STELA-GABRIELA JELEA MARIAN JELEA

CITOLOGIE HISTOLOGIE EMBRIOLOGIE

EDITURA UNIVERSITII DE NORD Baia Mare, 2007

7

CUPRINS

PREFA .............................................................................................. CAPITOLUL I - CITOLOGIE (Marian Jelea) .. 1.1. Scurt istoric al cercetrilor de citologie ..... 1.2. Celula ........ 1.2.1. Caracterele morfologice generale ale celulelor ... 1.2.2. Structura i ultrastructura celulei ..... 1.2.2.1. Membrana celular ..... 1.2.2.2. Citoplasma ...... 1.2.2.3. Nucleul ....................... 1.2.3. Compoziia chimic a celulei ....... 1.2.4. Adeziunea celular ... 1.2.4.1. Jonciuni intercelulare .... 1.2.4.2. Matricea extracelular ........ 1.2.4.3. Receptorii de membran .................... CAPITOLUL II - DIVIZIUNEA CELULAR (Marian Jelea) ..... 2.1. Diviziunea direct (amitoza) ..... 2.2. Diviziunea indirect .. 2.2.1. Diviziunea mitotic .. 2.2.2. Diviziunea meiotic ..... 2.2.2.1. Prima diviziune meiotic (meioza I) ...... 2.2.2.2. A doua diviziune meiotic (meioza II) ... CAPITOLUL III - HISTOLOGIE (Stela-Gabriela Jelea) ...... 3.1. Scurt istoric al cercetrilor de histologie ... 3.2. esuturile ... 3.2.1. esutul epitelial ... 3.2.1.1. Epitelii de acoperire ....... 3.2.1.1.1. Epitelii simple ... 3.2.1.1.2. Epitelii stratificate . 3.2.1.2. Epitelii glandulare .. 3.2.1.2.1. Glande exocrine 3.2.1.2.2. Glande endocrine ...... 3.2.1.2.3. Glande mixte ..... 3.2.1.3. Epitelii senzoriale (senzitive) . 3.2.2. esutul conjunctiv ...

5 7 7 10 10 12 12 22 41 50 52 52 56 57 59 59 60 60 65 66 69 71 71 73 75 77 77 80 83 84 93 94 95 96

3.2.2.1. Clasificarea esuturilor conjunctive 3.2.2.2. Varieti de esuturi conjunctive .... 3.2.2.2.1. esuturi conjunctive embrionare .. 3.2.2.2.2. esuturi conjunctive propriu-zise (adulte) ... A. esut conjunctiv general .... B. esuturi conjunctive specializate ... 3.2.2.2.3. esut conjunctiv semidur ...... 3.2.2.2.4. esut conjunctiv dur ..... 3.2.2.2.5. Sngele .......... 3.2.3. esutul muscular ...... 3.2.3.1. Compoziia biochimic a muchiului ..... 3.2.3.2. Clasificarea esutului muscular ...... 3.2.3.2.1. esutul muscular striat .. 3.2.3.2.2. esutul muscular cardiac .. 3.2.3.2.3. esutul muscular neted . 3.2.4. esutul nervos ...... 3.2.4.1. Neuronul . 3.2.4.2. Celulele gliale . CAPITOLUL IV - EMBRIOLOGIE (Stela-Gabriela Jelea)... 4.1. Scurt istoric al cercetrilor de embriologie ... 4.2. Gametogeneza ... 4.2.1. Spermatogeneza ... 4.2.1.1. Etapele spermatogenezei .... 4.2.2. Ovogeneza ... 4.2.2.1. Etapele ovogenezei ..... 4.3. Fecundaia ..... 4.4. Segmentarea ...... 4.4.1. Segmentarea oului la Amphioxus . 4.4.2. Segmentarea oului la om ..... 4.4.2.1. Derivatele foielor embrionare ... 4.4.2.2. Dezvoltarea formei exterioare a embrionului .... 4.4.2.3. Anexele embrionare ....... 4.4.2.4. Perioadele evoluiei ontogenetice ...... BIBLIOGRAFIE ...........

110 111 111 112 112 117 119 124 137 152 152 152 152 161 164 166 166 178 18I 18I 183 183 184 187 192 194 195 197 200 208 209 210 211 213

Capitolul I CITOLOGIE

1.1. SCURT ISTORIC AL CERCETRILOR DE CITOLOGIE

Citologia (gr. cytos cavitate i logos tiin) este tiina care studiaz structura, ultrastructura, compoziia chimic i funciile celulei. Apariia i dezvoltarea citologiei ca tiin a fost legat de descoperirea i perfecionarea microscopului, aparatul care a permis cercetarea lumii invizibile. Opticianul olandez Zacharias J anssen (1580-1638) este creditat de obicei ca fiind cel ce a prezentat, n anul 1595 la Middelbourg, primul microscop, compus dintr-un tub simplu cu cte o lentil la fiecare capt. Fizicianul englez Robert Hooke (1635-1703) a publicat n anul 1665 cartea sa Micrographia, care coninea observaii microscopice, telescopice i cteva imagini biologice originale. El a introdus n biologie termenul de celul, n urma observaiilor sale pe o seciune prin plut, deoarece textura plutei i amintea de chiliile clugrilor, numite cellula (lat. cellula cmru). Suberul fiind constituit din celule moarte (fr coninut viu), Hooke a considerat membrana ca fiind partea esenial a celulei, teorie care a dinuit aproape 170 de ani, pn cnd H. Mohl, n anul 1833, stabilete c membrana este un produs al activitii protoplasmei. Anton van Leeuwenhoeh (1632-1723) deschide calea ctre studiul lumii microscopice n biologie, n anul 1648 cnd prezint la Amsterdam primul su microscop ale crui lentile aveau o putere de mrire de trei ori. Cu ajutorul microscopului inventat de el, Anton van Leeuwenhoek descoper mai nti protozoarele (1674), apoi bacteriile (1676), spermatozoizii (1677) i face observaii asupra celulelor sanguine i a fibrelor musculare (1682). n 1831, Robert Brown (1773-1858) a descoperit nucleul, studiind celulele orhideelor. Tot el a observat i micarea moleculelor din masa celulelor, numit astzi micare brownian. Felix Duj ardin (1801-1860) a descris, n anul 1835, coninutul animalelor unicelulare ca fiind o substan gelatinoas,

10

omogen, elastic, contractil, insolubil n ap i fr urme de organizare. Nucleolul apare ca o formaiune corpuscular distinct, vizibil n majoritatea celulelor aflate n interfaz. A fost pus n eviden la microscopul optic de G. Valentin (1810-1883), n anul 1836. Perfecionarea microscopului i aprofundarea studiului structurii celulare i-a condus pe Matthias J acob Schleiden (1804-1881) i Theodor Schwann (1810-1882), la enunarea teoriei celulare n anul 1839. n 1840, J ohannes Pur kinj e (1787-1869) a dat coninutului celular denumirea de protoplasm. Mai trziu, protoplasma care nconjoar nucleul a fost numit citoplasm. n anul 1858 Rudolf Virchow n lucrarea Patologia celular fundamenteaz teoria celular n patologie, afirmnd c mbolnvirea organismului se datoreaz alterrii funciilor celulare. Dei a pus bazele tiinifice ale anatomiei patologice, n concepia lui Virchow se ntlnesc o serie de limite i anume: celulele se nasc numai din celulele preexistente (omnis cellula e cellula) i viaa nu se manifest dect n materia vie, cu organizare celular. Fizicianul italian Giovanni Battista Amici (1786-1863), inventeaz n anul 1840 microscopul cu imersie n ulei. Aceast tehnic a determinat creterea calitii observaiilor microscopice prin minimizarea aberaiilor produse de lumin, ceea ce a contribuit la o mai uoar cercetare a celulelor. Perfecionarea microscopului fotonic, folosirea condensatorului i inventarea microtomului de ctre W. Hiss, n anul 1870, au permis studierea pe seciuni subiri a organelor luate n studiu. ntre anii 1870-1910 au avut loc numeroase descoperiri n citologie: 1875 - 1878 a fost descris pentru prima dat centrul celular de Walther Flemming (1843-1905) i Edouard van Beneden (1845-1910); 1873 - structura celular a sistemului nervos de Camillo Gol gi (1843-1926) i Ramon Caj al (1852-1934); 1879-1882 Walther Flemming (1843-1905) descrie i numete cromatina, mitoza i spiremul. Descrie diviziunea celular la salamandr, studiaz cromozomii i clivarea lor n timpul mitozei; 1887 - meioza de Edouard van Beneden (1845-1910) i Eduard Strasbur ger (1844-1912) n anul 1894; 1890 - citologia partenogenezei de Oskar Hert wig (1849-1922); 1892 - descrie spermatogeneza i ovogeneza Teodor Heinrich Boveri (1862-1915);

11

1893 - membran nuclear a fost descris pentru prima dat de Os kar Hert wi g (1849-1922); 1896 - Camillo Gol gi (1843-1926) descoper aparatul Golgi; 1897 - mitocondriile au fost descoperite de Carl Benda (1857-1933). Cromozomii au fost descrii de W.F.B. Hoff meis ter (1824-1877), n anul 1848, iar denumirea lor a fost atribuit lui Heinrich W. von Waldeyer (1836-1921), n anul 1888 etc. Utilizarea unor substane fixatoare i a coloranilor, paralel cu perfecionarea tehnicilor de fixare i colorare a materialelor biologice, a contribuit la progresul cercetrilor tiinifice. Ulterior, descoperirea microscopului electronic n anul 1931 de Ernst August Friedrich Rus ka (1906-1988), perfecionarea lui i folosirea metodelor de analiz chimic i fizic au permis cunoaterea ultrastructurii celulare, compoziiei chimice i a organizrii moleculare a organitelor celulare. Astfel: microzomii au fost izolai de Albert Claude (1899-1983), n anul 1937; reticulul endoplasmatic a fost descris n perioada 1952-1954 de K. Porter (1912-1997) i de Geor ge Emil Palade (1912-); ribozomii sau granulele lui Palade au fost descoperii iniial de Palade, n anul 1953, care i-a numit microzomi, pentru ca ulterior R. Roberts, n anul 1958, s-i denumeasc ribozomi; lizozomii au fost descoperii n perioada 1949-1955 de Christian Ren de Duve (1917-), P. Baudhuin, H. Beaufay i Alex Benj amin Novi koff (1913-1987); peroxizomii au fost identificai n 1954, de J . Rhodin n celulele renale. n Romnia studiile citologice i au nceputurile, n jurul anului 1900, ca urmare a cercetrilor realizate la Bucureti, n cadrul Facultii de tiine, de ctre profesorul universitar dr. Di mitrie Voinov (1867-1951) i la Universitatea din Cluj-Napoca de ctre profesorul universitar dr. Ioan A. Scriban (1879-1937). La dezvoltarea citologiei se nscriu contribuiile importante aduse i de ali cercettori romni, precum Gh. Dornescu, I. Steopoe, I. Mihalca, V. Radu, V. Preda etc.

