Diagnosticul de

laborator in infectii
urinare si genitale

Prof. Dr. Olga Mihaela Dorobat

Tractul urinar
Organ steril exceptie uretra
Rezista invaziei bacteriene
Secretor
mucoasa produce mediatori solubili-proteina TammHorsfall
adera la pilii bacteriilor/impiedica
aderarea
IgA
Lactoferina restrictioneaza cantitatea de Fe
Lipocalin
necesara bacteriilor
Peptide constitutive/ inductibile- actiune bactericida
defensive - produse de epiteliul renal
defensine produse de leucocitein cursul inf. urinare
cathlicidine peptide antimicrobiene

 Raspuns imun celular

mediatori ai inflamatiei IL-6 si IL-8
cu actiune chemotactica pentru neutrofile

Receptori prezenti la suprafata celulelor

TLR4 controleaza producerea
de chemokine si citokine
TLR2 stimuleaza producerea de TNF
TLR5 recunoaste flagelina bacteriana
TLR11 previne infectiile tract urinar
Urina lichide, dieta, medicatie
Mediu bun de cultura
Bacteriile aerobe cresc bine
anaerobe nu cresc
vagin cresc

Bacteriile

Supravietuire
Crestere in urina
Aderare la mucoasa
Reziste la scurgerea urinii

Tract urinar superior

Steril- rata scurgerii 0.35ml/min
Bacteriile adera uroepiteliu, pietre

Tract urinar inferior Mediu static de cultura

Mucusul inhiba aderarea
Descuamarea
IgA. IgG inhiba aderarea

Recoltare

Jet mijlociu - Recipient steril 5cm

Instruire toaleta locala
Moment dimineata /3- 4h de la ultima mictiune
Inaintea administrarii de antibiotice
Nr.probe 1/zi
1-2 la barbat
2-3 la femeie
F.subclinice
Punga sterila- nn, sugar
Punctie suprapubiana nn, sugari, femei,
suspiciune bacterrii anaerobe
Cateter reduce riscul contaminarii probei
bolnavi neooperanti.
Cateter permanent - Nu din punga, cu seringa din
sonda

PRELUCRARE

IMEDIATA

max 2h

PASTRARE 4 C
Consevare acid boric 24 h la TC
Urocultura
Metoda ansei calibrate
Calibrare anse
0,01ml 5mm Din 0,1 ml
10 anse
0

0,001 ml
2,5 mm 100 anse
- 0,1 din dil. 1/10
CLED

gel sange

Dilutii

Examen microscopic I
Urina necentrifugata - camera de numarat
Nr.leucocite /l
sau mm3
Nr.hematii /l
Piurie
10 leucocite/ mm3
10x106 leucocite/l *
Centrifugare se pierd 20 - 80% celule
Frotiu colorat Gram 0,001 ml 2,5 mm
1 bacterie/camp
>105 UFC/ml
1 leucocit/camp Piurie
*European Urinalysis Guidelines

Examen microscopic II
Celule epteliale scuamoase marker
tehnica recoltare necoprespunzatoare
Exceptie gravide- crescuta exfolierea
celulelor epiteliale

Celule epiteliale mici rotunde

Celule urotheliale
Celule epiteliu tubular renal

greu de deosebit
indica leziune renala

Citire - interpretare
Limita bacteriurie semnificativa se bazeaza:
Simptome clinice
Specie bacteriana
Numarul de specii izolate
Metoda de recoltare
Sex
Infectii tract urinar necomplicate
majoritatea o specie
Flora normal din uretra/org.genitale - contaminanti

Interpretarea cantitativa a cresterii

Volum inocul
(ansa )

1l ( 2,5
mm)
10l ( 5
mm)

Nr.colonii pe
placa

Nr. colonii in
urina (CFU/ml)

103

10

104

100

105

102

10

103

100

104

Citire - interpretare
> o specie- interpretarea conditionata:
Daca o specie este dominanta
Cum a fost recoltata - jet mijlociu / cateter cronic
Prezenta de leucocite / celule epiteliale
Simptome clinice
Istoric

