Cercetări Asupra Variaţiilor Farmacocinetice Ale Unor Preparate Antiinflamatoare Folosite Topic

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE
CRAIOVA
REZUMAT
TEZ DOCTORAT
CERCETRI ASUPRA VARIAIILOR

FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE
ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC
CONDUCTOR TIINIFIC
Prof. univ. dr. FLORICA POPESCU
DOCTORAND
ANI-SIMONA SEVASTRE
CRAIOVA
2011
UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE - CRAIOVA
REZUMAT
TEZ DOCTORAT
CERCETRI ASUPRA VARIAIILOR

FARMACOCINETICE ALE UNOR PREPARATE
ANTIINFLAMATOARE FOLOSITE TOPIC
CONDUCTOR TIINIFIC
Prof. univ. dr. FLORICA POPESCU
DOCTORAND
ANI-SIMONA SEVASTRE
CRAIOVA
2011
2
CUPRINS
I. Introducere....................................................................................................................................5
II. Parte teoretic - Stadiul cunoaterii...........................................................................................7
II.1. Pielea, cale de administrare a formelor farmaceutice semisolide................................................7
II.2. Administrarea topic a medicamentelor..........................................................................7
II.2.1. Forme farmaceutice folosite topic n terapeutic..............................................7
II.2.2. Penetrarea medicamentelor administrate topic.................................................8
II.2.3. Metode de testare a difuziei..............................................................................8
II.2.3.1. Metode in vitro...................................................................................8
II.2.3.2. Metode in vivo....................................................................................9
II.3. Antiinflamatoarele nesteroidiene - date actuale din literatur..........................................9
II.3.1. Clasificarea antiinflamatoarelor nesteroidiene.................................................10
II.3.2. Efecte adverse...................................................................................................10
II.3.3. Metabolizarea AINS - retragerea de pe pia a Vioxx i Bextra..........................11
II.3.4. Aplicarea topic a antiinflamatoarelor nesteroidiene stadiul cunoaterii
actuale.......................................................................................................................................11
II.4. Meloxicamul substan medicamentoas test................................................................11
II.4.1. Meloxicamul reprezentant al inhibitorilor de COX2......................................11
II.4.2. Proprieti farmacologice ale Meloxicamului....................................................12
II.4.2.1. Farmacocinetica..............................................................................................12
II.4.2.2. Farmacodinamia..............................................................................................12
II.4.3. Proprieti fizico-chimice...................................................................................13
II.4.4. Modaliti de cretere a difuziei Meloxicamului prin membrane artificiale i piele
animal promotori fizici i chimici........................................................................................13
II.4.4.1. Promotori chimici ai absorbiei...........................................................13
II.4.4.2. Promotori fizici ai absorbiei...............................................................13
II.4.5. Formulri Meloxicam.........................................................................................14
II.5. Controlul unguentelor.......................................................................................................14
III. Cercetri personale......................................................................................................................15
III.1. Motivarea alegerii subiectului cercetat............................................................................15
III.2. Design experimental........................................................................................................15
III.3. Studiul I Contribuii personale la obinerea i controlul formelor farmaceutice
semisolide pentru aplicare topic pe baz de Meloxicam. Metode de optimizare a gradului de
solubilizare a Meloxicamului................................................................................................................16
III.3.1. Motivaia i obiectivele studiului......................................................................16
III.3.2. Material i metod.............................................................................................17
III.3.3. Rezultate............................................................................................................18
III.3.4. Discuii...............................................................................................................19
III.3.5. Concluzii............................................................................................................20
III.4. Studiul II - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro a Meloxicamului prin membrane

artificiale din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie
i a pH-ului............................................................................................................................................21
III.4.1. Motivaia i obiectivele studiului......................................................................21
III.4.2. Material i metod.............................................................................................21
III.4.3. Rezultate............................................................................................................23
III.4.3.1. Studiu comparativ: Influena agentului de solubilizare asupra vitezei de
difuzie i procentului de Meloxicam difuzat..................................................................23
III.4.3.2. Studiu comparativ: Influena pH-ului asupra vitezei de cedare..........26
III.4.3.3. Studiu comparativ: Influena pH-ului asupra procentului de Meloxicam
difuzat.............................................................................................................................27
III.4.3.4. Studiu comparativ: Distribuia Meloxicamului n cele trei
compartimente: unguent hidrofil membran - soluie receptoare................................28
III.4.4. Discuii................................................................................................................29
III.4.5. Concluzii.............................................................................................................30
III.5. Studiul III - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro a Meloxicamului prin piele animal
din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pH-ului.........31
III.5.1. Motivaia studiului..............................................................................................31
III.5.2. Material i metod..............................................................................................31
III.5.3. Rezultate.............................................................................................................32
III.5.3.1. Studiu comparativ: Distribuia Meloxicamului n cele trei
compartimente: unguent hidrofil membran - soluie receptoare................................33
III.5.3.2. Studiu comparativ: Influena agentului de solubilizare i a pH-ului
asupra vitezei de cedare..................................................................................................34
III.5.3.3. Studiu comparativ: Influena agentului de solubilizare i a pH-ului
asupra procentului de Meloxicam difuzat.......................................................................35
III.5.4. Discuii................................................................................................................39
III.5.5. Concluzii.............................................................................................................40
III.6. Studiul IV Compararea difuziei in vitro a Meloxicamului prin membran artificial i
prin piele animal....................................................................................................................................41
III.6.1. Variaia vitezei de difuzie a Meloxicamului n funcie de timp..........................41
III.6.2. Variaia procentului de Meloxicam difuzat n funcie de timp...........................42
III.7. Studiul V - Evaluarea farmacocinetic in vivo a unor preparate cu antiinflamatoare
nesteroidiene aplicate topic folosind experimente pe animale................................................................42
III.7.1. Motivaia studiului..............................................................................................42
III.7.2. Material i metod...............................................................................................43
III.7.3. Rezultate..............................................................................................................44
III.7.4. Discuii................................................................................................................45
III.7.5. Concluzii.............................................................................................................46
IV. Concluzii finale.....................................................................................................................46
V. Bibliografie selectiv..............................................................................................................50
4
I. INTRODUCERE
n prezent se acord un interes din ce n ce mai crescut medicaiei antiinflamatoare. S-a
observat tendina de a evita administrarea antiinflamatoarelor pe cale oral datorit efectelor adverse
multiple i nlocuirea acestei ci pe ct posibil cu o alt cale de administrare. De cele mai multe ori,
pentru tratarea afeciunilor reumatismale se prefer administrarea local, topic a antiinflamatoarelor
nesteroidiene. Numrul studiilor avnd ca interes durerea a crescut semnificativ n ultimul deceniu,
ceea ce arat c acest domeniu are foarte multe resurse neexploatate nc la nivel mondial. Numrul
de apariii n perioada 2000-2010 raportat la numrul de apariii din 1990-2000 este cu aproximativ
25% mai mare.
Din problematica foarte vast a antiinflamatoarelor, aceast tez de doctorat se axeaz pe
studiul farmacocineticii antiinflamatoarelor nesteroidiene.
Teza are o partea teoretic ce reprezint aproximativ 30% din volumul total i o parte
experimental intitulat Cercetri Personale, care ocup 70% din tez.
Partea teoretic este mprit n 5 subcapitole. n primul subcapitol sunt prezentate date de
actualitate referitoare la piele, ca i cale de administrare a formelor farmaceutice semisolide. Al doilea
subcapitol al prii teoretice aduce informaii din literatura de specialitate folosite la studierea
administrrii topice a medicamentelor, cu punctarea metodelor de testare a difuziei i a factorilor care
controleaz absorbia dermic i transdermic. n al treilea subcapitol s-a pus accent pe datele actuale
din literarur referitoare la antiinflamatoarele nesteroidiene, rezervndu-se apoi un ntreg subcapitol
unui reprezentant al acestei clase Meloxicamul un antiinflamator nesteoidian inhibitor de COX2.
Ultimul subcapitol al prii teoretice se axeaz pe prezentarea metodelor utilizate n controlul
unguentelor, ca i reprezentante ale formelor farmaceutice semisolide.
A doua parte a tezei intitulat Cercetri Personale este structurat n 7 subcapitole.
Contribuiile personale sunt justificate n primul subcapitol n care se motiveaz alegerea
subiectului cercetat. n ara noastr, Meloxicamul (cod ATC M01AC06) se gsete doar sub form de
comprimate, supozitoare i soluii injectabile potrivit ANM Romnia, nu i n preparate topice.
Designul experimental face obiectul celui de-al doilea subcapitol. Prin varierea parametrilor:
form farmaceutic, agent de gelificare, agent solubilizant, promotor de absorbie, pH form
farmaceutic, pH soluie receptoare, temperatur, membran utilizat, au fost planificate 21
experimente, dintre care doar 16 experimente au fost efectuate, utiliznd doar formele farmaceutice
cu Meloxicam care s-au dovedit a fi optime calitativ.
Fiecare dintre cele 5 studii reprezint cte un subcapitol:
1. Studiul I Contribuii personale la obinerea i controlul formelor farmaceutice semisolide
pentru aplicare topic pe baz de Meloxicam. Metode de optimizare a gradului de solubilizare a
Meloxicamului;
5
2. Studiul II - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro al Meloxicamului prin membrane

artificiale din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pHului;
3. Studiul III - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro al Meloxicamului prin piele animal
din formele farmaceutice semisolide hidrofile. Influena promotorilor de absorbie i a pH-ului;
4. Studiul IV Compararea difuziei in vitro a Meloxicamului prin membran atificial i prin
piele animal;
5. Studiul V - Evaluarea farmacocinetic in vivo a unor preparate cu antiinflamatoare
nesteroidiene aplicate topic folosind experimente pe animale;
Concluziile finale i bibliografia fac obiectul ultimelor dou capitole.
Lucrarea de fa este un rspuns la necesitatea observat prin studierea literaturii de specialitate
n ceea ce privete formularea unor preparate cu antiinflamatoare aplicate topic. Acest domeniu este
n continuu cercetat i are foarte multe aspecte neexploatate nc.
La finalizarea acestei teze, vreau sa exprim sincere mulumiri Doamnei Prof. univ. dr.
FLORICA POPESCU, conductorul meu de doctorat, un om deosebit care m-a ndrumat la fiecare
pas n elaborarea prezentei lucrri.
Experimentele din cadrul acestei teze de doctorat nu ar fi fost posibile fr ajutorul unor
persoane speciale crora le aduc mulumiri pe aceast cale. Mulumesc din suflet Domnului Prof.
univ. dr. farm. DUMITRU LUPULEASA Decanul Facultii de Farmacie UMF Carol Davila
Bucureti, Domnului Prof. univ. dr. JOHNY NEAMU Decanul Facultii de Farmacie UMF
Craiova, Domnului Prof. univ. dr. FLORIN GORUNESCU i Doamnei ef lucr. IONELA
BELU de la disciplina Tehnologie Farmaceutic.
Mulumesc persoanelor speciale pe care le am n jurul meu care ma ncarc n fiecare moment
cu optimism i de la care am n fiecare zi cte ceva nou de nvat.
Cuvinte cheie: Meloxicam, topic, difuzie, poteniatori de penetrare.
II. PARTE TEORETIC - STADIUL CUNOATERII

II.1.
PIELEA,
CALE
DE
ADMINISTRARE
FORMELOR
FARMACEUTICE SEMISOLIDE
Pielea este un esut particular, accesibil ce cntarete pn la 20% din greutatea total a
organismului. Din punct de vedere al compoziiei chimice, pielea conine aproximativ 70% ap, 25%
proteine i 2% lipide, restul de 3% fiind reprezentat de minerale, acizi nucleici, glicozaminoglicani,
proteoglicani i alte substane chimice. Pielea este format din 3 straturi principale: epiderm, derm i
hipoderm.
pH-ul suprafeei pielii unde hidratatrea este uor de reglat prin secreia glandelor sudoripare, are
valoarea de aproximativ 4,5. Aceasta reprezint de fapt mantaua acid a pielii.
Valoarea pH-ului este influenat de diferii factori precum: sex, vrst, temperatur corporal,
transpiraie excesiv, lumin solar, alimentaie, digestie. Pielea sntoas are capacitatea de a
tampona variaiile de pH provocate n special de produsele alcaline prin intermediul secreiilor
naturale i produse de metabolism care refac mantaua acid, dar aceasta constituie un efort care poate
provoca oboseala i mbatrnirea precoce a pielii [1].
Exist chiar i variaii individuale ale structurii i aspectului pielii. Dupa coninutul n lipide,
aceste diferene se pot clasifica n patru tipuri de piele: piele normal; piele uscat (alipidic i
deshidratat); piele seboreic i piele mixt [1].
II.2. ADMINISTRAREA TOPIC A MEDICAMENTELOR

II.2.1. FORME FARMACEUTICE FOLOSITE TOPIC N TERAPEUTIC
Pentru utilizare topic, se folosesc urmtoarele forme clasice, tradiionale:
forme lichide: soluii, loiuni, emulsii, supensii, tincturi, aerosoli, spunuri lichide, spume [2];
forme semisolide: unguente, spume rigide, spunuri moi, linimente semisolide;
forme solide: pulberi, microsfere, comprimate, granulate.
Datorit caracteristicii comune de a adera pe piele sau pe mucoase, rmnnd un timp mai lung
sau mai scurt pe zona de tratat, au fost denumite forme bioadezive sau sisteme de eliberare bioadezive
a substanelor medicamentoase [1, 3, 4].
Din categoria formelor farmaceutice cu aplicare topic, experimentele din aceast tez s-au
orientat asupra formelor farmaceutice semisolide pentru aplicaii cutanate (unguente).
Unguentele sunt forme farmaceutice semisolide destinate administrrii pe piele sau pe mucoase,
n scop terapeutic sau de protecie. Sunt constituite din excipieni sau baze de unguent n care se
disperseaz substane medicamentoase [4].
7
Substanele active sunt ncorporate n baza de unguent, iar prin aplicarea local se dorete
exercitarea unui efect terapeutic la nivelul muchilor i esutului nvecinat. n cazul aplicrii locale a
antiinflamatoarelor nesteroidiene (AINS) sub forma unor unguente, concentraia local a substanei
active este mult mai mare dect n esutul netratat. Cantitatea necesar de AINS pentru a produce
efect terapeutic prin administrare local este mult mai mic dect la administrarea oral. Pot totui s
apar efecte secundare la aplicare topic de genul iritaiilor locale.
Formele farmaceutice topice cu antiinflamatoare nesteroidiene sunt foarte raspndite n ntreaga
lume. Printre cele mai folosite antiinflamatoare se regsesc: diclofenacul, indometacinul, piroxicamul,
fenilbutazona, ibuprofenul, ketoprofenul. Asigurarea unei aciuni terapeutice optime depinde foarte
mult de alegerea vehiculului i a poteniatorilor de penetrare, substane care faciliteaz penetrarea prin
alterarea reversibil a structurii pielii [5].
II.2.2. PENETRAREA MEDICAMENTELOR ADMINISTRATE TOPIC