12

1.2. CELULA
1.2.1. Caracterele morfologice generale ale celulelor Celula (lat. cellula - camer) este prima treapt complex de organizare a materiei vii. Ea reprezint unitatea structural i funcional a organismelor animale. Toate celulele organismului provin din celula-ou (zigotul). Prin diviziuni mitotice, repetate, aceasta se fragmenteaz n celule fiice, cu aceeai cantitate de ADN i acelai cariotip. Dimensiunile celulelor sunt exprimate n microni (). Majoritatea celulelor au diametrul cuprins ntre 20 i 40 . Celulele nervoase din scoara cerebelului i elementele figurate ale sngelui (limfocitele 7-9 , hematiile 7 ) sunt cele mai mici celule din corpul uman. Cele mai mari celule din organism sunt fibrele musculare striate, cu o lungime de 10-15 cm, ovulul cu diametrul de 200 i neuronii multipolari din coarnele anterioare medulare cu diametrul de 150 . Pentru fiecare categorie de celule dimensiunile sunt relativ constante, indiferent de specie i de mrimea organului. Forma celulelor variaz n funcie de specializarea lor, de procesele fizicochimice din protoplasm i de condiiile mecanice din esuturile pe care le formeaz. Iniial toate celulele au form globular dar, n cursul diferenierii celulare, ele i pot schimba forma. Astfel, n timp ce unele i pstreaz forma sferic, altele se alungesc i devin fusiforme sau filamentoase, altele devin stelate, cilindrice, poliedrice etc (fig. 1). Forma sferic este ntlnit frecvent la celulele care se gsesc ntr-un mediu lichid (leucocitele) sau ntr-un esut cu substan intercelular bogat. Celule de form poliedric (cubice, prismatice, poligonale, pavimentoase) se gsesc n: epiteliile mucoasei tubului digestiv, mucoasei respiratorii, mezoteliul seroaselor etc. n esutul nervos i conjunctiv se ntlnesc celule cu prelungiri. Forma fusiform este specific fibrei musculare netede, iar cea cilindric fibrei musculare striate. n anumite condiii fiziologice unele celule pot s-i schimbe forma, de exemplu celula prismatic din epiteliul intestinal se poate transforma ntr-o celul caliciform care secret mucus. Volumul celulelor variaz ntre 200-10.000 3, fiind constant pentru acelai tip de celul.

13

Numrul celulelor n organismele pluricelulare difer la indivizii ce aparin unor specii diferite. n cadrul aceleai specii diferenele numerice sunt determinate de masa corporal i mrimea organelor. La om numrul de celule care alctuiesc fiecare organ este diferit. Astfel, n creierul uman numrul celulelor se ridic la aproximativ 17 miliarde, iar globulele roii sunt n numr aproximativ de 25.000 miliarde. n ceea ce privete raporturile celulelor ntre ele, acestea pot fi celule libere (elementele figurate ale sngelui i ale limfei) i celule asociate, fixe care formeaz esuturile epitelial, conjunctiv, muscular i nervos.

Fig. 1. Forma celulelor (dup Botrel i colab., 1982): A - celule sferice: 1 - celul sferic cu nucleu sferic - ovocit; 2 - celul sferic cu nucleu lenticular - adipocitul fibrocitar; 3 - celul sferic cu nucleu sferic cu nucleoli - limfocit; 4 - celul sferic cu nucleu polilobat polimorfonuclearul neutrofil; 5 - celul sferic cu nucleu sferic - limfocitul mic; 6 - celul sferic cu granulaii specifice i nucleul bilobat polimorfonuclearul acidofil; 7 - elemente anucleate de mamifer - hematii. B - celule poliedrice: 8 - celul prismatic cu platou striat - enterocitul; 9 celul prismatic cu cili i celul caliciform (epiteliul mucoasei respiratorii); 10 - celul poligonal - hepatocit (ficat); 11 - celul poliedric cu granulaii specifice - mastocit; 12 - celul pavimentoas cu nucleu turtit (mezoteliul seroaselor); 13 - celul piramidal cu nucleu sferic (acinul pancreatic); 14 - celul cubic cu nucleu sferic. C - celule cu ramificaii: 15 - celul multiramificat cu nucleu oval i picior vascular - glia protoplasmatic; 16 - neuron multipolar stelat din coarnele anterioare ale mduvei; 17 celul multiramificat cu nucleu sferic - microglia. D - celule cu alte forme: 18 - celul cilindric - fibra muscular striat; 19 celul fusiform - fibra muscular neted; 20 - celul elipsoidal eritrocitul de pasre.

14

1.2.2. Structura i ultrastructura celulei n ceea ce privete structura microscopic, celula este alctuit din trei componente principale: membran celular, citoplasm i nucleu (fig. 2).

Fig. 2. Schema structurii electronomicroscopice a celulei animale (dup Niculescu i col ab., 2003).

1.2.2.1. Membrana celular (membrana plasmatic, plasmalema) Membrana celular reprezint o structur complex ce delimiteaz i compartimenteaz coninutul celular. Membrana celular asigur existena vieii celulare prin desfurarea metabolismului intracitoplasmatic pe baza schimburilor continue de electrolii, ap i metabolii, ce au loc ntre lichidele extracelulare i lichidul protoplasmatic. n acelai timp, membrana celular, asigur nsi existena organismului prin proprietatea de adezivitate, care permite celulelor s se asocieze i s organizeze esuturile i organele corpului (Diculescu i colab., 1970).

15

Noiunea de membran celular a aprut la sfritul secolului al XIX-lea, n perioada 1885-1888, n lucrrile lui Hugo de Vries (1848-1921) i W. Pfeiffer (1845-1920). Cei doi autori au descris ns, membrana celulozic a plantelor (peretele celular), groas de 0,5 , care nconjoar celula vegetal, la exteriorul adevratei membrane plasmatice. Microscopia fotonic nu oferea posibilitatea examinrii membranei plasmatice, dat fiind c grosimea ei atinge numai n mod excepional 0,1-0,2 . n decursul anilor, pornindu-se de la cunotinele referitoare la compoziia chimic i la proprietile fizico-chimice ale plasmalemei, au fost elaborate diferite modele ipotetice ale ultrastructurii i organizrii moleculare ale acesteia. Primul model al structurii moleculare a membranei, acceptat de majoritatea oamenilor de tiin ai vremii, a fost propus n anul 1935, J ames F. Danielli (1911-1984) i Hugh A. Davson (1909-1996). Ei au imaginat o structur n sandwich a membranei celulare, format dintr-un strat bimolecular fosfolipidic cuprins ntre dou straturi subiri proteice (Danielli i Davson, 1935). Fosfolipidele sunt asociate prin grupri hidrofobe, care sunt orientate fa n fa, iar gruprile hidrofile sunt orientate spre straturile proteice. n timp modelul a devenit inadecvat, deoarece nu mai reuea s explice rezultatele cercetrilor ulterioare. n anul 1957, J .D. Rober tson a propus o variant modificat a modelului, Danielli-Davson, bazat pe studii de microscopie electronic pe teaca de mielin. Examinat la microscopul electronic, pe seciuni ultrafine, n condiii tehnice standard, membrana plasmatic apare ca o formaiune triplu stratificat, cu o grosime de 7,5-10 nm, alctuit din dou straturi ntunecate care separ un strat mai clar. Aceast structur s-a dovedit a fi prezent i n cazul altor membrane. Robertson a denumit aceast structur unitate de membran (unit membrane). Pornind de la aspectul de triplu strat, Robertson (1957) a elaborat modelul conform cruia stratul intern bimolecular de fosfolipide este acoperit pe ambele laturi de cte un strat de proteine fibrilare (fig. 3).

Fig. 3. Modelul membranei celulare elaborat de Robertson: X, Y proteine.

16

Proteinele se dispun pe suprafaa lipidelor n aa numita configuraie de tip beta (foaie pliat). Proteinele din stratul extern difer de cele din stratul intern, membrana avnd astfel o structur asimetric (Ionescu - Varo i colab., 1981). Dei a reuit s satisfac nevoia de explicaii la nivelul de cunoatere a perioadei respective, modelul propus de Robertson a fost infirmat ulterior de noi constatri acumulate n urma cercetrilor cu privire la ultrastructura celulei: membrana celular nu conine o cantitate suficient de proteine pentru a acoperi complet stratul bimolecular lipidic; proteinele de membran nu au configuraie fibrilar, ele sunt globulare i au proprieti amfipatice (posed pe suprafaa lor att regiuni polare, ct i regiuni nepolare); unele proteine sunt situate pe suprafaa dublului strat lipidic, n timp ce altele sunt inclavate n el sau l strbat integral. Studii ulterioare (J.D. Robertson, 1966; F.S. Sj strand, 1968, citai dup Anghel, 1979) au artat c structura trilamelar nu se ntlnete la toate membranele, n structura unora evideniindu-se o structur globular, subunitar. Modelul mozaicului fluid, elaborat de J onathan Singer i Garth Nicolson n 1972, propune o aezare caracteristic a componentelor specifice ale membranei (lipide, proteine i glucide), furniznd o explicaie satisfctoare a proprietilor generale ale biomembranelor. Dup acest model, fosfolipidele formeaz un film fluid, discontinuu, n care plutesc proteine globulare, n timp ce glucidele interacioneaz fie cu unele, fie cu altele (fig. 4).

Fig. 4. Modelul mozaicului fluid al organizrii membranelor celulare, propus de Singer i Nicolson (dup Ionescu-Varo i colab., 1981).

17

Compoziia chimic a membranei celulare Lipidele sunt reprezentate de fosfolipide, molecule amfipatice cu structur complex, avnd o extremitate polar, hidrofil (hidrosolubil n stare izolat), alctuit dintr-o grupare fosfat (PO4-) i ali constitueni, legai printr-o molecul de glicerol care formeaz un fel de punte de cozile moleculei, reprezentate de doi acizi grai, ce constituie regiunea nepolar, hidrofob (insolubil n ap) a moleculei. n contact cu apa, gruprile polare poart de regul sarcini electrice. Deoarece cele dou extremiti ale moleculelor lipidice au solubiliti incompatibile, n suspensie apoas ele se organizeaz spontan pentru a forma un dublu strat de molecule, discontinuu i fluid-vscos, n care moleculele sunt aranjate coad-la-coad n aa fel nct capetele ionice polare (hidrofile) sunt expuse spre soluia apoas de ambele pri ale membranei, iar lanurile nepolare (hidrofobe) ale acizilor grai sunt orientate n direcia opus contactului cu apa. n felul acesta, cele dou monostraturi de molecule formeaz mpreun, dou straturi hidrofile periferice separate de poriunea central hidrofob. Aceast modalitate de aranjare reprezint configuraia de minim energie posibil pentru o suspensie de lipide n ap i este, n acelai timp, foarte adecvat pentru funcia de barier ntre dou soluii apoase (cum sunt interiorul celulei i mediul extern). Structura de dublu strat fosfolipidic explic proprietile de permeabilitate ale membranei, deoarece acest strat este impermeabil fa de particulele ncrcate i fa de ioni i uor penetrabil de moleculele liposolubile (Zarnea, 1983). Fiecare dublu strat este un lichid bidimensional n care moleculele lipidice difuzeaz lateral, schimbndu-i poziia pn la un milion de ori pe secund. n schimb, deplasarea unei molecule de pe un monostrat pe altul (tranziia flip-flop) se face foarte rar (cel mai des o dat pe lun pentru o molecul dat). Raritatea deplasrilor flip-flop ale lipidelor i proteinelor permite meninerea compoziiei membranei i a structurii ei caracteristice. Dublul strat fosfolipidic trebuie s fie suficient de fluid pentru a permite micarea liber a proteinelor membranare implicate n procesele de transport activ. Fosfolipidele formeaz matricea structural a membranei i sunt rspunztoare de integritatea structural a acesteia. Prin structura caracteristic a dublului strat, ele confer membranei impermeabilitatea la cele mai multe molecule hidrosolubile, care sunt insolubile n regiunea uleioas a prii de mijloc a membranei. Proteinele, n raport cu poziia lor n structura membranei, sunt de dou tipuri: proteine integrate (intrinsece, integral proteins) i proteine de suprafa (periferice sau extrinsece).

