Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Coordonatori:
Simona Ivana
Autori:
Alexandru T. Bogdan
Simona Ivana
Iulian ogoe
Ipate Iudith
Gheorghe Cmpeanu
Traian Enache
Stelian Britreanu
Alexandru Popescu
MicrobiologiA ALIMENTELOR
- volumul II
Patogeni alimentari
Ediie mbuntit i revizuit
Editura Asclepius
Bucureti, 2011
1
Cuprins
CAPITOLUL 1
BACTERII PATOGENE CE SE TRANSMIT PRIN ALIMENTE 9
1.1. Patogeni alimentari
9
1.1.1. Introducere
9
1.1.2. Modul de transmitere 10
1.1.3. Patogenitate 11
1.1.3.1. Descrierea Quorum sensing 13
1.1.3.2. Biofilmele 16
1.1.3.3. Factorii sigma alternativi 19
1.1.3.4. Rspunsul la tolerana acid (ATR) 19
1.2. Bacteriile Gram pozitive 21
1.2.1. Listeria monocytogenes
21
1.3. Bacteriile Gram negative 22
1.3.1. Genul Salmonella
22
1.3.2. Escherichia coli 24
1.3.3. Genul Yersinia 25
1.3.4. Genul Shigella 26
1.3.5. Genul Vibrio 26
1.4. Concluzii 27
CAPITOLUL 2
TOXIINFECII ALIMENTARE PRODUSE DE BACTERII DIN
GENUL STAPHYLOCOCCUS
36
2.1. Staphylococcus aureus 36
2.1.1. Istoric 36
2.1.2. Taxonomie
37
2.1.3. Incidena speciilor de stafilococi n alimente 38
2.1.4. Condiii de cultivare i caractere culturale
40
2.1.4.1. Temperatura 41
2.1.4.2. Efectul substanelor chimice 41
2.1.5. Caractere morfologice 45
2.1.6. Proprieti biochimice 45
2.1.7. Tipurile de enterotoxine stafilococice i incidena lor 47
2.1.7.1. Proprieti chimice i fizice ale enterotoxinelor stafilococice 49
2.1.7.2. Modul de aciune al enterotoxinelor stafilococice 50
2.1.8. Ecologie
52
3
CAPITOLUL 5
IMPLICAIILE BACTERIILOR DIN GENUL LISTERIA N
PRODUCEREA TOXIINFECIILOR ALIMENTARE
160
5.1. Listeria monocytogenes 160
5.1.1. Caractere generale
160
5.1.2. Istoric 161
5.1.3. Taxonomie
162
5.1.4. Morfologie
163
5.1.5. Condiii de cultivare i caractere culturale
165
5.1.6. Proprieti biochimice 166
5.1.7. Sensibilitatea fa de factorii de mediu 167
5.1.8. Structura antigenic 170
5.1.9. Patogenitatea 170
5.1.10. Izolarea i identificarea
173
5.1.11. Listerioza uman
173
5.1.12. Epidemiologie 174
5.1.13. Transmiterea prin alimente 176
5.1.14. Transmiterea listeriozei la animale 178
5.1.15. Toxiinfeciile alimentare produse de Listeria monocytogenes
184
5.1.16. Profilaxie i combatere 186
5.1.17. Metoda i schema de lucru utilizat pentru izolarea i identificarea
lui Lis. monocytogenes
189
CAPITOLUL 6
Implicaiile bacteriilor din genul Mycobacterium n
producerea toxiinfeciilor alimentare
201
6.1. Mycobacterium avium subspecia paratuberculosis
201
6.1.1. Istoric 201
6.1.2. Morfologie
201
6.1.3. Condiii de cultivare i caractere culturale
201
6.1.4. Proprieti biochimice 202
6.1.5. Proprieti antigenice 202
6.1.6. Ecologie
202
6.1.7. Patogenitate 202
CAPITOLUL 7
Implicaiile bacteriilor din familia Enterobacteriaceae n producerea toxiinfeciilor alimentare 208
6
CAPITOLUL 8
Implicaiile bacteriilor din genul Salmonella n
producerea toxiinfeciilor alimentare
214
8.1. Caractere generale
214
8.2. Istoric 215
8.3. Taxonomie
216
8.4. Morfologie
218
8.5. Condiii de cultivare i caractere culturale
218
8.6. Proprieti biochimice 221
8.7. Proprieti antigenice 223
8.8. Nomenclatura salmonelelor
227
8.9. Ecologie 228
8.10. Patogenitate
229
8.11. Sensibilitatea fa de factorii de mediu 231
8.12. Infecia experimental 231
8.13. Serotipuri de salmonele patogene
232
8.14. Salmoneloza non-tifoidic la om
235
8.15. Epidemiologie 241
8.15.1. Distribuia cazurilor de salmoneloz uman 243
8.15.2. Supravegherea salmonelozelor
244
8.16. Rezervoare i ci de infecie 245
8.17. Contaminarea alimentelor
246
Contaminarea crnii 246
Contaminarea oulor 247
Contaminarea laptelui i produselor lactate 247
Contaminarea n timpul manipulrii alimentelor
248
8.18. Msuri de prevenire i combatere a salmonelozelor 248
8.19. Diagnosticul de laborator al toxiinfeciilor alimentare produse de
salmonele
253
Recoltarea probelor 253
Cuvnt nainte,
Anul editorial 2010, n domeniul medicinii veterinare marcheaz apariia unei
lucrri deosebite, a unui tratat remarcabil de Microbiologie a alimentelor, att de
necesar ntr-o perioad, n care, sigurana i controlul alimentelor se impune, att ca
pruden profilactic ct i ca necesitate de aliniere acceptat, la tot ceea ce reprezint
reglementrile UE.
Lucrarea de fa este realizat pe baza unui material bibliografic extrem de bogat
i recent, care poart amprenta experienei profesionale i tiinifice a autoarei, cadru
didactic la disciplina de Microbiologie-Imunologie, din anul 1990.
O lucrare de asemenea dimensiuni (compus din cinci volume), acoperitoare a
domeniului microbiologiei, a nsemnat un adevrat curaj contient, bazat pe competen
i pe obligaia resimit de autor, de a pune la dispoziia celor vizai, nu puini la numr,
medici veterinari, medici umani, oameni de sntate public, cercettori, specialiti
microbiologi.
Nu n ultimul rnd, tratatul se adreseaz studenilor facultilor de medicin
veterinar i medicin uman, chemai s-i neleag importana, din punctul de vedere al
sntii animale i al scopului final, Sntatea Public.
O asemenea ntreprindere de lung respir pune la dispoziia generaiilor tinere, un
volum de cunotine selecionate i reprezint rspunsul evident, la acumularea informaiilor
microbiologice i la aplicaiile rezultatelor cercetrii, n domeniul biotehnologiei.
Modul de prezentare, fr repro, fluent, cu grija cadrului didactic i al omului de
tiin, pentru limbaj, exprimarea tiinific ntr-un stil clar i corect mrturisete calitile
autoarei. Nu-i uor s-i convingi pe cei vizai, s participe la o asemenea lucrare, chiar
dac au motivaia necesar, nu-i uor s dai dovad de perseveren de a ncepe a urmri,
redacta, volumele tratatului, ntr-un stil unitar.
Volumul prim al Microbiologiei Alimentelor, cuprinde Bacteriologia General,
morfologia-structura celulei procariote, elemente de nutriie i metabolism bacterian,
creterea i multiplicarea, utilizri n biotehnologie, influena factorilor fizici, chimici
i biologici asupra bacteriilor, genuri bacteriene i ciuperci microscopice (mucegaiuri,
levuri) izolate din alimente, sursele principale de microorganisme prezente n alimente,
tipuri de fermentaii i produse alimentare.
Mai puin obinuit, ntr-un asemenea tratat este pledoaria pentru cercetare, pentru
verificarea ideilor, prin observaii i experimente, care s susin ipoteza de lucru, alturi
de deducie i inducie; sunt enumerate calitile cardinale ale celor chemai s lrgeasc
orizontul cunotinelor noastre (curiozitate, lipsa prejudecilor, scepticismul, creativitatea
i cooperarea, revizuirea opiniilor).
Lucrarea meritorie datorat faptului c pune la ndemn cititorilor avizai
numeroase informaii tiinifice, deosebit de utile n domeniile microbiologiei alimentelor.
CAPITOLUL 1
BACTERII PATOGENE CE SE TRANSMIT
PRIN ALIMENTE
1.1. Patogeni alimentari
1.1.1. Introducere
Cu toate ca multe boli infecioase se pot transmite prin alimente (de
exemplu: listerioza, colita hemoragic), ne vom referi n acest capitol la
cele care produc mbolnviri exclusiv sau predominant prin consumul de
produse alimentare (botulism-intoxicaii stafilococice).
Antraxul i bruceloza sunt dou zoonoze temute ce se transmit, ns
foarte rar prin consumul unor produse alimentare de la animalele bolnave.
n categoria patogenilor alimentari recunoscui se ncadreaz bacterii,
virusuri, fungi, prioni, protozoare, precum i parazii animali multicelulari.
Tabelul 1.1.
Patogeni alimentari
Bacterii Gram pozitive
Staphylococcus sp.
Bacillus cereus
B. anthracis
Clostridium botulinum, C. argentinensis
C. perfringens
Listeria monocytogenes
Mycobacterium avium subsp.
paratuberculosis
Bacterii Gram negative
Salmonella
Shigella
Escherichia
Yersinia
Vibrio
Campylobacter
Aeromonas (?)
Brucella
Plesiomonas (?)
9
Virusuri
Hepatita A
Norovirusuri
(Norwalk, etc.)
Rotavirusuri
Prioni
Infecia Creutzfeldt-Jakob
(varianta nou)
Obiecte de joac
ale copiilor
Alimente
Hran, tacmuri
Insecte
Degete
Ap
Fecale
10
1.1.3. Patogenitate
Pentru ca gazda s fie invadat sunt necesare o suit de evenimente
nedorite, pe care agentul patogen trebuie s le execute:
1. s supravieuiasc trecerii prin mediul acid conferit de pH-ul gastric.
Unii ageni se protejeaz de acest mediu prin nglobarea n bolul alimentar,
iar alii folosesc mecanisme adaptative proprii de rezistena la pH-ul acid;
2. s se ataeze sau s colonizeze pereii intestinali, n aa fel nct
s-i poat mri populaia; Prima linie de aprare a organismului mpotriva
invaziei patogenilor alimentari este reprezentat de mucoasa intestinal. De
exemplu, Lis. monocytogenes strbate stratul de mucus prin intermediul
listeriolizinei (LLO), iar C. perfringens nu are nevoie s nving aceast
barier pentru c se pare c nu trebuie s se ataeze la esuturile intestinale.
3. s posede arme mpotriva mecanismelor de aprare ale gazdei (de
exemplu: limfonodurile asociate intestinului);
4. s fie pregtit de lupta cu noua armat heterogen a microflorei
intestinale. Acest lucru se realizeaz pe principiul excluderii competititve,
prin faptul c microflora inofensiv odat ataat la toate situsurile
disponibile ale pereilor intestinali vor exclude alte microorganisme.
Deasemenea, tractul gastrointestinal reprezint un mediu srac n O2 i,
de aceea, majoritatea microorganismelor de la acest nivel sunt anaerobe.
Totui, s-a observat c, de exemplu, S. typhimurium poate crete n astfel de
medii datorit capacitii sale de a ptrunde n celulele mamiferelor.
5. s fie capabili, odat ataai, s elaboreze produi toxici, ori s treac de peretele epitelial i s patrund n celulele somatice sau n fagocite (de
exemplu: Lis. monocytogenes).
Capacitatea de a respecta aceste cerine nu este la dispoziia oricrui
agent microbian, majoritatea lor neputnt nvinge mecanismele defensive
ale organismului uman. Aceasta reprezint probabil motivul pentru care nu
se pot ncadra n categoria agenilor patogeni care se transmit prin consumul
de alimente.
Situsurile de ataare i mecanismele de virulen ale patogenilor
alimentari sunt discutate mai jos:
n figura 1.2 este prezentat o diagram a aparatului digestiv al
omului, iar n tabelul 1.2 este prezentat o list cu agenii patogeni capabili
s colonizeze diferite organe i aparate. n tabelul 1.2 Helicobacter sp. este
prezentat ca fiind singura bacterie capabil s colonizeze pereii stomacului.
Se tie c Sarcina ventriculi (germen strict anaerob) se dezvolt n stomac,
dar nu este un patogen alimentar. Acelai lucru trebuie demonstrat i despre
H. peglosi. pH-ul stomacului n timpul ingestiei este ntre 3 i 5 putnd
11
Glande salivare
Dini
Limb
Faringe
Epiglot
Esofag
Ficat
Stomac
Vezic
biliar
Sfincterul
piloric
Pancreas
Duoden
Intestinul gros
Intestinul subire
Cecum
Apendice
cecal
Rect
Anus
12
Tabelul 1.2.
Tipuri de toxiinfecii alimentare localizate la nivelul diferitelor organe la om
Musculatura scheletic
Trichinella spiralis
Stomac
Helicobacter pylori
Ficat
Clonorchis - viermele de glbeaz
(fascioloz)
Listeria monocytogenes
Hepatita A i E
Intestinul subire
Astrovirusuri
Bacillus cereus
Campylobacter jejuni (poriunea
distal a ileonului)
Clostridium perfringens
Cryptosporidium parvum
Cyclospora cayetanensis
Escherichia coli - tulpinile EPEC i
ETEC
Giardia lamblia
Hepatita A
Listeria monocytogenes
Rotavirusuri
Salmonella spp. (nontifoid) - poriunea
terminal a ileonului)
S. Typhi (poriunea distal a intestinului
subire)
Shigella spp. (poriunea terminal a ileonului i
jejunului producnd diareea apoas)
Toxoplasma gondii
Cestode
Vibrio cholerae
Vibrio parahaemolyticus
Yersinia spp.
Intestinul gros/colon
Campylobacter spp. (colon)
E. coli - tulpinile EHEC (enterohemoragic) i
EPEC (enteropatogen) (colonul ascendent i
transvers)
Entamoeba histolytica
Plesiomonas shigelloides (form aparent)
Salmonella Enteritidis
Shigella sp., n special S. dysenteriae
microorganisme.
Fig. 1.3.
Densitate
celular sczut
Densitate
celular crescut
Cu transcripia
genei int
Fr transcripia
genei int
Autoinductor (autoinducer)
Proteina R
Quorum sensing la organismele Gram negative are dou componente: proteina
activator transcripional (proteina R) i molecula AI care este produs prin sinteza
autoinductor. AI se acumuleaz n celul pn la nivelul de umplere al acesteia. n acest
moment se produce cuplarea moleculelor AI i activarea proteinei R inducnd expresia
genei. Proteina R este format din 2 domenii: proteina N-terminal care interacioneaz
cu AI i C-terminal implicat n legarea DNA-ului.
Moleculele AI ale bacteriilor Gram negative sunt N-acyl-HSL, (American Society
of Microbiology).
Tabelul 1.3.
Cteva rspunsuri fenotipice ale bacteriilor Gram negative,
ca o consecin a Quorum Sensing
Bacterii Gram negative
Vibrio fischeri
Escherichia coli
Escherichia coli mutanta LuxS
Escherichia coli
Escherichia coli
E. coli EHEC i EPEC
Serratia liquefaciens
Serratia marcescens
Pantoea stewartii
Pectobacterium carotovorum
Pectobacterium chrysanthemi
Burkholderia cepacia
Aeromonas hydrophila
Pseudomonas aeruginosa
Rspunsuri fenotipice
Bioluminiscen
Producia toxinei Stx
ncetinirea vitezei de not
Formarea de att/eff
Rspuns SOS
Sistem secretor tipul III
Mobilitate foarte activ
Producie de prodigiozin; sinteza carbapenului
Creterea produciei de polizaharide
Producie de enzime care degradeaz peretele
celular al plantelor
Producerea liazelor pectate
Proteaze, producerea de siderofori
Producerea de exoproteaze
Structur de biofilm
Dac celula din stnga figurii 1.3. se presupune a fi V. fisheri, este non14
acest lucru este prezentat mai jos. n cazul bacteriilor Gram pozitive, AIurile sunt reprezentate de peptide, feromoni peptidici i nisin. Reglarea
densitii celulelor din aceste sisteme descrise de ctre Kleerebezen et. al.
se pare c urmeaz o tem comun, n care semnalul molecular este dat de
un peptid procesat post translaional care este secretat de un ATP-bendingcasette-exporter (exportator de casete ce leag ATP-ul).
Feromonul peptidic secretat funcioneaz ca un semnal input (input
signal) pentru un senzor specific dintr-un sistem de transducie a semnalului
(signal-transduction system) format din dou componente. Este interesant
faptul c unele bacterii Gram pozitive cum ar fi Bacillus spp. produc
lactonaze care degradeaz specific AHL-urile produse de ctre bacteriile
Gram negative. Printre alte activiti fenotipice i fiziologice demonstrate
la bacteriile Gram pozitive se numr rspunsul virulent produs de Stp.
aureus, precum i producerea de peptide antimicrobiene, altele dect nisina.
S-a demonstrat c aceasta din urm i induce propria sintez. Detectarea
axonului a fost demonstrat la Stp. aureus i Stp. epidermidis. Cnd cele
dou bacterii au fost cultivate mpreun, Stp. epidermidis s-a prut a fi
favorit, ceea ce sugereaz c acest lucru ar putea fi motivul pentru care
aceast specie predomin pe piele, unde feromonii autoinductori sunt mai
eficieni dect n interiorul corpului. La Stp. aureus un feromon octopeptidic
i manifest virulena prin activarea locusului agr.
Detectarea quorumului in vivo este problematic din cauza lipsei
generale de oportuniti pentru ca substanele AI s ajung la aceasta.
1.1.3.2. Biofilmele
Un biofilm este reprezentat de bacterii, fungi sau protozoare singure
sau n combinaii legate mpreun de o matrice extracelular ataat de o
suprafa solid sau ferm. Exemplele obinuite includ suprafeele mucoide
(slime surfaces) formate pe pietrele sau butenii din apele curgtoare,
placa dentar i stratul mucos de pe carne, pete, psri care s-au stricat n
frigider. Aceste biofilme ader la suprafeele respective, n special datorit
concentraiei mari de nutrieni. n studiile de laborator aderena la suprafee,
este mai mare n mediile mbogite. Ataarea este facilitat de o excreie
microbian exopolizaharidic ce poart uneori denumirea de glicocalix.
n acest micromediu se formeaz colonii care comunic ntre ele prin
canalele de ap formnd astfel un sistem circulator primitiv n care nutrienii
sunt adui nuntru, iar subprodusele toxice sunt eliminate. Celulele
microbiene din lichide care nu sunt cuprinse n biofilm se afl ntr-o stare de
plancton (tree-floating).
16
20
celula gazd.
Mecanismul de aciune (strbaterea barierei mucoasei intestinale i
ptrunderea n celulele epiteliale) nu este pe deplin cunoscut. De asemenea,
numai 1/3 din oamenii contaminai manifest simptome.
Primul rspuns de aprare al organismului mpotriva listeriilor este
reprezentat de macrofage, n special de celulele Kuppffer din ficat. Ele
ptrund n aceste celule fiind internalizate n celule M, n mod nedistructiv.
Acest lucru este urmat de inducerea imunitii mediate de celulele T.
Neutrofilele polimorfonucleare (PMN) lizeaz celulele parenchimatoase infectate de Listeria sp. i expun bacteria fagocitelor profesionale.
PMN conin anioni superoxizi, enzime proteolitice i ali factori.
Cnd aceste neutrofile interacioneaz cu Lis. monocytogenes ele
prezint creteri ale citochinelor (interleukina-1beta, interleukina 6, factorul
de necroz tumorala=TNF).
Odat ce listeriile sunt fagocitate, celulele ies prin liza membranei
vacuolare cu LLO, se mic prin citosol prin filamentele de actin, iar apoi
se rspndesc n celulele nvecintate unde procesul se repet. Tulpinile
virulente se deosebesc de cele nevirulente prin capacitatea de aderare i
de ptrundere prin bariera mucoas i epitelial i prin capacitatea de a se
rspndi de la o celul la alta cu ajutorul LLO.
23
24
1.4. Concluzii
n tabelul 1.4 sunt prezentate 8 bacterii Gram negative care posed
cel puin o proprietate ce poate fi asociat cu patogeneza bacteriilor din
alimente. Ele nu reprezint ageni patogeni alimentari primari deoarece sunt
incapabili s adere i s invadeze celulele epiteliale.
Aeromonas hydrophila i Plesiomonas shigeloides s-au aflat pe lista
de supraveghere a microbiologilor timp de 2 decenii, dar nu s-a putut
demonstra c pot produce gastroenterit n absena unui alt enteropatogen.
n tabelul 1.5 sunt prezentai ultimii 8 patogeni alimentari descoperii.
nvCJD este cea mai nou toxiinfectie alimentar descoperit.
Tabelul 1.4.
Exemple de bacterii Gram negative care posed factori de virulen
Bacterii Gram negative
Aeromonas caviae
A. hydrophila
Bacteroides fragilis
Citrobacter freundii
Enterobacter cloacae
Hafnia alvei
Klebsiella pneumoniae
Plesiomonas shigelloides
Factor de virulen
Enterotoxin
Enterotoxin citotoxic
Enterotoxin
Enterotoxin termo-stabil; Leziuni A/E (attaching and effacing)
Enterotoxin termo-stabil
Producere leziuni A/E
Enterotoxin termo-stabil
Enterotoxin termo-stabil
Tabelul 1.5.
Cei mai receni patogeni de origine alimentar
Patogen/Sindrom
Botulismul la copii
Yersinia enterocolitica
Cyclospora cayetanensis
Norwalk i virusuri nrudite
Vibrio cholerae non-01
Listeria monocytogenes
E. coli enterohemoragic
Creutzfeldt-Jakob (v CJD) varianta nou
27
Mediu Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose agar (TCBS) utilizat pentru izolarea
selectiv a Vibrio cholerae i Vibrio parahaemolyticus din probe clinice. n imagine
colonii de 24 ore, incubate n aerobioz la
35C de Vibrio cholerae (galbene), Vibrio
parahaemolyticus (colonii verzi), Staphylococcus aureus nu a crescut.
28
Bibliografie selectiv
1. Archer, D.L. 1996. Preservation microbiology and safety: Evidence that stress
enhances virulence and triggers adaptive mutations. Trends Food Sci. Technol.
7:91-95.
2. Bagamboula, C.F., M. Uyttendaele, and J. Debevere. 2002. Acid tolerance of
Shigella sonnei and Shigella flexneri. J. Appl. Bacteriol. 93:479-486.
3. Bagge, D., M. Hjelm, C. Johansen, I. Huber, and L. Gram. 2001.
Shewanellaputrefaciens adhesion and biofilm formation on food processing
surfaces. Appl. Environ. Microbiol. 67:2319-2325.
4. Baumler, A.J., R.M. Tsolis, T.A. Ficht, and L.G. Adams. 1998. Evolution of host
adaptation in Salmonella enterica. Infect Immun. 66:4579-4587.
5. Berry, E.D., and C.N. Cutter. 2000. Effects of acid adaptation of Escherichia coli
0157:H7 on efficacy of acetic acid spray washes to decontaminate beef carcass
tissue. Appl. Environ. Microbiol. 66:1493-1498.
6. Bieber, D., S.W. Ramer, and C.-Y. Wu. 1998. IV pili, transient bacterial aggregates,
and virulence of enteropathogenic Escherichia coli. Science 280:2114-2118.
7. Blackman, I.C., and J.F. Frank. 1996. Growth of Listeria monocytogenes as a
biofilm on various food-processing surfaces. J. Food Protect. 59:827-831.
8. Boerlin, P., S. Chen, and J.K. Colbourne. 1998. Evolution of enterohemonhagic
Escherichia coli hemolysin plasmids and the locus for enterocyte effacement in
Shiga toxin-producing E. coli. Infect. Immun. 66:2553-2561.
9. Boland, A., andG.R. Cornells. 1998. Role of YopP in suppression of tumor necrosis
factor alpha release by macrophages during Yersinia infection. Infect. Immun.
66:1878-1884.
10. Borucki, M.K., J.D. Peppin, D. White, F. Loge, and D.R. Call. 2003. Variation
in biofilm formation among strains of Listeria monocytogenes. Appl. Environ.
Microbiol. 69:73367342.
11. Bremer, P.J., I. Mond, and CM. Osborne. 2001. Survival of Listeria monocytogenes
attached to stainless steel surfaces in the presence or absence of Flavobacterium
spp. J. Food Protect. 64:1369-1376.
12. Buchanan, R.L., S.G. Edelson, and G. Boyd. 1999. Effects of pH and acid resistance
on the radiation resistance of enterohemorrhagic Escherichia coli. J. Food Protect.
62:219-228.
13. Buswell, CM., YM. Herlihy, L.M. Lawrence, J.T. McGuiggan, P.D. Marsh, C.W.
Keevil, and S.A. Leach 1998. Extended survival and persistence of Campylobacter
spp. in water and aquatic biofilms and their detection by immunofluorescentantibody and -rRNA staining. Appl. Environ. Microbiol. 64:733-741.
14. Carpenter, B., and O. Cerf. 1993. Biofilms and their consequences, with particular
29
44.
45.
46.
47.
48.
49.
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56.
72. ODriscoll, B., C.G.M. Gahan, and C. Hill. 1996. Adaptive acid tolerance response
in Listeria monocytogenes: Isolation of an acid-tolerant mutant which demonstrates
increased virulence. Appl. Environ. Microbiol. 62:1693-1698.
73. Oh, D.-H, and D.L. Marshall. 1996. Monolaurin and acetic acid inactivation of
Listeria monocytogenes attached to stainless steel. J. Food Protect. 59:249-252.
74. Otto, M., H. Echner, W. Voelter, and F. Gotz. 2001. Pheromone cross-inhibition
between Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis. Infect. Immun.
