Micro General A

MICROBIOLOGIE GENERALA
Gr. Mihaescu, Carmen Chifiriuc, Lia Mara Ditu

CUPRINS
Prefa
Cuvnt nainte
Introducere
Evoluia microbiologiei ca tiin
Diviziunile microbiologiei
Importana practic a microorganismelor
Poziia microorganismelor in sistemele de clasificare a lumii vii
Criteriile de evaluare a diversitii bacteriilor
Clasificarea lumii vii n 3 domenii pe baza criteriilor moleculare
Caracteristicile distinctive ale organismelor celor trei domenii
Tipuri morfologice de bacterii
Capitolul I. STRUCTURA i FUNCIILE CELULEI BACTERIENE
Peretele celular
Structura molecular a peretelui celular la bacteriile Gram pozitive
Peretele celular la bacteriile Gram negative
Peretele celular la Archaea
Peretele celular acido-rezistent al micobacteriilor
Stratul S
Funciile peretelui celular
Protoplatii
Spaiul periplasmic
Membrana plasmatic
Membrana archaea
Funciile membranei plasmatice
Difuzia i transportul moleculelor n celul
Difuzia pasiv
Sisteme de transfer cu molecule purttor
Difuzia facilitat
Translocaia de grup
Transportul activ
Ttransportut ionilor
Aparatul fotosintetic
Mezosomul
Citoplasma
Echilibrul osmotic al celulei
Echilibrul osmotic la bacteriile halofile
Nucleoidul bacterian
Organizarea fizic a cromosomului
Replicarea ADN bacterian
Ribosomii
Particularitile sintezei proteinelor la bacterii
Secreia proteinelor extracelulare la bacterii
Sporul
Structura intern a endosporului
Particularitile biochimice ale sporului
Semnificaia biologic a procesului de sporogenez
Formarea sporilor de multiplicare la actinomicete
Vacuolele cu gaz (aerosomii)
Incluziile
Glicocalixul
Natura chimic a materialului capsular

Sinteza exopolizaharidelor
Glicocalixul comportamental
Flagelul
Structura flagelului
Motilitatea i chimiotaxia
Fimbriile
Pilii
Capitolul II. CRETEREA SI MULTIPLICAREA BACTERIILOR
Creterea celulei bacteriene
Multiplicarea prin diviziune
Mecanismul molecular al diviziunii
Diviziunea asimetric
Segregarea cromosomilor
Reglarea procesului de diviziune
Dinamica unei culturi bacteriene discontinui
Culturi continui
Capitolul III. NUTRIIA BACTERIAN~
Tipuri de nutriie a microorganismelor
Nutriia autotrof
Nutriia fotolitotrof
Nutriia chimiolitotrof
Bacteriile care oxideaz H2 i CO
Bacteriile metanogene
Importana ecologic a bacteriilor metanogene
Bacteriile care oxideaz sulful i compuii si
Bacteriile care oxideaz compuii Fe
Bacteriile care oxideaz amoniacul i nitritul
Fixarea CO2 la bacteriile chimiolitotrofe. Ciclul Calvin
Nutriia organic a bacteriilor chimiolitotrofe
Nutriia chimioorganotrof (heterotrof)
Factorii de cretere
Capitolul IV. METABOLISMUL BACTERIAN
Particularitile generale ale metabolismului bacterian
Metabolismul energetic bacterian
Tipuri de metabolism energetic n funcie de acceptorul final de electroni
Reacii de oxidare a substratului energetic
Potenialul redox si fora proton-motrice
Respiraia aerob bacterian
Componentele catenei respiratorii bacteriene
Sinteza ATP dependent de gradientul protonic
Mecanisme moleculare protectoare care permit respiraia aerob
Respiraia anaerob
Respiraia nitrailor
Reducerea asimilatorie a nitrailor
Respiraia sulfatului
Respiraia fumaratului
Respiraia carbonatului(Reducerea respiratorie a CO2)
Fermentaia
Fermentaia glucidelor
Fermentaia lactic
Fermentaia alcoolic produs de levuri
Fermentaia alcoolic bacterian
Fermentaiile acide
Fermentaia butiric
Fermentaia butanediolului
Fermentaia acidului propionic
Catabolismul lipidelor
Catabolizarea compuilor organici cu azot
Catabolismul compuilor aromatici
Catabolismul compuilor cu un atom de C. Bacterii metilotrofe si metanotrofe
Catabolismul alcoolului etilic
Reaciile de anabolism
Cile anaplerotice. Calea glioxilatului
Cap. V. INFLUENA FACTORILOR FIZICI I CHIMICI ASUPRA MICROORGANISMELOR
Temperatura
Microorganisme criofile
Microorganisme mezofile
Microorganisme termofile
Microorganisme hipertermofile
Sterilizarea
Principiile sterilizrii termice i dezinfeciei
Presiunea osmotic
Presiunea hidrostatic
Energia radiant
Aciunea laserului
Aciunea ultrasunetelor
Aciunea substanelor chimice asupra microorganismelor
Mecanismele de aciune a substanelor antibacteriene
Substane antibacteriene active prin modificri de permeabilitate
Substane care acioneaz prin denaturarea proteinelor
Evaluarea potenialului antibacterian al agenilor chimici
Coeficientul fenolic
Substane care acioneaz prin interferen cu gruprile active ale proteinelor-enzime
Colorani antiseptici
Ageni sterilizani n faz de vapori
Agenii chimioterapeutici
Ageni chimioterapeutici activi prin inhibiie competitiv. Sulfonamidele
Quinolonele
Ali ageni chimioterapeutici
Antibioticele
Clasificarea antibioticelor in funcie de structura chimic
Clasificarea antibioticelor n funcie de mecanismele de aciune
Antibiotice care inhib sinteza peretelui celular
Antibiotice antiribosomale
Antibiotice care modific permeabilitatea membranei plasmatice
Antibiotice care interfer cu funciile acizilor nucleici
Capitolul VI. VIROLOGIE
Modelul general de structur a virionului
Capsida viral
Inveliul extern
Genomul viral. Organizare fizic
Modaliti particulare de codificare a informaiei genetice
Genomuri virale ARN segmentate (divizate, multipartite)
Definirea conceptului modern de virus
Natura virusurilor
Simetria virusurilor
Simetria helical
Simetria icozaedric
Construcia virionilor icozaedrici
Simetria complex (binar)

Multiplicarea virusurilor
Iniierea procesului infecios
Ptrunderea virusului n celul
Sinteza ARNm la dezoxiribovirusuri
Sinteza ARNm la ribovirusuri
Biosinteza proteinelor timpurii
Replicarea genomului viral
Replicarea genomului ADN
Replicarea i transcrierea genomului viral ARN
Biosinteza proteinelor tardive
Asamblarea (morfogeneza) viral
Eliberarea virionilor
Infeciozitatea acizilor nucleici
Tipuri de relaii virus-celul
Patologia celulelor infectate cu virusuri
Mecanismele moleculare ale interaciunii virus-celul. Efectul citopatic (ECP)
1. Modificri metabolice
2. Pierderea funciilor membranei celulare
3. Modificri ale citoscheletului
4. Apariia corpilor de incluziune
Relaii ntre virusuri i organisme
Tropismul viral
Tipuri de infecii in vivo
Persistena viral
Mecanismele persistenei virale
Bacteriofagii
Anatomia molecular a fagilor din seria T-par
Relaiile fag-bacterie
Ciclul litic al interaciunii fag-bacterie. Multiplicarea bacteriofagului
Importana fenomenului de bacteriofagie
Ciclul lizogen
Proprietile bacteriilor lizogene
Importana studiului cuplului lizogen fag -E. coli
Noiuni generale de oncogenez
Agenii fizici i chimici ai malignizrii
Caracterele generale ale celulelor normale
Particularitile funcionale ale celulelor maligne
Oncogenele celulare
Virusuri oncogene
Oncogeneza cu retravirusuri
Oncogenele retravirale
Interaciunea oncodnavirusurilor cu substratul celular
Transformarea cu papovavirusuri
Transformarea cu papilomavirusuri
Latena
Dezvoltarea verucilor
Ageni infecioi subvirali
Viroizii
Patogenitatea viroizilor
Virusoizii
Virino
Prionii
Originea i apariia prionilor
Originea i evoluia virusurilor
Originea virusurilor din acizii nucleici celulari
Originea ribovirusurilor
Evoluia virusurilor
Recombinarea ca factor de evoluie

Rolul mutaiilor n evoluia ribovirusurilor
Capitolul VII. NOIUNI DE GENETIC~ BACTERIAN~
Organizarea funcional a genomului bacterian
Plasmidele
Clasificarea plasmidelor
Structura molecular a plasmidelor
Structura genetic i funciile plasmidelor
Controlul numrului de copii plasmidiale
Incompatibilitatea plasmidelor
Eliminarea plasmidelor
Replicarea plasmidelor
Distribuia plasmidelor in procesul diviziunii celulare
Recombinarea plasmidelor
Plasmidele F
Plasmidele R
Mecanismele rezistenei bacteriene la antibiotice
Cauzele fenomenului de rezisten la antibiotice
Plasmidele Col
Mecanismele de aciune a bacteriocinelor
Mecanismele variabilitii la bacterii
1. Mutaiile
Mecanisme de reparaie genetic
Fotoreactivarea
Rspunsul reparator adaptativ
Excizia bazelor catalizat de glicozilaze i endonucleaze
Reparaia prin excizia i resinteza nucleotidelor
Sistemul reparator inductibil SOS
2. Elementele genetice transpozabile ale bacteriilor
Secvenele de inserie
Transpozonii
Bacteriofagii transpozani
Transpoziia
Consecinele transopoziiei
3. Mecanisme de transfer al materialului genetic la bacterii
Transformarea genetic
Mecanismul molecular al transformrii genetice
Conjugarea bacterian
Determinismul genetic al procesului de conjugare
Etapele procesului de conjugare
Rolul pililor n procesul de conjugare
Transferul ADN plasmidial n cuplul F+ x FTransferul ADN cromosomal n cuplul Hfr x F Conjugarea la bacteriile Gram pozitive
Sexducia
Transducia genetic
Conversia fagic
Transfecia
Reglarea activitii celulei bacteriene
Modelul reglator al operonului
Reglarea pozitiv(Inducia sintezei enzimelor)
Reglarea negativ(Represia sintezei enzimelor)
Represia sintezei enzimelor ntr-un sistem biosintetic. Operonul triptofanului
Controlul activitii enzimelor. Inhibiia prin produsul final
Controlul sintezei proteinelor la nivelul traducerii
Represia prin catabolit
Principii de inginerie genetic

Ingineria genetic la nivel celular
Fuziunea protoplatilor bacterieni
Premisele tiinifice ale ingineriei genetice moleculare
Enzimele de restricie
Enzimele de modificare
Etapele reprogramrii microorganismelor prin tehnologia ADN recombinant(clonarea
molecular)
Aplicaii ale clonrii moleculare
Utilizarea microorganismelor n biotehnologie
Fazele culturii unui microorganism industrial
Scopul biotehnologiilor cu microorganisme
Enzime glicolitice
Proteaze
Celulaze
Lipaze
Acidul lactic
Acidul citric
Acidul acetic
Aminoacizi
Vitamine
Utilizarea levurilor in microbiologia industrial
Fermentaia alcoolic
a. Obinerea alcoolului etilic din cartofi i cereale
b. Utilizarea levurilor in vinificaie
c. Utilizarea levurilor n industria berii
d. Utilizarea levurilor n panificaie
Biosinteza substanelor antibiotice
Biosinteza penicilinei
Bioconversia
Producerea masei celulare
Dirijarea proceselor fermentative
Capitolul VIII. BIODIVERSITATEA MICROORGANISMELOR
Importana studiilor de biologie molecular pentru determinarea biodiversitii
Particularitile diversitii microorganismelor n diferite ecosisteme
Semnificaia marii diversiti microbiene ntr-un habitat
Grupe de microorganisme eucariote
Alge
Organizare celular i fiziologie
Reproducere
Clasificare
Chlorophyta(Alge verzi)
Phaeophyta (Alge brune)
Rhodophyta(Alge roii)
Bacillariophyta(Diatomee)
Pyrrophyta(Dinoflagelate)
Euglenophyta
Importana algelor
Protozoare
Reproducerea
Clasificare
Mastigophora (Flagelate)
Sarcodina
Sporozoa
Ciliophora
Fungii
Reproducerea
Clasificare
Oomycetes
Zygomycetes
Ascomycetes
Basidiomycetes
Deuteromycetes (Fungi Imperfecti)
Myxomycetes (Gymnomyxa)
Importana fungilor
Micotoxine
Capitolul IX. NOIUNI DE ECOLOGIA MICROORGANISMELOR
A. TIPURI DE INTERACIUNI {NTRE POPULAIILE DE MICROORGANISME
Interaciuni negative
Interaciuni pozitive
Simbioza
Rolul endosimbiozei n geneza celulei eucariote
Simbioze insecte-microorganisme
Simbioze fixatoare de N2
Simbioza Rhizobium-plante leguminoase
Simbioze asociative. Fixarea azotului n rizosfer
Actinorize. Simbioza Frankia-angiosperme neleguminoase
Micorizele
Ectomicorize
Endomicorize. Micorizele veziculo-arbusculare
Rolul micorizelor in biologia plantelor
Simbioza cianobacterii-fungi sau alge-fungi (Lichenii)
Parazitismul intracelular
Prdarea
Procariote prdtoare
B. MICROBIOTA NORMALA A MAMIFRELOR
Colonizarea i succesiunea populaiilor de microorganisme ale organismului uman
Microbiota normal a tegumentului
Microbiota tractului respirator
Microbiota tractului digestiv
Microbiota din rumen
Rolul fiziologic al microbiotei gastrointestinale
Translocaia bacteriilor din intestin
Microorganismele probiotice
Microbiota tractului urogenital
Gnotobioza i animalele gnotobiotice
Caracteristicile animalelor germ-free
C. PROPRIET~ILE MICROORGANISMELOR PATOGENE
Patogenitatea
Virulena
Factorii care condiioneaz virulena
a)Infeciozitatea
Adezinele
Sideroforii ca factori de virulen
b)Agresivitatea (Invazivitatea)
c)Toxigenitatea
Toxine bacteriene
Clasificarea toxinelor
Toxicitatea exotoxinelor
Receptori celulari pentru toxine
Mecanismele generale de aciune a toxinelor
Endotoxine
Efectele endotoxinelor LPS
Condiile de apariie a procesului infecios
a)Izvorul de infecie
b)Cile de eliminare a agenilor patogeni
c)Cile de transmitere a agenilor infecioi
d)Poarta de intrare in organism
Tipuri de infecii
D. ROLUL MICROORGANISMELOR {N CIRCUITUL GLOBAL AL MATERIEI {N NATUR~
Circuitul biogeochimic al azotului
Amonificarea
Nitrificarea
Denitrificarea
Circuitul oxigenului
Circuitul carbonului
Degradarea biologic a constituienilor vegetali
Scoaterea din circuit a carbonului organic sau anorganic
Circuitul fosforului in natur
Circuitul sulfului in natuir
Mineralizarea compuilor organici ai sulfului
Oxidarea compuilor anorganici ai sulfului
E. NOIUNI DE MICROBIOLOGIA APELOR
Diversitatea mediilor acvatice
Factorii fizici si chimici care influeneaz prezena microorganismelor in mediile
acvatice
Comportamentul microorganismelor n mediul salin
Marea - mediu natural pentru microorganisme
Degradarea substanelor organice n ocean
F.
ACTIVITATEA GEOLOGIC~ A MICROORGANISMELOR

Transformrile microbiene ale fierului i manganului
Biosolubilizarea metalelor. Leierea bacterian
Recuperarea metalelor prin acumulare de ctre microorganisme
Rolul microorganismelor n formarea zcmintelor de petrol
G. NOIUNI DE MICROBIOLOGIA SOLULUI

Formarea solului
Materia organic din sol
Factorii de mediu care influeneaz microbiota din sol
Microbiota din sol
Interaciuni intre rdcinile plantelor i microorganismele din sol. Rizosfera
H. BIODEGRADAREA SI BIODETERIORAREA MICROBIAN~
Modificri ale substratului induse de aciunea microorganismelor
Biodegradarea petrolului
Biodeteriorarea cauciucului
Degradarea tesuturilor vegetale asociat cu termogeneza microbiana
Coroziunea bacterian a metalelor
Substanele xenobiotice-poluani ai mediului nconjurtor
Efectele ecologice ale substanelor xenobiotice
Degradarea microbian a substanelor xenobiotice
Bazele genetice ale degradrii compuilor organici halogenai
Incapacitatea poluanilor de a induce sinteza enzimelor degradative

Cap. X. Imunologie
A. Antigene
Modelul general al structurii antigenelor
Proprietile definitorii ale antigenelor
Determinanii antigenici
Haptene
Clasificarea i imunogenitatea antigenelor
Antigene moleculare
Antigene corpusculare
B. Sistemul imunitar
Mecanisme de aprare la nevertebrate
Organizarea sistemului imunitar la vertebrate
Limfocitele
Limfocitele B
Limfocitele T
Receptorul de antigen al limfocitelor T (RCT)
Celulele NK
Imunoglobulinele (Anticorpii)
Structura moleculei de Ig
Funciile moleculei de Ig
Heterogenitatea anticorpilor
Heterogenitatea izotipic
Ig G
Ig A
Ig M
Ig E
Ig D
Variantele alotipice
Variantele idiotipice
C. Bazele genetice ale generrii diversitii receptorilor de antigen
Mecanismele genetice ale diversitii imunoglobulinelor
Mecanismele genetice ale generrii diversitii RCTi
D. Moleculele complexului major de histocompatibilitate
Structura moleculelor CMH clasa I
Structura moleculelor CMH clasa II
E.
Rspunsul imun adaptativ
Particularitile generale ale rspunsului imun
Etapele rspunsului imun
Celulele prezentatoare de antigen (CPA)
Prelucrarea antigenelor
Rolul moleculelor CMH n prezentarea antigenelor
Prezentarea antigenelor exogene n asociaie cu moleculele CMH II
Prezentarea antigenelor endogene n asociaie cu moleculele CMH I
Modelul recunoaterii antigenelor de ctre limfocitele T
Dinamica rspunsului imun mediat humoral
Rspunsul imun humoral secundar
F. Rezistena antiinfecioas nscut
Sisteme celulare cu rol n rezistena antiinfecioas nespecific
Sistemul fagocitar mononuclear
Receptorii membranari ai macrofagului
Activarea macrofagului
Sistemul fagocitar polimorfonuclear
Diferenierea neutrofilelor
Sisteme bactericide n PMNN

Sistemul complement
Mecanismul general de activare a sistemului complement
Calea clasic de activare a complementului
Calea altern a fixrii complementului
Calea lectinic
Funciile complementului
Rolul complementului n aprarea antiinfecioas
Procesul inflamator
Efectorii celulari ai inflamaiei
Reactanii de faz acut
Bibliografie selectiv
Coninutul acestui manual a fost elaborat pe baza consultrii unui vast material bibliografic, reprezentat n
primul rnd Microbiological reviews, MMBR sau Annual Reviews of Immunology, la care se adaug numeroase
articole din alte reviste, dar i cri sau tratate de specialitate.
Periodice
Applied Microbiology
Applied and Environmental Microbiology
Archives of Microbiology
J. of Biological Chemistry
Can. J. of Microbiology
Clinical Microbiological Reviews
Journal of Bacteriology
J. of. Gen. Microbiology
J. of Clinical Microbiology
J. of Medical Virology
Journal of Virology
Journal of General Virology
Microbiological Reviews
Microbiology and Molecular Biology Reviews (MMBR)
Nature
Proc. Natl. Acad. Sci. USA
Science
Virology
Scientific American, etc.
Cri
Alberts B., Bray D., Lewis J. Molecular biology of the cell, 3rdEdition, Garland Publishing, 1994.
Black J. G. Microbiology. Principles and Applications, 3rd Edition, Prentice Hall, Upper Sadle River, 1996
Brock Th. Biology of microorganisms, Prentice Hall, Englewood Cliffs, New Jersey, 1988, 2000, 2003.
Cajal N. Tratat de Virologie Medical, vol. I, Editura Medical Bucureti, 1990.
Davis B., Dulbecco R., Eissen H. Microbiology, 4th Edition, New York Lippincott, 1990.
Fields B. N., Knipe D. M. Virology, Second Edition, Raven Press, Ltd., New York, 1990.
Fields B. N., Knipe D. M., Howley P. M. Fields Virology, 3rd Edition Lippincot-Raven Publishers,
Philadelphia, 1996
Freifelder D. Molecular Biology, second Edition, Jones adn Bartlett Publishers Inc., Boston, 1987.
Lederberg J. Encyclopedia of Microbiology, Academic Press Inc., 1992.
Lehninger A. L. Biochimie, vol. I, Traducere dupa editia a II-a, Editura Tehnica Bucuresti, 1975.
Le Minor Leon, Michel V. Bacteriologie medicale, Flamarion Medicine Sciences, 1990.
Mihescu G., Gavril L. Biologia microorganismelor fixatoare de azot, Editura Ceres, Bucureti, 1989.
Nester E., Pearsall N., Roberts J., Roberts E. The Microbial Perspective, Saunders College Publishing, 1982
Stanier R. Y., Doudoroff M., Adelberg E. A.- The Microbial world, Prentice Hall Inc., Englewood Cliffs,
1970.
Starr M. P si colab., The Prokaryotes, Springer Verlag, Berlin, New York, 1981.
Streips N. U., Yasbin R. E. - Modern Microbial Genetics, Willey- Liss, 1991.
Topley and Wilsons Principles of Bacteriology, Virology and Immunity, 8th Edition, Ed. M. Tom Parker,
Lesslie H. Collier, 1990
Topley and Wilsons Microbiology and Microbial Infections, Vol. I , II, Ed. Lesslie Collier, A. Balows,
A. Sussman, 1998.
Watson J. D., Hopkins R, Steitz W. Molecular Biology of the Gene, The Benjamin Cummings Comp.,1987.
Wistreich G. A., Lechtman M. D. Microbiology, Macmillan Publishing Comp., 1984.
Zarnea G. Microbiologie general, Editura Didactic i Pedagogic Bucureti, 1970
Zarnea G. Tratat de Microbiologie general, volumele I, II, III, V, 1983-1994.
Pentru elaborarea seciunii de Imunologie au fost consultate urmtoarele titluri de reviste i cri:
Periodice
Annual Reviews Biochemistry
Annual Reviews Immunology
Annual Reviews Microbiology
Bulletin dInstitut Pasteur
Cancer Immunology
Cell
Clinical Microbiology Reviews
EMBO Journal
Immunology Today
Journal of Immunology
Mediators of inflamation
Microbiology and Molecular Biology Reviews
Nature
Scientific American
Science
Cri
Delves P.J, Roitt I. M. Encyclopedia of Immunology, vol. 1-4, sec. ed., 1998, Acad. Press.
Fields B.N., Knipe D.M., Howley P.M. Fields Virology, 3rd edition, Lippincot Raven
Publishers, Philadelphia, 1996.
R. A Goldsby, T. J. Kindt, Barbara A. Osborne - Kuby Immunology, 4-th Ed., W.H. Freeman
and Company, New York.
Male D., Champion B., Anne Cook Advanced Immunology, J.B. Lippincot Company, 1987.
Patrick S. and Larkin M. J. - Immunological and molecular aspects of bacterial virulence,
J. Wiley & Sons, 1995.
Roitt I. M. Essential Immunology, ninth edition, 1997, Blackwell Science
Samter M, Talmage D.W., Frank M.M., Austen K.F., Claman H.N. Immunological diseases,
vol. I, II, fourth ed., Boston, Toronto.
Serhan C. N., Ward P. A. - Molecular and Celular basis of Inflamation, 1999, Humana Press.
Sheehan Catherine Clinical Immunology, Principles and Laboratory Diagnosis, sec. edition,
1997, Lippincot, Philadelphia, New York

Topley and Wilsons Principles of Bacteriology, Virology and Immunity, 8th Ed. M. Tom Parker,
Lesslie H. Collier, 1990
Topley and Wilsons Microbiology and Microbial Infections, vol. IV Immunology, Ed. Lesslie
Collier, A. Balows, M. Sussman, 1998.
Weir D.M., Stewart J. Immunology , seventh edition, Longman Group, UK, 1993.
Zarnea G. Tratat de Microbiologie, vol. IV Imunobiologie, Ed. Academiei Romne, 1990.
Zarnea G., Mihescu Gr., Ioni A. - Principii i tehnici de imunologie, Ed. Univ. Buc., 1993.
Zarnea G., Mihescu Gr. Imunologie, Ed. Universitii Bucureti, 1995.
Zwilling B.S., Eisenstein T. K. Macrophage- Pathogen Interactions, 1994, New York, Basel,
Hong Kong.
INTRODUCERE
Obiectul de studiu al Microbiologiei este biologia microorganismelor, adic studiul organismelor
mici, vizibile numai la microscop.
Etimologic, noiunea de microorganism are sensul de organism mic. Cu acelai sens se folosete
noiunea de microb, mai ales in cazul microorganismelor patogene. Dei utilizat n mod curent, termenul de
microb nu este tiinific. Noiunea de microb a fost introdus de Sedillot (l878), cu sensul ei tiinific:
micro + bios = via scurt. Termenul s-a pstrat i a dat numele domeniului Microbiologiei.
Noiunea de microorganism nu are semnificaie taxonomic, deoarece reunete un grup vast i
heterogen de organisme diferite ca poziie sistematic i ca organizare structural, dar care se aseamn prin trei
proprieti comune:
- toate au dimensiuni microscopice, ceea ce le face invizibile cu ochiul liber;
- n general au organizare unicelular. Chiar dac unele microorganisme formeaz asociaii
pluricelulare, ele rmn, n esen, organisme unicelulare, deoarece, o celul izolat din complexul
multicelular i pstreaz viabilitatea, crete, se divide i reface asociaia;
- structura lor intern este relativ simpl, comparativ cu a macroorganismelor.
Heterogenitatea microorganismelor este definit de alte trei caracteristici:
- poziia sistematic a microorganismelor este foarte diferit;
- activitile biologice (fiziologice) pe care le desfoar sunt foarte diversificate
- morfologia si structura intern a diferitelor grupe de microorganisme sunt foarte diferite.
Cadrul larg al noiunii de microorganism cuprinde urmtoarele grupe:
1. Eubacteria (bacterii adevrate);
2. Cyanobacteria (fostele alge albastre-verzi)
3. Archaea, un grup de microorganisme asemntoare cu bacteriile adevrate, din punct de
vedere morfologic i structural.
Toate cele trei grupe au organizare celular de tip procariot. Celelalte microorganisme, cu poziie
sistematic heterogen au organizare celular de tip eucariot:
1. Fungii microscopici, cu un numr mare de reprezentani;
- levurile cu organizare unicelular
- mucegaiurile (fungi filamentoi), cu organizare pluricelular;
2. Algele microscopice
3. Protozoarele.
Denumirea de bacterie a fost introdus de Ehrenberg (l838). El a creat denumiri de gen: Bacterium,
Spirillum, Spirochaeta, fr s stabileasc deosebiri ntre bacterii i protozoare.
Dei virusurile nu sunt microorganisme, aceast lucrare cuprinde un capitol de Virologie n care sunt
prezentate, ntr-o form general, virusurile i entitile moleculare infecioase cu organizare subviral (viroizii
i prionii).
Virusurile sunt entiti infecioase cu un nivel nalt de organizare, alctuite n esen, din proteine i un
acid nucleic (ADN sau ARN). Studiul interaciunii virus-celul (in special fagul lambda-E. coli) a avut un rol
decisiv in dezvoltarea biologiei moleculare.
Viroizii sunt entiti infecioase alctuite dintr-o molecul de ARN pur, patogene pentru unele plante de
cultur.
Prionii sunt entiti infecioase de natur proteic. Pentru studiile referitoare la natura lor, modalitatea
de transmitere i la mecanismele patogenezei, lui S. Prusiner, n l997 i s-a decernat Premiul Nobel.
Evoluia Microbiologiei ca tiin
Microbiologia este o tiin relativ tnr. Ea s-a cristalizat ca un domeniu particular al tiinelor
biologice, n a II-a jumtate a secolului l9.
In l655, A. Kircher a intuit existena unor forme de via, invizibile cu ochiul liber. Primele
microorganisme au fost vzute cu ajutorul unui aparat optic de mrire a imaginii, de ctre olandezul A.van
Leevenhoek in l676. Cu aparatele sale de construcie proprie, el a examinat picturi de ap din diferite surse
naturale sau de saliv cu raclaj dentar i a observat o lume fascinant, cu densiti neobinuite, ntr-o micare
perpetu. In descrierile i n desenele sale pe care le-a prezentat Societaii Regale din Londra, printre alte
organisme se recunosc bacteriile. Din acest motiv, pn n l976, Leevenhoek a fost considerat descoperitorul
bacteriilor. Dar gndirea de atunci nu a reuit s reuneasc lumea microorganismelor cu restul lumii vii.
In l976, la 300 de ani de la descrierea lor, chiar cercettorii olandezi au considerat c este nedrept ca
Leevenhoek s fie considerat descoperitorul bacteriilor, deoarece el nu a intuit particularitile structurale i
funcionale ale acestor organisme, ci le-a considerat ca fiind nite pui ai animalelor acvatice mai mari. De
aceea le numea animalcule. Dei lupele sale aveau o putere de mrire net superioar celor de azi, Leevenhoek
nu a sesizat noutatea lumii pe care a vzut-o.
Caracterele aparte ale microorganismelor au fost intuite de F. Cohn (l875). El le-a definit ca organisme
microscopice, unicelulare, care se nmulesc prin diviziune direct i este considerat ntemeietorul
Microbiologiei ca tiin.
De o importan excepional pentru dezvoltarea Microbiologiei sunt descoperirile lui L. Pasteur (l822l895). El era preocupat de activitile fziologice ale microorganismelor, n special fermentative i patologice.
Pentru a le descrie, Pasteur folosete diferite denumiri: ciuperci, infuzori, bacterii, levuri, monade. El a nfiinat
primele laboratoare de cercetare microbiologic. Contribuiile sale de excepie se nscriu n urmtoarele
domenii:
- a demonstrat experimental, ca fermentaiile nu sunt procese pur chimice, ci sunt procese biologice,
rezultatul activitii metabolice a microorganismelor anaerobe. A definit procesul fermentativ ca fiind
rezultatul vieii fara aer a microorganismelor anaerobe. Odat cu descrierea proceselor fermentative,
Pasteur a pus bazele Microbiologiei industriale;
- a pus bazele teoretice ale Microbiologiei medicaleumane i veterinare, demonstrnd cauzele producerii
maladiilor infecioase. Pn atunci se cunotea caracterul transmisibil (contagios) al acestora, dar nu se
tia ca ele sunt rezultatul ptrunderii in organism a unor ageni patogeni;
- a demonstrat ca proprietile de patogenitate si virulent a microorganismelor se pot modifica in vitro.
Astfel, din culturile de bacterii patogene i virulente deriv culturi cu virulen atenuat, care se pot
utiliza ca vaccinuri. Pasteur a pus astfel bazele unei activiti practice de o importan practic
excepional vaccinarea;
- a fundamentat tiinific domeniul imunitii antiinfecioase, creind un domeniu nou al tiinelor biologice
Imunologia, nscut ca o ramur a Microbiologiei, dar care ulterior s-a separat complet, ca un domeniu
de sine stttor;
- este ntemeietorul primului Institut de Microbiologie din lume Institutul Pasteur din Paris;
- n plan teoretic, Pasteur a a rezolvat controversa generaiei spontane, demonstrnd cu argumente
experimentale c microorganismele sunt forme de via cu un grad nalt de organizare, ce nu pot lua
natere spontan din materia organic. Totdeauna microorganismele i au originea n alte celule, care
contamineaz materia organic.
In l897, Beijerinck a descoperit virusurile. El a intuit natura particular a agentului mozaicului la tutun
i l-a considerat ca fiind contagium, vivum, fluidum (agent contagios, viu-corpuscular-filtrabil). Iniial,
Virologia s-a dezvoltat ca o ramur a Microbiologiei, dar raportndu-ne la natura particular a virusurilor,
Virologia este o tiin independent.
La noi n ar, V. Babe, mpreun cu Cornil (Frana) este autorul primului Tratat de Bacteriologie din
lume. In sistemul nervos al animalelor moarte de turbare a descris prezena incluziilor Babe-Negri.
I. Cantacuzino este ntemeietorul Institutului de Microbiologie i mentorul colii de Microbiologie din
perioada interbelic.
Diviziunile Microbiologiei
Procariotele populeaz orice mediu adecvat pentru formele superioare de via, dar i o varietate de
medii cu condiii extreme, restrictive pentru majoritatea organismelor superioare. Diversitatea proceselor
fiziologice bacteriene, precum i rolul lor esenial n ecosistemele naturale, dar i capacitatea de a sintetiza
substane utile sau de a produce procese infecioase la organismele superioare au creat, nc de la nceputurile
dezvoltrii sale ca tiin, premisele diversificrii domeniilor de studiu al microorganismelor, unele cu un
accentuat caracter utilitar.
Microbiologia industrial s-a dezvoltat pornind de la descoperirea proceselor fermentative de ctre
Pasteur. Ea studiaz utilizarea microorganismelor productoare de substane utile pentru alimentaie,
terapeutic sau pentru diferite industrii. Domeniul s-a extins la studiul proceselor de biosintez si bioconversie.
Microbiologia solului studiaz ansamblul microorganismelor din sol, interrelaiile dintre ele, precum i
interaciunile dintre microorganisme si plante, dar n mod deosebit, rolul microorganismelor n fertilitatea
solului i n circuitul elementelor biogene n natur.
Geomicrobiologia se distinge prin caracterul ei pregnant utilitar. Studiaz, n special, microbiologia
petrolului: rolul microorganismelor n geneza petrolului; posibilitatea utilizrii microorganismelor n
exploatarea petrolului; rolul microorganismelor n biodegradarea petrolului. Studiaz rolul microorganismelor
n geneza zcmintelor minerale i posibilitatea utilizrii microorganismelor pentru exploatarea zcmintelor i
pentru recuperarea metalelor din zcmintele srace.
Hidromicrobiologia studiaz microorganismele din mediile aquatice i rolul lor n lanurile trofice.
Microbiologia marin, ramur a Hidromicrobiologiei studiaz microorganismele din marile bazine de ap
srat, dar n special rolul lor n circuitul elementelor biogene.
Microbiologia insectelor studiaz relaiile dintre microorganisme i artropode. S-a concretizat ca
domeniu de sine stttor datorit rolului important pe care l au artropodele n patologia uman, animal i
vegetal, ca vectori ai unor microorganisme patogene i ai unor virusuri.
Microbiologia medical studiaz microorganismele patogene pentru om i animale. Studiaz
particularitile lor fundamentale, adic patogenitatea i virulena, factorii care condiioneaz virulena, precum
i modul lor de transmitere i posibilitile de combatere.
Ecologia microorganismelor este o stiin de sintez care stabilete legitile generale de evoluie i
interaciune a microorganismelor n natur. Studiaz interaciunile dintre microorganisme, precum i
interrelaiile microorganismelor cu macroorganismele.
Genetica microorganismelor este o ramur tnr, conturat dup l940. Studiaz substratul molecular
al ereditii i variabilitii microorganismelor i mecanismele de transfer al materialului genetic la bacterii.
Microbiologia general este o tiin biologic fundamental, care studiaz particularitile generale
ale organizrii structurale i funcionale ale celulei bacteriene, sistematica, rspndirea microorganismelor n
natur, relaiile lor ecologice cu alte microorganisme i cu macroorganismele, originea i evoluia lor,
fenomenele de ereditate i variabilitate microbian. Microbiologia general este o tiin de sintez i se
bazeaz pe datele domeniilor aplicative ale microbiologiei. Cadrul larg al Microbiologiei generale, contribuia
sa imens la dezvoltarea multor ramuri ale biologiei i implicaiile ei teoretice i practice n evoluia altor
stiine, determinate de posibilitatea utilizrii microorganismelor ca model experimental fac, ca studiul
principiilor fundamentale ale microbiologiei generale s fie de o necesitate absolut pentru orice biolog modern
indiferent de domeniul sau de specialitate ca i pentru biochimist i biofizician, genetician, medic, agronom,
cercettor n industria fermentativ etc.
Importana practic a microorganismelor
De la descoperirea lor i pn astzi, interesul pentru studiul microorganismelor a nregistrat o
cretere permanent, deoarece un mare numr de specii desfoar activiti benefice, realiznd procese de o
valoare imens pentru societatea uman sau produc infecii la om i animale, cu efecte patologice mai mult sau
mai puin grave.
In mediile naturale, microorganismele realizeaz treapta mineralizrii (descompunerii) materiei
organice vegetale i animale, avnd astfel un rol decisiv pentru ncheierea ciclului unor elemente biogene n
natur (C, N, P, S), fcndu-le disponibile pentru reintegrarea lor n circuitul vieii.
Fertilitatea i productivitatea sistemelor agricole depind n mare msur de activiti fiziologice ale
bacteriilor din sol. Fixarea N2 este o activitate fiziologic exclusiv a unor procariote (eubacterii, cianobacterii).
Cele din g. Rhizobium produc nodoziti pe rdcinile plantelor leguminoase. Ele reduc N2 la NH4, pe care l
pun la dispoziia plantei gazd, fiind utlizat pentru sinteza proteinelor proprii. Astfel, bacteriile simbiotice, dar
ntr-o msur mai mic i cele libere reduc necesarul de fertilizatori industriali pentru producia agricol.
Bacteriile produc amonificarea materiei organice din sol, iar cele nitrificatoare oxideaz NH4+ la nitrai,
iar cele denitrificatoare, reduc nitraii diminund fertilitatea solului.
Microorganismele care populeaz tractul digestiv al animalelor i al omului formeaz microbiota
normal, ce sintetizeaz vitamina K, esenial pentru mamifere, acidul folic, nicotinic, pantotenic, tiamina,
riboflavina, biotina. De o importan deosebit este microbiota din compartimentul ruminal al mamiferelor
rumegtoare. Rumenul are rolul unui fermentator natural, n care substratul vegetal este transformat n mas
celular, format n special din bacterii i protozoare. Microorganismele constituie adevrata surs de proteine a
ierbivorelor. Fr microbiota ruminal, producia ierbivorelor ar fi imposibil.
In industria farmaceutic, producia de antibiotice (circa loo ooo t/an) este rezultatul activitii
microorganismelor.
Microorganismele au roluri multiple in industria alimentar. Majoritatea microorganismelor
contaminante au aciune degradativ si de aceea alimentele trebuie protejate prin conservare chimic, prin
ngheare sau uscare.
Unele microorganisme au efecte favorabile asupra unor produse alimentare: brnzeturile, iaurtul i alte
derivate din lapte sunt rezultatul activitii fiziologice a unor microorganisme asupra substratului.
Dospirea aluatului de pine, producerea vinului i berii sunt rezultatul fermentaiei alcoolice a
levurilor. Conservarea alimentelor vegetale i a furajelor se bazeaz pe fermentaia lactic produs be bacterii.
Microorganismele sunt utilizate pentru producerea buturilor acidulate. Acidul citric, adugat multor
buturi pentru conferirea aciditii este produs industrial de Aspergillus. De multe ori, astfel de buturi conin
fructoza, obinut din amidonul de porumb, prin aciunea bacteriilor amilolitice. Aspartamul, ca ndulcitor este
un amestec de doi aminoacizi (acid aspartic si fenilalanina), ambii obinui pe cale microbiologic.
Metanul este produs prin aciunea bacteriilor metanogene.
Un interes deosebit prezint microorganismele n raport cu industria petrolului. Petrolul brut este supus
atacului viguros al microorganismelor si de aceea forarea, exploatarea, dar in special depozitarea se fac in
condiii care minimalizeaz aciunea microorganismelor.
Microorganismele fotosintetizante utilizeaz energia solar pentru producerea biomasei, care poate fi
convertit, ca i deeurile vegetale, in biocombustibili (metan si etanol), de alte microorganisme.
Activitatea uman diminu rezervele diferitelor substane (metale) i microorganismele se folosesc
pentru recuperarea metalelor din minereurile srace.
Unul dintre cele mai importante domenii practice ale Microbiologiei este biotehnologia. In sens larg,
biotehnologia utilizeaz microorganismele n procesele industriale, dar n ultimii l5 20 de ani, biotehnologia
folosete microorganisme reprogramate genetic, prin tehnicile de inginerie genic.
Importana microorganismelor a fost subliniat de Pasteur n aseriunea rolul unor fiine infinit de
mici este infinit de mare.
Microorganismele nu sunt numai benefice pentru activitatea uman. Un numr relativ mic de
microorganisme patogene cauzeaz o larg diversitate de procese patologice, de la infecii locale, pan la
septicemii.
Microorganismele triesc n mediile naturale (ap, sol), pe suprafaa tegumentului i n tractul digestiv
al omului i animalelor. Majoritatea populeaz mediile cu condiii obinuite, dar bacteriile cresc n mediile care
ofer condiii fiziologice i biochimice extreme. Condiiile extreme sunt acelea care se abat mult de la cele
normale(pH neutru, atmosfer aerob, salinitate de 1,5%, substratul energetic glucoza).
Bacteriile sunt importante att din punct de vedere practic ct i teoretic, pentru studiul proceselor vieii
n condiii extreme. Unele bacterii supravieuiesc n condiiile cele mai neadecvate: temperaturi extreme,
desicare, ngheare, iar bacteriile extremofile, pentru creterea optim, sunt dependente de condiii speciale de
mediu: presiunea uria a abisurilor marine, temperaturi mai mari de l00 grade, concentraii saline apropiate de
nivelul de saturare a soluiei de NaCl, pH mai mic de 2 sau mai mare de 10. Bacteriile cresc n condiiile
stresului produs de substratul energetic (energie chimic limitat sau chiar n prezena substanelor toxice).
Dintre bacteriile extremofile, speciile hipertermofile anaerobe (Pyrococcus furiosus) cresc la temperaturi mai
mari de 100o. Exist habitate naturale cu temperaturi crescute: solurile expuse radiaiei solare, platformele de
gunoi (cu temperaturi de 60-70o), pn la lava vulcanic, de circa 1000o.
Care este temperatura care permite desfurarea proceselor vieii ? Dup Brock, bacteriile cresc la
orice temperatur la care exist ap lichid, chiar deasupra punctului de fierbere. Pn de curnd, mediile
naturale cunoscute ca fiind populate de bacterii au avut circa 100 o. In ultimele decade s-au identificat medii cu
temperaturi de peste 350o, n emanaiile de pe fundul oceanelor, ridicnd problema existenei vieii n aceste
medii. Din astfel de medii s-au izolat specii hipertermofile anaerobe, ce cresc la peste 100 o. Deoarece legturile
covalente ale proteinelor, ale ARN, ADN, ATP i NADP hidrolizeaz la 250 o i pentru c structura teriar a
celor mai multe macromolecule este alterat la temperaturi mult mai mici, temperatura limit pentru procesele
vieii pare a fi de peste 100 o, dar mult sub 250o. Cel mai interesant grup de bacterii termofile este cel
hipertermofil. Izolarea lor a ridicat pragul termic la care se cunoate c exist via. Pyrodictium occultum
crete la 110o.
Poziia microorganismelor in sistemele de clasificare a lumii vii
In sistemul vechi de clasificare al lui Aristotel, lumea vie este mparit n dou regnuri: Plantae si
Animalia. Odat cu descoperirea altor grupe de organisme, aceast clasificare a devenit nesatisfctoare, astfel
nct numrul regnurilor s-a extins treptat
Hogg (l86o) si Haeckel (l866) au sesizat dificultile de incadrare a unor organisme (Euglena,
Chlamydomonas) si au propus un nou regn - Protista , pe care ulterior Hogg l-a denumit Protoctista , alturi de
Plantae i Animalia.
Acest sistem de clasificare a fost ameliorat de R. Stanier, prin diviziunea regnului Protista in dou
subregnuri:
- protiste inferioare, in care include microorganismele cu organizare de tip procariot (bacterii si
cianobacterii) ;
- protiste superioare, corespunznd microorganismelor eucariote si care cuprind algele, fungii si
protozoarele.
In aceas clasificare, regnul Protista include toate microorganismele eucariote i procariote, dar i un
numr de macroorganisme pluricelulare nedifereniate (alge marine, bazidiomicete) .
Copeland (l938) a propus sistemul celor patru regnuri de clasificare a lumii vii:
l. Regnul Monera, n care sunt incluse bacteriile i cianobacteriile.
2. Regnul Protoctista, cuprinznd organismele eucariote inferioare, cu organizare, n esen,
unicelular, sinciial sau multicelular, fr difereniere celular avansat (alge, fungi, mixomicete si
protozoare).
3. Regnul Plantae cuprinde plantele terestre i acvatice.
4. Regnul Animalia.
Whittaker (l969) a propus un nou sistem de clasificare, care mparte lumea vie n 5 regnuri: Monera,
Protoctista, Fungi, Plantae, Animalia.
Bergey a schimbat denumirea regnului Monera, n cel de Procaryota.
Criteriile de grupare ale sistemului se bazeaz pe trei niveluri de organizare: procariot; eucariot
unicelular i pluricelular, precum i pe existena a trei modaliti principale de nutriie: fotosintetic si
secundar absorbtiv caracteristic plantelor, ingestiv, tipic pentru majoritatea animalelor i absorbtiv,
caracteristic fungilor.
In acord cu aceste principii, sistemul de clasificare a celor 5 regnuri are urmtoarea structur:
l. Regnul Monera include organisme unicelulare, cu organizare de tip procariot: bacterii, cianobacterii,
actinobacterii. Toate sunt unicelulare sau unicelular-coloniale, cu excepia actinomicetelor, care au o organizare
de tip micelial. Modul de nutriie este absorbtiv, iar metabolismul este de tip foto- sau chimiosintetizant.
2. Regnul Protoctista cuprinde microorganismele eucariote: algele microscopice, fungii acvatici
flagelai i protozoarele. Limitele sale fa de celelalte regnuri nu sunt bine precizate. Termenul de Protoctista
este preferat celui de Protista, deoarece, pe lng protozoare sunt incluse i organisme pluricelulare (alge
marine, fungi inferiori), dar datorit absenei diferenierii tisulare sunt mai apropiate de organismele
unicelulare. Metabolismul este foto- sau chimiosintetizant, iar nutriia este absorbtiv sau ingestiv.
3. Regnul Fungi cuprinde organisme eucariote imobile ce formeaz spori. Din spori, prin germinare se
formeaz hifele, compartimentate n celule, prin septuri transversale. O aglomerare de hife formeaz miceliul.
Prezint procese sexuale de tip connjugativ, rezultatul fiind un miceliu dicarion. Starea dicariot este eventual
urmat de fuziune, iar diploidia este tranzitorie, deoarece prin diviziuni meiotice se formeaz spori haploizi. In
absena procesului sexual, sporii se formeaz pe cale asexuat la vrful unor hife specializate i se numesc
conidii. La germinare, sporii sexuai sau asexuai formeaz o hif.
Aproape toi fungii sunt aerobi, dar sunt heterotrofi fr excepie. Nutriia este de tip absorbtiv. Fungii
secret enzime care degradeaz moleculele nutritive complexe din mediul extern. Moleculele simple sunt
transportate prin peretele i membrana fungic.
4. Regnul Plantae este mprit n dou grupe: plante nevasculare (briofite) i plante vasculare
(trachaeofite). Ultimele au esuturi conductoare (xilem si floem). Xilemul transport apa i ionii de la rdcini
spre parile aeriene, iar floemul transport seva elaborat n fotosintez, de la nivelul frunzelor, n toat planta.
Plantele se dezvolt din embrioni diploizi. Spre deosebire de animale, formate n cea mai mare parte din celule
diploide i de fungi care sunt organisme haploide sau dicariote, plantele alterneaz n ciclul lor de dezvoltare,
generaiile haploid i diploid. Generaia haploid se numete gametofit, iar cea diploid se numete sporofit.
La briofite predomin faza de gametofit, iar sporofitul este mic i cu aspect total diferit. La tracheofite,
predomin sporofitul, iar gametofitul este constituit dintr-un grup de celule dependente de sporofit.
5. Regnul Animalia cuprinde organisme multicelulare, cu nutriie de tip ingestiv. Celulele sunt diploide
si se dezvolt din doi gamei haploizi: ovulul si spermatozoidul. Dup fertilizare rezult celula ou diploid, ce
strbate etapele de blastul i gastrul. Celulele animale sunt lipsite de perete i de plastide, dar au o
difereniere tisular foarte inalt.
Sistemele de clasificare cu 4 i 5 regnuri scot n eviden heterogenitatea microorganismelor. In
sistemul celor 5 regnuri, microorganismele aparin regnurilor Monera, Protoctista i Fungi.
Bacteriile se disting de celelalte organisme prin organizarea celular de tip procariot., pe care Chatton a
evideniat-o nc din l925.
Toate sistemele moderne de clasificare rezerv bacteriilor o poziie sistematic separat. Incadrarea lor
alturi de plante este arbitrar si nelogic (Stanier, l977), iar pstrarea ei n pofida numeroaselor argumente
tiinifice care probeaz contrariul este rezultatul refuzului de a privi lucrurile n fa.
Criteriile de evaluare a diversitii bacteriilor
Estimarea diversitii vieii este o provocare permanent a biologiei. Pentru microorganisme, scopul
este complicat de faptul c subiectul inventarierii nu este vizibil cu ochiul liber i nici nu se difereniaz pe
criterii morfologice. Estimrile anterioare ale numrului de specii bacteriene erau de 107- 109.
Clasificarea microorganismelor, anterior utilizrii analizei moleculare, s-a fcut pe baza urmtoarelor
criterii:
- morfologice (coci, bacili, spirili)
- tinctoriale (reacia Gram)
- structurale
- metabolice (prin evidenierea capacitii de a metaboliza anumite glucide sau aminoacizi)
- biochimice prin evidenierea markerilor moleculari caracteristici (mureina, acizii teichoici, lipidele cu
legturi eterice din membrana Archaea etc).
Criteriile clasice de clasificare a bacteriilor s-au dovedit utile pentru determinrile curente de laborator,
dar nu au permis elaborarea unui sistem de clasificare bazat pe criterii naturale i nici explicarea legturilor
filogenetice dintre procariote i eucariote.
Pornind de la observaia lui Chatton (l925), n acord cu care exist dou tipuri distincte de organizare a
lumii vii, procariot i eucariot, R. Stanier (n anii 60) a elaborat conceptul clasic, unificator, privind structura
i funciile celulei bacteriene, pe baza unor criterii discriminatorii de tipul "totul sau nimic". Procariotele au fost
definite pe baza diferenelor de compoziie chimic i a funciilor pe care le ndeplinesc structurile omologe ale
organismelor procariote i eucariote.
Conceptul elaborat de Stanier, dei a dominat gndirea microbiologic circa 30 de ani, nu corespunde
realitii tiinifice, deoarece nu cuprinde toate procariotele.
Clasificarea lumii vii n 3 domenii pe baza criteriilor moleculare
In ultimii 15-20 de ani, locul criteriilor clasice a fost luat de metodele de analiz molecular.
Descoperirea organismelor procariote, grupate n domeniul Archaea a invalidat conceptul clasic de
bacterie, bazat pe particulariti biochimice i funcionale discriminatorii, n raport cu celula eucariot.
Microorganismele Archaea creeaz o punte de legtur ntre tipul de organizare procariot i eucariot
(Woese, l994), permind elaborarea unui arbore filogenetic comun al organismelor procariote i eucariote.
Metodele de biologie moleculara, de secventiere a proteinelor si acizilor nucleici (denumite semantide
Zuckerkandl si Pauling, 1965) au permis conturarea filogeniei bacteriene intr-un sistem de clasificare care
cuprinde toate procariotele. Cu cat secventele semantidelor a doua organisme sunt mai asemanatoare, cu atat
ele sunt mai apropiate filogenetic. Acest criteriu presupune ca genele codificatoare sa nu se transfere pe
orizontala, de la o celula la alta.
La bacterii, secvenierea proteinelor pentru scopuri filogenetice este neadecvat, pentru c uneori, o protein
are o distribuie limitat sau este greu de secveniat (Zinder, l998).
Metodele de biologie molecular au fost orientate n primul rnd asupra studiului acizilor nucleici. S-a
determinat procentul G + C din ADN, dar testul nu este edificator, deoarece dou organisme cu secvene
diferite de ADN pot avea aceeai proporie de G + C. Testul ramne valabil pentru a caracteriza un organism
nou.
Tehnica secvenierii ADN a revoluionat sistemele de clasificare a bacteriilor, deoarece a permis
accesul la informaia coninut n ADN.
Un alt test furnizat de biologia molecular, util pentru studiul filogeniei bacteriene este hibridarea
ADN-ADN. ADN se denatureaz prin tratament termic sau cu baze. Metoda evideniaz capacitatea unei
secvene de ADN monocatenar al unui organism de a forma un heteroduplex cu ADN monocatenar de la alt
organism, pe baza omologiei secvenei de baze. Dac deosebirile secvenei de baze sunt mai mari de l5%,
heteroduplexul nu se formeaz, astfel c acest test este negativ pentru organismele ndeprtate filogenetic, dar
este decisiv pentru delimitarea speciei bacteriene.
Woese i Fox au propus, ca instrument filogenetic pentru evaluarea raportului evolutiv dintre
microorganisme, analiza secvenei ADN din care este transcris ARNr 16S (ribotipia).
Ribotipia presupune folosirea probelor capabile s detecteze genele ce codific ARNr. Utilizarea
genelor ARNr pentru identificarea bacteriilor i are originea n gradul nalt de conservare a genelor
codificatoare a ARNr. Genele pentru sinteza ARNr sunt organizate n operoni, n care genele individuale sunt
adeseori separate prin ADN necodificator. O prob de ARNr marcat sau ADN de la o specie va hibrida cu
variate regiuni ale ADN de la specii bacteriene nenrudite.
Tehnica de ribotipie implic izolarea ADN total al celulei bacteriene i fragmentarea sub aciunea unei
enzime de restricie. Rezult astfel o colecie de fragmente de ADN cu o distribuie uniform a dimensiunilor.
Fragmentele se separ prin electroforez n gel de agaroz i se transfer pe o membran de nitroceluloz prin
capilaritate (blotting). Apoi fragmentele sunt hibridate cu o prob marcat care conine genele ARNr (ARNr de
E. coli). Hibridarea apare numai n acele fragmente cromosomale care conin secvenele genelor ARNr.
Ribotipia a fost una dintre primele tehnici moleculare folosit cu succes pentru taxonomia vibrionilor.
Astfel s-au identificat (i s-au depozitat n GenBank) peste 78 000 secvene ale genei pentru sinteza ARNr 16S,
izolate de la bacterii cultivate sau obinute prin amplificare, direct de la probele din sol, fr cultivare.
In anii 70, C. Woese a iniiat studiul secvenei ARNr (16S), ca un posibil marker filogenetic, folosind
ARNr l6S cu lungimea l500-l600 nucleotide, component al subunitii mici (30 S) a ribosomului. Tehnica
presupune izolarea ARNr i digestia sa cu RN-aza T 1, care cliveaz dup fiecare rest de G. Rezult o varietate
de fragmente de oligoribonucleotide, cu lungimea de l-25 baze, fiecare terminndu-se cu G. Amestecul se
separ prin metoda electroforezei bidimensionale. Se nregistreaz tabloul oligonucleotidelor i se compar cu
cel obinut de la alte organisme, stabilindu-se un coeficient de asemnare, a crui valoare variaz ntre 0 (pentru
neasemnare) i 1 pentru identitatea complet. Astfel s-a evideniat c Cyanobacteria sunt asemntoare cu
cloroplastele. Secvenele obinute prin amplificarea direct a probei din mediu, ofer singura informaie
disponibil pentru 99% dintre procariotele din mediile naturale.
Studiile recente sugereaz c numrul total al speciilor bacteriene, evaluat prin secvena de baze a
genelor pentru ARNr 16S, este de peste 1030, grupate n cel puin 50 de filumuri bacteriene. Jumtate dintre ele
sunt alctuite n ntregime din bacterii necultivabile. Alte 3 filumuri sunt formate din specii cultivate n
proporie mai mic de 10%. Membrii a numai 6 filumuri au fost cultivai n proporie de peste 90%.
Rezultatele cercetrilor de nivel molecular au artat ca sistemul de clasificare a lumii vii n cele 5
regnuri nu este corect din punct de vedere filogenetic, din mai multe motive:
- cele dou regnuri de microorganisme eucariote Protista i Fungi sunt artificiale;
- plantele i animalele (Metaphyta i Metazoa) au evoluat din organisme eucariote unicelulare;
- n sistemul celor 5 regnuri, diferenele dintre Monera (Procaryotae) i celelalte 4 regnuri sunt mult mai
mari dect diferenele ntre reprezentanii celor 4.
Noul sistem de clasificare accept c forma de organizare eucariot nsumeaz o multitudine de
caractere comune i definete o unitate filogenetic.
Regnul Procaryotae (Monera) reunete diviziunea EUBACTERIA i ARCHAEA. La nivel citologic,
ambele sunt procariote, dar la nivel molecular ARCHAEA se disting de EUBACTERIA. Ele nu constituie o
unitate filogenetic, deoarece nu ntrunesc caractere unitare. La nivel molecular, organismele ARCHAEA se
aseamn mai mult cu EUCARIOTELE dect cu EUBACTERIILE. Din aceast cauz, regnul Procaryotae
(Monera) este un taxon nevalidat de datele de ordin molecular.
Woese (l990) consider c noul sistem filogenetic, pe baza criteriilor moleculare, permite mprirea
lumii vii n trei sisteme primare distincte. Clasificarea trebuie s recunoasc, n primul rnd, cele trei tipuri
fundamentale de organisme: Eubacteria, Archaea i Eucaryotae. Gruprile trebuie s aib statutul de domenii,
o categorie taxonomic superioar regnului. Autorul propune abandonarea denumirii de Archaebacteria,
deoarece sugereaz nrudirea strns cu Eubacteria, care n realitate nu exist. Cele trei domenii se numesc
Bacteria (sinonim Eubacteria), Archaea si Eucarya (sinonim Eucaryotae), care include organismele eucariote
(protozoare, alge, fungi, plante, animale).
Din punct de vedere fiziologic, microorganismele domeniului Archaea aparin la trei tipuri:
metanogene, halofile i sulf-dependente.
Metanogenele sunt strict anaerobe i produc gaz metan ca produs final al fermentaiei.
Cele sulf-dependente triesc n medii termofile i reduc sulful elementar sau oxideaz compuii
sulfului pentru a obine energie sub forma potenialului reductor. Sunt specii aerobe si anaerobe.
Halofilele triesc n medii hipersaline i unele se protejeaz de lumin cu un pigment care conine
carotenoizi. Sunt aerobe obligate.
Din punct de vedere filogenetic, domeniul Archaea are dou diviziuni distincte (Kandler, l993):
- Crenarchaeota (crenos = izvor) cuprinde exclusiv microorganisme hipertermofile dependente de sulf,
care i dobndesc energia prin reacii de reducere a sulfului (Thermoproteus, Pyrodictium etc.), sau de
oxidare a compuilor cu sulf (Sulfolobus). Sunt rspndite n mediul marin i n mediile vulcanice
terestre;
- Euryarchaeota cuprinde metanogenele chimiolitotrofe hipertermofile strict anaerobe ce cresc la ll0 o
(Methanopyrus) i metanogenele mezofile (din ap, sol, intestinul animalelor). Ali reprezentani sunt
halofilele extreme ce triesc n soluii saturate de NaCl (Halobacterium halobium), sulfat-reductorii
termofili (Thermococcus, Pyrococcus).
Clasificarea lumii vii in trei domenii recunoate independena filogenetic a bacteriilor (Eubacteria) i
a reprezentanilor Archaea.
Nici unul dintre sistemele de clasificare a lumii vii nu include virusurile. Ele formeaz un grup de
entiti infecioase fr echivalent n lumea vie, dar au relaii foarte strnse cu aceasta, deoarece se multiplic
numai n substratul celular viu.
Fig. 1: Arborele filogenetic universal, bazat pe secvena ARNr a subunitaii ribosomale mici, care cuprinde cele trei
domenii (dupa Woese, 1991)
Caracteristicile distinctive ale organismelor celor trei domenii

Particularitile lumii bacteriene au fost sesizate de F. Cohn, in perioada l850-l875. El le-a definit ca
organisme de dimensiuni microscopice, unicelulare, care se nmulesc prin diviziune direct. Din acest motiv, F.
Cohn este considerat intemeietorul microbiologiei ca tiin.
Arhitectura celular a organismelor grupate in domeniul Archaea se aseamn cu cea a eubacteriilor.
Moleculele componente ale celulelor Archaea se aseamn, unele cu ale eubacteriilor, altele cu ale eucariotelor,
dar exist i molecule specifice (tabel nr. 1).
Tabel nr. 1: Caracterele structurale si funcionale ale eubacteriilor, Archaea si eucariote
Caracter
Dimensiuni
Eubacterii
Civa m
Archaea
Civa m
Perete celular
Prezent
constant
(cu
excepia
micoplasmelor).
Conine
un
peptidoglican (mureina), totdeauna cu
acid muramic.
Membrana
plasmatic
Permeabilitate foarte selectiv (pentru

ap i molecule cu diametrul mai mic
de o,8 nm), pentru enzimele
degradative i pentru fragmente mici
de ADN. Nu fac endocitoz sau
exocitoz. Lipsesc sterolii (cu excepia
micoplasmelor). Lipidele sunt esteri ai
acizilor grai cu glicerolul.
Conine
proteina
denumit
pseudomurein
fr
acid muramic.
Lipsete
la
Thermoplasma.
Idem
Citoplasma
Este ntr-o permanent stare de gel,

necesar
meninerii
integritii
structurii materialului nuclear. Lipsesc
Eucariote
Celule mult mai mari (zeci de um).
Unele eucariote sunt unicelulare
Lipsete la celulele animale. La cele
vegetale conine celuloz, iar la fungi
conine chitin.
Are o plasticitate accentuat. Celula

face endocitoz prin fagocitoz sau
pinocitoz. Sterolii sunt prezeni
constant.
Lipidele au legturi
eter ntre glicerol i
catenele de C. Au
catene
izoprenoidice
ramificate cu metil.
Unele
lipide
sunt
tetraeteri.
Transformri reversibile sol-gel.
Prezint cureni citoplasmatici.
Idem
Membrane
intracitoplasmaice
membranele
interne.
Curenii
citoplasmatici
sunt
abseni.
Dimensiunile mici ale celulei uureaz
difuzia substanelor nutritive i de
catabolism.
Absente. Membrana poate trimite
invaginri la nivelul crora se
desfoar activiti respiratorii
Organite care
conin ADN
Citoschelet
---------------
Organite de
locomoie
Tipul
diviziune
de
Cromosomi
Nucleul
Distribuia
materialului
genetic dup
diviziune
Ribosomi*
Introni
Sensibilitatea
ribosomilor la
streptomicin
(inhiba
initierea
catenei
polipeptidice)
i
la
cloramfenicol
(inhiba
alungirea
Idem
Au organite delimitate de o membran

cu o structur trilaminar de unit membrane.
Mitocondrii, cloroplaste
Flagelul cu structur simpl, format

din molecule de flagelin, aezate
dup o simetrie helical. Flagelul este
pus n micare de un motor rotativ
situat ntre perete i membrana.
Energia de micare este produs de un
gradient protonic de o parte i de alta a
membranei
Diviziunea este simpl (direct).
Rareori are loc o diviziune asimetric
prin
nmugurire.
Bacteriile
filamentoase
sufer diviziuni multiple prin
segmentare sau fragmentare.
Un cromosom circular ce conine o,6l26 perechi de baze.
Material genetic accesoriu (plasmide)
Un echivalent nuclear denumit
nucleoid cu aspect de mas fibrilar,
nedelimitat de membran, ce
corespunde cromosomului bacterian.
Absena membranei delimitante a
materialului
genetic
este
particularitatea
fundamental
a
organizrii celulare de tip procariot.
Cromosomul
mezosom
70 S
este
legat
fizic
--------------
Prezent
Idem
Accesorii. Dac exist sunt cili sau

flageli de tip eucariot, cu o structur
complex de 2 x 9 + 2 tubuli.
Diviziunea este indirect, cu aparatul

mitotic si fazele
caracteristice.
Idem
Un cromosom circular
cu l-4 x lo6 baze
perechi i plasmide.
Nucleu tipic, cu nucleol.

Idem
de
Prin intermediul aparatului mitotic

Idem
70 S
Abseni
Un numr constant de cromosomi, cu

caracter de specie. ADN este asociat cu
proteine histonice. In mitocondrii i
cloroplaste, ADN dublu catenar circular
nu conine histone.
Prezeni n genele ce
codific
ARNr
si
ARNt.
Genele
ce
codific proteinele sunt
continui.
Ribosomii lor sunt 70
S, dar sunt rezisteni la
inhibitorii clasici ai
sintezei proteice la
Eubacteria
(streptomicin
i
cloramfenicol)
(--)
80 S. In mitocondrii si cloroplaste sunt ribosomi 70 S.

Prezeni n genele ce
proteinele, ARNr i ARNt.
codific
Nu inhiba sinteza proteinelor in

citoplasma, dar cele doua antibiotice
inhiba sinteza proteinelor in cloroplaste
si mitocondrii pentru ca au ribosomi cu
caracteristici functionale de tip
procariot.
catenei
polipeptidice.
Sensibilitatea
ribosomilor la
cicloheximid
(inhiba
alungirea
catenei
polipeptidice.
Sensibilitatea
ribosomilor la
toxina
difteric
Aminoa-cidul
iniator
al
catenei
polipepti-dice
Structura
ARNpolimerazei**
Operoni
Iniierea
transcrierii
Tempera-tura
maxim
de
cretere
Sinergonul
respirator i
fotosintetic
Formarea
endosimbiontilor
Capacitatea
de a forma
organisme
multicelulare
Capacitatea
de
difereniere
celular
Mecanisme
de
transfer
genetic
Toxina difterica
inhiba
alungirea
catenei peptidice, la
Archaea, pentru ca
inactiveaza un factor
de alungire.
(+)
Cicloheximida inhiba specific

functia ribosomilor celulei eucariote.
Efectul inhibitor asupra sintezei

proteinelor la eucariote se produce
dupa acelasi mecanism ca si la
Archaea.
N-formyl-metionina
Metionina
Metionina
Complex (minimum 7
subuniti).
Idem
Simpl (5 subuniti)
+
Factorul sigma
95 grade
Sinergonul se definete ca un
ansamblu de enzime ce functioneaz
coordonat pentru realizarea unei ci
metabolice. Cele dou sinergoane sunt
nempachetate, sediul lor structural
fiind membrana plasmatic. De aceea,
cele dou funcii sunt interrelate,
modificarea
uneia
antrennd
modificarea celeilalte
Nu
adpostesc
niciodata
endosimbioni
Absenta. Sunt organisme unicelulare.
Uneori formeaz asociaii coloniale,
dar totdeauna fiecare celul i
pstreaz individualitatea structural
i funcional. Prin diviziune reface
asociaia.
Foarte rar si limitat la structuri de
rezisten (sporul i echivalentul sau
chistul). Fac excepie mixobacteriile,
care au ciclu de dezvoltare i
capacitate de difereniere
Sunt heterospecifice. Transferul
informatiei genetice se face ntre
specii i chiar ntre genuri diferite.
Informaia genetic este ntr-o
permanent mobilitate, ceea ce face
dificil definirea speciei bacteriene.
+
Proteina care se leag
de secvena TATA
110 grade
Idem
Idem
Idem
Absent
_
Idem
60 grade
Cele dou funcii au sedii diferite i se
desfoar independent. Sinergonul
respirator este localizat n mitocondrii,
iar cel fotosintetic, n cloroplaste.
Inglobeaz frecvent celule pe care le

pstreaz ca endosimbioni
Uneori, celula eucariot constituie
organisme unicelulare, dar de cele mai
multe
ori
formeaz
organisme
multicelulare.
Foarte marcat
Fuziunea gameilor este intraspecific.

Idem
Pentru proteinele ribosomale, omologia dintre Archaebacteria i Eucariotae nu are corespondent la Eubacteria (Kandler,
l993). Dar Archaea i eucariotele sunt foarte diferite i se disting, fiecare n parte, de eubacterii.
**
Eucariotele se disting prin existena a 3 ARN-polimeraze *: ARN-polimeraza I transcrie ARNr; ARN-polimeraza II

transcrie ARNm; ARN-polimeraza III transcrie ARNt. Cele 12 subuniti ale ARN-pol II sunt codificate de de tot attea
gene i sunt foarte bine conservate la eucariote. De exemplu, 6 subuniti ale ARN-pol II uman pot nlocui omologele lor
la levuri. Toate cele 3 ARN-polimeraze ale celulelor eucariote sunt alctuite fiecare din 12 subuniti. 5 dintre ele sunt
comune pentru toate cele 3 ARN-polimeraze, iar 3 dintre ele sunt specifice ARN-pol II. Astfel, ARN-polimerazele sunt
asamblate din subuniti comune i subuniti specifice de clas.
Uneori, moleculele Aarchaea se aseamn cu omologele lor de la eucariote, mai mult dect cu ale
eubacteriilor.
Tipuri morfologice de bacterii
Anatomia bacterian studiaz forma celulelor, ultrastructura si structura molecular a diferitelor
organite celulare, in strns corelaie cu funciile pe care le indeplinesc.
Forma celulelor bacteriene este controlat genetic i se realizeaz n mare masur prin intermediul
peretelui care confer celulei un grad de rigiditate i prin aceasta, forma tipic (fig. 2). Peretele celular este
rigid, dar n acelai timp, suplu i elastic, adic este deformabil.
Fig. 2: Tipuri morfologice de bacterii: A = diplococi; B = streptococi; C = stafilococi; D = bacili; E = cocobacili; F = bacili
fusiformi; G = forme bacilare filamentoase; H = vibrioni; I = spirili; J = sarcina
Datorit elasticitii sale, forma celulei bacteriene, n diferite condiii de mediu are tendina s varieze
ntre anumite limite, ns forma tipic a celulelor unei populaii rmne dominant.
Celulele bacteriene aparin urmtoarelor tipuri morfologice:
a. Forma sferic (sferoidal) denumit coc (coccus, latin = smn). Celulele sunt izodiametrice. Dup
modul de grupare se disting urmtoarele subtipuri:
- cocul simplu (celule solitare)
- diplococ (celule perechi)
- streptococ (celule asezate n lan, streptos = lan)
- tetracoc (tetrada)
- sarcina (dou tetrade suprapuse)
- stafilococ (staphylos = ciorchine)
La diplococi i streptococi, diviziunile celulare se succed dup un singur plan. La ali coci
(Pediococcus, Thiopedia, Lampropedia, Deinococcus), prin diviziuni succesive se formeaz grupri de 4 celule
aranjate n tetrade bidimensionale. Ulterior se formeaz tablete de form ptrat, de 16-64 celule, ceea ce
denot existena a dou planuri de diviziune, perpendiculare unul pe cellalt i care se succed alternativ. La
Sarcina i la Synechocystis, dup trei diviziuni celulare rezult 8 celule aranjate n pachete tridimensionale
cuboide. Diviziunile se succed dup toate cele trei planuri ale spaiului, fiecare perpendicular pe celelalte dou.
b. Forma bacilar (bacillus, latin = bastona). Diametrul mare (lungimea) depete de cteva ori pe
cel transversal. Extremitile celulei sunt rotunjite sau tiate n unghi drept. Se disting mai multe subtipuri
morfologice, n funcie de modul de grupare a celulelor:
- cocobacil, o forma intermediar intre coc si bacil
- diplobacil
- streptobacil
- rozet (stea)
- palisad
- litere chinezeti
c. Forma spiralat, cu cteva subtipuri:
- vibrion
- spiril
- spirochet
La spirili, spirele sunt rigide i puine, iar la spirochete sunt laxe i numeroase.
Celulele unei populaii bacteriene unitare, teoretic aparin aceluiai tip morfologic, dar frecvent apare
un polimorfism, mai accentuat n mediile naturale (ap, sol, tractul digestiv). Morfologia celulelor este mai
uniform n culturile bacteriene in vitro, dar se modific n cursul evoluiei unei populaii celulare. De aceea,
pentru a evita confuziile, descrierile morfologice, considerate tipice pentru o populaie bacterian se refer la
celulele cultivate n laborator pe medii optimale (medii care conin toate substanele necesare creterii
celulelor), in condiii adecvate de temperatura, pH, grad de aerare.
Deoarece n culturile bacteriene mbtrnite apar frecvent forme de involuie, cu morfologie atipic,
forma caracteristic a celulelor unei specii este aceea a celulelor tinere, dintr-o cultur bacterian aflat la
sfritul perioadei de multiplicare.
Bacteriile care se abat de la tipurile morfologice eseniale sunt mai rare. Astfel se disting: bacterii
ptrate, bacterii prostecate, bacterii cu apendice acelulare, bacterii cu trichoame (filamentoase), bacterii
miceliene.
Bacterile ptrate, au fost descrise de Walsby (l980) n apele hipersaline din peninsula Sinai. Pe seciune
au aspect de lentil biconcav, datorit coninutului foarte mic de ap. Din aceast cauz, presiunea intern a
celulei este practic nul. Nu se exercit presiune asupra nveliurilor celulare. Pentru ele s-a propus denumirea
de gen Quadra i aparin archaebacteriilor.
Bacteriile prostecate (prosteca = apendice, coad, anex, adaus). Caracteristica structural este
existena prostecii, o prelungire semirigid n continuarea celulei, cu diametrul mai mic dect al celulei mature.
Prosteca este o prelungire celular, ceea ce o deosebete de structurile apendiculare acelulare.
Se disting dou categorii de bacterii prostecate: bacterii pedunculate (de exemplu, Caulobacter);
bacterii prostecate care nmuguresc (de exemplu, Hyphomicrobium).
Bacteriile cu apendice acelulare (de exemplu, Gallionella) sunt reniforme. De pe faa concav pornete
un apendice acelular lung, format dintr-un produs de secreie a celulei
Bacteriile ce formeaz trichoame (de exemplu Beggiatoa, Sphaerotilus) au aspectul unui filament
multicelular, n care celulele vin n contact prin extremitile lor i sunt nvelite printr-un nveli parietal comun.
Bacteriile miceliene (actinomicete, iar denumirea nou este aceea de actinobacterii) au un aparat
vegetativ reprezentat de micelii fine, ramificate, cu organizare procariot.
CAPITOLUL I
STRUCTURA I FUNCIILE CELULEI BACTERIENE

Cunoaterea structurii interne a celulei bacteriene este rezultatul utilizrii tehnicilor de citochimie i de
microscopie electronic. Tehnicile de citochimie presupun utilizarea unor metode de colorare selectiv, adic a
coloranilor cu afinitate pentru o anumit structur celular. Astfel s-a demonstrat structura si arhitectura
molecular a componentelor celulare. Prin arhitectur molecular se intelege modalitatea de aranjare ordonat a
moleculelor constitutive ale unei structuri.
Structura reper a celulei bacteriene este peretele celular. In raport cu peretele se disting structurile
intraparietale (care alctuiesc protoplastul bacterian) i structurile extraparietale (fig. 3).
Structurile intraparietale sunt:
- spaiul periplasmic
- membrana plasmatic
- mezosomul
- citoplasma
- ribosomii
- incluziile
- vacuolele
- sporul
- aparatul fotosintetic
- rhapidosomii (rhapidos = baston) incluzii ribonucleoproteice n form de baston
- magnetosomii incluzii intracelulare delimitate de membran, cu structur cristalin formate din
magnetit (Fe3O4). Magnetosomii confer dipol magnetic permanent celulei, permindu-i s se
alinieze pasiv la cmpul geomagnetic. Bacteriile care produc magnetosomi manifest magnetotaxie,
adic procesul de orientare i migrare de-a lungul liniilor cmpului magnetic.
Structurile extraparietale sunt reprezentate de;
- glicocalix cu variantele sale structurale: capsula i glicocalixul comportamental;
- flageli
- fimbrii i pili
- spini structuri pericelulare groase la baz i ascuite la vrf.
Unele structuri (membrana, citoplasma, nucleoidul, ribosomii) sunt eseniale (obligatorii) i se gsesc
la toate celulele bacteriene. Altele sunt facultative (spor, aparat fotosintetic, capsul, flageli), fiind prezente
numai la anumite grupe de bacterii.
Fig. 3. Diagrama organizrii unei celule procariote (un bacil cu flagel polar).
Peretele celular
Perete celular este o structur rigid de nveli, care nconjur complet celula bacterian. La cele
mobile, peretele este strbtut de flageli. Structura parietal lipsete la bacteriile din grupul Mycoplasma,
precum i la cele halofile extreme (cele care triesc n medii saline foarte concentrate, unde structura
protectoare fa de ocul osmotic nu este necesar).
Evideniere. La microscopul optic, peretele celular se evideniaz dup colorare selectiv, cu colorani
de mare afinitate fa de componentele sale chimice. La microscopul electronic, peretele se evideniaz fie
direct, fie dup utilizarea unor artificii de tehnica, ce constau in lezarea mecanic a structurii parietale cu perle
de sticl sau cu ultrasunete. Coninutul celular se pierde i peretele rmne ca un sac gol i rigid, care
pstreaz forma original a celulei, ceea ce sugereaz rolul esenial al peretelui n determinarea formei
bacteriene.
Grosimea peretelui este cuprins ntre l5-30 nm (uneori pn la 80 nm).

n ciuda strii incerte a taxonomiei bacteriene, un criteriu empiric cu o valoare practic deosebit n
clasificarea i identificarea procariotelor este comportamentul la coloraia Gram (C. Gram 1884). Caracterul
Gram pozitiv sau Gram negativ reflect deosebiri structurale majore ale peretelui.
n funcie de particularitile structurale ale peretelui, bacteriile se mpart in 4 categorii:
l. Firmacutes (firmus = tare; cutis = nveli) sunt bacteriile Gram pozitive, cu perete celular gros i
rigid, la care mureina reprezint pn la 80% din greutatea uscat a acestei structuri i bacteriile acidoalcoolo-rezistente
2. Gracillicutes (gracillis = subire, fin) sunt bacteriile Gram negative cu perete subire, la care mureina
reprezint circa l0% din greutatea uscat a peretelui.
3. Mollicutes sau Tenericutes (mollis, tener = moale) cuprinde bacteriile din grupul Mycoplasma, lipsite
de perete. Periferia celulei este acoperit de o membran ce conine steroli, cu rol protector fa de liza
osmotic. Sunt cele mai mici bacterii cunoscute, cu capacitatea de a crete pe medii inerte. Se dezvolt ca
saprobionte n
cavitile organismului uman i animal sau sunt patogene pentru om, animale i plante.
4. Mendosicutes (mendosus =o structur cu defecte). Noiunea desemneaz organismele domeniului
Archaea, care au perete celular din care lipsete mureina.
Marea majoritate a bacteriilor cunoscute aparin grupului Gram pozitive sau Gram negative.
Structura molecular a peretelui la bacteriile Gram pozitive
La bacteriile Gram pozitive, peretele celular este gros, rezistent i rigid. Componenta esenial este
mureina, denumit nc i peptidoglican, glicopeptid, mucopeptid sau glucozaminopeptid. Mureina formeaz
un strat rigid, adiacent membranei plasmatice i sub aspectul compoziiei chimice este unitar la toate
eubacteriile (Gram pozitive i Gram negative).
Mureina este alctuit dintr-o component peptidic i una glucidic. Componenta glucidic repetitiv
este un dizaharid format din N-acetil-D-glucozamin i acid N-acetilmuramic, legate l-4. Acidul Nacetilmuramic rezult prin stabilirea unei legturi ester ntre N-acetil-D-glucozamin i acidul lactic (Fig. 4, 5).
Fig. 4. Derivaii glucidici cei mai comuni n structura peretelui celular bacterian :
N-acetil-glucozamina si acidul N-acetilmuramic.
Fig. 5. Structura glicanului tetrapeptidic, una dintre unitaile repetitive ale peptidoglicanului structurilor parietale. Aceasta
structura chimica se gasete la E. coli, dar bacteriile conin si ali aminoacizi.
La fiecare unitate diglucidic este legat o component peptidic, reprezentat de un tetrapeptid, a crui
compoziie n aminoacizi este variabil n funcie de specie, dar conine L-alanin, acid D-glutamic, acid
diaminopimelic (derivat al lizinei) sau lizina i D-alanina i se leag de acidul N-acetilmuramic. Acidul Nacetil muramic i D-aminoacizii sunt markeri biochimici ai eubacteriilor.
a. Acidul diaminopimelic, derivat al lizinei. b. Lizina.
Legturile glicozidice nu sunt suficiente pentru a asigura rigiditatea structurii parietale. Tetrapeptidele
sunt legate prin puni peptidice transversale (Fig. 6). La bacteriile Gram negative, punile transversale reunesc
gruparea NH2 a acidului diaminopimelic, cu gruparea COOH a D-alaninei terminale a altei grupri peptidice.
a.
d
Fig 6. (a) Structura chimic general a peptidoglicanului. (b) Sgeile indic situsurile la care peptidoglicanul poate fi
atacat de hidrolazele peretelui celular. Sunt reprezentate trei catene de peptidoglican ce constau din resturi alternante de
acid N-acetil muramic i N-acetil glucozamina. Tetrapeptidele legate de acidul N-acetilmuramic sunt interconectate prin
puni de pentaglicin. (c) La S. aureus tetrapeptidele sunt conectate prin puni de pentaglicin. (d) Reprezentarea structurii
generale a peptidoglicanului (G = N-acetilglucozamina ; M = acid N-acetilmuramic). Liniile groase reprezint legaturi
peptidice transversale (dupa Brock, 1988).
La bacteriile Gram pozitive, legtura transversal a tetrapeptidelor nvecinate este realizat de o punte
peptidic, cu compoziie variabil. La S. aureus este format de pentaglicin. Cu ct numrul de legturi
peptidice este mai mare, cu att crete rigiditatea sa.
Se formeaz astfel o structur covalent perfect continu n jurul celulei, o molecul mureinic gigant,
un adevrat sac mureinic, cu structur tridimensional dinamic.
Peptidoglicanii diferitelor specii difer prin aminoacizii 2 i 3 ai tetrapeptidului i prin frecvena
punilor transversale de pentaglicin. Speciile patogene au o frecven superioar a punilor transversale, ceea
ce se coreleaz cu o rezisten mai mare a mureinei la aciunea factorilor litici din umorile organismului
(lizozimul etc.).
La nivelul sacului mureinic sunt localizate enzimele care modeleaz creterea sa: murein-hidrolazele
taie legturile chimice ale mureinei, iar murein-sintetazele inser noi uniti de construcie.
Importana mureinei, ca element structural esenial al peretelui celular al bacteriilor Gram pozitive a
reieit din studiul aciunii a doi ageni antibacterieni: lizozimul i penicilina.
Lizozimul cliveaz legturile glicozidice l-4 i hidrolizeaz mureina celulelor aflate n faza
staionar.
Penicilina inhib celulele bacteriene aflate n faza de cretere, deoarece inhib treapta final a sintezei
mureinei, reacia de transpeptidare, adic formarea legturilor peptidice transversale ntre catenele de glican
adiacente. Inhibiia transpeptidrii sub aciunea penicilinei duce la formarea unui peptidoglican subire, urmat
de liza i moartea celulei, pentru c autolizinele continu s funcioneze, iar alte puni peptidice nu se mai
formeaz. De aceea, penicilina este activ numai asupra celulelor care cresc. In celulele care nu cresc,
autolizinele nu sunt active i peptidoglicanul nu este degradat.
Mureina formeaz o matrice, n care se gsesc ali polimeri: polizaharide, acizi teichoici.
Acizii teichoici sunt molecule lungi i flexibile. Din punct de vedere chimic sunt polimeri de l-3poliglicerol-fosfat sau de poli-ribitol-fosfat, legai fosfo-diesteric. Polimerii formeaz axul central al moleculei.
Gruprile OH libere ale glicerolului i gruparea OH C 3 a ribitolului sunt ocupate de resturi de D-alanin, Dglucoz sau de N-acetilglucozamin.
Poliglicerol fosfat
Poliribitol fosfat
Bacteriile Gram pozitive au dou categorii de acizi teichoici:
a) acizi lipoteichoici (ALT) traverseaz peptidoglicanul i cu o extremitate se leag de glicolipidele din
membrana, iar cellalt capt este liber la suprafaa celulei;
b) acizi teichoici parietali, ataai covalent de resturile de acid N-acetilmuramic ale mureinei.
mpreun cu mureina, acizii teichoici formeaz o reea polianionic sau matrice, cu rol n meninerea
echilibrului cu cationii metalici, dar i n reglarea traficului de ioni, nutrieni, proteine i antibiotice.
Funciile acizilor teichoici sunt multiple:
- acizii teichoici sunt structuri moleculare filamentoase, care confer un plus de rigiditate peretelui celular
al bacteriilor Gram pozitive ;
- fiind polianionici, au rol n transportul cationilor metalici n/i din celul;
- au rolul de receptori de fagi;
- au rolul de adezine (mediaz aderena celulei la substrat, favoriznd formarea biofilmelor), confer
rezisten la antibiotice. La bacteriile patogene, acizii teichoici sunt un factor de virulen, deoarece au
proprieti chimiotactic negative fa de fagocite. Acizii teichoici parietali sunt imunogeni, att n stare
liber ct i asociai celulei.
Uneori bacteriile secret cantiti mari de acizi teichoici solubili.
Nu toate bacteriile Gram pozitive au acizi teichoici: cele care nu au acizi teichoici, poart molecule
anionice cu funcii asemntoare (de exemplu, lipomananul, n locul ALT la Micrococcus luteus).
Peretele celular la bacteriile Gram negative
Bacteriile Gram negative se caracterizeaz prin prezena membranei externe. Analiza filogeniei
organismelor procariote pe baza secvenierii proteinelor a dus la concluzia existenei unor diferene filogenetice
majore ntre organismele cu nveli dublu membranar (didermice) i cele cu membran simpl
(monodermice).
La bacteriile Gram negative, mureina reprezint numai 2,5-l0% din greutatea uscat a peretelui.
Peretele lor este mai complex, datorit unei structuri caracteristice denumit membrana extern a peretelui
celular, o replic structural a membranei plasmatice, care poate fi astfel considerat ca membran intern (fig.
7).
Fig. 7. Reprezentarea schematic a structurii moleculare a peretelui la bacteriile Gram negative. Proteinele trimere
matriceale din membrana externa sunt asociate cu lipoproteine i cu lipopolizaharide (LPS). LPS sunt legate covalent de
peptidoglican.
La microscopul electronic, peretele celular apare pluristratificat, datorit structurii trilaminare a

membranei externe a peretelui.
Mureina este localizat n stratul cel mai intern al peretelui. Dup un tratament adecvat, membrana
extern se poate ndeprta i se obine sacul mureinic pur, extrem de fin care pstreaz forma original a celulei
i care sugereaz c mureina ar putea fi o reea bidimensional (un monostrat molecular), n timp ce la
bacteriile Gram pozitive cantitatea de peptidoglican corespunde la 20 de straturi moleculare sau mai mult.
Membrana extern a peretelui conine fosfolipide (35% din greutate), proteine (l5%) i lipopolizaharide
(50%).
Proteinele membranei externe se numesc porine, deoarece regleaz permeabilitatea i constituie
canalele membranare de transport celular. Iniial s-au descris trei tipuri de porine trimerice : OmpF, OmpC i
PhoE. Analiza prin metoda cristalografiei cu raze x relev c porinele sunt proteine transmembranare a cror
configuraie secundar este cea de -pliere. Aproape invariabil, secvenele porinelor la captul C-terminal au
fenil-alanina. Rareori restul C-terminal este triptofanul. O celul de E. coli produce circa 105 molecule porine,
al cror rol este barier selectiv de permeabilitate. In mediul hiperosmotic, numrul porinelor diminu.
Cel puin la enterobacterii, dublul strat fosfolipidic al membranei externe este asimetric:
- stratul extern conine aproape exclusiv LPS
- stratul intern conine aproape exclusiv fosfolipide.
Lipoproteinele leag ferm membrana extern, de peptidoglicanul profund.
Lipopolizaharidele (LPS) sunt inclavate n membrana extern. Ele sunt de fapt endotoxinele bacteriilor
Gram negative (Salmonella, Shigella, Escherichia) (fig. 9). Dei sunt localizate la suprafaa celulei, se numesc
endotoxine, deoarece se elibereaz numai dup pierderea integritii celulei.
Fig. 8. Raporturile macromoleculelor componente ale peretelui celular (dupa Todar, 2004).
Structura chimic a moleculei de LPS

Din punct de vedere chimic, LPS sunt molecule complexe, fiind alctuite dintr-o fracie lipidic i una
polizaharidic. De aici deriv proprietile amfipatice ale acestui agregat molecular, conferit de grupri polare
hidrofile i grupri apolare hidrofobe.
Datorit poziiei lor externe, LPS se pot extrage din celule, cu fenol 45- 60%.
La microscopul electronic, filamentele LPS au o structura trilaminar, corespunztoare celor dou straturi
poliozidice i stratului lipidic.
Cele mai studiate LPS sunt cele produse se tulpinile de Salmonella. Din punct de vedere structural, molecula
LPS are trei regiuni(fig. 9):
- o regiune polizaharidic extern (polizaharidul O)
- o regiune oligozaharidic intermediar (regiunea R)
- o regiune intern hidrofob, denumit lipidul A, prin care LPS se ancoreaz n membrana extern, printre
moleculele fosfolipidice.
Fig. 9. Reprezentarea schematica a structurii moleculei de LPS
Regiunile intermediar i intern ale moleculei LPS au compoziie chimic relativ constant la diferite
specii de bacterii Gram negative.
Polizaharidul regiunii externe este un polimer de uniti oligozaharidice repetitive i confer
specificitate serologic de grup, diferitelor variante antigenice de Salmonella. Unitile oligozaharidice conin
2-4 glucide: D-manoza, D-galactoza, L-ramnoza, o dezoxihexoza, o didezoxihexoza. Didezoxihezozele sunt
zaharuri care nu exist n stare liber n natur, dar intr frecvent n structura polizaharidului enterobacteriilor
i au primit denumiri care deriv de la speciile de origine: abequoza, tiveloza, paratoza, colitoza.
Variaia antigenic a polizaharidului regiunii externe se amplific pe urmtoarele ci:
- schimbri ale poziiei legturilor (de exemplu, 1-4 n loc de 1-6);
- configuraii moleculare modificate;
- nlocuiri la nivelul diferitelor subuniti repetitive;
- deleia sau substituia unui rest glucidic din subunitile oligozaharidice.
Regiunea centrala a LPS (miezul R) are o variabilitate chimic mult mai restrns i confer
specificitate de gen. Oligozaharidul este legat covalent de lipidul A printr-un trizaharid, 2-ceto-3-dezoxioctonat
(KDO).
Lipidul A este inserat i ancorat, prin catenele acizilor grai, cu lipidele membranei externe. Intreaga
molecul LPS este astfel orientat, nct polizaharidul O se proiecteaz la exterior i determin specificitatea
antigenic a celulei bacteriene.
La Salmonella, lipidul A este alctuit din dizaharide de D-glucozamin, legate l-6 (fig. 10). Perechile
de D-glucozamin sunt interconectate l-4, prin puni pirofosfat.
Fig. 10. Structura lipidului A al lipopolizaharidului de Salmonella, cu trizaharidul KDO i cu resturile de acizi grai.
Gruprile OH din poziiile 3, 4 si 6 ale

palmitic, miristoximiristic, hidroximiristic).
fiecrui dizaharid sunt substituite de acizi grai (lauric,
Grupul OH din poziia 3 se leag de componenta polizaharidic (acidul 2-ceto,3-deoxioctanoic)

(KDO).
Gruprile -NH2 ale glucozaminei sunt substituite de acidul D-3-hidroximiristic.
Componenta lipidic confer moleculei LPS, calitatea de toxin. Lipidul A are proprieti endotoxice,
evideniate la mutantele R care sintetizeaz LPS incomplet, cruia i lipsete polizaharidul O i unele
componente ale oligozaharidului regiunii intermediare R.
In mediile naturale, cele mai multe bacterii sintetizeaz polizaharidul O i formeaz colonii S. Cele care
nu sintetizeaz polizaharidul O formeaz colonii R. Polizaharidul O nu este factorul determinant al patogenitii,
deoarece formele coloniale R ale B. pertusis, N gonorrhoeae sunt patogene.
Permeabilitatea membranei externe
Membrana extern, ca i celelalte membrane biologice, este alctuit din stratul lipidic dublu, puin
permeabil pentru moleculele hidrofile. Membrana extern conine proteine, denumite porine, ce formeaz canale
pentru influxul nutrienilor i pentru eliminarea produselor de catabolism.
Porinele s-au gsit la toate bacteriile Gram negative i chiar la un grup de bacterii Gram pozitive:
Corynebacterium-Nocardia-Mycobacterium, care produc un perete celular bogat n lipide, asemntor dublului
strat.
Porinele clasice OmpF i OmpC transport preferenial cationi, iar PhoE, transport anioni.
Moleculele de LPS formeaz baza structural a membranei externe.
LPS este polianionic datorit sarcinilor negative ale lipidului A i leag cationi. Moleculele adiacente
polianionice de LPS sunt aparent legate electrostatic, una de alta, prin cationi bivaleni (Ca 2+, Mg2+) i formeaz o
structur compact ca un acoperi de igl, pe suprafaa membranei externe. Situsurile LPS care leag cationii
sunt eseniale pentru integritatea membranei externe, dar n acelai timp ele reprezint clciul lui Ahile al
acestei structuri, deoarece antibioticele policationice din grupul polimixinei se complexeaz avid cu LPS i
dezorganizeaz membrana extern, mrind permeabilitatea pentru agenii cu aciune asupra membranei sau
componentelor citoplasmatice. Toi agenii policationici se leag de LPS anionice, cu o afinitate variabil.
Bacteriile Gram negative sunt rezistente la detergenii anionici i neutri, dar sunt sensibile la detergenii
monocationici.
Agenii chelatori ai ionilor de Ca 2+ i Mg2+ dezorganizeaz i permeabilizeaz membrana extern.
n clasificarea empiric a bacteriilor, un rol deosebit l-a avut comportamentul lor la coloraia Gram.
Caracterul Gram pozitiv sau Gram negativ reflect deosebirile structurale majore ale celor diviziuni. Coloraia
Gram implic tratamentul succesiv al celulelor cu cristal-violet (un colorant bazic), urmat de tratamentul cu
soluie de iod i ulterior, extracia cu un solvent organic polar (alcool sau acetona). In celul, cristal-violetul i
iodul formeaz un complex insolubil. Celulele care rezist etapei decolorrii i rein complexul insolubil (cristal
violet-iod) albastru nchis sunt celule Gram pozitive, iar cele care nu rein colorantul sunt Gram negative
Reacia Gram nu se coreleaz direct cu compoziia chimic a peretelui, ci depinde de structura sa fizic,
de starea fiziologic a celulei, de integritatea ei structural. Astfel, levurile, dei au perete celular gros, dar cu o
compoziie chimic diferit de a mureinei, se coloreaz Gram pozitiv.
Peretele celular la Archaea
Archaea constau din 2 linii filogenetice:
linia metanogen include halofilele extreme (Thermococcus, Thermoplasma) ;
termofilele extreme (Sulfolobales i Thermoproteales).
La Archaea, peretele celular prezint diferene structurale majore, comparativ cu ale eubacteriilor (fig.
12). Diferitele specii de Archaea se coloreaz Gram pozitiv sau Gram negativ. Peretele lor nu conine acid
muramic sau D-aminoacizi, markeri biochimici ai mureinei.
-
Fig. 11. Structura pseudomureinei, polimerul peretelui celular la Methanobacterium sp.
Din punct de vedere chimic, peretele la Archaea este heterogen. La Archaea Gram pozitive
(Methanobacterium - productoare de metan), peretele conine o pseudomurein, metanocondroitin sau
hetropolizaharide.
Pseudomureina (markerul biochimic al metanobacteriilor) este alctuit din uniti repetitive formate
din dou zaharuri aminate (N-acetilglucozamin i acidul N-acetiltalosaminuronic, markerul biochimic al
metanobacteriilor), legate l-3. Resturile acidului N acetiltalosaminuronic sunt legate prin puni peptidice (ca
i la murein), iar aminoacizii sunt numai izomeri L. Legturile l-3 ale pseudomureinei sunt rezistente la
aciunea lizozimului. Componenta peptidic este alctuit din 3 L-aminoacizi: acid glutamic, alanina i lizina.
Ambele componente pot fi modificate : N-acetilglucozamina poate fi nlocuit total sau parial de Nacetilgalactozamin, iar resturile de glicin, treonin, ornitin sau asparagin pot lua locul celor 3 aminoacizi,
dac sunt n concentraii mari n mediul de cretere.
Mureina i pseudomureina sunt componente omologe ca structur i funcie, dar diversitatea
compoziiei chimice exclude originea lor comun.
La Methanosarcina, celulele au un perete celular ce const din N-acetilgalactozamin, acid glucuronic
sau galacturonic, glucoz i manoz. Forma celulei este meninut de un polimer fibrilar alctuit din acid uronic
i 2 resturi de N-acetilgalactozamin. Polimerul formeaz o matrice, reminiscen a esutului conjunctiv al
eucariotelor.
La Methanospirillum i Methanothrix, lanurile de celule sunt nvelite de o teac tubular format din
proteine i glucide. In interiorul tecii, fiecare celul este nconjurat de un strat format din subuniti proteice,
cu aezare bidimensional paracristalin (strat S) (Konig, 1988).
Archaea cu alte tipuri de nveli celular reacioneaz Gram negativ, dar structura tipic de perete Gram
negativ lipsete. La g. Halobacterium, la Sulfolobales i Thermoproteales (specii termofile extreme) cel mai
comun nveli celular, care menine forma celulei, este reprezentat de un singur strat molecular alctuit din
subuniti proteice sau glicoproteice (stratul S), strns asociate cu faa extern a membranei.
Peretele celular acido-alcoolo- rezistent al al micobacteriilor
Cel de al IV-lea tip de structur chimic a peretelui se gsete la micobacterii (fig. 13). Unele genuri
(Mycobacterium tuberculosis, Corynebacterium diphteriae, Nocardia asteroides) conin lipide complexe, care
nu se gsesc n structura parietal a altor bacterii. Ele se coloreaz slab dup protocolul coloraiei Gram, dar se
coloreaz la cald cu fuxin bazic concentrat i sunt rezistente la decolorare succesiv cu acid sulfuric diluat i
alcool etilic 96%. Aceste organisme se numesc acido-alcoolo-rezistente.
Fig. 12. Reprezentarea schematic a componentelor peretelui celular acido-rezistent la grupul Mycobacterium Nocardia.
Regiunea extern a nveliului conine unitai lungi de acid micolic legat de arabinogalactan (dupa Holt, 1998).
Rezistena la decolorare se datoreaz compoziiei chimice a peretelui celular. Peptidoglicanul

micobacteriilor conine acid diaminopimelic ca acid diaminic major, iar acidul muramic este N-glicozilat (i nu
N-acetilat).
Un alt compus major parietal al micobacteriilor este polizaharidul cu gr. mol. mare
arabinogalactanul, un copolimer polizaharidic, alctuit din arabinoz i galactoz, esterificate cu acizi grai cu
caten lung acizii micolici cu 70 - 90 atomi de C. La Corynebacterium i Nocardia, acizii grai au caten
mai scurt (40-60 de atomi de C). Glicolipidele complexe din structura peretelui confera proprietatea de acidoalcoolo-rezistenta.
A II-a categorie de lipide, cele libere sunt lipooligozaharide ce conin trehaloza i lipoarabinomanani.
Stratul S
Stratul S este o component a nveliului celular, alctuit dintr-o reea cristalin tridimensional de
subuniti proteice. La bacteriile Gram pozitive i la Archaea Gram pozitive, reeaua cristalin a stratului S este
ancorat de matricea rigid a peptidoglicanului i respectiv a pseudomureinei. La bacteriile Gram negative,
stratul S este ancorat de LPS ale membranei externe.
Subunitile proteice sunt aezate simetric: simetrie ptrat, hexagonal sau simetrie oblic. Grosimea
stratului S este de 5-25 nm. Reeaua moleculelor proteice componente formeaz pori de 2-10 nm. Proteinele
stratului S sunt glicozilate i predomin aminoacizii hidrofobi (fig. 13).
Stratul S are rol de nveli protector, de sit molecular, de canale ionice i mediaz interaciunea
celulei cu substratul.
Fig. 13. Imagine electrono-optic a stratului S la Aquaspirillum serpens pe preparate colorate negativ. Se distinge simetria
hexagonal (dup Koval S., 1988).
Funciile peretelui celular

Peretele celular este o structur cu rol esenial n arhitectura celular, pentru c fiind rigid, determin
forma celulei i meninerea ei. Dup pierderea coninutului celular, sacul mureinic pstreaz forma iniial a
celulei.
Mureina confer elasticitate celulei, permind mrirea volumului ei prin cretere. Elasticitatea este
capacitatea de a suferi deformri la presiune, fr alterarea structurii celulare.
Peretele celular regleaz funcia de permeabilitate, constituind o barier mecanic suplimentar, alturi
de membrana citoplasmatic. La bacteriile Gram pozitive, peretele are o porozitate de 1,1 nm, permind
trecerea moleculelor mai mici de l200 Da*.
*
Un dalton este egal cu masa atomului de H, adic l,672649 x l0-24 g. l kDa = l 000 Da.
La bacteriile Gram pozitive, peretele particip la formarea septului de diviziune, ce separ cele dou
celule surori i la procesele de cretere. Creterea volumului celular este rezultatul creterii peretelui.
La bacteriile Gram negative, porinele membranei externe, legate necovalent de murein, regleaz
procesele de permeabilitate prin modificri conformaionale, deoarece funcioneaz ca adevrate canale
moleculare. {n mediile cu osmolaritate mic (cele naturale), porinele sunt mai permeabile, iar la bacteriile
patogene, n organismul gazd, porinele au permeabilitate mai mic.
Membrana extern este o barier selectiv: permite difuzia moleculelor mici n ambele sensuri, fiind
impermeabil pentru macromolecule. Permite difuzia limitat a substanelor hidrofobe, deoarece lama extern
nu conine glicerofosfolipide. Suprafaa este acoperit cu LPS, care formeaz o structur quasicristalin. Din
aceast cauz, lama extern nu prezint o difuzie lateral marcat a moleculelor, tipic membranelor alctuite
din glicerofosfolipide.
Membrana extern conine proteine cu funcii de transport molecular. Ele au rolul de receptori de
vitamine, glucide, aminoacizi, de transferine (leag Fe i l transfer n celul).
La bacteriile patogene, n membrana extern se gsesc proteine de virulen: adezine, cu rol de fixare a
bacteriei pe celulele sensibile.
LPS are proprieti chimiotactic negative fa de fagocite, mrind nivelul virulenei bacteriene i
confer individualitate biochimic i serologic diferitelor tulpini.
LPS este antigenic i induce sinteza anticorpilor specifici cu rol protector.
In concluzie, peretele celular este o structur esenial a celulei bacteriene, ndeplinind funcii multiple,
cea mai important fiind protecia fa de liza osmotic n mediile hipotonice.
Peretele celular lipsete la micoplasme. Ele se pot izola din organismul uman, de la animale, plante,
insecte, fungi, sol, ape menajere. Sunt saprobionte, trind pe materia organic n mediile naturale (ape
menajere, sol) sau comensale la om i animale, pe mucoasele bucofaringian i genitourinar, incapabile s se
dezvolte n mediul extern ca saprobionte. Unele dintre cele comensale sunt potenial patogene. Dei nu au
perete celular, supravieuiesc, pentru c au o membran citoplasmatic rigid (care conine steroli) i pentru c
triesc n medii protejate osmotic, aa cum este organismul animal i uman.
Protoplatii bacterieni
Protoplastul este structura organizat a componentelor celulare care ramne dup ndeprtarea peretelui
celular i care, pstrndu-i viabilitatea realizeaz procese metabolice, biosinteze i transfer de energie (fig. 14).
Protoplatii bacterieni au fost obinui experimental n l952 de ctre Salton. El a evideniat c peretele
celular de Micrococcus lysodeikticus s-a digerat sub aciunea lizozimului.
Fig. 14. Imaginea electrono-optic a celulelor de Bacillus subtilis. a. In regiunea central s-a initiat formarea septului de
diviziune. b. Un stadiu intermediar al degradarii peretelui sub aciuna lizozimului i retracia protoplastului. c. Protoplastul
(original).
Cea mai folosit metod de obinere a protoplatilor este digestia enzimatic cu lizozim, a peretelui
bacteriilor Gram pozitive. Lizozimul, care se gsete n lacrimi, saliv, albuul de ou, atac mureina
(peptidoglicanul) prin hidroliza legturilor l-4 ale lanurilor polizaharidice. Rezult un dizaharid format din
N-acetilglucozamin i N-acetilmuramic, la care ramn ataate catenele peptidice.
Protoplastul este foarte sensibil la liza osmotic. Citoplasma celulei bacteriene este o soluie mai
concentrat (l0 mM) dect a mediului de suspensie. Apa trece din compartimentul cu concentraie mic, n cel
cu concentraie crescut, printr-un proces denumit osmoz. Intr-un mediu neprotejat osmotic, apa ptrunde n
protoplast i se produce plasmoliza.
Intr-un mediu protejat osmotic, protoplatii celulelor Gram pozitive i pstreaz integritatea
structural, capacitatea respiratorie, de biosintez, de cretere i diviziune i chiar de replicare a fagului, dac
infecia s-a fcut nainte de ndeprtarea peretelui.
Mediul de protecie osmotic (de protoplastizare) trebuie s conin o concentraie mare a unor
substane pentru care membrana celular este impermeabil (soluie de sucroz 0,3 M). Dac mediul de
suspensie este hipertonic, protoplastul pierde apa i colapseaz, proces denumit plasmoptiz.
In condiii speciale de mediu, protoplastul i regenereaz peretele i revine la forma original a celulei,
proces denumit reversie. Regenerarea este sigur dac protoplastul mai pstreaz un rest de perete, care va
funciona ca primer al resintezei structurii parietale.
Tratamentul cu lizozim nu este eficient pentru conversia bacteriilor Gram negative la protoplati,
datorit membranei externe care mpiedic accesul enzimei la peptidoglican. Pentru creterea eficienei aciunii
enzimatice, celulele se trateaz cu EDTA, care dimueaz concentraia ionilor de Mg. Se formeaz sferoplati
(celule sferice nconjurate parial sau total de membrana extern).
Spaiul periplasmic
Spaiul periplasmic este un compartiment celular al bacteriilor Gram negative, delimitat de membrana
extern a peretelui celular i de membrana intern (citoplasmatic). Este singurul compartiment al celulei
procariote i conine un volum apos semnificativ n care se gsesc proteine si oligozaharide. Proteinele sunt
reprezentate de enzime degradative (DN-aza, RN-aza, proteaze, fosfataze, penicilinaza etc.) i proteine de
legare specifice pentru diferite molecule, cu rol n transport i chimiotaxie.
Oligozaharidele se gsesc n concentraii variabile i au rolul de a regla presiunea osmotic a celulei. Cnd
presiunea osmotic a mediului crete, oligozaharidele trec n citoplasm, iar cnd scade, oligozaharidele revin
n spaiul periplasmic.
Spaiul periplasmic ndeplinete o funcie esenial ce const n acumularea nutrienilor moleculari din
mediu, nainte de a ptrunde n celul. Spaiul periplasmic funcioneaz ca un compartiment adaptativ, a crui
funcie de depozit este foarte important, deoarece bacteriile Gram negative triesc, de cele mai multe ori, n
mediile oligotrofe (mediile aquatice).
In spaiul periplasmic, nutrienii sunt scindai parial sub aciunea enzimelor degradative i de aici sunt
preluai de proteinele de transport din membrana intern i transferai n celul.
Proteinele periplasmice pot fi eliberate prin conversia celulelor la protoplati, dup tratamentul cu
cloroform sau prin oc osmotic (tratamentul celulelor cu EDTA n mediu hipertonic i transferul lor n mediu
hipotonic).
Membrana plasmatic
Membrana plasmatic nconjur celula bacterian i este bariera separatoare a citoplasmei de mediul
extern. Consecina imediat a lezrii membranei este pierderea componentelor citoplasmatice.
Grosimea membranei este de 7-10 nm. La microscopul electronic are o structur trilaminar, dup
modelul unitar al membranelor celulare (unit membrane) al lui Robertson. Pe baza structurii fine s-a considerat
(eronat) c membrana plasmatic este alctuit din dou straturi de proteine, ntre care se gsete unul lipidic,
dar cantitatea de proteine este prea mic pentru a forma dou straturi continui.
Membrana celulei procariote conine proteine, glucide i lipide, dar spre deosebire de membrana celulei
eucariote nu conine steroli (fig. 15a).
Singer i Nicolson au propus modelul mozaicului fluid (fig. 15b) de organizare a membranelor
biologice, n acord cu care membranele sunt structuri bidimensionale de proteine globulare i lipide, cu
distribuie orientat, stabilizate de cea de a III-a component major apa. Moleculele de ap sunt legate prin
puni intermoleculare de H, formnd o structur de reea. Dizolvarea unei molecule n ap semnific stabilirea
unei continuiti ntre structura chimic a moleculei dizolvate i structura de reea a apei. Pentru a se integra
(dizolva) n structura de reea de apei, molecula trebuie s formeze o legtur de H cu apa sau s accepte o
legtur a acesteia.
Fig. 15. a. Reprezentarea schematic a
moleculei fosfolipidice, componenta
structural a membranei. Fosfolipidele
sunt molecule polare. Cozile de acizi
grai sunt foarte hidrofobe (nu formeaz
legturi cu apa) i constituie o barier de
permeabilitate fa de moleculele
hidrosolubile. Capul moleculei este
format din gruparea fosfat, legat de o
grupare care conine N i din glicerol.
Este foarte hidrofil (formeaz legturi cu
moleculele de ap).
b. Modelul mozaicului fluid al
structurii membranei. Fosfolipidele
formeaz
un
strat
dublu,
cu
componentele hidrofobe orientate spre
interior, iar capetele hidrofile constituie
suprafaa
intern
i
externa
a
membranei.
In
marea
lipidic
proteinele plutesc ca niste iceberg-uri.
Unele se extind n toata grosimea
dublului strat lipidic, iar altele sunt
ancorate pe faa intern sau extern.
Membrana micoplasmelor i eucariotelor
conine colesterol.
Membrana este un dublu strat fosfolipidic i glicolipidic, la care se asociaz proteinele membranare.
Ansamblul molecular al membranei este asemnat cu un ocean fosfolipidic, n care plutesc ca nite iceberguri,
proteinele.
Proteinele confer membranelor, multe dintre proprietile funcionale specifice (de exemplu, meninerea i
utilizarea gradientului transmembranar de H pentru sinteza ATP).
In raport cu dispunerea lor n structura membranei, proteinele sunt periferice i integrate.
Proteinele periferice* sunt asociate cu membrana, dar nu au nici o secven inclus n structura ei. Structura
lor este analog proteinelor hidrosolubile.
*
Clasa proteinelor periferice este mprit n dou subclase:

- proteinele asociate membranei sunt globulare, legate pe suprafaa membranei, fie de stratul lipidic, fie de proteinele
integrate;
proteinele membranare de schelet formeaz scheletul membranei i sunt localizate imediat sub membrana plasmatic a
celulei. Ele se asociaz componentelor membranei, iar n celula eucariot se leag i cu citoscheletul. La procariote se
accept existena unui citoschelet primitiv, format din EF-Tu Elongation Factor Termo-unstable) i FtsZ (Factorul
termo-stabil), cu rolul de suport al structurii celulare. Lipsesc structurile de tipul microfilamentelor i microtubulilor.
FtsZ are potenial de polimerizare i are funcia se reea celular de suport. Echivalentul lui EF-Tu n celula eucariot
este EF1a.
Proteinele membranare integrate au cel puin un domeniu al moleculei situat n regiunea hidrofob a
stratului lipidic. Ele pot fi dislocate din structura membranei numai sub aciunea detergenilor ce solubilizeaz
lipidele.
Clasa proteinelor integrate se mparte n dou subclase:
1. Proteinele transmembranare au o mare parte a masei lor inclus n dublul strat fosfolipidic, dar expun
domenii semnificativ diferite pe ambele fee ale membranei, ceea ce confer asimetria funcional a acesteia.
Ele au o structur heterogen, deoarece cel puin un domeniu al moleculei este inclus n mediul hidrofob al
lipidelor i trebuie s fie compatibil cu acesta. Secvena de 19-23 aminoacizi a domeniului inclus n stratul lipidic
este hidrofob i are configuraia -helix (fig. 17).
Domeniile extralipidice ale proteinelor integrate sunt hidrofile, ceea ce confer asimetria structural i
funcional a membranei. Proteinele integrate difuzeaz liber n planul lateral al matricei lipidice, dar nu trec liber
dintr-un strat n altul i de aceea asimetria funcional a membranei se pstreaz pentru perioade lungi. Aa se
explic permeabilitatea superioar a feei interne n raport cu faa extern.
Asimetria structural a proteinelor integrate se evideniaz pe imagini electrono-optice ale membranei
criofracturate (fig. 16). Tehnica criofracturrii presupune nghearea rapid a membranei la temperatura azotului
lichid i fracturarea membranei cu un cuit special. Membrana se cliveaz de-a lungul regiunii hidrofobe a acizilor
grai i rezult dou jumti de membran, cu un grad accentuat de asimetrie, conferit de proteinele
transmembranare.
Fig. 16. Reprezentarea schematic a localizrii proteinelor membranare. Proteinele periferice sunt n raporturi spaiale strnse
cu capetele hidrofile ale fosfolipidelor. Proteinele integrate sunt localizate n dublul strat fosfolipidic ori au domenii care se
extind n regiunile hidrofile (dupa Holt si colab., 1998).
2. Proteinele membranare ancorate au un domeniu ce penetreaz dublul strat lipidic, dar nu traverseaz
complet membrana. Sunt ancorate de membran prin legtur covalent cu lipidele.
Structura membranei plasmatice este stabilizat prin legturi de H i interaciuni moleculare hidrofobe.
Ionii de Mg i Ca realizeaz legturi ionice cu sarcinile negative ale fosfolipidelor i stabilizeaz structura
membranei.
Lipidele conin esteri ai acizilor grai cu glicerolul. Predomin acizii cu l4-l6 atomi de C, saturai sau
nesaturai.
Fosfolipidele (fosfogliceride) membranelor biologice sunt molecule amfipatice polare, deoarece au un cap
polar (glicerolul) legat cu cozile nepolare ale acizilor grai: glicerolul intr n structura de reea a apei, fiind
hidrofil, iar acizii grai formeaz componenta hidrofob a moleculei (fig. 17). Astfel, membrana are dou suprafee
polare, hidrofile, datorit resturilor de glicerol.
Fig. 17. a. Structura de baz a dublului strat fosfolipidic. b. Distribuia stabil a moleculelor lipidice n ap, cu formarea unei
vezicule membranare.
Intr-o soluie apoas, lipidele se agreg i formeaz spontan structuri n dublu strat: acizii grai la interior,
n mediul hidrofob, iar moleculele de glicerol ramn expuse n mediul apos. Agregatul funcioneaz ca o barier
impermeabil pentru trecerea liber a moleculelor polare n i din celul.
Dublul strat lipidic este o structur ordonat. Catenele de carbon ale acizilor grai sunt constrnse la o
aezare paralel i datorit caracterului hidrofob, mobilitatea lor n afara stratului lipidic este foarte limitat.
Moleculele fosfolipidice sunt foarte mobile i se deplaseaz n plan lateral (bidimensional), n acelai strat, cu o
frecven foarte mare, dar deplasrile dintr-un strat n cellalt (tridimensionale) sunt foarte rare (una la cteva ore).
Squalen
Colesterol
Structura molecular a squalenului (9cu 30 atomi de C), precursorul biosintetic al sterolilor i structura colesterolului (un
sterol tipic).
Rolul lipidelor membranare, s-a studiat folosind ca model, veziculele membranare artificiale sau naturale,
ce se formeaz spontan dup spargerea celulelor. S-a demonstrat astfel c procariotele i regleaz fluiditatea
membranei, prin modificarea proporiei acizilor grai saturai/nesaturai. Cultivarea la temperaturi sczute mrete
proporia acizilor grai nesaturai i sporete gradul de fluiditate a membranei. Prin rcire, faza de cristal lichid a
lipidelor membranare trece spre o stare solid de gel, situaie n care grosimea dublului strat crete datorit
extensiei catenelor de C ale lipidelor.
Stratul lipidic este suportul proteinelor i are rolul unei bariere de permeabilitate. Permeabilitatea
difereniat a celor dou fee ale membranei se explic att prin asimetria proteinelor, ct i prin compoziia
chimic diferit a lipidelor n cele dou straturi ale membranei.
Cu excepia micoplasmelor i a metanotrofelor, membrana procariotelor se deosebete de cea a eucariotelor

prin absena sterolilor. Sterolii sunt molecule plane, rigide, iar acizii grai sunt flexibili. Sterolii confer un grad
superior de rigiditate membranei plasmatice. Rigiditatea membranei este necesar celulelor lipsite de perete. La
eucariote, rigiditatea ar fi necesar pentru a suporta forele fizice care se exercit asupra membranei.
Antibioticele polienice (nystatin, candicidin) reacioneaz cu sterolii i destabilizeaz membr ana. De aceea
ele sunt active fa de celulele eucariote i nu iflueneaz celulele procariote.
Micoplasmele ncorporeaz n structura membranei, sterolul disponibil n mediul de cretere i sunt
sensibile la antibioticele polienice.
La unele bacterii, n structura membranei se gsesc molecule asemntoare structural cu colesterolul i pot
avea acelai rol de cretere a rigiditii: hopanoidele. Un compus cu distribuie larg este diploptenul, cu 30 atomi
de C
Membrana la Archaea
Membrana citoplasmatic a Archaea are o structur electrono-optic trilaminar, dar din punct de vedere
chimic este unic prin natura lipidelor.
Lipidele eubacteriilor i eucariotelor sunt esteri ai acizilor grai cu glicerolul. Lipidele archaea nu conin
acizi grai i sunt de dou tipuri: glicerol-dieteri i diglicerol-tetraeteri, cu catene izoprenoidice (fig. 18).
La C3 al glicerolului se leag o grupare fosfat, sulfat sau un rest glucidic.
Fig. 18. Lipidele majore la Archaea. a. Glicerol dieterii. b. Digliceroli tetraeteri pentaciclici. Catena de C este ataat
totdeauna de glicerol prin legturi eter. d. Comparaia legturii ester din lipidele celorlalte organisme cu legtura eter a
lipidelor de la Archaea.
Catenele izoprenoidice au ntre l5 i 40 atomi de C. Membrana plasmatic a Archaea are dou suprafee
polare, cea intern i cea extern, datorit resturilor de glicerol, iar interiorul este hidrofob, ca i la celelalte
membrane, dar nu conine fosfolipide.
Glicerol-dieterii formeaz stratul dublu lipidic, prezent n structura membranelor celulare. La unele
Archaea predomin net diglicerol-tetraeterii i membrana este format dintr-un monostrat lipidic. Diglicerol-
tetraeterii sunt echivalentul chimic al dublului strat lipidic, dar diferena const n faptul c cele dou straturi sunt
legate covalent.
Glicerol-dieterii au catene laterale izoprenoidice de 20 atomi de C, iar diglicerol-tetraeterii au catene
laterale de 40 atomi de C. La unele archaea, catenele de C ale diglicerol-tetraeterilor sunt complicate prin existena
a 4 inele pentaciclice, dar se pstreaz lungimea de 40 de atomi de C.
Glicerol-eterii sunt markeri biochimici ai archaea. Identificarea lor este utilizat pentru a identifica membrii
grupului. Diferenele biochimice dintre lipidele archaea i eubacteriilor evideniaz distana evolutiv uria ntre
aceste linii filogenetice primare, dei ambele sunt procariote.
Funciile membranei plasmatice
Membrana plasmatic este bariera major structural i de permeabilitate ntre mediul celular i cel extern.
Membrana este n primul rnd bariera de permeabilitate care mpiedic difuzia liber a componentelor
citoplasmatice. Permeabilitatea foarte selectiv este asigurat de asimetria sa funcional: este mai permeabil pe
faa intern, ceea ce asigur meninerea constanei mediului intern fa de cel extern, foarte variabil.
Membrana este sediul sinergonului respirator (constituienii moleculari care realizeaz procesele de
respiraie celular si formeaz sistemul de transport al electronilor) i al sinergonului fotosintetizant. La
Azotobacter, care are cea mai nalt rat respiratorie, membrana i mrete adaptativ suprafaa formnd numeroase
intruzii veziculare(fig. 19).
Fig. 19. Intruzii veziculare la Azotobacter - imagine electrono-optica (original).
Membrana este implicat n sinteza i eliminarea exoenzimelor, iar la bacteriile patogene, n sinteza si
eliminarea unor substane toxice (exotoxine). Sinteza acestor molecule are loc la nivelul ribosomilor ataai pe faa
intern a membranei plasmatice.
Membrana este sediul structural al sarcinii electrice i energetice: protonii (H+) i ionii OH- sunt distribuii
separat pe cele 2 fee. Se genereaz o form de energie metabolic asemntoare potenialului energetic al unei
baterii. Starea energetic a membranei denumit for proton-motrice este utilizat pentru transport, mobilitate
flagelar i biosinteza ATP.
Membrana este sediul proteinelor cu rol de chemoreceptori, n special a celor ce au rol n mobilitatea
orientat a celulei. Unele proteine membranare au rol de enzime ale sistemului ATP-azic. Altele asigur modelarea
peretelui celular: sunt murein-hidrolaze i murein-sintetaze.
La nivelul membranei se gsesc proteinele de transport, ce asigur transferul moleculelor din mediu n
celul i invers, precum i proteinele enzime ce realizeaz turnover-ul lipidelor i proteinelor membranare.
Mecanismele fiziologice ale permeabilitii membranei
Creterea i multiplicarea microorganismelor sunt condiionate de disponibilitatea nutrienilor care trebuie
s strbat nveliurile celulare i de eliminarea produselor de catabolism.
Caracterul hidrofob al membranei i confer acesteia proprietatea de barier de permeabilitate: trec prin
difuzie liber unele molecule hidrofobe mici, molecule lineare i cele solubile n mediul lipidic al membranei
(antibioticele cu molecula polar). Apa difuzeaz liber printre fosfolipidele membranei pentru c este o molecul
mic i lipsit de sarcin. Membrana exclude moleculele mai mari dect glicerolul, dac nu sunt transportate de
sisteme membranare sau dac nu se dizolv n lipide. In acelai timp, barierele celulare asigur transportul
substanelor nutritive i rein n interiorul celulei substanele necesare, funcionnd ca adevrate pori moleculare,
ce controleaz intrarea i ieirea diferitelor molecule. Datorit structurilor de suprafa, celula bacterian nu este
niciodat n stare de echilibru cu mediul nconjurtor, n privina concentraiei diferitelor molecule de o parte i de
alta a membranei citoplasmatice.
In funcie de mecanismele fizico-chimice care stau la baza lor, transportul moleculelor (electrolii i
neelectrolii) prin membran se face prin dou categorii de procese fiziologice:
- difuzia pasiv
- mecanismele de transfer cu molecul purttor.
Difuzia pasiv
Difuzia pasiv este cea mai simpl modalitate de ptrundere a moleculelor n celul. Ea caracterizeaz
trecerea liber a substanelor prin membrana plasmatic n ambele sensuri i se definete prin urmtoarele
particulariti:
- trecerea moleculelor se face fr consum de energie;
- fora motrice a trecerii este gradientul de concentraie, ceea ce nseamn c transportul substanelor se face
din zona cu concentraie mai mare, spre zona cu concentraie mai mic a moleculelor;
- transferul dureaz pn n momentul n care moleculele substanei care se transfer ajung la aceiai
concentraie pe ambele fee ale membranei plasmatice;
- dac de o parte a membranei se gsesc mai multe tipuri de substane, difuzia pasiv se face individual pentru
fiecare tip de molecul n parte, pn la echilibrul osmotic al fiecrei categorii;
- difuzia pasiv se realizeaz lent i nespecific. Factorul determinant al difuziei pasive este dimensiunea
moleculei.
Prin difuzia pasiv trec moleculele de ap, O 2, CO2 (molecule mai mici de 0,8 nm), precum i moleculele
liposolubile (care se dizolv n lipidele membranei celulare, ca de exemplu, tetraciclina).
Membrana este permeabil pentru ap i pentru moleculele organice fr sarcin, pn la dimensiunile
glicerolului.
Fluxul molecular n oricare direcie este proporional cu concentraia moleculei pe faa de intrare, astfel
nct rata net de transfer este proporional cu diferena de concentraie ntre cele dou compartimente, dar
depinde i de ali factori: sarcina moleculei transportate, gradul ei de potrivire conformaional cu discontinuitile
membranare ce formeaz calea de transport.
Moleculele mai mari dect glicerolul necesit sisteme specifice de transport.
Sisteme de transport cu molecule purttor
Moleculele purttor sunt proteine integrate ale membranei plasmatice, care au proprietatea de a lega
substanele dizolvate de o parte a membranei i de a le transporta pe cealalt parte, unde le elibereaz. Denumirea
lor generic este aceea de sisteme de transport, transportori, purttori sau permeaze.
Sunt cel puin 3 clase de sisteme de transport membranar :
- cele care au o component ce traverseaz membrana
- cele care au o component ce traverseaz membrana i o protein periplasmic de legare
- cele formate din proteine multiple ce coopereaz pentru a media transportul.
Sistemele de transport cu molecule purttor ndeplinesc mai multe funcii:
- permit intrarea nutrienilor n celul
- regleaz concentraia metaboliilor, cataliznd excreia produselor finale ale cilor metabolice;
- mediaz eliminarea activ a antibioticelor i a substanelor toxice, favoriznd supravieuirea celulei;
- regleaz echilibrul ionic, ce trebuie meninut la concentraii ce difer mult de concentraia din mediul extern;
- particip la secreia proteinelor, polizaharidelor i lipidelor;
- permit transferul acizilor nucleici prin membran, uurnd schimburile genetice ntre celule;
- elimin molecule(antibiotice, toxine) care permit celulei s desfoare competiia biologic, conferindu-i un
avantaj selectiv pentru supravieuire.
Se cunosc trei modaliti de transport prin intermediul moleculelor purttor:
- difuzia facilitat
- translocaia de grup
- transportul activ.
Sistemele de transfer cu molecule purttor prezint urmtoarele caracteristici:
- prin intermediul lor se realizeaz o trecere mai rapid a moleculelor de pe o fa pe cealalt a membranei
plasmatice;
- asigur trecerea simultan a mai multor tipuri de molecule, fr s existe fenomene de interferen;
transfer n celule diferite molecule, chiar contra gradientului de concentraie i prin aceasta permit
acumularea moleculelor n celul la concentraii ce pot depi de l00-l0000 de ori, concentraia lor n mediu
(cu semnificaie deosebit pentru bacteriile care triesc n apele oligotrofe, srace n substane nutritive.
Difuzia facilitat
Difuzia facilitat se aseamn ca mecanism, cu difuzia pasiv, deoarece fora de propulsie a transportului
este diferena de concentraie a substanei dizolvate, pe cele dou fee ale membranei plasmatice. Procesul nu este
cuplat cu consumul de energie metabolic i nu genereaz procese concentrative. Transferul moleculelor se face la
vale, din zona cu concentraie mai mare, spre zona cu concentraie mai mic. In final, concentraia substanei n
celul este egal cu concentraia sa n mediu. Nu se produce acumularea (concentrarea) moleculelor pentru c nu se
consum energie. Deosebirea fa de difuzia pasiv const n aceea c intervin molecule membranare care
uureaz difuzia moleculelor transportate. Ele sunt proteine integrate, cu domenii extramembranare, att
citoplasmatic ct i la suprafaa extern (fig 20).
Fig. 20. Difuzia facilitat. Moleculele proteice purttoare particip la transferul substanelor prin membrana citoplasmatic,
dar numai in sensul gradientului de concentraie (de la concentraie mare la concentraie mic). Procesul nu necesit consum de
energie (dupa Black, 1996).
Sunt dou modaliti de transport facilitat: de tip canal (sau por) i de tip purttor (carrier).
In difuzia facilitat de tip canal, substana dizolvat trece de pe o latur pe cealalt a membranei, printr-un
canal sau por.
Canalele sau porii sunt proteine oligomerice (n special trimere) de membran care au rolul de a transfera
diferite molecule. Denumirea generic este aceea de porine. Porinele prezint structuri de tip beta-pliere i se
gsesc n membrana extern a bacteriilor Gram negative, n membrana cloroplastelor i mitocondriilor. Ele pot
transporta neselectiv molecule mici (fosfat, pirofosfat, cationi, metale grele, nucleotide, nucleozide, monozaharide,
oligozaharide, acizi grai, uree, vitamine, cofactori, oligopeptide) sau pot fi selective pentru o singur clas de
molecule.
Pereii canalului sunt delimitai de secvene hidrofile, hidrofobe sau amfipatice de aminoacizi, n funcie de
proprietile substratului care difuzeaz i favorizeaz trecerea moleculelor, spre deosebire de interiorul hidrofob al
stratului lipidic.
Moleculele purttor pot fi proteine monomerice sau dimerice, au specificitate stereospecific de substrat i
rata de transport este de cteva ori mai mic dect a difuziei de tip canal. Se presupune c molecula purttoare trece
prin membran mpreun cu substratul, i schimb conformaia spaial, ceea ce i permite s se prezinte cu
suprafaa activ, alternativ, spre faa extern sau spre faa intern a membranei. Fiecare tip de protein purttor are
unul sau mai multe situsuri de legare pentru molecula specific.
Mecanismul de transport al difuziei facilitate funcioneaz n celulele adaptate la concentraii mari de glucide n
mediu (de exemplu, levuri, eritrocite). La bacterii, care trebuie sa preia substanele nutritive din soluii diluate, nu sau evideniat astfel de sisteme de transport.
Translocaia de grup
Particularitatea fundamental a acestei modaliti de transport const n faptul c, pentru a fi transportat
prin membrana plasmatic, molecula este modificat chimic. Orice proces de transport n timpul cruia substratul
este modificat chimic, se numete translocaie de grup. Moleculele din mediu nu vor aprea n celul n aceiai
form chimic, ci sub forma unui produs modificat. Astfel sunt transportate glucidele (glucoza, fructoza, manoza,
lactoza, N-acetilglucozamina), bazele purinice i pirimidinice, acizii grai etc.
Moleculele sunt fosforilate prin sistemul fosfotransferazei, cu un rest de acid fosforic. Sistemul enzimatic
al fosfotransferazei este alctuit dintr-o reea de proteine citoplasmatice i membranare, care se fosforileaz n
cascad (fig 21). Prima protein a reelei (HPr) are localizare citoplasmatic i se fosforileaz din fosfoenol-piruvat,
rezultnd HPr-P, cu eliberarea piruvatului. La nivelul membranei, ultima component a catenei de transport, o
protein integrat, fosforileaz glucoza prin transferul gruprii fosfat. Glucoza este transferat n celul sub forma
esterului glucozo-6-P.
La E. coli, sistemul fosfotransferazei este alctuit din 24 de proteine, iar la transportul unui monozaharid
particip cel puin 4 componente (fig. 23).
Fig. 21. Mecanismul de aciune al sistemului fosfotransferazei la E. coli. Pentru transportul glucozei, sistemul const din cinci
proteine (Enz I, IIa, IIb, Iic, HPr). Transferul secvenial al gruprii fosfat are loc de la fosfoenol-piruvat (PEP), prin intermediul
proteinelor pn la Enz IIc, care fosforileaz i transport glucidul (dupa Brock, 1994).
Proteinele membranare care se fosforileaz n cascad au rolul de permeaze i formeaz unul din sistemele de
transport prin membrana citoplasmatic.
Permeazele sunt proteine de transport foarte eficiente. Ele mresc viteza de transport de cteva ori n raport
cu difuzia facilitat i sunt factorii determinani ai ratei excepionale a metabolismului bacterian. S-au identificat
mutante bacteriene fr permeaze. Ele devin dependente de ptrunderea nutrienilor prin difuzie i necesit o
concentraie extern a moleculelor nutritive de l000 de ori mai mare n raport cu tulpina parental.
Din categoria permeazelor fac parte:
- sistemele de transport pentru glucide, cu specificitate moderat, deoarece pot fi destinate transportului unei
anumite molecule de zahr sau unui grup de molecule glucidice. S-au identificat sisteme de transport pentru
monozaharide, pentru dizaharide i chiar pentru oligozaharide (de exemplu, sistemul de transport al maltozei
poate transporta maltodextrine);
- sistemele de transport pentru aminoacizi au afinitate mai nalt pentru substratul specific (comparativ cu cele
ce transport glucide), fapt care se coreleaz cu concentraia diferit a celor dou categorii de molecule n
mediu i cu rata lor diferit de metabolizare;
- sistemele de transport pentru oligopeptide au o specificitate mai mic de legare. La E. coli s-au identificat trei
sisteme de transport ale oligopeptidelor: unul care leag nespecific orice dipeptid, unul pentru tripeptide i
altul care leag orice peptid mai mic de 6 resturi.
Relativa lips de specificitate a permeazelor face posibil ptrunderea unor molecule pentru care membrana
nu este permeabil, prin cuplarea lor cu peptidele. Astfel ptrund agenii chimici antibacterieni, care se leag de
peptide prin legturi labile i se elibereaz intracelular, dup hidroliza peptidelor.
Transportul membranar prin translocaie de grup se realizeaz cu consum de energie. Este o modalitate de a
economisi energia, deoarece energia cheltuit prin fosforilare este folosit att pentru realizarea transportului, ct i
pentru prima treapt a metabolizrii glucidului.
Translocaia de grup realizeaz acumularea moleculei transportate n celul, la o concentraie net superioar
celei din mediu.
Transportul activ
Transportul activ este modalitatea de transfer intracelular al nutrienilor contra gradientului de concentraie,
prin care substanele pot fi concentrate de l000 de ori n interiorul celulei, fa de mediul extern. Procesul este
totdeauna energizat de o surs primar de energie(chimic, electric sau solar *) i se evideniaz prin incubarea
celulelor n prezena unui compus marcat radioactiv. Pentru a fi atribuit transportului activ, substana trebuie s se
acumuleze n aceiai form chimic (i nu sub forma unui derivat al su).
Pentru aminoacizi, dovada se obine mai uor, deoarece ncorporarea lor n proteine este anevoioas, dar
zaharurile sunt metabolizate rapid i de aceea este necesar blocajul metabolic (prin mutaie sau prin utilizarea unui
analog nemetabolizabil).
Transportul activ se realizeaz cu consum de energie, prin intermediul proteinelor membranare de
transport. Ele sunt proteine transmembranare i au domenii expuse att spre citoplasm ct i spre mediul extern.
Structural, moleculele transportoare formeaz circa 12 helice care se pliaz pentru a forma un canal transportor (fig.
22). Transportul implic o schimbare conformaional a proteinei, dup legarea substratului specific.
Fig. 22. Transportul activ. Ca i n cazul difuziei facilitate moleculele proteice purttoare transport moleculele prin membran.
Procesul are loc contra gradientului de concentraie i consum energie pin ATP (Pi = fosfat anorganic). Proteina accesorie
condiioneaz funcia proteinei de transport (dupa Black, 1996).
Uneori transportul activ este foarte specific, adic pentru fiecare tip de molecul transportat exist o
anumit molecul purttor**, care o preia de pe o fa a membranei i o transfer pe cealalt. Acestea sunt
sisteme uniport. Alte sisteme transport simultan, n acelai sens o substan, mpreun cu o alta necesar
pentru transport (sisteme simport). A III-a categorie realizeaz concomitent transportul a dou tipuri de
molecule, n direcii opuse (sisteme antiport) (fig. 23). Transportul activ al multor glucide i aminoacizi n
celula bacterian este dependent de gradientul electrochimic de H + prin membrana plasmatic.
Fig. 23. Reprezentarea schematica a modului de aciune a proteinelor de transport.
Substana care este transportat se leag specific *** cu o protein membranar purttor, dup care
molecula transportat este eliberat nemodificat chimic, n interiorul celulei.
Substanele transportate activ sunt unele glucide, aminoacizii, acizii organici, ionii anorganici (K +,
Mg2+, SO42- , PO42- ). Glucoza este luat prin procese active la unele bacterii, iar la altele, prin sistemul
fosfotransferazei.
Sursa de energie a transportului activ are 3 origini: transportorii cuplai leag transportul la deal al unei molecule cu
transportul la vale al alteia; pompele dependente de ATP cupleaz transportul la deal cu hidroliza ATP; pompele
dependente de lumin cupleaz transportul la deal cu aportul de energie luminoas (de exemplu, bacteriorodopsina de
halofilelor).
**
Existena proteinelor membranare de transport a fost dedus din creterea peak-ului electroforetic al proteinelor
marcate n prezena moleculei transportate i din dispariia lor n celulele mutante pentru sistemul respectiv de transport.
Prima protein purttor, identificat printre proteinele membranare solubilizate este proteina sistemului lac la E. coli. Este
o protein inductibil, iar n celulele bacteriene crescute pe mediu cu lactoz, ea reprezint 4% din totalul proteinelor
membranare.
***
Specificitatea proteinelor membranare de transport s-a demonstrat: o singur mutaie genic anuleaz capacitatea
bacteriei de a transporta glucide specifice prin membran.
Transportul activ necesit consum de energie, deoarece transportorii funcioneaz pe principiul

pompelor concentrative. La bacterii, energia necesar activrii pompelor este rezultatul separrii ionilor de H,
de electroni, n grosimea membranei, ceea ce constituie fora proton-motrice. Se creeaz un gradient de
concentraie a protonilor ntre exteriorul i interiorul celulei. Protonii se concentreaz la exteriorul celulei, iar n
interior se concentreaz OH-. Potenialul electrochimic are rol esenial pentru transportul activ.
La bacteriile Gram negative, transportul moleculelor n celul este rezultatul aciunii a dou
mecanisme, ambele consumatoare de energie. Moleculele sunt transportate n spaiul periplasmic prin
intermediul porinelor, proteine de transport ale membranei externe. Ele permit intrarea ionilor i a metaboliilor
cu molecul mic hidrofob. In spaiul periplasmic, molecula transportat se leag specific cu o protein
periplasmic, care faciliteaz transportul n citoplasm, pe calea unei proteine purttoare specifice din
membrana celulei. Al III-lea component al sistemului de transport este cel care furnizeaz energia necesar,
prin hidroliza ATP. Aceast clas de transportori s-au denumitsisteme ABC(ATP Binding Cassette).
Cellalt mecanism de transport este reprezentat de sistemul fosfotransferazei.
Adeseori, celulele bacteriene posed dou tipuri de sisteme de transport:
- sisteme constitutive, relativ nespecifice, n condiiile unei relative abundene a nutrienilor;
- sisteme inductibile, cu specificitate nalt, active n condiii de stres, provocat de deficitul substanelor
nutritive sau indus de substane toxice.
Sisteme celulare de transport ionic
Pentru o molecul fr sarcin, gradientul de concentraie determin transportul pasiv i sensul lui.
Dublul strat lipidic este foarte impermeabil pentru moleculele ncrcate electric, mici sau mari. Sarcina i
gradul de hidratare le mpiedic s ptrund n dublul strat lipidic. Transportul lor este influenat att de
gradientul de concentraie, ct i de diferena de potenial electric a membranei, adic de potenialul
membranar. Gradientul de concentraie i gradientul electric, adic gradientul electrochimic, determin fora
net de transport pentru fiecare tip de molecul. Diferena de potenial a membranei (negativ pe faa intern)
favorizeaz intrarea cationilor, dar se opune accesului anionilor.
Membrana citoplasmatic are rol de barier osmotic, prin permeabilitatea foarte selectiv, permind
trecerea (ieirea) unor anioni, dar reine cationii eseniali care au acces n i din celul, numai pe calea unor
unor sisteme specifice de transport.
Ionii de K+, Mg2+, SO42-, PO42- sunt transferai activ n celul, prin intermediul unor molecule purttoare
cu specificitate nalt, denumite pompe ionice.
Sistemele de transport pentru ionii cu importan nutritriv sunt sisteme de influx, iar cele pentru
transportul ionilor toxici sunt sisteme de eflux i reprezint substratul molecular al mecanismelor de rezisten.
Aceste pompe au o importan excepional pentru sistemele biologice, deoarece realizeaz i menin pH,
gradientele ionice i potenialul de membran.
Sistemele de transport pentru Na+, Ca2+, H+ i Cl- sunt sisteme de eflux i au rolul de a menine
concentraii intracelulare sczute i de a realiza gradiente ionice transmembranare. Sistemele de eflux pentru
cationi consum energie furnizat prin hidroliza ATP.
Unii ioni (Cu2+, Zn2+) au rolul de micronutrieni, fiind utili la concentraii mici i sunt concentrai prin
sistemele de influx, dar sunt toxici la concentraii mari, fiind eliminai prin sistemele de eflux. Pentru aceti
cationi, sistemele de influx i de eflux sunt separate. Sistemele de eflux pentru cationii toxici sunt fie
consumatoare de ATP ori sunt cuplate cu un sistem antiport de nglobare a altui cation (H +, Na+, Ca2+).
Aparatul fotosintetic
Aparatul fotosintetic este o structur accesorie, prezent numai la bacteriile fotosintetizante i este
reprezentat de complexul de structuri membranare i particulate, care particip la procesul de conversie a
energiei luminoase, n energie chimic. Spre deosebire de celulele eucariote, la care aparatul fotosintetic este
localizat n structuri specializate, delimitate de membran (cloroplastul), la bacterii aparatul fotosintetic este
localizat la nivelul unor diverticuli ai membranei plasmatice, de form tubular, vezicular sau lamelar care, n
general pstreaz legatura fizic cu membrana plasmatic de origine. De aceea, membrana plasmatic este
considerat ca sediu al sinergonului fotosintetic.
La bacteriile verzi (Chlorobiaceae) aparatul fotosintetic este format din vezicule care nu au legtur
structural cu membrana plasmatic. Fiecare vezicul este delimitat de o membran monostrat. Coninutul
vezicular este omogen. Formarea veziculelor are semnificaia unei modaliti de compartimentare celular a
funciei fotosintetice ntr-un organit specializat al celulei procariote (veziculele de Chlorobium).
La bacteriile purpurii(roii)(Chromatiaceae i Rhodospirillaceae), diverticulii membranari de form
vezicular sau lamelar, sedii ale pigmentului fotosintetic, pstreaz legtura cu membrana.
La cianobacterii, aparatul fotosintetic este constituit dintr-un sistem de saci membranari, structural
independeni de membrana plasmatic, aplatizai, denumii corpi tilacoizi (tilacos, grec = pung). Aici se
gsesc pigmenii fotosintetizani i sistemul transportor de electroni.
A II-a structur major cu rol n captarea luminii sunt ficobilisomii, aezai n iruri ordonate pe
suprafaa sacilor tilacoizi.
Mezosomul
Mezosomul (sau corpul din mijloc) este o structur derivat din membran, a crei poziie n celul este
adesea median. Se mai numete plasmalemasom (corp derivat din membran). Aceast structur a fost descris
de cteva ori sub denumiri diferite (corpi periferici, condrioizi, membrane intracitoplasmatice).
Pentru ca o structur membranar s poat fi ncadrat n categoria mezosomilor trebuie s ndeplineasc
trei condiii de baz:
- sa derive din membrana citoplasmatic, adic s fie rezultatul unor intruzii ale membranei citoplasmatice,
cu care structura mezosomal pstreaz permanent legturi de continuitate direct;
- s poat fi extruzat n spaiul dintre membrana plasmatic i peretele celular, prin creterea presiunii
osmotice a mediului de suspensie;
- s fie asociate cu urmtoarele procese importante ale celulei:
a) cu replicarea cromosomului i cu distribuia celor doi cromosomi n celulele surori;
b) cu procesul de sporulare.
S-au descris trei tipuri morfologice de mezosomi: tubulari, veziculari i lamelari. Unii autori consider
c aceste forme sunt reciproc reversibile, realiznd un continuum structural.
Mezosomii sunt mai frecveni i au o structur mai complex, de tip lamelar, la bacteriile Gram
pozitive. La cele Gram negative sunt mai rari i au aspect tubular.
In mediile hipertonice, mezosomii se extruzeaz n spaiul dintre membrana citoplasmatic i peretele
celular, ca o dovad cert a legturii lor structurale directe cu membrana plasmatic.
Structura molecular a membranelor mezosomale este identic cu aceea a membranei plasmatice din
care deriv: un strat dublu fosfolipidic, n care sunt inclavate proteinele structurale si enzimatice.
Mezosomii sunt structuri foarte dinamice si probabil apar numai n anumite stri fiziologice ale celulei,
cnd prezena lor este necesar. Formarea lor este o modalitate de extindere a membranei citoplasmatice spre
interior care, datorit rigiditii peretelui celular nu se poate mri pe alt cale (fig. 24).
Fig. 24. Imagine electrono-optica a structurii mezosomale de tip tubular (a) la o bacterie Gram negativ si de tip lamelar
(b) la Bacillus subtilis (original).
Funciile mezosomului. Mezosomul este o structur multifuncional:

- este asociat cu procesele de biosintez i de cretere celular. Structurile mezosomale sunt foarte
numeroase n celulele de B. subtilis, aflate n faza de cretere logaritmic;
- la nivelul mezosomului se gsesc situsuri de legare pentru cromosom i pentru plasmide;
- este calea de transmitere a semnalului, originar la nivelul membranei, pentru replicarea cromosomului i
pentru diviziune, dup ce dimensiunile celulei au atins o valoare critic;
- particip la procesul de segregare a celor doi cromosomi ntre celulele surori rezultate din diviziune;
- deoarece deriv din membran i mpreun cu aceasta este sediul sinergonului respirator (adic la nivelul
su se desfoar procese energetice celulare), mezosomul este considerat echivalentul structural i
funcional al mitocondriei;
- este echivalentul funcional al lizosomului, deoarece la nivelul su se gsesc enzime cu rol degradativ;
- este asociat cu funciile secretorii ale celulei. Mezosomii sunt mai numeroi n celulele de B. subtilis
productoare de enzime. Particip ntr-un mod necunoscut la sinteza si secreia unor enzime inductibile
(de exemplu, penicilinaza, pe care o secret bacteriile rezistente la penicilin). In mediu fr penicilin nu
se secret penicilinaza si mezosomii lipsesc, dar apar n celulele care cresc pe mediul ce contine
penicilin.
In ciuda funciilor multiple care li se atribuie, Nanninga (l985) contest existena mezosomilor,
considerndu-i ca structuri artificiale (artefacte), induse ca rezultat al reaciilor brutale, asociate cu tehnica de
preparare a materialului examinat la microscopul electronic.
Citoplasma
Citoplasma celulei bacteriene este un sistem coloidal complex format din proteine, glucide, ap i
substane minerale. Electroliii sunt n concentraie mare i sunt reinui n citoplasm datorit permeabilitii
selective a membranei. Concentraia mare a substanelor dizolvate organice i anorganice, genereaz o
presiune hidrostatic sau presiune de turgor, ce se manifest n raport cu faa intern a membranei.
In citoplasm coexist strile de coacervare, de emulsie i de soluie, ntr-o continu modificare a
raportului lor cantitativ, care n ansamblu, datorit lipsei curenilor citoplasmatici confer caracterul unui gel
fluid.
Caracterul de gel este consecina strii apei. Molecula de ap este polar. Proprietatea de polaritate a
apei este foarte important, deoarece multe molecule polare se dizolv uor n ap. Apa formeaz o reea
tridimensional att cu ea nsi, ct i cu macromoleculele. Polaritatea nalt a moleculei de ap face ca
moleculele nepolare s formeze agregate stabile. Faptul c moleculele de ap sunt legate n reea condiioneaz
proprietile sale de solvent, tensiunea nalt de suprafa i cldura specific nalt. In celul, apa se gsete n
dou stri:
- apa liber este cea care se deplaseaz liber n celul i care, la creterea presiunii osmotice a mediului
extracelular trece n afara celulei;
- apa legat (de hidratare) n structura gelului citoplasmatic.
In celula bacterian vegetativ, apa liber (n proporie de circa 70% din totalul apei) creeaz un mediu
de suspensie pentru macromolecule.
Apa liber este foarte mobil, iar cea din structura gelului este practic imobil. Starea de gel a
citoplasmei pstreaz componentele celulare separate spaial.
Absena curenilor citoplasmatici are ca rezultat imobilitatea coninutului celular.
La celulele bacteriene tinere, aflate n faza logaritmic de cretere, citoplasma este fin granular, intens
bazofil, datorit coninutului ridicat de acizi nucleici, este dens i omogen. ARN citoplasmatic este
reprezentat de ARNr (80%), ARNt (l0-20%) i ARNm (2%).
In citoplasma celulelor tinere, proteina dominant cantitativ este EFTu (Elongation Factor Termounstable), care reprezint circa 5% din totalul proteinelor. Acest factor particip la formarea legturilor
dipeptidice, la nivelul ribosomilor. Fiecare complex molecular ARNt-aminoacid ce ateapt recunoaterea
codonului este asociat cu EFTu. Abundena EFTu este reflectarea direct a ratei nalte a sintezei proteice.
In citoplasma celulelor mbtrnite apar materiale de incluzie i vacuole. Aspectul devine granular
neomogen, iar bazofilia diminu datorit scderii pn la 0 a ratei sintezei ARN, precum i datorit reducerii
treptate a cantitii existente. Afinitatea pentru coloranii bazici este neuniform.
Echilibrul osmotic al celulei bacteriene
In mediile naturale, bacteriile sunt supuse unor variaii ample ale presiunii osmotice a mediului extern.
De exemplu, bacteriile din sol supravieuiesc perioadelor de uscciune i umiditate, bacteriile infecioase ale
tractului urinar supravieuiesc variaiilor de concentraie a urinii, iar microorganismele industriale tolereaz
soluii nutritive concentrate, precum si acumularea extracelular a produselor de metabolism.
La schimbarea osmolalitii mediului lor, bacteriile rspund prin mecanisme pasive sau active.
Rspunsul este prompt, deoarece membrana citoplasmatic este liber permeabil pentru ap.
La creterea presiunii osmotice a mediului extern, bacteriile rspund n trei faze care se suprapun
parial:
- deshidratarea(pierderea unei pri a apei celulei);
- acumularea cosolvenilor;
- remodelarea celular(a peretelui, a nucleoidului, reluarea sintezei macromoleculelor, a creterii i a
diviziunii celulare).
Rspunsul la scderea presiunii osmotice parcurge de asemenea trei faze:
- nglobarea apei
- eliminarea cosolvenilor
- remodelarea funciilor celulare.
Cosolvenii sunt molecule solubile n ap, care echilibreaz presiunea osmotic a celulei cu presiunea
mediului extracelular. De cele mai multe ori, rolul de cosolvent l au cationii K +, Na+ i cosolvenii organici cu
sarcin pozitiv (ectoina, glicin-betaina).
Cosolvenii se gsesc n interiorul celulei i la exteriorul ei: NaCl i glucidele predomin n mediul
extracelular, iar K+ i cationii organici, care constituie solvenii compatibili sunt intracelulari.
Modificrile presiunii osmotice a mediului extern sunt recepionate de osmosenzori, localizai n
membrana citoplasmatic i n nucleoidul bacterian. Osmosenzorul este un ansamblu care detecteaz
schimbrile n activitatea apei extracelulare (osmosenzor direct) sau schimbrile care rezult n structura celulei
(osmosenzor indirect). Spre deosebire de chemosenzor, care se bazeaz pe interaciunea stereospecific dintre
ligand i receptor, osmosenzorii sunt macromolecule care sufer modificri ale conformaiei i/sau
oligomerizare, ca rspuns la schimbrile solventului.
Echilibrul osmotic la bacteriile halofile
Microorganismele triesc n medii cu ntregul spectru al concentraiei de sare, de la apa dulce i mediul
marin, pn la mediile n care NaCl are o concentraie la saturaie. Bacteriile halofile aparin grupului moderat,
adic acelea care cresc la concentraii de NaCl cuprinse ntre 2-15%(0,3-2,5 M) sau sunt halofile extreme, adic
necesit cel puin 15% NaCl (2,6 M) pentru cretere. Bacteriile halotolerante cresc n absena NaCl, dar
tolereaz concentraii relativ mari de sare.
Microorganismele halofile i halotolerante aparin tuturor celor trei domenii: Archaea, Bacteria si
Eucarya.
Deoarece membranele biologice sunt permeabile pentru ap, celulele nu pot menine o activitate a apei
citoplasmatice, mai mare dect a mediului salin nconjurtor, deoarece apa trece rapid n mediu.
Microorganismele care triesc n medii cu salinitate foarte mare, pstreaz un echilibru izoosmotic cu
mediul extracelular. Meninerea presiunii de turgor * necesit o presiune hiperosmotic. Cu excepia halofilelor
Archaea din ordinul Halobacteriales, toate organismele halofile i pstreaz presiunea de turgor.
*
Presiunea de turgor este diferena de presiune osmotic (osmolalitate) dintre interiorul i exteriorul celulei.
Microorganismele evit stresul osmotic determinat de concentraiile saline nalte, prin dou
mecanisme:
- celulele pot s pstreze concentraii saline intracelulare nalte (strategia salt-in), cel puin echivalente din
punct de vedere osmotic cu concentraiile externe. Toate sistemele intracelulare vor fi adaptate prezenei
concentraiei saline mari;
- celulele pot s-i menin concentraii saline sczute n citoplasm, dar presiunea osmotic nalt a
mediului extern este echilibrat de soluii compatibile organice (strategia soluiilor compatibile). Soluiile
compatibile sunt compui organici cu molecul mic, solubile la concentraie mare n ap i sunt lipsite
de sarcin, sau sunt pozitive la pH fiziologic.
Strategia salt-in este utilizat de dou grupuri nenrudite filogenetic: halofilele extreme din Archaea
(ordinul Halobacteriales) i halofilele anaerobe (ordinul Haloanaerobiales). Cu o excepie, ele nu conin soluii
osmotice organice, iar concentraia ionic intracelular este similar celei din mediul extern. In mediul extern
se gsete NaCl, iar n celul se gsesc concentraii echimolare de KCl.
La aceste celule, toate enzimele i componentele structurale sunt adaptate la prezena concentraiei
saline mari. Enzimele lor sunt tolerante la condiiile de salinitate. Proteinele lor au aminoacizi acizi n mare
exces i cantiti mici de aminoacizi hidrofobi.
Cele mai multe proteine ale Archaea halofile depind de prezena concentraiilor mari de sare pentru
meninerea conformaiei adecvate activitii. Sursa de energie pentru eliminarea Na+ i acumularea KCl este
gradientul electrochimic de protoni prin membrana citoplasmatic, rezultat n procesul respirator.
La majoritatea organismelor halofile si halotolerante, echilibrul osmotic este asigurat de molecule
organice mici, fie sintetizate de celule, fie preluate din mediu cnd acestea sunt disponibile. Strategia soluiei
compatibile nu necesit prezena proteinelor adaptate la mediul salin. Soluiile organice compatibile sunt acelea
care, la concentraii nalte, permit enzimelor s funcioneze eficient, deoarece, probabil interacioneaz cu
proteinele celulei.
Compui organici compatibili la microorganismele halofile i halotolerante.
Soluiile compatibile detectate la microorganismele halofile i halotolerante includ poliolii (glicerol,

arabitol), glucide i derivaii lor (sucroza, trehaloza, glucozil-glicerol), aminoacizi i derivaii lor, amine
quaternare (glicin-betaina). Betainele reprezint un grup restrns de substane naturale care rezult din
aminoacizi, prin metilarea complet a gruprii aminice. Derivaii quaternari ce se formeaz sunt amfiioni, cu
formula general:
Multe bacterii care acumuleaz ori sintetizeaz substane organice pentru stabilizarea osmotic, conin
i concentraii mari de Na+ i K+.
Procesele vitale n medii saline i hipersaline sunt costisitoare din punct de vedere energetic. Dintre
toate soluiile organice compatibile, glicerolul este molecula cea mai simpl i cea mai ieftin pentru celul.
Este miscibil cu apa n orice proporie. La Bacteria i Archaea, acumularea glicerolului nu este posibil,
datorit absenei sterolilor membranari. Pentru echilibrul osmotic, ele sintetizeaz alte molecule mai
costisitoare din punct de vedere energetic.
Soluiile care se sintetizeaz cu cea mai mic cheltuial de energie se gsesc la organismele care triesc
la concentraiile saline cele mai mari i care necesit cea mai mare concentraie de soluie compatibil.
Pentru sinteza unei molecule organice compatibile sunt necesare 23-79 molecule de ATP la heterotrofe,
produse n timpul respiraiei i 30-109 molecule de ATP pentru biosintez, la autotrofe. Dar moleculele
compatibile pentru soluia osmotic pot s reprezinte i o surs de carbon i energie, utilizabil n condiiile
epuizrii resurselor energetice externe. Cnd celulele trec n mediu cu salinitate sczut (de exemplu, n lacurile
srate, cnd apa de ploaie se amestec cu apa sarat), o parte a moleculelor organice cu rol osmotic devin
disponibile. Unele molecule (glicin-betaina i ectoina) nu sunt metabolizate, ci sunt excretate dup trecerea
celulei n mediul cu presiune osmotic mai mic. In mediul hipoosmotic, la Dunaliella (alg verde unicelular),
glicerolul este convertit in amidon (osmotic inactiv).
Multe microorganisme halofile si halotolerante menin un amestec de molecule osmotice compatibile i
reglarea sintezei lor este condiionat de nevoile celulei.
Bacteriile care sintetizeaz molecule organice compatibile posed proteine membranare de transport,
care le permit s le incorporeze din mediu, dac sunt disponibile.
Organizarea nucleoidului bacterian

Aparatul genetic bacterian este reprezentat de dou tipuri de structuri: nucleoidul, care din punct de
vedere structural i funcional corespunde cromosomului, iar cea de a doua categorie de structuri o reprezint
plasmidele. Corespunztor celor dou tipuri de structuri, determinanii genetici sunt de dou categorii: gene
eseniale (eucromosomale), localizate n structura cromosomului i genele accesorii, cu localizare plasmidial
sau n structura elementelor genetice transpozabile i a unor fagi.
Cromosomul bacterian, ca structur genetic esenial poart informaia genetic ce asigur
desfurarea funciilor eseniale pentru existena celulei, adic setul de determinani minim necesari pentru a
codifica arhitectura celulei i pentru a asigura metabolismul energetic i de biosintez, creterea, diviziunea i
reglarea diferitelor activiti celulare.
Structurile genetice extracromosomale (plasmidele) poart informaia genetic accesorie, de confort,
care permite celulei o mai bun adaptare la condiii de mediu noi sau modificate.
Genomul E. coli K12 este alctuit din circa 4400 de gene. Pentru creterea n laborator ar fi necesare numai
cteva sute. Genomul este rezultatul aciunii forelor selective pentru eficien metabolic i adaptabilitate.
Spre deosebire de celulele eucariote care au un nucleu cu structur bine definit, delimitat de o membran
i coninnd un numr definit de cromosomi, nucleul bacterian reprezint o form primitiv de organizare,
lipsit de membran, inclavat direct n citoplasm. Particularitatea structurii nucleare lipsa membranei
delimitante este fundamental pentru organizarea celular de tip procariot, cruia i aparin bacteriile.
Datorit caracterelor structurale particulare, nucleul bacterian a primit diferite denumiri: nucleoid,
material nuclear, nucleoplasm, echivalent nuclear sau chiar nucleu, prin analogie cu nucleul celulei
eucariote, lineom sau genofor.
Evideniere. Fiind foarte bogat n ARN, citoplasma celulei bacteriene este intens bazofil, fapt ce nu a
permis diferenierea materialului nuclear, la fel de bazofil, dup colorarea cu colorani bazici de anilin. De
aceea s-a considerat ca nucleul bacterian lipsete sau dimpotriv, c bacteriile ar avea un nucleu imens care
ocup ntreaga celul. Datorit bazofiliei citoplasmei, evidenierea materialului nuclear la microscopul optic
este posibil dup utilizarea tehnicilor de colorare selectiv, ce constau n ndeprtarea ARN prin hidroliz
acid (tehnica Robinow si Feulgen) sau enzimatic (cu ribonucleaz) i utilizarea coloranilor de anilin.
Dup hidroliza ARN, materialul nuclear apare sub diferite forme: sferic, ovalar, de halter, de bastona,
reprezentnd 5-l6% din volumul celulei.
Dup tratamentul celulelor cu DN-az, zona corespunztoare materialului nuclear apare golit de coninut.
Pe micrografiile electrono-optice, materialul nuclear este localizat, n mod obinuit, n partea central a
celulei i se distinge de citoplasma nconjurtoare, prin densitatea sa mai mic la fluxul de electroni, n
contrast cu celula eucariot, la care nucleul este mai electronodens, comparativ cu citoplasma. Celula
procariot are un contrast invers al structurilor sale, n raport cu celula eucariot, care se datoreaz att
faptului ca ADN nu este asociat cu proteine, ct i densitii foarte mari a citoplasmei bacteriene.
Pe seciuni ultrafine, zona materialului nuclear este ocupat de fibrile fine, cu diametrul de 2,5 nm,
uneori aranjate n iruri ondulate, paralele, asemntoare cu o jurubi de a (fig. 25) i sunt sensibile la
hidroliza cu DN-az.
Fig. 25. Imagine electrono-optica a nucleoidului bacterian (original).
Organizarea fizic a cromosomului

Materialul nuclear poate fi izolat din celul sub forma unui corpuscul dens i compact. Corpusculul
corespunde strii mpachetate a cromosomului. Dup tratamentul moderat cu RN-az i proteaze, din
structura compact se izoleaz molecula de ADN sub forma cromosomului circular nchis covalent (60%),
ARNm , ARNt (30%) i ARN-polimeraza (l0%). Cromosomul are o lungime de l400 m i diametrul de 2,5
nm, corespunztor diametrului moleculei de ADN dublu catenar. Circularitatea este o condiie a existenei
sale. Sub aceast form, molecula de ADN este rezistent la aciunea exonucleazelor citoplasmatice, active
asupra moleculelor lineare de ADN. Cromosomul bacterian este cea mai mare molecul biologic. Prin
lungimea sa (l400 m), molecula de ADN cromosomal depete de circa l000 de ori lungimea celulei
bacteriene.
Raportat la dimensiunile mici ale unei bacterii, molecula de ADN este supus constrngerilor
topologice* de supraspiralizare (suprarsucire), prin care este mpachetat pentru a forma un corp compact
de l500 de ori mai mic.
*
Topologia este o ramur a matematicii care studiaz proprietile corpurilor geometrice, proprieti care rmn
nealterate dup rsucirea sau contorsionarea lor.
Pentru a ocupa un volum att de mic, molecula de ADN se mpacheteaz dup norme foarte riguroase,
aa nct, n orice moment, din cele 3000-5000 de gene pe care le conine, oricare s fie accesibil sistemelor
celulare de transcriere i traducere.
Moleculele de ARN au un rol esenial n meninerea strii compacte a ADN. S-au propus mai multe
modele de mpachetare a moleculei de ADN. Cel mai acceptat este acela propus de Pettijohn i Hecht (l974),
n acord cu care, mpachetarea se face printr-un proces de pliere si supraspiralizare (formare de suprahelice).
Se formeaz astfel o structur condensat, meninut prin aciunea asociat a proteinelor din nucleoid.
Modelul de mpachetare prin pliere i supraspiralizare ncearc s explice mecanismul molecular al
drumului invers, de la structura circular relaxat a macromoleculei de ADN, la arhitectura corpuscului dens
existent n celul.
Pentru mpachetare, se consider c molecula dublu catenar, circular, iniial se pliaz n 40-60 de
domenii egale. Punctele de pliere sunt determinate de molecule de ARN nscnde, legate cu una dintre
extremiti de ARN-polimeraz. Moleculele de ARNr i ARNt, mpreun cu ARN-polimeraza particip la
formarea i meninerea domeniilor de pliere. Prin pliere, diametrul cromosomului scade la circa 30 m. In
interiorul fiecrui domeniu de pliere are loc un proces de supraspiralizare. Supraspiralizarea este o stare
fizic n care molecula de ADN se pliaz prin rsucire n jurul propriei axe (fig. 26).
Fig. 26. Diferite stri fizice ale cromosomului bacterian. a. Bucle multiple de ADN dintr-o celul spart prin oc
hipotonic, rspndite pe suporul reprezentat de o protein bazic. b. Diagrama ADN supraspiralizat. n stnga sunt
reprezentate 7 domenii (numrul real este de circa 50) supraspiralizate, meninute astfel de un set de proteine, care
stabilizeaz capetele unui domeniu. Buclele mici ale fiecrui domeniu pot fi spiralizate n jurul unui set de proteine
nucleosomale, reducnd tensiunea n dublul helix, creat prin supraspiralizare. n dreapta, dou domenii au fost incizate
la nivelul unei catene, permind rotaia helixului i relaxarea supraspiralei (dupa Pettijohn i Snider, 1985).
Intr-o etap ulterioar, domeniile suprahelicale se pliaz din nou unul fa de altul, superior i inferior
fa de un plan orizontal. Astfel, rezult masa compact a nucleoidului, aa cum se evideniaz la microscopul
optic i se poate izola din celul.
Spiralizarea ADN are sens pozitiv i negativ.
Spiralizarea primar a dublului helix are sens pozitiv(de dreapta), cu 10,4 pb/tur. Anumite secvene de
ADN, mai ales cele care conin resturi alternante de G i C, tind s formeze un helix rsucit spre stnga
(forma Z) a ADN, denumit astfel deoarece axa glucid-fosfat are o structur n zig-zag.
Spiralizarea secundar (supraspiralizarea) are sens negative (de stnga) i se produce prin rsucirea
moleculei de ADN n sens opus spiralizrii primare (pozitive) a dublului helix. ADN bacterian este, n mod
normal, supraspiralizat negativ, cu o spiral negativ la fiecare circa 200 pb.
Cromosomul bacterian const dintr-un numr mare de bucle supraspiralizate, aranjate pe o regiune
central, rezultnd o structur compact i organizat - nucleoidul.
Prin supraspiralizarea negativ, ntre capetele domeniului pliat, se creeaz o tensiune de torsiune, direct
proporional cu gradul de spiralizare, care se menine atta timp ct molecula este nchis covalent.
Tensiunea este anulat prin incizia unei catene i formarea buclelor de ADN. Catena incizat se rotete liber n
jurul axei moleculei, se relaxeaz i ia forma circular deschis, fr superhelice. Formarea unei bucle
elimin un tur al suprahelicei i diminu tensiunea general a suprahelicei.
Formarea suprahelicei i relaxarea ei este condiionat de activitatea unui set de enzime, denumite
ADN-topoizomeraze. Topoizomerazele sunt enzime care schimb configuraia spaial a ADN prin ruperea i
reunirea catenelor. O topoizomeraz este o nucleaz reversibil, care se leag covalent la o grupare fosfat a
ADN i rupe legtura fosfodiesteric. Deoarece legtura covalent care unete topoizomeraza la o grupare
fosfat a ADN reine energia legturii fosfodiesterice pe care o rupe, reacia este reversibil, adic incizia este
urmat de legarea celor dou capete. Legarea este rapid i nu necesit un aport suplimentar de energie.
Topoizomerazele de tip 1 acioneaz prin recunoaterea unui segment de ADN, parial despiralizat, prin
incizia unei catene, ceea ce permite celor dou pri ale helicei de ADN, de o parte i de alta a inciziei, s se
roteasc liber una fa de alta, n sensul care reduce tensiunea de supraspiralizare. Aceasta nseamn c
replicarea ADN se face numai cu rotaia unei mici pri a helicei, adic a celei situat n aval de bifurcaie.
Problema transcrierii se rezolv n acelai mod.
Topoizomerazele de tip II se leag covalent, simultan, de cele dou catene ale dublei helice i produc o
rupere bicatenar tranzitorie. Aceste enzime se activeaz la situsurile cromosomale la nivelul crora se
ntreptrund dou duble helice.
Dup fixarea topoizomerazei la un astfel de situs, etapele aciunii sale sunt urmtoarele:
- clivarea uneia din cele dou helice duble;
- enzima determin trecerea celei de a II-a catene, prin deschiderea creat;
- repar discontinuitatea nainte de a se disocia de ADN.
ADN-polimeraza de tip II poate astfel s separe cele dou molecule de ADN catenate.
Unele topoizomeraze sunt helicaze sau giraze(produc spiralizarea moleculei de ADN), iar altele sunt
derulaze (produc despiralizarea prin incizia unei catene i bucla se relaxeaz).
ADN-giraza (topoizomeraza II) modific configuraia spaial a moleculei de ADN, prin catalizarea
suprarsucirii negative a moleculei de ADN, uurnd mpachetarea cromosomului i plasmidelor n spaiul
restrns al celulei. Este o enzim alctuit din 4 subuniti (identice 2 cte 2), care utilizeaz energia rezultat
prin hidroliza ATP. Este esenial pentru mai multe procese vitale: iniierea, alungirea i terminarea replicrii
ADN, transcrierea unor operoni, repararea ADN, recombinarea i transpoziia.
ADN giraza elimin rsucirile suprahelicale pozitive care se acumuleaz naintea bifurcaiei de
replicare.
Aceste activiti sunt rezultatul secionrii coordonate a ambelor catene ale ADN, trecerea celuilalt segment
de ADN prin ni i restabilirea continuitii catenei. Acest mecanism de aciune este caracteristic
topoizomerazei II.
Topoizomeaza IV este asemntoare structural cu ADN giraza. Ea separ moleculele surori catenate de
ADN, rezultate dintr-un rund de replicare i permite segregarea lor n celulele surori.
Starea suprahelical a ADN intracelular este reglat prin aciunea ADN girazei i topoizomerazei I, care
anuleaz rsucirile suprahelicale ale ADN.
Ryter si Cohen (l975) consider c nucleoidul evideniat la microscopul electronic ca o structur net ar
reprezenta fracia de ADN condensat, genetic inactiv, care din punct de vedere topologic reprezint ADN
supraspiralizat.
Proporia ntre ADN supraspiralizat i ADN relaxat este meninut prin echilibrul dintre ADN-giraza
(topoizomeraza II), enzima care produce supraspiralizarea i topoizomeraza I, enzima care produce relaxarea.
Topoizomeraza I, prin clivarea unei catene, elimin tensiunea de torsiune i formeaz bucle externe
distribuite pe toat suprafaa nucleoidului. Buclele sunt secvenele de ADN care conin genele transcrise la un
moment dat. Ele sunt invizibile, extinse n citoplasm i n aceast topografie sunt mai uor accesibile ADNpolimerazei i ARN-polimerazei. Pe seciuni subiri, anticorpii marcai cu aur, specifici fa de ADN
monocatenar coloreaz numai periferia nucleoidului, iar anticorpii specifici fa de ADN dublu catenar
coloreaz partea central (condensat) a nucleoidului.
Domeniile cromosomului bacterian sunt topografic independente, ceea ce permite rotaia lor liber i
relaxarea individual a fiecrei supraspirale, care trece reversibil n starea de bucl, configuraie n care se
replic, este transcris sau reparat. ADN bacterian, ca i la eucariote este asociat cu proteine.
In celula eucariot, corpii proteici n jurul crora se spiralizeaz dubla caten de ADN se numesc
nucleosomi. La bacterii, organizarea molecular a nucleosomilor este puin cunoscut. Se pare c ei conin
dou proteine de legare pentru ADN: proteina HU (Helix Unwinding) i proteina I. Ele se gsesc n structura
nucleosomului, n proporia de o molecul la l50-200 perechi de baze.
Bacteriile au o cantitate mic de ADN neinformaional(genele bacteriene nu conin introni). Secvenele
repetate la bacterii pot fi:
- homopolimerice (multimeri ai uneia din cele 4 nucleotide: poli-A, poli-G, poli-T, poli-C), cu o lungime de
pn la 42 nucleotide;
- secvene scurte de 2-6 baze. Dac sunt localizate n interiorul genelor i au o secven diferit de 3 sau 6
nucleotide, modific potenialul codificator al genei.
- secvene mai lungi de 8 nucleotide. La numeroase bacterii s-au evideniat cteva sute de secvene
repetitive palindromice de 20-40 de baze, cu localizare extragenic, care delimiteaz unele gene i a cror
funcie nu este cunoscut.
La bacterii nu s-au gsit gene ndite. Comparnd secvenele genelor ce codific proteine bine
conservate n evoluie, reiese c intronii au fost prezeni n genele ancestrale, dar s-au pierdut n evoluia
organismelor mici, care i-au redus la minimum cantitatea de ADN i s-au adaptat la o cretere foarte rapid
(eubacterii i levuri).
Genele bacteriene sunt strns mpachetate: se poate estima c circa 30% dintre ele se suprapun parial
cu genele nvecinate.
In mod obinuit, n celula bacterian se gsete un singur cromoson, dar n culturi tinere, pe medii care
ofer condiii optime de cretere, celulele apar multinucleate, avnd 2-4 cromosomi, identici genetic, deoarece
provin prin replicarea cromosomului parental, astfel c, n esen, bacteriile sunt organisme haploide. Situaia
de celul polinucleat este temporar i este rezultatul lipsei de sincronizare ntre procesele de diviziune
nuclear i diviziune celular.
Replicarea ADN bacterian
Legturile de H nu sunt singurele fore stabilizatoare ale moleculei de ADN. Bazele sunt hidrofobe, se
stivuiesc i tind s se separe de mediul apos. Rsucirea helixului aduce bazele mai aproape i apa este exclus
mai eficient. Structura dublu catenar este stabilizat prin interaciunile hidrofobe dintre bazele celor 2 catene.
Dei bazele sunt hidrofobe i foarte puin solubile n ap, acizii nucleici sunt destul de solubili, datorit
hidrofiliei axei glucid-fosfat i n special, datorit concentraiei mari de grupri fosfat ncrcate negativ.
Acestea pot avea efect invers, de respingere electric a celor dou catene, dar prezena srurilor n mediu,
creeaz un nor de ioni pozitivi care anuleaz respingerea.
Replicarea cromosomului bacterian este un proces strict reglat i are loc ntr-o etap bine definit a ciclului
celular.
Replicarea ADN bacterian este de tip semiconservativ: fiecare din cele dou molecule fiice conine o
caten sintetizat de novo i o caten complementar, conservat din molecula parental (fig. 27).
Pentru ca replicarea ADN s aib loc, cele dou catene ale moleculei parentale trebuie s se separe fizic, cel
puin pe o secven scurt, pentru a permite ADN-polimerazei i proteinelor asociate s citeasc fiecare caten
individual cu rol de matri. Reasocierea catenelor separate este blocat prin legarea SSB( single stranded
DNA-binding protein).
Fig. 27. Pentru replicarea ADN la procariote, catenele se separ la punctul de origine a replicrii, de unde bifurcaia
de replicare se deplaseaz simetric. Fiecare dintre cele dou catene are rol de matri pentru sinteza unei catene
complementare. Sinteza noilor catene de ADN are loc n direcia 5- 3. De aceea, sinteza unei noi catene este discontinu,
sub forma segmentelor scurte (Okazaki) i apoi reunite.
Cromosomul bacterian este un singur replicon*, deoarece se replic de la o singur origine. Procesul
replicrii moleculei de ADN este iniiat la un punct denumit originea replicrii. Aceasta este o secven de 250300 de baze, recunoscut de complexul de iniiere. La punctul de origine a replicrii, dubla caten de ADN este
secionat i replicarea este iniiat pe cele dou catene izolate. Situsul de replicare, denumit bifurcaie de
replicare se deplaseaz bidirecional, pe molecula de ADN.
Complexul proteic de replicare este format din proteina A (cu rol n legarea cromosomului pe situsul
membranar), helicaza B o topoizomeraz I (cu rol de despiralizare a ADN), proteina SSB, cu rolul de a
stabiliza cele dou catene separate, ADN giraza (topoizomeraza II), ce limiteaz derularea extensiv a ADN sub
aciunea topoizomerazei I i induce supraspiralizarea negativ a ADN nou replicat). Aceste proteine,
Cromosomii celulei eucariote au fiecare mai muli repliconi, ceea ce face ca replicarea ADN s se fac ntr-un interval scurt.
mpreun cu G-primaza (cea care sintetizeaz ARN primer) formeaz un primosom (complexul primar care
iniiaz replicarea). Sunt necesare dou complexe de replicare: unul se deplaseaz n direcia 3-5 pe un lan,
iar cellalt, n direcia 5 3, pe catena opus.
Deoarece replicarea moleculei de ADN este bidirecional, exist dou puncte de sintez, denumite
bifurcaii de replicare, care se deplaseaz n direcii opuse, ncepnd de la punctul de origine i progreseaz cu
500-1000 nucleotide/sec., pn se ntlnesc. Pe imaginile autoradiografice se observ structuri de forma literei
theta.
Replicarea ADN are caracter cooperant, adic complexul de proteine implicate n replicare formeaz un
ansamblu stabil care se deplaseaz de-a lungul fiecrei catene, fr disociere i reasociere la fiecare treapt,
ceea ce contribuie decisiv la viteza foarte mare a replicrii ADN.
Enzima care catalizeaz adugarea nucleotidelor este ADN-polimeraza III.
Replicarea ADN este semidiscontinu: o caten a ADN este sintetizat continuu, iar cealalt se
sintetizeaz sub forma unor fragmente scurte, care ulterior sunt reunite cap la cap. Cele dou catene ale
moleculei parentale nu se replic simultan, deoarece sunt antiparalele (una are direcie 5- 3, iar cealalt, 35). Direcia de polimerizare a catenei noi este 5- 3, nici una dintre polimeraze neputnd s adauge
dezoxiribonucleotide n direcia 3- 5, la catenele nascente.
Catena care crete n direcia 5- 3 (catena leading) se sintetizeaz n mod continuu, deoarece,
permanent exist un capt 3OH liber la bifurcaia de replicare, la care se adaug o nou nucleotid. ADNpolimeraza III catalizeaz adugarea unei nucleotide la catena de ADN preexistent, dar nu iniiaz sinteza
ADN de novo, dintr-un amestec de nucleotide. Totdeauna este necesar un primer de ARN. La deschiderea
dublei catene de ADN, o ARN-polimeraz catalizeaz sinteza unui primer de ARN. ARN-polimeraza specific
se numete ARN-primaza.
Catena care crete n direcia 3- 5 se sintetizeaz discontinuu, deoarece la bifurcaia de replicare nu
exist un capt 3OH liber. Mici fragmente de ARN primer furnizeaz captul 3OH. Aceasta este catena
succesoare sau ntrziat (lagging). Ea se sintetizeaz sub forma unor fragmente scurte n direcia opus
bifurcaiei de replicare.
Dup ce ADN este sintetizat, primerii ARN sunt ndeprtai (probabil sub aciunea RN-azei H).
Fragmentele scurte rezultate din sinteza discontinu sunt completate de ADN-polimeraza I i reunite cap la cap
sub aciunea catalitic a polinucleotid-ligazei.
Deoarece o caten este sintetizat continuu, iar cealalt discontinuu, ntregul proces al replicrii ADN
are caracter discontinuu.
Pentru un scurt interval dup replicare, catena parental i cea progen difer din punct de vedere
chimic, deoarece catena parental este metilat. Aceast diferen de ordin chimic este util pentru corectarea
fidelitii copierii catenei matri (funcia de proof-reading). Astfel, catena nou este controlat pentru
eventualele mperecheri greite ale nucleotidelor. Eventualele erori de mperechere sunt depistate de sistemul
enzimatic de corectare, sunt clivate, dup care o enzim de reparare ncorporeaz nucleotidele corecte.
ADN-metilazele metileaz adenina i citozina i inhib astfel aciunea enzimelor de restricie.
Cele mai importante schimbri ale ADN n cursul replicrii sunt acelea ale gradului de spiralizare,
produs sub aciunea topoizomerazelor. ADN suprahelical se despiralizeaz mai uor dect moleculele cu un
grad inferior de spiralizare.
Deoarece topoizomerazele regleaz nivelul de supraspiralizare, ele sunt de fapt reglatoare ale
proceselor de replicare i transcriere.
Transcrierea. Spre deosebire de ADN, care se sintetizeaz ntr-o perioad definit a ciclului celular,
sinteza ARNr se desfoar continuu, pe tot parcursul ciclului de cretere a celulei. La eucariote, sinteza ARN
n timpul mitozei este stopat, deoarece, cromosomii fiind condensai, transcrierea nu poate avea loc.
Informaia genetic este convertit la ARNm. Procesul este catalizat de ARN-polimeraz i este foarte
asemntor cu cel al replicrii ADN, pentru c ADN are rol de matri i secvena de baze n noua molecul
sintetizat reflect pe aceea a matriei. Intre transcriere i replicare sunt dou diferene majore: a)se sintetizeaz
molecule scurte; b)este transcris numai o caten a ADN.
Unele gene sunt transcrise de pe o caten, iar altele de pe catena opus, dar n general, o secven a
ADN este transcris dintr-o singur caten.
ARN-polimeraza iniiaz transcrierea la secvenele de start denumite promotori, iar la captul mesajului
se gsesc semnalele care stopeaz polimerizarea, cnd blocul de gene a fost transcris. ARN-polimeraza este
alctuit din 5 catene polipeptidice: dou catene identice, i i (sigma). Primele 4 catene formeaz
regiunea central a enzimei, dar specificitatea legrii de promotor se datoreaz celei de a 5-a subuniti
factorul sigma. Cele 4 catene, mpreun cu factorul sigma, formeaz holoenzima.
ARN-polimeraza este mare i intr n contact simultan, cu mai multe baze. Moleculele de ARNpolimeraz interacioneaz aleatoriu cu ADN cromosomal, alunec de-a lungul ei, dar au afinitate mic fa de
majoritatea secvenelor. Polimeraza se leag foarte strns de secvena specific denumit promotor, ce conine
situsul de start pentru iniierea sintezei ARN.
Dup ce ARN-polimeraza se leag de regiunea promotor, structura iniial dublu catenar nchis a
ADN este convertit la forma deschis, n care cele dou catene se separ pe o secven localizat. Deschiderea
dublei catene expune bazele lanului codificator, permind mperecherea bazelor ribonucleozid-trifosfai pentru
sinteza ARN. Se formeaz prima legtur fosfodiesteric i factorul se disociaz din complex. Pentru extensia
catenei de ARN este necesar numai regiunea central a ARN-polimerazei. Transcrierea ARN nu necesit
primer i se face n direcia 5- 3, prin adugarea secvenial a nucleotidelor la captul 3. Transcrierea
progreseaz pn la un semnal terminal, cnd ARNm i ARN-polimeraza sunt eliberate.
Semnalele de terminare a transcrierii. Transcrierea ncepe la situsul de start (promotor) i se termin la
sfritul genei, marcat de o secvena terminator (stop), caracterizat prin prezena unei regiuni cu secvene
repetate invers (fig 38).
Fig. 28. Ilustrarea mecanismului molecular al terminarii transcrierii ARNm (modificat dupa Dale, 1996).
Secvena terminal va fi transcris n ARN, cu formarea structurii stem-loop (peduncul cu bucla) ceea
ce va permite reasocierea celor 2 catene de ADN. Astfel, transcrierea se ntrerupe i ARNm se disociaz.
Molecula de ARN conine secvena complementar a secvenei genice, adic secvena catenei care nu a
avut rol de matri.
La bacterii, promotorii puternici sunt asociai cu gene ce sunt transcrise ntr-un numr mare de
molecule de ARN.
In faza de cretere logaritmic a culturii bacteriene, la temperatura optim (37 oC), cromosomul este
transcris cu o rat de 60 nucleotide/secund. In orice moment, n celul se gsesc 400-800 molecule identice de
ARNm, circa l00 molecule diferite de ARNt i circa 700 molecule precursoare ale ARNr. Transcrierea fiecrei
molecule de ARN este catalizat de o molecul de ARN-polimeraz. Cele circa l600 molecule de ARNpolimeraz reprezint l% din cantitatea de proteine celulare. La procariote, toate tipurile de ARN sunt transcrise
de un singur tip de ARN-polimeraz.
Ribosomii
Ribosomii sunt particule ribonucleoproteice, localizate n citoplasm, care la microscopul electronic au
form sferic, cu diametrul de 20 nm.
Pe baza constantei de sedimentare * (S) se disting urmtoarele categorii de ribosomi: a) ribosomi 80S, n
citoplasma celulelor eucariote; b) ribosomi mitocondriali i cloroplastici, ntre 55S la mamifere i 75S la
plantele superioare; c) ribosomii archaea, de 70S, asemntori din punct de vedere funcional cu ribosomii 80S
ai eucariotelor, datorit absenei sensibilitii la streptomicin i cloramfenicol i prin sensibilitatea la toxina
difteric; d) ribosomii eubacteriilor, de 70S.
*
Simbolul S semnific viteza de sedimentare a unei particule sau a unei molecule prin tehnica ultracentrifugrii.
Constanta de sedimentare (viteza cu care o molecul se deplaseaz ntr-un cmp gravitaional) este dependent de dou
proprieti fizice ale moleculei:
- gr. mol. (M): cu ct gr. mol. crete, cu att crete i viteza de sedimentare;
- aspectul moleculei (o molecul aerodinamic se deplaseaz mai repede dect una sferic). O molecul mai compact
ntmpin o for de frecare mai mic i se deplaseaz mai repede.
Raportul dintre viteza de deplasare a moleculei i fora centrifug aplicat se numete coeficient de sedimentare(S).
S = Viteza/Fora centrifug
Valoarea lui S pentru o molecul dat este aceiai n diferite soluii.
Pentru majoritatea macromoleculelor, valoarea lui S este cuprins ntre 1 x l0 -13 secunde i l00 x l0-l3 secunde. In onoarea
lui Svedberg, cel care a inventat centrifuga, l0-13 secunde este echivalentul unui svedberg sau S.
Numrul ribosomilor n celula bacterian este corelat cu activitatea ei fiziologic: este mic n celulele
n repaus, dar crete foarte mult n celulele fiziologic active (n medie 20000 ribosomi/celul, cu variaii ntre
l5-l00 000).
Ribosomii sunt structuri dinamice, calitate ce se reflect n capacitatea lor de a se disocia n dou
subuniti, de 30 S i 50S i de a se reasocia. Disocierea i reasocierea sunt corelate cu variaia concentraiei
ionilor de Mg2+: creterea concentraiei ionilor favorizeaz asocierea, iar scderea concentraiei lor produce
disocierea. Circa l0% din numrul total de ribosomi sunt asamblai, liberi n citoplasm. Ei sintetizeaz
proteinele structurale. Ali l0% se gsesc sub forma subunitilor disociate, iar restul de 80% sunt polisomi.
Ribosomii au dou localizri: liberi n citoplasm sau ataai feei interne a membranei citoplasmatice.
La nivelul celor ataai se sintetizeaz proteinele de export. Studiul ribosomilor a beneficiat de tehnici din
domeniul fizicii (metoda dispersiei neutronilor), care, n asociaie cu tehnicile de chimie au permis nelegerea
structurii i funciei ribosomilor.
La microscopul electronic, s-a demonstrat c ribosomii au form complex, cea sferic perceput n
mod obinuit fiind rezultatul examinrii cu sisteme optice cu putere redus de rezoluie. Subunitatea 50S are o
form asemntoare cu aceea a unui fotoliu, iar subunitatea 30S se aseamn cu o halter asimetric, aezat
orizontal pe braele i sptarul fotoliului. Intre cele dou subuniti rmne un spaiu prin care trece ARNm (fig.
29).
Fig. 29. Reprezentarea schematic a subunitilor ribosomale 30S i 50S.
Din punct de vedere biochimic, ribosomii bacterieni conin circa 55 de tipuri de molecule proteice i
trei tipuri de molecule de ARNr.
Studiile privind structura funcional a ribosomilor s-au fcut cu dou metode foarte sensibile: difracia
cu neutroni i imunoelectronomicroscopia
Subunitatea mic 30 S cuprinde 2l tipuri de molecule proteice (S 1-S21), n ordinea descreterii mrimii,
cu gr. mol. ntre 60 kDa i 8 kDa i o molecul de ARNr l6S, alctuit din circa l6 000 nucleotide.
Subunitatea mare, 50S conine 34 tipuri de molecule proteice (L l - L34, L= Large), cu gr. mol. cuprins
ntre 9-28,5 kD i dou molecule de ARNr, de 23 S i respectiv 5 S. Cele dou tipuri de molecule de ARN
provin prin clivarea unui precursor comun, de 30 S.
ARNr este transcris din 7 operoni (rrn), fiecare cu doi operoni n tandem (P 1 i P2), din care sunt
transcrise copiile 16S, 23S i 5S.
Sinteza ARNr este controlat de concentraia aminoacizilor n celul: rata sintezei ARNr este
dependent de rata de aprovizionare cu aminoacizi, corelat direct cu capacitatea ribosomilor de a consuma
aminoacizii n sinteza proteinelor. Dac un singur aminoacid lipsete, sinteza proteinelor ribosomale este
stopat i celula nu mai asambleaz ribosomi.
Cele 55 de tipuri de proteine ribosomale se gsesc ntr-un singur exemplar (o singur molecul din
fiecare tip). Unele au rol structural, fiind eseniale pentru asamblarea ribosomului, altele au rol funcional,
permind legarea ARNm n procesul traducerii i sintezei lanului proteic. La E. coli, n fiecare subunitate
ribosomal, raportul ARN-proteine este 2/l, iar la alte bacterii, raportul este 2/3.
Moleculele componente au o distribuie fix, riguroas n structura ribosomului. ARNr este pliat ntr-o
structur tridimensional ce formeaz regiunea central a ribosomului i determin aspectul su. Proteinele sunt
localizate n general la suprafaa ribosomului, n depresiunile pe care le creeaz ARN pliat. Unele proteine
conin domenii globulare, localizate la suprafa, ce trimit extensii n regiunea central a ribosomului.
Interaciunile fixe ale componentelor condiioneaz procesele de autoasamblare a ribosomilor.
Rata sintezei proteinelor ribosomale este controlat negativ de proteinele-r libere: acumularea
proteinelor-r libere diminu rata traducerii, scade timpul de njumtire al ARNm i al proteinelor-r. Astfel
scade rata sintezei proteinelor-r.
Asamblarea ribosomilor. Experimental, componentele ribosomale se disperseaz i se autoasambleaz
dup restabilirea condiiilor de mediu, pentru a produce ribosomi activi. S-a reconstituit subunitatea 30 S, dar
reasamblarea subunitii 50 S este mai complex deoarece este dependent de temperatur (60 o) i proteinele se
denatureaz la aceast temperatur. n studiile experimentale s-au utilizat ribosomi de Bacillus
stearothermophilus, care are proteine termostabile, rezistente la 60 o. Ulterior s-a reasamblat subunitatea 50 S de
la E. coli. Reasamblarea urmeaz o cale specific: anumite proteine se leag de ARN i complexul este
recunoscut succesiv de alte proteine, pn ce structura devine complet. Ribosomii reconstituii sunt funcionali
(fac sintez proteic).
Rolul proteinelor pare a fi de stabilizare a ARN, dar ele permit schimbarea configuraiei ARNr,
necesare catalizei sintezei proteinelor.
Ribosomii reprezint componenta esenial a sistemului de traducere a informaiei genetice. Ei sunt
adevratele fabrici de proteine ale celulei. Ribosomii au rolul de a menine att molecula de ARNm, ct i
complexul aminoacil-ARNt, ntr-o orientare corespunztoare pentru a permite att citirea mesajului, ct i
formarea legturilor peptidice.
Ribosomii se asociaz n polisomi (poliribosomi), adic grupri funcionale formate din 4-50 uniti
ribosomale. Dimensiunile polisomilor variaz n funcie de lungimea ARNm. Polisomii sintetizeaz
concomitent mai multe molecule proteice pe aceiai molecul de ARNm.
Particularitile sintezei proteice la bacterii
In celula eucariot, transcrierea i traducerea informaiei genetice sunt evenimente separate n timp i
spaiu, datorit compartimentrii spaiului celular.
In celula procariot, ribosomii au relaii spaiale strnse cu ADN, deoarece transcrierea i traducerea
informaiei sunt dou procese intim coordonate, care se desfoar aproape concomitent.
Transcrierea moleculei de ARNm dureaz circa 1 minut. Rata traducerii este controlat de rata
transcrierii. Cele dou procese sunt intim corelate i se petrec cvasisimultan.
La bacterii, traducerea ncepe foarte repede, deoarece ARNm are o durat funcional scurt (l-2
minute), fiind degradat de nucleaze. Pentru a compensa instabilitatea ARNm, traducerea se iniiaz timpuriu:
complexul de iniiere se ataeaz la captul 5al mesajului, nainte de transcrierea captului 3. Ulterior se
ataeaz succesiv ali ribosomi, rezultnd structuri polisomice. Fiecare ribosom este legat de o molecul
proteic nascent, a crei lungime este direct proporional cu lungimea mesajului pe care ribosomul l-a citit.
Dup ce a citit integral informaia ARNm, ribosomul se desprinde din polisom, elibernd polipeptidul sintetizat
(fig. 30).
Fig. 30. Rolul robosomilor n biosinteza proteinelor.
Cuplarea transcrierii cu traducerea are dou consecine: a) accelereaz rata sintezei proteice, n sensul
c traducerea nu trebuie s atepte eliberarea ARNm de pe matria de ADN; b) buclele de ADN sunt conectate
la membrana citoplasmatic.
Pe medii nutritive bogate, cele mai multe celule bacteriene sintetizeaz i secret exoproteine, n
special n faza staionar a culturii. Proteinele pentru export se sintetizeaz pe ribosomii atasai membranei
plasmatice.
Traducerea. Structura ribosomului, capacitatea sa de a determina poziia ARNt pe ARNm, precum i
cataliza legturii peptidice sunt determinate de ARNr i nu de proteine.
ARNm bacterian nu are o secven semnal (aa cum este secvena TATA n celula eucariot) la nivelul
creia s nceap traducerea. Ribosomii se ataeaz la o secven specific a ARNm (secvena Shine-Dalgarno),
parial complementar unei regiuni de la captul 3 al ARNr 16S, astfel c legarea ribosomului poate fi mediat
de punile de H ce se formeaz ntre secvenele de baze complementare. ARNm bacterian i un ARNt iniiator
se asociaz cu codonul adiacent de iniiere (de obicei AUG, uneori GUG i mai rar CUG). Subunitatea 50 S se
ataeaz la complexul de iniiere. Aceste trepte necesit aciunea ctorva proteine neribosomale, denumite
factori de iniiere.
ARNm este citit n grupe consecutive de cte 3 nucleotide, fr semne de punctuaie. In funcie de
punctul de start, el poate codifica 3 proteine complet diferite, adic exist cadre de citire poteniale (reading
frames).
ARNt. Recunoaterea fiecrui codon triplet este mediat de moleculele de ARNt. Exist cel puin o
specie de ARNt specific pentru fiecare aminoacid. Moleculele de ARNt sunt scurte (75-100 nucleotide), pliate
i formeaz o structur ca o frunz de trifoi.
Braul acceptor al ARNt, format din mperecherea bazelor regiunilor terminale 5 i 3 formeaz situsul
atarii aminoacidului, prin acilarea captului 3. Braul anticodon conine bazele ce recunosc codonul triplet al
ARN, prin complementaritate.
Aminoacidul corespunztor este cuplat cu ARNt de enzima specific, aminoacil-ARNt sintetaza, care
are o specificitate dubl: recunoate ARNt, dar i aminoacidul cu care va fi legat ARNt. De exemplu, codonul
UGG care codific trp, va fi recunoscut de ARNtrp. Acest ARN va fi recunoscut de triptofanil-ARNt sintetaz,
care este specific pentru trp.
Sunt 3 elemente care particip la specificitatea procesului: codonul, anticodonul i recunoaterea ARNt
specific de ctre aminoacil-ARN sintetaz. Uneori ns, mperecherea este greit, deoarece moleculele de
ARNt sunt asemntoare, dup cum unii aminoacizi (izoleucina, valina) sunt asemntori. Erorile au frecven
mic (1/103 molecule proteice conin un aminoacid incorect), datorit unui mecanism de editing, prin care
sintetaza cliveaz aminoacidul legat incorect cu ARNt.
Dac toate cele 3 elemente de specificitate ar fi absolute, ar trebui s fie cel puin 61 specii diferite de
ARNt, cte unul pentru cei 64 codoni, minus cei 3 codoni stop, pentru care nu exist ARNt corespunztor.
Pentru muli aminoacizi exist specii multiple de ARNt.
Mecanismul sintezei proteice. La bacterii, codonul de iniiere AUG este recunoscut de o molecul
specific ARNtfMet. Dup ce ARNt se leag cu Met, aminoacidul este modificat de o alt enzim, pentru a forma
N-formil-metionina.
Moleculele de ARNt aminoacilate, se leag la un situs ribosomal, denumit situs A (acceptor), iar
regiunea anticodon se mperecheaz cu ARNm. Numai dup formarea legturii peptidice, ARNt este apt s se
deplaseze la un al II-lea situs pe ribosom, denumit situs P (peptid).
ARNt specific, legat cu fMet, este unic prin capacitatea lui de a se asocia direct cu situsul P, iar
anticodonul ARNtfMet recunoate codonul AUG.
ARNt cu aminoacidul corespunztor codonului urmtor, intr n situsul A pe ribosom i legtura
peptidic se formeaz prin transferul restului fMet, la al II-lea aminoacid. ARNt fMet este eliberat i ribosomul se
deplaseaz pe urmtorul codon al ARNm, care este nsoit de deplasarea celei de a II-a molecule de ARNt
legat cu dipeptidul, de la situsul A la situsul P. Etapa se numete translocaie. Situsul catalitic pentru formarea
legturii peptidice este reprezentat de ARN 23 S. Situsul A este liber s accepte ARNt-aminoacil, corespunztor
codonului al III-lea al ARNm.
Secreia proteinelor extracelulare la bacterii
Multe proteine rmn solubile n citoplasm, iar altele sunt secretate prin membrana citoplasmatic.
Termenul de secreie semnific trecerea unei molecule de la locul sintezei sale (citoplasma), prin
membran, la exteriorul celulei Gram pozitive sau n spaiul periplasmic al celulei Gram negative, iar cel de
translocaie semnific transferul extracitoplasmatic al unei molecule care rmne legat de membran.
Toate celulele, eucariote si procariote secret (export) proteine n spaiul extracelular.
Proteinele pentru export, la bacterii se sintetizeaz pe ribosomii asociai membranei plasmatice. Sinteza
ncepe cu o secven semnal, de l8-35 aminoacizi, la captul N-terminal. Prin secvena peptidic semnal,
proteinele pentru export se deosebesc de cele citoplasmatice i se orienteaz spre calea de export. Orientarea
este rezultatul legrii peptidului semnal, de membrana, fie direct, fie prin intermediul unei proteine
citoplasmatice denumit chaperone (engl. = a nsoi, a supraveghea).
Unele proteine destinate exportului nu apar niciodat n citoplasm, ceea ce sugereaz c eliminarea
lor se face pe msur ce sunt sintetizate. Ele sunt molecule relativ mici (20-40 kDa) i sunt flexibile pentru c
nu au legturi S-S i, de cele mai multe ori, nici component glucidic. Pentru aceast categorie de proteine,
translocaia este cotranslaional. Secvena semnal hidrofob N-terminal se angajeaz n traversarea
membranei, nainte ca restul moleculei s fie sintetizat. Dup ce secvena semnal ajunge pe suprafaa extern a
membranei plasmatice, este clivat i digerat, iar proteinele exportate rmn asociate membranei, pn ce
plierea este complet.
Alte molecule se sintetizeaz complet, nainte de nceperea exportului. Dup terminarea sintezei,
moleculele destinate exportului nu dobndesc configuraia teriar n citoplasm, deoarece factori proteici
denumii chaperoni*, interacioneaz cu polipeptidele nascente i blocheaz plierea lor, astfel nct proteinele
sunt meninute ntr-o configuraie parial nepliat, compatibil cu transferul.
*
Chaperonii(chaperon, engl = a nsoi, a supraveghea) s-au definit ca o familie de proteine celulare care mediaz plierea
corect a altor polipeptide i uneori asamblarea lor n structuri oligomere, dar care nu sunt componente ale structurilor
funcionale finale. Multe proteine se pliaz spontan, dar plierea iniial a unui numr mare de proteine celulare necesit
asistena chaperonilor. Proteinele care s-au pliat greit sunt degradate proteolitic.
Circa 20% dintre proteinele sintetizate nu ajung la destinaia final, datorit erorilor care au aprut n
timpul transcrierii, traducerii sau pentru c nu s-au pliat corect.
La bacterii, sinteza proteinelor are loc cu o rat foarte rapid: 15-20 aminoacizi/ribosom/secund, ceea
ce echivaleaz cu sinteza a 30 000 polipeptide/min. Rata nalt a traducerii necesit un control riguros al
calitii proteinelor. Circa 30% din totalul proteinelor, necesit asistena chaperonilor. Decizia destinaiei unei
proteine (pliere-degradare) trebuie luat rapid.
Chaperonii citoplasmatici particip la cteva ci specifice:
- asamblarea structurilor de suprafa ale celulei: flageli, fimbrii, pili
- asamblarea OMP
- secreia proteinelor n mediu.
Chaperonii asist plierea proteinelor n periplasm, cel mai probabil independent de ATP, deoarece
existena ATP n periplasm este foarte improbabil.
Prevenirea plierii proteinelor este o etap esenial pentru exportul proteinelor, deoarece, dup ce
dobndete structura teriar definitiv, proteina nu mai poate fi exportat.
Chaperonii au funcii multiple:
asist dobndirea conformaiei corecte a proteinelor care rmn n citoplasm. Ele interacioneaz cu
polipeptidul nascent i previn adoptarea conformaiei incorecte, pn este sintetizat proteina complet;
- moleculele chaperone pot avea rol important n replierea proteinelor denaturate, constituind un mecanism
important de protecie fa de agentul termic sau alte condiii de stress. Unele molecule chaperone sunt
sintetizate specific n condiiile care duc la acumularea proteinelor denaturate i se numesc proteine de
oc termic.
Molecula precursoare este orientat spre situsul su membranar specific, prin intermediul peptidului
semnal, al chaperonului sau al ambelor tipuri de molecule.
Proteinele structurilor de nveli sunt sintetizate de asemenea, pe polisomii ataai membranei
citoplasmatice. Pe msur ce sunt sintetizate, catenele peptidice nascente sunt transferate n grosimea
membranei. Unele se termin n membrana intern, iar altele n spaiul periplasmic sau n membrana extern.
Chiar i fosfolipidele apar iniial n membrana intern i ulterior difuzeaz spre membrana extern.
La bacteriile Gram negative, translocaia este un proces complex, deoarece moleculele trec n spaiul
periplasmic, printr-un proces dependent de energie. O protein de translocaie (Sec A) localizat, se pare n
membran, leag i hidrolizeaz ATP. Energia eliberat este utilizat pentru iniierea translocaiei prin
membrana citoplasmatic. Cele mai multe proteine secretate de bacteriile Gram negative ramn n spaiul
periplasmic i au o semnificaie metabolic (sunt enzime degradative). Majoritatea sunt proteaze i furnizeaz
nutrieni asimilabili pentru celul. Membrana extern a peretelui celular nu are sursa de energie necesar
excreiei. Din aceast cauz, o protein translocat n spaiul periplasmic, printr-un proces dependent de energie
nu poate fi translocat printr-un mecanism similar, prin membrana extern. Probabil, intervin proteine specifice
de translocaie ale membranei externe.
La bacteriile Gram pozitive, proteinele destinate membranei citoplasmatice i peretelui celular se
sintetizeaz fr secvene semnal. Prin analogie cu exportul proteinelor la E. coli, proteinele membranei
citoplasmatice sunt integrate spontan, prin interaciuni ionice i hidrofobe.
Tulpinile g. Bacillus sunt cele mai utilizate pentru producerea industrial a exoproteinelor. De aceea,
mecanismul sintezei proteinelor s-a studiat la tulpinile acestui gen. Se secret n special enzime degradative:
proteaze, amilaze, RN-aza, levan-sucraza.
Proteinele de export se sintetizeaz cu o secven semnal, de l8-35 aminoacizi, cu captul amino
ncrcat pozitiv, urmat de o secven hidrofob. Sinteza exoproteinelor are loc pe ribosomii asociai membranei
citoplasmatice. Mecanismul de export al exoproteinelor, la B. subtilis este probabil, asemntor cu cel de la E.
coli.
La B. subtilis, proteinele translocate prin membran sunt supuse clivajului secvenei semnal i rmn
legate de peretele celular sau sunt eliberate n mediul extern.
Mecanismul de export al exoproteinelor este complicat de faptul c, unele specii de Bacillus (dar nu B.
subtilis), la exteriorul peptidoglicanului se gsete un strat proteic. Un astfel de strat proteic nu este tipic numai
celulelor Gram pozitive, deoarece este prezent i la numeroase tulpini Gram negative. Stratul proteic este
prevzut cu pori, care permit trecerea proteinelor.
Unele proteine se sintetizeaz cu o secven suplimentar de aminoacizi, localizat ntre peptidul
semnal i proteina propriu-zis, denumit propeptid. Unele propeptide sunt lungi, altele scurte. Cele lungi sunt
caracteristice proteazelor. Exoproteazele la B. subtilis sunt sintetizate ca preproenzime, adic au att secvena
semnal, ct i propeptidul. Propeptidul pare a avea mai multe funcii:
- n excreia moleculei de exoproteaz
- mpiedic activarea enzimei n timpul secreiei
- leag proteaza de membrana citoplasmatic
Datorit secvenei propeptidului, la procariote, proteazele, asemntor celor de la eucariote sunt
secretate sub forma inactiv, ca zimogen
Propeptidele scurte sunt formate din cteva resturi de aminoacizi. Funcia lor nu se cunoate. Dup
translocaie, exoproteinele sunt eliberate n mediu cu propeptidele scurte ataate, dar clivajul lor survine
imediat.
Sisteme de secreie
Analiza genetic i biochimic a bacteriilor i a modelului experimental al culturii celulare infectat cu
bacterii au ridicat mult nivelul cunoaterii componentelor moleculare implicate n interaciunile patogen-celul
gazd. Progresele au conturat domeniul microbiologiei celulare, ca o zon nou a cercetrii microbiologice.
Agenii patogeni se disting de cei nepatogeni prin prezena genelor specifice de patogenitate, adeseori
organizate n insule de patogenitate, adic aglomerri de gene care par s fi fost dobndite n evoluie pe calea
transferului orizontal. Aa se explic faptul c bacterii patogene nenrudite, poart gene de virulen nrudite.
Interacia bacteriilor patogene cu celula gazd se realizeaz prin factorii localizai pe suprafa sau
secretai n spaiul extracelular. Proteinele bacteriene secretate sunt numeroase i diverse i ndeplinesc funcii
multiple: proteoliz, hemoliz, citotoxicitate, fosforilare i defosforilare proteic
La bacteriile Gram negative s-au descris 4 ci de secreie proteic (I-IV). Al V-lea sistem pentru
secreia macromoleculelor are rol n transferul conjugal al plasmidelor, n transferul ADN T la A. tumefaciens i
n secreia toxinei de B. pertussis.
Cile de secreie sec-dependente de tip II i IV
Cile de secreie de tip II i IV implic o etap a transportului prin membrana intern, nainte de
transportul prin membrana extern. n ambele cazuri, proteinele sunt exportate prin membrana intern, n
spaiul periplasmic, prin sistemul de secreie (sec). O caracteristic a exportului sec-dependent al proteinelor
este secvena semnal hidrofob N-terminal a proteinei exportate. Secvena semnal mediaz exportul proteinei
i este clivat de o peptidaz specific (semnal-peptidaz) periplasmic. La E. coli, calea sec cuprinde un
numr de proteine ale membranei interne (Sec D, E, F, Y), o ATP-az asociat membranei (Sec A), care
furnizeaz energia de export, un chaperon (Sec B) ce se leag de proteinele presecretoare i semnal-peptidaza.
n sistemul de secreie de tip II, transportul prin membrana extern necesit un set suplimentar de
proteine ale membranei interne i externe. Cel mai studiat sistem de secreie tip II este al pululanazei la
Klebsiella oxytoca. Aparatul de secreie cuprinde 14 proteine, dintre care cel puin 7 sunt localizate n
membrana intern, iar Pul S i Pul D sunt proteine ale membranei externe.
Secreia de tip II este calea primar pentru sinteza enzimelor extracelulare degradative (enzime
pectolitice, celulaze, proteaze) la bacteriile Gram negative.
Calea de secreie de tip IV cuprinde un grup de aa numii autotransportori: proteazele care cliveaz
IgA1 produse de N. gonnorrhoeae, N. meningitidis, H. influenzae, Str. pneumoniae i de reprezentani ai
microbiotei rezidente orale i faringiene, precum i o citotoxin vacuolant secretat de H. pylori.
Proteazele sunt enzime proteolitice care cliveaz una dintre legturile peptidice a regiunii balama a
catenei H a IgA1.
Ca i n calea de tip II, proteinele sunt exportate din citoplasm pe calea sec i implic clivarea
peptidului semnal N-terminal. Informaia necesar pentru transportul prin membrana extern rezid n
ntregime n proteina secretat. Aparent, proteinele autotransportoare formeaz un por n membrana extern,
prin care ies, iar clivajul autoproteolitic elibereaz proteinele n supernatant.
Calea de secreie tip I sec-independent
n contrast cu cile II i IV, cile I i III sunt independente de sistemul sec i nu impic prelucrarea Nterminal a proteinelor secretate.
Calea de secreie de tip I este exemplificat de sistemul de secreie al -hemolizinei la E. coli, al
adenilat-ciclazei la B. pertussis, al leucotoxinei la Pasteurella haemolytica, al proteazei la Ps. aeruginosa i
Erwinia chrysanthemi.
Calea de secreie de tip I necesit 3 proteine:
- o ATP-az cu rol de transport, din membrana intern (protein din clasa ABC = ATP binding cassette).,
care furnizeaz E pentru secreia proteinelor;
- o protein a membranei externe, care este exportat pe calea sec;
- o protein de fuziune membranar, ancorat n membrana intern, ce traverseaz spaiul periplasmic.
Proteinele secretate pe calea de tip I nu sunt supuse clivajului proteolitic, iar semnalul de secreie este
localizat n interiorul secvenei de 60 de aminoacizi C-terminali ai proteinei secretate.
Calea de secreie de tip III sec-independent
Secreia proteinei pe calea III se face n mod continuu, fr prezena distinct a intermediarului
periplasmic i este independent de sistemul sec. Aparatul de secreie de tip III este alctuit din circa 20 de
proteine, majoritatea localizate n membrana intern. Acest sistem necesit o ATP-az, probabil asociat
membranei.
Cele mai multe proteine ale membranei interne sunt omologe cu componentele aparatului de biosintez
flagelar al bacteriilor Gram pozitive i Gram negative. Proteinele secretate pe calea sistemului III nu sunt
supuse prelucrrii N-terminale n timpul secreiei. Semnalul pentru secreie este localizat n secvena de 15-20
aminoacizi a regiunii N-terminale a proteinei secretate.
Proteinele secretate pe calea III necesit proteine mici cu funcie de chaperon, care protejeaz factorii
secretai de interacia cu alte componente ale sistemului de secreie.
n contrast cu calea de screie de tip I, care este o cale adevrat de secreie, pentru c enzimele
secretate sunt active n spaiul extracelular, sistemul de secreie de tip III pare a fi destinat translocaiei
proteinelor de patogenitate, direct n citosolul celulei eucariote. n consecin, secreia proteic, cel puin
uneori, este reglat de contactul cu suprafaa celulei int.
Unele sisteme de secreie de tip III asambleaz structurile supramoleculare pe suprafaa celulei
bacteriene (flageli, fimbrii, pili).
Pentru unele bacterii Gram negative, sistemul de secreie de tip III este un determinant de baz al
virulenei. Mecanismul secreiei pe calea sistemului III este bine conservat la bacterii nenrudite filogenetic.
Multe dintre proteinele secretate interacioneaz direct cu componentele celulei gazd, alter nd
transducerea semnalului celulei gazd i cele mai multe proteine secretate acioneaz n interiorul citosolului
eucariot, n care sunt translocate prin mecanisme de screie de tip III.
Sistemele de secreie de tip III s-au evidniat la mai multe bacterii patogene: Yersinia pestis, Y
enterocolitica, Y. pseudotuberculosis. Toate cele 3 specii inhib activitatea fagocitelor i n consecin au
localizri extracelulare. Efectul antifagocitar este mediat de o protein cu activitate tirozin-fosfatazic ( Yop H).
La contactul cu macrofagul, proteina Yop H este injectat n citosol, unde catalizeaz o defosforilare rapid i
specific a c torva proteine ale macrofagului.
Shigella flexneri are localizare predominant intracelular i produce dizenteria bacilar, o diaree
sanguin originar n colon. Invazia bacterian a mucoasei colonice este trstura esenial a patogenezei cu
Shigella.
Ca i ali enteropatogeni, Shigella invadeaz epiteliul la nivelul celulelor M. Dup transcitoza prin
celula M, bacteriile nt lnesc macrofagele rezidente ale esutului limfoid i induc apoptoza. Apoptoza
macrofagelor duce la eliberarea IL-1, care determin un influx masiv de neutrofile n esutul infectat.
Unele bacterii patogene pentru plante folosesc secreia de tip III pentru patogenez, ca i patogenii
animali. Sistemele de secreie de tip III sunt conservate la 4 g. majore: Erwinia, Pseudomonas, Ralstonia,
Xanthomonas.
Secreia de tip III este esenial pentru inducerea reaciei de aprare denumit rspunsul hipersensibil
la plantele rezistente, care nu sunt gazde pentru patogen. Rspunsul hipersensibil este caracterizat prin necroza
tisular localizat, producerea fenolilor i a agenilor antimicrobieni la locul contactului bacterian care previne
rsp ndirea ulterioar a infeciei n esuturi.
Rspunsul HR este activ: necesit expresia genic de novo i sinteza proteinelor, fluxul Ca i activitate
ATP-azic. n condiii naturale, rspunsul HR este microscopic, dar devine macroscopic prin infiltrarea
artificial a unui numr mare de bacterii fitopatogene.
Proteinele de virulen ale bacteriilor sunt translocate n celula int. Termenul de translocaie semnific
transportul proteinelor din celula bacterian prin membrana plasmatic a celulei eucariote, n citosol.
Sporul
Sporul este o forma primitiv de difereniere celular, care const n reorganizarea structural i
funcional a celulei vegetative i formarea unui nou tip de celul, cu proprieti noi. Diferenierea celular este
un proces biologic fundamental.
Sporii se formeaz la bacteriile cilindrice: totdeauna la bacilii anaerobi din g. Clostridium i la
actinobacterii, facultativ la cei aerobi din g. Bacillus (fig. 28), excepional la coci (Sporosarcina). Toate
bacteriile sporulate sunt Gram pozitive. Sporularea este condiionat de existena unui perete mureinic gros.
Exist circa l0 tipuri de spori, ce se deosebesc prin modul de formare, prin structur i prin gradul de
rezisten la factorii de mediu. Cel mai caracteristic este endosporul, denumit astfel deoarece se formeaz n
interiorul unei celule vegetative.
La actinobacterii se formeaz cteva tipuri de spori: artrospori (prin segmentare), oidiospori (prin
fragmentare), aleuriospori (se formeaz apical sau lateral pe sporofori scuri), zoospori (spori mobili), iar
aplanosporii se formeaz prin septarea hifelor i sunt meninui n interiorul unui nveli. La Azotobacter se
formeaz chiti.
Endosporul sau sporul endogen a fost considerat ca unic tip sporal bacterian, pn la descrierea
celorlalte tipuri. Are form sferic sau ovalar. Cei ovalari au dimensiuni cuprinse ntre 0,5 1 m, pentru axul
scurt i 1,2 2 m pentru axul lung.
Evideniere. Endosporul este o structur reringent i n celula vie, la microscopul optic apare
strlucitor. Datorit nveliurilor groase, greu penetrabile pentru colorani (n special cortexul) i datorit
coninutului lor chimic particular, sporul se coloreaz prin tehnici speciale.
Poziia sporului n celul poate fi terminal, subterminal sau central. Sporii pot fi deformani
(diametrul lor este mai mare dect al celulei) i nedeformani (diametrul este mai mic dect al celulei).
Intr-o celul bacterian sporulant, sporul este unic, cu rare excepii: n sol apar bacterii bisporulate, iar n
intestinul unor vertebrate aquatice, s-au evideniat bacterii polisporulate. Probabil c sporii multipli apar ca
rezultat al perturbrii mecanismului de separare a celulelor dup diviziune. Ei se formeaz n celulele n care
materialul nuclear s-a replicat, dar nu s-a format septul de diviziune.
Sporogeneza este declanat n mod obinuit de lipsa unui nutrient esenial n mediu (sursa de azot sau
de carbon). Procesul este foarte complex din punct de vedere genetic, biochimic, structural i funcional.
Sporularea implic activarea unui numr de peste 50 de gene sporale, inactive n celula vegetativ. Sub aspect
biochimic, sporularea este nsoit de modificri majore ale componentelor moleculare. Se sintetizeaz un set de
proteaze care mresc turnover-ul proteic, furniznd aminoacizii necesari sintezei proteinelor noi.
Din punct de vedere structural, la nivel electrono-optic, sporularea la B.

subtilis parcurge 7 stadii (numerotare introdus de Ryter, cu cifre romane - I VII), n cursul crora celula sporal se formeaz i se elibereaz (fig. 31).
Celula vegetativ n care nu se detecteaz modificri structurale legate de
sporulare a fost desemnat cu stadiul 0. Sporularea este precedat de replicarea
materialului nuclear. Cei doi cromosomi fuzioneaz, formnd o structur axial
alungit, unic (stadiul I). Nucleoidul axial diploid segreg n dou structuri
cromosomale: una migreaz spre polul sporal i va deveni nucleoidul sporului, iar
cealalt rmne n celula vegetativ.
Celula se divide asimetric, subpolar prin formarea septului sporal i se formeaz dou celule inegale.
Septul sporal se iniiaz sub forma a dou mici intruzii simetrice ale peretelui mureinic, spre interiorul celulei.
Formarea complet a septului corespunde stadiului II.
In timpul diviziunii asimetrice, numai 1/3 din cromosom este prezent n structura presporal. Restul de
2/3 este pompat rapid de o translocaz, rezultnd dou celule inegale, dar cu genomuri identice. Dup
diviziunea asimetric, presporul i celula vegetativ sunt celule adiacente, complet separate.
n stadiul III, septul polar se subiaz i se lizeaz din zona central spre periferie. Membrana
citoplasmatic, dup ce i pierde punctele de legtur cu septul, ncepe s se plieze i acoper progresiv
suprafaa sporului. Cnd plierea este complet, cele dou pliuri membranare fuzioneaz la polul celulei i celula
sporal este complet nglobat n celula vegetativ.
In spaiul dintre cele dou membrane care nconjur presporul se depun cele dou straturi de
peptidoglican: peretele celular primordial i cortexul (stadiul IV).
Stadiul V corespunde depunerii unei structuri proteice complexe pe suprafaa extern a presporului,
denumit nveliul sporal. Maturarea sporului i dobndirea rezistenei la cldur i la radiaiile UV
corespunde stadiului VI. Liza celulei i eliberarea sporului matur reprezint stadiul VII.
Schimbrile morfologice profunde care se produc n timpul sporulrii sunt cuplate cu modificarea
expresiei genelor, datorit activrii n cascad a factorilor , care modific specificitatea de legare a ARNpolimerazei, de promotorii diferitelor gene.
S-au izolat mutante bacteriene care blocheaz sporogeneza n diferite etape.
Diviziunea pentru sporulare se aseamn cu cea vegetativ, dar se deosebete prin expresia genic
diferit. Diviziunea pentru sporulare, fiind asimetric, necesit relocalizarea aparatului de diviziune celular.
Asimetria morfologic a celor dou celule duce la evoluii ulterioare diferite.
Diviziunea vegetativ i cea de sporulare se deosebesc prin mai multe caracteristici:
- septul de diviziune pentru sporulare este mai subire dect septul diviziunii vegetative;
- cele dou celule rezultate nu se separ, iar celula mam nglobeaz presporul;
- autoliza peptidoglicanului din septul de diviziune ncepe la centrul septului i progreseaz pn la liza
complet a materialului septal. n contrast, autoliza materialului parietal al septului diviziunii vegetative
ncepe la periferia septului i progreseaz spre centru, dar nu e complet, deoarece septul va forma
peretele polar al celor dou celule rezultate din diviziune;
- dup diviziunea de sporulare, n cele dou celule se iniiaz programe diferite de expresie genic,
controlate de factorii care orienteaz legarea ARN-polimerazei de promotori diferii.
Transferul ADN n prespor. n stadiul de filament extins n axul lung al celulei, originile celor doi
cromosomi sunt situate lng poli. Diviziunea fiind asimetric, presporul include 1/3 proximal a
cromosomului, iar restul de 2/3 rmne n celula vegetativ. Ulterior, restul cromosomului este pompat activ,
din celula mam, n prespor. Translocaza ADN este localizat la centrul septului de sporulare, ancorat de
cromosom. Translocaza consum energie, prin hidroliza ATP.
Fig. 31. Reprezentarea schematic a etapelor de formare a endosporului.
Structura intern a endosporului

La diferite grupe de bacterii exist variaii importante ale structurii sporului, n special n privina
nveliurilor, care difer prin numrul i grosimea lor. Exist de asemenea variaii cu privire la relaia sporului
cu celula vegetativ n care s-a format: sporul ramne inclus n celul sau se elibereaz curnd dup formare,
prin liza acesteia.
Sporul este alctuit din protoplastul sporal, care conine sporoplasma i materialul nuclear.
Protoplastul sporal este acoperit de urmtoarele structuri:
- un perete intern subire, originar din membrana intern a presporului. Dup germinare, acesta va forma
peretele celulei vegetative;
- cortexul sporal, cu grosime variabil, electronoclar. Este o structur multilaminar ce se formeaz pe
feele adiacente ale celor dou membrane ale presporului i const, n general, din peptidoglican i un
lactam muramic specific sporului;
- stratul extern al cortexului, derivat din membrana extern a presporului;
- nveliul sporal intern (intina), un strat dens, de natur proteic;
nveliul sporal extern (exina). Uneori, aceste dou nveliuri sunt pluristratificate;
exosporul, un rest al celulei vegetative, uneori adiacent de celelalte nveliuri sporale, prin intermediul
filamentelor suspensoare.
nveliurile sporale cuprind o fracie major a sporului. Aceste structuri sunt de natur proteic, cu o
fracie de polipeptide acide solubile n baze, n nveliul intern i o fracie rezistent la baze, datorat legturilor
S-S.
La unele categorii de spori se gsesc structuri suplimentare denumite apendice sporale. Semnificaia
lor funcionala nu este cert, dar ar putea fi implicate n dispersarea sporilor n natur sau ar facilita absorbia
substanelor nutritive n perioada premergatoare germinrii sporului.
Particularitile biochimice ale sporului
Sporularea este iniiat ca rspuns la numeroase semnale externe i interne: epuizarea unui nutrient,
densitatea celular. Sporularea eficient necesit o densitate celular mare. Scderea ampl a concentraiei GTP
i GDP se coreleaz cu declanarea sporulrii. Schimbarea specificitii ARN-polimerazei este foarte
important pentru controlul sporulrii la B. subtilis. Cnd ncepe sporularea, multe gene active n celula
vegetativ sunt represate i sunt activate genele specifice. Fiecare stadiu al sporulrii este marcat de schimbarea
expresiei unor gene, mediat de factorul , care schimb specificitatea legrii de promotor a ARN-polimerazei.
Protoplastul sporal conine toate categoriile de molecule necesare relurii creterii: materialul nuclear i
cantiti mici ale fiecrui component al aparatului de sintez proteic (ribosomi, ARNt, enzime). Lipsesc
componentele celulare instabile (ARNm i nucleozid-trifosfaii), dar exist precursorii lor mai stabili (nucleozid
mono- i difosfai). Aminoacizii i enzimele lor de biosintez sunt virtual absente, dar la germinare, ambele
tipuri vor fi generate prin hidroliza proteinelor de depozit, solubile, cu molecul mic.
Puine enzime sporale deriv din enzimele celulei vegetative prin clivare. Majoritatea enzimelor
sporale sunt noi. Sinteza lor este codificat de gene activate n timpul sporulrii.
Toate enzimele sporale sunt termorezistente, fapt explicabil prin dimensiunile lor mici, fiind
reprezentate numai de situsul activ al moleculei. Lipsesc enzimele fundamentale ale metabolismului celular, ca
si sistemele transportoare de electroni.
La cele mai multe bacterii, ionii de Ca 2+ lipsesc. In stadiile timpurii ale sporulrii se activeaz sistemele
de transport activ pentru Ca. Ionii de Ca sunt legai cu o cantitate echivalent de acid dipicolinic (se formeaz
din acidul diaminopimelic un precursor al peptidoglicanului) (fig 33) i formeaz dipicolinatul, care poate
constitui circa l5% din greutatea uscat a sporului.
Acidul dipicolinic
S-a considerat c sporul este rezultatul unui proces de deshidratare profund. Cercetrile ulterioare au
evideniat c deosebirile dintre spor i celula vegetativ nu sunt de ordin cantitativ, ci de ordin calitativ i se
refer la starea apei. In celula vegetativ, apa liber reprezint 70% din cantitatea total, iar n spor oscileaz
ntre 3-l0%, restul de 90-97% fiind apa legat. Din aceast cauz, sporul este lipsit de metabolism, sau are un
metabolism de intensitate foarte mic, nedecelabil. Celula sporal este vie, dar procesele vieii sunt latente.
Fenomenul se numete criptobioz (via ascuns).
Consecina particularitilor de compoziie chimic, la care se adaug nveliurile groase multiple i
pluristratificate, este rezistena deosebit a sporului la caldur, la aciunea substanelor chimice (antiseptice,
dezinfectani) i a radiaiilor. Rezistena termic este conferit de dipicolinatul de Ca. Mutaiile care reduc
cantitatea de dipicolinat diminu rezistena sporului la agentul termic.
Rezistena termic a sporului impune o metodologie costisitoare de sterilizare, la temperaturi foarte
ridicate. Uneori, sporii rezist la temperatura de l80 grade, de la cteva minute, la cteva ore. Fierberea nu este
o metod de sterilizare, deoarece omoar numai formele vegetative, iar sporii rmn viabili.
Germinarea este procesul ireversibil n care sporul se activeaz de la starea dormind, la o stare
metabolic activ, ntr-un interval scurt. L-alanina se leag la un receptor specific pe suprafaa nveliului sporal
i iniiaz germinarea, care decurge n trei stadii:
- activarea sporului prin deshidratare, asociat cu mrirea volumului;
- germinarea, adic modificarea localizat prin gelificare a nveliurilor sporale;
- emergena celulei vegetative din nveliuri, delimitat de un perete derivat din peretele sporal intern.
Intr-un mediu nutritiv optim, germinarea este rapid: de la iniiere pn la diviziunea celular, procesul
dureaz 90 de minute. In medii favorabile, majoritatea sporilor germineaz, dar o proporie mic rmn
dorminzi.
Pentru iniierea germinrii, sporii necesit un factor suplimentar: un compus cu grupri SH, pH acid.
Dup circa o or de la nceputul activrii ncepe sinteza ADN.
Semnificaia biologic a procesului de sporogenez
Sporogeneza reprezint o form primitiv de difereniere celular i este o modalitate de adaptare a
celulei bacteriene la condiiile nefavorabile de mediu, prin criptobioz. Mecanismele criptobiozei sunt
necunoscute. Unul dintre ele ar putea fi starea special a enzimelor. Ele ar fi inactivate n mod reversibil. La
rndul ei, inactivarea reversibil poate fi determinat de trei factori:
- prin modificri fizico-chimice ale moleculelor enzimatice;
- prin aciunea unor inhibitori ai activitii enzimatice;
- prin lipsa unor metabolii eseniali, care ar condiiona starea normal, activ, a enzimelor.
Endosporul este o structur de conservare a viabilitii celulelor dotate cu aceast capacitate de
difereniere. Nu este o form de multiplicare, exceptnd cazurile rare ale bacteriilor bi- sau polisporulate.
Sporogeneza este asociat, la B. subtilis, cu producerea unor enzime proteolitice, iar la B. thuringiensis,
cu producerea cristalelor proteice parasporale. Acestea sunt netoxice n stare nativ (pretoxine), dar devin
foarte toxice dupa solubilizarea n mediul alcalin intestinal al larvelor de lepidoptere, coleoptere sau de nar.
Endosporul are o longevitate excepional: mii sau chiar sute de mii de ani. Sporii din rocile perioadei
quaternare au germinat pe medii nutritive, in vitro.
Formarea sporilor de multiplicare la actinobacterii
Actinobacteriile sunt eubacterii care cresc sub forma unei reele de filamente ramificate, denumit
miceliu coenocitic (fr perei transversali).
Sporularea prin fragmentare este caracteristic genurilor Actinomyces, Nocardia etc. In faza staionar
a culturii, miceliul filamentos se fragmenteaz prin septuri transversale. Ulterior, fragmentele se elibereaz sub
forma unor structuri cilindrice, cu extremitile tiate n unghiuri drepte. In mediu favorabil, structurile
germineaz i regenereaz miceliul. Unele sunt incapabile de germinare, deoarece le lipsete materialul nuclear.
Sporularea prin segmentare s-a studiat la Streptomyces coelicolor. Procesul se desfoar n cteva faze
succesive:
- n hifele aeriene ale miceliului, zone succesive de nucleoplasm se condenseaz devenind refringente;
- n jurul fiecrei condensri se difereniaz structuri parietale i rezult spori. iragul de spori este
meninut n interiorul hifei parentale, denumit sporangiu;
- sporangiul hifal se sparge i elibereaz sporii.
Sporii multipli ai actinomicetelor au rol n diseminarea acestor organisme n mediu. Au nveliuri
sporale mai simple i sunt mai puin rezisteni, comparativ cu endosporul.
Sporularea, la actinobacterii este asociat cu producerea substanelor antibiotice.
Vacuolele cu gaz (aerosomii)
Vacuolele cu gaz sunt structuri refringente cu aspect ovalar, ce se gsesc la bacteriile fotosintetzante
imobile din mediile aquatice. Se identifica usor, deoarece dispar dupa exercitarea unei presiuni asupra
recipientului n care se afla suspensia celulara.
La nivel ultrastructural s-a evideniat c vacuolele cu gaz sunt structuri compuse, adic sunt
compartimentate (fig.32). Att membrana periferic a vacuolei ct i cele de compartimentare au o structur
monostratificat (non unit membrane) i conin numai proteine hidrofobe. Lipsesc lipidele si glucidele.
Vacuola cu gaz are un aspect striat (cu nervuri) si este formata din cel putin doua tipuri de proteine:
a)proteina majora (A), foarte hidrofoba si rigida. Rigiditatea este esentiala pentru ca structura veziculei sa
reziste la presiunea care se exercita asupra ei. Moleculele proteinei majore sunt aliniate ca benzi paralele si
formeaza o structura impermeabila pentru apa; b)proteina minora (C), cu rolul de a consolida structura
veziculei gazoase. Benzile proteinei A sunt consolidate de proteina C, care le leaga transversal.
Vacuola cu gaz este liber-permeabil pentru gaze i nu se deformeaz sub presiunea lor. Spaiul plin cu
gaz rezult din modul n care se asambleaz moleculele proteice.
Fig. 32. Seciune printr-o celul de Microcystis sp. n curs de diviziune. Veziculele gazoase de form cilindric sunt
orientate trasversal i longitudinal (dup Walsby, 1994).
Compartimentele vacuolei se umplu rapid cu gaze, provenite din mediul extern, prin difuzie liber.
Membrana unistratificat este impermeabil pentru lichide. Dac presiunea ce se exercit pe suprafaa vacuolei
depete presiunea atmosferic (egal cu a gazului din interior), vacuola se sparge i elibereaz coninutul.
Semnificaie funcional. Vacuolele cu gaz au rolul unor corpi de flotaie. Cnd compartimentele ei sunt
pline cu gaz, densitatea celulei scade sub nivelul densitii apei i astfel celula urc spre straturile superioare.
Dup pierderea coninutului gazos, celula devine mai dens i coboar spre straturile mai profunde ale apei.
Compartimentarea vacuolei permite eliminarea fracionat a aerului i n consecin, reglarea poziiei celulei pe
vertical, n funcie de condiiile de mediu. Astfel se realizeaz deplasarea celulelor fotosintetizante imobile, ce
triesc n apele stagnante. Cnd intensitatea luminii scade, celula urc spre suprafaa apei, iar dac intensitatea
luminii este prea mare, celula coboar n straturile mai profunde.
Vacuolele cu gaz protejeaz celula fa de efectul nociv al radiaiei UV, deoarece formeaz un ecran ce
disperseaz energia luminoas. Vacuolele regleaz raportul suprafa/volum celular. Ele sunt foarte numeroase la
cianobacteriile care cresc cu o rat foarte mare i produc fenomenul de nflorire a apelor.
Incluziile
Incluziile sunt structuri inerte, ce apar n celula bacterian la sfritul fazei de cretere logaritmic.
Dup compoziia chimic, incluziile sunt de 3 tipuri :
- polimeri organici: polizaharidici (amidon, glicogen), incluzii de poli -hidroxibutirat (PHB) conin lipide
(2%) i proteine, polimeri de natur proteic (incluzia parasporal la B. thuringiensis) (fig 33);
- polimeri anorganici (polimetafosfat denumite incluzii de volutin);
- incluzii anorganice simple (de sulf coloidal, CaCO3).
Dup criterii structurale se disting :
- incluzii delimitate de membrane, ce au ca prototip pe cele de poli--hidroxibutirat. Ca trstur distinctiv,
ele relev o structur lamelar concentric, ce corespunde creterii progresive a incluziei. Sinteza se face
pe o cale lateral a sintezei acizilor grai ;
- incluzii lipsite de membrane (cele de glicogen, de sulf, incluzia proteic parasporal).
La microscopul optic, n celula vie, incluziile au aspect granular cu form neregulat, refringente, cu
dimensiuni de 50-100 nm.
Natura chimic a incluziilor se evideniaz prin metode citochimice, cu colorani care le coloreaz
specific. Incluziile de amidon (poliglucozid neramificat) se coloreaz n albastru cu soluia Lugol, iar glicogenul
(poliglucozid ramificat) se coloreaz brun. Incluziile de PHB se coloreaz cu negru de Sudan, ca i depozitele
lipidice neutre ale celulei eucariote i din aceast cauz au fost identificate incorect ca rezerve lipidice. Incluziile
proteice se coloreaz cu amido-schwarz, iar cele de polimetafosfat sunt metacromatice, pentru c dup colorare
cu albastru de metilen, dobndesc culoarea roie.
Fig. 33. Incluzii bacteriene. a. Formula structural a glicogenului (molecule de glucoz legate -1,4, cu ramificaii -1,6.
b. Polifosfatul. c. Acidul poli--hidroxibutiric. d. Imaginea electrono-optica a celulei de Azotobacter cu incluzii de poli-hidroxibutirat. e. Imaginea electrono-optic a incluziei proteice parasporale la Bacillus thuringiensis (original).
Ca regul general, o specie bacterian formeaz un singur tip de depozit celular.