18

Proteinele integrate, n general insolubile n ap, nu pot fi ndeprtate fr ruperea dublului strat lipidic. Au o orientare fix, fiecare protein de acelai tip este ndreptat n aceeai direcie. Cele mai multe strbat toat grosimea membranei celulare (proteine transmembranare), dar unele pot fi expuse fie numai pe suprafaa intern (citoplasmatic), fie spre suprafaa extern. Regiunile lor dirijate spre interiorul i/sau spre exteriorul celulei au caracter hidrofil, ceea ce mpiedic tranziia lor de tip flip-flop. Proteinele de suprafa, neinserate n dublul strat lipidic, sunt n general hidrosolubile i situate fie pe suprafaa intern, fie pe cea extern, de regul legate de proteinele integrate. Din punct de vedere funcional proteinele de membran pot fi: enzime responsabile de biosinteza nveliurilor celulare; proteine de transport care asigur transportul moleculelor solubile din mediu n celul i invers; citocromi i alte proteine aparinnd sistemului transportor de electroni; proteine cu activitate adenozintrifosfatazic (ATP-aza); proteine implicate n turnover-ul lipidelor i al proteinelor membranare - fosfolipaze, proteaze, peptidaze (Zarnea, 1983). Glucidele sunt slab reprezentate n structura membranei. Ele se gsesc sub forma unor polizaharide legate de proteine (glicoproteine) sau pot s interacioneze puternic cu anumite lipide (glicolipide). Proporia dintre componentele de baz ale membranei celulare (proteine i lipide) variaz n limite foarte largi, n funcie de tipul de celul. De asemenea, exist diferene semnificative ntre compoziiile membranelor interne, care delimiteaz organitele intracitoplasmatice (reticulul endoplasmatic, aparatul Golgi, mitocondrii, lizozomi, peroxizomi, nucleu) i a membranelor speciale (teaca de mielin). De exemplu, mielina conine 18% proteine i 76% lipide; membrana plasmatic a hematiei i cea a celulei hepatice de oarece au o compoziie asemntoare i conin cte 44,49% proteine i 43,52% lipide; membrana mitocondrial conine 76% proteine i doar 24% lipide (Alberts i colab., 1994). Plasmalema are o structur lipoproteic trilaminat cu grosimea de 7,5 nm. Se mai numete i citolem sau membrana plasmatic propriu zis. Lipidele plasmalemei din bistratul lipidic, sunt reprezentate de: fosfolipide (fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, sfingomielina); colesterol (abundent n stratul extern) i glicolipide (abundente n stratul intern) (Wolfe, 1993).

19

Glicocalixul Pe faa extern a plasmalemei se gsete glicocalixul (nveliul celular) care are o grosime de 50 nm. A fost descoperit, n anul 1963, de Bennett. Glicocalixul nu este dezvoltat la fel n cazul celulelor i nu este prezent pe toat suprafaa celular. De exemplu, n cazul celulelor epiteliale glicocalixul acoper doar polul apical al celulei. n structura glicocalixului intr att lanurile oligo- i poliglucidice ale glicolipidelor i glicoproteinelor membranare ct i glicoproteinele i proteoglicanii sintetizai de celul i ulterior absorbii pe suprafaa celular. Ultimele dou componente sunt n acelai timp i elementele matricei extracelulare, din aceast cauz este dificil stabilirea unei linii de demarcaie ntre suprafaa celular i matrice (Voicule i Puiu, 1997). Glicocalixul este format din dou componente: unul intern cu grosimea de 20 nm, mai puin dens numit nveli de suprafa i altul extern cu grosimea de 30 nm dens numit lamina extern (Miclu i Lisovschi-Cheleanu, 2002). Glicocalixul intervine n: protecia membranei celulare mpotriva agresiunii fizicochimice; distribuia sarcinilor electrice pe suprafaa celular; schimbul ionic transmembranar; aderena intercelular; ataarea celulelor la componentele matricei extracelulare; legarea i ataarea antigenelor i enzimelor de suprafaa celular. Citoscheletul membranei celulare Citoscheletul membranei celulare formeaz partea intern a membranei celulare. Are o grosime de 5-9 nm i o dispoziie sub form de reea. La microscopul electronic apare sub forma unei reele anastomozate de microfilamente proteice orientate neregulat. Aceste microfilamente se ancoreaz prin intermediul unor proteine globulare. Citoscheletul membranei celulare se ancoreaz la un capt de plasmalem, prin intermediul captului intern al proteinelor extrinseci, iar la cellalt capt de citoscheletul matricei citoplasmatice. Citoscheletul: asigur elasticitatea membranei i rezistena membranei; intervine n mecanismul recepie-transducie care mediaz transferul unor semnale.

20

Tipuri de biomembrane Cu toate c structura i funciile biomembranelor sunt n general unice exist mai multe tipuri morfofuncionale de biomembrane: membrana celular propriu-zis care delimiteaz celula; membranele organitelor celulare, care delimiteaz compartimentele celulare; membrane specializate (sinaptice, mielinice etc.); membrane tisulare de natur epitelial n cazul unor organe (endoteliul capilar, alveolar, mucoasa digestiv, epiteliul renal). Funciile membranei plasmatice Membrana plasmatic reprezint singura suprastructur citoplasmatic permanent, avnd rolul de a delimita spaiul intracelular. Ea formeaz un compartiment nchis, dar nu reprezint o grani fizic inert a celulei ci o structur funcional capabil s asigure o deosebire net ntre interiorul i exteriorul acesteia. Aceast proprietate este consecina faptului c membrana plasmatic prezint o asimetrie funcional, cu importan esenial pentru viaa celulei, n sensul c suprafaa intern funcioneaz diferit de cea extern. Astfel, un ion sau o molecul pompat la interior printr-un punct al membranei ar putea fi eliminat n altul cu o cheltuial inutil de energie. Aceast asimetrie funcional are la baz o asimetrie de structur molecular, manifestat pe mai multe ci: cele dou monostraturi lipidice includ proporii variate ale diferitelor tipuri de molecule lipidice; carbohidraii sunt prezeni numai pe suprafaa extern a membranei; proteinele periferice sunt situate aproape ntotdeauna pe faa intern; fiecare tip de protein integrat are o orientare definit, care este aceeai pentru fiecare molecul de acelai tip (Lodish i Rothman, 1979). Membrana plasmatic funcioneaz ca o barier osmotic, dotat cu impermeabilitate cvasitotal fa de multe tipuri de molecule, permind trecerea nestnjenit a altora. Ea asigur n acest fel schimburile necesare i selective ntre mediul extern i cel intracelular, meninnd constant compoziia chimic i ionic a celulelor, care, la rndul lor, influeneaz critic numrul enorm de reacii interdependente ce au loc n citoplasm.

21

Proprietile de permeabilitate ale membranei plasmatice pot fi sintetizate astfel: substanele uor solubile n solvenii lipidelor, ca i unii anioni (Cl-) traverseaz uor biomembranele; unii ioni ca Na+ i K+, glucidele i proteinele, nu o pot traversa uor, celula recurgnd la mecanisme speciale de transport. Unele proteine legate de membran sau aflate n contact lax cu ea (fiind localizate n spaiul periplasmic) joac rolul de chemoreceptori. Membrana celular are o ncrctur electric, datorat repartiiei inegale a ionilor. n repaus, sarcinile electrice pozitive sunt repartizate pe faa extern, iar cele negative pe faa intern formnd potenialul de repaus. n activitate, polaritatea membranei se inverseaz. Alte funcii ale membranei celulare ar putea fi sintetizate astfel: transferul de informaie realizat prin hormoni, medicamente i ali stimuli fizico-chimici. Aceti factori acioneaz frecvent prin receptorii membranari specializai, determinnd modificri ale activitii celulare; aprare i secreie prin fagocitoz, endocitoz i exocitoz; recunoaterea intercelular i aprarea imunitar; reglarea i limitarea creterii organelor; adezivitatea i relaii intercelulare. Prelungirile membranei celulare Prelungirile pot fi: temporare i neordonate pseudopode; permanente microvili, cili, stereocili, flageli etc. Pseudopodele sunt prelungiri ale citoplasmei, delimitate de membrana celular, de forme diferite dup tipul de celul i mediul n care se ntlnete aceasta. Pseudopodele au form de deget sau de conuri, se modific foarte repede, dispar i pot s reapar n alt loc al celulei. Aceste prelungiri se ntlnesc la celulele cu funcie fagocitar pronunat (leucocite i histiocite). Microvilii (fig. 5) sunt prelungiri ale membranelor celulare, situai la polul apical al celulelor din epiteliul mucoasei intestinale (formnd platoul striat) i al celulelor din epiteliul tubilor renali (formnd marginea n perie). Ei au diametrul de aproximativ 100 nm. Microvilii sunt structuri necontractile alctuite dintr-o regiune central i o reea terminal (fig. 6). Regiunea central conine n axul ei 20-30 filamente de actin organizate n fascicule. n regiunea central au mai fost identificate i proteine cu rol de a stabiliza filamentele n mnunchiuri ca fimbrina i vilina. Alte proteine asociate filamentelor de actin, identificate n regiunea central, au fost proteina 110, cu activitate ATP-azic i calmodulina cu rol de a lega exteriorul mnunchiului de membrana care delimiteaz microvilul.

22

La polul bazal, regiunea central este ancorat ntr-o reea terminal, alctuit din proteine scurte de actin i proteine asociate (fodrina). Filamentele din reeaua terminal i proteinele de asociaie interconecteaz filamentele de actin n mnunchiuri i leag mnunchiurile ntre ele din regiunea central.

Fig. 5. Microvili imagine de microscopie electronic (dup Bloom i Fawcett, 1994).

Fig. 6. Structura microvililor (dup Voicule i Puiu, 1997). Elementul central l reprezint mnunchiul de filamente de actin. Filamentele sunt interconectate prin proteine de legare i ancorate n membrana plasmatic ce delimiteaz microvilul prin proteina 110 i calmodulina. Filamentele de actin fasciculate se extind din corpul microvilului n reeaua terminal unde sunt stabilizate prin intermediul proteinelor conectoare (fodrin).