69:1957-1960.
75. ORiordan, M., M.A. Moors, and D.A. Portnoy. 2003. Listeria intracellular growth
and virulence require host-derived lipoic acid. Science 302:462-464.
76. erna, N.T., G.F. Mayhew, G. Posfai, S. Elliott, M.S. Donnenberg, J.B. Kaper,
and F.R. Blattner. 1998. Molecular evolution of a pathogenicity island from
enterohemorrhagic Escherichia coli 0157:H7. Infect. Immun. 66:3810-3817.
77. Phan-Thanh, L., F. Mahouin, and S. Alige. 2000. Acid responses of Listeria
monocytogenes. Int. J. Food Microbiol. 55:121-126.
78. Pruzzo, C, R. Tarsi, M. del Mar Lleo, C. Signoretto, M. Zampini, R.R. Colwell,
and P. Canepari. 2002. In vitro adhesion to human cells by viable but nonculturable
Enterococcus faecalis. Curr. Microbiol. 45:105-110.
79. Ren, D., J.j. Sims, and T.K. Wood. 2002. Inhibition of biofilm formation and
swarming of Bacillus subtilis by (5Z)-4-brome-5-(bromomefhylene)-3-butyl-2(5//)-furanone. Lett. Appl. Microbiol. 34:293-299.
80. Richter-Dahlfors, A.A., and B.B. Finlay. 1997. Salmonella interactions with host
cells. In Host Response to Intracellular Pathogens, ed. S.H.E. Kaufmann, 251-270.
Austin, TX: R.G. Landes Co.
81. Samelis, J., J.N. Sofos, J.S. Ikedak, P.A. Kendall, and G.C. Smith. 2002. Exposure
to non-acid fresh meat decontamination washing fluids sensitizes Escherichia coli
0157:H7 to organic acids. Lett. Appl. Microbiol. 34:7-12.
82. Samelis, J., J.N. Sofos, P.A. Kendall, and G.C. Smith. 2001. Influence of the
natural microbial flora on the acid tolerance response of Listeria monocytogenes
in a model system of fresh meat decontamination fluids. Appl. Environ. Microbiol.
67:2410-2420.
83. Saphra, I., and M. Wassermann. 1954. Salmonella choleraesuis: A clinical and
epidemiological evaluation of 329 infections identified 1940 and 1954 in the New
York Salmonella Center. Am. J. Med. Sci. 228:525-533.
84. Sasahara, K.C., and E.A. Zottola. 1993. Biofilm formation by Listeria
monocytogenes utilizes a primary colonizing microorganism in flowing systems. J.
Food Protect. 56:1022-1028.
85. Schauer, D.B., and S. Falkow. 1993. Attaching and effacing locus of a
Citrobacterfreundii biotype that causes transmissible murine colonic hyperplasia.
Infect. Immun. 61:2486-2492,
34
86. Schubert, S., A. Rakin, H. Karch, E. Carriel, and J. Heesemann. 1998. Prevalence
of the high-pathogenicity island of Yersinia species among Escherichia coli
strains that are pathogenic to humans. Infect. Immun. 66:480-485.
87. Sibelius, U., E.-C. Schulz, F. Rose, K. Hattar, T. Jacobs, S. Weiss, T. Chakraborty,
W. Seeger and F. Grimminger. 1999. Role of Listeria monocytogenes exotoxins
listeriolysin and phosphatidylinositol-specific phospholipase C in activation of
human neutrophils. Infect. Immun. 67:1125-1130.
88. Silhavy, T.J. 1997. Death by lethal injection. Science 278:1085-1086.
89. Sperandio, V, A.G. Torres, J.A. Giron, and J.B. Kaper. 2001. Quorum sensing is
a global regulatory mechanism in enterohemorrhagic Escherichia coli 0157:H7. /.
Bacteriol. 183:5187-5197.
90. Surette, M.G., M.B. Miller, and B.L. Bassler. 1999. Quorum sensing in Escherichia
coli, Salmonella typhimurium, and Vibrio harveyi: A new family of genes responsible
for autoinducer production. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:1639-1644.
91. Trucksis, M., J. Michalski, Y.K. Deng, and J.B. Kaper. 1998. The Vibrio cholerae
genome contains two unique circular chromosomes. Proc. Natl. Acad. Sci.USA
95:14459-14464.
92. van der Velden, A.W.M., A.J. Baumler, R.M. Tsolis, and F. Heffron. 1998. Multiple
fimbrial adhesins are required for full virulence of Salmonella typhimurium in
mice. Infect. Immun. 66:2803-2808.
93. Venturi, V. 2003. Control of rpoS transcription in Escherichia coli and Pseudomonas:
Why so different? Mol. Microbiol. 49:1-9.
94. Waldor, M.K., and J.J. Mekalanos. 1996. Lysogenic conversion by a filamentous
phage encoding cholera toxin. Science 272:1910-1914.
95. Wallis, T.S., and E.E. Galyov. 2000. Molecular basis of Salmonella induced
enteritis. Mol. Microbiol. 36:997-1005.
96. Waterman, S.R., and P.L.C. Small. 1996. Characterization of the acid resistance
phenotype and rpoS alleles of Shiga-like toxin-producing Escherichia coli. Infect.
Immun. 64:2808-2811.
97. Waterman, S.R., and P.L.C. Small. 1998. Acid-sensitive enteric pathogens are
protected from killing under extremely acidic conditions of pH 2.5 when they are
inoculated onto certain solid food sources. Appl. Environ. Microbiol. 64:38823886.
98. Wemekamp-Kamphuis, H.H., J.A. Wouters, P.P.L.A. de Leeuw, T. Hain, T.
Chakraborty, and T. Abee. 2004. Identification of sigma factor (5B-controlled
genes and their impact on acid stress, high hydrostatic pressure, and freeze survival
in Listeria monocytogenes EGD-e. Appl. Environ. Microbiol. 70:3457-3466.
99. Whitechurch, C.B., T. Tolker-Nielsen, P.C. Ragas, and J.S. Mattick. 2002.
Extracellular DNA required for bacterial biofilm formation. Science 295:1487
35
CAPITOLUL 2
TOXIINFECII ALIMENTARE PRODUSE
DE BACTERII DIN GENUL STAPHYLOCOCCUS
2.1. Staphylococcus aureus
Gastroenterita stafilococic este provocat de ingestia unor alimente,
care conin una sau mai multe enterotoxine, produse numai de unele specii
i tulpini stafilococice.
Dei producia de enterotoxine este considerat n general ca fiind
asociat cu tulpinile de Stp. aureus coagulaz i termonucleaz pozitive,
multe dintre speciile de stafilococi, care nu produc nici una dintre aceste
enzime produc enterotoxine.
Tabelul 2.1.
Familie
Micrococcaceae
Grupa cocilor
Gram pozitivi,
aerobi
Gen
Micrococcus
Specii
Mic. luteus, Mic. varians, Mic.
lylae, Mic. roseus
2.1.1. Istoric
Pentru prima dat stafilococii au fost observai de ctre Billroth (1874)
n colecii purulente umane i mai trziu izolai n culturi pure de Pasteur
(1880) i Rosenbach (1884), acesta din urm folosind primul termenul
de stafilococ. Studiul stafilococilor i a afeciunilor produse de acetia au
36
Fermentativ
+
Genul Micrococcus
Genul Staphylococcus
catalaza
Genul Streptococcus
G+C
anaerobius
TS
31,7
aureus
S. intermedius
+
+
TS
TS
+
+
+
+
+
(+)
32-36
32-36
S. hyicus
(+)
TS
33-34
S. delphini
+
+
+
39
S. schleiferi
subsp.
coagulans
+
TS
+
(+)
35-37
schleiferi
TS
+
37
S. caprae
TL
+
(+)
36,1
S. chromogens
-p
+
v
33-34
S. cohnii
+
v
36-38
S. epidermidis
+
v
30-37
S. haemolyticus
TL
+
+
v
34-36
S. lentus
+
+
30-36
S. saprophytics
+
+
31-36
S. sciuri
+
+
30-36
S. simulans
V
v
+
34-38
S. warneri
TL
+
-p
+
34-35
S. xylosus
+
+
v
30-36
Legend: + = pozitiv; - = negativ; -p = negativ spre slab pozitiv; (+) = reacie slab; v
= variabil; TS = termostabil; TL = termolabil.
D (C)
Tampon Veronal
Tampon Veronal
Tampon Veronal
Tampon Veronal
Tampon Veronal, pH 7,4
Bulion de carne, pH 7,4
Nucleaz
Legend: * toxin n stare pur;
99+% purificat
D110 = 29,7*
D110 = 23,5
D121 = 11,4*
D121 = 9,9
D110 = 18
D110 = 60
D110 = 16,5
Tabelul 2.4.
Valorile D i z pentru distrugerea termic a lui Stp. aureus 196E
Produse
D(F)
5,37
10,5
7,82
6,7-6,9
3,1-3,4
2,2-2,5
10,5
8,1
9,2
10,3
Carne fiart
2,2-2,6
10,5
5,34
4,11
6,71
15,08
4,27
4,20
Pui a la king
43
Produse
D(F)
z
-
Aspectul
Diametrul
coloniilor pe
coloniei
agar-snge
Stp. aureus
neted cremos
5-10 mm
Stp.
haemolyticus
neted cremos
3-5 mm
lucios,
cremos,
foarte convex
5-9 mm
Stp.
saprophyticus
Pigment
Aspectul coloniilor pe
mediu solid hiperclorurat
auriu/citrin
colonii galbene, manitol
fr pigment pozitive, nglbenesc mediul
colonii nepigmentate,
fr pigment
mediul rmne roz
pot fi
pigmentate
44
Stp. felis
Stp. gallinarum
Stp. epidermidis
Stp. intermedius
subsp.
chromogenes
subsp. hyicus
subsp.
anaerobius
Caractere
subsp. aureus
Tabelul 2.6
Caractere difereniale ale principalelor specii de stafilococi
(dup Catan Nicolae, 2001)
Stp. aureus
Stp. hyicus
Pigmentul (carotenoid) +s
+
d
Hemoliza
+
+
d
-s
s
-s
Coagulaza liber
+
+
d
+
Coagulaza legat
+
+
d
Fermentarea
+
d
d
+
d
manitolului
Fermentarea maltozei
(purple agar + 1%
+
+
d
(s)
+
+
maltoz)
Ureaz
+/ND
d
D
+
+
+
+
Producerea de acetoin +
+
Fosfataza alcalin
+
+
+
+
+
+
+
Fermentarea lactozei
+
+
+
d
d
d
+
Rezistena la
+
novobiocin
Hialuronidaza
+
+
ND
D
Legend: + = peste 90% tulpini pozitive; - = 90% tulpini negative; d = 1189% tulpini pozitive; s = reacie dubioas; -s = reacie slab negativ; +s = reacie slab
pozitiv; () = reacie tardiv; ND = termen nedeterminat; D = termen determinat.
46
muli productori de SEB dect orice alte tipuri. Variaii mari s-au constatat
printre tulpinile de Stp. aureus, izolate din alimente. Harvey i colab.
au observat c SED este asociat mai mult cu izolatele de la psrile de
curte dect cu cele umane. ntr-un alt studiu cercettorii au gsit specii
productoare de SED printre 55 de probe de la psri. Alt studiu prezint
c 2 din 3 izolate atipice de Stp. aureus care au produs o reacie lent, slab
pozitiv sau negativ la coagulaz i au fost negative pentru fermentarea
anaerob a manitolului au produs SED. Izolatele au provenit de la psrile
de curte.
Dintr-o varietate de alimente nigeriene s-au izolat 449 de tulpini de
Stp. aureus coagulaz pozitive, respectiv 57%, 15%, 6% i 5% fiind SEA,
SEB, SED i SEC.
Din laptele de oaie, SEA i SED au prezentat fiecare cte 35% din 124
de tulpini, incluznd 4 tulpini, coagulaz negative.
Din 48 de izolate din produsele lactate i 134 de izolate din produsele
de carne, 46%, respectiv 49% au fost enterotoxigene, iar din 80 de tulpini
provenite din epidemii de intoxicaii alimentare, 96% au produs SEA,
SEC.
ntr-un studiu al unor tulpini de Stp. aureus ce produc SEH, 10 din
21 de tulpini care au provocat vrsturi la maimue au produs SEH la
niveluri cuprinse ntre 13 i 230 ng per ml. Cnd un alt set de 20 de tulpini
productoare de SE a fost examinat, o tulpin de SEC a produs 142 ng/ml
de SEH, iar 2 tulpini de SED au produs 52, respectiv 164 ng/ml. Metoda
ELISA a fost aplicat pentru SEH, iar nivelul su minim de detectare a fost
de 2,5 ng/ml.
n ceea ce privete procentul de tulpini enterotoxigene, acesta a fost
foarte diferit, n funcie de sursa izolatelor. Numai 10% din 236 de izolate
din laptele crud au fost enterotoxigene, n timp ce 62,5% din 200 de izolate
alimentare au fost pozitive.
O epidemie de 50 de cazuri de intoxicaie alimentar stafilococic s-a
produs n Brazilia, iar vehiculul a fost brnza de Minos. Agentul etiologic
a fost o tulpin nucleaz termostabil, pozitiv de Stp. aureus i s-au gsit
SEA, SEB i SEC.
O alt epidemie cu 328 de victime a fost pus pe seama consumului de
lapte crud, iar agentul etiologic a fost o specie de stafilococ TN-az negativ,
alta dect Stp. aureus. Laptele a coninut SEC i SED i aproximativ 2x108
cfu/ml. Mastita bovin i cei care mnuiesc alimentele s-au dovedit a fi
sursele microorganismului cauzal.
ntr-un studiu al SEs provenind de la vaci cu mastit din Italia (1999),
din cele 2343 de probe, au fost identificate 160 de izolate de Stp. aureus.
48
Din cele 160 de izolate, 22 au produs SEs 7,5% fiind SED, 4,4% SEC i
19% SEC i SEA.
Din 504 alimente din bufetele examinate n Spania, 19 (3,8%) au fost
izolate SE pozitive, 10 fiind SEs, aparinnd SEC, 4 SED, 3 SEB i 2 SEA.
ncercrile de a asocia enterotoxigenicitatea cu alte proprieti biochimice
ale stafilococilor, cum ar fi producia de gelatinoliz, fosfataz, lizozim,
lecitinaz, lipaz i DN-az sau fermentaia a diferii hidrai de carbon au
euat. Tulpinile enterotoxigene par s fie aproximativ la fel ca alte tulpini,
n aceste privine.
ncercrile de a lega enterotoxigeneza cu diferite tipuri specifice
de bacteriofagi nu au fost ncununate de succes. Majoritatea tulpinilor
enterotoxigene aparin fagilor de grup III, dar se tie c toate grupele de fagi
conin tulpini toxigene.
2.1.7.1. Proprieti chimice i fizice ale enterotoxinelor stafilococice
Toate enterotoxinele stafilococice sunt proteine simple, de la care,
prin hidroliz s-au obinut 18 aminoacizi, cei mai des ntlnii fiind acidul
aspartic, glutamic, lizina i tirozina.
Secvena de aminoacizi din SEB, a fost determinat prima. Nul terminal al acestuia este acidul glutamic, iar lizina este aminoacidul
C terminal. SEA, SEB i SEE sunt compui din 239-296 de reziduuri de
aminoacizi. SEC 3 conine 236 de reziduuri de aminoacizi, N-terminal fiind
serina, n timp ce N-ul terminal de SEC 1 este acidul glutamic.
n strile lor activate, enterotoxinele sunt rezistente la enzimele
proteolitice, cum ar fi tripsina, chimotripsina, renina i papaina. La pepsin
sunt sensibile la un pH de aproximativ 2. TSST-1 este mult mai susceptibil
la pepsin dect SEs. Dei enterotoxinele difer n privina proprietilor
fizico-chimice, fiecare are aproximativ aceeai poten.
Dei activitile biologice i reactivitatea serologic sunt n general
asociate, s-a demonstrat c enterotoxina serologic negativ poate fi biologic
activ. Pe baza aminoacizilor SEA, SED, SEE i SEI, fac parte dintr-un
grup, n timp ce SEB, SECs i SEG, din altul. SECs sunt separate pe baza
unor epitopi minori.
Enterotoxinele sunt destul de termorezistente. Activitatea biologic
a SEB a fost limitat dup nclzirea la 60C, timp de 16 ore, la pH 7,3.
nclzirea unui preparat de SEC la 60C, 30 minunte, nu a avut drept urmare
nici o modificare a reaciilor serologice. nclzirea SEA la 80C, 3 minute sau
la 100C, pentru 1 minut a provocat pierderea capacitii sale de a reaciona
serologic. n ser fiziologic tamponat cu fosfat, s-a constatat c: SEC a fost
49
Enterotoxine
Nr. de
culturi
Procentaj
enterotoxic
Ref.
582
236
260
10
30
54,5
1,8
3,4
28,1
0,8
3,0
8,4
1,2
7,4
41,0
6,8
10,4
21
21
21
80
96,2
77,8
10,0
7,4
37,5
21
200
139
293
55
135
285
62,5
25,2
39
62
85,9
16,2
47,5
1,4
7,8
60,0
54,3
6,5
3,5
0
17,7
1,8
2,6
4,5
85
46
83
42
69
56
230
40,4
7,5
9,7
34,4
8,6
Tabelul 2.8.
Efectele pH-ului i ale NaCl n producerea de enterotoxin C, la un inocul de
108 celule/ml de Stp. aureus 137, ntr-un mediu de hidrolizat proteic, incubat la 37C,
8 zile
Valorile pH-ului
4,00-9,83 4,4-9,43 4,50-8,55 5,45-7,30 4,50-8,50
Coninutul n NaCl (%)
0
4
8
10*
12
Producia de enterotoxin
+
+
+
+
6
*enterotoxina a fost detectat i la un inocul de 3,6x10 la pH 6,38-7,3 (Genigeorgis
et al., 1971, American Society of Microbiology)
2.1.8. Ecologie
Un numr mare de investigatori au constatat incapacitatea speciei Stp.
aureus de a concura cu alte microorganisme, att n alimentele proaspete,
ct i n cele congelate.
La temperaturi care favorizeaz creterea stafilococilor, flora saprofit
din hrana normal, confer protecie mpotriva creterii stafilococilor prin
antagonism, prin competiie pentru nutrieni i prin modificarea mediului
nconjurtor, n condiii mai puin favorabile pentru Stp. aureus.
Bacteriile antagoniste, fa de Stp. aureus includ Acinetobacter,
Aeromonas, Bacillus, Pseudomonas, Stp. epidermidis, Enterobacter etc.
2.1.8.1. Habitat i distribuire
Speciile de stafilococi sunt adaptate gazdei, iar n jur de jumtate sunt
patogene pentru om (Stp. cohnii subsp. cohnii) sau pentru om i animale (Stp.
aureus). Numrul cel mai mare de germeni se gsete n apropierea orificiilor
de pe suprafaa corpului (nri, axil, regiunea ingvinal i perineal), care
se gsesc n habitate umede, iar numrul per centimetru ptrat poate atinge
ntre 103-106 germeni, n timp ce, n habitatele uscate, numrul de germeni
este ntre 10 i 103. Sursele de infecie cele mai importante sunt reprezentate
de purttorii nazali i persoanele care manipuleaz alimentele i ale cror
mini i brae prezint furunculi sau carbunculi.
Majoritatea animalelor domestice sunt gazde pentru Stp. aureus. Dac
laptele de la vacile cu mastit stafilococic este consumat sau folosit la
prepararea brnzei, ansele contactrii unei toxiinfecii alimentare sunt foarte
mari. Tulpinile de stafilococi izolate din laptele mastitic sunt considerate
de unii cercettori ca fiind de origine uman, totui ele sunt desemnate n
continuare, ca tulpini animale.
52
Doza
emetic
Greutate
molecular (Da)
Anul
izolrii
A
B
C1
C2
C3
D
E
G
H
I
5
5
5
5-10
<10
20
10-20
<30
slab
27,100
28,366
34,100
34,000
26,900
27,300
29,600
27,043
27,300
34,928
1960
1959
1967
1984
1984
1979
1971
1992
1995
1998
cromozom
SaPI
plasmid
cromozom
-
58
Enterotoxine
Doza
emetic
Greutate
molecular (Da)
Anul
izolrii
1998
K
26,000
2001
L
2001
SaPI = insula de patogenitate pentru Stp. aureus
SaPI
-
65
*** European Centre for Disease Prevention and Control. Annual Epidemiological
Report on Communicable Diseases in Europe 2008. Report on The State of
Communicable Diseases in The EU and EEA/EFTA Countries
Friedrich AW, Witte W, de Lencastre H, Hryniewicz W, Scheres J, Westh H, et
al. A European laboratory network for sequence-based typing of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus (MRSA) as a communication platform between human and
veterinary medicine an update on SeqNet.org. Euro Surveill. 2008;13(19):pii=18862.
*** EARSS. Interactive database access. http://www.rivm.nl/earss/database/
aerob al carbohidrailor.
Se poate realiza n mediul lichid sau pe mediu solid.
- testul n bulion nutritiv: se adaug la cultura de 18-24 de ore, n
bulion 1 ml soluie 3% H2O2.
- testul pe agar nutritiv: se ntinde 1 ml soluie H2O2 3% peste cultura
de 18-24 de ore a organismului testat cu tubul nclinat n mod adecvat.
Rezultatul reaciei:
Se observ imediat i dup 5 minute apariia bulelor de gaz. Viteza
descompunerii H2O2 crete o dat cu temperatura. Reaciile fals pozitive pot
fi datorate oxigenului dizolvat n reactiv. Inconvenientul poate fi evitat dac
se agit reactivul cu pipeta nainte de utilizare.
2. Utilizarea anaerob a glucozei
Se nsmneaz masiv fiecare tub cu mediu de fermentaie a
carbohidrailor ce conine glucoz 0,5%. Ca indicator se folosete albastrul
de bromtimol. Se acoper suprafaa mediului cu un strat de 25 mm de ulei
de parafin. Se incubeaz 5 zile la 37C.
Rezultatul reaciei:
Testul este pozitiv dac indicatorul i modific culoarea n galben i
negativ dac mediul rmne albastru.
3. Utilizarea anaerob a manitolului
Se repet procedura de mai sus folosind ca hidrat de carbon manitolul.
90% dintre tulpinile de Stp. aureus sunt pozitive la acest test. Concomitent
se folosesc martori pozitivi i negativi.
4. Sensibilitatea la lizostafin
Se transfer cu ansa de nsmnare o colonie izolat din placa cu agar
ntr-un ml de fosfat tampon salin i se omogenizeaz bine. Se adaug 25
nanograme/ml de lizostafin. Se incubeaz la 35C, maxim 2 ore, dac are
loc limpezirea mediului testul este considerat pozitiv. Majoritatea tulpinilor
de Stp. aureus sunt pozitive la acest test.
68
69
10 ml
10 ml
10 ml
Diluii seriate
n 90 ml
tampon fosfat
2. Diluarea
omogenatului de prob
alimentar
1: 100
1: 1000
3. Pipetarea
de 0,4; 0,3; 0,3 n plci
separate de agar BairdParker
4. Incubarea
la 35C, 45-48 de ore
5. Selectarea plcilor ce conin ntre 20-200 de colonii.
6. Numrarea coloniilor din fiecare tip morfologic suspicionate de a fi Stp. aureus; se testeaz > de o
colonie din fiecare tip pentru coagulaz; se adaug un numr de colonii pe un set de 3 plci Petri ce
dau testul coagulazei pozitiv i se multiplic factorul de diluie; aceast valoare se exprim ca fiind
numrul de celule de Stp. aureus per gram
70
Test
biochimic
Stp. aureus
Stp. epidermidis
Micrococi
Catalaz
Coagulaz
Termonucleaz
Lizostafin
Utilizarea
anaerob a:
glucozei
manitolului
+
+
+
-
71
Agar Columbia. Stp. aureus. Mediu nutritiv de baz mai complet dect agarul
nutritiv simplu, devine un excelent mediu selectiv cnd este adiionat i cu
substane inhibitorii; conine trei tipuri
de peptone, produse prin digestie i prin
infuzie, amidon clorur de sodiu i agar
72
Bibliografie
1. Adcock PM, Pastor P, Medley F, Patterson JE, Murphy TV. Methicillin-resistant
Staphylococcus aureus in two child care centers. J Infect Dis. 1998;178(2): 577580.
2. Bagger JP, Zindrou D, Taylor KM. Postoperative infection with methicillin-resistant Staphylococcus au-reus and socioeconomic background. Lancet. 2004;
363(9410):706-708.
3. Baggett HC, Hennessy TW, Rudolph K, et al. Community-onset methicillin-resistant Staphylococcus au-reus associated with antibiotic use and the cytotoxin
Panton-Valentine leukocidin during a furunculosis outbreak in rural Alaska. J Infect Dis. 2004;189(9):15651573.
4. Begier EM, Frenette K, Barrett NL, et al. A high-morbidity outbreak of methicillinresistant Staphylococcus aureus among players on a college football team, facilitated by cosmetic body shaving and turf burns. Clin Infect Dis. 2004;39(10):14461453.
5. Boyce JM. Methicillin-resistant Staphylococcus au-reus in hospitals and long-term
care facilities: microbiology, epidemiology, and preventive measures. Infect Control Hosp Epidemiol. 1992;13(12):725-737.
6. Centers for Disease Control and Prevention. Active Bacterial Core Surveillance:
methodologycase definition and ascertainment. http://www.cdc.gov /ncidod/
dbmd/abcs/meth-case.htm. Accessibility verified September 21, 2007.
7. Centers for Disease Control and Prevention. Four pediatric deaths from community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureusMinnesota and North
Dakota, 1997-1999. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 1999;48(32):707-710. http://
www.cdc.gov/mmwr /preview/mmwrhtml/mm4832a2.htm. Accessibility verified
September 25, 2007.
