Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
CU
166
B. Giberelinele n plante
Giberelinele au fost descoperite att n plante ct i n ciuperci cu o
distribuie inegal. Unele gibereline se pot ntlni doar n plante, altele doar n
ciuperci i unele n ambele grupe (acizii giberelici 1,3,4,7,9). Unele plante
posed doar un fel de gibereline, n alte specii se afl i acioneaz mai multe
tipuri de gibereline.
Locurile de sintez a giberelinelor se afl la nivelul frunzelor foarte
tinere, n mugurii foliari i florali, n lstarii activi, n vrful rdcinilor i n
embrioni.
Giberelinele circul liber prin plant fr existena unei polariti fiind
asociate deseori zaharurilor, eliberndu-se n situsurile int.
2.1.1.3 Citochininele
Citochininele au fost descoperite n timpul studiilor efectuate asupra
esuturilor vegetale cultivate in vitro. S-a descoperit i acum este bine cunoscut
faptul c adiia de lapte de nuc de cocos n mediile artificiale de cultur are un
efect favorabil asupra multiplicrii celulare i n lstrire. Cercetrile ce au
ncercat s descopere factorul responsabil de aceste efecte au dus la izolarea
unui complex chimic activ de natur purinic, care nu a putut fi iniial
identificat. Aceste rezultate au dat posibilitatea continurii cercetrilor asupra
purinelor i n 1956, Skoog a izolat, din ARN denaturat, o substan activ
numit chinetina.
Citochininele sunt nlocuitori ai adeninelor la care sunt cunoscui doi
compui endogeni:
-zeatina (Fig.4)
-izopenteniladenina, a crei compui sintetici sunt: chinetina (Kin
Fig.4) (6-furfurilaminopurina) i benziladenina (BAP) (6-benzilaminopurina).
a)
b)
Fig.4 Citochinine: a) zeatina, b) kinetina
Se mai folosesc i ali nlocuitori ai adeninelor, sintetici, liberi sau n
asociere cu zaharuri.
171
172
2.1.1.4 Etilena
Etilena (fig.5) este un compus gazos identificat cu mult timp n urm n
ncperile de depozitare a fructelor sau plantelor, dar funcia sa de regulator de
cretere nu a fost evideniat pn n momentul dezvoltrii tehnicilor de analiz
n plante. Etilena se afl n plante n cantiti infime i poate fi produs de toate
prile acesteia.
Fig.5 Etilena
Principalele proprieti ale acestui regulator de cretere sunt:
-determin iniierea procesului de maturare a fructelor, etilena fiind
folosit la nceput pentru coacerea fructelor la lmi, iar acum pentru
determinarea coacerii simultane a fructelor la mr i cire;
-accelereaz procesele de cdere a frunzelor i fructelor, fiind folosit
atunci cnd se urmrete recoltarea mecanizat a fructelor la cirei i mslini;
-induce formarea florilor la speciile familiei Bromeliaceae (ananas), o
proprietate folosit n horticultur;
-modific ritmul de cretere prin aciunea pe care o exercit asupra
polaritii transportului auxinelor;
-are aciune favorabil asupra tuberizrii.
Aceste proprieti au unele puncte comune cu auxinele (nflorirea
Bromeliaceaelor, corelaii de cretere) iar unele antagonice (cderea frunzelor i
fructelor, tuberizarea). Aciunea antagonic a etilenei pare a depinde de
interaciunea dintre cele dou substane ce pot controla sinteza, concentraia i
circulaia lor.
Aplicaiile practice ale etilenei, dificil de utilizat n starea sa gazoas, au
fcut progrese doar dup descoperirea acidului 2-cloro-etan fosforic. Acest
produs, aplicat prin pulverizare penetreaz esuturile, unde se elibereaz etilena.
Toate prile plantelor sunt capabile s sintetizeze etilena, ns cantitatea
cea mai mare se sintetizeaz n fructe, apoi ntr-o concentraie mai mic n flori
i organe rnite.
2.1.1.5 Inhibitori ai creterii
Multe substane au efecte inhibitoare asupra creterii plantelor, printre
substanele endogene enumerndu-se compuii fenolici i acidul abscisic.
173
A. Inhibitorii fenolici
Inhibitorii fenolici, ntr-un numr mare n plante, inhib metabolismul i
intervine n multe procese fie ca antagonici ai regulatorilor de cretere, fie ca
inhibitori ai reaciilor metabolice. Ei intervin n inducerea strii de laten a
mugurilor i seminelor, la nceput prin ncetinirea creterii acestora urmat de
stoparea total a acesteia. Nu se tie exact rolul i mecanismul lor n inducerea
strii de laten.
n culturile in vitro aceti compui sunt deseori sintetizai i eliberai n
mediul de cultur, unde se oxideaz cauznd brunificarea mediului ceea ce duce
deseori la moartea explantelor, de aceea n unele medii de cultur se utilizeaz
substane anti-oxidante sau adsorbani pentru a detoxifia mediul.
Exist cteva exemple referitoare la folosirea substanelor fenolice n
cultura in vitro, cum ar fi utilizarea florizinei pentru inducerea nrdcinrii la
altoii de mr.
B. Acidul abscisic
Acidul abscisic (fig.6) a fost identificat n 1965 i de atunci a fost
descoperit n toate plantele. Acest inhibitor pare s fie sintetizat de fiecare dat
cnd o plant este supus unor condiii stresante (lipsa apei, rnire, cldur
excesiv). Existena acidului abscisic n celule este una din cauzele crora
plantele supuse unor factori stresani i ncetinesc activitatea metabolic.
ncetinirea activitii plantelor este reversibil atunci cnd condiiile de stres
sunt trectoare i poate induce starea de laten sau chiar decesul plantei atunci
cnd condiiile nefavorabile sunt prelungite.
175
182
185
188
CAPITOLUL IV
4.1 CERINELE NUTRITIVE ALE ESUTURILOR
VEGETALE CULTIVATE N CONDIII ASEPTICE
4.1.1 Mediul de cultur
Explantele vegetale pentru a putea tri, dup desprinderea de planta
donator, au nevoie de condiii speciale de cultur, s fie protejate de agenii
patogeni (asepsie total) i s aib ca surs de hran o soluie nutritiv
complex, format din ap, sruri minerale, substane organice i fitohormoni.
Pentru meninerea explantelor la suprafa i pentru ca acestea s nu fie
asfixiate, mediul de cultur se solidific cu un agent de solidificare. Soluia
nutritiv complex lichid sau solid se numete mediu de cultur sau substrat
de cultur. Acest mediu de cultur trebuie sa fie steril i cu o compoziie
complex deoarece explantul nu are capacitate de a se hrni autotrof, el triete
heterotrof pe baza substanelor existente n mediu. n funcie de scopul urmrit,
evoluia explantului poate fi dirijat prin modificarea compoziiei mediului,
obinndu-se calus sau regenerarea de noi plante prin stimularea organogenezei.