23

Cilii (kinetocili) sunt prelungiri celulare, mai mult sau mai puin cilindrice, cu lungime variabil, cuprins ntre 10-20 nm i cu diametrul de 0,5 m, prezente la polul apical al unor celule. Studiile de microscopie electronic au semnalat unele deosebiri ultrastructurale ntre cilii diferitelor specii, ns planul general de organizare este similar (Anghel, 1979). Cilul este format dint-un corpuscul bazal situat n citoplasm, care se continu n profunzime cu o rdcin, iar la suprafaa celulei cu o tij nconjurat la exterior de o membran dubl care reprezint continuarea membranei plasmatice. Prelungirea liber a cilului conine o structur microtubular complex, numit axonema, nconjurat de hialoplasm, protejat la exterior de o membran celular simpl, generat prin expansiunea plasmalemei. Principalele elemente ale axonemei (fig. 7 i 8) sunt urmtoarele: microtubulii dispui n formaie de 9 perechi periferice i o pereche dispus n centru; teaca central care nconjoar cei doi microtubuli centrali; spiele radiare care se ntind de la dubletele periferice la teaca central; braele de dinein care pornesc unidirecional de la fiecare dublet periferic spre cel nvecinat, n sens orar; punile de nexin, o protein elastic, ce conecteaz dubletele periferice alturate, contribuind la meninerea formei cililor. La nivelul corpusculului bazal cei doi tubuli bazali lipsesc, iar dubletele de la periferie devin triplete, rezultnd o structur care seamn cu centriolii. Cilii se ntlnesc la nivelul celulelor epiteliale pe suprafaa crora exist un strat de lichid. Cilii au rol de a deplasa lichidul care i scald ntr-un singur sens i anume spre exterior. Prin deplasarea lichidului se realizeaz ndeprtarea substanelor care au ptruns accidental la acest nivel. Stereocilii (cilii rigizi) au structur asemntoare cililor, exceptnd lipsa perechii de filamente centrale n poriunea liber. Ei sunt prezeni la nivelul tractului genital masculin (epididim) i n urechea intern. Flagelii sunt formaiuni alungite (55 m) prezente la suprafaa unor celule. Structura flagelului este asemntoarea cu structura cilului. n majoritatea cazurilor o celul prezint un singur flagel. La mamifere singura celul flagelat este spermatozoidul. Flagelii realizeaz micri ondulatorii, cu amplitudine constant, n acelai plan. Micrile se propag de la baza organitului ctre captul su opus.

24

Fig. 7. Schema seciunii transversale prin cil (dup Brauer i Viettro, 2003): 1 membran celular; 2 dublet central; 3 teac central; 4 dublete periferice; 5 bra de dinein; 6 punte de nexin; 7 spi radiar.

Fig. 8. Seciune transversal prin cil imagine elecronomicroscopic (dup Lodish i colab., 2000).

1.2.2.2. Citoplasma Citoplasma reprezint masa celular extranuclear. Citoplasma din jurul nucleului se numete endoplasm, iar cea de la periferia celulei ectoplasm. Din punct de vedere structural i funcional, citoplasma formeaz un tot indisolubil. Pentru o mai bun nelegere a structurii citoplasmei, aceasta se mparte n dou componente: citoplasma fundamental, hialoplasma sau matricea citoplasmatic i formaiunile difereniate, structurate ale citoplasmei reprezentate de organite i incluziuni citoplasmatice.

25

Citoplasma fundamental sau hialoplasma (gr. hialos omogen) reprezint partea nestructurat a citoplasmei. Hialoplasma induce i menine forma celulei, constituie sediul n care se desfoar numeroase procese metabolice i reprezint un important depozit celular. Studiul electronomicroscopic al celulei, a permis nlocuirea noiunii de hialoplasma cu cel de matrice citoplasmatic. Matricea citoplasmatic este format dintr-o fracie solubil, citoscheletul i reeaua microtrabecular (o reea de filamente cu diametrul de 6 nm, observat la nivelul celulei eucariote de K. Porter). Reeaua microtrabecular interconecteaz citoscheletul cu organitele celulare ntr-o singur unitate morfofuncional, citoplasma (Voicule i Puiu, 1997). Citoscheletul este format dintr-o reea de filamente proteice. Filamente proteice sunt reprezentate de: microfilamente, microtubuli i filamente intermediare. Aceste elemente sunt interconectate ntr-o reea ce strbate ntreaga hialoplasm. n citoschelet se mai gsesc i proteine asociate cu rol de a regla procesele de polimerizare i depolimerizare ale filamentelor, de a conecta elementele de citoschelet n reea i de a lega de organitele celulare sau/i membrana plasmatic. Citoscheletul are capacitatea de a-i modifica structura n funcie de necesitile celulare. Aceast proprietate are la baz reaciile de polimerizare i depolimerizare ale microfilamentelor de actin i miozin. Prin urmare citoscheletul prezint o structur dinamic. Microfilamenetele sunt formate din proteine fibrilare contractile (actin n principal i miozin). n citoplasma tuturor celulelor, cu excepia celulelor musculare se ntlnesc microfilamente izolate cu o distribuie relativ difuz i dinamic. n celulele musculare actina reprezint 20% din proteinele citoscheletului, iar n restul celulelor ea constituie ntre 5-10% din aceste proteine. Actina se prezint sub dou forme: actina G sau actina globular (forma monomeric) i actina F (forma polimerizat a actinei G). Filamentele de miozin sunt larg rspndite n celulele organismelor eucariote. Se cunosc dou tipuri: miozina de tip I absent n celulele musculare, ea este implicat n fenomenele de motilitate celular; miozina de tip II (470.000 Da) prezent n celulele musculare din muchii striai, netezi ct i alte tipuri celulare. Microtubulii sunt substructuri celulare evideniate n citoplasma celulelor eucariote. n citoplasm ei sunt fie izolai microtubuli citoplasmatici, fie fasciculai formnd formaiuni cu caracter efemer fibrele fusului de diviziune, fie formaiuni permanente centrioli, corpusculi bazali i axonemele organitelor locomotorii (cili, flageli).

26

Microtubulii sunt formaiuni lungi, cilindrice cu diametrul de aproximativ 25 nm. Peretele lor este format din 13 protofilamente dispuse paralele cu axul longitudinal. Protofilamentele sunt rezultatul asocierii unui numr variabil de heterodimeri ce poart numele de tubulin (100.000 Da). Tubulina este alctuit din dou proteine distincte alfa i beta tubulina (fiecare avnd 50.000 Da). Cele dou componente proteice ce compun heterodimerul sunt dispuse helicoidal n peretele microtubulului. Filamentele intermediare au diametrele cuprinse ntre 8-12 nm. Iniial ele au fost puse n eviden n celulele muchilor striai, unde formeaz o matrice ce nconjoar i interconecteaz discurile Z. Ulterior au fost identificate i n alte tipuri celulare (celule epiteliale, mezenchimale, neuroni). Filamentele intermediare se pot ntlni i n ectoplasm, ancorate n structuri periferice (desmozomi) sau situate n prelungiri celulare (axoni). Filamentele intermediare sunt rezultatul polimerizrii subunitilor proteice. Proteinele ce formeaz filamentele intermediare sunt specifice pentru un anumit tip celular. La vertebratele superioare s-au identificat cinci tipuri moleculare distincte ce intr n constituia filamentelor intermediare: citocheratine (celule epiteliale); neurofilamente (celule nervoase); gliofilamente (celule gliale); desmina (celule musculare); vimentina (celule mezenchimale) (Han Yoon i colab., 2001). Citoscheletul: menine forma celulei i a prelungirilor celulare; permite compartimentarea funcional a citosolului; realizeaz micrile celulare i anume: micarea cililor i a flagelilor; deplasarea celulelor cu tip de locomoie ameboidal; transportul intracelular de particule, vezicule de transport i organite celulare; translocarea cromozomilor n timpul diviziunii celulare; desfurarea citokinezei i contracia muscular; ancorarea celulelor ntre ele. Hialoplasma conine n proporie de 15-30% substane organice (proteine, glucide, lipide, nucleotide, acizi ribonucleici), 2-3% ioni anorganici (Na+, K+, Ca2+, Mg2+,Fe2+, Cl-, PO43-, SO42-) i 70-85% H2O. Formaiunile structurate ale citoplasmei au fost clasificate n organite comune i organite specifice. Organitele comune celulelor sunt: reticulul endoplasmatic; mitocondriile; complexul Golgi; lizozomii; ribozomii; microzomii; peroxizomii; microtubulii i centrozomul.

27

ndeplinind funcii specializate unele celule conin organite adaptate realizrii acestor funcii. Din categoria organitelor celulare specifice fac parte miofibrilele celulelor musculare, neurofibrilele i corpii Nissl caracteristici neuronilor. Din punct de vedere structural organitele celulare se mai pot clasifica n: organite celulare delimitate de membran (reticulul endoplasmatic, aparatul Golgi, lizozomi, peroxizomi, vezicule de endo i exocitoz); organite celulare nedelimitate de membran (ribozomi, citoschelet, sisteme de microtubuli i filamente). n continuare sunt prezentate structura i funciile organitelor. Reticul endoplasmatic (lat. reticulum reea) a fost descris n perioada 1952-1954 de K. Porter i de G.E. Palade. A fost observat n celulele mamiferelor, plantelor i la unele tipuri de bacterii. Cercetrile de microscopie electronic, efectuate la numeroase specii de animale, au evideniat universalitatea reticulului endoplasmatic, cu unele excepii hematiile mature i trombocitele. Reticulul endoplasmatic este format din caviti polimorfe, tubuli, vezicule i cisterne, cu diametrul cuprins ntre 250-3000 , delimitate de membrane individualizate trilaminate lipoproteice. Cavitile unite ntre ele formeaz o reea repartizat n toat citoplasma. Coninutul cavitilor este format din ap, substane minerale i substane organice. Organitul are relaii funcionale cu membrana plasmatic i cu membrana extern a nucleului, ceea ce permite comunicarea direct a nucleului cu mediul extracelular, cu complexul Golgi prin microveziculele rezultate din fragmentarea tubulilor. Nu este o formaiune fix, neschimbat ci un sistem canalicular dinamic care se lrgete, se retract sau se poate fragmenta. Reticulul endoplasmatic din punct de vedere morfologic i funcional prezint dou tipuri: neted i rugos (fig. 9). Reticulul endoplasmatic neted (REN) nu are ribozomi ataai la nivelul membranei. Este alctuit din tubuli anastomozai, cu diametrul cuprins ntre 500 i 1.000 , prezentnd pe traiectul lor vezicule i cisterne ovale sau alungite, adesea bifurcate. Coninutul acestui sistem reticular apare omogen, cu o densitate electronooptic mai mic dect hialoplasma. El prezint o dispoziie a elementelor sale structurale, caracteristic pentru fiecare tip de celul, particularitatea structural fiind legat de eterogenitatea funcional a celulelor respective. Astfel, celulele care sintetizeaz steroli prezint un reticul endoplasmatic neted format din numeroi tubuli ramificai i bifurcai, dispui ntr-o reea complex n toat citoplasma ( Iones cu-Var o i colab., 1981).

