Universitatea de Stat din Republica Moldova

Facultatea de Biologie si Pedologie

Raport la practica de
specialitate
Realizat n perioada de 16 iunie13iulie

Tema: Obinerea de
metabolii secundari din
biomasa calusal a plantelor
medicinale

Conductorul tiinific: Leanu M

Doctor n biologie Confereniar universitar
A efectuat: aragov Diana
Studenta anului II la specialitatea Biologie

Chisinau 2014

Scopul cercetrii : Elucidarea avantajelor utilizarii culturilor n vitro pentru

obinerea metaboliilor secundari
Obiective:
nsuirea metodelor clasice
Acumularea cunotinelor teoretice, pentru aplicarea ulterioara n
cercetri.
Evidenierea explantelor adecvate nmulirii optimale: mrimea
explantelor i
perioada prelevrii; partea plantei, organul, fragmente de plant; esut sau
celulele
excizate;
Selectarea i testarea reagenilor chimici pentru sterilizarea
explantelor;
Alctuirea compoziiei mediilor nutritive pentru dezvoltarea explantelor
i studierea
acestor esuturi n procesele organogene;
Obinerea calusogenezei sub influena factorilor abiotici;
Evaluarea impactului factorilor exogeni i natura explantelor asupra
organogenezei
in vitro;
Studierea i evidenierea particularitilor biomorfologice ale speciei n
condiii noi
i analiza compoziiei chimice a plantei provenite din cultura in vitro.
Analiza cantitativ i cvalitativ a metaboliilor secundari din biomasa
calusal.
Actualitatea temei:
Dezvoltarea fr precedent a industriilor n ultimile decenii a
impulsionat reevaluarea unor strvechi metode de prelucrare a
produselor agro-alimentare prin mijlocirea industriei i a determinat
nscrierea n circuitul economic a unor tehnologii, care n diferite faze
de prelucrare a materiilor prime s se serveasc de anumite
particulariti ale sistemelor vii. Discutarea diverselor aplicaii n
industrie a tehnicilor bazate pe utilizarea sistemelor vii prezinta o

definire ct mai riguroas a conceptului de biotehnologie i a clasificrii

biotehnologiilor cunoscute astzi i posibil a fi folosite n viitorul
apropiat sau ndeprtat. ntr-un sens foarte larg prin biotehnologie se
poate inelege orice aciune uman, care se sprijin pe mbonarea a
doua procese fundamentale, diferite calitativ: viaa prin diversele
sisteme vii i tehnica, socotit drept un produs al inteligenei umane.
n sensul foarte larg al cuvntului , o serie de ndeletniciri umane ca
agricultura, zootehnia, prepararea diferitelor alimente i butui,
precum i altele snt n fapt biotehnologii. Ele toate mbin naturalul cu
artificialul producnd felurite bunuri necesare vieii omului. ntr-un sens
mai restrns biotehnologia ar nsemna aplicarea metodelor bazate pe
procesele induse de sistemele vii n industria mare (alimentar i de
alt profil) i n micile industrii de servire prompta a populaiei(V.Moses
i B. Rabin, 1982). Altcum spus termenul de biotehnologie se poate cu
precdere aplica numai acelor procedee n care organismele vii, unele
substane elaborate de organismele vii (n special enzimele) sau unele
materii prime puse la dispoziie de organismele vii sunt folosite pentru
producerea de bunuri ntr-o manier industrial prin utilizarea
mainelor i a energiei. Progresele nregistrate n ultimile decenii n
domeniul cercetrii biotehnologiei fundamentale au condus spre
conturarea a celor putin 10 tipuri de biotehnologii , dintre care unele
utilizate curent n producie, altele cu largi perspective de introducere
n viitor.
- Enzimele i producia selectiv de substane n cantiti industriale
- Biotehnologii de producerea coilagenului.
- Utilizarea bacteriilor n recuperarea ieiului din zcmintele srace.
- Biotehnologiile privind cultivarea in vitro a explantelor vegetale:
meristeme, cellule i protoplati.
Culturile in vitro de meristeme se folosesc att pentru obinere de
material liber de viroze, ct i pentru realizarea unei multiplicri clonale
,rapide a explantelor elit.
Introducere:
n prezent 95% din medicamentele utilizate n Republica Moldova sunt
de import. n
legtur cu aceasta a fost elaborat un Concept al Programului de
Stat de cercetare-dezvoltare - ntru ndeplinirea Programului Naional
Medicamentul. Directiva acestui program prevede elaborarea i
implementarea preparatelor farmaceutice noi, n baza utilizrii
materiei prime din plante autohtone i alohtone. Realizarea acestui
program prevede totodat evidenierea, cercetarea i atragerea de noi
specii de plante, care prezint interes tiinific i practic, valoroase
pentru a fi introduse n Republica Moldova i utilizate n domeniul
farmaceutic pentru producerea de materie prim. O metod eficient
pentru obinerea plantelor medicinale devirozate este cultura in vitro.

La momentul actual biotehnologiile moderne, bazate pe culturile in

vitro, sunt utilizate cu succes n cultivarea plantelor utile i
ameliorarea lor.
Calea parcurs de cercetarea biologic n domeniul culturilor de
esuturi i cellule are o istorie de peste 100 ani. Dup lansarea teoriei
unitii structural a lumii vii , elaborat de botanistul Schleiden (1838)
i soologul Schwann (1839), precum i a emiterii ipotezei c celulele
sunt uniti biologice omnipotente Vochting ( incepnd din anul 1878),
a eniiat o serie de studii n care i-a propus s analizeze capacitatea
regenerativ a variate segmente vegetale, de dimensiuni din ce in ce
mai mici, n urma acestor experimente, el a descoperit o caracteristic
comun a acestora, respectiv polaritatea. Vochting a ajuns la concluzia
c limitele capacitii regenerative a fragmentelor vegetale const nu
numai n mrimea explantelor, ci aceast aptitudinea a depins i de
specie. Dar idea posibilei cultivri a celulelor vegetale , izolate din
corpul plantelor, a fost formulat explicit pentru prima dat- de ctre
Haberlandt , ntr-o lucrare publicat de ctre acesta n 1902. El a fost
primul care a iniiat un asemenea experiment. Pornind de la
experimentele lui Vochting , Haberlandt i-a exprimat punctul de
vedere, potrivit cruia nu exist o limit a capacitii regenerative a
explantelor vegetale, n funcie de gradul lor de fragmentare,
elabornd conceptual care, actualmente se afl la baza tehnicilor de
cultivare n vitro a celulelor i esuturilor vegetale, graie fenomenului
denumit toti- sau omnipotenialitatea celular. Tentativele lui
Haberlandt de a cultiva celule i esuturi vegetale a euat , deoarece
nu a luat n considerare meninerea vitalitii celulare i a funciunii
acestora, necesitatea adausului de carbohidrai n mediul de cultur.
De asemenea el nu cunotea unele aspect ce in de anatomia
organelor vegetale, de lipsa lor de autonomie, i a faptului c
procesele de morfogenez, de multiplicare i cretere a celulelor , la
plante, n mod normal, se produc n zonele meristematice.
Experimentele sale au euat i din cauza reetelor, mediilor de cultur
care nu prevedeau adaus de fitohormonisau de regulatori de cretere
(asigur procesele regenerative). Gautheret a fost primul care a
utilizat acidul B- indililacetic (AIA ) n vitrocultur i a obinul n 1937
culturi vegetale cu cretere indefinit. Chimitii francezi Limasset i
Cornuet prin metode serologice au ajuns la concluzia c celulele
meristematice ale plantelor infectate cu viroze snt libere de atac viral.
La scurt timp Wetmore i Morel (1949) au fcut primele culture de
vrfuri vegetative prelevate de la ferigi i de la lupin, cercetri prin
care acetia au pus bazele studiilor referitoare la cerinele
meristemelor n condiii de vitrocultur.

1. Semnificaia biologic a metaboliilor primari i secundari

Metabolismul const din serii strns coordonate de reacii chimice mediate de enzime
care se desfoar n cadrul organismului vegetal, avnd ca rezultat sinteza i utilizarea unei mari
varieti de molecule din categoria glucidelor, aminoacizilor, acizilor grai, nucleotidelor i a
polimerilor derivai de la acestea (polizaharide, proteine, lipide, ADN, ARN, etc.). Totalitatea
acestor procese este definit ca metabolism primar iar compuii respectivi, care sunt eseniali
pentru supravieuirea plantei, sunt descrii ca metabolii primari.
Pe lng metaboliii primari, cu rol major n meninerea viabilitii plantei (proteine,
hidrai de carbon i grsimi), sunt sintetizai i o serie de compui care includ terpene, steroizi,
antociani, antrachinone, fenoli i polifenoli, care aparin aa numitului metabolism secundar.
Metaboliii secundari sunt prezeni numai la anumite specii, adesea manifestnd specificitate de
organ sau de esut, pot fi identificai numai ntr-un anumit stadiu al creterii i dezvoltrii n
cadrul unei specii, sau pot fi activai numai pe parcursul perioadelor de stres, cauzate de pild de
atacul unor microorganisme sau de srcirea nutrienilor. Sinteza lor pare fr semnificaie
direct pentru celula sintetizatoare, dar poate fi decisiv pentru dezvoltarea i funcionarea
organismului ca ntreg. Cu toate c sinteza lor nu constituie o parte indispensabil a programului
expresiei genice i dezvoltrii, aceti metabolii nu reprezint simpli produi catabolici, deoarece
au o structur foarte diversificat i pot fi adesea reinclui n procesele metabolice. De fapt
delimitarea ntre metabolismul primar i secundar este incert, ntruct muli dintre intermediarii
metabolismului primar ndeplinesc roluri similare i n cadrul metabolismului secundar. Astfel,
unii aminoacizi obscuri sunt n mod cert metabolii secundari, n timp ce sterolii sunt compui
structurali eseniali ai multor organisme i n consecin trebuie considerai metabolii primari.
Suprapunerea rolurilor multor compui asigur o interrelaie strns ntre metabolismul primar i
secundar, iar interpretarea delimitrii dintre aceste procese trebuie fcut cu pruden (figura 2).
Ca urmare, dat fiind conservarea lor pe parcursul evoluiei regnului vegetal,
este foarte plauzibil interpretarea c metaboliii secundari ofer un avantaj
selectiv speciilor. De exemplu la speciile la care polenizarea este realizat de ctre
insecte, acestea sunt atrase de culoare, parfum sau de prezena nectarului,
caracteristici datorate metaboliilor secundari. Rolul pigmenilor este evident i n
rspndirea fructelor i a seminelor de ctre psri i alte animale atrase de
culorile vii ale structurilor vegetale. Stigmatele foarte colorate de la Crocus sativus,
utilizate drept colorant alimentar, ca i culoarea rou intens a ardeilor iui
(Capsicum frutescens) i iueala capsaicinei, au efect atractiv sau repelent asupra
animalelor. Iat deci c metaboliii secundari vegetali pot servi ca atractani pentru
polenizatori, pot reprezenta adaptri chimice la stresul factorilor de mediu sau pot
constitui mijloace chimice ofensive, defensive sau protectoare mpotriva
microorganismelor, insectelor , animalelor ierbivore i chiar mpotriva altor plante
superioare (cum este cazul compuilor alelochimici, numii i ierbicide naturale),
fiind evident rolul lor de compui activi n plan biologic, fiziologic i ecologic.
Sunt numeroase exemplele de compui bioactivi din categoria metaboliilor
secundari, dintre care trebuie s amintim n primul rnd nicotina, piretrinele i
rotenona care sunt utilizate ca pesticide i anumii steroizi i alcaloizi utilizai in
industria medicamentelor.
Balandrin i Klocke (1988) au efectuat o evaluare amnunit a efectelor
terapeutice i a valorii comerciale a celor mai importante substane bioactive
extrase din plante, care includ sapogenine steroidale (digoxin i digitoxin), alcaloizi
cu efect anticancerigen (vincristin i vinblastin), alcaloizi beladonici (atropin,
hiosciamin i scopolamin), i numeroi ali compui utilizai n industria
medicamentelor, ca de exemplu: cocain, colchicin, alcaloizi de tip opium,
fitostigmin, pilocarpin, chinin, chinidin, reserpin i d-tubocurarin .