Granulele de volutin (polimetafosfat), denumite astfel pentru c s-au identificat la Spirillum volutans,
sunt polimeri lineari de ortofosfai, de lungime variabil. Se sintetizeaz n condiiile deficitului oricrui nutrient
major, prin adugarea secvenial a resturilor de fosfat la pirofasfat, dup reacia :
Degradarea polifosfatului urmeaz reacia invers i furnizeaz energie celular sub form de ATP.
Incluziile de sulf anorganic pot fi citoplasmatice sau sunt localizate la nivelul unor pliuri ale
membranei plasmatice i apar la dou grupe fiziologice de bacterii:
- la cele sulfuroase purpurii (Chromatiaceae), care folosesc H2S ca donor de electroni n procesul
fotosintezei;hv c
- la cele filamentoase chimiolitotrofe (Beggiatoa, Thiotrix), care oxideaz H2S i elibereaz energie. Dup
epuizarea H2S din mediu, So depozitat n celul este oxidat la sulfat.
Semnificaie biologic. Formarea incluziilor constituie o modalitate a celulei de a depozita cantiti
mari de materiale de rezerv. Ele se formeaz n condiiile unui mediu bogat n substane nutritive, sau n cazul
unui dezechilibru al compoziiei chimice a mediului, n special al raportului C/N. Materialele incluziei sunt
consumate dup epuizarea resurselor energetice din mediu sau cnd raportul C/N revine la normal.
Stocarea moleculelor sub forma polimerilor este o modalitate de pstrare a echilibrului osmotic ntre
celul i mediu, deoarece prin polimerizare. Moleculele devin inactive osmotic. Prin polimerizarea acidului PHB
se evit acidifierea citoplasmei, consecutiv acumulrii monomerilor. Gruprile libere COOH ale acidului
PHB sunt anihilate prin formarea legturilor esterice ntre monomeri.
Sinteza incluziilor proteice parasporale este sincronizat strns cu iniierea procesului de sporogenez.
Magnetosomii sunt structuri magnetice intracelulare care confer bacteriilor purttoare, capacitatea de
a se orienta i de a migra de-a lungul liniilor geomagnetice. Sunt cristale minerale de Fe magnetic, de
dimensiuni nano, delimitate de membran.
Bacteriile magnetotactice sunt un grup heterogen de procariote, ubicvitare n mediul aquatic marin i
dulce. Probabil au rol ecologic important n circuitul Fe. Magnetosomii se pstreaz dup moartea celulelor
bacteriene i se depun ca magnetofosile, ceea ce contribuie la magnetizarea sedimentelor.
Particulele de Fe mineral, n general, constau din magnetit (Fe3O4). Formula structural este Fe 3+
2+
3+
(Fe Fe )O4, cu proprieti magnetice. Spre deosebire de magnetita din sistemele anorganice sau produs
extracelular prin activitatea metabolic a bacteriilor care fac reducerea respiratorie a Fe, cristalele intracelulare
de magnetit au dimensiuni uniforme, cu variaii n limite nguste: 35-120 nm.
De obicei, magnetosomii sunt organizai n lanuri, rezultnd un dipol magnetic permanent, suficient de
mare pentru a orienta ntreaga celul de-a lungul cmpului geomagnetic.
Tulpinile de Magnetospirillum cresc microaerob, pe medii simple cu acizi organici scuri ca surs de C
i au metabolism de tip respirator dependent de O 2, dei nitratul poate fi acceptor de e- n microaerobie.
Mecanismul formrii. Fe III este luat de celul, probabil pe cale reductiv. Se crede c Fe este reoxidat
pentru a forma un oxid cu densitate mic i deshidratat pentru a forma un oxid de Fe III.
La Magnetospirillum, magnetosomul mineral este acoperit de o membran trilaminar, alctuit din
fosfolipide i proteine, dintre care unele sunt unice pentru aceast membran.
Compartimentarea prin formarea veziculelor magnetosomului permite ca procesul formrii s fie reglat
pe cale biochimic. Membrana poate aciona ca barier de compoziie, pH i pentru meninerea gradientului
redox ntre vezicul i mediul cellular.
Glicocalixul
Glicocalixul este reprezentat de totalitatea structurilor polizaharidice extraparietale: capsula, cu diferite
grade de dezvoltare i glicocalixul comportamental.
Capsula (fig. 34) este o structur accesorie, cu o consisten gelatinoas, vscoas, care acoper
complet celula bacterian. In funcie de gradul de dezvoltare la diferite specii bacteriene se disting urmtoarele
structuri capsulare:
- microcapsula, reprezentat de o pelicul fin de material polizaharidic, n jurul peretelui celular (pn la
0,2 m grosime). La microscopul optic se evideniaz numai prin metoda imunofluorescenei, dar este
vizibil la microscopul electronic;
- macrocapsula, o structur omogen, aderent de celul, mai groas de 0,2 m, vizibil la microscopul
optic prin tehnici speciale de colorare negativ, dac este o capsul suficient de compact i rigid, pentru
a exclude tuul de India i nigrozina. Dac are o structur lax i flexibil, coloranii o penetreaz.
Aderena macrocapsulei de celul este ferm i prin centrifugare se depune concomitent cu celulele;
- stratul mucos este o structur capsular cu o grosime neuniform i distribuie dezordonat n jurul
celulei. Consistena este mai fluid, iar prin centrifugare, celulele se desprind i se depun, iar materialul
polizaharidic ramne n suspensie;
- zoogleea o mas de material polizaharidic, n care sunt cuprinse un numar mare de celule bacteriene.
Materialul capsular se gsete la bacteriile Gram pozitive i Gram negative din sol, ape (dulci i srate),
rumen, la bacteriile patogene ce produc infecii ale vezicii urinare i pulmonare.
Fig. 34. Capsula bacteriana (coloratie negativa, original).
Natura chimic a materialului capsular

Materialul capsular este de natur polizaharidic. De cele mai multe ori, n alctuirea sa se gsesc Dglucoza, D-fructoza, D-galactoza. Mai rare sunt manoza, fucoza, pentozele. Unele polizaharide extracelulare se
aseamn cu acizii teichoici deoarece conin glicerol-fosfat sau ribitol-fosfat.
Materialul capsular poate fi un homopolizaharid sau un heteropolizaharid. Cele mai cunoscute
homopolizaharide sunt dextranii si levanii.
Dextranii formeaz o clas mare de polizaharide, alctuii din uniti de D-glucopiranozil, legate l-6,
cu puni de ramificare n poziiile 2, 3 sau 4. Lungimea lanului este cuprins ntre 4o-5oo resturi de glucoz.
Dextranii sunt produi de Peptococcus (Leuconostoc) mesenteroides, din sucroz. Sinteza lor este abundent n
melasa de la fabricile de zahr, unde o cantitate semnificativ de zahr este convertit la dextran, aducnd
prejudicii economice importante.
In stare purificat, dextranul se folosete n practica transfuziilor, ca nlocuitor al plasmei, fiind solubil
n ap, iar sephadexul este un dextran folosit n cromatografia bazat pe principiul sitei moleculare.
Levanii sunt poli-D-fructani (fructozizi), sintetizai de unele bacterii patogene pentru plante
(Pseudomonas, Xanthomonas), de Streptococcus salivarius, de Bacillus. Au greuti moleculare de l000 kD sau
mai mult.
Heteropolizaharidele sunt alctuite dintr-un numr variat de uniti diferite: glucoz, fructoz,
galactoz, manoz, acid galacturonic, derivai aminai si acetilai ai acestora.
Structura biochimic a heteropolizaharidelor este foarte diferit nu numai n funcie de compoziia chimic
global, ci i de secvena diferiilor monomeri n catena polizaharidic (de exemplu, pentru xantan, structura
repetitiv este un pentazaharid).
Diversitatea monomerilor glucidici confer heteropolizaharidelor o anumit diversitate a structurii
chimice i n consecin, o anumit specificitate antigenic. De exemplu, la Str. pneumoniae exist peste 80 de
tipuri chimice diferite de material capsular, care corespund nu numai unor diferene de compoziie chimic, dar
i de secven a monomerilor. Varianta antigenic a polizaharidului capsular imprim specificitatea anticorpilor
n reaciile de aprare fa de diferitele tulpini patogene ale acestei bacterii.
Sinteza exopolizaharidelor
-
Exopolizaharidele se sintetizeaz prin dou mecanisme distincte:

dextranii se sintetizeaz extracelular ntr-un proces ce implic enzimele secretate de celula bacterian. La
P. mesenteroides, enzimele rmn asociate la nivelul peretelui celular. Sinteza lor este indus de prezena
sucrozei n mediul de cretere. Enzima dextran-sucraz cliveaz molecula de substrat. Jumtatea glicozil
este adaugat la acceptor, iar fructoza este utilizat n metabolismul celulei;
alte exopolizaharide (hetero- sau homopolimeri) se sintetizeaz intracelular.
Biosinteza heteropolizaharidelor are loc n 4 trepte:

a) sinteza intermediarului format din nucleotid-difosfat i glucid;
b) asamblarea treptat a subunitii oligozaharidice repetitive a polimerului, prin transferul de la nucleotid la
gruparea lipidic purtatoare (C55-undecaprenil-fosfat), localizat n membrana celular; monozaharidele sunt transferate
secvenial de transferaze specifice;
c) adugarea gruprilor piruvat, acetat, succinat, hidroxibutirat, sulfat. Astfel se sintetizeaz unitatea repetitiv a
heteropolizaharidelor;
d) transferul catenei polizaharidice repetitive de la purttorul lipidic, la catena polizaharidic n curs de
polimerizare. Polimerul este excretat n mediul extracelular.
Mecanismul polimerizrii este puin cunoscut, dar se presupune c sinteza are loc pe faa intern a membranei
citoplasmatice, dup care exopolizaharidul este transferat la suprafaa celulei prin zonele de aderen Bayer, dintre
memnbrana extern i cea intern.
Sinteza exopolizaharidului necesit enzime specifice pentru legarea fiecrui monomer glucidic de nucleotid,
transferaze pentru legarea fiecrui monozaharid de subunitatea repetitiv, una sau mai multe polimeraze pentru legarea
subunitilor repetitive i proteine implicate eventual n exportul polizaharidului.
Controlul sintezei materialului capsular. Sinteza polizaharidelor capsulare este controlat genetic.
Exist linii de celule bacteriene necapsulate, dar i tulpini care sintetizeaz materialul capsular indiferent de
condiiile de cretere. Proprietatea de a sintetiza material capsular poate fi pierdut prin mutaie.
La bacteriile care au informaia codificatoare, sinteza materialului capsular este modulat cantitativ de
compoziia mediului de crestere. De exemplu, Peptococcus mesenteroides sintetizeaz dextrani numai dac
crete pe mediul cu sucroz. Celulele de Azotobacter, cultivate pe un mediu cu N combinat nu sintetizeaz
material polizaharidic, dar pe un mediu fr N combinat, produc un strat mucos abundent, cu caracter adaptativ
care limiteaz difuzia O2 n celule, protejnd astfel nitrogenaza, sensibil la prezena O2.
Bacteriile enterice sintetizeaz polizaharide n condiiile unui exces de glucide i a limitrii surselor de
N, P, S, n mediul nutritiv.
Pe msur ce cultura bacterian care sintetizeaz polizaharide, se dezvolt, mediul lichid devine tot mai
vscos, datorit solubilitii polimerilor n ap.
Unele bacterii sintetizeaz continuu exopolizaharide, n timpul fazei de cretere, iar altele, numai n
faza logaritmic trzie i n faza staionar.
Semnificaie biologic. Capsula este o structur inert, accesorie ce nu face parte integrant din celula
bacterian. Cel mai adesea nu ndeplinete o funcie esenial pentru celul.
Bacteriile patogene capsulate sunt virulente, deoarece capsula este un material chimiotactic negativ
pentru fagocite. Pe mediul solidificat, ele produc colonii netede (S, smooth). Mutantele lor necapsulate produc
colonii rugoase (R, rough) i sunt mult mai puin virulente.
Materialul capsular este higroscopic (reine apa) i astfel protejeaz celula de desicaie. Materialul
capsular ar putea avea rolul de depozit al unor nutrieni din mediu.
Glicocalixul comportamental
La anumite bacterii structurile superficiale sunt acoperite de un glicocalix adevrat, constituit dintr-o
reea de filamente polizaharidice i glicoproteice, legate de LPS ale membranei externe la bacteriile Gram
negative (fig. 35) sau de mureina celor Gram pozitive. Filamentele formeaz o structur pericelular
dezordonat, ca o psl, prin intermediul creia celula se ancoreaz fie pe alte celule, fie pe suporturi inerte.
Glicocalixul se gsete numai la bacteriile care triesc n mediile naturale, avnd un caracter adaptativ,
adic exist numai n condiiile n care prezena ei confer celulei un avantaj selectiv. Dup cultivare n medii
artificiale (bulion, geloza), glicocalixul dispare i din aceast cauz s-a evideniat trziu. Deoarece nu persist la
celulele cultivate n mediile artificiale, s-a propus denumirea de glicocalix comportamental.
Fig. 35. Reprezentarea schematic a glicocalixului legat de membrana extern a unei bacterii Gram negative
(dup Costerton, 1978).
Glicocalixul a fost studiat la celulele bacteriene din placa dentar. Placa este un depozit de culoare albglbuie, vizibil cu o lup, ce se formeaz pe suprafaa smalului dentar, iniiat de Str. mutans. Celulele sale
sintetizeaz un polizaharid glucanic i acizi lipoteichoici, prin intermediul crora ader foarte strns de
suprafaa smalului, formnd iniial o microcolonie, iar ulterior, o colonie. Celulele ader ntre ele, dar i de
smalul dentar (hidroxil-apatita), prin glicocalix. Dup impregnare cu sruri i glicoproteine salivare se creeaz
un micromediu anaerob, n care bacteriile elimin produsele de catabolism. Micromediul coloniei se acidific i
se creeaz condiiile favorabile degradrii smalului. n prezena sucrozei, la pH acid, sinteza ALT este
stimulat semnificativ. Astfel se iniiaz formarea cariei.
n mediul aquatic, celulele bacteriene lipsite de structur capsular, se asociaz formnd biofilme*.
Celulele se ancoreaz de suport, prin intermediul glicocalixului, formnd un consoriu funcional. Biofilmul se
definete ca un ansamblu format din celule i din produse extracelulare prin intermediul crora se ancoreaz
de suportul viu sau inert, formnd asociaii. Legarea (aderena) celulelor de suport este prima etap a
procesului de colonizare. Astfel se iniiaz formarea coloniei bacteriene.
*
Majoritatea microorganismelor din mediile aquatice nu se gsesc ca organisme libere plutitoare, ci triesc ataate de
suprafee, inclusiv la suprafaa apei, unde formeaz un biofilm. Asociaiile naturale de bacterii, n matricea unui biofilm
funcioneaz ca un consoriu cooperant. Biofilmele reprezint sisteme biologice cu un nivel nalt de organizare, n care
comunitile de bacterii sunt coordonate funcional.
Capacitatea lor de a popula ntreaga biosfer se datoreaz versatilitii lor metabolice i plasticitii fenotipice. Un
element esenial al adaptabilitii lor este capacitatea de a-i alege poziia ntr-o ni ecologic. Cel mai comun mecanism
de poziionare este mobilitatea flagelar i diferitele modaliti de translocaie pe suprafee: rsucire, alunecare, nclinare,
roire, dar i ataarea de substrat prin sinteza polizaharidelor, formnd o pelicul ce plaseaz celulele la interfaa aer-ap.
Prin intermediul biofilmului, celulele bacteriene se ataeaz de suport i se agreg, amplificnd interaciunile celulare.
Prin ataare, bacteriile dobndesc avantajul versatilitii fenotipice.
Biofilmele sunt foarte eficiente n epurarea apelor uzate i a celor contaminate cu produse petroliere.
Biofilmele se formeaz chiar n condiii extreme, ca de exemplu n apele acide (pH=0) de drenaj al minelor, unde
contribuie la circuitul sulfului. Cianobacteriile formeaz biofilme n izvoarele termale i pe suprafaa gheii din Antarctica.
Alt tip de comunitate n biofilm este ansamblul bacteriilor asociate cu particulele suspendate, de materie organic sau
anorganic. Aceste particule macroscopice formeaz zpada marin i sunt bogate n biomasa microbian i nutrieni,
avnd rol n n circuitul carbonului organic particulat n mediul pelagic.
In mediile naturale, glicocalixul este structura care mediaz asocierile bacteriene polispecifice. Astfel,
n rumen, se formeaz asociaii coloniale polispecifice (colonii polibacteriene). Intre ele se stabilesc relaii
metabolice sinergice, prin care bacteriile realizeaz activiti metabolice, pe care speciile separate nu le pot
desfura. De exemplu, n rumen se sintetizeaz CH 4: unele bacterii produc H2, altele CO2, iar bacteriile
metanogene reduc CO2, utiliznd H2 ca surs reductoare.
Pentru bacteriile patogene, glicocalixul este structura prin care celulele se ancoreaz de celulele
mucoaselor i iniiaz procesul infecios. De exemplu, Neisseria gonorrhoeae ader de celulele uretrale i
vaginale prin filamentele glicocalixului. Uneori, legarea mediat de glicocalix are caracter de specificitate
pentru un anumit tip de celule ale gazdei (de exemplu, bacteriile care iniiaz procese patologice intestinale se
leag cel mai adesea, exclusiv de epiteliul intestinal).
Glicocalixul capsular i cel comportamental sunt structuri foarte variabile din punct de vedere
fenotipic, avnd grade foarte diferite de dezvoltare la aceiai tulpin bacterian, n diferite condiii de mediu.
Dei sinteza reprezint o cheltuial semnificativ de energie, rolul lor funcional n mediile naturale justific
existena structurilor polizaharidice. Glicocalixul dispare la celulele cultivate n medii artificiale. Pe medii
nutritive bogate, existena acestor structuri nu mai este necesar, dar reapar prin transferul celulelor n medii
naturale nefavorabile.
Reunirea tuturor structurilor polizaharidice extraparietale, indiferent de gradul de dezvoltare sub
denumirea de glicocalix a fost propus de Costerton (l982). Capsula este cea mai important dintre ele, ca grad
de dezvoltare, dar toate structurile polizaharidice ndeplinesc aceiai funcie esenial aderena celulei de
substrat. Gradul diferit de dezvoltare, dela glicocalix la macrocapsul implic o diversificare corespunztoare a
funciilor acestor structuri.
Prin gradul lor foarte diferit de dezvoltare n raport cu condiiile de mediu, structurile polizaharidice
extraparietale sunt expresia autentic a plasticitii fenotipice structurale a bacteriilor.
Teoria plasticitii fenotipice consider c bacteriile rspund modificrilor mediului de via, prin
schimbri structurale i funcionale (metabolice) profunde, n cadrul aceleiai norme genetice.
Plasticitatea fenotipic a bacteriilor permite adaptarea rapid la schimbri majore ale mediului.
Bacteriile sunt primele organisme care se adapteaz la condiiile noi de mediu, n timp ce organismele
superioare se adapteaz mult mai lent, prin selecia mutantelor.
Bacteriile colonizeaz ecosistemele noi i prin mecanismul genetic al seleciei mutantelor. Aceast
dubl capacitate adaptativ prin plasticitate fenotipic i prin selecia mutantelor explic uriaul succes al
bacteriilor de a popula chiar cele mai ostile medii.
Flagelul
Flagelul (flagelum = bici) este organitul extracelular al mobilitii celulei procariote. Organitele
omologe de mobilitate ale celulei eucariote sunt flagelii i cilii. Flagelii se mai numesc i undulipode (undula =
und mic; pus, podos = picior).
Flagelul bacterin se prezint ca un filament extracelular, filiform, ondulat, cu grosimea uniform pe
toat lungimea sa. Lungimea este variabil, de la 4-5 m pn la 70 m, iar diametrul este de 20 nm.
Flagelii nu se observ prin examinarea direct a celulelor la microscopul optic. Existena lor se deduce
indirect, din mobilitatea celulelor bacteriene pe preparatele din cultura vie. Celulele fr flageli se numesc
atrihe. Dup numrul i modul de aezare a flagelilor, bacteriile sunt (fig 36):
- monotrihe (cu un singur flagel);
- amfitrihe (cu doi flageli asezai la cei doi poli ai unui bacil);
Poziia flagelului (sau flagelilor) poate fi polar, subpolar sau ecuatorial.
Fig. 36. Reprezentarea schematic a modului de aezare a flagelilor unei celule bacteriene. Bacteriile fr flageli se
numesc atrihe.
Structura flagelului
Comparativ cu flagelul celulei eucariote, flagelul bacterian are o structur simpl, cu originea n
structurile de nvelis ale celulei i este alctuit din urmtoarele elemente (fig. 37):
- corpusculul bazal, localizat n nveliurile celulare;
- crligul;
- filamentul extern (flagelul propriu-zis).
Corpusculul bazal formeaz o structur rotativ unic, att ca alctuire ct i ca funcionalitate n
sistemele biologice, asemntoare, n general, cu un buton de cma. La bacteriile Gram negative, structura sa
este mai complex, deoarece discurile componente sunt duble, alctuite din proteine diferite i ndeplinesc
funcii diferite. Se disting urmtoarele discuri, aezate pe o structur axial, fin:
- discul M(mobil) este ancorat n structura membranei citoplasmatice;
- discul S (stator) este legat de peptidoglican;
- discul P este localizat n spaiul periplasmic
- discul L este legat de lipopolizaharidele membranei externe a peretelui.
Crligul are rolul de articulaie flexibil ntre corpusculul bazal i filamentul extern. Prin axul su
central, crligul se leag de corpusculul bazal.
Fig. 37. Reprezentarea schematic a motorului rotativ al flagelului de E. coli. Rotorul este un disc proteic integrat
n membrana plasmatic si se rotete cu circa 100 revoluii/secund, fa de discul stator, sursa de energie gradientul de
protoni (dup Todar, 2004).
Micarea de rotaie a discului M (3000-4000 r/min) este transmis crligului i filamentului extern.
In alctuirea flagelului intr cel puin 11 tipuri de molecule proteice: cte unul n filamentul extern i
crlig i cel puin 9 tipuri de proteine n corpusculul bazal. Cea mai cunoscut este proteina filamentului extern,
denumit flagelin (gr. mol. 40 kDa). Moleculele sale sunt aezate dup o simetrie helical, formnd o
structur tubular, canalicular. Moleculele de flagelin au proprietatea de autoasamblare: dac moleculele de
flagelin sunt dispersate, n condiii adecvate, ele se reasambleaz spontan.
Flagelina se sintetizeaz sub forma monomerilor, n interiorul celulei. Moleculele de flagelin strbat
axul central* al structurii bazale i se aeaz la captul distal al flagelului, dup o simetrie helical pentru a
forma filamentul extern. Flagelul bacterian crete prin regiunea sa apical. Moleculele de flagelin nu sunt
eliberate** n mediul extracelular, nainte de a fi asamblate n structura flagelului.
*
Faptul s-a demonstrat prin examenul electrono-optic al flagelilor, la celulele marcate n puls cu un aminoacid
radiomarcat. Marcajul apare numai la captul distal al flagelilor.
**
S-a demonstrat indirect printr-un experiment n care Salmonella enterica serovar abortusequi, ce produce flageli
buclai (curly) a crescut mpreun cu o tulpin slbatic ce produce flageli normali. Dei se tie c subunitile de flagelin
ale celor 2 tulpini copolimerizeaz, fiecare tulpin bacterian i-a pstrat tipul caracteristic de flageli. Nu se gsesc flageli
micti.
Crligul este format din subuniti proteice identice. Funcia sa nu este cunoscut.
Corpusculul bazal are o structur molecular mult mai complex. Cele 9 proteine diferite sunt
organizate n discurile care nconjur un ax subire, ce se inser n membrana citoplasmatic.
Motilitatea i chimiotaxia
Motilitatea bacterian are dou particulariti: este foarte rapid i se face dup o direcie aleatorie.
Motilitatea a fost studiat cu ajutorul unui microscop special (microscop de urmrire) la o mutant
monoflagelar de E. coli (fig 38).
Intr-un mediu neutru (fr atractani i fr repeleni), celula bacterian se deplaseaz dup o
traiectorie linear, timp de aproximativ o secund n care parcurge circa 30 m (de 15 ori lungimea celulei)
apoi se rostogolete timp de 0,l secunde i reia deplasarea linear dup o direcie ntmpltoare. S-a ncercat s
se explice mecanismul alternanei deplasrii lineare i al rostogolirii. S-a reuit imobilizarea extremitii libere
a flagelului, cu anticorpi specifici, iar celula a rmas liber. S-a demonstrat astfel, c motorul rotativ imprim
flagelului dou tipuri de rotaii:
- o micare de rotaie n sens orar
- o micare de rotaie n sens antiorar.
La o celula peritrih, cnd flagelii se rotesc n sens antiorar, ei formeaz un fascicul coerent, astfel nct
imprim o micare de propulsie n linie dreapt. Cnd sensul rotaiei flagelilor devine orar, celula se
dezechilibreaz i se rostogolete. Imediat dup rostogolire, rotaia flagelilor devine antiorar. In condiii
normale de mediu (fr atractani i fr repeleni), mobilitatea celulei peritrihe este ntmpltoare, n direcii
imprevizibile i se face printr-o alternan de delplasri n linie dreapt, ntrerupte de rostogoliri.
Cercetrile de reologie au artat c datorit structurii flagelului, n mediul nutritiv lichid (bulion),
deplasarea celulei bacteriene mtmpin o rezisten foarte mare. Cum se explic o vitez aa de mare,
constant n timp, ntr-un mediu care opune o rezisten foarte mare? Explicaia rezid n metabolismul foarte
intens al celulei bacteriene i n natura particular a sursei de energie utilizat. Pentru mobilitate, celula
bacterian nu utilizeaz ATP, ci energia electrochimic, adic fluxul de electroni care strbate regiunea bazal a
motorului rotativ. Energia de rotaie a structurii bazale este energia protonic (chemiosmotic) generat de
deplasarea protonilor prin membrana celular, care furnizeaz fora inegalabil de deplasare a celulei
bacteriene.
Motilitatea celulei bacteriene este influenat de prezena n mediu, a substanelor chimiotactic pozitive
(atractante) sau a substanelor chimiotactic negative (repelente) (fig. 39). Substanele atractante (aminoacizi,
glucide, ioni de Ca si Mg, O2 pentru cele aerobe etc.) determin deplasarea celulei spre zonele n care
concentraia lor este mai mare. Substanele repelente (alcoolii, acizii grai, O 2 n form ionic (O2--), OH--,
metalele grele etc.) au efect chimiotactic negativ asupra celulelor bacteriene, determinnd ndeprtarea lor din
zonele cu concentraii mari.
Cnd celula se deplaseaz ntr-o direcie favorabil (n direcia unui atractant, sau se deprteaz de un
repelent), deplasarea este preponderent linear i rostogolirile sunt mai puin frecvente, ceea ce semnific o
prelungire a perioadei de rotaie antiorar i o scdere a frecvenei de rotaie orar a flagelilor.
Dac bacteria se deplaseaz ntr-o direcie nefavorabil sau ntr-un mediu neutru crete frecvena
rostogolirilor i scade corespunztor durata deplasrilor lineare. Rostogolirea are rolul de a corecta deplasarea
celulei de la o direcie greit. Reglarea frecvenei rsturnrilor este esenial pentru chimiotaxie.
Mobilitatea difereniat se datoreaz prezenei, la suprafaa celulei, a unor chemosenzori.
Chemosenzorii sunt structuri moleculare specializate, alctuite din chemoreceptor i proteinele de chimiotaxie,
care au capacitatea de a accepta grupri metilice.
Chemoreceptorul nregistreaz prezena atractantului sau repelentului n mediu i transmite informaiile
chimice n celul. Chemoreceptorii sunt proteine de legare din structura membranei plasmatice i din spaiul
periplasmic. Extremitatea NH2 a moleculei este extracelular i are rolul de a lega semnalul chimic (atractant
sau repelent). Unele molecule (aspartatul) se leag direct de chemoreceptor, iar altele sunt purtate de proteinele
de legare. Chemoreceptorii au o specificitate relativ fa de compusul chimic pe care l leag. De exemplu,
chemoreceptorul pentru galactoz, leag glucoza i fucoza, iar cel pentru manoza leag i glucoza.
Dup legarea semnalului chimic, chemoreceptorul catalizeaz metilarea proteinelor de chimiotaxie, din
categoria proteinelor transmembranare. Metilarea proteinei de chimiotaxie activeaz moleculele transductoare,
care difuzeaz spre rotorul flagelar i comut rotaia de la un sens la altul.
Gradul de metilare a proteinei de chimiotaxie este dependent de cantitatea de chemoefector din mediu.
In absena factorilor atractani sau repeleni, proteinele de chimiotaxie sunt demetilate de proteine
citoplasmatice i producerea factorilor difuzibili este oprit.
Factorul difuzibil nu este cunoscut, dar probabil este o molecul mic.
Fig. 38. a. Poziia flagelilor la E. coli in timpul deplasrii

lineare. Cand se rotesc n sens antiorar se strng ntr-un
mnunchi i propulseaz celula. b. Cnd flagelii se
distribuie uniform, sensul de rotatie devine orar i celula

se rostogolete.
Fig 39. a. ntr-un mediu neutru, deplasarea linear este
ntrerupta de rostogoliri, care schimb ntmpltor
direcia de deplasare. b. n prezena unui factor chimic

atractant, micarile de rostogolire sunt parial suprimate.
Deplasarea este orientat n direcia atractantului.
Dac bacteria vine concomitent n contact cu un atractant i cu un repelent, rspunsul chimiotactic depinde
de concentraia celor doi ageni i de afinitatea chemoreceptorilor care l leag (fig 40). Dac concentraia
repelentului este mai mare, bacteria se ndeprteaz, i invers, dac atractantul are o concentraie superioar, celula
se deplaseaz spre zona cu gradient maxim a acestuia.
Fig. 40. Mecanismul transducerii semnalului chimiotactic la bacterii. Atractanii chimici se leag de receptorii de tip 1 su 2 din
membrana plasmatic sau de proteinele periplasmatice, care la rndul lor se leag de chemoreceptorii de tip 3 sau 4. Receptorii
de chimiotaxie se activeaz i emit un semnal ce determin continuarea rotirii motorului flagelar n sens antiorar. Celula se
deplaseaz preponderent n linie dreapt, iar rostogolirile sunt parial supresate (dup Alberts i colab., 1994).
Chemosenzorul bacterian este primul care apare n lumea vie, dar este foarte sensibil i exact.
O proprietate definitorie a proteinelor cu rol transductor este adaptabilitatea la stimul, ce deriv dintr-un
grad semnificativ de memorie a chemosenzorului, deoarece percepe modificrile de concentraie a substanelor
chimice, att n spaiu (de 20 de ori lungimea celulei), ct i n timp i dispune de un sistem de prelucrare a
informaiei care moduleaz deplasarea celulei ntr-un mediu cu atractani i repeleni. Astfel, dac un atractant este
adugat n mediul de cretere, rostogolirea celulei este suprimat pentru cteva zecimi de secund. Dup un timp,
frecvena rostogolirilor revine la normal, n prezena continu a atractantului. Bacteriile rmn n starea de adaptare
la atractant, atta timp ct concentraia acestuia rmne constant. Mrirea concentraiei atractantului suprim din
nou micrile de rostogolire, iar ndeprtarea atractantului mrete frecvena rostogolirilor, pn cnd adaptarea se
produce din nou.
Rolul esenial al chemorecepiei este de a modula deplasarea celulei ca rspuns la schimbrile concentraiei
unui component al mediului (i nu de a semmnaliza o concentraie constant a acestuia), orientnd deplasarea ntr-o
direcie favorabil.
In suspensie, bacteriile flagelate se afl ntr-o micare continu, dup direcii ntmpltoare. Dac n mediu
se creeaz gradieni ai factorilor fizici sau chimici, celulele se vor deplasa n acea zon a gradientului, care
furnizeaz condiii optime. Deplasarea este rezultatul unui rspuns tactic (taxie). Cele mai cunoscute taxii sunt:
- fototaxia asigur deplasarea bacteriilor fotosintetizante spre zonele cu luminozitate optim;
- aerotaxia asigur deplasarea celulelor spre zonele cu concentraie optim a O 2;
- termotaxia. Temperaturile fiziologice sunt atractante, iar cele prea mari sau prea sczute sunt repelente.
Studiile de biomecanic i de reologie* consider c mobilitatea celulei bacteriene este un caz particular.
*
Reologia este un domeniu al fizicii care studiaz fora de frecare si rezistena pe care o ntmpin un corp solid n timpul
deplasrii n funcie de vscozitatea mediului lichid.
Viteza de deplasare este foarte mare, de 40-l00 de ori lungimea corpului pe secund, fr echivalent n
lumea vie. Datorit structurii flagelului, bacteriile ntmpin o rezisten foarte mare n mediul lichid foarte vscos
(bulion nutritiv). Explicaia deplasrii rapide const n metabolismul foarte intens al celulei bacteriene i n natura
particular a sursei de E utilizat pentru micarea de rotaie a flagelului. Pentru rotaia flagelului, celula bacterian
nu utilizeaz ATP, ci energia electrochimic, adic fluxul de protoni care strbate regiunea bazal a motorului
rotativ. Energia protonic (chemiosmotic) furnizeaz fora pentru viteza de deplasare inegalabil a celulei
bacteriene.
Semnificaia biologic a motilitii. Motilitatea favorizeaz supravieuirea bacteriilor, oferindu-le

posibilitatea s se deplaseze spre zonele din mediu n care condiiile de existen sunt mai favorabile. Bacteriile
simbiotice fixatoare de N2 (Rhizobium) se deplaseaz spre rdcinile plantelor leguminoase i iniiaz procesul
infecios. Dei deplasrile nsumeaz 2 centimetri/zi, distana este foarte semnificativ.
Pentru bacteriile patogene, mobilitatea (dac este prezent) favorizeaz penetrarea stratului de mucus ce
tapeteaz celulele epiteliale i faciliteaz aderena bacteriilor, flagelul fiind astfel un factor de virulena.
Alte tipuri de mobilitate. Mobilitatea flagelar este avantajoas numai pentru microorganismele ce triesc
n mediul aquatic. Multe microorganisme triesc n medii cu coninut sczut de ap sau in medii care-i schimb
gradul de umiditate: biofilme, sol etc. Unele bacterii flagelate produc un numr excesiv de flageli laterali, care le
permite s se deplaseze ntr-un strat subire de fluid pe o suprafa solid. Multe alte procariote se deplaseaz pe o
suprafa solid fie prin alunecare, fie prin micri brute discontinui.
Mobilitatea prin alunecare se definete ca micarea unei celule neflagelate n direcia axului celular lung, pe
suprafaa unor medii solidificate, sau n mediile lichide, la interfaa aer-ap. Este o micare lent, de trre, care nu
implic un singur mecanism. Mecanismele mobilitii prin alunecare includ aciunea unor proteine fibrilare
contractile, situate n straturile superficiale ale celulei; propagarea direcional a undelor de-a lungul suprafeei
celulare; eliminarea orientat a mucilagiului; eliberarea controlat a surfactanilor la polii celulelor etc.
Celulele de Proteus (un zeu grec al mrii, care ia multiple nfiri pentru a se face nevzut) pe suprafaa
mediului solidificat se deplaseaz prin roire (swarming). Roirea se produce pe o suprafa solid care nu permite
mi
carea flagelar obinuit n mediul lichid. Studiile de roire pe agar ncep prin uscarea suprafeei agarului
pentru a ndeprta umiditatea. Astfel este mpiedicat migrarea prin deplasarea n mediul lichid.
Procesul roirii cuprinde urmtoarele evenimente: a) creterea celulelor roitoare; b) migrarea lor pe
suprafaa agarului; c) diviziunea lor n celule scurte.
Comportamentul cunoscut sub denumirea de roire poate fi descris ca o micare a celulelor alungite i
flagelate pe suprafaa mediului solid, n cicluri periodice de micare i consolidare. Celulele care roiesc sufer
importante modificri morfologice. Roirea este determinat de apariia celulelor filamentoase (de 20-80 um
lungime), cu un numr mare de flageli (500-1000 flageli/celul), denumite celule roitoare. In timpul consolidrii,
celulele roitoare se divid pentru a produce celule scurte (2-4 um lungime, cu 1-10 flageli) care cresc i se divid o
perioad de timp, apoi se difereniaz pentru a forma o alt generaie de celule roitoare. Celulele roitoare apar la
periferia coloniei, pe suprafaa liber, n grupe mici, care se deplaseaz pe o distan scurt i se ntorc din nou la
colonie. Pe msur ce perioada de roire crete, celulele se deplaseaz n grupe mai mari, tot mai departe de colonie,
nainte de a se rentoarce. Deplasarea n grupe mai mari este mai eficient. La terminarea primei perioade de roire,
micarea se oprete i celulele intr ntr-o perioad de consolidare. Din celulele filamentoase, prin diviziune
transversal n cteva puncte rezult celule scurte normale. Celulele scurte rezultate prin diviziunea celulelor
roitoare cresc i se divid i ciclul se repet cu a II-a band de roire, care ncepe de la marginea primei benzi.
Fenomenul se numete zonare i continu pn cnd ntreaga suprafa a plcii este acoperit de cteva benzi
concentrice de cretere dens i lax. Micarea poate fi rezultatul chimiotaxiei negative fa de cataboliii care se
acumuleaz, sau al chimiotaxiei pozitive fa de substanele nutritive.
La spirochete, micarea este rezultatul contraciei i relaxrii unui fascicul de fibrile axiale (axostil), situate
ntre corpul celulei i o membran ce acoper celula. Se produc micri pulsatorii prin flexia i extensia celulei,
precum i o micare concomitent de rotaie n jurul axului longitudinal.
Fimbriile
Fimbriile sunt structuri de tipul unor apendice filamentoase, rigide i neuniforme ca lungime, care se extind
de la suprafaa celulei bacteriene.
Termenul de fimbrii a fost introdus de Duguid (1955) (fimbria -latin fibra, franjuri), iar n 1959 Brinton a
folosit termenul de pil(latin, pilus = pr). Apoi s-a sugerat ca termenul de pil s fie folosit pentru structurile
filamentoase codificate de plasmidele conjugative, cu rol n procesul de conjugare ce const n transferul unui
fragment de ADN de la o celul donor la o celul receptoare. Adeseori, cei doi termeni se folosesc pentru a descrie
aceiai stuctur. Fac excepie structurile fimbriale de la Neisseria, pentru care literatura folosete termenul de pil.
Fimbriile sunt alctuite din molecule proteice de fimbrilin, cu gr. mol. de 15-30 kDa, aezate totdeauna
dup o simetrie helical. Numrul lor este de pn la l000/celul. Daca sunt numeroase, au o dispoziie
pericelular. Dac sunt puine, au localizare polar sau bipolar. Lungimea lor este foarte variabil (l-20 m),
ceea ce sugereaz c au vrste diferite.
Fimbriile se observ la microscopul electronic, dup coloraia negativ a celulelor ntregi sau se
evideniaz indirect prin capacitatea lor de a aglutina hematiile diferitelor specii de animale i pot fi mprite n 3
categorii structurale:
fimbrii rigide, cu diam. de 5-10 nm, cu un lumen de circa 2 nm (la enterobacterii). Regiunea hidrofob este la
captul COOH al fimbrilinei;
- fimbrii flexibile, cu diam. de de 5-6 nm. Se mai numesc fimbrii N-metil-fenilalanin, deoarece la captul Nterminal al fimbrilinei au un rest de fenilalanin metilat. Se gsesc la Ps. aeruginosa, N. gonorrhoeae, N.
meningitidis. Regiunea N-terminal este hidrofob;
- fimbrii flexibile subiri spiralate, cu diam. de 4 nm sau mai puin, fr lumen (K88, K99, la E. coli).
Unele fimbrii au att o regiune rigid, ct i una flexibil.
Fimbriile sunt comune la bacteriile Gram negative i mai rare la bacteriile Gram pozitive
(Corynebacterium, Actinomyces), dar sunt diferite structural.
O bacterie posed cteva tipuri de fimbrii, n funcie de grosime, lungime, specificitatea antigenic
(determinat de secvena aminoacizilor n molecula de fimbrilin) i de specificitatea receptorilor glicoproteici ai
celulelor epiteliale de care ader.
Semnificaia biologic. Fimbriile sunt structuri din categoria adezinelor, adic mediaz interaciunea
celul-suport. In ceea ce privete capacitatea de legare, cele mai multe adezine fac parte din familia lectinelor*.
*
Lectinele sunt glicoproteine care se leag nespecific cu glucidele sau cu gruprile glucidice ale glicoproteinelor. Ele precipit
polizaharidele si glicoproteinele sau aglutineaz celulele. Activitatea lor aglutinant i precipitant poate fi inhibat de haptene
(monozaharide i oligozaharide).
Cea mai important funcie care li se atribuie ar fi aceea de puni de aderen intercelular sau aderen de
suportul inert. La bacteriile din mediile aquatice, fimbriile favorizeaz asocierile dintre celule i astfel se formeaz
pelicule fine (filme) de neuston la suprafaa apei, cu rol adaptativ, ce asigur condiii bune de aerare pentru
bacteriile aerobe i de luminozitate pentru cele fotosintetizante.
Pentru bacteriile patogene, prezena fimbriilor (tulpinile fim+) le confer un grad superior de virulen,
deoarece fimbriile ader ferm de receptorii suprafeei celulelor epiteliale ale mucoaselor i ai hematiilor.
Receptorul major al suprafeei celulelor eucariote pentru fimbriile bacteriene este o glicoprotein cu
manoz. Proteina de aderen localizat pe fimbrii se leag de resturile de manoz ale glicoproteinelor.
In funcie de comportamentul n prezena manozei, in vitro, s-au identificat fimbrii manozo-sensibile i
manozo-rezistente. La E. coli s-au evideniat fimbrii manozo-sensibile (manoza inhib hemaglutinarea, in vitro, prin
competiia cu receptorii suprafeei hematiilor).
Fimbriile manozo-rezistente aglutineaz numai eritrocitele tanate. Celulele bacteriene cu astfel de fimbrii
ader de celulele endoteliale, de celulele epiteliale ale tractului respirator, urogenital, de membrana bazal a tubilor
renali, a capsulei Bowmann.
O celul bacterian exprim simultan, fimbrii cu specificiti multiple de legare de suportul celular. Astfel
se explic selectivitatea bacteriilor patogene i comensale pentru anumite gazde i esuturi.
Elaborarea conceptului adezinelor i a specificitii lor de legare explic tropismul tisular selectiv al
bacteriilor infecioase. Caracterul progresiv ascendent al infeciei urinare, de la vezica urinar spre rinichi,
mpotriva fluxului urinar, se explic prin fenomenul de aderen, mediat de fimbrii cu diferite specificiti de
legare, de celulele epiteliale.
Exprimarea fimbriilor pe suprafaa celulei este adaptativ. Ele favorizeaz aderena celulei bacteriene de
substraturi celulare diferite.
Fimbrilina este codificat de gene cromosomale, ceea ce denot c fimbriile au o importan ecologic
deosebit, prezena lor fiind asociat cu anumite condiii favorizante de mediu. Dup sintez, fimbrilina este
transferat extracelular i depus la baza fimbriei.
Orice linie bacterian poate s existe alternativ n varianta fim+ sau fim- i s poarte simultan mai multe
tipuri de fimbrii, cu specificiti diferite de legare. Rata de mutaie a genelor care codific sinteza fimbriilor este
foarte mare, astfel nct celulele fim+ trec n varianta fim- i invers, prin retromutaie.
Uneori fimbriile sufer fenomenul variaiei de faz i al variaiei antigenice. Variaia de faz nseamn c
o structur dat este sau nu este produs. Variaia antigenic semnific faptul c aceiai structur se produce n
variante biochimice diferite.
Variaia antigenic a fimbriilor bacteriene este rezultatul aciunii mai multor mecanisme. Cel mai simplu
este acumularea lent a mutaiilor punctiforme n gena codificatoare. Fenomenul se numete drift antigenic i are loc
att la bacteriile patogene ct i la cele nepatogene.
Pilii
Pilii sunt apendice filamentoase neflagelare, a cror sintez este codificat de gene localizate n structura
unor plasmide denumite conjugoni sau plasmide sex.
Celulele purttoare de pili au capacitatea potenial de a dona material genetic (sunt celulemascul).
Numrul pililor pentru o celul este cuprins ntre 1 i l0, iar lungimea este de circa 20 m. Diametrul extern este de
6-l5 nm, iar cel intern de 2,5 nm.
Pilii sunt alctuii din molecule identice de pilin, o fosfoglicoprotein de l2-l5 kDa. Se sintetizeaz n
celul, de unde este transferat n lumenul piliar i este asamblat dup o simetrie helical, la extremitatea liber a
acestuia.
Pilii pot fi ndeprtai mecanic, prin agitare i se resintetizeaz. Prin nclzire sau tratament acid, pilii se
dezagreg n moleculele componente (pilina). Restabilirea neutralitii i a nivelului termic permite
autoasamblarea i formarea unei structuri identice cu pilul original.
Rolul pililor. Prezena pililor este asociat totdeauna cu procesul de conjugare bacterian. Pilii ar putea fi
structuri eseniale de transfer al materialului genetic de la celula donor la celula receptor. Molecula de ADN ar trece
prin lumenul pilului.
Dup ali autori, pilii ar avea numai rolul de a aga celula receptoare de material genetic, iar prin
retracia sa ulterioar, cele dou celule s-ar apropia.
Rolul pililor n conjugare este argumentat de faptul c depilierea (prin agitare cu perle de sticl) este
nsoit de pierderea capacitii de conjugare i de restabilire a ei odat cu resinteza pililor.
Capacitatea de sintez a pilinei se pierde odat cu pierderea plasmidei de sex i este redobndit odat cu
rectigarea plasmidei.
Pilii poart receptori de fagi. Pe suprafaa pililor se gsesc receptori pentru fagii ARN masculi. Se
numesc fagi masculi deoarece infecteaz numai celulele cu potenialitate de donor de material genetic.
Marcajul cu fagii ARN masculi este modalitatea de a-i distinge de alte structuri filamentoase. La extremitatea
liber a pililor se gsesc receptori pentru fagii filamentoi.
CAPITOLUL II
CRETEREA I MULTIPLICAREA BACTERIILOR
Procesele de cretere i multiplicare a celulei bacteriene sunt consecina metabolismului bacterian. Aceste
procese au o serie de particulariti, marcate de intensitatea deosebit a metabolismului i de reglarea perfect a
acestuia.
Creterea n sens biologic este rezultatul mririi coordonate a constituienilor structurali ai unui
organism uni- sau pluricelular, ca o consecin a sintezelor specifice, echilibrate, pe baza compuilor nutritivi
existeni n mediu. Pornind de la acetia, n cursul creterii se sintetizeaz noi compusi, care sunt asamblai pentru a
forma copii fidele ale constituienilor celulari proprii.
Creterea celulei bacteriene
In mod normal, toi constituienii celulari se dubleaz cantitativ n perioada de cretere, dar afirmaia este
valabil n primul rnd pentru ADN. Creterea i multiplicarea bacteriilor sunt procese controlate genetic.
O astfel de definiie, ce limiteaz procesul de cretere la ansamblul constituienilor specifici celulei, elimin
din cadrul noiunii de cretere, mrirea volumului celular consecutiv acumulrii unei cantiti crescute de ap.
Creterea celulei bacteriene implic creterea peretelui celular. De aceea, studiul mecanismelor de cretere
a peretelui celular reflect mecanismele de cretere n general. Peretele celular crete prin secionarea legturilor
chimice la anumite situsuri caracteristice ale moleculei de murein i prin intercalarea unor constituieni structurali
noi.
Forma celulelor bacteriene este consecina modului n care are loc creterea (adugarea de substan nou).
La bacteriile sferice, creterea este localizat ntr-o band ngust ecuatorial (fig. 41). Dovada a fost adus de
experienele n care s-au utilizat anticorpi specifici fa de polimerii parietali, marcai cu substane fluorescente.
Calotele celulei i pstreaz fluorescena cteva generaii succesive, n timp ce n zona ecuatorial, fluorescena
dispare progresiv, curnd dup marcare. Substana nou se depune, n proportii aproximativ egale, pe toate cele trei
directii ale spaiului.
Fig. 41. a. La celulele sferice (coci) sinteza peretelui celular nou este localizat la nivelul zonei ecuatoriale. b. Imaginea
electrono-optic de scanning a celulelor de Streptococcus hemolyticus. Sgeile indic zona de iniiere a septului de diviziune.
Fig. 42. Reprezentarea schematic a diferitelor modaliti
teoretice de cretere a bacilior, prin adugarea
constituienilot noi (zona haurat) la structura parietal.
(A) Perete celular in faza premergtoare creterii. (B)
Cretere limitat la una din extremiti. (C) Cretere la
ambele extremiti. (D) Cretere n vecintatea septului
transversal. (E) Cretere prin intususcepiune. (F) Cretere
prin ntinderea peretelui celular i depunerea de material
nou pe suprafaa intern.
Bacteriile cilindrice cresc prin adugarea substanei noi, pe direcia axului lung al celulei (fig. 42).
Depunerea substanei noi n peretele celular al bacteriilor cilindrice se poate realiza unipolar, bipolar,
ecuatorial (n zona de formare a septului transversal) sau intercalar.
Creterea celulei bacteriene este limitat n timp pn la atingerea unui volum critic, cnd nceteaz i este
urmat de diviziune.
Mecanismul molecular declanator al diviziunii nu este cunoscut. Un rol important se atribuie
dezechilibrului ntre suprafaa i volumul celulei, ce apare ca rezultat al creterii. In mod obinuit exist un raport
echilibrat, permanent controlat, ntre suprafaa celulei i volumul ei (S/V).
Suprafaa reprezint aria celular prin care se realizeaz schimburile cu mediul extern. Mrimea suprafeei
condiioneaz rata ptrunderii nutrienilor i a eliminrii substanelor de catabolism.
Volumul reprezint masa celular care consum nutrienii i produce cataboliii .
In procesul de cretere, suprafaa se mrete cu o rat ptrat, iar volumul, cu o rat cubic. Cnd valoarea
raportului S/V atinge o limit inferioar critic, dezechilibrul creat declanseaz diviziunea celular, prin care
raportul S/V se reechilibreaz.
Multiplicarea bacteriilor se realizeaz prin diviziune direct (simpl), prin nmugurire sau prin formarea
sporilor de propagare.
Multiplicarea prin diviziune
Din punct de vedere structural, mecanismul diviziunii simple i etapele desfurrii sale sunt bine
cunoscute.
La bacteriile cilindrice, diviziunea simpl se face dup un plan transversal, perpendicular pe axul lung al
celulei. Foarte rar, diviziunea poate avea loc dup un plan longitudinal. La coci, diviziunea se poate realiza dup 1,
2 sau 3 planuri perpendiculare unul pe cellalt, rezultnd diplococi, tetrade sau coci aezai n pachete cuboidale.
Nu exist un model unic al procesului de diviziune bacterian. Studiile s-au fcut la un numr limitat de
specii, aparinnd celor dou grupe majore: Gram pozitive i Gram negative.
Bacilii Gram pozitivi se divid dup urmtorul mecanism: n regiunea ecuatorial a celulei se formeaz un
sept transversal, alctuit din membrana citoplasmatic i peretele celular. Septul crete progresiv centripet, ca o
adevrat diafragm i separ cele dou celule surori ce vor rezulta din diviziune.
La microscopul electronic se evideniaz clar etapele succesive ale creterii centripete a septului ecuatorial.
Membrana citoplasmatic, uneori, precede uor septul parietal, dar niciodat nu progreseaz pentru a realiza
singur separarea complet a celor doi protoplati (fig 43).
La bacilii Gram negativi, diviziunea celular are loc prin constricia (strangularea) treptat a celulei la
nivelul zonei ecuatoriale. Constricia implic toate cele trei straturi: membrana extern, stratul peptidoglicanic i
membrana intern. Se produce o cretere treptat a curburii spre interiorul celulei i o ngustare a ei n regiunea
ecuatorial.
Relaia dintre celula care se divide i celulele rezultate din diviziune este, o celul mam dou celule
surori. Celula care se divide dispare. Ea i pierde individualitatea n cele dou celule ntinerite. Diviziunea celulei
este precedat de sinteza unor proteine, care se concentreaz la situsul formrii septului sau al constriciei.
Fig. 43. Imagini electrono-optice n transmisie a celulelor bacteriene n diviziune. a. La B. subtilis, diviziunea are loc prin
formarea unui sept de origine parietal. b. La bacteriile Gram negative diviziunea se face prin constricia treptat a celulei la
nivelul zonei ecuatoriale. c. Diviziunea asimetric. La extremitatile ambelor celule de B. subtilis, diviziunea inegala genereaz
minicelule (sagei) (original).
Mecanismul molecular al diviziunii

Procesul de diviziune este controlat de un set de 7 sau mai multe proteine cu funcie specific denumite
proteine de diviziune. Proteinele care regleaz diviziunea, ca i cele care controleaz segregarea cromosomilor,
motilitatea, nu sunt distribuite uniform n citoplasm, ci ocup situsuri speciale: n membran, n spaiul
periplasmic etc.
Proteinele de diviziune se agreg n zona ecuatorial a celulei i se asambleaz ntr-o ierarhie bine
determinat, formnd o structur multimeric inelar - inelul Z, denumit septalsom, divisom sau septator.
Diviziunea celulei se produce n zona inelului Z. La bacteriile Gram pozitive, pentru inelul Z este preferat termenul
de septalsom (deoarece diviziunea este precedat de formarea septului), iar la bacteriile Gram negative se folosete
termenul de divisom, pentru c diviziunea progreseaz prin constricie.
Moleculele implicate n diviziunea celular i n segregarea cromosomilor s-au evideniat prin metoda
microscopiei cu fluorescen. La E. coli, ele se asambleaz la nivelul situsului de diviziune i formeaz ansamblul
funcional de form inelar - divisomul. Toate proteinele reglatoare ale procesului de diviziune sunt proteine
termosensibile, deoarece la temperatur nepermisiv, funcia lor este alterat, nu mai controleaz procesul de
diviziune i determin apariia mutantelor filamentoase. Celulele filamentoase se formeaz ca rezultat al creterii
celulei, noit de replicarea repetat a materialului nuclear, dar celula nu se divide. De aceea, multe proteine i
mutantele pe care le genereaz au prefixul Fts (filamente termosensibile).
Majoritatea proteinelor Fts au un domeniu ancorat n membrana celulei, iar celelalte domenii se gsesc n
citoplasm sau n spaiul periplasmic.
S-au identificat funciile biochimice pentru 2 proteine : FtsZ i PBP (penicilin binding protein).
Cea mai important cantitativ (de ordinul miilor de molecule), dintre proteinele de diviziune este FtsZ, cu
localizare ecuatorial, care n forma polimerizat, localizeaz procesul de diviziune. Fts Z este o protein citosolic
i se gsete virtual la toate bacteriile i n organitele celulei eucariote. Este omolog tubulinei i se poate
polimeriza ca i tubulina, pentru a forma o structur asemntoare unui inel (inelul Z), la situsul de diviziune.
Inelul Z are un rol esenial n constricia membranei celulare i n coordonarea ntregului proces de diviziune. Fts Z
este o GTP-az i poate s se polimerizeze att in vitro ct i in vivo.
Proteina care leag penicilina (PBP) are rolul de sintez a peptidoglicanului parietal la noii poli ai celulei
(pentru organismele care au perete peptidoglicanic). PBP sunt enzime care catalizeaz reacia de legare ncruciat
ntre polimerii peptidoglicanului: sunt transpeptidaze care leag ncruciat catenele tetrapeptidice asociate acidului
N-acetilmuramic. Legarea antibioticelor -lactamice la PBP implicate n formarea septului de diviziune are ca
rezultat formarea filamentelor lungi. Inactivarea altor PBP duce la liza rapid a celulei bacteriene, deoarece celula
rmne osmotic neprotejat de perete.
Diviziunea celulei parcurge cteva etape :
- selecia situsului de diviziune, de obicei la mijlocul celulei, ntre nucleoizii recent segregai;
- asamblarea aparatului citoplasmatic, care aproape todeauna implic FtsZ i la majoritatea organismelor, FtsA.
Aceste proteine leag i hidrolizeaz nucleozidtrifosfaii, elibernd energia necesar remodelrii celulei.
In celulele bacilare gata s nceap diviziunea sunt 3 situsuri la care procesul se poate iniia: unul n zona
central a celulei, ntre cromosomii replicai i segregai i cte unul la polii celulei.
Evenimentul central al nceperii diviziunii este formarea inelului Z. Localizarea sa la mijlocul celulei este
controlat prin dou mecanisme:
- mecanismul nchiderii nucleoidului, se bazeaz pe observaia c diviziunea celulei este iniiat n spaiile
libere, n care ADN lipsete ;
- sistemul min, care controleaz poziia inelului Z, denumit astfel pentru c mutantele acestor gene produc
minicelule prin localizarea inadecvat, la polii celulei, a situsului de diviziune.
Fora motrice a citochinezei pare a fi depolimerizarea controlat a inelului format de proteinele Fts,
deoarece diametrul divisomului scade progresiv n timpul diviziunii, dar i creterea centripet a stratului de
peptidoglican.
Diviziunea asimetric.
De cele mai multe ori, diviziunea este simetric sau izomorf, adic din procesul de diviziune rezult dou
celule de dimensiuni egale (fig. 42c).
Uneori, diviziunea celular este asimetric, rezultatul fiind formarea a dou celule inegale. Cea de
dimensiuni mici este o minicelul. Diviziunea asimetric este caracteristic bacteriilor cilindrice i se produce
frecvent la mutante de E. coli i B. subtilis.
Minicelulele (bacterii miniaturale) au fost descrise n l967 de Adler ca bacterii foarte mici, care apar la
extremitatea celulelor de E. coli, dup diviziune.
Minicelulele apar foarte rar la bacteriile din mediile naturale, dar sunt frecvente la liniile mutante, crescute
pe mediile artificiale. In general, minicelulele sunt lipsite de material nuclear, sau conin o cantitate foarte mic de
ADN. Nu pot crete i nici nu se divid, dar au activitate metabolic: realizeaz procese oxidative, produc energie
sub form de ATP.
Adeseori, minicelulele conin plasmide. In cazul n care plasmidele le confer calitatea de donoare de
material genetic, minicelulele pot realiza procese conjugative de transfer de material genetic, unor celule
receptoare. Ele pot fi infectate de fagi, dar elibereaz un numr mic de fagi progeni.
Iniial li s-a atribuit numai o importan de ordin teoretic, minicelulele fiind structuri ce permit analiza
unor procese biologice importante: diviziunea celular, studiul fenomenelor de transport celular prin membran.
Interesul fa de ele a crescut, legat de posibilitatea de a le folosi n viitor pentru producerea de vaccinuri, chiar n
cazul n care provin de la bacterii patogene, deoarece fiind lipsite de capacitatea de diviziune, nu pot iniia procese
infectioase.
Mecanismul formrii minicelulelor nu este elucidat. Una din teoriile care explic diviziunea asimetric
presupune c n fiecare celul bacterian cilindric exist trei situsuri la care se poate iniia formarea unui perete
desparitor: unul situat central i celelalte dou, distribuite simetric la cei doi poli. In mod normal, bacteriile
cilindrice se divid printr-un perete transversal ce se formeaz la nivelul situsului central. Cele dou celule surori
motenesc cte un situs polar. Pe msur ce cresc, situsul polar dobndete o poziie central. Formarea unei
minicelule ar fi consecina activrii premature a unui situs polar, la nivelul cruia se formeaz un sept de diviziune,
nainte ca procesul de cretere celular s se realizeze complet.
Aceast teorie nu explic modul de formare concomitent a minicelulelor n iraguri, ceea ce presupune
activarea simultan a tot attea situsuri de diviziune.
Formarea minicelulelor pare a fi rezultatul unor mutaii la nivelul genelor reglatoare ale procesului de
diviziune.
Reglarea procesului de diviziune
Diviziunea celular normal este corelat cu procesul de replicare a cromosomului bacterian. Exist un
raport temporal strict ntre replicarea ADN i diviziunea celulei. Corelaia este esenial, deoarece astfel este
prevenit producerea celulelor anucleate. Rata diviziunii celulare este controlat, n primul rnd, de rata sintezei
ADN. Nucleoidul exercit putere de veto asupra diviziunii celulei, ceea ce nseamn c nucleoidul nereplicat sau
nesegregat dup replicare, reprezint o barier fizic pentru procesul diviziunii celulare.
In celulele care cresc cu o rat normal sau sczut, sinteza ADN se desfoar pe durata a 2/3 din timpul
de generaie. La o tulpin de E.coli cu timpul de generaie de 60 de minute, pentru sinteza ADN sunt necesare 40
de minute. In culturile care cresc mai lent, sinteza ADN dureaz mai mult, dar necesit tot 2/3 din timpul de
generaie. In astfel de culturi, o celul tnr rezultat printr-un proces de diviziune conine un singur cromosom.
In celulele care cresc pe medii optime, rata de cretere este mare i diviziunea celulei se face la intervale scurte de
timp.
Timpul de generaie (intervalul dintre dou diviziuni) este mai scurt dect timpul necesar pentru replicarea
moleculei de ADN. ADN se replic mai lent dect timpul necesar desfurrii unui ciclu de diviziune. Celula
bacterian compenseaz decalajul creat, iniiind un al II-lea ciclu de replicare a ADN, nainte de ncheierea ciclului
anterior. Astfel, n celulele care cresc rapid, pe molecula de ADN sunt prezente la un moment dat, cteva puncte de
replicare. Numrul lor depinde de rata de cretere a celulei. Cnd copiile de ADN sunt distribuite n celulele fiice,
ele poart regiuni deja replicate. Ca urmare, informaia genetic localizat n apropierea situsului de origine a
replicrii se gsete ntr-un numr mai mare de copii, dect aceea localizat aproape de punctul terminal al
replicrii cromosomului. Deoarece cantitatea de ADN/unitatea de mas celular ramne constant, celulele care
cresc repede sunt mai mari.
La eucariote, sinteza ADN se iniiaz simultan pe toi cromosomii setului. Pe fiecare cromosom exist un numr
de situsuri separate, la care sinteza ncepe simultan.
Segregarea cromosomilor
La bacterii, ncheierea replicrii cromosomului este semnalul disocierii sale de membran i astfel este
posibil repartizarea cromosomilor fii n cele dou celule surori. Mecanismul segregrii (distribuiei) celor doi
cromosomi nu este cunoscut. Se pare c rolul esenial n acest proces revine structurilor mezosomale. Clivarea
structurii mezosomale este corelat n timp, cu replicarea cromosomului. Fiecare dintre cei doi cromosomi rmne
legat de cte o structur mezosomal. Creterea membranei plasmatice n spaiul dintre cei doi mezosomi asigur
deplasarea acestora spre polii celulei. Fiecare dintre cele dou celule surori va moteni un cromosom legat de
propriul mezosom. Dar nveliurile celulei cresc n special prin intercalare la situsuri multiple.
Rezultatele autoradiografice sugereaz c originile replicrii celor doi cromosomi se ndeprteaz n cursul
replicrii, ajung la polii celulei i rmn acolo pentru cea mai mare parte a ciclului. Dar replisomul pare a fi
localizat la centrul celulei, probabil ataat de membrana celulei, ceea ce sugereaz c pentru un nou ciclu de
replicare, originea trebuie s revin spre centrul celulei.
Segregarea celor doi cromosomi n celulele fiice merge paralel cu replicarea. Cei doi cromosomi se
deplaseaz chiar n timpul replicrii. Secvenele de nucleotide adiacente situsului de origine a replicrii reprezint
situsuri de legare pentru proteinele ce particip la separarea ADN (fig. 44).
Pe msur ce ADN trece prin replisom, pierde supraspiralizarea i trece n stare relaxat. Dup ncheierea
replicrii, cromosomii se recondenseaz separat i se deplaseaz spre poziiile 1/4 i respectiv 3/4 ale celulei. Un
rol important n condensarea ADN are proteina Muk B, component a familiei proteinelor care menin structura
cromosomului (SMC). Fiecare dintre proteinele familiei, prin cele dou extremiti active se leag la dou situsuri
distante ale ADN i le apropie printr-un mecanism de balama, dependent de ATP.
Proteinele ce se leag de ADN nu i ntlnesc situsurile de aciune prin difuzie liber n celul, ci prin
legare la un situs de intrare i alunecare pe molecula de ADN pn la locul de aciune.
Fig. 44. Ilustrarea schematic a mecanismului segregrii cromosomilor n celulele surori rezultate dup diviziune (cr =
cromosom ; m = mezosom ; sd = sept de diviziune).
Dinamica (evoluia) unei culturi bacteriene

Cultura bacterian este rezultatul creterii i multiplicrii ntr-un mediu lichid sau solid, a unei mici
cantiti iniiale de celule, care constituie inoculul.
Microorganismele se cultiv n mai multe scopuri:
- izolarea si identificarea lor;
- meninerea viabilitii lor n colecie;
- studiul sensibilitii la antibiotice n laboratorul clinic sau n scopul cercetrii;
- n scop industrial pentru obinerea biomasei, a unor produi de biosintez sau de fermentaie.
Exist dou modaliti de cultivare a microorganismelor i tot attea tipuri de culturi:
- culturile bacteriene discontinui se obin prin cultivarea n mediul nutritiv lichid sau solidificat, ce nu se
renoiete;
- culturile bacteriene continui se obin prin cultivarea n mediu lichid renoit permanent, cu o anumit rat.
In mod curent, n laborator se obin culturi bacteriene discontinui, ntr-un volum fix de mediu lichid sau
solidificat, nerenoit. Odat cu creterea culturii bacteriene, compoziia chimic a mediului se modific: scade
cantitatea de substane nutritive i se acumuleaz catabolii, care pot fi toxici.
Intr-o cultur discontinu, numrul de celule viabile variaz continuu. Ritmul de diviziune este condiionat
de concentraia nutrienilor: este foarte nalt n faza iniial a evoluiei culturii, cnd mediul ofer condtii optime,
dar diminu treptat, pn la 0, pe msura epuizrii nutrienilor i a acumulrii cataboliilor.
Intr-o cultur discontinu, ciclul celular este sincron numai n primele cicluri de diviziune celular Curnd
apar decalaje i ritmul diviziunii devine asincron. Diferite grupe de celule se gsesc n faze diferite ale ciclului de
cretere i multiplicare. Vrsta celulelor unei culturi discontinui este diferit. Numrul de generaii celulare este
limitat.
Analiza evoluiei numrului de celule ntr-o cultur discontinu se poate face pe o curb de cretere,
trasat n coordonate semilogaritmice. Panta curbei reflect valoarea ratei de cretere, variabil n timp. Curba
relect variaiile numrului de celule i implicit a masei celulare, n funcie de timp.
In raport cu variaiile ratei de cretere, pe curb se disting 6 momente:
l) Faza de laten (de lag sau de cretere 0) este greu de delimitat de faza urmtoare (fig. 45). Are o durat foarte
variabil: poate s fie foarte scurt (chiar inexistent) sau s dureze cteva ore. Numrul celulelor ramne
neschimbat, egal cu cel din inocul sau poate chiar s scad uor. Este caracterizat printr-o intens activitate
celular. In cursul acestei faze, celulele se pregtesc pentru procesele de multiplicare care vor urma.
Fig. 45. Curba ideal de cretere a unei culturi staionare. Linia continu reprezinta numrul total de celule, iar linia
discontinu ilustreaz numarul celulelor viabile.
Timpul de laten este lung (1-3 ore) pentru inoculul bacterian care provine dintr-un mediu complex, ce
conine numeroi compui organici, nsmnat ntr-un mediu sintetic minimal. Latena corespunde timpului
necesar sintezei enzimelor celulare pentru biosinteza metaboliilor eseniali. Latena este de asemenea ndelungat,
dup inocularea unui mediu sintetic minimal, cu un numr mic de celule care provin din acelai mediu. In acest
caz, bacteriile sunt adaptate fiziologic la mediul de cretere, dar creterea ntrzie, deoarece anumite componente
toxice (de exemplu, ionii metalici) nu au fost neutralizate.
Timpul de laten depinde de starea fiziologic a celulelor din inocul: celulele aflate n faza staionar se
adapteaz uor la un mediu diferit. Dac inoculul provine dintr-o cultur aflat n faza de declin, alterarea
proceselor fiziologice se reflect n creterea perioadei de laten. Timpul de laten nu influeneaz durata
celorlalte faze de evoluie a unei culturi.
De cele mai multe ori, celulele bacteriene se adapteaz la noile condiii de mediu datorit plasticitii
fenotipice, n cadrul aceleiai norme genetice. Uneori, adaptarea unei culturi la noile condi ii de mediu se poate
datora seleciei unei populaii mutante i timpul de lag este lung. In acest caz, n inocul se gsete o proporie foarte
mic de celule mutante, capabile s metabolizeze aceste surse. Din punct de vedere genetic, mutantele sunt diferite
de restul celulelor. Din aceast cauz, perioada de lag este foarte lung. Masa celular a culturii va deveni vizibil
numai dup ce celulele mutante s-au multiplicat ntr-o msur suficient pentru a constitui o proporie
semnificativ a inoculului. In acest caz, perioada de lag este aparent i nu real, deoarece celulele mutante
capabile s creasc, se multiplic exponenial cu mult nainte ca rezultatul multiplicrii s se evidenieze prin
creterea masei celulare.
Perioada de lag este foarte scurt sau chiar absent, dac inoculul este transferat pe un mediu identic.
Celulele posed deja, echipamentul necesar metabolizrii mediului respectiv.
2) Faza de iniiere a creterii este un interval scurt de timp, n care celulele bacteriene cresc i se divid cu un
ritm care crete progresiv. Este faza de accelerare a ritmului de cretere.
3) Faza de cretere exponenial. Creterea numrului celulelor bacteriene se face cu o rat
exponenial(geometric)constant. Ritmul de diviziune este maxim. Mortalitatea celular este practic nul. Dup
fiecare diviziune, numrul celulelor se dubleaz. Daca Xo este numrul de celule/ml la nceputul fazei de cretere
exponenial, numrul de celule se dubleaz succesiv astfel:
- dup o diviziune: X1 = 2 x Xo;
dup dou diviziuni: X2 = 22 x Xo

dup n diviziuni: Xn = 2n x X0.
Expresia se poate scrie: logXn = log Xo + n log 2.
Creterea unei culturi bacteriene se realizeaz ntr-un interval de timp dependent de timpul de generaie sau
timpul de dublare a numrului de celule.
Timpul de generaie este intervalul necesar pentru ca o celul tnr rezultat din diviziune, s creasc i
s se divid i se msoar n intervalul de timp dintre dou diviziuni.
La bacterii, timpul de generaie se exprim n minute sau ore: la B. subtilis, B. megatherium 9-l0 min; la
E. coli 20 min; la Lactobacillus l00 min; la levuri 60-l20 min; la parameci 600 min; la Amoeba l400 min;
la M. tuberculosis l600 min; la T. pallidum 2000 min.
Durata timpului de generaie este diferit de la o specie la alta i este controlat genetic. In funcie de
condiiile de mediu, timpii de generaie sunt diferii pentru aceiai linie bacterian. Intr-un mediu optim, timpul
de generaie al unei specii se scurteaz, dar crete mult n condiii modificate de mediu.
In culturile bacteriene aerobe staionare, n mediul lichid, numrul maxim de celule care se acumuleaz n
aceast faz este de 200 milioane/ml. In condiii de agitare, contactul cu nutrienii este favorizat i se realizeaz
densiti de l0-20 de ori mai mari.
Pentru o celul cu timpul de generaie de 20 de min., dup l32 de diviziuni exponeniale (n mai puin de
48 de ore)va produce 2,2 x 10 43 celule progene cu o greutate de 2,2 x l0 31 g, mult mai mare dect greutatea
planetei. Aceast capacitate de diviziune ramne numai potenial i se realizeaz numai pentru intervale foarte
scurte de timp, deoarece condiiile de mediu devin foarte rapid limitante. Multiplicarea foarte rapid a celulelor
bacteriene este o strategie a supravieuirii. In condiii nefavorabile, multiplicarea este nul.
In cursul fazei de cretere logaritmic, celulele prezint cateva particulariti: sunt uniforme ca mrime i
puin mai mari fa de dimensiunile tipice speciei respective. Se coloreaz omogen deoarece nu conin incluzii i
sunt intens bazofile.
Intr-o celul care crete, circa 80% din ARN total este ARN ribosomal, iar restul este reprezentat, n cea
mai mare parte de ARNt. ARNm, dei ndeplinete funcia de sintez a proteinelor, are o proporie foarte mic
din ARN total, deoarece funcioneaz pentru cteva cicluri ale sintezei proteice, dup care, fiind instabil, este
degradat.
4) Faza de ncetinire a creterii se caracterizeaz prin diminuarea pregresiv a ritmului de diviziune. Este o faz
scurt i la sfritul ei, celulele au ncetat s se multiplice i s creasc.
5) Faza staionar (sau de cretere maximal) este caracterizat prin faptul c numrul total de celule rmne
constant, celulele nu se divid, dar numrul celor viabile diminu treptat. Celulele unei culturi n faza staionar
nu cresc, nu se divid i sunt considerate ca tipice pentru specia respectiv : dimensiunile lor sunt normale (mai
mici dect cele din faza precedent), se coloreaz normal i pe baza comportamentului lor n coloraia Gram sunt
atribuite grupului Gram pozitive sau Gram negative. In celule apar substane de rezerv, vacuole spori.
Faza staionar corespunde platoului curbei de cretere. Durata ei este variabil: n mediile sintetice este
scurt.
Oprirea creterii este datorat epuizrii unui compus nutritiv esenial, denumit limitant al creterii. Dac
componentele minerale ale mediului sunt n exces, compusul limitant este de obicei energetic. In cazul bacteriilor
auxotrofe, n prezena componentelor minerale i energetice, oprirea creterii se datoreaz epuizrii unui factor de
cretere.
6) Faza de declin a culturii este ilustrat grafic de panta descendent a curbei. Masa celular scade progresiv
datorit fenomenului de liz. Cu o rat similar scade numrul celulelor viabile. Cele care nu sporuleaz, mor i
se lizeaz. Morfologia celulelor este alterat. Intr-o cultur de bacili apar forme atipice: sferice, filamentoase,
ramificate. Celulele contin substane de rezerv, vacuole. Afinitatea pentru coloranii bazici diminu treptat,
odat cu scderea cantitii de ARN. Sunt celule mbtrnite. Numrul lor diminu treptat, iar pentru speciile
nesporulate tinde repede spre 0 i cultura se sterilizeaz.
Creterea colonial. Bacteriile diseminate individual sau ca grupri elementare pe suprafaa sau n masa
unui mediu nutritiv agarizat, se divid i formeaz o colonie bacterian. Fiecare colonie, izolat spaial de
vecinele sale, constituie o clon celular. Numrul celulelor ntr-o colonie depinde de talia celulelor i de rata lor
de cretere. Numai celulele situate la periferia coloniei, n contact cu mediul nutritiv sunt metabolic active.
Dac dup fiecare diviziune, cele dou celule surori se separ complet, colonia va lua o forma regulat:
sferic sau de lentil biconvex, pentru cea inclus n grosimea gelozei i o form bombat, neted, pentru cea de
pe suprafaa agarului. Acestea sunt colonii S(Smooth).
Dac celulele surori ader unele de altele, aspectul coloniei devine neregulat, cu suprafaa ncreit,
rugoas, proprie coloniei de tip R (Rough).
-
Msurarea creterii se face prin determinri cantitative a doi parametri: masa celular i numrul de
celule. Ambele msurtori se raporteaz la un volum fix de mediu, de exemplu la 1 ml. Masa celular i numrul
de celule nu sunt n mod necesare echivalente pentru c masa celulelor individuale poate s varieze, masa total a
celulelor crete continuu, iar creterea numrului de celule este discontinu n cazul culturilor sincrone. De
obicei, multiplicarea ntr-o populaie mare de celule este asincron i n aceste condiii creterea masei celulare i
a numrului de celule sunt echivalente.
Metoda direct de msurare a masei celulare este determinarea greutii uscate a celulelor ntr-un volum
fix de cultur. In timpul creterii compoziia chimic a materialului celular rmne constant.
Masa celular se poate determina prin metode indirecte: msurarea coninutului n C, N sau n proteine.
Metodele indirecte mai sensibile pentru estimarea masei celulare sunt determinrile cantitative ale unei
enzime particulare sau rata unui proces metabolic cum este respiraia sau fermentaia(de exemplu, rata producerii
de acid lactic este folosit ca parametru al creterii bacteriilor lactice).
Metoda optim pentru msurarea masei celulare a unei culturi bacteriene este cea optic,
ce const n determinarea cantitii de lumin dispersat de o suspensie celular. Capacitatea de dispersie a
luminii este proporional cu densitatea suspensiei celulare. Cnd o raz de lumin trece prin suspensie,
reducerea cantitii de lumin transmis permite msurarea densitii celulare.
Raportul dintre masa de celule n suspensie i densitatea sa optic, pentru un organism dat, se face empiric
prin msurarea direct a greutii uscate a celulelor ntr-o prob cu o densitate optic dat.
Determinarea numrului de celule se poate face microscopic, numrnd celulele ntr-un volum determinat.
Calculul se face cu ajutorul camerelor de numrat. Astfel se determin numrul total de celule dintr-o
sauspensie.
Numrarea automat a celulelor se face cu un instrument electronic (coulter counter). O cantitate de
suspensie este trecut printr-un orificiu foarte fin. Detectarea celulelor se bazeaz pe diferenele de conductivitate
electric ntre celul i mediul de suspensie. Se nregistreaz numrul de celule/unitate de volum. Metoda se
utilizeaz pentru numrarea celulelor mari (protozoare, alge), dar numrarea celulelor mici (bacterii) este dificil,
deoarece orificiul trebuie s fie foarte mic, iar mediul nu trebuie s conin particule neanimate mici, care pot fi
uor nregistrate ca celule bacteriene.
Numrarea microorganismelor unicelulare se face prin metoda cultivrii (plate count), pentru c celulele
viabile separate spaial una de alta prin dispersie pe sau ntr-un mediu agarizat, prin cretere dau colonii vizibile
macroscopic. Metoda permite numai calculul celulelor viabile, deoarece determin numai celulele care cresc i
se divid pe un mediu de cultivare.
Culturi continui
Bacteriile prelevate n faza exponenial sau n faza staionar i transferate pe un mediu identic se divid
fr faza de laten. Aceast observaie a stat la baza realizrii sistemelor de cultur continu, n care bacteriile
se multiplic cu o rat constant, ntr-un mediu renoit cu o rat constant.
Culturile continui se realizeaz n chemostat sau n turbidostat.
Funcionarea chemostatului se bazeaz pe principiul diluiei continue a suspensiei de celule, la un volum
constant (fig. 46). Mediul proaspt de cretere este adugat cu o rat constanta in recipientul de cultivare. Cu
aceiai rat, suspensia celular este recoltat printr-un sifon de supraplin, astfel nct volumul de mediu din
recipient rmne constant. Compoziia mediului nutritiv din chemostat nu este optim, dar se pstreaz constant
i condiioneaz rata de cretere a microorganismelor, care nu este maximal. Chemostatul permite controlul
densitii celulelor i a ratei de cretere a culturii, n funcie de rata renoirii mediului, precum i modelarea
creterii microorganismelor n mediile naturale.
Turbidostatul se bazeaz pe principiul meninerii constante a densitii celulare (turbiditii) n mediul
nutritiv, nregistrat permanent de o celul fotoelectric. Cnd densitatea celular crete, celula fotoelectric
emite un semnal, rezultatul fiind deschiderea unei valve prin care mediul proaspt este trimis n recipientul de
cretere. De aici, suspensia este recoltat prin mecanismul de preaplin.
Fig. 46. Reprezentarea schematica a unui chemostat.
Densitatea optic a suspensiei este cu att mai mare cu ct lungimea de und a luminii este mai mic. Pentru a
evidenia absorbia, msurarea se face cu o surs de lumin, cu lungimea de unda mai mare de 490 nm.
Creterea diauxic. In mediile nutritive care conin dou surse glucidice se observ dou tipuri de cretere:
- uneori, curba de cretere este similar celei clasice, obinut cu o singur surs glucidic;
- alteori, curba de cretere are o denivelare. Faza exponenial observat n prima parte este urmat de un platou i o a
II-a faz exponenial, care debuteaz dup perioada de laten a platoului intermediar. Fenomenul a fost descris de
J. Monod, (1942) la E. coli, crescut pe un mediu care conine glucoz i lactoz (fig. 47).
Creterea culturii are loc n dou faze exponeniale distincte: una corespunztoare creterii pe glucoz, iar cea de
a II-a, corespunztoare creterii pe lactoz. In prima faz este utilizat glucoza. Urmeaz o perioad de lag de circa 4 ore
i apoi a doua faz de cretere, n cursul creia celulele metabolizeaz lactoza.
Fig 47. Creterea diauxic a culturii de B. Subtilis pe mediu cu glucoz si arabinoz. Glucoza este utilizat in prima perioad de
cretere i arabinoza in cea de a doua. ncetarea temporar a creterii dupa 5 ore (marcat ntre 2 sgei) reflect utilizarea complet a
glucozei si corespunde perioadei in care are loc sinteza enzimelor necesare pentru utilizarea arabinozei
(dupa Monod, 1958).
Fenomenul diauxiei apare numai pentru zaharuri metabolizabile de ctre enzimele inductibile, i nu se manifest
cnd mediul conine un amestec de zaharuri metabolizabile sub aciunea enzimelor constitutive.
Perioada de laten care urmeaz primei creteri logaritmice corespunde timpului necesar sintezei enzimelor
inductibile.
Cea mai net cretere diauxic este dat de amestecul de glucoz sau manitol (grupul A), cu arabinoz, xiloz,
sorbitol, maltoz sau lactoz (grupul B). Substraturile de tip A inhib sinteza enzimelor inductibile ce catabolizeaz
substraturile din grupul B (fenomenul represiei catabolice).
Starea fiziologic a bacteriilor n condiii naturale este mult diferit de aceea a bacteriilor cultivate. Chiar n cele
mai productive medii aquatice, bacteriile trec alternativ prin starea de eutrofie i cea de nfometare i scurtele perioade
de cretere rapid sunt ntrerupte de perioade de non-cretere. In mediile aquatice, starea normal a bacteriilor
corespunde fazei staionare a curbei tipice a evoluiei unei culturi bacteriene.
Trecerea de la faza exponenial la faza staionar este asociat cu schimbri ample ale morfologiei celulare, ale
ratei sintezei macromoleculelor i degradrii, cu modificri ale peretelui celular.
Dup un interval al strii fr cretere, celulele pot s intre ntr-o stare de laten metabolic, cu pstrarea
viabilitii, dar cu pierderea capacitii de a fi cultivate pe medii minimale.
CAPITOLUL III
NUTRIIA BACTERIAN
Pentru cretere sau supravieuire, bacteriile trebuie s gseasc n mediul ambiant, substane nutritive cu rol
energetic, cu rol structural i uneori, nutrieni specifici (factori de crestere), cu rol funcional esenial. Ele trebuie s se
gseasc n concentraii adecvate, deoarece concentraiile mari exercit efecte toxice. Unele substane au numai rol
energetic, iar altele au att rol structural ct i energetic.
Substanele energetice sunt oxidate in metabolismul celular i elibereaz energia. Ele pot fi minerale sau organice
i au rolul de donatori de electroni sau de H, n cursul reaciilor catabolice. Cunoaterea exigenelor nutritive ale diferitelor
bacterii este important pentru clasificarea bazat pe natura sursei energetice, pentru prepararea mediilor selective (cele
care conin o singur surs energetic, utilizat de unul sau de cteva tipuri de bacterii). De exemplu, un mediu sintetic
care conine numai triptofanul ca surs de carbon i energie permite creterea numai a celulelor de E. coli.
In funcie de proporia n care substanele nutritive sunt necesare, se disting dou grupe: macronutrieni i
micronutrieni.
Categoria substanelor macronutritive, cu rol structural i funcional cuprinde:
- sursa de azot, sub forma NH3 sau a srurilor de amoniu n soluie, pe care le asimileaz majoritatea bacteriilor.
Amoniul este asimilat direct n glutamin i glutamat, donorii eseniali pentru reaciile de biosintez. Din punct de
vedere energetic, procesul este cel mai convenabil. Sursele organice (aminoacizii) trebuie s fie mai nti degradate la
amoniu, iar sursele anorganice (nitratul, nitritul sau N 2) trebuie reduse la amoniu, nainte de a fi asimilate. Puine
bacterii folosesc nitratul, nitritul sau un compus azotat organic (aminoacizi, amine);
- sursa de carbon. Pentru majoritatea bacteriilor, sursa de carbon asimilabil este un substrat organic. Un numr
restrns de specii utilizeaz CO2 ca surs de carbon asimilabil. Compuii organici cu carbon au rol dublu, fiind in
acelai timp utilizai ca substrat energetic oxidabil dar i ca surs de carbon asimilabil, o parte fiind degradat pentru
a produce energie, iar o alt parte este asimilat pentru biosinteze;
- substanele minerale cele mai importante sunt: HPO42-, SO42-, Cl-, K+, Na+, Mg2+. Ionii minerali intr n alctuirea
unor enzime sau a unor molecule cu rol de coenzime.
Fosforul, sub forma fosfailor este folosit pentru sinteza acizilor nucleici i a fosfolipidelor. Majoritatea
microorganismelor utilizeaz fosfatul anorganic (PO 4), iar fosfaii organici, dei apar frecvent n natur sunt utilizai
numai dup aciunea fosfatazelor, care elibereaz fosfatul anorganic.
Sulful are rol structural, fiind component al unor aminoacizi (cisteina, metionina) i a unor vitamine (tiamina,
biotina, acidul lipoic). Sulful este preluat sub form de SO42- sau sulfid (S2-).
Potasiul are rol n activarea unor enzime, chiar a celor implicate n sinteza proteic.
Magneziul stabilizeaz ribosomii, acizii nucleici i este necesar pentru activitatea multor enzime, inclusiv a
fosfotransferazelor.
Calciul are rol n stabilizarea peretelui celular bacterian i este un component esenial al endosporului bacterian.
Sodiul este necesar pentru creterea bacteriilor halofile, n concentraii apropiate de limita solubilitii NaCl n ap.
Unele sunt oligoelemente, necesare n concentraii foarte mici (Cu, Ni, Se, Mo, Mn, Fe, Co) i sunt aduse odat cu
impuritile altor compui minerali. Ionii minerali intr n alctuirea unor enzime sau a unor molecule cu rol de coenzime.
Fierul se gsete in enzimele celulare cu rol n respiraie (citocromi).
Cobaltul este necesar numai pentru sinteza vitaminei B 12. Dac vitamina se adaug n mediu, Co nu mai este
necesar.
Zincul are rol structural in molecula unor enzime: anhidraza carbonic, alcool-dehidrogenaza, ARN- i ADNpolimeraza i influeneaz sinteza ARN. Pare s modifice i s stabilizeze membrana celulei, formnd mercaptide cu
gruprile thiol ale proteinelor i interacioneaz cu gruprile fosfat ale fosfolipidelor i COOH ale acidului sialic.
Molibdenul se gsete n enzimele denumite molibdoproteine, cu rol n reducerea asimilatorie a nitratului. Se
gsete in nitrogenaz, enzima care catalizeaz reducerea N2 n procesul fixrii biologice.
Cuprul intr n alctuirea unor enzime respiratorii.
Manganul este activator al unor enzime ce acioneaz asupra compuilor ce conin fosfat. Se gsete n unele
enzime SOD (enzime ce detoxific formele toxice ale O 2).
Nichelul intr in alctuirea hidrogenazelor, cu rol de producere sau de nglobare a H 2,
Tungstenul (Wolframul) i seleniul sunt necesare bacteriilor care cliveaz formiatul. Seleniul este parte a enzimei
formiat-dehidrogenaz.
Apa reprezint 80-90% din greutatea unor bacterii i este o component obligatorie a mediului nutritiv.
Tipuri de nutriie a microorganismelor
Tipurile trofice sau de nutriie a bacteriilor sunt condiionate direct de capacitile de biosintez. La rndul lor,
activitile biosintetice sunt expresia complexitii aparatului enzimatic celular.
Pentru a defini tipul de nutriie a unui microorganism trebuie luate in consideraie mai multe criterii:
- capacitatea de a face biosinteza metaboliilor eseniali;
- sursa dominant de energie utilizat n procesele de biosintez;
- natura substratului folosit ca sursa reductoare.
Dup natura sursei de C, care reflect capacitatea de a face biosinteza metaboliilor eseniali, bacteriile pot fi:
autotrofe
heterotrofe.
Microorganismele autotrofe folosesc CO2 ca unic sau principal surs de carbon celular, iar cele heterotrofe
folosesc substanele organice, att ca surs de carbon pentru biosinteze, ct i ca surs de energie.
Marea varietate a tipurilor nutriionale ntlnite la microorganisme nu poate fi exprimat numai n funcie de
natura sursei de carbon, fapt care a impus utilizarea unor noi criterii.
In funcie de sursa dominant de energie, bacteriile se pot grupa n dou categorii:
- cele fototrofe (fotosintetizante) utilizeaz energia fotonic (luminoas), pe care o convertesc n energie chimic, sub
forma legturilor macroergice din ATP;
- cele chemotrofe (chemosintetizante) i obin energia prin reacii de oxido-reducere ale substratului chimic organic
sau anorganic.
In funcie de natura substratului folosit ca surs reductoare (donator de H+ sau de e-), microorganismele
chemotrofe prezint dou tipuri de metabolism energetic:
- unele sunt litotrofe (litos, grec = piatr), adic utilizeaz ca donori de e -, diferite substane anorganice (H2, H2S, So,
S2O32- (tiosulfat), Fe2+, NO2-, NH3), pe care le oxideaz (la ap, sulfat, Fe 3+ i respectiv NO3), n reacii exergonice
cuplate cu sinteza ATP;
- altele sunt organotrofe, deoarece, ca donori de e- folosesc diferii compui organici.
In funcie de natura sursei de carbon, a sursei de energie i a substratului donor de potenial reductor (H sau e-)
se disting urmtoarele tipuri de nutriie:
- nutriia fotolitotrof; sursa de carbon este CO 2, cea de energie este radiaia luminoas, iar donorul de H este un
compus anorganic (H2S, S0, H2, H2O). Aceast modalitate de nutriie este caracteristic bacteriilor fotosintetizante
din familiile Chromatiaceae, Chlorobiaceae, dar i pentru grupul Cyanobacteria, care fac fotosinteza dup
mecanismul molecular al fotosintezei plantelor superioare;
- nutriie fotoorganotrof; sursa de carbon este un compus organic (acizi grai, acizi organici sau aminoacizi, glucide,
alcooli i chiar compui aromatici), care are rol i de donor de potenial reductor (H +), iar sursa de energie este
radiaia luminoas. Acest tip de nutriie este caracteristic bacteriilor purpurii nesulfuroase din familia
Rhodospirillaceae.
- nutriie chimiolitotrof; sursa predominant de carbon este CO2. Potenialul reductor este furnizat prin reaciile de
oxidare a unor compui anorganici (NH3, NO2, H2S, S0, Fe2+, H2), care au rolul de donori de protoni (H +). Nutriia
chimiolitotrof este caracteristic exclusiv unor grupe de bacterii: nitrat- i nitritbacterii, ferobacterii, bacteriile
acetogene i metanogene sau cele care oxideaz CO;
- nutriia chimioorganotrof; sursa de carbon o constituie compuii organici, care au i rol de donor de potenial
reductor. Prin oxidarea lor se elibereaz energia necesar proceselor de biosintez. Majoritatea bacteriilor sunt
chimioorganotrofe: Bacillus, Clostridium, Pseudomonas, Lactobacillus, precum i toate bacteriile patogene sau
potenial patogene.
Nutriia autotrof
Autotrofia nu se refer la natura sursei de energie folosit, ci la sursa de C. Autotrofia definete capacitatea unor
organisme de a face sinteza materiei organice din substane anorganice. Este o modalitate de nutriie a unor
microorganisme care utilizeaz CO2 ca unic sau principal surs de C, pe care l reduc la aldehid 3-fosfogliceric.
Sursele de azot sunt compui simpli: NH4+, NO2- sau chiar N2 molecular.
Bacteriile autotrofe (fotolitotrofe i chimiolitotrofe) au capaciti mari de biosintez. Ele sintetizeaz toi
metaboliii necesari, pornind de la surse anorganice de carbon i azot.
Energia necesar reducerii CO2 la compui organici este eliberat prin oxidarea unor compui anorganici: CO, NH 3,
NO2, Fe2+, H2S, So, S2O32-, H2 sau este chiar energia luminoas. Energia eliberat prin oxidarea compuilor chimici
anorganici sau cea luminoas este stocat n ATP i utilizat pentru reaciile de reducere.
Fotosinteza
Fotosinteza este procesul biologic de transformare a energiei luminoase, n energie de legtur chimic, utilizabil
n reaciile de biosintez. Organismele fotosintetizante datoreaz aceast capacitate, prezenei unor pigmeni sensibili la
lumin, denumii clorofile.
Majoritatea organismelor fotosintetizante sunt autotrofe, capabile s utilizeze CO2 ca singur surs de carbon.
Energia luminoas este convertit ntr-o serie de reacii, n energie chimic sub forma ATP i a potenialului
reductor sub forma NADPH. Cele dou tipuri de molecule, ntr-o succesiune de reacii, convertesc CO 2 la glucoz, dup
urmtoarea reacie global:
Fotosinteza este rezultatul a dou tipuri de reacii: reacii fotochimice la lumin i reacii la ntuneric.
Reaciile la lumin. Clorofila absoarbe energia luminoas i o convertete n energie chimic sub form de ATP i
de NADPH ca potenial reductor al CO 2 (fig. 48). Molecula de clorofil excitat i energizat dup absorbia cuantei de
lumin, elibereaz un e-, care este acceptat indirect * de feredoxin sau de bacteriofeofitin (o bacterioclorofil a, fr Mg),
ambele puternic reductoare, cu potenial redox sczut.
Transferul de electroni de la clorofil, la unul dintre reductori constituie treapta conversiei luminoase n energie
chimic.
*
Acceptorul primar de e-, al fotosistemului I nu a fost identificat. Ar putea fi un radical liber al clorofilei a. Acceptorul primar devine
un reductor suficient de puternic pentru a reduce feredoxina, care la rndul ei reduce NADP+ la NADP.
Sarcina pozitiv a moleculei de clorofil oxidat (dup pierderea unui e -) este neutralizat de un alt e -, originar
dintr-un citocrom situat pe cealalt fa a membranei. Astfel, ntre citocromul oxidat i feredoxina redus se creeaz o
mare diferen de potenial electrochimic, a crui energie poate fi utilizat n dou moduri:
- pentru a converti ADP la ATP, prin intermediul transportorilor de e -;
- pentru reducerea NADP la NADPH, utilizabil n reaciile de biosintez.
In reaciile la ntuneric, energia stocat n ATP i NADPH este utilizat pentru a converti CO 2 i H+ n glucoz i
H2O:
Fig. 48. Reprezentarea schematic a reaciilor la lumin i la ntuneric.
In fotosinteza plantelor superioare i a cianobacteriilor, e- pierdut de molecula de clorofil este recuperat pe seama
oxidrii apei;
Rezultatul net al fotosintezei oxigenice este transferul ionilor de H + din molecula apei, la CO2, printr-un proces
de oxido-reducere n care apa este oxidat, iar CO2 este redus.
Potenialul redox al apei este + 0,81 V, net pozitiv fa de 0,42 V al acceptorului intermediar necunoscut. De
aceea, transferul de e- nu se poate face direct ntre H 2O i CO2. H2O nu poate reduce CO2, dar nici nu poate fi oxidat de
CO2.
Energia furnizat de o singur cuant de lumin nu este suficient acestui proces. Este necesar energia furnizat
de dou cuante, prin excitarea a doi centri de reacie la lumin. Cei doi centri de reacie ai clorofilei fotoactivate sunt
legai n serie ca o pereche de baterii electrice i formeaz fotosistemele I i II. Ei absorb radiaii luminoase cu lungimi de
und uor diferite. Fotosistemul I al clorofilei, denumit P 700, absoarbe radiaiile din domeniul rou ndeprtat, iar
fotosistemul II, (P680) absoarbe radiaiile cu lungime de und mai scurt. Ambele fotosisteme sunt variante ale clorofilei a .
Fotosistemul I realizeaz un transport ciclic al e- , n cursul cruia se sintetizeaz ATP i se genereaz NADPH
(fotofosforilare ciclic). Circuitul e- este ciclic, adic e- se rentorc pe molecula clorofilian de origine, dup ce au parcurs
un traseu format din cupluri redox.
Fotosistemul II are ca funcie principal, fotoliza apei i particip la procesul de fotofosforilare neciclic.
Electronii neciclici pierdui de molecula de clorofil sunt nlocuii cu e- din ionii OH-, rezultai prin fotoliza apei.
Molecula de clorofil P680, excitat de o cuant de lumin, reduce un intermediar necunoscut (probabil feofitina a o
clorofil a fr atomul de Mg). Electronii nu se mai ntorc pe molecula de origine a fotosistemului II, ci intr n circuitul
fotosistemului I (fig. 49).
Fig. 49. Schema Z a fluxului de electroni n fotosinteza oxigenic a plantelor, algelor i a cianobacteriilor. Cele dou fotosisteme (I
i II) sunt legate n serie. I = acceptorul intermediar neidentificat al fotosistemului II ; PQ = plastoquinona ; Cit = citocrom ; X =
acceptorul neidentificat al electronilor n fotosistemul I; Fd = feredoxina ;. P680 i P700 sunt centrii clorofilieni de reacie ai
fotosistemului II i respectiv I (dup Brock, 1988).
Cianobacteriile realizeaz o fotosintez oxigenic, asemntoare ca mecanism, cu a plantelor superioare. Celulele

vegetative posed ambele fotosisteme (I i II), iar heterochitii au numai fotosistemul I (nu fotolizeaz apa).
Cele dou fotosisteme, n mod normal funcioneaz corelat. In anumite condiii, unele cianobacterii realizeaz o
fotosintez anoxigenic, prin funcionarea numai a fotosistemului I, obinnd potenialul reductor din alte surse dect apa
(ca i bacteriile verzi i purpurii). Reducerea CO 2 are loc n condiii de anaerobioz. Ca donori de e - folosesc H2S (pe care-l
oxideaz la So extracelular) sau folosesc H2 pe care-l oxideaz sub aciunea unei hidrogenaze de nglobare. Potenialul
reductor rezultat de oxidarea H2S sau H2 reduce NADP la NADPH.
In condiii naturale, H2S este un inhibitor al fotosistemului II i al fotosintezei oxigenice, dar induce sinteza unei
enzime care permite cuplarea reducerii fotosintetice a CO 2, cu oxidarea H2S la So. Aceast reacie are loc n celulele de
Oscillatoria limnetica, care face numai fotosintez anoxigenic.
Fotosinteza bacterian
Bacteriile fotosintetizante sulfuroase verzi (familia Chlorobiaceae, g. Chlorobium) sunt strict anaerobe i folosesc
H2S ca donor de e-. Rezult So, pe care l oxideaz la sulfat. Nu conin niciodat incluzii celulare de S o. Reacia global a
oxidrii H2S este urmtoarea:
Bacteriile
fotosintetizante
purpurii
sunt
sulfuroase
(Thiorhodaceae
=
Chromatiaceae)
i
nesulfuroase(Athiorhodaceae = Rhodospirillaceae).
Bacteriile sulfuroase purpurii (Chromatiaceae) oxideaz H2S, la So elementar, pe care-l depoziteaz n spaiul
periplasmic. Dup epuizarea H2S, So este oxidat la SO42-. Ele oxideaz i ali compui ai S, n special tiosulfatul (S2O32-), H2
i chiar substraturi organice (acizi dicarboxilici, acizi grasi, piruvatul). Ultimii au rolul nu numai de donori de e-, ci sunt
utilizai si ca surse secundare de carbon, sursa principal rmnnd CO 2.
Bacteriile sulfuroase purpurii se gsesc n zonele anoxice iluminate ale mediilor aquatice unde se acumuleaz
H2S, precum i n izvoarele sulfuroase care conin H 2S de origine biologic sau geochimic.
Mediile cele mai favorabile pentru dezvoltarea bacteriilor sulfuroase sunt lacurile meromictice (permanent
stratificate), datorit densitii diferite a apei: n stratul inferior apa este salin, iar n partea superioar este ap dulce.
Dac n stratul inferior este o concentraie suficient de SO 42-, prin reducerea respiratorie (anaerob) se formeaz H 2S, care
difuzeaz spre zona iluminat, unde se dezvolt bacteriile sulfuroase purpurii i verzi.
Bacteriile purpurii nesulfuroase (Rhodospirillaceae) n absena luminii oxideaz H2, sau diferii compui organici
(acizi organici, alcooli, glucide, compui aromatici), pe care i utilizeaz att ca donori de e- ct i ca surse de carbon. In
anoxie realizeaz un metabolism anaerob sau de tip fermentativ, iar n aerobioz au un metabolism respirator. S-au
denumit nesulfuroase deoarece s-a considerat c nu pot utiliza H 2S ca donor de potenial reductor pentru reducerea
CO2. Ulterior s-a evideniat c majoritatea speciilor utilizeaz H 2S, dar tolereaz concentraii mai mici. La lumin sunt
fotoorganotrofe i cresc n condiii de anaerobioz. Pentru nutriia fototrof necesit aceiai compui organici (acizi
organici, alcooli, glucide, compui aromatici)
Bacteriile fotosintetizante posed un pigment fotosintetic particular, denumit bacterioclorofil, repartizat n mici
uniti elementare denumite cromatofori, dispersai n citoplasma bacterian.
In fotosinteza bacterian, conversia cuantei de lumin n energie de legtur chimic evolueaz ca o
fotofosforilare ciclic, n care se sintetizeaz ATP i se genereaz baze nucleotidice piridinice reduse (NADPH). Sinteza
ATP i generarea NADPH implic transportul e- printr-o caten de transport, localizat n membranele suport ale
pigmenilor fotosintetizani. Transportorii de e - ai catenei au localizare membranar i sunt cuplai n serie, n ordinea
creterii potenialului redox. Unele componente ale catenei de transport al e- n fotosintez se regsesc n catena de
respiraie.
In fotosinteza bacterian, transportul e- este ciclic. Fluxul de e- i are originea n molecula de bacterioclorofil.
Clorofila n repaus are un potenial redox pozitiv i trebuie s reduc o molecul acceptoare cu potenial redox
foarte sczut. Este un transfer mpotriva gradientului termodinamic.
Absorbia unei cuante de lumin mrete potenialul energetic al clorofilei i o transform ntr-un reductor
puternic. Electronul moleculei de clorofil este cedat unui acceptor intermediar neidentificat (probabil, bacteriofitinei a, o
bacterioclorofil a fr Mg). Intermediarul este un reductor puternic (cu potenial redox negativ) i transfer e- unor
componente cu poteniale redox progresiv mai mici (quinona, citocromi). Transferul este nsoit de eliberarea energiei.
Sub aciunea ATP-azei, care cupleaz scderea potenialului redox, cu sinteza ATP, energia este stocat n molecula de
ATP. Electronul se rentoarce pe molecula de origine i o readuce la potenialul redox iniial.
Centrul de reacie al bacterioclorofilei este echivalent fotosistemului I de la plantele superioare i de la
cianobacterii.
Pentru fixarea CO2, energia furnizata de ATP sintetizat sub actiunea ATP-azei nu este suficient. Reducerea CO2
necesit un potenial reductor sub forma NADPH. Dar bacteriile nu fac fotoliza apei. NADPH este furnizat prin oxidarea
compuilor redui ai S (H2S, Na2S2O32-, So), a H2 sau a compuilor organici (succinat, malat, butirat). Toate aceste molecule
au un potenial redox negativ, dar mai puin negativ dect al cuplului NADP/NADPH. Oxidarea lor este cuplat cu
generarea NADPH. Electronii rezultai din oxidarea lor intr n catena de transport a fotosintezei, la nivelul citocromilor i
reduc NADP la NADPH, cu consum de ATP.
Transportul e- de la donorii exogeni la un acceptor (NADP +), cu potenial redox foarte sczut se numete
transport inversat. El are loc cu consum de ATP i este necesar fixrii reductive a CO 2. ATP necesar reducerii NADP la
NADPH corespunde consumului energetic al reducerii CO 2. De exemplu, creterea n prezena H2S este nsoit de
formarea S elementar, care rmne la exteriorul celulelor bacteriene sulfuroase verzi sau este depozitat intracelular de cele
purpurii (fig. 50).
Fig. 50. Fluxul de electroni n fotosinteza anoxigenic a bacteriilor. P870 = centrul de reacie al bacterioclorofilei;
Bph = bacteriofeofitina; Q = quinona; Cit = citocrom (dup Brock, 1988)
Fotosinteza bacterian este un proces foarte restrns n natur, dar probabil a fost foarte important in atmosfera
primar a planetei, lipsit de O2, bogat n H2 i a contribuit la acumularea substanelor organice.
Nutriia chimiolitotrof
Nutriia chimiolitotrof, cunoscut exclusiv la bacterii, are un rol deosebit de important n natur, deoarece
reoxideaz anumii compui minerali i i reintegreaz n circuitul natural. Procesele de oxidare a unor substraturi
anorganice sunt specifice anumitor tipuri de bacterii specializate sub raport fiziologic, Gram negative, adeseori mobile,
unele strict aerobe.
Substratul anorganic oxidat are rolul de surs de e- (potenial reductor), pentru reducerea CO 2, utilizat ca surs de
carbon. Acceptorul final de e- este O2. Metabolismul chimiolitotrof de obicei implic procese respiratorii aerobe.
Chimiolitotrofele au caten transportoare de e - asemntoare cu acelea ale chimioorganotrofelor i genereaz fora protonmotrice care determin sinteza ATP.
Fig. 51. Reprezentarea schematic a fluxului de electroni i a CO2 la bacteriile chimiolitotrofe.
Bacteriile care oxideaz hidrogenul (hidrogen-bacteriile)

H2 este substratul pentru creterea unei mari diversiti de bacterii. Cele H 2-oxidante (Pseudomonas, Alcaligenes
etc.) cresc cu H2 i CO2 ca unic surs de energie i respectiv C, n prezena O 2. Sunt litotrofe facultative deoarece
bacteriile hidrogen-oxidante comut alternativ ntre metabolismul chimiolitotrof i cel chimio-organotrof deoarece cresc
pe o gam larg de substraturi organice, pe care le oxideaz i le utilizeaz ca donori de e- i ca surse de carbon, dar
totdeauna i pstreaz capacitatea de nutriie chimiolitotrof prin oxidarea H 2 i de a face asimilarea reductiv a CO 2 pe
calea ciclului Calvin (calea ribulozo-fosfatului), dup urmtoarea reacie global:
H2 este oxidat, iar O2 este acceptorul final de e-, dup reacia global:
Cele mai multe hidrogen-bacterii cresc chimioautotrof prin oxidarea H 2 n condiii de microaerobie(5-10% O 2),
deoarece hidrogenazele sunt sensibile la O2.
Energia rezultat este folosit pentru reducerea CO 2 la compui organici.
Organismele care folosesc un compus anorganic ca surs de energie i un compus organic ca surs de carbon se
numesc mixotrofe.
Cnd cresc autrotrof, hidrogen-bacteriile fixeaz CO 2 prin seria de reacii a ciclului Calvin, iar cnd cresc
heterotrof, enzimele ciclului Calvin sunt represate i se induce sinteza enzimelor implicate n oxidarea compusului
organic.
Hidrogen-bacteriile conin totdeauna n echipamentul lor enzimatic, una sau dou hidrogenaze*, enzime care leag
H2 i l oxideaz, fie pentru a produce ATP sau l utilizeaz ca potenial reductor pentru creterea autotrof.
*
In funcie de metalele componente ale situsului activ, hidrogenazele sunt clasificate n 3 grupe: cu NiFe, cu Fe si fr metale.
Majoritatea hidrogenazelor bacteriene conin NiFe.
Unele sunt hidrogenaze legate de membrana citoplasmatic (sau particulate), iar altele au localizare
citoplasmatic (sau solubile).
Hidrogenazele legate de membran au rol n metabolismul energetic. Dup legarea H2 la situsul activ al enzimei,
molecula este oxidat, protonii sunt transferai pe catena de respiraie pn la O 2.
Hidrogenazele citoplasmatice au rol n generarea potenialului reductor pentru creterea autotrof. Ele preiau H 2 i
reduc NAD+ la NADH. Acesta este fosforilat, iar NADPH este utilizat ca reductor n ciclul Calvin.
Uneori hidrogenaza este bidirecional: oxideaz H 2 i rezult H+ sau reduce H+ i rezult H2
Hidrogenazele oxideaz H2 numai la concentraii mai mari dect cele din atmosfer: n rizosfera plantelor de orez,
n izvoarele geotermale, n platformele de material vegetal n descompunere, n nodozitile fixatoare de N 2, pentru c
bacteroizii nu au Hup (hidrogenaza de nglobare). Toate bacteriile fixatoare de N 2 au o hidrogenaz care oxideaz H 2. Ele
contribuie la diminuarea pierderii potenialului reductor sub form de H 2 n nodozitile fixatoare de N 2 ale rdcinilor
plantelor leguminoase. Rolul ei este de a readuce n fluxul energetic al celulei, H 2 care rezult din activitatea nitrogenazei.
H2 este utilizat ca substrat pentru cretere de diferite bacterii anaerobe, n special metanogene, pentru c este
precursor al CH4, n solul anoxic. Multe bacterii heterotrofe oxideaz H 2, folosindu-l ca potenial reductor, dar nu ca
unic surs de energie (de exemplu, E. coli, Azospirillum).
Bacteriile carboxidotrofe. CO este un poluant atmosferic*. Degajarea CO din gazele de ardere ale automobilelor,
din arderea incomplet a combustibililor fosili i din catabolismul ligninei se produce n mediul aerob. Contribuia
sistemelor biologice la producerea CO este minor.
La om, expunerea la nivelul urban al CO (100 ppm) i formiat provoac simptome variate, interpretate greit ca viroze respiratorii.
Toxicitatea acut se produce consecutiv expunerii la concentraii mai mari, prin acumularea produselor de ardere n spaii nchise. CO
are afinitate special pentru atomii de metal legai de proteine. Toxicitatea CO pentru om se atribuie afinitii nalte pentru toate
proteinele ce conin Fe hemic, scznd capacitatea hemoglobinei de a lega O 2. CO este inhibitor al enzimelor cu Fe nehemic, inclusiv
hidrogenaza i nitrogenaza. Mamiferele produc CO endogen prin degradarea hemului. Hbg discrimineaz ntre CO endogen i exogen.
Fr discriminare, CO de origine endogen s-ar lega cu 20% din proteinele cu hem din organism.
*
Indeprtarea CO este, n primul rnd, rezultatul oxidrii fotochimice, dar este utilizat ntr-o msur semnificativ
de ctre microorganisme. Unele hidrogen-bacterii, un grup fiziologic foarte specializat, folosesc CO ca unic surs de
energie i l oxideaz sub aciunea carbon-monoxid-dehidrogenazei (enzim cu Mo), la CO2, pe care l fixeaz n reaciile
ciclului Calvin. Electronii care deriv din oxidarea CO intr n catena transportoare, la nivelul creia se sintetizeaz ATP.
S-au definit dou sisteme microbiene care utilizeaz CO: unul aerob i altul anaerob. Deoarece CO are afinitate
mare pentru Fe diferitelor enzime, bacteriile carboxidotrofe aerobe (Ps.carboxydomonas, Alcaligenes carboxydomonas)
cupleaz oxidarea CO, cu respiraia insensibil la CO, dup reacia global:
Enzima care oxideaz CO conine Mo. Consumul CO de ctre microorganisme este un proces ecologic foarte
semnificativ, deoarece o cantitate mare de CO este generat din diferite surse, dar concentraia sa n aerul atmosferic n-a
crescut corespunztor. Bacteriile carboxidotrofe din straturile superficiale ale solului reprezint probabil cea mai
semnificativ capcan pentru CO n natur.
Alte bacterii care oxideaz CO sunt cele acetogene. Ele catalizeaz aceiai reacie, cu o enzim (COdehidrogenaz) ce conine Ni, enzim care se gsete i la bacteriile sulfat-reductoare.
CO este consumat de bacteriile metanogene care au CO-dehidrogenaz cu Ni i de bacteriile fototrofe care
hidrolizeaz CO cu H2O i rezult H2 + CO2.
In afar de oxidarea bacterian, CO poate fi oxidat de monooxigenaze, fr s fie folosit pentru creterea
bacterian.
Bacteriile metanogene
Unele bacterii metanogene oxideaz H 2 i utilizeaz e- i energia rezultat pentru reducerea CO 2, la compui
glucidici i CH4. Sunt organisme strict anaerobe.
Metanul este cel mai redus compus organic i este rezultatul final al reaciilor de reducere pe care le realizeaz
bacteriile metanogene. Procesul are loc n mediile anaerobe: rumenul ierbivorelor, intestinul terminal al termitelor, n
digestoarele (bazinele instalaiilor n care se face epurarea) de ape menajere, n sedimentele apelor marine i dulci.
O trstur fiziologic important a metanogenelor este aceea c folosesc un numr limitat de substraturi simple
pentru metanogenez i au necesar crescut de Ni.
Unele metanogene, folosesc numai amestecul de H 2 i CO2, dar multe oxideaz formiatul, iar cteva oxideaz
CH3COOH, CH3OH sau CH3NH2 (metilamina), dar nu folosesc CO2 i H2.
Bacteriile metanogene din g. Methanobacterium, Methanosarcina, Methanospirillum) produc metan printr-o
reacie definitorie i caracteristic grupului: reducerea CO 2 ntr-o reacie n care H 2 este utilizat ca donor de e-. H2 este
oxidat ntr-o reacie productoare de energie:
Circa l/3 din cantitatea de CH4 produs n natur se formeaz prin aceast reacie, restul avnd originea n grupul
metil al acetatului.
Metanobacteriile sunt chimiolitotrofe, deoarece se dezvolt ntr-un mediu care conine o soluie mineral apoas
i o atmosfer format din CO2 i H2. Mecanismele reducerii CO2 pentru sinteza compuilor organici nu se cunosc.
Bacteriile metanogene produc CH4 nu numai prin reducerea CO2, ci i prin oxidarea unor substraturi organice,
precursoare directe ale CH4:
Formiatul este un substrat energetic utilizat de multe bacterii metanogene, rezultnd prin clivarea piruvatului la
acetil-CoA i formiat. Formiatul nefiind un precursor direct al metanului, este mai nti oxidat la CO 2 i H2 :
In cea de a II-a treapt, CO2 este redus la CH4.

Cele mai bune substraturi naturale pentru producerea CH 4 sunt CO2, H2 i acetatul.
Metanogenele utilizeaz H2 de origine abiogen, component al fluidului geotermal.

Alt surs abiogen de H2 este Fe metalic, care sufer spontan reacia chimic:
In mediile naturale, CH4 i CO2 se formeaz ca rezultat al degradrii materiei organice n condiii anoxice i cu
cantitate limitat de NO3-, SO4- sau Fe3+.
Metanogeneza este un proces tipic de acceptare a e - terminali n procesele de descompunere a materiei organice
din apele dulci, din mlatini, orezrii, din tractul digestiv al rumegtoarelor.
CH4 este rezultatul cooperrii metabolice a cel puin trei grupe fiziologice de bacterii ce formeaz un lan trofic, n
care acetatul este principalul intermediar metabolic: bacterii fermentative primare, secundare i dou tipuri de
metanogene.
Intr-o prim etap, polimerii (polizaharide, proteine, acizi nucleici, lipide) sunt convertii la oligomeri i
monomeri (glucide, aminoacizi, purine, pirimidine, acizi grai i glicerol) sub aciunea enzimelor hidrolitice extracelulare,
produse de bacteriile fermentative primare. Ele fermenteaz monomerii rezultai, la acizi grai, succinat, acetat, lactat,
alcooli. Unele produse de fermentaie (acetatul, H 2, CO2 i ali compui C1) pot fi convertii direct de bacteriile metanogene
la CH4 i CO2.
Degradarea altor produse de fermentaie (acizii organici cu caten mai lung de 2 atomi de C, alcoolii care conin
mai mult dect un atom de C i a compuilor aromatici), este catalizat de fermentatorii secundari, reprezentai de
bacteriile sulfat reductoare. Ele convertesc substratul la acetat, CO2, H2 i uneori formiat, pe care le utilizeaz
metanogenele.
Bacteriile metanogene realizeaz treapta final a lanului trofic anaerob, producnd CH 4 din, acetat sau din CO2 i
H2. Din aceast cauz, n cele mai multe habitate, metanogenele depind de convieuirea n asociaii cu alte bacterii
anaerobe care convertesc materia organic complex la precursorii metanului.
Degradarea substanei organice cu formare de CH 4 este un proces care elibereaz o cantitate mic de energie,
comparativ cu respiraia aerob sau anaerob, pentru c metanogeneza este ultima treapt care are loc dup ce au fost
redui ali acceptori de e-. CH4 ca produs de fermentaie, depoziteaz o parte important a energiei disponibile n substratul
iniial, care este eliberat prin oxidarea aerob a CH 4 de ctre bacteriile metan-oxidante.
Cantitatea mic de E disponibil pentru conversia materiei organice la CH 4, oblig microorganismele participante
la o cooperare foarte eficient. Cooperarea lor este att de accentuat, nct nu pot exista unele fr altele i se numete
relaie sintrofic.
Avantajul este c organismele sunt specializate metabolic, dar eficiena metabolic a asociaiei depinde de
eficiena transferului metaboliilor ntre parteneri: fluxul H 2 ntre cele care-l produc i metanogenele care-l consum este
invers proporional cu distana dintre ele. Transferul optim al metaboliilor se face cnd cei doi parteneri se gsesc n
contact strns, adic sunt ataai unul de cellalt i formeaz un agregat celular sau flocon. Astfel de flocoane se formeaz
n digestoarele anaerobe ale apelor uzate, n care sunt degradai acizii grai.
Importana ecologic a bacteriilor metanogene
Bacteriile metanogene realizeaz importante reacii terminale n habitatele anaerobe, modificnd semnificativ
proporia produselor finale ale proceselor fermentative. Ele intr n competiie cu alte bacterii consumatoare de H 2: cu cele
sulfat-reductoare i cu cele acetogene.
Analiza gazelor coninute n stratul de ghea din Groenlanda arat c valoarea concentraiei atmosferice a CH 4 a
fost stabil (0,7 ppm) pe o perioad de circa l0 milenii, dar a crescut constant n ultimii l50-250 de ani, ajungnd la l,6
ppm.
CH4 produce un puternic efect de ser. Dei reprezint numai 0,5% din cantitatea de CO 2, CH4 contribuie cu circa
25% din efectul de ser.
CH4 are rol n reaciile chimice din stratosfer, care duc la formarea i distrugerea O3.
Sursele de CH4 sunt biogene i abiogene. O contribuie deosebit o au bacteriile metanogene din rumenul
rumegtoarelor, ca i descompunerea deeurilor menajere i vegetale. Orezriile, ca i inuturile naturale umede (turbriile,
tundra) sunt surse importante de CH 4. Recuperarea i arderea CH4 rezultat din degradarea materiei organice ar duce la
creterea concentraiei atmosferice a CO2, un gaz cu un efect de ser mult mai sczut.
Sursele abiogene de H2 stimuleaz producerea biogen a CH 4: H2 din ariile geotermale i cel rezultat din reacia
chimic spontan a Feo metalic cu protonii:
Metanul atmosferic este rezultatul unor activiti umane nebiogene: exploatarea minier a crbunelui.
Bacteriile care oxideaz sulful i compuii si

Sulful este un element important pentru nutriia microorganismelor, att sub forma sa cea mai oxidat (SO 42-), ct
i cea mai redus (S2- din H2S sau din sulfuri), dar i n forma sa intermediar de S elementar (S o). Conversia S de la o
form chimic la alta este predominant, rezultatul activitii bacteriene.
Se disting 2 clase de bacterii chimiolitotrofe care oxideaz compuii redui ai S:
- cele care cresc la pH neutru
- cele care cresc la pH acid. Unele dintre acidofile pot folosi i Fe 2+ ca donor de e-.
Compuii cu S cei mai folosii ca donori de e- n nutriia chimiolitotrof sunt:
In aceste reacii se elibereaz cantiti mari de E. O parte genereaz fora proton-motrice, utilizat n sinteza ATP.
In reaciile de oxidare a H2S, So i S2O32-, unul dintre produse este H+. Se formeaz H2SO4 i pH scade chiar sub
valoarea 1.
Prin oxidarea H2S (forma cea mai redus a S) se formeaz S o foarte instabil. Unele bacterii care oxideaz H 2S
depun So sub forma incluziilor citoplasmatice. So constituie rezerva de energie, deoarece dup epuizarea H 2S, celula i
obine energia prin oxidarea So din incluzii.
So adugat n mediu este utilizat ca donor de e-. Bacteriile sulfuroase cresc ataate pe particula de S, datorit
insolubilitii So i i obin energia prin oxidarea atomilor de sulf. Progresiv, pe msur ce este oxidat, particula de sulf
trece n soluie.
In condiii de autotrofie, bacteriile sulfuroase fixeaz CO 2 pe calea ciclului Calvin.
Bacteriile sulf-oxidante (Beggiatoa, Thiobacillus )sunt chimiolitotrofe facultative, deoarece se pot dezvolta i
organotrof n prezena unor substraturi organice. Beggiatoa oxideaz H2S din apele uzate i acumuleaz granule de So n
citoplasm, pe care l poate oxida la SO 42-. Sursa de C este reprezentat de compuii organici. Cresc organotrof n rizosfera
plantelor din mediile inundate (orez), anoxice, la grania dintre mediul anoxic al solului i mediul aerob al rdcinii, unde
oxideaz H2S, avnd rol benefic pentru plant. Plantele favorizeaz creterea bacteriei n rizosfer, datorit producerii
catalazei.
Beggiatoa, Sphaerotilus formeaz flocoane laxe si produc fenomenul de umflare a nmolului activ atunci cnd
devin preponderente fa de bacteriile zoogleale.
Unele bacterii sulf-oxidante cresc numai in condiii de mixotrofie. Ca surs de energie folosesc H 2S i un compus
organic.
Bacteriile care oxideaz compuii fierului
Oxidarea aerob a Fe, de la starea feroas (Fe 2+) la cea feric (Fe3+) este o reacie furnizoare de energie pentru
unele bacterii.
Bacteriile din g. Gallionella, Thiobacillus ferrooxidans oxideaz Fe2+ la Fe3+. Cantitatea de energia rezultat din
acest proces este mic, fiind folosit pentru fixarea CO 2. De aceea, bacteriile ferice trebuie s oxideze o cantitate mare de
Fe2+ pentru cretere. Facultativ sunt organotrofe.
Fe3+ formeaz un precipitat (Fe(OH) 3), insolubil n ap. Bacteriile care oxideaz compuii Fe, oxideaz i compuii
S i sunt acidofile obligate, pentru c la pH neutru, n condiii aerobe, Fe 2+ este insolubil i foarte instabil, deoarece se
oxideaz spontan la Fe 3+.
La pH neutru, Fe2+ este stabil numai n condiii de anaerobioz. La pH acid, Fe 2+ este stabil i solubil n ap. De
aceea, bacteriile care oxideaz compuii Fe sunt acidofile obligate.
Cea mai cunoscut bacterie chimiolitotrof care oxideaz att compuii Fe ct i ai S este Th. ferooxidans, foarte
comun n apele acide.
Pirita (FeS2) este principala surs de Fe2+ i oxidarea sa este benefic n practica mineritului deoarece reacia
elibereaz Fe, dar este dezastruoas din punct de vedere ecologic pentru c acidific mediul.
Compuii Fe i ai S sunt oxidai de Sulfolobus (Archaea), n izvoarele termale acide, n izvoarele de min, la
temperaturi de pn la l00o. Oxideaz Fe2+, H2S, So i diferii compui organici. Crete autotrof i heterotrof.
Bacteriile care oxideaz amoniacul i nitritul
Cei mai comuni compui anorganici, utilizai ca donori de e- sunt NH4+ i nitritul (NO2-), fiind oxidai n aerobioz
de bacteriile nitrificatoare, cu o larg distribuie n sol.
NH3 rezultat n procesul de amonificare este oxidat de microorganisme, la nitrai, forma utilizabil a compuilor
cu azot, de majoritatea plantelor i microorganismelor. Oxidarea NH 3 la nitrai este un proces biologic complex, denumit
nitrificare, realizat de bacterii chemolitotrofe obligat aerobe, care nu tolereaz prezena substanelor organice n mediul de
cretere. Efectul lor pare a fi chiar toxic, deoarece inhib creterea autotrof.
Oxidarea biologic a NH3 la nitrai se desfoar n trepte:
- n prima etap, NH3 este oxidat la nitrii, de ctre nitritbacterii (Nitrosomonas, Nitrospira, Nitrosolobus):
In reacie, cei doi e - sunt necesari pentru reducerea unui atom de oxigen, la H 2O. Amoniacul este oxidat de
amonium-monooxigenaz (protein membranar). Se formeaz NH 2OH (hidroxilamin) i H2O, iar hidroxilaminreductaza (enzim periplasmic) oxideaz NH2OH la NO2-, elibernd 4 e- (nitritarea).
n etapa a II-a, nitriii sunt oxidai la nitrai, de ctre nitratbacterii (Nitrobacter):
Cea mai mare parte a energiei este eliberat n prima etap. Oxidarea NH3 i a NO2 furnizeaz potenialul
reductor necesar fixrii CO 2(sursa major de C) pe calea ciclului Calvin. O 2 este acceptorul final de e-. Nitrit- i nitratbacteriile triesc in asociaii strnse n sol i au rol important n fertilitatea acestuia.
Bacteriile amonium-oxidante au capacitatea de a oxida i ali compui: CO, CH 3OH, CH4, hidroxil-amina,
propilenul, fenolul etc. Cele mai multe din aceste reacii sunt catalizate de AMO sau de metan-monooxigenaz (MMO).
Cele dou enzime au proprieti comune.
Oxidarea anaerob a NH4+. Organisme neidentificate, care triesc n apa menajer uzat, n condiii de anaerobie
i cu un supliment de NO3- pentru stimularea denitrificrii, oxideaz NH 4+ la N2:
Reacia anamox este foarte exergonic. Descoperirea anamox a discreditat ideia mai veche c amoniul este stabil
n condiii anaerobe i c ar fi oxidat numai de bacteriile aerobe nitrificatoare.
Oxidarea unora dintre compuii anorganici (H 2, NH3, NO2) este realizat i de unele bacterii chimioorganotrofe
(heterotrofe), dar ele nu cresc pe medii anorganice deoarece nu pot utiliza CO 2 ca surs de carbon. Din aparatul lor
enzimatic lipsesc enzimele ciclului Calvin.
Deoarece moleculele anorganice pe care le oxideaz conin o cantitate mic de energie, microorganismele
chimiolitotrofe se dezvolt anevoios i furnizeaz o mas celular srac. Pe de alt parte, fixarea reductiv a CO 2 n ciclul
Calvin necesit un potenial reductor ridicat, pentru a aduce C din CO 2, la nvelul de oxidare caracteristic glucidelor.
Chimiolitotrofia este o proprietate fiziologic excepional, prezent numai la procariote. Bacteriile
chimiolitotrofe convertesc CO2 la compui organici, n absena procesului fotosintetic.
Fixarea CO2 la chimiolitotrofe. Ciclul Calvin
Calea principal prin care CO2 este ncorporat n substane organice a fost descris de Calvin, Benson si Basshan
(l946), la algele verzi unicelulare Chlorella pyrenoidosa i Scenedesmus obliquus, utiliznd CO2 marcat cu Cl4. Ciclul lui
Calvin este cunoscut i sub denumirea de ciclul ribulozodifosfatului (RuDP).
Toate organismele necesit carbon pentru sintezele celulare. Chiar i la heterotrofe, o parte a atomilor de carbon i
are originea n CO2. La autotrofe, tot carbonul organic provine din fixarea CO2.
Fixarea CO2 n ciclul Calvin are loc ntr-o serie de reacii ciclice, la ntuneric, utiliznd ATP i potenialul
reductor sub forma NADPH, generate n reaciile de fotosintez (la lumin) sau n cursul proceselor de oxidare a
substratului anorganic.
Reaciile ciclului Calvin (fig. 53) sunt cunoscute i sub denumirea de ciclul reductiv al pentozelor. Procesul fixrii
CO2 se desfoar n 4 faze (fig. 52):
Fig 52. Reaciile enzimatice eseniale ale ciclului Calvin. a. Reacia catalizat de ribulozo-difosfat-carboxilaza. b. Treptele conversiei
acidului 3-fosfogliceric la gliceraldehid-3-fosfat. c. Conversia ribulozo-5-fosfatului la ribulozo-difosfat, catalizat de
fosforibulokinaza (dup Brock, 1988).
Enzima cheie a ciclului este ribulozo-1,5-difosfat carboxilaza ce catalizeaz reacia dintre CO 2 i ribulozo-difosfat.
Se formeaz doua molecule de acid fosfogliceric. Atomul de C al CO 2 este ncorporat n una din cele dou molecule de
acid fosfogliceric.
In faza a II-a acidul fosfogliceric este redus la gliceraldehid-3P:
In faza de regenerare, atomul de C ajunge la nivelul reducerii din glucide:
In faza de sintez a materialului celular se sintetizeaz glucide din acid 3-fosfogliceric.
Fig. 53. Schema ciclului Calvin. Pentru fiecare 6 molecule de CO2 fixate, este produs o molecul de fructozo-6-fosfat.
In reaciile la lumin, ATP i NADPH produse n exces sunt depozitate sub forma amidonului sau a altor compui
glucidici. La bacteriile verzi, produsele de rezerv sunt glicogenul i acidul poli--hidroxibutiric.
Nutriia organic a chimiolitotrofelor
Toate microorganismele autotrofe folosesc aceiai surs de C (CO 2), dar sursa de energie este diferit. Unele sunt
litotrofe, iar altele sunt fototrofe. Termenul autotrof semnific posibilitatea utilizrii CO2 ca surs de C.
Toate microorganismele presupuse anterior a fi strict (obligat) autotrofe sunt de fapt autotrofe facultative,
deoarece se pot dezvolta i heterotrof, prin metabolizarea unor compui organici adugai n mediu (de exemplu, acetatul).
Hidrogen-bacteriile utilizeaz ca potenial reductor (donori de protoni), glucidele i acizii organici, n funcie de
condiiile de mediu.
Faptul ca microorganismele autotrofe sunt facultativ heterotrofe are o semnificaie secundar. Esenial rmne
capacitatea lor de nutriie autotrof, ce const n ncorporarea CO 2 n compui organici, proces denumit fixarea CO2.
Sursa de azot este NH3, NO3- sau N2. Din compuii anorganici simpli, ele sintetizeaz toate moleculele organice
caracteristice organismelor vii.
Cel puin o parte a carbonului celular poate fi obinut din surse organice, care sunt utilizate preferenial fa de
CO2, dac ele constituie un amestec n proporii adecvate. Plasticitatea metabolic adaptativ a microorganismelor merge
de la capacitatea de cretere autotrof, pn la cea de cretere heterotrof, n funcie de condiiile de mediu.
In vitro, chmiolitotrofele au o capacitate limitat de a utiliza compuii organici ca surs de carbon i energie.
Compuii organici pot nlocui numai parial CO 2 ca surs de carbon, cel puin pentru izolatele proaspete de bacterii
chimiolitotrofe, deoarece sunt inhibitori ai creterii datorit efectelor toxice: piruvatul are efect toxic; acetatul este cel mai
bine utilizat dintre compuii organici, iar aminoacizii i zaharurile sunt asimilate ntr-o msur mai mic. Aminoacizii sunt
inhibitori ai creterii.
Mecanismul inhibitor al creterii, ca i n cazul bacteriilor heterotrofe este dezechilibrul cantitativ al
aminoacizilor. Acest mecanism este sugerat de faptul c toxicitatea aminoacizilor individuali pentru chimiolitotrofele
obligate poate fi reversat de ali aminoacizi sau de amestecul lor echilibrat.
Chimiolitotrofele pstreaz o dependen parial de CO2, care este fixat n ciclul Calvin. Exist ns diferene ale
gradului de sensibilitate: un compus organic care la o concentraie prag are efect toxic pentru o specie de microorganisme,
poate fi stimulator pentru altele.
Capacitatea limitat a chimiolitotrofelor de a asimila compuii organici s-a explicat prin absena mecanismelor ce
mediaz transportul diferitelor molecule nutritive.
In concluzie, relaiile bacteriilor chimiolitotrofe cu compuii organici sunt complexe i acoper un spectru larg, de
la o utilizare minimal pn la susinerea complet a creterii.
Nutriia chimioorganotrof (heterotrof)
Majoritatea bacteriilor au o nutriie de tip chimioorganotrof. Ele nu au capacitatea de a folosi moleculele
anorganice simple ca surs reductoare i potenial reductor. Din punct de vedere fiziologic sunt foarte heterogene. In
raport cu bacteriile chimiolitotrofe, cele chimioorganotrofe au numeroase incapaciti de sintez i n consecin sunt
dependente de prezena n mediu, a compuilor organici pe care i folosesc ca surs de carbon pentru sinteza propriilor
molecule i ca surs de energie n reaciile de catabolism aerob sau anaerob.
Mediul de cretere trebuie s asigure prezena metaboliilor eseniali pe care celulele nu-l pot sintetiza.
In concepia actual, unificatoare cu privire la metabolismul bacterian, practic toate bacteriile au nevoie de acela i
set de metabolii eseniali, deoarece cile metabolice sunt comune. Diferenele ntre autotrofe i heterotrofe constau n
gradul diferit de complexitate a moleculelor pe care celulele le iau din mediu.
Bacteriile heterotrofe izolate din mediile naturale sunt prototrofe, adic se dezvolt pe un mediu minimal care
conine o surs organic de carbon i energie i un compus anorganic cu azot. Din aceti compui, ele i sintetizeaz toi
metaboliii eseniali.
Experimental, prin mutagenez, din tulpinile prototrofe se obin mutante auxotrofe, care necesit adugarea n
mediul nutritiv a unuia sau mai multor factori de cretere, datorit pierderii cilor corespunztoare de sintez.
Printre bacteriile heterotrofe, gradul de dependen fa de complexitatea mediului este foarte variabil. La unele
bacterii patogene, nevoia de compui organici compleci este foarte mare i de aceea nu pot fi cultivate dect pe medii la
care se adaug lichide biologice: ser sanguin, snge, lichid ascitic.
Unele microorganisme heterotrofe (patogene sau saprobionte) nu au fost cultivate pe medii inerte, orict de
complexe, ci numai pe un substrat viu (culturi de celule, ou embrionat, organisme animale). Heterotrofia este interpretat
ca rezultat al unui proces de evoluie, la care echipamentul enzimatic s-a simplificat n sensul pierderii capacitii de a face
biosinteza unor enzime, ceea ce se reflect n incapacitatea de a sintetiza anumii metabolii eseniali. Aceti metabolii
trebuie adugai n mediul de cretere.
In concluzie, echipamentul enzimatic al microorganismelor heterotrofe este mai simplu dect al celor autotrofe. In
grupul larg al organismelor heterotrofe exist de asemenea o scar ampl a diversitii capacitilor de sintez, de la cele
prototrofe, capabile s creasc pe medii minimale, pn la cele cu incapaciti multiple de sintez a unor substane care
trebuie adugate n mediul de cultivare, denumii factori de cretere sau vitamine ale microorganismelor.
Capacitile de biosintez realizeaz un continuum descresctor de la microorganismele autotrofe care i
sintetizeaz toi metaboliii eseniali, la cele heterotrofe, dependente de numeroi factori de cre tere. Trecerea de la nutriia
autotrof la cea heterotrof o realizeaz microorganismele prototrofe, care cresc pe un mediu minimal ce conine un
compus organic (glucidic) ca surs de carbon i energie i o surs de azot anorganic.
Factorii de cretere
Noiunea factori de cretere s-a definit odat cu constatarea c unele microorganisme cresc numai dac, n afar
de sursele de azot i de carbon propriu-zise, n mediu se mai adaug o serie de substane eseniale pentru metabolismul lor.
Factorii de cretere sunt metabolii eseniali, indispensabili meninerii viabilitii i creterii, pe care
microorganismele nu pot s-i sintetizeze.
Dat fiind unitatea fundamental a mecanismelor biochimice ale tuturor celulelor bacteriene, necesarul de factori
de cretere este unitar n ntreaga lume bacterian. Deosebirea esenial const n originea lor. Bacteriile prototrofe
sintetizeaz toi metaboliii eseniali pornind de la o surs organic de carbon i energie. La bacteriile prototrofe, factorii
de cretere au origine endogen i nevoia celulei pentru aceste molecule este mascat.
Bacteriile autotrofe au cele mai mari capaciti de biosintez. Ele sintetizeaz toi factorii de cretere. Cele
prototrofe au capaciti intermediare, iar cele heterotrofe au pierdut diferite capaciti de biosintez: unii factori de
cretere pot fi sintetizai, dar cei care nu se sintetizeaz trebuie adugai n mediul de cretere, din surse externe.
Nevoia de factori de cretere este individual pentru fiecare tulpin bacterian i de aceea noiunea are un caracter
relativ i se definete numai n raport cu un mediu de baz. Factorii de cretere sunt molecule mici, niciodat mari i
ndeplinesc urmtoarele funcii:
- precursori ai unor molecule cu rol structural (aminoacizi, peptide, baze purinice sau pirimidinice i acizi grai;
- factori catalitici cu rol de coenzime, denumite generic vitamine" datorit rolului analog cu acela al vitaminelor
celulei eucariote.
Factorii de cretere cu rol structural au aciune cantitativ, adic nivelul creterii culturii celulare este proporional
cu concentraia factorului de cretere cu care se suplimenteaz mediul unei tulpini auxotrofe. Concentraia de 10 g/ml
este optim.
Purinele i pirimidinele sunt componente ale nucleotidelor, dar intr i n alctuirea unor coenzime. Ele pot fi
adugate n mediu sub forma bazei libere sau sub forma unui nucleozid. Forma nucleotidic (care conine grupul fosfat)
nu este accesibil, deoarece n aceast form compusul nu traverseaz membrana celulei.
Incapacitatea de a sintetiza un aminoacid este datorat absenei enzimelor necesare catalizei reaciilor
corespunztoare.
Factorii de cretere cu rol structural condiioneaz desfurarea biosintezei macromoleculelor (proteine, acizi
nucleici, lipide).
Factorii de cretere cu rol catalitic au aciune oligodinamic i de aceea sunt necesari n cantiti foarte mici (l
g/ml). Din aceast categorie fac parte vitaminele, care intr n alctuirea coenzimelor. Majoritatea microorganismelor
sintetizeaz toate componentele coenzimelor, dar cele cu una sau mai multe incapaciti de sintez trebuie aprovizionate
cu aceste enzime sub forma vitaminelor.
Acidul para-amino-benzoic (APAB) este precursorul acidului folic, iar acesta, sub forma acidului tetrahidrofolic
are rol n metabolismul compuilor cu un atom de carbon i n transportul grupului formil i metil. Aciunea APAB este
inhibat de sulfamide, care se substituie APAB prin competiie. Astfel, sinteza acidului folic i toat calea metabolic
dependent de acidul folic este blocat.
Biotina este o vitamin purttoare a COO - n biosinteza acizilor grai, n reaciile de -decarboxilare i n cele de
fixare a CO2 n reaciile ciclului Calvin. Este un derivat ciclic al ureii. Avidina proteina specific albuului de ou, leag
ferm biotina, care este astfel inactivat. Prin nclzire, avidina se denatureaz, se inactiveaz i pierde capacitatea de a
lega biotina.
Acidul lipoic are rol n transferul H2 n reaciile de decarboxilare oxidativ a piruvatului i alfa-cetoglutaratului.
Acidul nicotinic este precursorul NAD, la rndul su avnd rol n transferul e- n reaciile de oxido-reducere.
Acidul pantotenic este precursorul coenzimei A. Coenzima A activeaz acetilul din diferiii si compui. CoA este
factor de cretere pentru L. bulgaricus.
Tiamina (vitamina B1) are rol n reaciile de -decarboxilare. Tiamin-pirofosfatul este coenzima decarboxilazelor
(fig. 55), avnd rol n decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic (n glicoliz) i a acidului -cetoglutaric n ciclul Krebs.
Riboflavina (vitamina B2) este precursorul FMN i FAD, componente ale flavoproteinelor, cu rol n transportul e-.
Piridoxina (vitamina B6) este coenzima cu rol n metabolismul aminoacizilor i cetoacizilor (coenzim a reaciilor
de dezaminare i decarboxilare).
Cobalamina (vitamina B12) catalizeaz reacia de sintez a dezoxiribozei, fermentaia glutamatului etc. Conine
Co legat cu mare afinitate.
Vitamina K are rol n transportul e- i n sinteza sfingolipidelor.
Coenzima M (CoM) este necesar unor bacterii metanogene i are rol n metanogenez.
Hidroxamaii sunt compui care leag Fe, l solubilizeaz din compuii si i l transport n celul.
Hematina (factorul X) intr n alctuirea hemoproteinelor (citocromi, catalaz) care au rol n transportul e-, pe
catena de respiraie celular.
Factorii stimulatori de cretere sunt substane neeseniale pentru creterea i multiplicarea unor microorganisme,
dup adugarea lor n mediu. Microorganismele sintetizeaz substanele din aceast categorie, dar n cantiti insuficiente,
care nu satisfac integral necesitile dezvoltrii optime a culturii. Prin urmare, creterea are loc cu o rat sczut.
Adugarea factorului stimulator al creterii, restabilete rata optim de cretere i diviziune a celulelor.
Semnificaia biologic a factorilor de cretere. Dup A. Lwoff (l944) nevoia de factori de cretere ar reflecta
procesul de evoluie regresiv a unor microorganisme, prin pierderea selectiv a unor capaciti de sintez. Evoluia
organismelor ar fi nsoit n mod obligatoriu de pierderea unor funcii, i n special a celor de biosintez.
Incapacitatea de sintez poate fi de tip calitativ i se manifest prin dependena total de un factor de cretere sau
de tip cantitativ, ca o consecin a diminurii unei activiti funcionale, care continu s se exprime ntr-o msur
detectabil. Deficitul cantitativ se compenseaz prin suplimentarea mediului cu un factor stimulator al creterii.
Aplicaii practice. Nevoia de factori de cretere a unor microorganisme este att de specific, nct gradul de
cretere al culturii unui microorganism auxotrof este proporional cu concentraia factorului n mediu. Tulpinile de
microorganisme care manifest o dependen strict i specific fa de un factor al mediului sunt folosite pentru dozarea
cantitativ a factorului de cretere. Dozajul microbiologic este adesea singura posibilitate de evaluare cantitativ a unui
facor de cretere. Metoda se bazeaz pe utilizarea unui mediu care satisface toate exigenele nutritive ale tulpinii test, cu
excepia factorului care se dozeaz. Creterea culturii este proporional cu concentraia factorului n mediu.
Metoda se aplic pentru dozarea aminoacizilor, tiaminei, riboflavinei, acidului pantotenic, acidului nicotinic,
vitaminei B12, biotinei, piridoxinei. Dozarea biologic este considerat a fi mai sensibil dect oricare metod chimic.
Dependena unor microorganisme de factorii de cretere este util n studiile genetice.
Incapacitatea de sintez a unui metabolit esenial este rezultatul unei mutaii. Tulpinile auxotrofe (care necesit
suplimentarea mediului cu un factor de cretere) se obin prin mutagenez dintr-o tulpin bacterian prototrof (capabil
s creasc pe un mediu minimal). De exemplu, o tulpin auxotrof ce nu sintetizeaz histidina (His -) necesit adugarea
acestui aminoacid n mediu.
Incapacitatea de sintez poate fi unic (pentru un singur metabolit) sau multipl i constituie un caracter marcant
(marker genetic) al tulpinii bacteriene. Tulpinile mutante auxotrofe sunt instrumente eseniale de lucru n domeniul
geneticii microorganismelor, deoarece permit studiul modalitii de transmitere n descenden a unei capaciti de
biosintez, detectabil prin teste relativ simple de cultivare pe medii cu sau fr factori de cretere.
CAPITOLUL IV
METABOLISMUL BACTERIAN
Metabolismul (metabole, grec = a schimba) este reprezentat de totalitatea reaciilor biochimice implicate n
activitile biologice ale celulei bacteriene, prin intermediul crora substanele biogene sunt preluate din mediul extern i
sunt supuse reaciilor productoare de energie i de biosintez.
Substanele sunt preluate din mediul extern, fie sub form simpl, utilizabil direct n metabolism, fie sub form
complex. Substanele biogene sunt folosite de celul n urmtoarele direcii eseniale:
- pentru sinteza metaboliilor primari (aminoacizi, baze purinice i pirimidinice, enzime, acizi grai), necesari
biosintezei constituienilor structurali, rezultatul fiind creterea celulei. Aceti compui se sintetizeaz n faza de
cretere primar, denumit i trofofaz;
- pentru producerea energiei, n metabolismul energetic i a produselor metabolismului energetic (produi de
fermentaie alcoolic, lactic, butiric, propionic, acid etc.);
- pentru producerea (uneori) a metaboliilor secundari (antibiotice, alcaloizi, ergotina, giberelina). Se sintetizeaz n
faza de cretere secundar, denumit idiofaz, dup epuizarea unui nutrient major (sursa de C sau de N). Metaboliii
secundari nu sunt eseniali pentru creterea celulei i sinteza lor este expresia procesului de difereniere biochimic.
Reglarea metabolismului bacterian este perfect i este subordonat principiului optimalitii activitii celulare,
astfel nct pierderea de energie s fie minim.
Reaciile metabolice fundamentale ale celulelor bacteriene nu difer mult de acelea care au loc n celula eucariot.
Totui, bacteriile au o serie de particulariti metabolice, n special ale metabolismului energetic, care este mult mai
diversificat dect al celulei eucariote.
Particularitile generale ale metabolismului bacterian
Metabolismul bacterian se distinge de acela al celulei eucariote prin cteva trsturi particulare:
l) Metabolismul bacterian are o intensitate neobinuit, de sute i chiar de mii de ori mai mare dect metabolismul
organismelor superioare, raportat la unitatea de greutate (gramul). De exemplu, un gram de celule de Micrococcus ureae
poate s metabolizeze pn l200 g uree ntr-o or; un gram de bacterii lactice hidrolizeaz ntr-o or pan la l4 000 g de
lactoz. Dac organismul uman ar avea o rat metabolic asemntoare ar trebui s ingere cteva tone de alimente pe or.
Diferitele ci metabolice i activiti enzimatice la bacterii se desfoar cu o intensitate deosebit de nalt,
proprie acestor organisme. Particularitatea deriv, n cea mai mare parte din valoarea nalt a raportului suprafa/volum
(greutate celular). La bacterii, suprafaa este foarte mare n raport cu volumul, ceea ce uureaz schimburile ntre celul
i mediu. Suprafaa de schimb, prin care substanele nutritive ptrund n celul, iar cataboliii sunt eliminai, este foarte
mare n raport cu volumul celulei, care reprezint consumatorul.
2) Natura substratului pe care bacteriile l pot cataboliza este foarte divers. Bacteriile reprezint grupul cel mai
omnivor din ntrega lume vie. Ele metabolizeaz substane inaccesibile pentru alte organisme, de la substane anorganice
simple, inclusiv substane toxice pentru sistemele biologice, pn la substane organice complexe: cauciucul, asfaltul,
fenolii, parafinele, petrolul, lemnul, substanele antibiotice, cheratina, detergenii, masele plastice. Reprezentani ai g.
Pseudomonas pot metaboliza pn la 200 substane diferite. Diversitatea chimic a substanelor pe care bacteriile le pot
metaboliza a condus la reutilizarea i valorificarea substanelor menajere pentru obinerea biogazului carburant, a
biomasei bacteriene.
Aceast particularitate a bacteriilor ca grup, de a metaboliza substraturi foarte diverse nu este estompat de unele
bacterii, adevarai specialiti fiziologici, care au exigene nutritive stricte i nu pot folosi dect un singur substrat pentru
activitile lor metabolice: nitrit- i nitrat bacteriile implicate n circuitul azotului se dezvolt numai n prezena
substratului corespunztor sau bacteriile celulozolitice se dezvolt numai n prezena celulozei.
3) Plasticitatea metabolismului bacterian este fr echivalent n lumea vie i se refer la capacitatea bacteriilor de
a folosi, alternativ, diferite surse de carbon i energie. Foarte multe microorganisme, considerate ca strict autotrofe
(capabile s utilizeze numai substane anorganice pentru nutriie) sunt de fapt facultativ heterotrofe i pot folosi
substanele organice ca substrat generator de potenial reductor. La rndul lor, microorganismele heterotrofe
(organotrofe), n absena substanelor organice utilizeaz compui anorganici.
Aceast versatilitate metabolic are caracter adaptativ i are o semnificaie ecologic major, deoarece, cel puin
n condiii naturale, microorganismele trebuie s-i adapteze tipul de metabolism n raport cu substratul disponibil.
4) Corelat direct cu intensitatea metabolismului, potenialul de sintez al celulei bacteriene este deosebit de mare,
ca o consecin a faptului c, transcrierea este simultan cu traducerea informaiei genetice. Dac potenialul de sintez,
exprimat n kg/zi, n mod convenional, la bovine l considerm a avea valoarea 1, la soia este l0, la levuri este l0 5, iar la
bacterii este l0ll, raportat la unitatea de greutate. O celul de E. coli sintetizeaz circa l000 molecule de proteine/secund,
circa 4000 molecule de lipide i 4 molecule de ARN. Acest uria potenial de sintez este numai teoretic i ar putea deveni
real numai n condiii optime de mediu. In condiii obinuite de mediu, acest potenial nalt de sintez se manifest o
perioad foarte scurt de timp, datorit factorilor limitani ai mediului: diminuarea cantitativ a nutrienilor, acumularea
rapid a substanelor toxice i de catabolism, modificarea pH, variaiile de temperatur.
5)Metabolismul bacterian se caracterizeaz prin diversitatea cilor catabolice alternative, prin care poate fi
degradat un compus chimic: calea glicolizei, a untului hexozo-monofosfailor, calea Entner-Doudoroff.
Toate substanele nutritive utilizabile n metabolism, trebuie s strabat nveliurile celulare: peretele i membrana
citoplasmatic. Membrana citoplasmatic are o permeabilitate foarte selectiv, fiind o barier nu numai fizic, ci i
chimic i biologic.
Metabolismul energetic bacterian
Metabolismul celulei bacteriene, ca i al celulei eucariote, are dou compartimente fundamentale:
- cile de producere a energiei, denumite catabolice sau degradative;
- cile consumatoare de energie, denumite anabolice sau de biosintez.
Deoarece cile catabolice i anabolice sunt strns interconectate prin intermediul unor compui cheie ai
metabolismului intermediar, adevrate plci turnante ale metabolismului, denumirea comun de ci amfibolice este
justificat.
La bacterii, datorit ratei foarte nalte a metabolismului, funcioneaz o categorie special de ci, denumite
anaplerotice (sau de alimentare), menite s aprovizioneze o cale metabolic ce funcioneaz intens, cu produsul
intermediar necesar.
Cile catabolice reprezint ansamblul proceselor biochimice prin care are loc degradarea nutrienilor preluai din
mediu i eliberarea energiei. Complexitatea reaciilor catabolice este variabil, n funcie de natura i complexitatea
substanelor supuse proceselor de degradare.
In general, reaciile catabolice degradative ale unei macromolecule se desfoar n trei faze succesive:
- n prima faz se desfoar reaciile biochimice catalizate de exoenzime, n cursul crora macromoleculele nutritive
sunt scindate n spaiul extracelular, la subunitile specifice: glucide, aminoacizi, oligopeptide, nucleozide, fosfai
organici cu molecul mic (glicerol-fosfat). Bacteriile, fungii i protozoarele produc enzime extracelulare
(exoenzime), pe care le elimin n mediu sau rmn legate de structurile de suprafa ale celulei. Exoenzimele sunt
hidrolaze: polizaharidaze (amilaz, celulaz, pectinaz), mucopolizaharidaze (hialuronidaz, chitinaz,
neuraminidaz, lizozim), nucleaze, lipaze, fosfolipaze, proteaze. Ele hidrolizeaz moleculele mari, rezultnd
oligomeri sau monomeri, pentru care structurile celulare de nveli sunt permeabile. Pentru microorganismele
patogene, exoenzimele reprezint un factor major de virulen, deoarece atac esuturile constitutive ale gazdei. La
bacteriile Gram negative, sediul exoenzimelor este spaiul periplasmic, deoarece triesc n medii oligotrofe. In
aceast etap se elibereaz numai 1% din energia macromoleculei, care se pierde sub form de cldur;
- n cea de a II-a etap, monomerii sunt degradai pe ci specifice i rezult un numr limitat (circa l2) de molecule
mici, denumite intermediari metabolici ai cilor centrale, aceiai la diferite tipuri de bacterii. In aceast etap se
elibereaz circa 1/3 din energia molecular;
- cea de a III-a faz este diferit n funcie de natura reaciilor metabolice: n aerobioz, reaciile evolueaz n sensul
metabolizrii integrale a compuilor, pn la CO 2 i H2O, cu eliberarea ntregii cantiti de energie. In anaerobioz,
reaciile evolueaz dup modelul respiraiei anaerobe sau al proceselor fermentative i cantitatea de energie care se
elibereaz este mic.
Reaciile catabolice sunt exergonice: ele realizeaz tranziia unei molecule de la o stare mai puin stabil, cu un
coninut mai mare de energie, la molecule mai mici i mai stabile, cu un coninut mai mic de energie.
Tipuri de metabolism energetic in funcie de acceptorul final de electroni
-
In funcie de natura acceptorului final de e -, microorganismele pot prezenta trei tipuri de metabolism energetic:
metabolism energetic de tip aerob (oxibiotic) sau metabolism respirator, dependent de citocromii catenei de
respiraie celular, propriu microorganismelor al cror acceptor final de e -, la captul catenei de respiraie este O 2;
metabolism energetic anaerob (anoxibiotic), caracteristic microorganismelor al cror acceptor final de e - este un
compus anorganic oxigenat (nitratul, sulfatul, carbonatul) sau un compus organic (fumaratul). In prezena O2,
respiraia este de tip aerob, deoarece catena de respiraie celular este funcional;
- reacii metabolice de tip fermentativ sunt acelea care au loc numai n condiii de anaerobioz, dar acceptorul final de
e- este un compus organic (de exemplu, piruvatul).
La bacteriile fermentative lipsete lanul citocromilor din catena de respiraie, pentru transportul e -. Substratul
acceptor este redus la produse de fermentaie (de exemplu, piruvatul, la lactat). Reducerea acceptorului final este cuplat
cu reoxidarea coenzimelor.
Pentru nevoile curente ale cultivrii microorganismelor n condiii de laborator sunt recunoscute urmtoarele
tipuri respiratorii:
- bacterii strict aerobe sunt acelea care necesit O 2 molecular ca acceptor final de e -. Ele realizeaz metabolism de tip
oxidativ i nu cresc n absena O 2. Pentru multe bacterii aerobe este necesar aerarea extensiv, pentru c O 2 este
puin solubil n ap i nu difuzeaz cu o rat care s egaleze rata utilizrii. Aerarea se face prin agitare viguroas a
recipientului sau prin barbotarea aerului sterilizat n mediul lichid, printr-un tub de sticl. Bacteriile aerobe cresc
mult mai bine n condiii de aerare forat dect dac O 2 difuzeaz liber;
- bacteriile microaerofile folosesc O2 ca acceptor final de e-, dar concentraia natural a O 2, de 20-21% este prea mare
i din aceast cauz nu cresc pe suprafaa mediului expus aerului atmosferic, dar nu cresc nici n anaerobioz;
- bacteriile facultativ anaerobe i obin energia pe cale oxidativ, folosind O 2 ca acceptor final de e-, dar cresc i n
condiii de anaerobioz i i obin energia pe cale fermentativ;
- bacteriile anaerobe nu folosesc O2 molecular ca acceptor de e -. In interiorul acestui grup se disting cteva diviziuni
fiziologice:
a) bacteriile anaerobe aerotolerante cresc puin (dar cresc) n condiii de aerobioz, ntr-o ambian care conine ntre
2-8% O2. Creterea optim are loc n anaerobioz (de exemplu, bacteriile lactice);
b) bacteriile anaerobe obligate variaz n privina sensibilitii lor la O 2: unele tolereaz cantiti mici de O 2, iar altele
strict anaerobe nu cresc n prezena unei concentraii mai mari de 0,5% O 2.
Efectul toxic asupra bacteriilor anaerobe l exercit O 2 i nu potenialul redox ridicat al mediului. In prezena O 2,
bacteriile anaerobe i pierd viabilitatea deoarece nu pot s detoxifice intermediarii toxici ai reducerii O 2: H2O2, O2(radicalul superoxid), OH- (ionul hidroxil), OH. (radicalul hidroxil), 1O2 (oxigen singlet*).
-
*1
O2 se formeaz dup ce molecula de O2 absoarbe o cantitate de energie. In molecule, n general, e - apar n perechi stabilizate, cu
spini de direcie opus. O 2 este o molecul neobinuit, prin faptul c spinii electronilor au aceiai direcie. Absorbia energiei
schimb unul dintre e- pe un orbital cu energie mai nalt i se produce inversia spinului.
Multe bacterii anaerobe obligate sunt bogate n flavine (enzime), care pot reaciona spontan cu O 2 i formeaz
produse toxice. Din aceast cauz, cultivarea lor se face n recipiente din care O 2 se elimin complet, pentru a crea un
potenial redox sczut.
Exist numeroase procedee pentru diminuarea coninutului de O2:
- unele simple (umplerea recipientelor cu mediu i acoperirea cu dop de cauciuc), pentru bacteriile care tolereaz o
concentraie mic de O2 n mediu;
altele mai complexe pentru cultivarea bacteriilor strict anaerobe: n mediul de cretere se adaug ageni reductori
(acidul tioglicolic, cistein) sau alturi de mediu, n atmosfera nchis a recipientului de cultivare (pirogalolul).
Pirogalolul
Agenii reductori reacioneaz cu O2 dizolvat n mediu sau existent n atmosfera recipientului i-l reduc la H 2O.
Reacii de oxidare a substratului energetic
Metabolismul energetic este o nlnuire de reacii de oxido-reducere, n cursul crora substratul energetic este
oxidat. Reaciile de oxidare sunt de trei tipuri:
l. Reacia de oxidare consecutiv pierderii de e-. De exemplu, Fe2+ (feros), forma redus este oxidat la Fe3+ (feric),
dup reacia:
2. Reacii de oxidare catalizate de dehidrogenaze, n care molecula oxidat pierde simultan protoni i e -, de
exemplu, oxidarea alcoolilor la aldehide:
3. Reacia de oxidare care comport ctig de atomi de oxigen de ctre substratul oxidat; de exemplu, oxidarea
aldehidelor la acizi:
sau reacia de decarboxilare oxidativ a piruvatului, la acetat i CO 2:
Aceste reacii de oxidare constau ntr-o dehidrogenare, n care apa are, n acelai timp, rolul de donor de O i de
surs de protoni i e-.
Toate reaciile de oxidare biologic au comun faptul c, n esen, ele semnific o pierdere de e - de ctre substrat
i eliberarea energiei.
Electronul cedat de un substrat molecular trebuie obligatoriu sa fie acceptat de un alt substrat, astfel nct reaciile
de oxidare biologic sunt cuplate totdeauna cu reacii de reducere, formnd un cuplu de oxido-reducere (un sistem redox),
n care o molecul se comport ca donoare de e-, iar cealalt, ca acceptoare.
Molecula care cedeaz e- sau protonii (H+) se oxideaz, iar cea care i accept se reduce.
Potenialul redox i fora proton-motrice
Din punct de vedre chimic, oxidarea semnific pierderea unuia sau mai mulor e- dintr-o molecul, iar reducerea
semnific ctigul e-. In biochimie, oxidarea i reducerea nu implic totdeauna transferul e -, ci i al atomilor de H. {n
reaciile de oxido-reducere biologic, dehidrogenrile sunt foarte importante i de aceea, termenii de donor de H+ i de
acceptor de H+ sunt folosii ca sinonimi cu cei de donor i respectiv de acceptor de e -.
Tendina unui compus chimic de a ceda sau de a accepta e - n reaciile de oxido-reducere biologic se exprim
cantitativ prin potenialul oxido-reductor (redox) al cuplului. Electronii sunt transportai totdeauna de la un cuplu cu un
potenial redox mai negativ, la un cuplu cu un potenial redox mai puin negativ (de exemplu, de la cuplul NADPH+ +H+,
la cuplul Fe2+/Fe3+).
In natur, mediile bogate n O2 au un potenial redox de + 0,82 V, iar cele bogate n H, au un potenial de 0,42 V.
Ca regul general, substraturile cu potenial redox pozitiv (O 2, Fe3+) sunt oxidante (acceptoare de e-), iar cele cu
potenial redox negativ (H2, NADH) sunt ageni reductori (donori de e-).
O substan chimic, cu ct este mai redus, cu att conine o cantitate mai mare de energie i cu att este mai
mare tendina ei de a ceda e-.
Transferul protonilor (H+) i al e- n sistemele biologice, se face de la substratul energetic la O 2. Dac acest
transfer s-ar face direct de la substratul redus la O 2, diferena maxim de potenial ar fi de 0,82 (- 0,42) = l,23 V, ceea ce
ar corespunde unei diferene energetice de 57 kcal/mol. Un astfel de transfer ar fi nsoit de o pierdere foarte mare de
energie.
Microorganismele (ca i celelalte organisme) dispun de mai multe sisteme redox, care
transport e- n cascad, permind eliberarea treptat a energiei.
Transportorii de e- pot fi mprii n dou clase:
- liber difuzibili (NAD+, NADP+). Totdeauna transfer 2 atomi de H spre urmtorul purttor al catenei. Transferul
atomului de H se numete dehidrogenare;
- ferm ataai de enzimele din membrana citoplasmatic. In dublul strat fosfolipidic sunt inserate sistemele redox
proteine cu rol de transport n catena de respiraie celular: flavoproteine, quinone, proteine cu Fe-S, citocromii.
Respiraia aerob bacterian

Respiraia aerob este procesul catabolic productor de energie n cursul cruia, compuii energetici organici sau
anorganici redui, cu rolul de donori de e- sunt degradai complet pe cale oxidativ pn la CO 2 i H2O. In respiraia
aerob, O2 este ultimul acceptor de e- (fig. 54).
Fig 54. Catena transportoare de electroni. Transportorii sunt: NAD, FMN (un derivat al vitaminei B 2), o protein cu Fe i S, coenzima
Q i citocromii a, b i c. Fiecare component al catenei se reduce i se oxideaz succesiv. La captul catenei, electronii sunt acceptai de
O2, pentru a forma H2O. FAD deverseaz electronii n aval fa de NAD. Datorit distribuiei diferiilor transportori n membrana
celular a procariotelor sau n membrana mitocondrial intern a eucariotelor i pentru c unii transportori accept numai protoni (H +),
iar alii numai electroni, protonii sunt pompai din citoplasm in mediul extracelular (sau din matricea mitocondrial n spaiul dintre
cele doua membrane) in timp ce electronii sunt transportai pe caten. Gradientul protonic este utilizat pentru sinteza ATP.
Substratul energetic poate fi anorganic (H2, NH3, nitriii, So i compuii si redui, compuii Fe) sau organic.
Setul de reacii de importan esenial n respiraia aerob este ciclul Krebs. Protonii (H+) cedai de diferii
intermediari ai ciclului Krebs ajung, prin sistemele redox ale catenei de respiraie, la O2. Trstura distinctiv a procesului
respirator este prezena enzimelor care alctuiesc catena transportoare de e-.
Catena de respiraie aerob este constituit din proteine ce poart grupe prostetice redox, care au rolul de enzime
oxido-reductaze (dehidrogenazele) sau de transportori de e- (citocromii). Catena de respiraie funcioneaz n
metabolismul aerob, dar anumite componente ale sale s-au identificat la organismele anaerobe.
Electronii eliberai din substrat strbat componentele catenei, pn la acceptorul final, O 2 n condiii de aerobioz
sau un alt acceptor final, dac O2 nu este disponibil. Concomitent se sintetizeaz ATP. Ansamblul reaciilor de oxidare i
de fosforilare poart denumirea de fosforilri oxidative.
Componentele catenei respiratorii bacteriene
Catena respiratorie bacterian este alctuit din componente transportoare de e -, asociate membranei i
diverticulilor ei. Catena ndeplinete dou funcii :
- accept e- de la un donor i-i transfer la un acceptor
- conserv o parte a E eliberate n timpul transferului de e -, pentru sinteza ATP. Cantitatea mare de energie produs in
respiraie rezult din transportul e - din caten, de la un component cu un nivel energetic nalt, la unul cu nivel
energetic mai sczut. Energia este captat n legturi macroergice prin combinarea P anorganic cu ADP, cu formarea
ATP. Procesul se numete fosforilare oxidativ
Componentele catenei sunt reduse de forma redus a purttorului anterior i sunt oxidate de forma oxidat a
componentului urmtor.
Catena poate fi mprit n trei segmente funcionale, al cror potenial redox crete de la flavoproteine, pn la
citocrom-oxidaza terminal.
Intrarea protonilor (H+) n catena respiratorie are loc la nivelul primului segment funcional format din
urmtoarele componente:
- dehidrogenazele cu nucleu piridinic (NAD sau NADP) sunt asociate feei interne a membranei celulare. NAD
funcioneaz ca purttor de e- n reaciile catabolice, iar NADP funcioneaz n reaciile de biosintez fixatoare ale
CO2. Ele accept atomi de H generai n diferite reacii celulare i i transfer la flavoproteine. Coenzima redus
(NADH), format prin oxidarea glucozei, este reoxidat i H + este transferat la grupul prostetic al flavoproteinelor
(FMN);
- dehidrogenazele cu nucleu flavinic(un derivat al riboflavinei), FAD i FMN.
Flavoproteinele sunt proteine care conin un derivat al riboflavinei(vitamina B 2). Poriunea flavinic, legat de o
protein, este grupul prostetic care accept atomi de H i se reduce sau doneaz e - i se oxideaz. {n celule se
gsesc 2 flavine: FMN i FAD.
- proteine nehemice cu Fe-S. S-au identificat la Cl. pasteurianum i funcioneaz ca transportori de e - pentru c sufer
tranziii reversibile Fe2+- Fe3+. Sunt foarte electronegative (-0,49 V) i conin o grupare prostetic alctuit din Fe
nehemic i S acidolabil, care formeaz aglomerri dimerice (Fe-S)2 sau mai frecvent, tetramerice (Fe-S)4, legate de
resturile de cistein ale proteinei. Potenialul redox al proteinelor Fe- S variaz mult n funcie de numrul atomilor
de Fe i S i de modul de legare de proteine. De aceea, proteinele Fe-S pot funciona n diferite puncte ale catenei
transportoare de e-. Ca i citocromii, proteinele Fe-S transport numai e-.
Al II-lea segment funcional este constituit dintr-o familie de molecule chinonice liposolubile, denumite
lipoquinone sau coenzime Q.
Quinonele (ubiquinona = CoQ) sunt molecule foarte hidrofobe, solubile n lipide i au rol n transportul e -. Unele
sunt nrudite cu vitamina K (un factor de cretere al animalelor superioare). Ca i flavoproteinele, quinonele funcioneaz
ca acceptori de H+ i ca donori de e-. Quinonele difuzeaz liber prin membrane i transport e - de la proteinele cu Fe-S, la
citocromi. Coenzimele Q sunt adevratele navete transportoare de e - , ntre flavoproteinele reduse (FMNH) i citocromii
oxidai.
Al III-lea segment funcional al lanului respirator este format din citocromi.
Citocromii sunt proteine de care se ataeaz inelul porfirinic cu Fe - hemul, ca grup prostetic. {n centrul grupului
prostetic se gsete un atom de Fe. Gruparea prostetic se numete hem, dac Fe este n stare redus (Fe2+) sau hemin,
dac Fe este oxidat (Fe3+). Funcia redox este intim legat de schimbarea valenei Fe hemic (citocrom-Fe 2+
citocromFe3+ + e-). Citocromii transport numai e- i se gsesc numai n celulele aerobe. Citocromii bacterieni funcioneaz n
transportul fotosintetic al e- i n respiraia aerob, cuplat cu oxidarea substratului redus (substane organice, H 2, S redus
sau metale). Citocromii au rolul de a transporta e - la alt citocrom cu potenial redox mai pozitiv, pn la acceptorul final.
Diferiii citocromi sunt desemnai prin litere: a, b, c. Citocromul terminal al catenei de respiraie a 3 (citocrom-oxidaza)
conine Cu. Citocromii unui organism pot s difere de ai altora i variantele sunt desemnate a 1, a2, aa3 etc.
Deoarece respiraia are loc n membrana citoplasmatic, citocromii sunt adeseori localizai n acest compartiment,
dar se gsesc i n spaiul periplasmic, unde funcia lor de transfer al e - este legat cu a citocromilor membranari.
Citocromii diferitelor organisme pot s difere ntre ei i sunt desemnai a 1, a2, aa3 etc.
Proteinele componente ale citocromilor sunt desemnate prin litere, urmate de un indice sau prin cifre, care indic
lungimea de und a spectrului lor maxim de absorbie.
NADH i coenzimele Q transport e- sub forma atomilor de H, iar citocromii transport e- ca atare. Nu transport
protoni (H+). La trecerea n citocromi, H+ trece n citosol i va fi extras n treapta final reducerii O 2, cu formarea apei.
Citocromul terminal, care are rolul unei enzime finale acceptoare de e - se numete citocrom-oxidaz. Este singura
protein capabil s transfere e- la O2 molecular, dup reacia:
Toate proteinele catenei sunt situate n membrana citoplasmatic a celulei bacteriene. Unele sunt agregate n
grupri funcionale complexe.
Reducerea unei molecule de O2 la H2O necesit 4 e-. Reducerea O2 cu un singur e- produce O2- (radicalul
superoxid), iar reducerea cu 2 e- produce H2O2, ambii avnd efecte distructive.
Catena de respiraie celular este format din proteine transmembranare, incluse n stratul lipidic i expun
domenii pe ambele fee ale membranei. Transportorii de e- sunt astfel orientai n membran nct, n timpul transportului
realizeaz o separare a protonilor de e-.
Curgerea e- prin sistemul de transport poate fi considerat ca o cascad cu mai multe trepte. La fiecare treapt,
energia electronilor este captat enzimatic i folosit pentru a forma molecula de ATP din ADP + Pi. n cele mai multe
transferuri de energie se elibereaz cantiti mici, dar trei dintre ele elibereaz catiti mari de energie utilizat pentru
sinteza ATP.
Atomii de H, la nivelul transportorilor specifici (NADH, NADPH), pe faa intern a membranei, sunt disociai n
protoni (H+) i e-. Electronii se ntorc pe faa citoplasmatic a membranei prin transportorii specifici (citocromii), iar
protonii sunt eliminai la exteriorul celulei Gram pozitive i produc o uoar acidificare a mediului extern sau n spaiul
periplasmic al bacteriilor Gram negative.
Fig. 53. Structura coenzimei NAD+ i NADP+.
Structura FMN i FAD.
La captul catenei de respiraie celular, e - reduc acceptorul final (O2). O2 redus necesit H+ din citoplasm pentru
formarea apei. H+ citosolic provine din disocierea apei n H + i OH-. Consumul H+ pentru reducerea O2 la H2O i
eliminarea H+ determin acumularea OH- pe faa intern a membranei. Deoarece au sarcin electric, H + i OH- nu trec
liber prin membran, iar echilibrul lor nu poate fi restabilit spontan.
Excesul de H+ pe faa extern confer membranei o sarcin net pozitiv n raport cu faa intern. Rezultatul net
al distribuiei asimetrice a acestor ioni este generarea unui gradient de pH i a unui potenial electric de membran
(potenial electrochimic). Faa intern a membranei are sarcin negativ i este alcalin, datorit ionilor OH - (derivat
din disocierea apei), iar faa extern are sarcin pozitiv i este acid (datorit protonilor).
Transportul e- la O2, aparent produce H2O, dar de fapt, prin disocierea H2O, produce H+ i OH-, care se
concentreaz pe cele dou fee ale membranei.
Diferena de pH i de potenial electrochimic de pe cele dou fee determin o stare energizat a membranei,
asemenea unei baterii, care se msoar n voli i se exprim ca for proton motrice.
Sinteza ATP dependent de gradientul protonic
Starea energizat a membranei este folosit direct pentru activiti fiziologice (transportul ionic, rotaia flagelului)
sau pentru conversia ADP la ATP.
Ideea conversiei ADP la ATP, dependent de gradientul protonic a fost propus sub denumirea de teoria
chemiosmotic sau chemiosmoz (Mitchell, l961). Procesul este rezultatul unei serii de reacii chimice ce se produc n i
pe cele dou fee ale unei membrane.
Chemiosmoza are loc att n membrana celulei procariote, ct i la nivelul membranei interne a mitocondriilor
celulei eucariote.
Gradientul de concentraie protonic pe cele dou fee ale membranei genereaz un gradient electrochimic, o stare
energizat a membranei, denumit for proton-motrice*, care se exprim n voli i face ca membrana s devin o baterie
biologic.
*
Reaciile fosforilrii oxidative, productoare de E, sunt cuplate cu reaciile consumatoare, printr-o stare intermediar bogat n E,
i nu printr-un compus chimic. Dup Mitchell, starea intermediar este gradientul electrochimic de H+ prin membrana citoplamatic
sau prin membrana mitocondrial intern, care cupleaz fluxul de E de la transportorii de e -, cu sinteza ATP. Substratul cuplrii este
membrana intact. E liber nmagazinat n gradientul de protoni s-a denumit for proton-motrice.
Fora proton-motrice este convertit n energie chimic prin sinteza ATP din ADP, sub aciunea ATP-sintazei
(ATP-az). ATP-sintaza, localizat pe faa citoplasmatic a membranei, este considerat cel mai mic motor biologic
cunoscut. Enzima este un complex format din cel puin l0 catene polipeptidice i are aciune reversibil pentru c
sintetizeaz ATP din ADP i Pi, dar catalizeaz i reacia invers, de hidroliz a ATP la ADP, Pi, cu eliberarea energiei.
ATP-aza este alctuit din subunitatea F1(format din 5 polipeptide: -3 copii, -3 copii, , , ), localizat pe faa
intern a membranei i subunitatea Fo, transmembranar, ce formeaz un canal prin care trec protonii. Trecerea H + prin
Fo genereaz o for de rotaie, transmis subunitii F 1 prin subunitatea . Subunitatea este rotorul care mediaz
conversia ntre curgerea H+ i sinteza ATP, iar F1 este statorul motorului ATP-azei. Energia de rotaie a motorului ATPazei nu este folosit pentru propulsie, ci pentru sinteza ATP.
Evenimentele transportului de e- sunt influenate de dou clase de ageni chimici: inhibitori i decuplani.
Inhibitorii blocheaz fluxul e- i astfel inhib chiar fora proton-motrice: CO i CN -(cianida) se leag strns de
anumii citocromi i inhib funcionarea lor.
Decuplanii inhib sinteza ATP fr s afecteze transportul e -: substanele liposolubile ca dinitrofenolul i
dicumarolul cresc permeabilitatea membranei i astfel fora proton-motrice este anulat.
In compuii fosforilai, grupul fosfat este ataat prin atomul de O legat esteric. Nu toate legturile fosfat sunt
macroergice (fosfoenol-piruvatul).
Oxidoreductazele care folosesc ali acceptori de e1) Nitrat-reductaza este enzima implicat n respiraia anaerob a nitratului, cupleaz fosforilarea respiratorie cu
reducerea NO3-, n absena O2. E. coli are 2 izoenzime nitrat-reductaze: NAR membranar i NAR periplasmic;
2) Nitrit-reductaza (periplasmic), catalizeaz dou reacii de transfer al e -:
- reducerea NO2- --- NO (oxid nitric) + H2O
- reducerea O2 ---- H2O
3) Reductaza oxidului nitric (NOR) convertete NO --- N2O, n reacia de denitrificare.
4) Dimetil sulfoxid reductaza (DMS), ancorat de membran printr-un citocrom b.
5) Reductazele compuilor cu sulf, implicate n reducerea respiratorie a compuilor cu S.
6) Fumarat-reductaza reduce fumaratul ca acceptor final al unei catene transportoare de e -, rezultnd succinatul.
Reaciile de oxido-reducere a componentelor catenei transportoare ndeplinesc dou funcii:
7) accept e- de la un donor i i transfer unui acceptor
8) conserv o parte din energie n procesele de fosforilare oxidativ.
Cantitatea mare de energie produs n respiraie rezult din transferul e - prin catena transportoare, de la un
component cu nivel redox mai crescut, la altul cu nivel redox mai sczut. Energia este captat n legturi macroergice, prin
combinarea Pi cu ADP i formarea ATP.
Fosforilrile oxidative au loc concomitent cu transferul protonilor(H +) ntre NADH-dehidrogenaz i
flavoprotein, la jonciunea CoQ/citocrom i la jonciunea citocrom-oxidaz/O 2.
Unele componente ale catenei de respiraie flavoproteinele i quinonele accept numai protoni(H +), iar
citocromii accept numai e-.
In prezena O2, setul de enzime al catenei de respiraie este abundent la bacteriile strict aerobe i la cele facultativ
anaerobe, cnd cresc n condiii de aerobioz.
Numeroase bacterii heterotrofe (chimioorganotrofe) realizeaz un metabolism aerob. Ele oxideaz substraturi
organice, acceptorul final de e- fiind O2: M. tuberculosis, Bacillus sp., Pseudomonas, Agrobacterium etc.
Mecanisme de conservare a energiei
Funcia chimic esenial a proceselor metabolice productoare de energie este aceea de a furniza compui
organici cu legturi chimice cu coninut energetic ridicat. Metaboliii fosforilai acumuleaz o cantitate variabil de
energie liber.
Molecula cea mai important cu rol de transportor de energie este ATP, cu un coninut de energie liber de 8
kcal/mol pentru fiecare legtur fosfat. ATP realizeaz un transfer de energie ntre moleculele cu coninut ridicat de
energie liber i cele care particip la reaciile consumatoare de energie.
Reaciile de fosforilare n cursul crora sunt sintetizate molecule cu coninut energetic ridicat i n special ATP
prezint un interes special pentru metabolismul energetic bacterian.
Valoarea energetic a unei ci metabolice se estimeaz dup numrul de molecule de ATP sintetizate prin oxidarea
unei molecule de substrat (de exemplu, glucoz).
Reaciile de fosforilare sunt de trei feluri i au sedii celulare distincte:
1) reacii de fosforilare la nivelul substratului, catalizate de enzime citoplasmatice;
2) reacii de fosforilare oxidativ, catalizate de enzimele localizate la nivelul membranei citoplasmatice i a intruziilor
sale;
3) reacii de fosforilare fotosintetic.
Ciclul Krebs este iniiat prin condensarea acetil-CoA cu oxaloacetatul, pentru a forma acidul citric (fig. 55). Intr-o
succesiune de reacii ciclice se produce oxidarea aerob a gruprii acetil, care provine nu numai din glicoliz sau din
untul hexozo-monofosfatului, ci i din beta-oxidarea acizilor grai, ca i din degradarea catenei de carbon a majoritii
aminoacizilor. Ciclul Krebs furnizeaz compuii care iniiaz cile de biosintez.
Fig. 55. Reaciile ciclului acizilor tricarboxilici (ciclul Krebs).
Fiecare tur al ciclului, pornind de la acetil-CoA elibereaz dou molecule de CO 2 i 8 H+, sub forma a dou
molecule de NADH + H+, una de NADPH + H+ i una de FADH2.
Experienele pe preparate mitocondriale denot c n timpul transportului unei perechi de e - ntre NAD i O2 se
sintetizeaz 3 molecule de ATP. Randamentul energetic global al oxodrii unei molecule de glucoz prin glicoliz i prin
ciclul Krebs este de 38 molecule ATP.
La bacterii, numrul real de molecule de ATP sintetizate nu este cunoscut, datorit prezenei ATP-azei.
Determinrile indirecte sugereaz un bilan identic, dar msurtorile directe evideniaz l6 molecule ATP/o molecul de
glucoz.
Mecanisme moleculare protectoare care permit respiraia aerob

Multe reacii biochimice eseniale pentru metabolismul aerob al celulei necesit transferul a 4 e - la molecula de O2
pentru a forma H2O (dup reacia: O2 + 4e- + 4 H+ = 2H2O). De cele mai multe ori transferul are loc simultan, fr
formarea altor intermediari ai reducerii.
Deoarece O2 este un oxidant puternic i acceptor de mare afinitate al e -, el poate avea rolul de acceptor de e - nu
numai la captul catenei respiratorii membranare, ci i n alte reacii de oxidare a substratului, catalizate de enzimele
solubile n citoplasm. Aceste reacii pot fi fiziologice, productoare sau neproductoare de energie sau sunt nefiziologice
i n anumite condiii sunt letale, deoarece O2 molecular este redus secvenial, univalent, formnd intermediari reactivi cu
diferite grade de toxicitate. Reducerea O 2 cu un singur e- produce radicalul superoxid (.O2-), care la pH fiziologic se reduce
nc odat univalent i formeaz H2O2 (produsul reducerii bivalente) (fig. 56).
Fig. 56. Reducerea complet a unei molecule de O2 la ap, necesit 4 electroni. n acest proces se formeaz compui intermediari
(radicalul anionic superoxid (O-2) peroxidul de O (H2O2) i radicalul hidroxil (OH-). Ionul O-2 este eliminat de superoxid dismutaze
(SOD), iar H2O2 este ndeprtat de catalaze i peroxidaze.
In consecin, celula bacterian este supus permanent unui stress oxidativ, care, funcional se poate defini ca ca
un exces de oxidani* n mediul celular, deoarece n anumite condiii, rata producerii intermediarilor reducerii pariale a O 2
depete capacitatea celulei de a-i elimina.
*
Oxidanii sunt molecule care pot s se reduc prin oxidarea altor molecule.
NO . (oxidul nitric) se formeaz prin aciunea nitric-oxid-sintazei (NOS), care oxideaz L-arg la citrulin i NO..
Microorganismele sunt expuse aciunii NO . endogen rezultat prin reacia de denitrificare(reducerea respiratorie a
nitrailor) la multe bacterii i fungi.
Reacia O2- cu NO formeaz un oxidant puternic - peroxinitritul ONOO-. Reacia este de 3 ori mai puternic dect
inactivarea O2- sub aciunea SOD. Peroxinitritul se formeaz cu o rat optim la concentraii echivalente de NO i O 2-.
Intermediarii reducerii O2 reacioneaz cu toate tipurile de macromolecule i produc leziuni ale moleculelor de
ADN, ARN, proteine, iar prin peroxidarea lipidelor apar leziuni membranare.
Toate organismele i-au dezvoltat mecanisme protectoare pentru a atenua efectele oxidanilor. Mecanismele de
aprare a celulei fa de stressul oxidativ sunt de dou categorii: preventive i reparatorii.
Mecanismele preventive acioneaz prompt i previn apariia leziunilor oxidative, prin distrugerea derivailor
reactivi ai O2 sau limiteaz durata aciunii unor reacii, ca de exemplu, peroxidarea lipidelor.
Peroxidul de H (H2O2) rezult prin transferul a doi e -, la o molecul de O2, catalizat de NADH-oxidaz, dup
reacia:
H2O2 are o toxicitate moderat. Oxideaz componentele membranare i enzimele, lezeaz ADN i produce
mutaii, inhib procesele de transport membanar. H 2O2 este ndeprtat, cel mai adesea sub aciunea catalazei, prin
conversia la H2O i O2, sau a peroxidazelor, care o reduc la H2O, dup reacia:
O molecul de H2O2 se reduce, iar alta se oxideaz.
Catalaza este o enzim neinductibil, cel mai adesea, un homotetramer cu un protohem/subunitate. Este produs
abundent de bacteriile aerobe i de cele facultativ aerobe. Cele microaerofile produc cantiti mici de catalaz. Enzima nu
este produs de bacteriile strict anaerobe i nici de cele anaerobe aerotolerante. Unele bacterii lactice sintetizeaz totui o
catalaz adevrat, dac n mediu se gsete hemina, deoarece ele nu sintetizeaz grupul prostetic hem al catalazei.
Peroxidazele sunt flavoproteine fr metale grele i catalizeaz dehidrogenarea unui substrat (AH 2), n prezena
H2O2. Cea mai important este NADH-peroxidaza:
Glutationul este substratul glutation-peroxidazei (GP) care ndeprteaz H 2O2 i peroxizii lipidici care rezult din
atacul radicalilor liberi asupra lipidelor. GP este reciclat pe calea glutation-reductazei, pentru a ndeprta alt molecul de
H2O2. Glutationul elimin, de asemenea, .OH i peroxizii lipidici care rezult din atacul radicalilor liberi asupra lipidelor.
Ionul O2- (superoxid) se formeaz n cantiti mici n timpul procesului respirator normal. Are reactivitate
moderat, capabil s acioneze ca oxidant sau ca reductor n sistemele biologice. Este relativ stabil, ceea ce i permite s
difuzeze la distane relativ mari nainte de a-i exercita efectele toxice. O 2. generat extracelular poate dobndi acces la
intele intracelulare pe calea canalelor pentru anioni. La pH acid (n focarul inflamator sau n interiorul fagosomului), O 2se protoneaz i formeaz HO 2. cu sarcin neutr i de aceea trece mai uor prin membrane i reacioneaz cu sine nsui,
formnd H2O2.
O2- produce distrugerea oxidativ a lipidelor i a altor componente ale celulei. Are durata de aciune cea mai lung
dintre toi intermediarii reducerii O2 i aciunea sa se poate produce succesiv, asupra mai multor molecule. O 2- este
eliminat sub aciunea superoxid-dismutazelor (SOD). SOD se combin cu 2 molecule de O2-, dup reacia:
Ionul superoxid este eliminat rapid i nu se acumuleaz n celul. Anihilarea .O2- este o strategie esenial de
aprare, deoarece nu numai c limiteaz aciunea sa direct, dar previne reducerea Fe mediat de .O2- i generarea .OH.
Sunt 3 forme de SOD n natur: eucariotele, unii fungi i puine bacterii produc n special CuZnSOD,
homodimere, cu 2 subuniti identice legate necovalent, fiecare cu cte un atom de Cu i Zn. Bacteriile anaerobe obligate
produc n special FeSOD(dimeri), iar cele aerobe produc predominant MnSOD(dimeri i tetrameri). Unele bacterii produc
ambele tipuri de SOD. Unele bacterii patogene(M. tuberculosis) secret FeSOD n mediul extracelular, ca o cale de
rezisten la atacul oxidant. La bacteriile facultativ-anaerobe (E. coli), SOD este periplasmic i nivelul activitii ei crete
dup expunerea la O2. Nocardia asteroides are activitate SOD asociat cu peretele celular, care poate fi secretat n mediul
extracelular i conine cantiti echimolare de Fe, Mn i Zn.
Singurele organisme care nu posed enzime protectoare sunt bacteriile anaerobe stricte. De aceea, O 2 exercit
efecte toxice letale asupra lor.
Radicalul hidroxil liber (OH.) se formeaz prin reducerea trivalent a O2 in vitro, prin reacia H2O2 cu .O2-.
Aceast reacie este amplificat de un catalizator metalic (Fe 3+). Se formeaz i ca rezultat al aciunii radiaiei ionizante.
OH. este cel mai reactiv dintre intermediarii reducerii O 2 , fiind cel mai puternic agent oxidant. Efectele sale
oxidante se manifest asupra tuturor categoriilor de molecule organice (proteine, ADN, lipide). Este probabil, unul dintre
agenii moleculari care omoar celulele dup iradiere x sau gama.
Datorit reactivitii foarte nalte, difuzia .OH este limitat nainte de a ntlni substraturile oxidabile. Mecanismul
aciunii sale const n iniierea cascadei radicalilor liberi. Oxidarea acizilor grai nesaturai ntr-o membran lipidic poate
produce radicalul peroxil (HO2), care reacioneaz cu alte molecule lipidice nvecinate, genernd ali radicali lipidici. Se
iniiaz reacia n lan a radicalilor liberi, care se propag la situsuri ndeprtate de situsul primar al reaciei.
Oxigenul singlet (1O2) este o form molecular cu energie superioar i se formeaz cnd cei doi e - pereche
dobndesc spini antiparaleli, fie c se afl pe acelai orbital, fie pe orbite diferite. In aceast form, O 2 nu primete un
electron suplimentar, ci numai energie suplimentar, care schimb spinul unuia dintre electroni.
1
O2 este un poluant atmosferic. Poate fi produs fie spontan, fie prin sisteme enzimatice. Cea mai comun cale
chimic a producerii sale este reacia O2 cu lumina vizibil. Procesul implic prezena unei molecule a unei substane
colorate care absoarbe lumina.
1
O2 se genereaz prin aciunea lactoperoxidazei i mieloperoxidazei, prezente n lapte, saliv i n fagocite. In
fagocite, 1O2 are rolul de a omor agentul fagocitat. In prezena 1O2 se produc reacii de oxidare, al cror rezultat este
distrugerea oxidativ a componentelor celulare vitale, ca de exemplu, fosfolipidele membranei celulare.
Mecanismele reparatorii acioneaz tardiv i repar leziunile cauzate de molecule reactive care nu au fost
anihilate de sistemele de aprare preventiv. Fiecare condiie de stress induce sinteza unui set de proteine, unic pentru
categoria agentului inductor al stressului. Unele proteine induse de stressul oxidativ sunt comune i pentru alte tipuri de
stress (stressul hipertermic, infometarea etc.).
Stressul oxidativ altereaz numeroase ci metabolice. Gradul de alterare este dependent de capacitatea de rspuns al
celulei la stress. Eliminarea timpurie a stresului oxidativ, prin mecanismele preventive este esenial pentru supravieuirea
celulei.
Respiraia anaerob
Majoritatea organismelor capabile de respiraie anaerob sunt procariote. Unele dintre bacteriile heterotrofe care
realizeaz respiraia anaerob au caten de respiraie i sunt facultativ anaerobe. In prezena O2, realizeaz metabolism
oxibiotic. Transformrile chimice pe care le realizeaz n timpul generrii energiei, n absena O 2 au o deosebit
importan ecologic sau industrial.
In absena O2, bacteriile heterotrofe facultativ-anaerobe i obin energia din substratul energetic, fie prin
respiraia anaerob, fie prin fermentaie. Respiraia anaerob este mai eficient din punct de vedere energetic, comparativ
cu fermentaia.
In procesul respiraiei anaerobe, e - cedai de substratul organic oxidabil sunt preluai de catena de respiraie
celular i sunt transferai unui acceptor final, care este fie un compus oxigenat (nitrat, sulfat, carbonat), fie unui singur
compus organic (fumaratul) (fig. 57). Transferul e- de-a lungul catenei respiratorii este cuplat cu fosforilrile oxidative
membranare.
Fig. 57. Acceptorii finali de electroni n respiraia anaerob i n fementaii. Catabolismul compuilor organici produce CO 2.
Respiraia nitrailor
Unele bacterii realizeaz reducerea dezasimilatorie a nitrailor la nitrii, iar altele reduc att nitraii la nitrii,
precum i nitriii la oxizi de azot i ulterior pn la N 2. Procesul fiziologic al reducerii nitrailor la N 2 se numete
denitrificare i are loc att n mediile naturale ct i in vitro. Nitratul, nitritul i respectiv oxizii de azot au rolul de
acceptori de e-, care deriv din oxidarea unor compui organici, pentru producerea energiei.
La E. coli, n condiii de anaerobioz, sistemul enzimatic al reducerii nitratului este inductibil. In prezena
lactatului (substrat nefermentabil) ca surs de carbon i energie i a nitratului este indus sinteza nitrat-reductazei (NAR),
o enzim ce conine Mo. De aceea, procesul denitrificrii este strict anaerob. Reducerea nitratului are loc dup reacia:
Reacia este dezasimilatorie, deoarece nitraii sunt redui la nitrii, care, n cazul E. coli se acumuleaz n mediu
i au un efect toxic, inhibitor pentru cretere, nitritul nefiind o surs de azot asimilabil. Reducerea dezasimilatorie limitat
a NO3- la NO2- se numete respiraia nitratului.
La unele bacterii denitrificatoare, n procesul respiraiei anaerobe a nitrailor, este indus tot setul de enzime
reductoare, astfel nct reducerea nitrailor este total, pn la N 2, n urmtoarele etape:
Reacia (1) este catalizat de NAR(A), treapta a 2-a, de nitrit-reductaz, iar reaciile 3 i 4, de enzime
necunoscute.
Fiecare treapt de reducere este cuplat cu sinteza ATP. Unele procariote catalizeaz numai o parte a reaciilor cii
reducerii nitrailor. Calea incomplet este utilizat n dou situaii:
1) cnd bacteriile posed echipamentul enzimatic necesar celor 4 trepte, dar n mediu se gsesc numai intermediari
mai redui dect nitratul;
2) cnd bacteriile au incapaciti genetice de a cataliza una sau alta din treptele reducerii.
In funcie de incapacitile genetice de sintez, variantele biochimice ale denitrificrii sunt urmtoarele:
1. organisme capabile s reduc nitratul la nitrit, crora le lipsesc enzimele pentru treptele 2, 3, 4;
2. organisme capabile s reduc nitratul pn la N2O (oxid nitros), crora le lipsete enzima pentru catalizarea
treptei a 4-a;
3. organisme capabile s reduc nitritul, la N2, dar nu au capacitatea de a cataliza reacia treptei l;
4. organisme capabile s reduc nitratul la nitrit i oxidul nitric la N2O, crora le lipsesc enzimele ce catalizeaz
reaciile 2 i 4.
Majoritatea bacteriilor aparin primei categorii. Nu sunt denitrificatoare, deoarece activitatea lor nu este nsoit
de producerea N2 (gazos).
Funcia respiratorie a NAR (A) permite bacteriilor s creasc n anaerobioz n prezena nitratului i a unei surse
oxidabile, dar nefermentabil, de energie. Intr-un mediu fr substrat fermentabil i fr nitrat, E. coli crete numai n
aerobioz.
In procesul respiraiei anaerobe, oxidarea substratului energetic este complet, deoarece ciclul Krebs este
funcional, ca i n respiraia aerob. Oxidarea complet a unei molecule de glucoz are loc dup urmtoarele reacii
globale:
Pentru o molecul de glucoz oxidat se sintetizeaz 24 molecule de ATP, mult mai mult dect n fermentaie, dar
mai puin dect n oxidarea aerob. Oxidarea substratului organic n condiiile respiraiei anaerobe a nitratului este
complet, singurul produs final fiind CO 2. De aceea, bacteriile facultativ anaerobe, n prezena nitratului, au un randament
superior de cretere, n raport cu creterea n condiii fermentative.
Unele bacterii(Shigella, Salmonella, Escherichia, Proteus, Brucella, Clostridium) reduc nitratul numai n absena
substratului care n mod obinuit are rolul de acceptor de e-. In mediu se acumuleaz nitrii toxici care limiteaz creterea.
Alte bacterii sunt specializate pentru reducerea dezasimilatorie a NO 3- i a NO2- pn la NO sau N2O, care ulterior sunt
redui la N2: Pseudomonas, Alcaligenes etc.
Cel mai adesea, bacteriile nitrat-reductoare sunt heterotrofe i n prezena O 2 sunt aerobe. Ele prefer respiraia
aerob, deoarece au caten respiratorie. Catena funcioneaz i n anaerobioz, dar la captul ei, acceptorul final de e - este
nitratul.
Nitrat-reductazele dezasimilatorii sunt proteine legate de membran. In prezena O 2, sinteza lor este represat, dar
este indus n condiii anaerobe.
Reducerea dezasimilatorie a NO 3- este limitat la bacterii, dar cele care catalizeaz acest proces sunt foarte diverse
sub raport fiziologic.
Reducerea nitratului este o modalitate alternativ de respiraie i pentru bacteriile care oxideaz H2. Oxidarea H2
este cuplat cu reducerea NO3-, pn la N2.
Bacteriile sulfoxidante (Thiobacillus) oxideaz So, reacia fiind cuplat de asemenea cu reducerea NO 3- la N2,
dup urmtoarea reacie global:
Importana ecologic. Bacteriile denitrificatoare sunt foarte rspndite n mediile naturale. Procesul denitrificrii
este foarte important, deoarece constituie una dintre treptele circuitului azotului n natur (astfel se formeaz aproape tot
N2 atmosferic), dar are efect negativ deoarece diminu randamentul productiv al fertilizatorilor cu azot, obinui pe cale
industrial. Astfel se pierde 5-80% din cantitatea de fertilizatori cu azot.
Bacteriile denitrificatoare realizeaz scderea concentraiei compuilor azotai din staiile de epurare a apelor
uzate, nlturnd pericolul eutrofizrii bazinelor n care se deverseaz.
Denitrificarea este calea prin care, compuii cu azot, levigai din sol i transportai n oceanul planetar sunt
reciclai la N2 atmosferic, acesta devenind din nou disponibil proceselor biologice prin fixare.
Unul dintre produsele reaciei de denitrificare oxidul nitros (N 2O) difuzeaz spre stratosfer, unde, ntr-o
reacie fotochimic este convertit la oxid nitric (NO). NO reacioneaz cu O3, formnd nitritul care se ntoarce sub forma
ploii acide. Rezultatul este distrugerea stratului de O3 care protejeaz organismele vii de radiaia UV.
Reducerea asimilatorie a nitrailor
Cele mai multe bacterii, dar i fungii, algele i plantele superioare au activitate nitrat-reductazic NAR(A), cu
funcie asimilatorie, adic enzima reduce nitratul la NH 4+. Reducerea nitrailor la nitrii este urmat de o serie de reacii de
reducere, consumatoare de energie, al cror rezultat final este formarea NH4:
Reducerea asimilatorie a nitratului nu este productoare, ci consumatoare de energie.

