FIZIOLOGIA BACTERIILOR.

METABOLISMUL MICROBIAN.
NUTRIIA I RESPIRAIA
BACTERIILOR

 Fiziologia

bacterian studiaz viaa i

activitile bacteriilor nutriia, respiraia,
creterea i multiplicarea, condiiile de cultivare
a bacteriilor.
Metabolismul bacterian reprezint ansamblul
de reacii biochimice care au loc n celula vie.
- Catabolism reacii chimice de descompunere a
substanelor complexe n elemente simple,
nsoit de degajarea energiei (metabolism
energetic)
- Anabolism reacii chimice de sintez a
substanelor complexe din elemente simple,
necesit energie (metabolism constructiv, de
sintez)

Particularitile metabolismului bacterian :

1. Este un metabolism unicelular,
necompartimentat (toate procesele metabolice
se desfoar intr-o singur celul)
2. Este foarte flexibil, realizndu-se prin diverse
ci metabolice (bacteriile se adapteaz rapid la
condiiile mediului)
3. Este foarte intens (viteza reaciilor este mare)
4. Produsele intermediare din procesele
catabolice pot fi utilizate direct n calitate de
precursori pentru reaciile anabolice
(amfibolism)
n toate reaciile metabolice intervin catalizatori
proteici specifici - enzimele

 Enzimele
-

bacteriene. Caractere

generale:
Substane proteice
Active n limite largi de temperaturi (065C) i de pH (2-9)
Specificitate de substrat i de aciune
(reacioneaz cu un substrat cataliznd
un tip de reacie)
Specificitatea este determinat de
centrul activ al enzimei, complementar
cu receptorul de pe substrat
Nu se modific n cursul reaciei

I.
II.
III.

Clasificarea enzimelor
Constitutive, permanente
Inductive, adaptive, se sintetizeaz n prezena
substratului (ex.: lactaza)
Represive, sinteza lor este inhibat de
acumularea n exces a produsului reaciei
catalizate
Dup locul de aciune (exoenzime, endoenzime)
Dup tipul reaciei catalizate (oxido-reductaze,
hidrolaze, transferaze, liaze, izomeraze, ligaze )
Dup impactul asupra ma/o
Enzime metabolice
Enzime de patogenitate, responsabile de
modificri patologice ale esuturilor, celulelor ma/o
: hialuronidaza, colagenaza, plasmocoagulaza,
hemolizina, fibrinolizina, lecitinaza, proteaze, etc.

Importana practic a studierii enzimelor

1. Rol n identificarea i clasificarea bacteriilor
(enzimele determin activitatea biochimic
specific a bacteriilor)
2. Unele substane chimice, antibiotice
interfereaz cu activitatea unor enzime,
inhibnd creterea bacteriilor (tratament)
3. Determinarea mecanismelor patogenezei
infeciilor (unele enzime sunt responsabile
de producerea leziunilor n esutul gazdei)
4. Aplicarea industrial a enzimelor

NUTRIIA BACTERIAN
Nutriia

modalitile prin care bacteriile

asimileaz din mediu substanele necesare
pentru metabolism.
Modul (tipul) de nutriie la bacterii este
absorbtiv.
Nutrieni substane, soluiile crora pot
traversa MCP pentru a fi antrenate n
metabolismul celulei. Se obin din alimente prin
solvire (sruri minerale, CO2, O2) sau dup o
digestie prealabil (proteine, polizaharide, lipide).
La bacterii digestia este extracelular (la
bacteriile G- n spaiul periplasmic)

Nutrienii

servesc n calitate de
material de construcie i surs de
energie pentru sinteza compuilor
i meninerea vieii bacteriei.
Transportul transmembranar
1. Difuzie simpl (conform
gradientului de concentraie, fr
utilizarea energiei): O2, CO2, acizi
grai, nutrieni liposolubili

2. Difuzie facilitat (conform gradientului

de concentraie) permite transportul
transmembranar al moleculelor mari prin
intermediul proteinelor de transport
specifice - permeaze.
3. Transport activ (contra gradientului de
concentraie, necesit energie). Particip
permeazele i alte proteine de transport
specifice. Nutrienii nu suport modificri.
4. Translocaie substratul este modificat
(ex.: fosforilat) n timpul transportului
membranar; necesit energie

