Butilhidroxitoluen si Butilhidroxianisol

Cuprins

INTRODUCERE.................................................................................................................2 BUTILHIDROXITOLUENUL (BHT, E321).....................................................................3 OBINERE I CARACTERIZARE...............................................................................4 DOZELE ADMISE IN PRODUSELE ALIMENTARE.................................................5 NECESITATE.................................................................................................................5 RISC.................................................................................................................................5 BUTILHIDROXIANISOLUL (BHA, E320)......................................................................6 OBINERE I CARACTERIZARE...............................................................................6 DOZELE ADMISE IN PRODUSELE ALIMENTARE.................................................7 NECESITATE.................................................................................................................7 RISC.................................................................................................................................8 STUDIU DE CAZ................................................................................................................8 Microprepararea rapida a procedurii de determinare a BHT,BHA,TBHQ din uleiurile comestibile prin gaz cromatograful si spectrometrie de masa:........................................8 CONCLUZIE PROIECT...................................................................................................14 BIBLIOGRAFIE................................................................................................................14

INTRODUCERE
Aditivii alimentari au fost folositi in prepararea si pastrarea alimentelor inca din cele mai vechi timpuri. Insa, in ultimul secol, odata cu dezvoltarea fara precedent a industriei alimentare, ei au capatat un rol primordial in procesarea alimentelor. Datorita cererii foarte mari de produse alimentare prelucrate, a crescut si cererea de substante care

sa faciliteze prelucrarea materiei prime, conservarea pe o perioada mai mare timp a produselor alimentare, etc. Din aceasta cauza substantele naturale, folosite pana atunci, au fost inlocuite cu substante sintetice, mai usor de produs si deci mai ieftine. Aditivii alimentari, notati cu litera E datorita alinierii la normele Uniunii Europene sunt continuti in majoritatea produselor alimentare. Utilitatea acestor aditivi alimentari este ca ei mentin calitatea si siguranta produselor o perioada mai mare de timp, mentin sau imbunatatesc gustul produselor, asigura controlul aciditatii si alcalinitatii produselor, mentin consistenta produselor, de asemenea mai mentin aroma sau culoarea produselor alimentare. In absenta acestora, populatia nu ar mai cumpara cu placere foarte multe produse uzuale: bauturi racoritoare, produse de patisserie si cofetarie, bomboane de tot felul, gemuri, marmalade, mezeluri, multe preparate culinare realizate in unitatile de alimentatie publica. Oamenii de stiinta afirma ca, in cantitati mici , consumul lor nu constituie un pericol pentru organism. De aceea normele pentru utilizarea aditivilor alimentari prevad cantitatile maxime de substanta care pot fi folosite in diversele categorii de produse alimentare. Totusi, pentru a preveni eventualele pericole Statele Unite ale Americi si Uniunea Europeana au interzis o parte din E-uri. Tarile Uniunii Europene fac eforturi deosebite pentru rescrierea listelor de aditivi alimentari, scopul fiind siguranta alimentara a consumatorilor. In Romania, in ultimul timp, mass-media a acordat o atentie deosebita aditivilor alimentari, in majoritatea cazurilor prezentandu-se numai aspectele negative ale utilizarii acestora, si de prea putine ori luandu-se in considerare si beneficiile lor. Aceasta atitudine negativista a mass-media poate fi inteleasa prin prisma particularitatilor de utilizare a aditivilor alimentari in tara noastra, si anume: - laboratoarele de la noi nu pot detecta toti aditivii ce sunt introdusi in alimente, iar de multe ori produsul este introdus pe piata doar prin datele furnizate de producator. Exista astfel riscul de a nu se respecta cantitatea adaosurilor sintetice conform reglementarilor legale. - in multe din produsele de pe piata romaneasca se gasesc E-uri interzise, si pentru care nu ia nimeni atitudine.

BUTILHIDROXITOLUENUL (BHT, E321)

Are formula structural:

H3C H3C H3C C

OH C

CH3 CH3 CH3

CH3

Este practic insolubil n ap, uor solubil n alcool etilic (1:4), uleiuri i grsimi (1:2 - 1:4). BHT este larg utilizat att pentru protejarea grsimilor i a uleiurilor ct i pentru impregnarea ambalajelor destinate unor produse cu coninut ridicat n grsimi. Activitatea sa este potenat prin asociere cu ali antioxidani (n special galat de dodecil) i ageni sinergetici. Are aceleai efecte adverse ca i BHA. Se folosete pentru maionez, grsimi i uleiuri comestibile, n principal margarin n doze de pn la 75 mg/kg. Functie tehnologica- Antioxidant Utilizare- Previne rancezirea alimentelor grase. BHT este considerat posibil cancerigen. Efecte negative- Cancerigen, tulburri ale ficatului, alergii OBINERE I CARACTERIZARE Are ca sinonim: BHT, iar denumirile sale chimice sunt: 2, 6-butilditer-p-crezol, 4- metil-2, 6-butilditerfenol. Formula sa chimic este: C15H240, iar M=220,35. Butilhidroxitoluenul (BHT) este un antioxidant fenolic cunoscut i utilizat n industria alimentar de aproximativ 50 de ani. Industrial, se obine prin mai multe metode, dintre care metoda ce utilizeaz paracrezolul ca substan de plecare este considerat cea mai convenabil din punct de vedere al realizrii sale tehnice. Reacia de sintez a BHT are loc prin alchilarea para- crezolului cu diveri ageni de alchilare, ca de exemplu izobuten, n prezena unor catalizatori acizi. Reacia de alchilare, n acest caz, poate avea loc n dou moduri: a) n faz lichid, cu utilizarea catalizatorilor acizi ca acidul sulfuric, acidul fosforic, acidul fluorhidric, acidul paratoluensul- fonic, sau n prezena unor cationii rini schimbtoare de ioni cu grupe sulfonice; b) n faz gazoas, cnd se lucreaz la temperaturi de 200-350"C i presiune de 20-200 atm, iar catalizatorul utilizat este n strat fix (oxizi de aluminiu i siliciu zeolii, oxid de crom n amestec cu oxid de fier sau amestecuri de oxizi de aluminiu, magneziu i calciu). In alte variante ale acestui procedeu, izobuten poate fi nlocuit cu amestec de butan-butene, cu alcool ter butilic sau cu alchi 1terbutileteri. Pentru ca grupele ter butilic s fie introduse n poziiile 2, 6 (vezi formula structural a BHT) se utilizeaz fenoxidul de aluminiu drept catalizator specific al acestei reacii. Inconvenientul metodei const n faptul c separarea paracrezolul ui de izomerii si orto- i meta- din amestecul extras din gudroanele de cocserie n care se gsete, este dificil de realizat. O alt metod de obinere a BHT (E 321) folosete ca materie prim 2, 6-diterbutil- fenolul. Butilhidroxitoluenul se prezint ca o pulbere cristalin alb sau glbuie, sau de fulgi de culoare alb. Este o substan inodor sau cu un miros slab aromatic. Are densitatea df = 1,048. temperatura de topire de 70C, iar temperatura de fierbere, 265C. n ceea ce privete solubilitatea sa, E 321 este insolubil n ap, uor solubil n alcool etilic n proporie de 1:4, iar n uleiuri i grsimi se solubilizeaz n raport de 1:2 pn la 1:4. Pentru a putea fi utilizat n industria alimentar, se cere ca

aditivul s aib un coninut de minimum 99% BHT, cenu sulfatat, maximum 0.005%, i impuriti fenolice, maximum. DOZELE ADMISE IN PRODUSELE ALIMENTARE Butilhidroxitoluenul (BHT) este adugat n produsele alimentare n concentraie de maximum 200 mg/kg (separat sau n combinaie cu galaii i BHA, din care BHT este n cantitate de 100 mg/kg) n: grsimi i uleiuri pentru fabricarea alimentelor tratate termic, n ulei i grsimi de gtit, exclusiv n uleiul din turte de msline, n untur, n ulei de pete, grsime de pasre i oaie. E 321 se mai adaug n maionez n concentraie de 60 mg/kg, iar pentru amestecuri utilizate n patiserie, n snacksuri pe baz de cereale, n lapte praf pentru automate, n supe, ciorbe, sosuri,.n carne deshidratat, n fructe n coaj prelucrate, n mirodenii i condimente precum i n cereale prepreparatc, n doza de 200 mg/kg, singur sau n combinaie cu galaii sau BHA (concentraia se exprim n grsime). n cartofi deshidratai aditivul se adaug n doza de 25 mg/kg, singur sau mpreun cu galaii i BHA. n guma de mestecat i n suplimentele dietetice doza limit de folosire a aditivului nu trebuie s depeasc 400 mg/kg individual sau n combinaie cu BHA sau cu galaii de propil, octil, doclecil, etil (E310-313). NECESITATE In absena antioxidanilor, produsele alimentare care conin grsimi sub influena oxigenului (aer) pot suferi procese de degradare (autooxidare. degradare oxidativ, rncezire aldehidic) i, ca urmare, are loc o modificare a proprietilor senzoriale ale acestor alimente - gust, miros, culoare. (Prin rncezire se observ de obicei o nchidere a culorii naturale a produselor alimentare). Pentru prevenirea proceselor de degradare a acizilor grai polinesaturai, n-6 i n-3 (acizi grai eseniali) i a vitaminelor (A. E, C, B1 B2, B6), folosirea antioxidantului este o necesitate. Antioxidantul mpiedic formarea substanelor toxice pentru organismul uman. Este tiut faptul c produsele alimentare rncezite acioneaz asupra mucoasei gastrice, producnd leziuni i, n acelai timp, deficiene n utilizarea digestiv a alimentelor. Dintre substanele toxice i urt mirositoare formate prin rncezire, se menioneaz oxiacizi, cetoacizi, cetone, acizi grai cu mase moleculare mai mici, aldehide. dintre care unele au chiar i efecte cancerigene. Utilizarea antioxidantului este o necesitate, deoarece previne aceste aciuni degradative cauzate de prezena oxigenului, luminii, a substanelor generatoare de radicali liberi, a metalelor grele (fier, cupru), printr-un proces de inhibare a reaciilor de oxidare precum i de propagare a acestora. Aditivul mai este necesar ca antioxidant i pentru impregnarea ambalajelor utilizate pentru produsele alimentare bogate n grsimi. RISC In general, aditivul E 321 este bine tolerat de ctre organismul uman, la respectarea dozelor admise de legislaiile actuale. Totui unii autori au reclamat apariia unor fenomene alergice, ca de exemplu cefalee, vertij, urticarie, crize astmatice, somnolen, eczeme, dermite de contact, dureri vagi abdominale sau edeme Quincke. Cercetri efectuate pe animale au evideniat ns efectele toxice ale acestui aditiv.