8. Centers for Disease Control and Prevention. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections among competitive sports participantsColorado, Indiana,
Pennsylvania, and Los Angeles County, 2000-2003. MMWR Morb Mortal Wkly
Rep. 2003;52(33):793
9. Centers for Disease Control and Prevention. Methicillin-resistant Staphylococcus
aureus infections in correctional facilitiesGeorgia, California, and Texas, 20012003. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2003; 52(41):992-996.
10. Centers for Disease Control and Prevention. Outbreaks of community-associated
methicillin-resistant Staphylococcus aureus skin infectionsLos Angeles County,
California, 2002-2003. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2003;52(5):88.
11. Centers for Disease Control and Prevention. Progress toward elimination of Haemophilus influenzae type b invasive disease among infants and children, United
73
24. Laupland KB, Church DL, Mucenski M, Sutherland LR, Davies HD. Populationbased study of the epidemiology of and the risk factors for invasive Staphylococcus aureus infections. J Infect Dis. 2003;187 (9):1452-1459.
25. Lina G, Pie dmont Y, Godal-Gamot F, et al. Involvement of Panton-Valentine
Leukocidin-producing Staphylococcus aureus in primary skin infections and pneumonia. Clin Infect Dis. 1999;29 (5):1128-1132.
26. Ma XX, Ito T, Tiensasitorn C, et al. Novel type of staphylococcal cassette chromosome mec identified in community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus
aureus strains. Antimicrob Agents Chemother. 2002;46(4):1147-1152.
27. McDougal LK, Steward CD, Killgore GE, Chaitram JM, McAllister SK, Tenover
FC. Pulsed-field gel electrophoresis typing of oxacillin-resistant Staphylococcus
aureus isolates from the United States: establishing a national database. J Clin
Microbiol. 2003; 41(11):5113-5120.
28. McDougal LK, Wenming Z, Patel JB, Tenover FC. Characterization of two new
community-associated oxacillin-resistant Staphylococcus aureus pulsed-field
types consisting of U.S. isolates that carry SCCmecIV and the Panton-Valentine
leukocidin gene [abstract]. Presented at: American Society for Microbiology 104th
General Meeting; May 23-27, 2004; New Orleans, LA.
29. Mokdad AH, Ford ES, Bowman BA, et al. Prevalence of obesity, diabetes, and
obesity-related health risk factors, 2001. JAMA. 2003;289(1):76-79.
30. Moran GJ, Krishnadasan A, Gorwitz RJ, et al. Methicillin-resistant S. aureus
infections among patients in the emergency department. N Engl J Med. 2006;
355(7):666-674.
31. Morin CA, Hadler JL. Population-based incidence and characteristics of community-onset Staphylococcus aureus infections with bacteremia in 4 metropolitan Connecticut areas, 1998. J Infect Dis. 2001; 184(8):1029-1034.
32. Muto CA, Jernigan JA, Ostrowsky BE, et al; SHEA. SHEA guideline for preventing nosocomial transmission of multidrug-resistant strains of Staphylococcus aureus and Enterococcus. Infect Control Hosp Epidemiol. 2003;24(5):362-386.
33. Naimi TS, LeDell KH, Como-Sabetti KM, et al. Comparison of community-and
health care associated methicillin-resistant Staphylococcus au-reus infection.
JAMA. 2003;290(22):2976-2984.
34. Rosenstein NEPB, Stephens DS, Popovic T, Hughes JM. Meningococcal disease.
N Engl J Med. 2001; 344(18):1378-1388.
35. Saravolatz LD, Markowitz N, Arking L, Pohlod D, Fisher E. Methicillin-resistant
Staphylococcus aureus: epidemiologic observations during a community-acquired
outbreak. Ann Intern Med. 1982;96(1): 11-16.
36. Schramm GE, Johnson JA, Doherty JA, Micek ST, Kollef MH. Increasing incidence of sterile-site infections due to non-multidrug-resistant, oxacillin-resistant
Staphylococcus aureus among hospitalized patients. Infect Control Hosp Epide75
77
CAPITOLUL 3
TOXIINFECII ALIMENTARE PRODUSE DE
BACTERII DIN GENUL BACILLUS
3.1. Bacillus anthracis
3.1.1. Taxonomie
Tabelul 3.1
Tip respirator
Familia
Genul
Specii
B. anthracis
Clostridium
Clostridiaceae
Bacili
Gram
pozitivi
sporogeni
Anaerobi
Aerobi
Tipul
Sp. cu patog.ridic.
Sp. ocazional patog.
C. tetani
C. botulinum
Sp toxigene
C. chauvoei
C. septicum
C. perfringens
C. novyi
C. colinum
C. piliforme
C. sordellii
C. difficile
C. villosum
C. baratii
3.1.2. Istoric
Nume comun: bacilul antraxului, agentul crbunelui, bacteridia
crbunoas
Studiul crbunelui, nume dat de Hippocrat, a preocupat muli medici
din cele mai vechi timpuri, datorit ravagiilor pe care aceast boal le
fcea printre erbivorele domestice. Un cadavru de animal mort de infecie
crbunoas, odat deschis, contamineaz solul i vegetalele cu miliarde de
bacili care, la aer se transform n spori, viabili zeci de ani. Erau vestite
cmpiile blestemate, pe care orice turm sau ciread erau rapid decimate,
contaminnd, i mai intens, solul respectiv. Izolarea bacteriei s-a realizat
concomitent n trei ri diferite, de ctre Rayer i Davaine n Frana,
Pollender n Germania i Branell n Rusia, n perioada 1849-1850. Robert
Koch a studiat procesul de sporogenez, iar Pasteur a preparat primul vaccin
anticrbunos prin cultivare la 42-45C.
La 21 mai 1881 a avut loc celebra experien public de la PouillyLe-Fort, cnd Pasteur i colaboratorii au vaccinat 24 de oi, o capr i 6 vaci,
animale care au supravieuit infeciei de prob cu bacteria virulent, n timp
ce acelai numr de martori nevaccinai au fcut infecia mortal.
n 1882, encovski prepar primul vaccin sporulat din lume, din
germeni atenuai prin cldur.
79
3.1.7. Ecologie
Bacilul antraxului se gsete n sol, sub form sporulat, fiind n
corelaie direct cu urmtorii factori de mediu: reacia alcalin sau neutr,
temperatura de 21-27C, umiditatea de 60% (Davies, 1960). De aceea,
incidena antraxului scade progresiv cu creterea latitudinii. La aceeai
latitudine, distribuia sporilor n sol este inegal, ceea ce determin caracterul
zonal al mbolnvirilor. Frecvena mai mare a cazurilor este n perioada
punatului. Insectele pot fi vectori ai germenului, n zonele cu clim cald
i umed.
3.1.8. Sensibilitatea fa de factorii de mediu
Bacilul antraxului este patogen obligatoriu, existena sa depinznd de
faza de multiplicare ntr-un animal gazd. De aceea, dezvoltarea microciclic
n mediu, este extrem de rar.
Forma vegetativ este surprinztor de fragil, n timp ce sporul poate
supravieui decenii (timpul ntre infectarea gazdelor receptive poate fi, de
asemenea, de ani sau decenii).
Formele vegetative sunt distruse n 30 de minute la 60C. Sporii mor
n 10 minute la fierbere, n 3 ore la 140C cldur uscat, n 60 de minute
n ap oxigenat 3%, n 15 minute n clorur de var 5%, formol 10%, sod
caustic 2-5%. Antibioticele cele mai active sunt penicilina, eritromicina,
teramicina, tetraciclinele, i cloramfenicolul. Fa de streptomicin,
majoritatea tulpinilor dau mutante rezistente. n prezena penicilinei, bacilii
se transform n forme sferoidale mari, care n lan dau aspectul unui irag
de perle (Perlschnurtest).
Din sol se izoleaz cu uurin bacteriofagi activi fa de Bacillus
anthracis, Bacillus cereus, Bacillus mycoides (fagi CAM).
3.1.9. Patogenitatea
Bacillus anthracis acioneaz prin virulen i toxicitate. Virulena este
dat de capsul i de toxina produs n timpul fazei de cretere exponenial.
Capsula reprezint un important factor antifagocitar care asigur nmulirea
excesiv a bacteriei n organismul infectat, fiind compus din polimeri
ai acidului D-glutamic, dar poate conine i polizaharide. Sinteza ei este
mediat de poliamide i stimulat de albumina seric bovin.
Virulena este asigurat i prin intermediul unor enzime ca: lecitinaza,
proteaza i colagenaza.
83
Rezistena mai mare la infecie a unor specii cum sunt cinele, porcul
i obolanul, se datoreaz unei enzime, gamma-glutamilaz, capabil s
degradeze capsula.
Toxina este format din trei proteine sinergice, dar separabile, produse
n faza logaritmic a creterii i denumite antigen protector (AP), factor
letal (FL) i factor edematogen (FE).
Administrarea intravenoas simultan a AP i a FL este letal pentru
oareci i obolani, n timp ce infectarea intradermic concomitent de AP
i de FE induce edem localizat la cobai sau iepuri.
Pe baza acestor considerente unii autori sunt de prere c AP+FL
reprezint toxina letal, iar AP+FE toxina edematogen ns n mod natural
cele trei fraciuni sunt produse ntotdeauna simultan.
FE este o metaloproteaz calciu i zinc dependent ce are capacitatea
de a produce modificri ale metabolismului apei i ionilor, aprnd astfel
edemul caracteristic n antrax. Rolul FE n infecie pare a fi acela de prevenire
a fagocitozei bacteriilor (PCB Turnbull, 2005).
Cauza major a decesului se pare c ar fi complexul FL+AP, care este
responsabil de producerea majoritii leziunilor tisulare.
Genele celor trei toxine (paf, leg, cya) sunt localizate ntr-o plasmid
de 119 Mda, fiind coordonate de cerinele de bicarbonat i temperatur.
Genele factorilor de virulen se afl n dou plasmide mari. Genele
celor trei toxine, sunt localizate n plasmida pX 01, iar cele implicate n
sinteza capsulei, n plasmida pX 02.
Pierderea uneia dintre cele dou plasmide (care implic pierderea
capacitii de a produce toxine sau capsul) induce pierderea virulenei.
Tulpinile pX 01 i pX 02 stau la baza vaccinurilor contra antraxului.
3.1.10. Infecia natural
Infecia natural se numete antrax, febris carbunculosa, charbon
bacteridien.
Antraxul este o infecie prin excelen septicemic, germenii
multiplicndu-se n snge, prin care sunt vehiculai n toate organele.
Evolueaz clinic cu febr, tulburri generale, circulatorii, respiratorii i
digestive. Morfopatologic se caracterizeaz prin edeme serohemoragice
n esutul conjunctiv subcutanat, hemoragii subseroase, aspectul asfixic al
sngelui, hipertrofia i ramolismentul pulpei splenice.
Este cunoscut i sub denumirea de dalac, bub neagr, crbune sau
pustul malign.
Poarta de intrare o constituie mucoasa bucofaringian lezat.
84
Cele mai multe cazuri au fost raportate de Spania dar numai dou au fost
confirmate i patru state (Bulgaria, Grecia, Romnia i Regatul Unit) au
raportat fiecare cte un caz.
Distribuia pe grupe de vrst i sex.
Nu au fost identificate diferene ale incidenei funcie de
sex (raportul brbat: femeie a fost de 1 la 1), cu raportarea tuturor
acestor cazuri la aduli, n principal la grupul de vrst 45-64 ani.
Sezonalitatea.
Majoritatea cazurilor au fost raportate n timpul lunilor de var, n iulie
(2 cazuri), august (1 caz) i septembrie (1 caz), iar celelalte cazuri au fost
raportate n ianuarie (date sezoniere au fost furnizate numai de Bulgaria,
Grecia, Spania i Regatul Unit).
3.1.11. Infecia experimental
Animalele de laborator sensibile sunt oarecele, cobaiul i iepurele.
Psrile pot fi infectate prin procedeul clasic, imaginat de Pasteur, prin
meninere n condiii de temperatur sczut. Cile de inoculare sunt multiple:
intradermic, subcutan, intramuscular, intraperitoneal, intravenoas.
Dac se inoculeaz intradermic un singur spor dintr-o tulpin virulent, se
poate reproduce infecia la oarece, care este specia cea mai sensibil.
3.1.12. Diagnosticul la om
n antraxul cutanat, poarta de intrare o constituie o leziune a pielii.
Dup 3-5 zile apare o mic vezicul, iar n urmtoarele 2-3 zile centrul
veziculei se ulcereaz i se transform ntr-o crust foarte aderent, uscat
i neagr nconjurat de un inel de vezicule, care reprezint escara specific
antraxului. Consecutiv leziunilor apare i edemul.
Diagnosticul antraxului cutanat se realizeaz prin efectuarea de frotiuri
colorate MFadyean i/sau prin cultura bacteriologic a probelor pretratate
de lichid vezicular, obinute de sub marginile escarei.
3.1.12.1. Diagnosticul diferenial
Se realizeaz n cazul furunculozei, ectimei contagioase, ancrului
sifilitic primar, erizipelului, pestei, morvei i ulcerului tropical.
n formele pulmonare i intestinale, boala se manifest printr-o faz
supraacut cu febr uoar, indispoziie i gastroenterit cu durata de la o
zi la cteva zile. n faza acut apar simptome severe de febr alternant cu
86
88
Testul
mobilitii.
Bacillus
anthracis dreapta
89
3.2.1. Introducere
dar nu pot fi detectate prin tehnici de colorare, dect dup liza sporangiului.
De aceea, dac nu se pot observa spori liberi, culturile se in la temperatura
camerei cteva zile n plus i se reexamineaz. De obicei, cristalele de toxin
proteic sunt produse de B. thuringiensis.
97
B.
cereus.
Coloraia
Gram. Metod indirect
de evideniere a sporului
care apare necolorat, oval
i deformeaz uor celula
vegetativ. Se remarc
prezena unei grupri n
lan.
B. cereus agar cu snge de oaie, hemoliz beta. Se remarc colonii mari, neuniforme,
opace de tip R (rough), lipsite de tenacitate, fiind nconjurate de o zon larg de beta
hemoliz. Se remarc aspectul caracteristic de picturi de cear.
100
Schema 3.2
Criterii biochimice de identificare a bacililor Gram pozitivi, sporogeni, aerobi
Fermentarea dextrozei
Acidifierea arabinozei
Negativ
Producerea de lecitinaz
Pozitiv
Negativ
B. cereus
B. anthracis
imobil, ureaz capsulat (in vivo)
nehemolitic
patogen: oarece, cobai
mobil
ureaz
hemolitic
nepatogen: oarece, cobai
101
Pozitiv
B. subtilis
B. megaterium
mobil
capete rotunjite
nehemolitic
lipsit de patogenitate
Bibliografie
1. Ariel, N., Zvi, A., Grosfeld, H., Gat, O., Inbar, Y., Velan, B., Cohen, S., Shafferman,
A. (2002). Search for Potential Vaccine Candidate Open Reading Frames in the
Bacillus anthracis Virulence Plasmid pXO1: In Silico and In Vitro Screening.
Infect. Immun. 70: 6817-6827
2. Ariel, N., Zvi, A., Makarova, K. S., Chitlaru, T., Elhanany, E., Velan, B., Cohen, S.,
Friedlander, A. M., Shafferman, A. (2003). Genome-Based Bioinformatic Selection
of Chromosomal Bacillus anthracis Putative Vaccine Candidates Coupled with
Proteomic Identification of Surface-Associated Antigens. Infect. Immun. 71: 45634579
3. Barlass, P. J., Houston, C. W., Clements, M. O., Moir, A. (2002). Germination of
Bacillus cereus spores in response to L-alanine and to inosine: the roles of gerL and
gerQ operons. Microbiology 148: 2089-2095
4. Barth, H., Aktories, K., Popoff, M. R., Stiles, B. G. (2004). Binary Bacterial Toxins:
Biochemistry, Biology, and Applications of Common Clostridium and Bacillus
Proteins. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 68: 373-402
5. Bavykin, S. G., Lysov, Y. P., Zakhariev, V., Kelly, J. J., Jackman, J., Stahl, D.
A., Cherni, A. (2004). Use of 16S rRNA, 23S rRNA, and gyrB Gene Sequence
Analysis To Determine Phylogenetic Relationships of Bacillus cereus Group
Microorganisms. J. Clin. Microbiol. 42: 3711-3730
6. Bell, C. A., Uhl, J. R., Hadfield, T. L., David, J. C., Meyer, R. F., Smith, T. F.,
Cockerill III, F. R. (2002). Detection of Bacillus anthracis DNA by LightCycler
PCR. J. Clin. Microbiol. 40: 2897-2902
7. Berger, B. J., English, S., Chan, G., Knodel, M. H. (2003). Methionine Regeneration
and Aminotransferases in Bacillus subtilis, Bacillus cereus, and Bacillus anthracis.
J. Bacteriol. 185: 2418-2431
8. Blackwood, K. S., Turenne, C. Y., Harmsen, D., Kabani, A. M. (2004). Reassessment
of Sequence-Based Targets for Identification of Bacillus Species. J. Clin. Microbiol.
42: 1626-1630
9. Bode, E., Hurtle, W., Norwood, D. (2004). Real-Time PCR Assay for a Unique
Chromosomal Sequence of Bacillus anthracis. J. Clin. Microbiol. 42: 5825-5831
10. Bouchek-Mechiche, K., Gardan, L., Andrivon, D., Normand, P. (2006).
Streptomyces turgidiscabies and Streptomyces reticuliscabiei: one genomic
species, two pathogenic groups. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 56: 2771-2776
11. Bourgogne, A., Drysdale, M., Hilsenbeck, S. G., Peterson, S. N., Koehler, T. M.
(2003). Global Effects of Virulence Gene Regulators in a Bacillus anthracis Strain
with Both Virulence Plasmids. Infect. Immun. 71: 2736-2743
12. Brillard, J., Lereclus, D. (2004). Comparison of cytotoxin cytK promoters from
Bacillus cereus strain ATCC 14579 and from a B. cereus food-poisoning strain.
102
Expression of Genes for Key Sigma Factors. Appl. Environ. Microbiol. 70: 25142519
26. DelVecchio, V. G., Connolly, J. P., Alefantis, T. G., Walz, A., Quan, M. A., Patra,
G., Ashton, J. M., Whittington, J. T., Chafin, R. D., Liang, X., Grewal, P., Khan, A.
S., Mujer, C. V. (2006). Proteomic Profiling and Identification of Immunodominant
Spore Antigens of Bacillus anthracis, Bacillus cereus, and Bacillus thuringiensis.
Appl. Environ. Microbiol. 72: 6355-6363
27. Demidova, T. N., Hamblin, M. R. (2005). Photodynamic Inactivation of Bacillus
Spores, Mediated by Phenothiazinium Dyes. Appl. Environ. Microbiol. 71: 69186925
28. Easterday, W. R., Van Ert, M. N., Simonson, T. S., Wagner, D. M., Kenefic, L. J.,
Allender, C. J., Keim, P. (2005). Use of Single Nucleotide Polymorphisms in the
plcR Gene for Specific Identification of Bacillus anthracis. J. Clin. Microbiol. 43:
1995-1997
29. Ehling-Schulz, M., Svensson, B., Guinebretiere, M.-H., Lindback, T., Andersson,
M., Schulz, A., Fricker, M., Christiansson, A., Granum, P. E., Martlbauer, E.,
Nguyen-The, C., Salkinoja-Salonen, M., Scherer, S. (2005). Emetic toxin formation
of Bacillus cereus is restricted to a single evolutionary lineage of closely related
strains. Microbiology 151: 183-197
30. Elzi, M. V., Mallard, K., Droz, S., Bodmer, T. (2005). Polyphasic Approach for
Identifying Bacillus spp.. J. Clin. Microbiol. 43: 1010-1010
31. Fedhila, S., Gohar, M., Slamti, L., Nel, P., Lereclus, D. (2003). The Bacillus
thuringiensis PlcR-Regulated Gene inhA2 Is Necessary, but Not Sufficient, for
Virulence. J. Bacteriol. 185: 2820-2825
32. Fedhila, S., Msadek, T., Nel, P., Lereclus, D. (2002). Distinct clpP Genes Control
Specific Adaptive Responses in Bacillus thuringiensis. J. Bacteriol. 184: 55545562
33. Ghelardi, E., Celandroni, F., Salvetti, S., Beecher, D. J., Gominet, M., Lereclus,
D., Wong, A. C. L., Senesi, S. (2002). Requirement of flhA for Swarming
Differentiation, Flagellin Export, and Secretion of Virulence-Associated Proteins
in Bacillus thuringiensis. J. Bacteriol. 184: 6424-6433
34. Gomes-Solecki, M. J. C., Savitt, A. G., Rowehl, R., Glass, J. D., Bliska, J. B.,
Dattwyler, R. J. (2005). LcrV Capture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for
Detection of Yersinia pestis from Human Samples. CVI 12: 339-346
35. Grass, G., Schierhorn, A., Sorkau, E., Muller, H., Rucknagel, P., Nies, D. H.,
Fricke, B. (2004). Camelysin Is a Novel Surface Metalloproteinase from Bacillus
cereus. Infect. Immun. 72: 219-228
36. Han, C. S., Xie, G., Challacombe, J. F., Altherr, M. R., Bhotika, S. S., Bruce, D.,
Campbell, C. S., Campbell, M. L., Chen, J., Chertkov, O., Cleland, C., Dimitrijevic,
M., Doggett, N. A., Fawcett, J. J., Glavina, T., Goodwin, L. A., Hill, K. K., Hitchcock,
104
37.
38.
39.
40.
41.
42.
43.
44.
45.
P., Jackson, P. J., Keim, P., Kewalramani, A. R., Longmire, J., Lucas, S., Malfatti,
S., McMurry, K., Meincke, L. J., Misra, M., Moseman, B. L., Mundt, M., Munk, A.
C., Okinaka, R. T., Parson-Quintana, B., Reilly, L. P., Richardson, P., Robinson, D.
L., Rubin, E., Saunders, E., Tapia, R., Tesmer, J. G., Thayer, N., Thompson, L. S.,
Tice, H., Ticknor, L. O., Wills, P. L., Brettin, T. S., Gilna, P. (2006). Pathogenomic
Sequence Analysis of Bacillus cereus and Bacillus thuringiensis Isolates Closely
Related to Bacillus anthracis. J. Bacteriol. 188: 3382-3390
Hao, W., Golding, G. B. (2004). Patterns of Bacterial Gene Movement. Mol Biol
Evol 21: 1294-1307
Hao, W., Golding, G. B. (2006). The fate of laterally transferred genes: Life in the
fast lane to adaptation or death.. Genome Res 16: 636-643
Harvie, D. R., Vilchez, S., Steggles, J. R., Ellar, D. J. (2005). Bacillus cereus Fur
regulates iron metabolism and is required for full virulence. Microbiology 151:
569-577
Hathout, Y., Setlow, B., Cabrera-Martinez, R.-M., Fenselau, C., Setlow, P. (2003).
Small, Acid-Soluble Proteins as Biomarkers in Mass Spectrometry Analysis of
Bacillus Spores. Appl. Environ. Microbiol. 69: 1100-1107
Helgason, E., Cer, R. Z., Jiang, L., Shores, K. A., Fouts, D. E., Tourasse, N. J.,
Angiuoli, S. V., Kolonay, J., Nelson, W. C., Kolsto, A.-B., Fraser, C. M., Read, T.
D. (2004). The genome sequence of Bacillus cereus ATCC 10987 reveals metabolic
adaptations and a large plasmid related to Bacillus anthracis pXO1. Nucleic Acids
Res 32: 977-988
Helgason, E., Tourasse, N. J., Meisal, R., Caugant, D. A., Kolsto, A.-B. (2004).
Multilocus Sequence Typing Scheme for Bacteria of the Bacillus cereus Group.
Appl. Environ. Microbiol. 70: 191-201
Hill, K. K., Ticknor, L. O., Okinaka, R. T., Asay, M., Blair, H., Bliss, K. A., Laker,
M., Pardington, P. E., Richardson, A. P., Tonks, M., Beecher, D. J., Kemp, J. D.,
Kolsto, A.-B., Wong, A. C. L., Keim, P., Jackson, P. J. (2004). Fluorescent Amplified
Fragment Length Polymorphism Analysis of Bacillus anthracis, Bacillus cereus,
and Bacillus thuringiensis Isolates. Appl. Environ. Microbiol. 70: 1068-1080
Hoffmaster, A. R., Hill, K. K., Gee, J. E., Marston, C. K., De, B. K., Popovic,
T., Sue, D., Wilkins, P. P., Avashia, S. B., Drumgoole, R., Helma, C. H., Ticknor,
L. O., Okinaka, R. T., Jackson, P. J. (2006). Characterization of Bacillus cereus
Isolates Associated with Fatal Pneumonias: Strains Are Closely Related to Bacillus
anthracis and Harbor B. anthracis Virulence Genes.. J. Clin. Microbiol. 44: 33523360
Hoffmaster, A. R., Ravel, J., Rasko, D. A., Chapman, G. D., Chute, M. D., Marston,
C. K., De, B. K., Sacchi, C. T., Fitzgerald, C., Mayer, L. W., Maiden, M. C. J.,
Priest, F. G., Barker, M., Jiang, L., Cer, R. Z., Rilstone, J., Peterson, S. N., Weyant,
R. S., Galloway, D. R., Read, T. D., Popovic, T., Fraser, C. M. (2004). Identification
105
57. Ko, K. S., Kim, J.-W., Kim, J.-M., Kim, W., Chung, S.-i., Kim, I. J., Kook, Y.-H.
(2004). Population Structure of the Bacillus cereus Group as Determined by
Sequence Analysis of Six Housekeeping Genes and the plcR Gene. Infect. Immun.
