizate pe traductor.
m Microorganismele pot asimila compui organici, care conduc la
o modificare a activitii respiratorii i pot produce produi
metabolici electroactivi.
12/3/2010
Biosenzori
13
m Avantaje:
Sunt surse mai ieftine de enzime n comparaie cu
enzimele izolate.
Sunt mai puin sensibile la aciunea dizolvanilor i mai
tolerante la modificrile pH i ale temperaturii.
Au o durat de funcionare mai mare.
m Dezavantaje:
Au, cteodat, un timp de rspuns mai mare.
Au un timp de revenire mare.
La fel ca i esuturile, ele conin, adesea, multe enzime i,
astfel, pot avea o sensibilitate mai mic.
12/3/2010
Biosenzori
25
14
m Exemple:
1.
In procesul de fermentaie a melasei trestiei de zahr, care

conine diferite zaharuri, este important s se determine
toate zaharurile asimilate. Acest lucru poate fi realizat
folosind toate celulele ale bacteriei Brevibacterium
lactofermentum imobilizat pe electrodul oxigen.
2.
Biosenzorul pentru msurarea glucozei poate fi realizat

utliznd bacteria Pseudomonas fluorescens imobilizat pe
electrodul oxigen. Schema acestui biosenzor este
prezentat n figura urmtoare.
12/3/2010
Biosenzori
15
a anod;
b catod de platin;
c, d inele de cauciuc;
e gel electrolit;
f membran;
g microorganisme reinute
pe plasa de nailon;
h membran de celofan.
12/3/2010
Biosenzori
26
16
3.
Biosenzor pentru determinarea etanolului sau a acidului

acetic - care utilizeaz bacteria Trichosporon brassicae i un
senzor de msurare a oxigenului pentru etanol sau acidul
acetic. Pentru determinarea acidului acetic indicele pH este
meninut la o valoare mai mic dect constanta de disociere
a acidului acetic pKa (= 4,75) pentru ca ionii de acetat s nu
treac prin membran. Trebuie remarcat faptul c nu exist
rspuns la compui volatili cum ar fi de exemplu acidul
formic sau metanolul, sau la nutriei cum ar fi fosfatul sau
glucoza. n schimb, exist inteferene de la acidul propionic,
acidul butanoic sau etanol, dar acetia nu sunt, n general,
prezeni n procesul de fermentaie.
n modul alcool indicele pH este meninut sub valoarea de 6
pentru ca acidul acetic, acidul propionic, etc. s fie n starea
lor de ionizare i s nu poat trece prin membran. Acest
biosezor are o mare sensibilitate. A fost realizat comercial n
Japonia.
12/3/2010
Biosenzori
17
m Ali biosenzori n care se utilizeaz microorganisme:
12/3/2010
Biosenzori
27
18
2.5. Mitocondria
m Mitocondria sunt particule multi-enzime subcelulare care pot fi
utilizate ca i componente biocatalitice.
m Ele pot fi, uneori, utile n mbuntairea rspunsului
biosenzorului i a sensibilitii acestuia, atunci cnd ntregul
esut i pierde din proprietile necesare.
12/3/2010
Biosenzori
19
r Caracteristicile biosenzorilor care msoar nivelul de

glutamin realizai folosind: enzime izolate, mitocondria,
bacterie i esut din ficat de porc
12/3/2010
Biosenzori
28
20
m Concluzii:
Sensibilitatea (panta n mV/decad) cea mai redus este
obinut n cazul utilizrii enzimelor izolate. n celelalte
cazuri este mai mare, dar nu depeste niciodat valoarea
Nernst (59 mV/decad).
Rspunsurile n termeni de limite de detecie i domeniu
liniar sunt similare. Cel mai peformant este biosenzorul
care utilizeaz un esut din ficat de porc.
Timpul de rspuns este lung n toate cazurile. Cel mai mare
este n cazul biosenzorului care utilizeaz un esut din ficat
de porc.
Durata de funcionare cea mai mic o are biosenzorul care
utilizeaz enzimele izolate, iar cea mai mare o are cel care
utilizeaz un esut din ficat de porc.
12/3/2010
Biosenzori
21
2.6. Anticorpi
m Organismele dezvolt anticorpi (Ac). Acestea sunt proteine care
se pot lega cu un antigen (Ag), legtur fiind reversibil:
Ac + Ag
Ac Ag
m Interaciunea anticorp antigen este similar cu interaciunea

dintre o enzim i substratul ei, cu deosebirea c aceasta din
urm nu este reversibil. n plus, anticorpii se leag cu o mai
mare putere i o mai mare specificitate cu antigenul
corespunztor dect enzimele cu substraturile lor.
12/3/2010
Biosenzori
29
m Forele care intervin la realizarea legturii dintre anticorp i

antigen sunt exclusiv necovalente. Fora tuturor interaciunilor
necovalente este denumit afinitate.
m Anticorpii cu afinitate sczut pentru un anumit antigen tind s
se lege slab la acesta i s se disocieze repede. Asocierea celor
dou componente poate fi caracterizat printr-o constat de
asociere Ka, iar disocierea printr-o alt constat, numit
constant de disociere Kd. Cele dou constante sunt invers
proporinale (Ka = 1/Kd).
m Constanta Ka reprezint i constanta de echilibru a reaciei. Este
dat de relaia:
Ka = [Ag Ac]/[Ag][Ac]
m Ka se exprim n M/litru sau M-1.
12/3/2010
Biosenzori
m Rata de disociere Kd reprezint o msur cantitativ a

stabilitii complexului respectiv. Ea se exprim n M/litru sau
M.
m Cu toate c nu au o activitate catalitic ca i enzimele, anticorpii
sunt ultra - sensibili.
m Anticorpii se folosesc, adesea, n forme etichetate.
m Anticorpii necunoscui pot fi determinai utiliznd anticorpi
etichetai. Etichetarea poate fi realizat folosind radioizotopi,
enzime, celule roii, sonde fluorescente sau sonde
chemiluminiscente (chemiluminiscen = lumina obinut n
urma unei reacii chimice fr producere de cldur).
m Anticorpii au fost utilizai n imunodozri.
12/3/2010
Biosenzori
30
m Avantaje:
Sunt foarte selectivi.
Sunt ultra-sensibili.
Se leag foarte puternic.
m Dezavantaj:
Nu au un efect catalitic.
12/3/2010
Biosenzori
m Putem clasifica imunodozrile enzim legat n funcie de

metoda electroanalitic utilizat.
r Analiza amperometric bazat pe electrodul oxigen al lui Clark

m Un exemplu este determinarea gonodotrofinei corionice
(hCG) utiliznd catalaza etichetat hCG. Gonodotrofina
corionic este un hormon secretat de ctre placent n timpul
primelor luni de sarcin.
m Un anticorp a fost imobilizat pe membrana de celuloz, care
este, apoi, plasat deasupra membranei din PTFE
(politetrafluoretilen) a electrodului oxigen.
12/3/2010
Biosenzori
31
Senzorul amperometric hCG
m Ambele hCG etichetat i neetichetat sunt n competiie pentru

anticorpul imobilizat n membran.
m Membrana este, apoi, splat pentru a elimina legtura de la
hCG liber.
m Electrodul este expus la soluia de ap oxigenat (peroxid de
hidrogen), care produce oxigenul i catalaza. Oxigenul este,
apoi, msurat folosind electrodul oxigen.
12/3/2010
Biosenzori
r Imunodozri enzim legat amperometrice

m Un exemplu este serul orosomucoid (hso) etichetat cu
fosfataza alcalin (AP).
m Serul orosomucoid este acidul glicoproteinic -1 (-globulinele
plasmei sanguine).
m Exist o reacie competitiv ntre anticorp i hso imobilizat pe
suprafaa unei cuvette i enzima etichetat hso. Aceasta este
eliminat i substratul fosfat de fenil este adugat:
fosfat + fenol
fosfat de fenil + H2O
m Concentraia fenolului este msurat prin oxidare electrochimic

la electrodul past de carbon.
12/3/2010
Biosenzori
32
r Imunodozri poteniometrice
m Dezvoltarea biosenzorilor bazai pe anticorpi care utilizeaz
traductoare poteniometrice a fost lent i cu multe probleme. Cu
toate acestea, au fost realizate cteva exemple de astfel de
bionsenzori cu performane satisfctoare.
m Un exemplu este determinarea estradiolului 17, ultiliznd un
electrod sensibil la ioni de iodur. Estradiolul 17 este un hormon
mai mult specific femeilor (la brbai exist n niveluri sczute),
care reprezint majoritatea esterogenului. Are efect asupra
oaselor.
m Anti-estradiolul 17 a fost imobilizat pe o membran de gelatin
pe suprafaa electrodului sensibil la ioni de iodur.
m Analiza a fost realizat pe baza competiiei dintre peroxidaza
etichetat antigen i eantionul antigen.
12/3/2010
Biosenzori
Determinarea estradiolului 17
12/3/2010
Biosenzori
33
m Cantitatea de eantion antigen este invers proporional cu cea a

antigenului etichetat.
m Antigenul etichetat este determinat prin adugarea de H2O2 i
iodur, care apoi este convertit n iodur n prezena
peroxidazei.
m Electrodul sensibil la ioni msoar iodura. Se obine un grafic de
calibrare al t.e.m n funciei de log[estradiol].
12/3/2010
Biosenzori
10
2.7. Acizi nucleici

m Acizii nucleici opereaz n multe cazuri ca i anticorpii. Perechile
de baz (perechi de nucleotide) specifice dintre direciile de
aciune a acizilor nucleici conduc la creterea codului genetic care
determin obinerea de replici ale caracteristicilor tuturor prilor
celulelor vii i, astfel, a caracteristicilor motenite ale membrilor
individuali ai unei specii.
m Testele DNA pot fi utilizate pentru determinarea bolilor genetice,
cancerului i infeciilor virale. Ele sunt utilizate fie n forme
sintetice scurte sau n forme lungi produse prin clonare. La fel
ca anticorpii, o analiz DNA necesit, adesea, adugarea n
cadrul analizei de DNA etichetate. Acestea pot fi radioactive,
fotometrice, enzimice sau electroactive.
12/3/2010
Biosenzori
34
11
m DNA (acidul deoxyribonucleic) este denumit planul vieii

