Biochimie-ENZIMELE 2011

ENZIME
Organismele vii, mono- i pluricelulare sunt caracterizate prin unele activiti ca: micare, producere de energie, lumin etc., activiti care au la baz reacii chimice. Organismele vii sunt supuse primului principiu al termodinamicii, adic legii conservrii masei i energiei. Energia pentru sinteza moleculelor complexe din elemente sau molecule mai mici este furnizat prin degradarea moleculelor complexe n intermediari i compui mai simpli. n consecin este necesar cuplarea celor dou aspecte ale metabolismului (anabolism i catabolism) printr-un transfer de energie. O reacie chimic de forma
A+B C+D

poate avea loc cnd o parte din moleculele A i B se gsesc ntr-o stare de energie ridicat, stare activat (stare de tranziie) n care exist o mai mare probabilitate ca legturilor din compuii A i B s se rup i s se formeze produii C i D. starea de tranziie este o barier nalt de energie care delimiteaz reactanii de produii de reacie. Viteza unei astfel de reacie este proporional cu moleculele aflate n stare de tranziie (activat). Exist dou posibiliti de accelerare a reaciei chimice: - creterea temperaturii ce favorizeaz agitaia molecular, creterea numrului de molecule activate i accelerarea vitezei de reacie care n cele mai multe reacii este aproximativ dubl pentru o cretere a temperaturii cu 10oC; - utilizarea catalizatorilor. Catalizatorul se combin temporar cu reactanii determinnd scderea energiei de activare. Cu ct energia de activare va fi mai mic cu att catalizatorul va fi mai eficace. De exemplu, descompunerea apei oxigenate: 2 H2O2 2 H2O + O2 Necatalitic, are loc cu un consum de energie, G = 18 Kcal/mol; n prezena catalizatorului de Pt coloidal, G = 13 Kcal/mol; iar n prezena enzimei, catalaza, numai 2 kcal/mol. O reacie chimic este endergonic (endoterm) dac variaia energiei libere este pozitive, deci necesit un aport de energie i exergonic (exoterm) cnd variaia energiei libere va fi negativ, deci va rezulta energie. n timpul unei reacii, catalizatorul sufer o serie de modificri, dar odat reacia terminat, acesta revine la starea iniial. Enzimele sunt catalizatori proteici pentru reaciile chimice care se petrec n sistemele biologice. n absena enzimelor, majoritatea reaciilor din celula vie s-ar petrece cu viteze foarte mici. Spre deosebire de catalizatorii neproteici (ioni metalici, H+, OH-) fiecare enzim catalizeaz un numr mic de reacii, de cele mai multe ori, una singur. Exist un numr foarte mare de enzime; pentru fiecare compus organic, ct i pentru muli compui anorganici, exist mcar o enzim capabil s reacioneze cu acesta i s catalizeze o anumit modificare chimic.

Biochimie-ENZIMELE 2011

2.1 Nomenclatura i clasificarea enzimelor

Numele tiinific al unei enzime se formeaz astfel: Donor: Acceptor reacia catalizat. De exemplu: enzima responsabil de oxidarea alcoolului etilic se numete Alcool: NAD+-oxireductaz. Pe lng denumirea tiinific, se utilizeaz acea denumire uzual, care este n acord cu numele tiinific. Denumirea uzual este format din dou pri: prima parte indic substratul sau substratelor asupra crora acioneaz enzima, iar partea a doua indic reacia catalizat. De exemplu, alcool: NAD+-oxireductaza se numete curent alcool-dehidrogenaza (ADH). innd seama de reacia catalizat, enzimele se clasific n ase clase: 1. Oxidoreductaze catalizeaz reaciile de oxido-reducere; n funcie de acceptorul de electroni se pot distinge: oxidaze transfer electronii de la un substrat direct la oxigen; dehidrogenaze transfer electronii de la un substrat la alt substrat (altul dect oxigenul); oxigenaze ncorporeaz direct oxigenul n substrat; peroxidaze transfer electronii de la substrat la H2O2 ca acceptor. 2. Transferaze catalizeaz transferul de grupri de pe un substrat (donor) pe alt substrat (acceptor). C1-transferaze transfer uniti de un atom de carbon ntre substrate (exemplu: metil-transferaze); amino-transferaze transfer gruparea amino de pe un aminoacid pe un cetoacid (transaminazele); kinaze transfer un radical fosfat din ATP pe un substrat; fosforilaze transfer radicalul fosfat din fosfat anorganic (Pa) pe un substrat. 3. Hidrolaze catalizeaz scindarea legturilor chimice cu ajutorul apei: fosfataze ndeprteaz radicalul PO3H2- de pe un substrat; fosfodiesteraze cliveaz legturile fosfatdiesterice, cum ar fi cele din acizii nucleici; proteaze scindeaz legturile peptidice din proteine. 4. Liaze catalizeaz scindarea nehidrolitic a unei grupri de pe un substrat cu formarea unei duble legturi sau fixeaz o grupare la o dubl legtur: decarboxilaze ndeprteaz CO2 de pe substrat; aldolaze formeaz aldehide n reacii de eliminare; sintaze leag dou molecule fr implicarea ATP-ului. 5. Izomeraze catalizeaz reaciile de interconversiune a izomerilor optici, geometrici i de caten: racemaze i epimeraze catalizeaz interconversiunea stereoizomerilor L i D; mutaze transfer grupri ntre atomii aceleiai molecule; cis-trans-izomeraze interconversiunea izomerilor geometrici; izomeraze care catalizeaz reacia reversibile (in ambele sensuri) de transformare a aldoz in cetoz (cetoza in aldoza). 6. Ligaze sau sintetaze unirea a doi compui utiliznd energia eliberat prin hidroliza unei molecule de ATP.