72: 5253-5261
58. Kristoffersen, S. M., Ravnum, S., Tourasse, N. J., Okstad, O. A., Kolsto, A.-B.,
Davies, W. (2007). Low Concentrations of Bile Salts Induce Stress Responses and
Reduce Motility in Bacillus cereus ATCC 14570. J. Bacteriol. 189: 5302-5313
59. Lee, S. J., Park, S.-Y., Lee, J.-J., Yum, D.-Y., Koo, B.-T., Lee, J.-K. (2002). Genes
Encoding the N-Acyl Homoserine Lactone-Degrading Enzyme Are Widespread in
Many Subspecies of Bacillus thuringiensis. Appl. Environ. Microbiol. 68: 39193924
60. Leoff, C., Choudhury, B., Saile, E., Quinn, C. P., Carlson, R. W., Kannenberg,
E. L. (2008). Structural Elucidation of the Nonclassical Secondary Cell Wall
Polysaccharide from Bacillus cereus ATCC 10987: COMPARISON WITH THE
POLYSACCHARIDES FROM BACILLUS ANTHRACIS AND B. CEREUS
TYPE STRAIN ATCC 14579 REVEALS BOTH UNIQUE AND COMMON
STRUCTURAL FEATURES. J. Biol. Chem. 283: 29812-29821
61. Liang, L., He, X., Liu, G., Tan, H. (2008). The role of a purine-specific nucleoside
hydrolase in spore germination of Bacillus thuringiensis. Microbiology 154: 13331340
62. Mukhopadhyay, S., Akmal, A., Stewart, A. C., Hsia, R.-c., Read, T. D. (2009).
Identification of Bacillus anthracis Spore Component Antigens Conserved across
Diverse Bacillus cereus sensu lato Strains. Mol. Cell. Proteomics 8: 1174-1191
63. Oggioni, M. R., Meacci, F., Carattoli, A., Ciervo, A., Orru, G., Cassone, A., Pozzi,
G. (2002). Protocol for Real-Time PCR Identification of Anthrax Spores from
Nasal Swabs after Broth Enrichment. J. Clin. Microbiol. 40: 3956-3963
64. Okstad, O. A., Tourasse, N. J., Stabell, F. B., Sundfaer, C. K., Egge-Jacobsen, W.,
Risoen, P. A., Read, T. D., Kolsto, A.-B. (2004). The bcr1 DNA Repeat Element Is
Specific to the Bacillus cereus Group and Exhibits Mobile Element Characteristics.
J. Bacteriol. 186: 7714-7725
65. Pannucci, J., Okinaka, R. T., Sabin, R., Kuske, C. R. (2002). Bacillus anthracis
pXO1 Plasmid Sequence Conservation among Closely Related Bacterial Species.
J. Bacteriol. 184: 134-141
66. Pomerantsev, A. P., Kalnin, K. V., Osorio, M., Leppla, S. H. (2003).
Phosphatidylcholine-Specific Phospholipase C and Sphingomyelinase Activities
in Bacteria of the Bacillus cereus Group. Infect. Immun. 71: 6591-6606
67. Priest, F. G., Barker, M., Baillie, L. W. J., Holmes, E. C., Maiden, M. C. J. (2004).
Population Structure and Evolution of the Bacillus cereus Group. J. Bacteriol. 186:
7959-7970
68. Radnedge, L., Agron, P. G., Hill, K. K., Jackson, P. J., Ticknor, L. O., Keim, P.,
107
69.
70.
71.
72.
73.
74.
75.
76.
77.
78.
79.
80.
81.
82.
83.
84.
85.
86.
87.
88.
89.
110
CAPITOLUL 4
TOXIINFECII ALIMENTARE PRODUSE DE
BACTERIILE DIN GENUL CLOSTRIDIUM
4.1. Clostridium botulinum
4.1.1. Taxonomie
Genul Clostridium (gr. closter = fus) face parte din familia
Clostridiaceae, Ordinul Clostridiales, Clasa Clostridia.
Cuprinde peste 180 de specii, Gram pozitive, n general mobile, cu
flageli dispui peritrih; dimensiuni de 0,2-2/1,5-3,5 . Produce endospori
ovali sau sferici care, uzual, deformeaz celula i sunt termorezisteni. Sunt
catalaz i oxidaz negativi. Unele specii atac zaharurile fermentativ, altele
sunt azaharolitice. Sunt strict anaerobi i rar aerotolerani. Se dezvolt n
limite largi de temperatur (15-69C) i pH (4-10).
Sunt prezeni n intestinul vertebratelor i nevertebratelor, unde
particip la digestia (descompunerea) materiilor organice de origine animal
i vegetal. Odat cu materiile fecale ajung n mediul ambiant contaminnd
solul, apele i plantele, unde supravieuiesc mult datorit sporilor.
Genul Clostridium cuprinde specii patogene i nepatogene. n funcie
de patogenitatea lor, pot fi mprite n:
specii predominant sau exclusiv toxigene;
specii toxigene i virulente (germenii gangrenei gazoase);
specii accidental patogene;
specii nepatogene;
111
Tabelul 4.1
Clasificarea speciilor din genul Clostridium
Specia bacterian
Om, mamifere
Om, mamifere, psri
Infecia natural
Clostridioze neurotoxice
Tetanos
Botulism (tipurile A-F)
Rumegtoare, suine
Rumegtoare, mai rar suine
Ovine
Gin, pui
Ovine
Rumegtoare
Ovine, mai rar bovine
Bubaline, mai rar taurine
Om, animale
Om
Mamifere, psri
Roztoare, carnivore
Crbune emfizematos
Edem malign
Bradsot
Dermatita gangrenoas
Edemul capului la berbeci
Gangren gazoas
Hepatita necrozant
Osteomielit
Gangren gazoas
Toxiinfecii alimentare
Enterotoxiemii
Boala lui Tyzzer
C. difficile
Enterotoxiemie
Enterotoxiemie
Enterit mucoid
Enterocolit
Enterocolit indus de
antibiotice
Enterocolit neindus de
antibiotice
4.1.2. Istoric
Pasteur, n anul 1861, pune prima dat n eviden, n cursul cercetrilor
asupra fermentaiei acide a untului, o bacterie anaerob pe care o denumete
Vibrio butyricum, ulterior Clostridium butyricum. Pasteur arat c aceast
bacterie nu numai c triete fr aer, dar aerul o omoar....
112
Tabel 4.2.
Caractere microscopice i culturale ale speciilor din genul Clostridium
(dup Macovei Alexandra, 1999)
Specia
Zona de
Sporula Corpul bacterian hemoliz
C. paraputrificum
OT
umflat,
0,5-1,9/1,6-10,2
m
neumflat,
0,6-1,9/1,6-11 m
umflat,
0,6-1,4/3,0-20,2
m
neumflat,
0,5-1,7/2,4-7,6 m
umflat,
0,3-1,3/1,4-9,4 m
umflat,
0,3-0,9/1,4-9,0 m
umflat,
0,5-1,9/3,0-16,9
m
umflat,
0,5-0,9/1,3-9,2 m
umflat,
0,4-1,6/1,6-9,4 m
umflat,
0,6-1,4/1,6-17 m
umflat,
0,5-1,4/1,9-17 m
C. perfringens
Osc
umflat,
0,6-2,4/1,3-19 m
dubl
C. ramosum
R/OT
C. septicum
OS
C. sordelii
OC/S
C. baratii
R-O
S-T
C. bifermentans
OC/S
C. botulinum
OC/S
C. butyricum
OC
C. cadaveris
OT
C. clostridiiforme
OC/Sc
C. difficile
OS
C. histolyticum
OS
C. inocuum
OT/S
C. novyi
OC/S
C. sporogenes
OS
umflat,
0,5-0,9/2-12,8 m
umflat,
0,6-1,9/1,9-35 m
puin umflat,
0,5-1,7/1,6-20,6
m
umflat,
0,3-1,4/1,3-16 m
C. subterminale
OS
umflat,
0,5-1,9/1,6-11 m
114
Aspectul coloniilor pe
agar-snge
unic
rotunde/neregulate,
turtite, uor convexe, translucid
opace
unic
unic
unic
unic
unic
rotunde/neregulate, turtite,
cenuii, transparente-opace
unic
-b
unic
unic
-
unic
Specia
Zona de
Sporula Corpul bacterian hemoliz
Aspectul coloniilor pe
agar-snge
C. tertium
OT
umflat,
0,5-1,4/1,5-10,2
m
unic
C. tetani
RT
umflat,
0,5-1,7/2,1-18,1
m
unic
C. tetani
C. botulinum I
C. botulinum II
C. botulinum III
C. botulinum IV
C. chauvoei
C. septicum
C. novyi A
C. novyi B
C. novyi C
C. haemolyticum
C. sordellii
C. colinum
C. perfringens
C. difficile
cel mai toxigen este tipul A, toxina avnd o capacitate mare de fixare pe
esuturi.
Toxina botulinic, mpreun cu tetanospasmina sunt considerate cele
mai puternice toxine din natur: s-a stabilit c un miligram conine 1.200.000
DLM/kg corp cobai, fiind capabil s omoare 1.200 de tone sau 2 milioane
de oareci; 198,422 g toxin ar fi suficiente pentru a distruge viaa pe toat
suprafaa globului.
Toxina se absoarbe pe cale digestiv, odat cu furajele sau cu apa
contaminate ca i proteinele din ingest[, avnd un neurotropism exclusiv.
Ea blocheaz transmiterea influxului nervos n fibrele nervoase colinergice,
prin inhibarea eliberrii de acetilcolin la nivelul plcilor neuromusculare
ale nervilor motori, rezultnd paralizia de tip flasc, activitate similar cu
a curarei, fr a fi identic. Toxina botulinic inhib activitatea toxinei
tetanice.
Sub aciunea formolului i a cldurii, se transform n anatoxin care
este un vaccin ideal fr ns s aib aplicaii practice datorit caracterului
accidental al acestei intoxicaii.
4.1.9. Sensibilitatea fa de factorii de mediu
Formele vegetative nu au o rezisten deosebit la factorii de mediu.
Dezvoltarea lor este inhibat de aciditate (3-4), nitrit de sodiu 1%,
clorur de sodiu, fum, condimente.
Sporii prezint cea mai mare rezisten la aciunea cldurii dintre
germenii anaerobi patogeni: 6 ore la 100 C, 2 ore la 105C i 20 de minute
la 120C. Termorezistena sporilor crete dac n mediile de cultur se
gsesc cantiti mari de zahr, ioni de calciu, magneziu, fier etc., precum
i albu de ou i lipide. Sporii tineri sunt mai rezisteni, iar pH-ul sub 5 i
peste 9 i sensibilizeaz. Formolul 10% la 20C i distruge ntr-o or. Razele
gamma asociate cu razele ultraviolete prezint un efect sporicid foarte
intens, asigurnd cea mai eficient metod de sterilizare a conservelor i
semiconservelor.
Toxina botulinic este sensibil la aciunea cldurii, fiind inactivat la
80C n 5-60 minute n funcie de tulpin.
Este inactivat de lumina direct n cteva zile, n schimb ntunericul
i temperatura de 4C o conserv mai multe luni.
Din conserve alimentare este distrus prin fierbere n 20 de minute, iar
din carne, pete, furaje dup 2 ore.
Soluia Lgol, permanganatul de potasiu 0,1% i alcoolul o inactiveaz
rapid, acesta din urm, administrat per os, dup ingerarea de toxin previne
119
intoxicaia.
n scopul inactivrii toxinei, apa potabil trebuie tratat cu 10 ppm
clor rezidual, timp de o or. Filtrarea i purificarea apei ndeprteaz o mare
parte de toxin.
4.1.10. Intoxicaia botulinic
Este o infecie rar care se produce la om i animale, consecutiv
consumului de alimente, respectiv furaje care conin toxin.
Acestea sunt reprezentate cel mai adesea de conserve, mezeluri nchise
n membrane, furaje nsilozate. Se spune c boala a fost inventat odat
cu metodele de conservare.
n toate tipurile de botulism, perioada de incubaie, evoluia bolii i
letalitatea sunt n raport direct cu cantitatea i tipul de toxin ingerat. Ingestia
de doze mortale determin simptome n 12-36 ore; letalitatea n infecia
netratat atinge 60-80%. Botulismul la animale are un caracter sporadic
sau zonal, cel mai frecvent fiind afectate solipedele, apoi rumegtoarele,
urmate de suine i carnasiere. Dintre animalele de blan cea mai sensibil
este nurca, iar dintre psri, raa (mai ales raa slbatic, cotat drept animal
santinel pentru o zon cu mai multe specii).
n funcie de specia afectat i tipul de toxin, apar predominant
modificri funcionale ale diferitelor grupe musculare cum sunt: tulburri de
vedere, disfagie, dizartrie, uscciunea gurii i vlului palatin la om, paralizia
limbii i faringelui la bovine, a aripilor, picioarelor i gtului la psri, ale
membrelor posterioare la nurc, iar la cabaline, pareze i paralizii ale ntregii
musculaturi. Procesele mintale sunt pstrate, iar febra lipsete. Moartea
survine prin paralizia muchilor respiratori, pneumonie, bronhopneumonii
secundare prin implicarea muchiului respirator.
La cabaline, psri i om, prin ingerarea sporilor, acetia germineaz
la nivelul tubului digestiv i elibereaz toxina determinnd botulismul la
mnji, pui broiler i nou-nscui. La copiii sugari, botulismul poate aprea
prin consum de miere contaminat cu spori.
4.1.11. Situaia epidemiologic a botulismului
n anul 2006 au fost raportate n total 157 cazuri (din care s-au confirmat
109) de ctre 26 state membre ale UE, Islanda i Norvegha (Finlanda
i Liechtenstein nu au raportat). n anul 2005 a fost raportat un numr
aproximativ egal: 152 cazuri raportate de 22 state. Numai 4 state au raportat
10 sau mai multe cazuri: Polonia (22), Romnia (14), Italia (12) i Regatul
120
Unit (10). Bulgaria a raportat cel mai mare procent de notificare (0,10 la
100.000), n timp ce rata medie a notificrii a fost de 0,024 la 100000.
Distribuia pe grupe de vrst i sex. Date privind distribuia pe
grupe de vrst i sex au fost furnizate de 26 state. Din 104 cazuri la care s-a
cunoscut vrsta, 39 cazuri au fost n grupul de vrst 25-44 ani, 25 cazuri n
grupul de vrst 45-64 ani i 24 cazuri n grupul de vrst 15-24 ani. Rata
cea mai ridicat a notificrii (0,04 cazuri la 100.000) a fost la grupul de
vrst 15-24 ani.
Date referitoare la sexul pacienilor au fost la 98 de cazuri. A fost
raportat un numr mai mare de cazuri la brbai (63) dect la femei (35), cu
un raport pe sexe de 1,8 brbai la o femeie.
Distribuia pe grupe de vrst a cazurilor de botulism uman n EU i EEA/EFTA
n 2006 (n=104 cazuri) (Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor,
2008)
121
27 probe
15 probe de ser 7 pozitive: - 2 tip B - 5 ser insufucient pentru
determinarea tipului de toxina
12 probe alimentare, 1 pozitiva, tip B
Nr.
crt.
Proba
Rezultat
Ser pacient
Ser pacient
Ser pacient
Ser pacient
Ser pacient
Ser pacient
Ser pacient
Ser pacient
Ser pacient
10
Ser pacient
Prezenta tip B
11
Prezenta tip B
12
Ser pacient
13
Ser pacient
14
122
15
16
17
18
Ser pacient
19
Aliment Zacusca
20
Aliment Peste
21
Aliment Peste
22
Prezenta tip B
23
24
25
26
27
Ser pacient
2004
18 probe
17 probe de ser 8 pozitive: - 2 tip B, - 6 ser insufucient
pentru determinarea tipului de toxina
1 proba alimentara, negativa
Nr. Crt.
Proba
Rezultat
1.
Ser pacient
2.
Ser pacient
3.
Ser pacient
4.
Ser pacient
Prezenta tip B
5.
Ser pacient
Prezenta tip B
6.
Ser pacient
7.
Ser pacient
8.
Ser pacient
9.
Ser pacient
10.
Ser pacient
11.
Ser pacient
12.
Ser pacient
13.
Aliment Crnai
14.
Ser pacient
15.
Ser pacient
16.
Ser pacient
17.
Ser pacient
18.
Ser pacient
2005
25 probe
20 ser 12 pozitive: - 5 tip B, - 7 ser insufucient pentru determinarea
tipului de toxina
1 proba alimentara, negativa
Nr. Crt.
Proba
Rezultat
1.
Ser pacient
2.
Ser pacient
Prezenta tip B
3.
Ser pacient
Prezenta tip B
4.
Ser pacient
5.
Ser pacient
6.
Ser pacient
7.
Ser pacient
8.
Ser pacient
9.
Ser pacient
10.
Ser pacient
Prezenta tip B
11.
Ser pacient
12.
Ser pacient
13.
Ser pacient
14.
Ser pacient
15.
Ser pacient
16.
Ser pacient
17.
Ser pacient
18.
Ser pacient
Prezenta tip B
19.
Ser pacient
Prezenta tip B
20.
Ser pacient
21.
Proba alimentara
22.
Ser pacient
23.
Ser pacient
24.
Ser pacient
25.
Ser pacient
2006
26 probe
26 ser 9 pozitive: - 7 tip B, - 2 ser insufucient pentru determinarea
tipului de toxina
Nr. Crt.
Proba
Rezultat
1.
Ser pacient
Prezenta tip B
2.
Ser pacient
3.
Ser pacient
4.
Ser pacient
5.
Ser pacient
6.
Ser pacient
7.
Ser pacient
8.
Ser pacient
Prezenta tip B
9.
Ser pacient
10.
Ser pacient
Prezenta tip B
11.
Ser pacient
Prezenta tip B
12.
Ser pacient
13.
Ser pacient
Prezenta tip B
14.
Ser pacient
15.
Ser pacient
Prezenta tip B
16.
Ser pacient
17.
Ser pacient
18.
Ser pacient
Prezenta tip B
19.
Ser pacient
20.
Ser pacient
21.
Ser pacient
22.
Ser pacient
23.
Ser pacient
24.
Ser pacient
25.
Ser pacient
26
Ser pacient
2007
110 probe
61 ser - 35 pozitive: - 1 tipE,
- 24 tip B,
- 11 - ser insufucient pentru determinarea tipului de
toxina
49 probe alimentare, 2 pozitive, tip B
Nr.
Crt.
Proba
Rezultat
1.
Ser pacient
2.
Ser pacient
3.
Ser pacient
Prezenta tip B
4.
Prezenta tip B
5.
Ser pacient
6.
Ser pacient
7.
Ser pacient
8.
Ser pacient
9.
Ser pacient
10.
Ser pacient
11.
Ser pacient
12.
Ser pacient
Prezenta tip B
13.
Ser pacient
14.
Ser pacient
Prezenta tip B
15.
Ser pacient
Prezenta tip B
16.
Ser pacient
Prezenta tip E
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
Ser pacient
28.
Ser pacient
29.
Ser pacient
Prezenta tip B
30.
Aliment Macrou
31.
Prezenta tip B
32.
33.
Aliment Inghetata
34.
Aliment Sorici
35.
Aliment Macrou
36.
Ser pacient
37.
Ser pacient
Prezenta tip B
38.
Ser pacient
39.
Ser pacient
40.
Ser pacient
Prezenta tip B
41.
Aliment Macrou
42.
Aliment Macrou
43.
Ser pacient
Prezenta tip B
44.
Ser pacient
Prezenta tip B
45.
Ser pacient
46.
Ser pacient
47.
Ser pacient
Prezenta tip B
48.
Ser pacient
Prezenta tip B
49.
Ser pacient
Prezenta tip B
50.
51.
52.
Aliment Parizer
53.
54.
55.
Aliment Parizer
56.
Ser pacient
57.
Ser pacient
58.
Ser pacient
59.
Ser pacient
60.
Ser pacient
Prezenta tip B
61.
Ser pacient
Prezenta tip B
62.
Ser pacient
Prezenta tip B
63.
Ser pacient
64.
Ser pacient
65.
Ser pacient
Prezenta tip B
66.
Ser pacient
67.
Ser pacient
68.
Ser pacient
Prezenta tip B
69.
Ser pacient
70.
Ser pacient
71.
Ser pacient
Prezenta tip B
72.
Ser pacient
Prezenta tip B
73.
Ser pacient
74.
Ser pacient
75.
Ser pacient
76.
Ser pacient
77.
Ser pacient
78.
Ser pacient
79.
Ser pacient
80.
Ser pacient
Prezenta tip B
81.
Ser pacient
Prezenta tip B
82.
Ser pacient
83.
Ser pacient
84.
Ser pacient
85.
Ser pacient
86.
Ser pacient
Prezenta tip B
87.
Ser pacient
88.
Ser pacient
89.
Ser pacient
90.
Ser pacient
91.
Ser pacient
92.
Ser pacient
93.
Ser pacient
94.
95.
96.
97.
98.
99.
100.
Ser pacient
101.
Ser pacient
102.
Ser pacient
103.
Ser pacient
104.
Ser pacient
105.
Ser pacient
Prezenta tip B
106.
Ser pacient
107.
Ser pacient
108.
Ser pacient
109.
Ser pacient
110.
Ser pacient
Prezenta tip B
2008
Pn la data de 21. 07.2008:
38 probe:
32 probe ser 19 pozitive: 15 tip B, 4 ser insuficient pentru
determinarea tipului de toxina
6 probe alimentare - 1 pozitiva, tip B, 2 in lucru
Nr.
Crt.
Proba
Rezultat
1.
Ser pacient
2.
Ser pacient
3.
Ser pacient
Prezenta tip B
4.
Ser pacient
5.
Ser pacient
6.
Ser pacient
Prezenta tip B
7.
Ser pacient
Prezenta tip B
8.
Ser pacient
9.
Ser pacient
10.
Ser pacient
Prezenta tip B
11.
Ser pacient
Prezenta tip B
12.
Ser pacient
13.
Ser pacient
14.
Ser pacient
15.
Ser pacient
16.
Ser pacient
Prezenta tip B
17.
Prezenta tip B
18.
19.
20.
21.
Ser pacient
Prezenta tip B
22.
Ser pacient
Prezenta tip B
23.
Ser pacient
Prezenta tip B
24.
Ser pacient
25.
Ser pacient
Prezenta tip B
26.
Ser pacient
Prezenta tip B
27.
Ser pacient
28.
Ser pacient
29.
Ser pacient
30.
Ser pacient
Prezenta tip B
31.
Ser pacient
32.
Ser pacient
33.
Ser pacient
34.
Ser pacient
35.
Ser pacient
Prezenta tip B
36.
Ser pacient
Prezenta tip B
131
37.
Aliment Conserva
SARDINELLA IN ULEI,
SKL CAN PROD, Thailanda
38.
Aliment Conserva
SARDINELLA IN ULEI,
SKL CAN PROD, Thailanda
39.
Aliment Conserva
SARDINELLA IN ULEI,
SKL CAN PROD, Thailanda
40.
Ser pacient
41.
Ser pacient
Prezenta tip B
42.
Ser pacient
43.
Ser pacient
Prezenta tip B
44.
Ser pacient
45.
Ser pacient
Prezenta tip B
46.
Ser pacient
Prezenta tip B
47.
Ser pacient
48.
Ser pacient
49.
Ser pacient
50.
Ser pacient
51.
Ser pacient
52.
Ser pacient
53.
Ser pacient
54.
Ser pacient
55.
Ser pacient
2009
Pn la data de 11. 02.2009:
9 probe ser
Nr. Crt.
Proba
Rezultat
1.
Ser pacient
Prezenta tip B
2.
Ser pacient
3.
Ser pacient
4.
Ser pacient
Prezenta tip B
5.
Ser pacient
Prezenta tip B
6.
Ser pacient
Prezenta tip B
7.
Ser pacient
In lucru
8.
Ser pacient
In lucru
9.
Ser pacient
In lucru
10.
In lucru
11.
In lucru
12.
In lucru
13.
In lucru
14.
In lucru
15.
Aliment crnai
In lucru
16.
In lucru
17.
In lucru
18
In lucru
19.
In lucru
20.
In lucru
21.
In lucru
137
Toxine
C. subterminale
C. tertium
C. cochlearium
C. putrificum
C. perenne (imobil)
C. novyi tip C
C. ramosum
C. cadaveris
C. pseudotetanicum
Evid n inf. gangrenoase la animale:
C. chauvoei
C. limosum
4.2.3. Morfologie
C. perfringens este un bacil scurt i gros, de 0,6-2,4/1,3-19,0, cu capetele retezate, dispus n perechi sau lanuri scurte, formeaz, uneori, filamente (mai ales cei din tipul C). Este Gram pozitiv n culturi tinere, iar
n cele vechi sau cu pH acid, devine Gram negativ. n organismul animal
majoritatea tulpinilor posed capsul, n care predomin polizaharidele.
Capsula se coloreaz prin metodele de evideniere a cililor. Prin metodele Giemsa i Gram, capsula apare ca un halou subire, necolorat, n jurul
bacilului. Este necilogen. Este sporogen, ns sporul nu se evideniaz
prin metodele obinuite de evideniere. Acesta este oval, cu dimensiuni de
0,4-0,6, situat central sau subterminal, deformnd celula vegetativ sub
139
senzitiv i una rezistent. Folosind aceast ipotez s-a artat c sporii devin
mai rezisteni la cldur dac sunt tratai cu soluii de acetat de calciu (de
exemplu, 0,1 sau 0,5M la pH 8,5 pentru 140 de ore la 50C). Prin aceast
metod rezistena sporilor la cldur poate fi crescut de la 5 la 10 ori. Pe
de alt parte rezistena la cldur poate fi sczut prin meninerea sporilor
n 0,1 N HCl la 25C pentru 16 ore sau prin meninerea endosporilor n
mncruri cu pH acid.