deoarece conine codul sau instruciunile pentru construirea
organismului i asigur funcionarea corect a acestuia.
m El este componenta chimic a cromozomilor, care sunt localizai
n nucleele fiecrei celule. Gena este un segment din DNA care
codeaz pentru o protein, care schimb codurile ntr-o anumit
caracteristic (nuana pielii, culoarea ochilor, etc.).
m Copierea identic (replica) DNA este procesul prin care DNA
realizeaz o copie a sa nsi. Acest proces este semiconservativ, deoarece jumtate din copie conine jumtate din
DNA iniial. Acest lucru reduce numrul de copii eronate.
m DNA rmn n nuclee. Transmiterea informaiei ctre ribozomi,
unde se realizeaz proteinele, este realizat prin intermediul
acizilor ribonucleici (RNA).
12/3/2010
Biosenzori
12
Folosind ingineria genetic i proteic sunt posibile alte utilizri

ale DNA n realizarea biosenzorilor.
1. mbuntirea produciei de enzime

m
Anumite enzime, care sunt adesea utilizate, sunt prezente n

cantiti mici, situaie n care izolarea acestora este dificil de
realizat. Un astfel de exemplu este glucoz-dehidrogenaza
(GDH), care poate fi utilizat n realizarea unui biosenzor de
msurare a glucozei. O surs de GDH este bacteria
Acinetobacter calcoaceticus, care este prezent doar n
cantiti mici. Numrul acestora poate fi crescut prin tehnici
de clonare, care dubleaz genele codate GDH, producnd
pn la 50 de copii ale vectorului plasmidic (mai muli DNA)
per celul i, n consein, un numr mare de enzime.
12/3/2010
Biosenzori
35
13
2. mbuntirea proprietilor enzimelor

m
Modificri n cadrul enzimelor pot fi realizate fie direct prin

inginerie proteic sau prin modificarea genelor obinute prin
copiere utiliznd ingineria genetic. Acestea pot:
- mbunti numrul de descompuneri (turnover) a enzimei;
- modifica dependena de indicele pH;
- modifica rspunsul liniar la concentraia substratului;
- mbunti stabilitatea n timpul stocrii i operrii;
- reduce susceptibilitatea la substanele cu care interfer;
- lrgete sau micoreaz specificitatea substratului;
- modific cerinele legate de cofactor.
12/3/2010
Biosenzori
14
2.8. Receptorii
m Cele mai multe cercetri referitoare la receptori au fost
realizate asupra neuroreceptorilor i cu recunoaterea
neurotransmitorilor, neurotransmitorilor antagoniti i
neurotoxine.
m Aplicaiile receptorilor n cadrul biosenzorilor sunt nc la
nceput. Cu toate acestea, au fost realizate o serie de aplicaii
ale receptorilor n cadrul biosenzorilor.
m Neurotransmitorii i receptorii hormonali sunt exemple de
biosenzori ai corpului uman (de exemplu membrana olfactiv a
nasului).
12/3/2010
Biosenzori
36
15
m Legatura unui ligand (molecul capabil s formeze un complex

cu alt molecul) la un receptor declaneaz un rspuns
psihologic, cum ar fi:
- deschiderea unui canal ionic;
- al doilea sistem mesager;
- activarea enzimelor.
m Aceti receptori biologici tind s aib o afinitate pentru o serie de
compui cu o anumit structur n locul unui analit specific.
Aceast caracteristic este foarte atractiv pentru a fi utilizat n
cadrul biosenzorilor. Adesea biosenzorii sunt utilizai cu
materiale etichetate, la nceput cu molecule ligand etichetate
radioactiv, iar n prezent i cu molecule ligand etichetate
enzimatic sau fluorescent. Alternativ, receptorul poate fi
etichetat.
12/3/2010
Biosenzori
16
m Biosenzorii pot fi n mare grupai n biosenzori bazai pe

receptori intaci i biosenzori bazai pe receptori izolai.
m Exemplu din cadrul primului grup chemoreceptorul prototip
(1986). Acesta utilizeaz contribuia structurii olfactive a
crustaceelor pentru sesizarea neuronal a moleculelor ligand
chemoreceptoare cu ar fi: aminoacizii, hormoni de sex i
substanele chimice bazate pe piridin. Legtura dintre ligand i
chemoreceptorul corespunztor declaeaz stimularea unui
potenial de aciune (AP) n nerv care poate fi detectat printr-un
microelectrod de sticl conectat n afara celulei.
m Exemplu din al doilea grup acetilcolina nicotinic. Aceasta a
fost utilizat cu diferite traductoare, cum ar fi de exemplu de tip
capacitiv i cu ISFET. Cel mai eficient este, ns, cel care
utilizeaz o fibr optic de und foarte mic cu molecule ligand
etichetate fluorescent. Durata de funcionare a acestui biosenzor
este 30 de zile.
12/3/2010
Biosenzori
37
17
3. Traductoare electrochimice
m Pentru traductoarele folosite n cadrul biosenzorilor sunt trei
procese electrochimice de baz:
- poteniometric se realizeaz msurarea potenialului celulei
la curent egal cu zero;
- voltammetric (amperometric) potenialul de oxidare sau de
reducere apare ntre electrozii celulei, iar curentul este msurat;
- conductimetric conductana celulei este msurat folosind o
punte de c.a.
12/3/2010
Biosenzori
3.1. Traductoare poteniometrice

r Celule i electrozi
m Dac o pies metalic este introdus ntr-o soluie electrolitic
apare o separare de sarcin electric ntre metal (electrodul) i
soluie. Circuitul se numete semicelul.
Structura unei semicelule
12/3/2010
Biosenzori
38
m Prin combinarea a dou semicelule se obine o celul voltaic

sau galvanic.
m Celula voltaic convertete energia chimic a oxidanilor i
reactanilor n energie electric.
m O celul voltaic conine doi electrozi i o punte de sare.
m Cei doi electrozi sunt: anodul (-) i catodul (+). Procesul de
oxidare are loc la anod, iar procesul de reducere are loc la catod.
Anodul se dezintegreaz, iar la catod au loc depuneri solide.
Electronii se deplaseaz de la anod la catod.
m Puntea de sare permite migrarea ionilor n scopul nchiderii
circuitului electric.
m Reacia chimic se numete reacie REDOX (REDuction and
OXidation).
12/3/2010
Biosenzori
m Metalele care n seria de reactivitate se gsesc naintea

hidrogenului sunt folosite ca i anod, iar cele care se gsesc
dup hidrogen sunt folosite ca i catod. n cazul n care cele dou
metale se gsesc de aceeai parte a hidrogenului, atunci metalul
mai reactiv va fi folosit ca i anod, iar cellalt ca i catod. Caz
particular: ca electrod al hidrogenului se folosete platina (este
nconjurat de hidrogen).
K Ca Na Mg Al Zn Fe Sn Pb H Cu Hg Ag Pt Au
Se oxideaz (anod -)
12/3/2010
Se reduc (catod +)
Biosenzori
39
m Diferena potenialelor celor doi electrozi reprezint t.e.m. a

celulei (e.m.f. = electromotive force). Aceasta se msoar
folosind un voltmetru numeric (DVM) cu o impedan intern de
valoare ridicat.
m Valoarea t.e.m. a celulei depinde de:
- natura electrozilor M1 i M2;
- natura i concentraiile soluiilor S1 i S2;
- potenialul jonciunii lichidului la puntea de sare.
12/3/2010
Biosenzori
Structura unei celule
M1 = metal 1
M2 = metal 2
S1 = soluie electrolitic 1
S2 = soluie electrolitic 2
V = voltmetru
12/3/2010
Biosenzori
40
m Reacia chimic global ntr-o celul voltaic const n dou

reacii chimice - una pentru reacia de oxidare i cealalt pentru
reacia de reducere.
m Numrul de electroni ctigai n reacia de reducere trebuie s
fie egali cu numrul de electroni pierdui n reacia de oxidare.
m O celul voltaic produce electricitate. Ca urmare, t.e.m a
celulei este pozitiv Ecelul > 0.
12/3/2010
Biosenzori
Celula voltaic Daniell
Anod = Zn
Catod = Cu
S1 = sulfat de zinc
S2 = sulfat de cupru
puntea = recipient poros
Presupunem c soluiile
electrolitice au aceeai
concentraie (1 M).
12/3/2010
Biosenzori
41
La anod: Zn
Zn2+ + 2e-
La catod: Cu2+ + 2e-
Cu
La celul: Zn + Cu2+
Zn2+ + Cu
m La anod are loc oxidarea zincului n ioni de zinc.

m Anodul de zinc se dezintegreaz n timp.
m La catod ionii de cupru sunt redui la atomi de cupru.
m Cuprul se depoziteaz n timp pe catodul din cupru.
m Electronii se deplaseaz de la anodul de zinc la catodul de
cupru.
m n cadrul reaciei REDOX zincul doneaz electroni ctre ionii
de cupru.
m Culoarea albastr a soluiei de sulfat de cupru plete n timp
fiind nlocuit de soluia de sulfat de zinc mai puin colorat.
12/3/2010
Biosenzori
m Recia REDOX apare spontan. Ca urmare, E0 > 0.

m Energia liber Gibbs pentru aceast reacie este negativ:
G = -nFE
unde: n este numrul de electroni transferai (n cazul nostru n = 2);
F este constanta Faraday (F = 96487 C/mol);
E este t.e.m. a celulei (presupunem c potenialul jonciunii
lichidului este egal cu zero).
m Energia Gibbs este potenialul chimic care este minimizat atunci
cnd sistemul ajunge la echilibru la presiune i temperatur
constante. Aceast energie este utilizat ca i criteriu de
spontaneitate pentru procese caracterizate prin temperatur i
presiune constante.
m Deoarece E > 0 rezult G < 0 i reacia se produce spontan.
12/3/2010
Biosenzori
42
10
m Ne punem problema determinrii valorii energiei G. Pentru

aceasta, conform relaiei energiei libere Gibbs, trebuie s
determinm t.e.m. aferente proceselor de oxidare i de
reducere. n acest scop se utilizeaz dou celule. n fiecare
dintre celule se utilizeaz un electrod de H2. Ceilali electrozi
fiind, n prima celul, de Zn, iar n a doua celul de Cu.
m Hidrogenul nu este un metal, dar prin oxidare poate genera un
cation H+ prin eliminarea unui electron, i.e.
H
H+ + e-
care poate fi scris:

H2
12/3/2010
2H+ +2e-
Biosenzori
11
m Pentru reacia anterioar energia G este definit ca fiind egal

cu zero pentru starea standard ([H+] = 1M, presiunea parial a
hidrogenului este egal cu 1 atm i T = 298 K (25oC)). Pentru
starea standard energia liber Gibbs se noteaz G0 (G0 = 0).
m Conform relaiei de definiie a energiei libere Gibbs rezult c
n starea standard potenialul pentru electrodul de H2 este egal
cu zero E0H = 0 V.
m Electrodul de hidrogen din starea standard (SHE) se mai
numete i electrodul de hidrogen normal (NHE).
12/3/2010
Biosenzori
43
12
Structura unei celule
12/3/2010
Biosenzori
13
r Pentru prima celul avem:

La anod: H2
2H+ + 2e-
La catod: Cu2+ + 2e-
Cu
La celul: H2 + Cu2+
2H+ + Cu
E0H = 0 V
E0Cu = +0,34 V
Ecelul1 = E0CU E0H = +0,34 V
12/3/2010
Biosenzori
44
14
r Pentru a doua celul avem:

La anod: H2
2H+ + 2e-
La catod: Zn2+ + 2e-
Zn
La celul: H2 + Zn2+
2H+ + Zn
E0H = 0 V
E0Zn = -0,76 V
Ecelul2 = E0Zn E0H = 0,76 V
r Pentru celula Daniell avem:

Ecelul = Ecelul1 Ecelul2 = 0.34 (0,76) V = 1,10 V
12/3/2010
Biosenzori
15
r Electrozi de referin
m Ca electrod de referin (RE) se poate utiliza electrodul normal
de hidrogen, care poate fi foarte uor realizat n laborator. Cu
toate acestea, datorit faptului c msurrile implic curgerea
hidrogenului, care prezint pericol de explozie, nu se utilizez
acest electrod ca electrod de referin.
m n practic se utilizeaz ali electrozi de referin. Acetia au
urmtoarele caracteristici: sunt uor de realizat practic, sunt
nepolarizai, furnizeaz poteniale reproductibile care au
coeficieni de temperatur de valoare redus.
m Cei mai utilizai elctrozi de referin sunt: electrodul clorur de
argint argint i electrodul calomel saturat.
12/3/2010
Biosenzori
45
r Electrodul argint/ clorur de argint

m Clorura de argint are avantajul de a fi moderat solubil n ap.
m Reacia chimic corespunztoare semicelulei este:
AgCl + e- = Ag + Cl- E0 = +0,22 V
m Electrodul const ntr-un fir de argint acoperit cu clorur de
argint i introdus ntr-o soluie de clorur de potasiu (uzual 1 M).
O soluie pentru acoperirea cu clorur de argint a firului de
argint este urmtoarea. Se utilizeaz o celul electrochimic n
care anodul este firului de argint, catodul este din Pt, iar soluia
electrolitic este clorura de potasiu. Electroliz se realizeaz 30
min, timp n care se aplic argintului o tensiune de 0,5 V.
Suprafaa argintului se oxideaz n ioni de Ag, care atrag ionii
de clorur, formndu-se, astfel, stratul de clorur de argint.
12/3/2010
Biosenzori
Electrod de referin argint/ clorur de argint
12/3/2010
Biosenzori
46
r Electrodul calomel saturat

m Calomel este vechea denumire a clorurei de mercur Hg2Cl2.
Aceasta este moderat solubil n ap.
m Reacia chimic corespunztoare semicelulei este:
Hg2Cl2 + 2e- = 2Hg + 2Cl- E0 = +0,25 V
m Electrodul const ntr-un bazin de mercur aflat n contact cu o
past obinut prin amestecarea de mercur, pudr de clorur de
mercur i soluie de clorur de potasiu saturat. Pasta este n
contact cu soluie de clorur de potasiu saturat. Soluia
saturat poate fi obinut prin amestarea prin agitare a clorurii de
potasiu cu apa pn nu se mai dizolv.
m Acest electrod este foarte potrivit n cazul soluiilor apoase.
12/3/2010
Biosenzori
Electrod de referin calomel saturat
12/3/2010
Biosenzori
47
r Relaii cantitative. Ecuaia lui Nernst

m Ne punem problema determinrii efectului concentraiilor
diferite ale electroliilor asupra potenialului electrodului.
m Pentru o semicelul reacia chimic este:
ox + ne- = red
unde: ox i red sunt speciile care sufer reducerea i oxidarea;
n este numrul de electroni schimbai n reacie.
m Substanele reduse i oxidate dintr-o semireacie formeaz un
cuplu redox i se noteaz ox/red (de exemplu la celula Daniell
cuplurile redox sunt Cu2+/Cu i Zn2+/Zn).
12/3/2010
Biosenzori
m Ecuaia lui Nernst este:
E = E0 +
RT aox
ln
nF ared
RT
= E0 +
ln (Q ),
nF
unde: E este t.e.m. a celulei;

E0 este potenialul standard al semicelulei;
T este temperatura absolut;
aox, ared sunt activitile chimice ale speciilor ox i red;
Q = aox/ ared este ctul reaciei;
F este constanta lui Faraday sarcina electric aflat
ntr-un mol de electroni (F = 9,6485104 C/mol);
R este constanta gazelor (R = 8,324472(15) JK-1mol-1).
12/3/2010
Biosenzori
48
m Activitatea chimic a unei specii x, aX este dat de relaia:
ax = xcx
unde x este coeficientul de activitate, iar cx este concentraia speciei x
Observaie: La concentraii mici coeficientul de activitate x tinde
ctre 1, situaie n care avem: ax cx.
m Presupunem c valorile concentraiilor sunt mici. n acest caz
ecuaia lui Nernst devine:
E = E 0 + 2,303
12/3/2010
[ox]
RT
log
nF
[red ]
Biosenzori
m Pentru T = 293 K (200C) obinem 2,303RT/F = 0,0580, iar

pentru T = 298 K (250C) obinem 2,303RT/F = 0,0591.
m innd cont de valorile de mai sus ecuaia lui Nernst scris
anterior o putem aproxima prin:
[ox]
.
E = E 0 + 0,06 log
[red ]
m Specia red este, de obicei, un metal. n acest caz [red] =1, iar
relaia de mai sus devine:
E = E 0 + 0,06 log([ox]).
12/3/2010
Biosenzori
49
m Ecuaia lui Nernst poate fi scris sub o forma mai simpl de

utilizat n practic:
E = K + S log([ox]),
unde K este decalajul, iar S este panta.
m Rezultatele experimentale obinute pentru K i S sunt
comparate cu cele teoretice E0 (pentru decalaj) i 2,303RT/F
(pentru pant) .
12/3/2010
Biosenzori
10
m n continuare introducem potenialul electrodului de referin

(EREF) i potenialul jonciunii lichidului (E1,j) ca n figura de mai
jos.
Electrod de referin combinat cu alt semicelul
12/3/2010
Biosenzori
50
11
m Avem relaiile:
E celul = E '
E'
M ,M
Rezult:
n+
M ,M n+
E RE E1, j
([
= E '0 + S log M n +
])
E celul = E '0 E RE E1, j + S log([ M n + ])

Relaia de mai sus poate fi scris:
Ecelul = K + S log([M n + ]),

unde K = E
'0
E RE E1, j .
12/3/2010
Biosenzori
12
r Concentraia celulelor
m n continuare n locul electrodului de referin introducem o
semicelul similar cu acelai cuplu redox, dar cu diferite
concentraii ale speciei ox, ca n figura de mai jos.
Celul cu concentraii diferite ale speciei ox.
RE1, RE2 electrozi de

referin.
12/3/2010
Biosenzori
51
13
m Ecuaiile Nernst aferente reaciile celor dou semicelule sunt:
E1 = E 0 + S log([ox]1 )
E 2 = E 0 + S log([ox]2 ).
m Prin scderea celor dou relaii se obine:
[ox ]1
.
E = E1 E 2 = S log
ox
[
]
2
m Concentraia [ox]2 este meninut constant (concentraie de

referin). n aceast situaie relaia de mai sus devine:
E = const + S log([ox ]1 ),
unde const este o constant egal cu Slog([ox]2).
12/3/2010
Biosenzori
14
m Rezultatul obinut anterior este utilizat n majoritatea electrozilor

sensibili la ioni (ISE). n practic, n general, aranjamentul este
ca n figura prezentat anterior.
m n partea stng este soluia de test, care urmeaz a fi
determinat, n care se introduce un electrod de referin. n
partea dreapt este soluia standard (de referin), care are o
concentraie fixat (cunoscut). n aceasta este introdus al
doilea electrod de referin. La mijloc, ntre cele dou soluii, se
afl o membran selectiv la ioni. ntre cei doi electrozi se
conecteaz un voltmetru care are o impedan intern de
valoare ridicat. Apoi, sistemul de electrozi este calibrat.
m Tensiunea msurat este dat de diferena de potenial a
electrozilor celor dou semicelule, care sunt identice, cu
excepia faptului c valorile celor dou concentraii ale ionilor
sunt diferite.
12/3/2010
Biosenzori
52
15
m T.e.m. a celulei este dat de relaia:
E = E REF1 + E REF 2 + E1, j S log(a2 ) + S log(a1 ),

unde a1 este activitatea soluiei de test, iar a2 este activitatea
soluiei de referin (standard).
m Relaia de mai sus poate fi scris:
E = K + S log(a1 ),
unde
K = E REF1 + E REF 2 + E1, j S log(a 2 ).
12/3/2010
Biosenzori
16
r Aspecte practice legate de electrozii selectivi la ioni

m n scopul obinerii unor rezultate consistente, reproductibile cu
limitele de detecie cele mai mici trebuie avute n vedere o serie
de precauii. Urmtorii factori trebuie avui n vedere:
- Concentraia ionic trebuie meninut constant de la un
eantion la urmtorul. Aceasta poate fi realizat prin adugarea
unui electrolit cu concentraie constant, destul de mare. Un
astfel de electrolit nu interfer n nici o direcie cu fiecare
eantion i fiecare standard.
- Indicele pH trebuie controlat cu o anumit eroare. Acest lucru
este mai important n cazul anumitor substane ionice, e.g.
fluorurile.
- Poate fi posibil i de dorit s se adauge componente care
minimizeaz sau elimin ionii de interferen.
12/3/2010
Biosenzori
53
17
m Amestecurile cele mai potrivite pentru ndeplinirea acestor

proprieti sunt soluiile folosite pentru reglarea concentraiei
ionice ISA (Ionic Strength Adjusters) i substanele tampon
folosite pentru reglarea concentraiei ionice totale TISAB (Total
Ionic Strenght Adjustement Buffers).
m Exemple:
Pentru ISE de nitrai substana ISA este sulfatul de sodiu.
Aceasta menine indicele pH ntre limitele cerute 2 -12. Cu toate
aceastea, aceast substan ISA nu elimin interferenele
importante din partea fluorurilor i nitriilor. Din acest motiv, s-a
folosit substana ISA sulfat de argint, iar n prezent o substan
mult mai complex, dar mai ieftin, care este un amestec de
acetat.
12/3/2010
Biosenzori
18
Electrozii pentru floruri necesit un amestec mult mai complex