Biochimie-ENZIMELE 2011

2.2. Structura enzimelor

Specificitatea mare a unei enzime este strns legat de structura ei fizic i chimic specific. Din punct de vedere chimic, o enzim este format dintr-o parte proteic apoenzima i o parte neproteic coenzima sau cofactor. Partea proteic este termolabil i este responsabil de specificitatea enzimei, de aciune, dar mai ales de substrat, iar coenzima este termostabil i dializabil. Apoenzima. Enzimele simple i apoproteinele enzimelor complexe sunt formate din catene lungi polipeptidice, avnd aceleai nivele de organizare structural ca i alte proteine: primar, secundar, teriar i cuaternar. Dei toate enzimele au structuri primare, secundare i teriare, structura cuaternar nu este obligatorie. Coenzime. Coenzima este partea neproteic, care particip efectiv la reacia catalitic (se modific temporar n timpul reaciei). Frecvent, coenzimele conin n structura lor vitamine din grupul B. 2.3. Izoenzime forme moleculare multiple ale aceleai enzime. Ele catalizeaz aceeai reacie enzimatic, dar difer ntre ele n privina proprietilor fizice, chimice i imunologice. Interesul medical pentru izoenzime a fost stimulat prin descoperirea n 1957, n serul uman, a mai multor izoenzime LDH, a cror proporii relative se modific semnificativ n anumite stri patologice. Cele 5 izoenzime LDH difer ntre ele n ceea ce privete structura cuaternar. Molecula activ de LDH este un tetramer (130.000) format din dou tipuri de subuniti H i M luate cte patru (fiecare subunitate are 34.000). Subunitatea H (heart) este caracteristic muchiului inimii i n general esuturilor cu metabolism aerob, iar subunitatea M (muscle) este caracteristic muchiului scheletic i n general organelor i esuturilor cu metabolism anaerob. Excepie fac ficatul i eritrocitul. Structura celor 5 izoenzime LDH este: LDH1 - H4 LDH2 - H3M1 LDH3 - H2M2 LDH4 - HM3 LDH5 - M4 Sinteza celor dou tipuri este coordonat de dou gene diferite. Ulterior au fost evideniate izoenzime i pentru alte enzime creatin-kinaza CK1(BB); CK2(MB) i CK3 (MM), hexo-kinaza, fosfataza alcalin etc.

Biochimie-ENZIMELE 2011

2.4. Specificitatea enzimelor

Dup specificitate de aciune enzimele pot fi grupate n: enzime cu specificitate absolut, enzime cu specificitate relativ i enzime cu specificitate optic sau stereochimic. Specificitatea absolut. Unele enzime acioneaz numai asupra unui singur substrat, cataliznd o singur reacie, de exemplu ureaza:

H2N C NH2 + H2O O

ureaza

2 NH3 + CO2

Aceast enzim este total inactiv fa de compui foarte asemntori structural tioureea H2N-CSNH2. De asemenea, arginaza enzima care catalizeaz hidroliza L-argininei la uree i ornitin nu poate cataliza hidroliza esterul metilic al argininei sau scindarea agmatinei, amina rezultat prin decarboxilarea argininei. Specificitatea relativ. Multe enzime sunt specifice numai pentru anumite tipuri de legturi chimice indiferent de structura moleculelor respective. Din acest grup fac parte esterazele care fac posibil scindarea mono-, di- trigliceridelor i chiar ali esteri cu structur chimic mult mai complicat. De exemplu, acetilcolinesteraza, specific pentru acetilcolin, poate scinda i ali esteri ai colinei cu acizii propionic, butiric etc. Butiril-colina pare a fi substratul de elecie, fiind hidrolizat mai rapid dect ali esteri ai colinei. Enzimele proteolitice care hidrolizeaz legturile peptidice din proteine i din ali compui neproteici, fac parte tot din acest grup. Specificitatea optic. Enzimele catalizeaz transformarea numai a unui stereoizomer; specificitatea optic este de obicei absolut, cellalt antipod optic rmnnd neschimbat. Excepie fac racemazele care catalizeaz interconversiunea antipozilor optici. Enzimele care recunosc substrate cu izomeri geometrici au o specificitate geometric. Fumaraza, de exemplu, permite hidratarea acidului fumaric (izomer trans) i nu a acidului maleic (izomer cis) cu formarea acidului malic ca produs final:

H HOOC C C COOH H Fumaraza H2O HOOC CH CH2 COOH OH

Biochimie-ENZIMELE 2011

2.5. Centrul catalitic al enzimei

Structura binar a enzimelor este indispensabil aciunii catalitice. Luate separat, att coenzima ct i apoenzima nu au activitate catalitic. Centrul catalitic a fost conceput mult vreme ca un tipar rigid, preformat, substratul potrivindu-se n enzim ca i cheia n broasc (lock and key) sau template (modelul Fischer). Dei n acest model centrul activ este rigid, el se mai folosete nc pentru explicarea unor proprieti enzimatice, cum ar fi legarea ntr-o anumit ordine a substratelor sau curba de saturare cu substrat. Un model mai perfecionat este cel imaginat de Koshland, numit induced fit (fixare indus), modelul cu cel mai puternic suport experimental. Principala caracteristic a acestui model este flexibilitatea centrului activ. n absena substratului gruprile catalitice i de legare a substratului sunt deprtate unele de altele, separate de mai multe resturi de aminoacizi. Apropierea substratului induce o modificare conformaional a enzimei nct gruprile care particip la legarea substratului sau la reacia catalitic se apropie spaial. Situsul (centrul) activ dintr-o enzim poate fi pus n eviden prin tratarea cu anumite substane ce au capacitatea de a se combina specific cu aminoacizii centrului catalitic, inactivnd enzima.

2.6. Factori care influeneaz activitatea enzimatic

Influena concentraiei enzimei
Dac se utilizeaz concentraii crescnde de enzim cantitatea de substrat transformat n unitatea de timp crete proporional cu concentraia enzimei.

Influena concentraiei substratului asupra vitezei de reacie

Dac se menine constant concentraia de enzim i se mrete concentraia de substrat S, se constat o cretere rapid a vitezei de reacie pn la o

Biochimie-ENZIMELE 2011 valoare limit (vmax). Dac [S] continu s creasc, curba capt o inflexiune i pentru valori mari de S, viteza nu mai crete, curba tinde asimptotic ctre o valoare maxim (vmax). Crescnd n continuare concentraia substratului viteza reaciei rmne constant deoarece nu mai exist enzim liber. Transformarea substratului n produs (produi) de reacie are loc cu formarea, pentru scurt timp, a unui complex enzim-substrat. Ipoteza formrii complexului ES a fost emis prima dat de Michaelis. Existena acestui complex a fost demonstrat practic prin analiza spectrelor de absorbie n ultraviolet, vizibil, rezonan magnetic nuclear, fluorescen sau prin dializ. K1 K3 E + S ES E ^ P (1) K2 Cantitatea de produs P format depinde direct de concentraia complexului ES, care depinde de viteza de descompunere a compusului ES n E + S. Aplicnd legea aciunii maselor pentru reaciile de echilibru se obine relaia: Cnd toat enzima a fost fixat sub form de [E] [S] K2 = complex ES, se atinge viteza maxim a reaciei. (2) [ES] KM = [S] (3) care a primit numele de constanta Michaelis, definit drept concentraia substratului pentru care se atinge jumtate din viteza maxim. Cnd numai jumtate din enzim este trecut n form [ES] i [E] =[ES] se atinge jumtate din viteza maxim vmax.

