Universitatea de tiine Agronomice i Medicin Veterinar

Bucureti

Facultatea de Biotehnologii

Substane biogene din Beta vulgaris

var. rubra (sfecl roie)

Student: Horea Gurgu

Bucureti
2014

CUPRINS

1. INTRODUCERE..............................................................................................................2
2. ncadrarea taxonomic i descrierea morfologic a speciei Beta vulgaris var. rubra
(sfecl roie).......................................................................................................................3
2.1. ncadrarea taxonomic a speciei Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie)...............3
2.2. Descrierea morfologic a speciei Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie)...............3
3. Cultura de Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie)...........................................................4
4. Pigmenti din Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie) betalainele.................................5
5. Calogeneza i suspensii celulare pentru obinerea betalainelor...................................6
6. Obinerea betalainelor din culturi rdcinoase transformate (proase) ....................7
7. Extracia betalainelor ......................................................................................................8
8. Mediul de cultur Linsmaier-Skoog................................................................................9
9. Concluzii ..........................................................................................................................10
10. Referine bibliografice.....................................................................................................11

1. INTRODUCERE

Sfecla roie sau Beta vulgaris var. rubra, este o plant bienal, cu rdcina crnoas
cunoscut nc din antichitate. Aceasta mpreun cu var. maritima i cicla erau utilizate de
romani att n alimentaie ct i n terapie pentru proprietile lor deosebite.

Sfelca i are originile n bazinul mediteranean, fiind folosit n special pentru frunze.
Pn la sfritul secolului al 15-lea aceasta este cultivat aproape n toat Europa iar la nceputul
secolului al 19-lea este adus i n Americi [1].
Din punct de vedere medical sfecla roie este utilizat pentru efectul ei carminativ,
emenagog, antitumoral i hemostatic. Aceasta este o surs important de antioxidan i, iar
coninutul ridicat n nitrai i ofer un potenial terapeutic n bolile cardiovascular. Sucul de sfecl
este utilizat n industrie ca surs de colorani naturali [2].
Efectul terapeutic este motivat i de compoziia chimic complex a speciei. Aceasta este
bogat n substane minerale precum calciu, fier, zinc, magneziu, fosfor, vitamina A i C, niacin,
tiamin, riboflavin, folai. Culoarea este imprimat n special de pigmen ii numi i betalaine:
betacianine i betaxantine. Pe lng aceti compui au mai fost descrii i derivai de acizi
fenolici, flavonozide i o protein inhibitoare a ribozomilor, beetina [2], [3].
Este bine cunoscut in literatur efectul antioxidant al pigmenilor naturali. Cu toate
acestea potenialul terapeutic al betalainelor nu a fost exploatat suficient, existnd relativ pu ine
studii n acest sens. De aceea probabil utilizarea acestora a trecut mai mult n sfera alimentar.
Totui biotehnologia poate oferi mijloacele necesare obinerii unui produs cu o compoziie i o
calitate bine controlat i constant, condiii care sunt absolut necesare oricrui medicament [4].

2. ncadrarea taxonomic i descrierea morfologic a speciei

Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie)

2.1. ncadrarea taxonomic a speciei Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie)
Regn: Plantae
2

ncrengtura: Magnoliophyta
Clasa: Magnoliopsida
Ordin: Caryophyllales
Familia: Chenopodiaceae
Genul: Beta
Specia: Beta vulgaris var. rubra

Fig.1 Beta vulgaris subsp. vulgaris. Franz Eugen Khler

(Sursa: http//:en.wikipedia.org)
2.2. Descrierea morfologic a speciei Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie)
Sfecla roie este o plant bienal ce dezvolt n primul an o rdcin groas i crnoas i
un buchet de frunze mari , lat-ovalate, iar n al doilea an de vegeta ie o tulpin florifer,
ramificat care poart frunze romboidale i flori mici verzui aezate n glomerule [1].