Infectie adevarata cu 2-3 specii poate aparea

A se repeta -

purttori sond

Trei sau > specii - de obicei

se raporteaza cultura mixta

Citire - interpretare
Interpretare Kass 1957 - 95% femei cu pieleonefrita
105 UFC/ml
Pozitiv
specificitate > sensibilitate <
Femei - Infectii acute simptomatice -o singura
specie
>102 104 UFC/ml + piurie + rspuns terapeutic
103 UFC/ml specificitate > sensibilitate >
<105 UFC/ml fara simptome obisnuit
contaminare
Barbai
104 UFC/ml > sensibilitatea fr sa <
specificitateaInfectii acute necomplicate
Infecii complicate
105 UFC/ml

Citire - interpretare
Pielonefrita 80%
105 UFC/ml
10-15% 104 - 105UFC/ml
Bacteriurie asimptomatica
2 probe 105 UFC/ml
Levuri < 103 UFC/ ml
C.albicans* 104 UFC/ml
Stafilococi* 5.104UFC/ml
Identificare / antibiograma clasic/ automat
Rezultat 48h / 24h
Neconcordanta frotiu/cultura incubare -48h
*Buiuc D, Negut M- Tratat de microbiologie
clinica ed II

Cauze posibile pentru o

concentratie scazuta de
bacterii*

Stadiul initial al infectiei

Diureza mare
Simptome urgente (timp scurt de
incubatie in vezica)
Prezenta antibioticelor in urina
pH-ul scazut al urinii
Crestere bacteriana inceata
Proba contaminata

*European Urinalysis Guidelines

Bacteriu
rie

Simpto
me

Piurie

Colonizare

Infectie
asimptomatica

Infectie
simptomatica

Inflamatie fara
infectie

Simptome fara
infectie

METODE ALTERNATIVE I
Sistemul Dipslide
2 medii CLED /Mac Conkey.
Sensibilitate 92-95,5%, specificitate 97,2100%
Corespunzator pentru ID Gram negativi E.coli
Probleme legate de ID
Enterococi, stafilococi S.saprophyticus
Unele sp.Pseudomonas nu cresc

Probleme legate de cantitate

Inoculul nu este reproductibil
Numaratoarea nu este sigura
La concentratii mari crestere conflenta necesita
subcultivare

METODE ALTERNATIVE II
Medii cromogene rezultat la 24 hidentificare

Enterococc
us

E.coli

P.mirabilis

METODE ALTERNATIVE III

Multistix 8 parametri
Leucocite activ. esterazic -decelare >10
leucocite/ml
Nitrai maj. patogeni reduc nitraii nitrii
106UFC/ml Neg. - streptococi, enterococi
Impreun sensibilitate 79%
Specificitate Leucocite 87%, Nitrati 100%
Proteine Sange Glucoza Corpi cetonici pH
Densitate
2 min citire pe urina proaspat emis

METODE ALTERNATIVE IV
Reactia catalazei 2ml urin + 4 pic. H2O2
10% 2 min. Bule gaz + reactie pozitiv
Bioluminiscena adenosin trifosfatul
sensibilitatea 93%, specificitatea 78%
Test screening
Fals neg. Stafilococi, Enterobacter
aerogenes, Pseudomonas
Metode automate
Flowcitometrie

Erori in efectuarea
uroculturii I

Recoltarea din primul jet de urina

Recoltare la < 4h de la utima mictiune
Recoltarea in recipiente nesterile
Trimiterea unei probe din toata cantitatea de
urina
Pastrarea > 2 h la TC pana la prelucrare
Utilizarea de medii lichide
Utilizarea urinii centrifugate pentru
insamantare
Folosirea de anse cu calibru neverificat
Culturi de rutina pentru bacterii anaerobe

