Metabolismul intermediar

CATABOLISM
Totalitatea reaciilor de degradare din organism
sunt frecvent reacii de oxido-reducere
au loc cu eliberare de energie
au loc cu creterea entropiei

energia eliberat este conservat n structuri cu legturi macroergice

(de exemplu - ATP, GTP)

n procesele de catabolism substanele macromoleculare cu mare

specificitate structural, cu nalt nivel de organizare, provenite din mediul
nconjurtor sunt transformate conform principiului termodinamicii n

compui cu molecul mic, cu specificitate redus, cu nivel sczut de

organizare.

ANABOLISM
Totalitatea proceselor de biosintez
decurg cu o scdere a entropiei sistemului (procese antientropice)

decurg cu consum de energie

sunt procese endergonice
Catabolismul i anabolismul se desfoar concomitent n celule
i sunt nsoite de schimburi de energie.

ATP

PRINCIPAL - rezervor
- furnizor
- transportor
- intermediar de energie
Procese amfibolice
3

Substrat redus

Substrat oxidat

Catabolism

ATP

ADP + Pi
Anabolism

Produs de biosintez
(stare redus)

Precursor
(stare oxidat)

Procesele catabolice sunt cuplate cu procesele anabolice prin mecanisme

caracteristice, care implic frecvent participarea ATP-ului.
ATP-ul joac un rol de principal rezervor, furnizor i transportor intermediar de
energie n organismele vii.
4

MECANISME GENERALE DE TRANSFORMARE A CONSTITUENILOR

ORGANICI FUNDAMENTALI AI ORGANISMELOR VII
Proteine

Polizaharide

Lipide

Aminoacizi

Hexoze
Pentoze

Acizi grasi
Glicerol

Stadiul I

Stadiul II
Acetil~SCoA

Ciclul
citratului

Stadiul III

2H
Stadiul IV

O2

2H

2H

2H

Oxidarea biologic

H 2O

ATP

CO2

LANUL RESPIRATOR MITOCONDRIAL Definiie

TOTALITATEA SISTEMELOR
OXIDOREDUCTORE ENZIMATICE
PRIN INTERMEDIUL CRORA
HIDROGENUL SUBSTRATULUI ESTE
OXIDAT DE OXIGENUL ATMOSFERIC
CU FORMARE DE AP I CU
ELIBERAREA A 57 kcal/mol
CORESPUNZTOARE DIFERENEI DE 1,2V
DE LA POTENIALUL
HIDROGENULUI SUBSTRATULUI
(- 0,42 V) LA CEL AL O2 (+ 0,81 V).
6

Sistemele redox ce fac parte din lanul transportor de electroni

mitocondrial
Sistemul redox

+ 2H+ + 2e- H2O

Citocrom a3 (Fe3+) + e- Citocrom a3 (Fe2+)
Citocrom a (Fe3+) + e- Citocrom a (Fe2+)
Citocrom c (Fe3+) + e- Citocrom c (Fe2+)
Citocrom c1 (Fe3+) + e- Citocrom c1 (Fe2+)
Citocrom b (Fe3+) + e- Citocrom b (Fe2+)
Ubichinon + 2H+ + 2e- Ubichinol
FAD + 2H+ 2e- FADH2
NAD+ + H+ + 2e- NADH2
2H+ + 2e- H2
1/

2O2

Potenialul
redox
standard
E'o (voli)
+ 0,816
+ 0,350
+ 0,290
+ 0,250
+ 0,210
+ 0,120
+ 0,01
- 0,219*
- 0,320
- 0,420

E'o este potenialul redox standard msurat la pH 7 i 25oC, iar n este numrul de
electroni transferai n reacia general:
Oxidant + ne- Reductor
* valoarea este pentru molecula de FAD libera; FAD legat de flavoproteinele
specifice (de ex. succinat dehidrogenaza) are un E'o diferit (- 0,05V), ce depinde de
componenta proteic. (dup Lehninger, 2008)

