Oxidarea biologic

Lanul respirator
Fosforilarea oxidativ
Oxidarea biologic. Dehidrogenarea
substratelor. Enzimele
dehidrogenrii.
Oxidarea biologic (OB) (respiraia tisular) reprezint totalitatea reaciilor de
oxido-reducere ce decurg n celule i esuturi.
Rolul: asigur organismul cu energie accesibil n form de ATP.
OB are loc prin reacii de dehidrogenare donarea atomilor de H2 sub
form de protoni i electroni. Sub aciunea enzimelor dehidrogenaze, ale
cror cofactori sunt NAD+ i FAD (inelul izoaloxezinic).
Enzimele NAD+-dependente:
piruvat DH;
izocitrat DH;
cg DH;
malat DH;
oxiacil CoA.
Enzimele FAD+-dependente:
succinat DH
NADH+H+ i FADH2 rezultai n reaciile de oxidare a acestor substrate
transfer p i n lanul respirator.

Lanul respirator (LR). Rolul.
Structura.
LR reprezint un ansamblu (complex) de enzime i
sisteme de oxido-reducere, ce particip la transferul H+ i
de la coenzimele reduse (NADH, FADH2) la O2. Este
ultima etap a degradrii aerobe.
Este localizat n membrana intern a mitocondriilor.
Funcia LR:
Prin transferul H2 pe O2 cu formarea H2O; coenzimele
se reoxideaz, putnd asigura dehidrogenri n continuare.
Cnd coenzimele se reoxideaz, se elibereaz energie ce
servete la sinteza ATP.
Potenialul de O/R
Transferul p i de NADH sau FADH2 pn la O2 se face
prin intermediul mai multor sisteme redox. Fiecare sistem
redox (O/R) este alctuit dintr-un donor i acceptor de
echivaleni reductori. Fiecare sistem redox posed un
potenial de O/R (potenial reductor), care se msoar n
voli.
Potenialul redox reprezint capacitatea sistemului de a
ceda sau a adiiona electronii (donorul i acceptorul cuplat
de electroni acoineaz n C% 1mol, pH=7, toC=25o,
formeaz un echilibru). Cu ct potenialul redox este mai
electronegativ cu att este mai nalt capacitatea de a ceda
, i invers, cu ct potenialul este mai electropozitiv, cu att
este mai nalt capacitatea sistemului de a adiiona
electroni.
n calitate de semielement standard se ia electrod de H2= -0,4V.
E0 (C% - 1mol, t 250C, pH 7,0)

NADH/NAD+ NAD+H+ --- 0,32V (NADH(FMNH2 FMN+) - -
0,30V)
FADH2/FAD+ -0,05
CoQ H2/CoQ +0,04
cit b Fe2+ Fe3+ +0,07
cit c1 +0,23
c +0,25
a +0,29
a3 +0,55
2H+
1/2O2 H2O +0,82
Torentul de e orientat n direcia micorrii energiei libere a
sistemului Cu ct e mai mare diferena potenialului dintre 2 redox
perechi cu att mai mare e diminuarea energiei libere la transferul .
tiind potenialul redox al fiecrei perechi se pot calcula modificarea
energiei libere standard.
G = -nFE
n-numrul de
F-constanta lui Faraday (23062 cal/Vmol)
E-diferena a potenialului redox
G = -223062(+0,82-(-0,32) = 52,6 kcal
7,3 x 3 = 21,9 cal
Randamentul utilizrii energiei libere 42%
Fosforilarea oxidativ
reprezint sinteza ATP din ADP i P, cuplat cu
LR, pe baza energiei eliberate la transferul n LR
de la coenzimele reduse la O2.
Deoarece transferul de are loc treptat, energia
se elibereaz n pachete i sunt G0 peste 7,3
kcal/mol, suficient pentru sinteza 1mol de ATP.
Locusurile unde are loc sinteza ATP se numesc
puncte de fosforilare.
n LR (lanul respirator) deosebim 3 puncte de
fosforilare:

ADP+P

ADP+P
ATP
ATP
Ded.S. NADH+H+ FPN CoQ
cit b
ADP+P
ATP
cit c1 cit c a-a3 O2
Toate componentele LR sunt dispuse n membrana intern a
mitocondriilor n ordinea descreterii potenialului redox negativ i
creterii celui pozitiv. CoQ i cit c funcioneaz individual, iar celelalte
componente se grupeaz n complexe. IV i al V-lea numit ATP-
sintetaz.
Complexul I NADH CoQ reductaz
Cderea de potenail 0,42V G0 = -
19,4 kcal/mol
(suficient pentru sinteza a 2 mol de
ATP, dar se sintetizeaz 1mol, restul sr
degaj sub form de cldur)
Complexul II succinat - CoQ-reductaza

formula II
Variaia de potenial este de 0,07V; G0
= -3,2 kcal/mol.
Complexul III CoQ-citocrom c reductaza

formula III
Variaia de potenial este de 0,18V; G0
= -7,75 kcal - 1mol de ATP.
Inhibat antimicina A

Complexul IV citocromoxidaz
Catalizeaz adiia a 4 la O2 molecular (a 2 la
O).
cit c (Fe2+) cit a Cu2+ cit a3 1/2O2
H2O
O2 + 4 + 4H+ 2H2O
Cderea de potenial de 0,54V.
G = -24,8 kcal 1mol de ATP
Inhibat: CO, ozide, cianide.
Complexul V ATP-sintetaz
F0F1 ATP-aza, alctuit din F0 strbate n
totalitate membrana intern, const din 4 tipuri de
protein ce formeaz un sistem de pori
transmembranari prin care trec protoni canal
protonic.
F1 e alctuit din cinci tipuri de proteine
(3) 3 . Se afl n intregime n matrixul
mitocondrial (form de sfer). La acest nivel are
loc reacia de condensare a ADP cu Pi factor de
cuplare 1.




Funcionarea celor 4 complexe, a CoQ i
cit c a LR, cuplate cu funcionarea ATP-
sintetazei.
Bilanul general al conservrii energiei libere n legturile macroergice
ale ATP n procesele LR-FO.
NADH + H+ + O2 + 3ADP + 3Pi NAD+ + 3ATP + 4H2O
FADH + H+ + O2 + 2ADP + 2Pi FAD++ 2ATP + 3H2O
Raportul ntre numrul de moli de ATP produi i O2 consumat este
numit ct de fosforilare P/O. P/O = 3/1 ramura lung, P/O = 2/1
ramura medie.
P/O reflect cuplarea transportului H+ i (respiraia) i fosforilarea
(sinteza ATP). Coeficient indic ce cantitate de P anorganic (H3PO4)
se transform n P organic (ATP) la transportul unei perechi de H+ i
n LR.
Valoarea lui depinde de calea de oxidare: P/O (NADH + H+) = 3
mol de ATP.
Controlul respirator