 Substanele

care au ptruns n
citoplasm sunt descompuse de
ctre enzimele bacteriene conform
cilor metabolice proprii fiecrei
specii bacteriene (ex.: EmbdenMeyerhof, Entner-Doudoroff, ciclul
pentozelor, ciclul Krebs, etc). Celula
obine energie i precursori care vor
fi antrenai n biosintez (anabolism).
Excreia metaboliilor difuzie,
proteine de transport, liza bacteriei

 Necesitile

nutritive ale bacteriilor

- Necesiti elementare, de baz: C, H, O,
N n cantiti importante, S, P, Fe, Ca, Mg, K
n cantiti mici i urme de Co, Cu, Zn, Mo
- Necesiti specifice. Bacteriile
prototrofe sunt capabile a-i realiza
integral sinteza metaboliilor eseniali.
Unele bacterii auxotrofe - solicit
suplimentar compui organici preformai
(factori de cretere), care nu pot fi
sintetizai de bacterie (ex.: AA, baze
purinice, pirimidinice, vitamine). Prezena
lor n mediul de cultur este indispensabil
creterii acestor bacterii.

Clasificarea bacteriilor dup sursa de carbon

Bacterii

autotrofe utilizeaz CO2 ca unic surs

de carbon (nepatogene)
Bacterii heterotrofe utilizeaz carbonul din
compuii organici (glucide, acizi grai, alcooli,
etc)
- Bacteriile care utilizeaz materia organic mo art
sunt saprofite (reciclarea materiei organice)
- Bacteriile parazite (obligate, facultative) triesc
pe contul organismelor vii, aducndu-le prejudicii
- Bacteriile patogene reprezint parazite care
afecteaz grav gazda, provocnd maladie sau
moarte.

 Surse

de azot
- AA sau acizi nucleici
- Sruri de amoniu, nitrii, azot
atmosferic
Surse
-

de substane minerale:
S - din AA, sulfuri, sulfai;
P - din fosfai;
K, Mg, Ca, Na - din sruri minerale;
Zn, Cu, Mn, Mo din ap

Clasificarea bacteriilor dup sursa de energie

Bacterii fototrofe utilizeaz energia solar
(fotosint)
Bacterii chemotrofe folosesc energia degajat
din reaciile chimice de oxido-reducere. Ele
necesit un substrat donor de hidrogen (e- i H+)
i un substrat acceptor de hidrogen. n transfer
particip transportori intermediari de electroni
(lanul respirator, NAD, NADH, FAD, etc.)
- Bacteriile chemolitotrofe donorul de H este o
substan anorganic
- Bacteriile chemoorganotrofe donorul de H este
o substan organic (glucoza, lipide...)
Bacteriile patogene sunt chemoorganotrofe

Mecanismele de obinere a energiei la

chemoorganotrofe n funcie de
acceptorul final de H :
Respiraie aerob. Acceptorul final este
oxigenul gazos. Implic lanul respirator
de transport al electronilor asociat MCP.
Produs final H2O sau H2O2 .
Respiraie anaerob. Acceptori finali
compui anorganici (nitrat, sulfat , S).
Transportul de electroni prin lanul
respirator. Produse finale nitritul,
amoniacul, sulfura (n prezena O H2O2).

 Fermentaie.

Substratul organic este

metabolizat fr intervenia unui
agent oxidant extern. Const n
procese de ox-red care realizeaz
numai o oxidare parial a
substratului, donorul i acceptorul de
H+ fiind substane organice. Astfel se
ajunge de la un substrat mai redus la o
molecul mai oxidat (ex.: fermentare
lactic, fermentare alcoolic, acid
mixt, acetoinic, etc). Fermentaia se
poate desfura n prezena O2, dar
fr intervenia acestuia.

Conservarea energiei
O parte din energia eliberat se pierde sub
form de cldur sau poate fi utilizat direct
sub form de energie electro-chimic (fpm) la
nivelul MCP (ex.: rotaia flagelilor, transport
transmembranar) sau stocat n compui
chimici macroergici bogai n energie: ATP
(sintetizat prin fosforilare oxidativ sau
fosforilare la substrat), fosfoenol-piruvat,
acetilfosfat i acetil-CoA.
n

procesele de respiraie se elimin mai mult

energie dect din fermentaie (n glicoliz dintrun mol de glucoz - 38 moli ATP, prin fermentaie
- 2 moli ATP). n procese de fermentare se
formeaz deeuri rejetate de ctre celul.