COMPONENTELE LANULUI RESPIRATOR

Sisteme oxidoreductoare specializate:
1. Substratul donor de hidrogen;
2. Oxidoreductazele piridinice: coenzima piridinic - nicotinamida
adenin dinucleotidul (NAD+);
3. Flavin enzimele ce au drept grupri prostetice flavin
mononucleotidul (FMN) sau flavin adenin dinucleotidul (FAD);
4. Fier-sulf (Fe-S) proteinele;
5. Coenzima Q (CoQ) sau ubichinona;
6. Citocromii;
7. Citocromoxidaza - reacioneaz direct cu oxigenul molecular.

 Lanul respirator funcioneaz ca o succesiune de reacii redox n care

fluxul de echivaleni reductori este dirijat de la perechea cu
potenialul standard cel mai negativ donorul de hidrogen - spre
perechea cu potenialul standard cel mai pozitiv - oxigenul molecular.

Componentele sistemului enzimatic transportor de hidrogen au rolul de

a activa hidrogenul sub form de proton (H+).
Componentele transportoare de electroni citocromii, au rolul de
a activa oxigenul molecular sub form de anion (O2-).
Aceste forme moleculare activate vor reaciona i vor forma apa (H2O).

Schema lanului respirator mitocondrial

i a locurilor de fosforilare oxidativ
G = - 9,9 kcal
0,13 V

G = - 11,9 kcal
0,2 V
- 0,42 V

Substrat - H2

Substrat - Ox

- 0,12 V*
- 0,06 V**

- 0,32 V

Fp-H2

NAD+

Fp
(FMN*
FAD**)

CoQH2

2 cit-b Fe3+

2 cit-c Fe3+

1/

2 cit a/a3 Fe2+

2 cit-c Fe2+

O2

2e-

2e-

ATP
7,3 kcal

2H+

+ 0,81 V

+ 0,29 V

2e-

2e-

ATP
7,3 kcal

Transport de hidrogen

+ 0,25 V

2 cit-b Fe2+

CoQ

(FMNH2
FADH2)

NADH+H+

+ 0,12 V

+ 0,01 V

G = - 23,9 kcal
0,52 V

O2-

2 cit a/a3 Fe3+

ATP
7,3 kcal

O2-

H2O

10

Structura lanului respirator mitocondrial organizat

funcional n complexele enzimatice Green
(Complexele I IV)
Substrat - H2

NADH + H+

Complexul I
NADH2 - ubichinon
oxidoreductaza
Proteine FMN
Proteine Fe-S
(8 atomi Fe
neheminic)

Complexul III
Ubichinon: cit c oxidoreductaza

Ubichinona
(CoQ)
Acid
succinic

Proteine FAD
Proteine Fe-S
(3 atomi Fe
neheminic)
Complexul II
Succinat - ubichinon
oxidoreductaza

2 Cit b
1 Cit c1
2 atomi Fe
neheminic
Proteine Fe-S

Cit c

Complexul IV
Citocrom a-a3:
oxidoreductaza
Cit a-a3
Proteine cu cupru

1/

2H+

H 2O

O2

O2-

11

Energetica lanului respirator

Variaia energiei libere standard (Go, cal/mol) ntr-un sistem redox:

[Oxidant]
G = - RT ln
[Reductor]
La transferul unui echivalent de electroni (n=1), i la o diferen de potenial
de 1 volt (E'o = 1 volt) se dezvolt o energie liber de 23,3 kcal/mol.