Valoarea metaboliilor secundari utilizai in industria farmaceutic poate

ajunge la mii de dolari per kg. De exemplu alcaloizii de tip opium purificai (codeina
i morfina) au valori de 650 1250 USD/kg iar uleiurile volatile eseniale ca cel de
trandafir sunt evaluate la peste 2000 3000 USD/kg. Alcaloizii extrai din
Catharanthus roseus ating valori de pn la 20.000 USD/g. Aceste preuri ridicate
se datoreaz att metodelor costisitoare de izolare ct i cantitilor extrem de
reduse ce pot fi obinute din sursele vegetale. Astfel, cantitatea de vincristin izolat
din plante de Catharanthus roseus este de aproximativ 0,0003 0,0005 %, fiind
necesare 500 kg de frunze pentru a produce numai 1 g de vincristin purificat,
proces care dureaz mai multe sptmni.
Cu toate acestea, plantele rmn singurele surse de extracie, ntruct muli
dintre metaboliii secundari de interes farmaceutic nu pot fi sintetizai pe cale
chimic, fiind stereostructuri complexe cu muli centri chirali care pot fi eseniali
pentru activitatea biologic.

Metaboliii vegetali primari i secundari de interes economic au cteva caracteristici

comune: majoritatea sunt compui chimici non-proteici, pot fi extrai din materialul vegetal prin
distilare cu aburi, cu solveni organici sau apoi, iar cu excepia biopolimerilor cauciucului
natural, a taninurilor condensate i a unor polizaharide precum gumele, pectinele i amidonul,
sunt compui cu greutate molecular mic (sub 2000 Da).

Tabelul 1. Exemple de compui de interes farmaceutic obinui la scar

comercial din surse vegetale (dup Balandrin i Klocke, 1988)
Clasa de compui

Sursele botanice

Utilizarea terapeutic

A. Steroizi
Hormoni (derivai ai
diosgeninei, hecogenin i
stigmasterol)
Glicozizi digitalici (digoxin,
digitoxin)

Dioscorea sp.,
Glicine sp.

Contraceptivi
orali i ali hormoni
steroizi

Digitalis purpurea,
D. lanata

Cardiotonici

B. Alcaloizi
Alcaloizi beladonici
(atropin, l-hiosciamin,
scopolamin)

Atropa belladonna,
Datura stramonium

Anticolinergici

Alcaloizi tip opium

(codein, morfin)

Papaver somniferum

Analgezici

Reserpin

Rauwolfia serpentina

Antihipertensivi,
psihotropici

Vincristin, vinblastin

Catharanthus roseus

Anticancerigeni

Physostigmin

Physostigma venenosum

Cholinergic

Pilocarpin

Pilocarpus sp.

Cholinergic

Chinin, chinidin

Cinchona sp.

Antimalaric,anti-aritmie
cardiac

Colchicin

Colchicum autumnale

Gut

Cocain

Erythroxylon coca

Anestezic local

d-Tubocurarin

Strychnos sp.,
Chondodendron
tomentosum

Relaxant muscular

2. Interdependena dintre plante i mediul nconjurtor

Plantele n procesul dezvoltrii lor filogenetice s-au adaptat la anumite condiii de via.
Rspndirea geografic a plantelor este determinat de cerinele acestora fa de factorii externi
i de gradul lor de adaptare la condiiile mediului nconjurtor. Plantele nu cresc n mod
hazardant, la ntmplare; ele sunt aranjate n asociaii i comuniti ecologice bine definite. n
timp ce gruprile sau asociaiile ecologice mai mari (pduri, stepe, mlatini etc.) sunt determinate
n mare msur de factorii climatici i edafici, asociaiile mai intime i mai restrnse au vegetaia
diferit n acelai cadru geografic, sub influena acelorai factori climatici i edafici. n acest
ultim caz, pe lng factorii menionai acioneaz i ali factori externi i interni, fapt ce
determin o grupare mai restrns a plantelor.
Pentru ca plantele s supravieuiasc i s dea producii sporite la hectar ele
trebuie s se adapteze condiiilor mereu schimbate ale mediului nconjurtor. Dac
plantele nu se adapteaz mediului lor de via, creterea i dezvoltarea este redus
foarte mult i, ntr-un timp relativ scurt, plantele vor dispare. Pe msur ce unul sau
mai muli factori de cretere nu sunt asigurai la un nivel corespunztor,
omogenitatea condiiilor de via este schimbat i determin limitarea
productivitii plantelor. Dac n cursul creterii i dezvoltrii plantelor apar anumite
condiii nefavorabile, plantele vor suferi anumite dereglri, n funcie de potenialul
de rezisten biochimic i fiziologic de care dispun speciile sau soiurile respective
fa de factorii duntori.
Prin noiunea de rezisten fiziologic se nelege nsuirea organismelor de a
supravieui sub influenele duntoare din mediul nconjurtor i capacitatea lor de
a asigura o desfurare normal a proceselor vitale.
Prin rezisten biochimic se nelege nsuirea organismelor de-a se opune
modificrii sensibile a proceselor metabolice sub aciunea unor factori de mediu
nefavorabili. Plantele reuesc s se adapteze mediului de via schimbat prin

modificarea sistemului lor enzimatic, prin biosinteza unor anticorpi, prin biosinteza
unor inhibitori sau activatori, prin acumularea de substane osmotic active etc.
Plantele sunt considerate ca fiind produsul interaciunii dintre constituia intern i
mediul lor de via. Adaptarea reprezint flexibilitatea (capacitatea) organismului
viu de a crete i a se dezvolta ntr-un mediu de via schimbat.
Adaptarea plantelor se petrece ntr-o perioad de timp mai ndelungat i se
realizeaz complet n decursul mai multor generaii.
Prin aclimatizare se nelege adaptarea plantelor la mediul nconjurtor n cadrul
unui ciclu biologic de via, n timpul vieii individuale a organismelor.

Factorii din mediul nconjurtor care acioneaz asupra plantelor pot fi mprii n cinci
grupe:

1. Factorii climatici, care includ temperatura, intensitatea luminii, lungimea de

und a radiaiilor absorbite, durata de iluminare, umiditatea, efectul sezonal.
2. Factorii edafici. Toate plantele, cu excepia epifitelor i parazitelor, i procur
substanele minerale din sol. n sol se afl, de asemenea, ciupercile ce
formeaz micorize pe rdcinile unor copaci, microorganismele fixatoare de
azot (la plantele leguminoase), ionii unor metale grele toxice, care mpreun
cu excesul de salinitate, excesul de umiditate sau uscciune, determin
stresarea biochimic a plantelor.
3. Poluanii nenaturali. n cadrul acestei categorii de factori se includ poluanii
atmosferici (praf, gaze industriale, gaze de eapament etc.), poluanii apei i
ai solului, urmarea folosirii neraionale a substanelor fitofarmaceutice, a
ngrmintelor chimice i a amplasrii unor obiective industriale i
zootehnice n zonele de cultur.
4. Animalele. Cu toate c ntre plante i animale exist numeroase raporturi de
simbioz (polenizarea, micorize, raporturile n cadrul unor fitocenoze etc.),
ierbivorele sunt ostile plantelor deoarece existena lor depinde de prezena
plantelor furajere. Se cunosc numeroase i diferite mijloace de aprare ale
plantelor fa de aciunea animalelor ierbivore.
5. Competiia ntre plante. Competiia ntre plante se poate realiza att prin
intermediul unor relaii interspecifice, ct i n cadrul unor relaii
intraspecifice.
Plantele conin mult mai muli compui secundari de metabolism dect
animalele. Termenul de plant se refer n ecologie, de obicei, la plantele
superioare, mai cu seam la angiosperme, gimnosperme i ferigi. Ciupercile,
bacteriile i virusurile sunt, n general, denumite ca microorganisme. Algele, muchii
i lichenii sunt mai puin exemplificate deoarece biochimia lor ecologic nu a fost
studiat n detaliu. Repartizarea n mare a compuilor secundari din plantele
superioare este prezentat n tabelul 2.

Prezena unor compui secundari n plante se explic prin faptul c plantele fiind fixate prin
rdcini n sol, nu se pot deplasa i deci nu pot rspunde deschis ca animalele la aciunea
factorilor de mediu. Compuii secundari de metabolism ajut plantele la o mai bun i uoar
adaptare la mediu, la stabilirea unor interrelaii ct mai complexe ntre plante i animale. Peste
45 din compuii secundari de metabolism prezeni n animale sunt de origine vegetal. O parte
din compuii secundari mresc rezistena plantelor la atacul microorganismelor. Unii compui
sun toxici i constituie arme de aprare ale plantelor mpotriva ierbivorelor, insectelor i a altor
duntori.
Tabelul 2. Principalele clase de compui vegetali secundari implicai n
interaciunea dintre organismele vegetale i animale (dup G. Neamu, 1983)

a. Compui cu
azot
Alcaloizi

Numrul
aproxi-mativ

Clasa de
compui

5.500

Distribuirea compuilor chimici

vegetali

Aciunea
fiziologic

Larg rspndii n Angiospermae, n

special n rdcini, frunze i fructe

Majoritatea sunt
toxici, cu gust
amar

Amine

100

Larg rspndii n Angiospermae,

predomon n flori

Majoritatea au
miros respingtor.
Unele sunt
halucinogene

Aminoacizi

400

Sunt n general larg rspndii.

Predomin n seminele
leguminoaselor

Muli sunt toxici

30

Sporadice, n special n frunze i

fructe

Otrvitoare (ca
HCN)

75

Cruciferae i alte 10 familii

Gust amar i acid

1000

Larg rspndite n uleiuri eterice

Plcut mirositoare

600

Predomin n Compositae. Sunt

prezente i n alte Angiospermae

Unele sunt amare,

toxice i alergice

neproteici
Glicozide
cianogenet
ice
Glucozide
b. Terpenoide
Monoterpe
ne
Lactone
sesquiterpen
ice
Diterpene

1000

Larg rspndite n latex i n

rinile plantelor

Unele sunt toxice

Saponine

500

Sunt identificate n peste 700

familii de plante

Produc hemoliza
globulelor
sanguine

Limonoide

100

Prezente mai ales n Rutaceae,

Meliaceae i Simaroubaceae

Gust amar

Predomin n Cucurbitaceae

Gust amar, sunt

toxice

Cucurbitaci

50

Cardenolid

150

Comune n Apocynaceae,
Aschepiadaceae i Scrofulariaceae

Gust amar, toxice

Carotenoid

400

Universal rspndite n frunze,

adesea n flori i fructe

Substane colorate

n
e
e

c. Fenoli

200
Fenoli

Universal rspndii n frunze i

alte esuturi

Aciune
antimicrobian

Universal rspndite n
Angiospermae, Gimnospermae i
Ferigi

Adesea colorani

simpli
Flavonoide

1000

Chinone

500

Larg rspndite, predomon n

Rhamnaceae

Colorani

d. Ali compui

650

Larg rspndite, predomin n

Compositae i Umbeliferae

Unele toxice

Poliacetilen
e

Unii compui secundari ndeplinesc rolul de inhibitori i stimulatori de cretere a plantelor,

alii, cum sunt carotenoidele i flavonoidele, absorb energia luminoas i iau parte n procesul de
fotosintez, att prin cedarea energiei absorbite clorofilei a, ct i prin aprarea clorofilelor i a
altor substane biologic active de degradri fotooxidative. Unele substane secundare determin
gustul i aroma fructelor i legumelor, iar eterii, esterii, substanele terpenice etc., prin mirosul
lor plcut, au un rol important n polenizarea plantelor. Pigmenii, care, de asemenea, sunt
produi secundari de metabolism, au un rol important n reaciile de oxidoreducere. Ei determin
culoarea florilor, fructelor, legumelor, a tuturor organelor plantelor. Au un rol nsemnat n
procesul de polenizare. Industria alimentar, industria farmaceutic, industria cosmetic i cea
textil se bazeaz, n mare parte, pe utilizarea compuilor metabolici secundari din organismele
vegetale.

