BIOCHIMIE MEDICAL

LUCIANA DOBJANSCHI

I. Introducere Scopul principal al biochimiei de astzi este s determine cum interacioneaz grupele de molecule nevii din organismele vii pentru a constitui, menine i perpetua starea vie. Biochimia este o tiin foarte tnr. Pn acum cteva zeci de ani puine universiti o recunoteau ca tiin n toate drepturile ei. !"ist dou izvoare distincte n genealogia biochimiei actuale. #nul provine din medicin i fiziologie i este rezultatul unor vechi preocupri de a cunoate compoziia chimic a sngelui, a urinii, i a esuturilor, precum i modificrile acestora n stare normal i patologic. $ellalt deriv din chimia organic, din vechi studii asupra compuilor organici naturali. %ult vreme, biochimia a fost privit pur i simplu, fie ca o ramur a fiziologiei, fie ca o ramur a chimiei. Pn la nceputul ultimului sfert de secol, ea nu a fost o tiin bine conturat, de sine stttoare, cu o solid metodologie e"perimental i cu posibilitatea de aprofundare a fenomenelor biologice. &ou descoperiri mai nsemnate au contribuit la schimbarea situaiei. #na a fost recunoterea sistemelor multienzimatice ca uniti catalitice pentru ma'oritatea cilor metabolice i dezvoltarea unei ipoteze unitare pentru transferul de energie n celula vie. $ealalt, a avut o inflen mult mai adnc i mai puternic, a fost recunoaterea faptului c ereditatea, unul din aspectele cele mai importante ale biologiei, are o baz real, molecular. Biochimia de astzi face investigaii spectaculoase ntr(o serie de ramuri fundamentale ale biologiei ) diferenierea celulelor i a organismelor, originea vieii i evoluia, comportamentul i memoria, patologia uman ) cercetri ce au demonstrat c aceste probleme fundamentale pot fi eficient abordate prin metode biochimice. *ntr(adevr, succesul biochimiei n e"plicarea multor procese celulare a fost att de mare nct muli oameni de tiin au a'uns la concluzia c biologia este chimie. #nii biologi nu accept acest punct de vedere, ei susin c esena sau caracterul comple" al organismelor vii nu poate fi redus, acum i niciodat, la nivelul moleculelor sau al interaciilor moleculare. +stzi este probabil mai logic s presupunem, ca o filozofie curent, c toate fenomenele biologice au n cele din urm o baz molecular i s abandonm aceast idee numai atunci cnd nu va mai fi util pentru proiectarea e"perimentelor cheie sau pentru e"plicarea datelor e"perimentale. ,u trebuie totui s privim biologia numai ca pe o ramur a chimiei clasice, cum este chimia organic, chimia fizic sau chimia anorganic. &ac biologia este chimie, ea este un fel de suprachimie care include, dar n acelai timp depete chimia clasic. +ceasta deoarece moleculele din organismele vii nu numai c se supun principiilor fizice i chimice obinuite, care guverneaz comportarea tuturor moleculelor, dar interacioneaz i ntre ele conform altui grup de principii pe care l vom numi o!ica mo ecu ar" a st"rii #ii. +ceste principii nu includ n mod necesar fore sau legi fizice noi, nedescoperite nc. %ai curnd ele trebuie privite ca un grup de reguli fundamentale care guverneaz natura, funcia i interaciile tipurilor specifice de molecule din organismele vii, proprieti ce confer acestora capacitatea de a se autoorganiza i autoreplica. Pn n prezent nu au fost identificate nc toate principiile cuprinse n logica molecular a strii vii, iar unele dintre ele sunt vag nelese. &e fapt, este probabil mult mai potrivit s considerm aceste principii ca a"iome, deoarece unele dintre ele sunt intuitive i nu pot fi demonstrate nc. Biochimia studiaz procesele chimice care condiioneaz viaa i structurile ce i corespund. Biochimia apare i dezvolt ca tiin de grani ntre chimie i biologie, fr a se putea realiza ns o demarcaie net ntre cele dou. *nceputurile Biochimiei ca tiin dateaz din sec.-.///, dar empiric unele procese biochimice se cunosc cu mult timp nainte. $ontibuii din domeniul chimiei, biologiei i medicinei se afl ntr(o relaie de reciprocitate cu dezvoltarea biochimiei. +stfel a aprut biochimia modern care studiaz procesele biochimice care se desfoar la nivel celular i molecular. *n ceea ce privete profesia de farmacist, Biochimia este o disciplin indispensabil, deoarece ea ne ofer bazele moleculare pentru studiul medicamentului n ceea ce privete aciunea principal, efectele secundare, biotransformarea medicamentului i to"icitatea sa. &easemenea n terapie sunt cunoscute un numr mare de produi biologici cum ar fi0 1

vitaminele, hormonii, enzimele, aminoacizii, glucidele, compuii purinici i pirimidinici precum i derivaii lor de sintez. Prin inginerie genetic se obin 0 hormoni, enzime, anticorpi, inetrferon, antitripsina. &eci, se poate concluziona c Biochimia studiaz totalitatea proceselor biochimice din organism 2procese catabolice i anabolice3, precum i procesele de biotransformare a medicamentelor a'unse n organism.

II. Compo$i%ia chimic" a or!anismu ui uman &. Compo$i%ia e ementar" a or!anismu ui uman +u fost identificate un numr de peste 56 de elemente care intr n compoziia chimic a organismului uman. +cestea au fost clasificate n funcie de proporia n care se gsesc n organism. &intre acestea ma'oritatea se gsesc n urme. +stfel ele au fost clasificate n0 macroelemente, oligoelemente i microelemente. 7abelul 1. 8epartiia elementelor n organismul uman. !lement carbon o"igen hidrogen azot calciu fosfor Procent 2 93 :6 16 16 ;,: < 1 !lement sulf sodiu clor magneziu fier iod Procent 293 6,; 6,< 6,< 6,1 6,61 6,6666:

&intre acestea primele patru 2$,=,> i ,3 reprezint peste ?:9 i sunt considerate macroelemente. !le sunt principalele bioelemente ale ma'oritii biomoleculelor datorit tendinei lor mrite de a forma legturi covalente. =ligoelementele se gsesc n proporie mai mic n organism i la fel ca i macroelementele intr n structura biomoleculelor. %icroelementele se gsesc n urme, dar cu toate astea ele au un rol esenial pentru via. '. Compo$i%ia (undamenta " a or!anismu ui uman Bioelementele enumerate mai sus se gsesc n organism grupate n categorii de componeni i anume0 componeni organici i componeni minerali. Componen%ii or!anici care intr n compoziia organismului uman sunt0 proteinele, glucidele, lipidele i acizii nucleici. +ceti compui sunt molecule comple"e, care sunt alctuite din molecule simple. +stfel, proteinele se formeaz prin policondensarea aminoacizilor, glucidele sunt formate din monozaharide, lipidele sunt formate din acizi grai i ali componeni, iar acizii nucleici sunt formai din ribonucleotide i dezo"iribonucleotide. 7abelul 1. Principalele biomolecule din organismul uman Biomolecula +&, +8, proteine glucide lipide #niti strucurale dezo"iribonucleotide ribonucleotide aminoacizi monozaharide +cizi grai i componeni @uncii %aterial genetic %odel pentru sinteza proteinelor @uncii multiple 8ezerv de energie ali @uncii multiple

Componen%ii minera i prezeni n organismul uman sunt apa i electroliii. +pa este constituientul ma'or al tuturor organismelor vii. =rganismul uman conine ntre :; i 559 ap. = influen remarcabil asupra coninutului de ap al organismului o are vrsta. $oninutul de ap variaz i n funcie de se", astfel femeile au un coninut de ap mai redus n comparaie cu brbaii. <

+pa din organism este repartizat n vasele sanguine i limfatice, spaiile intercelulare i celule nsi. +pa din organism se gsete repartizat n dou compartimente i anume0 compartimentul e"tracelular, care reprezint apro"imativ :69 din greutatea corpului i compartimentul intracelular, care reprezint apro"imativ 169 din greutatea corporal. @igura nr.1

+pa reprezint mediul ideal al reaciilor biochimice, vehiculul care asigur transportul i schimburile metabolice. +pa ocup cea mai mare parte din organism reprezentnd 1A4 2::9(B:93 din greutatea corporal. $antitatea total de ap din organism este n funcie de vrst, se", adipozitate precum i de esutul e"ploatat 0 esutul nervos conine apro"imativ ;1(;:9, plmnul, cordul, rinichiul B:(;69, osul 469, iar dintele 169. +pa total liber este repartizat n dou sectoare principale celular i e"tracelular. Apa ce u ar"0 se gasete n citoplasm, nucleu, mitocondrii, lizozomi. !a reprezint apro"imativ <69 din greutatea corporal. Apa e)trace u ar"0 este separat de cea celular prin membrane celulare, cantitatea ei se determin cu a'utorul unor substane care difuzeaz rapid prin membranele capilare, dar nu prin cele celulare :

2manitol, inulin, tiocianat de sodiu3. Ca adult, apa e"tracelular reprezint 169 din greutatea corporal. !a este depozitat n mai multe compartimente0 intravascular, interstiial, transcelular, i cel din esutul con'unctiv dens cartila'e i vase. a* Compartimentu intra #ascu ar0 conine plasma sanguin i limfa. +cesta reprezint :9 din greutatea corporal cantitatea lor poate fi determinat fie cu a'utorul unor substane colorante 2albastru !vans, rosu de $ongo3 fie cu a'utorul albuminei marcate. +* Compartimentu intersti%ia 0 reprezint adevratul Dmediul internE al organismului. !ste vorba de un ultrafiltrat plasmatic, care scald celulele, separat de compartimentul intravascular prin membranele capilare. +cestea permit o circulaie hidroelectrolitic liber, dar se opun ieirii proteinelor din vase. $antitatea de ap din compartimentul interstiial este dedus prin scderea volumului plasmatic din cel e"tracelular. Se admite ca ea reprezint 1:9 din greutatea corporal. c* Compartimentu transce u ar0 se refer la lichidul cefalorahidian, la mediile lichidiene oculare i articulare i la lichidele din seroase i toate nsumeaz apro"imativ 166 ml sau 1,: 9 din greutatea corporal. *n acelai compartiment sunt nglobate i secreiile glandelor digestive. +cestea, apro"imate la un total zilnic de 5(; l, se resorb aproape complet la nivelul diverselor segmente ale tubului digestiv. d* Compartimentu hidric din %esutu con,uncti# dens 0 2cartila'e i oase3 reprezint apro"imativ 169 din greutatea corporal. +pa acestui compartiment se deplaseaz lent i are schimburi foarte reduse cu restul lichidelor organismului. Aportu de ap" *n organism poate avea o provenien 0 E)o!en"- din digestia apei ca atare sau sub forma apei coninute n alimente 2apro" 1666ml A 1< ore3. Endo!en"- din o"idarea principiilor mediate n cadrul metabolismului intermediar. +stfel din metabolismul ( a 166 g proteine rezult <5 ml ap ( a 166 g lipide rezult 16B ml ap ( a 166 g glucide rezult :: ml ap. !"ist o interdependen ntre cantitatea de ap format i cea eliminat. !liminarea apei se face pe cale 0 renal, cutanat, digestiv i pulmonar. a* prin perspira%ie insensi+i "0 2 saturarea cu vapori de ap a aerului e"pirat 3 se pierd zilnic apro"imativ <66 ml ap. +ceast cantitate este mult depasit n stri patologice nsoite de febr. +* prin perspira%ie sensi+i "0 2evaporare transcutanat 3 se pierd zilnic ntre 166(:66 ml ap. /ntensitatea pierderilor prin perspiraie insensibil i sensibil nu poate fi reglat. c* prin e imin"ri hidrice di!esti#e0 Sunt minime la omul normal. Prin fecale se elimin apro"imativ 1:6ml A 1< ore. d* prin e imin"ri hidrice rena e0 sunt egale n medie cu 1:66 ml A 1< ore 2 cu variaii ntre B66( 1B66ml A 1< ore. !le reprezint elementul reglabil i cel mai nobil al pierderilor lichidiene. +ceast eliminare de ap este reglat pe cale hormonal de ctre hormonul antidiuretic 2+&>3 i prin aldosteron.

!lectroliii sunt reprezentai de cationi i anioni. !i ndeplinesc n organism rol fizico( chimic, structural i catalitic. &istribuia cationilor n compartimentele intra i e"tracelulare este diferit. 7abelul 4. &istribuia cationilor intra( i e"tracelular n m!gAl. $ationi ,aF GF $aF1 %gF1 intracelular 16 1:6 1 1: e"tracelular 1<: : 1 1

= clas diferit de biocompui sunt #itamine e care sunt indispensabile pentru funciile lor biologice, dar pe care organismul nu le poate sintetiza.!le reprezint componenii nutritivi eseniali. Hormonii sunt o alt clas de biomolecule cu rol ma'or n procesele endocrine, care au loc n organism.

II. Nuc eotide .i structura co#a ent" a aci$i or nuc eici +cidul dezo"iribonucleic 2+&,3 i ribonucleic 2+8,3 sunt macromolecule tip lan, care au funcia de a depozita i transmite informaia genetic. +cetia sunt componente ma'ore n toate celulele, reprezentnd :(1:9 din masa uscat a acestora. +cizii nucleici se gsesc i n virusuri, care sunt comple"e infecioase protein(acid nucleic, capabile s se autoreplice n celula gazd. &ei denumirea acizilor nucleici vine de la faptul c +&, a fost izolat prima dat din nucleii celulari, ei se gsesc totui i n alte compartimente ale celulei. Ca fel cum aminoacizii sunt elementele constitutive ale proteinelor, aa nucleotidele sunt componenii de baz a acizilor nucleici. Structura !enera " a nuc eotide or #nitile monomere ale +&, se numesc dezo"iribonucleotide, iar cele ale +8, se numesc ribonucleotide. ,ucleotidele sunt formate din 4 componente caracteristice i anume0 o baz azotat, o pentoz i molecul de acid fosforic. Ba$e e a$otate care intr n structura nucleotidelor sunt de dou tipuri0 baze purinice i baze pirimidinice. Bazele purinice prezint un nucleu de baz numit purina, de la care deriv cele dou baze purinice0 adenina i guanina. N N N N H NH2 N N N N H N N guanina Baz purinic O N N H

H2N

H adenina

Bazele pirimidinice prezint un nucleu de baz numit pirimidina, de la care deriv 4 baze pirimidinice, care int n structura acizilo nucleici, i anume0 citozina, uracilul i timina. N N Baz pirimidinic NH2 H N O N O N N H uracilul O H O N N H timina O CH3

H citozina ;

Bazele azotate sunt compui slabi bazici, care pot e"ista n 1 sau mai multe forme tautomere n funcie de p>. #racilul, de e"emplu, e"ist n form de lactam i lactim. O H O N N H lactam HO N N lactim OH

+ceste forme, n special cea lactam, este responsabil de formarea legturilor cu celelalte componente din structura nucleotidei. Pe lng bazele obinuite, descrise mai sus, n acizii nucleici se mai gsesc n cantiti mici i alte baze, numite baze rare sau minore. NH N N CH3 N N H ,5 )metiladenina O N N H : ) metilcitozina NH2 CH3

O H HC 3 HN N N N N H ,4 ) metilguanina O N

NH2 CH2 N H : ) hidro"imetilcitozina OH

+ doua component care intr n structura nucleotidei este reprezentat de pentoz. +ceasta poate s fie & ( riboza sau 1 ) dezo"i )& ) riboza.

HO

H 2C H

O H H

H OH

HO

H 2C H

O H H

H OH

OH OH
& ) riboza ?

OH H
1 ) dezo"i ) & ) riboza

Prin ataarea unei pentoze la baza azotat rezult o nucleozid, care n funcie de natura pentozei poate s fie ribonucleozid sau dezo"iribonucleozid.

NH2 N N H 2C H N N O H H H OH H
1H ) dezo"iadenozina

NH2 N N H 2C H N N O H H H OH OH
adenozina

HO

HO

Prin ataarea unei molecule de acid fosforic la structura unei nucleozide se formeaz un nucleotid. NH2 N OH HO P O O OH P O O OH P O O N H 2C H O H H H OH H AMP ADP AT P &eci, prin ataarea unei molecule de acid fosforic la o nucleozid se formeaz nucleozid ) monofosfatul 2,%P3, prin ataarea a 1 molecule de acid fosforic se formeaz nucleozid ) difosfatul 2,&P3, i prin ataarea a 4 molecule de acid fosforic se formeaz nucleozid ) trifosfatul 2,7P3. $omponentele ma'ore ale +&, sunt < dezo"iribonucleotide, care se deosebesc ntre ele prin baza azotat, care le d i numele. $ele < baze specifice dezo"iribonucleotidelor din +&, sunt0 adenina i guanina 2baze purinice3 i citozina i timina 2baze pirimidinice3. Similar, pentru ribonucleotide, care sunt componente fundamentale pentru acizii ribonucletidici 2+8,3, bazele azotate care intr n compoziia lor sunt0 adenina i guanina 2baze purinice3, citozina i uracilul 2baze pirimidinice3. &eci, timina se gsete numai n +&,, nu i n +8,, iar uracilul se gsete numai n +8, i nu i n +&,. = alt diferen ntre compoziiile celor dou tipuri de acizi nucleici este dat de pentoza din structura nucleotidului0 16 N N

( (

dezo"iribonucleotidele conin0 1 ) dezo"i ) & ) riboza ribonucleotidele conin0 & ) riboza.

OH HO P O O H 2C H baza azotat O HH H OH H
dezo"iribonucleotid

OH HO P O O H 2C H baza azotat O HH H OH O H
ribonucleotid ,ucleozidtrifosfaii prezint o serie de funcii importante. +7P este un transportor de grupri fosfat i pirofosfat n cteva recii enzimatice implicate n transferal energiei chimice. +&P ) ul rezultat prin defosforilarea +7P )ului este refosforilat la +7P n procesul respiraiei. Sistemul +7P ) +&P este sistemul principal pentru transferul gruprilor fosfat n celul, dar i ceilali nucleozidtrifosfai, i anume0 I7P, #7P i $7P au rolul de a canaliza energia chimic pe anumite biosinteze specifice. + doua funcie ma'or a ,7P i ,&P este cea de transportori de energie, energie pe care o nmagazineaz sub form de legturi macroergice. ,7P i d ) ,7P sunt precursori bogai n energie n procesul de biosintez enzimatic a +&, i +8,. *n acest proces ,7P i d( ,7P i pierd gruprile pirofosfat terminale, transformndu )se n resturi de nucleozid monofosfai, care sunt elemente constitutive ale acizilor nucleici. = alt funcie ma'or a ,7P i ,&P este cea de transportori energizani de tip coenzim ai anumitor elemente constitutive. &e e"emplu0 #&P este un transportor pentru glucide n procesul de biosintez a polizaharidelor. *n toate cele 4 funcii ale ,7P i d ) ,7P, energia chimic a legturilor fosfat J ) i K ) este folosit pentru formarea unor legturi covalente noi. Pe lng nucleozid :H ) fosfaii descrii, n natur mai e"ist i nucleotide cu gruprile fosfat n alte poziii. &ou nucleotide foarte importante au un rol cheie n aciunea biochimic a unor hormoni0 4 H, :H ) ciclic ) adenozin fosfatul 2+%P ciclic3 i guanozin 4H,:H ciclic ) fosfatul 2I%P ciclic3.

11

NH2 N N O H2C O H H H N N

H O P OH +%Pc O OH

+%Pc se formeaz n celulele eucariote, din +7P prin aciunea unei enzime din membrane celular, adenilat ciclaza, stimulat de anumii hormoni adui pe cale sanguin. +%Pc mai este denumit i al doilea mesager, ntruct el transmite i amplific n celul semnalele chimice transmise pe calea sngelui de ctre hormoni, care sunt primii mesageri. +&, ) ul este format din lanuri de dezo"iribonucleotide legate covalent, iar +8, ) ul este compus din lanuri de ribonucleotide. +cizii dezo"iribonucleici i acizii ribonucleici prezint o serie de propriti fizice i chimice commune, ntruct n ambele molecule, nucleotidele succesive sunt legate covalent prin puni fosfodiesterice ntre gruparea : H ) hidro"il a unei nucleotide i gruparea 4H ) hidro"il a urmtoarei nucleotide.

11

baz azotat H2C 5' O H H H 3' O O P O 5' CH 2 baz azotat O H H 3' O HO P O +&, H O H H H

OH

14

baz azotat H2C 5' O H H H 3' O O OH P O 5' CH 2 baz azotat O H H 3' H O OH HO P O O OH H

+8, +stfel catena principal a +&, i +8, const n grupri fosforice alternnd cu radicali de pentoz, legtura fosfodiesteric asigurnd continuitatea covalent. Bazele purinice i pirimidinice din unitile nucleotidice nu fac parte din catena principal, ele formeaz catene distincte n acelai mod n care radicalii 8 ai aminoacizilor sunt catenele laterale distinctive ale polipeptidelor. +cidul dezo"iribonucleic 2+&,3 a fost izolat pentru prima dat din celulele i sperma de somon de ctre @riedrich %iesscher 21;5?3. !l a denumit produsul izolat nuclein, dat fiind prezena lui n nucleii celulari. &e atunci au trecut peste B6 de ani de cercetri pn la definirea complet a elementelor constitutive i a structurii catenei principale a acizilor nucleici. @igura nr.1

1<

%oleculele de +&, din diferite celule i virusuri se deosebesc prin raportul dintre cele < tipuri de monomeri nucleotidici, prin secvena nucleotidelor i prin masa molecular. Pe lng cele < tipuri de baze ma'ore, n anumite tipuri de +&,, n deosebi de origine viral se gsesc cantiti mici de derivai metilai ai acestor baze. +cizii dezo"iribonucleici izolai din diferite organisme i virusuri au dou lanuri dispuse ntr(un aran'ament complementar dublu elicoidal. *n ma'oritatea celulelor moleculele de +&, sunt att de mari, nct este greu s le izolm sub form intact. *n celulele procariote, care conin un singur cromozom, ntreaga cantitate de +&, este prezent ca unic macromolecul, o singur elice dubl, cu masa molecular de peste 1 " 16 ?. *n celulele eucariote, ce conin mai muli cromozomi, e"ist mai multe molecule de +&,. *n bacterii, molecula de +&, care reprezint 19 din greutatea celulei se afl zona nuclearL de obicei ea este ataat printr(un singur punct de un pliu al membranei celulare, numit mezozom. #neori, n citoplasma celulelor bacteriene se gsesc molecule mici de +&, e"tramitocondrialL aceste molecule de +&,, care poart doar cteva gene, se numesc plasmide sau epizomi, n funcie de relaia lor genetic cu +&, (ul cromozomial. *n celulele eucariote diploide, aproape ntreaga cantitate de +&, se gsete n nucleu, combinat prin legturi ionice cu proteine bazice, numite histone. Pe lng +&, )ul din nucleu n celulele eucariote diploide mai gsim cantiti foarte mici de +&, n mitocondrii, care difer de +&, )ul nuclear prin bazele coninute i prin masa molecular. Aci$ii ri+onuc eici $ele 4 tipuri ma'ore de acizi ribonucleici din celule sunt0 +8,m, +8,r i +8,t. 7oate cele 4 tipuri de +8, sunt lanuri monocatenare poliribonucleotidice, dar se deosebesc ntre ele prin domenii caracteristice de mase moleculare i de coeficieni de sedimentare. @iecare dintre cele 4 tipuri ma'ore de +8, e"ist n forme moleculare multiple. +8,r e"ist n cel puin 4 forme ma'ore, +8,t e"ist n 56 de forme, iar +8,m e"ist n sute i poate mii de forme distincte. %a'oritatea celulelor conin de 1( ; ori mai mult +8, dect +&,. *n celulele bacteriene, cea mai mare parte a +8, se afl n citoplasm, dar o anumit cantitate este ataat necovalent de +&,, pe msur ce se formeaz n procesul de transcripie. *n celulele eucariote diferitele forme de +8, au o distribuie intracelular distinct.

@igura nr.4

1:

+8,m conine doar cele < baze ma'ore. !l se sintetizeaz n nucleu n procesul de transcripie, prin care secvena bazelor dintr(un lan de +&, cromozomial este copiat enzimatic n lanul de +8,m. = anumit cantitate de +8,m se sintetizeaz i n mitocondrii. Secvena bazelor din lanul de +8,m este complementar celei din lanul de +&, ce se transcrie. &up transcripie, +8,m trece n citoplasm i apoi la ribozomi, unde servete ca matri pentru ordonarea secvenial a aminoacizilor n procesul de biosintez a proteinelor. +8, )ul mitocondrial reprezint doar o mic parte din +8, )ul total din celul, dar el se afl n foarte multe forme distincte, care se deosebesc prin masa molecular i secvena bazelor azotate. @iecare din miile de proteine diferite sintetizate n celula este codificat de ctre un +8,m. +8,m din celulele eucariote se caracterizeaz prin prezena la captul 4 H terminal a unei secvene lungi de cca 166 de radicali adenilici, care pare s aib un rol n prelucrarea sau transportul +8,m de la nucleu la ribozomi. +8,t sunt molecule relativ mici, care funcioneaz ca transportori specifici ai cte unei molecule de aminoacizi n procesul de biosintez a proteinelor pe ribozomi. !i au o mas molecular de 14666 ) 1;666 i un coeficient de sedimentare de <S. !i conin B: ) ?6 de nucleotide. @iecare dintre cei 16 de aminoacizi din proteine are cel puin un +8,t coerspunztor, iar unii au chiar mai muli +8,t. &e e"emplu0 n celulele de !scherichia coli e"ist : +8,t diferii pentru transferul leucinei. %ai mult, n celulele eucariote unui anumit aminoacid i corespund +8,t mitocondriali diferii de +8,t citoplasmatici. %oleculele de +8,t prezint cteva trsturi comune. 7oate tipurile de +8,t au la un capt al lanului polinucleotidic un acid guanilic terminal, iar la cellalt capt secvena terminal citidil ) citidil ) adenil 2$$+3. Iruparea :H )hidro"il a acidului adenilic terminal este legat de gruparea 4 H )hidro"il a acidului citidilic precedent print(o punte fosfodiesteric. Iruparea hidro"il liber din acidul adenilic terminal este acilat enzimatic cu M( aminoacidul specific, formnd aminoacil )+8,t. +cest aminoacid este transferat enzimatic la captul lanului polipeptidic n curs de formare pe suprafaa ribozomilor, n procesul de biosintez proteic. +8,r reprezint 5:9 din masa ribozomilor. !l se poate obine din ribozomii de !.coli ca molecule lineare, monocatenare, prezente n 4 forme caracteristice, cu coeficienii de sedimentare de 14S, 15S i respectiv :S. +ceste 4 forme se deosebesc prin secvena i raportul bazelor. *n celulele eucariote, care au ribozomi mai mari dect celulele procariote, e"ist < tipuri de +8,r0 :S, BS, 1;S i 1;S. &ei +8,r reprezint o mare parte din +8, celular total, funcia lui n ribozomi nu este nc, bine elucidat. Sinte$a proteine or Procesul de sintez proteic const n polimerizarea aminoacizilor, n celule sau n vitro. *ntr(o celul pot e"ista circa 16666 proteine care au rol esenial n funcionarea i reproducerea celulei i organismului. Biosinteza proteinelor se desfoar n urmtoarele momente. n primul moment are loc transcriptia, care const n sinteza m+8, de ctre una dintre catenele de +&, dintr(o gen. +cest m+8, are o structur complementar catenei de +&, matrice, reprezentnd o Dimagine n oglindE a acestuia, o transcriere mecanic a codonilor catenei de +&,, respectiv a mesa'ului genetic, cu simboluri complementare. n al doilea moment are loc translaia care const n migrarea m+8, n citoplasma i asocierea m+8, cu ribozomii activi n sinteza proteic. $atena de m+8, se fi"eaz simultan prin absorbie pe mai muli ribozomi la distana ntre ei de 466(4:6+, formnd poliribozomi. n al treilea moment are loc activarea aminoacizilor, care const n reacia unui aminoacid cu adenozin(trifosfat 2+7P3 catalizat de aminoacil-ARN sinteza, i formarea de aminoacil(adenilat 2aminoacil +%P3, care se ataeaz de o molecul de t+8,, determinnd apariia unui comple" aminoacil-tARN. +cest comple" este transportat n locul lui propriu n lanul proteic, determinat de m+8, din polizomi. Pe catena m+8, din polizom, se vor amplasa, la nivelul fiecrui ribozom, numai acele comple"e aminoacil(t+8, care, pe bucla central, reprezentnd anticodonul, posed o secven de trei ribonucleotizi complementar 15

codonilor m+8, din comple"ul polizomului. *n acest fel aminoacizii sunt legai enzimatic ntr(o ordine impus de +&, care a matriat m+8, i care 'oac un rol direct n biosinteza proteinelor. n al patrulea moment are loc translata, polimerizarea sau asamblarea aminoacizilor. Cegtura se realizeaz ntre gruparea $==> a primului aminoacil care reprezint punctul activ al biosintezei progresive, cu gruparea ,>1, a celui de al doilea aminoacil, n prezena enzimei peptidpolimeraza, care catalizeaza formarea legaturilor peptidice ntre aminoaciziL ncorporarea aminoacizilor este ireversibilL iau astfel natere lanuri polipeptidice care se elibereaz de polizom, prin translocarea ultimului comple" aminoacil(t+8, de ultimul ribozom din polizom, cnd acesta a a'uns n urma rotirii la e"tremitatea matricei m+8, de care se detaseaz. #n lant polipeptidic se sintetizeaz ntr(un minut.

@igura nr.<

1B

Comp e)e supramo ecu are aci$i nuc eici / proteine #nii acizi nucleici se afl n celule asociai necovalent cu proteine specifice, formnd comple"e supramoleculare. &intre aceste sisteme acid nucleic ) proteine, cu structuri i funcii biologice foarte comple"eL ribozomii i virusurile sunt cele mai cunoscute. $ele mai comple"e sisteme acid nucleic ) protein sunt probabil cromozomii din celulele eucariote. 8ibozomii sunt particule ribonucleoproteice care se gsesc n toate tipurile de celule. !i sunt eseniali n biosinteza proteinelor. .irusurile sunt structuri subcelulare la limit ntre lumea biotic i abiotic. .irusurile au capacitatea de a se antagoniza atunci cnd intr ntr(o celul gazd specific. Imp ica%ii e medica ea e nuc eotide or #nele nucleotide naturale, precum i derivaii lor obinui prin sintez pot fi utilizate n terapie, fiind utilizate n0 chimioterapia bolii maligne, tratamentul hiperuricemiei i gutei, n afeciuni virale, n hipertiroidism sau ca ageni imunosupresori, hipogliceminai, antifungici i antiparazitari. %ecanismul lor de aciune este variat0 ( nhib enzimele implicate n biosinteza acizilor nucleici, blocnd procesul ( nhib enzimele care catalizeaz conversia "antinei n acid uric.