Pentru ca substanele medicamentoase s ajung n straturile profunde ale epidermei i dermului
sau n circulaia sistemic, trebuie ca n prima etap s se produc penetrarea acestora.
Datorit permeabilitii reduse a pielii, o mic fraciune din substane este realmente absorbit,
deci numai substanele foarte active pot avea o aciune general, dup administrarea topic.
Ptrunderea medicamentelor n, i prin piele se poate face pe dou ci:
1. fie prin pori pereii foliculilor piloi (transfolicular) i mai puin prin glandele sudoripare;
2. fie transepidermal strbtnd epiderma [1, 6].
Factorii care influeneaz penetrarea medicamentelor administrate topic i implicit
biodisponibilitatea i aciunea formei farmaceutice sunt n numr de trei:
1. factori legai de structura i condiiile pielii;
2. factori legai de caracteristicile substanei active;
3. factori legai de compoziia formulei topice aplicate, un rol special avndu-l vehiculul
excipientul sau baza de unguent.
Un caz deosebit l reprezint preparatele transdermice, urmrindu-se ca viteza de difuziune din
vehicul s fie cea care controleaz absorbia, iar pielea s acioneze numai ca un canal de scurgere,
meninnd la zero concentraia substanei active care penetreaz i trece rapid n circulaie
[1, 6]
II.2.3. METODE DE TESTARE A DIFUZIEI

II.2.3.1. METODE IN VITRO
Studiile de eliberare i penetrare transdermic in vitro sunt cele mai simple i mai necostisitoare
metode de a caracteriza absorbia i profilurile de penetrare la nivelul pielii. Ele sunt efectuate n
timpul formulrii formelor farmaceutice topice pentru selectarea celor cu profil optim de absorbie i
8
cedare a substanei active. Prima etap n cazul aplicrii topice este etapa eliberrii substanei active
din forma farmaceutic aplicat.
Celulele de difuzie simuleaz difuzia transdermic. Acestea sunt constituite din dou
compartimente separate de membrana de difuzie. Compartimentul donor este cel care permite
aplicarea formei farmaceutice de testat, iar cel receptor este umplut cu lichidul n care trebuie s
difuzeze substana activ. Ca membrane de difuzie pot fi folosite membranele artificiale (de nylon sau
celuloz), sau naturale (pielea de animal sau cea uman). Aceste studii pot fi efectuate n condiiile
asigurrii i meninerii viabilitii pielii animale folosite sau se poate folosi piele moart de animal.
n studiile din literatur, au fost efectuate comparaii ntre difuzia transdermic prin mai multe
tipuri de piele animal. Difuzia depinde de tipul de substan testat. n general, difuzia crete n
urmtoarea ordine: om=porc<iepure<obolan<oarece [7].
Pentru un test de penetrare topic clasic, pielea este montat pe celula de difuzie cu partea
epidermic spre zona donoare. La nivelul zonei cu suprafa standard se aplic forma farmaceutic
testat ntr-o cantitate precis, iar n partea receptoare se introduce mediul receptor. Din mediul
receptor se preleveaz volume fixe de fluid, care este mprosptat cu aceeai cantitate de fluid dup
fiecare prelevare. Substana activ este determinat prin diverse metode (metode cu markeri
radioactivi, HPLC, spectrofotometrie UV-Vis) din fraciile de fluid colectate la intervale regulate[8,9].
II.2.3.2. METODE IN VIVO
Testele de difuzie in vivo presupun folosirea modelelor animale. Dup aplicarea cutanat a
substanei active, aceasta este decelat prin determinarea concentraiei tisulare locale sau plasmatice,
precum i prin decelarea metaboliilor si [9]. Mai rar, substanele testate i metaboliii lor pot fi
determinai calitativ i cantitativ n fluidele de excreie: urin, fecale, transpiraie, aer expirat.
Ca animale se pot folosi: oarece, obolan, iepure, cine, cobai. Experimentele trebuie efectuate
n conformitate cu normele europene de testare pe animale vii.
II.3. ANTIINFLAMATOARELE NESTEROIDIENE - DATE ACTUALE DIN

LITERATUR
Inflamaia este un proces patologic care particip n manifestarea multiplelor maladii i care
apare ca rspuns la aciunea diverilor factori nocivi. Sub influena ultimelor, n esuturi are loc
formarea, eliminarea i activatea mediatorilor inflamaiei, adic a substanelor biologic active care
genereaz simptome ale inflamaiei locale tisulare i generale sistemice.
Cei mai activi mediatori ai inflamaiei sunt bradikinina, eicosanoizii (inclusiv prostaglandinele)
i aminele biogene (histamina i serotonina). n funcie de structur i de mecanismul de aciune,
antiinflamatoarele sunt clasificate n steroidiene i nesteroidiene.
Antiinflamatoarele nesteroidiene sunt folosite n farmacoterapia durerii alturi de alte clase de

medicamente, avnd un efect analgezic moderat, dar i antiinflamator i antipiretic puternic.
Acioneaz favorabil n dureri reumatice, tromboflebite, abcese, dismenoree. Formele orale se
administreaz dup mese, deoarece sunt puternic iritante gastric.
Mecanismul de aciune principal al AINS este reprezentat de blocarea ciclooxigenazei (COX),
cu inhibarea sintezei de mediatori proinflamatori (leucotriene, tromboxani, prostaglandine).
II.3.1. CLASIFICAREA ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE[10,11]

n funcie de selectivitatea pentru enzima ciclooxigenaza 2, antiinflamatoarele nesteroidiene pot
fi clasificate astfel:
-Antiinflamatoare nesteroidiene clasice (generaia I)
-Acizi carboxilici:
-Derivai de acid salicilic: acid acetilsalicilic, diflunisal, benorilat.
-Derivai de acid acetic:
-derivati de acid fenilacetic: diclofenac, alclofenac
-derivai de acizi carbociclici i heterociclici acetici: indometacin, sulindac,
lonazolac, ketorolac
-Derivai de acid propionic: ibuprofen, flurbiprofen, naproxen, ketoprofen,
dexketoprofen.
-Derivai de acid fenamic: acidul flufenamic, acid mefenamic, acid niflumic, acid
tolfenamic, etofenamat.
-Acizi enolici -Pirazolone: fenilbutazona
-Oxicami: piroxicam,tenoxicam, lornoxicam.
-Antiinflamatoare nesteroidiene inhibitoare selective sau specifice de COX2 (generaia a II-a)

-Blocante selective:Meloxicam, nimesulid, nabumeton, etodolac
-Blocante specifice (coxibi):rofecoxib(retras de pe pia), celecoxib,parecoxib, etoricoxib,
valdecoxib, lumiracoxib
II.3.2. EFECTE ADVERSE

Efectele adverse menionate n literatur sunt efecte gastro-intestinale[12], efecte hematologice[13],
efecte cardiorenale[14], efecte hepatice[15], efecte asupra aparatului respirator, efecte asupra vindecrii
plgilor i asupra esutului osos[16], reacii de hipersensibilitate [17].
10
II.3.3. METABOLIZAREA AINS - RETRAGEREA DE PE PIA A VIOXX I

BEXTRA
La puin timp dup introducerea lor pe pia, datorit efectelor adverse aprute, au fost retrase
dou dintre antiinflamatoarele nesteroidiene: rofecoxib (Vioxx) i valdecoxib (Bextra). Acest fapt a
dus la o mai mare atenie acordat efectelor adverse a AINS, chiar si a celor mai puin agresive
inhibitori COX2 selectivi [18].
II.3.4. APLICAREA TOPIC A ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE

STADIUL CUNOATERII ACTUALE
n general, n zilele noastre prescrierea antiinflamatoarelor nesteroidiene intr n
responsabilitatea medicilor, iar responsabilitatea eliberrii lor aparine farmacitilor care, din punct de
vedere farmacologic, trebuie s cunoasc n amnunt medicamentele eliberate i s sftuiasc
pacienii referitor la modul de administrare, contraindicaii, efecte adverse posibile i co-asocierea cu
alte medicamente. Spre deosebire de formele farmaceutice cu administrare oral, formele
farmaceutice semisolide pentru aplicare topic cu antiinflamatoare nesteroidiene pot fi eliberate fr
prescripia medicului i pot constitui o prim masur aplicat n cazul unor dureri acute i chiar
cronice [19].
Aplicarea topic de antiinflamatoare nesteroidiene ofer mijloace atractive de a reduce reaciile
adverse prim maximizarea eliberrii locale a substanei active cu minimizarea rspndirii ei
sistemice[20].
II.4. MELOXICAMUL SUBSTAN MEDICAMENTOAS TEST

II.4.1. MELOXICAMUL REPREZENTANT AL INHIBITORILOR DE COX2
Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian (AINS) din clasa oxicamilor cu proprieti
antiinflamatoare, analgezice, antipiretice si uricozurice. Este o enolcarboxamid nrudit cu
piroxicamul.
Solubilitatea, timpul de njumtire biologic i utilizarea n boli inflamatorii cronice, l fac un
candidat potrivit pentru forme farmaceutice cu cedare prelungit. n tratamentul afeciunilor
reumatice se pot utiliza capsule sau comprimate cu cedare modificat cu Meloxicam administrate
oral.
Pentru aplicrile topice, Meloxicamul ar putea fi formulat n forme farmaceutice cu aplicare
local. n ara noastr nu exist nici o form farmaceutic cu aplicare topic pe baz de Meloxicam.
Meloxicamul are o activitate terapeutic ridicat n doze sczute i o tolerabilitate mai bun
dect a altor AINS.
11
Putnd fi administrat pe majoritate cilor de administrare, Meloxicamul este indicat n

tratamentul simptomatic de lung sau de scurt durat al afeciunilor precum: reumatismul,
rahnoidita, artrita, lombalgiile, sciatica, Zona Zoster si alte tulburri dureroase care afecteaz pielea,
dureri de intervenie chirurgical, dureri n zona temporomandibular, posttraumatice.
II.4.2. PROPRIETI FARMACOLOGICE ALE MELOXICAMULUI

II.4.2.1. FARMACOCINETICA
n studiile anterioare de farmacocinetic s-au folosit ca indicatori ai inflamaiei: temperatura
local, testele de locomoie, volumul edemului de la nivelul labuei.
Biodisponibilitatea Meloxicamului la administrare topic a fost de 1.05% fa de administrarea
oral. Aceste concentraii mici fac aceast cale optim pentru evitarea efectelor adverse
gastrointestinale i de prim pasaj hepatic [21].
Majoritatea AINS se leag puternic de albumin, n cazul Meloxicamului, acesta avnd un
procent de 99% de legare (cu preferin n snge, ficat, rinichi). Acest procent mare de legare duce la
restricionarea volumului de distribuie. 40-45% din concentraia steady state plasmatic se regsete
n lichidul sinovial adiacent. n literatur s-a observat o concentraie mai mare a Meloxicamului n
esutul inflamat dect n zonele neafectate de inflamaie
[22]
Meloxicamul este aproape n totalitate eliminat sub form de metabolii. Eliminarea are loc n
mod egal la nivel renal si digestiv, i doar 0.25% eliminat prin urin. Meloxicamul este metabolizat
prin reacii din faza I, fr a fi detectai metabolii conjugai ai acestuia [23].
Meloxicamul administrat oral are un clearance total de 0.42-0.48 1/h i un timp de eliminare t
de 20 ore [24].
Afeciunile care nsoesc procesul inflamator pot influena farmacocinetica meloxicamului n
oricare dintre etape n sensul grbirii sau ncetinirii proceselor, cu apariia efectelor adverse sau toxice
ori a pierderii efectului terapeutic [25, 26].
II.4.2.2. FARMACODINAMIA
Comparativ cu alte AINS, Meloxicamul prezint o activitate sczut asupra COX 1, el avnd o
aciune de 18 ori mai slab dect a Indometacinului i de 29 ori mai slab dect a Diclofenacului.
Aceste studii au fost efectuate pe celule macrofage peritoneale de cobai prin inducerea expresiei
COX1 i COX2 cu ajutorul lipopolizaharidelor (LPS) [27].
Inhibiia preferenial a COX2 de ctre Meloxicam este strns legat de structura sa.
Modificarea structurii Meloxicamului prin schimbarea poziiei gruprii metil de pe grupul tiazolic din
poziia 5 n poziia 4 duce la o scdere semnificativ a selectivitii sale pentru COX2 i preferarea
enzimei COX1 [28].
12
II.4.3. PROPRIETI FIZICO-CHIMICE

Meloxicamul, un derivat de oxicam, este un AINS cu grupare acid enolic. Denumirea chimic
a Meloxicamului este 4-hidroxi-2-metil-N-(5-metil-2-tiazolil)-2H-1,2-benzotiazin-3-carboxamid-1,1dioxid. Are masa molecular 351,4. Formula sa empiric este C 14H13N3O4S2.
Din punct de vedere al proprietilor fizice, Meloxicamul are structur cristalin, de culoare
galben deschis, practic insolubil n apa, cu o solubilitate crescut n acizi i baze puternice. Este foarte
puin solubil n metanol. Meloxicamul are un coeficient de partiie aparent (log P) app = 0.1 n noctanol/tampon pH 7.4. Valorile pKa ale Meloxicamului sunt 1.1 i 4.2
[29]
Solubilitatea sczut a Meloxicamului la pH acid poate sugera existena unor efecte secundare
gastrice mult diminuate n comparaie cu alte AINS. La pH-uri sczute, Meloxicamul este mult mai
lipofilic decat AINS cele mai apropiate ca structur: piroxicamul i tenoxicamul
[30]
II.4.4. MODALITI DE CRETERE A DIFUZIEI MELOXICAMULUL PRIN

MEMBRANE ARTIFICIALE I PIELE ANIMAL PROMOTORI FIZICI I CHIMICI
Pentru a avea o difuzie optim a unei substane printr-o membrana artificial sau natural
trebuie ca substana medicamentoas sa fie cedat cu uurin de ctre forma farmaceutic n care este
ncorporat i n acelai timp, s fie uor absorbit de ctre esutul receptor. Creterea difuziei la
nivelul pielii se poate face cu ajutorul promotorilor chimici i fizici (enhanceri chimici i fizici).
II.4.4.1. PROMOTORI CHIMICI AI ABSORBIEI