Compoziia mediului de cultur este specific pentru fiecare specie, soi
i faz de dezvoltare, cerinele fiind diferite i n funcie de explantul folosit,
momentul de prelevare i zona din care s-a prelevat, chiar n cadrul aceluiai soi.
n prezent se cunosc i se utilizeaz o serie de medii de cultur ce poart numele
celor care le-au creat: White, Murashige-Skoog, Nitsch, Gamborg, Heller
(Tabelul 4.1).
Compoziia mediului s-a stabilit att prin tatonri repetate cu diferite
substane, ct i prin studii ale sevei brute i elaborate la diferite specii, studii
privind absorbia i desorbia, schimbul ionic care exist ntre plant i mediul
nconjurtor. n prezent se cunosc destul de bine modificrile pe care le sufer
plantele cnd elementele chimice sunt n exces sau n deficit. Trebuie evitate pe
ct posibil aceste stri de stres pentru plante att la cultura n cmp, ct mai ales
la culturile in vitro.
4.1.1.1 Compoziia chimic
A. Compuii anorganici i rolul lor
Apa
Apa reprezint componentul esenial al vieii, al materiei vii. Este
utilizat n tot fluxul tehnologic de producere a plantelor in vitro, de la
splarea materialului vegetal i a vaselor de cultur, pn la utilizarea ei ca
189
190
Tabelul 4.1
Principalele medii de cultur utilizate n culturi
in vitro (dup Street, 1977)
Constitueni
Macroelemente
KCl
NaNO3
MgSO4 x 7H2O
NaH2PO4 x H2O
CaCl2 x 2H2O
CaCl2
KNO3
Na2SO4
(NH4)2SO4
NH4NO3
KH2PO4
Ca(NO3)2 x
4H2O
Microelemente
FeSO4 x 7H2O
Na2EDTA x
2H2O
MnSO4 x H2O
MnSO4 x 4H2O
KI
NiCl2 x 6H2O
CoCl2 x 6H2O
ZnSO4 x 7H2O
CuSO4 x 5H2O
H3BO3
FeCl3 x 6H2O
Na2MoO4 x
2H2O
AlCl3
Fe(SO4)3
Constitueni
organici
Inozitol
Acid Nicotinic
Piridoxin HCl
Tiamin HCl
Glicin
Acid folic
Biotin
Zaharoz
Heller
White
Nitsch
Murashige
Skoog
Gamborg
750
600
250
125
75
-
65
720
16,5
80
200
300
mg/l
185
166
950
720
68
-
370
440
1900
1650
170
-
250
150
150
2500
134
-
27,8
37,3
27,8
37,3
27,8
-
0,01
0,01
0,03
1,0
0,03
1,0
1,0
-
7,0
0,75
3,0
1,5
-
25
10,0
0,025
10,0
0,25
22,3
0,83
0,025
8,6
0,025
6,2
0,25
10,0
0,75
0,025
2,0
0,025
3,0
0,25
0,03
-
2,5
0,05
0,01
0,01
3,0
2%
100
5
0,5
0,5
2
0,5
0,05
2%
100
0,5
0,5
0,1
2,0
3%
100
1,0
1,0
10
2%
pentru gsirea celei mai adecvate compoziii pentru mediu. Carenele pentru
elementele minerale in vitro se manifest dup 2-3 subculturi, deci trziu, cnd
nu se mai poate face mare lucru pentru salvarea culturii. De exemplu N are rol
important n embriogeneza somatic, n funcie de forma lui nitric sau
amoniacal influeneaz vitrificarea. Carena de N duce la acumulri de
antociani n vacuolele celulelor, iar dac aceasta persist provoac dereglri n
metabolismul glucidelor i proteinelor.
Potasiul influeneaz creterea esuturilor, carena determin o dezvoltare
slab. mpreun cu calciul, regleaz permeabilitatea membranelor celulare, a
fluiditii protoplasmei, intervine n schimbul ionic la nivelul membranelor.
Magneziul ntr n compoziia clorofilei, carena provocnd dereglri
grave n structura frunzei.
Microelementele exercit roluri metabolice i fiziologice diferite de cele
ale macroelementelor. Intr n compoziia multor combinaii organo-metalice
complexe, cu valoare biologic ridicat de tipul enzimelor, care controleaz
ntreg procesul metabolic al plantelor.
B. Compuii organici
Sursele de carbon
Viaa in vitro este aproape n exclusivitate heterotrof, n special n
primele faze ale existenei, pn la formarea unui numr suficient de mare de
frunze pe fiecare plantul sau lstar. Datorit acestei nutriii heterotrofe mediul
de cultur trebuie s conin un compus care s asigure carbonul organic necesar
n metabolism. Principalele surse de carbon sunt glucidele. Acestea sunt
substanele cele mai utilizate i mai accesibile plantelor ca surs energetic.
Dozele pe litru sunt de cca. 2-3% n funcie de faza de vegetaie i tipul de
explant folosit. Dintre glucide zaharoza rspunde cel mai bine cerinelor
culturilor in vitro.
Aminoacizii
Sunt utilizai ca surse de azot amoniacal disponibil imediat pentru celule
i esuturi, fa de azotul organic care este mai greu accesibil. Se adaug n
mediu sub form de compui simpli sau compleci. Principalii aminoacizi
utilizai sunt: glicina, asparagina, acidul aspargic, cisteina, alanina, glutamina
etc.
Vitaminele
Plantele spre deosebire de animale sunt capabile de sinteza vitaminelor,
dar nu i esuturile cultivate in vitro. S-a demonstrat experimental ca in vitro
esuturile i plantulele rspund favorabil la adaosul exogen de vitamine n
cantiti mici. Majoritatea vitaminelor sunt termolabile, sunt distruse la
192
195
CARE
INFLUENEAZ
4.2.1 Lumina
Cerinele fa de lumin pot fi divizate n mai muli parametri:
-intensitatea luminii pe unitatea de suprafa exprimat n W/m2
(unitatea lux nu ar mai trebui folosit ca unitate de msur a intensitii
luminoase, deoarece depinde de fiziologia ochiului uman, ceea ce este total
neadecvat necesitilor unei plante);
-durata iluminrii, exprimat n ore/zi;
-calitatea spectral a luminii primite de plante.
Pentru culturile de esuturi, fotosinteza nu este o activitate necesar atta
timp ct energia este furnizat sub forma carbohidrailor. Totui, unele cercetri
au evideniat c fotosinteza nu este eliminat n totalitate din culturile de esuturi
vegetale, dar este considerabil redus probabil datorit prezenei zaharurilor n
mediu.
Numeroase studii au dovedit c lumina este indispensabil reglrii
multor procese morfogenetice.
A.Intensitatea luminoas
O intensitate luminoas foarte mare poate duce la pierderi importante n
culturile in vitro. Utilizarea unei intensiti luminoase de 50 W/m 2 (aproximativ
10000luci) n camerele de cretere, intensitate folosit n mod obinuit n
fitotron, duce la ncetinirea creterii i scderea capacitii de regenerare la
multe specii vegetale. Intensitatea luminoas optim culturilor in vitro variaz
ntre 5 i 25 W/m2 (1000-5000 luci) cele mai folosite valori fiind de 10 pn la
15 W/m2. deseori, n faza a treia a micropropagrii, se urmrete creterea
treptat a intensitii luminoase n vederea aclimatizrii plantulelor la condiiile
de lumin din fitotron.