I.
II.
III.
IV.

Clasificarea bacteriilor dup

sursele de energie i carbon
Bacterii fotoautotrofe (energie solar,
CO2)
Bacterii fotoheterotrofe (en. sol.,
subst.org)
Bacterii chemoautotrofe
Bacterii chemoheterotrofe
(chemolitoheterotrofe,
chemoorganoheterotrofe)

CRETEREA I MULTIPLICAREA
BACTERIILOR

Creterea

mrirea coordonat a masei i

volumului structurilor bacteriene ca rezultat
al proceselor de sintez
Multiplicarea creterea numrului de
celule pe o unitate de suprafa sau de volum
- Diviziune binar
- nmugurire (levuri, ciuperci levuriforme)
- Autoreproducere (virusuri)
- Spori (micete)
- Fragmentare (actinomicete)

Ciclul celular procesele care au loc

de la formarea celulei pna la
urmtoarea diviziune
1. Faza C replicarea ADN
2. Faza G de laten, segregarea
cromozomilor
3. Faza D de diviziune, formarea
septului
Replicarea ADN depinde de masa critic
a celulei, iar separarea cromozomilor
i diviziunea intervin n momentul
cnd celula atinge o lungime - limit

 Perioada

dintre 2 diviziuni reprezint timpul

(perioada) de generaie (TG).
Durata TG depinde de specie i de condiiile
de cretere (condiii optime vitez maxim)
Bacteria

TG in
(min)

vitro TG in vivo
(ore)

Escherichia coli

20-40

Staphylococcus
aureus

40

3-5

Vibrio cholerae

10

2-3

Mycobacterium
tuberculosis

120-240

24-48

Creterea bacteriilor n laborator

cultivare. Se cultiv bacteriile pentru
izolarea lor din medii naturale (prelevate
patologice, alimente, ap, etc).
Izolarea bacteriilor se realizeaz pentru:
1. Identificarea mi/o (scop de diagnostic)
2. Testatea sensibilitii lor fa de
antibiotice
3. Obinerea unor produi de biosintez
(antibiotice, AA), bioconversie (hormoni
steroizi), fermentare (alcooli, acizi
organici, etc), producerea vaccinurilor,
probioticelor...

Pentru cretere bacteriile au nevoie de

nutrieni i condiii fizico-chimice
adecvate.
Condiiile (principiile) de cultivare
- Surs nutritiv adecvat
- Surs de energie
- Ap
- Temperatura potrivit
- pH adecvat
- Concentraie optim a oxigenului i a
CO2
- Presiune osmotic adecvat

Temperatura de cretere
Exist temperaturi minime, maxime i
optime de dezvoltare a bacteriilor. n
raport cu temperatura optim deosebim:
1. Bacterii psichrofile t optim 10-20 C.
Cresc i la 0 C.
2. Bacterii mezofile optimum 30-37 C
(limite 15-45 C)
3. Bacterii termofile optimum 50-60 C
(pn la 95 C)
4. Bacterii hipertermofile (cresc la 70110
C)

pH

1.

Bacterii neutrofile (majoritatea, inclusiv

cele patogene) pH 6-7,5
Bacterii acidofile pH 2-6 (Lactobacillus)
Bacterii alcalofile pH >8
(Pseudomonas, Vibrio)
Presiunea osmotic
Bacterii halotolerante (osmotolerante)
cresc n concentraii reduse de NaCl
(mediu izotonic cu mediul intern al
gazdei) mi/o patogene
Bacterii halofile prefer concentraii
mari de NaCl (1-30%) stafilococi,
vibrioni (Vibrio parahaemolyticus)

2.
3.

1.

2.


1.
2.

3.

4.

5.