Solubilitatea Meloxicamului crete cu creterea pH-ului. Unul din factorii responsabili de
dizolvarea unui compus organic este capacitatea sa de a disocia n ioni, fapt care la rndul su
depinde de pH. Deoarece Meloxicamul este un acid, solubilitatea sa e dependent de gradul de
disociere n ioni i deci de pH.
Solubilitatea Meloxicamului poate fi mbuntit i prin folosirea unor ageni de cretere a
solubilitii precum: alcooli (alcool laurilic, alcool stearilic, hexidecanol, octildodecanol, alcool
izostearilic), acizi grai (acid caproic i stearic), esteri (dietil cebacat, diizopropil adipat, izopropil
miristat,
triacetin),
terpene
(eucaliptol,
mentol),
amine
(di
trietanolamina,
di
triizopropanolamina), surfactani (glicerinmonocaprilat, polisorbat 80)[31].
II.4.4.2. PROMOTORI FIZICI AI ABSORBIEI

Din categoria promotorilor fizici ai absorbiei face parte metoda aplicrii curentului electric
pentru facilitarea transportului transdermic, metoda numit iontoforez. Alturi de iontoforez, din
aceast clas mai fac parte i electroporaia, magnetoforeza i undele fotomecanice.
13
II.4.5. FORMULRI MELOXICAM

Meloxicamul este un antiinflamator nesteroidian ce inhib selectiv COX2.
Dei a fost demonstrat selectivitatea sa, efectele adverse gastrointestinale nedorite pot s apar
dup administrare oral. Aplicarea topic a Meloxicamului poate s ofere avantaje prin eliberarea
medicamentului direct la locul dureros, cu producerea unui efect local. Cu toate acestea, funcia de
barier a pielii limiteaz difuzia multor substane active.
Pentru a contracara aceste neajunsuri, este necesar stabilirea unei formulri pe baz de
Meloxicam care s conin un vehicul optim din care substana activ s fie cedat dup un profil
prestabilit. Recent au fost efectuate studii pe diferite forme farmaceutice de genul: microemulsii,
lipogeluri, hidrogeluri [32].
Studiile anterioare efectuate n diverse centre universitare sunt axate pe determinarea efectului
promotorilor de permeabilitate asupra difuziei transdermice, efectul diverselor amestecuri de solveni
asupra cedrii substanei active i pe obinerea unor matrici din care Meloxicamul s fie cedat ntr-un
mod controlat. La momentul actual, nu exist la noi pe pia nici o formul pe baz de Meloxicam
care s fie aplicat topic [33].
II.5. CONTROLUL UNGUENTELOR

Controlul
organoleptic:
omogenitate,
culoare
miros
caracteristic
componentelor.
Omogenitatea se controleaz prin ntinderea unguentului pe o plac i observarea cu lupa 4.5X. Se

determin mrimea particulelor pentru unguentele suspensii (obinuite i oftalmice).
Determinarea pH-ului se realizeaz poteniometric, n faz apoas i trebuie s fie cuprins ntre
4,5-8,5.
Pentru a aprecia consistena unguentelor sunt patru tipuri de probe reologice: probe de
viscozitate; probe de penetraie; probe de ntindere i probe de elasticitate. [1].
14
III. CERCETRI PERSONALE

III.1. MOTIVAREA ALEGERII SUBIECTULUI CERCETAT
Folosind anumite cuvinte cheie (pain, year) i motoarele de cutare www.pubmed.com,
www.google.com i www.interscience.wiley.com am analizat evoluia interesului artat studierii
proceselor fizio-patologice ale durerii.
Procent studii legate de

durere din din totalul
studiilor
Evolutia studiilor despre durere (2)

2
1.9
1.8
1.7
1.6
1.5
1.4
1.3
1.2
pain
2003
pain
2004
pain
2005
pain
2006
pain
2007
Perioada
pain
2008
pain
2009
pain
2010
w w w .interscience.w iley.com
GRAFIC 1 - EVOLUIA ANUAL A STUDIILOR DESPRE DURERE

N PERIOADA 2003-2010 (surse: www.interscience.wiley.com)
Numrul studiilor avnd ca interes durerea a crescut semnificativ n ultimul deceniu, ceea ce
arat c acest domeniu are foarte multe resurse neexploatate nc la nivel mondial. Numrul de apariii
n perioada 2000-2010 raportat la numrul de apariii din 1990-2000 este semnificativ mai mare,
raportul fiind de 1,244845, adic cu aproape 25% mai mult.
n ara noastr antiinflamatoarele nesteroidiene administrate topic pot fi formulate sub forma de
unguente lipofile, creme, geluri, spray-uri cutanate, ape de gur, picturi oftalmice. Avnd ca surs
siteul Ageniei Naionale a Medicamentului, am centralizat informaiile referitoare la formele
farmaceutice ce conin antiinflamatoare nesteroidiene aplicate topic utilizate n ara noastr [159-162].
Mergnd mai departe, am observat c nu exist nici o form farmaceutic aplicat topic avnd ca
substan activ Meloxicamul. Meloxicamul (cod ATC M01AC06) se gsete doar sub form de
comprimate, supozitoare i soluii injectabile [34]
Aceast tez are ca interes principal obinerea unor forme farmaceutice semisolide originale i
stabile, coninnd ca substan activ un antiinflamator nesteroidian COX2 selectiv Meloxicamul,
formulate astfel nct s aib un profil farmacocinetic optim de cedare.
III.2. DESIGN EXPERIMENTAL

Experimentele efectuate n cadrul aceastei teze s-au desfurat n mai multe etape care au
urmrit:
15
1.
gsirea unor ageni de cretere a solubilitii Meloxicamului, substan test cu un grad de
dizolvare foarte mic n solvenii uzuali de genul: ap, tampoane fosfat, citrat, borat, solveni lipofili;
2.
includerea soluiilor de Meloxicam preparate n etapa 1 n forme farmaceutice
semisolide hidrofile i hidrofobe, cu pstrarea gradului de dispersie molecular;

3.
controlul formelor farmaceutice obinute din punct de vedere organoleptic, al aspectului,
al vscozitii i al plasticitii;
4.
obinerea standardelor de Meloxicam i a curbei de calibrare utilizat n determinrile
calitative i cantitative cu ajutorul spectrofotometrului UV-Vis;

5.
efectuarea studiilor de farmacocinetic care au constat n determinarea profilului
farmacocinetic de cedare i difuzie al Meloxicamului in vitro prin

-
prin membran artificial;
prin piele animal
6.
efectuarea de studii comparative ale profilului farmacocinetic de de cedare i difuzie al
Meloxicamului in vitro la pH fiziologic 7.5 i la pH-ul acid al pielii 4.5 utiliznd aceleai membrane:
artificial i animal;
7.
efectuarea studiilor in vivo, pe experimente pe animal.
n urmtoarele dou tabele este prezentat designul experimental, care a inut cont de urmtorii
parametrii:.
Prin varierea parametrilor: form farmaceutic, agent de gelificare, agent solubilizant, promotor
de absorbie, pH form farmaceutic, pH soluie receptoare, temperatur, membran utilizat, au fost
planificate 21 experimente, dintre care doar 16 experimente au fost efectuate, utiliznd doar formele
farmaceutice cu Meloxicam care s-au dovedit a fi optime n urma controlului de calitate.
III.3. STUDIUL I CONTRIBUII PERSONALE LA OBINEREA I

CONTROLUL
FORMELOR
FARMACEUTICE
SEMISOLIDE
PENTRU
APLICARE TOPIC PE BAZ DE MELOXICAM. METODE DE OPTIMIZARE A

GRADULUI DE SOLUBILIZARE A MELOXICAMULUI
III.3.1. MOTIVAIA I OBIECTIVELE STUDIULUI
n aceasta tez unul dintre obiective a fost acela de a prepara forme farmaceutice semisolide din
categoria unguentelor hidrofile i lipofile cu o concentraie de 0.3% Meloxicam substan activ.
Deoarece mai departe, s-a urmrit profilul farmacocinetic al Meloxicamului i innd cont c acesta
este mult mai uor eliberat din forme farmaceutice n care se gsete dispersat la nivel molecular, un
alt scop al acestei teze a fost obinerea unor forme farmaceutice unguente de tip soluie (substana
activ s fie dizolvat n baza de unguent) [35].
16
S-a cercetat ncorporarea Meloxicamului cu ajutorul diverilor ageni de cretere a solubilitii n

formele farmaceutice semisolide hidrofile i lipofile mai sus amintite.
III.3.2. MATERIAL I METOD

Substanele i soluiile folosite au fost: Meloxicam (Unichem Laboratories LTD), Carbopol 990
(Medchim T.M.), Metilceluloz (Medchim T.M.), Lanolin (Medchim T.M.), Vaselin (Medchim
T.M.), Tween 80 (Merck), Trietanolamin (Fluka Chemie AG), Polietilenglicol 400 (Merck),
Polietilenglicol 4000 (Merck), Glicerin (SC Chimreactiv SRL), Hidroxid de sodiu (Merck), Fenosept
(Medchim T.M.), Ser fiziologic 0,9% m/v (BBraun), Nipagin (Medchim T.M.), Nipasol (Medchim
T.M.).
Ca aparatur i ustensile, s-au folosit: mojare farmaceutice, balane electronice, pipete
electronice 1-5 ml, seringi 1 ml 20 ml, vscozimetru Thermo Scientific HAAKE, Tester de
determinare a plasticitaii dispozitivul Ojeda i Arbussa, pH-metru Consort. Unguentele obinute au
fost condiionate n cutii de polietilen bine nchise, la cel mult 25 0C. Pentru preluarea imaginilor
fotografice acestea au fost transferate n seringi cu o capacitate de 20ml. S-a folosit un aparat foto
CANON PowerShot G9.
Pentru prepararea unguentelor s-a folosit metoda manual de pulverizare a substanei active,
obinerea soluiei i omogenizarea manual cu restul componentelor. S-au folosit:
-agent de cretere a solubilitii: tween 80, polietilenglicol 400 i 4000, trietanolamina, octilsulfat
de sodiu;
-agent de gelificare: Carbopol 990, metilceluloz;
-agent de meninere a umiditii: glicerin;
-agent conservant: borat de fenilmercur;
-vehicul: ap distilat.
2.1.
CONTROLUL
ORGANOLEPTIC:
omogenitate,
culoare
miros
caracteristic
componentelor. Omogenitatea se controleaz prin ntinderea unguentului pe o plac i observarea cu

lupa 4.5X. Se determin mrimea particulelor pentru unguentele suspensii.
2.2. DETERMINAREA pH-ULUI se realizeaz poteniometric, n faz apoas i trebuie s fie
cuprins ntre 4,5-8,5.
2.3. CONTROLUL REOLOGIC: n acest studiu am cuantificat vscozitatea i plasticitatea.
Determinarea vscozitii. Unguentele sunt corpuri plastice i tixotrope, vscozitatea
modificndu-se dependent de temperatur i forele de forfecare aplicate. S-a folosit vscozimetrul
rotaional Thermo Scientific HAAKE 550 [4].
Determinarea plasticitii. Se folosete dispozitivul Ojeda i Arbussa, alctuit din 2 plci de
sticl de anumite dimensiuni. Se obin date numerice (curba extensiometric reprezint suprafaa
17
ocupat n funcie de greutatea aplicat), care permit aprecierea valorilor orientative ale plasticitii
unguentelor.
III.3.3. REZULTATE
S-au obinut nou formulri cu o concentraie de 0.3% Meloxicam:gelurile: G1, G2P1, G2P2,
G3, G4, G5, G6 i unguentele U1 i U2.
Metodele de preparare i control au avut la baza principiile de preparare i control ale
unguentelor prevzute n FRX i utilizate n literatur
[1, 36]
Unguentele preparate au fost transvazate n seringi transparente cu o capacitate de 20ml, au fost

analizate din punct de vedere organoleptic, al pH-ului, al vscozitii i al plasticitii. Toate
unguentele preparate au fost captate fotografic.
Formulrile G1, G2P2 i G4 cu un coninut de 0.3 % Meloxicam au fost translucide, fr
particule n suspensie i cu o consisten bun. Spre deosebire de acestea, restul formulrilor cu acelai
coninut de Meloxicam s-au prezentat sub forma unor unguente de tip suspensie, n care s-au putut
observa particule aflate n suspensie i care au avut o consisten mai mic.
FIGURA 1 GEL FORMULA G1 (1% CBP 990, 0.3% Meloxicam, 0.1%Tween 80)
pH-ul s-a ncadrat n prevederile Farmacopeei Romne a X-a ntre 4.5 i 8.5.
Formul
G1
G2P1
G2P2
G3
G4
G5
G6
U1
U2
pH
8.4
8.2
8.2
8.1
8.1
8.3
7.3
6.8
Vascozitatea (mPAs)
TABEL 1 - pH-UL FORMULELOR PREPARATE

Variatia vascozitatii unguentelor utilizate, in functie de
temperatura
25
20
15
10
5
0
Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3%

Mx
Mx
Mx
Mx
Mx
Mx
Mx
Mx
Mx
G1
G2P1
G2P2
G3
G4
G5
Tipul formularii
G6
U1
U2
Vascozitatea la 23.5C
Vascozitatea la 37.5C
GRAFIC 2 VARIAIA VSCOZITII

N FUNCIE DE FORMULARE I TEMPERATUR
18
Se poate observa c unele din preparate precum G2P1, G3, G5 i G6 au valori ale vscozitii
mult mai mici dect ale celorlaltor formulri. Acest lucru poate fi datorat unui pH inadecvat, la care
gelificrile Carbopolului respectiv Metilcelulozei nu au loc n totalitate.
VARIATIA SUPRAFETEI DE INTINDERE IN FUNCTIE DE GREUTATEA APLICATA SI DE
TIPUL DE FORMULARE
SUPRAFATA DE INTINDERE (mm2)
5000
4500
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
50 g
100g
200g
250g
500g
750g
GREUTATE APLICATA (g)

G1
G1 cu Mx 0.3%
G2P2
G2P2 cu Mx 0.3%
G4
G4 cu Mx 0.3%
U1
U1 cu Mx 0.3%
U2
U2 cu Mx 0.3%
GRAFIC 3 VARIAIA SUPRAFEEI DE NTINDERE