B.Durata iluminrii
Nu exist multe date cu privire la influena fotoperiodismului asupra
morfogenezei esuturilor in vitro, aa cum exist dovezi clare ale influenei
acestui parametru asupra plantelor donor, in vivo. Se pare c n medie, calitatea
luminii (intensitatea durata luminii) este important dezvoltrii armonioase a
plantulelor n condiii aseptice de cultur.
n practic, marea majoritate a camerelor de cretere au o durat a
iluminrii de 16-18 ore/zi.
Cerinele fa de durata de iluminare, din camerele de cretere sunt
diferite n funcie de natura explantului, scopul urmrit dar i de specia la care se
experimenteaz. Astfel, la gru, n cazul culturii de antere, n vederea obinerii
198
CAPITOLUL VI
6.1 INIIEREA UNEI CULTURI IN VITRO
6.1.1 Aspecte generale privind condiiile aseptice de cultur
Prima condiie n realizarea cu succes a unei culturi de celule sau esuturi
in vitro este asepsia. Mediile de cultur sunt foarte favorabile dezvoltrii
bacteriilor i ciupercilor, creterea crora este mult mai rapid dect cea a
celulelor vegetale i duce la inhibarea proceselor fiziologice ale esuturilor
cultivate. De aceea un laborator de culturi de esuturi este organizat i pstrat
ntr-o asepsie strict asemeni unei sli de operaie.
Principalele cauze ale apariiei infeciilor n culturile in vitro sunt:
1) Aerul care conine o cantitate mare de organisme patogene de tipul
bacteriilor sau fungilor.
2) esuturile vegetale sunt acoperite la suprafa cu fungi i/sau bacterii.
Cele mai infectate organe sunt cele ce se dezvolt n pmnt (rdcini, bulbi,
tuberculi). Bacteriile i ciupercile se dezvolt i n interiorul esuturilor, n
vasele conductoare libero-lemnoase sau n spaiile intercelulare, caz n care este
imposibil sterilizarea esuturilor, iar folosirea antibioticelor nu este
recomandat.
3) Corpul uman, care poart numeroase microorganisme pe piele sau n
respiraie.
Metodele de eliminare ale acestor surse de infecie sunt:
a) Produsele chimice, care distrug microorganismele:
-hipoclorit de sodiu;
-hipoclorit de calciu;
-mercurobutol;
-clorid mercuric;
-produse bactericide i fungicide;
-etanol 70-80%.
b)Becuri de gaz pentru sterilizarea instrumentarului prin flambare.
c) Aerul cald: la 120oC timp de 20 minute (autoclav), cldur umed
pentru sterilizarea mediilor de cultur i a apei sau 180 oC timp de 2-3 ore,
cldur uscat (etuv) pentru sterilizarea sticlriei.
d) Razele ultraviolete, care distrug doar o parte din spori.
e) Sisteme de filtrare a aerului: se folosesc filtre speciale ce nu permit
trecerea particulelor mai mari de 0,22m. Filtrarea este realizat de un
ventilator-extractor ce asigur o ventilaie constant cu o vitez optim i are
avantajul de a menine steril aerul din incinta hotei cu flux laminar. n momentul
200
capacul recipientului de cultur. n unele cazuri, din fericire rare, sporii unor
bacterii pot rezista autoclavrii, de aceea este necesar cltirea sticlriei n
clorur lichid. Atunci cnd se observ dezvoltarea unui miceliu de
Penicillinium se constat o capacitate de lucru slab a operatorului. Manipularea
necorespunztoare a materialului vegetal i aplicarea ineficient a tehnicilor de
cultur in vitro, genernd infecii ale culturilor se poate datora: vorbitului n
timpul lucrului la hota cu flux de aer laminar steril, sterilizarea
necorespunztoare
i
insuficient
a
instrumentarului,
transportul
microorganismelor de la explantele infectate la cele neinfectate.
Se poate ca, n cursul culturii, s nu se observe apariia unei infecii cu
bacterii, caz n care mediul de cultur folosit nu permite dezvoltarea acestora.
Totui, culturile pot fi infectate i cea mai sigur cale este subcultivarea lor pe
mediu adiionat cu 2g/l pepton (un component obligatoriu n mediile de
cretere ale bacteriilor). Prin aceast metod se testeaz culturile i de elimin
vasele de cultur infectate, obinnd culturi de esuturi libere de bacterii.
6.1.6 Probleme tehnice minore ce pot cauza pierderi n culturile in
vitro
Se poate ntmpla ca unele culturi s mearg foarte bine n anumite
condiii, iar alteori, n aceleai condiii s mearg prost sau deloc. Problema
poate fi dat de condiiile de cultur, care sunt rareori identice, condiiile
climaterice din camera de cretere se pot schimba, s-a schimbat tipul vasului de
cultur sau calitatea sticlei acestuia. Un singur detaliu minor n aparen, poate
schimba ntreaga evoluie a culturii, de aceea atenia i meticulozitatea sunt
caliti absolut necesare unui operator in vitro.
n continuare se prezint cteva exemple concludente:
- creterea volumului vasului de cultur poate ncetini schimbul de gaze cu
exteriorul ceea ce duce la ncetinirea creterii inoculilor;
- utilizarea parafilmului ncetinete considerabil schimbul de gaze i poate
modifica funcionarea esuturilor;
- unele capace cptuite conin cleiuri toxice ce pot, prin evaporare sau prin
dizolvare n apa condensat, s otrveasc esuturile; de aceea, este recomandat
ndeprtarea acestor cptueli nainte de folosirea capacelor;
- condensul apei n vasele de cultur apare atunci cnd temperatura din
exteriorul vasului este cu cteva grade mai mic dect cea din interior, cauza
putnd fi expunerea direct a culturilor la aerul rece suflat de aparatele de
climatizare.
206
225
plpnde, iar n sol dovedesc o cretere mai lent i sunt mai firave. Cultura de
embrioni imaturi, recoltai foarte tineri, uneori conduce la obinerea de plantule
malformate, chiar dac mediile de cultur au o compoziie adecvat dezvoltrii
acestora.
n unele cazuri, dup polenizarea interspecific sau intergeneric,
dezvoltarea embrionilor a fost extrem de lent, ceea ce a fcut ca explantarea
embrionilor i cultivarea lor in vitro, s fie imposibil. Taira i Larter (1978) au
tratat ovulele fertilizate cu acid E-amino-n-caproic, facilitnd astfel, creterea
embrionilor hibrizi, realizai ntre gru i secar, depind barierele fiziologice
care mpiedicau creterea acestora. Deci, pretratamentul florilor femele cu
anumii regulatori de cretere, dup polenizare, impulsioneaz creterea
embrionilor pn la faza n care ei pot fi extrai i cultivai, cu succes, pe medii
aseptice.