Nocivitatea aditivului crete cu coninutul alimentaiei n lipide. (La BHA nu s-a constatat acest efect). Studii efectuate de unii cercettori au evideniat faptul c aceast substan ar fi un "promotor" al carcinogenezei i ar putea avea i un efect embriotoxic. La animale (obolanii de experien), doze de 0.5 - administrate pe o perioad mai mare de timp au artat o cretere a colesterolemiei. a fosfolipidelor i a mucoproteinelor din ser. La concentraii relativ mai mari (1%) s-a constatat apariia unor modificri hematologice i se presupune c ar favoriza apariia unor adenoame (la oareci). La om, doza zilnic admisibil este de 0,3 mg/kilocorp.

BUTILHIDROXIANISOLUL (BHA, E320).

Are formula structural:

OH C

CH3 CH3 CH3

OCH3
BHA este unul dintre antioxidanii cel mai des utilizai n grsimi i uleiuri. Prezint avantajul ca are aciune antioxidant puternic, nu schimb calitile senzoriale ale produsului i nu-i pierde proprietile antioxidante la prelucrarea termica a produselor alimentare n care se ncorporeaz. Prezint risc de reacii alergice, cancer, hiperactivitate, efect estrogenic, crete nivelul de colesterol din snge. Este interzis n hrana pentru copii i bebelui. Se folosete pentru maioneze, grsimi i uleiuri comestibile, materii grase lactate anhidre, n doze de maxim 200 mg/kg.Efecte negative- tulburri ale ficatului, alergii. OBINERE I CARACTERIZARE Are ca sinonim: BHA, iar denumirile sale chimice sunt: 3-ter-butil-4hidroxianisol. Este de fapt un amestec de doi izomeri: 2-ter- buti 14hidroxianisol i 3-ter-butil-4-hidro- xianisol, dintre care primul are proprieti antioxidante mai bune. Formula sa molecular este C11H16O2, iar M=180,24. Butilhidroxianisolul (BHA) se obine industrial, prin reacia de metilare a hidrochinonei cu metanol n prezena acidului sulfuric sau a cationiilor puternic acizi. Produsul rezultat este alchilat cu izobuten n prezena catalizatorilor: alumina, alumina fluorurat, zeolii sau rini schimbtoare de ioni, care au n structura lor grupri SO3H. Butilhidroxianisolul este o substan cristalin, cu aspectul unei mase ceroase de culoare alb sau glbuie. Prezint, de asemenea. un miros aromat. Este solubil n alcool (1:4), n propilenglicol (1:1) precum i n uleiuri i grsimi. Nu se solubilizeaz n ap. BHA se topete n intervalul de temperatur de 48-55OC. Este necesar ca produsul comercial utilizat n industria alimentar s aib un coninut de substan activ de minimum 98.5%, dintre care izomerul 3-tert-butii-4- hidroxianisol s fie de minimum