Nitrat-reductaza asimilatorie este o protein citoplasmatic (solubil). In prezena NH 4, sinteza ei este
represat. La fiecare treapt a reaciei are loc transferul a 2 e -. Treptele reaciei reducerii asimilatorii au loc n condiii de
aerobioz.
NH4 este sursa de azot asimilabil pentru toate bacteriile chimioorganotrofe.
La bacterii, NH4 este asimilat pe dou ci majore: calea glutamin-sintazei (GS) i glutamat-sintazei (GOGAT). O
cale alternativ de asimilare, la multe bacterii, inclusiv enterobacterii este calea glutamat-dehidrogenazei (GDH), mai
puin eficient energetic dect cile GS/GOGAT. GDH are afinitate mai mic pentru amoniu i este ineficient n celulele
care cresc n condiii de limitare a sursei de azot.
Reducerea asimilatorie i cea dezasimilatorie a NO 3- (denitrificarea) nu par a fi procese fiziologice corelate n mod
obligatoriu. Unele bacterii catalizeaz ambele tipuri de reacii. Altele fac numai reaciile reducerii dezasimilatorii ale NO 3
i nu pot s-l asimileze, iar o alt categorie asimileaz NO3, dar nu fac reacia de denitrificare. La organismele capabile s
catalizeze ambele tipuri de reacii, distincia dintre cele dou procese se face prin expunerea culturii la O 2. De exemplu, P.
aeruginosa poate asimila NO3 n prezenta sau n absena O2, dar denitrificarea are loc numai in condiii de anaerobioz.
Respiraia sulfatului
Sulfatul, anionul major n apa mrii, este cel mai oxidat compus al sulfului i are rol de acceptor final de e- n
procesul oxidrii anaerobe a unor compui organici de ctre organismele unui grup fiziologic special, al bacteriilor sulfatreductoare.
SO42- i So au rol de acceptori de e- n condiii anoxice pentru un grup larg de bacterii chimioorganotrofe sau
chimiolitotrofe hidrogen-oxidante. Ele posed echipamentul enzimatic care catalizeaz reducerea dezasimilatorie a
sulfatului. Produsul final al reducerii SO42- este H2S, care se poate acumula n cantiti mari n mediile naturale.
Bacteriile sulfat-reductoare sunt strict anaerobe i oxideaz diferite substraturi organice. Ele constituie un
ansamblu fiziologic i ecologic de tipuri morfologice diferite de bacterii anaerobe, care au n comun capacitatea de a
activa SO42- i de a-l reduce la H2S.
Bacteriile din grupul I (Desulfovibrio, Desulfomonas, Desulfotomaculum) utilizeaz lactatul, piruvatul, etanolul,
malatul etc., dar i H2 i reduc SO42- la H2S.
Substraturile organice sunt oxidate la acetat, deoarece bacteriile sulfat-reductoare (Desulfovibrio,
Desulfotomaculum) nu au echipamentul enzimatic al ciclului Krebs. Acetatul este secretat ca produs final.
Bacteriile din grupul al II-lea (Desulfobacter, Desulfococcus, Desulfonema) oxideaz acizii grai i n special
acetatul, pn la CO2 i reduc SO42- la So.
Desulfosarcina, Desulfococcus, Desulfobacterium, Desulfotomaculum sunt unice printre sulfat-reductori prin
capacitatea lor de a crete chimioautotrof cu H2 ca donor de e-, CO2 ca singur surs de C i SO42- ca acceptor de e-.
Toate bacteriile sulfat-reductoare sunt strict anaerobe. Reducerea dezasimilatorie a sulfatului este un proces
respirator obligatoriu pentru acest grup fiziologic i nu o cale alternativ a respiraiei, aa cum este denitrificarea. Sulfatul
este redus la H2S dup urmtoarea reacie;
Bacteriile sulfat-reductoare reprezint una dintre formele vechi de via ale planetei i particip la producerea i
transformarea depozitelor minerale n natur.
Ali compui oxidai ai sulfului (sulfitul SO 32-, tiosulfatul S2O32-, tetrationatul S4O62-) pot fi utilizai ca
acceptori de e- i sunt redui la H2S n procese dezasimilatorii. Reducerea lor este catalizat nu numai de bacteriile sulfatreductoare, ci i de alte grupe fiziologice.
Reducerea bacterian a sulfatului este un proces important pentru mineralizarea materiei organice n mediile
anoxice, n special n sistemele marine (cu salinitate de 1-4%, n care cresc Desulfovibrio, Desulfobacter, Desulfococcus)
i n mediile hipersaline.
Oxidarea complet a materiei organice la CO 2 cu reducerea simultan a SO42- la H2S nu depinde de fermentaiile
sintrofice.
Pe lng capacitatea de a folosi SO 42- ca acceptor de e-, multe bacterii sulfat-reductoare pot folosi NO 3- ca
acceptor de e-, pe care-l reduc la NH 3 sau fermenteaz anumii compui organici pentru producerea E, n absena
acceptorilor finali de e- (de exemplu, piruvatul este fermentat la acetat, CO 2 i H2).
SO42- este un acceptor de e- mai puin favorabil creterii bacteriene, comparativ cu O 2 sau NO3-, dar se elibereaz
suficient E pentru sinteza ATP.
Bacteriile sulfat-reductoare i metanogenele sunt dou populaii care intr n competiie metabolic pentru
aceleai substraturi. Ambele tipuri catalizeaz stadiile finale ale mineralizrii anaerobe a materiei organice i ambele
depind de microorganismele fermentative care convertesc materia organic complex, la compui mai simpli (H 2, CO2 i
acetat).
Se accept c cele dou grupe se exclud reciproc. Mediile bogate n sulfat selecteaz bacteriile sulfat-reductoare,
iar cele fr sulfat selecteaz metanogenele. Totui, cele dou grupe coexist n medii cu sulfat.
Reducerea So. Bacteriile care folosesc So ca acceptor final de e- genereaz H2S, dar nu reduc SO42- la H2S.
Reducerea asimilatorie a sulfatului
Bacteriile i organismele superioare (plante i animale) preiau sulful necesar din sulfat. Sulful are numrul de
oxidare 2 n compuii organici i +6 n SO 42-, o diferen de 8e-. Asimilarea S implic reducerea SO 42- la H2S, nainte de
ncorporarea sa n compui organici. Aceiai reacie de reducere are loc n procesul fiziologic al respiraiei anaerobe a
SO42-, dar mecanismele enzimatice sunt diferite. Reducerea SO 42- pentru a fi folosit ca surs de H 2S se numete reducerea
asimilatorie a sulfatului.
SO42- este activat de ATP. ATP-sulfurilaza catalizeaz legarea ionului SO 42-, de un fosfat al ATP i rezult
adenozin-fosfo-sulfatul (APS). O alt grupare fosfat este adaugat la APS i se formeaz fosfo-adenozin-fosfo-sulfatul
(PAPS), dup care ionul SO42- este redus. Ca i n reducerea dezasimilatorie, primul produs al reducerii SO 42- este sulfitul
(S2O32-).
In reaciile de reducere asimilatorie a SO 42-, H2S format este convertit la sulf organic, iar n cele de reducere
dezasimilatorie, H2S este excretat.
H2S este ncorporat n substratul organic, ca atom de S al cisteinei. La bacterii, substratul organic acceptor al S
este O-acetilserina, dup reacia;
Ali acceptori finali de eFe3+ are rol de acceptor de e - n metabolismul energetic la o varietate de bacterii chimioorganotrofe i
chimiolitotrofe pentru c este abundent n mediile naturale. Potenialul reductor al Fe3+/Fe2+ este foarte electropozitiv (+
0,77 V la pH 2). Reducerea Fe3+ poate fi cuplat cu oxidarea unor donori de e-, organici sau anorganici.
Geobacter metallireducens oxideaz acetatul, odat cu reducerea Fe3+ la Fe2+. Fe3+ este unul dintre cele mai
comune metale n sol i roci. Reducerea Fe3+ la Fe2+ este important deoarece furnizeaz o form mai solubil a Fe.
Mn metalic are mai multe stri de oxidare, Mn 4+ i Mn2+ fiind cei mai stabili i cei mai relevani. Bacteriile
chimioorganotrofe fac reducerea anoxic a Mn4+ la Mn2+. Potenialul redox al cuplului Mn4+/Mn2+ este foarte mare, astfel
c unii compui organici pot dona e- pentru reducerea Mn4+.
Ali compui anorganici care pot funciona ca acceptori de e - n respiraia anaerob sunt Se i As. In natur nu se
gsesc n cantiti mari, dar sunt poluani i pot suporta creterea anoxic a unor bacterii. Reducerea SeO 42- (selenat)la
SeO3- (selenit)i chiar la Seo (metalic) este o metod important pentru ndeprtarea Se din ap (bioremediere).
Respiraia fumaratului
In procesul respiraiei anaerobe, rolul de acceptor final de e - l au nu numai compuii anorganici (nitrai, nitrii,
sulfatul), ci i fumaratul, un compus organic.
n respiraia fumaratului, transferul de e - se face, ca i n procesul respiraiei aerobe, pe calea unei dehidrogenaze, a
unei lipoquinone, unul sau mai muli citocromi b si a unei fumarat-reductaze (o feredoxin), legat covalent cu grupul
prostetic FAD. Fumarat-reductaza catalizeaz urmtoarea reacie:
Fumarat-reductaza oxideaz NADH, lactatul, formiatul, glicerolul. Sursele de fumarat ale celulei sunt multiple:
fumaratul se formeaz din malat, aspartat, piruvat. Reducerea unei molecule de fumarat produce o molecul de ATP. E.
coli crete ntr-un amestec de H2 sau formiat i fumarat ca surs de carbon i energie.
Trimetil-amin-oxidul (TMAO) este un acceptor organic de e -, fiind i o substan de echilibru osmotic la petii
marini, unde are rolul de a excreta excesul de N.
O varietate de bacterii reduc TMAO la TMA (trimetil-amin). TMA are un miros puternic i o parte din mirosul
degajat de petele marin alterat se datoreaz TMA format prin aciunea bacteriilor facultative care pot folosi TMAO ca
acceptor de e-. Un analog al TMAO este DMSO (dimetil-sulfoxid), care este redus de unele bacterii la DMS (dimetilsulfit).
Trimetil amin-oxid
Respiraia carbonatului( Reducerea respiratorie a CO2)
Carbonatul (CO2 sau HCO3-) este unul din cei mai abundeni anioni anorganici n natur. CO 2 este produsul
metabolismului organismelor heterotrofe. Apa mrii este o soluie de carbonat, tamponat cu diferite sruri.
Unele bacterii folosesc CO 2 ca acceptor de e- n respiraia anaerob. Dintre bacteriile care reduc CO 2, cele mai
importante sunt metanogenele. Donorul de e- este H2. Metanogenele cresc n condiii de chimiolitotrofie, ntr-un mediu
mineral i o atmosfer gazoas format din amestec de CO 2 i H2. O parte a CO2 este asimilat, adic este folosit pentru
sinteza compuilor celulari, dar nu este fixat pe calea reductiv a ciclului Calvin, ci printr-un alt set de reacii specifice
grupului. O alt parte a CO2 este redus la CH4. Metanogenele sunt frecvente n mediile naturale, deoarece n reacia de
oxidare a H2, cuplat cu reducerea carbonatului, se elibereaz o cantitate relativ mare de energie:
Alte bacterii care reduc CO2 sunt acetogenele (Cl. aceticum, Acetobacter woodii). Ele produc acetat din CO2 i
H2, dup reacia:
Cnd cresc ntr-un mediu care conine o atmosfer format din amestecul de H 2 i O2,, att metanogenele ct i
acetogenele sunt chimiolitotrofe i sunt strict anaerobe. Ambele grupe se dezvolt i ca heterotrofe pe medii organice.
Fermentaia
Denumirea de fermentaie vine de la latinescul fervere, care nseamn a fierbe i semnific degajarea, uneori
abundent, a CO2 n timpul fermentaiei i i confer aspectul de fierbere.
Fermentaia este un proces catabolic productor de energie n absena O 2, n care compuii organici au rolul de
donori i de acceptori de electroni. Compuii chimici care ndeplinesc aceste funcii sunt, de regul, metabolii derivai
dintr-un substrat fermentabil(de exemplu, un glucid). Procesele redox se produc n absena oricrui acceptor terminal de
electroni.
Studiul tiinific al fermentaiilor a fost iniiat de L. Pasteur. In perioada l857-l875, el a demonstrat c procesele de
transformare biochimic a unor substraturi sunt consecina vieii fr aer a unor microorganisme, cu rolul de fermeni.
Fermentaia poate fi definit ca un ansamblu de reacii biochimice anaerobe de oxidare i de reducere care
furnizeaz celulei energia necesar prin mecanismul fosforilrilor la nivelul substratului, care au loc n citoplasm.
Funcia energetic major sau unic a fermentaiei este producerea ATP. ATP rezult prin transferul grupelor
fosfat, din intermediarii fosforilai cu potenial energetic nalt, ce se formeaz n timpul degradrii substratului.
Fermentaiile se desfoar n condiii anaerobe. La microorganismele strict anaerobe i la cele aerobe facultativanaerobe, n prezena O2, cile fermentative sunt represate. Cele strict anaerobe nu se dezvolt, iar cele facultativ-anaerobe
i schimb calea metabolic de producere a energiei, de la fermentaie la respiraie. Numai bacteriile lactice constituie o
excepie: O2 nu modific modul lor de a produce energie, astfel nct fermentaia continu chiar n prezena O 2. Efectul
inhibitor al O2 asupra fermentaiei, la microorganismele facultativ anaerobe ar fi datorat inactivrii uneia din enzimele
cheie ale cii Embden-Meyerhof, fosfofructokinaza.
La microorganismele aerobe-facultativ anaerobe, inhibiia fermentaiei n aerobioz poart denumirea de efect
Pasteur* i se manifest prin diminuarea net a cantitii produselor de fermentaie, precum i prin creterea randamentului
energetic ce se reflect n producerea unui volum net superior de biomas pentru aceiai cantitate de substrat consumat.
*
O celul facultativ-anaerob metabolizeaz glucoza pe cale aerob sau anaerob. In anaerobie, glucoza este degradat la lactat, rata
degradrii fiind mult mai mare dect n condiii aerobe. Diferena se datoreaz randamentului mai mic de sintez a ATP/molecul, n
timpul glicolizei: se produc 2 molecule de ATP/molecul, iar n aerobioz se sintetizeaz 36 molecule de ATP. In anaerobie, pentru
sinteza aceleiai mase celulare este necesar de 18 ori mai mult glucoz.
Dac suspensia celular anaerob se oxigeneaz, rata de consum a glucozei scade foarte mult, iar acumularea lactatului scade pn
spre 0. Fenomenul inhibrii consumului de glucoz i stoparea acumulrii lactatului n prezena O 2 se numete efect Pasteur. Efectul sa descoperit pentru fermentaia alcoolic, dar este o caracteristic a tuturor celulelor facultative, inclusiv a celulelor musculare.
Substraturile fermentabile sunt compui organici diveri: glucide sau compui nrudii (acizi organici, alcooli),
aminoacizi, amine, purine, pirimidine. In procesul fermentaiei, anumii compui organici, de obicei doi metabolii diferii,
derivai dintr-un substrat fermentabil au rolul de donor i respectiv, de acceptor de e-.
In procesul fermentativ este meninut echilibrul redox. Nivelul mediu de oxidare a produselor finale este egal cu
al produsului fermentabil: din glucoz rezult att metabolii oxidabili ct i reductibili.
Degradarea substratului n fermentaie este incomplet i de aceea se elibereaz o cantitate mult mai mic de
energie dect n procesul de respiraie, n cursul creia oxidarea substratului este complet.
Procesele de fermentaie sunt iniiate de fosforilri la nivelul substratului. Rezultatul lor este sinteza ATP, dar i a
altor compui cu o legtur bogat n energie, cel mai important fiind acetil-CoA (fig. 58).
Diferena esenial ntre metabolismul aerob i anaerob const n soarta acidului piruvic i a NADH. n
metabolismul aerob, NADH este oxidat n catena transportoare de e -, cu sinteza ATP prin fosforilare oxidativ, iar n
anaerobioz NADH este folosit n reducerea anaerob a compuilor organici.
Fig. 58. Structura moleculara a acetil CoA.
Fermentaia glucidelor
Glucidele sunt cele mai importante substraturi fermentabile. Bacteriile fermenteaz polizaharide (amidonul,
celuloza, pectina, chitina), dizaharide (lactoza, maltoza, zaharoza), hexoze (glucoza, fructoza, galactoza), pentoze
(arabinoza, xiloza), acizi derivai din zaharuri (acidul gluconic i glucuronic), polialcooli (manitol, glicerol).
Fermentaia diferitelor glucide are loc n una sau n cteva etape specificice, urmate de o etap nespecific. In
etapa nespecific intervin unele dintre enzimele implicate n fermentaia glucozei.
Glucoza este fermentat, virtual, de toate bacteriile anaerobe. Fermentaia ei este cel mai cunoscut proces
fermentativ i este iniiat printr-o reacie de fosforilare, n urma creia rezult glucozo-6 fosfatul. Procesul poate fi
considerat c decurge n dou etape:
- n prima etap se desfoar reaciile de oxidare a glucozei. Rezultatul lor este formarea intermediarului central al
metabolismului fermentativ al glucidelor acidul piruvic. Acest compus este mai oxidat dect glucoza i diferena
de potenial redox este stocat n piridin-nucleotidele reduse;
- n etapa a II-a au loc reacii de reducere a compuilor intermediari, prin care se formeaz mai multe produse finale.
Glucoza este oxidat pe una din urmtoarele 4 ci:
- calea Embden-Meyerhoff-Parnas (EMP, denumit i calea hexozo-difosfatului sau a glicolizei);
- calea hexozo-monofosfatului (HMP, denumit i calea pentozo-fosfatului);
- calea fosfocetolazei;
- calea Entner-Doudoroff.
Calea EMP este calea major de degradare a glucozei, la cele mai multe organisme, precum i n celulele vegetale
i animale (fig. 59). Este o cale integral anaerob. Ea cuprinde o secven de l0 reacii enzimatice, prin care o molecul de
glucoz este degradat la dou molecule de piruvat, fr participarea O2 molecular.
Glucoza este fosforilat la glucozo-6 fosfat, n cursul procesului de transport membranar, sau intracelular, sub
aciunea unei kinaze citoplasmatice, cu consum de ATP. Glucozo-6 fosfatul este izomerizat la fructozo-6 fosfat, iar acesta,
sub aciunea fosfofructokinazei este convertit la fructozo-1,6 difosfat.
Reacia caracteristic a cii EMP este scindarea fructozo-1,6 difosfatului, ceea ce justific denumirea de calea
hexozo-difosfatului.
Fig. 59. Calea Embden-Meyerhoff-Parnas (calea glicolizei) de degradare a glucozei la piruvat.
Fructozo-1,6 difosfatul este scindat sub aciunea aldolazei i rezult un amestec de triozo-fosfai (aldehida-3
fosfogliceric i dihidroxiaceton-1 fosfat), reversibil interconvertibili. Numai gliceraldehid-3P poate fi degradat pe calea
glicolizei. Intr-o prim etap, gliceraldehid-3 P este oxidat, cu reducerea NAD + i se formeaz dou molecule de acid 1,3
difosfogliceric. Printr-o serie de reacii, acidul l,3 difosfogliceric este convertit la piruvat:
Reacia de clivare a fructozo-1,6 difosfatului i formarea 3-fosfogliceroil-fosfatului. Se esterific fosfatul

anorganic i se reduce NAD+.
In aceast reacie, aldehida 3-fosfogliceric este oxidat i adus la nivelul de oxidare al gruprii COOH. Este o
reacie exergonic. Nu rezult acidul fosfogliceric liber, ci o anhidrid mixt a gruprii COOH a acidului 3-fosfogliceric
i a acidului fosforic, adic 3- fosfogliceroil-fosfatul, un compus macroergic care conserv E potenial a oxidrii gruprii
aldehidice la acid.
In etapa urmtoare, 3-fosfogliceroil-fosfatul, transfer gruparea fosfat la ADP i se sintetizeaz ATP.
Conversia celor dou molecule de acid l,3-difosfogliceric la dou molecule de acid piruvic i regenerarea ATP.
Calea EMP nu explic modul n care pentozele pot fi folosite ca surs de energie i nici formarea ribozei, necesar
biosintezei acizilor nucleici.
Fosforilrile n anaerobioz sunt puin numeroase, deoarece se produc numai n reaciile de dehidrogenare a
substratului, neexistnd caten de respiraie. De exemplu, n fermentaia glucozei, fosforilarea are loc n dou etape :
- prin conversia gliceraldehid- 3 P sub aciunea NAD
- prin conversia fosfoenol-piruvatului la piruvat. Se sintetizeaz dou molecule de ATP. Reaciile de reducere a
intermediarilor oxidai la produse finale (de exemplu, reducerea piruvatului la lactat) nu produc energie. Unele
reacii de reducere sunt chiar consumatoare de ATP (de exemplu, formarea acidului piruvic). Producerea limitat de
energie n procesele fermentative explic randamentul totdeauna inferior al creterii n anaerobioz, comparativ cu
acela al procesului respirator.
Piruvatul este intermediarul oxidat cel mai frecvent al diferitelor ci catabolice. Uneori se formeaz acetil-CoA.
Reaciile de reducere a compusului oxidat intermediar (piruvatul) conduc la formarea diferitelor produse finale,
fie unice, fie n amestec, pe baza crora se difereniaz bacteriile fermentative. In cazul n care rezult un amestec de
produse finale, acestea au grade diferite de oxidare, de la CO 2 pn la alcool (mai redus dect glucoza), trecnd prin
nivele intermediare de oxidare a cetonelor i aldehidelor.
Produsele finale ale fermentaiei nu pot fi degradate n anaerobioz. Proporia lor n amestec influeneaz n mod
direct valoarea pH a mediului la sfritul procesului. Analiza cantitativ a produselor finale ale unei fermentaii este util
pentru caracterizarea unor grupe taxonomice.
Glucoza este fermentat, virtual, de toate bacteriile anaerobe.
Fermentaia lactic
Fermentaia lactic este procesul biologic prin care microorganismele catabolizeaz glucoza din mediu i o
tranasform n acid lactic. In cantitate mic, acidul lactic este produsul de catabolism a unui numr mare de
microorganisme, dar unele bacterii furnizeaz acidul lactic, ca produs principal al metabolizrii glucidelor.
Bacteriile lactice se mpart n dou categorii:
a) bacteriile homofermentative produc numai acid lactic ca produs final al procesului fermentativ: Lactobacillus
delbrueckii, L. bulgaricus. L. acidophilus, L. casei, L. plantarum, Streptococcus lactis, S. cremoris, S. thermophilus;
b) bacteriile heterofermentative produc, pe lang acid lactic, cantiti mari ale altor produse finale (CO 2, etanol, acid
acetic, glicerin, manit, in funcie de specie): L. brevis, L. lycopersici, Leuconostoc mesenteroides, L. dextranicum,
L. citrovorum.
Cantiti mari de acid lactic sunt produse de unii fungi filamentoi (Rhizopus), dar pentru producerea industrial a
acidului lactic se folosesc bacteriile lactice.
Bacteriile lactice sunt Gram pozitive, nesporulate, anaerobe-aerotolerante sau microaerofile, mobile, nepatogene
i cresc n mediu acid.
Acidul lactic (-hidroxipropionic) conine un atom de carbon asimetric i de aceea poate exista sub dou forme
optic active: izomerii D(-) i L (+):
Lactat-dehidrogenaza este stereospecific. Izomerul rezultat din fermentaie depinde de natura dehidrogenazei
lactice. Bacteriile homofermentative i Rhizopus oryzae (dintre fungii filamentoi) conin L-lactat-dehidrogenaza i
produc lactat (L+). Cele heterofermentative conin o D-lactat-dehidrogenaz i formeaz acid D(-) lactic. Bacteriile lactice
produc acid lactic optic inactiv, adic amestecul racemic al formelor D(-) i L(+). Racemizarea se datoreaz aciunii
enzimei racemaza, existent la majoritatea bacteriilor lactice. Activitatea racemazei depinde de concentraia de acid
nicotinic din mediu, un factor de cretere esenial pentru bacteriile lactice. In general, bacteriile lactice necesit prezena
n mediu, a vitaminelor grupului B i a unor aminoacizi, care au rolul de factori de cretere.
Diferenele dintre bacteriile homofermentative i heterofermentative sunt determinate de prezena sau de absena
aldolazei, enzima cu rol esenial n glicoliz. Bacteriile homofermentative au aldolaz i cliveaz hexozodifosfatul la
triozofosfai, iar n echipamentul enzimatic al celor heterofermentative, aldolaza lipsete.
Din punct de vedere biochimic, fermentaia lactic este cea mai simpl: piruvatul, furnizat pe calea EMP este
redus direct, fr decarboxilare, sub aciunea NAD + - lactat-dehidrogenazei, la lactat.
In acest proces fermentativ, acidul lactic este produsul final unic sau dominant cantitativ. In funcie de proporia
produselor finale ale fermentaiei se disting trei tipuri de microorganisme:
a) Microorganisme homofermentative (lactobacili, streptococi, unii fungi, unele protozoare). Acidul lactic este produsul
unic al fermentaiei. Dintr-un mol de glucoz se formeaz doi moli de lactat. Acelai set de reacii are loc n celula
muscular, n condiii de hipoxie:
Glucoza degradat pe calea glicolizei:
b) Microorganisme heterofermentative (unele specii de Lactobacillus, Peptococcus) realizeaz o fermentaie

heterolactic. Procesul ncepe pe calea hexozo-monofosfatului(HMP) i se continu pe calea fosfocetolazei.
Calea HMP este o variant a cii glicolitice, activ la unele bacterii, pentru utilizarea hexozelor, pentozelor i a
altor glucide. Este o cale de ocolire a cii glicolitice i de aceea se mai numete untul HMP sau calea pentozofosfatului, calea fosfogluconatului sau calea Warburg-Dickens-Horecker. Aceast cale furnizeaz uniti pentozice care
sunt convertite la intermediari ai cii glicolitice i la acid piruvic.
Prima reacie a untului HMP este fosforilarea glucozei, ca i n calea glicolizei. Glucozo-6 fosfatul este oxidat la
acid-6 fosfogluconic.
Acidul fosfogluconic este decarboxilat la ribulozo-5-fosfat:
Ribozo-5 fosfatul este utilizat pentru sinteza acizilor nucleici, pentru glicoliz etc.
Calea fosfocetolazei este o cale fermentativ restrns la bacteriile heterolactice. Este o variant a cii hexozomonofosfatului, cu care are n comun primele trei reacii ce conduc la formarea ribulozo-5 fosfatului. Acesta este
izomerizat la xilulozo-5 fosfat. Fosfocetolaza, enzima caracteristic a cii, cliveaz xilulozo-5 fosfatul, la aldehida-3
fosfogliceric i acetil fosfat.
Aldehida-3 fosfogliceric este metabolizat pe calea EMP, pn la piruvat i n final la lactat, iar acetil-fosfatul
este redus n dou trepte succesive, la etanol.
In fermentaia heterolactic se formeaz cantiti echimolare de CO 2, etanol i lactat (fig. 60).
Fig. 60. Fermentatia heterolactica bacteriana pe calea fosfocetolazei. Produsele finale sunt CO 2, acidul lactic si etanolul.
Etanolul se formeaz din acetil-fosfat, prin dou reduceri succesive care echilibreaz cele dou oxidri ce au loc
n reacia de conversie a glucozo-6 P la pentozo-P i CO 2. Produsele finale ale fermentaiei sunt etanolul, lactatul i CO2.
c) Microorganisme aceto-lactice. Bacteriile din g. Bifidobacterium, ntr-o fermentaie mixt aceto-lactic (fig. 61)
produc un amestec de acizi lactic i acetic, dup reacia:
Glucoza este fosforilat i convertit la fructozo-6 fosfat, ca i n calea glicolitic EMP. Fructozo-6 fosfatul este
clivat ntr-o reacie de fosforilare cu fosfat anorganic, ntr-o molecul de acetil-fosfat i eritrozo-4 fosfat. Reacia eritrozo4 fosfatului, cu o molecul de fructozo-6 fosfat iniiaz o serie complex de rearanjri moleculare, din care rezult
gliceraldehid-3 fosfat i acetil-fosfat:
Fig. 61. Fermentatia acetolactica a glucozei la Bifidobacterium.
Fermentaia alcoolic produs de levuri

Fermentaia alcoolic este foarte asemntoare celei lactice, diferena fiind numai cu privire la transformrile
acidului piruvic. Cea mai mare parte a etanolului produs n natur i n industrie rezult prin catabolizarea anaerob a
glucozei i a altor zaharuri de ctre S. cerevisiae (fig. 62).
Levurile catabolizeaz glucoza pe calea EMP. Dintr-o molecul de glucoz se formeaz dou molecule de piruvat,
care nu este convertit la acetil-CoA, ca n metabolismul aerob i nici redus la acid lactic, ci sub aciunea piruvatdecarboxilazei, o enzim cheie n fermentaia alcoolic, este decarboxilat la acetaldehid. Acetaldehida este redus de
NAD-reductaz, la etanol.
Producia net de ATP n fermentaia alcoolic este de dou molecule, pentru fiecare molecul de glucoz, mult
mai puin dect n catabolizarea aerob.
Prin transferul celulelor n condiii anaerobe, rata degradrii glucozei se intensific de 3-4 ori. Transferul invers
este nsoit de diminuarea ratei de catabolizare a glucozei i oprirea fermentaiei alcoolice. Fenomenul poart denumirea
de efect Pasteur.
Fig. 62. Fermentatia glucozei produsa de levuri. Rezulta etanol si CO2.
Fermentaia alcoolic bacterian

O alt cale a fermentaiei alcoolice este aceea care se desfoar n celulele bacteriene saprobionte anaerobe,
aerotolerante, ce aparin g. Zymomonas. Glucoza este catabolizat pe calea Entner-Doudoroff (ED) (fig. 63).
Calea ED a fost descoperit la Pseudomonas saccharophila i la Zymomonas mobilis, dar este funcional i la
unii viermi parazii.
Primul intermediar al cii este glucozo-6 P, care este oxidat, ca i pe calea HMP, la 6-fosfo-gluconat.
Prin reacia de dehidrogenare, 6-fosfo-gluconatul formeaz un compus intermediar
2-ceto-3-dezoxi-6-fosfo-gluconatul, care este scindat sub aciunea aldolazei, la piruvat i aldehida-3-fosfogliceric.
Aldehida-3-fosfogliceric poate fi catabolizat de enzimele cii EMP i rezult piruvat sau de enzimele cii HMP
i se formeaz precursori pentru biosinteza ADN, ARN, a vitaminelor, aminoacizilor aromatici etc. Calea funcioneaz i
la Rhizobium. Lipsete la bacteriile Gram pozitive, cu excepia unora din g. Nocardia.
Bacteriile din g. Zymomonas metabolizeaz piruvatul prin decarboxilare, deoarece au o enzim rar la bacterii
piruvat-decarboxilaza. Pe aceast cale, dintr-o molecul de glucoz se formeaz dou molecule de etanol i dou
molecule de CO2.
Multe bacterii lactice, enterobacterii i clostridii formeaz cantiti mari de piruvat n procesul fermentaiei, dar nu
au piruvat-decarboxilaz pentru producerea acetaldehidei.
Fig. 63. Fermentatia alcoolica bacteriana (g. Zymomonas). Se formeaza 2 molecule de CO2 si 2 molecule de etanol.
Fermentaiile acide
La cele mai multe bacterii, catabolizarea glucozei la acid piruvic se desfoar pe calea EMP.
Exist cteva tipuri de fermentaii, care se deosebesc de fermentaia homolactic, prin reacia de reducere a piruvatului,
deoarece numai o parte a acestui intermediar este redus direct la lactat, dar majoritatea moleculelor sale sunt supuse unei
reacii de decarboxilare, sub aciunea piruvat decarboxilazei. Se formeaz acetaldehida, care este oxidat n trepte
succesive, rezultatul fiind un amestec de produse de fermentaie n care predomin acizii.
Echilibrul cantitativ al produselor finale depinde de echipamentul enzimatic al speciei bacteriene, dar i de un mcanism
general de reglare a metabolismului bacterian, n funcie de pH-ul mediului de cretere. Dac pH-ul scade sub un anumit
nivel, datorit producerii iniiale a acizilor tari (acetic, lactic), metabolismul bacterian este reglat spre producerea acizilor
mai slabi (propionic, butiric) i n anumite cazuri, a corpilor cetonici (butanediol) sau a alcoolilor (etanol, butanol).
Cele mai multe fermentaii bacteriene sunt acide. In funcie de raportul cantitativ al produselor finale se disting
urmtoarele tipuri:
Fermentaia acid mixt (fig 64) este caracteristic a unui numr mare de enterobacterii negative pentru reacia
Voges-Proskauer. In varianta sa cea mai simpl, fermentaia acid mixt este rezultatul a dou serii principale de reacii:
- reducerea direct a piruvatului la lactat
- clivarea piruvatului la formiat i acetil, n prezena CoA.
Reacia este catalizat de formiat-piruvat-liaz:
Unele grupri acetil din acetil-CoA sunt reduse de dou ori: la acetaldehid i la etanol. Reacia este catalizat de
o alcool-dehidrogenaz, legat de CoA:
Alte grupri acetil, care nu sunt necesare pentru oxidarea NADH pot fi folosite pentru a furniza ATP suplimentar.
Fosfotransacetilaza catalizeaz transferul reversibil al acetatului, de la acetil-CoA, la fosfat, cu formarea acetil-fosfatului:
Intr-o reacie reversibil, acetokinaza transfer fosfatul de la acetil-P, la ADP pentru a forma ATP i elibereaz
acetatul:
Fig. 64. Produsele finale derivate din piruvat prin fermentatie acida mixta.
Produsele finale ale fermentaiei acide mixte sunt: lactatul, acetatul, etanolul i formiatul. Consecutiv clivrii
formiatului, la multe enterobacterii (E. coli), din fermentaia glucozei rezult gaze (CO 2, H2). Dac din echipamentul
enzimatic lipsete formiat-liaza, fermentaia se produce fr gaze.
Unele enterobacterii, n special cele care au formiat-dehidrogenaz, produc o cantitate mic de acid succinic, n
prezena ATP, prin reacia de condensare a unei molecule de CO 2 cu o molecul de piruvat. Reacia este catalizat de
piruvat-feredoxin-oxidoreductaz.
Proporia produselor finale ale fermentaiei depinde de condiiile de cultivare. PH-ul mediului scade datorit acumulrii
acizilor rezultai n fermentaie.
Fermentaia butiric
Fermentaia butiric este caracteristic, dar nu exclusiv, bacteriilor zaharolitice din g. Clostridium (fig. 65).
Butiratul se formeaz pe o cale metabolic ce ncepe cu clivarea piruvatului, n prezena CoA, n acetil-CoA, CO2
i H2. CO2 i H2 se formeaz direct, fr faza intermediar a acidului formic:
Dou molecule de acetil-CoA se condenseaz i formeaz aceto-acetil-CoA. Aceto-acetil-CoA este redus la

butirat, dup urmtoarea reacie:
O proporie variabil a moleculelor de acetil-CoA este hidrolizat la acetat i regenereaz CoA.

Unele specii ale g. Clostridium pot forma alte produse de fermentaie: alcooli (butanol, etanol, izopropanol) i
aceton, ce rezult prin reducerea acizilor formai n fermentaie.
Fig. 65. Fermentatia butirica
Conversia piruvatului la acetil-CoA implic sistemul enzimatic al piruvat-feredoxin-oxidoreductazei (PFO), o

enzim ce catalizeaz oxidarea piruvatului pentru a forma acetil-CoA i CO 2. Feredoxina este un transportor de e -, care i
poate dona unei hidrogenaze, cu formarea H2.
Feredoxinele sunt proteine cu Fe i S, care funcioneaz i n alte reacii: fixarea N 2, fotosintez. PFO catalizeaz
o reacie rapid de schimb ntre CO2 i gruparea COOH a piruvatului, reacie ce poate fi folosit pentru a diferenia PFO
de alte enzime de clivare a piruvatului. In condiii reductoare, reacia poate fi reversat, permind sinteza piruvatului din
acetat i CO2.
PFO are un rol important n procesele de oxido-reducere ale bacteriilor anaerobe (Clostridium). Enzima permite
reutilizarea H2 ca potenial reductor, avnd rol de hidrogenaz de nglobare. Are un potenial redox foarte mic,
asemntor cu al H2 (-0,42 V). Funcia de hidrogenaz de nglobare a PFO catalizeaz reducerea produselor primare acide
ale fermentaiei mixte, rezultate din acidul piruvic, la molecule neutre: prin reducerea aceto-acetilului rezult butanol, prin
decarboxilarea aceto-acetil-CoA se formeaz acetona, iar prin reducerea acetonei rezult izopropanol.
Recircularea H2 i utilizarea sa ca potenial reductor pstreaz echilibrul redox al mediului de cretere a acestor
bacterii.
Fermentaia butanediolului
Fermentaia butanediolului (2,3 butan-glicol) este produs de unele enterobacterii (Vibrio, Aeromonas), de unele
specii de Bacillus i de unele bacterii lactice (Streptococcus cremoris, Lactobacillus cremoris).
Pe lng sistemul enzimatic al fermentaiei acide mixte, ele au i setul de enzime al fermentaiei particulare,
denumit butanediolic sau butilen-glicolic, care furnizeaz ca produs final, o molecul neutr de 2,3-butanediol.
Aceast cale metabolic intr n aciune dup ce pH-ul mediului de cretere scade sub 6.
Reacia cheie a acestei ci este cea de condensare a dou molecule de piruvat, prin decarboxilare i eliberare a
acidului formic. Rezult diacetilul, care este redus la acetoin (acetil-metil-carbinol).
Prin reducerea acetoinei se formeaz butanediolul, dup urmtoarea reacie global:
Diacetilul i acetoina dau aroma caracteristic untului. Diacetilul se formeaz din lapte (l g/l). Citratul este scindat
n acetat i oxalo-acetat. Oxalo-acetatul este decarboxilat la piruvat.
La enterobacterii, butanediolul se formeaz pe calea acetolactatului. Dou molecule de piruvat se condenseaz
printr-o reacie de decarboxilare i se formeaz acetolactatul:
Acetolactatul este decarboxilat sub aciunea aceto-lactat-decarboxilazei i se formeaz acetoina, care este redus
la butanediol.
Calea fermentaiei butanediolice se evideniaz prin reacia Voges-Proskauer * i prin valoarea relativ ridicat a
pH.
*
Reactia Voges-Proskauer evideniaz capacitatea unor microorganisme de a produce prin fermentaia glucozei, acetil-metilcarbinol(acetoina), care n prezena alcalilor este oxidat la diacetil. Diacetilul se combin cu arginina, creatina sau cu creatinina din
mediu i determin apariia culorii roii.
Fermentaia acidului propionic

Acidul propionic este produs pe cale fermentativ de un grup de bacterii nesporulate din g. Propionibacterium.
Ele pot fermenta acidul lactic (produsul final al altor fermentaii bacteriene) (fig. 66). Se formeaz acid propionic, acid
acetic i CO2. Aceast cale de fermentaie permite generarea ATP prin metabolizarea acidului lactic sau a acidului piruvic,
rezultat pe calea glicolizei:
O parte din acidul piruvic este oxidat la CO 2 i acetil-CoA. Acetil-CoA este utilizat pentru sinteza ATP i a acetilP, care ulterior este redus la acid acetic. O alt parte a acidului piruvic este carboxilat la acid oxalo-acetic:
Fig. 66. Reprezentarea schematica a fermentatiei acidului lactic la acid propionic.
Catabolismul piruvatului
Piruvatul este catabolizat pe cale aerob sau anaerob. Microorganismele strict aerobe sau cele facultative, n
prezena O2 realizeaz decarboxilarea oxidativ a piruvatului i formeaz acetil-coenzima A, care intr n ciclul Krebs, la
nivelul oxalo-acetatului:
Dac oxalo-acetatul nu se formeaz cu o rat corespunztoare (datorit faptului c intermediarii ciclului Krebs,
acidul alfa-cetoglutaric i acidul succinic sunt precursorii altor constituieni), meninerea ciclului este posibil prin sinteza
suplimentar a acidului oxalo-acetic, prin carboxilarea piruvatului sau a acidului fosfo-enol-piruvic:
In anaerobioz, piruvatul este decarboxilat sub aciunea piruvat-decarboxilazei i se formeaz acetaldehid i CO 2,

redus ulterior la etanol, de ctre bacteriile din g. Zymomonas:
Piruvat-decarboxilaza poate fi asociat cu un sistem transportor de electroni, pan la CO 2.
Catabolismul lipidelor
Trigliceridele sunt hidrolizate la glicerol si acizi grai, sub aciunea exo- sau endolipazelor. Aceste enzime sunt
produse de mucegaiuri (A. flavus, P. roqueforti, Rhizopus sp., Geotrichum), la levuri (Candida lipolytica, Torulopsis, S.
cerevisiae), la bacterii (Serratia liquefaciens, Ps. aeruginosa, Alcaligenes sp., S. aureus).
Glicerolul intr n calea glicolizei, la nivelul dihidroxi-aceton-fosfatului, trecnd prin dihidroxi-acetona sau prin
glicerol fosfat (fig. 67). Ulterior, aceste produse sunt degradate pe calea glicolizei. Procesul este anaerob.
Fig. 67. Caile de catabolizare a glicerolului
Catabolismul glicerolului
Acizii grai sunt activai de ATP n prezena CoA i se formeaz acil-CoA. Acesta este oxidat la carbonul beta i
prin hidroliz rezult acetil-CoA, care este mai scurt dect cel iniial cu doi atomi de carbon.
Fig. 68. Mecanismul beta-oxidrii unui acid gras care duce la formarea succesiv a acetil-CoA (cu 2 atomi de C).
Catabolizarea compuilor organici azotai

Numeroase bacterii (in special din g. Clostridium i Bacillus) secret exoproteaze care scindeaz lanurile
polipeptidice n fragmente de civa aminoacizi. Sinteza enzimelor proteolitice este represat dac n mediu se adaug
hidrolizat de proteine sau amestec de aminoacizi. Peptidazele hidrolizeaz polipeptidele i le transform n aminoacizi. In
funcie de modul de aciune asupra lanului polipeptidic, peptidazele sunt de dou tipuri: endopeptidaze i exopeptidaze.
La rndul lor, exopeptidazele sunt de dou categorii :
- aminopeptidaze, cele care ncep aciunea lor la extremitatea NH 2 liber a polipeptidului. Activitatea lor depinde de
prezena ionilor metalici ;
- carboxipeptidaze, cele a cror aciune se initiaz la extremitatea COOH liber a polipeptidului.
Aciunea acestor enzime are ca efect formarea di- i tripeptidelor, ulterior hidrolizate n aminoacizi.
Majoritatea bacteriilor oxideaz puin sau deloc aminoacizii. Ele sunt mult mai active n sinteza dect n
degradarea lor, n special n faza de cretere rapid. Unele bacterii pot degrada aminoacizii, n special dac acetia sunt
unica surs de C n mediu. La plantele superioare, ca i la bacterii, dominant este sinteza, deoarece ca i bacteriile, tind s
creasc continuu.
Exist dou ci principale de catabolizare a aminoacizilor :
- prin dezaminare
- prin decarboxilare.
Dezaminazele microorganismelor sunt foarte diverse. Ele cuprind enzime oxidative i neoxidative. Rezultatul
dezaminrii oxidative este formarea iminoacidului, care este apoi hidrolizat n acid - cetonic i NH 3:
Dezaminarea neoxidativ poate fi de trei feluri:

dezaminare desaturant, cu formarea acidului nesaturat i a NH3;
dezaminare reductiv, ce const n reducerea aminoacizilor la acidul saturat corespunzator i formarea NH 3;
dezaminare prin deshidratare, o cale exclusiv a microorganismelor pentru aminoacizii hidroxilai. Se formeaz
acidul cetonic i NH3;
Un tip special de dezaminare este dezaminarea cuplat (reacia Stickland) (fig. 69). Reacia se numete
dezaminare cuplat, deoarece necesit cel puin o pereche de aminoacizi complementari, unul fiind oxidat, iar cellalt
avnd rolul de acceptor de electroni.
Reacia global a dezaminrii cuplate este urmtoarea:
-
Aminoacidul donor este oxidat sub aciunea unei NAD-dehidrogenaze. Rezultatul reaciei este dezaminarea celor
doi aminoacizi. Acidul alfa-cetonic este decarboxilat secundar, reacie n cursul creia se produce fosforilarea la nivelul
substratului (pentru o pereche de aminoacizi se sintetizeaz o molecul de ATP).
Un exemplu tipic este fermentaia alaninei i a glicinei, dup reacia global:
Fig. 69. Mecanismul reaciei Stickland, ca modalitate a metabolismului fermentativ productor de energie. L-alanina are rol de donor
de electroni , iar glicina de acceptor. Ambele sunt convertite la acid acetic.
Dup comportamentul lor n reacia Stickland, aminoacizii se mpart n trei grupe: reductori, oxidani i cei care se
comport ca reductori sau oxidani, n funcie de condiiile de mediu.
Reacia de dezaminare cuplat este catalizat de numeroase bacterii anaerobe (de exemplu, Clostridium).
Decarboxilarea aminoacizilor este o cale de catabolizare comun multor microorganisme, proteolitice sau
neproteolitice. Se formeaz CO2 i o amin:
Un mediu acid favorizeaz biosinteza decarboxilazelor i pH crete, datorit producerii NH 3, ureii, aminelor, iar
ntr-un mediu alcalin este stimulat sinteza dezaminazelor i pH scade.
Unele bacterii i obin energia prin catabolizarea unui singur aminoacid (arginina), pe ci fermentative foarte
specifice i complexe sau prin fermentarea unor compui aminai (purine, pirimidine).
Catabolismul compuilor aromatici
In raport cu capacitatea de a metaboliza compuii aromatici, bacteriile se mpart n trei categorii:
cele care nu degradeaz astfel de compui;
cele care realizeaz o degradare incomplet (de exemplu, enterobacteriile). E. coli scindeaz triptofanul la indol i
piruvat, sub aciunea unei triptpofanaze, fr s deschid ciclul benzenic sau pirolic. Reacia de evideniere a
indolului n mediile nutritive peptonate este un test de identificare a enterobacteriilor, utilizat frecvent (fig. 70);
bacteriile care metabolizeaz complet compuii aromatici, prin ruperea structurilor ciclice. Reacia de clivare a
moleculelor ciclice este generatoare de energie.
Fig. 70. Reacia de degradare a triptofanului de ctre E. coli.
Degradarea hidrocarburilor
O categorie special de substane organice relativ rezistente la aciunea degradativ a bacteriilor sunt
hidrocarburile*. Molecula lor conine numai atomi de C i H. Hidrocarburile se leag ferm de suprafeele solide, inclusiv
de granulele solului. Cele uoare i adeseori toxice tind s se volatilizeze i altereaz calitatea aerului, periclitnd
sntatea omului i animalelor.
Majoritatea moleculelor componente ale petrolului brut i din produsele de rafinare sunt biodegradabile.
Microorganismele care degradeaz petrolul sunt ubicvitare, dar un rol major n decontaminarea mediilor poluate cu petrol
l au pierderile abiotice prin evaporare, dispersie i fotooxidare.
Hidrocarburile cu catena linear sunt degradate de reprezentanii ctorva genuri de bacterii (Nocardia,
Pseudomonas, Mycobacterium) i de levuri, dar cele ciclice sunt foarte rezistente la aciunea degradativ.
*
Petrolul este un amestec de mai multe clase(fracii) de hidrocarburi i ali compui organici, inclusiv organo-metalici, care conin
sulf, vanadiu i nickel:
- fracia alifatic, reprezentat de alcani i alchene (hidrocarburi cu caten linear, saturate i respectiv, nesaturate)
- fracia aromatic (compui aromatici nesaturai, de exemplu, benzenul)
- fracia gudronului i fracia asfaltic, alctuite din compui chimici compleci.
Ordinea descrescnd a biodegradabilitii hidrocarburilor petrolului este: n-alcani > alcani cu caten ramificat > alchene ramificate
> aromatice n-alkil cu gr. mol. mic > monoaromatice > alcani ciclici > aromatice polinucleare > asfaltene.
Petrolul brut este supus aciunii degradative energice a bacteriilor. Unele specii de Pseudomonas catabolizeaz
hidrocarburile aromatice din petrol. Procesul este aerob, ceea ce explic stabilitatea depozitelor de petrol pentru perioade
foarte lungi, dar dup expunerea la aer, hidrocarburile din petrol sunt oxidate.
Reacia de degradare a hidrocarburilor este catalizat de metan-monooxigenaz* i implic participarea O 2 ca
reactant. Unul dintre atomii moleculei de O 2 este ncorporat n molecula oxidat.
Alcanii sunt convertii la alcool. Alcoolul poate fi oxidat la aldehid i acid, dup care intr n ciclul -oxidrii i
n ciclul acizilor tricarboxilici.
Hidrocarburile aromatice policiclice mici (cu 1-3 cicluri) i cele mari (cu 4 sau mai multe cicluri naftalen,
antracen, fluorantren, piren, crisen) sunt folosite ca unic surs de C de bacterii, cianobacterii, fungi, alge. Oxidarea
compuilor aromatici are ca rezultat formarea unor molecule cu un singur ciclu aromatic (catecol, protocatecol, gentisat,
homogentisat).
Calea degradrii fenil-alaninei i tirozinei trece prin gentisat i respectiv, homogentisat.
*
Cea mai mare parte a O 2 molecular consumat n metabolismul aerob, este redus cu e - transportai pe catena de respiraie, cu formarea
apei. Mici cantiti de O2 sunt introduse n substraturile organice, formndu-se gruparea OH. Enzimele care catalizeaz aceste reacii
se numesc oxigenaze i sunt de 2 tipuri:
dioxigenaze, cele care catalizeaz introducerea ambilor atomi de O n substratul organic

monooxigenaze introduc un singur atom de O.
Dioxigenazele, denumite oxigen-transferaze, catalizeaz reacii de tipul AH2 + O2 -- A(OH)2
Cele 2 grupri OH rezultate sunt adiacente i produsul A(OH) 2 este adeseori instabil, deoarece legtura C-C care poart cele 2 grupri
OH se rupe.
Monooxigenazele (hidroxilaze) catalizeaz introducerea unui singur atom de O ntr-un substrat organic, cellalt atom fiind redus la
ap. Monooxigenazele necesit al II-lea substrat care s cedeze e- necesari reducerii celui de al II-lea atom de O.
Oxigenazele sunt enzime Fe, dar unele conin i Cu.
In etapa a II-a se produce clivarea ciclului monoaromatic, n orice punct al su. Rezult compui care intr in
ciclul Krebs (succinat, acetil-CoA, piruvat). Degradarea fenil-alaninei i tirozinei trece prin gentisat i homogentisat.
Fig. 71. Catabolismul compuilor aromatici este catalizat de oxigenaze. (a) Protocatecolul i catecolul rezult din oxidarea inelului
benzenic. (b) Hidroxilarea benzenului la catecol catalizat de o oxigenaz cu funcie mixt n care NADH este al II-lea donor de
electroni. (c)Clivarea catecolului la cis,cis-muconat.
Bacteriile din g. Pseudomonas degradeaz numeroase molecule ciclice: naftalenul, fenantrenul, antracenul,
toluenul, benzenul, fenolul, salicilatul, triptofanul etc.
Fig. 72. Degradarea fenolului i a benzoatului (conin O n molecula) poate avea loc i n condiii anaerobe prin clivarea reductoare a
inelului.
Hidrocarburile aromatice policiclice pot fi metabolizate n condiii anaerobe de ctre bacteriile care reduc Fe la
Fe3+, sulfat-reductoare, denitrificatoare.
Hidrocarburile sunt toxice i dezagreg structurile membranare pentru c sunt lipofile. Ele se inser n aria
hidrofob a membranei, prin asociere cu catenele acil ale fosfolipidelor. Hidrocarburile tind s rmn n aria hidrofob,
ntre monostraturile lipidice, n zona cozilor acizilor grai ai fosfolipidelor. Inseria hidrocarburilor altereaz structura
membranei, schimbndu-i fluiditatea i configuraia proteinelor.
Mecanismele reparatorii compenseaz pierderile integritii structurale a membranei. Fluiditatea membranei
diminu prin scderea cantitii de acizi grai nesaturai din compoziia lipidelor membranare. Aceste modificri constituie
o barier fa de intercalarea hidrocarburilor n membran, limitnd influxul pasiv al hidrocarburilor n celul.
Catabolismul compuilor cu un atom de carbon. Bacteriile metilotrofe i metanotrofe
Compuii mai redui dect CO2 care conin unul sau mai muli atomi de C, dar nu conin legturi C-C formeaz
grupul C1: CH4, CH3OH, metilamina (CH3NH2), dimetilamina (CH3)2NH, trimetilamina(CH3)3N, tetrametilamoniu
(CH3)4N+, trietilamina N-oxid (CH3)3NO, trimetilsulfoniu (CH3)3S+, formiat (HCOO-), formamida (HCONH2), CO,
dimetil-eter (CH3)2O, dimetil-carbonat (CH3OCOOCH3), dimetil-sulfoxid (DMSO) (CH3)2SO, dimetil-sulfid (CH3)2S.
Organismele care pot s creasc folosind numai compui organici C 1 se numesc metilotrofe. Bacteriile care
oxideaz compuii C1 trebuie s sintetizeze de novo toi compuii organici obinuii (C-C). Din punctul de vedere al
asimilrii C, bacteriile metanotrofe i metilotrofe au asemnri cu cele autotrofe (cele care folosesc CO 2), diferena fiind
c primele folosesc compui organici mai redui dect CO 2.
Metanul este un compus abundent n mediile naturale, fiind produs de bacteriile metanogene n mediile naturale
anaerobe: nmolul anaerob, tractul intestinal al ierbivorelor, orezrii, prin degradarea anaerob a deeurilor organice
reziduale i menajere, dar i n activiti antropologice nebiogene: exploatarea minier a crbunelui, arderea biomasei.
Intre bacteriile metilotrofe i metanotrofe exist deosebiri cu privire la substratul pe care l degradeaz.
Numeroase specii de bacterii cresc pe metanol, metil-amin sau pe formiat, dar nu oxideaz metanul. Ele sunt bacterii
heterotrofe (Pseudomonas, Bacillus, Vibrio) i metilotrofe facultative, deoarece, pe lng metanol degradeaz i ali
compui cu unul sau mai muli atomi de carbon. Degradarea lor este iniiat de metanol-dehidrogenaz.
Metanolul din surse endogene(prin oxidarea CH4) sau exogene(degradarea pectinei, ligninei) este oxidat la
formaldehid, de o metanol-dehidrogenaz periplasmic, la Gram negative.
Bacteriile metanotrofe au caracteristici metabolice particulare, deoarece utilizeaz att compui mai redui dect
CO2, cu un singur atom de carbon, ct i metanul i sunt metilotrofe obligate. Ele sunt unice, prin capacitatea lor de a
utiliza CH4 ca surs de carbon i energie.
Bacteriile care oxideaz metanul au un sistem enzimatic specific: metan-monooxigenaza(MMO), enzima care
catalizeaz introducerea unui atom de O n molecula de metan, rezultnd metanolul:
Carbonul este asimilat sub form de formaldehid i CO 2, pe calea serinei, n care 2 moli de formaldehid i 1
mol de CO2 formeaz un intermediar 3C al metabolismului central, sau n ciclul RuMP (ribulozo-uridin-monofosfat), n
care 3 moli de HCOH formeaz un intermediar metabolic cu 3C. Pe aceast cale, tot C celular este asimilat la nivelul de
oxidare al HCOH.
Oxidarea metanului la metanol, catalizat de MMO este trstura definitorie a bacteriilor metanotrofe.
Cea mai mare parte a potenialului reductor, necesar metabolizrii CH 4, este produs prin oxidarea HCOH, via
HCOOH, la CO2.
MMO are un spectru larg de aciune asupra alcanilor, alchenelor, hidrocarburilor aromatice i halogenate (de
exemplu, diclor-metan). Enzima se gsete sub dou forme: citoplasmatic (solubil) i asociat membranei
(particulat).
MMO face parte din monoxigenazele clasice (legat de membran sau solubil), care utilizeaz doi echivaleni
reductori pentru a rupe legturile O 2. Unul dintre atomii de oxigen este redus pentru a forma H 2O, iar cellalt este
ncorporat n CH4 pentru a forma CH3OH.
Bacteriile metanotrofe sunt aerobe. Triesc la periferia zonei anaerobe, unde CH 4 i O2 se gsesc simultan: n
metalimnionul lacurilor dimictice (sisteme aquatice stratificate, n care apa circul liber de dou ori pe an, ntre cele dou
straturi majore: epilimnion i hipolimnion).
Metanul este cel mai stabil compus al C n mediile anaerobe i este un intermediar foarte important n reaciile de
mineralizare a materiei organice. Este format de bacteriile metanogene ca produs final al descompunerii materiei organice
n stratul profund al acestor lacuri i difuzeaz pn n metalimnion, unde ntlnete O 2 dizolvat n ap. Metanotrofele
localizate n stratul ngust de ap, oxideaz CH 4 i mpiedic trecerea lui n atmosfer. Metanul care scap oxidrii de
ctre metanotrofe, difuzeaz n atmosfer.
Bacteriile care oxdeaz CH 4, mpreun cu Mycoplasma sunt singurele procariote, care posed steroli n structura
membranei citoplasmatice.
Bacteriile metanotrofe au o semnificaie ecologic deosebit, deoarece metanul este un gaz abundent n atmosfer
(l,6 ppm), ocupnd locul al II-lea, dup CO2. Concentraia sa a crescut cu o rat de circa l% pe an, n ultimii l50 200 de
ani. Deoarece absoarbe radiaia n spectrul infrarou mult mai eficient dect CO 2, contribuia sa la nclzirea global a
atmosferei (efectul de ser) tinde s o egaleze pe aceea a CO 2.
Oxidarea anaerob a CH4, dependent de sulfat este o reacie redox important n sedimentele marine anoxice,
dar nu se cunosc bacteriile care catalizeaz aceast reacie i nici mecanismul prin care ele activeaz molecula stabil a
CH4. Oxidarea metanului dependent de sulfat este exergonic:
Chiar bacteriile metanogene par a cataliza reacia de sens opus: CH 4 ---- CO2 + H2, o reacie termodinamic
posibil dac presiunea parial a H 2 este meninut la un nivel sczut de bacteriile hidrogen-oxidante sulfat-reductoare.
In testele experimentale, producerea CH 4 are o rat de 3-4 ori mai mare dect reacia de oxidare.
Catabolismul alcoolului etilic
Unele levuri (Debaromyces, Hansenula, Pichia) i unele bacterii metabolizeaz complet alcoolul etilic, pn la
CO2 i ap. Reacia are loc n dou trepte: n prima treapt rezult aldehida acetic.
n treapta a II-a, aldehida acetic este oxidat la acetil-CoA i n condiii de aerobioz o ncorporeaz n ciclul
Krebs;
Bacteriile acetice (Acetobacter, Gluconobacter) oxideaz incomplet alcoolul etilic, cu acumularea acidului acetic,
ca produs final, deoarece acetaldehida este oxidat direct la acid acetic:
Oxidarea acetaldehidei este o reacie aerob i este baza producerii industriale a oetului alimentar, prin diferite
metode. Dup epuizarea alcoolului, unele bacterii acetice oxideaz acidul acetic la CO 2 i H2O, prin intermediul acetilCoA.
Bacteriile acetice sunt aerobe i se deosebesc de bacteriile acetogene anaerobe, prin aceea c nu oxideaz complet
sursa lor energetic. Oxidarea alcoolului etilic are loc numai pn la acid acetic, care se acumuleaz n mediu i pH scade.
Bacteriile acetice sunt acido-tolerante.
Reaciile de anabolism
Reaciile de anabolism se desfoar n sensul utilizrii metaboliilor intermediari ai cilor centrale, pentru sinteza
constituienilor proprii celulei bacteriene. Procesele anabolice evolueaz n dou faze, care se desfoar n sens invers n
raport cu cele catabolice. Rezultatul lor este sinteza constituienilor celulari.
Celulele bacteriene sintetizeaz dou tipuri de macromolecule:
- macromolecule informaionale, codificate de mesaje genetice, cu caracter de specificitate, de importan biologic
fundamental;
macromolecule de rezerv (de depozit), cu o structur n general uniform, formate prin legarea unor monomeri, n
polimeri de diferite mrimi.
Sinteza macromoleculelor informaionale se realizeaz cu o mare eficien, deoarece, n procesele metabolice,
ntr-o faz iniial, nespecific, sunt furnizate subunitile de construcie: aminoacizi, baze purinice i pirimidinice. In cea
de a II-a faza, controlat genetic se desfasoar procesele specifice de biosintez a macromoleculelor informaionale, care
poart denumirea generic de diataxie, n cursul creia subunitile specifice sunt polimerizate ntr-o ordine riguros
exact, conform mesajului genetic.
Cile amfibolice. Sub aceast denumire sunt reunite cile centrale ale metabolismului, care, simultan au rolul de a
elibera energie i de a produce molecule precursoare pentru biosinteze.
Caracterul amfibolic este conferit de faptul c energia i anumii intermediari ai cilor catabolice sunt utilizai n
reacii de anabolism, dup urmtoarea schem general:
Existena cilor amfibolice este expresia interaciunii dintre cile catabolice i anabolice, care funcioneaz
simultan n citoplasma necompartimentat a celulei bacteriene.
Cile anaplerotice (sau de aprovizionare) sunt cai metabolice auxiliare. Nevoia existenei lor deriv din faptul ca
nutrienii din mediu sunt degradai progresiv pentru eliberarea energiei sau sunt folosii n reaciile de biosintez. Calea
metabolic principal ce furnizeaz metaboliii intermediari, eseniali pentru catabolism i anabolism trebuie
reaprovizionat cu compui care provin din alte ci metabolice, ce se desfoar simultan n celula. Astfel, se asigur
funcionarea ndelungat i la o rat optim a cii metabolice principale.
Calea anaplerotic a glioxilatului, are ca rezultat final, regenerarea oxaloacetatului, molecula acceptoare a
acetatului n ciclul Krebs. Dac oxaloacetatul este intens folosit n biosinteze, funcionarea ciclului acizilor tricarboxilici
va diminua. Pentru a evita scderea ratei de producere a energiei, se sintetizeaz suplimentar un compus cu 4 atomi de C.
Dac substratul energetic este un glucid, compusul cu 4 atomi de C se formeaz prin carboxilarea piruvatului. Dac
substratul energetic este acetatul sau un acid gras, microorganismele aerobe nu reduc acetatul la piruvat. Acetatul intr n
ciclul Krebs, dar izocitratul nu este decarboxilat succesiv prin cele dou trepte, pn la succinat. In celula bacterian este
indus sinteza a dou enzime care unteaz cele dou reacii de decarboxilare ntre izocitrat i succinat.
Izocitratul este scindat de izocitrat-liaz i rezult glioxilat i succinat. Glioxilatul se combin cu o alt molecul
de acetat din acetil-CoA i rezult malat, care restabilete ciclul. Procesul ciclic n cursul cruia acetatul nu este convertit
la CO2 poart denumirea de ciclul glioxalic.
Bacteriile i plantele sintetizeaz acetil-CoA din acetat i coenzima A, ntr-o reacie consumatoare de ATP,
catalizat de ATP-sintetaza.
Fig. 73. untul glioxilatului i raporturile sale cu reaciile ciclului acizilor tricarboxilici. Reacia eseniala a ciclului este clivarea
izocitratului n glioxilat i succinat. Malataul se sintetiteaz din glioxilat i acetil-CoA. Celelalte reacii ale ciclului sunt aceleai ca i
n ciclul Krebs. Ciclului glioxilatului este activ cnd substratul energetic este catabolizat la acetat i nu funcioneaz cnd sunt
degradate glucidele, deoarece sunt catabolizate la acid piruvic.
Intr-o a II-a reacie, acidul glioxilic este condensat cu acetil-CoA i formeaz acidul malic.
Acidul malic este oxidat i rezult acidul oxaloacetic:
In concluzie, reaciile metabolice ale celulelor bacteriene, ca mecanism general de desfurare sunt similare cu
cele care au loc n celelalte sisteme vii, dar se deosebesc prin faptul c, n special cile catabolice sunt mai diversificate,
ca o consecin direct a naturii foarte heterogene a substraturilor degradate.
Faptul c n privina mecanismului general de desfurare, cile metabolice sunt similare cu ale celorlalte
organisme a permis ca numeroase desoperiri ale biologiei moleculare s se fac pe sistemul bacterian i s se extrapoleze
la celula eucariot:
- ciclul Krebs
- diferitele ci metabolice
- procesele de oxido-reducere
- mecanismul sintezei proteinelor
Din acest punct de vedere, culturile bacteriene au constituit un model ideal de investigare. Ele au avantajul
creterii rapide pe medii sintetice (cu compoziie bine determinat). A devenit astfel posibil, determinarea precis a
modificrilor chimice ale mediului de cretere, prin evidenierea diminurii cantitative a unor componente i acumularea
produselor de catabolism sau prin ncorporarea precursorilor marcai ai mediului nutritiv, n macromolecule.
Deosebirea esenial const n faptul c la bacterii funcioneaz ci catabolice particulare, care nu se regsesc la alte
organisme i care permit celulelor bacteriene s catabolizeze substane chimice greu degradabile: cauciuc, asfalt, diferii compui
aromatici etc.
CAPITOLUL V
INFLUENA FACTORILOR FIZICI I CHIMICI ASUPRA MICROORGANISMELOR
Activitatea biologic normal a microorganismelor este profund influenat de condiiile fizice si chimice ale mediului.
Activitatea lor este maxim, cnd condiiile mediului sunt optime n raport cu necesitile speciei. Condiiile optime de
viaa pentru microorganisme se intlnesc foarte rar n mediile naturale, dar ele compenseaz printr-o mare capacitate de
adaptare i printr-o rezisten superioar la condiiile nefavorabile, comparativ cu organismele superior organizate.
Cunoaterea influenelor mediului asupra microorganismelor este obligatorie pentru inelegerea distribuiei lor n natur i
pentru elaborarea metodelor de control a activitii microorganismelor i distrugerea celor nedorite.
Rspunsul microorganismelor la diferite condiii de mediu nu este uniform: unele sunt inhibate, iar altele sunt stimulate.
INFLUENA FACTORILOR FIZICI
Temperatura
Temperatura este unul din cei mai importani factori de mediu care influeneaz creterea i supravieuirea
organismelor. Rata reaciilor chimice i enzimatice n celul crete odat cu creterea temperaturii, dar acizii nucleici i
alte componente celulare sunt sensibile la temperaturi crescute i pot fi inactivate ireversibil.
Temperatura de dezvoltare. Pentru fiecare specie de organism exist o temperatur minim, sub nivelul creia
creterea nu mai are loc, o temperatur optim, la care creterea este cea mai rapid i o temperatur maxim, deasupra
creia creterea nu mai este posibil. Spectrul termic care permite desfurarea normal a proceselor metabolice i deci
creterea i multiplicarea microorganismelor reprezint zona temperaturii de dezvoltare.
Temperatura optim de
dezvoltare este mai apropiat de valoarea maxim, dect de cea minim. Cele trei puncte termice, denumite temperaturi
cardinale sunt, n general, caracteristice pentru fiecare tip de organism, dar nu sunt fixe, deoarece pot fi modificate de ali
factori, ca de exemplu, pH i concentraia nutrienilor. Temperatura de dezvoltare poate fi cuprins n limite restrnse (3540o), la microorganismele stenoterme i n limite largi (6-50o) la cele euriterme. In general, temperatura de dezvoltare este
cuprins ntre 5o si 70-8oo. Aceast variaie corespunde temperaturii minime, optime i maxime. Organismele stenoterme
triesc n habitate cu temperatur relativ constant, iar cele euriterme populeaz mediile n care temperatura variaz
considerabil.
Temperatura minim de dezvoltare reprezint valoarea termic cea mai scazut la care microorganismele se mai
multiplic nc n mod evident. La aceast temperatur, rata metabolismului este sczut, iar rata creterii i diviziunii
celulare este mult ncetinit. Limita inferioar a temperaturii minime de dezvoltare este determinat, teoretic, de
temperatura de ingheare a apei, dar se situeaz sub 0 o (-5o), deoarece punctul de congelare a constituienilor celulari este
mai sczut dect acela al apei pure.
In condiii particulare, care mresc zona de stabilitate fizic a apei celulare (coninutul ei bogat n diferite
substane i presiunea osmotic ridicat), temperatura minim tolerat de microorganisme poate s scad pan la l8 o.
Aceasta explic procesul de multiplicare a unor specii specii bacteriene n apa mrii, la temperaturi de 5-ll o, iar
mucegaiurile i unele bacterii (Pseudomonas) pot crete la l8o, n soluii concentrate de zahr. Creterea i multiplicarea
unei generaii bacteriene dureaz n aceste condiii, sptmni i chiar luni.
Chiar n materialele ngheate se gsesc pungi microscopice de apa lichid, unde microorganismele pot s creasc.
Temperatura minim de dezvoltare a microorganismelor mezofile ar fi determinat de ncetarea transportului
substanelor dizolvate prin membrana celular. Mecanismele biochimice ale inactivrii transportului membranar ar putea
fi urmtoarele:
- modificarea conformational a moleculelor proteice;
- modificarea arhitecturii membranei celulare;
- limitarea producerii i utilizrii ATP.
Temperatura optim de dezvoltare este definit de nivelul termic la care dezvoltarea unei populaii de
microorganisme ale unei specii are loc cu o rat maxim. Aceast valoare nu coincide cu aceea a temperaturii optime
pentru alte activiti fiziologice ale celulei. De aceea, numrul maxim de celule vii se acumuleaz nu atunci cnd
diviziunea are loc foarte rapid, ci n condiiile unui ritm mai lent de diviziune, probabil datorit diferenelor de
temperatur optim necesar diferitelor activiti celulare. La o temperatur mai ridicat crete rata acumulrii produselor
de catabolism i implicit efectul lor toxic devine inhibitor pentru creterea celular. In mod similar, viteza de fermentaie
sau de acumulare a unui anumit produs de metabolism este maxim la valori termice care nu coincid obligatoriu cu
temperatura optim pentru diviziunea celular. De aceea, nu se poate vorbi despre o temperatur optim pentru cretere i
diferite activiti biologice, ci de temperatura optim pentru fiecare din activiti, luate in parte.
Temperatura maxim de dezvoltare reprezint valoarea cea mai ridicat la care activitatea biologic a unui anumit
organism este nc posibil, iar multiplicarea sa se mai poate face in mod evident. Aceast valoare, limitat de
termolabilitatea proteinelor i acizilor nucleici este de obicei cu l0-l5 o mai mare dect temperatura optim pentru
microorganismul respectiv.
In funcie de temperatura lor de dezvoltare, microorganismele pot fi grupate n trei categorii:
a) Microorganismele criofile sau psichrofile cresc cel mai bine la temperaturi sczute. Ele triesc n izvoarele reci, n
lacuri i mri, n regiunile de altitudine i polare. Aceste microorganisme prezint un mare interes economic, deoarece pot
altera produsele alimentare conservate prin congelare.
b) Microorganismele mezofile se dezvolt la temperaturi medii (lo-45 o). Ele fac parte din microbiota normal a
animalelor homeoterme, fa de care se comport ca saprobionte. Din aceiai categorie fac parte microorganismele
parazite.
c) Microorganismele termofile se dezvolt n apele termale i n platformele de deeuri menajere i din zootehnie.
d) Microorganismele hipertermofile
a) Microorganisme criofile
Organismele care cresc la temperaturi sczute se numesc criofile sau psichrofile. Apartenena unui microorganism
la aceast categorie este condiionat de capacitatea lui de a crete la 0 o.
Se disting dou categorii de organisme psichrofile: obligate i facultative.
Organismele obligat-criofile se dezvolt la o temperatur optim de cel mult l5 o, iar temperatura maxim, este de
o
circa 2o .
Microorganismele criofile facultative, dei pot crete la 0 oC, cresc cu o rat optim la 25-30 o, iar temperatura
maxim de cretere este de 35-40 oC. Criofilele obligate sunt stenoterme, iar cele facultative sunt euriterme. Psichrofilele
obligate triesc n medii cu temperatura constant sczut. La temperatura de 25-30 oC ele mor rapid, ceea ce ngreuneaz
studiul. Organismele psichrofile sunt un grup divers: bacterii, fungi, alge. Cele mai studiate psichrofile obligate sunt
algele eucariote, ce formeaz mase dense n interiorul i sub gheaa regiunilor polare. Algele psichrofile se gsesc
adeseori, pe suprafaa zpezii i gheii, n numr att de mare, nct determin culoarea roie sau verde a suprafeei. Cea
mai comun alg care crete pe zpad este Chlamidomonas nivalis. Celula vegetativ este pigmentat verde. Odat cu
topirea zpezii, are loc sporularea. Sporii au culoarea roie.
Organismele psichrofile facultative se gsesc n solul i apele din regiunile cu climat temperat. Temperatura
optim de cretere este de 25-30 oC, iar cea maxim, de 35 oC. Deoarece mediile din regiunile temperate se inclzesc in
sezonul cald, ele nu sunt favorabile creterii organismelor psichrofile obligate.
Microorganismele psichrofile facultative sunt implicate n alterarea calitii produselor alimentare de origine
animal i vegetal, conservate prin rcire sau ngheare. Cu ct temperatura de conservare este mai sczut, cu att
multiplicarea microorganismelor este mai lent sau chiar imposibil.
Creterea la temperaturi sczute a microorganismelor psichrofile este explicat prin proprietile enzimelor lor,
capabile sa catalizeze mai eficient la temperaturi sczute. Probabil, din aceast cauz, psichrofilele sunt foarte sensibile la
temperaturi mai mari, fiind inactivate rapid la 30-40 oC.
Procesele de transport activ funcioneaz optim la temperaturi sczute, iar coninutul membranei celulare n acizi
grai nesaturai este mai crescut dect la alte organisme. Consecina este c la temperaturi sczute, membrana rmne
semifluid. Membranele cu coninut ridicat de acizi grai saturai sunt mai rigide i la temperaturi sczute devin
nefuncionale.
Inghearea. Temperatura de ngheare a diferitelor medii este dependent de compoziia i concentraia
substanelor dizolvate. Inghearea oprete creterea microorganismelor, dar moartea celular nu survine totdeauna.
Celulele mari sunt mai sensibile la ngheare, iar cele cu perete celular gros sunt mai rezistente. Inghearea este una din
cele mai bune metode de conservare a culturilor de microorganisme.
Prin ngheare, unele celule sunt omorte, dar dac supravieuiesc, ele rmn viabile pentru perioade lungi de
timp. Procesele vitale sunt suspendate (funciile celulare sunt oprite) i sunt reluate dup restabilirea regimului termic.
Leziunile celulare ce rezult din nghearea apei intracelulare sunt consecina efectului fizic al cristalelor de ghea, n
special asupra membranei celulare. Inghearea rapid produce cristale mici i leziunile pot fi minime. De aceea, nghearea
trebuie fcut rapid. Astfel, levurile rmn viabile ntr-o proporie optim, dac rcirea se face cu l0 o/minut, iar pentru
hematii, rcirea cu 20o/minut ofer cea mai bun protecie. Severitatea efectelor deshidratrii este limitat de glicerol i
dimetilsulfoxid, adugate n proporie de 0,5M la mediul de suspensie. Ele sunt miscibile cu apa i penetreaz n celul.
Moleculele mari (albumina seric, dextranul, polivinil-pirolidona) la concentraia de l0 -5- l0-3 M nu penetreaz n
celule. Efectul lor protector se realizeaz prin combinarea cu molecule ale suprafeei celulei i astfel este prevenit lezarea
membranei celulare.
Rezistena celulelor la ngheare este folosit pentru conservarea lor ntr-un mediu adecvat. Cu ct temperatura
este mai sczut, cu att condiiile de pstrare sunt mai bune. Temperatura de 70 o este mai bun dect cea obinuit de
20o, iar temperatura de l95o a azotului lichid este cea mai bun.
b) Microorganisme mezofile
Microorganismele mezofile au temperatura optim de dezvoltare, cuprins ntre 25 i 40 o. Cele care au
temperatura de cretere mai mare de 30 o se dezvolt n cavitile macroorganismelor homeoterme, ca saprobionte sau
parazite. De exemplu, E. coli se dezvolt optim la temperatura de 39 o. Bacteriile mezofile asociate organismelor
homeoterme sunt relativ stenoterme. Aceast proprietate este evident la microorganismele patogene.
Microorganismele mezofile cresc cu o rat scazut la o temperatur mai mic de 20 o. Sub l0o, creterea lor este
oprit, deoarece se blocheaz iniierea sintezei proteice, dar sinteza celor deja initiate nu este afectat. La o temperatur
sczut este inhibat i funcia enzimelor. Inhibitorul este probabil, un metabolit obinuit, care la temperatur sczut se
leag foarte strns de enzim. Odat cu creterea temperaturii, inhibitorul se disociaz i enzima i reia funcia.
Acest mecanism de aciune este sprijinit de existena a dou categorii de mutante: mutantele sensibile la rece i
cele rezistente la rece. Mutantele sensibile la rece nu cresc la l5 o (la care tulpina salbatic crete), deoarece enzima
mutant leag inhibitorul feed-back mai ferm dect enzima de tip slbatic. Mutanta rezistent la rece produce o enzim
mai puin sesibil la inhibiia prin feed-back, dect tipul slbatic.
La E. coli s-au izolat mutante termo-sensibile, care nu cresc la temperatura la care crete tulpina salbatic. Aceste
mutante produc o protein mai sensibil la denaturarea termic, dect proteina omolog de tip salbatic.
Dei s-au izolat mutante cu limite termice superioare sau inferioare fa de tipul slbatic, temperatura lor optim
de dezvoltare rmne aceiai, deoarece este condiionat de un numr mare de proteine.
S-a studiat rspunsul microorganismelor mezofile la ocul hipo- sau hipertermic. Expunerea microorganismelor
mezofile la temperaturi mai nalte determin reacia de rspuns la ocul termic. Rspunsul la ocul termic const ntr-o
cretere rapid i trectoare a ratei de sintez a unor proteine din categoria chaperonilor, care au rolul de repliere a
proteinelor denaturate, denumite proteine de oc termic. Ele au rolul de a proteja celula de cldur i de alte condiii de
stress. Creterea ratei sintezei lor este rapid n decurs de ordinul secundelor dup expunerea culturii bacteriene la o
temperatur superioar.
Trecerea culturii de E. coli, de la 37o la 46o induce o cretere de l00 de ori a ratei sintezei proteinelor de oc
termic, ns rata global a sintezei proteinelor scade. Proteinele de oc termic sunt factori de rezisten fa de
temperaturile letale. Ele fac parte din categoria chaperonilor. Chaperonii sunt proteine constitutive normale, a cror rat
de sintez crete brusc dup ocul termic.
Raspunsul la ocul termic s-a evideniat nu numai la bacteriile mezofile, ci i la cele termofile, la cele psichrofile
i la Archaea.
Invers, prin scderea temperaturii la l0 o, unele bacterii sintetizeaz un set de circa l4 proteine, denumite proteine
de oc la rece, dei rata global a sintezei proteinelor scade. Unele proteine de oc la rece au rolul de a stabiliza
capacitatea de transcriere a ADN i de traducere a mesajului n proteine.
Stressul nfometrii determin un rspuns ce const n sinteza a 30-50 de proteine cu rol adaptativ. Infometarea
celulelor bacteriene are ca rezultat creterea rezistenei lor la diferite stressuri, inclusiv la temperaturi sczute.
Reactivitatea celulei la diferite stressuri este codificat de genele de stress. Ele codific factori activatori ai setului
de gene ce codifia sinteza proteinelor de adaptare la stress.
c) Microorganisme termofile
Microorganismele termofile cresc la temperaturi mai mari de 45-50 o i au o rspndire limitat n mediile
naturale. Solul expus luminii solare se nclzete la temperaturi mai mari de 50 o, iar solurile de culoare nchis se
nclzesc la 70o. Materialele care fermenteaz (deeuri menajere, materiale vegetale) ating temperaturi de circa 70 o. Cele
mai ridicate temperaturi n natur sunt asociate cu fenomenele vulcanice. Adeseori, izvoarele termale ating temperatura de
fierbere. Pe msur ce apa se ndeprteaz de surs, se realizeaz un gradient termic, cu o distribuie a speciilor de
microorganisme, dependent de nivelul termic.
Organismele procariote sunt capabile s creasc la temperaturi mai mari, comparativ cu organismele eucariote.
Cele nefotosintetizante tolereaz temperaturi superioare, n raport cu cele fotosintetizante.
In interiorul grupului microorganismelor termofile sunt diferene ale temperaturii optime de dezvoltare: speciile
termofile cresc optim ntre 50 i 80o, iar cele hipertermofile cresc optim la temperaturi ntre 80-110o.
Mecanismul biochimic al toleranei la temperaturi crescute nu este bine cunoscut. Enzimele microorganismelor
termofile conin lipide membranare bogate n acizi grai saturai, care permit membranelor s rmn stabile i funcionale
la temperaturi ridicate. Acizii grai saturai formeaz legturi hidrofobe mai puternice dect acizii grai nesaturai, ceea ce
explic stabilitatea membranei.
Absena microorganismelor eucariote la temperaturi mai mari de 60 o se poate datora termolabilitii inerente a
membranelor, n special a membranei nucleare, mitocondriale sau cloroplastice. Membranele mitocondriale sunt deosebit
de sensibile la caldur. Prin nclzirea celulelor cu cteva grade peste temperatura maxim, mitocondriile dispar.
Membranele organitelor celulei eucariote sunt suficient de fluide pentru a permite trecerea macromoleculelor. Membrana
nuclear este permeabil pentru ARNm i pentru subunitile ribosomale, care trec n citoplasm. La temperaturi crescute,
membrana nuclear i pierde funcionalitatea.
d) Microorganismele hipertermofile
Bacteriile hipertermofile se dezvolt foarte bine la temperaturi cuprinse ntre 80-ll0 o. Nu cresc la temperaturi mai
mici de 60-80o. Ele se gsesc n regiunile hidrotermale submarine anaerobe, bogate n H 2S, H2, So i SO32- i cu o
concentraie salin caracteristic apei marine, precum i n emanaiile de gaze fierbini din cratere vulcanice ce conin
vapori de ap, CO2 i H2S. In 1999 erau descrise peste 70 de specii care cresc optim la 110 o i mai mult. Puine sunt
eubacterii(Thermotogales i Aquificales), restul fiind Archaea: Sulfolobales, Pyrococcales, Thermococcales.
Comunitile hipertermofile sunt productori primari i descompuntori ai materiei organice. Productorii
primari hipertermofili sunt organisme chimiolitotrofe:
- cele aerobe oxideaz So cu O2 i produc acid sulfuric (hipertermofile acidofile -Sulfolobales);
- cele anaerobe reduc So cu H2 i produc H2S.
Coninutul n materie organic al mediului submarin este foarte mic. Cele heterotrofe i obin energia din
peptidele derivate prin descompunerea productorilor primari.
Mecanismul molecular al hipertermofiliei nu este cunoscut. Deoarece proteinele i acizii nucleici sunt inactivate
la temperaturi de 60-70o se consider ca hipertermofilia s-ar datora existenei unor factori termostabilizatori (necunoscui),
prezenei unor enzime cu structur globular particular, existenei unor proteine de tip histonic cu rol termoprotector,
precum i configuraiei mai strnse a dublei helice a ADN, care ar ngreuna separarea catenelor componente.
Enzimele izolate de la hipertermofile au activitate optim, de obicei ntre 70-125 o, uneori net superioar
temperaturii optime de cretere a organismului i de obicei sunt foarte stabile. Termostabilitatea este multifactorial:
a) enzimele ar fi mai rigide dect omologele lor mezofile. Rigiditatea excesiv ar putea explica inactivitatea lor
la temperatura de 20-37o. Unele enzime sunt active chiar la 37 o. Explicaia este c enzimele hipertermofile
combin flexibilitatea local a situsului activ cu rigiditatea global a moleculei.
b) La temperaturi crescute proteinele se denatureaz prin depliere, datorit ruperii interaciunilor necovalente
(legturi de H, ionice, hidrofobe i interaciuni Van der Waals). Starea pliat a moleculei este rezultatul
efectului hidrofob. Efectul hidrofob este fora major a stabilitii proteinelor. Interaciunile hidrofobe care
confer structura secundar sunt asemntoare cu ale enzimelor mezofile omologe, dar proteinele
hipertermofile au interaciuni stabilizatoare suplimentare.
c) Buclele rezultate prin pliere i capetele C i N ale moleculei sunt regiunile cu cei mai nali factori termici
(regiuni calde) i sunt cele mai sensibile la denaturarea termic. La hipertermofile, buclele sunt fie mai scurte,
fie sunt mai bine ancorate de restul moleculei.
d) Metalele (Co, Mg, Mn, Ca) stabilizeaz enzimele. Dificultatea cu care ele se ndeprteaz din molecula de
enzim este dovada indirect a rolului metalelor n stabilizarea acestor molecule. Alfa-amilazele leag specific
Ca. Unele enzime termofile i hipertermofile conin atomi de metal, care lipsesc la mezofile. Feredoxina de
Sulfolobus conine Zn.
e) Srurile anorganice stabilizeaz proteinele.Foarte puine proteine hipertermofile sunt glicozilate.
f) Temperatura maxim de cretere a acestor microorganisme ar depi puin ll3 o, la care biomoleculele
termosensibile ar putea fi sintetizate cu o rat suficient de mare pentru a nlocui pe cele denaturate termic.
Organismele termofile i hipertermofile

Organismele termofile sunt acelea care necesit pentru cretere, o temperatur optim cuprins ntre 50- 80 0, iar
cele HT cresc cu o rat optim la 80-1100.
Organismele HT (70 de specii la sfritul lui 99) s-au izolat din sulfurete continentale, straturi profunde
geotermale care conin petrol, sedimente marine de mic i de mare adncime, izvoare hidrotermale la 4000 m adncime,
precum i din medii industriale (apa de rcire a uzinelor termice, instalaiile de nclzire a apei, instalaiile de epurare a
apelor uzate), la temperaturi de 80-1150.
Cel mai termofil este Pyrolobus fumarii (1130). Probabil c peste 1130, viaa nu este posibil.
Thermus aquaticus s-a izolat din instalaiile de nclzire a apei(Brock, 75 0).
HT triesc n medii cu coninut nalt de S i sunt chimiolitotrofe facultative sau obligate :
- reduc So cu H2 --- H2S (anaerobe);
- oxideaz So cu O2 --- H2SO4 (aerobe).
Peste 1100, moleculele (aminoacizi, metabolii) devin foarte instabile. ATP se hidrolizeaz spontan n soluie apoas la
0
140 , iar interaciunile hidrofobe slbesc semnificativ.
Macromoleculele procariotelor termofile prezint cteva adaptri :
- enzimele, dar i alte proteine sunt mai stabile dect ale organismelor mezofile. Substituia unui aminoacid ntr-una
sau n cteva poziii eseniale ale unei enzime, permite o pliere compatibil cu stabilitatea termic;
- un coninut mai mare de Ala, participant la formarea helixului;
- conin o proporie mai mare de resturi hidrofobe i aromatice (dect cele mezofile);
- punile S-S stabilizeaz proteinele, mai ales prin efectul antientropic*, scznd entropia fa de valoarea entropiei
proteinei depliate. Efectul antientropic al punilor S-S crete proporional cu numrul de resturi de aminoacizi care
se gsesc n interiorul punii S-S;
*
Conform celui de-al II-lea principiu al termodinamicii (ramur a fizicii care studiaz energia i transformrile ei), toate procesele
fizice i chimice sunt nsoite de creterea dezordinii sau ntmplrii, adic a entropiei.
creterea numrului de legturi ionice ntre cationi i sarcinile negative ale unor aminoacizi ;
creterea proporiei acizilor grai saturai n lipidele membranare, permindu-le s rmn stabile i funcionale la
temperaturi crescute. Acizii grai saturai formeaz un mediu hidrofob mai puternic dect cei nesaturai i
favorizeaz stabilitatea membranei;
- hipertermofilele (majoritatea sunt Archaea) nu conin acizi grai n membran, dar au catene lungi de C i H (C 40),
alctuite din uniti repetitive de phytan cu 5 atomi de C, legate prin legtur eteric cu glicerol-fosfatul. Structura
acestor membrane este un monostrat lipidic, mult mai stabil dect dublul strat lipidic al Eubacteria i Eucarya.
Enzimele HT au stabilitate intrinsec. Unele i dobndesc termostabilitatea de la factorii intracelulari: sruri,
concentraia proteic nalt, coenzime, substraturi, poliamine. Srurile anorganice stabilizeaz proteinele pe dou ci: prin
efectul specific (un ion metalic interacioneaz cu o protein ntr-o manier conformaional; prin efectul general de sare,
care modific activitatea apei. K+ i NH4+ sunt stabilizatori eficieni).
Organismele HT din marile adncuri suport presiuni de 200-360 atm. Unele sunt barotolerante, altele sunt chiar
barofile.
Absena eucariotelor la temperaturi de peste 60 0 se datoreaz instabilitii membranelor organitelor, care trebuie
s rmn destul de permeabile pentru a permite trecerea moleculelor mari (ATP, ARN).
Mecanismele inactivrii proteinelor
Proteinele sunt meninute n stare nativ (funcional) prin echilibrul forelor necovalente: legturi de H, fore
ionice, interaciuni hidrofobe, van der Waals. Odat cu creterea temperaturii, interaciunile necovalente se rup i
proteinele se depliaz. Deplierea proteinelor se detecteaz prin diferite tehnici; calorimetrie diferenial, fluorescena,
spectroscopia cu dicroism circular, evaluarea vscozitii, tipul de migrare n cmpul electric.
Cisteinele sunt aminoacizii cei mai reactivi ai proteinelor. Autooxidarea, catalizat de cationi metalici (Cu 2+), duce
la formarea punilor S-S intra- i intermoleculare sau la formarea acidului sulfenic.
Mecanismele termostabilizrii proteinelor
Efectul hidrofob este considerat a fi fora major a plierii proteinelor i implicit, a stabilitii lor. Hidrofobia
induce proteinei o structur colapsat, definitorie pentru structura nativ, meninut prin forele necovalente.
Proteinele termofile au urmtoarele caracteristici :
- perechile de ioni (prezente n numr mic n moleculele proteice) nu reprezint o for pentru pliere, dar interaciunile
electrostatice constituie o for important de stabilizare a proteinei pliate. Perechile de ioni sunt mai puternice n
molecula proteic dect n solveni pentru c se formeaz ntre sarcini fixe. Buclele i capetele N i C, de regul, au
cei mai nali factori termici, ntr-o structur proteic cristalin. Buclele proteinelor hipertermofile au trsturi
structurale care pot stabiliza proteinele. Buclele sunt fie scurtate, fie mai bine ancorate de restul proteinei;
metalele stabilizeaz enzimele: unele enzime termofile i HT conin ioni metalici (Co 2+, Mg2+, Mn2+), cu rol catalitic
i structural, care nu se gsesc la omologele mezofile;
modificarea posttraducere prin glicozilare. Puine proteine HT sunt glicozilate. Glicozilarea poate cauza stabilizarea
termic i poate preveni agregarea proteinelor parial pliate sau nepliate.
Sterilizarea
Temperaturile supramaximale moderate i datoreaz efectul letal, procesului de intoxicaie metabolic, deoarece
ridicarea temperaturii accelereaz reaciile metabolice.
Temperaturile supramaximale omoar majoritatea microorganismelor, prin efectul lor denaturant asupra
proteinelor celulare i n special asupra enzimelor. Concomitent se produce topirea membranelor lipidice.
Efectul letal al temperaturilor supramaximale are o aplicaie practic major: sterilizarea.
Creterea temperaturii peste un nivel maxim produce efecte letale. Moartea celulelor prin inclzire se produce
dup o curb exponenial i este mai rapid la temperatur crescut. De aceea, pentru distrugerea prin sterilizare a unei
populaii celulare, la temperaturi inferioare este necesar un interval de timp mai mare. Pentru sterilizarea unui material se
alege temperatura i, n functie de nivelul termic, procesul are o durat corespunztoare.
Tratamentul termic nu are efect cumulativ asupra celulei. Durata de timp n care celula a fost expus la caldur,
nainte de a muri nu are efect perceptibil. La organismele pluricelulare, tratamentul termic pare sa aiba efect cumulativ.
Se consider ca moartea microorganismelor sub aciunea cldurii este un eveniment de ordinul 1 (adic lipsete
efectul cumulativ al aciunii factorului termic) i este rezultatul inactivrii unei singure entiti moleculare critice.
Moartea termic a celulei procariote se datoreaz efectului asupra membranei. La temperatur crescut, lipidele
membranare se dizolv i discontinuitile de dimensiuni critice determin pierderea constituienilor celulari si moartea.
Rezistena microorganismelor la caldur este diferit. Cele psichrofile sunt mai sensibile, iar cele termofile au cea
mai mare rezisten.
Natura mediului n care se face nclzirea influeneaz rezistena celulelor vegetative i a sporilor. Moartea
survine mai rapid la pH acid i de aceea alimentele acide sunt mai uor de sterilizat, comparativ cu cele neutre.
Concentraiile mari de glucide, proteine i lipide mresc rezistena organismelor la aciunea cldurii. In mediu uscat,
celulele sunt mai rezistente dect n mediul umed. De aceea, sterilizarea termic a obiectelor uscate necesit temperaturi
mai nalte i intervale de timp mai lungi dect sterilizarea umed.
Endosporul bacterian are o termorezisten net superioar, comparativ cu a celulelor vegetative, conferit de trei
factori: termorezistena proteinelor, deshidratarea i mineralizarea.
Factorul major al rezistenei termice este cantitatea i starea fizic a apei (apa lagat) din endospor. In timpul
sporulrii, protoplasma se reduce la un volum minim. Se acumuleaz cantiti mari de Ca 2+ i de acid dipicolinic (prezent
numai n spor). Citoplasma dobndete o stare de gel. Cortexul sporal gros condiioneaz indirect rezistena termic,
deoarece impiedic mbibarea sporului cu ap, dar sporii fr cortex sunt la fel de rezisteni ca i sporii obinuii.
Proteinele sporale pot avea o rezisten intrinsec la caldur sau termostabilitatea le este conferit de asocierea cu
dipicolinatul de Ca2+. In celula sporal se gsesc proteine specifice, de dimensiuni mici, acidosolubile, asociate cu ADN,
dar i proteine neasociate cu macromoleculele sporului.
Principiile sterilizrii termice i dezinfeciei
Principiile sterilizrii se ilustreaz cel mai bine, utiliznd caldura ca agent de aciune, ale crei efecte sunt bine
cunoscute.
Rata morii bacteriilor care contamineaz un material este logaritmic, dar mult accelerat.
Principiul 1: o proporie definit din totalul celulelor mor ntr-un interval de timp dat. Dac la o temperatur dat,
n primul minut mor 30% din totalul celulelor, n cel de al II-lea minut mor 30% din rest .a.m.d.
Cnd numrul celulelor bacteriene dintr-o prob supus sterilizrii, rmne foarte mic, de exemplu l00, dup
primul minut rmn 70 viabile, dup al II-lea rmn 49, dup al III-lea 34, iar dup l2 minute o celul. Probabilitatea de
a gsi un singur organism viu rmne foarte mic. O prob este steril, atunci cnd probabilitatea de a gsi un organism
viu nu depete l/l000.
Principiul 2: cu ct o prob conine mai puine microorganisme, cu att timpul necesar sterilizrii este mai scurt.
Curirea ct mai avansat a obiectelor, nainte de a le steriliza este o aplicaie practic a acestui principiu. Materia
organic diminu eficiena multor ageni chimici.
O specie bacterian are o sensibilitate diferit la aciunea unui agent, n funcie de faz de cretere. Cea mai
sensibil faz, pentru cele mai multe microorganisme este cea de cretere logaritmic, deoarece n aceast faz sunt active
toate reaciile de biosintez i interferena cu o singur enzim poate s omoare celula. Sporii sunt foarte rezisteni.
Principiul 3: microorganismele difer n privina sensibilitii lor la aciunea agenilor antimicrobieni.
Presiunea osmotic
Presiunea osmotic n interiorul celulelor bacteriene este ceva mai mare dect aceea a soluiei reprezentate de un
mediu uzual de cultivare. Aceasta se datoreaz faptului c celula conine n stare solvit, concentraii mai mari de
substane minerale i organice pe care le poate reine datorit permeabilitii selective a membranei ei citoplasmatice. Ca
urmare, apa din mediu tinde s ptrund n celul pentru egalizarea concentraiilor intra- i extracelulare de substane
dizolvate. De aceea, n condiii normale, celula bacterian se afl ntr-o stare de turgescen determinat de forele
intracelulare de distensie, caracteristice tuturor celulelor vii.
Dezvoltarea bacteriilor decurge n condiii optime, dac mediul lor de via are o presiune osmotic aproximativ
echivalent celei intracelulare, reprezentnd pentru ele o soluie izoton.
Spre deosebire de celulele animale, foarte sensibile la variaiile presiunii osmotice, bacteriile protejate de un
perete celular elastic dar rezistent suport relativ usor modificrile presiunii osmotice, dac abaterile de la izotonie
survin lent, treptat, permind funciilor compensatoare de adaptare a membranei citoplasmatice s intre eficient n
aciune. Dac ns, echilibrul izotonic se deregleaz brusc, aciunile care tind s refac brusc echilibrul osmotic determin
liza mecanic a peretelui celular, ceea ce expune celula la degradri profunde cu efect letal.
Abaterile mari de la izotonie ale unui mediu de suspensie a bacteriilor, genereaz dou tipuri de modificri
celulare caracteristice:
l) In medii hipertone (de exemplu, n soluii saline concentrate), bacteriile sufer fenomenul de plasmoliza, n
cursul cruia, datorit pierderii apei, care trece n mediu volumul celulei se micoreaz, iar citoplasma se retract sub
forma unei mase sferice sau ovalare, desprins de peretele celular;
2) In medii hipotone (de exemplu, n ap) se produce fenomenul de plasmoptiz. Datorit ptrunderii apei din
exterior, turgescena celulei crete pn cnd presiunea intracelular, depind capacitatea de distensie a peretelui celular,
determin dezagregarea unor structuri parietale. Peretele se sparge i coninutul celular este eliberat n mediu.
Pentru dezvoltarea optim, bacteriile necesit ca n mediul de cretere, presiunea osmotic s fie mai mic dect
cea intracelular. O excepie o constituie microorganismele osmofile, care se dezvolt numai n medii cu presiune
osmotic ridicat. Ele sunt halofile (obligate sau facultative), dac cresc pe medii cu salinitate mare, sau zaharofile, dac
se dezvolt pe medii cu concentraii mari de zahr (50 -70%).
Spre deosebire de marea majoritate a microorganismelor, care tolereaz sarea n anumite limite, microorganismele
halofile se dezvolt normal n condiiile unui mediu cu salinitate crescut. Halofilele facultative se dezvolt n condiii
obinuite de izotonie, dar cresc bine i pe medii cu concentraii mai mari de sare (pn la l0 -l2% NaCl). Halofilele
obligate se dezvolt numai n medii nutritive care conin concentraii mari de sare, care ating l6-35% NaCl i 2% MgSO 4.
Microorganismele halofile fac parte din microbiota normal a marilor i oceanelor, a lacurilor srate i a salinelor.
Halofilele se gsesc, de asemenea, uneori, n alimentele srate (msline, pete srat, anchois), pe care le pot altera, dar n
general au aciune util, participnd la procesele de maturare a unor alimente ca brnzeturi, carne sarat etc.
In raport cu limitele relativ restrnse ale salinitii care favorizeaz creterea optim a microorganismelor, gama
concentraiilor de sare pe care microorganismele le tolereaz este mult mai larg: de la nivelul salin infim din apa
bidistilat (cu un coninut organic de 70 g/l), la care este posibil supravieuirea unor bacterii heterotrofe, pn la
concentraia enorm de circa 500 g de sruri/litru, la care pot crete unii fungi (Aspergillus oryzae i A. terricola).
Bacteriile halofile extreme cresc n condiii saline suprasaturate. Ele supravieuiesc chiar pe cristalele de sare rmase dup
evaporarea apei.
Osmoreglarea (ajustarea presiunii osmotice intracelulare n funcie de presiunea osmotic a mediului extracelular)
se realizeaz prin procese active ce au loc in timpul adaptrii la stressul osmotic al mediului. Multe specii de bacterii
rspund la presiunea osmotic crescut a mediului, acumulnd molecule cu greutate mic, la concentraii intracelulare
mari, pentru a echilibra concentraia crescut a ionilor n mediul extracelular.
Substanele acumulate n citoplasm, n condiiile unui mediu hipertonic i care nu sunt inhibitorii pentru
activitatea enzimelor, chiar la concentraie nalt, adic sunt compatibile cu metabolismul celular se numesc soluii
compatibile sau osmoprotectoare.
Moleculele cu greutate mic echilibreaz osmoliii externi, astfel nct este mentinut presiunea de turgor a
celulei. Substanele osmoprotectoare se acumuleaz n celul, prin transport din mediul extracelular, iar alteori numai prin
sinteza de novo: aminoacizi i derivaii lor, trehaloza (un dizaharid), glicin-betaina, prolin-betaina etc.
Microorganismele osmofile i osmotolerante au o deosebit importan economic, deoarece pot altera alimentele
conservate n soluii concentrate de sare (saramuri) sau de zahr (siropuri), soluii care, fa de microorganismele obinuite
exercit un efect microbiostatic.
Presiunea hidrostatic
In mri i oceane, presiunea hidrostatic are valori diferite, n funcie de adncime i atinge valori foarte nalte n
zonele abisale. La fiecare l0 m adncime, presiunea hidrostatic crete cu circa o atmosfer, corespunztoare coloanei de
ap.
Microorganismele care cresc la presiuni hidrostatice mari sunt barotolerante i respectiv barofile.
Unele suport (adic cresc i se divid) diferene mari de presiune (l-l600 atm) i se numesc euribare, iar cele care
se dezvolt n limite restrnse ale variaiei presiunii hidrostatice sunt stenobare.
Sub aciunea presiunii hidrostatice mari, la E. coli se produce ntrzierea creterii, precum i modificri
morfologice ale celulelor ce constau n apariia celulelor filamentoase.
O specie izolat din adncurile abisale (11 034 m) Pseudomonas bathycetes crete la 3o i la l000 atm, cu durata
unei generaii celulare calculat la 33 de zile.
Creterea presiunii hidrostatice i scderea temperaturii produc modificri asemntoare ale lipidelor
membranare. Ambii factori mresc vscozitatea lipidelor membranare i produc astfel o tranziie de la starea fluid
lichid cristalin la faza mai solid, cea de gel.
In compoziia lipidelor membranare, la bacteriile barofile crete cantitatea de acizi grai nesaturai, ceea ce pare s
condiioneze meninerea unei fluiditi membranare compatibil cu funciile sale, contracarnd efectele presiunii
hidrostatice nalte.
Energia radiant
Radiaiile electromagnetice au un spectru larg al lungimii de und i include radiaiile herziene (undele radio),
infraroii, ale spectrului vizibil, ultraviolete (UV), X i gama. Ele sunt fenomene ondulatorii i fascicule discontinue de
mici cuante de energie. Iradierea reprezint propagarea orientat a unui fascicul de cuante de energie asupra unui material,
iar efectele asupra acestuia sunt consecina absorbiei energiei radiaiilor i depind de energia cuantei i de natura
materialului absorbant.
Radiaiile herziene, ca i cele infraroii, cu lungime de und mare (lambda, mai mare de l2 000 A o) au un potenial
energetic att de sczut, nct nu produc modificri chimice ale substanelor de care sunt absorbite i de aceea, energia lor
este convertit integral i imediat n caldur.
Radiaiile cu lungimea de und cuprins ntre l2 000 A o (infrarou apropiat) i 2000 Ao (ultraviolet ndeprtat) au
un potenial energetic suficient de mare pentru a produce modificari fotochimice ale moleculelor de care sunt absorbite.
Radiaiile cu lungimea de und mai mic de 2000 Ao (radiaiile X, gama i cosmice) au un potenial energetic att
de mare nct produc ionizarea moleculelor pe care le ntlnesc, de unde i denumirea lor de radiaii ionizante.
Efectele biologice ale radiaiilor depind de lungimea lor de und i de cantitatea total de energie incident (doza
de iradiere). In funcie de aceti doi factori, iradierea poate avea dou efecte distincte asupra celulelor:
- efectul letal ntr-o dinamic logaritmic, adic n fiecare interval succesiv de timp, celulele mor ntr-o proporie care
rmne constant;
- efectul mutagen, care const n modificarea unor caractere genotipice a unei pari din celulele expuse i se manifest
prin apariia la aceste celule, a unor nsuiri fenotipice noi: rezistena la infecia cu un bacteriofag, dobndirea sau
pierderea capacitii de a sintetiza un anumit metabolit etc.
Deinococcus radiodurans este o bacterie recunoscut pentru rezistena sa la radiaia ionizant. Unul dintre factorii
rezistenei este probabil, peretele celular, n structura cruia s-au identificat 6 straturi. Dei structural aparine celulelor
Gram negative, adeseori se coloreaz Gram pozitiv. La nivel nalt de iradiere (1,75 megarazi), mecanismele reparatorii ale
ADN la D. radiodurans (prin excizie, reparare prin recombinare) sunt foarte eficiente: celulele reconstituie genomul din
1000-2000 fragmente rezultate prin ruperi dublu catenare, spre deosebire de E. coli care i restabilete genomul din 10-15
fragmente cu ruperi dublu catenare. Se sintetizeaz Rec A, EFTu i Kat A.
Radiaiile luminoase acioneaz asupra celulelor prin intermediul unor reacii fotochimice cu constituienii
celulari. Cele mai studiate sunt reaciile implicate n procesul de fotosintez i n fenomenele de fototaxie, ntlnite la
microorganismele fototrofe (bacterii, cianobacterii, alge).
Lumina solar direct este bactericid, probabil datorit nu att aciunii radiaiilor UV, ct mai ales inclzirii sub
efectul deshidratrii consecutive a celulelor expuse: dei soarele este o surs puternic de raze UV, stratul de ozon din
patura superioar a atmosferei absoarbe majoritatea radiaiilor cu o lungime de und mai mic de 2900 A o. In plus, lumina
vizibil exercit i efecte cu caracter mai specific, indiferent de componenta caloric sau ultraviolet a luminii solare,
dintre care unele sunt ns condiionate de o iradiere ultraviolet concomitent sau prealabil.
l) Fotosensibilizarea reprezint fenomenul de intensificare a efectului biologic al radiaiilor luminoase, ca urmare a
prezenei n mediul extracelular, a unor substane inactive la ntuneric, care se activeaz n prezena luminii. De exemplu,
n prezena unor colorani fluoresceni (albastru de metilen, rou bengal), lumina vizibil puternic denatureaz proteinele
i astfel omoar celulele bacteriene i inactiveaz virusurile. Aceti colorani rein un timp mai ndelungat o cuant
absorbit, timp n care energia este transferat altei molecule, n loc s fie emis ca fluorescent. Transferul de energie
determin reducerea unor aminoacizi (histidina, triptofan) i a bazelor azotate din acizii nucleici.
2) Fotoprotecia constituie rezultatul biologic al aciunii antagoniste a radiaiei luminoase faa de efectele unei iradieri
simultane cu ultraviolete. Modificarile celulare caracteristice pentru iradierea cu UV sunt atenuate sau chiar prevenite
printr-o expunere concomitent la radiaiile din spectrul luminii vizibile.
3) Fotoreactivarea este procesul de restaurare, de revenire la normal unor celule expuse prealabil la radiaii UV, realizat
sub aciunea luminii vizibile, care este capabil s repare alterrile celulare, consecutive iradierii cu UV. Dintr-o
populaie bacterian iradiat letal cu UV, un numr de celule renvie dup expunerea la lumin, n urmtoarele trei ore.
Radiaiile ultraviolete au aciune inhibitorie net asupra creterii microorganismelor. Efectul lor depinde i de
durata iradierii. Dozele mici, de scurt durat au efect mutagen i de inducie litic a celulelor lizogene sau blocarea
temporar a multiplicrii celulare. Dozele mari produc modificri profunde, ireversibile, cu efect letal. Radiaiile UV, cu
lungimea de und cuprins intre 2300 i 2800 Ao sunt cele mai active din punct de vedere biologic. Efectul letal maxim l
au radiaiile cu lungimea de und de 2600 Ao (2537 Ao), corespunztor spectrului maxim de absorbie a UV de ctre ADN.
Purinele i pirimidinele din acizii nucleici absorb radiaiile de 2600 A o, iar inelele aromatice ale triptofanului, tirozinei i
fenilalaninei din proteine, pe cele cu lungimea de und de 2800 Ao.
Radiaiile UV produc modificri ale moleculei de ADN, ce constau n formarea dimerilor de timin, ntre resturile
adiacente situate pe aceiai caten, sau pe cele dou catene. Consecina este oprirea procesului de replicare sau alterarea
secvenei bazelor n catena nou sintetizat. Restul aparatului celular rmne funcional, astfel nct, iradierea celulelor,
urmat de infecia fagic, restrnge sinteza ARNm i a proteinelor, la cele codificate de fag.
Cele mai multe alterri celulare induse de radiatiile UV pot fi reparate, dac microorganismele i virusurile sunt
expuse aciunii luminii cu lungime de und mai mare, fenomen denumit fotoreactivare (reparare sub aciunea luminii).
Din aceast cauz, eficiena sterilizrii cu raze UV este foarte mic.
Radiaiile UV sunt emise de lmpi cu vapori de Hg la presiune mic (peste 90% din radiaii au lungimea de und
de 2540 Ao) i sunt folosite pentru diminuarea contaminrii aeriene din diferite incinte.
Radiaiile UV penetreaz foarte ptin prin corpurile solide, astfel c o pelicul fin de grsime pe sursa emitoare
poate reduce mult efectul letal. Cele mai multe tipuri de sticl i materiale plastice absorb extensiv lumina UV. Sterilizarea
are loc numai la doze nalte de iradiere.
Lumina UV poate cauza leziuni ale pielii i retinei i favorizeaz apariia cancerului tegumentar.
Faza de cretere a microorganismelor influeneaz eficacitatea iradierii cu UV. Celulele care cresc i se multiplic
sunt cele mai sensibile, iar endosporii sunt rezisteni.
Lumina solar are efect letal asupra microorganismelor, datorit componentei UV, dar i pentru c induce procesul
de fotooxidare.
In procesul fotoxidrii, energia luminoas cu lungimea de und mai mare dect a radiaiei UV este absorbit de
pigmeni sau de ali compui chimici ai celulei i determin oxidarea letal a unor molecule de importan vital. Procesul
are loc numai n prezena O 2 atmosferic. Lumina solar poate inactiva prin fotooxidare, chiar sporii de B. anthracis, dup
expunere prelungit. In contrast, efectul letal produs de UV nu necesit prezena O 2.
In celula vegetativ se activeaz mecanisme de reparare a leziunilor induse de UV:
- fotoreactivarea este procesul n cursul cruia, n celulele iradiate cu UV i expuse razelor de lumin cu lungimea de
und mai mic de 500 nm se induc enzimele de fotoreactivare, ce monomerizeaz dimerii de timin i o mare
proporie din celulele iradiate rmn viabile;
- excizia secveelor dimerice i a nucleotidelor nvecinate. Procesul este catalizat de o endonucleaz care incizeaz
ADN, o exonucleaz care excizeaz secvena, o ADN-polimeraz care repar secvena prin ncoporarea corect a
bazelor i o ADN-ligaz, care reunete cele dou capete ale catenei reparate;
- repararea la ntuneric prin recombinare postreplicativ. Replicarea ADN progreseaz pn ajunge la un dimer
neexcizat. Pe catena opus dimerului este lsat o discontinuitate i replicarea este reluat la un nou situs de iniiere,
situat cu 80-l000 de baze n aval. Asemenea discontinuiti apar pe ambele catene nou sintetizate, deoarece dimerii de
T se gsesc pe ambele catene parentale. Discontinuitile vor fi reparate prin inseria recombinatorial a ADN
parental din catena opus.
Radiaiile corpusculare (, , protonii), ca i radiaiile electromagnetice i x sunt ionizante. Radiaiile sunt
atomi de He, cu for sczut de penetraie i nu se folosesc pentru sterilizare. Radiaiile sunt electroni cu vitez nalt.
Razele i x au lungimi de und foarte mici i sunt generate de surse radioactive (Co 6o) i electronii accelerai sunt sursele
principale de radiaii ionizante. Unitatea de radiaie folosit n microbiologie a fost radul, care cuantific energia absorbit
din radiaia ionizant, de materia prin care trece radiaia. Unitatea de msur mai modern a radiaiei este gray (Gy),
definit ca un aport de 1 J Kg-1 energie n esut. 1 Gy = l00 razi.
Cel mai rezistent organism la radiaiile ionizante este Deinococcus radiodurans.
Radiaiile ionizante scot electronii din atomii prin care trec. Toate schimbrile chimice ce au loc n celula
bacterian se datoreaz electronilor mobilizai, care initiaz un lan de reacii chimice. Ionizarea se produce mai nti n
apa din citosol i rezult radicali foarte reactivi cu via scurt: OH . si H+. Se genereaz astfel coloanele de ionizare, prin
deplasarea n cascad a electronilor de pe orbitele lor, care determin alterarea sau distrugerea unor molecule eseniale
pentru celul. Se produc ruperi monocatenare sau dublu catenare ale moleculei de ADN si stoparea sintezelor si diviziunii
celulare.
Datorit efectului lor specific, aceste radiaii sunt denumite generic ca ionizante, spre deosebire de alte radiaii (de
exemplu, UV) care nu transform atomul n ion, deoarece nu pot s-i smulg un electron, ci determin numai excitarea
atomului, adic trecerea lui la un nivel energetic superior, prin deplasarea unui electron satelit pe o orbit mai indepartat
de nucleul atomic.
Razele x sunt cele mai active, n special cele moi, cu un intens efect bactericid. Dozele neletale opresc
diviziunea i produc modificri de ordin morfologic i fiziologic.
Razele x tari, ca i razele i , mai penetrante, deci mai puin absorbite, au un efect antimicrobian mai atenuat.
Radiaiile i x se folosesc pentru sterilizarea conservelor alimentare, dei le confer un miros particular, care
poate fi numai parial ndeprtat. De asemenea, ele sunt folosite pentru inactivarea vaccinurilor, avnd avantajul c nu
modific structura chimic i antigenic a produsului tratat. Rezistena la iradiere este mult mai mare la microorganisme
dect la mamifere. Astfel, n timp ce doza mortal pentru om este de circa 500 r, pentru E. coli este de l0 000 r, pentru
levuri este 30 000 r, iar pentru Paramecium, de 300 000 r. S-au izolat bacterii viabile din apa de rcire a unei pile atomice,
care primise l00 milioane r, ntr-un interval de 8 ore.
Starea ADN n celul este important n raport cu sensibilitatea la iradiere. Sporii sunt mai rezisteni dect celulele
vegetative, deoarece, probabil conin substane radioprotectoare, nveliul sporal pare a fi protector, iar ADN sporal se
gsete ntr-o stare mai rezistent la rupere.
Unele microorganisme au o rezisten deosebit la radiaia ionizant i la UV, deoarece posed enzime capabile s
repare avaria ADN. Mecanismele reparatorii s-au studiat la D. radiodurans i la E. coli, la care funcioneaz mecanisme
rapide de recombinare reparatorie, codificate de gene rec multiple (A, B, C).
Aciunea laserului
Laserul este un fascicul foarte concentrat de cuante luminoase sau fotoni, generat de obicei n interiorul unui
cristal de rubin (cristal de oxid de aluminiu, n care sunt dispersai atomi de crom), ca urmare a excitaiei atomilor de crom
din cristal, podus prin modificarea strii energetice sub aciunea luminii emise de o lamp cu xenon (blitzul fotografilor).
Denumirea de laser vine de la iniialele cuvintelor engleze care l definesc: light amplification by stimulated
emission of radiation (amplificarea luminii prin emisie stimulat de radiaii).
Spre deosebire de o surs de lumin de tipul becului electric (cu lumin incandescent), care emite lumin
incoerent sub form de radiaii dispersate i de numeroae lungimi de und diferite, laserul emite o lumin
coerent, sub forma unui fascicul de radiaii foarte apropiate ntre ele, cu o lungime de und practic uniform, cuprins
ntre 3000 i 9000 Ao. Datorit proprietilor sale particulare, laserul poate aciona extrem de intens i foarte localizat,
concentrnd o cantitate enorm de energie, pe o suprafa infim, strict circumscris. Aplicat asupra microorganismelor,
laserul determin distrugerea lor instantanee i de aceea poate fi folosit pentru sterilizarea unor medii care se degradeaz
prin expunere la temperaturi ridicate.
Aciunea ultrasunetelor
Dintre diferitele vibraii mecanice, infrasunetele (sunt neaudibile) i sunetele percepute de urechea uman (l6-l6
000 herzi) nu influeneaz microorganismele. Vibraiile ultrasonice i cele supersonice produc moartea celulelor prin
ruperea pereilor celulari i dezintegrarea structurilor intracelulare.
Eficiena vibraiilor sonice depinde mai mult de amplitudinea dect de frecvena lor. Ca atare, vibraii cu frecven
relativ joas, dar cu intensitate mare sunt mai eficiente dect cele cu frecven nalt i intensitate mic.
Sensibilitatea bacteriilor la ultrasunete variaz cu specia i, pe de alt parte este mult mai mare la formele
vegetative, dect pentru spori.
Moartea i liza bacteriilor se datoresc fenomenului de cavitaie: pereii celulari sunt intens bombardai de bule
foarte mici de gaz, care se formeaz n lichidul de suspensie, ca rezultat al agitaiei produs de vibraiile cu frecven
nalt (ultrasonice i hipersonice).
Aciunea ultrasunetelor este folosit n practic pentru dezintegrarea celulelor bacteriene, separarea enzimelor sau
altor constituieni chimici sau antigenici, ca i pentru sterilizarea anumitor produse.
MECANISMELE DE ACIUNE
MICROORGANISMELOR
ALE
ANTISEPTICELOR
SI
DEZINFECTANILOR
ASUPRA
Substanele chimice din compoziia unui mediu de cretere a microorganismelor pot exercita, n funcie de natura
i concentraia lor, trei tipuri de efecte asupra acestora:
- un efect favorizant asupra dezvoltrii i multiplicrii celulare, prin aportul substanelor nutritive i realizarea
echilibrelor fizico-chimice necesare;
- un efect microbiostatic, prin blocarea potenial reversibil a proceselor de multiplicare celular, determinnd
inhibiia procesului de multiplicare, dar bacteriile rmn viabile i i reiau creterea i multiplicarea dup ce
sunt transferate pe medii adecvate;
- un efect microbicid, prin alterarea profund i ireversibil a unor procese metabolice eseniale.
Particularitile fiziologice ale microorganismelor influeneaz aciunea substanelor chimice. De exemplu, CO 2 i
H2S sunt toxice pentru majoritatea microorganismelor aerobe, al cror metabolism respirator l inhib, dar pentru unele
specii bacteriene aceste substane reprezint o surs de energie.
Una i aceiai substan poate aciona n moduri diametral opuse, n funcie de concentraia ei: n concentraie de
1%, zaharoza este o bun surs de carbon i energie, iar la concentraia de 40% are efect bacteriostatic.
Substanele folosite n metabolismul microorganismelor au rolul de surse de carbon, de azot i de energie sau
acioneaz ca factori de cretere.
La concentraii foarte mici ale unei substane nutritive n mediu, creterea bacterian este foarte slab, dar se
intensific odat cu creterea concentraiei substanei nutritive, pn cnd aceasta atinge un nivel prag, dup care, rata de
cretere a populaiei celulare devine constant, independent de concentraia substanei nutritive.
Cnd concentraia substanei atinge limita de toleran pentru celul, se produce inhibiia creterii celulare, iar
dincolo de aceast limit, substana nutritiv poate avea un efect bactericid.
Unele substane exercit efecte de chimiotaxie sau chimiotropism pozitiv, fiind atractante pentru microorganisme,
n timp ce altele exercit un chimiotactism negativ asupra celulelor, efectul lor fiind repelent.
Efectele duntoare ale unor compui chimici pot fi de tip microbiostatic, alteori, compuii chimici au efect
microbicid, adic determin moartea microorganismelor expuse.
Imprirea substanelor chimice n microbiostatice i microbicide este arbitrar, deoarece o substan poate fi
microbiostatic la concentraie mic sau cnd aciunea ei este de scurt durat, dar poate fi microbicid la concentraie
mare sau dup aciunea prelungit a unei concentraii mici.
Caracterul bacteriostatic sau bactericid este dependent de urmtoarele dou criterii:
- concentraia la care se manifest un anumit efect;
- timpul de aciune pentru producerea efectului.
O substan este microbicid (bactericid, fungicid) dac efectul ei se produce ntr-un interval scurt de timp i se
manifest la concentraii foarte mici i este microbiostatic, dac efectul ei rmne ca atare i la concentraii relativ mari
de substan activ, iar rata efectului microbicid este foarte sczut, astfel nct cel puin o parte din celule pot supravieui
timp foarte ndelungat.
In practic, n afara celor doi termeni se folosesc denumirile de antiseptice (AS) i dezinfectante (DF).
Antisepticele sunt substane chimice care, aplicate pe esuturile vii impiedic creterea i multiplicarea
microorganismelor existente. Sunt relativ netoxice i pot fi aplicate pe esuturi umane i animale.
Termenul de dezinfectant este restrns la substanele cu efect microbicid rapid, la concentraii mici. Ele se aplic
pe obiecte neanimate, n scopul distrugerii microorganismelor contaminante. Cele mai multe substane dezinfectante sunt
toxice i nu pot fi administrate la om i la animale.
Antisepticele i dezinfectantele cuprind o larg varietate de ageni chimici (tabel nr. 2) i poart denumirea
generic de biocide. Biocidele, n general, au un spectru mai larg de aciune dect antibioticele i spre deosebire de
acestea, care au inte intracelulare specifice, biocidele au inte multiple. Majoritatea substanelor dezinfectante acioneaz
fie prin dizolvarea lipidelor din membrana citoplasmatic (detergeni, solveni lipidici), fie prin modificri ale proteinelor,
acizilor nucleici etc.
Unele biocide se folosesc pentru conservarea unor produse biologice (farmaceutice, alimentare). Conservarea
semnific prevenirea multiplicrii microorganismelor. Altele se folosesc pentru curire, care semnific ndeprtarea unui
material strin de pe o suprafa.
Tabel nr.2: Structurile chimice i utilizrile biocidelor antiseptice i dezinfectani.

Compui
Reprezentani
Formula chimic
chimici
Alcooli
Etanol
CH3 CH2OH
Izopropanol
Aldehide
Aciune
Antiseptic
Dezinfectant
Agent de conservare
Glutaraldehida
Dezinfectant
O=C - CH2CH2CH2 C=O
Formaldehida
H2C
Anilide
Structura
general
Triclorcarban
Biguanide
Clorhexidina
Antiseptic
Alexidina
Biguanide
polimerice
Dezinfectant
Agent de conservare
Agent antiplac dentara
Triclosan
Antiseptic
Agent antiplac dentara
Bifenoli
C6H5-NH-COR
Agent de sterilizare
Agent de conservare
Antiseptic
Hexaclorofen
Odorizant
Agent de conservare
Diamidine
Propamidina
Dibromopropamidina
Antiseptic
Agent de conservare
Compui
halogenai
Compui cu Cl
Halofenoli
Compui
metalici
Peroxizi
OCl-, HOCl, Cl2
Compui cu I
Cloroxilenol
(PCMX)
I2
Compui cu Ag
Ag
Compui cu Hg
Peroxid de H
Hg
H2 O2
Dezinfectant
Antiseptic
Agent de curire
Antiseptic
Agent de conservare
Agent de conservare
Antiseptic
Dezinfectant
Dezinfectant
Ozon
Acid peracetic
Fenoli
crezoli
Sruri
cuaternare
de amoniu
O3
CH3COOOH
Fenol
Dezinfectant
Cresol
Agent de conservare
Structura
general
R1
2
R3
N
X-
Cetrimid,
clorura
de
benzalkonium
Faza
vapori
de
Dezinfectant
Antiseptic
Agent de conservare
Agent de curire
Etilenoxid
O
H2C
CH2
Formaldehida
H2CO
Dezinfectant
Peroxidul de H
H2 O2
Dezinfectant
Mecanisme de aciune a substanelor antibacteriene

Metodele de studiu privind mecanismele de aciune ale AS i DF sunt:
- studiul dinamicii nglobrii;
- determinarea efectelor litice sau de pierdere a constituienilor celulari;
- studiul efectelor asupra modelului membranar;
- detectarea inhibiiei activitii enzimelor;
- studiul efectelor asupra proceselor de biosintez macromolecular;
- examinarea microscopic a celulelor expuse aciunii biocidelor.
Efectele nocive ale substanelor antibacteriene se exercit pe mai multe ci:
- prin modificri de permeabilitate la nivelul peretelui celular i membranei citoplasmatice;
- prin denaturarea unor constituieni celulari eseniali (proteinele);
- prin blocarea gruprilor funcionale active ale enzimelor i interferena cu metabolismul productor de
energie;
- inhibiia competitiv prin analogie steric, a reaciilor de biosintez.
Uneori, aceiai substan i poate exercita aciunea, pe una sau pe mai multe ci, dar una dintre acestea reprezint
calea principal de aciune.
Oricare ar fi tipul de celul microbian, aciunea substanelor antimicrobiene se desfoar dup o secven
comun de evenimente. Interaciunea cu suprafaa celulei poate modifica semnificativ viabilitatea (de exemplu,
glutaraldehida), dar cei mai muli ageni antimicrobieni sunt activi dup ce ptrund n celul.
Mecanismele aciunii antisepticelor i dezinfectanilor asupra protozoarelor nu au fost investigate, datorit

dificultii cultivrii unor protozoare n condiii de laborator (de exemplu, Criptosporidium). Diferitele stadii ale ciclului
de dezvoltare (de exemplu, trofozoiii i chitii) ilustreaz modul n care schimbrile fiziologice i citologice influeneaz
rspunsul la antiseptice i dezinfectani.
Antisepticele i dezinfectantele se folosesc pe scar larg n spitale i n alte locaii, pentru aplicaii locale i
pentru dezinfectarea suprafeelor expuse. Ele constituie o parte esenial a practicilor de control al infeciilor i contribuie
la prevenirea infeciilor nosocomiale*.
*
Infeciile nosocomiale sunt produse de tulpini de microorganisme cu circulaie limitat n mediul spitalicesc, rezistente la
tratamentul cu antibiotice i cu ageni chimioterapeutici, ca rezultat al unei presiuni selective constante.
Substane antibacteriene active prin modificri de permeabilitate

Substanele din aceast categorie (spunurile, detergenii) produc modificri fizico-chimice, care duc la pierderea
permeabilitii selective a membranelor celulare, astfel nct membrana citoplasmatic nu mai reine n interiorul celulei,
moleculele utile (aminoacizi, nucleotide, coenzime, ioni) i nici nu poate opri ptrunderea din exterior a unor substane
nocive.
Spunurile i datoresc efectul antimicrobian, aciunii acizilor grai nesaturai (oleic, linoleic, linolenic) din
compoziia lor. Aciunea lor se exercit asupra constituienilor lipidici ai membranelor celulare, care astfel devin mai
permeabile. Datorit capacitii lor emulsionante, spunurile determin, prin splare, o reducere masiv a numrului
microorganismelor pe suprafaa tegumentului.
Detergenii sunt compui organici tensioactivi, obinui prin sintez chimic, din materii prime derivate din petrol.
Molecula lor este asemntoare aceleia a spunurilor, dar au proprieti fizice i chimice superioare.
Molecula agenilor tensioactivi este asimetric: conine o regiune hidrofil i una hidrofob (lipofil sau
liposolubil). Molecula detergenilor se leag att de ap, ct i de moleculele organice nepolare. Molecula amfipatic a
detergenilor se orienteaz cu captul hidrofob, spre materialul organic, iar cu captul hidrofil, spre ap. Efectul
detergenilor este udarea, desorbia, emulsionarea, suspensionarea i stabilizarea particulelor dizlocate de pe o suprafa
(Fig. 74). Rezultatul este detergena (sau curirea). La contactul cu o suprafa lipidic sau cu interfaa ulei-ap,
moleculele detergentului se adsorb pe aceast suprafa, prin gruprile lor hidrofobe, iar cele hidrofile rmn n ap.
Fig. 74. Molecula de detergent se orienteaz cu gruparea hidrofob spre materialul organic
Astfel orientate, moleculele detergentului formeaz un strat (o soluie) de continuitate ntre cele dou medii
insolubile (lipide-ap), ceea ce determin efectul de udare, ca rezultat al scderii tensiunii superficiale.
Pe baza sarcinii sau absenei ionizrii gruprii hidrofile, detergenii sunt de patru tipuri: cationici, anionici,
neionici i amfoterici. Cei neionici nu au caliti dezinfectante, iar uneori pot chiar s favorizeze creterea bacteriilor i
fungilor.
Monoglicerida acidului stearic

(detergent neionic)
Lauratul de sodiu
(detergent anionic)
Detergenii anionici sunt sruri de Na i K ale acizilor grai superiori. Au efect bactericid sczut, deoarece prin
disociere elibereaz un anion organic, cu toxicitate redus, respins de sarcina net negativ a suprafeei bacteriene. Sunt
mai eficieni fa de bacteriile Gram negative.
Detergenii cationici (Cetavlon, Cetazol, Bromocet) sunt sruri de amoniu quaternar, care conin patru grupri
organice legate de un atom de azot.
Cetilpiridinium clorid (detergent cationic)

Prin disociere, detergenii cationici elibereaz un cation organic toxic. Compuii amoniului quaternar acioneaz
asupra structurii membranei, pe care o dezorganizeaz. Bacteriile i pierd sarcina electronegativ, prin adsorbia ionilor
pozitivi. Substanele lipidice din peretele celular i cele din membran sunt solubilizate. Numeroi constituieni
citoplasmatici prsesc celula, iar substana activ ptrunde n interior i denatureaz proteinele i acizii nucleici.
Srurile quaternare de amoniu lizeaz sferoplatii i protoplatii suspendai n soluie de sucroz. Sunt sporostatici
(inhib dezvoltarea celulei vegetative din sporul germinat, dar nu procesul de germinare propriu-zis). Au efect
micobacteriostatic, dar nu micobactericid. Compuii amoniului quaternar se folosesc pentru dezinfecia preoperatorie a
tegumentului intact, se aplic pe membranele mucoase.
Detergenii cationici sunt bactericizi fa de toate categoriile de bacterii, chiar i fa de M. tuberculosis, deoarece
dizolv nveliul lipidic al suprafeei lor. Eficiena lor este diminuat de materialele fibroase, de ap, de ionii de Ca 2+ i
Mg2+. Oxideaz obiectele de metal, dac nu se adaug un agent antioxidant (nitritul). Viabilitatea sporilor nu este afectat.
Nu sunt toxici pentru organismul uman i nu irit esuturile. Se folosesc ca antiseptici tegumentari. Aciunea lor este
neutralizat de spunuri i fosfolipide.
Detergenii neionici (polieteri i esteri poliglicerici) nu au aciune bactericid. Adaugai n mediile nutritive sunt
chiar metabolizai de unele microorganisme. Unii dintre ei (Tween 80) sunt folosii ca ageni de dispersare ai celulelor
bacteriene, pentru a favoriza creterea i multiplicarea lor. Concentraiile mici de polisorbat (Tween) modific
permeabilitatea membranei externe a bacteriilor Gram negative.
Tween 80
Agenii amfoterici cumuleaz proprietile de detergent ale compuilor anionici, cu proprietile antimicrobiene
ale compuilor cationici. Activitatea lor rmne constant la o variaie larg de pH. Din aceast categorie fac parte
compuii din seria Tego.
Substane care acioneaz prin denaturarea proteinelor
Substanele din aceast categorie produc modificri fizico-chimice ale coloizilor citoplasmatici, stopeaz
activitatea enzimelor i precipit sau coaguleaz proteinele celulare.
Fenolul (acidul carbolic) este cel mai vechi dezinfectant cunoscut (Lister l-a folosit in l867). La concentraii mici
este bactericid, deoarece produce denaturarea i chiar precipitarea proteinelor celulare. Este iritant i produce coagularea
proteinelor tisulare. Aceleai efecte le produc i derivaii si (crezolul, crezil-acetatul).
Agenii antimicrobieni de tip fenolic s-au folosit pentru proprietile antiseptice, dezinfectante sau conservative, n
funcie de compus. Adeseori s-au denumit otrvuri protoplasmatice generale (McDonnell, 1999), dar sunt activi i fa
de membran.
Fenolul induce pierderea progresiv a constituienilor intracelulari, inclusiv eliberarea K +, indiciul major al
leziunii membranare. Se consider c fenolul acioneaz la punctul de separare a celulelor fiice pereche. Celulele tinere
sunt mai sensibile. Fenolii sunt antifungici i antivirali. Aciunea antifungic se datoreaz lezrii membranei plasmatice i
pierderii constituienilor citoplasmatici.
Fenolul i crezolii au proprieti analgezice (fig. 75). Se folosesc sub form de spray ca antiseptice i analgezice
pe membranele mucoase (ale urechii, nasului, gtului). Sunt foarte stabili la nclzire i uscare i i pstreaz activitatea
n prezena materialului organic. Fa de sporii bacterieni au o eficien moderat.
In diluie de 5%o, fenolul este folosit ca prezervant pentru diferite preprate biologice. Prin convenie
internaional, activitatea fenolului este considerat ca etalon, n raport cu care se apreciaz activitatea antibacterian a
diferitelor substane.
Fig. 75. Structura agenilor antibacterieni care aparin grupului fenolic.
Fenolii sunt mai activi n amestec cu spunurile, care mresc solubilitatea lor i favorizeaz penetrarea n substrat.
Adugarea unui halogen (clor) sau a unui compus organic stimuleaz activitatea microbicid a fenolilor.
Difenolii sunt derivaii hidroxi-halogenai a dou grupri fenolice conectate prin diferite legturi. Au spectru larg
de eficacitate, sunt sporostatici, dar au activitate sczut fa de Ps. aeruginosa i fungi.
Triclozanul i hexaclorofenul
sunt cele mai folosite biocide din acest grup: n spunurile antiseptice i n soluiile dezinfectante pentru mini. Ambele au
efecte cumulative i persistente asupra tegumentului.
Triclosanul are activitate n special fa de bacteriile Gram pozitive. Eficiena fa de bacteriile Gram negative i
levuri poate s creasc prin efectul de formulare: de exemplu, n asociaie cu EDTA, determin creterea permeabilitii
membranei externe. Efectul primar se produce, probabil, asupra membranei citoplasmatice, deoarece inhib nglobarea
nutrienilor, iar concentraiile mari bactericide produc creterea ampl a permeabilitii i eliberarea rapid a
componentelor celulare.
Hexaclorofenul (difenol halogenat) este bacteriostatic la diluii foarte mari. In combinaie cu un spun este un
dezinfectant eficace al pielii. Dac este absorbit pe cale tegumentar este toxic. Nu are miros iritant, este un bun
deodorant, ceea ce explic utilizarea sa ca deodorant comercial i pentru producerea spunurilor, nainte de a fi interzis,
datorit neurotoxicitii la copii. Mecanismul de aciune const n inhibiia catenei transportoare de electroni, al crei
sediu structural este membrana citoplasmatic, efectul fiind bactericid.
Hexaclorofenul
Clorhexidenul este probabil cel mai folosit biocid n scopul producerii antisepticelor utilizate pentru curirea
minilor, dar i ca dezinfectant i conservant. Este un nlocuitor eficient al hexaclorofenului. Are eficien cu spectru larg.
Activitatea antibacterian este dependent de pH i este mult diminuat n prezena materiei organice.
Clorhexidenul
Clorhexidenul este un agent bactericid, deoarece traverseaz peretele celular sau membrana extern, prin difuzie
pasiv i acioneaz asupra membranei citoplasmatice, perturbnd-i permeabilitatea. Nu este sporicid. Efectul asupra
germinrii este minim, dar inhib creterea.
Micobacteriile sunt, n general, foarte rezistente la clorhexiden.
Alexidina difer chimic de clorhexiden, pentru c are grupri terminale etil-hexil. Are aciune mai rapid
bactericid, deoarece altereaz mai rapid permeabilitatea.
Esterii alkilai ai acidului hidroxibenzoic sunt conservani ai alimentelor i medicamentelor. Nu sunt toxici,
deoarece sunt hidrolizai rapid.
Evaluarea potenialului antibacterian al agenilor chimici
Potenialul sau eficiena unui agent chimic antimicrobian este influenat de temperatur, pH, concentraie i
timpul de aciune.
Creterea temperaturii cu l0oC dubleaz rata reaciilor chimice i mrete potenialul agentului chimic.
La o valoare a pH-ului care mrete gradul de ionizare a unui agent chimic crete i capacitatea sa de a penetra n
celul. Valoarea pH poate altera chiar coninutul celulei.
Concentraia influeneaz decisiv efectele agentului antibacterian. Concentraiile mari pot fi bactericide, iar cele
mici pot fi bacteriostatice. Alcoolul etilic i izopropilic sunt excepii notabile de la regula concentraiilor. Ei sunt mai
activi la concentraia de 70% dect la concentraii mai mari. Alcoolii acioneaz prin coagularea (denaturare permanent)
a proteinelor, iar apa este necesar reaciei de coagulare. Amestecul alcool-ap n proporia 70% penetreaz mai profund
dect alcoolul pur, n materialul supus dezinfectrii.
Coeficientul fenolic
Efectul dezinfectant al fenolului este unitatea etalon, cu care se compar ali dezinfectani, n aceleai condiii de
aciune. Comparaia se exprim n coeficientul fenolic (CF).
Microorganismele test pentru determinarea coeficientului fenolic sunt S. typhi i S. aureus. Un dezinfectant care
are CF egal cu 1, are aceiai eficien antibacterian ca i fenolul, iar un CF mai mic dect 1 semnific o eficien mai
sczut.
Coeficientul fenolic se determin astfel:
- se prepar cteva diluii ale agentului chimic i se repartizeaz volume egale n tuburi test;
- se prepar un set identic de tuburi test cu diluii de fenol;
- ambele seturi de tuburi se aduc la acelai nivel termic prin nclzire n baie de 20 o, timp de 5 minute;
- n fiecare tub din cele dou seturi se transfer 0,5 ml din cultura unui microorganism test ( S. typhi sau S.
aureus);
- dup 5, l0, l5 minute se transfer, cu ansa calibrat, un volum din fiecare tub, ntr-un tub cu bulion nutritiv.
Tuburile se incub;
dup 48 de ore se evalueaz turbiditatea tuburilor inoculate i se gsete cea mai mic concentraie (cea mai
mare diluie a agentului care a omort toate organismele n l0 minute, dar nu n 5 minute);
- se stabilete raportul diluiei agentului chimic, la diluia fenolului ce are acelai efect. De exemplu, dac
diluia l/l0 a unui agent chimic are acelai efect ca i diluia l/l00 a fenolului, CF al agentului chimic este l0.
Determinarea CF este o modalitate adecvat de a aprecia eficiena agenilor chimici derivai din fenol, dar este
mai puin adecvat pentru ali ageni dezinfectani.
Evaluarea potenialului antibacterian a unui agent chimic se poate face mai simplu, prin metoda discurilor de
hrtie de filtru:
- fiecare disc de hrtie este mbibat cu soluia unui agent chimic diferit;
- discurile se aeaz pe suprafaa unei plci cu mediu agarizat, inoculat cu un organism test;
- fiecare organism test se nsmneaz pe o plac diferit;
- dup incubare, efectul inhibitor al unui agent chimic asupra organismului se identific printr-o zon clar de
inhibiie a creterii n jurul discului.
Diametrul zonei de inhibiie a creterii este proporional cu potenialul antibacterian al agentului chimic.
Acizii i bazele
Cele mai multe bacterii pot fi cultivate n medii al cror pH este cuprins ntre 6 i 9, diferena de concentraie a
ionilor de H fiind echivalent cu diferena de la l la 1000. Tolerana la variaia larg a pH se datoreaz faptului c
bacteriile sunt puin permeabile pentru ionii de H + i OH-, ceea ce le permite meninerea neutralitii interne. Aa se
explic faptul c, deseori, tocmai acizii slabi i bazele slabe, care se disociaz puin, au un efect antibacterian evident.
Efectul lor nu se datoreaz ionilor de H + sau OH-, ci este legat de prezena unui numr mare de molecule nedisociate, acizi
sau baze care pot ptrunde n celul mai uor dect ionii corespunztori. De aceea, activitatea lor antimicrobian este
dependent de pH-ul mediului. Aa se explic faptul c ntr-un mediu uor acid, acidul acetic este toxic pentru bacterii, pe
cnd HCl are un efect antibacterian slab. La un pH relativ sczut al mediului, acizii slabi, aflai sub forma nedisociat pot
ptrunde n celula bacterian i i modific pH, n timp ce acizii tari, intens disociai rmn n afara ei. In mediul neutru
sau uor alcalin, moleculele de acid acetic sunt aproape complet ionizate (disociate), ceea ce le ngreuiaz accesul n
celul i, ca urmare, toxicitatea lor este anulat. Acelai mod de comportare este caracteristic i bazelor slabe: NH 3 este
toxic n mediu slab alcalin i inofensiv pentru bacterii, n mediu neutru sau slab acid.
Pentru acizii tari, eficiena aciunii antimicrobiene este proporional cu concentraia ionilor de H + n soluie.
HCl este sporicid i se folosete pentru dezinfectarea pieilor de animale, infectate cu B. anthracis.
Unele bacterii sunt acidotolerante i chiar acidofile. Lactobacillus sp. se dezvolt la pH 4, iar Thiobacillus
thiooxidans, chiar n prezena H2SO4, 0,1 M.
Aciunea antimicrobian a acizilor este folosit n practic pentru conservarea alimentelor cu acid acetic 5%, cu
srurile acidului propionic (CH3- CH2 COOH), parahidrobenzoic, benzoic, sorbic sau cu esterii metil, etil, propil, butil,
ori prin fermentaie lactic natural.
Micobacteriile sunt relativ rezistente la aciunea acizilor i alcolilor, practica obisnuit fiind lichefierea sputei
nainte de cultivare, prin expunere pentru 30 de minute, la NaOH 1N sau H 2SO4 1N.
Acidul boric este un antiseptic de valoare medie.
Activitatea antimicrobian a alcalilor tari este dependent de concentraia ionului OH - n soluie. NaOH are
proprieti alcaline puternice: la concentraia de 5% omoar celulele vegetative, iar la concentraii mai mari omoar sporii
de B. anthracis.
Ca(OH)2 rezult din reacia CaO + H2O. Soluia 20% de Ca(OH)2 omoar majoritatea bacteriilor nesporulate.
Alcoolii sunt cei mai utilizai ageni chimici pentru dezinfecie. Ei sunt activi prin efectul denaturant asupra
proteinelor i prin solubilizarea lipidelor. Produc ruperea membranelor i inactivarea enzimelor. Omoar bacteriile
nesporulate, inclusiv pe cele acidorezistente. Inhib sporularea i germinarea sporilor, dar efectul este reversibil.
Efectul dezinfectant al alcoolilor crete odat cu lungimea catenei (metilic, etilic, izopropanol etc), pn la 8-l0
atomi de C, dup care solubilitatea n ap scade progresiv. Cei mai folosii alcooli sunt CH 3OH (metanol), C2H5OH
(etanol) i CH3CHOHCH3 (izopropanol). Ultimul este un bactericid mai eficace, la concentraia de 99%.
Etanolul se folosete n soluii apoase. Cele mai eficiente sunt cele cu concentraia de 60-70%. Prezena apei este
esenial pentru activitatea antimicrobian a etanolului. Concentraiile mai mari de 90% i mai mici de 5% sunt relativ
ineficiente ca ageni dezinfectani.
Aciunea lor dezinfectant, ca i efectul denaturant asupra proteinelor implic participarea apei. Eficiena aciunii
lor scade n prezena materiei organice. Expunerea timp de o or este letal pentru formele vegetative, dar nu modific
viabilitatea sporilor, dar inhib sporularea i germinarea lor. Contactul de scurt durat nu are efect sterilizant, ci numai
reducerea populaiei bacteriene. Alcoolii au activitate antibacterian rapid, cu spectru larg fa de formele vegetative
(inclusiv micobacterii), antifungic, neutralizeaz infeciozitatea virusurilor.
Pentru c omoar sporii, alcoolii nu se folosesc pentru sterilizare, dar se folosesc pentru dezinfectarea suprafeelor
i ca antiseptice tegumentare. Alcoolul izopropilic este mai eficient fa de bacterii, iar alcoolul etilic este mai eficient fa
de virusuri.
Fenil-etanolul este activ faa de bacteriile Gram negative i se folosete drept conservant al soluiilor de uz
oftalmic.
Ali solveni organici (eter, benzen, aceton) omoar bacteriile dar nu sunt ageni dezinfectani. Adugarea ctorva
picturi de toluen sau cloroform n soluii apoase inhib dezvoltarea fungilor i bacteriilor. Glicerolul este bacteriostatic la
concentraii de peste 50%. Este folosit pentru conservarea vaccinurilor, deoarece nu este iritant pentru esuturi.
Substane care acioneaz prin interferen cu gruprile active ale proteinelor-enzime
Unele substane acioneaz direct asupra unor grupri reactive (amino, carboxil, sulfhidril, amido, indol) din
structura enzimelor, combinndu-se cu ele i blocnd astfel sau modificnd activitatea enzimatic. In funcie de
stabilitatea legturii formate ntre aceste substane i gruprile reactive ale enzimelor, efectul este microbiostatic sau
microbicid, iar reacia este reversibil sau ireversibil.
Formaldehida (HCHO) i glutaraldehida (OCH(CH2)3CHO) omoar celulele prin denaturarea nespecific a
proteinelor i acizilor nucleici i au spectru larg de aciune antimicrobian.
Formaldehida (CH2O) este o monoaldehid, foarte reactiv, care interacioneaz cu proteinele, cu ADN i cu
ARN. Concentraiile de 25 g/ml pot fi bactericide. Ele nlocuie atomii labili de H din gruprile NH 2, -OH, -COOH,
-SH ale proteinelor i formeaz puni metilenice (R-CH 2-R), care leag, n general ireversibil, moleculele proteice i le
inactivez. Reaciile formaldehidei sunt, parial, ireversibile. Se folosete n soluie apoas (34 - 38%) sau 20% n alcool
metilic 65-70% (pentru a ntrzia polimerizarea) sau prin vaporizare la cald, pentru dezinfectarea i sterilizarea
suprafeelor uscate. Este bactericid, fungicid, sporicid i inactiveaz virusurile. In concentraie de 4% o este folosit ca
prezervant pentru vaccinuri i preparate de diagnostic. Soluiile de formaldehid, apoase sau alcoolice sunt netoxice i
neiritante. Ele omoar celulele vegetative n 5 minute, M. tuberculosis n l0 minute, sporii n 3-l2 ore i inactiveaz
virusurile n l0 minute.
O-ftalaldehida are aciune bactericid i sporicid. Este un compus aromatic cu dou grupri aldehidice.
Glutaraldehida are spectru larg de activitate fa de bacterii, spori, fungi i inactiveaz virusurile. Se leag de
structurile de suprafa ale celulei, inhib transportul membranar i enzimele periplasmice, inhib sinteza
macromoleculelor. Glutaraldehida interacioneaz puternic cu lizina, dar i cu ali aminoacizi. Este mai activ la pH
alcalin. Pe msur ce pH extracelular se modific la valori alcaline, suprafaa celulei expune mai multe situsuri reactive i
efectul bactericid este mai rapid. Are efect letal asupra micobacteriilor. La concentraii mici inhib germinarea sporului,
iar la concentraii mari (2%) este sporicid.
Datorit efectului denaturant asupra proteinelor, glutaraldehida se folosete ca fixator n tehnica de preparare a
materialului biologic pentru examinarea la microscopul electronic.
Etilen-oxidul (CH2-O-CH2) este cel mai folosit gaz sterilizant. Molecula de etilen-oxid nlocuie H din proteine, din
acizii nucleici i probabil din alte molecule. Legarea etilen-oxidului se numete alkilare i efectul este blocarea gruprilor
reactive ale macromoleculelor. Este solubil n ap i foarte exploziv. Este folosit pentru sterilizarea gazoas a obiectelor
termosensibile: echipamente chirurgicale, lenjerie de spital. Are aciune toxic remanent (este vezicant).
Ionii unor metale grele (Hg, Ag, Cu, Zn, Fe) sunt toxici pentru microorganisme datorit aciunii lor
oligodinamice, adic sunt activi la concentraii foarte mici. Cu, Zn, Fe intr n componena unor enzime i au rolul
fiziologic de microelemente, dar la concentraii supraoptimale, n compoziia substanelor antimicrobiene, ionii metalelor
grele acioneaz prin precipitarea enzimelor sau a altor proteine eseniale ale celulei. Ionii metalici pot fi aezai n serii cu
activitate antimicrobian descresctoare: Hg, Ag, Zn, Cu. Sunt activi la concentraii foarte mici (o parte la un milion),
datorit afinitii lor pentru gruprile SH.
Hg este utilizat sub forma srurilor anorganice (HgCl 2, sublimat coroziv, cu CF = 827 i oxicianura de Hg) sau sub
form organic (mertiolat, mercurocrom). Aciunea srurilor de Hg se datoreaz formrii de mercaptide cu gruprile SH
ale proteinelor. Iniial, reacia este reversibil i efectul este microbiostatic. Efectul HgCl 2 este neutralizat prin adugarea
n exces a compuilor cu grupri SH (glutation, tioglicolat). Din aceast cauz, utilizarea ei este considerat a fi
perimat. Dup contactul prelungit sau prin utilizarea unor concentraii mari de HgCl 2, reacia devine ireversibil i
efectul este microbicid. HgCl 2 este folosit curent n laborator, la concentraii de 1/l000 pn la 1/l0 000, care omoar
toate microorganismele. La diluii mari (1/20 000 sau mai mari), efectul este bacteriostatic.
Compuii organici cu Hg se folosesc pentru dezinfectarea rnilor superficiale i pentru conservarea serurilor i
vaccinurilor.
Argintul i compuii si au fost folosii mult timp ca ageni antimicrobieni.

Ionii de Ag au efect microbiostatic, la concentraii foarte mici i microbicid, la concentraii mai mari. Se pare c
unele proteine au afinitate mare pentru ionii de Ag i i fixeaz chiar la concentraii mici. Bacteriile omorte sub aciunea
ionilor de Ag conin n medie l06 ioni/celul, ceea ce corespunde aproximativ numrului de molecule de proteine-enzime
dintr-o celul. Cel mai important compus este Ag-sulfadiazina (AgSD), dar se folosesc i ali compui: acetatul i nitratul
de Ag.
AgNO3, n soluie de 1% (Argyrol) se folosete pentru a inhiba posibilele infecii gonococice ale ochiului la noul
nscut. Se instileaz n ochi imediat dup natere, deoarece infecia nosocomial poate determina orbirea. In locul AgNO 3
s-a folosit penicilina, dar odat cu preponderena bacteriilor rezistente la penicilin, AgNO 3 a fost reintrodus n uz.
Ionii de Ag interacioneaz cu gruprile thiol (-SH), dar probabil i cu alte inte, iar la nivel membranar produce
eliberarea ionilor de K+. Aminoacizii, ca cisteina i ali compui (tioglicolatul de Na) care conin grupri tiol, neutralizeaz
activitatea AgNO3 fa de Ps. aeruginosa. Aminoacizii care conin legtura S-S (disulfid), aminoacizii fr S i compuii
cu S ca acidul cisteic, L-metionina, taurina, tiosulfatul de Na, nu neutralizeaz activitatea Ag +. Faptul sugereaz c
interaciunea Ag+ cu gruparea tiol a enzimelor i proteinelor. Joac rol esenial n inactivarea bacteriilor, dar pot fi
implicate i alte componente celulare.
Srurile de Ag i ale altor metale grele (Cu) acioneaz prin legarea de gruprile funcionale ale enzimelor
fungice. Ag+ produce eliberarea ionilor de K+ din celula microorganismelor. Membrana citoplasmatic - sediul activitii
multor enzime este o int important pentru activitatea Ag.
Ag+ este activ nu numai asupra enzimelor: produce inhibiia marcat a creterii la Cryptococcus neoformans i
este depozitat n perete i n vacuol citoplasmatic. Ag + inhib diviziunea celular i lezeaz membrana extern la Ps.
aeruginosa. Volumul celulei crete semnificativ, iar componentele sale exprim anomalii structurale. Ag + interacioneaz
cu acizii nucleici, cel mai probabil cu bazele.
Sulfadiazina este o combinaie a doi ageni antibacterieni: Ag + i sulfadiazina (SD). Efectul antibacterian este
rezultatul unui singur compus sau este rezultatul interaciunii sinergice. AgSD are un spectru larg de activitate, dar spre
deosebire de AgNO3 induce formarea protuberanelor membranare la bacteriile sensibile (dar nu i la cele rezistente).
AgSD se leag de macromoleculele celulare, inclusiv de acizii nucleici.
Zincul se folosete sub forma unui amestec al srii (ZnCl 2), cu acizi grai cu lan lung. Se folosete ca pulbere
antifungic sau ca unguent. ZnCl 2 este astringent i se utilizeaz n tratamentul leziunilor superficiale. Pasta de ZnO se
folosete pentru tratamentul infeciilor fungice i bacteriene.
Aciunea substanelor dezinfectante asupra microorganismelor se desfoar ca un proces treptat, n cursul cruia,
numrul bacteriilor viabile scade progresiv: n fiecare unitate de timp va fi distrus un procent constant din numrul
celulelor viabile. Efectul antimicrobian este dependent de sensibilitatea microorganismului, de faza sa de cretere, de
forma de existen (vegetativ sau spor), de natura i concentraia substanei bactericide, de durata aciunii ei, de
compoziia chimic a mediului i de pH. Prezena unor substane organice supraadaugate, alcalinitatea i temperaturile
sczute diminu efectele toxice ale substanelor chimice.
Halogenii i compuii lor. Halogenii clorul i iodul - se folosesc ca dezinfectani sub form organic i
anorganic. Majoritatea compuilor organici ai halogenilor au efect letal asupra celulelor, prin oxidarea proteinelor,
ruperea membranelor i inactivarea enzimelor.
Iodul se combin ireversibil cu proteinele, prin iodurarea tirozinei i este un agent oxidant. Tinctura de iod (27%), adic iodul metalic (I2), dizolvat n soluie alcoolic concentrat de KI, este antiseptic i se aplic pe suprafaa pielii,
nainte de procedeul chirurgical i pe rnile mici. Soluiile apoase sunt instabile: n soluie cel puin 7 specii molecule de
iod se gsesc n echilibru cu I2. Cel mai activ este iodul diatomic (I2), avnd efect microbicid rapid fa de bacterii, levuri,
microfungi, spori.
Folosirea iodului este limitat de toxicitate i de culoare. Este iritant i poate determina chiar reacii alergice. De
aceea se utilizeaz iodofori complexe formate din iod i un agent soloubilizant (purttor), care acioneaz ca rezervor de
iod activ, liber. Iodul este solubilizat de ageni tensioactivi: detergeni neionici cu proprieti dezinfectante i polivinil
pirolidona, cu proprieti antiseptice. Iodul se leag uor cu aceti compui organici, de unde este eliberat lent, fapt ce
condiioneaz o dezinfecie eficient. Iodoforii sunt microbicizi la variaii mari de pH i i pstreaz activitatea n
prezena materiei organice.
Iodul se fixeaz de un grup important de proteine (n special cele care nu conin aminoacizi cu S), de nucleotide i
acizi grai, producnd moartea celulei.
Clorul liber are culoare caracteristic (verde) i miros ptrunztor. In oricare din variatele sale forme, clorul este
deodorant i dezinfectant.
Clorul este un agent bactericid foarte puternic (CF = 200). Adugat n ap, clorul formeaz acidul hipocloros,
produs instabil care degaj O2 n stare nscnd, un oxidant foarte puternic, dup reaciile:
In soluie apoas (apa de clor), clorul este bactericid la concentraia de 0,02%, dup maxim 5 minute. Se folosete
pentru tratarea apei potabile (clorinare), la concentraia de 1-3 mg/l.
Clorul i compuii si sunt inactivai n prezena materiei organice i a catalizatorilor metalici.
Soluiile de hipoclorit sunt folosite pentru dezinfectare i ca deodorante. Sunt inofensive pentru esuturile umane,
uor de manevrat, incolore, dar decolorante. Se folosesc n spitale pentru dezinfectarea camerelor, a suprafeelor, a
instrumentelor nechirurgicale.
Agenii care elibereaz clorul sunt cloraminele (derivai clorurai ai aminelor (R-NHCl), din care face parte
cloramina-T), hipocloritul de Na, dioxidul de clor. Sunt compui mult mai stabili dect hipocloriii, cristalini, solubili n
ap, cu care dau prin hidroliz, hipoclorit de sodiu i anionul hipocloros. Sunt active la concentraii de 0,5-l,5%, exprimate
n clor activ.
Hipocloritul de Na se folosete ca nlbitor al esturilor. In ap, ionizeaz i elibereaz Na + i ionul hipoclorit
(OCl ), care stabilete un echilibru cu acidul hipocloros (HOCl). La pH 4-7, clorul exist predominant ca HClO, iar la pH
peste 9, predomin OCl-. Se folosete pentru dezinfecia obiectelor contaminate cu snge infectat cu HIV sa cu virusul
hepatitei B (VHB).
Agenii care elibereaz Cl sunt oxidani foarte activi i denatureaz proteinele celulare. La pH sczut, activitatea
compuilor care elibereaz Cl este maxim. {n concentraii mari, agenii care elibereaz Cl sunt sporicizi.
Acidul hipocloros perturb fosforilarea oxidativ.
Civa compui organici clorurai se folosesc pentru dezinfectarea apei. Cel mai utilizat este compusul halazon
sau acidul parasulfon-dicloraminobenzoic. La concentraia de 4-8 mg/l dezinfecteaz, n 30 de minute, apa ce conine
bacili tifici.
Succin-clorimidul - o clorur organic stabil n form de tablet, devine activ n contact cu apa. Este ineficient
fa de chitii de Entamoeba hystolitica.
Halazon
(Acid parasulfondiclor-aminobenzoic)
Succin-clorimidul
Iodul este mai puin reactiv dect clorul, dar are efecte bactericide, fungicide, sporicide, tuberculocide i
inactiveaz virusurile. Tincturile (soluiile) apoase i alcoolice se folosesc de peste 150 de ani ca antiseptice, sunt iritante
i colorante. {n soluie se gsesc mai multe variante de iod, n echilibru cantitativ, dar activitatea antimicrobian principal
este produs de iodul molecular.
Iodoforii sunt complexe alctuite din iod i un agent de solubilizare, cu rol de purttor al iodului, pe care-l
elibereaz sub forma sa activ. Iodoforii sunt mai puin activi fa de fungi i spori, comparativ cu tincturile. Iodul
ptrunde rapid n celul i reacioneaz cu gruprile eseniale ale macromoleculelor: cu aminoacizii cu S (cisteina i
metionina), cu nucleotidele, cu acizii grai. Efectul este letal. Virusurile nude sunt cele mai sensibile, iar cele nvelite sunt
mai rezistente. Ca i n cazul bacteriilor, iodul denatureaz proteinele capsidei sau ale nveliului.
Alti ageni oxidani. Permanganatul de potasiu (KMnO4), n concentraie de 1:l0 000 este un antiseptic puternic,
dar aciunea sa este neutralizat de prezena substanelor organice.
Peroxizii. Peroxidul de H, perhidrolul sau apa oxigenat (H2O2) este un antiseptic eficient i netoxic. Se folosete
pentru dezinfecie, sterilizare i antisepsie. Este un lichid incolor, disponibil ntr-o varietate de concentraii, de la 3 la 90%.
Molecula este instabil i se descompune repede n H 2O i O2, dup reacia:
Dei soluiile pure sunt n general stabile, cele mai multe conin stabilizatori care mpiedic descompunerea.
H2O2 are un spectru larg de eficacitate fa de bacterii, spori bacterieni, levuri i inactiveaz virusurile. Este mai
activ fa de bacteriile Gram pozitive, dar prezena catalazei sau altor peroxidaze poate s le fac tolerante la
concentraiile mici de H2O2. Pentru efectul sporicid sunt necesare concentraii de 10-30% i timp mai ndelungat de
contact.
H2O2 acioneaz ca oxidant, producnd radicalul OH. liber, reactiv fa de gruprile cu S i fa de dublele legturi
ale macromoleculelor. In timpul generrii O2 se formeaz O2- (radicalul superoxid), n prezena ionilor de metal din
citoplasm. Radicalul O2- reacioneaz cu gruprile ncrcate negativ ale proteinelor i inactiveaz enzimele.
Concentraia de 6-25% H2O2 se folosete pentru sterilizarea unor materiale (implante chirurgicale, lentile de
contact). Nu are toxicitate remanent. Concentraia de 0,1% H 2O2 n lapte, la temperatura de 54o, diminu numrul total de
bacterii cu 99,99%. La concentraia de l0%, distruge sporii i inactiveaz virusurile. Soluia comercial de 3% se folosete
pentru dezinfecia rnilor, deoarece bacteriile anaerobe sunt foarte sensibile la prezena O 2.
Peroxidul de sodiu (Na2O2), ca past, se folosete pentru tratamentul acneii.
Peroxidul de zinc (ZnO2) se folosete n suspensie cu ZnO i Zn(OH) 2 pentru tratamentul infeciilor tegumentare
cu bacterii microaerofile i anaerobe.
Benzoil-peroxidul se folosete pentru tratamentul acneii i se adaug n soluiile de curire a pielii.
Acidul peracetic (CH3 CO O OH) este un agent oxidant puternic i se folosete sub form gazoas pentru
sterilizarea la temperatur sczut, a camerelor destinate creterii animalelor germ-free, a aparaturii medicale pentru
hemodializ i ca sterilizant al suprafeelor. Este bactericid, fungicid i inactivator al virusurilor la concentraii mai mici
de 0,3%. Se descompune la acid acetic i O 2, dar nu este sensibil la aciunea peroxidazei i rmne activ n prezena
materiei organice. Acidul peracetic denatureaz proteinele i enzimele, rupnd legturile SH i S-S.
Coloranii antiseptici
O categorie special de colorani manifest aciune bacteriostatic: derivaii acridinei i coloranii de rozanilin.
Acriflavina este un amestec format din doi derivai ai acridinei. Are toxicitate sczut i nu sensibilizeaz
tegumentul. Are un spectru larg de aciune i se folosete pentru tratamentul infeciilor tractului urinar. Mecanismul de
aciune pare s conste n capacitatea acridinelor de a se insera ntre nucleotidele moleculei de ADN.
Cristal-violetul este un derivat metilic al colorantului rosanilin. Este colorantul utilizat n reacia Gram, dar are i
efect bacteriostatic asupra bacteriilor Gram pozitive.
Cristal violet
Cristal-violetul a fost folosit pentru tratamentul vaginitei cauzat de Trichomonas. Agentul etiologic al candidozei
vaginale, C. albicans este foarte sensibil la aciunea colorantului.
Mecanismul de aciune a acestui compus fa de bacteriile Gram pozitive este foarte asemntor cu acela al
penicilinei, ce const n blocarea treptei finale a sintezei peretelui celular.
Quinonele sunt colorani naturali, care confer culoare multor forme de via, plante i animale. Unele quinone
sunt fungicide de importan agricol: cloranil i diclone.
Ageni sterilizani n faz de vapori
Multe instrumente medicale termosensibile pot fi sterilizate prin aciunea sterilizanilor lichizi (glutaraldehid,
acidul peracetic, H2O2) sau a agenilor sterilizani n faza de vapori. Cei mai folosii ageni n aceste sisteme reci sunt
oxidul de etilen, formaldehida, iar mai recent se folosesc H 2O2 i acidul peracetic.
Etilen-oxidul i formaldehida sunt ageni alkilani* cu spectru larg. Activitatea lor este dependent de concentraia
activ, temperatur, durata expunerii, umiditatea relativ.
*
Agenii alchilani sunt substane care adaug gruparea alchil (ca de exemplu, -CH3), la alte molecule. Adugnd un grup
alchil la o baz azotat, i modific dimensiunile i determin o eroare de mperechere. Agenii alchilani acioneaz asupra ciclurilor
purinice azotate, la nivelul O6 al guaninei sau O4 din bazele pirimidinice, producnd leziuni mutagene, dar i la nivelul legturilor
fosfodiesterice ale catenei de ADN.
Agenii alchilani se formeaz prin prepararea multor produse alimentare, n gazele de eapament prin combustia
intern a N2 atmosferic, formdu-se nitrai i nitrii. Prin arderea tutunului, a produselor petroliere i prin prepararea
alimentelor, din resturile de guanin se formeaz hidrocarburi policiclice aromatice, cu efect alchilant asupra ADN. Fiind
ageni alkilani, etilen-oxidul i formaldehida reacioneaz cu proteinele, acizii nucleici, fiind foarte reactivi fa de
gruprile sulfhidril (-SH) ale proteinelor. Etilen-oxidul are dezavantajul c este exploziv i mutagen. H 2O2 i acidul
peracetic n faz de vapori sunt ageni oxidani mai activi, la concentraiile inferioare, dect cele n form lichid. Ambele
au toxicitate sczut, aciune rapid la temperatur sczut, dar au penetran sczut.
Rezistena microorganismelor la aciunea antisepticelor i dezinfectantelor poate fi natural (intrinsec) sau
dobndit.
Rezistena intrinsec sau natural este proprie bacteriilor Gram negative, sporilor, micobacteriilor. Este o
proprietate controlat de gene cromosomale i permite depirea aciunii unui antiseptic sau dezinfectant. Moleculele de
antiseptic sau dezinfectant trebuie s strbat straturile externe pentru a atinge inta celular. Structura chimic a acestor
straturi depinde de grupul de microorganisme i poate constitui o barier eficient de permeabilitate, limitnd difuzia
agentului chimic. Mult mai rar este posibil ca enzimele sintetizate constitutiv s degradeze compusul antiseptic sau
dezinfectant.
Sporii de Bacillus spp. i Clostridium spp. sunt cei mai rezisteni la antiseptice i dezinfectante. Sporii de Bacillus
spp.(dei, n general, nu sunt patogene), sunt folosii ca indicatori ai sterilizrii eficiente. Sporii de Clostridium sunt
patogeni semnificativi: Cl. difficile este cauza comun a diareii de spital.
Multe biocide sunt bactericide sau bacteriostatice la concentraii mici, pentru formele vegetative, dar pentru
efectul sporicid sunt necesare concentraii mai mari (de exemplu, glutaraldehida i agenii care elibereaz clor). Alcoolii,
fenolii, srurile quaternare de amoniu i clorhexidina nu au efect sporicid, dect la temperaturi superioare.
Rezistena superioar a sporilor se datoreaz structurii complexe a nveliurilor sporale multiple. nveliurile
sporale cuprind o fracie major a sporului. Aceste structuri sunt de natur proteic, cu o fracie de polipeptide acide
solubile n baze, n nveliul intern i o fracie rezistent la baze, datorat legturilor S-S.
Sporularea ete procesul n care celula vegetativ se difereniaz n spor i implic 7 stadii. Celula vegetativ
(stadiul 0) sufer schimbri morfo-funcionale, care culmineaz cu eliberarea sporului matur (stadiul VII). Pentru
dezvoltarea rezistenei la biocide, stadiile IV (dezvoltarea cortexului) pn la VII, sunt cele mai importante pentru
dezvoltarea rezistenei la biocide.
Studiul mecanismelor rezistenei sporale se studiaz prin tehnica parcurgerii retrograde a treptelor sporulrii, care
const n ndeprtarea secvenial a nveliului sporal. {n acest scop se folosesc mutante de sporulare, care nu progreseaz
dincolo de stadiile determinate genetic ale sporului, ceea ce permite o sporulare cu un grad nalt de sincronizare. Se
adaug antisepticul sau dezinfectantul la nceputul sporulrii i se determin gradul de progresie a sporulrii.
Unele microorganisme au un grad intermediar de rezisten la antiseptice i dezinfectante, ntre cele sporulate i
nesporulate. La micobacterii, rezistena se datoreaz peretelui celular complex, care constituie o barier eficient fa de
ptrunderea agenilor chimici: peptidoglicanul este legat covalent cu un copolimer polizaharidic (arabinogalactan), alctuit
din arabinoz i galactoz, esterificate cu acizi micolici. Antisepticele i dezinfectantele care au activitate asupra
micobacteriilor sunt fenolul, acidul peracetic, H 2O2, alcoolul i glutaraldehida. Ali ageni bactericizi clorhexidina,
srurile amoniului quaternar, sunt bacteriostatice fa de Mycobacterium spp., chiar la concentraii mari. Biocidele
hidrofile nu penetreaz nveliul lipidic consistent hidrofob al celulelor de Mycobacterium, la concentraii suficient de
mari, pentru a fi letale. Activitatea lor poate s creasc sub efectul diferitelor variantelor de formulare.
Peretele Gram pozitiv al bacteriilor din g. Staphylococcus este format din peptidoglican i acizi teichoici. Nici
unul dintre componente nu are rolul de barier eficient fa de antiseptice i dezinfectani. Plasticitatea structurii mureinei
este bine cunoscut: grosimea i numrul de legturi transversale ale peptidoglicanului sunt influenate de condiiile de
mediu i de starea fiziologic a celulei, ceea ce modific gradul lor de sensibilitate la antiseptice i dezinfectante. De
exemplu, S. aureus poare s existe n varianta mucoid, celulele fiind nconjurate de un strat mucos. Tulpinile nemucoide
sunt mai sensibile dect cele mucoide, la aciunea agenilor chimici.
Bactriile Gram negative, n general, sunt mai rezistente dect bacteriile Gram pozitive nesporulate: concentraia
minim inhibitorie a dezinfectanilor i antisepticelor este mai mare la bacteriile Gram negative, deoarece membrana
extern acioneaz ca barier limitant a ptrunderii agenilor antibacterieni.
Rezistena intrinsec este consecina adaptrii fenotipice, foarte evident n cazul formrii biofilmelor. Biofilmele
rezult prin asocierea microorganismelor cu suprafeele solide. Biofilmul este un consoriu (o asociaie) de
microorganisme, organizate ntr-un exopolimer polizaharidic foarte bine exprimat.
Biofilmele pot s conste din culturile ctorva specii sau din fenotipuri diferite ale unei specii bacteriene.
Biofilmele sunt importante pentru biocoroziune, diminuarea calitii apei i constituie focare pentru contaminarea
diferitelor produse. Colonizarea se produce de asemenea, pe biomaterialele implantate i pe dispozitivele medicale,

rezultatul fiind creterea ratei de infecie i de recuren a infeciei.
Fenotipul organismelor sesile n biofilme difer semnificativ de al celulelor planctonice sau de cele crescute pe
medii artificiale, n laborator. {n diferite zone ale biofilmului, bacteriile au disponibiliti diferite ale nutrienilor, iar
proprietile fiziologice sunt modificate. {n profunzimea biofilmului, limitarea nutrienilor reduce rata de cretere a
bacteriilor, ceea ce modific sensibilitatea la aciunea agenilor antimicrobieni. Bacteriile cu o rat mic de cretere sunt
deosebit de rezistente.
Biofilmele sunt cele mai ilustrative exemple referitoare la modul n care adaptarea fiziologic (fenotipic) are rol
important n conferirea rezistenei intrinsece. Sensibilitatea redus a bacteriilor ntr-un biofilm se datoreaz mai multor
factori:
- accesului redus al dezinfectantului sau antibioticului la celulele din biofilm;
- interaciunii chimice ntre dezinfectani i biofilm;
- producerii enzimelor degradative i/neutralizante ale substanelor chimice;
- schimbului genetic dintre celule n biofilm.
Bacteriile din biofilm, recultivate n mediul lichid, nu sunt mai rezistente dect celulele planctonice ale speciei
respective.
Rezistena dobndit. Ca i n cazul antibioticelor i al altor ageni chimici, rezistena dobndit la antiseptice i
dezinfectante poate s se produc prin mutaie sau prin dobndirea unei plasmide sau a unui Tn (caset transmisibil de
ADN cromosomal sau plasmidial, cu proprieti de integrare).
Cu excepia Ag, a compuilor organomercurici, plasmidele induc nivele semnificative ale rezistenei la antiseptice
i dezinfectani. Compuii Hg nu se mai folosesc ca dezinfectani, dar srurile fenil-mercurice i tiomersalul se folosesc ca
ageni conservani pentru unele produse farmaceutice. Rezistena la Hg este plasmidial, inductibil i poate fi transferat
prin conjugare sau transducie. Izolatele clinice de S. aureus care sintetizeaz -lactamaz sunt rezistente la Hg2+
anorganic i la agenii organomercurici.
AGENI CHIMIOTERAPEUTICI DE SINTEZA

Utilizarea substanelor de sintez chimic sau produse de diferite organisme, n scop terapeutic, este veche.
Indienii din Peru mestecau scoara arborelui de chinin pentru tratamentul malariei. In secolul 15, n Europa se foloseau
compuii cu mercur pentru tratamentul sifilisului, iar chinezii utilizau cultura de fungi microscopici crescut pe seminele
de soia, pentru tratamentul furunculelor. Fenomenul de antibioz (inhibiia dezvoltrii unui microorganism de ctre altele)
a fost descris de Pasteur (l877). Conceptul chimioterapiei a fost formulat de P. Ehrlich (l904) n Germania. El a presupus
c este posibil gsirea unor substane chimice cu efecte toxice selective asupra paraziilor, dar nu pentru om. Ideia a fost
denumit pastila magic, pentru care a fost distins cu premiul Nobel. Ehrlich a descoperit para-rosanilina, cu efecte
antitripanosomiale i a sintetizat compusul arsenic arsfenamina (salvarsan) pentru tratamentul sifilisului.
Salvarsan
Gelmo (1908) a sintetizat sulfanilamida pentru tratamentul pacienilor infectai cu Treponema pallidum, agentul
sifilisului. Eisenberg(1913) a studiat proprietile bactericide ale azo-coloranilor cu grupri sulfonamidice. Gratia i Dath
(1924)au studiat microorganismele din sol i au descoperit actinomicetina, produs de actinomicete.
Fleming (l928), n cutarea unor compui cu potenial antibacterian, a observat inhibiia creterii coloniilor de
Staphylococcus aureus n vecintatea coloniilor fungice de Penicillium notatum. Apoi a artat c mediul lichid al culturii
de P. notatum, diluat de 800 de ori, a inhibat creterea culturii de Staphylococcus. A descoperit medicamentul miracol
pe care l-a denumit penicilina, dar n-a izolat-o, pentru care a fost distins cu premiul Nobel. Calitile ei de medicament
miraculos au fost evideniate de ctre Ernst Chain i Howard Florey (1939), care au izolat-o i au folosit-o n
tratamentul infeciilor bacteriene n timpul celui de al II-lea rzboi mondial. Producia industrial a nceput n l943. Noul
medicament a fost introdus n circuitul clinic general n 1944 i a avut un impact uria asupra strii de sntate a
populaiei umane.
In acelai timp, Gerhard Domagk (1935) (medic german) a remarcat activitatea antimicrobian in vitro a
compusului prontosil, primul dintr-o serie lung de substane sintetice denumite sulfonamide. Prontosil a fost introdus n
clinic n anii 30 pentru tratamentul infeciilor tractului urinar, pneumoniei i altor stri patologice. In vivo, prontosil este
convertit la sulfanilamid activ, analogul acidului paraaminobenzoic (APAB). In 1939, el a demonstrat valoarea
terapeutic a sulfonamidelor (gruparea S a compuilor) pentru tratamentul infeciilor cu Streptococcus i activitatea
antimicrobian cu spectru larg. Multe sulfonamide au eficien inferioar antibioticelor naturale, dar se folosesc pe scar
larg.
R. Dubos (1939) a izolat gramicidina i tirocidina din Bacillus brevis, active fa de bacteriile Gram pozitive. In
1945, farmacologii aveau la dispoziie, pentru uzul clinic, 5488 derivai ai sulfanilamidei (sulfonamidei).
S. Waksman (1944-45) a izolat streptomicina din Str. griseus, un microorganism izolat din sol, pentru care a
primit premiul Nobel. Streptomicina este activ fa de unele bacterii Gram pozitive i fa de Mycobacterium
tuberculosis. El a propus denumirea de antibiotic, cu sensul de compus chimic produs de un microorganism, care la
concentraie mic, inhib creterea sau omoar alte microorganisme.
Creterea unui organism depinde de integritatea aparatului su enzimatic de sintez. Mediul influeneaz
creterea celulelor, n primul rnd prin alterarea activitii enzimelor. Inhibiia activitii enzimelor este o modalitate
important de tratament al infeciilor bacteriene.
Caracteristicile unui agent antimicrobian sunt urmtoarele:
- solubilitatea n fluidele organismului i o farmacocinetic favorabil pentru a fi transportat la situsul infeciei,
unde trebuie s ating o concentraie nalt. Chiar agenii care se administreaz local trebuie s se dizolve n
fluidele esutului lezat, dar nu trebuie s se lege prea strns de proteinele serice. Farmacocinetica semnific
aciunea medicamentului n organism pentru o perioad de timp i include: absorbia, distribuia, localizarea
n esuturi, biotransformarea (modificarea biochimic), excreia;
- s ptrund n celula bacterian prin structurile de nveli;
- toxicitatea selectiv: agenii chimioterapeutici trebuie s fie mai toxici pentru microorganisme dect pentru
celulele gazdei. DL50 (doza letal 50)s fie nalt, iar concentraia minim inhibitorie(CMI) i/sau
concentraia bactericid minim (CBM)s fie ct mai sczut. DL 50 msoar toxicitatea/letalitatea fa de
gazd. CMI msoar concentraia antibioticului, necesar pentru a inhiba creterea patogenului int, iar CBM
msoar concentraia antibioticului necesar pentru a omor agentul patogen int. Idealul este s existe o
diferen mare ntre concentraia minim toxic pentru microorganisme i concentraia ce lezeaz celula
gazd;
- s aib un spectru de activitate adecvat (larg sau ngust), corelat cu diagnosticul. Un antibiotic cu spectru larg
este indicat ntr-o infecie polimicrobian (de exemplu, o infecie anaerob intraabdominal), iar un antibiotic
cu spectru ngust este recomandat pentru o infecie produs de un singur agent patogen (de exemplu, o infecie
stafilococic tegumentar);
- s-i pstreze toxicitatea standard i s nu devin mai toxic sau mai puin toxic dup interaciunea cu
substanele nutritive, cu alte medicamente sau n condiii patologice (diabet, insuficien renal etc.);
- s nu determine efecte secundare (de exemplu, s nu fie alergic pentru organismul gazd);
- s fie stabil dup administrare, adic s-i pstreze concentraia terapeutic constant n snge i n fluidele
organismului;
- s fie degradat i excretat lent;
- s nu induc fenomenul de rezisten a microorganismelor;
- s fie stabil n condiiile pstrrii (refrigerare, ntuneric);
- s fie ieftin.
Principiul fundamental al chimioterapiei antiinfecioase const n utilizarea unor substane cu toxicitate selectiv
care s stopeze creterea i multiplicarea agentului patogen infectios, dar s nu altereze funcionalitatea celulelor
organismului uman i animal. Agenii chimioterapeutici interacioneaz selectiv cu sistemele metabolice active ale
microorganismelor, dar nu cu acelea ale celulelor organismului gazd.
Aciunea selectiv nseamn capacitatea unui agent chimic de a inhiba dezvoltarea microorganismelor (i prin
extindere, a celulelor maligne), la concentraii ce pot fi tolerate de organismul gazd.
Agenii antimicrobieni interfer cu procese specifice, eseniale pentru creterea i diviziunea agenilor patogeni:
bacterii, fungi, protozoare. Ei pot fi grupai n inhibitori ai peretelui celular bacterian i fungic, inhibitori ai funciei
membranei citoplasmatice, inhibitori ai sintezei acizilor nucleici i inhibitori ai funciei ribosomale.
Agenii antimicrobieni pot fi bactericizi (omoar inta bacterian sau fungic) sau bacteriostatici, adic inhib
creterea celulei int. Agenii bactericizi sunt mai eficieni, iar cei bacteriostatici pot fi benefici, deoarece modific
intensitatea metabolismului celular i permit mecanismelor de aprare ale gazdei, s distrug agentul patogen.
Clasificarea mecanismelor de aciune ale agenilor antimicrobieni
I. Inhibitori ai sintezei peretelui celular bacterian

Medicamente inhibitorii ale enzimelor de biosintez
Fosfomicina
Cicloserina
Medicamente ce se combin cu moleculele purttor
Bacitracina
Medicamente ce se combin cu precursorii peretelui celular
Vancomicina
Medicamente ce inhib polimerizarea i legarea peptidoglicanului nou la peretele celular
Penicilina
Cefalosporina
Carbapenem
Monobactam
Inhibitori ai funciei membranei citoplasmatice
Medicamente care dezorganizeaz membrana citoplasmatic
Tirocidina
Polimixina
Medicamente ce produc pori n membran
Gramicidina
Medicamente ce altereaz structura fungilor
Poliene (amfotericina)
Imidazolii (ketoconazol, fluconazol)
II. Inhibitorii sintezei acizilor nucleici
Inhibitori ai metabolismului nucleotidelor
Adenozin-arabinozida (antiviral)
Acyclovir (antiviral)
Flucytosina (antifungic)
Inhibitori ai funciei de matri a ADN
Ageni de intercalare
Cloroquina
Inhibitori ai replicrii ADN
Quinolone
Nitroimidazoli
Inhibitori ai ARN-polimerazei
Rifampin
III. Inhibitori ai funciei ribosomale

Inhibitori ai subunitii 30S
Streptomicina
Kanamicina, gentamicina, amikacina
Spectinomicina
Tetraciclina
Inhibitori ai subunitii 50S
Cloramfenicol
Clindamicina
Eritromicina
Acidul fusidic
IV. Inhibitori ai metabolismului acidului folic
Inhibitori ai acidului pteroic
Sulfonamidele
Inhibitori ai dihidrofolat-reductazei
Trimetoprim
Ageni chimioterapeutici activi prin inhibiie competitiv
Sulfonamidele sunt ageni chimioterapeutici foarte importani din punct de vedere practic. Nu sunt antibiotice,
deoarece termenul de antibiotic este rezervat substanelor sintetizate de organisme, de cele mai multe ori, bacterii sau
fungi, care n concentraii foarte mici inhib sau omoar microorganismele. Descoperirea lor are caracter empiric i
pragmatic (tabel nr. 3). Domagk (cercettor i medic german) a descoperit c prontosilul (un colorant rou), dei in vitro
nu are efecte inhibitorii, in vivo este foarte eficient fa de S. aureus. Explicaia este urmtoarea: n organism, molecula de
colorant a fost scindat enzimatic i s-a eliberat o molecul mic sulfanilamida foarte activ fa de S. aureus, dar
inactiv n forma legat de colorant.
Sulfonamidele reprezint primul grup de substane microbiostatice introduse cu succes n clinic, avnd ca
prototip sulfanilamida (para-amino-benzen-sulfonamida).
Mecanismul aciunii sulfonamidelor a fost clarificat cnd Woods a demonstrat c acidul para-aminobenzoic
(APAB) are o aciune antagonist fa de aceste substane, n sensul c anihileaz efectul lor antimicrobian: dublarea
concentraiei de inhibitor adugat n mediu necesit dublarea concentraiei de APAB, pentru a relua creterea.
Toxicitatea selectiv a sulfonamidelor deriv din faptul c organismul uman preia acidul folic din surse externe,
dar multe bacterii i sintetizeaz propriul acid folic.
Acidul para-aminobenzoic (APAB).
Tabel nr.3: Ageni chimioterapeutici care acioneaz prin inhibiie competitiv (adaptare dup Topley i Wilsons, 1998).
Clasa de ageni
inta specific
Structura chimic
chimioterapeutici
Sulfonamide
Inhibarea dihidropteroid
sintetazei (DHPS)
H2N
SO2NH2
sulf onamide
Diaminopirimidina
(Trimetoprim)
Inhibarea dihidrofolat
reductazei
NH2
OCH3
N
H2N
CH2
OCH3
N
OCH3
trimetoprim
Nitroimidazoli
Interfer cu biosinteza timinei

(produc ruperi ale moleculei
de ADN)
O2N
CH3
CH2 CH2OH
metronidazol
Nitrofurani
(Nitrofurantoil)
Interfer cu biosinteza timinei

(produc ruperi ale moleculei
de ADN).
O
C
O2N
CH
NH
H2C
O
O
nitrofurantoil
Aciunea antagonist a APAB nu este direct, ci se exercit prin intermediul metabolismului bacterian. APAB este
un nutrient esenial, fiind precursorul acidului folic, un factor de cretere pentru bacterii. Acidul folic i formele sale
reduse acidul dihidrofolic i tetrahidrofolic transfer fragmente cu 1C derivate din serin, pentru sinteza metioninei,
purinelor, timinei, tiaminei, pantotenatului.
Datorit marii asemnri a structurii chimice a celor dou substane(APAB i sulfanilamida), ntre ele are loc un
fenomen de competiie pentru intrarea n calea sintezei acidului folic (Fig. 5).
Acidul folic
Enzima bacterian implicat n conversia APAB la acid foli c (pteridin-sintetaza), adeseori greete i se
combin cu sulfanilamida, n loc de APAB. Astfel, sinteza acidului folic i toat calea metabolic dependent de acidul
folic este blocat. Sulfanilamida intr n competiie cu APAB pentru situsul activ al enzimei (fig. 76).
Acest tip de inhibiie este reversibil: dac sulfanilamida este ndeprtat, enzima funcioneaz normal. Cu ct
raportul moleculelor de sulfanilamid/APAB este mai mare, cu att inhibiia metabolismului bacterian este mai ampl.
Fig. 76. Ilustrarea schematic a competiiei dintre molecula de sulfonamid i acidul para-aminobenzoic (APAB) pentru substrat,
datorit omologiei structurale.
Sulfonamidele au afinitate mai mare dect APAB pentru pteridin-sintetaz. Trimetoprimul (un analog al acidului
dihidrofolic) are afinitate foarte mare (de 10000-100000 de ori) pentru dihidrofolat-reductaza (DHFR) bacterian dect
pentru cea mamalian, enzima care catalizeaz conversia dihidrofolatului la acidul tetrahidrofolic (Fig. 77). Astfel sunt
blocate cile metabolice dependente de acidul folic. Acidul folic acioneaz ca purttor al gruprilor C1 i este necesar
pentru sinteza ADN, ARN, etc. Spre deosebire de mamifere, bacteriile i protozoarele parazite nu au sistem de transport
care s preia acidul folic preformat din mediul extern. Majoritatea acestor organisme trebuie s sintetizeze acidul folic,
dei unele pot s foloseasc timidina exogen, acoperind necesarul metabolic de acid folic.
Fig. 77. Ilustrarea mecanismului aciunii agenilor terapeutici prin inhibiie competitiv: sulfonamidele blocheaz competitiv conversia
pteridinei i APAB n acidul dihidrofolic, pe calea sintezei acidului folic.
Deoarece, n privina trsturilor sale eseniale, metabolismul este acelai la toate bacteriile, rezult c toate
speciile utilizeaz acidul folic, chiar dac nu toate l pot sintetiza.
Sulfamidele sunt toxice pentru bacteriile capabile s sintetizeze acidul folic, pornind de la molecule mai simple.
Bacteriile care nu sintetizeaz acidul folic, ci necesit aportul exogen al moleculelelor preformate, nu sunt sensibile la
sulfonamide.
Efectul sulfonamidelor este antagonizat necompetitiv de un amestec de intermediari ai cii acidului folic, adic
efectul lor antagonic nu poate fi depit prin creterea concentraiei de sulfonamid.
Sulfanilamida inhib sinteza acidului folic prin inhibiie competitiv cu sintetaza acidului dihidropteroic.
Enzima catalizeaz condensarea dihidropteridinei cu acidul para-aminobenzoic, n stadiul timpuriu al sintezei
acidului folic. Deoarece acidul folic i pstreaz activitatea n celulele bacteriene, efectul inhibitor al sulfonamidelor
devine evident dup cteva generaii de celule, cnd cantitatea de acid folic s-a diminuat sub un nivel critic, prin
distribuie n celulele fiice. Toxicitatea selectiv deriv din faptul c bacteriile sensibile sintetizeaz acidul folic de novo,
iar omul absoarbe cofactorul preformat.
Cele mai cunoscute sulfonamide sunt sulfadiazina i sulfametoxazol (cotrimoxazol), bine absorbite dup
administrare oral i excretate n urin.
Sulfametoxazol (Cotrimoxazol)
Aciunea derivailor sulfanilamidei este bacteriostatic fa de bacteriile Gram pozitive i Gram negative. Se
folosesc n tratamentul infeciilor vezicii urinare, cauzate n marea lor majoritate de E. coli. Circa 5% dintre pacieni
sufer efecte secundare, mai ales reacii alergice, cu febr i eritem tegumentar.
Ca i sulfamidele, acidul para-aminosalicilic (APAS) i dapsone, obinui prin sintez chimic sunt inhibitori
competitivi ai metabolismului APAB i inhib sinteza acidului folic.
Dapsone
APAS (Acid para-aminosalicilic)
Rezistena bacterian la sulfonamide este mediat de plasmide, dar i de gene cromosomale, prin hiperproducia
de acid p-aminobenzoic.
Familia derivailor diaminopirimidinici cuprinde trimetoprimul i tetroxoprimul.
Trimetoprim este un analog al acidului dihidrofolic, component esenial al sintezei aminoacizilor i nucleotidelor.
Agentul chimic blocheaz metabolismul dependent de acidul folic, dar la alt nivel dect sulfonamidele, a cror eficien o
ridic foarte mult. Agentul inhib competitiv dihidrofolat-reductaza, enzima care convertete dihidrofolatul la cofactorul
activ acidul tetrahidrofolic. Trimetoprim blocheaz regenerarea acidului tetrahidrofolic, precursorul acidului folinic i
ulterior al purinelor i al sintezei ADN, fiind un inhibitor al creterii bacteriilor mai eficient dect sulfonamida.
Acidul tetrahidrofolic
Blocajul secvenial al aceleiai ci de biosintez, sub aciunea sulfonamidelor i trimetoprim, determin un grad
nalt de activitate sinergic fa de un spectru larg de microorganisme.
Omul nu sintetizeaz acidul folic, dar necesit aportul exogen i sinteza purinelor n celula uman nu este
influenat semnificativ de trimetoprim. Are aciune selectiv deoarece este de 50 000 100 000 de ori mai activ fa de
dihidrofolat-reductaza bacterian, comparativ cu cea uman.
Trimetoprim are spectru larg de aciune: coci Gram pozitivi i majoritatea bacililor Gram negativi, cu excepia Ps.
aeruginosa i Bacteroides.
Rezistena la trimetoprim poate fi mediat de gene cromosomale ori plasmidiale, mobile prin intermediul Tn7,
este consecina dobndirii unei gene a dihidrofolat-reductazei (DHFR), mult mai puin sensibil la trimetoprim.
Rezistena poate fi datorat altor mecanisme: supraproducia DHFR, mutaii ale genei structurale a DHFR sau
dobndirea unei gene care codific o enzim rezistent la DHFR. Genele ce codific enzimele modificate se gsesc
frecvent pe plasmide autotransferabile. Enzimele modificate sunt produse n celule care produc concomitent i o
dihidrofolat reductaz de tip slbatic, dar cantitatea enzimei alterate depete blocajul sintezei acidului folic mediat de
efectul trimetoprimului asupra enzimei de tip slbatic. Rezistena la sulfonamide se produce printr-un mecanism
asemntor.
Datorit rezistenei la sulfonamide, trimetoprim a fost introdus ca un poteniator al sulfonamidelor, n asociaie cu
care s-a administrat mult timp, considerndu-se c are proprieti antibacteriene slabe. Acum se administreaz pe scar
larg, ca agent terapeutic unic.
Quinolonele
Quinolonele (denumite i 4-quinolone) sunt primele substane antimicrobiene obinute pe cale sintetic i
formeaz o familie de compui care se aseamn prin existena nucleului quinolinic. Primul compus din acest grup, folosit
n terapie este acidul nalidixic (Fig. 78).
Quinolonele, alturi de lactamice i macrolide, reprezint una dintre cele trei familii principale de ageni
antimicrobieni folosii n terapeutica uman. Importana lor terapeutic este n continu cretere ncepnd din 1968, data
comercializrii primei quinolone reprezentat de acidul nalidixic.
Acidul nalidixic este un produs intermediar de sintez a quinolonelor. Ulterior quinolonele s-au diversificat prin
introducerea unui atom de fluor (F) n poziia 6 i a unui heterociclu n poziia 7 (piperazine, pirolidina, etc.) care au
generat fluoroquinolonele. Aceste molecule posed un spectru antibacterian foarte larg i pot fi divizate n molecule
metabolizabile i nemetabolizabile (grupele III i IV).
Quinolonele se pot clasifica n dou grupe :
- cele de prim generaie, ca acidul nalidixic, active asupra bacililor Gram-negativi;
- fluoroquinolonele.
Acid nalidixic
Norfloxacin
Ciprofloxacin
Ofloxacin
Amifloxacin
Temafloxacin
Pefloxacin
Flerofloxacin
Tosufloxacin
Enoxacin
Lomefloxacin
PD 127, 391
Ageni antimicrobieni fluoroquinolonici.
Gama derivailor quinolonei s-a diversificat prin modificarea nucleului de baz, 4-quinolona. La atomul C6 s-a
adugat unul de fluor, ceea ce a crescut semnificativ spectrul i potenialul lor antimicrobian.
Avand n vedere spectrul lor de activitate antibacterian, limitat la bacterii Gram negative i n principal la
enterobacterii, acidul nalidixic i derivaii si au fost folosii pentru tratamentul infeciilor urinare. Modificrile structurii
au dat natere la quinolone, denumite noile quinolone sau fluoroquinolone (norfloxacin, pefloxacin, ofloxacin,
ciprofloxacin etc.), al cror spectru de activitate antibacterian se extinde la alte specii Gram negative (de ex.
Pseudomonas aeruginosa), dar i la anumite specii Gram pozitive (S. aureus, micobacterii).
Totui, activitatea noilor quinolone fa de alte specii, aa cum sunt cele natural-sensibile la acidul nalidixic, rmne
modest, ceea ce corespunde unui anumit grad de rezisten intrinsec a acestor specii.
Mecanismul de aciune a quinolonelor este foarte complex. Aceste molecule ptrund n celula bacterian prin
difuzie pasiv i acioneaz asupra intelor specifice reprezentate de topoizomeraze*: ADNgiraza (topoizomeaza II) i
topoizomeraza IV. Aciunea celor dou enzime este inhibat. Ambele sunt proteine heterotetramerice, alctuite din 2
subuniti A i 2 subuniti B. Quinolonele se leag i stabilizeaz complexele giraz-ADN (quinolona singur nu se
asociaz cu ADN), dup clivarea lanului, mpiedicnd aciunea catalitic a ADN-polimerazei la nivelul bifurcaiei de
replicare. Complexul genereaz o rupere a moleculei de ADN, pe care celula nu o repar eficient.
*
Formarea suprahelicei moleculei de ADN al cromosomului bacterian i relaxarea ei este condiionat de activitatea unui set
de enzime, denumite ADN-topoizomeraze. Topoizomerazele sunt enzime care modific conformaia spaial a ADN prin ruperea i
reunirea catenelor. Bacteriile posed patru clase de topoizomeraze (I - IV). O topoizomeraz este o nucleaz reversibil, care se leag
covalent la o grupare fosfat a ADN i rupe legtura fosfodiesteric. Deoarece legtura covalent care unete topoizomeraza la o
grupare fosfat a ADN reine energia legturii fosfodiesterice pe care o rupe, reacia este reversibil, adic incizia este urmat de
legarea celor dou capete. Legarea este rapid i nu necesit o surs suplimentar de energie.
Topoizomerazele de tip 1 acioneaz prin recunoaterea unui segment de ADN, parial despiralizat, prin incizia
unei catene, ceea ce permite celor dou pri ale helicei de ADN, de o parte i de alta a inciziei, s se roteasc liber una
fa de alta, n sensul care reduce tensiunea de supraspiralizare. Aceasta nseamn c replicarea ADN se face numai cu
rotaia unei mici pri a helicei, adic a celei situat n aval de bifurcaie. Problema transcrierii se rezolv n acelai mod.
Topoizomerazele de tip II se leag covalent, simultan, de cele dou catene ale dublei helice i produc o rupere
bicatenar tranzitorie. Aceste enzime se activeaz la situsurile cromosomale la nivelul crora se ntreptrund dou duble
helice.
Dup fixarea topoizomerazei la un astfel de situs, etapele aciunii sale sunt urmtoarele:
- clivarea uneia dintre cele dou helice duble;
- enzima determin trecerea celei de a II-a catene, prin deschiderea creat;
- repar discontinuitatea nainte de a se disocia de ADN.
ADN-polimeraza de tip II poate astfel s separe cele dou molecule de ADN catenate.
Unele topoizomeraze sunt helicaze sau giraze(produc spiralizarea moleculei de ADN), iar altele sunt derulaze
(produc despiralizarea prin incizia unei catene i bucla se relaxeaz).
Fluoroquinolonele formeaz complexe stabile cu topoizomeraza II, efectul fiind moartea celulei. S-a sugerat c
quinolonele nu se leag cu ADN-giraza nsi, ci probabil chiar la situsuri specifice pe ADN, create de ADN-giraz
Studiile comparative ale sensibilitii la fluoroquinolone i de dezvoltare a rezistenei, au relevat c ADN-giraza
este inta primar a fluoroquinolonelor la bacteriile Gram negative, iar topoizomeraza IV este inta primar la bacteriile
Gram pozitive. Excepia o constituie S. pneumoniae, la care fie giraza, fie topoizomeraza pot fi inte primare, n funcie de
fluoroquinolona folosit.
Activitatea antibacterian este dependent ntr-o msur semnificativ de atomul de fluor din poziia 6 i de
nucleul piperazinic din poziia 7. Configuraia spaial a quinolonei determin nivelul activitii. Astfel, enantiomerii
stereochimici (care difer unul de altul numai prin poziia n spaiu a unei grupri particulare), ce implic grupul metil
ataat la inelul al III-lea de ofloxacin, au activiti antibacteriene foarte diferite, care difer n proporie de 1/10.
Celulele eucariote conin topoizomeraze care au omologie limitat a aminoacizilor cu ADN-giraza i cu
topoizomeraza IV.
Cele 2 enzime au localizare citoplasmatic i quinolonele trebuie s traverseze structurile de suprafa ale celulei
bacteriene.
Quinolonele sunt ageni bactericizi. Ele stopeaz rapid sinteza replicativ a ADN i ntrerup progresia bifurcaiei
de replicare. Inhibiia activitii ADN-girazei sub aciunea fluroquinolonelor induce moartea rapid a celulei bacteriene.
Inhibiia rapid a sintezei ADN nu explic moartea celulei bacteriene. Pentru efectul letal sunt necesare alte evenimente
suplimentare: inhibiia sintezei ARN i a proteinelor. La concentraiile de quinolone care depesc un anumit prag,
activitatea bactericid diminu, probabil pentru c este inhibat numai sinteza ARN i a proteinelor.
Tratamentul cu quinolone, probabil induce efecte pleiotrope, ce pot fi consecine secundare ale inhibiiei sintezei
ADN-girazei: leziuni ale ADN bacterian, deoarece quinolonele sunt inductoare ale sistemului reparator SOS, dependent
de Rec A.
ADN giraza sau topoizomeraza II este o protein heterotetrameric format din dou subuniti A(gyr A) i dou
subuniti B(gyr B). (La E. coli proteinele gyr au 97 kDa).
Situsul catalitic a ADN girazei este situat la tirozina din poziia 122 a subunitii A.
Subunitatea B cuprinde situsul de hidroliz a ATP, hidroliz care furnizeaz energia necesar activitii
enzimatice.
Subunitile A i B ale topoizomerazei II sunt codificate de genele gyrA i gyrB.
Dup purificarea ADN-girazei de E. coli, structura acestei enzime a fost investigat pentru numeroase alte specii
bacteriene, evideniindu-se un grad nalt de omologie ntre subunitile A pe de o parte i a subunitilor B pe de alt parte.
Cu toate acestea, secvena situsurilor catalitice din proteinele gyr A i aceea a situsului de hidroliz a ATP n proteinele
gyr B sunt foarte conservate. Genele gyr A i gyr B sunt gene structurale ale subunitilor A i B ale ADN-girazei.
Subunitatea A a fost desemnat ca inta preferenial a aciunii quinolonelor. Subunitatea B este inta altor
antibiotice: cumermicina i novobiocina.
ADN-giraza purificat introduce rsuciri suprahelicale negative ale moleculei de ADN circular nchis i separ
reversibil moleculele circulare catenate. Aceste activiti sunt dependente de energia eliberat prin hidroliza ATP i
constau n clivarea ambelor catene ale moleculei de ADN, trecerea altui duplex de ADN (sau alt segment al aceluiai
duplex) i reunirea catenelor. Activitatea ADN-girazei este inhibat de quinolone.
ADN-giraza este o topoizomeraz, singura enzim care supraspiralizeaz molecula de ADN, adic modific
configuraia spaial a moleculei, prin catalizarea suprarsucirilor negative ale ADN cromosomal i plasmidial, uurnd
mpachetarea cromosomului bacterian n spaiul restrns al celulei. ADN-giraza este singura enzim care influeneaz
gradul de spiralizare al ADN, fiind esenial pentru meninerea strii suprahelicale a cromosomului bacterian. Inhibiia
activitii acestei enzime de ctre fluoroquinolone este asociat cu moartea rapid a celulei bacteriene. Proteina se leag
de ADN ca un tetramer, n care cele 2 subuniti A i 2 subuniti B mpacheteaz ADN prin supraspiralizare negativ.
ADN-giraza utilizeaz energia rezultat prin hidroliza ATP i este esenial pentru mai multe procese vitale:
iniierea i progresia bifurcaiei de replicare, terminarea replicrii ADN, transcrierea unor operoni, repararea ADN,
recombinarea i transpoziia.
Aceste activiti sunt rezultatul secionrii coordonate a ambelor catene ale ADN, trecerea celuilalt segment de
ADN prin ni i restabilirea continuitii catenei. Mecanismul de aciune este caracteristic topoizomerazei II.
ADN giraza elimin rsucirile suprahelicale pozitive care se acumuleaz naintea bifurcaiei de replicare.
Topoizomeraza IV a fost descris recent, iar funcia sa principal este decatenarea, adic separarea copiilor ADN
circular dublu catenar dup replicarea cromosomului bacterian i a plasmidelor. Topoizomeaza IV este omolog structural
cu ADN giraza. Este o enzim de separare a catenanilor (a moleculelor surori catenate de ADN), rezultai dintr-un rund de
replicare bidirecional i permite segregarea lor n celulele surori.
ADN-giraza i topoizomeraza IV acioneaz asupra dublei catene, dar efectele sunt diferite: giraza mpacheteaz
ADN prin inducerea supraspiralizrii, iar topoizomeraza IV separ moleculele reunite prin legturi intermoleculare.
Topoizomeraza IV este format la fel ca ADN-giraza din dou subuniti denumite Par C i dou subuniti Par
E, cu aceeai repartiie funcional ca i a subunitilor ADN-girazei. Proteinele Par C i Par E sunt foarte asemntoare
prin structura lor primar cu proteinele Gyr A i Gyr B (40% din secvena aminoacizilor este identic) i sunt codificate de
genele parC i parE.
Topoizomeraza IV modific ntr-o msur mult mai mic topologia ADN dublu catenar: rolul su este important
pentru separarea catenelor de ADN dup terminarea replicrii.
Rolul topoizomerazei IV, ca int specific a quinolonelor a fost recent demonstrat la E. coli (Koto, 1990), S.
aureus (Ferrero, 1994) i N. gonorrhaeae (Belland, 1994).
Noile quinolone au reprezentat un real progres terapeutic avnd n vedere caracteristicile lor antibacteriene
(spectru larg, activitate bactericid i farmacocinetic). Aceasta explic spectaculoasa cretere a utilizrii lor n ultimii 10
ani. Dar utilizarea extensiv a noilor quinolone s-a tradus prin emergena ngrijortoare a tulpinilor rezistente a unor specii
bacteriene de mare importan medical (enterobacteriile, P. aeruginosa, S. aureus, M. tuberculosis, Neisseria
gonorrhoeae) i a tulpinilor multirezistente la alte antibiotice.
Mecanismele rezistenei bacteriene la fluoroquinolone sunt de trei categorii:
- modificri ale enzimelor int ale medicamentelor
- alterri care limiteaz accesul medicamentelor la int
- activitatea pompelor de efux.
Rezistena la quinolone este, predominant, consecina modificrilor enzimei int, la situsurile active ale enzimei.
La bacteriile Gram negative, ADN-giraza pare a fi inta primar pentru toate quinolonele. La bacteriile Gram pozitive,
quinolonele, n funcie de compusul chimic, acioneaz asupra topoizomerazei IV sau ADN-girazei. Structura quinolonei
determin specificitatea intei de aciune asupra bacteriilor.
Rezistena speciilor Gram pozitive la quinolone se datoreaz n special mutaiilor ntr-o regiune specific
(quinolone resistance determining region - QRDR) a subunitii A a ADN-girazei. QRDR este regiunea N-terminal a
proteinei, omolog cu regiunile GyrA i ParC de la E. coli. Regiunea cuprins ntre codonii 67 - 106 ai GyrA la E. coli,
este determinant pentru rezistena la quinolone. Mutaiile genei gyrA induc schimbri ale situsului de legare/sau ale
sarcinii, care condiioneaz interaciunea ADN-girazei cu quinolona. Quinolonele interacioneaz n primul rnd cu
subunitatea A, dar s-au identificat mutaii ale subunitii B care confer rezisten la quinolone.
ADN giraza i topoizomeraza IV sunt localizate n citoplasma bacterian. Pentru a-i atinge inta, antibioticele
fluoroquinolonice trebuie s traverseze nveliul celular. Modificrile structurale ale membranei externe a bacteriilor
Gram negative asociate cu diminuarea nglobrii sunt factori importani ai rezistenei la fluoroquinolone.
Variantele Gram negative rezistente la quinolone care se selecteaz, se datoreaz modificrii porinelor din
membrana extern, asociat cu scderea permeabilitii. Rezistena la quinolone nu este transferabil prin intermediul
plasmidelor. La bacteriile Gram pozitive, scderea ratei nglobrii nu s-a demonstrat a fi un mecanism al rezistenei.
Atat bacteriile Gram pozitive, cat i cele Gram negative pot dobandi un nivel sczut al rezistenei, mediat de
activitatea pompelor de eflux, cu rol de transportori multipli, a cror activitate este dependent de gradientul electrochimic
(fora proton motrice).
Nu s-au identificat enzime cu efect inactivator fa de quinolone, aa cum -lactamaza inactiveaz penicilina sau
cefalosporinele.
Ciprofloxacinul are un potenial antibacterian mult mai ridicat dect acidul nalidixic.
*
Ciprofloxacinul se folosete n special pentru tratamentul infeciilor respiratorii, ale tractului urinar, gonoreii, pentru
tratamentul infeciilor diareice cu tulpinile enterotoxice de E. coli, Campylobacter jejuni, Shigella. Este activ, in vitro, fa de M.
tuberculosis. Este parial metabolizat de ficat i excretat de rinichi. Medicamentele antiacide (Maloox) blocheaz absorbia
ciprofloxacinului i nu vor fi administrate concomitent. Administrat mpreun cu teofilina, poate duce la acumularea unor nivele
sanguine nalte ale teofilinei. Teofilina se folosete ca bronhodilatator n tratamentul astmului. Nivelul crescut al teofilinei poate
produce atacul cerebral i tulburri de ritm cardiac.
Ionii de Ca2+, Cu2+, Fe2+, Mn2+, Mg2+, Zn2+ pot s lege ciprofloxacina i diminu mult absorbia medicamentului.
Multe antibiotice, inclusiv ciprofloxacinul, pot altera microbiota normal a colonului, favorizand dezvoltarea
bacteriilor care produc inflamaia mucoasei (colita pseudomembranoas) i determin tulburri diareice. Colita
pseudomembranoas se datoreaz creterii n exces a bacteriei Cl. difficile i poate induce stri febrile, durere abdominal,
tulburri ale tranzitului intestinal i chiar starea de oc. Tratamentul cu ciprofloxacin poate s duc la creterea n exces a
levurii C. albicans, cu localizare vaginal (vaginit) sau intestinal (disbioza).
Manifestarea efectelor secundare este prevenit prin administrarea probioticelor: Lactobacillus casei,
L.
acidophilus, Bifidobacterium longum, Saccharomyces cerevisiae.
Derivaii quinolonici se folosesc pentru tratamentul infeciilor cilor urinare, unde, dup administrare oral, se
acumuleaz n concentraii inhibitorii. Fluoroquinolonele ptrund n esutul prostatic la concentraii care echivaleaz sau
depesc de cteva ori pe cele din plasm.
Cele mai sensibile la aciunea quinolonelor sunt enterobacteriile, dar compuii grupului sunt activi fa de
chlamidii i micobacterii. Efectul bactericid al ciprofloxacinului este rapid, cu o pierdere de 90% a viabilitii, ntr-un
interval de l9 minute.
Quinolonele au efect antimicrobian prelungit dup administrare, ceea ce se reflect n continuarea supresiei
creterii bacteriene, dup eliminarea agentului antimicrobian din organism. Dac un medicament are un efect persistent
dup administrare, nseamn c poate fi eficient chiar n intervalele dintre doze, cnd nivelul seric i tisular au sczut sub
nivelul concentraiei minime inhibitorii.
Quinolonele i pstreaz activitatea fa de multe bacterii rezistente la antibiotice, inclusiv fa de bacilii Gram
negativi cu rezisten multipl, fa de S. aureus rezistent la meticilin, fa de N. gonorrhoeae rezistent la penicilin, fa
de H. influenzae productor de -lactamaze.
Ciprofloxacina, ofloxacina i tosufloxacina sunt active fa de Chlamydia trachomatis i Mycoplasma hominis.
Quinolonele sunt de asemenea active fa de Rickettsia spp.
Acidul nalidixic inhib numai speciile de bacterii Gram negative aerobe. In molecula de ciprofloxacin, fluorul
confer activitate fa de bacteriile Gram pozitive. Grupul piperazinic crete activitatea fa de enterobacterii, iar gruparea
piperazin i ciclopropil confer activitate fa de speciile de Pseudomonas.
Ali ageni chimioterapeutici
Hidrazida acidului nicotinic (izoniazida, INH), introdus n clinic nainte de 1950, mpreun cu rifampina,
formeaz baza chimioterapiei antituberculoase. Izoniazida este un derivat al nicotinamidei. Mecanismul de aciune al
izoniazidei nu este cunoscut, dar influeneaz sinteza lipidelor, acizilor nucleici i acidului micolic la M. tuberculosis.
Izoniazida
Piridoxina (vitamina B 6)
Se presupune c izoniazida este activ prin competiie cu piridoxina (vitamina B6) necesar creterii celulelor de
M. tuberculosis, sau inhib sinteza acizilor micolici (acizi grai specifici acestor bacterii). Este bactericid fa de celulele
care cresc i se divid i are aciune bacteriostatic fa de celulele care nu se multiplic. Toate cele trei (PASA, dapsone i
izoniazida) se folosesc pentru tratamentul infeciilor cu Mycobacterium.
Etambutolul, pirazinamida i etionamida blocheaz reaciile enzimatice n celula bacterian, deoarece sunt
similare dar nu identice cu vitaminele bacteriene.
Etambutolul inhib arabinozil-transferaza, enzim implicat n biosinteza arabinogalactanului i
lipoarabinomananului. Alte efecte atribuite aciunii etambutolului sunt inhibiia metabolismului ARN i sintezei
fosfolipidelor, inhibiia transferului acizilor micolici la arabinogalactanul legat de peretele celular mureinic, sinteza
spermidinei i inhibiia unei trepte timpurii a conversiei glucozei n monozaharidele utilizate pentru sinteza
polizaharidelor parietale (arabinogalactan, arabinomanan) i a peptidoglicanului. Este un medicament foarte specific i
eficient, utilizat n asociaie cu izoniazida, pentru tratamentul tuberculozei. Are efect bacteriostatic. Nu se cunoate
mecanismul care determin rezistena la etambutol (J. A. Musser, 1995).
Etambutolul
Pirazinamida este un derivat sintetic al nicotinamidei. Nu se cunoate mecanismul de aciune, nici baza
molecular a rezistenei. Unele tulpini sensibile la pirazinamid au o enzim specific (pirazinamidaza), ce metabolizeaz
pirazinamida la acidul pirazinoic, intermediarul activ antibacterian. Tulpinile rezistente la pirazinamid au pierdut
activitatea pirazinamidazic. S-au identificat i tulpini foarte rezistente la pirazinamid, care au i activitate
pirazinamidazic. Aceasta sugereaz c, n plus fa de pierderea capacitii de sintez a pirazinamidazei, exist i alte
mecanisme de rezisten.
Pirazinamida
Etionamida, derivat a acidului izonicotinic, este activ fa de M. tuberculosis i alte micobacterii. In vitro,
celulele tratate cu etionamida, celulele de M. tuberculosis i pierd acidorezistena. Se crede c mecanismul su de aciune
implic inhibiia sintezei acizilor micolici.
Etionamida
Nu se cunosc mecanismele rezistenei la etionamid i la izoniazid.
Metronidazolul a fost introdus n clinic n 1959 pentru tratamentul infeciei cu Trichomonas vaginalis. Ulterior sa demonstrat eficiena sa fa de infeciile cu bacterii anaerobe i fa de alte infecii parazitare. Difuzeaz bine n esuturi,
inclusiv n sistemul nervos. Are cea mai bun activitate bactericid, dintre toate medicamentele active fa de bacteriile
anaerobe.
Aciunea sa const n activarea reductiv a grupriii nitro. Metronidazolul acioneaz ca acceptor preferenial de
electroni(e-), fiind redus de proteinele transportoare de e - cu potenial redox sczut. Reducerea scade concentraia sa, ceea
ce menine un gradient ce favorizeaz ncorporarea medicamentului n celul i generarea produselor intermediare ale
reducerii, cu efecte toxice pentru celul.
Toxicitatea se datoreaz compuilor intermediari sau radicalilor liberi ce interacioneaz cu ADN i probabil cu
alte molecule, producnd leziuni. Intermediarii citotoxici se descompun n produse finale netoxice i inactive: acetamida
i acidul 2-hidroxietil oxamic. Efectul asupra microbiotei intestinale este minim, deoarece medicamentul este redus n
condiii anaerobe.
Methenamina este produsul ciclic de condensare a formaldehidei i amoniului. Are activitate antibacterian slab,
dar la pH acid, fiecare molecul hidrolizat genereaz 4 molecule de amoniu i 6 molecule de formaldehid:
Este excretat n urina acid, unde este hidrolizat i formaldehida eliberat este bactericid. Este disponibil ca
sare a acidului mandelic sau hipuric pentru acidifierea urinii. Nu s-a descris rezistena la formaldehid, dar tulpinile de
Proteus, care produc frecvente infecii urinare sunt rezistente, deoarece ureaza lor cliveaz ureea la CO 2 i NH3 i
alcalinizeaz urina.
Derivaii nitrofuranului (furazolidon, nitrofurantoina, nitrofuratel, nitrofurazon) au efect bacteriostatic fa de

bacteriile Gram pozitive i Gram negative. Cel mai utilizat este nitrofurantoina.
Derivaii nitrofuranului se folosesc pentru terapia infeciilor tractului urinar, deoarece realizeaz concentraii
suficient de mari n urin. Nu au aciune sistemic. Un intermediar redus al nitrofuranilor produce ruperea catenei de
ADN, ceea ce explic efectele mutagene ale acestor compui in vitro. Sunt activate mecanismele de reparare a ADN.
Metaboliii reactivi redui ai nitrofurantoinei interfer nu numai cu ADN, ci par a fi capabili s se lege cu proteinele
ribosomale i inhib sinteza proteinelor. Inhib respiraia bacterian i metabolismul piruvatului.
Nitroimidazolii au spectru larg de aciune (bacterii, fungi, protozoare, helmini). Cei cu activitate antibacterian
sunt 5-nitroimidazolii: 2-metronidazolul, furazolidonul i tinidazolul.
Furazolidonul este unul din numrul foarte mare de compui (de ordinul miilor) de nitrofuran, introdui n clinic
dup descoperirea acestei clase de compui n anii 40. Este activ fa de Klebsiella, E. coli, Campylobacter spp., S.
aureus, Giardia lamblia.
Efectul lor antibacterian este dependent de reducerea gruprii nitro n condiii anaerobe. Compuii capteaz e- din
feredoxina redus, generat n reacia de decarboxilare a piruvatului. Produsul reducerii are efect letal, probabil prin
ruperea catenei de ADN. Unele bacterii microaerofile sunt deosebit de sensibile, dar mecanismul morii lor nu se
cunoate.
Aceste substane au spectru antibacterian redus, limitat la bacterii anaerobe, cu doar dou excepii: Helicobacter
pylori i Gardnerella vaginalis, bacterii microaerofile sensibile la nitroimidazol. Condiia esenial pentru ca
nitroimidazolii s acioneze, este reducerea parial a gruprii nitrat prin sistemul intracitoplasmatic transportor de
electroni. Bacteriile aerobe sunt incapabile s realizeze aceast reducere, ceea ce explic rezistena lor natural.
Nitrofuranii sunt ageni antibacterieni a cror structur i mod de aciune sunt similare cu cele ale
nitroimidazolilor. Activitaea lor este legat de reducerea gruprii NH 2.
Intreaga cantitate administrat, pe cale oral sau parenteral rmne disponibil aciunii antimicrobiene. Perioada
de njumtire permite administrarea a dou doze/zi. Datorit mecanismului unic de aciune, nu exist fenomene de
rezisten ncruciat. Bacilii Gram negativi posed rezisten intrinsec pentru c au pompe de eflux eficiente fa de
Linezolid.
Un parametru esenial al unui agent chimioterapeutic este indexul terapeutic, adic raportul dintre doza toxic
minim i doza cu eficien maxim. Valoarea mare a acestui raport este caracteristic agenilor chimioterapeutici foarte
eficieni.
Oxazolidinonele reprezint o clas unic de ageni antimicrobieni sintetici. Utilizarea lor n clinic a fost impus
de necesitatea tratrii infeciilor produse de stafilococii rezisteni la meticilin, de pneumococii rezisteni la penicilin, de
enterococii rezisteni la vancomicin.
Aceti ageni au un mecanism unic de aciune, ceea ce elimin riscul rezistenei ncruciate cu agenii
antimicrobieni disponibili. Deoarece nu sunt molecule naturale, genele de rezisten specific nu preexist n genofondul
natural.
Oxazolidinonele au fost iniial utilizate n terapie ca inhibitori ai monoamin-oxidazei, pentru tratamentul
depresiei, dar ulterior s-a descoperit c au i activitate antimicrobian. Primul agent al acestei clase a fost produs de
compania DuPont de Nemours, la sfritul anilor 70 pentru controlul bolilor foliare bacteriene i fungice la diferite
plante, inclusiv la tomate. Modificarea chimic a oxazolidinonei a dus la descoperirea a doi ageni - eperezolid i
linezolid, cu activitate in vitro i toxicitate diminuat.
Linezolid are activitate in vitro, fa de N. gonorrhoeae i N. meningitidis i are o eficien bun fa de multe
bacterii Gram pozitive anaerbe (Bacteroides fragilis). Bacteriile Gram negative sunt probabil intrinsec rezistente, deoarece
posed pompe de eflux, eficiente fa de linezolid. In vitro, linezolid are o eficien relativ bun fa de M. tuberculosis i
foarte bun fa de Nocardia.
Linezolid
Concentraiile subinhibitorii de linezolid diminu producerea hemolizinei i coagulazei la S. aureus i inhib

sinteza streptolizinei O i DN-azei la streptococi.
Mecanismul de aciune i rezisten. Oxazolidinonele sunt inhibitorii sintezei proteinelor ribosomale la bacterii,
dar spre deosebire de ali ageni antimicrobieni cu aciune asupra ribosomilor, oxazolidinonele au un mecanism unic de
aciune deoarece blocheaz prima treapt a asamblrii ribosomilor din subunitile disociate. Oxazolidinonele se leag de
un situs al subunitii 50S, la interfaa sa cu subunitatea 30S i previn formarea complexului de iniiere 70S, care cuprinde
ARN-fMet, ARNm i cele dou subuniti ribosomale.
Linezolid se leag de subunitatea 50S, la sau lng situsul care leag cloramfenicolul i lincomicina, deoarece cele
3 molecule intr n competiie pentru situsurile de legare din domeniul V al ARN 23S al subunitii 50S. Domeniul V este
centrul peptidil-transferazei, care catalizeaz formarea legturii peptidice. Spre deosebire de cloramfenicol i lincomicin,
linezolid nu inhib formarea legturilor peptidice i ntre ele nu exist rezisten ncruciat.
Asemntor majoritii inhibitorilor sintezei proteinelor ribosomale, activitatea linezolidului fa de bacterii in
vitro este considerat bacteriostatic, deoarece bacteriile sunt omorte mai ncet decat de agenii bactericizi.
Linezolid este metabolizat prin oxidarea inelului morfolino i se formeaz doi metabolii: acidul aminoetoxi-acetic
i hidroxi-etil glicina.
Linezolid este un agent antimicrobian cu spectru larg de activitate, virtual fa de toate bacteriile Gram pozitive.
Intreaga cantitate administrat, pe cale oral sau parenteral rmne disponibil aciunii antimicrobiene. Perioada
de njumtire permite administrarea a dou doze/zi. Datorit mecanismului unic de aciune, nu exist fenomene de
rezisten ncruciat. Bacilii Gram negativi posed rezisten intrinsec pentru c au pompe de eflux eficiente fa de
Linezolid.
Un parametru esenial al unui agent chimioterapeutic este indexul terapeutic, adic raportul dintre doza toxic
minim i doza cu eficien maxim. Valoarea mare a acestui raport este caracteristic agenilor chimioterapeutici foarte
eficieni.
Antibioticele
Antibioticele (anti + bios = cu efecte nefavorabile) sunt un grup heterogen de substane chimice cu greutate
molecular mic, produse de microorganisme prin procese de biosintez, care omoar sau inhib creterea altor specii de
microorganisme.
Definiia iniial s-a completat ulterior, deoarece antibioticele sunt substane chimice obinute prin biosintez,
semisintez sau prin sintez chimic, care n concentraie mic inhib multiplicarea sau omoar microorganismele.
Definitorie pentru noiunea de antibiotic, rmne capacitatea de a fi produs prin biosintez de ctre microorganisme.
Fenomenul de antibioz (inhibiia dezvoltrii unui microorganism de ctre alii) a fost descris de Pasteur (l877).
Gratia i Dath (1924)au studiat microorganismele din sol i n filtratul acelular al culturii de actinomicete au evideniat
efectul inhibitor al unei substane pe care au denumit-o actinomicetin.
Fleming (l928), n cutarea unor compui cu potenial antibacterian, a observat inhibiia creterii coloniilor de
Staphylococcus aureus n vecintatea coloniilor fungice de Penicillium notatum. Apoi a artat c mediul lichid al culturii
de P. notatum, diluat de 800 de ori, a inhibat creterea culturii de Staphylococcus. A descoperit medicamentul miracol
pe care l-a denumit penicilina, dar n-a izolat-o, pentru care a fost distins cu premiul Nobel. Calitile ei de medicament
miraculos au fost evideniate de ctre Ernst Chain i Howard Florey (1939), care au izolat-o i au folosit-o n
tratamentul infeciilor bacteriene n timpul celui de al II-lea rzboi mondial. Producia industrial a nceput n l943. Noul
medicament a fost introdus n circuitul clinic general n 1944 i a avut un impact uria asupra strii de sntate a
populaiei umane.
R. Dubos (1939) a izolat gramicidina i tirocidina din Bacillus brevis, active fa de bacteriile Gram pozitive.
S. Waksman (1944-1945) a izolat streptomicina din Str. griseus, un microorganism izolat din sol, pentru care a
primit premiul Nobel. Streptomicina este activ fa de unele bacterii Gram pozitive i fa de Mycobacterium
tuberculosis. El a propus denumirea de antibiotic, cu sensul de compus chimic produs de un microorganism, care la
concentraie mic, inhib sau omoar alte microorganisme.
Antibiotice au fost eseniale n lupta cu maladiile infecioase i au contribuit esenial la creterea speranei de via
n secolul 20. Dup introducerea penicilinei n clinica general (1944), infeciile grave (faringita streptococic) pn
atunci, au devenit vindecabile. Azi, dependena omului de antibiotice este total. Numai n SUA, n 1998, pentru uzul
uman s-au folosit circa 12,5 tone de antibiotice. Dac se adaug cele administrate n hrana animalelor i n agricultur, se
apreciaz c n ultimii 50 de ani s-au produs i s-au utilizat peste un milion de tone.
Antibioticele sunt produse de trei grupe de microorganisme: actinomicete, bacili Gram pozitivi i fungi
filamentoi microscopici. Actinomicetele sunt cele mai bune productoare de antibiotice i ali metabolii secundari cu
activitate biologic. Genul cel mai reprezentativ Streptomyces - s-a izolat din tubul digestiv al unui pui de gin.
Cephalosporium a fost izolat din apa mrii, lng un canal de deversare a apelor menajere, iar Bacillus, dintr-o ran
tegumentar a unei fetie (Tracy) i de aici s-a dat denumirea antibioticului bacitracina.
Estimrile numrului de substane antibiotice variaz: unii au inventariat circa 5000 antibiotice identificate, iar
alii evalueaz cifre net superioare de ordinul a 10 000. Actinomicetele produc peste 2/3 din totalul antibioticelor, iar
speciile g. Streptomyces produc 70-80% dintre metaboliii secundari. Pentru terapia infeciilor umane i animale se
folosete un numr restrns (circa l00), produse de reprezentanii a 5 genuri de microorganisme: Bacillus, Streptomyces,
Micromonospora, Penicillium, Cephalosporium. Celelalte sunt toxice ori au efecte defavorabile asupra organismului sau
sunt lipsite de selectivitate.
Izolarea microorganismelor productoare de antibiotice este foarte laborioas. Din l34 700 tulpini bacteriene
izolate din circa 5000 de probe diferite de sol, o singur tulpin a prezentat interes practic.
In perioada descoperirii celor mai multe antibiotice (anii 1950-60) s-au identificat tetraciclina, eritromicina i
kanamicina, agenii antifungici candicidina i nistatinul, precum i substane cu efect antineoplazic (adriamicina).
Marea majoritate a antibioticelor se obine n procese industriale, pe cale microbiologic.
In prezent, numai poriunea major a moleculei de antibiotic este sintetizat de microorganisme, iar restul
moleculei este sintetizat pe cale chimic. Se obin astfel antibiotice de semisintez sau prin metode de bioconversie. In
unele cazuri (de exemplu, cloramfenicolul), ntreaga molecul se sintetizeaz pe cale chimic, datorit structurii sale
moleculare simple.
Convenional, n categoria antibioticelor sunt incluse i substanele de semisintez sau cele sintetizate artificial,
dar pe care microorganismele le pot sintetiza total sau parial. Aceast meniune (c microorganismele le pot sintetiza total
sau parial) este necesar, pentru ca din categoria antibioticelor s se exclud compuii cu efect antibacterian sintetizai
numai pe cale chimic (sulfamidele) sau cei produi n organismele superioare (lizozimul).
Structurile moleculare complexe ale antibioticelor combin derivai a dou sau mai multe grupe de metabolii:
aminoacizi, glucide, bazele acizilor nucleici, intermediari ai sintezei lipidelor. Acetil-CoA i propionil-CoA formeaz
catene lungi (ca n sinteza acizilor grai) i rezult poli- cetone (RCO CH2 CO CH2 - ), care se condenseaz pentru
a forma inelele macrolidelor, polienelor, tetraciclinelor sau poriuni ale moleculei altor antibiotice.
Antibioticele metabolii secundari