Prin cultura de embrioni s-a reuit obinerea de plante mature din hibrizi
de trifoi 2n x 4n, mbinndu-se caracterul de perenitate cu cel al calitii
furajului realizat (Evans, 1962). Rezultate bune s-au obinut i n regenerarea de
plante din embrionii altor specii furajere, obinndu-se hibrizi interspecifici de
Melilotus, Lotus, Phaseolus, i Medicago.
Tot prin cultura de embrioni s-a reuit obinerea de plante la specii ale
cror semine nu germineaz (banane) sau a celor care se nmulesc greu prin
semine (specii forestiere). n unele cazuri scoaterea embrionilor din starea de
laten, prin cultivarea lor pe medii aseptice a constituit o metod eficient n
scurtarea ciclului de dezvoltare a plantelor.
De asemenea, embrionii pot s serveasc i ca esuturi de plecare n
multiplicarea i propagarea rapid a unor plante (la specii ornamentale) atunci
cnd acest lucru este dificil de realizat prin utilizarea altor tipuri de explante.
O atenie deosebit trebuie acordat aspectelor teoretice i practice pe
care le ridic problemele de embriologie experimental la gimnosperme. Cea
mai veche cultur de embrioni la gimnosperme este citat ca fiind efectuat de
ctre Schmidt n anul 1924, cnd a cultivat pe un mediu organic embrioni de
Pinus sylvestris. Mai trziu, n 1936 Rue a reuit cultivarea in vitro a
embrionilor provenii de la cteva specii: Pinus resinosa, Picea canadensis,
Tsuga canadensis i Pseudotsuga menziensii i a demonstrat, totodat, c
embrionul imatur de gimnosperme (de 2-4 mm) poate fi cultivat pe medii
aseptice, pn la stadiul de plantul. Experimentele ulterioare au reliefat faptul
c embrionii de gimnosperme pot fi crescui in vitro, n lipsa megagametofitului
(Cachi, 1984).
La cultura de embrioni, presiunea osmotic, sau sursa de carbon organic,
joac un rol important n evoluia acestora, atunci cnd embrionii sunt excizai i
sunt cultivai in vitro. De exemplu, embrionii de Pinus strobus, pe mediu
Murashige-Skoog, cun un coninut de 3-6% zaharoz i hormoni, vor genera
229
230
239
CAPITOLUL VIII
8.1 TEHNOLOGII DE CULTUR IN VITRO
Tehnicile de cultur in vitro a explantelor reprezint o cale optim de
cercetare a fiziologiei plantelor. Aplicaiile practice ale acestor tehnici au fost
repede apreciate de vreme ce plantulele obinute n vase de cultur pot fi
aclimatizate pe un substrat normal n condiii naturale de via.
Cronologic, cultura de meristeme a stat la originea primelor aplicaii,
deoarece scopul acestor culturi a fost, n principal, obinerea de plante libere de
virusuri. Dup primele succese ce au confirmat semnificaia metodei, s-au
dezvoltat rapid tehnicile de micropropagare pentru a asigura o producie rapid
de plante libere de virusuri.
Acestor dou tehnici, care sunt acum utilizate frecvent n horticultur, le
mai pot fi adugate altele trei, ce nc aparin domeniului cercetare, obinerea
plantelor haploide, izolarea i cultura de protoplati i cultura de calus i
suspensii celulare cu scopul producerii de compui medicinali aromatici. Ultima
tehnic vizeaz obinerea de substane farmaceutice direct din culturi de celule
vegetale, fr o cultivare n cmp.
8.1.1 Cultura de meristeme
Meristemele sunt esuturi de tip formativ cu celule tinere ce-i menin pe
tot parcursul vieii plantelor capacitatea de se divide, formnd mereu noi celule.
Meristemele sunt localizate n vrful ramificaiilor organelor tulpini sau
rdcini fiind meristeme apicale cu rol n creterea n lungime a acestora.
Importana culturii de meristeme const n principal n utilizarea lor n vederea
obinerii de plante libere de viroze, aceasta fiind i principala aplicaie practic a
acestui tip de culturi.
Pentru cultura de meristeme cu scopul devirozrii plantelor se folosesc
ndeosebi meristemele din vrful de cretere al tulpinilor, i anume din mugurii
floriferi sau foliari, iar la cartof din ochii de pe tubercul tocmai pornii n
vegetaie.
Mugurele este constituit dintr-un ax principal n apexul cruia se afl
meristemul, iar prin diviziunea continu a meristemului se formeaz primordiile
foliare (Fig.17). Formarea meristemelor i mai apoi organogeneza, adic
formarea organelor plantei, sunt procese ce au loc sub influena fitohormonilor,
de aceea meristemele excizate sunt plasate pe medii cu o balan hormonal
adecvat.
240
sunt mai bune cu condiia asigurrii unei aerri optime (pentru a se evita
asfixierea explantelor), deci a unei agitaii corespunztoare.
Regulatorii de cretere sunt determinani n realizarea cu succes a unei
culturi de meristeme. n general, auxinele sunt indispensabile multiplicrii
celulare. Uneori se adaug i citochinine n concentraii foarte mici, n special
sub form de urme. Deseori sunt necesare i giberelinele pentru determinarea
alungirii axului principal, meristemele aparinnd grupului de explante de tip
organizat. Vasele optime culturii de meristeme sunt cutiile Petri, deoarece
volumul de aer de deasupra meristemelor trebuie s fie mic pentru a evita
deshidratarea acestora.
Dup inocularea meristemelor, vasele de cultur sunt plasate n camerele
de cretere la o intensitate luminoas de 1000 pn la 3000 de luci, la un
fotoperiodism de 16 ore lumin i 8 ore ntuneric i la temperaturi de 22-25oC.
n aceste condiii, dac mediul este favorabil, se va observa formarea
unor lstari care vor nrdcina sau nu, n funcie de specie. Dac plntuele sunt
complet formate, cum e cazul crizantemelor, garoafelor, violetelor de Parma sau
anghinrii, se poate trece la aclimatizarea lor sau pe mediu de multiplicare, n
cazul n care se dorete obinerea unui numr mare de plante. Dac plntuele nu
nrdcineaz, cum e cazul speciilor Actinia, Gerbera i trandafir, lstarii
regenerai se subcultiv pe mediu pentru nrdcinare, ce va conine doar
elementele minerale necesare fr fitohormoni sau cu adiie de auxine.
Din numrul total de meristeme inoculate se pierd mai multe sau mai
puine din mai multe cauze.
Prima cauz ar fi de ordin tehnic, procedeul de izolare al meristemelor
este dificil i delicat, rezultnd contaminri cu bacterii sau fungi (n medie de
aproximativ 5%). Mai mult, un numr nsemnat de meristeme se deshidrateaz,
iar la cele de dimensiuni foarte mici s-ar putea la seciunea final s se treac
prin inelul central al domului meristematic i astfel s se determine decesul
acestuia.