Supravieuirea la congelare n piureul de pasre a fost studiat de
Strong i Canada care au descoperit c doar 4% din celule au supravieuit
la -17,7C, 180 de zile. Sporii uscai au avut o rat de supravieuire de 40%
dup 90 de zile i de 11% dup 180 de zile.
Tipizarea cu bacteriocin a fost realizat la tipul A. A fost realizat pe
90 de tulpini neimplicate n epidemiile alimentare cu un set de 8 bacteriocine
i 85,6% reprezentate de tipurile de bacteriocin de la 1 la 6.
Oxigenul este nociv pentru formele vegetative. Expunerea plcilor
Petri cu medii solide la contactul cu aerul, dup scoaterea din anaerostat,
la temperatura camerei sau la 40C, 10-18 ore, determin moartea
unor tulpini, ne mai fiind posibil transplantarea lor. C. perfringens este
sensibil la penicilin, cloramfenicol, eritromicin, tetraciclin, ampicilin,
clindamicin, metronidazol i rezistent la streptomicin, kanamicin,
negamicin, polimixine (B, E).
Sporii sunt distrui la 100C n 2-3 minute, cu excepia tipului F ai
crui spori rezist la aceast temperatur pn la 2 ore.
n culturile de diferite tipuri apar bacteriofagi specifici pentru C.
perfringens, clasificai n cinci grupe fagice. Bacteriofagii viruleni s-au
gsit n apele de canal i n rurile poluate. Unele tulpini de tip A, B, C sunt
lizogene, pe cnd cele de tip D i E nu sunt. Tulpinile cu colonii S i R sunt
sensibile la bacteriofagi, iar cele mucoase sunt rezistente.
4.2.5. Proprieti biochimice
Majoritatea tipurilor sunt hemolitice, cu excepia tipului A izolat din
focare de toxiinfecii alimentare cu activitate lecitinazic intens.
n laptele turnesolat formeaz coagul caracteristic, alveolar, buretos,
cu lichid limpede, glbui, cu turnesolul redus mai accentuat n partea
inferioar a tubului. n bulion cu snge hemolizeaz eritrocitele, iar mediul
ia o culoare brun, cu miros butiric. n mediile cu creier se dezvolt, dar nu
le nnegrete, ci le imprim o culoare roie.
Pe mediul Zeissler cu snge de iepure, oaie, bou sau om, majoritatea
coloniilor sunt nconjurate de o zon larg de hemoliz, format din dou
142
Fig. 4.1. Relaia dintre timp i temperatur n timpul preparrii crnii de curcan n
cantina unei coli dup Bryan et al.
Medii i reactivi
VV
VV
VV
VV
VV
VV
VV
VV
VV
VV
VV
152
Fig. 4.3. Agar cu snge nsmnat cu Clostridium perfringens examinat sub fascicul de
lumin. Colonii nconjurate de cte un inel dublu de hemoliz.
Bibliografie selectiv
1. Anellis.A., and D. Berkowitz. 1977. Comparative dose-survival curves of
representative Clostridium botulinum type F spores with type A and B spores.
Appl. Environ. Microbiol. 34:600-601.
2. Angulo, F.J., J. Getz, J.P. Taylor. K.A. Hendricks, E.L. Hathaway, S.S. Barth, H.M.
Solomon, A.E. Larson, E.A. Johnson, L.N. Nickey, and A A. Reis. 1998. A large
outbreak of botulism: The hazardous baked potato./ Infect. Dis. 178:172-177.
3. Anniballi, F.L. Fenicia, G. Franciosa, and P. Aureli. 2002. Influence of pH and
temperature on the growth of and toxin production by neurotoxigenic strains of
Clostridium butyricum type E. J. Food Protet. 65:1267-1270.
4. Austin, J.W., and K.C. Dodds. 2001. Clostridium botulinum. In Foodborne Disease
Handbook, Vol. 1, 2nd ed., ed. Y.H. Heu, M.D. Pierson, and J.R. Gorham, 107138. New York: Marcel Dekker.
5. Baker, D.A., and C. Genigeorgis. 1990. Predicting the safe storage of fresh fish
under modified atmospheres with respect to Clostridium botulinum toxigenesis by
modeling length of the lag phase of growth. J. Food Protect. 53:131-140.
6. Beecher, D.J., J.L. Schoeni, and A.C.L. Wong. 1995. Enterotoxic activity of
hemolysin BL from Bacillus cereus. Infect. Immun. 63:4423-428.
7. Beecher, D.J., J.S. Pulido, N.P. BRNAey, and A.C.L. Wong. 1995. Extracellular
virulence factors in Bacillus cereus endophthalmitis: Methods and implication of
involvement of hemolysin BL. Infect. Immun. 63:632-639.
8. Bradshaw, J.G., G.N. Stelma, V.I. Jones, J.T. Peeler, J.G. Wimsatt, J.J. Corwin, and
R.M. Twedt. 1982. Thermal inactivation of Clostridium perfringens enterotoxin in
buffer and in chicken gravy. J. Food Sci. 47:914-916.
9. Barnes. E., and M. Ingram. 1956. The effect of redox potential on the growth of
Clostridium welchii strains isolated from horse muscle. J. Appl. Bacteriol. 19:117128
10. Bryan. F.L.. T.W. McKinely. and B. Mixon. 1971. Use of time-temperature
evaluations in detecting the responsible vehicle and contributing factors of
foodborne disease outbreaks. J. Milk Food Technol. 34:576-582.
11. Byrne, M.P., T.J. Smith, V.A. Montgomery, and L.A. Smith. 1998. Purification,
potency, and efficacy of the botulinum neurotoxin type A binding domain from
Pichia pastoris as a recombinant vaccine candidate. Infect. Immun. 66:48174822.
12. Christiansen, L.N., J. Deffner, E.M. Foster, and H. Sugiyama. 1968. Survival and
outgrowth of Clostridium botulinum type E spores in smoked fish. Appl. Microbiol.
16:133-137.
13. Ciccarelli, A.S., D.N. Whaley, L.M. McCroskey.D.F. Gimenez, V.R. Dowell,
Jr., and C.L. Hatheway. 1977. Cultural and physiological characteristics of
Clostridium botulinum type G and the susceptibility of certain animals to its toxin.
Appl. Environ. Microbiol. 34:843-848.
14. Craig, J., and K. Pilcher. 1966. Clostridium botulinum type F: Isolation from
154
49. Imai. H.. K. Oshita. H. Hashimoto, and D. Fukushima. 1990. Factors inhibiting
the growth and toxin formation of Clostridium botulinum types A and B in tsuyu
(Japanese noodle soup). J. Food Protect. 53:1025-1032.
50. Johnson. K.M.. C.L. Nelson, and F.F. Busta. 1983. Influence of temperature on
germination and growth of spores of emetic and diarrheal strains of Bacillus
eRNAs in a broth medium and in rice. J. Food Sci. 48:286-287.
51. Kang. C.K.. M. Woodburn, A. Pagenkopf. and R. Cheney. 1969. Growth,
sporulation. and germination of Clostridium perfringens in media of controlled
water activity. Appl. Microbiol. 118:798-805
52. Simona Ivana, 2002 Bacteriologie veterinar special (Ed. Ceres, Bucureti; 460
pagini), ISBN: 973-40-0568-5
53. Simona Ivana, 2002 Bacteriologie veterinar special (Ed. Ceres, Bucureti;
460 pagini), ISBN: 973-40-0568-5
54. Simona Ivana, 2005 Bacteriologie general (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;
250 pagini), ISBN: 973-86485-7-2
55. Simona Ivana, 2005 Bacteriologie general (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;
250 pagini), ISBN: 973-86485-7-2
56. Simona Ivana, 2006 Tratat de bacteriologie medical-veterinar i introducere n
micologie (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;768 pagini), ISBN (10) 973-865715-6; ISBN (13) 978-973-86571-5-1
57. Simona Ivana, 2006 Tratat de bacteriologie medical-veterinar i introducere n
micologie (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;768 pagini), ISBN (10) 973-865715-6; ISBN (13) 978-973-86571-5-1
58. Simona Ivana, 2007 Manual de microbiologia alimentelor (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti; 160 pagini), ISBN: 978-973-86571-3-7
59. Simona Ivana, 2007 Manual de microbiologia alimentelor (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti; 160 pagini), ISBN: 978-973-86571-3-7
60. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. I (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-01-6
61. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. I (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-01-6
62. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. II (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-02-3.
63. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. II (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-02-3.
64. Simona Ivana, 2008, Microbiologia alimentelor, Ed. Orizonturi, ISBN: 978-973736-090-8
65. Simona Ivana, 2008, Microbiologia alimentelor, Ed. Orizonturi, ISBN: 978-973736-090-8
66. Simona Ivana, 2008, Practical guide of microbiogical diagnosis, Ed. Orizonturi,
ISBN: 978-973-736-089-2
67. Simona Ivana, 2008, Practical guide of microbiogical diagnosis, Ed. Orizonturi,
ISBN: 978-973-736-089-2
68. Solomon, H.M., D.A. Kautter. and R.K. Lynt. 1982. Effect of low temperatures
on growth of nonproteolytic Clostridium botulimtm types B and F and proteolytic
157
159
CAPITOLUL 5
IMPLICAIILE BACTERIILOR DIN
GENUL LISTERIA N PRODUCEREA
TOXIINFECIILOR ALIMENTARE
5.1. Listeria monocytogenes
5.1.1. Caractere generale
Listeriile sunt bacterii Gram pozitive nesporogene i neacidorezistente.
n trecut erau clasificate n genul Listerella. Numele generic a fost schimbat
n 1940 n Listeria. n multe privine sunt similare cu genul Brochothrix.
Ambele genuri sunt pozitive la testul catalazei i au tendina s se asocieze
n natur cu bacteriile din genul Lactobacillus. Toate cele 3 genuri produc
acid lactic din glucoz i alte zaharuri fermentescibile,dar spre deosebire de
Listeria i Brochotrix, lactabacilii nu produc catalaz.
O perioad de timp listeriile au fost considerate nrudite cu
bacteriile corineforme i din acest motiv au fost clasificate n familia
Corynebacteriaceae, ns acum este clar c sunt mai apropiate de bacteriile
din genurile Bacillus, Lactobacillus i Streptococcus. Din punct de vedere
al RNA-ului ribozomal 16S, Listeria se apropie de Brochothrix, iar aceste
genuri mpreun cu Staphylococcus i Kurthia ocup poziia dintre grupul
Bacillus i Lactobacillus/Streptococcus n cadrul ncrengturii ClostridiumLactobacillus-Bacillus.
Transferurile genetice au loc ntre Listeria, Bacillus, Stafilococcus,
iar reaciile imunologice ncruciate apar ntre Listeria, Streptococcus,
Staphylococcus i Lactobacillus. Cu toate c Erysipelothrix intr n cadrul
micoplasmelor are n comun cu Listeria i Brochothrix 338 de baze purinice
i pirimidinice.
Listeria spp. conine acizi teichoici i lipoteichonici, precum i bacilii,
stafilococ, streptococii i lactobacilii, ns spre deosebire de acestia coloniile
160
5.1.3. Taxonomie
Familia Listeriaceae
Cuprinde dou genuri, i anume: Listeria i Brachothrix (J.P. Euzby,
2006).
162
Genul
Listeria
Erysipelothrix
Grupa bacililor Gram pozitivi,
nesporogeni, aerobi sau facultativ
anaerobi
Corynebacterium
Arcanobacterium
Actinomyces
Actinobaculum
Tabelul 5.2
Specia
Lis. monocytogenes
Ers. rhusiopathiae
Ers. tonsillarum
Ers. inopinata
Cor. pseudotuberculosis
Cor. bovis
Cor. diphteriae
Abc. pyogenes
Act. bovis
Act. israelii
Abl. suis
subtilis.
5.1.5. Condiii de cultivare i caractere culturale
Listeriile sunt bacterii facultativ anaerobe i se cultiv bine pe medii
uzuale ntre 0 i 45C, optim la 20-37C. Uneori necesit suplimentarea
mediilor cu snge, lichid de ascit sau glucoz.
Izolarea listeriilor din materialele patologice, se realizeaz deseori
dificil, necesitnd medii selective sau de mbogire cum ar fi: agarul cu
tripaflavin, acid nalidixic i ser; agar cu acridin i acid nalidixic. Uneori,
pentru izolare este necesar mbogirea la rece, care se realizeaz
prin pstrarea produsului patologic n bulion triptaz, la 4C, timp de 4
sptmni, cu subcultivare din 4 n 4 zile pe geloz snge i incubare la
37C n atmosfer cu 10% dioxid de carbon.
n bulion peptonat produce un aspect uniform, iar n bulion glucozat
un aspect floconos. Dup o incubare prelungit formeaz un depozit dens
i aderent caracteristic, care se ridic n mediu, dup agitare, sub form de
tirbuon.
Pe agarul glucozat sau triptozat formeaz colonii de mrimi diferite,
de form rotund, de tip S, uor bombate, transparente, cu aspect caracteristic de picturi de rou. Centrul lor poate avea un aspect cristalin sticlos.
Prezint o consisten apoas, iar dac sunt examinate n lumin oblic, la
45 de grade, apar cu irizaii bleu-verzui.
Coloniile variantelor L sunt mai mari, turtite, cu centrul opac i cu
marginile neregulate, friabile, greu emulsionabile.
Pe agar cu 5% snge de berbec, iepure, cal, bou sau om, coloniile de
Lis. monocytogenes apar nconjurate de o zon ngust de beta hemoliz
difuz.
Culturile de pe medii solide degaj un miros caracteristic de lapte
acidulat.
n mediile semisolide (agar 3), dup nsmnarea bacteriei prin
neparea mediului n profunzime i incubarea la 37C, aceasta crete sub
forma unei umbrele la 3-5 milimetri de suprafaa agarului, dovedind astfel
o mobilitate marcant.
Cerinele nutriionale ale listeriei sunt tipice bacteriilor Gram pozitive.
Ele se dezvolt bine pe medii cum ar fi infuzia de cord-creier, soia cu
tripticaz i cu triptoz. Au nevoie pentru cretere de cel puin 4 vitamine
B: biotina, riboflavina, tiamina i acidul tioctic (acid alfa lipoic; factor
de cretere pentru unele bacterii i protozoare) i de aminoacizi: cisteina,
glutamina, izoleucina, leucina, valina.
165
169
Listeriolizina O i ivanolizina O:
n general tulpinile patogene/virulente de Lis. monocytogenes produc
beta hemolizin pe agarul cu snge i acid din ramnoz, dar nu din xiloz.
Tulpinile a cror hemoliz poate fi amplificat cu exosubstana
prepurificat sau direct prin folosirea culturii sunt potenial patogene.
Toate tulpinile virulente de Lis. monocytogenes produc o substan
specific care este responsabil de beta hemoliz asupra eritrocitelor i de
distrugere a celulelor fagocitare care le nglobeaz i anume listeriolizina O
(LLO).
Substana respectiv i perfingolizina O (PFO) sunt omoloage cu
streptolizina O (SLO) i pneumolizina (PLO).
Listeriolizina O (LLO) are o greutate moleculara de 60000Da, fiind
constituit din 504 aminoacizi. Este produs n faza de cretere exponenial
(cu niveluri maxime dup 8-10 ore).
LLO este sintetizat la 37C n medii cu glucoz 0,2%. Sorbitolul n
proporie de 2% inhib sinteza LLO la 35C n condiii aerobe sau anaerobe
de incubare.
LLO a fost detectat la toate tulpinile de Lis. monocytogenes chiar i
la unele tulpini nehemolitice. Nu a fost identificat la Lis. welshimeri i Lis.
grayi.
Gena care codific producerea ei este denumit hly i este de origine
cromozomal.
Lis. ivanovii i Lis. seeligeri produc exotoxine tiol dependente care
sunt similare, dar nu identice cu LLO. Lis. ivanovii produce cantiti mari
de astfel de exotoxine.
Ivanolizina O(ILO) este o citolizin tiol activat produs de Lis.
ivanovi. Antiserul obinut de la Lis. ivanovi produce reacii ncruciate
cu cel de la Lis. monocytogenes i SLO. Mutantele deficiente n ILO s-au
dovedit a fi avirulente pentru oarece i embrionii de gin.
LLO purificat prezint n comun cu SLO si PLO urmtoarele
proprietai: 1) sunt activate de compuii SH cum ar fi cisteina; 2) sunt
inhibate de cantiti mici de colesterol i prezint situsuri antigenice comune
evideniate prin reacii cross-imunologice.
Spre deosebire de SLO si PLO, LLO este activat la un pH de 5,5 dar
nu la un pH 7,0 ceea ce sugereaz posibilitatea activitaii sale n fagolizozomi
(fagozomii macrofagelor).
DL50 pentru oarece este de aproximativ 0,8g i induce un
rspuns inflamator cnd este injectat intradermic. Se pare ca LLO i alte
toxine poreforming (formatoare de pori) au evoluat de la o singur gen
171
progenitoare.
Cnd infecia cu Lis. monocytogenes se produce pe cale oral, n mod
aparent colonizeaz tractul intestinal prin mecanisme neelucidate pn n
prezent. De la acest nivel invadeaz esuturile, inclusiv placenta la femeile
gravide i intr n torentul sangvin de unde ajunge la alte celule susceptibile.
Ca patogen intracelular trebuie s patrund i s se replice n aceste celule.
Invazia fagocitelor se produce n dou faze prin ptrunderea listeriilor direct
n fagozomi i apoi de la acetia n citoplasma fagocitului.
Intrarea Lis. monocytogenes n celulele gazd care nu au fost fagocitate
este facilitat de ctre proteinele de suprafa ale bacteriei, denumite n 1A
i 1B. Prima are o greutate molecular de 88 KDa, iar cea de-a doua de
65KDa.
Proteina 1A (internalina are ca receptor de suprafata F-cadherina),
invadeaz culturile celulare, epiteliale, iar proteina n 1B invadeaz culturile
de hepatocite de oarece. Alte proteine intalnite la listerii sunt: 1) p60, o
proteina de 60 kDa codificat de gena iap. Este secretat de toate speciile
de listeria fiind implicate n producerea listeriilor n celulele gazd; 2) Act A
(90kDa) care este necesar pentru polimerizarea actinei i permite micarea
intracitoplasmatic a listeriilor n celulele gazd; 3) Ami (90kDa) este o
bacterie lizin care se afl pe suprafaa lui Lis. monocytogenes.
Dintr-un studiu de 150 de probe de hran, Ami a fost prezent in 149,
n timp ce 283 din 300 de probe umane au coninut aceast protein. Toate
proteinele pozitive au prezentat LLO, n 1B i Act A.
Lis. monocytogenes supravieuiete n interiorul macrofagelor trecnd
prin membranele fagolizozomale n citoplasm (citosol) proces facilitat n
parte de LLO.
O dat ajuns n citosol proteina de suprafa Act A (faciliteaz formarea
cozilor de actin) care propulseaz microorganismul ctre membrana
citoplasmatic. La nivelul membranei formeaz vacuole membranare
duble. Cu ajutorul LLO i a celor 2 fosfolipaze bacteriene, fosfolipaza C
fosfotidilinozitol-specific (codificat de plcA) i fosfolipaza C (broad-rouge
phospholipase) (codificat de plcB) bacteriile sunt eliberate, iar procesul
se repet cu intrarea acestora n celulele gazd adiacente. Ultimul proces
apare dupa forarea membranei n afar i formarea unui filopodiu care
este absorbit de o celul adiacent, dup care procesul se repet. Astfel
rspndirea lui Lis. monocytogenes de la o celul la alta are loc far ca
bacteria s prseasc componentele interioare ale celulei.
O parte interesant, dar incomplet studiat a celulei de Lis.
monocytogenes este acidul lipoteichoic (LTA) al membranei celulare care
se aseamn cu lipopolizaharidul (LPS) din membrana extern a bacteriilor
172
Gram negative.
Datorit acestui factor de producere a monocitozei (monocytosisproducing-activity, MPA) s-a dat i numele speciei: monocytogenes.
Acidul lipoteichoic (LTA-lipoteichoic acid) reprezint 6% din
greutatea uscat a celulei i este asociat cu membrana plasmatic. Are o
greutate molecular de 1000 Da, nu conine aminoacizi sau carbohidrai i
stimuleaz numai celulele mononucleare. Prezint toxicitate mic pentru
esuturi i este inactiv serologic dar omoar macrofagele in vitro. S-a
demonstrat c are urmtoarele proprieti comune cu LPS: este pirogenic
i letal pentru iepure; produce o reacie Schwartzman local; conine acizi
grai hidroxi acilai; produce o reacie pozitiv cu reactivul LAL (Limulus
ameobocyte lysatereagent); conine KDO (2-keto-3 deoxyoctonic acid);
conine heptoz. Reactivul LAL n cantitate de 1mg produce reacie pozitiv,
n timp ce LPS poate fi activat ntr-o cantitate de picograme.
Lis. ivanovii este patogen pentru oi la care produce avort, fiind un
producator prolific de hemoliz pe eritrocitele de oaie. Posed o hemolizin
like-LLO (ILO), sfingomielinaz i lecitinaz. Sfingomielinaza are o
greutate molecular de 27000Da. n timp ce hemolizina like-LLO este
responsabil pentru producerea beta hemolizei pe eritrocitele de oaie, alfa
hemoliza produs de Rco. equi se pare c este cauzat de dou enzime.
5.1.10. Izolarea i identificarea
nainte de jumtatea anilor 1980, mbogirea la rece, bazat pe
capacitatea Listeriei de a depi prin cretere la temperaturi sczute germenii
competitivi, a fost utilizat n principal pentru izolarea selectiv. Totui,
datorit lipsei de specificitate a acestei metode i a faptului c este lent
(unii cercettori au incubat bulion pn la 6 luni), procedurile au fost mult
mbuntite. Au fost dezvoltate medii care utilizeaz diveri ageni selectivi,
incluznd acriflavin, clorur de litiu, colistin, acid nalidixic, cicloheximid
i polimixin. Aceste metode au lrgit capacitatea laboratoarelor de
microbiologie (n special, a celor implicate n controlul alimentelor) de a
izola selectiv Listeria.
Pentru detectarea listeriilor n alimente sunt din ce n ce mai mult
utilizate hibridizarea acizilor nucleici i testele imunoenzimatice.
5.1.11. Listerioza uman
Listerioza este o infecie oportunist care afecteaz cel mai frecvent
persoanele cu afeciuni intercurente severe, btrnii, femeile gravide,
173
Sezonalitatea
Cazurile de listerioz au fost mai rar raportate n primul trimestru
al anului 2008 dect n restul anului. Cu toate acestea nu se poate discuta
despre o evoluie sezonier a acestei boli.
175
An
1985
1986
Aliment implicat
Crnciori de curcan
Brnz topit
177
ar
Anglia
Anglia
Canada
SUA
Finlanda
Italia
Italia
Danemarca
Canada
Belgia
Italia
An
1988
1988
1989
1989
1989
1989
1989
1989
1989
1989
1994
Aliment implicat
Brnz topit
Pui prjit
Tablete cu lucerna
Salam
Ciuperci srate
Salam
Pete
Icre de cod afumate
Brnz topit
Frica proaspt i ngheat
Msline murate
An
2002
2003
2004
2005
2006
Total tulpini
NR.
7
1
11
7
26
Produse lactate
%
23,33
3,33
36,66
23,33
86,66
NR.
2
2
4
Total tulpini
%
6,66
6,66
13,33
NR.
9
1
11
9
30
%
30,0
3,33
36,66
30,0
100
Tabelul 5.5
Apartenena la speciile listeria conform investigaiilor efectuate
(Nr. rezultate pozitive/%)
Lis. monocytogenes
Lis.
Specie
Lis. innocua L. gray
welshimeri
serovar 1 a serovar 4b
Test
%
%
%
% Nr.
%
Nr.
Nr.
Nr.
Nr.
Beta-hemoliza
23,33
Testul S. aureus
CAMP R. equi
Mobilitatea
Testul oxidazei
Testul catalazei
7
7
7
23,33
23,33
23,33
3,33
3,33
3,33
19
63,33
3,33
6,66
181
Tabelul 5.6
Apartenena la speciile listeria conform investigaiilor efectuate
(Nr. Rezultate pozitive / %)
Lactoz
2 6,66 Zaharoz
2 6,66 Maltoz
7 23,33 1 3,33 19 63,33 1 3,33 2 6,66
Trehaloz
2 6,66 1 3,33 2 6,66 Salicin
7 23,33 1 3,33 19 63,33 1 3,33 2 6,66
D-Manit
1 3,33 D-Manoz
7 23,33 1 3,33 19 63,33 2 6,66
L-Ramnoz
7 23,33 1 3,33 1 3,33 1 3,33
D-Xiloz
2 6,66
L.m. 1a 7 23.33 Identificare serologic
1 3,33 L.m. 4b Total tulpini
7 23,33 1 3,33 19 63,33 1 3,33 2 6,66
Tabelul 5.7
L.monocytogenes
L.innocua L.gray
serovar la serovar 4b
%
% Nr.
%
Nr.
Nr.
Nr. %
1
3,33
8 26,66 1
3,33
3
10,0
3 10,0
1 3,33
3 10,0
i
i
i
i
1 3,33
1
3,33
-
Spat porc
Carcas pasre
Cacaval
Lapte praf
Lapte crud
Total tulpini
23,33
1
3,33
3,33
182
3,33
L.welshimeri
Nr.
-
3,33
19 63,33
3,33
3,33
6,66
6,66
191
Nucleu
Listeria n citoplasm
Microscopie electronic a unui macrofag dup 8 ore de la infecia cu Lis. monocytogenes.
Bacteria a trecut de bariera lizozomilor i se divide n citoplasm. Cromatina nucleului
macrofagului apare condensat i citoplasma se afl ntr-un stadiu progresiv de liz
Bibliografie selectiv
1. Fenlon, D.R., T. Stewart, and W. Donachie. 1995. The incidence, numbers
and types of Listeria monocytogenes isolated from farm bulk tank milks. Lett.