Go = - n F E'o

Go = - 1 x 23,3 = - 23,3 kcal/mol

La transferul a doi electroni, eliberarea de energie pentru o variaie de
potenial de 1 Volt :

Go = - 2 x 23,3 = - 46,6 kcal/mol

12

Energetica lanului respirator

E'o = - 0,42 V
Substrat - H2

2 H+
H2O + 57 kcal/mol

2e1/

O2
(atmosferic)
2

E'o = + 0,81 V

O2-

E'o = Eo(oxidant) - Eo(reductor)

E'o = + 0,81 - (- 0,42) = 0,81 + 0,42 = 1,23 V
E'o = 1,23 V
Go = - n F E'o

unde n = 2 electroni
F = echivalentul caloric al lui Faraday
(23,3 kcal/mol)
Go = - 2 x 23,3 x 1,23
Go = - 57,318 kcal/mol

E'o este pozitiv => transferul de electroni din cadrul lanului transportor
de electroni are loc spontan, deci Go este negativ

13

Conservarea energiei biologice

Fosforilarea oxidativ
Fosforilare oxidativ: procesele prin care oxidarea (transportul de
electroni) este intim cuplat cu formarea de compui fosforilai bogai
n energie.
ATP se poate forma numai n etapele n care variaiile de potenial
(E'o) sunt ndeajuns de mari ( > 0,12V) pentru a permite eliberarea
unei cantiti de energie superioar celei necesare formrii unei
legturi macroergice (~ 7kcal).

Treptele de fosforilare = locurile specifice, precise de conservare a

energiei - locuri de fosforilare
Raportul dintre cantitatea de fosfat legat sub form de ATP i
cantitatea de oxigen consumat n timpul desfurrii lanului
respirator = ct de fosforilare

14

Conservarea energiei biologice

Fosforilarea oxidativ

raportul P/O = ct de fosforilare

Raportul P/O = 3 n cazul oxidrilor care au loc
prin intermediul enzimelor piridinice
(NADH+H+)
Raportul P/O = 2 n cazul oxidrilor care au loc direct
prin intermediul flavin enzimelor
(FADH2)
1 NADH2 . . . . . . . 3 ATP
1 FADH2 . . . . . . . . 2 ATP

15

Randamentul energetic al lanului respirator

Din transferul a 2 atomi de hidrogen de la NADH la oxigen rezult
o variaie a energiei libere de 57 kcal/mol din care sunt stocai n
legtura fosfat macroergic din ATP doar 21 kcal. Din energia de
formare a apei este nmagazinat ca energie biologic util energia
corespunztoare formrii a 3 molecule de ATP (21 kcal).
Randamentul procesului () va fi:
Total 57 kcal ..21 kcal (ATP)
100 kcal ......X

X 37% ()
Energia liber care nu este captat n legturile fosfat macroergice este
eliberat sub form de cldur sau este transformat n alte forme de
energie necesare pentru funcionarea celulei: energie mecanic, osmotic
16
sau energie luminoas (bioluminiscen).

LANUL RESPIRATOR MITOCONDRIAL

- CONCLUZII 1. Lanul respirator componenta major a respiraiei celulare este un
proces universal i fundamental deoarece este generator de energie. El
se desfoar la toate vieuitoarele aerobe, n toate celulele care
conin mitocondrii (o excepie o reprezint eritrocitele), i n toate
etapele vieii celulare. n esen, are loc oxidarea hidrogenului.
2. Componentele lanului respirator sunt situate n membrana intern
mitocondrial, n ordinea cresctoare a potenialelor perechilor lor
redox.
3. Succesiunea acestor componente este foarte bine determinat, ele fiind
asamblate n complexe Green.
4. Oxidarea biologic este cuplat cu fosforilarea, respectiv cu formarea
de compui macroergici fosforilai ATP, sub aciunea complexului
enzimatic al ATP sintetazei.
5. Moleculele de ATP se formeaz n anumite trepte, acolo unde diferena
de potenial este > 0,12 voli i permite eliberarea unei energii > 7 kcal,
necesar formrii unei molecule de ATP.
17

ALTE SISTEME TRANSPORTOARE DE

HIDROGEN I ELECTRONI.
OXIDOREDUCERILE MICROZOMALE

18

ALTE SISTEME TRANSPORTOARE DE HIDROGEN I

ELECTRONI. OXIDOREDUCERILE MICROZOMALE

Localizat n reticulul endoplasmatic neted (fraciunea microzomal)

Sistem transportor de electroni care nu este fosforilant (nu este productor de
ATP)
Implicat n procesele de hidroxilare i de dehidrogenare

Sistemul cuprinde:
donorul de echivaleni reductori - NADPH2

flavoprotein

fier-sulf-protein

citocrom microzomal specific, denumit citocromul P450, care are rol de oxidaz
mixt, cataliznd concomitent procese de hidroxilare i de formare a apei.