3. Cultura de Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie)

Beta vulgaris germineaz la 7-8C, iar temeperatura optim este 15-20C. n faza
depunerii substanelor de rezerv necesit 20-23C. Planta suport temperaturi de -5..-8C, dar
rdcina tuberizat nu rezist sub 0C, de aceea recoltarea se face naintea venirii ngheului.
Pentru formarea rdcinilor necesit cel puin 10 ore de lumin pe zi. Nevoia de
umiditate este moderat, cantiti mai mari de ap fiind necesare n perioada germinrii
3

seminelor, n primele faze de vegetaie i la ngroarea rdcinilor. Sfecla roie prefer solurile
bogate n humus i potasiu cu pH de 6-7. Se pot administra ngr minte cu azot, fosfor, potasiu,
magneziu, bor.
Cultura de sfecl roie poate fi timpurie 70-80 de zile, semitimpurie 80-90 de zile i
semitrzie 90-100 de zile.
Cultura timpurie se face la nceputul lunii aprilie cnd n sol sunt temperaturi de 8-10C,
la adncimea de 3-4 cm.
Principalii batogeni ai sfeclei roii sunt:
-

Cercospora beticola (cercosporioza sfeclei):

Erysiphe betae (finarea)
Pleospora betae (putregaiul inimii sfeclei)

Duntorii sfeclei roii:

-

Bothynoderes punctiventris/Tanymecus palliates (grgria sfeclei)

Chaetocnema tibialis (puricele sfeclei)

[1], [5]

4. Pigmeni din Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie) betalainele

Betalainele sunt pigmeni hidrosolubili, derivai azotai, fiind sintetizai din tirozin i
sunt formate din dou grupuri, n funcie de coloraie: betacianinele, roii-violet i betaxantinele
galbene-portocalii. Cromoforul specific tututror betalainelor este acidul betalamic. Diferen a
structural determin i schimbarea culorii. Astfel betacianinele conin un rest de ciclo-3,4dihidroxifenilalanina care datorit conjugrii determin o absorbie a luminii la o frecven
superioar [4].

Betanidina este agliconul principal al betacianinelor, majoritatea fiind 5-O-glucosidaze.

Cea mai cunoscut betacianin este betanina: 5-O--glucozo-betanidina [4].
Betaxantinele, vulgaxantina fiind principalul reprezentant, conin ali aminoacizi sau
amine n catena alturat.
Aceti colorani au diverse aplicaii n industria alimentar, fiind inclui n Codex
Alimentarius [4].
Exist tot mai multe dovezi c stresul oxidativ duce la modificri biochimice care pot
determinarea apariia unor patologii degenerative precum cancerul sau cardiopatiile. Mai multe
studii au demonstrat efectul in vitro de scavanger al betalainelor. Anumite rapoarte bazate pe
studii in vitro claseaz sfelca roie printre primele 10 legume cu activitate antioxidant [6].
n alt studiu betanina s-a dovedit eficient n supresia pe termen lung a tumorilor de la
nivelul pielii sau ficatului induse de diferite chimicale la oareci [7].

5. Calogeneza i suspensii celulare pentru obinerea betalainelor

Pentru studierea culturilor celulare s-au folosit seminele de la dou variet i de Beta
vulgaris, Detroit Dark Red (DDR) i Extra Early Flat Egyptian.
Suprafaa seminelor a fost sterilizat cu etanol 70% i hipoclorit de sodiu 1%.
Ca mediu nutritiv s-a folosit mediu Linsmaier-Skoog agarizat suplimentat cu 30 g/L
zaharoz.
5

Seciuni din hipocotiledonul seminelor sterile germinate au fost inoculate pe mediu LS