Erori in efectuarea
uroculturii II
Utilizarea de sisteme miniaturizate cu suprafete
mici de medii gelozate care nu permit obtinerea
unui numar suficient de colonii
Efectuarea sistematica a antibiogramelor din
direct din urina
Neincubarea placilor necrescute la 24h timp de
48h in conditiile in care s-au observat bacterii /
leucocite la ex.microscopic direct
Necorelarea nr/ml si a felului bacteriilor cu
starea clinica a bolnavului

PIELONEFRITA

Debut - brusc Febr 39-400C oscilant

Frisoane
Durere lombar
Simptome mictionale - arsuri
disurie
polakiurie

pot lipsi

Femei Persoane in vrst

Brbati - uzual initial
prostatita
Obstructii litiaza,
apoi inf. urinar
Gg, tumori compresiuni
Aderente, stricturi ureter,
Reflux vezico-uretral
Ex. Urina leucocite piurie nu intotdeauna
Lipsa indiciu localizare bazinet
Fara atingere parenhim renal
Ex.gravide
- bacterii E.coli, Proteus, Klebsiella
Complemantar Hemocultura pozitiva
Nr.leucocite >, VSH >, Uree, Creatinina

Infecii urinare joase

CISTITE

Urgena, frecvena
Femei n perioada de
activ. sexual
Polakiurie
10-20 % cel puin odat / via
Disurie
5 % inf recidivante < 21 zile
Dureri suprapubiene
aceeai bacterie
cistalgia
reinfecie
> 21 zile
Febra absenta
bacterii diferite

Diagnostic diferential
inf digestive

inf ginecologice

Infecii urinare joase

CISTITE
Patogenie
Contaminare din apropiere intestin, genital
Incapacitatea de a goli complet vezica

Ex. urinii indispensabil

leucocite
bacterii
UFC /ml

10 / mm3
105 UFC /ml........... 103

E.coli
S.saprophyticus
Streptococ B Enterococcus

Supraveghere La 2 zile de la oprire tratament

2 - 4 sptmni pt. depistare recidive

Infecia urinar la
gravide
Factori favorizani
compresie ci urinare
dilatare uretere
imunodepresie
oarecare
Frecvent 5-10 %
Nu este banal/ benign
Multe asimptomatice
Polakiuria
confund
Durerea suprapubian
sarcina
Risc
copil n. prematur, hipotrofie
fetala
inf. neonatale(meningita, sepsis)
mama - pieleonefrit

Infecia urinar la gravide

Inf. urinar
bine tolerat 6-7 luni - neglijata
brusc tablou grav- 8-9 lun
nastere fat mort
mama soc septic
Necesara depistare sistematic
Febra

- Ex. urin
- Hemocultur

Infecia urinara la copil

0,2% .........5,8% spitalizai
0-2 luni (nn) urmare tulburarilor digestive,
fr febr primele 10 zile
> baiei malformaii, megaureter,
sindrom de jonctiune, diverticul vezical
2 luni - 6 ani frecventa > predominant fete
febra 50%, tulburari digestive 25%
enuresis, falsa albuminurie

Infecia urinar la purtatori

de sond permanent
Infecia
8% - I zi Schimbare 2
luni 17% - II zi
eroziuni
75% - III zi bacteriemie 100% - IV zi
febra - soc
Pentru retenie acut de urin sonda
nu > 48 h
Ex. urin febra
- cu o sptmn inaintea schimbrii

Infecia urinar la persoanele

10 20 %in varst
Factori favorizani
Femei cistocel,diabet, tulburari neurologice
reziduu
Barbati - adenom prostat, scleroza col vezical
vezical
Intervenii chirurgicale Adenocarcinom
Polipi vezicali
Ureterotomie Extirpare calculi

Vezica neurologic
Malformaii congenitale spina bifida
Tumori
Accidente seciune medular
Reziduu vezical asociat
Reflux vezicouretral
Favorizeaz infecia urinar
Pseudomonas
Proteus Insuficien renal
Pielonefrit
E.coli

Izolare patogeni specifici

Mycobacterium tuberculosis
Recoltare -3 zile - 50ml
Centrifugare 15min. 13000g*- Tratare -idem
sputa
Frotiu Ziehl-Neelsen - Cultivare -Lowenstein

Salmonella typhi
Jet mijlociu 20ml - centrifugare 3000g 30 min
Insamantare selenit - trecere Mac Conkey, SS..