care conine: 1 M clorur de sodiu (pentru controlul concentraiei
ionice) + 1 M acid acetic, ajustat pn la indicele pH de 5,5 cu
hidroxid de sodiu (pentru controlul indicelui pH, deoarece un
indice pH ridicat conduce la interferene din partea hidroxidului) +
10-3 M citrat de sodiu.
m Temperatura trebuie controlat foarte precis deoarece n ecuaia
lui Nernst intervine temperatura. O variaie a temperaturii cu 1 K
conduce la o eroare de 2% de msurare a concentraiei. Similar,
ali factori cum ar fi de exemplu timpul de agitare i de echilibrare
(de regul 30 s 2 min) nainte de citire trebuie standardizat.
12/3/2010
Biosenzori
54
19
r Msurarea i calibrarea
Graficul de calibrare
m O serie de soluii sunt realizate prin adugarea soluiilor ISA, iar
apoi potenialele electrozilor sunt msurate. n continuare se
reprezint grafic dependena tensiunii de logaritmul zecimal al
concentraiei. Acest grafic se numete grafic de calibrare.
Deviaiile fa de liniaritatea graficului ideal dat de ecuaia
Nernst sau obinearea unei pantei diferite de cea ideal nu au
nici o importan. Eantioanele sunt tratate n acelai mod, iar
valoarea logaritmului zecimal al concentraiei este citit de pe
graficul real. Aceste grafice de calibrare sunt realizate n mod
regulat.
12/3/2010
Biosenzori
Adaos standard
m Eantionul este preparat aa cum s-a precizat anterior i
tensiunea sa este citit. Apoi o cantitate cunoscut de soluie
standard de concentraie ridicat (n general de zece ori mai
mare dect concentraia ateptat s se obin) este adugat i
are loc citirea noii tensiuni. n continuarea se stabilete o ecuaie
care aproximeaz cel mai bine datele obinute prin msurare.
Aceast ecuaie trebuie s conin o corecie pentru diluarea
realizat prin adugarea noii soluii standard.
12/3/2010
Biosenzori
55
m Notm cu Cu concentraia necunoscut ntr-un volum Vu cm3 de

soluie i Cs concentraia standard adugat ntr-un volum Vs
cm3 de soluie.
m Ecuaiile Nernst pentru cele dou situaii sunt urmtoarele:
E1 = K + S log(Cu ),
C V + C sVs
E 2 = K + S log u u
Vu + Vs
m Prin scderea celor dou relaii se obine:
C (V + V s )
E = E1 E 2 = S log u u
.
C
V
+
C
V
s s
u u
m Din relaia de mai sus se obine concentraia necunoscut:

Cu =
12/3/2010
Cs
V
10 E / S 1 + u
V s
Vu

V
s
Biosenzori
Graficul Gran
m Acesta reprezint o extensie a metodei de adaos standard

prezentat anterior care utilizeaz adaosuri standard multiple.
Procedura este aceeai ca i n cazul metodei de adaos standard
cu excepia faptului c sunt realizate mai multe adosuri (cinci sau
mai multe).
m Utiliznd notaiile anterioare, cu excepia faptului c Cs este
variabil i reprezint creterea n concentraia eantionului de
soluie produs de fiecare adaos.
m Ecuaia Nernst pentru aceast situaie este:
E = K + S log(C u + C s ).
m Din relaia de mai sus se obine:
10 E / S = K ' (Cu + C s ),
unde K ' = 10 K / S .
12/3/2010
Biosenzori
56
m Dependena 10E/S = f(Cs) reprezint graficul lui Gran.
Graficul lui Gran
12/3/2010
Biosenzori
r Exemple de electrozi ion-selectivi
Electrodul cu membran de sticl
m Cel mai cunoscut exemplu este electrodul cu membran de sticl

folosit pentru msurarea concentraiei ionilor de hidrogen sau a
aciditii, denumit uzual electrodul pH. Membrana subire de
sticl are o mare selectivitate la ionii de hidrogen ntr-un domeniu
foarte larg de variaie a concentraiilor. Performana electrodului
pH depinde n foarte mare msur de compoziia sticlei. Dac
aceasta se modific membrana de sticl devine selectiv la ali
ioni. Compoziia folosit adesea pentru sticla selectiv la ioni de
hidrogen este: 22% Na2O, 6% CaO i 72% SiO2.
12/3/2010
Biosenzori
57
Schema tipic a unui electrod pH
Electrod Ag/AgCl
Electrod pH
12/3/2010
Biosenzori
m Al doilea electrod de referin se afl ntr-un tub de sticl

concentric i nconjoar tubul electrodului principal. Contactul
dintre acest electrod i soluia de test este realizat pe baza unei
sticle poroase din ceramic care permite trecerea soluiei.
m Electrozii de referin sunt, de regul, de tipul Ag/AgCl.
m Electrodul pH este calibrat n termeni de pH i nu n termeni de
activitate chimic:
( )
pH = log a H + .
12/3/2010
Biosenzori
58
m Ecuaia Nernst aferent este:
( )
E = K + 0,0591 log a H + = K 0,0591 pH .

m Pe baza relaiei de mai sus rezult:
pH =
EK
.
0,0591
m Ali electrozi ion-selectivi din membran de sticl au fost

realizai pentru Na+, Li+, K+ i Ag+.
12/3/2010
Biosenzori
Electrodul cu stare solid
m n figura urmtoare se prezint structura general a unui astfel de

electrod.
12/3/2010
Biosenzori
59
10
m n mod normal acest traductor are un electrod de referin

separat, care este introdus n soluia de test. Acesta poate fi, dar
nu este necesar s fie, de acelai tip cu electrodul de referin
intern realizat de fabricant.
m Membrana poate fi realizat dintr-un cristal solid cum ar fi de
exemplu fluorura de lantan (LaF3) n cadrul electrodului pentru
fluoruri sau din pelei presai din materiale sub form de pudr
cum ar fi de exemplu sulfura de argint (Ag2S) n cadrul
electrodului pentru sulfuri.
m Exemple de acest tip de electrozi: F-, Cl-, Br-, I-, SCN- i S2-.
Dintre acestea electrodul pentru fluoruri este des utilizat n
instalaiile de tratare a apei pentru msurarea nivelului de fluoruri
din apa potabil.
12/3/2010
Biosenzori
11
Electrodul ion-schimbai cu membran lichid

electrod.
12/3/2010
Biosenzori
60
12
m Membrana este realizat dintr-un material hidrofob (nu se

combin cu apa i nu se mbib de ap) cum ar fi material PVC
plastifiat. n aceast membran este absorbit doar materialul
lichid ion-schimbai cum ar fi de exemplu valinomicin pentru
potasiu.
m Pentru a menine acelai nivel de concentraie n cadrul
membranei exist un rezervor de lichid ion-schimbai dizolvat
ntr-un solvent organic.
m Exemple de acest tip de electrozi: NO3-, Cu2+, Cl-, BF4-, ClO4- i
K+. Dintre acestea electrodul pentru nitrai este foarte des utilizat
pentru msurarea nivelului de nitrai din sol i ap.
12/3/2010
Biosenzori
13
Electrodul de gaz

electrod.
12/3/2010
Biosenzori
61
14
m Aceti electrozi se bazeaz, n principal, pe electrozii pH i pot

detecta gazele care n soluii apoase formeaz soluii acide sau
baze.
m Ei conin o membran permeabil de gaz ataat ca n figur.
ntre aceast membran i membrana de sticl selectiv la
hidrogen se afl o soluie electrolitic intern care conine
materialul care va forma o substan tampon cu gazul. De
exemplu, pentru electrodul de amoniac se utilizeaz clorura de
amoniac. n acest caz echilibrul presupune urmtoarele reacii
chimice:
NH4Cl = NH4+ + ClNH3 + H+ = NH4+
12/3/2010
Biosenzori
15
m Constanta de disociere Ka este dat de relaia:
Ka = [NH3][H+]/[NH4+]
m Pe baza relaiei de mai sus se obine:
log([NH3]) = pH +pKa + log([NH4+])

m Datorit concentraiei ridicate a clorurii de amoniu concentraia
ionilor de amoniu este constant. De aceea, logaritmul
concentraiei de amoniac este direct proporional cu indicele pH
al soluiei.
m n mod similar sunt realizai electrozii pentru SO2, NO2 i H2S.
12/3/2010
Biosenzori
62
16
r Electrozi ion-selectivi utilizai n biosezori

m Relativ puini electrozi ion-selectivi (ISE) sunt utilizai n cadrul
biosenzorilor. Cei mai utilizai sunt: H+, NH4+ i NH3, care se
bazeaz pe principiul electrodului pH. Mai rar se utilizeaz
electrozii CO2, I- i S2-.
12/3/2010
Biosenzori
17
3.2. Traductoare voltametrice

r Voltametria liniar
m Se aplic un potenial liniar variabil ntre electrodul de lucru (la
care are loc reacia chimic) i electrodul de referin a unei
celule electrochimice. Aceasta conine un electrolit de
concentraie ridicat, care asigur c soluia va fi conductoare
electric, numit electrolit de suport i speciile care sufer
reducerea i oxidarea numite specii electroactive. Curentul prin
celul este monitorizat continuu. Acesta se reprezint grafic n
funcie de potenial. Acest grafic poart numele de
voltamogram. Aceast tehnic se numete voltametrie liniar.
12/3/2010
Biosenzori
63
m n figura de mai jos se reprezint o voltamogram tipic.
12/3/2010
Biosenzori
m La nceput (punctul A) curentul este foarte mic. ntre punctele A

i B acesta crete foarte lent din cauza curentului rezidual
(datorat impuritilor) i a sarcinii dintre straturile duble (interfaa
electrod-soluie se comport ca un condensator). Acest curent
este denumit, cteodat, curent din urm (background). n
punctul B potenialul se apropie de cel de reducere al speciei
ox. Creterea potenialului conduce la transferul de electroni de
la electrod la specia ox cu o rat de cretere conform reaciei
chimice generale:
ox + ne-
12/3/2010
red
Biosenzori
64
m Creterea ratei de reducere cauzeaz creterea curentului prin

celul. Se poate arta c, n aceast regiune, valoarea
curentului prin celul este dat de suma algebric a curentului
catodic (de reducere) ic i a curentului anodic (de oxidare) ia:
i = ia + ic.
m Expresiile acestor cureni sunt dai de ecuaia Butler-Volmer:
ic = nFAk 0f Cox e
nF E Eeq
RT
(1 )nF (E Eeq )
ia =
nFAkb0 C red e
RT
unde Cox i Cred sunt concentraiile speciilor ox i red la suprafaa