agar suplimentat cu 30 g/l zaharoza i diverse concentraii de 2,4-D. pH-ul mediului a fost ajustat
la 5,5 cu o soluie de KOH 1 N. Timpul de inocul a fost de 4 sptmni.
Calusul indus a fost transferat pe un mediu LS agar (30g/L sucroz i 10 -6 2,4-D), fiind
subcultivat pe acelai mediu la 25C la ntuneric timp de patru sptmni.
S-au obinut suspensii celulare prin transferul calusului n pahare Erlenmayer cu 50 ml
mediu LS (30g/L sucroz i 10-72,4-D). Culturile au fost subcultivate timp de dou sptmni
prin inocularea a 10 ml de suspensie celular pe 40 ml mediu LS [8].
ntr-un alt studiu culturile de calus au fost obinute din frunze de Beta vulgaris DDR.
Frunzele aflate ntr-un stadiu de maturizare de 4-8 sptmni sunt sterilizate la suprafa
cu soluie de hipoclorit de sodiu 2% i sunt cultivate pe mediu MS suplimentat cu 30 g/L
sucroz, 5,5% agar i combinaii din diferite concentraii de 2,4-D (0.5 , 1.0, 2.0 i 2.5 mg/L) i
6-benzilaminopurin (0.0, 0.5 , 1.0, 2.0 mg/L).
Culturile sunt pstrate la 26, n cicluri de 16 h lumin/8 h ntuneric. Calusul apare la
aproximativ 4 sptmni. [11]

6. Obinerea betalainelor din culturi rdcinoase transformate

(proase)
Culturile celulare rdcinoase transfomate (hairy root culture) se obin n urma
infectrii frunzelor de Beta vulgaris, vechi de patru sptmni, cu Agrobacterium rhizogenes.
Celulele de Beta vulgaris sunt cultivate pe mediu nutritiv MS suplimentat cu 30 g/L
sucroz, n pahare Erlenmeyer cu 50 ml mediu, la 26C, la ntuneric. Pentru inoculare se folosesc
celule rdcinoase transformate proaspete , cultivate pe acelai mediu timp de 14 zile.
Betalainele sunt extrase n urma omogenizrii culturilor n etanol 50%. Omogenatul este
apoi centrifugat, iar supernatantul este folosit pentru determinarea betalainelor [9].
6

Culturile de Agrobacterium rhizogenes sunt cultivate pe mediu YEB, la 26C sub agitare
timp de 16 ore. Suspensiile bacteriene obinute sunt centrifugate pe un mediu steril, apoi
suspendate in mediu MS fr hormoni, suplimentat cu 30 g/L sucroz.
Frunzele de Beta vulgaris DDR, dup ce sunt sterilizate cu hipoclorit de sodiu 2% i 2-3
picturi de Tween-20 timp de 15 minute sunt splate cu ap distilat. Frunzele astfel sterilizate
sunt infectate cu suspensie de Agrobacterium, folosind metoda co-cultivrii [11]. Rdcinile
proase se observ dup 4 sptmni. Se preleveaz segmente din aceste rdcini

i sunt

transferate pe mediu MS fr hormoni suplimentat cu 30 g/L sucroz, 5,5 g/L agar. Culturile sunt
pstrate la 26C, la ntuneric i sunt subcultivate la fiecare 21 zile. Pentru a omor bacteria se
adaug Claforan 0,25g/L la primele trei sub-culturi [11].

7.

A. Beta vulgaris DDR

B. Rdcini proase
(Sursa: Weber J et al., 2010)

C. Calus

Extracia betalainelor

Pentru obinerea extractelor materia prim este n general macerat sau mrunit.
Pigmenii fiind hidrosolubili pot fi extrai din mediu apos.
Se folosesc soluii de metanol sau etanol (20-50%) pentru extracia complet.
O uoar acidifiere a mediului de extracie crete stabilitatea betacianinelor i mpiedic
oxidarea.
Este de preferat inactivarea iniial a enzimelor printr-un tratament termic scurt, pentru a
evita degradarea enzimatic a betalainelor.
7

La nivel de laborator betalainele pot fi extrase prin diverse metode, precum dufizieextracie, extracie solid-lichid, osmoz invers sau ultrafiltrare [4].
ntr-un studiu care determin concentraia de betalaine i activitatea antioxidant se
folosete o metod de extracie hidroalcoolic.
Produsul vegetal, rdcinile proaspete de Beta vulgaris, este iniial mrunit, apoi
deshidratat, uscat i omogenizat.
Probele sunt dizolvate n 10 ml etanol 50%, agitate i apoi centrifugate la 6000 rpm timp
de 10 min.
Supernatantul este colectat i centrifugat din nou pentru a asigura o extracie total a
betalainelor.
n final supernatantul este folosit pentru determinare concentraiei n betalaine [12].

