1.

Efectuati si colorati un frotiu din cultura bacteriana (cu Gram,

Z-N)
2. Efectuati si colorati un frotiu din produs patologic ( coloratie
purulenta ) (A.M, Gram, Z-N)

frotiurile se pot realiza pornind de la produse patologice (recoltate

de la om sau de la animale de experien) sau din cultura microbian (n
mediu lichid sau solid)

frotiul trebuie ntins n strat ct mai subire (preferabil n unistrat)

este de preferat s folosim lame i lamele noi supuse urmtoarelor

proceduri succesive (imersare n amestec sulfo-cromic cteva zile, splare,
cltire, pstrare n alcool 50%)

lamele se usuc (folosim o crp curat) apoi se degreseaz

suplimentar prin flambare (trecere de cteva ori prin flacra becului
Bunsen)

Executarea frotiurilor din p.p. cu consisten fluid sau din

culturi microbiene realizate n mediu de cultur lichid

dup ce am flambat lama, o aezm cu partea flambat n sus

sterilizm ansa bacteriologic i ateptm s se rceasc

prelevm aseptic p.p. / cultur i depunem produsul n centrul lamei

ntindem prin micri de dute-vino (de haurare) pe axul lung al

lamei produsul prelevat, n strat ct mai subire, avnd grij s nu ne
apropiem de marginile lamei / ntinderea se poate face i prin micri
circulare, excentrice

lsm lama s se usuce lng becul de gaz (nu grbim uscarea prin
eventuale treceri ale frotiului prin flacr) n cazul n care avem n dotare
un dispozitiv n care lama se poate aeza i usca la +70C, vom utiliza
aceast metod

fixm frotiul; exist metode chimice de fixare, ns cel mai frecvent

folosim fixarea prin cldur, distrugnd n acelai timp i microorganismele
(care prezint o afinitate tinctorial mai mare dect celulele vii)

n acest scop, trecem frotiul prin flacr (aa cum am procedat i

pentru flambarea lamei, nainte de executarea frotiului) ns de aceast
dat partea pe care am ntins p.p. sau cultura este orientat n sus; ca o
modalitate de control, atingem dosul minii cu lama flambat iar
temperatura atins prin flambare nu trebuie s fie mai mare dect pe care
o putem suporta

frotiul fixat este gata pentru colorare

Executarea frotiurilor din p.p. cu consisten solid sau din

culturi microbiene realizate n mediu de cultur solid

dup ce am flambat lama, o aezm cu partea flambat n sus

cu ajutorul flaconului cu picurtor sau cu ansa bacteriologic

sterilizat i rcit depunem n centrul lamei o pictur de soluie salin
fiziologic sau ap distilat

sterilizm ansa bacteriologic i ateptm s se rceasc

prelevm aseptic p.p. / un fragment din colonie i depunem

produsul n pictura de fluid de pe lam

omogenizm foarte bine p.p. / fragmentul de colonie n pictura de

fluid

procedm ca mai sus pentru ntinderea, uscarea i fixarea frotiului

Executarea amprentelor de organ / alte p.p.


flambm lama

cu partea flambat atingem suprafaa de seciune a organului

respectiv

lama se poate aplica i pe suprafaa de seciune a unor prelevate

bioptice sau obinute prin necropsie

procedm ca mai sus pentru uscarea i fixarea frotiului

Coloraia Gram

dilum ntr-un recipient fucsina (9 pri ap distilat / 1 parte

fucsin)

acoperim frotiul cu violet de metil sau cristal violet (violet de

genian din punct de vedere istoric), pentru 1-3 minute (nu are rost s
acoperim cu colorant lama n ntregime)

ndeprtm colorantul

acoperim frotiul cu lugol (mordant, fixator) pentru 1-3 minute

ndeprtm lugolul

acoperim frotiul cu un amestec de alcool-aceton (1 parte aceton /

3 pri alcool de 96) pentru un timp foarte scurt, 7-8 secunde

splm insistent cu ap distilat sau ap de la robinet

acoperim frotiul cu fucsina diluat 1/10 pentru 1 minut

splm cu ap distilat sau ap de la robinet

aezm frotiul n stativ pentru uscare (de preferat) sau grbim

uscarea prin tamponare cu sugativ sau hrtie de filtru

examinm la microscop, notm observaiile, interpretm

Coloraia Ziehl-Neelsen
Este o coloraie util n identificarea prezenei de bacili acid-alcool
rezisteni (BAAR), solubiliznd peretele bacterian prin creterea
temperaturii, facilitnd penetrarea colorantului.

punem frotiul uscat i fixat pe un suport situat deasupra tviei de

colorare

acoperim complet lama cu fucsin bazic nediluat (filtrat

extemporaneu)

trecem becul de gaz aprins pe sub lama acoperit de fucsin, pn

ncepe emiterea de vapori (nu atingem temperatura de fierbere). n cazul
n care lama nu mai este acoperit complet cu fucsin, adugm colorant.
Timpul de lucru este de 10 minute, perioad n care repetm de 3 ori
operaia de nclzire a lamei pn la emiterea de vapori.

splm insistent cu ap distilat sau ap de la robinet

adaugm amestecul decolorant acid-alcool (3 ml acid clorhidric

concentrat / 97 ml alcool etilic 90-95), pentru 2-3 minute

splm cu ap distilat sau ap de la robinet

recolorm cu albastru de metilen, 1 minut

splm cu ap distilat sau ap de la robinet

aezm frotiul n stativ pentru uscare (de preferat) sau grbim

uscarea prin tamponare cu sugativ sau hrtie de filtru

examinm la microscop, notm observaiile, interpretm

Coloraia cu albastru de metilen

acoperim frotiul cu soluie de albastru de metilen, pentru 3-4 minute

(nu are rost s acoperim cu colorant lama n ntregime)

splm cu ap distilat sau ap de la robinet

aezm frotiul n stativ pentru uscare (de preferat) sau grbim

uscarea prin tamponare cu sugativ sau hrtie de filtru

examinm la microscop, notm observaiile, interpretm

3. Colorati prin metoda Ziehl-Nielsen un frotiu din sputa
Coloraia Ziehl-Neelsen
Este o coloraie util n identificarea prezenei de bacili acid-alcool
rezisteni (BAAR), solubiliznd peretele bacterian prin creterea
temperaturii, facilitnd penetrarea colorantului.