Appl. Microbiol. 20:57-60,
2. Focgeding, P.M., and N.W. Stanley. 1990. Listeria monocytogenes P5069
thermal death times in liquid whole egg, y. Food Protect. 33:6-8.
3. Galsworthy, S.B., and D. Fewster. 1988. Comparison of responsiveness to the
monocytosis-producing activity of Listeria monocytogenes in mice genetically
susceptible or resistant to listeriosis. Infection 16(Suppl. 2):118-122.
4. Geoffroy, C, J.-L. Gaillard, J.E. Alouf, and P. Berche. 1989. Production of
thiol-dependent haemolysins by Listeria monocytogenes. J. Gen. Microbiol.
135:481487.
5. Geoffroy, C, J.-L. Gaillard, J.E. Alouf. and P. Berche. 1987. Purification,
characterization, and toxicity of the sulfhydryl-activatcd hemolysin
listeriolysin O from Listeria monocytogenes. Infect. Ininiun. 55:1641-1646.
6. George, S.M., B.M. Lung, and T.F. Brocklehurst. 1988. The effect of pH and
temperature on initiation of growth of Listeria monocytogenes. Lett. Appl.
Microbiol. 6:153-156.
7. Gilbert, R.J. 1992. Provisional microbiological guidelines for some ready-toeat foods sampled at point of sale: Notes for PHLS Food Examiners. Public
Health Serv. Lab. Q. 9:98-99.
8. Gilbert, R.J., and P.N. Pini. 1988. Listeriosis and foodborne transmission.
Lancet 1:472-473.
9. Gitter, M., R. Bradley, and PH. Blampied. 1980. Listeria monocytogenes
infection in bovine mastitis. Vet. Rec. 107:390-393.
10. Glass, K.A., and M.P Doyle. 1990. Fate of Listeria monocytogenes in
processed meat products during refrigerated storage. Appl. Environ. Microbiol.
55:1565-1569.
11. Golnazarian, C.A., C.W. Donnelly, S.J. Pintauro, and D.B. Howard.
1989. Comparison of infectious dose of Listeria monocytogenes F5817 as
determined for normal versus compromised C57B1/6J mice. J. Food Protect.
52:696-701.
12. Grau, F.H., and P.B. Vanderline. 1990. Growth of Listeria monocytogenes on
vacuum-packaged beef. J. Food Protect. 53:739-741.
13. Green, S.S. 1990. Listeria monocytogenes in meat and poultry products.
Interim Rept. to Natl Adv. Comm. Microbiol. Spec. Foods. FSIS/USDA,
Nov. 27.
194
14. Groves. R.D., and H.J. Welshimer. 1977. Separation of pathogenic from
apathogenic Listeria monocytogenes by three in vitro reactions. J. Clin.
Microbiol. 5:559-563.
15. Haak-Frendscho, M., K.M. Young, and C.J. Czuprynski. 1989. Treatment
of mice with human recombinant interleukin-2 augments resistance to the
facultative intracellular pathogen Listeria monocytogenes. Infect. Immitn.
57:3014-3021.
16. Harrison, M.A., and Y.-W. Huang. 1990. Thermal death times for Listeria
monocytogenes (Scott A) in crabmeat. J. Food Protect. 53:878-880.
17. Heisick, J.E., D.E. Wagner, M.L. Nierman, and J.T Peeler. 1989. Listeria spp.
found on fresh market produce. Appl. Environ. Microbiol. 55:1925-1927.
18. Hird, D.W. 1987. Review of evidence for zoonotic listeriosis. /. Food Protect.
50:429-433.
19. Hogen, C.J., E.R. Singleton, K.S. Kreuzer, E.M. Sloan, and J.N. Sofos.. 1998.
Isolation of catalasc-negative Listeria monocytogenes from foods. Dairy Food
Environ. Sanit. 18:424-426.
20. Hof, H., and P. Hefner. 1988. Pathogenicity of Listeria monocytogenes in
comparison to other Listeria species. Infection l6(Suppl. 2): 141-144.
21. Igarashi, K.-I., M. Mitsuyama, K. Muramori, H. Tsukada, and K. Nomoto.
1990. Interleukin-1 -induced promotion of T-cell differentiation in mice
immunized with killed Listeria monocytogenes. Infect. Ininiim. 58:3973-3979.
22. Jacquet, C, E. Gouin, D. Jcannel, P. Cossart, and J. Rocourt. 2002. Expression
of ActA, Ami, InlB. and listeriolysin O in Listeria monocytogenes of human
and food origin. Appl. Environ. Mirobiol. 68:616-622.
23. Jay, J.M. 1996. Prevalence of Listeria spp. in meat and poultry products. Food
Control 7:209-214.
24. Johnson. J.L., M.P. Doyle, and R.G. Cassens. 1990. Listeria monocytogenes
and other Listeria spp. in meat and meat products. A review. J. Food Protect.
53:81-91.
25. Johnson, J.L., M.P. Doyle, and R.G. Cassens. 1988. Survival of Listeria
monocytogenes in ground beef. Int. J. Food Microbiol. 6:243-247.
26. Jones, D. 1988. The place of Listeria among Gram-positive bacteria. Infection
16(Suppl. 2):85-88.
27. Junttila, J., J. Hirn, P. Hill, and E. Nurmi. 1989. Effect of different levels
of nitrite and nitrate on the survival of Listeria monocytogenes during the
manufacture of fermented sausage.,/ Food Protect. 52:158-161.
28. Junttila. JR.. S.I. Nicmcla, and J. Him. 1988. Minimum growth temperatures
of Listeria monocytogene* and nonhaemolytic listeria. J. Appl. Bacterial.
195
65:321-327.
29. Kampelmacher, E.H., and L.M. Van Nooble Jansen. 1969. Isolation of Listeria
monocytogenes from faeces of clinically healthy humans and animals. Zentral.
Bakt. Inf. Abt. Orig. 211:353-359.
30. Kathariou. S. 2002. Listeria monocytogenes virulence and pathogenicity, a food
safety perspective. J. Food Protect. 65:1811-1829.
31. Kaufmann, S.H.E. 1988. Listeria monocytogenes specific T-cell lines and
clones. Infection 16(Suppl. 2): 128-136.
32. Kaufmann. SHE.. E. Hug. U. Vath. and I. Muller. 1985. Effective protection
against Listeria monocytogenes and delayed-type hypersensitivity to listerial
antigens depend on cooperation between specific L3T4+ and Lyt2+ T cells.
Infect. Immun. 48:263-266.
33. Kouassi. Y.. and L.A. Shelef. 1995. Listeriolysin O secretion by Listeria
monocytogenes in broth containing salts of organic acids../. Food Protect.
58:1314-1319.
34. Kreft. J.. D. Funke. A. Haas. F. Lottspeich. and W. Goebel. 1989. Production,
purification and characterization of hemolysins from Listeria ivanovii and
Listeria monocytogenes Sv4b. FEMS Microbiol. Lett. 57:197-202.
35. Kurtz. R.S., K.M. Young, and C.J. Czuprynski. 1989. Separate and combined
effects of recombinant interleukin-1 a and gamma interferon on antibacterial
resistance. Infect. Immun. 57:553-558.
36. Kwantes. W., and M. Isaac. 1971. Listeriosis. Br. Med. J. 4:296-297.
37. Leasor, S.B., and P.M. Foegeding. 1989. Listeria species in commercially
broken raw liquid whole egg. J. Food Protect. 52:777-780.
38. Lammerding, A.M., and J.M. Farber. 1994. The status of Listeria monocytogenes
in the Canadian food industry. Dairy FoodEmiron.Sanit. 14:146-150.
39. Lingnau, A., E. Domann, M. Hudel, M. bock, T. Nichterlein. J. Wehland. and
T. Chakraborty. 1995. Expression of the Listeria monocytogenes EGD in IA
and iw7B genes, whose products mediate bacterial entry into tissue culture
cell lines, by PrfA-dependent and -independent mechanisms. Infect. Immun.
63:3896-3903.
40. Linton, R.H., M.D. Pierson, and J.R. Bishop. 1990. Increase in heat resistance
of Listeria monocytogenes Scott A by sublethal heat shock. J. Food Protect.
53:924-927.
41. Liu. Z.. and C. Cheers. 1993. The cellular source of interleukin-6 during
Listeria infection. Infect. Immun. 61:2626-2631.
42. Loessner. M.J., and M. Busse. 1990. Bacteriophage typing of Listeria species.
Appl. Environ. Microbiol. 56:1912-1918.
43. Lovett, J., I.V. Wesley, M.J. Vandermaaten, J.G. Bradshaw, D.W. Francis, R.G.
196
1260.
58. Moors, M.A., B. Levitt, P. Youngman, and D.A. Portnoy. 1999. Expression
of listeriolysin O and ActA by intracellular and extracellular Listeria
monocytogenes. Infect. Immun. 67:131-139.
59. Murray, E.G.D., R.A. Webb, and M.B.R. Swann. 1926. A disease of rabbits
characterized by large mononuclear leuco-cytosis caused by a hitherto
undescribed bacillus Bacterium monocytogenes (n. sp.). J. Pathol. Bacterial.
29:407-439.
60. Nakane, A., A. Numata, M. Asano, M. Kohanawa, Y. Chen, and T. Minagawa.
1990. Evidence that endogenous gamma interferon is produced early in Listeria
monocytogenes infection. Infect. Immun. 58:2386-2388.
61. Nicolas, J.-A., and N. Vidaud. 1987. Contribution a letude des Listeria presented
dans les denrdes dorigine animale destinces a la consommation humaine. Rec.
Med. Vet. 163(3):283-285.
62. Notermans, S., J. Dufrenne, P. Teunis, and T. Chackraborty. 1998. Studies on
the risk assessment of Listeria monocytogenes. J. Food Protect. 61:244248.
63. Parish, M.E., and D.P. Higgins. 1989. Survival of Listeria monocytogenes in
low pH model broth systems. J. Food Protect. 52:144-147.
64. Petran, R.L., and E.A. Zottola. 1989. A study of factors affecting growth and
recovery of Listeria monocytogenes Scott A. J. Food Sci. 54:458-460.
65. Piccinin, D.M., and L.A. Shelef. 1995. Survival of Listeria monocytogenes in
cottage cheese. 7. Food Protect. 58:128-131.
66. Pine, L., G.B. Malcolm, and B.D. Plikaytis. 1990. Listeria monocytogenes
intragastric and intraperitoneal approximate 50% lethal doses for mice are
comparable, but death occurs earlier by intragastric feeding. Infect. Immun.
58:2940-2945.
67. Pini, P.N., and R.J. Gilbert. 1988. The occurrence in the U.K. of Listeria species
in raw chickens and soft cheeses Int. J. Food Microbiol. 6:317-326.
68. Rocourt, J., P. Boerlin, F. Grimont, C. Jaquet, and J.-C. Piffarctti. 1992.
Assignment of Listeria grayi and Listeria murrayi to a single species, Listeria
grayi, with a revised description of Listeria grayi. Int. J. System. Bacteriol.
42:171-174.
69. Ruhland, G.J., and F. Fiedler. 1987. Occurrence and biochemistry of lipoteichoic
acids in the genus Listeria. System. Appl. Microbiol. 9:40-46.
70. Ryser, E.T., and E.H. Marth. 1988. Survival of Listeria monocytogenes in coldpack cheese food during refrigerated storage. J. Food Protect. 51:615-621.
71. Ryser, E.T., and E.H. Marth. 1987. Fate of Listeria monocytogenes during the
manufacture and ripening of Camembert cheese. J. Food Protect. 50:372-378.
198
72. Ryser, E.T., E.H. Marth, and M.P. Doyle. 1985. Survival of Listeria
monocytogenes during manufacture and storage of cottage cheese. J. Food
Protect. 48:746-750.
73. Schmidt. U., H.P.R. Seeliger, E. Glenn, B. Langer, and L. Leistner. 1988.
Listerienfunde in rohen Fleischcrzeugmsscn Fleischwirtsch. 68:1313-1316.
74. Seeliger, H.P.R., and K Holme. 1979. Serotyping of Listeria monocytogenes
ami related species. Meth. Microbiol. 13:31^19.
75. Shelef, L.A. 1989. Survival of Listeria monocytogenes in ground beef or liver
during storage at 4 and 25 C. J. Food Protect. 52:379-383.
76. Simona Ivana, 2002 Bacteriologie veterinar special (Ed. Ceres, Bucureti;
460 pagini), ISBN: 973-40-0568-5
77. Simona Ivana, 2005 Bacteriologie general (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;
250 pagini), ISBN: 973-86485-7-2
78. Simona Ivana, 2006 Tratat de bacteriologie medical-veterinar i introducere
n micologie (Ed. tiinelor medicale, Bucureti;768 pagini), ISBN (10) 97386571-5-6; ISBN (13) 978-973-86571-5-1
79. Simona Ivana, 2007 Manual de microbiologia alimentelor (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti; 160 pagini), ISBN: 978-973-86571-3-7
80. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. I (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-01-6
81. Simona Ivana, 2007 Microbiologie medical veterinar, Vol. II (Ed. tiinelor
medicale, Bucureti) ISBN: 978-973-1847-00-9; 978-973-1847-02-3.
82. Simona Ivana, 2008, Microbiologia alimentelor, Ed. Orizonturi, ISBN: 978973-736-090-8
83. Simona Ivana, 2008, Practical guide of microbiogical diagnosis, Ed. Orizonturi,
ISBN: 978-973-736-089-2
84. Singh, S.P., B.L. Moore, and l.H. Siddique. 1981. Purification and further
characterization of phenol extract from Listeria monocytogenes. Am. J. Vet.
Res. 42:1266-1268.
85. Sizmur, K., and C.W. Walker. 1988. Listeria in prepackaged salads. Lancet
1:1167.
86. Skalka, B., J. Smola, and K. Elischerova. 1982. Routine test for in vitro
differentiation of pathogenic and apathogenic Listeria monocytogenes strains.
J. Clin. Microbiol. 15:503-507.
87. Skovgaard, N., and C.-A. Morgen. 1988. Detection of Listeria spp. in faeces from
animals, in feeds, and in raw foods of animal origin. Inl. .1. Food Microbiol.
88. Vit M, Olejnik R, Dlh J, Karpskov R, Cstkov J, Prkazsk V, Prkazsk
M, Benes C, Petrs P. Outbreak of listeriosis in the Czech Republic, late 2006:
preliminary report. Euro Surveill. 2007 Feb 8;12(2):E070208.1.
199
89. European Food Safety Authority (EFSA). The Community summary report
on trends and sources of zoonoses, zoonotic agents, antimicrobial resistance
and foodborne outbreaks in the European Union in 2006. The EFSA Journal.
2007(130). Available from: http://www.efsa.europa.eu/EFSA/DocumentSet/
Zoon_report_2006_en,0.pdf.
90. Denny J, McLauchlin J. Human Listeria monocytogenes infections in Europe:
an opportunity for improved European surveillance. Euro Surveill. 2008;13
(13).
200
CAPITOLUL 6
Implicaiile bacteriilor din genul Mycobacterium n
producerea toxiinfeciilor alimentare
6.1. Mycobacterium avium subspecia paratuberculosis
(Myb. paratuberculosis)
Sinonime: Myb. johnei, Francis, 1943, Bacillus paratuberculosis
(Bergey i col.).
Nume comune: Bacilul paratuberculozei, Bacilul lui Johne.
6.1.1. Istoric
Germenul a fost izolat pentru prima dat de ctre Twort i Ingram n
1912 dup ce boala fusese descris cu mult timp n urm de ctre Johne i
Frothingham (1895).
6.1.2. Morfologie
Myb. avium subsp. paratuberculosis este un bacil scurt i relativ gros,
asemntor cu Myb. bovis, de 1-2 microni lungime, imobil, necapsulogen,
nesporogen, Gram pozitiv i acidorezistent.
6.1.3. Condiii de cultivare i caractere culturale
Bacilul lui Johne este o bacterie pretenioas din punct de vedere al
condiiilor de cultivare. Se cultiv greu pe medii speciale (Lwenstein,
Petragnani), necesitnd adugarea unor extracte de micobacterii sau chiar
de micobacterii inactivate. De regul, se adaug suspensii de Myb. phlei.
Izolarea germenului este dificil i se realizeaz printr-o tehnic
asemntoare cu cea folosit la tuberculoz. Incubarea culturilor se
realizeaz la temperatura de 37C i dureaz 1-2 luni.
Pe suprafaa mediilor solide formeaz dup minimum 4-6 sptmni
201
202
Bibliografie selectiv
1. Bull, T. J., Hermon-Taylor, J., Pavlik, I., El-Zaatari, F., Tizard, M. (2000).
Characterization of IS900 loci in Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis and
development of multiplex PCR typing. Microbiology 146: 2185-2197
2. Bull, T. J., Hermon-Taylor, J., Pavlik, I., El-Zaatari, F., Tizard, M. (2000).
Characterization of IS900 loci in Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis and
development of multiplex PCR typing. Microbiology 146: 2185-2197
3. Castellanos, E., Aranaz, A., Gould, K. A., Linedale, R., Stevenson, K., Alvarez,
J., Dominguez, L., de Juan, L., Hinds, J., Bull, T. J. (2009). Discovery of Stable and
Variable Differences in the Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis Type I, II, and
III Genomes by Pan-Genome Microarray Analysis. Appl. Environ. Microbiol. 75: 676686
4. Collins, D. M., De Zoete, M., Cavaignac, S. M. (2002). Mycobacterium avium
subsp. paratuberculosis Strains from Cattle and Sheep Can Be Distinguished by a PCR Test
Based on a Novel DNA Sequence Difference. J. Clin. Microbiol. 40: 4760-4762
5. de Juan, L., Alvarez, J., Romero, B., Bezos, J., Castellanos, E., Aranaz, A., Mateos,
A., Dominguez, L. (2006). Comparison of Four Different Culture Media for Isolation and
Growth of Type II and Type I/III Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis Strains
Isolated from Cattle and Goats. Appl. Environ. Microbiol. 72: 5927-5932
6. Dupont, C., Thompson, K., Heuer, C., Gicquel, B., Murray, A. (2005).
Identification and characterization of an immunogenic 22 kDa exported protein of
Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis. J Med Microbiol 54: 1083-1092
7. Enosawa, M., Kageyama, S., Sawai, K., Watanabe, K., Notomi, T., Onoe, S.,
Mori, Y., Yokomizo, Y. (2003). Use of Loop-Mediated Isothermal Amplification of the IS900
Sequence for Rapid Detection of Cultured Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis.
J. Clin. Microbiol. 41: 4359-4365
8. Fang, Y., Wu, W.-H., Pepper, J. L., Larsen, J. L., Marras, S. A. E., Nelson,
Eric. A., Epperson, W. B., Christopher-Hennings, J. (2002). Comparison of Real-Time,
Quantitative PCR with Molecular Beacons to Nested PCR and Culture Methods for
Detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in Bovine Fecal Samples. J.
Clin. Microbiol. 40: 287-291
9. Griffiths, T. A., Rioux, K., De Buck, J. (2008). Sequence Polymorphisms in
a Surface PPE Protein Distinguish Types I, II, and III of Mycobacterium avium subsp.
paratuberculosis. J. Clin. Microbiol. 46: 1207-1212
10. Harris, N. B., Barletta, R. G. (2001). Mycobacterium avium subsp.
paratuberculosis in Veterinary Medicine. Clin. Microbiol. Rev. 14: 489-512
11. Harris, N. B., Barletta, R. G. (2001). Mycobacterium avium subsp.
paratuberculosis in Veterinary Medicine. Clin. Microbiol. Rev. 14: 489-512
12. Hermon-Taylor, J., Barnes, N., Clarke, C., Finlayson, C. (1998). Grand Round:
Mycobacterium paratuberculosis cervical lymphadenitis, followed five years later by
terminal ileitis similar to Crohns disease. BMJ 316: 449-453
13. Hughes, V., Bannantine, J. P., Denham, S., Smith, S., Garcia-Sanchez, A., Sales,
J., Paustian, M. L., Mclean, K., Stevenson, K. (2008). Immunogenicity of ProteomeDetermined Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis-Specific Proteins in Sheep
with Paratuberculosis. CVI 15: 1824-1833
204
14. Kurade, N. P., Tripathi, B. N., Rajukumar, K., Parihar, N. S. (2004). Sequential
Development of Histologic Lesions and Their Relationship with Bacterial Isolation, Fecal
Shedding, and Immune Responses during Progressive Stages of Experimental Infection of
Lambs with Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. Vet Pathol 41: 378-387
15. Marsh, I. B., Bannantine, J. P., Paustian, M. L., Tizard, M. L., Kapur, V.,
Whittington, R. J. (2006). Genomic Comparison of Mycobacterium avium subsp.
paratuberculosis Sheep and Cattle Strains by Microarray Hybridization. J. Bacteriol. 188:
2290-2293
16. Mobius, P., Luyven, G., Hotzel, H., Kohler, H. (2008). High Genetic Diversity
among Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis Strains from German Cattle Herds
Shown by Combination of IS900 Restriction Fragment Length Polymorphism Analysis
and Mycobacterial Interspersed Repetitive Unit-Variable-Number Tandem-Repeat Typing.
J. Clin. Microbiol. 46: 972-981
17. Mobius, P., Luyven, G., Hotzel, H., Kohler, H. (2008). High Genetic Diversity
among Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis Strains from German Cattle Herds
Shown by Combination of IS900 Restriction Fragment Length Polymorphism Analysis
and Mycobacterial Interspersed Repetitive Unit-Variable-Number Tandem-Repeat Typing.
J. Clin. Microbiol. 46: 972-981
18. Motiwala, A. S., Amonsin, A., Strother, M., Manning, E. J. B., Kapur, V.,
Sreevatsan, S. (2004). Molecular Epidemiology of Mycobacterium avium subsp.
paratuberculosis Isolates Recovered from Wild Animal Species. J. Clin. Microbiol. 42:
1703-1712
19. Motiwala, A. S., Strother, M., Amonsin, A., Byrum, B., Naser, S. A., Stabel, J. R.,
Shulaw, W. P., Bannantine, J. P., Kapur, V., Sreevatsan, S. (2003). Molecular Epidemiology
of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis: Evidence for Limited Strain Diversity,
Strain Sharing, and Identification of Unique Targets for Diagnosis. J. Clin. Microbiol. 41:
2015-2026
20. Motiwala, A. S., Strother, M., Amonsin, A., Byrum, B., Naser, S. A., Stabel, J. R.,
Shulaw, W. P., Bannantine, J. P., Kapur, V., Sreevatsan, S. (2003). Molecular Epidemiology
of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis: Evidence for Limited Strain Diversity,
Strain Sharing, and Identification of Unique Targets for Diagnosis. J. Clin. Microbiol. 41:
2015-2026
21. Overduin, P., Schouls, L., Roholl, P., van der Zanden, A., Mahmmod, N.,
Herrewegh, A., van Soolingen, D. (2004). Use of Multilocus Variable-Number TandemRepeat Analysis for Typing Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. J. Clin.
Microbiol. 42: 5022-5028
22. Paustian, M. L., Kapur, V., Bannantine, J. P. (2005). Comparative Genomic
Hybridizations Reveal Genetic Regions within the Mycobacterium avium Complex That
Are Divergent from Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis Isolates. J. Bacteriol.
187: 2406-2415
23. Pearce, L. E., Truong, H. T., Crawford, R. A., Yates, G. F., Cavaignac, S., de
Lisle, G. W. (2001). Effect of Turbulent-Flow Pasteurization on Survival of Mycobacterium
avium subsp. paratuberculosis Added to Raw Milk. Appl. Environ. Microbiol. 67: 39643969
24. Pickup, R. W., Rhodes, G., Bull, T. J., Arnott, S., Sidi-Boumedine, K., Hurley,
M., Hermon-Taylor, J. (2006). Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in Lake
Catchments, in River Water Abstracted for Domestic Use, and in Effluent from Domestic
205
Sewage Treatment Works: Diverse Opportunities for Environmental Cycling and Human
Exposure.. Appl. Environ. Microbiol. 72: 4067-4077
25. Rodrguez, J. G., Fissanoti, J. C., Del Portillo, P., Patarroyo, M. E., Romano, M.
I., Cataldi, A. (1999). Amplification of a 500-Base-Pair Fragment from Cultured Isolates
of Mycobacterium bovis. J. Clin. Microbiol. 37: 2330-2332
26. Salgado, M., Herthnek, D., Bolske, G., Leiva, S., Kruze, J. (2009). First isolation
of mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis from wild guanacos (lama guanicoe) on
tierra del fuego island. J Wildl Dis 45: 295-301
27. Semret, M., Turenne, C. Y., de Haas, P., Collins, D. M., Behr, M. A. (2006).
Differentiating Host-Associated Variants of Mycobacterium avium by PCR for Detection
of Large Sequence Polymorphisms.. J. Clin. Microbiol. 44: 881-887
28. Stevenson, K., Hughes, V. M., de Juan, L., Inglis, N. F., Wright, F., Sharp, J.
M. (2002). Molecular Characterization of Pigmented and Nonpigmented Isolates of
Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. J. Clin. Microbiol. 40: 1798-1804
29. Stevenson, K., Hughes, V. M., de Juan, L., Inglis, N. F., Wright, F., Sharp, J.
M. (2002). Molecular Characterization of Pigmented and Nonpigmented Isolates of
Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. J. Clin. Microbiol. 40: 1798-1804
30. Thibault, V. C., Grayon, M., Boschiroli, M. L., Hubbans, C., Overduin, P.,
Stevenson, K., Gutierrez, M. C., Supply, P., Biet, F. (2007). New Variable-Number TandemRepeat Markers for Typing Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis and M. avium
Strains: Comparison with IS900 and IS1245 Restriction Fragment Length Polymorphism
Typing. J. Clin. Microbiol. 45: 2404-2410
31. Turenne, C. Y., Collins, D. M., Alexander, D. C., Behr, M. A. (2008).
Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis and M. avium subsp. avium Are
Independently Evolved Pathogenic Clones of a Much Broader Group of M. avium
Organisms. J. Bacteriol. 190: 2479-2487
32. Turenne, C. Y., Semret, M., Cousins, D. V., Collins, D. M., Behr, M. A. (2006).
Sequencing of hsp65 Distinguishes among Subsets of the Mycobacterium avium Complex.