28

n celulele luteinice ale corpului progestativ din ovar, reticulul prezint numeroase vezicule fenestrate, turtite, n strns vecintate cu mitocondriile. O form specializat de organizare a reticulului endoplasmatic neted se ntlnete n fibrele musculare striate. n jurul fiecrei miofibrile se gsete un sistem de tubuli i cisterne dispuse longitudinal numit reticul sarcoplasmic. Reticulul sarcoplasmic are rol de a stoca ionii de calciu i ulterior de ai elibera n citosolul fibrei musculare cu rol n producerea contraciei. Acumularea ulterioar a ionilor de calciu n reticul se realizeaz prin intervenia pompei de calciu, un proces activ dependent de concentraia ATP-ului din mediu i de echilibrul cationilor monovaleni de Na+ i K+.

Fig. 9. Reticul endoplasmatic (RE) (dup Botrel i colab., 1982): A schem; B modul de organizare tridimensional. REN reticul endoplasmatic neted sau agranular; REG reticul endoplasmatic rugos sau granular.

Funciile reticulului endoplasmatic neted Reticulul endoplasmatic neted ndeplinete numeroase funcii dependente de raporturile sale spaiale dinamice cu celelalte sisteme intracelulare, de prezena sistemelor enzimatice i de permeabilitatea selectiv a membranelor sale. El joac un rol important n: schimbul de ioni; echilibrul hidric; schimbul nucleoplasmatic; sinteza substanelor specifice (lipidelor, steroli);

29

transmiterea intrafibrilar a excitaiei i cuplarea acesteia cu contracia muscular; detoxifierea organismului de xenobiotice; sinteza mediatorilor sinaptici. Reticulul endoplasmatic rugos (REG) caracterizat prin ataarea ribozomilor pe faa extern a membranei. A fost evideniat, n 1897, de C. Garnier sub forma unor diferenieri citoplasmatice, observate n celulele secretoare ale glandelor salivare. Garnier l-a denumit ergastoplasm. Termenul de ergastoplasm este sinonim cu plasm elaboratoare, formaiune observat n special n celulele secretorii, fiind asociat cu activitatea de sintez a unor celule. Aspectul morfologic corespunde unor filamente (n celulele secretorii din pancreas sau glanda parotid) unor mase rotunjite (corpii Berg n hepatocite), coluroase (corpii Nissl n neuroni). S-a stabilit o corelaie ntre aspectul ergastoplasmei i activitatea celular. n stresul funcionale sau n cursul unor modificri patologice ergastoplasma poate s dispar, fenomen numit cromatoliz, nsoit de o scdere a ARN-ului i a coninutului proteic al celulei. Fenomenul de cromatogenez corespunde reapariiei ergastoplasmei, cnd celulele regenereaz. Procesul se observ n celulele nervoase n timpul degenerrii retrograde sau n condiii de stres, cnd corpii lui Berg dispar (Ionescu-Varo i colab., 1981). Caracteristica ultrastructural acestui tip de membran este determinat de prezena pe suprafaa extern a ribozomilor, care confer un aspect rugos. Dispunerea ribozomilor apare liniar, circular, spiralat sau n rozet pe membrana reticulului. Forma particular de organizare a reticulului granular este dependent de particularitile funcionale ale celulei, adesea citomembranele sunt dispuse n teancuri de saci turtii sau cisterne. Alturi de cisternele dilatate se observ canale nguste care descriu structuri caracterizate printr-un grad crescut de eterogenitate. Spaiul delimitat ntre membranele reticulului granular prezint variaii considerabile. Reticulul endoplasmatic rugos este bine reprezentat n celulele care secret proteine de export (fibroblaste, neuroni, celule acinoase, celule caliciforme, epiteliul foliculilor tiroidieni, epiteliul nefronului). Funciile reticulului endoplasmatic rugos Reticulul endoplasmatic rugos intervine n sinteza proteinelor intracelulare. Studiile lui Palade au evideniat rolul reticulului endoplasmatic rugos de a sintetiza proteinele de export.

30

Proteinele secretorii sintetizate la nivelul ribozomilor sunt transferate i acumulate n cisternele reticulului. n lumen proteinele sunt supuse unor modificri (glicozilare, fosforilare) i apoi exportate spre aparatul Golgi. Ribozomii sau granulele lui Palade (gr. soma corp i ribo riboproteine) sunt particule subcelulare rotunde sau ovale cu dimensiunile cuprinse ntre 100-300 . Au fost descoperii iniial de G. Palade, n anul 1953, care i-a numit microzomi. R. Roberts, n anul 1958, i-a denumit ribozomi. Ribozomii sunt prezeni n toate celulele, att la procariote ct i la eucariote, cu excepia hematiilor adulte. n citoplasma celulelor eucariote ribozomii sunt liberi (situai n nodurile reelei microtrabeculare din hialoplasm) fie ataai citomembranelor (reticulul endoplasmatic, membranei extern a nucleului i la suprafaa microsomilor). Ribozomii pot fi izolai sau grupai n poliribozomi (fig. 10). Numrul de ribozomi ce intr n alctuirea unui poliribozom depinde de mrimea moleculei proteice care va fi sintetizat. Ei sunt numeroi n celulele aflate n fazele de cretere i n celulele cu sintez crescut de proteine (celule pancreatice, celule hepatice, nervoase etc.).

Fig. 10. Ribozomi (dup Roberts i colab., 1965): SR - subuniti ribozomale. R - ribozomi, DP poliribozomi.

Cercetrile efectuate la organismele animale i la bacterii au dus la acumularea unor informaii referitoare la structura electronomicroscopic, organizarea molecular i funciile ribozomilor. Prin izolarea ribozomilor din diferite celule i determinarea coeficientului de sedimentare, ribozomii au fost grupai n dou clase: ribozomi de 70 S (celulele procariote i mitocondriile celulelor eucariote) i ribozomi 80 S (celulele eucariote). Ribozomii se compun din dou subuniti inegale ca dimensiuni i n privina constantei de sedimentare (Doudna i Rath, 2002).

31

Ribozomii de 80 S sunt formai dintr-o subunitatea mare, sferic, cu diametrul de 30 nm i cu constanta de sedimentare de 60 S i o subunitatea mic, oval, cu diametrul ntre 10 i 20 nm care are constanta de sedimentare de 40 S. Componenii chimici ai ribozomilor sunt proteinele i acidul ribonucleic n cantiti egale, iar n cantiti reduse lipide, ioni de calciu, magneziu i ap. Acidul ribonucleic reprezint 80% din ARN-ul celular. Datorit coninutului ridicat de ARN, Palade a presupus nc din 1953, rolul lor n sinteza proteinelor. Proteinele au greutate molecular mic i o compoziie asemntoare n aminoacizi, indiferent de tipul de celul. La eucariote subunitatea mare conine 50 de tipuri de proteine, iar cea mic 32. Ele se caracterizeaz prin: greutate molecular, compoziie chimic, punct izoelectric, pH, capacitatea de a se fixa direct i specific pe ARN i prin stoekiometria lor n cadrul subunitii. Funciile ribozomilor liberi: sinteza proteinelor de structur (proteine specifice); sinteza proteinelor din structura organitelor citoplasmatice; sinteza unor proteine speciale (hemoglobina, mioglobina, proteinele contractile). Funciile ribozomilor ataai citomembranelor: sinteza proteinelor de export (celule acinoase, plasmocite). Aparatul sau complexul Golgi a fost descris, n 1898, de Camillo Gol gi (1843-1926) n citoplasma neuronilor din ganglionii spinali, de la bufni i pisic, sub forma unei reele de filamente fine, dispuse n jurul nucleului. n 1954, A.J . Dalton i M.D. Felix au introdus termenul de complex Golgi. La organismele inferioare apare sub forma unei vezicule sau cisterne, sau dictiozom, iar la formele superioare ca ansambluri dictiozomice interconectate prin tubuoare. Ansamblurile golgiene sunt reprezentate prin asocierea mai multor teancuri de cisterne turtite, interconectate prin tubuoare. n citoplasm, organitul ocup o poziie variat dependent de forma celulei: perinuclear (celulele sferice), juxtanuclear (celulele prismatice), apical (celulele piramidale) i bazal (celulele caliciforme). Numrul i localizarea dictiozomilor dintr-o celul difer n funcie de tipul celulei, vrsta ei i activitatea funcional. Astfel, celulele tinere sau cele aflate n plin proces secretor posed un numr mare de organite. Studiile de microscopie electronic i histochimie au permis elucidarea ultrastructurii, compoziiei chimice i rolului fiziologic al aparatului Golgi. Ultrastructura complexului Golgi din celula animal a fost descris, n anul 1956, de P Grass, N. Carasso i P. Favard.

32

Imaginile electronomicroscopice au evideniat un complex de caviti: microvezicule, cisterne (saci aplatizai) i macrovezicule - caviti limitate de membrane trilaminate lipoproteice simple, de 60-90 (fig. 11).

Fig. 11. Complexul Golgi, la microscopul electronic (dup Dinulescu i colab., 1970): A cisterne; B microvezicule; C macrovezicule.

Cisternele (saci aplatizai) aplatizate sunt suprapuse, paralele i n cele mai multe cazuri curbate. Cisternele sunt cele mai caracteristice structuri ale complexului Golgi. Ele sunt mrginite de membrane. Majoritatea cisternelor sunt curbate ntr-un arc de cerc, iar veziculele sunt localizate numai pe faa concav la extremitatea saculilor. n mod obinuit numrul lor este cuprins ntre 3-10. Numrul cisternelor din complexul Golgi variaz dependent de funcia i tipul celulei. Dictiozomii nevetebratelor au un numr mai mare de cisterne apatizate dect complexele golgiene ale vertebratelor. Prin tehnici speciale de colorare, ntre cisterne s-au evideniat elemente fibrilare dispuse paralel care strbat dictiozomii. Probabil elementele fibrilare au rol n legarea cisternelor una de alta. Complexul Golgi reprezint un agregat de dictiozomi. Schimbrile sincrone n activitatea de secreie a tuturor dictiozomilor din celul sugereaz existena unei legturi informaionale. La marginea cisternelor se difereniaz o reea fibrilar. Morfologic i funcional complexul Golgi prezint o polaritate distinct: compartimentul cis orientat spre nucleu, este reprezentat de faa convex, numit i fa formatoare sau imatur. Prin aceast fa organitul primete veziculele de transport ale proteinelor sau lipidelor sintetizate de reticul endoplasmatic;

33

compartimentul median n care se face glicozilarea proteinelor i a lipidelor; compartimentul trans orientat spre membrana plasmatic este reprezentat de faa concav, numit i faa elaboratoare sau matur, deoarece la acest nivel are loc elaborarea granulelor de secreie (fig. 12).

Fig. 12. Complexului Golgi imagine electronomicroscopic (dup Bannykh i Balch, 1997).

