1.

Fitohormonii - generaliti
1.1. Definiie
Fitohormonii (regulatorii de cretere sau substanele de cretere) sunt compui
organici care, n concentraii mici sau foarte mici, influeneaz procesele de cretere i de
morfogenez (le stimuleaz sau le inhib), respectiv regleaz procesele fiziologice din
diferitele esuturi i organe ale plantelor.
Fitohormonii sunt un set unic de compui, cu metabolism i proprieti specifice.
Singurele caracteristici universale sunt faptul c reprezint compui naturali din plante cu o
abilitate de a afecta procesele fiziologice la concentraii mult mai mici dect cele la care
nutrienii sau vitaminele afecteaz aceste procese. (Davies, 2004).
1.2. Etimologie
Termenul hormon a fost pentru prima dat folosit n medicin n urm cu
aproximativ 100 de ani, nsemnnd un factor stimulator, dei a ajuns s nsemne un mesaj
chimic transportat. Cuvntul provine din limba greac unde nseamn a stimula sau a pune
n micare. Prin urmare, nsi originea cuvntului nu presupune noiunea de transport, iar
definiia de mai sus a unui fitohormon este mult mai aproape de nelesul cuvntului grecesc
dect de semnificaia actual a hormonilor folosit n contextul fiziologiei animale.
Went i Thimann (1937), n cartea lor Phytohormones, au definit hormonii ca
substane ce sunt transportate dintr-o parte a organismului n alta. Utilizarea lor original n
fiziologia vegetal a derivat din conceptul mamalian al hormonilor. Acesta implic
identificarea unui loc de sintez, transportul prin fluxul sanguin la un esut int i controlul
rspunsurilor fiziologice n esutul int n funcie de concentraia hormonului. (Davies, 2004).
1.3. Scurt istoric (Cachi, 1987)
Darwin (1880) a intuit existena fitohormonilor, dar abia n secolul XX s-a putut
dovedi experimental rolul lor fiziologic, respectiv modul de aciune, precum s-a putut realiza
izolarea, purificarea sau sintetizarea acestora.

Went (1928) a pus n eviden prezena, n coleoptilul de Avena, a unei substane de

cretere, cu rol n curbarea fototropic a poriunii apicale a acestuia.
Kgl i Haagen-Smit (1931) au obinut o substan activ, auxina A, izolat din
urina uman. Apoi Kgl i colab. (1934) au comunicat izolarea, tot din urin, a unei substane
mai complexe, pe care au denumit-o heteroauxin (auxina A i B), compus care, ulterior,
s-a dovedit a fi acidul 3-indolilacetic (acidul -indolilacetic, abreviat AIA). Aceast substan
a fost sintetizat nc din anul 1904 de ctre Ellinger, dar pn n anii 1937 - 1939 nu s-au
cunoscut proprietile sale biologice. n 1934, Kgl i Kostermans au izolar AIA din drojdii,
iar Thimann, n 1935, a extras AIA din Rhizopus.
n anii 1938 - 1939, prin experimente independente (i aproape simultane), efectuate
de ctre Gautheret i Nobecourt cu culturi de esuturi in vitro, s-a pus n eviden aciunea
fitohormonal (de excepie) exercitat de ctre auxin.
n laboratoarele lui Skoog, n anul 1956, s-a izolat o alt substan activ, chinetina (6furfurilaminopurina), preparat din sperm de heringi. Tot n 1956, s-a remarcat, n
laboratoarele lui Steward, aciunea particular a laptelui din nuc de cocos, a crui prezen
n mediul de cultur inducea formarea a numeroase plantule, din celulele cultivate in vitro.
Laptele din nuc de cocos este un produs natural, bogat n citochinine native.
Giberelinele, acidul abscisic i etilena au fost descoperite cam n aceeai perioad a
anilor 30. Efectele acestora n culturile de esuturi sunt mai puin spectaculoase n raport cu
cele obinute n practica agricol.
1.4. Structura, sinteza i transportul
Sub aspect chimic, fitohormonii sunt substane micromoleculare foarte heterogene ce
se aseamn cu vitaminele i cu unii hormoni animali. Conin n molecul inele ciclice
(indolic, gibanic, purinic, iononic etc.), legturi etenice i diferite grupri funcionale. Sunt
substane larg rspndite n natur, ce se gsesc n diferite esuturi i organe ale plantelor
superioare, n ciuperci, drojdii, alge, flagelate, n numeroase microorganisme, att n stare
liber, ct i asociate cu proteinele.
Pe lng fitohormoni (regulatori de cretere de natur endogen) se cunoate i o
foarte extins gam de substane organice cu aciune fiziologic asemntoare cu cea a
fitohormonilor, compui de sintez ce aparin familiilor de substane fitohormonale native,
avnd un nucleu apropiat sau prezint o structur diferit. Dei sunt compui variai ca