N FUNCIE DE GREUTATEA APLICAT
Curba extensiometric arat c la adugarea de Meloxicam, ntinderea are loc pe o suprafa uor
mai mare (p=4.83191E-07 <0.05).
Dintre toate formulrile, cele mai mici suprafee de ntindere au fost observate n cazul
unguentului hidrofil U2, iar cele mai mari, n cazul formulei G2P2, ceea ce demonstreaz importana
excipienilor n formularea formelor farmaceutice semisolide.
III.3.4. DISCUII
n acest studiu s-a dorit obinerea unor unguente hidrofile i hidrofobe n care s se ncorporeze
cu uurin un antiinflamator nesteroidian (Meloxicamul) i care s corespund calitativ normelor n
vigoare (F.R. X, Farmacopeea European).
Din punct de vedere organoleptic, unguentele au avut un aspect caracteristic componentelor. n
cazul formulelor care au coninut Meloxicam ca substan activ, culoarea a fost mai intens glbuie
dect cele fr substan activ. Determinarea organoleptic a fost efectuat utiliznd metodele de
evaluare ntlnite n literatura de specialitate[32].
n urma analizelor, preparatele obinute n cadrul acestei teze au avut un pH care s-a ncadrat n
intervalul impus de Farmacopeea Romn a X-a [4].
S-a putut observa c pH-ul crescut a fost dat n special de soluia de NaOH cu care s-a efectuat
gelificarea. De asemenea, o contribuie la un pH ridicat l-a avut i Trietanolamina folosit ca agent de
cretere a solubilitii. pH-ul unguentului hidrofil pe baz de PEG 400 i PEG 4000 este foate puin
influenat de prezena Meloxicamului. La aceleai concluzii a ajuns i Nagia et al. care a folosit n
studiul su ca ageni de cretere a solubilitii Tween 80 i Trietanolamina
19
[32]
pH-ul este important pentru stabilitatea sistemului dispers i a substanelor active. El poate
influena vscozitatea gelurilor i poate scdea activitatea conservanilor. Dac se gsete n afara
limitelor impuse de FRX, pH-ul preparatelor semisolide aplicate topic poate influena negativ structura
pielii.
Din punct de vedere reologic, au fost analizate vscozitatea i plasticitatea. Aceste caracteristici
sunt strns legate de bazele de unguent folosite, dar pot fi cu uurin influenate de excipienii
utilizai. Hidrogelurile pe baz de Carbopol se obin prin neutralizarea dispersiilor macromoleculelor
mbibate anterior cu vehicul, cu ajutorul soluiilor alcaline. Carbomerii cunoscui i ca acizi poliacrilici
sau polimeri carboxivinilici sunt ntlnii cel mai frecvent cu denumirea de Carbopoli. Sunt polimeri
sintetici ai acidului acrilic, cu caracter anionic i mas molecular mare. Se prezint ca pudre de
culoare alb, fine, cu densitate foarte mic. Vscozitatea maxim este obinut la pH ntre 6 i 11. Ea
scade n prezena electrolizilor i crete n prezena glicerolului, propilenglicolului sau alcoolului
[35]
Analiznd valorile vscozitii tuturor preparatelor, se poate trage concluzia c adugarea unei
cantiti mici de Meloxicam (0.3%) duce la o scdere uoar a vscozitii preparatelor (p=0.134034).
n cazul preparatelor G1, G2P2, G4, U1 i U2, aceasta ramne totui n valori optime. Preparatele cu
vscozitate bun au fost selectate pentru a fi studiate n urmtoarea etap, din punctul de vedere al
profilului farmacocinetic de cedare al Meloxicamului. n studiul publicat n 2010 de Shashikant et al.
care folosete baz de unguent gelul de Carbopol, iar ca agent de cretere a solubilitii
Trietanolamina, testele de reologie au condus la obinerea unor rezultate asemntoare cu cele obinute
n aceast tez, suprafaa de ntindere fiind n intervalul 17-28 cm2[37].
III.3.5. CONCLUZII
n urma acestui studiu pot fi trase mai multe concluzii:
1. n absena unor ageni de cretere a solubilitii atent alei, Meloxicamul nu poate fi formulat sub
forma unor preparate semisolide hidrofile sau lipofile cu aplicare topic;
2. n urma numeroaselor testri, am determinat c Tween-ul 80 n concentraie 0.1%,
Trietanolamina 30% i Polietilenglicol-ul 400 3% au capacitatea de a crete gradul de solubilizare al
Meloxicamului. Acetia au fost singurii dintre cei testai, care adugai n unguente alturi de substana
activ, au dus la solubilizarea Meloxicamului i la obinerea unor unguente transparente, de tip soluie;
3. Dintre agenii presupui a crete solubilitatea, octilsulfatul de sodiu, un agent tensioactiv cu
proprieti umectante i de scdere a tensiunii superficiale lichid - solid, nu a reuit s solubilizeze
Meloxicamul;
4. Au fost formulate 9 unguente hidrofile i lipofile, de tip soluie (geluri: G1, G2P2, G4 i
unguentul U2), dar i de tip suspensie (gelurile: G2P1, G3, G5, G6 i unguentul U1);
20
5. Foarte important n procesul de solubilizare este protocolul de lucru, drept urmare, folosind exact
aceleai componente n aceleai cantiti, am obinut dou formule diferite ca grad de dispersie:
formula G2P1 hidrogel tip suspensie, iar formula G2P2 hidrogel tip soluie;
6. Din punct de vedere organoleptic, unguentele obinute au caracteristicile componentelor. pH-ul
lor s-a ncadrat n limitele impuse de Farmacopeea Romn a X-a;
7. Analiznd vscozitatea preparatelor obinute, doar formulele G1, G2P2, G4, U1 i U2 au fost
considerate a fi corespunztoare. Restul preparatelor nu au avut o consisten potrivit;
8. Vscozitatea preparatelor a sczut uor dup adugarea substanei medicamentoase testate Meloxicam 0.3%;
9. Din punct de vedere al capacitii de ntindere, toate preparatele pe baz de Carbopol au avut un
comportament asemntor;
10. Pentru a determina profilului cinetic de cedare al Meloxicamului, n urmtoarea etap au fost
alese preparatele cu caracteristicile optime, i anume: G1, G2P2, G4, U1 i U2.
III.4. STUDIUL II - PROFILUL FARMACOCINETIC DE CEDARE IN

VITRO
AL
FORMELE
MELOXICAMULUI
FARMACEUTICE
PRIN
MEMBRANE
SEMISOLIDE
ARTIFICIALE
HIDROFILE.
DIN
INFLUENA
PROMOTORILOR DE ABSORBIE I A pH-ULUI

III.4.1. MOTIVAIA I OBIECTIVELE STUDIULUI
Studiul a avut n vedere observarea profilului farmacocinetic prin determinarea concentraiei
Meloxicamului n soluia receptoare dup aplicarea pe membran artificial de celuloz a celulei de
difuzie Franz.
Prin adugarea de ageni de cretere a solubilitii, s-a putut ncorpora Meloxicamul n hidrogel,
obinndu-se un unguent hidrofil de tip soluie din care substana activ se elibereaz mult mai uor
comparativ cu unguentele de tip emulsie sau suspensie.
Am optat pentru obinerea unor unguente hidofile datorit proprietilor fizice ale agenilor de
solubilizare, precum i datorit rspndirii mult mai largi n ultima perioad a acestei forme
farmaceutice. Dintre formulrile obinute n cadrul Studiului I, doar cteva dintre ele au fost selectate
pentru studierea profilului farmacocinetic al Meloxicamului prin membran artificial. Acestea sunt
gelurile G1, G2P2, G4 i unguentul U2, pastrndu-se codificarea din studiul anterior.

(Medchim T.M.), Tween 80 (Merck), Trietanolamin (Fluka Chemie AG), Polietilenglicol 400
21
(Merck), Glicerin (SC Chimreactiv SRL), Hidroxid de sodiu (Merck), Fenosept (Medchim T.M.), Ser
fizioliogic 0,9% m/v (BBraun).
S-a folosit o celul de difuzie vertical Hanson Research 58-001-455 cu o capacitate de 7ml, un
orificiu de difuzie de 15 mm (recomandat FDA i SUPAC SS) i cu agitator Helix, iar absorbiile au
fost citite la spectofotometrul UV-Vis JASCO V530.
Au fost folosite membrane metilcelulozice cu un diametru de 25 mm i o dimensiune a porilor de
0,45 m, suprafa de cedare 3.14cm2 Teknokroma.
S-a folosit celula de difuzie vertical Hanson Research 58-001-455 cu o capacitate de 7ml, un
orificiu de difuzie de 15mm (recomandat FDA i SUPAC SS) i cu agitator Helix. Toate
experimentele au fost efectuate n triplicat.
FIGURA 2
CELUL DE DIFUZIE
FIGURA 3
SCHEMA APARATURII DE DIFUZIE IN VITRO
Soluia receptoare pentru testele de difuziune efectuate pe celula de difuzie cu o capacitate de

7ml a fost Serul fiziologic 0.9%, steril i apirogen, cu un adaos de Tween 0.1% pentru a favoriza
umectarea substanei de difuzat. Toate experimentele au fost efectuate n triplicat. Timpul 0 este
considerat momentul n care a fost aplicat forma farmaceutic pe membran, cu asamblarea imediat
a celulei de difuzie. Pentru fiecare experiment s-au aplicat cte 0.3g gel cu un coninut de 0.3%
substan activ Meloxicam. La 5min, 10min, 15min, 30min, 1h, 2h, 3h, 6h, 24h de la nceperea
experimentului, au fost prelevate probe de cte 0.5ml. Fiecare prob prelevat a fost diluat pn la
2.5ml cu soluie receptoare. Cantitatea prelevat a fost nlocuit cu soluie receptoare, aa nct
volumul receptor din celula de difuzie s rmn neschimbat. Cantitatea de gel rmas pe membran la
finalul experimentului a fost diluat cu soluie receptoare i a fost citit la spectofotometrul JASCO
V530 alturi de probele prelevate la intervalul de timp specificat.
Probele au fost citite la spectofotometru JASCO V530 la lungimea de und 362nm specificat n
literatur. S-a determinat media triplicatelor, deviaia standard, iar gradul de ncredere a fost evaluat
folosind testul TTEST Microsoft Excel. Standardele au fost obinute folosind Meloxicam n diverse
concentratii la un pH alcalin.
22
III.4.3. REZULTATE
Soluiile standard au fost obinute prin dizolvarea a 0.01g Meloxicam n 10g Ser fiziologic
alcalinizat cu 0.1g NaOH20%. n funcie de absorbiile diluiilor la lungimea de und 362nm, a fost
trasat curba de calibrare (slope= 0.182418223).
FIGURA 4-. SPECTRUL MELOXICAMULUI (Picul se observ la 362nm)
Absorbtia
Absorbtia in functie de concentratie

Valori sem nificative
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
0.5
1.5
Concentratia m g/100m l
2.5
3.5
Absorbtia
GRAFIC 4 - VALORILE SEMNIFICATIVE ALE ABSORBIEI STANDARDELOR

SLOPE = 0.0279931
III.4.3.1. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE

VITEZEI DE DIFUZIE I PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT
Graficele prezint evoluia vitezei de difuzie a Meloxicamului, precum i procentul difuzat,
pentru toate cele 4 formulri studiate.
23
Influenta agentului de solubilizare asupra vitezei de difuzie a Meloxicamului din

unguente hidrofile
pH fiziologic 7.5
Viteza de difuzie (mg/min)
0.02
0.018
0.016
0.014
0.012
0.01
0.008
0.006
0.004
0.002
0
0
10
15
30
60
120
180
EXP
EXP
EXP
EXP
Timp (min)
360
1440
1 G1 (DESIGN 1)
2 G2P2 (DESIGN 2)
3 E14 PEG 400 CBP (DESIGN 14)
4 E16 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 16)
GRAFIC 5 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA VITEZEI DE DIFUZIE A

MELOXICAMULUI DIN UNGUENTE HIDROFILE
PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5
Viteza maxim de difuzie a Meloxicamului se poate observa n cazul formulei care conine ca
agent de cretere a solubilitii Trietanolamina. Viteza atinge valori maxime de aprox 0.018mg/min la
10 minute de la aplicare.
n cazul formulei care conine Tween 80, picul este observat tot la 10 minute, dar este mult
sczut comparativ cu cel al formulei G2P2.
Cele mai mici valori ale vitezei de difuzie sunt atinse n cazul hidrogelului cu Polietilenglicol
400.
Comparnd din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului la pH 7.4 G2P2 cu G1, G4
i U2, utiliznd TTEST au fost obinute valorile 0.001843, 0.00477282, 0.00537582 (p<0.05).
Influenta agentului de solubilizare asupra vitezei de difuzie a Meloxicamului din
unguente hidrofile
pH 4.5
0.018
0.016
0.014
0.012
0.01
0.008
0.006
0.004
0.002
0
0
10
15
30
60
Timp (min)
120
EXP
EXP
EXP
EXP
180
360
1440
9 G1 (DESIGN 5)
10 G2P2 (DESIGN 6)
12 E19 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 19)

PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH-UL PIELII 4.5
24
Comparnd formularea G2P2 din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului difuzat
la pH 4.5 cu G1, G4 i U2, folosind TTEST au fost obinute valorile 0.00141029, 0.00365196,
0.00485342 (p<0.05).
Evoluia vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu pH
4.5 este asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, picurile aprnd ceva mai trziu, cu o laten de 1015 minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5. De asemenea, valorile pe care le ating vitezele sunt i
ele mai sczute comparativ cu cele determinate n cadrul experimentelor desfurate la pH 4.5.
Concentraiile de Meloxicam decelate n soluiile receptoare la pH 7.5 i 4.5 sunt eficiente pentru
a asigura aciune terapeutic local i sunt suficient de mici pentru a minimaliza efectele sistemice.
Influenta agentului de solubilizare asupra procentului de Meloxicam difuzat din
unguente hidrofile
pH fiziologic 7.5
100
90
Procent difuzat (%)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0
10
15
30
60
Timp (min)
120
EXP
EXP
EXP
EXP
180
360
1440
1 G1 (DESIGN 1)
2 G2P2 (DESIGN 2)
4 E16 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 16)
GRAFIC 7 - INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE ASUPRA PROCENTULUI DE

MELOXICAM DIFUZAT DIN UNGUENTE HIDROFILE
PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5
Comparnd formularea G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat la pH 7.4
cu G1, G4 i U2, folosind TTEST au fost obinute valorile 0.00071999, 0.00018932, 0.00016125
(p<0.05).
Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24 ore de la
aplicarea unguentului) este ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%), formul la care s-au observat
i cele mai mari valori ale vitezei de difuzie. Restul formulelor au avut un procent de Meloxicam
difuzat n medie de 40%.
25
Influenta agentului de solubilizare asupra procentului de Meloxicam difuzat din

unguente hidrofile
pH fiziologic 4.5
90
Procent difuzat (%)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0
10
15
30
60
120
EXP
EXP
EXP
EXP
Timp (min)
180
360
1440
9 G1 (DESIGN 5)
10 G2P2 (DESIGN 6)
12 E19 PEG 400 PEG 4000 (DESIGN 19)