1;

III. 0roteine Proteinele sunt compui macromoleculari, respectiv biopolimeri rezultai din policondensarea aminoacizilor legai ntre ei prin legturi peptidice. &iferena ntre proteine i polipeptide se face pe baza dimensiunii moleculare, limita de delimitare fiind stabilit arbitrar la o greutate molecular de ; " 16 Gd. Canurile de peptide alctuite din sub 16 resturi de aminoacizi se numesc oligopeptide, iar cele de pn la :6 ) 56 de resturi de aminoacizi se numesc polipeptide. Proteinele sunt formate din sute de resturi de aminoacizi, iar masa lor molecular poate urca la sute de mii de daltoni. Aminoaci$ii +minoacizii sunt unitile structurale de baz din molecula proteinelor. +minoacizii conin dou grupri funcionale comune tuturor aminoacizilor0 o grupare aminic i o grupare carbo"ilic. $apacitatea unui aminoacid de a se condensa cu ali aminoacizi pentru a forma peptide este dependent de propritile chimice ale acestor dou grupri funcionale. $ea mai important proprietate a aminoacizilor este aceea de a servi ca subuniti monomerice pentru proteine, dar ei prezint i alte roluri importante pentru celul. &e e"emplu, glutationul este o tripeptid cu funcii importante, alte peptide mici au funcii de hormoni, sau n unele organisme au rol de antibiotice. +cidul glutamic are rol de neuro )transmitor. +minoacizii sunt precursorii unei variti de biomolecule 2de e"emplu0 hitidina pentru histamin3. #nii aminacizi sunt metabolizai i utilizai pentru producerea de glucoz 2gluconeogenez3. &eoarece nu e"ist rezerve de aminoacizi, cu e"cepia celor implicai n structura proteinelor, atunci cnd gluconeogeneza are nevoie de aminoacizi, acetia sunt eliberai prin decompunerea proteinelor. Structura aminoaci$i or *n proteinele tuturor speciilor procariote i eucariote a fost identificat un set de cca 16 de aminoacizi, marea ma'oritate aprinnd seriei sterice C. 7oi aminoacizii, cu e"cepia prolinei, prezint aceeai strucutur general n sensul c atomul de carbon M( este legat de o grupare ) $==>, de una ),>1 i de un rest 8 rspunztor de proprietile diferite ale diferiilor aminoacizi. @ormula general a unui aminoacid0 R CH CO O-

NH3+ *n toi M( aminoacizii, cu e"cepia glicinei, carbonul M este optic activ. /zomerii posibili aparin seriei & sau C. S(a constatat c toi izomerii e"isteni n mod natural n constituia proteinelor aparin seriei sterice C. Sarcinile aprute n formulele aminoacizilor sunt cele care apar la p> 5(B. $a urmare, la p> 5(B, un aminoacid poate s aib caracter acid sau bazic. C asi(icare aminoaci$i or &in punct de vedere structural aminoacizii se pot clasifica astfel0 ( aminoacizi alifatici HC 2 CO O H H3 C CH CO O H

NH2 glicina 2 glicocol, IlN3 H3 C CH CH CO O H H3 C

NH2 alanina 2+la3 CH CH3 leucina 2leu3 CH2 CH NH2 CO O H

CH3 NH2 valina 2val3 1?

H3 C

CH 2

CH

CH NH2

CO O H

CH3 /zoleucina 2ile3 (

aminoacizi hidro"ilai

HO

CH2

CH NH2

CO OH

H3 C

CH OH

CH NH2

CO O H

serina 2ser3 ( aminoacizi cu sulf HS CH2 CH CO O H NH2 cisteina 2cNs3 ( aminoacizii dicarbo"ilici i amidele lor CH2 CH NH2 H 2 N CO CH2 CH CO O H NH2 asparagina 2 asn3 HO O C CH2 CH2 CH NH2 acid glutamic 2glu3 CO O H CO O H acidaspartic2asp3

treonina 2thr3

H3 C S

CH2

C H2

CH NH2

CO O H

metionina 2met3

HO O C

HN 2

CO

CH2

CH2

CH NH2

CO O H

glutamina 2gln3 ( aminoacizi cu dou grupri bazice

16

H2N CH2 lisina 2lNs3 H2N C NH arginina 2arg3

CH2

CH2

CH2

CH NH2

CO O H

NH CH2

CH2

CH2

CH CO O H NH2

CH2 N NH

CH NH2

CO O H

histidina 2his3 ( aminoacizi aromatici

CH2

CH NH2

CO O H

fenilalanina 2phe3 HO

CH2

CH NH2

CO O H

tirozina 2tNr3 CH2 N H triptofan 2trp3 CH NH2 CO O H

CO O H N H prolina 2pro3 ( ( ( 11 *n funcie de polaritatea radicalului, aminoacizii se clasific, astfel0 aminoacizi neutri0 IlN,+la, Ser, $Ns, 7hr, +sn, Iln ) care au radicalul polar, dar lipsit de sarcin electric la p>OB. aminoacizi hidrofili, cu caracter acid0 +sp, Ilu, 7Nr ) care sunt aminoacizi ncrcai negative la p> fiziologic. aminoacizi hidrofili cu caracter bazic0 +rg, CNs, >is ) aminoacizi care la p> fiziologic sunt

ncrcai cu sarcin pozitiv. ( aminoacizi hidrofobi0 .al, Ceu, /le, %et, Pro, Phe, 7rp. !"ist proteine care pe lng aceti 16 de aminoacizi eseniali sau de baz, conin i ali aminoacizi. +cetia pot s ia natere prin modificri ulterioare sintezei lanului polipeptidic, determinnd astfel caracteristici noi ale activitii biologice. !"emplu0 ( acetilarea captului ,(terminal, crete rezistena la degradare ( prin hidro"ilarea resturilor de prolin i lizin se formreaz0 hidro"iprolina i hidro"ilizina, cu rol n stabilizarea fibrei de colagen ( K ) carbo"iglutamatul are legtur cu aciunea vitaminei G ( fosforilarea resturilor de0 Ser, 7hr, 7zr, se folosete ca mecanism de reglare a multor procese celulare. o +li aminoacizi modificai se ntlnesc n structura unor peptide biologic active. Pe lng aminoacizii prezeni n proteine, e"ist aminoacizi, care liberi sau n combinaii ndeplinesc funcii importante n metabolism. &e e"emplu0 ( P ) alanina, din stuctura coenzimei + i a unor peptide ( homoserina i homocisteina sunt intermediari metabolici ( citrulina i ornitina apar n biosinteza ureei ( acidul K( aminobutiric 2I+B+3 este un mediator chimic nervos ( 4,< ) dio"ifenilalanina 2&=P+3 este precursor al adrenalinei ( acidul p( aminobenzoic intr n structura acidului folic. 0ropriet"%i e aminoaci$i or +minoacizii sunt substane solide, cristaline i au puncte de topire sau de descompunere peste 1666$. !i sunt mult mai solubili n ap dect n solveni nepolari. *n reeaua cristalin, moleculele de aminoacizi sunt atrase prin fore electrostatice. &ac aminoacizii ar cristaliza ntr(o form neionic, datorit atraciei .an der Qaals, atunci ar avea puncte de topire mult mai sczute. 7oate acestea duc la concluzia c aminoacizii se gsesc n soluii apoase i n reeaua cristalin sub form de ioni dipolari sau amfioni. H2N R CO O H HN 3
+

CO O -

&atorit caracterului lor amfoter, aminoacizii formeaz sruri att cu acizii ct i cu bazele. HN HN 3
+ +

R R

CO O - + H+ CO O + H2O

HN 3

R R

CO O H CO O - + H2O

HN 2

&eci, n mediu acid, aminoacizii se comport ca baze, iar n mediu bazic se comport ca acizi. &atorit faptului c aminoacizii posed grupri carbo"ilice i grupri bazice, ei prezint proprieti datorate gruprilor carbo"il i proprieti datorate gruprii aminice precum i proprieti determinate de ambele grupri.

11

0E01IDE $ea mai important proprietate a aminoacizilor, este aceea de condensare, care duce la formarea de peptide. Peptidele se formeaz prin eliminarea unei molecule de ap ntre gruparea carbo"il a unui aminoacid i gruparea aminic a unui alt aminoacid.

H2 N CH R1

COOH + H2N CH R2

COOH

H2N CH R1

CO

NH

CH R2

COOH + H2O

Prin convenie, un lan polipeptidic se scrie ncepnd cu e"tremitatea ce are gruparea aminic liber, numit capt ,( terminal i se ncheie cu captul $ )terminal, reprezentat de gruparea carbo"ilic a ultimului aminoacid. H2N CH R1 CO NH CH R2 CO ....... NH CH CO O H Rn

*n unele cazuri aceste capete sunt derivatizate. =ligopeptidele se clasific n di(, tri(, tetra( pn la decapeptide, n funcie de numrul de resturi de aminoacizi prezeni n structura peptidei. $a e"emple de peptide cu rol biologic cunoscut amintim0 ( &ipeptidele0 carnozina i anserina, cu rol n metabolismul muscular. CH2 N N R CH NH COOH CO CH 2 CH2 NH2

R = H carnozina = CH3 ans rina ( 7ripeptide. Ilutationul este o tripeptid format acid glutamic, cistein i glicin, motiv pentru care se numete i K( glutamil(cisteinil(glicin.

HO O C

CH NH2

CH2

CH2

CO

NH

CH CH2 SH

CO

NH

CH2

CO O H

Ilutationul se ntlnete n celulele animale, unde se gsete n concentraie ridicat. !l funcioneaz ca un sistem redo" i servete n transportul intercelular de aminoacizi.

14

!"#

C$s SH

!"$

- 2H + 2H

!"#

C$s S S

!"$

&!S H% glutation redus

!"#

C$s

!"$

&!S S H% glutation o"idat

/nterconversiunea formelor reduse i o"idate are loc sub aciunea unor enzime i servete n biosinteza eicosanoizilor, a dezo"iribonucleotidelor, n biotransformarea insulinei circulante, precum i n alte procese. &eoarece glutationul redus prote'eaz gruprile tiol ale proteinelor, el este esenial pentru integritatea eritrocitului i deasemeni pentru meninerea @e din hemoglobin n stare bivalent. %ecanismul implicat privete neutralizarea potenialului agresiv al pero"izilor rezultai n metabolismul aerob.

2 !S H + R- O- OH

'"#tation ( ro)i*aza !S S H + R- OH +H2O

@ormarea unor astfel de pero"izi este favorizat de un numr de medicamente, la care pot s apar ca efecte adverse anemia hemolitic i methemoglobinemia. = alt tripeptid este hormonul de eliberare a tirotropine 278>3 de origine hipotalamic, care are ambele capete derivatizate. 78> se mai numete0 piroglutamil( histidil( prolinamida. Ilutamatul ,(terminal apare ciclizat sub forma acidului piroglutamic, iar captul $ )terminal este reprezentat de prolinamid. !"ist dou grupe de oligopeptide formate din B( 16 resturi de aminoacizi cu aciune asupra musculaturii netede, care rezult din hidroliza enzimatic a unor proteine plasmatice. +ngiotensinele provin din angiotensigen, o protein format din cca. <66 de aminoacizi. An'iot ns ino' n r nina An'iot ns ina + &* c a( (ti*% &(rot ina ("as ,atic % c a(to(ri" nzi,a * c on- rs i An'iot ns ina ++ &oc ta( (ti*% a,ino( (ti*aza An'iot ns ina +++ &. (ta( ti*% +ngiotensinele acioneaz asupra vaselor, mai intens pe artere stimulnd secreia de aldosteron i eliberarea de prostaglandine. +ngiotensina // este socotit cel mai puternic agent presor present n circulaia general. +ceasta pare a fi implicat n patogeneza hipertensiunii arteriale eseniale, dei sunt cazuri cu activitate reninic normal sau chiar sczut. /nhibitorii 1<

sistemului renin( angiotensin, n care rolul central l are enzima de conversie, se utilizeaz n tratamentul hipertensiunii arteriale0 de e"emplu captoprilul. #n alt grup de polipetide este reprezentat de Rininele plasmatice, formate din Rininogeni sub aciunea enzimelor numite RaliRreine. PlasmaRininele, considerate i hormoni locali, produc vasodilataie arterial 2efect hipotensor3, dar determin contracia vaselor, musculaturii uterine, a intestinului i bronhoconstricie. +lte oligopeptide cu activitate biologic sunt encefalinele i hormonii neurohipofizari. #n alt e"emplu de polipeptide naturale este reprezentat de vasopresin i o"itocin, care sunt peptide ciclice alctuite numai din aminoacizi. +ceste dou polipeptide au o structur foarte apropiat, fiind alctuite din ? resturi de aminoacizi, dar prezint funcii fiziologice diferite. .asopresina are efect antidiuretic, iar o"itocina acioneaz asupra musculaturii netede a uterului, producnd contracia uterului. ="itocina stimuleaz i contracia musculaturii din 'urul alveolelor mamare, determinnd astfel eliminarea laptelui din canalele glandei mamare, avnd aciune lactagog.

1:

02O1EINE 0roteine e .i (unc%ii e or +io o!ice. Proteinele sunt cele mai rspndite molecule organice din celul. %asa molecular a proteinelor este foarte mare, dar prin hidroliz acid toate se transform n compui organici simpli, i anume C(aminoacizi. Proteinele se mpart, n funcie de compoziia lor n dou clase principale0 ( proteine simple ( proteine con'ugate Proteinele simple sunt acelea care prin hidroliz formeaz numai aminoacizi i nici un alt compus organic sau anorganic. Proteinele con'ugate sunt acelea care prin hidroliz pun n libertate pe lng aminoacizi i ali compui organici sau anorganici. Partea con'ugat a proteinei, care nu este aminoacid se numete grupare prostetic. *n funcie de natura gruprii prostetice, proteinele con'ugate se mpart n0
1ipu proteinei ( nucleoproteine ( lipoproteine ( glicoproteine 3ruparea prostetic" acizi nucleici0 ( +&, ( +8, fosfolipide glucide0 ( he"ozamine ( galactoz ( manoza ( acid sialic fosfai esterificai cu radicali ai sernei hem metale @+& Locu 4n care se !"sesc ribozomi virusul mozaicului tutunului P) lipoproteinele plasmatice lipide membranare K ) globuline

( fosfoproteine ( hemoproteine ( flavoproteine ( metaloproteine

cazeina hemoglobina citocromul $ succinat dehidrogenaza feritina

%asa molecular a proteinelor se poate determina prin metode fizice i poate fi cuprins ntre :666 i cteva milioane. !"emplu0 ( insulina0 greutatea molecular de :B66 daltoni ( virusul mozaicului tutunului0 greutatea molecular de <6666666 de daltoni. &iversitatea funcional a proteinelor Proteinele ndeplinesc n organism multiple funcii, dintre care amintim urmtoarele0 1. !nzimele sunt proteine ce catalizeaz diverse reacii biochimice. !"emplu0 he"oRinaza, lactat dehidrogenaza 1. Proteinele de rezerv !"emplu0 ( ovalbumina ) proteina din albuul de ou ( cazeina ) proteina din lapte ( feritina ) proteina de depozitare a @e n splin ( zeina ) proteina din semine de porumb ( gliadina ) proteina din gru 4. Proteine de transport !"emplu0 15

( hemoglobina ) proteina ce transport o"igenul n s ngele vertebratelor ( hemocianina ) proteina ce transport o"igenul din s ngele nevertebratelor ( mioglobina ) proteina ce transport o"igenul n celulele musculare ( albumina seric ) proteina ce transport acizii grai n snge ( P1(lipoproteina ) proteina ce transport lipidele n snge ( ceruloplasmina ) proteina ce transport cuprul n snge +ceste proteine sunt capabile s lege i s transporte pe calea sngelui anumite tipuri de molecule. <. Proteinele contractile sunt proteine cu rol esenial n fenomenul de contracie i n micare. !"emplu0 ( actina ) filamentele subiri din miofibrile ( miozina ) filamentele groase din miofibrile ( dineina ) proteinele din cili i flageli. *n muchi, actina i miozina sunt aezate n iruri paralele, alunecnd unele pe lng altele n timpul contraciei. :. Proteinele cu rol de protecie n sngele vertebratelor !"emplu0 ( anticorpii formeaz compleci cu proteinele strine ( sistemul complement formeaz comple"e cu anumite sisteme antigen(anticorp. ( @ibrinogenul ) precursor al fibrinei n coagularea sngelui ( 7rombina ) particip la procesul de coagulare. #nele proteine au rol de aprare sau de protecie. Proteinele sanguine 2trombina i fibrinogenul3 particip la coagularea sngelui oprind astfel pierderile de snge n sistemul vascular al vertebratelor. $ele mai importante proteine cu rol de aprare a organismului sunt anticorpii sau globulinele imune, care se combin cu proteinele strine sau cu alte substane strine intrate ntmpltor n organism, neutralizndu(le. 5. 7o"inele !"emplu0 ( to"ina din $lostridium botulinum ( to"ina difteriei ( veninul de arpe ( ricinul ( gossipina 7o"inele sunt substane foarte to"ice pentru organismul animalelor superioare, chiar i n cantiti foarte mici. B. >ormoni !"ist proteine care funcionez ca i hormoni. !"emplu0 ( insulina este secretat de anumite celule specializate din pancreas i regleaz metabolismul glucozei. ( >ormonul adrenocorticotrop0 hormonul de cetere sau somatotropina este un hormon al glandei hipofizare anterioare, care regleaz sinteza corticosteroizilor. ;. Proteinele structurale !"ist o clas de proteine care servesc ca i elemente structurale. !"emplu0 ( proteinele din nveliul viral ( glicoproteinele ( M( Reratina ( sclerotina ( fibroina 1B

( ( (

colagenul elastina mucoproteinele.

Anticorpii .i r"spunsu imun. Speci(icitatea de specie a proteine or. +nticorpii sau imunoglobulinele au o importan foarte mare n demonstrarea faptului c proteinele sunt specifice pentru fiecare specie. %oleculele de anticorpi apar n serul sanguin sau n anumite celule de vertebrate ca rspuns la introducerea unei proteine sau a unei alte macromolecule strine acelei specii. = astfel de macromolecul strin speciei respective se numete antigen. %oleculele specifice de anticorpi produse n acest mod se pot combina cu antigenul care a determinat formarea lor pentru a forma comple"ul antige(anticorp. +ceast reacie, numit rspuns imun, este baza ntregului domeniu al imunologiei. /munitatea fa de o anumit boal infecioas poate fi adesea realizat prin in'ectarea unei cantiti foarte mici de componeni macromoleculari din microorganisme sau virusuri care provoac boala respectiv. $a rspuns la antigenul strin se formeaz anticorpul specific, sau o imunoglobulin, care rmne n snge un timp ndelungat. &ac microorganismul va ptrunde mai trziu n snge sau n limf, aceti anticorpi specifici l vor putea inactiva sau chiar omor prin combinare cu componenii lor antigenici. 8spunsul imun este dat numai de vertebrate. +nticorpii sunt foarte specifici pentru moleculele strine care le produc. #n anticorp format de un iepure in'ectat cu ou de gin, de e"emplu, se va combina cu acesta, dar nu i cu alte proteine, cum ar fi hemoglobina uman. %ai mult ei sunt specifici pentru structura tridimensional a albuminei native din oul de gin, astfel nct dac aceasta este denaturat prin nclzire sau prin alt mi'loc, cu deplierea lanurilor polipeptidice componente sau este modificat chimic, anticorpii nu se vor mai combina cu ea. &e aici putem trage urmtoarele concluzii0 1. Proteine cu funcii diferite aparinnd unei singure specii determin formarea unor anticorpi diferii. +stfel cnd se imunizeaz un iepure cu hemoglobin de cal, anticorpii vor precipita hemoglobina de cal i nu celelalte proteine de cal. 1. Proteine omoloage de la specii diferite nu sunt identice imunologic. 4. Specificitatea anticorpilor reflect relaia filogenetic. !"emplu0 Proteinele omoloage a speciilor foarte nrudite sunt mult mai asemntoare ntre ele dect ale speciilor foarte ndeprtate. +stfel, anticorpii produi de iepure fa de hemoglobina de cal reacioneaz cel mai bine cu hemoglobina de cal. !i reacioneaz, de asemenea puternic cu hemoglobina altor specii nrudite cu calul 2zebra, vaca, porcul sau alte copitate3 dar sunt mult mai puin reactivi cu hemoglobina roztoarelor, psrilor sau amfibienilor. +stfel cu ct dou specii sunt mai apropiate cu att mai asemntoare sunt i secvenele de aminoacizi ale proteinelor lor omoloage. &eci, secvena de aminoacizi ale proteinelor omoloage poate da informaii preioase despre evoluia diferitelor organisme i pentru legtura lor filogenetic.

1;

Structura proteine or Canurile polipeptidice ale proteinelor se pliaz n diferite moduri, att n cadrul propriului lan, dar i ntre lanurile vecine, adic intracatenar i intercatenar. +cest mod de pliere este esenial pentru activitatea biologic a proteinelor i aceast organizare complicat este cea care trebuie conservat pe parcursul procedurilor implicate n purificarea proteinelor. &ei mult timp s(a considerat c modurile de pliere ale lanurilor polipeptidice sunt determinate numai de secvena aminoacizilor din lan, astzi s(a stabilit c proteinele avnd aceeai secven a aminoacizilor pot e"ista n forme diferite de mpachetare i c astfel de plieri pot fi influenate de prezena altor proteine. Structura proteinelor a fost imaginat ca avnd < nivele de organizare, i anume0 structura primar, secundar, teriar i cuaternar.

@ig. . Principalele tipuri de structuri ale proteinelor

1?

Structurile proteice sunt stabilizate de dou tipuri de legturi puternice0 legtura peptidic i puntea disulfidic, precum i de trei tipuri de legturi slabe. Cegtura disulfidic se stabilete ntre dou resturi de cistein, aparinnd sau nu aceluiai lan polipeptidic i este la fel de rezistent ca i legtura peptidic la aciunea agenilor denaturani uzuali ai proteinelor. +ceast legtur poate fi distrus prin o"idare cu acid performic sau prin reducere cu betamercatoetanol. Cegturile disulfidice sunt prezente de obicei n proteinele e"tracelulare i aproape c lipsesc din cele intracelulare. Cegturile slabe sunt reprezentate n general de legturile necovalente, i anume0 legturi de hidrogen, ionice i hidrofobe. Cegturile de hidrogen se stabilesc ntre grupri )$= i ),> aparinnd unitilor peptidice diferite, aflate n poziie adecvat.

46

R C O CH N H " ' t#r * .i*ro' n H N CH O C

R @orele electrostatice se formeaz prin atracia gruprilor cu sarcin opus ce aparin aminoacizilor ionizai. !"emplu0 ( ntre un aminoacid dicarbo"ilic i gruparea S ) aminic a lizinei. #n rol semnificativ n meninerea structuri l au deasemeni interaciunile hidrofobe prin care radicalii nepolari ai aminoacizilor hidrofobi tind s se asocieze. Proteinele n stare natural au o structur tridimensional unic, ce se e"prim prin conformaia, care i determin de astfel i funcia. Structura primar" *n structura oricrei proteine sau peptide se distinge un element comun, reprezentat de a"ul covalent, care se formeaz prin repetarea gruprii peptidice i o parte a variabilei reprezentat de radicalii aminoacizilor constituieni. H2N CH R1 CO NH CH R2 CO ....... NH CH CO O H Rn

Structura primar este definit ca secvena resturilor de aminoacizi ce deriv din policondensarea lor prin legturi M( peptidice. !"ist mai multe argumente n favoarea acestei structuri, dintre care amintim0 ( proteinele au puine grupri amino( i carbo"il titrabile, iar numrul lor crete dup hidroliz ( dau uor reacia biuretului ( sinteza de proteine este posibil e"cusiv prin interaciuni peptidice ( proteinele sunt substrate pentru peptidaze ( identificarea aminoacizilor componeni prin difracie cu raze - i spectroscopie n infrarou 2/83. $unoaterea structurii primare a proteinei const n stabilirea naturii radicalilor, n ordinea nlnuirii i localizarea eventualelor puni disulfidice i stabilirea tuturor cone"iunilor dintr(un lan polipeptidic. Pentru determinarea compoziiei, proteina este supus hidrolizei n cataliz acid, bazic sau enzimatic, urmat de separarea i identificarea aminoacizilor rezultai. >idrolizatul obinut n urma reaciei de hidroliz este analizat prin cromatografie sau alte tehnici automatizate. &up separarea aminoacizilor, cuatentificarea lor se face prin reacia de culoare cu ninhidrina sau fluoresceina, care sunt reacii de mare sensibilitate. Pentru determinarea succesiunii aminoacizilor dintr(un lan se folosesc tehnici manuale i automate bazate pe procese chimice i enzimatice. &ac catena polipeptidic este relativ scurt, se identific mai nti capetele , i $ terminale i apoi secvena cuprins ntre ele. Pentru lanuri mai lungi, dup identicarea capetelor , i $ terminale, fragmentul rmas ntre ele se scindeaz n fragmente de pn la :6 de resturi, care se separ prin cromatografie sau electroforez. Se determin structura primar a fiecrui fragment i apoi se potrivesc n ordinea lor iniial, fcndu(se reconstituirea lanului. ,umrul 41

de grupri terminale gsite ofer informaii asupra numrului de lanuri ce compun proteina. $aptul , terminal se poate identifica prin marcarea sa cu un compus care formeaz o legtur covalent, stabil n condiiile n care legturile peptidice sunt hidrolizate. *n acest scop s(au utilizat 1,< ) dinitrofluorbenzenul, clorura de &ansNl i clorura de &absNl. = alt metod enzimatic folosete aminopeptidaza, care hidrolizeaz legtura peptidic n care este cointeresat aminoacidul , terminal. +stfel, enzima va detaa pe rnd cte un aminoacid ce a'unge n poziie terminal. &ezavanta'ul acestei metode este c aciunea enzimei este foarte lent n cazul unor aminoacizi. $aptul $ terminal poate fi stabilit prin aciunea carbo"ipeptidazei, enzim ce scindeaz lanul peptidic cu un rest, ncepnd dinspre aminoacidul cu gruparea carbo"ilic liber. &up un timp de reacie se separ i se identific aminoacizii eliberai. =dat ce fragmentele rezultate din lanul iniial au structura primar descifrat, urmez rezolvarea succesiunii lor n lan, pentru care se folosete tehnica peptidelor suprapuse. Canul peptidic original se scindeaz prin dou sau mai multe metode diferite de hidroliz specific i din compararea seturilor de peptide obinute se deduce integral secvena iniial. Pentru proteinele mari, cu peste 1666 de resturi de aminoacizi, secvenarea lanului devine o operaie dificil i care cere mult timp. + aprut ns, tehnologia +&,(ului recombinat, care a permis o nou modalitate de abordare e"perimental n chimia proteinelor. Semni(ica%ia structurii primare Prima protein a crei structur primar a fost identificat este insulina. S(a dovedit c structura primar a proteinelor este determinat genetic i c proteinele din toate organismele sunt sintetizate printr(un mecanism comun.S(a constatat c secvena de aminoacizi este veriga ntre mesa'ul genetic cuprins n +&, i structura tridimensional responsabil de funcia biologic a proteinei. $unoaterea secvenei de aminoacizi aduce informaii eseniale pentru descifrarea conformaiei i mecanismului de aciune, cu privire la nrudirea proteinelor, n legtur cu evoluia filogenetic a speciilor precum i cu domeniul patologiei moleculare. +ctivitatea biologic a unei proteine poate depinde direct i indirect de structura ei primar. %odificri minore, ca nlocuirea, pierderea sau inseria unui aminoacid se traduc biochimic prin polimorfismul proteinelor n cadrul speciei conferind individualitate organismelor prin specificitatea de specie i prin boli genetice consecutive alterrii sau pierderii funciei. Structura secundar" a proteine or Structura secundar a proteinelor se refer la dispunerea spaial a resturilor de aminoacizi nvecinai n secvena liniar, ce poate fi ordonat sau dimpotriv cu puine neregulariti. Prin difracie cu raze - a fost confirmat e"istena conformaiilor ordonate i au fost observate structuri ce se repet periodic. 7ot prin tehnica cristalografic cu raze - a fost stabilit caracterul planar, rigid al legturii peptidice, datorat con'ugrii.

@igura . $oplanaritatea celor < atomi $onsecinele formrii acestui sistem puternic con'ugat sunt coplanaritatea celor < atomi, ceea ce presupune imposibiliatea rotirii i e"istenei formelor cis i trans. S(a observat c izomerul trans este favorizat, deoarece este mai srac n energie. Scheletul lanului polipeptidic apare, deci ca o succesiune de planuri rigide unite prin atomii de $M ai aminoacizilor constitutivi. &ou treimi dintre atomii lanului poilpeptidic se afl n poziii fi"e unul fa de altul, dar de o parte i de alta a fiacrei legturi peptidice e"ist o libertate de micare. +stfel 1 planuri succesive se pot roti n 'urul aceluiai $M. Prezena unor radicali mai mult sau puin voluminoi va impune amplitudinea rotaiilor, 41

astfel c unghiurile nu pot avea valori ntmpltoare, ci sunt caracteristice diferitelor tipuri de structuri secundare. Structura secundar prezint 1 modele, i anume0 modelul M(heli" i foaie pliat. Mode u 5/he i) %odelul M(heli" reprezint un tip de structur secundar ce presupune ca lanul s se nfoare strns pe o direcie spiralat, formnd un cilindru cu interiorul aproape plin, din care radicalii aminoacizilor apar nt(o dispunere helicoidal. @igura . %odelul de M(heli" $a sens de rsucire n proteine a fost identificat M( heli" pe dreapta. Stabilitatea M( heli"ului este meninut prin legturi de > ce se formeaz ntre gruprile carbonil i aminice din lanul spiralat aflate fa n fa la o distan adecvat. Ca M(heli" fiecare aminoacid avanseaz spirala cu 1,:+6 la o rotire de 1666, pe fiecare spiral e"istnd 4,5 resturi, deci pasul spiralei este de :,<+6. +ceste dimensiuni arat formarea legturii de > ntre gruprile $= i ,> din cadrul lanului polipeptidic. !"ist unii aminoacizi care sunt nefavorabili structurii de M(heli". +cetia sunt aminoacizi ce stabilizeaz structura de M(heli". !"emplu0 ( prolina poate s rup spirala. +minoacizii cu resturi laterale voluminoase 2arg, ile, lNs, asp, glu3 destabilizeaz heli"ul prin interferne fizice sau electrostatice. $oninutul de M(heli" n proteine cu structur spaial este variabil. Cungimea i repartizarea segmentelor de M(heli" depinde de distribuia resturilor favorabile sau destabilizatoare n lungul lanurilor. *n mioglobin i hemoglobin apare ca motiv structural ma'or, iar n altele lipsete chimotripsina. Ca ma'oritatea proteinelor se gsete ca heli" singular pe distane scurte 2<6 +63, rar pe zone e"tinse de 1666+6. &ou sau cteva M(heli"uri se pot mpleti ca uviele unui nur, aa cum apar n proteinele fibroase0 M(Reratina din pr, miozina, fibroina, care ndeplinesc un rol mecanic de formare a mnunchiurilor rezistente de fibre.