Oxigenul
Bacterii strict aerobe cresc doar n prezena O2.
Obin energia prin respiraie aerob
Bacterii microaerofile necesit concentraii reduse
de O2 i 2-10% CO2. Obin energia prin respiraie sau
fermentaie (Neisseria, Brucella, Campylobacter )
Bacterii strict anaerobe cresc doar n absena O2.
Obin energia prin fermentaie sau uneori respiraie
anaerob. Toxicitatea O2 formarea H2O2, a radicalilor
superoxizi O2-, sau peroxizi O22- pe care anaerobii nu
le pot descompune (absena catalazei, superoxid
dismutazei, peroxidazei) Clostridium, Bacteroides
Bacterii anaerobe aerotolerante pot crete n
prezena O2, obin energia prin fermentaie, posed
peroxidaz (Lactobacillus, streptococi)
Bacterii facultativ anaerobe cresc n orice condiii,
obin energia prin respiraie sau fermentaie

 Mediile

de cultur soluii sau substrate

solide care asigur nutrienii i condiiile fizicochimice necesare cultivrii bacteriilor. Ele pot fi
utilizate pentru cultivarea (izolarea) bacteriilor,
testarea sensibilitii la antibiotice, stocarea sau
transportul culturilor bacreiene.
Cerinele fa de mediile de cultur
- S asigure necesitile nutritive i energetice
ale bacteriilor
- Umiditate optimal
- pH optimal (7,2-7,4) i constant (caracter de
tampon)
- Potenial de oxido-reducere optimal (anaerobi rH2<5, aerobi rH2>10)
- S fie izotonice (0,5% NaCl)
- S fie sterile i transparente

CLASIFICAREA MEDIILOR DE CULTUR

Dup provenien
1.
Empirice, naturale. Au la baz produse
de origine animal sau vegetal (snge,
ser, lapte, ou, cartof, extracte din
carne, cord, creier, ficat, pete, levuri,
etc). Compoziia lor chimic precis nu
poate fi controlat
2.
Sintetice includ ingrediente chimice
pure, compoziia chimic este
cunoscut cu exactitate
3.
Semisintetice


1.

2.

3.

Dup consisten
Medii lichide (bulion) utilizate pentru
obinerea biomasei bacteriene i a
produselor lor (antibiotice, enzime, toxine)
Medii solide conin 10-15% gelatin sau 23% agar-agar (polizaharid extras din alge
roii, t topire 80-100C, solidificare 42C).
Placa de geloz n cutii Petri este utilizat
pentru izolarea culturilor pure, geloza
nclinat (n pant) pentru acumularea
culturilor pure
Medii semisolide 0,2 0,5 % agar-agar. Se
utilizeaz pentru studierea activitii
biochimice sau a mobilitii bacteriilor.

Dup compoziia chimic (complexitate)

i destinaie
A. Medii uzuale (universale, simple)
1.
Ap peptonat (ap+1% pepton+0,5%
NaCl)
2.
Bulion peptonat BP (extract apos din
carne + 1% pepton+0,5% NaCl)
3.
Geloza nutritiv (BP + 2-3% agar-agar)
4.
Gelatina nutritiv (BP + 10-15% gelatin)
Sunt utilizate pentru creterea bacteriilor
nepretenioase la cultivare
Sterilizarea prin autoclavare: 120C, 20 min

B. Medii complexe
I. Medii elective formate din medii simple
cu adaos de componente care permit
creterea mi/o exigente nutritiv (bulion-ser,
bulion glucozat, geloz-snge streptococi,
neisserii; ser coagulat corinebacterii, etc)
II. Medii selective medii solide cu adaos de
componente sau cu condiii fizico-chimice
particulare care stimuleaz creterea unor
specii i inhib creterea altor specii
(geloza salin - stafilococi, geloza alcalin vibrioni, mediul Ploskirev - Salmonella,
Shigella, etc)

Mediile de mbogire reprezint medii

selective lichide, utilizate pentru
mbogirea florei patogene i inhibarea
florei de asociaie dintr-un prelevat
plurimicrobian (ex: materii fecale)
- Mediul Muller (BP+Lugol+CaCO3+hiposulfit )
- Mediul Kauffmann (mediul
Muller+bil+verde de briliant) Salmonella
- Bulion cu selenit Shigella, Salmonella
- Ap peptonat alcalin (pH=8) Vibrio
cholerae
- Kitt-Tarrozzi (BP+0,5% glucoz+buci de
ficat) pentru anaerobi