Influena temperaturii asupra activitii enzimatice

Viteza de reacie crete cu creterea temperaturii, dar n anumite limite. Studiul vitezei iniiale a unei reacii enzimatice n funcie de temperatur determin apariia a dou faze distincte care corespuns la dou fenomene diferite: - n zona de temperaturi mai mici (0 i o 40 C) viteza reaciei crete cnd temperatura crete. Aceast cretere a vitezei cu temperatura se explic printr-o cretere a concentraiei complexului activat (intermediar) atunci cnd se furnizeaz mai mult energie sub form termic sistemului n reacie. - la o temperatur ce depete 45oC se asist la o denaturarea a proteinei. Temperatura optim pentru cele mai multe enzime este de 30oC 40oC.

Exist microorganisme termofile care triesc n ap la 70oC 80oC i a cror enzime sunt active la aceast temperatur. La 0oC unele enzime i nceteaz reversibil activitatea, aceast temperatur constituind temperatura de conservare pentru unele enzime.

Influena pH-ului
Variaiile de pH pot avea efecte att la nivelul enzimei, ct i la nivelul substratului. Astfel, se poate modifica gradul de ionizare a unor grupri funcionale de pe enzim a cror sarcin pozitiv sau negativ este necesar fie formrii complexului enzim-substrat, fie meninerii conformaiei tridimensionale native a protein-enzimei. De asemenea, la nivelul substratului poate fi modificat gradul de ionizare mpiedicnd sau favoriznd formarea complexului enzim-substrat. Valoarea pH-ului la care reacia enzimatic se desfoar cu vitez maxim se numete pH optim. pH-ul optim pentru cele mai multe enzime are valori cuprinse ntre 6 i 8. Excepie fac enzimele digestive, pepsina (pH=1,5-2), arginaza (pH= 9,5-10).

Influena efectorilor asupra activitii enzimelor

Efectorii sunt substane care mresc sau scad aciunea catalitic a enzimelor. Acetia pot fi activatori sau inhibitori. Activatorii sunt compui de natur organic sau anorganic care n concentraii mici mresc viteza unei reacii enzimatice atunci cnd se gsesc n mediul de reacie. O serie de ioni metalici, cum ar fi K, Cu, Fe, Mg, Mn, Co, Mo, au efecte pozitive asupra unor reacii enzimatice. Fe, Mo, Cu particip n reaciile de oxido-reducere, Mg este necesar n reaciile de transfer ale gruprii fosfat, iar Ca este necesar n reaciile enzimatice ce intervin n coagularea sngelui. Inhibitorii enzimatici sunt compui care diminueaz sau anihileaz activitatea enzimelor. Ei au compoziie chimic i mod de aciune diferit. Printre substanele capabile s se fixeze pe diferite grupri din proteine (hidroxil, sulfhidril, carboxil) i s modifice proprietile catalitice, fie prin modificarea conformaiei, fie prin blocarea centrului activ al enzimei, se gsesc ionii metalelor grele, sau compui cum sunt acidul monoiodacetic sau acidul paraclormercuri-benzoic care reacioneaz cu gruprile -SH din enzime. - Inhibitorii competitivi sunt compui care prezint o analogie structural cu substratul enzimei i pot intra n competiie cu acesta pentru a se fixa pe locul activ al enzimei. Enzima se poate combina fie cu substratul, fie cu inhibitorul formnd complexele ES i EI:

ES E

E + P X P

EI

Este clar c enzima angajat n complexul EI nu poate funciona ca un catalizator, numai complexul ES va permite formarea produilor de reacie. Inhibiia depinde de concentraia substratului, inhibitorului, de afinitatea enzimei pentru substrat i pentru inhibitor. La adugarea de cantiti mari de substrat inhibitorul este deplasat din centrul catalitic al enzimei, care va fi ocupat de substrat, iar viteza de reacie va reveni la valoare maxim ca i n absena inhibitorului. Inhibiia competitiv are numeroase aplicaii practice, n special n terapeutic. Exemplul clasic este cel al sulfamidelor, analogi structurali ai acidului para-aminobenzoic:

H2N

COOH

H2N

SO2 NH2 sulfonamid\

acid para aminobenzoic

Sulfamidele intr n competiie cu acidul p-aminobenzoic i inhib producerea de acid folic necesar creterii bacteriilor. Chimioterapia anticanceroas face apel la numeroi antimetabolii, n general analogi structurali ai bazelor purinice sau pirimidinice, permind inhibiia biosintezei acizilor nucleici i blocarea diviziunii celulare. - Inhibitorii necompetitivi se fixeaz fie pe enzim (dar ntr-un loc diferit de locul activ), fie pe complexul ES pentru a forma un complex ESI, fie pe amndou. Locul activ ale enzimei i pierd capacitatea de a reaciona cu substratul datorit unui fenomen de mpiedicare steric. Gradul de inhibiie depinde de concentraia inhibitorului i de afinitatea enzimei pentru inhibitor. Exemple de inhibitori necompetitivi sunt cianurile, care se combin cu unele metale necesare activitii enzimei (Fe2+, Fe3+) cu care formeaz complexe inactive asemntoare cu fero- sau fericianurile. Unele metale grele (Hg, Pb, Cu, Ag) sunt inhibitori deoarece se combin cu gruprile SH ale enzimei formnd mercaptide Enzim-SH + Ag+ Enzim-S-Ag + H+ Agenii chelatani de tipul acidului etilendiaminotetraacetic (EDTA) leag Mg2+ sau Ca2+. Efectori alosterici Activitatea catalitic a enzimelor poate fi alterat i de compui care se fixeaz pe enzim n locuri ndeprtate de centrul activ (loc alosteric). Aceti compui pot crete activitatea catalitic i se numesc efectori pozitivi, sau pot reduce activitatea catalitic i se numesc efectori negativi. Enzimele alosterice au o structur cuaternar, oligomer, formate dintr-un numr variabil de monomeri legai prin legturi necovalente. n afara situsului catalitic unde se fixeaz substratul, aceste enzime posed unul sau mai multe situsuri alosterice, care pot fi situate pe acelai lan polipeptidic unde se afl i centrul activ dar n zone diferite.

- Activatorii alosterici se fixeaz la locul alosteric determinnd o modificare a conformaiei enzimei, numit tranziie alosteric, care antreneaz o modificare a conformaiei la nivelul situsului catalitic. Acest situs determin o conformaie mai propice pentru fixarea substratului, crescnd afinitatea enzimei pentru substrat. Legarea unui inhibitor alosteric produce o modificare conformaional care mpiedic legarea substratului la locul activ (locul activ este deformat) i enzima este inhibat.

2.7. Reglarea metabolismului

Reaciile catalizate de enzime au loc cu viteze anumite, determinate de concentraia enzimei, a substratului, pH-ului, temperaturii etc. Aceste reacii nu sunt independente unele de altele, ele sunt grupate i se succed formnd ci metabolice care funcioneaz simultan i n mod coordonat calitativ i cantitativ. Principalele mecanisme prin care se moduleaz activitatea enzimelor dintr-o cale metabolic sunt reprezentate de: reglarea alosteric, transformarea pre-enzimelor inactive n enzime active i sinteza de noi molecule de enzime. Reglarea alosteric este mecanismul cel mai complex al coordonrii metabolice. Enzimele implicate n aceast reglare sunt enzime alosterice. n unele ci metabolice, unul din produii de reacie poate inhiba prima enzim din calea respectiv:

X activator alosteric

E1

E2

E3

G inhibitor alosteric

Activare Inhibi]ie Transformarea substratului A n produsul final G are loc printr-o succesiune de reacii catalizate de diferite enzime. Acumularea de produs G n exces, n celule, determinnd inhibiia enzimei E 1 care catalizeaz transformarea substratului A n produsul B, considerat etap limitant a succesiunii de reacii enzimatice. Acest tip de inhibiie se numete inhibiie prin produs final, inhibiie feed-back sau retroinhibiie.

Reglarea covalent
Un grup mare de enzime i regleaz activitatea prin adiia sau ndeprtarea unei grupri fosfat la un rezidiu de serin, treonin, tirozin. Fosforilarea se face pe baza ATP-ului, n prezena unei familii de enzime, denumite kinaze, iar defosforilarea se face n prezena apei i a unor fosfataze. Rspunsul la fosforilare este diferit funcie de enzima fosforilat. Astfel, n urma fosforilrii, unele enzime se activeaz (glicogen fosforilaza), iar altele sunt inhibate (glicogen sintetaza). n metabolismul glicogenului, n momentul fosforilrii, sunt fosforilate simultan dou enzime:

ATP

Kinaz\

ADP

Enzim\ ser OH

Enzim\ ser O O P O _ O

_ HPO4

fosfataze

H2O

glicogen fosforilaza, care este activat i declaneaz scindarea glicogenului; glicogen sintetaza, care este inhibat i mpiedic reformarea glicogenului.