Substanele biogene preluate de celul sub o form simpl, sunt folosite de celul n urmtoarele direcii eseniale:
- pentru sinteza metaboliilor primari (aminoacizi, baze purinice i pirimidinice, enzime, acizi grai), necesari
biosintezei constituienilor structurali, rezultatul fiind creterea celulei. Aceti compui se sintetizeaz faza de
cretere primar, denumit i trofofaz;
- pentru producerea energiei, n metabolismul energetic i a produselor metabolismului energetic (produi de
fermentaie alcoolic, lactic, butiric, propionic, acid etc.);
- pentru producerea (uneori) a metaboliilor secundari (antibiotice, alcaloizi, ergotina, giberelina).
Metaboliii secundari se sintetizeaz n faza de cretere secundar - idiofaz - dup epuizarea unui nutrient major
(sursa de C sau de N), nu sunt eseniali pentru creterea celulei i sinteza lor este expresia procesului de difereniere
biochimic.
Metaboliii primari i secundari pot fi denumii generali i speciali. Metabolismul primar implic activitatea
unei serii de ci interconectate de anabolism, de catabolism i amfibolice, catalizate de enzime care furnizeaz
intermediari de biosintez i energie i convertesc precursorii n macromolecule eseniale: ADN, ARN, proteine, lipide i
polizaharide. Metabolismul primar este acelai pentru toate organismele vii.
Pe lng metaboliii generali, unele organisme ale diferitelor grupri taxonomice sunt capabile s sintetizeze
metabolii de tip special, folosind fie aceleai enzimele metabolismului general, sau sintetaze speciale produse de celule n
condiii nutriionale speciale. De exemplu, acizii grai se sintetizeaz pe o cale comun la toate celulele vii, iar anumite
grupe taxonomice de microorganisme i plante sintetizeaz poliketide din aceiai precursori, utiliznd enzime
asemntoare.
Metaboliii secundari au fost denumii idiolii, deoarece se sintetizeaz n idiofaza (faza de producie) culturii
staionare. Metaboliii secundari au structuri chimice particulare, nu sunt eseniali pentru creterea organismului
productor, dar probabil au rol n asigurarea supravieuirii n mediile naturale. Diversitatea chimic i structurile
neobinuite ale metaboliilor secundari sunt ilustrate de numrul mare de clase crora le aparin: aminozaharuri, quinone,
cumarine, epoxizi, alcaloizi ergot, glicozide, derivai indolici, lactone, macrolide, naftalene, nucleozide, peptide,
poliacetilene, poliene, piroli, terpenoide, tetracicline etc.
Metaboliii secundari includ legturi chimice neobinuite: inele -lactamice, peptide ciclice alctuite din
aminoacizi normali i modificai, legturi nesaturate de poliacetilene i poliene, inelul macrolidelor.
Metaboliii secundari sunt produi numai de unele specii ale unui gen, ca familii de compui strns nrudii: cel
puin 10 peniciline naturale, 10 bacitracine, 25 actinomicine etc. Proporia diferitelor componente n amestec depinde de
factori genetici, de factorii de mediu i se datoreaz relativei lipse de specificitate a enzimelor implicate n metabolismul
secundar. {n contrast, procesele de biosintez ale metaboliilor primari sunt totdeauna catalizate de enzime cu specificitate
nalt: enzima recunoate un singur substrat i se formeaz un singur produs. Specificitatea aciunii enzimelor care
catalizeaz sinteza metaboliilor primari se datoreaz faptului c erorile de biosintez ale componentelor celulare eseniale
sunt, n general, letale, iar erorile care survin n metabolismul secundar nu au consecine semnificative pentru celula
productoare, deoarece metabolitul secundar modificat i pstreaz, de regul, activitatea biologic.
Metaboliii secundari se sintetizeaz pe o varietate mai mare de ci, dect cei primari. Dei au structuri chimice
foarte diversificate i se sintetizeaz pe ci variate, metaboliii secundari se asambleaz dintr-un numr limitat de
metabolii intermediari.
Antibioticele sunt metabolii secundari a cror sintez ncepe trziu n timpul fazei de cretere, la intrarea n faza
staionar. Experienele de autoradiografie cu aminoacizi marcai au evideniat c n perioada n care miceliul crete cu o
rat nalt, aminoacizii se ncorporeaz n proteinele celulare, dar nu se sintetizeaz actinomicin. Dup ce
microorganismul a ncheiat faza de cretere, rata ncorporrii aminoacizilor n proteine scade considerabil. Waksman
(1961) a intuit c proprietatea anumitor microorganisme de a sintetiza antibiotice nu este corelat cu nici un mecanism
esenial al nutriiei i creterii celulei. {n general, sinteza metaboliilor secundari din categoria antibioticelor este supresat
n timp ce celulele se gsesc n faza de multiplicare activ i este cea mai rapid dup ce cultura intr n faza staionar.
Comparativ cu metaboliii primari, antibioticele au specificitate redus de biosintez, deoarece acelai organism
sintetizeaz, de multe ori, un grup de molecule nrudite.
Cele dou faze, trofofaza i idiofaza, sunt bine separate la o cultur bacterian productoare de antibiotic, dar nu
sunt clar delimitate pentru microorganismele filamentoase (actinomicete i fungi). Criteriul evalurii creterii masei
celulare este determinarea greutii uscate. {n numeroase procese de biosintez industrial cu microorganisme
filamentoase, greutatea uscat continu s creasc semnificativ n idiofaz, dar cu o rat mai mic dect n trofofaz.
Determinarea greutii uscate nu este un criteriu optim pentru evaluarea creterii. Masa celular const din totalitatea
structurilor necesare diviziunii celulare (organitele celulare) i din materialele de rezerv (polioli, lipide, polifosfai i
glucide nestructurale), care pot s reprezinte 50-60% din greutatea uscat a celulei la sfritul procesului de biosintez.
Creterea greutii uscate n idiofaz este rezultatul acumulrii substanelor de rezerv, o cretere cu caracter nereplicativ
(nu este asociat cu diviziunea celular),. De aceea, parametrul optim pentru msurarea creterii masei replicative a
celulei, este determinarea cantitativ a ADN. {n acest caz, creterea celulei poate fi disociat de producerea de antibiotic.
Sfritul fazei de cretere replicativ este marcat de ali parametrii: scderea ratei activitii respiratorii i scderea ratei
sintezei ARN.
Cele dou faze sunt bine delimitate n cazul fermentaiei antibioticelor (cloramfenicol, colistin, penicilina,
bacitracina) n mediile organice complexe, care favorizeaz creterea rapid a culturii discontinui *, dar se suprapun ntr-un
grad semnificativ, n mediile chimic definite (sintetice), care favorizeaz creterea lent.
*
Culturile bacteriene discontinui se obin prin inocularea unui mediu nutritiv lichid sau solidificat, ce nu se renoiete.
Factorul care controleaz declanarea biosintezei antibioticelor este deficiena unuia sau mai multor componente
nutriionale care limiteaz creterea. Epuizarea unui astfel de factor oprete creterea i iniiaz biosinteza idioliilor. {n
mediile definite chimic, favorizante ale creterii lente, unul sau mai muli factori nutriionali pot fi limitani ai creterii
chiar de la nceputul cultivrii, dar favorabili sintezei antibioticelor. Momentul sintezei produsului nu este un criteriu
totdeauna valid pentru a defini metabolitul secundar.
Microorganismele par a fi programate s produc antibiotice numai cnd rata specific de cretere scade sub un
anumit nivel. Fenomenul s-a stabilizat n evoluie, ca rspuns la presiunile competitive. {n mediile bogate n substane
nutritive, ca de exemplu intestinul mamiferelor, producerea antibioticelor nu este necesar, deoarece resursele satisfac
necesitile metabolice ale ntregii asociaii. {n mediile naturale majore (sol, ap), nutrienii sunt totdeauna limitani
pentru creterea diferitelor asociaii de microorganisme heterotrofe i sinteza antibioticelor devine avantajoas pentru
supravieuire.
Microorganismele evit efectul letal al antibioticelor pe care le produc (sinuciderea) prin urmtoarele mecanisme :
- modificarea i detoxificarea antibioticelor de ctre enzime sintetizate de organismele productoare;
- alterarea intei antibioticului n celula productoare;
- scderea permeabilitii pe faa extern a membranei, dup ce antibioticul a fost excretat.
Unele antibiotice au rol n dinamica proceselor de sporulare (de exemplu, polimixina, produs de Bacillus
polymyxa). Altele sunt produse secundare, rezultate din degradarea peretelui celular, corelat cu sporularea, deoarece
peretele conine D-aminoacizi i glucide care se regsesc n compoziia chimic a unor antibiotice.
Producerea antibioticelor a evoluat ca un mecanism ecologic de inhibiie a creterii altor microorganisme, cu care
intr n competiie pentru resursele energetice. Fenomenul se numete antibioz i are o semnificaie funcional opus
simbiozei. Dar microorganismele productoare de antibiotice reprezint o proporie foarte mic din totalul
microorganismelor din sol. Faptul c antibioticele se sintetizeaz la sfritul fazei de cretere, pare s nu le confere un
avantaj competitiv real.
Condiiile de mediu necesare sporulrii i secreiei metaboliilor secundari sunt adeseori asemntoare i chiar mai
stringente dect acelea necesare creterii vegetative. S-a crezut c sinteza metaboliilor este obligatorie pentru sporulare,
dar unele tulpini fungice sporuleaz chiar n absena producerii metaboliilor secundari.
Cei mai muli metabolii secundari sunt sintetizai de organisme cu cretere filamentoas i cu morfologie relativ
complex.
Sinteza metaboliilor secundari, la microorganisme, este asociat cu procesele de sporulare. Se disting 4 categorii
de metabolii secundari a cror sintez este declanat de procesul de sporulare:
- metabolii care activeaz sporularea (acidul linoleic, la Asp. nidulans);
- pigmenii structurilor de sporulare (melaninele necesare formrii sau integritii sporilor sexuai i asexuai).
Melaninele sunt pigmeni de culoare nchis care se formeaz prin polimerizarea oxidativ a compuilor
fenolici, se sintetizeaz n timpul sporulrii i sunt depozitai n peretele celular, avand rol protector fa de
radiaiile UV, dar sunt i factori de virulen;
- metabolii toxici secretai la timpul sporulrii (micotoxinele);
- antibiotice.
Metaboliii secundari sunt substane neeseniale pentru organismul productor, crora li se atribuie urmtoarele
activiti biologice:
- inhibiia creterii sau chiar efectul letal asupra altor organisme din mediu;
- efecte toxice fa de organismele multicelulare (nevertebrate, plante) ;
- stimuleaz diferenierea microorganismelor;
- au rol n transportul ionilor metalici.
Metaboliii secundari au semnificaie adaptativ pentru microorganismele productoare, deoarece sinteza lor este
determinat genetic, iar pe de alt parte, multe clase de compui prezint o adaptare remarcabil de a interaciona cu
intele lor. Unii metabolii au activitate biologic chiar la concentraiile mici produse n mediile naturale.
Antibioticele produse de Streptomyces se sintetizeaz n cantiti mici, n faza de tranziie, cnd creterea
miceliului vegetativ ncetinete, ca rezultat al epuizrii nutrienilor i miceliul aerian este gata s se dezvolte pe seama
nutrienilor eliberai prin degradarea hifelor vegetative. Astfel de antibiotice ar avea rolul de a proteja organismul
productor, de alte microorganisme care tind s consume resursele nutritive din mediu.
Uneori, antibioticele produse de diferitele specii ale unui grup au aciune sinergic: de exemplu, antibioticele lactamice i acidul clavulanic (produs de Str. clavuligerus). Acidul clavulanic este un inhibitor natural al -lactamazelor,
care confer rezisten la -lactamice. Antibioticele -lactamice i ale inhibitorilor -lactamazei sunt eficiente fa de
bacteriile rezistente la -lactami. Efectul sinergic al asociaiei este reflectat de denumirea dat combinaiei acidului
clavulanic cu meticilina: augmentin.
Coproducerea cefamicinei (un antibiotic -lactamic) i acidului clavulanic este constant: nu exist prodctori
cunoscui de acid clavulanic, care s nu produc cefamicine (Challis, Hopwood, 2003).
Multe specii de Streptomyces produc dou sau mai multe antibiotice, cu aciune sinergic fa de un organism
competitiv care domin numeric asociaia natural. Astfel, Str. avermitilis sintetizeaz doi compui antifungici cu structuri
diferite: oligomicina i un macrolid polienic. Cele dou antibiotice au inte moleculare distincte: oligomicina inhib o
sintaz mitocondrial, iar macrolidul polienic se leag ireversibil de membrana celulelor fungice, alternd permeabilitatea
lor. Oligomicina i macrolidele polienice pot aciona sinergic fa de fungi. Probabil c un competitor fungic al lui Str.
avermitilis, l-a selectat pe ultimul pentru sinteza acestor antibiotice.
Oligomicina
Multe produse naturale de importan medical (antibiotice), alimentar, industrial sau agricol sunt metabolii
secundari.
Creterea fungic i sinteza antibioticului sunt rezultatul interaciunii dintre miceliul fungic, substrat i condiiile
de mediu. Sinteza este influenat de condiiile mediului de cretere al fungilor. Multe antibiotice sunt metabolii
secundari, produi n condiii suboptimale de cretere sau n prezena unor cantiti limitante de nutrieni. Temperatura,
umiditatea, aeraia, pH-ul, rata de cretere influeneaz masa fungic i sinteza antibioticelor.
Sinteza proteinelor neribosomale*
Cele dou categorii de proteine celulare i antibiotice polipeptidice se sintetizeaz dup mecanisme diferite.
Dovezile experimentale au fost aduse utiliznd inhibitori metabolici. De exemplu, cloramfenicolul i puromicina
inhibitori ai sintezei proteinelor celulare stimuleaz ncorporarea aminoacizilor n actinomicin. In abena sintezei
proteinelor celulare, rezerva de aminoacizi poate fi folosit exclusiv pentru sinteza antibioticelor.
Nu toate proteinele se sintetizeaz pe ribosomi. Unele polipeptide, cu mai puin de 50 de aminoacizi pot fi
asamblate de peptid-sintetaze, ca i ali compui, ca de exemplu acizii grai, a cror sintez este catalizat de alte
sintetaze.
Produsele peptidice de sintez neribosomal includ ciclosporina (cu aciune imunosupresoare) i antibiotice ca
gramicidina S, tirocidina A i surfactinele. O structur modular a peptid-sintetazelor determin alungirea secvenial a
catenei peptidice, prin adausul de aminoacizi specifici.
*
Sinteza neribosomal a peptidelor are loc la procariote i la eucariotele inferioare i se bazeaz pe principiul matriei cu S
(thiotemplate), catalizat de complexe enzimatice mari multifuncionale, denumite peptid-sintetaze, care sunt organizate n module
(un modul de iniiere a sintezei i mai multe module de alungire a catenei peptidice). Fiecare modul este alctuit din mai multe
domenii, care determin alungirea catenei polipeptidice prin adugarea succesiv a aminoacizilor.
Modulele au un model comun de organizare care le permite activarea aminoacidului fixat i realizarea unei
legturi peptidice, ca i modificarea aminoacidului fixat prin reacii de epimerizare sau N-metilare.
S-a demonstrat experimental c un modul de alungire trebuie s posede cel puin 4 domenii:
- un domeniu de adenilare (A) cu activitate de peptid-sintetaz care fixeaz aminoacidul i l activeaz printr-o
reacie de adenilare;
- un domeniu de tioesterificare (T sau PCP-peptidyl carrier protein) care menine peptidul nascent asociat cu
sintetaza, pe ntreaga durat a sintezei prin intermediul unei legturi tioesterice;
- un domeniu de condensare (C) prin care sintetaza catalizeaz formarea legturilor peptidice;
- un domeniu specific (Te) cu activitate de tioesteraz care permite eliberarea peptidului de complexul
sintetazei, dup terminarea sintezei.
Spre deosebire de calea de sintez proteic clasic (ribosomal) care utilizeaz doar 21 de aminoacizi (20 eseniali
i selenocisteina), sinteza non-ribosomal poate utiliza peste 300 de aminoacizi (de exemplu, D-aminoacizi, aminoacizi Nmetilai etc.), ns peptidele sintetizate nu pot depi 48 de aminoacizi.
Peptid-sintetazele, ca i alte complexe enzimatice (de exemplu, poliketid-sintetazele) sunt interesante datorit
posibilitii utilizrii lor n biosinteza produselor nenaturale.
Majoritatea peptidelor neribosomale sintetizate de microorganisme sunt clasificate ca metabolii secundari, adic
rareori au rol n metabolismul primar, n cretere sau n reproducere, dar sinteza lor a evoluat cu un oarecare beneficiu
pentru organismul productor.
Clasificarea antibioticelor n funcie de structura chimic

Din punct de vedere chimic, antibioticele sunt un grup de substane foarte heterogene. Se disting urmtoarele
categorii:
l. Antibioticele -lactamice constituie unul dintre cele mai mari i importante grupe de antibiotice. Toate cuprind
n structura lor, inelul -lactamic i sunt foarte diverse: penicilinele, cefalosporinele i cefamicinele.
Penicilina este produs de Penicillium chrysogenum. Molecula nativ (benzil-peniclina sau peniclina G) este
alctuit din inelul -lactamic i inelul tiazolidinic. La C 6 este ataat grupul fenil-acetamido.
La cefalosporine, inelul tiazolidinic are un atom de C suplimentar, cu o legtur nesaturat ntre C 3 i C4 i rezult
o structur denumit cefem.
Cefamicinele sunt similare ca structur chimic, dar inelul -lactamic conine un grup metoxi, care-i confer
stabilitate la multe enzime -lactamazice.
Alte variante structurale ale compuilor -lactamici utilizai n clinic sunt: carbapenem, carbacefem, oxacefem,
clavam (acid clavulanic), sulfone, monobactam.
Penicilinele semisintetice se obin din acidul 6-aminopenicilanic, care se condenseaz cu orice acid carboxilic.
Rezult astfel un numr mare de peniciline: oxacilina i derivaii si, meticilina, ampicilina, amoxicilina, azlocilina,
mezlocilina, piperacilina, ticarcilina.
Acidul 6-aminopenicilanic, pentru penicilinele semisintetice, se obine prin tratamentul penicilinei cu o amidaz
sau prin cultivarea organismului productor, ntr-un mediu fr donorul gruprii acil.
Acidul 6-aminopenicilanic este un dipeptid ciclic, format prin condensarea L-cisteinei i D-valinei i de aceea
penicilinele, cefalosporina i cloramfenicolul aparin grupului antibioticelor oligopeptidice.
Cloramfenicolul este un antibiotic simplu, sintetizat de Streptomyces, dar n cea mai mare parte se obine prin
sintez chimic. Are un spectru larg de aciune: bacteriile Gram pozitive i Gram negative, dar i bacteriile parazite obligat
intracelulare (chlamidii, rickettsii).
Cloramfenicolul conine o grupare nitro i un grup diclor-acetil. El se leag de subunitatea ribosomal mare i
blocheaz transferul peptidil, la ribosomii care alungesc catena.
2. Antibiotice polipeptidice: bacitracina (produs de B. subtilis), gramicidina (sintetizat de B. brevis),
cicloserina (produs de Streptomyces), actinomicina, polimixina (sintetizat de B. polymyxa).
Bacitracina este un peptid ciclic ce mpiedic defosforilarea purttorului lipidic ce transfer noul peptidoglican,
prin membrana celulei, n timpul sintezei peretelui celular. Bacitracina deriv dintr-o protein a celulei vegetative, care
este degradat parial n timpul sporulrii. Este toxic pentru a fi aplicat sistemic, dar se gsete n formulri pentru
aplicaii locale.
Polimixinele sunt o familie de antibiotice produse de specii de Bacillus. O parte a polipeptidului are o configuraie
ciclic, cu o coad hidrofob de acid octanoic. In clinic se folosesc polimixina B i polimixina E (colistina), precum i
derivaii lor sulfometilai. Polimixinele sulfometilate au activitate antibacterian redus, dar se cliveaz spontan i rezult
compui mai activi.
Tyrocidina i gramicidina S sunt polipeptide ciclice. Ele produc dezorganizarea membranei, rezultatul fiind
pierderea moleculelor mici i liza protoplatilor. Nu se folosesc pentru administrare sistemic, deoarece sunt toxice.
3. Antibioticele aminoglicozidice a cror denumire se termin cu mycin deriv direct sau indirect de la
Streptomyces, iar cele care se termin cu micin deriv de la Micromonospora. Toate aminoglicozidele au un inel format
din 6 uniti, cu grupri amino i de aici deriv denumirea de aminociclitol. Molecula lor polar, policationic, conine un
aminociclitol, de care se leag dou sau mai multe glucide, dintre care cel puin unul este aminat. La streptomicin,
aminociclitolul este diguanidin-inozitolul (streptidina).
Majoritatea aminoglicozidelor au grupul aminociclitol reprezentat de deoxistreptamin. Ele se mpart n derivai
ai neomicinei, kanamicinei, gentamicinei.
Aminoglicozidele sunt active fa de numeroase bacterii infecioase Gram pozitive i Gram negative, dar i fa de
M. tuberculosis. Legarea unei singure molecule este suficient pentru inactivarea ribosomului bacterian. Aceste antibiotice
nu traverseaz uor membranele celulare. Se absorb cu dificultate din intestin, dar pentru modificarea microbiotei
intestinale, administrarea oral este calea optim. Sunt ineficiente fa de bacteriile cu localizare intracelular. Anaerobia
i prezena cationilor bivaleni diminu eficiena aminoglicozidelor. Se administreaz numai n cazul infeciilor severe
(tuberculoza, bruceloza, tularemie, plaga bubonic). Sunt sinergice cu antibioticele beta-lactamice i se folosesc n
septicemiile cu bacterii Gram negative. Pentru a-i exercita efectul bactericid, aminoglicozidele necesit sinteza proteic.
4. Antibioticele polichetide (acetogenine) sunt substane naturale derivate din acizi poli--cetonici, care la rndul
lor se formeaz din acetil-CoA i mai multe molecule de malonil-CoA, dup decarboxilare: griseofulvina (produs de
Penicillium patulum), tetraciclina (sintetizat de Streptomyces).
Tetraciclinele sunt un grup de substane naturale sau de semisintez, a cror formul cuprinde un nucleu
tetraciclic linear fuzionat, de care se ataeaz o varietate de grupri funcionale: clor-tetraciclina (produs de Streptomyces
aureofaciens), oxitetraciclina (produs de S. rimosus).
Tetraciclinele sunt ageni chelatori puternici i proprietile lor farmacochinetice sunt influenate de chelarea
ionilor de metal. Sunt cel mai important grup de antibiotice, datorit spectrului antibacterian foarte larg. Sunt active fa
de bacteriile Gram pozitive i Gram negative, fa de protozoarele parazite (Entamoeba), fa de chlamidii, micoplasme i
ricketsii. Acioneaz prin inhibiia sintezei proteinelor, deoarece inhib ataarea aminoacil-ARNt la situsul acceptor
ribosomal. Sunt larg utilizate n terapia antiinfecioas uman i animal, deoarece nu produc colaterale majore. Se adaug
ca supliment n furaje n doze subterapeutice, pentru stimularea creterii.
5. Antibioticele macrolide.
Denumirea de macrolid desemneaz o structur chimic caracterizat prin prezena unui ciclu lactonic cu
complexitate variabil, la care se ataeaz componenta glucidic. Ciclul lactonic rezult prin nchiderea unui lan lung de
acizi grai hidroxilai. Antibioticele macrolide sunt foarte diverse, datorit att variaiei inelului macrolidic, ct i a
complexului glucidic. Cele mai cunoscute sunt eritromicina i oleandomicina.
6. Antibioticele steroidice au o structur chimic asemntoare colesterolului. Acidul fusidic (fusidina) este
produs de fungii filamentoi din g. Fusarium. Este activ prin legarea de factorul de elongaie G (EFG).
7. Antibioticele polienice se caracterizeaz prin prezena, n molecula lor, a unui anumit numr de legturi duble:
nistatina, amfotericina B, candicidina (produse de membri ai g. Streptomyces), iar fumigalina este sintetizat de
Aspergillus fumigatus.
8. Antibiotice glicopeptidice
In clinic se folosesc dou glicopeptide: vancomicina i teicoplanina. Vancomicina este o molecul mare,
complex, produs de Streptomyces orientalis. Utilizarea ei este limitat, datorit toxicitii asupra rinichiului.
Vancomicina este un heptapeptid rezultat din aminoacizi aromatici modificai i condensai ntr-o structur
triciclic, de care se ataeaz un dizaharid. Activitatea sa antimicrobian se datoreaz legrii la catenele laterale de Dalanil-D-alanil ale peptidoglicanului, blocnd formarea legturilor ncruciate ale catenei polipeptidice i este limitat, n
esen, la bacteriile Gram pozitive, deoarece, la bacteriile Gram negative mureina acoperit de membrana extern, nu este
accesibil antibioticelor glicopeptidice.
Clasificarea antibioticelor n funcie de mecanismele de aciune
Antibioticele au aciune selectiv: ele nu produc leziuni asupra celulelor organismelor superioare, dar inhib
creterea sau omoar agentul infecios. Selectivitatea aciunii este o condiie ideal, pentru c, de exemplu, penicilina
produce o stare alergic, independent de aciunea antibacterian i implic o alt parte a moleculei dect cea efectoare a
aciunii antibacteriene. Unele antibiotice produc efecte toxice nete la om i animale i folosirea lor este limitat pentru
tratamentul infeciilor la care riscul administrrii este mai mic dect consecinele procesului infecios.
Antibioticele i datoreaz aciunea selectiv, reactivitii lor chimice mai nalte sau exclusive fa de unele
componente ale celulei bacteriene sau fungice, n raport cu celulele umane i animale.
Sensibilitatea diferitelor organisme la antibiotice, ca i la agenii chimioterapeutici, variaz n limite largi. De
obicei, bacteriile Gram pozitive sunt mai sensibile, deoarece peretele mureinic este o barier mai permeabil pentru
moleculele de antibiotic i n plus, sinteza mureinei este o int important pentru aciunea unor antibiotice. Bacteriile
Gram negative sunt mai puin sensibile, deoarece membrana extern este hidrofob, iar moleculele de LPS stabilizate de
ionii bivaleni formeaz o structur dens, greu permeabil.
*
Moleculele de LPS formeaz baza structural a integritii membranei externe. LPS este polianionic datorit sarcinilor
negative ale lipidului A i leag cationi. Moleculele adiacente polianionice de LPS sunt aparent legate electrostatic, una de alta, prin
cationi bivaleni (Ca2+, Mg2+) i formeaz o structur compact ca un acoperi de igl, pe suprafaa membranei externe. Situsurile
LPS care leag cationii sunt eseniale pentru integritatea membranei externe, dar n acelai timp ele reprezint clciul lui Ahile al
acestei structuri. Antibioticele policationice din grupul polimixinei se complexeaz avid cu LPS i dezorganizeaz membrana extern,
mrind permeabilitatea pentru agenii cu aciune asupra membranei sau componentelor citoplasmatice. Toi agenii policationici se
leag de LPS anionice, cu o afinitate variabil. Bacteriile Gram negative sunt rezistente la detergenii anionici i neutri, dar sunt
sensibile la detergenii monocationici. Agenii chelatori ai ionilor de Ca 2+ i Mg2+ dezorganizeaz i permeabilizeaz membrana
extern.
Antibioticele se clasific n funcie de spectrul de activitate, adic de diversitatea microorganismelor asupra

crora acioneaz:
- antibiotice cu spectru restrns de activitate, fa de bacteriile Gram negative: de exemplu, penicilina G este
activ fa de cocii Gram pozitivi;
- antibiotice cu spectru intermediar de activitate: sunt active fa de bacteriile Gram pozitive, dar i fa de
unele bacterii Gram negative: streptomicina, neomicina, gentamicina, kanamicina, cefalosporina;
- antibiotice cu spectru larg, active fa de bacteriile Gram pozitive i Gram negative: tetraciclina,
cloramfenicolul;
- antibiotice antifungice, active fa de infeciile fungice superficiale (de exemplu, griseofulvina) sau fa de
infeciile profunde (amfotericina). Nistatinul (stamicin) este activ fa de infeciile tegumentului i ale
epiteliilor mucoaselor digestive i vaginale, produse de Candida.
Antibioticele active asupra bacteriilor Gram pozitive i Gram negative sunt de spectru larg. Acestea au o utilitate
clinic mai larg dect cele active fa de un singur grup de microorganisme, denumite antibiotice cu spectru ngust.
Ultimele se folosesc pentru controlul infeciilor care nu rspund la alte antibiotice. De exemplu, vancomicina (un
glicopeptid) este activ fa de bacteriile din g. Staphylococcus, Bacillus i Clostridium.
In unele cazuri, antibioticele interacioneaz cu molecule caracteristice microorganismelor i de aceea indexul lor
terapeutic este foarte nalt. De exemplu, penicilina este activ fa de sinteza mureinei, componenta specific a peretelui
bacterian. Penicilina reacioneaz i cu moleculele proprii organismului uman i animal, la concentraii de cteva mii de
ori mai mari dect cele necesare pentru a omor bacteriile.
Majoritatea antibioticelor sunt bacteriostatice sau bactericide. Efectul bacteriostatic semnific inhibiia
reversibil a creterii, iar cel bactericid are semnificaia unei aciuni letale ireversibile. Excepie fac griseofulvina i
antibioticele polienice, care sunt antifungice.
Mecanismele de aciune a antibioticelor sunt diferite, consecin a diversitii structurii lor moleculare (fig. 78).
Cele mai multe sunt molecule complexe, cu regiuni hidrofobe, ce uureaz difuzia n celule. Cea mai simpl modalitate de
a le clasifica, este n funcie de situsul de aciune n celula bacterian:
- antibiotice ce acioneaz asupra sintezei componentelor chimice ale peretelui celular (penicilina,
cefalosporina, bacitracina, cicloserina, fosfomicina);
- antibiotice active asupra sintezei proteinelor bacteriene (aminoglicozide, cloramfenicol, tetraciclina,
macrolide, streptogramina);
- antibiotice active asupra sintezei acizilor nucleici (rifamicina, novobiocina);
- antibiotice active asupra membranei celulare (polimixina, gramicidina, tirocidina, valinomicina, monensina
ultimele dou nefolosite n clinica uman).
In celul, inhibiia unui proces poate duce la inhibiia sau la stimularea indirect a altor procese, prin alterarea
sistemelor feed-back sau a altor mecanisme de control. De aceea, nu se pot trage concluzii ferme din studiul efectelor unui
antibiotic asupra unui singur proces celular.
Fig. 78. Ilustrarea schematic a situsurilor majore ale aciunii antibioticelor
Antibiotice care inhib sinteza peretelui celular

Peretele acoper membrana citoplasmatic, confer forma specific i rigiditate celulei bacteriene, asigur
meninerea integritii structurale. Structura chimic unic a peretelui bacterian condiioneaz sensibilitatea lui la cteva
grupe de antibiotice, care includ -lactamii (peniciline, cefalosporine, carbapenemi i monobactami), acidul clavulanic (un
inhibitor al -lactamazelor), antibioticele glicopeptidice (vancomicina, teicoplanina i avoparcina stimulator al creterii
animalelor). Sunt de asemenea active asupra peretelui, fosfomicina i cicloserina, dei acestea sunt active asupra cii
metabolice a sintezei monomerilor peretelui celular.
La bacteriile Gram-negative stratul peptidoglicanic este foarte subire i este acoperit de o structur secundar,
membrana extern, care reprezint o barier important de permeabilitate, n special fa de ptrunderea antibioticelor.
Sinteza peretelui celular este inhibat de antibioticele -lactamice (peniciline, cefalosporine), inhibitoare ale
polimerizrii peptidoglicanului i de vancomicin (tabel nr. 4).
Tabel nr. 4: Antibiotice inhibitoare ale sintezei peretelui bacterian (adaptare dupa Topley si Wilsons, 1998).
Clasa de
inta specific
Structura chimic
antibiotice
PLP/PBP
-Lactaminele
HO
O
H
CH3
(Penicilin Binding
(Peniciline,
Protein);
C ON
R1
C
N
Cefalosporine,
H
C
3
Transglicozilaze;
Carbapenem)
CH3
S
Transpeptidaze;
O
NH
Carboxidaze.
O
COO
Cicloserina
Fosfomicina
Lipidul
transportor al
precursorilor
nucleotidici
Inhibarea
dipeptidsintetazei
Inhibarea PEP ??sintetazei
N
R2
COOH
carbapenem
Bacitracina
cefalosporina
H
C
H3C
C
PO3H2
O
fosfomicina
Vancomicina
Dipeptidul
terminal D-Ala-DAla
HO
HO
CO2-
AA1
R1
R2
R3
vancomicina
O
NH
N+
O
OH
AA3
O
NH
NH
NH
HO
X1
X2
O
X3
NH
NH
O
OS1
O
OS2
Familia antibioticelor -lactamice cuprinde un numr mare de molecule, reprezentantul cel mai vechi fiind
penicilina G (Duval, 1989); ele se pot clasifica n patru grupe:
- peniciline
- cefalosporine
- carbapeneme
- monobactami.
Antibioticele -lactamice inhib ultima etap a sintezei peptidoglicanului, adic formarea punilor interpeptidice.
Aceti compui prezint o analogie structural cu dipeptidul terminal D - Ala - D - Ala, care face parte din pentapeptidul
mureinic.
Problema funciei fiecrei proteine care leag penicilina (PBP Penicillin Binding Proteine) a fost studiat n
detaliu E. coli. La aceast specie s-au identificat patru PBP cu greutate molecular mare (PBP 1a, 1b, 2 i 3), cu rol de
enzime bifuncionale: catalizeaz transpeptidarea i transglicozilarea peptidoglicanilor.
Peretele celular este una dintre intele primare pentru antibiotice. Efectul lor se realizeaz prin inhibiia sintezei
unui component parietal sau prin inhibiia polimerizrii componentelor chimice ale mureinei.
Antibioticele -lactamice interfer cu reacia final de transpeptidare, ce formeaz legturile transversale ntre
catenele adiacente de peptidoglican, cele care confer rigiditatea structurii parietale.
Antibioticele -lactamice sunt bactericide, dar mecanismul aciunii lor este diferit, asupra bacteriilor Gram
pozitive i Gram negative.
Bacteriile produc 4 tipuri de proteine care leag penicilina (PBP), asemntoare serin-proteazelor. Unele
catalizeaz reaciile de transpeptidare(formarea legturilor ncruciate n peptidoglican) i de carboxipeptidare
(modificarea peptidoglicanului) ale asamblrii peretelui celular. PBP, dup legarea penicilinei, transmit un semnal
transmembranar pentru inducerea sintezei -lactamazelor.
Beta-lactamazele sunt PBP ce catalizeaz hidroliza inelului -lactamic i inactivarea antibioticului.
PBP sunt proteine legate de membran (1% din totalul proteinelor de membran), eseniale pentru viabilitatea
celulei, cu excepia -lactamazelor care pot fi legate de membran sau secretate. Antibioticele -lactamice se leag
covalent cu PBP prin acilarea restului de serin din situsul activ.
La bacteriile Gram pozitive, antibioticele -lactamice difuzeaz liber spre PBP.
La bacteriile Gram negative, porinele membranei externe limiteaz ptrunderea antibioticelor n celul, care se
acumuleaz n spaiul periplasmic. Cnd concentraia devine eficient, antibioticele sunt legate de PBP de pe suprafaa
extern a membranei celulare.
Stratul extern al peretelui bacteriilor Gram negative este format din lipopolizaharide (LPS) a cror structur este
foarte compact i hidrofil la suprafa, datorit acizilor grai saturai i sarcinii electrice negative.
Rezistena se manifest dac concentraia antibioticului n periplasm este mai mic dect cea necesar pentru
legarea i inhibiia activitii PBP.
Mecanismele rezistenei bacteriene la antibioticele -lactamice sunt:
- nglobarea sczut a antibioticului prin porine
- hidroliza sub aciunea -lactamazelor (la Gram negative sunt localizate n spaiul perilasmic)
- aciunea pompelor de eflux;
- mutaii ale PBP care reduc afinitatea pentru antibioticele -lactamice.
In absena sintezei mureinei, celulele lipsite de perete celular sufer fenomenul lizei osmotice. La cocii Gram
pozitivi, antibioticele -lactamice determin pierderea acizilor lipoteichoici parietali. Absena lor elimin controlul
procesului autocatalitic, care n mod normal este limitat i dezagreg peptidoglicanul la situsuri strict localizate.
Antibioticele -lactamice sunt active numai asupra celulelor bacteriene tinere, aflate n faza de cretere. Penicilina
poate fi administrat n doze mari fa de cele terapeutice, singurul risc fiind manifestrile alergice. Administrat oral, este
degradat n cea mai mare parte, de HCl din stomac. De aceea se injecteaz intramuscular sau intravenos. Se absoarbe
rapid n snge i este excretat rapid. Din acest motiv se asociaz cu procaina, care diminu excreia i i prelungete
aciunea.
Penicilina G se folosete pentru tratamentul infeciilor cu streptococi, meningococi, pneumococi, spirochete,
bacili aerobi Gram pozitivi, Clostridium. Ii pstreaz activitatea n urin i se folosete pentru tratamentul infeciilor
tractului urinar.
Carbapenemii reprezint un grup de antibiotice cu efect bactericid, ce conin un antibiotic -lactamic i un
compus ce mpiedic degradarea medicamentului n rinichi.
Bacitracina (un peptid ciclic) mpiedic defosforilarea moleculei lipidice purttoare, ce transfer molecula de
peptidoglican nou sintetizat, prin membrana celulei, n timpul sintezei peretelui celular. Este toxic pentru rinichi i de
aceea nu se administreaz sistemic, dar se aplic local pentru tratamentul leziunilor tegumentare i ale membranelor
mucoase.
Mecanismul aciunii vancomicinei const n blocarea creterii celulei, deoarece formeaz un complex cu D-ala-Dala din peptidul mureinic. Este activ numai fa de multe bacterii Gram pozitive, pentru c la Gram negative,
peptidoglicanul nu este accesibil antibioticului. Nu selecioneaz mutante rezistente. Cocii Gram pozitivi (Leuconostoc) i
Lactobacillus sunt rezistente pentru c lanul lateral al peptidoglicanului const din D-alanil-D-lactat, care are afinitate
mai mic pentru antibioticele glicopeptidice.
Cicloserina inhib competitiv formarea D-Ala din L-Ala i astfel stopeaz sinteza dipeptidului D-Ala-D-Ala. Este
relativ toxic i se folosete pentru tratamentul infeciilor cu M. tuberculosis, rezistent la alte medicamente.
Fosfomicina este un inhibitor al piruvil-transferazei i astfel blocheaz sinteza acidului N-acetil-muramic.
Cicloserina i fosfomicina se comport ca analogi ai precursorilor peptidoglicanului. Sunt molecule foarte
hidrofile i ptrund n citoplasm pe calea sistemelor de transport pentru metaboliii nrudii: fosfomicina este anolog
structural cu fosfo-enol-piruvatul, iar cicloserina este analog D-alaninei:
Fosfo-enol-piruvatul
Cicloserina i fosfomicina inhib sinteza peptidoglicanului.
D-Cicloserina
D-Alanina
Alanina este un compus major al peptidoglicanului i al acizilor teichoici din peretele celulelor bacteriene Gram
pozitive. O parte a alaninei parietale se gsete ca izomer D. Prezena D-aminoacizilor (D-Ala, acidul D-Glutamic) n
peretele bacteriilor infecioase este considerat ca un mecanism protector fa de mediul intern al organismului gazd.
Compuii analogi ai D-aminoacizilor au activitate antibacterian. Antagonitii D-alaninei (D-cicloserina i Ocarbamil-D-Serina) inhib selectiv ncorporarea D-alaninei n peptidoglican. D-alanina rezult din L-alanin sub aciunea
racemazei. Incorporarea D-Alaninei este catalizat de D-Alanin-D-Alanin ligaz. Creterea E. coli n prezena Dcicloserinei i a sucrozei 0,32 M duce la formarea sferoplatilor, iar n celul se acumuleaz precursorii parietali. Sinteza
proteinelor celulare nu este modificat.
Adugarea D-Alaninei n mediul de cretere reverseaz efectele inhibitorii ale D-cicloserinei.
D-cicloserina are dou grupri ionizabile. Este un antibiotic cu spectru larg de activitate, dar este mai eficient fa
de bacteriile Gram pozitive dect fa de cele Gram negative. Este foarte important c D-cicloserina inhib creterea M.
tuberculosis.
O-carbamil-D-serina izolat dintr-o tulpin de Streptomyces are acelai mecanism de aciune: activitatea
antibacterian este reversat de D-Alanin.
Antibiotice antiribosomale (inhibitoare ale sintezei proteinelor *
Sinteza proteinelor implic 3 procese de recunoatere macromolecular: selecia ARNt iniiator; selecia codonului iniiator
pe ARNm; interacia ARNm i ARNt iniiator cu ribosomul neangajat n sinteza proteinelor.
Primul eveniment al iniierii este legarea subunitii 30S de codonul iniiator al ARNm i formarea complexului
de iniiere. La procariote, iniierea sintzei proteinelor se face prin legarea N-formil-metionil-ARNt. Dup legarea n
polipeptid, N-f-Met este clivat sub aciunea peptidazelor.
f-Met-ARNt iniiator ocup situsul ribosomal peptidil (P). Al II-lea complex aa-ARNt, ca i toate cele care
urmeaz, se leag la nivelul situsului acceptor (A), unde are loc interaciunea dintre codonul ce specific aminoacidul
urmtor i anticodonul din secvena ARNt.
Formarea legturii peptidice ntre gruparea COOH a f-Met-ARNt legat la situsul P i gruparea NH 2 liber a
aminoacidului din situsul A, este catalizat de enzima peptidil-transferaz, component a subunitii 50S. Se formeaz un
dipeptid legat la situsul A, n timp ce ARNt din situsul P este descrcat de aminoacidul corespunztor (fig. 79). Creterea
polipeptidului cu un aminoacid se face prin clivarea acestuia de la ARNt situat n situsul P i legarea la aminoacidul din
situsul A. Reacia de clivare-reunire (adic de formare a legturii peptidice) consum energie eliberat prin hidroliza GTP.
La sfaritul reaciei, situsul A poart ARNt al celui de al II-lea aminoacid, de care este legat un dipeptid (f-Met i al II-lea
aminoacid legat - o molecul de peptidil-ARNt).
Situsul P, foarte apropiat de situsul A, accept complexul ARNt-peptidil (ARNt legat cu lanul polipeptidic n curs
de biosintez). Translocaia ARNt la situsul P este nsoit de deplasarea coordonat a ribosomului de-a lungul secvenei
de ARNm, cu distana egal cu un codon. Astfel, un alt codon este plasat n situsul A, care leag un alt aminoacil-ARNt,
pe baza relaiei specifice codon-anticodon.
Fig. 79. Situsurile de aciune a antibioticelor inhibitoare ale sintezei proteinelor. Quinolonele inhib replicarea ADN. Rifampicina
inhib transcrierea. Tetraciclinele inhib traducerea prin blocarea formrii complexului de iniiere. Aminoglicozidele ocup situsul
acceptor al ribosomului i induc erori de citire a ARNm. Cloramfenicolul interacioneaz cu ARNr 23S al subunitii ribosomale 50S
i inhib formarea legturii peptidice. Eritromicina i clindamicina se leag la subunitatea 50S i interfer cu procesul de translocaie a
peptidului nascent, de la situsul acceptor (A), la situsul peptidil (P).
Unele antibiotice acioneaz selectiv asupra ribosomilor celulei procariote. Altele (de exemplu, cicloheximida)
sunt active fa de ribosomii celulelor eucariote, iar o alt categorie sunt active fa de ambele tipuri de ribosomi. Unele
sunt active asupra ribosomilor polisomali (puromicina, cloramfenicolul), iar altele blocheaz numai ribosomii liberi, de
iniiere a catenei polipeptidice, pentru c situsurile lor de legare sunt restrictive i nu se pot asocia cu ribosomii polisomali
(de exemplu, eritromicina). Unele antibiotice se leag de subunitatea ribosomal mic, iar altele se asociaz cu subunitatea
ribosomal mare.
Antibioticele cu aciune asupra ribosomilor sunt molecule complexe, adeseori avnd cicluri i grupri cationice,
care favorizeaz interaciunile ionice cu ARNr. Spre deosebire de antibioticele care blocheaz sinteza mureinei la nivelul
suprafeei externe a membranei citoplasmatice, cele care acioneaz la nivelul ribosomilor trebuie s ptrund n
citoplasm.
Din punct de vedere chimic, majoritatea sunt aminoglicozide policationice, cu molecule polare. Ele au o regiune
hidrofob mare, care uureaz difuzia prin stratul lipidic al membranei.
Aminoglicozidele (streptomicina i kanamicina) au activitate bactericid dependent de concentraie. Sunt foarte
solubile n ap i insolubile n solvenii organici i de aceea au o capacitate limitat de a traversa membranele lipidice.
Aminoglicozidele cationice interacioneaz chimic cu antibioticele -lactamice. Rezultatul este deschiderea inelului lactamic i acilarea grupului amino al aminoglicozidei, cu pierderea reciproc a activitii antibacteriene.
Aminoglicozidele interacioneaz ionic cu suprafaa extern a celulei i sunt transportate n celul. Sursa energiei
este gradientul electrochimic al protonilor generai n procesul respiraiei. Cele cationice se leag de resturile ncrcate
negativ ale LPS i de proteinele anionice ale membranei externe i nlocuiesc competitiv Mg 2+ i Ca2+ care consolideaz
LPS adiacente. Ele modific conformaia subunitii 30S a ribosomului polisomal, astfel nct crete rata erorilor de
mperechere a codonilor cu anticodonii. Mesajul este tradus greit i se sintetizeaz proteine nefuncionale.
Aminoglicozidele sunt active i fa de ribosomii liberi: asocierea antibioticului cu ribosomul liber blocheaz
interaciunea acestuia cu ARNm (se blocheaz astfel formarea complexului de iniiere).
Sensibilitatea la Str este dependent de subunitatea 30 S, pentru c ribosomii hibrizi formai din subuniti 30 S de
la o tulpin Str rezistent i subuniti 50 S de la o tulpin Str sensibil, sunt Str rezisteni. Sensibilitatea la streptomicin
este determinat de proteina S12. Streptomicina face ca ribosomul s citeasc greit ARNm i s insere greit
aminoacidul. Ribosomul normal ncorporeaz fenil-alanina, ca rspuns la mesajul sintetic poli-U, dar streptomicina
stimuleaz intens ncorporarea izoleucinei, a serinei i leucinei ca rspuns la mesajul poli-U.
Schimbarea mutaional a unui singur aminoacid ntr-o protein a subunitii ribosomale 30S determin rezistena
celulei la streptomicin, dar nu i la antibioticele care conin deoxistreptamina ca grup lateral ataat heterociclului
complex, deoarece ele se asociaz cu ambele subuniti ribosomale.
Rezistena la aminoglicozide este rezultatul modificrii moleculelor sub aciunea enzimelor bacteriilor Gram
pozitive i Gram negative. Enzimele sunt codificate de plasmide sau aparin unor transpozoni:
- fosforilarea dependent de ATP, a unui grup OH, sub aciunea unei fosfotransferaze;
- adenilarea dependent de ATP, sub aciunea unei nucleotidil-transferaze;
- acetilarea dependent de CoA, a unui grup amino, sub aciunea unei acetil-transferaze.
Aminoglicozidele modificate de enzime se leag cu afinitate sczut de ribosomi i apare rezistena chiar la
concentraii mari de antibiotice.
Macrolidele (eritromicina, lincomicina i clindamicina) penetreaz greu n celula Gram negativ. Se asociaz cu
ribosomii liberi, dar nu cu ribosomii polisomali. Se leag cu subunitatea 50 S i interfer cu procesul de translocaie a
polipeptidului nascent, producnd disocierea peptidil-ARNt de ribosom. Dei unele antibiotice care interacioneaz cu
ribosomii liberi blocheaz complexul de iniiere, eritromicina stopeaz sinteza proteic numai dup ce s-a sintetizat un
polipeptid scurt.
Unele antibiotice policiclice mari se leag cu subunitatea mare a ribosomului i blocheaz legarea factorilor de
elongaie EFTu (Elongation Factor Thermo unstable) i EFG (Elongation Factor G, implicat n translocaia peptidului
nascent).
Acidul fusidic este bacteriostatic, dar la concentraii mari poate fi bactericid. Are o structur molecular de tip
steroidic. Spre deosebire de ali inhibitori ai sintezei proteice, nu se leag direct de ribosomi, ci formeaz un complex
stabil cu guanozin-trifosfatul i cu factorul de elongaie G. Sinteza proteic bacterian depinde de translocaia peptidilARNt de la situsul acceptor ribosomal, la situsul peptidil. Translocaia necesit factorul G de alungire proteic i hidroliza
GTP. Acidul fusidic are capacitatea de a stabiliza complexul ribosom-factorul G de alungire GTP fosfat anorganic,
inhibnd hidroliza GTP i blocnd alungirea catenei polipeptidice nascente.
Puromicina a fost izolat din filtratele de Streptomyces alboniger. Antibioticul este un aminoglicozid substituit,
alctuit din 3 componente :
- 6-dimetil-aminopurina
- 3-deoxi-3-amino-D-riboza
- p-metoxi-L-fenilalanina.
Legtura glicozidic, n configuraie ca i n nucleozidele naturale, este clivat de acizi tari (HCl 1N, la 100 o,
timp de 10 min), condiii n care legtura amidic a aminoacizilor este stabil. Comparativ cu multe alte antibiotice,
puromicina are un spectru deosebit de larg al activitii, ce const n inhibiia creterii. Puromicina este un inhibitor al
sintezei proteinelor i inhib creterea tuturor organismelor : bacterii, plante, protozoare, animale. Principalul mecanism
de aciune al puromicinei, ca agent inhibitor al sintezei proteinelor a fost definit ca rezultat al investigaiei mecanismului
biosintezei proteinelor.
Datorit analogiei structurale cu aminoacil-ARNt, un intermediar al sintezei proteinelor, puromicina produce
terminarea prematur a creterii catenei polipeptidice. Puromicina elibereaz polipeptidul n cretere din complexul
ribosom-ARNm, producnd o rupere a legturii ester ntre gruparea COOH a polipeptidului i gruparea OH a adenozinei
din ARNt. Clivarea se datoreaz faptului c peptidul este transferat de la ARNt la puromicin.
Datorit stoprii sintezei proteinelor, efectul puromicinei const n oprirea creterii celulei. Efectul este
predominant bacteriostatic. Sinteza ADN i ARN continu pentru un timp la o rat normal sau aproape normal, dar
sinteza proteinelor este inhibat imediat. {n celulele mamaliene, inhibiia sintezei proteinelor este reversat rapid dup
ndeprtarea puromicinei.
Deoarece puromicina este un analog al adenozinei, este posibil ca regiunea aminonucleozidic a moleculei s
interfere direct cu metabolismul nucleotidelor. Puromicina are toxicitate crescut asupra organismelor superioare:
nefrotoxicitate, stare de ru general etc.
Bacteriile Gram pozitive sunt mai sensibile dect cele Gram negative. Diferenele de sensibilitate se pot datora
nglobrii reduse a puromicinei. Ionii de Mg2+ mresc sensibilitatea la puromicin.
Nu se folosete n terapia antiinfecioas, dar este util n studiul experimental al mecanismului sintezei
proteinelor. Ea interfer cu sinteza proteic, producnd eliberarea prematur a polipeptidului nascent din asociaia sa cu
ribosomul.
Puromicina
Cloramfenicolul se leag reversibil cu subunitatea ribosomal 50 S i blocheaz alungirea peptidului nascent pe
ribosom. Ribosomii 80 S nu sunt afectai, dar probabil ribosomii 70 S mitocondriali sunt sensibili la cloramfenicol.
Rezistena se datoreaz, n general, inactivrii antibioticului catalizat de cloramfenicol-acetil-transferaz (CAT),
efluxului activ sau permeabilitii sczute.
Antibiotice care modific permeabilitatea membranei plasmatice
Interaciunea unor antibiotice (gramicidina, polimixina, nistatina, amfotericina B) cu membrana plasmatic a
celulei bacteriene produce creterea permeabilitii i pierderea proprietilor de membran selectiv. Rezultatul este
moartea celulei prin liz osmotic.
Polimixina actioneaz asupra membranei citoplasmatice ca un detergent cationic, avnd afinitate pentru gruprile
sale cationice. Este singurul antibiotic cu aciune bactericid asupra celulelor aflate n faza staionar, dup ce au depit
faza de cretere. Acioneaz asupra membranei externe, pe care o fragmenteaz, ceea ce explic aciunea sa bactericid i
selectivitatea fa de bacteriile Gram negative (tabel nr. 5).
Sensibilitatea diferitelor specii variaz foarte mult, ceea ce denot specificitatea interaciunii dintre antibiotic i
microorganism.
Antibioticele polienice (nistatin, amfotericina B) formeaz complexe cu sterolii din structura membranei
plasmatice. Nu sunt active fa de bacterii, deoarece membrana lor nu conine steroli, dar inhib creterea micoplasmelor,
deoarece conin steroli. Rezultatul interaciunii cu membranele celulelor sensibile este pierderea permeabilitii selective,
pierderea ionilor de K+ i Mg2+ i diminuarea ratei sintezei proteinelor i a ARN.
Toate tipurile de celule sensibile la aciunea antibioticelor polienice conin steroli. Sterolii sunt componente
comune multor grupe de organisme: alge, protozoare, levuri, viermi, mamifere etc. Datorit efectului lor asupra
permeabilitii membranei, antibioticele polienice mresc eficiena altor antibiotice.
Antibioticele polienice se utilizeaz n tratamentul micozelor. Infeciile produse de fungi sunt mai rare dect cele
bacteriene, rareori pun n pericol viaa i adeseori sunt lipsite de importan clinic. Tratamentul micozelor cu ageni
chimici este limitat, datorit absenei specificitii aciunii lor. Cei mai importani ageni antifungici sunt cei ce acioneaz
asupra membranelor celulare, iar dintre acetia, nistatinul i amfotericina B.
Tabel nr. 5: Antibiotice active asupra membranei bacteriene (adaptare dupa Topley si Wilsons, 1998):
Clasa
de inta specific Structura chimic
antibiotice
Polipepdide ciclice LPS
membranei
(Polimixina
B, externe
Polimixina E)
Fosfolipidele
membranei
externe/interne
Gramicidinele
Fosfolipide
Tirocidina
Fosfolipid
Gramicidina
Amfotericina B este produs de Streptomyces nodosus. Mecanismul aciunii sale const n legarea de ergosterolul
din membrana plasmatic a celulei fungice, a unor alge i a unor protozoare, dar i de celulele umane. Efectul este
creterea permeabilitii membranei, astfel nct glucoza, K + i alte molecule eseniale ies din celul. Amfotericina B se
absoarbe puin din tubul digestiv i de aceea se administreaz prin injectare intravenoas. Rezistena fungic la acest
antibiotic nu este cunoscut, dar efectele secundare sunt foarte frecvente i uneori severe.
Nistatinul (Micostatin) este produs de Streptomyces noursei. Mecanismul de aciune este acelai ca i al
amfotericinei B. Se administreaz local pentru tratamentul infeciilor cu Candida. Nu se absoarbe din intestin i se
administreaz oral, numai pentru tratamentul suprainfeciilor intestinale, care adeseori sunt consecutive tratamentului cu
antibiotice.
Antibiotice care interfer cu funciile acizilor nucleici
Tabel nr. 6: Antibiotice care interfer cu funciile acizilor nucleici (dupa Topley si Wilsons, 1998):
Clasa de
Etapa de
inta
Structura chimic
antibiotice
biosintez
specific
Novobiocina
Replicare
ADN-giraza
CH3
CH3
OH3C
CH3
OO
OH
HN CO
NH2COO
CH2
OH
OH
CH
Transcriere
ARNpolimeraza
dependent da
ADN
HC
CH3
rifampicina
Aminoglicozid
Streptomicina,
Kanamicina,
Tobramicina)
Traducere
Subunitatea
30S
ribosomal
(perturbarea
citirii ARNm)
H2C
HO
NH2 O
NH2
NH2
OH O
HO
HO
CH2OH
OH
kanamicina
NH2
HO
HOH2C
HO
HO
H3CHN
OH
CH3
H
HN
H CHO
O
NH2
NH
O
HO
H2N
HN
NH
OH
HO
streptomicina
Cloramfenicol
Tretracicline
Traducere
Traducere
Factor
de
elongare EG-F
Inhibiia fixrii
aminoacilatARNt.
Inhibiia
peptidiltransferazei.
Factor
de
elongare EG-F
Inhibiia fixrii
aminoacilatARNt
Inhibiia
peptidiltransferazei.
O
C
O2N
NH
CHCl2
CH2OH
OH H
cloramfenicol
OH
N(CH2)
OH
H3C
OH
CH3
CH3
novobiocina
Rifampicinele
OH
OH
tetraciclina
CONH2
O
Acid fusidic
Traducere
Factor
de
elongare EG-F
CH3
CH2
CH2
HO
CH
CH3
C
CH3
O
H
CO
CH3
CH3
HO
CH3
Macrolide
Traducere
Situsul
aminoacil (A)
de
pe
subunitatea
ribosomal
50S
(perturbarea
translocaiei)
acid fusidic
OH
CH3 H C
3
H3C
OCH3
O
CH3
H3C
O
HO
H3C
CH3
OH
H3C
OH
CH3
O
OH
CH3
CH3
O
CH2CH3
eritromicina
Lincosamide
Traducere
Inhibiia fixrii
aminoacilatARNt
Inhibiia
peptidiltransferazei
CH3
CH3
HO C H
H7C3
CO NH C H
HO
O
OH
lincomicina
S CH3
OH
Rifamicina B este sintetizat natural, iar rifampicina este derivatul semisintetic cu cea mai larg utilizare clinic.
Rifampicina este alctuit dintr-o grupare cromofor aromatic, inclus ntr-o caten alifatic. Ea se asociaz cu
subunitatea B a ARN-polimerazei dependent de ADN i probabil chiar cu ADN n complexul de iniiere, blocnd astfel
iniierea transcrierii i sinteza ARN. Antibioticul se folosete n terapia combinat a tuberculozei. Mutantele rezistente, cu
subunitatea B a ARN-polimerazei modificat se selecioneaz repede.
Rifamicina
Actinomicina D (Dactinomicina) este format dintr-o grupare cromofor aromatic i un ciclu peptidic. Ea
interacioneaz cu ADN i inhib replicarea i transcrierea. Gruparea aromatic se intercaleaz n dublul helix al ADN, la
perechile GC, iar peptidul ciclic rmne la suprafa.
Actinomicina D
Novobiocina interfer cu sinteza ARN, deoarece inhib ARN-polimeraza dependent de ADN, iar griseofulvina
inhib replicarea ADN, consecutiv interferenei cu polimerizarea nucleotidelor purinice. Cercetri recente sugereaz c
novobiocina acioneaz asupra subunitii B a ADN-girazei (topoizomeraza II) care produce i menine starea
supraspiralizat a ADN.
Griseofulvina sintetizat de Penicillium griseofulvum a fost izolat ca un factor care produce dezvoltarea
anormal (rsucirea) a hifelor fungice. Se folosete pentru tratamentul infeciilor fungice superficiale. Inhib creterea
fungilor micelieni, dar nu este activ fa de bacterii sau levuri. Nu influeneaz creterea fungilor cu perei celulozici, dar
inhib creterea fungilor care conin chitin. Griseofulvina influeneaz celulele fungice prin contact direct: creterea
hifelor aeriene nu este modificat. Concentraiile mici produc rsucirea hifelor, ramificarea extensiv, micorarea distanei
dintre pereii transversali, creterea diametrului. La concentraii mari de antibiotic, modificrile de cretere se amplific i
hifele se rup.
Injectarea intravenoas a griseofulvinei la obolan determin oprirea mitozei n metafaz, produce mitoze
multipolare i nuclei anormali. n miceliile tratate cu griseofulvin scade coninutul de proteine, de acizi nucleici.
Antibioticul interfer cu creterea fungic, probabil mpiedicnd incomplet formarea aparatului mitotic de diviziune.
Griseofulvina
Antibioticele care interacioneaz cu ADN produc efecte nediscriminatorii asupra ADN bacterian, viral sau al celulei
eucariote.
CAPITOLUL VI
VIROLOGIE
Virusurile* sunt ageni infecioi de natur nucleoproteic, care se disting net de sistemele biologice prin
caracteristici unice att structurale, ct i biochimice i funcionale. Particularitatea structural const n organizarea de tip
acelular, iar cea funcional const n aceea c virusurile se exprim ca entiti genetice numai n interrelaiile cu
sistemele biologice. Caracterele structurale i funcionale unice ale virusurilor reies indirect i din faptul c aceste entiti
nu sunt incluse n nici unul din sistemele de clasificare a lumii vii.
*
Etimologic, denumirea de virus vine de la cuvntul grecesc ios, al crui sens este otrav de natur biologic. Prin
latinizarea acestui cuvnt a derivat noiunea de virus.
tiina care se ocup de studiul virusurilor se numete Virologie.
Primele cunotiine tiinifice referitoare la virusuri dateaz de mai bine de un secol, ns preocuprile de ordin practic pentru
tratarea sau prevenirea unor maladii virale, datorit caracterului lor evident i uneori foarte grav sunt cunoscute din cele mai vechi
timpuri. Inc din anii 2500 . C., n China existau descrieri ale variolei umane, care se refereau att la simptomatologia ct i la
caracterul transmisibil al acestei maladii. Aristotel (484-322) afirma c rabia (turbarea) este transmis prin muctura de cine.
Preocuprile cu caracter strict aplicativ au devansat cu mult timp descoperirea propriu-zis i definirea pe plan conceptual a noiunii
de virus. Recunoscnd c supravieuitorii epidemiilor de de variol erau protejai de infeciile ulterioare, chinezii au recurs la un
procedeu empiric de vaccinare, prin inhalarea crustelor uscate din leziunile de variol (variolizare).Variolizarea s-a practicat timp de
secole, ca o metod riscant de prevenire a variolei. In l796, Edward Jenner, dup ce a suferit o infecie variolic grav la vrsta de 7
ani, a introdus vaccinarea variolic, sesiznd c mulgtorii de vaci, care se infecteaz cu virusul cowpox devin rezisteni la infecia cu
virusul variolei (smallpox). L.Pasteur (l822-l895) a fundamentat tiinific practica producerii i utilizrii vaccinului rabic, fr s
evidenieze agentul infecios. El presupunea ca maladia este rezultatul infeciei animalelor i omului santos, cu un agent infecios de
dimensiuni foarte mici, cu particulariti distincte, invizibil cu mijloacele optice ale timpului su i care nu poate fi izolat prin
metodele aplicabile altor ageni patogeni. In l892, D. I. Ivanovski a artat ca boala infecioas denumit mozaicul tutunului este
datorat unui agent transmisibil, invizibil la microscop i care strbate filtrele ce rein celulele bacteriene. Leziunile caracteristice sunt
transmise n serie de la o plant bolnav, la cele sntoase, prin filtratele de lichid acelular extras din frunzele infectate. In l897,
Beijerinck a confirmat filtrabilitatea acestui agent patogen, intuind natura sa deosebit i l-a considerat ca fiind un agent contagium,
vivum, fluidum(contagios, viu, fluid, adic trece prin filtrele care rein bacteriile). A. Lwoff (l957) l consider pe Beijerinck ca fiind
adevratul ntemeietor al Virologiei ca tiin.
R. Dulbecco (1952) a cuantificat virusurile infecioase pentru om i animale, prin testul plajelor de liz. Preparatul viral diluat se
folosete pentru a infecta monostratul celular, acoperit ulterior cu agar moale pentru a limita difuzia liber a virionilor. Rezultatul este
liza localizat a monostratului i apariia plajelor. Aceiai tehnic se folosete pentru izolarea virusurilor dintr-un amestec heterogen.
Capitolul de virologie general i propune prezentarea particularitilor moleculare ale structurii virionilor,
diversitatea genetic i modalitile de expresie a genomului viral, precum i mecanismele moleculare ale interaciunii
virus-celul gazd n diferitele sale variante: litic, persistent sau oncogen.
Modelul general de structur a virionului
Descrierile referitoare la anatomia virusurilor se refer totdeauna la virion unitatea integrat de structur i
funcie a tuturor virusurilor dotat cu proprietatea de infeciozitate a celulelor sensibile.
Din punct de vedere morfologic se disting urmtoarele tipuri de virioni (fig. 80):
-
virioni de form sferic (izodiametric) sau sferoidal (de exemplu, virusurile gripale, adeno- i herpesvirusurile,
picorna i reovirusurile etc.);
- virioni de form cilindric alungit, adic de bastona rigid sau flexibil (de exemplu, virusul mozaicului tutunului,
fagii filamentoi);
- virioni de form paralelipipedic, caracteristic poxvirusurilor (de exemplu, virusul vaccinal, virusul variolei etc.);
- virioni cu form de obuz sau de cartu, la rhabdovirusuri;
- virioni n form de cirea cu coad (de exemplu, fagii cu coad).
Dimensiuni. Virusurile au dimensiuni submicroscopice. Cele mai mari sunt orthopoxvirusurile, de 240 300 nm,
adic apropiate de dimensiunile celor mai mici bacterii, la limita de rezoluie a microscopiei optice. Bacteriofagii cei mai
mari ating 200 nm. Cele mai mici sunt enterovirusurile, sub 30 nm diametru, adic de dimensiunile ribosomilor.
Tehnicile de centrifugare analitic au fcut posibil obinerea unor cantiti mari de virus purificat. Organizarea
intern a virionului i relaiile spaiale ale diferitelor componente structurale s-au evideniat prin studii de difracie cu raze
x a preparatelor virale n stare cristalin.
Virionii posed doi constituieni structurali eseniali i definitorii: genomul i capsida. Virionii alctuii numai din
genom i capsid, crora le lipsete nveliul extern, sunt caracteristici virusurilor nude (Picorna-, Reo-, Adenovirus). La
virusurile nvelite, celor dou componente obligatorii se adaug o structur de suprafa, denumit peplos sau nveli
extern. Peplosul poart pe suprafaa sa, subuniti proeminente (peplomere), denumite spicule, care sunt structuri
supramoleculare de glicoproteine virale.
Fig. 80. Tipuri morfologice de virioni.
Majoritatea virusurilor au o morfologie specific, conferit de modul de aezare a capsomerelor n capsid. Unele
virusuri au o capsid helical, ce const dintr-o nlnuire a moleculelor proteice (capsomere), ntr-o caten ce formeaz o
spiral n jurul acidului nucleic. Alte virusuri au o capsid poliedric. Cel mai comun poliedru este icozaedrul.
Virusurile nvelite au un aspect sferic, dei capsida lor poate fi icozaedric.
Capsida viral
Capsida este o structur proteic ce acoper genomul viral (capsa, grec = cutie). Cea mai mic unitate structural
a capsidei este capsomera. La rndul ei, capsomera este alctuit dintr-un lan polipeptidic (fiind i unitate biochimic)
sau dintr-un agregat de catene polipeptidice identice sau diferite. Capsomerele sunt cele mai mici uniti structurale
vizibile la microscopul electronic. In general, la virusurile cu simetrie helical, capsomerele sunt uniti morfologice ale
capsidei i n acelai timp sunt uniti de structur biochimic, fiind formate dintr-un singur polipeptid.
Fig. 81. Reprezentarea schematic a structurii virionului. A. Virion nud cu capsid helical. B. Virion acoperit de nveliul viral, cu
nucleocapsid tubular i simetrie helical. nveliul este format dintr-un dublu strat fosfolipidic, n care sunt inclavate proteine virale
sub form de spicule (peplomere). nveliul este tapetat la interior de o preotein de membran codificat de virus. C. Virion
icozaedric format dintr-o regiune centrala (core) n care se gasete genomul acoperit de capsida icozaedric. Cele dou componente
formeaza nucleocapsida. nveliul viral, prevzut cu spicule, acoper nucleocapsida.
La virusurile cu simetrie icozaedric, capsomerele sunt numai uniti morfologice, dar din punct de vedere
biochimic sunt oligomere. In alctuirea lor intr mai multe uniti biochimice: cele cu structur de penton conin 5
subuniti (pentamere), iar cele cu structur de hexon conin trei subunitai (trimere). Polipeptidele din structura
oligomerului pot fi identice sau diferite.
Inveliul extern
Inveliul extern sau peplosul (peplos, grec = manta) este o structur accesorie care acoper capsida unor virusuri.
Peplosul este dobndit n timpul maturrii virionilor prin procesul de nmugurire, care, n general are loc la suprafaa
celulei (herpesvirusurile se nvelesc prin nmugurire la nivelul membranei nucleare).
Peplosul viral ntrunete toate criteriile de structur trilaminar ale membranei celulei animale: stratul fosfolipidic
dublu, n care sunt inclavate proteine derivate din celul, precum i proteine codificate de virus. Fosfolipidele i proteinele
de origine celular sunt diferite n funcie de tipul de celul n care a avut loc multiplicarea viral. Cele mai multe
glicoproteine ale peplosului sunt codificate de genomul viral.
Glicoproteinele codificate de virusuri sunt constituienii universali ai peplosului, dar diversitatea lor biochimic
este foarte limitat (unul sau cteva tipuri pentru un virus). Greutatea molecular a glicoproteinelor este cuprins ntre l0
i l00 kDa, iar coninutul glucidic, ntre 5 i 40%. Aceste molecule sunt formate dintr-un ax polipeptidic, iar componenta
glucidic constituie catene laterale de N-acetilglucozamin, manoz, fucoz, acid neuraminic. Glicozilarea proteinelor
virale este catalizat de transferazele celulare.
Cele mai cunoscute glicoproteine virale sunt spiculele, inclavate n peplos. Spiculele sunt prelungiri proeminente
la suprafaa peplosului. Cele mai studiate sunt spiculele din nveliul mixovirusurilor, cu funcie de hemaglutinine i de
neuraminidaz. Originea lor este mixt: componenta proteic este codificat de virus, iar glicozilarea este catalizat de
enzimele celulare, n timp ce proteina parcurge drumul de la locul sintezei, pn la nivelul membranei.
Lipidele (sub forma glicolipidelor sau a fosfolipidelor) sunt ncorporate n nveliul viral n timpul nmuguririi din
membranele celulare. Inveliul viral are un coninut semnificativ mai nalt de colesterol, comparativ cu membrana
citoplasmatic.
Pentru majoritatea virusurilor nvelite (Herpes-, Toga-, Rhabdo-, Myxo, Oncornavirus), componentele moleculare
ale nveliului sunt ncorporate n membrane celulare preformate. La Pox- , Iridovirus i lipofagi, nveliul viral se
asambleaz ntr-un mod mai puin cunoscut.
Semnificaia biologic a capsidei i a nveliului extern. Capsida ndeplinete un rol protector esenial pentru
genomul viral, acoperindu-l integral i particip la procesele de adsorbie i fixare a virionului pe suprafaa celulei
sensibile.
Inveliul extern consolideaz funciile capsidei, protejeaz nucleocapsida i asigur o structur mai compact a
virionului. Spiculele proeminente pe suprafaa peplosului favorizeaz fazele de adsorbie i fixare a virionului n procesul
infecios.
Genomul viral. Organizare fizic
Genomul viral este alctuit dintr-o molecul de acid nucleic ADN sau ARN. Niciodat virionii nu conin ambele
tipuri de acizi nucleici. Virusurile al cror genom este alctuit dintr-o molecul de ADN aparin grupului
dezoxiribovirusuri, iar cele care au ca genom o molecul de ARN formeaz grupul larg al ribovirusurilor.
Unele virusuri, n diferite stadii ale ciclului de multiplicare, au alternativ, genom ADN sau ARN (retra-, hepadna,
caulimovirusuri).
Genomul viral poate avea o structur unitar sau informaia genetic este distribuit n mai multe segmente
genomice legate prin interaciuni specifice.
Moleculele de acid nucleic viral pot fi monocatenare sau dublu catenare, lineare sau circulare. Faptul c genomul
unor virusuri este format dintr-o singur caten de ADN s-a dedus din observaia c determinrile cantitative ale adeninei
nu sunt echivalente cu ale timinei, iar cantitatea de guanin nu este egal cu cea de citozin.
In funcie de structura molecular a materialului genetic, virusurile cu genom ADN se mpart n trei clase:
- virusuri cu genom dublu catenar, linear (adeno, herpes etc.);
- virusuri cu genom dublu catenar, circular (papova);
- virusuri cu genom monocatenar, linear (parvovirusuri).
Toate genomurile ADN lineare, mono- sau dublu catenare au secvene repetate invers, fie la extremiti (adeno-),
fie att la extremiti, ct i n interior.
Moleculele genomice monocatenare, lineare(parvovirusuri) sau circulare (fagul fi x 174), au o tendin foarte
accentuat de a se plia, formnd bucle dublu catenare n ac de pr, ori de cte ori secvenele de baze permit formarea unui
numr semnificativ de perechi, reunite prin intermediul punilor de H. Circa jumtate din bazele de ADN monocatenar
sunt legate prin puni de H, astfel nct molecula este foarte compact. Odat cu formarea parial a unei catene duble,
molecula se pliaz. Starea pliat este favorabil unei mpachetri optime, deoarece permite o stivuire mai eficient a
suprafeelor hidrofobe ale bazelor.
Genomul viral dublu catenar, din punct de vedere topologic (al configuraiei spaiale) poate fi linear cu
extremiti libere (adeno, herpes) sau cu extremitile legate covalent prin puni fosfodiesterice (poxvirusuri), circular
nchis (papovavirusuri), cu diferite grade de supraspiralizare i corespunztor, cu un grad mai mare sau mai mic de
condensare.
La fagul , genomul este dublu catenar linear, cu cozi monocatenare complementare adezive la cele dou capete
5(sticky ends).
Genomul viral are sarcin net negativ (este policationic) i este asociat cu dou tipuri de molecule care
favorizeaz plierea (condensarea) i mpachetarea: poliamine (oligocationice) i proteine(policationice). Dintre poliamine,
spermina i spermidina s-au identificat n virionii mixo-, herpes-, adeno-, poxvirusurilor, iar la fagul T 4 - putrescina i
spermidina. Efectul de mpachetare este favorizat de legturile ionice ntre gruprile cationice ale poliaminelor i
proteinelor i de gruprile polianionice ale acizilor nucleici.
Proteinele asociate genomului sunt bazice de tipul protaminelor i histonelor i sunt cunoscute sub denumirea
generic de nucleoproteine. Unele proteine asociate genomului sunt ARN-polimeraze.
La unele virusuri ADN, la captul 5 al fiecrei catene este asociat o protein, care-i confer stabilitate, dar are i
rol n iniierea replicrii genomului. Genomul viral i proteinele asociate formeaz regiunea central, electrono-dens a
virionului.
In mediul celular, dup ce genomul viral este eliberat, poliaminele induc modificri conformaionale ale moleculei
genomice: relaxeaz i extind catenele genomice, favoriznd procesele de replicare i transcriere n celula infectat.
Majoritatea virusurilor infecioase pentru om i animale au ca genom o molecul de ARN

monocatenar. Numai membrii familiei Reoviridae au ca genom o molecul de ARN dublu
catenar. Peste 90% dintre virusurile infecioase pentru plante, aparin ribovirusurilor, genomul
lor fiind alctuit dintr-o molecul ARN mono- sau dublu catenar.
Dimensiunile genomului ribovirusurilor sunt relativ uniforme, variaiile fiind n limita a 30 de ori: genomul
virusului hepatitei delta are gr. mol. de 500 kDa (l678 nucleotide). Este cel mai mic genom viral i n ciclul multiplicrii
este dependent de virusul hepatitei B. Cel mai mare genom ARN este acela al reovirusurilor (l5000 kDa).
Genomul dezoxiribovirusurilor are o scar de variaie dimensional mai larg, de la 1 la l85. Cel mai mic genom
este al virusului hepatitei B (l000 kDa* 3 200 nucleotide), iar cel mai mare este al unui avipoxvirus (l85 000 kDa).
Uneori, virionii unui preparat prezint variaii ale cantitii de ARN genomic. De exemplu, la paramixovirusuri,
un virion poate s conin mai multe copii ale genomului viral. Alteori, particulele virale pot fi goale(lipsite de genom),
sau includ numai un fragment de genom. Din genom lipsesc diferite secvene genice, uneori chiar cele care condiioneaz
multiplicarea viral. Acetia sunt virioni defectivi i n ciclul multiplicrii sunt dependeni de prezena n celul, a unor
virusuri helper(ajuttoare), care suplinesc defectele genetice ale virionilor defectivi.
*
Un Dalton este egal cu masa atomului de hidrogen, adic 1,672649 x 10-24 g. 1 kDa =1 000 D.
Genomuri virale ARN segmentate (divizate, multipartite)

Unele ribovirusuri, infecioase pentru organismul animal, precum i altele infecioase pentru plante au genomul
alctuit din mai multe segmente. Ribovirusurile cu genom segmentat, infecioase pentru om i animale (virusurile gripale,
reo- i arenavirusurile) se caracterizeaz prin faptul ca toate segmentele genomului sunt ncorporate ntr-o capsid
comun.
Virusurile gripale au genomul alctuit din 8 i respectiv 7 segmente de ARN monocatenar. La Arenaviridae,
genomul este format din dou segmente inegale (L = Large = 2 x l06 D i S = Small = l06 D). La reovirusuri, genomul are
caracter de unicitate, fiind format din l0 segmente de ARN dublu catenare. La toate cele trei familii de virusuri,
segmentele de ARN sunt distincte, adic se deosebesc prin secvena nucleotidelor i nu provin prin fragmentarea unei
molecule mari. Dovada caracterului lor distinct este c moleculele nu hibrideaz unele cu altele, fiecare fiind transcris n
ARNm specific i codific sinteza unei proteine.
Ribovirusurile cu genom segmentat, infecioase pentru plante (Tobra-, Bromo-, Como-, Nepo-, Cucumovirus) au o
particularitate distinct: segmentele genomului lor nu sunt ncorporate n aceiai capsid viral, ci sunt distribuite
individual n capside separate. Pentru desfurarea ciclului de multiplicare viral este necesar infecia simultan cu toate
particulele virale care constituie complementul genomic. Virusul mozaicului lucernei (alfalfavirus) are genomul alctuit
din 5 segmente, repartizate n 4 tipuri de virioni: trei au form de bastona, fiecare avnd cte o molecul de ARN, iar al
IV-lea, de form elipsoidal conine dou segmente de ARN.
Genomul segmentat pare a fi avantajos, deoarece mesajele genetice mai mici sunt mai uor replicate i transmise
n celula eucariot animal sau vegetal. Pentru virusurile cu genom segmentat repartizat n mai multe capside, faptul pare
dezavantajos pentru iniierea replicrii, dependent de toate segmentele genomice ncapsidate separat, dar n realitate, n
procesul infecios se elibereaz cantiti imense de particule virale, care asigur ansa transmiterii tuturor particulelor ce
conin un complement genomic.
Modaliti particulare de codificare a informaiei genetice la virusuri
Virusurile prezint o diversitate proprie de sisteme genetice, nentlnit la sistemele celulare (bacterii, fungi plante
i animale, luate la un loc). Diversitatea genetic a virusurilor este consecina succesului lor de a parazita toate grupele
cunoscute de organisme.
Raportul dintre gr. mol. a genomului i a produsului de sintez este de circa l0/l pentru genomul monocatenar i
20/l pentru cel dublu catenar. Valoarea foarte mic a acestui raport se datoreaz existenei unor mecanisme moleculare
care permit utilizarea cu maxim eficien a informaiei genetice coninut n genom.
Genomul de dimensiuni mici prezint avantajul de a fi transcris i tradus mai rapid i mai fidel.
Datorit dimensiunilor mici ale genomului lor, virusurile fac economie de informaie genetic, utiliznd mai multe
strategii de codificare. Noiunea de strategie semnific modalitile de organizare i funcionare a informaiei genetice
care permit utilizarea informaiei genetice cu randament optim.
l. Virusurile codific sinteza unei varieti foarte limitate de proteine. Capsida este format din molecule proteice de
acelai tip, sau dintr-un numr mic de tipuri de proteine diferite, la care se adaug alte cteva tipuri de proteine asociate
genomului. Asociate peplosului, se gsete un numr restrns de glicoproteine.
2. Pentru realizarea unor funcii proprii, unele virusuri utilizeaz molecule ce aparin total sau parial celulei gazd: de
exemplu, enzima de replicare (ARN-polimeraza) a fagului Q-beta (un fag ARN) este alctuit din 4 subuniti
polipeptidice, dintre care una este codificat de virus, iar celelalte trei aparin celulei.
3. Unele polipeptide virale ndeplinesc funcii multiple, avnd att rol structural (adic sunt proteine care intr n
alctuirea virionului) ct i rol reglator.
4. In ciclul de multiplicare, unele virusuri utilizeaz informaia genetic a virusurilor helper. Virusurile helper
suplinesc anumite deficiene funcional-replicative ale virusului defectiv. Virusurile defective nu se pot replica pn la
stadiul de virus matur, deoarece le lipsesc genele codificatoare ale proteinelor structurale sau genele reglatoare ale
morfogenezei. De exemplu, adenovirusurile au funcia de helper pentru replicarea unor parvovirusuri (Adeno-AssociatedViruses AAV), iar virusul hepatitei B are rol helper pentru replicarea virusului delta.
5.Virusurile utilizeaz mai multe modaliti de transmitere a informaiei genetice de la genom la proteine, prin
intermediul ARNm. Ele depesc condiiile restrictive ale cantitii limitate de informaie genetic, impus de
dimensiunile reduse ale capsidei, prin existena genelor suprapuse. Suprapunerea genic semnific faptul c o secven de
ADN poate s codifice mai mult dect o protein. Fenomenul suprapunerii se realizeaz pe dou ci:
1) ndirea acelorai secvene codificatoare ale moleculei de ARNm n succesiuni diferite. La virusurile
infecioase pentru animale, informaia genetic are caracter discontinuu, aa cum este i a celulelor.
Fenomenul de ndire (splicing) a secvenelor informaionale neadiacente de acid nucleic s-a identificat iniial la
adenovirusuri* (Berget, 1977), dar acum este recunoscut ca fiind universal i are loc fie n timpul sintezei ARNm sau, n
genomul eucariot, ca rezultat al rearanjrii genelor prin fenomene de transpoziie n timpul diferenierii celulare.
*
n celulele infectate cu adenovirusuri, moleculele de ARN care hibrideaz cu ADN viral sunt heterogene ca dimensiuni : aceleai
sonde de ADN hibrideaz cu molecule lungi i cu molecule scurte de ARN. S-a dedus astfel, c genomul viral este transcris n
molecule lungi, clivate ulterior n fragmente mai mici i reunite n molecule de ARNm de lungimi diferite (clivare-jonciune = sudare).
S-a precizat pentru prima dat c gena este discontinu: are fragmente necodificatoare care alterneaz cu cele codificatoare. Apoi s-a
constatat c discontinuitatea este o caracteristic general a genelor celulei eucariote.
Genele adenovirale introno-exonice sunt transcrise de ARN-pol II n precursori ARNm. Precursorii sunt supui proceselor de
prelucrare i maturare, n care secvenele intronice sunt eliminate i degradate. Clivajul are loc totdeauna la aceleai secvene semnal,
dar jonciunea reunete un numr variabil de secvene codificatoare i n succesiune alternativ, astfel nct o gen (E1A) codific cel
puin 8 proteine diferite.
ARNm este rezultatul unui proces de prelucrare a copiei primare (ARN premesager), ce const n eliminarea
intronilor* i ndirea exonilor. La virusuri, exonii sunt asamblai n succesiuni diferite n molecula de ARNm, ceea ce
diversific gama proteinelor codificate de o secven de ADN. Secvenele intronilor nu se gsesc n ARNm matur.
*
Sunt dou posibiliti de eliminare a intronilor:

- intronii nu sunt transcrii, deoarece ARN-polimeraza sare de la un exon la altul i ignor intronii
- intronii sunt transcrii i rezult o copie primar (ARN-premesager), care e clivat pentru eliminarea intronilor, iar exonii sunt
ndii. Procesul secionrii intronilor i ndirea exonilor este rezultatul aciunii unui aparat enzimatic, denumit spliceosom, care
recunoate secvena GU-intron-AG exon. Secvenele GU-AG care delimiteaz intronul marcheaz situsurile de clivare. Semnalul este
ns mai complex, deoarece aceste secvene apar cu o frecven prea mare pentru a constitui singure semnalul clivrii.
Unele molecule de ARN mesager se ndesc singure. Moleculele de ARN au activitate ribozimic i intronii se elimin fr
intervenia aparatului enzimatic al spliceosomului. Reacia nu este pur enzimatic, deoarece ARN nsui se modific. Se consider c o
enzim adevrat rmne nemodificat la sfritul reaciei.
Echipamentul enzimatic care catalizeaz prelucrarea ARNm prin clivare i ndire este localizat n nucleu i n
consecin, mecanismul ndirii genice poate fi activ numai la virusurile care au o faz nuclear a ciclului de replicare
(adeno, herpes, papova, influenza).
2) Iniierea traducerii mesajului la dou sau chiar trei situsuri diferite. Unele virusuri schimb cadrul de citire a
informaiei n timpul traducerii (frame shifting), iniiind sinteza proteic la noi situsuri de traducere a ARNm (open
reading frames ORF). Prin iniierea traducerii mesajului la dou sau chiar trei situsuri diferite, aceiai secven de
nucleotide este tradus n dou sau trei proteine distincte.
Ribosomii au capacitatea intrinsec de a schimba cadrul de citire n timpul traducerii mesajului, pe care unele
virusuri o exploateaz pentru a diversifica setul de proteine pe care le sintetizeaz. S-a sugerat c subunitatea 40S a
primului ribosom angajat n traducerea ARNm se fixeaz la primul codon de iniiere a traducerii (AUG). Restul
ribosomilor alunec pe molecula de ARNm, pn la urmtoarea triplet de iniiere AUG, de unde rencepe traducerea
mesajului. De exemplu, n timpul traducerii mesajului pentru proteina gag a virusului sarcomului Rous, 5% din ribosomi
i schimb cadrul de citire pentru a sintetiza proteina gag-pol. Secvene specifice ale ARNm viral favorizeaz alunecarea
ribosomilor, astfel nct se sintetizeaz i mici cantiti de revers-transcriptaz (RT).
In ciuda diversitii strategiilor funcionale ale genomului viral, universalitatea codului genetic nu este nclcat,
dei anumii codoni pot avea o frecven superioar.
Gene neeseniale. Calificativul de gen neesenial a genomului viral este complicat de faptul c un produs
genic poate fi esenial n anumite condiii de mediu celular i nesemnificativ n altele. De exemplu, gena Tk de HSV 1 nu
este esenial pentru replicarea virusului n celule care cresc i se divid cu o rat crescut, dar este esenial pentru
replicarea genomului n celulele care nu se divid (neuroni).
Gena Tk permite ca timidina exogen s fie ncorporat n ADN. Dependena virusului de produsul genei proprii
depinde de nivelul activitii enzimei n celula gazd.
Un alt exemplu al unei gene neeseniale este gena codificatoare a glicoproteinei E 3 (de la adenovirusuri). Gena
poate fi inactivat prin mutaie i ciclul de multiplicare viral nu este modificat. Virusul mutant, in vivo, este mai puin
virulent dect virusul de tip slbatic, iar leziunile tisulare sunt diminuate.
Glicoproteina E3 este activ la nivelul la nivelul reticulului endoplasmic i stopeaz maturarea moleculelor CMH I
pe suprafaa celulei infectate, astfel nct celulele Tc nu rspund eficient fa de celulele infectate cu virusul de tip
slbatic. Se formeaz mai mult virus progen, iar patologia tisular este mai ampl.
Importana geneticii virale. Studiile de genetic viral au adus o contribuie de o valoare deosebit la definirea
unor noiuni fundamentale. Analiza modului n care este codificat i transmis informaia genetic, la virusurile
infecioase pentru celula animal a dat o definiie mai flexibil noiunii de gen, ca rezultat al descoperirii c aceiai
secven de ADN sau ARN poate s specifice (s codifice) mai mult dect un produs genic. Conceptul vechi, o gen = o
enzim a fost nlocuit cu definiia mai corect, o gen codific mai multe polipeptide. Datorit suprapunerii genice,
fenomen descoperit la virusuri, genomul nu mai poate fi considerat ca o succesiune linear de uniti codificatoare
independente.
Descoperirea caracterului discontinuu al informaiei genetice este de asemenea, rezultatul studiului genetic al
virusurilor infecioase pentru celula uman i animal.
Una din marile contribuii ale virologiei animale la dezvoltarea stiinelor biologice n general i a biologiei
moleculare n special, a fost descoperirea i caracterizarea enzimei revers-transcriptaz a retravirusurilor. Pentru prima
dat a devenit evident ca transferul informaiei genetice n sistemele biologice nu se face exclusiv pe filiera ADN --ARN --- proteine, ci n anumite situaii, informaia genetic poate fi transmis n sensul ARN --- ADN --- ARN ---proteine. A fost astfel completat axioma central a biologiei moleculare, care susinea transmiterea unidirecional a
informaiei genetice.
Pe de alt parte, enzima revers-transcriptaz a devenit unul dintre instrumentele foarte importante ale
biotehnologiilor bazate pe clonare i secveniere. S-a lrgit cadrul de aplicare a metodologiei ingineriei genice. A devenit
posibil propagarea copiilor ADN ale genomului viral ARN, precum i a copiilor ADN obinute prin reverstranscrierea
ARNm celular.
Semnificaia biologic a genomului viral. Informaia genetic viral conine determinani genetici care asigur
desfurarea ciclului de multiplicare, n celula gazd sensibil: replicarea genomului, informaia genetic necesar devierii
metabolismului celulei gazd, n sensul sintezei componentelor virale, genele pentru sinteza proteinelor structurale i
reglatoare, precum i genele care asigur asamblarea i eliberarea virionilor progeni din celula gazd.
Genomul viral condiioneaz patogenitatea i virulena viral i asigur potenialul de variabilitate a virusurilor.
Variabilitatea este o proprietate esenial pentru propagarea virusurilor n natur. Astfel, spiculele de hemaglutinin ale
virusului gripal prezint o variaie biochimic de la un sezon la altul, iar spiculele virusului imunodeficienei umane
(HIV), cu rolul de a fixa virionul pe receptorii membranari ai limfocitului TCD 4 au tendina spre o variaie biochimic
accentuat.
Definirea conceptului modern de virus
Noiunea de virus a fost definit n cadrul conceptual actual de ctre A. Lwoff, pe baza stabilirii unor deosebiri
distincte ntre virus i nevirus. Ca o consecin a unui mare numr de caractere discriminatorii fa de sfera viului
(care semnific existena unor deosebiri absolute) pe care le posed n comun, s-a conchis ca virusurile formeaz un grup
particular de ageni infecioi, reunii ntr-o categorie unic, distinct de lumea vie, fa de care asemnrile i afinitile
sunt minime, iar diferenele i deosebirile sunt fundamentale.
In tabelul urmtor sunt redate caracterele discriminatorii dintre virusuri i bacterii.
Caractere
Unitatea
structural
Strile posibile
de existen
Structura intern
Virusuri
Virionul
Bacterii
Celula bacterian
Virionul sau virusul infecios matur

(particula viral infecioas).
Virus vegetativ, adic genomul viral liber n celula
infectat, care poate fi replicat.
Provirus, sau genomul viral integrat n
cromosomul celulei gazd.
Genomul viral i capsida, structuri eseniale i
obligatorii, formeaz mpreun nucleocapsida.
Celula bacterian (forma vegetativ),

capabil de diviziune.
Sporul bacterian (forma facultativ de
difereniere).
Relativ complex (structuri eseniale i
accesorii): perete celular, membrana
Inveliul
extern
(peplosul),
cu
spicule
hemaglutinante este o structur caracteristic
numai virusurilor nvelite.
Constant, de tip helical, icozaedric sau binar
(mixt).
ADN sau ARN, niciodat ambii, cu localizare
exclusiv n genomul viral
Simetria la
nivel molecular
Acizi nucleici
Proteine
Numr fix de molecule de acelai tip (identice) sau

aparinnd unui numr mic de tipuri diferite.
Proteinele virale au rol structural (intr n
alctuirea capsidei) i uneori au rol enzimatic (sunt
proteine de replicare a genomului).
De regul sunt absente. Se gsesc n peplosul viral
sub forma glicoproteinelor i sinteza lor este
catalizat de glicozil-transferazele celulare.
De regul sunt absente. Se gsesc n peplos i
provin din membrana celular la nivelul creia are
loc nvelirea virionului.
Glucide
Lipide
Echipamentul
enzimatic
biosintez i
catabolism
plasmatic,
citoplasm,
nucleoid,
ribosomi, vacuole, incluzii, spor, aparat
fotosintetic, capsul, flageli, pili, fimbrii.
Absent
ADN, n cromosom i plasmide.
ARN, ca ARNm, ARNt i ARNr, n
citoplasm.
Numr mare de molecule, ce aparin la 2-3
000 de tipuri diferite, cu rol structural i
funcional.
Prezente n mod constant
Prezente constant
Absent. Uneori virionul conine enzime cu rol de

replicare sau enzime care favorizeaz ptrunderea
virionului sau eliberarea sa din celul. Lipsesc
enzimele de biosintez sau cele productoare de
energie.
Prezent constant
Capacitatea
de
sintez
a
moleculelor
cu
potenial energetic
ridicat
Capacitatea
de
sintez independent
a
constituienilor
chimici
Capacitatea
de
cretere
Capacitatea
de
diviziune
Absent
Prezent constant
Absent
Prezent
Absent
Prezent constant
Absent
Prezent constant
Dependena
de
substratul viu pentru
multiplicare
Se multiplic exclusiv n substratul celular viu,

pornind uneori numai de la genom, iar alteori de la
genom i de la enzimele de replicare
Multiplicarea
celor
parazite
este
independent de substratul viu, cu
excepia rickettsiilor i chlamidiilor
i
pornete totdeauna de la ansamblul
integrat al constituienilor celulari, chiar
pentru cele dependente de substratul viu.
de
de
Utilizarea sistemelor
structurale
i
biochimice
ale
gazdei n cursul
parazitismului
intracelular:
-sistemul enzimatic
Lipmann*
-ARNt
ribosomii
Parazitism absolut
Totdeauna
Constant
Bacteriile parazite niciodat
Absent
Tipul de organizare
Acelular
Celular
Sistemul enzimatic Lipmann cuprinde enzimele care convertesc energia potenial a moleculelor, n energie util; enzimele care
catalizeaz sinteza proteic (cu participarea ribosomilor i a ARNt); componentele catenei de respiraie celular.
Caracterele enumerate n tabel relev cteva particulariti structurale i funcionale cu totul speciale, proprii
exclusiv virusurilor. Conceptul de virus, definit pe baza nsumrii unui numr mare de criterii discriminatorii fa de
celula bacterian, reflect o total lips de concordan i absena oricrei afiniti structurale i funcionale ntre virusuri
i sistemul biologic n forma sa cea mai simpl celula bacterian.
Natura virusurilor
Virusurile sunt entiti infecioase complexe i organizate, deoarece conin dou componente eseniale: una
genetic (acidul nucleic) i una proteic. Uneori, proteinele nu sunt eseniale pentru exprimarea proprietilor sistemului,
pentru c acidul nucleic n stare pur este infecios. Caracterul nalt organizat al virionului rezult din faptul c relaiile
spaiale dintre genom i capsid sunt definite i constante i deriv din simetria la nivel molecular.
Virionii nu au echipament enzimatic propriu, productor de energie. Uneori, virionul conine enzime de replicare
a genomului. Consecina este c virionul nu are metabolism, nu crete i nu se divide. Virusurile realizeaz complexe
biologice numai n contextul procesului infecios n celula sensibil. In afara relaiilor cu celula gazd, virionul matur este
o entitate inert. Deoarece nu au metabolism propriu, virusurile nu se multiplic, ci sunt multiplicate de celul, pornind
numai de la genomul viral i nu de la ansamblul constituienilor structurali. Infecia viral este rezultatul ptrunderii n
celul, a virionului sau numai a acidului nucleic viral. Pentru sinteza componentelor virale este utilizat aparatul structural
i enzimatic al celulei infectate (ribosomii i enzimele catalizatoare). Instruciunile programului genetic viral sunt
executate numai n celula vie.
Starea de dependen total a replicrii virale de substratul celular viu, corespunde relaiei de parazitism absolut,
fundamental distinct de cea a parazitismului obligat, caracteristic unor microorganisme patogene (Treponema, Rickettsia,
Chlamydia etc.). Aceste bacterii preiau substanele nutritive din celula gazd, au propriul aparat de sintez a
macromoleculelor componente, i pstreaz totdeauna integritatea structural. Diviziunea lor are loc pornind de la
ansamblul integrat al structurilor celulare.
In contrast, multiplicarea viral necesit, n esen, numai genomul viral, toate celelalte componente necesare
multiplicrii fiind de origine celular.
In acord cu concepia veche, virusurile sunt organisme primitive - contagium, vivum, fluidum aa cum le-a
definit Beijerinck n l897). Concepia a dinuit datorit prezenei n structura virusurilor, a dou componente definitorii
pentru lumea vie acizii nucleici i proteinele. Dar proprietile particulare ale sistemelor biologice nu sunt date de
moleculele componente, ci de nivelurile superioare de integrare funcional a componentelor structurale.
Dificultatea major a ncadrrii virusurilor n categoria sistemelor vii sau nevii, decurge din faptul c, n prezent
nu exist o definiie unanim acceptat a vieii. Definiiile se reduc la o enumerare a proprietilor observabile ale unui
organism, dar multe din aceste proprieti se ntlnesc i la formele de organizare ale materiei neanimate. Szent-Gyorgyi
consider c viaa este o calitate a unor sisteme fizice, o expresie a interaciunilor dintre structurile care alctuiesc
sistemul, dar este greu de definit.
In sprijinul concepiei apartenenei virusurilor la lumea vie, a fost invocat procesul multiplicrii lor, considerat ca
fiind analog multiplicrii celulelor bacteriene. Studiile ulterioare de biologie molecular, au evideniat diferenierea net,
de fond, ntre multiplicarea viral i multiplicarea bacterian: virusurile se multiplic ntr-un substrat celular viu, pornind
exclusiv de la genomul viral, dup modelul furnizat de informaia genetic nscris n genom.
Dintre marii virologi, foarte puini susin ca virusurile sunt vii. Luria (l973) le consider vii, pornind de la un
punct de vedere foarte original de a defini sistemele biologice: el consider c un sistem biologic (care are calitatea de
viu) este o entitate care, dup ce a fost izolat i pstreaz o configuraie specific i prin aceasta, posibilitatea de a fi
reintegrat n circuitul materiei vii. Din acest punct de vedere, virusul este un organism ntr-o msur mai mare chiar dect
o celul din organismul unui metazoar.
Viaa reprezint capacitatea de a reproduce un anumit tip de organizare specific i independent: dup Luria, o
molecul de ADN, in vitro, este vie, pentru c i pstreaz configuraia, are o structur i o organizare proprie, un anumit
grad de autonomie.
Cei mai muli autori consider c ncadrarea virusurilor n lumea vie este imposibil, artificial sau forat.
In evoluie, viul ncepe numai dup constituirea unui program genetic, dar proprietatea fundamental a viului este
capacitatea de autoreproducere.
Virusurile posed anumite proprieti ale sistemelor vii: au un program genetic, se disemineaz, sunt sensibile la
aciunea factorilor de mediu, dar sunt lipsite de autonomie, adic de capacitatea de a se manifesta ca sisteme biologice
de sine stttoare. Lipsa de autonomie le plaseaz n afara sferei viului. Virusurile nu se reproduc ca sisteme autonome,
ci sunt multiplicate numai de sistemele celulare.
Rich A. (l980) caracterizeaz sistemele vii, n funcie de fluxul diferitelor elemente i procese pe care le
desfoar. Sistemele biologice realizeaz un flux triplu: de energie, de materie i de informaie, care coordoneaz
multitudinea reaciilor chimice. Virusurile sunt sisteme informaionale. Prin programul genetic, virusurile interacioneaz
cu sistemele vii, fac schimb de informaie genetic, dar virionul matur n afara celulei este inert.
Dup F. Jacob (l970), distincia dintre viu i neviu, o constituie raportul celor dou categorii de sisteme cu
timpul.
Organismele sunt indisolubil legate de timpul istoric, n sensul c sunt rezultatul unui proces istoric evolutiv. Nici
una dintre structurile lor nu poate fi detaat de contextul istoric. Virusurile au un timp istoric al evoluiei proprii, legat
intrinsec de gazdele celulare, conserv experiena trecutului i o transmit, ntocmai ca i fiinele vii. Probabil c la origini
au ntrunit mai multe caracteristici ale viului, pe care le-au pierdut de-a lungul evoluiei. Corpurile nevii nu depind de
timpul istoric.
Dup Crick (l966), un sistem biologic trebuie s ndeplineasc trei condiii minimale: l)s aib capacitatea de
cretere; 2)s aib metabolism (s fac sinteze moleculare i s produc energie); 3)s se autoreproduc. El consider c
ncadrarea virusurilor n sistemele vii, nseamn a extinde proprietile lor dincolo de anumite limite. Virusul n afara
relaiei sale cu substratul celular nu este viu, dar sistemul virus-celul are toate proprietile sistemului biologic.
Monod (l97l) consider c sistemele biologice sunt singurele din univers, dotate cu urmtoarele patru proprieti
definitorii eseniale: l)morfogeneza autonom (proprietatea de a se construi ele nile); 2)emergena (proprietatea de
reproducere); 3)reproducerea la nivel molecular, cu caracter predominant nevarietar; 4)teleonomia (proprietatea de a avea
o structur i o organizare adaptate supravieuirii individului i speciei). Virusurile nu ndeplinesc aceste criterii.
Pentru A. Lwoff (l98l), organismul viu este un sistem ordonat i integrat, de structuri i funcii interdependente,
capabil de metabolism, cretere i reproducere. Ceea ce determin complexitatea unui organism superior organizat, n
raport cu un virus nu este complexitatea superioar a moleculelor sale, ci gradul mai nalt de organizare i integrare a
acestor molecule.
Insumnd aceste criterii, uneori complementare, prin care sunt definite sistemele biologice, concluzia este c
unitatea fundamental (ce rspunde acestor criterii), care st la baza organizrii tuturor sistemelor biologice este celula.
Dintre toate celulele cunoscute, bacteria reprezint cea mai simpl unitate de integrare i reproducere, care
reunete calitile de organizare, autonomie i invarian, prin care se caracterizeaz sistemele vii. Celula bacterian
constituie un minim vital, situat la frontiera lumii vii. Nivelul inferior celulei bacteriene se definete n termeni de chimie
i de fizic, iar sistemele superioare, n termeni de organizare (F. Jacob, l970).
Pentru c virusurile nu sunt nici organisme, nici celule, ele nu sunt fiine vii. Virusurile sunt virusuri pentru ca virusurile sunt
virusuri (A. Lwoff. 1962, l98l).
Simetria virusurilor
Simetria este definit de aranjarea ordonat i repetat ntr-un ansamblu, a subunitilor sale identice ca form i
mrime, dispuse n jurul unui plan sau al unui ax.
Mult timp dup descoperirea virusurilor i dup acceptarea naturii lor nucleoproteice s-a considerat ca genomul
este acoperit de o molecul proteic uria. Intr-o capsid de dimensiuni medii, intr circa 330 000 de aminoacizi. Dac
fiecare aminoacid este codificat de trei baze, pentru edificarea structurii capsidei ar fi necesar un genom care s cuprind
circa un milion de nucleotide. Dar nici cele mai mari virusuri nu au un genom de asemenea dimensiuni. In cursul sintezei
unei molecule proteice att de mari, ar crete mult ansa ncorporrii greite a aminoacizilor, astfel nct moleculele
proteice ar fi inutilizabile pentru morfogeneza viral. Ineficiena asamblrii ar fi un dezavantaj incompatibil cu cu
perpetuarea virusurilor n natur.
Watson i Crick (l956) au adus dovada c genomul viral, datorit dimensiunilor sale reduse nu poate codifica
sinteza unei molecule mari * i nici sinteza unui numr mare de proteine diferite. Ei au presupus c n alctuirea capsidei
intr un numr mare de molecule identice, dispuse dup o arhitectur riguros simetric. Ipoteza a fost verificat prin
metode biochimice, de analiz a gr. mol. a proteinelor capsidale i a compoziiei lor n aminoacizi.
*
Avantajele folosirii subunitilor mici pentru a construi structuri complexe sunt multiple:
reduce cantitatea de informaie genetic necesar;
asamblarea i dezasamblarea pot fi uor controlate, deoarece subunitile se asociaz prin legturi multiple cu nivel energetic
sczut;
- erorile n sinteza structurii sunt mai uor evitate, deoarece mecanismele de corecie pot opera n cursul asamblrii pentru a
exclude subunitile malformate.
In natur exist exemple de structuri cu simetrie molecular: toate cristalele au moleculele componente aezate
simetric. Ele au inspirat pe autorii modelului aezrii simetrice a moleculelor capsidei virale.
In structura molecular a capsidei intr un numr fix de molecule proteice de acelai tip, sau un numr limitat de
tipuri diferite, dispuse obligatoriu ntr-o aranjare simetric. Ca i n structura cristalelor, ele au o aranjare perfect ordonat.
Watson i Crick au dedus c dintre toate tipurile de simetrie cunoscute, numai simetria helical i cea cubic,
permit mpachetarea ordonat a subunitilor componente, realiznd simultan i condiia obligatorie a identitii ambianei
lor chimice. La baza simetriei moleculare a cristalografiei geometrice st principiul echivalenei. Conform acestui
principiu, oricare din componentele unei structuri cu organizare simetric, trebuie s se afle n ambiana unor componente
echivalente. Deoarece elementele de construcie ale capsidei virale (capsomerele), uneori nu sunt perfect identice (unele
sunt trimere, altele sunt pentamere), iar pe alt parte, moleculele mari sunt uor deformabile, principiul echivalenei este
nclcat i se aplic principiul cvasiechivalenei.
S-au descris trei tipuri de simetrie viral:
- simetria helical (la virusul mozaicului tutunului, la mixovirusuri, paramixo-, rhabdovirusuri etc.);
- simetria icozaedric (la polio-, adeno-, herpesvirusuri);
- simetria mixt, la fagii din seria T par (capul are simetrie icozaedric, iar coada are simetrie helical).
Simetria helical
Simetria helical este definit de aezarea unitilor componente n jurul unui ax, care este supus, concomitent,
unei micri de rotaie i unei micri de translaie, paralel cu acelai ax (micarea este similar unui urub).
Capsomerele sunt aezate n mod repetat, avnd poziii rezultate din cele dou tipuri de micare simultan n jurul axului
i paralel cu acesta, astfel nct definesc o suprafa cilindric, cu o structur helical (fig. 82).
Unele virusuri au nucleocapside helicale flexibile, ceea ce le permite s dobndeasc o form sferic
(izodiametric, dup ce sunt nvelite de peplos, sau o form linear flexuoas, dac sunt nude (de exemplu, unii
bacteriofagi). Cele cu nucleocapsid rigid au form cilindric.
Dintre virusurile cu simetrie helical, cu nucleocapsid rigid, cel mai cunoscut este VMT. Diametrul extern al
cilindrului este de l8 nm, iar cel intern, de 4 nm. Lungimea cilindrului este de 300 nm. Capsida este alctuit din 2130
capsomere identice, formate la rndul lor dintr-o singur unitate proteic (sunt capsomere monomere), cu gr. mol. de l7,5
kDa, fiecare protein avnd l58 aminoacizi, a cror secven este cunoscut. Genomul su este o molecul de ARN
monocatenar, linear, cu gr. mol. de 2 x l0 6 D, aezat n zona central a virionului, inclavat ntre capsomere. Configuraia
spaial a genomului este o spiral cu diametrul de 8 nm (mai mare dect diametrul intern al cilindrului). Din aceast
cauz, spirele de ARN genomic se inclaveaz i se inser printre moleculele proteice capsidale, deoarece acestea sunt
deformabile, nefiind corpuri geometrice perfecte. Fiecare capsomer are raporturi spaiale cu trei nucleotide. Fiecare tur
de helice a ARN conine 49 de nucleotide, care se gsesc n raporturi spaiale cu l6,3 molecule proteice, aezate helical.
Unele virusuri nude, cu simetrie helical au aspectul unor filamente flexibile i o structur tubular mai lax (fagii
filamentoi). O serie de virusuri infecioase pentru om i animale prezint o nucleocapsid cu un grad foarte accentuat de
flexibilitate, astfel nct virionul ia forma sferic. Faptul se explic prin flexibilitatea individual a fiecrei capsomere,
evideniat la paramixovirusuri. Cele mai reprezentative virusuri cu capsid helical flexibil aparin familiilor
Orthomyxo, Paramyxo- i Rhabdoviridae.
Fig. 82. Reprezentarea schematic a unei poriuni din virionul de VMT.
Simetria icozaedric
Virusurile cu simetrie icozaedric au fost considerate ca avnd o form sferic (izodiametric), deoarece pe
imaginile electrono-optice, la o mrime moderat, aspectul lor este sferic. In realitate, aceste virusuri au un contur
hexagonal, datorit capsidei lor poliedrice, cu un nalt grad de organizare, constituit din capsomere aezate dup o
simetrie riguroas.
Virionii cu simetrie icozaedric, n aparen de form sferic, sunt constituii din capsomere asimetrice
(neidentice), aezate n jurul axelor de simetrie.
Spre deosebire de VMT, la care unitatea proteic este n acelai timp i unitate de structur, la virusurile cu
simetrie icozaedric, unitile morfologice vizibile la microscopul electronic (capsomerele) sunt alctuite din cteva (3-5)
subuniti proteice. Ca urmare, ambiana fiecrei subuniti i legturile cu vecinele sale nu sunt perfect identice, ci
aproximativ echivalente sau cvasiechivalente (Caspar i Klug, l962).
Conturul hexagonal foarte regulat al virusurilor sferice, aa cum apare la microscopul electronic la mriri nalte
sugereaz ideia c forma lor ar fi apropiat de aceea a unui corp solid cu toate feele identice, cu toate laturile i unghiurile
egale. Din cele 5 corpuri solide euclidiene care rspund acestor condiii i anume, tetraedrul, cubul, octaedrul,
dodecaedrul i icozaedrul, ultimul d un profil hexagonal al umbrei sale, n cele mai multe orientri ale fasciculului de
lumin.
Simetria icozaedric a virusurilor sferice a fost clarificat dup mai multe experiene i demonstraii intuitive.
In microscopia electronic s-a utilizat pe scar larg, tehnica de umbrire a preparatului viral, adic acoperirea sa cu un
strat monoatomic de metal (aur) pulverizat. Astfel, dimensiunile particulelor virale se mresc artificial. Metalizarea
mrete densitatea virionilor la fluxul de electroni i evidenierea lor este mai uoar. Williams i Smith (l958) au
demonstrat c umbrele proiectate de un icozaedru pe o suprafa plan pe care este aezat i iluminat din diferite unghiuri
corespund exact imaginii electrono-optice a virusului Tipula iridescent (patogen pentru larvele de insecte) umbrit prin
metalizare. Expuse la fluxul de electroni, particulele virale icozaedrice, umbrite, nu dau o umbr sferic, ci o umbr care
sugereaz organizarea lor poligonal. Forma umbrei este diferit n funcie de incidena fasciculului de electroni, dar
totdeauna sugereaz a fi dat de un poligon cu toate feele identice, cu toate laturile i unghiurile egale. Dintre cele 5
solide analizate, iluminate n aceleai condiii sub diferite unghiuri de inciden, umbra dat de virionii umbrii prin
metalizare se aseamn cel mai mult cu umbra rezultat dup iluminarea lateral a icozaedrului. Icozaedrul este un
poliedru regulat cu 20 de fee, toate triunghiuri echilaterale (eicosi, grec = 20), 30 de muchii (creste) i l2 vrfuri
(vertexuri). El are cel mai nalt tip de simetrie, caracterizat ca fiind de tip 5: 3 :2, deoarece are 6 axe de simetrie
rotaional de ordinul 2, 10 axe de simetrie de ordinul 3 i 15 axe de simetrie de ordinul 2.
Virusurile sferice prezint i ele o simetrie de ordinul 5: 3: 2, deoarece capsomerele lor stau pe /sau n jurul
axelor de simetrie de tip 5: 3: 2 ale unui icozaedru. In natur exist exemple similare. De exemplu, simetria de ordinul 5
este cea mai frecvent la flori. Trepiedul unui aparat fotografic are un ax de simetrie de tip 3. O scar n form de spiral
prezint o simetrie rotaional de tip 2 n jurul axului sau central.
Construcia virionilor icozaedrici
Descoperirea simetriei icozaedrice a virionilor sferici ridic o serie de probleme privind modul n care poate fi
construit o astfel de structur. In acest sens s-au elaborat o serie de ipoteze, fr s se fi ajuns la o concepie unitar.
Microscopia electronic a demonstrat n cazul virusurilor din aceast categorie, existena a dou tipuri de
capsomere, avnd 5 i respectiv 6 laturi (pentoni i hexoni), rezultnd la rndul lor, din aranjarea smetric a unor uniti de
construcie mai mici. Problema construciei particulei virale const deci, n a identifica modul n care capsomerele de
form penta- i hexagonal se pot aranja simetric pentru a acoperi o suprafa nchis, alctuind un fel de cutie icozaedric
(fig. 83).
Incercnd sa explice aceast construcie, Caspar i Klug (l962) au recurs la unul din principiile de geometrie
aplicat de arhitectul B. Fuller n construcia domului geodezic. In proiectul de plan (realizat n construcie), pentru cupola
domului, Fuller a divizat suprafaa unei sfere n faete triunghiulare echilaterale, n raporturi cvasiechivalente, aranjate
dup o simetrie icozaedric. Procedeul triangulrii sferei ofer soluia optim pentru asamblarea unei cutii nchise,
construit din uniti identice de structur. Un grad comparabil de cvasiechivalene nu poate fi realizat prin nici un alt
model de subdivizare a suprafeei unei sfere, deoarece creeaz tensiuni net superioare (fig. 88).
Fig. 83. a. Reeaua plan de triunghiuri echilaterale (izometrice). B. Prin plierea a douzeci de triunghiuri echilaterale, rezult
icozaedrul . c. Sgeile simple indic direcia n care se face apropierea vertexurilor. d. Reprezentarea schematic a domului geodezic
al lui Fuller. Suprafaa sa este alctuit din faete triunghiulare cvasiechivalente, grupate n hexamere sau pentamere, n jurul unor
suprafee circulare mici.
Unitile moleculare identice ale capsidei, n acord cu ipoteza lui Caspar i Klug (l962) se leag specific i
formeaz o structur stabil i simetric, deoarece exist un numr limitat de ci n care o anumit unitate poate fi legat
de vecinele sale pentru a forma un numr maxim de legturi stabile. Cea mai simpl situaie este aceea ntlnit la cristale,
care apar ca o reea periodic tridimensional, n care, fiecare unitate este n raporturi echivalente cu vecinele sale. In cazul
particulelor virale, moleculele capsidale, dei identice, nu sunt n raporturi exact echivalente, ci numai cvasiechivalente.
Aezarea subunitilor de construcie n raporturi cvasiechivalente face posibil asamblarea unui numr redus de
subuniti mai mari ntr-o capsid puin mai deformat, dar pstrnd simetria icozaedric.
Pentru a nchide icozaedrul, sunt necesare dou tipuri de uniti de construcie: pentagonale i hexagonale. Cele
hexagonale sunt aezate pe feele i pe muchiile icozaedrului, iar cele pentagonale, la vrfurile icozaedrului. Radiolarul
Aulonia hexagona (descris de Haeckel) are scheletul calcaros, alctuit din uniti de form hexa- i pentagonal i
probabil a inspirat pe autorii acestui model de simetrie (fig. 84).
Relaiile dintre genom i capsid, la virusurile icozaedrice sunt greu de explicat. In unele cazuri, genomul viral n
asociaie cu una sau cu mai multe proteine bazice, formeaz regiunea central (core) a nucleocapsidei cvasisferice.
Alteori (la herpesvirusuri), genomul ADN este rsucit pe o structur format din proteine fibrilare, rezultnd o structur
toroidal. La adenovirusuri, genomul are interaciuni ferme cu proteinele capsidale, cea ce confer stabilitate maxim
structurii nucleocapsidice.
Fig. 84. Scheletul de siliciu al radiolarului Aulonia hexagona,

avnd aspectul unui model hexagonal mbrcat pe o sfer.
Printre ochiurile hexagonale ale reelei sunt intercalate
pentagoane. n lipsa pentagoanelor, o reea hexagonal nu
poate acoperi o sfer.
Cele mai importante familii de virusuri cu simetrie icozaedric, din punct de vedere practic (clinic) i
teoretic sunt picorna-, adeno- i herpesvirusurile. Caracteristicile lor structurale i funcionale sunt prezentate
sumar n acest capitol.
Simetria icozaedric prezint avantaje funcionale importante, evideniate prin eficiena replicrii
virale. Virusurile icozaedrice pot fi asamblate cu o mai mare economie de proteine, deoarece ofer
posibilitatea mpachetrii i condensrii genomului ntr-un spaiu mai restrns, comparativ cu cele helicale.
De exemplu, genomul ARN al virusului mozaicului galben al napului este acoperit de l80 de molecule
proteice, dispuse dup o simetrie icozaedric, n timp ce genomul VMT, de dimensiuni echivalente este
acoperit de o capsid alctuit din 2130 capsomere. Alte avantaje sunt legate de uurina asamblrii particulei
virale i mai ales de stabilitatea structurii care rezult.
Simetria binar
Simetria complex sau binar este prezent n modul cel mai evident la bacteriofagii cu coad
contractil (de exemplu, fagii din seria T-par, care infecteaz E. coli), a caror structur formeaz un adevrat
dispozitiv pentru injectarea ADN n celula bacterian: capul are o simetrie icozaedric, n timp ce
capsomerele cozii sunt ordonate dup o simetrie helical. Amnuntele referitoare la arhitectura molecular a
fagilor vor fi prezentate ulterior n acest capitol.
Multiplicarea virusurilor
Multiplicarea este procesul complex n cursul cruia are loc transcrierea i traducerea informaiei
genetice n proteine, replicarea genomului i asamblarea virionilor progeni.
Procesul multiplicrii virale prezint particulariti care decurg din parazitismul absolut, de nivel
genetic, al acestor entiti. Replicarea are loc exclusiv n celulele vii, care furnizeaz nu numai precursorii
monomerici ai macromoleculelor, ci i ntregul dispozitiv celular efector (ribosomi, enzime activatoare ale
aminoacizilor, ARNt, diferii factori solubili, sistemele generatoare de energie etc.).
Celula infectat cu un virus constituie un complex viu complexul virus-celul n care se
desfoar dou categorii de procese:
- sintezele moleculare specific virale
- diataxia viral. Termenul de diataxie(Lwoff, l98l) semnific punerea n ordine sau asamblarea
moleculelor specific virale, n structuri virale.
Multiplicarea viral este, n esen, rezultatul exprimrii programului genetic viral, datorit cruia,
ordinea celular normal este nlocuit de ordinea viral. Informaia genetic viral deviaz metabolismul
celulei.
Dei celula poate asigura majoritatea funciilor replicrii virale, adeseori este necesar aciunea unor
enzime virale existente n virion sau codificate timpuriu de genomul viral.
Numrul genelor virale difer considerabil. Ele codific sinteza urmtoarelor categorii de proteine:
- enzime pentru replicarea genomului viral (replicaze). Ele pot fi componente ale virionului matur
(infecios) sau se sintetizeaz n celul, dup infecie;
- proteine structurale, componente ale capsidei i peplosului;
- proteine reglatoare, de dou categorii: a) cele care modific specificitatea aparatului de biosintez al
celulei n sensul specificitii virale; b) proteine reglatoare ale morfogenezei virale.
Multiplicarea viral (producerea particulelor virale progene) este condiionat de infecia fiecrei
celule, in vivo sau in vitro, cu cel puin o particul viral. Practic ns, pentru a asigura infecia fiecrei celule
a unei culturi i un grad foarte nalt de sincronizare a etapelor replicrii sunt necesare l0-l00 particule virale
pentru fiecare celul.
Calitatea unei celule sau a unui organism de a fi gazd pentru multiplicarea unui virus poart
denumirea de sensibilitate.
Pentru ca o celul s fie sensibil la infecie sunt necesare dou condiii:
- virionul s se fixeze stabil de componente moleculare ale suprafeei celulei;
- celula s permit desfurarea ciclului de replicare (s fie permisiv). Particularitile funcionale ale
celulelor care condiioneaz desfurarea ciclului de multiplicare viral, au fost echivalate, prin analogie,
cu factorii de cretere ai celulei bacteriene.
Tipurile de celule i speciile de organisme pe care le poate infecta i n care se poate multiplica un
virus, definesc spectrul su de gazd. Unele virusuri au spectrul de gazd foarte larg i se pot multiplica n
celulele unor specii foarte diverse. De exemplu, arbovirusurile se multiplic n esuturile insectelor
hematofage i sunt transmise vertebratelor, la care produc infecii. Unele rhabdovirusuri infecioase pentru
vertebrate se multiplic n esuturile insectelor, dar i ale unor plante. Alte virusuri sunt foarte specializate i
infecteaz cteva tipuri de celule ale unei specii.
Multiplicarea viral se desfoar ntr-o serie de etape succesive, mai mult sau mai puin secveniale,
dei o anumit faz se continu n faza urmtoare, astfel nct dup cteva ore de la infecie, ntr-o singur
celul se pot ntlni majoritatea fazelor replicrii unui virus cu genom ADN. Multiplicarea viral propriu-zis
este precedat de interaciunea virionilor cu substratul celular.
Iniierea procesului infecios
Evenimentul preliminar al multiplicrii este adsorbia particulei virale, ca o consecin a ciocnirilor
ntmpltoare a virionilor aflai n suspensie, cu suprafaa celulei. Procesul adsorbiei este ineficient, uneori
fiind necesare milioane de ciocniri favorizate de micrile browniene ale moleculelor din suspensie. Forele
electrostatice au rol important n realizarea adsorbiei. Densitatea virionilor i a celulelor influeneaz decisiv
eficiena acestui proces, care este reversibil.
Fixarea ireversibil(ataarea) a virusului pe suprafaa celulei, presupune aciunea unui mecanism care
stabilizeaz interaciunea, pn n momentul nglobrii virionului. Una din particularitile virusurilor i
anume specificitatea lor pentru o anumit categorie de celule este n primul rnd o specificitate de fixare,
condiionat de interaciunea unei proteine virale(ligand * sau antireceptor), cu un constituient normal al
suprafeei celulare, care are rolul de receptor de virus.
*
Ligandul este orice molecul sau structur care mediaz interaciunea specific sau nespecific dintre un virus i
celul sau dintre dou celule.
Rolul interaciunii specifice este demonstrat de faptul c acidul nucleic viral purificat este infecios
pentru un spectru mai larg de celule.
Gradul de specificitate al interaciunii virus-celul este diferit. Suprafaa celulelor vegetale este
acoperit cu cear, pectin, dar mai ales cu un perete gros celulozic i nu are receptori de virus. Nu se
cunoate nici un virus care s utilizeze receptori celulari specifici. Infecia celulei vegetale este condiionat
de lezarea peretelui celulozic: virusurile sunt inoculate de vectori (artropode, nematode)care transmit virusul
sau prin leziunea mecanic a celulei.
Infecia viral n-are consecine patologice dac virusul nu se disemineaz de la celula infectat iniial
(adeseori n frunze), la celulele nvecinate. Trecerea virusului de la o celul la alta este mpiedicat de pereii
celulari. Dar celulele conin canale n peretele despritor (plasmodesmata), ceea ce produce un continuum
intercelular.
Diseminarea virusurilor la distan n esuturile plantei se face prin celulele perforate ale floemului.
Interaciunea fag-bacterie este caracterizat printr-un grad nalt de specificitate (utilizat n scop
practic pentru tipizarea fagic a tulpinilor bacteriene), iar aceea dintre virus i celula animal are un nivel
intermediar. Uneori, ataarea virusului de celula animal este mediat de receptori foarte specifici, de aici
decurgnd citotropismul, cu consecine majore asupra patogenitii virale. De exemplu, poliovirusul (un
enterovirus) are specificitate de legare pentru celulele mucoasei intestinale i pentru motoneuronii din
coloanele anterioare ale mduvei spinrii. In mod obinuit, ciclul se desfoar n celulele mucoasei
intestinale, fr manifestri clinice, dar dup infecia motoneuronilor survine paralizia muscular.
Se cunosc mai bine liganzii virali, dect receptorii celulari. Virionii nvelii se leag de receptorii
celulari prin glicoproteinele peplosului, care adesea proemin sub forma spiculelor.
Structurile de legare a virusurilor nude cu simetrie icozaedric sunt situate la vrfurile icozaedrului.
Ele sunt polipeptide ale capsidei sau sunt proteine fibrilare proeminente la vrfuri (de exemplu, fibra
pentonic a adenovirusurilor).
Definirea receptorului celular de virus este dificil, deoarece particula viral este un ligand de
dimensiuni mari, ce interacioneaz cu o suprafa mare a celulei, la nivelul creia se gsesc molecule de
legare specific i nespecific. Pentru ca o molecul membranar s aib rolul de receptor pentru virus, n
primul rnd, trebuie s aib o densitate suficient de mare pentru a asigura interaciuni multiple cu ligandul
viral. Pe de alt parte, virusul se poate lega de receptori diferii pe diferite tipuri de celule. Totui, s-au
identificat receptorii celulari pentru cteva virusuri.
Din punct de vedere biochimic, receptorii celulari pentru virusuri sunt glicoproteine, glicolipide sau
glucide. Specificitatea de legare este conferit de o parte a unei macromolecule sau de catenele glucidice ale
conjugatelor glicoproteice.
Astfel, ligandul virusului influenza hemaglutinina (o glicoprotein a peplosului) se leag specific de
resturile de acid sialic ale glicoproteinelor membranei citoplasmatice.
Receptorul pentru acetilcolin, de la nivelul sinapselor neuroefectoare poate avea rol de receptor i
pentru virusul rabic.
nveliul HSV1 conine cel puin 9 glicoproteine. Cteva (B, C, D, H, L) mediaz legarea virionului
de heparan-sulfat*, cu rol de receptor celular. Glicoproteinele B i D mediaz tropismul HSV 1 pentru neuronii
SNC.
*
Heparan-sulfatul este un proteoglican, o macromolecul alctuit dintr-o regiune central proteic, pe care se leag
covalent catene laterale de glicozaminoglicani, formnd un monomer proteoglicanic. Mai muli monomeri se leag prin
intermediul componentei proteice, de o molecul lung de acid hialuronic.
Glicozaminoglicanii (MPZ acide) sunt polizaharide ce conin uniti dizaharidice nalt repetitive.
EBV produce mononucleoza infecioas, o maladie limfoproliferativ benign. Este singurul virus al
familiei pentru care s-a identificat un receptor de mare afinitate: este glicoproteina membranar CD21 (sau
CR2, adic receptorul pentru complement de tip 2, ce leag C 3d). Receptorul CD21 are rol n activarea normal
a limfocitelor B. n timpul activrii cascadei C, C 3 este clivat n C3b, care se leag de complexele Ag-Ac. C 3b
este prelucrat proteolitic i rezult C 3d. C3d ataat de complexul Ag-Ac, se fixeaz la limfocitul B, pe calea
CR2. C3d este ligandul natural pentru CR2.
Receptorul pentru HCMV pare a fi molecula CMH I.
Receptorii celulari pentru virusurile nude cu simetrie icozaedric sunt mai puin cunoscui.
Adenovirusurile se fixeaz prin intermediul fibrei pentonice, la o varietate de receptori celulari,
inclusiv moleculele CMH I.
Receptorii pentru Rhinovirusuri sunt moleculele intercelulare de aderen (ICAM-1). ICAM-1 se
gsete pe celulele epiteliului cavitii nazale i pe multe alte tipuri de celule din organism. Are 5 domenii
extracelulare omologe domeniilor Ig (D1-D5), un domeniu transmembranar i un domeniu citosolic i face
parte din suprafamilia Ig. Cele 5 domenii sunt aezate linear. Funcia normal este de a lega integrina LFA-1
de pe suprafaa limfocitelor. Interaciunea LFA-1-ICAM-1 mediaz aderena dintre celulele epiteliale i
limfocitele T care lizeaz celulele epiteliale infectate cu virus.
Expresia ICAM-1 pe celulele epiteliale ale cavitii nazale este restrictiv n condiii normale, dar este
indus de mediatorii inflamaiei (IL-1, IFN , TNF) eliberai dup infecia cu rinovirus, ceea ce uureaz
diseminarea infeciei. Pe de alt parte, inducia expresiei ICAM-1 este important pentru localizarea
limfocitelor la situsul inflamaiei.
Receptori pentru HIV1. Molecula CD4 are rol de coreceptor pentru recunoaterea Ag, n asociaie cu
moleculele CMH II, dar transmite i semnalul activator al celulei T. Celulele CD 4 secret limfochine
activatoare pentru limfocitele B i macrofage. CD 4 se gsete i pe membrana celulelor liniei monocitmacrofag.
Proteina CD4 este un polipeptid de 55 kDa al membranei. Regiunea extracelular conine 372
aminoacizi, ce formeaz 4 domenii, omologe cu ale moleculei de Ig.
HIV infecteaz i celule CD4- : neuroni, astrocite.
Utilizarea AMC specifici fa de diferite componente membranare a dus la identificarea
sfingolipidului* galactozil ceramid (Gal C), ca un posibil receptor pentru HIV pe membrana neuronal.
*
Sfingolipidele sunt formate dintr-un aminoalcool cu 18 atomi de C(sfingozina). La gruparea NH 2 a sfingozinei este
legat un acid gras, majoritatea cu 24 atomi de C). Cele care conin o grupare glucidic se numesc sfingoglicolipide.
Sfingozina
Celulele organismelor uman i animal au receptori pentru un numr mare de ageni infecioi.
Teleonomic ns, moleculele cu rol de receptori nu sunt destinate legrii virionilor, ci ndeplinesc diferite
funcii normale: de exemplu, unele au rol de receptori de hormoni. Moleculele care au rol de receptori de
virus sunt polifuncionale. Virusurile mprumut diferite molecule ale suprafeei celulare, prin intermediul
crora dobndesc accesul n celul. Numrul receptorilor de virus, pe suprafaa unei celule este cuprins ntre
l0 000 i l00 000.
Tropismul unor virusuri pentru anumite celule sau esuturi este determinat de specificitatea
interaciunii cu receptorul: de exemplu, tropismul HIV-1 pentru limfocitele T i pentru macrofagele care
prezint receptorul CD4 ; tropismul EBV pentru limfocitele B care conin receptorul CD 21. Dar specificitatea i
distribuia tisular a receptorilor nu poate explica tropismul celor mai multe ribovirusuri, deoarece adeseori
infecia este abortiv: virionul este internalizat i genomul este dezvelit, dar multiplicarea este stopat ntr-o
etap ulterioar, ceea ce sugereaz existena unor factori celulari, care condiioneaz sinteza
macromoleculelor eseniale ale ciclului de multiplicare viral (ARN, proteine). De exemplu, virusul influenza
se fixeaz de resturile de acid sialic ale glicoproteinelor i glicolipidelor, care au o distribuie ubicvitar n
cele mai multe esuturi. Totui, infecia cu virusul influenza este limitat exclusiv la celulele epiteliale ale
tractului respirator al omului i la modelele animale ale infeciei. Pentru aceste virusuri, tropismul viral este
condiionat de existena receptorilor celulari i de starea de permisivitate a celulei. Virusurile se multiplic n
celulele care nu pot s declaneze un rspuns antiviral mediat de IFN /.
Ataarea de receptorii celulari este un proces reversibil. Dac nu se produce internalizarea, virusul
poate s se detaeze (fenomen denumit eluie), de pe suprafaa celulei. Unele virusuri au mecanisme speciale
de eluie. Detaarea virionilor ortho- i paramyxo- este mediat de neuraminidaz (NA), o esteraz care
cliveaz resturile de acid sialic din catenele glucidice ale glicoproteinelor. Resturile de acid sialic rmn
legate de HA i previn legarea de alt receptor. De aceea, se admite c rolul NA este de a desializa
glicoproteinele pe msur ce ele sunt inserate n nveliul viral nascent.
De cele mai multe ori, ataarea virusului determin modificri ireversibile n structura receptorului i
n mod obligatoriu urmeaz internalizarea (nglobarea virusului n celul). Uneori ns, dup fixare, virionul
se poate detaa i se reabsoarbe pe alt celul.
Dup legarea virusului, receptorii celulari se modific. Astfel, glicoproteina CD 4, dup interaciunea
cu HIV se fosforileaz, o modificare esenial pentru nglobarea virionului. Inhibiia fosforilrii cu inhibitori
ai protein-kinazei blocheaz nglobarea i virionii rmn la suprafaa celulei. Fosforilarea declaneaz
semnalul reorganizrii citoscheletului.
Chiar dac virusul nu ptrunde n celul, legarea sa de membrana citoplasmatic influeneaz
activitatea celulei. De exemplu, legarea VEB de suprafaa limfocitului B poate iniia activarea acestuia.
Ptrunderea virusului n celul(infecia propriu-zis)
Faza de ptrundere sau de nglobare a virusurilor n celulele sensibile se desfoar dup mecanisme
diferite, derivate din complexitatea structurilor de suprafa ale celulei i ale virionului (fig. 85).
Peretele mureinic al bacteriilor Gram pozitive, complexitatea structural a peretelui bacteriilor Gram
negative, precum i natura celulozic a peretelui vegetal constituie bariere foarte eficiente fa de infecia
viral. Celulele vegetale sunt infectate numai dup leziunea mecanic a peretelui celulozic, iar fagii din seria
T-par au un aparat complex, foarte specializat, prin intermediul cruia genomul viral este injectat n celula
bacterian.
Virusurile infecioase pentru celulele animale sunt nglobate n ntregime n celula sensibil,
consecina direct a absenei peretelui celular.
Ptrunderea virusurilor n celula animal, dup fixarea ireversibil se poate produce prin dou
mecanisme fundamentale: endocitoza i fuziunea.
Mecanismul predominant prin care virusurile ptrund n celula animal este endocitoza (denumit i
viropexie), un proces analog celui de pinocitoz, caracteristic virusurilor nude (adeno-, reovirusuri), dar i
unor virusuri nvelite (influenza, rhabdo-, poxvirusuri).
Interaciunea iniial a virionului cu receptorii din membrana celular nu este suficient pentru a
declana endocitoza particulei legate, ci reprezint semnalul* pentru iniierea agregrii proteinelor contractile
ale celulei i pentru formarea unor pseudopode.
*
Celulele (cu excepia fagocitelor profesioniste) au capaciti endocitare foarte limitate. Dup fixarea virionului de
receptor este indus endocitoza, ce const n reorganizarea unor componente ale citoscheletului.
Formarea pseudopodelor uureaz interaciunile multiple ale suprafeei virionului cu receptorii

celulei. Proteinele contractile ale citoplasmei se activeaz i realizeaz nchiderea particulei virale, ntr-o
vacuol de endocitoz, denumit microvezicul sau pinosom tapetat cu clatrin*, printr-un mecanism similar
nchiderii unui fermoar.
*
Clatrina este o protein mare, oligomeric, ce formeaz o reea pe suprafaa intern a membranei plasmatice,
favoriznd intruzia membranei i formarea unei vezicule tapetat cu reeaua molecular, care ulterior poate fuziona cu
alte organite celulare.
Marginile libere ale membranei celulare intruzate, fuzioneaz i restabilesc integritatea suprafeei
celulare, astfel nct virusul rmne inclus ntr-o vezicul de endocitoz. Vezicula pierde nveliul de clatrin
i fuzioneaz repede cu mici cisterne de reticul endoplasmic neted i cu lizosomi. Se formeaz un endosom al
crui pH se acidific sub aciunea unei pompe protonice din membran. Pe msur ce pH scade, proteinele
capsidei sufer modificri de conformaie i expun un domeniu hidrofob ce determin fuziunea cu membrana
endosomului. Acesta este mecanismul de ptrundere a virionilor nuzi, prin liza endosomului. Virusul eliberat
din endosom este fie sub forma nucleocapsidei (adeno, herpes), fie sub forma nucleoproteinelor
(enterovirusuri).
Pentru virusurile nvelite, la pH acid al endosomului, nveliul viral fuzioneaz cu membrana
endosomului, ceea ce favorizeaz eliberarea nucleocapsidei n citoplasm.
Fig. 85. nglobarea unei particule virale nude prin mecanismul endocitozei mediat de receptori.
Al II-lea mecanism de ptrundere, pentru unele virusuri nvelite, const ntr-un proces de fuziune a
nveliului viral cu membrana citoplasmatic. Peplosul, la contactul cu membrana celular, se dizolv i
rmne ncorporat n membran. La locul coalescenei celor dou structuri, se formeaz un canal, care
permite trecerea virionului n citoplasm.
Fuziunea nveliului viral, cu membrana plasmatic necesit interaciunea proteinelor virale de
fuziune ale peplosului, cu constituienii specifici ai membranei celulare. Fuziunea este modalitatea de
ptrundere n celul, caracteristic virusurilor nvelite. Astfel ptrund n celul unele paramixo- i poxvirusuri.
Paramixovirusurile conin, inclavat n peplos, o protein de fuziune (F), care mediaz fuziunea
nveliului viral cu membrana celulei sensibile. Proteina F mediaz fuziunea celor dou structuri, numai dac
este inclavat n nveliul fosfolipidic viral i dac este inut n contact strns cu membrana celular, prin
intermediul hemaglutininelor.
Fig. 86. Unele virusuri animale nvelite intr n celul, fiind endocitate n vezicule tapetate cu clatrin. Vezicula de
fagocitoz i pierde nveliul de clatrin i fuzioneaz cu lizosomii. Scderea pH-ului n vezicul determin un proces de
fuziune a nveliului viral cu embrana veziculei endosomale i eliberarea nucleocapsidei n citoplasm.
Cele dou mecanisme de nglobare (endocitoza i fuziunea) nu se exclud reciproc. Acelai virus
nvelit poate fi nglobat pe o cale sau alta, n funcie de substratul celular. Mai mult, cele dou mecanisme pot
coexista frecvent pentru un virus dat, n raporturile sale cu o linie celular.
Rareori, virionul ptrunde n celul, prin modaliti particulare, ce constau n liza local a membranei
plasmatice, la contactul cu virionul. Se produce liza peplosului viral i a membranei celulare sau virionul trece
intact prin brea membranar ;
Decapsidarea este procesul de conversie treptat a virusului, din starea de virion complet, la starea de
virus vegetativ (genomul liber n celula infectat), prin pierderea capsidei i, cnd este cazul, a nveliului
viral.
Dezagregarea capsidei este un proces
puin cunoscut, datorit dificultilor de modelare
experimental i se produce n trepte. La reovirusuri, decapsidarea se iniiaz nainte de contactul cu celula
gazd, sub aciunea proteazelor intestinale i este incomplet, pentru c replicarea genomului este catalizat
de o enzim asociat virionului. La picornavirusuri, capsida se dezagreg parial la suprafaa celulei, dup
legarea de receptorul celular. Cel mai adesea, decapsidarea are loc n vezicula endosomal, sub aciunea
proteazelor lizosomale i a pH acid.
Capsida virusurilor herpetice i adeno se dezagreg la contactul cu porul nuclear.
Dezvelirea virusurilor din grupul pox se face n dou etape: nveliul extern este degradat sub
aciunea enzimelor citoplasmatice, iar dezagregarea nveliului intern i eliberarea ADN este catalizat de
produsele de sintez a unor gene virale timpurii.
In vitro, dezvelirea virusurilor cu peplos este modelat sub aciunea detergenilor neionici (polieteri
i esteri poliglicerici, de exemplu, Tween 80). Acetia interacioneaz cu componentele hidrofobe ale
membranei i astfel peplosul este rupt i solubilizat.
Deplasarea intracelular pn la locul replicrii este necesar numai pentru virusurile care au sedii
caracteristice ale replicrii. Cele care se multiplic n citoplasm ajung uor la sediul desfurrii procesului,
imediat dup ce au strbtut membrana citoplasmatic.
Virusurile care se multiplic n nucleu, necesit transferul de la locul ptrunderii n celul, pn n
nucleu. Deplasarea lor pare a fi orientat de un tropism molecular ale crui mecanisme nu se cunosc.
Reorganizarea unor componente ale citoscheletului * are un rol important n mecanismul transportului
citoplasmatic.
Nu se cunoate nici un acid nucleic viral transportat n nucleu ca molecul liber.

*
Citoscheletul este format din 3 elemente structurale: microfilamente, microtubuli i filamente intermediare.
Microfilamentele sunt alctuite din subuniti de actin, iar microtubulii sunt formai din tubulin. Aceste elemente sunt
comune marii majoriti a tipurilor celulare. Ele au rol structural, de transport i de mobilizare a organitelor. Filamentele
intermediare sunt formate din subuniti de citocheratin i sunt specifice pentru starea de difereniere celular.
Adeno- i herpesvirusurile sunt transportate prin citoplasm sub forma nucleocapsidelor, n vacuola
membranar de endocitoz, pn la contactul cu un por nuclear, prin care acidul nucleic este transferat n
nucleu, iar capsida rmne la nivelul membranei nucleare.
Proteinele virale asociate cu acidul nucleic au rol esenial n procesul de transport i ndeplinesc dou
funcii:
- furnizeaz semnale specifice i orienteaz transportul complexului spre nucleul celulei;
- confer complexului o configuraie stabil, compatibil cu transferul prin porii membranei nucleare.
Acizii nucleici monocatenari sunt transportai cu o eficien mai mare deoarece moleculele
monocatenare sunt polare, mai flexibile i sunt tapetate cu proteina SSB (single strand binding). De exemplu,
ARN de influenza este transportat n nucleu sub forma ribonucleoproteinei. Proteinele complexului mediaz
transferul nuclear.
Dezoxiribovirusurile i retravirusurile intr n nucleul celulei, fie ca particule ntregi (nucleocapside)
fie sub forma complexelor nucleoproteice(ADN i proteinele asociate). Nu se cunoate mecanismul prin care
nucleocapsida interacioneaz cu membranele nucleare. Transferul complexului nucleoproteic n nucleu se
realizeaz probabil prin fuziunea nucleocapsidei cu membrana nuclear.
Virusurile nude din grupul Papova ptrund n nucleu ca virioni ntregi, prin fuziunea nespecific a
veziculei de endocitoz, cu membrana nuclear extern, dup care, virionul sau numai complexul
nucleoproteic trece n nucleoplasm, prin fuziunea vacuolei cu membrana intern.
Tranzitul acestor virusuri n nucleu este rapid (virionii de SV 40 se gsesc n nucleu la l5 min. dup
infecie) i se explic prin tropismul nuclear al proteinelor.
Sinteza ARNm viral
Existena mesagerilor specific virali este o condiie esenial i o restricie major pentru iniierea
procesului de multiplicare. Virusul ofer aparatului de sintez al celulei, un ARNm pe care celula trebuie s-l
recunoasc i s-l traduc n proteine. Generarea mesagerilor virali semnific nceputul subordonrii
aparatului de sintez proteic i trecerea de la sinteza proteinelor celulare, la sinteza celor specific virale.
Transcrierea este prima treapt a expresiei genelor virale i urmeaz ptrunderii nucleocapsidei n celul.
Unele virusuri au enzime de transcriere asociate genomului i activitatea lor ncepe foarte curnd dup
dezagregarea parial a capsidei. Alteori, chiar molecula genomic de ARN funcioneaz ca ARNm.
In citoplasm nu s-a detectat activitate ARN-polimerazic, astfel nct genomul virusurilor care nu au
transcriptaze proprii, nu poate fi transcris. Datorit acestui fapt, genomul ADN (adeno, herpes, papova) poate
fi transcris n ARNm numai dup ce ajunge n nucleu. Poxvirusurile sunt o excepie. Ele au propria enzim de
transcriere (ARN-polimeraza) pentru sinteza ARNm i se multiplic n citoplasm.
Ribovirusurile se multiplic n citoplasm. Genomul viral ARN este transcris n ARNm de o enzim
proprie de transcriere, ori ARN genomic funcioneaz i ca ARNm.
Sinteza ARNm viral este catalizat de dou categorii de polimeraze:
- ARN-polimeraza II celular, pentru virusurile a cror informaie genetic este transcris n nucleu
(dezoxiribovirusuri);
- ARN-polimeraza viral, pentru cele care se multiplic n citoplasm (poxvirusuri i ribovirusri). Cele
dou tipuri de polimeraze au omologii extinse ale secvenei de aminoacizi, inclusiv ale secvenei GlyAsp-Asp. Acest tripeptid se gsete chiar i n ARN-polimeraza fagic i n reverstranscriptaz. De aceea
se consider c are rol n recunoaterea matriei de acid nucleic.
Cele mai multe molecule de ARNm viral sunt monocistronice, adic sunt traduse ntr-o singur
molecul proteic.
Sinteza ARNm la dezoxiribovirusuri
Toate genomurile ADN lineare, mono- sau dublu catenare au secvene repetate invers, fie la
extremiti (adeno-), fie att la extremiti, ct i n interior.
Genomul viral ADN se disociaz de proteinele specifice de mpachetare, acestea fiind nlocuite de
histonele celulei. Astfel, ADN dobndete o structur nucleosomal, asemntoare cu a ADN celular,
favorabil proceselor de replicare i transcriere.
Sinteza ARNm este rezultatul transcrierii unicei catene, la cele cu genom monocatenar, sau a uneia
dintre catene, la cele cu genom dublu catenar.
La majoritatea virusurilor cu genom ADN, se disting dou faze ale transcrierii: timpurie i tardiv.
O mic parte a genomului, este transcris n ARNm timpuriu, necesar sintezei proteinelor precoce.
Cea mai mare parte a genomului este transcris ulterior, n ARNm tardiv. Cele dou etape ale transcrierii sunt
separate n timp, de momentul replicrii genomului viral. ARNm timpuriu i ARNm tardiv sunt transcrise de
pe catenele genomice opuse.
Reglarea cantitativ a sintezei proteinelor timpurii i tardive se face posttranscriere, prin intermediul
ARN antisens.
In faza timpurie a infeciei productive se acumuleaz preponderent copiile catenei timpurii, care sunt
traduse n proteine timpurii.
In faza tardiv a ciclului de multiplicare, ARN polimeraza II transcrie copii multiple ntregi ale
catenei opuse, din care, prin clivare rezult ARNm tardiv i moleculele de ARN antisens. Prin asocierea
moleculelor de ARNm cu ARN antisens se formeaz ARN dc i astfel ARNm timpuriu este inactivat. ARN dc
s-a identificat cu anticorpii specifici marcai cu fluorocromi, n celulele infectate cu virusuri ADN (adeno,
HSV, polioma, SV40, vaccinal)
Dezoxiribovirusurile infecioase pentru celulele eucariote, au informaie genetic discontinu,
deoarece, pentru a face economie de informaie genetic, secvenele codificatoare ale unei proteine (exoni)se
ndesc ntr-o succesiune alternativ. O secven necodificatoare pentru sinteza unei proteine, va avea rol de
exon pentru ARNm al altei proteine. Consecina direct este c transcrierea genelor se face, iniial, ntr-o
molecul de ARN premesager, ce va fi prelucrat ulterior de aparatul enzimatic al celulei. Copiile de ARNm
sunt rezultatul unui proces de prelucrare prin clivare i ndire alternativ (splicing). Ulterior sunt supuse altor
modificri: adugarea secvenei de poli-A (l00-200 de resturi) la captul 3 i metilarea captului
5(bonetare). Bonetarea este esenial pentru stabilirea interaciunii ARNm viral cu subunitatea ribosomal 40
S.
Prelucrarea ARNm al dezoxiribovirusurilor este catalizat de enzimele celulare. Att transcrierea ct
i prelucrarea ARNm au loc n nucleu.
La poxvirusuri, transcrierea ARNm este catalizat de o ARN-polimeraz proprie virionului i procesul
are loc n citoplasm.
Moleculele de ARNm sunt monocistronice (conin informaia genetic pentru sinteza unei singure
proteine).
La dezoxiribovirusuri, transcrierea i traducerea informaiei genetice sunt evenimente separate
spaial i temporal: transcrierea are loc n nucleu, iar sediul traducerii este citoplasma. Fac excepie
poxvirusurile, la care transcrierea ARNm i traducerea au loc n citoplasm.
Originea ARNm la ribovirusuri
La ribovirusuri, ARNm are origini diferite n funcie de tipul de virus, de natura genomului su (ARN
mono- sau dublu catenar), dar n special n funcie de polaritatea materialului genetic.
Polaritatea acizilor nucleici este stabilit convenional, n raport cu posibilitatea traducerii lor directe
sau indirecte, n proteine. ARN genomic, tradus direct n proteine, fr s necesite o etap prealabil de
transcriere este considerat a avea polaritate (complementaritate) pozitiv. ARN genomic, care este mai nti
transcris ntr-o molecul de ARNm complementar are polaritate negativ (fig. 87).
Fig. 87. Transcrierea i traducerea informaiei genetice la virusuri: (a) cu genom de polaritate pozitiv ; (b) cu genom de
polaritate negativ
In ciclul de multiplicare a ribovirusurilor nu se face distincia funcional ntre ARNm timpuriu i

tardiv, deoarece genomul viral funcioneaz alternativ ca matri pentru sinteza ARNm i a ARN genomic.
Dup natura ARN genomic i dup raportul su cu ARNm, ribovirusurile infecioase pentru celulele
animale, pot fi mprite n 6 clase:
- clasa I cuprinde familiile Picornaviridae i Togaviridae, la care ARN genomic are rol de ARNm i
codific sinteza proteinelor virale structurale i funcionale. Genomul acestor virusuri este infecios,
pentru c funcioneaz direct ca ARNm pentru sinteza ntregului set de proteine virale, inclusiv a ARNpolimerazei, care catalizeaz replicarea genomului viral.
Coronavirusurile au particularitatea c genomul lor, cu polaritate pozitiv, este transcris iniial de ARNpolimeraza viral, ntr-o copie de sens negativ, de aceiai lungime. Catena negativ, la rndul ei, este
transcris n ARNm monocistronic, de diferite lungimi;
- virusurile clasei a II-a (Paramyxo-, Rhabdo-, Filoviridae, virusuri viscerotrope Marburg, Ebola) au
genom cu polaritate negativ. Genomul lor antimesager nu funcioneaz ca ARNm i nu este transcris
de celul. Virionul conine o transcriptaz proprie, ARN-polimeraza dependent de ARN, care transcrie
genomul de sens negativ, n ARNm monocistronic. Transcrierea este iniiat la un singur promotor*, dar
ARN-polimeraza recunoate secvenele semnal i la sfritul fiecrei gene, este eliberat copia de ARNm
monocistronic.
*
Promotorii sunt secvene de ADN care regleaz expresia regiunilor codificatoare adiacente.
virusurile clasei a III-a (Myxoviridae) au genom segmentat, monocatenar, cu polaritate negativ.

Fiecare segment genomic este transcris n propriul su mesager. Fiind de polaritate negativ, transcrierea
catenei genomice n ARNm este catalizat de o ARN-polimeraz dependent de ARN, existent n virion,
analog funcional cu enzima de transcriere a altor ribovirusuri cu catena genomic ARN de polaritate
negativ. ARN-polimeraza virusului influenza este defectiv din punct de vedere funcional: nu iniiaz
sinteza ARNm i nici nu-l modific prin bonetare sau metilare intern. Aceste funcii sunt suplinite de
ARN-polimeraza II a celulei, cea care catalizeaz iniierea sintezei i metilarea ARNm celular;
- clasa a IV-a (Arenaviridae), au genom ARN monocatenar, format din dou segmente. Particularitatea sa
funcional const n aceea c jumtatea 3 a fiecrui segment genomic are o polaritate negativ i este
transcris n ARNm complementar, de o transcriptaz virionic, iar jumtatea 5 a fiecrui segment are
polaritate pozitiv. Pentru jumtatea 5, ARNm rezult dup o transcriere dubl: mai nti se sintetizeaz
o copie a genomului i ulterior, aceasta este transcris n ARNm. Deoarece informaia este nscris n
direcii opuse n cele dou jumti ale fiecrui fragment, strategia de codificare a genomului este
ambisens.
La Bunyaviridae, genomul este de asemenea ambisens, deoarece att ARN genomic
(de sens negativ), ct i catena complementar transcris ulterior (de sens pozitiv),
funcioneaz ca ARNm;
- clasa a V-a (Reoviridae), au genomul ARN dublu catenar, segmentat. Fiecare din cele l0 segmente
genomice este transcris separat la ARNm, de o transcriptaz a virionului. Transcrierea este conservativ,
deoarece catenele genomice parentale nu se separ i numai catena de complementaritate negativ
funcioneaz ca matri. ARNm este monocistronic. ARN genomic rmne n regiunea central a
virionului, iar copiile complementare sunt eliminate prin capsida parial dezintegrat.
- clasa VI-a (Retraviridae), prezint particularitatea c genomul lor se replic printr-o copie intermediar
de ADN. ARN genomic are complementaritate pozitiv, dar nu funcioneaz ca ARNm. ARN pur nu este
infecios pentru c replicarea sa este dependent de revers-transcriptaza asociat virionului, care
transcrie ARN genomic ntr-o molecul de ADN. ARNm este transcris din molecula de ADN, de ARNpolimeraza II celular.
Biosinteza proteinelor timpurii
Sinteza proteinelor cu specificitate viral este evenimentul esenial al ciclului de multiplicare viral i
necesit existena unui mesaj viral generat n etapa transcrierii. Sinteza proteinelor virale semnific traducerea
unui mesaj strin celulei i este supus unor restricii.
O restricie major a sintezei proteinelor virale deriv din faptul c n celula infectat, exprimarea
genelor virale este n competiie cu activitatea numeroaselor gene celulare funcionale. O singur copie a
genomului viral, iniiaz programul de dominan asupra programului celular, de 10 4 106 ori mai mare, care
este deja exprimat. Mesagerii virali sunt n competiie, pentru traducere, cu mesagerii celulari.
Proteinele virale sunt sintetizate de aparatul celular de sintez proteic (aminoacizi, ARNt, ribosomi,
enzimele catalizatoare).
Aparatul de sintez proteic al celulei traduce numai mesaje unitare, i nu recunoate situsurile
multiple de iniere a traducerii unui ARNm viral policistronic. La unele virusuri, ARNm este policistronic,
copie a ctorva gene i este tradus ntr-o poliprotein gigant, clivat ulterior n proteine individuale de
mrime adecvat. Poliproteina nu se evideniaz la electroforez n gel de poliacril-amid, deoarece este
clivat chiar n timp ce se sintetizeaz. Inhibiia clivajului, prin ncorporarea analogilor aminoacizilor, sau
prin creterea temperaturii face posibil detectarea ei la electroforez.
Proteinele virale se sintetizeaz pe polisomii citoplasmatici. Pentru virusurile care se multiplic n
nucleu, proteinele sintetizate n citoplasm trebuie s fie transportate n nucleu, pentru a-i ndeplini funcia
specific: enzime de replicare a genomului sau proteine virale structurale.
Proteinele virale precoce aparin urmtoarelor categorii:
l) Proteine de reglare au rol de instituire i meninere a ordinii virale. Ele inhib sinteza macromoleculelor
specifice celulei, prin modificarea specificitii sistemelor enzimatice de replicare, transcriere i traducere,
astfel nct sintezele macromoleculare ale celulei sunt stopate i metabolismul este orientat n sensul sintezei
constituienilor virali. Proteinele virale cu rol n controlul expresiei genelor sunt multifuncionale ;
2) Proteine matriceale au rolul de a delimita viitoarea fabric de virus, adic teritoriul celular n care
virusul se multiplic;
3) Proteine-enzime de tipul polimerazelor: ADN- i ARN-polimeraza, nucleaze (enzime de clivare), ligaze,
proteaze. Virusurile codific serin-proteaze, cistein-proteaze i aspartic-proteaze, dar nu codific
metaloproteaze. Serin-proteazele, la situsul activ conin o Ser reactiv, care mpreun cu Asp i His formeaz
triada catalitic, ce cliveaz legturile peptidice. Cistein-proteazele au o diad catalitic format din resturi de
Cys i His. Ambele categorii formeaz intermediari enzim-substrat. Aspartic-proteazele virale sunt
asemntoare cu omologele lor celulare(pepsina, gastrina, catepsina D, renina), n general sunt active la pH
acid i nu par s formeze intermediari enzim-substrat.
Cele mai multe virusuri, n faza timpurie exprim o cantitate foarte limitat de informaie genetic.
Numai poxvirusurile exprim 30-50 de funcii n faza precoce.
Replicarea genomului viral
In etapa timpurie se sintetizeaz proteine virale cu rol enzimatic, care condiioneaz procesul
replicrii virale i implicit, evoluia complexului virus-celul gazd.
Pentru replicarea ADN viral sunt utilizai precursorii din mediul de cretere a celulelor, deoarece
ADN celular nu este degradat. Celula sintetizeaz nucleotide, din care se sintetizeaz acizii nucleici virali.
Procesul replicrii genomului viral a fost studiat prin tehnica autoradiografiei, ce const n adugarea n
mediul nutritiv, a precursorilor nucleotidelor, marcai radioactiv i detectarea lor ulterioar n ADN viral.
Replicarea genomului viral ADN este dependent de aciunea catalitic a unei ADN-polimeraze.
Virusurile mici utilizeaz ADN-polimeraza celular, iar cele complexe (adeno, herpes), codific
sinteza ADN-polimerazelor proprii. Virusurile herpetice codific 7 proteine-enzime, cu rol n replicarea
genomului.
Replicarea ADN viral se face dup modelul semiconservativ. Mecanismul replicrii s-a studiat la
toate familiile de dezoxiribovirusuri.
Replicarea ADN la adenovirusuri
La adenovirusuri, genomul este o molecul dublu catenar, linear, de 2000-2500 kDa (circa 36 kbp),
cu secvene repetate invers, lungi de l00-l40 nucleotide, la ambele extremiti ale celor dou catene(secvena
de baze la un capt al unei catene (de exemplu 5) este repetat n ordine invers pe catena opus, n acelai
sens (5-3). Ele permit circularizarea moleculelor monocatenare care apar n timpul replicrii. La cele dou
capete 5, catenele genomice sunt asociate covalent cu o protein de 55 kDa.
Replicarea ADN, catalizat de ADN-polimeraza proprie este semiconservativ i asimetric.
Asimetria const n faptul c numai una dintre catene este copiat ntr-o caten complementar.
Replicarea se iniiaz la captul 3 al uneia dintre cele dou catene ale moleculei genomice parentale,
la care se ataeaz o protein de 80 kDa, cu o secven asemntoare de aminoacizi cu a proteinei de 55 kDa
de la captul 5. Proteina de 80 kDa de la captul 3 are rol de amors a replicrii. Sinteza ADN ncepe cu
adugarea dCMP (deoxicitidin-monofosfat), la proteina amors, formnd o legtur esteric. Apoi ADNpolimeraza* alungete catena ADN n sensul 5 3, prin polimerizare succesiv la captul 3.
*
ADN-polimeraza nu iniiaz sinteza de novo a unei catene de ADN, avnd nevoie totdeauna de un primer, ci
alungete o caten preexistent. De obicei, primerul este un fragment de ARN complementar fa de una dintre catene.
Ulterior, secvena de ARN este nlocuit cu una de ADN.
La adenovirusuri, rolul de primer revine proteinei de 80 kDa, legat covalent la captul 5. Catena se
alungete n direcia 5 - 3 pe catena matri i nu necesit fragmente Okazaki. Catena nascent deplaseaz
catena preexistent de aceiai polaritate i mpreun cu catena matri de polaritate opus, formeaz o
molecul dublu catenar.
Catena deplasat are rol de matri pentru sinteza unei catene complementare. Dup acelai
mecanism, se formeaz o molecul dublu-catenar, linear.
Virusurile din grupul Papova au genomul format dintr-o molecul de ADN dublu catenar, circular.
Replicarea moleculei circulare se realizeaz dup modelul semiconservativ, bidirecional i este simetric.
Dup acelai mecanism se replic ADN bacterian, precum i ADN din organite (mitocondrii, cloroplaste).
Replicarea este precedat de despiralizarea celor dou catene, ca rezultat al inciziei succesive.
Inciziile sunt reparate rapid dup ce s-a produs despiralizarea.
Enzimele care incizeaz i repar rapid breele moleculei de ADN se numesc topoizomeraze. Rolul
lor este acela de a relaxa ADN supraspiralizat n sens pozitiv sau negativ. Ele produc modificri ale
configuraiei spaiale (topologice) a moleculei de ADN, prin modificarea gradului de spiralizare.
Virusurile Papova nu au topoizomeraze proprii, ci utilizeaz enzimele celulare.
Replicarea moleculei circulare ncepe la un punct fix, denumit originea replicrii, iar punctul n care
catenele moleculei parentale se separ i sunt sintetizate catenele noi se numete bifurcaie de replicare.
De la origine, bifurcaia de replicare se deplaseaz cu foarte puine excepii, n ambele direcii ale
moleculei circulare. Din aceast cauz, o molecul de form circular, n cursul procesului de replicare are
aspectul literei greceti theta (), iar mecanismul de replicare se numete theta.
Rezultatul replicrii este o pereche de molecule circulare, denumite catenani. Catenarea este procesul
de legare a dou molecule circulare de ADN ntr-o structur supramolecular, iar decatenarea este procesul
invers, de separare a celor dou molecule.
La herpesvirusuri, genomul este o molecul de ADN dublu catenar, linear, de l50 kbp. Molecula
este alctuit din dou domenii cu secven unic: unul mai mare, notat cu L (Large), i altul mai scurt, S
(Short).
La Herpes simplex virus (HSV), fiecare secven este flancat la extremiti, de cte o secven de
nucleotide repetate n ordine inversat (SRI), de cte 300-400 de baze. O particularitate a genomului HSV
este orientarea ntmpltoare a celor dou secvene unice, astfel nct ntr-o populaie de virioni se gsesc
simultan cele 4 variante de genom linear: P (Prototip), IL (Inverted L), IS (Inverted S) i ISL (Inverted S i
L ). Ele apar ca o consecin a asocierii aleatorii n oricare dintre cele dou orientri a celor dou domenii
genomice.
Replicarea genomului se face prin intermediul moleculelor circulare. Dup ce ADN viral ajunge n
nucleul celulei, secvenele terminale repetate n ordine invers (SRI) sunt supuse aciunii limitate a unei
exonucleaze, la nivelul uneia dintre catene. Secvenele rmase se mperecheaz, formnd o molecul
circular, dublu catenar, covalent nchis.
Intr-o prim etap, replicarea moleculei circulare se face ciclic, dup modelul semiconservativ al
cercului simplu. Ulterior, moleculele circulare generate n prima etap a transcrierii se replic dup modelul
cercului rotativ. Un rol esenial n procesul de replicare l au helicazele*.
*
Helicazele sunt enzime care catalizeaz despiralizarea catenei duble a acizilor nucleici, prin disocierea legturilor de H
i utilizeaz E eliberat prin hidroliza unui nucleotid 5-trifosfat (NTP), de obicei ATP. Energia eliberat n timpul
hidrolizei NTP este utilizat pentru derularea AN, dei nu se cunoate modalitatea n care se cupleaz cele 2 reacii.
Helicazele ADN s-au descris cu peste 20 de ani n urm, dar helicazele ARN s-au evideniat recent la virusuri, la
bacterii, la levuri, pn la om. La virusuri, helicazele au rspndire larg, cu excepia retravirusurilor i a celor cu
genom de polaritate negativ.
Modularea structurii ARN este o etap esenial n numeroase procese fundamentale: sinteza ARN, transcrierea,
replicarea i traducerea. La virusuri, helicazele au rol esenial n ciclul de replicare. Ele deruleaz ARN i ADN dc, dar
i heteroduplexul ARN-ADN n timpul replicrii, transcrierii i traducerii genomului viral. Helicaza ar fi necesar
oricrui virus, indiferent de natura genomului su, datorit existenei nucleotidelor complementare.
La virusurile cu genom d c, ARN sau ADN, helicaza este necesar disocierii catenelor n timpul replicrii i
transcrierii. La ribovirurile monocatenare, genomul se gsete tranzitoriu sub form dc: n timpul replicrii ARN de
polaritate pozitiv, cnd aparatul de replicare trebuie s funcioneze, iar matria liber trebuie s fie permanent
disponibil pentru un nou ciclu de replicare. Rolul helicazei ar fi acela de a disocia perechile intramoleculare de baze i
de a preveni formarea perechilor extinse ntre matrice i catena complementar nascent. Virusurile cu genom mai mic
de 5,8 kb nu codific helicaza.
Una dintre catenele moleculei circulare (catena leading *) este incizat la un situs specific, sub
aciunea unei endonucleaze virale i rezult dou capete libere: 3OH i 5P. Cealalt caten rmne
circular, nchis covalent.
La captul 3 al catenei incizate (catena leading) este iniiat sinteza replicativ. Captul 3OH are
rol de primer i crete prin polimerizarea nucleotidelor, catalizat de ADN-polimeraza. Catena circular
funcioneaz ca matri rotativ.
Polimerizarea are loc totdeauna, prin alungirea unei catene primer n direcia 5- 3, ncepnd de la
captul 3OH al catenei incizate. Cnd bifurcaia de replicare a parcurs cel puin odat catena circular cu rol
de matri i catena incizat (leading*) este de dou ori mai lung n raport cu momentul iniial, ea poate fi
copiat n sens invers, pe calea replicrii discontinue a fragmentelor Okazaki, de un alt complex enzimatic de
replicare. Astfel, molecula nou sintetizat devine dublu catenar.
*
Catena leading(to lead, englez = a conduce) este cea care expune captul 3OH liber i este transcris ntr-o caten
complementar continu n direcia 5 -- 3.
Catena leading continu s se roteasc pe matria circular, fiind copiat succesiv. Se formeaz astfel
mai multe molecule concatemere, n tandem, n conexiune cap-coad.
Rezultatul intermediar al replicrii este un cerc cu o ramificaie lateral, care se aseamn cu litera
greceasc sigma () i de aceea, replicarea dup modelul cercului rotativ se numete replicare sigma.
Concatemerul poate fi separat de molecula circular prin clivare, sub aciunea unor endonucleaze. La
rndul lor, capetele catenei incizate ale moleculei circulare sunt reunite sub aciunea unei ligaze i se reface
continuitatea covalent nchis a structurii circulare dublu catenare.
In procesul morfogenezei virale, concatemerii lineari sunt clivai n molecule dublu catenare lineare,
de lungimea genomului.
Replicarea dup modelul cercului rotativ are urmtoarele caracteristici: a)catena leading este legat
covalent de catena parental; b)replicarea repetat pe matria circular genereaz o ramificaie lateral
concatemer, legat covalent.
Parvovirusurile au ca genom o molecul de ADN monocatenar, linear. Capetele moleculei au
secvene palindromice*, repetate n ordine invers, care formeaz bucle n ac de pr. Regiunile
palindromice terminale reprezint 5% din genom i sunt eseniale pentru replicarea acestuia, deoarece
constituie secvenele primer pentru aciunea catalitic a ADN-polimerazei. Replicarea este catalizat de
aparatul enzimatic al celulei.
Intr-o prim etap, genomul monocatenar este convertit la forma dublu catenar, prin mperecherea
bazelor complementare, denumit intermediar de replicare.
Intermediarul dublu catenar este incizat ntr-o poziie opus situsului de iniiere pentru sinteza catenei
complementare i genereaz un capt 3OH, de la care secvena repetitiv este alungit pe catena
complementar cu rol de matri. Se sintetizeaz astfel, catene multiple cu polaritate genomic (pozitiv).
Catenele nou sintetizate, cu polaritate genomic, rmn n configuraie linear i constituie genomul
virionilor progeni sau se replic dup acelai mecanism, amplificnd rata sintezei catenelor genomice.
*Palindromul este o succesiune de baze, simetric fa de un punct central, astfel nct secvena bazelor este aceiai
att n sensul 3 --- 5, ct i n sensul 5 --- 3.
Fig. 88. Reprezentarea schematic a replicrii genomului ADN viral.
Replicarea i transcrierea genomului viral ARN

In citoplasma celulelor animale i umane, activitatea ARN-polimerazei nu este detectabil. Toate
ARN-polimerazele dependente de ARN din celulele animale sunt codificate de ribovirusuri.
De cele mai multe ori, la ribovirusuri, procesele de replicare i transcriere nu sunt separate n timp i
spaiu, ci interfer, datorit faptului ca ARN genomic funcioneaz alternativ ca matri pentru copierea
replicativ a ARN genomic sau pentru transcrierea ARN mesager.
Replicarea genomului ARN monocatenar se face totdeauna dup urmtorul model: catena genomic
este convertit la forma dublu catenar, sub aciunea catalitic a unei enzime de replicare (o ARN-polimeraz
dependent de ARN), de origine viral, prin sinteza unei catene complementare de aceiai lungime. ARNpolimeraza se deplaseaz totdeauna n direcia 3 5 a matriei i sintetizeaz ARN n direcia de elongaie
5 3. Se formeaz o structur dc, denumit form de replicare. Forma dc de ARN este suportul sintezei
replicative a ARN genomic i transcrierii ARNm. ARN-polimeraza nu necesit existena unui primer pentru a
iniia sinteza catenei noi.
Sinteza noilor catene are loc dup mecanismul semiconservativ asimetric. Din forma de replicare
dublu catenar, catena genomic este deplasat progresiv de catena nou, n curs de sintez. Catenele nou
sintetizate au aceiai secven de baze i aceiai polaritate ca i catena genomic. Sinteza catenelor noi este
succesiv i complet, adic sinteza catenei urmtoare nu ncepe pn ce precedenta nu s-a eliberat.
Forma de replicare dublu catenar, mpreun cu o caten nascent formeaz un intermediar de
replicare.
Catenele nou sintetizate, cu polaritate genomic devin suportul sintezei replicative sau se asociaz cu
proteinele capsidale.
La virusurile care au ca genom o caten de ARN cu polaritate pozitiv (Picorna, Togavirus), catena
de sens pozitiv a formei dc este dislocat de catena nascent a intermediarului de replicare, iar catena de sens
negativ are rol de matri pentru sinteza copiilor de polaritate pozitiv, care ndeplinesc dou roluri:
a) unele, dup prelucrarea prin bonetare *(metilare la captul 5), metilare intern i adenilare la captul 3,
au rolul de ARNm;
*
Bonetarea sau capping (cap, englez = bonet) semnific o etap a prelucrrii post-transcriere a moleculei de ARNm,
ce const n adugarea la captul 5 a metil-G. Bonetarea este esenial pentru interaciunea moleculei de ARNm cu
ribosomii n procesul traducerii informaiei genetice.
b) altele funcioneaz ca matrie pentru sinteza unor catene noi, de polaritate negativ, amplificnd rata
sintezei ARN cu specificitate viral.
La virusurile cu genom ARN de polaritate pozitiv, deoarece ARN genomic funcioneaz ca ARNm,
ARN-polimeraza se sintetizeaz n celul, dup infecie, i nu este component a virionului. Din aceast
cauz, ARN genomic este infecios (fig. 89).
Fig. 89. Modelul replicrii genomului viral ARN cu polaritate pozitiv.
La virusurile cu genom ARN de polaritate negativ (grupul Mononegavirales- paramixo-, rhabdo-,

filovirusuri), mesagerii i catenele genomice sunt transcrise de pe matrie diferite: catena de polaritate
negativ a formei dublu catenare funcioneaz ca matri pentru transcrierea ARNm monocistronici, iar cea de
polaritate pozitiv este transcris n copii de lungimea genomului (fig. 90), de polaritate negativ, cu rol de
ARN genomic. Replicarea se deosebete de transcriere prin modul n care progreseaz ARN-pol: continuu
sau secvenial.
Virionul conine o transcriptaz proprie o ARN-polimeraz dependent de ARN, care catalizeaz
sinteza catenei de ARN complementar i a ARNm. De aceea, ARN purificat al acestor virusuri nu este
infecios.
Virusurile cu genom ARN se multiplic n citoplasm, cu excepia virusurilor gripale, la care,
replicarea i transcrierea genomului au loc n nucleu. La mixovirusuri, transcrierea moleculelor cu rol de
ARNm, ca i a celor genomice, este catalizat de aceiai ARN-polimeraz viral, dar enzima este defectiv
funcional, deoarece alungete o caten preexistent, dar nu iniiaz sinteza de novo *.
*
Polimeraza PB2 i proteina NS1 cliveaz capetele 5 bonetate ale mesagerilor celulari, pe care polimeraza PB 1 le
folosete ca primeri pentru sinteza replicativ i pentru transcrierea genomului viral. Alt explicaie a dependenei de
nucleu rezid n aceea c mesagerii pentru sinteza proteinelor M 1 i M2, respectiv NS1 i NS2 sunt prelucrai prin clivare
i ndire.
Unele copii de polaritate pozitiv, cu rol de ARNm sunt bonetate (capping), metilate i
poliadenilate de enzime celulare nucleare i sunt transferate n citoplasm, iar altele rmn n nucleu, cu rol
de matri pentru sinteza ARN genomic (de polaritate negativ), pe toat durata procesului infecios.
Fig. 90. Modelul replicrii genomului viral ARN cu polaritate negativ.
Replicarea genomului ARN dublu catenar multipartit al reovirusurilor* (l0 segmente) este simultan
cu transcrierea (fig. 91).
*
Reovirusurile se transmit pe cale oral i sunt prelucrate de proteazele digestive n lumenul intestinal. Dezvelirea
implic parial, digestia proteolitic a capsidei externe. Proteoliza nu inactiveaz virusul, ci remodeleaz capsida extern.
Virusul este activat, dup eliberarea proteinei majore 3, clivajul proteinei 1c i a HA 1. Virusul prelucrat proteolitic
ader de celulele M i de enterocite. Rezult particule subvirale, identice cu cele obinute in vitro sub aciunea
chimotripsinei.
Catena de polaritate negativ a fiecrui segment genomic este transcris de o ARN-polimeraz viral,
n capsida parial deschis. Se sintetizeaz l0 tipuri de ARN cu polaritate pozitiv, care prsesc capsida prin
dizlocarea capsomerelor de la vrfurile icozaedrului. Transcrierea este conservativ, deoarece ambele catene
ale ARN genomic rmn n regiunea central, nedezvelit a virionului.
Moleculele de ARN au dou funcii:
a) sunt traduse n mesaje monocistronice i astfel se sintetizeaz proteine virale;
b) se asambleaz cu o precapsid i au rolul de matrie pentru sinteza catenelor complementare, de
polaritate negativ. Catenele perechi constituie genomul viral.
Fig. 91. Modelul replicrii genomului ARN dublu catenar al reovirusurilor.
Replicarea ARN genomic printr-un intermediar ADN este caracteristic retravirusurilor. Genomul
lor este reprezentat de o caten de ARN, care, n fiecare virion se gsete n dublu exemplar, ceea ce confer
caracterul diploid al genomului acestor virusuri. Nu se cunoate modul de asociere fizic a celor dou
molecule de ARN.
Genomul ARN al retravirusurilor este replicat printr-un flux de informaie genetic ce trece prin
ADN, proces denumit transcriere invers* (fig. 92).
*
Fenomenul a fost descoperit de H. Temin i D. Baltimore (1970). Ei au tratat celulele infectate cu VSR, cu
actinomicina D, un antibiotic care se inser ntre bazele nucleotidice i inhib transcrierea. S-a remarcat astfel c
actinomicina D, inhib ciclul de multiplicare al retravirusurilor, dar nu inhib multiplicarea ribovirusurilor obinuite.
Concluzia a fost c n ciclul lor de multiplicare exist o faz sensibil la actinomicina D, reprezentat de un intermediar
ADN.
Singura funcie a ARN genomic este de a ndeplini rolul de matri pentru sinteza intermediarului de
ADN n celula infectat. Celula nu posed o enzim care s ndeplineasc aceast funcie. Virionul conine o
ADN-polimeraz dependent de ARN, denumit revers-transcriptaz (RT), precum i molecule de ARNt
ncorporate din celul n procesul asamblrii, care ndeplinesc rolul de primer al transcrierii inverse,
deoarece ADN-polimeraza nu iniiaz sinteza unei catene noi, ci doar alungete una preexistent.
Fig. 92. Succesiunea etapelor transcrierii i traducerii informaiei genetice la retravirusuri.
Procesul transcrierii ncepe timpuriu, deoarece RT se activeaz imediat ce virusul a ajuns n celula
sensibil. Etapele replicrii ARN viral sunt urmtoarele:
a) Legarea complexului molecular al RT, de ARN genomic viral;
b) Sinteza unei copii de ADN complementar, catalizat de RT, care rmne legat prin puni de H, de ARN
genomic. Rezult un hibrid molecular ARN-ADN;
c) Digestia selectiv a ARN genomic, din hibrizii moleculari ARN-ADN, sub aciunea RN-azei H, sau chiar
sub aciunea RT;
d) Sinteza unei catene complementare de ADN viral. Astfel se formeaz o molecul dublu catenar de ADN
viral, care este translocat n nucleul celulei infectate i se integreaz covalent n structura unui cromosom al
celulei. ADN viral este integrat stabil i din punct de vedere structural nu se distinge de secvenele de ADN
cromosomal.
ADN integrat este transcris n dou tipuri de molecule de ARN: unele scurte (subgenomice), cu rol de
ARNm i altele lungi, cu funcie genomic. La retravirusurile transductoare, copiile lungi de ARN
ncorporeaz secvene oncogene (protooncogene), derivate din celula gazd.
Activitatea ADN-polimerazic a RT necesit o matri de ARN sau ADN i, ca toate ADNpolimerazele cunoscute, nu iniiaz sinteza ADN de novo, ci necesit o molecul preexistent (primer). In
vitro, primerul poate fi ARN sau ADN, dar n vivo, totdeauna este ARN.
Pentru sinteza catenei ADN de polaritate negativ, rolul de primer l are molecula de ARNt, originar
n celul. Pentru sinteza celei de a II-a catene de ADN, molecula de ARN genomic este incizat la nivelul
secvenei polipurinice (PP) i funcioneaz ca primer.
Toate revers-transcriptazele, pentru activitatea in vitro au nevoie absolut de cationi bivaleni: Mg2+
(l0 mM).
Activitatea RN-azei H este inerent n toate preparatele de revers-transcriptaza. Ea hidrolizeaz ARNgenomic din hibridul ARN-ADN, pe msur progresiei celei de a II-a catene de ADN.
Biosinteza proteinelor tardive
Categoria proteinelor tardive cuprinde pe acelea care se sintetizeaz dup replicarea genomului viral.
Ele sunt n primul rnd, proteine structurale, necesare asamblrii virionilor progeni i se sintetizeaz cu o
rat nalt, prin transcrierea i traducerea copiilor genomice multiple, rezultate prin replicare. De aceea,
proteinele tardive se sintetizeaz n cantiti mari, uor detectabile pe imaginile electrono-optice sau la
analiza electroforetic. De exemplu, n celulele infectate cu adenovirusuri, proteinele tardive se sintetizeaz
n mare exces i formeaz incluziuni mari, n care agregatele moleculare au o distribuie ordonat,
paracristalin. Alte proteine tardive au rol funcional:
- proteinele reglatoare, al cror rol s-a demonstrat mai nti pentru bacteriofagi, iar ulterior, pentru adenoi herpesvirusuri. Cantitile de proteine necesare asamblrii diferitelor structuri virale sunt foarte diferite i
proporiile sintezei trebuie corelate direct cu necesarul;
- proteine de morfogenez, necesare asamblrii virusurilor cu structur complex;
- proteine care uureaz eliberarea virionilor din celul.
Pentru sinteza proteinelor tardive, virusurile folosesc aparatul celular de sintez i exploateaz
mecanismele celulare pentru transportul i modificarea proteinelor traduse.
Ca i proteinele celulare, cele virale se sintetizeaz pe ribosomii legai de membrane sau pe ribosomii
liberi n citoplasm, n funcie de destinaie. In celula normal, ribosomii asociai membranelor, sintetizeaz
proteine i glicoproteine de membran, iar ribosomii liberi sintetizeaz enzime i alte proteine citoplasmatice.
Transportul i prelucrarea proteinelor
Pentru localizarea diferit a proteinelor este determinant secvena de aminoacizi de la captul Nterminal al polipeptidului, denumit secvena semnal, dar i alte secvene ale polipeptidului, ca i modificrile
ce survin dup sintez. Toate orienteaz proteina spre diferite localizri: intrarea n nucleu, inseria n
membran etc. Determinanii care orienteaz destinaia proteinei se numesc semnale de triere. Semnalele au
caracter de specificitate i constau din scurte secvene de aminoacizi care se adaug polipeptidului n
cisternele aparatului Golgi. In funcie de destinaie, proteinele vor fi segregate i mpachetate n vezicule
separate.
Adeseori, proteinele virale se sintetizeaz sub forma unor precursori de dimensiuni mai mari, care
sunt supui clivajului proteolitic, fie n timpul sintezei, fie ulterior. Clivrile sunt catalizate de proteaze
celulare i mecanismul lor este similar cu acela al clivrii proteinelor celulare. Astfel, proteinele virale cu
destinaie membranar pierd secvena N-terminal, nainte de terminarea sintezei. Proteinele structurale sunt,
adeseori, clivate n timpul asamblrii virionilor.
Glicozilarea proteinelor virale, consecutiv traducerii informaiei genetice urmeaz acelai mecanism
ca i glicozilarea proteinelor celulare. Toate proteinele expuse pe suprafaa nveliului sunt glicozilate, iar
cele din structura nucleocapsidei nu sunt niciodat glicozilate. Catenele glucidice ale glicoproteinelor virale i
celulare, formate din l-3 resturi, sunt N-lincate de asparagin i conin secvena Man-GlcNac-GlcNac.
Glicozilarea ncepe n timpul sintezei polipeptidului n reticulul endoplasmic.
Catenele glucidice O-lincate sunt legate de treonin i serin i sunt adugate totdeauna n cisternele
Golgi. Diferitele zaharuri ale catenei oligozaharidice sunt adugate secvenial, fiecare reacie fiind catalizat
de o glicozil-transferaz specific de origine celular.
Unele proteine virale sunt fosforilate. Ele interacioneaz cu ADN i au rol n replicarea ADN sau n
transcriere. Altele sunt acilate, prin legarea covalent a acizilor grai.
Proteinele virale tardive sunt transportate la situsuri diferite n funcie de sediul morfogenezei
virionilor: o parte rmne n celul, iar o alt parte este transportat la nivelul membranei, avnd rol n
procesul nmuguririi virale.
Transportul glicoproteinelor de nveli este cunoscut la mixo- i paramixovirusuri. Ele se sintetizeaz
pe poliribosomii ataai cisternelor de reticul endoplasmic. De aici migreaz n cisternele golgiene i se
glicozileaz sau sufer alte modificri (acilare cu acid palmitic sau miristic). Prin vezicule de transport,
glicoproteinele sunt transportate la nivelul membranei i se inser pe faa extern a acesteia. Proteina
matriceal (M), neglicozilat, se agreg prin interaciuni necovalente, pe faa intern a membranei
citoplasmatice, n zone distincte (petice).
Asamblarea (morfogeneza) viral
Studiul dinamicii asamblrii virusurilor infecioase pentru celula animal este ngreunat, pe de o
parte, de complexitatea structural a capsidei, iar pe de alt, de abundena componentelor moleculare ale
mediului celular n care are loc asamblarea. Cunotiinele referitoare la mecanismele dominante ale asamblrii
virale sunt rezultatul studiilor morfogenezei fagilor i a virusurilor infecioase pentru plante.
Morfogeneza viral se supune principiului fundamental al autoasamblrii*, ca rezultat al faptului c
fiind determinante de form, capsomerele se pot asocia ntr-o modalitate unic.
*
Autoasamblarea semnific faptul c toat energia i informaia pentru asamblare sunt coninute n monomerii
individuali. Monomerii se asociaz unul cu altul, ntr-o ordine determinat, ntr-o combinaie de legturi ionice, legturi
de H i interaciuni hidrofobe.
La virusurile cu simetrie helical (de exemplu, virusul mozaicului tutunului VMT), capsida se
asambleaz pe msur ce capsomerele interacioneaz cu ARN genomic (fig. 93). La acest virus s-a
demonstrat pentru prima dat, existena unei relaii fixe ntre genom i capsomere, precum i mecanismul
autoasamblrii. Genomul VMT este alctuit din 6390 de nucleotide. Dac fiecare capsomer, n procesul
morfogenezei capsidei se asociaz cu trei nucleotide, rezult c lungimea genomului viral, determin n mod
obligatoriu, lungimea virionului. Altfel spus, n timpul asamblrii virionului, capsomerele se aeaz n jurul
moleculei de ARN genomic. In absena genomului, capsomerele se asambleaz n numr foarte mare,
formnd o capsid imens, dar goal.
La VMT, molecula proteic este n acelai timp, unitate chimic i unitate structural a capsidei
(capsomera). In anumite condiii de mediu (creterea valorii pH), capsida se dezorganizeaz n capsomerele
componente. Restabilirea condiiilor de mediu, induce autoasamblarea capsidei cilindrice, deoarece
capsomerele sunt determinante de form, adic se pot asambla ntr-un singur mod, dup principiul de
construcie a simetriei helicale.
Fig. 93. Procesul autoasamblrii semnific interaciunea genomului cu capsida. a. La VMT, structura n ac de pr
a genomului cu regiunea de iniiere, se leag de primul disc dublu format din capsomere pentru a iniia asamblarea
virionului. b, c. Inseria ARN viral n scobitura central a discului dublu format din capsomere. d, e. Alungirea virusului
se realizeaz prin adugarea succesiv a discurilor duble de capsomere.
Mecanismul autoasamblrii capsidei VMT este urmtorul: iniial se formeaz un complex stabil, de l7
uniti proteice (capsomere), n form de disc, aezate ntr-un strat unic. Ele se agreg spontan pentru a
forma un disc alctuit din dou straturi ce conin 34 capsomere. Fiecare strat al discului conine l7
capsomere, aproape acelai cu numrul de capsomere (l6,3), ntr-un tur al helixului VMT. Discul alctuit din
dou straturi de capsomere este intermediarul cheie al asamblrii VMT. O proprietate important a discului
este c subunitile pot s alunece una fa de alt, pentru a forma un helix cu dou tururi.
Discul, alctuit din dou tururi de capsomere interacioneaz cu ARN genomic. Asamblarea ncepe
prin inseria buclei de iniiere a genomului (secvena de mpachetare), n spaiul liber din centrul discului
proteic. Discul proteic recunoate specific secvena de mpachetare a genomului. Cu excepia secvenei de
mpachetare, care iniiaz procesul asamblrii, proteinele capsidei i ARN genomic interacioneaz
nespecific. Prin interaciunea lor nu se formeaz legturi covalente noi, ci numai legturi secundare slabe. Ca
dovad a interaciunii laxe, att ntre capsomere, ct i ntre capsomere i ARN, capsida se disociaz prin
creterea valorii pH.
Virionul este complet asamblat dup ce este acoperit captul 5 al genomului.

In general, virionii cu structur complex se asambleaz gradat din ansambluri distincte, construite
din subuniti proteice, ce se formeaz spontan prin autoasamblarea moleculelor proteice individuale.
In esen, asamblarea virionilor cu simetrie icozaedric, este rezultatul a dou procese ce se desfoar
succesiv sau aproape simultan:
- asamblarea proteinelor structurale n capsomere i a acestora n structura capsidei. La virusurile
complexe, capsomera ca unitate de construcie este alctuit din cteva molecule proteice;
- asocierea capsidei cu acidul nucleic genomic.
La ribovirusurile nude, cu simetrie icozaedric, asamblarea capsidei i asocierea ei cu ARN sunt
procese aproape concomitente, datorit instabilitii ARN viral n celul.
La virusurile ADN cu simetrie icozaedric (adeno-, herpetice), ansamblurile proteice pot forma o
structur goal, matur, denumit precapsid, nainte de a se asocia cu genomul. Interaciunea genomului
viral (ADN sau ARN), cu proteinele capsidale i rolul acestor interaciuni n mpachetarea genomului rmn
necunoscute. n capsid este mpachetat, de regul, numai ARN genomic, ca dovad a existenei unei secvene
de mpachetare (identificat la ARN Sindbis un alfavirus).
In procesul asamblrii capsidelor cu simetrie icozaedric, particip proteinele de cofraj. Ele au
probabil, nu numai un rol mecanic, ci i catalitic n realizarea unor interaciuni stabile ale moleculelor
componente. Dup asamblarea capsidei i consolidarea interaciunilor ntre capsomere, proteinele de cofraj
sunt eliminate din structura virionului.
La reovirusuri, segmentele genomice de ARN dublu catenar se asambleaz cu o protein de
morfogenez i formeaz regiunea central a virionului, pe suprafaa creia se asambleaz capsida.
Studiul ultrastructural al replicrii virusului vaccinal a relevat procesul stadial complex al
morfogenezei, cu participarea cisternelor aparatului Golgi, care formeaz nveliul extern al virionilor. n
citoplasma celulelor infectate apar zone difuze sau bine delimitate alctuite din material fin-granular,
denumite viroplasm, n interiorul crora se asambleaz virionii progeni. Procesul asamblrii, complex i
incomplet elucidat, comport edificarea de novo a unor structuri membranare destinate s nglobeze o parte
din materialele viroplasmei.
Creterea, turnover-ul i repararea membranelor se face prin intercalarea componentelor structurale
(proteine, lipide) n structurile preexistente. Biogeneza de novo a membranelor rmne una dintre marile
probleme ale biologiei. Pentru virusurile pox, exist dovada structural c unele componente ale nveliului,
sintetizate sub control viral, ncep s se condenseze n membrane. Membranele sunt asamblate n focare
viroplasmice discrete i rmn separate de membranele celulare.
Membranele virale sintetizate de novo sunt detectabile n matricea viroplasmei i au structur
trilaminar, fiind tapetate la exterior de un strat dens de spiculi. Pe msur ce membranele cresc, ele nconjur
ADN nascent i proteinele acumulate n viroplasm.
Eliberarea virionilor
Eliberarea virusurilor din celul se face prin mai multe mecanisme, dependente n primul rnd, de
natura virusului.
Virusurile nude se elibereaz rapid dup moartea i liza celulei. Intr-o mic msur, virusurile nude
(cu genom ARN sau ADN) se elibereaz prin modificarea permeabilitii membranei citoplasmatice.
Ribovirusurile nvelite (mixo-, paramixo, toga-, retravirusuri) se elibereaz prin nmugurire din
membrana citoplasmatic sau n cisternele reticulului endoplasmic granular (flavivirusuri). Ultimele etape ale
asamblrii nucleocapsidei sunt asociate cu primele stadii ale nmuguririi, sau asamblarea capsidei precede
nmugurirea (de exemplu, particulele de tip B i D ale retravirusurilor). Inmugurirea are loc la nivelul unor
situsuri specifice ale membranei celulare, acolo unde proteinele virale s-au inserat, att pe faa intern ct i
pe cea extern a membranei plasmatice sau a membranelor reticulului endoplasmic. Asamblarea prin
nmugurire necesit co-localizarea componentelor structurale (fig. 94).
Proteinele care proemin pe suprafaa extern a membranei sau n cisternele reticulului endoplasmic,
sunt glicozilate, iar cele care tapeteaz faa intern a membranei citoplasmatice sunt neglicozilate.
Glicoproteinele virale se inser n zone distincte ale membranei, din care proteinele celulare sunt deplasate
sau chiar nlocuite. Nucleocapsidele se asociaz specific cu proteinele virale care tapeteaz faa citoplasmatic
a membranei (proteina M), sau cu domeniile citoplasmatice ale glicoproteinelor virale inserate n membran
(la togavirusuri).
La ortho- i paramixovirusuri, nucleocapsidele recunosc specific i se ataeaz de proteina matriceal.