Hidroxilazele utilizeaz NADPH, n calitate de cosubstrat i oxigenul molecular,

cataliznd urmtoarea reacie general:

R-H + NADPH + H+ + O2

R-OH + NADP+ + H2O

19

Citocrom P450
reductaza
NADPH+H+

transferul primului electron

se face prin intermediul
flavoproteinei (NADPH
citocrom P450 reductaza)

citP450-Fe3+

primul
electron
2Fe2+-Sulf
proteine

FAD

2eNADP+

Produs (R-OH)
hidroxilat

1e-

R-OH
citP450-Fe3+

citP450-Fe3+
(Oxidat)

2Fe3+-Sulf
proteine

FADH2

2H+

R-H + NADPH + H+ + O2

oxidoreducere
intern

citP450-Fe2+

Substrat (R-H)

Substrat (R-H)
Compus aromatic
Compus steroidic
Acizi biliari
Metabolit toxic endogen
Medicament

R-H O

Citocromul
P450

citP450-Fe2+

1e-

R-H

R-H

al doilea
electron

O2

O2

2-

H2O

R-OH + NADP+ + H2O

Mecanismul secvenial al oxidoreducerilor microzomale

20

R-H + NADPH + H+ + O2

R-OH + NADP+ + H2O

R-H - substratul care urmeaz a fi hidroxilat: compui aromatici,

compui steroidici, acizi biliari, medicamente, metabolii toxici
endogeni;
Un atom din molecula de O2 este ncorporat n substratul R-H iar
cellalt este redus cu formarea apei.
Flavoproteina microzomal i citocromul P450 prezint fenomenul de
inducie enzimatic: biosinteza i deci concentraia lor n ficat crete
semnificativ sub aciunea barbituricelor i a altor medicamente.
Aceti ageni stimuleaz proliferarea reticulului endoplasmatic din
celulele hepatice = > adaptare cu rol protector a celulei.
21

CICLUL CITRATULUI
CICLUL KREBS

CICLUL ACIZILOR TRICARBOXILICI

22

Proteine

Polizaharide

Lipide

Aminoacizi

Hexoze
Pentoze

Acizi grasi
Glicerol

Stadiul I

Stadiul II
Acetil~SCoA

Ciclul
citratului

Stadiul III

2H
Stadiul IV

O2

2H

2H

2H

Oxidarea biologic

H 2O

ATP

CO2

23

CICLUL CITRATULUI (CICLUL KREBS)

Reacia global care are loc n cursul ciclului Krebs este:
CH3-COOH + 2 H2O 2 CO2 + 8H
Formarea CO2 din acetil-CoA are loc prin intermediul unei serii de

8 reacii enzimatice care constituie un ciclu.

Ciclul citratului n ansamblul lui, reprezint un sistem catalitic care
asigur degradarea unui numr nelimitat de molecule de acid acetic

activate sub form de acetil-CoA.