structur chimic, ei au comun faptul c exercit aciuni asemntoare fitohormonilor

(mimnd efectul lor), influennd procesele de cretere la diluii foarte mari.
Fitohormonii naturali sunt metabolizai intracelular i, ca atare, au durat limitat de
aciune asupra celulelor. Spre deosebire de acetia, regulatorii de cretere sintetici (omologi ca
aciune fiziologic cu fitohormonii) sunt metabolizai mai lent. Astfel, durata lor de influen
este prelungit, efectul lor fiind mai puternic.
Regulatorii de cretere sunt sintetizai de citoplasma celulelor tinere i se acumuleaz
mai ales n zonele de cretere ale tulpinilor i rdcinilor, n muguri, semine, polen, n ovare,
n esuturi tinere etc. (Burnea, 1977).
Fitohormonii sunt, de regul, transportai i acioneaz de la distan, dar pot aciona i
n esutul n care au fost sintetizai. De exemplu, citochininele sunt transportate de la rdcin
la frunze, unde intervin n prevenirea senescenei, n timp ce etilena acioneaz n acelai esut
n care a fost sintetizat. (Vntu, 2005).
Biogeneza fitohormonilor este localizat, de regul, n alte organe dect n organele
int. Din locurile de sintez, ei sunt translocai (sub form activ sau inactiv) spre esuturile
apte de a recepiona semnalele i de a reaciona la stimulii primii (concentraiile active sunt,
adesea, mai mici de 1 M). (Cachi, 1987).
Translocai la locul de reacie ei determin producerea unor rspunsuri specifice
biochimice, fiziologice i/sau morfologice. n funcie de natura lor, sinteza fitohormonilor este
localizat n diferite zone ale plantelor. Ei pot fi pstrai un timp la locul de origine (sub form
activ sau inactiv) ori pot migra n diferitele organe ale plantelor, acumulndu-se n anumite
celule i esuturi. Faptul c semnalul purtat de ctre fitohormoni marcheaz un rspuns
imediat sau ntrziat depinde de starea fiziologic a celulelor, esuturilor sau organelor
receptori, de stadiul lor de dezvoltare, de natura i nivelul semnalului, de interaciile cu ali
fitohormoni i de condiiile de mediu.
Celulele responsabile de biogeneza fitohormonilor, ca de altfel i cele care decodific
mesajul lor, trebuie s dein un sistem enzimatic adecvat sintezei sau deblocrii cilor
metabolice, responsabile de asigurarea manifestrii integrale a activitii fiecrui
compartiment biomolecular, implicat n procesele de cretere i dezvoltare. Amplitudinea
reaciei este dependent nu numai de ntrunirea condiiilor endogene receptoare a impulsurilor
fitohormonale i a condiiilor de mediu, ci i de disponibilitile celulare n a rspunde
mesajelor primite, cu referire deosebit la rezervele energetice i constructive ale celulelor, cu
att mai mult cu ct ne adresm proceselor de multiplicare i de cretere celular. (Cachi,
1987).
3

1.5. Rolul fiziologic

Fitohormonii ocup poziii cheie n procesele de multiplicare celular i n creterea
acestora, n general, i n morfogeneza plantelor cormofite, n special. Fitohormonii determin
creterea plantelor prin intensificarea diviziunii celulare i prin alungirea celulelor existente.
Mecanismul prin care se realizeaz creterea plantelor depinde de natura fitohormonilor.
Fitohormonii joac un rol important n controlarea modului n care planta crete i se
dezvolt. n timp ce metabolismul furnizeaz energia i crmizile necesare pentru viaa
plantei, hormonii sunt cei care regleaz viteza de cretere a prilor individuale i integrarea
acestora pentru a produce forma pe care noi o recunoatem ca fiind plant. Prin urmare, ei
joac un rol important n procesele de reproducere. (Davies, 2004).
1.6. Clasificare
Clasificarea fitohormonilor se face, de obicei, n trei grupe (Vntu, 2005):

Stimulatoare;

Retardante;

Inhibitoare.

Aceste trei grupe de substane se intercondiioneaz reciproc, astfel c reaciile

plantelor, n toate fazele de cretere i dezvoltare, reprezint rezultatul unui echilibru ntre
produii stimulatori i cei inhibitori.
n categoria substanelor stimulatoare se ncadreaz: auxinele, citochininele,
giberelinele i etilena.
Pe baza aciunilor de stimulare i inhibare a proceselor de cretere s-au sintetizat i
substane cu proprieti biologice caracteristice, implicate n ntrzierea proceselor de cretere,
motiv pentru care au fost numite retardani. ntre acestea amintim: beta-hidroxietilen
hidrazida, clorura de trimetilamoniu etc.
Dintre inhibitorii naturali menionm acidul abscisic, florizinul, cumarina,
scopoletina, acidul maleic, acidul citric, acidul cafeic, unii alcaloizi (chinina, cafeina) etc.
Dintre inhibitorii sintetici menionm hidrazida maleic, actinomicina D un puternic
inhibitor al metabolismului nucleoproteic, oprind creterea plantelor.

Alte substane regulatoare de cretere i maturare:

brasinosteroizii: brasinolidul (izolat din uleiul de rapi) i castasteronul cu rol
stimulator n creterea esuturilor vegetale, stimularea produciei de etilen i creterea
rezistenei la nghe, boli, stres hidric;
poliaminele alifatice care sunt implicate n dezvoltarea fructelor i au aciune
antagonic fa de etilen;
acidul jasmonic care are efect asemntor cu etilena i actiuni similare acidului
abscisic;
acidul salicilic care este implicat n biosinteza proteinelor cu mas molecular mic ce
confer rezisten plantelor la aciunea agenilor patogeni.

2. Auxinele
Auxinele sunt compui naturali, fiziologic polivaleni, care (n doze extrem de reduse)
pot influena att creterea, ct i dezvoltarea plantelor, respectiv formarea organelor
vegetative i generative. (Vntu, 2005).
Auxinele au fost primul grup de substane fitohormonale descoperite. n aceast
categorie sunt grupate i alte substane organice, de regul acizi organici, care n principal au
capacitatea de a produce curbarea coleoptilului de Avena (la concentraii <0,001 M),
promovnd creterea n lungime a celulelor. (Cachi, 1987).
Acidul 3-indolilacetic este primul fitohormon cert care a fost descoperit i care se mai
numete i heteroauxin (Kgl 1934). Acest fitohormon are o larg rspndire n natur, fiind
prezent n toate plantele superioare i inferioare. Se acumuleaz de obicei n endosperm,
coleoptil, ovare i n gruncioarele de polen. Se formeaz n cantitate mai mare n vrful
rdcinii i tulpinii, n tuburile polenice, n seminele tinere i n general n esuturile
meristematice, dar este sintetizat i de unele ciuperci parazite i simbiote.
Principalele auxine sunt:

cu nucleu indolic acidul 3-indolilacetic (auxina nativ, AIA), acidul indolilbutiric

(AIB), acidul indolilpropionic (AIP);

cu nucleu naftalic acidul alfa naftilacetic (ANA), acidul beta naftoxiacetic

(ANOA);

cu nucleu clorfenoxiacetic acidul 2,4 diclorfenoxiacetic (2,4-D), acidul 2,4,5triclorfenoxiacetic (2,4,5-T), acidul 2-metil-4-clorfenoxiacetic;

cu nucleu benzoic acizi 2,4,6- sau 2,3,6-triclorbenzoici, acidul 2-metoxi-3,6diclorbenzoic (dicamba);

cu nucleu picolinic acidul 4-amino-3,5,6-tricloropicolinic (PIC / picloram) etc.