A doua cauz poate fi de natur fiziologic, condiiile n care au crescut
plantele donor prezentnd o importan deosebit. La speciile ierboase, se
ntlnesc deseori urmtoarele fenomene: cnd meristemul este prelevat de pe
axa principal de cretere, rata de regenerare este de 80-90%. n contrast,
aceast rat poate descrete pn la 5-10% atunci cnd meristemele sunt
prelevate din axele secundare cu creteri lente.
La speciile lemnoase aceast metod este dificil de aplicat deoarece
meristemele prelevate de pe ramuri aflate n faza de vegetaie se brunific n
contact cu mediul i mor. n acest caz, prelevarea meristemelor se face din
muguri dorminzi.
A treia cauz ar putea fi de ordin biologic, pe de o parte, dup cum se
tie, unele virusuri ajung i n domul meristematic, pe cnd unele sunt uor de
nlturat prin cultura de meristeme, iar pe de alt parte, la unele specii se poate
243
CAPITOLUL XI
11.1 MICROPROPAGAREA PLANTELOR
11.1.1 Consideraii generale
Spre deosebire de metodele de nmulire clasic, generativ i vegetativ,
micropropagarea plantelor prezint o serie de avantaje, care au impus-o n faa
primelor. Aceste avantaje ar putea fi urmtoarele:
-nmulirea in vitro este mult mai rapid dect cea in vivo, astfel c ntrun an dintr-un explant se pot obine peste un milion de exemplare;
-multe specii care nu pot fi nmulite in vivo sau care se nmulesc greu,
pot fi nmulite in vitro n urma parcurgerii unui proces de juvenilizare;
-creterea plantelor nmulite in vitro este mai puternic, fapt datorat
juvenilizrii i devirozrii. Astfel, Cameron i colab. (1986) au observat la
cpun, c creterea mai puternic a explantelor obinute in vitro se datoreaz
modificrilor survenite n schimburile gazoase ale acestora;
-este posibil obinerea i nmulirea plantelor libere de virusuri cu toate
avantajele care decurg de aici;
-plantele cultivate in vitro pot fi transportate n condiii de siguran
fitosanitar desvrite, putnd fi schimbate, exportate sau importate;
-pentru iniierea unei culturi in vitro este nevoie de o cantitate redus de
material biologic. Pentru amelioratori acest lucru este foarte important nct se
poate realiza o selecie drastic a materialului biologic i n plus se pot nmulii
indivizi deosebii obinui prin hibridri sau mutante aprute;
-se realizeaz importante economii de teren, spaiu, energie i
combustibil;
-ofer posibilitatea controlului total al factorilor de mediu, fapt ce duce
la creterea productivitii i eficienei culturilor i la nlturarea periodicitii
produciei determinat de efectul sezonier. Se poate, de asemenea, planifica
producia de plante obinute in vitro n funcie de necesitile concrete ale pieei;
-nmulirea in vitro permite obinerea plantelor pe rdcini proprii,
nlturnd altoirea cu toate dezavantajele pe care le presupune;
-materialul produs in vitro poate s fie conservat prin diferite metode i
folosit n momentul n care este cerut;
Pentru ameliorarea plantelor, micropropagarea ofer avantaje
suplimentare:
-se scurteaz timpul necesar producerii i lansrii unui soi;
-se pot obine i nmulii clone homozigote care s fie folosite pentru
obinerea hibrizilor F1;
245
246
247
11.1.2.4 nrdcinarea
Faza de nrdcinare sau de pregtire a materialului pentru trecerea in
vivo este o faz important care const n reducerea lstririi axilare, stimularea
alungirii lstarilor, inducerea formrii rdcinilor sau chiar formarea rdcinilor.
Frecvent, n aceast faz se folosesc medii de cultur adiionate cu
crbune vegetal, lipsite de hormoni sau cu concentraii ridicate de auxine. O alt
variant const n cultivarea pe un mediu cu o concentraie ridicat de auxine, o
anumit perioad, urmat de cultivarea pe un mediu fr hormoni. Foarte multe
laboratoare opteaz ns pentru realizarea nrdcinrii concomitent cu
aclimatizarea pentru a evita astfel pierderile de timp i reactivi.
11.1.2.5 Aclimatizarea
Este etapa cea mai dificil dintr-un protocol de micropropagare. Lstarii
nrdcinai sau cu primordii de rdcini sunt trecui n amestecuri de pmnt i
apoi meninui ntr-un spaiu caracterizat prin umiditate relativ ridicat i
temperatur controlat.
nainte de a fi folosit pentru plantare materialul sditor, att cel de pomi
fructiferi i vi-de-vie, ct i cel de arbori trebuie s petreac cteva luni n
cmp (pepiniere) pentru cretere i fortificare.
11.1.3 Cultura de meristeme i apexuri
Meristemele caulinare sunt folosite n mod normal pentru a fi cultivate
pe medii aseptice in vitro.
Datorit totipotenei de care dau dovad meristemele caulinare, ele vor fi
capabile s genereze n final plante ntregi.
n general, se folosesc pentru iniierea de culturi meristematice,
meristemele terminale i cele axilare (laterale). Acestea sunt capabile s
genereze in vitro plntue care sunt folosite apoi pentru nmulirea rapid.
Primele ncercri de cultivare a meristemelor caulinare i radiculare in
vitro au fost fcute n 1922 de ctre Kotte la mazre i de ctre Robbins la
porumb. Abia n 1946, Ball a reuit s obin plante din apexuri meristematice
de Lupinus albus i Tropaeollum majus. Ulterior, Wetmore i Morel, citai de
Cachia-Cosma (1984), au studiat comportarea meristemelor provenite de la
diferite specii, n diferite condiii de cultur.
Epoca optim pentru prelevarea meristemelor variaz de la caz la caz.
De regul se evit perioadele de laten a organelor, cnd activitatea
meristematic este redus.
La garoafe, cel mai mare procent de supravieuire l-au avut meristemele
recoltate primvara sau toamna devreme, pe cnd cele recoltate iarna au
248
nrdcinat mai uor, iar cele recoltate vara au prezentat cel mai ridicat grad de
devirozare.
La cartof, meristemele recoltate primvara i vara formeaz plante care
nrdcineaz mai bine dect cele recoltate n a doua parte a anului.
Prelevarea meristemelor se face dup sterilizarea prealabil a
materialului vegetal.
La speciile lemnoase care prezint meristeme protejate de catafilele
mugurilor, sterilizarea poate s se fac la concentraii mai ridicate ale agenilor
sterilizani.
Ulterior, prelevarea meristemelor se face la hot sub o lup binocular. Se
nltur treptat catafilele i primordiile frunzelor cu ajutorul bisturiului i a unor
ace spatulate pn se ajunge la domul meristematic. Excizarea acestuia se face
prin una sau dou tieturi urmrind detaarea unei cantiti ct mai reduse din
esutul aflat dedesubt.