punem frotiul uscat i fixat pe un suport situat deasupra tviei de

colorare

acoperim complet lama cu fucsin bazic nediluat (filtrat

extemporaneu)

trecem becul de gaz aprins pe sub lama acoperit de fucsin, pn

ncepe emiterea de vapori (nu atingem temperatura de fierbere). n cazul
n care lama nu mai este acoperit complet cu fucsin, adugm colorant.
Timpul de lucru este de 10 minute, perioad n care repetm de 3 ori
operaia de nclzire a lamei pn la emiterea de vapori.

splm insistent cu ap distilat sau ap de la robinet

adaugm amestecul decolorant acid-alcool (3 ml acid clorhidric

concentrat / 97 ml alcool etilic 90-95), pentru 2-3 minute

splm cu ap distilat sau ap de la robinet

recolorm cu albastru de metilen, 1 minut

splm cu ap distilat sau ap de la robinet

aezm frotiul n stativ pentru uscare (de preferat) sau grbim

uscarea prin tamponare cu sugativ sau hrtie de filtru

examinm la microscop, notm observaiile, interpretm

4. Insamantati un produs patologic pe o placa petri cu geloza in
vederea izolarii germenilor
nsmnarea n pentagon deschis a mediului solid aflat ntr-o
plac Petri folosind ansa bacteriologic, pentru obinerea de colonii
bacteriene izolate, pornind de la un produs patologic recoltat i transportat
ctre laborator ntr-o eprubet / tub nchis cu dop de vat include
urmtoarele etape:

atenie: pe suprafaa mediului de cultur poate exista lichid de

condens

se sterilizeaz ansa bacteriologic la flacra becului de gaz prin

aducerea la incandescen a buclei i firului ansei urmat de flambarea
portansei

se noteaz pe placa cu mediu de cultur data inoculrii, numrul de

identificare i tipul produsului

se ia eprubeta cu produs patologic n mna stng (n cazul n care

fiind dreptaci, ansa bacteriologic este inut n mna dreapt, ca un

creion), se scoate dopul eprubetei utiliznd n acest scop degetele 4-5 de

la mna dreapt

se flambeaz gura eprubetei

se introduce ansa n eprubet fr s se ating gura sau pereii

acesteia n partea superioar, se rcete bucla pe pereii eprubetei n
vecintatea produsului patologic i se ncarc bucla ansei din profunzimea
produsului patologic, recoltnd fragmente care ar putea include cu o mai
mare probabilitate bacterii implicate n procesul infecios

se scoate ansa fr sa atingem pereii sau gura eprubetei

se flambeaz gura eprubetei

se monteaz dopul la eprubet printr-o micare de rsucire ce are

ca scop fixarea lui

atenie: gura eprubetei poate fi fierbinte dup flambare !

dup ce eprubeta a fost aezat n stativ, mna stng eliberat va

lua o plac Petri pe care o va aeza pe mas cu capacul n jos i mediul n
sus

tot cu mna stng se va deschide placa iar cu ansa ncrcat cu

produs patologic se vor trasa linii (striuri) aproximativ paralele ntre ele, ca
un zig-zag (fr a se ridica ansa de pe mediul de cultur) reprezentnd o
prim latur a unui pentagon deschis

se nchide placa Petri

ansa se sterilizeaz la flacr, portansa se flambeaz

se rcete ansa (se poate ncerca rcirea ei prin atingere pe

suprafaa mediului solid steril, nensmnat, lng peretele exterior al
plcii Petri)

fr s se mai ncarce ansa cu produs patologic se traseaz a doua

latur a pentagonului intersectnd-o pe prima, tot ca linii paralele, dup
care ansa se va steriliza din nou

se va proceda la fel ca mai sus i pentru urmtoarele laturi avnd

grij s nu se uneasc ultima latur cu prima latur

n momentul interesectrii cu ansa a laturii precedente a

poligonului, ansa este rencrcat cu microorganisme, dar n cantitate
din ce n ce mai mic, pn ce se va ajunge la cteva celule microbiene
izolate care, diseminate pe plac vor da natere la colonii microbiene
izolate

se introduce placa Petri pe care a fost realizat cultivarea n

termostat, rsturnat pentru o temperatur de 35-37C, pentru fungi la
28C)

dup o perioad de incubare de 18-24 ore, pe prima latur se va

obine cea mai important cantitate de cultur (cultur microbian
confluent), pe urmtoarele laturi se va remarca scderea cantitativ a
culturii iar cel puin pe ultima latur a pentagonului deschis se vor
obine colonii izolate.

5. Antibiograma difuzimetrica. Principiu, interpretare

Antibiograma difuzimetric comun
Din punct de vedere tehnic nsmnm germenul de testat pe
mediul solid (ex. agar Mueller-Hinton) turnat n plci Petri. nsmnarea se
poate realiza de exemplu prin inundarea plcii urmat de aspirarea,
aseptic, a excesului de inocul sau cu ajutorul unui tampon (exist i alte
variante tehnice).
Dup circa 20 minute (timp n care placa Petri se las cu capacul
ntredeschis n vecintatea becului de gaz, aprins) se aplic
microcomprimatele n care sunt ncorporate antibiotice n concentraie
standardizat. Aplicarea microcomprimatelor se poate face cu ajutorul
unei pense, n condiii aseptice, sau cu ajutorul unui aplicator automat
(la minim 30 mm distan ntre ele i minim 15 mm de marginea plcii;
vom utiliza 5 antibiotice diferite pentru o plac Petri cu diametrul de 9
cm).
Microcomprimatele trebuie s vin n contact perfect cu mediul,
motiv pentru care, cu ajutorul unei pense le presm uor (dup caz). Dup
nc 15-20 minute, incubm plcile peste noapte n termostat, la 28 sau
35-37C, n funcie de temperatura optim de multiplicare a
microorganismului testat.
Antibioticul eliberat din microcomprimat difuzeaz n mediu,
realiznd zone de inhibiie n care coloniile microbiene nu se dezvolt.
Cu ct zona de inhibiie este mai larg, cu att germenul va fi
considerat mai sensibil. Dac n interiorul zonei de inhibiie (chiar dac
diametrul nregistrat este foarte mare) se dezvolt colonii, mutani
rezisteni, germenul va fi considerat rezistent.
Aceast metod, cu toate c este folosit pe scar larg n
laboratoare, permite de fapt numai eliminarea antibioticelor complet
inactive i eventual selecionarea antibioticelor foarte active, pentru c
tehnica nu este standardizat.
Antibiograma difuzimetric standardizat
Din punct de vedere tehnic se realizeaz asemntor cu prima
metod prezentat, dar este standardizat, fiind singura metod
difuzimetric recunoscut pe plan internaional, care permite obinerea
unor rezultate reproductibile i corelabile ntre laboratoare diferite (Film nr.
1).
Elementele necesare standardizrii sunt:

mediul
o exist elemente minerale care trebuie adugate n cazul testrii
anumitor microorganisme
o se va verifica pH-ul mediului (de obicei cuprins ntre 7,2 i 7,4);
o grosimea mediului trebuie s fie de 4 mm (25 ml de mediu/plac de 9
cm);


inoculul, care se obine de preferat din 5 colonii izolate (cultur
pur) i trebuie s aib o turbiditate corespunztoare standardului
turbidimetric 0,5 McFarland (circa 108 uniti formatoare de colonii/ml) n
majoritatea cazurilor;

timpul de incubare (n majoritatea cazurilor 16-18 ore la 35-37C,

nu mai mult de 2-3 plci suprapuse), atmosfera de incubare, umiditatea
atmosferei de incubare;

concentraia substanelor antimicrobiene din microcomprimate i

dimensiunea microcomprimatelor (6 mm diametru);

pstrarea plcilor cu mediu pn n momentul utilizrii (maxim 7

zile, n pungi de polietilen, la +4C);

utilizarea tulpinilor de referin pentru controlul de calitate;

interpretarea rezultatelor (se msoar diametrul zonei de inhibiie i

se compar rezultatele cu cele din tabelele puse la dispoziie de
productori i/sau centrele de referin).
Metodele difuzimetrice au dezavantajul c nu permit aprecierea
concentraiilor eficace ale antibioticului la nivelul focarului infecios.

7. Diagnosticul bacteriologic in infectiile streptococice

Testul sensibilitii la bacitracin
Principiu:
Multiplicarea streptococilor de grup A este inhibat de bacitracin
(antibiotic produs de Bacillus licheniformis). Se apreciaz c dintre tulpinile
deStreptococcus pyogenes, mai puin de 1% sunt rezistente la bacitracin.
Control de calitate:

Martor pozitiv Streptococcus pyogenes

Martor negativ Streptococcus agalactiae

Testul bilolizei (Neufeld)
Principiu:
Pneumococii (Streptococcus pneumoniae) capsulai sunt lizai n
prezena bilei sau srurilor biliare (unele tulpini necapsulate nu sufer
acest proces) prin activarea unei enzime autolitice.
Control de calitate:

Martor pozitiv Streptococcus pneumoniae

Martor negativ Streptococcus viridans.

Testul CAMP
Principiu:
Streptococii de grup B produc o substan extracelular de natur
proteic denumit factorul CAMP (dup iniialele cercettorilor care au pus

la punct testul / Christie, Atkins, Munch-Petersen), care acioneaz sinergic

cu b-lizina produs de unele tulpini de Staphylococcus aureus.
Dac aceste 2 microorganisme sunt cultivate n 2 striuri
perpendiculare (fr s se ating), acolo unde cele 2 striuri se nvecineaz,
liza hematiilor (de berbec sau de bou) apare mrit, n form de vrf de
sgeat.
Interpretare:

apariia unei zone de hemoliz lrgite, n vrf de sgeat (vrful

spre tulpina de stafilococ) reprezint un test pozitiv (confirmat de martorul
pozitiv)

hemoliz nemodificat test negativ (confirmat de martorul

negativ)
Control de calitate:

Martor pozitiv Streptococcus agalactiae

Martor negativ Streptococcus pyogenes sau un streptococ de grup

D
Testul sensibilitii la optochin
Principiu:
Majoritatea tulpinilor de pneumococi (Streptococcus pneumoniae)
sunt sensibile la concentraii sczute (< 5 g/ml) de optochin (hidroclorid
de etil-hidrocuprein). Unele tulpini ale altor streptoci care produc
hemoliz viridans pot fi sensibile, dar la concentraii mai mari ale
substanei active, n timp ce alte tulpini sunt rezistente.
Control de calitate:

Martor pozitiv Streptococcus pneumoniae

Martor negativ Streptococcus viridans.

8. Reactia ASLO. Principiu, interpretare
Aceast reacie poate fi utilizat n diagnosticul retrospectiv al unei
infecii streptococice sau pentru confirmarea etiologiei unei boli
poststreptococice (mpreun cu criteriile minore i majore de diagnostic).
Reacia ASLO determin titrul Ac anti streptolizin O (SLO).
Principiu:
Titrarea Ac anti-SLO se bazeaz pe faptul c SLO are efect hemolitic
asupra hematiilor de iepure sau de berbec. n cazul n care n serul de
cercetat exist Ac anti-SLO, aciunea hemolitic a SLO este neutralizat.
Combinnd diluii din serul de cercetat cu o cantitate constant de SLO
vom putea determina titrul ASLO.
Materiale i reactivi necesari:
- ser de cercetat (sau seruri pereche, recoltate la interval de 2
sptmni);
- SLO liofilizat (standardizat de ctre productor);
- snge defibrinat de iepure / berbec;
- soluie salin izoton, soluie de rivanol 0,3%;
- eprubete, pipete gradate foarte curate;
- baie de ap, centrifug etc
Tehnica de lucru:
Trebuie urmate toate indicaiile din protocolul de lucru, respectiv

- se omogenizeaz suspensia de hematii;

- se ndeprteaz inhitorii SLO din serul de cercetat (utilizm soluie de
rivanol i suspensie de crbune activ, realizm o diluie de 1/10 a serului
care se va menine 30 minute la 56C);
- se realizeaz diluiile de ser i se repartizeaz n tuburile de reacie (ser
n diluii succesive) mpreun cu SLO (n cantitate constant, cte 0,5 ml /
tub); combinarea serului de cercetat cu SLO reprezint prima etap a
reaciei;
- se agit tuburile pentru omogenizare i se menin timp de 15 minute la
37C;
- urmeaz a doua etap a reaciei ASLO, respectiv adugarea suspensie de
hematii (5%), cte 0,5 ml n fiecare tub;
- se agit pentru omogenizare i se incubeaz timp de 45 minute la 37C;
- se centrifugheaz tuburile timp de 1 minut (1.500 rotaii / minut) i se
menin pn a doua zi la 4C (temperatura frigiderului).
Interpretare:
Pornind de la o diluie iniial a serului de 1/10, dup adugarea
tuturor reactivilor titrul (numrul de uniti ASLO) va fi 12, 50 n tubul
urmtor, 100, 125, 166, 250, 333 etc n tuburile urmtoare. Titrul reaciei
ASLO este dat de cea mai mare diluie de ser la care lipsete complet
hemoliza. Pentru zona noastr geografic se accept ca normal un titru de
200 (maxim 250) uniti ASLO.
Control de calitate:
Ultimele 2 tuburi sunt reprezentate de tubul martor pentru hematii,
n care se verific rezistena hematiilor i respectiv tubul martor pentru
SLO n care se pun SLO i suspensia de hematii.