3. Substanele vegetale de origine secundar

Exist n corpul vegetal o serie de substane organice de o inepuizat
diversitate i mulime, rezultate prin biosintez sau care reprezint produse
intermediare sau finale pe parcursul proceselor catabolice, fr nici o importan
structural, fr rosturi fiziologice fundamentale sau chiar fr nici un rol fiziologic
experimental dovedit. Ele au fost numite, de ctre CZAPEK, substane vegetale
secundare. Aa sunt glicozizii, acizii organici, lipide de secreie, compuii terpenici,
substanele aromatice neazotate, antocianidinele, substanele secundare azotate
(amine, betaine, alcaloizi, compui cianici) etc.
n plante, aceste substane secundare sunt grupate n diferite clase pe baza
structurii chimice i proprietilor asemntoare. Denumirea de substane vegetale
secundare a fost adaptat convenional i se refer la originea i nu la importana
lor. Substanele secundare apar n organismul vegetal n procesele de formare sau
de degradare a substanelor plastice (glucide, lipide, protide). Ele rmn ca atare,
depunndu-se la nivelul esuturilor sau se elimin. Substanele secundare
reprezint deci produse intermediare i finale ale metabolismului. Sunt produi
secundari, cu rol metabolic nc puin cunoscut, cu repartiie foarte neregulat, dar
localizai n zone anatomice bine determinate ale plantei. Rolul lor este important
att n ceea ce privete calitatea alimentar i gustativ a diferitelor produse ct i
interesul tehnic, industrial, agricol, farmaceutic etc.

Datorit frecventelor lor aplicaii industriale i terapeutice, multe din ele au

fost aprofundat cercetate din punct de vedere chimic, dar ele au format prea puin
obiectul unor cercetri fiziologice. La unele din ele se constat sau se bnuiesc
oarecare prestaii de ordin metabolic sau ecologic, cele mai multe din ele ns nici
nu pot fi nc interpretate din acest punct de vedere. n ultimul timp s-a ncercat s
se reconstituie geneza lor n celul, o problem categoric fiziologic i fr ndoial
important att pentru mecanismul ei biologic, ct i pentru funciile de secreie i
excreie, prea puin cunoscute pn acum, ale plantei.
Problema lor s-a ncercat s se elucideze i n perspectiv filogenetic. S-a
constatat de drept cuvnt c ele sunt din ce n ce mai numeroase i mai variate n
procesul evolutiv al regnului vegetal. Alcaloizii de exemplu lipsesc la Talofite, cu
excepia unor ciuperci puine la numr; la ferigi i Gimnosperme sunt excepionali,
la monocotile rari i abia la unele familii dicotiledonate devin frecveni.
Antocianidinele att de generalizate la Fanerogame apar nti abia la un muchi, ca
s nu mai vorbim de varietatea specific de antociani descoperit la indivizii
masculi ai algei Chlamydomonas. Cele mai srace vegetale n substane organice
secundare sunt tocmai Cianoficeele i Cloroficeele. Garniturile enzimatice ale celulei
de asemenea cresc i se diversific pe msur ce ne ndeprtm de aceste grupuri,
astfel c i producia substanelor secundare crete, de ndat ce crete diversitatea
calitativ a proceselor metabolice principale.
Substanele vegetale de origine secundar pot fi grupate n: pigmeni
vegetali, glicozide, lignine, taninuri, uleiuri eterice, rini, balsamuri, alcaloizi,
substane antibiotice, fitoncide, insecticide vegetale etc. Dintre substanele
vegetale de origine secundar se vor prezenta n continuare cele mai importante
din punctul de vedere biologic.

3.1. Pigmenii vegetali

Sunt diferii dup culoarea pe care o dau: clorofila-verde, carotenul-rou-oranj, xantofilagalben, flavonele-galbene, antocianiipigmenii vacuolari ce variaz de la rou la albastru, dup
pH-ul acid sau bazic al sucului celular. Pe lng rolul lor de atragere a insectelor polenizatoare,
ei ocup un loc central ca fotoreceptori n fotosintez i fotoperiodism. Pigmenii vegetali sunt
colorani naturali ai florilor, frunzelor, fructelor i ai esuturilor plantelor. Unii sunt rspndii n
tot regnul vegetal, iar alii se ntlnesc numai n anumite plante sau n anumite organe ale
plantelor. n plante, pigmenii se pot prezenta n stare liber sau form de combinaii cu
holoproteide i glucide, formnd heteroproteide i glicozide. Pigmenii vegetali dau aroma,
gustul i coloritul produselor vegetale. Pigmenii pot intra n constituia coenzimelor redox, unii
snt protectori ai enzimelor i ai activitii enzimatice, reglnd potenialul redox al mediului
biochimic, alii particip direct sau indirect la procesul fotosintezei etc. n funcie de structura
chimic, n general foarte variat, pigmenii vegetali pot fi mprii n mai multe grupe:
pigmenii porfirinici, pigmeni carotenoidici, pigmenii chinonici, pigmeni flavonoidici,
pigmeni indolici etc.
PIGMENII PORFIRINICI (cromoproteidele cu clorofil i hem, ca i cloroglogina,

leghemoglobina, citocromii, catalaz etc.), au rol biocatalitic important. Dintre

pigmenii porfirinici, foarte rspndii n regnul vegetal sunt pigmenii clorofilieni,
reprezentai prin clorofila-a, clorofila-b i derivaii lor de oxidare (oxiclorofile).

Acetia dau culoarea verde i galben verzuie a frunzelor i tulpinilor i particip n

procesul de fotosintez.
PIGMENII CAROTENOIDICI reprezint totalitatea carotenoidelor vegetale. Acetia

sunt pigmenii cei mai rspndii din tot regnul vegetal. n regnul animal, aceti
pigmeni provin din alimente de natur vegetal. Carotenoidele sunt pigmeni
colorai n galben, portocaliu, rou, violet etc. n organismul vegetal se afl n stare
liber sau n combinaie cu holoproteidele i glucidele (carotenoproteide, glicozide
carotenoidice). Pigmenii carotenoidici sunt rspndii n toate organele plantelor cu
sau fr clorofil (frunze, fructe, tulpin, bulb, semine etc.). Coninutul n pigmeni
carotenoidici depinde de natura speciei i de influena condiiilor de mediu (tabelul
3).

Tabelul 3. Coninutul mediu al carotenoidelor din legume i fructe

(dup G. Neamu i Ghe. Cmpeanu, 1983)

PRODUSUL

Carotenoide
mg/100 g
produs

Morcovi

6,0 24,0

Spanac

5,0 6,5

Fasole verde
Mazre
verde
Salat verde
Tomate
Ardei verde
Ardei rou

0,17 0,22
boabe

0,4 1,6

PRODUSUL

Caise
Piersici
Mere
Viine, Zmeur

Carotenoide
mg/100 g
produs
2,0 2,2
0,76
0,3 0,8
0,3

0,2 0,25

Mure

0,3 0,8

1,5 2,0

Fragi

0,3 0,5

pn la 2,5

Lmi

0,4

Prune uscate

0,1

10,0

Datorit structurii de hidrocarbur, pigmenii carotenoidici sunt substane

hidrofobe, solubile numai n solveni organici, uleiuri i grsimi. Din punct de vedere
chimic, pigmenii carotenoidici se caracterizeaz printr-o structur cu legturi duble
conjugate, care determin caracterul nesaturat i deci posibilitatea reaciilor de
oxidare i autooxidare (n prezena aerului), capacitatea de absorbie a unor radiaii
luminoase etc. Rolul biochimic al pigmenilor carotenoidici este determinat de
structura lor chimic i de proprietile menionate mai sus. Carotenoidele, ca i
terpenele, sterolii, fitolul, vitaminele K, vitaminele E etc., au ca unitate structural
repetitiv izoprenul activat, care poate forma catene de hidrocarburi de tip
carotenoidic, steroidic etc. Carotenoidele se mpart n: hidrocarburi carotenoidice i
derivai oxigenai ai hidrocarburilor carotenoidice. Hidrocarburi carotenoidice sunt
carotenoide cu 40 atomi de carbon, cu formula brut C 40H56. Dintre acestea cele mai
importante sunt : licopina, -carotenul, -carotenul, -carotenul.

Licopina este o substan cristalin, de culoare rou-violet, insolubil n ap,

solubil n solveni organici. Este colorantul fructelor i tomatelor.
-Carotenul este o substan cristalin de culoarea cuprului, solubil n
solveni organici. Prin nclzire, -carotenul este posibil s se transforme n caroten. n plante se afl n cantiti mai mici dect -carotenul.
-Carotenul se prezint sub form de cristale violete, solubile n solveni
organici. Este foarte rspndit n tot regnul vegetal nsoind permanent clorofila.
Prin hidroliz enzimatic oxidativ, -carotenul se transform n dou molecule de
vitamin A1. -Carotenul este principala provitamin A.
-Carotenul se prezint sub form de cristale roii cu reflexe albastre, solubile
n solveni organici. -Carotenul este puin rspndit n regnul vegetal. Cel mai mult
se gsete n morcov.

Derivaii oxigenai ai carotenoidelor sunt alcooli, cetone, acizi etc., provenii din
hidrocarburile carotenoidice. Se cunosc foarte muli reprezentani ai acestor derivai dintre care
amintim : xantofilele, cetonele carotenoidice, acizii carotenoidici etc.
XANTOFILELE. Sunt derivai hidroxilici ai hidrocarburilor cerotenoidice. Se
cunosc mai multe xantofile, dintre care cele mai importante sunt luteina i
zeaxantina. Luteina este o substan cristalizat de culoare galben cu luciu violet.
nsoete -carotenul i clorofila n toate plantele verzi. Este colorantul galben al
florilor. Se gsete de asemenea n glbenuul de ou, n esuturile animale i n
special n ovar. Zeaxantina se prezint sub form de cristale portocalii. Structural se
deosebete de lutein prin poziia unei duble legturi ( 2 cicluri -ionice).
CETONE CAROTENOIDICE. Dintre cetonele carotenoidice menionm
rodoxantina i astacina. Rodoxantina este o substan de culoare roie-albstruie,
rspndit n plantele acvatice i n conifere. Este o diceton carotenoidic.
Astacina este o substan de culoare violet. Din punct de vedere chimic este o
tetraceton carotenoidic.
ACIZI CAROTENOIDICI. Dintre acizii carotenoidici, cu mai puin de 40 atomi de carbon,
cei mai importani sunt bixina i crocetina, pigmeni galbeni.
Pigmenii carotenoidici intervin n procesul de fotosintez, avnd un rol att
n absorbirea energiei luminoase ct i n protejarea de autofotodistrugere a
moleculelor de clorofil sau alte substane active (citocromi, peroxidaze, catalaze,
pigmeni flavonoidici, vitamina B12, vitaminele E, vitaminele K etc.). Deoarece pot
fixa oxigenul formnd compui oxigenai puin stabili, pigmenii carotenoidici
intervin n procesele de oxidoreducere. Pot forma metabolii intermediari care s
stimuleze sau s inhibe dezvoltarea plantelor. n organismul animal aceti pigmeni
ndeplinesc rolul de provitamine A. Sunt importani de asemenea pentru aciunea ce
o pot avea n fototropii i fotoaxii. Carotenoidele au utilizri numeroase n industria
farmaceutic, cosmetic, industria alimentar (ca antioxidani i colorani naturali),
zootehnie (furajarea animalelor) etc.

sunt substane care conin n molecul, un nucleu

benzochinonic, naftochinonic, antrachinonic sau fenantrenchinonic cu proprieti
cromofore. Pigmeni chinonici : p-Benzochinona, Naftochinona, Antrachinona, 3,4Fenantrenchinona. Para-chinonele sunt colorani galbeni, orto-chinonele sunt
colorani roii, iar amestecul lor formeaz colorani portocalii. Pigmenii chinonici
combinai cu glucidele sub form de glicozide sunt rspndii n tot regnul vegetal,
n alge, insecte i animale marine. Pigmenii fenantren chinonici se gsesc rar n
natur.
PIGMENII