Pentru uurarea lucrului, la mugurii vegetativi provenii de la speciile
lemnoase nainte de dezvelirea domului meristematic, sub lup, se poate
recurge la eliminarea prin patru tieturi paralele cu marginile mugurilor a
aproximativ 50% din volumul acestora. Tierea se va face antrennd i scoara
adiacent de pe ramur i nlturnd astfel i eventualele riscuri de infecie.
Dup detaare, meristemul este aezat uor de pe lama bisturiului pe
mediul de cultur. Se poate practica, cu ajutorul vrfului bisturiului, o uoar
incizie n masa mediului n care se va aeza meristemul.
Mediul de cultur folosit este, de regul, mediul solid, putndu-se ns
folosi i medii lichide, meristemele aezndu-se n acest caz, pe puni de hrtie
de filtru.
Frecvent se recomand reducerea coninutului de macroelemente la
jumtate (Standardi, 1982), iar pH-ul mediului variaz ntre 5,5 5,8.
Concentraiile de hormoni sunt reduse 0,1-0,5 m/l, auxinele i
citochininele fiind indicate pentru stimularea diviziunii celulare, iar giberelinele
pentru stimularea alungirii lstarilor.
Intensitatea luminoas variaz de la caz la caz, n general recomandnduse 2400-2600 luci, cu o fotoperioad de 16 ore lumin i 8 ore ntuneric. La
unele specii incubarea meristemelor la ntuneric timp de cteva zile (2-6) are ca
efect reducerea brunificrilor (Stnic i colab., 1992).
Exist situaii cnd intensitatea luminoas trebuie s ating valori
cuprinse ntre 3000-4000 luci sau chiar de 10000 luci la conifere. Uneori, se
recomand suplimentarea luminii fluorescente , cu lumin roie.
Temperatura optim este de 22-25oC, dar la unele specii (via-de vie)
incubarea meristemelor la temperaturi mai ridicate poate avea un efect mai
drastic n eradicarea virusurilor.
Dup nceperea formrii lstarilor din meristeme se trece la nmulirea
acestora, folosind cel mai adecvat procedeu n funcie de specie.
249
250
Tabelul 11.1
Denumirea
speciei
Ananas
comosus
Castanea
sativa
Citrus sp.
Cocos
nucifera
Rezultat
Lstari axilari
MS (1962)
Lstar unic
Lstar unic
MS (1962)
Rodriquez (1982 b)
K(h)
Rodriquez (1982 b)
K(h)
Vieitez i Vieitez
(1980 b)
Bouzid (1975) A
lstari
Proliferare
lstari
Lstari axilari
i adventivi
Rizogenez
Lstari
devirozai
Fragaria
Proliferare
lstari
Lstari
30
5,5
30
30
5,5
30
5,5
30
5,8
30
68,4
6,5
30 glucoz
20
1 ANA;
1 KIN
1-2 ANA;
12% CM
2,5 AIA;
0,1 KIN
10% CM
DSouza (1982) BM
Autori
1,8 ANA;
2 AIB; 2 KIN
25% CM
1 AIB
Matheus i Rangan
(1979)
Zepeda i Sagawa (1981)
Rodriquez (1982 c)
0,06 AIB;
1 BAP
0,1 BAP
Rodriquez (1982 c)
Vieitez i Vieitez (1980
b)
Bouzid (1975)
DSouza (1982)
Mullin i colab.
(1974) B
White (1954) - sruri
5,75,8
Adams (1972)
Boxus (1974 a)
5,2
5,6
30
22 glucoz
Miller i Belkengren
(1963)
Adams (1972)
Boxus (1974)
Mullin i colab.
(1974)
4,5
30 glucoz
1 AIA
251
252
Rezultat
Proliferare
lstari
Proliferare
lstari
Calus
Lstari axilari
i adventivi
Proliferare
lstari axilari
Cretere lstari
Lstari axilari
Proliferare
lstari
Lstari axilari
Autori
MS (1962)
5,3
20
1,1 BAP
Lane (1979)
Jones i colab.
(1977)
MS (1962)
5,2
30
30
6,5
1 AIB; 1 BAP;
0,1 GA3
0,3 AIA; 1 KIN;
Mante i Tapper
(1983)
LS (1965)
5,7
30
5-8
2 BAP
5,8
30
0,5 BAP
Donnelly (1982)
Skirvin i Chu
(1978)
Goldy i Lyrene
(1984)
Smagula i Lyrene
(1984)
5,7
5,8
30
30
10
5,7
30
10 2IP;
5,7
30
5 2IP
Smagula i Lyrene
(1984)
Ma i colb. (1978)
Tabelul 11.2
Denumirea
speciei
Hedera helix
Lavandula
augustifolia
Pinus
sylvestris
Syringa
vulgaris
Weigela
florida
Rezultat
nrdcinare
(sub lumin
puternic)
nrdcinare
(sub lumin
slab)
Lstari
Calus
nmugurire
Dezvoltare
lstari
4 lstari/expl.
5,8
20
Hackett (1970)
5,8
20
Polito i Alliata
(1981)
Kharta (1974)
5,6
20
5,5
Bornman i Janson
(1980)
Wetmore (1954)
5,65,8
MS (1962)
Autori
Hackett (1970)
20
Quazi (1980)
50,5
6-7
1 ANA; 4 BAP;
10% CM
2,2 BAP; 1-2 2IP
20
10
15% CM
30
6,5
2,25 BAP
Hackett (1970)
Bornman i Janson
(1980)
Wetmore (1954)
Calvert i Stephens
(1986)
253
254
255
Tabelul 11.3
Denumirea
speciei
Acer negundo
Betula
verrucosa
Paulownia
tomentosa
Quercus
robur
Rezultat
Calus
Calus
Muguri axilari
Lstari
Lstari
Salix
babylonica
Salix
madsudana
Lstari
Lstari
adventivi i
axilari
Lstari axilari
Tilia cordata
Vinca minor
Proliferare
lstari
5,6
5,8
Chalupa
(1984) WPM
Stapfer i Heuser
(1985)
5,65,8
20
3 ANA;
15%CM
0,05 AIB;
0,6 BAP
0,1 ANA;
1 BAP
0,2-1 BAP
30
30
6,5
20
15
Glucoz
15
Glucoz
20
6,5
0,01 ANA;
0,05 BAP
20
30
0,2-1 BAP;
0,1 ANA sau
AIB
0,018-0,18 ANA
14,4 BAP
Autori
Radojevic i colab.
(1980)
Chalupa
(1981)
Burger i colab.
(1985)
Chalupa
(1981)
Daguin i Letouze
(1986)
Daguin i Letouze
(1986)
Bhojwani
(1980)
Chalupa
(1981)
Stapfer i Heuser
(1985)
257
Tabelul 11.4
Denumirea
speciei
Rezultat
Actinidia
deliciosa
Armeniaca
vulgaris
Castanea
mollissima
Lstari
nrdcinai
70% lstari
Castanea
sativa
Citrus sp.