Organii vii sintetizeaz ATP n raport cu necesit.org. de
aceea FO cuplat cu LR este riguros controlat. Deoarece
LR i FO etapa final a degradrii G, L, P controlul
respirator se poate efectua att prin compui direct
implicai n LR i FO, ct i prin intermediorii degradrii
celor 3 clase.
Rolul primordial i revine ADP.
F1 din ATP sintetaz rmne blocat n lips de ADP.
Intensitatea transferului de protoni prin F0 al ATP
sintetazei deasemenea e determinat de nivelul ADP.
ADP reglator alosteric (+) pentru mai multe enzime ce
sunt implicate n degradarea G P.
Ipoteze principale cu privire la
procesele de FO. Ipoteza lui Mitchell
Prin ce mecanism energia eliberat n LR este
cuplat cu formarea ATP?
Teoria chimic, numit i a intermediatorilor
comuni (produi intermediatori macroergici,
precursori de ATP).
Teoria conformaional (energia este preluat de o
protein ntr-o conformaie activ, ce stimuleaz
ATP).
Teoria chemiosmotic (Mitchell, 1961).
Ipoteza lui Mitchell
Ce postuleaz c starea intermediar energetic care
determin sinteza ATP din ADP+Pi e reprezentat de
gradientul de protoni, ce se stabilete ntre faa interioar i
cea exterioar a membranei interne a mitocondriilor n
timpul transferului de electroni.
la transferul unei perechi de (energia eliberat)
pompeaz 3 perechi de H2+ din interiorul mitocondriilor
spre exterior. Astfel partea extern pozitiv, intern
negativ.
Apare potenialul transmembranar. Protonii revin din
spaiu intermembranar n mitocondrii prin partea F0
(deoarece restul membranei este impermiabil).
Acest flux de protoni este cel care determin la nivelul
subunitii F1 sinteza de ATP din ADP+P.
Datele experimentale ce
confirm:
S-a confirmat generarea gradientului de protoni n cele 3
puncte ale LR. Anume gradientul de protoni se
utilizeaz la sinteza ATP.
S-a demonstrat ca pH matrixului mitocondrial crete, iar
cel al med. extern al membranei mitocondr. scade
(acid).
S-a argumentat teza c transferul H+ din mitocondria n
timpul transportului de i revenirii lor prin ATP-
sintetaza sunt comporabile cu V lor din cadrul proceselor
de FO n mitocondriile intacte.
H2O rezultat n reacia de formare a ATP din ADP+P
se ionizeaz spontan; spa. intermembranar:
ADP + Pi ATP + Hint+ + OHexter
Decuplarea produselor de oxidare i
fosforilare, principalii ageni decuplani.
La FO contribue:
Integritatea membranei interne a mitocondriilor orice
leziune duce la perderea capacitii de FO (n timp ce
transferul de poate continua.
Impermeabilitatea mitocondriei interne pentru ionii H+
OH- K+ Cl-.
FO poate fi decuplat cu ajutorul unor substane
chimice, ce inhib sinteza ATP dar neafectnd decuplani.
La aciunea lor respiraia crete, iar FO este inhibat.
protonofori
AD
ionofori
Protonofori permeab.membranei pentru
protoni, lichidnd potenialul transmembranar.
a.g. liberi
2,4 dinitrofenol
salicilaii (antiinflamatoare)
dicumarol (anticoagulant)
T3 i T4 (h.gl.tiroide)
______________________________
Ionoforii ei leag i transfer ionii prin
membran.
Ex.: - valinomicina ( K+) (dar nu complet a
respir. i FO), nigericina ( K+), gramicidina A
Na+, K+; H+.
Inhibitorii ai fosforilrii acioneaz asupra ATP-
sintetazei. Oligomicina blocheaz ptrunderea H+
prin FO (nchide canalul) cu ncetul slbete
respiraia ntrerupere.
Respiraia liber are loc decuplarea FO de LR i
toat energia este convertit n cldur, care nu se
utilizeaz la executarea funciilor celulare. Astfel
mitocondriile devin o sob, ce produc cldur. E
necesar n situaii, cnd necesitatea cldurii este
mai mare dect ATP. Pentru mitocondrii
musculare producerea cldurii nu e funcia de
baz. n grsimea brun mitocondriile sunt
specializate la producerea cldurii (nou-nscui,
animale n hibernare).

Oxidarea microsomal

Un alt tip de reacii de oxidare biologic este cel oxigenazic. Acestea
sunt catalizate de monooxigenaze.
Lanurile monooxigenazice de oxidare sunt lanuri scurte de
transport al H+ i a cror surs sunt substratele oxidate de
hidrogenazele NADP-dependente.
(substr. care se hidroxileaz) SH + O2 +NADPH + H+ S-OH +
H2O + NADP+ reducerea O2 i incorporarea lui n anumii
compui chimici (include un atom de O2, cellalt este redus la H2O).
n sistemul de hidroxilare un asemenea lan este microsomial
localizat n reticulul endoplasmatic al celulele hepatice i suprarenale.
Rol esenial are cit P450 (activatorul O2). El cuprinde o FP (FAD) la
nivelul creia H2 este disproporionat n H+ i .
Rolul: plastic i dezintoxicare.
n ficat hidroxilarea medicamentelor,
neutralizarea toxinelor, hormonilor (sunt
eliminai).
n medulosupr. sinteza noradrenalinei i
adrenalinei.
n corticosupr. sinteza colesterolului
h.gluco- i minaralocorticoizi.
Noiune de radicali liberi. Oxidarea
peroxidic a a.g. nesaturat. Sistema de
protecie.
La reducerea incomplet a O2 se formeaz
forme reoctogene i agresive ale substanei
cum ar fi: superoxidanionul, peroxid;
hidroxil sau peroxidul de hidrogen.

O2 O2- HO2
superoxid HO - hidroxil
anion
Aceti produi iniiaz OP, ce se petrece n lan cu
generarea de peroxizi a a.g. nesaturai.
n condiii fiziologice ORL i OPL sunt implicate n
renoirea membranelor biologice, degradarea substrailor
fagocitare; biosinteza isocanoizilor.
Amplificarea lor poate condiiona moartea celulei
(lezarea membranelor).
SAO sistem de protecie AO (enzimatic,
neenzimatic)
SOD transformarea O2- n H2O2
2 O2- +2H+ O2- + H2O2
Catalaza 2H2O2 2H2O + O2