Leptospira
Jet mijlociu 20ml - centrifugare 3000g 30 min
Insamantare Korthof cu 200-400 g/ml
fluorouracil/ml 300C 30 zile
*Buiuc D, Negut M - Tratat de microbiologie clinica ed II

Secretia uretrala
Recoltare prelucrare
La 2h dup miciune
Scurgere spontana -tampon
Fara - se inser tampon fin alginat/ dacron 2-4
cm
se rotete, se las cteva sec., se retrage
Pentru Trichomonas inainte de prima mictiune
se imerseaza in 1ml sol salina izotona 370C
examinare rapida
Pentru ex.microscopic
efectuarea frotiurilor si fixare imediat dupa
recoltare

Secretia uretrala
Recoltare prelucrare
N.gonorrhoeae
insamantare imediata pe placa mediu la 37 0C
mediu transport Stuart /Amies

Chlamydia trachomatis
mediu conservant SPG sau 2SP -2ml
Congelare -700C

Micoplasme
Bulion tripticaz soia 2ml 40C zile, -700C ani

Urina matinala primii 10ml, 100ml WC, 10ml

Diferentiere uretrita/cistita

Secretia uretrala
Examinare microscopica
Frotiu Gram
Normal flora mixta, levuri extracelular
Coci Gram negativi intracelular N.gonorrhoeae

Frotiu Giemsa
Incluzii Chlamydia trachomatis

Preparat proaspat I proba

Trichomonas

Cultivare

Geloza chocolat, mediu Thayer Martin N.gonorrhoeae

Incubare atm 5% CO2
ID Testare sensibilitate

Secretia uretrala
Probe urina
Examen macroscopic
Filamente mucus in prima proba
sugereaza
Examen microscopic
Centrifugare 300g 5 min
Sediment lama/lamela X400
Leucocite 15/camp in prima proba
indica

Diagnostic
Chlamydia trachomatis
Cultivare
ELISA
imnunofluorescenta
Tehnici moleculare

Mycoplasma/ Ureaplasma
Seturi comerciale izolare/ identificare
(cantitativa)
Serologie

Mycoplasma genitalium
Evidentierea ADN-ului -urina

 Studiu 2007 SUA tineri

Mycoplasma genitalium depaseste
prevalenta gonoreei devine a 3-a
cauza BTS
4,2% Chlamydia
2.3% Trichomonas
1,0 % M. genitalium
0.4 % N. gonorrhoeae
Boskey E, About.com Guide Updated May
24, 2009

Prostatite
Probe - dimineata
1.Primii 5-10 ml urina
2.Urina din jetul mijlociu
3.Secretie prostata dupa masaj
4.Primul jet dupa masaj prostata
Examen citobacteriologic
Cuantificarea bacteriilor geloza sange + Mac
Conkey
Prostatita bacteriana nr.bacterii 10X in proba
3 si 4
10 leucocite/camp -marire x400

Prostatite
Tuseu rectal orienteaz
Prostata

Prostatita acuta

Edematiata , dureroasa

Agenti
etiologiciDura, nedureroasa
Prostatita

cronica%
E.coli 10-20
Alte enterobacterii
Proteus,
Epididimita
Normala, durere
Enterococcus
Klebsiella
discreta
S.aureus
discutabil
U. urealyticum
S. saprophyticus
C. trachomatis