CHINONICI

Pigmenii chinonici colorai prin reducere trec reversibil n hidrochinone, care

sunt substane incolore. n unele organisme vegetale, pigmenii chinonici apar iniial
sub form de hidrochinone incolore, iar pe msura creterii organismelor, pigmenii
se oxideaz i se formeaz chinone colorate. Prin faptul c se pot reduce reversibil
n hidrochinonele corespunztoare, pigmenii chinonici joac un rol nsemnat n
reaciile de oxidoreducere. Pot ndeplini rolul de transportori de hidrogen
neenzimatici. Pigmenii chinonici intr n constituia unor enzime de oxido-reducere.
PIGMENII BENZOCHINONICI. Se gsesc n cantiti mai mari, sub form de glicozide,
n plantele medicinale, ciuperci i bacterii. Ca reprezentani mai importani sunt: ubichinona,
care intervine n procesul respirator i 2,6-dimetoxibenzochinona, colorant al florilor.
PIGMENII NAFTOCHINONICI. Se ntlnesc n plantele superioare. Spre exemplu,
juglona (5-hidroxil-1,4-naftochinona) se gsete n coaja nucilor verzi. Vitaminele K conin de
asemenea un nucleu naftochinonic, iar vitaminele E un nucleu derivat din naftochinon
(croman). Datorit structurii lor aceste vitamine formeaz sisteme oxidoreductoare ce intervin
n procesele respiratorii.
PIGMENII ANTRACHINONICI. Se gsesc predominant n plantele superioare i n
ciuperci sub form de combinaii (glicozide). Reprezentanii cei mai importani sunt: alizarina,
purpurina i chinalizarina, substane cristaline colorate n rou portocaliu. Cu cationii unor
metale formeaz compleci chelatici folosii ca mordani n vopsitorie. Datorit structurii
chimice pigmenii antrachinonici pot participa la sistemele redox din plant. Pe cale chimic, se
poate trece de la alizarin i chinalizarin la purpurin.
Alizarina - pigment cu structur antracenic, duhidroxilat, utilizat din
antichitate drept colorant. Se gsete n cantitate mai mare n plantele din familiile
Rubiaceae, Ramnaceae, Polygonaceae etc. ct i n ciuperci. Substan solid,
cristalin, de culoare roie, cu p.t. 280 0C i p.f. 4300C, insolubil n ap, dar solubil
n alcool i n soluii alcaline. Reacioneaz cu metalele i formeaz compleci
(chelai) colorai, denumii lacuri, a cror culoare depinde de ionul metalic.
Purpurina - pigment antracenic trihidroxilat, de culoare roie-purpurie, folosit
din antichitate n vopsitorie. Se afl n aceleai familii de plante ca i alizarina. Cu
metalele formeaz compleci ciclici interni (chelai), care diversific nuana culorii.
Ca mordant se folosete Al(OH)3, cu care pigmenii antrachinonici formeaz lacuri.

PIGMENII FLAVONOIDICI. Flavonoidele sunt pigmeni fenolici care conin n

molecula lor un heterociclu piranic sau furanic condensat cu un inel benzenic. De

heterociclu se cupleaz un alt inel benzenic. Inelele au grupri hidroxilice, ceea ce
determin caracterul fenolic al acestor pigmeni.

Flavonoidele sunt pigmeni vegetali care predomin n plantele superioare. Se gsesc n

flori, fructe, frunze, tulpini, rdcini, scoara copacilor etc. n cantitate mic se gsesc n unele

alge, n microorganisme i n unele insecte (flavone). Majoritatea flavonoidelor sunt colorate i

contribuie n mare parte la formarea culorii florilor i a fructelor. Se gsesc n natur n stare
liber, dar mai ales sub form de glicozide.
Sub aspect chimic pigmenii flavonoidici sunt glicozide fenolice, solubile n
ap. Se gsesc n sucul vacuolar i n cromoplaste. Se cunosc 6 tipuri de flavonoide:
flavani, antocianidine, flavone, flavanone, calcone i aurone. Aceste grupe se
deosebesc ntre ele prin felul heterociclului i prin numrul i poziia gruprilor
hidroxilice i metoxilice, legate de inele benzenice.
FLAVANII (cromanii) sunt pigmeni care deriv de la flavan (2-fenilbenzopiran, croman). Ei au n molecul un inel benzopiranic. Au tendin de
polimerizare i formeaz catechine care intr n constituia taninurilor catechinice.
ANTOCIANIDINE I ANTOCIANI. Antocianidinele sunt pigmeni care deriv de
la 2-fenil-benzopiren (2-fenil-cromen). Ei sunt principalii pigmeni care dau
culoarea roie i albastr florilor i fructelor. Se gsesc n natur de obicei sub form
de glicozide, care poart numele de antociani. Cele mai importante antocianide
sunt: pelargonidina, cianidina i delfinidina, care se deosebesc ntre ele prin
numrul i poziia gruprilor hidroxilice de pe inelul benzenic C.
Pelargonidina se afl n florile de mucat, cianidina n florile de cicoare i de
centauree, delfinidina n florile de nemior (Delfinum consolida). n antociani,
glucidele (monoglucidele, diglucidele) se leag de antocianidine (aglicon), de obicei
la hidroxilul de la C-3 de pe heterociclu. n natur predomin antocianii
monoglicozidici, dar se cunosc i antociani diglicozidici. Prin metilarea
antocianidinelor menionate, se obin noi pigmeni cu culori diferite, cum sunt:
peonidina, pentunidina i malvidina.

Antocianii se gsesc n flori singuri i mai cu seam n amestec cu ali pigmeni, formnd
o varietate mare de culori. Florile roz, roii, rou aprins conin predominant pelargonidin, florile
purpurii i viinii conin cianidin. Antocianii sunt solubili n ap i alcool, greu solubili n eter,
benzen i cloroform. Se extrag cu ap sau alcool n mediu de acid clorhidric. Din extractul
obinut, dac se adaug eter, precipit clorura de antocian. Cu acizii minerali antocianii formeaz
sruri de culoare roie, stabile la diluare (spre deosebire de flavone). Antocianidinele cu grupri
hidroxilice nvecinate formeaz cu metalele (Al, Fe) compleci de culoare albastr. Antocianii i
schimb culoarea n funcie de pH, fapt pentru care se utilizeaz ca indicatori acido-bazici.
FLAVONE I IZOFLAVONE. Sunt pigmeni galbeni care deriv de la 2-fenilbenzopiron (2-fenil-cromon) i respectiv de la 3-fenil-benzopiron (3-fenilcromen). n natur, flavonele i izoflavonele se gsesc, de obicei, sub form de
glicozide i sunt larg rspndite. Se cunosc peste o sut de flavone care se gsesc
n flori, fructe, frunze, n lemn i scoara copacilor.
Flavonele i izoflavonele conin pe inelele A i C grupri hidroxilice i
metoxilice. Dac pe inelul heterociclic se afl grupri hidroxilice, pigmenii se
numesc flavanoli i izoflavanoli. Dintre flavonele mai rspndite, fac parte
apigenina, luteolina i quercitrina.
Flavonele sunt substane cristaline, de culoare galben, solubile n ap i
alcool. n mediu alcalin, inelul piranic se deschide i se formeaz dicetone.
Flavonele au maxime de absorbie cuprinse ntre 335-350 nm, iar flavanolii ntre
360-380 nm. Cu metalele, flavonele formeaz compleci. Se dizolv n acid sulfuric
concentrat dnd soluii galbene, datorit formrii srurilor de flaviliu. Flavonele

prezint n ultraviolet dou sau trei benzi de absorbie caracteristice. Ele protejeaz
n organism oxidarea vitaminei C i a adrenalinei. Absorb radiaiile ultraviolete i
protejeaz citoplasma i clorofila de aceste radiaii. Se gsesc n cantitate mai mare
n plantele tropicale i n cele din regiuni montane i alpine. Flavanolii care au un
numr mare de grupri hidroxilice i metoxilice pe inelul A sunt intens colorai n
galben. Aa sunt gosipetina, quercetagetina care imprim culoarea galben florilor
de bumbac, primulelor, numeroaselor compozite. Florile albe au un coninut redus
de flavone i de flavanoli.
FLAVANONE, CALCONE I AURONE. Flavanonele deriv de la 2-fenildihidrobenzo-piron, calconele de la benziliden - aceto - fenon, iar auronele de la
2-benziliden-cumaranon. Flavonele sunt pigmeni incolori (datorit ntreruperii
sistemului cromoformic) care nsoesc flavonele. n mediu bazic se transform n
calcone (prin ruoerea heterociclului), iar acestea n mediu acid se ciclizeaz i refac
flavonele. Prin oxidare se transform n aurone, care au o culoare galben-aurie
intens i se gsesc predominant n florile unor compozite.

Flavanonele, calconele i auronele au de asemenea grupri hidroxilice pe inelele A, C i

chiar pe heterociclu. Ele se gsesc n natur de obicei sub form de glicozide. Auronele i
calconele apar de obicei n flori, iar flavanonele n flori, frunze, lemn etc. Prezena flavanonelor
n organismele vegetale mrete rezistena acestora la atacul insectelor i al microorganismelor.
Ele influeneaz gustul, aroma i stabilitatea unor preparate extrase din plante. Unele flavonoide
se utilizeaz ca substane antioxidante la conservarea grsimilor, altele se utilizeaz ca produse
farmaceutice.
Flavonoidele pot forma n celule sisteme de oxido-reducere, care au un rol
nsemnat n organism. Unele flavonoide sunt folosite ca vitamine P n terapeutic.
Prin diferite reacii de oxidare, reducere, izomerizare etc., diferite grupe de
flavonoide se pot transforma reciproc unele n altele, ceea ce constituie un mare
avantaj pentru plante. n funcie de necesitile din plante, unele flavonoide se pot
transforma n altele, realizndu-se o bun utilizare a acestor pigmeni.

PIGMENII INDOLICI fac parte din grupa pigmenilor azotai. Ei se gsesc n regnul

vegetal sub form de cromoproteide sau glicozide.

Indigoul este un pigment care se utilizeaz din antichitate ca i colorant. Se
gsete sub form de glicozid numit indican, n Indigofera tinctoria, plant originar
din India i n Isatis tinctoria, plant cultivat n Europa. Prin macerarea plantelor n
mediu apos, se produce hidroliza enzimatic a indicanului i se obine indoxilul, care
prin autooxidare va forma indigoul. Indirubina este un izomer al indigoului, numit i
rou de indigou.

Purpura antic este un derivat al indigoului (6,6-dibrom-indigo) care se extrage din

unele molute (Murexbranderia) i servete ca i pigment colorat nc din antichitate. Din grupa
pigmenilor azotai fac parte i melaninele, care sunt pigmeni de culoare nchis, ce se formeaz
din aminoacizi aromatici (fenilalanina i tirozina). Se gsesc n plantele superioare, la animale
vertebrate i nevertebrate, n cuticula insectelor. Tot din grupa pigmenilor azotai fac parte unele
cromoproteine colorate, cum sunt cloroglobulinele, hemoglobulinele, citocromii etc.
Cloroglobulinele au rolul esenial n fotosintez, cel mai important proces de biosintez de pe
pmnt.

3.2. Alcaloizii
Sunt substane organice azotate complexe, produse doar de ctre organismul vegetal, ce
prezint o reacie alcalin mai mult sau mai puin important. Sunt produi finali ai
metabolismului azotat. Se cunosc aproximativ 5000 de alcaloizi naturali diferii. Alcaloizii se pot
localiza n frunze (ceai, coca), semine (cafea), rdcini i scoar, spermoderm (brndue),
"scoara" fructului (mac), canale secretoare, laticifere etc.
n general alcaloizii se caracterizeaz prin structuri heterociclice. Datorit azotului din
molecul, prezint caracter bazic. Sunt substane insolubile n ap i solubile n solveni organici.
Reacioneaz cu acizii minerali i formeaz sruri solubile. n plante se gsesc sub form de
sruri ale acizilor oxalic, citric, malic, fumaric etc. Dau reacii caracteristice de precipitare cu
numeroi reactivi (iodura de potasiu, clorura de platin, acid picric, acid sulfuric etc.).
Exercit efecte fiziologice considerabile asupra omului i asupra animalelor.
Alcaloizii sunt folosii n terapeutic ca narcotice i calmante. Unii alcaloizi sunt
otrvuri puternice, spre exemplu curara, ce are capacitatea de a paraliza sistemul
nervos. Se consider c alcaloizii constituie mijloace de aprare ale plantelor
mpotriva insectelor. Unii alcaloizi, de exemplu nicotina, joac rol n procesele
enzimatice de oxido-reducere.
Plantele productoare de alcaloizi sunt dicotiledonatele, iar n msur mai
mic monocotiledonatele i criptogamele. n general o plant conine mai muli
alcaloizi. Coninutul n alcaloizi depinde de vrsta plantei, regiune, clim i anotimp.
Algele i muchii nu au alcaloizi. Ei sunt rari la ciuperci (ergotamina), la pteridofite
(nicotina de la Equisetum, coniina sporilor de Lycopodium) i la gimnosperme
(efedrina de la Ephedra). La angiosperme, anumite familii sunt reputate prin bogia
lor n alcaloizi : Solanaceae (solanina, nicotina, hiosciamina, atropina .a.),
Rubiaceae (cofeina, ernetina, chinina), Papaveraceae (morfina, papaverina,
codeina, narseina .a.). Alcaloizii mai importani sunt : coniina, nicotina, tropanul,
atropina, cocaina, chinina, papaverina, morfina, codeina, stricnina, cofeina etc.
CONIINA se extrage din seminele de cucut. Este o otrav puternic, care n
doze mari produce moartea prin paralizia centrului nervos respirator. Acest alcaloid
prezint nucleu piperidinic.
NICOTINA ( - piridin - N - metilpirolidina) este principalul alcaloid din tutun. n
cantiti mici este excitant al nervilor centrali i periferici i provoac contracia
vaselor sanguine. n cantiti mari este un toxic puternic. Nicotina este o substan
cancerigen. Este un alcaloid care conine un nucleu piridinic legat de un
heterociclu pirolidinic.
TROPANUL, ATROPINA I COCAINA se extrag din solanaceae, convolvulaceae,
dioscoraceae i eritroxilaceae. Din punct de vedere chimic aceti alcaloizi sunt
esteri ai unor alcooli derivai de la tropan. Atropina acioneaz asupra sistemului
nervos parasimpatic. Ea produce o relaxare a muchilor netezi i se folosete ca
medicament antispasmodic. n cantitate mic dilat pupila, n cantiti mari este
toxic. Cocaina, n cantiti mici este anestezic local, iar n cantiti mari produce
paralizia nervului central.
MORFINA I CODEINA se extrag din opiu. Morfina determin o insensibilitate
la dureri datorit aciunii asupra sistemului nervos central. Codeina nu posed
nsuiri narcotice. n cantitate mic se folosete ca medicament contra tusei.