III. Medii diferenial-diagnostice (DD)

permit diferenierea speciilor bacteriene n
baza activitii lor biochimice (zaharolitice,
proteolitice, lipolitice, de oxido-reducere)
Sunt construite dup urmtoarea schem:
Baz nutritiv+substrat+indicator (la necesitate)
Medii DD pentru izolarea culturii pure
Studierea proprietilor zaharolitice
Endo (geloz+lactoz+fucsin+hiposulfit de Na)
Levin (geloz+lactoz+eozin+albastru metilen)
Ploskirev (geloz+lactoz+rou neutru+sruri de
acizi biliari+verde de briliant)
Coloniile lactozo-pozitive vor fi colorate (roii pe
Endo, Ploskirev, albastru-violete pe Levin)

Studierea proprietilor de oxidoreducere

Mediul cu sulfit de Bi pentru Salmonella
(colonii negre reducerea sulfitului n
sulfura de Bi)

Mediul Klauberg (geloz-snge cu

telurit de K) pentru
Corynebacterium diphtheriae
Studierea proprietilor lipolitice
Geloza cu glbenu de ou bacteriile
cu lecitinaz formeaz un halou opac
n jurul coloniei

Studierea proprietilor hemolitice

Geloza-snge (geloza+5-15% snge
defibrinat)
n cazul hemolizei n jurul coloniilor apare
o zon clar

Medii DD multitest pentru acumularea

culturii pure i identificare preliminar
Russel geloz+1% lactoz, 0,1% glucoz,
indicator
Kligler identic Russel+sulfat de Fe (detectarea
H2S)
Olkeniki identic Kligler+1% zaharoz+uree
Indicatorul Andrede fucsin+NaOH
Scindarea glucidelor (acid - A, acid i gaz - AG)
duce la modificarea pH i virajul culorii
mediului din rou n galben.
n pant se apreciaz lactoza/zaharoza
(oxidare), n coloan-glucoza (fermentare).
Producerea H2S nnegrirea mediului

Medii DD pentru identificarea final

a culturii pure
- irul pestri Hiss (lichid sau semi-solid) un ir
de tuburi ce conin soluii 0,5% de diferite
glucide i indicator.
Aprecierea dup modificarea culorii (acid - A)
i apariia bulelor de gaz (acid i gaz - AG)
- Medii cu AA (lizin, arginin, ornitin) i
indicatori
IV. Medii speciale pentru izolarea unor
anumite bacterii (Finn, Popescu, LowensteinJensen pentru agenii tuberculozei,
Sabouraud fungi)

V. Medii de transport destinate

transportrii sau stocrii unui material
(prelevat), care va fi examinat ulterior.
Menine n via bacteriile, fr a favoriza
multiplicarea lor.
- Mediul cu glicerin 30%
- Soluie tampon-fosfat
- Soluie NaCl 3%
- Mediul Cary-Blair
- Mediul Stuart (NaCl, 0,5% agar, tioglicolat
de Na, albastru de metilen) pentru
anaerobi, neisserii, etc

 Pentru

cultivarea bacteriilor o cantitate

mic de material ce conine bacterii
(inoculum) se ntroduce ntr-un mediu de
cultur (nsmnare, inoculare), care
ulterior va fi incubat n termostat (pentru
asigurarea temperaturii optime).
n timpul incubrii (18-24-48 ore..)
bacteriile cresc i se divid, formnd o
cultur bacterian (totalitatea bacteriilor
acumulate prin multiplicare intr-un mediu).
M.tuberculosis 3-5 sptmni
V.cholerae 6-12 ore

 Cultur

pur format din bacterii

de aceeai specie (indispensabil
identificrii)
Cultur mixt compus din bacterii
de specii diferite
Tulpin populaie microbian
constituit din descendenii unei
singure izolri n cultur pur, care va
fi studiat ulterior.
Clon populaie care rezult din
multiplicarea unei singure celule

Manifestarea creterii i multiplicrii

bacteriilor
n mediu lichid
- Turbiditate uniform
- Formarea unei pelicule la suprafaa
mediului (vibrioni, yersinia - agentul
pestei)
- Formarea unui sediment
la fundul tubului sau pe perei
(streptococi, Bacillus anthracis)

mediu solid formarea coloniilor

Colonie o aglomerare de bacterii care
se dezvolt dintr-o singur celul sau
un grup de celule (UFC - unitate
formatoare de colonii) pe suprafaa
unui mediu solid
Fiecare specie bacterian formeaz
colonii specifice (caracter util n
identificare)