Macroveziculele (vezicule secretorii) sunt caviti ovoide cu diametrul cuprins ntre 2.000-6.000 , dispuse la periferia cisternelor i pe faa concav a organitului. Macroveziculele sunt abundente la nivelul complexului Golgi din celulele aflate n plin activitate secretorie i lipsesc n celulele secretorii inactive sau celulele nesecretorii. Ele vehiculeaz produii formai n cisterne spre membrana celular. Microveziculele sunt caviti eliptice cu diametrul cuprins ntre 300-500 , situate ntre reticulul endoplasmatic rugos i sacii golgieni. Provin din fragmentarea tubulilor reticulului endoplasmatic rugos i din foia extern a membranei nucleare. Originea lor justific rolul microveziculelor n transportul de substane de la formaiunile de provenien spre sacii golgieni de pe faa cis. n majoritatea celulelor morfologia complexului Golgi este constant, n unele cazuri (stri patologice) morfologia se poate modifica predominnd una sau alta din cele trei forme. Din punct de vedere chimic cavitile golgiene conin glucide, fosfolipide, proteine, protein-enzime (fosfataze), acid ascorbic (n unele celule endocrine), mucopolizaharide asociate cu proteinele, lipoproteine (hepatocite) i substane minerale.

34

Funciile complexului Golgi: condensarea i agregarea proteinelor; sinteza i secreia polizaharidelor; complexarea, definitivarea i formarea unor produi de secreie; generarea i regenerarea de membrane; formarea acrozomului din spermatozoid; neurosecretorie. Mitocondriile (gr. mitos filament, khondrion granule) sunt organite existente n toate celule eucariote cu excepia hematiilor adulte. Au fost descoperite de Carl Benda (1857-1933) n anul 1897. n anul 1952 G.E. Palade i F.S. Sj strand, au studiat mitocondriile la microscopul electronic. Forma mitocondriilor poate fi rotund, ovalar sau alungit. Dimensiunile lor variaz limea ntre 0,3-1,5 , iar lungimea ntre 0,3-10 . Variaiile numerice sunt influenate de gradul de difereniere, funcie i intensitatea proceselor metabolice. Celulele n care se desfoar intense procese fiziologice conin un numr mare de mitocondrii. Acestea se acumuleaz n citoplasm n zonele cu consum energetic mare. De exemplu, spermatozoidul are 25 mitocondrii, nefrocitul n jur de 300, iar hepatocitul 2.500. Mitocondriile sunt rspndite n ntreg citosolul, ns ele au posibilitatea s se grupeze la polul activ al unor celule. De exemplu, n celulele ciliate mitocondriile se acumuleaz la polul apical, la spermatozoid n piesa intermediar, n cazul nefrocitelor la polul bazal, iar n fibra muscular striat i cea cardiac se dispun printre miofibrile. Ultrastructural mitocondriile au aspect caracteristic cu mici variaii n funcie de tipul celular. Ele prezint: membran extern; spaiu intermembranar; membran intern i matrice mitocondrial (fig. 13 i 14). Membrana extern are un aspect neted i ea funcioneaz ca un filtru molecular interpus ntre compartimentul periferic i citosol. Permeabilitatea membranei externe, pentru moleculele cu greuti moleculare sub 10.000 Da, se datoreaz prezenei n structura membranei a unor proteine canal numite porine. Compoziia chimic a membrana extern este reprezentat de proteine, colesterol i fosfolipide. Membrana intern trimite spre interior invaginri numite criste mitocondriale orientate perpendicular pe axa lung a organitului celular. Numrul cristelor variaz de la un tip de mitocondrie la altul i este n strns legtur cu activitatea metabolic a esutului respectiv. Forma cristelor variaz de la un tip de celul la altul, ele pot s fie septale, tubulare i veziculare.

35

Din punct de vedere chimic membrana intern conine proteine (80%) i cardiolipin (difosfatidilglicerol-10%). Cardiolipina confer membranei caracterul impermeabil pentru diferite specii ionice (Voicule i Puiu, 1997). Transportorii proteici existeni n grosimea membranei interne sunt responsabili de permeabilitatea selectiv pentru moleculele ce urmeaz s fie metabolizate n spaiul matricei mitocondriale sau pentru intermediarii metabolici care urmeaz s fie expulzai din mitocondrie.

Fig. 13. Schema organizrii mitocondriei (dup Green, 1964, din Anghel, 1979).

Fig. 14. Mitocondrie imagine electronomicroscopic (dup Bloom i Fawcett, 1994).

Din punct de vedere funcional proteinele din membrana intern a mitocondriei sunt: proteine implicate n reaciile de oxido-reducere, ce se desfoar la nivelul catenei respiratorii; proteine transportoare i complexe enzimatice responsabile de producerea i eliberarea n matricea mitocondrial a ATP-ului (Voicule i Puiu, 1997).

36

Spaiul dintre criste se numete matrice mitocondrial. Ea conine o cantitate mare de proteine din aceast cauz starea ei fizic este apropriat de gel. Matricea mitocondrial conine granulaii cu densiti electronice diferite (depozite de Ca+2), ribozomi mitocondriali, genomul mitocondrial i ARN de transport. Enzimele mitocondriale localizate n matrice i criste asigur conversia acizilor grai i a piruvatului n acetil-coenzima A, precum i desfurarea ciclului Krebs. NADH, H+ i FADH2 rezultai din oxidarea complet a glucozei i a acizilor grai la CO2 sunt reoxidai n cadrul catenei respiratorii mitocondriale. Procesul implic numeroase reacii redox care se desfoar n cascad. Electronii cedai de NADH, H+ i FADH2 sunt transportai de-a lungul unui lan de proteine transportoare de electroni, a cror componente sunt asociate membranei mitocondriale interne. n final, electronii sunt cedai acceptorului final, oxigenul molecular, cu formarea apei. Studiul, ultrastructurii mitocondriilor cu ajutorul tehnicilor de colorare negativ a evideniat prezena n membranele mitocondriale (membrana intern i criste) a oxizomilor. Oxizomii au fost descrii de H. Fernnde z-M orn i colab., n anul 1964, sub forma unor particule rotunde sau poliedrice. Oxizomii sunt constituii dintr-o poriune sferic (cu diametrul ntre 40-100 ) care se continu cu o tij lung (50 ) i groas (40 ). Tija se fixeaz de membranele mitocondriale cu ajutorul unei piese bazale sferice, cilindrice sau rectangulare de 40 grosime i 100 lungime (fig. 15 i 16). Se consider c numrul particulelor elementare corespunde cu numrul lanurilor respiratorii din mitocondrie i cu natura esutului. Mitocondriile conin enzimele: ciclului Krebs; lanului respirator; fosforilrii oxidative; care catalizeaz -oxidarea acizilor grai i a piruvatului (Bartlett i Eaton, 2004). Funciile mitocondriei: conversia energiei eliberate din metabolismul glucidelor i a acizilor grai n legturi macroergice ale ATP-ului; respiraia celular; acumularea de ioni.

37

Fig. 15. A, B - Seciune transversal prin mitocondrie i detaliu structural al membranei interne cu oxizomi (dup Dinulescu i colab., 1970): a - criste; b - matrice; c - membrana extern; d oxizomi.

Fig. 16. Imaginea electronomicroscopic a unui fragment de mitocondrie izolat din cordul de bou (ntr-o suspensie de zaharoz 0,5M i colorat cu fosfotungstat de potasiu 1%). Se observ oxizomi x600.000 (dup Fernndez-Morn, 1963). Lizozomii sunt particule citoplasmatice descoperite n perioada 1949-1955 de Christian Ren de Duve (1917-), P. Baudhuin, H. Beaufay i Alex Benj amin Novi koff (1913-1987) n celulele hepatice de obolan, prin ultracentrifugare difereniat. Lizozomii sunt formaiuni sferice sau ovoidale de 0,2-1 , concentrate n zona complexului Golgi. Au fost descrii n toate tipurile de celule animale cu excepia hematiilor adulte. Prezint o membran trilaminat lipoproteic, unic, de 90 . La macrofage membrana prezint la exterior spiculi radiari. Matricea lizozomilor conine aproximativ 40 enzime hidrolitice (care acioneaz pe diferite substraturi de glucide, lipide, proteine i acizi nucleici).

38

Sinteza enzimelor lizozomale are loc n poliribozomii reticulului endoplasmatic, de unde trec pe faa cis a complexului Golgi, unde una sau mai multe molecule de manoz sunt fosforilate, ajung n compartimentul trans, dup care se desprind veziculele golgiene. Matricea lizozomal prezint aspecte morfologice variate ceea ce a determinat clasificarea lor n: lizozomi primari, secundari i corpi reziduali. Lizozomii primari au matricea ncrcat cu granulaii fine, iar complexul enzimatic pe care l conin este inactiv. Particulele ingerate i nconjurate de membranele derivate din plasmalem sunt denumite fagozomi. Un fagozom poate s fuzioneze cu un alt fagozom sau se poate divide n vacuole mai mici, iar n final fagozomul poate s fuzioneze cu un lizozom primar formnd lizozomul secundar. Lizozomul secundar are o morfologie diferit i conine enzime active. Materialul endogen este supus aciunii hidrolazelor lizozomale i va fi digerat. Dup digestia enzimatic o parte din produii macromoleculari de degradare vor difuza n citoplasm, iar o alt parte rmn n vacuola lizozomal, constituind corpul rezidual. Funciile lizozomilor: heterofagia procesul de digestie intracelular a substanelor introduse n citoplasm prin endocitoz i fagocitoz; autofagia procesul de digestie a organitelor uzate din celul; aprare fagocitarea microorganismelor n granulocite i macrofage; secreia unor hormoni scindarea hormonilor tiroidieni din stocurile tiroglobulinice; absorbia proteinelor recuperarea proteinelor filtrate de ctre celulele tubului contort proximal; regenerarea bastonaelor retiniene (Hulic, 1996). Peroxizomii sunt organite mici, sferice, cu un diametru de 0,5-0,7 . n 1954, J ohannes Rhodin (1922-2004) i-a identificat n celulele renale i le-a denumit microcorpusculi (microbodies). n anul 1965, de Duve i Baudhui n (1966) au denumit aceste organite peroxizomi. Peroxizomii sunt delimitai de o membran lipoproteic simpl, iar n interior prezint o matrice proteic care conine enzime oxidative (catalaz, Daminoacidoxidaza, L-hidroxiacidoxidaze). Peroxizomii folosesc oxigenul molecular pentru ndeprtarea atomilor de hidrogen din diferite molecule organice. n urma acestor reacii rezult apa oxigenat care este descompus de catalaz n ap i oxigen molecular.