8. Mediul nutritiv Linsmaier-Skoog[10]

Proprieti:
Aspect: Pulbere alb-glbuie
Solubilitate: Ap
Concetraia de lucru: 41,43 g/L
Temeperatura de conservare: 2-6C
pH: 4,25-5,25
Formula (mg/L): [10]
8

Nitrat de amoniu
Acid boric

1650
6,2

Clorur de calciu anh.

332,2

CoCl2 6 H2O

0,025

CuSO4 5 H2O

0,025

Na2EDTA 2 H2O

37,26

FeSO4 7 H2O

27,8

MgSO4 anh.

180,7

MnSO4 1 H2O

16,9

Acid molibdic (sarea de sodiu) 2 H2O

0,25

Iodur de potasiu

0,83

Nitrat de potasiu

1900

Fosfat de potasiu monobazic

170

ZnSO4 7 H2O

8,6

Agar

7000

Mio-Inositol

100

Sucroz

30000

Tiamin HCl

0,4

9. CONCLUZII

Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie), este o important surs de substane biogene,

avnd constitueni att cu rol nutritiv ct i terapeutic.

Pigmenii obinui din Beta vulgaris var. rubra (sfecl roie), sunt deja folosii pe scar
larg n industria alimentar, dar acetia au i un mare poten ial curativ, fiind buni
antioxidani avnd rol de molecule scavenger (care cur organismul de radicalii

liberi).
Culturile celulare de calus, suspensii celulare i culturi de celule rdcinoase transformate

sunt surse bune de betalainele.

Dezvoltarea bioreactoarelor poate scdea costul obinerii i poate crete randamentul de

producie.
Produsele obinute n urma unui proces biotehnologic au o compozie i o calitate
constant i bine controlat, condiii necesare oricrui medicament.
9

REFERINE BIBLIOGRAFICE

1. Nottingham S, Beetroot, August 2006, SFN.

2. Beta vulgaris L. USDA, NRCS.2008. The PLANTS Database (http://plantss.usda.gov,
July 2008).
3. Iglesias R, Perez Y, de Torre C, et al. Molecular characterization and systemic induction
of single-chain ribosome-inactivating proteins (RIPs) in sugar beet (Beta vulgaris) leaves.
J Exp Bot 2005; 56(416): 1675-1684.
4. Azeredo H. Betalains: properties, sources, applications and stability a review,
International Journal of Food Science and Technology 2009, 44, 2365-2376.
5. http://www.agropataki.ro/
6. Vinson J A, Hao Y, Su X. Phenol antioxidant quantity and quality in foods: vegetables.
Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1998, 46, 3630-3634.
7. Kapadia G J, Tokuda H, Konoshima T, Nishino H. Chemoprevention of lung and skin
cancer by Beta vulgaris (beet) root extract. Cancer Letters, 1996, 100, 211-214.
10

8. Akita T, Hina Y, Nishi T. Production of Betacyanins by a Cell Suspension Culture of

Table Beet (Beta vulgaris L.), Biosci. Biotechnol. Biochem., 2000, 64(9), 1807-1812.
9. Pavlov A, Georgiev V, Ilieva M. Betalain biosynthesis by red beet (Beta vulgaris L.) hairy
root culture, Process Biochemistry, 2005, 40, 1531-1533.
10. Linsmaier EM, Skoog F. Organic growth factor requirements of tobacco tissue culture.
Physiol. Plant. 1965, 18:100-127.
11. Weber J, Georgiev V, Haas C, Bley T, Pavlov A. Ploidy levels in Beta vulgaris (red beet)
plant organs and in vitro systems. Eng. Life Sci. 2010, No.2, 139-147.
12. Ravichandran K, Thaw Saw N M, Mohdaly A. Impact of processing of red beet on
betalain content and antioxidant activity. Food Research International. 2013, Vol 50: 670675.

11