9. Diagnosticul de laborator in infectiile stafilococice

Testul producerii de catalaz
Principiu:
Catalaza descompune peroxidul de hidrogen n ap i oxigen.
Exist mai multe tehnici dintre care vom prezenta testul realizat pe o
suspensie bacterian i respectiv testul catalazei prin suspensionarea
culturii pe lam
Materiale necesare:

colonii izolate dezvoltate pe medii fr snge / n cazul n care

urmeaz s testm o bacterie care s-a dezvoltat pe geloz-snge,
deoarece pot aprea reacii fals pozitive datorit catalazei eritrocitare,
urmeaz s prelevm cultura bacterian fr a atinge mediul de cultur; n
acest sens urmeaz s utilizm o ans fir i s prelevm cultur din
poriunea cea mai bombat a coloniei de identificat

soluie de peroxid de hidrogen 3%

ap distilat
Tehnica de lucru:
B1.

Realizm o suspensie bacterian dens n 1-2 ml de ap distilat la care

adugm 1-2 picturi de soluie de peroxid de hidrogen 3%.
Observm imediat i dup trecerea a 5 minute apariia bulelor de oxigen.
B2.
Pe o lam de sticl punem o pictur din soluie de peroxid de hidrogen.
Suspensionm cultura n pictura de H2O2 i urmrim timp de 30 de
secunde apariia bulelor de oxigen.
Interpretare:

apariia bulelor de gaz semnific un test pozitiv, bacteria produce

catalaz

absena bulelor de gaz semnific un test negativ.

Control de calitate:

Martor pozitiv Staphylococcus aureus

Martor negativ Streptococcus pyogenes

Testul coagulazei
Principiu:
Stafilococii coagulazo pozitivi produc o enzim care activeaz
coagularea plasmei. Exist 2 tipuri de coagulaz: coagulaza liber i
coagulaza legat de peretele celular (clumping factor). Coagulaza liber
acioneaz pe protrombin. Coagulaza legat acioneaz direct pe
fibrinogenul plasmatic. Stafilococii coagulazo pozitivi sunt considerai
Staphylococcus aureus.
Materiale necesare:

colonii izolate pe mediu neselectiv ale tulpinii care urmeaz s fie

testat

plasm de iepure (de preferat) / n cazul n care plasma de iepure nu

este disponibil se poate folosi plasm uman

lame, tuburi
Tehnica de lucru:
a. Testul coagulazei pe lam
Verific prezena coagulazei legate. Pe lam se depune o pictur de ap
distilat (nu soluie salin fiziologic). Suspensionm i omogenizm 1-2
colonii n pictura de ap distilat.
Ateptm circa 10 secunde i urmrim apariia unei eventuale
autoaglutinri (caz n care nu putem interpreta rezultatul testului; trecem
la efectuarea testului coagulrii n tub).
Interpretare:

apariia coagulilor n 10-15 secunde semnific un test pozitiv

absena coagulilor semnific un test negativ / 5% din S. aureus

dau reacii fals negative la testul pe lam, fiind necesar realizarea
testului coagulazei n tub
b. Testul coagulazei n tuburi
Verific prezena coagulazei libere. Pipetm aseptic 0,5 ml de plasm ntrun tub steril. Prelevm o colonie i o descrcm n plasma din tub
(alternativ putem nsmna o colonie de testat n 0,5 ml bulion glucozat,
incubm 18-24 ore la 35-37C i vom amesteca plasma cu suspensia
microbian rezultat dup cultivare).

Incubm tubul timp de 4 ore la 35-37C (pentru unele tulpini reacia poate
fi pozitiv chiar i mai repede de 4 ore). Rezultatul reaciei este examinat
prin nclinarea tubului. Dac reacia este negativ la 4 ore, reincubm
pn la 24 ore.
Atenie, cheagul poate fi lizat destul de rapid dup momentul formrii
(unele tulpini de S. aureus produc fibrinolizin). Din acest motiv, unii autori
recomand examinare tubului test din 30 n 30 minute, n primele 4 ore.
Interpretare:

formarea unui cheag, semnific un rezultat pozitiv

absena cheagului semnific un rezultat negativ

Control de calitate:

Martor pozitiv S. aureus

Martor negativ S. epidermidis

10. Identificarea serologica a unei tulpini bacteriene izolate

prin hemocultura la un bolnav febril
n diagnosticul serologic, n mod obinuit, reaciile utilizate permit
detectarea prezenei Ac n serul de cercetat dar i stabilirea titrului. Totui
exist i cteva exemple de reacii de aglutinare calitative.
1. Aglutinarea pe lam
Reaciile de aglutinare pe lam Huddleson (n diagnosticul
brucelozei) i respectiv Kudicks-Steuer (n diagnosticul tifosului
exantematic) au intrat n istoria medicinei.
Prima dintre reacii o utilizm demonstrativ n cadrul lucrrilor
practice, apariia aglutinatelor fiind clar iar tehnica de lucru foarte simpl.
Pe o lam de microscop depunem o pictur din soluia de Ag
brucelos i n imediata vecintate a acesteia, o pictur de ser de
cercetat. Cu colul unei alte lame amestecm i omogenizm cei 2
reactani. P
rin micri de nclinare a lamei n toate direciile facilitm formarea
complexelor Ag-Ac, n cazul n care n serul de pacient sunt prezeni Ac
anti-Brucella spp. Reacia este pozitiv n cazul n care se remarc
prezena aglutinatelor. Chiar i n perioada n care aceast se utiliza n
diagnostic, o reacie pozitiv pe lam trebuia s fie confirmat prin
aglutinare n tuburi.
Tehnica de aglutinare indirect poate fi utilizat n diagnosticul
serologic al infeciilor produse de Helicobacter pylori, Treponema pallidum
(hemaglutinare pasiv) etc.
2. Aglutinarea n tuburi
Tehnica de aglutinare n tuburi se poate folosi n diagnosticul
serologic al brucelozei (reacia Wright), diagnosticul serologic al infeciilor
produse de Cryptococcus neoformans, diagnosticul serologic al febrei
tifoide etc.