J. Clin. Microbiol. 44: 433-440
33. Turenne, C. Y., Wallace, R. Jr., Behr, M. A. (2007). Mycobacterium avium in the
Postgenomic Era. Clin. Microbiol. Rev. 20: 205-229
34. Turenne, C. Y., Wallace, R. Jr., Behr, M. A. (2007). Mycobacterium avium in the
Postgenomic Era. Clin. Microbiol. Rev. 20: 205-229
35. Whittington, R. J., Hope, A. F., Marshall, D. J., Taragel, C. A., Marsh, I.
(2000). Molecular Epidemiology of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis: IS900
Restriction Fragment Length Polymorphism and IS1311 Polymorphism Analyses of
Isolates from Animals and a Human in Australia. J. Clin. Microbiol. 38: 3240-3248
36. Whittington, R. J., Hope, A. F., Marshall, D. J., Taragel, C. A., Marsh, I.
(2000). Molecular Epidemiology of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis: IS900
Restriction Fragment Length Polymorphism and IS1311 Polymorphism Analyses of
Isolates from Animals and a Human in Australia. J. Clin. Microbiol. 38: 3240-3248
37. Whittington, R. J., Marsh, I., McAllister, S., Turner, M. J., Marshall, D. J.,
Fraser, C. A. (1999). Evaluation of Modified BACTEC 12B Radiometric Medium and
Solid Media for Culture of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis from Sheep. J.
Clin. Microbiol. 37: 1077-1083
38. Whittington, R. J., Marsh, I., McAllister, S., Turner, M. J., Marshall, D. J.,
Fraser, C. A. (1999). Evaluation of Modified BACTEC 12B Radiometric Medium and
206
Solid Media for Culture of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis from Sheep. J.
Clin. Microbiol. 37: 1077-1083
39. Whittington, R. J., Marshall, D. J., Nicholls, P. J., Marsh, I. B., Reddacliff, L. A.
(2004). Survival and Dormancy of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in the
Environment. Appl. Environ. Microbiol. 70: 2989-3004
207
CAPITOLUL 7
Implicaiile bacteriilor din familia Enterobacteriaceae n
producerea toxiinfeciilor alimentare
Tabelul 7.1
Familia
Genuri
Escherichia
Proteus
Providencia
Enterobacteriaceae
Klebsiella
Morganella
Serratia
Yersinia
Salmonella
Specii
E. coli, E. adecarboxylata, E. albertii, E. fergusonii,
E. hermannii, E. vulneris, E. blattae
K. pneumoniae ( subsp. pneumoniae i rhinoscleromatis), K. granulomatis, K. mobilis, K. ornithinolytica, K. oxytoca, K. ozaenae, K. planticola, K. rhinoscleromatis, K. singaporensis (Li i col. 2004), K.
terrigena, K. trevisanii, K. variicola (Rosenblueth i
col.. 2004)
P. vulgaris, P. hauseri, P. inconstans, P. mirabilis,
P. morganii, P. myxofaciens, P. penneri, P. rettgeri
(Prov. rettgeri)
Prov. rettgeri, Prov. stuartii, Prov. alcalifaciens, Prov.
friedericiana, Prov. heimbachae, Prov. rustigianii
M. morganii (subsp. morganii i sibonii)
S. marcescens (subsp. marcescens i sakuensis), S.
entomophila, S. ficaria, S. fonticola, S. grimesii, S.
liquefaciens sakuensis (Ajithkumar i col. 2003), S.
marinorubra, S. odorifera, S. plymuthica, S. proteamaculans, S. proteamaculans (subsp. proteamaculans
i quinovora), S. quini-vorans, S. rubidaea, S.
ureilytica (Bhadra i col. 2005)
Y. pseudotuberculosis (subsp. pseudotuberculosis
i pestis), Y. enterocolitica (subsp. enterocolitica
i palearctica), Y. aldovae, Y. aleksiciae (Sprague
i Neubauer 2005), Y. bercovieri, Y. frederiksenii,Y.
intermedia, Y. kristensenii, Y. mollaretii, Y. pestis, Y.
philomiragia, Y. rohdei, Y. ruckeri
S. enterica (subsp. arizonae, bongori, diarizonae,
enterica, houtenae, indica i salamae), S. bongori,
S. choleraesuis ( subp. arizonae, bongori, choleraesuis, diarizonae, houtenae, indica i salamae), S.
enteritidis, S. typhi, S. typhimurium S. arizonae, S.
paratyphi, S. subterranea (Shelobolina, 2005),
208
Aspecte particulare
Forma S
Forma R
Bulion simplu
limpede ori tulbure n
tulbure, uniform,
(bulion glucozat,
grade diferite, cu inel
fr depozit
Mediul I)
ori vl i cu depozit
Agar nutritiv
VV
colonii mucoide de 4-5
mm, rotunde, bombate, cu
margini regulate, tendin
la confluare, aspect mucos
(frecvente la Klebsiella i
Escherichia;
VV
colonii pigmentatea;
VV
cretere
invaziv:
n jurul coloniei se
dezvolt zone de migrare
concentrice (caracteristic
pentru genul Proteus)
Agar-snge
ca
pe
agarul
nutritiv;
unele
similare formei S
tulpini
dezvolt
hemoliz
Tabelul 7.3 a.
Medii folosite n diagnosticul enterobacteriaceelor
(dup Carp-Crare M., 1997)
Mediul
Substana
Substana
hidrocar- Indicator
inhibant
bonat
Aspectul coloniilor
Pozitiv
Negativ
sruri biliare
integrale i lactoz
cristal violet
rou
neutru
roii, cu halou
opalescent
necolorate
sruri biliare
(dezoxicolat
de Na)
lactoz
rou
neutru
roii
rou
neutru
roii, cu
centrul opac
necolorate semitransparente
Mac Conkey
(MC)
Leifson
(ADCL)
Istati Meitert
(M)
bil uscat
lactoz
albastru
galbene opace verzui sau albastre
bromtimol
Geloz verde
briliant sau
Christensen
(V.B.)
verde
briliant
lactoz
rou fenol
Wilson Blair
(W.B)
verde
briliant
glucoz
sulfit de
bismut
Levin (EMB)
lactoz
eozin
albastru
metilen
Drigalski
(dup Le
Minor)
lactoz
bromtimol
galbene
albastre
Endo
lactoz
fuxin,
hiposulfit
de Na
roii
incolore
Geloza
lactozat
i albastru
bromtimol
lactoz
albastru
bromtimol
galbene
albastre
lactoz
Metacromgelb
i Wasserblau
albastre
galbene
Gassner
210
galbeneverzui
roii
majoritatea enterobacteriaceelor
se dezvolt greu, exceptnd
Salmonella
negre, cu luciu
necolorate sau roz
metalic
Tabelul 7.3 b.
Aspectul coloniilor la principalele genuri de enterobacteriacee
Mediul
Salmonella
Shigella
Escherichia
Proteus
Wilson Blair
colonii umede,
negre pentru
S. typhimurium;
colonii plate,
verzui pentru
S. suipestifer i
S. typhimurium
nu se dezvolt
(afar de
S. flexneri i
S. sonnei, care
dau colonii
brune)
nu crete sau
d colonii rare,
mici, gri
colonii verzi,
neinvadante
Leifson
colonii incolore
colonii incolore
colonii roii
colonii cu
centrul negru
Christensen
Lester i
Jurgens
colonii netede,
roii sau roz
strlucitoare
colonii groase,
colonii netede
galbene-verzui
roii, strlucitore
strlucitoare
SS
colonii incolore,
cu centrul negru
colonii incolore
pentru salmonelele
ce dau H2S
Istrati Meitert
colonii verzi,
albstrui
Geloza verde
briliant
colonii roii
(Christensen)
colonii izolate,
mucoase,
galbene sau roz
colonii rare
neinvadante
colonii izolate,
central opace,
devenind negre
nu crete
colonii verzui
uneori colonii
rare roii,
neinvadante
Mac Conkey
colonii incolore
colonii incolore
colonii roii
cu inele
invadeaz
periferice de bil
precipitat
Levin
(E.M.B.)
colonii incolore
colonii incolore
Geloz
lactozat
turnesolat
(Drigalski)
colonii albastre
colonii albastre
colonii roii
invadeaz
Endo
colonii incolore
colonii incolore
colonii roii
invadeaz
211
Genul
Tabelul 7.4
Familia Enterobacteriaceae: identificarea preliminara
(dup Negu M., 1999)
Mediul T.S.I.
Mediul M.I.L.F.
Citrat
Glucoza
Lizin- Fenil-ala- Urea(SimLactoza/
Mobi(coloana) H2S
Indol decar- nindeza- z
mons)
Zaharoza litate
boxilaz minaz
Acid Gaz
Escherichia
+b
+c
+b
+d
Shigella
Salmonella
+c
+f
+g
+f
+h
Citrobacter
Klebsiella
+i
+i
+i
+i
Enterobacter +
Hafnia
+22C
Serratia
+j
Proteus
+k
Providencia
Morganella
+
+
+
+
+22Yersinia
+
V
V
+
30C
a
Simboluri: + = majoritatea tulpinilor pozitive; - = majoritatea tulpinilor negative; V =
variaii n funcie de specie.
b
Cu excepia E. coli inactiv.
c
Escherichia fergusonii i majoritatea tulpinilor de E. vulneris i E. coli inactiv nu formeaz
lactoz/zaharoz.
d
Exceptnd E. vulneris.
e
Exceptnd serovarurile typhi i tallinarum de S. enterica.
f
Exceptnd serovarul paratyphi A de S. enterica.
g
Exceptnd serovarurile gallinarum i pulorum de S. enterica.
h
Exceptnd serovarurile tiphy, paratiphy A., gallinarum i pullorum de S. enterica.
i
Exceptnd K. rhinoscleromatis.
j
Exceptnd Serratia plymuthica.
k
Tulpinile de P. myxofaciens nu produc H2S, iar cele de P. penneri produc doar n proporie
de 30%.
212
Mobilitate
Mobili
Imobili
Citrat
Citrat
Lactoz
Lactoz
-
Citrobacter
Enterobacter
Citrobacter
Enterobacter
Ureaz +
Ureaz -
Ureaz -
Ureaz +
Klebsiella
Shigella
Citrobacter
Proteus
Schema 7.2
Lactoz
Lactozo -
Lactozo +
Glucoz
Indol
+
Citrat
Uree
+
Mobilitate Pseudomonas
alcaligenes
-
Citrobacter
Escherichia
Klebsiella
Enterobacter
+
Uree
H2S
Proteus
Salmonella
213
Shigella
CAPITOLUL 8
Implicaiile bacteriilor din genul Salmonella n producerea
toxiinfeciilor alimentare
8.1. Caractere generale
Toxiinfeciile alimentare produse de salmonele, din punct de vedere al
frecvenei i al implicaiilor igienico-sanitare ocup primul loc n majoritatea
rilor. Acestea apar mai frecvent n anotimpurile calde (mai-octombrie),
cnd exist mai muli purttori umani i animali, temperatura fiind factor
favorabil pentru dezvoltarea i multiplicarea germenilor.
Exist peste 2700 de serotipuri Salmonella, grupele majore fiind
reprezentate de:
- grupul I S. enterica subsp. enterica;
- grupul II S. enterica subsp. salamae;
- grupul III S. enterica subsp. arizonae;
- grupul III b S. enterica subsp. diarizonae;
- grupul IV S. enterica subsp. houtenae;
- grupul V S. enterica subsp. indica.
Grupul V a cptat statutul de specie, ca S. bongori. Aceste schimbri
au avut loc pe baza hibridizrilor DNA-RNA i a electroforezei enzimatice
multiloculare. Serovarurile se pot scrie cu liter mare. De exemplu: S.
enterica serovar Typhimurium poate fi notat S. typhimurium. Din punct de
vedere epidemiologic, salmonelele pot fi plasate ntr-una din urmtoarele
trei grupe:
1. Serotipuri monopatogene pentru om: S. Typhi, S. Paratyphi A, S.
Paratyphi C, care sunt agenii febrei tifoide i paratifoide.
2. Serovaruri adaptate gazdei (patogeni umani ce pot fi contactai din
alimente). S. Gallinarum (carnea de pasre), S. Dublin (carnea de vit),
S. Abortus-equi (cal), S. Abortus-ovis (oaie), S. Choleraesuis (carnea de
porc).
3. Serovaruri inadaptate (fr gazd preferenial); patogeni
pentru oameni i animale i includ majoritatea serovarurilor care produc
214
toxiinfeciile alimentare.
Principalele rezervoare pentru infecia uman sunt psrile, bovinele,
ovinele i porcinele.
La oameni, prezena i severitatea simptomelor depind de doza
infectant. Tipic, apare o diaree apoas, cu durat de cteva zile, ce duce
la deshidratare, cu dureri abdominale i febr joas. Septicemia i formarea
abceselor sunt rare.
La animale este frecvent infecia subclinic, multe dintre acestea fiind
purttori intermiteni sau persisteni. Bovinele, pot prezenta febr, diaree,
avorturi. La viei apar epizootii de diaree, cu o mortalitate nalt.
La porcine, febra i diareea sunt mai puin frecvente dect la bovine.
Ovinele, caprinele i psrile infectate nu prezint de obicei nici un
semn de infecie.
Profilaxia i combaterea toxiinfeciilor alimentare includ msuri de
educare a celor care manipuleaz alimentele pentru meninerea igienei
corespunztoare n buctrii, prepararea adecvat a crnii, refrigerarea
alimentelor preparate i prevenirea contaminrii ncruciate, pasteurizarea
laptelui, msuri de igien personal i reducerea contaminrii carcaselor de
psri n abatoare. Iradierea crnii i a altor alimente nainte de achiziionare
va reduce contaminarea.
Salmoneloza uman se poate manifesta sub dou forme clinice. Cea
mai sever este febra enteric, produs de S. typhi sau S. paratyphi A, B sau
C.
Cu puine excepii, n cazul febrei paratifoide B transmiterea este
interuman, fr implicarea animalelor. Toate celelalte salmonele aparin
n primul rnd animalelor i unele pot fi transmise la om, producnd
salmoneloza non-tifoidic.
8.2. Istoric
n 1880, Eberth i Koch, au evideniat n foliculii limfatici necrotici
la decedaii de febr tifoid, un bacil incriminat n etiologia bolii, pe care
ulterior Gartner reuete s-l cultive.
Salmon i Smith, n 1885, izoleaz Bacillus choleraesuis de la
porcii cu pest, iar Gartner descrie n 1888 n Germania prima toxiinfecie
alimentar, cu 58 de mbolnviri n urma consumului de carne de vit tiat
de necesitate i atribuie acestui microorganism numele de B. enteritidis.
n anul 1900, Ligniers, separ pasteurelele de grupul de bacterii
descris de Salmon i constituie un nou gen, n cadrul bacteriilor intestinale
Gram negative, pe care l intituleaz Salmonella.
215
8.3. Taxonomie
Termenul de Salmonella a fost adoptat n onoarea unui medic
veterinar american, Daniel E. Salmon, care a participat la studiile iniiale.
Genul Salmonella face parte din familia Enterobacteriaceae. Popoff i
Le Minor propun clasificarea genului Salmonella n dou specii: S. enterica
i S. bongori.
Tabelul 8.1
Specia
enterica
bongori
Om
Serotipuri de
Salmonella
Infecia produs
S. typhi
febra tifoid
S. paratyphi
febra paratifoid
S. schottmuelleri
febra paratifoid
S. enteritidis
toxiinfecii alimentare
S. typhimurium
toxiinfecii alimentare
S. dublin
Bovine S. typhimurium
S. bovimorbificans
S. choleraesuis i
izbucniri clinice severe, similare cu cele din pesta porcin;
S. choleraesuis
complicaii secundare n pesta porcin
Porcine biotip Kunzerdorf
Ovine
S. typhisuis
S. abortus ovis
avort la oaie
S. montevideo
S. dublin
S. typhimurium
S. anatum
217
Gazda
Serotipuri de
Salmonella
S. abortus equi
Cabaline
S. typhimurium
Gini
i alte
psri
Infecia produs
avort la iap
enterite sau septicemie, mai ales la mnji dar i la adulii
supui stresului
S. pullorum
S. gallinarum
S. enteritidis
S. typhimurium
8.4. Morfologie
Salmonella (cu excepia lui S. pullorum-gallinarum) este o
enterobacterie mobil, respectiv un bacil sau cocobacil Gram negativ,
cu dimensiuni de 0,6/2-4 microni. Este necapsulogen i nesporogen.
Serotipurile de S. enterica subsp. enterica prezint fimbrii manozosenzitive,
cu rol de adezine la celulele epiteliale intestinale. Salmonelele din serotipul
pullorum-gallinarum au fimbrii neadezive de tip 2 i din aceast cauz sunt
apatogene pentru om.
S. enterica subsp. arizonae i diarizonae posed fimbrii
hemaglutinante.
Coninutul n guanin i citozin al DNA este de 50 moli % (prin
analiz biochimic, Hill, 1966).
Majoritatea tulpinilor genului sunt sensibile la fagul 01 al lui Felix i
Callow (1943). Acest fag este nalt specializat pentru Salmonella, liznd
99,5% din tulpinile testate (din acest gen) i numai 0,3% din tulpinile ce
aparin altor membrii ai familiei (Thall i Kalligs, 1955).
FURAJE*
ANIMALE PENTRU
CONSUM
ANIMALE
IMPORT
ABATOR
PROCE SARE
VECTORI
MEDIU
AP
SOL
ALIMENT
OM
219
Lactoz pozitive
eozin albastru de
metilen (Levin)
agar dezoxi-colat
citrat lactoz
(Leifson)
ADCL
HE
XLD
Salmonella spp.
colonii roii
Yersinia colonii
0,5 mm incolore,
translucide
Moderat
selective (2448 ore, citire agar Salmonella
interm. la 24 Shigella (Difco)
ore)
SMID (bio
Mrieux)
SMID
S.S.
IM
Hektoen en-teric
Moderat
King i Metzger
selective (2448 ore, citire
xiloz-lizin
interm. la 24
dezoxicolat
ore)
(Taylor)
Y. cholerae colonii
incolore, translucide
ori roz
R.A.
Slab selective
(24 ore)
Observaii
Lactoz negative
MC
Mediul
Dezvoltarea enterobacteriaceelor
- colonii -
EMB
Categoria
selectiv
(incubare
35-37C)
Abrev.
Tabelul 8.3
Dezvoltarea enterobacteriaceelor lactoz negative i lactoz pozitive pe mediile
selective (adaptat dup Duca E., 1977)
220
Abrev.
Lactoz pozitive
agar-sulfur de
bismut (WilsonBlair)
WB
Mediul
Dezvoltarea enterobacteriaceelor
- colonii -
inhibiie
AVB
Categoria
selectiv
(incubare
35-37C)
inhibiie
Observaii
Lactoz negative
1-2 mm, negre, roii, halou Shigella i Yersinia nu
negru metalic
se dezvolt
nalt selective
(48 ore)
1-2 mm roii, halou rou
Shigella i Yersinia nu
se dezvolt
221
Tabelul 8.4
Caractere difereniale ale speciilor i subspeciilor de Salmonella
(dup Negu, 1999)
-galactozidaza
Gelatinaza
Galacturonat
Crete n mediu
cu KCN
Malonat
Mucat
d-tartrat
-glutamil
transferaza
-glucuronidaz
Dulcitol
Salicin
Sorbitol
Lactoz
Liza prin fag O1
Habitat
Salmonella
enterica salamae arizonae diarizonae houtenae indica bongori
-
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
d
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
-
+
d
-
+
-
+
-
d
+
+
+
d
+
+
+
+
-75%
-
+
+
+75%
+
+
+
-
d
d
+
+
+
+
d
d
animale cu
snge cald
Testul
animale cu
snge rece
Tabelul 8.5
Salmonella enterica subsp. enterica: diferenierea biochimic a serovarurilor
(dup Negu, 1999)
Serovarurile
Celelalte
Testul
typhi paratyphi A choleraesuis gallinarum pullorm serovaruri
Gaz din glucoz
+
+
+
+
Citrat (Simmnons)
d
+
+
H2S
(48h)
+
Lizindecarboxi+
+
+
+
+
laz
Ornitindecarboxi+
+
+
+
laz
Mobilitate
+
+
+
+
222
Tabelul 8.6
Structura antigenic a serovarurilor de Salmonella mai frecvent circulantea
(dup Negu, 1999)
Structura antigenic
Serovarul
H
O
1
2
Grup A
Paratyphi A
a
1, 2, 12
Grup B
Paratyphi B
b
1,2
1,4/5/12
Java
1,4/5/12
b
/1,2/
Abony
1,4/5/12
b
c, n, x
Schleissheim
4, 12, 27
b, z12
Saintpaul
4/5/,12
c, h
1,2
Reading
1,4/5/,12
c, h
1,5
Kaapstad
4,12
c, h
1, 7
Chester
5/5/,12
c, h
e, n, x
Derby
1,4/5/,12
f, g
/1,2/
Agona
1,4,12
f, g, s
Essen
4,12
g, m
California
4,5,12
m, t
Typhimurium
1,4/5/12
i
1,2
Bredeney
1,4,12,27
l, v
1,7
Kimuenza
1,4,12,27
l,v
e, n, x
Heidelberg
/1/,4,5,/12/
r
1,2
Haifa
1,4,/5/,12
z10
1,2
Grup C1
Ohio
b
l, w
6,7
Paratyphi C
6,7/Vi/
c
1,5
Choleraesuis
6,7
c
1,5
Choleraesuis var.
6,7
/c/
1,5
kunzendorf
Typhisuis
6,7
c
1,5
Isangi
6,7
d
1,5
Livingstone
6,7
d
1, w
Lomita
6,7
c, h
1,5
Braenderup
6,7
c, h
e, n, z15
Montevideo
6,7
g, m, s
/1,2,7/
Weltevreden
3,10
r
z6
Amager
3,10
y
1,2
Orion
3,10
y
1,5
Grup E2
Newington
c, h
1,6
3,15
225
Serovarul
Tucbinger
Senftenberg
Taksony
Aberdeen
Rubislaw
Poona
Durham
Grumpensis
Worthington
Cubana
Gaminara
Minnesota
Adelaide
Johannesburg
Waycross
Houten IV
Oranienburg
Thompson
Concord
Irumu
Colorado
Virchow
Infantis
Tennessee
Lille
Menchen
Manhattan
Newport
Kottbus
Chincol
Bonariensis
Blockley
Structura antigenic
H
1
y
O
3,15
Grup E4
1,3,9
1,3,19
Grup F
11
11
Grup G1
1,13,22
Grup G2
13,23
13,12
1,13,23
1,13,23
Grup I
16
Grup L
21
Grup O
35
Grup R
41
Grup S
41
43
6,7
6,7
6,7
6,7
6,7
6,7
6,7,/14/
6,7
6,7
Grup C2
6,8
6,8
6,8
6,8
6,8
6,8
6,8
2
1,2
g/s/t
226
z6
1,2
c, n, x
1,6/z59
c, n, z15
d
z
z29
1,7
1,w
-
1,7
c, n, x
f, g
c, n, x
z4, z23
z4, z23
m, t
k
l, v
l, v
l, w
r
r
z29
z38
z4, z23
1,2
1,2
1,5
1,5
1,2
1,5
-
1,2
d
c, h
c, h
g, m, s
i
k
1,2
1,2
1,5
c, n, x
c, n, x
1,5
Serovarul
Structura antigenic
H
1
l, v
l, v
r
z10
z10
z10
Litchfield
Manchester
Bovismorbificans
Hadar
Glostrup
Wippra
6,8
6,8
6,8
6,8
6,8
6,8
Grup C3
/8/,20
/8/,20
Grup C4
6,/7/,/4/
6,/7/,/4/
Grup D1
9,12,/Vi
1,9,12
1,9,12
1,9,12
9,12
1,9,121,122
1,9,121,121
Grup E1
3,10
3,10
3,10
3,10
3,10
3,10
3,10
3,10
Emek
Kentucky
Eimsbuettel
Jerusalen
Typhi
Enteridis
Dublin
Javiana
Wangata
Pullorum
Gallinarum
Butantan
Muenster
Anatum
Meleagridis
Westhampton
Sinstorf
London
Give
2
1,2
1,7
1,5
c, n, x
c, n, z15
z6
g, m, s
z6
l, w
z10
l, w
g, m
g, p
l, z28
z4z23
-
1,5
/1,7/
-
1,5
c, h
c, h
c, h
g, s, t
l, v
l, v
l, v
1,5
1,6
l, w
1,5
1,6
1,7
formula antigenic.
Schema Kauffmann-White este un catalog iniiat de Kauffmann care
conine un inventar al tuturor serotipurilor de Salmonella, aezate pe grupe
serologice. n dreptul fiecrui serotip este notat formula antigenic.
8.9. Ecologie
Salmonelele se gsesc n tubul digestiv al omului, mamiferelor,
psrilor i animalelor cu snge rece. Cele dou surse majore, omul i
animalele sunt responsabile de poluarea solului, apelor reziduale, apelor
de suprafa n care pot supravieui luni i chiar ani (n sol). O suit de
factori, printre care intensificarea comerului i a cltoriilor la mari
distane, migraiile populaionale, industrializarea alimentaiei i a creterii
animalelor de consum (porci, psri), n mari colectiviti consumatoare
de hran cu adaosuri proteice, deseori contaminate (finuri furajere de
carne, oase, snge) au contribuit la rspndirea serovarurilor i la creterea
morbiditii prin salmoneloze. Factorii sezonieri i clima cald favorizeaz,
n condiii precare de igien, nivelul morbiditii. Cu puine excepii
serovarul Typhi i Paratyphi, pentru om; ser. Abortus ovis, pentru ovine;
ser. Typhisuis, pentru porci i ser. Gallinarum/Pullorum pentru psri toate
celelalte serovaruri nu au specificitate de gazd.