44

Moe u 6 sau (oia p iat" Structura de foaie pliat a fost studiat tot de Pauling i $oreN, curnd dup M(heli", de aceea au numit(o structura P. $ele 1 modele difer n primul rnd prin faptul c lanul polipeptidic n conformaia P este mai rela"at, fiind aproape complet e"tins. &istana a"ial ntre dou resturi succesive este de 4,:+6 fa de 1,:+6 n M(heli", cu o periodicitate decorespunznd la cca B+ 6. Canurile polipeptidice sunt aezate n foi pliate, care sunt legate ntre ele prin legturi de hidrogen. 8adicalii aminoacizilor se situeaz deasupra i dedesubtul planului foii. &ac sensul de desfurare a lanului n poriunile adiacente coincide, foaia este numit paralel. +ran'amentul alternativ n foaia antiparalel este favorabil, succesiunea gruprilor $= i ,> fiind complementare.

@igura nr.. Strucura de foaie pliat. +minoacizi mici0 glN, ala, avanta'eaz foaia pliat, iar cei cu radical mare sau cu sarcin stn'enesc aran'amentul. $a i modelul de M(heli", structura P se ntlnete n multe proteine globulare sau fibroase. +socieri de lanuri paralele apar n fibroina 2mtase3 i antiparalele apar n P(Reratina. #n e"emplu de protein fibrilar prezent la animlaele superioare este colagenul din esutul 4<

con'unctiv, fiind cea mai rspndit protein dintre proteinele vertebratelor superioare. $u ct un animal este mai mare i mai greu, cu att proporia de colagen este mai mare. @ibrele de colagen sunt aran'ate n moduri diferite, depinznd de sarcina biologic pe care o are de ndeplinit proteina. Structura ter%iar" a proteine or Structura teriar a proteinelor reprezint aran'amentul spaial general al moleculei, rezultat prin asocierea dintre diferite regiuni ale aceluiai lan, a cror structur secundar poate sau nu varia. +ran'amentul spaial al proteinelor s(a studiat cu raze -. Printre proteinele globulare ale cror structur teriar este binecunoscut sunt0 mioglobina, hemoglobina, lizozomii, ribonucleaza, citocromul c, lactat dehidrogenaza. 8eprezentantul clasic al structurii teriare este mio! o+ina. %ioglobina este o protein globular relativ mic, care conine un singur lan polipeptidic format din 1:4 resturi de aminoacizi, a cror secven nc nu se cunoate. %ioglobina conine o feroprotein, sau hem, grupare identic cu cea a hemoglobinei, fiind i ea capabil s se o"igeneze i s se deo"igeneze. %ioglobina se gsete n celulele muchilor scheletici i este deosebit de abundent la mamiferele acvatice, cum ar fi0 balena, foca sau morsa, a cror muchi sunt att de bogai n mioglobin nct sunt colorai n brun nchis. Scheletul moleculei de mioglobin este format din opt segmente apro"imativ drepte, unite prin poriuni curbate. @iecare segment drept este un M(heli", cel mai lung fiind constituit din 14 de aminoacizi, iar cel mai scurt este format din numai B aminoacizi i toi au sensul de rsucire spre dreapta. +ceste regiuni M( helicoidale reprezint B69 din aminoacizii din molecul. &ei structura mioglobinei pare neregulat i asimetric, ea nu este deloc ntmpltoare. 7oate moleculele de mioglobin au aceeai configuraie.

@igura nr. . Structura mioglobinei +lte aspecte structurale legate de structura mioglobinei sunt urmtoarele0 1. %olecula este foarte compact, n interiorul ei rmne spaiu pentru patru molecule de ap. 1. 7oate gruprile 8 polare ale resturilor de aminoacizi sunt localizate pe suprafaa e"tern a moleculei i sunt hidratate. 4. +proape toate gruprile 8 nepolare sau hidrofobe se afl n interiorul moleculei, ferite de e"punerea la ap. <. 8esturile de prolin se gsesc numai n zonele de curbur, care conin, deasemenea aminoacizi care nu formeaz cu uurin M(heli", de e"emplu0 izoleucina i serina. :. $onformaia de ansamblu a lanului polipeptidic este aparent aceeai la mioglobina tuturor speciilor speciilor studiate, dei ele difer oarecum n compoziia de aminoacizi. +stfel, 4:

resturile constante de secven pot fi implicate n determinarea poziiei curburilor i a direciei segmentelor drepte. 2i+onuc ea$a, este o enzim pancreatic ce depolimerizeaz molecula de +8, i e"emplific un model diferit de mpachetare tridimensional a lanului. $atena ei este format din 11< de aminoacizi i este organizat n proporie de <69 ca foaie pliat antiparalel, 1:9 n M(heli", restul lanului gsindu(se sub form de bucle. *n structura teriar forma general a moleculei amintete de cochilia unui melc, la a crei stabilitate contribuie i < puni disulfidice. Structura cuaternar" Structura cuaternar apare la proteinele alctuite din dou sau mai multe lanuri polipeptidice care se asociaz formnd o unitate de sine stttoare, cu form spaial bine definit i posednd o anumit activitate biologic. Structura cuaternar se refer la felul, numrul i aran'amentul lanurilor polipeptidice ncluznd i natura contactelor dintre ele. $ele mai multe proteine oligomer sunt formate dintr(un numr mic i par de lanuri, care se numesc subuniti sau protomeri. Subunitile identice sau diferite au fiecare structura sa spaialL ele se pot aeza succesiv pe direcie liniar, circular sau mai compact suprapuse n forme geometrice diferite. +ceste posibiliti de aran'are se refer la protomeri identici sau foarte puin diferii. +nsamblul prezint simetrie, suprafeele de contact sunt complementare, sugernd gradul nalt de specificitate al structurii cuaternare. %onomerii realizeaz interaciuni slabe0 2legturi saline, legturi de hidrogen, fore Qan der Qaals, legturi hidrofobe3, proteina putnd astfel disocia reversibil. Canurile izolate sunt lipsite de activitate, funcia fiind rezultatul ansamblului cu structur cuaternar. !"emple de proteine cu structur cuaternar0 ( creatin Rinaza, lactat dehidrogenaza, glutamat dehidrogenaza, enzime, proteine neenzimatice0 hemoglobina , imunoglobulina I. +lte e"emple de proteine cu structur cuaternar sunt enzimele allosterice. ,oiunea de structur cuaternar se poate e"tinde i la unele heteroproteine. Printre cele mai simple proteine oligomere este hemo! o+ina7 care este format din < lanuri polipetidice. >emoglobina conine ' an%uri 5 formate din 1<1 de resturi de aminoacizi i ' an%uri P formate din 1<5 de resturi de aminoaciziL fiecare dintre acestea avnd ataat printr(o legtur necovalent cte un radical hem. %olecula a fost studiat n forma sa o"igenat, care are o structur sferic, compact, cu dimensiuni de0 5,<A:,:A:,6mm. *n hemoglobin, ntre cele 1 lanuri M, ca i ntre cele dou lanuri P e"ist foarte puine contacte, n schimb, numeroase grupri 8 fac legtura ntre perechile de lanuri care nu sunt asemenea.

45

@igura nr.. Structura hemoglobinei #n inters deosebit l prezint aezarea pe fiecare subunitate a cte uneia dintre cele < grupri hem, care leag cele < molecule de o"igen. +ceste grupri hem, molecule plane, n care atomii de fier formeaz compleci de coordinare plan(ptrai, sunt destul de ndeprtate ntre ele i sunt situate la anumite ungliuri unele de altele. *n molecula hemoglobinei rmne o cavitate cental, mrginit de grupri cu radical 8 polare.

@igura nr.. @ormarea hemoglobinei

*n sngele uman adult s(au identificat trei hemoglobine a cror prezen este constant,i anume hemoglobinele +1, +1 i @. 8olul fiziologic al hemoglobinei +1 nu este bine definit nc, iar n ceea ce privete hemoglobina @ fetal aceasta reprezint un tip de hemoglobin adaptat pentru condiiile de o"igenare din uter. &up natere hemoglobina @ este nlocuit cu hemoglobina +1. >emoglobina are proprietatea de a accepta o"igenul , proprietate dublat de posibilitatea de 4B

a l transporta organism. +cest lucru sete posibil datorit structurii tetramerice ce permite att acceptarea unei cantiti mari de o"igen n plmn, ct i posibilitatea de eliberare a acestuia n mod treptat, n funcie de presiunea de o"igen din esutul respectiv. Cegarea o"igenului de hemoglobin se face la nivelul celor < atomi de fier coninui n cele < molecule de hem ale lanurilor M i J. @ierul din hemoglobin nu i schimb valena n urma fi"rii o"igenului el rmne deci sub form de ion feros. /a natere astfel o"ihemoglobina, compus labil care la presiune sczut de o"igen la nivelul esuturilor pune n libertate o"igenul cu reformarea hemoglobinei. Cegarea o"igenului de hemoglobin i eliberarea sa constituie un model de adaptare biologic fa de o anumit necesitate a organismelor superior organizate. $ombinarea gradat i controlat a hemoglobinei cu o"igenul, precum i e"istena unor forme parial saturate cu o"igen, permite o"igenarea tuturor celulelor, indiferent de presiunea de o"igen e"istent la nivelul lor. *n afar de o"igen hemoglobinele se pot uni reversibili cu alte gaze, iar valena fierului n compuii care rezult este cai n o"ihemoglobin i anume F1. Iazul pentru care hemoglobina are o afinitate mare este o"idul de carbon, formndu se carbo"ihemoglobina mai stabil ca i o"ihemoglobina. +cest lucru este motivul pentru care ntr un mediu saturat o"id de carbon pot s apar into"icaii grave. +mbele forme o"i i carbo"ihemoglobina se pot transforma prin desfacerea o"igenului respectiv a o"idului de carbon simultan cu o o"idare a ionului feros la feric, ntr un compus numit methemoglobin. +cest lucru are loc n mod continuu n eritrocit unde se gsete ntr o concentraie de 6,<9 dintotalul hemoglobinei, constituid o etap preliminar catabolizrii sale. = cantitate limitat de methemoglobin se poate transforma n hemoglobin sub aciunea unei enzime numit methemoglobinreductaz. $oncentraia methemoglobinei nu crete mai mult de 6,<9 din totalul hemoglobinei eritrocitare numai prin introducerea n organism de o"idani ca fericianura i azotii sau chiar a unor medicamente cum ar fi antipirina. $ombinaia hemoglobinei cu gazele au spectre de absorbie caracteristice care permit identificarea fiecareia dintre ele. Denaturarea proteine or &enaturarea proteinelor reprezint perturbarea structurii lor native, nalt organizate, trecerea la o form ntmpltoare cu creterea entalpiei sistemului, astfel c activitatea biologic este compromis. &enaturarea proteinelor are loc sub aciunea unor ageni denaturani. +genii denaturani sunt0 temperatura, acizii, bazele, o"idanii, unele metale, ureea, guanidina, solvenii organici. +genii denaturani acioneaz distrugnd legturile ce dau stabilitate structurii tridimensionale. @enomenul de denaturare privete nivelele de structur secundar, teriar i cuaternar, meninute prin legturi slabe, fr afectarea structurii primare. Procesul de denaturare poate s fie pn la un punct reversibil. *ns, dac agentul denaturant acioneaz mai energic, proteina se denatureaz ireversibil. *n cazul unui proces reversibil, dup ndeprtarea agentului cauzant, proteina se renatureaz, redobndind structura nativ. +ceasta se e"plic prin dependena structurii spaiale de cea primar.

4;

@igura nr.. Procesul de denaturare i renaturare a proteinelor Proteinele denaturate i schimb proprietile fizice, cum ar fi0 activitatea optic i vscozitatea. &easemenea solubilitatea n ap scade producnd precipitarea lor. +cest fenomen de precipitare este e"ploatat n biochimia analitic la cercetarea proteinelor din lichidele biologice n scopul deproteinizrii. +lte aplicaii ale fenomenului de denaturare sunt0 procedeele de purificare a proteinelor i operaia de sterilizare.

4?

I8. En$ime !nzimele sunt proteine ce posed o funcie nalt specializat i anume aceea de biocataliz i se deosebesc de catalizatorii din lumea nevie prin cteva proprieti care le definesc. !nzimele se caracterizeaz prin urmtoarele proprieti0 ( capacitatea catalitic mare, eficiena catalitic crete cu un factor de 16 5 ) 1611 fa de reacia necatalizat. ( Specificitatea superioar de reacie ) elimin formarea de produi secundari ( +ctivitile catalitice enzimatice sunt reglate prin mecanisme diferite, care privesc fie aciunea lor, fie cantitatea de enzim sintetizat. $ontrolul enzimatic are semnificaie ma'or pentru reglarea metabolismului celular. ( !nzimele acioneaz n condiii foarte blnde i anume la temperatura celulelor vii, la p> aproape neutru i la presiune atmosferic. Nomenc atur" .i c asi(icare %ult vreme enzimele au fost denumite prin adugarea sufi"ului a$a la numele substratului. !". +milaza, ureeza, alcool dehidrogenaza. #nele denumiri ns nu includeau nici substratul, nici reacia catalizat. !". 7ripsina, pepsina, catalaza. &atorit faptului c numrul de enzime este n continu cretere, nomenclatura veche crea confuzii, astfel c s(a impus introducerea unei terminologii unitare i a unei clasificri adecvate. *n 1?51, $omisia de !nzime a #niunii /nternaionale de Biochimie, adopt o claisficare i o nomenclatur sistematic, bazat pe natura reaciei chimice catalizate. +stfel, enzimele au fost clasificate n 5 clase, fiecare cuprinznd un numr de subclase i, respectiv subsubclase. 1. ="idoreductaze ) enzime ce catalizeaz reaciile de o"idoreducere. 1. 7ransferaze ) enzime ce catalizeaz reaciile de transfer de grupri funcionale. 4. >idrolaze ) enzime ce catalizeaz reaciile de hidroliz. <. Ciaze ) enzime ce catalizeaz reaciile de descompunere a substratului prin alte mecanisme dect cele de o"idare i hidroliz. :. /zomeraze ) enzime ce catalizeaz reacii de interconversiune a izomerilor. 5. Cigaze ) enzime ce catalizeaz reacii de formare a legturii $(=, $($, $(S, $(,, cuplat cu scindarea unui compus macroergic 2+7P3. Pentru a defini o enzim, fiecruia i se atribuie un numr sistematic format din numele substratelor, urmat de cuvntul ce indic tipul de reacie catalizat, la care adaug sufi"ul a$a. &easemenea, fiecrei enzime i se atribuie un cod determinat de poziia pe care enzima o ocup n sistemul zecimal. E)emp u0 +cest numr de clasificare este alctuit din iniialele !$ 2$omisia de enzime3 i < cifre. Prima cifr indic clasa din care face parte enzima, a doua indic subclasa, determinat de felul gruprii implicate n reacie, a treia cifr reprezint subsubclasa , adic natura particular a substratelor din grupul respectiv, iar a patra cifr reprezint poziia ocupat de enzim n subsubclas. ( alcool dehidrogenaza0 !.$. 1.1.1.1. ( glucozoo"idaza0 !.$. 1.1.4.<. Structura en$ime or *n cea mai mare parte, enzimele sunt proteine globulare. !"cepie face ribonucleaza P. = mic proporie de enzime sunt proteine simple 2pepsina, chimotripsina, lizozim3, iar celelalte sunt heteroproteine 2metaloenzime, dehidrogenaze piridinice3. #nele enzime sunt alctuite <6

sunt alctuite dintr(un singur lan polipeptidic 2ribonucleaza3, altele din mai multe lanuri identice sau diferite. %asa molecular a enzimelor este e"trem de variabil datorit lungimii lanurilor polipeptidicre componente, ct i datorit asocierii unui numr diferit de subuniti, ca n cazul enzimelor oligomer. Pe lng aceste aspecte legate de structur, la enzime mai apar anumite caracteristici specifice lor0 ( identificarea centrului catalitic, i, la enzimele allosterice i a centrilor allosterici. ( $unoaterea cofactorilor enzimatici ct i locul lor n ansamblul structural enzimatic. Co(actorii en$imatici sunt componente micromoleculare indispensabile activitii unui numr mare de enzime. $ofactorul poate s fie un ion metalic sau o molecul organic specific, uneori sunt cerui ambii i foarte rar cofactorul este un anion anorganic. &. Meta e e 4n cata i$a en$imatic" #n numr mare de enzime cer pentru a(i manifesta activitatea ioni metalici.Tn F1 , %nF1 , %oF1 , $oF4 , @eF4 , $uF1 , %gF1 , GF , ,aF , $aF1 . #nele enzime care conin o cantitate definit de ion metalic funcional, fiind strns legat n structura lor se numesc meta o/en$ime, iar altele care leag slab metalu se numesc en$ime meta o/acti#ate. !"emple0 ( anhidraza carbonic0 TnF1 ( enzimele heminice0 @eF4 ( piruvat Rinaza 0 %gF1 , GF '.Co(actorii de natur" or!anic" sunt sisteme con'ugate n care mobilitatea electronic este foarte mare, ceea ce e"plic puterea lor catalitic. $ofactorii slab legai de enzim sau ataai temporar se numesc coen$ime. !"emplu0 acid lipoic, coenzima U, biopterinele, ,+&F, ,+&PF, @+&, $o+. Centru acti# a en$imei 9 centru cata itic* $entrul activ al enzimei este o zon restrns din structura enzimei responsabil direct de funcia ei catalitic, aceea de legare i transformare a substratului. +ceast regiune reprezint la ma'oritatea enzimelor cca :9 din total. $a entitate tridimensional centrul activ poate cuprinde o poriune sau mai multe din acelai lan, ori din lanuri diferite, apropiate spaial. !"emplu0 &in centrul activ al ribonucleazei fac parte0 >is 11, >is11?, CNs<1. +ceti aminoacizi dei sunt situai la distan n structura liniar, sunt apropiai n structura teriar, datorit plierii lanului. $entrii activi conin resturi de aminoacizi i eventual cofactori cu rol de a recunoate i lega substratul sau care particip n transformarea lor chimic, uneori aceti aminoacizi ndeplinind ambele funcii. +li aminoacizi aflai la distane variabile de centrul activ contribuie la stabilitatea structurii proteice, sunt resturi structura e, considerate alturi de resturile catalitice i de legare ca eseniale pentru activitatea enzimei. &e fapt, n procesul catalitic particip indirect ntreaga molecul. +ctivitatea este condiionat de e"istena conformaiei native a structurii enzimatice. +minoacizii care nu particip n nici un fel la actul catalitic sunt numii resturi neesen%ia e, ele conferind moleculei anumite proprieti fizico( chimice. Mecanismu de ac%iune a en$ime or Procesul catalitic const n formarea comple"ului cu substratul sau substratele, ceea ce determin o scdere a energiei strii de tranziie, transformarea chimic i eliberarea produilor. Se <1

cunosc urmtoarele mecanisme de aciune ale enzimelor0 Cata i$a prin distorsie implic interaciuni care deformeaz legturile i unghiurile acestora n molecula substratului. *n unele cazuri, contorsia, poate fi consecina atarii covalente a substratului de enzim. Cata i$a acido/+a$ic" se datoreaz radicalilor aminoacizilor din centrul activ care pot funciona ca acizi sau baze Bronsted sau ca acizi sau baze CeVis. Cata i$a prin orientarea reactan%i or. !nzima are rolul de a dispune substratele ntr(o poziie favorabil reaciei. Speci(icitatea cata i$ei en$imatice Specificitatea unei enzime reprezint capacitatea unei enzime de a selecta dintr(un numr de compui substratul particular i a(l transforma printr(o reacie de un anume tip. Se distinge 0 specificitatea de aciune 2 de reacie3, i specificitatea de substrat. Speci(icitatea de rec%ie. Spre deosebire de catalizatorii neproteici, care accelereaz o varietate de reacii, o enzim catalizeaz, de regul, un singur tip de reacie. !"emplu0 ( o reacie de hidroliz ( o reacie redo" ( formarea unei legturi. !"ist, ns unele proteine, puine la numr, cu activiti polienzimatice. *n acest caz proteina posed centri catalitici independeni, responsabili de reacii diferite ce decurg prin mecanism deosebit. Speci(icitatea de su+strat reprezint calitatea enzimei de a forma comple"ul enzim( substrat ca prima etap obligatorie n transformarea acestuia. &ac enzima acioneaz asupra unei varieti de compui avem de(a face cu o speci(icitate re ati#" 9de !rup*7 n care caz enzima are capacitatea de a transforma un numr de substrate nrudite chimic. !"emplu0 ( hidrolaze0 ( esteraze ( peptidaze ( glicozidaze ( proteaze0 ( e"opeptidaze ( endopeptidaze. Specificitatea relativ are importan n biochimia analitic, deoarece permite introducerea de substrate artificiale la determinri enzimatice. Se cunosc i enzime cu speci(icitate a+so ut". +cestea sunt inactive fa de analogii structurali ai substratului, ceea ce presupune recunoaterea integral a unei molecule, precum i o rigiditate a centrului activ, n conformitate cu modelul cheie/ +roasc". !"emplu0 ( ureaza ( arginaza ( anhidraza carbonic ( fructozo(1,5(difosfataza. Stereospeci(icitatea en$ime or. Stereospecificitatea enzimelor este un caz de specificitate absolut. !"ist un numr mare de substrate care se caracterizeaz prin asimetrie structural, iar n procesele metabolice adeseori se ntlnete unul din izomerii posibili. !"emplu0 ( C ) i & ) aminoacid o"idazele sunt specifice pentru stereoizomerii respectivi. ( +lte enzime recunosc numai izomerii geometrici0 succinat dehidrogenaza, fumaraza. <1

:actorii care in( uen%ea$" acti#itatea en$imatic" *n reaciile enzimatice viteza de reacie se msoar fie prin cantitatea de substrat transformat, fie prin cantitatea de produs format, e"primat n molaritate, iar timpul se e"prim n minute. .iteza unei reacii enzimatice poate fi influenat de un numr de factori, dintre care amintim0 concentraia de enzim, concentraia de substrat, temperatura, p>, inhibitori. &. In( uen%a concentra%iei de en$im" .iteza unei reacii enzimatice arat o dependen liniar de concentraia enzimei, n condiiile n care concentraia de substrat este fi".

W !X &ependena vitezei de reacie de concentraia de enzim +baterile de la liniaritate se datoreaz erorilor tehnice sau e"istenei unui inhibitor ce acioneaz numai la o anumit concentraie.

'. In( uen%a concentra%iei de su+strat.teoria Michae is/Menten &e e"emplu s presupunem urmtoarea reacie catalizat de enzim0 /+ S 01 02 /S 03 /+ P

Pentru enzimele michaeliene, dependena vitezei de reacie de concentraia de substrat este descris ca o hiperbol, la o concentraie de enzim constant. +stfel viteza de reacie crete la nceput rapid i liniar, dup care dependena nu mai este liniar, iar la o anumit concentraie de substrat curba tinde spre o valoare ma"im. <4

. .ma"

.mA1

Gm

W SX

.6 O .ma" O WSX A WSX F Gm . ( viteza iniial de reacie .ma" ) capacitatea catalitic ma"im a enzimei ) viteza ma"im realizat W S X ) concentraia de substrat Gm ) $onstanta lui %ichaelis ) %enten, reprezint concentraia de de substrat pentru care viteza de reacie atinge 'umtatea valorii ma"ime. &ozrile de activitate enzimatic se efectueaz la concentraii mari, saturante de substrat pentru a asigura o cinetic de ordinul zero. !cuaia %ichaelis(%enten este fundamental n studiile de cinetic enzimatic, permind analiza cantitativ a ma'oritii reaciilor enzimatice. Pe lng utilitatea la interpretarea mecanismului reaciilor enzimatice i a aciunii inhibitorilor, cei doi parametri cinetici 2 .ma", Gm 3 au importan la determinarea de enzime, inclusiv n laboratorul clinic. ;. Inhi+itorii en$ime or /nhibiia reprezint scderea parial sau pierderea activitii enzimatice ca urmare a legrii de enzim a unui compus numit inhibitor. /nhibiia poate s fie un proces reversibil sau ireversibil. a. Inhi+i%ia re#ersi+i " *n cazul inhibiiei reversibile inhibitorul se combin cu enzima sau cu comple"ul !S, iar prin ndeprtarea inhibitorului activitatea enzimei se restabilete. /+ + 01 02 1i = /S + + 1i /S +

/+ 2 /3 2 +3 2 /+3

!ficiena unui inhibitor se msoar prin Gi. $u ct valoarea Gi este mai mic cu att inhibitorul este mai efficient. /nhibiia reversibil este de dou tipuri competitiv i necompetitiv.

<<

Inhi+i%ia competiti#" *n cazul inhibiiei competitive inhibitorul intr n competiie cu substratul pentru acelai loc de legare la situsul activ al enzimei.

/+ S /+ +

/S /+

/+ P 1i = /+ P

2/32+3 2 /+3

*n cazul inhibiiei competitive inhibitorul este un analog structural al substratului. !"emplu0

CH2 CH2

CO OH COO H

+ 4AD -

HC HO OC CH

COOH

4ADH2

!nzima succinat dehidro!ena$a, care catalizeaz aceast reacie, este inhibat competitiv de analogi structurali, ca de e"emplu0 acid malonic, acid o"alilacetic, acid o"alic. +ceti acizi dicarbo"ilici se pot lega de centrul activ al enzimei la fel ca i succinatul. Inhi+i%ia necompetiti#" are loc prin legarea inhibitorului la un loc diferit de centrul activ al enzimei, rezultnd un comple" ternar !S/. /nhibitorul poate interaciona fie cu enzima liber, fie cu comple"ul !S. /+ P /S /+ S

+ + 1i /+ + S

+ + 1i /S + 5',a) =

5,a) 1 + 2+361i

Pe de alt parte substratul se poate lega i de comple"ul !/. Spre deosebire de inhibiia competitiv efectul inhibitorului necompetitiv nu este influenat de creterea concentraiei de substrat.

<:

1Av /nhibiie competitiv inhibiie necompetitiv 1A.m 8eacie fr inhibitor

1A.m

(1AGm

(1AGHm

1AS

#n alt tip de inhibiie reversibil este inhi+i%ia necompetiti#" 9incompetiti#" *, care are loc atunci cnd se formeaz comple"ul ternar !S/, ca urmare a interaciunii / cu comple"ul !S, cnd are loc scderea valorii Gm i .ma". +. Inhi+i%ia ire#ersi+i " /nhibiia ireversibil este consecina legrii covalente a inhibitorului de enzim sau de comple"ul !S, el neputnd fi ndeprtat. /+ P /S /+ S + + + +

/+ inac ti-i

/S +

$apacitatea inhibitorului ireversibil este msurat printr(o constant de vitez care e"prim fraciunea de enzim inhibat ntr(o perioad definit de timp la o anumit concentraie de inhibitor. /nhibitorii ireversibili sunt to"ici, fiind numii i otrvuri enzimatice. !"emplu0 metalele grele, agenii o"idani, organofosforicele, compui ai arseniului. Semni(ica%ia .i importan%a practic" a inhi+i%iei en$imatice 1. /nhibiia enzimatic este o modalitate important de control metabolic. 1. #nele to"ice i e"ercit aciunea datorit calitii lor de inhibitori enzimatici ireversibili. !"emplu0 insecticidele 4. /nhibitorii enzimatici au aplicabilitate n to"icologia clinic, servind ca antidoturi. !"emplu0 etanolul este folosit ca antidot n into"icaiile cu metanol i etilenglicol. <. #tilizarea inhibitorilor n enzimologie pentru identificarea mecanismului de aciune i a <5

centrilor activi. :. /nhibiia enzimatic este un instrument terapeutic polivalent. !"emplu0 agenii chimioterapici, antiinflamatoarele nesteroidiene. <. In( uen%a temperaturii asupra acti#it"%ii en$imatice .iteza reaciei enzimatice crete odat cu temperatura, n intervalul n care enzima respectiv este stabil, datorit creterii energiei cinetice a reactanilor. *n multe procese biologice o cretere a temperaturii cu 166 $ duce la dublarea sau triplarea vitezei de reacie. 7emperatura optim pentru ma'oritatea enzimelor este temperatura celulelor n care acestea se gsesc. Peste temperatura de :6 ) 566 $ ma'oritatea enzimelor sunt inactive. !"cepie fac unele microorganisme termofile ale cror enzime sunt active i la ;66$. :. E(ectu pH/u ui asupra acti#it"%ii en$imatice. !nzimele sunt stabile ntr(un domeniu relativ ngust de p>, domeniu n care se gsete o valoare, numit p> optim, pentru care activitatea unei enzime este ma"im. %a'oritatea enzimelor au p>(ul optim n 'urul p>(ului fiziologic de B,<. !"cepii fac enzimele digestive pentru care p>(ul optim este cel acid, monoaminoo"idazele din membrana mitocondrial e"tern care au p> optim apro"imativ 16. !"ist unele enzime a cror activitate este independent de p> 2 pepsina 3. 2e! area acti#it"%ii en$imatice 8eglarea activitii enzimatice este o component esenial a procesului de control i de coordonare a metabolismului, n direct legtur cu meninerea homeostaziei. @lu"ul reaciei enzimatice poate fi influenat prin 4 mecanisme generale0 ( variaii n cantitatea absolut de enzim ( modificarea fondului metabolic celular de substrate i cofactori, condiionate i de transportul prin membrane ( schimbri n eficiena catalitic a enzimelor. En$ime e a osterice !nzimele allosterice sunt alctuite din subuniti care interacioneaz n cursul procesului catalitic, fenomen ce se numete cooperati#itate. +ctivitatea acestor enzime este controlat prin legarea necovalent a unor metabolii specifici n locuri distincte de centrul activ, locuri ce se numesc centri a osterici. &eci, proteinele 2enzimele3 allosterice sunt oligomeri alctuii din monomeri identici sau nu, aflai n numr par. @iecare monomer posed un centru activ i locuri separate i diferite de situsul activ numite centri a osterici. = enzim allosteric catalizeaz de obicei o etap iniial din secvena multienzimatic a unei ci metabolice. 8eaciile enzimelor allosterice sunt ireversibile sau cu grad redus de reversibilitate, reprezen nd astfel puncte de control pentru ntregul lan de reacii. +stfel, cnd produsul final al cii metabolice se acumuleaz peste concentaia necesar, el funcioneaz ca modulator negativ al enzimei. +cest efect se numete inhi+i%ie prin produs (ina 7 inhi+i%ie (eed+ac= sau retroinhi+i%ie. !"emplu0

<B

/1 S S1

/2

S2

P in.iba nzi,a ( aspartat transcarbamilaza, enzim ce catalizeaz prima reacie din procesul de sintez a ribonucleotidelor pirimidinice.