electrozilor, este coeficientul de transfer, A este suprafaa
electrodului, k0f i k0b sunt ratele de transfer ale electronilor (sunt
constante).
12/3/2010
Biosenzori
m Din relaiile anterioare se observ c dac E (potenialul

aplicat) scade, atunci curentul ic crete, iar curentul ia scade.
Acest lucru conduce la o cretere a curentului n forma de und
voltametric, care atinge un maxim n punctul C. Dup aceea
curentul ncepe s scad deoarece transportul speciilor
electroactive ctre electrod de ctre fenomenul de difuzie a golit
de specii ox vecintatea electrodului (scade concentraia
speciei ox).
12/3/2010
Biosenzori
65
m Efectul de difuzie este prezentat n figura de mai jos.
12/3/2010
Biosenzori
m Valoarea curentului limitat prin difuzie este obinut din legea

nti de difuzie a lui Fick:
=D
dC
dx
unde este fluxul de material spre suprafaa electrodului, D este

coeficientul de difuzie, iar dC/dx este gradientul de concentraie.
m Expresia curentului este:
id = nFAD
12/3/2010
dC
.
dx
Biosenzori
66
m Efectul de golire progresiv n timp este stabilit de legea a doua

de difuzie a lui Fick:
dC
d 2C
=D 2
dt
dx
m Rezolvarea ecuaiei de mai sus este foarte dificil. n practic se
obine o soluie aproximativ folosind metode numerice de
integrare implementate folosind un calculator.
m Trebuie menionat faptul c exist anumite situaii particulare
care conduc la soluii simple. O astfel de situaie permite
obinerea curentului de vrf din punctul C. Pentru situaia n care
transferul de electroni este reversibil curentul de vrf este dat de
ecuaia Randles-Sevcik:
12/3/2010
Biosenzori
la 298 K
i p = 2,68 10 5 n 3 / 2 AD1 / 2 C ox 1 / 2 ,
unde este viteza de baleiaj.
m Dac reacia nu este reversibil sau dac rata de transfer de
electroni este redus (valori mici pentru ratele de transfer ale
electronilor k0f i k0b), reacia este numit ireversibil, iar
expresia curentului de vrf este:
la 298 K
i p = 2,98 10 5 n(n a )AD 1 / 2 C ox .
12/3/2010
Biosenzori
67
Observaie: n ambele cazuri (reacie reversibil i reacie

ireversibil) curentul de vrf este proporional cu concentraia
speciei ox.
m Pentru o reacie reversibil relaia de legtur dintre potenialul
la care apare vrful de curent, Ep i potenialul redox standard
pentru cuplul redox ox/red este:
Ep = E0 +
0,056
.
n
m Pentru o reacie ireversibil relaia depinde i de ali factori.
12/3/2010
Biosenzori
10
r Voltametria ciclic
m Odat cu procesul de golire a speciei ox la suprafaa electrodului
prin reacia de reducere, aceasta este nlocuit de specia red
care difuzeaz mai la distan n cadrul soluiei. De aceea, dac
inversm sensul de variaie al potenialului ncepnd de la vrful
pozitiv se obine efectul revers. n momentul n care potenialul
ajunge la valoarea potenialului redox speciile red ncep s fie
reoxidate ctre specia ox. Curentul va ncepe s creasc n
direcia negativ (de oxidare) pn n momentul n care vrful de
oxidare este obinut.
12/3/2010
Biosenzori
68
11
m Variaia n timp a potenialului este prezentat n figura de mai

jos.
12/3/2010
Biosenzori
12
m Voltamograma ciclic este prezentat n figura de mai jos.
12/3/2010
Biosenzori
69
13
m n cadrul voltamogramei ciclice se observ dou vrfuri de

curent unul corespunde procesului de reducere a substratului
original, cel de-al doilea corespunde reoxidrii produsului
napoi la substratul original.
m Cele dou vrfuri de curent au practic aceeai nlime, iar
diferena potenialelor aferente celor dou vrfuri de curent
este egal cu (0,056/n) V.
m Media potenialelor celor dou vrfuri este egal cu valoarea
potenialului redox standard E0, indiferent de concentraia
substratului, coeficienii de difuzie sau rata de transfer a
electronilor.
m Dac procesul este ireversibil, atunci vrfurile de curent se afl
la o distan mai mare unul fa de cellalt Ep(c) Ep(a) >
(0,056/n) V. Cu toate acestea, media potenialelor celor dou
vrfuri poate fi folosit pentru determinarea potenialului E0.
12/3/2010
Biosenzori
14
m Cteodat vrful de curent corespunztor efectului revers nu

apare sau are o form diferit sau distorsionat. Acest lucru
indic o reacie complet ireversibil datorit unei reacii
suplimentare a produsului obinut prin reducere format iniial.
Un exemplu foarte des ntlnit este acela al 4-acetilaminofenol
(paracetamol), care poate fi uor oxidat folosind un electrod
past de carbon.
m n figura urmtoarea se prezint voltamograma ciclic a
paracetamolului.
12/3/2010
Biosenzori
70
15
12/3/2010
Biosenzori
16
m Deoarece reacia iniial este cea de oxidare (pierdere de

electroni), vrful de curent iniial este n jos. Pe partea
reversibil vrful de curent este n mare msur separat de
vrful de oxidare iniial. De asemenea, el este mai larg.
12/3/2010
Biosenzori
71
17
r Amperometria
m Acesta este numele uzual pentru aplicaia analitic a tehnicii
cronoamperometrie.
m Folosind anumite celule i configuraii de electrozi curentul de
descretere atinge dup un anumit timp o stare aproximativ
stabil (este prezentat pe poriunea haurat a graficului din
figura urmtoare). n acest stare curentul devine independent de
timp, fiind dat de relaia:
nFADCox
i=
,
unde este o constant funcie de grosimea suprafeei de difuzie.

m Relaia de mai sus este foarte util pentru studiul analitic, chiar
dac curentul a sczut foarte mult de la valoarea sa maxim.
12/3/2010
Biosenzori
m Forma de und a curentului id este prezentat n figura de mai

jos.
12/3/2010
Biosenzori
72
r Efecte cinetice i catalitice

m n majoritatea aplicaiilor cu biosenzori reacii reversibile sau
ireversibile simple sunt rare. n general exist o reacie chimic
cuplat, poate cu transferul unui singur proton, dar care poate fi
uneori o o reacie mult mai complex (de exemplu paracetamolul).
O reacie generalizat este:
ox + ne- = red
k
red + A
12/3/2010
Biosenzori
m Un alt efect care este foarte util i utilizat n cadrul biosenzorilor

este reacia catalitic, n care reactantul original ox este
regenerat n reacia urmtoare. Acest lucru este artat prin
ecuaia:
red + ne- = ox
ox + A
red + B
m Efectul reaciei de mai sus este c ciclii procesului redox se

nconjoar de mai multe ori. Reacia de reducere invers a
speciei ox nu se vede, n schimb vrful corespunztor reaciei de
oxidare direct este mrit de mai multe ori.
m Exemplu voltamograma ciclic reversibil a ferocenului (v.
figura urmtoare). Forma de und catalitic este cauzat de
interaciunea cu glucoz-oxidaza n prezena glucozei.
12/3/2010
Biosenzori
73
12/3/2010
(A)
Voltamograma ciclic a
acidului
monocarboxilic
ferocen
n
prezena
glucozei;
(B)
La fel ca i pentru (A), dar

la care se agaug glucozoxidaza (GOD).
Biosenzori
3.3. Conductometrie
m Conductivitatea este folosit ca o msur a trecerii curentului prin
soluie.
m Conform legii lui Ohm avem:
E = I R,
sau
E = I / G,
n care G este conductana, G = 1/R.
m Conductana se msoar n siemens (S): 1S = 1-1.
12/3/2010
Biosenzori
74
m Conductana este legat de dimensiunile celulei n mod similar

cu rezistena. Astfel, pentru o celul de lungime l i arie a
seciunii transversale A, conductana este egal cu:
G = A / l ,
n care este conductivitatea (inversul rezistivitii) sau
conductana specific (n Scm-1).
m Pentru a obine conductivitatea molar , conductivitatea este
mprit la molaritatea soluiei:
= / C,
n care C este molaritatea soluiei (n molcm-3).
12/3/2010
Biosenzori
m Conductivitatea este proporional cu concentraia ionilor din

soluie.
m Pentru msurarea conductivitii se poate utiliza puntea
Wheatstone.
este rezistena variabil;

aceasta se modific pentru ca
puntea s ajung la echilibru.
12/3/2010
Biosenzori
75
m Conductivitatea depinde de sarcina ionului, mobilitatea ionului

i de gradul de disociere al ionului. Din acest motiv apar o serie
complicaii. n plus, tehnica n sine nu conduce la o sensibilitate
ridicat. Astfel, aceast tehnic necesit impunerea unei
selectivitate prin introducerea unei membrane sau a unui
nveli.
m Msurarea se face n c.a. Ca urmare mrimea care se msoar
este admitana (inversul impedanei). Aceasta depinde de
conductan i de capacitatea sau de inductivitatea sistemului.
m Diagrama Argand realizeaz reprezentarea prii imaginare a
unei impedane n funcie de partea real a impedanei (v.
figura urmtoare).
12/3/2010
Biosenzori
Diagrama Argand
12/3/2010
Biosenzori
76
10
m n principiu o modificare a conductanei poate fi folosit pentru a

urmri orice reacie care produce o modificare a numrului de
ioni, ncrcarea ionilor, disocierea ionilor sau mobilitatea ionilor.
n acest scop, n general, se utilizeaz o celul de tip diferenial.
O astfel de celul este prezentat n figura de mai jos.
12/3/2010
Biosenzori
11
m Exemple:
(1)
uree + H2O
ureeaz
2NH4+ + HCO3-
Evident reacia de mai sus implic o modificare a ionilor. Aceasta

poate fi urmrit conductimetric cu mbuntirea vitezei i a
sensibilitii n comparaie cu metodele colorimetrice. Msurarea
conductanei nu este afectat de culoare sau de turbiditate.
(2) O serie de enzime conduc la o modificare a conductivitii
Amidaza (enzim care desface legtura dintre carbon i azot
din diferite substane, fixnd elementele apei) genereaz
grupuri ionice.
12/3/2010
Biosenzori
77
12
Dehidrogenaza (enzim care particip la degradarea glucozei)