 Caracteristica

coloniilor
Dimensiuni colonii mici (0,1-1mm), medii (12mm), mari (2-3mm)
Contur (margini) neted, ondulat, zimat, lobat,
etc
Suprafa plat, bombat, convex,
ombilicat, etc
Form punctiform, circular, filamentoas,
neregulat
Culoare (pigmentaie) alb, galben, aurie, etc
Densitate opac, transparent, etc
Consisten cremoas, untoas, uscat,
mucoid

 Tipurile

de colonii
Colonii S (smouth) rotunde, netede,
umede, lucioase
Colonii R (rough) margini neregulate,
suprafaa uscat, rugoas

Caracterele de cultur ale

bacteriilor reprezint exigenele
nutritive (medii, temperatur, pH,
aerare, etc), viteza i
manifestarea creterii pe medii
lichide i solide

 Dinamica

culturi

multiplicrii bacteriilor n

n funcie de modul de dezvoltare a

culturilor bacteriene se disting:
- Culturi discontinue
- Culturi continue
- Culturi sincrone
Culturile discontinue se obin la
cultivarea bacteriilor n volum limitat de
mediu. Astfel de culturi sunt obinute i
utilizate n laboratorul microbiologic

Fazele dezvoltrii unei culturi

discontinue
I. Faza de lag faza de adaptare la condiiile
mediului, bacteriile sunt active metabolic,
cresc n dimensiuni, dar nu se divid.
Durata este variabil (2-4 ore); depinde de
starea bacteriei, condiiile mediului, etc
II. Faza logaritmic bacteriile cresc i se
divid cu vitez maximal constant, curba
evolueaz exponenial. Bacteriile sunt
foarte sensibile la ageni antimicrobieni
(culturi utile pentru testarea sensibilitii la
antibiotice).
Durata 8-10 ore

III. Faza staionar rata celulelor care se

multiplic scade treptat, numrul celulelor
vii rmne constant mai multe ore.
Cauza consumarea nutrienilor,
acumularea metaboliilor toxici.
Morfologia bacteriilor este tipic speciei,
apar incluziuni, spori (culturi utile pentru
identificare). Sensibilitatea la ageni i
antimicrobieni scade. Durata 10-12 ore
IV. Faza de declin (letalitate) bacteriile mor
progresiv

Cultura continu se realizeaz cnd

mediul de cultur este continuu
rennoit i mbogit cu oxigen cu
evacuarea unei cantiti de cultur.
Se realizeaz n chemostate sau
turbidostate, cultura aflndu-se
permanent n faza exponenial. Se
utilizeaz n microbiologia
industrial.
n intestin culturi continue.
Culturi sincrone culturi n care
bacteriile se divid n acelai timp

EXAMENUL BACTERIOLOGIC
Examenul bacteriologic const n
inocularea prelevatelor pe medii de
cultur pentru izolarea culturilor pure
de bacterii (tulpinilor) care vor fi
ulterior identificate, testate vis-a-vis
de antibiotice, eventual conservate.
Examenul bacteriologic const din
cteva etape succesive, de la
prelevarea (recoltarea) probelor
biologice pn la remiterea
rezultatelor.

Faza pre-analitic (responsabilitatea

medicului)
Prescrierea investigaiei (n funcie de
datele examenului clinic i paraclinic). n
ordonan se fixeaz identitatea
medicului, a pacientului, scopul analizei,
manifestrile patologice, locul, data
apariiei, alte date: imunosupresie,
tratament cu antibiotice, graviditate, etc.
Prelevarea probelor
Alegerea prelevatului (de la poarta de
intrare, locul multiplicrii sau/i din cile
de eliminare a agentului patogen)

Materiale de examinat (prelevate) de la

pacieni:
- Secreii rino-faringiene
- Sput
- Puroi
- Exudate
- Snge
- LCR
- Urin
- Mase fecale
- Bioptate
- Material cadaveric

Materiale de examinat din mediul

extern:
- Ap
- Alimente
- Sol
- Aer
- Lavaje
- Vectori, etc

Modul de prelevare (recoltare)