Importan%a +iomedica " .i (armaceutic" !nzimologia aduce un aport important att n problemele de diagnostic ct i n ceea ce privete terapia cu enzime. I. Dia!nosticu en$imatic &iagnosticul enzimatic se bazeaz pe informaiile furnizate de dozarea enzimelor din ser. &eterminrile enzimatice din hematii i leucocite, precum i din material bioptic sunt mai puin abordate. Se mai urmresc unele enzime i n urin, suc gastric i suc duodenal. *n funcie de locul de producere i modul n care a'ung n snge, enzimele serice se clasific astfel0 ?. En$ime secretate acti#L se produc n ficat i se elibereaz n plasm, unde ndeplinesc un anumit rol fiziologic. !"emplu0 lipoproteinlipaza, pseudocolinesteraza, lecitin )colesterol( acil( transferaza. 16. En$ime a e secre%ii or e)ocrine. +cestea se produc n diferite organe i difuzeaz pasiv n plasm. !"emplu0 amilaza salivar i pancreatic, lipaza pancreatic, fosfataza acid prostatic, fosfataza alcalin. 11. En$ime ce u are. +ceste enzime se gsesc n plasm n cantiti de sute de ori mai mici dect n esuturi. !"emplu0 lactat dehidrogenaza, creatin Rinaza, transaminazele. 11. En$ime e inducti+i e, sintetizate n e"ces ca rspuns la un agent imductor, i ca atare mbogesc plasma. !"emplu0 K( glutamil transpeptidaza, enzimele de hidro"ilare, glicuronozil(transferaza. I$oen$ime e /zoenzimele sunt enzime ce ndeplinesc acelai rol catalitic, dar difer prin proprietile structurale, fizice, chimice, cinetice i imunologice. &in punct de vedere structural sunt oligomeri alctuii din subuniti identice sau diferite. !"emplu0 1. lactat dehidrogenaza prezint : izoenzime C&>, care se deosebesc prin proporia n care sunt distribuite. $ele : izoenzime rezult prin combinarea difert a 1 tipuri de lanuri, notate cu > 2subunitate de origine miocardic3 i % 2subunitate ce provine din muchi3. C&>1 0 >< C&>1 0 > 4% C&>40 > 1%1 C&>< 0 >%4 C&>: 0 %< +ceste enzime se dozeaz n studiul leziunii de organ i anume n boli cu citoliz. 1. $reatin ) Rinaza prezint 4 izoenzime, i anume0 <;

$G1 0 BB $G1. B% $G4 0 %% +ceste izoenzime sunt dozate n infarctul miocardic 1erapia cu en$ime. Pentru multe medicamente att aciunea principal c t i efectele secundare sunt n legtur direct cu diferite activiti enzimatice. !nzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte importante i specifice. !nzimele sunt introduse n terapie din apro"imativ 1?46. %edicamentul enzimatic apare n diferite forme solide, soluii buvabile, soluii in'ectabile precum i preparate destinate uzului local. 7erapia cu enzime este indicat n afeciuni digestive i boli genetice, boli cardio(vasculare, neoplazii sau ca medicamente antiinflamatoare n dermatologie, oftalmologie, =8C, reumatologie, afeciuni bronice. %etode i surse de obinere a enzimelor terapeutice0 ( !"tragerea din diferite esuturi sau lichide biologice umane 2placenta, snge, urin3 sau animal i purificarea corespunztoare. ( $ulturi de celule mamifere sau bacterii din sol. ( Surse vegetale ( *n ultimul timp tehnologia +&,(ului recombinat. !"emplu0 ( streptoRinaza, uroRinaza, enzime ce se obin prin biotehnologie. +ceste enzime reduc mortalitatea prin infarctul de miocard.

<?

8. 8I1AMINE .itaminele sunt biomolecule indispensabile vieuitoarelor pentru creterea, ntreinerea troficitii i funciei esuturilor. =rganismul uman nu le poate sintetiza sau produce n cantiti insuficiente. .itaminele sunt necesare organismului n cantiti mici de ordinul miligramelor sau mai puin, cu e"cepia vitaminei $ care este necesar n cantiti de apro"imativ B: mg pe zi. &eci, vitaminele pot fi considerate factori eseniali. $arena unei vitamine genereaz stri patologice, cu manifestri specifice. &eficienele vitaminice reflect dezechilibru dintre aport i necesiti. !le sunt cauzate0 0rimar ( prin lipsa de aport alimentar ( de afeciuni digestive ce se repercut asupra absorbiei ( datorit disbiozei pentru vitaminele ce sunt produse de flora intestinal, aceasta este afectat prin administrarea oral de antibiotice sau sulfamide. Secundar / datorit cerinelor crescute ce apar n anumite stri. ,ecesarul pentru o vitamin sau alta depinde de0 ( vrst ( de starea fiziologic, de e"emplu0 sarcina ( de starea de sntate ( efortul fizic ( temperatura ambiant ( administrarea unor medicamente. Strile careniale sunt numite a#itamino$e 2apar astzi la populaia malnutrit din rile subdezvoltate3 i hipo#itamino$e7 cu manifestri policareniale. #nele vitamine au provitamine, care sunt compui nrudii structural, inactivi sau slab activi, pe care organismul i transfer n forma activ n forma activ de vitamin. +u mai fost identificai i ali compui numii anti#itamine7 care sunt capabili s(i diminuie sau s(i suprime activitatea unei anumite vitamine. #nele antivitamine au utilizri terapeutice, dar prezin dezavanta'ul de a induce simptome careniale. C asi(icarea #itamine or !"ist o clasificare care are la baz criteriul solubilitii n ap sau solveni nepolari. +stfel vitaminele se mpart n0 ( vitamine hidrosolubile0 B1, B1, B5, B11, PP, acid folic, $, biotina, acidul pantotenic. ( vitamine liposolubile0 +,&,!,G. #nii autori admit i o categorie de pseudovitamine care cuprind compui care au parial trsturi de vitamine 2vitaminoide3. &e e"emplu0 ( flavonoizii numii i vitamina P ( acizii grai eseniali sau vitamina @ ( mezoinozitolul ( colina

Mecanismu de ac%iune a #itamine or %ulte vitamine acioneaz dup o prealabil biotransformare, iar altele rmn nemodificate i funcioneaz ca i coenzime, participnd la o multitudine de procese biochimice. +lte vitamine ca de e"emplu vitaminele + sau & folosesc ci de aciune ce amintesc de mecanismele hormonale. .itaminele ! sau tocoferolii funcioneaz ca sisteme antio"idante fa de agresiunea pero"idic. :6

!"ist, deasemenea i modaliti particulare de aciune, cum ar fi de e"emplu0 retinalul i acidul retinoic. *n general vitaminele prezint i un important rol catalitic. Imp ica%ii terapeutice *n terapie, vitaminele sunt utile ca medicaie specific pentru combaterea sau profila"ia strilor careniale. Preparatele pot s conin o singur vitamin sau asocieri de vitamine. *n doze terapeutice vitaminele sunt n general bine tolerate. Supradozarea poate provoca tulburri grave, numite hiper#itamino$e, mai ales la vitaminele liposolubile, care sunt mai greu eliminabile. !"emplu0 ( n literatur se semnaleaz c vitamina + ar prezenta risc teratogen, fiind astfel contraindicat n primele luni de sarcin. *n terapie se folosesc unii derivai vitaminici ca sruri, esteri, reprezentnd forme optimizate sub raportul eficacitii sau al posibilitii de adminidtrare. 8itamine e iposo u+i e .itaminele liposolubile sunt molecule apolare derivate din izopren. !le sunt relativ stabile la temperatura operaiilor culinare, dar uor inactivate de radiaiile #. i substanele o"idante. &igestia i absorbia lor decurge n condiii proprii lipidelor, cu participarea enzimelor specifice i a bilei. @icatul poate depozita vitaminele +,&,G, iar vitamina ! se acumuleaz mai ales n esutul adipos. *n circulaia sanguin vitaminele liposolubile sunt vehiculate de ctre proteinele plasmatice. .itaminele liposolubile se elimin n bil, urmeaz un circuit enterohepatic i se e"cret n fecale. #nii metabolii pot s treac n urin. 8itamine e A .itaminele + mai sunt cunoscute i sub denumirea de retinoide. Surse de 8itamina A .itamina + se gsete n alimenia carnal ca atare sau n produsele vegetale sub form de provitamine. =rganismul uman nu poate sintetiza vitamina +, dar are capacitatea de a transforma provitaminele n forme active. Provitaminele + sunt pigmeni de culoare galben(portocalie sau roie. Structur" Pigmenii vegetali au o structur polizoprenic format din <6 de atomi de carbon i au nite inele ciclohe"enil 2cicluri iononice3. *n grupa provitaminelor + intr hidrocarburi 2caroteni3 i derivaii lor o"igenai 2"antofile, carotenoide3. $ondiia structural obligatorie este prezena a cel puin a unui nucleu P(iononic. !"emplu0

P ( caroten

:1

M ) caroten *n mucoasa intestinal, P( carotenul sufer o scindare o"idativ a legturii duble din poziia 1: 2proces enzNmatic3 n urma creia se formeaz vitamina +1 2retinalul3.
O2 *io)i' naza

CH
2

vitamina +1 2retinalul3 ( 7ot n mucoasa intestinal mai au loc dou transformri i anume0 reducerea gruprii carbonilice la grupare alcoolic n prezena enzimei alcool dehidrogenazei sau retinol dehidrogenazei.

CH

a"coo" * .i*ro' naza CH2O H

retinol

o"idarea gruprii aldehidice la acid carbo"ilic, n prezena aldehid dehidrogenazei, cu formare de acid retinoic.

:1

CH O a"* .i* * .i*ro' naza COO H

acid retinoic

@orma alcolic i cea de aldehid reprezint formele de absorbie intestinal. &up absorbie vitamina + se esterific cu acizii grai 2acid palmitic3 i se depoziteaz n ficat. &e acolo se mobilizeaz dup necesiti. .itamina + este transportat de o protein plasmatic specific la esuturile int. %a'oritatea esuturilor au capacitatea de a realiza conversia0 o" a" oic

Se mai cunosc i alte vitamine +, i anume. +1, +4.

CH O

vitamina +1 24(dehidroretinal3 .itamina +1 se gsete sub 4 forme, i anume0 4( dehidroretinal , (ol i )oic i se gsete n ficatul petilor. CH2 CH O

.itamina +4 *n cazul vitaminei +4 are loc deplasarea legturii duble din poziia 14(1< n poziia 14(16. 7oate cele trei forme ale vitaminei +1 2retinol, retinal i acid retinoic3 sunt active biologic, dar sunt inechivalente ca aciune. Acidu retinoic :4

+cidul retinoic este capabil s ntrein dezvoltarea i diferenierea diferitelor esuturi. +cidul retinoic particip n biosinteza glicoproteinelor, datorit capacitii sale de a prote'a pielea i mucoasele 2aciune epitelotrop3 i mrete rezistena organismului la infecii. 2etino u *n celula int retinolul este captat de o protein specific citoplasmei, diferit de cea seric i l transloc n nucleul celulei, unde este preluat de o protein nuclear. Se presupune c vitamina + sub forma alcoolic acioneaz asemntor hormonilor. 8etinolul influeneaz funcia de reproducere, acionnd asupra hormonilor. 2etina u 8etinalul particip direct n procesul vederii, fiind elementul cromofor al tuturor pigmenilor vizuali coninui n celulele fotoreceptoare din retin. $elulele fotoreceptoare din retin conin dou tipuri de celule ca form0 bastonae i conuri. Pigmenii vizuali sunt instrumente moleculare ale vederii. $a structur sunt cromoproteine, proteine comple"e formate din proteina propriu(zis plus o grupare micromolecular colorat. $elula bastona este implicat n procesul vederii i este format din dou segmente, i anume unul e"tern i unul intern. Segmentul e"tern este format din apro"imativ 1666 de discuri ce conin pigmeni vizuali de tipul rodopsinei. 8odopsina este o cromoprotein format din dou componente0 o parte proteic, numit opsina i cromoforul, care este izomer al vitaminei +0 > &&/ cis retina u . $ele dou componente sunt legate printr(o legtur de tip baz Schiff ce se realizeaz ntre funcia carbonil a cromoforului i funcia S( aminic a unui rest de lizin din structura opsinei. R CH N+ H cro,o8or &11 - cis r tina" % 2odopsina are capacitate mare de a absorbi lumina, ceea ce face ca celula bastona s fie un receptor foarte sensibil, fiind necesar energia unui singur foton pentru a fi fotoe"citat. 8odopsina face parte dintr(un sistem senzor. @enomenul primar al procesului de e"citare vizual este izomerizarea 11(cis retinalului din structura rodopsinei, consecutiv absorbiei luminii. & CH2 %7 CH NH CO o(s ina

izo, rizar HC NH
11 +

"#,ina o(s ina

cis r tina"

CH

NH

o(s ina

a"" trans r tina" Prin izomerizare se schimb geometria structurii polienice a rodopsinei, are loc o deplasare a legturii aldiminice cu :+6 n raport cu inelul P( iononic. +ceast deplasare va antrena structura :<

proteinei i apar astfel modificri constante ale opsinei, modificri ce duc la desprinderea cromoforului de opsin. Procesul de fotoliz a pigmentului are loc n etape care se succed cu vitez foarte mare. 8odopsina activat va declana o serie de interaciuni n cascad care e"plic fenomenul de e"citaie vizual.
R "#,ina int#n ric

R9 &ro*o(s ina 8oto )citata%

a"" trans r tina" izo, raza * .i*ro' naza a"" trans r tino"
11

o(s ina

cis r tina"

Procesul de e"citare vizual. Caren%a de #iatmina A mbrac diverse forme. Ca nivelul ochilor0 ( se instaleaz tulburri funcionale, scderea acomodrii n lumin crepuscular, apar dificulti n vedere. ( Pot s apar leziuni ale con'unctivei 2"eroftalmie3 ( =bstrucia canalelor vasculare, cheratomalacie, suprainfectare cu Bacillus "erosus Ca nivelul pielii0 ( apar leziuni trofice ale epidermei i mucoasei 7ot n caren de vitamina + pot s apar tulburri ale creterii i sterilitate. Suprado$area cu vitamina + duce la hipervitaminoz, care se manifest prin creterea tensiunii intracraniene, cefalee, prurit, hepato(splenomegalie, descuamare cutanat, anore"ie, iritabilitate. *n condiii obinuite necesarul zilnic de vitamina + este de 1,Bmg pentru adult i 1 mg pentru copii. !l poate s creasc n sarcin, lactie, pneumonie, nefrit. Indica%ii .itamina + este indicat n special n0 oftalmologie, dermatologie, dar i n boli infecioase febrile, boli renale, ciroze hepatice, hipertiroidism, diabet i n pediatrie. *n scop terapeutic se folosesc esterii de retinol i anume0 acetatul i palmitatul. 8itamine e D 9 ca ci(ero ii* Prin origine, structur i mod de aciune vitaminele & se apropie mult de hormonii steroizi. ,ecesarul n raia alimentar este evaluat n 'ur de 1:6 #/ la adult, ntre 466( :66#/ la copil, cu condiia unui aport adecvat da $a i P. ,ecesitile de aport e"ogen crescut sunt reclamate n sarcin, alptare, la sugari i la persoanele private constant de lumina solar. Surse de #itamina D( din alimente sub form de provitamine ( endogen prin biosintez ( suplimentar sub form de medicamente n caz de sarcin, la sugari, persoanele ce triesc i lucreaz mult n ntuneric Provitaminele & sunt compui sterolici cu 1? atomi da carbon n structura tetraciclic de baz. $onversia provitaminelor & n vitamine & este un proces fotochimic ce are loc sub influana radiaiilor #.. Procesul are loc n etape cu deschiderea inelului B. Se cunosc 5 vitamine &, care se ::

noteaz de la &1 la &B. &1 este considerat preparat impur de &1.

"#,ina

HO

HO

B( dehidrocolesterol

colecalciferol 2&43

"#,ina

HO

HO

ergosterol

ergocalciferol 2&13

Provitamina &1 se ntlnete n sclerotul de secar, S.cereviceae, esuturi animale.

:5

Sursa endo!en" de #itamina D s int za n*o' na a"i, nt

co" s t ro" ,#coas a int s tina"a

:

* .i*roco" s tro" "#,ina

HO co" ca"ci8 ro" Prin aciunea radiaiilor #. B(dehidrocolesterolul format n mucoasa intestinal i depozitat n piele sufer un process de fotoliz neenzimatic, trecnd n precolecalciferol, care se izomerizeaz spontan n colecalciferol. 7ransformarea este direct proporional cu intensitatea e"punerii i invers proprional cu gradul de pigmentare a epidermei. Procesul de conversie se diminu cu vrsta. $alciferolii se absorb din intestinul subire pro"imal. Meta+o ismu #itaminei D .itamina & sufer un proces de hidro"ilare la fel ca i hormonii. +u fost pui n eviden cca 16 de derivai hidro"ilai. +stfel, n microzomii hepatici o hidro"ilaz specific introduce gruparea hidro"il n poziia 1:. 1:( hidro"icalciferolul sub aciunea unui comple" de trei enzime duce la hidro"ilarea n poziia 1, cu formare de 1, 1: calciferol sau calcitriolul, care este metabolitul cel mai activ, fiind considerat i hormonul &. Perturbarea procesului de obinere a calcitriolilor duce la cauzele de producere a carenei de vitamina &. +stfel, medicaia antiepileptic 2fenobarbital, fenitoina3 administrat timp ndelungat induce enzime capabile s produc produi hidro"ilai preponderent inactivi.

:B

ca"ci8 ro" .i*ro)i"aza OH

25 .i*ro)ica"ci8

OH

ro"

1; 25 ca"ci8

ro" &ca"citrio"%

27; 25 ca"ci8

ro"

HO ca"citrio"

1; 27; 25 ca"ci8

ro"

:;

2o u +iochimic a #itaminei D .itamina & alturi de hormonul paratiroidian intervine n metabolismul $a i al fosfailor. +stfel, reacia de hidro"ilare a calcifediolului este stimulat direct de scderea fosfatului i indirect de scderea calciului.

.i(o8os 8at ,i

.i(oca"c ,i
+

P TH
+

ca"ci8 *io"

ca"citrio"

$alcitriolul i stopeaz propria sintez prin mechanism feed(bacR. $alcifediolul s(a putut localiza n intestine, n esutul renal, ososL acestea find deci principalele esuturi int a hormonului &. +ciunea biologic principal a hormonului & este de a facilita absorbia intestinal de $a i fosfat. Ca nivelul tubilor renali produce retenie de fosfai i crete sinergic cu P7> reabsorbia $a. *n corelaie cu P7> asigur concentraiile sanguine optime de $a i fosfai, n vederea mineralizrii normale a osului. &up unele preri, calcitriolul ar stimula sinteza de osteocalcin, o protein transportoare de $a, a crei formare depinde i de vitamina G. +ciunea parathormonului i a hormonului & este de a ridica nivelul de $a n fluidul e"tracelular i de a menine sau scdea concentraia de fosfat. $nd e"ist un deficit de $a n os, creterea calcemiei sub influena vitaminei & va produce inhibiie feed(bacR a secreiei P7>, permind mineralizarea. &ozele mari de vitamina & stimuleaz osteoclatii i mobilizeaz $a din oase. +ceste micri ale $a pot fi puse n legtur cu proteinele transportoare din celulele respective. *n concluzie, hormonul & este produs printr(o serie comple" de reacii enzimatice i neenzimatice, ce implic transportul moleculelor precursor la esuturi. *n organele int hormonul & acioneaz dup modelul hormonilor steroizi, interceptnd n final un numr de procese biologice. >ormonul & are o contribuie esenial la homeostazia calciului. +cest bioelement este important nu numai n metabolismul osos, ci i n e"citabilitatea neuromuscular, stimuleaz producerea unor hormoni i neurotransmitori, intervine i n procesul de coagulare. Caren%a de #itamina D $arena de vitamina & se manifest n primul rnd prin tulburri n metabolismul osos. Ca adult, demineralizarea osului provoac osteoporoza, care evolueaz spre osteomalacie. Ca copii, carena de vitamina & duce la apariia rahitismului. Semnele biuochimice sunt creterea fosfatazei alcaline serice, hipocalcemia i hipofosfatemia. 7abloul clinic al rahitismului include0 deformri ale scheletului, modificri osoase vizibile radiologic, hipotonie muscular i ligamentar, uneori spasmofilie. &eformrile osului se instaleaz n primii ani de via. !"emplu0 ( fontanela defectuos suturat, craniu ovalar, dentiie ntrziat, toracele cu sternul proiectat :?

nainte, bazin strmtat. Ca maturitate apare bazin distocic, membrele inferioare se curbeaz, iar abdomenul devine voluminos. Indica%ii *n terapie se utilizeaz vitaminele &1 i &4, calcifediolul i calcitriolul asociate cu preparate de $a i fosfat. Ca sugari se face profila"ie cu vitamina &. !"ist forme de rahitism, numite rahitism pseudocarenial, rezistente la vitamina &. +ceste boli sunt congenitale, datorate incapacitii transformrii vitaminei & n calcitriol i a absenei receptorului pentru hormonul &. 7oate preparatele cu vitamina & sunt to"ice prin supradozare, provocnd mobilizarea $a din os, osteoporoza, hipercalcemia, depuneri n esutul renal ducnd la calculoza renal. Ca administrarea prelungit a vitaminei & se recomand controlul nivelului de $a i fosfat din snge. + fost obinut un analog sintetic al vitaminei & , compusu dihidrotachistero u 9 A1&?7 tach@stin*, prin hidrogenarea parial a tachisterolului, unul din produii secundari din procesul de fotoliz a provitaminei &. +cest compus este folosit la combaterea de urgen a tetaniei paratireoprive, datorit efectului rapid de corectare a hipocalcemiei. 8itamina E 9toco(ero ii* .itamina ! este cunoscut sub denumirea de vitamina antisterlitii, deoarece este necesar pentru fertilitate la unele mamifere i psri. &enumirea de tocoferol vine din limba greac Ato=os B a na.te7 pherein B a purtaA. .itamina ! se gsete e"clusiv e"ogen n plantele verzi, uleiuri vegetale, alimente de origine animal, mai ales viscere. Structura #itaminei E 7ocoferolii sunt derivai metilai ai nucleului, numit tocol. Se cunosc < tocoferoli naturali notai0 M(, P(, K(, Y( tocoferol. $ompusul M posed activitatea vitaminic cea mai marcat i este cel mai larg rspndit.

HO CH3 O
tocol M ) tocoferol0 :,B,; )trimetiltocol P ) tocoferol0 :,; ) dimetiltocol K ) tocoferol0 B,; ) dimetiltocol Y ) tocoferol0 ; ) metiltocol %etaboliii acestei vitamine nu se cunosc, neidentificndu(se nici un metabolit activ. 2o u +io o!ic a #itaminei E .itamina ! prezint dou funcii biochimice0 ( una legat de calitatea sa puternic antio"idant ( cealalt privind metabolismul Se. .itamina ! este un puternic antio"idant n vivo sau n vitro. .itamina ! este activ la presiuni mari de o"Ngen i prote'eaz astfel acizii grai nesaturai, vitamina +, carotenii i gruprile tiolice ale enzimelor. .itamina ! este bine distribuit n membranele eritrocitelor i ale celulelor din teritoriul arborelui respirator. *n vivo 'oac un rol important n protecia fosfolipidelor membranare, contribuind astfel la conservarea structurii celulare, fa de agresiunea pero"idic a diverilor ageni. 8elaia vitamina ! ) Se este una de reciprocitate. 8olul legat de Se este specific i insuficient precizat. *n ce privete Se, se arat c el este necesar pentru funcionarea normal a pancreasului 2digestia lipidelor i deci a vitaminei !3. Se contribuie la reinerea vitaminei ! n 56

CH3

CH3

CH3 CH3

lipoproteinele plasmatice. Se are o aciune sinergic antio"idant ca i component al unei enzime numite ! utation > pero)ida$".
2!

SH

H2O 2 '"#tation ( ro)i*aza

2 H2O

,ecesarul de viatamina ! este de 16 mg Azi, iar n sarcin i alptare a'unge la 1: mgAzi. Caren%a de #itamina E Stri de caren ! se pot instala n cadrul sindromului de malabsobie lipidic, cauzate de disfuncia pancreatic, colecistopatii, boli inflamatorii intestinale, cnd se produce steatoree 2pierderea de lipde n scaun3. Pn n prezent lipsesc dovezi sigure c vitamina ! ar fi necesar funciei reproductive la om. $arena se manifest prin tulburri neurovegetative, apariia de edeme, fragilitate eritrocitar, anemia hemolitic, care apare n special la nou(nscuii prematur. .itamina ! se indic n sarcin i alptare, la prematuri, la vrstnicii cu tulburri de circulaie periferic. *n avort, sterilitate i distrofii musculare eficiena este ndoielnic. 8itamina C .itaminele G naturale se gsesc n diferite alimente, ca0 lapte, ou, uleiuri vegetale. Sursa ma'or de vitamina G este flora saprofit intestinal 2B.coli3, astfel c n mod obinuit nu este necesar aportul e"ogen. .itaminele G sunt derivai de 1( metal( 1,<(naftochinona. $ompusul printe este considerat vitamina G4, numit i menadiona. O CH3

O vitamina G4 , menadiona Se cunosc B vitamine G, dintre care0 G 1ZZG4 sunt liposolubile 2vitamine naturale3, iar G<Z..GB sunt hidrosolubile 2vitamine de sintez3.

O CH3 CH2 O
51

CH3 CH C CH2 CH2 CH2

CH3 CH CH2 3 H

fitomenadiona , vitamina G1 O CH3 CH2 O vitamina G1 2 nO 5,B,;3 OH CH3 CH CH3 C CH2 H n

OH

vitamina G< NH2HC" CH3

OH vitamina G:

NH2HC" CH3

NH2HC" vitaminaG5 OH CH3

NH2HC" vitamina GB

51

Biotransformarea vitaminei G are loc n microzomii hepatici. %etabolitul cel mai activ al vitaminei G este derivatul hidrochinonic. +cesta sufer un proces de glicuronocon'ugare, iar produii rezultai se elimin pe cale biliar i renal.

Aci* '"#ta,ic

aci* carbo)i'"#ta,ic CO 2 ,onoo)i' naza O2

OH CH3 R OH

O CH3 O R O O CH3 R O

(o)i* r *#ctaza

+cidul K(carbo"i( glutamic fi"eaz calciul cu afinitate mare pentru glutamat, care este un chelator slab, permind interaciunea specific protein" > CaD' > (os(o ipide, esenial pentru procesul de coagulare. 2o u +io o!ic a #itaminei C .itamina G are rol n procesul de coagulare a sngelui. .itamina G este esenial pentru asigurarea nivelului optim pentru < din factorii coagulrii sngelui0 //, .//, /-, -. +ceti factori sunt proteine care se sintetizeaz i se elibereaz n circulaie sub form de precursori inactivi0 zimogeni 2precursori enzimatici3. $onversia zimogenilor la forme active este un proces vitamino ) G ) dependent. 8olul biochimic al vitaminei G a fost pus n eviden prin e"periene cu antivitamine G. +stfel, s(a demonstrat c dicumarolul introdus n alimentaia animalelor produce hemoragii letale, deoarece sngele acestor animale conine o protrombin anormal, incapabil s lege calciu, ntruct ea nu conine resturi de acid K(carbo"iglutamic. $ompuii de tip cumarinic sunt folosii n terapia anticoagulant, pentru tratamentul i profila"ia afeciunilor tromboembolice, acionnd asupra epo"id reductazei pe care o nhib. Caren%a de #itamina C &eficitul de vitamina G se poate instala n sindromul malabsorbiei lipidice, n boli hepatice, prin disbioza intestinal indus de antibiotice sau sulfamide, abuz de la"ative, tratament cu anticoagulante cumarinice, supradozare cu vitamina +. $arena de vitamina G duce la hemoragii, epista"is, hemoragii subcutane, digestive, hematurie. &easemenea carena de vitamina G poate s 54

mai apar n boala hemoragic a sugarului, la care intestinul este relativ steril, sistemul de sintez hepatic a factorilor de coagulare este imatur, iar bariera placentar este greu accesibil la vitamina G. 1erapia cu #itamina C .itamina G face parte dintre hemostaticele folosite sistemic n hemoragii de diverse etiologii. Preparatele farmaceutice de vitamina G sunt0 fitomenadiona, menadiona solubil i derivaii si hidrosolubili, menadion sodiu sulfat i menadiol sodiu fosfat. @itomenadiona este lipsit de to"icitate, celelate fiind contraindicate la nou(nscui i sugari putnd provoca anemie hemolitic i hiperbilirubinemie. &ozele terapeutice sunt mai mari dect cerina fiziologic, care este apreciat la 1 mgAzi.

5<

8itamine e hidroso u+i e .itaminele hidrosolubile sunt molecule polare cu structur chimic foarte variat. !le se ntlnesc asociate n produse naturale ca0 dro'dia de bere, corte"ul gramineelor, ficat. &in aceast cauz lipsa de aport prin alimentaie provoac stri de policaren i nu o hipovitaminoz anume. &e e"emplu0 alcoolismul cronic produce policarena vitaminic B, cu preponderen a carenei de vitamina B1. .itaminele hidrosolubile se absorb n circulaia portal, se stocheaz n cantiti mici, eliminndu(se cu uurin pe cale renal. 8itamina B& .itamina B1 se mai numete tiamina sau aneurina i apare larg rspndit n esuturile vegetale i animale, n dro'dia de bere. ,ecesarul zilnic pentru un adult sntos este de cca 1 mgAzi. ,ecesiti crescute pot s apar n sarcin i alptare, n cretere i n stri patologice ca boli nervoase, alcoolism, boli infecioase. Structura *n structura moleculei de tiamin intr 1 nuclee heterociclice0 unul pirimidinic i unul tiazolic. $ele dou nuclee sunt unite print(o punte metilenic. N H3C N CH2
+ N

CH3 CH2 CH2 OH

.itamina B1 este uor absorbit din intestine, n esuturi unde este fosforilat i transformat n tiaminpirofosfat 27PP3, care apoi poate fi hidrolizat cu eliminarea gruprii pirofosforice.