Premisele experimentale n descoperirea ciclului Krebs
Localizarea intracelular a enzimelor ciclului citratului

24

O
H3C

Reaciile ciclului Krebs

C ~ SCoA

Acetil~SCoA
NADH+H+

CH2 COOH

NAD+
8
CH

HO

+ H2 O

COOH

HSCoA

Acid oxalilacetic
HO

COOH

CH2

H2C

COOH

COOH

Acid citric

COOH

CH2 COOH
- H2O

Acid L-malic
7
+ H2 O
HC
CH

Acid cis-aconitic

COOH

Acid fumaric

COOH

COOH

COOH

FADH2

H2C

COOH

+ H2 O

+ H2O

FAD
H2C

COOH

Acid succinic

Acid izo-citric

CH2 COOH
HO

Succinil~SCoA
5
GTP

COOH

COOH

CH

COOH

NAD+
CH2

CH2
C

HC

COOH

CH2
HSCoA

COOH

Acid -cetoglutaric

+ H2 O

GDP+Pi

H2C

CH2

~ SCoA

C=O

NADH+H+

COOH

CO2

NADH+H+

NAD+
HSCoA

CO2

25

Acetil~SCoA
O

C ~ SCoA
CH3

citrat
sintaza

COOH

HO

COOH

+ H2O

HO

CH2

CH2

COOH

2 CH
2

CH2

+
O

C ~ SCoA

HSCoA

COOH

COOH

- H2O
aconitaza
2

CH2
COOH

COOH

Citril~SCoA

Acid oxalilacetic

COOH

COOH

HC

COOH

CH
COOH
Acid cis-aconitic

HO

NADH+H+
NAD+

CH2

+ H2O
aconitaza

CH2

Acid citric

COOH

CH
COOH

Acid izo-citric

COOH
CH2

izocitrat-DH

CH2

C=O
CO2

COOH
Acid a-cetoglutaric
26

NADH+H+
COOH

GTP
COOH

HSCoA
NAD+

CH2

CH2

a-cetoglutarat-DH

CH2

TPP
Acid lipoic
FAD
NAD+
CoASH

4
C=O
COOH

+ H2 O

HSCoA
Acid succinic

Succinil~SCoA

GTP + ADP

FADH2 COOH

CH

succinat-DH
6

CH2

COOH

~ SCoA

CO2

Acid -cetoglutaric

FAD

CH2

succinil tiokinaza

CH2
O

COOH

GDP+Pi

NADH+H+

COOH

+ H2O
fumaraza

HC
COOH
Acid fumaric

ATP + GDP

COOH

NAD+
HO

CH
CH2
COOH

Acid L-malic

malat-DH
8

C
CH2
COOH

Acid oxalilacetic
27

Bilanul chimic al ciclului Krebs

Principalele reacii ale ciclului Krebs:
a)

1 reacie de condensare (C2 + C4).

b) 4 dehidrogenri dintre care trei catalizate de NAD+ (izocitrat,

-cetoglutarat i malat) i una de FAD (succinat).
c)

2 decarboxilri (izocitrat i -cetoglutarat).

d)

2 hidratri efective (hidratarea fumaratului i formarea acidului

succinic din succinil-CoA).

e)

1 reacie de hidratare reversibil (reacia aconitazic).

Bilanul chimic al ciclului citratului poate fi redat prin ecuaia global:

CH3-CO~SCoA + 3H2O + 3NAD+ + FAD + GDP + Pi
2CO2 + HS-CoA + 3NADH+H+ + FADH2 + GTP
28

Bilanul chimic al ciclului Krebs

Simplificat, se poate scrie:
CH3-COOH + 2 H2O 2 CO2 + 8H
Prin oxidarea unei molecule de acetil-CoA se formeaz 2 molecule de CO2
i 4 perechi de echivaleni reductori (3 NADH+H+ + FADH2)

6 3 NADH2 x 3ATP = 9ATP

8H

11ATP+ 1GTP ATP

2 1 FADH2 x 2ATP = 2ATP

12ATP

29

BILANUL CHIMIC I ENERGETIC AL CICLULUI KREBS

CUPLAT CU LANUL RESPIRATOR
CH3-COOH + 2 H2O

+ 2O2 2 CO2 +

4 H2O + energie

stocat n compui macroergici

12 ATP (11ATP + 1GTPATP)

Oxidarea acetatului prin ciclul citratului cuplat cu lanul respirator

conduce la formarea a 228 kcal, corespunztoare celor patru

molecule de ap formate (4 x 57 kcal)
Pe seama energiei eliberate n acest proces, se formeaz

12 molecule de ATP, crora le corespund 84 kcal (7 x 12).