i decarboxilaza (enzim catalizatoare a unei reacii de
carboxilare) conduc la o separare a sarcinilor nedorite.
Esteraza (enzim care catalizeaz hidroliza esterilor n
constituienii lor acizi i baze) implic migrarea (deplasarea)
protonilor.
Kinaza (enzim care catalizeaz transferul gruprii fosfat)
cauzeaz modificarea gradului de asociere a ionilor.
Fosfataza (enzim care se gsete n cantiti mari n oase i
ficat, dar poate fi ntlnit n placent i n intestine) i sulfataza
(enzim care se gsete n toate organele corpului animalelor,
ndeosebi n rinichi) conduce la modificarea dimensiunii
grupurilor purttoare de sarcin.
12/3/2010
Biosenzori
13
3.4. Tranzistoare cu efect de cmp

m Tranzistoarele cu efect de cmp (FET) sunt circuite n care
tranzistorul n montaj amplificator este adaptat pentru a fi un
traductor miniaturizat. Traductorul este utilizat n scopul
deteciei i msurrii semnalelor de poteniale diferite produse
de ctre procesul unui senzor poteniometric pe poarta
tranzistorului FET. Este necesar un electrod de referin.
Legturile circuitului sunt miniaturizate. Ca urmare, zgomotele
electronice sunt reduse, iar sensibilitatea este mrit.
m Tranzistoarele FET pot fi incluse n cadrul unui circuit integrat
care realizeaz citirea i/sau prelucrarea datelor.
12/3/2010
Biosenzori
78
14
m Trebuie menionat faptul c nu au fost realizai electrozi de

referin miniaturizai de performane ridicate. Majoritatea
versiunilor realizate nu satisfac o serie de principii de baz ale
electrozilor de referin. Cu toate acestea, au fost realizate i
folosite o serie de astfel de electrozi ncepnd cu pseudoelectrozii de referin, care constau dintr-un fir de platin sau
argint, pn la cei realizai prin procedee serigrafice folosind
cerneala din argint/clorur de argint. O modalitate eficient este
aceea de utilizare a dou tranzistoare FET care opereaz
diferenial, dintre care nu este acoperit la care poarta are un
rspuns neglijabil la analit i cellalt acoperit cu o membran
sensibil la analit.
12/3/2010
Biosenzori
15
m Cel mai des utilizat este tranzistorul cu poart izolat IGFET

(Insulated Gate FET) a crui schem este prezentat n figura
de mai jos.
1. Substrat de siliciu de tip p

2. Substrat izolator
3. Poarta de metal
4. Substrat de siliciu de tip n
5. Drena de tip n
6. Contacte metalice la
surs i dren
12/3/2010
Biosenzori
79
16
m Regiunea sursei (4) realizat dintr-un substrat de siliciu de tip n

este separat de regiunea drenei (5), de asemenea, realizat
dintr-un substrat de siliciu de tip n, prin intermediul substratului
de siliciu de tip p (1) i a substratului izolator (2), realizat din
dioxid de siliciu (SIO2).
m Sursa este polarizat electric n raport cu drena prin intermediul
tensiunii VD. Poarta (3) este realizat din metal, izolat fa de
restul circuitului. Ca urmare, aceasta formeaz un condensator
sandwich metal/strat izolator/semiconductor (MIS) (v. figura
urmtoare).
m Regiunea porii este ncrcat prin intermediul tensiunii de
polarizare VG. Curentul de la drena (5) la surs (4) ID este
msurat.
m Exist, de asemenea, o tensiune de prag, VT, la care substratul
de siliciu de tip p devine de tip n, avnd loc o inversare de
suprafa.
12/3/2010
Biosenzori
17
Poarta tranzistorului IGFET
M = Metal, I = Insulator, S = Semiconductor
12/3/2010
Biosenzori
80
18
m Pentru o tensiune VD de valoare mic i VG < VT substratul (1)

rmne de tip p i curentul de dren este nul. Substratul de
siliciu de tip n este polarizat pozitiv n raport cu cel de tip p.
Dac VG > VT, atunci are loc o inversare de suprafa, iar
stratul de siliciu de tip p devine de tip n. n acest caz curentul
poate trece de la dren la surs, fr s treac prin jonciunea
p-n polarizat invers. Tensiunea VG moduleaz numrul de
electroni de la stratul inversat i va controla conductana.
Curentul ID va circula de la surs la dren. El este proporional
cu rezistena electric a stratului cu inversare de suprafa i
cu tensiunea VD.
12/3/2010
Biosenzori
19
r Tranzitor CHEMFET
m n scopul transformrii tranzistorului IGFET ntr-un senzor poarta
metalic este nlocuit cu o suprafa sensibil chimic. Se obine
astfel un tranzistor CHEMFET (CHEmical FET). Schema de
principiu a acestui tranzistor este prezentat n figura urmtoare.
m Membrana sensibil chimic (3) este n contact cu soluia de
analizat (7). Electrodul de referin (8) completeaz acest circuit
via tensiunea de polarizare VG.
12/3/2010
Biosenzori
81
Structura de principiu a unui tranzistor CHEMFET
1. substrat de siliciu;
2. strat izolator;
3. membran sensibil chimic;
4. sursa;
5. drena;
6. capsula;
7. soluia de analizat;
8. electrod de referin.
12/3/2010
Biosenzori
Determinarea curentului ID
m n cadrul tranzistoarelor CHEMFET tensiunea VG este corectat
prin diferena dintre potenialul membranei i cel al soluiei.
m Avem relaiile urmtoare:
mem sol =
1
ni F (isol imem )
ni F (isol imem )
= E0 +
RT
ln(ai )
ni F
n care: mem, sol sunt funciile de lucru ale membranei, respectiv

ale soluiei;
imem, isol sunt mobilitile electronului aferente membranei,
respectiv soluiei.
12/3/2010
Biosenzori
82
m Din relaiile de mai sus rezult:
mem sol = E 0 +
RT
ln(ai )
ni F
m Curentul ID are expresia:
RT
I D = K VG VT E 0
ln(ai ) VD / 2 VD
ni F
n care: K =C0Wn/L, unde C0 este capacitatea stratului izolator,

W este limea canalului, L este lungimea canalului, iar n este
mobilitatea electronului.
12/3/2010
Biosenzori
m Curentul ID poate fi msurat direct, folosind o valoare constant

a tensiunii VG, pe baza schemei prezentat n figura de mai jos.
12/3/2010
Biosenzori
83
m O alt metod de msurare const n meninerea constant a

curentului ID prin modificarea tensiunii VG, care apoi este
msurat. Schema de msurare este prezentat n figura de
mai jos.
12/3/2010
Biosenzori
m Alturi de senzorii CHEMFET exist i senzorii ISFET i

ENFET. Senzorul ISFET (Ion Selectiv FET) utilizeaz
tranzistorul FET ca un electrod sensibil la ioni. ENFET este un
biosenzor la care poarta conine un sistem enzim.
12/3/2010
Biosenzori
84
r Aplicaii ale senzorilor FET
Senzorul CHEMFET
m n aplicaii cel mai simplu mijloc care poate fi utilizat este
tranzistorul IGFET, la care poarta const dintr-un strat de
paladiu evaporat pe cipul de siliciu i acoperit cu un strat de
oxid de 100 nm. Aceasta este foarte specific pentru hidrogenul
gaz sub 0,01 ppm. Rspunsul este V = kp, n care k = 27
mV/ppm. Exist o anumit sensibilitate a acestui electrod la
CO, NH3, H2S, CH4 i C4H10. Prin adugarea unui strat de iridiu
sensibiliatea la amoniac crete, iar la hidrogen descrete.
12/3/2010
Senzorul
Biosenzori
ISFET
m Ionoforii sunt tipul de polimeri ion-selectivi cei mai utili pentru

utilizarea la tranzistoarele FET, precum i la cele ISFET.
m Folosind tranzistoarele FET se obin rspunsuri speciale pentru
H+.
m Primul senzor PH ISFET a utilizat poarta izolat ca strat sensibil
la ioni, n schimb stratul izolator de SIO2 nu a fost foarte eficient,
datorit hidroxilrii uoare a SiO2. Cu toate acestea, senzorii cu
poart cu strat izolator Si3N4 nu se hidrolizeaz i sunt foarte
sensibili la ioni de H+, avnd un rspuns de 50-60 mV/decad.
TiO2 i Ge conduc la un rspuns similar. Aceste materiale
semiconductoare pot fi folosite utiliznd aceleai tehnici ca la
fabricarea cipurilor tranzistoarelor FET. Pentru ali ioni aceste
tehnici sunt mai puin eficiente. Cu toate acestea, pentru ionii de
Na+ sticla borosilicat poate fi depus n regiunea porii prin
procesul folosit n cadrul circuitelor integrate.
12/3/2010
Biosenzori
85
m Membranele din polimer au fost utilizate cu succes pentru K+

incorpornd eter coroan valinomicin i pentru Ca2+ cu p(1,1,3,3-tetrametilbutil) acid fenilfosforic. Rspunsurile sunt mai
mici dect 40 mV/decad, dac nu membrana este mai groas
dect 100 m.
m Un senzor ISFET cu patru funcii pentru H+, Na+, K+ i Ca2+ a fost
realizat pentru aplicaii clinice. Aceasta utilizeaz o poart cu
strat izolator Si3N4 pentru H+, sticl pentru Na+, ionosfor derivat
din acid fosforic pentru Ca2+ i valinomicin pentru K+. Acesta s-a
dovedit satisfctor n condiii de laborator, dar folosind ntregul
snge au fost probleme la analiza sodiului.
m Membranele heterogene au, de asemenea, folosite. Cea mai
eficient este fosfazina polifluorurat (PNF) amestecat cu sruri
de argint, cum ar fi de exemplu clorura de argint (75%) i PNF
(25%). Rspunsul pentru Cl- a fost de 52 mV/decad. Modificnd
amestecul i incluznd Ag2S sau AgI se poate ajusta
sensibilitatea pentru favorizarea unui anumit ion.
12/3/2010
Biosenzori
10
Biosenzorul ENFET
m Acesta constituie un mijloc excelent pentru miniaturizarea
biosenzorilor. n general, structura sa conine dou pori, ca n
figura de mai jos.
12/3/2010
Biosenzori
86
11
m Cel mai utilizat este senzorul pH-bazat pe tranzistor FET, de

exemplu cu penicilin i cu glucoz i uree. A fost realizat un
biosenzor dual glucoz-uree, cu trei pori, n care una este folosit
ca referin, una cu glucoz-oxidaza i una cu ureeaz.
m Senzorul Pd-MOS FET pentru hidrogen gaz a fost utilizat cu
NAD+/NADH i hidrogen-hidrogenaz legat cu piruvat/NH3, care
cu alanin dehidrogenaza (AlaDH) produce alanina. Alanina (Ala)
este un aminoacid neesenial, constituent al proteinelor i
glucoformator. NADH este nicotinamida adenin dinucleotid
(coezima -1 sau CoE-1) este o enzim deosebit de important
pentru producerea de energie la nivel celular, n special n creier
i sistemul nervos central.
12/3/2010
Biosenzori
12
hidrogenaz
NADH +
Piruvat + NH3 + NADH
H+
H2 + NAD+
AlaDH
alanin+ NAD+
m Senzorul Ir-MOS pentru amoniac a fost utilizat pentru uree. Alte

substane au fost detectate n acest mod, ca de exemplu:
aspartanul, asparginina, glutamat i creatinina.
12/3/2010
Biosenzori
87
13
Comparaia senzorilor chimici integrai (miniaturizai )
12/3/2010
Biosenzori
14
4. Traductoare optice
4.1.
Introducere
m Majoritatea analizelor biologice sunt de tip fotometric. Acestea

implic modificri ale speciilor, care conduc la schimbarea
puternic a proprietilor lor fotometrice. Cel mai cunoscut
exemplu este cel al implicrii NAD+/NADH n reaciile
biochimice. De exemplu:
Piruvat + NADH + H+
LDH
L-lactat + NAD+
LDH = lactat dehidrogenaza;