n numeroase plante s-au identificat derivai ai acidului 3-indolilacetic sau substane

nrudite cu acesta, care au aciune fitohormonal, dintre acestea, mai importante fiind aldehida
3-indolilacetic, acidul indolilpiruvic, esterul etilic al acidului indolilacetic, acidul
indolilacetonitrilic, acidul indolilpiruvic etc.
Paralel cu extragerea i separarea auxinelor naturale au fost sintetizate numeroase
substane chimice cu structur asemntoare cu a compuilor endogeni, avnd o puternic
influen asupra metabolismului plantelor i multiple aplicaii n practica agricol i horticol.
Aceste substane sunt: acidul 2,4-diclorfenoxiacetic (2,4-D), acidul indolilbutiric, acidul
indolilpropionic, acidul naftilacetic (ANA). Aceste substane sunt derivai ai indolului i
naftalenului. (Vntu, 2005).
Extragerea, purificarea i identificarea chimic a auxinelor au pus n eviden prezena
lor, n stare natural, n concentraii extrem de reduse, n diferite organe ale plantelor, precum
i faptul c se acumuleaz preferenial n organele cu cretere activ muguri i frunze tinere,
vrfuri de tulpini i rdcini, antere i granule de polen, cotiledoane, semine imature etc.
Cantiti infime de auxine se gsesc n cambiu i n esuturile parenchimatice. (Vntu, 2005).
Sinteza primar a auxinei presupune existena unui precursor care se transform prin
oxidare: triptofanul trece treptat n triptamin, apoi n acid -indolilpiruvic. Acidul indolilpiruvic reprezint punctul de plecare a reaciilor metabolice din procesul sintezei
auxinelor, reacii ce au la baz anumite procese enzimatice ce necesit pentru fiecare etap o
enzim specific.
Auxinele se sintetizeaz n frunzele tinere, de unde migreaz spre celelalte organe
tinere, aflate n procese intense de cretere, sub form de precursori inactivi, legai de
proteine. n vrfurile vegetative (meristemele apicale), auxinele inactive se desprind de
proteine sub aciunea unor enzime proteolitice i devin libere i active. Sub aceast form
(activ) circul descendent, prin vasele liberiene i, mai rar, prin esuturile parenchimatice
adiacente vaselor conductoare. (Vntu, 2005).
Circulaia auxinelor nu se face prin difuziune, ci pe principiul polaritii, datorit
diferenei de potenial electric dintre vrful plantei (cu sarcin electric negativ) i baza

plantei (cu sarcin electric pozitiv). Astfel, auxina (ncrcat cu sarcin electric negativ)
circul bazipetal, polarizat, spre celulele tinere, dar auxinele pot circula i transversal, n cazul
organelor aezate orizontal (lstari laterali) sau iluminate lateral, ceea ce explic geotropismul
rdcinilor i fototropismul tulpinilor.
n prezena luminii pe care o capteaz unii fotoreceptori (riboflavin, beta-caroten),
are loc degradarea auxinelor, ca un proces de oxidare i trecere ntr-o form oxidat i
inactiv, numit hemiauxin-lacton sau hemiauxin. Datorit proceselor concomitente de
biosintez i degradare oxidativ, stocul auxinic dintr-un organ va fi alctuit din precursori
auxinici, auxine active i auxine degradate. (Vntu, 2005).
Acidul 3-indolilacetic se gsete n plante n stare liber i asociat cu proteinele.
Acidul 3-indolilacetic asociat cu proteinele este inactiv i reprezint o rezerv nsemnat
pentru plante. n funcie de necesiti, acidul 3-indolilacetic se desprinde pe cale enzimatic
de proteina inhibitoare i devine astfel activ.
n celule, auxina nativ (AIA) este degradat de ctre AIA-oxidaz. n meninerea sau
decarboxilarea AIA intervin i peroxidazele, iar n procesele fiziologice legate de auxin se
interpun i ali fitohormoni care amplific sau nu efectele auxinei.
Viteza de degradare, ca i capacitatea de a aciona, ntr-un anumit sens este
dependent de natura esutului supus influenei unei anumite auxine, rdcinile fiind mai
receptive la administrarea unor concentraii mici, iar tulpinile reacionnd la concentraii ceva
mai ridicate. ntre organele aceleiai plante, reacia este diferit, n funcie de natura,
concentraia i combinaiile dintre variate auxine i, eventual, dintre auxine i ali regulatori
de cretere (de exemplu, n stimularea nrdcinrii butailor, uneori se folosesc i amestecuri
de auxine). Acest fapt este i mai evident la explantele cultivate in vitro. Diferena de reacie
exist i n ceea ce privete receptivitatea selectiv a plantelor fa de dozele de auxine, ntre
dicotiledonate i monocotiledonate, fapt care a permis combaterea buruienilor n lanuri prin
aplicarea unor doze ridicate de auxine, ca erbicide. (Cachi, 1987).
n general, decarboxilarea enzimatic a AIA este mai puternic n esuturile btrne
dect n cele tinere. Dintre auxine, ANA i 2,4-D sunt mai stabile i mai puin supuse
degradrii endocelulare, pe cnd AIA nativ sau exogen este fotooxidabil i este degradat de
ctre radiaiile ionizante, de razele UV, de peroxizi etc.
Auxinele intervin n numeroase procese fiziologice, interacioneaz cu alte substane
endogene i, firete, cu ali fitohormoni, n special cu citochininele, giberelinele i cu etilena.
Auxinele naturale i cele obinute prin sintez au o larg utilizare n agricultur i horticultur.
Ele pot fi utilizate ca stimulatori pentru nrdcinarea butailor, pentru accelerarea coacerii
7

fructelor, obinerea fructelor fr semine, inhibarea mugurilor, pentru prevenirea cderii