Ulterior ncepe nmugurirea i treptat, virionul se elibereaz, nvelit fiind de membrana citoplasmatic, n care
se gsesc inclavate glicoproteinele virale. Proteina matriceal are rolul unei puni de legtur ntre
nucleocapsida viral i glicoproteinele inserate n membran.
Fig. 94. Formarea nveliului viral prin nmugurire. Eliberarea particulelor virale progene.
Lipidele i glucidele din alctuirea nveliului viral sunt proprii celulei. Din aceast cauz, compoziia
lor n structura unui virus difer n raport cu substratul celular n care se multiplic. Datorit acestui fapt,
preparatele unui virus, obinute pe linii celulare diferite se deosebesc prin proprietile fizice, biologice i
antigenice.
Unele virusuri care nmuguresc, nu sunt foarte eficiente n procesul eliminrii proteinelor
membranare, iar fenomenul ncorporrii proteinelor strine este real. De aceea, nveliul viral conine i
glicoproteine de origine celular i chiar ale unui alt virus, care infecteaz concomitent aceiai celul. Faptul
este ilustrat de neutralizarea retravirusurilor, att in vivo ct i in vitro, de anticorpii specifici fa de
proteinele membranare. Proteinele membranare par a fi ncorporate pasiv n nveli, dac nu mpiedic steric
formarea acestuia.
Eliberarea virionilor prin nmugurire este mai eficient pentru randamentul infeciei (producerea
virusului progen), deoarece nu depinde de dezintegrarea imediat a celulei. Celula rmne viabil o perioad
mai lung de timp sau dup transformarea malign este chiar nemuritoare i elibereaz virus.
Efectele virusurilor care nmuguresc, asupra celulei gazd sunt foarte diverse: de la citoliz (toga-,
paramixo, rhabdovirusuri), pn la supravieuirea nelimitat a acesteia, dup transformarea cu retravirusuri.
La herpesvirusuri, virionii se nvelesc la contactul cu lamela intern a membranei nucleare,
traverseaz spaiul dintre cele dou lamele i la nivelul porilor nucleari trec n cisternele reticulului
endoplasmic i n vezicule. Sistemele membranare nchise protejeaz virionii de contactul cu citoplasma i
mediaz transportul la suprafaa celulei. Membrana veziculei de transport, fuzioneaz cu membrana
citoplasmatic i virionii sunt eliberai n spaiul extracelular. Herpesvirusurile sunt totdeauna citolitice.
Celulele infectate cu virusuri care nmuguresc la nivelul membranei citoplasmatice sau la nivelul
altor membrane celulare, devin inta antigenic pentru efectorii sistemului imunitar, care recunosc
glicoproteinele codificate de virus. Cele infectate cu virusuri nude sunt recunoscute de efectorii sistemului
imunitar, deoarece expun antigene virale asociate cu molecule membranare.
Infeciozitatea acizilor nucleici virali
Desfurarea ciclului de replicare viral nu este condiionat de ansamblul integrat al componentelor
structurale ale virionului, ci n esen, numai de genomul viral i uneori, de proteinele de replicare asociate
acestuia. Infeciozitatea acizilor nucleici virali s-a demonstrat iniial pentru ADN fagic i ulterior pentru ARN
al VMT. Dac acidul nucleic genomic funcioneaz ca ARNm, infeciozitatea sa este o proprietate fr
excepie. ARN genomic cu polaritate negativ, n stare pur, nu este infecios, deoarece este necesar
transcrierea sa ntr-o copie de ARN complementar, cu rol de ARNm.
Infeciozitatea acizilor nucleici virali nu mai este condiionat de interaciunea cu receptorii suprafeei
celulare. De aceea, spectrul celulelor infectate prin intermediul acizilor nucleici purificai crete foarte mult,
dar eficiena procesului infecios (numrul de molecule genomice infecioase/celul i respectiv cantitatea de
virus progen) diminu semnificativ.
Tipuri de relaii virus-celul
Utilizarea culturilor de celule a permis definirea mai multor tipuri de interaciuni ale virusurilor cu
celulele pe care le infecteaz, dominate de particularitatea unic a acestor entiti infecioase parazitismul
absolut. Interaciunea virus-celul este modulat de particularitile funcionale att ale virusului ct i ale
celulei.
Dup ce un virus infecteaz celula sensibil, ansamblul rezultat constituie o unitate funcional cu
trsturi noi, distincte, care nu este suma aritmetic a celor dou uniti (celul i virus), ci un complex viu, a
crui funcionalitate deriv din interaciunea celor dou genomuri. Uneori, genomul viral domin
funcionalitatea complexului, iar alteori informaia genetic viral este dominat de programul genetic al
celulei.
Modalitile de evoluie a complexului virus-celul sunt urmtoarele:
- evoluia (starea) independent;
- evoluia (starea) dependent (sau interaciunea de tip integrativ).
Starea independent a celor dou uniti care interacioneaz corespunde situaiei n care genomul
viral nu se supune mecanismelor reglatoare ale celulei. Multiplicarea virusului se realizeaz ntr-un ritm
propriu, coordonat de genomul viral. Rezultatul interaciunii este infecia viral productiv.
Infecia productiv definete interaciunea n cursul creia virusul infectant preia controlul proceselor
de biosintez celular i le deviaz de la sinteza constituienilor proprii, n sensul biosintezei mai mult sau mai
puin exclusiv, de constituieni virali. Informaia genetic viral este exprimat integral, asigurnd
desfurarea ntregului ciclu de multiplicare, asamblarea virionilor i, n multe cazuri, moartea i liza celulei
cu eliberarea virusului progen (efect citocid).
Celulele care permit exprimarea integral a mesajului genetic, multiplicarea i eliberarea virusului
sunt permisive. Permisivitatea este o proprietate datorat structurii lor genetice. Celulele permisive provin, de
regul, de la speciile pe care virusul le infecteaz n mod natural, dei exist numeroase excepii (de exemplu,
ortho- i paramixovirusurile se multiplic n oul embrionat de gin). Caracterul permisiv i respectiv
nepermisiv este, cel puin uneori, controlat genetic i este influenat de gradul de difereniere celular.
Celulele embrionare sunt mai permisive. Celulele semipermisive permit multiplicarea viral, dar cu o rat mai
mic. Degenerarea celulei i liza, dac se produc, apar ntr-un interval mai ndelungat dect al celulei
permisive.
Starea independent a genomului viral fa de celul se poate manifesta sub dou forme:
a) a sistemului independent citocid
b) a sistemului independent echilibrat, care corespunde unei evoluii moderate a interaciunii.
Sistemul independent citocid corespunde relaiei n care genomul viral se replic foarte activ. Celula
este copleit de rata nalt a biosintezei componentelor virale i de asamblarea virionilor progeni. Rezultatul
este dezintegrarea celulei i eliberarea virionilor progeni. Aceast interaciune corespunde infeciei litice
productive.
Sistemul independent echilibrat caracterizeaz complexele furnizate de unele virusuri moderate, care
persist n celul, dar nu inhib biosintezele celulare. Genomul viral se replic autonom, dar cu o rat sczut,
care asigur persistena lui n celul i transmiterea de la o generaie celular la alt. Se sintetizeaz
macromolecule virale i se asambleaz virioni progeni. Caracteristic este faptul c genomul viral se pstreaz
n celul, n stare fizic independent, ca ADN episomal. Virusul determin o infecie de lung durat (infecie
persistent).
Infeciile persistente sunt produse de virusuri care se multiplic fr s produc modificri profunde
ale metabolismului celular. Iniial, infeciile persistente au fost recunoscute numai in vivo, dar persistena
viral se produce i in vitro. In culturile celulare se recunosc dou tipuri de infecii persistente:
l) Infeciile echilibrate cronice (steady state infections, steady, engl. = stabil) corespund situaiei n
care, toate sau aproape toate celulele dintr-o cultur sunt infectate cu un virus necitocid, care este produs
continuu, uneori foarte intens. Celulele rmn viabile, metabolic active i continu s se divid, iar virusul
este transmis celulelor fiice. Disfunciile celulei, dei iniial sunt minore pot duce n timp, la tulburri severe.
Acest tip de infecie a fost evideniat n celulele renale de maimu, aparent normale, contaminate cu SV 4o sau
cu SV5 (un paramixovirus). In culturile de celule renale, SV 4o se multiplic, dar celulele rmn viabile,
elibernd cantiti mari de virus n mediul extracelular.
Infecia echilibrat, in vitro nu poate fi eliminat prin adugarea anticorpilor neutralizani, deoarece
nu exist o faz de infecie exogen.
2) Starea de purttor (carrier state) se datoreaz infeciei produse de un virus citocid, a crui
multiplicare este limitat la un numr restrns de celule permisive, dar majoritatea celulelor substratului sunt
nepermisive. Persistena infeciei este asigurat de transmiterea virusului progen la un numr mic de celule
permisive ale culturii. Majoritatea celulelor culturii sunt nepermisive, datorit unor fenomene de rezisten
intrinsec sau datorit unor factori inhibitori (anticorpi, interferon) prezeni n mediu. Spre deosebire de
infecia cronic echilibrat, starea de purttor de virus a unei culturi celulare poate fi vindecat (deoarece
infecia este exogen), prin adugarea anticorpilor antivirali neutralizani sau prin clonarea suspensiei
celulare, la o densitate suficient de mic, pentru a permite izolarea celulelor individuale indemne.
Evoluia dependent sau interaciunea de tip integrativ a fost recunoscut iniial, pentru interaciunea
fagului cu celulele de Escherichia coli K12. Genomul viral se integreaz n cromosomul bacterian, ca profag
(provirus) i persist nu numai n celula infectat, ci se transmite descendenilor ei.
Interaciunea de tip integrativ caracterizeaz raportul dintre genomul virusurilor oncogene i celulele
animale. Uneori, rezultatul interaciunii de tip integrativ este transformarea malign (efect citochinetic) a
celulei, consecin direct a modificrilor profunde a funciilor celulare. Celulele transformate malign pot s
produc virus progen (transformare productiv), dar n alte cazuri, producerea virusului progen nu este
detectabil. Alteori, interaciunea de tip integrativ nu are ca efect transformarea malign, ci constituie
mecanismul molecular obligatoriu al multiplicrii virale (de exemplu, pentru retravirusurile neoncogene).
In concluzie, tipurile de interaciuni dintre un virus i un substrat celular sunt dependente att de
originea substratului celular, de stadiul fiziologic al celulelor, dar i de virusul infectant.
Patologia celulelor infectate cu virusuri
De cele mai multe ori, ntr-un substrat celular permisiv, multiplicarea virusurilor interfer cu funciile
normale ale celulei gazd i produce modificri cu att mai ample, cu ct gradul de sensibilitate a celulei este
mai mare, mergnd pn la degenerare i moarte. n celulele infectate cu virusuri, se acumuleaz componente
virale care determin apariia modificrilor structurale, biochimice i funcionale, consecina fiind liza celulei.
Virusurile care formeaz complexe echilibrate, se multiplic cu o rat sczut. Celulele rmn viabile,
cu modificri structurale sau funcionale minime.
Orice tip de modificare celular indus de virus, fie c are o expresie morfologic, fie numai una
biochimic poart denumirea de efect citopatogen sau citopatic (ECP). Noiunea include att efectul litic, ct
i toate celelalte modificri compatibile cu supravieuirea.
Modificrile morfologice constau n schimbri ale aspectului celular: a)constricia- celulele devin mai
mici, se rotunjesc, iar citoplasma are aspect granular; b)creterea volumului celular, creterea refringenei i
apariia tendinei de agregare); c)vacuolizarea citoplasmei (indus de virusurile vacuolante tip SV4o), precum
i alterri nucleare sau citoplasmatice, cu diferite grade de intensitate; d)fuziunea i formarea sinciiilor sunt
modificri frecvente induse n special de virusurile nvelite; e) efectul citochinetic este produs de virusurile
oncogene i const n stimularea ratei de diviziune, de cele mai multe ori ca rezultat al transformrii maligne,
produs de retravirusurile oncogene i dezoxiribovirusuri, numai n substratul celular nepermisiv, cu o
frecven redus.
Frecvent, termenul de efect citopatogen este folosit n sens strict pentru a descrie exclusiv leziunile
morfologice, deoarece sunt mai uor de evideniat. Modificrile morfologice sunt expresia celor metabolice,
dei intensitatea lor nu este totdeauna corelat direct.
Efectele citopatogene au, adeseori, un caracter specific i se nsoesc de apariia unor modificri
caracteristice i pot fi utilizate pentru a preciza natura virusului infectant.
Din punct de vedere funcional, cele mai evidente ECP sunt de tip citotoxic, citocid sau citochinetic.
Efectul citotoxic hiperacut este cauza morii celulare, nainte de multiplicarea viral, fr producerea
virusului progen. Moartea celular este rezultatul unui efect toxic al proteinelor virale, consecutiv infeciei
experimentale a culturilor celulare cu un inocul masiv. Efectul toxic este produs de proteina pentonic a
adenovirusurilor.
Efectul citocid este rezultatul infeciei celulelor sensibile cu virusuri citolitice i se datoreaz
leziunilor progresive, care duc la alterarea profund a activitilor metabolice i a unor structuri celulare
determinnd, n fazele tardive ale ciclului infecios, moartea celulei i eliberarea virionilor. Celulele cultivate
n monostrat se desprind de suport i manifest alterri majore: rotunjire, vacuolizare, ratatinare (constricie
celular), pierderea afinitii pentru coloranii vitali (albastru tripan, rou neutru), ceea ce permite
identificarea i diferenierea lor de celulele vii.
Efectul citocid i de distrugere litic a celulelor infectate cu virus se exteriorizeaz macroscopic, n
culturi celulare n monostrat, prin apariia discontinuitilor pnzei celulare, denumite plaje de liz. Ele apar
ca nite zone clare n mijlocul unui strat confluent de celule nvecinate, de obicei ca rezultat al multiplicrii n
cicluri succesive, a unei singure particule virale din inoculul iniial. Plaja de liz este rezultatul lizei celulelor
infectate n cicluri succesive de multiplicare. Forma i mrimea plajelor pot furniza date utile pentru
identificarea virusului. Virusurile care nu lizeaz celula gazd, nu produc plaje de liz.
Mecanismele moleculare ale efectului citopatic
ECP este consecina parazitismului absolut al virusurilor, a eficienei lor de a subordona activitatea
metabolic a celulei i de a o orienta n sensul sintezei macromoleculelor cu specificitate viral. Bazele
moleculare ale ECP sunt puin cunoscute.
Virusurile inhib mai multe procese celulare pentru c un singur mecanism de aciune nu are eficien
complet. Mecanismele ECP sunt specifice virusului infectant.
Intr-un complex virus-celul, predomin unul dintre mecanismele prezentate mai jos.
1. Modificri metabolice
Interaciunea citolitic produce inhibiia sintezei macromoleculelor specifice celulei, denumit i
efect de ntrerupere. In absena sintezelor specifice, care s nlocuiasc moleculele uzate, apar modificri
funcionale i structurale incompatibile cu viaa.
Virusurile controleaz metabolismul celular prin mai multe mecanisme, care constau n:
- schimbri n metabolismul intermediar, n special al dezoxiribonucleotidelor ;
- modificri ale sintezei, prelucrrii, transportului i turnover-ului macromoleculelor celulare ;
- intensificarea exprimrii genelor virale i interferena cu programul celular.
De regul, virusul nu omoar celula nainte de desfurarea ciclului de replicare.
Modificri ale metabolismului ADN celular. Replicarea ADN celular are loc n faza S a ciclului i
necesit dezoxiribonucleotide, enzime de replicare i sintez proteic.
Pentru replicarea ARN al ribovirusurilor este folosit rezerva de ribonucleotide a celulei i
metabolismul ADN celular nu se modific semnificativ. Retravirusurile se integreaz n cromosomii celulei i
stimuleaz rata diviziunii celulare, dar nu interfer cu replicarea ADN celular.
Replicarea ADN viral este, de cele mai multe ori, dependent de disponibilitatea
dezoxiribonucleotidelor celulare.
Dezoxiribovirusurile se multiplic n diferite tipuri de celule, chiar n cele difereniate terminal (de
exemplu, neuroni), n care sinteza ADN i diviziunea nceteaz. Ele posed mecanisme prin care depesc
condiiile restrictive ale cantitii limitate de dezoxiribonucleotid-trifosfai (dNTP).
Uneori, chiar celulele care se divid nu pot oferi cantitile de dNTP impuse de sinteza ADN viral,
ceea ce necesit un aport suplimentar.
Disponibilitatea limitat a dNTP este depit prin dou mecanisme :
- virusurile cu genom mic (papova) induc intrarea celulei n faza S. Se exprim genele celulare pentru
sinteza enzimelor ce catalizeaz sinteza dNTP i replicarea ADN. Antigenul T de 94 kDa, codificat de
SV4o se leag de o protein supresoare a diviziunii celulare i a replicrii ADN proteina p53 - i astfel
se anuleaz efectul su inhibitor. Exprimarea unei singure gene virale pregtete celula pentru replicarea
ADN. Activarea genelor reglatoare ale diviziunii, st la baza potenialului oncogen al acestor
virusuri;
virusurile cu genom mare (adeno, herpes, pox), suplimenteaz cantitatea de dNTP deoarece codific
propriile enzime ale metabolismului nucleotidelor i ale replicrii ADN. Genele virale pentru aceste
enzime au fost probabil dobndite din celul. Ele nu funcioneaz, dac virusul infecteaz celule
metabolic active, dar confer independena replicrii virale de faza S a ciclului celular. Enzimele virale
catalizeaz aceleai reacii ca i omologele lor celulare, dar specificitatea de substrat i mecanismele de
reglare sunt diferite, ceea ce le face inte pentru agenii antivirali. De exemplu, acyclovir i gancyclovir,
analogi ai guanozinei pot fi fosforilate de Tk a herpesvirusului, dar nu de Tk a celulei.
adenovirusurile codific trei proteine pentru replicarea ADN: o ADN-polimeraz, o
protein legat terminal de genom cu rol de primer al sintezei ADN viral i o protein
care se asociaz cu ADN monocatenar. Herpesvirusurile codific 7 proteine cu rol n
replicarea ADN, ceea ce le confer independena de ciclul celular i le permite s se
multiplice dup inhibiia sintezei ADN i chiar n celule care nu se divid (neuroni), unde
produc infecii persistente latente .
Modificarea strii fizice a ADN. Virusurile complexe(adeno, herpes)modific starea fizic a ADN
celular, fcnd-o incompatibil cu replicarea i cu funcia de transcriere, ceea ce determin inhibiia sintezei
macromoleculelor specifice celulei. Matricea nuclear este substratul fizic pentru cromatin, dar i pentru
procesele de transcriere i replicare a ADN.
Unele molecule virale se asociaz cu matricea nuclear i modific distribuia ADN n nucleu. De
exemplu, n celulele infectate cu virusuri herpetice, ADN se desprinde din punctele de inserie pe matricea
nuclear, iar dup infecia cu adenovirusuri, efectul este invers, de marginaie a cromatinei (deplasarea i
aglomerarea ei spre periferia nucleului, n blocuri heterocromatice). Virusurile pox codific o DN-az, ce
ptrunde n nucleul celulei i depolimerizeaz ADN monocatenar, despiralizat pentru replicare sau pentru
transcriere.
Ca rspuns la infecia cu unele virusuri, celulele sufer fenomenul de apoptoz, n cursul creia se
produce clivajul internucleosomal al cromatinei. In general, virusurile inhib programul apoptotic, celula
rmnnd viabil ca substrat al multiplicrii virale, iar altele (influenza, Sindbis) par a fi adaptate s se
multiplice n celulele apoptotice.
Modificri ale metabolismului ARN. Pentru sinteza proteinelor virale, este totdeauna necesar
sinteza ARNm cu specificitate viral. Perturbarea metabolismului celular se produce la toate treptele:
transcriere, prelucrare, transportul nucleo-citoplasmatic, traducere, sau modificarea ratei degradrii. Toate
confer ARN viral un avantaj competitiv prin urmtoarele mecanisme:
- toate ribovirusurile i poxvirusurile codific sinteza unei ARN-polimeraze cu aciune specific fa de
genomul viral;
- dezoxiribovirusurile codific n faza timpurie, sinteza cel puin a unui factor viral care schimb
specificitatea ARN-pol II celulare i o orienteaz spre ADN viral, trecnd-o sub controlul unui promotor
viral foarte activ.
- majoritatea ribovirusurilor inhib activitatea aparatului de transcriere al celulei, deoarece se multiplic
n citoplasm i nu necesit activitatea de transcriere a celulei. Unele proteine virale cu rol important n
ciclul de multiplicare (de exemplu proteaza 3C a poliovirusului i proteina M a VSV), inhib
transcrierea genelor gazdei (Lyles, 2000, mmbr, 64, 4) catalizat de toate cele 3 ARN-polimeraze
celulare. Proteinele ribovirusurilor sunt localizate, n cea mai mare parte n citoplasm, dar proteaza 3C
i proteina M se gsesc i n nucleul celulei infectate. In cele 2 sedii proteina M ndeplinete funcii
distincte: n ciclul replicrii virale(are rol n asamblarea virionilor i inducerea procesului de
nmugurire), iar n nucleu inhib transcrierea genelor celulare. Proteaza 3C a FMDV cliveaz histona H 3
i inhib transcrierea prin alterarea matriei cromatiniene. Excepia o constituie virusurile influenza care
avnd o faz nuclear a ciclului, necesit activitatea de transcriere a celulei pentru producerea
oligonucleotidelor bonetate pe care le folosesc ca primeri pentru sinteza ARNm viral. ;
- cele mai multe virusuri neoncogene inhib maturarea ARNm celular prin mecanisme complexe. De
exemplu, proteina NS1 a virusului gripal inhib maturarea ARNm celular, n 2 trepte: interfer cu treapta
de clivare a ARN premesager i inhib treapta adenilrii captului 3. Tot ea cliveaz un fragment de l0l3 nucleotide de la captul 5 al ARNm celular. Fragmentele au rol de primeri pentru iniierea sintezei
ARNm viral n nucleul celulei infectate, dat fiind incapacitatea ARN-polimerazei virale de a iniia
sinteza moleculelor de ARN. Efectul este transferul secvenei de bonetare de la ARNm celular la
mesagerii virali, fcndu-i nefuncionali pe primii i asigurnd traducerea celor virali;
la adenovirusuri, dou proteine timpurii inhib transferul nucleo-citoplasmatic al ARNm celular din
nucleu i favorizeaz transferul ARNm viral tardiv;
virusurile herpetice i virusul vaccinal mresc rata degradrii ARNm i inhib sinteza proteinelor
celulare. Creterea ratei degradrii nu este specific ARNm celular, deoarece ARNm virali sunt supui
aceluiai proces, dar abundena ARNm virali datorat ratei superioare a transcrierii compenseaz
pierderea prin degradare. In celulele infectate cu VSV, ARNm virali, n mare exces cantitativ, sunt
asociai cu proteina N (nucleoproteina) n complexe RNPm i formeaz o rezerv mare de ARNm care
intr n competiie eficient cu ARNm al gazdei. Dar ARNm viral este tradus preferenial chiar cnd
abundena sa este diminuat de 10 ori sau mai mult: se crede c ARNm viral conine secvene ce
favorizeaz traducerea (situsuri interne care favorizeaz legarea ribosomilor);
- n celulele infectate cu virusul influenza este inactivat un factor celular(eIF4E) care se leag de
secvena de bonetare a ARNm. Pentru a se lega de captul bonetat, eIF4E trebuie fosforilat de o kinaz
celular. In celulele infectate cu virusul influenza, eIF4E este parial inactivat prin nivelul redus al
fosforilrii. ARNm virali au acelai cap bonetat i o secven de 10-13 nucleotide, ca i mesagerii
celulari i teoretic, ar trebui s fie la fel de sensibili la inactivarea eIF4E. ARNm al virusului influenza
conine o secven la captul 5 care favorizeaz legarea ribosomilor i ridic nivelul traducerii.
Modificri ale metabolismului proteinelor. Sinteza, prelucrarea i transportul proteinelor virale

constituie domeniul de intersecie a funciilor celulare i virale, deoarece virusurile intr n competiie cu
mecanismele sintezei proteinelor celulare. ARNm virali i celulari intr n competiie direct pentru traducere.
Att celula ct i virusul sunt dependente de aparatul celular de sintez i transport proteic.
Inhibiia sintezei proteinelor celulare este una dintre consecinele cele mai evidente ale infeciei cu
virusuri citocide, iar retravirusurile produc perturbri minime. Intre cele dou extreme se situeaz raporturile
celorlalte virusuri cu substratul n care se multiplic.
Mecanismele moleculare ale ntreruperii sintezei proteinelor celulare i ale schimbrii specificitii
aparatului de sintez celular sunt multiple.
Virusurile citocide (polio, herpes, adeno, vaccinal) ntrerup selectiv sinteza proteinelor celulare prin
mai multe mecanisme:
- inhib traducerea mesagerilor celulari
- inactiveaz factorii specifici ai sintezelor celulare;
- prin transcrierea i traducerea preferenial a mesagerilor virali.
Mecanismul traducerii discriminatorii ntre ARNm celular i ARNm viral a fost dedus din faptul c
inhibiia sintezei proteinelor celulare este prea rapid pentru a fi atribuit numai scderii cantitative a ARNm
sau inhibiiei sintezei sale (herpes, vaccinal, rinovirus) :
- ARNm al adenovirusurilor este asemntor cu ARNm celular i este foarte eficient n
competiia traducerii cu mesagerii celulari;
- n celulele infectate cu virusul polio sau cu virusuri herpetice se produce dezagregarea selectiv a
polisomilor celulari. Ribosomii rmn funcionali i disponibili pentru sinteza proteinelor virale. Pe
msur ce sinteza proteinelor virale devine detectabil, apare o nou clas de polisomi, mai mari,
corespunztoare ARNm viral, care este mai mare dect dimensiunea medie a ARNm celular ;
- traducerea ARNm al picornavirusurilor este independent de secvena de bonetare 5. ARNm are o
secven lung 5 necodificatoare ce conine un situs intern de intrare a ribosomilor.
Aproape totdeauna, n celula infectat se sintetizeaz o cantitate total de proteine, mai mic dect n
celula normal, deoarece, n general, infecia diminu capacitatea de sintez proteic.
In multe cazuri, inhibiia sintezei proteinelor are rolul de a inhiba rspunsul antiviral al celulei, iar
traducerea preferenial a ARNm viral este consecina adaptrii virusurilor la replicarea n prezena aciunii
unor astfel de mecanisme inhibitorii.
Aproape toate ribovirusurile, n ciclul replicrii, produc molecule de ARN dublu catenar. Rspunsul
celulei gazd la ARN dc este inhibiia sintezei proteice, mediat de o fosfo-chinaz dependent de ARN
(PKR). PKR este, n esen, o chinaz indus de IFN, dar cele mai multe celule exprim constitutiv nivele
semnificative ale acestei proteine. Rolul ei este de a activa rspunsul celulei la ARN dc, chiar n absena IFN.
In prezena ARN dc, PKR fosforileaz subunitatea a eIF2 i iniierea traducerii este astfel blocat.
2. Pierderea funciilor normale ale membranelor celulare

Virusurile altereaz membrana celulei gazd, pe dou ci:
- modific permeabilitatea membranei citoplasmatice;
- induc fuziunea membranei cu celulele nvecinate.
Ambele procese sunt rezultatul diminurii sau stoprii biosintezelor proprii celulei, precum i al
nlocuirii proteinelor celulare membranare, cu glicoproteine ale peplosului viral. Astfel se perturb echilibrul
mediului ionic intracelular, diminu rata transportului nutrienilor n celul i a eliminrii produilor de
catabolism.
Cele mai evidente modificri ale membranei citoplasmatice sunt detectabile la celulele infectate cu
virusuri nvelite (herpes, mixo-, paramixovirusuri). Celulele au frecvent tendina de a fuziona, producnd
uneori sinciii gigante sub forma unor mase mari de citoplasm, delimitate de o membran, care pot include
zeci sau chiar sute de nuclei.
Procesul fuziunii celulare poate fi indus de proteinele nveliului viral, n special n cazul n care
nveliul conine proteine de origine celular. Fuziunea a fost studiat n culturi de celule infectate cu virusul
Sendai (un paramixovirus), care acioneaz cu mare eficien, ca agent fuzionant. Dup multiplicarea viral,
sinciiile se lizeaz.
Procesul de fuziune celular a fost studiat dup infecia substratului celular cu virusul inactivat prin
iradiere. Virusul iradiat i pierde capacitatea de multiplicare, dar i-o pstreaz pe cea hemaglutinant i
fuzionant. Un virion n raporturi spaiale strnse cu dou celule, favorizeaz formarea unei puni
membranare ce se extinde treptat, rezultatul fiind fuziunea complet a celor dou celule.
Factorul fuzionant al nveliului paramixovirusurilor este o protein specific polifuncional
(proteina F), implicat n iniierea procesului infecios, prin fuziunea nveliului viral cu membrana celulei
sensibile, n hemoliza viral i n fuziunea celular. Proteina F i exercit efectul fuzionant, numai dac este
inclavat n dublul strat lipidic al nveliului viral i dac este meninut n contact strns cu membrana
celular, prin intermediul hemaglutininelor.
Fuziunea din exterior se produce numai dup expunerea celulelor sensibile la doze mari de virioni
infecioi sau inactivai (cteva mii de particule/celul).
Infecia natural se face totdeauna cu un numr mic de virioni i fuziunea este tardiv, dup
desfurarea ciclului de multiplicare. Fuziunea este mediat de glicoproteinele virale inserate n membran.
Este aa numita fuziune din interior, a crei consecin este formarea sinciiilor sau policariocitelor. Efectul
fuzionant este foarte evident la Paramyxovirus i Pneumovirus (virusul respirator sinciial).
Scderea rezistenei membranelor lizosomale determin eliberarea enzimelor hidrolitice n citoplasm
i prin aceasta, agravarea celorlalte mecanisme de producere a ECP.
In celula animal, modificrile lizosomale evolueaz n dou etape: a)creterea permeabilitii
membranelor (cu pstrarea coninutului enzimatic); b)difuzia enzimelor lizosomale n citoplasm i absorbia
lor secundar n nucleul celulei infectate, asociat cu modificri morfologice (rotunjirea celulei) i pierderea
afinitii pentru coloranii vitali.
3. Modificri ale citoscheletului
In timpul infeciei, majoritatea ribovirusurilor induc modificri morfologice pronunate, al cror
rezultat este rotunjirea celulei. Modificrile se datoreaz aciunii unor molecule virale, asupra componentelor
citoscheletului sau sunt cauzate de inducerea apoptozei.
Citoscheletul este format din 3 elemente structurale: microfilamente, microtubuli i filamente
intermediare. Microfilamentele sunt alctuite din subuniti de actin, iar microtubulii sunt formai din
tubulin. Aceste elemente au rol structural, de transport intracelular, de mobilizare a organitelor i sunt
comune marii majoriti a tipurilor celulare. Filamentele intermediare sunt formate din subuniti de
citocheratin i sunt specifice pentru starea de difereniere celular.
Dup infecia viral, frecvent se produce ruperea unuia sau mai multor sisteme de fibre ale
citoscheletului, n special a microfilamentelor de actin. Proteaza 3C a virusului polio i proteina M a VSV
care determin inhibiia sintezei ARN celular, cliveaz proteina asociat microtubulilor i celulele se
rotunjesc. Dup infecie, matricea nuclear de dezorganizeaz, iar efectul se manifest n redistribuirea
cromatinei.
4. Apoptoza este consecina inhibiiei expresiei genelor celulare, indus de virusuri sau se datoreaz
rspunsului antiviral al gazdei.
In infecia cu virusul influenza, apoptoza se datoreaz rspunsului antiviral al celulei: pe suprafaa
celulei este indus expresia receptorului Fas i a ligandului Fas. Dup legarea la ligandul Fas, receptorul Fas
induce semnalul proapoptotic.
Apoptoza este indus de doi factori ai virusului influenza: ARN dc i NA. Inducerea expresiei
receptorului Fas este parte a rspunsului gazdei la ARN dc i este mediat cel puin parial de PKR.
In celulele infectate cu VSV, unul dintre factorii inductori ai apoptozei este proteina M, inhibitoare a
expresiei genelor i a dezorganizrii citoscheletului, dar rspunsul celulei la ARN dc i n special activarea
PKR au rol la fel de important.
5. Apariia corpilor de incluziune

Corpii de incluziune sunt structuri celulare neoformate dup infecie, n masa crora se acumuleaz
componente virale. Prin localizare, incluziile reflect situsul multiplicrii virale.
Incluziunile virale au proprieti tinctoriale noi. Dup form pot fi sferice, ovalare, piriforme sau
nedefinite, n funcie de virusul infectant. Dimensiunile lor sunt cuprinse ntre l i 30 m, ceea ce le face
vizibile la microscopul optic. Unice sau multiple, ele sunt dispuse n citoplasm (n celulele infectate cu
poxvirusuri, ribovirusuri), n nucleu (n celulele infectate cu dezoxiribovirusuri) sau au localizare mixt (n
celulele infectate cu orthomixovirusuri). Unele incluziuni sunt mai cunoscute dup numele autorilor care le-au
descris: corpii Babe-Negri (virusul rabic), corpii Guarnieri (virusul vaccinal), incluziunile Cowdry (virusul
herpes).
Semnificaia biologic a incluziunilor virale este evident i din faptul c ele se dezvolt pe msura
progresiei ciclului de multiplicare. Incluziunile sunt markeri structurali ai procesului dinamic prin care celula
produce virus. Ele reprezint, n general, fabricile de virus n care are loc sinteza componentelor virale
(acizi nucleici, proteine) i are loc morfogeneza virionilor.
Prin specificitatea i localizarea lor, incluziunile indic sediile celulare ale multiplicrii virale. Ele
sunt un indicator util pentru demonstrarea naturii virale a unor leziuni celulare, iar morfologia i dispoziia lor
caracteristic n anumite celule, constituie un important criteriu de diagnostic n unele viroze. Astfel, punerea
n eviden a incluziunilor rabice (corpusculii Babe-Negri) n neuronii din cornul lui Ammon, permite
precizarea diagnosticului de turbare la omul i animalele suspectate de a fi murit n urma infeciei cu acest
virus.
Relaiile dintre virusuri i organisme
Virusurile sunt totdeauna potenial patogene pentru organismul gazd, deoarece altereaz profund
activitatea fiziologic a celulei.
Patogenitatea este definit de mecanismele prin care un virus altereaz starea fiziologic a gazdei.
Patogenitatea se exprim cantitativ prin virulena viral.
Virulena este o proprietate multifactorial, care exprim cantitativ capacitatea unui virus de a se multiplica,
de a se disemina n organism n competiie cu efectorii rspunsului imun i de a produce stri patologice de
diferite intensiti. Virulena este dependent de cteva particulariti ale gazdei:
- de numrul celulelor sensibile i de posibilitatea de acces a virusului la substratul celular permisiv;
- de intensitatea i complexitatea reaciilor de aprare a gazdei, care determin eliminarea i inactivarea
virusului i/sau a celulelor infectate.
Patogenitatea viral s-a studiat pe modelul experimental al animalelor de laborator, dar rezultatele nu
sunt ntru-totul extrapolabile i analoge infeciilor n condiii naturale, la om i animale.
Virulena se exprim totdeauna n raport cu un organism dat. Virusurile care au efect citolitic (citocid)
au virulen extrem, n timp ce virusurile ale cror interaciuni cu celula gazd se manifest prin efect
citochinetic (transformant), au o virulen moderat (sunt virusuri temperate).
Tropismul viral
Particularitile de patogenitate a virusurilor, n special ale celor infecioase pentru organismul uman
i animal sunt determinate de tropismul lor.
Tropismul sau afinitatea semnific proprietatea unui virus de a infecta anumite specii de organisme
(genotropism*), anumite esuturi (histotropism) sau anumite celule ale unui esut (citotropism).
*
In condiii naturale, spectrul de gazd al unor virusuri este foarte restrns: virusurile gripale produc efecte patologice
numai la om, virusul polio i rinovirusurile infecteaz numai omul, iar aftovirusul infecteaz paricopitatele.
In condiii experimentale, unele virusuri (vaccinal, rabic) pot infecta un numr mai mare de specii animale, cu
condiia utilizrii unei doze suficient de mari de inocul.
Manifestrile patologice ale infeciilor virale sunt variabile i dependente de histotropism i

citotropism. In raport cu aceste proprieti, virusurile pot fi clasificate n urmtoarele categorii:
- virusuri dermotrope, cu afinitate pentru tegument i mucoase (poxvirusuri);
- virusuri neurotrope, cu tropism pentru SNC (virusul rabic, virusurile encefalitogene, virusul polio);
- virusuri dermo-neurotrope, cu afinitate pentru celulele tegumentare i pentru SNC (virusurile herpetice);
- virusuri organotrope (viscerotrope), cu afinitate pentru organele interne (virusurile hepatitice);
- virusuri pantrope, cu afinitate pentru celulele sistemului reticuloendotelial(fagocite, celulele reticulare
ale sinusurilor venoase din splin i ganglioni, celulele endoteliale ale vaselor sanguine i limfatice,
fibroblastele esutului conjunctiv).
In general, virusurile au afinitate, ndeosebi pentru celulele normale sau patologice care se divid cu o
rat mai nalt, dar i pentru unele celule care nu se divid, nalt specializate ca structur i funcie. De
exemplu, virusul polio infecteaz motoneuronii din mduv, dar n cazurile grave, chiar neuronii din
coloanele posterioare, din ganglionii spinali senzitivi, din substana reticulat, din nucleii cerebeloi, din
cortexul motor din girul precentral.
Mecanismele tropismului celular par a fi condiionate de existena moleculelor membranare care
condiioneaz interaciunea virusului cu suprafaa celulei. Ipoteza a fost dedus din modificarea sensibilitii
unor celule dup cultivare. De exemplu, rinichiul uman i amniosul, in situ nu sunt infectate de Poliovirus,
dar devin foarte sensibile dup cultivare. Sensibilitatea este corelat cu expunerea pe suprafaa celulelor, in
vitro, a situsurilor de legare a virusului.
Ptrunderea virusurilor n organism se face pe urmtoarele ci:
- la nivelul mucoaselor (respiratorie, gastrointestinal, urogenital)
- prin leziunile tegumentare.
Situsul la nivelul cruia se multiplic dup ce a ptruns n organism se numete focar de infecie
primar. In raport cu tropismul lor pentru diferite celule, unele virusuri se multiplic i produc leziuni la
nivelul porii de intrare.
Din focarul primar, infecia se disemineaz n dou modaliti:
- trecerea direct a virionilor din celula infectat n celulele adiacente, n special pentru virusurile care
nmuguresc i induc fuziunea celulelor. Infeciile progreseaz foarte rapid;
- eliberarea virionilor n spaiul extracelular i reluarea ciclului de adsorbie i fixare pe celulele adiacente.
In spaiul extracelular, virionii sunt expui mecanismelor de aprare a organismului.
Alte virusuri, de la locul ptrunderii i eventual al multiplicrii primare, trebuie s fie diseminate,
pentru a ajunge la celulele sensibile, permisive pentru replicare. Diseminarea este mediat de secreii, limf
sau snge. O cale particular de disemimnare este cea axonal (proprie virusului rabic).
Tipuri de infecii in vivo
Interrelaiile dintre virusuri i organisme sunt modulate de virulena viral, de sistemele de aprare, de
tipul celulelor infectate. Astfel modulat, multiplicarea virusurilor n organism produce mai multe tipuri de
infecii: infecia inaparent, infecia acut, infecia persistent, cu diferitele sale modaliti de evoluie:
- infecia cronic
- infecia latent
- infecia lent
Infeciile inaparente definesc situaiile n care, infecia i replicarea viral nu sunt nsoite de
manifestri clinice. Virusul se multiplic ntr-o msur limitat n celulele pentru care manifest un tropism
natural i nu determin simptome clinice. De exemplu, virusul polio manifest un tropism evident pentru
celulele mucoasei digestive, dar infecia evolueaz inaparent. Leziunile poliomielitice, cu manifestri
patologice apar la un numr redus de persoane, la care virusul infecteaz motoneuronii medulari.
Infeciile inaparente au o importan deosebit n epidemiologie*. Ele reprezint rezervoare

necunoscute de virus, foarte greu de depistat. Evoluia unei infecii n forma sa inaparent este condiionat,
n principal, de sistemele specifice(rspunsul imun celular i humoral) i nespecifice de aprare (interferonii).
*
Epidemiologia este un domeniu al tiinelor medicale care studiaz cile de eliminare, de transmitere i de
ptrundere a agenilor patogeni n organism.
Infeciile acute sunt determinate de virusurile care depesc sistemele de aprare a organismului i
produc leziuni mai mult sau mai puin ample, cu alterarea strii generale a organismului.
Pentru infeciile acute, perioada de incubare este urmat de perioada de stare, cu maifestrile
clinice. La nivel celular, infeciile acute sunt de tip productiv. Este produs virus progen i de cele mai multe
ori se produce liza celular. Aceste infecii au o durat limitat n timp. Rezultatul final al infeciei depinde de
virulena agentului infecios i de intensitatea reaciilor de aprare a gazdei. De cele mai multe ori, virusul
este eliminat din organism, lsnd dup caz, o stare de imunitate mai mult sau mai puin solid.
Infeciile persistente au o durat foarte ndelungat de evoluie, uneori pentru tot restul vieii. Ele pot
avea acest tip de evoluie de la nceput, adic din momentul infeciei, dar uneori, persistena este consecutiv
unei infecii acute.
Persistena viral
Infeciile persistente sau de durat constituie un fenomen biologic semnificativ pentru interaciunea
unor virusuri cu gazdele lor.
Persistena este consecina faptului c dispariia simptomelor unei infecii acute nu este nsoit de
eliminarea virusului. Virusul se pstreaz n organism n rezervoare virale, reprezentate de situsuri celulare
sau anatomice n care virusul poate s persiste n competiie cu RI. Persistena determin recurena
(revenirea) formei acute a infeciei i bolii sau a formei atenuate a acesteia.
Bazele moleculare ale evoluiei persistente a infeciei au fost studiate in vitro, n sisteme celulare.
Rezultatele nu pot fi ntru-totul extrapolate pentru a explica persistena celular in vivo, deoarece infecia
natural este produs de o tulpin slbatic de virus, care poate interaciona cu o multitudine de tipuri celulare
specializate, dar mai ales pentru faptul c in vivo, virusul se multiplic sub presiunea selectiv permanent a
factorilor de aprare a gazdei.
Infeciile persistente au fost mprite n trei categorii:
- infecii persistente, n cursul crora virusul este produs permanent. Au fost denumite infecii cronice sau
productive: infeciile produse de virusul hepatitei B i C umane, de HIV i de virusul coriomeningitei
limfocitare (LCM) la oarece;
- infecia latent se caracterizeaz prin perioada ndelungat a evoluiei, n cursul creia virusul nu este
produs permanent, ci numai la intervale de timp(infeciile herpetice);
- infecii lente formeaz un grup avnd caracteristici definitorii, perioada de incubare foarte lung, evoluia
progresiv i lent a procesului patologic, dar fr a omor celulele infectate i fr apariia semnelor
vizibile de infecie. La om i animale, infeciile lente pot determina i declana boli degenerative cronice.
O infecie lent tipic este produs de virusul Visna (un retravirus), agentul panencefalitei bovinelor.
Aceast clasificare este nclcat de numeroase excepii, deoarece pentru unele virusuri, persistena
implic succesiunea etapelor de infecie productiv i latent. De exemplu, virusul hepatitei B (VHB)
infecteaz cronic (productiv) hepatocitele, dar limfocitele sunt infectate latent, iar virusul Epstein-Barr (EBV)
infecteaz productiv celulele epiteliului faringian, dar infecteaz latent limfocitele B.
Pentru ca un virus s produc o infecie persistent, trebuie s ndeplineasc trei condiii:
- s nu lizeze celula infectat (efectul citopatic s fie minim);
- genomul viral s poat fi meninut pe termen lung n celula gazd;
- sa evite detectarea i eliminarea de ctre efectorii sistemului imunitar.
Infeciile persistente n organismul uman sunt produse de urmtoarele virusuri (dup R. Ahmed, l996):
Virusul
Adenovirusuri
CMV
EBV
Locul persistenei
Adenoide, tonsile, limfocite
Rinichi, glande salivare, limfocite ?, macrofage ?,
celule stromale ale maduvei osoase
Celule epiteliale faringiene, limfocite B
Consecinte
Necunoscute
Pneumonie, retinit
Mononucleoza infecioas, limfomul
Burkitt, carcinom
nazofaringian,
limfom non-Hodgkin
HSV l i 2
Neuronii ganglionilor senzitivi
Virusul herpetic uman 6

VZV
VHB
VHD
Papiloma virus
Parvovirus Bl9
Polioma virus BK
Polioma virus JC
VHC
Virusul rujeolei
Rubela virus
Limfocite
Neuronii ganglionilor senzitivi i celulele satelite
Hepatocite, limfocite ?, macrofage ?
Hepatocite
In celulele epiteliale tegumentare
Celulele precursoare ale eritrocitelor din mduva
osoas
Rinichi
Rinichi, oligodendrocite n SNC
Hepatocite, limfocite ? macrofage ?
Neuroni i celule gliale ? n SNC
SNC
HIV
Limfocite TCD4, monocite, macrofage, microglie,
HTLV l
HTLV 2
Limfoc l li Limfocite T
Limfocite T
Leziuni herpetice orale, genitale,

encefalita, keratita
Exantem
Varicela zoster.
Hepatita, carcinom hepatocelular
Exacerbarea infeciei cronice cu HBV
Papiloma, carcinoma
Anemie
hemolitic
aplazic,
deficiena cronic a mduvei osoase
Cistita hemoragic
Leucoencefalopatie multifocal
Hepatita, carcinom hepatocelular
Panencefalita sclerozant subacut
Panencefalita progresiv, diabetinsulino-dependent ? artrita juvenil ?
SIDA
Leucemia celulelot T, polimiozit
Necunoscut
Virusurile care in vitro produc infecii echlibrate cronice, adic infecteaz productiv dar nu lizeaz
celula, evolueaz ca infecii persistente. Ele nu perturb echilibrul funcional al celulei i persist ca infecii
cronice de lung durat (de exemplu, virusul corio-meningitei limfocitare la oarece (LCMV) i virusul
hepatitei B (VHB).
Infeciile persistente sunt produse i de virusurile cu potenial litic, cnd infecteaz celule
nepermisive, sau atunci cnd se selecteaz n timp, variante virale mai puin virulente. Un virus dat poate fi
litic pentru unele celule, dar produce infecii echilibrate pentru altele. De exemplu, HIV lizeaz limfocitele T,
dar este mai puin virulent i litic pentru celulele seriei monocit-macrofag.
Mecanismele persistenei virale
Infeciile latente sunt produse mai frecvent de virusurile cu genom ADN, probabil pentru c celula
pstreaz mai uor ADN, fie integrat, fie ca molecul fizicindependent.
Virusurile cu genom ADN infecteaz uneori celulele nepermisive, datorit restriciilor de replicare
impuse de celula gazd. Chiar i virusurile care n mod obinuit lizeaz celulele permisive, pot infecta
persistent diferite tipuri de celule.
Virusurile ARN pot produce infecii cronice n cazul n care virusul se multiplic continuu cu o rat
sczut sau cnd genomul viral se integreaz n cromosomii celulei i este replicat sincron cu ADN celular.
Infecia persistent corespunde interaciunii virus-celul de tip independent echilibrat. In aceast
interaciune, virusul pare a fi pasiv, adic nu codific factori inductori ai infeciei persistente, spre deosebire
de infecia lizogen fag-bacterie care este modulat de represorul fagic.
Persistena viral presupune, ca o condiie obligatorie, meninerea virusului sau cel puin a genomului
viral n celula infectat. Dac celula infectat se divide, genomul viral trebuie s se replice pentru a nu se
dilua n celulele fiice. La retravirusuri, genomul viral se replic odat cu replicarea ADN al celulei gazd.
Genomul parvovirusurilor, ca i al retravirusurilor este integrat ntr-un cromosom al celulei.
In neuroni (celule care nu se divid), genomul herpesvirusurilor se menine fr s se replice, sub
forma unei molecule circulare fizic independente.
Evitarea efectorilor sistemului imunitar. Uneori, virusurile persistente infecteaz esuturi cu statut
imunitar privilegiat. SNC este un astfel de esut, deoarece bariera snge-creier limiteaz traficul limfocitar, iar
neuroniii nu exprim moleculele CMH I i II i dup o posibil infecie nu pot fi detectai de limfocite.
Unele virusuri care infecteaz persistent, exprim ntr-o msur limitat informaia lor genetic. De
exemplu, genele HSV n neuroni nu sunt exprimate, cu excepia unei regiuni a genomului. In neuronii
infectai, proteinele virale sunt practic absente, neuronii nu expun la suprafa proteine virale i nu sunt
detectai de efectorii sistemului imunitar. Dar starea de laten este defavorabil propagrii virusului. Latena
este ntrerupt de infecia productiv n celulele epiteliale permisive.
Epiteliile sunt de asemenea situsuri privilegiate imunologic, deoarece efectorii IMC trebuie s
traverseze membrana bazal i bariera endoteliului vascular. Limfocitele au acces limitat la epiteliul
tegumentar, la epiteliul nefronilor sau la epiteliile glandelor exo- i endocrine. Aceste esuturi sunt infectate
persistent de papovavirusuri.
Poliomavirusurile BK i JC persist n rinichi, cu eliberare de virus progen pentru perioade lungi,
EBV i CMV persist n glandele salivare, iar virusurile papiloma persist n esutul epitelial tegumentar.
Virusurile, n special cele cu genom ARN, sufer evenimente mutaionale cu o frecven mare, iar
n condiiile presiunii selective de aprare specific, variantele antigenice apar cu rapiditate. Exemplul
clasic este oferit de variantele ce apar prin mecanismele de shift i drift genetic ale celor dou glicoproteine
de nveli (HA i NA). Virusul influenza nu produce o infecie persistent n organismul uman, dar apariia
sezonier a variantelor realizeaz persistena n populaia uman.
Variaia antigenic se produce i la virusurile care infecteaz persistent, n special la lentivirusuri (de
exemplu, virusul anemiei infecioase equine, virusul Visna al ovinelor, virusul artritei/encefalitei caprinelor,
HIV, SIV). Serul de cal infectat neutralizeaz izolatele virale din episoadele clinice anterioare.
Virusurile care produc infecii persistente la om (HIV, EBV, VHB) genereaz variante antigenice noi,
care scap mecanismelor recunoaterii de ctre limfocitele Tc. Adenovirusul tip 2 are alte mecanisme de a
evita contactul cu efectorii sistemului imunitar: proteinele E 3 i E1a se complexeaz cu moleculele CMH n
citoplasm i nu mai sunt transferate pe suprafaa celulei.
Un alt mecanism al persistenei virale este inducerea toleranei imunitare. Exemplul clasic este al
virusului corio-meningitei limfocitare (LCMV), care, la oarecii infectai in utero, elimin selectiv clonele de
limfocite reactive i produce o infecie persistent cu viremie, pentru tot restul vieii. Persistena este nsoit
de absena limfocitelor Tc reactive fa de antigenele virale. Virusul hepatitei B utilizeaz aceiai strategie a
inducerii toleranei imunitare, prin inundarea organismului cu antigene virale sintetizate n mare exces.
Importana infeciilor persistente
Infeciile persistente cronice creeaz o stare de purttor, nsoit de eliminarea continu a virusului, o
premis a transmiterii la gazde noi.
Infeciile persistente sunt foarte rspndite n natur. Sunt frecvente la animalele de laborator i
prezint o importan practic deosebit, deoarece, dup inocularea experimental cu microorganisme
patogene sau cu virusuri, exist posibilitatea activrii infeciei latente. Infecia viral latent activat poate s
modifice particularitile de patogenitate a agentului inoculat experimental i chiar s domine tabloul
simptomatologic.
Infeciile persistente sunt rspndite la artropode (cpue, insecte). Ele reprezint mari rezervoare de
virus n natur, deoarece sunt gazde n care se multiplic virusurile patogene pentru om i animale.
Numeroase plante de cultur sau din flora spontan sunt infectate persistent de virusuri cu spectru de
gazd foarte larg, care infecteaz alternativ, organismul vegetal i animal. Ele creeaz rezervoare necunoscute
de virusuri, din care este posibil evoluia unor virusuri de mare importan clinic pentru om i animale.
Bacteriofagii
Bacteriofagii sunt virusuri care infecteaz celulele bacteriene (eubacterii). Cel mai adesea, rezultatul
interaciunii este liza celulei gazd. Fenomenul lizei transmisibile a bacteriilor a fost descoperit de Twort
(l9l5) i l-a atribuit unei enzime litice sau unui virus. DHerelle (l9l7) a descoperit independent fenomenul
lizei bacteriene, a demonstrat natura particulat a agentului inductor i l-a denumit bacteriofag (mnctor de
bacterii) sau prescurtat, fag. Denumirile fagilor deriv de la grupul de organisme gazd: actinofagi
(infecteaz actinomicetele), cianofagi (pentru cianobacterii), micofagi (infecteaz fungii microscopici).
Fig. 95. Principalele tipuri morfologice de bacteriofagi.
Se disting trei tipuri morfologice de fagi (fig. 95):

fagii n form de cirea cu coad: au cap i coad de lungimi diferite, flexibil sau rigid);
fagii filamentoi
fagii sferici, fr coad.
Structura molecular este mai bine cunoscut pentru fagii din seria T, n special din grupul T-par (T 2,
T4, T6) i fagul , (infectioi pentru E. coli), fagul X l74.
-
Anatomia molecular a fagilor din seria T-par

Studiul fagilor la nivel molecular a fost iniiat n anii 40 de ctre M. Delbruck. Particula fagic
matur din seria T-par, are gr. mol. de 2,2 x l08 D i este alctuit din ADN (40%)i proteine (60%).
Simetria fagului T4 este binar: capsomerele regiunii capului sunt aezate dup o simetrie
icozaedric, iar la nivelul cozii, dup o simetrie helical.
Capul fagului T4, cu o lungime de l00 nm i limea de 65 nm, pe imaginile electrono-optice ale
preparatelor umbrite, are form poliedric*, iar n seciune longitudinal, are un contur hexagonal (fig. 96).
*
Forma geometric exact a capului nu este cunoscut, deoarece capsomerele nu se observ n structura sa intact, ci
numai dup dezintegrarea parial. Pe baza formei umbrelor virionilor n preparatele umbrite, capul este descris ca o
prism hexagonal bipiramidal. Cele dou piramide sunt decalate una fa de alt cu un unghi de 30 o. Din cauza
decalajului, ar rezulta o configuraie geometric, denumit antiprism hexagonal bipiramidal.
In interiorul capului se gsete genomul fagic, o molecul de ADN dublu catenar, linear, cu o
lungime de circa 50 m i aproximativ 200 de gene, mpachetat foarte strns, asociat cu alte tipuri de
molecule:
- o protein intern (300 l000 de molecule), cu gr. mol. mic;
- un polipeptid acid (l000 3000 de molecule);
- dou tipuri de poliamine (spermidina i putrescina).
La vrful uneia dintre piramide se gsete un mic dop proteic, care face legtura ntre capsid (cu
axe de simetrie de tip 5 i 2) i gt, un tub cilindric, cu simetrie helical. Dopul proteic ar avea rolul de
adaptor de smetrie.
Gulerul are forma unei plci hexagonale, cu un orificiu n zona central, strbtut de cilindrul axial al
cozii, situat n continuarea gtului.
Cilindrul axial al cozii are un diametru de 7,5 nm i un lumen canalicular de 2 nm. Prin acest canal,
ADN fagic este transferat n celula bacterian.
In jurul cilindrului axial este asamblat teaca contractil a cozii. Cilindrul axial este mai lung dect
teaca cozii i proemin n raport cu ea, avnd rolul de a perfora peretele celulei bacteriene. Teaca cozii este
alctuit din l44 de capsomere, dispuse pe 24 de rnduri, dup o simetrie helical. Prin contracie, teaca se
scurteaz, datorit reaezrii spaiale a capsomerelor i elibereaz cilindrul axial pe o lungime de circa 50 nm,
permindu-i s perforeze peretele celulei bacteriene.
La extremitatea cozii se gsete placa bazal, cu aspectul uni disc hexagonal, cu diametrul de 40 nm,
format dintr-un pivot central i 6 subuniti aezate dup o simetrie radial de tip 6. Orificiul central al
pivotului este strbtut de cilindrul axial al cozii. Placa este prevzut cu 6 crlige, denumite croetele cozii,
cte unul la fiecare vrf al hexagonului. Rolul croetelor este de a fixa ferm particula fagic pe suprafaa
celulei bacteriene.
Fibrele cozii, n numr de 6, sunt structuri filamentoase proteice, lungi de l30 nm i par a fi alctuite
din 4 subuniti identice. Cu una dintre extremiti, fiecare fibr este fixat stabil la unul dintre vrfurile plcii
hexagonale, iar cu extremitatea distal se leag lax de subunitile gulerului, formnd astfel nveliul extern al
cozii, n jurul tecii contractile. Inainte de fixarea pe celul, fibrele se desprind din inseria lor distal pe guler
i rmn legate numai de placa bazal. Fibrele cozii ar avea rolul unor structuri de ancorare a fagului de
peretele bacterian, n cursul interaciunii primare.
Genomul fagic. Fagii cei mai mici - fagi ARN masculi - (Q-beta, MS 2 i f2) au genomul format
dintr-o molecul de ARN monocatenar, de circa 3,5 x l0 3 baze, cu topologie linear. Adeseori, molecula de
ARN formeaz structuri secundare dublu catenare n ac de pr(hairpin), prin intermediul punilor de H care
reunesc 60-80% din totalul bazelor.
Fig. 96. Anatomia bacteriofgului T4.
Fagii filamentoi (Ml3, f1, fd) i cei cu simetrie icozaedric, fr coad (X l74 etc.), au genomul
format dintr-o molecul de ADN monocatenar, circular.
Fagii din seria T-par (T2, T4, T6), T-impar (T1, T3, T5, T7), fagul , P2 au genomul format dintr-o
molecul de ADN dublu catenar, linear.
Exist deosebiri ale secvenelor terminale ale moleculei de ADN. Astfel, la fagii , P2 (cu genom
ADN dublu catenar, linear), ambele extremiti se termin cu secvene monocatenare, complementare unele
fa de altele, formnd capete aderente, coezive sau lipicioase. Prin legarea celor dou extremiti, pe baza
complementaritii, genomul fagului, liber n celula gazd, se circularizeaz.
Fagii din seria T-impar au ca genom, o molecul de ADN dublu catenar linear, iar la extremiti, au
secvene nucleotidice repetate invers, de la 250 la l0000 de baze.
Genomul fagului T4 conine circa 200 de gene. Peste 50 dintre ele au rol n procesul asamblrii, iar
celelalte codific diferite proteine cu rol n ciclul de multiplicare. O mic parte dintre genele de multiplicare
sunt eseniale, iar restul sunt neeseniale, deoarece au corespondent printre genele cromosomului bacterian.
Fenomenele mutaionale ale genelor neeseniale nu blocheaz desfurarea ciclului de multiplicare, dar
randamentul infeciei este net inferior (se asambleaz un numr mai mic de fagi progeni).
Informaia genetic a fagilor, ca i a celulelor bacteriene are caracter continuu, adic, de regul
lipsesc secvenele necodificatoare. Cteva gene ale fagului T4 conin cte un intron de circa l000 pb (de
exemplu, gena timidilat-kinazei).
Genomul fagic se deosebete de al virusurilor infecioase pentru celulele animale, prin coninutul n
baze neobinuite: 5-hidroxi-metil-citozina, n locul citozinei la fagii din seria T-par sau 5-hidroxi-metil-uracil
i 5-4,5-dihidroxi-pentil-uracil.
Relaiile fag-bacterie
Studiul relaiilor fag-bacterie a adus o contribuie major la fundamentarea i evoluia biologiei
moleculare. Istoria cercetrilor interrelaiilor fag-bacterie se confund, pn n anii 70, cu nsi istoria
biologiei moleculare. Studiul interaciunii fag-bacterie a fundamentat concepte i a permis demonstrarea unor
mecanisme ale biologiei moleculare:
- inducia sintezei enzimelor i proteinelor codificate de fagi;
- colinearitatea gen-protein
- natura nesuprapus a codului genetic
- mecanismul semiconservativ al replicrii ADN
- existena fenomenelor de restricie i modificare la bacterii
- mecanismul traducerii informaiei genetice
- mecanismele mutagenezei i aciunea fenomenelor reparatorii
- reglarea activitii genelor
- mecanismele oncogenezei virale.
De cele mai multe ori, infecia fagic a unei culturi bacteriene sensibile, evolueaz n sensul sintezei
constituienilor fagici. Se asambleaz i se elibereaz fagi progeni, rezultatul fiind liza celulei bacteriene.
Studiul multiplicrii fagilor a nceput odat cu evidenierea formrii plajelor de liz, ntr-o pnz de
celule bacteriene, crescute pe suprafaa unui mediu agarizat. Fiecare plaj de liz este iniiat prin
multiplicarea unei singure particule virale fagice i este rezultatul repetrii ciclului litic al infeciei fagice, n
perioada de cretere a culturii bacteriene.
A II-a modalitate de evoluie a interaciunii fag-bacterie este caracteristic fagilor temperai i
corespunde fenomenului de lizogenie. In interaciunea de tip lizogen, genomul viral se integreaz n structura
cromosomului bacterian i se comport ca gene cromosomale.
Ciclul litic al interaciunii fag-bacterie. Multiplicarea bacteriofagului
Multiplicarea fagului are loc ntr-o serie de etape, identificate iniial pentru cuplul fag T 4- E. coli.
Inelegerea lor a avut un rol esenial pentru studiile privind interaciunea dintre virusuri i celulele animale.
Multiplicarea propriu-zis este precedat de stabilirea contactului fizic dintre fag i celula sensibil.
Adsorbia i fixarea fagului sunt rezultatul ciocnirilor ntmpltoare dintre particula fagic i celula
bacterian, a cror frecven depinde de densitatea lor relativ. La densitatea de l0 8 bacterii/ml i l07-l09
fagi/ml, n cteva minute, 90% dintre fagi se adsorb pe suprafaa bacteriilor.
Pentru fixarea fagilor din seria T-par, un rol esenial par s-l aib croetele plcii bazale, deoarece
distana dintre placa bazal i peretele celular nu este niciodat mai mic de 5 nm. Fixarea particulei fagice pe
celula bacterian, depinde de existena, la suprafaa celulei, a unor structuri chimice complementare denumite
receptori de fag.
Receptorii s-au evideniat pe membrana extern a peretelui celular i pe stratul capsular la bacteriile
Gram negative, pe acizii teichoici ai bacteriilor Gram pozitive, pe flageli i pe pili.
S-au descris 4 mecanisme principale de legare a fagilor, pe suprafaa celulei bacteriene:
- fagii cu coad contractil din seria T, se fixeaz reversibil, prin intermediul fibrelor cozii, pe catenele
glucidice ale LPS la bacteriile Gram negative, sau de acizii teichoici parietali (legai covalent de
murein), la cele Gram pozitive. Fibrele cozii fagului T 4, prin captul lor distal, interacioneaz cu
specificitate nalt, cu resturile glicozil ale LPS din membrana extern la E. coli. Fixarea ireversbil este
rezultatul legrii croetelor plcii bazale, cu receptorii celulei;
- fagii cu coad necontractil, se leag de componenta glucidic a LPS din membrana extern a peretelui
celular. Imediat dup aceea, are loc degradarea parial a receptorilor sub aciunea unei endoglicozidaze
virale.
De obicei, capsula bacterian blocheaz fixarea fagilor pe structurile subiacente, dar uneori, fagii se leag
de receptorii capsulari i infecteaz celula, dup degradarea parial a polizaharidelor;
- fagii icozaedrici ARN masculi se leag pe suprafaa pilului. Sinteza proteinei componente a pilului
(pilina) i asamblarea ei sunt codificate de plasmida F. Pilul este o structur caracteristic numai
celulelor bacteriene cu potenialitate de donor de material genetic i de aici deriv denumirea de fagi
masculi;
- fagii filamentoi se fixeaz la extremitatea pilului, prin intermediul proteinei A (Attachment, engl. =
ataare) a capsidei virale. Nu se cunoate mecanismul prin care genomul fagilor ARN masculi sau
filamentoi ajunge n celula bacterian. Este puin probabil ca pilul s aib rol de conductor al
genomului fagic. Se pare c pilul se retract i astfel fagii sunt orientai pn la un receptor al suprafeei
celulare.
Fig. 97. Ataarea bacteriofagului T4 de peretele celular al E. coli i injectarea ADN viral. (a) Virion netaat. (b) Ataarea
virionului prin fibrele cozii. (c) Fixrea ireversibil prin intermediul croetelor plcii bazale. (d) Contracia tecii cozii i
injectarea ADN
(dup Brock, 1988).
Infecia propriu-zis. Dup fixarea pe suprafaa celulei bacteriene, placa bazal i schimb
conformaia i induce o modificare a modului de aranjare a capsomerelor tecii cozii. Ca urmare, teaca se
contract i se scurteaz, uurnd ptrunderea cilindrului axial al cozii, prin peretele celular, cu o lungime de
circa l2 nm. ADN din capul fagului, trece n celul pe calea cilindrului axial tubular (fig. 97).
La fagii din seria T-par, coada contractil, injecteaz genomul n citoplasma celulei.
Capsida fagic rmne n ntregime la exterior, ndeplinind numai rolul unei microseringi, adaptat s
injecteze genomul fagic n celul.
Mecanismul injectrii genomului fagic nu este cunoscut cu certitudine. Membrana intern i cea
extern, par s fuzioneze local, formnd un canal, sub aciunea presiunii pe care o exercit vrful cilindrului
axial al cozii. Acidul nucleic fagic ptrunde direct, prin punctul de fuziune a membranelor. Genomul fagic ar
fi orientat spre celula bacterian, de molecule proteice pilot asociate genomului. Ulterior, canalul
membranar se nchide cu proteinele pilot, ataate la extremitatea proximal a ADN, cu rol n specificitatea
i eficiena translocaiei ADN prin membranele celulei.
Injectarea genomului fagic se realizeaz ntr-un interval foarte scurt (circa l5 secunde). n procesul
transferului genomului fagic, celula bacterian ar fi pasiv, pentru c n capsid, ADN fagic este pliat i
mpachetat foarte strns, ceea ce ar crea o presiune datorit creia ADN, n momentul contraciei cozii i al
scoaterii dopului proteic, ar fi propulsat energic n celula bacterian. La aceasta s-ar aduga presiunea
produs de agitaia termic a moleculelor mari, existente n capul fagului. Ali autori consider c celula ar
exercita un efect de aspiraie, care ar facilita ptrunderea genomului fagic.
Concomitent cu genomul, trec moleculele legate ionic de ADN: mici cantiti de proteine,
oligopeptide bazice, poliamine.
Genomul fagic liber n celul, corespunde strii de fag vegetativ i poate fi transcris i replicat.
Infecia fagic a celulei bacteriene, determin o reorganizare profund a activitii sale biologice.
Rezultatul interaciunii, de cele mai multe ori, este subordonarea ntregului aparat de biosinteza celular, n
scopul producerii constituienilor virali. Programul genetic este transcris n dou etape: timpurie i tardiv,
separate n raport de intervalul de timp al replicrii genomului.
Programul timpuriu al genomului fagic codific urmtoarele categorii de proteine:
- proteine de membran, destinate s astupe discontinuitile produse de cozile
fagilor multipli care se fixeaz pe celula sensibil;
- nucleaze care degradeaz cromosomul bacterian. Endonucleaza A creeaz bree
monocatenare la secvenele cu citozin, iar endonucleaza B atac secvenele
monocatenare care conin citozin. Rezult astfel, mici fragmente de ADN dublu
catenare, iar o exonucleaz fagic desvrete procesul pn de dezoxi-nucleotidtrifosfai (dNTP).
- proteine care catalizeaz sinteza bazelor specifice ADN fagic (5- HMC);
- proteine reglatoare ale transcrierii ADN fagic. ARNm viral timpuriu este transcris de ARN-polimeraza
bacterian, iar sinteza ARNm tardiv este catalizat de proteine virale. Unii fagi inactiveaz ARNpolimeraza celular i codific sinteza unei ARN-polimeraze timpurii proprii;
- enzime care catalizeaz replicarea ADN fagic: ADN-polimeraza, polinucleotid-ligaza.
Sinteza ARNm celular este blocat prin schimbarea specificitii ARN-polimerazei care trece sub
controlul unui promotor viral. Sinteza proteinelor celulare este inhibat curnd dup infecie, deoarece
ARNm bacterian are un timp de njumtire foarte scurt. Astfel, ribosomii bacterieni devin disponibili
pentru traducerea ARNm fagic.
Replicarea genomului fagic este mai bine cunoscut pentru fagii T 4 i . ADN-T4 se sintetizeaz din
nucleotidele rezultate din degradarea ADN celular, proces catalizat de endonuclezele den A i den B,
codificate de fagul T4. Ele sunt active numai asupra ADN care conine citozina.
Hidroxi-metil-citozina (HMC) este sintetizat de dou enzime fagice. In sinteza ADN T4 trebuie
prevenit ncorporarea citozinei, deoarece o astfel de molecul este substratul endonucleazelor fagice care
degradeaz ADN bacterian. Fagul trebuie s codifice sinteza enzimelor care s previn ncorporarea C, n
molecula de ADN.
E. coli posed o endonucleaz(restrictaz) care cliveaz secvenele cu HMC. Pentru a preveni
degradarea ADN-T4 (cu HMC), resturile de HMC sunt glicozilate de dou enzime fagice ( i -glicozil-
transferaza). ADN T4 devine imun fa de enzimele de restricie ale celulei bacteriene. Glicozilarea este o
modificare post-replicativ, iar endonucleaza bacterian este inactiv fa de ADN-glicozilat.
5-hidroxil-citozina neglicozilat i glicozilat. Prin inlocuirea gruparii CH2OH cu H, rezult citozina.
ADN fagic, ntr-o prim etap, se replic dup modelul semiconservativ bidirecional, al cercului
simplu. Se sintetizeaz copii ale genomului care vor fi transcrise pentru sinteza proteinelor tardive. Ulterior,
ADN fagic se replic dup modelul cercului rotativ (fig. 98). Rezult o molecul poligenomic de ADN
(genomuri multiple asociate n conexiunea cap-coad), un genom concatemer. O endonucleaz cliveaz
concatemerul, n molecule de lungimea genomului, ce vor fi ncorporate n capsid, n procesul morfogenezei.
Sinteza proteinelor tardive, devine predominant dup circa 20 de minute, dup ce ADN a atins rata
maxim de replicare, iar transcrierea genelor timpurii este stopat. Proteinele tardive sunt grupate n trei
categorii:
- majoritatea sunt proteine structurale i intr n alctuirea capului, cozii i anexelor ei;
- proteinele de morfogenez (de asamblare). Cele mai importante sunt proteinele de cofraj, definite ca
proteine necesare n timpul asamblrii unei structuri, dar lipsesc din structura virionului;
- proteinele enzimatice, necesare lizei celulei bacteriene i eliberrii fagilor progeni: o muramidaz de
tipul lizozimului, ce hidrolizeaz mureina peretelui bacterian i o lipaz (holina), care atac membrana
plasmatic a celulei, uurnd accesul lizozimului spre structura parietal. Liza celulei este condiionat
de acumularea acestor proteine.
Asamblarea i morfogeneza fagului s-a studiat la mutante fagice defective, care produc numai capete,
numai cozi sau numai fibre. Fagul are o arhitectur complex i principiul autoasamblrii nu este funcional.
S-au identificat 3 linii separate de asamblare a subunitilor structurale ale fagului: linia capetelor, a cozilor,
a fibrelor i a proteinei 63, care catalizeaz legarea fibrelor la nivelul plcii bazale.
Fig. 98. Mecanismul replicrii ADN al fagului n cursul infeciei litice. a. Iniial, replicarea se face dup modelul
cercului simplu (sintez bidirecional fa de punctul de origine al replicrii). B. Pentru asamblarea fagilor progeni,
replicarea genomului se face dup modelul cercului rotativ (dup Watson, 1977).
Mai mult de 50 de gene ale fagului T 4 sunt implicate n morfogenez. Ele codific proteinele
structurale, dar i pe cele nestructurale, necesare asamblrii.
Prima regul a morfogenezei, este c asamblarea se face pe module structurale. Capetele i cozile
sunt primele care se asambleaz i formeaz complexe vizibile la microscopul electronic. Ulterior, fibrele
cozii se adaug acestor complexe. Avantajul asamblrii fagului pe mai multe module, este acela c
subunitile cu erori pot fi eliminate timpuriu, separat la fiecare linie.
A II-a regul este c asamblarea se face de la captul terminal, spre punctul de jonciune cu restul
virionului. De exemplu, pentru asamblarea cozii, primele sunt produse plcile bazale, apoi cilindrul axial, iar
n final, teaca.
In procesul asamblrii capului, prima structur care se formeaz se numete precap tip I, ce se
asambleaz pe o structur proteic central, format din proteinele de cofraj, pe care sunt inserate
capsomerele i nu conine ADN. Aceasta structur este convertit n precap de tip II, de asemenea lipsit de
ADN, dar mai consolidat prin apariia legturilor chimice ntre capsomere. Structura capului i dobndete
proprietile structurale i funcionale depline, nainte de ptrunderea ADN (fig. 99).
Fig. 99. Ilustrarea schematic a mecanismului asamblrii fagului T4. Asamblarea fagilor se face pe trei module: cap,
coad i fibrele cozii (dup Davis, 1990).
Impachetarea ADN, ncepe prin legarea unui capt al moleculei de ADN poligenomic (concatemer),
de o protein a capului fagic. Molecula de ADN s-ar rula pe un ax proteic, ntr-un mod particular, de la
exteriorul spre interiorul axului. ADN ptrunde pe la unul din vrfurile icozaedrului, dup dislocarea unei
capsomere. La acelai vrf se asambleaz coada.
Poliaminele i o protein de condensare, au rol n mpachetarea ADN. Molecula de ADN este
secionat din concatemerii rezultai n replicare. In capul fagului T 4 intr o cantitate de ADN mai mare dect
un genom complet (l02%). Din aceast cauz, n timpul mpachetrii ADN, secionrile din concatemeri, nu
se fac la o secven unic de baze, ci la poziii determinate de cantitatea de ADN ce intr ntr-un cap. Probabil,
captul liber al moleculei, intr n capul fagic i continu pn la umplere, dup care concatemerul este
secionat. Acesta este mecanismul capului plin. Secvena terminal mpachetat este duplicat fa de
secvena care a intrat iniial, adic ADN este redundant terminal.
Deoarece n capsida fagului T4 este mpachetat o molecul de ADN mai mare dect genomul
propriu-zis, secvena nucleotidelor n genomul particulelor virale ale unei populaii, este defazat cu un numr
determinat de baze. De exemplu, dac ntr-o molecul de ADN genomic, secvena nucleotidelor este
ABCD. XYZAB, n altele secvena este CDEF. XYZABCD. Toate moleculele de ADN genomic
conin aceiai secven de nucleotide, dar secvena iniial a genomului se repet la captul terminal i difer
de la un virion la altul. Datorit redundanei terminale, genomul fagilor este permutat ciclic.
Redundana terminal este o proprietate individual a moleculelor de ADN fagic, iar permutarea
ciclic este o proprietate a genomului populaiei de fagi.
Pe msur ce genomul este ncorporat n capsid, proteinele de cofraj sunt eliminate prin spaiile
dintre capsomere. Capul matur are un volum cu 40-l00% mai mare dect al precapului.
Fagii maturi se acumuleaz n celula bacterian, iar cromosomul bacterian pierde treptat coordonarea
activitii celulare i apare un dezechilibru funcional profund. Muramidaza se sintetizeaz foarte timpuriu, la
8 minute dup infecie, dar este ineficient atta timp ct celula este fiziologic activ. Enzima secioneaz
moleculele de murein, dar celula activ repar leziunile. Cnd leziunile nu mai pot fi reparate n ritmul
producerii, celula se lizeaz exploziv i elibereaz fagii progeni. Liza celulei necesit aciunea sinergic a
dou produse genice: lizozimul i holina (o lipaz). Holina creeaz bree n membrana intern, permind
lizozimului s ajung la structura sensibil.
Fiecare virion progen poate s infecteze o nou celul. Repetarea de mai multe a ciclului litic pe o
pnz de celule sensibile, produce o plaj de liz. Plaja de liz este echivalentul unei colonii de fagi.
n cultura bacterian crescut ntr-un mediu lichid, fagii determin liza celulelor, astfel nct
suspensia bacterian se clarific, mergnd pn la sterilizare.
Fagii icozaedrici cu genom ADN monocatenar au dimensiuni mici (25-35 nm), sunt totdeauna
viruleni ca i cei cu genom ADN dublu catenar i lizeaz celula n circa 30 de minute. Prototipul lor este
fagul fi X l74. Capsida este alctuit din trei tipuri de proteine (F, G, H). Proteinele G i H se termin cu
prelungiri n form de spiculi, necesar atarii pe suprafaa celulei.
In celula infectat, ADN se tapeteaz cu proteina SSB (Single Stranded Binding) i ncepe s se
replice. Iniial, se sintetizeaz o molecul de ARN scurt, catalizat de ARN-polimeraza celular, cu rol de
primer. Complexul celular de replicare extinde primerul, iar ulterior ARN este digerat. Rezult o molecul
ADN dublu catenar, care este forma replicativ.
Fagii filamentoi (prototipul este fagul fd) au ca genom o molecul de ADN circular, care se
dubleaz, prin pliere fa de sine nsi. Bazele nu sunt complementare, ceea ce nseamn c ADN este
monocatenar.
Virionul se adsoarbe la extremitatea unui pil F. Mecanismul ptrunderii ADN n celul nu se cunoate.
ADN monocatenar este tapetat cu o protein codificat de fag, cu rol major, se pare, n mpachetare i nu n
replicare. Impachetarea genomului n capsid, este concomitent cu ieirea virionului. Proteina major a
capsidei helicale este inclus n membrana celular. Pe msur ce ADN fagic ptrunde n membran, este
acoperit de proteina capsidei. Sunt singurii fagi care nu necesit liza celulei pentru eliberare. Celula continu
s creasc, s se divid i s elimine cteva sute de virioni la fiecare generaie celular.
Fagii ARN masculi (prototipul este MS 2) au simetrie icozaedric. Genomul este o molecul de
ARN monocatenar, de 4 kb lungime i conine 3-4 gene. Receptorii se gsesc pe suprafaa pilului F i de
aceea infecteaz numai celulele bacteriene F +, cu potenialitate de donor de material genetic n cuplul de
conjugare. De aici deriv denumirea de fagi masculi. Cele 4 gene codific o protein capsidal (C), o ARNpolimeraz dependent de ARN (P), o lizin (L) i proteina A, reglatoare a asamblrii, prezent ntr-o singur
copie n virion.
Toate copiile de ARN sunt identice, fie c au rol de genom, fie c sunt mesagere.
Importana fenomenului de bacteriofagie
Bacteriofagii sunt foarte rspndii: se gsesc n mediile naturale n care triesc bacteriile sensibile
care le pot fi gazd, adic n ap, sol, n tractul digestiv al omului i animalelor. Datorit efectului litic al
interaciunii cuplului, fagii regleaz densitatea populaiilor bacteriene n mediile naturale. Interaciunea litic
a cuplului fag-bacterie are cteva aplicaii practice majore.
Fagul este utilizat n terapeutic, pentru tratamentul unor infecii rezistente la antibiotice i la agenii
chimioterapeutici.
Specificitatea relaiei fag-bacterie, a stat la baza elaborrii unui procedeu de identificare i clasificare
a bacteriilor, n funcie de sensibilitatea lor la un fag sau la un grup de fagi, procedeu denumit lizotipie sau
tipizare prin fag. Metoda este folosit pentru stabilirea diagnosticului bacteriologic n clinic, dar i n studiile
de sistematic bacterian.
Prin tipizare fagic se nelege identificarea unei tulpini bacteriene, utiliznd un set de preparate
fagice purificate i standardizate, crora li se cunoate capacitatea de a liza anumite tulpini bacteriene.
Tipizarea prin fag este o metod foarte util n studiile de epidemiologie, pentru a reconstitui originea i
circulaia unei infecii ntr-o colectivitate, n cursul unei epidemii. Practic, toate tulpinile unei specii
bacteriene patogene, izolate n cursul unei epidemii de la bolnavi, de la purttori, din alimente contaminate,
din vectori sau de animalele care acioneaz ca izvor de infecie, avnd origine comun, aparin aceluiai
lizotip (aceluiai tip fagic).
Metoda se folosete pentru identificarea tulpinilor de Salmonella, Vibrio etc. In acest scop, tulpinile
se nsmneaz n plci, dup tehnica n pnz. Se testeaz sensibilitatea lor fa de un numr ct mai mare
de preparate fagice standardizate.
In bioindustrie, fagii pot produce liza microorganismelor productoare de substane utile, provocnd
pierderi economice importante.
Ciclul lizogen
Ciclul infecios lizogen este cunoscut, n primul rnd, pentru cuplul fag i celulele de E. coli (fig.
100).
Fagul se deosebete de fagii din seria T (par i impar), att din punct de vedere morfologic, ct i al
interaciunii sale cu celulele sensibile. Capul este un icozaedru aproape perfect, cu diametrul de 55 nm, iar
coada este mai lung (l55 nm), mai subire i mai flexibil i se ngusteaz progresiv spre extremitatea liber.
Este goal n interior, necontractil, format din 35 de discuri suprapuse.
Genomul fagic este o molecul de ADN dublu catenar, linear i se termin cu secvene
monocatenare, complementare, denumite cozi adezive sau coezive. n interiorul celulei bacteriene, molecula
se circularizeaz devenind dublu catenar, circular nchis covalent, sub aciunea catalitic a unei
polinucleotid-ligaze.
Genomul fagului cuprinde circa 50 de gene. Cele din jumtatea stng (a moleculei lineare)
codific proteine cu rol morfogenetic, iar cele din jumtatea dreapt codific factorii de interaciune ai
genomului fagic cu cromosomul bacterian, fiind importante n evoluia lizogen a cuplului fag-bacterie.
Corespunztor celor dou programe genetice, cuplul fag - E. coli are dou ci posibile de evoluie :
- calea litic, ce implic sinteza proteinelor virale i morfogeneza fagului, urmat de liza celulei
bacteriene;
- calea lizogen, n cursul creia, replicarea genomului fagic este stopat. Genomul fagic se circularizeaz
prin legarea capetelor sale adezive i se integreaz ca profag n cromosomul bacterian.
Fagii care dup infecie nu lizeaz celula se numesc temperai, iar o celul bacterian care conine un
set de gene fagice se numete lizogen. ADN fagic se gsete fie integrat n cromosomul bacterian, fie n
stare autonom (fizic independent).
Fig 100. Dup infecie, cuplul E. coli fag poate evolua litic sau lizogen.
Dintre celulele infectate de fagii temperai, numai o proporie mic evolueaz lizogen, marea
majoritate fiind lizate.
Fagul virulent, inoculat pe o pnz de celule bacteriene sensibile formeaz o plaj de liz clar,
deoarece toate celulele sunt lizate. Fagul temperat formeaz o plaj de liz cu o zon central turbid
(opalescent). Turbiditatea este determinat de multiplicarea bacteriilor lizogene, imune fa de fag.
Decizia ntre liz i lizogenie este dat de un mecanism reglator, complex i subtil, influenat de
structura genetic a fagului, a celulei i de factorii de mediu: concentraia nutrienilor n mediu i
multiplicitatea de infecie. La o multiplicitate sczut de infecie se desfoar preponderent ciclul litic. Dar
dup cteva cicluri litice, multiplicitatea de infecie devine nalt i un numr mic de celule sunt lizogenizate.
Odat cu epuizarea nutrienilor din mediul agarizat, celulele bacteriene nceteaz s se divid, virusul
nu se mai multiplic i plaja nceteaz s se extind. Deoarece n aria plajei, nutrienii sunt nc disponibili,
datorit lizei timpurii a majoritii celulelor, cele lizogene continu s creasc i s se divid, rezultnd plaje
cu un centru turbid.
Oricare ar fi ponderea acestor factori, lizogenia este consecina blocrii transcrierii i traducerii
informaiei genetice a fagului, a blocrii ciclului su de multiplicare, urmat de integrarea genomului ca
profag, n cromosomul bacterian.
Integrarea genomului fagului n cromosomul bacterian este rezultatul recombinrii ntre situsurile
specifice de legare att (attchment, englez = ataare), situate pe cromosomul bacterian i pe cel fagic. Ele
condiioneaz afinitatea de legare a celor dou genomuri.
Situsurile att bacterian i fagic au secvene omologe de baze i sunt alctuite din dou jumti situate
simetric fa de o regiune median O, de circa l5 baze, n care omologia celor dou genomuri este total.
Situsul fagic de legare are o secven de 3l7 baze i este notat POP ( Phage), iar cel al cromosomului
bacterian are o secven de 250 de baze i este notat cu BOB (Bacterium). Localizarea sa a fost identificat
ntre gena gal (codific enzimele metabolizrii galactozei) i gena bio (codific sinteza biotinei).
Recunoaterea celor dou genomuri se face prin intermediul regiunii O, la care particip secvenele PP i
BB.
Esena mecanismului de integrare este circularizarea cromosomului fagic. Pentru ca integrarea

genomului fagic s aib loc, cele dou genomuri sunt secionate la nivelul situsului de legare, sub aciunea
unei enzime fagice din setul timpuriu o terminaz cu funcie de endonucleaz, denumit integraz, o enzim
ce recunoate situsurile de legare a ADN fagic i ADN bacterian i catalizeaz legarea recombinatorie a celor
dou molecule.
In procesul de integrare, zona central de omologie este cea care determin i condiioneaz
integrarea, iar zonele laterale au un rol secundar n procesul de legare recombinatorie a celor dou genomuri.
Integraza este o topoizomeraz I. Ea catalizeaz clivarea unei catene a dublului helix, rotete un capt
al catenei clivate n jurul catenei ntregi, secioneaz i cea de a II-a caten i apoi reunete extremitile
libere. Catenele secionate ale celor doi cromosomi, sunt aezate ntr-o continuitate perfect.
Ca rezultat al integrrii, ordinea linear a genelor n molecula de ADN fagic este permutat. Apar
dou noi situsuri de legare: BOP i POB.
La sfritul procesului de integrare, cromosomul bacterian este mai lung cu echivalentul unui genom
fagic, fapt demonstrat prin conjugare, prin msurarea intervalului de timp necesar transferului celor dou gene
(gal i bio) n procesul conjugrii.
Integrarea fagului n cromosomul bacterian corespunde unui proces unic, denumit recombinare
integrativ sau recombinare la situsuri specifice (fig. 101). Omologia dintre situsurile de legare a celor dou
genomuri, nu este perfect ca n recombinarea general, dar procesul este rezultatul aciunii unor enzime care
recunosc anumite situsuri specifice i secioneaz decalat secvene relativ omologe ale celor dou genomuri,
genernd extremiti adezive, care permit legarea ncruciat i integrarea genomului viral ca profag.
Fig. 101. Reprezentarea schematic a etapelor procesului de integrare a cromosomului fagic n cromosomul bacterian.
Dup integrare, genele fagice se comport ca i genele cromosomale: se replic sincron cu

cromosomul bacterian i se transmit prin diviziune celular, generaiilor succesive, ca i genele cromosomale.
Starea lizogen este controlat de represorul , o protein de 200 aminoacizi, codificat de profag,
care se leag de regiunea operator a genomului fagic integrat. Astfel, represorul fagic, intr n competiie cu
ARN-polimeraza, care, pentru iniierea transcrierii se leag de acelai situs al profagului. Legarea prompt a
represorului de situsul de legare a operonilor virali are ca efect blocarea transcrierii tuturor genelor fagice,
cu excepia celor care codific sinteza represorului.
Proprietile bacteriilor lizogene
Bacteriile lizogene dobndesc proprieti noi, care deriv din nsi existena profagului n stare
integrat: imunitatea i inducia litic.
l. Imunitatea. Bacteriile lizogene sunt imune la suprainfecia cu un fag omolog (identic). Chiar dac
genomul fagic este injectat n citoplasma sa, evoluia spre liz este stopat, deoarece represorul deja existent
n celula lizogen va represa exprimarea funciilor genomice ale virusului suprainfectant. Suprainfecia unei
celule lizogene cu un fag identic este abortiv. Fagul nu se multiplic i genomul su se dilueaz n populaia
bacterian rezultat prin diviziunea succesiv a generaiilor de celule lizogene.
Imunitatea fa de fagul suprainfectant este determinat de represor i, ca urmare, evoluia oricrui fag
suprainfectant, depinde de sensibilitatea lui fa de represorul rezident n celula lizogen: dac este sensibil,
infecia este abortiv, iar dac este rezistent, infecia evolueaz spre liz. Dac doi fagi manifest sensibilitate
fa de acelai represor, se numesc fagi coimuni. Imunitatea bacterian, datorat represiei specifice a genelor
fagice, prin intermediul proteinei represor, trebuie deosebit de rezistena bacterian la infecie, controlat
genetic, fiind datorat absenei receptorilor pentru fag, sau pierderii capacitii de a face sinteza acestora, ceea
ce transform bacteriile sensibile n bacterii rezistente.
2. Inducia litic. Bacteriile lizogene au, potenial, capacitatea de evoluie litic, denumit nc i
inducie litic. Ele se pot liza spontan, fr intervenia unui fag suprainfectant de la exterior. In mod
obinuit, fenomenul induciei litice se produce cu o frecven mic (l/l0 2 l07 celule), dar are o frecven mult
mai mare dup expunerea bacteriilor lizogene inductibile, la aciunea unor ageni inductori: radiaiile UV
sau X, peroxizi, azotiperita, ageni alkilani. Sub aciunea lor, majoritatea celulelor mor, iar cele care
supravieuiesc sufer fenomenul de inducie, adic de trecere din starea lizogen spre ciclul litic. Agenii
inductori, probabil inhib sinteza represorului. Profagul ieit de sub aciunea inhibitorie a represorului se
excizeaz din cromosomul bacterian i trece n stare liber (vegetativ), evolund spre liz, cu eliberare de
particule fagice progene. In mod normal, excizia ADN viral se face cu exactitate la nivelul situsurilor sale de
integrare ca profag (att P i att B), astfel nct fagii eliberai sunt identici din punct de vedere genetic, cu fagul
infectant originar.
Cu o frecven mic (l/l0 5 l06 celule), excizia genomului fagic se face la nivelul altor situsuri ale
cromosomului bacterian. Rezult astfel, o molecul de ADN circular, care conine o mic secven a ADN
bacterian, adiacent situsului de inserie a profagului (n acest caz, gnele gal sau bio), din care lipsete o
secven echivalent de ADN fagic, situat la captul opus al profagului. Genomul fagic, purttor al unei
secvene a cromosomului bacterian este ncorporat n fagii maturi. Astfel de particule fagice sunt
transductoare. Intr-un nou ciclu infecios, fagii transductori aduc n celula bacterian, att genomul viral, ct
i secvenele de ADN bacterian pe care le transduc.
Mecanisme celulare de aprare antifagic
Bacteriile i-au elaborat mecanisme de rezisten fa de infecia fagic, iar fagii au elaborat strategii
de contracarare, ceea ce reflect importana major pe care o are infecia fagic n mediile naturale.
Mecanismul major de aprare a celulei este reprezentat de sistemul enzimatic de restricie-modificare.
Enzimele de restricie hidrolizeaz ADN exogen care n-a fost modificat chimic (n special prin metilare) la
situsurile specifice. Ele recunosc situsurile specifice ale ADN exogen, cliveaz molecula, iar exonucleazele
nespecifice degradeaz fragmentele lineare rezultate (Vezi enzime de restricie).
ADN celular este protejat de aciunea enzimelor de restricie prin modificare. ADN fagic care scap
aciunii enzimelor de restricie, este modificat i fagul se multiplic. La ciclul infecios urmtor, teoretic, toate
celulele tulpinii bacteriene vor fi sensibile la infecia fagic, deoarece ADN fagic este deja modificat.
Fagii evit fenomenul restriciei bacteriene pe diferite ci. Prima modalitae este frecvena mic a
secvenelor de recunoatere. De exemplu, fagii infecioi pentru Bacillus spp. au puine palindroame de 4
baze, recunoscute de enzimele bacteriene de restricie, iar colifagii au puine palindroame de 6 baze, pe care le
recunosc restrictazele de E. coli.
Importana studiului cuplului lizogen fag - E. coli
Studiul cuplului fag-bacterie, dar n special studiul interaciunii lizogene fag E. coli (tulpina K12) a
avut un rol esenial n fundamentarea conceptelor biologiei moleculare. Studiul aceluiai model a furnizat o
explicaie logic cu privire la mecanismul genezei cancerului viral. In l952, A. Lwoff a emis ipoteza,
demonstrat ulterior, c virusurile oncogene i datoreaz aciunea cancerigen, proprietii lor de a se integra
ca provirus n genomul celulei gazd.
Fagul este un factor care influeneaz semnificativ variabilitatea i evoluia populaiilor bacteriene n
mediile naturale, deoarece o anumit categorie de fagi poate s asigure transferul materialului genetic de la o
celul la alt, prin mecanismul transduciei genetice.
Ciclul de multiplicare fagic are loc numai n celulele care cresc rapid. Concluzia este c n mediile
aquatice, cei mai muli fagi (>90%) se menin i se propag sub form temperat n celulele lizogene, din
urmtoarele motive :
- cele mai multe bacterii din mediile aquatice nu ofer posibilitatea multiplicrii fagilor, deoarece se
gsesc ntr-o stare de cretere lent sau de nfometare;
- majoritatea mediilor aquatice sunt caracterizate printr-o densitate mic (<10 5 celule/ml) a celulelor
bacteriene ;
- n stare liber, fagii i pstreaz infeciozitatea un interval foarte scurt. ansa adsorbiei lor pe o celul
bacterian sensibil i inierea unui nou ciclu de multiplicare este foarte mic. In absena acesteia, fagii
se adsorb pe substane organice, pe diverse particule coloidale, pe resturi de celule bacteriene.
Din aceaste cauze, modalitatea principal de propagare a fagilor n mediile naturale, este cea de
genom integrat (profag) n cromosomul bacterian.
Densitatea virionilor n mediile aquatice se schimb rapid. Creterea rapid a densitii virionilor se
datoreaz, probabil, infeciei i lizei sincrone a celulelor sensibile.
Printre cei circa 4000 de fagi cunoscui, regula general a interaciunii cu gazda este specificitatea.
Un fag virulent, cu un spectru de gazd restrns va fi eliminat rapid dintr-un mediu n care bacteriile gazd
cresc lent i au densitate mic.
S-au identificat fagi polivaleni, cu spectru larg de gazd. Cei mai reprezentativi n acest sens sunt
fagii a cror capsid conine lipide. Ei pot infecta bacterii Gram pozitive i Gram negative. Spectrul de gazd
foarte larg se explic prin faptul c receptorul fagic este codificat de plasmide conjugative.
Pseudolizogenia (starea de purttor) se aseamn cu lizogenia, prin aceea c dup infecie, fagul intr
ntr-o faz de eclips, dar spre deosebire de lizogenie, genomul fagic rmne n stare fizic independent i nu
se replic. De aceea, nu se distribuie n mod egal, n cele dou celule fiice rezultate din diviziune.
Pseudolizogenia este determinat de condiiile de nfometare ale celulei. Energia disponibil pentru iniierea
lizei sau lizogeniei este insuficient. De ndat ce energia celular devine disponibil, fagii intracelulari devin
lizogeni sau iniiaz ciclul litic.
Noiuni generale de oncogenez

Orice hipertrofie localizat a unui esut, poart denumirea de tumor. Ea poate fi determinat de o
proliferare celular sau de inflamaie. O tumor determinat de proliferare celular se numete neoplasm
(cretere nou). Neoplasmele neinvazive rmn localizate la locul formrii i se numesc benigne. Celulele
benigne se aseamn cu celulele normale, att din punct de vedere structural ct i funcional. Tumorile
benigne sunt nconjurate de o capsul fibroas i sunt uor eliminate prin excizie chirurgical. Ele pun n
pericol viaa numai n cazul n care devin foarte voluminoase sau dac secret n exces substane active, ca de
exemplu, hormoni.
Tumorile care invadeaz esuturile nvecinate i se disemineaz la distan, se numesc neoplasme
maligne. Nu sunt delimitate de capsula fibroas. Celule izolate migreaz la distan de situsul de origine i
iniiaz noi centre de proliferare. Diseminarea celulelor tumorale i constituirea unor noi focare de cretere i
multiplicare se numete metastazare.
Celulele tumorale pstreaz o oarecare asemnare cu tipul celular normal de origine i de aceea este
posibil clasificarea lor dup raportul cu esutul normal. Tumorile care i au originea n celulele epiteliale
ectodermice sau endodermice sunt incluse n categoria carcinoamelor, iar cele originare n celulele
mezenhimale se numesc sarcoame. Leucemiile sunt maligniti ale leucocitelor (leukemia = snge alb) i
constituie o categorie special a sarcoamelor.
Evenimentul primordial al maladiei este procesul biologic al transformrii maligne a celulei. Cauzele
care determin transformarea malign, sunt multiple i incriminarea uneia sau alteia este nsoit de
numeroase incertitudini. Maladia neoplazic nu este unic, ci prin diversitatea substratului celular de origine,
a factorilor transformani, a stadiului fiziologic al celulei n momentul transformrii maligne, include un
numr nelimitat de maladii.
Agenii fizici i chimici ai malignizrii
Transformarea malign este rezultatul aciunii convergente a numeroi factori de mediu extern i
intern, care interacioneaz i se influeneaz reciproc:
- factori umorali (n special hormoni din sfera genital);
- substane chimice de origine industrial (inclusiv numeroase substane de uz farmaceutic);
- substane alimentare modificate chimic prin prelucrare neadecvat;
- factori fizici (radiaii ultraviolete, radiaii ionizante, traumatisme);
- factori biologici (virusuri).
Evenimentul declanator al malignizrii celulare este mutaia somatic. Alterarea mutaional a ADN
este cauza fundamental a malignizrii. Celulele somatice sunt cele ce nu sunt destinate s devin celule
sexuale. Un argument indirect al rolului mutaiilor este creterea incidenei tumorilor, odat cu vrsta, fapt
explicabil prin necesitatea acumulrii mutaiilor somatice, nainte de producerea malignizrii.
Factorii interni sau externi care produc mutaii i favorizeaz transformarea malign a celulelor
poart denumirea de carcinogeni.
Dintre factorii fizici, radiaiile UV i ionizante sunt foarte mutagene. Expunerea tegumentului la
lumina UV cauzeaz producerea neoplaziei tegumentare, iar razele x aplicate la nivelul tiroidei produc tumori
tiroidiene. Majoritatea celulelor expuse aciunii agenilor mutageni, sufer leziuni incompatibile cu
supravieuirea, dar un numr foarte mic dintre ele se malignizeaz.
Radiaiile UV pot fi absorbite de bazele ADN i produc modificri chimice. Cea mai comun
modificare este formarea dimerilor ntre resturile pirimidinice adiacente pe o caten sau ntre resturi situate pe
cele dou catene opuse. Dimerii interfer cu transcrierea i replicarea. Bacteriile care supravieuiesc iradierii
cu UV nu sunt mutante, ceea ce denot c efectul mutaional al iradierii este produs n primul rnd, n timpul
reparrii i nu ca o consecin primar a iradierii.
Radiaia ionizant produce ruperi ale catenei de ADN. Capacitatea radiaiei ionizante de a produce
maligniti umane, n special leucemii, a fost evideniat dramatic de creterea ratei leucemiei la
supravieuitorii exploziei bombelor atomice din cel de al II-lea rzboi mondial.
Ambele tipuri de radiaii pot produce neoplazii in vivo i transformarea celulelor in vitro.
Carcinogeneza chimic. Se disting dou categorii mari de carcinogeni: cu aciune direct i
indirect.
Carcinogenii cu aciune direct sunt definii prin proprietatea lor de reactivitate electrofil, adic sunt
compui ce reacioneaz cu gruprile ncrcate negativ ale altor compui.
Agenii chimici cu aciune indirect sunt convertii la carcinogeni, dup dobndirea gruprilor
electrofile. Activarea metabolic a carcinogenilor este catalizat de enzimele hepatice, ce detoxific agenii
chimici toxici ce ptrund n organism: medicamente terapeutice, insecticide, hidrocarburi policiclice i chiar
unele produse naturale liposolubile. Sistemul de detoxifiere produce solubilizarea, adic adaug grupe
hidrofile la compuii insolubili n ap. Procesul de detoxifiere ncepe cu o serie de reacii de oxidare,
catalizate de enzimele asociate membranelor reticulului endoplasmic. Ele pot s oxideze compui nereactivi,
aa cum sunt hidrocarburile aromatice policiclice. Prin oxidarea compuilor aromatici policiclici rezult un
epoxid, un grup electrofil foarte reactiv. De obicei, epoxizii sunt rapid hidrolizai la grupri OH (sub aciunea
enzimei epoxid-hidrataz), apoi cuplai cu acidul glucuronic sau cu alte grupri, rezultnd produi solubili n
ap, ceea ce permite excreia.
Unii intermediari epoxizi sunt hidrolizai mai lent la gruprile OH, timp n care cei electrofili i
reactivi acioneaz i i manifest potenialul carcinogen. Moleculele electrofile pot interaciona cu gruprile
ncrcate negativ ale mai multor tipuri de molecule (proteine, ARN, ADN). Interaciunea compuilor
electrofili cu ADN este mutagen i carcinogen.
Caracterul mutagen al agenilor chimici este testat fa de bacterii. Potenialul mutagen al unui
compus chimic este direct proporional cu potenialul carcinogen. De aceea, mutageneza fa de bacterii a
devenit test pentru carcinogeni. Cel mai cunoscut este testul Ames. Potenialul carcinogenic real al unui
compus chimic este testat pe animale.
Unii ageni chimici inductori ai cancerului acioneaz sinergic. In concepia modern, unii
carcinogeni chimici au rolul de iniiatori ai malignizrii. Iniiatorii sunt carcinogeni care acioneaz prin
efectul lor mutagen, dar singuri, de obicei, nu produc malignizarea(dei uneori acioneaz att ca iniiatori ct
i ca promotori), deoarece mecanismele de reparare a ADN sunt eficiente (acioneaz rapid i fr erori).
Efectul iniiatorilor este desvrit de ageni chimici diferii, denumii promotori. Promotorii nu sunt
mutageni, dar mimeaz efectele factorilor de cretere, deoarece stimuleaz diviziunea celular i expresia
alterat a genelor. Pentru a fi eficient, promotorul trebuie s fie aplicat dup iniiator, n mod repetat, timp de
sptmni sau luni, iar iniiatorul trebuie aplicat o singur dat. Cei mai cunoscui promotori sunt esterii
forbolului. Promotorul nu poate modifica metabolismul celulei, dect consecutiv aciunii iniiatorului.
Rezultatul aciunii sale poate fi alterarea ADN sau schimbarea strii de difereniere a celulei. Gudroanele
rezultate din arderea igaretei par a avea aciune carcinogen de tipul promotorului.
S-au identificat sute de gene, care, consecutiv unui proces mutagen produc creterea necontrolat. In
ultimii ani, tot mai multe dovezi sugereaz c mutaiile genice nu sunt singurele cauze inductoare ale
neoplaziei. Adugarea anumitor grupri chimice la ADN sau la proteinele asociate, poate altera activitatea
genic, rezultatul fiind, uneori, malignitatea. S-a raportat c proteina oncogen mutant implicat n leucemia
acut promielocitar (APL) mobilizeaz (recruits)enzime care ataeaz grupele metil la ADN (probabil la
secvena genic supresoare a tumorii). Adugarea grupelor metil inhib gena i contribuie la transformarea
malign a celulei leucemice. Descoperirea explic metilarea genelor n celulele maligne. Genomul celulelor
maligne are mai puine grupe metil dect celulele normale, dar genele particulare inclusiv genele supresoare
ale oncogenelor, a cror inactivare induce creterea celular excesiv - adeseori sunt mai metilate.
Caracterele generale ale celulelor normale
Celulele normale au o durat de via, limitat n timp. Att in vivo, ct i in vitro, ele realizeaz un
numr limitat de cicluri de diviziune.
Diviziunea celulelor normale in vitro este strict dependent de urmtoarele condiii:
- densitatea celular
- disponibilitatea factorilor de cretere
- disponibilitatea unei suprafee solide la care s adere.
Dependena creterii de densitatea celular, se manifest prin fenomenul inhibiiei de contact.
Inhibiia de contact sau creterea dependent de densitate definete capacitatea celulei normale de a
recepiona stimuli din mediul extern i de a nceta diviziunea i micrile (formarea de pseudopode) n
condiii restrictive de spaiu. Consecina creterii dependente de densitate este c, in vitro, celulele normale
se divid numai atta timp ct dispun de spaiul necesar, adic cresc numai pn la contactul cu celulele
vecine, formnd un monostrat. Cnd monostratul este confluent, diviziunea se oprete. In vitro, celulele
normale realizeaz o cretere bidimensional, iar in vivo, consecina creterii limitate de spaiu este pstrarea
riguroas a arhitecturii esutului i organului din care fac parte
Inhibiia de contact este rezultatul unor mecanisme reglatoare complexe. Diviziunea celulelor
normale, in vivo este coordonat de semnale multiple din mediul extracelular, recepionate de molecule
membranare specializate funcional, cunoscute sub denumirea generic de integrine, adic molecule care
integreaz activitatea unei celule n contextul ansamblului structural din care face parte.
Denumirea de integrin s-a bazat pe concepia c aceste molecule au rolul unor puni de legtur
ntre matricea extracelular i citoschelet i mediaz activitile de rspuns ale celulei normale, n contextul
convieuirii ei cu celulele vecine.
Integrinele sunt proteine heterodimere transmembranare, cu un plan structural bine conservat.
Subunitile mari () conin 3-4 secvene repetitive, cu rolul de legare a cationilor i sunt alctuite din trei
domenii: extracelular, transmembranar i citoplasmatic. Subunitatea mic () a fiecrei integrine, are
numeroase resturi de cistein i se asociaz necovalent cu subunitatea mare.
Celulele normale sintetizeaz i secret numeroase componente moleculare, care formeaz matricea.
Matricea poate lua forma unei simple membrane bazale care constituie suportul unui epiteliu, pn la
esuturile conjunctive diversificate (piele, tendoane, ligamente). In structura ei se gsesc fibre (colagen i
elastin) i polimeri solubili (proteoglicani*, fibronectin i glicoproteine).
Fibronectina se gsete att n matrice ct i n plasma sanguin. Este alctuit din dou subuniti
neidentice, legate prin puni disulfurice. Multe tipuri de celule mezenhimale ader prin fibronectin, iar
celulele epiteliale i endoteliale ader prin laminin. Lamininele se gsesc n toate membranele bazale i au
influene majore asupra aderenei, creterii, migrrii i diferenierii celulelor.
Domeniul citoplasmatic al integrinelor se conecteaz cu citoscheletul, acesta la rndul lui fiind
mediatorul interaciunilor celul-celul i celul-substrat.
Integrinele sunt molecule receptoare pentru un numr mare de molecule matriceale. Prin domeniul lor
extern leag diferite molecule din mediul matriceal i extracelular i transmit semnale n interiorul celulei, pe
care le preia citoscheletul, cel care condiioneaz comportamentul normal (social) al celulei, care se
materializeaz n fenomenul inhibiiei de contact.
Filamentele de actin ce formeaz citoscheletul celulei normale au o distribuie ordonat i se
ancoreaz pe faa intern a membranei citoplasmatice. Filamentele citoscheletului preiau semnalele
recepionate de integrinele membranare din mediul extern. In celula normal, filamentele de actin au o
orientare bine definit, ceea ce determin o form constant i un anumit grad de rigiditate a acesteia.
Creterea i diviziunea celulelor normale in vitro este restrictiv n raport cu doi factori.
Disponibilitatea factorilor de cretere. Celulele normale necesit concentraii mari de ser de origine
animal, care trebuie adugat la compoziia mediului nutritiv. Ele au o capacitate limitat de transport
intracelular al moleculelor nutritive i realizeaz un metabolism aerob.
*Proteoglicanii au unul sau mai multe lanuri de glicozaminoglicani, ataate de o regiune central proteic i sunt
localizai n celul, intercalai n membrane i n matrice.
Disponibilitatea unei suprafee solide. Dependena fa de suportul de aderen pentru creterea in

vitro este o condiie absolut a celulelor normale (fibroblaste sau de tip epitelial). Dac sunt meninute n
suspensie, ele nu cresc, chiar ntr-un mediu care conine toi factorii de cretere. Rmn viabile un timp, dar
nu cresc i nu se divid.
Din punct de vedere genetic, celula normal este diploid.
Particularitatea fundamental a celulelor normale, este diviziunea cu o rat proprie fiecrui esut i
pstrarea arhitecturii normale a acestora.
Particularitile funcionale generale ale celulelor maligne
Transformarea malign este un proces care se realizeaz n trepte i implic cel puin dou clase de
funcii biologice. Prima este cea care determin imortalizarea*, ceea ce semnific stabilizarea celulelor in
vitro, adic dobndirea potenialului de cretere nelimitat. Imortalizarea nu este un indicator al transformrii
maligne, pentru c celulele se imortalizeaz nainte de expunerea la stimuli transformani. Stabilizarea unei
tulpini celulare se poate face sub aciunea unor stimuli i depinde de predispoziia natural a celulelor de a
dobndi imortalitatea. Celulele sanguine animale sunt imortalizate numai prin transformare, cele aderente
umane sunt rareori stabilizate, iar cele de oarece se stabilizeaz uor.
A II-a clas de funcii este cea care determin transformarea malign, asociat cu modificri
fenotipice i fiziologice. Uneori, chiar tumorile benigne progreseaz spre malignitate i stadiile timpurii ale
malignizrii sunt greu de identificat.
Distincia dintre celulele normale i cele transformate malign se bazeaz pe un set de caractere care
nu sunt totdeauna evidente i acceptate. Pentru scopuri practice, o celul transformat, se definete prin
caracterul permanent al creterii sale, nelimitat n timp i prin capacitatea de a iniia creterea tumorii,
dup transplantare la organismele singenice.
Celula malign este mai puin difereniat (este dedifereniat), adic a pierdut ntr-o msur
semnificativ particularitile structurale i funcionale ale celulei normale de origine. De exemplu, celulele
canceroase hepatice pierd anumite enzime caracteristice celulelor hepatice normale i pierd cele mai multe
funcii specifice ficatului.
Celulele maligne se pot distinge de celulele normale prin analiz microscopic. Ele posed
caracteristicile celulelor cu cretere rapid, adic au un raport mare N/C, nucleoli proemineni, mitoze
frecvente i o specializare structural redus. Prezena celulelor invadante printre celulele normale nvecinate
este cel mai sigur indiciu al malignitii.
*
Imortalizarea este explicat prin scurtarea progresiv a telomerei, pe msur ce progreseaz numrul ciclurilor de
diviziune, in vitro i in vivo. Telomera are rolul unui ceas molecular ce controleaz capacitatea replicativ i intrarea
celulelor n senescen. ADN-pol nu poate s replice complet captul 3 al catenei lagging al moleculei lineare
In vitro, celulele mamaliene normale prolifereaz un numr limitat de generaii. Scurtarea telomerei n celulele umane
normale are rolul unui ceas molecular care monitorizeaz istoria replicativ a celulelor.
La limita superioar a numrului de cicluri, una sau mai multe telomere ajunse la dimensiunea critic, declaneaz o
oprire ireversibil a creterii, denumit senescen replicativ sau stadiu 1 de mortalitate (M 1).
Celulele care scap senescenei, activeaz o gen critic pentru ciclul celular (ca de exemplu, p 53) i continu s se
divid pn la o nou scurtare a telomerei, cnd ajung la al II-lea blocaj replicativ denumit stadiu de criz sau stadiu 2
de mortalitate (M 2), caracterizat prin mortalitate masiv, datorat telomerelor scurte i nefuncionale. Puine celule
supravieuiesc crizei i sunt capabile s pstreze lungimea telomerei prin activarea telomerazei. Aceasta condiioneaz
proliferarea celular nelimitat, adic imortalizarea.
Telomeraza este o ADN-pol dependent de ARN, care sintetizeaz secvenele ADN telomerice i aproape totdeauna
constituie baza molecular pentru potenialul nelimitat de proliferare.
Activitatea telomerazei lipsete n cele mai multe celule somatice umane, dar este prezent n peste 90% dintre
celulele maligne i n celulele imortalizate in vitro.
Telomeraza este alctuit din 2 componente eseniale:
- ARN funcional, care servete ca matri pentru sinteza ADN telomeric
- o protein catalitic (hTERT)cu activitate de RT. hTERT este n general represat n celulele normale i are
activitate nalt n celulele imortalizate
Telomeraza coopereaz cu oncogenele sau inactiveaz antioncogenele, pentru a induce conversia tumorigen i
induce malignizarea celulelor epiteliale umane i a fibroblastelor.
Telomeraza are rol important n senescena celular.
Celula malign este o celul anarhic, asocial i antisocial, care nu recunoate celulele vecine i
se divide n ritm propriu. Are aderen sczut fa de vecinele sale i din aceast cauz, are caracter invaziv,
adic se desprinde de celulele nvecinate, migreaz la distan printre celulele normale i iniiaz un nou
centru de cretere, la distan de focarul iniial. Pentru migrare, ele produc att receptori pentru proteinele
membranei bazale, ct i enzime care degradeaz componentele structurale ale membranei bazale(colagenul,
proteoglicanii, glucozaminoglicanii). Celulele tumorale metastatice pot s adere de celulele endoteliale, ceea
ce uureaz migrarea lor, dar n ultim instan ele prsesc patul vascular i ncep creterea ntr-un mediu
strin. Celulele metastatice trebuie s adere de noile tipuri celulare i s se multiplice.
Celulele maligne continu s se divid n condiiile n care, celulele normale rspund prin ncetarea
creterii i diviziunii, att in vivo ct i in vitro.
Diferenele dintre celulele transformate malign i cele normale se pot mpri n 4 categorii:
1) modificri ale modului de cretere
2) modificri ale suprafeei celulare
3) modificri ale componentelor intracelulare, ce rezult din prezena genelor transformante
4) modificri fiziologice.
5) modificri genetice.
l) Modificrile modului cretere includ:
a) creterea la o densitate celular superioar

b) necesarul redus de factori de cretere n mediu
c) diminuarea dependenei de suportul de cretere
d) formarea tumorilor (tumorigeneza), dup injectarea in vivo.
Densitatea celular. Celulele maligne realizeaz, in vitro, densiti mari pe unitatea de suprafa, de
5-l0 ori mai mari dect celulele normale, deoarece, pierzndu-i inhibiia de contact cresc n straturi
suprapuse. Creterea lor este aglomerat (tridimensional). Pe suprafaa suportului solid, se formeaz
aglomerri de celule, denumite microtumori, iar in vivo, pierderea inhibiiei de contact se reflect n
caracterul invaziv al creterii i n modificarea arhitecturii normale a esutului.
Scderea necesarului de factori de cretere. Celula malign are necesiti sczute pentru factorii de
cretere. Spre deosebire de celula normal, creterea celulei maligne este relativ independent de factorii
serici stimulatori (hormoni, vitamine, ioni de Ca 2+). Celulele tumorale se divid cu o rat foarte nalt, la
concentraii serice foarte puin favorabile creterii celulelor normale, deoarece mecanismele lor de transport
membranar a nutrienilor (glucoza, aminoacizi, etc.) sunt de 5-l0 ori mai eficiente, comparativ cu ale
celulelor normale, fiind active chiar la concenratii foarte sczute ale moleculelor nutritive.
Diminuarea dependenei fa de suportul de cretere in vitro. Celulele maligne pierd parial sau total,
dependena de suportul de cretere i se divid n medii semisolide i chiar lichide. Pierderea dependenei de
ancorare de suport este foarte evident, chiar in vivo, pentru tumorile lichide (ascite).
Scderea aderenei fa de suport i fa de celulele vecine, creterea accentuat a mobilitii, abolirea
capacitii de recunoatere selectiv a semnalelor din mediul extern se explic prin diminuarea cantitativ a
integrinelor n membrana celulelor maligne. Datorit scderii aderenei, celula tumoral se desprinde din
angrenajul ei structural i migreaz la distan, formnd metastaze.
Aciunea tumorigen. Celulele maligne, dup injectarea la organisme cu molecule de
histocompatibilitate identice se divid i produc tumori.
2) Modificrile suprafeei celulare. Probabil, cea mai important diferen a celulelor maligne, fa de
celulele normale, const n mobilitatea proteinelor suprafeei celulare. Datorit acestui fapt, anticorpii pot mai
uor s aglutineze o protein a suprafeei celulelor transformate. Alterarea legturilor dintre proteinele de
suprafa i elementele citoscheletului, reprezint baza alterrii morfologiei celulelor transformate i este
probabil cauza mobilitii proteinelor. Modificrile suprafeei se exprim astfel:
- creterea gradului de aglutinabilitate cu lectinele din plante;
- modificarea cantitativ a glicoproteinelor i glicolipidelor
Lipidele membranare ale celulelor maligne nu au mobilitate superioar.
Celulele transformate malign pierd fibronectina, ceea ce explic scderea aderenei de suport i
creterea mobilitii. Pierderea fibronectinei este consecina ratei sczute de sintez, a secreiei de proteaze, a
turnover-ului ridicat sau a exprimrii diminuate a receptorilor de fibronectin pe suprafaa celulei. Adugarea
fibronectinei (in vitro), derivat din celulele normale, reverseaz la normalitate morfologia celulelor tumorale.
Pe suprafaa celulelor maligne se gsete o cantitate crescut de mucopolizaharide, ce se evideniaz
cu coloraii speciale.
Celula tumoral conine pe suprafaa sa, molecule glicoproteice noi (absente pe suprafaa celulei
normale), care se comport ca antigene. Sinteza lor este determinat de starea transformat. Antigenele
tumorale formeaz o adevrat reea molecular pericelular.
3) Schimbrile componentelor intracelulare includ, n primul rnd, modificrile citoscheletului.
Independena de cretere fa de suportul mecanic se coreleaz cu modificri ale citoscheletului: pierderea
filamentelor de actin sau redistribuirea lor n celul. In celula normal, filamentele de actin se inser pe
membrana plasmatic, la jonciunea acesteia cu suportul de cretere. In celula malign, filamentele de actin
au o distribuie difuz. Datorit dezorganizrii reelei de actin, celulele maligne sunt mai uor deformabile.
De aceea, la examenul microscopic, morfologia celulelor tumorale este modificat. Pierderea elementelor de
citoschelet se asociaz cu creterea mobilitii proteinelor suprafeei celulare.
4) Modificri fiziologice. In celulele transformate malign, activarea sau supresia unor gene celulare
specifice sunt modificri obinuite, datorate proceselor de dedifereniere celular, ce constau n pierderea ntro msur mai mare sau mai mic, a funciilor specifice celulelor normale de origine. In unele cazuri, celulele
transformate malign prezint activiti de tipul uzurprilor de identitate. De exemplu, tumorile de origine
pulmonar produc hormoni hipotalamici (vasopresina) sau hipofizari (hormon corticotrop), fapt explicabil
prin derepresia unor gene nefuncionale n celula normal de origine.
Sinteza factorilor de cretere. Factorii de cretere sunt proteine secretate de celulele normale, cu efect
stimulator al creterii celulelor embrionare i difereniate.
Unele celule transformate produc att factori de cretere, ct i receptorii corespunztori, ceea ce
constituie o modalitate de autostimulare a creterii, denumit stimulare autocrin.
Secreia de proteaze. Celula transformat secret proteaze, care uureaz procesul de metastazare.
Este cunoscut proteaza activatoare a plasminogenului, ce cliveaz o legtur peptidic a plasminogenului
seric i-l convertete la plasmin, o proteaz. Secreia unei mici cantiti de activator al plasminogenului,
determin creterea concentraiei proteazei n plasm. Celulele normale tratate cu proteaz, manifest unele
caracteristici ale celulelor transformate(pierderea microfilamentelor de actin, stimularea creterii), ceea ce
sugereaz c secreia de activator al plasminogenului favorizeaz meninerea strii transformate a anumitor
linii celulare. In vivo, proteaza favorizeaz metastazarea celulelor maligne prin membrana bazal.
Creterea ratei sintezei macromoleculelor (ADN, ARN, proteine). In celula malign, sinteza ADN are
loc cu o rat ne superioar (de pn la l0 ori mai mare), n raport cu celula normal.
Creterea ratei metabolice. Celulele tumorale manifest efectul Crabtree - fenomenul de inhibiie a
respiraiei n prezena glucozei. Consecina este c celulele tumorale catabolizeaz glucoza pe cale
predominant anaerob (fermentativ) i produc cantiti mari de acid lactic. Catena de respiraie celular,
pierde ntr-o msur semnificativ, citocromii a, b i c, prin diminuarea sintezei lor. Astfel, activitatea ciclului
Krebs diminu pn inhibiia total.
Deoarece mecanismele de transport membranar sunt foarte eficiente, celula tumoral se comport ca
o capcan de substane nutritive. Transportorul de glucoz are afinitate mult mai mare pentru glucoz, dect
cel neuronal sau eritrocitar. Transportul glucozei cu o rat crescut se coreleaz cu glicoliza nalt a celulelor
maligne.
Rata de cretere i diviziune a celulelor maligne este net superioar fa de a celulelor normale de
origine, ca o expresie a ratei metabolice foarte nalte.
5) Modificri genetice. Informaia genetic transformant (oncogena celular malignizant, ADN
viral) i produsele de transcriere i traducere (ARNm viral, proteinele virale) sunt prezente constant n
celulele n celulele transformate de virusuri.
Celulele maligne se caracterizeaz prin modificri genetice, ce se manifest printr-o accentuat
instabilitate a setului cromosomal. Sunt frecvente modificrile numerice ale garniturii cromosomale
(aneuploidie). Schimburile intercromosomale de fragmente sunt un marker distinctiv al celulelor maligne.
Una dintre modificri este translocaia, fenomen mutaional prin care un fragment cromosomal de dimensiuni
variate este transferat de pe un cromosom, pe altul neomolog. De exemplu, n leucemia mieloid cronic, un
fragment al unui cromosom al perechii 22 este translocat pe unul cromosom al perechii 9. Cromosomul mai
scurt al perechii 22 se numete cromosom Philadelphia i este rezultatul unui proces de translocaie
nereciproc. In celulele tumorale au loc, uneori, procese de translocaie robertsonian, prin care cei doi
cromosomi telocentrici, fuzioneaz prin centromerii lor, rezultnd un cromosom metacentric sau
submetacentric.
Oncogenele celulare
Transformarea malign indus de virusurile oncogene ARN i ADN presupune interaciunea
genomului viral cu o categorie special de gene celulare normale, denumite oncogene.
Denumirea de oncogene semnific faptul ca sunt gene care au potenialul de a determina
transformarea malign a celulei, sub aciunea inductoare a unor factori de mediu.
Genele oncogene sunt componente ale setului normal de gene celulare i se numesc oncogene
celulare (c-onc) sau protooncogene. Unele (ras, jun) au o constan evolutiv remarcabil, fiind prezente de la
levuri pn la om.
Oncogenele celulare codific sinteza oncoproteinelor, localizate n toate compartimentele celulei:
membran, citoplasm i nucleu. In condiii normale, oncogenele i oncoproteinele ndeplinesc funcii
eseniale pentru controlul diferenierii celulelor n cursul dezvoltrii embrionare, al creterii i diviziunii
celulelor difereniate, iar n condiii de dezechilibru funcional, oncogenele i oncoproteinele sunt efectorii
transformrii maligne.
Creterea normal i malignitatea sunt cele dou variante funcionale ale celulelor.
Creterea celular normal este controlat de 5 tipuri de proteine, codificate de oncogene:
- factori de cretere
receptori de factori de cretere

transductori intracelulari ai semnalului
factori nucleari ai reglrii transcrierii
proteine care controleaz ciclul celular.
Factorii de cretere, ca i hormonii, nu au efecte metabolice, dar au rolul de semnale, fiind liganzi
pentru receptorii specifici i induc rspunsuri multiple(diferenierea, intrarea n ciclul mitotic). Evenimentele
celulare ncep cu interaciunea ligand-receptor, fie la suprafaa celulei, fie n interiorul ei.
Oncoproteinele din membrana citoplasmatic sunt integrine, adic molecule care mediaz
integrarea celulei n ansamblul tisular i au rol de receptori ai semnalelor din mediu. Cei mai cunoscui
receptori intracelulari sunt cei pentru steroizi.
Celula normal se caracterizeaz prin capacitatea de a recepiona i de a rspunde adecvat semnalelor
pe care le primete din mediul extracelular. Semnalul stimulator al creterii ajunge la suprafaa celulei sub
forma unui factor polipeptidic, care se leag cu receptorul membranar. Adeseori, receptorul celular este o
protein membranar integrat, cu activitate specfic, tirozin-kinazic.
Mecanismul general de aciune al oncoproteinelor membranare este urmtorul: dup ce au legat o
molecul semnal din exterior, oncoproteinele dobndesc proprieti fosfokinazice. Molecula receptor se
dimerizeaz, activitatea ei kinazic crete i resturile de tirozin din secvena citoplasmatic se
autofosforileaz. Semnalul recepionat este transmis prin fosforilarea unei catene de proteine citoplasmatice,
pn n nucleu. Receptorul final al semnalului este un factor activator al transcrierii, ce controleaz un set de
gene.
Oncoproteinele citoplasmatice sunt componente ale catenei de propagare a semnalului recepionat la
suprafaa celulei i constituie cel mai numeros grup. Cei mai cunoscui transductori sunt proteinele G, iar una
dintre ele (GS) controleaz sinteza AMPc. Proteina G S simte c un ligand de suprafa a ocupat un receptor
de suprafa, leag GTP i activeaz adenil-ciclaza, ce sintetizeaz AMPc.
Alte proteine din aceiai clas (Src, Abl) sunt chinaze protein-tirozinice (PTK). Multe dintre ele au un
acid gras cu caten lung(miristic).
Oncoproteinele nucleare sunt componentele terminale ale catenei proteice i ndeplinesc urmtoarele
funcii:
- regleaz sinteza ADN
- regleaz proporia transcrierii diferitelor molecule de ARNm, pentru c celulele care cresc sintetizeaz
proteine cu rate diferite fa de celulele n repaus. Transcrierea este controlat prin dou tipuri de
secvene de ADN: promotori (localizai la punctul de start al transcrierii) i secvene stimulatoare
(enhancer), situate mai departe de situsul de start. Controlul transcrierii este exercitat de proteine
specifice, denumite factori nucleari de transcriere. Acetia se leag de secvenele specifice i
accelereaz sau ntrzie rata cu care ARN-pol II iniiaz transcrierea.
- regleaz rata diviziunii celulare(cicline). Ele controleaz intrarea celulelor n ciclul de diviziune i
includ ciclinele, p53, RB. Cele mai cunoscute sunt proteinele RB i p53, codificate de gene supresoare
ale oncogenelor (antioncogene). Ele acioneaz ca inhibitori ai diviziunii, avnd capacitatea de a stopa
progresia celulelor spre malignizare. Celulele care pierd ambele alele ale acestor antioncogene au
avantajul selectiv al supravieuirii, dar se transform malign (celulele retinoblastomului).
replicrii sau proteine reglatoare ale creterii i diviziunii celulare, asemntoare ca aciune, factorilor de
cretere.
Fig. 102. Oncoproteinele sunt localizate in toate compartimentele celulei, fiind componente ale catenelor care
controleaz creterea si diviziunea.
Protooncogenele exprimate n condiiile unui control celular normal nu sunt oncogene.

Oncoproteinele au, n acelai timp, capacitatea potenial de a induce transformarea malign a celulelor n
anumite condiii de dezechilibru al activitii lor.
Genele c-onc sunt active n timpul dezvoltrii embrionare i sunt eseniale pentru diferenierea
celular, dar ulterior se represeaz, unele complet, iar altele sunt transcrise cu o rat foarte sczut. Toate
oncogenele i pstreaz capacitatea de a-i relua activitatea i respectiv, de a i-o intensifica n diferite
condiii:
- dup infecia cu un virus oncogen;
- sub aciunea unor factori de mediu (substane cancerigene, radiaii UV sau ionizante);
- dup mutaii punctiforme care determin creterea ratei de transcriere.
Toi aceti factori activeaz potenialul transformant al oncogenelor. Activarea oncogenelor sau
inactivarea antioncogenelor este numitorul comun al tuturor tipurilor de cancere.
Oncogenele celulare (protooncogene) s-au izolat din esuturile normale, iar corespondentele lor
malignizante, s-au izolat de la retravirusuri i din esuturi maligne umane.
Cea mai cunoscut oncogen celular (protooncogen) este c-src, omolog cu gena v-src a virusului
sarcomului Rous. Gena c-src se gsete la psri, peti, mamifere, om i este esenial pentru celul. Ea
codific sinteza unei tirozin-chinaze (enzima care fosforileaz proteinele la nivelul resturilor de tirozin).
Oncogenele din celulele normale au corespondent n celulele maligne. Uneori, cele dou gene sunt
identice, iar alteori se deosebesc printr-o singur pereche de baze, oncogena malignizant fiind o mutant
punctiform a genei normale. Substituia unui singur aminoacid n proteina codificat, poate converti o
protooncogen ntr-o oncogen.
Deoarece proteinele codificate de genele c-onc au rol de reglare a creterii celulare i de receptori de
semnale, se poate deduce c transformarea malign este consecina urmtoarelor categorii de evenimente:
- schimbarea unei singure baze prin mutaie punctiform, determin apariia unei variante genice, care la
rndul ei produce creterea sau diminuarea sintezei oncoproteinei. Dac proteina este un factor de
cretere, sinteza sa crescut intensific rata creterii i diviziunii celulare ;
- oncoproteina codificat de gena normal are o anumit rat de turn-over, activitatea sa fiind reglat de
rata sintezei i degradrii. Oncoproteina codificat de gena mutant, poate fi o molecul mai stabil i
astfel activitatea ei biologic va crete. Funciile biologice specializate nu sunt determinate numai de
prezena unui anumit produs genic, ci i de concentraia produsului respectiv. Astfel, conversia unei
protooncogene la oncogena activ poate s fie rezultatul schimbrii concentraiei unui factor reglator al
activitii protooncogenei;
translocaia ntr-o nou localizare i trecerea unei gene sub controlul unui alt promotor, sau separarea de
un element reglator adiacent, poate altera expresia protooncogenelor. Este posibil ca o protooncogen s
devin oncogen, cnd intr sub aciunea reglatoare a promotorului viral, care poate avea o activitate
semnificativ superioar promotorului normal. Dup inseria ADN viral ntr-un cromosom al celulei,
oncogena poate fi exprimat la o rat mai nalt dect protooncogena.
Virusuri oncogene
Virusurile oncogene (tumorigene) sunt potenial inductoare ale transformrii maligne, in vivo sau in
vitro. Pentru unele, potenialul transformant a fost demonstrat numai in vitro.
Ipoteza originii virale (infecioase) a neoplaziilor este veche. In l903, Metchnikoff i Borell au
presupus c tumorile maligne s-ar putea datora infeciei cu ageni patogeni. In l908, Ellerman i Bang au
artat c leucoza ginilor poate fi transmis de la organismele bolnave, la cele sntoase, prin filtratul acelular
al sngelui. In l911, P. Rous a adus dovada experimental, c sarcomul muchiului pectoral al ginii (o tumor
solid) este produs de un agent filtrant. Descoperirea sa a fost prea timpurie fa de nivelul general al
cunoaterii i nu s-a impus ateniei. Cercetrile au fost abandonate, dar pentru valoarea deosebit a
rezultatelor investigaiilor, lui P. Rous i s-a decernat, postmortem, premiul Nobel (l966).
Unul dintre factorii majori ai nencrederii n originea posibil infecioas a cancerului provenea din
faptul c tumorile nu se transmit de la organismul bolnav la cel sntos. Tumorile organismelor animale i
umane nu sunt infecioase n cresctorii sau n spitale. Observaiile clinice sugerau c tumorile apar din alte
cauze dect cele infecioase, rolul factorilor chimici fiind preponderent:
- la oarece, badijonarea regional a tegumentului cu gudroane, provoac o iritare cronic i apariia, n
timp, a tumorilor maligne;
- existena cancerelor profesionale: tumori tegumentare la personalul unitilor radioactive, expus
iradierilor accidentale, cancerul scrotal la coari;
cancerul pulmonar la fumtori (componetele cancerigene sunt gudroanele rezultate din arderea tutunului
i a foiei). In zonele geografice unde tutunul se mestec, tumorile sunt localizate pe limb sau pe
mucoasa bucal.
Problema originii infecioase a unor tumori a fost reluat de ctre L. Gross (l952), care a descoperit
virusul leucemiei oarecelui. S-a considerat c oarecele este un organism oarecum artificial, datorit
gradului nalt de consanguinizare. In l964, s-a evideniat pentru prima dat, cu certitudine, natura viral a unei
tumori umane: virusul Epstein-Barr este agentul declanator al proliferrii celulare ce produce limfomul
Burkitt (o tumor a regiunii maxilare, la copiii ntre 4 i l5 ani), cu originea n limfocitele B.
Cercetrile ulterioare, pe sisteme celulare in vitro, au scos n eviden c un numr mare de virusuri,
n special cu genom ADN au capacitatea de a induce transformarea malign a celulelor.
In regnul vegetal, exist o dovad cert a originii infecioase a proliferrii celulare necontrolate:
tumorile de colet (crown gall) sunt produse de Agrobacterium tumefaciens, o bacterie heterotrof din sol.
Proliferarea celular necontrolat, este rezultatul transferului plasmidei Ti (Tumor inducing), n celulele
plantei.
Din cele peste 600 de virusuri, infecioase pentru om i animale, circa l50 sunt considerate potenial
oncogene i sunt distribuite n urmtorele grupe:
- Oncornavirusuri, virusuri oncogene cu genom ARN din familia Retraviridae;
- Oncodnavirusuri, virusuri oncogene cu genom ADN, creia i aparin urmtoarele familii:
Familia Papovaviridae, cu subfamiliile Papillomavirinae (g. Papillomavirus) i Polyomavirinae (g.
Polyomavirus), virusurile vacuolante (SV4o). Papilomavirusurile determin apariia papiloamelor la numeroase
specii: om, feline, bovine, iepure. Papiloamele au o evoluie benign, dar uneori pot progresa la un carcinom
metastazant. Virusul polioma induce tumori la oarece. SV 4o, n condiii naturale, infecteaz maimuele (M.
rhesus, Cercopithecus, Cynomolgus). Tumorile produse de Polyoma i de virusurile vacuolante la puii de
roztoare sunt delimitate de o capsul bine difereniat, necrozeaz extensiv n zona central i nu
metastazeaz.
Familia Adenoviridae. Opt din cele aproape 50 de serotipuri care infecteaz omul, produc sarcoame la
hamsterul nou nscut. Cele mai oncogene sunt serotipurile l2, l8 i 31, iar serotipurile 3, 7, l4, l6 i 2l au
activitate oncogen slab. Potenialul oncogen s-a evideniat la 6 serotipuri infecioase pentru maimu,
precum i la altele izolate de la bovine i cine.
Familia Herpesviridae. La om virusul Epstein-Barr este agentul inductor al limfomului Burkitt.
Virusul Lucke produce adenoame i adenocarcinoame ale rinichiului broatei leopard. La psri, virusul
Marek produce o neurofibromatoz, caracterizat prin proliferarea invaziv a limfocitelor T.
Familia Hepadnaviridae. Hepadnavirus (virusul hepatitei B) produce carcinomul hepatocelular.
Familia Poxviridae. Unele poxvirusuri induc rspunsuri hiperplazice i chiar tumori n tegumentul
animalelor infectate: virusului fibromului Shope, Yaba virus, Moluscipoxvirus. In unele cazuri s-a observat
stimularea replicrii ADN i pierderea inhibiiei de contact. ADN viral nu se integreaz n genomul celular.
Virusurile oncogene sunt potenial transformante in vivo, dar unele transform numai celulele in
vitro. Modificrile de natur malign a celulelor, in vitro, apar la l2-48 de ore dup infecie.
Pentru ca un virus sa fie oncogen trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii:
- informaia genetic viral s se replice n nucleul celulei i s aib capacitatea de a se integra n nucleu.
Aceasta permite genomului viral s persiste n genomul celulei i s se tramsmit generaiilor succesive
de celule;
- s conin informaie genetic transformant, care s induc trecerea celulei de la starea normal la cea
malign, sau dac nu conine gene transformante, s interfere cu activitatea oncogenelor celulare.
Transformarea malign este rezultatul aciunii genelor oncogene ale virusurilor cu genom ADN, a
oncogenelor virusurilor cu genom ARN, a oncogenelor celulare (protooncogene) i a genelor supresoare ale
oncogenelor celulare denumite antioncogene. Antioncogenele codific proteine care inhib creterea i
multiplicarea celular.
Pentru a-i exercita efectul transformant, virusurile oncogene acioneaz sinergic cu ali factori de
mediu sau cu factori genetici, denumii factori cocarcinogeni.
Oncogeneza cu retravirusuri
Interaciunea retravirusurilor oncogene cu oncogenele celulare a furnizat singura cale de acces pentru
studiul acestor gene.
In raport cu capacitatea lor de a ncorpora oncogene celulare n genom, retravirusurile oncogene
aparin urmtoarelor dou grupe:
- retravirusuri transductoare sunt acelea care poart oncogene celulare n genomul lor;
- retravirusuri netransductoare, caracterizate prin absena oncogenelor celulare n structura lor genomic.
Oncogeneza cu retravirusuri transductoare. Retravirusurile sunt singurele printre virusurile
infecioase pentru animale, care au capacitatea de a ncorpora fragmente ale unor gene celulare ( c-onc =
protooncogene) n genomul lor i de a altera structura i expresia lor fenotipic, astfel nct ele transform
celula normal n una malign.
Retravirusurile transductoare poart n genomul lor gene oncogene (v-onc), foarte asemntoare, pn
la identitate, cu genele c-onc. Asemnarea celor dou categorii de gene a fost evideniat prin analiza
secvenei de baze i prin tehnicile de hibridare molecular in situ.
Oncogenele retravirale
Toate oncogenele retravirale sunt derivate din genomul gazdei i reprezint o achiziie recent.
Cele mai productive surse de oncogene virale au fost animalele la care infecia cu virusurile
leucemice este comun: puiul de gin, pisicile de cas care fac frecvent tumori. In tabelul de mai jos sunt
redate denumirile celor mai reprezentative oncogene retravirale.
Oncogen
Abl
Erb A, erb B
Fes, fgr,fms
Fos
Virusul transductor
Virusul leucemiei murine Abelson (MuLV)
Sursa de celule maligne

Limfomul celulelor B de oarece i om
Virusul eritroblastozei aviare (VEA)

Virusul sarcomului felin
Virusul osteosarcomului murin (FBJ MuSV)
Fibrosarcom i leucemie de pui de gin

Fibrosarcom felin
Condrosarcomul de oarece
Fps
H-ras
K-ras
Virusul sarcomului Fujinami (FuSV)

Virusul sarcomului murin Harvey (Ha-MuSV)
Virusul sarcomului murin Kirsten (Ki-MuSV)
Myb
Virusul mieloblastozei aviare (AEV)
Rel
Sis
Src, ski, yes
Virusul reticuloendoteliozei
Virusul sarcomului simian (VSS)
Virusul sarcomului Rous
Sarcom de pui de gaina

Sarcom de obolan, carcinom uman i de obolan
Sarcom de obolan, carcinom i sarcom uman,
leucemii umane
Celule leucemice de pui de gin i celule
leucemice umane
Leucemie limfoid de curcan
Sarcom de maimu
Sarcom de pui de gin
Denumirile protooncogenelor sunt prescurtri sau acronime pentru virusurile sau esuturile de origine.
Aceste gene codific sinteza unor tirozin-kinaze (src), treonin-kinaze, a unor proteine care se asociaz cu
ADN i au rol n reglarea
Studiile de hibridare molecular in situ au argumentat c gena v-src a virusului sarcomului Rous
(VSR) este de origine celular: gen v-src a fost ncorporat de virus din ADN celular i astfel virusul a
dobndit proprieti oncogene.
Ipoteza originii celulare a v-src este sprijinit de faptul c mutantele virale rezultate prin deleia genei
src, se multiplic normal. Rezultatele se pot extrapola pentru toate oncogenele transduse de retravirusuri.
Genele retravirale oncogene nu conin introni, n timp ce oncogenele celulare sunt totdeauna
discontinui. Exist i alte gene care i-au pierdut intronii, dar nu se cunoate nici una care s-i fi dobndit.
Virusurile transductoare au o eficien foarte mare de transformare a celulelor in vitro (24-48 de ore)
iar in vivo produc tumori la cteva zile dup inoculare.
Virusurile transductoare sunt defective, deoarece n capsid poate fi mpachetat o cantitate limitat
de ARN genomic. O parte a informaiei genetice virale, este nlocuit de genele transduse. Din aceast cauz,
virusurile transductoare sunt mutante defective ale ciclului de replicare (fig. 103), deoarece oncogena celular
a nlocuit total sau parial o secven esenial pentru replicare. Retravirusurile defective codific majoritatea
etapelor ciclului de multiplicare: revers-transcrierea, integrarea, sinteza ARN i traducerea (fig. 104) . Ele
produc transformarea malign a celulelor pe care le infecteaz, dar nu se asambleaz virus progen, deoarece
nu se sintetizeaz proteine structurale. Virionii progeni se asambleaz numai dac aceiai celul este infectat
de un retravirus cu ciclu complet de replicare, care suplinete deficienele virusului defectiv.
Fig. 103. Reprezentarea schematic a principalelor etape ale ciclului de replicare a virusurilor tumorale ARN.
Virionul are rolul unui vehicul transductor pentru oncogenele de origine celular. Dup ce au fost
transduse ntr-o nou celul, transcrierea lor este controlat de genomul viral.
Gena v-src transdus de VSR este o excepie. Ea se adaug ntregului set de gene virale i virionii
transductori nu sunt defectivi pentru ciclul de replicare. Deleia genei v-src nu influeneaz capacitatea de
replicare a VSR.
Fenomenul transduciei este un eveniment rar. Virusurile transductoare nu pot fi considerate ca ageni
infecioi naturali, ci ca accidente ale ciclului de replicare, deoarece virionii transductori sunt defectivi.
Fig. 104. Ilustrarea schematic a mecanismului molecular al integrrii ADN viral ntr-un cromosom al celulei (dup
Coffin, 1991).
Mecanismul transduciei genelor celulare este ipotetic. Se admite c integrarea genomului viral ca
provirus, are loc n proximitatea unei oncogene celulare, n amonte, n raport cu promotorul ei, n aceiai
orientare de transcriere. Transcrierea genomului viral, catalizat de aparatul enzimatic al celulei, se extinde
asupra oncogenei celulare, deoarece gena c-onc trece sub controlul promotorului viral. Astfel, este transcris o
molecul himer de ARN, care conine att copia provirusului ct i a oncogenei celulare. Copia de ARN este
prelucrat prin mecanismul clivrii i ndirii (intronii sunt excizai) i ARN himeric va forma genomul
virionilor progeni.
Oncogenele de origine celular sunt transduse sub forma unei copii de ARN. Un virus transduce o
singur gen, rareori dou. Genele onc transduse de retravirusuri sunt cei mai eficieni ageni ai transformrii
maligne.
Oncogenele de origine celular s-au gsit numai la subfamilia Oncovirinae, dar lipsesc la
Lentivirinae i Spumavirinae, dei treptele replicrii sunt aceleai.
Mecanismele posibile ale transformrii maligne sub aciunea retravirusurilor transductoare, sunt
multiple.
1) In acord cu teoria supradozajului, transformarea malign este rezultatul sintezei n exces a
oncoproteinelor codificate de genele transduse. Eficiena transformant a retravirusurilor transductoare,
deriv din faptul c genele v-onc, fiind sub controlul promotorului viral, sunt transcrise cu o rat superioar,
comparativ cu genele c-onc. Dac oncogena celular codific un factor stimulator al sintezei ADN, creterea
ratei diviziunii celulare este prima treapt spre transformarea malign.
2) Sinteza oncoproteinelor modificate. In celulele normale ale muchiului pectoral de gin, gena csrc codific o tirozin-kinaz, o fosfoprotein de 60 kDa, care se inser n membrana citoplasmatic i nu are,
n mod obinuit, proprieti transformante. Ea fosforileaz resturile de tirozin ale catorva proteine din
categoria integrinelor. Proteinele tirozin-fosforilate, n celula normal, au rolul de a lega Ca 2+ i funcioneaz
ca receptori pentru fibronectin. Activitatea tirozin-kinazei codificat de c-src este de numai 10% din aceea a
enzimei codificat de gena v-src.
Genele v-onc transduse, codific sinteza unor oncoproteine modificate. De exemplu, gena v-src
codific o tirozin-kinaz uor modificat fa de tirozin-kinaza codificat de gena c-src: ultimii l9 aminoacizi
ai captului C-terminal al proteinei C-src sunt nlocuii cu o secven de l2 aminoacizi n proteina V-src.
Modificarea are consecine asupra efectului sau reglator, dar gena v-src este transcris cu o rat net
superioar, fiind sub controlul promotorului viral.
3) Modificarea poziiei genei este unul dintre mecanismele prin care o gen celular transdus devine
oncogen. Genele v-onc, originare n celul, la un nou ciclu infecios se integreaz concomitent cu provirusul,
ntr-o nou localizare cromosomal, n ambiana altor gene celulare.
Oncogeneza cu retravirusuri netransductoare. Multe retravirusuri care nu transduc oncogene
celulare, induc tumori dup inoculare experimental la animale: sarcoame, leucemii, carcinoame. Diferena
major fa de virusurile oncogene transductoare, const n perioada de laten care precede apariia
tumorilor: de la cteva sptmni, la cteva luni. Nici unul dintre virusurile netransductoare nu induce
transformarea malign a celulelor in vitro. Cel mai cunoscut reprezentant al acestui grup este virusul leucozei
aviare. Tumorile induse de retravirusurile netransductoare au cteva proprieti definitorii:
- toate celulele unei tumori conin genomul integrat ca provirus
- provirusul este integrat n acelai situs cromosomal, n toate celulele tumorii
- celulele tumorii sunt clonale (identice din punct de vedere genetic), avnd originea ntr-o singur celul
transformat.
Integrarea provirusului se face la situsuri specifice ale unui cromosom, n imediata vecintate a
oncogenelor celulare, ca i genomul virusurilor transductoare. Consecina direct a integrrii genomului viral,
este mutageneza prin inserie.
Integrarea genomului viral este mutagen, deoarece modific secvena de ADN. Mutaiile induse n
oncogenele celulare pot avea dou efecte: stimuleaz activitatea unei gene sau o inactiveaz.
Modificarea activitii oncogenelor celulare constituie esena mecanismului molecular al
transformrii maligne i a fost explicat prin mai multe teorii:
l) teoria supradozajului consider c transformarea malign este rezultatul stimulrii activitii unei
oncogene i a sintezei n exces a oncoproteinei pe care o codific. Gena c-onc din proximitatea situsului de
integrare a provirusului, trece n subordinea promotorului viral i va fi transcris cu o rat superioar celei
normale. Oncoproteina corespunztoare se sintetizeaz n exces, are aciune stimulatoare i activeaz
necontrolat rata diviziunii celulare.
2) teoria activrii genelor c-onc sub aciunea inductoare a provirusului consider c genele c-onc, n
mod obinuit sunt parial sau total represate, dar se activeaz dup integrarea provirusului n imediata lor
vecintate. Se sintetizeaz oncoproteine, inductoare ale transformrii maligne. Acesta este fenomenul
activrii prin inserie sau al cis-activrii oncogenelor celulare, consecutiv trecerii lor sub controlul
promotorului viral.
3)inactivarea antioncogenelor este un alt efect al mutagenezei prin inserie. Antioncogenele sunt
inactivatoare ale protooncogenelor. Ele codific proteine supresoare ale protooncogenelor celulare, al cror
rol este meninerea funciilor normale ale celulei. De exemplu, retinoblastomul (o tumor retinian ce apare n
copilrie) se datoreaz pierderii ambelor copii ale genei rb. Fosfoproteina RB, cu localizare nuclear, are rol
important n reglarea ciclului celular, controlnd intrarea celulei n ciclul mitotic. Absena proteinei RB, are ca
efect proliferarea necontrolat a celulelor retiniene.
Gena p-53, supresoare a oncogenelor poate fi inactivat prin inseria unui provirus la ambele alele,
sau prin combinarea unui eveniment de inserie, cu pierderea celeilalte alele prin deleie.
Genele c-onc se pot activa independent de infecia viral sub aciunea mutaiilor, chiar punctiforme,
care apar n interiorul lor. Substituia unui singur aminoacid al oncoproteinei este suficient pentru a converti
o oncoprotein reglatoare, ntr-o protein cu caracter transformant.
Activarea oncogenelor ar putea fi rezultatul translocaiei unei protooncogene ntr-o nou localizare
cromosomal. De exemplu, n celulele limfomului Burkitt, schimbul de fragmente ntre cromosomii perechii
8 i l4 are o frecven de 90%. Schimbul ntre cromosomii perechilor 8 i 2, ca i ntre perechile 8 i 22 are o
frecven de 5%. In toate cazurile are loc translocaia unui fragment al unui cromosom din perechea numrul
8. Acest fragment conine protooncogena c-myc, care astfel este translocat adiacent fa de o gen reglatoare
a sintezei anticorpilor. In noua lcalizare a genei, oncoproteina c-myc este sintetizat n exces.
Oncogenele celulare mediaz transformarea malign indus de virusuri, dar i de factorii fizici i
chimici cu aciune mutagen.
Infeciile cu retravirusuri potenial oncogene, la om i animale sunt mult mai frecvente dect
incidena tumorilor. Pentru ca transformarea malign a celulei s se produc, este necesar ca simultan cu
infecia viral, s acioneze ali factori cu efect sinergic, denumii factori cocarcinogeni. Acetia pot fi factori
intrinseci (genetici, hormonali, imunologici) sau factori ai mediului extern (substane chimice potenial
cancerigene, radiaii). Factorii cocarcinogeni interni sau externi poteneaz evoluia spre malignizare a
infeciei cu virusuri oncogene.
Interaciunea oncodnavirusurilor cu substratul celular

Un numr mare de virusuri cu genom ADN, infecioase n mod natural pentru o larg varietate de
specii animale i pentru om, au capacitatea de a induce transformarea malign a celulelor in vitro sau s
induc tumori la animalele de laborator. Unele determin formarea tumorilor chiar la gazdele lor naturale.
Virusurile oncogene ADN cuprind:
l) Papilomavirusuri (peste 60 de serotipuri izolate de la om i numeroase serotipuri animale).
2) Poliomavirusuri (SV4o, polioma i virusurile BK i JC)
3) Adenovirusuri (cu numeroase variante antigenice umane i animale).
4) Herpesvirusuri (virusul Epstein-Barr, virusul bolii lui Marek, virusul carcinomului renal Lucke al broatei
leopard).
5) Virusurile hepatitice (virusul hepatitei B umane).
Papilomavirusurile induc carcinomul cervixului uterin, virusul Epstein-Barr induce limfomul Burkitt
i carcinomul nazofaringian, iar virusul hepatitei B este asociat cu carcinomul hepatocelular. Polioma i
adenovirusurile au activitate transformant numai n sistemele experimentale in vitro, dar rolul lor n
inducerea tumorilor umane sau animale nu s-a demonstrat.
Toate virusurile oncogene ADN au simetrie icozaedric, cu dimensiuni cuprinse ntre 40-l00 nm i
sunt nude, cu excepia herpesvirusurilor.
Spre deosebire de retravirusuri, la care oncogenele sunt de origine celular, genele transformante ale
oncodnavirusurilor sunt gene virale eseniale pentru desfurarea ciclului de replicare viral. Ele nu au
coresponden printre genele celulare normale. Genele virale oncogene (transformante) au fost caracterizate
prin evidenierea rolului lor n ciclul multiplicrii acestor virusuri.
Transformarea malign cu oncodnavirusuri nu este asociat cu producerea virusului progen, deoarece
transcrierea programului tardiv este blocat.
Cercetrile de genetic molecular au evideniat ca genomul virusurilor oncogene ADN, din punct de
vedere funcional, poate fi mprit n mod convenional, n dou regiuni distincte, n raport cu momentul
transcrierii lor:
a) gene timpurii, a cror transcriere precede replicarea ADN;
b) gene tardive, care sunt transcrise dup replicarea genomului viral.
Pornind de la aceste concluzii, s-a dedus c interaciunea oncodnavirusurilor cu celula, este modulat
genetic pe dou ci distincte:
In celulele permisive sunt transcrise ambele programe genetice. Se sintetizeaz molecule de ARNm
timpurii i tardive, care sunt traduse n proteine virale. Ciclul multiplicrii virale este complet. Infecia ete
productiv: se asambleaz i se elibereaz virus progen, iar celula se lizeaz.
In celulele nepermisive, este transcris informaia genetic timpurie i numai parial, programul tardiv
al genomului viral. Celulele nepermisive provin de la organisme sau din esuturi pe care virusul nu le
infecteaz n condiii naturale.
Dup transcrierea strict limitat a informaiei genetice, un factor celular blocheaz transcrierea
celorlalte gene ale programului tardiv. Ciclul multiplicrii virale este stopat nainte de replicarea genomului i
nu se asambleaz virus progen. Genomul viral este degradat ori se dilueaz prin diviziunea celulelor.
Rezultatul interaciunii virusului cu celula nepermisiv, de cele mai multe ori, este infecia abortiv, fr
consecine detectabile.
Dac genomul viral persist n stare fizic autonom sau integrat n celul, are loc transformarea
malign.
Pentru ca transformarea malign s se produc, genele virale trebuie s rmn asociate cu celula, fie
sub form fizic independent, fie sub form integrat n cromosomul celulei. Proteinele codificate de genele
virale oncogene, sunt necesare permanent pentru meninerea fenotipului transformant al celulei.
ADN viral se poate integra n ADN celular, la un situs specific sau la un situs aleatoriu. Integrarea la
situs specific este probabil condiionat de proteine virale care recunosc o secven a ADN celular, dar nu par
a avea rol n procesul fizic al integrrii. Integrarea ADN viral nu are rol n propagarea virusului, nefiind o
treapt obligatorie a replicrii virale. Dup pierderea genomului viral, celula reverseaz la starea normal.
Transformarea malign cu virusuri oncogene ADN este un eveniment rar (sub l/l0 5) i necesit un
mare numr de particule virale infecioase/celul. Ineficiena procesului de transformare, reflect absena
mecanismelor specifice de integrare a ADN viral n cromosomii celulei. Genele virale oncogene au o
probabilitate mic s fie integrate ntr-o stare care s permit transcrierea.
Mult mai frecvent este transformarea abortiv, caz n care, infecia celulelor nepermisive este
urmat de exprimarea genelor timpurii. Tranzitoriu, celula dobndete caractere care denot procesul de
transformare, dar ulterior, dup pierderea ADN viral, reverseaz la fenotipul normal i ADN viral se pierde.
Condiia transformrii maligne este pstrarea genomului viral n celul n stare integrat sau fizic
autonom i ntreruperea transcrierii genelor virale tardive.
Consecinele majore ale integrrii genomului viral sunt cele mutagene i se manifest prin
urmtoarele evenimente:
l) inactivarea genei celulare, ca rezultat al integrrii genomului viral n secvena ei sau datorit separrii
genei de promotorul ei. Dac gena are un rol reglator, consecina este perturbarea proceselor celulare
dependente de gena inactivat;
2) integrarea poate s pun o gen a celulei sub controlul unui promotor viral mult mai activ i rezultatul
este o supraproducie a proteinei codificat de o gen;
3) integrarea genomului viral poate s provoace ruperea unui cromosom celular i rearanjarea lui, astfel
nct poate altera expresia genelor.
4) unul sau mai multe produse ale genelor virale pot, direct sau indirect, s determine transformarea.
Oncoproteinele codificate de virus stimuleaz celulele aflate n faza G o s intre n ciclul celular. Stimularea
ratei activitii mitotice a celulelor este prima treapt transformrii maligne. Aciunea oncoproteinelor este n
acord cu ipoteza supradozajului.
Virusurile oncogene se deosebesc de fagii lizogeni prin faptul ca nu codific represori, astfel nct
transcrierea ADN viral integrat se face continuu. Bacteriofagul integrat necesit sinteza unui represor propriu
pentru meninerea strii lizogene, pentru a preveni activarea funciilor virale, ce produc liza bacteriei. La
retravirusuri, represorul nu este necesar, deoarece celula transformat este concomitent productoare de
particule virale progene. La oncodnavirusuri, genele transformante aparin programului timpuriu i
transcrierea lor este permanent, fiind necesar pentru meninerea strii transformate. De accea, nu este
necesar sinteza represorului.
Detectarea ADN integrat. In studiul interaciunii transformante virus-celul se urmrete detectarea
ADN viral, integrat sau n stare fizic autonom, numrul i localizarea secvenelor de ADN viral, n celula
transformat.
Dovada concludent a prezenei ADN viral n celulele transformate este adus de experienele de
hibridare prin metoda Southern blotting (ADN este n gel, iar ARN marcat, cu secvena cunoscut, este
utilizat ca prob). ARN marcat (radioactiv sau cu digoxigenin), obinut prin transcrierea in vitro a ADN viral
(polioma, SV40 etc.) hibrideaz cu ADN izolat din celulele transformate cu virusul corespunztor, dar nu
hibrideaz cu ADN izolat din celulele normale.
ADN viral se poate integra sau rmne sub form fizic independent n celulele transformate malign.
Transformarea cu Papovavirusuri
Grupul Papovaviridae cuprinde dou genuri: Papilomavirus, Poliomavirus, care la rndul su include
i virusurile vacuolante (SV4o).
Familia Poliomavirinae (denumire dat dup dup capacitatea lui SV 40 de a produce leziuni tumorale
cu localizri multiple la puii de roztoare).
Virusul simian 40 (SV4o) infecteaz n mod natural, rinichiul maimuelor de Cercopithecus aetiops i
Macaccus rhesus, iar virusul polioma(Pi) este endemic la oarecele de laborator i la cel slbatic, unde
produce infecii persistente. Infecia primar are loc n celulele epiteliale neciliate ale bronhiilor i
bronhiolelor. Replicarea Pi este dependent de gradul de gradul de difereniere celular.
Infecia cu Pi este inaparent i persistent. Virusul s-a gsit n diferite organe i n excreta. Tractul
urinar pare a fi sursa persistenei i rspndirii virusului prin urin n populaiile de oareci. In condiii
naturale, Pi produce tumori cu o rat sczut. Virusul Pi s-a gsit i la obolan, iar la psri produce numai
infecii acute.
SV40 i Pi nu produc mbolnviri decelabile la gazdele naturale. Ciclul de multiplicare este litic i se
elibereaz virus progen. Ambele virusuri induc tumori la puii de oarece, de hamster, de obolan sau in vitro
transform celulele lor.
Poliomavirusurile BK i JC(dup numele pacienilor) infecteaz timpuriu n copilrie i sunt

ubicvitare n populaia uman.
Virusul JC s-a izolat n 1971 din creierul unui pacient cu LMP i s-a multiplicat n celulele creierului
fetal uman in vitro. Este icozaedric, nud.
Virusul BK s-a izolat de la un pacient cu transplant renal. Cele dou virusuri sunt diferite i
aglutineaz hematiile de grup 0.
Infecia cu JCV se produce, la majoritatea indivizilor (circa 90%), n primele 2 decade de via.
Infecia rm@ne latent i se activeaz la cei care dezvolt leucoencefalopatie multifocal progresiv (LMP),
o maladie neurodegenerativ caracterizat prin dezordini neurologice. Virusul JC infecteaz celulele gliale i
produce demielinizare multifocal: n emisferele cerebrale, corpii striai, talamus, cerebel, trunchiul cerebral.
Pacienii cu LMP par s aib deficien a IMC i au frecvent tumori limfatice. Majoritatea au SIDA.
Celulele creierului pacienilor cu LMP nu evideniaz antigene virale. Sediul latenei ar putea fi
limfocitul B, n mduva osoas, deoarece IF cu AMC evideniaz antigenul JCV, de unde virusul se
disemineaz pe cale hematogen, pentru c leziunile demielinizante sunt multiple i sunt localizate la
jonciunea substanei albe cu substana cenuie. Virusul este eliminat prin urin, ceea ce sugereaz c latena
ar fi n tractul urogenital.
Virusul BK i rareori virusul JC produce infecii hemoragice ale tractului urinar.
Infecia primar cu aceste virusuri nu determin manifestri clinice, dar n condiiile imunosupresiei
prelungite, virusul JC dobndete acces la SNC i produce o maladie demielinizant, leucoencefalopatia
progresiv multifocal(LMP) uman, o maladie neurodegenerativ, caracterizat prin dezordini neurologice.
Virusul JC infecteaz celulele gliale i produce demielinizare multifocal: n scoara cerebral, corpii striai,
talamus, cerebel i trunchiul cerebral.
Muli pacieni cu LMP au tumori limfatice diseminate. Cele dou virusuri inoculate intracerebral i
subcutan la hamsterii tineri produc tumori gliale i alte tumori neclasificate.
Dup inoculare la roztoarele nou nscute, virusul polioma produce o varietate de tumori.
Transformarea este consecina unei infecii neproductive sau abortive.
Genomul Pi este o molecul de ADN circular, de 4,7-5,2 kb. Virionii sunt nuzi, cu simetrie
icozaedric. Funcional, genomul cuprinde setul de gene timpurii i al genelor tardive. In celulele permisive
sunt transcrise ambele programe, iar n celulele nepermisive sau semipermisive este transcris numai setul de
gene al programului timpuriu, codificatoare pentru antigenele T (Tumorale). Antigenele T sunt proteine
oncogene, stimulatoare ale sintezei ADN celular, o condiie preliminar a transformrii maligne a celulei, dar
i a ciclului de replicare litic.
Programul timpuriu al virusurilor polioma, codific sinteza a dou Ag tumorale: antigenul T i t (l00
i respectiv l7 kDa). Virusul polioma infecios pentru oarece i hamster codific sinteza a trei Ag: mare,
mijlociu i mic. Antigenele T sunt proteine oncogene i stimuleaz creterea i diviziunea celulei infectate.
Antigenul T de l00 kDa are o localizare aproape exclusiv nuclear, att n celulele infectate, ct i n
cele transformate. Proteina de l00 kD se asociaz cu ADN viral i regleaz cteva trepte cheie ale ciclului de
multiplicare: transcrierea ARNm timpuriu i tardiv, replicarea ADN. Antigenul viral se asociaz i cu proteina
p53 o fosfoproterin nuclear, cu rol inhibitor al diviziunii celulare. Dup formarea complexului, funciile
reglatoare ale proteinei p53 sunt anulate.
Antigenul T de 55 kDa (mijlociu) este o protein fosforilat, care se asociaz cu proteina celular de
60 kDa (p60), codificat de protooncogena c-src, o kinaz tirozin-specific. Interaciunea p60 cu antigenul
viral, determin o stimulare de circa 50 de ori a activitii tirozin-kinazice a proteinei Src i concomitent,
perturbarea mecanismului su de reglare negativ.
SV40 are tropism pentru celulele difereniate, care nu se divid, ale rinichiului maimuei M. rhesus,
folosite pentru producerea vaccinului polio. Zeci de milioane de copii au primit, odat cu vaccinul polio, SV 40
cu titru mic sau mare. Ulterior s-a descoperit c SV 40 induce tumori la puii de roztoare i se suspecteaz rolul
su n inducerea unor tumori umane.
SV40 produce infecii persistente n rinichi, fr efecte patologice vizibile. Datele recente de PCR
sugereaz un rol posibil al lui SV40 n inducerea mezoteliomului*, osteosarcomului, a tumorilor de plex coroid
i alte tumori ale creierului.
*
Mezoteliomul este o tumor care apare difuz pe suprafeele pleurale. Expunerea la azbest i efectul sinergic al
fumatului sunt factori majori de risc pentru aceast neoplazie. Latena este lung (circa 20 de ani) i constituie o
problem de sntate public.
SV4o codific sinteza antigenului T multifuncional (708 aminoacizi), cu rol n desfurarea ciclului
de multiplicare (pentru c induce intrarea celulelor n faza S), dar are i rol n tumorigenez. Este o protein
de 94 kDa, cu localizare predominant nuclear, creia i se atribuie cteva funcii:
- se asociaz specific cu genomul viral i are rol n iniierea replicrii acestuia;
- controleaz transcrierea programului timpuriu i tardiv;
- stimuleaz sinteza enzimelor de replicare a ADN;
- se inser n membrana plasmatic i se comport ca antigen de transplantare specific tumoral.
Curnd dup infecia viral, att n celulele permisive ct i n cele nepermisive, are loc creterea
accentuat a enzimelor ce catalizeaz sinteza ADN. Creterea este detectabil chiar n celulele blocate n faza
G1(faz n care sinteza ADN este stopat). Enzimele iniiaz nu numai sinteza ADN viral, ci i sinteza ADN
celular.
Expresia Ag T poate duce la transformarea malign a celulei. Ag t asist transformarea unor tipuri de
celule, iar alteori sinteza sa este suficient pentru a induce fenotipul transformant.
SV40 induce tumori la nou nscuii de oarece i hamster.
Transformarea cu papilomavirusuri
Papilomavirusurile prezint un interes tiinific i practic deosebit, deoarece s-au izolat de la primate,
bovine, iepurele de vizuin din vestul SUA i de la diferite specii de psri.
Virusurile Papiloma nu se multiplic n sisteme celulare in vitro, cu excepia celor foarte specializate
(culturi de heratinocite).
Papilomavirusurile produc tumori benigne epiteliale i fibroepiteliale la gazdele naturale. Tumorile
epiteliale denumite papiloame* (negi, veruci) pot progresa uneori spre carcinoame, prin proliferare dup
strpungerea membranei bazale.
*
Originea viral a leziunilor papilomatoase a fost intuit de Ciufo (l907). El a evideniat c filtratele acelulare ale
negilor transmit leziunile. Primul virus al acestui grup a fost descoperit de Shope (l933) la iepurele de vizuin. Virusul
produce o papilomatoz cutanat, care n 25% din cazuri, progreseaz la un carcinom celular squamos, evoluia malign
fiind accelerat de metilcolantren i de gudronul de crbune. In condiii experimentale, virusul infecteaz i iepurele
domestic, iar papiloamele progreseaz spre carcinom n proporie de 75%.
Genomul papilomavirusurilor este o molecul de ADN dublu catenar, circular nchis, de 7,2-8 kb.
Virionii sunt nuzi, cu simetrie icozaedric. Nu se multiplic n culturi de celule.
Din punct de vedere funcional, genomul poate fi mprit n trei regiuni:
- regiunea reglatoare, ce cuprinde l0% din genom;
- regiunea timpurie E (Early) codific proteine reglatoare ale persistentei genomului, ale replicrii ADN i
ale activrii ciclului litic. Proteina codificat de genele E 6/E7 interacioneaz cu proteina p53 i rezultatul
este degradarea rapid a proteinei celulare;
- regiunea tardiv L (Late), codific proteinele structurale ale capsidei.
La om s-au identificat peste 100 de genotipuri de papilomavirusuri, notate HPV (Human Papilloma
Virus) urmat de o cifr. Creterea rapid a numrului genotipurilor identificate este rezultatul direct al
utilizrii tehnicii PCR. Numeroasele genotipuri se grupeaz dup gradul de omologie a nucleotidelor.
Subgrupele de virusuri au tropisme pentru situsuri i esuturi specifice. Peste 30 de genotipuri
formeaz un subgrup ce infecteaz celulele epiteliale ale tractului anogenital. Variantele ce infecteaz tractul
genital* sunt de dou categorii: de risc mare i de risc sczut. Cele de risc sczut (HPV-6 i 11) produc numai
negi genitali benigni. Cele de risc mare (HPV-16, 18, 31, 33, 45) sunt asociate cu dezvoltarea tumorilor
anogenitale.
*
Cele care infecteaz tractul genital sunt transmise pe cale sexual. Se estimeaz c circa 2/3 dintre indivizii care au
relaii sexuale cu un partener infectat, se infecteaz. Majoritatea infeciilor sunt subclinice. Infeciile cu HPV de risc nalt
nu sunt limitate la tractul genital, deoarece circa 20% dintre neoplaziile orofaringiene conin ADN al HPV anogenitale.
Alte 20 de tipuri infecteaz tegumentul pacienilor cu epidermodisplazie veruciform, caracterizat

prin verucoz extensiv.
HPV1 i HPV4 produc negi plantari, iar HPV2 produce negi ai minii. HPV6 i HPV11 produc veruci ai
regiunii genitale i infecia se transmite pe cale sexual.
La bovine, maimue etc., s-au descris peste 20 de tipuri de papilomavirusuri. Unele produc papiloame
(tumori benigne derivate din celulele epiteliale), altele produc fibropapiloame (tumori benigne formate din
celule epiteliale i din esut conjunctiv fibros) sau fibroame (tumori benigne formate din esut conjunctiv
fibros i fibroblaste proliferante).
Infecia tractului genital cu HPV poate produce iniial, leziuni uoare (displazii) sau neoplazii
cervicale intraepiteliale de gradul I, cu un grad mediu de alterare a diferenierii celulare. Multe dintre ele sunt
eliminate de sistemul imunitar n mai puin de un an. Unele celule ale displaziilor nu sunt eliminate de
sistemul imunitar i persist perioade lungi, de cteva decade. Persistena infeciei cu HPV de risc nalt
constituie un risc major pentru dezvoltarea malignitilor genitale: carcinomul cu celule squamoase i mai rar,
adenocarcinomul de col cervical.
Ciclul de multiplicare. n virion, genomul ADN circular, dublu catenar, de 8 kb, este asociat cu
histone de origine celular i formeaz complexe asemntoare celor de cromatin. Genomul viral este
transcris n 8 cadre de citire (ORF), exprimate n molecule de ARN policistronice.
La HPV de risc nalt, transcrierea copiilor este iniiat la doi promotori virali: la cel timpuriu se
iniiaz transcrierea mesagerilor timpurii i este activ nainte de ciclul infecios productiv. Pentru ciclul
productiv este activat promotorul tardiv.
Ciclul de multiplicare este condiionat de programul de difereniere al cheratinocitului.
Papilomavirusurile au un tropism specific pentru celulele epiteliilor squamoase (epitelii cu celule
aplatizate), cu rat nalt de renoire, ce constau din celule stem* nedifereniate ale stratului bazal al epidermei.
*
Celula stem, de origine sau, celula mam (stem, engl. = tulpin) este nedifereniat, cu potenialitate nalt de
diviziune i difereniere. Celulele rezultate prin diviziune se difereniaz gradat i dobndesc funciile tisulare specifice.
Infecia celulelor stratului bazal ** este favorizat de leziunile i microleziunile epiteliului tegumentar sau se
produce la situsurile n care astfel de celule sunt n mod natural expuse la suprafa: la jonciunea diferitelor
tipuri de epitelii, ca de exemplu, zona de tranzit a cervixului uterin i la jonciunea epiteliului laringian, cu
cel respirator. Receptorul celular pare a fi heparan-sulfatul.
**
Prin diviziunea celulei bazale, rezult dou celule cu evoluie diferit: una rmne n stratul bazal al epidermei i
continu s se divid, iar cealalt intr n stratul suprabazal, nu se mai divide i va fi mpins spre suprafaa epidermei,
de alte celule fiice, trecnd succesiv prin straturile spinos, granular i cornos.
Latena.
Celulele stratului bazal al epidermei sunt nepermisive i infecia este neproductiv. Multiplicarea
virusului este complet represat. Sunt transcrise ntr-o msur limitat, numai genele programului timpuriu
(E1 i E2) ce catalizeaz replicarea genomului. Aceste proteine formeaz un complex ce se leag la secvena
de origine a replicrii ADN i recruteaz ADN-polimeraza celular i proteinele accesorii ale replicrii. E 1 are
i activitate de helicaz, permind separarea catenelor de ADN viral naintea complexului de replicare.
Genomul viral este pstrat ntr-un numr de 20-100 de copii ADN/celul, n stare autonom, rezultate prin
replicarea genomului virionului infectant. Numrul de copii este meninut stabil n celulele bazale nedifereniate,
tot timpul infeciei.
n celulele stratului bazal, virusurile papiloma realizeaz o infecie latent propriu-zis. Genomul viral
persist, dar nu se sintetizeaz proteine virale tardive. In absena proteinelor virale, rata diviziunii celulare rmne
n limite fiziologice i negul nu apare. Celulele stratului bazal pot s poarte mult timp genomul viral, nainte de
apariia negului.
Dezvoltarea verucilor
Papilomavirusurile umane sunt agenii cauzatori ai negilor.
Negul poate s apar trziu dup infecie, n condiii de imunosupresie sau sub aciunea unor factori
stimulatori ai sintezei proteinelor virale. Proteinele E 6 se asociaz cu proteina antioncogen p53 i mpeun cu
ubiquitin-ligaza celular formeaz un complex trimeric ce stimuleaz turn-over-ul p53. E 7 se leag cu alte
proteine antioncogene ale familiei Rb. Simultan, proteinele virale stimuleaz proliferarea celulelor stratului
bazal i se formeaz o tumor benign. Deoarece celulele stratului se divid, genomul viral se distribuie n
celulele fiice, dintre care una se detaeaz din stratul bazal, migreaz n stratul granular i se difereniaz (fig.
105).
Celulele epiteliale neinfectate, dup ce prsesc stratul bazal, ies din ciclul celular i n straturile
suprabazale, adeseori pierd nucleul. Dar celulele infectate, dup ce prsesc stratul bazal, rmn active n
ciclul celular, sub aciunea proteinei E7 i activeaz expresia factorilor de diviziune celular, necesari
multiplicrii virale. Prezena E 7 duce la meninerea caracterului de celule nucleate n toate straturile celulare
ale epiteliului infectat (Longworth, 2004).
Fig. 105. Reprezentarea schematic a evenimentelor consecutive infeciei unei celule a stratului bazal cu HPV. n
partea de sus, o celul infectat se difereniaz fr diviziuni celulare. Ea poate produce virus i poate fi eliminat. n
partea de jos sunt reprezentate consecinele obisnuite ale infeciei cu HPV: celula stratului bazal, infectat printr-o
microleziune, se divide, ntrzie procesul de difereniere, formeaz un neg i, eventual, celulele din straturile superioare
ale leziunii produc virus (dup Zur Hausen, 1994).
Oncoproteinele virale E6 i E7 sunt necesare imortalizrii cheratinocitelor.

esutul negului este format din aceleai straturi de celule epiteliale, ca i epiderma, iar membrana
bazal este intact.
Programul multiplicrii virale este strns legat de procesul de difereniere a celulelor epiteliilor
squamoase. Exist o corelaie strns ntre stadiul de cheratinizare a celulelor epiteliale i exprimarea
programului tardiv al multiplicrii virale. Se sintetizeaz proteinele L 1 i L2, care se asambleaz spontan n
capside icozaedrice.
Virusul nu s-a putut propaga n culturi celulare, datorit dependenei de stadiul de cheratinizare. In
straturile celulare profunde ale verucilor nu se gsesc virioni. Celulele negului devin permisive pentru
multiplicarea virusului, pe msur ce se difereniaz n cheratinocite, n straturile spinos i granular. Virionii
se asambleaz numai n celulele cheratinizate.
Dup iniierea diferenierii celulare, marcat de nceputul cheratinizrii, se exprim att genele
timpurii, ct i genele programului tardiv. In straturile spinos i granular se sintetizeaz proteinele capsidei,
iar virionii se asambleaz n nucleu. Particulele virale se elibereaz prin descuamarea celulelor de la suprafaa
leziunii.
Un subset al HPV sunt implicate n neoplaziile de cervix uterin i n apariia altor maligniti
anogenitale, precum i a unor neoplazii tegumentare la pacienii cu epidermo-displazie veruciform. Circa
99% dintre biopsiile tumorilor de cervix uterin, recoltate din diferite regiuni ale lumii conin ADN de HPV l6 i
HPVl8 (Bosch, l995). In circa 2/3 din aceste biopsii, ADN viral este integrat n genomul celulei. Experienele
de transfecie a keratinocitelor cu genele E6-E7, au avut ca rezultat imortalizarea celulelor, cu cretere
nelimitat in vitro. Comutarea pe poziia stop a activitii acestor gene a fost urmat de ncetarea creterii
celulelor in vitro i incapacitatea lor de a produce tumori prin transplantare in vivo.
Viroizii
Viroizii reprezint o categorie specific de ageni infectioi subvirali, patogeni exclusiv pentru plante,
caracterizai printr-un genom alctuit din ARN pur, prin absena capsidei proteice i a stadiului de virion.
Denumirea de viroid (cu aspect de virus) este neadecvat, deoarece genomul lor nu este niciodat
protejat de un nveli proteic.
Viroizii s-au descoperit accidental (Diener, l97l), cu ocazia ncercrilor de caracterizare a agentului
patogen al bolii tuberculilor fusiformi la cartof, considerat pn atunci ca fiind de origine viral. Viroizii
cunoscui n prezent, au luat numele maladiei pe care o produc: viroidul tuberculilor fusiformi la cartof, al
nanismului i marmorrii clorotice a crizantemelor, al nanismului la hamei etc. Cel mai studiat este viroidul
care produce boala tuberculilor fusiformi la cartof.
Morfologie i structur molecular. Viroizii sunt molecule de ARN pur. La microscopul electronic, ei
apar sub forma unor structuri lineare, ca nite bastonae, uor curbate, lungi de circa 50 nm, cu o grosime de
2,0 2,5 nm, izolate sau grupate n agregate compacte. Greutatea lor molecular este cuprins ntre 75 l25
kDa.
Structura molecular a viroidului care produce boala tuberculilor fusiformi la cartof, este cu totul
neobinuit, fiind reprezentat de molecule de ARN mononatenar, circulare, nchise covalent, alctuite din
359 ribonucleotide, a cror structur primar (secven) a fost determinat cu exactitate.
Structura secundar, de dubl helice defectiv, este de asemenea foarte caracteristic. Datorit
gradului ridicat de complementaritate intramolecular, un numr mare de baze (244, respectiv 68%) sunt
legate n perechi. Ele formeaz regiuni dublu catenare (rezultate din mperecherea intracatenar a unei
secvene de 4-5 baze), care alterneaz cu regiuni mai scurte monocatenare (2-3 baze), sub forma unor bucle
interne i terminale, corespunztoare regiunilor lipsite de baze complementare, care rmn separate. Acest tip
de structur, numit n ac de pr, impune anumite constrngeri topologice, datorit crora molecula de ARN
sufer o pliere tridimensional. Dup denaturare cu formaldehid, la 63 o, legturile de H dintre bazele
complementare se rup i la microscopul electronic se observ molecule circulare monocatenare cu lungimea
de l40 nm i molecule lineare monocatenare cu lungimea medie de ll0 nm.
Datorit dimensiunilor mici, viroizii au rezisten deosebit la agenii fizici (radiaii) i chimici.
Mecanismul replicrii ARN viroidal nu este cunoscut (fig. 108). Cantitatea de informaie genetic a
ARN viroidal este foarte mic (teoretic suficient numai pentru a codifica o protein alctuit din ll9
aminoacizi). Experienele cu extracte acelulare de plante i bacterii au evideniat c ARN viroidal nu are
capacitatea de codificare, datorit absenei situsurilor de legare ribosomal (absena codonului initiator AUG)
i datorit structurii secundare stabile i circularitii moleculei. ARN viroidal nu funcioneaz ca ARNm.
Absena capacitii de codificare a ARN viroidal este confirmat de faptul ca din celulele vegetale infectate nu
s-a purificat nici o protein strin de proteinele plantei, care s sugereze originea viroidal.
Replicarea viroizilor este, n consecin, total dependent de celul, reprezentnd o form aparte de
parazitism absolut, distinct de tipul celei descrise pentru virusuri.
Au fost propuse mai multe modele ipotetice, bazate pe cunotiinele actuale de biologie molecular,
implicnd activitatea unor enzime diferite.
Modelul lui Branch i Robertson (l984) este cel mai probabil (fig. 106), deoarece se bazeaz pe
evidenierea concomitent, n celulele infectate, a dou tipuri de molecule de ARN, respectiv, molecule tipice
de ARN viroidal circulare (notate convenional + ) i molecule de ARN multimere lineare, cu o secven
complementar (notate ).
Modelul consider c moleculele multimere de ARNc sunt intermediari de replicare, iar forma
circular a viroizilor maturi, sugereaz c replicarea s-ar face dup modelul cercului rotativ, sub controlul
ARN-polimerazei II celulare, a crei legare de extremitile viroizilor a fost evideniat prin microscopie
electronic. Rezult molecule lineare multimere de sens antigenomic. Acestea sunt transcrise n molecule
multimere complementare de sens genomic, ulterior prelucrate prin clivaj la situs specific. Dup legarea
extremitilor se formeaz molecule circulare mature. In mod surprinztor, activitile enzimatice de clivare i
legare a extremitilor, se desfoar n absena proteinelor enzimatice i se se aseamn cu mecanismul
autoexciziei intronilor din ARN premesager al organitelor. ARN are activitate enzimatic ribozimic.
Deoarece, n mod normal, ARN-polimeraza II celular folosete ca matri o molecula de ADN,
autorii consider c, datorit structurii lor unice, prezena viroizilor n celule ar fi interpretat greit de
enzim, ca o molecul de ADN. Dup aceti autori, viroizii ar fi ageni similari ADN (ADN-like).
Dup ali autori, replicarea moleculei de ARN viroidal este autocatalitic. O molecul de ARN care
se replic autocatalitic se numete ARN-replicaz.
Replicarea viroizilor are loc n nucleul celulelor i, ca urmare, infeciozitatea maxim este asociat cu
nucleul i, n special, cu cromatina celulelor infectate.
In funcie de faza infeciei, numrul viroizilor variaz ntre 200 i l0 000/celul.
Fig. 106. Replicarea viroizilor dup modelul lui Bransch i Robertson (1984). Viroidul matur (+) (1) are rol de
matri (2) pentru sinteza unor molecule multimere de ARN complementar (3). Acestea sunt transcrise n molecule
multimere (+) (4), reprezentate de genomuri viroidale concatemere (5). Clivarea lor riguroas (6) are ca rezultat formarea
moleculelor monomere de ARN viroidal, cu secvene terminale caracteristice. Circularizarea lor genereaz ARN viroidal
progen.
Patogenitatea viroizilor
Dei cantitatea de informaie genetic pe care o aduc n celul este foarte mic, viroizii produc mai
mult de l0 maladii grave ale plantelor de cultur sau ornamentale, cu importan economic. Intre acestea,
cele mai studiate sunt: boala tuberculilor fusiformi la cartof, nanismul i marmorarea clorotic a
crizantemelor, nanismul hameiului, boala cadang-cadang a cocotierului i o boal caracteristic a portocalilor
i lmilor, nsoit de distrugerea progresiv a scoarei i scderea masiv a produciei de fructe.
Infecia experimental reproduce tabloul manifestrilor patologice la plante din aceiai specie,
datorit replicrii excesive a acestor entiti moleculare cu caracter infecios. ARN viroidal care produce boala
tuberculilor fusiformi la cartof, se propag la un numr foarte mare de plante din familia Solanaceae, dar i la
plante din alte familii, unde se replic fr s produc simptomele mbolnvirii.
Viroizii produc infecii persistente: la cartof, simptomele apar n perioada formrii tuberculilor, iar la
tomate, la 2-3 sptmni de la infecie. In frunzele de tomate i n peiol, dup infecia cu ARN viroidal al
tuberculilor fusiformi de cartof se produce o hipertrofie marcat a nucleului. Se intensific curenii
citoplasmatici. In esutul infectat, infeciozitatea este asociat cu fracia sa nuclear, ceea ce denot c ARN
viroidal este asociat cu nucleul i n special cu cromatina celulelor infectate.
Mecanismul producerii bolilor viroidale este greu explicabil, deoarece ARN viroidal nu codific
sinteza unor proteine noi. |esuturile plantelor infectate nu conin proteine noi, n raport cu plantele sntoase,
dar prezint variaii cantitative foarte importante ale unor proteine normale. Este probabil c viroizii
determin o perturbare a mecanismelor de reglare a exprimrii anumitor gene ale celulei. Viroizii nu ar
aciona prin exprimarea propriei lor informaii genetice, ci prin perturbarea funciei genelor celulare, a crei
consecin ar fi alterarea mecanismelor normale de reglare a funciilor celulei.
In unele cazuri, s-a observat o scdere pronunat a cantitii de gibereline n esuturile plantelor
infectate. Deoarece acidul giberelic poate regla evenimentele nucleare ale transcrierii, precum i metabolismul
unor specii de ARN, replicarea viroizilor i/sau patogenitatea lor ar putea fi influenate prin intermediul
acestei clase de mediatori hormonali.
Tulburrile de cretere, frecvent asociate cu infeciile viroidale, pot fi astfel explicate ca rezultat al
unui dezechilibru al sintezei i activitii hormonilor de cretere: viroizii prezeni n nucleul celulelor, ar
aciona ca molecule anormale de reglare, care interfer cu cele care asigur n mod normal reglarea genelor ce
codific hormonii de cretere.
Transmiterea viroizilor pe orizontal, de la o plant bolnav, la plantele sntoase se realizeaz n
mod obinuit, pe cale mecanic (de exemplu, prin altoire sau prin alte leziuni mecanice), probabil prin
intermediul nucleilor celulari sau al unor fragmente de cromatin, care conin ADN viroidal. Conservarea
infeciozitii viroizilor n cursul transmiterii, n fazele extracelulare, adic pstrarea infeciozitii lor n
absena nveliului proteic (capsidal) este datorat localizarii lor intranucleare, la adpost de atacul enzimatic.
Transmiterea viroizilor pe vertical, se face prin polenul infectat, al plantelor de tomate sau cartof.
Originea viroizilor este necunoscut. Au fost propuse mai multe ipoteze.
l. Ipoteza originii virale a fost formulat n dou variante:
a) Viroizii ar fi entiti virale foarte primitive, care nu au ajuns la gradul de complexitate structural i
genetic, necesare pentru a induce n celul, reaciile metabolice noi, de biosintez, pentru a codifica
sinteza proteinelor specifice, capabile s asigure propria lor replicare;
b) Viroizii ar reprezenta entiti virale degenerate, a cror biosintez i replicare a fost iniial determinat
de infecia cu ARN viral, care a suferit o reducere important a genomului (inclusiv a genelor care
codific proteinele capsidei) i a cptat o autonomie total.
2. Ipoteza originii celulare consider viroizii ca provenind din acizii nucleici ai celulei:
a) Viroizii ar putea proveni din transcrierea unor gene cromosomale patologice, sub influena unor factori
nc nedeterminai, sau ar fi derivai dintr-o specie de ARN cu greutate molecular mic, de genul celor
prezente n nucleu i nucleol, implicate n mod normal n reglarea unor funcii nucleare i n
transcrierea ARN;
b) Viroizii ca derivai ai elementelor genetice transpozabile (EGT). Ipoteza se bazeaz pe observaia c
viroizii conin secvente care se aseamn cu cele prezente la extremitile EGT. Viroizii ar fi evoluat
din EGT sau din provirusuri retravirale, din care, n cursul transcrierii la ARN, ar fi disprut unele
secevene de baze;
c) Ipoteza originii viroizilor prin circularizarea intronilor, se bazeaz pe faptul ca genele celulelor
eucariote, ca i cele ale virusurilor animale, au o structur discontinu, n sensul c sunt formate din
secvene cu rol de codificare (exoni), care prin transcriere sunt regsite n structura ARN matur i
secvene intercalate (introni), care sunt clivate n etapa de prelucrare a ARN premesager.
In cursul procesului de biosintez a proteinelor, ntreaga gen (exonii i intronii) este transcris la o
molecul mare de ARN premesager. Ulterior, acesta sufer un proces de maturare, prin care intronii sunt
ndeprtai de o enzim special, iar exonii sunt lipii sau ndii cap la cap, pentru a forma o molecul de
ARN matur, care trece n citoplasm i este tradus ntr-o secven polipeptidic.
Secionarea intronilor este controlat de o molecul mic de ARN (ARN U 1), prezent n nucleii
celulelor vegetale, parial omolog cu intronii, care se leag de extremitile acestora, asigurnd excizia
corect. Final, intronii se circularizeaz sub controlul unei ARN-ligaze). Circularizarea mpiedic degradarea
enzimatic, confer posibilitatea de replicare necontrolat i de infectiozitate, prin mobilitate intercelular i
ntre organisme.
Virusoizii
Virusoizii sunt molecule mici de ARN monocatenar, circulare, covalent nchise, incluse n stare fizic
autonom (ARN2), n capsida unor virusuri fitopatogene cu genom linear segmentat sau integrate n genomul
viral (ARN1).
Virusoizii sunt molecule mici de ARN satelite, descoperite relativ recent (l983) i sunt foarte puin
studiai.
Virusoizii sunt alctuii din molecule mici de ARN monocatenare, circulare, nchise covalent (ARN 2),
de 300-400 nucleotide, prezente uneori n forme concatemere, n celulele plantelor infectate. Replicarea
moleculei de ARN genomic este catalizat de ARN-polimeraza virusului helper sau de ARN-polimeraza
dependent de ARN a celulei vegetale. Sediul replicrii este citoplasma celulei vegetale. Activitatea ARNpolimerazei dependent de ARN este detectabil n multe tipuri de celule vegetale neinfectate, se intensific
dup infecia viral i nu are specifitate de virus, n timp ce ARN-polimerazele virale sunt specifice. Virusoizii
nu se multiplic n absena virusului helper, fie datorit absenei replicazei, fie datorit absenei proteinelor
capsidale.
In cazul VTMV (Velvet tobacco mottle virus), care produce o form special de marmorare la plantele
de tutun, ca i n cazul celui care produce marmorarea unor plante tropicale (Solanum nodiflorum mottled
virus), virusoizii sunt integrai n genomul viral, prezena lor asociat fiind obligatorie pentru producerea
infeciei.
Prin contrast, n cazul LTSV (Lucerne transient strek virus), ARN2 virusoidal se comport ca ARN
satelit, nefiind implicat n replicare.
Virusoizii se aseamn cu viroizii, prin structura lor secundar (dar probabil mai flexibil), prin
aparenta incapacitate de a codifica sinteza unor proteine i prin mecanismele de replicare.
Virusoizii se deosebesc de viroizi, prin faptul c genomul lor este ncapsidat i este incapabil sa
infecteze plantele sensibile, n absena genomului viral asociat.
Virino
Sub aceast denumire a fost descris un agent infecios subviral, alctuit dintr-o molecul mic de acid
nucleic, asociat cu o protein codificat de celula gazd. Acidul nucleic nu codific sinteza unor proteine, dar
are rol de matri pentru propria sa replicare, catalizat de enzimele celulei gazd. El are, probabil, un rol de
reglare a activitii celulelor infectate, declannd sinteza unor proteine codificate de celula gazd.
Prionii
Prionii formeaz o categorie special de ageni infectioi subvirali, patogeni pentru om i animale,
alctuii exclusiv dintr-o molecul proteic. Sunt lipsii de genom i, n consecin difer de toate celelalte
categorii de ageni infectioi prezeni n natur, prin faptul c nu conin nici-un tip de acid nucleic (nici ADN,
nici ARN).
Conceptul de prion (proteinaceous infectious) a fost definit de Prusiner (l982), dup circa 20 de ani
de studii asupra bolii scrapie. Denumirea reflect unul din simptomele sale majore, respectiv pruritul (to
scrapie, englez = a freca, a rzui, a curi rzuind lna). Studiile asupra bolii scrapie, semnalat nc din
secolul XVIII n Marea Britanie au incriminat, n ultimele 5 decenii, peste 20 de tipuri de ageni patogeni,
incluznd virusuri, viroizi, protozoare, macromolecule replicative etc.
Prionii sunt alctuii dintr-o glicoprotein hidrofob, cu gr. mol. de 28 kDa, extrem de rezistent la
degradarea cu proteaze, la formol l0% (timp de 28 de luni) i la cldur (fierbere timp de trei ore), precum i
la toi agenii inactivatori ai acizilor nucleici.
Prin analogie cu nomenclatura proteinelor din Virologie (VP Viral Protein), aceast protein
infecioas i patogen a fost denumit proteina prionic (PrP, Prusiner, l983, Mc Kinley l983).
Maladiile prionice constituie un grup de afeciuni neurodegenerative, reprezentate la om de maladia
Creutzfeldt-Jakob (MCJ), Kuru, sindromul Gerstmann-Straussler Scheinker (GSS), insomnia familial fatal
(IFF), de encefalopatia spongiform a bovinelor *(boala vacilor nebune) (ESB) i felinelor, maladia
scrapie(tramblana) a ovinelor i caprinelor, encelopatia a nurcilor, maladia epuizrii cronice a rumegtoarelor
slbatice. Aceste maladii se caracterizeaz prin acumularea unei proteine, denumit PrP sc, ce corespunde unei
forme alterate a proteinei normale PrP c.
Creierul persoanelor sau animalelor atinse de encefalopatia spongiform are aspect spongios. Sunt
maladii transmisibile pentru c se transmit de la organismul bolnav la cel sntos al aceleiai specii sau al
unor specii diferite.
*
Encefalopatia spongioas transmisibil (EST) a fost adus n prim planul actualitii n 1996, dup ce medicii
veternari englezi au relevat posibilitatea transmiterii ESB la om. Epidemia ESB a atins apogeul n anii 92-93, n Anglia,
cu 3500 de noi cazuri declarate lunar. A fost incriminat alimentaia bovinelor: fabricile de furaje proteice au introdus
fini de origine animal (carcase de ovine i bovine). Modificarea procedeului tehnic a survenit n anii 80, cnd
temperatura de sterilizare a fost cobort de la 130 la 110oC, iar etapa de extracie cu solveni organici a fost eliminat.
Fracia infecioas a creierului de ovine se distinge printr-o rezisten foarte mare la tratamentele care altereaz acizii
nucleici (razele i UV), dar este insensibil la formaldehid i la temperaturile care inactiveaz toate virusurile
cunoscute. Agentul infecios poate s reziste la 360 o cldur uscat. O infeciozitate rezidual persist chiar dup
incinerarea la 600o.
Totui, fracia infecioas este n general inactivat prin procedee care modific proteinele: ureea, proteinaza K, SDS,
fenolul, tripsina, tiocianatul de guanidin.
Originea i apariia prionilor. Proteina neuronal PrPc

Att n creierul de hamster infectat experimental cu mojarat de creier de oaie cu maladie prionic
scrapie, ct i n creierul pacienilor umani cu maladii prionice s-au identificat prin metode fizice, dou
izoforme de proteine prionice.
Proteina prionic neuronal normal (PrPc) este sintetizat n neuronii i n celulele gliale ale SNC,
n leucocite i n alte esuturi n cantiti limitate, la nivelul reticulului endoplasmic, este modificat n
aparatul Golgi i transportat la suprafaa neuronilor, unde este ancorat de membrana celular printr-o
ancor glicolipidic (glicozil-fosfatidil-inozitol) i nu are domeniu citoplasmatic. De la acest nivel, PrP c
este endocitat i probabil recirculat, fiind final degradat de proteaze, ca parte a metabolismului celular.
PrPc este nepatogen i netransmisibil. Structura spaial este de tip -helix, iar funcia, necunoscut.
Proteina PrPc uman conine 253 aminoacizi (254 la oarece i 264 la bovine). Rolul ei este incert.
Localizarea la suprafaa celulei neuronale ar putea s reflecte rolul n aderena celular, n legarea unui ligand
sau o posibil funcie de semnalizare. Partea N-terminal conine o secven de 5 octapeptide repetate, bogate
n glicin i prolin, care in vitro, leag Cu i Zn. In vivo, PrPc ar putea avea rol n transportul i metabolismul
Cu.
Cu pare s aib un rol esenial n protecia SNC fa de stresul oxidativ i fa de maladiile degenerative.
*
Cu este un oligoelement esenial pentru via. Are dou grade de oxidare: +1 i +2. Cu 2+ este mai stabil. Fora
oxidant a cuplului Cu+/Cu2+ este utilizat n diferite reacii de oxidoreducere, catalizate de enzime dependente de Cu. {n
exces, Cu este toxic.
Cu poate reaciona cu H 2O2 pentru a genera radicalul HO ., un radical liber foarte reactiv, care produce leziuni
importante ale macromoleculelor (ADN, proteine, lipide).
Dereglarea metabolismului Cu are ca rezultat creterea ratei de producere a radicalilor liberi.
SNC este foarte sensibil la leziunile cauzate de radicalii liberi, pentru c este un esut srac n enzime antioxidante
(SOD Cu/Zn, catalaz i peroxidaze) i bogat n substraturi uor oxidabile (acizi grai polinesaturai).
Perturbarea echilibrului Cu genereaz un stres oxidant care determin moartea neuronilor.
Neurodegenerescena asociat maladiei Alzheimer rezult din depunerea plcilor de amiloid n neuroni, n care s-a
gsit un procent important de Cu. Precursorul proteinei amiloid (PPA)conine mai multe situsuri de fixare a Cu. S-a
demonstrat c PPA reduce Cu2+ la Cu+.
n scleroza lateral amiotrofic familial (SLAF) o maladie neurodegenerativ caracterizat prin degenerarea
neuronilor motori, s-a identificat o gen anormal ca fiind codificatoare a SOD Cu/Zn.
Chelarea experimental a Cu cu cuprizon induce leziuni de tip spongiform, care regreseaz dup oprirea administrrii
chelatorului. Maladia epuizrii cronice (chronic wasting disease), o maladie prionic a cervidelor, are inciden crescut
n regiunile n care solul este srac n Cu.
In SNC, PrPc i ARNm sunt larg distribuite, dar se gsesc n special n neocortex, hipocampus, celule
Purkinje i n neuronii motori spinali.
In neuroni PrPc este transportat prin axon, spre terminaia nervoas i a fost localizat la nivelul
sinapselor prin metoda imunoelectron-microscopiei.
PrPc este reciclat ntre membrana plasmatic i compartimentul endocitar.
A II-a form este proteina prionic patologic (PrPsc).
Prionii au 2 origini: endogen i exogen (infecioas).

Originiea exogen a prionilor a fost demonstrat experimental de Bassler (l986), prin inocularea
intracerebral a hamsterilor cu mojarat de creier de oaie, cu boala scrapie. Proteina patologic PrP sc
endogen ar putea avea dou proveniene:
- prin reciclarea proteinei celulare, proces n care se face conversia PrPc la PrPsc ;
- prin mutaia punctiform a genei Prn-p, codificatoare a proteinei normale.
Mutaiile punctiforme, extrem de rare la nivelul genei Prn-p, au drept consecin formarea unei
proteine prionice modificate, denumit dup numele bolii la care a fost studiat, PrP scrapie sau PrPsc.
Denumirea a fost pstrat pentru agenii patogeni (prioni) ai tuturor bolilor din aceast familie, deoarece
mecanismul a fost demonstrat ca fiind comun, inclusiv n cazul maladiilor prionice umane.
Studiul secvenei aminoacizilor la cele dou tipuri de proteine a demonstrat prezena a peste l8 tipuri
de mutaii punctiforme. Cele mai frecvente sunt cele care determin nlocuirea aminoacidului numrul 66
(glicocol din PrPc, cu prolina n PrPsc, sau a aminoacidului l02 (leucina) din PrPc, cu prolina n PrPsc.
Prusiner i Hsiao (l988) au stabilit existena unei relaii directe ntre mutaii i maladie, evideniind
prezena acestora n structura PrPsc la toi pacienii cu maladii prionice.
Exist o relaie direct ntre proteina normal i cea patologic. Proteina Prp sc, mutant sau de origine
infecioas, acioneaz asupra echivalentului su celular normal PrPc, n sensul c, venind n contact cu
aceasta, determin deplierea ei de la forma normal de -helice i replierea ei ntr-o conformaie nou, de tip
-pliere. In timpul infeciei prionice are loc o interaciune fizic nalt specific ntre PrP c i PrPsc i se produce
conversia conformaional a proteinei, care face PrP sc rezistent la degradarea cu proteaze i i confer
caracterul infecios i patogen.
Conversia PrPc n PrPsc este conformaional. Cele dou forme au aceiai secven de aminoacizi.
Schimbarea conformaiei presupune o cretere cantitativ substanial a structurii -pliere, cu o uoar
descretere a structurii -helix. PrPc are circa 42% structur -helix i 3%, -pliere, iar PrP sc are 30% structur
-helix i 43%, - pliere.
Replicarea prionilor s-a studiat in vivo, prin inocularea experimental a animalelor sensibile cu
diluii foarte mari de omogenat de creier infectat cu scrapie, sau de la bolnavi cu maladia Creutzfeldt-Jakob,
n creierul acestora se acumuleaz mari cantiti de prioni (pn la l0 8 DL5o uniti infecioase). In vitro, numai
unele linii celulare neuronale sunt sensibile la infecia cu prioni scrapie.
Mecanismul formrii PrPsc poate fi diferit pentru formele infecioase i pentru cele genetice. In primul
caz, PrPsc exogen are rolul de catalizator pentru conversia PrP c endogen, la starea PrPsc. Prionii de provenien
exogen (prin infecie), interacioneaz cu moleculele normale de protein prionic celular (PrP c), pe msur
ce acestea sunt sintetizate, imprimndu-le propria lor conformaie special(tip -pliere), transformndu-le n
proteine prionice (PrPsc). Fiind rezistente la degradarea enzimatic, proteinele prionice se acumuleaz n
neuroni, determinnd vacuolizarea i necroza lor. Prionii eliberai pe aceast cale, sunt adsorbii pe neuronii
normali adiaceni, determinnd extinderea procesului patologic. Locul neuronilor lizai este luat de celulele
gliale.
In al II-lea caz, PrPc mutant(rezultat prin mutaii punctiforme n gena Prn-p) este transformat spontan
sc
la PrP .
Transmiterea prionilor. Prionii reprezint forma modificat a unei proteine celulare normale (PrP c).
Prusiner (l986, l993) a demonstrat originea exogen a proteinei prionice prin transmiterea experimental a
maladiilor prionice. Pasajul prionilor ntre organismele diferitelor specii este un proces ntmpltor, cu o
perioad lung de incubaie (de ordinul anilor). Prin pasaje succesive la indivizi ai aceiai specii, timpul de
incubaie se scurteaz progresiv de la un pasaj la altul i propagarea devine predictibil. Bariera de specie nu
funcioneaz (sau nu funcioneaz totdeauna) i are importan practic pentru evaluarea riscului ca omul s
dezvolte maladia Creutzfeldt-Jakob, dup consumul creierului de oaie infectat cu scrapie sau de bovine
infectate cu prionul encefalopatiei spongiforme.
Dup inoculare, perioada de incubare este de 1-3 ani. Odat declanate, bolile prionice au o evoluie
clinic cu agravare progresiv de-a lungul mai multor luni sau ani, care duce invariabil la moarte.
Experienele pe oi i capre, prin inoculare intracerebral, oral, subcutanat, intramuscular sau
intravenoas, au artat existena gradelor diferite de sensibilitate a diferitelor rase de animale, mai ales dup
inocularea subcutanat, ceea ce sugereaz c fondul genetic influeneaz decisiv sensibilitatea la infecia
prionic. Adeseori, multe dintre animalele inoculate, nu dezvolt maladia.
Fig 107. Cile sintezei i degradrii proteinei prionice n celulele cultivate. Ptratele simbolizeaz PrP sc (proteina
scrapie), iar cercurile semnific PrPc(proteina prionic). PrPc, precurorul PrPsc, este sensibila la digestia cu dispaz sau la
PIPLC adaugate n mediu. PrPc este endocitat, n condiii normale fiind recirculat si ulterior degradat de proteaze, ca
parte a metabolismului celular. ntr-un proces infecios, are loc interaciunea PrP c cu proteina PrPsc exogen (infecioas),
n cursul creia PrPc este convertit la proteina patologic, fr implicarea reticulului endoplasmic i a cisternelor Golgi.
n celulele cultivate, dar nu n creier, captul N-terminal al PrP sc este clivat ulterior, n endosomul acid, cu formarea PrP
27-30 (triunghi) i acumularea acesteia n lizosomul secundar
(dup Prussiner, 1996).
Patogenitate. Maladiile prionice pot fi: infecioase, familiale i sporadice.

Bolile prionice sunt limitate la SNC i evolueaz cu leziuni degenerative tipice pentru encefalitele
spongiforme. Ele pot s apar spontan n populaie, fr nici o cauz aparent (formele sporadice) sau au
caracter ereditar-familial. In ambele tipuri de maladii, prionii sunt infecioi i pot fi transmii prin inoculare
la organisme ale aceleiai specii sau ale unei specii nrudite.
Prionii produc o varietate de boli neurologice degenerative, care afecteaz ovinele i caprinele (boala
scrapie), bovinele (encefalopatia spongiform sau boala vacii nebune), felinele, cervidele, nurcile etc.,
precum i omul.
Leziunile produse de prioni sunt limitate la nivelul sistemului nervos central i includ vacuolizarea i
necroza neuronal, degenerarea spongiform a esutului cerebral, reacii astrogliale cu hipertrofia astrocitelor
i proliferarea lor n cortex. Datorit focarelor multiple de liz neuronal, apar guri care confer creierului
un aspect spongios. La unele organisme se observ depunerea unor plci de amiloid (colorabile cu rou de
Congo), n sistemul nervos central. Ele ar putea fi formate din proteine prionice sau din agregate de prioni.
Maladia scrapie (tramblana)apare n populaii de ovine i caprine, cu predispoziie genetic, dar
faptul c se poate propaga prin inoculare, respinge ideia caracterului pur genetic. Boala se instaleaz dup 2-5
ani de la contaminare, cu tulburri neurologice: prurit intens, dificultate n mers (prin hipoplazia cerebelului),
cu agravare progresiv, pn la imobilitate total, cu sfrit letal. Principalele leziuni apar ns n creier, care
degenereaz lent.
Infecia natural se face pe cale digestiv cu proteine prionice din ingredientele de origine animal i
iniial evolueaz la nivelul sistemului limfoid, de unde se disemineaz n organism, pe calea nervilor, a
fibrelor din nevrax i pe cale sanguin. Apariia maladiei trebuie urmat de sacrificarea ntregului efectiv de
animale.
Maladiile prionice umane sunt exogene (natur infecioas) sau endogene, adic sunt motenite prin
predispoziie genetic, iar altele au caracter sporadic (apar fr cauze cunoscute). Formele sporadice nu au
etiologie infecioas sau genetic i se pot atribui conversiei spontane a PrPc la starea PrPsc sau existenei unei
mutaii somatice nedetectate n protein, ce favorizeaz conversia la PrP sc.
Formele infecioase ale maladiei prionice sunt rezultatul transmiterii orizontale a prionilor infectioi.
Cele mai cunoscute sunt boala kuru i boala Creutzfeldt-Jacoob.
Boala kuru* afecteaz exclusiv populaia tribului Fore din Papua-Noua Guinee i este caracterizat
prin lipsa coordonrii motorii, accentuat progresiv, astfel nct bolnavii necesit sprijin att aezai, ct i n
poziie vertical. Maladia se transmite pe cale digestiv, datorit canibalismului ritual (cinstirea naintailor
prin consumul creierului cadavrelor).
*
Termenul kuru reflect principalele simptome ale bolii i este tradus prin a tremura de fric, a se infiora sau
moartea zmbind.
Boala Creutzfeldt-Jacob (CJD) are o frecven de l la un milion i apare n jurul vrstei de 60 de ani,
cu micri anormale, rigiditate, tulburri psihice de tip demenial. Poate aprea sporadic (caracter ereditarfamilial) sau prin infecie exogen, dup unele practici medicale (transplant de cornee sau de duramater,
injecii de hormoni hipofizari, n special a celor de cretere, obinui din hipofiza uman recoltat de la
cadavre, dup implantarea electrozilor contaminai pentru EEG sau prin operaii chirurgicale cu instrumente
contaminate).
Sindromul Gerstmann-Straussler-Scheinker (GSS) este o varietate natural a bolii Creutzfeldt-Jacob,
caracterizat prin instalarea precoce a incapacitii de coordonare a micrilor, prin leziuni cerebeloase i
demen.
Insomnia familial letal (IFL) debuteaz cu tulburri ale somnului i ale sistemului nevos vegetativ,
urmate de demen.
Descoperirea mutaiilor n genele PrnP la bolnavii cu CJD, GSS i IFL, a dus la concluzia c bolile
prionice sunt att genetice ct i infecioase.
Semnificaie biologic. Existena prionilor (proteine infecioase, replicabile pe o cale neobinuit), a
sugerat posibilitatea transmiterii unor maladii infecioase n absena unui transfer de material genetic
codificator al sintezei proteice, ceea ce este n contradicie cu dogmele biologiei moleculare, ale virologiei i
microbiologiei.
Ideea c o protein este capabil de autoreplicare printr-o interaciune protein-protein, n absena
informaiei genetice i a circulaiei ei n celul, dup modelul clasic este greu de acceptat.
Chesebro i Fields (l996) consider c este posibil ca PrP (proteina rezistent la proteaze) s aib un
rol important n patogeneza maladiei, fr s fie agentul cauzal. Ea ar funciona ca un receptor sau ca un
cofactor necesar pentru agentul cauzal sau pentru un virus ubicvitar, cu mare rezisten la inactivare.
Modificarea structural a PrPc la PrPsc ar putea fi rezultatul aciunii unei proteine necunoscute, cu rol
de chaperonin (Guillemet i col, l996). Chaperonii sunt proteine care faciliteaz plierea polipeptidelor n
timpul biosintezei i transportului n organite i mpiedic agregarea proteinelor n condiiile stressului celular
(ca de exemplu, ocul termic). Chaperonii acioneaz prin legarea de substratul lor, uneori dependent de ATP
i mpiedic formarea intermediarilor pliai, nefuncionali. Formarea PrP sc implic modificarea plierii i
agregarea moleculelor, procese n care chaperonii au rol important.
Este posibil ca prezena prionilor s fie mult mai larg n natur, i oricum, nelimitat strict la
mamifere.
Dup Prusiner (l995), este posibil ca mai multe boli nervoase cronice (demena presenil uman de
tip Alzheimer, maladia Parkinson, scleroza multipl, scleroza lateral amiotrofic etc.), cu etiologie
necunoscut, s fie produse sau influenate n evoluie, de intervenia unor ageni patogeni subvirali, de tipul
prionilor.
Bolile prionice exemplific un mecanism de patogenitate bazat pe schimbarea conformaiei unei
proteine care se autopropag. Probabil c transmiterea informaiei biologice pe calea conformaiei proteinei
este un fenomen mai general n natur. La levuri i la fungii filamentoi s-au identificat proteine care se
comport ca prioni.
CAPITOLUL VII
NOTIUNI DE GENETIC BACTERIAN
Genetica microorganismelor este un domeniu recent al Microbiologiei i al Geneticii, deoarece

a existat ideia preconceput c bacteriile nu sunt un material adecvat pentru astfel de studii. Studiile
premergtoare cercetrilor de genetic molecular sunt cele referitoare la bacteriofag (Twort, l9l5,
dHerelle, l9l7), dar n special studiile lui Griffith (l928), asupra transformrii genetice la pneumococ.
Microorganismele au fost redescoperite pentru studiile de genetic molecular n anii 40, cnd Avery
i colaboratorii au demonstrat c ADN este substratul informaiei genetice. S-au descris apoi mecanismele de
transfer de material genetic la bacterii, s-au descoperit virusurile temperate (lambda i Mu) i ulterior,
plasmidele.
Un rol esenial n dezvoltarea geneticii microorganismelor l-a avut grupul fag, condus de M.
Delbruck. Studiile referitoare la relaia de tip lizogen dintre virusul temperat lambda i bacteria E. coli au
contribuit decisiv la fundamentarea biologiei moleculare i la nelegerea mecanismului transformrii maligne
a celulelor animale, sub aciunea virusurilor oncogene ARN. Microorganismele sunt foarte mult utilizate n
studiile de genetic din mai multe motive:
- genomul bacterian i viral are organizare foarte simpl fa de genomul celulei eucariote, iar din punct de
vedere chimic, este format exclusiv din acizi nucleici;
- bacteriile sunt haploide, ceea ce favorizeaz studiile de genetic, deoarece o mutaie odat aprut se
exprim fenotipic imediat;
- ritmul de cretere foarte rapid al microorganismelor permite ca ntr-un interval foarte scurt s se poat
urmri evoluia unui numr foarte mare de generaii.
- microorganismele folosite n studiile genetice au necesiti nutritive simple i pot fi cultivate pe medii
sintetice. Se pot astfel urmri modificrile chimice pe care le produc n mediul de cretere, dependena lor
de substanele nutritive, capacitatea lor de a utiliza anumite substraturi;
- la microorganisme s-a demonstrat existena mecanismelor de transfer de material genetic i a fenomnelor
de recombinare genetic, care pot fi studiate mult mai uor dect la celula eucariot.
Organizarea funcional a genomului bacterian
Informaia genetic esenial este reprezentat de cromosomul bacterian. In raport cu funciile
ndeplinite, n structura sa se ntlnesc mai multe tipuri de determinani genetici:
1. Genele structurale, care reprezint circa 90% din cantitatea informaiei genetice, determin
structura primar a proteinelor, respectiv secvena aminoacizilor n lanul polipeptidic. Ele sunt
grupate, de regul, n uniti de exprimare coordonat (transcriere sincron), denumite operoni,
mpreun cu genele reglatoare. Uneori, ansamblul genelor supuse unui control unitar sunt
dispersate n genom i formeaz mpreun un reglon.
2. Genele reglatoare au funcia de a controla activitatea genelor structurale, prin intermediul
produsului lor de sintez (represor sau aporepresor).
3. Regiunea operator reprezint segmentul de ADN cromosomal din structura fiecrui operon care
are rolul de receptor de semnale. Ele nregistreaz prezena substanelor cu funcie de represor sau
de inductor n mediu i asigur funcionarea coordonat a operonului.
4. Regiunea promotor (iniiator) reprezint un fragment din structura operonului, adiacent genei
operator. Are funcia de iniiere a transcrierii operonului, n molecula de ARNm. La nivelul su are
loc legarea enzimei efectoare, ARN-polimeraza.
5. Secvenele de inserie (SI) sunt secvene nucleotidice scurte (800-l400 nucleotide), caracterizate
printr-o mare mobilitate care decurge din capacitatea lor de transpoziie. Transpoziia este termenul
care definete rearanjrile ADN, n care o secven de nucleotide se elibereaz prin excizie din
situsul lor de inserie cromosomal sau plasmidial i se reinser la un alt situs pe aceiai sau pe o
alt molecul de ADN.
6. Gene pentru sinteza ARNr (l0-20) i ARNt (circa 50), situate n regiuni diferite ale cromosomului.
Cromosomul conine de asemenea, secvenele ori care controleaz replicarea, precum i
suprafee de legare cu mezosomul.
Genetica bacterian s-a dezvoltat pe baza studiului bacteriilor enterice. Problema esenial este
identificarea genelor i a funciilor lor. Multe dintre genele necunoscute (circa 1/3) sunt probabil importante
pentru supravieuirea n condiiile mediului natural schimbtor: n apele curgtoare, n sol, pe resturi organice,
n esuturile gazdei.
Nu s-au identificat toate genele cu rol reglator, ca de exemplu: genele ce controleaz diviziunea
celular, segregarea nucleoidului, asamblarea.
Plasmidele
Plasmidele sunt structuri genetice separate fizic de cromosomul bacterian, capabile de replicare
independent de cromosom, adic entiti cu capaciti de replicare autonom sau repliconi. Ele conin
informaie genetic neesenial pentru creterea i diviziunea celulei, care poate fi ctigat sau pierdut fr
ca existena celulei s fie afectat. Autonomia lor fa de cromosom este relativ: sunt separate fizic de
cromosom, dar n ceea ce privete replicarea, sunt permanent controlate de gene cromosomale.
In categoria plasmidelor tipice intr factorii genetici F, Col, R, Tox etc., care probabil au o rspndire
universal n lumea bacteriilor. S-au izolat peste l000 de tipuri de plasmide diferite, prezente n mod natural, n
special la bacteriile Gram negative.
Clasificarea plasmidelor
Plasmidele se denumesc i se clasific dup efectul lor cel mai evident asupra celulei (conferirea
proprietii de donor de material genetic, sinteza de colicine, rezisten la antibiotice etc.). Acest criteriu de
clasificare nu este satisfctor, deoarece, uneori o plasmid confer mai multe proprieti celulei n care se
gsete: de exemplu, plasmida R i confer rezisten la antibiotice, dar n acelai timp celula poate dobndi i
calitatea de donor de material genetic. Din acest motiv se folosesc i alte criterii de clasificare.
Plasmidele se grupeaz dup criteriul incompatibilitii lor, adic al capacitii de a exclude din
celul alte plasmide cu aceiai secven de baze, sau una foarte apropiat. Altfel spus, plasmidele cu acelai tip
de informaie genetic sunt incompatibile, adic nu pot coexista ntr-o celul. Clasificarea bazat pe
compararea secvenei de baze este mult mai practic. In acelai scop se poate folosi comparaia secvenei de
aminoacizi a proteinelor Rep, deoarece sunt codificate de majoritatea plasmidelor i au funcii comune.
In funcie de capacitatea lor de a media transferul de material genetic prin conjugare, plasmidele se mpart
n dou categorii.
l. Plasmidele conjugative (transmisibile sau infecioase), denumite i factori de sex, sunt acelea care confer
celulei purttoare de plasmid, proprietatea de donor de material genetic (celula mascul), n raport cu o
celul care nu posed o astfel de plasmid i care se comport ca receptor (celul femel). Plasmidele
conjugative se mai numesc conjugoni, factori de fertilitate sau transferoni. Ele au n structura genetic, pe
lng genele de replicare autonom, determinanii genetici de transfer (tra). Din aceast categorie fac parte
plasmidele de sex (F, F, Hfr), plasmidele Ent, unele plasmide Col i unele plasmide R. Plasmidele conjugative
au cel puin 30 kbp.
2. Plasmidele neconjugative nu sunt autotransmisibile deoarece nu confer celulei purttoare proprietatea de
donor de material genetic, neavnd determinanii genetici tra. Din aceast categorie fac parte celelalte
plasmide Col i R. Ele se pot transfera de la o celul la alta, fie prin intermediul unui fag transductor, fie prin
procesul de conjugare iniiat de o plasmid conjugativ, coexistent n aceiai celul.
Dup criteriul capacitii lor de a se integra n cromosomul celulei, se disting dou categorii de
plasmide.
l. Plasmidele episomale (episom = corp adugat) sau integrative pot exista n celul, att n stare autonom
(fizic independent) de cromosom, fie n stare integrat n cromosomul bacterian. Din aceast categorie fac
parte plasmidele F i Col E1. Cele dou stri sunt reversibile i alternative: dup integrare n structura
cromosomului, ele pot trece din nou n stare autonom i redevin fizic independente, printr-o excizie corect,
sau printr-o excizie incorect, cnd plasmida se desprinde din inseria cromosomal mpreun cu cteva gene
ale acestuia.
2. Plasmidele neintegrative nu se integreaz n cromosomul bacterian, ci persist indefinit numai n stare
autonom.
Structura molecular a plasmidelor
Plasmidele sunt cromosomi miniaturali (minicromosomi) alctuii din molecule de ADN dublu
catenare, circulare, nchise covalent, care reprezint l-2% din mrimea cromosomului. O plasmid poate s
conin una sau cteva sute de gene. ADN plasmidial se gsete n celulele bacteriene n trei forme fizic
diferite (fig. 114).
l. Forma circular nchis covalent (denumit C C C)(Covalently Closed Circular), care prezint n plus 1-2
torsiuni ce dau moleculei aspectul de suprahelice.
2. Forma circular deschis, avnd o caten deschis i una nchis.
3. Plasmidele concatemere sau oligomere concatenate, sunt complexe supramoleculare formate din cteva
plasmide i sunt rezultatul unor erori de replicare a monomerilor circulari sau a proceselor de recombinare
interplasmidial. Dac ambele catene sunt nchise, componentele individuale ale complexului sunt
suprahelicale, iar dac una dintre catene este deschis, forma este circular. Configuraia circular este o
condiie a existenei lor n celul, cea care le confer rezisten la aciunea nucleazelor celulare. Totui, s-au
identificat plasmide cu configuraie linear (la Streptomyces, Rhodococcus).
Fig. 108. Configuraii diferite ale ADN plasmidial. a. Plasmid circular cu o caten incizat. b, c. Plasmide covalent
nchise superhelicale. d. Plasmide concatenate.
Structura genetic i funciile plasmidelor

Plasmidele conin urmtoarele categorii de determinani genetici:
l. Gene eseniale pentru existena lor ca repliconi fizic independeni, adic genele implicate n replicarea
acestor structuri genetice.
2. Gene de specificitate pentru incompatibilitate. Incompatibilitatea corespunde situaiei n care, dou
plasmide omologe nu pot fi meninute stabil n aceiai celul, deoarece una o exclude pe cealalt. Tehnica
hibridrii ADN-ADN evideniaz o omologie net ntre plasmidele din acelai grup de incompatibilitate i o
foarte mic asemnare ntre plasmidele compatibile. Pe baza incapacitii de a coexista n aceiai celul,
plasmidele au fost grupate n grupe de incompatibilitate.
3. Gene structurale, n numr variabil, care confer celulei proprieti noi.
4. Suprafaa de legare de mezosomi, care asigur corelarea replicrii plasmidelor cu ciclul celular, precum i
repartizarea lor echilibrat n cele dou celule fiice.
5. Elemente genetice transpozabile (secvene de inserie i transpozoni).
6. Plasmidele conjugative au determinani genetici de transfer (tra).
Plasmidele au dimensiuni variate: l 400 kb (echivalentul a l0% din cromosomul de E. coli). Cele mai
mici au ADN echivalent pentru 2-3 gene. Genele plasmidiale nu confer un fenotip detectabil celulei
purttoare i de aceea se numesc gene criptice.
De cele mai multe ori, prezena plasmidelor confer celulelor purttoare, proprieti noi, concretizate
ntr-o gam larg de funcii, dintre care, cele mai importante sunt urmtoarele:
rezistena la una sau la mai multe grupe de antibiotice (ampicilina, streptomicina, tetraciclina, kanamicina
etc.) i la sulfamide;
- rezistena la cationii metalelor grele (la ionii de Hg2+ i combinaiile sale orgnomercurice, la ionii de Ni,
Co, Pb, Cd, Zn, Ag, At);
- rezistena la anioni: arseniat, arsenit, telurit, borat, cromat;
- rezistena la compuii de intercalare(acridin, etidiu) i la radiaiile UV;
- proprieti noi de biosintez: sinteza antibioticelor i bacteriocinelor;
- proprieti metabolice noi: metabolismul unor glucide simple (lactoza, sucroza, rafinoza), al compuilor
compleci (octan, toluen, camfor, 2,4-diclor-toluen), al proteinelor (caseina, gelatina);
- producerea de toxine (enterotoxina la E. coli, toxina exfoliativ la S. aureus, neurotoxina la C. tetani) i
prin ele, proprieti noi de virulen;
- sinteza antigenelor de colonizare la E. coli (antigenele fimbriale K88 i K99);
- sinteza materialului capsular la B. anthracis;
- inducerea tumorilor de colet la plante (plasmid Ti la A. tumefaciens) i sinteza de ctre celulele tumorii,
a derivailor azotai din aminoacizi, denumii opine (octopina, derivat al argininei i nopalina);
- infecia i nodularea plantelor leguminoase (plasmida Sym la Rhizobium);
- proprieti conjugative: plasmide ce codific sinteza pilinei i asamblarea pililor (i implicit dobndirea
sensibilitii la fagii ARN masculi, care se leag specific de pili);
- alte proprieti: formarea vacuolelor cu gaz la Halobacterium, variaia translucid/opac a coloniilor de
Mycobacterium, producerea H2S la Enterobacteriaceae.
Genele localizate pe plasmide inhib exprimarea genelor cromosomale omologe.
Controlul numrului de copii plasmidiale
Intr-o celul bacterian se gsete un numr diferit de copii plasmidiale: una cteva/celul, sau un
numr de l0-l00 copii. Numrul difer n funcie de tipul de control pe care l exercit cromosomul asupra
replicrii plasmidelor, de starea fiziologic a celulei, de dimensiunile plasmidelor, dar, n esen, numrul de
copii se regleaz prin controlul ratei de iniiere a sintezei ADN. Dac o celul este transformat cu o plasmid
ce se afl ntr-un numr mic de copii n celula de origine, ea se va replica odat sau de dou ori nainte de
diviziunea celulei. Dac transformarea se face cu o plasmid, care n celula de origine se gsete ntr-un numr
mare de copii, ea se va replica n mod repetat pn este atins numrul caracteristic de copii.
Explicaia acceptat pentru reglarea numrului de copii este urmtoarea: plasmida codific un
inhibitor, cu rol reglator negativ (inhibitor) asupra iniierii replicrii. Activitatea inhibitorului este dependent
de concentraie. Pe msur ce celula crete, concentraia de inhibitor scade i replicarea nu mai este inhibat.
Dup replicare, numrul moleculelor de ADN plasmidial se dubleaz. In acelai timp, se dubleaz numrul de
gene codificatoare ale sintezei inhibitorului i prin sintez proteic, concentraia inhibitorului. Consecina este
stoparea replicrii.
Secvena de evenimente este aceiai pentru cazul n care transformarea celulei s-a fcut cu o plasmid
ce realizeaz un numr mare de copii/celul. Probabil c, pentru plasmidele care se gsesc n numr mare de
copii/celul, efectul inhibtor necesit o concentraie mai mare a factorului inhibitor, dect n cazul plasmidelor
cu un numr mic de copii.
Amplificarea numrului de copii plasmidiale/celul, semnific creterea major a numrului de copii,
n raport cu situaia obinuit. Amplificarea este consecina tratamentelor chimice sau a manipulrilor genetice
ale celulei bacteriene. Faptul este extrem de util n domeniul ingineriei genetice celulare cu scopuri
biotehnologice. Se creeaz posibilitatea ca o gen util, transferat artificial sau existent n mod natural n
structura plasmidei, s realizeze un numr mare de copii/celul i sinteza unui anumit produs, cu o rat
corespunzator mai nalt. De exemplu, sinteza catalazei poate fi amplificat de pn la 25 de ori.
Incompatibilitatea plasmidelor
Cuplurile de plasmide strns nrudite nu pot fi meninute stabil n descendena unei celule, deoarce
sunt incompatibile. Faptul este explicabil prin modelul inhibitorului, a crui concentraie este esenial pentru
iniierea replicrii. De exemplu, o celul care conine dou plasmide, F i Col E 1 sintetizeaz inhibitori diferii.
Replicarea fiecrui tip de plasmid se va desfura independent, deoarece inhibitorul unei plasmide nu
regleaz replicarea celeilalte. Astfel, plasmidele F i Col E1 sunt compatibile i aparin unor grupe diferite de
incompatibilitate.
Invers, dou variante ale aceleiai plasmide nu pot fi meninute stabil n aceiai celul, adic sunt
incompatibile. Explicaia const n faptul c, fiecare plasmid codific sinteza propriului inhibitor de replicare,
care este activ nu numai asupra repliconului codifcator ci i asupra celuilalt replicon. Astfel, numrul
moleculelor plasmidiale n celul, este meninut la un nivel inferior sumei copiilor poteniale ale celor dou
plasmide.
Plasmidele cu sisteme nenrudite de control al replicrii sunt compatibile. Ele aparin unor grupe
diferite de incompatibilitate, iar cele incompatibile aparin aceluiai grup.
Eliminarea plasmidelor
Eliminarea plasmidelor din celula sau procesul de vindecare se poate realiza spontan sau cu o
frecven superioar, prin tratarea celulelor cu substane care interfer selectiv cu replicarea lor, fr s
modifice dinamica replicrii cromosomului. Pierderea plasmidelor nu afecteaz viabilitatea celulei, datorit
caracterului neesenial al informaiei lor genetice. Eliminarea plasmidelor este realizat cu oarecare eficien
de acriflavin, rifampicin, bromura de etidiu, ionii de cobalt. Unii ageni chimici au aciune selectiv, fiind
foarte eficieni pentru eliminarea unor plasmide (acridina elimin plasmida F), fr s afecteze pe altele. Din
punct de vedere practic, aciunea selectiv este important, n primul rnd pentru eliminarea plasmidelor de
rezisten la antibiotice. Selectivitatea aciunii unor ageni chimici se explic prin compoziia diferit n baze, a
plasmidelor fa de cromosom. Quinolonele sunt recunoscute pentru eficacitatea lor ca ageni de eliminare a
plasmidelor, dar nu exist nici un agent chimic de vindecare a tuturor plasmidelor.
Replicarea plasmidelor
Studiul replicrii plasmidelor a dus la descoperirea ARN antisens. Plasmidele au o regiune esenial ce
conine genele implicate n replicare i controlul ei, care teoretic, sunt singurele gene obligatorii ale unei
plasmide. In regiunea esenial a unei plasmide sunt concentrate cteva gene i secvene:
- originea replicrii (ori), caracteristic fiecrui replicon. La nivelul regiunii ori se gsesc secvene
specifice cu care interacioneaz proteina Rep(proteina de iniiere a replicrii). Aici, cele dou catene se
pot separa pentru iniierea replicrii i ncepe sinteza catenei leading. In multe cazuri, originea replicrii
conine secvene repetate direct denumite iteroni. Ele sunt situsurile de legare ale proteinei Rep, se gsesc
i n afara originii replicrii, avnd i rol n controlul replicrii ;
- gena codificatoare a proteinei Rep, existent la multe plasmide;
- secvenele cu rol n controlul replicrii.
Fig. 109. Replicarea plasmidelor dup modelul cercului rotativ. Proteina Rep codificat de plasmid recunoate
originea dublu catenar (dso) a ADN superhelical i produce o clivare situs specific, genernd un capt 3OH. Captul
3OH este alungit de proteinele de replicare, iar catena parental este dislocat. Cnd bifurcaia de replicare ajunge la
situsul dso, proteina Rep catalizeaz o reacie de transfer a catenei, elibernd un intermediar monocatenar de ADN i o
molecul dublu catenar, cu o caten parental i una nou sintetizat (cercul punctat). Pe molecula circular
monocatenar este iniiat sinteza unei catene lagging, la situsul monocatenar de origine (sso), catalizat de ARNpolimeraz. Enzima va sintetiza un primer scurt de ARN, iar sinteza catenei lagging este catalizat de ADN-polimeraz.
Produsele sintezei sunt dou molecule de ADN superhelicale (dupa Bennett, 1998).
Plasmidele se replic fizic autonom fa de cromosomul bacterian, dar funcional, replicarea este total
sau parial dependent de proteinele codificate de genele cromosomale. Majoritatea plasmidelor sunt circulare.
Plasmidele lineare s-au gsit la bacteriile Gram pozitive i Gram negative.
Iniierea replicrii necesit asamblarea replisomului, format din ADN polimeraza III, o ADN helicaz
i primaza (proteina Rep).
S-au propus 3 mecanisme generale de replicare ale plasmidelor circulare: replicarea dup modelul
theta, replicarea prin deplasarea catenei i replicarea dup mecanismul cercului rotativ.
Plasmidele circulare se replic semiconservativ i i pstreaz forma circular pe toat durata ciclului
replicativ.
Replicarea dup modelul theta (al cercului simplu) este foarte frecvent la plasmidele bacteriilor
Gram negative i ncepe la un punct denumit originea replicrii (ori), prin incizia ambelor catene.
Evenimentele timpurii sunt:
- deschiderea celor dou catene la secvene specifice (ori), catalizat de proteina Rep;
- sinteza primerilor ARN.
De cele mai multe ori, iniierea replicrii necesit o protein iniiatoare, codificat de plasmid
(proteina Rep). Proteina Rep recunoate specific i se asociaz cu secvena de origine a replicrii. Regiunea
ori conine secvene de baze repetate n ordine direct, denumite iteroni. Iteronii sunt eseniali nu numai pentru
replicare, dar i pentru controlul replicrii. Cele dou catene, dup incizie au rolul de matrie pentru sinteza
catenelor noi. Bifurcaia de replicare se deplaseaz uni- sau bidirecional. Ambele catene se replic simultan.
Replicarea prin deplasarea catenei necesit 3 proteine codificate de plasmid, pentru iniierea
replicrii ADN. Replicarea este iniiat la origine i progreseaz n oricare din cele dou direcii prin
mecanismul deplasrii catenei. Cele 3 proteine codificate de plasmid (Rep A, Rep B, Rep C) au rol de
helicaz, primaz i respectiv de iniiere.
Replicarea ncepe de la dou origini simetrice i adiacente monocatenare (ssi A i ssiB). Replicarea
ncepe cnd aceste origini sunt accesibile ca regiuni monocatenare. Despiralizarea este dependent de dou
proteine de replicare, Rep C i Rep A i este uurat de o secven bogat n A-T care precede regiunile ssi A i
ssiB. Rep C recunoate secvenele repetate ale regiunii adiacente secvenei bogate n A-T, iar Rep A este o
helicaz. Rep B are rol de primaz i este specific plasmidei. Sinteza fiecrei catene este continu i se face
cu deplasarea catenei complementare. Replicarea catenei deplasate se iniiaz la originea ssi.
Replicarea dup modelul cercului rotativ este unidirecional, deoarece sinteza celor dou catene
este decalat n timp. Proteina Rep creeaz o bre la secvena dso (double strand origin) i genereaz gruparea
3OH, cu rol de primer terminal. Captul 3OH al catenei de polaritate negativ are rol de primer pentru
sinteza catenei leading, fiind alungit prin polimerizare pe catena circular de polaritate opus, cu rol de
matri. Catena negativ este ndeprtat, pe msur ce replicarea progreseaz. Alungirea captului 3OH al
catenei negative continu pn cnd complexul enzimatic de replicare (replisomul) a parcurs ntregul cerc al
matriei pozitive. Dup ce ntreaga caten circular pozitiv a fost copiat ntr-o caten complementar,
proteina Rep catalizeaz o reacie de transfer i catena negativ este circularizat. Astfel, ntr-o prim etap,
din procesul replicrii, rezult o molecul circular dublu catenar i catena negativ parental, de asemenea
circular. Caten negativ circular este ulterior convertit la molecula dublu catenar, pornind de la o
origine proprie a replicrii. Mecanismele de replicare a plasmidelor sunt comune i pentru replicarea
genomului unor dezoxiribovirusuri.
Plasmidele actinomicetelor
La actinomicetele miceliene s-a identificat o larg varietate de plasmide diferite, majoritatea
conjugative. Ele nu conin gene de rezisten sau pentru alte particulariti metabolice, ci conin numai gene
de replicare i fertilitate. Unele conin genele codificatoare ale sintezei antibioticelor.
Unele sunt plasmide mari (cteva sute de kbp) i adeseori codific pentru cile de biosintez ale
antibioticelor. Ele se replic de la punctul de origine, localizat central i poart proteine legate de secvenele
repetitive de la ambele capete. Aceste plasmide par s se recombine frecvent cu cromosomul linear, rezultatul
fiind schimbul secvenelor terminale ale celor dou structuri. Extremitile cromosomului de Streptomyces nu
conin gene eseniale i de aceea pierderea acestor gene nu interfer cu viabilitatea. Schimbul fragmentelor de
ADN plasmidial i cromosomal poate fi o cale foarte eficient de diseminare a genelor prin transfer pe
orizontal.
Plasmidele integrative de la Streptococcus pot fi excizate din cromosom i devin autonome. In stare
autonom se replic dup modelul cercului rotativ sau dup modelul (theta). Integrarea se face prin
recombinare la situs specific, mediat de o integraz codificat de plasmid, la un situs ce corespunde unei gene
cromosomale pentru sinteza ARNt. Diferitele plasmide se integreaz n diferite gene pentru ARNt. Deoarece
genele pentru ARNt sunt bine conservate la bacterii, spectrul de gazd al plasmidelor integrative este mai larg
dect al celor care se replic autonom.
Sinteza ADN linear necesit prezena unui primer, care n mod obinuit este generat de o ARNpolimeraz ce se asociaz cu ADN i sintetizeaz o molecul scurt de ARN. ARN-polimerazele nu copiaz
secvena situsului la care ele se leag. Cum sunt copiate capetele acestor structuri ? Pentru cromosomii
eucariotelor (care conin ADN linear), impedimentul este depit prin prezena secvenelor repetitive la capete
(telomere). Copii ale acestei secvene pot fi adugate dup replicare, sub aciunea enzimelor specifice
(telomeraze).
La Streptomyces, replicarea ADN linear al plasmidei (fig. 110) este iniiat de o protein cu rol de
primer, ataat la captul 5 al fiecrei catene (fig. 112). Capetele 3 sunt libere i sunt sensibile la degradarea
cu exonucleaza 3. La diferite tulpini de Streptomyces productoare de antibiotice, s-au gsit plasmide gigante
(180-590 kb), pe care sunt plasate genele codificatoare ale antibioticelor. Iniierea replicrii se face prin
asocierea acestei proteine cu o a II-a molecul a aceleiai proteine, legat covalent cu o nucleotid.
Nucleotidul formeaz legturi de H cu captul 3 al catenei complementare i ofer o grupare 3OH, cu rol de
primer pentru sinteza ADN.
Fig. 110. Replicarea plasmidelor lineare la Streptomyces (dupa Dale, 1996).
Unele dovezi experimentale sugereaz c replicarea plasmidelor este iniiat de proteine de replicare,
distincte de cele care iniiaz replicarea cromosomului. De exemplu, cloramfenicolul (sau un alt inhibitor al
sintezei proteice) inhib iniierea replicrii ADN cromosomal, dar nu a ADN plasmidial. Numrul de
plasmide/celul crete la circa l000. Replicarea plasmidelor continu dup inhibiia replicrii ADN
cromosomal, deoarece ele utilizeaz proteine de replicare codificate de plasmide, stabile la aciunea agenilor
chimici.
Distribuia plasmidelor n procesul diviziunii
Replicarea este o condiie necesar, dar nu suficient pentru meninerea plasmidelor n celula
bacterian. Prin diviziune, fiecare dintre cele dou celule fiice trebuie s dobndeasc cel puin o copie a
plasmidei.
Pentru plasmidele mari, cu un numr mic de copii/celul (plasmid F i unele plasmide R), distribuia
este un proces activ, care implic funcii codificate de plasmid. Mecanismul distribuiei active este
necunoscut. Se presupune c o secven de cteva sute de baze, echivalent unui centromer primitiv,
mperecheaz plasmidele nainte de diviziune. Aceast secven, mpreun cu una sau mai multe proteine,
codificate de plasmid sau de cromosom formeaz sistemul de distribuie sau de partiie. Sistemul poate
orienta asocierea plasmidelor de membran sau lng zona de formare a septului de diviziune.
Incompatibilitatea funcioneaz i la acest nivel: plasmidele asemntoare au acelai sistem de distribuie i se
repartizeaz dezechilibrat n cele dou celule fiice.
Plasmidele mici nu au sisteme de distribuie activ. Distribuia lor n celulele fiice este ntmpltoare.
Ele realizeaz un numr mare de copii/celul (30-40), astfel nct ansa ca o celul fiic, s nu primeasc nici
o copie plasmidial, este foarte mic.
Recombinarea plasmidelor
Recombinarea este definit de proprietatea plasmidelor de a se asocia prin mecanisme genetice, cu ali
repliconi: cu cromosomul bacterian sau cu alte plasmide. Recombinarea este o proprietate limitat numai la
plasmidele care au capacitate integrativ. Ca urmare a acestei proprieti, ele trec reversibil de la starea fizic
autonom, la cea integrat.
Plasmidele cu funcii episomale se pot integra reversibil, att n cromosomul bacterian, ct i ntr-o
alt plasmid existent n celul. Integrarea n structura cromosomului este precedat de secionarea ambelor
structuri genetice, sub aciunea unei nucleaze, urmat de reunirea lor prin extremitile libere, ntr-o singura
molecula circular. Consecutiv recombinrii, plasmida nu se mai replic autonom, ci numai sincron cu ceilali
determinani genetici cromosomali.
Recombinarea genetic plasmid-plasmid se face prin acelai mecanism molecular al integrrii
plasmid-cromosom i este deosebit de important prin consecinele sale. Fenomenul st la baza formrii
plasmidelor mari, cu rol de conjugon, ca i la baza acumulrii pe aceiai plasmid, a unui numr mare de gene
structurale, care confer, fiecare n parte, rezisten la un antibiotic diferit.
Integrarea recombinatorie a plsmidelor este un proces reversibil. Printr-un proces de excizie (invers
celui de recombinare), plasmidele se desprind din inseriile structurii genetice n care au fost integrate i revin
la starea fizic autonom. Excizia poate fi corect, cu exactitate de la situsurile de integrare, astfel nct
plasmida redevenit autonom, este identic cu cea dinainte de integrare. Uneori, excizia este incorect, caz n
care, plasmida schimb cu cromosomul, prin procese de recombinare, o secven de nucleotide. Plasmida
recombinat este modificat: a pierdut o parte din determinanii genetici proprii, dar a ctigat o secven
echivalent, de origine cromosomal.
Plasmidele F
Plasmidele F (Fertility), denumite i plasmide de sex sunt uniti genetice extracromosomale cu
proprieti episomale i funcie de conjugon. Prototipul plasmidelor de fertilitate este cel descris la E. coli K12,
prezent ntr-un singur exemplar/celul bacterian, datorit sincronizrii replicrii sale cu replicarea
cromosomului (fig.111). Mrimea sa este apreciat la 94,5 kbp, distribuite n 4 regiuni distincte:
- regiunea genelor de incompatibilitate (inc) i a celor implicate n replicare (rep);
- regiunea care cuprinde cele patru elemente genetice transpozabile (trei secvene de inserie (IS) i
transpozonul Tn l000;
- regiunea linitit, cuprins ntre IS2 i inc-rep;
- regiunea tra, care cuprinde secvenele ori T (de origine a transferului) i nc cel puin 28 de gene
structurale ale plasmidei.
Fig. 111. Harta genetic a factorului F de la E. coli. Amnunte in text.
Plasmidele F se replic fizic autonom, dar sincron cu cromosomul bacterian, datorit unei strnse
asocieri fizice cu acesta.
In funcie de prezena plasmidelor de sex F, de raportul lor cu cromosomul bacterian i de mecanismul
n care este mediat transferul de material genetic, celulele bacteriene se pot grupa n patru categorii distincte:
l. Celulele F-, lipsite de factorul F, echivalente fiziologic unor celule femele, care se comport ca receptoare
de material genetic.
2. Celulele F+ poart plasmide F autonome i sunt fiziologic echivalente unor celule mascule sau donoare
de material genetic, fiind capabile sa transfere o copie a plasmidei F, n timpul conjugrii.
3. Celulele Hfr posed plasmida F integrat n cromosom. Fiziologic, sunt considerate ca avnd un caracter
de supermascul, deoarece se comport ca donoare de material genetic, realiznd procese de conjugare i
recombinare cu o frecven mare.
4. Celulele F sunt purttoare ale unei plasmide F recombinat, care a ncorporat n structura sa, i gene ale
cromosomului bacterian n care a fost iniial integrat i din care a trecut n stare autonom, printr-un proces
de excizie eronat. Aceste celule au caracter mascul i se comport ca donoare de material genetic (transfer
factorul F).
Plasmidele R
Plasmidele R (de rezisten transmisibil, cu caracter infecios), descrise de Watanabe (l960), sunt
elemente genetice extracromosomale care confer celulei purttoare, rezisten simultan la mai multe
antibiotice, la sulfamide, la cationii metalelor grele. El a demonstrat rezisten simultan a celulelor de
Shigella (agentul dizenteriei, bacterie Gram negativ, enteric), la mai multe antibiotice, iar rezistena s-a
dovedit a fi transmisibil la celule sensibile.
Plasmidele R conin informaia genetic ce confer rezisten la mai multe antibiotice, la sulfamide
(produi de sintez chimic, derivai ai acidului paraaminobenzoic) i la diferii ageni chimici. Datorit
nrudirii chimice dintre diferite familii de antibiotice, o plasmid confer rezisten simltan, la un numr mare
de antibiotice. Astfel, celula bacterian devine suprarezistent, att calitativ cat i cantitativ. Datorit
rezistenei plasmidiale, bacteriile patogene produc infecii foarte greu de controlat prin mijloacele terapeutice
obinuite.
Plasmidele R au fost evideniate la E. coli, Proteus, Salmonella, Pseudomonas, Erwinia, Yersinia,
Staphylococcus, Streptococcus, Clostridium etc.
Plasmidele R au o structur genetic complex i sunt alctuite din urmtoarele categorii de
determinani genetici:
- genele care confer rezisten la antibiotice (genele r );
- genele care confer plasmidei R, funcia de conjugon (transferon). Ele sunt grupate ntr-un transpozon,
formnd factorul de transfer al rezistenei (FTR). Se numesc gene tra i codific sinteza proteinelor
necesare transferului plasmidei prin conjugare;
- secvene de inserie;
- secvena de iniiere a procesului de replicare (ori);
- genele ce asigur replicarea fizic autonom, a plasmidei.
Genele r fac parte din structura unor transpozoni (fiind delimitate de secvene de inserie) i au o
mobilitate foarte accentuat, adic se deplaseaz dintr-un situs n altul n structura plasmidei sau ntre plasmid
i cromosom. Numrul genelor de rezisten ntr-o plasmid este variabil. Spre deosebire de plasmidele F,
plasmidele R nu se integreaz n cromosomul bacterian.
Cele dou categorii de determinani genetici, de rezisten i de transfer, pot s existe n stare
recombinat sau se gsesc disociai n celula bacterian, ca uniti de sine stttoare (fig. 112):
- factorul de transfer al rezistenei (FTR) ce poart gene reglatoare ale replicrii, genele de transfer i
uneori gena de rezisten la tetraciclina (tet), cu gr. mol. de ll x l0 6 D;
- cellalt component, care conine genele de rezisten la antibiotice i are dimensiuni foarte diferite, ntre
cteva milioane - l00 milioane D.
Cele dou plasmide mici se replic autonom.
Fig. 112. Harta genetic a unei plasmide R, cu gene de rezisten la diferite antibiotice i la diferii ageni chimici cu efect
antibacterian. Unele plasmide R conin factorul de transfer al rezistenei (FTR) cu determinanii genetici de rezisten.
In celulele de E. coli, cele dou plasmide se recombin i formeaz o plasmid mare, care poart att
genele de rezisten, cat i pe cele de transfer. In aceast stare, plasmid R se transmite prin conjugare cu o
frecven foarte mare: l00% din celulele sensibile ale unei populaii celulare ce formeaz cupluri de conjugare,
primesc o copie a plasmidei R i devin rezistente (aa numita rezisten infecioas sau transmisibil).
Frecvena transmiterii conjugative scade treptat, datorit sintezei unui represor care blocheaz activitatea
genelor tra i astfel este inhibat sinteza pilinei i implicit asamblarea pililor.
Dac plasmid R nu conine determinanii genetici tra (FTR), transferul su se face prin transducie
mediat de un fag de dimensiuni mari, sau prin conjugare iniiat de alte plasmide conjugative.
Mecanismele rezistenei la antibiotice
In prezent, pentru tratamentul infeciilor bacteriene, la om i animale se folosesc peste 250 de ageni
antibacterieni, dar problemele clinice sunt departe de a fi rezolvate. Rezistena bacterian la antibiotice a fost
recunoscut imediat ce antibioticele au fost introduse n clinic. Genele codificatoare ale factorilor de
rezisten au preexistat momentului introducerii antibioticelor n clinic deoarece au fost recunoscute n
coleciile bacteriene alctuite nainte de utilizarea antibioticelor. n anii 50, Watanabe i colab. au observat c
Sh. disenteriae a devenit rezistent nu numai la sulfonamide, dar i la tetraciclin i cloramfenicol.
Introducerea antibioticelor i a agenilor chimioterapeutici n tratamentul infeciilor a fost nsoit de
creterea permanent n timp, a frecvenei cu care se izoleaz tulpini rezistente. Bacteriile prezint o
multitudine de ci prin care scap de efectele inhibitorii ale substanelor terapeutice i gsesc noi modaliti de
a invada esuturile gazdei. Mutaiile care confer rezisten la un antibiotic, pot s inactiveze o familie ntreag
de antibiotice nrudite structural. Astfel, bacteriile rezistente la o sulfamid sau la o tetraciclin, sunt rezistente
la toate sulfamidele, respectiv la toate tetraciclinele. Mai mult, bacteriile pot s posede gene de rezisten
pentru clase nenrudite de ageni antibacterieni, localizate pe plasmide ce pot fi uor transferate la alte specii
sau la alte genuri.
Uneori, rezistena la antibiotice este determinat de mutaii ale genelor cromosomale, dar de cele mai
multe ori, rezistena multipl este consecina dobndirii unei plasmide R.
Rezistena plasmidial la antibiotice i la agenii chimioterapeutici a celulelor bacteriene este bine
cunoscut. Prezena plasmidelor R n celulele bacteriene se coreleaz cu rezistena multipl la antibiotice.
Eliminarea plasmidelor este urmat de redobndirea sensibilitii la aceleai antibiotice.
Rezistena plasmidial la antibiotice este multipl i are capacitatea de a se rspndi nu numai pe
vertical (de la o generaie celular la alta), ci i pe orizontal, prin mecanismele de transfer genetic ntre
diferite specii patogene, sau de la specii saprobionte la cele patogene. Nivelul rezistenei se poate modifica
sub raport cantitativ, prin modificarea numrului de copii ale plasmidei. Rezistena plasmidial nu modific
rata de cretere i nici virulena tulpinilor bacteriene.
Efectul antibioticelor i al agenilor chimici antimicrobieni poate fi contracarat prin mai multe
mecanisme, unele intrinsece fiziologiei bacteriei, iar altele rezult din mutaiile genelor ce codific pentru
structurile int.
ADN cromosomal i plasmidial bacterian posed un mare rezervor de gene de rezisten, ce codific
diferite mecanisme de rezisten la medicamente: activarea pompelor de eflux, enzime inactivatoare ale
antibioticelor, modificarea intei aciunii antibioticului.
Inactivarea enzimatic a medicamentului este cel mai comun mecanism al rezistenei la o varietate
larg de tipuri structurale de antibiotice. Genele codificatoare ale enzimelor ce inactiveaz diferitele
antibiotice se gsesc n rezerva natural de gene de rezisten: bacteriile din sol care triesc n proximitatea
organismului productor de antibiotic, pot s produc enzime inactivatoare ale antibioticului. Genele ce
codific sinteza enzimelor inactivatoare pot fi transferate prin conjugare mediat de plasmide, ceea ce explic
frecvena nalt la tulpinile bacteriene supuse presiunii selective a antibioticelor. Antibioticele pot fi inactivate
prin clivaj enzimatic sau prin modificare chimic (fosforilarea, acetilarea sau adenilarea aminoglicozidelor),
astfel nct ele nu mai sunt transportate n celul sau nu mai interacioneaz cu inta specific.
Modificarea chimic poate conferi rezisten clinic la aminoglicozide, cloramfenicol, peniciline,
cefalosporine.
-lactamazele catalizeaz hidroliza ciclului -lactamic, iar antibioticele aminoglicozidice sunt
modificate chimic sub aciunea enzimelor specifice, prin fosforilare, adenilare sau acetilare; acetiltransferazele transfer un grup acetil de la un donor la un grup funcional al antibioticului, convertindu-l la
forma sa inactiv.
Efluxul activ al antibioticelor. Celulele bacteriene i eucariote au o varietate de sisteme de transport
membranar, care ndeplinesc funcii vitale: nglobarea nutrienilor eseniali, eliminarea compuilor toxici,
meninerea homeostaziei celulare. Identificarea sistemelor de transport, al cror numr este ntr-o continu
cretere, se datoreaz utilizrii tehnicilor de clonare genic i secveniere (Paulsen, 1996). S-au identificat
numeroase proteine de transport membranar (de ordinul sutelor), care au funcii fiziologice importante, dar
funcioneaz i pentru eliminarea substanelor toxice din celul.
Efluxul transmembranar al antibioticelor este un mecanism foarte eficient al rezistenei. Rezistena la
antibiotice i la antiseptice a bacteriilor patogene se datoreaz frecvent, eliminrii medicamentului. Sistemele
de rezisten prin flux sunt dependente de energie i pot fi sisteme de transport activ primare sau secundare.
Rezistena mediat de pompele membranare de eflux a fost evideniat iniial, la o tulpin de E. coli, rezistent
la tetraciclin.
Pompele de eflux pot fi specifice pentru un anumit medicament (de exemplu, transportorul TetB la E.
coli, elimin tetraciclina i un spectru ngust de analogi structurali) sau transport o larg varietate structural
de medicamente i de aceea s-au numit pompe cu funcie transportoare multipl.
Specificitatea de aciune a transportorilor de eflux este variabil: majoritatea transportorilor, inclusiv
determinanii efluxului de tetraciclin, au un spectru ngust de aciune, iar pompele de tip MDR (rezisten
multipl = multi drug resistance) export compui chimici cu structur chimic heterogen.
Sistemele de eflux multiplu au o semnificaie clinic major: dobndirea unui astfel de sistem scade
sensibilitatea la un spectru larg de ageni chimioterapeutici. n celulele neoplazice umane, rezistena la agenii
chimioterapeutici antitumorali este mediat n mod obinuit de pompa de eflux multiplu reprezentat de
glicoproteina P, care confer rezistena la un spectru larg de medicamente citotoxice prin exportul dependent
de ATP.
Bacteriile exprim i i duplic informaia de supravieuire, printre care i genele de rezisten la
medicamente, localizate pe plasmide, transpozoni i integroni.
Toate proteinele de eflux dependente de ATP aparin suprafamiliei ABC, cunoscute i sub denumirea
de ATP-aze de trafic. In general, transportorii de tip ABC au o structur molecular alctuit din 4 domenii.
Ulterior s-a identificat un numr mare de proteine de transport, care confer rezisten multipl la
medicamente (MDR = multidrug resistance), implicate n exportul unei mari diversiti de compui chimici
antimicrobieni, nenrudii din punct de vedere structural.
Transportorii multipli confer rezisten multipl i utilizeaz gradientul electrochimic
transmembranar al protonilor, sau uneori al ionilor de Na+, pentru a elimina medicamentul.
Pompele de eflux care confer rezisten multipl la diferii ageni antimicrobieni sunt exprimate la
organismele saprobionte i patogene de tip slbatic, care nu au venit n contact cu antibioticele (nainte ca
efluxul semnificativ al agentului antimicrobian s se produc), dar funcioneaz la un nivel semnificativ mai
nalt la organismele rezistente. Existena sistemelor de eflux, att la bacteriile patogene ct i la cele
saprobionte, sugereaz c genele de rezisten sunt colectate cu aceiai rat. Pompele de eflux confer avantaj
celulei, ceea ce explic conservarea genelor i diseminarea larg n populaiile bacteriene.
Rolul nativ al sistemelor de eflux este aprarea celulei de compuii toxici exogeni. Alteori, sistemele
de eflux multiplu par s ndeplineasc funcii primare, nelegate de rezistena la medicamente. Ele transport
medicamente multiple numai n situaii speciale.
Expresia celor mai multe proteine de eflux al medicamentelor este inductibil.
Pompele de eflux care confer rezisten multipl la antibiotice creeaz dificulti mari n tratamentul
maladiilor infecioase.
Diminuarea ratei de nglobare(inhibiia intrrii medicamentului n celul). Scderea permeabilitii
membranei externe a bacteriilor Gram negative i bariera periferic foarte eficient a micobacteriilor,
limiteaz difuzia medicamentelor. Permeabilitatea membranei externe a bacteriilor Gram negative se poate
diminua prin pierderea porinelor sau ca rezultat al mutaiilor care modific porinele i astfel rata difuziei
pasive a medicamentului scade foarte mult. Pierderea mutaional a porinelor crete rezistena la antibioticele
hidrofile, deoarece aceste molecule sunt mai mari dect nutrienii i trec greu prin canalele de transport.
Structura molecular, dar n special datele experimentale, sugereaz c antibioticele mici (-lactamice,
tetraciclina, cloramfenicol, fluoroquinolone) ptrund n celul n special pe calea porinelor, cel puin la
enterobacterii, care posed porine cu permeabilitate nalt. Scderea permeabilitii porinelor poate s
mreasc nivelul rezistenei fa de agenii antibacterieni care traverseaz membrana extern prin canalele
formate de porine. n contrast, antibioticele cu molecule mari, lipofile (macrolide, rifamicinele, novobiocina,
acidul fusidic) difuzeaz cu dificultate prin porii canalelor. Pentru ele, difuzia lent prin stratul lipidic este o
cale semnificativ de ptrundere n celul.
Membrana extern a bacteriilor Gram negative este o barier eficient pentru prevenirea influxului
antibioticelor. Moleculele de LPS formeaz baza structural a integritii membranei externe. Ele sunt
molecule polianionice legate electrostatic una de alta, datorit sarcinilor multiple negative ale lipidului A.
Moleculele LPS leag cationi bivaleni(Ca 2+, Mg2+), formnd o structur compact hidrofob, ca un acoperi
de igl pe suprafaa membranei externe, impermeabil pentru moleculele hidrofile. LPS sunt ntr-o stare de
gel, cu fluiditate sczut, n condiiile fiziologice de cretere a bacteriilor i constituie o barier solid de
permeabilitate. Fluiditatea sczut a LPS se datoreaz unor interaciuni puternice ntre moleculele de LPS
nvecinate.
n acelai timp, LPS reprezint clciul lui Ahile al acestei structuri. Antibioticele policationice din
grupul polimixinei se complexeaz avid cu LPS i dezorganizeaz membrana extern, mrind permeabilitatea
pentru agenii cu aciune asupra membranei sau componentelor citoplasmatice. Toi agenii policationici se
leag de LPS anionice, cu o afinitate variabil.
n general, barierele fizice de permeabilitate produc rareori fenomene de rezisten semnificativ,
deoarece nici cele mai eficiente bariere nu pot stopa complet difuzia liber a moleculelor mici.
Modificarea mutaional a intei antibioticului. Multe antibiotice inactiveaz o enzim specific sau
ribosomii. Un numr mare de tulpini rezistente apar printr-un proces mutaional: sintetizeaz o protein int
care devine incapabil s lege antibioticul sau mai rar, inta i pstreaz funcia chiar dup legarea
antibioticului. Adeseori, diferena dintre proteina de tip slbatic i cea mutant const n substituia unui singur
aminoacid n catena proteic. Ribosomii stafilococului pot deveni rezisteni la eritromicin dup modificarea
ARNr, iar rezistena la rifampin poate s rezulte din schimbarea unui singur aminoacid n subunitatea b a
ARN-polimerazei.
Utilizarea unei ci metabolice rezistente (de ocolire a cii metabolice inhibate). Dac un medicament
este activ prin inhibarea unei enzime eseniale a unei ci metabolice, celulele care produc o cantitate mai mare
de enzim pot supravieui n prezena medicamentului. De exemplu, rezistena la trimetoprim poate fi datorat
supraproduciei dihidrofolat reductazei (DHFR), mutaiei genei structurale a DHFR sau dobndirii unei gene
care codific o enzim DHFR rezistent la aciunea medicamentului.
Rareori, medicamentul trebuie s fie modificat de aparatul enzimatic al celulei bacteriene, pentru a
deveni activ. Mutantele care nu pot metaboliza medicamentul devin rezistente: de exemplu, Bacteroides
fragilis nu metabolizeaz metronidazolul i este rezistent
Cauzele fenomenului de rezisten la antibiotice