Din totalul de 228 kcal eliberate, 84 kcal au fost stocate sub form
de ATP, ceea ce corespunde unui randament () de cca 37%.

30

BILANUL CHIMIC I ENERGETIC AL CICLULUI KREBS

CUPLAT CU LANUL RESPIRATOR
12 ATP 12 x 7 84 kcal

Proces endergonic

4 H2O .4 x 57 - 228 kcal

Proces exergonic

228 kcal 84 kcal stocai n energie biologic util (ATP)

100 kcal X
X = 37% ()

Restul de energie, nestocat n ATP este consumat sub diferite forme:

cldur, energie mecanic, osmotic, etc.
Apa rezultat n urma oxidrii hidrogenului intr n fondul metabolic de

ap al celulei.
31

Glucide

Cuplarea ciclului Krebs

cu lanul respirator

Mobilizarea
acetil~SCoA

Piruvat

Aminoacizi
2H

Acizi grasi
CO2

Acetil~SCoA

Oxalilacetat

Citrat

Malat
cis-Aconitat
Ciclul acizilor
tricarboxilici

CO2
Izocitrat

Fumarat
CO2

a-Cetoglutarat

Succinat

2H

2H

2H

2H

NAD+
ATP

ADP + Pi
Flavoprotein
Transportul de
electroni
si fosforilarea
oxidativ

Citocrom b
ADP + Pi

ATP
Citocrom c

Citocrom a/a3
ADP + Pi

ATP

32
2H+ + 1/2O2

H 2O

Concluzii

Semnificaia metabolic a ciclul Krebs

1.) Ciclul Krebs are caracter de universalitate.

Este prezent la toate vieuitoarele, de la cele mai simple la cele

complexe, inclusiv la plante.
Este prezent n toate celulele organismului, cu excepia hematiilor.

Prin cuplarea cu lanul respirator, este o cale final de degradare,

comun i obligatorie, de transformare a componentelor din
principiile alimentare (glucide, lipide, proteine).
2.) Localizarea intracelular a reaciilor ciclului Krebs este cea
intramitocondrial, n apropierea componentelor lanului respirator.
33

3.) Ciclul Krebs este n esen un proces de oxidare, i anume a CH3CO~SCoA/CH3-COOH prin cuplare cu lanul respirator. Ciclul Krebs se
desfoar exclusiv n condiii de aerobioz, pentru a permite oxidarea
echivalenilor reductori din NADH2 i FADH2.
4.) Ciclul Krebs este un proces formator de CO2.

5.) CO2 se formeaz prin decarboxilarea oxidativ a cetoacizilor, nu prin

combinarea direct a carbonului i a oxigenului molecular, ceea ce subliniaz
importana proceslor de decarboxilare n lumea vie.
6.) Ciclul Krebs este un proces ciclic. n acest proces are loc rennoirea
acidului oxalilacetic.

34

7.) Ciclul Krebs este un proces amfibolic. Este n primul rnd catabolic,
deoarece CH3-CO~SCoA se degradeaz la CO2 dar are i caracter
anabolic, deoarece are lor formarea unor intermediari foarte

importani n biosinteza altor compui: hem, purine, pirimidine, acizi

grai, steroli.

8.) Ciclul Krebs, prin cuplarea cu lanul respirator, este un proces

puternic eliberator de energie; oxidarea unei singure molecule de
CH3-COOH presupune stocarea energiei n 12 molecule de ATP.

Cuplarea ciclului Krebs cu lanul respirator la nivel mitocondrial

reprezint principala surs de energie biologic la organismele
chimiosintetice.

O a doua surs major de energie biologic o constituie fotosinteza.

35