premature a fructelor etc. n concentraii mai mari sunt utilizate ca ierbicide n combaterea
buruienilor. (Burnea, 1977).
Auxinele naturale i sintetice exercit diferite aciuni fiziologice, care declaneaz
reacii particulare de cretere, dezvoltare i metabolism.
Tratamentul cu auxine intensific creterea prin modificarea volumului celular,
alungirea plasmalemei i ngroarea ei, prin depunerea de noi substane formative. Totodat
sunt modificate proprietile fizice ale membranelor (elasticitate, plasticitate, permeabilitate
pentru ap i pentru anumii ioni), proprietile structurale (orientarea microfibrilelor de
celuloz) i proprietile chimice (natura proteinelor plasmatice, compoziia pectinelor).
Influeneaz metabolismul, ndeosebi sinteza proteic, prin exercitarea unei influene asupra
sintezei de ARN ribosomal.
Auxinele, n concentraii sczute, stimuleaz diviziunea celular, iar n concentraie
ridicat stimuleaz elongaia celular. Influeneaz sinteza de etilen, iar etilena la rndul ei
acioneaz n stabilirea nivelului de auxin i n transportarea acesteia prin corpul plantelor.
Exercit o aciune n micrile de cretere tropisme i sunt implicate n corelaiile interorgane i, mai ales, n fenomenul de dominan apical, caulinar, exercitat de ctre mugurele
terminal.
Unghiul de curbur al plantelor (coleoptilului) este proporional cu cantitatea
substanei de cretere. Ca unitate de msur se ia unitatea de ovz, prin care se nelege
cantitatea de auxin care, aplicat pe un coleoptil de ovz, produce o curbur de 10 la o
temperatur de 22 C i la o umiditate relativ a aerului de 92 %. (Burnea, 1977).
Stimuleaz germinarea seminelor, tratamentele cu AIA, 2,4-D i ANA mrind
capacitatea i energia germinativ a seminelor. Unele auxine sintetice (AIA, ANA, 2,4-D)
stimuleaz formarea rdcinilor la plante care, n mod normal, se nrdcineaz greu prin
butai (Rosa, Clematis, Magnolia). Prin urmare, pentru reuita butirii i a marcotajului, se
recomand folosirea acestor substane.
n doze mari, auxinele menin n stare de laten mugurii pomilor fructiferi sau pe cei
ai tuberculilor de cartof. n declanarea nfloririi, un rol activ l au auxinele endogene
existente n ovar, la baza inflorescenei i n pedunculul florii. Polenul conine, de asemenea,
auxine implicate n creterea tubului polenic. (Vntu, 2005).
n timpul polenizrii i fecundrii are loc biosinteza auxinelor naturale. Creterea
fructului este stimulat de auxinele sintetizate n semine, de unde difuzeaz n pulpa fructului
i declaneaz extensia celulelor. Pe baza administrrii auxinelor exogene este posibil
8

formarea fructelor fr polenizare, obinerea fructelor partenocarpice (fr semine), la

tomate, struguri, mr, pr, citrice etc. (Vntu, 2005).
ntrzierea mbtrnirii esuturilor se poate realiza prin tratamente cu auxine, ceea ce
poate fi asociat cu meninerea unui anumite nivel al proteinelor i acizilor nucleici. De
asemenea, auxinele inhib formarea embrionilor n suspensiile de celule.

3. Citochininele
Citochininele constituie un grup de substane derivate de la adenin, cu efect n
inducerea diviziunilor celulare. Au fost izolate din laptele de Cocos nucifera i din diferite
extracte de flori i fructe. Au fost identificate n numeroase plante superioare i inferioare,
avnd o larg rspndire n natur.
La nceput a fost izolat chinetina (6-furfurilaminopurina) i a fost experimentat pe
explante din mduv de tutun, cultivate pe medii aseptice. n lipsa acestei substane celulele
nu se divid. n prezena chinetinei sau a unei substane de tip citochininic (i mai ales i n
prezena unei auxine), se obine o multiplicare celular i neoformarea de mugurai i de
tulpinie. (Cachi, 1987).
Spre deosebire de auxine, citochininele reprezint un grup de substane mai omogen,
din punctul de vedere al constituiei chimice. n general, citochininele sunt adenine substituite
i posed un nucleu purinic. Prin nlocuirea gruprii furfurilice a chinetinei cu alte grupe
(fenil-naftil-ciclohexil etc.) se pot obine substane cu activitate asemntoare chinetinei.
n general, citochininele suport bine autoclavarea, fiind termostabile.
Prima extragere i purificare a citochininelor naturale a fost realizat de ctre L. S.
Letham (1963), care a izolat, din boabe imature de porumb, un compus numit zeatin. n
ultimii ani au fost sintetizai peste 50 de compui chimici care manifest proprieti similare
cu cele ale citochininelor naturale (benziladenina, 6-benzilaminopurina, gama-azochinetina).
Citochininele endogene deriv din degradarea acizilor nucleici, trecnd prin faza de
nucleotide. (Vntu, 2005).
Metabolismul citochininelor este strns legat de metabolismul acizilor nucleici, n
special de cel al ARN-ului. La doar trei luni de la sintetizarea chinetinei, s-a sintetizat i
benziladenina (benzilaminopurina, abreviat BAP sau BA). Din marele numr de derivai
activi cu nucleu purinic, n culturile de esuturi i de celule, se folosesc mai frecvent urmtorii

patru: 2-izopentiladenina (2iP) i zeatina (Z) ca citochinine naturale i chinetina (K) i