Plasmidele R nu au aprut ca rezultat al utilizrii antibioticelor n terapia antiinfecioas. Ele sunt
prezente n culturile bacteriene din colecii, izolate anterior erei antibioticelor. Frecvena izolrii tulpinilor
bacteriene din mediul spitalicesc, cu rezisten multipl, a crescut de la 0,2% la l958, la 58% n l965 i 95% n
l980. Fenomenul rezistenei este ntr-o expansiune constant. Astzi, peste 99% din izolatele bacteriene din
mediul spitalicesc sunt rezistente la una sau mai multe familii de antibiotice, ceea ce explic frecvena nalt a
infeciilor nosocomiale. Utilizarea antibioticelor nu a indus apariia plasmidelor R i nici a fenomenului de
rezisten, ci a determinat o selecie continu a tulpinilor rezistente, ceea ce explic preponderena lor n
clinica infecioas.
Genele de rezisten probabil au evoluat ntr-o prim etap la productorii de antibiotice, ca parte a
unei aglomerri de gene de biosintez, pentru a proteja organismul de aciunea defavorabil a propriului su
antibiotic. Evenimentele ulterioare de transfer genic au diseminat determinanii genici de rezisten la alte
bacterii.
Cauzele creterii procentului de tulpini bacteriene rezistente la antibiotice sunt:
- utilizarea antibioticelor pe scar larg n clinica uman, adeseori n situaii care nu impun o asemenea
decizie;
- folosirea antibioticelor furajere. Acestea se gsesc n masa micelian (de la fabricile de antibiotice), ce se
administreaz n hrana animalelor. Efectul este benefic, pentru c se elimin bacteriile enterice toxigene,
vitaminele miceliene favorizeaz creterea, dar antibioticul selecteaz tulpinile bacteriene rezistente.
Combaterea rezistenei plasmidiale este posibil pe urmtoarele ci:
- utilizarea raional a antibioticelor, bazat pe observaia c plasmidele au tendina s dispar, dac mediul
de via nu mai exercit o presiune selectiv;
- efectuarea unei antibiograme cantitative, nainte de administrarea antibioticului;
- interzicerea, pentru civa ani, a utilizrii antibioticelor devenite ineficiente, ca urmare a seleciei n timp, a
tulpinilor rezistente;
- eliminarea selectiv a plasmidelor R, prin utilizarea unor ageni care le inhib selectiv replicarea;
- utilizarea unor antibiotice noi, de semisintez.
Plasmidele Col
Plasmidele Col sunt elemente genetice extracromosomale, care codific sinteza unor substane
antibiotice de tip special, denumite colicine. Fenomenul de colicinogenez a fost descoperit de Gratia (l925).
Denumirea de colicine a fost atribuit unor substane cu proprieti antibiotice produse de o tulpin virulent
de E. coli, care au efect letal asupra celulelor productoare, precum i a unor tulpini strns nrudite cu cea
productoare. Producerea de colicine nu este limitat la E. coli, ci este un fenomen mult mai rspndit n
lumea bacteriilor i din acest motiv, Jacob (l953) a dat denumirile de bacteriocine, bacteriocinogeneza i
factori bacteriocionogeni, pentru a desemna substanele, fenomenul i respectiv plasmidele care controleaz
producerea lor.
Plasmidele (factorii Col) au aceleai particulariti, comune altor plasmide: sunt molecule de ADN,
circulare, dublu catenare nchise, suprahelicale. La E. coli, n mod obinuit se gsesc 5-25 de copii/celul.
Unele plasmide Col (de exemplu, Col E1) au funcie de conjugon, deoarece poart n structura lor
genetic, determinanii genetici de transfer. Ele se pot transfera la tulpinile col-, prin conjugare. Plasmidele Col
tra- se transfer prin transformare genetic, transducie fagic sau prin conjugare iniiat de alte plasmide cu
funcie de conjugoni.
Bacteriocinele sunt substane antibiotice cu aciune bactericid, a cror sintez este codificat de
plasmidele Col. De cele mai multe ori, bacteriocinele sunt proteine pure, uneori sunt glicoproteine, cu o gr.
mol. de l8-90 kDa.
Bacteriocinele produse de bacteriile Gram negative au cteva proprieti generale:
- au un spectru de aciune foarte ngust, limitat la tulpina productoare i la altele strns nrudite;
- aciunea lor este bactericid;
- conin o component biologic-activ, de natur proteic;
- se leag de celulele sensibile prin intermediul unor receptori celulari cu specificitate nalt, ceea ce explic
spectrul lor foarte restrns de aciune;
- biosinteza bacteriocinelor are efect letal asupra celulei productoare.
Denumirile diferitelor bacteriocine provin de la numele genului sau al speciei bacteriei productoare,
la care se adaug sufixul cin: de exemplu, lactocine (produse de Lactobacillus), vibriocine (produse de
Vibrio), respectiv pesticine (produse de Yersinia pestis), megacine (produse de B. megatherium), subtilicine
(produse de B. subtilis) etc.
Bacteriocinele produse de bacteriile Gram pozitive au un spectru de aciune foarte larg. Ele sunt active
asupra celulelor productoare, dar i asupra unor specii mai ndeprtate i chiar asupra bacteriilor Gram
negative. Din punct de vedere chimic, sunt glicoproteine sau lipoproteine.
O categorie special de bacteriocine, o constituie cele sintetizate de Ps. aeruginosa (bacilul piocianic),
denumite piocine. Ele se evideniaz n lizatele culturilor, dup inducia sintezei cu UV, sub forma unor
bastonae perechi, asemntoare cozilor contractile ale fagilor din seria T-par, infecioi pentru E. coli, cu
lungimea de 90-l25 nm i grosimea de 20 nm. Uneori, perechile de bastonae apar contractate, mai scurte i
groase, iar ntre cele dou structuri electrono-dense se evideniaz zona central (core), echivalentul
structural al cilindrului axial al cozii fagului.
Mecanismele de aciune a bacteriocinelor
Bacteriocinele produse de celulele Gram negative acioneaz prin mecanisme specifice asupra unor
inte situate n membran sau n citoplasm. Spectrul foarte limitat de aciune a bacteriocinelor produse de
celulele Gram negative, sugereaz existena unor receptori prin care acestea i dobndesc accesul la
structurile sensibile. De fapt, moleculele care funcioneaz ca receptori nu sunt specializate n acest sens, ci
ndeplinesc diferite activiti, n special de transport celular al unor substane nutritive.
Mecanismele de aciune s-au studiat pentru colicine (produse de E. coli). Dup fixarea ireversibil la
nivelul receptorilor membranei externe, colicinele i exercit efectul bactericid prin unul din urmtoarele
mecanisme:
- inhibarea fosforilrii oxidative, stopnd astfel procesele energetice celulare. Consecutiv se produce
alterarea permeabilitii membranei plasmatice, blocarea sintezei macromoleculare (ADN, ARN, proteine), ca
i a transportului activ al substanelor nutritive;
- unele colicine se fixeaz specific pe molecula de ADN i determin apariia inciziilor monocatenare, ceea
ce deschide calea aciunii nucleazelor celulare i a degradrii ADN;
- altele inactiveaz subunitile ribosomale 30 S, prin clivarea ARNr l6 S.
In concluzie, bacteriocinele au efect bactericid asupra celulelor sensibile. Ceea ce le deosebete
fundamental de alte antibiotice este faptul ca au efect letal asupra celulelor n care s-au sintetizat i din aceast
cauz, proprietatea de bacteriocinogenez nu se poate perpetua ntr-o celul, dect n starea ei potenial.
Periodic, sinteza bacteriocinelor este indus i celula productoare se lizeaz, elibernd moleculele cu efect
litic n mediu. Efectul litic al bacteriocinelor se manifest numai asupra celulelor aceleiai specii, care nu o pot
codifica, fiind lipsite de factorul Col. Celulele care poart factorul Col sunt rezistente la aciunea colicinei
omologe, elaborat de celule purttoare ale aceluiai factor, ca i cum ar fi imune la aciunea lor.
Originea plasmidelor este un subiect al speculaiilor. Plasmidele par s fi evoluat din EGT, a cror
structur genetic s-a complicat progresiv, prin dobndirea unor gene noi. Plasmidele au specificitate de
gazd. Fiecare grup de bacterii pare s aib setul propriu de plasmide. In general, plasmidele rezidente n
bacteriile Gram pozitive nu se stabilizeaz n celulele Gram negative i invers. Fac excepie plasmidele
enterobacteriilor, care pot fi transferate la multe, dac nu la toate genurile de bacterii.
Mecanismele variabilitii la bacterii

Bacteriile triesc cel mai adesea n medii nefavorabile, n care o serie de factori nocivi, fizici sau
chimici produc alterri ale materialui genetic.
Variabilitatea genetic a bacteriilor este rezultatul aciunii mai multor mecanisme.
Primul nivel al variabilitii se datoreaz mutaiilor punctiforme.
Al II-lea nivel al variabilitii se datoreaz modificrii unui numr mai mare de perechi de baze,
adic unor rearanjri ale unor segmente mari de ADN. Astfel de rearanjri includ inversiile, duplicaiile,
inseriile, deleiile sau transpoziia unor secvene mari de ADN de la o localizare cromosomal sau
plasmidial, la alta i se datoreaz unor secvene genomice speciale.
Al III-lea nivel al variabilitii genetice la bacterii este dobndirea unui fragment de ADN strin prin
mecanismele de transfer genetic.
1. Mutaiile
Mutaia este o modificare stabil a materialului genetic, transmisibil la descendeni. Molecula de
ADN este o int cu situsuri multiple pentru aciunea factorilor lezionali endogeni i exogeni. Nucleotidele
din incizura major a dublului helix, sunt mai sensibile la modificare dect cele din incizura minor. Unii
dintre atomii bazelor purinice i pirimidinice sunt mai sensibili dect alii. Din aceste considerente, molecula
de ADN este o int heterogen pentru aciunea agenilor lezionali.
Mutaiile sunt produse prin modificri stabile ale secvenei de baze ale unei gene, transmisibile la
descendeni. Ele pot fi punctiforme, adic implic modificarea unei singure baze i pot altera situsul de
aciune al unui agent antimicrobian, interfernd cu activitatea lui sau modific o secven de baze.
Mutaiile modific totdeauna genotipul, dar n funcie de natura lor pot s nu fie exprimate n fenotip.
In funcie de agentul cauzal, mutaiile sunt induse de factori endogeni (denumite i mutaii spontane)
i de factori exogeni (denumite i mutaii induse).
Expresia fenotipic a unei mutaii este precedat totdeauna, de apariia unor modificri lezionale ale
moleculei de ADN, care scap aciunii corective a mecanismelor reparatorii.
Mutaiile spontane se produc n absena aciunii oricrui agent, cunoscut ca avnd efecte asupra
moleculei de ADN. Diferite activiti metabolice, n special anaerobe, pot s genereze intermediari cu efecte
lezionale fa de ADN. Cei mai cunoscui sunt internediarii reducerii O 2 (H2O2, radicalul O2-, radicalul OH.)
Generarea intermediarilor care lezeaz ADN, n metabolismul anaerob, este argumentat de inducerea
enzimelor de reparare a ADN n condiii de anaerobioz.
Mutaiile spontane sunt punctiforme. Ele apar n timpul replicrii ADN i par a fi datorate erorilor de
mperechere a bazelor ntre catena nou sintetizat i cea veche.
Fig. 113. Modelul structural al moleculei de ADN care evideniaz configuraia dublu helical i raporturile celor
dou catene nucleotidice. n stnga, reprezentarea diagramatic a moleculei. Catenele asemntoare unor panglici
reprezint axul central al moleculei de ADN. Cele dou catene sunt antiparalele. Este ilustrat mperecherea bazelor,
legturile de H i dimensiunea moleculei de ADN. Un tur de helix cuprinde o pereche de baze. n dreapta, o scurt
secven a moleculei de ADN care arat raportul dezoxiribozei i acidului fosforic cu bazele.
Mutaiile spontane punctiforme rezult prin substituia unei perechi de baze i se datoreaz unor
fenomene de transversie.
Tranziiile sunt mutaii punctiforme care apar prin substituii de perechi de baze, in care o baz
purinica (A sau G) este substituit cu o alt purin, sau o pirimidin (C sau T) este substituit cu o alt
pirimidin. Perechea purin pirimidin este schimbat de la GC la CC sau la TA. Acestea sunt modificri
rare i apara ca o consecin a mperecherilor greite ce au loc n timpul replicrii ADN.
Transversiile sunt mutaii punctiforme n care o baz purinic este substituit de o baz pirimidinic
sau invers i se datoreaz fenomenului de tautomerie. Cele 4 baze pot coexista n diferite forme tautomere ce
se deosebesc prin schimbarea poziiei unui proton: grupul C=O (cetonic) este transformat n grupul C=OH
(enol), iar gruparea NH2 este transformat n gruparea NH (imina). In condiii normale, predomin
gruprile cetonic i aminic (fig. 114).
Fig. 114. Schimbri n mperecherea bazelor datorate strilor tautomerice. n forma enolic (a), timina
formeaz legturi de H cu guanina, n locul adeninei. n forma imino (b), adenina formeaz legturi de H cu citozina, n
locul timinei. Modificri similare ale guaninei i citozinei determin modificri ale mperecherii bazelor.
Apariia gruprilor tautomere (enol i imino) produce o relaxare a mperecherii bazelor i permit
guaninei s formeze pereche cu timina (n loc de citozin), pstrnd perechea purin-pirimidin. Dac
perechea GT nu este corectat la replicare, unul dintre cromosomi va avea perechea normal AT (n loc de
GC) i astfel s-a produs o mutaie punctiform.
Depurinarea este consecina sensibilitii nalte la hidroliz, a legturilor glicozidice care leag
guanina n catena nucleotidic, dar celelalte, care leag adenina sau bazele pirimidinice (citozina, timina)
sunt mai stabile. Situsurile apurinice astfel rezultate (i mai rar apirimidinice) sunt recunoscute de sistemele
de supraveghere i reparare.
In cursul replicrii ADN, uneori, nucleotidele sunt ncorporate greit. Perechile incorecte pot scpa
funciei de control (editing) a ADN-polimerazei.
Disponibilitatea limitat a dUTP sau inhibiia sistemului enzimatic al timidilat-sintetazei, are ca
rezultat inhibiia sintezei dTTP i ncorporarea uracilului n locul timinei. Prezena uracilului este
recunoscut de sistemele de reparare.
O21, O2-, radicalul OH (OH.) liber produc leziuni la nivelul restului glucidic, a cror consecin poate
fi ruperea catenei ADN.
Mutaiile induse sunt rezultatul leziunilor produse de aciunea factorilor exogeni asupra moleculei de
ADN i apar cu o rat net superioar fa de nivelul ratei mutaiilor spontane.
Factorii mutageni exogeni sunt agenii chimici i radiaiile.
Agenii chimici cu efect mutagen acioneaz la nivel molecular prin alterarea secvenei de baze a
ADN: analogi ai bazelor, ageni alchilani, ageni de dezaminare, derivai ai acridinei.
Un analog al unei baze este o molecul similar ca structur, cu una dintre bazele azotate ale ADN. O
celul poate ncorpora n ADN, un analog al bazei, n locul bazei normale. De exemplu, 5-bromo-uracilul (5BU) poate fi ncorporat n locul timinei.
Analogii bazelor induc substituia unei baze prin fenomenul de tranziie. Tranziia rezult prin
nlocuirea unei purine cu o alt purin, sau a unei pirimidine cu alt pirimidin, adic o schimbare de la
perechea GC la AT sau invers.
5-BU i analogii si tautomerizeaz mai uor dect bazele naturale. In forma C=O, 5-BU se
mperecheaz cu A i este ncorporat n ADN, formnd o pereche pseudo-AT. In forma C=OH, la urmtorul
rund de replicare, 5-BU se mperecheaz cu G, n locul lui A. La un nou rund de replicare, tranziia de la AT
la GC se va stabiliza.
Fig. 115. Exemple de analogi ai factorilor de cretere.
Agenii alchilani* sunt substane care nlocuie H cu o alt grupare (de exemplu, -CH 3 sau C2H5), ntro baz, ca de exemplu guanina. Adugarea un grup -CH3 la o baz azotat, i modific dimensiunile i
determin mperecherea eronat. Agenii alchilani acioneaz n special asupra ciclurilor purinice azotate, la
nivelul O6 al guaninei sau O4 din bazele pirimidinice, producnd leziuni mutagene, dar i la nivelul
legturilor fosfodiesterice ale catenei de ADN. Guanina metilat se mperecheaz greit cu Timina, n locul
Citozinei. Astfel, la urmtoarea rund de replicare a ADN, G iniial este nlocuit cu A, care va face pereche
cu cu T.
*
Sinteza i transferul gruprii CH 3 este un proces metabolic important. Atomii C,O,N,S ai compuilor organici
funcioneaz frecvent ca acceptori ai gruprii CH3 n procese metabolice primare i secundare. Procesul poart
denumirea de biometilare. Termenul de bioalchilare semnific procesul prin care o grupare alchil se leag direct de
un element cu numr atomic mai mare de 10. Termenul de bioalchilare presupune acceptarea altor grupri alchil: etil,
propil, dei procesul are o frecven mic.
Agenii alchilani se formeaz prin prepararea multor produse alimentare, n gazele de eapament
prin combustia intern a N2 atmosferic, formdu-se nitrai i nitrii. Prin arderea tutunului, a produselor
petroliere i prin prepararea alimentelor, din resturile de guanin se formeaz hidrocarburi policiclice
aromatice, cu efect alchilant asupra ADN.
Agenii de dezaminare (de exemplu, acidul nitros) scot un grup NH 2 dintr-o baza azotat. Conversia
adeninei la hipoxantin, a guaninei la xantin i a citozinei la uracil, prin dezaminare, are efecte mutagene
pentru c bazele dezaminate se mperecheaz cu alte baze dect cu cele normale. De exemplu, dezaminarea
citozinei la uracil modific perechea C=G la perechea U=A, iar dezaminarea adeninei la hipoxantin (analog
guaninei), modific perechea A=T la G=C (fig. 116).
Fig. 116. Reaciile de dezaminare au consecine mutagene, deoarece bazele dezaminate se mperecheaz greit.
NO3- i NO2- se adaug la unele alimente (preparate din carne) pentru culoare, miros sau pentru
aciune antibacterian. In tubul digestiv se formeaz nitrozamine. Acestea sunt ageni de dezaminare care
produc cancere ale tractului digestiv i efecte defavorabile asupra dezvoltrii ftului.
In contrast cu aceste alterri care produc mutaii punctiforme, derivaii acridinei, cauzeaz mutaii
prin schimbarea cadrului de citire. Molecula de acridin conine un inel pirimidinic i dou inele benzenice.
Molecula sau unul dintre derivaii si se inser n dublul helix al ADN, nlocuind ambele baze ale unei
perechi. Modificarea deformeaz helixul i produce despiralizarea parial a catenelor de ADN.
Despiralizarea permite ca una sau mai multe baze sa fie adugate sau eliminate. Rezult astfel, o mutaie prin
schimbarea cadrului de citire.
Mutaiile prin schimbarea cadrului de citire, constau n inseria sau deleia uneia sau ctorva baze n
molecula de ADN (un numr diferit de multiplu de 3). Ele determin schimbarea cadrului de citire, pentru c
dincolo de situsul mutaiei, toi codonii i schimb secvena de baze. A II-a schimbare a cadrului de citire, de
aceiai mrime, dar n sens invers, restabilete cadrul iniial de citire a informaiei genetice. O astfel de
mutaie se numete supresoare a primei mutaii i pentru c are loc n aceiai gen, fenomenul se numete
supresie intragenic.
Coloranii de acridin, n special proflavina, bromura de etidiu, induc mutaii ale cadrului de citire
(fig. 117, 118). Proflavina este o molecula planar, cu dimensiuni similare cu ale unei perechi purinpirimidin i se intercaleaz ntre bazele ADN. Mutagenii care schimb cadrul de citire sunt ageni de
intercalare, dar nu toi agenii de intercalare schimb cadrul de citire.
Fig. 117. Inseria acridinei n dublul helix ADN poate produceo mutaie prin schimbarea cadrului de citire.
Bromura de etidiu
(colorant)
ADN-dublu catenar
Moleculele de colorant intercalate ntre baze

confer flurescen moleculei de ADN
Fig. 118. Bromura de etidiu se intercaleaz ntre bazele ADN
(dupa Brock,1988).
Mutaiile punctiforme ale ADN (tranziii, transversii sau cele produse prin schimbarea cadrului de
citire) modific secvena de baze n ARNm. O mutaie de sens greit d natere unui codon ce specific un alt
aminoacid dect cel codificat original. Efectul aminoacidului nou asupra polipeptidului, depinde de poziia
aminoacidului i de natura schimbrii. Polipeptidul poate s rmn nemodificat, dar alteori funcia sa se
poate pierde complet sau mutaia poate genera o protein cu stabilitate termic alterat. La o temperatur
relativ sczut (permisiv), proteina funcioneaz normal, iar la temperaturi mai mari (nepermisive), proteina
este nefuncional (mutant termosensibil). Dac rezultatul este moartea celulei, mutaia se numete
condiionat letal, adic este letal numai la temperatur nepermisiv.
Mutaiile punctiforme pot schimba un codon sens (care specific un aminoacid), la un codon care
specific terminarea sintezei proteinei (UAG, UAA, UGA). Se sintetizeaz o protein incomplet, n locul
celei normale. Astfel de codoni mutani se numesc nonsens, deoarece nu codific ncorporarea unui
aminoacid.
Generarea unui codon nonsens ntr-o gen proximal a unui operon, poate induce un efect polar
asupra celorlalte gene ale operonului, situate distal fa de situsul codonului nonsens. Codonul nonsens
semnific stoparea traducerii ARNm i peptidul nascent este eliberat din ribosomi. Uneori, ribosomii se pot
reataa la ARNm, distal fa de situsul nonsens, la un alt situs de legare. Dac numrul ribosomilor care se
reasociaz cu ARNm, este mai mic dect normal, rezult fenomenul de polaritate a traducerii. Uneori,
efectul polar asupra traducerii este puternic, adic genele situate distal fa de situsul mutaiei nonsens sunt
foarte puin exprimate.
Mutaiile punctiforme sunt dependente de replicarea ADN, pentru consolidare.
Mutaiile majore produse prin modificarea unui numr mare de baze se datoreaz deleiilor,
duplicaiilor, inversiilor i adiiilor. Mutaiile majore pot s implice secvene de ADN ce depesc mrimea
unei gene, iar efectele lor sunt mult mai ample dect ale mutaiilor punctiforme. Ele se datoreaz erorilor de
replicare, evnimentelor de recombinare ntre secvenele omologe de ADN sau aciunii mecanismelor de
reparare. Deleiile sunt rezultatul aciunii mecanismelor de transpoziie a elementelor genetice transpozabile
(EGT).
Erorile de replicare a ADN (erori de copiere) se datoreaz alunecrii unei catene a ADN n raport cu
cealalt, n timpul replicrii. Dup ce s-au separat tranzitoriu, cele dou catene se realiniaz incorect, datorit
formrii unei bucle pe catena matri. Reluarea copierii la o secven ce precede bucla produce o duplicaie,
iar reluarea copierii n aval de bucl, determin o deleie n catena nou sintetizat.
Deleiile i inversiile pot fi rezultatul recombinrii intra- i inter-repliconi, pentru c recombinarea

necesit duplicaii de secvene. Recombinarea ntre secvene omologe, cu aceiai orientare ntr-o molecul de
ADN, duce la pierderea unei copii a secvenei duplicate.
Radiaiile UV sunt mutagene. ADN absoarbe radiaiile cu lungimea de und de circa 260 nm.
Majoritatea celulelor bacteriene mor, dar cele care supravieuiesc sufer mutaii cu o frecven nalt. Cea
mai frecvent leziune indus de radiaiile UV, este formarea dimerilor pirimidinici (fig. 119). Intre
pirimidinele adiacente, pe aceiai caten se formeaz legturi covalente, astfel nct ele sunt reunite printr-un
inel ciclobutan. Se formeaz n special dimeri T-T, dar i C-C sau T-C. Formarea dimerilor deformeaz
molecula de ADN i interfer cu mperecherea normal a bazelor. Replicarea ADN se ntrerupe la dimerii T-T
i este reluat distal, la oarecare distan. Astfel, n catena nou sintetizat, apare o discontinuitate, care, dac
nu este reparat, devine letal.
Fig. 119. Modificri induse de radiaiile UV m molecula de ADN. a. Secvena bazelor n molecula de ADN . b, c.
Sub aciunea luminii UV se formeaz dimeri de timin (dup Russell, 1998).
Radiaiile ionizante ( i x) au energie nalt i acioneaz prin ruperea legturilor chimice ale
moleculelor. Se formeaz radicali liberi, atomi foarte reactivi, molecule sau ioni ce atac alte molecule ale
celulei, inclusiv molecula de ADN. Efectul radiaiilor ionizante const n primul rnd, n radioliza apei prin
care se genereaz radicali OH (OH .). Radicalul OH. este capabil s mobilizeze protoni de la C 4 al
dezoxiribozei sau de la bazele pirimidinice. Se labilizeaz legturile fosfodiesterice cu posibila apariie a
ruperilor mono- sau dublu catenare.
Mutaiile consecutive reparrii ADN. Supravieuirea bacteriilor n mediile ostile se datoreaz parial,
sistemelor de supraveghere ce recunosc leziunile aprute n structura ADN i activeaz o cascad de
evenimente moleculare ce restabilesc integritatea structural i funcional a moleculei originale, asigurnd
stabilitatea genetic.
ADN este singura macromolecul ale crei leziuni sau defecte pot fi corectate prin aciunea unor
sisteme enzimatice. Cele mai multe modificri ale moleculei de ADN sunt temporare pentru c sunt imediat
corectate sub aciunea unui set de procese denumite generic repararea ADN. Mai puin de 1 din 1000 de
schimbri ale bazelor ADN produc o mutaie permanent, restul fiind eliminate prin procesele de reparare.
Unele leziuni ale ADN (dimerii pirimidinici) nu pot fi reparate i molecula de ADN nu se replic. O celul
care nu i replic ADN, moare.
Mecanisme de reparaie genetic
La bacterii, cteva procente din capacitatea de codificare este destinat funciilor de reparare a ADN.
In absena mecanismelor de reparare, mutaiile spontane ar schimba rapid secvena de ADN. Structura dublu
helical a ADN este ideal pentru reparare. Cnd una dintre catene este lezat, catena complementar
pstreaz o copie intact a informaiei i este folosit ca matri pentru a restabili secvena iniial de
nucleotide.
Fiecare celul dispune de sisteme multiple de reparare a ADN, fiecare cu propriul set de enzime.
Aciunea diferitelor mecanisme este dependent de de tipul de leziune. Cele mai multe sisteme de reparare
folosesc catena intact ca matri pentru repararea catenei lezate.
Reparaia genetic se face prin mai multe mecanisme:
a) Reversia direct a leziunii, fr sinteza unor noi legturi fosfodiesterice. In aceast categorie intr
fotoreactivarea i rspunsul reparator adaptativ;
b) Mecanismul reparator prin excizie i resintez, bazat pe incizia catenei lezate la sau lng situsul
leziunii, excizia i resinteza secvenei excizate, folosind ca matri, catena complementar normal;
c) Reparaia prin recombinare dup replicare implic schimbul de catene prin recombinare;
d) Reparaia prin sistemul inductibil SOS a leziunilor ce nu pot fi corectate prin sistemele constitutive.
Fotoreactivarea
Dat fiind frecvena mare a mutaiilor induse de radiaiile UV, celulele bacteriene i-au elaborat
mecanisme cu aciune prompt pentru eliminarea leziunilor specifice i restabilirea secvenei normale. Dac
celulele tratate cu radiaii UV sunt expuse aciunii luminii vizibile cu lungimea de und de 300-400 nm, att
frecvena mutaiilor, ct i letalitatea scad foarte mult. Fenomenul se numete fotoreactivare. Iradierea UV
produce o leziune caracteristic n molecula de ADN: o legtur chimic stabil, respectiv a unui dimer de
tipul ciclobutil, cu patru atomi de carbon ntre dou baze pirimidinice adiacente (fig. 120).
Fig. 120. Fotoreactivarea. a. O molecul de fotoliaz recunoate dimerul i este activat de lumina cu lungimi de und
specifice. .b. Dimerul este clivat. c. Secvena ADN este restabilit. d. Reacia de fotoreactivare enzimatic a dimerilor
pirimidinici de ciclobutan.
Dimerii pirimidinici se formeaz cel mai adesea (50%) ntre dou resturi de T, ceva mai rar ntre un
rest de T i unul de C (40%) i foarte rar ntre dou resturi de C (l0%). Lumina vizibil activeaz o fotoliaz,
enzim ce hidrolizeaz inelul de ciclobutan i reverseaz reacia produs de radiaia UV, fr erori, restabilind
bazele monomere. Fotoreversia implic transferul de energie de la molecula de pterin, la FADH 2 i
transferul electronilor la dimerul pirimidinic.
Spre deosebire de mecanismul de reparare indus de lumina vizibil, care repar leziunile fr erori,
celula bacterian posed mecanisme de reparare la ntuneric, dar predispuse la erori, adic generatoare de
mutaii, cu frecven mare.
Rspunsul reparator adaptativ

Acest tip de rspuns se activeaz dup expunerea prelungit a celulelor de E. coli, la concentraii
mici de substane mutagene, ca de exemplu, N-metil-N-nitro-nitrozoguanidina (MNNG) sau etil-metansulfonatul. Celulele bacteriene tratate cu concentraii mici de ageni alchilani, care preced administrarea
dozelor letale sau mutagene, devin rezistente la aciunea mutagen sau letal a unor concentraii de cteva
sute de ori mai mari de substan activ.
Rspunsul fiziologic al celulelor de E. coli, la aciunea agenilor metilani sau etilani s-a numit
rspuns adaptativ.
Agenii metilani sau etilani produc leziuni ale moleculei de ADN, printr-un proces de alchilare,
adic grefarea unei grupri alchil (metil, etil) pe un atom de C, N sau O (fig. 121).
Efectul MNNG const n adaugarea unei grupri metil (-CH 3), legat de un atom de O, n poziia C6 a
guaninei. Formarea leziunii O6-alchil-guanin este nsoit de pierderea legturilor de H care leag G metilat
de C de pe catena opus.
Fig. 121. Reversia leziunilor produse de ageni alchilani la nivelul gruprilor fosfat i la nivelul guaninei.
Gruprile alchil sunt transferate la resturile de cistein ale transferazei, a crei sintez este indus de agenii alchilani.
Dup metilare, enzima se inactiveaz (dup Grossman, 1992).
Procesul reparator este dependent de sinteza proteic de novo. Se sintetizeaz o metil-transferaz

proteina Ada, care ndeprteaz specific grupul metil de la legtura fosfodiesteric i grupul metil din O 6metil-guanin. Gruprile metil nu sunt eliberate n stare liber, ci sunt transferate direct, de la ADN alchilat,
la protein. Din reacie rezult proteina Ada metilat i guanina nemodificat. Prin metilare, transferaza se
inactiveaz. Sinteza transferazei este indus pentru c mono- sau dimetil-transferaza activeaz transcrierea
operonului codificator ada, care pe lng gena ada cuprinde genele alk B (cu rol necunoscut) i alk A, pentru
sinteza ADN-glicozilazei. ADN-glicozilaza acioneaz asupra 3-metil-adeninei, 3-metil-guaninei, O 2-metilcitozinei i O2-metil-timinei. Proteina Ada metilat se leag de operatorul genei ada i acioneaz ca reglator
pozitiv. Reglarea negativ este controlat de proteaze care cliveaz metil-transferaza (Ada), la cisteina 69 i
321.
Repararea prin excizia bazelor, catalizat de glicozilaze i endonucleaze

Bazele modificate prin dezaminare pot fi excizate de un grup de enzime denumite ADN-glicozilaze.
ADN-glicozilazele sunt enzime mici, cu specificitate nalt, foarte bine conservat n evoluie, att ca
structur, ct i ca mecanism de aciune, de la bacterii pn la om. Fiecare recunoate un tip specific de baz
alterat i catalizeaz eliminarea ei hidrolitic, prin clivarea legturii N-glicozil a bazei cu deoxiriboza
catenei. Sunt cel puin 6 tipuri de enzime: cele care elimin C dezaminat, A dezaminat, bazele alchilate sau
oxidate, baze cu inele deschise sau baze la care dubla legtur C=C a fost convertit la legtur simpl C-C.
Dup excizia bazei, rezult o deoxiriboz creia i lipsete baza. Absena bazei este recunoscut de o
endonucleaz AP (apurinic, apirimidinic) care cliveaz catena fosfodiesteric, leziunea este ndeprtat i
reparat.
Fig. 122. Repararea prin excizia bazelor, catalizat de glicozilaze i endonucleaze. Dimerul format dup
expunerea bacteriilor la UV (a, b) este ndeprtat sub aciunea glicozilazei i endonucleazei AP (APurinic sau
APirimidinic) specifice. Glicozilaza specific, indus de agentul lezional recunoate dimerul pirimidinic i cliveaz
legtura glicozidic dintre bazele lezate i dezoxiriboz, rezultnd un situs apirimidinic sau apurinic. Endonucleza
recunoate situsurile AP i hidrolizeaz legturile fosfodiesterice ale dezoxiribozei (c. d, e, f) (dup Grossman, 1992).
Reparaia prin excizia i resinteza nucleotidelor

Mecanismul de reparaie prin excizie i resintez, const n excizia enzimatic a secvenei lezate,
urmat de completarea sa prin resintez (fig. 123), utiliznd ca matri, catena complementar rmas intact.
Spre deosebire de procesul fotoreactivrii, n cursul cruia dimerii de T sunt clivai n situ i rezult
monomerii corespunztori, n reparaia la ntuneric, dimerii sunt ndeprtai din molecula de ADN, prin
excizia fragmentului n care s-au format.
Reparaia prin excizie i resintez, a fost caracterizat la E. coli i este mediat de cel puin 6 produse
genice ale sistemului uvr:
- proteina UvrA, sub form dimeric, se leag de ADN n prezena ATP;
- ulterior, se asociaz proteina UvrB. Complexul Uvr2AB este translocat de la situsul iniial al ADN, la
situsul lezat, de o ATP-az asociat cu UvrB, care este activat prin formarea complexului UvrA 2BADN;
- proteina UvrC face dou clivri n catena de ADN, la 7 nucleotide n direcia 5 fa de situsul lezat i la
3-4 nucleotide n direcia 3 fa de acelai situs;
- n prezena proteinei UvrD (cu rol de helicaz), a ADN-polimerazei I i a substratului
(deoxiribonucleozid-trifosfai), fragmentul lezat este eliberat, iar proteinele UvrA, UvrB, UvrC sunt
recirculate.
Continuitatea catenei clivate se restabilete prin sinteza de novo, catalizat de ADN-polimeraza I,
utiliznd ca matri, catena intact, iar polinucleotid-ligaza restabilete continuitatea secvenei.
Fig. 123. Repararea nucleotidelor prin excizie i resintez. Dimerii pirimidinici care se formeaz sub aciunea radiaiei
UV sunt recunoscui de complexul enzimatic UvrA, UvrB i UvrC (c). n prezena UvrD, complexul cliveaz catena de
ADN (d), iar AND-polimeraza resintetizeaz catena lezat, folosind ca matri catena opus (e, f).
Sistemul reparator inductibil SOS

Lezarea sever a ADN, care interfer cu capacitatea sa de replicare, determin activarea genelor care
fac parte din reeaua de reglare SOS (fig. 124).
Activitatea reparatorie SOS este dependent de produsele de sintez a genelor rec A+ i lex A+.
Cele dou gene codific nu numai proteine reglatoare ale reparaiei ADN, ci au i alte funcii:
- inducia litic a unor fagi infecioi pentru E. coli;
- ntrzierea diviziunii celulare, care duce uneori la formarea filamentelor etc.
Proteina Rec A are un rol esenial n reparaia SOS. Ea indeplinete dou funcii:
funcia de proteaz n activitatea reglatoare a sistemului;
funcia de enzim de recombinare n reparaia postreplicativ.
Mutantele rec A- sunt defective pentru capacitatea de recombinare genetic n general i pentru
exprimarea sistemului inductibil SOS i, din aceast cauz sunt foarte sensibile la aciunea radiaiilor UV.
Substratul activitii proteolitice a proteinei Rec A este represorul fagului lambda. Consecina este
evoluia lizogen a cuplului E. coli-fag lambda i inducia proteinei Lex A n cursul reparaiei SOS.
Lezarea ADN intensific sinteza proteinei Rec A. Ea trebuie s dobndeasc activitate proteolitic,
pentru a cliva proteina Lex A i represorul .
Funcia de enzim de recombinare a proteinei Rec A, const n stimularea formrii perechilor
omologe ntre dou molecule de ADN, adic de a alinia precis fragmentele de ADN care au secvene de baze
complementare, pentru schimbul reciproc de baze prin recombinare.
Proteina Lex A (24 kDa), are funcia de represie prin legarea de operatorul a circa l4 gene: rec A, uvr
A, uvr B, uvr B, uvr D etc., precum i a propriei sale gene lex A. Astfel, proteina Lex A permite transcrierea
ARNm i sinteza proteinelor codificate de aceste gene, la nivele foarte sczute n celulele neinduse. In
celulele neinduse (normale), funcia SOS este represat.
Cnd celulele sunt expuse aciunii unor factori care produc leziuni importante ale ADN, ce nu pot fi
reparate de nivelul sczut al enzimelor de reparaie prezente constitutiv, n molecula de ADN dublu catenar
apar bree monocatenare, postreplicative. Moleculele de rec A prezente constitutiv n celul, se leag de ADN
monocatenar rmas intact n regiunea opus breelor. Se produce un semnal inductor care activeaz funcia
de proteaz a proteinei rec A i odat cu aceasta, rspunsul SOS. Proteina Rec A activat, cliveaz
represorul Lex A n dou subunitai inactive i genele controlate de acest represor uvr A, uvr B, uvr C uvr D
i lex A sunt deblocate i sunt transcrise cu o rat crescut, pentru sinteza proteinelor corespunztoare.
-
Fig. 124. Mecanismul rspunsului SOS. Leziunea moleculei de ADN determina conversia proteinei Rec A ntr-o
proteaz care cliveaz proteina Lex A. Proteina Lex A, n condiii normale represeaz activitaile genei rec A i ale
genelor de reparare uvr A i uvr B. Dupa inactivarea proteinei Lex A, aceste gene se activeaz (dupa Brock, 1988).
In absena proteinei Rec A, proteina Lex A nu mai este clivat i continuarea sintezei sale reface
rezerva celular. Proteina represor Lex A se leag de regiunea operator a genelor sistemului SOS i
blocheaz transcrierea lor, inclusiv a genei lex A. Celula revine astfel, la starea normal, neindus.
Repararea ruperilor dublu catenare. Ruperile dublei catene sunt produse de radiaia ionizant, de
ageni oxidani, de erorile de replicare i de anumite produse metabolice ale celulei. Dac aceste leziuni nu
sunt reparate, consecina este ruperea cromosomului n fragmente mai mici. Sunt 2 mecanisme de reparare a
ruperilor dublei catene:
- reunirea i legarea neomolog a capetelor ADN, cu pierderea uneia sau mai multor nucleotide la situsul
de legare. Mecanismul este comun n celulele mamiferelor;
- legarea omolog, activ n celulele diploide: mecanismele de recombinare transfer secvena de
nucleotide din dubla caten intact, la situsul rupturii dublei catene.
Semnificaia biologic a sistemelor de reparare. Existena mai multor mcanisme de rspuns la
leziunile moleculei de ADN este consecina aciunii agenilor fizici i chimici, care pot afecta structura i
funcia ADN.
Numrul leziunilor inactivatoare a unui genom, cu radiaii UV sau x crete odat cu complexitatea
genomului.
Procesele reparatorii sunt avantajoase ntr-un mediu n care acioneaz factori care induc mutaii cu o
frecven mare, pentru meninerea stabilitii genetice a organismului, dar pe de alt parte nu permit apariia
i exprimarea unor mutaii, eseniale pentru evoluia sistemelor vii.
Rata evoluiei unei specii ar putea fi cuplat cu capacitatea de discriminare a sistemelor de reparaie a
ADN i cu eficiena aciunii lor.
2. Elementele genetice transpozabile ale bacteriilor i transpoziia

Elementele genetice transpozabile * (EGT) sunt secvene specifice de ADN, mobile, care se pot
desprinde (exciza) din inseriile lor i se reintegreaz n alte situsuri ale aceluiai replicon sau n repliconi
diferii.
*
Elementele genetice transpozabile s-au identificat iniial la porumb (McClintock, l952), sub denumirea de elemente de
control. Ele controleaz activitatea (trecerea n poziia de start sau de stop), a genelor pigmentare a seminelor de
porumb. Descoperirea a venit prea devreme, ideile au fost considerate erezii n raport cu dogma dominant i nu au fost
luate n consideraie. Interesul pentru EGT a fost renoit odat cu evidenierea lor n structura genomului bacterian. EGT
se gsesc la organisme foarte diferite ca poziie sistematic (bacterii, levuri, porumb, Drosophyla) i probabil au o
rspndire universal n lumea vie, iar la bacterii par a fi ubicvitare. S-au descris la E. coli, Citrobacter, Salmonella,
Shigella, Pseudomonas, Klebsiella, Rhizobium, Staphylococcus, Haemophilus, Bacillus.
Termenul de transpoziie (sau translocaie) semnific schimbul unui secvene de ADN ntre repliconi
diferii sau ntre regiuni neomologe ale aceleiai molecule de ADN. Fenomenul transpoziiei se
materializeaz prin apariia unei secvene de ADN cu o lungime definit, ntr-o localizare genomic nou, n
care anterior nu a fost detectat. Caracterul mobil al EGT este reflectat n diferitele denumiri propuse: gene
cltoare, elemente mobile, gene care sar, vehicule genetice autopropulsate etc. S-au denumit gene egoiste,
deoarece funcia unora dintre ele este numai aceea de a se replica, fr s codifice o protein detectabil.
Caracteristica general a EGT este c toate au capacitatea de a transpoza, adic de a se insera la
diferite situsuri, fr omologie genetic, pe acelai sau pe un alt replicon.
Se cunosc 4 clase de EGT:
a) secvenele de inserie (SI) i transpozonii simpli
b) transpozonii compleci
c) bacteriofagii transpozani (fagii i Mu)
d) transpozonii conjugativi.
Secvenele de inserie (SI) i transpozonii (Tn) nu au existena autonom, ci se gsesc numai n stare
integrat n structura unui replicon, ca segmente lineare de ADN, cu extremiti bine definite, n timp ce fagii
prezint o faza liber, extracelular.
Nomenclatur. Este o adevrat explozie n ceea ce privete nr diferitelor EGT izolate i
caracterizate prin secvena Nt. Pn n 89 erau analizate numai 50 SI, iar n 98, nr lor a depit 500. S-au
gsit SI la peste 240 specii de insecte, la fungi, mamifere, peti i plante.
SI sunt definite imprecis ca segmente criptice mici de ADN(<2,5 kbp), cu organizare genetic simpl
i capabile s se insere la situsuri multiple ntr-o molecul int.
Au fost excluse retravir, retrotranspozonii i retropozonii, Tn cojugativi care folosesc un mecanism
de tipul fagului pt translocaie i elemente ca fagul Mu, Tn7 i Tn 554 care sunt mari i relativ compleci.
S-au folosit cel puin 2 sist de nomenclatur a SI:
- cel iniiat de Lederberg n 78 atribuie un singur numr unei SI (de ex. IS 1). Sistemul nu include
suficient informaie i este insuficient, odat cu creterea nr. de structuri genetice cunoscute.
- al II-lea sistem aduce informaie suplim, privind originea elementului pt c include iniialele speciei
bacteriene de origine (de ex., IS Rm 1) pt Rhiz. meliloti.
Secvenele de inserie
Secvenele de inserie (SI) sunt cele mai simple elemente transpozabile descrise la bacterii. Ele conin
circa l000 bp, dei unele sunt mai mici (IS 1 conine 769 bp) sau mai mari (l53l bp pentru IS 5o). Secvenele de
inserie nu conin nici o gen cunoscut i nu au nici o alt funcie n afar de cea de replicare (fig. 125).
Fig. 125. a. Reprezentarea schematic a secvenei de inserie SI 1, care conine gena enzimei transpozaz,
determinanta pentru mobilitatea ei, flancat la cele dou extremitai de secvenele repetate invers. b. Transpozomul
Tn1681, cu gena codificatoare a toxinei termostabile de E. coli, ncadrat de SI1.
SI sunt mici i compacte, alctuite dintr-o regiune central, codificatoare pentru funcia de
transpoziie, mediat de transpozaz (enzima care catalizeaz excizia acestor secvene din situsul de inserie).
Regiunea central este flancat la ambele extremiti, de secvene terminale mai scurte (de 10-40 bp), repetate
n ordine direct, (secvene repetate n aceiai ordine la extremitile unui segment de ADN, pe aceiai caten)
sau n ordine inversat (SRI* - secvena nucleotidelor n direcia 5---- 3 pe una din catene este aceiai pe
catena complementar, n aceiai direcie 5 --- 3, la captul opus).
3 G T C G C A G A G .. G T C G C A G A G 5
5 C A G C G T C T C C A G C G T C T C 3
Secvene terminale
Secvene nucleotidice
Secvene terminale
directe
interne
directe
3 C C C A G A C G T C T G G G 5
5 G G G T C T G . C A G A C C C 3
Secvene terminale
Secvene nucleotidice
Secvene terminale
inversate
interne
inversate
*
SRI pot fi divizate n 2 domenii funcionale:

- unul e aezat n SRI i e implicat n legarea transpozazei
- cellalt include 2-3 bp terminale, e implicat n clivare i n reaciile de transfer, care duc la transpoziia elementului.
Secvenele de inserie nu se replic autonom. O secven de inserie se desprinde din inseria sa i se

deplaseaz la un alt situs pe cromosom, n oricare din cele dou orientri posibile. Sunt elemente genetice
criptice, adic prezena lor nu este detectabil fenotipic, ci este dedus indirect, prin mutaiile pe care le
genereaz. Integrarea unei SI ntr-o gen, suprim funcia genei respective i rezult o mutaie. Dac gena
face parte dintr-un operon, integrarea SI n structura genetic a unui operon produce efecte polare severe.
Transpozonii
Transpozonii sunt segmente de ADN mobile (cu potenial de transpoziie), care includ n alctuirea
lor, o serie de gene structurale, delimitate la extremiti de SI, totdeauna repetate n ordine inversat.
Mrimea lor variaz ntre 2l00 9300 bp. Din punctul de vedere al structurii genetice, Tn simpli sunt
asemntori cu SI, dar se deosebesc de acestea prin faptul c n secvena central, poart gene a cror
expresie fenotipic este decelabil i confer proprieti noi celulei purttoare (de exemplu, gene de rezisten
la Km, Cm, Tc etc.). Genele structurale sunt flancate de secvene repetate lungi (l-2 kb), cel mai adesea n
ordine inversat. Secvenele inversate confer o stabilitate superioar structurii Tn.
Transpozonii compleci grupai n familia Tn1 au pn la 20 kb, dar au fost descrii alii mult mai
mari (80 kb). Se disting de transpozonii simpli prin aceea c att secvenele de transpoziie ct i secvenele
specifice sunt flancate de SRI scurte (40 pb).
Interesul pentru studiul transpozonilor s-a amplificat odat cu descoperirea faptului c genele de
rezisten la antibiotice pot s treac de la un replicon la altul. De exemplu, gena pentru -lactamaz este
foarte mobil, trecnd cu uurin de pe o plasmid pe alta, ceea ce explic rspndirea larg a rezistenei
bacteriene la antibioticele -lactamice.
La multe bacterii, patogenitatea i virulena sunt condiionate de gene care fac parte din structura
EGT: Bacillus, Bordetella, Brucella, Campylobacter, Clostridium, Escherichia, Haemophilus, Neisseria,
Vibrio, Yersinia, dar ]i la patogeni ai plantelor: Agrobacterium, Erwinia, Pseudomonas, la simbiontul
Rhizobium.
Alt domeniu de importan practic este bioremedierea: Tn poart gene care sunt pri ale cilor
degradative ori catabolice (Tn ce poart gene pentru utilizarea citratului).
Bacteriofagi transpozani
Fenomenul transpoziiei este cunoscut pentru fagul Mu-1 (Mutator), care infecteaz celulele de E.
coli K12. Capul este icozaedric, iar coada cu simetrie helical, este prevzut cu cele 6 fibre ale plcii bazale.
Molecula de ADN are 39 kbp, dar numai 37,2 kbp formeaz genomul, deoarece ambele capete ale moleculei
de ADN, conin secvene ale cromosomului bacterian
Dup infecie, Mu-l poate urma o cale lizogen sau calea litic.
Evenimentul comun pentru evoluia litic sau lizogen este inseria sa ca profag n cromosomul
celulei. Inseria se face aleatoriu, producnd mutaii cu o frecven foarte mare. Genomul fagic integrat
(profagul) se deplaseaz continuu prin transpoziie, catalizat de o transpozaz specific, n diferite situsuri
cromosomale, reintegrndu-se n oricare din cele dou orientri posibile. Genomul fagic se replic prin
transpoziii succesive. Situsul transpoziiei nu are specificitate, genomul fagic integrndu-se la diferite
situsuri ale cromosomului bacterian.
Fagul Mu-1 produce o varietate de rearanjri ale cromosomului bacterian. Mutaiile sunt rezultatul
efectului polar intens, ce const n inactivarea tuturor genelor operonului situate n aval fa de punctul de
inserie, n raport cu secvena promotor.
Particularitile ciclului de replicare a fagului Mu-1 au fost clarificate numai dup descoperirea EGT.
Pentru evoluia litic, genomul ADN Mu-1 este excizat sub aciunea unei nucleaze fagice. Excizia
este incorect: cu l0-l50 de baze la stnga fa de captul stng al genomului, iar la captul din dreapta, 5003000 de nucleotide i au originea n cromosomul gazdei. Se sintetizeaz proteine virale i se asambleaz
virioni progeni. Secvenele de nucleotide care flancheaz genomul fagic se pierd totdeauna prin clivare,
nainte de integrarea sa n cromosomul bacterian.
Fagul Mu-1 este considerat a fi un transpozon de tip special, de dimensiuni mari, ce codific nu
numai enzima de transpoziie (transpozaza), ci i toate proteinele necesare asamblrii i morfogenezei
capsidei.
Transpoziia
Transpoziia semnific excizia EGT din situsul sau de integrare ntr-un replicon i inseria ntr-un alt
situs al aceluiai sau al altui replicon. Integrarea EGT se realizeaz prin procese de recombinare nelegitim,
datorit absenei omologiei genetice cel puin pe o lungime considerat ca minim, ntre cele dou secvene ale
ADN recombinant. Recombinarea are loc independent de produsul genei rec A, mediatorul recombinrii
genetice ntre secvene omologe de baze.
Transpoziia este un fenomen rar, datorit concentraiei foarte mici de transpozaz n celul. De
exemplu, Tn1o codific sinteza unei singure molecule/celul/generaie. Transpoziia sa are loc, n medie, o dat
la l07 generaii celulare.
Fig. 126. Reprezentarea schematic a procesului de transpoziie. Secvena din molecula donor este reprezentat prin
linia dubl, iar molecula receptor, prin linie simpl.
Mecanismul molecular al transpoziiei este ipotetic. Transpozaza se sintetizeaz imediat dup replicarea
ADN. Transpoziia este asociat n timp, cu momentul sintezei transpozazei. Unele EGT (de exemplu, genomul
fagului lambda) se integreaz numai la situsuri cromosomale bine determinate, aa numitele zone calde ale
transpoziiei. Altele (de exemplu, IS1) se inser aproape la orice situs cromosmal, dei prefer anumite secvene.
Ca i enzimele de restricie, transpozonii recunosc secvene palindromice de 4-6 perechi de baze.
Transpozonii sunt excizai cu precizie la extremitile inseriei lor n replicon, deoarece transpozaza
recunoate ambele extremiti ale situsului de inserie. Moleculele de transpozaz leag ambele extremiti ale
transpozonului, precum i secvena de baze a repliconului receptor. Ambele catene ale moleculei acceptoare
sunt clivate decalat, dup mecanismul de aciune al enzimelor de restricie. Simultan se produce clivajul
monocatenar al extremitilor transpozonului, pe catenele opuse, astfel nct transpozonul are o caten liber la
fiecare capt. Dup legarea monocatenar a fiecrei extremiti a EGT la situsul receptor, fenomenul
transpoziiei poate urma una din urmtoarele dou ci:
a. Modelul transpoziiei conservative sau simple presupune c transpozaza produce al II-lea set de seciuni la
cele dou capete ale transpozonului. Rezultatul este transferul transpozonului intact la noul situs.
Continuitatea catenelor repliconului receptor este restabilit de ADN-ligaz. Discontinuitatea catenelor
repliconului nu mai este reparat i molecula este degradat de nucleaze. Transpoziia simpl implic
numai ruperea i reunirea catenelor repliconului receptor i deplasarea EGT la un nou situs;
Fig. 127. Modelul molecular al transpoziiei. A. Transpoziia conservativ (simpl). B. Transpoziia replicativ, cu
formarea unei structuri intermediare cointegrate. Unii transpozoni se separ din structura cointegrat, sub acuinea
rezolvazei, enzim care secioneaz i leag capetele celor doi repliconi. Alteori, repliconii fuzioneaz ntr-o structur
unic. Liniile groase ntre a si b delimiteaz transpozonul, n repliconul donor ; linia n zig-zag semnific secvenele
terminare repetate ; x, y = situsurile de clivare n cei doi repliconi. Alte amnunte, n text (dup Davis, 1990).
b. Modelul transpoziiei replicative presupune c n momentul transpoziiei, EGT este replicat: o copie a sa
este transpozat la situsul receptor, iar cea de a II-a rmne la situsul original al repliconului donor. Cea de
a II-a serie de seciuni a catenelor EGT, nu mai are loc, astfel nct cei doi repliconi fuzioneaz i formeaz
o structura cointegrat.
In procesul fuziunii, EGT este copiat integral i rezult dou copii. Ulterior, cei doi repliconi se
separ, dar fiecare poart cte o copie a EGT, sau rmn fuzionai ntr-o structur unic. Prin procesul
transpoziiei replicative a unui EGT dintr-o plasmid ntr-o alt plasmid, urmat de fuziunea celor doi repliconi,
se formeaz o plasmid mai mare, stabil, cu cte o copie a EGT la ambele puncte de jonciune.
Modelul transpoziiei replicative pare a fi cel mai probabil. Transpoziia nu const ntr-un schimb de
material genetic, ci n dobndirea unui EGT.
Dei transpoziia EGT este rezultatul unor procese de recombinare nelegitim, totui fenomenul are loc
ntre secvene cu un grad variabil de omologie a bazelor, ntre slab i moderat. Face excepie fagul , care se
inser cu specificitate nalt, la situsuri omologe, existente att n cromosomul de E. coli (att B), ct i n cel
fagic (attP).
La bacterii, cele mai multe EGT se deplaseaz (transpozeaz) foarte rar (odat la l05 l07 generaii
celulare) i de aceea se difereniaz greu de componenta imobil a cromosomului.
La levuri, la plante, la protistele eucariote, la Drosophyla i la procariote s-au gsit EGT, a cror
transpoziie se face dup un mecanism similar ciclului de multiplicare a retravirusurilor. Prima treapt a
transpoziiei este transcrierea EGT ntr-o copie de ARN, de peste 5000 de baze. Aceast copie codific sinteza
enzimei reverstranscriptaz, care catalizeaz sinteza unei copii de ADN dublu catenar, circular, pe matria de
ARN. ADN circular se integreaz ntr-un situs cromosomal, cu specificitate de secven a bazelor. Integrarea
ADN este catalizat de o transpozaz, codificat de copia de ARN. De aici deriv denumirea de
retrotranspozoni sau retropozoni pentru aceste EGT. Ele au, n special, importan teoretic, deoarece sugereaz
posibila origine i evoluie a retravirusurilor. Singura deosebire ntre retravirusuri i retropozoni pare s conste
n absena nveliului viral.
Consecinele transpoziiei
Procesele de transpoziie produc o multitudine de rearanjri genetice. Nu numai c deplaseaz diferite
gene de la un situs la altul, dar transpoziia produce diferite macroleziuni: mutaii, deleii, inversii etc. Situsurile
inseriei EGT sunt zone calde pentru astfel de modificri genetice. Inseria elementelor transpozabile perturb
invariabil integritatea genei n interiorul creia s-a fcut transpoziia i efectul este mutaia. Dac mutaia se
produce ntr-o gen proximal (n raport cu secvena operatoare) a operonului, ea exercit efecte polare intense
asupra genelor situate distal fa de gena mutant. Noul tip de mutaie s-a numit mutaie polar. Concluzia a
fost c mutaiile cu efect polar intens, rezult prin inseria unei secvene de ADN, la situsul mutaiei.
Inseria unui Tn ntr-un situs nou, prin efectele sale polare, produce frecvent o mutaie. Efectele polare
se produc pentru c EGT sunt, n general, entiti genetice de sine stttoare i adeseori semnific terminarea
transcrierii. De aceea, transcrierea operonului rareori depete situsul de inserie a EGT, n absena unui
promotor la captul terminal, care s reiniieze transcrierea dincolo de secvena EGT. Restul genelor operonului,
situate n aval de situsul de inserie, vor rmne netranscrise (Bennett, l998).
Mutaiile prin deleie survin ca urmare a exciziei incorecte a transpozonului, mpreun cu secvene
cromosomale.
Cea mai cunoscut mutaie datorat unei inversii a secvenei cromosomale este cea care determin
fenomenul variaiei de faz, descris la Salmonella. Flagelii conin proteina H1 sau H2, cu specificitate antigenic
distinct, niciodat ambele. Schimbrile compoziiei chimice, de la H 1 la H2 sau invers, se produc cu o frecven
de circa l la l000 diviziuni celulare, cu mult peste rata mutaiei spontane. Fenomenul se datoreaz inversiilor
cromosomale, al cror rezultat este exprimarea alternant a genei h, n cele dou orientri (h 1 sau h2). Cnd
segmentul de ADN codificator are orientare direct, se sintetizeaz proteina H 1, iar sinteza proteinei H2 este
represat. Dup inversiunea segmentului de ADN codificator, se sintetizeaz proteina H 2, iar sinteza proteinei Hl
este represat.
Transpozonii au rolul unor comutatori pentru genele adiacente situsului de inserie: n raport cu
situsul integrrii, ntr-o direcie se iniiaz transcrierea, iar n direcia opus, ori o inhib, ori produc terminarea
ei prematur.
Transpozonii pot avea consecine funcionale favorabile pentru celul, prin introducerea genelor noi.
Un alt efect al transpoziiei este fuziunea repliconilor. Un transpozon inserat ntr-o plasmid, va uura
integrarea ei ulterioar n cromosomul celulei, flancat fiind de dou copii ale transpozonului. Un exemplu n
acest sens, este generarea liniilor Hfr (High frequency of recombination) la E. coli, dup integrarea factorului F
n cromosom. Fuziunea repliconilor poate sa fie rezultatul transpoziiei sau al unui crossing-over ntre EGT cu
secvene omologe, existente n ambii repliconi.
Datorit existentei elementelor genetice transpozabile, genomul bacterian a dobndit potenialul unei
remarcabile plasticiti genetice.
Descoperirea plasmidelor a condus la ideia genomului bacterian colectiv, suprapus celui individual,
reprezentat de cromosom, decurgnd din caracterul transmisibil al acestora cu o frecven mare, de la o celul la
alta.
Anterior descoperirii EGT, se considera c mutaiile i recombinrile genetice omologe (legitime)
erau suficiente pentru a genera diversitatea lumii bacteriene n mediile naturale. Descoperirea lor a evideniat
faptul c prin mobilitatea foarte accentuat, EGT sunt promotorii recombinrilor nelegitime. Acestea se
produc cu o frecven mult mai mare dect recombinrile pe baza omologiei genetice, sporind astfel diversitatea
mecanismelor de control genetic al proceselor fiziologice i permind o mai eficient adaptare a celulei
bacteriene la condiiile variabile ale mediului de via.
Integronii sunt secvene de ADN ce conin determinani genetici ai unui sistem de recombinare cu
specificitate de situs. Ei recunosc, nglobeaz i astfel mediaz deplasarea unor scurte secvene mobile de ADN,
denumite casete genice (Recchia i Hall, l995). Cele mai multe casete genice cuprind o singur gen de
rezisten la antibiotice. Un integron conine o secven ce codific integraza. Integraza este o enzim ce
catalizeaz recombinarea cu specificitate de situs. Integronul conine o secven specific de ADN, la care
integraza poate funciona pentru integrarea casetelor genice i un promotor ce poate exprima caseta genic nou
integrat. Intr-un integron pot fi grupate casete genice multiple.
Frecvent, integronii fac parte din structura unor transpozoni, dar au o distribuie mai larg.
O caset genic poate exista n dou forme:
- ca o secven linear ntr-un integron
- ca o molecul circular de ADN, dublu catenar, ce poart l-2 gene de rezisten i un situs de recombinare
(att) de 59 de nucleotide, cu rolul de a integra caseta genic la situsul specific al unui replicon.
Secvenele 5 i 3 care flancheaz caseta genic linear, sunt bine conservate. Regiunea 5 conine gena
int, codificatoare a integrazei, o enzim de recombinare la situs specific, iar la captul 3 se gsete gena de
rezisten la un antibiotic (fig. 128).
Fig. 128. Structura genic a unui integron. Secvena att mediaz recombinarea la situs specific. Gena sul codific
rezistena la sulfonamide (dup Reccchia i colab., 1995).
Integrarea unei casete genice ntr-un replicon este reversibil. Caseta excizat se integreaz n alt
replicon. Prin intermediul casetelor genice, complementul genelor de rezisten poate fi mereu rearanjat i
deplasat de pe un replicon pe altul.
Integronii sunt sisteme de diseminare a genelor bacteriene, distincte de plasmide i de EGT.
Integronii se gsesc aproape exclusiv la bacteriile Gram negative i mediaz rezistena multipl la
antibiotice (MDR): aminoglicozide, peniciline, cefalosporine, trimetoprim, tetraciclin, eritromicin,
cloramfenicol.
3. Mecanisme de transfer al materialului genetic la bacterii

Transferul informaiei genetice la bacterii semnific trecerea unui fragment de ADN de la celula donor
la celula receptor.
Cele mai cunoscute mecanisme de transfer a informaiei genetice la bacterii sunt: transformarea
genetic, conjugarea, sexducia, transducia, transfecia i fuziunea de protoplati.
Transferul materialului genetic presupune traversarea barierelor celulare, de dou ori: o dat la ieirea
din celula donor i a II-a oar, la intrarea n celula receptor. Numai n cazul conjugrii, cele dou trepte ale
transferului sunt corelate direct. In cazul transformrii genetice, sau al proceselor de transfer de gene mediate de
fagi, eliberarea ADN din celula donor i ptrunderea sa n celula receptor sunt procese separate n timp.
Transferul de gene la bacterii are cteva particulariti distincte:
l. Lipsa fuziunii celulelor participante la schimbul genetic, cu excepia fuziunii de protoplati;
2. Contribuia cantitativ inegal a celor dou celule: celula receptoare particip cu ntregul genom, iar
fragmentul de ADN al celulei donoare este strict limitat ca mrime. Datorit acestui fapt, la sfritul
transferului, celula receptoare este parial i temporar diploid (merodiploid), pentru acea parte a genomului
su care este omolog fragmentului exogen, primit de la celula donoare.
3. Transferul este unidirecional: de la celula donoare, la cea receptoare i nu este corelat cu procesul diviziunii
celulare.
In cazul transformrii, conjugrii i fuziunii protoplatilor, se transfer gene cromosomale
sau/plasmidiale. Prin transducie i transfecie se transfer gene fagice, dar i gene bacteriene ncorporate n
genomul fagic.
Foarte adesea, dup transfer, ADN exogen este degradat de enzimele celulare de restricie. Dac ADN
exogen se circularizeaz repede, devine rezistent la aciunea enzimelor, iar dac se replic repede, cele dou
celule surori primesc cte o copie. Exist ns posibilitatea rar (l-2%), ca ADN exogen s fie ncorporat n
structura cromosomului receptor printr-un proces de recombinare genetic.
Transformarea genetic
Transformarea genetic este o modalitate de transfer a informaiei genetice de la bacterie donoare la una
receptoare, prin intermediul unui fragment de ADN (o fraciune a ADN total al celulei donoare), eliberat prin
mecanisme fizice (plasmoliz), prin extracie chimic sau pe cale enzimatic.
Procesul transformrii genetice s-a descris la Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp., Bacillus
subtilis, Neisseria sp., Rhizobium sp., Salmonella sp., Yersinia sp., Azotobacter sp. etc. i s-a demonstrat c are
loc att intraspecific ct i interspecfic i chiar ntre genuri diferite de bacterii.
Transformarea* propriu-zis este un eveniment rar i este rezultatul integrrii fragmentului de ADN
exogen, n genomul celulei receptoare prin procesul recombinrii i a exprimrii fenotipice a noilor
determinani genetici pe care i conine.
*
Fenomenul transformrii genetice a fost descoperit de Griffith (l928). El studia variabilitatea caracterelor de cultur la
pneumococ (Str. pneumoniae), o bacterie care se prezint sub forma unui diplococ, capsulat sau necapsulat. Pe baza
compoziiei chimice i a specificitii serologice a polizaharidelor capsulare, exist circa 80 de tipuri distincte. De exemplu
polizaharidele capsulare de tip II sunt polimeri de acid galacturonic, galactoz, N-acetil-glucozamin i fucoz, iar cele de
tip III sunt polimeri de glucoz i acid glucuronic. Sinteza acestor polizaharide este codificat de gene diferite. Celulele
capsulate de pneumococ sunt virulente, iar cele necapsulate sunt nevirulente (dup inocularea ntr-un organism sensibil nu
produc simptome de mbolnvire). Celulele capsulate cresc pe suprafaa unui mediu solidificat, sub forma unor colonii
netede (S, Smooth), iar cele necapsulate, produc colonii rugoase (R, Rough). Prin cultivarea tulpinilor capsulate i virulente
(de tip S) n prezena serului imun specific, se obin variante necapsulare, avirulente, care cresc sub forma coloniilor R.
Mutantele S - R apar cu o frecven mult superioar mutantelor R - S. Modificarea tipului de colonie se face totdeauna n
cadrul aceluiai tip biochimic de polizaharid, fr modificarea tipului serologic.
Griffith a observat c, uneori, dup inocularea intraperitoneal la oarece a unei cantiti mari de suspensie celular a
unei tulpini R, animalele mor. Din snge se izoleaz celule care, pe mediul solidificat cresc sub forma colonii lor S, adic
sunt celule capsulate. El a dedus c, de cele mai multe ori, celulele care formeaz colonii de tip R pstreaz o cantitate
mic de material polizaharidic, care se acumuleaz pe suprafaa unor celule, iniial necapsulate. Vor rezulta astfel celule
capsulate, virulente, ce determin moartea animalelor de experien.
Pentru a-i verifica ipoteza, Griffith a inoculat un numr mic de celule vii dintr-o tulpin R a tipului serologic II,
avirulente, n amestec cu o cantitate mare de celule ale tulpinii S de tip serologic III, omorte prin caldur. Inoculate
separat, nici una din cele dou tulpini bacteriene nu produce moartea animalelor. Amestecul celular produce infecia
mortal la oarece, iar din snge se izoleaz pneumococi vii de tip III. Aparent, aceast experien a confirmat ipoteza de
lucru a autorului: apariia pneumococilor capsulai i viruleni ar fi rezultatul transferului polizaharidului de pe suprafaa
celulelor capsulate omorte, pe suprafaa celulelor vii ale tulpinii R.
Experienele lui Griffith au fost reluate de Avery i colab. (l944). Ei au demonstrat c la baza procesului
de transformare genetic, st transferul unor determinani genetici, prin intermediul unui fragment de ADN, care
confer celulei receptoare, capacitatea de a codfica polizaharidele capsulare. Sinteza materialului capsular
determin apariia corelativ a celorlalte particulariti: tipul coloniei (S sau R), virulena. In acelai mod pot fi
transferai i ali determinani genetici: cei care determin rezistena la un antibiotic, sau care codific sinteza
unei enzime cu rol n metabolismul celular.
In experienele lui Griffith, deoarece mutanta R II de pneumococ, trece ntr-o mutant S III este evident
ca un fragment de ADN al mutantei S III a fost transferat i s-a exprimat n celulele mutantei R II, permind
sinteza materialului capsular de tip serologic III i chiar activarea sintezei materialului de tip II.
Cercetrile diferitelor variante serologice patogene de pneumococ au evideniat c virulena este o
expresie cantitativ a gradului de patogenitate. In timp ce patogenitatea este o caracteristic de specie, gradul de
virulen a bacteriilor patogene, poate s varieze de la avirulent pn la hipervirulent, trecnd prin trepte
intermediare.
Procesul de transformare genetic a fost studiat pentru reprezentanii mai multor genuri. Pentru ca
transformarea s aib loc, sunt necesare cteva condiii:
- ADN transformant trebuie s aib gr. mol. ntre l-20 kDa;
- fragmentul de ADN trebuie s fie dublu catenar. ADN monocatenar nu este ncorporat n celul sau
ncorporarea este ineficient;
- numrul celulelor transformate crete odat cu concentraia ADN n mediu, pn la nivelul de saturare (l20 g ADN/ml cultur bacterian competent, ceea ce corespunde la l00-200 fragmente de molecule de
ADN/celul);
- s existe un grad de omologie genetic ntre ADN transformant i o anumit secven a cromosomului
celulei receptoare. Astfel se explic frecven superioar a recombinrilor genetice pentru transformrile
intraspecifice i scderea frecvenei lor, pe msur ce se accentueaz diferenele de structur genetic;
- acceptarea ADN i transformarea sunt condiionate de o anumit stare fiziologic a celulei receptoare,
denumit stare de competen, cu o durat variabil.
Produsele genice necesare transformrii sunt clasificate n dou grupe;
a) proteinele genelor timpurii, cu rolul de a determina starea de competen;
b) proteinele trzii necesare pentru legarea, prelucrarea ADN i asamblarea mecanismelor de translocaie a
ADN.
Competena definete o stare particular de permeabilitate crescut a structurilor suprafeei celulare,
care permite legarea i nglobarea unui fragment de ADN exogen, ntr-o form rezistent la aciunea DN-azei.
Starea de competen limiteaz foarte mult frecvena procesului de transformare, pentru c, dei ADN
este adeseori disponibil (din celulele lizate ntr-o cultur), transformarea este condiionat de starea fiziologic a
celulelor acceptoare.
Starea de competen poate fi natural (fiziologic) sau artificial (indus). Competena natural, la
unele bacterii, este permanent, iar la altele este temporar.
La bacteriile Gram pozitive (B. subtilis, Str. pneumoniae), competena natural este temporar i este
indus de sinteza unor factori difuzibili, denumii factori de competen, a cror concentraie este proporional
cu densitatea celular(quorum sensing* ).
*
Quorum sensing este definit ca fenomenul de reglare a expresiei genice dependent de densitatea celular. Bacteriile i
coordoneaz reglarea expresiei genice, producnd molecule-semnal difuzibile: aminoacizi, AMPc, oligopeptide, dipeptide
ciclice, derivai ai acizilor grai etc. Acestea se acumuleaz extracelular i interacioneaz specific cu o molecul
receptoare, pentru a induce modificri fiziologice, nelegate de metabolismul propriu. Moleculele semnal induc un rspuns
dup ce au atins o concentraie limit.
Competena este o stare fiziologic temporar i reversibil, se instaleaz la sfritul fazei de cretere
exponenial i este asociat cu scderea ratei sintezei ADN i cu sinteza unor proteine specifice localizate n
membrana citoplasmatic, care determin o stare fiziologic particular a structurilor suprafeei celulare.
In faza de competen, numai l0% din celulele unei populaii devin competente pentru transformare,
probabil ca o consecin a unei reglri individuale la nivel celular.
Alteori, starea de competena depinde de stri particulare ale nveliului celular, consecin a sintezei
unor proteine de membran cu rol de receptori pentru ADN, i a unor autolizine. S-a descris la Str. pneumoniae,
B. subtilis, H. influenzae, A. vinelandii, Neisseria sp., Pseudomonas sp., Rhizobium sp., Xanthomonas sp.
Bacteriile Gram negative nu sintetizeaz factori de competen, starea fiind reglat prin mecanisme
metabolice interne i este indus n condiii de deficit nutriional, asociate cu ncetinirea sau limitarea creterii.
Toate celulele unei culturi devin competente i starea este meninut n medii care limiteaz creterea.
La Neisseria sp. i la ali gonococi, starea de competen este constitutiv i permanent, nefiind
dependent de stadiul culturii i nici de sinteza factorilor de competen.
Competena artificial este indus de :
- concentraiile relativ mari de CaCl2 sau cloruri de Mg, Ba, Rb, Sr i amestecurile lor;
- tratamentul celulelor cu ageni chelatori (EDTA) ;
- tratamentul cu enzime (muramidaze sau peptidaze), ce duc la formarea sferoplatilor sau protoplatilor ;
- fuziunea protoplatilor cu lisosomi purttori de ADN;
- expunerea celulelor la ocuri electrice (electroporare);
- bombardarea celuleor cu particule mici ce transport ADN n citoplasm (transformarea biolostic).
Celulele de B. subtilis devin competente n faza staionar, n prezena ionilor de Mg 2+ i Ca2+. De
obicei, se folosesc combinaii ionice de CaCl 2 (30 mM) i MgCl2 (26 mM).
O metod eficient de inducere a strii de competen, este electroporarea, ce const n permeabilizarea
nveliurilor celulare i uurarea nglobrii ADN exogen, sub aciunea stimulilor electrici.
Mecanismul molecular al transformrii genetice
Mecanismul molecular al transformrii genetice a fost descris la B. subtilis, Streptococcus sp.,
Haemophilus sp. Transformarea genetic este produs numai de moleculele de ADN dublu catenare, lineare, n
timp ce ADN monocatenar, ARN, hibrizii ADN-ARN sau ADN circular nchis, nu sunt legate pe suprafaa
celulelor competente. Procesul transformrii poate fi mprit n trei etape:
- legarea moleculei de ADN pe suprafaa celulei i fragmentarea ei;
- nglobarea (transportul ADN prin inveliurile celulei);
- stabilizarea ADN transformant, fie ca replicon autonom, fie prin recombinare cu un replicon rezident.
Mecanismul transformrii este asemntor la bacteriile Gram pozitive i la cele Gram negative, dar
exist diferene ale etapelor de legare i nglobare, datorate diferenelor structurale majore ale peretelui celular.
Intr-o prim etap, fragmentul de ADN exogen este adsorbit reversibil, consecin a unei interaciuni
laxe. Peretele celulelor Gram pozitive are o sarcin net pozitiv, iar ADN are o sarcin electric negativ. Din
aceast cauz, adsorbia ADN este rapid. Faza adsorbiei reversibile dureaz 4-5 secunde. Molecula de ADN
poate fi ndeprtat prin splare rapid.
Faza de legare strns sau de adsorbie ireversibil, corespunde ancorrii ferme a moleculei de ADN,
la cteva situsuri din cele circa 50 ale celulei receptoare.
La B. subtilis, n legarea ADN exogen este implicat o protein complex de 75 kD, asociat
membranei, sintetizat sub aciunea factorului de competen. Proteina de legare este format din dou
polipeptide echivalente ca mrime, una dintre ele avnd activitate endonucleazic. Deoarece are rol decisiv n
transportul ADN exogen n celul a fost denumit translocaz. Ambele faze ale legrii sunt nespecifice,
deoarece celulele de B. subtilis pot s lege fragmente de ADN de provenien strin (de exemplu, ADN de
mamifer).
Transportul ADN prin nveliul celular (nglobarea) este puin neles. Ptrunderea ADN exogen n
celula receptoare se face sub form monocatenar. Studiile experimentale cu molecule marcate radioactiv au
evideniat o njumtire a radioactivitii n interiorul celulei, ceea ce sugereaz c transportul ADN se face sub
form monocatenar. {n timpul transportului, catena complementar este degradat complet. Inglobarea
implic incizia unei catene a ADN exogen, la sau lng situsurile de legare la membran, n prezena ionilor
bivaleni (Mg2+, Ca2+) i este catalizat de nucleaza din complexul de 75 kD. Urmeaz incizii succesive
monocatenare, astfel nct una dintre catenele de ADN exogen este degradat complet.
Fig. 129. Modelul molecular al transformrii genice la bacteriile Gram pozitive. Canalul transmembranar este probabil
format de proteinele de competen. n timpul trecerii prin membrana citoplasmatic, o catena a ADN dublu catenar exogen
este degradat de o endonucleaz asociat membranei (dup Dreiseikelmann, 1994).
Inglobarea ADN monocatenar n celula receptoare pare a fi rezultatul aciunii endonucleazei.

Transportul se face, probabil, printr-un canal membranar, format prin modificarea conformaiei spaiale a
nucleazei. La B. subtilis, nglobarea ADN necesit fora proton-motrice i nu hidroliza ATP.
ADN monocatenar este protejat de aciunea nucleazelor n timpul transportului, prin formarea unui
complex cu o protein specific de legare, sintetizat n intervalul de competen.
La bacteriile Gram negative (Haemophilus sp., N. gonorrhoeae), ADN exogen este legat i transportat
n transformasomi (vezicule membranare de transport) cu diametrul de 20 nm, alctuii n special, din
componentele membranei externe. In transformasom, ADN este protejat de aciunea DN-azei exogene i de
endonucleazele celulare de restricie.
La ieirea din vezicula de transport, o caten a ADN exogen este degradat complet.
ADN nglobat de celulele competente, poate fi izolat sub forma fragmentelor monocatenare de circa l0
kb.
Moleculele suprahelicale i chiar unele relaxate nu sunt transportate n citoplasma. Structura spiralizat
a plasmidelor sau absena capetelor libere mpiedic translocaia ADN din transformasom n citoplasm. Astfel
se explic efociena sczut a transformrii, cu ADN plasmidial.
Stabilizarea ADN monocatenar transformant, este consecina unui proces de integrare prin
recombinare. ADN monocatenar este protejat de aciunea nucleazelor, de o protein specific sintetizat n faza
de competen, proteina SSB (Single Strand Binding).
Integrarea ADN monocatenar exogen n cromosomul celulei receptoare, este catalizat de enzime i
este dependent de proteina Rec A* (produsul genei rec A), printr-un proces de recombinare. Rezultatul final al
recombinrii, este o molecula hibrid (heteroduplex). Fragmentul de ADN monocatenar exogen se aliniaz pe
baza complementaritii bazelor, cu o regiune omolog a cromosomului. Se formeaz un complex ADN exogenADN receptor. Recombinarea propriu-zis are loc prin deplasarea fizic i nlocuirea uneia dintre catenele ADN
receptor. Deplasarea catenei este nsoit concomitent, de degradarea ei i a altor molecule de ADN exogen
transformant. Dac ADN exogen nu are omologie cu ADN cromosomal, ADN exogen este degradat complet.
*
Activitatea enzimatic unic a proteinei Rec A const n mperecherea moleculelor omologe de ADN, att monocatenare ct
i dublu catenare i favorizarea schimbului reciproc al catenelor de ADN ntre moleculele omologe. Schimbul genetic
implic, suplimentar, activitatea altor enzime: ADN-helicaze, DN-aze, ATP-aze, topoizomeraze, ADN-polimeraza i ADNligaza.
Proteina Rec A este o ATP-az, dependent de ADN. In vitro, proteina Rec A favorizeaz formarea perechilor omologe
ntre moleculele de ADN adecvate. Dac nu sunt constrngeri topologice care s mpiedice formarea heteroduplexului, va
rezulta o legare plectonemic a moleculelor (catenele sunt legate ntr-un ADN dublu catenar). Dac sunt constrngeri
topologice (cele 2 catene pot fi circulare) se vor forma perechi paranemice (se formeaz perechi de baze, dar catenele nu
sunt topologic mperecheate).
Pentru toate reaciile omologe de mperechere, catalizate de Rec A, este necesar ADN monocatenar. Pentru complexele
paranemice, ADN mc este esenial. Necesitatea ADN mc n procesele de mperechere dependente de proteina Rec A, explic
necesitatea aciunii helicazelor i nucleazelor n recombinarea genetic. Helicazele produc ADN mc prin despiralizarea
ADN dc. Nucleazele produc ADN mc prin degradarea unei catene a ADN dc.
Reacia de schimb ntre ADN cromosomal i ADN exogen este condiionat de proteina Rec A.
Aciunea proteinei Rec A const n alinierea celor dou molecule de ADN, pe baza complementaritii
nucleotidelor, ntr-o reacie dependent de ATP. Alinierea este urmat imediat de formarea buclei D, n care
ADN monocatenar invadeaz ADN dublu catenar rezident. Recombinarea parcurge urmtoarele trei etape:
l. Polimerizarea proteinei Rec A pe molecula de ADN monocatenar. In vitro, proteina Rec A i ADN
monocatenar formeaz un filament nucleoproteic evideniat la microscopul electronic.
2. Sinapsa. In prezena ATP, nucleoproteina formeaz un complex cu ADN cromosomal. Interaciunea iniial
nu se produce ntre secvenele de bazele omologe. Cele dou molecule de ADN se deplaseaz una fa de alta,
astfel nct secvenele omologe vin n contact direct i se aliniaz pe baza omologiei nucleotidelor.
3. Schimbul postsinaptic. Catenele omologe, aliniate dar nemperecheate, se leag instabil. Proteina Rec A
deplaseaz o caten a moleculei dublu catenare i catalizeaz integrarea catenei exogene, cu consum de energie,
furnizat prin hidroliza ATP. Proteina Rec A are aciune de helicaz i produce despiralizarea ADN dublu
catenar. Integrarea ADN este polarizat n direcia 5 ---- 3.
Fig. 130. Etapele procesului de recombinare a secvenelor omologe, dependent de proteina Rec A.
La Str. pneumoniae, rolul proteinei Rec A pare a fi ndeplinit de SSB. Catena nlocuit este secionat.
Nucleazele secioneaz capetele libere ale ADN exogen i endogen, iar ligaza repar inciziile. Se formeaz un
heteroduplex, n care unele baze sunt mperecheate greit. Rezultatul recombinrii, adic meninerea sau
eliminarea ADN exogen n genomul celulelor progene, depinde de repararea mperecherilor greite.
Unii markeri transform celulele cu o eficien foarte nalt. Imperecherile de baze greite ori sunt
corectate eficient i aduse la nivelul secvenei de baze a ADN exogen, ori corectarea este nesemnificativ.
Pentru markerii care au eficien transformant sczut, mecanismele de reparare a bazelor mperecheate greit
sunt foarte active. Sunt ndeprtate bazele ADN exogen i celula pstreaz fenotipul conferit de ADN propriu.
Dovada pentru validitatea acestei concluzii a fost adus de izolarea mutantelor defective pentru repararea
bazelor mperecheate greit. La aceste mutante, toi markerii de transformare au eficiena foarte nalt.
Fenomenul recombinrii este rar, avnd loc n circa l% din totalul evenimentelor de nglobare a ADN
exogen. De cele mai multe ori, ADN exogen nu se poate recombina datorit fenomenului de restricie, un
adevrat mecanism de imunitate molecular, prin care ADN strin este recunoscut i eliminat.
Exist dou tipuri de ADN, care dup nglobarea n celula competent, nu necesit integrarea: ADN
plasmidial i fagic. Neavnd omologie a bazelor fa de ADN cromosomal, nu se integreaz, ci rmn ca
repliconi n stare fizic autonom.
Studiile de transformare s-au fcut cu ADN cromosomal, pentru markerii de prototrofie i cu ADN
plasmidial pentru markerii de rezisten la antibiotice. Se nregistreaz apariia coloniilor prototrofe i respectiv
a celor rezistente la antibiotice, pe mediile adecvate. Transformarea cu ADN fagic se nregistreaz sub forma
plajelor de liz pe o pnz de celule sensibile i nu depinde de prezena secvenelor de baze omologe. Este o
transformare independent de capacitatea celulei de a face recombinare omolog.
Transformarea cu ADN plasmidial sau fagic are loc cu o frecven foarte mic i necesit cooperarea
unui mare numr de copii moleculare, echivalent la circa l0 000 echivaleni ai genomului fagic i l000-l0 000
molecule de ADN plasmidial, pentru un eveniment de transformare.
Dimensiunea medie a ADN integrat n celulele de B. subtilis s-a estimat la 8-l0 kb. Fiecare celul poate
integra l0 molecule de 8-l0 kb fiecare, ceea ce coresunde la circa l00 de gene de dimensiuni medii.
Transformarea genetic, descoperit n laborator, este un fenomen care se desfoar cu mare
probabilitate i n condiii naturale, n mediile n care se realizeaz populaii bacteriene foarte dense i unde au
loc procese de liz celular, prin care se elibereaz fragmente de ADN: liza fiziologic, liza fagic sau sub
aciunea substanelor antibiotice. Fragmentele de ADN sunt preluate de alte celule prin mecanismul
transformrii, asigurnd o variabilitate genetic cu o frecven semnificativ.
Funciile nglobrii ADN :
- variaia proprietilor antigenice (de exemplu, ale pilinei) este o strategie pentru invazia bacteriilor patogene;
- protecia celulelor fa de fagi;
- nglobarea ADN ca o cale de dobndire a nutrienilor. Produsele rezultate din degradarea ADN heterolog
rmn disponibile metabolismului celular i sunt folosite ca precursori ai sintezei ADN sau ca surs de C,
N i P;
- repararea ADN: ADN exogen homolog ar putea fi folosit pentru repararea prin recombinare, a leziunilor
ADN cromosomal al receptorului, induse de stresul genotoxic. Ipoteza presupune implicit, c celulele
competente supravieuiesc mai bine dect cele necompetente.
Conjugarea bacterian
Conjugarea este o modalitate de transfer de material genetic de la o celul donoare, la una receptoare,
prin intermediul unei legturi celulare directe. Procesul este condiionat de existena, n celula donoare, a unei
plasmide cu funcie de conjugon (transferon sau plasmid conjugativ), care trebuie s codifice structurile
necesare realizrii contactului celular, iar pe de alt parte, s pregteasc transferul n celula receptoare, adic s
fie o plasmid mobilizabil. Absena uneia sau a ambelor funcii, semnific existena plasmidelor neconjugative
i/sau nemobilizabile.
Plasmidele conjugative sau plasmide de sex sunt factorii F, la care se adaug unele plasmide R i unele
plasmide Col.
Fenomenul conjugrii bacteriene a fost descoperit de Lederberg i Tatum (l944). Ei au remarcat c
tulpinile dublu auxotrofe complementare de E. coli K12, dup cultivarea n amestec n mediu nutritiv lichid,
genereaz celule prototrofex, care cresc pe un mediu solidificat minimal i produc colonii.
*
Tulpina de E. coli K12 este prototrof, adic face sinteza tuturor constituienilor chimici, ceea ce i permite s creasc i
s se multiplice pe medii minimale, care nu conin factori de cretere (vitamine, aminoacizi). Se mai numesc i tulpini de
tip slbatic, deoarece, din punct de vedere metabolic corespund celor existente n natur.
De la tulpinile prototrofe, sub aciunea mutagen a radiaiilor UV, se obin mutante nutriionale,
denumite auxotrofe (auxein, grec = strin), care au drept caracter marcant, incapacitatea de a face sinteza uneia
sau mai multor substane necesare (eseniale). Prin urmare, substana ce nu poate fi sintetizat, trebuie adugat
mediului de baz, ca o condiie obligatorie pentru ca bacteria respectiv s se poat dezvolta. Substanele
adugate pentru a suplini incapacitile de sintez se numesc factori de cretere.
Lederberg i Tatum au utilizat n experienele lor, tulpini mutante dublu auxotrofe i triplu auxotrofe, cu
incapacitatea de a sintetiza treonina, leucina, tiamina, biotina, fenil-alanina i cisteina. Aceste incapaciti de
sintez au fost luate ca markeri genetici pentru analiza ulterioar.
In expriena crucial, autorii au urmrit comportarea a dou tulpini mutante A i B triplu auxotrofe,
dar selecionate astfel nct cele trei incapaciti de sintez ale tulpinii A s fie complementate de tulpina B i
invers (sunt tulpini auxotrofe complementare) (fig. 131).
Tulpina A
thr+ , leu+, thi+

bio-, phe-, cis-
Tulpina B
thr--, leu-, thibio+, phe+, cis+
Cultivate izolat, pe mediul minimal, cele dou tulpini bacteriene nu cresc (nu formeaz colonii). In
experiena propriu-zis de conjugare, cele dou tulpini bacteriene (cte lo 8 celule din fiecare), au fost puse n
contact pentru un interval, n mediul lichid i ulterior au fost nsmnate pe mediul minimal solidificat. Dup
24 de ore se nregistreaz apariia coloniilor prototrofe. In experiena de control, cultivarea tulpinilor A i B,
separate, pe mediul minimal, nu genereaz apariia coloniilor.
Toate coloniile crescute pe mediul minimal, din punct de vedere genetic sunt prototrofe: thr +, leu+, thi+,
+
bio , phe+, cis+, ca i cum cele dou tulpini auxotrofe au fcut schimb de material genetic.
Fig. 131. Reprezentarea schematic a experimentului iniial al lui Lederberg, care a condus la descoperirea procesului
de conjugare.
Pentru a explica originea celulelor prototrofe s-a emis ipoteza retromutaiei. Retromutaiile n
experiene de acest tip sunt fenomene rare: se produc cu o frecven de l/l0 -7 celule/24 de ore pentru un singur
caracter. Pentru trei caractere, rata statistic a producerii retromutaiei, este de l/l0 -21 celule/24 de ore, practic
imposibil datorit caracterului triplu auxotrof al mutantelor.
Ipoteza reversiei la prototrofie prin transformare genetic, a fost eliminat prin experiena cultivrii
celor dou tulpini triplu auxotrofe, ntr-un tub n forma literei U. Cele dou brae ale tubului sunt separate
printr-o membran poroas, permeabil pentru moleculele mediului de cretere, dar care nu permite trecerea
celulelor dintr-un bra n cellalt al tubului. Atta timp ct celulele celor dou tulpini sunt fizic separate, reversia
la prototrofie nu se realizeaz. Singura explicaie pentru geneza mutantelor prototrofe, n experiena evocat,
rmnea posibilitatea unui contact celular direct, argumentat i de imagini la microscopul electronic, care
sugereaz acest fapt.
Determinismul genetic al procesului de conjugare
Conjugarea este condiionat de prezena n celula donor, a plasmidei F, care conine determinanii
genetici tra (circa 28 de gene) i secvenele de origine a transferului - ori T. Alte gene codific sinteza pilinei,
sinteza moleculelor de recunoatere ntre celula donoare i receptoare, replicarea plasmidei. Cel puin alte 11
gene sunt necesare pentru asamblarea pilului funcional.
Factorul F prezint un grad important de omologie genetic cu cromosomul bacterian, n special pentru
genele tra. Astfel s-a emis ipoteza c la origine, genele factorului F ar fi fost cromosomale, dar s-au desprins i
au devenit autonome.
In funcie de prezena i de raportul plasmidei F cu cromosomul, exist patru tipuri de celule, care se
comport diferit n procesul de conjugare:
- celulele F- sunt acelea care nu au plasmid F. In procesul de conjugare, ele sunt receptoare de material
genetic. Sunt echivalenii genetici ai organismelor de sex feminin;
- celulele F+ posed plasmida de sex n stare fizic autonom. In procesul conjugrii, ele sunt donoare de
material genetic. Sunt echivalenii genetici ai organismelor de sex masculin;
- celulele Hfr (High frequency of recombination) prezint plasmida F integrat n structura cromosomului.
Aceste celule au capacitatea de a realiza cupluri de transfer, urmat de recombinare genetic, cu o mare
frecven. Fiziologic sunt considerate a fi celule supermascul, donoare de material genetic;
- celulele F conin un factor F modificat prin procesul de recombinare cu cromosomul. Factorul F are
proprieti episomale (se integreaz, reversibil, prin recombinare cu cromosomul). Dup excizia incorect,
factorul F se desprinde mpreun cu un mic fragment de ADN cromosomal i devine factorul F. In
procesul de conjugare, celulele F se comport ca i celulele F +.
Etapele proceslui de conjugare
Conjugarea bacterian este un proces foarte specific prin care ADN este transferat de la bacteria
donoare la cea receptoare printr-un complex de proteine i organite care formeaz aparatul de conjugare. O
condiie important pentru transferul conjugativ este asocierea intim a suprafeelor celor dou celule.
Iniierea procesului de conjugare este condiionat de prezena pililor, structuri care se evideniaz dup
marcajul cu fagii care recunosc receptori piliari: la extremitatea liber a pililor se gsesc receptori pentru fagii
filamentoi, iar pe suprafaa pilului, pe toat lungimea sa se leag fagii ARN masculi, (de exemplu, MS 2).
Flagelii sunt structuri mai lungi i ondulate, iar fimbriile nu au receptori pentru fagi.
Dup amestecul populaiilor de celule conjugante, n proporii corespunztoare, ntre celule se produc
contactele (coliziunile) ntmpltoare, urmate de formarea unor cupluri specifice de perechi, care la nceput sunt
instabile, adic se pot dispersa printr-o agitaie uoar.
Cuplurile instabile se formeaz prin legarea extremitii libere a pilului de o suprafa receptoare a
celulei F-. Faza de legare instabil este urmat uneori, dup cteva secunde, de faza de legare stabil. Cele dou
celule sunt aduse n contact direct. Aceast faz corespunde formrii perechilor eficiente. Asocierea celor dou
celule este mult mai rezistent la aciunea forelor de dispersie. In aceast etap are loc transferul propriu-zis al
materialului genetic, probabil prin formarea unui canal de conjugare. Cuplurile de transfer eficient, se formeaz
la circa l5 minute, de la amestecul celulelor n proporii echivalente.
Rolul pililor n procesul de conjugare
-
Rolul pililor n procesul de conjugare este argumentat de mai multe fapte de observaie:
cultivarea bacteriilor n condiii de mediu, n care numrul pililor scade foarte mult, diminu corespnztor
frecvena proceselor de conjugare;
pilii sunt prezeni numai la celulele care conin o plasmid cu funcii conjugative;
ndeprtarea pililor prin agitare mecanic, este nsoit de incapacitatea formrii cuplurilor de conjugare,
pn cnd pilii se refac;
blocarea suprafeelor receptoare ale pililor cu fagi ARN masculi sau a extremitii libere cu fagi ARN
filamentoi, diminu sau anuleaz capacitatea de formare a cuplurilor de conjugare;
pilul este un cilindru de 20 m lungime, cu diametrul extern de 8 nm, iar cel intern de 2-2,5 nm, suficient
pentru trecerea ADN monocatenar. Aranjarea moleculelor de pilin n structura pilului, este similar cu
aceea a capsomerelor fagilor filamentoi;
la microscopul cu contrast de faz, se observ cupluri de celule care se deplaseaz sincron, separate de o
distan fix;
la microscopul electronic cu baleiaj se observ structuri care leag celulele cuplului.
Pentru rolul pilului n transferul de material genetic pledeaz rezultatele experienelor de conjugare
ntrerupt. Dac, dup formarea cuplului, suspensia celular este agitat i pilul este rupt, lungimea
fragmentului de ADN care a trecut n celula receptoare este direct proporional cu durata existenei pililor.
Prezena ADN n lumenul pilului nu s-a demonstrat cu certitudine.
A II-a ipotez consider c pilii ar avea un rol esenial n faza iniial a procesului de conjugare, aceea a
formrii cuplurilor. Pilul ar avea rolul unui crlig de agare a celulei receptoare, dup care ar urma retracia
sa n celula donoare, printr-un proces de dezasamblare la baz. Exist dovezi c interaciunea final ntre
celulele cuplului este un canal de conjugare, asamblat de proteinele celulei donoare.
Studiul electrono-optic al unor celule Gram negative asociate tecii cianobacteriilor, a evideniat un
canal intercelular, delimitat de membrana citoplasmatic i de peretele celular (fig. 132). Lumenul canalului are
un coninut de aceiai textur cu a materialului nuclear.
Fig. 132. Imaginea electrono-optic a unui posibil canal de conjugare la bacteriile Gram pozitive. Coninutul
canalului este asemntor nucleoplasmei (original).
Transferul ADN plasmidial n cuplul F+ x FPlasmidele conjugative pot s transfere o copie a lor, de la celula donoare la celula receptoare.
Transferul plasmidei F se realizeaz cu o frecven mare. De exemplu, dac o singur celul de E. coli F+ se
adaug la o cultur de celule F - , aflate n faza de cretere, dup l5-20 de generaii, o mare proporie a celulelor
conine factorul F, ca urmare a transferului unei copii a plasmidei de la celula F + la celula F-, fr ca factorul F
s fie pierdut din celulele donoare. Fiecare celul receptoare dobndete o plasmid F i la rndul ei devine
donoare. Intre dou diviziuni, o celul F+ realizeaz 1-2 transferuri, astfel c factorul F se rspndete repede n
populaia bacterian receptoare. Fenomenul se numete masculinizare epidemic a celulelor F -.
Fig. 133. Transferul ADN monocatenar al factorului F prin membranele celulei donor i receptor n timpul conjugrii.
Canalul transmembranar al celulei donor ar putea fi asamblat din proteinele de transfer (mi = membrana interna ; me =
membrana externa) (dupa Dreiseikelmann, 1994).
Dup formarea cuplurilor eficiente, transferul conjugativ al ADN are loc n trei etape:
mobilizarea ADN pentru transfer
transferul propriu-zis
formarea unei plasmide funcionale (cu capacitate de replicare n celula receptoare).
Etapele conjugrii se succed numai dac n celula donoare se gsete o plasmid conjugativ i
mobilizabil. Plasmidele conjugative poart gene ce determin formarea perechilor eficiente, iar cele
mobilizabile pregtesc ADN pentru transfer. Plasmidele autotransmisibile (de exemplu, plasmida F) sunt att
conjugative ct i mobilizabile.
O celul poate avea dou plasmide diferite: F i Col E 1. Ultima este mobilizabil, dar neconjugativ.
Intr-un cuplu de conjugare, plasmida F poate suplini incapacitatea conjugativ a plasmidei Col E 1, astfel nct
aceasta va fi transferat. Procesul n care o plasmid neconjugativ este transferat ntr-un proces mediat de o
plasmid conjugativ, se numete donaie.
O plasmid conjugativ poate s medieze transferul unei plasmide nemobilizabile, sau chiar al genelor
cromosomale. In cuplul de conjugare F+ x F- se transfer, cu o frecven mic, gene cromosomale sau plasmide
neconjugative. Fenomenul se numete conducie i definete procesul de mobilizare pasiv a oricrui replicon,
inclusiv a cromosomului celulei F+, prin intermediul Tn l000. Conducia este rezultatul recombinrii genetice
ntre cei doi repliconi, mediat de Tn l000. Treapta intermediar a procesului de transpoziie, este o structur
cointegrat, n care cele dou copii ale transpozonului au rolul unor puni ntre cei doi repliconi. Transferul
ADN cromosomal este iniiat n stadiul de cointegrare a celor doi repliconi.
La nivel molecular, conjugarea i transferul ADN sunt procese complexe, reglate de gene i proteine
multiple. Genele implicate n procesul conjugrii sunt organizate ntr-un singur operon operonul tra
organizat n circa 35 cadre de citire (ORF).
Dup retractarea pilului i formarea canalului de conjugare, are loc mobilizarea plasmidei F.
Mobilizarea ncepe n momentul n care o protein cu funcie nucleazic proteina Tra codificat de
plasmid, realizeaz incizia unei catene, la o secven unic de baze, denumit originea de transfer (ori T) i
rmne legat covalent de capatul 5P al catenei incizate. Proteina Tra are i funcie de helicaz i
despiralizeaz plasmida F n timpul transferului conjugativ. Energia necesar pentru separarea catenelor este
furnizat de hidroliza ATP.
Mecanismul transferului conjugativ este ipotetic. In acord cu unul dintre mecanismele de transfer,
incizia monocatenar declaneaz replicarea plasmidei dup modelul cercului simplu i ramura linear ce
rezult din replicare este transferat. Proteina Tra, legat la captul 5P are, probabil, rolul de protecie a ADN
linear monocatenar, de aciunea nucleolitic i este transferat concomitent cu ADN, n celula receptoare.
Aceiai protein ar avea i rol de ligaz, reunind capetele catenei lineare n celula receptoare.
Una dintre proteinele codificate de operonul tra, care nsotete ADN n timpul transferului, este SSB.
Ea tapeteaz ADN transferat, protejndu-l de aciunea endonucleazelor.
In cursul transferului, sinteza ADN se desfoar att n celula donoare ct i n celula receptoare. In
celula donoare, sinteza conjugativ nlocuiete catena ce se transfer, iar n celula receptoare, sinteza
conjugativ convertete ADN monocatenar transferat, la forma dublu catenar.
Un alt model al transferului consider c proteina Tra rmne n celula donor i ADN trece n celula
receptoare sub forma monocatenar circular, care nu necesit protecie fa de aciunea endonucleazelor.
n cuplul de conjugare F+- F-, genele transferate codific factori accesorii : rezistena la antibiotice, UV,
metale grele sau degradarea unor compui xenobiotici.
-
Transferul ADN cromosomal n cuplul Hfr x FIn celulele F+, cu o frecven mic, plasmida F se integreaz n cromosomul bacterian, printr-un proces
de recombinare. Situsul de recombinare a plasmidei F n cromosom are loc, predominant, n transpozonul IS 3.
Se cunosc peste 20 de situsuri majore ale cromosomului, la nivelul crora poate avea loc integrarea plasmidei F,
dar afinitatea factorului F pentru fiecare situs este variabil. Afinitatea semnific probabilitatea schimbului de
secvene nucleotidice ntre aceste elemente. Factorul F se poate integra n orientare direct sau inversat.
Celula bacterian purttoare a factorului F integrat devine Hfr, deoarece are o capacitate foarte ridicat
de a iniia formarea cuplurilor de conjugare. Factorul F linear, integrat n cromosomul bacterian, i pierde
capacitatea de replicare independent i este replicat odat cu genele cromosomale. Odat cu diviziunea celulei,
factorul F este transmis pe vertical, tuturor celulelor, de la generaie la alta. In stare integrat, factorul F nu mai
este infecios nu se transmite pe orizontal prin conjugare dect n mod excepional, cnd conjugarea
dureaz foarte mult.
O particularitate funcional distinct a bacteriilor Hfr, decurge din tendina foarte marcat de rupere a
cromosomului. De aici rezult capacitatea foarte crescut (de l00%) a cuplurilor de conjugare, de a transfera
gene cromosomale. Genele transferate sunt diferite de la un cuplu de conjugare la altul, datorit numrului
mare de situsuri cromosomale la care se poate face integrarea factorului F. Totdeauna sunt transferate genele n
care s-a inserat factorul F.
Ruperea cromosomului se face, de regul, la nivelul structurilor plasmidei, foarte aproape de una dintre
extremitile ei, astfel nct cromosomul linear care se genereaz, poart o extremitate, un mic fragment al
plasmidei, iar restul se gsete la extremitatea opus. Rareori, incizia se face la limita dintre plasmid F i
cromosom.
In funcie de poziia lor fa de situsul integrrii plasmidei F, fiecare gen cromosomal are ansa s fie
transferat n celula receptoare.
Mecanismul transferului de material genetic n cuplul Hfr x F - este foarte asemntor cu acela descris
pentru transferul factorului F n cuplul de conjugare F + x F-. Transferul este precedat de incizia monocatenar a
cromosomului, la nivelul plasmidei integrate. Incizia este
catalizat de proteina Tra, cu activitate nucleazic. Punctul inciziei semnific originea transferului (ori T).
Transferul se iniiaz la circa 3 minute dup amestecul celulelor conjugante i progreseaz cu o rat constant,
cuprins ntre 45 000 l00 000 nucleotide/minut. Rata uniform de transfer a ADN n conjugare, face ca
transferul conjugativ s fie instrumentul esenial de lucru, pentru cartarea genetic a cromosomului.
Din celula donoare se transfer ADN monocatenar. Concomitent cu transferul are loc replicarea
cromosomului celulei donoare, dup modelul cercului simplu. Catena rmas n celula donoare are rol de
matri pentru sinteza unei noi catene. Rezult astfel, o copie dublu catenar a ADN transferat. Nu se cunoate
originea energiei de transfer, care deplaseaz caten ADN din celula donoare n cea receptoare.
In cuplul Hfr x F- se transfer un mic fragment al plasmidei F, gene cromosomale i n mod excepional
se transfer o copie complet a factorului F.
De cele mai multe ori, conjugarea se ntrerupe datorit factorilor de mediu, la intervale variabile de
timp. Din aceast cauz, n conjugare se transfer, de obicei, numai gene cromosomale. Nu se transfer factorul
F, deoarece este localizat la captul opus al ori T, astfel c celula receptoare rmne F -. Factorul F se transfer
numai dac durata procesului de conjugare este de 90-l20 minute, mult mai mare dect durata unei generaii
celulare. Faptul este explicabil prin aceea c, procesul conjugrii stopeaz creterea i diviziunea celulelor
cuplului.
Fragmentul de material genetic transferat are dimensiuni diferite, n raport cu durata procesului de
conjugare. Celula receptoare a cuplului, dup conjugare, este un merozigot (un zigot parial i temporar diploid).
Dac nu este degradat de enzimele de restricie, fragmentul de ADN primit, se poate integra n cromosom,
printr-un proces de recombinare genetic. Dac ADN exogen poart gene noi, dup recombinare se exprim n
celula receptoare, care astfel dobndete caractere noi.
In general, conjugarea se realizeaz ntre celulele aceleiai specii, dar are loc i interspecific i chiar
intergeneric, dar cu o frecven mai mic. De exemplu, E. coli formeaz cupluri de conjugare cu celule ale
propriei specii, dar i cu Salmonella sp., Proteus mirabilis etc.
Conjugarea la bacteriile Gram pozitive
La cocii Gram pozitivi (Str. pneumoniae, E. faecalis, Streptomyces) procesul conjugrii are
particulariti distincte i este mediat de plasmide i de transpozonii conjugativi.
Transpozonii conjugativi sunt EGT, n mod obinuit integrate n genomul bacterian i au funcie de
transpoziie. Din punct de vedere funcional, transpozonii conjugativi cumuleaz proprieti ale transpozonilor
propriu-zii i ale plasmidelor:
- se aseamn cu transpozonii propriu-zii, pentru c se excizeaz i se reintegreaz n ADN;
- se aseamn cu plasmidele pentru c se excizeaz i formeaz un intermediar circular nchis covalent,
fizic independent, ce se poate integra n genomul aceleiai celule (transpoziie intracelular) ori se
transfer prin conjugare, la o celul receptor i se integreaz n genomul ei (transpoziie intercelular).
Diferena fa de Tn propriu-zii const n existena unui intermediar dublu catenar nchis covalent. Se
deosebesc de plasmide, deoarece intermediarul nu se replic.
La bacteriile Gram pozitive, strategia formrii perechilor sau a agregatelor de mperechere este diferit.
Plasmidele i transpozonii conjugativi sunt prea mici pentru a codifica numeroasele proteine Tra ale aparatului
de conjugare.
Conjugarea la Streptomyces
Este un proces distinct de schimbul genetic al bacteriilor, att n ceea ce privete mecanismul molecular,
ci i din punct de vedere fenotipic. Fuziunea hifelor nu s-a evideniat microscopic. Proteina Tra codificat de
plasmid, singurul factor esenial pentru transferul conjugativ, poate s condiioneze i procesul de fuziune.
Plasmida nu codific structurile anatomice care s medieze formarea perechilor la vrfurile hifelor celor
2 parteneri. Streptomyces este imobil i crete ca un miceliu cu ramificare multipl, pe mediul solidificat.
Vrfurile miceliului pot fuziona numai dac se sintetizeaz proteina de transfer (Tra), iar rspndirea plasmidei
prin pereii transversali ai miceliului receptor necesit alte 3-5 gene.
Semnul distinctiv fenotipic al transferului plasmidei este apariia zonelor pustulare care semnific
inhibiia creterii. Dup cultivarea pe mediu agarizat, pe suprafaa plcii apar zone vizibile macroscopic, de 1-3
mm diametru. Acestea sunt ariile n care miceliul receptor a primit o plasmid. {n interiorul structurii pustulare,
diferenierea morfologic a miceliului receptor care a dobndit o plasmid, este temporar ntrziat. Aceast
trstur fenotipic face din Streptomyces, singurul microorganism la care schimbul genetic este vizibil cu
ochiul liber.
Transferul conjugativ are loc n condiii restrictive: numai pe mediul solidificat, numai n faza de
cretere timpurie, cnd Streptomyces crete ca miceliu de substrat. Dup nceperea diferenierii morfologice,
transferul conjugativ este abolit.
Diseminarea plasmidei transferate n compartimentele miceliene ale receptorului este mediat de
proteinele Spd (Spreading). Ele par s se asambleze formnd o structur de forma unui por n pereii transversali
ai miceliului receptor i favorizeaz diseminarea plasmidei la prile mai vechi ale coloniei de Streptomyces.
Astfel, cea mai mare parte a miceliului este colonizat de plasmid. Este indus transcrierea genei tra,
deoarece compartimentele miceliene care abia au primit plasmida nu au un represor funcional. Supraexpresia
tranzitorie a proteinei Tra este cauza apariiei zonelor inhibitoare ale creterii i ntrzierii diferenierii
morfologice, ce apare sub forma structurilor pustulare specifice.
Conjugarea a fost descris i la alte actinobacterii: Mycobacterium, Corynebacterium, Rhodococcus.
Evenimentele moleculare ale procesului de transfer genic nu se cunosc.
Sexducia
Transferul genelor cromosomale bacteriene, mediat de plasmidele de sex, este numit sexducie sau
transducie mediat de plasmidele de sex. Cel mai studiat mecanism de sexducie este cel mediat de plasmida F,
sau F-ducia.
La unele tulpini Hfr de E. coli , factorul F are tendina de trecere n stare autonom, prin fenomenul de
excizie din structura cromosomului. Excizia este controlat de secvenele de inserie. Wollman (l956) a
presupus posibilitatea exciziei plasmidelor F, mpreun cu gene cromosomale adiacente, iar Jacob i Adelberg
(l956) au izolat plasmida F-lac (purttoare a operonului lac), ce se poate transfera celulelor lac -.
Plasmida F, excizat incorect din situsurile sale de inserie, purttoare de gene cromosomale se numete
plasmid F.
Excizia plasmidei F are loc dup modelul exciziei fagilor care fac transducie specializat. Fenomenul
exciziei are loc la dou situsuri:
- cnd unul este situat pe cromosom i cel de al II-lea la punctul de inserie a plasmidei F, rezult plasmida
FI. Plasmida excizat poart gene cromosomale la o singur extremitate. Cromosomul bacterian sufer
deleie pentru genele excizate;
- cnd cele dou situsuri de excizie sunt situate pe cromosom, de o parte i de alta a factorului F, se formeaz
plasmid FII. Plasmida excizat poart gene cromosomale la ambele extremiti. Genele excizate odat cu
plasmida, sunt pstrate i n cromosom, printr-un proces de recombinare reciproc, astfel ca plasmidele F
confer diploidie pentru secvena cromosomal ncorporat.
Bacteriile F au caracteristici comune, att celulelor F + ct i celulelor Hfr i de aici deriv denumirea
lor de masculi intermediari.
In procesul conjugrii dintre o celula F i alta F -, celula receptoare dobndete ntreaga plasmid F i
devine celula mascul, diploid pentru genele transferate de plasmid F. Genele cromosomale din plasmidele F
se recombin cu regiunile cromosomale omologe i rezult recombinani, care poart dou copii ale genelor
transduse de plasmid F': un set de gene plasmidiale i altul localizat pe cromosom.
Transducia genetic
Transducia este procesul de transfer al materialului genetic ntre celulele bacteriene, mediat de
bacteriofagi. Zinder i Lederberg (l952) au descoperit transducia generalizat la Salmonella typhimurium. Ei au
pus n contact mutante auxotrofe, cu diferite incapaciti de sintez i ulterior, au izolat, pe un mediu minimal,
colonii recombinante prototrofe. Pentru a-l deosebi de conjugare, ei au demonstrat c acest proces genetic nu
necesit contactul fizic dintre celula donoare i cea receptoare de material genetic. Agentul mediator al
transferului genic, trece prin porii filtrului, suficient de mici pentru a opri bacteriile. Procesul nu s-a datorat nici
transformrii genetice, deoarece este rezistent la DN-az. Vectorul purttor de gene, de la celula donoare la cea
receptoare a fost fagul temperat P22. Profagul P22 a fost indus spontan i astfel celulele lizogene au evoluat spre
liz. S-au asamblat particule virale transductoare, care au infectat celulele celei de a II-a tulpini de Salmonella
din amestecul celular. Particulele virale erau purttoare ale genei bacteriene de tip slbatic, care s-a recombinat
cu cromosomul celulelor mutante (auxotrofe), rezultnd astfel celule prototrofe, care cresc i se divid pe mediul
minimal i formeaz colonii.
n raport cu diversitatea genelor transduse i cu gradul de manifestare a efectului transduciei asupra
celulelor descendente, se descriu trei variante ale procesului;
- transducie specializat
- transducie generalizat
- transducie abortiv.
Transducia specializat a fost descoperit de Lederberg (l953). Este caracteristic fagului , ca o
consecin a faptului c genomul su se integreaz riguros, numai ntre genele gal i bio ale cromosomului de
E. coli, n raport cu care prezint omologie genetic. Integrarea este rezultatul recombinrii genetice la situsuri
specifice (fig. 134).
Fig. 134. Ilustrarea schematic a procesului de transducie genetic. Dup ce fagul infecteaz o celul de E. coli,
genomul su se circularizeaz i cuplul evolueaz n dou direcii alternative: 1) evoluia litic, n cursul creia
cromosomul se replic i formeaz concatemeri ce vor fi clivai i mpachetai n particule fagice progene; 2) evoluia
lizogena, n cursul creia fagul se integreaz n cromosomul celulei, prin recombinare la situs specific. Sub aciunea unui
factor inductor, genomul fagic se excizeaz printr-un proces invers celui de integrare. n situaii rare, procesul de excizie
este aberant (incorect), adic genomul fagic ncorpopreaz secvene cromosomale ale celulei gazd, dar pierde o secven
de mrime echivalent. Dac genele fagice nu sunt eseniale pentru ciclul de multiplicare, cromosomul fagic recombinat se
replic i se asambleaz fagi progeni transductori.
In stare integrat, profagul se comport ca orice gen cromosomal, adic se replic sincron cu
cromosomul i este transmis tuturor celulelor descendente.
Sub aciunea unor factori fizici (ocuri termice, radiaii UV etc.) sau chimici, genomul viral este excizat
din inseriile sale cromosomale, se circularizeaz i se replic productiv, genernd fagi progeni. Procesul se
numete inducie litic, deoarece rezultatul este liza celulei bacteriene. Inducia litic este consecina anihilrii
aciunii proteinei represor, singura codificat de genomul fagc integrat. Excizia genomului fagic are loc sub
aciunea unor enzime i de regul, secionarea se face la situsurile cos care flancheaz genomul fagic, ceea ce
corespunde unei excizii corecte. Proteina Rec A se activeaz i devine proteaz, substratul aciunii sale fiind
represorul codificat de fagul lambda, iar excizionaza (o endonucleaz) secioneaz genomul fagic. Excizionaza
formeaz un complex funcional cu integraza, ce se leag strns de situsul POB' Aciunea lor combinat
determin excizia profagului.
Cu o frecven mic (l/l06 celule), excizia genomului fagic este incorect. Astfel, se excizeaz un genom
fagic care poart gene bacteriene, dar cruia i lipsete o secven echivalent de nucleotide virale, la
extremitatea opus. Genomul viral modificat, se replic, este tradus la proteine virale i se asambleaza fagi
transductori.
Fagul este excizat mpreun cu gena cromosomal gal, bio, ori cu ambele. Datorit integrrii genelor
bacteriene n cromosomul fagic, are loc pierderea (prin recombinare) unei secvene echivalente ca mrime, din
genomul fagic. Rezult astfel, fagi transductori defectivi, deoarece cantitatea de material genetic ce poate fi
mpachetat n capul fagului este constant. ADN viral este pierdut totdeauna la extremitatea opus genelor
bacteriene dobndite de fagul transductor. Foarte rar pot fi generai fagi transductori, care conin genomul viral
complet, mpreun cu secvene de ADN bacterian, derivate de la ambele extremiti ale punctelor de inserie a
profagului.
In general, fagii transductori sunt defectivi i n consecin, incapabili s se multiplice i s lizeze celula
bacterian. De aceea, pentru a iniia ciclul de multiplicare i liza celulei bacteriene, necesit prezena fagilor
helper.
In celula infectat, de cele mai multe ori, genomul fagului transductor este supus aciunii enzimelor de
restricie i este degradat.
Cu o frecven mic, genomul fagului transductor se poate integra n cromosomul bacterian, printr-un
proces de recombinare i genele transduse pot conferi noi caractere fenotipice celulei bacteriene. De exemplu,
fagul transductor defectiv lambda dgal+, dup ce infecteaz i genomul su se recombin cu cromosomul unei
bacterii defective pentru utilizarea galactozei (gal -), i confer acesteia capacitatea de a metaboliza galactoza.
Celula bacterian care a dobndit un fenotip nou se numete transductant. Fragmentul de material genetic
transdus de genomul fagic este adugat genomului bacterian, i nu substituit.
Transducia fagic este un proces care se realizeaz cu o frecven mic, dar datorit numrului mare de
particule virale i a celulelor bacteriene infectate, aceast modalitate de transfer de material genetic ntre
celulele bacteriene, are rol semnificativ n condiii naturale.
Transducia generalizat, nelimitat sau nerestrictiv este procesul de transfer, prin intermediul unui
fag, a oricrei gene a cromosomului bacterian, indiferent de poziia sa n genom. Procesul a fost descris pentru
fagul P1 care infecteaz E. coli, pentru fagul P22 la Salmonella i pentru unii fagi care infecteaz celulele de B.
subtilis.
Fagii de transducie generalizat au proprietatea, ca n ciclul litic n raport cu celula bacterian, s
ncorporeze fragmente cromosomale ale gazdei.
Virusul P1 are ca genom o molecul de ADN linear, dublu catenar i o capsid icozaedric. ADN, de
l00 kb este permutat ciclic i are secvene repetitive terminale. Ca i fagul T 4, dup infecie molecula se
circularizeaz.
Cuplul poate urma ciclul litic sau lizogenic. Varianta lizogen necesit replicarea ADN circular, n stare
fizic autonom. In stare lizogen, fagul P 1, sub forma moleculei circulare este meninut ntr-un numr minim de
copii (una/celul), datorit unui control stringent al replicrii, ca i n cazul plasmidei F. Mecanismul distribuiei
poate deveni ineficient dac un proces de recombinare omolog a creat o molecula dimeric, ce se distribuie
numai n una din cele dou celule fiice.
In evoluia litic, ADN fagic se replic dup modelul theta () i al cercului rotativ. Rareori, n procesul
asamblrii, sunt ncorporate i fragmente de ADN ale cromosomului bacterian, rezultnd fagi de transducie
generalizat.
Infecia celulelor de Salmonella cu fagul P22 produce fragmentarea ADN celular. In cursul morfogenezei
virale, n capside se mpacheteaz uneori, exclusiv ADN bacterian i rezult fagi transductori. In capsidele goale
sunt ncorporate, de regul, numai gene de provenien bacterian i numai n mod excepional sunt ncorporate
gene celulare n asociaie cu mici fragmente de genom viral. Teoretic, oricare dintre genele cromosomale, are o
ans egal de a fi transdus (de aceea se numete transducie generalizat), dei, practic, unii cistroni sunt
transdui cu o frecven mai mare. In capsida fagic sunt mpachetate preferenial, fragmentele de ADN care au
o secven similar secvenei pac (packing =mpachetare), care regleaz mpachetarea genomului fagic.
Aparatul enzimatic de mpachetare a genomului fagic recunoate secvena anolog i astfel fragmentele de
ADN bacterian sunt ncorporate n capsida viral. Rezult astfel, particule fagice care poart diferite fragmente
ale cromosomului bacterian. Dei n celul exist cantiti aproximativ egale de ADN fagic i ADN celular,
numai un mic procent al fragmentelor cromosomului bacterian este mpachetat i un procent mic de particule
virale sunt transductoare. Factorul limitant al asamblrii fagilor transductori este frecvena secvenelor pac.
Particulele fagice care ncorporeaz exclusiv sau preponderent gene bacteriene sunt totdeauna defective.
Aceti fagi nu sunt obligatoriu lizogenizani. Dup ce infecteaz o nou celul bacterian, nu se multiplic i nu
au efect litic, deoarece lipsesc genele virale eseniale. Genele transduse pot fi integrate prin procese de
recombinare, n cromosomul bacterian. Procesul se realizeaz prin nlocuirea unor determinani genetici ai
celulei receptoare, cu cei transdui. Recombinarea necesit omologie genetic ntre secvenele de ADN
participante i este dependent de proteina Rec A.
Transducia abortiv (incomplet) se caracterizeaz prin faptul c genomul virusului transductor nu
determin liza, dar nici nu se integreaz n cromosomul celulei infectate.
Recombinarea fragmentelor de ADN transduse, de origine bacterian, are loc cu o frecven foarte
mic. Majoritatea fragmentelor transduse rmn n citoplasma celulelor receptoare. Nu se replic, deoarece nu
conin o origine a replicrii i astfel sunt motenite numai de una din cele dou celule surori care rezult la
fiecare diviziune. Totui, sunt gene funcionale i codific produsul lor n celula receptoare, n care determin o
stare de diploidie parial. Genele transduse se dilueaz treptat n populaia celular, prin diviziune.
Dac celula este mutant nutriional (datorit mutaiei unei gene cromosomale), iar fragmentul
transdus i are originea ntr-o celul prototrof, se produce complementarea genic i reversia la prototrofie a
celulei receptoare. La fiecare diviziune celular, produsul de sintez a genei transduse poate fi distribuit n cele
dou celule surori i astfel, celula care nu primete fragmentul de ADN, fenotipic poate rmne de tip slbatic,
pn cnd produsul este degradat sau diluat prin diviziuni succesive. Astfel de celule produc colonii mici, spre
deosebire de transductanii stabili, care produc colonii de dimensiuni normale.
Un alt exemplu al transduciei abortive este acela al genelor care determin sinteza i asamblarea
flagelului. In acest caz, merodiploidul format prin transducia abotiv este mobil, iar celula sor rezultat prin
diviziune, este imobil. Pe o plac cu agar moale, merodiploidul este mobil, iar celulele imobile formeaz o
colonie tipic.
Transducia plasmidelor
Asa cum cromosomul bacterian poate fi mpachetat n fagii de transducie generalizat, n mod
asemntor ADN plasmidial poate fi nglobat n capsidele virale. Dac plasmida este mai mare dect capul
fagic, se mpacheteaz numai o parte a plasmidei. Plasmida R este mai mare dect capul fagului P 22. Fragmentul
de plasmid transdus nu se poate circulariza (nu are secvene omologe de baze) i nici nu se poate integra n
cromosomul gazdei i de aceea va fi degradat. Plasmidele prea mici nu produc un cap fagic stabil, dar formele
lor multimere pot fi mpachetate eficient.
Transducia este un proces care are loc i la bacteriile Gram pozitive: Mycobacterium, Staphylococcus,
Streptomyces i B. subtilis.
Conversia fagic
Conversia fagic este procesul apariiei unor proprieti fenotipice noi ale celulei bacteriene, consecutiv
intrrii n aciune a unor gene fagice. Fenomenul conversiei fagice se manifest la unele bacterii infectate cu
un fag temperat netransductor, care persist n celul, fie n stare de profag (integrat n cromosomul bacterian),
fie n stare fizic autonom.
Conversia fagic se deosebete de transducia fagic specializat, prin dou particulariti eseniale:
- modificrile celulei bacteriene sunt rezultatul expresiei unor gene de origine viral (i nu bacterian, ca n
cazul transduciei fagice);
- fagii care realizeaz fenomenul de conversie sunt normali i posed tot setul de gene, n timp ce fagii de
transducie specializat sunt defectivi, datorit pierderii unor gene proprii, prin nlocuirea lor cu gene ale
cromosomului bacterian.
Fenomenul conversiei fagice este cunoscut la Corynebacterium diphteriae. Celulele care au ca material
genetic numai propriul cromosom nu sunt virulente i nu determin un proces patologic infecios. Apariia
virulenei este condiionat de infecia cu fagul beta, al crui genom se integreaz n cromosomul bacterian.
Sinteza toxinei difterice este codificat de o gen fagic.
Un alt exemplu este acela al structurii chimice a lipopolizaharidului din peretele celular de Salmonella.
S-a descris fenomenul de conversie serologic a unei linii de S. anatum, dup infecia cu un fag, ca o reflectare
a modificrii compoziiei chimice a polizaharidului din molecula de lipopolizaharid. Dup pierderea profagului
prin excizie, liniile bacteriene respective revin la fenotipul anterior infectiei fagice: C. diphteriae pierde
capacitatea de a sintetiza toxina (i pierde patogenitatea), iar S. anatum revine la tipul serologic iniial. Se
consider c aceste gene fagice, la origine au fost gene cromosomale, dar au fost ncorporate i au devenit gene
fagice.
Transfecia
Transfecia este o variant a transformrii genetice, prin intermediul acizilor nucleici de origine viral.
In acest scop se poate folosi att ADN ct i ARN.
Transfecia a fost definit de Foldes i Trautner (l964). Ei au tratat suspensia de celule bacteriene cu
ADN fagic purificat. Dup cultivarea celulelor pe suprafaa placilor cu mediu solidificat, au observat apariia
plajelor de liz, al caror numr este proporional cu cantitatea de ADN adugat suspensiei celulare.
Transfecia a fost realizat, n special, la bacterii Gram negative: E. coli, A. tumefaciens, E. aerogenes,
P. aeruginosa, S. typhimurium, dar i la B. subtilis.
La E. coli, transfecia a fost descris de Kaiser i Hogness (l960), ca rezultat al interaciunii dintre ADN
purificat al fagului transductor ( dgal), cu celulele lizogenizate de fagul . Transfecia este uurat dac
celulele sunt infectate simultan cu un fag helper netransductor. Fagul helper asigur perforarea peretelui celular
i probabil c pe msur ce fagul injecteaz propriul sau ADN, situsul cos al ADN de transfecie se asociaz cu
ADN al fagului helper i astfel moleculele sunt transportate simultan n celul.
Deoarece fagii transductori conin gene cromosomale bacteriene, transfecia realizeaz concomitent i
procesul transformrii genetice.
La E. coli, transfecia, similar transformrii, se poate realiza dup tratarea celulelor cu o soluie de Ca 2+
0,025 M, care asigur o permeabilizare a nveliurilor celulare fa de ADN de diferite proveniene.
Proporia celulelor care ncorporeaz ADN fagic crete semnificativ dup tratamentul cu lizozim i
EDTA, n urma cruia rezult sferoplati.
Fluxul vertical al informaiei este procesul de transmitere a genelor de la prini la descendeni.
Diversificarea molecular rezult prin procese mutaionale i prin duplicaie genic, rezultatul fiind
diversificarea organismelor i speciaia. Fluxul vertical al genelor este cel care determin arborele filogenetic
universal sau tabloul evoluiei canonice.
La nivel inferior, arborele evoluiei canonice arat dichotomia veche ntre Bacteria i Archaea i
evoluia ulterioar a Eucarya din ramura Archaea. Moleculele care reflect evoluia canonic sunt rezultatul
fluxului vertical al genelor. Fluxul genetic vertical contribuie la diversificarea genetic lent, prin procesul
denumit descenden cu modificare, care n timp duce la divergen de mari dimensiuni.
Transferul orizontal al genelor (HGT) este transferul elementelor genetice ntre organisme diferite i
constituie cel de al II-lea tip de flux genetic. Efectul HGT poate fi limitat, cnd are loc ntre bacterii strns
nrudite, dar este mult mai amplu cnd are loc ntre specii sau genuri diferite.
Transferul orizontal al genelor este o modalitate de amestec rapid al materialului genetic, capabil s
introduc modificri genetice rapide. HGT, foarte timpuriu n evoluie, de la o bacterie la un eucariot, poate
avea efecte deosebit de ample.
Rolul transferului orizontal interspecific de gene este subliniat de faptul c circa 17% din genele
cromosomului de E. coli K12 deriv din surse colaterale nenrudite.
Reglarea activitii celulei bacteriene

Activitatea metabolic a celulei bacteriene se adapteaz permanent condiiilor de mediu mereu
schimbtoare, prin intermediul unor mecanisme fine i eficiente.
Simplitatea organizrii interne a celulei bacteriene i deosebita sa plasticitate fiziologic i asigur
supravieuirea n contextul unor variaii largi ale condiiilor de mediu, spre deosebire de celulele organismelor
superioare, care tolereaz modificri n limite foarte restrnse ale parametrilor homeostaziei. Celula bacterian
se gsete ntr-o permanent stare de echilibru dinamic, n care toate componentele sale structurale sunt
continuu construite i degradate.
Bacteriile sintetizeaz unele enzime necesare degradrii anumitor substraturi, numai cnd acestia sau
analogii lor se gsesc n mediu.
In mod obinuit, bacteriile necesit produsele de sintez ale unui singur operon. In celul funcioneaz
mecanisme reglatoare de tip on-off care permit sinteza enzimelor, numai dac acestea sunt cerute de condiiile
externe.
Selecia natural optimizeaz eficiena. Sistemele reglatoare ale celulelor procariote au o finalitate
teleonomic precis: s favorizeze creterea cu o rat maxim, cu excepia cazurilor n care creterea ar fi
duntoare. Aceiai strategie a finalittii se aplic i organismelor eucariote unicelulare: levuri, alge, protozoare.
Reglarea celular la bacterii este supus unor reguli generale:
1. moleculele care sunt necesare numai ocazional, se sintetizeaz numai cnd prezena lor este necesar;
2. o activitate enzimatic ce consum inutil energie, sau consum o molecul care este substratul unei alte
enzime, este de obicei inhibat;
3. dac celula are mai multe ci metabolice disponibile, ea va alege calea care produce o cantitate mai
mare de energie pe unitatea de timp.
Schimbrile chimice n lumea vie se produc pe cale metabolic, adic printr-o secven de reacii,
fiecare fiind catalizat de o enzim specific.
La bacterii, reglarea activitii unei astfel de cI, se face prin sinteza sau inhibiia sintezei ntregului set
de enzime i proteine accesorii: ori se sintetizeaz ntregul set de enzime, ori nu se sintetizeaz nici una. Acest
fenomen, denumit reglare coordonat deriv din controlul sintezei unei molecule de ARNm policistronic, care
codific toate produsele genice.
Un operon funcioneaz cnd este necesar (on) i se ntrerupe (off) cnd enzimele codificate sunt inutile
pentru celul.
Dup Kleinsmith (l976), activitatea mecanismelor reglatoare se poate desfura la 4 nivele:
- la nivelul transcrierii genetice (prin sinteza ARN sau prin blocarea ei);
- prin controlul la nivelul traducerii genetice;
- prin modificarea direct a activitii enzimelor existente n celul;
- prin modificarea ratei degradrii proteinelor.
Controlul la nivelul traducerii mesajului, este un eveniment mult mai rar, dar cele de reglare la nivelul
transcrierii sunt comune.
Controlul la nivelul transcrierii prin oprirea procesului nu are semnificaia blocrii sale complete (off
state). Nu se cunoate nici un sistem cu ntrerupere total a sintezei ARNm. Totdeauna rmne un nivel foarte
sczut al transcrierii, ce const din l-2 evenimente de transcriere/generaie celular, astfel nct sinteza
produsului genic este foarte limitat. Numai n sporii bacterieni, exprimarea genelor este total oprit.
Mecanismele de reglare la nivelul transcrierii sunt dependente de rolul enzimelor reglate: dac
acioneaz n cile degradative sau au rol n reaciile de anabolism. De exemplu, ntr-un sistem degradativ cu
mai multe trepte, disponibilitatea moleculei ce urmeaz a fi degradat, condiioneaz adeseori, sinteza
enzimelor. Invers, ntr-o cale biosintetic, produsul final al cii, este adeseori, molecula reglatoare.
Chiar ntr-un sistem n care o singur molecul proteic este sintetizat din ARNm monocistronic,
proteina poate fi autoreglat, adic ea nsi poate s inhibe iniierea transcrierii. Concentraia crescut a
proteinei, scade rata transcrierii ARNm specific (fig 135).
Fig. 135. Mecanismul represiei sintezei enzimelor. a. Represorul este inactiv, adic nu se poate asocia cu secvena
operator, iar genele operonului sunt transcrise n ARNm. b. Dup legarea corepresorului (o molecula mica exogena) cu
represorul, acesta se activeaz, se asociaza la regiunea operatoare i transcrierea genelor operonului este blocata.
Mecanismele moleculare sunt proprii pentru fiecare sistem reglator, dar n funcie de efectele asupra
celulei, procesele reglatoare sunt de dou categorii:
1. Procese reglatoare pozitive sunt acelea n care exprimarea informaiei genetice crete cantitativ. Intr-un
sistem reglat pozitiv, o molecul efectoare (o protein, un complex molecular) activeaz rata transcrierii
de la un promotor.
2. Procesele reglatoare negative semnific diminuarea cantitativ a exprimrii informaiei genetice. Intr-un
sistem reglat negativ, transcrierea genelor este blocat de un inhibitor prezent n celul. Inhibitorul se
numete represor. Pentru reluarea transcrierii, este necesar un antagonist al represorului denumit
inductor.
O cale degradativ poate fi reglat pozitiv sau negativ.
Intr-o cale biosintetic, produsul final al cii, regleaz negativ propria sa sintez.
Activitatea reglatoare a diferitelor activiti celulare se realizeaz la nivelul unitilor genetice denumite
operoni.
Modelul reglator al operonului
Operonul este o unitate funcional de reglare, alctuit dintr-un grup de cistroni (A, B, C etc.), care
codific o anumit funcie (de exemplu, biosinteza enzimelor unei ci metabolice) i este transcris unitar ntr-o
molecul de ARNm policistronic. Cel mai cunoscut este operonul lac, care codific i regleaz sinteza
enzimelor ce intervin n metabolismul lactozei.
Pe baza studiului operonului lac, Jacob i Monod (l967) au elaborat modelul clasic de structur a
operonilor. Un operon este alctuit din:
- gene structurale;
regiunea operator (o) format din circa 27 de perechi de baze, ce funcioneaz ca situs de recunoatere i
legare a represorului specific;
- regiunea promotor (p), cu o lungime de circa 80 de baze, cu rolul de a lega ARN-polimeraza pentru
iniierea transcrierii genelor structurale;
- gena reglatoare, situat adiacent sau la distan de regiunea operatoare, ce ine sub control toate celelate
gene ale unui operon.
La bacterii, activitatea genic este reglat, n primul rnd, la nivelul transcrierii. Transcrierea
coordonat a genelor ntr-un operon este blocat de proteinele represor i este activat de proteinele
stimulatoare.
Elementele genetice ale operonului bacterian sunt urmtoarele: gena reglatoare (i), situsul operator i
un set de gene structurale (z, y, a) (fig. 136).
Fig. 136. Harta genetic a operonului lac. Secvenele p i o sunt mult mai mici dect genele.
Gena reglatoare (i) codific sinteza unui represor de natura proteic, ce interacioneaz cu situsul
operator. Situsul operator este un segment de ADN adiacent genei structurale pe care o controleaz. Operonul
lac poate fi reglat pozitiv (inducie) sau negativ (represie).
Reglarea pozitiv (Inducia sintezei enzimelor)
Majoritatea genelor din structura cromosomului bacterian sunt nefuncionale n absena substratului
specific, astfel c enzimele de catabolism nu se sintetizeaz. Dup adugarea substratului n mediu, gena
(genele) se activeaz, fenomen cunoscut sub denumirea de inducie sau derepresie.
Enzimele care se sintetizeaz numai n prezena substratului corespunzator (adugat n mediul de
cretere) se numesc enzime inductibile sau adaptative (Karstrom, l938). Enzimele constitutive sunt acelea a
cror sintez este permanent, independent de prezena substratului n mediu.
Numeroase enzime de catabolism aparin categoriei enzimelor inductibile. Cei mai cunoscui inductori
sunt amidonul (pentru amilaz), zaharoza (pentru invertaz), lactoza (pentru -galactozidaz).
Mecanismul molecular al inductiei enzimatice. E. coli utilizeaz lactoza ca unic surs de carbon.
Enzimele eseniale pentru catabolismul acestui dizaharid sunt -galactozidaza (sub aciunea creia, lactoza este
hidrolizat la galactoz i glucoz), galactozid-permeaza (necesar transportului lactozei prin membrana celulei
bacteriene) i thiogalactozid-transacetilaza (al crei rol fiziologic este incert).
Celulele de E. coli cultivate pe un mediu cu glucoz sau cu glicerol, conin mai puin de l0 molecule de
-galactozidaz/celul, iar numrul lor crete la cteva mii, dup cultivarea celulelor pe mediul cu lactoz.
Sinteza -galactozidazei este inductibil.
Inductorul fiziologic al sintezei -galactozidazei este alolactoza (izomerul glucoz-l,6-galactoz),
derivat din lactoz, printr-o reacie de transglicozilare. Sinteza alolactozei este catalizat de cele cteva
molecule de -galactozidaz, existente n celul, nainte de inducie. Sinteza -galactozidazei la nivel minim se
numete sinteza constitutiv de baz (bazal) i este posibil, deoarece legarea represorului de operator nu este
niciodat att de ferm nct s blocheze complet transcrierea operonului.
Inductorul (lactoza) se asociaz cu represorul i l modific, astfel nct acesta nu mai interacioneaz
cu operatorul. In prezena inductorului, operatorul rmne liber i promotorul este disponibil pentru iniierea
sintezei ARNm. Genele structurale z, y, a sunt transcrise ntr-o molecul de ARNm, codificatoare pentru toate
cele trei proteine. O molecul de ARNm ce codific sinteza a cel puin dou proteine diferite se numete
poligenomic sau policistronic (fig 137).
Reglarea operonului necesit ca gena operatoare sa fie adiacent genelor structurale ale operonului (lac
z, lac y, lac a), dar proximitatea genei lac i nu este obligatoriu necesar, deoarece represorul lac I este o
protein difuzibil.
Genele ARNm lac sunt traduse diferenial. Raportul cantitativ al celor trei proteine (-galactozidaza,
permeaza i transacetilaza) este l,0 : 0,5 : 0,2. Sinteza lor difereniat cantitativ este rezultatul reglrii traducerii
pe dou ci:
l) Gena z este tradus prima, din ARNm policistronic. Dup sinteza -galactozidazei, jumatate din ribosomi se
detaeaz de molecula de ARNm. Cealalt jumatate a numrului de ribosomi continu traducerea i la nivelul
genei y. Astfel, numrul moleculelor de permeaz va fi numai jumatate din numrul moleculelor de betagalactozidaz;
Fig. 137. Diagrama operonului lac n stare activa (indusa). Un inductor exogen se asociaza cu represorul i formeaz un
complex inactiv, care nu recunoate secvena operator. Genele operonului sunt transcrise i se sintetizeza enzimele pentru
catabolismul lactozei.
2) ARNm bacterian este degradat dup cteva cicluri de traducere. Degradarea este lent, dar ncepe cu o
frecven mai mare la nivelul genei a dect la nivelul genei y, iar degradarea la nivelul genei y este mai
frecvent dect la nivelul genei z.
Reglarea negativ (Inducia sintezei enzimelor)
Proteina represor produsul de sintez a genei lac I, se leag de secvena operatoare a operonului.
Represorul s-a purificat din celulele bacteriene infectate cu fagi transductori ai genei lac. In absena
inductorului, represorul se leag cu mare afinitate de regiunea operatoare (fig. 138). Represorul gsete situsul
operator prin difuzie unidimensional de-a lungul moleculei de ADN i nu prin difuzie din mediul
citoplasmatic. Intr-un mod asemntor i gsete situsul promotor, molecula de ARN-polimeraz. Represorul
lac se leag de situsul su cromosomal, cu un mare grad de selectivitate.
S-au izolat mutante defective pentru sinteza uneia din cele trei proteine. De exemplu, mutanta z -y+a+
este defectiv pentru sinteza beta-galactozidazei, dar sintetizeaz permeaza i transacetilaza. Cea mai
interesant clas de mutante este aceea a mutantelor constitutive, care sintetizeaz cantiti mari ale celor trei
proteine n absena inductorului.
Fig. 138. Diagrama operonului lac n stare represata. Represorul activ se leaga de regiunea operator i blocheaza
transcrierea genelor structurale.
Rata sintezei celor trei proteine este, n mod normal, controlat de o gen reglatoare comun (gena i).
Bacteriile de tip slbatic sunt inductibile i au genotip i + z+ y+ a+. Efectul reglator al genei i se realizeaz prin
intermediul represorului pe care-l codific.
Represia sintezei enzimelor ntr-un sistem biosintetic. Operonul triptofanului
Represia enzimatic reprezint fenomenul scderii ratei de sintez a unui grup de enzime metabolic
nrudite, ori chiar de oprire a sintezei lor, ca urmare a prezenei n celul, a unui metabolit cu rol de represor.
Enzimele din aceast categorie se numesc represibile.
Represia sintezei enzimelor s-a studiat la E. coli. Pe un mediu minimal, cu glucoz i azot combinat
anorganic, celulele sintetizeaz toi monomerii necesari n proporii optime. In medii complexe (cu aminoacizi),
prezena produsului final al unei ci de biosintez, reprezint un semnal pentru celul, care, printr-un fenomen
de feed-back negativ sau de represie prin produsul final al cii, stopeaz biosinteza enzimelor devenite inutile,
ntruct celula folosete cu precdere metabolitul existent ca atare n mediu. Invers, cnd aprovizionarea cu
triptofan diminu, se sintetizeaz enzimele sale de biosintez.
Operonul triptofanului (trp) la E. coli codific sinteza acestui aminoacid (fig. 139). Reglarea operonului
se face astfel nct, cnd triptofanul se gsete n mediul de cretere, operonul trp nu este transcris. Cnd
aprovizionarea celulelor cu triptofan este insuficient, transcrierea operonului este iniiat.
Pentru reglarea unei ci biosintetice, o reglare de tipul on-off nu rspunde necesitilor celulei. Este
necesar o reglare cantitativ, deoarece n natur apar situaii n care, o cantitate suboptimal de triptofan este
disponibil, dar aceasta este insuficient pentru creterea normal a celulei. Deficitul de triptofan n celul, este
evitat printr-un sistem reglator modulator, n care, nivelul transcrierii operonului n starea derepresat este
determinat de concentraia triptofanului disponibil. Acest mecanism reglator este activ pentru muli operoni care
codific biosinteza aminoacizilor.
Triptofanul se sintetizeaz n 5 trepte, fiecare catalizat de o enzim specific. La E. coli, genele
codificatoare (A, B, C, D, E) ale enzimelor sunt traduse dintr-o molecul de ARNm policistronic. Prima gen
tradus este trp E.
Gena pentru sinteza represorului (trp R) este localizat departe de acest policistron. Proteina codificat
de gena trp R este aporepresorul trp, inactiv ca atare, datorit lipsei totale de afinitate pentru regiunea operator.
In prezena produsului final al cii de biosintez (triptofanul), de origine exogen sau acumulat prin sinteza
endogen, aporepresorul se activeaz: moleculele de triptofan, cu gr. mol. mic, se comport ca un corepresor.
Complexul format din aporepresor i corepresor se leag de secvena operator i transcrierea genelor trp este
blocat.
Fig. 139. Diagrama operonului triptofanului la E. coli.
Cnd aprovizionarea celulei cu triptofan exogen este diminuat, operatorul este liber i transcrierea
ncepe. Acesta este principiul mecanismului reglator on-off.
Cile biosintetice sunt controlate ns, prin mecanisme mai fne, n care concentraia enzimelor unei ci
este variabil n funcie de concentraia produsului final al cii. Mecanismul const n terminarea prematur a
transcrierii, nainte ca prima gen structural s fie transcris.
Pe msur ce triptofanul disponibil scade, ncepe transcrierea, dar aceasta este modulat cantitativ. Intre
promotor i operator sunt dou regiuni, denumite leader i atenuator (trp L i trp a). Secvena L,
necodificatoare, se gsete la capatul 5 al moleculei de ARNm. La bacteriile de tip slbatic, n absena
triptofanului n mediu, transcrierea majoritii moleculelor de ARNm se termin la secvena de 28 de baze,
denumit atenuator. Rezultatul este transcrierea unui ARNm de l40 de nucleotide (al secvenei L), fr ca
genele structurale ale operonului sa fie transcrise. Secvena Leader codific un polipeptid de l4 aminoacizi, care
conine triptofan n pozitiile l0 i 11. Cei doi codoni ai triptofanului din secvena Leader sunt sensibili la
concentraia ARNt trp, adic dac aprovizionarea cu triptofan este suficient, traducerea ARNm Leader
diminu.
Moleculele de ARNm Leader au rolul de a recepiona concentraia triptofanului sintetizat de enzimele
operonului. Dac nivelul triptofanului este sczut, ARN-polimeraza depete situsul atenuator i transcrie
ntregul operon. Invers, creterea concentraiei aminoacidului n celul, blocheaz transcrierea la nivelul
secvenei atenuator.
Ali civa operoni care codific sinteza aminoacizilor la E. coli, posed situsuri atenuatoare i
realizeaz o reglare cantitativ asemntoare. Secvena atenuatoare este senzor al concentraiei celulare a
aminoacidului a crui sinteza o regleaza. Peptidul leader al fiecrui operon conine civa aminoacizi de tipul
celor controlai de operon. De exemplu, operonul treoninei codific enzime ce sintetizeaz treonina i
izoleucina. Peptidul leader conine 8 resturi de treonina i 4 resturi de izoleucina. In secvena leader de l5
aminoacizi a fenil-alaninei se gsesc 7 resturi de fenil alanin, iar peptidul leader al operonului histidinei
conine 7 resturi consecutive de histidin.
Din punct de vedere molecular, mecanismul reglator este condiionat de faptul c la bacterii,
transcrierea este cvasi-simultan cu traducerea mesajului.
Fenomenul represiei sintezei enzimelor prin feed-back, permite celulei s menin n limite adecvate,
concentraiile relative ale enzimelor necesare sintezei aminoacizilor, proteinelor, acizilor nucleici etc.
Controlul activitii enzimelor. Inhibiia prin produsul final
Reglarea prompt a activitii enzimatice pentru evitarea supraproduciei de intermediari metabolici
(aminoacizi, baze purinice i pirimidnice), se realizeaz prin inhibiia activitii enzimelor, sub aciunea
produsului final de biosintez. Acest proces reglator se numete inhibiie prin produs final, retroinhibiie sau
inhibiie prin feed-back.
Dac celula ar controla numai biosinteza enzimelor, reglarea ar fi lipsit de promptitudine, deoarece
enzimele deja existente n celul, i-ar exercita aciunea catalitic i rezultatul ar fi acumularea n exces a
produsului cii respective. Celulele dispun de mecanisme de reglare fin, instantanee, ce constau n inhibarea
sau blocarea funcionrii primei enzime a cii biosintetice, sub aciunea produsului final aflat n exces.
Existena reglrii prin inhibiia activitii enzimelor s-a demonstrat pentru mai multe sisteme
enzimatice, n care biosinteza unor metabolii sau degradarea unui substrat se realizeaz printr-o serie de trepte
succesive, fiecare fiind catalizat de o enzim diferit. Grupul de enzime care acioneaz cooperant pentru
sinteza sau pentru degradarea unui metabolit se numete zimom. Prezena n mediu, a produsului final al ultimei
trepte metabolice de sintez, inhib activitatea enzimei care catalizeaz prima treapt a biosintezei i astfel,
ntreaga serie de reacii succesive este blocat, dar se reactiveaz n absena metabolitului.
E. coli sintetizeaz L-izoleucina din treonin. Dac mediul minimal, cu glucoza i NH 4+ este
suplimentat cu L-izoleucin, are loc blocarea prompt a activitii enzimei L-treonin-deaminaza, implicat n
prima treapt a biosintezei. Astfel, enzimele care catalizeaz reaciile urmtoare ale cii sintezei L-izoleucinei
sunt lipsite de produii intermediari, care reprezint substratul lor specific.
De obicei este blocat numai prima treapt a unui lan metabolic.
Mecanismul molecular al inhibiiei prin produs final. Sitemele de retroinhibiie sunt active, n esen, n
reglarea cilor de biosintez (anabolism). Produsul final al cii, inhib aciunea catalazei ce catalizeaz prima
treapta a sintezei produsului final. Produsul final al unei ci de biosintez, format din mai multe trepte, se
deosebete net de substratul primei enzime. Att produsul final, ct i substratul su nespecific, interacioneaz
cu aceiai enzim. Aceste enzime au caracter de proteine alosterice. Interaciunea cu substratul specific i cu
produsul final al cii, are loc la situsuri moleculare diferite. Cnd se combin cu produsul final al cii (efectorul
alosteric), enzimele alosterice sunt incapabile s funcioneze catalitic, deoarece situsul lor activ sufer o
tranziie alosteric, la forma inactiv. Astfel de proteine ale cror configuraii spaiale se modific dup legarea
moleculelor mici specifice, la alte situsuri dect situsul activ, se numesc proteine alosterice, iar moleculele
efectoare ale acestor transformri se numesc efectori alosterici.
Exist mai multe tipuri de inhibiie prin produs final:
- inhibiia cilor multifuncionale (multivalente), corespunde reglrii cilor metabolice ramificate, n care se
sintetizeaz mai muli produi finali. Pentru a asigura inhibiia reglatoare, este indispensabil prezena
diferiilor produi finali. Aciunea izolat a fiecrui produs este ineficient;
- inhibiia cumulativ se caracterizeaz prin faptul c, fiecare din produsele finale ale unei ci ramifcate,
chiar la concentraia de saturare, inhib parial activitatea primei enzime. Diferiii produi finali acioneaz
sinergic;
- inhibiia asupra izoenzimelor: enzima ce catalizeaz prima treapt se gsete sub mai multe forme
(izoenzime), fiecare fiind sensibil la aciunea unui anumit produs. Cel mai cunoscut este cazul aspartokinazei la E. coli, constituit din trei izoenzime.
Inhibiia prin produs final este de ordin cantitativ. Produsul final inhib parial sau total, activitatea
primei enzime, n funcie de concentraia sa n mediu. Inhibiia total a activitii enzimei, se produce numai n
cazul n care produsul final s-a acumulat n exces fa de necesitile celulei.
Aplicaii ale represiei sintezei enzimelor n biotehnologie. Represia sintezei enzimelor ofer
posibilitatea dirijrii proceselor de biosintez industrial, pe urmtoarele ci:
- limitarea prezenei i acumulrii produilor finali n mediu. Astfel, producerea glutamat-dehidrogenazei
poate fi mrit de circa 20 de ori la B. liqueniformis, prin utilizarea glucozei sau malatului ca surs de C,
n loc de glutamat sau de hidrolizat de cazein;
- limitarea producerii interne prin biosintez, a produilor finali, prin adugarea n mediu, a unui inhibitor al
cii metabolice;
- nfometarea parial a unei mutante auxotrofe, fa de produsul necesar creterii;
utilizarea unor mutante de reglare (mutante constitutive): fie a unor mutante care sintetizeaz un
aporepresor ce nu se combin cu corepresorul, fie a unor mutante la nivelul regiunii operatoare, ce nu pot
lega represorul. Ele sintetizeaz enzime constitutive, chiar n prezena unor concentraii mari de produi
finali, care n mod normal sunt represoare.
Controlul sintezei proteice la nivelul traducerii
Genele codificatoare ale celor peste 50 de proteine ribosomale sunt localizate n peste 20 de operoni i
sinteza lor este controlat riguros. Controlul este esenial, deoarece componentele ribosomale reprezint peste
40% din greutatea uscat a celulei bacteriene.
Controlul sintezei proteinelor ribosomale se exercit n primul rnd la nivelul traducerii, spre deosebire
de alte proteine care sunt reglate la nivelul transcrierii.
Cel puin o protein, codificat de fiecare din cei peste 20 de operoni, are rolul de represor al traducerii.
Represorul traducerii se leag de ARNm lng situsul de iniiere a propriei sale sinteze i blocheaz sinteza
ctorva proteine codificate de mesajul poligenic.
Legarea proteinelor reglatoare, de ARNm, nu interfer cu asamblarea ribosomilor, deoarece proteinele
ribosomale se leag mai ferm de ARNr dect de ARNm.
Represia traducerii are loc numai cnd sinteza proteinelor ribosomale o devanseaz pe aceea a ARNr,
sau cnd aceste proteine nu se formeaz n cantiti echimolare.
Represia prin catabolit
Represia prin catabolit se exercit asupra sistemelor enzimatice inductibile ale catabolismului i a fost
descris sub denumirea de efectul glucozei, deoarece, la unele microorganisme, glucoza represeaz
catabolizarea altor glucide. Acest tip de represie este evident n condiiile cultivrii unor bacterii, ntr-un mediu
ce conine un amestec de zaharuri, care sunt catabolizate succesiv, astfel nct curba de cretere este de tip
diauxic.
Fenomenul de diauxie este datorat represiei catabolice pe care o exercit un compus uor i rapid
metabolizabil (glucoza), asupra utilizrii unui alt glucid. Exemplul clasic al represiei prin catabolit, este al
celulelor de E. coli, cultivate n prezena unui amestec de glucoz-lactoz. Cultura are o curb de cretere
diauxic. Dac un microorganism se cultiv n prezena a dou substraturi glucidice, din care unul este represor,
iar sistemul enzimatic de catabolizare a celui de al II-lea este sensibil la represie, metabolizarea primului glucid
blocheaz sinteza enzimelor de metabolizare a celui de al II-lea. E. coli, cultivat pe un mediu cu glucoz i
lactoz, crete iniial, exclusiv pe seama catabolizrii glucozei, iar cnd concentraia ei scade foarte mult, dup
o scurt perioad de lag, creterea este reluat pe seama catabolizrii lactozei.
Glucoza este metabolizat cu o rat superioar altor glucide, astfel nct, n celul se acumuleaz o
concentraie suficient de metabolii necesari diferitelor ci de sintez.
Represia prin catabolit survine atunci cnd un compus este metabolizat att de rapid, nct produii
intermediari acoper ntregul necesar de biosinteze ale celulei i face inutil i chiar costisitoare, funcionarea
concomitent a cii de degradare a altui compus. Cataboliii intermediari n exces, represeaz nu numai
enzimele cii metabolice prin care au fost generai, ci chiar i enzimele oricrei alte ci care are potenialitatea
de a-i produce.
La nivel molecular, represia prin catabolit, este rezultatul scderii concentraiei de AMP ciclic. Legarea
ARN-polimerazei pentru transcrierea operonului lac, are loc numai dac o alt protein, denumit proteina
activatoare a catabolismului s-a asociat n imediata vecintate a situsului promotor. Aceast protein se
asociaz numai dac, n prealabil, s-a activat n prezena AMP ciclic (fig 140).
In prezena glucozei n mediu, nivelul AMP ciclic scade i proteina activatoare a catabolismului nu se
asociaz promotorului operonului lac. In absena acesteia, ARN-polimeraza nu initiaz transcrierea operonului.
Astfel, represia prin catabolit pare a fi rezultatul unui deficit al AMP ciclic.
Fig. 140. Rolul AMP ciclic n sinteza ARNm i mecanismul represiei catabolice. Cnd AMPc este disponbil, proteina
activatoare a catabolismului (CAP) se asociaza de un situs adiacent promotorului, care la rndul sau stimuleaza legarea ARNpolimerazei. n prezena glucozei, AMPc este degradat, CAP nu se poate asocia i ARNm nu este transcris.
Structura molecular a AMP (Adenozin-monofosfatul) ciclic.
Principii de inginerie genetic

Ingineria genetic (denumirea mai corect este aceea de inginerie genic) are ca domeniu de activitate,
modificarea structurii genetice a unui organism, prin introducerea unor gene noi, de la un organism al aceleiai
specii, al unei specii diferite sau a unor gene artificiale. Ingineria genic ofer posibilitatea recombinrii genelor
provenite de la organisme ndeprtate filogenetic, care nu fac schimb de informaie genetic pe cale natural.
Ingineria genic este subordonat practicii biotehnologice, deoarece ea reprezint numai prima etap a
procesului biotehnologic, etapa reprogramrii genetice.
Biotehnologia (Bioindustria) clasic a utilizat i utilizeaz nc, microorganismele existente n mediile
naturale i este limitat la obinerea produselor de fermentaie: a berii, n vinificaie, n industria panificaiei.
Ulterior, n scopul optimizrii randamentului productiv, s-au folosit microorganisme selecionate. Astzi,
biotehnologia utilizeaz, pe scar tot mai larg, microorganisme reprogramate genetic. Scopul reprogramrii
genetice este ameliorarea proprietilor biologice ale microorganismelor de interes biotehnologic, precum i
conferirea unor proprieti noi de biosintez.
Tehnicile de modificare a programului genetic al microorganismelor pot fi grupate n dou categorii: de
nivel celular i de nivel molecular.
Ingineria genetic la nivel celular
n l960, Barski a evideniat c celulele somatice ale organismului animal sunt capabile s fuzioneze i s-i
reasorteze informaia genetic. In l965, G. Harris a remarcat c frecvena hibridrii celulelor somatice crete
semnificativ, dac n amestecul celular se adaug particule de virus Sendai, inactivat cu radiaii UV. Inveliul viral
conine o proteina de fuziune, care produce agregarea su fuziunea celulelor.
Pe calea fuziunii ete posibil hibridarea celulelor care provin de la organisme ndeprtate filogenetic: celule
de obolan i oarece, de oarece i om, celule normale i tumorale etc.
Experienele de fuziune s-au realizat iniial la celulele vegetale. Ca i celulele animale, protoplatii celulelor
vegetale pot s fuzioneze. Agentul favorizant al fuziunii este polietilenglicolul (PEG). Modelul vegetal al fuziunii se
deosebete de cel animal, prin posibilitatea de principiu, de a clona planta ntreag, care ntrunete suma caracterelor
celor doi parteneri care se hibrideaz prin fuziune. La unele specii de plante (tutun, morcov, vi de vie, tomate), din
protoplatii fuzionai, dup regenerarea peretelui celular i formarea calusului, se poate regenera ntregul aparat
vegetativ al plantei.
Tehnica de inginerie genetic la nivel celular, aplicabil microorganismelor se bazeaz pe fuziunea
protoplatilor.
Fuziunea protoplatilor bacterieni
Utilizarea protoplatilor n studiile genetice a ntrziat, datorit aparentei incapaciti a protoplatilor
celulelor Gram pozitive, de a reversa la condiia de celul cu perete.
Studiul lor a cptat semnificaii i dimensiuni noi, dup ce s-a observat c aceste structuri celulare nude au
capacitatea s reverseze la forme celulare osmotic stabile, identice cu cele de origine. Aceast constatare a
impulsionat cercetrile de inginerie genetic celular, al cror scop este obinerea de noi tulpini de microorganisme
de importan industrial, prin tehnica fuzionrii protoplatilor.
Agenii de fuziune (PEG cu greutatea molecular de 4 000-6000 D i ionii de Ca 2+) mresc semnificativ
capacitatea protoplatilor de a se agrega, uneori n grupuri mari.
Scopul fuziunii este obinerea celulelor cu determinani genetici noi, rezultai prin procesele de recombinare
a genomurilor protoplatilor parentali.
Pentru a urmri realizarea proceselor de recombinare se folosesc markeri genetici de morfologie, de
auxotrofie, de rezisten la antibiotice etc.
Etapele metodologiei fuziunii protoplatilor
Fuziunea. In mediul de fuziune, care conine PEG 50% i ioni de Ca 2+ (l0l00 mM), n faza iniial se
produce aglutinarea protoplatilor, datorit deshidratrii intense, formndu-se agregate de diferite dimensiuni. In
zonele de contact strns are loc o translocaie a proteinelor membranare, urmat de interaciuni lipidice ntre
membranele adiacente. Moleculele fosfolipidice se reorganizeaz n zona de contact i rezultatul este fuziunea
intermembranar. Se stabilesc puni citoplasmatice care cresc treptat, astfel nct fuziunea se definitiveaz.
Pentru procesul fuziunii nu este n mod obligatoriu viabilitatea ambilor parteneri. Se poate realiza
inactivarea prealabil a uneia din cele dou linii de protoplati fuzionani.
Cei doi parteneri participani la fuziune nu au polaritate. Ei sunt egali att n capacitatea de a dona, cat i de
a primi informaie genetic. Procesul de fuziune nu este limitat de bariere genetice sau de incompatibilitate.
Fuziunea protoplatilor determin formarea unei noi entiti, o celul binucleat, care n decursul regenerrii
sau ulterior, segreg i produce colonii care conin celule cu genotip haploid, modificat prin recombinare.
Fuziunea s-a realizat la protoplatii de B. subtilis, B. megatherium, Streptomyces, E. coli, precum i la o
serie de levuri i fungi filamentoi.
Regenerarea protoplatilor semnific refacerea peretelui celular i reversia la structura celular de origine.
Regenerarea este o etap esenial i este cea mai dificil dintre etapele metodologiei utilizarii lor. Regenerarea este
rapid i total, dac protoplastul mai pstreaz un rest din peretele vechi, care are rolul de primer pentru biosinteza
noului perete.
Selecia recombinanilor se face dup regenerarea pe un mediu special de reversie, un mediu selectiv pe care
se pot dezvolta numai celulele revenite la prototrofie, prin procesul recombinrii.
Aplicaii practice ale fuziunii protoplatilor. Fuziunea protoplatilor este o tehnic de inginerie genetic la
nivel celular, cu importan excepional pentru biotehnologie, datorit aplicaiilor poteniale multiple. Fuziunea
protoplatilor este deosebit de important pentru microorganismele lipsite de mecanisme de transfer al informaiei
genetice, crora le confer n mod artificial, sexualitate.
Metoda fuziunii protoplatilor a fost aplicat bacteriilor din g. Bacillus, pentru obinerea unor noi tulpini cu
randament superior de producere a diferitelor enzime (proteaze, amilaze), din g. Streptomyces, pentru creterea
randamentului produciei de antibiotice, precum i a levurilor utilizate n producerea berii (S. carlbergensis).
La fungi, dup fuziune, se formeaz un heterocarion(celul care conine 2 nuclei diferii). Metoda este foarte
important deoarece muli fungi de importan comercial nu se reproduc pe cale sexuat.
O alt metod de stimulare a procesului de fuziune este electroporarea. Celulele bacteriene se amestec cu
ADN plasmidial i sunt supuse unui scurt impuls electric cu voltaj nalt. Acesta pare s determine formarea unor
mici discontinuiti n membran, prin care ADN ptrunde n celul. Celulele transformate pot fi selectate pe baza
rezistenei la antibiotice, conferit de o plasmid. Metoda poate fi folosit pentru a uura nglobarea ADN, de ctre
orice tip de celul.
Transformarea protoplatilor este o metod eficient de clonare a genelor. Se folosesc protoplati de B.
subtilis sau de levuri. Celulele de B. subtilis se pot transforma genetic datorit competenei naturale, dar nglobeaz
numai ADN linear. ADN circular este nglobat numai de protoplati. Eficiena procesului de transformare a
protoplatilor, adeseori este prea mic pentru a avea importan practic, iar regenerarea necesit condiii greu de
optimizat.
Premisele stiinifice ale ingineriei genetice la nivel molecular
Ingineria genic molecular este un domeniu multidisciplinar, al crui scop este dezvoltarea bioindustriei n
general i a microbiologiei industriale n particular. Evoluia sa pn la stadiul de corp unitar de metode i tehnici
proprii este rezultatul descoperirilor n domeniul biochimiei enzimelor i acizilor nucleici de origine bacterian.
Progresele tiinifice ale microbiologiei din perioada l950-l965, au avut un impact hotrtor asupra dezvoltrii
biologiei n general, dar n special asupra dezvoltrii conceptelor biologiei moleculare. Termenul de biologie
molecular a fost introdus n l950.
Biologia molecular nu este o disciplin de sine stttoare, ci reunete ntr-un corpus tiinific unitar,
domenii care anterior erau complet independente (Microbiologia, Genetica, Biochimia). Biologia molecular este un
mod de a nelege desfurarea proceselor biologice. Ea explic proprietile i activitile organismelor pe baze
moleculare, aplicnd sistemelor biologice, legi care guverneaz sistemele mai simple (fizice i chimice).
Orientarea molecular a cercetrilor biologice, cristalizat n timp, a beneficiat de aportul Microbiologiei i
Virologiei, domenii care au furnizat modelul experimental al cuplului E. coli fag lambda. In acest context,
Microbiologia a avut rolul unificator, deoarece diferitele tehnici (fizice, biochimice, genetice) i rezultatele obinute
au fost raportate la acelai model experimental, fcnd posibil interpretarea lor corelativ. Sistemul biologic E. coli
- fag lambda a devenit cel mai bine cunoscut din ntreaga lume vie, fiind cunoscute toate detaliile de structur,
precum i amplasarea pe cromosom a circa 800 de gene. Biologia molecular este rezultatul utilizrii convergente a
mai multor tehnici experimentale de vrf, pentru studiul aceluiai model experimental. Consecina a fost
consolidarea biologiei moleculare, concretizat n cteva realizri tiinifice fundamentale:
- elucidarea structurii acizilor nucleici i a proteinelor;
- descoperirea codului genetic
- descoperirea fluxului informaiei genetice n celul;
- descoperirea mecanismului molecular al biosintezei proteinelor;
- descoperirea proceselor de variabilitate, de recombinare i de mutagenez;
- descoperirea bazelor moleculare ale proceselor de cretere i diviziune celular;
- descoperirea mecanismelor de reglare a activitii celulare.
Aceste descoperiri tiinifice de excepie, au justificat definirea perioadei l950-70, n termenii revoluiei
biologiei moleculare. Conceptele majore ale celor mai multe tiine tradiionale s-au reformulat pe baze moleculare.
Dup l970, dou categorii de descoperiri tiinifice au influenat decisiv evoluia biologiei moleculare:
l) Descoperirile care au infirmat o serie de dogme:
- dogma central a biologiei moleculare, odat cu descoperirea reverstranscriptazei i a transcrierii inverse (la
retravirusuri);
- dogma o gen o enzim, dup evidenierea genelor suprapuse i a citirii defazate, la virusurile de
dimensiuni mici;
- dogma citirii secveniale a informaiei genetice (citirea fr pauze, odat cu descoperirea genelor discontinui);
2) Descoperirea enzimelor de restricie i a plasmidelor a deschis calea elaborrii unor tehnici i tehnologii de
biologie molecular, cunoscute astzi sub denumirea de inginerie genetic, geniu genetic sau tehnologia ADN
recombinant. Tehnicile de inginerie genetic se bazeaz pe posibilitatea secionarii moleculei de ADN, de diferite
origini (animal, vegetal, fungic, bacterian, viral), cu ajutorul unor enzime speciale denumite endonucleaze de
restrictie i a legrii reasortate a unor fragmente, prin intermediul aciunii altor enzime, denumite generic ADNligaze, n vederea transferului n alte celule.
Exist posibilitatea ca genele transferate, s funcioneze n celula acceptoare i s determine sinteza de ctre
celula respectiv, a unor substane noi, pe care, n mod obinuit, celula nu le produce. Microorganismele, crora n
mod artificial li se grefeaz gene strine, funcionale sunt reprogramate genetic.
Un interes deosebit pentru tehnicile de inginerie genetic, l-a strnit posibilitatea sintezei de ctre celulele de
E. coli reprogramate, a unor molecule de o deosebit importan clinic: insulina, somatostatina, interferonii etc.
Tehnicile bazate pe metodologia ADN recombinant, au deschis calea unei noi revoluii revoluia
biotehnologic sau bioindustrial. Revoluia biotehnologic este ferm orientat spre industria genetic, deoarece
utilizeaz, pe scar tot mai larg, microorganisme modificate genetic (reprogramate) prin tehnici de inginerie
genetic.
Revoluia biotehnologic este considerat ca una din perspectivele de mare succes ale studiului
microorganismelor. La baza ei stau descoperirile fcute, n primul rnd, pe celulele de E. coli. Cunoaterea
aprofundat a celulei de E. coli a condiionat, ca majoritatea transferurilor de gene s se fac la acest organism, care
a devenit astfel un adevrat cobai al biologiei moleculare.
Enzimele de restricie
Pn n l960, izolarea unei gene cromosomale prea imposibil. Prin procedeul fragmentrii mecanice a
ADN, obinerea unui fragment de lungimea unei singure gene din genomul mamiferelor are o ans foarte mic
(l/l00 000). Purificarea unui astfel de fragment este imposibil.
Soluia practic a izolrii genelor a fost adus de enzimele de restricie, care au activitate de endonucleaze.
Studiul lor a nceput odat cu descoperirea faptului c unele bacterii au capacitatea de a rezista infeciei fagice,
deoarece posed enzime care atac i cliveaz ADN de provenien exogen (strin).
Enzimele de restricie se gsesc la cele mai multe microorganisme procariote, dar lipsesc la eucariote.
Diferena net a distribuiei lor este parial explicat, prin aceea c la procariote exist un flux genetic deosebit de
intens, fr echivalen n restul lumii vii. Enzimele de restricie au rolul de a recunoate i de a degrada ADN
exogen, limitnd replicarea sa i propagarea n generaiile celulare ulterioare.
Enzimele de restricie au urmtoarele proprieti definitorii:
- recunosc ca strine secvenele din molecula de ADN exogen i o cliveaz, fcnd-o nefuncional, fiind
enzime cu activitate endonucleazic;
- enzimele de restricie sunt asociate n celula bacterian, cu enzimele de modificare. Ultimele recunosc aceleai
secvene de ADN strin i le modific, astfel nct nu mai pot fi clivate de endonucleaze.
Enzimele de restricie-modificare formeaz un sistem funcional unitar i au rolul de santinele genetice ale
celulei. Ele recunosc aceiai secven de ADN, dar realizeaz activiti enzmatice diferite.
Se cunosc trei clase de enzime de restricie, notate cu I, II i III. Molecula de enzim de restricie de tip I
cumuleaz funciile de nucleaz (produce clivarea) i de modificare prin metilare. Trei situsuri distincte ale aceleiai
molecule realizeaz funciile de recunoatere, clivare i modificare. Fragmentele de ADN rezultate sunt heterogene
ca mrime i nu pot fi utilizate pentru clonare sau pentru analiza structural a ADN.
Restrictazele de tip II au numai funcie endonucleazic i cliveaz molecula de ADN n fragmente de
dimensiuni relativ egale, utilizabile pentru clonare.
Restrictazele de tip III se deosebesc de cele de tip I, prin aceea c nu au funcia de modificare. Fragmentele
de ADN care rezult, sunt heterogene.
Nucleazele taie legturile fosfodiester ale lanurilor polinucleotidice. Cele ce taie preferenial legturile
interne se numesc endonucleaze, iar cele care secioneaz nucleotidele terminale se numesc exonucleaze.
Mecanismul de aciune. Mult timp dup descoperirea lor, s-a considerat c endonucleazele acioneaz
nespecific, adic cliveaz molecula de ADN n orice punct, indiferent de secvena bazelor. Endonucleazele de
restricie cliveaz fragmentele de ADN numai la nivelul unor secvene de 4-8 baze, care au caracter de palindrom,
adic ordinea bazelor n direcia 5 -- 3 pe o caten este aceiai i pe caten opus n aceiai directie 5 --- 3.
De exemplu, restrictaza Eco R1 recunoate secvena *:
Situsul de aciune a enzimei, pe cele dou catene este decalat, fiind localizat ntre nucleotidele marcate cu simboluri n relief.
Deoarece aceiai secven de baze, dar orientat n direcii opuse se gsete pe ambele catene, enzimele de
restricie creeaz totdeauna clivri dublu catenare. Ruperile se produc aproape simultan, deoarece multe enzime de
restricie, sub forma dimerilor, se leag de ambele situsuri de recunoatere pe cele dou catene. Adeseori, situsul de
recunoatere este i situs de clivare. Dac cele dou catene ale moleculei de ADN sunt secionate la acelai nivel
rezult fragmente cu capete tiate drept (blunt ended). Alte enzime secioneaz decalat pe cele dou catene, la o
oarecare distan de axul de simetrie a palindromului i astfel rezult fragmente de ADN cu extremiti
monocatenare lipicioase (sticky ends), care se pot lega prin complementaritate i genereaz structuri moleculare
circulare.
Palindroamele recunoscute de enzimele de restricie sunt relativ scurte. Discontinuitile create nu sunt
reparate de enzimele de reparare.
Se cunosc peste l00 de endonucleaze cu specificiti diferite, izolate de la peste 300 de specii de
microorganisme procariote. Pentru ingineria genetic, aceste enzime sunt instrumente eseniale de lucru, adevrate
bisturie biochimice, care secioneaz moleculele de ADN. Din moleculele mari de ADN se obin fragmente mici.
Secvenele scurte de diferite origini pot fi legate sub aciunea ADN-ligazei.
Enzimele de modificare
Modificarea este procesul biochimic prin care, unele enzime specifice sintetizate de bacterii modific natura
bazelor la nivelul unor secvene de ADN, recunoscute de enzimele de restricie. Secvenele modificate devin
rezistente la aciunea endonucleazelor de restricie.
Pentru fiecare endonucleaz de restricie trebuie s existe o enzim de modificare. Cel mai adesea,
modificarea se realizeaz prin metilare la situsuri specifice sub aciunea metilazelor. De exemplu, restrictaza Eco R
II recunoate secvena:
G C A G G .
G G T C C ..
Enzima de modificare metileaz citozina:
m
C C A G G ..
G G T C C ..
m
O secven de nucleotide poate fi substratul aciunii unei enzime de restricie sau de modificare, dar
niciodat pentru ambele.
La procariote, circa l% din totalul bazelor sunt metilate. Cel mai adesea este metilat adenina (sub forma
metil-adeninei) i cu o frecven mai mic se metileaz citozina (sub forma metil-citozinei). Modificarea prin
metilare se realizeaz pe ambele catene ale moleculei de ADN, n cursul replicrii acesteia.
Simultan cu enzimele de restricie-modificare s-au descoperit alte categorii de enzime:
- ligazele, enzime capabile s adauge nucleotide la extremitatea moleculei de ADN, s lege covalent cele dou
extremiti i s formeze o molecul linear recombinat sau respectiv, o molecula circular. Cea mai utilizat
ligaz comercial este cea codificat de fagul T4;
- terminal-transferazele, enzime care catalizeaz adugarea nucleotidelor la extremitatea 3 a moleculei de ADN
n curs de sintez, fr s necesite matria i chiar pot s creeze extremiti adezive.
Restrictazele, ligazele i terminal-transferazele sunt instrumentele de lucru ale ingineriei genice.
Restrictazele taie fragmentele de ADN, iar ligazele reunesc capetele rezultate. Foarte important i definitoriu pentru
ingineria genic, este faptul ca fragmentele de ADN rezultate sub aciunea unei restrictaze pot fi reunite
(recombinate), indiferent de proveniena lor. Se obin astfel molecule himere.
Moleculele recombinate de ADN stau la baza restructurrii profunde a coninutului microbiologiei
industriale.
Cea de a II-a categorie important de molecule pentru biotehnologie sunt plasmidele. Ele au capacitatea de a
ncorpora n structura lor, gene de provenien strin i de a le transmite cu o frecven mare, de la o celul la alta.
In al II-lea rnd, biotehnologia se bazeaz pe perfecionarea in vitro, a tehnicilor de transfer de material
genetic la bacterii i la levuri, prin care se modeleaz mecanismele de transfer care au loc n mod natural.
Etapele reprogramrii microorganismelor prin tehnologia ADN recombinant (clonarea molecular)
Ingineria genic la nivel celular, prin fuziunea protoplatilor realizeaz transferul necontrolat al genelor de
la o celul la alta. Metodele ingineriei genice, bazate pe aciunea enzimelor de restricie asigur clivarea controlat i
obinerea fragmentelor de ADN de dimensiunea genelor individuale. Ele ofer posibilitatea izolrii genelor i
transferului lor n celula receptoare.
Tehnicile de inginerie genic molecular sau tehnologia ADN recombinant, avnd ca model transferul unor
gene din celula animal, n celulele bacteriene, se desfoar n urmtoarele etape:
l) Izolarea genei naturale sau sinteza chimic a moleculei de ADN care codific molecula proteic cu semnificaie
practic;
2) Selecia unui vehicul sau vector adecvat i inseria genelor strine n molecula vector i obinerea unei
molecule himere;
3) Transferul moleculei vector n celula bacterian;
4) Selecia celulelor modificate genetic.
Obinerea unei molecule hibride de ADN prin recombinare in vitro i amplificarea ei numeric ntr-o
populaie bacterian se numete clonare.
Pentru a fi perpetuate, genele clonate trebuie s devin parte component a moleculei de ADN, care este
replicat la fiecare ciclu de diviziune.
Prima etap a clonrii moleculare este alegerea sursei donoare de material genetic i obinerea fragmentelor
de ADN. Sursa de ADN poate fi o celul procariot sau eucariot (fungic, vegetal, animal) sau un virus. Din
celule se purific ADN i ulterior, fragmentele utilizabile n etapa clonrii se obin prin diferite metode, innd
seama de faptul c fragmentele care se pot clona sunt relativ mici, ntre l000-2000 perechi de baze. Un astfel de
fragment trebuie s conin secvena integral a unei gene i ct mai puin ADN neinformaional.
Fragmentarea ADN se realizeaz cu ajutorul enzimelor de restricie. Mrimea fragmentelor de ADN
obinute este determinat de mrimea situsului de recunoatere a enzimei i de frecvena cu care situsul respectiv se
ntlnete de-a lungul moleculei de ADN. Cu ct situsul de recunoatere este mai mic, cu att ansa repetrii sale
este mai mare i fragmentele rezultate sunt mai mici. Dintr-un cromosom mamalian rezult l0 5 l07 fragmente, care
se separ dup dimensiuni.
Moleculele de ADN se pot fragmenta mecanic, prin agitare n suspensie, ntr-un mixer special
(waringblender) i rezult fragmente de circa 3000 perechi de baze.
Tehnologia ADN recombinant a fost folosit i pentru clonarea unor gene, a cror identificare prin
fragmentarea genomului nu este posibil, dar pentru care, n celul se gsete ARNm. Din celul se izoleaz ARNm,
iar prin transcriere invers, in vitro se obine o copie de ADN complementar (ADNc). Astfel, se elimin diversitatea
moleculelor de ADN dintr-un amestec. Moleculele de ADNc sunt convertite la ADN dublu catenar.
ADNc se deosebete de ADN genomic, deoarece ARNm este prelucrat prin clivare i ndire. Metoda este
limitat la clonarea genelor de ADNc, al cror ARNm se gsete n citoplasm, n cantitate semnificativ.
Dac proteina are dimensiuni mici, gena codificatoare se obine prin sintez chimic. Se determin secvena
aminoacizilor i se sintetizeaz o molecula de ADN cu codonii corespunztori. Genele astfel sintetizate au caracter
continuu, sunt lipsite de introni i sunt adecvate transcrierii i traducerii n celula bacterian: gena pentru
somatostatin (un hormon de l4 aminoacizi).
In general, genele celulare eucariote sunt prea mari pentru a fi sintetizate chimic i spre deosebire de genele
bacteriene, sunt adesea gene discontinui (mozaicate).
Alegerea vehiculului sau vectorului adecvat ca purttor i cuplarea cu fragmentul de ADN. Pentru ca
fragmentul de ADN s fie transferat n celula receptoare este necesar un purttor denumit vector sau vehicul de
clonare, deoarece ADN din celula eucariot nu poate fi ncorporat direct n cromosomul bacterian. ADN exogen nu
are capacitate de replicare autonom i nici nu se menine n stare autonom, deoarece este sensibil la aciunea
nucleazelor citoplasmatice.
Vectorii sunt molecule de ADN cu capacitatea de replicare autonom. De cele mai multe ori, vectorii sunt
reprezentai de o plasmid sau de un fag temperat, ce pot s lege fragmentul de ADN n care se gsete gena ce
urmeaz a fi clonat.
Vectorii ideali au urmtoarele proprieti:
- sunt relativ mici;
- se replic independent (autonom) n celul, deoarece au o origine a replicrii;
- se purific uor ca uniti ntregi din acizii nucleici ai celulei gazd;
au situsuri de aciune a enzimelor de restricie.