ATP

AMP

TP P Tia,ina (iro8os 8attrans 8 raza (iro8os 8ataza P P H2O

N H3C N

CH2

+ N

CH3 CH2 CH2 O

OH P O O

OH P OH O 7PP

5:

7PP 2cocarbo"ilaza3 este forma metabolic activ, care servete drept coenzim n reacii ce transfer uniti de aldehid activat. +semenea transferuri au loc n reacia de decarbo"ilare o"idativ a M( cetoacizilor i n reacia de transcetolare. +mbele tipuri de reacii sunt ntlnite n cadrul metabolismului glucidic. *n aceste reacii de transfer, rolul propriu(zis al coenzimei 7PP este de a servi la eliberarea din anumite molecule a unitilor aldehidice care urmeaz a fi transferate pe alte molecule. Caren%a $arena de tiamin apare atunci cnd cresc necesitile. Sindromul tipic pentru carena de tiamin este cunoscut sub numele de boala +eri/+eri. Sindromu +eri/+eri prezint 4 forme0 ( Beri-beri uscat (paralitic), se manifest prin atonie muscular, caecsie, polinevrit periferic degenerativ. ( Beri-beri edematos (umed), care se manifest prin tahicardie, cardiomegalie, dispnee, edem generalizat ( Beri-beri difuz , ce se manifest cu dureri musculare de tip reumatismal, astenie. Sindromul beri(beri rmne cauza esenial a mortalitii neonatale n +sia de S(!. = alt form de hipovitaminoz este sindromu Eernic=e, care se manifest cu fenomene de encefalopatie 2afeciune a sistemului nervos3. Ca alcoolici carena apare frecvent evolund cu polinevrita, crampe dureroase ale membrelor inferioare, tulburri senzitive, apoi motorii. Indica%ii .itamina B1 este indicat n tratamentul strilor careniale, n neurologie, reumatologie, alcoolism, boli infecioase, diabet zaharat. 8itamina B' .itamina B1 sau riboflavina este sintetizat de plante i microorganisme. !a se gsete n cantiti mari n0 lapte, ou, ficat, legume verzi. !ste relativ termostabil, dar se descompune n prezena luminii. Structura 8iboflavina este reprezentat de nucleul izoalo"azinic substituit cu doi radicali metil n poziiile 5 i B, i cu un rest ribitil n poziia ?.

CH2 H3C N N

CHO H 3 CH2 N O NH O

OH

H3C

8iboflavina la nivelul mucoasei intestinale este fosforilat cu a'utorul m+7P rezultnd o structur ce amintete e un nucleotid, i anume0 @%,. @%, reprezint forma de absorbie intestinal. *n diferite esuturi, @%, este nglobat ntr(o structur mai comple", prin legare de un rest de +%P, transferat de pe o molecul de +7P cu formare de @+&.

55

CH2 H3C N N

CHO H 3 CH2 N O NH O

OH 8"a-o0inaza M' +2

+ ATP

H3C

CH2 H3C N N

CHO H 3 CH2 N O NH O

P O 3H2

H3C

@%, CH2 H3C N N O CH2 H3C N N O @+& &intre aceste dou forme @+& reprezint ;69, @%, ) 169, iar riboflavina liber rmne ntr(o proporie negli'abil. 2o +iochimic +mbele flavin(nucleotide 2@%,, @+&3 sunt coenzime care fac parte din sisteme enzimatice implicate n diverse procese de o"ido(reducere din organism. &atorit structurii coenzimelor respective, aceste enzime se mai numesc flavoenzime sau flavoproteine. *n structura lor se remarc o legtur strns 2necovalent3 ntre coenzim i partea proteic. &easemenea, ma'oritatea flavoproteinelor conin metale cu rol de cofactori adiionali, de aceea enzimele respective sunt cunoscute i sub numele de metaloflavoproteine. *n reaciile de o"ido(reducere catalizate de flavoproteinele active, participantele directe la procesele redo" sunt tocmai coenzimele constituente, @%, sau @+&. +stfel, ciclul izoalo"azinic 5B CHOH 3 CH2 O N O NH HO OH CHOH 3 CH2 OPO 3H2 N O NH
+ ATP

8"a-o0inaza M' +2 NH2 OH P O O OH P O CH2 O O N N N N

H3C

H3C

poate suferi reduceri reversibile prin fi"area temporar la atomii de azot din poziiile 1 i 16 a doi atomi de hidrogen preluai de la substratele cu care intr n reacie i care se o"ideaz. R H3C N N O R H3C N N H H N N O NH
+ SH 2

H3C

O
+ S o)

H3C

NH O

*n acest fel, @%, sau @+& trec din formele lor o"idate n formele reduse @%,> 1 sau @+&>1 . @ormele o"idate sunt pigmeni galbeni, fluoresceni, iar cele reduse apar ca leucoderivai. +ceste flavoproteine pot fi utilizate n o"idarea unor substrate ca0 aminoacizi, amine, glucoza, etc. ,ecesarul de vitamina B1 este de apro"imativ 1,: mg n 1< de ore i este acoperit din alimente i prin aportul florei intestinale, astfel c o caren de B1 este destul de rar ntlnit.

5;

Caren%a $nd aportul de riboflavin este insuficient apar simptomele avitaminozei i anume0 ragade la colurile gurii, leziuni ale buzelor, colorarea n rou intens a limbii, oboseal ocular, dilatarea pupilei, sensibilitatea ochiului la lumin, modificri ale vascularizaiei la nivelul corneei, tremurturi, tulburri digestive, dificulti la urinare. 7oate aceste simptome dispar prin includerea sistematic n alimentaie a unor alimente bogate n vitamina B 1 sau prin administrarea de produse farmaceutice ce conin riboflavin. Indica%ii .itamina B1 este indicat n dermatologie, oftalmologie i neurologie. !a se administreaz n asociaie cu alte vitamine din grupul B. 8itamina 00 .itamina PP 2niacina, nicotinamida, vitamina B4 3 este vitamina antipelagroas. .itamina PP se sintetizeaz n plantele verzi i la animale pornind de la triptofan. !a se gsete n cantiti mari n0 carne, legume i cereale. ,ecesarul zilnic de vitamina PP este de cca 1: mg Azi. &in punct de vedere structural vitamina PP este acidul nicotinic. CO O H N acid nicotinic N nicotinamida CO NH2

.itamina PP este constituientul a 1 nuleotide ce reprezint formele sale biologic active0 ,+&F i ,+&PF. NH2 CO NH2 O
+N

N O P OH O CH2 O N N P O OH

CH2

OHOH OH O 80 > O ,+& P=4>1 O ,+&P *n celulele animale ,+&F este prezent n cantiti mult mai mari dect ,+&P. $oninutul de ,+&PF al esuturilor este proporional cu activitatea lor biosintetic. ,+&F i ,+&PF au rol de coenzime i servesc unor enzime de o"ido(reducere, numite dehidrogenaze. +stfel ,+&F este considerat principalul colector de hidrogen al substratelor. R

5?

AH2 A H CO NH2
+N +

H+ H CONH2

N R & NADH %

& NAD+%

< < H2

H+

+ceste reacii implic transferal reversibil de perechi de atomi de >. 2o u dehidro!ena$e or piridinice0 ( transfer de > i electroni ntre substrate fie n reacii cuplate aparinnd aceleai ci metabolice, fie ntre ci metabolice diferite. ( ,+&> ofer hidrogen n etapa final a o"idrii celulare reprezentat de lanul respirator mitochondrial ( ,+&F este principalul colector de > a substratelor. !l funcioneaz mai cu seam n cile metabolice o"idative. !nzimele ,+& ) dependente se mai numesc reductaze i servesc n procese de hidro"ilare ce privesc substane endogene i "enobiotice. Caren%a de vitamina PP provoac pe a!ra. 7imp ndelungat pelagra a fost considerat ca o form tipic de caren PP. #lterior s(a constatat c pelagra este o stare policarenial cauzat prin absena aportului de viatamina PP i B 5, precum i de triptofan. !a apare la populaii malnutrite, mai ales consumatoare de porumb, din care lipsete triptofanul i proteinele cu valoare biologic ridicat. Pelagra mai poate s apar i secundar n cazul sindromului de malabsorbie, al sindromului carcinoid, cnd o cantitate mare de triptofan este sustras biosintezei de acid nicotinic, la alcoolici, n aminoacidurii 2ca boala >artnup3 i sub tratament cu izoniazid. Pelagra se manifest printr(o erupie caracteristic pe pielea e"pus soarelui, care devine atrofic, aspr i fisurat, prin inflamaia mucoaselor digestive 2stomatite, glosite, enterite3. Simptomelor dermice li se asociaz i tulburrile de tranzit, diaree apoas, uneori sanguinolent, tulburri ale S,$, insomnie, confuzie, delir, com, tulburri hematologice i de circulaie periferic. Uti i$area 4n terapeutic" Preparatele cu vitamina PP corecteaz eficient o bun parte din simptome, ncepnd cu cele digestive i mai trziu cu dermatita. Pentru administrare se prefer nicotinamida. +cidul nicotinic poate s produc fenomene adverse chiar i n doze terapeutice. +dministrarea cantitilor mai mari de niacin 2pn la 166mg Azi3 nu determin fenomene de to"icitate. $antitile e"cesive provoac ns prurit, roirea pielii i, n general, modificri circulatorii deoarece vitamina PP determin dilatarea lumenului vaselor sanguine.

B6

8itamina BF .itamina B5 , numit i pirido"ina sau adermina, apare sub trei forme biologic active interconvertibile. .itamina B5 se gsete n principal n grne, ficat, dro'die, legume verzi i n cantiti mici n lapte i ou. &in punct de vedere structural are la baz nucleul piridinic, substituit.

CH2O H HO CH2O H HO N H3C

CHO CH2O H N

H3C pirido"ina

pirido"al CH2 NH2 CH2O H N

HO

H3C

pirido"amina Pirido"ina i analogii si se absorb din intestine. *n citoplasma celulelor derivaii vitaminei B 5 sunt fosforilai la gruparea alcoolic din poziia :, rezultnd pirido"al(fosfatul 2P+CP=3.
CHO HO CH2OH N (iri*o)a" 0inaza HO N CHO CH2 O P OH H3C ATP ADP H3C PA=PO OH

CH2NH2 HO N CH2

O P OH OH

H3C

PMP

P+CP= i P%P 2pirido"aminfosfat3 sunt formele active ale vitaminei B 5. !le funcioneaz ca i coenzime n metabolismul aminoacizilor. P+CP= intervine n procesul de transaminare a aminoacizilor.

B1

/ CHO

H2O R1 CH COOH NH2 baza Sc.i88 + / CH N CH R1 COOH R1 C N COOH baza S c.i88 ++ CH2 /

+HO 2

R1 C COOH O

CH2 NH2

R2 C COOH + / O
+H O 2

CH2NH2

H2O

R2 C COOH N CH2 / baza S c.i88 +++

R2

CH COOH N CH /

baza S c.i88 +5

R2 CH COOH + / CHO NH2

&eci, ntr( un proces de transaminare are loc transferul funciei aminice de pe un aminoacid pe un alfa( cetoacid acceptor, astfel c aminoacidul donor devine alfa( cetoacid, iar alfa(cetoacidul acceptor devine aminoacid.. *n cursul procesului catalitic are loc transformarea reversibil a PCP n P%P. .itamina B5 este foarte bine rspndit n rndul produilor alimentari, astfel c o alimentaie normal i aportul florei intestinale acoper necesitile de vitamina B 5 n condiii obinuite. +stfel strile careniale de vitamina B 5 de origine nutriional apar foarte rar la om. Principalele manifestri ale carenei de vitamina B5 sunt dermatita seboreic, polinevrita, apariia de convulsii 2 n special la sugari3, anemia. +nemia apare ca urmare a perturbrii etapelor iniiale din biosinteza hemului. +lte posibiliti de instalare a deficienei de vitamina B 5 sunt0 alcoolismul cronic, sarcina, insuficiena renal i unele boli genetice. &easemenea, unele medicamente, ca0 izoniazida 2>/,3, cicloserina, penicilamina, contraceptivele orale, administrate timp ndelungat pot s induc carena de vitamina B5. ,ecesarul de vitamina B5 este n 'ur de 1 mgAzi la adult. +portul e"cesiv poate determina efecte to"ice pe sistemul nervos. Acidu pantotenic 9#itamina BG * +cidul pantotenic poart acest nume pentru c este foarte mult rspndit n esuturile vegetale i animale. !l este vitamin pentru om, dar i factor de cretere pentru microorganisme. $ele mai bogate surse de acid pantotenic sunt0 dro'dia de bere, boabele cerealelor, glbenuul de ou, carnea. *n organism acidul pantotenic provine i prin sintetizarea sa de ctre flora bacterian intestinal. *n structura acidului pantotenic intr acidul pantoic i P(alanina legate printr(o legtur amidic.

B1

CH3 HO CH2 C CH CO NH CH2 CH2 CO O H

CH3 O H ac i* (antoic b ta- a"anina

+cid pantoic este absorbit uor n intestine, i apoi fosforilat n poziia K a acidului pantoic, urmnd astfel o cale metabolic prin care este transformat n 1 cofactori enzimatici 0 fosfopantoteina i coenzima +.
O HO P OH CH3 O CH2 C CH CO CH3 OH NH CH2 CH2 CO NH CH2 CH2 SH

fosfopanteina
O HO P O O P OH O CH2 O CH3 O CH2 C CH CO NH CH2 CH2 CO NH CH2 CH2 SH

CH3 OH NH2 N N N N

O OH O P OH OH

$oenzima + &up cum se observ coenzima + are o structur nucleotidic ce include fosfopantoteina de care este legat un rest adenilic fosforilat n poziia 4 a ribozei. @osfopantoteina servete ca grupare prostetic transportoare de radicali acil, numit +cNl ) carrier ) Protein 2+$P3. +$P face parte dintr(un sNstem multienzimativ implicat n procesul de biosintez a acizilor grai. $oenzima + este deasemenea implicat n diverse reacii enzimatice din diferite ci degradative sau biosintetice cum ar fi0 o"idarea acizilor grai, decarbo"ilarea o"idativ a alfa( cetoacizilor, degradarea aminoacizilor, n procesul de iniiere a ciclului Grebs, n biosinteza diferitelor lipide, precum i n procesele de acetilare a unor compui endogeni sau "enobiotici 2 de e". acetilarea >/,3. $oenzima + se leag de resturile acil prin intermediul funciei tiolice, formnd astfel B4

tioesteri macroergici de tipul 0 8( $=( S$o+. @ormarea legturilor macroergice presupune consum de energie, care poate s fie cedat de +7P. +limentele pot s ofere cantiti mari de acid pantotenic, astfel nct nu a fost semnalat carena spontan. &eficiena specific s(a putut induce e"perimental prin administrare de antagoniti. Simptomele sunt variate0 digestive, predispoziie la infecii, crampe musculare, modificri cutanate, hipoglicemie, depresii nervoase. &eficitul de pantotenat alturi de cel al vitaminei B 5, acizilor grai eseniali i de proteine contribuie la instalarea steatozei hepatice. +cidul pantotenic este indicat n stri de policaren B. Biotina 98itamina H* Biotina este un derivat imidazolic cu structur biciclic care conine ca lan lateral un rest de acid valerianic la P(biotina sau izovalerianic la M(biotina.

O HN NH

CH2 7 CO O H

*n natur, biotina se gsete liber sau combinat fie cu lisina 2biocitina3, fie cu proteine. *n intestin biotina este eliberat de biotinaz pancreatic i absorbit printr(un proces activ ,a( dependent. Biotina funcioneaz ca grupare prostetic pentru enzimele ce catalizeaz reaciile de carbo"ilare, servind astfel drept cru pentru $=1 activat.
<iotin- nzi,a + HCO 3 + ATP

CO2

biotin- nzi,a + ADP + aP

s #bs trat

s #bs trat carbo)i"at

+stfel, biotin(enzima ncarc gruparea carbo"il pe biotin rezultnd carbo"i(biotin(enzima, care transport gruparea carbo"il pe un substrat acceptor. !"emle de enzime biotin(dependente0 ( piruvat carbo"ilaza, care catalizeaz carbo"ilarea piruvatului la o"alil(acetat. ( acetil( $o+ carbo"ilaza, care catalizeaz formarea malonil( $o+. Ca om necesarul de biotin este de 1:6( 466 [g pe zi i este n mare msur asigurat de flora intestinal. $antiti suficiente se gsesc alimentaia carnat, glbenu, cereale i legume. $arena provocat e"perimental se manifest prin dermatit seboreic, anore"ie, oboseal, B<

insomnii, parestezii. Stri careniale se cunosc la sugarii cu deficit genetic privind enzima responsabil de ataarea biotinei la componenta carbo"ilazic. Semnele clinice sunt0cetoza metabolic, cu creterea lactocidemiei i o eliminare anormal de acid propionic n urin. *n terapie, biotina este de obicei inclus n preparatele polivitaminice. Acidu (o ic 9(o acina* Ca fel ca i alte vitamine din comple"ul B, acidul folic este factor de cretere pentru microorganisme. &enumirea de acid folic se datoreaz faptului c prima substan descoperit din acest grup de vitamine a fost izolat din frunze de spanac i s(a dovedit c are caracter acid. &in punct de vedere structural acidul folic conine n structura sa acid pteroic i un lan K( glutamil peptidic.
OH N H2N N N N CH2 NH COOH CO NH CH CH2 CH2 CO COOH NH CH CH2 CH2 COOH

+cizii folici pot s fie0 ( acizi pteroil monoglutamic ( acizi pteroil poliglutamici Ca plantele e"ist sub form de comple" heptaglutamic, iar n ficat predomin con'ugatul pentaglutamic. Spre deosebire de plante i microorganisme, organismul animal este incapabil s sintetizeze acid pteroilmonoglutamic. *n intestine acizii pteroil poliglutamici sunt hidrolizai cu enzime specifice rezultnd derivatul monoglutamic, care se absorbe n circulaia mezenteric. *n celulele intestinale acidul folic este n mare parte redus la 7>@ 2@> <3. +pro"imativ 1A4 din folatul absorbit se leag de proteinele plasmatice. >idrogenarea acidului folic sub aciunea folat(reductazei ,+&P>(dependente are loc n 1 etape, intermediar formndu(se &>@.

B:

OH N H2N N N N CH2 NH R 8o"at r *#ctaza NADP + H2N N

OH N N N H OH N H N N N H TH4 H DH4 CH2 H NH R CH2 NH R H 8o"at r *#ctaza

NADPH + H+

NADPH + H+ NADP +

H2N

7>@ reprezint metabolitul activ i servete drept coenzim n reaciile de transfer sau interconversiunea gruprilor cu un $, numite i fragmente $ 1 active. &onorii de grupri $1 active sunt0 serina, histidina, acidul formic. +cidul folic particip la biosinteza nucleotidelor i a acizilor nucleici, care au un rol important n biosinteza proteinelor. &easemenea acizii folici controleaz procesul de cretere i hematopoeza. =rganismul uman este dependent de aportul de folat furnizat de legumele cu frunze i carne. +cidul folic nu rezist la temperatura de preparare culinar. ,ecesarul zilnic este de <66 [g, care crete n sarcin i alptare, n sindroame de malabsorbie intestinal la alcoolici, la bolnavii cu anemie hemolitic sau cancer cu evoluie rapid. $arena poate fi indus medicamentos prin administrare de antifolice sau la tratament ndelungat cu0 fenobarbital, fenitoina, primidona, care cresc nevoia de folat. &eficiena folic acut cuprinde manifestri digestive i dermice. $arena cronic se caracterizeaz prin tulburri de cretere, dereglri de hematopeoz ce conduc la anemia megaloblastic, leucopenie, trombocitopenie. +cidul folic se administreaz ca biostimulator general, ca factor antianemic n diferite forme de anemie, mai ales macrocitar, n leucopenia secundar, chimio( sau radioterapia bolii maligne. +cidul folic este contraindicat persoanelor peste 56 de ani deoarece poate stimula un process neoplazic latent. #neori acidul folic se asociaz cu vitamina B11 sau cu preparate pe baz de fier. Anti(o ice 9 Anta!oni.ti (o ici* +ntifolicele sunt substane care se aseamn structural cu acidul folc i sunt inhibitori ai unor enzime implicate n biosintez. %ulte antifolice i(au gsit aplicabilitate terapeutic. !"emple0 ( Sulfamidele i sulfonele sunt utilizate ca antibacteriene i interfereaz inserarea P+B n structura acidului folic, acionnd asupra dihidropteroat sintetazei, care catalizeaz etapa intermediar n sinteza de folat. ( 7rimetoprimul este inhibitor al folat reductazei ( %etotre"atul este folosit n leucemie i psoroazis. *n tratamentul ndelungat cu antifolice apare o caren folic. $arena poate fi compensat prin administrare de acid folinic, care se administreaz oral sau parenteral sub form de folinat de $a. 8itamina B&' .itamina B11 sau ciancobalamina ndeplinete rol de vitamin pentru om i este factor de B5

cretere pentru microorganisme. Poart indicele 11 deoarece este al 11(lea compus izolat din comple"ul B. &in punct de vedere structural vitamina B 11 are o structur foarte comple". +sfel, ea conine o parte intern,reprezentat de un schelet tetrapirolic numit corrina. ,ucleul corinic din partea central difer de cel al hemului prin urmtoarele elemente0 ( n centru se afl ionul $oF ( sistemul tetrapirolic este mai saturat ( dou nuclee pirolice sunt unite direct ntre ele ( are un numr mai mare de substituieni, ma'oritatea lor cu grupri amidice. &easemenea vitamina B11 mai conine i o parte e"tern reprezentat de un nucleotid cu riboz. !l este unit prin dou legturi cu regiunea central0 una direct ntre unul din atomii de , ai benzimidazolului i ionul monovalent de cobalt, iar a doua legtur se realizeaz prin intermediul restului de acid fosforic al nucleotidului cu riboz i o caten ataat la unul din cele patru nuclee pirolice. R R> CN- ; O H; CH3 N N N Co + N

n#c" oti* .itamina B11 este sintetizat e"clusiv de ctre bacterii anaerobe, dar se gsete i n esuturile animale, mai ales n ficat. +bsorbia ei este mediat de receptori specifici din ileum, dup prealabila cuplare cu un factor intrinsec 2$+S7C!3. +cesta este o glicoprotein cu specificitate absolut pentru vitamina B11, secretat de celulele parietale din mucoasa gastric. &up desprindere de factorul intrinsic cobalamina trece n circulaia portal, unde se leag de o protein plasmatic transportoare, numit trancobalamina //. *n esuturi se elibereaz ca hidro"icobalamina, fiind apoi transformat n metilcobalamin. @icatul stocheaz cantiti de ordinul mg, pentru lungi perioade, graie legrii de o alt protein, numit transcobalamina /. :unc%ii e +iochimice a e #itaminei B&' !nzimele cobalaminice funcioneaz n metabolimul gruprilor cu un $, fiind ntlnite n 4 tipuri de reacii0 1. reacii de rearan'ament intramolecular 4. reacii de metilare <. reacii de reducere a ribonucleotidelor la dezo"iribonucleotide. *n esutul mamiferelor se cunosc dou procese dependente de cobalamine0 ( izomerizarea metal(malonil $o+ la succinil $o+

BB

CO O H CH2 H CH CO S CoA ,#taza CH2 CO CH2 S CoA CO O H

transformarea homocisteinei n metionin CH3 , tionina

CH2 N5, ti" TH4 CH2 HO Cb" CH

S NH2

CO O H TH4 M Cb" CH2 CH2 CH NH2 SH .o,ocis t ina

CO O H &eficitul de cobalamin se repercut negativ asupra sintezei de metionin, cu consecine privind biosinteza proteic i regenerarea de 7>@. .itamina B11 este esenial alturi de folat, pentru creterea i maturarea celulelor, mai cu seam a celor cu ritm intens de proliferare. &easemenea cobalamina este necesar pentru funcia mduvei hematogene, a aparatului digestiv i a sistemului nervos. Prin participarea la sistemul metioninei este un factor lipotrop, prote'nd ficatul de ncrcarea cu grsimi. $arena cobalaminic apare rar, deoarece alimentaia carnal ofer necesarul 2cca 16 mgAzi3, e"istnd avanta'ul termostabilitii. $auza principal este absena factorului intrinsec datorit incapacitii mucoasei gastrice de a(l produce n afeciuni gastrice, rezecii sau constituional prin defect genetic de sintez, ori prin mecanism autoimun. $arena este rar provocat prin lips de aport, n regim e"clusiv vegetarian prelungit, n sindrom de malabsorbie intestinal, dup tratament cu neomicin, metformin, antiepileptice, n disbioz intestinal. %aladia produs n carena de vitamina B 11 este anemia pernicioas" 9anemia Biermer*. $linic aceasta se manifest prin0 paloare, astenie 2sindrom anemic3, inapeten, grea, emez, balonri, tulburri de transit 2sindrom de transit3, neuropatie. +nemia biermerian face parte dintre anemiile megaloblastice, ma'oritatea cauzate prin deficiena vitaminei B11 iAsau a acidului folic, ce determin perturbri n sinteza acizilor nucleici, implicnd suferina tuturor sistemelor celulare. +pare astfel hematopoeza ineficient cu deviaie megaloblastic, consecina fiind producerea insuficient a elementelor liniilor celulare ale sngelui i n special a seriei roii. +stfel n sngele periferic se evideniaz0 pancitopenia, megalocitoza, magaloblastoza, celule cu alte modificri morfologice, fragile. &iagnosticul diferenial n anemia megaloblastic se face prin dozarea cobalaminei n plasm, prin testarea absorbiei intestinale, administrarea de vitamina B11 marcat i msurarea radioactivitii n urin. *n anemia pernicioas tratamentul ncepe cu doze de atac de vitamina B 11, parenteral, care pe msura ameliorrii simptomelor se reduce la doze de ntreinere administrate cu intermiten toat viaa. +lte indicaii ale viatminei B11 sunt n 0 neuropatii, ciroz, hepatite, stri de malnutriie. B;

*n terapie se folosesc ciancobalamina i hidro"icobalamina. 8itamina C .itamina $ poart i numele de acid ascorbic deoarece este o substan cu caracter acid, iar carena sa n organism provoac scorbut. &in punct de vedere structural vitamina $ este numit i lactona acidului 1,4(dienol( C( gulonic. Structura sa este e"trem de labil prin e"punere la aer, iar n soluii alcaline trece n acid dehidroascorbic. +mbele forme sunt active i apar n esuturi. O O C C HO HO H HO C C C C H HO CH2O H aci* = as corbic C H O O O H C C C O

CH2O H aci* = * .i*roas corbic

7ransformarea acidului C(ascorbic n acid C(dehidroascorbic poate fi efectuat de C(ascorbat o"idaza, enzim ce conine $u. .itamina $ este una din cele mai rspndite vitamine, fiind sintetizat de ma'oritatea speciilor vegetale i animale din glucoz. !"cepie sunt primatele, cobaiul i alte cteva specii, posesori ai unor enzimopatii genetice, fiind incapabili s efectueze etapa final din lanul metabolic de biosintez, adic conversia C(gulono(lactonei n acid ascorbic. +cizii ascorbic i dehidroascorbic se absorb aproape n totalitate n intestin i se distribuie e"tra( i intracelular. Ca un aport adecvat rezervele satisfac necesitile cteva luni consecutive lipsei de alimentaie. &ozele foarte mari de vitamina $ satureaz depozitele i depete pragul renal de eliminare. &eci dozele mari de vitamina $ sunt e"cretate urinar, astfel c administrarea e"cesiv este inutil. *n esuturi vitamina $ este transformat n mic msur prin o"idare.
O C HO HO H C C C H HO CH2OH aci* = as corbic C H CH2OH CH2OH aci* = * .i*roas corbic aci* 2;3 *ic to '#"onic O O O H O C C C C H HO O O COOH C OH C C C C O O OH H HO C H H COOH O C C OH OH Ca +2 o)a"at * Ca

HO C

CH2OH aci* = tr onic

.itamina $ se elimin urinar, n proporie mare netransformat, cantitatea de acid ascorbic e"cretat normal fiind pn la 19. ="alatul de calciu poate ns precipita n cile renale cauznd litiaza o"alic. 2o u #itaminei C B?

+cidul ascorbic are un potenial reductor destul de mare, fiind astfel capabil s reduc o"igenul molecular, nitraii, citocromii a i c, methemoglobina. $uplul ascorbat(dehidroascorbat funcioneaz ca sistem redo" activ ntr(o serie de procese biochimice. !"emplu0 ( *n reaciile de hidro"ilare din0 ( metabolismul aminoacizilor aromatici o ) metabolismul prolinei, lisinei o ) biosinteza noradrenalnei o )biotransformarea medicamentelor &ozele mari de vitamina $ stimuleaz absorbia @e, reducndu(l la ion feros, forma favorabil absorbiei, iar concentraiile fiziologice cresc ncorporarea @e n feritina. Se consider c acidul ascorbic este necesar procesului de cretere, pentru integritatea tegumentelor, n buna funcionare a aparatului cardiovascular. &e asemenea i se atribuie un rol n procesul de aprare imunitar, n mrirea rezistenei la efort, n hematopeoz. ,ecesarul de vitamina $ este de 1mgARgcorpAzi la adultul sntos i este asigurat n primul rnd de vegetalele proaspete, crude. $erinele sunt crescute n sarcin, alptare, frig, condiii de munc grea, boli infecioase, cancer i dependent de vrst. $arena este reprezentat de scorbut. Pot s apar stri de subcaren, n special la sfritul iernii. Se manifest prin0 tendina la hemoragii, n special gingivale, echimoze, hiperReratoza folicular, dureri articulare 2osteoporoza3, anore"ie, tulburri de tranzit intestinal, anemie, astenie. +cidul ascorbic este necesar formelor active ale unor enzime 2dio"igenaze cu enzime3, acionnd probabil prin meninerea metalului la valena sa inferioar. Indica%ii e #itaminei C sunt profilactice i de corectare a simptomelor careniale, n boli infecioase, n pediatrie, n methemoglobinemie, astenie, asociat preparatelor cu @e. ,u se cunosc efecte to"ice, dar n caz de supradozare poate fi duntoare la subiecii cu predispoziie la o"aloz sau deran'eaz absorbia unor vitamine ca0 B 11 sau a altor medicamente simultan ingerate.