Lund n discuie diagnosticul serologic al febrelor enterice, inclusiv

febra tifoid, sunt necesare urmtoarele: seruri recoltate (n dinamic) de
la pacienii la care se suspicioneaz acest diagnostic, tampon fosfat salin,
baie de ap cu temperatur reglabil, Ag cunoscute (Ag O i Ag H).
Se va lucra cu 2 rnduri de eprubete, un rnd pentru detectarea
prezenei i titrului Ac anti-O, al doilea pentru detectarea prezenei i
titrului Ac anti-H (pentru persoanele n convalescen sau n cazul
suspicionrii strii de purttor vom ncerca s identificm n serul de
cercetat Ac i titrul Ac anti-Vi, de ex. prin hemaglutinare pasiv).
Serul de cercetat, pentru fiecare rnd de tuburi, va fi diluat cu
tampon fosfat salin, n diluii binare. Dac amestecul de ser de cercetat i
diluant va fi n cantitate de 0,5 ml, vom aduga o cantitate similar de Ag,
cte 0,5 ml Ag O n primul rnd de tuburi i respectiv cte 0,5 ml Ag H n al
doilea rnd de tuburi.
Vom proceda n aa fel nct s obinem n primul tub o diluie de
1/20, n al doilea tub 1/40 etc. Un tub va conine doar un amestec de
tampon fosfat salin i soluie Ag (tub martor).
Citirea se va realiza dup incubare, comparnd rezultatul din fiecare
tub cu martorul pentru Ag. Pentru evidenierea reaciei vom agita uor
tuburile.
Aglutinarea H difer de aglutinarea O. Aglutinatul O este mai dens,
mai grunjos, n timp ce aglutinatul H este mai floconos i uor de disociat
prin agitare. Ultimul tub care mai prezint aglutinare vizibil permite
stabilirea titrului reaciei.

11. Identificarea serologica a unei tulpini bacteriene izolate

prin coprocultura de la un bolnav cu sindrom dizenteric
Pe baza structurii antigenice au fost difereniate patru subgrupe (AD) respectiv Shigella dysenteriae (13 serotipuri)
Caractere antigenice:

se utilizeaz seruri imune polivalente pentru subgrup sau seruri

imune specifice de tip, prin reacii de aglutinare pe lam, conform unor
scheme stabilite

n cazul n care o tulpin izolat are un comportament biochimic

sugestiv dar reacia de aglutinare este negativ, trebuie s realizm o
suspensie (destul de dens) din respectiva tulpin, pe care o meninem
timp de 30-60 minute la o temperatur de 100C i ulterior repetm
reacia de aglutinare

Testarea sensibilitii la bacteriofagi (lizotipia) se poate utiliza n

studii epidemiologice sau n scop de cercetare, fiind rezervat
laboratoarelor de referin; schemele de lizotipie au fost utilizate n special
pentru S. flexneri 2a i S. Sonnei
Diagnosticul serologic se realizeaz respectnd principiile generale
ale acestui tip de diagnostic. Reacia Widal a fost imaginat n finalul
secolului al IX-lea i standardizat la mijlocul secolului XX. Serodiagnosticul

Widal, folosind culturi vii de S. typhi nu se mai practic astzi. Cea mai
cunoscut metod utilizabil actual este analiza seric cantitativ,
realizat tot prin tehnica aglutinrii n tuburi. Utilizm serii separate de
tuburi, cte o serie pentru fiecare Ag cunoscut folosit, serul de cercetat
fiind diluat corespunztor protocolului de lucru. Un titru de 1/250 n cazul
Ac anti-O i respectiv 1/2500 n cazul Ac anti-H ar putea fi sugestiv.
Creterea de 4 ori a titrului, la 2 determinri succesive (interval de 710 zile) poate confirma suspiciunea de diagnostic. La persoanele vaccinate
n antecedente diagnosticul serologic nu poate fi utilizat (rezultatele nu
sunt interpretabile) i este strict necesar izolarea n culturi a S. typhi.
Att n cazul bolnavilor, dar mai ales n cazul convalescenilor i
purttorilor a fost recomandat reacia de aglutinare n tuburi pentru
identificarea prezenei i titrului Ac anti-Vi. Se consider c un titru de
peste 1/40 poate fi considerat sugestiv.
Boala diareic acut (BDA) a fost i rmne o entitate patologic
foarte rspndit la nivel mondial.
Sindromul diareic include eliminarea a peste 3 scaune n 24 de ore
iar scaunele au consistena diminuat (pn la emiterea unor scaune
apoase, cu pierderea a pn la 20-30 litri / zi n holer). Materiile fecale
pot avea aspect patologic (apos, mucos, purulent, sanguinolent etc),
culoare modificat, miros particular etc. De regul sindromul diareic
asociaz i alte semne i simptome digestive (dureri abdominale,
tenesme, grea, vrsturi etc) sau generale (febr, stare general
alterat etc).
Foarte important i obligatoriu de reinut este c BDA duce la
pierderi de ap i electrolii iar intervenia cea mai important care trebuie
avut n vedere este reechilibrarea hidroelectrolitic.

12. Caracterizati comportamentul biochimic al unei

enterobacterii. Insamantare pe medii diferentiale
Familia Enterobacteriaceae cuprinde un important numr de genuri
de microorganisme semnificative din punct de vedere medical (28) i
numeroase specii (peste 100, n cazul n care nu lum n considerare
clasificarea genuluiSalmonella n peste 2000 de specii). Dintre genurile
incluse n aceast vast familie, vom aminti
urmtoarele: Escherichia, Shigella, Salmonella, Yersinia,Klebsiella, Proteus,
Citrobacter etc.
Enterobacteriile sunt bacili gram negativi care nu se pot diferenia
prin microscopie optic, mobili cu cili peritrichi (ex. Salmonella
spp.,Proteus spp.), sau imobili (ex. Shigella, Yersinia, Klebsiella),
nesporulai; unele specii prezint capsul (ex. Klebsiella pneumoniae).
Sunt germeni nepretenioi care se pot multiplica pe medii simple,
aerobi facultativ anaerobi, utilizeaz fermentativ glucoza cu sau fr
producere de gaz, sunt oxidazo-negativi, catalazo-pozitivi, reduc nitraii.