benziladenina (BAP) ca citochinine de sintez. (Cachi, 1987).
Citochininele includ substane care determin efecte fiziologice legate de reglarea
diviziunii celulare, creterea celulei prin extensie, diferenierea i organogeneza. Prezena
citochininelor n vasele de xilem arat c sinteza acestei substane se face n rdcini, de unde
migreaz ctre vrful plantei i se acumuleaz n fructe, frunze i muguri. Migraia se
realizeaz concomitent cu curentul care asigur transpiraia. Totui, ele nu circul polarizat n
plant, n cursul migraiei fiind legate de un glucid sau mbrcnd o form inactiv.
La culturile in vitro citochininele servesc n meninerea viabilitii celulelor, susinnd
capacitatea de supravieuire a esuturilor inoculate, favoriznd dediferenierea i stimulnd
multiplicarea celular. Procesele de morfogenez n prezena citochininelor constau n
caulogenez, ele impulsionnd formarea de mugurai i tulpinie.
Citochininele stimuleaz diviziunea celulelor mature, nemeristematice. Ele stimuleaz
creterea plantelor, procesele de morfogenez, biosinteza substanelor proteice (s-au
descoperit citochinine legate de ARN de transfer), formarea mugurilor i sunt antagoniste
rizogenezei. Protejeaz metaboliii de aciunea enzimelor hidrolizante, ceea ce confer
citochininelor un rol important n prevenirea senescenei.
Ele exercit un efect antagonic auxinelor, anihilnd dominana apical a mugurelui
terminal (mugurii axilari tratai cu citochinine intr n cretere activ, n competiie cu
mugurele terminal, dar, odat cu nlturarea citochininei, creterea acestor se micoreaz i se
oprete, ei reintrnd sub incidena aciunii mugurelui apical). Acest fapt are ca efect o
puternic ramificare a tulpinii (cazuri frecvent ntlnite la specii de Centaurea, Crepis).
Stimuleaz de asemenea germinarea seminelor plantulelor parazite, ntrerup repausul
seminelor, stimuleaz formarea i creterea frunzelor prin alungirea limbului. Reduc efectul
toxic al unor virusuri i anuleaz efectul unor inhibitori ai germinaiei (cumarina, xantina
etc.). Stimuleaz dezvoltarea mugurilor, a organelor florale, dezvoltarea ovarelor, induce
formarea fructelor partenocarpice, intensific transportul asimilatelor i mrete rezistena
plantelor la temperaturi sczute sau ridicate, la infecii cu ciuperci. Prin capacitatea de a
stimula sinteza proteinelor, a pigmenilor clorofilieni i a acizilor nucleici, ca i prin
polarizarea circulaiei metaboliilor din esuturile adiacente spre cele tratate, citochininele au
rol esenial n ntrzierea mbtrnirii plantelor.
Citochininele acioneaz asupra diviziunii celulei vegetale, eficiena lor fiind asigurat
de prezena auxinei, ntruct auxina favorizeaz duplicarea ADN, iar chinetina separarea
cromozomilor. Stimularea diviziunii celulare este datorat unor modificri eseniale n ciclul
10

mitotic, reducnd durata fazei presintetice (G1) din ciclul mitotic, intensificarea procesului de
sintetizare (S) a ADN-ului i prelungirea perioadelor post-sintetice (G2). (Vntu, 2005).
Deosebit de important este efectul fiziologic combinat al auxinelor i citochininelor,
alctuind ceea ce, n tehnica culturilor de esuturi i celule vegetale, poart denumirea de
balan hormonal.
n 1957, Skoog i Miller au fondat experimental conceptul de control hormonal al
organogenezei. n lucrarea lor, devenit clasic, ei au demonstrat c diferenierea de rdcini
i de tulpini, n cultura de mduv de tutun, a fost dependent de raportul dintre
auxin/citochinin, prezent n substratul de cultur. Organogeneza a putut fi reglat prin
schimbarea concentraiei acestor doi hormoni n mediul de cultur. Astfel, o concentraie
crescut de auxin a promovat rizogeneza, n timp ce mrirea coninutului de citochinin a
stimulat formarea de tulpinie. O concentraie egal a celor doi hormoni a impulsionat
creterea calusului. Acest experiment st la baza cercetrilor ulterioare, efectuate cu explante
cultivate in vitro i a servit la dirijarea proceselor de morfogenez la multe alte tipuri de
culturi de esuturi i celule. (Cachi, 1987).

4. Giberelinele
Giberelinele sunt fitohormoni care deriv de la hidrocarbura tetraciclic numit giban.
Giberelina, principalul reprezentant al acestei clase de compui, a fost descoperit n mediile
de cultur ale ciupercii Gibberella fujikuroi i izolat de ctre cercettorii japonezi T. Yabuta
i T. Hayashi (1935). Giberelinele au fost identificate ulterior n numeroase plante
superioare, ciuperci, bacterii, alge, muchi, ferigi etc.
Ulterior au fost descoperite peste 50 de gibereline. Dintre acestea, acidul giberelic
(GA) este cea mai activ substan de acest tip i cea mai frecvent utilizat n practic, precum
i n tehnicile de culturi in vitro. (Cachi, 1987).
Din punct de vedere chimic, giberelinele sunt diterpenoide tetraciclice care conin n
molecul grupri etilenice, hidroxilice i carboxilice. Giberelinele au o structur molecular
asemntoare acidului giberelinic, care are cea mai mare activitate fitohormonal din acest
grup. (Burnea, 1977). Sunt termolabile i se sterilizeaz numai prin filtrare.
S-a reuit detectarea prezenei giberelinelor naturale n aproximativ 130 de specii de
plante superioare (100 de specii de dicotiledonate i 30 de specii de monocotiledonate). Locul
de sintez a giberelinei este n embrionii seminelor n curs de germinare, n frunzele tinere,

11

mugurii apicali. Se cunosc 52 de gibereline, care au fost identificate prin metode moderne de
separare i analiz (electroforez, cromatografie). (Vntu, 2005). Ele circul n plant prin
vasele liberiene.
La culturile in vitro giberelinele se folosesc n mai mic msur, dar exist, totui,
recomandri exprese de utilizare a lor n anumite situaii. De exemplu, ele exercit o anumit
aciune specific asupra alungirii meristemelor apicale care, n absena GA, prezint o cretere
globular. Adaosul de giberelin face ca miniinternodurile meristemelor caulinare s se
alungeasc (de exemplu, la cultura in vitro a meristemului de cartof) i servesc la nlturarea
fenomenelor de nanism.
Pe de alt parte, trebuie avut n vedere faptul c giberelinele inhib dediferenierea
celulelor, de aceea ele se folosesc n mediile de cultur numai n cazul n care explantul
posed meristeme n structura sa (de exemplu, la cultura de apex sau de dom meristematic).
(Cachi, 1987).
Giberelinele au n general o aciune sinergic cu a auxinelor, iar n unele esuturi
efectul lor este identic. Giberelinele nu acioneaz asupra rdcinilor i au efect mic asupra
coleoptilelor, dar stimuleaz creterea tulpinilor i a frunzelor. Ele acioneaz n special
asupra sistemelor enzimatice implicate n procesul de cretere i mai puin asupra
membranelor celulare. Joac un rol important n reglarea nivelului endogen de auxin, fie prin
intervenii directe n procesul de biosintez al acesteia, fie inhibnd aciunea AIA-oxidazei.
Exercit un rol complex n suprimarea latenei instalate n semine, muguri sau n
organele de rezerv. Tratamentul cu gibereline poate determina substituirea aciunii frigului i
a fotoperioadelor, formarea fructelor partenocarpice, formarea florilor mascule sau femele etc.