;6

;1

8I. ME1ABOLISM %etabolismul reprezint totalitatea transformrilor de substan, energie i informaie, care au loc ntr(un organism viu. %etabolismul general prezint dou aspecte eseniale0 catabolismul i anabolismul. atabolismul reprezint totalitatea reaciilor de degradare din organism, iar aceste reacii sunt frecvent procese de o"ido(reducere, care au loc cu eliberare de energie. !nergia eliberat este conservat sub forma legturilor macroergice din +7P. !nergia nmagazinat n +7P este utilizat n procese de biosintez a biomoleculelor, care sunt substane cu molecul mare. $u mare specificitate i cu nivel nalt de organizare. 7otalitatea proceselor de biosintez din organism constituie anabolismul! Spre deosebire de procesele catabolice, procesele anabolice decurg cu consum de energie, fiind endergonice. !nergia necesar proceselor de biosintez este asigurat de hidroliza legturii macroergice din +7P. Pe lng procesul cu caracter catabolic sau anabolic, n celule mai au loc transformri ale constituenilor si, care au concomitent att caracter catabolic ct i anabolic. +cestea se numesc procese amfibolice. *n cadrul acestor procese pot rezulta compui care pot fi catabolizai sau care pot fi utilizai n procese de biosintez. 7otalitatea transformrilor pe care le sufer anumii compui de la ingestia sau biosinteza lor pn eliminarea lor din organism se numete metabolism intermediar. &egradarea constituenilor organici fundamentali ai celulei vii 2proteine, glucide i lipide3 se desfoar n mai multe stadii0 %oleculele mari a acestor compui sunt degradate cu eliberarea unitilor lor structurale fundamentaleL //. Produii rezultai n primul stadiu sunt transformai pe ci specifice ntr(un numr mic de molecule simple, printre care predomin acetil($o+L ///. $ompuii rezultai n al doilea stadiu sunt transformai n dio"id de carbon i ap pe o cale numit ciclul citratuluiL /.. !chivalenii de hidrogen preluai de la metaboliii din stadiile anterioare sunt o"idai cu formare de ap prin intermediul lanului respirator. Stadiile / i // sunt specifice pentru fiecare categorie de compui, iar stadiile /// i /. sunt caracteristice transformrii glucidelor, lipidelor i proteinelor. $ea mai important cale de formare de dio"id de carbon n celul este ciclul citric sau ciclul acizilor tricarbo"ilici sau ciclul lui Grebs. /.

;1

proteine

po i$aharide

ipide

aminoaaci$i

mono$aharide

aci$i !rasi ! icerina

II aceti /CoA

III

$+7
CO' 'H 'H 'H 'H

I8 O' antu respirator H'O o)idare +io o!ica CO'

CICLUL ACIHILO2 12ICA2BOIILICI 8espiraia este procesul prin care celula aerob obine energie n urma o"idrii moleculelor de combustibil de ctre o"igenul molecular. $iclul acizilor tricarbo"ilici este calea metabolic central cea mai obinuit pentru degradarea resturilor de acetil($o+ rezultate prin catabolizarea glucidelor, acizilor grai i aminoacizilor. $iclul acizilor tricarbo"ilici este o secven ciclic, care are loc n toate celulele aerobe. Se mai numete i ciclul acidului citric sau ciclul lui Grebs. +ceast secven de reacii este catalizat de un sistem multienzimatic care primete gruparea acetil de la acetil($o+ drept combustibil i o descompune n dio"id de carbon i echivaleni reductori. +cetia sunt apoi condui printr(un lan de proteine transportoare de electroni la o"igen, care este redus pentru a forma ap. &in schema prezentat mai sus se constat c acetil($o+ rezultat n urma procesului de catabolizare a principalelor biomolecule, intr n ciclul acizilor tricarbo"ilici. *n unele cazuri, ns, n ;4

urma procesului de catabolizare a acestor biomolecule nu rezult acetil($o+, ci piruvat. Piruvatul ca s poat intra n ciclul acizilor tricarbo"ilici trebuie s se transforme, n prealabil, n acetil($o+. O)idarea piru#atu ui a aceti /CoA. ="idarea piruvatului la acetil($o+ este un proces comple" catalizat de comple"ul multienzimatic piruvatdehidrogenaz.
F

$>4 ( $ ( $==> F ,+& F $o+ =

piruvatdehidrogenaza

$>4 ( $= ( $o+ F ,+&> F > F $=1

+ceast reacie, care este ireversibil n esuturile animale, nu reprezint o parte din ciclul acizilor tricarbo"ilici, dar este obligatorie pentru participarea tuturor hidrailor de carbon la ciclul acizilor tricarbo"ilici. &ecarbo"ilarea o"idativ a piruvatului la acetil($o+ i dio"id de carbon necesit trei enzime diferite i cinci coenzime organizate ntr(un comple" multienzimatic. !tapele de reacii realizate sub influena acestor enzime sunt artate mai 'os. $>4 ( $ ( $==> F !1 ( 7PP =
piruvat dehidrogenaza

!1 ( 7PP ( $> ( $>4 =>

$=1

+ceast etap este catalizat de ctre piruvat dehidrogenaz, enzim a crei grupare prostetic este coenzima tiaminpirofosfat. Piruvatul sufer o decarbo"ilare pentru a elimina dio"idul de carbon i derivatul (hidro"ietil.

;<

aminoaci$i

! uco$a

aci$i !rasi

piru#at CO' 'H aceti /CoA o)a i acetat ma at citrat Jcis/aconitatK

(umarat

i$ocitrat CO'

succinat succini /CoA 'H 'H 'H

/ceto! utarat CO' 'H

NAD

( a#oproteine

AD0 D 0 A10

coen$ima L

citocrom + transportu de e/ si (os(ori area o)idati#a din antu respirator citocrom c AD0 D 0 citocrom a; A10 AD0 D 0 A10

'HD D &M'O'

H'O

*n etapa a doua, gruparea hidro"ietil este dehidrogenat de piruvat dehidrogenaz iar gruparea acetil care rezult este transferat la acidul lipoic, care reprezint gruparea prostetic legat covalent la cea de a doua enzim, dihidrolipoil transacilaz.
!1 ( 7PP ( $> ( $>4 F !1 => S S

!1 ( 7PP F !1 S S> = O $ ( $>4

;:

7ransferul unei perechi de atomi de hidrogen de la gruparea hidro"il a 7PP la legtura disulfuric a acidului lipoic face ca aceasta din urm s treac n forma redus a acidului dihidrolipoic. *n etapa a treia, gruparea acetil este transferat pe cale enzimatic, de la gruparea lipoil a acidului dihidrolipoic la gruparea tiolic a $o+.
!1 S S> = O $ ( $>4 !1 S> S>

F $o+(S>

F $>4 ( $= ( S$o+

+cetil($o+ astfel format prsete comple"ul enzimatic sub forma sa liber. *n etapa a patra, forma ditiolic a gruprii lipoil a dehidrolipoil transacetilazei este reo"idat la forma disulfuric prin transferul atomilor de hidrogen de la cea de a treia enzim a comple"ului, cunoscut sub numele de dihidrolipoil dehidrogenaz, la a crei grupare prostetic este strns legat @+&.
!1 S S

!1 S> S>

F !4 ( @+&

F !4 ( @+&>1

@+&>1, care rezult, rmne legat de enzim i este reo"idat n faza a cincea de ctre ,+&F. !4 ( @+&>1 F ,+&F !4 ( @+& F ,+&> F >F

$omple"ul piruvat dehidrogenaz este inhibat specific de compuii arsenului trivalent 2+s 3. +ctivitatea comple"ului piruvat dehidrogenaz este reglat la nivelul +7P(ului i a ionilor de calciu. +cetil($o+ rezultat intr n ciclul acizilor tricarbo"ilici unde este transformat n dio"id de carbon i ap.
F4

2eac%ii e cic u ui tricar+o)i ic. Ca nceput ciclul acizilor tricarbo"ilici reprezenta o simpl schem. +ceast schem a fost completat cu detalii privind enzimele care catalizeaz reaciile, ct i stereochimia reaciilor din ciclu. &. Acidul citric este primul intermediar al ciclului acizilor tricarbo"ilici se formeaz prin condensarea acetil($o+ cu o"alilacetat.
$= ( $o+ $o+S ( =$ ( $>4 F = O $ ( $==>
acetil($o+ citrat sintetaza

$>1 >= ( $ ( $==> $>1 $==>

citroil($o+

>1=

$==> $>1 >= ( $ ( $==> $>1 $==>

acid citric

$>1
o"alilacetat

$==>

$o+(S>

;5

+ceast reacie este catalizat de citrat sintetaz, enzim ce determin formarea intermediar a citroil($o+, care ulterior trece n acid citric. $itrat sintetaza are rol de enzim reglatoare, deoarece este inhibat de +7P i 2,+&> F >F3, produsul final al fosforilrii o"idative. '. + doua reacie a ciclului acizilor tricarbo"ilici este reprezentat de trecerea citratului n izocitrat, printr(un intermediar denumit acid cis-aconitic!
$==> $>1 >= ( $ ( $==> $>1 $==>
acid citric

$==> >1= $>1 $ ( $==> $> $==>

acid cis(aconitic

$==> >1= $>1 $> ( $==> >= ( $> $==>

acid izocitric

!nzima care catalizeaz aceast reacie se numete aconitaz, care este activat i stabilizat de @e i de cistein. +ceast reacie este stereospecific, adiia apei la cis(aconitat este o trans adiie.
F1

;. ="idarea izocitratului la -cetoglutarat este o reacie care are loc n prezen de izocitrat de"idrogenaz care necesit prezen de ,+&F sau ,+&PF. $==> $>1 $> ( $==> >= ( $> $==>
acid izocitric izocitrat dehidrogenaza

$==> $=1 $>1 $>1 $O= ,+&F ,+&> F >F

acid (cetoglutaric

$==>

/zocitrat dehidrogenaza ,+& dependent din mitocondrie necesit prezena ionilor de magneziu, este o enzim alosteric reglat de +&P, ca i activator specific i %gF1. <. + patra etap o constituie o"idarea (cetoglutaratului la succinil($o+ n prezena ( cetoglutarat dehidrogenazei.
$==> $>1 $>1 $O=
acid (cetoglutaric

F ,+& F $o+

(cetoglutarat dehidrogenaza

$==> $>1 $>1 F $=1 F ,+&> F >

F

$==>

$= ( $o+
succinil($o+

8eacia este analoag o"idrii piruvatului la acetil($o+ i dio"id de carbon i are loc prin acelai mecanism, cu participarea tiamin(pirofosfatului, a acidului lipoic, a coenzimei +, @+&(ului ;B

i ,+&(ului drept coenzime. G. *n etapa a cincea succinil($o+ sufer o pierdere a gruprii $o+, nu printr(o simpl reacie de hidroliz ci printr(o reacie conservatoare de energie. 8eacia are loc n prezena succinil($o+ sintetazei, ca enzim, care provoac formarea legturii macroergice a I7P(ului, gin I&P i fosfat anorganic, pe seama legturii macroergice din succinil($o+.
$==> $>1 $>1 $= ( $o+
succinil($o+

F Pa F I&P

succinil($o+ sintetaza

$==> $>1 $>1 $==>

+cid succinic

F I7P F $o+S>

I&P F Pa

I7P !(succ(fosfat F $o+

succinil($o+ F Pa F ! !(succ.(fosfat ! fosfat F I&P !

fosfat F succinat ! F I7P

F. *n etapa urmtoare succinatul este o"idat la fumarat de flavoproteina succinat dehidrogenaza, care conine @+& legat covalent. $==> $>1 $>1 $==>
+cid succinic

F @+&

succinat dehidrogenaza

$==> $> >$ $==>

+cid fumaric

F @+&>1

!nzima este activat de succinat, fosfat, +7P i coenzima U redus i inhibat de concentraii mici de o"alilacetat. 8eacia este stereospecific, dehidrogenaza ndeprteaz atomii de hidrogen din poziia trans de la atomii de carbon metilenici ai succinatului. N. Succinatul rezultat este apoi hidratat la C(malat n prezena enzimei fumarat dehidrogenaz sau fumaraz.

;;

$==> $> >$ $==>

+cid fumaric

$==> F >1=
fumaraza

>= ( $ ( > $>1 $==>

+cid malic

@umaraza acioneaz stereospecific, deoarece ea formeaz numai stereoizomerul C al malatului. O. *n ultima reacie a ciclului C(malatul este o"idat la o"alilacetat n prezen de C(malat dehidrogenaz ,+& dependent. $==> >= ( $ ( > $>1 $==>
+cid malic

$==> F ,+&F =O$ $>1 $==>

+cid o"alilacetic

F ,+&> F >F

8eacie este strict stereospecific pentru stereoizomerul C al acidului malic. ="alilacetatul rezultat poate reintra ntr(un nou ciclu condensndu(se cu acetil($o+. &ac facem un bilan al ciclului se constat c pentru fiecare grupare acetil intrat n ciclu doi atomi de carbon formeaz dou molecule de dio"id de carbon, iar prin reacia de dehidrogenare enzimatic, care au loc, rezult patru perechi de atomi de hidrogen0 trei dintre ele au fost utilizate la reducerea ,+&F i una la reducerea @+&. +ceste patru perechi de atomi de hidrogen vor ceda electronii, n cursul lanului respirator, o"igenului. !cuaia global se poate scrie astfel0
+c($o+ F 4 ,+&F F @+& F 1 >1= F I&P F Pa 1 $=1 F $o+(S> F 4 ,+&> F 4 >F F @+&>1 F I7P

Loca i$area intrace u ar" a en$ime or cic u ui $ercetrile efectuate de GennedN i Cehninger au demonstrat c mitocondriile izolate prin ultracentrifugare omogenatelor de esut hepatic, asigur transformarea tuturor intermediarilor ciclului citric, deci conin toate enzimele necesare acestui ciclu. Pe de alt parte nucleele, fraciunea microzomal i fraciunea solubil a citoplasmei erau inactive. &eci, mitocondriile hepatice conin toate enzimele necesare ciclului citric i enzimele necesare transportului de electroni. &eci, se constat c la toate animalele i plantele studiate pn n prezent, sediul desfurrii ciclului Grebs ce reprezint mitocondriile. Natura am(i+o ic" a cic u ui $iclul acizilor tricarbo"ilici este de fapt o cale amfibolic, care funcioneaz nu numai n catabolism, ci i n anabolism, fiind precursor important ntr(o serie de biosinteze. +numii intermediari i cu preponderen (cetoacizi i o"alilacetatul servesc n biosinteza unor aminoacizi ;?

ce pot fi uor transformai n prezena unor transaminaze.

IP7

>==$ ( $ ( $>1 ( $>1 ( $==> F >4$ ( $> ( $==> =

acid (cetoglutaric

,>1
alanina

>==$ ( $> ( $>1 ( $>1 ( $==> F >4$ ( $ ( $==>

acid glutamic

,>1

=
acid piruvic

>==$ ( $ ( $>1 ( $>1 ( $==> F >==$ ( $> ( $>1 ( $==> =

acid (cetoglutaric

I=7

,>1
acid aspartic

>==$ ( $> ( $>1 ( $>1 ( $==> F >==$ ( $ ( $>1 ( $==> ,>1

acid glutamic

=
acid o"alilacetic

$itratul format imediat dup intrarea acetil($o+ n ciclu poate s serveasc ca precursor n biosinteza hemului. Ca fel i succinil($o+ va servi pentru biosinteza hemului. Prin ndeprtarea citratului din ciclul acizilor tricarbo"ilici, acesta servete pentru biosinteza acizilor grai +ceti intermediar pot fi, la rndul lor, \pui la locE prin reacii enzimatice specifice, numite i reacii anaplerotice. &e e"emplu carbo"ilarea piruvatului duce la formarea acidului o"alilacetic.
piruvatcarbo"ilaza %nF1

$>4 ( $= ( $==> F $=1 F +7P F >1=

>==$ ( $= ( $>1 ( $==> F +&P F Pa

Lan%u respirator constituie o secven de procese biochimice a crui rezultat este transportul electronilor la o"igenul molecular. Sistemul este format dintr(un comple" multienzimatic avnd componentele niruite ntr(o secven dictat de valoarea crescnd a potenialului redo". Sistemul de enzime care deservete lanul respirator este localizat n membran mitocondrial intern.
substrat ,+&> F >
F

@%,>1

CoL

cit. b

cit c1

+&P F Pa

+7P +&P F Pa

+7P

?6

cit c

cit a

cit a4 F >F F =1

>1=

+&P F Pa

+7P

!nergia eliberat n urma proceselor de o"idare din lanul respirator este ncorporat n moleculele de +7P. +&P F Pa F U +7P F >1=

+ceste procese ce cupleaz sinteza endergonic de +7P n urma unor procese de o"idoreducere din lanul respirator reprezint punctele de fosforilare o"idativ. +stfel, o"idarea unei molecule de ,+&> F >F din lanul respirator produce trei molecule de +7P, iar o"idarea unei molecule de @+&>1 produce 1 +7P. Semni(ica%ia ener!etic" a cic u ui aci$i or tricar+o)i ici. Procesele din ciclul Grebs i din lanul respirator au loc n mitocondrie i constituie etapa final a o"idrii celulare care furnizeaz o cantitate mare de energie stocat sub form de +7P. Bilanul energetic al ciclului este urmtorul0 I7P 42,+&> F >F3 @+&>1 1 +7P 4 +7P 1 +7P 11 +7PA+c$o+

2e! area cic u ui aci$i or tricar+o)i ici.

?1

piru#at $=1 Ac/CoA

o)a i acetat ma at (umarat succinat

citrat i$ocitrat $=1 /ceto! utarat succini /CoA $=1

?1

ENHIME 12ANS0O21OA2E DE ELEC12ONI *n transportul de electroni de la substrate organice la o"igenul reductor particip patru tipuri de enzime0 ( dehidrogenaze legate de un nucleu piridinic 2piridindependente3, care necesit ,+& sau ,+&P ca i coenzimeL ( dehidrogenaze legate de nucleu flavinic 2flavindependente3, care conin @+& sau @%, ca i grupare prosteticL ( proteine cu fier(sulfL ( citocromii, care conin inelul porfirinic cu fier ca i grupare prostetic. *n plus, fa de aceste proteine, pentru transportul de electroni mai particip i ubi]uinona sau coenzima U. Dehidro!ena$e e!ate de piridin". &eoarece aceste enzime necesita ,+& sau ,+&P drept coenzime, aceste enzime se numesc dehidrogenaze piridin dependente. Se cunosc mai bine de dousute de astfel de enzime care funcioneaz n diferite procese metabolice. @orma general a reaciilor catalizate de acest tip de enzime este0 S>1 F ,+&F S>1 F ,+&PF S F ,+&> F >F S F ,+&P> F >F

+ceste reacii implic transferul reversibil a echivalenilor reductori de la substrat, sub forma unui ion de hidrur 2>(3, la poziia < a inelului nicotinamidic 2 n forma o"idat3 a nucleului piridinicL cellalt hidrogen este eliminat de pe substrat ca ion liber 2>F3 Piridinnucleotidele sunt legate necovalent i slab de dehidrogenaza proteic. &eci, ,+& i ,+&P trebuiesc privite nu ca i grupri prostetice fi"e, ci ca un al doilea substrat, deoarece ele se leag reversibil de situsul activ catalitic de pe enzim. +stfel, nucleotidele piridinice servesc ca i transportori disociabili de electroni. #nele dehidrogenaze piridin dependente 2e". (hidro"ibutirat dehidrogenaza3 sunt localizate n mitocondrie, altele 2de e". lactat dehidrogenaza3 sunt localizate n citoplasm, iar altele 2e". malat dehidrogenaza3 se gsesc n ambele compartimente. *n celulele animale, ,+& se gsete intr(o cantitate mult mai mare dect ,+&P. *n ficat cca 5o9 din ,+&(ul total se afl n mitocondrie, iar restul n citoplasm. &ehidrogenazele ,+& ( dependente au un rol important n respiraie unde asigur transferul de electroni de pe diferite substrate spre o"igen, pe cnd dehidrogenazele ,+&P(dependente servesc n principal la transferul de electroni de la intermediari catabolici la intermediari anabolici. %ulte dehidrogenaze piridin ) dependente conin strns legai ioni metalici \divaleniE, de e"emplu, alcool dehidrogenaza conine ioni de zinc 2Tn F13. &ehidrogenazele piridin dependente reacioneaz stereospecific, de e"emplu, lactat dehidrogenaza este specific numai pentru C(lactat. *n secvena glicolitic aldehida 4(fosfogliceric este o"idat la piruvat n urmtoarele reacii, cu intermediarul comun ,+&. $> O = > ( $ ( => F Pa F ,+&F $>1 ( =( P ?4 $==P > ( $ ( => F ,+&> F >F $>1 ( =( P

$>4 ,+&> F >F F $ O = $==> *nsumnd cele dou ecuaii0 $> O = $>4 $==> $>==P

$>4 ,+&>F F > ( $ ( => $==>

$>4 $==>

> ( $ ( => F Pa F $ O = $>1 ( =P

> ( $ ( => F > ( $ (> $>1 ( =P

deci sistemul ,+&>A,+&F poate transfera electroni de la un substrat la altul n virtutea faptului c ,+&> are capacitatea de a aciona ca un intermediar comun pentru dou reacii piridin dependente, fiecare catalizat de o dehidrogenaz specific. Dehidro!ena$e e!ate de ( a#in". +ceste enzime conin, strns legate grupri prostetice, fie @%,, fie @+&. *n reaciile catalizate de aceste enzime are loc transferul unei perechi de atomi de hidrogen de la substrat pentru a genera formele reduse @%,>1 i @+&>1. S>1 F !(@%, S>1 F !(@+& = >4$ >4$ , , 8 , , > = 1> >4$ >4$ S F !(@%,>1 S F !(@+&>1 > , , 8 = , , > > =

$ele mai importante dehidrogenaze flavin ) dependente ntlnite n transportul de electroni n procesul de respiraie mitocondrial sunt0 1. NA#$ de"idrogenaza, care conine @%, i catalizeaz transferul de electroni de la ,+&> la urmtorul membru al lanului respiratorL 1. %uccinat de"idrogenaza, este activ n ciclul acizilor tricarbo"iliciL 4. #i"idrolipoil de"idrogenaza, un component al sistemului piruvat i (cetoglutarat dehidrogenazL ( Acil- oA- de"idrogenaza, catalizeaz prima etap de dehidrogenare din o"idarea acizilor grai. &ehidrogenazele flavin dependente difer semnificativ de cele piridin dependente, deoarece flavin nucleotida este strns legat de molecula enzimei, funcionnd astfel ca o grupare prostetic i nu ca i o coenzim. @lavin nucleotida nu prsete enzima n timpul sau dup efectuarea ciclului catalitic. !nzimele de o"idoreducere flavin dependente pot fi plasate n dou clase0 dehidrogenaze i o"idaze, n funcie de capacitatea lor de a reaciona ca acceptori de electroni. Ca flavin dehidrogenaze de tipul ,+&> dehidrogenaz i succinat dehidrogenaz e"ist o tendin foarte slab a reo"idrii formei reduse a flavin nucleotidei de ctre o"igenul molecular. Spre deosebire de acestea, flavin o"idazele sunt reo"idate de o"igenul molecular cu formare de pero"id de hidrogen, de e"emplu, &(aminoacid o"idaza i "antin o"idaza. ?<

*n celule, acceptorul direct de electroni dintre hidrogenazele flavin dependente, pare s fie ubi]uinona din lanul transportor de electroni. #nele flavoproteine conin, pe lng flavin nucleotid i metale 2de e". @e i %n3, acetia fiind eseniali n pentru e"primarea activitii catalitice. @lavoproteinele cu fier 2de e". succinat dehidrogenaza i ,+&> dehidrogenaza3 conin atomi de sulf reactivi. +tomii de fier n flavoproteinele cu fier i sulf sufer tranziia0 @e// @e///

i par s participe la transferul de electroni ctre i de la gruparea prostetic flavinic. +lte enzime flavin dependente 2de e". "antin o"idaza i aldehid o"idaza3 conin @ier i molibden. 0roteine cu (ier .i su (. Proteinele cu fier ) sulf conin fier i sulf liberabil cu acizi, n cantiti echimoleculare. Prima protein fier ) sulf descoperit, feredo"ina, a fost identificat ntr(o bacterie anaerob, $lostridium pasteurianum, capabil s fi"eze azotul atmosferic. Proteine asemntoare au fost apoi descoperite n plantele superioare, unde ele se gsesc n cloroplaste i particip la transportul de electroni al procesului de fotosintez. Proteine cu fier ) sulf au fost gsite i n microorganisme i n esuturi animale, n mod special n mitocondrii. Irupri @e ) S se gsesc n unele flavoproteine i se numesc centri fier ) sulf. +ceste proteine par s funcioneze ca transportori de electroni suferind tranziii reversibile @e2//3 ) @e2///3. *n lanul mitocondrial de la ,+&> la o"igen, par s e"iste cel puin apte centre de fier ) sulf diferite. Patru sunt localizate n comple"ul ,+&>(dehidrogenaza, dou centre sunt asociate citocromului b i unul citocromului c1. Citocromii $itocromii sunt proteine transportoare de electroni care conin n molecula lor ca i grupri prostetice fier porfirinic. +ceste structuri sunt prezente doar n celulele aerobe. #nii citocromi sunt localizai n membrana mitocondrial intern, unde acioneaz secvenial pentru transportul de electroni provenii de la diferite sisteme de o"ido(reducere pn la o"igen molecular. +li citocromi 'oac un rol important n procesele specializate de hidro"ilare. 7oi citocromii sufer tranziii reversibile de stare de o"idare @e2//3 ) @e2///3 n timpul secvenelor de transport de electroni. @ormele reduse de citocromi nu pot fi o"idate direct de ctre o"igenul molecular, cu e"cepia citocromului terminal al respiraiei mitocondriale, i anume citocromul a4 sau citocrom c o"idaza, care conine cupru ca i cofactor. *n membrana mitocondriile animalelor superioare, au fost identificai cel puin cinci citocromi diferii 2cit. b, c1, c, a i a4. $itocromii conin ca i grupare prostetic porfirinic protoporfirina. &ac protoporfirina comple"eaz ionul de @F1 rezult hemul iar dac comple"eaz ionul @eF4 rezult hemina.
$>O$>1 >4$ $>4 $>O$>1 >4$ $>O$>1 $>4 $>O$>1

, >

>

, @e
F1

>4$

$>4 $>1 $>1

>4$

$>4 $>1 $>1 $==>

$>1 $>1

$>1 $>1 $==> hem

$==> $==> protoporfirina /-

?:

Se tie c ionul de fier are ase coordinaii. &atorit structurii plane a sistemului aromatic porfirinic cei patru atomi de azot formeaz un ptrat iar ionul de fier se afl n centru, consumnd n felul aceste patru coordinaii. $oordinaiile : i 5 se afl de o parte i de alta a planului ptratului pe o perpendicular. : 1 1

, @e ,4
5

<,

*n mioglobin i hemoglobin, coordinaia a cincea este legat de gruparea imidazolic a unui rest de histidin, iar poziia a asea este fie neocupat, fie ocupat cu =1. *n aproape toi citocromii 2cu e"cepia citocromului a4, att poziia a cincea ct i poziia a asea de coordinare sunt ocupate de gruprile 8 ale unor resturi specifice de aminoacizi. &eci citocromii pot lega liganzi ca =1, $= sau $,(. *n funcionarea normal a hemoglobinei i a mioglobinei atomul de fier nu sufer schimbri ale strii de o"idare, n timp ce o"igenul este desprins sau prins. Ca citocromi, ns, +tomul de fier sufer trecerii reversibile ntre starea de o"idare @e2//3 i @e2///3. &eci, se constat c citocromii servesc ca transportori de electroni, pe cnd hemoglobina i mioglobina acioneaz ca transportori de liganzi. U+iPuinona 9Coen$ima L* #bi]uinona este o coenzim liposolubil, care particip la transferul de electroni de la substratele organice la o"igen, n lanul respirator din mitocondrie.
= >4$= >4$= = $>4 $>4
F 1e(, F 1 >F ( 1 e(, ( 1 >F

=> >4$= >4$= => $>4 $>4

2$>1 ( $> O $ ( $>13n

2$>1 ( $> O $ ( $>13n

+ceast coenzim este o chinon reductibil, n mod reversibil i are o caten lateral izoprenoid. Se cunosc mai multe ubi]uinone, care difer numai prin lungimea catenei izoprenoide, care are ase uniti de izopren n unele microorganisme i zece n mitocondriile esuturilor animale. *n esuturile vegetale, corespondentele ubi]inonei sunt plastochinonele, care ndeplinesc funcii similare n transportul de electroni ai fotosintezei. Ca ea transportu ui de e ectroni 9 an%u respirator* Secvenele de reacii pe care le pargurg electronii de la ,+&> la o"igen molecular poart numele de lan respirator. ,+&> este forma sub care electronii sunt colectai de la diferite substrate, cu a'utorul dehidrogenazelor ,+&(dependente. ?5

Secvena de reacii, care are loc este0 ,+&> F >F F @%, @%,>1 1 @e.S2///3 1 @e.S2//3 F 1 >F F U U>1 F 1 cit.b2///3 1 cit.b2//3 F 1 cit.c2///3 1 cit.c2//3 F 1 cit.a2///3 1 cit.a2//3 F 1 cit.a4 2///3 1 cit.a42//3 F 1A1 =1 F 1 >F ,+&F F @%,>1 @%, F 1 @e.S2//3 F 1 >F 1 @e.S2///3 F U>1 U F 1 >F F 1 cit.b2//3 1 cit.b2///3 F 1 cit..c2//3 1 cit.c2///3 F 1 cit.a2//3 1 cit.a2///3 F 1 cit.a42//3 1 cit.a42///3 F >1=

Se constat c transportorii de electroni intermediari din lan, dinspre substrat ctre o"igenul molecular, se gsesc n stare de echilibru aerob ntr(o succesiune de forme din ce n ce mai o"idate, artnd c electronii se scurg de(a lungul unui gradient de la ,+&> la =1. &e asemenea, s(a constatat c e"ist inhibitori care blocheaz n mod specific transportorii din lanul transportor de electroni. !"emple de astfel de inhibitori amintim0 rotenona 2substan foarte to"ic e"tras din plante3, amitalul 2medicament din clasa barbituricelor3, antimicina 2izolat din Streptomiccs griseus3, mono"idul de carbon, hidrogenul sulfurat i acidul cianhidric. Schim+uri de protoni 4n timpu transportu ui de e ectroni. = alt proprietate a lanului transportului de electroni este aceea c ionii de hidrogen sunt formai sau utilizai ntru(nele din reaciile secveniale ale transportului de electroni. #nii dintre transportorii de electroni 2,+&> i ubi]uinona3 transport electroni ca atare i nu preiau s(au cedeaz protoni. +ceste reacii unde se formeaz sau se absorb protoni au un rol important n conservarea energiei transportului de electroni. Ener!etica transportu ui de e ectroni. *n cursul trecerii unei perechi de electroni de(a lungul lanului respirator de la ,+&, la o"igen se formeaz 4 +7P, n urma unui proces numit fosforilare o"idativ. Pa F +&P +7P F >1=