Corylus
avellana
Juglans
hindisii x J.
regia
Juglans regia
Olea europea
258
Proliferare
lstari axilari
Proliferare
lstari axilari
Proliferare
lstari
Proliferare
lstari
Embriogenez
direct
Multiplicare
lstari
Lstari
Proliferare
lstari
Autori
5,5
20
5,2
20
0,1 ANA;
40 Ad;
2 2IP
5,5
20
6,5
0,1 BAP
30
0,1 BAP
5,5
30
1 BAP
5,7
30
10
5,5
30
1 BAP;
100 AdS;
0,1-1 AIB
5,5
30
2
gelrite
0,001 AIB;
1 BAP;
Harada
(1975)
Snir
(1984)
Yang i colab.
(1986)
San Jose i colab.
(1984)
Vieitez i Vieitez
(1980 b)
Navarro i colab.
(1975)
Perez i colab.
(1986)
Driver i Kuniykuhi
(1984)
30
30
0,15 ANA;
0,1 BAP;
0,5 AIB;
0,5 GA3;
Chalupa
(1981)
Rugini i Fontanazza
(1981)
5,8
Rezultat
Pyrus
communis
Lstar unic
Lstar unic
Rubus idaeus
Theobroma
cacao
Vaccinium
corymbosum
Vaccinium sp.
Proliferare
lstari axilari
Lstari axilari
1-2 lstari/expl.
Lstari axilari
5,8
30
0,45 BAP
5,0
20
6,5
Passey i Jones
(1983)
Cohen i Elliot
(1979)
Lloyd i McCown
(1981) WPM
Smagula i Lyrene
(1984) WPM
5,2
30
0,22 2,4 D
1 BAP;
0,1 GA3
0,2 BAP
5,7
30
5 2IP
5,2
30
5 2IP
5,7
30
5 2IP
Autori
Shen i Mullins
(1984)
Snir
(1981)
Passey i Jones
(1983)
Cohen i Elliot
(1979)
Wolfe i colab.
(1983, 1986)
Smagula i Lyrene
(1984)
259
Tabelul 11.5
Denumirea
speciei
Rezultat
Plantule
Ananas
comosus
Plantule
Lstari multipli
Lakshni Sita
(1974)
MS (1962)
MS (1962)
Castanea
sativa
Cretere lstari
Proliferare
lstari
Lstar unic
0,5 x MS (1962)
Vieitez i Vieitez
(1980)
MS (1962)
Proliferare
lstari
Cretere lstari
i rdcini
Dezvoltare
lstari
8 lstari/
explant
Lstar unic
LS (1965)
5,2
30
Jones i Vine
(1968)
Jones i Vine
(1968)
LS (1965)
5,65,8
5,65,8
5,2
40
Glucoz
40
Glucoz
29,9
Heinz i Mee
(1979)
Anderson
(1978, 1980)
5,8
40
5,7
30
Ficus carica
Glossularia
redinata
Malus x
domestica
Mussa sp.
Rubus idaeus
260
Proliferare
lstari
5,8-6
20
30
30
6,5
-
5,5
30
30
5,8
30
1 ANA
1,8 ANA, 2 AIB,
2 KIN
25%CM
1-2 BAP
0,18 ANA, 0,1
BAP, 0,03 GA3
0,5 BAP, 0,1
AIB, 0,1 GA3
Autori
Lakshni Sita
(1974)
Mapes (1973)
Matheus i Rangan
(1979)
Zepeda i Sagawa (1981)
Vieitez i Vieitez
(1980)
Muriithi
(1982)
Pontikis i Melas
(1986)
Jones i Vine
(1968)
Jones i Vine
(1968)
Van Nieuwkirk i colab.
(1986)
Cronauer i Krikorian
(1984)
Anderson
(1979)
Tabelul 11.6
Cultura de lstari axilari la arbori i arbuti ornamentali
(dup Stnic, 1999)
Mediu de cultur pH
Zaharoz
Agar
Fitohormoni
(g/l)
(g/l)
(mg/l)
Denumirea
speciei
Rezultat
Clematis sp.
Cotoneaster
dammeri
Crataegus
rachzacantha
Fraxinus
americana
Hydrangea
macrophylla
Lstari multipli
Lstari multipli
LS (1965)
LS (1965)
5,8
30
30
6
7
10 BAP
1 BAP
Lstari multipli
LS (1965)
5,8
30
1 BAP
Lstari multipli
5,2
20
Lichid
5-10 BAP
5,5
20
5,75,8
5,5
20
2
gelrite
7
1,8 BAP
Proliferare
lstari
Plantule
Lloyd i McCown
(1981)
Gamborg
(1968)
Miller i Murashige
(1976)
Kartha (1974)
20
2 2,4D, 4 BAP,
10%CM
Proliferare
lstari
Rumary i Thrope
(1974)
5,9
30
Lavandula
augustifolia
Picea glauca
6 lstari/explant
1 BAP
Autori
Kratz i Langhans (1978)
Norton i Boe
(1982)
Norton i Boe
(1982)
Heiman i Preece
(1983)
Bailey i colab.
(1986)
Stoltz (1984)
Quazi (1980)
Rumary i Thrope
(1984)
261
262
Tabelul 11.7
Denumirea
speciei
Actinidia
deliciosa
Amygdalus
communis
Ananas
comosus
Armeniaca
vulgaris
Castanea
sativa
Cerasus
avium
Explant
Fragmente
rdcini
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Lstari
Lstari
20
1 Z, 40 Ad
Harada (1975)
30
6,5
1Z
5,7
22,5
Hisajima (1982)
Hisajima (1982)
5,5
5,5
30
30
6
6
Lstari
MS (1962)
5,8
30
Calus
Matheus i Rangan
(1981)
0,5 x MS (1962)
30
6,5
0,023 AIB, 2
BAP, 60 AdS
0,0225 BAP
0,0225 BAP,
0,005 AIB
0,1 ANA, 0,7
BAP
5%CM
Kwei i colab.
(1980)
Monette (1986)
Monette (1986)
30
0,5-1 AIB
20
6,5
30
30
Seirlis i colab.
(1979)
Lstari
Fragmente
lstari
Epicotil
Fragmente
lstari
Harada (1975)
5,5
Autori
MS (1962)
Skirvin (1980)
5,7
5,2
Hisajima (1982)
Hisajima (1982)
Ruginii i Verma
(1982,1983)
Matheus i Rangan
(1981)
Zepeda i Sagawa
(1981)
Skirvin (1980)
263
Citrus sp.
Corylus
avellana
Diospyros
kaki
Fragaria
Glossularia
redinata
Juglans regia
264
Explant
Fragmente
lstari
Lstari
Fragmente
rdcini
Fragmente
lstari (5 cm)
Calus
Calus
Calus
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Lstari
Semine
5,7
20
6,5
5,7
30
6,5
30 -40
10
5 BAP, 80 AdS
20
8-10
1 KIN, 2 Ad
20
8-10
5,65,8
5,6
30
30
5,5
30
30
30
1 KIN, 2 Ad,
1GA3
1 ANA, 0,1-1
KIN
0,2-1 AIB, 1,1
BAP, 1 GA3
0,1 AIB, 0,49
BAP
0,1-0,3 ANA,
0,1-0,6 BAP
9 BAP
5,65,8
Chalupa (1981)
0,5 x Rodriguez
(1982)
5,5
Autori
Skirvin i colab.