85%. Cenua sulfatat este de maximum 0,05%, iar impuritile fenolice, maximum 0,5%. DOZELE ADMISE IN PRODUSELE ALIMENTARE Butilhidroxianisolul (BHA) este utilizat pentru grsimi i uleiuri comestibile, unt, materii grase anhidre, diverse amestecuri de grsimi vegetale i animale n concentraie maxim de 200 mg/kg, singur sau n combinaie cu butilhidroxi- toluenul (BHT) i cu galatul de propil. n acest amestec de antioxidani BHT nu trebuie s depeasc 100 mg/kg. La maionez, butilhidroxianisolul este folosit n doz maxim de 140 mg/kg. n cazul utilizrii aditivului ca antioxidant pentru uleiul de cocos, uleiul din smburi de struguri, de soia, de arahide, bumbac, rapi, susan, mutar, germeni de porumb sau pentru grsimea topit de porc, doza de aditiv E 320 este limitat la 200 mg/kg, singur sau n combinaie cu BHT sau cu galai. Cerina este ca aditivul BHT s fie utilizat n amestec, n doze sub 100 mg/kg. Conform actului normativ actual, E 320 se utilizeaz la grsimi i uleiuri supuse tratamentelor termice sau pentru prjire, n concentraie de maximum 200 mg/kg, individual sau n combinaie cu BHT (ambii antioxidani se raporteaz la coninutul de grsime). BHT nu trebuie s depeasc 100 mg/kg. Tot n concentraie maxim de 200 mg/kg, E 320 poate fi folosit pentru untur, ulei de pete, grsime de pasre i oaie, mixuri pentru checuri, snacksuri pe baz de cereale, lapte praf, supe i bulioane deshidratate, sosuri, carne deshidratat, produse de asezonare i condimente, fructe n coaj prelucrate, cereale pretratate termic. Pentru cartofi deshidratai, 25 mg/kg, separat sau n combinaie cu galaii. Pentru guma de mestecat i pentru suplimente dietetice, doza maxim de aditiv este de 400 mg/kg, individual sau n combinaie cu galaii sau BHT. NECESITATE Butilhidroxianisolul folosit ca antioxidant n produsele alimentare previne procesele de autooxidare (datorate oxigenului). Procesul de degradare oxidativ a grsimilor i uleiurilor ca i a alimentelor ce conin grsimi se manifest prin formarea de substane toxice pentru organismul uman, ca: hidroperoxizi, aldehide, cetoacizi, cetone, acizi grai cu mas molecular mic, epoxizi, hidroacizi etc.; modificri ale proprietilor senzoriale (gust ru, miros neplcut i nchiderea la culoare a produselor respective), reducerea valorii lor nutritive, ca urmare a degradrii acizilor grai polinesaturai (acizi grai eseniali) precum i degradri ale vitaminelor A, E, C, B1 B2, B3 D. De asemenea, prin procesare, lipidele pot suferi o degradare termic, avnd ca urmare formarea de substane toxice ca acizi, hidrocarburi, esteri, propendioli, acrolein, cetone etc., n cazul acizilor grai saturai, precum i dimeri aciclici i ciclici, n cazul acizilor grai nesaturai i al esterilor ca triacilgliceroli. Sub aciunea combinat a temperaturii i oxigenului rezult alcani cu lan lung, aldehide, cetone, lactone, produse dimerice de oxidare, precum i o serie de substane volatile. Majoritatea acestor compui sunt toxici sau unii chiar ; cancerigeni. Din acest motiv, utilizarea antioxidantului E 320 este o necesitate. Aditivul este folosit ca antioxidant pentru o gam larg de produse, datorit faptului c nu modific

proprietile organoleptice ale alimentelor, are o mare aciune antioxidant i nu ii modific proprietile antioxidante n timpul procesrii termice a produselor alimentare. RISC Butilhidroxianisolul este n general bine tolerat de ctre organismul uman. Totui, sunt cazuri care au semnalat apariia fenomenelor alergice ca: cefalee, grea, dureri abdominale, somnolen, astm, rinite, urticarie precum i hiperactivitate etc. Aceste simptome se fac simite la depirea dozelor impuse de legislaiile sanitare. In organism, acumularea de aditiv este relativ mic. Aproximativ 70% (din doza ingerat) se elimin prin urin sub form de glucuron-conjugat, iar 1% sub form liber. BHA este considerat ns de unii autori o substan toxic, posibil cancerigen. Este interzis n Japonia, din anul 1958. In Marea Britanie, experii recomand oficial interzicerea sa. In lucrare se arat c problema carcenogenezei n cazul aditivului BHA este foarte controversat. O serie de specialiti apreciaz (contrar celor artate mai nainte) c reducerea important a incidenei cancerului de stomac n SUA i n rile vest-europene se explic prin folosirea larg a BHA i a BHT. Doza zilnic admisibil pentru om este; de 0-0,5 mg/kilocorp.

STUDIU DE CAZ
Microprepararea rapida a procedurii de determinare a BHT,BHA,TBHQ din uleiurile comestibile prin gaz cromatograful si spectrometrie de masa: Abstract