- n recipiente sterile
- Respectnd regulile de autoprotecie
- La debutul bolii
- Pn la administrarea antibioticelor
Transportarea
- Imediat sau utiliznd medii de transport, cu
respectarea condiiilor speciale dup necesitate
- n ambalaj special (cutii metalice, pungi din
plastic...)
- n fia de nsoire s fie indicat identitatea
pacientului, vrsta, sexul, natura prelevatului,
data, ora prelevrii, scopul investigaiei)

EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU

CULTURILE AEROBE
Prelevatul este supus examenului
macroscopic (modificarea aspectului, a
mirosului, etc) - orientare n diagnostic
Dup necesitate, probele sunt supuse
pregtirii pentru investigaie (diluare,
omogenizare, centrifugare, etc)
Examinarea microscopic (preparate
native, Gram, Ziehl-Neelsen, BurriHinss...) prezena mi/o, forma,
cantitatea, G+/-.

I etap IZOLAREA CULTURILOR PURE

Scopul izolrii - de a obine o cultur pur
dintr-un melanj de celule bacteriene sau
dintr-un produs patologic. O colonie separat
constituie o cultur pur.
Tehnici utilizate:
1. Prin epuizarea inoculului pe suprafaa
gelozei din cutia Petri (nsmnare n striuri
paralele, nsmnare n cadrane, etalarea
consecutiv pe trei cutii).
2. Metoda diluiilor logaritmice a inoculului n
geloz topit i rcit la 50 C (10-1, 10-2,...),
apoi turnate n cutii Petri sau eprubete.
Incubare n termostat la 37 C, 18-24 h (n
funcie de TG).

Metode speciale de izolare n culturi

pure:
- A bacteriilor sporulate: nclzirea prealabil
a prelevatului 80 C 20 min
- A bacteriilor acido-rezistente: tratarea
prealabil cu acid a prelevatului i
neutralizarea ulterioar cu o baz
- A bacteriilor din asociaii cu numr minim
de mi/o patogene: mbogirea prealabil a
florei patogene utiliznd medii de
mbogire
- A bacteriilor cu virulen nalt i
pretenioase la cultivare: inocularea la
animalele de laborator sensibile

II etap ACUMULAREA CULTURII PURE

- Examinarea macroscopic a coloniilor
crescute (form, culoare, dimensiuni, etc)
- Examinarea microscopic (frotiu Gram) a
coloniilor suspecte, confirmarea puritii
culturii
- Repicarea coloniilor suspecte pe geloz n
pant (nclinat) pentru acumularea
culturii pure
- Termostat, 37 C, 18-24 ore

III etap IDENTIFICAREA CULTURII PURE

- Verificarea puritii culturii (frotiu Gram)
- Identificarea culturii pure const n
evidenierea unor caractere specifice ale
acestei culturi pentru a o include ntr-o familie,
gen, specie, variant
Se studiaz caracterele:
- Morfologice
- Tinctoriale
- De cultur
- Biochimice
- Antigenice (seroidentificarea)
- De patogenitate
- Sensibilitatea la bacteriofagi (fagoidentificarea)
- Sensibilitatea la antibiotice

1.
2.
-

STUDIEREA ACTIVITII
BIOCHIMICE A BACTERIILOR
Activitatea zaharolitic (irul Hiss,
coagularea laptelui, etc)
Activitatea proteolitic
Degradarea proteinelor native
(lichefierea gelatinei sau a serului
coagulat, peptonizarea laptelui, etc)
Evidenierea enzimelor specifice
(ureaz, decarboxilaze, dezaminaze,
etc) prin detectarea produsele finale
ale reaciilor: H2S, NH3, indol

Depistarea producerii H2S: formarea sulfurii

de fer de culoare neagr n mediile
multitest Kligler, Olkeniki, etc; plasarea
unei benzi de hrtie de filtru mbibat cu
acetat de Pb deasupra BP n care crete
cultura studiat (formarea sulfurii de Pb
nnegrete hrtia)
Depistarea indolului (produs al
metabolizrii triptofanului) benzi de
hrtie mbibate cu acid oxalic. n prezena
indolului indicatorul vireaz n roz.
Depistarea amoniacului (ureaza) hrtia de
turnesol se coloreaz n albastru.