Formeaz colonii de tip S, R (n cazul culturilor vechi) sau M (pentru

speciile capsulate), pot fermenta lactoza (ex. Escherichia coli, Klebsiella)
sau sunt lactozo negativi (ex.Salmonella, Shigella, Yersinia).
Pentru izolarea speciilor de enterobacterii putem folosi medii
selective, difereniale i selectivo-difereniale.
Caracterele biochimice sunt eseniale pentru identificarea
enterobacteriilor. Dup examinarea caracterelor de cultur (pe mediile
selectivo-difereniale se poate identifica i comportamentul
enterobacterian n ceea ce privete fermentarea lactozei), prin repicarea
coloniilor suspecte pe medii potrivite (TSI, MIU / MILF, Simmons etc), n
ziua urmtoare se pot examina diferite caractere biochimice (fermentarea
zaharurilor, evidenierea unui anumit metabolit, metabolizarea unui
anumit substrat, utilizarea citratului ca unic surs de carbon, identificarea
unor enzime etc) sau alte caractere fenotipice (ex. motilitatea).
n momentul de fa exist baterii de teste i sisteme
comercialecare permit examinarea unei game extinse de caractere
biochimice (ex. galeriile API). Dorim s menionm c pentru fiecare test
fenotipic exist o serie de variaii care sunt prezentate procentual n tabele
special dedicate.

13.

Testul Elek. Principiu, interpretare

Dubla difuzie Elek
Aceast metod permite depistarea capacitii toxigene a unei
tulpini de Corynebacterium diphteriae. n cazul n care tulpina este
toxigen, toxina va difuza n mediu iar dup unirea cu Ac anti-toxin,
complexele Ag-Ac vor da natere unor linii de precipitare.
ntr-o cutie Petri turnm mediul Elek i dup ce mediul s-a ntrit,
decupm un an pe unul din diametre. n anul respectiv pipetm 0,5 ml
ser antidifteric, ser care conine Ac anti-toxin difteric n concentraie de
1.000 UI / ml. Ac anti-toxin difteric vor difuza n mediu. Dup circa 2 ore
nsmnm perpendicular pe anul cu Ac anti-toxin, de fiecare parte a
anului, o tulpin de Corynebacterium diphteriae toxigen (martor
pozitiv), o tulpin de Corynebacterium diphteriae ne-toxigen (martor
negativ) i tulpini de cercetat, cte un striu (de fiecare parte a anului)
pentru fiecare tulpin.
Incubm la 37 C pentru 48 ore, dar urmrim zilnic apariia culturii i
precipitatului (liniilor de precipitare). De-a lungul liniilor de nsmnare
apare cultur bacterian. Din cultura de Corynebacterium diphteriae
toxigen, toxina (Ag) difuzeaz n mediu. Unirea dintre Ag i Ac duce la
formarea unor complexe Ag-Ac care precipit, iar n mediu vor aprea linii
de precipitare n unghiurile dintre cultur i anul cu Ac anti-toxin.

n cazul n care apar linii de precipitare n unghiul dintre una dintre

tulpinile de cercetat i anul cu Ac anti-toxin, respectiva tulpin este
toxigen. Reacia va fi negativ pentru martorul negativ i pentru tulpinile
de cercetat ne-toxigene

14. Reactia Ascoli. Principiu, mod de lucru, interpretare

Reacia de precipitare n inel, const n punerea n contact a Ag i Ac
astfel nct s nu se amestece; reacia care apare la interfaa dintre Ag i
Ac se concretizeaz printr-un inel de precipitare albicios. Se utilizeaz
pentru identificarea originii petelor de snge (reacia Uhlenhut, n
medicina legal) i pentru identificarea provenienei unor preparate pe
baz de carne.
Demonstrativ, n cursul lucrrilor practice, reacia de precipitare n
inel (reacia Ascoli) se poate utiliza pentru identificarea prezenei
antigenului crbunos (Ag obinut de la Bacillus anthracis). Istoric, soluia
de antigen se prepara pornind de la organe (de ex. splin) recoltate de la
un animal care a decedat i pentru care se suspecta c decesul a fost
produs de o infecie generalizat cu Bacillus anthracis. Fragmentul de
organ se mojara n soluie de clorur de sodiu steril, adugndu-se
ulterior cteva picturi de acid acetic, apoi se meninea la temperatura de
fierbere timp de 5-10 minute.
Dup decantarea i alcalinizarea cu NaOH, urma filtrarea i rezulta
soluia antigenic. Din punct de vedere tehnic vom utiliza 3 tuburi, 1
pentru reacie i 2 tuburi martor.
n primul tub martor vom pipeta 0,5 ml ser anticrbunos i 0,5 ml
soluie salin fiziologic iar n al doilea tub martor vom pipeta 0,5 ml ser
normal de cal i 0,5 ml soluie de antigen.
n ceea ce privete tubul de reacie trebuie s pipetm nti 0,5 ml
din serul anticrbunos, urmnd ca soluia de antigen (n cantitate de 0,5
ml) s fie pipetat foarte lent, eventual prin scurgere pictur cu
pictur pe peretele interior al tubului, n aa fel nct cele 2 soluii s nu
se amestece. n cazul reaciei pozitive (prezena Ag crbunos n soluia
antigenic), dup circa 5 minute, la interfaa dintre cei 2 reactivi apare un
inel de precipitare.
15. Reactia Bordet-Wasswerman. Principiu, interpretare
Reacia de fixare a complementului se poate folosi att pentru
identificarea Ag ct i n diagnosticul serologic. Pentru c nu urmeaz s
discutm pe larg prima variant, vom enumera doar cteva dintre
exemple, RFC permind identificarea unor Ag rickettsiene, chlamydiene,
virale etc.
Principiu
RFC se bazeaz pe proprietatea sistemului C de a se fixa pe
complexul imun Ag-Ac. n prima faz a reaciei se introduce serul de
cercetat iar dac acest ser conine Ac specifici fa de Ag cunoscut se va
forma un complex Ag-Ac, urmat de fixarea C, care se va activa pe calea

clasic i nu va mai fi disponibil pentru a se fixa pe sistemul hemolitic

indicator (hematii + Ac-antihematie).
n cazul n care serul de cercetat nu conine Ac specifici fa de Ag
cunoscut, nu va avea loc formarea unui complex Ag-Ac n prima etap a
RFC. Dup introducerea n reacie a sistemului hemolitic indicator,
hematiile i Ac-antihematie se vor cupla, vor forma un complex imun iar C
liber se va fixa pe acesta. Dup fixare va urma activarea C i
respectiv liza hematiilor, hemoliza putnd fi examinat cu ochiul liber.
Materiale i reactivi necesari:

serul de cercetat recoltat de la pacientul suspect sau o pereche de

seruri, obinute n dinamic

seruri de referin (martor pozitiv i negativ)

Ag cunoscut (suspensie corpuscular sau soluie coloidal, dup

caz)

sistemul C obinut din ser proaspt sau conservat recoltat de la

cobai

sistemul hemolitic indicator format din

hematii de berbec, soluie 4%, valabil timp de o sptmn la 4C

ser hemolitic anti-hematii de

baie de ap cu temperatur reglabil

plci cu godeuri, tuburi de hemoliz, pipete.