O procedur rapid, precis i cu o economie de solvent a fost dezvoltat pentru determinarea GC/MS a trei antioxidani fenolici, butilhidroxitoluen (BHT), butilhidroxianisol (BHA) i butilhidrochinona(TBHQ), n uleiuri vegetale. Metoda implic dou etape de exctracie i o procedur de centrifugare ntr-un flacon de 2 ml auto-eanionat, consumnd doar 50 mg de prob i 1 ml acetonitril. Recuperrile de antioxidani fenolici, atunci cnd rezulatele pentru uleiul de soia, ulei de arahide i ulei de cereale de gtit la 50, 200 i 250 mg / kg, respectiv au fost n intervalele 95.6-104.3% pentru BHT, 99.7-107.5% pentru BHA i 93.6-103.8 % pentru TBHQ cu deviaia standard relativ (RSD) au fost mai puin de 3% pentru msurtorile independente. Metoda a fost dezvoltat repetabil i poate fi aplicat pentru a determina urmele de antioxidani fenolici n uleiurile vegetale. Introducere Antioxidanii joac un rol semnificativ n ntarzierea reaciilor de oxidare a lipidelor n produsele alimentare, deoarece uleiurile i grsimile, eseniale pentru alimentaia noastr, tind sa se confrunte cu probleme de oxidare i rncezire, care afecteaz calitatea produselor alimentare i pot pune n pericol sntatea noastr. Pentru a preveni peroxidarea lipidelor din alimente, productorii prefer s utilizeze antioxidani fenolici sintetici, cum ar fi butilhidroxitoluenul (BHT), butilhidroxianisolul (BHA) i butilhidrochinona(TBHQ), din cauza stabilitii lor chimice, disponibilii lor si preurile reduse. Cu toate acestea, sigurana acestor antioxidani sintetici a fost audiat datorit potenialului lor de risc (Kubow, 1990; Namiki, 1990; Okubo, Yokoy- ama, Kano, & Kano, 2003). De aceea, utilizarea acestor antioxidani sintetici din produsele alimentare este strict reglementat de ctre guverne, precum i regulamentele privind nivelurile permise de multe ori variaz de la o ar la alta. De exemplu, TBHQ este permis in Statele Unite ale Americii n timp ce acesta este interzis n rile Uniunii Europene (Noguera-Ort, Villanueva-Ca-om ~ ca, si Ramis-Ramos, 1999). De obicei, limita maxim de BHT, BHA i TBHQ ar trebui s fie nu mai mult de 200 mg/kg n uleiurile vegetale, fie individual sau n combinaie. Astfel, determinarea antioxidanilor sintetici din alimente este necesar pentru a asigura mplinirea cerinelor legale i procedurile de control al calitii n industria alimentar. O varietate de metode analitice pentru determinarea antioxidanilor fenolici, au fost raportate pana in prezent. Exist spectrometria UV (Komaitis & Kapel, 1985), metode sau tehnici electrochimice (Araujo, Barbosa, Viana, si Ferreira, 2011; Raymun-DOA, Paulab, Francoc, si Fetta, 2007;. Tormina et al, 2010), Electroforeza capilar(CE) (Boyce & Spickett, 1999; Xiang, Gao, si Xu, 2007) i cromatografia capilar electrocinetica micelara cu detectare electrochimic (MECC) (Guan, Chu, Fu, si Ye, 2005). Cromatografia lichid de nalt performan (HPLC), combinat cu sistemele diferite de detectare sunt cele mai comune proceduri analitice pentru detectarea i cuantificarea antioxidanilor fenolici, n uleiuri i grsimi comestibile. Mai multe metode HPLC combinate cu UV sau spectrometria de mas (MS) au aprut n literatura de specialitate recent (Anddrikkopoulos, Brueschweiler, Felber, si Taeschler, 1991; Hao, Ni, Sun, i Huang, 2007; Huang et al , 2008;. Li et al, 2009;. Perrin & Meyer, 2002;. Saad et al, 2007). GC cu detector de ionizare n flacr (FID)este, de asemenea, utilizat pentru determinarea de antioxidani fenolici, n uleiurile comestibile (Gonzalez, Gallego, si Valcarcel, 1999; Yang, Lin, si Choong, 2002). Cu toate acestea, metodele raportate anterior implic, de obicei, cantiti mari de solveni organici n