La nivelul unui situs de restricie, genomul vehiculului de clonare va fi secionat cu aceiai enzim de
restricie, care a generat fragmentele de ADN strin, creind posibilitatea legrii celor dou genomuri.
Plasmidele naturale, ca i fagii nu ndeplinesc toate condiiile enunate. De aceea s-au creat noi vectori,
pornind de la cei naturali. Plasmida pBR 322 este cel mai cunoscut vector de clonare i conine o cantitate minim de
ADN. Plasmidele pot lega fragmente de l0-l2 kbp. Fragmentele mai mari tind s fie instabile i pierd cea mai mare
parte a ADN strin. Rata replicrii plasmidelor, scade odat cu creterea dimensiunilor.
Un alt vector plasmidial este pUC18, construit dintr-un replicon asemntor plasmidei Col E 1.
Vectorii plasmidiali trebuie s poarte markeri care s permit selecia celulelor transformate: de exemplu,
una sau mai multe gene de rezisten la antibiotice. Plasmida pUC 1 poart gena bla, care confer rezisten la
ampicilin. Al II-lea marker este gena -galactozidazei. Celulele tranformate sintetizeaz -galactozidaza,
detectabil cu un substrat cromogenic (x-gal), care d culoarea albastr dup ce este hidrolizat de -galactozidaz.
Coloniile transformate de vectorul plasmidial pUC 1 sunt albastre, iar celelalte rmn albe.
Dintre fagi, cel mai utilizat vector este fagul care infecteaz E. coli. Genomul su are circa 48 kb.
Regiunea central, de 20 kb, poate fi nlocuit cu ADN strin, deoarece partea stng (l9 kb) i cea dreapt (l0 kb)
conin toat informaia genetic necesar replicrii fagului. S-a creat astfel o varietate de vectori fagici, care poart l20 kb de ADN strin, fr s afecteze replicarea i mpachetarea normal a cromosomului n fagii progeni.
Diferena esenial fa de vectorul plasmidial este c dup introducerea ADN n celula bacterian, trebuie cutate
plajele de liz ntr-o pnz bacterian.
Fagul , purttor al fragmentului de ADN strin, se multiplic n celulele de E. coli i formeaz genomuri
concatemere, n care situsurile fagice cos, care semnific mpachetarea, sunt aezate la distana de 50 kb.
Mecanismul mpachetrii, orientat de situsurile cos, nu distinge ADN fagic de cel strin. Astfel, lungimea
moleculelor recombinate, mpachetate, este condiionat de prezena situsurilor cos pe molecula de ADN. Fagii
purttori ai fragmentului de ADN strin, sunt infecioi pentru bacteriile sensibile, ca i fagul natural.
Al III-lea tip de vector, combin unele particulariti ale plasmidelor i fagilor i se numete cosmid. Vectorii
cosmizi sunt hibrizi ntre plasmide (care i pstreaz funcia de replicare i markerii de rezisten) i fagi, de la care
pstreaz situsurile cos, ceea ce le permite s fie mpachetai n capsida fagic. Aceti vectori permit legarea i
clonarea unor fragmente mari de ADN, de pn la 50 kbp.
Alegerea celulelor ca suport al clonarii genelor. Molecula hibrid sau himer, rezultat prin legarea ADN
strin de vectorul de clonare, trebuie transferat ntr-o celula bacterian adecvat replicrii. Cel mai adesea,
transferul s-a realizat n celulele de E. coli i B. subtilis.
Transferul propriu-zis se poate face pe una din urmtoarele trei ci:
- transformare genetic, prin inducerea competenei artificiale a celulelor receptoare cu CaCl 2:
- prin conjugare
- prin transducie genetic
Consecutiv replicrii genelor clonate n substratul celular adecvat, s-au creat colecii de plasmide sau fagi,
fiecare purtnd un fragment de ADN, denumite bnci de gene. Intr-o banc ideal se va gsi ntregul genom al
organismului, ca un set de fragmente clonate independent. De regul, lipsesc unele fragmente de ADN, fie datorit
lipsei situsurilor de aciune pentru enzimele de restricie, fie pentru c unele gene sunt letale pentru celula gazd.
Clonarea este o etap complex, att din punct de vedere molecular, ct i al realizrii tehnice. Din punct de
vedere molecular, clonarea corespunde grefrii genelor strine n celula receptor, replicrii i exprimrii lor n noua
gazd. Din punct de vedere tehnic, clonarea const n selectarea celulelor modificate genetic ale populaiei
respective, care vor perpetua vectorul n generaiile de celule.
Clona celular reprezint o populaie de celule rezultat din reproducerea asexuat a unui organism, astfel
nct toate celulele populaiei respective sunt identice din punct de vedere genetic i sunt identice cu celula
parental. Bacteriile reprogramate genetic sunt considerate tulpini mutante ale celulelor parentale, deoarece cel mult
l% din materialul lor genetic este nou.
Posibilitatea clonrii genelor ntr-un organism, cruia n mod natural i lipsete informaia omolog a oferit
o modalitate cu totul original de a studia bazele moleculare ale organizrii genelor i reglrii lor, precum i calea
modificrii organismelor prin modificarea cilor metabolice.
Spectrul de gazd a genelor clonate a fost extins la vectori ai celulelor eucariote: se folosesc plasmide ale
levurilor sau ADN al unor virusuri infecioase pentru organismul animal. S-au obinut vectori prin fuziunea a doi
repliconi, unul bacterian i altul cu originea n celula eucariot, cu capacitatea de replicare, att n celula bacterian,
cat i n celula eucariot.
Genele celulelor eucariote, clonate n celula bacterian nu sunt transcrise de la promotorii proprii, deoarece
acetia nu sunt recunoscui de ARN-polimeraza bacterian. De aceea, pentru exprimarea unei gene n celula
bacterian, este necesar cuplarea cu o secven promotoare bacterian.
O alt problem important este ca fragmentul de ADN generat de o endonucleaz de restricie nu conine
numai gena codificatoare a moleculei biologic active, ci i secvenele care o flancheaz i care trebuie clivate.
Eliminarea lor se face ntr-o etap suplimentar, denumit etapa subclonrii. Pentru aceasta, fragmentul de ADN
recuperat dup clonarea primar este supus clivrii cu diferite enzime de restricie.
Aplicaii ale clonrii moleculare
Clonarea fragmentelor de ADN, purttoare de informaie genetic a revoluionat studiul multor domenii ale
biologiei. Cele mai importante sunt urmtoarele :
l. Cunoaterea organizrii genomurilor de dimensiuni mici este rezultatul clonrii ADN i al metodelor de
scveniere a bazelor. S-a determinat secvena complet a bazelor n plasmide i a genomului mai multor virusuri.
2. Inelegerea geneticii celulei eucariote. Prin clonarea ADN i folosirea ADN clonat n tehnicile de hibridare, s-au
evideniat schimbrile ce au loc n organizarea genelor n timpul maturrii limfocitelor, a genelor ce determin
schimbrile antigenicitii tripanosomelor.
3. Producerea substanelor de mare valoare biologic. Celulele care primesc o gena clonat ntr-un vector, pot
sintetiza cantiti mari ale substanei codificate de gena respectiv.
4. Studiile de nlocuire a genelor i nelegerea mcanismelor reglrii activitii genelor n celula eucariot. In acest
sens, organismele transgenice sunt un exemplu elocvent. Ele rezult prin injectarea n nucleul celulei, a unei gene
clonate. Fragmentul de ADN clonat se integreaz la situsuri diferite n cromosomii celulei ou. Se ofer astfel
posibilitatea studiului diferenierii celulare asupra expresiei genice, ca i a interaciunilor genice. O posibil viitoare
aplicaie la om a metodologiei de clonare este terapia genic, prin introducerea unei gene clonate n celulele
somatice ale unui organism (celule ale maduvei osoase sau ale liniei germinale), pentru a compensa un defect
genetic.
Realizri ale biotehnologiei cu microorganisme. Domeniul care pare s aib cele mai multe avantaje ale
biotehnologiei cu microorganisme reprogramate genetic este cel chimio-farmaceutic. Prin metodologia
biotehnologic se produc hormoni, substane imunostimulatoare (sau adjuvante), capabile s stimuleze rspunsul
imun al organismului animal i uman.
Sinteza n celulele bacteriene, a unei poteine animale cu activitate biologic, presupune depirea unor
dificulti suplimentare celor obinuite de clonare:
- bacteriile nu prelucreaz ARNm transcris din ADN al unei gene eucariote i nu elimin secvenele
neinformaionale (intronii):
- nu cliveaz secvenele suplimentare ale precursorilor proteinelor mature;
- nu realizeaz glicozilarea proteinelor sintetizate.
Totui, unele proteine specifice celulei eucariote sunt sintetizate de bacteriile reprogramate genetic, n forma
lor activ. De exemplu, genele codificatoare ale interferonilor nu au secvene necodificatoare i n consecin,
ARNm nu trebuie s fie clivat i ndit, iar moleculele de interferon produse de leucocite, fie c nu sunt glicozilate,
fie c-i pstreaz activitatea biologic n absena glicozilrii. Aceast restricie impus de necesitatea prelucrrii
ARNm, prin eliminarea intronilor, pentru alte proteine este depit folosind ADNc.
In general, proteinele care se secret sunt produse n cantiti mult mai mari dect acelea care se acumuleaz
n celula bacterian, unde tind s sufere denaturare i digestie. Condiiile reductoare din celul, mpiedic formarea
legturilor S-S stabilizatoare pentru cele mai multe proteine extracelulare.
La E. coli s-au transferat genele pentru sinteza insulinei. Avantajele insulinei bateriene sunt mari, deoarece
ea nlocuie insulina din pancreasul de porc sau bovine. Randamentul de extracie a insulinei pancreatice este de
numai 2 000 UI/kg esut, ceea ce explic criza de insulin pe plan mondial. In plus, insulina animal se deosebete
de cea uman, prin aminoacizii din poziiile 8, 9, l0 i este, prin urmare, o substan non-self. Dup administrare
ndelungat, la persoanele cu reactivitate imunitar mare, se sintetizeaz anticorpi anti-insulin. Insulina
administrat, este legat imediat n complexe reversibile antigen-anticorp, din care se elibereaz necontrolat,
provocnd ocul hiperinsulinemic, cu hipoglicemie marcat. Insulina bacterian, fiind codificat de gena sintetizat
chimic, este identic din punct de vedere chimic cu cea uman. Randamentul de obinere a insulinei prin metode
biotehnologice este foarte mare: circa l00 000 molecule/celul bacterian.
Somatostatina este hormonul hipotalamic reglator al creterii, inhibitor al sintezei de STH hipofizar, izolat
de R. Guillemin. Poate fi produs de E. coli manipulat genetic, purttoare a genei obinut prin sinteza chimic.
Hormonul de cretere (STH) produs de adenohipofiz, ridic probleme medicale deosebite, pentru c are un
grad nalt de specificitate a aciunii sale. Se utilizeaz n tratamentul nanismului, numai hormonul extras din lobul
anterior al hipofizei umane, imediat dup moarte. Acesta este un material foate greu de procurat, care n plus
prezint riscul infeciilor lente. Astzi, STH se obine prin biosintez n celulele de E. coli, purttoare ale genei
obinut prin sinteza chimic, cu secven corespunzatoare celei umane.
Interferonul se obine, n mod obinuit, din leucocite, n centrele hematologice specializate. Este folosit
pentru tratamentul unor forme de cancer, dar producerea sa este foarte costisitoare, pentru un bolnav fiind necesare
circa un miliard de uniti. Biosinteza sa n celulele de E. coli clonate, purttoare ale genei umane este mult mai
ieftin. Sinteza moleculelor active de interferon este posibil numai dac n ADN plasmidial s-a inclus acea parte a
genei care codific aminoacizii sai, fr codonii care specific traducerea peptidului semnal.
Culturile de celule animale sunt utilizate pentru producerea factorilor necesari tratamentului hemofiliei.
Anterior, acesti factori erau izolai din snge, cu un mare risc de a transmite virusurile hepatitie B, C sau HIV.
Obinerea unor proteine sanguine de coagulare prin tehnologia ADN recombinant face aceste substane mai
uor disponibile pentru persoanele cu hemofilie sau alte dezordini sanguine.
Au fost sintetizate artificial i clonate n celulele de E. coli, genele ce codific proteine reglatoare ale
circulatiei sngelui (bradikinina, angiotensina), precum i gene ce codific sinteza mediatorilor sinapselor
neuronale (endorfine).
ADN recombinant este folosit pentru producerea vaccinurilor, mai ieftine i n cantiti mai mari. Clonarea
genelor n celulele de levuri a fcut posibil obinerea antigenului HBs (antigen Australia), precum i a
glicoproteinelor altor virusuri: HSV, VEB, HIV, RSV. Aceste vaccinuri, mai ieftine i mai specifice, produc mai
puine efecte secundare.
Tehnologia ADN recombinant a fost utilizat pentru diagnosticul defectelor genetice fetale, prin metoda
studiului enzimelor n celulele fetale din lichidul amniotic. Defectele sunt detectate, folosind ADN recombinant cu o
secven cunoscut de nucleotide. Eroarea ADN fetal este echivalent cu absena enzimelor sau cu sinteza unor
enzime nefuncionale. Este posibil inseria genei absente sau nlocuirea celei defecte (terapie genic).
Experii pot determina paternitatea cu precizie de 99%, pe baza comparrii probelor de ADN, iar amprenta
ADN recoltat din lichidul spermatic, din snge sau din celulele firului de pr, este folosit n medicina legal
pentru identificarea fptaului.
In biotehnologie, procesele de fermentaie alcoolic, producerea antibioticelor i a altor substane pot fi ameliorate
prin tehnicile de ADN recombinant. De exemplu, inseria genelor pentru sinteza amilazei la Saccharomyces ar face
posibil obinerea alcoolului din amidon. Etapa de zaharificare a amidonului pentru obinerea berii nu ar mai fi
necesar. Vinul ar putea fi obinut din sucuri care conin amidon, n loc de glucide simple.
Degradarea celulozei i a ligninei, producerea unor substane combustibile, ndeprtarea poluanilor i
biosolubilizarea (leierea) metalelor din minereurile srace, sunt procese naturale, dar viteza desfurrii lor, poate
fi mult accelerat prin utilizarea unor bacterii manipulate genetic. Leierea industrial sau extracia metalelor din
minereurile srace de cupru i uraniu, este deja fcut de bacterii din g. Thiobacillus.
Tulpinile de Pseudomonas putida, care degradeaz diferite componente din petrol pot fi manipulate astfel,
nct o tulpin s metabolizeze toate componentele petrolului i s fie utilizat pentru depoluare.
In agricultur, tehnologia ADN recombinant este folosit n scopul controlului insectelor duntoare.
Genele toxinei de B. thuringiensis au fost transferate la Ps. fluorescens, iar acestea se aplic pe seminele de cereale.
Astfel, toxina se prodce n jurul rdcinilor plantei, avnd efect protector fa de insecte.
Prin tehnologia ADN recombinant se ncearc obinerea unor soiuri de plante cu randament productiv
superior, dar care s fie rezistente la ierbicidele folosite pentru combaterea buruienilor.
Tehnologia ADN recombinant a stat la baza crerii bncilor de gene ale diferitelor organisme: om,
Drosophyla, oarece, X. laevis, levuri, bacterii, virusuri. Fiecare banc este o colecie de molecule hibride de ADN,
care cuprinde genele unei specii. Idealul este ca banca s conin tot setul de gene ale unui organism.
Extinderea metodelor de inginerie genetic la nivelul celulei anuimale este legat de identificarea
moleculelor vectoare. Acestea trebuie s aib calitatea nu numai de a lega materialul genetic strin, dar sa permit i
replicarea acestuia.
Dezavantajele clonrii genelor animale i umane n celula bacterian provin din urmtoarele aspecte:
- cele mai multe clonri de gene s-au fcut n celulele de E. coli Kl2. Ca orice bacterie Gram negativ, E. coli nu
secret uor produsele de sintez, care astfel se acumuleaz n citoplasm i sunt parial denaturate;
- celulele bacteriene nu produc modificri specifice, eseniale pentru activitatea biologic a produselor de
sintez: glicozilri, fosforilri, carboxilri;
- unele molecule sintetizate de gene clonate n celula bacterian sunt pliate anormal i dobndesc o configuraie
spaial modificat (de exemplu, Il-2), ceea ce le confer caracter nonself i dup administrare induc sinteza
anticorpilor. Activitatea lor biologic este modificat n raport cu a moleculei native.
Perspectivele utilizrii bacterilor reprogramate genetic. Pentru viitor se apreciaz c multe substane
chimice care n prezent se obin prin sintez, vor fi produse de ctre microorganismele modificate genetic, deoarece
foarte multe procedee de sinteza chimic industrial au ca punct de plecare petrolul i derivaii si. O bun parte a
industriei petrolului va evolua spre bioindustrie. In viitor, pe cale biotehnologic, se vor produce combustibili
neconvenionali: metanol, etanol, metan, H2, petrol sintetic.
Microorganismele reprogramate genetic prin tehnologia ADN recombinant vor fi folosite pentru
recuperarea metalelor neferoase din zcmintele srace i din depozitele de steril, pentru extracia petrolului (70%
rmne n zcmant), pentru combaterea polurii cu petrol.
Utilizarea microorganismelor n biotehnologie (bioindustrie)

Domeniul microbiologiei industriale cuprinde ansamblul proceselor de biosintez sau de bioconversie,
realizate de microorganismele de importan economic.
Prin bioindustrie sau biotehnologie se nelege exploatarea industrial a potenialitii productive a
microorganismelor, a celulelor vegetale sau animale sau a fraciilor subcelulare derivate, cu scopul de a obine
produse utile, cu valoare economic ridicat. Termenul este format din dou cuvinte: bios i tehnos i semnific
tehnologia unui proces de producie cu celule vii.
tiina Microbiologiei industriale este nou, deoarece a urmat progresului Microbiologiei generale,
Biochimiei i Tehnologiei corespunztoare, chiar dac microorganismele se folosesc din antichitate pentru
conservarea alimentelor vegetale, pentru producerea vinului, a laptelui fermentat i a brnzeturilor. Inainte de
tehnologia industrial a rcirii, produsele alimentare erau conservate prin acidifiere (fermentaie lactic sau acetic),
prin fermentaie alcoolic, desicare sau creterea presiunii osmotice prin adugarea zahrului.
In anul 1923, Pfizer n SUA, a nceput producerea bioindustrial a acidului citric, iar de atunci
microorganismele sunt folosite pentru producerea industrial a acidului lactic, acetic, gluconic i a unor solveni
(butanol). Cea mai spectaculoas dezvoltare a microbiologiei industriale s-a produs odat cu descoperirea
antibioticelor, penicilina fiind prima produs pe scar industrial n 1943.
Utilizarea microorganismelor n scop bioindustrial (sau biotehnologic) este cunoscut sub diferite denumiri:
biotehnologia microorganismelor, ingineria microorganismelor sau ingineria biochimic.
Biotehnologia se deosebete de tiin, prin obiectul preocuprilor sale, care este tehnica biologic, dar este
tiinific prin metoda de lucru.
Biotehnologia i bioindustria sunt termeni cu sens echivalent. Din punct de vedere practic, biotehnologia
(bioindustria) nu reprezint un domeniu nou. Ea a intrat de mult n sfera forelor de producie a societii. Toate
tehnologiile fermentative alimentare (producerea vinului, a pinii, a berii, a derivatelor lactate), precum i cele de
biosintez a aminoacizilor, a acizilor organici, a enzimelor i antibioticelor sunt biotehnologii clasice. Sunt excluse
din sfera biotehnologiei, tehnologiile medicale (cu excepia celor de obinere a vaccinurilor i a produselor biologice
de diagnostic), tehnologiile agricole convenionale i cele de ameliorare a plantelor i animalelor. Sectorul cel mai
dinamic al biotehnologiei este acela care utilizeaz microorganismele. El a furnizat i bazele teoretice de modificare
a zestrei genetice a organismelor.
Cultivarea microorganismelor n scop industrial se face n instalaii speciale, denumite bioreactoare.
Bioreactoarele sunt recipiente n care un substrat material este transformat de un catalizator biologic (enzime
sau microorganisme). Bioreactoarele cele mai rspndite folosesc microorganismele sub form liber sau
imobilizat. O alt denumire a bioreactorului este aceea de fermentor.
Dimensiunile bioreactorului depind de procesul de biosintez i de modul de operare. Procesele de
biosintez n culturi discontinui necesit fermentoare mai mari dect cele care sunt operate n regim continuu sau
discontinuu. Trebuie s se poat steriliza i s ofere posibilitatea operaiilor aseptice.
Fermentoarele industriale sunt de dou tipuri: pentru procese aerobe sau anaerobe.
Fermentoarele anaerobe necesit puin echipament special, cu excepia celui pentru ndeprtarea cldurii
generate n timpul fermentaiei.
Un fermentor aerob este un recipient prevzut cu mecanisme de agitare, de aerare, nclzire i control al
temperaturii, de msurare a pH, a O 2 dizolvat, a potenialului redox. Condiiile de cultivare sunt reglate automat,
operaiile fiind asistate de un computer, care colecteaz i nsumeaz datele primite de la diferii senzori.
Aerarea este produs prin pomparea aerului n fermentor, iar agitarea realizeaz o distribuie uniform a
nutrienilor n mediu. Un fermentor industrial are capacitatea cuprins ntre 10 000 500 000 litri.
Fazele cultivrii unui microorganism industrial
Intr-o cultur staionar a unui microorganism industrial, n general, se succed dou faze:
a) Faza de cretere a culturii, denumit trofofaza, corespunztoare perioadei de multiplicare rapid i de acumulare
a masei celulare.
b) Faza de producie sau faza metabolismului secundar, denumit idiofaza, corespunztoare ncetinirii ritmului de
cretere, dei celulele rmn active metabolic.
Microorganismele de importan industrial produc se folosesc pentru obinerea unor de metabolism i
produi de bioconversie.
Produii de metabolism pot fi:
a) Produi ai metabolismului energetic, rezultai n procesele fermentative (alcoolic, lactic, butiric, acetonobutilic, propionic, 2,3-butan-diolic). Alcoolul etilic se formeaz n faza primar.
b) Metabolii primari: aminoacizi, vitamine, enzime(amilaze, celelulaze, proteaze), nucleotide, acizi organici. Sunt
molecule mici, eseniale pentru celul i se sintetizeaz preponderent n timpul fazei de cretere primar (trofofaz).
Unii metabolii primari (acidul glutamic, vitamina B12, acidul citric) se sintetizeaz n idiofaz.
c) Metabolii secundari: antibiotice, alcaloizi (ergotina), stimulatori ai creterii plantelor (gibereline). Apartenena
la grupul metaboliilor primari sau secundari nu se coreleaz strict cu faza n care ei sunt sintetizai, ci cu rolul lor n
viaa celulei.
Metaboliii secundari sunt substane neeseniale pentru viaa celulei i se sintetizeaz la sfritul fazei de
cretere primar, sau chiar n faza staionar a culturii, denumit idiofaz, cnd o surs nutritiv s-a epuizat i
creterea echilibrat nu mai este posibil. Sinteza metaboliilor secundari este expresia proceselor de difereniere
biochimic.
Cei mai importani, din punct vedere industrial, sunt metaboliii secundari.
In condiiile cultivrii continui (n chemostat sau n turbidostat), cele dou faze nu sunt separabile, ci
coexist.
Metaboliii secundari au urmtoarele caracteristici:
- au un grad relativ mare de specificitate (adic fiecare metabolit este sintetizat de un numr mic de tulpini de
microorganisme);
- nu sunt eseniali pentru creterea celulelor
- sinteza lor este dependent de compoziia mediului
- sunt produi ca un grup de compui nrudii, cu mici variaii biochimice.
Dac un proces biotehnologic urmrete obinerea unui metabolit primar, faza de cretere logaritmic va fi
extins ct mai mult cu putin. Pentru obinerea metaboliilor secundari, fazele de lag i de cretere exponenial,
vor fi reduse ca durat, dar se va extinde faza staionar sau se va favoriza creterea lent pe toat durata procesului.
Creterea celulelor i producerea metaboliilor primari sunt procese simultane.
In prima etap se sintetizeaz

metaboliii primari, pe seama
crora celulele cresc. Metaboliii
secundari se sintetizeaz tardiv.
Cele mai rspndite biotehnologii sunt cele care exploateaz capacitatea microorganismelor
de a face biosinteze de mare interes practic.
Un microorganism industrial trebuie s rspund urmtoarelor criterii:
- s creasc rapid pe un substrat ieftin, pe care s-l transforme, producnd cantiti maxime de produs final util i
cantiti minime de produse secundare;
- s tolereze concentraii mari de produs final, fr s-l metabolizeze;
- s realizeze transformarea metabolic a substratului n condiii ct mai economice, astfel nct produsul final s nu
necesite utilizarea metodelor de extracie complicate i costisitoare;
- microorganismele selecionate sau reprogramate genetic, s-i pstreze n timp, proprietile metabolice
particulare, fr riscul variaiilor genetice.
Scopul biotehnologiilor cu microorganisme
Procesele biotehnologice cu microorganisme au ca scop obinerea biomasei sau a unor substane cu utilizri
foarte diverse. Domeniile majore care beneficiaz de produsele microbiologiei industriale sunt cel farmaceutic,
agricol, alimentar, chimic i protecia mediului.
Biomasa obinut prin cultivarea microorganismelor (single cell protein) are un coninut ridicat de proteine,
n care se gsesc aminoacizi eseniali. Pentru obinerea biomasei se cultiv bacterii aerobe ( Pseudomonas,
Mycobacterium), cianobacterii (Nostoc, Oscillatoria, Spirulina), levuri (Candida, Torulopsis), fungi filamentoi
(Rhizopus, Penicillium), alge (Chlorella, Scenedesmus).
Microorganismele cultivate n scopul obinerii biomasei trebuie s aib un randament bun de cretere (s
realizeze densiti celulare mari pe unitatea de volum), s aib coninut mare de proteine bogate n aminoacizi
eseniali, s nu produc substane toxice, s aib gust acceptabil, s fie uor digestibile, s creasc pe substraturi
ieftine, s fie rezistente la contaminare cu alte microorganisme.
Pentru stimularea formrii nodozitilor la plantele leguminoase, n agricultur se utilizeaz inoculul de
Rhizobium.
Enzimele produse de microorganisme sunt amilaze, proteaze, lipaze. Utilizarea lor industrial are avantaje
multiple, comparativ cu agenii chimici, deoarece au aciune specific i sunt lipsite de toxicitate. O enzim foarte
important este glucozo-izomeraza, folosit pentru obinerea fructozei (un ndulcitor) din glucoz.
Produii de metabolism constituie cel mai important grup de substane, obinute prin biotehnologii cu
microorganisme. Unii sunt produi ai metabolismului energetic fermentativ: etanol, acid lactic, acid acetic, acid
butiric, acid propionic, 2,3-butan-diolul. Alii sunt metabolii primari: aminoacizi (acidul glutamic, lizina, triptofanul,
acidul aspartic, fenil alanina), vitamine (riboflavina, vitamina B 12, acidul ascorbic), acidul citric, nucleotide. Cea de a
III-a categorie sunt metaboliii secundari: antibiotice, alcaloizi (ergotina), gibereline. Aproape toate antibioticele
utilizabile n clinic sunt produse prin biosintez.
Bioindustria este orientat spre cultivarea microorganismelor pe deeurile industriei agroalimentare, cu
scopul dublu: de a elimina poluarea i de a produce mas celular pentru hrana animalelor.
In industria petrolier, inoculul de bacterii n sonda de extracie, prin procesele metabolice care au loc pe
seama degradrii hidrocarburilor din iei sau a substratului energetic exogen (melasa)se elibereaz CO 2 i se
sintetizeaz substane tensioactive care mobilizeaz ieiul din depozit i astfel se mrete randamentul de extracie.
In industria extractiv, bacteriile oxideaz compuii cu Fe, Ag, Cu, Ni, Mo, Zn din minereurile srace i
astfel, metalele se extrag prin procese bacteriene. Sulful se extrage cu randament de l00%, prin oxidarea compuilor
cu sulf, de ctre bacteria Thiobacillus thiooxidans.
Microorganismele sunt utile n combaterea polurii mediului nconjurtor. Eliminarea substanelor organice
din apele uzate (menajere, industriale), este consecina metabolizrii lor, n primul rnd de ctre bacterii.
Microorganismele se folosesc pentru valorificarea cantitilor mari de biomas vegetal, n scopul obinerii
etanolului sau a gazului combustibil (biogaz).
Enzime glicolitice
Microorganismele produc o varietate de enzime, majoritatea n cantiti mici, care catalizeaz desfurarea
proceselor metabolice. Unele tulpini de microorganisme produc cantiti mari de enzime, pe care le secret n mediu.
In mediile naturale, enzimele extracelulare hidrolizeaz macromoleculele nutritive (proteinele, amidon, pectina,
celuloza, lipidele, acizii nucleici), iar monomerii i oligomerii sunt transportai n celul.
Preparatele enzimatice produse de microorganisme prin procese industriale aparin urmtoarelor categorii:
a) enzime hidrolitice: glicozidaze, peptidaze (proteaze), lipaze. Glicozidazele sunt oligozidaze (invertaza) i
poliozidaze (amilaze, pectinaze, celulaze);
b) oxidoreductaze (glucozidaza, catalaza);
c) izomeraze (glucoizomeraza).
-amilaza este cea mai comun enzim amilolitic*.
Amidonul este un amestec din dou polizaharide: amiloza, o caten linear de resturi de glucoz, legate -1,4; amilopectina, o
molecul ramificat format din lanuri de amiloz, legate prin puncte de ramificare 1-6. Proporia celor dou tipuri de
molecule variaz n funcie de surs, dar amilopectina formeaz circa 70%.
*
-amilaza este o endoglicozidaz, ce hidrolizeaz legturile interne l,4 din amiloz, amilopectin i din
glicogen. -amilazele sunt enzime de lichefiere i de zaharificare.
Amilazele de lichefiere hidrolizeaz amiloza, la oligozaharide din 5-6 resturi de glucoz i cantiti mici de
maltoz i glucoz. Sunt produse de B. amyloliquefaciens, B. licheniformis, B. stearothermophilus.
Amilazele de zaharificare fac o hidroliz mai eficient a amilozei, rezultnd cantiti mari de glucoz,
maltoz, maltotrioz. Ele sunt produse de B. subtilis, iar pentru producia industrial se folosesc fungii A. oryzae,
Rhizopus sp.
-amilazele sunt metalo-enzime cu Ca i necesit cel puin un atom/molecul. Ca 2+ le confer stabilitate la
variaii largi de pH, activitatea optim fiind ntre 4,8 i 6,5. Enzimele fungice sunt glicoproteine i activitatea optim
este la un pH mai sczut.
Glucoamilaza (amiloglucozidaza) hidrolizeaz legturile -1,4 din amilopectin, amiloz i glicogen.
(Glicogenul este o form ramificat de amilopectin). Este o exoenzim ce atac legturile de la captul nereductor
al catenei. Enzima hidrolizeaz mai lent i legturile -1,6, la punctele de ramificare a amilopectinei. Face o
hidroliz aproape total a amidonului, la glucoz (circa 96%). Enzima este produs de bacterii, dar pe cale industrial
se obine din culturi de Aspergillus i Rhizopus.
-amilaza este produs de bacterii: B. polymyxa, B. cereus, B. megatherium. Este o exoenzim ce atac
legturile -1,4 ale amilozei, de la captul nereductor. Nu hidrolizeaz legturile -1,6. Produsul final al hidrolizei
este o dextrin.
Amilazele sunt folosite pe scar larg n industria prelucrrii amidonului, unde au nlocuit hidroliza acid
clasic.
Procesul de baz ncepe cu etapa obinerii pastei de amidon. Amestecul de amidon-ap, ce conine granule
insolubile de amidon se nclzete la l05-ll0 oC, pentru spargerea granulelor i liberarea amidonului n soluie. Sub
aciunea amilazei i glucoamilazei, din amidon (cereale, cartof) se obine un sirop care conine 40% glucoz, 45%
maltoz i restul maltotrioz, utilizat n industria berii, n panificaie, a produselor de cofetrie, a buturilor dulci.
Prin prelucrarea amidonului se obin siropuri de fructoz. Fructoza este de dou ori mai dulce dect glucoza
i se folosete ca nlocuitor al sucrozei din alimente i buturi.
Pentru obinerea siropului de fructoz, -amilaza termostabil, adugat nainte i dup obinerea pastei de
amidon, scurteaz lanul polizaharidic i reduce vscozitatea polimerului, prin hidroliza parial la maltodextrine de
circa 40 de resturi de glucoz (faza de lichefiere).
In etapa de zaharificare, -amilazele i glucoamilaza fac o conversie aproape total a amidonului la glucoz
(circa 96%). In etapa izomerizrii, glucozo-izomeraza convertete glucoza la fructoz. Produsul final al aciunii
enzimelor este un sirop care conine cantiti egale de glucoz i fructoz, ce se adaug ca ndulcitor al buturilor
rcoritoare.
Amilazele se utilizeaz n industria alcoolului distilat, pentru zaharificarea pastei de amidon nainte de
procesul fermentativ, n panificaie pentru ameliorarea finii cu activitate -amilazic slab (pentru mrirea cantitii
de maltoz n timpul pregtirii aluatului), pentru clarificarea sucurilor de fructe i a berii prin hidroliza amidonului,
n industria textil pentru ndeprtarea dextrinei depus pe firele de bumbac pentru a-i consolida elasticitatea i a le
proteja de eroziune n timpul esutului.
Invertaza (zaharaza, sucraza), produs n special de levuri, hidrolizeaz zaharoza la un amestec de glucoz i
fructoz. Zaharul invertit este mai solubil dect dizaharidul i astfel, concentraia de zahar a unui produs poate fi
mrit fr s apar fenomenul de cristalizare.
Enzimele de depolimerizare sunt: izoamilaza (hidrolizeaz legturile -l,6 din glicogen); pululanazahidrolizeaz legturile -l,6 din pululan. (Pululanul este o molecul linear de uniti de maltotrioz, legate prin
puni -l,6). Aceste enzime sunt produse industrial de K.
pneumoniae i B. pullulyticus.
Proteaze
Proteazele sunt cele mai importante din punct de vedere economic, dintre toate enzimele produse pe cale
industrial. Ele reprezint circa 40% din producia total de enzime. Proteazele sunt produse de bacterii i fungi, iar
n ultimul timp au dobndit importan practic, proteazele de origine viral. Cele mai multe proteaze comerciale,
mai ales neutre i alcaline, sunt produse de g. Bacillus. Proteazele bacteriene neutre sunt active la pH 5-8 i au
toleran termic sczut.
Se caracterizeaz prin afinitatea lor mare pentru secvenele de aminoacizi hidrofobi. Unele proteaze neutre sunt de
tipul metaloproteazelor, adic necesit ioni metalici bivaleni pentru activitatea lor i sunt sensibile la prezena
ionilor chelatori, iar altele sunt serin-proteaze i activitatea lor nu este modificat de agenii chelatori.
Proteazele bacteriene alcaline au activitate optim la pH alcalin (l0) i temperatura de 60 o, proprieti care le
fac adecvate pentru industria detergenilor.
Proteazele fungice au o diversitate mult mai mare dect cele bacteriene. De exemplu, Aspergillus oryzae
secret proteaze acide, neutre i alcaline. Ele sunt active la pH 4-11, au o specificitate larg de substrat, ca i cele
bacteriene, dar rata reaciei i termotolerana sunt inferioare. Proteazele fungice neutre sunt metaloproteaze, active la
pH 7 i sunt inhibate de agenii chelatori.
In mod curent, proteazele se clasific pe baza a dou criterii:
a) tipul de reacie catalizat;
b) natura chimic a situsului catalitic.
In funcie de situsul de aciune, proteazele se submpart n dou grupe: a) exopeptidaze; b) endopeptidaze.
Exopeptidazele cliveaz legtura peptidic proximal gruprii NH 2 sau COOH terminal, iar
endopeptidazele cliveaz legturile peptidice interne ale moleculei proteice din substrat.
Aminopeptidazele acioneaz la nivelul gruprii NH2 terminale a catenei polipeptidice i elibereaz un
singur aminoacid, un dipeptid sau un tripeptid. Aceste enzime sunt produse de bacterii i fungi i au localizare
intracelular, dei A. oryzae produce o enzim extracelular.
Carboxipeptidazele acioneaz la nivelul gruprii COOH terminale a polipeptidului i elibereaz un singur
aminoacid sau un dipeptid i se mpart n trei grupe majore: serin-, metalo- i cistein-carboxipeptidaze.
Endopeptidazele se caracterizeaz prin aciunea lor prefereniala asupra legturilor peptidice interne ale
catenei polipeptidice. Gruprile NH2 sau COOH au influen negativ asupra enzimei.
In funcie de natura restului de aminoacid la situsul activ al enzimei, endopeptidazele se mpart n 4 grupe:
- serin-proteazele au un rest de serin la situsul activ. Au activitate optim la pH 9-11. Sunt produse de B.
liqueniformis, B. amyloliquefaciens i de bacili alcalifili;
- metalo-proteazele sunt active la pH neutru i conin un atom de metal, esenial pentru activitatea enzimei (de
obicei Zn). Sunt sintetizate de B. stearothermophilus;
- cistein-proteazele au un rest de cistein la situsul activ. Activitatea optim este la pH acid. Sunt produse de cteva
tulpini bacteriene, dar pe cale industrial se obin din plante. Exemplul tipic este papaina;
- aspartic-proteazele sunt proteaze acide, cu activitate optim la pH 3-4. Sunt produse de unele bacterii, dar sunt larg
rspndite la mucegaiuri i la levuri. Situsul lor activ are un rest aspartat.
Aplicaii ale proteazelor
Proteazele au o varietate larg de aplicaii, n special n industria detergenilor i cea alimentar, n industria
mtsii pentru ndeprtarea gelatinei sau cazeinei folosite ca material protector al fibrelor fa de eroziunea n timpul
esutului, dar i n alte tehnologii.
Ecologizarea unor procese industriale impune aplicarea unor tehnologii, n care, proteazele nlocuiesc unele
metode clasice, bazate pe folosirea reactivilor chimici, ca de exemplu, industria pielriei i procesele de
bioremediere. Proteazele se folosesc pe scar larg n industria farmaceutic pentru prepararea unguentelor i pentru
curirea rnilor. In scop farmacologic, proteazele se obin n stare pur, n cantiti mici, iar pentru alte scopuri se
produc n cantiti mari i se folosesc ca preparate brute.
Proteazele sunt ingredientele de baz ale detergenilor. In acest scop se folosete circa 25% din producia de
enzime. Proteazele din detergeni trebuie s aib specificitate larg de substrat i s fie active i stabile la pH crescut
i temperatur ridicat.
Prelucrarea pieilor parcurge etapele de nmuiere, depilare, smluire (ndeprtarea materialului necolagenic
albumin, globuline) i tbcire. Inmuierea, n metoda clasic, s-a fcut cu baze, iar acum se folosesc proteazele
alcaline. Metoda clasic pentru depilare const n alcalinizarea i tratamentul cu bioxid de sulf pentru solubilizarea
proteinelor rdcinii prului.
Acum se folosesc proteaze alcaline cu var i NaCl, ceea ce reduce cantitatea de ap uzat rezultat din
procesul industrial. Smluirea se face cu tripsin pancreatic, cu proteaze din Bacillus, Aspergillus.
In industria alimentar, proteazele se folosesc pentru obinerea derivatelor din lapte i n panificaie. In
industria laptelui, proteazele se folosesc ca ageni de coagulare pentru obinerea brnzeturilor.
In panificaie, proteazele din A. oryzae sunt utilizate pentru proteoliza limitat a glutenului, proteina care
determin proprietile aluatului. Tratamentul enzimatic al aluatului permite obinerea unei palete largi de produse.
Proteazele alcaline se folosesc pentru prelucrarea finii de soia, o surs alimentar bogat n proteine de
calitate bun.
Hidrolizatele proteice intr n compoziia produselor dietetice, n dieta copiilor, ca ageni amelioratori ai
gustului, dar au inconvenientul major al gustului amar, a crui intensitate este proportional cu cantitatea de
aminoacizi hidrofobi pe care i conine i n special, de prolin. Peptidazele produse de bacteriile lactice care cliveaz
aminoacizii hidrofobi i prolina se folosesc pentru ndeprtarea gustului amar al hidrolizatelor proteice.
Aspartamul se folosete ca ndulcitor artificial necalorigen i este un dipeptid alctuit din acid L-aspartic i
esterul metilic al L-fenilalaninei. Configuraia L a celor doi aminoacizi i confer gustul dulce. Pentru sinteza sa este
preferat metoda sintezei enzimatice. Dei proteazele sunt enzime hidrolitice, n anumite condiii ele catalizeaz
reacia invers, de formare a legturii peptidice.
In industria farmaceutic, proteazele din A. oryzae, administrate oral, se folosesc pentru corectarea
deficienei unor enzime digestive. Colagenaza de Clostridium sp., n asociaie cu diferite antibiotice, se
administreaz pentru tratamentul arsurilor i rnilor. O asparaginaz din E. coli se folosete pentru eliminarea
asparaginei din snge, n variate forme de leucemie
limfocitar.
Celulaze
Hidroliza celulozei cristaline la glucoz este un deziderat de mare perspectiv, dar cu preparatele enzimatice
actuale, procedeul nu este economic. Inclzirea global a climei, datorit emisiei de CO 2, rezultat din arderea
industrial a combustibililor fosili, a renoit interesul pentru utilizarea biomasei n scopul producerii energiei.
Trecerea de la combustibilii fosili, la cei derivai din biomas, ar reduce emisia net de CO 2 la valori minime.
Celuloza este polizaharidul major sintetizat de plante. Este un polimer linear format din subuniti de
glucoz, legate -1,4. Unitatea repetitiv a celulozei este celobioza (dimer de glucoz). Celuloza este insolubil n
ap. Celuloza nativ este format din microfibrile, care la rndul lor conin ntre l00 i l4 000 resturi de glucoz.
Microfibrilele sunt formate dintr-o alternan de domenii foarte ordonate, cu structur cristalin i regiuni amorfe.
Proporia zonelor cristaline variaz de la 0, n celuloza tratat cu acid i n derivatul solubil carboximetil-celuloza
(CMC), pn la l00% pentru celuloza din peretele algei Valonia. De cele mai multe ori, fibrilele de celuloz din
peretele celulei vegetale sunt incluse ntr-o matrice format din hemiceluloz i lignin. Hemiceluloza este un
complex de polimeri glucidici, n care xilanii i mananii sunt componente principale. Lignina este un polimer rezultat
prin condensarea alcoolilor aromatici, rezistent la biodegradare i protejeaz celuloza, de atacul enzimatic al
microorgnismelor.
Cea mai mare parte a celulozei se gsete sub forma lignocelulozei. Procesul degradrii este prea lent pentru
a-i gsi aplicabilitate industrial. Diminuarea structurii cristaline (cea mai rezistent la atacul enzimatic) prin
tratamente fizice i chimice i creterea suprafeei disponibile pentru aciunea enzimelor, sunt cile de optimizare a
procesului de degradare a celulozei. Hidroliza hemicelulozei poate fi catalizat de acidul adugat sau de acidul acetic
eliberat din gruprile acetil ale xilanului.
Pe msur ce hidroliza hemicelulozei avanseaz, lignina se separ de microfibrilele de celuloz.
Enzimele celulazice sintetizate de fungi (Trichoderma reesei) sunt amestecuri de exoenzime
(celobiohidrolaz), endoenzime i -glucozidaz. Exoenzima ncepe hidroliza fibrilei de celuloz la regiunile amorfe,
urmat de hidroliza sinergic sub aciunea endocelulazei, decisiv pentru degradarea polizaharidului. Clostridium
thermocellum produce o endoglucanaz sub forma celulosomilor, care hidrolizeaz celuloza nativ, n absena
exoenzimelor. Derivaii solubili ai celulozei (carboxi-metil-celuloza) sunt hidrolizai de diferite endocelulaze produse
de bacterii, inactive fa de celuloza nativ.
Celulazele se folosesc pentru degradarea pulpei de fructe, cu scopul creterii randamentului de extracie a
uleiurilor i sucurilor.
Tratarea furajelor de siloz cu enzime celulazice, elibereaz glucidele i grbete fermentaia lactic, inhibnd
fermentaia butiric de ctre Clostridium i asigur o conservare optim.
Enzimele care degradeaz hemiceluloza, se folosesc pentru nlbirea pastei celulozice din care se fabric
hrtia.
Celulazele se utilizeaz ca aditivi ai detergenilor de splare. Splarea repetat a textilelor de bumbac, duce
la atenuarea culorii, datorit uzurii fibrelor. Aciunea limitat a celulazelor adugate la detergent, ndeprteaz
microfibrilele i restabilete culoarea original a esturii.
Lipaze
Substratul lipazelor este molecula de trigliceride cu acizi grai cu caten lung. Trigliceridele fiind insolubile
n ap, lipazele catalizeaz hidroliza legturilor ester la interfaa dintre faza apoas i substratul solid.
Lipazele se folosesc ca aditivi n detergenii de splare i n industria alimentar. Lipazele microbiene se
folosesc pentru modificarea grsimilor de origine vegetal.
Sub forma preparatelor polienzimatice (amilaze, proteaze, celulaze, fosfataze), se administreaz la om pentru
a compensa insuficiena sucurilor digestive i pentru a combate tulburrile asociate.
Enzimele microbiene se folosesc pentru ameliorarea nutriiei animalelor i a omului. Ele se adaug n hrana
animalelor pentru accelerarea digestiei.
Acizi organici
Catabolismul substratului organic de ctre microorganisme, de cele mai multe ori, este complet, rezultatul
fiind conversia lor la produse asimilabile i CO 2.
Uneori ns, oxidarea substratului organic este incomplet i se formeaz compui organici, parial oxidai.
Formarea lor reflect perturbarea reaciilor terminale ale oxidrii, n condiii fiziologice speciale: concentraia mare a
substratului, limitarea O2, modificarea pH.
Unii fungi excret cantiti mari de intermediari ai ciclului acizilor tricarboxilici: acid citric, fumaric,
gluconic, -cetoglutaric, dac n mediu se gsete o concentraie mare de zahr.
Acidul lactic
Microorganismele industriale pentru producerea acidului lactic sunt homofermentative: Lactobacillus sp. i,
n msur mai mic, Lactococcus, Streptococcus i Pediococcus. In prezena unei cantiti mici de CO2, acidul lactic
este produs n condiii de aerobioz de Rhizopus oryzae. Substratul fermentabil este glucoza sau fructoza, bine
utilizate de lactobacili, la care se adaug sruri minerale, extract de porumb, de levuri, fin de soia, de bumbac,
diferite hidrolizate proteice. Producia industrial a acidului lactic se face prin cultivare n cultur discontinu.
Cultivarea n regim continuu, trebuie s in seama de faptul c lactococii sunt adesea lizogeni. Declanarea unui
ciclu litic prin inducia unui profag antreneaz distrugerea ntregii culturi, oricare ar fi tehnicile de asepsie.
Acidul citric
Acidul citric este un metabolit primar al ciclului acizilor tricarboxilici, produs al unui proces metabolic
aerob. Pn n anul l923, acidul citric a fost produs numai n Italia, prin procedeul extraciei din fructe citrice. Dup
aceast dat, n SUA a nceput producia microbiologic cu Aspergillus niger. In mod normal, acidul citric nu se
acumuleaz n mediul de cretere, dar n condiii controlate este sintetizat n exces i secretat: concentraie mare de
zahr (sucroz), pH mic pentru a limita formarea acidului oxalic i carena de Fe pentru a inhiba activitatea
aconitazei, ceea ce favorizeaz acumularea acidului citric.
Sursa de carbon este zaharoza (din melasa de la fabricile de zahr sau din siropul de trestie de zahr), iar cea
de azot este NH4NO3, n condiii de pH foarte acid (l,7-2,2). Dac sursa de carbon este amidonul (din cartof), este
necesar adugarea amilazei pentru hidroliz. Eliminarea Fe se face cu rini schimbtoare de ioni sau cu ferocianura
de potasiu. Acidul citric se acumuleaz dup creterea miceliului. Produsul se separ prin filtrare i se precipit cu
Ca(OH)2. Precipitatul se separ prin filtrare, se spal i se trateaz cu H 2SO4. Rezult acidul citric i precipitatul de
CaSO4. Acidul citric este foarte important, datorit utilizrii sale n industria alimentar, farmaceutic etc.
Acidul acetic
Cele mai reprezentative bacterii care au tendina de a oxida incomplet substanele organice sunt bacteriile
productoare de acid acetic. Acidul acetic este produsul conversiei alcoolului etilic la acid acetic, de ctre bacteriile
acetice din g. Acetobacter i Gluconobacter. Acidul acetic alimentar se obine din vin sau din cidru (vin de mere).
Procesul conversiei este aerob i condiiile de aerare sunt eseniale pentru desfurarea procesului. Oxidarea
alcoolului etilic nu este complet, ci se oprete la acidul acetic, care se acumuleaz n mediu. Bacteriile acetice sunt
acido-rezistente, n condiiile acumulrii acidului acetic n mediu.
Alte bacterii oxideaz etanolul n dou etape: iniial, alcoolul etilic este convertit stoichiometric la acid
acetic. Dup ce alcoolul a fost epuizat, bacteriile oxideaz acidul acetic la CO 2.
Aminoacizi
Aminoacizii se folosesc n industria alimentar ca aditivi, n farmacologie i n industria chimic.
Majoritatea aminoacizilor se obin prin sintez chimic, dar rezult forme DL, optic inactive. Aminoacizii, n forma
L sunt produi pe cale microbiologic. Pe cale chimic se obin amestecuri racemice (D i L), ce nu pot fi utilizate n
scopuri biologice.
Producerea industrial a aminoacizilor este impus de faptul c, singurele organisme care i sintetizeaz toi
aminoacizii necesari sunt plantele. Omul i animalele au pierdut capacitatea de a face sinteza unor aminoacizi (lizina,
treonina, valina, metionina, triptofanul, leucina i izoleucina), care se numesc aminoacizi eseniali. Aportul lor pentru
necesitile organismului este exogen.
Aminoacizii sunt produi de bacterii, levuri, fungi filamentoi, actinobacterii
Adausul de aminoacizi mrete valoarea nutritiv a alimentelor de origine vegetal, deficiente n coninutul
unor aminoacizi: de exemplu, fina de porumb nu conine lizin i triptofan.
Pe cale microbiologic, se sintetizeaz n special acidul glutamic (produs de Corynebacterium glutamicum),
lizina (cu Brevibacterium flavum), acidul gluconic (folosit n farmaceutic sub forma gluconatului de Ca, pentru
corectarea deficitului de Ca), acidul aspartic i fenilalanina (utilizai ca ingredieni ai ndulcitorului aspartam, pentru
producerea buturilor rcoritoare). Cel mai important este acidul glutamic, utilizat ca agent de aromatizare (glutamat
monosodic).
Majoritatea microorganismelor elimin n mediul de cretere, cantiti mici de aminoacizi, n amestec.
Pentru stimularea sintezei unui singur aminoacid se folosesc mutante auxotrofe pentru aminoacizi, dar i intervenii
la nivelul cilor de reglare metabolic. Prima treapt enzimatic a biosintezei aminoacizilor este supus inhibiiei
feed-back prin produsul final al cii. In bioindustrie se folosesc mutante bacteriene, la care, prima enzim a cii nu
mai este sensibil la inhibiia prin feed-back. In general, metaboliii eseniali, aa cum sunt aminoacizii nu sunt
excretai. Pentru a evita inhibiia prin feed-back, este necesar o mutant care s excrete aminoacizii n mediu.
Vitamine
Omul i animalele nu sintetizeaz o serie de factori eseniali (aminoacizi, vitamine). Absena lor cronic
conduce la instalarea unor maladii careniale: scorbut, beri-beri.
Microorganismele prototrofe sintetizeaz toi factorii de cretere(vitamine i aminoacizi). Prin perturbarea
metabolismului, este posibil ca microorganismele s produc majoritatea vitaminelor sau provitaminelor (pantotenat,
piridoxina, biotina, thiamina, acidul folic, acidul lipoic, nicotinamida, riboflavina (vitamina B 2) i ciancobalamina
(vitamina B12).
Majoritatea vitaminelor se obin prin sintez chimic. Cele care au o structur chimic prea complex pentru
a fi sintetizate pe cale chimic, sunt produse de microorganisme.
Vitamina Bl2 (ciancobalamina), n natur, este sintetizat exclusiv de ctre unele microorganisme
(Propionibacterium, Pseudomonas denitrificans). Necesarul alimentar pentru aceast vitamin este satisfcut prin
ingestia hranei sau prin absorbia vitaminei produs de microbiota intestinal. Omul trebuie s obtin vitamina B l2
din hran, sau s-i fie administrat ca supliment vitaminic, pentru c, dei este sintetizat de microbiota intestinal,
nu este absorbit n snge. Plantele nu sintetizeaz i nu utilizeaz vitamina B 12. Enzima conine Co n structura sa i
randamentul sintezei crete prin adugarea Co la mediul de cretere.
Vitamina B2 este un compus triciclic flavinic, la care se leag riboza. Este sintetizat de bacterii (Aerobacter,
Azotobacter, Mycobacterium, Clostridium), levuri i fungi (Ashbya gossypii), pe un mediu cu hidrolizat de porumb.
La Clostridium, riboflavina este un produs secundar al fermentaiei acetono-butilice. Este sintetizat de levurile g.
Candida i fungii din g. Eremothecium, precum i toate microorganismele la care riboflavina este legat de anumite
nucleotide i formeaz FMN (riboflavin-mononucleotide) sau FAD (riboflavin-adenin- dinucleotid), avnd rol
esenial pentru transferul e-, n formarea ATP.
Complexul vitaminelor B este utilizat n farmacologia uman i veterinar.
Separarea diferitelor enzime din amestec nu prezint interes practic. Biosinteza unei anumite vitamine este
orientat prin utilizarea precursorului care se adaug n mediu.
Enzima se sintetizeaz i pe cale chimic.
Vitaminele se folosesc pentru suplimentarea hranei animalelor, n scopul stimulrii productivitii. {n
industria farmaceutic, vitaminele se folosesc ca ageni curativi i preventivi, n special pentru populaiile supuse
riscului carenelor vitaminice de origine alimentar.
Biosurfactani
Surfactaii sunt molecule amfipatice cu jumti hidrofile i hidrofobe (n general hidrocarbonate), care se
aaz preferenial la interfaa dintre fazele fluide cu grade diferite de polaritate, ca de exemplu interfaa ap/petrol
sau ap/lipide i la interfaa aer/ap. Aceste proprieti fac ca surfactanii s reduc tensiunea de suprafa i la
interfa s formeze o microemulsie, n care hidrocarburile se pot solubiliza n ap sau apa se poate solubiliza n
hidrocarburi. Aceste caracteristici confer caliti de detergeni, emulsificatori, spumani i de ageni de dispersie.
Aproape toi sufactanii utilizabili sunt derivai chimic din petrol.
Exist posibilitatea obinerii biosurfactanilor prin procese de fermentaie, cu aplicaii poteniale n protecia
mediului, n recuperarea petrolului brut, n medicin i n industria alimentar.
Biosurfactanii sunt un grup structural heterogen de molecule cu activitate de suprafa *, (tensioactive)
sintetizate de microorgnisme.
*
Tensiunea superfcial se manifest la nivelul suprafeei de separare dintre un lichid i un gaz sau ntre dou lichide
nemiscibile i const n aceea c suprafaa lichidului se comport ca o membran elastic, care tinde s se strng i s se
micoreze.
Moleculele tensioactive reduc tensiunea de suprafa la interfaa amestecului ap-hidrocarburi, ceea ce le

face candidai poteniali pentru creterea randamentului recuperrii petrolului i n procesele de deemulsificare.
Biosurfactanii au avantajele toxicitii mai sczute, biodegradabilitii mai nalte, proprietii spumante
superioare, selectivitii nalte i activitii specifice la temperaturi extreme.
Structura molecular a biosurfactanilor include o jumtate hidrofil ce const din aminoacizi sau peptide
anionice sau cationice, mono-, di- sau polizaharide i o jumtate hidrofob ce const din aminoacizi nesaturai,
saturai sau grai.
Clasele majore de biosurfactani: glicolipide, lipopeptide, lipoproteine, fosfolipide i acizi grai, surfactani
polimerici, surfactani particulai (J. D. Desai, 1997).
Cei mai cunoscui biosurfactani sunt glicolipidele: glucide n combinaie cu acizii alifatici cu lan lung sau
hidroxialifatici. Cele mai cunoscute glicolipide sunt ramnolipidele, trehalolipidele i soforolipidele.
Ramnolipidele, produse de Ps. aeruginosa, conin 1-2 molecule de ramnoz, legate de 1-2 molecule de acid
-hidroxidecanoic.
Trehalolipidele sunt formate din dizaharide de trehaloz, la al cror C6 i C6 se leag acizi micolici. Sunt
produse de cele mai multe specii de Mycobacterium, Nocardia i Corynebacterium. Acizii micolici sunt acizi grai hidroxilai, cu ramificare , cu caten lung. Trehalolipidele de la diferite organisme difer prin lungimea catenei,
gradul de nesaturare i structura acidului micolic.
Soforolipidele, produse n special de levuri (Torulopsis bombicola), constau din glucidul dimeric soforoz,
legat de un acid gras hidroxilat, cu caten lung.
Unele lipopeptide ciclice (gramicidinele antibiotice decapeptidice) produse de B. brevis i antibioticele
lipopeptidice (polimixine) produse de B. polymyxa sunt molecule tensioactive.
Cei mai studiai biosurfactani polimerici sunt emulsan, liposan, manoproteina i alte complexe polizaharideprotein. Emulsanul este un agent foarte activ de emulsificare pentru hidrocarburi n ap, la o concentraie de pn la
0,01%. Este un stabilizator puternic al emulsiei ap-petrol.
Liposanul este un emulsificator solubil n ap, sintetizat de Candida lipolytica, alctuit din 83% glucide i
17% proteine. Poriunea glucidic este un heteropolizaharid alctuit din glucoz, galactoz, galactozamin i acid
galacturonic.
Utilizarea levurilor n microbiologia industrial
Levurile sunt cele mai importante microorganisme industriale, deoarece au cea mai larg utilizare. Levurile
se cultiv pentru obinerea biomasei (folosit n industria panificaiei i ca adaus alimentar).
Din levuri se prepar extractul de levuri, un ingredient esenial al multor medii nutritive pentru
microorganisme. Din levuri se separ vitamine (complexul B, D), precum i enzime pentru industria alimentar
(invertaza, galactozidaza).
Cu levurile se obin produse de fermentaie: alcool etilic, glicerol, bere, vin dar i buturi alcoolice distilate
(whisky, brandy, vodc, rom).
Fermentaia alcoolic
Fermentaia alcoolic este una dintre cele mai importante fermentaii industriale, deoarece alcoolul se
ntrebuineaz n industria alimentar, chimic, farmaceutic, a parfumurilor i a cauciucului.
Materiile prime folosite pentru producerea fermentativ a alcoolului sunt reprezentate de: materii prime
amidonoase* (cartof, porumb, orz, secar, gru etc.), utilizabile dup conversia hidrolitic a amidonului, n zaharuri
simple fermentescibile de ctre levuri; materii prime zaharoase (trestie de zahr, sfecla de zahr, sucuri de fructe,
melase (deeuri de la fabricarea zahrului) i leii sulfitice (soluii reziduale de la fierberea lemnului utilizat la
fabricarea hrtiei, ce conine 1-25% zahr); materii prime celulozice (lemn i stuf), care prin fierbere cu acizi sub
presiune, se hidrolizeaz i elibereaz glucide simple, fermentescibile.
*
Levurile nu produc amilaze sau celulaze. De aceea, nainte de utilizarea lor n fermentaiile industriale, materiile prime
amidonoase i celulozice sau hemicelulozice trebuie hidrolizate sau convertite la glucide simple fermentescibile. Hidroliza se
realizeaz cu preparate enzimatice de origine vegetal (malul** de cereale), cu enzime produse de microorganisme (amilaza din
Aspergillus oryzae) sau prin hidroliz acid (cu HCl sau H 2SO4 diluai). Zaharificarea cu acizi are avantajul c permite
sterilizarea soluiei zaharoase, dar reduce randamentul produciei de alcool i scade valoarea nutritiv a borhotului rmas dup
fermentaie.
**
Malul este un produs enzimatic preparat de obicei din orz de buna calitate, selecionat pentru capacitatea de germinare de
minimum 95% i o mare putere de germinare. n timpul germinrii, n bobul de orz incolit se produc multe modificri
biochimice. Esenial este formarea unei cantiti mari de enzime sau activarea celor existente. nainte de a fi utilizat pentru
hidrolixa materiei amidonoase, malul, care nu se poate pstra n stare proaspt, este uscat i mcinat.
a. Obinerea alcoolului etilic din cartofi i cereale
Materia prim amidonoas este tratat n prealabil, pentru a deveni un mediu favorabil multiplicrii levurilor,
adic s conin zaharuri simple, fermentescibile. In acest scop, ea este supus unui proces de fierbere sub presiune
(o or la 2,5-3 atmosfere), urmat de decompresarea brusc. Celulele se sparg, iar granulele de amidon se dezagreg,
transformandu-se ntr-un terci (clei de coc) de amidon. Amidonul este supus n prealabil, unui proces de zaharificare
cu malt.
Pentru zaharificare, masa de amidon este tratat timp de 90 de minute, la 60-62 o, cu mal mcinat i
amestecat cu ap. Amilaza hidrolizeaz amidonul i se formeaz maltoza (25-30% din plmad) i dextrine. Plmada
dulce este un mediu adecvat pentru creterea levurilor (Saccharomyces), care realizeaz fermentaia alcoolic.
Fermentaia alcoolic poate fi spontan sub aciunea levurilor slbatice, prezente n sol i contaminante
ale materiei prime sau dirijat, prin introducerea n materialul de fermentat, a unor culturi de levuri selecionate din
grupul celor de fermentaie superioar*.
*
Levurile de profunzime (S. carlsbergensis), n timpul fermentaiei nu se ridic la suprafa i formeaz o spum cu aspect
sticlos. Depozitul format este aderent i se resuspend greu. Temperatura optim de dezvoltare este de 5-l0 o. Aceste levuri
fermenteaz total molecula de rafinoz, deoarece au att invertaz ct i melibiaz. Sporuleaz greu sau de loc. Sunt mai rare n
mediile naturale i se folosesc la obinerea berii.
Fermentaia alcoolic dureaz 72 de ore i are trei faze succesive: a)faza preliminar de fermentaie lent,
cu o durat de circa 20 de ore la 28 o, caracterizat prin degajarea slab a CO 2 i care corespunde perioadei de
multiplicare a levurii; b)faza principal de fermentaie, cu o durat de circa l8 ore, n care multiplicarea levurii
nceteaz, dar fermentaia are o rat maxim, nsoit de o degajare intens de CO 2 i formarea unui strat de spum;
c)faza de fermentaie complementar, cu degajare lenta de CO 2, care la 28o dureaz 24-30 de ore.
Produsul rezultat conine alcool, n concentraie de l0-l2% i diferii produi secundari (acetaldehida,
glicerina, acizi organici volatili i alcooli superiori, care-i confer gust i miros neplcut). Prin distilarea lui se obine
spirtul brut (concentraie n alcool etilic de 75-85%) i borhotul (reziduul dup distilare). Alcoolul brut conine nu
numai alcool etilic, dar i o cantitate mic de glicerol denumit ulei de fuzel.
Pentru eliminarea acestor impuriti, alcoolul este supus rafinrii sau rectificrii prin distilare fracionat.
Uleiul de fuzel care se separ prin distilarea ultimei poriuni din distilatul de rafinare, este format dintr-un amestec de
alcooli amilic, izoamilic, propilic i butilic, acizi acetic i butiric, diferii esteri etc. El este folosit n industria
chimic ca materie prim pentru prepararea solvenilor necesari n industria lacurilor i n prepararea unor esene
alimentare.
Fermentaia alcoolic are numeroase aplicaii practice n industrie, fiind utilizat n producia spirtului i a
buturilor spirtoase, la producerea vinului, a berii, a sucurilor de fructe i n panificaie.
Buturile alcoolice naturale se prepar prin distilarea produselor rezultate n urma fermentaiei alcoolice a
diferitelor fructe (prune, mere, ciree, viine, piersici, dude etc.). Fermentaia este fcut de levurile naturale de pe
fructe sau de tulpini selecionate. Produsul rezultat din fermentaie, este concentrat prin distilare i redistilare, pn la
un coninut de 40-50% alcool. In cursul fermentaiei, pe lng alcool se formeaz i ali alcooli i esteri, n proporii
variabile, dup cantitatea de aminoacizi din materia prim, care dau buturilor, aroma i buchetul caracteristice.
b. Utilizarea levurilor n vinificaie
Vinul este o butur alcoolic nedistilat, obinut prin fermentaia mustului de struguri. Mustul de struguri
este un produs cu compoziie chimic foarte complex i variabil: conine l8-25% zahr (glucoz, levuloz,
zaharoz, pentoze, pentozani), 0,3-l,5% acizi (tartric, malic, citric, oxalic, gluconic, glucuronic etc.), aminoacizi,
taninuri, vitamine, pigmeni, substane minerale etc.
Fermentaia mustului, obinut prin spargerea strugurilor recoltai la maturitate, se face n recipiente speciale
deschise. Levurile folosite n fermentaia mustului sunt de dou feluri: a)levuri slbatice, prezente n mod natural pe
tegumentul boabelor de struguri (S. ellipsoideus); b)levuri cultivate i selecionate, care se adaug la mustul de
struguri pentru a ncepe fermentaia.
O diferen major ntre levura slbatic i cea cultivat este tolerana la alcool. Majoritatea levurilor
slbatice pot tolera numai o concentraie de 4% alcool, dup care activitatea lor fermentativ nceteaz. Levurile
selecionate pot tolera pn la l2-l4% alcool.
De multe ori este posibil obinerea unui vin de calitate, prin fermentaia produs de levurile slbatice
existente pe bobul de strugure. De cele mai multe ori, levurile slbatice, pe lng coninutul alcoolic scazut, nu
confer nici aroma produsului final. De aceea, prezena levurilor slbatice n procesul fermentativ nu este de dorit.
Ele se ndeprteaz prin adugarea SO 2 (l00 ppm) la mustul de strugure. Mustul se nsmneaz cu starteri de
fermentaie, reprezentai de o cultur pur, crescut pe suc de strugure sterilizat sau pasteurizat.
Fermentaia parcurge trei faze succesive: a)faza de multiplicare a levurii, n cursul creia au loc creterea i
multiplicarea pe seama O2 dizolvat n must; b)etapa fermentaiei zgomotoase ncepe dup ce O2 a fost consumat n
faza multiplicarii i s-au creat astfel condiii de anaerobioz. Se degaj caldur, care poate s urce temperatura, peste
nivelul optim fiziologic al levurii. De aceea, temperatura trebuie controlat i inut sub 29 o. Cele mai fine vinuri se
obin printr-o fermentaie la 21-24o; c)faza de fermentaie final, de mic intensitate.
Fermentorul trebuie construit astfel nct s permit degajarea cantitii mari de CO 2, dar s mpiedice
ptrunderea aerului.
In cursul fermentaiei, concentraia zahrului scade, dar crete concentraia de alcool. Se formeaz o serie de
produi secundari de fermentaie: glicerina, acetaldehida, acizi (lactic, acetic, succinic, citric), alcooli superiori
(izoamilic, izobutilic etc.) i diferii esteri. Vinul astfel obinut, poate fi sec, cnd toat cantitatea de zahr din must
a fost fermentat, sau dulce, atunci cnd fermentaia nu este dus pn la capt. Vinul conine o parte din zahrul
iniial, sau zahrul adugat suplimentar, care se simte la gust.
Dup ncheierea procesului de fermentaie, vinul se separ de sedimentul format din celulele levurii i din
substane organice precipitate. Vinul se depoziteaz pentru maturare, dobndirea aromei i clarificare. Clarificarea
(limpezirea) poate fi grabit prin adugarea taninurilor, bentonitei sau se filtreaz prin pmnt de diatomee, azbest
sau membrane filtrante.
In procesul maturrii, au loc oxidri, reduceri, esterificri, pe durata ctorva luni, pn la doi ani. In acest
timp, celulele de levur se lizeaz, ceea ce stimuleaz dezvoltarea lactobacililor. Acetia atenueaz asprimea, prin
diminuarea aciditii, ca urmare a transformrii acidului malic n acid lactic i fac s dispar gustul de levur. In
aceast faz, buchetul se amelioreaz prin esterificarea alcoolilor superiori i a unei pri din alcoolul etilic, cu
diferii acizi existeni, iar culoarea vinului se modific.
c. Utilizarea levurilor n industria berii
Berea este o butur alcoolic nedistilat, obinut prin fermentarea mustului de mal de orz, cu un coninut
redus de alcool, dextrin, maltoz, peptone i aminoacizi, care i confer i o valoare nutritiv.
Denumirea provine de la cuvntul latinesc baere, care nseamn orz. Producerea berii cuprinde trei etape
principale: a)prepararea malului; b)producerea mustului; c)fermentaia.
Materia prim bobul de orz conine polizaharide care devin accesibile echipamentului enzimatic al
levurii, numai dup o degradare prealabil la molecule mici. De aceea, prepararea malului sau maltajul, are ca scop
activarea enzimelor din bobul de orz, care produc hidroliza amidonului (etapa de zaharificare). In acest scop, boabele
de orz sunt mai nti nmuiate de ap timp de dou zile i apoi puse la germinat la temperatura de l0-l5 o, fie n strat
subire pe o suprafa neted, fie n dispozitive speciale care asigur aerarea i ntoarcerea lor periodic, pentru a
preveni alterarea. In acest timp, boabele germineaz, proces nsoit de acumularea enzimelor amilolitice i
proteolitice i de o dezagregare pariala a celulelor, care face bobul friabil i uor de broiat. Produsul obinut dup 69 zile (malul verde) se usuc la cald. Embrionul plantei este omort, dar enzimele rmn active. Uscarea malului se
face l0 ore la 85 o pentru berea blond, sau 36 de ore la 90-l00 o (malul brun caramelizat), n care o parte din
enzime au fost inactivate. Rdcinile plantulei sunt ndeprtate, deoarece confer gust neplcut, iar boabele sunt
sfrmate prin mcinare. Rezult malul uscat.
Prepararea mustului sau brasajul are ca scop obinerea plmezii zaharificate, care servete ca mediu de
cultivare pentru levura fermentativ. Apa cald extrage din mal, diferite molecule solubile: glucide, colorani, tanin,
iar enzimele hidrolitice degradeaz macromoleculele i rezult glucide simple, peptide, aminoacizi care trec n
soluie. Cnd zaharificarea este complet, produsul se filtreaz pentru ndeprtarea borhotului, iar mediului steril i se
adaug 200-300 g/hl hamei (Humulus lupulus). Hameiul aduce n mustul de mal, lupulina, un complex de substane
secretate la baza bracteelor inflorescenei femele sau a conurilor, care dau berei gustul amar caracteristic, aroma
special i o uoar putere antiseptic. Dup fierbere timp de 2,5 ore, care asigur sterilizarea i clarificarea
lichidului, mustul rcit brusc, este gata pentru fermentaie.
Fermentaia ncepe dup nsmnarea mustului de mal cu o tulpin de S. cerevisiae sau S. carlsbergensis.
Prima este de fermentaie superioar, iar cea de a II-a, de fermentaie inferioar. Pentru producerea berii tari (n
Marea Britanie) se folosete levura de fermentaie superioar. Cele de fermentaie inferioar se folosesc pentru
obinerea berii cu concentraie mic de alcool.
Faza principal a fermentaiei are loc n bazine deschise, n prezena aerului, la temperatura de 6-l2 o i
dureaz 6-l0 zile. Faza secundar a fermentaiei se realizeaz n atmosfera de CO 2, la temperatura de 1-3o, dup
decantarea lichidului n vase. Masa celular care rmne dup decantare, este folosit pentru nsmnarea unui alt
lot de must, pentru extragerea de vitamine sau pentru prepararea autolizatului de levur (utilizabil la prepararea unor
medii nutritive). Supernatantul care va fermenta lent, timp de 2-6 luni n tancuri de fermentaie are puine celule de
levur. In aceast ultim faz, producerea de alcool este foarte slab, dar lichidul de fermentaie se satureaz cu CO 2
care rmne dizolvat n cantitate mare, i amelioreaz calitile de gust i arom i se limpezete prin sedimentarea
resturilor de levur, a substanelor insolubile, a rinilor etc. Inainte de comercializare, berea este limpezit prin
filtrare, la nevoie este mbogit artificial cu CO 2 i, n unele fabrici, chiar pasteurizat.
d. Utilizarea levurilor n panificaie

Producerea levurii de panificaie. In tehnologia panificaiei, dospirea aluatului nainte de coacere este o
etapa esenial. In acest scop, mult timp s-a folosit levura de la fabricile de bere. Astzi, levura de brutrie este
produs dup o metodologie proprie. Levura se cultiv n fermentoare de mare capacitate, aerate, pe mediul
reprezentat de melasa de la fabricile de zahr. Melasa conine zaharoz, aminoacizi, vitamine, substane minerale. Se
adaug acid fosforic ca surs de P i sulfat de amoniu ca surs de N i S.
Producerea biomasei de levur pentru panificaie este un proces aerob. Meninerea condiiilor de aerare este
esenial. Creterea masei celulare a levurii are loc numai n condiiile unui metabolism aerob. In anaerobioz,
creterea ei nceteaz i ncepe fermentaia alcoolic. In scopul asigurrii desfurrii metabolismului aerob,
cantitatea de melas se adaug treptat, dup o rat exponenial, corespunzatoare ratei de cretere a levurii.
La sfritul perioadei de cretere, celulele de levur se separ de bulionul de cretere, prin centrifugare.
Depozitul celular se spal cu ap i se recentrifugheaz. Rezult un depozit celular de culoare deschis, care se
prelucreaz prin presare n cuburi sau ca pulbere uscat.
Levura compresat se obine prin amestecul levurii centrifugate, cu ageni de emulsificare, amidon i ali
aditivi, care confer produsului o consisten adecvat. Un cub de levur conine circa 70% ap i circa 2 x l0 lo
celule/gram. Levura presat poate fi conservat prin congelare, deoarece i pstreaz viabilitatea.
Levura prelucrat prin uscare, pstreaz o proporie mai mic de celule viabile, comparativ cu levura presat.
Dup splare, levura se amestec cu aditivi i se usuc n vid la 25-45 o, timp de 6 ore, pn cnd umiditatea diminu
la 8%. Se pstreaz n containere nchise ermetic, chiar n atmosfer de azot.
Fermentaia alcoolic produs de levuri este esenial pentru tehnologia panificaiei. Prin aciunea enzimelor,
ele fermenteaz zahrul din fin, cu formare de alcool i degajarea CO 2. Aluatul devine astfel bine afnat, este
crescut (are volum mai mare). Pinea crescut are miezul elastic, cu pori dei i uniformi. Are gust i arom
placute, datorit produilor secundari rezultai din fermentaie.
Inaintea fermentaiei alcoolice produs de levuri, n aluat ncepe o fermentaie lactic sub aciunea bacteriilor
lactice. Acidul lactic nu are rol direct n panificaie, dar este foarte important, deoarece creeaz condiii de pH
favorabile dezvoltrii levurilor i totodat mpiedic multiplicarea microorganismelor duntoare, care ar putea altera
gustul i aroma pinii i ar putea intra n competiie cu levurile. In acelai timp, fermentaia lactic influeneaz
gustul pinii i provoac umflarea glutenului sub aciunea CO 2 degajat, care astfel este reinut n porii aluatului.
Activitatea micoorganismelor intervine n diferite faze ale procesului de panificaie:
a) prima faz este prepararea aluatului o past subire obinut din amestecul unei cantiti mici de fin, ap i
levur. Aluatul se las n repaus ctva timp, pentru multiplicarea levurilor i a bacteriilor lactice, dup care i se
adaug restul de fin i ap i se frmnt. In cursul acestei faze, principalele proteine din fin, gliadina i
glutenina formeaz cu apa, o mas legat, elastic numit gluten. Frmntarea asigur omogenizarea i aerarea
aluatului, fapt ce favorizeaz creterea levurilor;
b) faza a II-a este dospirea aluatului (un proces fermentativ) i are loc la temperatura de circa 30 o. Enzimele
amilolitice din fin, hidrolizeaz o parte din amidon, pn la maltoza. Sub aciunea maltazei, maltoza este
hidrolizat la glucoza. Glucoza este fermentat la alcool etilic i CO 2. In acest timp continu i fermentaia lactic, cu
formare de CO2. Sub aciunea CO2, glutenul elastic se umfl i astfel pinea crete i devine poroas;
c) n faza iniial a coacerii, procesele metabolice ale bacteriilor lactice i ale levurilor continu. Pn la 45-50 o,
levurile au activitate intens, prin care realizeaz un proces fermentativ, nsoit de creterea aluatului. Peste 50 o,
levurile mor, dar aciunea enzimelor amilolitice continu pn la 80 o, cu formare de CO2, ceea ce mreste porozitatea
pinii.
In cursul acestor procese, n pine se formeaz produi chimici noi, ca diacetilul, care i confer aroma
placut.
Levurile metabolizeaz glucidele simple (glucoza, fructoza, melibioza i maltoza) prezente n fin, n timp
ce enzimele diastatice din fin acioneaz asupra amidonului, mrind cantitatea de zahr fermentescibil. Cea mai
mare parte a alcoolului format se elimin n timpul coacerii pinii, iar CO 2 este aproape n ntregime reinut, datorit
proprietilor de structur fizico-chimic a aluatului.
Biosinteza antibioticelor
Producerea industrial a antibioticelor presupune, n primul rnd, transferul inoculului din laborator n
instalaia industrial, n condiii de sterilitate. Procesul creterii microorganismului productor i al biosintezei
antibioticului dureaz ntre 3 i 10 zile. {n etapa a II-a, mediul este supus prelucrrii pentru ndeprtarea celulelor,
iar supernatantul este supus procedeelor specifice pentru purificarea antibioticului i determinarea proprietilor
antimicrobiene prin metoda difuziei n mediul nutritiv agarizat, repartizat n plci Petri. Pe mediul din plci se
nsmneaz microorganismul test i se aplic rondelele de hrtie de filtru mbibate n soluia de antibiotic. {n
funcie de diametrul zonei de inhibiie, se stabilesc proprietile antimicrobiene ale antibioticului, n comparaie cu
aceea a unei soluii standard de antibiotic. Puterea antimicrobian se exprim n uniti de activitate/mg de produs.
Unitatea de activitate este g. Pentru penicilin, o unitate de activitate (UA) este 0,6 g.
Biosinteza substanelor antibiotice de ctre microorganisme are loc printr-o serie de reacii, supraadugate
reaciilor metabolice eseniale. Antibioticele sunt metabolii secundari i multe dintre ele se sintetizeaz cnd
fosfatul devine factor limitant al creterii. Cile sintezei metaboliilor primari (aminoacizi, enzime, vitamine) sunt
interconectate cu cile sintezei metaboliilor secundari. Procesele prin care metaboliii primari sunt transformai n
metabolii secundari sunt ci de biosintez.
Glucoza cea mai bun surs de C pentru cretere interfer cu biosinteza multor antibiotice. Polizaharidele
i oligozaharidele sunt adeseori surse mai bune de C, dect glucoza, pentru sinteza antibioticelor. {ntr-un mediu care
conine glucoz i un alt glucid cu o rat mai mic de metabolizare, curba de cretere a culturii reflect o cretere
diauxic: ntr-o prim etap este folosit glucoza, fr producerea antibioticului. Dup ce glucoza este epuizat,
pentru biosinteza antibioticului este metabolizat cea de a II-a surs de C.
Glucoza, datorit ratei crescute cu care este metabolizat, favorizeaz creterea rapid a masei celulare, dar
inhib sinteza multor antibiotice prin efectul supresor asupra unor enime:
represeaz biosinteza kanamicinei, datorit represiei N-acetil-kanamicin-aminohidrolazei, probabil ultima
enzim a cii de biosintez a kanamicinei;
represeaz (dar nu inhib) ncorporarea valinei C 14 n penicilin
interfer cu biosinteza streptomicinei prin represia ultimei enzime a cii de biosintez.
Amoniul sau orice surs de N uor asimilabil represeaz enzimele implicate n utilizarea altor surse de N:
nitrit-reductaza, nitrat-reductaza asimilatorie, arginaza, ornitin-transaminaza, proteazele extracelulare, enzimele
degradative ale purinelor, transportul ureii i enzimele care o ncorporeaz n compuii organici ai celulei.
Fosforul este un factor limitant foarte important al creterii pentru multe specii de microorganisme care
produc antibiotice: Str. griseus (produce candicidina), Str. aureofaciens, nainte de sinteza tetraciclinei. Fosforul
regleaz sinteza unor antibiotice: peptidice, macrolide, poliene, tetraciclina. Producerea industrial a acestor
antibiotice se desfoar la concentraii mici de P anorganic, limitante ale creterii. Concentraiile mari, de pn la
300 mM favorizeaz creterea masei celulare a microorganismelor productoare, iar cele sub 10 mM sunt favorabile
sintezei antibioticelor. Adugarea P anorganic nu numai c interfer cu sinteza antibioticelor, dar dup cteva ore
determin reversia celulelor productoare de antibiotice, la starea de cretere.
Celulele unui microorganism productor sintetizeaz antibioticul pe toat durata viabilitii. Celulele rmn
viabile atta timp ct sursa energetic este disponibil. Cauzele ncetrii biosintezei sunt urmtoarele:
declinul ireversibil al uneia sau mai multor enzime ale cii de biosintez a antibioticului. Activitatea
sintetazelor antibioticelor peptidice scade rapid n cteva ore dup declanarea sintezei antibioticului;
efectul feedback al antibioticului acumulat. Cteva antibiotice inhib propria lor biosintez: cloramfenicolul,
cicloheximida, puromicina etc.
epuizarea precursorilor intermediari ai antibioticului.
Biosinteza penicilinei
Structura de baz a tuturor tipurilor de peniciline este acidul 6-aminopenicilanic, ce const dintr-un inel
tiazolidinic i un inel -lactamic. La acidul 6-aminopenicilanic, n poziia 6, este ataat o caten variabil.
Microorganismul productor este o tulpin de Penicillium chrysogenum, nalt productoare, selecionat prin
mutagenez.
Faza iniial (de fermentaie) este cea n care se asigur cultivarea i creterea n condiii optime a
microorganismului productor. Cultivarea se face n tancuri de mare capacitate, prevzute cu dispozitive de aerare cu
aer steril, de agitare i de reglare a temperaturii. Sinteza optim a antibioticelor -lactamice produse de fungi este n
mare msur dependent de sursele de C disponibile.
Mediul de cultivare conine lactoz (ca sursa de C), fin de rapi (ca surs de azot), sruri minerale (sulfat
de sodiu, sulfat de amoniu, carbonat de calciu, monofosfat de potasiu etc.). La nevoie se adaug, n condiii de
sterilitate, o substan tensioactiv, care stimuleaz dezvoltarea miceliului fungic prin dispersarea culturii i mrirea
gradului de aerare i un agent antispumant, care oprete formarea spumei datorit agitrii, aerrii i agentului
tensioactiv.
Fiecare microorganism productor, ca i fiecare antibiotic, au caracteristici proprii i, n consecin, tehnica
producerii industriale este adaptat acestor particulariti.
Compuii hidrofili ai cefalosporinelor sunt sintetizai de fungi, bacterii Gram pozitive i Gram negative, iar
penicilinele hidrofobe sunt produse numai de fungii filamentoi.
Fazele sintezei au fost identificate prin utilizarea atomilor marcai (C 14 i C12, H3 i N15). Primele dou trepte
ale biosintezei penicilinei i cefalosporinei sunt comune. Penicilinele i cefalosporinele naturale sunt formate din
aceiai aminoacizi: acidul L--aminoadipic, L-cisteina, L-valina.
Acidul L--aminoadipic este un aminoacid neproteic i este sintetizat pe calea aminoadipatului specific
fungilor, care duce la formarea L-lizinei (A. Brakhage, 1998).
n prima reacie, cei 3 aminoacizi precursori sunt condensai pe cale neribosomal n tripeptidul (L-aminoadipil)-L-cisteinil-D-valina (ACV). Condensarea neribosomal a tripeptidului limiteaz calea sintezei. Toate
reaciile necesare formrii tripeptidului sunt catalizate de o singur enzim multifuncional, denumit ACVsintetaz. Originea acidului -aminoadipic este diferit la fungi i la actinobacterii. La fungi, produsul este un
intermediar al cii lizinei, iar la actinobacterii, acidul -aminoadipic este produsul de catabolism al lizinei.
n treapta a II-a, nchiderea inelului oxidativ al tripeptidului linear duce la formarea unei structuri inelare
biciclice acidul aminopenicilanic, adic inelul -lactamic cu 4 atomi, fuzionat cu inelul tiazolidinic format din 5
atomi. Nucleul comun biciclic este comun pentru toate penicilinele. Reacia este catalizat de izopenicilin-N-sintaza.
Rezult izopenicilina N, a crei activitate de antibiotic este slab.
n treapta a III-a a biosintezei, lanul lateral al acidului L--aminoadipic al izopenicilinei N este schimbat cu
un grup acil hidrofob. Schimbul este catalizat acil CoA-izopenicilin N-acil-transferaz.
Tripeptidul ACV se formeaz pe calea mecanismului sintezei neribosomale a matriei cu S, din aminoacizii
precursori. Sistemul multienzimatic al ACV-sintetazei este alctuit din monomeri cu mase moleculare de circa 420
kDa i manifest activiti catalitice diverse: 1)recunoaterea specific a celor 3 aminoacizi i activarea lor;
2)formarea punii peptidice; 3)izomerizarea L-valinei la forma D i eliberarea peptidului.
Ca i n biosinteza ribosomal a peptidelor, funcia COOH a aminoacidului este activat prin formarea unei
anhidride cu -fosfatul din ATP i eliberarea pirofosfatului (P-Pi). Dup activarea unui aminoacid, aminoaciladenilatul este clivat sub aciunea unei enzime thiol. Se formeaz o legtur tioesteric ntre enzima thiol i
aminoacid, cu eliberarea AMP. Aminoacizii tioesterificai joac acelai rol ca i aminoacizii legai de ARNt n
biosinteza peptidelor ribosomale. Ei sunt intermediari cu energie nalt, care devin intele atacului nucleofilic al
gruprii NH2 al unui al II-lea aminoacid. Astfel se formeaz puntea peptidic. Ca i n sinteza ribosomal, peptidul
nascent crete de la captul NH2, spre captul COOH, iar peptidele intermediare rmn legate de enzim, ca tioesteri.
Specificitatea de substrat este mai puin strict dect n sinteza proteinelor.
Microorganismul productor sintetizeaz, n mod obinuit, mai multe tipuri de penicilin, cu aceiai structur
de baz, dar care difer dup natura catenei laterale ataat nucleului biciclic prin intermediul unei funcii amidice.
Dac procesul de biosintez se desfoar fr adugarea catenei laterale, sunt produse penicilinele naturale
(penicilina G sau benzil-penicilina). Dintre penicilinele naturale, numai penicilina G (benzil-penicilina) este
utilizabil n clinic. Pentru penicilina G, molecula precursoare a catenei laterale este acidul fenil-acetic (C6H5CH2)
sau unul dintre derivaii si (fenilacetatul de Na sau fenilacetamida). Acidul fenil-acetic rezult i prin transformarea
fenil-etilenaminei din extractul de porumb, n acidul fenilacetic (fig 141).
Fig.
141.
Structura molecular a penicilinei G. Dup clivajul enzimatic se formeaz acidul 6-aminopenicilanic i acidul peniciloic.
Biosinteza industrial a penicilinei cu P. chrysogenum s-a realizat utiliznd lactoza ca surs de C, deoarece
furnizeaz cel mai nalt titru al penicilinei. Glucoza n exces determin reducerea ampl a titrului penicilinei.
Deoarece separarea penicilinelor prin purificare este un proces dificil, n mediul de cretere se adaug
molecule precursoare ale catenei laterale, care asigur sinteza unui anumit tip de penicilin, inhibnd sinteza
celorlalte tipuri. Cea mai util penicilin, cea cu activitate fa de bacteriile Gram negative, este rezultatul unui
proces de biosintez, combinat cu o cale chimic, prin adugarea precursorilor specifici n timpul fermentaiei. Se
obin astfel peniciline de semisintez (ampicilina, amoxicilina, meticilina). n acest caz, benzil-penicilina produs n
mod natural de miceliul fungic, este clivat chimic sau enzimatic i rezult acidul 6-aminopenicilenic, supus
modificrii chimice prin adugarea unei catene laterale.
Penicilinele de semisintez au avantajul unui spectru mai larg de activitate i al administrrii orale.
Compoziia mediului de cultur este diferit de la un productor la altul. Sursa de carbon a mediului este
glucoza i lactoza, iar sursa de aminoacizi i de factori de cretere este hidrolizatul de porumb (corn steep), un
ingredient major al mediului. Glucoza poate fi folosit ca unic surs de carbon, dar are dezavantajul metabolizrii
rapide i al efectului de represie prin catabolit. De aceea trebuie s aib o concentraie mai mic i se adaug treptat.
Sunt mai favorabile metodele de cultivare continu. n culturile discontinui se folosesc ambele surse de carbon.
Lactoza se metabolizeaz lent i nu produce fenomenul represiei prin catabolit. Uleiul de floarea soarelui are
rol de surs de carbon, dar este n primul rnd agentul antispumant. CaCO 3 se adaug pentru stabilitatea pH. Mediul
conine microelemente i obligatoriu, un precursor care s furnizeze precursorii catenei laterale a antibioticului,
orientnd sinteza spre un anumit tip de penicilin.
Prin adugarea moleculelor precursoare adecvate, sinteza poate fi orientat n sensul producerii sintezei
penicilinei specifice. Acidul fenilacetic (C6H5-CH2COOH) este precursorul sintezei penicilinei G. Pentru sinteza
penicilinei V, ca precursor se folosete acidul fenoxiacetic (C6H5-O-CH2-COOH).
Penicilinele sunt sintetizate ntr-un proces de cultivare submers, n fermentatoare de 40 000 200 000 litri.
Este un proces strict aerob i necesit aerare energic. Penicilina este un metabolit secundar tipic.
Faza fermentativ dureaz circa 120 de ore la 25 o i cuprinde trei etape: a)etapa iniial, n care are loc
creterea microorganismului productor, pe seama metabolizrii glucozei. Producerea de antibiotic este
nesemnificativ; b)etapa de maturaie, dup epuizarea sursei de carbon, cu sinteza masiv de antibiotic;
c) etapa de declin sau de mbtrnire, n cursul creia producerea de antibiotic este nul i survine chiar scderea
cantitii sale prin degradare.
Procesul produciei de antibiotic, strict aerob este urmrit prin controlul modificrilor biochimice (pH,
concentraia lactozei i a NH 3), caracteristicile microbiologice (aspectul i gradul de dezvoltare a miceliului) i a
concentraiei de antibiotic n mediul de cultur. Procesul este submers, necesit o aerare eficient i este oprit n
momentul n care ntreaga cantitate de lactoz din mediu a fost metabolizat. In absena sursei de carbon, creterea
miceliului nceteaz i survine autoliza. NH 3 alcalinizeaz mediul i la pH alcalin, penicilina este instabil.
Penicilina se elibereaz n mediu. Sub 1% rmne asociat cu miceliul fungic. Miceliul se ndeprteaz prin
filtrare.
Tulpina de Penicillium notatum utilizat iniial pentru biosinteza penicilinei, a produs 6 mg/litru. {n 1941, n
SUA au nceput studiile pentru ameliorarea randamentului de producie al tulpinii de P. notatum i pentru
identificarea unor noi tulpini productoare de penicilin. S-a identificat astfel o nou specie, P. chrysogenum, cu un
randament de producie mult mai bun, de 60 mg/litru.
Studiile de selecie s-au fcut prin mutagenez cu raze x i uv, cu azotiperit. S-au urmrit dou aspecte:
obinerea unor tulpini lipsite de pigmentul galben chrisogenina care ngreuneaz operaiile de purificare a
antibioticului; obinerea tulpinilor nalt productoare de penicilin, peste 20 g/litru. Cele mai multe tulpini obinute n
programele de dezvoltare sunt mutante reglatoare. Obinerea lor se bazeaz pe conceptul c mecanismele de control
ale sintezei antibioticelor pot fi depite prin procese mutaionale. Producia industrial a penicilinelor i
cefalosporinelor se realizeaz cu mutante nalt productoare de Penicillium i respectiv Cephalosporium
acremonium. Cefamicinele sunt produse de specii de Streptomyces.
S-au obinut mutante de Penicillium i Cephalosporium care cresc n profunzime, n condiii de aerare, cu
randament de producie de 4500 UI/ml benzil-penicilin, ceea ce echivaleaz cu 30 g/l, n bioreactoare cu volume de
250-400 m3 (Diaconu, Nechifor, 1988).
De obicei, mutantele sunt genetic instabile i necesit msuri de meninere a potenialului de biosintez i de
conservare. Cele mai adecvate metode de conservare sunt pstrarea celulelor vii n azot lichid (-196 o) sau liofilizarea
sporilor.
Reglarea biosintezei penicilinei. Sinteza penicilinei este supus mecanismului reglrii feed-back al sintezei
metaboliilor primari. Dei penicilina este un metabolit secundar, sinteza sa este influenat de metaboliii primari,
deoarece acetia sunt precursorii metaboliilor secundari. Astfel, mecanismele reglatoare ale sintezei metaboliilor
primari influeneaz producerea antibioticului.
Unul dintre cei trei aminoacizi care particip la sinteza nucleului comun al penicilinei este L-valina.
Biosinteza valinei este reglat printr-un mecanism feed-back: valina exercit o aciune inhibitorie a activitii primei
enzime a lanului de biosintez. Dac prima enzim este inactivat, biosinteza valinei este inhibat i astfel este
inhibat biosinteza penicilinei. Dac n mediu se adaug lizina, biosinteza penicilinei scade foarte mult. La fungi,
lizina se sintetizeaz pe calea acidului -aminoadipic. Lizina exercit o inhibiie feed-back a activitii primei
enzime a lanului de biosintez, enzim implicat n sinteza acidului -aminoadipic.
Extracia antibioticului. Lichidul obinut la sfritul primei faze este vscos, cu miros puternic i conine
substane toxice, compui piretogeni i numeroase impuriti, care depesc de sute de ori cantitatea de antibiotic.
Extracia antibioticului din mediu se face cu solveni organici (pentru penicilin, cu acetat de amil sau acetat de butil
la pH = 2,5). Cele insolubile (tetraciclina) se separ i se solubilizeaz n solveni speciali sau separarea unora
(streptomicina, neomicina) se face cu ajutorul rinilor schimbtoare de ioni.
Antibioticul separat din supernatantul de cretere este supus unui proces de purificare, sterilizare, splare,
cristalizare i uscare n vid. Dac dup controalele finale, chimice, microbiologice i toxicologice (pentru absena
toxicitii i a substanelor piretogene) ndeplinete condiiile de utilizare, antibioticul este standardizat n raport cu o
unitate de activitate stabilit prin convenie internaional i este trecut n faza ultim, cea de condiionare
(repartizare n fiole, flacoane etc.) sub forma de pulberi cristaline (prin sublimarea n vid a soluiilor) sau ncorporat
n diferite substane. Penicilina se prezint ca o pulbere alb, microcristalin, hidrosolubil i netoxic pentru om,
chiar n doze mult mai mari dect cele active fa de microorganisme.
S-au produs peste l00 de peniciline de biosintez. Pentru obinerea celor mai utile peniciline se folosete
procedeul combinat, fermentativ i chimic, prin care rezult peniciline semisintetice.
Cefalosporinele (nocardicina, acidul clavulanic i tienamicina) sunt antibiotice -lactamice care conin inelul
dihidrotiazin, n loc de tiazolidin. Au fost descoperite ca fiind produse de Cephalosporium acremonium, dar sunt
sintetizate i de ali fungi, ca i de unele procariote. C. acremonium produce 4 tipuri morfologice de celule, care
reprezint stadii ale ciclului de cretere: hife, artrospori, conidii, gemule. Diferenierea morfologic a lui C.
acremonium pare a fi legat de sinteza cefalosporinei C. Rata maxim a sintezei cefalosporinei C coincide cu
conversia fragmentelor hifale la artrospori.
Sinteza cefalosporinei C este influenat de metionin. Adugarea metioninei n mediul de fermentaie
mrete semnificativ producia de antibiotic. Metionina are rol de donor de S pentru sinteza antibioticului i este un
inductor al anumitor enzime implicate n sintez (-(L--aminoadipil-L-cisteinil-D-valin sintetaza, izopenicilin N
sintetaza = ciclaza), dar are i o funcie reglatoare i stimuleaz formarea artrosporilor.
Sinteza cefalosporinei C de ctre C. acremonium pare a fi nsoit de creterea cantitii de acid linoleic.
Acidul clavulanic are o importan clinic deosebit, pentru c dei nu este un antibiotic foarte eficient, se
administreaz n asociaie cu -lactamicele, deoarece este cel mai bun inhibitor al sintezei -lactamazelor.
Semisinteza. Utilizarea penicilinei G (de biosintez) prezint cteva dezavantaje importante: este sensibil la
penicilinaze, enzimele care o inactiveaz prin aciune asupra ciclului -lactamic; este instabil n mediul acid al
stomacului i de aceea se administreaz numai prin injectare; se elimin foarte repede din circulaie, prin rinichi.
Pentru a menine o concentraie activ, se injecteaz la intervale scurte; este activ numai asupra bacteriilor Gram
pozitive.
Obinerea antibioticelor de semisintez se bazeaz principiul utilizrii moleculei native, de la care se obin
diferite derivate mai active, prin metode de sintez. Moleculele rezultate sunt asemntoare celor naturale, cu valoare
terapeutic superioar sau fr valoare. Numai benzil-penicilina, penicilina V i acidul clavulanic sunt molecule
naturale. Celelalte peniciline, toate cefalosporinele i cefamicinele sunt derivate ale moleculelor obinute prin
biosintez.
Atomii moleculei de penicilin sunt reactivi i permit un spectru larg de modificri. Practic, fiecare atom din
structura penicilinei i cefalosporinei naturale, cu excepia celui de N din ciclul -lactamic, a constituit sediul unei
modificri chimice (Diaconu, Nechifor, 1988). Multe antibiotice sunt rezultatul unei singure modificri, iar altele
rezult dup dou sau chiar mai multe transformri succesive.
Cele mai importante modificri chimice ale moleculei native sunt:
dezacilarea penicilinelor i cefalosporinelor naturale n scopul obinerii acidului 6-aminopenicilenic (A6AP),
respectiv acidului 7 aminocefalosporinic (A7AC);
acilarea gruprii 6(7) NH2 din A6AP, respectiv A7AC i obinerea penicilinelor i cefalosporinelor
semisintetice;
transformarea penicilinei n cefalosporine prin extensia ciclului;
modificarea poziiei 3-acetoxi din cefalosporinei;
esterificarea grupei 3-carboxil a penicilinei.
Cele mai importante antibiotice de semisintez sunt ampicilina, oxacilina, meticilina. Jumtate din molecul
se obine prin biosintez, iar cealalt jumtate prin sintez chimic. Penicilinele de semisintez sunt diferite de cele
de biosintez, prin catenele laterale. Fungii din g. Penicillium nu sintetizeaz acidul 6-aminopenicilanic. Penicilinele
de semisintez se obin din penicilina G, supus aciunii unei enzime - penicilin-acilaza, extras din E. coli. Enzima
scindeaz catena lateral (radicalul benzil) i elibereaz acidul 6-aminopenicilanic. Ulterior, pe calea sintezei
chimice, gruparea aminic este acilat cu diferii radicali i rezult diferite peniciline de semisintez.
Sinteza chimic. Cercetrile privind posibilitatea sintezei chimice a antibioticelor -lactamice au fost
stimulate n special de dificultatea metodelor de separare-purificare. Creterea randamentului de biosintez, odat cu
utilizarea tulpinilor nalt productive (de 100 de ori mai productive dect tulpina de origine izolat de Fleming), a
fcut ca metoda sintezei chimice s rmn numai de interes tiinific. Sinteza chimic are ca scop obinerea unor
molecule analoge celor naturale, cu activitate antimicrobian superioar, mai ieftine, fr efecte secundare asupra
macroorganismului. Pe cale sintetic s-au obinut peniciline, cefalosporine peneme, carbapeneme i monobactame.
Metodele de ameliorare a produciei de antibiotice
Producia de antibiotice se gsete n impas, datorit fenomenelor de rezisten multipl, ntlnite frecvent la
bacterii. Din aceast cauz se preconizeaz obinerea unor antibiotice noi prin tehnica fuziunii de protoplati
bacterieni sau fungici. Cele dou tulpini celulare (bacteriene, respectiv fungice) supuse procedeului fuziunii, trebuie
s fac sinteza a dou antibiotice diferite, din aceiai familie. Prin cuplarea artificial a celor dou ci de biosintez
poate s rezulte un nou antibiotic (un antibiotic hibrid).
Fuziunea protoplatilor se poate utiliza n scopul creterii randamentului produciei de antibiotice. Se
procedeaz la fuziunea protoplatilor unei tulpini bacteriene nalt productoare, care crete ncet sau este pretenioas
la condiiile de cretere, cu o linie bacterian care face sinteza antibioticelor cu o rat inferioar, dar se dezvolt
repede i nu are exigene nutritive deosebite. Prin fuziune rezult organisme care cumuleaz proprieti noi,
convenabile att n ceea ce privete producia de antibiotice, ct i exigenele nutritive.
O alt modalitate de cretere a ratei de sintez a antibioticelor este amplificarea genic. Genele codificatoare
ale sintezei antibioticelor sunt cromosomale i extracromosomale (plasmidiale). Numrul plasmidelor per celul este
variabil n funcie de tipul de control pe care celula l exercit: un control riguros are ca efect existena unui numr
mic de plasmide n celula (1-5 copii); un control relaxat permite creterea numrului de copii plasmidiale per celul
(50-l0). In aceste condiii, dac genele cdificatoare ale sintezei antibioticului sunt plasmidiale, randamentul sintezei
crete foarte mult.
Transferul genelor codificatoare ale sintezei unui antibiotic, prin tehnologia ADN recombinant, pare a nu fi
realizabil, deoarece genele sunt dispersate. De aceea, s-a recurs la un artificiu: se ncearc mrirea produciei de
antibiotic prin grefarea unor gene promotor foarte eficiente, care s grbeasc intrarea n aciune a operonului
codificator.
O alt cale pentru ameliorarea producerii de antibiotice este biosinteza mutaional sau mutasinteza.
Principiul metodologic este urmtorul: sinteza unui antibiotic se desfoar pornind de la un produs iniial, prin etape
intermediare, pn la sinteza produsului final. In aceast tehnologie se folosesc microorganisme mutante, cu
incapacitatea de a face sinteza unui produs, aproape de captul lanului de sintez. Dac n mediul de cretere se
adaug compusul natural, microorganismul produce antibioticul natural. Dac n mediul de cretere se adaug un alt
compus, nenatural (de sinteza chimic), celulele ncorporeaz acest produs chimic nou i sinteza este orientat n
funcie de natura produsului care a fost furnizat. Aceast tehnic s-a denumit biosinteza mutaional.
Pentru producerea antibioticelor noi, industria de biosintez a utilizat dou ci majore:
prin procedee de mutagenez s-a urmrit selecia unor tulpini nalt productoare. Pe aceast cale, randamentul
biosintezei de antibiotice s-a ameliorat permanent. Procedeul este foarte laborios, deoarece mutageneza este o
metoda oarb, ce presupune testarea a mii i mii de tulpini celulare, dup iradiere cu raze UV, X sau dup tratamentul
cu substane chimice mutagene (azotiperita). Aceast metod este tipic pentru producerea penicilinei, cu tulpini
mutante de P. chrysogenum. Randamentul tulpinilor actuale, obinute prin mutagenez cu radiaii gama (Co 6o) este de
mii de ori superior fa de al tulpinii originale;
producerea de antibiotice cu un oarecare grad de modificare chimic, prin procedeul semisintezei. Metoda
const n grefarea unui radical chimic, pe o molecul de antibiotic, produs pe o cale natural.
Bioconversia
Produsele de bioconversie, denumite bioderivai, se formeaz prin modificri minime ale substratului, sub
aciunea microorganismelor: acidul acetic (prin oxidarea etanolului), acidul gluconic (prin oxidarea glucozei);
hormonii corticosteroizi (prin conversia steroizilor); vitamina C (prin oxidarea -sorbitolului la L-sorboza) etc.
Procesele de bioconversie pe care le realizeaz microorganismele reprezint o realizare biotehnologic de
importan excepional, deoarece astfel sunt posibile reacii care depesc posibilitile chimiei organice.
Importana bioconversiilor rezid n faptul c transformrile catalizate de enzime libere sau fixate pe
suporturi sau sub aciunea microorganismelor se fac n condiii moderate de pH i de temperatur, iar moleculele
sunt modificate specific, fr reacii secundare.
Principiul metodologiei de bioconversie este urmtorul: microorganismul se cultiv n fermentoare mari, pe
mediul nutritiv adecvat. Dup ce creterea a atins nivelul maxim, se adaug compusul chimic ce urmeaz a fi
convertit. Dup timpul de incubare necesar aciunii microorganisului asupra habitatului, din mediul de fermentaie se
purific substana rezultat prin bioconversie.
Hormonii steroizi sunt foarte importani pentru controlul fertitilitii la om i animale i a unor stri
patologice (artrit, oc), datorit efectului antiinflamator.
Unele microorganisme, n special fungii (Aspergillus ochracaeus, Curvularia lunata, Dactylium dendroides),
dar i bacteriile (Streptomyces lavendulae) transform steroizii n corticosteroizi. Transformarea se face sub aciunea
unei enzime, ntr-o singur treapt asupra substratului, rezultnd un nou compus. Cele mai multe bioconversii ale
steroizilor implic hidroxilri specifice. Pe aceast cale se obin hidrocortizonul, cortizonul, prednisonul i
prednisolonul, iar progesterona este convertit la hidroxiprogesteron.
Oxidarea -sorbitolului la L-sorboz, n procesul obinerii vitaminei C este tot un proces de bioconversie:
Bioconversia glucidelor este important din punct de vedere practic. Fructoza are caliti dietetice i
industriale: este puin cariogen, nu este insulino-dependent, are putere de ndulcire superioar glucozei,
cristalizeaz uor. Siropurile cu coninut nalt de fructoz sunt indispensabile industriei alimentare. Glucozoizomeraza produs de Streptomyces, Aerobacter aerogenes convertete glucoza n fructoz, dup urmtoarea reacie:
Alte procese de bioconversie a glucidelor:

bioconversia zaharozei (prin hidroliz), n amestec de glucoz i fructoz;
bioconversia lactozei (prin hidroliz), n glucoz i galactoz;
bioconversia glucozei, prin reacia de oxidare, n acid cojic;
bioconversia ribozei, prin reacia de reducere, la ribitol;
bioconversia D-xilozei, prin reacia de reducere, la xilitol;
bioconversia acidului fumaric, prin aminare, la acid aspartic;
bioconversia prin reacia de condensare a indolului, piruvatului i NH 3, n triptofan.
Bioconversia steroizilor.
Corticosteroizii sunt ageni antiinflamatori, cu o larg utilizare terapeutic. Extragerea hormonilor
corticosteroizi din glandele suprarenale este foarte costisitoare, datorit dificultilor de procurare a acestora i a
randamemntului mic de extracie. Sinteza chimic a acestor hormoni este, de asemenea, laborioas i costisitoare.
Sinteza cortizonului din acid dezoxicolic necesit 36 de etape tehnologice, randamentul este foarte mic (l-2% o), iar
materia prim (secreia biliar) este greu de procurat n cantitile necesare.
Transformarea steroizilor n cortizon, pe cale chimic este condiionat de introducerea unui atom de oxigen
n pozitia C11, a unui nucleu steroidic natural. Prezena atomului de oxigen n aceast poziie, confer efectul
antiinflamator al hormonilor corticosteroizi. Aceast oxidare este realizat de mucegaiul Rhizopus arrhizus.
Substratul aciunii fungice este nucleul steroidic al progesteronei (la poziia 11), o substan mai apropiat
ca structur chimic de cortizon dect acidul dezoxicolic i care este obinut din steroizii vegetali. (Steroizii vegetali
sau sapogeninele se gsesc sub forma de glicozide denumite saponine, n cantiti mari i uor de obinut n plante ca
Agave, Dioscorea, Lilium, Yucca etc.).
Randamentul de extracie este de 90%, iar produsul final se obine dup nc 11 trepte chimice (n loc de 36,
cte erau necesare iniial).
Pornind de la molecule intermediare naturale se poate ajunge pe o cale de sintez mult simplificat, la
obinerea unui numr de steroizi noi, analogi chimic, dar cu activiti hormonale i biologice mai mari sau diferite.
Alte microorganisme fac hidroxilri, hidrogenri i dehidrogenri n diferite poziii ale inelului steroidic,
ceea ce a simplificat etapele chimice de obinere a produsului final.
Bioconversia steroizilor se realizeaz n tancuri de mare capacitate pentru culturi n profunzime, cu aerare i
agitare continu. Din punct de vedere chimic i biologic, procesul este fundamental diferit de acela al obinerii
antibioticelor, vitaminelor etc. Antibioticele i vitaminele se sintetizeaz pornind de la compuii din mediu care
servesc n acelai timp ca substrat pentru creterea i multiplicarea celulelor. Dimpotriv, substanele steroidice sunt
adugate spre sfritul fazei de cretere i sufer numai cteva modificri chimice, mici dar foarte importante, fiind
determinante pentru particularitile farmacologice ale substanelor astfel obinute. Cnd transformarea substratului
steroidic este complet, miceliul este ndeprtat, iar filtratul este tratat cu un solvent al steroizilor (cloroform,
tricloretilena), separndu-se pn la 95% din produsul transformat.
In procesul de bioconversie a steroizilor, microorganismele au rolul unor reactivi sui-generis, cu aciune
specific i care realizeaz uor i cu randament mare, un proces greu de realizat pe cale chimic.
Producerea masei celulare
Levurile sunt folosite n panificaie, n fermentaia alcoolic (obinerea berii i n vinificaie). Obinerea unei
cantiti mari de mas celular n procesul producerii berii a determinat cutarea modalitii de utilizare a acestui
subprodus. Masa celular de levuri este bogat n aminoacizi eseniali (n special lizin) i n vitamine din grupul B.
Folosirea masei celulare uscate de S. cerevisiae i Candida utilis, adugate n hrana animalelor, a iniiat
industria biomasei levurilor.
Levurile cultivate n scopul n scopul obinerii masei celulare trebuie s creasc viguros, s utilizeze
substraturi variate, s reziste la contaminani, s nu aib gust amar.
Se folosesc tulpini de Candida i de Torula.
Pentru obinerea masei celulare este necesar prezena O 2, prin aerare energic.
Ca substrat nutritiv se folosesc leia bisulfitic bogat n pentoz, melasa de sfecl sau melasa de trestie de
zahr, hidrolizat de lemn, sucuri de fructe.
n hrana animalelor se poate aduga suplimentar o mas de celule bacteriene uscate, mai ales E. coli, cu
coninut ridicat de aminoacizi cu S (metionina), deoarece proteinele de origine fungic au coninut foarte sczut al
acestui aminoacid.
Dirijarea proceselor fermentative
Dac un proces fermentativ este destinat obinerii unui metabolit primar, faza de cretere logaritmic a
microorganismului productor va fi prelungit ct mai mult cu putin. Pentru obinerea unui metabolit secundar,
faza de lag i cea de cretere logaritmic vor fi limitate la o durat minim, dar se va extinde faza staionar sau va fi
favorizat creterea lent pe toat durata fermentaiei.
Se folosesc 3 moduri de conducere a procesului fermentativ industrial: cultivarea discontinu (batch),
semidiscontinu (feed-batch) i continu. Alegerea uneia sau alteia este determinat de tipul de produs care se obine.
Un proces n cultur discontinu este un sistem nchis, n care sunt prezeni numai nutrienii iniiali. Se
folosete pentru producerea biomasei, utiliznd o surs de C rapid metabolizabil.
Pentru obinerea unui metabolit primar (o enzim), se folosete un glucid care se metabolizeaz lent. Acelai
tip de glucid este avantajos ntr-o cultur discontinu, pentru obinerea unui metabolit secundar, deoarece o rat de
cretere lent mrete randamentul. Procesul dureaz 36 de ore pentru acidul gluconic sau cteva zile pentru acidul
fumaric.
Cultivarea discontinu are dezavantajul epuizrii nutrienilor i a stoprii rapide a producerii metabolitului,
inhibiia prin feed-back a sintezei produsului respectiv, eliminarea produilor toxici.
Cultivarea semidiscontinu este un sistem deschis, n care substanele nutritive sunt adugate cu o rat
constant n timpul procesului de cretere i biosintez, fr ndeprtarea mediului. Volumul de mediu nutritiv crete
progresiv. Rata de cretere a microorganismului se poate controla prin ajustarea ratei adugrii glucidului. Avantajele
constau n diluia substanelor toxice, care pot avea efect inhibitor i extinderea procesului fermentativ, comparativ
cu cultivarea discontinu.
Cultivarea continu este un sistem deschis n care nutrienii sunt adugai i suspensia celular este
ndeprtat cu o rat constant, astfel nct rata sintezei produsului se menine constant. Cultivarea continu permite
controlul cel mai eficient al procesului. Perioada de cretere logaritmic, pentru obinerea unui produs primar poate fi
extins prin adugarea cu o rat mai mare a mediului proaspt. Astfel, durata procesului se poate prelungi pn la
cteva luni, dar exist riscul degenerrii tulpinii productoare i al contaminrii.
Cele mai multe procese folosesc procedeul batch sau feed-batch. Metoda creterii continue este folosit
pentru producerea biomasei (proteine single-cell). Metoda creeaz o presiune selectiv pentru tulpinile care cresc cel
mai rapid i optimizeaz randamentul procesului.
BIODIVERSITATEA MICROORGANISMELOR
Termenul de biodiversitate semnific diversitatea tuturor organismelor vii, terestre i acvatice si include
diversitatea n interiorul fiecarei specii, ceea ce echivaleaza cu diversitatea genetica, diversitatea speciilor unui
ecosistem, ceea ce semnifica diversitatea taxonomica si diversitatea ecosistemelor, care inseamna diversitatea
ecologica (di Castri, l995). Cea mai scurta definitie a biodiversitatii este data de formula: totalitatea genelor,
speciilor si ecosistemelor dintr-un areal. Biodiversitatea este intr-o dinamica permanenta si este definita ca un
ansamblu de interactiuni genetice in interiorul fiecarei specii, al speciilor si al diversitatii ecologice.
Desi biodiversitatea reprezinta o problema actuala nu numai pentru comunitatea stiintifica, ci si pentru
diferite organizatii guvernamentale si neguvernamentale, pentru politicieni si economisti, interesul pentru
diversitatea microorganismelor a fost, in mod neasteptat, foarte scazut.
Cele mai multe studii si programe au ignorat total microorganismele sau le-au acordat o pozitie marginala.
Desi au exista numeroase cercetari privind prezenta, frecventa si functiile microorganismelor in cele mai
diferite medii naturale, prima incercare de interpretare a lor intr-un cadru conceptual adecvat, a avut loc in anul l99o
(di Castri si Younes).
Anul l992 marcheaza prima recunoastere oficiala (Hawksworth si Collwell), a necesitatii de a recupera
ignoranta asupra unor aspecte-cheie, privind diversitatea microorganismelor, care indeplinesc, asa cum este unanim
recunoscut, activitati indispensabile oricarei forme de viata.
Un imbold deosebit privind explorarea diversitatii microorganismelor in medii dintre cele mai neobisnuite a
venit din partea biotehnologilor, impresionati de unele descoperiri recentr din microbiologie si oarecum dezamagiti
de limitele si diferentele dintre sperantele si realizarile ingineriei genetice. Ei au ajuns la concluzia ca
biodiversitatea naturala reprezinta cea mai mare resursa a Planetei, cel mai putin utilizata pentru inovatie in
biotehnologie (Bull, l992).
Studiile de diversitate a microorganismelor sunt marcate de o serie de dificultati specifice: in primul rand,
de nevoia de a le studia nu ca indivizi, ci ca populatii si nu in mediul lor natural, ci in conditii artificiale de laborator.
Dar, caracterele fenotipice care stau la baza sistematicii traditionale se pot modifica (evident, in limite fixate de
genotip), in asa fel incat microorganismele cultivate nu reproduc niciodata fenotipul natural, ci unul corespunzator
conditiilor artificiale in care sunt puse.
Dificultati majore sunt legate de studiul asocierilor diferite dintre microorganisme, precum dintre micro- si
macroorganisme, de la cele facultative la cele obligat simbiotice sau parazitare, ca si din inconvenientele decurgand
din explorarea mediilor greu accesibile sau extreme. In cazul bacteriilor, se adauga marea variabilitate, determinata
de transferul orizontal de gene purtate de plasmide, prin procese de parasexualitate, care nu sunt limitate numai in
cadrul speciei, ci se pot produce interspecific, intergeneric si probabil chiar intre regnuri diferite (de exemplu, intre
bacterii si fungi). Frecventa proceselor de transfer in mediile naturale (sol, acvifere, caile digestive etc.) este mult
mai mare decat era de asteptat pe baza experientelor de laborator (Kellenberg, l994). In sfarsit, o alta dificultate
majora, deosebit de pregnanta, mai ales in cazul bacteriilor, provine din lipsa unei conceptii clare privind definirea
speciei, esentiala pentru studiile de diversitate si, decurgand din aceasta, absenta unui sistem natural de clasificare.
S-a recurs la solutii controversate, considerate de unii autori ca inaplicabile izolatelor din mediile naturale,
acceptabile din punct de vedere pragmatic, operational utile, de identificare pe criterii arbitrare, selectionate
subiectiv, in functie de asemanari, trecand cu vederea caracterele necomparabile sau divergente.
Datorita acestor sisteme de clasificare create artificial, condamnate sa greseasca, cunostiintele privind
diversitatea microorganismelor sunt foarte sumare si contradictorii, atat sub raportul numarului global de specii
estimate, cat si privitor la cele identificate (tabelul de mai jos).
Numarul speciilor virale si biologice cunoscute si al celor considerate ca existente in natura. Denumirile
diferitelor grupuri sunt utilizate in sens colocvial si nu taxonomic (dupa date din literatura de specialitate) *.
Grupul
Virusuri**
Numrul de specii
cunoscute
5 ooo
Numrul total al
speciilor
13o ooo 5oo ooo
% specii cunoscute
41
Bacterii***
Fungi****
Alge
Protozoare
Briofite
Gimnosperme
Angiosperme
Porifere
Cnidarii
Nematode
Crustacee
Insecte
Alte artropode + neVertebrate inferioare
Moluste
Echinoderme
Amfibieni
Reptile
Peti
Psri
Mamifere
3 o58 476o
69 ooo
4o ooo
3o 8oo
17 ooo
75o
25o ooo
5 ooo
9 ooo
15 ooo
38 ooo
8oo ooo
132 46o
4o ooo 8 ooo ooo

1 5oo ooo
35o ooo lo ooo ooo
1oo ooo
25 ooo
?*****
27o ooo
?
?
5oo ooo
?
6 lo ooo ooo
?
7 o,o5
5
11 o,4
3l
68
?
93
?
?
3
?
8 l3
?
5o ooo
6 loo
4184
638o
19 ooo
9 198
417o
?
?
?
?
21 ooo
>lo ooo
>4 ooo
?
?
?
?
9o
9o
1oo
Dupa di Castri i Younes (199o), Mc Neely i colab. (199o), Bull si Hardman (1991), Select Committee Science and
Technology (1991, 1992, Bulll, Goodfellow si Slater (1992), Truper (1992), Groombridge (l992).
**
Definiia standard a speciei biologice nu se aplic virusurilor. Eigen (1993) propune conceptul nou de quasispecie,
aplicabil exclusiv acestor entiti infecioase.
***
Inclusiv Cyanobacteria si Archaebacteria.
****
Inclusiv levurile i fungii lichenizai.
*****
Semnele de intrebare marcheaza absena estimrilor sau a unor date certe pentru grupurile respective de organisme.
Decurgand din aceasta, cunotiintele referitoare la multe din funciile lor ecologice specifice i la proprietile lor poteniale
sunt foarte limitate.
Diversitatea bacteriilor este puin cunoscut. Numrul global al speciilor bacteriene este estimat n limite
uimitor de largi: 8oo ooo (Klaus si Kubitki, 1982), 3o ooo (di Castri si Younes, 199o), 2 3 milioane (Truper, 1992)
si 8 milioane (Groombridge, 1992).
Cifra maxim, considerat iniial ca nerealist este susinut de numeroase observaii recente, care sugereaz
c fiecare din cele 6 1o milioane de specii de insecte, poate purta cel puin o specie bacterian ignorat pn n
prezent.
Margulis, Chase si Guerrero (1986) au demonstrat ca fiecare specie de termite din genul Triconympha poarta
in medie 1o specii de bacterii noi pentru stiinta. Eliminarea lor cu ajutorul antibioticelor determina moartea gazdelor
axenice, dupa o saptamana, fapt ce demonstreaza rolul lor esential in viata insectelor. In sprijinul acestui punct de
vedere pledeaza observatia lui Hawksworth (l992), dupa care, in asociere cu insectele ar exista cel putin un milion de
specii ignorate, apartinand genului Spiroplasma (Mollicutes), probabil cel mai bogat in specii dintre genurile
prezente in natura. Se adauga numarul mare de specii bacteriene prezente in diferite tipuri de relatii cu acarienii.
Prin contrast cu aceste date, numarul speciilor identificate este, in estimarile cele mai optimiste, de ordinul a
3 ooo 4 ooo, ceea ce reprezinta o,o4 o,o5% raportat la estimarile maxime. Datorita acestui fapt, sistematica
bacteriana reprezinta singurul domeniu in care numarul speciilor identificate a scazut de la 21 ooo, inregistrat in
Index Bergeyana (l974) si in suplimentele sale, la 2 258 specii (inclusiv cianobacteriile, apartinand la 561 genuri, in
determinatorul Bergey (1994). Explicatia rezida in faptul ca datorita ineficientei tehnicilor clasice, aceiasi specie a
fost descrisa de mai multe ori, sub diferite denumiri, infirmate ulterior cu metodele moderne. Cauzele acestei situatii
sunt multiple:
- Numarul mic de specii descrise reflecta deficientele metodelor traditionale de izolare si identificare. Datorita
diversitatii lor fiziologice, nici un mediu de cultura si nici un set de conditii de crestere nu corespund
diferitelor categorii de microorganisme;
- insuficienta exlorare a unor medii naturale greu accesibile (largul si sedimentele marilor si oceanelor,
gradientele intermediare intre conditiile nete de aerobioza si anaerobioza etc.) sau a celor heterogene (solul
etc.).
- o alta motivatie decurge si din faptul ca microbiologii si-au focalizat aria de interes apropape exclusiv asupra
unor bacterii importante pentru medicina, agricultura si industrie. Majoritatea studiilor fundamentale s-au
concentrat asupra unei singure bacterii E coli ajungand la ideea falsa ca intelegerea aprofundata a
biologiei acesteia ar fi o paradigma pentru cunoasterea bacteriilor in general si chiar, intr-un sens mai larg, a
tuturor organismelor;
- un factor important putin asteptat este acela ca in multe medii naturale, microorganismele se gasesc intro stare de stress, datorita unor conditii nefavorabile (lipsa de nutrienti in multe medii acvatice, variatii de
pH, temperatura etc.). Conditiile de supraalimentare, tipice pentru mediile artificiale de cultura sunt
inhibitoare, toxice sau chiar letale pentru microorganismele din mediile naturale. Intre acestea se inscrie un
spectru larg de bacterii necultivabile, corespunzatoare diferitelor strategii de supravietuire la stress, cum
sunt, in principal, asa zisele bacterii nerecuperabile sau ultramicrobacterii (Torella si Morita, 198o).
Urmarea este ca in functie de diferiti factori, pot fi cultivate si identificate foarte putine dintre bacteriile
vizibile prin microscopie directa, restul de 99,9% din speciile existente in natura, ramanand inaccesibile metodelor
traditionale de izolare si identificare.
Importana studiilor de biologie molecular
Insatisfacia produs de deficientele sistematicii clasice, la care s-au adaugat progresele biologiei moleculare
i nu in ultimul rnd, tentatia unei abordari filogenetice (de trecere de la simple exercitii intelectuale speculative, la
descifrarea unor aspecte ale evolutiei microorganismelor, bazate pe date experimentale) au dus la utilizarea
progresiva a tehnicilor moleculare. Ele includ o gama relativ larga, cele mai frecvent folosite fiind: compozitia in
baze (G + C%), hibridarea ADN/ADN si ADN/ARN, sondele de ADN si de ARN, secventa bazelor in ADN genomic
si in ARNr (5S, 16S si 23S) etc.
Aplicarea tehnicilor moleculare la un numar mare de habitate naturale a relevat existenta unui rezervor
enorm de bacterii necultivabile, pana in prezent necunoscute, prin evidentierea nui numar imens de genomuri
bacteriene difrite. Astfel, intr-o proba de sol, din care, cu metodele clasice se izoleaza un numar limitat de specii,
tehnicile moleculare evidentiaza intre 5 ooo si l3 ooo de genomuri diferite. Aceasta situatie s-ar datora si marii
heterogenitati a solului, fiecare proba incluzand multe microhabitate diferite, cu microbiotele corespunzatoare.
Mediile acvatice sunt mult mai omogene si, ca urmare, contin un numar mai mic de genomuri bacteriene, bogatia in
specii fiind cu mult mai mica decat in sol. Datele mentionate demonstreaza ca indicii de diversitate calculati pe baza
studiilor traditionale se refera numai la mica parte din comunitatile reale de microorganisme, si anume, la cea care
poate fi cultivata, iar organismele descrise ca dominante pot fi, in realitate, dintre cele mai putin reprezentative
pentru comunitatea naturala. Aceasta diversitate reala nu trebuie ignorata, deoarece formele necultivabile sunt
viabile, inglobeaza nutrienti, fac sinteze proteice (Chowdburry, 1993), iar in unele medii pot metaboliza cantitati
semnificative de nutrienti, avand un rol important in retelele trofice ale ecosistemelor respective.
Chiar mai mult, bacteriile aflate in stare de latenta sau in repaus (care nu se multiplica) pot transfera gene
si sunt uneori hipermutabile. Datorita prezentei unor enzime si functii metabolice complet diferite fata de normal, ele
pot adapta mutatiile (mutatii dirijate sau induse de selectie) la nevoile celulei, de a relua sau de a continua
cresterea (Kellenberger, 1994).
Tehnicile de biologie si genetica moleculara au schimbat radical intelegerea diversitatii microorganismelor,
evidentiind gradul imens de heterogenitate genetica a taxonilor microbieni si permitand si permitand detectarea unor
grupuri de microorganisme, pana in prezent necunoscute. In acest sens exista numeroase probe concrete. Astfel, pe
baza criteriilor moleculare s-a demonstrat ca cele 19 tulpini de Deinococcus radiopugnans, considerate ca absolut
identice pe baza tehnicilor clasice conventionale, apartineau la 17 tipuri atat de diferite incat apartenenta lor la o
singura specie era exclusa.
Un alt exemplu semnificativ este furnizat de datele lui Ward, Weller si Bateson (199o), care au analizat
structura ARNr extras dintr-o impaslire de cianobacterii dezvoltate pe suprafata apei provenite din izvorul Octopus
din Yellowstone National Park (SUA). Studiile amanuntite cu tehnici clasice efectuate de-a lungul mai multor ani au
permis stabilirea prezentei cu certitudine a l4 specii diferite. Analiza ARNr 16S a permis identificarea a inca opt
specii noi, demonstrand valoarea limitata a metodelor traditionale, care ignora o parte semnificativa din diversitatea
reala a comunitatilor de microorganisme.
In sfarsit, sistematica moleculara a demonstrat ca una din cele mai active si mai studiate bacterii
celulozolitice din rumen, descrisa de taxonomia clasica sub denumirea de Bacteroides succinogenes este, in realitate,
o asociere a doua specii, genetic distincte: Fibrobacter succinogenes si F. intestinalis (Montgomery si colab. 1988).
Aceste rezultate cu consecinte pozitive majore au creat si un anumit impas, deoarece demonstreaza ca in foarte multe
cazuri, caracterele clasice fenotipice sunt inselatoare si, in plus, lipsite de orice relevanta filogenetica.
Opinia curenta este ca datorita lor, taxonomia bacteriana actuala va fi complet rescrisa pe baze
experimentale si ca definirea taxonilor sai se va deplasa progresiv, de la nivelul organismic/celular, la cel molecular.
Tinand seama insa de complexitatea sistemelor biologice, chiar la nivelul cel mai simplu, reprezentat de bacterii, un
demers de acest gen este evident reductionist si nescutit de riscuri.
Optiunea ideala este cea a unei taxonomii polifazice, integratoare, bazata pe utilizarea informatiilor
fenotipice, chemotaxonomice si genetice, precum si pe cele ecologice.
Diversitatea microalgelor. Majoritatea autorilor apreciaza numarul speciilor cunoscute la circa 4o ooo, iar al
celor existente, la 4oo ooo. Prin contrast Andersen (1992) estimeaza numarul global al speciilor algale la peste lo
milioane, datorita, in special, marii diversitati a clasei Bacillariophyceae.
Desi sunt ubicvitare (in apele dulci si marine, in sol, pe roci si pe plante, pe ghetari si zapezi vesnice) si au o
mare diversitate, microalgele sunt un grup relativ putin explorat. Andersen (l993) explica aceasta situatie printr-o
serie de factori, proprii anumitor medii: l)dimensiunile mici, decurgand din situatia paradoxala in care cel mai mare
ecosistem, reprezentat de biotopurile acvatice, care acopera 75% din suprafata biosferei si 9o% din volumul ei
(Shilo, 198o) este dominat de cele mai mici organisme; 2)accesul dificil la multe medii naturale; 3)mobilitatea unor
specii algale si capacitatea de a-si schimba frecvent pozitia; 4)modificarile dramatice ale numarului si speciilor
prezente in unele medii, in perioade scurte de timp; 5)variatiile de temperatura si de iradiere solara; 6)heterogenitatea
mediului natural, variabil si dinamic si interactiunile complexe; 7)absenta unui concept clar si universal acceptat cu
privire la definirea speciei.
Diversitatea fungilor. Numarul speciilor cunoscute in anul 1983 era de 69 ooo, iar cel real este estimat la 1
ooo ooo 1 5oo ooo (Hawksworth, 1988; May, 1991).
Grupul de fungi cu cel mai mic numar de specii este reprezentat de levuri, cu aproximativ 59o de specii,
apartinand la 81 de genuri, dintre care au fost identificate peste 5oo specii (Barnett si colab., 199o). Aceasta situaie
este determinat de mai muli factori: 1)sunt puine numeric; 2)se dezvolt uor pe medii artificiale de laborator;
3)sunt uor observabile prin microscopie fotonica; 4)atat speciile patogene cat si cele de interes tehnologic au fost
mult studiate datorita interesului pentru practica. In plus, in prezent sunt considerate ca arhetip al celulelor eucariote
si, in consecinta, folosite ca model de electie pentru studiile fundamentale ca si pentru producerea de proteine
recombinante prin tehnici de inginerie genetica.
Diversitatea protozoarelor ste putin studiata, desi, ca si in cazul algelor, multe specii pot fi identificate pe
criterii morfologfice. Dupa unii autori, ar fi grupul cel mai numeros de organisme prezente in natura. Numarul global
al speciilor este estimat la peste loo ooo, iar al celor cunoscute, la 3o 8oo (31%).
Diversitatea virusurilor este putin studiata. Nefiind sisteme biologice, aceste entitati infectioase nu se
incadreaza in conceptul de specie biologica standard. Eigen (1993) propune un concept nou, de quasispecie.
Numarul speciilor virale identificate este de 5 ooo, iar al celor estimate ca prezente in natura, de circa 5oo ooo.
Ansamblul acestor date sugereaza in cazul microorganismelor, un grad foarte mare de diversitate,
comparativ cu macroorganismele (cu exceptia insectelor). Prin contrast, numarul speciilor identificate este foarte mic
si perspectivele imbunatatirii acestei situatii nu sunt apropiate: in plan global, annual sunt descrise circa 1o ooo de
specii noi, dintre care numai 12o sunt bacterii si 1 7oo sunt fungi (Preston Cloud, 1988).
Particularitile diversitii microorganismelor n diferite ecosisteme
Ca regul general, microorganismele sunt bine dotate pentru a avea o distribuie foarte larg i o tendin
general de rspndire ubicvitara, determinata de dimensiunile mici, usurinta dispersarii prin apa si aer,
adaptabilitatea enorma, datorita versatilitatii si flexibilitatii metabolice, multiplicarii rapide si capacitatii de a tolera
conditii nefavorabile pentru alte organisme, prin prezenta unor forme specifice de rezistenta sau de adaptare la medii
extreme.
Dupa Groombridge (1992), varietatea niselor ecologice exploatate de principalele grupuri de macro- si
microorganisme este direct corelata cu varsta lor geologica (ecologia recapituleaza filogenia, Price, 1988). Ca
urmare, cel mai mare spectru de nise apartine bacteriilor, urmate in ordine descrescanda de alge, protozoare, fungi,
animale si plante.
Conditiile de mediu influenteaza compozitia in specii a comunitatilor bacteriene si, in anumite conditii pot fi
esentiale pentru supravietuirea speciilor individuale. In consecinta, particularitatile de diversitate ale unui mediu
natural sunt influentate de gradiente fizico-chimice (nutrienti organici si anorganici, pH, substante toxice,
temperatura etc.) si variaza in diferite grade, de la diversitatea mare din sol, la cea redusa din apele curgatoare
nepoluate si, mai ales, in unele medii extreme.
Diversitatea speciilor microbiene tinde sa fie mica si limitata la populatii foarte specializate, in ecosistemele
controlate fizic (izvoare calde si fierbinti, mlastini acide, regiuni de desert etc.), in care influenta stressului fizicochimic puternic prevaleaza fata de interactiunile echilibrate si integratoare dintre specii.
Prin contrast, diversitatea speciilor tinde sa fie mai mare in ecosistemele controlate biologic, in care
importanta interactiunilor dintre populatiile de microorganisme depaseste influenta mediului fizico-chimic (abiotic).
Acesta este cazul solului nepoluat.
Regiunile si habitatele cu mare diversitate de macroorganisme sunt, deopotriva, bogate in microorganisme
ca o consecinta a a numarului mare de microorganisme saprobionte, simbiotice sau parazitare (Whitecomb si
Hackett, 1988). Exista insa si habitate fara nici o importanta pentru macroorganisme, dar in care prezenta si
conservarea diversitatii microorganismelor este esentiala.
Comunitatile de microorganisme cu o mare diversitate sunt mai stabile si mai apte sa competitioneze in
limite largi de toleranta fata de fluctuatiile mediului, desi nu se cunoaste nivelul prag de diversitate necesar pentru a
mentine stabilitatea comunitatii (Atlas, 1992). Capacitatea de a competitiona poate fi depasita de perturbarile severe
si/sau continue ale mediului. Spre exemplu, comunitatea stabila, diversa a namolului activat din statiile de epurare a
apelor uzate poate tolera influxul accidental sau continuu al unor concentratii mici de substante chimice toxice, in
timp ce aportul masiv al acestora o dezechilibreaza pana la suprimare.
O categorie aparte o reprezinta microorganismele extremofile care populeaza mediile cele mai neobisnuite
ca: mediile hipersaline si chiar cristalele de sare, gheturile polare si zapezile vesnice, apele termale si fierbinti,
mediile hiperalcaline si hiperacide etc.
La limita extrema se situeaza populatiile de bacterii hipertermofile (Pyrococcus furiosus) sau
superhipertermofile ( Pyrolobus fumarii), care se dezvolta inca la ll3 o C, in peretii fumegatorilor din izbucurile
hidrotermale suboceanice (Galapagos Rift). Dezvoltarea este optima la lo5 o C si inceteaza la 9oo C. Aceste date
sugereaza ca limita de temperatura maxima de crestere pentru procariote (mult mai rezistente decat eucariotele),
temperatura de 15oo, la care se desfac legaturile chimice din moleculele informationale si din alte macromolecule
esentiale.
Semnificatia marii diversiti microbiene ntr-un habitat
Prezenta unui anumit grad de diversitate este o necesitate absoluta pentru a asigura functiile variate, necesare
functionarii retelelor trofice, a ciclurilor biologice si pentru mentinerea ecosistemului (Solbrig, 199o). Situatia este
foarte evidenta in cazul habitatelor ce contin substante recalcitrante, a caror degradare nu este posibila decat prin
procese de co-metabolism.
Desi exista unanimitate in a considera ca microorganismele reprezinta un component esential, fara de care
nu poate exista un ecositem stabil, semnificatia marii diversitati microbiene nu are o explicatie unanim admisa.
Bazati pe caracterul ubicvitar al microorganismelor si pe marea lor versatilitate metabolica, unii cercetatori
considera ca bogatia in specii microbiene a unui ecosistem nu ar corespunde unei nevoi reale pentru mentinerea
ecosistemului. Ea ar fi, mai degraba o expresie a acestui caracter ubicvitar.
In opozitie cu acest punct de vedere, se considera pe baza a numeroase observatii, ca un anumit grad de
redundanta functionala, asigurat de prezenta in unele regiuni a unui mai larg spectru de specii diferite, capabile sa
indeplineasca functii similare este, fara indoiala, benefica pentru mentinerea si stabilitatea ecosistemului.
Un exemplu ilustrativ este cel al ectomicorizelor din padurile temperate, in care unele specii de arbori pot
forma micorize cu peste loo de specii diferite de fungi. Fenomenul este foarte important, datorita sensibilitatii
fungilor de micorize la poluare. In aceste conditii, practic totdeauna se vor selectiona unele specii de fungi, rezistenti
fata de poluanti, care vor asigura producerea ectomicorizelor. Habitatele respective sunt avantajate: in mediile cu
grad ridicat de biodiversitate, disparitia unei specii, chiar daca este dominanta, poate fi inlocuita de o specie
mascata (ascunsa) functional, capabila sa o inlocuiasca. De aceea, redundanta functionala confera stabilitate,
rezistenta la stress si o capacitate superioara de recuperare, intrucat pierderea unei specii-cheie este tamponata de
altele cu functii similare (Pery si colab., 1989, Bull si colab., 1992).
Disparitia unor specii de microorganisme este o realitate, demonstrata atat pe baza unor observatii certe, cat
si prin analogie cu acest fenomen, in cazul plantelor si animalelor.
Datele existente sunt sumare. Stim foarte putin referitor la mecanismele care determina o diminuare a
diversitatii microorganismelor si, in special, asupra speciilor esentiale pentru anumite ecosisteme, respectiv asupra
celor a caror eliminare ar putea avea efecte nocive asupra stabilitatii sau chiar a existentei unui ecosistem.
Cuantificarile acestor pierderi sunt iluzorii deoarece, dupa cum am aratat, cunostiintele asupra diversitatii
microorganismelor sunt foarte reduse. Unele date sunt bazate pe simple presupuneri, sau pe extrapolarea datelor din
regiuni de megadiversitate. Astfel, Raven (1988), pe baza datelor privitoare la reducerea suprafetei padurilor
tropicale, apreciaza ca pana in a doua decada a secolului urmator, vor disparea aproximativ 35 ooo de specii de
fungi.
Este normal de conceput ca microorganismele asociate cu plantele si animalele pot fi conservate atata timp
cat sunt protejate gazdele lor si ca disparitia sau degradarea acestora au consecinte asupra diversitatii
microorganismelor.
Cuantificarile disparitiei unor microorganisme din apele dulci, marine sau chiar din sol sunt mai greu de
formulat. Oricum, disparitia unor specii este la fel de inacceptabila si de alarmanta, nu numai pentru botanisti si
zoologi, ci si pentru microbiologi.
Sfritul secolului gsete tiinele microbiologice ntr-o situaie paradoxal: triumftoare, datorit
uimitoarelor progrese n domeniul propriu i rolului lor esenial n revoluia biologiei moleculare i a celei
biotehnologice i, profund ignorante n ceea ce privete cunoaterea propriului obiect de studiu.
Studiul diversitii microorganismelor furnizeaz o direcie cu importan major de lucru din pcate
neluat nc n seam de cercetarea microbiologic i o ans pentru a face s se atenueze acest imens decalaj.
CAPITOLUL IX
GRUPE DE MICROORGANISME EUCARIOTE
Alge
Denumirea de alge, n limba latin nseamn iarb de mare, cu referire la reprezentanii macroscopici ai
grupului. Ramura botanicii care studiaz algele se numete phycologie (phycos, grec = iarb de mare).
Algele cuprind un grup heterogen de organisme eucariote, cu particulariti distinctive. In general sunt
fotosintetizante i nu au diferenieri tisulare complexe sau structuri reproductoare nalt specializate. Conin clorofila
a, ce se deosebete de alte clorofile prin prezena gruprii CH 3, pe inelul structurii sale.
Cele mai multe alge sunt organisme libere n apa dulce i srat sau n sol. Unele stabilesc raporturi
simbiotice cu fungii, cu plantele i animalele i numai rareori sunt parazite la organismele superioare.
Algele unicelulare sunt cele mai reprezentative organisme ale planctonului (forme microscopice de via
care plutesc liber n ptura superficial a pnzelor de ap) i formeaz fitoplanctonul, n timp ce zooplanctonul
cuprinde organismele animale mici. Planctonul st la baza ctorva lanuri trofice. Fitoplanctonul reprezint veriga
esenial a reelei trofice a oceanului, sursa major de hran pentru multe specii de animale.
Algele sunt organisme eucariote, cu o variaie larg a dimensiunilor i a aspectului morfologic. Dimensiunile
acoper un spectru foarte larg, de la civa m (cele microscopice), pn la zeci de metri, filamentoase, cu tal
cormoid, ca de exemplu, Macrocystis (cormofitele sunt plante al cror corp vegetativ este alctuit din rdcin,
tulpin i frunze). Unele alge sunt unicelulare, iar altele, multicelulare, cu diferenieri structurale. Cele unicelulare
apar ntr-o varietate de forme: sferice, ovalare sau poliedrice. Algele pluricelulare sunt filamentoase sau masive.
Uneori, cariochineza nu este urmat de citochinez: ca urmare, se formeaz o structur filamentoas, tubular,
polinucleat. Unele alge microscopice (de exemplu, Volvox) formeaz colonii de celule vizibile cu ochiul liber.
Altele(de exemplu, diatomeele) au structuri tridimensionale perfecionate. Ele se aseamn cu o cutie, deoarece o
parte a peretelui celular o acoper pe cealalt, asemntor unei cutii cu capac.
Algele macroscopice sunt organisme multicelulare. Ele posed structuri specializate, care deservesc funcii
specifice. Multe au o structur difereniat, denumit crampon, prin intermediul creia alga se fixeaz pe substrat.
Cramponul este o structur care are rol exclusiv mecanic (de ancorare) i nu are funcie de absorbie i apei i a
nutrienilor. Dei ating, uneori, dimensiuni considerabile, algele nu prezint structuri difereniate pentru transportul
substanelor nutritive. De fapt, nici nu este nevoie de astfel de structuri, deoarece algele sunt imersionate n apa n
care se gsesc solubilizate toate substanele nutritive.
Multe alge mari au vezicule pline cu gaz sau alte structuri cu rol de flotaie, prin care talul algal i menine
poziia adecvat fa de incidena optim a luminii. La Nereocystis luetkeana, vezicula gazoas are civa centimetri
lungime. Cramponul se continu cu pedunculul algal, denumit stip sau cauloid. Pedunculul algal, rigid sau flexibil,
susine partea vegetativ fotosintetizant a algei. La algele macroscopice, creterea este fie apical, fie generalizat
(pe toat lungimea filamentului).
Peretele celular este rigid i conine celuloz, de obicei asociat cu o pectin i cu ali compui (acid alginic,
manan, xilan, agar, caragenina) i unele substane anorganice (Si, Ca).
Clorofila este localizat n structurile cloroplastelor. Tot aici se gsesc i alte tipuri de pigmeni (carotenoizi),
precum i substane de rezerv depozitate temporar: granule de amidon, picturi lipidice.
Algele sunt organisme fotosintetizante i pentru a capta energia luminoas de diferite lungimi de und,
posed trei tipuri de pigmeni: clorofile, carotenoizi (caroteni i xantofile) i ficobiline. Diferenele structurii lor
moleculare determin lungimea de und pe care fiecare categorie de pigmeni o poate absorbi.
Clorofila a este prezent la toate algele. Ea absoarbe lumina roie i transmite lumina verde. Se gsete la
toate organismele eucariote fotosintetizante i la cianobacterii i este esenial pentru fotosintez. Clorofila a, dei
este totdeauna prezent, poate fi mascat de ali pigmeni, la diferite grupe de alge. Unele alge apar brune, deoarece
conin o cantitate mare de xantofile i caroteni, care transmit culoarea brun, mascnd culoarea verde transmis de
clorofila a. Alte alge sunt roii sau purpurii, culoare conferit de ficobiline.
Consecina direct a intensitii crescute a fotosintezei, este sinteza n exces a glucidelor i depozitatea lor ca
substane de rezerv. Natura chimic a rezervelor sugereaz raportul filogenetic al diferitelor grupe de alge, cu
plantele superioare. De exemplu, algele verzi depoziteaz amidon, ca i plantele superioare cu care au i alte
caractere comune. Algele brune depoziteaz laminarina (un polimer de glucoz). Alte alge depoziteaz lipide, ceea
ce le confer o densitate mai mic dect a apei. Astfel, algele plutesc la suprafaa apei i dobndesc avantajul
incidenei maxime a luminii pentru fotosintez.
Toate algele fotosintetizante i-au dobndit modaliti speciale de reglare a gradului de expunere la lumin.
Una din formele de adaptare este rspunsul fototactic, ce const n capacitatea algei de a se deplasa, activ sau pasiv,
spre sau de la sursa de lumin. Fototaxia este prezent la reprezentanii tuturor grupelor majore de alge, cu excepia
celor roii, care nu au forme flagelate. Algele au capacitatea de a recepiona stimulii luminoi, prin aa numitele
antene direcionale fa de und luminoas. Acestea sunt conectate cu aparatul de locomoie a celulei. Antenele
direcionale sunt independente de aparatul fotosintetic. Arhitectura suprafeei celulare, precum i poziia sa n timpul
deplasrii sunt expresii ale fototaxiei. Schimbarea poziiei celulei fa de lumin, produce modificri ale distribuiei
luminii n celul.
Reproducere
Algele se reproduc pe cale asexuat sau sexuat.
Cea mai rspndit modalitate de reproducere asexuat este diviziunea mitotic. Fiecare celul fiic
primete jumtate din cantitatea de ADN a celulei parentale. De cele mai multe ori, diviziunea se realizeaz dup un
plan transversal. Algele multicelulare se nmulesc asexuat prntr-un proces de fragmentare. Filamentele lungi se rup
i fiecare fragment i reia creterea. Cea mai evoluat modalitate de nmulire asexuat este prin spori. Majoritatea
algelor produc spori unicelulari, celule specializate care germineaz fr s fuzioneze cu alte celule. Sporii algelor
aquatice sunt mobili, prin intermediul flagelilor i se numesc zoospori, iar cei imobili poart denumirea de
aplanospori.
Reproducerea sexuat este rezultatul unirii a dou celule specializate denumite gamei. La alge, ca i la
celelalte organisme eucariote, reproducerea sexuat presupune formarea gameilor, printr-un proces n care are loc
reducerea numrului de cromosomi, denumit meioz. Gameii sunt celule haploide i prin fuziunea lor, se reface
numrul diploid de cromosomi caracteristic speciei. Produsul fuziunii gameilor este zigotul diploid.
Meioza se produce n stadii diferite ale ciclului de via. La unele organisme, ciclul de via este dominat de faza
diploid. La altele, la germinare, zigotul sufer meioza, astfel nct ciclul de via este dominat de faza haploid. La
multe alge microscopice exist o alternan a fazelor haploid i diploid. Generaia haploid se numete gametofit,
iar cea diploid poart denumirea de sporofit.
Clasificarea algelor.
Clasificarea algelor se bazeaz pe proprietile generale, comune membrilor unui grup: pigmeni
fotosintetizani, tipul de substan de rezerv, mecanismele mobilitii, modul de reproducere. Denumirile grupelor
de alge deriv din culoarea caracteristic, dominant a grupului.
Chlorophyta, Chlorophycophyta(Alge verzi)
Algele verzi formeaz cel mai comun grup de alge i au cele mai multe asemnri cu plantele: au clorofile
de tip a i b i principalul produs depozitat este amidonul. Toate au perei celulari formai din celuloz i pectin.
Algele verzi sunt foarte diversificate sub aspect morfologic: de la cele microscopice unicelulare sau
coloniale, pn la cele macroscopice pluricelulare, filamentoase sau cu tal masiv. Majoritatea triesc n apele dulci,
puine fiind prezente n mediul marin. Sunt abundente n straturile superficiale ale mediilor aquatice. Puine cresc la
adncimi mai mari de 8 metri, deoarece lumina nu ptrunde la adncimi mai mari. Unele alge verzi se gsesc pe
suprafaa zpezii, pe trunchiul copacilor, n sol sau n raporturi simbiotice cu fungii cu care formeaz lichenii, cu
protozoarele, cu anemonele de mare, cu hidra.
Chlamydomonas este reprezentantul comun al grupului. Este o alg unicelular, ovoid. Celula conine un
cloroplast mare, n care este localizat stigma, organitul fotoreceptor. La partea anterioar a celulei, proemin doi
flageli identici. Celula are dou vacuole contractile, cu funcie excretoare.
Celulele de Chlamydomonas se reproduc asexuat i sexuat (fig. 142). n cursul reproducerii asexuate, celula
i pierde flagelii i se divide mitotic n 4 (sau 8 ori l6) celule fiice, n interiorul celulei parentale. Fiecare celul fiic
secret propriul perete i i formeaz flagelii. Celulele fiice sunt eliberate sub aciunea unei enzime care lizeaz
peretele parental.
Reproducerea sexuat este indus prin epuizarea sursei de azot a mediului. In timpul nfometrii, celulele
sintetizeaz molecule de suprafa care mresc adezivitatea reciproc. Celulele formeaz aglomerri i n interiorul
acestora, se unesc n perechi i dup dizolvarea local a peretelui celular, fuzioneaz. Celula rezultat prin fuziune,
sintetizeaz un perete gros i intr ntr-o faz de laten (dormind). La sfritul acesteia, are loc meioza i rezult 4
celule, fiecare cu propriul perete i cte doi flageli.
Fig. 142. Ciclul de viata la Chlamydomonas. Alga unicelular se reproduce sexuat prin fuziunea unor celule cu polaritate
sexuala opusa. Dup fuziune se formeaz zigotul, o celula cu pereti grosi. Dup o perioada de repaus, zigotul se divide meiotic i
rezulta 4 celule haploide, care se divid asexuat prin fisiune binara.
Acetabularia este unicelular, dar macroscopic, putnd atinge l0 centimetri. Nucleul este unic, situat la
baza pedunculului, ce seamn cu o tulpin. Pedunculul se termin cu o structur lamelar, asemntoare unei
frunze.
Fragmentul de tal ce conine nucleul, poate regenera restul algei, dar poiunile fr nucleu au capacitate
foarte limitat de regenerare. Se pot grefa diferite regiuni ale talului de Acetabularia, de la specii diferite (fig. 143).
Caracteristicile morfologice ale hibridului sunt determinate de tipul morfologic al speciei, care, la gref, contribuie
cu fragmentul nucleat. Nucleul condiioneaz capacitatea de regenerare i determin aspectul morfologic al regiunii
lamelare.
Fig. 143. Celulele diferitelor specii de Acetabularia (a, b) pot fi grefate (c ). Partea superioara formata de alga grefat
este caracteristica speciei donoare a nucleului (d). Experientele au evideniat ca nucleul determin att capacitatea de a regenera
constituientii celulari, cat i specificitatea componentelor celulare regenerate.
Spirogyra este o macroalg cu tal filamentos, neramificat ce formeaz mase mucilaginoase plutitoare n
ochiurile mici de ap dulce i n canalele de drenaj. Denumirea ei reflect aspectul helical al cloroplastului.
Reproducerea asexuat se face prin fragmentarea talului. Este modalitatea comun de reproducere.
Reproducerea sexuat este precedat de procesul conjugrii. Celulele din filamentele adiacente, formeaz
tuburi de conjugare ce se extind, fuzioneaz i formeaz un canal intercelular. Coninutul unei celule trece prin
canalul de conjugare i fuzioneaz cu coninutul celulei adiacente. Zigotul care rezult, dezvolt un perete celular
gros, rezistent i devine zigospor. La germinarea zigosporului are loc meioza.
Ulva (salata de mare) este comun pe linia rmului. Talul este aplatizat ca o frunz i se ancoreaz de
substrat prin crampon.
Speciile genului Codium au celule foarte mari, ramificate, multinucleate, ce rezult prin diviziuni nucleare
succesive, fr clivarea peretelui transversal.
Phaeophyta (Alge brune)
Algele brune sunt exclusiv organisme marine. In Oceanul Atlantic, creterea algei Sargassum este att de
abundent nct a dat denumirea regiunii.
Creterea algelor brune este foarte rapid. Intr-un singur an, Nereocystis atinge dimensiunea maxim de 40
m. Macroalgele brune prezint un tal cu diferenieri tisulare i regiuni morfofuncionale: crampon, stip, vezicule,
filoizi.
Algele brune conin clorofil a, clorofil c i pigmeni carotenoizi (xantofila i fucoxantina), care confer
algelor culoarea brun sau verde-oliv.
Substanele de rezerv a algelor brune sunt laminarina (un polimer de glucoz, resturile fiind legate l,3)
i manitolul (un alcool). In peretele celular, unele au algine (sunt poliuronide, echivalente ale substanelor pectice).
Cele mai multe alge brune se reproduc asexuat prin zoospori, dar i pe cale sexuat prin fuziunea gameilor,
asemntori sau diferii ca morfologie.
Rhodophyta (Alge roii)
Culoarea roie este dat de un pigment ficobilinic dominant, ficoeritrina. Impreun cu ficocianina,
mascheaz culoarea verde a clorofilei a. Ele sunt adaptate sa absoarb culoarea verde, violet i albastr a spectrului
vizibil, care penetreaz adnc n ap. Raportul cantitativ variat al pigmenilor, explic nuanele de culoare de la rou
aprins pn la albastru-verde, ale unor specii.
Algele roii cresc la adncimi de pn la l75 de metri n apele marine tropicale, dei unele se gsesc n apele
mai reci.
Materialul de rezerv al algelor roii este un compus special, denumit amidon de floridee.
Peretele celular algal conine celuloza i polizaharide sulfatate: agar i caragenina. Speciile genului
Corallina pot s depoziteze CaCO3 n pereii celulari i au avut rol important n formarea recifelor de corali.
Cele mai multe alge roii cresc fixate de diferite suporturi, inclusiv de alte alge. Foarte puine specii plutesc
libere.
Reproducerea este predominant asexuat, prin spori imobili. Reproducerea sexuat implic fuziunea
celulelor sexuale difereniate.
Bacillariophyta (Diatomee)
Grupul diatomeelor reunete organisme unicelulare de o mare diversitate morfologic. Culoarea galbenbrun este dat de pigmenii carotenoizi (fucoxantina). In peretele celular se gsete pectina, dar lipsete celuloza.
Peretele este impregnat cu compui ai siliciului i este foarte rigid.
Diatomeele reprezint o proporie important a algelor ce constituie planctonul din apa dulce i srat. Ele
cresc abundent chiar n regiunile arctice. Cele mai multe specii de diatomee sunt autotrofe, dar unele specii care
triesc n profunzimea pnzei de ap pot s absoarb materia organic i nu fac fotosintez.
Carapacea care acoper o diatomee se numete frustul. Pe baza simetriei arhitecturii lor, frustulele sunt
centrice (cu simetrie radiar) sau penate (cu simetrie bilateral).
Peretele frustulei este alctuit din dou jumti, denumite valve: jumtatea superioar - epivalv, iar cea
inferioar - hipovalv. Cele dou jumti ale frustulei sunt delimitate de rafeu (fanta din mijlocul frustulei).
Reproducerea asexuat, prin diviziune este calea obinuit de multiplicare (fig. 144). Fiecare celul fiic
primete cte o valv din cele dou ale celulei parentale. La unele specii, jumtatea nou a frustulei are dimensiuni
mai mici, astfel nct s acopere jumtatea original. Continuarea acestui proces pentru mai multe generaii, conduce
la scderea dimensiunilor. De aceea, cnd dimensiunea frustulei scade cu 30% din cea iniial, ncepe un stadiu de
reproducere sexuat, n cursul creia frustula i restabilete dimensiunile normale.
Din grupul diatomeelor fac parte algele galben-brune, ce formeaz o parte din nanoplanctonul oceanic
(organisme cu diametrul mai mic de 75 um). Unele din speciile acestui grup sunt amoeboide.
Fig. 144. Reproducerea diatomeelor se face n special pe cale asexuala. Fiecare celula fiica primeste o valva parentala i
i formeaz o vlva noua (culoare deschis), de dimensiuni mai mici dect valva parentala. n cteva generaii, dimensiunile
valvelor diminua semnificativ. Cnd reducerea a atins 30% se declanseaza stadiul reproducerii sexuate i se restabilesc
dimensiunile iniiale ale celulei.
Pyrrophyta(Dinoflagelate)
Dinoflagelatele formeaz un grup divers de organisme unicelulare biflagelate sau fr flageli. Din cauza
motilitii lor, dar i datorit capacitii de a ingera particule solide, au fost considerate protozoare. Dinoflagelatele
sunt rspndite n mediile marine i dulci, unde sunt fotoautotrofe saprobionte, simbionte (cu anemone, spongieri,
corali) sau chiar parazite.
Cele mai multe dinoflagelate conin clorofile de tip a i c, mascate de pigmeni carotenoizi (de culoare
galben). Unele nu au clorofil i se hrnesc heterotrof.
Majoritatea reprezentanilor acestui grup, au un perete celular denumit teac, alctuit din plci ce conin
celuloz. Att cele cu teac, ct i cele nude prezint un an transversal, la nivelul cruia, la speciile mobile, emerg
doi flageli.
Cea mai comun form de reproducere este diviziunea celular. Unele se reproduc prin fragmentare. Altele
formeaz zoospori i spori imobili (aplanospori). La unii reprezentani s-a observat reproducerea sexuat.
Genul Gonyaulax este important deoarece sintetizeaz toxine active asupra esutului nervos. Produce
nflorirea algal denumit mareea roie, ce omoar petii. Molutele consum celulele algale i concentreaz
toxina n organismul lor. Persoanele ce consum molute care, la rndul lor s-au hrnit cu Gonyaulax pot suferi
paralizie, prin efectul toxinei de origine algal.
Euglenophyta
Euglenoidele sunt un grup mic de microorganisme unicelulare, cu proprieti comune plantelor i animalelor.
Ca i plantele, euglenoidele au aparat fotosintetic, asemntor cu acela al algelor verzi, dar, ca i celula animal nu
au perete celular i inger hran particulat.
Euglenoidele sunt delimitate de o membran celular groas, denumit pelicul, ce prezint un sistem de
caneluri i benzi ce merg paralel i spiralat de-a lungul celulei. Benzile sunt formate din proteine flexibile, care se
anastomozeaz i au dispoziie helical n jurul celulei. Benzile proteice, mpreun cu membrana plasmatic,
formeaz pelicula, o structur foarte flexibil, care permite celulei s-i schimbe aspectul prin micare helicoidal i
reprezint n acelai timp o modalitate alternativ de locomoie, pentru organismele ce triesc n ml. Acesta este
tipul de deplasare specific grupului, denumit micare euglenoid, realizat printr-o succesiune rapid de contracii i
relaxri ale proteinelor helicoidale.
Ali reprezentani sunt flagelai. Celula are doi flageli: unul este scurt, fr rol n mobilitate. Ambii se inser
la baza unei invaginri, la captul anterior al celulei. Unii flageli au peri subiri, foarte fini, ce proemin la exterior.
In timpul micrilor flagelului, perii se rsucesc n jurul flagelului, mrind astfel eficiena deplasrii.
Euglenoidele au cloroplaste distribuite n toat celula. Pigmenii cloroplastelor sunt carotenoizi i
clorofilieni. Fiecare cloroplast conine un pirenoid, la nivelul cruia se depoziteaz un tip special de amidon, denumit
paramilon, utilizat ca rezerv de hran i pentru resinteza constituienilor cloroplastului. Cloroplastele fuzioneaz
frecvent, fenomen care semnific, dup toate probabilitile, schimbul de material genetic ntre aceste organite.
Celulele verzi de euglenoide prezint n partea anterioar o structur (organit) pigmentat, sensibil la
lumin, denumit stigm. Unele euglenoide au o vacuol contractil, prin intermediul creia se elimin cataboliii i
excesul de ap (fig. 145).
In condiii nefavorabile de mediu, unele euglenoide formeaz structuri de rezisten, denumite chiti.
Reproducerea este asexuat, prin diviziune celular simpl, binar. Nu se cunoate reproducerea sexuat.
In absena luminii, euglenoidele se hrnesc heterotrof, prin ingestia hranei particulate.
Fig. 145. Imagine electrono-optica a celulei de Euglena sp (original).
Importana algelor
In mediul aquatic, algele sunt productori primari n lanul trofic i servesc ca hran pentru animalele mici,
componente ale verigii trofice. Algele constituie fitoplanctonul, principala surs de hran pentru peti, influennd
direct producia piscicol. Algele reprezint sursa de hran pentru zooplancton, pe seama cruia se hrnesc
mamiferele aquatice mari. Viaa n mediul marin, depinde de productivitatea primar a algelor.
Diatomeele sunt unice prin faptul ca peretele lor celular conine concentraii mari de silicai, componente de
baz ale nisipului, granitului i sticlei. Dup moarte, silicaii cochiliei se dizolv rapid. In condiii favorabile,
structurile parietale se acumuleaz i formeaz depozite de diatomee fosile, denumit pmnt de diatomit. In unele
locuri din SUA, depozitele au grosimi de circa 900 de metri. Pmntul de diatomit se folosete ca abraziv n
industria prelucrrii prin lustruire a argintului, n producerea filtrelor de purificare a apei, ca izolant al cazanelor i
conductelor de vapori. Se adaug n pasta de dini, avnd rol abraziv.
Diatomeele sunt productoare de vitamine A i D. Petii consum diatomeele i concentreaz vitaminele n
ficat, de unde pot fi extrase pentru uz uman.
Algele verzi au un impact important asupra activitii umane:
- fotosinteza contribuie semnificativ la creterea concentratiei de O 2 n atmosfer i n sursele de ap;
- unele se cultiv artificial i se folosesc ca adaus n hrana animalelor, n proporie de pn la l0%;
- se folosesc pentru purificarea apelor de anal i a celor uzate industrial. Densitatea algelor ntr-o surs de ap,
este un indiciu al concentraiei compuilor cu azot, fosfor sau indiciu al gradului de poluare cu ap de canal.
Algele influeneaz mirosul i gustul apei. Ele colmateaz filtrele sau produc intoxicarea i chiar moartea
prin intermediul algatoxinelor.
Se studiaz posibilitatea cultivrii unor alge monocelulare, n condiii economice, pentru a fi folosite n
hrana omului, acolo unde deficitul de substane nutritive se amplific.
Algele roii furnizeaz dou polizaharide de importan economic major: agarul i caragenina. Agarul
produs de algele din genurile Gelidium i Gracilaria, are cea mai larg utilizare pentru solidificarea mediilor
nutritive de uz microbiologic, pentru producerea capsulelor farmaceutice. Caragenina produs de Chondrus crispus
se folosete n unele regiuni, ca aditiv ntr-o varietate de produse alimentare, dar a fost folosit ca agent
antiinflamator i n tratamentul ulcerului.
Dintre Phaeophytae, Macrocystis, cea mai mare alg marin, este sursa substanei algina (un polizaharid),
utilizat n producerea adezivilor, a maselor plastice i ca adaus n diferite produse alimentare: crema de ngheat,
erbet. Laminarina (un polimer de glucoz) are valoare comercial, ca stabilizator i emulsificator (emulsia este o
suspensie de picturi mici ale unui lichid n alt lichid, cu care nu se amestec), pentru prepararea vopselei i a altor
produse.
Unele alge brune se folosesc ca surs de vitamine n hrana animalelor de apartament i ca surs de hran
pentru animalele domestice. Se preconizeaz folosirea lor ca hran pentru populaia subnutrit.
Dinoflagelatele confer miros i gust neplcut apei. Unele produc mareea roie, cu efecte toxice i pot
omor petii, nevertebratele sau produc intoxicaii umane consecutive consumului de molute.
Diatomeele produc i depoziteaz chrysolaminarina (un polizaharid) i grsimi (sub form de uleiuri). Se
consider c au fost surse importante de petrol. Sunt indicatori ai schimbrilor geologice, fiind utile n studiul
formrii ghearilor n nordul Europei. Sunt indicatori ai polurii apelor industriale.
Inflorirea algal
In mod obinuit, prezena algelor microscopice n ap nu este evident. Uneori ns, n condiii favorabile de
mediu (creterea concentraiei compuilor cu azot, fosfor sau consecutiv polurii cu ap de canal), densitatea lor
crete exploziv i formeaz un strat la suprafaa apei. Fenomenul se numete nflorire i este limitat de
disponibilitatea nutrienilor eseniali specifici: azotai, fosfai. Dac nutrienii se gsesc n concentraii mari,
creterea algal poate acoperi ntreaga suprafa a apei. De multe ori, apele menajere i industriale, deversate n
bazinele de ap aduc nutrieni, rezultatul fiind eutrofizarea (suprafertilizarea) mediului aquatic. In lacurile poluate,
nflorirea algal poate avea dimensiuni uriae. Cnd masele uriae de alge mor, descompunerea lor sub aciunea
fungilor i bacteriilor, epuizeaz ntreaga cantitate de O 2 dizolvat, provocnd moartea prin hipoxie a organismelor
aquatice.
Importana medical a algelor
Un numr restrns de alge sunt implicate n patologia uman.
Prototheca este singura alg responsabil de producerea unei stri patologice infecioase i numai sub form
unei infecii secundare. A fost considerat ca aparinnd fungilor, deoarece este incolor, nu conine clorofil, dar
recent s-a demonstrat c este o varietate a algei Chlorella, ce s-a adaptat la nutriie heterotrof, prin pierderea
cloroplastului. Prototheca se poate izola din ap, din ap de canal i din tractul gastrointestinal. Infecia apare numai
n strile de deficien a funciei imunitare. La om produce leziuni tegumentare i bursita (inflamaia cavitilor
articulare).
Persoanele care lucreaz fr protecie cu pmntul de diatomee, fac silicoz, datorat prafului inhalat, ce
conine o mare cantitate de siliciu. Hiperplazia guogen a glandei tiroide este frecvent rezultatul ingestiei unor
cantiti mari de alge bogate n iod.
Algele verzi i diatomeele elimin algatoxine, care produc leziuni tegumentare, similare strilor de
hipersensibilite de contact.
Gonyaulax i Gymnodinium produc o toxin neurotrop, ce provoac paralizii. Pericolul intoxicrii
paralitice, crete n sezoanele n care se produc nfloriri cu aceste dinoflagelate. Cnd densitatea celulelor algale
crete la 50 000/ml, apa se coloreaz. Fenomenul este cunoscut sub denumirea de mareea roie i indic abundena
neurotoxinei n molutele zonei (midii, stridii).
Densitile celulare mici, care nu schimb culoarea apei sunt totui periculoase. Ingestia a 0,5 mg toxin,
poate fi fatal pentru om. Cantitatea se gsete n sute de grame de molute i este stabil dup ngheare sau
prelucrare obinuit. Nu se cunoate antidotul fa de neurotoxina dinoflagelatelor. Moartea poate surveni n 3-l2
ore. Pentru reducerea nivelului toxinei se provoac reflexul de vom.
Algele verzi sunt foarte importante din punct de vedere teoretic. Unii botaniti consider ca plantele au
evoluat din algele verzi.
Fungii
Fungii sunt organisme eucariote, heterotrofe, care au evoluat dintr-un strmo comun cu al metazoarelor.
Sunt mai nrudii cu metazoarele dect cu plantele. Asemenea majoritii bacteriilor i organismelor animale, fungii
folosesc substanele organice, ca surs de energie. Nu conin pigmeni fotosintetizani, ci pentru producerea energiei
sunt dependente de sisteme enzimatice specifice.
Fungii pot fi organisme saprobionte, adic cresc pe materia organic n descompunere, de origine vegetal i
animal. Alii sunt parazii i preiau nutrienii din esuturile organismelor vii, plante i animale, prin intermediul
unor hife specializate denumite haustori. In ambele cazuri, enzimele hidrolitice sunt eliberate din celula fungic n
mediul nconjurator, unde moleculele nutritive sunt simplificate prin digestie enzimatic, iar nutrienii trec n celula
fungic, sub form unei soluii apoase.
Celul fungic este asemntoare, din punct de vedere structural, cu cea vegetal sau animal. Nucleul
celulei fungice este foarte mic. Inveliul nuclear dublu-membranar, adeseori, prezint pori mari. In timpul mitozei,
nveliul nu se dezorganizeaz, ci sufer o constricie, ceea ce confer nucleului, aspectul de halter. In final se
formeaz doi nuclei fii. Fusul de diviziune este intranuclear. Cromosomii au dimensiuni mici. In metafaz, ei se
distribuie ntmpltor pe fibrele fusului i nu formeaz o plac ecuatorial. In timpul diviziunii mitotice, nucleolul
persist.
In diviziunea meiotic, att membrana nuclear, ct i nucleolul se dezorganizeaz.
Vacuolele, totdeauna prezente n celula fungic, niciodat nu ating dimensiunea celor din celula vegetal.
Celula fungic depoziteaz glicogen sau lipide.
Peretele celular const din microfibrile de chitin sau de celuloz. Majoritatea fungilor au perete chitinos.
Uneori, chitina i celuloza coexist n compoziia aceluiai perete.
Intre plasmalem i peretele celular, apar structuri speciale denumite lomasomi, alctuii din agregate de
tubuli sau din vezicule. Funcia lor nu este cunoscut.
Compoziia chimic a peretelui celular al levurilor este heterogen. El conine cantiti aproximativ egale de
glucan (un polizaharid cu grad nalt de ramificare) i manan (un polizaharid solubil). Ali compui chimici ai
peretelui fungic sunt lipidele, proteinele i glucozamina (un glucid aminat).
Studiul suprafeei fungilor este important, deoarece la acest nivel se gsesc structurile moleculare care
realizeaz interaciunile celulare n cursul reproducerii sexuate, n procesul floculrii levurilor de fermentaie, n
nglobarea i excreia moleculelor. Studiile ultrastructurale au evideniat, pe suprafaa diferitelor levuri, prezena
fimbriilor, crora li se atribuie un rol important n etapa iniial a procesului de reproducere sexuat.
Unitatea structural a aparatului vegetativ al fungilor este, de regul, hifa. Pe msur ce crete, hifa se
ramific ntr-o reea dens de hife, care constituie miceliul vizibil ca o psl fin. Fungii macroscopici sunt alctuii
din hife mpachetate ntr-o structur denumit corp de fructificare. Miceliul este analog coloniei bacteriene.
Hifele sunt alctuite din celule. Celulele fungice pot avea dimensiuni diferite: uneori o singur celul
formeaz ntregul aparat vegetativ al fungilor. In aceast categorie intr levurile monocelulare.
Celulele fungice pot fi alungite i filiforme, mononucleate sau binucleate. La Zygomycetes, hifele sunt
coenocitice (neseptate), adic dup diviziunea nucleului, pereii despritori nu se formeaz i coninutul hifei se
poate deplasa liber pe lungimea filamentului. La ali fungi, hifele miceliene sunt divizate prin perei transversali
(septe). Adeseori, septurile transversale sunt perforate de unul sau mai muli pori mici, care permit citoplasmei i
nucleilor s treac dintr-o celul n alta.
Miceliul prezint diferenieri funcionale. Aproape toi fungii prezint miceliul vegetativ, care crete n
grosimea substratului i are rol absorbant al substanelor nutritive. Unele specii prezint structuri specializate
denumite rizoizi, care absorb nutrienii, dar au i rol de fixare. Miceliul care crete deasupra substratului este
miceliul aerian, pe care se dezvolt structurile cu rol reproductor. Cele dou tipuri de miceliu pot s se dezvolte
simultan, formnd un aparat vegetativ unitar, sau apariia lor este decalat n timp. Miceliul asimilator este bine
dezvoltat i ptrunde adnc n substrat. Structurile reproductoare sunt totdeauna aeriene i pot fi microscopice sau
macroscopice. La levuri, aceiai celul ndeplinese ambele funcii.
Dimorfismul fungic. Civa fungi patogeni prezint un dimorfism evident, adic dou aspecte morfologice
distincte, n condiii diferite de mediu. Pe medii nutritive, aceste organisme manifest tipul morfologic normal,
caracteristic nutriiei saprobionte, dar n esuturile animale sau pe medii foarte bogate n substane nutritive, la
temperaturi superioare, aparatul vegetativ are caracteristicile unei levuri. Denumirea de saprobiont se folosete
pentru varianta morfologic filamentoas, iar cea de parazitar se folosete pentru stadiul de levur.
S. cerevisiae sufer o tranziie dimorfic, de la morfologia de levur, la forma filamentoas, ca rspuns la
semnalele nutriionale din mediu, n special limitarea sursei de azot i excesul sursei de carbon fermentescibil.
Celulele diploide sufer tranziia dimorfic la forma filamentoas, denumit difereniere pseudohifal. Creterea
filamentoas reprezint o schimbare ampl a morfologiei creterii celulare. Celulele devin alungite, se comut la
modul de nmugurire unipolar, rmn ataate una de alta i invadeaz substratul de cretere, ceea ce i permite
utilizarea nutrienilor n condiii defavorabile
Creterea pseudohifal invaziv se produce ca rspuns al tulpinilor diploide, la abundena sursei de C i
limitarea sursei d N. n contrast, tranziia la forma invaziv a tulpinilor haploide se produce pe un mediu bogat n
nutrieni (mediul YPD extract de levuri- pepton, dextroz).
n mediile naturale, cele mai multe tulpini de S. cerevisiae sunt diploide, iar starea haploid a ciclului este
reprezentat de gamei
Reproducerea
Fungii se reproduc pe cale sexuat i asexuat. Cele dou ci nu sunt comune tuturor fungilor, deoarece
unele grupe se reproduc numai pe cale asexuat.
Unitatea structural de reproducere, tipic pentru fungi este sporul cu unul sau mai muli nuclei. Formarea
sporilor este o modalitate comun pentru reproducerea, dispersia i supravieuirea n condiii nefavorabile. Pentru
fungii patogeni, sporii sunt sursa major de infecie a gazdelor.
Sporii, sexuai sau asexuai sunt produi pe hife, n interiorul lor sau n structuri specializate. Formarea
sporilor sexuai implic mperecherea hifelor de polaritate sexual opus i diviziunea meiotic, iar sporii asexuai se
formeaz prin diviziuni mitotice.
La fungii macroscopici se formeaz structuri reproductoare multicelulare ce poart spori, denumite
sporocarpi.
Sporul este o structur ce poate fi separat de talul parental i astfel este diseminat.
Tipul de spori produi i modalitatea de sporulare sunt criterii importante pentru clasificarea fungilor. In
general, sporii sexuai nu sunt mai termorezisteni dect celulele vegetative.
Reproducerea sexuat poate s fie rezultatul unirii hifelor, a celulelor sexuale difereniate (gamei), a unor
structuri multinucleate cu polaritate sexual denumite gametangii sau a unui gametangiu femel cu un gamet mascul
imobil.
Toate aceste structuri reproductoare au nuclei cu un set haploid de cromosomi. Unirea elementelor
reproductoare mascule i femele realizeaz ntr-o prim etap, fenomenul de plasmogamie, ce semnific unirea
maselor citoplasmatice, dar cei doi nuclei haploizi rmn separai i constituie stadiul de celul dicariotic. Faza
dicariotic este, probabil, prezent la toate organismele care se reproduc sexuat, dar uneori are o durat foarte scurt.
La majoritatea fungilor superiori (Bazidiomicete), faza dicariotic se extinde pe cea mai mare parte a
ciclului de via i se prelungete mai multe generaii celulare, timp n care reproducerea se face numai pe cale
asexuat.
Cnd cei doi nuclei (mascul i femel) fuzioneaz n procesul de cariogamie, rezult un zigot diploid, la care
prima diviziune este meiotic i se formeaz sporii sexuai haploizi. Aadar, formarea sporilor sexuai este precedat
de fuziunea nuclear i de diviziunea meiotic. Celulele sporale formate pe cale sexuat se numesc ascospori,
bazidiospori, oospori i zigospori. Sporii sexuai se formeaz cu o frecven mai mic dect cei asexuai.
Sporularea sexuat este indus n condiii speciale de mediu.
Ascosporii se formeaz n celule saciforme, denumite asce, dup fuziunea citoplasmatic i nuclear a
celulelor polarizate sexual. Sporii sunt structuri individualizate, de obicei n numr de 8 pentru o asc, sferici sau
ovali, nerezisteni la factorii de mediu.
Bazidiosporii se formeaz la captul unor structuri dilatate, denumite bazidii. Sunt solitari, sferici sau ovali,
n numr de 4, fr proprieti de rezisten (de exemplu, la Amanita, Agaricus, Coprinus).
Oosporii se dezvolt ntr-o celul ou, denumit oogonie. Sunt sferici, n numr de 1-20 ntr-o oogonie, mai
rezisteni dect majoritatea sporilor asexuai (de exemplu, la Saprolegnia).
Zigosporii sunt mari, cu perei groi, sferici sau ovali, nerezisteni. Se formeaz un singur zigospor (de
exemplu, la Rhizopus).
Sporii asexuai. Unele grupe de fungi produc att spori sexuai cat i asexuai, iar altele produc numai spori
asexuai. Formarea sporilor asexuai poate avea loc n faza haploid, n faza dicariotic sau n faza diploid a ciclului
sexual. Spre deosebire de sporii sexuai, sporii asexuai nu sunt niciodat precedai de diviziunea meiotic.
Sporii asexuai includ o diversitate de structuri, cu denumiri diferite n funcie de modalitatea de formare:
artrospori, blastospori, clamidospori, conidii, sporangiospori, zoospori.
Unele grupe de fungi au capacitatea de a forma dou tipuri de spori asexuai. Sporii asexuai difer prin
aspectul morfologic i dimensiuni, culoare, prin numrul de nuclei.
Artrosporii se formeaz prin fragmentarea hifelor i au form cilindric sau sferic. Nu sunt rezisteni la
aciunea factorilor de mediu. Sunt definitorii pentru genurile Geotrichum, Trichosporon etc.
Blastosporii se formeaz prin nmugurirea celulei principale. Au form sferic sau ovalar i sunt
nerezisteni. Sunt caracteristici pentru genurile Candida, Saccharomyces etc.
Clamidosporii se formeaz prin dilatarea celulelor terminale sau intercalare ale hifei. Sunt solitari, sferici, au
perei groi i foarte rezisteni la uscciune i cldur. Se difereniaz la Candida, Mucor etc.
Conidia se formeaz ca o structur solitar sau n iruri moniliforme pe hife specializate, denumite
conidiofori. Au form sferic sau ovoid i nu sunt rezisteni la factorul termic. Se difereniaz la Aspergillus,
Penicillium (i se numesc microconidii) sau sunt multicelulari (macroconidii), lungi i ascuii, nerezisteni (de
exemplu, la Alternaria, Trichophyton).
Fialosporul (o conidie special) se formeaz pe ramuri specializate ale conidioforilor, denumite fialide.
Fialosporii sunt solitari sferici sau ovalari, nerezisteni. Se difereniaz la Phialospora.
Sporangiosporii se formeaz n interiorul unor celule dilatate, la captul hifelor, denumite sporangi. Sunt
sferici, nerezisteni (de exemplu, la Mucor, Rhizopus etc.).
Zoosporii se formeaz n interiorul zoosporangilor, difereniai la captul hifelor principale sau al
ramificaiilor laterale. Sunt sferici, nerezisteni, dar caracterul lor distinctiv este mobilitatea prin flageli, de unde i
iau i denumirea. Se formeaz la fungii inferiori (de exemplu, la Saprolegnia).
Sporii produi de fungii aquatici sunt mobili, iar cei produi de fungii teretri sunt nconjurai de perei mai
groi dect ai hifei. Peretele sporal este alctuit din epispor i endospor, care acoper protoplastul sporal. Intreaga
structur poate fi acoperit de perispor.
In condiii favorabile de mediu (substane nutritive, umiditate, pH, temperatur), sporii fungici germineaz i
produc una sau mai multe structuri filamentoase denumite tuburi de germinare (fig. 146). Ele emerg n zonele mai
subiri ale nveliului sporal. Apoi cresc, se alungesc i se ramific pentru a forma hifele.
Fig. 146. Germinarea sporilor fungici. Iniial se formeaz tubul de germinare, care crete i rezulta o hifa. Hifa crete, se
ramifica i formeaz o panza hifala, denumit miceliu.
Clasificare
Criteriile majore de clasificare a fungilor sunt urmtoarele:
modul de reproducere;
ciclul de via
morfologia organelor de reproducere i a sporilor formai; particulariti de ordin biochimic, fiziologic,
determinri de ordin calitativ a asemnrilor i deosebirilor dintre diferii reprezentani.
Fungii sunt considerai ca unitate taxonomic de sine stttoare, cu rangul de regn: regnul Fungi (Mycetae),
propus de Ainsworth (l973).
Fungii inferiori formeaz zoospori i includ clasele Oomycetes i Chytridiomycetes.
Fungii din diviziunea Amastigomycota nu produc zoospori i sunt reprezentai de clasele: Zygomycetes,
Ascomycetes, Basidiomycetes, Deuteromycetes.
Regnul Fungi cuprinde i un grup de organisme cu particulariti comune fungilor i protozoarelor:
Mixomycete (Gymnomyxa).
Fungii inferiori constituie un grup heterogen, care au fost reunii n dou clase nenrudite: Oomycetes i
Chytridiomycetes.
Majoritatea fungilor inferiori triesc n mediul aquatic i ntr-un anumit stadiu al ciclului de via formeaz o
celul mobil, denumit zoospor. La originea sa poate fi un proces sexuat sau unul asexuat. Zoosporul participant la
un proces sexuat are funcia unui gamet.
Zoosporii sunt mobili prin unul sau doi flageli. Flagelul este un apendice filiform, alctuit din dou fibre
centrale i 9 fibre periferice, contractile.
Zoosporii i gameii mobili se formeaz ntr-o structur n form de sac, denumit zoosporangiu. Dac
zoosporul are rol de gamet, sacul se cheam gametangiu.
-
Oomycetes
Oomycetes sau fungii filamentoi de ap se deosebesc de fungii propriu-zii, deoarece au perei celulozici.
Cromosomii lor conin proteine histonice, n timp ce fungii adevrai au histone puine sau deloc. Un alt caracter
distinctiv fa de fungii propriu-zii, const n prezena centriolului, absent la fungi. Reprezentanii lor triesc mai
ales n ap dulce. Unii sunt teretri. Cel mai reprezentativ este Plasmopara viticola, agentul care produce mana viei
de vie. Amestecul Bordeaux, format din CuSO 4 i Ca(OH)2 este foarte eficient pentru controlul acestei boli cu un
potenial distructiv uria.
Ciclul de reproducere include dou stadii: sexuat i asexuat. Sporii asexuai sunt biflagelai i mobili.
Gameii sunt imobili i prin fuziune genereaz zigotul 2n, denumit oospor.
Zygomycetes
Zygomycetes se caracterizeaz printr-un tip de reproducere sexuat, n care dou gametangii fuzioneaz i
formeaz un zigot (zigospor). Hifele au puini perei transversali sau acetia lipsesc complet, miceliul fiind de tip
coenocitic(fig. 147).
Un reprezentant comun al grupului este Rhizopus nigricans, care crete pe resturi alimentare pe care le
acoper cu un miceliu de culoare nchis (mucegaiul negru). Unele hife se rspndesc orizontal pe suprafaa
substratului i se numesc stolonifere. Din acestea se dezvolt hife care penetreaz substratul nutritiv, avnd rol n
absorbia nutrienilor i de fixare. La extremitatea unor hife care cresc vertical se formeaz o dilatare n form de sac,
denumit sporangiu. In fiecare sporangiu se dezvolt o aglomerare de spori asexuai, care se elibereaz prin ruperea
peretelui sporangial.
Creterea acestui mucegai n i pe produsele de panificaie este stopat prin adugarea agenilor inhibitori, la
aluatul de cretere. Unele zigomycete produc infecii la om i animalele vertebrate. Altele paraziteaz viermii i
artropodele.
Fig. 147. Ciclul reproducerii sexuate i asexuate la Rhizopus stolonifer (mucegaiul negru al painii).
Ascomycetes
Ascomicetele formeaz cel mai mare i diversificat grup de fungi, cu circa 2000 de genuri. Grupul include
levurile, fungii filamentoi care produc boli caracteristice la plante denumite finri i fungi cu plrie: Morchella
(zbrciogul) i Tuber (trufele).
Majoritatea sunt specii terestre, dar un numr considerabil, populeaz apele dulci sau srate. Majoritatea sunt
saprobionte pe resturile vegetale n descompunere, iar unele sunt parazite sau triesc n asociaii reciproc benefice,
cu alte microorganisme sau cu unele plante.
Multe ascomicete saprobionte sunt foarte specializate i cresc numai pe anumite pri n descompunere ale
unor specii de plante, iar cele parazite sunt restrnse la anumite esuturi ale gazdei (de exemplu, peiolul frunzei). Un
numr important de reprezentani ai grupului sunt parazii ai plantelor i mai puini ai insectelor sau altor animale.
Ascomicetele se reproduc pe cale sexuat i asexuat. Caracteristica acestui grup de fungi este c sporii
sexuai, denumii ascospori se formeaz ntr-o structur n form de sac, denumit asc.
Asca este o celul care se formeaz prin procesul de fuziune a unor structuri tubulare a dou celule
nvecinate haploide, polarizate sexual. Iniial fuzioneaz numai masele citoplasmatice, prin procesul de
plasmogamie. Plasmogamia poate fi rezultatul unirii a dou celule similare sau hife, ori prin unirea heterogen a
dou celule diferite, difereniate, denumite gametangii, unul mascul i unul femel sau a unui gametangiu femel cu o
celul masculin detaat (spermatie) (fig. 148).
Fig. 148. Stadiile succesive ale formarii ascei. a. Celula binucleata rezultata prin fuziunea celulelor haploide. b. Fuziunea
nucleara. c, d, e. Diviziuni nucleare. f. Formarea ascosporilor.
Dup plasmogamie, celula are dou ci de evoluie:

cariogamia poate avea loc imediat dup plasmogamie i rezult zigotul. Zigotul sau celulele rezultate prin
diviziunea sa, se transform n asc;
- cariogamia ntrzie i starea dicariot, iniiat prin procesul plasmogamiei, se prelungete pentru mai multe
generaii.
In interiorul ascei, procesul generrii ascosporilor este asemntor la toi fungii. Dup cariogamia imediat
sau tardiv, nucleul diploid al ascei, sufer diviziunea meiotic. Dup prima diviziune meiotic, se formeaz doi
nuclei, iar dup a II-a diviziune rezult 4 nuclei. La cele mai multe ascomicete, urmeaz o a II-a diviziune mitotic
i se formeaz 8 nuclei. Cei 8 nuclei sunt ncorporai n ascospori, delimitai de o membran dubl. Membrana este
originar n reticulul endoplasmic sau n nveliul nuclear. Ea se invagineaz pentru a nconjura fiecare nucleu.
Peretele sporal nou, este depus ntre cele dou lame membranare. Membrana intern devine plasmalema sporului.
Numrul ascosporilor poate fi numai de 4 dac cea de a II-a diviziune mitotic nu mai are loc, sau de l6, 32 sau alt
-
multiplu de 8, n funcie de numrul diviziunilor mitotice. La unele ascomicete, ascele se pot forma n corpi de
fructificaie, denumii ascocarpi. Se cunosc patru tipuri de astfel de structuri: apotecia, cleistotecia, loculotecia i
peritecia.
Reproducerea asexuat este comun majoritii ascomicetelor. Pe medii copiotrofe, celulele de levuri se
reproduc asexuat prin nmugurire, iar pe medii oligotrofe, celulele diploide rezultate prin fuziune, sporuleaza (fig.
149).
Fig. 149. Ciclul de via la S. cerevisiae. Pe mediul bogat n nutrieni, celulele haploide de polaritate sexuala opusa, se
mperecheaz i fuzioneaz. Rezult celule diploide, cu evoluie diferit n funcie de disponibilitatea nutrienilor: N + C =
mediu nutritiv bogat n surse de N i de C fermentescibile; n + C = sursa de N este limitat, iar cea de C fermentescibil este
abundent; n + c = surse limitate de N i de C nefermentabil; - mediu fr nutrieni( dup K. Lengeler, 2000).
In acest proces, nucleul se divide prin mitoz, fr dezorganizarea membranei nucleare. Unul dintre cei doi
nuclei, se deplaseaz ntr-o mic proiecie a citoplasmei, delimitat de membran i perete, denumit mugure.
Reproducerea asexuat prin conidii este comun. Ele se pot forma libere pe miceliu sau sunt organizate n
corpi de fructificaie, asemntori ascocarpilor. Adeseori, stadiul conidial i cel de asc, apar pe micelii separate.
Miceliul formator de conidii se mai numete stadiul imperfect, datorit absenei modalitii de reproducere sexuat,
iar miceliul formator de asce se numete stadiul perfect, pentru c este sediul proceselor sexuale.
Formarea sporilor asexuai la Asp. nidulans. Ciclul de sporulare asexuat la A. nidulans poate fi mprit n
2 faze (fig. 150):
- o faz de cretere, n care celulele devin competente pentru a rspunde la semnalele inductoare ale sporulrii:
- o faz de reproducere asexuat, n care se iniiaz sporularea i se formeaz structurile sporifere.
Aceast ciuperc crete formnd o reea ordonat de hife ce constituie un miceliu. Fiecare hif este format
din celule vegetative haploide, multinucleate i separate de septuri perforate, ce permit migrarea nucleilor. Hifa
crete prin extensie apical i se ramific, formnd o colonie cu simetrie radial.
Hifa are rolul de a absorbi nutrienii din mediul de cretere, facilitat de secreia enzimelor degradative.
Dup o perioad fix de timp, ce urmeaz creterii vegetative, unele celule hifale din centrul miceliului produc
ramificaii aeriene ce iniiaz sporularea asexuat. Se formeaz structuri multicelulare denumite conidiofori, ce
poart lanuri de spori denumite conidii. Este o trecere de la creterea hifal, nalt polarizat, la creterea prin
nmugurire i tranziia de la starea multinucleat la cea uninucleat.
Fig. 150. Ciclul formrii sporilor asexuai la Asp. nidulans. In faza de cretere vegetativ, sporii germineaz i se formeaz hife
miceliene. In faza reproductiv, celule hifale specializate din miceliul primar dau natere hifelor aeriene specializate denumite
conidiofori. Hifele aeriene se termin cu o vezicul, ce nmugurete i se ramific, rezultnd sterigme de ordinul 1 i 2. Prin
diviziuni mitotice succesive, sterigmele de ordinul 2 (fialide) formeaz lanuri de conidii care pot germina pe un mediu favorabil
i reiau ciclul (dup Lengeler, mmbr 2000).
Ciclul sexuat. In condiii de deficit nutritiv, hifele multinucleate i ramificate formeaz un miceliu
multicelular. n ciclul vegetativ, N. crassa produce dou tipuri de spori vegetativi: macro- i microconidii.
Macroconidiile sunt multinucleate i se difereniaz din hife aeriene specifice denumite conidiofori, ce cresc
perpendicular pe suprafaa miceliului. Dup o perioad de cretere aerian apical, hifele aeriene se comut la modul
de cretere prin nmugurire, ce duc la formarea lanurilor de proconidii n interiorul conidioforului. Pe msur ce se
matureaz, se separ i sunt dispersate n primul rnd de curenii de aer. In condiii favorabile, germineaz rapid (fig.
151).
Microconidiile se difereniaz din miceliul vegetativ primar (de substrat), sunt mai mici, uninucleate i au
capacitate redus de germinare.
Fig. 151. Ciclul de via la N. crassa. Ca rspuns la condiiile de mediu, miceliul vegetativ produce conidii (macro i
microconidii) i protoperitecii. Macroconidiile se formeaz din conidiofori ce se difereniaz din hifele aeriene, iar
microconidiile se formeaz direct pe hifele vegetative. Dup fertilizarea protoperiteciei de polaritate feminin cu un nucleu al
protoperiteciei de polaritate masculin, este iniiat ciclul sexual n care se produc ascospori (adaptat dup Lengeler, mmbr,
2000).
Ciclul sexual. La fungi, meioza este strns asociat cu sporularea. Dezvoltarea sexuat a ascei se
caracterizeaz unui corp de fructificare ce conine asce cu celule precursoare sporale. In contrast, levurile formeaz
asca pe cale direct, dintr-o singur celul diploid, fr s formeze corpul de fructificare.
N. crassa este heterotalic i are dou tipuri de hife miceliene, polarizate sexual: A i a. Ciclul sexual se
iniiaz ca rspuns la epuizarea sursei de N. Reproducerea sexuat are loc numai ntre tulpini de polaritate sexual
opus (mat A i mat a).
Celulele vegetative A, n condiiile limitrii sursei de N, produc precursori ai corpilor de fructificare,
denumite protoperitecii. Din protoperitecii cresc hife specializate polarizate sexual (gamei feminini), care manifest
cretere chemotrop spre celule de polaritate masculin (condii sau hife), ca rspuns posibil la feromoni. Contactul
dintre trichogin i celula de polaritate masculin duce la intrarea nucleului masculin n trichogin I transportul su
ulterior n ascogonul protoperiteciului. Odat ce nucleul unui gamet mascul intr n protoperiteciu, acesta devine
periteciu- o hif ascogen dicariot, pentru c cei doi nuclei de polaritate sexual opus nu fuzioneaz imediat, dar
se divid mitotic pentru a produce o mas hifal ascogen. Urmeaz fuziunea celor 2 nuclei de polaritate opus. Se
formeaz celule diploide, care intr n diviziune meiotic urmat de 1-2 diviziuni mitotice, rezultnd asce cu 4- 8
ascospori.
Basidiomycetes
Bazidiomicetele sunt fungii cei mai evoluai. Miceliul este pluricelular i se distinge prin organul sporifer
denumit bazidie, n care se formeaz bazidiosporii.
Grupul bazidiomicetelor include 20-30 000 de specii, cu morfologie diferit a talului, n funcie de modul de
via: saprobionte sau parazite. Din acest grup fac parte fungii gelatinoi, fungii care produc boli la plante (rugini,
tciuni, mluri), fungii consol, care se dezvolt pe scoara copacilor, fungii macroscopici comestibili i
necomestibili.
Denumirile comune se refer la partea vizibil a ciupercii, denumit bazidiocarp, susinut de un miceliu
asimilator bine dezvoltat, care penetreaz substratul (solul sau materialele vegetale), pe care ciuperca fructific.
Reproducerea sexuat. Structura purttoare de spori sexuai a bazidiomicetelor este o celul specializat, cu
aspect mciucat, care se numete bazidie. La vrful ei se dezvolt 4 bazidiospori, care proemin la exteriorul
bazidiei. Sporii sunt eliberai i dup germinare se dezvolt un miceliu. De cele mai multe ori, bazidiile se formeaz
pe corpuri de fructificare (bazidiocarp).
Fig. 152. Modalitatea diviziunii celulare ntr-o hifa dicariotica de bazidiomicete. n acest fel, fiecare dintre cei doi nuclei distinci
se distribuie n cele dou celule. Structura caracteristic are form de crlig.
Cele mai multe bazidiomicete produc bazidii, organe de reproducere omologe ascei i probabil derivate din
ea. Bazidia se formeaz ntr-o structur hifal binucleat, sediul evenimentelor definitorii ale reproducerii sexuate:
cariogamia i meioza. Spre deosebire de asc, bazidia poart bazidiosporii la exteriorul ei.
Bazidiosporul conine un nucleu haploid. Dup germinare, din bazidiospor se dezvolt un miceliu haploid
monocariotic, septat, format din celule uninucleate. Faza miceliului uninucleat haploid este scurt, deoarece curnd
se produce plasmogamia, care semnific fuziunea a dou hife monocariote. La bazidiomicete, organele sexuale
lipsesc.
Celula dicariotic, format prin plasmogamie, continu s se divid, dar i pstreaz starea binucleat. Se
formeaz un miceliu asimilator care penetreaz n substrat.
Cnd condiiile de mediu sunt favorabile procesului de reproducere, miceliul dicariotic sufer o
morfogenez complex, pentru a forma un bazidiocarp. Unele dintre celulele bazidiocarpului se transform n
bazidii. Celulele din care se formeaz bazidiile (probazidii) sunt dicariote, avnd doi nuclei haploizi. Cei doi nuclei
ai probazidiei fuzioneaz i formeaz un nucleu diploid, care se divide meiotic. De obicei, bazidia dilatat formeaz
la extremitatea ei liber, 4 proiecii alungite denumite sterigme. Vrful fiecrei sterigme se dilat pentru a forma
bazidiosporul. In sterigm, migreaz un singur nucleu haploid i ntreaga structur devine bazidiospor. Bazidiosporii,
de obicei, conin un singur nucleu (fig. 153).
Fig. 153. Stadiile succesive ale formarii bazidiei i eliberarii bazidiosporilor. a. O celula binucleata. b. Fuziunea nucleilor. c, d.
Diviziunea nucleara. e. Formarea bazidiosporilor. f, g. Eliberarea bazidiosporilor.
Rareori, n bazidiospori sunt ncorporai doi nuclei i se formeaz o bazidie care conine numai doi
bazidiospori binucleai.
Corpii de fructificare (bazidiocarpi) sunt caracteristici tuturor fungilor macroscopici, dar lipsesc la cei
microscopici (tciuni, mluri, rugini).
Bazidiosporii formai pe corpul de fructificare, se disperseaz i iniiaz creterea miceliului. Miceliul
haploid poate s creasc extensiv, dar uneori, prin fuziunea a dou micelii haploide se formeaz miceliul dicariotic,
care formeaz corpul de fructificaie.
In anumite condiii de mediu, hifele dicariote cresc i formeaz structuri butonate submerse. Acestea sunt
primordiile corpilor de fructificare. Butonii pot s rmn perioade lungi de timp, n stare latent. In condiii de
umiditate optim, butonii cresc rapid n cteva ore sau 1-2 zile, pe seama acumulrii apei i se formeaz corpi de
fructificare. De multe ori, pe o suprafa de sol bine delimitat, se produce o adevrat explozie a formrii corpilor
de fructificare.
Reproducerea asexuat este comun la bazidiomicete, dei este mai puin frecvent dect la fungii inferiori
i ascomicete. Structurile reproductoare asexuate la bazidiomicete sunt mugurii (ca i la levuri), conidiile,
clamidosporii i oidiile. Oidiile se formeaz prin fragmentarea miceliului monocariotic: o hif se fragmenteaz n
celulele sale componente. Oidiile sunt haploide i prin germinare se formeaz un miceliu haploid. Miceliile derivate
din oidii, fuzioneaz i formeaz un miceliu dicariotic.
Ciclul de via la Ustilago maydis. Celula asexuat are aspect uor alungit este saprobiont pe materia
organic i crete prin nmugurire. Dou celule cu polaritate sexual opus, dezvolt protruzii filamentoase,
denumite tuburi de conjugare, fuzioneaz i formeaz o hif dicariot infecioas. Hifa este patogen i infecteaz
esutul meristematic al oricrei pri aeriene a plantei. Proliferarea hifal n esuturile plantei induce creterea
neoplazic i formarea galelor. Hifele fungice, n interiorul acestor structuri tumorale, se rotunjesc i se produce
cariogamia, dnd natere la teliosporii diploizi uninucleai. Prin spargerea esutului tumor-like, sporii se
disemineaz n mediu. Ca rspuns la condiiile favorabile de mediu, are loc meioza i teliosporii germineaz,
formnd un promiceliu ce const din 4 celule haploide, care include i teliosporul original. In final, bazidiosporii
nmuguresc din promiceliu i germineaz, relund ciclul (fig. 154).
Fig. 154. Ciclul de via la U. maydis se caracterizeaz printr-o comutare a aspectului morfologic, de la creterea sub forma de
levur saprobiont, la creterea filamentoas patogen (adaptare dup K. Lengeler, mmbr, 64, 4, 2000).
Deuteromycetes (Fungi Imperfecti)

Grupul include circa l5 000 de specii de fungi, crora, aparent le lipsete stadiul sexuat de reproducere i din
aceast cauz se numesc fungi imperfecti. Se presupune c majoritatea organismelor cuprinse n acest grup sunt,
stadiile asexuate ale fungilor care se reproduc sexuat, ce aparin grupelor Ascomycetes i Bazidiomycetes.
Ca grup, deuteromicetele sunt heterogene, speciile componente neavnd origine comun i nici raporturi
filogenetice.
La unii reprezentani ai grupului s-a identificat existena unei faze sexuate a ciclului de via. In astfel de
situaii, ambele stadii de dezvoltare a ciupercii (sexuat sau perfect i asexuat sau imperfect) sunt transferate la grupul
cruia i aparine stadiul perfect, n acord cu concepia c, mpreun, cele dou stadii formeaz ciclul complet de
via al ciupercii.
Membrii grupului cresc pe orice tip de substrat. Unele sunt saprobionte pe materia organic vegetal n
descompunere, iar altele sunt parazite la plante i animale.
In acest grup sunt inclui fungii filamentoi uor cultivabili pe medii artificiale. Unii produc substane utile
pe care se bazeaz industria micologic: antibiotice, acizi organici sau sunt folosii pentru obinerea unor specialiti
de brnzeturi.
Miceliul poate fi de tipul ascomicetelor, cu septuri intercelulare perforate, sau de tipul bazidiomicetelor, la
care se formeaz septuri complexe i conexiuni crlig.
Reproducerea se face prin fragmente miceliene sau prin spori. Unii membri ai grupului nu formeaz spori.
Sporii pot fi oidii, clamidospori sau conidii. Conidiile se formeaz pe hife modificate i specializate, denumite
conidiofori, difereniate din miceliul vegetativ. Conidioforii pot fi neramificai sau ramificai, cu grosime uniform
sau dilatai la vrf. Conidiile se pot forma la vrf (pentru cei neramificai) sau n diferite puncte pe traseul hifei
specializate. Conidiile sunt colorate ca i conidioforii. Ele sunt sferice, eliptice, curbate, rsucite, n form de secer.
De cele mai multe ori, conidiile sunt unicelulare, dar uneori pot avea dou sau mai multe celule.
Myxomycetes (Gymnomyxa)
Grupul cuprinde o varietate larg de organisme, care au fost clasificate ca fungi sau protozoare, caracterizate
prin mai multe proprieti comune, dar care se deosebesc de fungii adevrai. Aparatul lor vegetativ este o mas
amoeboid, asemntoare cu un protozoar, dar corpul de fructificare se aseamn cu al fungilor i aici se formeaz
spori cu perete celular.
Aparatul vegetativ al mixomicetelor este o mas celular nud, denumit plasmodiu, mobil pe suprafaa
unui substrat solid. Plasmodiul este alctuit din celule amoebiene (denumite mixamoebe), lipsite de perete celular.
Structurile reproductoare formeaz corpi de fructificare, asemntori cu ai fungilor.
Fig. 155. Ciclul de via la Dictiostelum discoideum.
Se cunosc circa 500 de specii de mixomicete. Sunt organisme heterotrofe i se hrnesc cu materia vegetal n
descompunere. Corpii de fructificare sunt viu colorai i apar frecvent pe lemnul n descompunere din pdurile
dense, cu grad mare de umiditate.
Unele sunt parazite. De exemplu, Plasmodiophora brassicae produce boli la conopid, ridiche, nap,
caracterizate prin deformarea rdcinilor.
Mixomicetele sunt divizate n dou grupe: celulare i plasmodiale.
Cele cu organizare celular au un aparat vegetativ alctuit din celule individualizate, asemntoare
amoebelor. Aparatul vegetativ al mixomicetelor plasmodiale este format dintr-o mas de protoplasm nedifereniat,
de diferite aspecte i dimensiuni, comparabil cu o amoeb gigant plurinucleat. Se deplaseaz amoeboidal.
Mixomicetele se caracterizeaz printr-un ciclu de via neobinuit, cu alternana unor structuri de aspect
morfologic foarte variat. Cele de tip celular triesc i se multiplic n sol, sub form unor celule amoebiene, care se
hrnesc cu bacterii pe care le fagociteaz. Dup epuizarea sursei de hran, celulele se agreg (dar nu fuzioneaz) n
structuri multicelulare (pseudoplasmodii).
Cel mai cunoscut reprezentant este Dictyostelium discoideum. Agregarea celulelor este produs de acrasin,
o substan identificat ca AMPc, cu efect chimiotactic pentru mixomicete. Pseudoplasmodiul manifest fototactism
i se deplaseaz spre sursa de lumin. Dup ncetarea deplasrii, pseudoplasmodiul formeaz corpul de fructificare
(fig. 155).
Agregatul multicelular (pseudoplasmodiul), prin procese morfogenetice complexe formeaz un corp de
fructificare colorat. Acesta este un sporocarp, format dintr-un disc bazal, un peduncul i o capsul plin cu spori, la
extremitatea pedunculului. Sporii sunt celule reproductoare asexuate. In condiii de umiditate, sporii germineaz i
rezult celule individualizate denumite mixamoebe, care n privina modului de hrnire i locomoie sunt
asemntoare cu amoebele. Se divid prin fisiune simpl. In condiii nefavorabile de mediu, ele se agreg n
pseudoplasmodiu i ciclul se reia.
Importana fungilor
Fungii au un rol deosebit de important n natur, deoarece, fiind descompuntori ai materiei organice, redau
elementele biogene, circuitului natural. Fungii descompun toate categoriile de macromolecule caracteristice lumii
vii: polizaharide, acizi organici, lignine, hidrocarburi aromatice i alifatice, zaharuri, alcooli, aminoacizi, purine,
lipide, proteine, acizi nucleici. O specie fungic oarecare poate s descompun numai anumite componente ale
esuturilor vegetale i animale. Descompunerea substratului necesit aciunea cooperant a mai multor specii de
microorganisme. Aciunea degradativ a fungilor produce mari pierderi ale fructelor i altor produse vegetale n
depozite.
Unii reprezentani ai fungilor au o importan economic de prim ordin n bioindustria micologic
(producerea antibioticelor, a acizilor organici etc.), iar fungii parazii prezint att interes medical, dar n special
pentru producia agricol.
Ascomicetele au o importan economic deosebit, att prin potenialul lor distructiv, ct i prin efectele
benefice. Levurile sunt utilizate n producerea industrial a buturilor alcoolice de fermentaie i n industria
panificaiei, iar Claviceps purpurea (cornul secarei) este folosit ca surs de medicamente (ergotina).
Morchella (zbrciogul) i Tuber (trufe) sunt ascomicete comestibile. Tuber este o ciuperc sferic subteran,
care crete n jurul anumitor specii de stejar. Savoarea unic a acestor dou specii, le face s fie foarte cutate de
gastronomi, dei valoarea lor nutritiv este sczut.
Claviceps purpurea este parazit i crete, n special, pe plantele de secar, dar i pe alte plante cerealiere.
Din ergotin (un alcaloid toxic), se extrag medicamente utilizate n tratamentul afeciunilor vasculare, precum i
cunoscutul halucinogen LSD (dietil-amida acidului lisergic).
Dintre macromicete, Agaricus bisporus este cultivat n amenajri speciale.
Dintre deuteromicete, cei mai importani sunt membrii g. Penicillium. Unele specii de Penicillium sunt
productoare de penicilin. P. roqueforti i P. camemberti confer savoarea distinct i consistena moale a
brnzeturilor de Roquefort i Camembert, datorit activitilor enzimatice ale fungilor specifici. Miceliul se dezvolt
preponderent la suprafa, dar ptrunde i n substrat i prin aciunea sa enzimatic i diminu consistena i i
confer o savoare unic.
Alcaloizi cu important medicala: ergotamina i ergonovina. Acidul lisergic produs de microorganisme este modificat chimic
pentru prepararea la scara comerciala a ergonovinei.
Fungii patogeni. Circa 50 de specii de fungi sunt patogene pentru om i animale. Majoritatea fungilor
patogeni sunt ageni infecioi oportuniti, care invadeaz esuturile organismelor cu rezisten sczut la infecie.
Infecia fungic a esuturilor umane i animale se produce pe fondul unor condiii locale favorizante. Din
aceast cauz, transmiterea infeciei de la un organism la altul este rar. In general, maladiile fungice nu sunt
contagioase.
Infeciile produse de deuteromicete se numesc micoze i pot fi mprite n dou categorii mari:
- infecii sistemice sau profunde, n care agentul patogen este larg diseminat n organism i crete n diferite
organe i esuturi;
- micoze superficiale, care includ infecii ale pielii, prului, unghiilor. Unii fungi produc numai un tip de infecie,
iar altele pe amndou.
Pentru majoritatea fungilor patogeni nu se cunosc stadii de nmulire sexuat i de aceea poziia lor
sistematic este incert. Unele micoze sistemice sunt produse de levuri. Altele sunt cauzate de fungi dimorfici, care
cresc ca levuri in vivo (la 37o) i ca miceliu la temperatur mai mic, in vitro pe medii artificiale.
Fungii patogeni triesc n sol i ptrund n organism pe cale respiratorie, fiind inhalai odat cu aerul. De la
poarta de intrare, agentul infecios se disemineaz n organism i se instituie o infecie cronic, cu simptome foarte
variate. Infeciile fatale sunt rare.
Infeciile fungice apar frecvent, ca o consecin a eliminrii microbiotei normale, prin terapie oral cu
antibiotice. Civa fungi (Cryptococcus neoformans, Coccidioides imitis, Histoplasma capsulatum, Blastomyces
dermatitides) produc infecii pulmonare foarte asemntoare prin manifestrile clinice, cu tuberculoza.
Micozele superficiale sunt cauzate, n primul rnd, de fungi micelieni (Microsporum, Trichophyton,
Epidermophyton). Ele au afinitate pentru esuturile care conin keratina (piele, pr, unghii) i produc enzima necesar
degradrii acestei proteine. Unele cresc pe suprafaa firului de pr, iar altele la interior. Vrsta este un factor
important care condiioneaz sensibilitatea la infecie: impetigo al pielii capului este frecvent la copii i rar la
aduli, iar infecia interdigital este frecvent la aduli i rar la copii. Acizii grai nesaturai din screia glandelor
sebacee ale adultului, au aciune antifungic, ceea ce explic rezistena mai mare a adultului la infeciile fungice
superficiale. Una dintre substanele antifungice, acidul undecilenic, se adaug n compoziia multor unguente,
folosite n controlul infeciilor fungice ale pielii.
Infecia interdigital ste favorizat de umiditatea local crescut i este produs de fungi din g.
Epidermophyton.
Fungii care produc infecii superficiale se numesc dermatofite. Majoritatea infeciilor cu fungii dermatofitici
se pot trata eficient cu griseofulvina, un antibiotic antifungic produs de Penicillium griseofulvum. Griseofulvina se
concentreaz n celulele epidermice, la valori inhibitoare pentru creterea dermatofitului.
Micozele intermediare sunt considerate acelea care produc leziuni epidermice, subcutanate, ale mucoaselor,
plmnului. Infecia se poate extinde i n alte esuturi, la diferite profunzimi.
Infecia este realizat de inhalarea sporilor, prin contaminarea rnilor sau prin ingestie. Cele mai tipice
infecii intermediare sunt candidoza i aspergiloza.
Candidoza este produs de variate specii de Candida, n special C. albicans, din grupul fungilor imperfecti.
In procesul infecios se prezint sub form unei levuri, dar formeaz i structuri miceliene. Infecia se localizeaz, n
primul rnd, la nivelul membranelor mucoase, dar i n piele sau plmn. Infeciile mucoasei bucale a nou-nscutului
sunt comune, iar la adult produce infecii bucale, tonsilare, vaginale.
Aspergiloza, cauzat de Aspergillus fumigatus este frecvent la puii de gin, n primele zile dup ecloziune,
la care produce infecii de amploarea unei epidemii. Miceliul se dezvolt abundent n plmn i respiraia devine
imposibil. Produce avortul la vac, oaie etc. Omul prezint rezisten natural la infecia cu A. fumigatus. Cazurile
de mbolnvire sunt rare.
Fungi patogeni pentru plante. Cei mai importani ageni patogeni ai plantelor, att n ceea ce privete
numrul, ct i a pierderilor economice produse, sunt fungii. Dintre fungii inferiori (Plasmopara, Phytophtora,
Peronospora etc.) au un potenial distructiv foarte mare, iar fungii care produc tciunii, mlura, ruginile, aparin
bazidiomicetelor.
Fungii patogeni infecteaz i produc boli la toate tipurile de plante, de la cele ierboase, pn la cei mai mari
copaci. S-au studiat n special agenii patogeni ai plantelor de cultur. Toate prile aparatului vegetativ sunt sensibile
la atacul fungilor. In general, o specie fungic are specificitate evident pentru anumite pari ale plantei. Leziunile
esuturilor gazdei se datoreaz producerii de toxine, blocrii vaselor ce transport apa i nutrienii sau inducerii
malformaiilor.
Fungii produc o larg varietate de metabolii secundari, a cror semnificaie adeseori nu este cunoscut, dar
au importan practic medical, industrial sau agricol. Unele sunt vtmtoare (micotoxine), altele sunt benefice
(antibiotice) pentru om.
Cele mai multe produse secundare sunt sintetizate de organisme cu cretere filamentoas i au morfologie
relativ complex.
Sinteza metaboliilor secundari, la microorganisme este asociat cu procesele de sporulare.
Metaboliii secundari asociai cu sporularea sunt de 3 categorii:
- metabolii care activeaz sporularea (acidul linoleic, la A. nidulans);
- pigmenii structurilor de sporulare (melaninele necesare formrii sau integritii sporilor sexuai i asexuai);
- metabolii toxici secretai la timpul sporulrii (micotoxinele).
Producerea metaboliilor secundari ncepe trziu n timpul de cretere, la intrarea n faza staionar.
Condiiile de mediu necesare sporulrii i secreiei metaboliilor secundari sunt adeseori asemntoare i chiar mai
stringente dect acelea necesare creterii vegetative. S-a crezut c sinteza metaboliilor este obligatorie pentru
sporulare, dar unele tulpini sporuleaz chiar n absena producerii metaboliilor secundari.
Melaninele sunt pigmeni de culoare nchis care se formeaz prin polimerizarea oxidativ a compuilor
fenolici. Se sintetizeaz n timpul sporulrii i sunt depozitai n peretele celular.
Pigmenii sunt protectori fa de UV, dar sunt i factori de virulen.
Micotoxine
Contaminarea produselor alimentare, a cerealelor i chiar a alimentelor preparate, cu fungi din sol este
aproape inevitabil. Depozitarea n condiii improprii, favorabile creterii fungilor, altereaz caracteristicile de gust
i miros ale produsului. Cei mai muli fungi filamentoi care cresc pe alimente sunt inofensivi. Dar creterea unor
fungi pe substraturi alimentare este nsoit de sinteza i eliminarea unor toxine puternice, denumite micotoxine, care
produc mbolnvirea sau chiar moartea omului i animalelor.
Cele mai cunoscute micotoxine sunt aflatoxinele, produse de A. flavus, toxice pentru om i pentru multe
specii de animale.
Din punct de vedere chimic, aflatoxinele sunt inele aromatice complexe. In doze mari sunt letale, iar n doze
mici, induc tumori hepatice.
Alte micotoxine: ochratoxina (produs de A. ochraceus), rubratoxina (P. rubrum), patulina (A. clavatus),
stachibotriotoxina (Stachybotrys atra).
Factorul esenial favorizant al creterii fungilor n produsele alimentare, n cereale i alimente este
umiditatea. Producerea micotoxinelor are cea mai mare frecven n depozitele de cereale, arahide i nuci, la
umiditate mai mare de l5%. In regiunile tropicale, datorit umiditii permanent crescute, dezvoltarea fungilor n
produsele depozitate este greu de controlat. Este posibil ca apariia endemic a neoplaziilor hepatice s se datoreze
creterii fungilor i producerii de aflatoxine n produsele depozitate. Dat fiind importana lor pentru inducerea unor
stri patologice, multe micotoxine au fost caracterizate chimic i s-au elaborat metode pentru depistarea lor n
produsele alimentare.
Intoxicaia cu toxine fungice are o semnificaie deosebit, n contextul comunitilor care sufer de
malnutriie. In timpul tratamentului pentru malnutriie, indivizii afectai sufer leziuni hepatice severe, datorate
micotoxinelor. Intoxicaia se produce din cauz c sursele proteice folosite pentru corectarea malnutriiei (arahide,
cereale) pot fi contaminate cu fungi productori de micotoxine.
Micotoxinele sunt un factor de mediu cu semnificaie major, care influeneaz starea de sntate. Dintre
produsele naturale, micotoxinele sunt cele care pericliteaz cel mai grav starea de sntate. OMS atrage atenia
asupra pericolelor pentru sntate, pe care le implic consumul alimentelor contaminate cu fungi.
Protozoare
Protozoarele au fost descrise n l674 de Antony van Leeuwenhoek. Alturi de alge i de fungi, protozoarele
constituie un grup de protiste eucariote, considerate tradiional ca fcnd parte din lumea microorganismelor.
Protozoarele sunt organisme unicelulare, eucariote, lipsite de perete celular, a cror modalitate tipicde nutriie este
ingestiv, prin fagocitoz.
Limitele celor trei grupe de microorganisme eucariote nu sunt clare. Exist organisme cu proprieti comune
algelor i protozoarelor sau fungilor i protozoarelor. De exemplu, liniile mutante de Chlamydomonas i Volvox,
frclorofilsunt clasificate printre protozoare, iar cele cu clorofilsunt considerate caparin algelor. Euglenofitele
sunt un grup de microorganisme unicelulare, flagelate, care de cele mai multe ori, au clorofili sunt fotosintetizante.
De aceea sunt clasificate printre alge. Dar speciile de euglenofite pot screascpe medii complexe, la ntuneric i de
aceea unii autori aeazntregul grup printre protozoare.
Mixomicetele celulare i plasmodiale sunt considerate ca fungi sau ca protozoare.
Majoritatea protozoarelor sunt organisme care triesc liber i sunt mobile. Unele sunt microscopice (de
civa m), iar altele se vd chiar cu ochiul liber (1 mm). Unele sunt parazite pe gazde foarte diverse: alge,
nevertebrate, vertebrate i chiar la om.
Se cunosc peste 45 000 de specii de protozoare. Toate necesitmedii umede, indiferent de habitat: n apa
dulce i marin, n sol sau parazite la alte organisme.
Protozoarele se dezvoltn mediile care conin substane organice, pe seama crora se dezvoltbacteriile. La rndul
lor, bacteriile constituie o sursfoarte importantde hrana protozoarelor.
Apele bogate n vegetaie aquatic (ape puin adnci, lacuri artificiale, canale, mlatini), sunt favorabile
dezvoltrii protozoarelor. In mediul marin, macroalgele i vegetaia mlatinilor srate, sunt habitate favorabile
protozoarelor. Ele sunt abundente n instalaiile de tratare a apelor menajere, n special n nmolul activ.
Multe protozoare triesc comensale n tractul digestiv al animalelor.
Unele protozoare sunt parte componenta zooplanctonului i se hrnesc cu algele fitoplanctonului: altele tot
acvatice, sunt fixate pe diferite suporturi. Puine protozoare populeazhabitate foarte specializate: intestinul
termitelor, compartimentul ruminal. Ele au raporturi mutual-benefice cu gazdele.
Protozoarele care au capacitatea de descompuntori ai materiei organice, contribuie la fertilizarea solului.
Cele prdtoare au un rol deosebit de important n controlul numeric al diferitelor populaii de microorganisme,
deoarece se hrnesc pe seama acestora.
Formele parazite produc boli la om i animale: de exemplu, boala somnului, dizenteria amoebian, malaria,
toxoplasmoza etc.
Organizare celulari fiziologie
Complexitatea funciilor eseniale ale celulei protozoarelor necesit specializarea diferitelor componente.
Celula protozoarelor este una dintre cele mai complexe din lumea vie: ea posed organite implicate n obinerea i
digestia substanelor nutritive, n excreie i osmoreglare, n reproducere, protecie, recepionarea stimulilor,
locomoie etc.
Deplasarea. Locomoia protozoarelor se realizeazprin trei tipuri de organite: pseudopode, flageli i cili.
Pseodopodele sunt prelungiri celulare temporare, prezente la membrii grupului Sarcodina. Ele pot fi
lobopodii (rotunjite), alctuite din ectoplasm i endoplasm, filopodii (prelungiri lungi i ascuite), alctuite numai
din ectoplasmsau rizopodii (prelungiri citoplasmatice ramificate).
Pentru deplasare, ectoplasma (pelicula superficial a citoplasmei) mai vscoas, se fluidizeaz. Din cauza
presiunii interne, n acest punct, citoplasma formeaz un pseudopod (fig. 156). Pe msur ce endoplasma fluid
nainteaz, ea se schimb n ectoplasm mai vscoas i ancoreaz pseudopodul de suport. Intreaga celul este
deplasat n direcia punctului de fixare a pseudopodului. Pseudopodele au rol esenial n procesul fagocitrii
materialului nutritiv particulat.
Flagelii protozoarelor sunt organite de locomoie, lungi i delicate. Structura i organizarea flagelilor este
aproximativ aceiai la toate categoriile de celule eucariote: doi microtubuli centrali, nconjurai de 9 dublete tubulare
periferice. Aranjamentul celor 9 x 2 + 2 tubuli centrali, este caracteristic pentru majoritatea cililor i flagelilor
celulelor eucariote, de la Euglena pn la om.
Protozoarele nu au perete celular. Inveliul extern sau teaca unui flagel este o continuare a membranei
celulare. La baza fiecrui flagel, se gsete un granul denumit kinetoplast, care conine ADN.
La cele mai multe flagelate, celula este prevzutcu 1-2 flageli. La un grup de flagelate parazite n intestinul
termitelor, celula are zeci de flageli. Existflagelate libere cu 4, 8 sau mai muli flageli.
Fig. 156. Ilustrarea schematica a mecanismului deplasarii amoebiene. Sageile indic direcia deplasrii.
Cilii sunt flageli miniaturali. Structura intern este aceiai ca i a flagelului: doi microtubuli centrali i 9
dublete periferice, acoperii de un nveli, care este o continuare a membranei celulare. Membrana citoplasmaticare
o consistenspeciali se numete pelicul. Fiecare cil are la origine, un granul bazal.
Cilii pot s acopere ntreaga suprafa a celulei sau au o distribuie limitat, n special la polul oral. La unele
specii, cilii fuzioneazn mnunchiuri compacte denumite cirri. Lungimea cililor este variat. Cei de la extremitile
celulei sunt mai lungi.
Pentru micarea perfect coordonat, cilii sunt conectai printr-o reea de fibre situat sub membrana
pelicular.
Nutriia. In general, protozoarele se hrnesc prin ingestia materialului particulat sau macromolecular.
Macromoleculele n mediul apos sunt nglobate prin pinocitoz. Majoritatea protozoarelor inger materialul
particulat prin fagocitoza. Pinocitoza este relativ nespecifici continu, iar fagocitoza este un proces discontinuu i
de asemenea, nespecific.
Protozoarele sunt, n general, organisme aerobe, heterotrofe, rareori anaerobe (de exemplu, cele ce triesc n
intestinul uman, n rumen sau n intestinul termitelor).
La protozoare se ntlnesc dou modaliti majore de nutriie:
- unele sunt autotrofe, adic sintetizeazcompui organici din substane anorganice, pe cale fotosintetic. Sunt
organisme productoare de materie organic: glucide, proteine, lipide. Pot fi cultivate n soluii de sruri
anorganice, n condiii de iluminare;
- majoritatea protozoarelor sunt heterotrofe, adic organisme consumatoare i utilizeaz substanele organice
preformate.
Unele protozoare heterotrofe sunt saprobionte, adicse hrnesc prin absorbia substanelor nutritive. Altele
sunt holozoice, adicingerhranparticulatdin mediu. Ele posed mecanisme pentru captarea i ingestia hranei.
Celula nglobeazhrana particulat, ntr-o vacuolde fagocitoz (fagosom), n care se elibereaz coninutul enzimatic
lizosomal. In timpul digestiei, dimensiunile vacuolei cresc. Produsele de digestie trec n citoplasm, iar materialele
indigeste sunt excretate.
La grupul Ciliophora, hrana este ingeratprintr-o regiune difereniat a celulei, o deschidere denumit
citostom. Hrana particulatdin mediul lichid, este orientatspre citostom, prin micarea ordonata cililor.
Cultivare. Exigenele nutritive ale protozoarelor sunt diferite. Cele libere se cultivpe medii artificiale care
conin infuzie de fn sau n ap de lac, la care se adaug boabe de orez, de gru, lapte degresat. Culturile pure
(axenice) se obin mai greu, deoarece multe protozoare necesit hran particulat.
Mediile de cretere conin hidrolizat de casein, extract de levuri, extract de carne, glucoz, minerale. Unele
specii de Amoeba i Didinium (flagelat), necesitadugarea n mediul de cretere, a altor microorganisme (bacterii,
protozoare) ca surs de hran.
Unele protozoare parazite au fost cultivate n esuturi crescute in vitro, iar altele n medii complexe, cu adaus
de snge integral sau de ser. Culturile sunt deosebit de importante pentru obinerea vaccinului i pentru testarea
efectului agenilor chimioterapeutici.
Cele mai multe protozoare parazite s-au cultivat n organismul animal: obolan, oarece, hamster. Anumite
specii de Plasmodium se cultivin vivo, prin inocularea puilor de gin.
Pentru protozoare nu existcolecii de culturi, aa cum existpentru bacterii i fungi.
Excreia. Produsele de catabolism (CO 2, NH3, uree i alte substane difuzibile) sunt eliminate prin difuzie
liber, la nivelul ntregii membrane citoplasmatice sau prin vacuole contractile.
La ciliate, materialele indigeste sunt eliminate printr-o zonspecializat, denumitcitopige, localizat n
poziie opuscitostomului.
Majoritatea protozoarelor din apele dulci, posedvacuole contractile. Ele acioneazca nite pompe pentru
ndeprtarea excesului de apcare ptrunde n celul, avnd astfel rol n reglarea osmolaritii. Intr-o celul, vacuola
contractilpoate fi unicsau sunt multiple. Vacuola primete ap, fie direct din citoplasm, ori, la Paramecium, este
nconjuratde mai multe canale radiare, cu rolul de a colecta apa din celul.
Ciliatele de ap dulce sau srat, au totdeauna vacuole contractile, deoarece, chiar n mediul salin, nveliul
celular este permeabil pentru api impermeabil pentru sruri. Frecvena pulsaiilor vacuolei, denumite sistole,
depinde de cantitatea de apcare intrn celul. Speciile dulcicole, duptransferul n apsalin, i diminurata
pulsaiilor. Speciile mari au o frecvenmai mica pulsaiilor.
Sistemul vacuolei contractile este o membranseparatoare ntre coninutul diluat (soluie hipotonic) i
mediul celular cu presiune osmotic superioar.
Vacuola se deschide la nivelul unei zone specializate un por - la suprafaa celulei. La amoeb, porul este o
structurtemporar, ce se formeazla nceputul fiecrei pulsaii, iar la parameci porul este o deschidere permanent.
Structuri speciale. Unele protozoare sunt sesile, fixate pe substrat, prin intermediul unei structuri
specializate denumitcrampon. Unele protozoare sesile au existencolonial. Celulele fiice rezultate din diviziunea
celulei mam, rmn asociate formnd colonii bi- sau tridimensionale, cu aspect i dimensiuni caracteristice.
Majoritatea protozoarelor sunt organisme nude. Unii reprezentani ai grupului Sarcodina formeazcochilii.
Acestea sunt structuri externe rigide, secretate de celulsau formate din materiale preluate din mediul extern
(granule fine de nisip, frustule de diatomee) i ncorporate ntr-un material mucilaginos secretat de celul.
Sarcodinele din grupul Foraminifera produc, printr-un proces de secreie, cochilii de carbonat de calciu, iar
Radiolaria au cochilii de siliciu sau sulfat de stroniu. Cochilia nu este totdeauna limita externa celulei
protozoarului, pentru cla multe foraminifere, protoplasma se extinde peste cochilie i chiar o acopercomplet.
Dup epuizarea sursei de hran, iar experimental i sub aciunea altor factori (de exemplu, diferite noxe),
multe protozoare formeazstructuri de rezistendenumite chiti.
Reproducerea
Protozoarele se reproduc pe cale sexuat i asexuat. Unele se reproduc numai pe cale asexuat. La unele
protozoare, cele doumodaliti de reproducere pot salterneze n timpul ciclului de via.
In procesul reproducerii asexuate, celula parental se divide simetric sau asimetric i rezult dou sau mai
multe celule. Fisiunea binar este cel mai comun tip de reproducere asexuati implic diviziunea mitotica
nucleului. In reproducerea prin fisiune binarnu se produce meioza i nici fuziunea de gamei (fig 157).
Fig. 157. Modalitatile de reproducere asexuata la protozoare.
Reproducerea asexuat se face i pe alte ci: nmugurire, fisiune multipl, urmatde citochinez. Prin
nmugurire, la suprafaa celulei parentale, se formeazo noucelul, n care migreazunul dintre nucleii rezultai din
diviziunea mitotic. Mugurele crete progresiv, pnse desprinde de celula parental.
Fisiunea multipl, denumitschizogonie, implicformarea unui organism multinucleat. Nucleul i celelalte
organite eseniale se divid repetat, frcitochinez. Ulterior, se produce diviziunea, prin care, simultan rezultun
mare numr de celule uninucleate. Fisiunea multipleste caracteristicsporozoarelor parazite.
Reproducerea sexuat este comunla protozoare. Unele sunt diploide n cea mai mare parte a existenei lor.
Formarea gameilor este consecutivdiviziunii meiotice. Celulele sexuale (gameii) se unesc, fenomen denumit
singamie i formeazzigotul diploid. Acest tip de reproducere se gsete la sporozoare (Plasmodium).
La ciliate are loc un schimb reciproc de macronuclei haploizi, ntr-un proces de sexualitate denumit
conjugare, care implicstabilirea unei puni citoplasmatice ntre cele doucelule conjugante. Micronucleul transferat
de la donor, mpreuncu micronucleul propriu, prin fuziune, formeazun nucleu zigot (fertilizat).
Autogamia este o variantsimplificata conjugrii, deoarece procesele nucleare se petrec n interiorul unei
celule. Micronucleul se divide meiotic. Se formeazdoi micronuclei, care se reunesc pentru a forma un nucleu zigot.
Ulterior, celula se divide prin fisiune simpli rezultdoucelule, fiecare avnd setul complet al structurilor nucleare.
O proprietate importanta protozoarelor este capacitatea lor de a regenera o parte pierdutprin excizie sau
lezare. De remarcat este faptul cregenereaznumai poriunea care conine nucleul. Unele ciliate pot regenera
ntreaga celul, din circa l0% din volumul celulei originale, dacnucleul rmne intact. Citostomul parameciului nu
se regenereazdupamputare.
Clasificare
Principalele grupe de protozoare se disting uor pe baza criteriilor morfologice, a modului de obinere a
nutrienilor, a organitelor de locomoie, a organizrii celulare, la care se adauganaliza biochimica acizilor nucleici
i a proteinelor, pentru a stabili gradul de asemnare sau de deosebire a unor specii foarte nrudite. Pe baza acestor
criterii se disting urmtoarele grupe:
- grupul Sarcodina, la care locomoia i captarea hranei se fac prin intermediul pseudopodelor;
- grupul Mastigophora sau Flagellata posedcel puin un flagel, ntr-un anumit stadiu al ciclului de via, cu rol
n locomoie;
- grupul Sporozoa cuprinde protozoare parazite, care se hrnesc prin absorbia hranei din organismul gazd. Nu
au organite de locomoie.
Grupul Ciliophora este caracterizat prin prezena cililor, cu rol att pentru deplasare, ct i pentru capturarea
hranei.
Mastigophora (Flagelate)
Flagelatele se caracterizeazprin prezena unuia sau mai multor flageli, ntr-un stadiu al ciclului de via.
Flagelii au rol n locomoie, pentru obinerea hranei i sunt receptori pentru excitani. Flagelatele sunt cele mai
apropiate, filogenetic, de alge. Unele alge (Chlamydomonas, Volvox) sunt adeseori clasificate ca flagelate.
Unii autori clasific flagelatele n dougrupe:
- fitoflagelate (asemntoare cu plantele) conin clorofili sunt fotosintetizante. Depoziteazamidon i au perete
celular celulozic. Reproducerea sexuateste comun;
- zooflagelate (asemntoare organismelor animale) nu au pigment fotosintetizant i sunt heterotrofe.
Depoziteazglicogen sau uleiuri. Nu au stadiul de reproducere sexuat.
Cele dou subgrupe se aseamnprin prezena flagelului ca organit de locomoie, dar deosebirile sunt majore
i plasarea lor n aceiai unitate taxonomiceste artificial.
Speciile g. Euglena au un statut aparte, datoritcapacitii lor de a se hrni fotosintetizant sau heterotrof. Sub
aciunea unor ageni chimici sau a radiaiilor se poate induce pierderea cloroplastelor. Mutantele acloroplastice se
hrnesc heterotrof.
Majoritatea flagelatelor sunt libere n apa dulce i srat. Altele triesc n sol sau n tractul intestinal al unor
animale. Unele flagelate sunt parazite pentru om i animale, fiind foarte importante din punct de vedere medical.
Cele mai importante mastigofore patogene sunt tripanosomele, agenii bolii somnului (T. brucei, T. gambiense).
Lungimea lor este de 20 m, subiri, cu formde semilun, uniflagelate, cu originea ntr-un corp bazal. Flagelul se
orienteazspre polul posterior, pe marginea celulei, fiind inclus ntr-o cuta membranei. Se formeazun pliu
membranar ondulator, ale crui micri sunt coordonate de flagel. Membrana ondulantmrete eficiena deplasrii
parazitului n snge, a crui vscozitate este mai mare.
T. brucei i T. gambiense sunt transmise prin neptura mutei ee (Glossina). Netratat, victima devine
somnolent. Agentul patogen invadeaz sistemul nervos central i produce inflamaia esutului nervos, determinanta
manifestrilor neurologice ale bolii. Parazitul se multiplicprin fisiune binarn tractul intestinal al artropodului.
Parazitul invadeaz glandele salivare, de unde este transferat la o nou gazd uman (fig. 158).
Fig. 158. Diagrama ciclului de viata la Trypanosoma. Dezvoltarea n organismul mutei ee este necesar pentru a produce
forma infecioas pentru organismul uman.
Leishmania sp. produce infecia cutanatla om, denumitleishmanioza.