5. Etilena i acidul 2-cloroetilfosfonic

Etilena a fost recunoscut ca fitohormon n anii 80, dei nc din anul 1901 Neljubov
a descris la plante efectele fiziologice stimulatoare ale acestei substane. ntre anii 1917
1937 se ntlnesc referiri bibliografice cu privire la rolul etilenei n coacerea fructelor, dar
abia n anul 1959 a crescut interesul specialitilor pentru studierea acestui fitohormon. Fiind o
hidrocarbur nesaturat gazoas, a fost greu de identificat i de cuantificat, cu att mai mult cu
ct la plante etilena se produce n cantitate foarte mic (numai fructele n curs de coacere
eman cantiti mai mari de etilen). (Cachi, 1987).

12

n culturile de esuturi i celule, etilena a fost mai puin folosit, datorit dificultilor
inerente de administrare a ei n concentraii strict controlabile. Fiind n stare gazoas,
difuzeaz uor din recipientele de cultur i este imposibil de sterilizat prin autoclavare.
Efectele fiziologice ale etilenei sunt multiple, cile metabolice i aciunea fiziologic
ale acesteia intersectndu-se cu multe alte procese. Astfel, etilena exercit un control asupra
creterii permeabilitii membranelor, stimuleaz cderea frunzelor i a fructelor, deschiderea
florilor, induce senescena esuturilor i este implicat n transportul auxinei. Celulele rnite
produc etilen n cantitate mai mare dect celulele netraumatizate.
A fost semnalat o cretere substanial a biosintezei i a eliberrii de etilen sub
influena AIA i a chinetinei prezente n mediul de cultur. Acumularea unei cantiti maxime
de etilen s-a nregistrat n faza de intens diviziune a celulelor aflate n cultur. Dup
atingerea pragului maxim de multiplicare celular, se instala un fenomen rapid de reprimare a
producerii de etilen.
Street (1976) meniona c ntr-o suspensie fin celular de Spinacea oleracea,
producia de etilen a fost antagonist cu nverzirea culturii. Tisserat i Murashige (1977) i
Dunwell (1979) au raportat producerea unei inhibri a embriogenezei somatice (la morcov,
tutun i citrice) sub influena etilenei. (Cachi, 1987).
Acidul 2-cloroetilfosfonic (ACEP) este un regulator de cretere deosebit de valoros, cu
aplicaii practice extinse att n horticultur (cultura de legume, n floricultur, pomicultur i
viticultur), ct i n cultura cerealelor, plantelor tehnice, cartofului, tutunului etc. El are
efecte diverse asupra creterii plantelor, n funcie de doza i momentul aplicrii acestuia.
Introdus n mediul de cultur folosit pentru creterea in vitro a ovulelor de bumbac excizate
din capsule imature, a inhibat creterea normal a ovulelor, dar a indus o stimulare a formrii
de calus n lipsa altor hormoni n mediu. A fost raportat, totui, stimularea creterii
explantelor tisulare la Citrus pe medii cu acid 2-cloroetilfosfonic.
Mattoo i Lieberman (1977) au sugerat c sinteza de etilen este localizat n
complexul constituit de membrana celular i protoplasm. Ei au observat c protoplatii de
mr izolai produc foarte puin etilen, n comparaie cu celulele cultivate n suspensie.
Capacitatea de a sintetiza etilen a fost redobndit n momentul n care protoplatii au
nceput regenerarea peretelui celular. (Cachi, 1987).
Kevers i Gaspar (1985) precizau c la plantele vitrificate s-a observat un efect al
etilenei n lignificarea vaselor i n rigidizarea pereilor celulelor parenchimatice. Ei au
experimentat cu explante constnd din noduri de Dianthus caryophyllus cultivate pe medii
lichide i solide. (Cachi, 1987).
13

Se presupune c etilena joac un rol major n rndul hormonilor vegetali, avnd o

important contribuie n controlarea proceselor regenerative, n embriogeneza somatic i n
morfogenez. Experimentele utiliznd explante din solzi de bulbi de Lilium speciosum au
evideniat faptul c adugarea de etilen ntr-o faz timpurie de cultur a stimulat neoformarea
de plantule n prezena ANA. Temperatura ridicat sau rnirea esuturilor (care urmau a fi
inoculate) a provocat un efect similar, considerat ca fiind datorat mririi sintezei de etilen,
biogenez care pare a avea un rol crucial n primele faze ale proceselor de regenerare, la
nivelul explantelor de acest tip. Experimentele realizate pe o suspensie celular de morcov au
semnalat faptul c putresceina i arginina blocheaz biosinteza de etilen n celule.
S-a observat c formarea de xilem (xilogeneza) n explantul medular de salat
(Lactuca sativa) a crescut pe msura adugrii la mediile de cultur a precursorilor etilenei
(acidul 1-aminociclopropan-1-carboxilic sau ACC) sau a L-metioninei sau chiar a ACEP,
generator de etilen, substane ce au ridicat producia de etilen n recipientele de cultur.
Introducerea n mediu a unor inhibitori ai etilenei a condus la o inhibare a formrii de xilem i
la o inhibare a producerii de etilen de ctre esuturile aflate n cultur. Nici L-metionina, nici
ACC i nici etilena nu sunt eficiente n inducerea xilogenezei n absena unei auxine i a unei
citochinine. (Cachi, 1987).
n general, ACEP stimuleaz puternic organogeneza la diferite tipuri de inoculi.
Natura proceselor de morfogenez (rizogenez sau caulogenez) i amploarea lor depind mult
de concentraia ACEP i de specie. La garoafe, ACEP provoac generarea dintr-un unic
meristem a nenumrai mugurai i tulpinie, dar rizogeneza este slab reprezentat. Dei
caulogeneza a fost puternic stimulat de prezena ACEP n substratul de cultivare al inoculilor
meristematici de garoafe, tulpiniele neoformate au avut frunzuliele vitrificate.
Att la crizanteme, ct i la protocormul de Cymbidium, ACEP a provocat o stimulare
deosebit a proceselor de rizogenz, concomitent cu o optimizare a creterii tulpinilor. La
minibutaii de crizanteme, prezena AIA n mediul de cultur a stimulat rizogeneza (cu
formare de rdcini groase i lungi), dar s-a nregistrat o brunificare a mediului i a
rdcinilor, probabil din cauza oxidrii AIA. La propagulele de gerbera, prezena ACEP n
mediul de cultur a indus o foarte bun cretere a coloniei de plantule, fiind stimulat att
rizogeneza, ct i caulogeneza. (Cachi, 1987).
n cazul minibutailor de cartof, constnd din minidiscuri dimensionate din
minituberculi, generai in vitro, s-a constatat c a fost stimulat att caulogeneza, ct i
rizogeneza n prezena ACEP. Experiene ntreprinse cu explante constnd din minibutai de
Saintpaulia (frunzulie pedunculate, detaate din colonii de propagule generate in vitro) pe
14

medii cu ACEP nu au condus la nregistrarea vreunui efect deosebit al ACEP asupra

proceselor de morfogenez.