L-lactat = form a acidozei lactice; este unica form produs de
metabolismul uman.
12/3/2010
Biosenzori
88
15
m NADH are o puternic absorban la o lungime de und max =

340 nm, dar NAD+ nu are nici o absorban la aceast lungime
de und. De asemenea, NADH produce fluorescen la 400 nm.
Spectrele de absorie ale NAD n formele de oxidare i reducere
sunt prezentate n figura de mai jos.
12/3/2010
Biosenzori
16
m Reactanii i soluia de analizat sunt msurate i amestecate, iar

apoi sunt introduse ntr-o cuvet n spectrometru. Problema care
se pune este aceea de realizare a unui senzor folosind o tehnic
optic.
m Rspunsul optic de baz este stabilit pe baza legii Beer-Lambert
(cunoscut i sub numele de legea lui Beer):
log(I/I0) = A = CI,
unde: I0 este intensitatea luminii incidente;
I este intensitatea luminii transmise;
A este absorbana (n general msurat direct cu aparatul);
ste coeficientul de extincie;
C este concentraia soluiei de analizat (analit);
l este lungimea parcurs de lumin prin soluie.
12/3/2010
Biosenzori
89
17
m Lungimea parcurs de lumin limiteaz dimensiunea senzorului,

aspect care nu apare n cadrul senzorilor electrochimici.
r Avantajele dispozitivelor fotometrice
Nu necesit electrod de referin, dar o surs de referin este
util.
Nu apare interferen electric.
Un reactiv imobilizat nu trebuie s fie n contact cu fibra optic. El
poate fi uor nlocuit.
Nu apar hazarduri de siguran electric.
Anumite soluii, cum ar fi de exemplu oxigenul, pot fi sesizate n
echilibru.
Au o mare stabilitate a strii stabilit prin calibrare, n special
dac msurm raportul intensitilor a dou lungimi de und.
12/3/2010
Biosenzori
18
Ele pot rspunde simultan la mai mult de o substan utiliznd

multipli reactivi imobilizai cu diferite lungimi de und pentru
rspuns, e.g. O2 i CO2.
Pot fi realizate msurri cu lungimi de und multiple pentru
monitorizarea modificrilor n starea reactivului.
Ele pot furniza o cantitate mai mare de informaie dect
traductoarele electrice.
12/3/2010
Biosenzori
90
19
r Dezavantajele dispozitivelor fotometrice

Ele lucreaz numai dac fazele de reactiv corespunztoare pot fi
dezvoltate.
Ele sunt supuse interferenelor produse de lumina ambiental.
Acestea pot fi excluse direct sau utiliznd tehnici de modulare.
Au un domeniu dinamic limitat n comparie cu senzorii electrici
tipic 102 (comparativ cu 106 1012 pentru electrozii ion-selectivi).
Sunt circuite extensive, dependente de cantitatea de reactiv. Ca
urmare, sunt dificil de miniaturizat.
Au probleme cu stabilitatea pe termen lung a reactailor aflai
sunt incideaa luminii.
Timpul de rspuns poate fi mare datorit timpului de transfer a
masei soluiei ctre faza de reactiv.
12/3/2010
Biosenzori
20
4.2. Tehnici optice

r Noiuni introductive
m Luminiscena este o radiie luminoas care apare ca exces al
radiaiei termice a unui corp la o temperatur dat. Pentru
apariia luminiscenei este necesar o surs de energie, care
difer de energia termic de echilibru, corespunztoare
temperaturii date. Se deosebesc:
fotoluminescena apare ca rezultat al absoriei luminii;
electroluminescena este condiionat de cmpul electric
exterior n care este plasat substana;
catodoluminescena este excitat de iradierea substanei cu
fascicule de electroni rapizi;
triboluminescena este determinat de aciuni mecanice
exterioare;
12/3/2010
Biosenzori
91
chemiluminescena apare n unele procese chimice;

bioluminescena se observ la unele bacterii, ciuperci i
animale nevertebrate (de exemplu: licuricii).
m Dup durata luminiscenei se deosebesc fluorescena i
fosforescena.
n cazul fluorescenei electronul trece, sub aciunea sursei de
energie exterioare, pe un nivel excitat (cu energie mai mic), iar
peste 10 ns, trece spontan n starea iniial i emite o cuant de
lumin (de exemplu luminescena lichidelor organice). Denumirea
provine de la mineralul fluorin (CaF2). Fluorescena apare la o
iluminare cu raze UV.
n cazul fosforescenei electronul excitat trece pe un nivel
metastabil intermediar, iar dup un interval de timp mai mare
dect 10 ns se ntoarce n starea fundamental. Cristalele
fosforescente (fosfori) conin atomi strini (activatori), care emit
pe o anumit lungime de und n funcie de natura activatorului.
12/3/2010
Biosenzori
Fluorescena
12/3/2010
Biosenzori
92
m n figura urmtoare se prezint lungimele de und relative

aferente celor mai importante tipuri de radiaii: vizibile,
ultraviolete i infraroii.
12/3/2010
Biosenzori
m Legea lui Beer (sau legea Lambert-Beer):
A = C l = l,
n care: A este absoria;
este absoria molar a absorbantului;
C este concetraia de absorie a speciilor n material;
l este distana strbtut de lumin prin material;
este coeficientul de absorie al substanei.
12/3/2010
Biosenzori
93
m Principalele tipuri de comportri fotometrice care au fost utilizate

n biosenzori sunt urmtoarele:
absoria ultraviolet vizibil;

emisia fluorescent i fosforescent;
bioluminescena;
chemiluminescena
spectroscopia reflexiei interne (IRS Internal Reflection
Spectroscopy);
metode de mprtiere a luminii laserului.
12/3/2010
Biosenzori
. Fibre optice

m Fibrele optice sunt ghidurile de und pentru lumin. Primele fibre
optice au fost realizate din sticl, iar n momentul de fa sunt
realizate din materiale polimerice, fiind mult mai ieftine dect
sticla i dect firele din metal folosite la cablurile electrice.
Structura unei fibre optice este prezentat n figura de mai jos.
12/3/2010
Biosenzori
94
m Undele luminoase se propag dealungul fibrei pe baza reflexiei

interne totale (TIR Total Internal Reflection). Aceasta este
prezentat n figura de mai jos.
12/3/2010
Biosenzori
m Reflexia intern total depinde de unghiul de inciden i de

indicii de refracie a mediului.
m Legea lui Snell:
sin n2
=
= n,
sin n1
m Dac = /2 rad i c = , atunci c = n2/n1, n care c este unghiul
critic pentru reflexia intern total.
Dac sin > n2/n1, atunci avem reflexie intern total.
Dac sin < n2/n1, atunci avem reflexie i refracie.
m Principiile de mai sus se aplic unei unde armonice plane i unei
unde cilindrice. Trebuie luate, ns, n considerare efectul de
modificare a fazei i a coturilor n fibr.
12/3/2010
Biosenzori
95
m n cadrul senzorilor ghidurile de und se utilizeaz n dou

moduri: extrinsec i intrinsec.
m n modul extrinsec ghidurile de und se comport simplu lumina
este transmis de la sursa de lumin la colectorul luminii. n
cadrul acestui mod se utilizeaz adesea legea lui Beer.
m n modul intrinsec lumina este modificat de msurand: faza,
polarizarea i intensitatea pot fi modulate nuntrul fibrei de ctre
msurand aflat nuntrul adncimii de penetrare pentru cmpul
evanescent adiacent ghidului (vezi figura urmtoare).
12/3/2010
Biosenzori
10
Modelul unui senzor intrinsec bazat pe enzim care

utilizeaz o fibr cu membran din polistiren
12/3/2010
Biosenzori
96
11
4. Construcia circuitelor

m Spre deosebire de traductoarele electrochimice, la care se utiliza
un electrod de referin, la traductoarele optice nu este necesar
un astfel de electrod. Cu toate acestea, sistemul funcioneaz
mai bine cu o referin necompletat (spaiu liber), situaie n
care sursa de lumin este mprit ntre eantion i referin.
Detecia poate fi afectat la lungimi de und analitice i de
referin diferite, putnd astfel obine raportul semnalelor la dou
lungimi de und. Acest lucru elimin mprtierea i fluctuaiile
sursei.
m Ghidurile de und pentru diferite forme de lumin necesit
realizarea lor din diferite materiale:
- plastic (de exemplu poliacrilamida) pentru > 450 nm;
- sticla pentru > 350 nm;
- silice (SiO2) topit pentru < 350 nm;
- ghiduri din cristal de germaniu pentru > 1000 nm.
12/3/2010
Biosenzori
12
m n cadrul senzorilor fotometrici reactivul trebuie imobilizat astfel