 Clinic

EPIDIDIMITE

tumefiere dureroasa-unulaterala- scrot

Scurgere uretrala
Iritatie tract urinar

Diagnostic examinare
Prelevat de electie cultura din ureter
Prima urina si jet mijlociu
Aspirat din epididim sau testicol dupa
dezinfectia pielii cu dezinfectant chirurgical

Agenti etiologici
C.trachomatis
N.gonorrhoeae
Enterobacteriaceae , Pseudomonas > 35 ani
M.tuberculosis

ORHITE
Adeseori virale - V.urlian,Coxsakie B,
Prelevate intraoperatoriu
Examinare
Microscopica
Cultivare bacterii aerobe

Agenti etiologici
E coli K.pneumoniae P.aeruginosa
Stafilococi Streptococi

Tract genital feminin

Superior steril bacteriologic
Inferior contaminat cu flora piele / tract
digestiv
Variaii Vagin/ cervix Vrsta
Ciclul
Graviditate
Imunodepresie
Flora influenat de estrogeni
Nou-nascut 6 spt- estrogeni de la mam
lactobacili
Pan la pubertate-flor de pe piele - Stafilococi cg.
neg, difteromorfi, bacterii / fecale - E.coli
Dupa pubertate predomina lactobacilii
Menopauza- lacobacili <, nr.mare enterobacterii

Femeia adulta
In absenta infectiei 106-109 bacterii/gram secretie
vaginala
Frecventa izolarii speciilor
Portaj obisnuit
Portaj frecvent
%
%
Portaj
Lactobacili (Flora Doderlein) >80
Baciliexceptional
anaerobi
20
(Bacteroides, prevotella,
Mobiluncus)
Streptococi negrupabili

>60 Stafilococi coagulazonegativi

20

Enterococi

>30 S.aureus

10

Candida albicans

30

Mycoplasma hominis

<5

Enterobacterii (E coli,
Proteus, etc)

30

Pneumococi

Ureaplasma

30

Haemophilus spp.

Gardnerella vaginalis

20

Streptococ grup A

Streptococi anaerobi

20

Meningococ

<1

Vaginite- vaginoze
Recoltare secretie
3 tampoane fund de sac vaginal posterior
Prelucrare
Tampon 1- in 0,5 ml solutie salina isotona 37 0C

Examinare lama/lamela x100 x400

Trichomonas, levuri inmugurite, pseudofilamente
Raportul PNM/ celule epiteliale
Reactie inflamatorie
Intensa - Trichomonas
Discreta Candidoza
Absenta- vaginoza

Tampon 2 Frotiu Gram

Interpretarea frotiu Gram pentru

vaginoza bacteriana
Numar bacterii/camp microscopic imersie
Nugent
modificat
4+ = >30
3+ = 6 -12
Interpretare
SCOR
2+ = 1 5
0 3 Flora normala
1+ = <1
4 7 Flora
modificata
Morfotip
Scor dupa morfotip
0
=
0
7 -9 Vaginoza
Apreciere cantitativa
0
1+
2+
3+
4+
bacteriana
Bacili Gram pozitivi
medii si mari

Bacili miciGram negativi

sau variabili

Bacili incurbati Gram

negativi sau variabili

Vaginite- vaginoze
Tampon 3
Cultivare pentru Candida- Sabouraud cu
cloramfenicol sau mediu cromogen
La solicitare cultura pentru
N.gonorrhoeae
S.aureus- in sindromul socului toxic
evidentierea toxinei ELISA, reverse pasive latex
agglutination
Streptococcus pyogenes
Streptococcus agalactiae
Listeria monocytogenes
Shigella spp.- fetite

Enterobacteriile nu se comunica- fac parte din

flora normala a vaginului

Caractere diagnostice pentru

vaginite si vaginoza
Boala sau
conditie

pH

Observatii la
ex. preparat
umed
Bacili lungi

Miros de
amina

Alte teste

Normal

44,5

Absent

Atrofie

>6

Candidoza

44,5

Pseudohife
sau levuri
inmugurite

Absent

Cultura
pentru
levuri

Vaginoza
bacteriana

>4,
5

Clue cells

Prezent

Coloratie
Gram

Absent

Thricomoniaza 5-6
Prezent in
TestulParaziti
Whiff= testul aminelor
flagelati
mod
volatile
obisnuit