39

n condiiile n care apa oxigenat nu este descompus de catalaz, apar radicalii liberi ai O2 cu efecte duntoare pentru celul. Funciile peroxizomilor: protejeaz celula de efectele radicalilor liberi ai O2; regleaz catabolismul glucozei; gluconeogenez; sinteza sterolilor (Ionescu-Varo i colab., 1981). Microtubulii au fost descrii, n anul 1964, de Schlauferbach sub forma unor structuri tubulare cu diametrul cuprins ntre 180-300 i cu lungimea de civa microni. Pentru c exist n majoritatea celulelor, s-a acreditat ideea c sunt organite comune. Componentul principal al microtubulilor este o protein numit tubulin. Microtubulii rezult prin polimerizarea heterodimerilor de tubulin i , polimerizare facilitat de concentraiile sczute de Ca+2 i de proteinele asociate microtubulilor. Funciile microtubulilor: intr n alctuirea cililor, flagelilor i a centriolilor; formeaz citoscheletul; intervin n transportul apei, ionilor i a moleculelor mici; realizeaz transportul rapid al proteinelor din pericarion n axoni; n celulele secretorii exocrine sunt implicai n transportul secreiei spre polul apical; n diviziunea celular (formarea fusul de diviziune, deplasarea cromozomilor n planul ecuatorial al celulei i alinierea lor n placa metafazic i translocarea cromozomilor anafazici). Microsomii (gr. soma corp i micros mic, corpi mici) au fost izolai de Albert Claude (1899-1983), n anul 1937. Microscopia electronic a demonstrat c sunt fragmente subcelulare eterogene (fraciuni de citomembrane alfa, beta, gamma, fragmente de nucleoplasm, plasmalem sau granule de ribozomi). Ei constituie ntre 15-20% din masa total a citoplasmei. Microsomii particip activ la metabolismul celular, prezentnd variaii n diferite stri funcionale ale celulei. Centrul celular a fost descris pentru prima dat, n perioada 1875-1878, de Walter Flemming (1843-1905) i Edouard van Beneden (1845-1910) fiind prezent n toate celulele animale cu unele excepii celula absorbant, fibra muscular striat i eritrocitul. Majoritatea celulelor au doi centrioli, plasai perpendicular unul pe altul, situai n apropierea membranei nucleare sau la un pol al celulei (nefrocite).

40

Organitul poate prezenta aspecte difereniate din punct de vedere morfologic n raport cu stadiul n care se afl celula. n celula aflat n interfaz centrul celular se prezint sub forma unei sau dou granule mici, dense, dispuse n vecintatea nucleului sau la un pol al celulei. Aceste structuri reprezint centriolii. n timpul diviziunii celulare structura centrozomului este mai complex. Centriolul este nconjurat de o mas de citoplasmatic dens i omogen centrozom, nconjurat de o zon mai puin dens i aparent omogen numit centrosfer, de la care pornesc filamente citoplasmatice radiare care strbat citoplasma ca razele unui astru formnd asterul (fig.17). Centrul celular atinge dezvoltarea maxim la sfritul profazei, el st la baza diferenierii fusului mitotic. La sfritul profazei centrul celular se divide n dou uniti constitutive i migreaz la cei doi poli ai celulei. n momentul dezorganizrii membranei nucleare fibrilele asteriene se dezvolt i contribuie la formarea fusului de diviziune (Anghel, 1979). Studiile de microscopie electronic au contribuit la elucidarea ultrastructurii centriolilor. Ei se prezint ca o formaiune cilindric cu o lungime de 0,5 , cu diametrul de 0,15 , avnd peretele format din nou tubuli (dubli sau tripli) aezai la distan unul fa de cellalt. n afara peretelui i prinse de el prin puni de legtur se afl dou rnduri de sferule suprapuse.

Fig. 17. Schema centrului celular constituit pe baza observaiilor de microscopie fotonic (dup Nougarde, 1969, din Anghel 1979). A - centriol simplu; B - centriol nconjurat de centrozom; C - centriol nconjurat de centrozom i centrosfer; D - centriol nconjurat de centrozom i centrosfer de la care pornesc fibre asteriene.

41

Fiecare rnd este format din cte nou sferule. Aceste formaiuni sunt denumite structuri satelite. Ele reprezint originea filamentelor lungi i scurte ale fusului de diviziune. Structura electronomicroscopic a centriolilor este redat n fig. 18 .

Fig. 18. Centrul celular, vzut la microscopul electronic (dup De Robertis i colab., 1965).

Funciile centrului celular: n timpul diviziunii sintetizeaz proteinele fusului de diviziune i particip la formarea aparatului acromatic; coordoneaz micrile cililor i ale flagelilor; asigur reorganizarea centrozomilor celulelor-fiice la sfritul diviziunii. Organitele specifice sunt diferenieri structurale i funcionale ale citoplasmei, ntlnite n anumite tipuri celulare. Organitele citoplasmatice se clasific n organite: fibrilare (cili, flageli, tonofibrile, microvili, miofibrile i neurofibrile); granulare (corpusculii Nissl; granulaiile specifice polimorfonuclearelor). Organite citoplasmatice fibrilare Cilii se mpart n vibratili i rigizi. Cilii vibratili (kinetocilii) au lungimea cuprins ntre 5-15 i grosimea de 0,2 . Sunt organite specifice epiteliului respirator i genital. Cilii rigizi (stereocilii) au structura asemntoare cililor vibratili, ei sunt specifici epiteliului epididimului. Flagelii formeaz coada spermatozoidului.

42

Funciile cililor i flagelilor: cilii realizeaz ndeprtarea unor substane aflate n suspensie la suprafeele epiteliilor respirator i genital; stereocilii au rol trofic n hrnirea spermatozoizilor, cnd acetia traverseaz epididimul; flagelii sunt organite de micare pentru spermatozoizi. Microvilii sunt expansiuni ale celulelor epiteliale ce delimiteaz lumenul intestinal i lumenul tubului contort proximal. Ei mresc suprafaa de absorbie a celulelor epiteliale cu 25%. Sunt structuri necontractile alctuite dintr-o regiune central i o reea terminal. Tonofibrilele sunt expansiuni cu rol de solidarizare. Miofibrilele sunt elementele contractile din sarcoplasma fibrelor musculare. Neurofibrilele sunt localizate n pericarion i n prelungirile nervoase. Organitele citoplasmatice granulare Corpusculii Nissl sau corpii tigroizi reprezint reticulul endoplasmatic rugos i sunt caracteristici neuronului. Granulaiile specifice sunt diferenieri particulare ale citoplasmei neutrofilelor, acidofilelor i bazofilelor. Incluziunile citoplasmatice au un caracter temporar n celule i sunt localizate n citoplasm. n categoria incluziunilor ntr substanele de rezerv, produii de secreie i pigmenii. Materialul de rezerv este reprezentat de glicogen, lipide, proteine i vitaminele. Granulele de glicogen sunt depozitate n celulele hepatice, fibrele musculare, epiteliile mucoasei uterine etc. Granule lipidice sunt dispersate n citoplasm sub form de trigliceride sau sub form de picturi sferice de diferite mrimi. Celulele care depoziteaz lipidele sunt celulele corticosuprarenalei, celulele corpului galben din ovar, nefrocitele i hepatocitele. Granulele de proteine i cele de vitamine sunt reduse. Proteinele se depoziteaz n fibrele musculare, celulele hepatice i vitelus. Vitamina C se concentreaz n fibra muscular, hepatocite, glandele suprarenale i gonade, iar vitamina A n epitelii. Produii de secreie sunt elaborai de diferite tipuri de celule. De exemplu: granulele de zimogen de acinii pancreatici; mucusul de celulele caliciforme; hormonii de glandele endocrine; granule de pigmeni se acumuleaz i rmn o perioad n celulele n care s-au produs dup care sunt eliminai.

43

Un alt tip de incluziuni l reprezint pigmenii. De exemplu: carotenoizi (luteina din celulele corpului galben, iodopsina i rodopsina celulelor retiniene) cromolipoizi (neuroni, hepatocite, miocard, celulele Leydig), melanici (celulele pigmentare ale pielii, coroid, procesele ciliare, iris, stratul pigmentar al retinei), hemoglobina, mioglobina etc. Produii de dezasimilaie rezultai n urma catabolismului se pot acumula n citoplasm constituind incluziuni. 1.2.2.3. Nucleul Nucleul (lat. nucleus nucleu) a fost descris pentru prima dat de Robert Brown (1773-1858), n anul 1831, sub forma unei vezicule clar observate n celula de orhidee, iar ulterior a fost descoperit i n celulele animalelor. Nucleul este un organit celular prezent n toate celulele eucariote, cu excepia hematiilor adulte i a trombocitelor. Este un organit celular mai refringent dect citoplasma, fiind uor de evideniat in vivo cu ajutorul microscopului fotonic. Prezint o mare afinitate pentru coloranii bazici (fuxin, hematoxilin, Giemsa). Majoritatea celulelor prezint un singur nucleu, dar exist i cazuri n care celulele sunt binucleate (condrocitele) sau multinucleate (megacariocitele din mduva osoas, fibra muscular striat). Hematiile adulte sunt lipsite de nucleu deoarece acesta se elimin n cursul eritropoiezei prin exocitoz. Forma nucleului corespunde n general formei celulei. De exemplu: celulele sferice au nucleul sferic, celulele cilindrice au nucleul ovoidal, celulele pavimentoase au nucleul aplatizat, iar celulele fusiforme au nucleul alungit. Dimensiunile nucleului sunt diferite de la 4 (spermatozoid) la 200 (ovul). Dimensiunile nucleului variaz n funcie de tipul celular, vrsta celulei, activitatea ei metabolic etc. Celulele tinere cu activitate metabolic intens, au nucleul mare i eucromatic, iar celulele btrne au nucleul mic i heterocromatic. Volumul nucleului variaz de la cteva zeci la 2.000 3. El este controlat de diferii factori printre care cei mai importani sunt: raportul nucleoplasmatic, activitatea celulei i forma de prezentare a cromatinei. Raportul nucleoplasmatic variaz n limite foarte largi (1/3 - 1/20) n funcie de vrst, starea funcional i de difereniere a celulei. Celulele tinere i cele maligne au o activitate metabolic intens, ca urmare au volumul nucleului crescut, iar citoplasma mai redus. Celulele mbtrnite prezint un raport invers, volumul nucleului mic i cel al citoplasmei mare.

44

Evaluarea acestui raport ne informeaz dac celula este tnr sau btrn, normal, belign sau malign. n cazul n care volumul citoplasmei crete mai mult dect volumul nucleului, raportul nucleoplasmatic se reface fie prin diviziunea celulei, fie prin creterea volumului nuclear. Poziia nucleului este de obicei n centrul celulei, dar se poate modifica sub influena diferiilor factori citoplasmatici. n cazul celulelor care acumuleaz anumite produse n citoplasm nucleul este excentric (celule adipoase). Nucleul este situat excentric i n cazul celulelor difereniate. Celulele secretorii au nucleul localizat n partea bazal a celulei. n structura nucleului s-au evideniat urmtoarele structuri: membrana nuclear, nucleolul, matrixul nuclear i cromatina nuclear (fig. 19).

Fig. 19. Structura nucleului. Membrana nuclear se continu cu reticulul endoplasmatic (dup Ispas i colab., 2000): HC - heterocromatina; EC - eucromatina; NU - nucleol.

Membran nuclear A fost descris pentru prima dat de Oskar Hertwi g (1849-1922), n anul 1893. La microscopul electronic apare sub forma unei membrane duble, cu o grosime de 100 i cu o structur trilaminat (fig. 20). ntre membrana nuclear extern i cea intern exist un spaiu perinuclear (150-300 ) umplut cu material amorf care comunic direct cu cavitatea reticulului endoplasmatic.