Codeina are structur chimic similar morfinei cu deosebirea c din nucleul A este
nlocuit hidroxilul cu o grupare metoxilic. Morfina i codeina conin n molecul un
inel fenantrenic parial saturat.
CHININA se extrage din arborele de chinin. Se utilizeaz la combaterea
malariei. Regleaz temperatura corpului uman. Chinina conine n molecula ei un
heterociclu chinolinic.
PAPAVERINA se extrage din sucul lptos al capsulelor necoapte de mac (opiu).
Ea acioneaz direct asupra musculaturii netede. Papaverina conine n molecul
heterociclu izochinolinic.
STRICNINA se extrage din seminele i frunzele plantei numit Strychnos nux
vomica (turta lupului). Este o otrav puternic. n cantiti mici este toxic general
iar n cantiti mari este insecticid. Stricnina conine n molecul heterociclu indol.
COFEINA se extrage din boabele de cafea. Este un excitant al sistemului
nervos central. Cofeina conine n molecul ciclul purinic.

Alcaloizii sunt produi finali de metabolism ai compuilor azotai i constituie mijloace

de protecie i de aprare ale plantelor. n cantiti mici pot fi folosii ca substane farmaceutice,
iar n cantiti mari acioneaz ca insecticide i otrvuri.

3.3. Uleiurile, rezinele (rinile) i oleorezinele

Uleiurile eterice i rinile sunt produi finali ai metabolismului plantelor.
Aceste substane sunt depuse n anumite esuturi ale plantei, pentru a nu afecta
cursul proceselor metabolice. Astfel, pot fi ntlnite n vacuole, pungi intercelulare,
solzi, sub scoar sau la suprafaa scoarei copacilor.
ULEIURILE ETERICE sunt substane lichide, volatile, cu miros parfumat, aromat,
insolubile n ap, solubile n solveni organici sau grsimi. Au rol de condiment, rol antiseptic,
antispasmodic, stomachic etc. Uleiurile eterice se extrag din flori, frunze, fructe, coaj i uneori
din partea lemnoas (lemnul de camfor), folosind solveni organici sau prin distilare i antrenare
cu vapori de ap. Numrul uleiurilor eterice vegetale este foarte mare (peste o mie). Din punct de
vedere chimic, uleiurile eterice reprezint amestecuri de substane constituite din hidrocarburi
terpenice, hidrocarburi aromatice, alcooli, aldehide, cetone, acizi organici, pigmeni, eteri, esteri
etc. Unul i acelai ulei eteric poate conine pn la 50 de substane diferite. Dintre aceti
compui, cei mai importani sunt hidrocarburile terpenice sau terpenele i derivaii lor (mircenul,
geraniolul, limonenul, mentolul, camforul, borneolul etc.).
Mircenul se gsete n hamei, geraniolul n florile de trandafiri, limonenul n
chimion, mentolul n ment, camforul n lemnul de Laurus camfora i n pelin,
borneolul n lavand etc.
RINILE, produse de excreie ale plantelor, apar n deosebi n esutul
lemnos, n amestec cu mici cantiti de uleiuri eterice. Deriv din uleiuri prin oxidare
i se pot combina, dnd oleorezine. Rinile sunt substane solide sau semisolide,
solubile numai n solveni organici. Ele fierb la temperaturi ridicate (peste 300 oC), nu
sunt distilabile i nu au puncte fixe de topire (sufer nmuiere). Din punct de vedere
chimic, rinile sunt formate din acizi rezinici (de tipul acidului abietic) i derivaii
lor, substane policiclice cu caracter acid. Au proprieti stupefiante, purgative,
expectorante, vermifuge. Se pot acumula n celule izolate (idioblaste), n celulele

epidermice, peri, buzunare i canale secretoare. Exemple de rini sunt saczul i

tmia.
BALSAMURILE sunt rini lichide sau semisolide, cu coninut ridicat n uleiuri
eterice (pn la 40%). n contact cu aerul, ca i rinile, i balsamurile se solidific
deoarece o parte din uleiurile eterice din constituia lor se volatilizeaz. Copalii sunt
rini fosile aflate n sol, sub form de depozite care provin din plante disprute.
Lignanii sunt tot rini n care predomin substane nrudite cu elementele
structurale ale ligninelor (monomeri, dimeri etc.). Rina de guaiac care conine
acid guajaritic se gsete n Guaiacum officinalis i este deosebit de bogat n
lignani.
Rinile i uleiurile eterice constituie mijloace de aprare ale plantelor fa de
parazii. Mirosul lor plcut poate atrage unele insecte favorizndu-se polenizarea.
Rinile care se depun pe diferite leziuni ale organismului vegetal au rol protector,
de izolare i de vindecare. Uleiurile eterice sunt importante i datorit utilizrilor
practice n parfumerie, n industria farmaceutic, industria alimentar etc. Rinile
se folosesc n industria textil, la prepararea de lacuri i vopsele, n industria
farmaceutic etc.

3.4. Substane antibiotice

Antibioticele sunt substane cu aciune bacteriostatic (mpiedic nmulirea
microorganismelor) sau bactericid (distrug microorganismele). Dup originea lor se
deosebesc antibiotice de origine microbian i antibiotice de origine vegetal.
Antibioticele de origine microbian. Sunt substane sintetizate de ctre
anumite microorganisme i mucegaiuri. Ele sunt substane folosite ca medicamente
n cazul unor boli provocate de microorganisme patogene la om, animale sau
plante. Ca reprezentani ai antibioticelor putem meniona: penicilina, streptomicina,
cloromicetina, tetraciclina etc.
Antibioticele vegetale (fitoncide). Sunt substane cu proprieti antibiotice
sintetizate de ctre plante. Fitoncidele prezint aciune antibiotic mult mai redus
comparativ cu cea a antibioticelor de origine microbian. Unele fitoncide prezint i
proprieti insecticide fa de numeroase insecte, viermi, roztoare etc. se cunosc
peste 50 de fitoncide extrase din diferite plante, dintre care cele mai importante
sunt: allicina, dihidroallina, acidul benzoic, alil-senevolul etc.
Allicina este un antibiotic volatil extras din usturoi, cu aciune distructiv
asupra bacilului difteric, holerei, stafilococilor etc. Dihidroaliina este un antibiotic
extras din ceap.
Acidul benzoic, acidul p-hidroxil-benzoic, acidul vanilic, acidul cafeic, acidul
ferulic etc., sunt rspndii n numeroase plante superioare (n special n morcovi),
au aciune bacteriostatic, bactericid i antihormonal. Ei mpiedic biosinteza
giberelinelor. Alil-senevolul, se extrage din mutar, hrean, ridichii etc.

Unii alcaloizi i taninurile prezint de asemenea proprieti fitoncide. Plantele

medicinale, florile, rdcinile i tuberculii unor plante (leguminoase, orhidee)
reprezint o important surs de antibiotice vegetale.

3.5. Insecticide vegetale

Unele plante superioare pot sintetiza anumite substane cu aciune
insecticid, care s exercite o aciune de aprare mpotriva insectelor, viermilor,
roztoarelor etc. Din punct de vedere chimic, insecticidele vegetale sunt substane
cu structuri foarte diferite ca : cetoalcooli nesaturai (piretrolona), esteri ciclici
nesaturai (piretrina i cinerina), benzo-pirani (rotenona, care este toxic pentru
animale), glicozide (scilirozida din ceap roie de mare), senevoli (senevolul feniletilenic, extras din sfecl, insecticid puternic, de acelai grad cu aldrinul i
clordanul), amide ramificate nesaturate. Deci plantele superioare au capacitatea de
a sintetiza substane de aprare cu proprieti bacteriostatice, bactericide,
fungicide sau insecticide.
n florile de Chrysantheum cinerariaefolium, Peonia albiflora, Pyrethrum
carneum etc. se gsesc esteri ciclici nesaturai. Prin hidroliza acestora, se formeaz
un cetoalcool nesaturat, piretrolona sau cinerolona i un acid ciclopropan
monocarboxilic, respectiv dicarboxilic.
n unele leguminoase din genurile Derris, Jochocarpus, Tephhrosia, Millelia
etc., se gsesc insecticide din grupa rotennoidelor, ce conin n molecul un nucleu
benzopiranic sau benzopironic. Ele sunt toxice nu numai pentru insecte, dar i
pentru alte animale inferioare i pentru peti.
Prezena fitoncidelor n plante, se poate remarca dac se planteaz, ntr-un
sol ruderal, un pomior i un b, de aceeai grosime cu pomul. Bul se degradeaz
n scurt timp, sub aciunea microorganismelor din sol, n timp ce pomul se apr de
aciunea microorganismelor, prin fitoncidele ce le conine. n timp ce bul se
degradeaz, pomul crete i se dezvolt, sub aciunea factorilor de mediu.

3.6. Lignine
Ligninele sunt substane macromoleculare care nsoesc celuloza n diferite organe i
esuturi ale plantelor. Sunt substane foarte rspndite n regnul vegetal, ocupnd locul al doilea
dup celuloz. Se gsesc n lemnul diferitelor specii de plante n proporie de 21-30% din
materia uscat. Fibrele de in i de cnep sunt srace n lignin, iar cele de iut conin 19%
lignin. n tabelul 4 este dat coninutul n lignine al lemnului de conifere i foioase i al unor
fibre textile.
Ligninele sunt substane ternare, formate din C, H i O, de natur aromatic. Caracteristic
este prezena n molecul a gruprilor metoxil i hidroxil. Substanele constituente de baz din
lignine sunt alcoolii aromatici derivai de la fenilpropan: alcoolul coniferilic, alcoolul
hidroxiconiferilic i alcoolul sinapinic. Ligninele se formeaz prin condensarea acestor alcooli.
Ligninele din diferite plante nu sunt identice, ele difer prin numrul i felul unitilor
structurale. Astfel, n ligninele de foioase predomin alcoolul sinapinic, iar n cele ale coniferelor

alcoolul coniferilic. Masa molecular a ligninelor variaz ntre 700 100.000 Da. Sunt substane
amorfe, de culoare nchis, insolubile n ap, acizi i alcalii diluate. Sunt solubile n acizi tari
concentrai i alcalii concentrate.
Tabelul 4. Coninutul n lignine al lemnului de conifere i foioase i al unor fibre
textile
(dup G. Neamu i Gh. Cmpeanu, 1983)
Materialul
vegetal

Lignine %

Materialul
vegetal

n material uscat

Lemn de
conifere

Lignine %
n material uscat

Mesteacn

19,6-22,2

Brad

25-30

Plop

18,2-20,30

Molid

28-28,5

Stejar

27,3-29,4

Pin

26-29

Fibre textile

Lemn de foioase

Bumbac

Arin

24,3-26,5

Cnep

1,4

Arar

24,1

In

0,8

Fag

21-24,5

Iut

19,0

Ligninele se ntreptrund cu fibrele de celuloz prin legturi fizice ct i legturi chimice

(eterice). Ele confer fibrelor de celuloz o rezisten mrit la aciunea apei deoarece reduc
capacitatea de mbibare, micorndu-le ns elasticitatea. Lignina se separ de celuloz fie prin
dizolvarea celulozei i a substanelor nsoitoare n reactivi adecvai, fie prin dizolvarea lor n
hidroxizi alcalini concentrai i precipitarea ulterioar din soluie. Ligninele se pot recunoate
prin tratare cu o soluie de floroglucin n mediu de acid clorhidric cnd apare o coloraie roie.
Ligninele au un rol nsemnat n formarea humusului cu stabilitate mare,
deoarece rezist la aciunea agenilor chimici i sunt atacate greu de
microorganisme. Ele se utilizeaz pentru obinerea unor materii plastice sintetice, a
negrului de fum i ca nlocuitori ai taninurilor vegetale.