10% KOH

Cultura
Trichomon
as

Vulva
Recoltare-durere, eritem, edem
Curatirea cu sol. 0.85% NaCl
Exsudat/ eritem cu tampon pentru culturi levuri
Vezicule
Rupte colectare lichid cu tampon
Aspirat cu seriga cu ac 26-27gauge

Cruste se indeparteaza
Tampon umezit sol. 0.85% NaCl

Examinare
Microscopica Trichomonas
Gram- reactie inflamatorie, bacterii
Cultivare pentru S.aureus, S.pyogenes ..

Streptococ grup B
Evidentiere la gravide s 35-37 gestatie
Recoltare - tampon vaginal
Metoda de electie
Bulion LIM (Todd Hewitt)
colistin 10g/ml, ac nalidixic 25 g/ml

Bulion Trans Vag

Trecere pe geloza sange
Latex aglutinare

Insamantare directa mediu Granada

20-60% dintre pozitivi
Necesita atm. anaeroba

Streptococ grup B
Dificultati
Inhibitia cresterii in prezenta Enterococcus
LIM
2% nu produc hemoliza
3-4% nu produc pigment
Clasic rezultatul 48 ore
Metode moleculare
AccuProbe
Cepheid Real time PCR

Glanda Bartholin
Recoltare

Decontaminare povidone/iodine- alt preparat

Aspirare din canal
Frotiu in momentul recoltarii
Transport rapid in mediu Amies /Stuart

Examinare
Microscopica- frotiu Gram
Cultivare pentru
N.gonorrhoeae
Enterobacterii (E.coli, Proteus)
S.aureus
Streptococi
Haemophilus
Anaerobi
Pasteurella bettyae

Teste pentru Chlamydia trachomatis, Ureaplasma

l

Cervicite
Recoltare scurgere mucopurulenta
Se indeparteaza secretia exocol comprese
sterile
Se introduc tampoanele(3) in endocol 1-2 cm

Tampon 1- frotiu Gram

Tampon 2 -cultivare N.gonorrhoeae
Tampon 3 C.trachomatis -Frotiu Giemsa
Alte teste
Imunofluorescenta
ELISA
Cultivare
Metode moleculare

Endometrite
Recoltare transvaginala prin aspirare
Transport in conditii de anaerobioza
Examinare
Microscopica- Frotiu Gram
Cultivare bacterii aerobe si anaerobe

Agenti etiologici
Actinomycetes Bacteroides spp C. trachomatis
Enterococcus spp.
E.coli
G.vaginalis
H.influenzae
Klebsiella
L.monocytogenes
Prevotella
S.agalactiae
S.pyogenes
Isenberg HD- Clinical Microbiology Procedures
Handbook

Salpingite

Recoltare
Aspirat si probe biopsice prin laparascopie
Examinare
Microscopica- Frotiu Gram
Cultivare bacterii aerobe / anaerobe
Agenti etiologici
Actinomycetes
Bacteroides spp
C. trachomatis
Enterococcus spp. E.coli
H.influenzae
N.gonorrhoeae
Pasteurella
Prevotella
S.aureus S.epidermidis
S.agalactiae
Streptococi

Situatii particulare
Daca

Proba a fost obtinuta invaziv

Cultura abundenta predominenta

Se identifica
Haemophilus spp
Bacilii Gram negativi
enterici (exceptie enterobacteriile din vagin - Nu se
raporteaza)
Pseudomonas spp. /alti Gram negativi nefermentativi
Pasteurella bettyae la nn.
Capnocytophaga spp.
Campylobacter fetus

S. aureus
G.vaginalis

S. pneumoniae

N. meningitidis