procesul de extracie cu solvent lichid, n faza mobil sau n procedura de eluie a fazei solide de extracie(SPE). Prin urmare, metoda cea mai simpl, rapid care poate reduce foarte mult cantitatea de solveni organici, n analiza de antioxidani fenolici, n uleiuri comestibile este dezirabil n special n aplicaiile de control al calitii. Cromatografia de gaze i spectrometria de mas (GC / MS) este o metod puternic de separaie i identificare i a fost folosit pentru sensibilitatea sa ridicat pentru muli ani. O aplicaie important a GC / MS pentru identificare utiliznd att timpii de retenie i abundentele relative ale fragmentelor de ioni caracteristice, crescnd astfel precizia i ofer rezultate de ncredere. Aceast technic, prin urmare, este frecvent utilizat pentru analiza reziduurilor de pesticide din alimente (Bolaos, Frenich, si Vidal, 2007; Leandro, Hancock, Fussell, si Keely, 2007). Au fost gsite documente privind detecia antioxidanilor in uleiurile vegetale folosind aceast metod(Guo et al., 2006). Cu toate acestea, Guo a utilizat 9 ml de etanol ca extract, pentru extracia antioxidanilor din 1 g de ulei vegetal, care a poluat sever coloana capilar deoarece solubilitatea uleiului n etanol este att de mare nct matricea de ulei a fost coextras i injectat n coloan capilar. n aceast lucrare a fost dezvolat o metoda care rapid i uor poate reduce solventul organic care in mare parte depinde de sensibilitatea nalt a GC/MS. Rspunsul detectorului este liniar ntr-o und destul de larg 0.01-20 mg/L. Antioxidanii din uleiurile comestibile au fost extrai cu 1 ml de acetonitril si apoi injectai direct n unitatea GC/MS fr curare sau preconcentrare, iar analizanii au fost detectai uor i sensibil. n plus fa de furnizarea de sensibilitate mai mare i o procedur mai simpl, un alt avantaj mare al metodei actuale este faptul c utilizeaz acetonitril ca solvent de extracie, n care solubilitatea matricei de ulei este mult mai mic dect n etanol sau metanol, astfel nct complexitatea probei injectate este redus la minimum i astfel ajut pentru a extinde durata de via a coloanei capilare. 2. Experiment 2.1. Materiale i reactivi Mai multe uleiuri de gatit, inclusiv ulei de semine de floarea-soarelui, ulei de porumb, ulei de gtit din cereale, uleiul amestecat si uleiul din boabe de soia au fost achiziionate de la toate supermarketurile locale din Hangzhou. Probele de BHT, BHA i TBHQ au fost toate de o puritate mai mare de 98% i cumprate de la Supelco (Bellefonte, PA, Statele Unite ale Americii). Metanolul, acetonitrilul i etanolul au fost conform gradului HPLC i au fost achiziionate de la Zheng-Xin Chemical Co (Shanghai, RP Chinez). 2.2. Pregtirea i depozitarea antioxidanilor fenolici Pentru a prepara soluia standard de stoc, aproximativ 0.01000 g (cu precizie ponderate la 0,00001) de BHT, BHA i TBHQ au fost introduse n mod individual ntr-un balon cotat de 10 ml i se dizolv cu chihlimbar acetonitril. Soluiile stoc au fost depozitate ntr-un congelator (4 C), departe de lumin pentru maxim o lun. Soluii standard de lucru de concentraie variabil au fost pregtite de zi cu zi prin diluarea volumelor corespunztoare de soluie din stocul de acetonitril. Pentru a reduce utilizarea solvenilor organici, volumul de soluie de lucru standard pentru fiecare nivel de concentrare preparat este de numai 1 ml. Procesul specific a fost dup cum urmeaz: 100 ml soluie stoc de standard lL (1000 mg / l) a fost transferat la o precizie 2 ml intr-un flacon eanionat.

Nou sute microlitrii de acetonitril au fost apoi adugai repede. Flaconul a fost acoperit i agitat uor. Deci, concentraia din soluia final obinut a fost de 100 mg/L. Prin repetarea aceeai metode, diferite niveluri de concentraie de soluie de lucru standard au fost treptat obinute. 2.3. Aparat Urmtoarele aparate au fost folosite n timpul cursului de pregatire a probei: baie cu ultrasunete, modelul KQ-50B, (Kunshan Shumei, China); centrifug modelul Anke TDL-4, (Shanghai Anting, China); 100 seringi LL (Agilent, USA), 5 ml (injectoare Kajie Miao, China) ,flacoane eanionate de 2ml (Agilent, USA), precum i balana analitic Model AE240 (Mettler-Toledo, Elveia). 2.4. Procedura de extracie Mostra de ulei (50 mg) a fost cntrit ntr-un flacon eanionat de 2 ml. Acetonitrilul (ACN) (0,5 ml) a fost adugat, apoi plasat ntr-o baie cu ultrasunete timp de 1 min. Amestecul a fost centrifugat la 3500 rpm timp de 3 min. Partea de sus a fost clar transferat cantitativ de ctre un injector la un alt flacon eanionat. Procedura a fost repetat o dat, iar cele dou extracte ACN au fost bine amestecate. Soluia final a fost injectat pentru analiza CG/MS. 2.5. Analiza GC/MS Analiza GC / MS a fost efectuat pe un gaz cromatograf-HP6890 si pe un detector spectrometric de mas HP5973 echipate cu o surs de ionizare de electroni i un qudripol cu o singur faz. Probele au fost separate pe coloan capilar DB-17, 30 m 0.25 mm ID i faza LM cu o grosime de 0,25. Gazul purttor heliu a fost stabilit la o constant de debit de 1 ml/min. Injecia eantion a fost fcut cu un auto eanionator 7683 HP. 10 seringi lL au fost splate de trei ori cu acetonitril nainte i dup fiecare prob i se cltesc cu lL soluie de prob nainte ca lL soluie de prob s fie injectat n modul farastropire. Temperaturile instrumentelor GC/MS au fost stabilite la 250 C la injector si 280 C la linia de transfer, 230 C de la sursa de ioni si 150 C la cuadrupolar. Cuptorul GC a fost meninut la 60 C, consolidat la o rata de 20 C/min la 220 C i inut la aceast temperatur timp de 1 min, apoi consolidat, la o rat de 40 C / min la 280 C. Spectrometru de mas a fost operat n modul electronic de impact (EI, 70Ev) i ioni selectati au fost monitorizai pentru m/z 220, 205 pentru BHT, 180, 165 pentru BHA i 166, 151 pentru TBHQ. Identificarea de BHT, BHA i TBHQ a fost confirmat prin comparaie direct cu standardele lor pe baza timpului de retenie i de raiile spectrometriei de mas a ionilor. 3. Rezultate i discuii 3.1. Liniaritate i detectarea limitelor Vrfurile moleculare ale ionilor de BHT, BHA i TBHQ la m / z 220, 180, 166 i, respectiv, a ionilor de fragment corespunztor puternic la m / z 205, 165 i 151 au fost selectate ca semnalul cantitaii. Curba de calibrare a fost obtinut prin trasarea zonelor de vrf fa de msurile concentrate. Liniaritatea excelent a fost obinut n intervalul 0.01-20 concentraie de mg/L pentru fiecare antioxidant fenolic, oferindu-le coeficientul de corelaie 0.9992 pentru BHT, 0.9998 pentru BHA, 0.9997 pentru TBHQ. Limita de detecie (LD), a fost luat atunci cnd semnalul zgomotos a fost de 3. n acest fel, LD pentru BHT a fost de 0,001 mg / l, pentru BHA a fost de 0.002 mg / L i pentru TBHQ a fost de 0.004 mg / L. 3.2. Optimizarea procedurilor de extrac ie