Comparnd formularea G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat la pH 4.5
cu G1, G4 i U2, folosind TTEST au fost obinute valorile 0.00082431, 0.00024356, 0.00018774
(p<0.05).
Procentul de Meloxicam difuzat la pH 4.5 atinge valori mai mici comparativ cu cele ntlnite la
pH acid 4.5. Procentul difuzat total maxim atins este de aproximativ 80%, tot pentru formula G2P2.
III.4.3.2. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE

CEDARE
Influenta pH-ului asupra vitezei de cedare
FORMULA G4
0.005
0.0045
0.004
0.0035
0.003
0.0025
0.002
0.0015
0.001
0.0005
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
EXP 3 E14 PEG 400 CBP (DESIGN 14)
Tim p (m in)
EXP 11 E15 PEG 400 CBP (DESIGN 15)
GRAFIC 9 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA G4 p=0.0071359

Din graficele anterioare se poate observa c valorile vitezelor de difuzie sunt mai mari n cazul
folosirii ca soluie receptoare a soluiei saline cu pH 7.5, comparativ cu soluia salin pH 4.5. Evoluia
26
vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu pH 4.5 este
asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, picurile aprnd ceva mai trziu, cu o laten de 10-15
minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5.
III.4.3.3. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI

DE MELOXICAM DIFUZAT
Influenta pH-ului asupra procentului de Meloxicam difuzat
FORMULA G2P2
90
Procentul difuzat (%)
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0
10
Tim p (m in)
15
30
60
120
180
EXP 2 G2P2 (DESIGN 2)
360
1440
GRAFIC 10 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI

DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G2P2 p=6.28864E-05
Se poate observa c n toate experimentele, procentul de Meloxicam difuzat este mai mic n
cazul folosirii soluiei saline cu pH 4.5 dect n cazul folosirii soluiei saline cu pH 7.5. Procentul mai
mic difuzat n cazul soluiilor receptoare cu pH acid 4.5 poate fi datorat unei mai mici solubiliti a
Meloxicamului n aceste soluii, dar i unei posibile degradri a acestuia la acest pH. Orientarea ctre o
ipotez sau alta, trebuie s in cont i de cantitatea de Meloxicam care nu a fost regsit n nici unul
dintre compartimente: gel, membran, soluie receptoare. Aceast cantitate neregsit poate fi datorat
pierderilor inevitabile din timpul manipulrii, dar i unor eventuale procese de degradare ale
Meloxicamului, care astfel nu mai poate fi detectat la lungimea de und corespunztoare (362nm).
Procentul de Meloxicam difuzat la pH 4.5 atinge valori mai mici comparativ cu cele ntlnite la
pH fiziologic 7.5. Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24
ore de la aplicarea unguentului) este ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%),comparativ cu 80%
ntlnit pentru aceeai formulare n cazul folosirii unui pH acid 4.5.
n studii asemntoare n care s-a lucrat cu geluri de Meloxicam, cantitatea de substan activ
difuzat in vitro prin membran artificial a atins valori pn la 500 g/cm 2, n condiiile aplicrii unei
cantiti de 0.5g Meloxicam 0.3% [38].
27
III.4.3.4. STUDIU COMPARATIV: DISTRIBUIA MELOXICAMULUI N CELE TREI

COMPARTIMENTE: UNGUENT HIDROFIL MEMBRAN - SOLUIE RECEPTOARE
Dintre toate formulrile, formularea G2P2 a avut cel mai mic procentaj de Meloxicam rmas n
forma farmaceutic aplicat.
Procentul de Meloxicam ramas in unguentul aplicat
70
Procent (%)
60
50
40
30
20
10
0
G1
G2P2
G4
Tipul de formulare
U2
pH 7.5
pH 4.5
GRAFIC 11 PROCENT DE MELOXICAM RMAS N UNGUENTUL APLICAT p=0.15937284
Evolutia Meloxicamului la pH 7.5
Procentaj (%)
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
G1
G2P2
G4
U2
Tip formulare
pH 7.5 procent difuzat
pH 7.5 procent nedifuzat
pH 7.5 procent pierdut
GRAFIC 12 EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH 7.5
Procentaj (%)

100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
G1
G2P2
G4
U2
Tip formulare
GRAFIC 13 EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ARTIFICIAL LA pH 4.5

28
III.4.4. DISCUII
La fel ca i celelalte antiinflamatoare nesteroidiene, Meloxicamul a ridicat probleme la
ncorporarea n forma farmaceutic datorit solubilitii sczute n baza de unguent. Studiile arat c
solubilitatea AINS poate fi crescut cu ajutorul alcoolilor, propilenglicolului, DMSO. Concentraia n
substan activ nu depete 10 % n cazul antiinflamatoarelor nesteroidiene formulate pentru aplicare
topic si comercializate pe pia
[39]
. Pentru aplicrile topice Meloxicamul ar putea fi formulat n forme
farmaceutice cu aplicare local. n ara noastr nu exist nici o form farmaceutic cu aplicare topic
pe baz de Meloxicam.
Agenii folosii n acest studiu pentru creterea difuziei prin membrana artificial au mai multe
mecanisme de aciune:
1. Trietanolamina crete solubilitatea substanei active n vehicul. Creterea solubilitii
compuilor greu solubili se bazeaz uneori pe transformarea lor n sruri mult mai uor solubile, cu
condiia pstrrii efectelor terapeutice. Pe acest gen de mecanism se bazeaz folosirea etanolaminelor
pentru creterea solubilitii compuilor antiinflamatori nesteroidieni
[31]
2. Polietilenglicolii cresc coeficientul de partiie,

3. Tween 80 crete gradul de dizolvare al Meloxicamului, dar poate aciona i prin solubilizarea
lipidelor din stratum corneum n cazul administrrii pe piele.
Studiul a constat n determinarea in vitro a vitezei de cedare, a procentului de Meloxicam
difuzat, precum i a modului de repartizare a substanei active n cele trei compartimente.
Viteza de difuzie (mg/ml) a Meloxicamului prin membrana artificial a crescut n toate
experimentele foarte mult n intervalul de timp 0 - 30 minute, dup care a sczut treptat, cantiti de
Meloxicam putnd fi decelate chiar i dup o perioad de 24 ore de la aplicarea unguentului pe
membrana artificial. Aceste rezultate au fost n concordan cu cele gsite n literatura de
specialitate[132]. n studiul efectuat de Nagia et al. n 2006 folosind diferite geluri cu Meloxicam,
cantitatea de substan activ difuzat prin membran artificial a atins cote maxime pn la 2 ore de la
momentul aplicrii, iar la 9 ore dup aplicare, aceasta a fost de 133.6 g/cm2 pentru un gel de carbopol
cu 0.5% Meloxicam[32].
n alt studiu efectuat de Jantharaprapap et al. n 2007, cantitatea difuzat a atins valori de
500g/cm2 n condiiile aplicrii a 0.5g gel Meloxicam 0.3% [38].
Vitezele de difuzie obinute n cadrul Studiului II au putut fi optimizate prin testarea mai multor
ageni de cretere a difuziei prin membran. Dintre toi agenii, trietanolamina a avut cea mai mare
influen asupra vitezei de difuzie, aceasta atingnd valori de 0.018mg/min la 10 minute de la aplicare.
Picurile vitezelor de difuzie prin membrana artificial utiliznd soluia salin cu pH 4.5 apar ceva mai
trziu, cu o laten de 10-15 minute comparativ cu cele aprute cnd s-a utilizat soluia salin pH 7.5.
29
Studiile recente arat continua preocupare a cercettorilor pentru creterea gradului de

solubilizare i de difuzie prin diferite membrane artificiale i naturale a Meloxicamului, un
antiinflamator cu un potenial ridicat din punct de vedere al aciunii terapeutice la aplicare topic [31] .
III.4.5. CONCLUZII
1. Viteza de difuzie (mg/ml) a Meloxicamului prin membrana artificial a crescut n toate cazurile
foarte mult n intervalul de timp 0 - 30 minute, dup care a sczut treptat, cantiti de Meloxicam
putnd fi decelate chiar i dup o perioad de 24 ore de la aplicarea unguentului pe membrana
artificial.
2. Viteza maxim de difuzie a Meloxicamului se nregistreaz n cazul formulei care conine ca
agent de cretere a solubilitii Trietanolamina. Viteza atinge valori maxime de aprox 0.018mg/min la
10 minute de la aplicare. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea fi explicat prin
transformarea Meloxicamului n sarea sa, un compus mai uor solubil i deci care poate difuza mai
uor prin membrana artificial.
3. Adugarea de PEG 400 solubilizeaz Meloxicamul i duce la formarea unui unguent de tip
soluie, dar evoluia vitezei de difuzie sugereaz o afinitate foarte mare a Meloxicamului pentru
agentul de solubilizare PEG 400, respectiv PEG 4000 n cazul formulrilor G4, respectiv U2.
4. Evoluia vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu pH
4.5 este asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, valorile maxime aprnd ceva mai trziu, cu o
laten de 10-15 minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5.
5. Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24 ore de la
aplicarea unguentului) este ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%), formul la care s-au observat
6. Procentul mai mic difuzat n cazul soluiilor receptoare cu pH acid 4.5 poate fi datorat unei
solubiliti mai reduse a Meloxicamului n aceste soluii, dar i unei posibile degradri a acestuia la
acest pH. Orientarea ctre o ipotez sau alta, trebuie s in cont i de cantitatea de Meloxicam care nu
a fost regsit n: gel, membran sau soluia receptoare. Aceast cantitate neregsit poate fi datorat
pierderilor inevitabile din timpul manipulrii.
7. Dintre toate formulele, hidrogelul pe baz de Carbopol 990 cu agent de cretere a solubilitii
Trietanolamin a avut cel mai bun profil farmacocinetic, comparativ cu celelalte 3 formulri.
30
III.5. STUDIUL III - PROFILUL FARMACOCINETIC DE CEDARE IN

VITRO AL MELOXICAMULUI PRIN PIELE ANIMAL DIN FORMELE
FARMACEUTICE SEMISOLIDE HIDROFILE. INFLUENA PROMOTORILOR
DE ABSORBIE I A pH-ULUI
III.5.1. MOTIVAIA STUDIULUI
Foarte multe dintre studiile in vitro efectuate au ca scop corelarea valorilor obinute cu cele
determinate prin studiile in vivo, aa nct treptat s poat fi eliminate studiile ce implic animale vii.
Uneori aceste corelri sunt dificil de realizat.
Acest experiment are ca obiectiv determinarea profilului farmacocinetic al Meloxicamului ca
reprezentant al clasei antiinflamatoarelor nesteroidiene, utiliznd metoda in vitro din studiul anterior,
dar prin folosirea unei membrane naturale (pielea de oarece).
Din gama variat a preparatelor utilizate n studiul anterior, au fost selectate pentru a fi testate n
acest studiu formulele cu cele mai bune profile de cedare a substanei active. Diferenele care au aprut
n profilul de cedare al Meloxicamului s-au datorat prezenei unor substane cu rol de promotori de
absorbie. Am determinat influena diferitelor substane auxiliare asupra difuziei Meloxicamului la
dou pH-uri diferite: unul acid, asemntor cu al pielii - 4.5 i unul neutru, fiziologic, asemntor cu al
plasmei - 7.5.

(Medchim T.M.), Tween 80 (Merck), Trietanolamin (Fluka Chemie AG), Polietilenglicol 400
(Merck), Polietilenglicol 4000 (Merck) Glicerin (SC Chimreactiv SRL), Hidroxid de sodiu (Merck),
Fenosept, Ser fizioliogic 0,9% m/v (BBraun), Nipagin, Nipasol, Lanolin, Vaselin, Metilceluloz.
Pentru testele de difuzie in vitro s-a folosit celula de difuzie Franz termostatat ntr-o baie de ap
cu recirculare, meninndu-se o temperatur de 320C.
Ca membrane biologice naturale au fost folosite poriuni de piele proaspt recoltat de la oarece
adult.
Pielea dorsal a fost obinut de la oareci Swiss albino aduli cu o greutate de aproximativ 30g.
Toate experimentele au fost efectuate n acord cu regulile bioetice de cercetare tiinific de la nivelul
instituiei noastre Universitatea de Medicin i Farmacie Craiova. oarecii au fost anesteziai cu eter
i apoi sacrificai prin tierea venei jugulare. Pielea dorsal a fost prelevat, iar blana a fost ndeprtat
prin radere cu ajutorul unui aparat de ras. Grosimea pielii abdominale de oarece a fost de
1.83x10-2cm. Pielea fost secionat n fracii de cte 15 mm diametru. nainte de fixarea pe celula de
31
difuzie, fiecare fracie de piele a fost analizat din punct de vedere al integritii fizice, urmrindu-se s
nu fie prezente zone de piele prin care cederea s se fac neuniform.
FIGURA 5 - OARECE SWISS ALBINO UTILIZAT N EXPERIMENTE
FIGURA 6
FIGURA 7
ZON INTEGR DE PIELE DORSAL
ZON DE PIELE UTILIZAT N

TESTELE DE DIFUZIE
Protocolul de difuzie a fost identic cu cel utilizat n Studiul II anterior.
III.5.3. REZULTATE
Absorbtia in functie de concentratie
Absorbtia
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0
20
40
60
80
concentratia m g/100 m l
100
120
Absorbtia
GRAFIC 14 - ABSORBIA STANDARDELOR N FUNCIE DE CONCENTRAIE
32
III.5.3.1. STUDIU COMPARATIV: DISTRIBUIA MELOXICAMULUI N CELE TREI

COMPARTIMENTE: UNGUENT HIDROFIL MEMBRAN - SOLUIE RECEPTOARE
n cazul experimentului efectuat, se poate observa c formularea G2P2, are cea mai mic valoare
a procentului de Meloxicam rmas n piele (aproximativ 20%). Chiar i n condiiile unui pH acid 4.5,
dei valorile sunt ceva mai mari, se pstreaz aceeai tendin, formula G2P2 avnd cel mai mic
procent nedifuzat(aproximativ 25%).
Procentul de Meloxicam ramas in unguentul aplicat pe piele
70
Procent (%)
60
50
40
30
20
10
0
G1
G2P2
G4
U2
Tipul de formulare
pH 7.5
pH 4.5
GRAFIC 15 - PROCENT DE MELOXICAM RMAS N UNGUENTUL APLICAT p=0.14526511
Procentaj (%)
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
G1
G2P2
G4
U2
Tip formulare
GRAFIC 16 - EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN PIELE ANIMAL LA pH 7.5
Procentaj (%)
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
G1
G2P2
G4
U2
Tip formulare
GRAFIC 17 - EVOLUIA MELOXICAMULUI PRIN PIELE ANIMAL LA pH 4.5
33
II.5.3.2. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE I

A pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE
Graficele reprezint evoluia vitezei de cedare a Meloxicamului pentru cele patru formulri cu
compoziie diferit n dou condiii de lucru diferite: pH 4.5 i pH 7.4.
EXP 5 vs EXP 13 - G1 PIELE
0.0007
0.0006
0.0005
0.0004
0.0003
0.0002
0.0001
0
0
10
15
30
Timp (min)
60
120
180
EXP 5 G1 PIELE (DESIGN 9)
360
1440

EXP 6 vs EXP 14 - G2P2 PIELE
0.0016
0.0014
0.0012
0.001
0.0008
0.0006
0.0004
0.0002
0
0
10
15
Timp (min)
30
60
120
180
EXP 6 G2P2 PIELE (DESIGN 8)
360
1440
GRAFIC 19 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA G2P2 p=0.029771

EXP 7 vs EXP 15 - PEG 400 CARBOPOL - PIELE
0.0014
Viteza de difuzie
(mg/min)
0.0012
0.001
0.0008
0.0006
0.0004
0.0002
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
Timp (min)
EXP 7 PEG 400 CARBOPOL PIELE (DESIGN 17)
34

EXP 8 vs EXP 16 - PEG 400 PEG 4000 - PIELE
Viteza de difuzie
(mg/min)
0.0014
0.0012
0.001
0.0008
0.0006
0.0004
0.0002
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
Timp (min)
EXP 8 PEG 400 PEG 4000 PIELE (DESIGN 18)
GRAFIC 21 - INFLUENA pH-ULUI ASUPRA VITEZEI DE CEDARE FORMULA U2 p=0.0006772
Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei vitezei de difuzie in vitro a

Meloxicamului din unguente hidrofile prin piele animala la pH 7.5
VITEZA DE DIFUZIE (mg/min)
0.0016
0.0014
0.0012
0.001
0.0008
0.0006
0.0004
0.0002
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
TIMP (MIN)

PRIN PIELE ANIMAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5
Comparnd G2P2 din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului prin piele de
oarece, cu G1, G4 i U2 la pH 7.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p:
0.0002864, 0.0090254, 0.0140013.
35
Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei vitezei de difuzie in vitro a

Meloxicamului din unguente hidrofile prin piele animala la pH 4.5
0.0014
0.0012
0.001
0.0008
0.0006
0.0004
0.0002
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
TIMP (MIN)

PRIN PIELE ANIMAL LA pH-UL PIELII 4.5
Comparnd G2P2 din punct de vedere al vitezei de difuzie a Meloxicamului prin piele de
oarece, cu G1, G4 i U2 la pH 4.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p:
7.06278E-05, 0.000316052, 1.53073E-05 (p<0.05).
III.5.3.3. STUDIU COMPARATIV: INFLUENA AGENTULUI DE SOLUBILIZARE I

A pH-ULUI ASUPRA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT
EXP 5 vs EXP 13 - G1 PIELE
30
25
20
15
10
5
0
0
10
Timp (min)
15
30
60
120
180
360
1440

DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G1 p=0.0276794
36

EXP 6 vs EXP 14 - G2P2 PIELE
70
60
50
40
30
20
10
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
Timp (min)

DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G2P2 p=0.0188565

EXP 7 vs EXP 15 - PEG 400 CARBOPOL - PIELE
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
Timp (min)

DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA G4 p=0.0226368
37

EXP 8 vs EXP 16 - PEG 400 PEG 4000 - PIELE
50
Procentul
difuzat (%)
40
30
20
10
0
1440
Timp (min)

DE MELOXICAM DIFUZAT FORMULA U2 p=0.0181545
Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei procentului de Meloxicam difuzat in vitro

din unguente hidrofile prin piele animala la pH 7.5
PROCENT DIFUZAT (%)
70
60
50
40
30
20
10
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
TIMP (MIN)

PRIN PIELE ANIMAL LA pH FIZIOLOGIC 7.5
Comparnd G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat prin piele de oarece,
cu G1, G4 i U2, la pH 7.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p: 0.0193025,
0.0520875, 0.0652805 (p<0.05).
38
Influenta substantelor auxiliare asupra variatiei procentului de Meloxicam difuzat in

vitro din unguente hidrofile prin piele animala la pH 4.5
60
50
40
30
20
10
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
TIMP (MIN)

Comparnd G2P2 din punct de vedere al procentului de Meloxicam difuzat prin piele de oarece,
cu G1, G4 i U2, la pH 4.5, utiliznd TTEST, au fost obinute urmtoarele valori ale p: 0.020147496,
0.063803846, 0.047039375 (p<0.05).
III.5.4. DISCUII
n ultimii ani, cercettorii au ncercat s demonstreze c unele antiinflamatoare precum
ketoprofenul, naproxenul, tenoxicamul i celecoxibul au un profil foarte bun de cedare la administrare
topic [40].
Pentru testele in vitro se pot folosi trei tipuri de piele: membrana epidermic (de o grosime de
0.1 mm, obinut prin tratament termic, chimic sau enzimatic), piele cu grosime variabil (splitthickness skin) ntre 0.2 0.5mm, obinut cu ajutorul dermatomului, sau pielea ntreag cu o grosime
ntre 0.5 i 1mm. Din toat structura pielii, cel mai important rol l are stratum corneum.
Un posibil dezavantaj al pielii ntregi este constituit de faptul c zona lipofilic de la nivelul
dermului poate reine substanele active, fcndu-le inaccesibile soluiei receptoare. Pe de alt parte,
membranele epidermice sunt foarte fragile i supraestimeaz absorbia in vivo.
Metoda de lucru utilizat n aceast tez a avut la baz studiile recente din domeniu. Durata de
expunere este considerat a fi optim n general n intervalul 6-8-24 ore. O expunere un timp mai scurt
nu ofer informaii suficiente pentru a stabili un profil farmacocinetic de absorbie, iar un timp mai
ndelungat de contact nu este necesar deoarece majoritatea substanelor active administrate topic nu
necesit un timp mai mare de 24 ore pentru exercitarea efectului terapeutic
[40]
Difuzia in vitro a Meloxicamului prin piele animal a fost mai dificil dect prin membrana
artificial. Acest aspect a fost evideniat i de ali cercettori. Spre exemplu, n studiul efectuat n India
n 2010 de ctre Shashikant et al, fluxul prin pielea abdominal de obolan a variat n jurul valorii de
39
200 g/cm2/h, n condiiile utilizrii unor geluri de Carbopol 934P cu adaos de trietanolamin,
propilenglicol sau DMSO[195]. n acelai studiu, procentul de Meloxicam difuzat a atins valori de 90%.
Studiul a decelat Meloxicamul din soluia receptoare doar pn la 12 ore de la aplicare. Comparativ cu
acesta, rezultatele obinute n cadrul prezentei teze au fost satisfctoare, procentul de Meloxicam
difuzat atingnd i valori de 70% n cazul formulei G2P2. n literatur sunt menionate i procente mai
mici de 70% de Meloxicam difuzat prin piele animal.
Viteza de cedare a Meloxicamului atinge valori mai mari cnd se lucreaz la pH fiziologic
comparativ cu pH-ul acid unde se obin valori de aproximativ 1.1g/min. Fluxul se ncadreaz n
valorile gsite n literatur de aprox 50-100 g/cm2/h [32].
Comportamentul la cele dou pH-uri diferite a fost similar, observndu-se pierderi aproximativ
egale. Pierderile de Meloxicam observate n anumite cazuri, ar putea fi datorate afinitii foarte mari a
Meloxicamului pentru agentul de solubilizare polietilenglicolul 4000. n aprilie 2010, un studiu
publicat n Scientia Pharmaceutica a artat o posibil afinitate a substanei active pentru
polietilenglicoli [41].
III.5.5. CONCLUZII
1. Formele farmaceutice topice cu piroxicam, substan cu structur i aciune farmacologic
similar cu a Meloxicamului, au un coninut n substan activ de 0.5 1.5%. Deoarece Meloxicamul
este de 2-3 ori mai puternic din punct de vedere al aciunii terapeutice, am optat pentru o concentraie
de 0.3% Meloxicam n formele farmaceutice studiate.
2. Factorii care au variat n experimentele efectuate au fost: agentul de solubilizare i pH-ul (7.4
i 4.5).
3. Formula la care s-au obinut cele mai mari valori ale vitezei de cedare a Meloxicamului
(mg/min) a fost G2P2 (gel de carbopol cu adaos de trietanolamin), fapt explicat prin creterea
gradului de solubilizare a Meloxicamului. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea
fi explicat prin transformarea Meloxicamului n sarea sa cu Trietanolamina, un compus mult mai uor
solubil i deci care poate difuza mai uor prin membran natural.
4. n cazul difuziei prin piele de oarece, se remarc dou valori maxime ale vitezei de difuzie: la
5-10 minute i la 3 ore de la nceperea experimentului. Aceste picuri apar n cazul tuturor celor patru
formulri testate, maximele fiind atinse tot n cazul formulrii G2P2. Ele
s-ar putea datora
mecanismelor diferite de difuzie implicate n transportul substanei active. Concentraiile de

Meloxicam obinute n soluia receptoare sunt n concordan cu cele gsite n literatur.
5. Procentul de Meloxicam difuzat prin pielea de oarece s-a ncadrat ntre 30 i 70%, cu valori
mai bune n cazul utilizrii pH-ului neutru i a agentului de solubilizare trietanolamina (formula
G2P2). Totui, comparativ cu datele din literatur, procentele difuzate in vitro au fost mai mici.
40
III.6.
STUDIUL
IV
COMPARAREA
DIFUZIEI
IN
VITRO
MELOXICAMULUI PRIN MEMBRAN ATIFICIAL I PRIN PIELE ANIMAL

Folosind datele obinute n cadrul studiilor anterioare efectuate pe membran artificial i pe
piele dorsal de oarece, se pot trage cteva concluzii referitoare la profilul farmacocinetic al
Meloxicamului difuzat prin diferite tipuri de membrane naturale sau artificiale utiliznd teste in vitro.
Se poate analiza variaia vitezei de difuzie, a procentului de Meloxicam difuzat i a distribuiei
Meloxicamului n cele trei compartimente: form farmaceutic, membran i soluie receptoare.
Suprafaa de difuzie a fost n toate experimentele aceeai.
III.6.1. VARIAIA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI N FUNCIE DE

TIMP
Formularea farmaceutic cu cele mai bune rezultate s-a dovedit a fi G2P2 care are n compoziie
Meloxicam 0.3%, Trietanolamin 3%, Carbopol 990 1%, Glicerin 12 %, Soluie NaOH 10% - 6.5% i
Soluie Fenosept 1% (g/g).
Variatia vitezei de difuzie a Meloxicamului in functie de timp
0.02
0.018
0.016
0.014
0.012
0.01
0.008
0.006
0.004
0.002
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
Timp (min)
GRAFIC 30 - VARIAIA VITEZEI DE DIFUZIE A MELOXICAMULUI

N FUNCIE DE TIMP PENTRU FORMULA G2P2 pH 7.4 p=0.003375384
Comparnd difuzia prin cele dou tipuri de membran, se poate observa c viteza de difuzie ia
valori mult mai mari n cazul difuziei prin membrana artificial dect prin cea animal, ceea ce era de
ateptat, innd cont de caracteristicile celor dou tipuri de membran: grosime, compoziie, tipuri de
difuzie implicate. Se mai poate remarca faptul c n cazul difuziei prin piele animal, viteza de difuzie
are dou picuri la 5-10min i la 3 ore dup aplicare, spre deosebire de membrana artificial unde
aceasta crete pn la 15 minute, dup care ncepe s scad pn la 24 ore. Trebuie avut n vedere i
faptul c membrana artificial poate avea o grosime cu pn la de 10 ori mai mic dect pielea
recoltat de la oarece.
41
III.6.2. VARIAIA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT N FUNCIE DE

TIMP
Variatia procentului de Meloxicam difuzat in functie de timp
100
Procent difuzat (%)
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0
10
15
30
60
120
180
360
1440
Timp (min)
GRAFIC 31 - VARIAIA PROCENTULUI DE MELOXICAM DIFUZAT

N FUNCIE DE TIMP PENTRU FORMULA G2P2 pH 7.4 p=0.0002125
Procentul de Meloxicam difuzat a atins valori asemntoare cu cele din literatur pentru
experimente similare, el incadrndu-se n jurul valorii de 80-90% pentru difuzia prin membran
artificial i 60% pentru cele ce au utilizat pielea animal. Procentul de Meloxicam neregsit n cazul
experimentelor prin piele animal a fost ceva mai mare, oferind ipoteza unei retenii a substanei active
n mostra de piele utilizat, fracia aceasta putnd avea i rol dept.
Nu au aprut diferene semnificative la utilizarea unui pH 4.5 diferit de cel fiziologic.
Urmtoarea etap ar fi efectuarea unor teste in vivo cu aplicarea acestei forme farmaceutice
direct pe pielea unui animal viu, cu determinarea variaiei concentraiei plasmatice.
III.7. STUDIUL V - EVALUAREA FARMACOCINETIC IN VIVO A UNOR

PREPARATE CU ANTIINFLAMATOARE NESTEROIDIENE APLICATE TOPIC
FOLOSIND EXPERIMENTE PE ANIMALE
III.7.1. MOTIVAIA STUDIULUI
Antiinflamatoarele nesteroidiene aplicate topic prezin efecte terapeutice locale similare, dar
efectele adverse gastrice sunt mult reduse comparativ cu efectele secundare aprute dup administrare
oral sau injectabil.
n acest studiu s-a dorit determinarea concentraiilor plasmatice a ctorva dintre
antiinflamatoarele nesteroidiene dup administrarea percutan n doz unic la animale de laborator i
42
monitorizarea acestor concentraii plasmatice n decurs de 24 ore. Determinrile cantitative i calitative

au fost efectuate prin cromatografie de lichide.
Studiul i-a mai propus s determine:
- dac la administrarea cutanat AINS se absorb i ating nivele plasmatice similare cu nivelele
plasmatice descrise n literatur ca fiind terapeutice;
- dac preparatele cu eliberare lent administrate cutanat n priz unic prezint o eficien i o
tolerabilitate bun.
Proporia de AINS absorbit prin piele depinde de timpul de contact, de aria acoperit, precum i
de doza total i de hidratarea pielii.
S-a determinat cantitatea de substan activ absorbit prin piele, prin determinarea
concentraiilor plasmatice.