Interpretare:
Iniial se verific rezultatele aprute pentru martori (fie c este vorba
de o metod cantitativ sau calitativ); spre ex. n cazul metodei
calitative, n tubul martor pentru serul de cercetat trebuie s fie hemoliz,
la fel ca i n tuburile martor pentru Ag, C i ser sigur negativ. n tuburile
martor sigur pozitiv i martor pentru sistemul hemolitic, nu trebuie s fie
hemoliz.
n tuburile cu serul de cercetat, dac apare hemoliza, nseamn c
nu exist Ac iar testul este negativ (lichidul din tub va avea un aspect
rou, limpede).
Testul este pozitiv atunci cnd n tuburile cu ser de cercetat nu apare
hemoliz, hematiile se depun formnd un buton n partea inferioar a
tubului (n serul de cercetat exist Ac). Pentru a stabili diagnosticul final,
este necesar ca RFC-BW s fie confirmat prin reacii specifice

16. Exudatul faringian. Mod de recoltare, insamantare,

interpretare
Exsudatul faringian

se recolteaz preferabil dimineaa nainte ca pacientul s mnnce

i fr s se fi splat pe dini, fr s fi utilizat gargarisme cu diferite
soluii (iar dac aceste condiii nu au fost respectate, recoltarea se va face
dup minim 4 ore)


pacientul st pe scaun, cu faa spre sursa de lumin i gtul n
uoar extensie

ne aezm puin lateral fa de pacient pentru a evita contaminarea

cu picturi eliminate n cursul unui eventual acces de tuse (de preferin
vom purta masc i ochelari)

deprimm baza limbii cu ajutorul unui apstor de limb steril i n

condiii de iluminare adecvat examinm faringele posterior, pilierii,
amigdalele pentru a sesiza care sunt zonele inflamate (roii, cu depozite,
ulceraii etc) i eventualele depozite purulente

utilizm utilizm tampoane cu vat obinuite

un tampon va fi utilizat pentru examen microscopic direct

un tampon va fi utilizat pentru nsmnare pe medii de cultur

n cazul suspicionrii difteriei se vor utiliza 3 tampoane

solicitm pacientului s pronune vocala A i printr-o micare de

tergere, circular, ferm, recoltm secreia de la nivel faringian,
amigdalian insistnd n zonele unde exist ulceraii, depozite (n cazul n
care se remarc prezena unei false membrane o detam cu grij nspre
periferie i recoltm secreia care exist sub aceast structur)

trebuie s evitm atingerea bazei limbii sau a palatului moale

este de preferat utilizarea imediat a p.p., sau n cel mult 1-3 ore; n
cazul n care acest lucru nu este posibil, tamponul va fi trimis ctre
laborator n mediu de transport
Insamantare

notm pe placa cu mediu de cultur data inoculrii, numrul de ide

ntificare i tipul produsului (tipul produsului poate fi inclus printrun simbol n numrul unic de identificare) nu vom
mai nota aceast etap la prezentarea urmtoarelor tehnici dar menion
m acum faptul c este
obligatorie, de fiecare dat alte lucruri cu importan general, menionat
e la tehnica obinerii
coloniilor izolate prin epuizarea inocului cu ansa bacteriologic rmn vala
bile

scoatem tamponul din tubul protector cu primele trei degete de la

mna dreapt

flambm gura tubului protector i l aezm pe un stativ

cu mna stng lum o plac Petri (care nu mai prezint lichid de c

ondens interior) pe
care o aezm pe mas cu capacul n jos i mediul n sus

tot cu mna stng deschidem placa iar cu dreapta descrcm tam

ponul ncrcat cu
produs patologic (exist mai multe modaliti de descrcare a tamponului,
dintre care vom prezenta dou)

descrcm tamponul prin rulare, pe toate feele pe o raz a plcii, urmnd

ca s dispersm
produsul cu o baghet de sticl n L, steril, pe toat suprafaa plcii
descrcm tamponul prin rulare, pe toate feele pe un cadran al plcii, ur
mnd ca s
dispersm produsul cu ansa bacteriologic n celelalte cadrane, ca n meto

da pentagonului
deschis (dup nsuirea tehnicii, pentru economie, se poate realiza cultiva
rea pe jumtatea unei plci).

17.

Urocultura. Mod de recoltare, insamantare, interpretare

Recoltarea i transportul produsului patologic
n ITU se pot recolta urin, snge (ex. n pielonefrita acut) sau chiar
i LCR. n continuare vom discuta despre recoltarea i transportul urinei.
n afar de recomandrile generale menionate anterio, trebuie s
subliniem unele aspecte particulare.

n cazul n care nu se poate recolta prima urin de diminea,

trebuie ateptat pentru recoltare 3-4 ore dup miciune

Recoltarea se realizeaz dup splarea cu ap i spun a organelor

genitale i a perineului; exist recomandri specifice pentru sexul feminin
i masculin i respectiv pentru copilul mic

Este preferabil ca recoltarea s aib loc ntr-un spaiu corespunztor

n apropiere de laborator iar personalul medical trebuie s explice i
eventual s asiste recoltarea

Este contraindicat recoltarea urinei la domiciliu; dup recoltare, n

cazul n care urina nu este prelucrat imediat (sau n cel mult 30 de
minute dup recoltare), p.p. trebuie meninut la temperatura frigiderului
iar transportul trebuie realizat la +4 C

De regul se recolteaz urina din mijlocul jetului; dup splarea

organelor genitale i a perineului, prin miciune se elimin circa 100 ml
urin i abia apoi se recolteaz 20-50 ml (preferabil 50 ml) urin n
recipientul steril, dup care miciunea continu