Pentru a reduce utilizarea de solventului organic, volumul extractului de solvent a fost selectat la 1 ml. Eantionul analizat de ulei ar trebui s fie ponderat ct mai puin posibil, deoarece matricea de ulei poate fi coextras in procedura de extractie a solventului, prin urmare,procedura polueaz coloana capilar in urmtoarele analize GC/MS. Este cunoscut faptul c limita maxim permis de antioxidani fenolici este de 200 mg/kg n uleiurile vegetale. n cazul n care proba de ulei contine antioxidanti ai acestui nivel de concentrare (200 mg / kg) au fost diluati de 20 ori fat de extractul de solvent (1 ml), care e s spun, eantionul a fost ponderat la 50 mg, apoi concentraia final de antioxidant pentru GC / MS determinat ar fi de 10 mg/L, care s-a ntmplat s fie n intervalul 0.01-20 concentraie de mg / L (liniaritatea a fost excelent pentru fiecare antioxidant fenolic discutat n seciunea de mai sus). Chiar dac concentraia de antioxidani n uleiurile comestibile a fost de numai 1 mg/kg, dup diluarea multipl de 20 ori (0,05 mg / L a fost obinut pentru analiza CG / SM), este nc n limita de 0.01-20 mg / L. Potrivit cu aceasta, proba de ulei ponderat a fost selectat la 50 mg. Pentru a selecta extractantul potrivit pentru mbuntirea eficientei de extractie, metanolul (MeOH), etanolul (EtOH), acetonitrilul (ACN) i MeOH / ACN (1:1, v / v) au fost evaluati ca fiind cei mai potriviti solvent pentru a extrage antioxidantii fenolici din grasimi (Perrin & Meyer, 2002;. Saad et al, 2007). Dou sute de micrograme din fiecare antioxidant fenolic au fost adugate separat la 1.0000 g de ulei de arahide, care nu coninea iniial antioxidanti fenolici. Cincizeci de miligrame din acest ulei de arahide au fost ponderate separat n patru flacoane auto-esantionate. MeOH, MeOH / ACN (1:1, v / v), ACN i EtOH au fost selectate ca solvent de extracie. Procedura de extracie descrisa mai sus a fost efectuat. Soluia finala obinuta a fost injectata pentru analiza CG / SM. Eficiena extragerei utiliznd EtOH a fost peste asteptari, probabil, din cauza coextractiunii matricei de ulei. Aceast postulare a fost confirmata de urmtorul experiment simplu: ulei de arahide (25 mg) a fost impartit n dou si cntrit cu flacoane auto-esantionate de 2 ml. ACN (1 ml) i EtOH (1 ml) au fost adugate, respectiv,, i plasate ntr-o baie cu ultrasunete timp de 1 min. S-a constatat ca o soluie clar nu poate fi obtinuta in urma fazelor de separare specifice n flaconul de EtOH, n timp ce emulsionarea a fost observat ntr-un flacon de ACN. Dup centrifugare, o soluie clar poate fi nc obinuta n flaconul de EtOH, dar separarea fazelor specifice i au gasit urme de precipitat de ulei n partea de jos a flaconului de ACN. Deci, putem concluziona c solubilitatea uleiului n EtOH este mult mai mare dect n ACN. De aceea, ACN a fost selectat ca solvent de extracie, care va minimiza complexitatea probelor injectate i, astfel, ajuta in continuare pentru a extinde durata de via a coloanei capilare. Un alt aspect important n aceast procedur de extracie este alegerea modului de agitaie a probei. Dou moduri diferite de tremurturi, mecanice si ultrasonice, au fost utilizate pentru comparaie. Agitarea timp de 1 min pana la 5 min pentru ambele moduri a fost evaluata. S-a constatat c acesta a luat cel putin 5 minute pentru a amesteca mostra de ulei cu solventul folosind modul de scuturare mecanic i modul de ultrasunete fiind mai bun modul mecanic de agitare. 3.3. Cromatograma extrac iei de antioxidanti fenolici Este studiata selectia de monitorizare ion (SIM) cromatogram la m / z 220, 205, 180, 165, 166 i 151 pentru soluie standard de BHT, BHA i TBHQ. 3.4. Recuperri i studii de precizie