Transformarea pre-enzimelor n enzime active are loc printr-un proces de proteoliz limitat catalizat fie de enzime proteolitice, fie de H+, ca de exemplu:
pepsinogen tripsinogen H ^ sau pepsin\ tripsin\ sau enterokinaz\ tripsin\ pepsin\ tripsin\ chimotripsin\

chimotripsinogen

Transformarea pepsinogenului i tripsinogenului poate fi catalizat de nsi forma activ a enzimei, printr-un proces de autocataliz. Alte procese de transformare n forme active se ntlnesc la enzimele implicate n coagularea sngelui i fibrinoliz.

protrombin\ plasminogen

Xa, Ca^^ , fosfolipide activatori

trombin\ plasmin\

Procesul de activare prin proteoliz limitat implic hidroliza unor legturi peptidice, ndeprtarea unor peptide de clivare i demascarea centrului activ al enzimei. Fenomenul se ntlnete i la unii hormoni proteici. Reglarea sintezei de enzime reprezint un aspect particular al sintezei de proteine i se afl sub controlul aparatului genetic al celulelor, realizndu-se prin procese de inducie sau represie. Inducia se refer la sinteza de novo a unei proteine ca rspuns la semnalul transmis de o molecul de inductor care, de multe ori, este chiar substratul enzimei (de exemplu lactoza induce sinteza de beta-galactozidaz). Represia reprezint reprimarea sintezei de novo a unei proteine ca rspuns la prezena din mediu a unui represor. De multe ori produii reaciei catalizate de o anumit enzim acioneaz n calitate de represori limitnd sinteza respectivei enzime.

10

2.8. Importana biomedical a enzimelor rezid n utilizarea acestora n diagnosticul unor

boli i instituirea unei terapii corecte, precum i folosirea unora n scop terapeutic. Majoritatea proceselor enzimatice se petrec la nivel celular iar determinarea enzimelor se face n unele lichide biologice (snge total, urin, lichid cefalorahidian, plasm etc.). Este important de cunoscut locul de producere al diverselor enzime, mecanismele prin care ajung aceste enzime din celule n snge. Din acest punct de vedere se deosebesc: enzime secretate activ n plasm, mai ales de ficat, care acioneaz asupra unor substrate din plasm ndeplinind aici un rol fiziologic. Astfel de enzime specifice plasmei se numesc enzime plasmatice funcionale. Enzimele coagulrii, pseudocolinesteraza, sunt enzime plasmatice. Lezarea organului care produce aceste enzime determin scderea activitii enzimelor n plasm. Pentru diagnosticarea afectiunilor hepatice se practica, alaturi de alte investigatii paraclinice, dozarea activitatii a peste zece enzyme plasmatice nefunctionale. enzime ale secreiilor exocrine care pot difuza pasiv n snge, fr a avea rol specific la acest nivel. Astfel de enzime sunt: amilaza, lipaza, tripsina pancreatic, pepsinogenul gastric, precum i fosfataza alcalin biliar i fosfataza acid prostatic. Enzimele din aceast categorie vor scdea n snge n cazul atrofiei organului care le sintetizeaz sau vor crete cnd apar creteri ale permeabilitii membranei celulelor ce le sintetizeaz; enzimele celulare acioneaz exclusiv intracelular, se mai numesc i enzimele plasmatice nefuncionale deoarece substratele i cofactorii lor specifici nu se gsesc n plasm. Concentraia lor n spaiul intracelular este mult mai mare dect n plasm. Pentru diagnosticarea afectiunilor hepatice se practica, alaturi de alte investigatii paraclinice, dozarea activitatii a peste zece enzime plasmatice nefunctionale. Ptrunderea enzimelor celulare n snge, n condiii patologice, are loc prin creterea permeabilitii membranei celulare sub aciunea unor factori infecioi, toxici. n leziunile distructive, att enzimele citoplasmatice ct i cele legate de organitele celulare, trec n snge. O alt cale de ptrundere a enzimelor celulare n snge o constituie blocarea cilor de eliminare normal a enzimelor (unele enzime hepatice, pancreatice) sau o cretere a concentraiei de enzime ca urmare a unei inducii enzimatice. Scderea activitii enzimelor n plasm poate fi datorat scderii sintezei de enzime, consumului unor medicamente (cortizon, morfin, atropin) sau unor erori genetice. Deosebit de util pentru diagnostic ar fi sa existe pentru fiecare tesut o enzima extrem de specifica in ser. Un caz, este fosfataza acida a carei crestere a activitatii este in legatura cu carcinomul de prostata.

11