nct s interacioneze cu analitul pentru formarea unui complex
cu proprieti optice distincte, care pot fi monitorizate de senzor.
Aceast lucru poate fi realizat n dou moduri, dup cum urmeaz.
r Metoda direct
m Analitul A poate forma mpreun cu reactivul R un complex:
AR
A+R
[
AR]
K=
[A][R]
12/3/2010
Biosenzori
97
13
m Dac {R} este concentraia total de reactiv, atunci avem:
{R} = [R ] + [AR ]
m n aceast situaie concentraia reactivului liber este egal cu:
[R ] = {R}
1 + K [ A]
iar concentraia reactivului combinat este egal cu
[AR ] = K [A]{R}
1 + K [ A]
m Se observ c nu exist o relaie simpl ntre semnalul datorat
reactivului liber i analitului sau ntre reactivul combinat i analit.
12/3/2010
Biosenzori
14
m Dac parametrul optic msurat este proporional cu [AR], atunci

la concentraii mici rspunsul este proporional cu [A], astfel
nct [A] << 1/K; dac [A] >> 1/K, atunci rspunsul este saturat
la o valoare limit.
m Dac rspunsul este proporional cu [R], atunci semnalul va
scdea o dat cu creterea concentraiei [A]. n aceast situaie
se obine o relaie liniar:
{R} = 1 + K [A]
[R ]
m O modalitate mai bun este aceea de a utiliza dou lungimi de
und, una pentru AR i alta pentru R (referina). n aceast
situaie se obine o relaie liniar independent de {R}:
[AR ] = K [A]
[R ]
12/3/2010
Biosenzori
98
15
r Metoda indirect
m Uneori se utilizeaz metoda legturii competitive. Aceasta este
util, n particular, cnd nici analitul i nici reactivul nu prezint n
cazul legaturii o modificare spectral, caz n care un analit analog
poate fi utilizat. Aceasta este o substan similar cu analitul care
are caracteristici optice inerente sau care induce la legtur o
modificare optic. Caracteristica optic este adesea la analitul
analog, ca de exemplu, o etichet fluorescent. n determinarea
glucozei un reactiv potrivit, numit bioreceptor, este concavalina
A (Con A), iar analitul analog potrivit este dextran etichetat cu
izotiocianat de fluorescein (FITC-dextran). Con A este o protein
derivat din leguma Conavalia ensiformis (fasolea sabie din
Madagascar) care stimuleaz proliferarea limfocitelor T.
12/3/2010
Biosenzori
Concavalina A
12/3/2010
Biosenzori
99
m Con A este imobilizat pe o fibr goal cu membrana din

celuloz, ca n figura urmtoare.
Dou moduri de realizare a biosenzorilor pentru glucoz utiliznd
dextran etichetat cu izotiocianat de fluorescein (FITC) i Con A.
12/3/2010
Biosenzori
m FITC-dextran se poate deplasa liber n interiorul celulei optice,

dar nu poate difuza n afar direct prin membran. Analitul poate
difuza direct prin membran n celula optic datorit
dimensiunilor relative diferite ale analitului i analitului analogic
(A*). n absena zaharurilor, analitul analogic formeaz un
complex cu receptorul R:
A* + R
A* R
m Complexul obinut elimin o parte din receptor de pe pereii

fibrei, fapt care conduce la observarea unui semnal echivalent cu
20% din maximul fluorescenei.
12/3/2010
Biosenzori
100
m Cnd analitul A este introdus apare un echilibru competitiv ntre

analit i receptor:
AR
A+R
m Aceasta conduce la creterea cantitilor de receptor deplasate

de pe perei rezultnd creterea fluorescenei semnalului.
Eventual, ntregul receptorul este liber, caz n care nu se vede o
cretere a fluorescenei semnalului (semnalul este saturat).
12/3/2010
Biosenzori
Rspunsul pentru diferite zaharuri
12/3/2010
Biosenzori
101
m Putem analiza comportarea pe baza reaciilor urmtoare:
A+R
AR
A* + R
A*R
m n cazul unei legturi unipolare simple, constantele de echilibru

pentru cele dou procese de legtur sunt:
K=
[A R]
[A][R]
K* =
[ A * R ]
[A *][R]
12/3/2010
Biosenzori
m Notm cu {R} concentraia total a receptorului, iar cu {A*}

concentraia total a analitului analog.
m Concentraiile totale se conserv:
{R} = [R ] + [A R ] + [A* R]
{A }= [A ]+ [A R]
*
m Cele patru ecuaii prezentate anterior conduc la urmtoarea

ecuaie de gradul doi:
([A ]/{A }) + ([A ]/{A })({R}/{A } 1) + K{A[A}]K+ 1 K{A[A}]K+ 1 = 0

*
* 2
12/3/2010
Biosenzori
102
m [A*]/{A*} reprezint rspunsul normalizat; el are valori cuprinse

ntre 0 i 1.
m Sensibilitatea este funcie de {A*}.
m Rspunsul normalizat este funcie de doi termeni {R}/{A*} i
(K[A] + 1)/{A*}K*. Concentraia analitului apare n al doilea
termen. Astfel, o caracterizare complet a modelului sistemului
poate fi obinut prin reprezentarea grafic a rspunsului
normalizat n funcie de (K[A] + 1)/{A*}K* pentru diferite valori
ale raportului {A*}/{R}. Un exemplu de astfel de grafic este
prezentat n figura urmtoare.
12/3/2010
Biosenzori
Dependena [A*]/{A*} =f((K[A] + 1)/{A*}K*), pentru diferite

valori ale raportului {A*}/{R}.
12/3/2010
Biosenzori
103
10
Graficele prezentate anterior pot fi utilizate pentru estimarea

celor mai potrivite condiii pentru realizarea unui biosenzor, prin
urmtoarea procedur:
(i) Se estimeaz concentraia analitului corespunztoare mijlocului
domeniului, [A].
(ii) Se selecteaz un bioreceptor care are o constat de legtur
de ordinul 10/[A].
(iii) Se estimeaz minimul concentraiei analitului analog A* care
poate fi estimat cu sistemul optic, [A*]; se presupune c {A*}
este aproximativ egal cu 50[A*].
(iv) Se selecteaz (sau sintetizeaz) un compus analogic astfel
nct K* = 1/ [A*].
(v) Se
implementeaz
o
tehnic
pentru
ncrcarea
compartimentului senzorului cu bioreceptorul R astfel nct
concentraia site-urilor s fie aproximativ egal cu 100{A*}.
m
12/3/2010
Biosenzori
11
m Aplicnd aceste principii la un senzor pentru determinarea

glucozei, domeniul pentru glucoza n snge este de 1 5 mgml-1;
ca urmare [A] este egal cu 2,5 mgml-1 (0,025 M). Constanta K
pentru Con A legat cu glucoza este de 320 M-1. Cantitatea
maxim de Con A care poate fi imobilizat pe suprafaa interioar
a fibrei de dializ determin o concentraie efectiv de 10-5 M.
Constanta de legtur K* ntre FITC-dextran i Con A este
aproximativ egal cu 7,5x104 M-1. Concentraia total de FITCdextran {A*} este aproximativ egal cu 1,5x10-6 M. Valoarea
pentru K[A] a fost n jurul valorii 6, cu glucoza la nivelul de 2,5
mgml-1, iar {R}/[A*] a fost egal cu 7.
m Datele de mai sus satisfac criteriul prezentat anterior.
12/3/2010
Biosenzori
104
12

Biosenzori

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Biosenzori

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Biosenzori

B. Eggins, Biosensors. An Introduction, Ed. Willey

L. Kekedy, Senzori elecrochimici metalici

X. Zhang, H. JU, and J. Wang, Electrochemical

r Structura unui biosenzor

(a) bio-reacie transform substratul (S) n produs (P);

r Exemplu de biosenzor : nasul

Nrile preiau un eantion de miros, care este apoi sesizat de membrana

m Elementul biologic sensibil

- Senzori bazai pe tranzistoarele cu efect de cmp (FET Field Effect

r Parametrii unui biosenzor

r Metode de imobilizare a elementului biologic de traductor

1.2. Primii biosenzori

r Biosenzorul pentru determinarea glucozei n snge

Biosenzorul se bazeaz pe faptul c enzima

Acid gluconic + H2O2

m n cadrul primilor biosenzori oxigenul a fost utilizat ca agent

O2 + 2e- + 2H+ = H2O2

Structura electrodului oxigen realizat de Clark (1953)

m O tensiune egal cu 0,7 V este aplicat ntre catodul de

Schema biosenzorului cu electrodul oxigen realizat de Clark

Electrodul oxigen are o membran permeabil de oxigen (de

Schema straturilor biosenzorului cu electrodul oxigen realizat de Clark

M1 = membran din celofan;

Substratul (soluia de glucoz) i oxigenul pot penetra prima

r Biosenzorul pentru determinarea ureii

m Concentraia de amoniac este monitorizat prin

1.3. Domenii de aplicaii ale biosenzorilor

Este principalul domeniu de aplicaie.

m Controlul proceselor industriale

m Monitorizarea mediului nconjurtor

Se folosesc cel mai adesea ca elemente biologice.

Se leag cu antigenii corespunztori n scopul eliminrii acestora din

m Reacia catalitic la care particip o enzima E i substratul S

k1, k-1, k2 = constante de vitez chimic de reacie

Acid gluconic + H2O2

Viteza de formare a complexului = k1[S][E] k-1[ES]

k1[S][E] k-1[ES] k2[ES] = 0

[E0] = [E] + [ES]

KM = (k-1 + k2)/k1 constanta Michaelis

[ES ] = [E0 ][S ]

Pentru a obine grafic o dreapt se determin inversa ecuaiei

Graficul 1/ = f(1/[S]) este o dreapt cu panta KM/Vmax i

2.2.1. Exemple de biosenzori bazai pe enzime

Reacia este, n general, urmrit n funcie de potenial cu

Reacia de oxidare a glucozei de ctre oxigenul molecular,

Acid gluconic + H2O2

Reacia a fost iniial urmrit cu ajutorul electrodului oxigen a

2.2.2. Avantajele i dezavantajele enzimelor

Arginina este un amino acid complex care este, adesea,

Arginina este descompus, folosind un esut din ficat de

Glutamina este cel mai abundent amino acid liber n corpul

Glutamina este descompus, folosind un esut din ficat de

Determinarea nivelului de dopamin din creier. Dopamina

esutul din banan (la fel ca i esuturile din mr,

m Alte exemple n care se utilizeaz esuturile:

In procesul de fermentaie a melasei trestiei de zahr, care

Biosenzorul pentru msurarea glucozei poate fi realizat

Biosenzor pentru determinarea etanolului sau a acidului

m Ali biosenzori n care se utilizeaz microorganisme:

r Caracteristicile biosenzorilor care msoar nivelul de

m Interaciunea anticorp antigen este similar cu interaciunea

m Forele care intervin la realizarea legturii dintre anticorp i

m Rata de disociere Kd reprezint o msur cantitativ a