Trei nivele (50.0, 200.0 i 250.0 lg) pentru fiecare antioxidant fenolic au fost adugate la 1.000 g de ulei de soia, ulei de arahide i ulei de cereale de gtit n mod corespunztor, care nu conineau iniial toti antioxidantii fenolici. Fiecare prob a fost amestecata bine. Pentru fiecare nivel de plus,au fost efectuate trei experimente in mod repetat. Rezultatele obtinute au fost satisfctoare. Acestea au furnizat valori de recuperare procentuale fa de 93,6% pn la 107,5% i valori RSD toate fiind sub 3%. Reproductibilitatea peste diferite zile a fost de asemenea verificata prin injectarea amestecurilor care conin 10 mg/l din fiecare antioxidant fenolic. Acestea au fost observate c att timpii de retentive din zonele de vrf au fost reproductibile i toate valorile RSD obinute au fost satisfctoare (<4%). Nu a fost nici o influen semnificativ a stabilitii antioxidantilor asupra rezultatelor experimentale n timpul pregtirii probei i in timpul determinarilor GC/MS. 3.5. Analiza de uleiuri vegetale comerciale Probe reale de ulei in care au fost gasite urme de antioxidanti fenolici sunt prezentate n tabelul 2. Toate probele au fost analizate in conformitate cu procedura de dezvoltat. Identificarea vrfului de BHT, BHA i TBHQ a fost confirmat de comparaia direct cu standardele lor pe baza timpului de retenie i masa de ioni spectral. Cuantificarea s-a bazat pe metoda standard externa folosind curbele de calibrare montate prin analiza de regresie liniar. Acestea au observat c TBHQ a fost gsit n toate probele analizate, n timp ce BHT i BHA, nu s-au gsit decat in uleiul de porumb, care conine 8.3 mg/kg BHA. Nici una din probele pozitive nu ncalc limita legala. 3.6. Comparatie cu metoda standard Pentru a verifica acurateea metodei dezvoltate, Asociaia Farmacitilor oficial analitici (AOAC) Procedura de 983.15 (Asociaia Farmacitilor oficiale analitice, 1995) este descrisa pentru uleiuri i grsimi pentru determinarea de antioxidanti in uleiurile comerciale. Rezultatele obinute se gasesc n tabelul 3. Dup cum se poate observa din tabelul 3, rezultatele cantitative ale amestecului de uleiuri cum ar fi ulei de floarea soarelui Ulei de semine de porumb sunt n bun concordan cu cele raportate n aceast metod i declarate de fabricaie (raportat doar la categoria de antioxidanti). 4. Concluzii Un proces microextractie simplu, rapid si economisitor de solvent organic a fost dezvoltat pentru determinarea antioxidantilor fenolici, n probele de ulei. Intreaga procedura implic dou etape de microextraciune i o procedur de centrifugare ntr-un flacon auto-esantionat de 2ml, consumand doar 50 mg de prob i un total de 1 ml acetonitril. Aceast procedur poate fi utilizat pentru controlul calitii de concentrare a antioxidantilor fenolici, n uleiul comestibil, cu necesitatea de numai 1 ml solvent organic, oferind rezultate precise, cu o deviaie standard relativ mai mic de 3%, cu o recuperare buna la primire. Acetonitrilul selectat ca extractant pentru extragerea de antioxidanti fenolici, de la grsimi minimalizeaza complexitatea probelor injectate i, astfel, ajuta la extinderea duratei de via a coloanei capilare. Toate aceste avantaje permit acestei metode sa fie un instrument potential valoros pentru determinarea antioxidantilor fenolici din uleiurile comestibile precum si evaluarea rapida a continutului industrial de antioxidanti fenolici.

CONCLUZIE PROIECT
Daca nu puteti sa aveti in alimentatie produse naturale, si sunteti nevoiti sa consumati zi de zi aproximativ 7g de E-uri din alimente avand valoare nutritiva mica, dar aport mare de calorii si grasimi,se pune la dispozitie cele mai performante produse din plante comprimate pentru: A curata periodic organismul de toxinele care se aduna zi de zi din cauza poluarii (alimentare,apa,aer) si datorate stresului. A curata periodic vasele de sange de colesterol. A elimina grsimile din alimentele zilnice. A suplimenta hrana organismului cu toate elementele nutritive, pe care nu le poate obtine din alimentatia moderna, evitand anemierea si mentinerea unei sanatati optime pe termen lung. A controla greutatea cu usurinta fara a renunta total la alimentele preferate.

BIBLIOGRAFIE

1. Ornescu Elena Aditivii alimentari,necesitate i risc , Editura AGIR, Bucureti 2008 2. Hura Carmen Aditivi alimentari Editura Cermi , Iai 2004 3. Ciobanu Domnica Aditivi i ingrediente alimentare:investigaii analitice Editura Tehnica-Info , Chiinu 2002 4. www.sciencedirect.com/