Au fost folosii: iepuri aduli cu greuti aproximativ identice (3kg), de sex masculin; Diclofenac
- Diclac 5% gel HEXAL, lot 8C7627; Indometacin - Indometacin 4% crem MARK
PHARMACEUTICS, lot 008; pansamente sterile; seringi; ace de unic folosin pentru recoltarea
probelor; vat; pansamente sterile; recipiente sterile pentru recoltarea probelor de snge; ser fiziologic
90mg/10ml ZENTIVA; main de tuns electric; fosfat monopotasic Merck; acetonitril Merck;
cloroform Merck; naproxen; balan electronic; centrifug; cromatograf de lichide FINNIGAN SURVEYOR cu coloan BDS - HYPERSIL C18, 250X4,6 i dimensiunea particulelor de 5m.
Metoda de lucru a folosit iepuri aduli crora li s-a aplicat n zona dorsal o anumit cantitate de
form farmaceutica semisolida produs industrial i distribuit pe piaa farmaceutic din Romnia.
Animalele de laborator au fost 10 iepuri masculi aduli, fiecare cu o greutate de aproximativ 3kg.
Iepurii au fost mparii n dou loturi: 5 iepuri au fost tratai cu cte 2g Diclac 5% gel HEXAL,
iar ceilali 5 iepuri au fost tratai cu cate 2g Indometacin 4% crem MARK PHARMACEUTICS.
Formele farmaceutice respective au fost aplicate pe suprafaa ras anterior, care nu prezenta leziuni de
continuitate.
Probele de snge (3ml) au fost recoltate la intervale de 2 ore pe parcursul primelor 12 ore de la
nceperea experimentului, ultima prob fiind prelevat la 24 ore. Probele au fost pstrate pn la
separarea plasmei i apoi centrifugate 10min la 4800rpm. Din probele recoltate de la fiecare iepure,
s-au prelevat cte 500l ser.
Probele s-au analizat cromatografic folosindu-se un cromatograf de lichide FINNIGANSURVEYOR cu coloan BDS- Hypersil C18, 250 X 4,6 mm i cu dimensiunea particulelor de 5 m
folosindu-se metoda eluiei izocratice.
43
III.7.3. REZULTATE
Dup analiz cromatografic, rezultatele obinute au fost reprezentate mai jos.
FIGURA 8 - CROMATOGRAMA DICLOFENACULUI
FIGURA 9 - CROMATOGRAMA INDOMETACINULUI
GRAFIC 32 - VARIAIA CONCENTRAIEI PLASMATICE MEDII A DICLOFENACULUI N

FUNCIE DE TIMP (ORE)
44
GRAFIC 33 - VARIAIA CONCENTRAIEI PLASMATICE MEDII A INDOMETACINULUI N

FUNCIE DE TIMP (ORE)
III.7.4.DISCUII
Aciunea analgezic i antiinflamatoare, ct i toxicitatea sunt corelate cu concentraia
plasmatic a medicamentului i se afl n strns legtur cu inhibarea ciclooxigenazei COX1 cu
scderea succesiv a nivelului de prostaglandine.
Prin studiul efectuat, am determinat concentraia plasmatic a Indometacinului i Diclofenacului,
ca parametru important de farmacocinetic, dup aplicarea topic a celor dou antiinflamatoare la
iepure.
Diclofenacul i Indometacinul au avut o cretere progresiv a concentraiilor plasmatice,
asemntoare pn la 12 ore, cu scdere progresiv dar meninndu-se i la 24 de ore de la aplicare
pentru ambele preparate folosite.
Ambele substane au realizat concentraii asemntoare n plasm.
Avnd n vedere c testarea s-a facut pe iepuri de acelai sex, cu greutate corporal aproximativ
egal, la care administrarea s-a efectuat folosind aceeai cale, cutanat, nivelul plasmatic al
substanelor nu a fost influenat de variaii ale absorbiei sau ale primului pasaj.
Tegumentul animalelor nu a prezentat escoriaii care ar fi putut s influeneze absorbia prin
untarea tegumentului.
La finalul studiului starea general a animalelor de experien a fost bun, la nivelul locului de
administrare neaprnd fenomene de iritaie, hematoame sau semne de infecie.
Pe parcursul experimentului nici un iepure nu a prezentat reacii adverse (erupii cutanate,
tulburri digestive, reacii anafilactoide).
Comparnd cu datele din literatur obinute dup administrarea oral a Diclofenacului i
Indometacinului, concentraiile plasmatice din studiul acesta, dup administrare cutanat au fost puin
mai mici (0,35158g/ml la Diclofenac i respectiv 0,35404 g/ml la Indometacin n raport cu datele
din literatur de 0,45 0,5g/ml la administrarea oral la om) i obinute la intervale de timp mai mari
(concentraia maxim a fost obinut n acest studiu la 12 ore, n raport cu studiile din literatur, unde
la administrarea oral concentraiile maxime au fost obinute la 4 ore de la administrarea a 100 mg
45
compus antiinflamator la om). n studii la om, concentraia plasmatic maxim pentru plasturii cu
Diclofenac a fost: 376, 1562, 2953, 2902, 2864, i 2948 ng/ml, dup 2, 4, 8, 24, 30, i 48 ore de la
aplicarea plasturilor care conineau 50mg diclofenac dietilamin. Concentraia plasmatic maxim
dup administrarea oral a 50mg Diclofenac sodic, valorile raportate sunt: 383.7, 2569, 3693.5, 162.5
i 55.3ng/ml la 2, 4, 8, 24, i 30 ore dup adiministrare unic. Valorile Cmax dup administrare oral
sunt 3693.5 ng/ml, respectiv 2953.8 ng/ml dup administrare transdermic [42].
n studiul efectuat de Magnette JL i colab. (2004) s-au obinut concentraii plasmatice mari la
om datorit suprafaei mari de aplicare (15% din suprafaa corpului) a Indometacinului (eritem indus
de ultraviolete). Aplicarea topic pe zone limitate de piele a antiinflamatoarelor nesteroidiene la om nu
realizeaz totui concentraii plasmatice mari [43].
III.7.5. CONCLUZII
1. Rezultatele acestui studiu susin ideea c antiinflamatoarele nesteroidiene (Diclofenac,
Indometacin) administrate cutanat la iepure realizeaz concentraii plasmatice apropiate de nivelele
obinute la administrarea oral, dar mai tardiv.
2. Experimentul efectuat aduce argumente suplimentare asupra eficienei terapeutice a
preparatelor topice cu antiinflamatoare nesteroidiene n tratamentul afeciunilor inflamatorii cronice,
cu localizare cutanat, articular (unguente, geluri), sfera genital (unguente, geluri, ovule) [44] etc.
3. Datorit mecanismului de aciune al antiinflamatoarelor nesteroidiene, chiar i n cazul
aplicrii topice, trebuie meninute contraindicaiile digestive i luate msuri de protecie gastric
deoarece concentraiile plasmatice sunt suficient de mari pentru a realiza efecte sistemice terapeutice,
dar i adverse.
IV. CONCLUZII FINALE

Numrul studiilor avnd ca interes durerea generat de inflamaie a crescut semnificativ n
ultimul deceniu, ceea ce arat c acest domeniu are foarte multe resurse neexploatate nc la nivel
mondial. Numrul de apariii bibliografice n perioada 2000-2010 raportat la numrul de apariii din
1990-2000 este semnificativ mai mare, raportul fiind de 1,244845, adic cu aproape 25% mai mult.
Meloxicamul (cod ATC M01AC06) se gsete formulat n ara noastr doar sub form de comprimate,
supozitoare i soluii injectabile.
n urma cercetrii preclinice au putut fi trase urmtoarele concluzii:
1.Creterea solubilitii Meloxicamului (o substan cu o slab solubilitate n solveni lipofili i
hidrofili) s-a remarcat la Tween 80 0.1%, Trietanolamina 30% i Polietilenglicolul 400 3%. Acetia au
fost singurii excipieni dintre cei testai, care adugai n unguente alturi de substana activ, au dus la
solubilizarea Meloxicamului i la obinerea unor unguente de tip soluie transparente;
46
2.Dintre agenii presupui a crete solubilitatea, octilsulfatul de sodiu, un agent tensioactiv cu

proprieti umectante i de scdere a tensiunii superficiale lichid solid, nu a reuit s solubilizeze
Meloxicamul;
3.Au fost formulate 9 unguente din categoria unguentelor hidrofile i lipofile, de tip soluie
(gelurile G1, G2P2, G4 i unguentul U2), dar i de tip suspensie (gelurile G2P1, G3, G5, G6 i
unguentul U1);
4.Din punct de vedere organoleptic, unguentele obinute au caracteristicile componentelor. pH-ul
lor s-a ncadrat n limitele impuse de FR X;
5.Analiznd vscozitatea preparatelor obinute, doar formulele G1, G2P2, G4, U1 i U2 au fost
considerate a fi corespunztoare unui unguent ideal, restul preparatelor avnd o consisten mult prea
sczut;
6.Vscozitatea preparatelor a fost slab influenat, n sensul scderii ei, de ctre substana
medicamentoas testat - Meloxicam 0.3%;
7.Din punct de vedere al capacitii de ntindere, preparatele pe baz de carbopol au avut un
comportament asemntor.
8.In vederea determinrii profilului cinetic de cedare a Meloxicamului prin membrana artificial,
au fost alese preparatele cu caracteristicile optime i anume: gelurile G1, G2P2, G4 i unguentele U1 i
U2.
9.S-a putut observa c viteza de difuzie (mg/ml) a Meloxicamului prin membrana artificial
crescut n toate cazurile foarte mult n perioada de timp 0-30 minute, dup care a sczut treptat,
cantiti de Meloxicam putnd fi decelate chiar i dup o perioad de 24 ore de la aplicarea
unguentului pe membrana artificial.
10. Viteza maxim de difuzie a Meloxicamului s-a nregistrat n cazul formulei care conine ca
agent de cretere a solubilitii Trietanolamina. Viteza a atins valori maxime de aproximativ
0.018mg/min la 10 minute de la aplicare. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea fi
explicat prin transformarea Meloxicamului n sarea sa cu Trietanolamina, un compus mult mai uor
solubil i deci care poate difuza mai uor prin membrana artificial.
11. PEG-ul 400 a solubilizat Meloxicamul i a dus la formarea unui unguent de tip soluie, dar
evoluia vitezei de difuzie a sugerat o afinitate foarte mare a Meloxicamului pentru agentul de
solubilizare PEG 400, respectiv PEG 4000, n cazul formulrilor G4, respectiv U2.
12. Evoluia vitezelor de difuzie a Meloxicamului prin membrana artificial n soluia salin cu
pH 4.5 este asemntoare cu cea din soluia cu pH 7.5, valorile maxime n soluia receptoare aprnd
ceva mai trziu, cu o laten de 10-15 minute comparativ cu cele aprute la pH 7.5. De asemenea,
valorile pe care le ating vitezele sunt i ele mai sczute comparativ cu cele determinate n cadrul
experimentelor desfurate la pH 7.5.
47
13. Concentraiile de Meloxicam decelate n soluiile receptoare la pH 7.5 i 4.5 sunt eficiente
pentru a asigura aciune terapeutic local i sunt suficient de mici pentru a minimaliza efectele
sistemice.
14. Procentul cel mai mare de Meloxicam difuzat pn la ncheierea experimentului (24 ore de la
aplicarea unguentului) a fost ntlnit la formula G2P2 (aproximativ 90%), formul la care s-au observat
15. Procentul mai mic difuzat n cazul soluiilor receptoare cu pH acid 4.5 poate fi datorat unei
solubiliti mai reduse a Meloxicamului n aceste soluii, dar i unei posibile degradri a acestuia la pH
acid. Orientarea ctre o ipotez sau alta, trebuie s in cont i de cantitatea de Meloxicam care nu a
fost regsit n nici unul dintre compartimente: gel, membran, soluie receptoare.
16. Dintre toate formulele, hidrogelul pe baz de Carbopol 990 cu agent de cretere a solubilitii
Trietanolamin a avut cel mai bun profil farmacocinetic, comparativ cu celelalte 3 formulri
[45]
17. n experimentele in vitro de difuzie a preparatelor cu Meloxicam prin pielea de oarece