Depistarea catalazei (H2O2 .... H2O + O2)

(cultura se amestec cu o pictur de ap
oxigenat apariia bulelor de gaz)
Depistarea oxidazei (detectarea prezenei
citocromoxidazei din lanul respirator)
Reactiv di (tetra)metil-parafenilendiamin (benzi sau rondele de hrtie
mbibate cu reactiv, creioane, etc)
Oxidarea reactivului culoare violetneagr
Oxidazo+ : Neisseria, Vibrio, Pseudomonas
Oxidazo- : Enterobacteriaceae

Depistarea lecitinazei mediu cu

glbenu de ou 10% - formarea unui
halou opac n jurul coloniilor
Depistarea lipazei mediu cu Twin 80
1% halou opac n jurul coloniilor
(precipitarea acizilor grai)
Depistarea hemolizinei geloz-snge
5-10% - zon clar n jurul coloniei
Depistarea ADNazei, fosfatazei, etc
Probele sunt incubate la 37 C, 18-24 h

 Identificarea

rapid
Utilizarea galeriilor miniaturizate
standarde (economie de timp, spaiu,
material)
Sistemul API o galerie din plastic
format din numeroase alveole care
conin fiecare un mediu deshidratat
diferit (glucide, AA, etc). Alveolele sunt
inoculate cu o suspensie bacterian
testat i incubate. Ulterior la
necesitate se adaug reactive pentru
detectarea metaboliilor particulari.
Lectura conform unui cod de cifre sau
computerizat

IV etap EVALUAREA
REZULTATELOR, FORMULAREA SI
ELIBERAREA RSPUNSULUI
- Compararea rezultatelor obinute cu
caracterele speciilor bacteriene
cunoscute pentru a gsi asemnri.
- Exemplu de rspuns: Din proba
examinat a fost izolat tulpina de
Corynebacterium diphtheriae, biovar
gravis, tox+, sensibil la ...., rezistent
la .....

EXAMENUL BACTERIOLOGIC PENTRU CULTURI

ANAEROBE (clostridiene, neclostridiene)
Condiia principal cultivare n absena
oxigenului
1. Utilizarea mediilor anaerobe (Kitt-Tarrozzi
regenerat - 100 C, 20 min, rcit, acoperit cu
vazelin; nsmnarea n geloz n coloan)
2. Crearea condiiilor de anaerobioz
Metoda fizic utilizarea anaerostatului
Metoda chimic n exicator se ntroduc
substane ce fixeaz oxigenul
(pirogalol+baz); utilizarea gas-pachetelor
Metoda biologic Fortner cultivarea
concomitent a aerobilor i anaerobilor

Recoltarea cu precauie, evitnd

contactul cu aerul (n seringi, utiliznd
medii speciale)
I etap MBOGIREA ANAEROBILOR
- nsmnarea prelevatului n 2 eprubete
cu mediul Kitt-Tarrozzi regenerat
- nclzirea unui tub la 80 C, 20 min
distrugerea florei nesporogene
- Incubarea la 37 C, 24-48 h (va avea loc
nmulirea anaerobilor)

II etap - IZOLAREA CULTURII PURE

DE ANAEROBI
- Studierea caracterelor de cultur
tulburarea mediului, descompunerea
bucilor de ficat, etc
- Izolarea culturii pure de anaerobi prin
metoda Zeissler (nsmnarea a 0,1
ml din mediul K-T pe 3 cutii cu gelozsnge glucozat consecutiv). Incubarea
n anaerostat/exicator/gas-pack, 24-48
h

Metoda Weinberg diluii succesive a

culturii n geloz glucozat lichefiat i
aspirarea n tuburi lungi i nguste, nchise
ermetic. Incubarea n termostat, 24 h
III etap - ACUMULAREA CULTURII PURE
- Studierea macroscopic a coloniilor
- Examinarea microscopic (frotiu Gram) a
coloniilor suspecte
- Repicarea n mediul K-T regenerat pentru
acumularea culturii pure
- Incubarea n termostat, 24 h
-

IV etap - IDENTIFICAREA CULTURII

PURE DE ANAEROBI
- Verificarea puritii culturii pure
(frotiu Gram)
- Studierea caracterelor culturii pure
izolate (cu respectarea condiiilor de
anaerobioz)
V etap - EVALUAREA
REZULTATELOR, FORMULAREA I
ELIBERAREA RSPUNSULUI