3.7. Glicozide
Glicozidele sunt substane formate din dou componente: o component
glucidic i o component neglucidic, numit aglicon. Componenta glucidic se
leag de aglicon prin legtur glicozidic, prin intermediul hidroxilului semiacetalic.
Componenta glucidic poate fi monoglucid, diglucid sau o oligoglucid.
Predominant se ntlnete glucoza sau oligoglucide ce conin glucoz. Agliconul
poate aparine unor clase de substane extrem de diferite ca alcooli, fenoli, steroli,
tioalcooli, hidroxichinone, pigmeni, substane cu azot etc.

Glicozidele sunt larg rspndite n regnul vegetal. Se gsesc att n plantele superioare: n
frunze, flori, fructe, semine, rdcini, lemn etc., ct i n cele inferioare. Sunt substane solide,
cristaline, incolore sau colorate (n funcie de felul agliconului), cu gust n general amar. Unele
au o arom specific. Glicozidele prezint activitate optic. Majoritatea sunt solubile n ap,
alcool, aceton i insolubile n eter. Nu prezint fenomenul de mutarotaie i nu au proprieti
reductoare. Se hidrolizeaz cu uurin n mediu acid, bazic sau sub aciunea enzimelor.
Numeroase glicozide au aciune fiziologic asupra organismelor animale (curativ sau nociv) i
se ntrebuineaz nc din antichitate ca medicamente sau ca otrvuri. Se presupune c unele
glicozide reprezint pentru plante forme inofensive de depozitare a unor agliconi toxici. Prin
hidroliz parial plantele elibereaz o parte din aglicon n doze netoxice, exercitnd asupra
plantei o aciune protectoare. Unele substane farmacologice active, printre care i glicozidele, n
cantitate mic se utilizeaz ca medicamente, iar n cantitate mare sunt toxice.

Dintre diferitele tipuri de glicozide, cele mai numeroase sunt O-glicozidele,

care se deosebesc ntre ele prin felul glucidei i a agliconului. Dintre O-glicozidele
formate din -glucopiranoz, alcooli i fenoli, menionm arbutina, extras din
Arbutus uva ursi, salicina izolat din Salix helix i coniferina identificat n diferite
conifere. Agliconul acestor glicozide, n ordinea prezentat este hidrochinona,
alcoolul salicilic i alcoolul coniferilic.
n migdalele amare, smburii de caise, piersici, prune, ciree etc., se gsete
amigdalina, care prin hidroliz sub aciunea emulsiei formeaz dou molecule de
glucoz, aldehid benzoic i acid cianhidric. Glicozidele care conin acid cianhidric
sunt substane toxice i se numesc glicozide cionogenice. Unele plante furajere
conin glicozide cianogenetice care prin hidroliz elibereaz acid cianhidric. Aceste
plante consumate n cantitate mare n stare proaspt produc intoxicri la animale.
Prin uscarea sau murarea acestor furaje acidul cianhidric se elimin n mod treptat,
n urma reaciilor de hidroliz enzimatic sau acid i astfel crete calitatea acestor
furaje. n amigdalin, componenta glucidic se afl sub form de gentiobioz, o
diglucid format din dou molecule de glucoz unite prin legtur 1,6- glicozidic. Dintre O-glicozidele steroidice, care au ca aglicon steroli, mai importante
sunt glicozidele cardiotonice i saponinele.
GLICOZIDELE CARDIOTONICE n cantitate mic ntresc muchiul inimii i
produc o mrire a amplitudinii contraciilor. Acestea, administrate n cantitate mare
determin oprirea inimii n sistol. Cele mai utilizate glicozide cardiotonice n
medicin sunt digitalina i strofantina. Aceste glicozide se gsesc n Digitalisa
lanata, D. purpurea, Strophantus kombi, Scilla maritima etc. Agliconul strofantinei
se numete strofantiolin, iar componenta glucidic este o triglucid.
SAPONINELE sunt glicozide steroidice, identificate n peste 80 familii de
plante. Agliconul lor poart numele general de sapogenin. Saponidele sunt
glicozide cu proprieti specifice. Injectate intravenos la om i la animale produc
hemoliz. Au aciune iritant asupra mucoaselor i sunt extrem de toxice pentru
peti. Au proprieti tensioactive i emulsioneaz grsimile. Prin agitare cu ap
formeaz o spum abundent i persistent.

Datorit proprietilor lor, saponidele au numeroase utilizri practice. Sunt folosite ca

ageni de spumare (n extinctoare), detergeni, coloizi protectori etc. Unele saponide se
utilizeaz ca materie prim pentru sinteza hormonilor sexuali i n general a hormonilor
steroidici.

O alt grup de O-glicozide o formeaz glicoalcaloidele, care au ca aglicon un

alcaloid, de regul cu structur steroidic. Dintre acestea se menioneaz solanina
i tomatina. Solanina se gsete n Solanum tuberosus. Ea este format dintr-o
triglucid i din solanidin, ca aglicon. Triglucida se numete solatrioz i este
format din glucoz, galactoz i ramnoz. Tomatina se gsete n Solanum
lycopersicum. Agliconul se numete tomatidin, iar componenta glucidic este o
tetraglucid.
Tot din grupa O-glicozidelor fac parte unele glicozide
carotenoglicozide, glicozide xantonice, glicozide indolice etc.

flavonoidice,

S-glicozidele sunt mai puin rspndite n natur. Ele se gsesc, predominant,

n plante din familia cruciferelor. Dintre S-glicozide, importan alimentar mai mare
o are sinigrina, care se gsete n seminele de mutar negru (Sinapis nigra), n
hrean, ridichii, rapi. Prin hidroliza sinigrinei, sub aciunea mirozinazei, se obin ca
produi finali, glucoza, alilsenevolul i KHSO 4. Senevolii sunt substane cu miros
caracteristic neptor, uneori lacrimogeni, irit pielea i mucoasele. n doze mici,
stimuleaz secreia gastric, n doze mari determin paralizia sistemului nervos. n
mutarul alb se gsete sinalbina. S-glicozidele se pot forma i din tioglucoz, ce
are hidroxilul semiacetalic substituit printr-o grupare tiolic.
N-glicozidele sunt substane larg rspndite n natur. Din aceast grup fac
parte nucleozidele i nucleotidele. Dintre glicozidele cu azot fac parte i glicozidele
cianogenice i glicoalcaloidele, dar la aceste substane legtura glicozidic nu se
stabilete la nivelul atomului de azot, de aceea s-au prezentat la O-glicozide.

3. 8. Taninurile
Taninurile vegetale sunt substane foarte cunoscute pentru multiplele lor
aplicaii practice, n special n medicina tradiional i n industria tbcritului.
Literatura de specialitate amintete de vechi triburi din America de Nord care
foloseau decocturile i cataplasmele preparate din rdcinile unor plante
(cunoscute n prezent ca avnd un coninut ridicat n taninuri, precum crinul de ap
canadian Nuphar variegatum) pentru a trata durerile de gt, leucoreea, rceala,
rnile, durerile interne sau alte infecii ale pielii. Tbcirea pielii cu ajutorul
taninurilor vagatale este cunoscut nc din antichitate i ea era realizat folosinduse coaja diferitelor specii de copaci, n special specii de stejar.

Stabilirea structurii lor moleculare a permis de asemenea stabilirea unor diferene, n ceea
ce privete utilitatea practic, ntre diferitele tipuri de taninuri. S-a ajuns astfel la concluzia c n
special galotaninurile, dar i elagotaninurile, ambele aparinnd clasei de taninuri hidrolizabile,
au aplicaii practice mult mai numeroase dect taninurile condensate.
Din punct de vedere chimic taninurile sunt substane polifenolice (derivai ai
3-hidroxi-flavanului sau poliesteri ai acidului galic) solubile n ap, cu gust
astringent, care prezint reacii caracteristice fenolilor i care precipit cu alcaloizii
i cu proteinele, formnd combinaii impermeabile i imputrescibile (caracteristice
procesului de tbcire a pielii).

Taninurile sunt mult rspndite n natur. Se ntlnesc n cantiti foarte mici

la majoritatea plantelor, iar n cantiti mari se gsesc n scoara, lemnul i frunzele
de stejar, n scoara de arin, molid, plop, nuc, afin, coronite, mangrove, n fructele
unor specii ca Terminalia chebula, Caesalpinia brevifolia etc. Sunt substane
astringente, utilizate ca antidiareice. Dup tipul de legtur dintre polifenoli i acizi
fenolici se deosebesc : taninuri hidrolizabile i taninuri nehidrolizabile sau
condensate.
TANINURI HIDROLIZABILE. Prin hidroliz acid sau n prezena tanazelor,
pun n libertate o oz, de obicei glucoz i acid galic sau un derivat al acidului galic,
ca acid m-digalic sau acid elagic. Taninurile care conin acid galic se numesc
galotaninuri, iar cele care conin acid elagic se numesc elagotaninuri. Din categoria
galotaninurilor fac parte taninul turcesc i taninul chinezesc. O molecul de tannin
turcesc elibereaz prin hidroliz cinci molecule de acid galic i o molecul de
glucoz, iar o molecul de tannin chinezesc elibereaz prin hidroliz nou molecule
de acid galic i o molecul de glucoz. Prin hidroliza elagotaninurilor rezult acid
elagic i glucoz sau acid elagic, acid galic i glucoz. Prin nclzirea galotaninurilor
la temperaturi ridicate se formeaz pirogalol.
TANINURI NEHIDROLIZABILE (CONDENSATE). Nu pot fi descompuse n prile lor
componente dect prin topire alcalin. Ele nu conin glucoz. Taninurile nehidrolizabile rezult
prin condensarea derivailor catechinici i au o structur necunoscut pn n prezent. Prin
nclzire n prezen de hidroxizi alcalini elibereaz pirocatechin (ortodifenol).
Taninurile catechinice sunt foarte rspndite n natur i prezint o mare
importan practic. Pe cale industrial, acestea se extrag din scoara de stejar,
salcm, mesteacn, salcie etc. Spre deosebire de galotaninuri, taninurile
catechinice precipit numai gelatina din piele i nu au proprieti de tbcire. Prin
nclzire sau pe cale enzimatic, mai multe molecule de catechine se condenseaz
i formeaz tanin condensat, cu proprietile taninului natural.
n organismul vegetal, taninurile joac un rol biochimic important. Ele mresc
rezistena plantelor fa de virusuri i microorganisme. De asemenea dau gustul i
aroma unor produse vegetale (ceai, cafea, vin etc.). Practic, taninurile se folosesc la
tbcirea pieilor, fabricarea cernelurilor, limpezirea vinului etc. Tbcirea pieilor cu
taninuri este un procedeu cunoscut din vechime. n procedeele moderne de tbcire
soluia de tanin, obinut din coaja de stejar, este nlocuit de alte substane ca
aldehida formic, sruri de crom etc.
Taninurile au largi utilizri n medicin, n industria pielriei, n medicina
tradiional. n medicin pot fi administrate intern i cu aciune antidiareic,
antimicotic i antiseptic, ca urmare a precipitrii proteinelor bacteriene i fungice.
Administrarea intern se face mai ales sub form de decocturi, n tratamentul
diareei, ulcerului, colitelor i ca antidot n intoxicaii cu alcaloizi.
Administrarea pe cale extern se face prin aplicri locale, pentru tratarea
stomatitelor (sub form de caluton i gargarisme), a arsurilor i a hemoroizilor.
De asemenea, taninurile acioneaz ca: inhibitori ai peroxidrii lipidelor,
captatori de radicali liberi, inhibitori ai formrii de ion superoxid. Au fost descrise
efectele inhibitoare asupra implicrii virusurilor. Acestea se datoreaz denaturrii
proteinelor virale.