6. Acidul abscisic i ali inhibitori

Acidul abscisic este un fitohormon ce poate lua natere din unele carotenoide sau din
precursori inferiori. Se gsete predominant n fructele necoapte i are o aciune complex
asupra plantelor. El inhib n general creterea plantelor i grbete formarea florilor. Se pare
c acidul abscisic se gsete n raport invers proporional cu coninutul giberelinelor.
Acidul abscisic a fost descoperit de P. F. Wareing (1964) n mugurii dorminzi de
paltin de munte (Acer pseudoplatanus). Se consider c acidul abscisic este prezent n
indivizii tuturor speciilor vegetale, cu variaii sezoniere n funcie de starea fiziologic a
esuturilor. Transportul acidului abscisic din zona de sintez se face prin floem, de unde se
extinde n seva xilemului. Circulaia are loc dup o polaritate distinct, fiind mult mai intens
n sensul descendent dect n cel ascendent. (Vntu, 2005).
Dei acidul abscisic (AAB) este un fitohormon cu rol important n viaa plantelor
cormofite, fiind implicat n procesele de laten, n culturile de esuturi i de celule se
folosete n mic msur. Este totui utilizat n culturile de embrioni somatici, pentru
inducerea intrrii acestora n repaus i n procedeele de conservare in vitro. (Cachi, 1987).
Acidul abscisic prezint aciune antigiberelinic, antiauxinic, menine starea de
repaus a plantelor, fiind prezent n esuturile meristematice (meristeme apicale, cambiu), n
oosfere nefecundate, embrioni, regleaz creterea mugurilor i nflorirea, favorizeaz
procesele de desprindere i cdere a fructelor i frunzelor i grbete mbtrnirea
esuturilor i descompunerea clorofilei. (Vntu, 2005).
Substanele inhibitoare sunt substanele care exercit o aciune specific de inhibare a
diferitelor procese vitale, anihilnd aciunea auxinelor naturale. n majoritatea cazurilor,
inhibitorii endogeni sunt lactone nesaturate, compui fenolici simpli sau compleci, acizi
organici, flavonoide, prezeni n diferite organe ale plantelor (semine, bulbi, muguri).
Inhibitorii au capacitatea de a reduce sau anula aciunea substanelor stimulatoare i de a
provoca o inhibare a creterii plantelor cu intensiti diferite. (Vntu, 2005).
Aciunea fitohormonilor poate fi inhibat de unele substane numite antiauxine, cum
sunt acidul gamafenilbutiric, florizinul, hidrazida maleic, cumarina, xantina, scopoletina,
acidul maleic, acidul citric, acidul cafeic, unii alcaloizi (chinina, cafeina) etc.

15

Compuii fenolici acioneaz antagonic substanelor de cretere, inhibnd unele

reacii metabolice, oprind creterea i chiar provocnd necrozarea celulelor. Aceti compui
pot interveni i ei n fenomenele de laten. La explantele cultivate in vitro compuii fenolici
sunt desorbii n mediul de cultur de ctre celulele traumatizate sau chiar de ctre celulele din
profunzimea esuturilor inoculate. Treptat, fenolii se oxideaz, se brunific, iar acest fapt are
ca o prim consecin o brunificare a mediului de cultur. Fenolii oxidai sunt toxici pentru
celulele aflate n cultur, iar acestea se necrozeaz rapid i inoculul moare. Pentru prevenirea
aciunii profund nocive a fenolilor (n special a formelor oxidate), se indic operarea unor
subculturi repetate, practicate n cascad (2 3 la numr) la intervale de zile sau sptmni, n
funcie de specie, pentru a feri esuturile de efectul inhibitor al acestor substane toxice.
Eventual, la fiecare subcultivare, se recomand nlturarea unei mici poriuni din zona bazal
a explantelor. (Cachi, 1987).
n general, eliberarea de fenoli n substratul de cultur constituie un fenomen frecvent
ntlnit la explantele prelevate de la plante lemnoase, dar nu numai la acestea. Dac
brunificarea mediului persist la fiecare subcultur, se recomand adugarea n mediu a unor
substane cu proprieti antioxidante (cisteina HCl, acidul ascorbic, acidul citric, ditiotritol
(DTT) etc.) sau a unor compui ce au proprietatea de a adsorbi produii fenolici, cum ar fi
polivinilpirolidona (Policar AT sau PVP) sau crbunele activ. Uneori pstrarea explantelor
inoculate o perioad de timp la ntuneric a condus la o micorare a proceselor de oxidare a
fenolilor i la o mai slab brunificare a mediului, prentmpinndu-se efectul nociv al
fenolilor oxidai asupra inoculilor. (Cachi, 1987).
Florizinul este un inhibitor natural din grupa flavonoizilor, descoperit de L. P.
Sarapun (1960, 1965). Este un compus rezultat din glicozidarea i condensarea polifenolilor i
se sintetizeaz uneori n frunze, n condiii de zi scurt. Dup sinteza sa n frunze, florizinul se
degradeaz i trece n floretin, un compus cu proprieti stimulatoare asupra nfloririi i
creterii embrionare. Floretinul migreaz n muguri, unde sufer o nou glicozidare i trece la
florizin, care exercit o aciune de inhibare n perioadele de repaus mugural din timpul iernii.
Se consider c din raportul cantitativ i calitativ al acestor compui cu proprieti fiziologice
diferite ar rezulta ritmul proceselor de cretere a plantelor n diferite sezoane i faze de
vegetaie. (Vntu, 2005).