45

Membrana nuclear intern este aderent de coninutul nuclear. Are un contur continuu i rigid, deoarece sub ea exist o reea proteic numit lamina fibrosa sau lamina nuclear, asemntoare unui citoschelet. Aceast formaiune este format dintr-o reea fibroas de natur proteic format din trei polipeptide denumite laminele A, B i C (Gerace i Burke, 1988; Stuurman i colab., 1998), cu capacitatea de a se lega specific de proteinele membranei nucleare interne i de regiunile de cromatin nuclear, ancornd n interfaz cromozomii de nveliul nuclear (Dingwall i Laskey, 1992).

Fig. 20. Structura elementar a membranei nucleare (dup Lewis din Diculescu i colab., 1970).

nveliul nuclear nu este continuu, el prezint pori, cu diametrul ntre 300 i 1.000 (fig. 21). Porii sunt zonele de schimb macromolecular nucleocitoplasmatic precum i zonele unor schimburi dintre nucleu i cisternele reticulului endoplasmatic (Stoffler i colab., 1999) . Diametrul, numrul i distribuia porilor variaz cu specia, gradul de difereniere celular i starea fiziologic a nucleului. La mamifere reprezint 10% din suprafaa nveliului nuclear (Pante i Aebi, 1993).

46

Fig. 21. nveliul nuclear cu pori (dup Alberts i colab., 1994).

Nucleolul Este un component al nucleului, care apare ca o formaiune corpuscular distinct, vizibil n majoritatea celulelor aflate n interfaz. A fost pus n eviden la microscopul optic de Gabriel G. Valentin (1810-1883), n 1836. Spre deosebire de alte organite citoplasmatice nucleolul nu prezint membran. Este nconjurat de precursori ai ribozomilor care se leag unul de altul formnd o reea. n mod obinuit celulele au un singur nucleol, dar exist i celule cu doi sau mai muli nucleoli. Ca mrime nucleolii sunt cu att mai voluminoi cu ct celula are o activitate intens n sinteza proteinelor. n celulele adulte numrul nucleolilor variaz n funcie de: numrul de seturi cromozomiale, sex (este mai mare la femei), numrul nucleelor (celulele multinucleate au i mai muli nucleoli) i activitatea secretorie (celule acinoase, plasmocite etc.). Examinat la microscopul electronic n structura nucleolului s-au identificat patru componente (fig. 22): filamentoas - pars fibrosa (groase de 50 i lungi de 300-500 , conine ARN); granular - pars granulosa (cu diametrul de 150-800 , conine ARN); amorf - pars amorpha (dispus n ochiurile reelei de fibrile conine proteine i nglobeaz granule) i pars chromosoma reprezentat de materialul cromatidian (Ra ka i colab., 2004). Componenta principal a nucleoplasmei este cromatina organizat sub form de fibrile.

47

Fig. 22. Nucleolul - ultrastructur (dup Bernhard, 1958, din Diculescu i colab., 1970): a pars fibrosa; b pars granulosa; c pars amorpha; d pars chromosoma.

Matrixul nuclear (matricea nuclear sau carioplasma) Matrixul nuclear a fost pus n eviden de Lawrence, n anul 1987. Interiorul nucleului este format dintr-o reea de filamente proteice insolubile, interconectate. Cercetrile de histochimie electromicroscopic i de analiz electroforetic ale proteinelor matriceale au permis fundamentarea teoriei fibrilare a matricei nucleare (Comings i Okada, 1976). Dup extragerea cromatinei din nucleii hepatocitelor, prin tehnici speciale, rmne numai matricea cu o structur fibrilar. Electronomicroscopic matricea nuclear este format din fibrile proteice de 20-30 denumite matrixin. Matrixina se leag de fibrele de cromatin, avnd un rol principal n organizarea acestor fibre n cromomerele cromozomilor mitotici i meiotici. n matrixul nuclear se observ dou componente distincte: cromatina nuclear i nucleolul. Se consider c fiecare tip celular are un set distinct de proteine care compun matrixul nuclear. Analizele utrastructurale i biochimice au evideniat c matricea are urmtoarea compoziie chimic: proteine (87%), fosfolipide (12%), ADN (1%) i ARN (0,1%). Matricea nuclear are rol n iniierea i propagarea replicrii ADN-ului. ADN-ul care se replicar n faza de sintez (S) a ciclului celular este reinut n diferite regiuni ale nucleului.

48

Secvenele specifice din acest ADN se leag de proteinele care formeaz matrixul. Aceste secvene au mai fost numite scaffold-associatted region (MAR sau SAR). Regiunile care sunt ataate de matrix ajut la organizarea cromozomilor, reglarea replicrii, a transcripiei ADN-ului i delimitarea eucromatinei de heterocromatin. n plus, s-a observat c i ARN-ul este coninut n cadrul unor compartimente specifice n nucleu (Voicule i Puiu, 1997). Cromatina nuclear Cromatina nuclear n perioada dintre dou diviziuni celulare (interfaz) este format din filamente mici, rsucite fixate de membrana nuclear sau nucleoli. Aceste filamente au fost denumite cromoneme i ele reprezint forma sub care se gsesc cromozomii n nucleul celulei n perioada dintre dou diviziuni. n profaza meiotic (I) pe cromoneme se observ poriuni mai ngroate numite cromomere. Microscopia electronic a evideniat faptul c cromonemele sunt alctuite din mai multe fibrile elementare spiralizate, cu diametrul cuprins ntre 20-300 , alctuite din nucleohistone. Tot cu ajutorul microscopiei electronice s-a evideniat n regiunea cromomerelor, cromonemele care sunt spiralizate mai dens (fig. 23 i 24).

Fig. 23. Cromozom: 1 cromatide; 2 centromer; 3 microtubuli ataai; 4 braul lung; 5 braul scurt.

Dup modalitatea de organizare a materialului genetic organismele se mpart n dou categorii majore: eucariote i procariote. Eucariotele sunt organisme cu nucleul bine individualizat, iar procariotele sunt organisme la care materialul genetic este dispersat n citoplasma celular.

49

n cromozomii eucariotelor, prin colorare, au fost evideniate dou zone structural-funcionale: eucromatina; heterocromatina. Cele dou tipuri de cromatin difer dup gradul lor de spiralizare. Astfel, heterocromatina este mai condensat i se coloreaz intens pe durata ntregului ciclu celular n timp ce eucromatina este mai puin condensat i se coloreaz intens doar n timpul diviziunii celulare. Cele dou tipuri de cromatin difer i din punct de vedere funcional. Eucromatina este de dou feluri: eucromatina activ este transcris continuu; eucromatina permisiv este transcris cu intermiten, numai n urma unei inducii enzimatice (Ehrenhofer-Murray, 2004). Heterocromatina este de dou feluri: heterocromatina constitututiv constant condensat, ea conine gene care nu se transcriu. Este situat lng centromer i constituie 15% din ADN-ul repetitiv; heterocromatina facultativ prezint regiuni condensate doar n anumite celule. Celulele embrionare au o heterocromatin redus pe cnd celulele nalt specializate au o cantitate mare. Heterocromatina facultativ conine gene structurale represate care s-au transcris sau se vor transcrie (Grigor yev i colab., 2006). Raportul eucromatin/heterocromatin reprezint un indiciu al activitii metabolice. Un nucleu cu mult eucromatin are ADN-ul relaxat, ceea ce permite transcrierea mai multor gene (celule cu activitate metabolic intens), pe cnd un nucleu cu mult heterocromatin are ADN-ul condensat i nu permite transcrierea genelor (celule cu activitate metabolic redus). Din punct de vedere biochimic, filamentele din structura cromatinei nucleului n interfaz precum i cromozomii, care se formeaz n timpul diviziunii sunt alctuii din acid dezoxiribonucleic i proteine histonice, nonhistonice, cantiti mici de acid ribonucleic. La nceputul diviziunii celulare cromonemele se scurteaz i se ngroa formnd cromozomi. Cromozomii (gr. soma corp) au fost descrii de W.F.B. Hoff meister (1824-1877), n anul 1848, iar denumirea lor a fost atribuit lui Heinrich W. von Waldeyer (1836-1921), n anul 1888. Cromozomii sunt alctuii din dou cromatide paralele omogene ca structur unite printr-o formaiune inelar numit centromer.

50

Fig. 24. Cromozomul bicromatidic, structura schematic (dup Manoliu i colab., 1965, din tefnescu, 2004): 1 centromer sau constricia primar; 2 cromatide; 3 cromonema; 4 cromomera; 5 matrix; 6 nucleol; 7 heterocromatina telomeric; 8 satelitul; 9 kinetocorul; 10 regiunile heterocromatinice pericentrice; 11 regiunile eucromatinice; 12 constricie secundar, cu organizatorul nucleolar.

Dup poziia centromerului pe cromozom, Levan i colab., (1964, citai dup tefnescu, 2004), au elaborat o nomenclatur pentru a defini tipurile de cromozomi. Cromozomii se pot ncadra n urmtoarele tipuri (fig. 25): metacentric cu centromerul situat median;

51

submetacentric cu centromerul situat n aproprierea zonei mediane; subtelocentric cu centromerul poziionat subterminal; acrocentric cu centromerul localizat aproape de o extremitate a cromozomului; telocentric cu centromerul situat la o extremitate a cromozomului. La nivelul cromatidelor s-au descris i constricii secundare, care de asemenea pot constitui criterii de individualizare morfologic a cromozomilor. De constricia secundar se ataeaz n cursul diviziunii secundare nucleolul de unde i denumirea de zon nucleolar sau organizator nucleolar (fig. 25).

Fig. 25. Tipuri de cromozomi (dup Levan i colab., 1964, din Raicu, 1980).

Extremitatea cromozomilor, rotunjit, este denumit telomer. Acesta prezint proprieti specifice, conine o telogen care provoac respingerea cromozomilor. De braul lung sau scurt al cromozomului adesea se prind formaiuni corpusculare denumite satelii nucleari. n profaza i metafaza diviziunilor celulare mitotice i meiotice (I i II) ct i n anafaza i telofaza diviziunii meiotice (I) cromozomii sunt formai din dou cromatide ataate la nivelul centromerului. Aceti cromozomi se numesc bicromatidici. n anafaza i telofaza diviziunii mitotice i diviziunii meiotice (II), are loc clivarea centromerului i separarea cromatidelor, iar cromozomii rezultai se numesc monocromatidici. Numrul cromozomilor variaz n funcie de specie. Celulele somatice sunt diploide, conin dou seturi de cromozomi i sunt notate cu simbolul 2 n, iar cele sexuate sunt haploide i notate cu simbolul n.

52

Funciile nucleului: transmite caracterele ereditare; centrul cinetic care declaneaz diviziunea celular; coordoneaz i regleaz procesele implicate n realizarea mitozei i meiozei. Incluziunile nucleare - traduc o stare de suferin i au semnificaie de diagnostic. De exemplu, picturile lipidice sunt n special abundente n intoxicaiile severe. n bolile metabolice s-au descris la nivelul limfocitelor i a plasmocitelor apariia unor vacuole intranucleare sau corpi deni. Incluziunile nucleare sunt reprezentate prin corpi strini, particule de citoplasm i substane chimice.

53