Taninurile au efect inhibitor enzimatic manifestat asupra: 5-lipoxigenazei,

enzimei
de
conversie
a
angiotensinei
i
activeaz
hialuronidaza,
glucoziltransferazele microorganismelor implicate n cariogenez. Monomerii i
dimerii au proprieti de vitamin P (cresc rezistena i scad permeabilitatea
capilarelor, cresc tonusul venos, stabilizeaz colagenul).
Taninurile elagice acioneaz asupra mecanismelor imunitare (stimuleaz
fagocitoza), efect evideniat i pentru galatul de epicatechol i galatul de
epigalocatechol.
Din punct de vedere fiziologic, taninurile sunt considerate factori de aprare
ai plantelor mpotriva infeciilor bacteriene i virale (precipit proteinele
microorganismelor), antioxidani (sunt puternic reductori), transportori de hidrogen
(particip la sisteme redox celulare); unii autori consider taninurile substane de
rezerv pentru organismele vegetale ntruct dispar din semine n perioada
ncolirii.

4. Producerea de metabolii n culturi de celule i esuturi vegetale i

potenialul lor aplicativ
n ultimii ani, interesul pentru metaboliii secundari de origine vegetal a
crescut, dat fiind, pe de o parte efectul lor terapeutic, iar pe de alt parte,
caracterul lor natural, n prezent aproximativ 60% dintre medicamentele utilizate
pentru oameni fiind de natur vegetal. Dar utilizarea plantelor nu se rezum numai
la domeniul farmaceutic sau agroalimentar, ci ea se poate extinde la cosmetic i
parfumerie.
Se apreciaz c un numr mare de compui noi sunt identificai anual n
diferite specii de plante, dar este totodat semnalat i rapiditatea procesului de
extincie a speciilor i de ngustare a bazei genetice a resurselor vegetale n lume.
De exemplu, planta Pilocarpus
pabonadi utilizat pentru producerea
medicamentului pilocarpin, datorit colectrii neraionale este n prezent declarat
specie ameninat cu dispariia n Himalaia i a fost nlocuit cu Pilocarpus
microphyllus ca surs de principii farmacologic active (R. GUPTA, 1991). Acest
fenomen a stimulat att reconsiderarea importanei vitale a resurselor genetice ct
i interesul pentru obinerea metaboliilor secundari prin metode neconvenionale.
nc din 1952 J.B. ROUTIEN i L.G. NICKEL au obinut un brevet cu titlul "Cultivarea
celulelor vegetale" demonstrnd cu acest prilej c celulele vegetale pot s creasc
n medii lichide i c aceste celule pot fi utilizate pentru obinerea de compui
chimici utili. Dar abia 30 de ani mai trziu n 1982 Y. FUJITA i colab. au raportat
producerea primului produs natural la scar comercial - shikoninul din culturi
celulare de Lithospernum erythrorhizon.
n ultimii ani numeroase cercetri au fost dedicate producerii de compui utili
prin culturi de esuturi vegetale. Ca urmare s-au nregistrat progrese tehnologice
remarcabile, astfel c n prezent studiile bazate pe culturi de celule i esuturi se
desfoar att la nivel fundamental ct i sub forma cercetrilor aplicative care

utilizeaz culturi la scar larg, industrial, pentru producerea comercial a

metaboliilor secundari.
Deoarece sinteza lor nu constituie o parte indispensabil a programului
expresiei genice i dezvoltrii, aceasta poate fi modelat att prin modificri ale
materialului genetic ct i prin modificri ale mediului sau prin utilizarea unor
substane cu rol de semnal pentru declanarea cii biosintetice respective (M.
LUCKNER, 1982; K. LINDSAY i M.G.K. JONES, 1989).

Tehnicile "in vitro" i propun stimularea exprimrii complete a unor secvene metabolice
care au ca rezultat sinteza unui metabolit dorit, fapt ce ofer importante avantaje economice prin
posibilitatea realizrii sintezei la scar industrial, n bioreactoare, ca i prin dirijarea selectiv a
unor anumite secvene biosintetice, n funcie de scopul urmrit (B.E. ELLIS, 1982). De regul
speciile vegetale productoare de compui secundari cresc numai n anumite zone climatice, iar
sinteza acestor metabolii cu structur complex pe cale artificial este neeconomic, dificulti
care conduc la fluctuaii considerabile ale materiei prime i implicit ale preului de cost. n plus o
serie de reglementri elaborate n multe ri limiteaz utilizarea produselor sintetice n special ca
aditivi alimentari sau medicamente. Intensa concentrare a cercetrilor efectuate n diferite
laboratoare din lume n scopul utilizrii culturilor de esuturi i celule vegetale ca surse
poteniale de metabolii utili poate fi explicat prin avantajele importante oferite de acestea, ca de
pild:
metaboliii utili pot fi obinui n condiii controlate de mediu, n flux
continuu, indiferent de factorii climatici sau de nsuirile solului;
culturile celulare sunt necontaminate cu microbi i insecte;
celulele oricrei plante, tropicale sau alpine, pot fi uor multiplicate n
scopul producerii metaboliilor specifici;
controlul automat al creterii celulare i reglarea proceselor metabolice
contribuie la reducerea costului forei de munc i la mbuntirea
productivitii;
ciclurile biosintetice ale culturilor celulare n bioreactoare sunt mult mai
rapide dect cele ale plantei n condiii naturale. De exemplu n cazul sikoninului
un ciclu de producie n bioreactoare dureaz cteva sptmni, n timp ce
numai plantele n vrst de 5 ani sunt recomandate pentru extracia produsului
farmaceutic (A.W. ALFERMANN i M. PETERSEN, 1995);
prin selecie clonal i mutagenez se pot izola linii celulare care
sintetizeaz metaboliii secundari n cantiti chiar mai mari dect cele prezente
n organele specializate ale plantei intacte (M. TABATA, 1977);
culturile celulare n suspensie pot fi utilizate i pentru biotransformarea
unor substraturi pentru obinerea unor noi compui neidentificai n natur sau
pentru producerea unor enzime utilizabile n sinteza chimic a compuilor
naturali (K. HERBERS i colab., 1995).

0 analiz efectuat de specialitii japonezi privind metodele brevetate, ncepnd cu anul

1975 pentru producerea de compui utili prin culturi de esuturi i celulele vegetale, au evideniat
o cretere semnificativ a numrului acestora, n special n domeniul produselor farmaceutice.
n l977 M. H. ZENK i colab. au publicat o strategie menit s contribuie la
obinerea n cantiti crescute a compuilor chimici naturali prin culturi de celule
vegetale care n esen stabilete parcurgerea urmtoarelor etape:
1. - testarea i selecia unor plante iniiale caracterizate prin capacitate crescut
de acumulare a compusului natural urmrit;
2. - stabitirea culturilor de calus de la plantele donor selectate;
3. - analize chimice pentru stabilirea concentraiei produsului natural n culturile
de calus;
4. - stabilirea de culturi celulare n suspensie;

5. - analize chimice la nivelul liniilor celulare n suspensie;

6. - selecia de linii celulare nalt productoare prin clonri unicelulare ca
rezultat al variabilitii somaclonale sau al unor tratamente mutagene;
7. - obinerea de linii celulare nalt productoare stabile n bioreactor;
8. - ameliorarea producerii de metabolii secundari prin optimizarea
parametrilor de cultur fizici i chimici.

Cu toate c aceast strategie a fost adoptat i utilizat de numeroi specialiti, obinerea

la scar comercial a unor astfel de compui prin culturi de celule i esuturi se limiteaz la
cteva produse.
O dificultate major se semnaleaz de diveri autori const n instabilitatea liniilor
celulare n ce privete acumularea de metabolii secundari i faptul c parametrii optimizai
individual n faza de laborator nu acioneaz sinergic i nu conduc la rezultate reproductibile n
bioreactoare cu volum mare (A.W. ALFERMANM i M. PETERSEN, 1995). Utilizarea eficient
a culturilor celulare n scopul producerii de compui secundari, implic satisfacerea urmtoarelor
condiii:
rata creterii celulare i a biosintezei trebuie s fie suficient de ridicat
pentru a se obine o cantitate semnificativ de produs final ntr-o perioad de
timp;
culturile trebuie s fie stabile genetic pentru a produce cantiti ridicate
de metabolii secundari n mod constant;
metaboliii s se acumuleze n celule fr a fi catabolizai rapid sau,
preferabil, s fie eliberai n mediu lichid;
preul produciei, incluznd costul mediului de cultur, precursorii i
extracia chimic, s fie suficient de sczut pentru a fi profitabil (M. TABATA,
1977).

Pentru rentabilizarea acestor tehnologii n sensul reducerii cheltuielilor de producie, se

au n vedere dou obiective: creterea productivitii culturilor celulare i creterea produciei pe
unitatea de volum a culturilor din bioreactoare. n acest scop se procedeaz la selecia de linii
celulare nalt productoare de la nivelul micilor agregate celulare sau la clonare unicelular,
corelate cu optimizarea compoziiei mediului de cultur pentru a stimula capacitatea maxim a
celulei de a produce metabolitul de interes.
0 contribuie important la depirea limitelor prezente n acest domeniu este ateptat de
la experimentarea unor strategii recente dintre care deosebit de promitoare par a fi: tehnica de
cultur a esuturilor i organelor difereniate (ca de exemplu a lstarilor multiplii sau a
rdcinilor transformate cu Agrobacterium), biotransformarea precursorilor n compui de baz
i stimularea biosintezei prin utilizarea unor elicitori (Y. FUJITA, 1990).
Dei celulele din culturi posed ntregul potenial biochimic al genomului plantei ntregi, adesea noile
condiii de mediu determin modificri ale metabolismului, exprimate prin tipul i cantitatea metaboliilor
sintetizai, pn la dispariia total a unora dintre acetia sau la formarea unui compus cu totul nou. Trebuie deci
precizat c incapacitatea unor culturi de a sintetiza anumite substane nu este rezultatul pierderii potenialului
biochimic, ci a faptului c acesta nu se poate exprima n anumite condiii, pe parcursul diferenierii biochimice i
citochimice (L. MERAVY, 1987). Instabilitatea capacitii biosintetice caracteristic culturilor celulare poate fi
i consecina unor modificri la nivelul materialului genetic, att intercromozomale, exprimate prin aneuploidie
i poliploidie, ct i restructurri intracromozomale, care au ca rezultat modificri ale tipului de expresie genic
(M. J. C. RHODES i colab., 1987). Dar tocmai heterogenitatea caracteristic sistemelor celulare "in vitro" a fcut
posibil selecia unor linii celulare de un deosebit interes practic ca de pild celule fotoautotrofe (HUESEMANN i
BARZ, 1977; YAMADA i SATO, 1978; YASUDA i colab., 1980); celule rezistente la factori de stress (PALMER i
WIDHOLM, 1975; MALIGA i colab., 1976; NABORS i colab., 1980); celule nalt productoare de vitamine
(YAMADA i WATANABE, 1980; NATSUMOTO i colab., 1980; WATANABE i YAMADA, 1982) celule nalt
productoare de pigmeni (KINERSLY i DOUGALL, 1980; YAMAMOTO i colab., 1982); celule productoare de
alcaloizi (ZENK i colab., 1977; OGINO i colab., 1978; YAMADA i HASHIMOTO, 1982).