Numeroi vectori (insecte, roztoare, psri, carnasiere, apele reziduale
din ferme, abatoare etc.) constituie verigi importante n declanarea unor
enzootii de salmoneloz. S-a demonstrat c musca domestic, nu numai c
vehiculeaz pasiv salmonelele, dar le i transmite trasovarian, iar albinele
fac o salmoneloz chimic. Gndacul de buctrie, furnica, ixodidele,
argasidele, pot vehicula i ele infecia salmonelic. Nu exist ecosistem
n natur n care salmonelele s nu fie prezente. obolanii s-au dovedit a fi
unul dintre rezervoarele principale, pentru animalele domestice i om. Cinii
sunt vectori pentru numeroase serotipuri. De la acetia s-au identificat: S.
typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis, S. anatum.
Malnutriia, avitaminozele, dismineralozele i micotoxicozele
contribuie i ele prin debilitarea organismului. n afara transmiterii pe
orizontal se nregistreaz i infecii cu transmitere vertical, transplacentar,
n special la oaie i iap, la care infecia se exprim prin avort.
Transmiterea vertical este, de asemenea, o caracteristic a salmonelozei
psrilor, dat de serotipuri imobile (ser. Gallinarum/Pullorum).
228
8.10. Patogenitate
Salmonelele au grade diferite de patogenitate care variaz n funcie
de serotip. n tabelul Kauffmann-White, figureaz i numeroase serotipuri,
al cror rol patogen este necunoscut, unele dintre acestea fiind izolate o
singur dat. Salmonelele au capacitatea de a se multiplica n organism,
att extracelular ct i intracelular. Imunitatea fa de salmonele este
mediat celular i dependent de imunoglobulinele netransferabile pe cale
placentar.
Orice infecie cu salmonele induce o imunitate specific de serotip.
ntr-un organism imunizat antisalmonelic (vaccinuri vii, vaccinuri atenuate),
macrofagele nu mai permit nmulirea intracelular a germenilor, iar fa de
cei aflai extracelular sunt active imunoglobulinele i complementul.
Salmonelele i datoreaz patogenitatea, att virulenei, ct i
toxicitii. Acestea posed mai muli factori de virulen, care faciliteaz
invazia celulelor non-fagocitare, supravieuirea n mediul intracelular i
replicarea n interiorul celulei gazd.
Dup ingestia microorganismului, urmtoarea etap a procesului
patogen este reprezentat de penetrarea epiteliului intestinal. O dat
penetrate, aceste celule, bacteriile sunt incluse n vacuole intracitoplasmatice
delimitate de o membran.
Salmonelele virulente supravieuiesc i se multiplic n aceste vacuole
i n final lizeaz celulele gazd i disemineaz n organism.
Supravieuirea salmonelelor n interiorul incluziilor implic blocarea
fuziunii ntre fagozomi i lizozomi. Totodat, prin depolarizarea barierelor
epiteliale, salmonelele afecteaz integritatea jonciunilor intercelulare,
fenomen ce se traduce prin favorizarea leziunilor citotoxice (semnificative)
ale celulelor epiteliale.
Salmonelele nu au nevoie de mobilitate sau de fimbrii (ca speciile
Yersinia spp., Escherichia coli), pentru a adera i invada celulele eucariote
(E. J. Threlfall).
Pentru invazie este necesar sinteza proteic de novo, care este
reglat de concentraia sczut n oxigen, de faza de cretere sau de suprafaa
celulelor epiteliale.
Virulena reprezint mecanismul major de agresiune i const n
capacitatea de a se ataa, a se multiplica i a invada peretele intestinal.
Ataarea salmonelelor la enterocit se realizeaz prin intermediul fimbriilor
(fie manoz sensibile tip 1, fie manoz rezistente tip 3) a adezinelor de
suprafa i hemaglutininelor sau prin peptidele induse de enterocit. Zona de
ataare o reprezint receptorii glicoproteici ai celulei intestinale, localizai
229
ficat i splenomegalie.
Pentru salmonelele imobile se folosesc n infecia experimental puii
de gin.
C. Cabaline
Se ntlnesc serotipurile: typhimurium, enteritidis, derby, bovis,
mortificans, choleraesuis, newport, anatum, dublin i altele care produc
salmoneloza franc a cabalinelor. Infecia are o evoluie sporadic, rar
enzootic i afecteaz de obicei animalele tinere, de 6-18 luni.
S. abortusequi, produce avortul salmonelic al iepelor i a fost izolat
n 1893 de Smith i Kilborne din secreia vaginal a iepelor care au avortat
(R. M. Mnzat).
D. Suine
Serotipul cu cea mai mare implicaie n patologie este S. choleraesuis,
cu dou varieti:
monofazic sau Kunzendorf;
bifazic sau american.
Din acestea au derivat prin mutaii selective S. typhisuis i S. paratyphi
C (tabelul 8.7).
Tabelul 8.7
Serotipuri patogene pentru porc (adaptat dup Edwards i Ewing)
Specia
Antigen
Antigen H
Vi
Specifice
Nespecifice
VI
VI, VII
1, 4, 5
VI, VII
1, 3, 4, 5
VI, VII
1, 3, 4, 5
4. S. typhisuis
VI, VII
1, 3, 4, 5
5. S. typhisuis
v. voldagsen
VI, VII
1, 3, 4, 5
Grupa C
1. S. paratyphi C
2. S. choleraesuis
v. american
3. S. choleraesuis
v. kunsendorf
mobilitate;
amprentarea plasmidic;
urmtoarele metode:
ribotipizarea;
rmn purttoare.
La bovine, n marea majoritate a cazurilor, infecia clinic este produs
de S. dublin i S. typhimurium, vaccinurile comerciale mpotriva acestor
serotipuri avnd o larg utilizare.
La psri, S. enteritidis poate produce manifestri clinice. Un vaccin
recent, care utilizeaz o tulpin de S. enteritidis cultivat n condiii de
depleie de fier, a redus ratele mortalitii, i contaminrii coninutului
oulor la psri infectate experimental.
Diseminarea infeciei de ctre psrile slbatice (pescrui) reprezint
un mijloc important de contaminare a mediului.
ansele de a produce animale libere de salmonele cresc prin asigurarea
unei biosecuriti corespunztoare, prin programe eficiente de combatere a
roztoarelor, igien i dezinfecie.
Unul dintre cele mai eficiente tratamente ale produsului finit l
constituie iradierea. Dempster (1985) a demonstrat c aceasta distruge
salmonelele din carcasele de pui.
n ceea ce privete carnea roie, s-a dovedit c pulverizarea cu
ap fierbinte (80C) sau acid lactic pot fi utilizate cu bune rezultate n
decontaminarea carcaselor.
Pe lng msurile de igien aplicate n ferme, reducerea timpului
de transport i limitarea timpului de ateptare naintea sacrificrii, reduc
substanial riscul contaminrii cu Salmonella.
Trebuiesc instituite programe educaionale care s accentueze
importana splrii minilor, a depozitrii i refrigerrii adecvate a
alimentelor, a igienei buctriilor i a prevenirii contaminrii ncruciate.
Combaterea epidemiilor se bazeaz pe urmtoarele aspecte:
VVspitalizarea i tratamentul pacienilor;
VVidentificarea i supravegherea contacilor i a altor persoane
expuse aceleai surse;
VVblocarea transmiterilor ulterioare;
VVdepistarea i eliminarea cauzei epidemiei.
Infecia cu Salmonella are cel mai frecvent ca rezultat o afeciune de
tip gastroenterit, cu diaree i, uneori, un numr de alte simptome.
ntr-o epidemie din Canada asociat cu brnza Cheddar, doza infectant
de S. typhimurium la aduli anterior sntoi a fost calculat ca fiind mai
mic de 10 celule.
Rata medie a atacului n epidemiile de salmoneloz n care vehiculul
era carnea de pasre a fost estimat la 20%.
239
Simptom
Procent de cazuri*
Diaree
87
Durere abdominal
84
Stare febril
75
Grea
65
Mialgii
64
Vrsturi
24
Cefalee
21
Scaune sangvinolente
6
* Date dintr-o epidemie cu S. enteritidis cu transmitere prin ou.
8.15. Epidemiologie
Raportrile naionale continu s semnaleze Salmonella ca cel mai
important agent etiologic al toxiinfeciilor alimentare.
Salmoneloza uman continu s fie o problem internaional major,
att ca morbiditate ct i din punct de vedere economic.
n multe ri numrul de cazuri raportate de salmoneloz non-tifoidic
a crescut substanial n decursul ultimilor 10 ani. Acestea sunt asociate
n mare parte cu S. enteritidis, tipul fagic (TF)4, predominnd n Europa
occidental, (TF)1 Europa de Est i (TF)8 i 13 n Statele Unite.
n 2006 statele membre ale Uniunii Europene alturi de Islanda i
Norvegia (cu excepia Liechtensteinului care nu a raportat) au avut 171.791
alerte de toxiinfecii salmonelice din care 168.639 au fost confirmate,
aceasta a fcut ca rata medie a notificrilor s fie 34 la 100.000 locuitori.
(tabelul 8.8).
Tabelul 8.8.
Numrul i rata notificrilor cazurilor de salmoneloz uman n UE i EEA/EFTA,
n 2006 (Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
Nr. cazuri per
Tipul de raporCazuri confirpopulaii de
ara
Total cazuri
tare
mate
100.000 de
oameni
Austria
C
4787
4787
57,9
Belgia
C
3630
3630
34,5
Bulgaria
A
1056
1056
13,7
Cipru
C
99
99
12,9
241
ara
Republica Ceh
Danemarca
Estonia
Finlanda
Frana
Germania
Grecia
Ungaria
Irlanda
Italia
Latvia
Lituania
Luxembourg
Malta
Olanda
Polonia
Portugalia
Romnia
Slovacia
Slovenia
Spania
Suedia
Marea Britanie
Total UE
Islanda
Liechtenstein
Norvegia
Total
Tipul de raportare
C
C
C
C
C
C
C
C
C
C
C
A
C
C
C
A
C
A
C
C
C
C
C
C
N
C
Total cazuri
Cazuri confirmate
25102
1662
453
2576
6008
52575
985
9752
422
6272
866
3557
308
63
1667
13362
415
645
8784
1519
5117
4056
14124
169862
116
1813
171791
24186
1662
453
2576
6008
52575
890
9389
420
6272
781
3467
308
63
1667
12502
387
645
8191
1399
5117
4056
14124
166710
116
1813
168639
Sezonalitatea.
Luna cu cele mai multe cazuri de salmoneloz uman raportate a fost
septembrie. Cnd s-au analizat sezonier cazurile de salmoneloz, fr a se
lua n calcul Germania, luna cu cele mai multe cazuri a fost august. Totui,
este evident c un numr semnificativ mai mare de salmoneloz uman este
semnalat spre finalul verii.
Cazuri
Figura 8.2.
Distribuia sezonier a cazurilor de listerioz uman n EU i EEA/EFTA n
2006 (Centrul European Pentru Prevenirea i Controlul Bolilor, 2008)
Serovar
Enteritidis
Typhimurium
Infantis
Virchow
Newport
Hadar
Sursa: TESSy.
Tabelul 8.9
Anul
2008
Probe
Probe
analizate
pozitive
10
2
8
3
10
2
9
4
250
Probe
analizate
8
4
5
4
2009
Probe
pozitive
3
2
3
3
Sortiment
Anul
Carne de vit
Hamburger
ngheat
Lapte i derivate
Lapte praf
Ou
Produse de patiserie
Salate cu compoziie proteic
Total
2008
Probe
analizate
7
8
5
6
6
10
8
7
94
Probe
pozitive
0
2
1
2
2
4
0
2
24
Probe
analizate
10
11
5
5
9
10
8
11
90
2009
Probe
pozitive
2
2
1
0
0
2
1
3
22
Numrul
total de
probe
18
12
15
13
17
19
10
11
15
20
16
18
Dintre care
Negative
Pozitive
13
7
10
6
15
15
8
9
13
14
15
7
72,22
58,33
66,66
46,15
88,23
78,94
80,00
81,81
86,66
70,00
93,75
38,88
5
5
5
7
2
4
2
2
2
6
1
5
27,77
41,66
33,33
53,84
11,76
21,05
20,00
18,18
13,33
30,00
6,25
27,77
Serovar
Procent
1
2
3
4
5
S. Enteritidis
S. Typhimurium
S. Thompson
S. Anatum
S. Agona
27
11
3
2
1
58,69
23,91
6,52
4,34
2,17
251
6
7
S. Dublin
S. London
1
1
2,17
2,17
Total
46
253
Metoda de lucru
Controlul curent al alimentelor pentru detectarea salmonelelor se
face conform metodelor stabilite de standarde, din care menionm pe cea
descris n ISO 6579/1995.
1. Prembogire neselectiv: se cntresc 25 grame de produs
alimentar n 225 ml ap peptonat tamponat;
2. Se incubeaz la 35C, 24 de ore;
3. mbogire selectiv: a) se transfer 0,1 ml cultur obinut n faza
de prembogire ntr-o eprubet care conine 10 ml de bulion tetrationat
(M72);
b) se transfer 1 ml cultur din mediul de prembogire selectiv
ntr-o eprubet cu 10 ml de bulion selenit cistin (SC).
Numai n cazul amestecului de probe incubate care conin molute, se
transfer 0,1 ml la 10 ml de mediu Rappaport-Vassiliadis (RV) (M59) i un
alt mililitru la 10 ml de bulion TT.
4. Se incubeaz bulioanele la 35C, 24 de ore.
5. Izolarea pe medii selective agarizate:
a) Se striaz cu ajutorul unei anse pe suprafaa unei plci Petri mari
(140 mm), care conine primul mediu selectiv de izolare n trei plci cu agar
BS (agar cu sulfit de bismut HE (agar Hekten enteric) (M43) i XLD (agar
cu xiloz-lizin-dezoxicolat) (M69). Plcile cu sulfit de bismut se prepar cu
o zi nainte i se pstreaz pn la nsmnare la ntuneric i la temperatura
camerei. Se repet nsmnarea cu 3 ml de bulion din cultura obinut n
mediul Rappaport-Vasiliadis pe agar cu rou fenol i verde briliant Edel i
Kampelmaker, pentru probele de molute.
b) Se procedeaz la fel i cu cel de-al doilea mediu de izolare selectiv
SC (bulion selenit cistin) n vederea obinerii de colonii izolate.
Mediul BS este nalt selectiv, iar HE i XLD sunt moderat selective.
6. Se incubeaz plcile la 35C, 24-48 ore.
7. Se examineaz plcile pentru prezena unor colonii suspecte de a
face parte din genul Salmonella.
a) Agar Hekten enteric (HE) (M43) coloniile tipice sunt albastre
verzui sau bleu, cu sau fr centru negru; multe culturi de Salmonella
pot produce colonii cu centre mari, negre, lucioase sau pot s apar sub
forma unor colonii aproape complet negre; n mod atipic, cteva specii de
Salmonella produc colonii galbene, cu sau fr centre negre.
b) Agar cu sulfit de bismut (BS) (M23) coloniile tipice de Salmonella
pot fi maro, gri sau negre; uneori prezint luciu metalic; mediul din jurul
coloniilor este, de obicei, la nceput cafeniu, dar poate deveni negru, o dat
254
ureea mediul iniial galben se coloreaz n rou, datorit virrii roului fenol
n prezena amoniacului, metabolit rezultat din descompunerea ureei.
2. Mediul cu cianur de potasiu (KCN) (M58): Dac are loc creterea
bacteriilor (indicat prin turbiditate) reacia este pozitiv. Majoritatea
speciilor de Salmonella sunt negative la acest test.
3. Bulion cu malonat: Se inoculeaz 3 mililitri de cultur bacterian
de 24 de ore prezumptiv pozitiv n bulion malonat (M76). Se incubeaz 48
de ore la 35C, dar se examineaz i dup 24 de ore. Dac testul este pozitiv
mediul devine albastru, iar dac este negativ culoarea bulionului va rmne
nemodificat.
4. Testul indolului reacie negativ-inel galben.
5. Reacia Voges-Proskauer (M68) reacia pozitiv este indicat de
apariia unei culori roz, pn la rou n toat coloana mediului. Salmonelele
dau reacii negative la acest test.
6. Testul roului metil majoritatea salmonelelor dau test pozitiv,
indicat de culoarea roie, difuz a mediului.
Se consider ca nefiind Salmonella culturile care dau rezultate pozitive
la KCN i VP i rezultate negative la testul roului metil.
7. Agar cu citrat Simmons (M64): Test pozitiv: prezena creterii este
nsoit de modificarea culorii mediului din verde n albastru; majoritatea
culturilor de Salmonella sunt citrat-pozitive.
Confirmarea serologic:
Punerea n eviden a antigenelor O, H i Vi ale salmonelelor se face
prin reacia de aglutinare pe lam cu serul corespunztor al coloniilor pure,
dup eliminarea surselor autoaglutinabile.
Eliminarea surselor autoaglutinabile:
Se aplic pe o lam de sticl bine splat soluie salin n care se
disperseaz o parte din coloana ce urmeaz a fi testat obinnd o suspensie
omogen i tulbure. Se oscileaz lama n plan orizontal 30-60 secunde; se
examineaz pe un fond ntunecat; dac bacteriile aglutineaz (se adun
n grmezi) nseamn c sursa este autoaglutinabil i nu se mai supune
ncercrilor ulterioare.
Punerea n eviden a antigenelor O:
Se folosete o colonie pur neautoaglutinabil i se procedeaz ca mai
sus, numai c soluia salin se nlocuiete cu o pictur de antiser O.
Test pozitiv: aglutinare n amestecul testat; absena aglutinrii n
martorul salin.
Reacia negativ nu exclude prezena unei specii a acestui gen,
deoarece Ag O poate fi mascat de Ag Vi de la suprafaa bacteriei (antigen
256
257
iZolArEA i iDENTiFicArEA
gENUlUi SAlMoNEllA
1. omologat
alimentar
2. Prembogire
Incubare la 35C,
24 de ore
10 ml
bulion selenit cistin
3. mbogire
selectiv. Incubare
la 35C, 24 de ore
10 ml
bulion tetrationat
4. nsmnare n
plci Petri.
Incubare la 35C,
24-48 de ore
5. nsmnare pe
mediul TSi i li.
Incubare la 35C,
24 de ore (agar TSI)
sau 48 de ore (agar
LI).
Agar TSi
Pant alcalin
(roie)
Baz acid
(galben)
Agar li
258
Baz alcalin
(purpurie)
Cu sau fr nnegrire
(producia de H2S)
Bibliografie selectiv
1. Brzoi D., 1985, Influena diferitelor valori de pH asupra dezvoltrii i
supravieuirii unor tulpini de Staphilococcus aureus, Comunicare la Sesiunea de Comunicri
tiinifice, FMV, Bucureti.
2. Brzoi D., Lidia Tulu, 1984, Eficiena unor metode de lucru pentru decelarea
S. aureus din laptele praf, Rev. cret. anim., Bucureti 11, 42.
3. Brzoi D., 1985, Microbiologia produselor alimentare de origine animal., Ed.
Ceres, Bucureti, 84-93.
4. Brzoi D., Meica S., Negu M., 1999, Toxiinfeciile alimentare, Ed. Diacon
Coresi, Bucureti.
5. Brzoi D., 1993, Asigurarea calitii microbiologice a produselor alimentare
prin aplicarea unui sistem de msuri preventive, Caiet de informare i documentare tehnic,
LCCAF, Bucureti, 2, 16.
6. Brzoi D., 1990, Unele metode folosite pentru decelarea enterotoxinei
stafilococice, Caiet de informare i documentare tehnic, LCCAF, Bucureti 1, 60.
7. Collinson S. K. i col., 1998, Thin, aggresive fimbriae mediate binding of
Salmonella enteritidis to fibronectin, J. Bacteriol.
8. DAoust I. Y., 1994, Salmonella and International food Trade, Int. J. Food
Microbiol.
9. De Rycke J. i col., 1990, Evidence for two types of citotoxic necrotizing factor
of Escherichia coli., J. Clin. Microbiol.
10. De Rycke J. i col., 1991, Les colibacilles producteurs de cytotoxines:
importance en, mdicine vtrinaire et en sant publique, Ann. Rech. Vt.
11. Donnenberg M. S., J. B. Keper, 1992, Enterotoxigenic Escherichia coli, Infect.
Immun.
12. Dorn C. R., E. J. Angrick, 1991, Serotype O157:H7 Escherichia coli from bovine
and meat source, J. Clin. Microbiol.
13. Dorn C. R., 1995, may 5, Escherichia coli O157:H7 (Review), JAVMA.
14. Farmer J. J., 1995, Enterobacteriaceae Introduction and identification, Manual
of clinical microbiology, Ed. VI by Muray R., ed. ASM Press Washington D.C.
15. Garcia Dee Portieeo F. Finlayb, 1994, Invasion and intracellular proliferation
of Salmonella within nonphagocytic cells, Microbioloaa SEM.
16. Garbutt J., 1997, Essentials of food microbiology RNAOLD, Londra.
17. Guard-Petter i col., 2002, Molecular pathobiology and epidemiology of egg
contaminating Salmonella enterica serovar Enteritidis In: Current topics in Food Safety in
Animal Agriculture (Eds.), ASM Press, Washington DC.
18. Hennessyw W. T., 1996 A national outbreak of Salmonella enteritidis infection
from ice-cream, New Engl. J. Med.
19. Liebana E. i col., 2002 Investigation of the genetic diversity among isolates
of Salmonella enterica serovar dublin from animals and humans from England, ara
Galilor and Ireland Journal of Applied Microbiology.
20. Old D.C. Threefale E.J., 2005, Salmonella in Topley and Wilsons Microbiology
and Microbial Infections, Systematic Bacteriology, RNAold, London.
267
United States and Canada, 2000-2002. Morb. Mort. Wkly. Rep. 51:1044-1047.
41. Centers for Disease Control and Prevention. 2000a. Outbreak of Salmonella
serotype Enteritidis infection associated with eating raw or undercooked shell eggs
United States, 1996-1998. Morb. Mort. Wkly. Rep. 49:73-79.
42. Centers for Disease Control and Prevention. 2000b. Outbreak of Salmonella
serotiype intentions associated with eating a nationally distributed dipCalifornia, Oregon,
and Washington, January 2000. Morb. Mori. Wtiy. Rep. 49:60-61.
43. Centers for Disease Control and Prevention. 1999. Outbreak ol Salmonella
serotype Muenehen infections associated with unpasteurized orange juiceUnited States
and Canada, June 1999. Morb. Mori. \\ kty. Rep. 48:582-585.
44. Centers for Disease Control. 1985. ShigellosisUnited States, 1984. Morb.
Mori. Wkly. Rep. 34:600.
45. Chung. K.C.. and J.M. Goepfen. 1970. Growth of Salmonella at low pH. J.
Food Sci. 35:326-328.
46. Chung. Y.H.. S.Y. Kim. and Y.H. Chang. 2003. Prevalence and actibiotic
susceptibility of Salmonella isolated from foods in Korea for 1993 to 2001. J. Food
Protect. 66:1154-1157.
47. Crockett, C.S., C.N. Hass, A. Fazil. 1996. Prevalence of shigellosis in the
U.S.: Consistency with dose-response information. Int. J. Food Microbiol. 30:87-99.
48. DAoust, J.Y., and H. Pivnick. 1976. Small infectious doses of Salmonella.
Lancet 1:866.
49. Dargatz, D.A., P.J. Fedorka-Cray, S.R. Ladely, and K.E. Ferris. 2000. Survey
of Salmonella serotypes shed in feces of beef cows and their antimicrobial susceptibility
patterns. J. Food Protect. 63:1648-1653.
50. Fedorka-Cray, P.J., D.A. Dargatz, L.A. Thomas, and J.T. Gray. 1998. Survey
of Salmonella serotypes in feedlot cattle. J. Food Protect. 61:525-530.
51. Goepfert, J.M., and R.A. Biggie. 1968. Heat resistance of Salmonella
typhimurium and Salmonella Senftenberg 775W in milk chocolate. Appl. Microbiol.
16:1939-1940.
52. Graber, G. 1991. Control of Salmonella in animal feeds. Division of Animal
Feeds. Center for Veterinary Medicine, Food and Drug Administration. Report to the
National Advisory Commission on Microbiological Criteria for Foods.
53. Hennessy, T.W., C.W. Hedberg, L. Slutsker. 1996. A national outbreak of
Salmonella Enteritidis infections from ice cream. N. Engl. J. Med. 334:1281-1286.
54. Hinton. M.. E.J. Threlfall. and B. Rowe. 1990. The invasive potential of
Salmonella Enteritidis phage types for young chickens. Lett. Appl. Microbiol. 10:237239.
55. Hobbs, B.C. 1961. Public health significance of Salmonella carriers in
livestock and birds. J. Appl. Bacteriol. 24:340-352.
56. Horwitz, M.A., R.A. Pollard, M.H. Merson, and S.M. Martin. 1977. A large
outbreak of foodbome salmonellosis on the Navajo Indian Reservation, epidemiology and
secondary transmission. Am. J. Public Health 67:1071-1076.
57. Impey, C.S., and G.C. Mead. 1989. Fate of salmonellas in the alimentary tract
of chicks pre-treated with a mature caecal microflora to increase colonization resistance.
J. Appl. Bacteriol. 66:469^475.
58. Jones, F.T.. R.C. Axtell. D.V. Rives, S.E. Schneideler, F.R. Tarver, Jr., R.L.
269
270