formula la care s-au obinut cele mai mari valori ale vitezei de cedare a Meloxicamului (mg/min) a fost
G2P2 (gel de carbopol cu adaos de trietanolamin), fapt explicat prin creterea gradului de solubilizare
a Meloxicamului. Evoluia vitezei de difuzie pentru hidrogelul G2P2 ar putea fi explicat prin
transformarea Meloxicamului n sarea sa cu Trietanolamina, un compus mult mai uor solubil i deci
care poate difuza mult mai uor prin membrana natural
18. n cazul difuziei prin piele de oarece, s-au remarcat dou picuri ale vitezei de difuzie: la 5-10
minute i la 3 ore de la nceperea experimentului. Aceste picuri au aprut n cazul tuturor celor patru
formulri testate, maximele fiind atinse tot n cazul formulrii G2P2. Ele s-ar putea datora
mecanismelor diferite de difuzie implicate n transportul substanei active. Concentraiile de
Meloxicam obinute n soluia receptoare au fost n concordan cu cele gsite n literatura de
specialitate.
19. Prin folosirea membranei naturale, procentul de Meloxicam difuzat s-a ncadrat ntre 30 i
70%, cu valori mai bune n cazul utilizrii pH-ului neutru i a agentului de solubilizare trietanolamina
(formula G2P2). Totui, comparativ cu datele din literatur, procentele difuzate au fost mai mici.
20. Comparnd difuzia prin cele dou tipuri de membran, s-a observat c viteza de difuzie a
atins valori mult mai mari n cazul difuziei prin membrana artificial dect prin cea animal, ceea ce
era de ateptat, innd cont de caracteristicile celor dou tipuri de membran: grosime, compoziie,
tipuri de difuzie implicate. S-a mai putut remarca faptul c n cazul difuziei prin piele animal, viteza
de difuzie a avut dou picuri la 5-10 min i la 3 ore dup aplicare, spre deosebire de membrana
artificial unde aceasta a crescut pn la 15 minute, dup care a sczut pn la 24 ore. Trebuie avut n
48
vedere i faptul c membrana artificial poate avea o grosime cu pn la de 10 ori mai mic dect
pielea recoltat de la oarece.
21. Procentul de Meloxicam difuzat a atins valori asemntoare cu cele din literatur pentru
experimente similare, el ncadrndu-se n jurul valorii de 80-90% pentru difuzia prin membran
artificial i n medie de 60% pentru cele ce au utilizat pielea animal. Procentul de Meloxicam
neregsit n cazul experimentelor prin piele animal a fost ceva mai mare, oferind ipoteza unei retenii
a substanei active n mostra de piele utilizat, fracia aceasta putnd avea i rol dept.
22. In urma studiului in vivo, cu determinarea concentraiei plasmatice prin metoda lichid
cromatografic de nalt presiune, dup aplicarea topic a unor unguente cu diclofenac i indometacin
la iepure, s-a observat c se realizeaz concentraii plasmatice apropiate de nivelele obinute la
administrarea oral, dar mai tardiv.
23. Datorit mecanismului de aciune a antiinflamatoarelor nesteroidiene, chiar n cazul aplicrii
topice, trebuie meninute contraindicaiile digestive i luate msuri de protecie gastric, deoarece
concentraiile plasmatice sunt suficient de mari pentru a realiza efecte sistemice terapeutice, dar i
adverse.
49
V. BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. Popovici I., Lupuleasa D., Tehnologie Farmaceutica vol II, Polirom, Iai, (2008), 657- 664;
2. Dumitru Lupuleasa, Ionela Belu, Ani Simona Sevastre, Mirela Mitu, ndreptar practic pentru
prepararea medicamentelor, Vol I Ediia a II-a, Editura Medical Universitar Craiova, (2009), 171;
3. Popovici I., Lupuleasa D., Tehnologie Farmaceutica vol I, Editura Polirom, (2001), 171-219;
4. Farmacopeea Romn a X-a, Editura Medical,(1996), p 951 1003;
5. R. Jantharaprapap, G. Stagni, Effects of penetration enhancers on in vitro permeability of
Meloxicam gels, International Journal of Pharmaceutics 343 (2007) 2633;
6. Michael S. Roberts, Kenneth A. Walters, Dermal Absorption and Toxicity Assessment,
DRUGS AND THE PHARMACEUTICAL SCIENCES vol 177, Informa healthcare (2008), p37 -117;
7. Pao-Chu Wu, Yaw-Bin Huang, Jia-You Fang and Yi-Hung Tsa,i In vitro percutaneouus
absorption of captopril, International Journal of Pharmaceutics Volume 148, Issue 1 (1997), 41-46;
8. Glgn Yener, zlem Dal and Melike ner, Effect of Vehicles on Release of Meloxicam from
Various Topical Formulation,s The Open Drug Delivery Journal (2009), 3, 19-23;
9. Paul C. Mills, Sheree E. CrossThe effects of equine skin preparation on transdermal drug
penetration in vitro, The Canadian Journal of Veterinary Research, (2006);70:317320;
10. Aurelia Nicoleta Cristea, Tratat de Farmacologie Ediia I, Editura Medical Bucureti 2008,
p617-635 ;
11. Farmacologie general Aurelia Nicoleta Cristea Ed Didactic i Pedagogic Bucureti
(1999), p 46-76;
12. Laine L. Nonsteroidal anti-inflammatory drug gastropathy. Gastrointest Endosc Clin North
Am (1996); 6: 489504;
13. Mitchell JA, Akarasereenont P, Thiemermann C, Flower RJ, Vane JR., Selectivity of
nonsteroidal anti-inflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase. Proc
Natl Acad Sci U S A. (1993);90:11693-11697;
14. Catella-Lawson F, Reilly M, Kapoor S, et al., Cyclooxygenase inhibitors and the antiplatelet
effects of aspirin. N Engl J Med (2001); 345: 180917;
15. Fitzgerald G., Cardiovascular pharmacology of nonselective nonsteroidal antiinflammatory
drugs and coxibs: clinical considerations. Am J Cardiol (2002); 89: 2632;
16. Simon A, Manigrasso M, OConnor J., Cyclo-oxygenase 2 function is essential for bone
fracture healing. J Bone Miner Res (2002); 17: 96376;
17. Walley T, Coleman J., Allergic drug reactions: incidence and avoidance. Clin Immunother
(1994); 1: 1019;
18. Howard S. Smith,
Arachidonic Acid Pathways in Nociception, J Support Oncol
(2006);4:277287;
50
19. Saravana Kumar, Karen Grimmer, Nonsteroidal antiinflammatory drugs (NSAIDs) and
physiotherapy management of musculoskeletal conditions: a professional minefield? Australia
Therapeutics and Clinical Risk Management (2005):1(1) 6976;
20. Towheed T, Shea B, Wells G, Hochberg M:, Analgesia and nonaspirin, non-steroidal antiinflammatory drugs for osteoarthritis of the hip., Cochrane Database Syst Rev (2000), 2:CD000517;
21. Bing XIN, Yoshihito YOKOYAMA, Tatsuhiko SHIGETO, Hideki MIZUNUMA, Anti-Tumor
Effect of Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs on Human Ovarian Cancers, PATHOLOGY
ONCOLOGY RESEARCH (2007) Vol 13, No 4, http://www.webio.hu/por/ 2007/13/4/0365;
22. Muller M,Mascher H, Kikuta C, Schtier S, Brunner M, Dorner G, Eichler HG., Diclofenac
concentrations in defined tissue layers after topical administration. Clin Pharmacol Ther (1997); 62:
2939;
23. Hui X, Anigbogu A, Singh P, Xiong G, Poblete N, Liu P, Maibach HI., Pharmacokinetic and
local tissue disposition of [14C]sodium Diclofenac following iontophoresis and systemic administration
in rabbits. J Pharm Sci (2001); 90: 126976;
24. Busch U, Engelhardt G., Distribution of [14C]Meloxicam in joints of rats with adjuvant
arthritis. Drugs Exp Clin Res (1990);16:49-52;
25. Turck D, Busch U, Heinzel G, Narjes H,. Clinical pharmacokinetics of Meloxicam. Eur J
Rheumatol Inflamm (1995);15:22-34;
26. Schmid J, Prox A, Busch U, Kaschke S, Sauter T., The biotransformation of Meloxicam in
man and rat, Scand J Rheumatol (1994);Suppl 9, A118;
27. Engelhardt G., Meloxicam inhibits preferentially COX-2. Eur J Clin Pharmacol
(1994);47:A98;
28. Pairet M, Engelhardt G., The preferential inhibition of COX-2 by Meloxicam is highly
dependent on the structure of the drug. Rheumatol Eur (1995);24(suppl. 3):272;
29. http://www.rxlist.com/mobic-drug.htm;
30. Peter Luger, Klaus Daneck, Wolfhard Engel, Gnter Trummlitz, and Klaus Wagner,
Structure and physicochemical properties of Meloxicam, a new NSAID, European Journal of
Pharmaceutical Sciences 1996, Vol, 4, 3, 175-187;
31. Ki HM, Choi HK., The effect of Meloxicam/ethanolamine salt formation on percutaneous
absorption of Meloxicam, Arch Pharm Res. (2007) Feb;30(2):215-21;
32. Nagia A. El-Megrab, Hanan M. El-Nahas and Gehan F.Balata Saudi,Formulation and
evaluation of meloxicam gels for topical administration, Pharmaceutical Journal (2006), Vol. 14, Nos.
3-4;
33. Deepika Jain and Kamla Pathak, Design, Characterization, and Evaluation of Meloxicam
Gel Prepared by Suspension and Solution Polymerization Using Solubility Parameter as the Basis for
Development, AAPS PharmSciTech (2010), Vol. 11, No. 1;
51
34. http://www.anm.ro/anm/anm_list.asp;
35. Lenua - Maria Miclea, Lavinia Vlaia, V. Vlaia, C. Mircioiu, Formulation and quality
evaluation of some hydrogels containing piroxicam 1% or Meloxicam 0,5%, Journal of
Agroalimentary Processes and Technologies (2010), 16 (1), 7-12;
36. Magdalena Mititelu, L. Hincu, Prepararea i caracterizarea unor unguente cu rol protector,
Craiova Medical (2007) Vol 9, Nr2;
37. Shashikant D. Barhate, Mrugendra B. Potdar, Prashant Nerker, Development of meloxicam
sodium transdermal gel, International Journal of Pharma Research and Development, 2010, vol-2,
ISSUE-5, 11
38. R. Jantharaprapap, G. Stagni, Effects of penetration enhancers on in vitro permeability of
Meloxicam gels, International Journal of Pharmaceutics 343 (2007) 2633;
39. http:// www.rpsgb.org;
40. Yener, G.; Gnll, .; ner, M.; Deim, T.; Araman, A., Effect of vehicles and penetration
enhancers on the in vitro percutaneous absorption of celecoxib through human skin. Pharmazie,
(2003), 58, 330-333;
41. Babatunde Akinlade, Amal A. Elkordy, Ebtessam A. Essa, Sahar Elhagar, Liquisolid Systems
to Improve the Dissolution of Furosemide, Sci Pharm.(2010); 78: 325344
42. B. Mukherjee., S. Mahapatra., S. Das., G. Roy., S. Dey, HPLC detection of plasma
concentrations of diclofenac in human volunteers administered with povidone-ethylcellulose based
experimental transdermal matrix-type patches, .Methods and Findings Methods Find Exp Clin
Pharmacol, Prous Science, 2006, ISSN 0379-0355, 28(5): 301;
43. Magnette JL, Kienzler JL, Sallin D, Mnart C, Nollevaux F, Knops A., Diclofenac systemic
exposure is not increased when topical diclofenac is applied to ultraviolet-induced erythema, Eur J
Clin Pharmacol., (2004);60(8):591-4;
44. Ani-Simona Sevastre, Florica Popescu, Anca Berbecaru, O. Croitoru, Mihaela Baniceru,
Pharmacokinetic
Evaluation
after
Percutaneous
Administration
of
Some
Non-Steroidal
AntiinflamatoryDrug Preparations Using Animal Experiments, Therapeutics, Pharmacology and

Clinical Toxicology, Vol XIII, Number 2, (2009), 161-166;
45. Ani-Simona Sevastre, R. Cazacincu, D. Lupuleasa, Ionela Belu, Florica Popescu, Influence
Of Some Dissolution Enhancing Agents On The Pharmacokinetic Profile Of Meloxicam Delivered
From Hydrophilic Ointments, Current Health Sciences Journal Vol. 36, No. 3, (2010), 151-157.
52

Cercetări Asupra Variaţiilor Farmacocinetice Ale Unor Preparate Antiinflamatoare Folosite Topic

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Cercetări Asupra Variaţiilor Farmacocinetice Ale Unor Preparate Antiinflamatoare Folosite Topic

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE

CERCETRI ASUPRA VARIAIILOR

UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE - CRAIOVA

CERCETRI ASUPRA VARIAIILOR

III.4. Studiul II - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro a Meloxicamului prin membrane

2. Studiul II - Profilul farmacocinetic de cedare in vitro al Meloxicamului prin membrane

Cuvinte cheie: Meloxicam, topic, difuzie, poteniatori de penetrare.

II. PARTE TEORETIC - STADIUL CUNOATERII

II.2. ADMINISTRAREA TOPIC A MEDICAMENTELOR

II.2.2. PENETRAREA MEDICAMENTELOR ADMINISTRATE TOPIC

II.2.3. METODE DE TESTARE A DIFUZIEI

II.3. ANTIINFLAMATOARELE NESTEROIDIENE - DATE ACTUALE DIN

Antiinflamatoarele nesteroidiene sunt folosite n farmacoterapia durerii alturi de alte clase de

II.3.1. CLASIFICAREA ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE[10,11]

-Oxicami: piroxicam,tenoxicam, lornoxicam.

-Antiinflamatoare nesteroidiene inhibitoare selective sau specifice de COX2 (generaia a II-a)

II.3.2. EFECTE ADVERSE

II.3.3. METABOLIZAREA AINS - RETRAGEREA DE PE PIA A VIOXX I

II.3.4. APLICAREA TOPIC A ANTIINFLAMATOARELOR NESTEROIDIENE

II.4. MELOXICAMUL SUBSTAN MEDICAMENTOAS TEST

Putnd fi administrat pe majoritate cilor de administrare, Meloxicamul este indicat n

II.4.2. PROPRIETI FARMACOLOGICE ALE MELOXICAMULUI

II.4.3. PROPRIETI FIZICO-CHIMICE

II.4.4. MODALITI DE CRETERE A DIFUZIEI MELOXICAMULUL PRIN

II.4.4.1. PROMOTORI CHIMICI AI ABSORBIEI

triizopropanolamina), surfactani (glicerinmonocaprilat, polisorbat 80)[31].

II.4.4.2. PROMOTORI FIZICI AI ABSORBIEI

II.4.5. FORMULRI MELOXICAM

II.5. CONTROLUL UNGUENTELOR

Omogenitatea se controleaz prin ntinderea unguentului pe o plac i observarea cu lupa 4.5X. Se

III. CERCETRI PERSONALE

Procent studii legate de

Evolutia studiilor despre durere (2)

GRAFIC 1 - EVOLUIA ANUAL A STUDIILOR DESPRE DURERE

III.2. DESIGN EXPERIMENTAL

gsirea unor ageni de cretere a solubilitii Meloxicamului, substan test cu un grad de

includerea soluiilor de Meloxicam preparate n etapa 1 n forme farmaceutice

semisolide hidrofile i hidrofobe, cu pstrarea gradului de dispersie molecular;

controlul formelor farmaceutice obinute din punct de vedere organoleptic, al aspectului,

obinerea standardelor de Meloxicam i a curbei de calibrare utilizat n determinrile

calitative i cantitative cu ajutorul spectrofotometrului UV-Vis;

efectuarea studiilor de farmacocinetic care au constat n determinarea profilului

farmacocinetic de cedare i difuzie al Meloxicamului in vitro prin

prin membran artificial;

prin piele animal

efectuarea de studii comparative ale profilului farmacocinetic de de cedare i difuzie al

efectuarea studiilor in vivo, pe experimente pe animal.

III.3. STUDIUL I CONTRIBUII PERSONALE LA OBINEREA I

APLICARE TOPIC PE BAZ DE MELOXICAM. METODE DE OPTIMIZARE A

S-a cercetat ncorporarea Meloxicamului cu ajutorul diverilor ageni de cretere a solubilitii n

III.3.2. MATERIAL I METOD

componentelor. Omogenitatea se controleaz prin ntinderea unguentului pe o plac i observarea cu

Unguentele preparate au fost transvazate n seringi transparente cu o capacitate de 20ml, au fost

TABEL 1 - pH-UL FORMULELOR PREPARATE

Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3% Fr 0.3%

GRAFIC 2 VARIAIA VSCOZITII

SUPRAFATA DE INTINDERE (mm2)

GREUTATE APLICATA (g)

GRAFIC 3 VARIAIA SUPRAFEEI DE NTINDERE

III.4. STUDIUL II - PROFILUL FARMACOCINETIC DE CEDARE IN

PROMOTORILOR DE ABSORBIE I A pH-ULUI

III.4.2. MATERIAL I METOD

Soluia receptoare pentru testele de difuziune efectuate pe celula de difuzie cu o capacitate de

FIGURA 4-. SPECTRUL MELOXICAMULUI (Picul se observ la 362nm)