$ele trei puncte de formare a +7P n procesul de transport de electroni de la ,+&> la o"igen sunt0 @P ( @e.S cit.b cit.a4 U cit.c =1 1 +7P 1 +7P 1 +7P

&eci, se constat c eliberarea energiei are loc n trepte i sunt absorbii i eliberai numai la unele dintre aceste etape, sugernd c schimburile de protoni sunt implicate n conservarea energiei. 1ranshidro!ena$e piridin/nuc eotide ^esuturile animale i microorganismele conin enzime ce catalizeaz reacia0 ,+&P> F , +&F ?B ,+&PF F ,+&>

+ceast reacie permite utilizarea echivalenilor reductori ai ,+&> de ctre lanul respirator, care, n mod normal, accept electroni de la ,+&> ca donor apropiat. !nzimele ce catalizeaz reacia invers, ce permite reducerea ,+&PF se numesc trans"idrogenaze! Sensul reaciei de trasnhidrogenare n mitocondria intact depinde de energia produs de transportul de electroni i prezena +7P. .iteza reaciei de la ,+&P> la ,+&F este, de obicei, mai mare dect viteza reaciei n sens invers. 7endina electronilor de a trece de la ,+&> la ,+&PF cu formare ,+&P> apare atunci cnd e"ist e"ces de +7P, iar ,+&P>(ul rezultat 'oac un rol nsemnat n procesele de biosintez. Uti i$area o)i!enu ui de c"tre o)i!ena$e. &ei, cea mai mare parte an o"igenului molecular consumat de celulele aerobe este redus cu formare de ap. $antiti mici de o"igen sunt folosite n reacii enzimatice, n care unul sau ambii atomi de o"igen din molecul sunt introdui direct pe substrate organice cu formare de grupri hidro"il. !nzimele care catalizeaz astfel de reacii se numesc o"igenaze. _i se mpart n dou clase.0 ( ( dio"igenaze mono"ogenaze

&io"igenazele catalizeaz introducerea ambilor atomi de o"igen ai moleculei =1 pe diferite substrate organice, n timp ce mono"igenazele introduc numai unul. #io&igenazele numite i o"igen(transferaze, catalizeaz reacii de tipul0 +>1 F =1 +2=>31

unde +>1 este molecula de substrat +2=>31 forma hidro"ilat. $ele dou grupri hidro"il sunt introduse de obicei n poziii adiacente sau vicinale. Produsul +2=>31 este deseori instabil i are loc ruperea legturii $ ) $ ntre gruprile hidro"ilice vicinale. #n e"emplu important este cazul triptofan(1,4(dihidro"ilazei, enzim ce catalizeaz o etap de degradare o"idativ a triptofanului. *n aceast reacii doi atomi de o"igen sunt introdui n ciclul de cinci atomi al triptofanului rezultnd un produs hidro"ilat, care este apoi transformat n C( formilRinunerin.
,>1
=1 dio"igenaza triptofan o"igenaza

$>1 ( $> ( $==> , > ,>1

$>1 ( $> ( $==> => , > =>

,>1

$ ( $>1 ( $> ( $==> ,> ( $> O =

,(formil(C(Rinuinerina

?;

'onoo&igenazele sau hidro"ilazele catalizeaz introducerea unui singur atom de o"igen din molecula de o"igen pe un substrat organic, cellalt atom de o"igen fiind redus la ap. %ono"igenazele necesit un al doilea substrat care s cedeze electroni pentru reducerea pentru reducerea celui de(al doilea atom la ap. &in aceast cauz monoo"igenazele mai sunt numite i o"igenaze cu funciune mi"t. !cuaia general este0 +> F ->1 F =1 +=> F >1= F -

unde0 +> ( substratul ce va fi hidro"ilat, ->1 ( donorul de electroni, +=> ) substratul hidro"ilat i - ) donorul de electroni o"idat. Substratul care furnizeaz electroni pentru a reduce un atom de o"igen la ap este ,+&> sau ,+&P>. $ele mai multe monoo"igenaze 2din bacterii3 sunt flavoproteine care conin @+& i catalizeaz secvena de reacii0 ,+&2P3> F !(@+& !(@+&>1 F +> F =1 ,+&2P3F F !(@+&>1 !(@+&>1 F +=> F >1=

unde ! F enzima i +> F substratul. &e e"emplu0 fenilalanin hidro"ilaza 2enzim hepatic3 sau fenilalanin(<(monoo"igenaza catalizeaz reacia de hidro"ilare a fenilalaninei cu formare de tirozin. #ltimul donor de electroni este ,+&P>, dar echivalenii reductori sunt transferai prin intermediul tetrahidrobiopterinei.
=1 $>1 ( $> ( $==> ,>1 ,+&P> F >
F

>=

$>1 ( $> ( $==> F >1= ,>1

Supero)id dismuta$a .i cata a$a *n timpul transportului de electroni spre o"igenul molecular sau n diferite reacii de hidro"ilare i o"igenare, se pot forma produi to"ici rezultai prin reducerea parial a o"igenului. $ei mai importani produi to"ici sunt = ( 1 2supero"id3 i >1=1, care sunt e"trem de reactivi i capabili de a distruge activitatea biologic a unor macromolecule. *n celulele aerobe a fost pus n eviden o supero"id dismutaz, ce catalizeaz reacia0 1 =1( F 1 >F >1=1 F =1

Pero"idul de hidrogen format este distrus de o hemoglobulin numit catalaz. ??

>1=1

>1= F 1A1 =1

Supero"id dismutaza se gsete sub dou forme una n citoplasma e"tramitocondial i alta n mitocondrie. +ciunea supero"id dismutazei i catalazei este completat de acidul sorbic, glutationul redus i vitamina !, care accept uor electroni, fiind eficieni pentru ndeprtarea radicalului.

166

8I. ME1ABOLISMUL 3LUCIDIC 3enera it"%i. Ilucidele sau zaharurile sunt compui polihidro"icarbonilici 2aldoze i cetoze3. *n funcie de capacitatea de a hidroliza glucidele se pot clasifica n monozaharide 2zaharuri simple nehidrolizabile3, oligozaharide 2formate din 1 ) 16 resturi de monozaharide, legate prin intermediul legturilor glicozidice i care prin hidroliz elibereaz monozaharidele constituente3 i polizaharide 2formate din lanuri lungi, liniare sau ramificate de monozaharide, ce pot fi eliberate prin hidroliz. = categorie aparte o constituie glucidele con'ugate glicoproteinele, glicolipidele 2care prin hidroliz pun n libertate pe lng componenta glucidic i o component neglucidic numit aglicon3. 2o u ! ucide or 4n or!anism. Ilucidele ndeplinesc n organism funcii variate. a. Ilucidele sunt surse nemi'locite de energie. +stfel n toate organismele vii, sursa imediat de energie o constituie o"idarea glucozei. &e e"emplu, celulele nervoase sunt dependente de glucoz ca i surs de energie. b. Ilucidele au rol de substane de rezerv. *n organismele animale superioare i ale omului, glucoza poate constitui depozite de energie sub form de glicogen hepatic i muscular. Ca plante, substana ma'or de rezerv glucidic este amidonul. c. Ilucidele ndeplinesc roluri de substane structurale i de susinere. Ca animale, polizaharidele intr n structura esuturilor conective ale matricei osoase. d. Ilucidele sunt substane cu funcii specifice. %ucopolizaharidele intr n structura substanelor de grup sangvin, particip la procesele imunitare, intr n structura heparinei, substan cu aciune anticoagulant. Di!estia .i a+sor+%ia ! ucide or. *n organismul animal, glucidele pot fi de origine e"ogen, introduse n organism sub form de alimente sau de origine endogen, rezultate n urma unor procese de biogenez. $ea mai mare parte din glucidele din organismul animalelor superioare i al omului este de origine e"ogen. Ilucidele alimentare pot fi, la rndul lor, de natur vegetal sau animal. principala glucid de origine animal este glicogenul, ns cea mai mare parte a glucidelor alimentare const din amidon, glucid de origine vegetal, mai ales sub form de pine. *n cantiti mai mici alimentele mai conin dizaharide ca zaharoza, lactoza, maltoza sau monozaharide ca glucoza sau fructoza. Pentru a putea fi utilizate de ctre organism, glucidele alimentare sunt n prealabil unui proces de digestie, urmat de un proces de absorbie. &igestia polizaharidelor ncepe n cavitatea bucal sub aciunea amilazei salivare, care este o enzim hidrolitic secretat de glandele salivare. Sub aciunea acestei enzime, amidonul alimentar este hidrolizat sub form cu formare de de"trine, eventual maltoz. +ciunea acestei enzime este limitat timpul de contact pentru c alimentele rmn n gur un timp relativ scurt. *n continuare, la nivelul stomacului sub aciunea sucului gastric asupra bolului alimentar, amilaza salivar este inactivat de aciditatea sucului gastric. Ca nivelul intestinului, glucidele alimentare sunt hidrolizate sub aciunea enzimelor pancreatice i a celor intestinale. +stfel, amilaza pancreatic acioneaz asupra amidonului i a glicogenului alimentar, pe care le hidrolizeaz cu formare intermediar de de"trine, pn la stadiul de maltoz. +supra maltozei, precum i asupra altor dizaharide, acioneaz enzime coninute n sucul gastric. = serie de polizaharide, cum ar fi celuloza, nu sunt transformate n tubul digestiv al omului, care nu conine enzimele necesare acestor procese. +ceti compui trec, ca atare, n intestinul gros, unde 161

sunt degradai n mic msur sub aciunea florei intestinale i sunt apoi eliminai prin fecale. +adar, aceste polizaharide nu au rol n nutriie, cu sunt utile pentru digestie, deoarece regleaz peristaltismul intestinal. $a rezultat al digestiei zaharurilor, n intestinul subire rezult o serie de monozaharide, printre care predomin glucoza, galactoza, fructoza, manoza precum i unele pentoze. +bsorbia glucidelor are loc la nivelul intestinului subire sub form de monozaharide. .iteza de absorbie depinde de mai mui factori, printre care regiunea i starea de funcionare a intestinului, prezena unor anumite coenzime 2tiamin, acid pantotenic3 i hormoni 2tiro"in3. +bsorbia monozaharidelor se pate face prin mecanisme fizice sau prin mecanisme biochimice. %onozaharidele provenite din absorbia intestinal a'ung prin vena port la ficat, unde pot fi temporar depozitate sub form de glicogen, apoi trec n circulaia general a'ungnd pe calea sangvin n toate celulele diferitelor organe i esuturi. *n celule, glucidele pot suferi diferite transformri, care pot fi anabolice 2 n cadrul crora au loc sinteze de glucide din ali compui glucidici i neglucidici3 i catabolice 2 n cadrul crora moleculele glucidice sunt degradate cu eliberare de energie3. Cata+o ismu ! ucidic Ilucidele care servesc cel mai frecvent substrate al transformrilor catabolice la animale, plante i microorganisme este glucoza Schema meta+o i$"rii ! uco$ei
<

& ' ;

3/F/0
F

o$e 9;/Nc* D NAD0H D HD

Q N O

CO' 'a aceti /CoA 'CO'

piru#at
'c

3/&/0

! ico!en

actat D ener!ie

acid ! ucuronic

CAT
'+

reactii de con,u!are #itamina C

ant respirator

H'O D ener!ie

1 ( fosforilarea glucozei, 1 ) glicoliza, 1a ) decarbo"ilarea o"idativ a piruvatului, 1b ) ciclul Grebs i lanul respirator, 1c, 4, < ) gluconeogeneza, : ) calea pentozofosfatului, 5 ) calea de interconversie n cei doi esteri ai glucozei, B ) gliconeogeneza, ? ) glicogenoliza. :icatu utilizeaz glucoza astfel0 ( o parte o utilizeaz pentru necesiti propriiL ( o parte o depoziteaz sub form de glicogenL ( cea mai mare parte este repus n circulaie pentru a servi altor esuturi. 161

Ilucoza i fructoza sunt transformate n ficat n glucoz, care reprezint forma principal de utilizare de ctre organismul animal. Rn (icat1:9 din glucoz se transform pe calea 1L 19 din glucoz se transform pe calea :L 1;9 din glucoz se transform pe calea ;L ::9 din glucoz este repus n circulaie graie cii nr. <, catalizat de ctre glucozo(5( fosfataz. +ceast cale este prezent n rinichi, intestin, lipsete din muchi, creier, esut adipos. Eritrocite e (o osesc ?69 din glucoz pe calea 1L 169 din glucoz pe calea :. Creieru ,u face depozit de glicogenL $nd nu primete glucoz pe cale sangvin rmne fr substrat glucidic, astfel c n caz de hipoglicemie, se a'unge uor la lipotimie. Ca ea nr. & ( cale obligatorie pentru intrarea glucozei n transformri metabolice.
%gF1 glucoRinaza he"oRinaza

I F +7P

I(5(P F +&P

( ( (

procesul de fosforilare este endergo(dependent ireversibilL procesul are loc cu scderea entalpiei libereL enzime0 glucoRinaza 2enzim specific3 he"oRinaza 2enzim nespecific3.

+mbele enzime au rol cheie n metabolismul glucozei.

164

3 ico i$a Ca ea nr. ' > cic u Em+den > Me@erho( > 0arnas 9! ico i$a* ( ( ( procesul de degradare a glucozei pn la piruvat sau lactatL procesul are loc cu producere de energieL se desfoar n faza solubil a celulei 2citoplasm3, deoarece acolo se gsete ntregul set de enzime necesare desfurrii procesului.

Etape e ! ico i$ei / degradarea glucozei pn la trioze 2proces consumator de energie3L // descompunerea glicerinaldehid(4(fosfatului pn la piruvat 2proces n care se produce energie3 I.
$>1=> = => >= => =>
+7P

glucoRinaza

$>1=P = => >= => =>

glucozo(5(fosfat izomeraza

$>1=P

= >=

$>1=> =>

+&P

=> $>1(=(P $O=

fosfofructo Rinaza

$>1=P

= >=

$>1=P =>

$>1=>
fosfotriozo izomeraza

=>

$>O= >$(=> $>1=P

II.
= $>O= >($(=> $>1=P
glicerinaldehid(4(fosfat dehidrogenaza

$(= >($(=>
F

fosfogliceroil Rinaza +&P

$==> >($(=> $>1=P

,+&

,+&> F >

$>1=P

+7P

fosfoglicerat mutaza

$==> >($(=P $>1=>

enolaza >1=

$==> $(= P $>1

piruvat Rinaza

$==> $(=> $>1

+&P

+7P

16<

$==> $O= $>4

lactat dehidrogenaza

$==> > ( $ ( => $>4

,+&F

,+&> F >F

Importan%a ! ico i$ei ( glicoliza este o etap obligatorie n procesul de degradare a glucozei, ca substrat energetic pn la dio"id de carbon i apL ( este cea mai important cale sub aspect cantitativ de degradare a glucozeiL Bi an%u ener!etic a ! ico i$ei / // ( consum ( ctig 3 ico i$a este0 ( ( un proces metabolic cu bilan e"ergonicL o important surs de energie att pentru esuturile ce lucreaz anaerob, ct i pentru cele ce lucreaz aerob. 1 +7P < +7P 1 +7P 2reaciile 1 i 43 2reaciile B i 163

:ermenta%ia a coo ic" #nele microorganisme 2dro'dia de bere3 au capacitatea de a transforma glucoza n etanol cu eliberare de dio"id de carbon. Procesul se numete fermentaie alcoolic, i are un mers asemntor cu glicoliza pn la formare de acid piruvic. &e aici, fermentaia alcoolic i are mersul su caracteristic. +stfel, ntr(o prim etap, acidul piruvic este decarbo"ilat, sub aciunea piruvat decarbo"ilazei.
piruvat decarbo"ilaza 27PP, %g F13

>4$ ( $= ( $==>

>4$ ( $>O= F $=1

+cetaldehida rezultat este redus la alcool etilic, sub aciunea alcool dehidogenazei, care necesit prezena coenzimei ,+&>. alcool dehidrogenaza

>4$ ( $>O= F ,+&> F > !cuaia global este0 glucoza F 1 Pa F 1 +&P 16:

>4$ ( $>1 ( => F ,+&F

1 $>4($>1=> F 1 $=1 F 1 +7P F 1 >1=

Procesul prezint importan industrial deosebit, deoarece st la baza fabricrii buturilor alcoolice de fermentaie. *n fermentaia acetic, acetaldehida sub aciunea alcool dehidrogenazei, care are ca i coenzim ,+&F, se transform n acid acetic. >4$ ( $>O= F >1=
,+&F

>4$ ( $==>
,+&> F >F

165

Ca ea pento$o(os(atic"

= alt cale de degradare a glucozei n celulele organismului uman este reprezentat de calea pentozofosfat sau untul pentozofosfat. +ceast cale se realizeaz n poriunea solubil a citoplasmei e"tramitocondriale din celulele animale. *n procesul de degradare a glucozei pe aceast cale se pot distinge dou etape0 d3 o"idativ 2obinerea de pentoze din he"oze3L di3 calea ce permite interconversia dintre diferite glucide. &. Etapa o)idati#" $>1=P = >= => => =>
,+&
F

$>1=P = >=
,+&>F>F

=> =>

*n aceast reacie glucozo(5(fosfatul se o"ideaz sub aciunea glucozo(5(fosfat dehidrogenazei 2I&P>3 formnd 5(fosfogluconolacton. IP&> are drept coenzim ,+&PF care funcioneaz ca i acceptor de electroni i hidrogen. *n continuare 5(fosfogluconolactona, hidrolizeaz spontan sau sub influena unei lactonaze formeaz acid 5(fosfogluconic. $==> $>1=P = >= => => =
>1=

>($(=> >=($(> >($(=> >($(=> $>1(=(P=4>1

*n etapa urmtoare, catalizat de 5(fosfogluconat dehidrogenaz 2PI&>3 are loc concomitent o o"idare i o decarbo"ilare. !nzimele utilizeaz ,+&P ca i coenzim.

$==> >($(=> >=($(> >($(=> >($(=> $>1(=(P=4>1

,+&P
F

$==> >($(=> =O$ >($(=>

,+&P>F>
F

$>1(=> $O=
( $=1

>($(=> >($(=> $>1(=(P=4>1

>($(=> $>1(=(P=4>1

16B

Sub aciunea unei izomeraze, ribulozo(:(fosfatul se izomeraz la nitrozo(:(fosfat. $>1(=> $O= >($(=> >($(=> $>1(=(P=4>1
ribulozo(:(fosfat izomeraza

$>O= >($(=> >($(=> >($(=> $>1(=(P=4>1

*n unele cazuri procesul se poate opri aici, din o"idarea glucozo(5(fosfatului rezult dio"id de carbon, ,+&>F>F ce intr n reaciile de biosintez, care au loc n citoplasma e"tramitocondrial i &(ribozo(:(fosfat, care este un precursor n sinteza nucleotidelor. !cuaia global este0 I(5(P F 1 ,+&PF 8ibozo(:(fosfat F $= 1 F 1 ,+&P> F >F

*n alte cazuri, ins, pentozele rezultate pot fi din nou convertite n he"oze, n cadrul unei secvene de reacii de sine stttoare. *n etapa anterioar din glucozo(5(fosfat a rezultat ribulozo(:(fosfat, care sub aciunea unei izomeraze se transform n ribozo(:(fosfat, iar sub aciunea unei epimeraze se transform n "ilulozo(:(fosfat. $>O= >($(=>
(fo o(: za z o ul era rib izom t sfa

>($(=> >($(=> $>1(=(P=4>1 ribozo(:(fosfat

$>1(=> $O= >($(=> >($(=>

$>1(=(P=4>1 ribulozo(:(fosfat

rib ulo epi zo(: me (fo raz sfa t a

$>1(=> $O=

>=($(> >($(=> $>1(=(P=4>1 "ilulozo(:(fosfat 16;

+ceste transformri sunt reversibile, iar echilibrul se stabilete n urmtoarele rapoarte cantitative. 4:9 ribulozo(:(fosfat, 1:9 ribozo(:(fosfat i <69 "ilulozo(:(fosfat. *n etapa urmtoare, sub aciunea transcetolazei are loc transferul unei grupri glicolaldehidice de la "ilulozo(:(fosfat la ribozo(:(fosfat. 8eacia necesit prezena 7PP ca i coenzim i ioni de magneziu, iar produsul care rezult este o heptoz, seduheptulozo(B(fosfat i o trioz.
$>1(=> $>O= >($(=> >($(=> >($(=> $>1(=(P=4>1 ribozo(:(fosfat $>1(=> $O= $O=
transcetolaza

>=($(> >($(=> >($(=> >($(=>

$>O=

>($(=> >($(=> $>1(=(P=4>1 ribulozo(:(fosfat

>($(=> $>1(=(P=4>1 glicerinaldehid(4(fosfat

$>1(=(P=4>1 seduheptulozo(:(fosfat

*n continuare n prezena unei transaldolaze, are loc transferul unei grupri de dihidro"iaceton la seduheptulozo(B(fosfat la glicerinaldehid(4(fosfat. &in reacie rezult o prim molecul de he"oz i anume fructozo(5(fosfatul, precum i o molecul de eritrozo(<(fosfat. @ructozo(5(fosfatul este un produs ce face legtura cu secvena glicolitic.
$>1(=> $O= >=($(> >($(=> >($(=> >($(=> $>O=
transaldolaza

$>1(=> $O= >=($(> >($(=> >($(=> $>1(=(P=4>1 fructozo(5(fosfat

$>O= >($(=>

>($(=> $>1(=(P=4>1 glicerinaldehid(4(fosfat

>($(=> $>1(=(P=4>1 eritrozo(<(fosfat

$>1(=(P=4>1 seduheptulozo(B(fosfat

Produii rezultai sunt tot intermediari ai secvenei glicolitice. !nzimele cheie ale acestei ci sunt glucozo(5(fosfat dehidrogenaza i 5(fosfogluconat dehidrogenaze. Importan%a meta+o ic" a cic u ui pento$o(os(at %etabolizarea glucozei pe calea pentozofosfat nu constituie propriu(zis o form de degradare sau de o"idare a glucozei. $alea pentozofosfat nu este cuplat cu lanul respirator, ci n cadrul ei, nu se formeaz +7P, ci se consum pentru activarea glucozei la glucozo(5(fosfat. /mportana sa metabolic o constituie faptul c diveri produi ai secvenei metabolice sau intermediarii cii pentozofosfat sunt implicai n procese de biosintez a unor compui de importan biologic ma'or. ,+&P> F >F este un furnizor de hidrogen i de electroni n procesele de sintez a acizilor grai, a compuilor steroidici. &iferitele tetroze, pentoze, he"oze i heptoze rezultate sunt implicate n biosinteza monozaharidelor i a acizilor nucleici. 16?

7ransformarea glucozei pe calea pentozofosfat constituie un mecanism tipic amfibolic de metabolizare. &iferitele etape ale acestei secvene metabolice au loc n faza solubil a citoplasmei i toate enzimele care particip la aceste reacii au fost izolate n stare pur. $iclul pentozofosfat este avanta'os pentru economia celular i prin faptul c necesit echipament enzimatic relativ redus, de unde i denumirea de \unt pentozofosfatE. 0ato o!ia c"ii pento$o(os(at Ilucozo(5(fosfat dehidrogenaza este o enzim ce prezint proprietatea de polimorfism genetic. +ceasta nseamn c e"ist numeroase variante genetice ale acestei enzime, ca urmare a unor mutaii genetice. +ceast enzim este un e"emplu tipic de enzimopatie farmacogenetic, deoarece se manifest condiionat de administrarea unor medicamente i numai la indivizi cu variaii genetice ale enzimei. !"emple de medicamente ce pot provoca apariia de enzimopatii sunt antimalaricele 2chimina3, sulfamidele, nitrofurantoina, vitamina G, aspirina. Posesorii de o astfel de enzimopatie nu prezint suferine pn cnd nu inger un astfel de medicament, cnd se produce hemoliz, anemie hemolitic i methemoglobinurie. +ceste medicamente cresc potenialul o"idativ al celulei i enzima nu mai face fa.

116

De!radarea ! uco$ei pe ca ea aci$i or uronici Pe lng celelalte ci de degradare a glucozei n organismele animale i la plantele superioare s(a observat i o alt cale, care implic o"idarea glucozei la acid glucuronic. +ceast cale este important din punct de vedere metabolic deoarece0 1. @urnizeaz acid glucuronic, care este utilizat n procesele de deto"ificare hepatic prin con'ugarea sa cu fenoli, bilirubin, cu diveri hormoni, cu unele medicamente sau produii lor de o"idare. +ceast con'ugare are ca i consecin scderea to"icitii acestor compui i mrirea solubilitii lor, ceea ce faciliteaz e"creia renal. 1. acidul glucuronic prezint i o importan structural, deoarece intr n structura mucopolizaharidelor. 4. +tt n plantele superioare ct i n organismele animale 2cu e"cepia omului, a primatelor i a cobailor3, acidul glucuronic constituie o etap intermediar n biosinteza acidului ascorbic din glucoz. @ormarea acidului glucuronic n organismele umane parcurge mai multe etape. 1. Ilucozo(1(fosfatul rezultat din glicogen prin foforoliz sau din izomerizarea glucozo(5( fosfatului i se activeaz prin cuplare cu #7P, cu formare de #&P(glucoz.
= > $>1=> = >= => =P=4>1 => = F P P P ( = ( >1$ = , ,
#&P(glucozo(pirofosforilaza pp

=> =>

= > $>1=> = >= => => = = , ,

=>

=>

= ( P ( = ( P ( = ( P ( = ( >1$ => = = =

=>

=>

#&P(glucoza

*n etapa urmtoare #&P(glucoza se o"ideaz n prezen de #&P(glucozo dehidrogenaz cu formare de acid #&P(glucuronic. 111

= > $>1=> = >= => => = = PP => => , ,

#&P(glucozopirofosfataza

=> =

=> =

= ( P ( = ( P ( = ( P ( = ( >1$ => =

= > $==> = >= => => = = , ,

=>

=>

= ( P ( = ( P ( = ( P ( = ( >1$ => = = =

=>
acid #&P(glucuronic

=>

+cidul #&P(glucuronic poate elibera i #7P prin hidroliz sau poate intra direct n reacii de con'ugare.

= > $>1=> = >= => => = = , ,

#&P(glucozo( dehidrogenaza

=>

=>

= ( P ( = ( P ( = ( P ( = ( >1$ => = = =

1 ,+&F

1,+&> F 1>F

=> =>

= > $==> = >= => => = = , ,

=>

=>

= ( P ( = ( P ( = ( P ( = ( >1$ => = = =

=>

=>

111

acid #&P(glucuronic

+cidul #&P(glucuronic poate elibera acidul glucuronic i #7P prin hidroliz sau poate intra direct n reacii de glucuronocon'ugare. reactii de con'ugare acid #&P glucuronic vitamina $ alicozaminoglicani 2gliciproteine3 7ransformarea acidului #&P(glucuronic pe calea Ba, reprezint o cale de deto"ifiere a organismului. +ceast cale se desfoar n esutul hepatic i renal, viznd, n primul rnd, compuii to"ici de origine e"ogen sau produi rezultai n urma metabolismului normal. *n urma acestui proces se formeaz glicuronide, compui solubili i uor de eliminat, prin care se neutralizeaz efectul to"ic al unor metabolii 2 de e"emplu, compui fenolici, carbo"ilici, aminici etc.3 8(=> #&P(glucuronic glucuronat transferaza

#&P

8(=(glucunoril

Ca om, la maimue i la cobai, acidul glucuronic rezultat prin hidroliza acidului #&P( glicuronic se o"ideaz la acid gulonic, cu formare final de "iluloz i dio"id de carbon 2Bc3. > > => > acid #&P(glucuronic
#&P

>1

>==$ ( $ ( $ ( $ ( $ ( $>O= >= => > =>

acid glucuronic

> > => > >==$ ( $ ( $ ( $ ( $ ( $>1=> >= => > =>
acid gulonic

$=1

=> > >=>1$ ( $ ( $ ( $ ( $>1=> = > =>

C("iluloza

>1

114

C("iluloza trece n &("iluloz, care intr intr n calea pentozofosfat. Prezena "ilulozei n cantitate mic n urina omului sntos i n cantiti mari la bolnavii suferinzi de pentozurie carenial, dovedete posibilitatea acestei ci de degradare a acidului glucuronic. Ca plantele superioare i la ma'oritatea animalelor, acidul glucuronic trece n acid ascorbic 2Bb3.

$>O= > ( $ ( => >= ( $ ( > > ( $ ( => > ( $ ( => $==> > $ ( $>1=> => => =>
gulonolactona >1 >1=

> $ ( $>O= =>

>1

=> =>
glucuronolactona

> $ ( $>1=> =>

=> =>
acid ascorbic

&eficiena genetic, care nu permite sinteza acidului ascorbic la om, primate i cobai, const n absena enzimei C(gulonolacton o"idaz, care catalizeaz etapa final abiosintezei de acid ascorbic.