Meninerea unor linii celulare caracterizate printr-o productivitate ridicat i

stabil de metabolii secundari poate fi realizat prin modificarea compoziiei
mediului de cultur, a parametrilor fizici, prin inducerea, identificarea i selecia
unor clone derivate de la celule cu capacitate sintetic ridicat. n acest mod s-a
reuit de pild producerea unor cantiti ridicate de ajmalicin, folosit ca
medicament antihipertensiv, din culturi celulare de Chatarantus roseus, ca i

cultivarea la scar comercial a celulelor de Lithospermum erythrorhizon, pentru

producerea pigmentului rou ca aciune antiinflamatoare shikonin, obinndu-se o
cretere a productivitii de la 0,4 la 23% substan uscat.
Tot n acest scop s-a experimentat suplimentarea mediului de cultur ca
anumii precursori (compui intermediari ai procesului biosintetic), fapt ce are ca
rezultat n final producerea metabolitului secundar specific, n situaia n care
cultura celular posed competena bioconversiei intermediarului respectiv i deci
reactivarea activitii biosintetice.
Pe de alt parte nc din anul 1974 COSTABEL i colab. au sesizat c sinteza
i acumularea metaboliilor secundari sunt dependente de unele procese biochimice
i structurale care se petrec la nivelul esuturilor cultivate "in vitro". Este bine
cunoscut faptul c o serie de compui secundari se acumuleaz n anumite esuturi
i organe specializate, cum sunt rdcini, fructe, lstari, saci glandulari, canale
pentru uleiuri eterice, etc. De exemplu nicotina i alcaloizii nrudii sunt sintetizai n
sistemul radicular al plantelor de tutun, dar sunt transportai i se pot acumula
predominant n prile aeriene ale plantei. Capsaicina este sintetizat i se
acumuleaz ntr-o anumit faz a dezvoltrii fructelor de Capsicum frutescens,
enzima-cheie fiind activ numai n esutul placentar. Uleiul eteric al mentei se
acumuleaz n celulele glandulare din frunze, iar cel de mueel n capitule. La
Datura ferox hiosciamina este sintetizat n rdcini de unde este transportat n
frunze. Pe traseul parcurs spre situsul de depozitare hiosciamina este apoi oxidat
n scopolamin.

Este deci evident c n multe cazuri biosinteza i biotransformarea metaboliilor secundari sunt
corelate cu diferenierea morfologic i c aceste fenomene sunt nscrise n genomul speciilor.
S-a constatat c i n cazul culturilor de esuturi i celule de la unele specii,
biosinteza metaboliilor specifici este n mod obligatoriu corelat cu un anumit nivel
al diferenierii celulare i tisulare (H. A. COLLIN i M. WAT'I'S, 1984).
Se cunosc numeroase exemple cnd celulele aglomerate n agregate
sintetizeaz produsul caracteristic speciei n timp ce suspensiile celulare fine nu
realizeaz sinteza.
n alte sisteme de culturi celulare organizarea multicelular sub form de
embrioni somatici, lstari sau rdcini, favorizeaz sinteza i acumularea
metaboliilor secundari, probabil datorit limitelor impuse diviziunilor celulare de
condiia multicelular, n care exist gradieni ai nutrienilor, oxigenului i presiunii
mecanice. Din aceast categorie fac parte de pild speciile la care n condiii
naturale acumularea metaboliilor secundari se realizeaz n rdcini, ntre care i
Rubia tinctorum.
0 tehnic apreciat ca avnd un potenial superior pentru producerea
anumitor metabolii secundari "in vitro", bazat pe corelaia dintre organizarea
structural i acumularea produilor secundari utilizeaz sistemul de transformare
cu Agrobacterium rhizogenes. Rspunsul fenotipic determinat de inseria ADN-T al
plasmidei Ri n genomul plantei const n proliferarea rapid de rdcini la situsul
de infecie, care pot fi detaate i cultivate pe perioade nelimitate, n scopul
producerii metaboliilor specifici. Aceste rdcini pstreaz caracteristicile

biosintetice ale plantei de origine, la care metaboliii secundari se sintetizeaz i se

acumuleaz n rdcini.

n figura 3 sunt prezentate diferite modaliti de obinere a metaboliilor secundari, dar

ele trebuie s in cont de:
aprovizionarea cu plante, n vederea unei eventuale extracii;
facilitatea sintezei sau a hemisintezei chimice;
capacitatea microorganismelor de a produce compuii de interes.

Extracia plecnd de la plante

Produsul int urmrit

HemisintezSintez
chimic
Celule vegetale
Extracie,
Sintez, Hemisintez
in vitro
Producia cu ajutorul
microorganismelor

Teste aprofundate

Selecia suelor productoare

Cercetarea noilor produi

Biotransformare

Trecere la nivel industrial

Sue morfogenetice

Rdcini transformate

Elicitare

Reactoare
enzimatice

Conservare

Clonare de

gene

Producie de enzime

-celule libere
-celule imobilizate
Figura 3. Posibiliti de producere a metaboliilor secundari (dup G. Freyssinet, M.Lebrun,
B. Pelissier i
T. Hardy, 1993).

Dac nici una dintre aceste ci nu este posibil sau dac ele sunt limitate, se
va putea realiza producia substanelor cercetate de ctre culturile celulare
vegetale in vitro, evitndu-se concepia conform creia acest procedeu poate fi lung
i riscant. Numeroasele avantaje ale aplicaiilor culturilor celulare vegetale in vitro
contrazic aceast concepie:

Prin valorificarea potenialului de biosintez sau de biotransformare

se pot obine produi noi (domeniul farnaceutic);
Eticheta produs natural permite cucerirea unei pri rentabile de
pia, fa de produii de sintez.

5. Manipularea genomului prin aplicarea tehnologiei ADN

recombinat
Perfecionarea tehnicilor moleculare fac posibil modificarea genomului celulelor
vegetale i n scopul dirijrii anumitor procese metabolice responsabile de sinteza unor
metabolii secundari de interes. n acest context, manipulrile genetice vizeaz trei aspecte:
reglarea aciunii genelor codificatoare pentru enzime-cheie pe
parcursul procesului dezvoltrii;
introducerea de gene noi;
reglarea aciunii unor gene specifice prin utilizarea tehnologiei ARN
antisens.
Este cunoscut faptul c metabolismul secundar este puternic influenat de factori
ai mediului, precum lumina, elicitorii sau rnirea mecanic. Totodat s-a demonstrat
c muli metabolii secundari prezint specificitate de organ, de esut sau chiar
pentru un anumit tip de celul, care poate constitui situsul sintezei sau al depozitrii
compusului respectiv. Identificarea unei gene reglatoare specifice creeaz
posibilitatea activrii acesteia pentru a realiza sinteza unui metabolit care nu este
produs n condiii normale n populaia celular n cauz.
Fezabilitatea acestei abordri a fost demonstrat n 1995 de ctre Facchini i de
Luca, n urma cercetrilor ntreprinse pentru studiul corelaiei dintre dezvoltarea

plantelor de Papaver, diferenierea celular, expresia genelor pentru biosinteza de

alcaloizi i acumularea alcaloizilor specifici. S-a demonstrat astfel c expresia
difereniat a genelor TYDC (tirozin/dopa decarboxilaz) i acumularea de alcaloizi
cu specificitate de organ sugereaz o reglare coordonat a genelor care controleaz
biosinteza alcaloizilor n concordan cu procesele dezvoltrii, fapt ce reliefeaz
posibilitatea reglrii metabolismului secundar prin intermediul enzimelor cheie.
Introducerea unor noi gene sau utilizarea unui promotor puternic pentru supraexpresia genelor care controleaz producerea unor enzime de tip slbatic
reprezint o alt modalitate de manipulare a metabolismului secundar. Aceast idee
a fost dezvoltat de ctre Meyer i colaboratorii (1987) pentru a studia biosinteza
antocianilor, prin introducerea n celulele de Petunia hybrida a unei gene de la
porumb, codificatoare pentru DQR (dihidroquercitin-4-reductaza), o enzim care nu
este n mod normal implicat n biosinteza flavonoizilor la Petunia.
Aceast enzim a utilizat metabolitul endogen dihidrokaempferol ntr-un proces
biosintetic nou care a avut ca rezultat producerea de leucopelargonidin. Acesta a
fost la rndul lui convertit n pigmentul rou pelargonidin, care nu se acumuleaz n
condiii normale n Petunia.
Supra-expresia unor activiti enzimatice poate conduce la un flux crescut de
precursori i n consecin la acumularea n cantiti sporite a unor compui.
Aceast ipotez a fost verificat de ctre Napoli i colaboratorii (1990), prin
introducerea n Petunia a unor extra-copii ale genelor codificatoare pentru CHS
(chalcon-sintaz) i DFR (dihidroflavonol-4-reductaz), sub controlul transcripional
al unui promotor puternic CaMV35S.
n mod surprinztor, au constatat c un numr crescut al copiilor genelor nu a
condus la accentuarea pigmentaiei, ci dimpotriv la reducerea acesteia, datorit
unui nivel redus al transcrierii att al genelor strine ct i al celor native (chs i
dfr).
Studii similare au ntreprins i Eikind i colaboratorii (1990), ncercnd s induc
supra-expresia unei gene PAL de la fasole ntr-o plant transgenic de tutun,
spernd c n acest fel acestea vor acumula un coninut crescut n lignin. n
realitate, s-a constatat ns o reducere a cantitii de lignin i de fenoli solubili, i
n consecin a devenit evident faptul c sunt necesare mai nti cercetri
aprofundate n domeniul reglrilor metabolice pentru ca aceast abordare s poat
fi utilizat cu succes pentru a stimula acumularea unor compui secundari n
culturile de celule vegetale.
Prima ncercare de a manipula metabolismul secundar prin utilizarea tehnologiei
ARN-antisens pentru reglarea activitii unor gene specifice aparine lui Krol i
colaboratorii (1988) care au experimentat manipularea genetic a culorii la Petunia
hybrida. n acest caz, pigmenii aparin grupului flavonoizilor, i un numr de gene
codificatoare ale enzimelor implicate n biosinteza flavonoizilor au fost izolate i
caracterizate.
n mod special, CHS (chalcon-sintaz), prima enzim a cii fenilpropanoidice care
conduce la biosinteza autocianilor, a fost identificat ca o int pentru manipulri
genetice. Prin transformarea plantelor de Petunia cu gene antisens chs (menit s

blocheze expresia complet a genei) s-a constatat c pigmentaia de tip slbatic a

fost perturbat i a rezultat o gam de transformani cu diferite niveluri i tipuri de
pigmentaie, fapt ce demonstreaz potenialul important al acestei abordri.
Progresele nregistrate n ultimii ani n domeniul tehnicilor moleculare i
ingineriei biochimice dau garania obinerii unor succese remarcabile n producerea
de compui utili n culturi de celule vegetale, cu att mai mult cu ct identificarea
unor compui deosebii de valoroi (cum este de exemplu Taxolul), care pot fi
produi la parametrii optimi numai n culturi celulare, a dat un nou impuls
reconsiderrii importanei culturilor celulare vegatale, ca surse eficiente de compui
de interes practic deosebit.

Concluzii
n secolul urmtor, caracterizat drept era biotehnologiilor , strategiile
biotehnologice vor determina schimbri ample, prin noi dimensiuni ale eficienei i
productivitii n numeroase domenii economice.
n cadrul noilor biotehnologii, tehnicile moderne de culturi de celule i
esuturi vegetale ofer poteniale relevante de aplicabilitate n unele domenii
biotehnologice competitive, viznd obinerea unor medicamente, produse
alimentare, pigmeni naturali alimentari sau industriali, arome alimentare sau
cosmetice etc.
Interesul pentru obinerea metaboliilor secundari prin metode
neconvenionale este stimulat de pronunata descretere a resurselor vegetale
consacrate, ca urmare a perturbrii echilibrului mediului natural, a exploatrii
nelimitate a acestor resurse, a creterii costului forei de munc i dificultilor
tehnice i economice n cultivarea plantelor din flora spontan.
Ca impact socio-economic, nmulirea prin culturi in vitro permite
adaptarea rapid la cerinele pieii, aplicarea biotehnologiei respective oferind
posibilitatea nceperii unei activiti profitabile prin obinerea unor venituri
substaniale n urma aclimatizrii i certificrii materialului sditor propus n condiii
aseptice, n timp scurt, pe suprafee de teren restrnse.
Cercetrile ntreprinse au adus un plus substanial de informaie
tiinific privind valorificarea pe ci neconvenionale a potenialului
regenerativ al celulei vegetale, ca expresie a totipotenei morfogenetice i
biochimice.
Acestea s-au concretizat n tehnologii reproductibile i eficiente de
regenerare in vitro de la diferite explante somatice att n scopul
microclonrii unor genotipuri, ct i n scopul stabilirii de culturi celulare
productoare de metabolii secundari de interes industrial.
Obinerea unor rezultate pozitive reprezint primul pas n elaborarea unor metode aplicabile la scar
industrial, necesare n industria alimentar, farmaceutic, textil sau cosmetic.