Exist i alte tehnici de recoltare, neinvazive sau invazive (puncie i

aspiraie suprapubian, cateterizare uretral, cu riscurile respective).
Examinarea macroscopic i microscopic a urinei
Realizm iniial examenul macroscopic; p.p. poate fi tulbure,
opalescent, poate prezenta un anumit miros etc. n vederea examenului
microscopic al urinei omogenizm urina prin rsturnare, de 2-3 ori.
Punem o pictur de urin pe lam, acoperim cu o lamel i examinm cu
microscopul cu imersie (sau microscopul cu contrast de faz). n cazul n
care identificm prezena a cel puin unei bacterii pe fiecare cmp, n
fiecare dintre 5 cmpuri succesive, putem cu o bun aproximaie s
considerm c avem o bacteriurie de 105 bacterii / ml. Alternativ se poate
utiliza preparatul colorat Gram.
Examenul sedimentului urinar permite vizualizarea de celule
epiteliale (malpighiene, vezicale, uretrale etc), celule sanguine (leucocite,
hematii), cilindrii urinari (hialini, leucocitari, eritrocitari, epiteliali, granulari
etc), cristale urinare, levuri
Cultivarea urinei
n mod obinuit, pentru cultivare putem utiliza 3-4 medii diferite. Din
motive de economie am putea nsmna o jumtate de plac cu mediu
MacConkey (fr cristal violet), o jumtate de plac cu geloz-snge i
cte un sector de plac cu mediu agar telurit i respectiv agar cu eozin i
albastru de metilen (EMB) n cazul n care examenul microscopic al urinei

este pozitiv. Dac examenul microscopic este negativ, nsmnm doar o

jumtate de plac Petri cu mediu MacConkey.
Interpretarea rezultatelor uroculturii cantitative

Izolarea unei bacterii cu o concentraie de peste 105 / ml de urin

confirm ITU la brbat sau la femeie (cu simptome caracteristice)

Izolarea a dou bacterii diferite, fiecare cu o concentraie de peste

105 / ml de urin, impune repetarea recoltrii i nsmnrii; n cazul n
care rezultatul este similar i pentru a doua prob de urin este posibil
ITU mixt (n caz contrar este o foarte probabil contaminare)

Izolarea a trei bacterii diferite, chiar i n cazul n care concentraiile

pentru fiecare n parte depesc 105 / ml de urin, impune repetarea
analizei; extrem de probabil este vorba de o contaminare sau de un p.p.
recoltat cu mai mult timp n urm i meninut la temperatura camerei i nu
la frigider

Izolarea unei bacterii cu o concentraie de 104 / ml de urin conduce

la recomandarea repetrii analizei

Lipsa multiplicrii bacteriene sau dezvoltarea de UFC n concentraie

de 103 / ml de urin reprezint o urocultur negativ
18. Coprocultura. Mod de recoltare, insamantare,
interpretare
Recoltarea i transportul materiilor fecale
Se pot recolta i examina:

scaunul emis spontan reprezint produsul patologic utilizat cel mai

frecvent. Defecaia are loc ntr-un recipient de carton sau ntr-un container
din material plastic de unic ntrebuinare (care poate fi apoi decontaminat
i eliminat fr probleme). n acelai timp efectum i examinarea
macroscopic a p.p. din punctul de vedere al mirosului, culorii sau
aspectului.
.
Utilizm pentru prelevare linguria recoltorului alegnd poriuni
care permit cu o mai mare ans izolarea agentului patogen (fragmente
mucopurulente, poriuni cu snge, flocoane riziforme etc) sau poriuni
diferite dintr-un scaun n care nu se remarc aspectele menionate
anterior. Prelevm o cantitate de aproximativ 1 gram pe care o
suspensionm n mediul de transport (minim 2 ml n cazul scaunelor
apoase).

tamponul rectal este recomandat n cazul unei infecii cronice cu

Shigella spp

sonda Nelaton se poate utiliza atunci cnd urmrim recoltarea p.p.

de la nivelul colonului sigmoid. Introducem cu blndee sonda pn la
nivelul dorit (circa 10-12 cm la copil i respectiv circa 15-20 cm la adult),
adaptm la cellalt capt al sondei o sering i aspirm p.p.de la nivel
sigmoidian. Introducem p.p. n mediul de transport.
n cazul n care p.p. nu poate fi prelucrat imediat sau n maxim 1 or,
utilizm un mediu de transport, transportul la rece (+4 C) sau transportul
n mediu de transport meninut la 4 C. Cel mai frecvent utilizm mediul
Cary-Blair.
Acest mediu asigur supravieuirea enterobacteriilor patogene timp
de 24-48 de ore, inhibnd n acelai timp multiplicarea florei de asociaie.

Examinarea materiilor fecale

Materiile fecale sunt examinate macroscopic i microscopic. Din
punct de vedere microscopic, de fiecare dat se vor realiza preparate
native (ntre lam i lamel). Materiile fecale sunt suspensionate ntr-o
pictur de lugol sau de albastru de metilen 1% iar preparatul se va
examina iniial cu obiectivul 10, apoi cu obiectivul 40.
Cultivarea materiilor fecale
n mod obinuit, pentru cultivare vom utiliza 3 medii diferite,
respectiv o eprubet cu bulion selenit acid de sodiu i 2 plci Petri, una cu
mediu cu selectivitate sczut (ex. Mac Conkey) i alta cu mediu cu
selectivitate medie (ex. ADCL sau XLD). Aceste medii selective sunt n
acelai timp i medii difereniale.
Alegem fragmente caracteristice din p.p. (mucus, puroi etc) i
nsmnm 2-3 anse n mediul cu bulion selenit (mediu de mbogire n
special pentru Salmonella spp.). Realizm o suspensie omogen n mediul
lichid. Prelevm o ans (sau o pictur) din suspensie i o depunem pe
mediul MacConkey. ntindem p.p. n striuri paralele pe o jumtate de plac,
pn aproape de marginile plcii fr s le atingem. Fr s sterilizm
ansa, atingem ultimile 3-4 striuri i dispersm p.p. n alte striuri paralele,
perpendiculare pe primele, pe jumtate din mediul disponibil, pn
aproape de marginile plcii fr s le atingem. Atingnd din nou ultimele
3-4 striuri, dispersm p.p. n mod similar pe mediul nc nensmnat.
Incubm timp de 18-24 de ore la 35-37 C.
n ziua urmtoare, pornind de la tubul cu bulion selenit nsmnm
aa cum am menionat mai sus o plac cu MacConkey i o plac cu ADCL
(sau XLD); incubm aceste plci timp de 18-24 de ore la 35-37 C.
Examinm plcile nsmnate precedent n vederea selectrii coloniilor
suspecte.
Pentru interpretare vom utiliza diferitele tabele disponibile n
tratatele de specialitate sau recomandrile productorilor n cazul utilizrii
unor sisteme comerciale de diagnostic. Pentru tulpinile considerate a fi
implicate patogenic vom realiza studiul sensibilitii la antibiotice i
chimioterapice, de regul prin metode difuzimetrice (antibiograma
difuzimetric standardizat, comparativ, E test).