16

7. Alte substane cu efect n reglarea creterii, a multiplicrii i a

morfogenezei la explantele cultivate in vitro
Procaina HCl (clorhidrat de procain / p-aminobenzoat de dietilaminoetanol) face
parte din categoria biostimulatorilor cu gam larg de aciune. Ea a fost aplicat n culturile de
celule de drojdie de bere i s-a constatat un efect stimulator al acesteia asupra respiraiei
celulelor, asupra multiplicrii drojdiilor, asupra creterii algelor, iar la plantele superioare s-a
dovedit aciunea sa stimulatoare asupra germinaiei i a creterii lor.
La monocotiledonate se recomand utilizarea unor doze mai ridicate, iar la
dicotiledonate, concentraii mai mici. Tratamentele se aplic la nivelul seminelor (prin
mbibarea acestora) sau al plantelor prin stropiri repetate n decursul ciclului de vegetaie. Se
obine o cretere a masei vegetative, o precocitate n nflorire i n coacere, o sporire a
cantitii de fructe i de semine etc. S-a constatat c adaosul de procain n mediul de cultur
al inoculilor cultivai in vitro a determinat o stimulare a multiplicrii protocormilor de
Cymbidium i o cretere n greutate a acestora. (Cachi, 1987).
La nivelul explantelor constnd din fragmente de rdcini de morcov (cu cambiul n
poziie median) procaina a indus instalarea unui net proces proliferativ i de stimulare a
creterii n lungime a celulelor nou formate i a determinat o sporire a greutii uscate a
inoculilor. Calusul de Arabidopsis cultivat pe medii cu procain a prezentat o sporire a
creterii n volum i a greutii proaspete i uscate. Procaina a indus nu numai o stimulare a
multiplicrii celulare, ci i o cretere a coninutului n pigmeni asimilatori, a activitii
peroxidazice, a consumului de oxigen etc. (Cachi, 1987).
Floroglucinolul este indicat a fi folosit n culturile de explante prelevate de la pomii
fructiferi, mai ales la speciile din familia Rosaceae. Acest compus fenolic, izolat din seva
brut a merilor, asigur o mai bogat multiplicare a tulpinilor i o mai corespunztoare
nrdcinare a plantulelor neoformate in vitro.
n afara regulatorilor de cretere, n unele reete de medii de cultur se practic
adugarea unor substane ca picloramul, insatinul, unele carburi cancerigene (antracen,
metilcolantren, acid traumatic), unii ageni chelatizani (acidul 1,3-diamino-2-hidroxipropanN, N, N, tetraacetic), erbicide (benazolinul), antibiotice etc.
n scopul intensificrii proceselor de morfogenez este indicat adugarea n mediul
de cultur a sulfatului de adenin. Difenilureea este, de asemenea, o substan cu efect
citochininic.

17

Anexe

Foto 1. Apariia lstarilor la nivel de calus

cu originea peiol la kiwi

Foto 2. Apariia lstarilor la nivel de

calus cu originea limb foliar la kiwi

Foto 3. Formarea calusului din explantul

peiol kiwi

Foto 4. Formarea exogen a

primordiilor foliare la kiwi

Foto 5. Formarea rdcinilor pe mediul B5 la kiwi

18

Foto 6. Rspunsul speciei Piper solmsianum, explantul fiind un peiol, dup 30 de zile de
cultivare. A: control; B: 2 mg/l BA i 2mg/l IAA; C: 2 mg/l BA i 0,2 mg/l 2,4 D; D: 2mg/l
IAA; E: 2 mg/l BA i 0,2 mg/l NAA; F: 0,2 mg/l BA i 0,2 mg/l 2,4 D. c, r, s formarea
calusului, rdcinii i respectiv tulpinii; e explant.

Foto 7. Rizogeneza lstarilor derivai din frunze la P. pyrifolia Senbuzhi pe mediul MS

suplimentat cu 25 mg/l IBA i 30 g/l sucroz cu (a) sau fr (b) crbune activ i plantul binedezvoltat (c). (Tang, 2008)

Foto 8. Influena giberelinei (Ziauka, 2006)

19

Bibliografie
1. Burnea I., Popescu Ionela, Neamu G., Stancu Elena, Lazr t., 1977 Chimie i
biochimie vegetal, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti.
2. Cachi-Cosma Dorina, 1987 Metode in vitro la plantele de cultur, Editura Ceres,
Bucureti.
3. Davies Peter J., 2004 PLANT HORMONES. Biosynthesis, Signal Transduction,
Action, Kluwer Academic Publusher, pag. 1 2.
4. Derendovski Antonina, Tcaciuc Olga, Moroan Elizaveta, 2008 Activitatea
procesului de rizogenez la butaii de vi de vie i metodele de reglare a ei,
tiina agricol, nr. 2, Republica Moldova.
5. Maria Graziela Zagatto Krug, Liliane Cristina Librio Stipp, Adriana Pinheiro
Martinelli Rodriguez, Beatriz Madalena Januzzi Mendes, 2005 In vitro
organogenesis in watermelon cotyledons, Pesq. agropec. bras., Braslia, v.40,
n.9, p.861-865.
6. Meneses A., Flores Dora, Muoz M., Arrieta Griselda, Espinoza Ana M., 2005
Effect of 2,4-D, hydric stress and light on indica rice (Oryza sativa) somatic
embryogenesis, Rev. Biol. Trop. (Int. J. Trop. Biol. ISSN-0034-7744) Vol. 53
(3-4): 361-368, September-December.
7. Omid Karami, Gona Karimi Kordestani, 2007 Proliferation, shoot organogenesis
and somatic embryogenesis in embryogenic callus of carnation, Journal of
Fruit and Ornamental Plant Research Vol. 15: 167-175.
8. Tang H., Luo Y., Liu C., 2008 Plant regeneration from in vitro leaves of four
commercial Pyrus species, Plant Soil Environ., 54, (4): 140148, China.
9. Vntu Smaranda, 2005 Culturi de celule i esuturi vegetale n biotehnologii, Editura
Univ. Al. I. Cuza, Iai.
10. Xiaofei Lin, Wenbo Zhang, Hiroyoshi Takano, Susumu Takio, Kanji Ono, 2004
Efficient plant regeneration and micropropagation from callus derived from
mature zigotic embryo of Larix gmelinii, Plant biotechnology, 21 (2), 159
163.
11. Jonas Ziauka, Sigute Kuusiene, 2006 Gibberellin in vitro research for vegetative
propagation of aspen.

20