11<

3 uconeo!ene$a Procesele de catabolizare a glucidelor n celule se desfar concomitent cu cele de biosintez. +stfel, dei ma'oritatea proceselor metabolice sunt procese reversibile, calea de biosintez a unei molecule nu reprezint o simpl inversare a cii de degradare. *n cadrul fiecrui proces metabolic trebuie s e"iste cel puin o verig prin care anabolismul s se diferenieze de catabolism. +ceste verigi constituie, n general, tocmai punctele de control al cii metabolice respective. $ile anabolice prezint o anumit independen n raport cu cele catabolice, ele desfurndu(se adesea n compartimente celulare diferite. $uplarea proceselor catabolice cu cele anabolice este realizat frecvent prin intermediul +7P(ului, transportor al energiei eliberate n cursul catabolismului i totodat furnizor al energiei necesare n procesele de biosintez. *n cadrul anabolismului glucidic, formarea glucozo(5(fosfatului constituie etapa nodal. Ilucozo(5(fosfatul se poate forma pe mai multe ci0 1. prin fotosintez 2procesul se ntlnete n organismele autotrofe3L 1. prin conversia acidului lactic, respectiv a acidului piruvic n glucozL 4. prin gluconeogenez din intermediari ai ciclului acizilor tricarbo"iliciL <. prin gluconeogenez din aminoaciziL :. prin interconversia altor he"oze n glucozo(5(fosfat. Iluconeogeneza este procesul de resintez a glucozei din material neglucidic. !ste procesul ce contribuie la satisfacerea necesarului de glucoz a esuturilor ntre mese sau atunci cnd aportul alimentar de glucoz este insuficient. Procesul poate avea loc plecnd de la lactat sau piruvat prin inversarea etapelor glicolizei cu intercalarea anumitor etape unidirecionale, care sunt soluionate prin alte secvene de reacii, cu participarea altor enzime. +cestea se numesc ci de ocolire i sunt0 ( ( ( formarea fosfoenol piruvatului din piruvatL transformarea fructozo(1,5(difosfatului n fructozo(5(fosfatL transformarea glucozo(5(fosfatului n glucoz

:ormarea (os(oeno piru#atu ui. 7recerea fosfoenol piruvatului n piruvat sub aciunea piruvatRinazei este un proces care decurge cu o scdere apreciabil a energiei libere, ceea ce face ca reversibilitatea acestei reacii s fie e"trem de redus. &in aceast cauz, fosforilarea piruvatului la fosfoenol piruvat, care pe cale direct ar fi puternic endergonic, decurge pe o cale deviat, care implic participarea att a unor enzime din citoplasm ct i din mitocondrii. +stfel ntr(o prim etap piruvatul este carbo"ilat n mitocondrii cu formare de o"alilacetat. 8eacia necesit participarea +7P(ului, ca donor de energie i prezena acetil $o+, ca modulator de reacie. $==> $>1 $O= $==> +cidul o"alilacetic rezultat este apoi redus la malat, tot n mitocondrii, sub aciunea ,+&>. 11: F +&P F Pa

$>4 $ O = F $=1 F +7P $==>

$==> $>1 $O= $==> F ,+&> F >F

$==> $>1 $>=> $==> F ,+&F

+cidul malic difuzeaz din mitocondrie n citoplasm unde este reo"idat la acid o"alil acetic, sub aciunea malat dehidrogenazei. $==> $>1 $>=> $==> F ,+&F $==> $>1 $O= $==> F ,+&> F >F

+cidul o"alilacetic sub aciunea fosfoenolpiruvat dehidrogenazei li cu participarea I7P ca donor de energie se decarbo"ileaz i se fosforileaz concomitent formnd fosfoenol piruvat. $==> $>1 $O= $==> F I7P
%g
F1

$>1 $(= $==> P=4>1 F I&P F $=1

!cuaia global a procesului este0 $>4 $ O = F +7P F I7P $==> $>1 $ ( = P=4>1 F I&P F +&P F Pa $==>

&eci, pentru fosforilarea enolpiruvatului la fosfoenolpiruvat a fost necesar energia unei molecule de +7P i una de I7P. *n continuare fosfoenolpiruvatul format, se transform prin inversarea reaciilor glicolitice pn la stadiul de fructizo(1,5(difosfat. Hidro i$a (ructo$o/&7F/di(osa(atu ui este a doua reacie din cursul biosintezei glucozei care are un mecanism propriu i nu const dintr(o inversare a reaciei din cadrul glicolizei.
fructozofosfataza

@ructozo(1,5(difosfat F >1=

@ructozo(5(fosfat F Pa

*n etapa urmtoare fructozo(5(fosfatul sub aciunea izomerazei este transformat n glucozo( 5(fosfat. 115

@ructozo(5(fosfat

Ilucozo(5(fosfat

Ilucozo(5(fosfatul este un compus cheie n cadrul metabolismului glucidic, deoarece el constituie compusul iniial pentru multiple transformri anabolice i catabolice ale glucozei. *n vederea biosintezei glucozei libere, glucozo(5(fosfatul hidrolizeaz n baza unui mecanism propriu i nu prin inversarea procesului de formare. Hidro i$a ! uco$o/F/(os(atu ui. *n secvena glicolitic, glucozo(5(fosfatul se formeaz prin fosforilarea direct a glucozei de ctre +7P i n prezena he"oRinazei. 8eacia invers este endergonic i puin probabil. @ormarea glucozei libere se realizeaz prin hidroliza glucozo(5(fosfatului sub aciunea glucozo(5(fosfatazei
glucozo(5(fosfataza

Ilucozo(5(fosfat F >1=

Ilucoza F Pa

+ceast enzim este repartizat selectiv n 8! din ficat i rinichi. !ste o enzim cu funcii multiple poate cataliza i hidroliza pirofosfatului sau biosinteza glucozo(5(fosfatului din glucoz i pirofosfat. *n acest caz glucozo(5(fosfatul nu se gsete n muchi i creier, care nu au capacitatea de a forma glucoza liber. =rganismul poate s produc glucide i din ali precursori 2intermediari ai ciclului acizilor tricarbo"ilici, amino acizi etc3. *n procesul de gluconeogenez e"ist patru enzime ce constituie puncte de control a acestei ci0 piruvat carbo"ilaza, fosfoenolpiruvat carbo"ilaza, fructozodifosfataza i glucozo(5 fosfataza, de fapt sunt enzimele care catalizeaz etapele de ocolire din procesul de gluconeogenez. Iluconeogeneza este un proces endergonic ce se desfoar n ficat, rinichi i mai puin n alte esuturi. &ac n proces se pleac de la lactat i piruvat se consum ase molecule de +7P pentru o molecul de glucoz.

11B

Meta+o ismu ! ico!enu ui Ilicogenul reprezint forma ma'or de stocare 2uor disponibil3 a e"cesului de glucoz n organismul animal. Ca acest form se face apel n faza catabolic a metabolismului. Ilicogenul este un polimer ramificat alctuit din (&(glucoz, legate ma'oritar prin prin legturi 1(< glicozidice i cu o frecven de cca 16 uniti legturi 1(5 glicozidice, care for crea punste de ramificare.

$>1=> = => => =

$>1=> = => => =

$>1=> = => => >= = $>1 => => = =

Ilicogenul este localizat n ficat 2cca 5693 i n muchi 2 193. $antitatea de glicogen depozitat n ficat este mai mic dect cea din muchi, deoarece masa muscular este mai mare dect masa ficatului. Ilicogenul va fi folosit n scopuri diferite n funcie de locul de depozitare. Iliconeogeneza i glicogenoliza, ca i alte ci metabolice decurg decur distinct i se conformeaz principiului general al dualitii reglrii, ceea ce asigur funcionarea lor nesincron. 3 ico!eno i$a ) reprezint procesul de degradare a glicogenului, care presupune desfacerea legturilor 1(< i 1(5(glicozidice din structura acestuia. Procesul se desfoar sub aciunea con'ugat a dou enzime specifice. Prima etap 2limitant de vitez3 este o (os(oro i$" adic transferul unui rest glucozil, de la captul nereductor al polizaharidei pe o molecul de acid fosforic 2fosforoliz3. *n urma transferului rezult glucozo(1(fosfat i glicogen cu o unitate de glucoz mai puin.
fosforilaza

glicogen 2nF13 F P

glucozo(1(fosfat F glicogen 2n3

:os(ori a$a sau 1(< glucozil(fosfo(glicozil transferaza este o enzim specific care acioneaz asupra legturii glicozidice 1(<. +ciunea acestei enzime nceteaz la o distan de patru uniti de glucoz fa de punctul de ramificare. +ici intr n aciune enzima de deramificare, care ndeplinete dou roluri0 desprinde un rest de trei uniti de glucoz 2rest trizaharidic3 pe care(l va transfera pe lanul nvecinat.

11;

enzima de deramificare

enzima de deramificare

!nzima de deramificare funcioneaz ca o transferaz. *n apropierea punctului de ramificare mai e"istp o singur unitate de glucoz. +ceeai enzim de deramificare, dar cu activitate 1(5 glicozidic va desface i acest ultim rest de glucoz. Ilucozo(1(fosfatul rezultat n urma procesului de fosaforoliz se va transforma n glucozo( 5(fosfat, care n ficat, sub aciunea glucozo(5(fosfatazei trece n glucoz, care trece n snge i va servi ca surs de energie prin trecere prin secvena glicolitic. *n muchi nu e"ist glucozo(5(fosfataz, astfel c glucozo(5(fosfatul va trece direct n glicogenoliz 2glicogenul muscular nu poate funciona direct ca surs de glucoz sanguin3.7otui, metabolismul esutului muscular poate contribui la glucoz sanguin indirect, prin aceea c lactatul produs n muchi poate fi convertit la glucoz n ficat. +ceat secven de reacii prin care poart numele de ciclul lui Cori. &eci, degradarea glicogenului la glucoz implic < reacii catalizate de < enzime0 ( ( ( ( fosforilaza, care hidrolizeaz legturile M(1,< enzima de deramificare, care ndeprteaz ramificaiile cu legturi M(1,5 fosfoglucomutaza, care convertete I 1P n I 5P glucozo(5 fosfataza, care convertete I 5P n glucoz.

3 iconeo!ene$a reprezint etapa de formare a glicogenului din resturi de glucoz i glicogen cu uniti mai puine de glucoz 2primer3. *n procesul de formare a glicogenului din glucoz, mai nti glucoza este transformat n glucozo(5 fosfat, din care apoi se formeaz glucozo(1 fosfat. Ilucozo(1 fosfatul reacioneaz cu #7P pentru a forma #&P(glucoza. #&P(glucoza reacioneaz cu o molecul iniial de glicogen pree"istent din metabolismul glicogenului, denumit iniiator 2primer3 pe care vor fi transferate una cte una uniti de glucoz de pe forma activat a aceasteia. Ca nceput se formeaz legturile 1(<((glicozidice sub aciunea glicogen sintetazei 2rol reglator3. Se pornete de la o molecul iniial de glicogen pree"istent din metabolismul glicogenului, denumit iniiator 2primer3, pe care vor fi transferate una cte una uniti de glucoz de pe forma activ a acestuia.
#&P

glicogen 2n3 F #&P(glucoza 2primer3 !S

glicogen 2nF13

8eacia decurge n acest fel pn se leag cel puin 11 resturi de glucoz. &up aceast faz intervine enzima de ramificare, care creiaz legturi 1(5 glicozidice. +ceast enzim desprinde un 11?

rest de ase uniti de glucoz i l transfer pe un lan nvecinat cu apariia unui punct de ramificare. +ciunea combinat a moleculei primer de glicogen, a glicogensintetazei i a enzimei de ramificare duce la formarea moleculei de glicogen.

enzima de ramificare

&eci, secvena de reacii din biosinteza glicogenului cuprinde urmtoarele etape0 ( ( ( ( ( legarea a apro"imativ ; resturi de glucoz la molecula primer de glicogen creterea catenei M(1,< sub aciunea glicogen(sintetazei formarea legturilor M(1,5 de ctre enzima de ramificare creterea ulterioar a catenelor M(1,< de ctreglicogen(sintetaza repetarea etapelor 4 i <.

2e! area .i contro u meta+o ismu ui ! ico!enu ui 2e! area ! ico!eno i$ei ( ( afecteaz n mod special fosforilaza, aceast enzim este supus unui control metabolic variat i comple" realizat att prin modificri de covalen ct i allosterice. Sistemul fosforilaz este alctuit din mai multe enzime0 ( fosforilaza b 2form inactiv3 ( fosforilaza a 2forma activ3 ( alte dou fosforilaze ( bosforilaz(b(Rinaza 2transform forma inactiv b n forma activ a3 ( fosforilaz(b(fosfataza 2catalizeaz reacia invers3

116

epinefrina adenilat ciclaza adenilat(ciclaza

insulina

+%P

glicogensintetaza fosforilata

! P&

+7P

+%Pc

glicogensintetaza defosforilata

proteinRinaza +%Pcinactiva

+7P

proteinRinaza +%Pca

+&P

glucozo(1(fosfat glicogen 2n3 F glicogen 2n(13

+&P fosforilazRinaza b defosforilata

fosforilaza a

fosforilazRinaza a fosforilazfosfataza +7P fosforilaza b

fosforilazfosfataz Rinaza

Ca apariia unui stimul intr n aciune epinefrina care acioneaz pe 8 i determin activitatea adenilat ciclazei, care transform +7 n +%Pc. !ste vorba de o activare n cascad a glicogenului care duce la o amplificare a semnalului iniial. adrena ina

&+I 2diacilgliceride3 $>1==$(81 $>==$ ( 81 $>1=>

/4P42inozitol(4(fosfat3 => P= >= => =P =>

$ele dou ci metabolice, glicogenoliza i giconeogeneza sunt distincte, dar n reglare intervin aceleai mecanisme0 creterea c(+%P afecteaz i procesul glicogenezei, acionnd asupra glicogensintetazei, favoriznd fosforilarea acesteia de ctre proteinRinaz. 8eglarea acestor procese se realizaz nu numai ca +%Pc, ci i n urma interaciunii hormonului 2andrenalin3 cu 81(adrenergici i prin intermediul altor mesageri secunzi 2/ 4P3 /nozitol(4(fosfatul acioneaz prin scoaterea calciului din 8!, creterea tranzitorie a concentraiei intracelulare a ionului de calciu, care poate aciona fie independent, sau cuplat cu sisteme de formare a acestuia sub aciunea altor mesageri. +ciunea poate s fie o aciune rapid, de scurt durat 216(Bs3 ) mai ales cnd se produce un influ" de ioni de calciu din e"terior, sau poate fi o aciune de mai lung durat, n cazul n care aciunea sa este cuplat cu a altor mesageri secunzi 111

2e". inozitol(4(fosfat3. /onul de calciu acioneaz cuplat cu calmodulina, protein cu mare fle"ibilitate conformaional, cu patru domenii similare de legare a ionului de calciu. +tt ionul de calciu ct i calmodulina, separat, sunt inactivi. Prin legare de ion de calciu, calmodulina trece ntr(o conformaie compact activ, capabil s scioneze asupra altor proteine, determinnd la acestea o tranziie cu implicaii n activitatea acestora. #neori calmodulina constituie o parte integrant a unei enzime fosforilazRinaz. Prin creterea concentraiei ionilor de calciu intracelular, calmodulina fi"eaz calciu i duce la transformri conformaionale favoriznd activitatea fosforilazRinazei. Inhi+area ! ico!eno i$ei +%Pc :`+%P

/nsulina este un hormon ce activeaz P&!, favoriznd trecerea +%Pc la :H(+%P, deci inactiveaz glicogenoliza. 1u +ur"ri meta+o ice. &atorit unei deficiene ereditare a sistemului enzimatic implicat n cele dou ci ale glicogenului duc la depuneri masive de glicogen n ficat sau muchi sau depunere anormal de glicogen cu o evoluie blnd sau dramatic 2mortale uneori3. %aladia se numete glicogenoz. !"ist cteva defecte genetice ce duc la stri n care se acumuleaz glicogenul. +cestea au consecine severe asupra sntii esuturilor, n special a ficatului. !le sunt cunscute sub denumirea de boli de stocare a glicogenului.#na din cele mai comune boli se datorete deficienei glucozo(5( fosfatazei i este cunoscut ca tipu & de +oa " de stocare a ! ico!enu ui sau boala 8on 3ier=e. *n acest caz se observ nivel sczut al glicemiei n timpul repausului alimentar i ficat mrit cu un nivel ridicat al glicogenului.

111

114

3 icoproteine .i proteo! icani. Con,u!a%ii ! ucide or Sunt compleci formai prin asociere de glucide cu proteine iAsau lipide, de e"emplu, glicoproteinele, proteoglicanii, lipoproteinele etc. Ilicoproteinele i proteoglicanii sunt compui care se formeaz prin ataarea covalent de lanuri oligo sau polizaharidice la schelete polipeptidice. &istincia se face n raport cu componenta glucidic. 3 icoproteine e sunt formate din lanuri de oligozaharide, de obicei ramificate, unite n proporie variabil cu lanuri proteice. Structura unit"%ii ! ucidice #nitile glucidice pot fi reprezentate de0 ( ( ( ( uniti glucidice0 galactoz, glucoz, manoz oze ,(acetilate 2doi aminoacizi30 ,(acetilactozamina, ,(acetilglucozamina acid sialic 2,+,+ ) ac. ,(acetilneuraminic3 fucoza $>1=> = => >= => ,>($=($>4 ,(acetilglucozamina
$==> >= >1,($(> = >=($(> >($(=> >($(=> $>1=> $==> >==$ >= = >($(=> >($(=> $>1=> => ,>1 $(=> $>1 = >($(=> >1,($(> $(> >($(=> >($(=> $>1=>

$>1=> = >= => => ,>($=($>4 ,(acetilgalactozamina

acid sialic 2,+,+3 O acilarea ac. ,euraminic

11<

$>= >=($(> >($(=> >($(=> >=($(> $>1=> C(galactoza

$>= >=($(> >($(=> >($(=> >=($(> $>4 fucoza

Canurile zaharidice se leag de lanurile proteice prin legtur =( sau ,(glicozidic. &e e"emplu, n colagen 2glicoprotein3 se leag de hidro"ilul lizinei. $>1=> = >= => = = = => $>1(,>1 $> 2$>131 $>($=( ,>

Biosinte$a $omponentele se sintetizeaz separat, dup care se cupleaz formnd glicoproteina. Sinte$a o i!o$aharidei *n sinteza oligozaharidei l are un compus lipofil cu structur poliizoprenic, poliizoprenol O dolichol.

>4$ ( $ O $> ( $>1 ( W$>1 ( $ O $> ( $>1 (Xn( $>1 ( $> ( $>1 ( $>1=> $>4 dolidol Etape e sinte$ei 1. +samblarea lanului oligozaharidic i transferul su pe scheletul peptidic. 1. Prelucrarea glicoproteinei formate n prima etap. 1. 11: $>4 $>4

Do

Rinaza +7P +&P

Do /0

#&P(glu

Do /0/0/3 u

#%P

#&P(,(acetil(gal

#&P

Do /0/0/! u/N/Ac/!a
I&P(manoza

I&P

Do /0/0/! u/N/Ac/!a /man

Do /0/0/o i!o$aharida

lant polipeptidic
oligozaharid transferaza

Do /0/0 ! icoproteina primara Do /0

'. *n etapa a doua are loc prelucrarea enzimatic a glicoproteinelor primare prin eliminarea i adugarea de uniti glucidice sub aciunea unor glicozidaze i a unei glicozil transferaz, ce adaug alte subuniti cu formare de glicoproteine de anumite tipuri. 2o u ! icoproteine or este divers i multiplu. ( ( ( ( ( ( ( 115 rol structural0 ( colagen ( peretele celularL rol de transport ) glicoproteinele ce transport ioni metalici, lipide, vitamine etc. rol lubrifiant i protecie ) mucina rol enzimatic ) factori de coagulare unii hormoni sunt glicoproteine rol n imunitate rol n reacii de recunoatere 2rol receptor3 e". recunoaterea unei bacterii sau a unui

virus. 0roteo! icani. Proteoglicanii sunt compui formai dintr(un lan polizaharidic legat de un lan polipeptidic. *n structura lor ponderea mare o are componenta glucidic 2?:93 polizaharide i :9 proteic. Proteoglicanii sunt specifici celulelor animale i formeaz matricea esutului con'unctiv. Partea glucidic este reprezentat de glicozaminoglicani 2mucopolizaharide3 ) polimeri liniari de natur heteropolizaharidic. *n structura lor intr0 ( he"oze aminate ( acizi uronici &. Acid hia uronic +cidul hialuronic este un polimer linear cu mas molecular foarte mare, fiind format din acid glucuronic i ,(acetilglucozamin, legate alternativ prin legturi P(1,4(glucuronidice i P(1,<( glucozamidinice. S! ntlnete n esutul con'unctiv, piele, corpul vitros, cartilagii, lichid sinovial. Cegturile glicozidice ale acidului hialuronic pot fi hidrolizate de ctre hialuronidaza bacterian, ceea ce duce laalterarea capacitii de filtru selectiv al substanei fundamentale i la e"punerea esuturilor la invazia bacterian. $==> = = => = => $>4$=,>

=> $>1=>

'. Condroitin/su (a%ii sunt glicozaminoglicanii ma'ori din proteoglicanii cartilagiilor, arterelor, corneei, fiind alctuii din acid glucuronic i ,(acetilgalactozamin legate P(1,4( glucuronidic i P(1,<(galactomidinic. ,umrul mare de sarcini negative din molecula condroitinsulfailor i consacr un rol de rini schimbtoare de cationi, avnd un rol important n reglarea homeostaziei matriceicartila'ului i n mineralizarea matricei osoase. ;. Dermatansu (atu este un constituient fundamental al esutului con'unctiv dermic. Se ntlnete n tendoane, valvele cardiace, peretele vascular. <. Heparina >eparina este un glicozaminoglican ce are o serie de particulariti funcionale. >eparina este sintetizat n mastocite i n toate esuturile ce le conin. +ciunea anticoagulant a heparinei s( ar e"plica prin abilitatea acesteia de a accentua aciunea de inhibare a trombinei, manifestat prin antitrombina ///. Cegarea de heparinei la antitrombina /// induce n molecula acesteia o tranziie allosteric ce favorizeaz legarea sa la trombin. >eparina 'oac un rol important i n procesul de clarificare a plasmei prin aciunea de eliberare n circulaie a lipoproteinlipazei din pereii 11B

capilarelor.

= $==> =>

$>1=S=4> = = => = ,>S=4>

$==> = => = =S=4>

$>1=S=4> = => = ,>=$$>4

=S=4>

0ato o!ia meta+o ismu ui ! ucidic &esfurarea normal a metabolismului glucidic este controlat att la nivel molecular prin intermediul enzimelor reglatoare, ct i la nivel superior, de factorii de reglare cum sunt0 hormonii, sistemul nervos. Starea de echilibru a metabolismului glucidic este indicat de glicemie, care reprezint concentraia glucozei din snge. *n condiii fiziologie, la 11 ore de la ultima ingestie alimentar glicemia este cuprins ntre ;6 i 116 mg9. 7ulburprile metabolismului glucidic, mecanism deosebit de comple", se poate manifesta prin hiperglicemii, iar n form mai avansat prin glicozurie 2apariia glucozei n urin3 este diabetul zaharat, care const ntr(o alterare comple" a ntregului metabolism intermediar, ndeosebi a celui glucidic n corelare cu cel lipidic. &iabetul zaharat implic i tulburri endocrine grave, mai ales a secreiei insulinei din pancreas. = alt categorie de tulburri ale metabolismului normal al glucidelor o constituie sindroamele hipoglicemice, care au la baz modificri patologice ale activitii principalilor factori de reglare i control care intervin n metabolismul glucidic, respectiv hormonii pancreatici, insulina i glucagonul. *n patologia metabolismului glucidic sunt ntlnite i boli de depozitare ale glicogenului, numite glicogenoze. +cestea sunt boli congenitale i familiale rare i sunt caracterizate prin depunerea n diverse esuturi i organe a unor cantiti neobinuite de glicogen.

11;

Meta+o ismu a tor he)o$e Meta+o ismu !a acto$ei 3a acto$a este o component a catenei oligoglucidice care intr n constituia unor glicolipide, glicoproteine i proteoglicani.&easemenea intr n compiziia lactozei, care este diglucida din lapte. Ialactoza este un important substrat energetic. Schema metabolizrii galactozei
,+&> F >F ,+&F

du cito

aldoreductaza

!a acto$a

he"oRinaza +7P +&P

!a acto$o/F/(os(at

+7P galactoRinaza 213 +&P

!a acto$o/&/(os(at

UD0/! uco$a

UD0/!a acto$a

! uco$o/&/(os(at

! ico!en

! uco$o/F/(os(at ! uco$a glicoliza

Prima etap n metabolismul galactozei o constituie formarea galactozo(1 fosfatului, sub aciunea unei Rinaze, numit galactoRinaza. CH2 HO O OH OH OH 'a"actoza 11? ATP ADP HO CH2 O OH O OH 'a"actozo? 1 8os 8at P

'a"acto0inaza

*n continuare Ial(1 fosfatul reacioneaz cu #&P(glu i formeaz #&P(gal i glucozo(1 fosfat.

CH2 OH HO O OH O OH !a"1P P
+

CH2OH O OH HO #ri*i" ?

CH2OH HO O OH
+

CH2OH O OH O P OH !1P

trans 8 raza O @DP

O @DP HO OH

OH @DP?'"# @DP?'a"

(i, raza @DP ?'a" @DP ? '"#

+ceste reacii au loc n ficat, motiv pentru care viteza de metaboliare a galactozei reflect capacitatea de funcionare a ficatului. +cest lucru se folosete n practic prin testul de ncrcare cu galactoz. Ca nivelul glandei mamare #&P(galactoza reacioneaz cu glucoza sub aciunea enzimei lactozo(sintetaza i formeaz lactoza.
CH2OH O OH O OH OH OH @DP

CH2OH HO O OH
+

CH2OH O OH HO OH OH

CH2OH HO O "actozo?s int taza OH

O @DP OH

Dismeta+o ii e !a acto$ei +cestea apar ca urmare a deficienei enzimelor care intervin n metabolismul galactoze. Prin deficiena galactoRinazei, prima enzima de transformare a galactozei apare galactozemia. +ceasta duce la acumularea galactozei n snge. +cumularea galactozei n cristalin duce la transformarea acesteia n prezena aldo(reductazei n galactil, care este responsabil de apariia cataractei. Prin absena celei de(a doua enzime 2uridil(trabsferaza3, se acumuleaz Ial(1P, care este un produs to"ic pentru organism. Ca copii lipsa acestei enzime este destul de sever, deoarece #&P(gal nu se mai formeaz. Sugarul prezint tulburri de cretere, iar n lipsa unui tratament pot aprea afeciuni hepatice, boli mintale, cataracta i leziuni ale tubilor renali. Ialactozemia se trataeaz prin e"cluderea galactozei din alimentaie.

146

Meta+o ismu (ructo$ei @ructoza, n urma metabolizrii ei ofer intermediari metabolici cu importan metabolic ma'or, n special ai glicolizei. Pentru a putea fi metabolizat fructoza trebuie s fie n prealabil fosforilat. @osforilarea poate avea loc cu a'utorul unei he"oRinaze 2@5P( calea minor3 sau a unei fructoRinaze @1P( calea ma'or3. @ructoRinaza este o enzim cu afinitae mare pentru fructoz, nu este dependent de insulin i este influenat de natura dietei, astfel c fructoza este un zahr care poate fi folosit de ctre diabetici. @ructozo(1 fosfatul poate fi scindat de o aldolaz 2fructoaldolaza3 la &=+P i gliceraldehid 2nefosforilat3. Iliceraldehida poate s fie la rndul ei fosforilat la gliceraldehid(4 fosfat n prezen de gliceraldehidRinaz sau s fie redus la glicerol, n prezena unei reductaze ce necesit ,+&> F > F. Ilicerolul rezultat poate s fie fosforilat la glicerol(fosfat de o glicerol(Rinaz. Ilicerol(fosfatul la rndul su poate s fie o"idat printr(o reacie de dehidrogenare cu a'utorul unei glicerol( dehidrogenaze cu formare de &=+P. &eci, fructoza se poate integra n glicoliz pe mai multe ci0 calea minor, prin &=+P, prin glicerol(Rinaz i calea ocolit.
NADH+H+ NAD+ ! S orbito" AR NAD+ S o r ?DH NADH +H+ ADP 4AP H1 41 41; ADP 4 1P 4A DO AP !a 3 P T1 (ir#-at ADP AT P !A NADH +H+ ADH NAD + ' "ic ro " AT P !1 ADP ' "ic ro "?3 8o s 8at NAD + NADH+H+ DO AP ATP 4 AT P ADP

!AP

+8( aldozo(reductaza >G( he"oRinaza @G ) fructoRinaza @+ ) fructoaldolaza 141

7G ) tioRinaza IG ) glicerolRinaza

@ructoza se administreaz diabeticilor sub form de perfuzii. @ructoza se transform n mare parte n glucoz, astfel c n circulaia posthepatic a'unge o cantitate destul de mic de fructoz, deoarece se metabolizeaz n glucoz. +pariia M( glicerofosfatului ca metabolit al fructozei, leag metabolismul glucidic de metabolismul lipidic. $alea de formare a fructozei din glucoz prin intermediul sorbitolului se numete calea poliol.

!"#

AR

S or NAD +

NADH+ H+

S o r ?DH?a za 4 + NAD NADH +H+

Aspecte de pato o!ie &eficiena fructoRinazei duce la apariia enzimopatiei numit fructozurie esenial 2nu se fosforileaz fructoza, aceasta se acumuleaz n snge, apoi trece n urin3. &eficiena de fructozoaldolaz duce la acumularea de @ructozo(1P, ceea ce provoac intoleran ereditar la fructoz ;boal Irav3. Sugarul prezint tzlbiurri digestive cu formare de emez, hepatomegalie, icter, uneori moarte. 7ratamentul const n e"cluderea fructozei din alimentaie pentru toat viaa. +dministrarea de fructoz n perfuzii, n cantiti mari, precum i a e"cesului alimentar de zaharoz, duce la ncrcarea sngelui cu fructoz, care stimuleaz sinteza de grsimi i implicit rete lipemia. 0ato o!ia meta+o ismu ui ! ucidic &esfurarea normal a metabolismului glucidic este controlat att la nivel molecular prin intermediul enzimelor reglatoare, ct i la nivel superior de factorii de reglare cum sunt0 hormonii, sistemul nervos. Starea de echilibru a metabolismului glucidic este indicat de glicemie, care reprezint concentraia de glucoz din snge. *n condiii fiziologice, la 11 ore de la ultima ingestie alimentar, glicemia este cuprins ntre ;6(116mg9. 7ulburrile metabolismului glucidic se pot manifesta prin hiperglicemii sau hipoglicemii. $ea mai grav maladie care se manifest prin hiperglicemie, iar n forma cea mai avansat prin glucozurie este diabetul zaharat, care const ntr(o alterare comple" a ntregului metabolism intermediar, ndeosebi a celui glucidic n corelare cu cel lipidic. &iabetul zaharat implic ns i tzlburri endocrine grave, mai ales ale secreiei hormonului insulin din 141

pancreas. = alt categorie de tulburri ale metabolismului normal al glucidelor o constituie sindroamele hipoglicemice, care au la baz tot modificri patologice ale activitii principalilor factori de reglare i control care intervin n metabolismul glucidic, respectiv hormonii pancreatici0 insulina i glucagonul. *n patologia metabolismului glucidic sunt ntlnite i boli de depozitare a glicogenului, numite glicogenoze. +cestea sunt boli congenitale i familiale rare i sunt caracterizate prin depunerea n diverse esuturi i organe a unor cantiti neobinuite de glicogen, cu structur normal i anormal.

144