(1980)
Skirvin i colab.
(1981)
Murashige i colab.
(1972)
Kitto i Young
(1981)
Radojevic
(1975)
Radojevic
(1975)
Yokoyama i Takeuchi
(1976)
Anderson i colab.
(1982)
Walender (1985)
Chalupa (1981)
Rodriguez
(1982)
Malus x
domestica
Morus alba
Musa
acuminata
Explant
Fragmente
lstari
Cotiledon
Calus
Calus din
cotiledon
Calus din
embrion
Lstari
5,2
30
Jones (1977)
5,2
30
Lstari
LS (1965)
5,2
29,9
Kartha (1974)
Kartha (1974)
White (1943)
5,8
5,8
30
30
20
8
8
6,5
20
6,5
Muguri
dorminzi/lstar
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Muguri
Lstari
Zimmerman
(1984)
Lakshmi-Sita
(1976)
Lakshmi-Sita
(1976)
MS (1962)
Krikorian i Cronauer
(1984)
20
5,6
30
1 BAP
5,6
30
10 BAP
5,6
5,8
30
40
8
-
10 BAP
4,95 BAP, 10%CM
White (1943)
Autori
Jones (1977)
Liu i colab. (1983)
Liu i colab. (1983)
Mehra i Sachdeva
(1979)
Mehra i Sachdeva
(1979)
Snir i Erez
(1980)
Van Nieuwkirk
i colab.(1986)
Zimmerman
(1984)
Oka i Ohyama
(1981)
Oka i Ohyama
(1981)
Oka i Ohyama (1981)
Krikorian i Cronauer
(1985)
265
Denumirea
speciei
Explant
Musa
cavendishii
Calus
MS (1962)
Lstari
Lstari
Musa spp.
Musa textilis
Persica
vulgaris
Phoenix
dactylifera
30
6,5
5,8
40
5 BAP
Mante i Tepper
(1983)
Miller (1982)
Skirvin i Chu (1978)
LS (1965)
5,7
30
5-8
5,7
5,7
20
30
30
8
6,5
8
Thompson i Gordon
(1977)
Tisserat (1984)
30
30
0,5 x MS (1962)
5,65,8
5,65,8
5,8
Lstari
MS (1962)
5,8
4 BAP
5-8 mm lstari
MS (1962)
30
4 BAP
Lstari
Lstari
Fragmente
lstari
Calus
Fragmente
lstari
Semine
Pistacia vera
266
10 2,4D
Autori
Ma i colab.
(1978)
Cronauer i Krikorian
(1984)
Mante i Tepper
(1983)
Miller (1982)
Skirvin i Chu (1978)
Tisserat i colab.
(1979)
Tisserat i colab.
(1982)
Tisserat i colab.
(1984)
Barghchi i Alderson
(1983)
Barghchi i Alderson
(1983)
Barghchi i Alderson
(1985)
Ribes nigrum
Explant
Autori
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Lstari
Lstari
Pietropaolo i Reisch
(1984)
Skirvin (1980)
5,8
30
1,1 BAP
5,7
20
6,5
Nu sunt menionai
Pietropaolo i Reisch
(1984)
Skirvin (1980)
Jones (1977)
5,2
30
Lane (1979)
5,2
30
Jones i Hopgood
(1979)
Lane (1979)
MS (1962)
5,8
30
LS (1965)
5,75,8
5,7
30
Shen i Mullins
(1984)
Singha (1982)
20
1,35 BAP
5,65,8
5,7
5
40
Glucoz
30
20
Flegmann i
Wainwright (1981)
Jones i Vine (1968)
6,5
Gelrite
Donnely (1980)
Snir (1981)
Lstari cu
noduri
Welander
(1985)
5,2
30
MS (1962)
Jones i Vine (1968)
Donnely (1980)
Snir (1981)
Rubus idaeus
Welander
(1985)
267
Tabelul 11.8
Denumirea
speciei
Explant
Acer rubrum x
Acer saccharum
Fragmente
lstari
Calus
Calus
Betula pendula
Betula verucosa
Biota orientalis
(thuja)
Chaenomeles
japonica
Crataegus
rachyacantha
Fraxinus
americana
268
Frunze
Fragmente
lstari
Calus
Hipocotil
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Fragmente
lstari
Autori
MS (1962)
5,7
30
10
0,1-0,5 Thidiazuron
Simola (1985)
Srivastava i
Steinhauer (1981)
Srivastava (1985)
Srivastava (1985)
5,6
5,8
20
40
6
6
5,8
5,8
30
30
6,5
6,5
Simola (1985)
Srivastava i
Steinhauer (1981)
Srivastava (1985)
Srivastava (1985)
30
Thomas i Tranvan
(1982)
LS (1965)
5,4
30
2 AIA; 5 Z; 2 GA3
0,5 ANA; 5 2 iP; 30
Ad
0,05 AIB; 0,2 BAP;
20 AdS
0,1 AIB; 1,1 BAP
5,8
30
2,5 BAP
LS (1965)
5,8
30
0,1-1 BAP
Lloyd i McCown
(1981)
5,2
20
0,5 1 BAP
Chalupa (1981)
Chalupa (1981)
Thomas i Tranvan
(1982)
Norton i Boe
(1982)
Norton i Norton
(1986)
Heiman i Preece
(1983)
270
Tabelul 11.9
Embriogeneza somatic la pomi i arbuti fructiferi (dup Stnic, 1999)
Mediu de cultur pH Zaharoz
Agar
Fitohormoni
(g/l)
(g/l)
(mg/l)
Denumirea
speciei
Explant
Actinidia
deliciosa
Fragmente de
rdcini
Semine
imature
Fructe
imature
Fragmente de
lstari
Muguri
laterali
Calus
Mangifera
indica
Pheonix
dactylifera
Autori
Harada (1975)
5,5
20
Harada (1975)
Litz (1984)
5,7
30
Litz (1984)
5,7
60
1 2,4D
Litz (1984)
LS (1965)
5,7
30
Tisserat (1979)
Thompson i Gordon
(1977)
Tisserat (1984)
5,65,8
5,65,8
30
10 2,4D; 3 2iP; 40
AdS
10 2,4D; 3 2iP
30
Litz (1984)
Tisserat (1982)
Tisserat (1984)
Tabelul 11.10
Denumirea
speciei
Hedera helix
Ilex aquifolium
Larix decidua
Picea abies
Quercus rubra
Embrioni
maturi
Internod
Banks (1979)
LS (1965)
Nagmani i Bogna
(1985)
Von Arnold i Erikson
(1981)
Von Arnold i Erikson
(1981)
MS (1962)
Autori
5,7
5,6
5,8
30
40
20
5
10
8
Banks (1979)
Hu i Sussex (1972)
Nagmani i Bogna (1985)
5,8
34,2
10
3
gelrite
6,5
30
271
272
CAPITOLUL XIV
273
275
276