Giardia lamblia este unul dintre cele mai rspndite protozoare intestinale. Infecteazomul i animalele.
Parazitul se ataeazde celulele mucoasei intestinale. In numr mare, celulele parazitului, interfercu absorbia
substanelor nutritive. Produce tulburri digestive diareice, dar i manifestri nespecifice. Infecia este
diagnosticatprin identificarea chitilor n materialele fecale. Sursa de infestare este apa sau alimentele vegetale
contaminate de om sau de animalele bolnave. In comunitile de copii, parazitul se transmite direct.
Trichomonas vaginalis este un flagelat mai rspndit dect G. lamblia i produce o infecie usoara
vaginului.
Flagelatele din intestinul termitelor, constituie asociaii reciproc benefice. Termitele ingerlemnul, dar nu pot
degrada celuloza. Flagelatele digerceluloza i furnizeazglucide simple, att pentru ele nsele ct i pentru gazd.
Sarcodina
Protozoarele cuprinse n grupul Sarcodina sunt mai simple ca structurdect flagelatele i ciliatele, deoarece
au mai puine diferenieri celulare. Locomoia i capturarea hranei se realizeazprin intermediul pseudopodelor. La
amoebe apare i micarea flagelar, pentru cunele specii formeazi celule flagelate n anumite condiii de mediu
nefavorabil, astfel corganismele se pot dispersa mai rapid.
Reprezentanii grupului Sarcodina triesc n ap. Foarte interesante sunt subgrupele Foraminifera i
Radiolaria. Ambele formeazcochilii. Cochiliile foraminiferelor sunt formate din calcar secretat de celul, iar la
radiolari, cochilia se formeazdin materiale exogene. Celula nu este ferm ataatde cochilie i de aceea i poate
extinde pseudopodele prin unica sau numeroasele deschideri ale cochiliei.
La formele cochiliere, diviziunea celulareste o reminiscena nmuguririi levurilor: se produce mitoza i
unul dintre nuclei se deplaseazntr-o poriune a citoplasmei, care se extruzeazprin apertura cochiliei. In jurul
citoplasmei extruzate se secreto noucochilie i celula progense separde celula parental. Celula progenare o
cochilie nou, iar celula parentalo pstreazpe cea veche.
Foaminiferele triesc n regiunile de coast, iar radiolarii, n larg. La multe foraminifere apare un ciclu
sexual i n unele cazuri are loc o alternande generaii: celulele haploide i diploide se divid i formeazlinii
celulare care se reproduc independent. Unele celule diploide se divid meiotic i rezult celule haploide care cresc
vegetativ, nainte de a forma gamei. Acetia se mperecheaz i refac organismul diploid.
Datorit greutii cochiliei, celulele cad pe fundul apei i se hrnesc cu bacterii i detritus. Cochiliile
acumulate pe fundul oceanului formeaz roci sedimentare. Fiind foarte rezistente, se fosilizeaz. In anumite condiii
geologice, depozitele de cochilii ale foraminiferelor se pot transforma n cret. Foraminiferele fosile sunt foarte utile
pentru geologi, n vederea evalurii vrstei rocilor de calcar. Depozitele de foaminifere sunt utile pentru
prospeciunile geologice petroliere. Piramidele de lng Cairo au fost construite din depozite de calcar de
foraminifere.
Amoeba proteus este un protozoar de apdulce, cu lungimea de 300 m. Are un nucleu mare, fapt care a
uurat studiile de enucleare i nlocuire cu nucleul altei amoebe.
O larg varietate de amoebe este parazitla om i la alte vertebrate, cu localizare n cavitatea oral sau n
tractul intestinal.
Entamoeba histolytica este parazit n tractul intestinal uman. In multe cazuri, infecia nu produce simptome
evidente, dar la unii indivizi produce ulceraii ale tractului intestinal, nsoite de diaree. Starea patologic provocat
de infecie se numete dizenterie amoebian. Maladia este rspndit n toat lumea, dar prevaleaz n regiunile
geografice cu condiii sanitare precare.
Parazitul este transmis de la un organism la altul, sub formde chist, prin contaminarea fecal a apei i a
alimentelor. Odatajuni n intestin, din chiti se elibereaz trofozoii. Acetia se hrnesc cu secreia mucoasi cu
bacterii. De aceea se dezvolt numai la organismele convenionale i nu la cele germ free. Trofozoiii, prin cretere,
devin amoebe, care cresc i se divid prin fisiune binar. Amoebele produc enzime proteolitice, care lezeaz mucoasa
intestinal. Astfel, amoebele ptrund n grosimea peretelui intestinal, unde invadeaz vasele sanguine. Pe cale portal
ajung n ficat, dar i n alte organe. Amoebele se multiplic i produc abcese tisulare.
Amoebele produc un efect iritant asupra celulelor mucoasei intestinale. Se intensific peristaltismul i
secreia de fluid intestinal. Diareea, uneori saguinolent, datorat leziunilor mucoasei, este simptomul dizenteriei
amoebiene. In fluidul diareic, pe o lamde microscop nclzit la 35-37 o se observ trofozoiii mobili, cu diametrul
de 20-40 m. La examenul fecal, trofozoiii nu se observ, dar chitii sunt prezeni. La trecerea prin intestinul gros,
prin dou diviziuni succesive, chitii formeaz 4 nuclei i sunt infecioi pentru gazda urmtoare. Chitii se identific
prin examenul direct al fecalelor persoanelor infectate. Dac sunt n numr prea mic, se pot detecta dupconcentrare,
prin diferite metode.
E. histolytica crete anaerob n culturi pure sau aerob n medii lichide care conin bacterii. Amestecul mai
multor specii de bacterii favorizeaz creterea amoebei. E. histolytica produce puine leziuni, dar acestea lipsesc la
animalele germ free.
Antibioticele care inhib dezvoltarea bacteriilor intestinale sunt eficiente fa de infecia amoebian, chiar
dac nu au efect direct asupra amoebelor. Aceasta denot dependena amoebei de populaia bacterian intestinal, pe
seama creia se hrneste i chiar existena unui sinergism al amoebei i bacteriilor pentru producerea dizenteriei
amoebiene.
Sporozoa
Sporozoarele sunt un grup mare de protozoare, toate parazite obligate, unele pentru o singur gazd, altele
pentru dou, n ciclul lor infecios n care se succed tipuri morfologice i fiziologice distincte.
Sporozoarele nu au organite de locomoie, dei unele formeaz pseudopode, iar uneori, gameii au mobilitate
flagelar.
Modul de nutriie este particular: hrana nu este ingerat, ci este absorbitn formsolubil, prin nveliul
extern, ca la bacterii i fungi.
Denumirea de sporozoare presupune formarea sporilor n ciclul de via. Totui, nu formeaz spori
adevrai de tipul celor fungici, ci numai structuri analoge denumite sporozoii, implicai n transmiterea la un nou
tip de gazd.
Gazdele sporozoarelor sunt specii de nevertebrate, dar mai ales vertebrate. Unele prezint o alternan
obligatorie a gazdelor, deoarece unele stadii ale ciclului se desfoar la o gazd, iar alte stadii au loc n organismul
altei specii de gazd.
Cei mai importani membri ai grupului sunt coccidiile, parazite la psri i plasmodiile (agenii malariei),
infecioase pentru psri i mamifere, inclusiv pentru om.
Plasmodium. Omul este infectat de 4 specii de Plasmodium care produc malaria: P. vivax, P. falciparum, P.
malariae, P. ovale. Toate necesit o alternan de gazde, om-nar. Speciile de Plasmodium difer morfologic, prin
unele aspecte ale ciclului de via i prin severitatea malariei.
Cel mai rspndit este P. vivax. Parazitul i desfoar o parte a ciclului de via la om i alta la nar,
vectorul care-l transmite de la om la om (fig. 159). Sunt implicai numai narii din g. Anopheles. Malaria este o
boal infecioas, foarte frecvent n zonele tropical i subtropical. Cea mai caracteristic trstur a malariei este
reacia febril paroxistic, la intervale de 1-3 zile, care alterneaz cu stri fiziologice normale.
Fig. 159. Ciclul de via al parazitului malariei (Plasmodium sp.) n organismul narului i al mamiferului
(dup Phillips, 2000).
Omul este infectat prin neptura femelei de nar, care i inser trompa direct ntr-un capilar sanguin,
unde inoculeaz sporozoiii. Sporozoiii plasmodiali sunt celule alungite care se formeaz n organismul narului i
care se localizeaz n glanda salivar a insectei.
Dup inocularea n gazda uman, prin neptur, parazitul malariei este transportat n ficat unde prsete
circulaia i infecteaz celulele hepatice. Sporozoiii sunt transportai cu torentul sanguin n tot organismul, dar sunt
reinui de celulele sistemului fagocitar mononuclear din ficat, splin i din ganglionii limfatici. In ficat, sporozoitul
crete i se transform n schizont. Schizontul se fragmenteaz n mii de celule fiice mici, denumite merozoii, care
sunt eliberai din ficat n snge.
Unele specii de Plasmodium reiau ciclul de multiplicare hepatic, unde produc o infecie persistent, de
lung durat, rezistent la tratamentul infeciei sanguine i care se reactiveaz dup ntreruperea tratamentului.
Merozoiii infecteaz hematiile, iniiind stadiul de schizont eritrocitar. La P. vivax, ciclul multiplicrii n
hematie i liza ei dureaz 48 de ore. Stadiul multiplicrii eritrocitare este insoit de simptomele alternante de febr i
frig. Senzaia de frig apare cnd din eritrocite se elibereaz o nou generaie de parazii.
Cele mai multe plasmodii tinere, eliberate din eritrocitul lizat, reiau ciclul infecios n noi eritrocite. O parte
din plasmodiile eliberate din eritrocite nu pot s infecteze alte eritrocite. Ele sunt celule specializate denumite
gametocite i sunt infecioase numai pentru nar. Gametocitele sunt celule sexuate care se deosebesc de celulele
vegetative, att ca aspect ct i ca sensibilitate la medicamentele antimalarice. Nu se dezvoltn organismul uman i
nu au importanpentru producerea simptomelor malariei.
Gametocitele sunt ingerate de Anopheles odat cu sngele, prin neptur. Infecia narului ncepe
odatcu ingestia celulelor sexuate ale parazitului. Gametocitele se matureazi rezult gamei masculi i femeli. Doi
gamei cu polaritate sexual opus fuzioneaz i formeaz un zigot, care se deplaseaz prin micare amoeboidal n
peretele intestinului mijlociu al narului. Aici zigotul devine chist de reproducere, cu cretere progresiva prin
diviziuni celulare. Una dintre diviziuni este meiotic i se formeaz un numr mare de celule asexuate, denumite
sporozoii. Acetia sunt eliberai, ajung n glanda salivar a narului, de unde sunt inoculai la o nou gazd uman.
Infecia plasmodial a narului nu interfer cu funciile fiziologice ale insectei, ceea ce denot c raporturile lor
sunt vechi i n evoluie s-a produs o selecie a variantelor de Plasmodium, capabile s convieuiasc cu insecta. La
om ns, malaria este o boal grav, uneori mortal.
Plasmodium nu a fost cultivat pe medii artificiale. Studiile s-au fcut pe stadiul infecios eritrocitar.
Hematiile infectate pot fi separate din snge i pot fi incubate in vitro, n condiii care permit multiplicarea
parazitului. Parazitul are propriul sistem enzimatic generator de energie. Nu sintetizeaz CoA, pe care o preia din
eritrocit. Sintetizeaz acidul folic, dac este disponibil precursorul acestuia, acidul para-amino-benzoic. Pentru
sinteza proteinelor proprii, parazitul folosete aminoacizii derivai din hemoglobin, cea mai abundent protein
eritrocitar (circa 90%). Hemoglobina este endocitat prin pinocitoz i este hidrolizat la amnoacizi. Hematia
mamiferelor nu conine ADN, ci numai mici cantiti de ARN, ceea ce denot c, probabil, parazitul sintetizeaz
bazele purinice i pirimidinice, pornind de la aminoacizi. Probabil cpermeabilitatea foarte mare a membranei
celulare, permite preluarea unor molecule mari din eritrocit. Permeabilitatea crescut, determin pierderea rapid a
macromoleculelor n mediul extracelular, ceea ce explic parazitismul su obligat i imposibilitatea de a crete pe
medii artificiale.
Probabil exist diferene fiziologice ntre stadiul infecios pentru eritrocite i cel infecios pentru ficat.
Schizontul eritrocitar pare adaptat s utilizeze numai hemoglobina ca surs de aminoacizi.
In zonele calde ale globului, unde narii sunt numeroi, malaria este o infecie endemic. In aceste regiuni,
indivizii umani dobndesc rezistenla infecia cu Plasmodium. In Africa de Vest, rezistena la malaria cauzat de P.
falciparum este asociat cu prezena n hematii, a hemoglobinei S, care difer de hemoglobina A, printr-un singur
aminoacid n cele dou jumtti simetrice ale moleculei. In hemoglobina S, aminoacidul neutru valina este nlocuit
cu un aminoacid acid, acidul glutamic. Hemoglobina S are afinitate sczut pentru O 2, ceea ce creeaz condiii
nefavorabile pentru Plasmodium, care are un metabolism strict aerob i nu se dezvolt la fel de bine n hematiile S,
ca n hematiile cu hemoglobinnormalA. Corelat cu afinitatea mai mic a hemoglobinei S fa de O 2 este faptul ca
indivizii suport greu altitudinile mari, la care presiunea O 2 este mai mic, dar n regiunile joase, dezavantajul creat
de hemoglobina S nu este evident.
In unele regiuni mediteraneene, unde malaria este endemic, rezistena la P. falciparum este asociat cu
deficiena n hematii, a enzimei glucozo-6-fosfat-dehidrogenaza.
Pe baza corelaiilor dintre tipul de hemoglobin i gradul de sensibilitate la infecia cu Plasmodium, se
consider c parazitul malariei a fost unul dintre factorii importani n evoluia sub raport biochimic a speciei umane.
Un alt sporozoar cu un ciclu complex de viaeste Toxoplasma gondii, agentul toxoplasmozei la psri i
mamifere, la care a produs epidemii cu pierderi economice importante.
T. gondii infecteaz celulele mucoasei intestinale ale pisicii. Procentul pisicilor infectate pare s fie foarte
mare (circa 50%). Alte animale sau omul se infecteaz prin ingestia hranei sau apei, contaminat cu fecalele
animalelor infectate. Parazitul strbate peretele intestinal i pe cale sanguinajunge n esuturile gazdei (vac, oaie
etc.) unde se dezvolt ntr-o form chistic, n care prin diviziune, rezult multe celule progene infecioase. Ele
rmn viabile pentru o perioad nedefinit i sunt transmise la om, prin ingestia crnii insuficient pregtit. Studiile
epidemiologice au artat c persoanele care triesc n contact cu pisica au o inciden mai mare a toxoplasmozei.
Ciliophora
Ciliatele sunt protozoare care se caracterizeaz prin prezena cililor pe suprafaa ntregii celule sau numai n
zone specializate ale ei. Din punct de vedere structural i funcional, celulele ciliatelor sunt printre cele mai
complexe i specializate din lumea vie, deoarece posed organite ce realizeaz funcii vitale particulare, de ingestie
a hranei, de eliminare a resturilor indigeste, de meninere a echilibrului osmotic, de micare, de recepie a stimulilor
etc.
Cele circa 6 000 de specii sunt mprite n dou grupe:
- cele care au cili numai pe o zon a suprafeei celulare (Stentor);
- cele care au cili distribuii pe toat suprafaa celulei (Paramecium).
Ciliatele sunt foarte rspndite n apele dulci, iar parameciul este abundent n apele stttoare.
Ciliatele sunt unice printre protozoare, deoarece au doi nuclei: micronucleul, cu rol de a transmite
caracterele ereditare i pentru realizarea fenomenului de sexualitate; macronucleul, care nu are rol n transmiterea
caracterelor ereditare, dar codific sinteza ARNm i coordoneaz toate funciile celulei.
Macronucleul este poliploid, avnd multe copii ale informaiei genetice a celulei. Conine de circa 500 de ori
mai mult ADN dect micronucleul. La unele cilitate, macronucleii sunt multipli.
Majoritatea ciliatelor se hrnesc, ingernd materiale particulate printr-o regiune difereniat, denumit
citostom. In jurul regiunii orale se gsesc cili, care prin micarea lor coordonat, creeaz un curent al apei ce
deplaseaz particulele alimentare spre orificiul oral. Citostomul se nchide i se deschide, ca rspuns la absena sau
prezena particulelor alimentare. Particula alimentar este transportat prin citofaringe, n citoplasm, unde este
nchis ntr-un sistem membranar i se formeazo vacuol digestiv, n interiorul creia se elibereaz enzimele
hidrolitice.
Fig. 160. a. Organizarea celular la Paramecium. b. Numeroi cili emerg prin membrana intern i extern a peliculei. n repaus,
trichocistii sunt localizati sub pelicul.
Vacuola digestiv este delimitat de o membran extern foarte fin i este transportat intracelular, prin
cureni citoplasmatici. Vacuola digestiv se oprete totdeauna un interval de timp, n apropierea nucleului. Coninutul
vacuolei are, iniial, o reacie acid. Odat cu progresia digestiei, coninutul devine alcalin, prin hidroliza
componentelor proteice. Coninutul vacuolei se pierde n regiunea porului anal, unde are loc excreia produselor de
uzur. Produsele de catabolism (ap, CO 2, uree etc.) sunt eliminate la suprafaa celulei, printr-o structur
specializat, denumit vacuol contractil, o structur permanent sau temporar.
Un alt organit specializat al ciliatelor este trichocistul, o structur filamentoas, subire, ancorat sub
nveliul celular i se formeaz dintr-o grupare de cili. El poate fi proiectat sau retractat i servete ca mijloc de
ancorare, arm de aprare sau instrument de captare a przii. La Didinium, un ciliat prdtor, trichocistul paralizeaz
prada, nainte de a o ingera.
Ciliatele se deosebesc net de alte protozoare, prin prezena celor dou tipuri de nuclei: micronucleul diploid
i macronucleul poliploid. Micronucleul nu are rol direct n creterea i diviziunea celulei. Celula fr micronucleu
continu s creasc i s se divid. Dup ndeprtarea macronucleului, celula moare repede. Dup excizia unei pri
a macronucleului, fragmentul rmas, regenereaz macronucleul ntreg.
La ciliate se produc dou feluri de fenomene nucleare: autogamia i amfimixia.
In procesul de autogamie are loc reorganizarea nuclear, n absena proceselor sexuale. Semnificaia
fiziologic a procesului este prevenirea senescenei i const n regenerarea aparatului nuclear, fr conjugare.
Macronucleul degenereaz, iar micronucleul se divide repetat i se organizeaz un alt macronucleu. Ca rezultat al
autogamiei, celula devine homozigot, deoarece toate genele ambilor tipuri de nuclei provin din micronucleul
haploid. Datorit repetrii autogamiei pentru mai multe generaii, se produce senescena (mbtrnirea) populaiei
celulare, prin pierderea funciei macronucleului. Rata diviziunii scade treptat i chiar nceteaz.
Al II-lea fenomen nuclear, care are loc la ciliate este amfimixia i implic conjugarea ntre dou celule ce
aparin unor tipuri sexuale diferite. Fecundarea nu se produce ntre indivizii descendeni din aceiai celul
parental.
Procesul conjugrii este precedat de recunoaterea celor doi parteneri i implic aderena reciproc n zona
citostomului i realizarea unei puni de legtur ntre cele doucelule. Macronucleul degenereaz treptat, iar
micronucleul sufer modificri ample, de-a lungul unei serii de diviziuni succesive. Prima diviziune este mitotic.
Cea de a II-a este meiotic i produce 4 micronuclei haploizi. Din cei 4, trei degenereaz. Cel care rmne, se divide
i rezult doi micronuclei de fecundaie sau pronuclei. Aceste evenimente se produc simultan n cele dou celule
conjugante. Are loc un schimb reciproc de pronuclei haploizi. Micronucleul exogen fuzioneaz cu cel autohton i
rezult un nucleu diploid, a crei informaie genetic provine, n egal msur, din cele dou celule conjugante.
Dup schimbul de nuclei, celulele se separ. Nucleul diploid se divide i rezult doi micronuclei. Unul rmne
micronucleu diploid, iar cellalt se mreste progresiv prin endomitoze succesive, i mrete numrul de cromosomi
i atinge un grad nalt de poliploidie. Rezultatul net al conjugrii este formarea exconjuganilor, care sunt hibrizi
pentru genele doi conjugani.
Conjugarea nu este o modalitate de multiplicare, ci este o cale de renoire parial a garniturii de cromosomi.
Multe linii de Paramecium (dar i alte protozoare) conin alge sau bacterii endosimbiotice, localizate n
citoplasm sau n macronucleu. De exemplu, la P. bursaria, n citoplasm, se gsete alga Chlorella. In acest raport
simbiotic, alga este protejat, iar protozoarul beneficiaz de produsele fotosintezei algale. Simbionii algali ai
protozoarelor de ap dulce se numesc zooclorele i au culoare verde, iar ai protozoarelor marine au culoare galben
sau cafenie i se numesc zooxantele.
Paramecii au o varietate de endosimbioni de natur bacterian. P. aurelia conine celule bacteriene
cunoscute sub denumirea de particule kappa. Endosimbiontul secreto substan toxic, ce produce efect litic asupra
paramecilor sensibili, lipsii de particulele endosimbionte bacteriene i de aceea au fost denumii parameci killer.
Alt exemplu de endosimbiont bacterian, este particula lambda, care a fost cultivati este un bacil Gram
negativ.
Rolul bacteriilor, algelor i fungilor endosimbiotici este incert, dar exist dovezi c endosimbionii au rol
nutritiv pentru ca sintetizeaz vitamine i ali factori de cretere pe care protozoarele nu-i pot sintetiza i necesit
aportul lor exogen.
Unul dintre cele mai mari ciliate este Stentor, cu lungimea de 1 mm, vizibil cu ochiul liber. Este sesil, fixat
pe substrat prin intermediul unui peduncul. Deschiderea citofaringelui este tapetat cu un ir de cili, care prin
micare ordonat, orienteaz hrana din curentul de ap, spre citofaringe.
Diviziunea celulei este un proces complex. In timpul diviziunii, una din celulele fiice pstreaz citofaringele
matern i formeazun nou crampon, iar cealalt formeaz un citofaringe nou i pstreaz cramponul vechi.
Opalina ranarum este un ciliat parazit n intestinul unor broate. Diviziunea nucleului nu este sincron cu
diviziunea celulei, ci permanent, pe toat durata creterii celulei. Opalinele se deosebesc de ciliatele propriu-zise,
prin aceea cau doi nuclei egali. Lipsete micronucleul.
In compartimentul ruminal al rumegtoarelor, se gsete o asociaie diversificat i caracteristic de ciliate,
care au rol benefic n procesul digestiei masei vegetale i n aprovizionarea organismului animal cu proteine.
Un alt grup de ciliate, cu morfologie distinct este Suctoria. Celulele libere formeaz o parte a planctonului.
Pe msur ce se matureaz, pierd cilii i se fixeazde suport printr-un peduncul sau un disc. Membrii grupului se
gsesc n apa dulce i srat, fixai pe plante i animale. Ii obin hrana din esutul suport, prin aspiraie, cu ajutorul
unor tentacule protoplasmatice fine, care penetreaz stratul protector al esutului gazdei. Se multiplic prin
nmugurire.
Foarte puine ciliate sunt parazite la om i animale. Balantidium coli este parazit la animalele domestice, dar
infecteaz tractul intestinal uman. Simptomele produse sunt similare cu cele cauzate de E. histolytica.
CAPITOLUL X
NOTIUNI DE ECOLOGIE A MICROORGANISMELOR
Majoritatea habitatelor naturale sunt populate de asociaii polispecifice de microorganisme. Numrul
speciilor depinde de complexitatea i diversitatea chimic a substanielor nutritive.
TIPURI DE RELATII INTRE MICROORGANISME

Starr i Chatergee (1972) clasific interaciiunile dintre microorganisme pe baza a trei criterii fundamentale:
1) dup localizare i modul de existeni n raport cu altele: comensalism, simbioza, parazitism, pradare;
2) n functie de rezultatul asocierii: neutralism, mutualism, antagonism
3) n funciie de gradul de dependeni a asociaiiei: accidental, facultativ, obligatoriu.
Unele interaciiuni sunt pozitive (benefice): comensalismul, protocooperarea i mutualismul. Altele sunt
negative (competiiia, amensalismul). Unele sunt benefice pentru un partener i duntoare pentru cellalt
(parazitismul, prdarea), iar altele sunt de indifereni (neutralismul).
Interaciunile posibile ntre populaiile a dou specii de microorganisme (adaptat dup Odum, 1971).
Tipul de interaciiune
Specia
A
B
Natura general a interaciunii
Neutralism
Comensalism
Protocooperare
Nici una dintre populaiile asociaiei nu este

influentat.
Populaia (A) comensal beneficiaz, cea asociat
(B) nu este influentata.
Interaciune neobligatorie, bilateral benefic.
Mutualism
Interaciune obligatorie, bilateral benefic.
interfereni
utilizarea
Amensalism
Parazitism
Fiecare dintre cele dou specii o poate inhiba direct

pe cealalt.
Fiecare dintre cele dou specii o poate influena pe
cealalt, prin consumarea unui nutrient limitat
cantitativ.
Una dintre populaii (A) este inhibat, cealalt (B) nu
este influentata.
Populaia A, cu dimensiuni mai mici paraziteaz
populaia B.
Prdare
Competiie
direct
Competiie
nutrienilor
prin
prin
Populaia prdtoare A atac populaia gazd B.
Neutralismul
Asocierea de tip neutral este lipsit de influene reciproce, dar este considerat puin probabil n mediile
naturale. Neutralismul este favorizat de mediile cu condiii restrictive care permit creterea microorganismelor cu o
rat minim sau pentru cele foarte diferite sub raportul exigenelor nutritive, adic nu intr n competiie pentru
aceiai nutrieni.
Interaciiuni negative
Interaciunile negative se manifest n special la densiti mari ale microorganismelor i influeneaz viteza de
cretere a uneia dintre populaii. Interaciunile negative includ :
- competiia pentru un substrat disponibil
- producerea de compui toxici de ctre una dintre populaii cu efect nociv pentru alta
- acumularea de metabolii cu efect inhibitor pentru alte specii (acizi organici, H 2S)
- parazitism sau prdare.
Competiia are importan fundamental pentru toate organismele din natur. Competiia este rezultatul
diversitii microorganismelor, iar dezvoltarea lor depinde de fondul comun de resurse nutritive ale mediului.
Competiia definete efectul negativ al unui organism asupra altuia, ca rezultat al epuizrii unei surse din
mediu ( sursa de C, N, P, factori de cretere).
Au fost descrise dou tipuri de competiie:
1)Competiia interspecific definete interaciunea negativ dintre dou sau mai multe specii care diminu
sau inhib creterea uneia dintre ele. De exemplu, bacteriile din mediile naturale sunt mai bine adaptate dect cele
alohtone.
2) Competitia intraspecific are loc ntre tulpini ale aceleiai specii. De exemplu, creterea mai intens a
bacteriilor patogene virulente n culturi, n competiie cu mutantele avirulente.
n relaia de competiie, influenele adverse se realizeaz indirect. Competiia ntre dou specii de
microorganisme diferite fiziologic, cu rate diferite de multiplicare, dar care necesit aceiai surs de energie, duce la
excluderea unuia dintre competitori. Competiia avantajeaz microorganismul cu o rat mai mare de cretere, care
decurge din eficiena superioar de utilizare a nutrienilor limitani, din capacitatea de a sintetiza i stoca substane
de rezerv, precum i factori de cretere. Prototrofele sunt avantajate fa de auxotrofe.
Factorii abiotici ai mediului influeneaz competiia: pH, temperatura, concentraia O 2, a srurilor, tolerana
la desicaie. De exemplu, la temperaturi sczute sunt avantajate microorganismele psichrofile, care se multiplic cu
rate mai mari, putnd exclude pe cele psichrotrofe. La temperaturi mai ridicate, situaia este invers, fiind avantajate
psichrotrofele.
Amensalismul este un tip de interaciune negativ, ntlnit n comunitile de microorganisme cu mari
densiti populaionale. Amensalismul este caracterizat prin producerea de ctre o specie de microorganisme, a unor
substane solubile organice (acizi grai, etanol, toxine, enzime litice etc.) sau anorganice (H 2O2, NH3, NO-2, H2S, O2
etc.), care influeneaz negativ creterea altor microorganisme asociate din mediu.
Amensalismul are un caracter unidirecional, n sensul c o singur populaie produce metabolii toxici sau
inhibitori.
Producerea de acizi organici sau anorganici modific mediul natural, facndu-l inaccesibil
microorganismelor sensibile. De exemplu, microorganismele autohtone de pe tegumentul uman produc acizi grai,
care nu permit colonizarea acestuia de ctre bacteriile patogene.
Bacteriile sulf-oxidante (Thiobacillus thiooxidans) produc H2SO4, care scade valoarea pH a apelor de drenaj
din mine la 1.0 - 2.0, condiii n care dezvoltarea microorganismelor acidosensibile este inhibat.
Producerea biogen i acumularea H2S n anaerobioz (n sedimentele din ape, n solurile inundate) inhib
microorganismele pentru care H2S este toxic.
Amensalismul este un fenomen benefic pentru microorganismele productoare de substane toxice sau cu rol
inhibitor, deoarece le confer avantaj competitiv. Populaiile sensibile sunt inhibate pn la eliminarea lor din mediu.
Amensalismul i antagonismul au importan ecologic deosebit pentru c determin distribuia i mrimea
populaiilor de microorganisme. Fenomenul are i unele efecte benefice (de exemplu, eliminarea unor
microorganisme pentru om, plante i animale). Tehnicile de conservare a alimentelor prin aciunea unor acizi (acetic,
lactic, propionic) sau a etanolului se bazeaz pe acelai fenomen.
Antibioza este fenomenul determinat de aciunea unor compui chimici produi de anumite
microorganisme, care n concentraii mici au un efect inhibitor sau letal asupra altor organisme.
Antibioza a fost descoperit de Roberts (1874), care a descris sub denumirea de antagonism, efectul
inhibitor exercitat de Penicilium glaucum asupra bacteriilor. Villemin (1889) a propus termenul de antibiotic, iar
Fleming (1928), studiind antibioticul produs de P. notatum a deschis era aplicaiilor practice.
Multe microorganisme (eubacterii, actinomicete, fungi) produc mai multe antibiotice diferite (5-6), n
proporii variabile, n funcie de natura mediului de cultivare i de condiiile de cretere.
Dei antibioticele sunt produse pe scar industrial, sunt puine probe directe care atest producerea antibioticelor
n mediile naturale i de aceea nu se poate afirma categoric rolul lor n ecologia microorganismelor. Datele
referitoare la producerea antibioticelor n vitro nu pot fi extrapolate la condiiile din sol. n condiii de laborator,
inocularea unui numr mare de productori ntr-o prob de sol, a dat rezultate pozitive dac solul a fost n prealabil
tratat termic sau dac s-a adugat fin de soia.
Interaciuni pozitive
Interaciunile pozitive sunt relaii de tip cooperant care mresc rata de cretere a microorganismelor asociate.
Efectul pozitiv se poate produce chiar ntre celulele aceleiai specii. De exemplu, formarea coloniilor asigur o
utilizare mai eficient a substanelor nutritive.
Interaciunile pozitive sunt foarte importante n mediile naturale, pentru degradarea compuilor chimici
foarte rezisteni (lignina, hidrocarburi, diferite substane de sintez) sau pentru producerea metaboliilor disponibili
pentru alte microorganisme.
Creterea colonial este probabil o adaptare bazat pe interaciuni cooperante n populaie. De exemplu,
producerea enzimelor degradative furnizeaz nutrieni pentru toi membrii coloniei, n timp ce creterea diseminat a
celulelor unei populaii duce la inaccesibilitatea nutrienilor prin diluie. Chiar microorganismele mobile rmn
asociate n colonii, dar coloniile mobile ofer avantajul de a se deplasa n zonele mediului cu concentraii mari de
nutrieni.
Comensalismul sau metabioza definete creterea asociat a dou specii de microorganisme, aflate ntr-o
relaie n care una profit de asociere, iar cealalt nici nu profit dar nici nu este influenat negativ.
Se disting dou categorii de microorganisme comensale:
a) ectocomensale - situate pe suprafaa altor microorganisme, plante sau animale, de obicei prin intermediul unor
structuri specializate de legare (fimbrii, structuri de tip crampon la Caulobacter);
b) endocomensale - prezente n tubul digestiv al animalelor.
Protocooperarea este o relaie de mutualism neobligatoriu i nespecific n care cei doi parteneri beneficiaz
reciproc. De exemplu, relaia cooperant dintre cianobacterii i bacteriile heterotrofe asociate tecii gelatinoase a
acestora. Cianobacteriile elibereaz substanele organice, pe care bacteriile heterotrofe le utilizeaz ca substrat
nutritiv. Aa se explic persistena bacteriilor heterotrofe asociate cianobacteriilor i dificultile de a obine culturi
axenice de cianobacterii.
Azotobacter fixeaz N2, utiliznd substante organice simple pe care le furnizeaz alte microorganisme care
hidrolizeaz moleculele complexe.
Sinergismul este o form de protocooperare ntre dou sau mai multe tipuri de microorganisme prezente
ntr-un mediu, ce pot avea activiti foarte diferite, cantitativ sau calitativ fa de activitile nsumate ale acelorai
specii cultivate separat n mediul respectiv.
Asocierea a dou specii realizeaz un efect pe care fiecare n parte nu-l poate realiza, adic sinteza unui
produs sau degradarea unui substrat complex.
Asociaia nu are un caracter obligatoriu, deoarece unul dintre membrii asociaiei poate fi nlocuit cu altul, iar
cele dou organisme se pot dezvolta separat n mediul lor natural.
Relaia sinergic este greu de difereniat de mutualism i comensalism. Mai este descris i sub denumirea
de sintrofism. De exemplu, E. coli i S. faecalis produc putresceina din arginin, numai dac sunt cultivate mpreun
i niciodat izolat. Ps. aureofaciens var. nonliquefaciens si Ps. fluorescens au activitate lecitinazic numai dac sunt
cultivate mpreun.
Mutualismul este o asociaie reciproc benefic, o relaie care prezint diferite grade de la asocieri laxe, pn
la forme obligatorii ntre specii de microorganisme sau intre micro- i macroorganisme. Mutualismul este considerat
ca o extensie a sinergismului. De exemplu, Lactobacillus arabinosus 17-5 necesit fenilalanina pentru cretere, iar
Str. faecalis R necesit acid folic. Nu cresc pe un mediu minimal dup cultivare separat, dar cultivate mpreun
furnizeaz culturi abundente. Fiecare specie sintetizeaz i elibereaz n mediu, factorul de cretere necesar
celeilalte. Interaciunea nu necesit contactul intim ntre celulele celor dou specii, deoarece moleculele sintetizate i
eliberate sunt solubile i difuzibile.
Relaiile mutuale caracterizeaz asociaiile dintre bacterii i alge n mediul marin. Bacteriile produc vitamina
B12 necesar algelor, iar acestea elimin compui glucidici de fotosintez i CO 2.
Sintrofia corespunde situaiei n care unul sau mai multe microorganisme ale asociaiei acioneaz ca surs
de metabolii majori sau minori pe care i folosesc mpreun cu partenerii ntr-o relaie de schimb metabolic (cross
feeding). De exemplu, consoriul de microorganisme strns agregate (S.lactis, S.cremoris, Leuconostoc dextranicus,
B. kefir i levuri) particip la fermentaia laptelui.
Simbioza
Conceptul de simbioz definete viaia mpreun a unor organisme diferite, indiferent dac asocierea lor
are efect benefic sau duntor asupra unuia sau ambilor parteneri.
n sens strict, termenul de simbioz denot o convieuire de lung durat, n cursul creia dou sau mai multe
specii diferite triesc n relaii spaiiale directe, beneficiind reciproc din interaciunile lor.
n sens strict, termenul de simbioz corespunde conceptului de mutualism. Unele simbioze sunt determinate
de interrelaia dintre dou microorganisme sau ntre un microorganism i un un macroorganism.
n funcie de localizarea microorganismelor simbionte se disting:
1) ectosimbioze - microorganismele rmn n afara celulelor i esuturilor gazdei (bacteriile inclavate n teaca
gelatinoas a cianobacteriilor, pe suprafaa frunzelor, n cavitile corpului etc.
2)endosimbioze (endocitobioze), cele n care microorganismul simbiont este localizat n celulele i /sau esuturile
gazdei, n general un organism mai mare.
n funcie de gradul de dependen se disting:
1) simbioze facultative. Cei doi parteneri pot exista n natur, liberi sau asociai. De exemplu, n prezena unor
cantiti adecvate de azot anorganic, bacteriile din g. Rhizobium i plantele leguminoase se pot dezvolta separat. De
asemenea, fungii din licheni pot fi cultivai n vitro.
2) simbioze ecologic obligate - de exemplu, bacteriile i protozoarele din rumen care asigur degradarea celulozei
la compui intermediari accesibili gazdei.
3) simbioze efectiv obligate (ereditare), n care cei doi parteneri nu au existen liber n natur i nu pot crete
independent in vitro. Este cazul unor nevertebrate marine acre au nevoie absolut de alge endosimbiote.
n funcie de natura relaiei se disting:
a) simbioze mutualiste - adaptarea ambelor organisme este superioar cand triesc impreun, comparativ cu existena
lor separat.
b) simbioze parazitare - unul dintre parteneri este mai adaptat n asociaie, dect atunci cnd triete separat.
Dup Dubois (1965), termenii de simbioz mutualist sau parazitar implic n mod necesar o permanen a
relaiei, care frecvent are un caracter dinamic. De exemplu, unele microorganisme parazitare cndva, au evoluat spre
comensalism sau spre simbioze mutualiste sau invers, prin trecerea de la mutualism sau de la comensalism, la
parazitism patogen (microbiota intestinal la organismele imunosupresate sau iradiate).
Simbioza implic un anumit grad de permanen (persistena sa n cea mai mare parte a vieii organismelor
participante) i o anumit specificitate (alegerea partenerului nu este ntmpltoare, ci se bazeaz pe un grad
semnificativ de selectivitate). Aceste dou particulariti deosebesc simbioza de protocooperare.
Specificitatea este o proprietate condiionat de particulariti ale ambilor parteneri i se bazeaz pe
fenomene de recunoatere reciproc. Fiecare partener particip cu o serie de factori mai mult sau mai puin critici
pentru partenerul su. Cu ct numrul factorilor care interacioneaz este mai mare, cu att gradul de specificitate
simbiotic este mai mare. Specificitatea accentuat corespunde capacitii de simbioz cu un spectru limitat de
asociai. Specificitatea extrem poate determina limitarea unui organism la un singur partener gazd sau la civa
parteneri nrudii. Invers, specificitatea redus este expresia unei promiscuiti simbiotice excesive, reflectat prin
capacitatea de asociere cu un numr mare de tulpini, specii i genuri. De exemplu, fungii din micorize pot infecta un
numr mare de specii diferite de plante.
Meninerea asociaiei simbiotice este condiionat de transmiterea eficient de la o generaie la alta. Pentru
endosimbioze, transmiterea se face n mod direct sau prin infecie.
Transmiterea direct corespunde situaiei n care microorganismele triesc permanent n esuturile gazdei,
trecnd de la o generaie la alta.
Transmiterea prin infecie este ntlnit n cazul n care endosimbionii rmn intracelular numai o parte din
ciclul de via al gazdei. ntr-o anumit etap, ei sunt eliberai n mediul extracelular, astfel nct fiecare generaie a
gazdei trebuie reinfectat cu simbionii, care au temporar o existen liber.
Adaptri consecutive simbiozei. Evoluia simbiozei n timp este asociat cu modificri structurale, biochimice i
fiziologice, care furnizeaz caractere adaptative noi, utile pentru capacitatea organismelor asociate de a tolera
condiii de mediu noi, uneori extreme i elimin o mare parte din organismele individuale. Specializrile aprute n
timp, precum i pierderile unor funcii ale partenerilor mresc gradul de specificitate a relaiei i dependena
reciproc a celor doi parteneri.
Evoluia simbiozelor. Dyer (1984,1989) propune urmtoarea succesiune de etape prin care o asociere
simbiotic se integreaz treptat i devine progresiv mai obligatorie:
1)Asocierea a dou organisme heterospecifice care schimb nutrieni cu un anumit avantaj selectiv. Cele dou
organisme se comport mai bine n asociaie, dect independent.
2)Presiunea selectiv asigur dezvoltarea armonioas a celor doi parteneri, prin coordonarea activitii metabolice i
a ritmului de diviziune, astfel nct nici unul nu-l poate coplei pe cellalt.
3)Dispariia structurilor i funciilor redundante. Iniial, sunt pierdute enzimele produse de unul dintre parteneri, iar
ulterior apar modificri structurale (de exemplu, simplificarea structurii parietale a cianobacteriilor endosimbiotice).
Simbioza foarte eficient evolueaz spre coordonare la nivel genetic. Selecia acioneaz prin codificarea
coordonat a produselor genelor eseniale, ducnd la pierderea autonomiei ambilor parteneri. Relaia devine
obligatorie i, n final, cele dou genomuri asociate funcioneaz ca un genom mare perfect coordonat.
Rolul endosimbiozei n geneza celulei eucariote
Ipoteza originii simbiotice a organitelor celulare a fost propus n 1850 de ctre Altman i formulat ulterior
n diferite variante.
Cea mai cunoscut este ipoteza simbiozei seriale (Margulis, 1967, 1981) n acord cu care, mitocondriile,
flagelii de tip eucariot, cloroplastele i microtubulii au fost la origine, bacterii libere, care au fost preluate prin
endocitoz n asociere simbiotic, de o celul ancestral mai mare. Se presupune c ele au evitat digestia de ctre
gazd, obinnd de la aceasta o serie de nutrieni eseniali, iar la rndul lor, furniznd excesul de sinteze.
Cu timpul, autonomia organismelor strine s-a pierdut progresiv, relaia evolund spre o asociere simbiotic,
n care gazda a preluat ntregul control. Esenial n acest proces a fost o modificare a sistemului genetic: o parte din
determinanii genetici au fost translocai din genomul endosimbionilor i ncorporai n genomul nuclear al gazdei.
Astfel, endosimbionii i-au pierdut statutul de organisme, dobndindu-l pe acela de organite. Ei i-au pstrat ns
capacitatea de a se replica (evideniat la mitocondrii), de a-i menine un genom propriu, care poate suferi
modificri prin mutaii. Procesul s-a realizat n etape succesive:
1) Formarea protomitocondriilor s-a realizat n momentul n care o bacterie gazd heterotrof facultativ anaerob a
nglobat o bacterie aerob, posesoare a enzimelor ciclului Krebs.
2) Asocierea cu unele bacterii mobile anaerobe, asemntoare spirochetelor actuale.
3)Endocitoza unor cianobacterii libere fotosintetizante.
Datorit acestor modificri, fenotipul unei plante este definit de trei sisteme genetice perfect integrate: cel
nuclear propriu, genomul mitocondrial i genomul cloroplastelor. Din punct de vedere evolutiv, celula vegetal poate
fi considerat ca rezultat al unei comuniti format din trei specii de bacterii intim asociate, care ii coordoneaz
activitiile, pentru a produce fenotipul caracteristic.
Semnificaia biologic a simbiozelor. Organismele simbionte realizeaz un interschimb de nutrieni (factor
esenial pentru interaciunea partenerilor), protecie i dobndesc avantaje ecologice.
Avantajele nutriionale ale celor doi parteneri s-au demonstrat de cele mai multe ori. Produsele de
fotosintez sunt transferate totdeauna de la fototrofe la heterotrofe. Algele simbiotice elimin o cantitate mai mare de
produi de fotosintez dect echivalentele lor n stare liber. Produsul de fotosintez este eliberat n forma pe care
partenerul heterotrof o poate utiliza n metabolismul propriu.
Simbiozele sunt foarte diversificate, ceea ce sugereaz rolul lor benefic pentru partenerii simbioni. Peste
150 de genuri de nevertebrate (Protozoa, Coelenterata, Porifera, Plathelminthes, Nemethelminthes, Molusca)
adpostesc endosimbioni autotrofi (alge endozoice), ce pot fi grupai n trei categorii:
1) zooclorele simbioni ai algelor verzi cu nevertebratele de ap dulce i cteva marine.
2) zooxantele simbioni ai algelor galben-brune cu nevertebratele marine.
3) cianele - cianobacterii simbionte cu protozoare de apa dulce.
Sonnenborn (1938) a descris un tip de Paramecium, denumit killer, care elibereaz n ap un principiu
toxic, particular, factorul K, fa de care este imun, dar are efect letal fa de tulpinile sensibile. Factorul K este
reprezentat de bacteria Caedibacter taeniospiralis, activ fa de P. aurelia. Endosimbiontul bacterian nu a fost
cultivat n afara protozoarului, dar poate fi transferat de la un protozoar la altul prin mediul extern.
Simbioze insecte microorganisme
Insectele i acarienii sunt adeseori asociai cu diferite microorganisme: bacterii, microfungi, protozoare.
Gradul de asociere este diferit, de la contaminani temporari din mediu, asocieri ectosimbiotice constante localizate
n structuri specializate de tipul invaginrilor deschise n lumenul extremitii posterioare a intestinului mijlociu, sau
ca endosimbiont complet izolat.
Prezena microorganismelor simbiotice este foarte rspndit, mai ales la organismele care se hrnesc cu
alimente incomplete: seva plantelor (srac n compui cu azot), cereale depozitate, lemnul (bogate n lignin,
celuloz, hemiceluloze i srace n compui cu azot), lna, prul, penele (bogate n keratin i srace n vitamine),
sngele i serul sanguin uman i animal (deficitare n vitamina B).
Simbionii sunt abseni la insectele hematofage cu metamorfoz complet, care, fiind omnivore n stadiul
larvar i hrnindu-se cu diferite resturi organice, stocheaz cantiti importante de vitamine i factori de cretere, pe
care le pot utiliza n diferite faze ale reproducerii. Ca urmare, flebotomii, narii, simulidele etc., nu conin
microorganisme simbiotice. Face excepie Culex pipiens fatigatus care poart simbioni intracelulari, probabil de tip
Rickettsia, n intestinul mijlociu. Prin contrast, insectele hematofage cu metamorfoza incomplet(Pediculus, Cymex
sp., musca ee), cpuele i acarienii au toate simbioni n stadiul de nimf, dei intestinul lor este steril (Brooks,
1964).
Endosimbionii sunt localizai n celule specializate sau chiar gigante, cu grad nalt de poliploidie, numite
bactericite (dac conin bacterii) i micetocite (dac conin fungi). Ele pot fi izolate i dispersate sau formeaz
structuri difereniate denumite micetoame, cu funcia de a adposti simbionii.
Localizarea micetocitelor i micetoamelor este foarte variat: n epiteliul intestinal i simbionii pot fi eliminai
continuu n lumen; n esutul mezodermic subiacent, iar uneori n tot corpul. La gndaci i la homoptere,
micetocitele sunt rspndite n peretele intestinului mijlociu sau inclavate n corpul gras (un esut lax discontinuu,
situat de-a lungul cavitii corpului). La Curculionidae (Apion pisi), doi dintre cei 6 tubuli malpighieni au devenit
micetoame sub forma unor distensii globulare.
Ectosimbioze. Capacitatea insectelor xilofage de a se dezvolta pe substratul lemnos (cu mare deficit de
proteine, steroli, vitamine) este condiionat de asocierea lor cu levuri i fungi filamentoi.
ntre microorganismele i insectele xilofage se stabilesc relaii cu caracter reciproc benefic, care fie
favorizeaz utilizarea materialului lemnos, fie furnizeaz insectelor biomasa microbian ca principal nutrient.
Interactiunea cea mai simpl a insectelor cu fungii are loc n galele ce se formeaz dup depunerea oulor n
esuturile vegetale (muguri, frunze sau tulpini). Probabil c insecta depune i spori fungici care germineaz i cresc
parazitar pe esutul galelor, formnd un strat gros micelial, ce tapeteaz interiorul acestora.
Relaia simbiotic este simpl: insecta asigur transmiterea fungilor intr-un mediu protejat n care se
dezvolt, degradnd esutul galei la compui ce pot fi utilizai de insecte. Acestea se hrnesc i cu seva produs de
esutul vegetal lezat.
Fungii simbioni furnizeaz gazdei vitamine, aminoacizi, factori de cretere (biotin, tiamin, acid pantoteic,
mezoinozitol, acid folic, acid nicotinic etc.) sau mbogesc echipamentul enzimatic al gazdei: amilaze, celulaze,
pectinaze, hemicelulaze, lipaze, proteaze, care mresc capacitatea acestora de a degrada unele substane neobinuite.
Simbiozele fixatoare de N2
Simbioza Rhizobium-plante leguminoase. Aproximativ 1 200 de specii de plante leguminoase, din cele 12-14
000 existente sunt capabile s stabileasc simbioze cu bacteriile fixatoare de N 2: o parte dintre membrii familiilor
Mimosaceae i Papilionaceae (Fabaceae) i 30% dintre Caesalpinaceae. Excepia o constituie Trema cannabina
(Ulmaceae). Probabil c simbioza diazotrof a fost o proprietate general a leguminoaselor, pierdut de unele genuri
i specii dup divergenia evolutiv a celor trei familii.
Leguminoasele au semine bogate n proteine (circa 25%), comparativ cu grul (circa 10%) i nevoia
suplimentar de azot a fost, n cursul evoluiei, unul dintre factorii care au stimulat asocierea fixatorilor de N 2 cu
aceste plante.
Simbiontul bacterian. Celulele de Rhizobium sunt prezente n sol n numr variabil, n funcie de condiiile
locale: 102 105/g n solul recent cultivat, lipsit de plante, 10 5 108/g sol n prezena plantelor i 10 6 - 1011 n
rizosfera de trifoi.
n funcie de viteza cu care cresc n culturi axenice au fost descrise dou categorii de bacterii simbiontice: a) cele
care se multiplic rapid, cu durata unei generaii de circa 6 ore (R. leguminosarum, R. trifolii, R.phaseoli,
R.meliloti); b) bacteriile cu ritm lent de multiplicare din g. Bradyrhizobium (B. japonicum), care infecteaz Glycine
max (soia) i Vigna sinensis. Ele produc exopolizaharide, polizaharide capsulare i lipopolizaharide, cu rol n
aderenia celulelor bacteriene la suprafaia radicular i n asigurarea specificitii de gazd.
Specificitatea interaciunii dintre bacterii si plante este consecina unor fenomene de control ce se petrec la
mai multe nivele:
1) dezvoltarea tulpinilor de Rhizobium n rizosfera leguminoaselor, controlat de ambii parteneri ai simbiozei;
2) controlul legrii bacteriilor de perii radiculari
3) deformarea perilor radiculari, efect foarte specific controlat de ambii parteneri;
4) infectarea perilor radiculari i formarea cordonului de infecie, de asemenea, un proces foarte selectiv;
5) evoluia abortiv a infeciilor neadecvate.
Multiplicitatea acestor mecanisme care acioneaz sinergic face posibil ca nici unul dintre ele s nu aib
specificitate absolut.
Specificitatea relativ a interaciunii dintre bacterii i plante st la baza celor 6 grupuri de inoculare
ncruciat:
1) grupul Pisum, infectat de R.leguminosarum, include specii de Vicia, Lathyrus, Lens;
2) grupul Trifolium, include speciile de trifoi, infectate de R.trifolii;
3) grupul Glycine, infectat numai de Bradyrhizobium japonicum;

4) grupul Medicago, cu specii de Melilotus, Trigonella, infectate de R. meliloti;
5) grupul Phaseolus include specii de fasole infectate de R. phaseoli;
6) grupul Lupinus - Vigna - Lotus infectat de R. lupini.
Natura constituienilor implicai n recunoaterea specific este controversat, dar un rol important n
interaciunea specific a celor doi parteneri este atribuit lectinelor.
Lectinele sunt glicoproteine produse de plante si animale, cu afiniti specifice de legare. Datorit capacitii
lor de a aglutina hematiile i datorit originii lor vegetale (iniial au fost izolate de la Ricinus communis) s-au
denumit fitohemaglutinine. Denumirea generic de lectine vine de la latinescul legere (a alege, a selecta) i reflect
proprietatea selectiv de legare cu anumite glucide libere sau conjugate.
Lectinele ar ndeplini urmtoarele funcii:
- funcia de anticorpi ai plantelor, cu rolul de a neutraliza microorganismele patogene din sol;
- rol n transportul i/sau stocarea glucidelor n plante;
- rol n organizarea glicopeptidelor cu activitate enzimatic n sisteme multienzimatice;
- rol n diferenierea celulelor i n recunoaterea intercelular;
- asigurarea specificitii de legare Rhizobium - leguminoase.
Lectinele sunt localizate la nivelul perilor absorbani sub forma unor petice mici, dense, la extremitatea
acestora.
Receptorii de lectine de pe suprafaa bacteriilor sunt de natur glucidic i sunt localizai pe polizaharidele
capsulare i extracapsulare sau pe lipopolizaharide.
Specificitatea interaciunii dintre bacterii i leguminoase a permis definirea taxonomiei g. Rhizobium i pe de
alta parte, pe aceea a grupelor de inoculare ncruciat. Plantele unui grup produc lectine similare.
Interaciunea Rhizobium/leguminoase implic existena unor fenomene de compatibilitate ntre cei doi
parteneri, iar incompatibilitatea limiteaz infecia.
Polizaharidele bacteriene sunt foarte importante pentru iniierea procesului de infeciie. Mutantele
necapsulate nu produc deformarea perilor radiculari.
Primul eveniment vizibil dup contactul bacterie-rdcin este deformarea i rsucirea (curbarea) perilor.
Dei celulele de Rhizobium interacioneaz cu toi perii radiculari, numai circa 25% sunt deformai efectiv, printr-un
proces de stimulare local a creterii. Deformarea este produs numai de tulpina bacterian omolog, ceea ce denot
caracterul de specificitate al acestei faze.
Celulele de Rhizobium sunt atrase (chimiotactism pozitiv) n rizosfer, de flavonoidele capabile s induc
exprimarea genelor nod. n prezena exudatului radicular i a flavonoidului luteolina, Rhizobium sintetizeaz i
excret un factor extracelular, produs al genelor nod. Factorul a fost identificat la R. meliloti ca tetrazaharid al Dglucozaminei, sulfatat -1,4 n care grupele amino sunt acetilate, iar una este acilat cu un acid gras C 16.
Formarea nodozitilor. Nodozitile sunt rezultatul multiplicrii i hipertrofiei anormale, dar limitate, a
celulelor corticale stimulate de infecia cu Rhizobium. Nodozitile asigur condiiile necesare fixrii N 2, furniznd
sistemul vascular prin care apa, srurile, sursa de carbon din plant devin disponibile pentru fixarea N 2 si pentru alte
procese metabolice ale celor doi simbioni.
Inducia formrii nodozitii implic o interaciune complex ntre Rhizobium i planta gazd specific, ce
evolueaz n mai multe etape.
Concomitent sau la scurt timp dup iniierea formrii cordonului infecios, celulele corticale complet
difereniate (care n mod normal nu se divid), ncep s se multiplice, stimulate fiind de substanele produse de
bacterii. Genele pentru nodulare (nod) de la Rhizobium sunt activate de molecule mici din categoria
hidroxiflavonelor, sintetizate de plant.
Rolfe i colab. (1986) au stabilit urmtoarele etape n formarea nodozitilor la trifoi:
1) bacteriile din rizosfer rspund la compuii secretai de plant, care stimuleaz exprimarea genelor de
nodulare, elibernd o serie de substane care induc deformarea perilor radiculari i sinteza receptorilor specifici de
legare a lectinelor de pe suprafaa celulelor vegetale;
2) dup legarea de perii radiculari, celula de Rhizobium strbate peretele celular al acestora n circa 24 ore de
la expunere.
Nucleul celulei infectate migreaz spre situsul parietal de ptrundere. Bacteriile protejate de polizaharidele
extracelulare nainteaz spre cortex, n interiorul cordonului de infecie (fig. 161) n care se multiplic. Cordonul
infecios este o structur tubular, derivat din celula gazd, prin care bacteriile dispuse n ir unic, traverseaz
celulele radiculare pentru a ajunge de la suprafaa prului absorbant, n cortex, la nivelul primordiului nodozitii.
Fig. 161. Imagine electrono-optica a cordonului infectios produs de Rhizobium sp. in parul radicular de Trifollium
pratensae (original).
Structura nodozitii. Infecia cu Rhizobium declaneaz activitatea mitotic a celulelor cortexului radicular,
rezultatul fiind formarea nodozitii caracteristice cu o structur difereniat zonal.
Regiunea periferic este reprezentat de cortexul nodozitii, format din mai multe straturi de celule diploide i
este strbtut de fascicule vasculare rudimentare.
Zona meristematic, situat n regiunea distal a nodozitii este format din celule diploide neinfectate. Prin
diviziune, ele asigur creterea nodozitii, dar i forma ei (meristemele emisferice genereaz nodoziti sferice, cele
apicale nodoziti alungite, iar cele bifurcate nodoziti ramificate).
Regiunea central este alctuit din trei zone distincte, ce se succed de la zona meristematic spre baza
nodozitii, legat de prul absorbant:
- zona de invazie, adiacent meristemului, este format din celule neinfectate care au endocitat bacterii eliberate
din cordonul infecios;
- zona simbiotic ocup poriiunea major i este alctuit din dou subzone: a)zona simbiotic timpurie conine
celule gazd alungite (38-62 m) i bacterii care nc mai prolifereaz; b)zona simbiotic tardiv conine celule
gazd hipertrofiate, poliploide, ncrcate cu bacterii difereniate la stadiul de bacteroizi. Celulele gazd au nucleu
hipertrofiat, un numr mare de mitocondrii, plastide i poliribosomi;
- regiunea de senescen, caracteristic nodozitilor batrne, corespunde celulelor vegetale si bacteroizilor n
curs de degenerare sau moarte.
Eliberarea bacteriilor din cordonul infecios. Dup ce filamentul infecios a strbtut o serie de straturi ale
cortexului radicular, bacteriile sunt eliberate fie n spaiile intercelulare, fie n interiorul celulelor meristematice ale
viitoarei nodoziti. Bacteriile eliberate sunt delimitate de o membrana peribacteroidian.
Dup eliberarea din cordonul infecios, n citoplasma celulei vegetale, celulele de Rhizobium se difereniaz
n forme endosimbiotice - bacteroizi - care fixeaz N 2 (fig. 162). Numrul bacteroizilor/celul vegetal este variabil
(circa 1000 la R. trifolii - deoarece multiplicarea nceteaz relativ timpuriu dup infecie i 3 - 4 x 10 4 n sistemul B.
japonicum/soia).
Fig. 162. Imagine electrono-optica a bacteroizilor din nodozitatea radiculara de t. pratensae (original).
Bacteroizii sunt celule cu un perete celular subire i mai puin rigid, modificare care favorizeaz trecerea
nutrienilor din citosolul vegetal n bacteroid i a NH 4+ n sens invers. Volumul lor depete de cteva zeci de ori pe
acela al celulelor libere, iar forma este sferic, poliedric, piriform sau de Y. Bacteroizii sunt celule specializate
funcional: conin complexul enzimatic al nitrogenazei, leghemoglobina, rezerve mari de poli--hidroxibutirat i
glicogen. Dup eliberarea din nodozitile senescente, in sol bacteroizii revin la forma bacilar i pot relua
multiplicarea. Stadiul de endosimbiont reprezint numai o faz a ciclului de via.
Fiziologia nodozitii. Celulele de Rhizobium, libere, n absena interaciunii cu plantele leguminoase, nu
conin nitrogenaz i nu fixeaz N2.
Procesul fixrii N2 este energo-intensiv, iar plantele reprezint sursa final de energie i de potential
reductor. Compuii cu carbon, provenii din plant furnizeaz nu numai energia necesar, ci i structurile chimice
care leag azotul fixat.
Compusul major furnizat de plant, esutului nodozitii este zaharoza, care este n prealabil hidrolizat de o
invertaz de origine vegetal. Sistemul fixator de azot n perioada de activitate maxim utilizeaz circa 22% din
cantitatea net de fotosintat produs de plant. Bacteroizii conin sistemul enzimatic - nitrogenaza - codificat de
genele nif, singurul capabil s reduc N 2 la la NH +4. Produsul final al fixrii este NH 3, care este excretat de
bacteroizi n citosolul vegetal, unde este convertit la glutamin, asparagin i o serie de ali aminoacizi. Procesul
implic reaciile cuplate ale glutamin-sintetazei i glutamat-sintazei, a cror concentraie n nodoziti este de cteva
ori mai mare dect n rdcin.
Glutamin-sintetaza transfer gruparea amino de la NH 3, fie la aspartat cu formare de asparagina, fie la cetoglutarat (rezultat n ciclul Krebs din glucoza) pentru a forma glutamat. Asparagina, glutamina i glutamatul
reprezint surse importante de azot pentru plante.
Simbiozele asociate. Fixarea azotului n rizosfer
Rizocenozele sunt asocieri cu diferite grade de interaciune ntre unele bacterii libere fixatoare de azot i
diferite specii de plante. Tarrand i colab. (1978) le-au reunit n g. Azospirillum.
Rizosfera unui numr mare de graminee spontane sau a unor plante de cultur reprezint un habitat ideal
pentru dezvoltarea bacteriilor heterotrofe fixatoare de azot. Substanele organice provenite din resturile celulelor
radiculare i exudatele solubile ale rdcinii sunt preluate de bacteriile simbiotice, ca surs de carbon i energie. Cele
mai studiate sunt asocierile bacteriene descrise la porumb, gru, orz, trestia de zahr, precum i la o serie de
graminee furajere tropicale.
Microorganismele implicate n acest tip de simbioze sunt: Azospirillum lipoferum, A. brasilense, A.
amazonense, A. halopraeferans, Azotobacter paspali, Beijerinckia sp., Campylobacter sp.
Asociaiile au un anumit grad de selectivitate, n sensul c rdcinile unor plante ar elimina substane care,
recunoscute de bacterii, ar favoriza aderena lor preferenial de perii radiculari. Aa se explic simbioza asociativ
dintre A. paspali i planta Paspalum notatum.
Interaciunile asociative nu ating niciodat complexitatea simbiozei Rhizobium-plante leguminoase. A.
paspali formeaz un manon n jurul rdcinilor plantei, fiind protejate de o teac mucilaginoas. A. lipoferum se
gsete pe rdcinile de porumb, iar A. brasilense, pe cele de gru i orez. Bacteriile strpung epiderma radicular i
infecteaz celulele corticale ale rdcinii i se localizeaz chiar n celulele corticale superficiale ale rdcinii sau n
esuturile corticale i vasculare fr s formeze structuri difereniate.
Cu excepia orezului, toate plantele tropicale asociate cu bacterii fixatoare de azot fac fotosinteza de tip C 4.
Produsul primar al fotosintezei lor este malatul, sursa optim de carbon pentru bacterii. Bacteriile lipsesc din
rizosfera unui numr limitat de plante C4, care, probabil produc compui antibacterieni. Plantele cu fotosintez de tip
C4 utilizeaz cu maxim eficien CO 2, ca i lumina intens i spre deosebire de plantele cu fotosinteza de tip C 3,
exudeaz cantiti importante de carbon organic prin rdcini, asigurnd un substrat eficient bacteriilor heterotrofe.
Fiziologia plantei este foarte important pentru activitatea nitrogenazic i se consider c numai plantele care
exudeaz cantiti mari de compui metabolizabili au valoare agronomic.
Rolul simbiozelor asociative este deosebit de important n regiunile tropicale, unde menin fertilitatea
solului, n absena ngrmintelor azotate.
Eficiena acestor asociaii este limitat de lipsa unor sisteme specializate de transport care s asigure
aprovizionarea bacteriilor cu substrat energetic, precum i exportul produselor fixrii N 2.
Actinorizele. Simbioza Frankia-angiosperme neleguminoase
Actinorizele sunt asociaii simbiotice fixatoare de azot la cel puin 200 de specii de angiosperme, aparinnd
la 15 genuri i respectiv la 7 familii. Ele includ plante lemnoase, caracteristice zonelor cu deficit de azot combinat.
Simbiontul aparine unui gen nou de actinomicete - Frankia - ce se gsete n rizosfera plantelor i este capabil s le
infecteze.
Relaia implic un grad important de specificitate. S-au descris 10 specii de actimonicete specifice pentru
diferite plante gazd: F. alni (Alnus), F. brunchorsti (Myrica), F. casuarinae (Casuarina), F. ceanothi (Ceanothus), F.
cercocarpi (Cercocarpus), F. coriariae (Coriaria), F. discardiae (Discardia), F. dryadis (Drias), F. elaeagni
(Elaeagnus) si F. purshiae (Purshia).
Studiul interaciunii actinomicetelor cu plantele gazd, efectuat n principal pe Alnus glutinosa, Myrica gale
i Casuarina cunninghamiana, a evideniat trei stadii de evoluie structural si metabolic a microsimbiontului.
Faza de invazie corespunde stadiului n care Frankia sp., cu structur filamentoas de tip hifal, ramificat i
septat, infecteaz celulele corticale. Stadiul hifal persist n celulele corticale ale nodozitii primare timp de 2 - 3
sptmni, formnd n celulele infectate o mas dens de filamente perinucleare.
Formarea veziculelor corespunde stadiului al doilea de dezvoltare a simbiontului. La terminaiile hifelor
apar dilatri care iau forma sferic sau de mciuc. Veziculele cu diametrul de 3-5 m, treptat ocup toat zona
central a celulelor corticale. Apariia lor este corelat cu debutul activitii nitrogenazei.
Formarea sporangilor i a sporilor. Aceste structuri sunt echivalenii funcionali ai sporilor i apar prin
diferenierea veziculelor, din care se formeaz sporangii. Sporii se formeaz prin compartimentarea septal a
veziculelor. Sporii maturi au forma sferic sau ovalar, cu diametrul de 1,0-5,0 m. Sporii se gsesc n celulele
vegetale care i-au ncheiat ciclul de via i sunt eliberai dup moartea acestora. n nodozitile senescente i n sol,
sporii reprezint forme de laten. O parte din spori i pstreaz capacitatea de germinare in vitro i in vivo.
Randamentul fixrii N2 n actinorizele simbiotice este comparabil cu acela al simbiozelor leguminoase.
Azotul fixat este transportat n plant i revine n sol prin litier sau prin intermediul rdcinilor care mor. Cele mai
multe plante gazd ale actinorizelor sunt specii pionier, care populeaz terenuri cu deficit foarte mare al azotului
combinat (terenuri mltinoase, dune de nisip, pietri, cenui vulcanice, bli srate, soluri de pdure tropical, zone
deertice).
Plantele cu actinorize au o rspndire larg n regiunile temperate, arctice, subalpine, es, subtropicale i
tropicale. Natura peren a plantelor creeaz o surs de azot combinat pe termen lung pentru fertilizarea acestor
soluri.
Simbioza Azolla-Anabaena azollae. Cianobacteria A. azollae este rspndit la toate speciile ferigilor
aquatice din g. Azolla. Cianobacteria este iniial asociat cu meristemul apical al plantei i este capturat ulterior, pe
msur ce se dezvolt primordiile frunzelor, n cavitile formate pe lobii dorsali ai acestora. Asociaia este mutual
benefic. Cianobiontul este protejat, fixeaz N 2 atmosferic i l cedeaz gazdei. Planta furnizeaz sursa de carbon,
probabil maltoza. Randamentul fixrii N2 este evaluat la circa 120 kg N/ha/an, iar n condiii foarte favorabile ajunge
pn la 670 kg N/ha/an.
Endofitele. Sunt microorganisme care colonizeaz esuturile interne ale plantelor, fr s produc
efecte negative imediate evidente. Fungii i bacteriile sunt cele mai comune endofite, dar se pare c
exist i alte forme micoplasme i Archaea, dar nu exist dovezi certe. Cele mai frecvente endofite
sunt fungii. La majoritatea plantelor, natura endofitului nu a fost studiat.
Micorizele
Micorizele reprezint rezultatul asociaiei simbiotice permanente, ntre rdcinile plantelor i fungi specifici
n mediul natural.
Interrelaia implic:
- asocierea relativ constant a celor doi parteneri
- infecia normal a plantelor de ctre fungi, n absena simptomelor patologice
- invadarea exclusiv a cortexului radicular i meninerea sterilitii meristemului apical i a cilindrului
vascular.
Micorizele sunt foarte larg rspndite n natur, peste 80% dintre taxonii studiai fiind purttori de micorize,
prezena unor plante neinfectate fiind mai curnd excepii. Micorizele lipsesc la Centrosperme, Plumbaginales,
Cruciferae, Farinosae, Cyperales, Caryophylaceae, toate productoare de substane antifungice. Lipsesc de
asemenea la Filicales, la plantele aquatice i la cele care populeaz solurile mltinoase (Droseraceae,
Oenotheraceae, Halorrhagaceae, etc.)
Clasificarea cea mai frecvent se bazeaz pe raportul dintre hifele fungice i celulele corticale ale rdcinii.
Pe baza acestor criterii, micorizele aparin urmtoarelor categorii:
- ectomicorize (micorize ectotrofe), n care fungii produc infecii hifale intercelulare
- endomicorize (micorize endotrofe), cu localizare intracelular a hifelor
- ectoendomicorize, incluznd ambele tipuri de infecie
- micorize peritrofe.
Aceste tipuri de micorize sunt determinate de caracterele genetice ale plantelor. Micorizele sunt structuri
dinamice. Ele prezint stadii succesive de dezvoltare, de maturare, de senescen.
Ectomicorizele
Sunt asociaii simbiotice rezultate din interaciunea miceliilor fungice cu rdcinile plantelor, n care fungii
rmn permanent localizai extracelular. Hifele fungice formeaz o teac extern ce inconjur rdcinile gazdei,
denumit manta. Mantaua este format dintr-un strat de hife intre celulele scoariei radiculare ce formeaz reieaua
Hartig i hife ce se extind la exterior, in sol.
Ectomicorizele sunt foarte larg rspndite. Plantele gazd sunt arborii de pdure n soluri brune sau podzolizate i
mai rare la arborii izolai n solurile agricole. S-au descris la Pinaceae, Fagales, Juglandales, Myrtaceae, Tiliaceae,
etc.
Fungii de ectomicorize aparin claselor: Basidiomycetes evoluate (ciuperci cu plrie), Ascomycetes (trufe) i
Phycomycetes: Amanita muscaria, Boletus edulis, Lactarius deliciosus sp., Russula sp., Tuber sp., etc.
Fungii din ectomicorize sunt dependeni de glucidele simple i de ali nutrieni eliminai la suprafaa
rdcinilor (acizi organici, aminoacizi, vitamine, factori stimulatori de cretere). Din aceast cauz, n stare liber,
fungii din micorize sunt necompetitivi cu fungii din sol. Se pare ca odat cu diminuarea sever a glucidelor din sol,
fungii pot manifesta tendina de a ptrunde n celulele radiculare, evolund spre producerea de micorize
ectoendotrofe.
Fungii din ectomicorize nu degradeaz lignina i sunt slab celulozolitici.
Specificitatea interaciunii celor doi parteneri este foarte diferit: unii au o mare specificitate de gazd, iar
alii au un spectru larg, putnd infecta arbori ce aparin unor genuri diferite.
Uneori aceiai plant este infectat de mai multe specii de fungi.
Hifele fungice infectante provenite din sporii germinai cresc rapid n rizosfer, stimulate fiind de exudatul
radicular i formeaz un manon radicular. Inhibitorii din exudat i mpiedic s iniieze o stare patologic.
Fungii ptrund la nivelul rdcinilor tinere, sensibile la atac, prin zona de infecie a micorizelor. Fungii de
micorize nu invadeaz meristemul, datorit imunitii lui i pentru c este constant renoit, avnd o poziie
temporar prin deplasarea sa permanent n substrat.
Pe msur ce celulele rdcinii infectate se divid i se alungesc, auxina secretat de fungi modific
dezvoltarea rdcinii. Perii radiculari nu se mai dezvolt, iar cei infectai, rmai mai scuri se ramific.
Teaca sau manonul fungic formeaz un esut fungic gros, pseudoparenchimatos, care acoper radicelele
plantei gazd. Teaca este un sistem complicat, ramificat, ntreesut, dezvoltat din hifele care ptrund ntre celulele
epidermei i chiar ntre celulele cortexului radicular. Teaca asigur o mare suprafa de contact ntre cei doi
simbioni, fr ca hifele s ptrund n celulele vii. Ele secret enzime pectinolitice, cu ajutorul crora pot ptrunde
ntre celulele cortexului.
Teaca fungic se conecteaz cu solul printr-o reea luxuriant de hife ramificate sau lanuri hifale, denumite
rizomorfe. n condiii favorabile, rizomorfele se difereniaz formnd corpuri sporifere (corpi de fructificare), a cror
nutriie este asigurat de planta gazd. Apariia corpilor sporiferi este mpiedicat dac se ntrerupe legtura dintre
rizoforme i rdcinile arborilor gazd. Aceasta demonstreaz c majoritatea ciupercilor comestibile prezente n
apropierea copacilor sunt corpuri sporifere ale fungilor de ectomicorize i nu saprobionte pe materia organic n
descompunere. Ptrunderea hifelor n rdcinile arborilor este o precondiie a formrii acestor sporofori n condiii
naturale, ceea ce explic apropierea anumitor fungi de speciile specifice de arbori.
Trstura distinctiv a micorizelor este reieaua Hartig, o reea de hife ce ptrund printre celulele corticale,
fr s produc infecii intracelulare.
Endomicorizele. Micorizele veziculo-arbusculare
Endomicorizele sunt tipul cel mai comun de micorize, ntlnit la cele mai multe plante cultivate. Sunt
prezente la majoritatea angiospermelor: toate speciile lemnoase ce nu fac ectomicorize i mii de plante ierboase.
Endomicorizele veziculo-arbusculare se gsesc la mai multe genuri de gimnosperme care includ: Cupressus,
Thuja, Taxodium, Sequoia, Juniperus, etc. Cele mai studiate sunt micorizele plantelor cu importan economic
(gru, porumb, soia, mazre, tomate, cpuni, mr, piersic, graminee furajere, trestie de zahr, arborii de cafea, ceai,
cauciuc, etc.).
Fungii care produc endomicorize sunt larg rspndii n sol, mai ales n regiunea periradicular i n rizosfer.
Majoritatea cresc n culturi pure. Marea asemnare anatomic a micorizelor veziculo-arbusculare duce la
presupunerea c majoritatea, dac nu toate, sunt produse de o specie unic de fungi (Mosse, 1973). Apoi s-au descris
mai multe specii Endogone i alte cteva genuri: Glomus, Sclerocystis, Gigaspora, Acaulospora. Cei mai muli fungi
de endomicoriz au un spectru larg de gazd.
Formarea micorizelor veziculo-arbusculare. Denumirea acestor micorize endotrofe deriv din faptul c
formeaz structuri sferice denumite vezicule i structuri ramificate cu funcia de organ absorbtiv de tipul haustorilor,
denumite arbusculi. In evoluiia infeciei simbiotice s-au descris trei faze succesive:
- dezvoltarea extensiv in sol a miceliului extraradicular, cel puin civa centimetri la suprafaa rdcinii
- apariia unui sistem hifal intercelular n cortex
- infecia intracelular i formarea hifelor ncolcite, veziculelor i arbusculilor n celulele vegetale.
Iniial, fungii cresc sub forma de hife individuale sau de reele laxe pe suprafaa rdcinilor pe care le colonizeaz,
fie formnd apresori, fie ramificndu-se pentru a forma o structur de preinfecie de la care se formeaz apresori ce
stimuleaz infecia. Infecia este favorizat de producerea de ctre fungi, a unor enzime celulozolitice, ce dizolv
mici poriuni din peretele celulelor vegetale.
Arbusculii sunt sisteme complexe structural i funcional, similare haustorilor, formate prin ramificarea
dihotomic repetat a hifelor n celulele corticale. Arbusculii sunt progresiv ncapsulai ntr-un sistem de perei
derivai din celula gazd, pentru a forma structurile numite iniial sporangiole.
Celulele infectate cu arbusculi au un volum mrit de pn la 4 -5 ori. Arbusculii au o durat de via limitat
(4 10 zile) dup care se lizeaz.
Veziculele sunt structuri saciforme ce apar la extremitile sau la mijlocul hifelor. n stadiile tinere au un
perete subire i citoplasm omogen. Ulterior peretele devine gros, citoplasma vacuolat cu incluzii lipidice.
Fungii de micorize endotrofe atac planta gazd ca un parazit, deoarece hifele intracelulare se comport ca
haustorii fungilor patogeni. Fungii rmn localizai n straturile externe ale cortexului radicular. Cnd ncearc s
ptrund n structurile interne ale rdcinii, ei sunt distrui de factorii protectori ai gazdei, care determin
dezintegrarea hifelor sau a arbusculilor. Prin liza hifelor endofitului, planta obine compui organici fungici.
n mod normal, stelul i meristemul apical sunt lipsite de infecia fungic. Endodermul plantei reprezint,
pentru fungi, o barier insurmontabil. Dac o depesc, ei devin parazii.
Micorizele ectoendotrofe. Sunt prezente numai la speciile de arbori (brad, pin, molid) care n mod obinuit
formeaz ectomicorize. Micorizele ectoendotrofe au particularitile anatomice ale ambelor tipuri majore de
micorize. Mantaua fungic nu este foarte bine dezvoltat, dar prezint concomitent reeaua Hartig n cortex i hife
ptrunse intracelular. Fungii sunt probabil fungi imperfecti. Reteaua Hartig patrunde printre pereii celulelor
epidermice n interiorul celulei gazd, prin intermediul unor haustori.
Rolul micorizelor n biologia plantelor
Micorizele confer plantelor numeroase avantaje, n special legate de nutriie i dezvoltare. Micorizele
funcioneaz ca adevrate organe absorbtive radiculare, asociate cu fungii. Reeaua Hartig creeaz o suprafa mare
de contact cu celulele vegetale i de aceea absorbia nutrienilor este mult mai intens dect cea realizat prin perii
radiculari.
Rdcinile infectate cu fungi de micorize sunt de 2-3 ori mai lungi dect cele neinfectate, sunt mai grele i
mai ramificate. Formarea perilor radiculari este supresat, iar funcia lor este preluat de hifele fungice.
Fungii de micorize au un rol foarte activ n preluarea nutrienilor: P, N, Ca, Na. Fungii secret metabolii
care mresc solubilitatea ionilor minerali legai n sol, astfel nct ionii anorganici sunt preluai i translocai direct n
rdcini, realiznd un circuit nchis al nutrienilor (Atlas si Bartha, 1987).
Mantaua fungic a ectomicorizelor acumuleaz Mg, Fe, Zn, Ca, K i Si i are rolul unui principal organ de
acumulare, nainte de transferul lor n rdcin.
Speciile de arbori beneficiaz mai mult de prezena micorizelor, comparativ cu cerealele i gramineele
furajere, pentru c au puine rdcini i peri absorbani.
Hifele fungice larg rspndite n sol, traverseaz zonele deficitare n nutrieni sau cu nutrieni inaccesibili din
apropierea rdcinilor pentru a se ramifica i exploata zone noi situate la distan, inaccesibile rdcinilor ca atare.
Ramificarea i creterea continu a hifelor i conexiunile lor cu solul permit exploatarea extensiv la distan
a acestuia.
Fungii produc substane de tip auxinic, care meniin echilibrul simbiotic cu celulele radiculare: de exemplu,
acidul -indol-acetic, utiliznd triptofanul, sau o serie de citochine care mpiedic maturarea i suberizarea
rdcinilor infectate, prelungind perioada fiziologic activ.
Fungii produc auxine care mresc concentraia glucidelor n rdcinile plantelor, stimulnd circulaia mai
intens i mai rapid a fotosintatului, dect n rdcinile lipsite de micorize.
Fungii au rol protector, formnd o barier fizic ce mpiedic accesul patogenilor. Mantaua fungic acoper
prile cele mai fragile ale radicelelor, impiedicand orice contact direct al rdcinilor tinere cu solul. n absena
mantalei fungice, datorit peretelui celular foarte fin, rdcinile tinere sunt invadate i colonizate chiar de patogeni
puin viruleni, iar planta se apr prin sinteza substanelor antifungice (taninul). Dar impregnarea celulelor vegetale
cu tanin afecteaz funcia absorbtiv a rdcinii i determin creterea deficitar a plantei.
Fungii de micorize produc acizi organici volatili cu efect fungistatic, meninnd un echilibru ntre fungii
simbiotici i cei patogeni din sol.
Micorizele pot compensa ntr-o msur important distrugerile sistemului radicular.
Arborii individuali, aparinnd unor specii diferite pot fi legai ntre ei prin una sau mai multe specii fungice.
ntr-o comunitate vegetal natural, cele mai multe plante sunt infectate de fungi de micorize. n consecin, este
posibil ca toate plantele cu micorize veziculo-arbusculare s fie legate ntre ele de micelii ale unor specii de
Endogonaceae. Asemntor, plantele cu ectomicorize pot fi legate de grupul de fungi. n acest cadru, compuii cu
carbon eliberai de arborii dominani pot compensa necesitile de nutrieni ale plantelor care cresc la umbra lor. n
felul acesta, competiia dintre specii depinde de relaia lor cu fungii.
Hifele favorizeaz formarea agregatelor de sol, avnd rol important n dezvoltarea structurii solului.
Coniferele lipsite de micorize rmn mici sau nu se dezvolt de loc. Incetarea creterii poate fi prevenit
numai prin adugarea fungilor de micorize, adic a solului de pdure.
Semnificaia biologic a micorizelor este controversat. Pentru muli cercettori, micorizele sunt simbioze
mutualiste echilibrate, avantajoase pentru ambii parteneri. In unele cazuri, asocierea are un caracter obligatoriu, iar
alteori, plantele supravieuiesc i n absena partenerului simbiotic. In faza n care celulele fiziologic active ale celor
doi parteneri sunt n contact intim, i numai atunci, are loc un schimb bidirecional de substane (Smith, 1980). Dup
sfritul acestei faze, fie fungii, fie celulele gazdei, fie ambele, degenereaz.
Simbioza cianobacterii-fungi sau alge-fungi (Lichenii)
Lichenii sunt produsul asocierii simbiotice a dou microorganisme nenrudite: un productor primar (o
cianobacterie sau o alg - adic un ficobiont) i un consumator - un tip de fungi (micobiont). Forma complet
integrat d natere unei noi entiti biologice, fr nici o asemnare cu componenii si individuali.
Asocierea are drept consecini o serie de modificri structurale, biochimice i fiziologice, care faciliteaz
interaciunea i care sunt eseniale pentru diferenierea morfologic i pentru asigurarea stabilitii asociaiei.
Cei doi sau trei parteneri ai asociaiei formeaz un corp vegetativ talul - avnd o structur macro- i
microscopic cu caracteristici proprii speciei.
Cea mai mare parte a talului este alctuit din hifele fungice, care formeaz un strat de esut specializat,
rezultat din mpletirea strns a hifelor - cortexul superior, sub care se gasesc o regiune medular i adesea un
cortex inferior, hipotal i rizine.
Regiunea medular const dintr-o mpletitur lax a hifelor, n ochiurile creia se gsete stratul algal. Aici se
stabilete contactul fizic dintre partenerii simbiozei.
Lichenii crustoi nu au niciodat cortex inferior, fiind ataai de substrat.
Lichenii se nmuliesc pe cale vegetativ prin fragmente de tal, soredii (structuri alctuite din celule algale
nconjurate de hife fungice) sau izidii (alctuite din celule algale i esut medular acoperit de cortex).
Alga se multiplic n stratul algal prin diviziune mitotic i prin aplanospori, eliberai prin ruperea peretelui celulei
mam.
Fungii din licheni se nmulesc prin ascospori asexuai, dup ce sunt eliberai din tal. Ei aparin clasei
Ascomycetes i mai puin clasei Basidiomycetes. Izolai, cresc greu n culturi de laborator, cu o incubaie uneori de
cteva luni.
O serie de alge poate forma licheni cu orice alt specie fungic compatibil i invers. Exist totui un anumit
grad de selectivitate ntre micobiont i ficobiont, n sensul unei interaciuni prefereniale, bazat tot pe fenomene de
recunoatere.
Ficobiontul reprezint sursa principal de carbon organic. Excedentul este cedat fungilor. Fotosinteza algal
are o rat scazut. Algele coniin de 4 -10 ori mai puin clorofil per unitate de greutate fa de algele verzi libere.
Lichenii au dou surse de azot: organic sau anorganic absorbit din mediu i cel fixat de cianobacterii.
Lichenii cu cianobacterii fixatoare de azot sunt mai bogai n azot.
Fungii au o mare capacitate de absorbie a apei, fie rapid (cnd este n stare lichid), fie lent (apa sub forma
de vapori).
Lichenii au rate de cretere foarte sczute. n regiunile temperate, creterea radial este de 1-2 mm/an, iar la
speciile rapid cresctoare, de 2-4,5 mm/an. n regiunile antarctice nu apare nici un indiciu al creterii timp de 30 de
ani.
Pe medii agarizate, cu substane organice, cei doi parteneri cresc independent unul de cellalt. n condiiile
unor concentraii minime de nutrieni sau n absena lor (pe medii cu agar fr adaus de nutrieni) se observ un
proces de lichenizare, evideniat prin ncercuirea algelor de ctre hifele fungice, formarea haustorilor fungici sau
apariia unui esut pseudoparenchimatos, prin dispunerea hifelor n jurul unui grup de alge.
Concluzia acestor experimente preliminarii este c asocierea simbionilor din licheni nu are loc niciodat n
condiii care permit creterea independent a unuia sau ambilor parteneri.
Asocierea simbionilor ar depinde de creterea echilibrat a algelor i fungilor n condiiile unui substrat
srac n nutrieni, alternana uscciune/umiditae, absena poluanilor. Creterea dezechilibrat a unuia dintre
simbioni duce la separarea lor.
Lichenii au capacitatea de a sintetiza o serie de metabolii secundari specifici, denumii substanele
lichenilor. Sunt peste 220 de compui organici extracelulari, ce acoper suprafaa peretelui celular al hifelor,
heterogeni din punct de vedere chimic, insolubili n ap, dar solubili n solveni organici. Sinteza lor are loc n
treptele metabolismului glucidic.
Lichenii reprezint simbioza cu cel mai nalt grad de integrare din natur. Integrarea creeaz structuri noi i
se sintetizeaz metabolii care nu sunt produi niciodat de componenii individuali.
Botnariuc (1979) ader la ideea c lichenii pot fi considerai ca un exemplu de speciaie prin mutualism.
Specialitii din domeniul ecologiei microorganismelor consider c lichenii au atins ultima treapt n evoluia
sistemelor simbiotice - aceea de unitate funcional, de organism unic, cu cel mai nalt grad de integrare, datorit
persistenei separate a celor dou organisme, care pot fi disociate, cultivate separat i reasociate natural sau artificial
(experimental). Se consider c lichenii se comport mai degrab ca un simbiont ecologic dect ca un simbiont
fiziologic (Brock,1966).
n realitate, lichenii ca grup, prezint stadii de evoluie de la parazitism spre mutualism. n lichenii primitivi,
fungii ptrund efectiv n celulele algale i sunt, n esen, parazii pe acestea. La speciile difereniate, hifele fungice
nu rup peretele celulei algale i triesc n armonie cu acestea, fie n contact strns, fr s ptrund n interiorul lor.
Lichenii pot fi considerai ca un caz de parazitism controlat, n care algele au dezvoltat un anumit grad de rezisten
la fungi (Ahmadjian, 1982).
Parazitismul
Parazitismul corespunde relaiei n care un organism se hrnete cu celulele, esuturile sau cu lichidele altui
organism, care poate suferi prejudicii mai mult sau mai puin severe.
Relaia parazit-gazd este diferit i variaz de la ectoparazitism la parazitism intracelular obligat.
n unele cazuri, interaciunea are grad nalt de specificitate. Alteori, paraziii au spectru larg de gazde.
Parazitismul intracelular. Moulder (1979) consider c sistemul parazit intracelular-celula gazd prezint
particulariti proprii mediilor extreme.
Parazitul intr n competiie cu gazda pentru intermediari de biosintez, pe care i dobndete uneori cu mare
dificultate. Cel mai adesea, relaiile parazit-celul evolueaz spre o stare de echilibru datorit tendinei de
multiplicare a parazitului, n aa fel nct s nu depeasc limitele tolerate de gazd. n general, relaiile dintre
parazit i celula gazd evolueaz spre o stare de toleran, caracterizat printr-o infecie prelungit, cu leziuni
minime.
Tipuri de parazitism intracelular. Parazitismul facultativ intracelular este tipic pentru microorganismele cu
exigene nutritive relativ moderate, care le confer posibilitatea s se dezvolte pe medii inerte. De exemplu, M.
tuberculosis se dezvolt pe medii organice complexe, dar i pe medii sintetice suplimentate cu aminoacizi, biotin,
NH4+, glicerol.
Parazitismul obligat intracelular este caracteristic microorganismelor care au pierdut capacitatea de a exista
extracelular.
Ptrunderea microorganismelor parazite n celulele gazd are cel mai adesea un grad mare de specificitate.
nglobarea parazitului este precedat de legarea prealabil de celula gazd prin fenomene de recunoatere bilateral,
pe baza interaciunii unor structuri complementare. S-au descris dou mecanisme principale de ptrundere a
paraziilor n celula gazd:
- endocitoza - corespunde situaiei n care parazitul distruge continuitatea structural a nveliurilor celulei gazd i
intr nconjurat de o membran derivat din cea a gazdei. Mecanismul este tipic pentru interactiunea dintre
Plasmodium i hematiile vertebratelor.
- diacitoza (dia, grec = prin, de partea cealalt) corespunde situaiei n care parazitul perforeaz nveliurile externe
ale celulelor gazd, producnd o discontinuitate prin care intr fr a fi inclus ntr-o membran. Mecanismul este
tipic pentru Bdellovibrio, care intr prin peretele perforat al bacteriei gazd, propulsat fiind de micrile flagelului.
Ulterior, peretele celular este reparat prin formarea unei cicatrice, iar membrana citoplasmatic a bacteriei gazd se
ndeprteaz de peretele celular. Astfel, Bdellovibrio nu este un parazit intracelular tipic, deoarece ramne n
compartimentul intramural i nu n citoplasm.
Pentru supravieuirea n celulele gazd, paraziii au elaborat mai multe strategii:
- infectarea unei celule gazd lipsit de lizosomi, ca de exemplu, eritrocitul matur, parazitat de Bartonella sau de
protozoarul Plasmodium i de hemosporidii;
- evadarea din fagosom curnd dup ptrunderea n celul, descris iniial la Rickettsia mooseri;
- mpiedicarea fuziunii fagolizosomale este un mecanism mai comun ntlnit la M. tuberculosis, Chlamydia,
Legionella pneumophila, T. gondii;
- rezistena la aciunea enzimelor lizosomale, ntlnit la C. burnetii.
Parazitismul intracelular este rezultatul unei adaptri subtile i complexe la mediul celulei gazd, asociat cu
pierderea capacitii de a tri extracelular.
La baza acestui proces ar sta o serie de procese de adaptare negativ, adic pierderea unor caractere
neeseniale pentru viaa intracelular. Adaptarea la viaa parazitar este, se pare, asociat cu reducerea genomului,
prin pierderea genelor neeseniale. Unii parazii intracelulari au genomuri mici (N. gonorrhoeae are circa 1000 de
gene, Chlamydia - circa 500 de gene) spre deosebire de bacteriile libere (B. subtilis 5 6 000 de gene, sau E. coli
3 - 4000 de gene).
Prdarea
Este o interrelaie n care un organism mai viguros prdtorul atac un alt organism, provocndu-i
moartea, rapid n cazul przii unicelulare sau distrugerea parial ori total n cazul celei multicelulare, urmat de
utilizarea constituienilor lor ca material nutritiv.
Brock (1976) pledeaz pentru un sens restrictiv, limitnd prdarea la microorganismele fagotrofe, lipsite de
un perete celular rigid, capabile s nglobeze i s digere microorganismele cu dimensiuni mai mici. Relaia este
tipic pentru microorganismele bacteriovore, n timp ce microorganismele cu perete rigid sunt excluse de la acest tip
de relatie.
Cei mai muli autori pledeaz pentru un cadru mai larg, considernd ca prdtorii pot fi ntlnii i printre
eubacterii, mixobacterii, fungi, dinoflagelate, alge marine i de ap dulce.
Un sistem bine cunoscut este cel reprezentat de Didinium (prdtor) - Paramecium (prada), care la rndul
sau este prdtor pentru bacterii.
Procariote prdtoare. La procariote, prdarea se poate realiza pe dou ci majore.
Prdarea extracelular se realizeaz prin activiti enzimatice exercitate din afara celulei-prad. Dintre
numeroasele enzime extracelulare produse de bacterii, puine pot ataca, dizolva i digera celulele bacteriene vii.
Prdarea extracelular este de dou tipuri, corespunznd prdtorilor periplasmatici (Bdellovibrio) i celor
citoplasmatici (Daptobacter).
Bacteriile din g. Bdellovibrio (bdellos = lipitoare, parazit, exploatator) sunt parazite endocelulare, prdtoare
i bacteriolitice. Celula de Bdellovibrio atac att bacteriile sensibile ct i insensibile, dar se leag stabil numai de
primele. Atacul este realizat prin coliziuni violente, urmate de legarea de suprafaa celulei gazd, prin extremitatea
neflagelat. Parazitul ptrunde n celula gazd printr-un mecanism necunoscut, cel mai probabil prin perforarea
favorizat de prezena unor spicule la polul de legare. Parazitul ptrunde n spaiul dintre perete i membrana
citoplasmatic. Apoi, peretele celular este reparat i nchis.
Multiplicarea parazitului are loc ntr-un spatiu nchis extracitoplasmatic, respectiv intramural sau
periplasmatic. Celula invadat se modific morfologic i devine un corp globulos sau bdelloplast, dar i fiziologic
(blocarea sintezei ADN, ARN i a proteinelor, modificarea activitii respiratorii, modificri nucleare etc.). Celulele
de Bdellovibrio cresc filamentos spiralate, devenind de cteva ori mai lungi dect celula infectat. Multiplicarea
parazitului se realizeaz prin fragmentarea filamentului n celule mobile, identice cu cele infectante, care pot umple
celula gazd.
Eliberarea celulelor progene n mediu se face brusc, odat cu distrugerea nveliurilor celulei gazd. Singura
surs de nutrieni a parazitului este sferoplastul celulei parazitate.
Bacteriile din g. Daptobacter (dapto = a roade, a devora, a distruge) se fixeaz perpendicular pe celulele
prad de Chromatium vinosum, C. minutissimum, Lamprocystis i Thiocapsa roseoperscina distruge peretele celular
i membrana citoplasmatic i ptrunde n celul. Pe mediile de cultur, n curs de cteva zile, rezultatul lizei const
n apariia unor plaje de liz cu diametrul de 0,5 cm colorate rou-pal.
Semnificaie biologic. Unele bacterii prdtaoare evideniaz relaii nutriionale puin cunoscute la
procariote. Astfel, Vampirovibrio chlorellavorus, Vampirococcus i Daptobacter care prad alga Chlorella i
respectiv bacteriile fotoorganotrofe sunt consumatori primari, echivaleni organismelor fitofage, deoarece se hrnesc
cu organisme fotoautotrofe.
Se consider c relaia de prdtorism a aprut iniial la procariote, n ecosistemul anoxic n era paleozoic
(Guerrero, 1986, Margulis, 1986), cnd microorganismele erau singurele organisme de pe Pmnt. Se poate
presupune c n perioada n care bacteriile fototrofe erau singurii productori primari i bacteriile heterotrofe singurii
consumatori, ntre procariote au existat relaii ecologice analoge cu cele existente ntre organismele eucariote n
prezent.
Ptrunderea unor bacterii prdtoare (Bdellovibrio) n spaiul periplasmatic sau n citoplasma (Daptobacter)
reprezint argumente n favoarea teoriei endosimbiotice privind originea bacterian a organitelor celulei eucariote.
MICROBIOTA NORMAL A MAMIFERELOR

Dei organismele animale sunt sterile n cursul vieii intrauterine, imediat dup natere sunt colonizate
progresiv de un numr mare de microorganisme, care se localizeaz pe suprafaa corpului i a diferitelor mucoase, n
special pe traiectul digestiv. Numrul microorganismelor la omul adult este apreciat la 10 14 celule, cu un grad de
mrime peste numrul total al celulelor organismului uman (10 13) (Dobzhansky, 1974), cea mai mare parte fiind
localizate n sistemul digestiv.
Microorganismele asociate organismului animal i uman aparin la dou categorii majore:
1) Microbiota normal sau asociat este reprezentat de microorganisme indigene sau autohtone. Asocierea
lor cu microorganismele a fost stabilit n cursul evoluiei comune i sunt reprezentate de bacterii, microfungi i
protozoare. Dei de la copiii sntoi au fost izolate i cultivate mai multe virusuri, Reed i colab. (1974) consider
c n mod normal nu exist virusuri asociate.
2) Microorganismele strine sau alohtone provin din mediul extern (aer, sol sau de la alte animale). Unele
pot fi patogene. Frecvent sunt numai n tranzit, fr s contribuie semnificativ la activitatea microbiotei normale, la
ale crei condiii nu se pot adapta.
O situaie particular o prezint microbiota gastrointestinal. Un microorganism poate fi autohton pentru un
anumit segment i alohton pentru altul pe care l tranziteaz dup ce s-a desprins de habitatul su natural.
Colonizarea si succesiunea asociaiilor de microorganisme la organismul uman
Colonizarea microbian a tuturor suprafeelor externe i a unora interne ale organismului ncepe la natere.
Procesul este, de regul, benefic att pentru microorganisme ct i pentru gazd, n sensul c fiecare furnizeaz ceva
esenial celuilalt i primete n schimb ceva esenial.
Ftul este steril in utero, dar se infecteaz n cursul trecerii prin vagin i organele genitale externe materne i
de la orice surs din mediu, la care este expus.
n cursul procesului de colonizare, multe microorganisme contaminante mor i dispar, deoarece nu se pot
adapta. Totdeauna exist unele specii-pionier care se stabilizeaz, ader la diferite substraturi sau se divid cu o rat
superioar dect cea a eliminrii. La sugarul hrnit la sn, primele bacterii care apar n sistemul digestiv aparin g.
Lactobacillus, urmat dup 1-2 zile de Bifidobacterium, care devine predominant numeric. Ulterior se instaleaz alte
specii facultativ anaerobe (E. coli, S. faecalis).
Modificarea major a microbiotei, la toate animalele studiate, este asociat cu tranziia la alimente solide,
cnd apar bacterii strict anaerobe (Bacteroides), n special n intestinul gros, iar proporia celor facultativ anaerobe
scade progresiv.
Mecanismele colonizrii sunt cunoscute. Colonizarea trebuie s nving sistemele de eliminare mucociliare
(care ndeprteaz bacteriile nelegate de epitelii), fluxul unidirecional al lichidelor pe suprafaa epiteliilor i
activitatea peristaltic a tubului digestiv, turnover-ul celulelor epiteliale senescente, sistemele imunitare locale,
variaiile pH i ale potenialului redox, agenii antimicrobieni nespecifici ai gazdei, competiia cu alte
microorganisme etc.
S-a semnalat existena unei anumite asemnri antigenice ntre suprafaa celulei microbiene i mucusul sau
mucoasa intestinal, n care ocup un habitat.
Aderena are un caracter de specificitate, n sensul c epiteliile situate n diferite localizri anatomice leag
specii bacteriene diferite.
Aderena bacterian este, de regul, funcia adezinelor bacteriene, care se leag de receptorii complementari
de pe suprafaa celulelor epiteliale ale gazdei, care se leag de receptorii glicoproteici sau glicolipidici de pe
suprafaa epiteliilor.
Aderena trebuie s nving mecanismele de aprare ale gazdei:
- producerea de Ig A din secreii (sIgA)
- sinteza lizozimului
- sinteza de analogi ai receptorilor specifici, care se combin cu suprafeele de legare bacterian,
neutralizndu-le capacitatea de aderen
- efectul antibacterian al bilei neconjugate, care explic numrul mic al bacteriilor din intestinul subire
- producerea de ctre gazd, a unor proteine care leag Fe, crend un deficit de Fe pentru bacterii
- existena unor situsuri anatomice favorabile pentru unele microorganisme (pH, potenial redox).
Microbiota normal a tegumentului
Pielea nu ofer condiii favorabile dezvoltrii microorganismelor, deoarece este expus unor variaii extreme
de temperatur, umiditate, dezinfectani chimici (spun, ampon). De aceea, populaia microorganismelor este mai
mic i mai simpl comparativ cu alte situsuri corporale. Totui, numeroase bacterii i stabilesc rezidena
permanent pe suprafaa pielii. In plus, se produce i o colonizare tranzitorie cu o diversitate de microrganisme din
mediul extern i cu microorganisme endogene.
Suprafaa pielii este foarte heterogen. Sunt arii uscate i fr pr (palme, tlpi), arii cu o mare densitate a
glandelor sudoripare (regiuni axilare, inguinale, perianal), arii bogate n glande sebacee (fruntea, pliurile
nazolabiale).
Microorganismele prolifereaz n mediul umed: zonele cu glande sudoripare i suprafeele ocluzate. Pielea
feei, aria perirectal sau perigenital au o microbiot mai complex.
Pe suprafaa pielii, bacteriile anaerobe sunt de 10 -100 de ori mai numeroase dect cele aerobe. In raport cu
levurile, predomin net bacteriile i n special cele Gram pozitive: Staphylococcus, Micrococcus, Corynebacterium,
Peptostreptococcus, Propionibacterium.
Bacteriile Gram negative colonizeaz tranzitoriu suprafaa pielii, deoarece peretele celular subire nu
protejeaz celula de aciunea detergenilor. Acinetobacter se gsete n zonele umede: regiunea inguinal, axilar, pe
tegumentul interdigital.
Microbiota normal a tractului respirator
La nivelul cilor respiratorii superioare (cavitile nazale i nazofaringe), numrul microorganismelor este
mic, fiind reprezentate de S. aureus i specii coagulaz-negative (Corynebacterium, Peptostreptococcus i
Fusobacterium). Tranzitoriu, n nri, prezena altor microorganisme este comun.
n nazofaringe, populaia de microorganisme este mai complex: predomin speciile de Streptococcus i
Neisseria (streptococii -hemolitici i 12 specii de Neisseria). Colonizarea cu N. meningitidis atinge valori mari
(pn la 95%) la adulii tineri din aglomerrile umane.
In cile respiratorii medii (orofaringe i tonsile) predomin cocii Gram pozitivi i Gram negativi. Cei
anaerobi depesc pe cei aerobi n proporie de 100/1.
Cile respiratorii inferioare (laringe, trahee, bronhii i plamni) sunt sterile.
Microbiota tractului digestiv
In saliv i pe suprafaa limbii se gsesc streptococi din grupul viridans (Str. salivarius). Suprafaa dinilor
este colonizat cu S. sanguinis, S. mutans, iar mucoasa oral, cu S. vestibularis i S. sanguis. Ali streptococi din
orofaringe sunt cei -hemolitici. S. pyogenes produce faringita streptococic, dar poate coloniza tranzitoriu
persoanele sntoase.
Ali coci Gram pozitivi din orofaringe: Stomatococcus mucilaginosus, Gemella sp. i Peptostreptococcus.
Dintre cocii Gram negativi anaerobi cei mai frecveni sunt speciile de Veillonella.
Bacilii Gram pozitivi din microbiota orofaringelui sunt speciile de Actinomyces, Actinobacillus,
Corynebacterium, Lactobacillus, Propionibacterium., iar cei Gram negativi anaerobi sunt reprezentai de
Fusobacterium, Bacteroides, Porphyromonas, Prevotella, Selenomonas, Haemophilus influenzae, H. parainfluenzae.
Actinobacillus actinomycetemcomitans este cauza periodontitei juvenile.
Dintre fungi, Candida albicans se gsete aproape la toi indivizii.
Protozoarele din orofaringe sunt reprezentate de Entamoeba gingivalis i Trichomonas tenax, dar nu produc
manifestri clinice.
Habitatele microbiotei gastrointestinale. Ecosistemul gastrointestinal este complex, deschis, integrat i
format din cele mai multe habitate pentru microorganisme. Fiecare habitat este colonizat de mai multe specii de
microorganisme autohtone. Acestea pot avea trei localizri:
1) Lumenul are calitatea de habitat n msura n care microorganismele pot coloniza materialele prezente n
el. Habitatul adevrat este reprezentat de suprafaa particulelor de materiale solide, cum ar fi cele ale constituienilor
alimentari.
2) Suprafaa epitelial a diferitelor regiuni ale tubului digestiv.
3) Criptele mucoaselor, prezente mai ales n intestinul subire superior, cecum i colonul anumitor animale.
Microbiota gastric. Stomacul este un compartiment ostil dezvoltrii microorganismelor i de aceea este
considerat steril, dar poate conine microorganisme ingerate odat cu alimentele sau cu apa. Acest fenomen este
foarte accentuat la animalele coprofage (roztoare, porc, etc) care inger cantiti imense de microorganisme
alohtone provenite din fecale.
Odat ajunse n stomac, marea majoritate a microorganismelor sunt distruse de aciditatea secreiei gastrice.
Microbiota este srac, asociat cu suprafaa epiteliului, fiind protejat de secreia de mucus i de bicarbonat.
Bacteriile prezente sunt acidotolerante: Lactobacillus sp. Streptococcus sp., H. pylori. Ultimul pare a fi implicat n
producerea gastritei, a ulcerului gastric i duodenal i este asociat cu malignitatea gastric.
Microbiota intestinului subtire. Acest segment ofer trei regiuni majore, cu condiii de mediu distincte:
duoden, jejun i ileon. In condiii normale, microbiota este limitat (10 5 celule/ml) i predomin anaerobii:
Lactobacillus, Streptococcus, Candida albicans, Bifidobacterium, Bacterroides, Clostridium, unele derivate n mod
cert din cavitatea bucofaringian.
In ileon pot fi gsite bacterii provenite din colon. Dac se produce obstrucia tractului intestinal are loc staza,
iar microbiota se aseamn cu cea din colon (Bifidobacterium, Bacteroides, Clostridium, E. coli, Enterococcus) i
duce la malabsorbie.
Factorii limitani ai multiplicrii bacteriilor n intestinul subire sunt: aciditatea gastric, peristaltismul
intestinal care asigur tranzitul relativ rapid spre intestinul gros i existena unor substane care inhib creterea
microorganismelor.
Microbiota intestinului gros. La om i la cele mai multe mamifere, microbiota acestui segment este alctuit
din cteva sute de specii bacteriene intolerante la O 2, dintre care puine au fost cultivate in vitro i identificate.
Microorganismele alohtone devin semnificative dac densitatea lor depete 10 6 celule/g de coninut intestinal. Ele
provin din alimente sau din etajele superioare ale tractului digestiv.
La om, numrul bacteriilor strict anaerobe este de peste 10 11 celule/g, n care predomin Bifidobacterium sp.,
grupul Bacteroides fragilis, Enterococcus, n timp ce coliformii reprezint numai 0.1-1%. n colonul normal nu se
gsesc protozoare. Multe bacterii sunt legate de celulele epiteliale ale mucoasei sau chiar inclavate ntre acestea.
Microbiota colonului poate determina complicaii severe, cnd integritatea barierei intestinale este
compromis (apendicite etc.). Bacteriile coliforme, originare n colon produc infecii genito-urinare. NH 3 produs de
bacterii prin dezaminarea aminoacizilor nedigerai este toxic. Efectul se manifest att asupra mucoasei colonului,
genernd leziuni ale acesteia, ct i asupra ficatului. Microbiota ar putea fi implicat, direct sau indirect n geneza
neoplaziei de colon. Incidena bolilor colonului, n general este mult redus la populaiile care consum multe fibre
vegetale, comparativ cu cele care au un regim bogat n grsimi i proteine.
In funcie de structura sistemului digestiv au fost descrise trei tipuri de habitate, care ofer
microorganismelor condiii diferite de mediu.
1) Tipul tub drept - caracteristic mamiferelor carnivore, omnivore i insectivore - corespunde unei hrane
reprezentat de proteine, glucide i lipide, digerabile att sub aciunea enzimelor digestive, ct i de ctre
microorganisme. Caracteristica esenial este existena stomacului foarte acid, care limiteaz multiplicarea
microorganismelor ce se dezvolt progresiv, pe msur ce secreiile alcaline restabilesc un pH favorabil.
2) Tipul multicameral al rumegtoarelor, caracterizat prin prezena unei camere de fermentaie, deviat de
la linia de tranzit a alimentelor, precednd stomacul propriu-zis - rumenul caracteristic pentru Bovidae i Ovinae sau
situat n linie, sub forma unei regiuni parial separat de restul tubului digestiv (la marsupiale, maimue,
ierbivore).
Caracteristica fundamental o constituie dezvoltarea unei microbiote imense, strict anaerobe, care
fermenteaz hrana cu producere de acizi grai volatili absorbii i oxidai de gazd, biomasa microbian i gaze
(CO2, CH4 sau H2). Interaciunea major ntre microorganisme i gazd este de cooperare.
3) Tipul cecal (la cal, roztoare, iepure, elefant etc.) corespunde animalelor cu stomac acid i un cecum
bine dezvoltat. Materialele nedigerabile de ctre enzimele digestive ale gazdei sunt fermentate ntr-un cecum lrgit
i n regiunea superioar a colonului. Celulele microbiene nu pot fi digerate de ctre gazd, deoarece se formeaz
distal fa de compartimentul enzimatic care ar putea asigura utilizarea lor. Tipul cecal este mai puin eficient dect
cel ruminal. Handicapul este compensat, cel puin la unele specii, prin coprofagie, care asigur ingestia de nutrieni
sub forma celulelor microbiene i de acizi organici rezultai din fermentaie.
Microbiota din rumen
Hrana unei mari varieti de mamifere este format ntr-o proporie important din materiale vegetale, pe
care nu le pot digera, datorit absenei enzimelor necesare. Microorganismele din tubul digestiv asigur
transformarea substanelor polizaharidice complexe (celuloze, hemiceluloze, pectine, amidon etc.) la forme
asimilabile.
La ierbivorele nerumegtoare, dup digestia din stomac i intestinul subire, esuturile vegetale sunt
degradate ntr-un cecum lrgit i n colon. Uneori, cecumul este att de mare nct atinge lungimea corpului
animalului. Digestia microbian a materialului vegetal este relativ ineficient, fiind de ordinul a 20 - 30%. Produii
de degradare sub aciunea microorganismelor sunt absorbii prin mucoasa intestinal n snge, iar microorganismele
sunt eliminate, n cea mai mare parte, prin fecale.
Rumegtoarele (bovine, ovine, caprine etc.) prezint un compartiment specializat, pregastric - rumenul - la
nivelul cruia are loc digestia polizaharidelor vegetale, prin aciunea bacteriilor i protozoarelor. La rumegtoare,
stomacul este compartimentat, fiind alctuit din rumen (burduf), reticulum (ciur) i omassum (foios), considerate
ca expansiuni ale esofagului i abomassum (cheagul), singurul compartiment care conine glande gastrice i la
nivelul cruia ncepe digestia propriu-zis.
Rumenul este populat de o comunitate complex de microorganisme autohtone, format din bacterii
specifice anaerobe, protozoare ciliate, un numar mic de protozoare flagelate, civa fungi anaerobi sau aerobi, aflai
n tranzit, cu activitate nesemnificativ.
Bacteriile din rumen pot fi libere, imobile, mobile sau aderente de celulele mucoasei ruminale prin
intermediul fimbriilor, glicocalixului sau polizaharidelor extracelulare. Cele mai multe colonizeaz masa alimentar.
Din cele cteva sute de specii bacteriene din rumen, numai 17-30 domin numeric i au activitate biochimic
funcional: Bacteroides amylogenes, B. amylophilus, B. ruminicola, B. succinogenes, Butyrivibrio fibrisolvens,
Clostridium lochadii, Lachnospira fibrisolvens, Methanobacterium ruminantium, Ruminococcus albus,
Succinogenes amylolitica etc.
Protozoarele din rumen sunt oligotriche (Diplodinium, Entodinium, Metadinium, Ophryoscolex). Ele
nglobeaz i fermenteaz materialele particulate. Cele holotriche au pe lng activitate celulolitic, i capacitatea de
a utiliza glucidele solubile i de a produce matabolii utilizabili de ctre gazd. Numrul lor este evaluat la 10 5-106
celule/ml.
Ca grup, importana ecologic a protozoarelor deriv din capacitatea lor de a ataca celuloza, hemiceluloza,
pectinele, amidonul, precum i de asimilare rapid a glucidelor solubile.
Protozoarele ciliate utilizeaz glucoza, fructoza, galactoza, zaharoza, rafinoza i inulina i produc acetat i
butirat cnd fermentaia este lent, respectiv lactat cnd fermentatia este rapid. O parte din azotul necesar, l obin
din celulele bacteriene pe care le inger i le diger. Principala sursa de hran a protozoarelor sunt bacteriile.
Protozoarele utilizeaz aminoacizii eliberai prin proteoliza bacteriilor i a alimentelor, dar i de a sintetiza
aminoacizi. Stocheaz polizaharide de rezerv, cu o lungime de 22 resturi de glucoz. Circa 75% din numrul
protozoarelor sunt reinute n rumen unde mor i sunt lizate. Williams (1984) apreciaz c 20% din proteinele
microbiene disponibile pentru gazd provin din protozoare.
Microorganismele din rumen provin din surse exogene (aer, ap, furaje, contactul cu alte animale).
Popularea rumenului are loc progresiv dup natere. Protozoarele apar n cea de a II-a lun dup natere, la viel i
este asociat cu creterea capacitii de digestie. Digestibilitatea atinge parametri normali la vrsta de 12 luni.
La rumegtoare, hrana urmeaz un circuit special: dup fragmentare, prin masticaie i amestec cu saliva,
alimentele trec n rumen, unde microbiota iniiaz procesul de fermentaie. Ulterior, masa alimentar este transferat
n reticulum, este separat n porii mici - ghemuri - care sunt regurgitate n cavitatea bucal pentru re-masticaie i
divizare n fragmente tot mai mici, mrind suprafaa de atac pentru microorganisme. Acestea prin actul deglutiiei
trec direct n reticulum, n omassum, apoi n abomassum, duoden, intestin.
Digestia ruminal a materiilor vegetale este rezultatul unor procese complexe, care implic participarea a
numeroase microorganisme i enzime.
Microorgnismele fibrolitice degradeaz polizaharidele vegetale n diferite grade, n funcie de structura lor
chimic (celuloza 58-80%, amidonul 75%, proteinele 88%, lignina 0%) Din celuloz i hemiceluloze, iniial rezult
celobioza i glucoza, care apoi sufer fermentaia anaerob, cu producere de oligozaharide solubile, utilizabile de
ctre microorganismele ruminale.
La bovine, sub aciunea enzimelor extracelulare, produii finali ai fermentaiei substanelor complexe sunt o
serie de acizi grai volatili cu lan scurt, n principal acetat (40-80% din total), propionat, butirat i cantiti mici de
acizi izobutiric, izovaleric, valeric, caproic i heptanoic. Este eliberat o cantitate mare de gaze (60-80 l/zi la
bovinele mature), care sunt eliminate prin eructaie. Dintre acestea, 60-70% este CO 2, iar restul este CH4.
Acizii grai volatili sunt rapid absorbii n circulaia sanguin i utilizai astfel: acetatul este sursa major de
energie; propionatul este singurul acid gras volatil care poate fi convertit la glucide prin procesul de gluconeogenez.
O vac de 500 kg poate sintetiza zilnic 1 kg de lactoz (corespunztor la 30 l de lapte), pornind de la acizii
grai volatili care trec prin peretele rumenului; butiratul este utilizat pentru sinteza acizilor grai.
Proteinele din furaje, n rumen sunt hidrolizate de microorganisme, la peptide, aminoacizi i NH 3. Cantiti
importante de NH3 trec prin peretele ruminal n snge i sunt convertite n uree la nivelul ficatului. O parte din azotul
care a urmat aceast cale revine n rumen fie direct din circuitul sanguin, fie pe calea salivei, sub forma de uree. O
parte din uree este eliminat prin urina. Ureea reintrat n rumen odat cu saliva este convertit la NH 3 i CO2.
Simultan cu aceste reacii degradative, la nivelul rumenului are loc o sintez de proteine microbiene, de la
peptide, aminoacizi i NH3, care amplific mrimea biomasei de microorganisme. In acelai timp, exist o trecere
continu de proteine alimentare nedigerate, de proteine microbiene i azot neproteic n abomassum i intestin, unde
sunt hidrolizate la aminoacizi, care sunt absorbii. In rumen, proteina alimentar cu valoare nutritiv redus este
convertit la proteina microbian cu valoare mult mai ridicat.
Pornind de la premisa c producerea de CH 4 i eliminarea lui prin eructaie reprezint o pierdere de 10% din
energia disponibil pentru rumegtoare, s-a ncercat utilizarea unor tehnici de diminuare a producerii de CH 4 i de
cretere simultan a eliberrii de acizi grai volatili, care asigur o utilizare mai economic a hranei. Adugarea
antibioticului ionofor monesina n alimentaie crete randamentul formrii de propionat i scade producia de CH 4 n
rumen. Animalele utilizeaz mai eficient hrana, consum mai puin dect martorii, dar cstig n greutate cu aceeai
rat. Probabil, monensina selecioneaz microorganismele care produc mai mult propionat i mai puin H 2. Scderea
concentraiei de H2 are drept consecin diminuarea producerii de CH 4. Bacteriile metanogene i obin energia, prin
oxidarea H2 necesar reducerii CO2 la CH4.
Rolul fiziologic al microbiotei gastrointestinale
Studiile experimentale asupra animalelor axenice au artat c microbiota normal, n special intestinal,
exercit efecte benefice asupra organismului gazd:
- stimuleaz dezvoltarea organelor cu care vine n contact direct
- sintetizeaz vitamine (vitamina K, acidul folic, acidul nicotinic, biotina, riboflavina, piridoxina, tiamina i
acidul pantotenic), necesare metabolismului gazdei;
- stimuleaz mecanismele de aprare ale gazdei;
- favorizeaz meninerea strii generale a gazdei, mpiedicnd implantarea n intestin a unor microorganisme
patogene;
- degradeaz compui chimici alimentari, care nu pot fi hidrolizai de sucurile digestive;
- favorizeaz eliminarea fecal a colesterolului.
Dei microbiota exercit efecte favorabile multiple asupra organismului gazd, ea nu este esenial i nu este
indispensabil pentru viaa acestuia. Datorit evoluiei ndelungate s-a creat o stare de dependen a gazdei de
anumii stimuli, n special bacterieni. La ierbivorele rumegtoare, microbiota este esenial pentru digestie i pentru
existena animalului, datorit absenei celulazelor din sucurile digestive.
Microorganismele gastrointestinale au funcii nutriionale cu importan diferit la rumegtoare i la
mamiferele monogastrice. Studiile au evideniat c la rumegtoare, rolul microorganismelor indigene este esenial,
iar la animalele monogastrice i la om, rolul lor este mai curnd accesoriu.
Fermentaia n intestinul gros. La animalele adulte, n funcie de cantitatea de alimente ingerate i de natura
lor, materialele ce nu pot fi degradate de enzimele acestora n stomac i de intestin sunt reinute temporar n
intestinul gros. Ele includ constituieni fibroi din materialele vegetale (celuloza, hemiceluloze), amidon, pectine,
proteine, acizi nucleici etc. Lor li se adaug macromolecule endogene aparinnd unor clase diferite de polizaharide
ca, de exemplu, mucus gastrointestinal, imunoglobuline, constituieni ai celulelor descuamate etc., precum i unele
glucide cu molecul mic, cum sunt stahioza din fasole, rafinoza din seminele de bumbac etc. La bolnavii cu
deficien genetic de hidroliza a lactozei, aceasta devine disponibil pentru fermentaie n intestinul gros. Nu se tie
n ce msur, n intestinul gros, ajung componente ale crnii ingerate. Hidroliza substanelor complexe i transportul
produilor rezultai, n celulele bacteriene sunt efectuate de sisteme enzimatice inductibile. Sinteza enzimelor
hidrolitice este blocat prin represie sau activitatea lor este inhibat prin feed-back. Fermentaia este asigurat de o
comunitate complex de bacterii care atac hexozele cu producerea acizilor grai volatili (acetic, propionic, n-butiric,
izobutiric, valeric, izovaleric i caproic), CH 4, CO2. O parte din acizii grai rezultai n fermentaie sunt absorbii prin
peretele colonului, trec n snge i sunt matabolizai de organismul gazdei (Savage, 1986).
Unele microorganisme intestinale sintetizeaz n exces fa de nevoile proprii, o serie de vitamine pe care le
elibereaz n lumenul intestinal (acid folic, piridoxina, biotina, acid pantotenic, riboflavina, vitaminele K i B 12. Nu
se tie n ce msur ele sunt preluate efectiv de organismul uman, deoarece sunt produse, n special, de organisme
din cecum i colon. Uneori, efectul este invers, de deficit al vitaminei B 12 pentru om, n urma consumrii ei de ctre
microorganismele intestinale. In plus, bacteriile se lizeaz i elibereaz n sistemul digestiv al mamiferelor, toate
componentele celulare.
Unul dintre produii azotai, care se gsete n intestinul gros, este ureea. Ea ajunge n intestin prin difuzia
din sngele capilarelor. Bacteriile o hidrolizeaz la CO 2 i NH3, ultimul fiind folosit pentru biosinteze.
In cursul fermentaiei se produc cantiti importante de gaze (CO 2, H2, CH4, apreciate la 200 2000 ml/zi
(Mallison, 1987). La circa 33% dintre indivizii umani, produsul major este CH 4. O mare parte din H2 i CH4 sunt
absorbite n snge i sunt eliminate la nivel pulmonar. Producerea simultan de CH 4 i H2 este rar, deoarece H2 este
folosit pentru reducerea CO2 la metan.
Microbiota normal grbete tranzitul digestiv, care este mult mai lent la animale germ-free. Mecanismul
acestei aciuni este necunoscut. Probabil este rezultatul aciunii sinergice a unor constituieni chimici sau fizici din
alimentaie i a produilor finali de metabolism bacterian, asupra proceselor de neurotransmitere la muchii netezi.
Sistemul ecologic microbiot/intestin poate fi perturbat prin: a) administrarea unor substane antibiotice care
distrug microorganismele sensibile i se produc disbioze; b) prin infecii sau alte boli ale sistemului.
Microbiota normal influeneaz rata de turnover a eritrocitelor i a activitii lor enzimatice. Rata nlocuirii
acestor celule este de dou ori mai mare la animalele convenionale de laborator dect la cele axenice.
Microbiota normal are funcia de bariera antiinfecioas. Microorganismele autohtone exercit o funcie de
barier care protejeaz organismele animale de implantarea unor organisme alohtone, ce ptrund cu alimentele sau
cu apa. Aceast funcie este pregnant evideniat de comportamentul diferit al animalelor axenice (germ-free) fa de
cel al animalelor convenionale. Soarecii axenici pot fi infectai per os, cu mare usurin cu inocul mic de Sh.
flexneri sau de S. enteridis (10 celule bacteriene). Ele se multiplic, se stabilizeaz i se pstreaz la densitatea de 110 miliarde celule/g de coninut intestinal. Animalele holoxenice (convenionale) elimin microorganismele
infectante, cu aceiai rat cu care ndeprteaz un marker de control inert (sporii de B. subtilis, termofili, incapabili
s germineze). Doza infectant este de 10 6 celule de S. enteridis. Fenomenul a fost descris sub denumirea de efect
de barier (Ducluzeau, 1970).
Populaiile de microorganisme din sistemul digestiv i gazda lor formeaz un sistem ecologic al crui
echilibru este indispensabil pentru sntatea individului. In acest sistem se realizeaz o serie de interactiuni
complexe, sinergice i antagonice, pe de o parte ntre diferitele populaii de microorganisme, iar pe de alt parte,
ntre ele i gazda lor, care asigur echilibrul sistemului. In strile de disbioz, care apar la om consecutiv terapiei cu
antibiotice cu spectru larg, echilibrul este alterat.
Unele observaii de laborator demonstreaz existena unor efecte negative ale microbiotei normale. Unele
microorganisme indigene pot favoriza ptrunderea unui microorganism patogen n organismul gazda. Entamoeba
histolytica este totdeauna comensal n intestinul gros, la animalele de laborator. Stabilirea ei n organismele-gazd
depinde de microbiota rezident. De aceea, animalele axenice sunt foarte rezistente la infecie. Rarele episoade de
patogenitate la animalele convenionale sunt determinate, dup Mackwiak (1982), de interveneia factorilor de
virulen provenii de la bacteriile intestinale indigene.
Relaia dintre microbiota normal i neoplazie a devenit evident dup ce s-a demonstrat c
microorganismele pot hidroliza substane inofensive cu producere de compui cancerigeni. Prin reducerea nitratului
i aminelor (utilizai ca prezervani) de ctre microorganisme pot rezulta nitrozamine (Walker, 1973). Unele
microorganisme intestinale pot sintetiza nitrozamine in vivo, la pH neutru.
Translocaia bacteriilor din intestin
Translocaia este fenomenul de trecere a bacteriilor din lumenul intestinal n ganglionii mezenterici, urmat
adesea de localizare n diferitele situsuri extraintestinale. Procesul are loc cu precdere la persoanele
imunosupresate, expuse unor mari traumatisme sau intervenii chirurgicale i determin complicaii infecioase
grave, adesea sistemice.
Translocaia se realizeaz, de obicei, practic, exclusiv cu bacterii aerobe i facultative aerobe: E. coli, K.
pneumoniae, Proteus mirabilis, Enterococcus sp., Lactobacillus sp., C. albicans i probabil Staphylococcus sp., dar
i cu bacterii patogene: Salmonella sp., L. monocytogenes.
Prin contrast, n mod normal, bacteriile strict anaerobe nu sunt expuse translocaiei din intestin i produc
rareori complicaii infecioase. Ele pot fi translocate numai n cazurile n care integritatea mucoasei intestinale este
grav compromis (dup iradiere letal, arsuri grave, ischemie mezenteric acut, administrare oral a acidului
ricinoleic etc.).
Bacteriile strict i facultativ aerobe sunt translocate prin epiteliul intestinal histologic inatact. Celulele
epiteliului intestinal - n special cele ileale - ar reprezenta poarta principal de intrare, iar ganglionii limfatici
mezenterici ar fi cei mai sensibili. Wells (1990) consider c enterocitele fagociteaz bacteriile i le elibereaz la
polul bazal, n lamina proprie. De aici pot lua calea limfatic, spre ganglionii limfatici mezenterici, sau ajung la ficat
pe cale vascular.
Bacteriile strict anaerobe nu pot transloca, deoarece se leag greu de enterocite, neavnd situsuri-receptor
pentru celulele epiteliale intestinale. Ele trec numai prin epiteliul lezat. Raportul dintre celulele anaerobe i cele strict
sau facultativ aerobe n intestin oscileaz ntre 100 : 1 i 1000 : 1, ceea ce denot c translocaia nu este dependent
de densitate.
Microorganismele probiotice
Conceptul de probiotic a fost formulat n 1965 (Lilly i Stillwell) pentru a descrie substanele produse de
un protozoar (Tetrahymena pyriformis) care favorizeaz creterea altui protozoar (Stylonychia sp.). Parker (1974),
sub denumirea de probiotic, reunete orice supliment alimentar, care are efect asupra gazdei, prin modificarea
microbiotei intestinale.
Fuller (1989) consider ca probiotic orice organism viu care adugat alimentelor are efect benefic asupra
organismului gazd prin ameliorarea echilibrului microorganismelor din sistemul digestiv.
Preparatele probiotice utilizeaz una sau mai multe tipuri de bacterii (Lactobacillus, Bifidobacterium sp.) i
se adaug n hrana animalelor de cresctorie sau sub diferite forme (granule, pudr, past, capsule).
Caracteristicile unui bun probiotic nsumeaz:
- lipsa de patogenitate i toxicitate
- capacitatea de a supravieui n mediul intestinal
- s exercite efecte benefice asupra organismului gazd
- s fie accesibil din punct de vedere economic

- s fie stabil prin tehnica de conservare.
Modul de aciune al probioticelor este relativ puin cunoscut, dar s-au identificat cteva ci majore:
1)Efectul direct, antagonist prin producerea unor metabolii de tipul acizilor organici, H 2O2 sau a unor substane
macromoleculare cu aciune antimicrobian; competiie pentru nutrieni; blocarea colonizrii bacteriilor patogene
prin competiie pentru situsurile de aderen pe suprafaa epiteliului intestinal;
2) Modificarea metabolismului microbiotei intestinale, prin creterea activitii unor enzime sau diminuarea altora;
3) Stimularea imunitii prin creterea activitii macrofagelor i a concentraiei de sIgA.
Efectele produselor probiotice sunt: a)stimularea creterii n greutate i protecia fa de infeciile intestinale;
b)atenuarea fenomenelor de intoleran la lactoza prin deficiena congenital a -galactozidazei; c)Lactobacillus sp.
exercit un efect anticancerigen prin inhibarea creterii celulelor tumorale i prin inhibarea creterii bacteriilor, care
prin activitatea lor enzimatic elibereaz substane cancerigene din complexe inofensive.
Microbiota normal a tractului urogenital
Tractul urogenital este steril, cu excepia uretrei i a vaginului. Microorganismele pot s migreze ascendent
prin uretr, pn n vezica urinar, dar n mod normal sunt rapid eliminate de anticorpii din secreii, de aciunea
microbicid a celulelor epiteliale ce cptuesc vezica, ca i de fluxul urinar descendent.
Uretra feminin este colonizat de un numr mare de lactobacili, streptococi i stafilococi coagulaznegativi. Bacteriile de origine fecal (E. coli, Enterococcus faecalis, Proteus mirabilis, C. albicans) pot coloniza
tranzitoriu uretra, dar cnd ajung n vezica urinar, prolifereaz i produc infecii ale tractului urinar.
Microbiota vaginal este mai abundent i mai diversificat. Predomin lactobacilii, deoarece se multiplic
n mediul acid. Ali anaerobi vaginali: Bifidobacterium, Peptostreptococcus, Porphyromonas.
Bacterii aerobe: Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium, Mycoplasma, Candida. In mod obinuit,
Trichomonas este prezent n numr mic, dar poate prolifera i produce vaginita.
Gnotobioza i animalele gnotobiotice
Conceptul de animal axenic (germ-free) a fost enunat de Pasteur (1885). El considera ca viaa animalelor
este imposibil n absena microorganismelor. Abordrile experimentale ale lui Thierfelder i Nuttall (1895) au
invalidat concepiile lui Pasteur. Reyniers (1949) a stabilit condiiile tehnice speciale pentru obinerea animalelor
gnotobiotice.
Terminologia utilizat n studiile de gnotobiologie a fost propus de Reyniers (1949) si completat de
Luckey (1965) i Gordon i Pesti (1971).
Gnotobiotic (gr. gnotos cunoscut) este animalul scos prin intervenie cezarian sau ecloziune steril din ou,
crescut i meninut continuu n condiii de izolator, prin tehnici germ-free.
Gnotofor - animal purttor al unei (unor) specii cunoscute de microorganisme inoculate n mod deliberat.
Axenic (steril sau germ-free) - animal lipsit de orice microorganism viabil.
Monognotofor - animal axenic, inoculat cu o singur specie cunoscut de microorganisme.
Dignotofor - animal axenic inoculat cu dou specii de microorganisme cunoscute.
Gnotobiologie - biologia sistemelor n care sunt prezente numai specii cunoscute.
Convenional - animal crescut n condiii obinuite, n mediu deschis, care conine microorganismele
asociate tractului digestiv, pe tegument, etc.
Conventionalizate - animal axenic, trecut ulterior n condiii de via liber.
SPF (Specific pathogen free) - animale puttoare ale unei microbiote convenionale normale, n absena
oricrui agent patogen (microorganism sau virus) cunoscut.
Obinere. Mamiferele sterile se obin prin intervenie chirurgical cezarian, n spaiu steril, urmat de
histerectomie i transferul uterului n camera steril a unui izolator, n care este eliberat nou-nscutul. Oule aflate la
sfritul perioadei de incubare sunt supuse unei bi germicide, iar ecloziunea are loc ntr-un dispozitiv sterilizat.
Sistemul izolator de cretere este alctuit din mai multe compartimente ermetic nchise. Fluxul de aer, hran
i ap sunt sterilizate.
Au fost crescute n condiii axenice, gndaci i melci, rae, gini i prepelie, oareci, obolani, cobai, iepuri,
oi, cini, porci, bovine, maimue i ponei. Ele au fost pstrate n condiii de sterilitate microbiologic mai multe
generaii, cu un comportament aparent normal.
Caracteristicile animalelor germ-free
Animalele axenice sunt, n esen, animale normale, care difer de cele convenionale prin absena
microbiotei asociate.
Din punctul de vedere al ratei de cretere, al capacitii de reproducere i al longevitii, sunt comparabile
celor convenionale sau chiar superioare. Fenomenele de mbatrnire sunt mai lente, sau durata vieii este chiar
prelungit (gini, maimue).
Organele care sunt n contact continuu i intim cu microorganismele sau cu antigene provenite din acestea
(ficatul, intestinul, ganglionii limfatici) sunt mai mici dect la animalele convenionale. In schimb, cecum-ul la
roztoare i gua, oasele i intestinul gros la puii de gin sunt mai mari dect la animalele convenionale.
Cecum-ul la roztoare (oarece, obolan, cobai) este mult mrit la animalele axenice, iar coninutul sau este
de 5 ori mai mare dect la animalele convenionale. Dimensiunile sale revin la normal dup inocularea animalelor cu
E. coli, Proteus vulgaris, Streptococcus faecalis, etc. Microbiota ar avea rolul de asigurare al tonusului peretelui
intestinal.
Ganglionii limfatici, la animalele axenice sunt subdezvoltai, iar numrul limfocitelor este redus.
Concentraia imunoglobulinelor este de numai 15 - 50% din cea normal. Sinteza lor este indus de antigene
bacteriene sau de alta natur, prezente n hrana sterilizat, capabile s induc imunizarea dup administrarea oral.
Pleasants (1973) a obinut animale cu stare imunitar de baz, n absena oricrei stimulri antigenice
(antigen-free), prin hrnire cu o diet hidrosolubil (aminoacizi, glucoz, vitamine, sruri minerale, etc.). La
organismele antigen-free concentraia imunoglobulinelor este nedetectabil prin tehnicile obinuite.
PROPRIETILE MICROORGANISMELOR PATOGENE

Din numrul mare de microorganisme existente n natur, un numr limitat sunt capabile s se dezvolte in
asociaie cu organismele superioare, iar dintre acestea, un numr restrns (cateva sute) sunt patogene.
Bacteriile patogene au doua proprieti definitorii: patogenitatea i virulena. Cei doi termeni au
semnificaie distinct.
Patogenitatea este proprietatea unui microorganism de a determina n condiii naturale sau experimentale,
apariia unui proces infecios, decelabil din punct de vedere clinic, la o gazd receptiv.
In mod obinuit, patogenitatea este asociat, inexact, cu modul de via parazitar a microorganismelor, dar
calitatea de patogen nu se asociaz totdeauna cu parazitismul. Majoritatea bacteriilor patogene sunt parazite, iar in
vitro se dezvolt ca saprobionte pe medii organice, uneori cu compoziie chimic complex. Unele bacterii, dei sunt
strict saprobionte, adic se dezvolt pe materia organic n mediile naturale (de exemplu, Cl. botulinum), dar nu sunt
parazite, produc totui efecte patologice prin intermediul exotoxinelor pe care le secret.
Patogenitatea este un caracter de specie. De exemplu, B. anthracis, C. diphteriae, S. typhi, M. tuberculosis
sunt patogene sau condiionat patogene, adic determin apariia unui proces infecios numai dac sunt inoculate n
doze foarte mari sau dac organismul are o rezisten general sczut. Cel mai ilustrativ exemplu de patogenitate
condiionat este oferit de Ps. aeruginosa, o bacterie saprobiont n mediile naturale: organismul uman mpiedic, n
condiii obinuite, colonizarea pseudomonadelor, dar la persoanele imunocompromise, n rnile provocate de arsuri
sau de traumatisme sau n esutul pulmonar al pacienilor cu fibroz chistic, Ps. aeruginosa totdeauna produce
infecii.
Alte specii nu sunt niciodat patogene, pentru c nu au capacitatea de a stabili interaciuni cu organismele
superioare: Azotobacter, Nitrobacter, Acetobacter etc.
Patogenitatea implic existena a patru proprieti eseniale:
a) capacitatea de a ptrunde i de a se localiza n organismul gazdei;
b) proprietatea de a se multiplica in esuturile acesteia i de a le invada;
c) rezistena la mecanismele de aprare ale gazdei;
d) producerea leziunilor tisulare care se pot exterioriza clinic.
Virulena este capacitatea unei tulpini a unui microorganism patogen aflat ntr-o anumit faz de cretere, de
a se localiza (a coloniza), de a se multiplica i eventual de a invada celulele i esuturile gazdei i/sau de a produce
toxine, determinnd o stare patologic la o gazd receptiv.
Virulena este o proprietate biologic corelat cu anumite caractere de structur (prezena flagelilor,
fimbriilor), cu prezena unor proteine membranare sau cu unele particulariti fiziologice i de sintez (ca de
exemplu sinteza exotoxinelor sau a exoenzimelor).
Virulena exprim cantitativ gradul de patogenitate a unei tulpini pentru o anumit gazd i este o
proprietate multifactorial:
- infeciozitatea (sau capacitatea de colonizare)
- agresivitatea (sau invazivitatea)
- toxigenitatea.
a) Infeciozitatea reprezint capacitatea unui microorganism de a depi mijloacele de aprare a organismului, de a
se implanta i de a coloniza esuturile sntoase, adic de a stabili o localizare i de a forma un focar primar de
infecie.
Colonizarea esutului de ctre un microorganism patogen este o faz iniial critic pentru evoluia
procesului patologic i este un fenomen complex, care implic att implantarea ct i utilizarea substanelor nutritive
disponibile n mediul gazdei.
Bacteriile produc o larg varietate de factori, care uureaz capacitatea lor de a invada gazda, de a se
rspndi n esuturi i de a supravieui mecanismelor de aprare ale gazdei. Moleculele au fost grupate n 4 clase:
adezine, invazine, agresine i impedine.
Adezinele sunt proteine bacteriene care mediaz interaciunea celulei bacteriene cu o varietate de celule ale
gazdei, n special epitelii, ca o prim treapt de colonizare a gazdei. Invazinele sunt proteine bacteriene care permit
celulei s intre n celula eucariot. Agresinele sunt molecule, de exemplu toxine i proteaze, care produc leziuni ale
gazdei ori favorizeaz rspndirea infeciei. Impedinele sunt componente bacteriene care inhib aciunea
mecanismelor de aprare, fr s produc leziuni.
Prima etap a colonizrii unui esut este aderena celulelor bacteriene de celulele gazdei
Legarea bacteriilor patogene de celulele sensibile este etapa iniial a procesului infecios. Aderena
mpiedic ndeprtarea bacteriilor prin fluxul secreiilor, prin tuse, prin motilitatea cililor sau prin peristaltism.
Aderena este mediat de structuri specializate ale suprafeei bacteriene, cunoscute sub denumirea generic
de adezine.
Structurile bacteriene de aderen, anatomice sau moleculare sunt, de cele mai multe ori, adaptative. Ele
dispar prin cultivarea succesiv in vitro. De aceea, tulpinile bacteriene de laborator sunt mai puin aderente de suport,
comparativ cu izolatele bacteriene recente.
Aderenta asigura colonizarea anumitor situsuri din organism, multiplicarea bacteriilor, sinteza toxinelor i
desfurarea reaciei inflamatorii de aprare.
Bacteriile ader n special de epiteliile mucoaselor, dar i de epiteliile keratinizate, de endotelii, de esutul
osos, de smalul dentar etc. Aderena implic interaciunea situsurilor complementare de pe suprafaa celor dou
tipuri de celule: epitelial i bacterian.
Aderena este condiionat de complementaritatea sarcinilor electrice ale celor dou suprafee. Cele mai
multe bacterii au o sarcin net negativ a suprafeei lor, dar au i zone limitate electropozitive, precum si molecule
cu caracter hidrofob.
Aderena reprezint un avantaj ecologic major pentru bacteriile patogene, cu privire la asigurarea
nutrienilor, protecia fa de anticorpi i lizozim etc. Multiplicarea lor, dup aderen, are loc cu o rat net superioar
fa de a celulelor neaderente.
Mecanismele aderenei bacteriene in vivo au fost studiate n special pentru bacteriile generatoare de carii
dentare. Aderena celulelor bacteriene patogene, de celulele sensibile implic participarea a doi factori: o adezin
localizat pe suprafaa bacteriei i un receptor de pe suprafaa celulei gazd.
Adezinele bacteriene se mpart n dou mari categorii: a)adezine de natur proteic; b) adezine neproteice.
Grupul adezinelor proteice cuprinde fimbriile. Acestea sunt structuri filamentoase, neflagelare ale suprafeei
celulare i sunt diferite de pilii participani la conjugare. Fimbriile fac parte din categoria lectinelor i se gsesc
numai la bacteriile Gram negative. Ele se leag de receptori specifci ai membranei celulare. Fimbriile care aparin
aceluiai tip sunt formate din molecule proteice identice. Diferitele variante fimbriale se deosebesc prin lungimea
filamentului si prin gr. mol. a monomerilor polipeptidici constitutivi.
In aceiai categorie sunt incluse o categorie de proteine din structura membranei externe a bacteriilor Gram
negative, care ndeplinesc funcia de adezine.
Grupul adezinelor neproteice. Cele mai comune adezine neproteice sunt polizaharidele care intr n
structura unei reele de tip glicocalix, de tip capsular sau a unei structuri neorganizate de tipul stratului mucos. Ele
sunt prezente la bacteriile Gram pozitive i Gram negative.
Exopolizaharidele formeaz structuri capsulare la multe bacterii patogene i au consisten de geluri
hidratate. Ca factori de virulen, exopolizaharidele au dou roluri majore:
a) aderena de substratul tisular. Dupa Gristina si colab. (l985), att suprafaa celulei bacteriene ct i a
substratului tisular sunt polianionice. Sarcinile electrice asemntoare determin respingerea celulei bacteriene de
ctre substratul tisular. Forele de respingere sunt contracarate de forele de atracie London-van der Waals. Ele
permit realizarea unor interaciuni hidrofobe ntre moleculele suprafeei bacteriene i ale celulei gazd.
Exopolizaharidele bacteriene intensific interaciunile dintre liganzii bacterieni i tisulari. Astfel, esutul este acoperit
de un biofilm, n care agregatul de celule bacteriene, nconjurat de o matrice molecular ader strns de substrat.
b) Protecia celulei bacteriene fa de sistemele de aprare a gazdei. Capsula mpiedic fagocitarea pentru c
bacteriile capsulate formeaz microcolonii i nglobarea lor de ctre fagocite devine dificil. Cu ct suprafaa celulei
bacteriene este mai hidrofil, cu att este mai greu fagocitat. Pe de alt parte, complementul i anticorpii nu au
acces la suprafaa celulei. Unele specii bacteriene produc o capsul, a crei compoziie chimic este asemntoare
componentelor tisulare. O astfel de capsul camufleaz celula bacterian fa de sistemul imunitar. De exemplu,
capsula de la Str. pyogenes si Pasteurella multocida conin acid hialuronic.
Matricea molecular polizaharidic, cu structur fibroas favorizeaz creterea celulelor i stabilitatea
biofilmului. Stabilitatea biofilmului asigur formarea continu de microcolonii, persistena i extinderea infeciei
cronice. Din structura sa scap periodic celule bacteriene care trec n s@nge sau n lichidele tisulare adiacente,
favoriznd extinderea infeciei.
Alte adezine sunt acizii lipoteichoici, caracteristici bacteriilor Gram pozitive, ancorai de glicolipidele
membranare. Sunt structuri moleculare filamentoase, foarte asemntoare fimbriilor, cu rol de aderen la substrat.
La Str. pyogenes, acizii lipoteichoici au efect sinergic cu proteina M.
Adezinele neproteice sunt mai puin eficiente n medierea proceselor de aderen bacterian, comparativ cu
adezinele proteice. Polizaharidele capsulare, n anumite cazuri favorizeaz aderena, iar alteori au efect invers (de
exemplu, polizaharidele mpiedic aderena celulelor de H. influenzae, N. meningitidis sau P. multocida tip A).
Receptori de adezine. Interaciunea dintre celula epitelial sensibil i adezinele bacteriene este mediat de
receptorii de adezine i se bazeaz pe principiul complementaritii spaiale. Uneori, interaciunea este nespecific,
ceea ce explic faptul c unele specii bacteriene (Salmonella, Yersinia) infecteaz att celulele intestinale umane, ct
i liniile celulare de Drosophyla. Alteori, interaciunea are un grad nalt de specificitate. De exemplu, Str. pyogenes
se localizeaz la nivelul epiteliului faringian i foarte rar n tractul urinar, iar E. coli colonizeaz epiteliul intestinal i
al cilor urinare, dar foarte rar pe cel respirator.
Helicobacter pylori, un patogen specific uman, ader de celulele epiteliale ale mucoasei gastrice, dar nu de celulele profunde
ale mucoasei sau ale colonului. Pe celulele epiteliului, H. pylori recunoate antigenul de grup sanguin Lewis, dar probabil i alte
molecule, deoarece H. pylori infecteaz i indivizi negativi pentru acest antigen. Un factor esenial pentru colonizare este
ureaza, pe care H. pylori o produce in cantiti foarte mari. In vitro, celulele de H. pylori hidrolizeaz ureea, elibernd amoniul
care neutralizeaz aciditatea i permite colonizarea iniial. Amoniul generat prin hidroliza ureii produce NH 4OH care se
disociaz i ionul OH- produce leziuni ale mucoasei.
Receptorii de adezine ai celulelor epiteliale sunt molecule din familia integrinelor, care ndeplinesc funcii
fiziologice importante: leag proteine plasmatice, dar i proteine din matricea extracelular (fibronectine, fibrinogen,
laminina, colagenul de tip I etc.).
Receptorii de adezine sunt molecule ale suprafeei celulei sau se gsesc la nivelul mucopolizaharidelor care
tapeteaz totdeauna epiteliile mucoase.
Din punct de vedere chimic, receptorii de adezine sunt glicoconjugate: glicoproteine ale membranei celulare
sau ale stratului mucopolizaharidic i glicolipide din structura membranei.
Glicoproteinele i glicolipidele proemin la suprafaa membranei celulare i expun la exterior catene
oligozaharidice mai mult sau mai puin complexe, cu rol de receptori de adezine.
Glicoproteinele din stratul mucopolizaharidic sunt formate din catene polipeptidice legate prin puni S-S.
Catena oligozaharidic este format din N-acetil-galactozamin, N-acetil-glucozamin, fucoz, galactoz i acid
sialic. Glicoproteinele din mucus se gsesc i n secreii (salivar, digestive).
Glicoproteinele membranare se deosebesc de cele din mucus: N-acetil-galactozamina lipsete, locul ei fiind
luat de manoz i de acizii uronici. Catenele glicoproteice ale mucopolizaharidelor i ale suprafeei celulare sunt
asemntoare cu cele ce se gsesc pe suprafaa eritrocitelor i formeaz antigenele de grup sanguin. Aa se explic
proprietile hemaglutinante pe care le posed anumite adezine bacteriene, dac receptorul lor celular se gsete pe
hematii.
Glicoconjugatele pot avea rol de receptori pentru toxine. De exemplu, glicolipidul GM 1, prin componenta sa
oligozaharidic este receptor specific al toxinei holerice.
Detectarea localizrii receptorilor glicoproteici i glicolipidici pe suprafaa celulei este posibil prin
utilizarea lectinelor. Lectinele sunt glicoproteine ce se combin specific cu un rest oligozaharidic. Lectinele cuplate
cu un derivat fluorescent sunt utilizate pentru a studia repartiia receptorilor suprafeei celulare.
Modularea expresiei proprietilor de aderen se poate face, teoretic, pe mai multe ci:
- prin blocarea receptorilor celulari cu analogi structurali ai adezinei bacteriene. De exemplu, aderena
streptococilor poate fi inhibat in vitro, dac la mediul de reacie se adaug acid lipoteichoic, analogul structural
al adezinelor acestor bacterii;
- prin utilizarea analogilor structurali ai receptorilor celulari. D-manoza, adaugat n mediul de reacie inhib
aderena S. typhimurium i Sh. flexneri de eritrocitele de cobai. Bacteriile poart fimbrii de tip I, ai cror
receptori celulari sunt glicoproteine cu manoz;
- blocarea parial sau total a adezinei cu anticorpi specifici este considerat ca o modalitate eficient de
protecie. Astfel, starea imunitar postvaccinal sau consecutiv unei infecii, asigur o protecie bun fa de o
infecie ulterioar cu acelai agent sau cu ali ageni care au adezine comune;
- utilizarea antibioticelor la doze subinhibitorii este o modalitate de a modifica expresia adezinelor. Dozele
subinhibitorii blocheaz parial sau total, biosinteza unor constituieni ai suprafeei celulare, antrennd i
modificri ale anumitor proprieti, inclusiv a celor de aderen.
Receptorii celulari de adezine se modific, att cantitativ ct si calitativ.
Modificrile receptorilor celulei gazd pot favoriza aderena i invazia tisular. Un exemplu este infecia
sever produs de Str. pneumoniae, care determin infecii clinice(pneumonie, otit medie, septicemie).
Sensibilitatea la infecie crete foarte mult consecutiv unei infecii virale a tractului respirator. Citochinele gazdei
activeaz receptorul pentru PAF(platelet activating factor), pe suprafaa celulelor epiteliului pulmonar. Pneumococii
ambelor tipuri de colonii(transparente i opace) ader de suprafaa celulei pulmonare, dar cei ce produc colonii
transparente invadeaz circulaia sistemic prin capilarele pulmonare ori prin vasele limfatice. Aa se explic
predispoziia pacienilor infectai cu virus, la complicaiile consecutive pneumoniei pneumococice(meningit,
septicemie).
Interacia unui patogen cu celula gazd nu este mediat totdeauna de receptori celulari. Adeseori, bacteriile
patogene activeaz cile de semnalizare ale celulei, direct prin componentele celulare sau prin intermediul
citochinelor inflamatorii.
Sideroforii ca factori de virulen
Sideroforii sunt molecule mici, difuzibile, secretate de multe microorganisme, care au n structura lor,
grupri caracteristice de tipul catechol, fenolat sau hidroxamat. Structura molecular caracteristic, definit
funcional ca o cuc molecular, are rolul de a lega Fe3+ (feric).
La bacteriile Gram pozitive, complexele Fe-siderofor sunt recunoscute selectiv de receptori membranari i
transportate n celul cu consumul ATP. {n celul, complexul Fe-siderofor se disociaz prin hidroliza sideroforului
i/reducerea ionului feric la Fe2+(feros), care este depozitat n bacterioferitin, utilizat ca un cofactor n cteva
procese celulare vitale. Fe este legat n centrul sideroforilor cu o afinitate echivalent celei de legare cu transferina.
Sideroforii pot prelua ionii de Fe chiar din compui minerali, ca hematita.
Multiplicarea bacteriilor n esuturile gazdei este limitat de mecanismele de aprare ale gazdei i este
condiionat de prezena obligatorie a Fe 2+ (forma accesibil metabolismului). Fe este necesar desfurrii unor
variate reacii enzimatice, eseniale pentru cretere, fiind un cofactor de sine stttor sau parte a unui grup prostetic,
n special de tip hem. Fe este un component esenial al catenei de transport al electronilor n membrana celular.
In mediile naturale, ca i n organismul uman i animal, Fe se gsete n cantiti suficient de mari pentru a
asigura creterea microorganismelor, dar este n forme inaccesibile. Astfel, concentraia normal a Fe n plasma
mamiferelor (mai mic de l0 M) este satisfctoare pentru creterea i multiplicarea bacteriilor, dar numeroi
factori l fac inaccesibil microorganismelor. Practic, Fe disponibil lipsete. Un deficit parial al Fe are efect
bacteriostatic, iar deficitul major are efecte letale, prin inhibiia sintezei proteinelor. Fe anorganic este insolubil in
aerobioz la pH fiziologic.
In mediile naturale, Fe este legat de ageni chelatori (compui chimici n care un ion metalic multivalent este
captat, sechestrat i legat n structura ciclic a agentului chelator). In organismul uman i animal, Fe este legat n
complexe organice cu proteinele (feritina, hemosiderina, gruparea hem din hemoglobin, sau din mioglobin), cu
glicoproteine extracelulare (lactoferina din lapte, saliva, lacrimi), precum i cu transferina din snge i limf. Toate
aceste molecule au o mare afinitate de asociere cu Fe i n mod normal sunt parial saturate. Capacitatea de legare a
transferinei, proteina major de transport a Fe n plasma sanguin, este ocupat n proporie de 30%. In ser,
hemoglobina (Hbg) este complexat cu alte proteine ca haptoglobina, iar cantiti mici de hem pot fi legate de
albumin sau de hemopexin. Fierul intracelular poate fi asociat cu Hbg, transferina sau cu lactoferina sau este
depozitat sub forma feritinei.
Proteinele de legare reduc concentraia Fe 3+ liber n organism, la valori foarte sczute. Nivelul Fe
biodisponibil este estimat la 10-18 M, de cteva ori mai mic dect nivelul creterii normale. Dup administrarea
parenteral a Fe la cobai, sensibilitatea la infecia cu K pneumoniae a crescut dramatic, ceea ce demonstreaz rolul
aprovizionrii cu Fe asupra patogenezei bacteriilor. De aceea, serul sanguin uman este bacteriostatic.
Din aceste cauze, bacteriile i-au elaborat mecanisme adaptative prin care mobilizeaz Fe i l
disponibilizeaz pentru activitile celulei. Bacteriile cu localizare intracelular dobndesc Fe din rezerva celulei. L.
monocytogenes produce un reductor al Fe 3+ la Fe2+ i astfel Fe este eliberat din glicoproteinele chelatoare
intracelulare.
Fe intracelular poate fi obinut prin liza celulei gazd, mediat de citolizine sau hemolizine. Se elibereaz Fe,
hemul sau Hbg. Unele bacterii folosesc Fe din celulele care degenereaz la suprafaa epiteliilor mucoase. Neisseria
i Prevotella (Bacteroides) elimin proteaze specifice care degradeaz transferina i elibereaz Fe.
Cel mai rspndit mecanism prin care bacteriile i obin Fe n organismul gazd, este sinteza agenilor
chelatori care intr n competiie cu mecanismele gazdei care sechestreaz Fe. Denumirea general a agenilor
chelatori bacterieni este cea de siderofori.
In condiiile deficitului de Fe, enterobacteriile sintetizeaz o varietate de siderofori. Grupul cel mai comun
este de tip fenolat, cel mai cunoscut reprezentant fiind enterobactina (enterochelina). La E. coli, n condiiile de
restricie a Fe, translocaia Fe3+ n celula i conversia sa n forma utilizabil (Fe 2+) se face prin dou mecanisme:
l) Sinteza i secreia sideroforilor. Sideroforii sunt ageni chelatori de mare afinitate ai Fe, cu gr. mol. mic (600 D),
capabili s preia competitiv Fe legat de proteinele gazdei. Complexul Fe 3+ - siderofor este recunoscut de un receptor
situat n membrana extern i nu poate trece prin canalele membranei celulei bacteriene datorit dimensiunilor sale.
Transferul membranar al Fe3+ mediat de receptor, este asociat cu reducerea lui la forma feroas (Fe 2+), iar sideroforul
rmne la nivelul receptorului.
Sideroforii se gsesc nu numai la bacteriile patogene, ci constituie mecanisme eficiente de preluare a Fe in tot
regnul procariotelor. In funcie de specie, ei sunt factori cu diferite grade de virulen.
2) Un alt mecanism de preluare a Fe este propriu unor bacterii patogene care colonizeaz mucoasele ( Neisseria,
Bordetella). Ele nu secret siderofori, dar preiau Fe pe o cale direct, prin contactul selectiv ntre componentele
membranei externe, cu proteinele care leag Fe (transferina, lactoferina sau chiar hemoglobina). Neisseria sp. si H.
influenzae utilizeaz ca surse de Fe numai transferina i lactoferina uman, ceea ce ar explica specificitatea lor
pentru gazdele primate.
Fe are nu numai un rol fiziologic deosebit, dar multe bacterii l utilizeaz pentru activarea unor factori de
virulen: toxine, adezine, invazine.
b) Agresivitatea (Invazivitatea)
Puterea de invazie (agresivitatea sau invazivitatea) reprezint capacitatea agenilor patogeni de a depi prin
mecanisme specifice, barierele epiteliale, de a ptrunde n esuturile gazdei i de a se multiplica, producnd efecte
patologice. Microorganismele invazive au capacitatea de a ptrunde prin mijloace proprii n esuturile gazdei sau de
a stimula funcia endocitar a substratului i de a-i pstra viabilitatea n mediul gazdei.
Invazia este modalitatea prin care microorganismele infecioase sparg barierele epiteliale ale gazdei. Multe
bacterii patogene au capacitatea de a supravieui n interiorul celulei eucariote. Ele ptrund n celule care, n mod
obinuit nu sunt fagocitare(celulele mucoase, celulele endoteliale ale vaselor sanguine). Mediul intracelular ofer
protecie microorganismului, care ori se replic ori persist.
In general, organismele invazive ader de celula gazd, prin intermediul unei clase de molecule de adezine,
denumite invazine, care orienteaz intrarea bacteriei n celul. Mecanismele de aderen declaneaz sau stimuleaz
semnalele celulare, care direct sau indirect uureaz intrarea bacteriei. Invazia este un eveniment activ, susinut de
funciile normale ale celulei. Suportul procesului de invazie i nglobare este citoscheletul celulei gazd.
Un numr mic de specii bacteriene par s foreze intrarea direct n celula gazd, printr-o digestie enzimatic
local a membranei celulei gazd, dup aderen. De exemplu, R. prowazecki secret fosfolipaze care produc
degradarea localizat i controlat a membranei celulei gazd. Prin leziunile membranare, agentul patogen intr
direct n citoplasm.
In categoria invazinelor intr o categorie de proteine asociate suprafeei celulare, dar i apendicele celulare
evideniate la microscopul electronic (fimbrii i flageli) sau cele care constituie un strat fin, nalt organizat, pe
suprafaa celulei. Invazinele uureaz rspndirea bacteriilor n organism, dup fixarea i multiplicarea lor la poarta
de intrare.
Flagelii ca organite de motilitate sunt n acelai timp invazine, deoarece confer un avantaj evident
celulelor bacteriene care trebuie s traverseze stratul vscos de mucus, pentru a ajunge la celulele epiteliale ale
tractului digestiv sau respirator.
Fimbriile, la bacteriile patogene, au rol de adezine bacteriene, dar n aceiai msur ele constituie i un
factor de agresivitate, deoarece confer un grad de protecie a celulei fa de factorii de aprare a gazdei.
Unele invazine produc efect necrotic sau determin alte modificri care favorizeaz colonizarea tisular
progresiv. De exemplu, unele bacterii produc hialuronidaza i alte enzime care hidrolizeaz polimerii din substana
fundamental a esutului conjunctiv, favorizand astfel intrarea bacteriilor n vasele sanguine i limfatice.
Enterobacteriile au mecanisme proprii de invazie. Agenii patogeni enterici strpung bariera mucoasei
intestinului subtire, prin motilitate flagelar, la nivelul unor celule epiteliale specializate, denumite celule M
(Microfold) care acoper plcile Peyer.
c) Toxigenitatea
Toxigenitatea (toxigeneza) reprezint capacitatea unui agent patogen de a elabora n cursul creterii sale, una
sau mai multe substane toxice. Toxigeneza este o proprietate esenial a patogenitii bacteriene.
Sub denumirea de toxin sunt cuprinse toate substanele toxice de provenien biologic (sintetizate de
bacterii, fungi, celule vegetale sau animale). Termenul de toxin deriv din cuvntul grecesc toxicon, care
nseamn otrav.
Se cunosc circa 140 de toxine proteice, din care 2/3 sunt produse de bacteriile Gram pozitive. Unele specii
bacteriene produc ntre 5 i l0 tipuri de toxine.
Capacitatea de a elabora toxine nu este limitat la bacteriile patogene propriu-zise. Numeroase saprobacterii
produc substane toxice, uneori foarte puternice (de exemplu, toxina botulinic produs de Cl. botulinum).
Toxigenitatea bacterian variaz n cadrul aceleiai specii i este dependent de condiiile de mediu.
Bacteriile patogene sintetizeaz o varietate de substane care, direct sau indirect, sunt toxice pentru celulele
i esuturile gazdei. Unele sunt secretate de celulele bacteriene n cantiti foarte mici, fiind proteine cu aciune
predominant enzimatic i poart denumirea generic de exotoxine. Altele, de natur lipopolizaharidic (LPS), care
nu au aciune enzimatic i sunt biologic active la concentraii mult mai mari, aparin endotoxinelor. Se cunosc circa
140 de toxine proteice, din care 2/3 sunt produse de bacteriile Gram pozitive. Unele specii bacteriene produc ntre 5
i l0 tipuri de toxine.
Capacitatea de a elabora toxine nu este limitat la bacteriile patogene propriu-zise. Numeroase saprobacterii
produc substane toxice, uneori foarte puternice (de exemplu, toxina botulinic produs de Cl. botulinum).
Toxigenitatea bacterian variaz n cadrul aceleiai specii i este dependent de condiiile de mediu.
Clasificarea toxinelor bacteriene
Pentru a-i exercita efectul, toxinele trebuie s se elibereze din celule i s se solubilizeze n umorile
organismului. Dup sintez, toxinele pot rmne asociate permanent sau temporar cu celula sau sunt eliminate la
exterior. Aceste diferene sunt dependente, n primul rnd de specia productoare, precum i de fazele succesive ale
evoluiei unei populaii bacteriene: faza exponenial, staionar sau de declin. Chiar toxinele care n faza
exponenial a culturii bacteriene sunt asociate celulei, n faza de declin se gsesc libere n mediul extracelular
datorit lizei celulelor. Din aceast cauz, studiul raportului topologic ntre celul i toxin are semnificaie numai
pentru faza de evoluie a culturii bacteriene. Din acest punct de vedere se disting urmtoarele categorii de toxine:
a) Toxine localizate n celul (citoplasmatice) produse de bacterii Gram negative (Sh. dysenteriae, Y. pestis, B.
pertusis, E. coli etc.) i Gram pozitive (enterotoxina produs de Cl. perfringens, streptolizina S, pneumolizina
produs de S. pneumoniae, o toxin sintetizat de Cl. difficile). Toate sunt de natur proteic. Sunt localizate n
citoplasm sau sunt asociate membranei citoplasmatice i pot fi eliberate dup ndeprtarea peretelui prin liz
mecanic sau prin extracie chimic.
b) Toxinele constitutive ale peretelui celular, produse numai de bacteriile Gram negative i care corespund
endotoxinelor clasice. Sunt situate n afara membranei citoplasmatice i fac parte din structura membranei externe a
peretelui celular. Din punct de vedere chimic, endotoxinele sunt complexe glicolipidice sau glicolipoproteice. Ele nu
sunt niciodat eliberate n cursul fazei de cretere exponenial, ci numai prin dezagregarea peretelui celular.
c) Toxinele eliminate n mediul extern sau exotoxinele propriu-zise sunt de natur proteic i sunt produse mai
frecvent de bacteriile Gram pozitive (toxina difteric, toxinele stafilococice, toxina de B. anthracis etc.), dar i de
cele Gram negative (V. cholerae, Ps. aeruginosa). Exotoxinele ndeplinesc n mod obligatoriu, 3 condiii:
- se gsesc n mediul de cretere, independente de celula care le-a produs;
- eliberarea lor n mediul extracelular nu necesit autoliza celulei care le secret. Celula rmne viabil, continu s
creasc i s se multiplice;
- nu se acumuleaz n celul.
Aceste criterii se aplic celulelor n faza de cretere exponenial i staionar, deoarece n faza de declin,
celulele pot prezenta fenomene de autoliz, independente de sinteza toxinei.
d) Toxinele cu localizare mixt (endocelular i exocelular), n funcie de faza de evoluie a culturii bacteriene. In
faza exponenial, toxinele sunt secretate parial n mediu, dar o fracie semnificativ rmne n interiorul celulei i
este eliberat prin autoliz (toxinele tetanic, botulinic).
Mult timp s-a considerat c exotoxinele sunt de natur proteic, iar endotoxinele de natur
lipopolizaharidic. Aceast difereniere nu este net, deoarece unele toxine proteice aparin categoriei endotoxinelor,
fiindc rmn asociate celulei productoare i invers, uneori, toxinele de natur lipopolizaharidic sunt eliminate la
exterior ca exotoxine. De aceea, clasificarea toxinelor trebuie s se fac dup criteriul compoziiei chimice. Din acest
punct de vedere, majoritatea sunt de natur proteic, iar majoritatea endotoxinelor sunt de natur lipopolizaharidic.
Raynaud i Alouf (1970) au clasificat toxinele n raport cu compoziia chimic i cu localizarea celular.
Grupa I cuprinde toxinele proteice intracitoplasmatice ale bacteriilor Gram negative, eliberate dup ruperea
mecanic, enzimatic, prin autoliza nveliurilor sau prin extracie chimic. Sunt sintetizate de B. pertussis, Sh
dysenteriae (neurotoxina), Y. pestis.
Grupa a II-a cuprinde toxinele lipopolizaharidice sau glico-lipo-peptidice (endotoxine), componente
structurale ale peretelui celular Gram negativ. Cele mai tipice endotoxine se gsesc la enterobacterii.
Grupa a III-a cuprinde exotoxinele proteice propriu-zise, produse de V. cholerae, Cl. tetani, C. diphteriae.
Grupa a IV-a cuprinde toxinele proteice cu localizare intra- i extracelular, n cursul fazei logaritmice de
cretere: toxinele produse de Cl. tetani, Cl. botulinum, Cl. oedematiens, Cl. sordelii.
Din punctul de vedere exclusiv al compoziiei chimice, se disting:
1) Toxine proteice, reprezentate de exotoxinele produse de bacteriile Gram pozitive i de toxinele proteice
intracelulare ale unor bacterii Gram negative: B. pertussis, Y. pestis, Sh. dysenteriae (neurotoxina).
2) Toxinele glico-lipo-polipeptidice, corespunztoare endotoxinelor.
In raport cu tropismul lor se disting neurotoxine, enterotoxine, cardiotoxine, cu efecte limitate la esutul respectiv
sau toxine pantrope, cu efecte asupra multor categorii de esuturi.
Toxicitatea exotoxinelor
Unele toxine au efect toxic foarte puternic. De exemplu, toxina botulinic de tip D este de 3 milioane de ori
mai puternic dect stricnina, luat ca etalon, iar toxinele tetanic, neurotoxina de Sh. dysenteriae i cea botulinic
de tip A sau B, de un milion de ori.
Efectul toxic este variabil nu numai n funcie de specia bacterian productoare, ci i de tulpin, chiar n
condiiile unui mediu optim. Adeseori, toxigeneza se atenueaz sau chiar dispare, n subculturi repetate.
Efectul toxinelor este variabil n funcie de natura, vrsta, greutatea, sexul, linia genetic a animalelor pe
care sunt testate, ca i de calea de administrare a toxinei.
Toxicitatea diferitelor probe ale aceleiai toxine poate prezenta variaii foarte importante: de exemplu, unele
probe de toxin botulinic sunt de 6000 de ori mai toxice pentru cobai dect pentru oarece, iar altele numai de 3 ori.
Exotoxinele au, uneori, un rol determinant n patogeneza unor ageni infecioi, datorit potenialului lor
toxic foarte nalt. De exemplu, toxinele purificate reproduc n general, manifestrile clinice ale infeciei cu V.
cholerae, C. tetani sau C. diphteriae. Dar la majoritatea agenilor patogeni, exotoxinele acioneaz sinergic cu alte
componente celulare pentru a produce efectele poteniale asupra gazdei. Sinteza i secreia toxinelor este reglat de
ali factori de virulen. De exemplu, capacitatea de aderen creeaz un contact strns ntre agentul patogen i celula
sensibil, ceea ce permite transferul toxinei i exprimarea ntregului potenial toxic. Dei toxina holeric poate
reproduce multe din simptomele procesului infecios, pentru exprimarea integral a virulenei bacteriene este
necesar adezina care leag celula bacterian de celula mucoasei intestinale. Alteori, toxina are alte funcii
suplimentare celei de toxicitate, care amplific virulena: toxina de B. pertusis are i rolul de protein de aderen a
bacteriei, de celulele mamaliene.
Receptori celulari pentru toxine
Interaciunea toxinelor cu celulele sensibile, asemenea altor biomolecule (hormoni, antigene, lectine, fatori
reglatori etc.) este mediat de molecule specifice denumite receptori, situate n stratul extern al membranei
citoplasmatice. Celulele sensibile nu au receptori specifici pentru toxine. Toxinele mprumut receptorii, care n mod
obinuit au rolul de a ngloba molecule utile metabolismului celular.
Se cunosc receptorii prin intermediul crora, cteva toxine interacioneaz cu suprafaa celulei. De exemplu,
receptorul celular pentru streptolizina O (SLO), pentru listeriolizin (LLO) i pentru pneumolizin (PLO) este
colesterolul. Aceste toxine se fixeaz pe suprafaa celulei prin intermediul colesterolului membranar i nu depind de
ali receptori de suprafa. De aceea, ele pot s lizeze membranele, teoretic, ale oricrei celule animale.
Toate toxinele acestui grup sunt alctuite dintr-o singur caten polipeptidic, a crei lungime variaz de la
471 aminoacizi (pentru pneumolizin) pn la 571 pentru streptolizina O. Variaia lungimii se datoreaz n ntregime
secvenelor localizate la captul N-terminal, a cror funcie rmne necunoscut. Cea mai lung secven, cu
omologie aproape perfect la toxinele grupului este de 11 aminoacizi i este bogat n triptofan.
Secvena comun pentru toate acete molecule i esenial pentru activitatea citolitic corespunde celei mai
mici secvene - a pneumolizinei. Pneumolizina se deosebete de celelalte toxine ale grupului, prin absena peptidului
semnal secretor i din aceast cauz este eliberat numai prin liza celulelor de Streptococcus pneumoniae.
Aceste toxine nu se leag de membranele care nu conin colesterol sau un compus nrudit cu colesterolul.
Interaciunea cu colesterolul se produce n absena altor lipide. Toxinele interacioneaz chiar cu sterolul pur n
soluie sau n suspensie i rezultatul este inhibiia activitii litice.
Alte cteva toxine au ca receptori moleculele de gangliozide. Acestea sunt glicolipide, mai abundente n
neuroni, alctuite dintr-o component oligozaharidic legat de un ceramid (acid stearic i sfingozin). Gangliozidele
difer ntre ele, prin numrul i secvena resturilor glucidice componente, n special a acidului N-acetil neuraminic
(NANA) sau de acid sialic.
Toxina tetanic se leag de gangliozide, n special de di- i tri-sialogangliozide, care conin dou i respectiv
trei resturi de acid sialic, ataate de galactoza. Intre toxina tetanic i hormonul tirostimulator (TSH) exist o
competiie de legare strict reciproc, pe membrana celulelor tiroidiene. Astfel s-a dedus c receptorul neuronal
pentru toxina tetanic este asemntor cu receptorul celulei tiroidiene pentru TSH.
Receptorul celular pentru toxina holeric, ca i pentru toxina termolabil de E. coli, foarte asemntoare
toxinei holerice este gangliozidul GM 1. S-a evideniat o corelaie direct ntre coninutul membranar n GM 1 i
sensibilitatea tisular la toxin.
Receptorul celular al toxinei de B. pertussis pare a fi tot o gangliozid care conine acid sialic, iar receptorul
toxinei difterice ar fi o glicoprotein.
In raport cu localizarea intei lor moleculare se disting dou nivele de aciune a toxinelor:
- cele care au inta final la nivelul membranei;
- toxine a cror int final este citoplasmatic.
inta final este structura a crei interaciune cu toxina produce efectul toxic, n timp ce receptorul are
uneori rolul de int intermediar, dei alteori este chiar inta final.
Toxinele care acioneaz la nivelul membranei sunt active prin modificri structurale pe care le induc n
membrana citoplasmatic, urmate de ruperea acesteia. Consecina este citoliza ori moartea celulei. Toxinele care
consecutiv aciunii lor produc dezorganizarea membranei se numesc citolizine (respectiv hemolizine, dac celula
inta este eritrocitul).
Toxinele a cror int final este intracelular, mai nti traverseaz membrana i ajung n citoplasm.
Moleculele suprafeei eritrocitului, cu rol de receptor pentru toxinele bacteriene, sunt glicolipidele. Legarea
toxinelor de glicolipide pare a fi mai avantajoas dect legarea de glicoproteine, pentru interacia cu membrana, care
este esenial pentru aciunea toxic.
Ptrunderea moleculelor de toxin n celul. Toxinele bacteriene a cror int este intracelular sunt
molecule bifuncionale, ca i toxinele vegetale (ricina, abrina), bacteriocinele sau hormonii glicoproteici. Toate
aceste categorii de molecule sunt alctuite dup acelai model funcional, fiind monomere (de exemplu, toxina
difteric, exotoxina de Ps. aeruginosa) sau dimere (de exemplu, enterotoxina holeric i cea termostabil de E. coli).
Cele monocatenare au o secven COOH-terminal, prin care se leag la nivelul receptorului i o secven NH 2terminal, care ptrunde n citoplasm i interacioneaz cu inta intracelular. Pentru toxinele dublu catenare,
funciile de legare B (Binding) i de activitate propriu-zis A (Activity) sunt realizate separat de fiecare caten.
Ptrunderea moleculei de toxin n celul este un proces complex pentru majoritatea toxinelor cu aciune
intracelular i se face prin unul din urmtoarele mecanisme:
- endocitoza mediat de receptori;
- pinocitoza nespecific n faza lichid;
- transferul direct al moleculei prin membrana citoplasmatic.
nglobarea prin mecanismul endocitozei mediate de receptori confer specificitate i eficien aciunii
moleculelor mari. Receptorii celulari glicoproteici, dup interaciunea cu moleculele de toxin, sufer o dinamic
accentuat. In mod normal, moleculele cu rol de receptor sunt uniform distribuite n planul membranei sau sunt
concentrate n teritorii specializate denumite zone tapetate cu clatrin* (coated pits), un nveli de natur proteic pe
faa citoplasmatic a membranei. Dup legarea moleculei de toxin, complexele receptor-toxin se aglomereaz n
zonele tapetate cu clatrin, situate la baza microvilozitilor. Zonele respective se intruzeaz i formeaz vezicule
acoperite cu clatrin, cu rol de transport. In citoplasm, nveliul de clatrin se dezorganizeaz i receptorii celulari
devenii disponibili sunt reciclai spre suprafaa celulei, iar molecula de toxin este eliberat spre un situs intracelular
specific.
*
Clatrina este o protein mare, oligomeric, ce formeaz o reea pe suprafaa intern a membranei plasmatice, favoriznd
intruzia membranei i formarea unei vezicule tapetat cu reeaua molecular, care ulterior poate fuziona cu alte organite celulare.
Mecanisme generale de aciune a toxinelor

Efectul biologic al exotoxinelor este specific i este datorat afinitii lor caracteristice pentru anumite celuleint ale organismului.
Unele toxine (tetanic, difteric, botulinic, holeric, eritrogen) au un rol determinant in patogenitatea
bacterian. Primele patru enumerate mai sus, sunt factori unici ai patogenitii pentru bacteriile productoare. In
cazul holerei, gravitatea infeciei este consecina efectelor fiziopatologice nespecifice ale toxinei asupra mucoasei
intestinale ce constau n pierderea apei i srurilor minerale la acest nivel.
Eritemul specific scarlatinos, produs de Streptococcus pyogenes se datoreaz efectului primar al toxinei
eritrogene streptococice.
Enterotoxinele stafilococice i enterotoxina de Cl. perfringens produc efecte la nivelul mucoasei intestinale,
ca rezultat al intoxicaiei alimentare.
Toxina produs de Sh. dysenteriae este cauza dizenteriei, deoarece enterocitele i celulele endoteliale ale
vaselor mici se lizeaz sub aciunea toxinei, rezultatul fiind ulcerarea mucoasei intestinale.
Exotoxina de B. anthracis produce un edem local i hemoragie, iar n cazul septicemiei, efectul letal pare a fi
datorat neurotropismului su, cu aciune n special asupra centrului bulbar al respiraiei.
Uneori, toxine foarte asemntoare, cauzeaz boli foarte diferite. De exemplu, toxina botulinic este ingerat
oral i produce paralizia flasc a muchilor striai, prin blocarea transmiterii potenialului la nivelul plcii motorii.
Toxina tetanic, produs n rnile profunde infectate cu Cl. tetani, produce paralizia spastic, prin SNC.
Efectele biologice ale toxinelor se produc la nivelul diferitelor structuri celulare. De exemplu, hemolizinele
i leucocidinele acioneaz la nivelul membranei citoplasmatice, iar alte toxine sunt active asupra organitelor, asupra
catenei transportoare de electroni s.a.m.d.
Toxinele perturb funciile celulei gazd: influeneaz cile de transducere a semnalelor, rearanjeaz
citoscheletul i traficul vacuolar.
Toxinele bacteriilor Gram pozitive, n general, nu necesit activare. Multe toxine ale bacteriilor Gram
negative sunt sintetizate n form inactiv i necesit o etap de prelucrare, care const n clivajul proteolitic, pentru
a genera forma activ.
Toxinele cu aciune enzimatic (toxina Shiga, toxina holeric, toxina pertusic, toxina difteric i exotoxina
A de Ps. aeruginosa) sunt clivate proteolitic pentru a produce fragmentul A catalitic activ.
Multe toxine neenzimatice care se inser n membrana celulei eucariote, necesit clivajul proteolitic pentru a
permite oligomerizarea i formarea porilor: hemolizina de V. cholerae El Tor este clivat N-terminal, iar aerolizina,
toxina de C. septicum i citotoxina de Ps. aeruginosa sunt clivate C-terminal. Hemolizina de E. coli, formatoare de
pori, reprezint o clas unic de toxine ce necesit prelucrarea posttraducere pentru activare.
Unele toxine au un plan structural i mecanisme de aciune comune, ceea ce permite gruparea lor n cteva
familii.
Toxine cu activitate ADP-ribozilant. Multe exotoxine au o structur de tip A-B, adic sunt formate din dou
componente: subunitatea B (binding), care mediaz legarea moleculei i ptrunderea ei n celula sensibil;
subunitatea A (activity), care determin efectul enzimatic (toxic) specific. Domeniul B are cea mai larg variaie,
probabil pentru a conferi specificitate de legare de substratul celular sensibil.
Activitatea enzimatic a subunitii A produce efecte foarte variabile, de la cea ADP-ribozilant (toxinele
holeric, pertusic, difteric, toxina termolabil de E. coli, exotoxina A de Pseudomonas, ADP-ribozil-transferazele
C2 i C3 produse de Cl. botulinum), pn la aciune proteolitic (toxinele tetanic i botulinic). Toxinele ADPribozilante au ca situs comun de legare NAD-ul i transfer ADP-riboza de la NAD i o leag covalent la proteine
ale celulei eucariote, dup reacia global:
NAD+ + Proteina int ----- ADP-riboza- Protein + Nicotinamida + H +.
Unele dintre aceste exotoxine se asociaz cu proteine cu rol important n fiziologia celular, care au
capacitatea de a lega nucleotidele i produc ADP-ribozilarea (fig. 163):
- unor proteine heterotrimerice care leag GTP;
- unor proteine mici care leag GTP;
- actinei;
- altor proteine ale celulei eucariote, care nu au fost nc identificate.
Exotoxinele ADP-ribozilante au trei tipuri de organizare A-B:
- proteine polipeptidice unice, cu componentele A-B legate covalent;
- complexe cu componente A-B localizate pe proteine separate, legate prin interaciuni necovalente;
- complexe multiproteice cu componente A-B localizate pe dou proteine separate.
Pentru unele exotoxine ADP-ribozilante, nu s-a evideniat organizarea structural de tip A-B.
Mecanismele activrii in vitro a exotoxinelor ADP-ribozilante cu organizare de tip A-B sunt:
- proteoliza parial i generarea peptidului A activ cu activitate catalitic;
- reducerea legturilor S-S;
- activarea alosteric de ctre nucleotide sau de ctre proteinele accesorii ale celulei eucariote.
Modelul de aciune ADP-ribozilant s-a elaborat pe baza proprietilor moleculare ale toxinei difterice,
exotoxinei A de Ps. aeruginosa i enterotoxinei termolabile de E. coli.
Fig. 163. Reprezentarea reaciei de ADP-ribozilare
Toxina difteric i exotoxina A de Ps. aeruginosa produc ADP-ribozilarea proteinelor mari care leag GTPul, cum ar fi factorul de elongare al catenei polipeptidice EF-2, la resturi de acid glutamic diferite (148 i respectiv
553), dar omologe din punct de vedere funcional, deoarece ambele leag inelul nicotinamidei din NAD printr-un
mecanism dependent de UV.
Proteinele familiei Rho leag GTP i mediaz polimerizarea actinei celulare, avnd rol n organizarea
citoscheletului, n formarea veziculelor de transport, n creterea i diviziunea celulei i desfurarea ciclului celular,
particip la procesele de transducie a semnalelor, sunt implicate n endocitoza mediat de receptor i secreie,
controleaz transcrierea, apoptoza i transformarea celular i sunt inta aciunii toxinelor bacteriene.
Proteinele Rho sunt GTP-aze mici, controlate prin ciclul GTP-azei: sunt inactive n forma legat
de GDP, dar se activeaz dup trecerea GDP n GTP. Invers, hidroliza GTP legat, inactiveaz proteinele.
Toxine proteolitice
Toxinele cu structur asemntoare pot genera manifestri clinice foarte diferite. De exemplu, toxina
botulinic ingerat odat cu alimentele, produce o paralizie flasc datorat aciunii la nivelul terminaiilor nervoase
periferice, iar toxina tetanic, eliberat n rnile profunde contaminate cu C. tetani produce paralizia spastic prin
intermediul sistemului nervos central. Ambele toxine acioneaz prin acelai mecanism: blocarea eliberrii
mediatorilor sinaptici prin clivarea sinaptobrevinelor, proteine componente ale veziculei sinaptice. Toxina tetanic
blocheaz eliberarea mediatorilor glicin i GABA, n timp ce toxina botulinic blocheaz eliberarea acetilcolinei.
Ambele proteine sunt metaloendoproteaze i se aseamn prin domeniile care leag Zn. Modul de ptrundere a
toxinelor n organism determin manifestri clinice distincte, dei ele sunt foarte asemntoare.
Toxine formatoare de pori. Numeroase microorganisme patogene cu localizare intracelular produc proteine
care pot s lizeze membrana celulei eucariote. Cteva dintre aceste toxine sunt eseniale pentru patogenitate. Rolul
lor este diferit, de la blocarea funciei celulelor imunitare, pn la medierea ieirii din vacuola de fagocitoz n
citosol.
Toxinele SLO, LLO, PLO aparin familiei toxinelor activate de gruparea thiol (Tabel ). Capacitatea lor de a
forma pori depinde de o secven conservat de aminoacizi la captul C terminal, care conine resturi de Trp,
eseniale pentru formarea porilor i un rest de Cys, care le face intolerante la condiiile oxidante.
Toxinele thiol -activate recunosc colesterolul din membrana celulelor eucariote i induc formarea unor pori
de dimensiuni foarte mari (pn la 30 nm), inelari sau n form de arc (aceti pori sunt de dimenisuni mai mici),
alctuii din cca 50 de monomeri de toxin. Cantitatea de colesterol membranar trebuie s depeasc cu cteva
ordine de mrime cantitatea de toxin, pentru a avea loc o interacie stabil, probabil din cauza unor restricii sterice
sau termodinamice. Colesterolul nu are doar rol de receptor pentru moleculele de toxin, ci mediaz i
oligomerizarea monomerilor de toxin, acionnd probabil ca un efector alosteric.
Toxinele thiol-activate sunt alctuite din 4 domenii, dintre care domeniul 4 este implicat n legarea de
receptor (colesterol). Legarea iniial de colesterol este total reversibil, se realizeaz foarte rapid i independent de
temperatur. Dup legarea iniial, domeniile 1 i 3 implicate n oligomerizare sufer modificri alosterice care
conduc iniial la apariia unui pre-por metastabil, care ulterior este stabilizat prin fore de tensiune superficial cu
apariia porului stabil, n form de inel. Porii incomplei, n form de arc, permit de asemenea inseria moleculelor de
toxin n membran.
Rolul biologic major al acestor toxine este de a permite ptrunderea n interiorul celulei eucariote a altor toxine sau
enzime bacteriene, prin porii de dimensiuni mari. n cazul bacteriilor intracelulare, aceste toxine (ex. listeriolizina)
permit propagarea infeciei de la o celul la alta.
Toxinele thiol-activate se gsesc la bacterii care au un mod de via asemntor. Listeria i Streptococcus
produc infecii invazive, iar toxinele lor sunt determinani de patogenitate. Aceste bacterii produc enzime
depolimerizante (proteaze, nucleaze) i sunt secretate concomitent cu toxinele. Deoarece porii formai de toxinele
activate de thiol sunt mari, ei constituie calea de acces a acestor enzime n interiorul celulei. Toxina i enzimele
coopereaz pentru degradarea celulelor animale, n beneficiul agentului patogen.
In cazul infeciilor clostridiene gangrena gazoas sau tetanosul, cele dou moduri de via prezint
convergene evidente: toxinele pot fi implicate att n stadiul iniial al lezrii esutului, necesar pentru realizarea unui
mediu anaerob, ct i n stadiul tardiv (postmortem), caracterizat prin distrugere tisular rapid i masiv.
Listeriolizina este produs intracelular i se abate de la condiiile de aciune ale altor lizine, prin necesarul
unui pH acid optim pentru aciunea ei. Mediul acid este creat n fagosom, din care Listeria se elibereaz singur prin
secreia toxinei.
Unele toxine funcioneaz prin inseria n membrana celulei sensibile. Rezultatul este formarea unui por sau
canal, care duce la liza celulei prin mecanisme osmotice. O astfel de familie este format de toxinele RTX (repetead
toxins - denumire datorat repetrii unei secvene de 9 aminoacizi n fiecare toxin), produse de bacteriile Gram
negative. Toxinele au fost grupate pe baza efectelor toxice i litice asupra celulelor gazd ale mamiferelor. Prototipul
acestei familii este hemolizina de E. coli.
Hemolizina de E. coli. Hemolizina A (Hly A) de E. coli este un factor important al virulenei n infeciile
extraintestinale, aa cum sunt cele ale tractului respirator superior, produse de E. coli. Este reprezentantul unei
familii de toxine bacteriene care necesit modificarea posttraducere pentru dobndirea activitii biologice.
Hly A face parte dintr-o familie care mai cuprinde leucotoxina de Y. haemolytica, hemolizinele i leucotoxinele de
Actinobacillus actinomycetemcomitans, toxina bifuncional (adenilat-ciclaz/ hemolizin) de B. pertussis i
hemolizinele de P. vulgaris, Morganella morganii i Moraxella bovis, fa de care exist o identitate a secvenei
aminoacizilor n proporie de 30-75%. Toate se matureaz dup sintez i au un domeniu C-terminal care leag Ca 2+,
format din secvenele nonapeptidice repetitive bogate n glicin acid, ceea ce a dus la denumirea RTX. Toate se
export din celul pe calea sistemului de secreie de tip I. Modificarea post-traducere este o caracteristic unic a
acestor toxine, dar legarea Ca 2+ i secreia de tip I sunt comune i altor proteine bacteriene.
Cnd leag Ca2+, secvenele repetitive RTX formeaz scurte lanuri -pliate, organizate ntr-o structur
neobinuit de suprahelice-.
Legarea Ca2+ este o necesitate absolut pentru o activitate citotoxic i se produce dup exportul proteinei.
Nivelul intracelular al Ca2+ este prea mic (0,1 uM) pentru a activa Hly A.
Toate sunt citotoxice pentru diferite tipuri de celule nucleate. Hemolizina de E. coli lizeaz n cteva minute,
eritrocitele diferitelor specii: oarece, iepure, berbec, bovine, cal, om.
Hly A are spectru larg de aciune: lizeaz eritrocitele, granulocitele, monocitele, celulele endoteliale, celulele
epiteliale renale de oarece, rumegtoare i primate. Absena receptorilor specifici poate s explice spectrul larg al
aciunii Hly A.
Eritrocitele expuse aciunii Hly A de E. coli sufer schimbri majore ale citoscheletului care se
exteriorizeaz prin formarea proieciilor de suprafa. Liza eritrocitelor poate s semnifice eliberarea Fe, iar liza
leucocitelor poate s aib semnificaia unui factor de virulen, care mpiedic fagocitoza.
Unele citolizine sunt fosfolipaze: LLO de L. monocytogenes, citolizinele produse de Cl. perfringens i Ps.
aeruginosa sunt fosfolipaze C, iar cea de Corynebacterium pseudotuberculosis este o fosfolipaz D.
Fosfolipazele bacteriene cuprind un grup heterogen de proteine-enzime, care produc o varietate de efecte in
vivo i in vitro, de la alterri celulare minore n structura i funcia membranei citoplasmatice, pn la efectul letal.
Listeriolozina O (LLO) produs de L. monocytogenes, este singura toxin activat de gruparea tiol, a crei
activitate optim este la pH-ul acid din vacuola intracelular. pH-ul acid este declanator al lizei vacuolei.
LLO este singura toxin-enzim din familia citolizinelor, produs de un patogen intracelular, care are rolul
de a liza fagosomul. Acidifierea coninutului vacuolar declaneaz efectul litic al LLO, limitat la membrana
fagosomului.
LLO este reprezentat de dou fosfolipaze C, cu specificitate pentru fosfatidil-inozitol i fosfatidil-colin.
Ieirea agenilor patogeni de Rickettsia din vacuola celulei este mediat de fosfolipaze, care fac parte din
aceiai familie a citolizinelor.
Trypanosma cruzi invadeaz celulele, cu formarea vacuolelor acide intracelulare i produce o toxin activ
la pH 5,5, n stadiile intracelulare ale ciclului. Blocarea acidificrii reduce capacitatea T. cruzi de a liza vacuola i de
a trece n citosol.
Toxinele termostabile produse de E. coli, Yersinia, Citrobacter freundii, Vibrio mimicus acioneaz prin
acelai mecanism: activarea guanilat-ciclazei.
Enterotoxinele sunt proteine secretate care se leag de un receptor celular, intr n celul i produc creterea
nivelului AMPc.
O mare parte dintre enterotoxinele diareice se leag la receptorii de natur glicosfingolipidic. Unele dintre
aceste toxine sunt capabile s formeze canale permeabile pentru ionii de Ca, care ptrund n celulele epiteliului
intestinal i acioneaz ca mesager secundar care moduleaz procesele de transport ionic. Toxinele care nu formeaz
astfel de canale, determin, n urma interaciuii cu receptorii specifici, eliberarea altor mesageri secundari inductori
ai secreii ionilor de Cl, care la rndul lor antreneaz secreia ionilor de Na i a apei, ca i a altor anioni, ceea ce
conduce la acumularea apei n lumenul inestinal, la dezechilibrarea balanei hidro-electrolitice i generarea diareii
secretorii. Activitatea enterotoxinelor se poate evidenia in vitro prin alungirea celulelor CHO (Chinese hamster
ovary), rotunjirea celulelor Y-1 (mouse adrenal tumor cells) sau prin determinarea AMPc n celulele expuse aciunii
toxinei. O metod independent de celulele cultivate este ELISA (enzyme-linked imunosorbent assay). Receptorii
specifici (ex. gangliozidele GM1) sunt fixate pe faza solid pentru a lega enterotoxina, care poate fi detectat cu
antiserul specific. In varianta alternativ a metodei ELISA sandwich, faza solid const din fragmente F (ab) 2 ale
anticorpilor anti-toxin. Ambele metode au sensibilitate i specificitate nalte. In vivo, pentru detectarea activitii
enterotoxinelor se folosete testul ansei ileale de iepure sau de obolan.
Citotoxinele sunt definite ca proteine care omoar celulele int. Ele pot aciona intracelular sau la nivelul
membranei i formeaz pori. Citotoxinele cu aciune intracelular se leag la nivelul receptorilor membranari i
nainte de a ajunge n citoplasm sunt prelucrate.
Mecanismele de aciune ale citotoxinelor sunt diferite:
- inhibiia sintezei proteinelor celulare
- inhibiia formrii filamentelor de actin
- formarea porilor membranari.
Formarea porilor n structura membranei int este un mecanism major de aciune a citotoxinelor. Astfel de
citotoxine se pot detecta prin activitatea lor litic asupra eritrocitelor, motiv pentru care se mai numesc hemolizine.
Liza eritrocitelor poate fi un mecanism de dobndire a Fe.
Formarea porilor induce un set de larg de reacii secundare n celulele nucleate: eliberarea citokinelor,
disfuncia citoscheletului, sinteza mediatorilor lipidici. Liza leucocitelor poate determina scderea reactivitii
imunitare.
Comparativ cu alte substane toxice, exotoxinele bacteriene au o toxicitate foarte nalt, att n stare brut
sub forma filtratelor de cultur, dar mai ales n forma purificat. Astfel, toxina botulinic de tip D este de trei
milioane de ori mai puternic dect stricnina luat ca etalon. Efectul toxic este variabil nu numai in functie de specia
bacteriana producatoare, ci si de tulpina, chiar pe medii optime. In multe cazuri, toxigeneza se atenueaz sau chiar
dispare prin subcultivare repetat.
In general, efectul toxinelor este variabil n funcie de natura, vrsta, greutatea, sexul i linia genetic a
animalelor pe care sunt testate, ca i de tehnica i calea de administrare folosite.
Datele referitoare la toxigenez se refer la administrarea lor parenteral, deoarece cu excepia
enterotoxinelor, toxinele uzuale sunt distruse de modificrile de pH sau de activitatea enzimelor digestive.
Potenialul toxic al toxinelor este ilustrat de date teoretice:
1) toxina botulinic de tip A purificat i cristalizat ar conine ntr-un miligram, 1 000 000 DLM (doze limite
mortale) pentru un kg corp cobai, ceea ce nseamn c 1 mg de toxin poate s omoare l 200 tone de cobai sau dou
milioane de oareci;
2) 200 g neurotoxine (botulinic sau tetanic) ar putea omor ntreaga populaie a globului.
Potenialul toxic al toxinelor bacteriene este dependent de calea de administrare. Dozele letale pentru caile
respiratorie i digestiv sunt de l00 l000 de ori mai mari decat pentru cile intravenoas, intramuscular,
intraperitoneal sau subcutanat. Pielea intact este o barier eficient fa de toxine.
Determinismul genetic al sintezei toxinelor. Sinteza toxinelor bacteriene este codificat de gena tox, a crei
localizare este cromosomal, plasmidial sau fagic. La V. cholerae, subunitile toxinei holerice sunt codificate de
gene cromosomale, asociate cu alte gene ce codific ali factori de virulen. Astfel de grupe de gene de virulen se
numesc insule de patogenitate. Secvena lor difer mult de a altor gene cromosomale, ceea ce denot c ele sunt
achiziii relativ recente n evoluie. Ar putea s aib originea prin integrarea unui element genetic exogen fagul.
La Cl. botulinum, gena tox, cu situs cromosomal, prezint mai multe alele, care codific sinteza a 7
serotipuri de toxina (notate A --- G), care nu dau reacie ncruciat semnificativ cu anticorpii obinui fa de una
dintre ele.
Enterotoxinele i hemolizinele de E. coli, toxina dermo-exfoliativ stafilococic sunt codificate de gene
plasmidiale.
Gena tox, codificatoare a toxinei difterice este localizat n genomul unor bacteriofagi ADN (, P, 1, W).
Activitatea ei este controlat de o gen situat pe cromosomul bacterian.
Fagii purttori ai genei tox se gsesc n celulele de C. diphteriae n stare integrat (profag), de fag virulent
replicativ sau sub forma de replicon autonom represat. Este cunoscut modul de funcionare a genei tox, purtat de
fagul , ce se integreaz ca profag. Ea se gsete aproape de situsul de inserie a genomului fagic n cromosomul
bacterian, dar are propriul su promotor i se poate exprima independent de alte gene fagice, dar poate fi represat
fr s afecteze biosinteza altor proteine fagice. Aceast gen nu pare a fi esenial pentru genomul fagc.
Modificarea ei mutaional nu influeneaz ciclul de multiplicare a fagului. Se consider ca gena tox a acestui fag
este de origine bacterian, care a fost mobilizat prin procesul de transducie fagic.
Sinteza toxinei eritrogene streptococice (scarlatinoas), precum i a toxinelor botulinice C i D este
codificat de fagi temperai. La Cl. perfringens, toxigeneza este legat temporal de procesul sporulrii. Sporularea
este o condiie obligatorie, dar insuficient pentru producerea toxinei. Toxina pare a fi un produs al unei gene de
sporulare i este o protein de structura a tunicii sporale.
Endotoxinele
Termenul de endotoxin (introdus de Pffeifer, l892) este impropriu, deoarece lipopolizaharidele (LPS)
sunt componente ale suprafeei bacteriilor Gram negative, dar este totui folosit pentru c, spre deosebire de
exotoxine semnific asocierea LPS cu celula.
Factorul toxic al bacteriilor Gram negative a fost extras de Boivin si Mesrobeanu (l933). Ei au identificat
complexul glico-lipidic, cu antigenul somatic (O) al bacteriilor ce formeaza colonii netede (S-Smooth).
Endotoxinele LPS sunt componente structurale ale peretelui celular, la toate bacteriile Gram negative
patogene i se elibereaz dup dezintegrarea celulei. Sunt relativ termo-stabile i mai puin toxice dect exotoxinele,
iar efectele lor sunt lipsite de specificitate. Din punct de vedere chimic, endotoxinele LPS sunt macromolecule
complexe ce conin fosfolipide i polizaharide. Toxicitatea lor rezid n fracia fosfolipidic. Nu se denatureaz i nu
rezult anatoxine.
Endotoxinele LPS reprezint 25% din moleculele de suprafa ale celulei i sunt eseniale pentru integritatea
membranei externe.
Efectele endotoxinelor LPS

Termenii de LPS i endotoxin sunt folosii cu sensuri echivalente, dar LPS semnific moleculele
purificate, iar denumirea de endotoxin desemneaz complexul format din LPS i proteinele asociate din
membrana extern.
LPS sunt molecule amfifile, cu o parte hidrofob, capabil s se dizolve n lipidele membranare i o regiune
hidrofil, care poate rmne n faza apoas. O prim treapt a aciunii LPS o constituie interaciunea dintre molecula
amfifil i suprafaa celulei sensibile. Molecula LPS poate fi inserat n membrana celulei prin jumtatea hidrofob
sau se ataeaz de receptorii membranari prin jumtatea hidrofil. O modalitate distinct a interaciunii LPS cu
macrofagele, este aceea mediat de o protein plasmatic de faz acut denumit LBP (LPS binding protein).
Sursele majore de endotoxine sunt urmtoarele: 1)septicemia cu bacterii Gram negative; 2)bacterii originare
n microbiota intestinal, datorit leziunilor mucoasei.
O particularitate a LPS, n contrast cu aciunea exotoxinelor, const n aceea c simptomele toxice nu se
datoreaz aciunii lor directe asupra celulelor sensibile, ci sunt mediate, n mare parte, de citochinele sintetizate de
novo de macrofage, ca rspuns la LPS.
LPS sunt molecule foarte imunogene prin stimularea nespecific, policlonal a limfocitelor B. Anticorpii au
specificitate fa de polizaharidul extern i precipit LPS, dar nu neutralizeaz efectele lor toxice. Rspunsul imun
este de tip primar, deoarece molecula de LPS este un antigen timo-independent, cu grupari antigenice repetitive.
Lipidul A are proprieti imunogene, iar anticorpii specifici reacioneaz ncruciat cu lipidul A al altor
endotoxine, datorit uniformitii structurii sale.
Antigenul polizaharidic, obinut prin hidroliza acid i pstreaz proprietatea de specificitate, dar nu este
imunogen, avnd proprietatea de hapten.
Efectele endotoxinei se manifest att n stare fizic legat de celul, ct i dup ce a fost eliberat prin
moartea i liza celulei sau printr-un proces de nmugurire, care nu afecteaz viabilitatea acesteia. Din aceast
cauz, cele dou stri, endotoxemia i bacteriemia pot s coexiste sau s se manifeste n etape distincte ale
procesului infecios. Proprietile endotoxice ale celulelor bacteriene, vii sau omorte sunt aceleai cu ale
preparatului de endotoxin. In organismul infectat nu este o corelaie linear ntre nivelul bacteriemiei i
endotoxemiei i respectiv, intensitatea efectelor endotoxice. Capacitatea organismului de a detoxifica este un factor
modulator esenial al manifestrilor endotoxice. Glucocorticoizii au efect protector anti-endotoxic, probabil prin
modificarea permeabilitii capilare.
Endotoxinele nu au rol n colonizarea i penetrarea suprafeei mucoase, deoarece lipidul A are o localizare
profund n membrana extern. Tulpinile invazive i neinvazive de Salmonella produc cantiti similare de
endotoxina. Endotoxina are rol n iniierea infeciei, probabil prin inducerea unei scderi tranzitorii a capacitii de
aparare a gazdei, prin ntrzierea declanrii unui rspuns inflamator.
Dozele mici de toxin mresc rezistena organismului la infeciile bacteriene i virale prin stimularea
activitii fagocitare i respectiv, a producerii de interferon.
Endotoxinele iniiaz calea altern a activrii complementului, dar efectul nu este bacteriocitoliza, deoarece
reacia se produce la distan de membrana extern. In vitro au efect mitogenic asupra limfocitelor B. LPS au
proprieti adjuvante, deoarece stimuleaz rspunsul imun specific fa de un antigen administrat simultan.
Dozele mari de endotoxine determin o serie de manifestri patologice sistemice, nespecifice:
- hipertermie (febr), prin aciunea lor asupra centrilor termoreglrii, chiar dup administrarea unor doze
minimale. Inducerea febrei este semnul marcant al toxicitii LPS. Febra este efectul indirect al aciunii LPS
asupra macrofagului, care secret cteva citochine: IL-1, TNF , IFN , cu aciune direct asupra
hipotalamusului. Starea febril se instaleaz brusc, este monofazic, mediat de prostaglandine;
- leucopenie urmat de leucocitoz. Efectul se exercit direct i rapid asupra leucocitelor. Ele prsesc patul
vascular si se retrag aproape instantaneu in plaman si in alte tesuturi, in proporie de circa 60%. Dupa circa 4
ore, numarul leucocitelor circulante creste peste limitele normale. Crete numrul hematiilor circulante, datorit
eliberrii n circulaie a rezervelor celulare din centrele de formare si depozitare a eritrocitelor;
- modificri cardiovasculare: legarea endotoxinei de celulele hepatice sau de alte celule induce eliberarea rapid
a aminelor biogene (histamina, serotonina) i a peptidelor (bradikinina) din depozitele celulare. Aminele produc
o hipertensiune tranzitorie, urmata de hipotensiune severa, hipovolemie si formarea cheagurilor vasculare de
fibrina. Endotoxinele activeaza sistemul de coagulare sanguina;
- efecte metabolice: inhib sistemele enzimatice ale gluconeogenezei si ale sintezei glicogenului.
Din punct de vedere clinic, dozele mari de endotoxina produc urmtoarea secven de modificari: frison,
febra, somnolenta, dispnee, modificari ale dinamicii tranzitului intestinal, diaree sanguinolenta, hiperglicemie
incipient urmat de hipoglicemie, paralizie, com, moarte. Acest tablou de modificri se succede n circa 24 de ore
dup injectarea preparatului la animalele sanatoase i corespund starii de oc endotoxic, consecinta a endotoxemiei.
Endotoxemia este rezultatul supraincarcarii celulelor cu rol de aparare, ca urmare a revrsrii endotoxinelor n
circulaie. Starea de endotoxemie nu este totdeauna urmata de soc si moarte. Nu se cunosc cauzele marilor diferene
de rspuns i reactivitate, la starea de endotoxemie. Socul fatal este consecinta interactiunii endotoxinei cu sistemul
de coagulare a sangelui, pe care l activeaz i l amplific. S-a emis ipoteza c instalarea socului ireversibil este
favorizata de absorbtia in sange a endotoxinelor produse de microbiota intestinala. In mod normal, mecanismele de
detoxifiere a organismului sunt eficiente, dar starea de oc se instaleaz consecutiv diverselor tulburri funcionale,
care mpiedic o reactivitate optim fa de infecia cu bacterii Gram negative.
Condiiile de apariie a procesului infecios

Simpla prezen a unui microorganism patogen n mediul nconjurator nu este suficient pentru a produce o
infecie la o gazd sensibil. Pentru iniierea procesului infectios sunt necesare urmtoarele condiii obligatorii:
existena unui izvor de infecie, a unei ci de eliminare a agentului infecios, a unei ci de transmitere i a unei pori
adecvate de intrare in organismul sensibil. Domeniul specializat al patologiei infecioase care studiaz cile de
eliminare, transmitere i ptrundere a agenilor patogeni n organism se numete epidemiologie.
a) Izvorul de infecie
Necesitatea existenei izvorului de infecie deriv din faptul c mediul extern (sol, ap, aer) este nefavorabil
creterii i multiplicrii majoritii agenilor patogeni. Mediul extern asigur, cel mult, condiii de supravieuire
temporar a microorganismelor i de pstrare a infeciozitii virusurilor. Perpetuarea microorganismelor patogene n
natur este condiionat de existena unui izvor sau rezervor de infecie, n care agentul patogen se multiplic. Aici se
realizeaz procesul de acumulare natural, de unde agentul patogen se disemineaz i contamineaz alte organisme.
Izvorul de infecie este diferit, n funcie de agentul patogen i de spectrul su de gazd. Unele
microorganisme i virusuri infecteaz numai gazdele animale i produc zoonoze, omul fiind infectat n situaii
accidentale. Alteori, agenii patogeni produc boli infecioase (transmisibile) strict caracteristice omului (denumite
antroponoze) fr s infecteze organisme animale. In acest caz, omul reprezint unicul izvor de infecie n natur,
pentru viroze (variola, varicela, oreionul, poliomielita, guturaiul, gripa, hepatite) sau pentru bacterioze (dizenteria
bacterian, febra tifoid, febrele paratifoide, tusea convulsiv, sifilisul, gonoreea, lepra). Pentru unele maladii
infecioase (lepra, sifilisul, variola, rujeola), omul bolnav este unicul rezervor natural al infeciei. In alte cazuri (de
exemplu, febra tifoida, scarlatina, difteria, poliomielita, holera), agentul infecios este transmis att de omul bolnav,
ct i de cel sntos, purttor de ageni patogeni. In unele cazuri, purttorii sunt fotii bolnavi care s-au imunizat, nu
mai prezint nici un simptom clinic, dar pstreaz n organism agentul patogen, temporar sau pentru totdeauna, pe
care l elimin n mediu. Purttorii sunt foarte importani pentru diseminarea agenilor patogeni n mediul extern,
deoarece fiind aparent sntoi sunt greu de depistat i se deplaseaz liber in colectiviti, unde pot transmite infecia
la organismele receptive.
O alt categorie de boli infecioase sunt comune omului i animalelor i sunt cunoscute sub denumirea
generic de antropozoonoze. Izvorul de infecie este reprezentat de animale domestice sau slbatice: cinele pentru
rabie, febra butonoas, leptospiroze; bovinele pentru salmoneloze, vaccin, bruceloz, tuberculoz, febra Q;
obolanul pentru salmoneloze, leptospiroze, febra mucturii de obolan (febra sodoku), turbare, pesta (ciuma), tifos
murin; psrile pentru encefalite virale, grip, ornitoze, salmoneloze etc.
Controlul antropozoonozelor este foarte greu pentru c n circuitul agentului patogen intr animalele
slbatice. De exemplu, turbarea este rspndit la vulpe, veveri, liliac, de unde este transmis la cine, iar de aici la
om. Chiar dac incidena bolii scade dup imunizarea cinilor prin vaccinare, virusul nu se poate elimina din
populaiile de animale slbatice.
Unele microorganisme patogene se dezvolt, n primul rnd n mediile naturale (ap, sol) i numai accidental
infecteaz gazdele: de exemplu, agenii tetanosului i ai gangrenei gazoase. Agenii se multiplic n sol i pentru a se
menine nu este necesar transmiterea la o gazd. Clostridium botulinum, agentul botulismului, se dezvolt numai n
sol, de unde ajunge n conservele alimentare, se multiplic i produce toxina, care dup ingestie produce manifestri
patologice.
b) Calea de eliminare a agenilor patogeni
Agenii patogeni care se multiplic n izvorul natural de infecie sunt eliminai n mediu i pot s infecteze
gazde noi. Calea de eliminare este condiionata de localizarea lor specific n organism. Principalele ci de eliminare
a agenilor patogeni sunt cea intestinal i cea respiratorie.
Calea intestinal este comun bacteriilor enterotrope, prin intermediul materiilor fecale, care pot conine
intermitent sau continuu, cantiti mari de ageni patogeni ai febrelor tifoide i paratifoide, dizenteriei, holerei, ai
toxiinfeciilor alimentare, precum i virusuri (virusul hepatitei A, virusul polio).
Calea respiratorie asigur rspndirea agenilor patogeni ai infeciilor respiratorii (difteria, tusea convulsiv,
rujeola, variola, varicela, oreionul, gripa, guturaiul), prin intermediul secreiilor nazofaringiene i bucale, proiectate
in timpul tusei, strnutului, vorbirii. Pe aceasta cale, omul bolnav sau infectat rspndete n jur o pulbere fin de
aerosoli constituii din picturi microscopice de secreii ncrcate cu ageni patogeni. Intr-un strnut se pot elimina
ntre l0 000 l00 000 celule bacteriene. Cele rezistente la uscciune i pstreaz viabilitatea pentru perioade lungi
de timp, ataate de particulele inerte.
Alte ci de eliminare: rni i supuraii (n cazul infeciilor produse de stafilococi, streptococi, bacilul
piocianic, gangrena gazoas); calea urinar (pentru agenii febrei tifoide, leptospirozei, febrei Q, tuberculozei
renale); secreia lactat (agentul brucelozei, tuberculozei, febrei Q).
Pentru agenii patogeni care produc infecii generalizate i care nu au o cale natural de eliminare din
organism, ieirea se realizeaz prin intermediul unui artropod hematofag care se hrnete cu sngele infectat (de
exemplu, agenii tifosului exantematic, ai pestei, ai encefalitelor virale, ai paludismului) sau ieirea se face pe cale
artificial, prin seringa sau instrumente chirurgicale infectate (agenii hepatitelor virale B, C, D, ai sifilisului).
c) Calea de transmitere a agenilor infecioi
Dup ce au fost eliminate din organismul bolnav sau purttor, agenii patogeni trebuie s fie transmii la o
nou gazd receptiv. Transmiterea se realizeaz n mai multe modaliti.
Transmiterea prin contact direct are loc n cazul n care, ntre organismul infectat i cel receptor exist o
legtur direct i se face prin muctur (agenii turbrii, ai febrei mucturii de obolan), prin supt (la animale,
agenii febrei Q, tuberculozei, iar la om, M. tuberculosis, agenii infeciilor piogene), prin srut(agenii tuberculozei
pulmonare, sifilisului, mononucleozei infecioase), prin contact cutanat direct (agenii dermatomicozelor,
furunculozei), prin contact sexual (agenii sifilisului, gonoreii). Cnd agentul cauzal este transmis prin cile genitale,
infecia se numete veneric.
De cele mai multe ori, transmiterea infeciei este indirect, prin interpunerea mai mult sau mai puin
evident, a unui factor de mediu neanimat denumit vehicul, sau a unui organism denumit vector, care se interpune
ntre izvorul de infecie i organismul receptor:
- transmiterea prin intermediul produselor alimentare carne, lapte, ou, n cazul n care provin de la animale
infectate sau sunt contaminate prin manipulare de ctre o persoan (bolnav sau purttoare) care elimin ageni
patogeni. Bacteriile patogene, de regul, se multiplic in produsele alimentare. Astfel se transmit agenii febrei
tifoide, ai toxiinfeciilor alimentare (cu Staphylococcus i Salmonella), ai febrei Q, ai infeciei crbunoase, ai
botulismului, ai tuberculozei;
- transmiterea prin intermediul obiectelor folosite de un bolnav (vesela, rufe, mbrcminte, cri, jucrii etc) este
posibil un timp limitat dup contaminarea acestora, proporional cu rezistena agenilor patogeni la condiiile
de mediu (agenii tuberculozei, difteriei, scarlatinei, variolei);
- transmiterea prin vectori se realizeaz prin intermediul artropodelor, n special hematofage (insecte, cpue),
care preiau agenii patogeni de la gazda infectat i i transmit la o nou gazd, fie prin neptur, fie
depunndu-i pe tegumentul intact sau lezat. Uneori, vectorul are numai rol mecanic pentru agentul patogen, pe
care l transport n tubul digestiv sau pe suprafaa corpului. Musca este vector mecanic pentru agentul patogen
al febrei tifoide, al dizenteriei. Alteori, vectorul este el nsui infectat i realizeaz o transmitere biologic. In
acest caz, agentul patogen se multiplic masiv n corpul vectorului (de exemplu, Ricketsia prowazeki, agentul
tifosului exantematic) sau strbate o faz a ciclului su vital (de exemplu, sporozoitul Plasmodium, n corpul
narului. Flavivirusurile (agenii encefalitelor) se multiplic n organismul artropodelor vectoare, fr s
produc leziuni tisulare;
- transmiterea prin intermediul aerului se face prin inhalarea picturilor septice, rspndite de un bolnav sau de un
purttor de ageni patogeni. Cele mai eficiente sunt picturile septice foarte mici (nuclei), care pot rmne n
suspensie n aer (ca aerosoli), mult timp dup eliminarea lor din organism. Astfel se transmit agenii gripei,
guturaiului, rujeolei, rubeolei, varicelei, scarlatinei, tusei convulsive;
- transmiterea hidric este proprie infeciilor intestinale (agenii febrelor tifoida i paratifoid, holerei, hepatitei A,
enterovirozelor) i leptospirozelor i se produc prin contaminarea accidental a unei surse de aprovizionare cu
ap, cu agenii patogeni provenii din dejecii umane sau animale;
- transmiterea prin intermediul solului are loc n cazul unor plgi, de regul adnci, n care au fost antrenate
granule de sol. Astfel se transmit infeciile cu B. anthracis, cu Cl. tetani, agenii gangrenei gazoase (Welchia
perfringens, Cl. oedematiens, Cl. histolyticum).
d) Poarta de intrare n organism
Pentru ca agenii patogeni s determine o boal infecioas este necesar ca ei s nving barierele naturale
protectoare ale gazdei. Poarta de intrare n organism corespunde, n general, cii prin care s-a fcut eliminarea
agentului patogen din organismul infectat.
De cele mai multe ori, poarta de intrare n organism este reprezentat de calea respiratorie (n infecii ca
oreionul, guturaiul, gripa, rujeola, variola, varicela, difteria, tusea convulsiv, scarlatina), calea digestiv(agenii
febrei Q, hepatitei virale A, poliomielitei), calea cutanat(pentru agenii infeciei crbunoase, tularemiei, febrei Q,
pentru agenii transmii prin muctur, prin neptura vectorilor, prin rnire).
Unii ageni patogeni ptrund n organismul receptiv pe mai multe ci, din care una este principal, dar
determin aceleai manifestri indiferent de poarta de intrare. Ali ageni produc maladii cu caractere clinice diferite,
n funcie de poarta de intrare, ca unic factor determinant i fr relaie cu vreun caracter biologic particular al
agentului patogen. De exemplu, B. anthracis, dup ptrunderea pe cale tegumentar produce crbunele cutanat, iar
dup ingestia alimentelor contaminate produce un proces patologic intestinal. Dac infecia se face pe cale
respiratorie, rezultatul este infecia pulmonar.
Tipuri de infecii
Infecia reprezint totalitatea proceselor biologice care se desfoar n organismul uman sau animal, ca
urmare a ptrunderii i multiplicrii agenilor patogeni.
Pentru iniierea procesului infecios, agentul patogen trebuie s ptrund n organism pe o cale adecvat, iar
organismul s fie receptiv (s permit multiplicarea agentului infecios). In concepia modern, procesul infecios
trebuie interpretat ca rezultat al interaciunii dinamice dintre micro- i macroorganism. In concepia ecologic,
agentul infecios este fora motrice a procesului infecios, iar reactivitatea imunitar a organismului condiioneaz
intensitatea, extinderea, gravitatea i nsi posibilitatea apariiei procesului infecios.
In raport cu momentul n care se face infecia organismului uman i animal se disting patru tipuri de infecii.
a) Infecia germinal se produce n cazurile n care ovulul sau spermatozoidul sunt purttorii agentului infecios,
pe care-l transmit celulei-ou (pe vertical), odat cu caracterele ereditare. Acest mecanism de infecie nu s-a
demonstrat la om i nici la animalele superioare. A fost descris la artropode (cpue din g. Ornithodorus,
Dermacentor, Rhipicephalus), infectate astfel cu bacteria spiralat Borrelia recurentis, agentul patogen al febrei
recurente de cpue. Ele devin astfel, rezervoare naturale de infecie.
b) Infecia transplacentar (intrauterin) este demonstrat i la om. Uneori este condiionat de producerea
prealabila a unor leziuni placentare sub aciunea agentului patogen, ca de exemplu, T. pallidum, Brucella, Coxiella
burnetii (agentul febrei Q). Alteori, infecia are loc fr modificri placentare (infecia variolic, rujeolic, hepatitic
etc.).
c) Infecia intrapartum se produce n timp ce ftul traverseaz cile genitale (la expulzie), cu microorganisme
patogene ale tractului genital matern (oftalmia i conjunctivita gonococic a nou-nascuilor).
d) Infecia postpartum se produce dup natere. In aceast categorie sunt cuprinse majoritatea infeciilor omului i
animalelor. Ele se manifest n special dup epuizarea imunitii pasive, conferit de transferul anticorpilor materni
prin placent i colostru.
In raport cu originea microorganismelor care le produc, infeciile sunt de dou categorii:
- exogene, provocate de microorganisme care ptrund pe o cale adecvat;
- endogene, provcate de microorganisme autohtone (indigene), potenial patogene ale microbiotei normale,
datorit scderii rezistenei locale sau generale a gazdei, dup iradiere, dup tratamentul cu medicamente
citotoxice, hormoni corticosteroizi, malnutriie, obstrucia cilor de excreie. Aceste infecii nu induc un rspuns
imun detectabil i au tendina s revin ciclic sau s evolueze lent.
Din punct de vedere microbiologic, starea caracteristic a organismului infectat cu un agent patogen, nainte
de declanarea simptomelor este aceea de contaminare.
Colonizarea sau multiplicarea are loc dup ptrunderea agentului infecios pe o cale adecvat. Multiplicarea
realizeaz condiia cantitativ obligatorie a procesului infecios, deoarece, n mod obinuit, doza contaminant a
agentului patogen este prea mic pentru a iniia imediat procesul infecios. Cu ct tulpina este mai virulent, cu att
doza contaminant necesar iniierii infeciei este mai mic.
Dup contaminare, agentul patogen se multiplic la poarta de intrare sau este transporat prin snge i limf,
la nivelul unor situsuri specifice localizate la distan.
Consecina direct a colonizrii (multiplicrii) agentului patogen la poarta de intrare, local se constituie un focar
de inflamaie, adic o reacie de aprare local a organismului, cu mobilizarea leucocitelor. Rezultatul inflamaiei
este supuraia (formarea puroiului), la nivel cutanat i la nivelul mucoaselor respiratorie, digestiv, urinar, genital.
Modalitaile de manifestare a patologiei infecioase

In funcie de natura agentului patogen, de preponderena unuia sau altuia dintre factorii de virulen,
patologia infecioas mbrac urmtoarele aspecte:
a) ntoxicaia de natur bacterian fr infecie, este o situaie de excepie, n cazul botulismului. Cl. botulinum se
multiplic n alimentele conservate i produce toxina. Consumul unor astfel de alimente determin intoxicaia.
b) oxiinfeciile sunt procese alterative produse de bacteriile care se multiplic la poarta de intrare i elibereaz
toxine difuzibile n organism. De exemplu, Cl. tetani se multiplic n plaga anaerob provocat de rnire, iar toxina
ajunge prin difuzie axonal retrograd, la motoneuronii din coloanele anterioare ale mduvei, unde i exercit
efectul. Asemntor, C. diphteriae se multiplic la nivelul mucoasei faringiene, iar toxina determin efecte
patologice la distan, asupra fibrei musculare cardiace, celulei nervoase sau glandelor suprarenale;
c) oxiinfeciile alimentare sunt rezultatul consumului alimentelor infectate (carne, lapte, ou) provenite de la
animalele bolnave sau contaminate n timpul manipulrii. De exemplu, Salmonella sp. i Str. aureus se multiplic
excesiv n alimente (carne) i concomitent se acumuleaz endotoxine i respectiv enterotoxine. Consumul
alimentelor echivaleaz cu ingestia culturii bacteriene. Concomitent cu efectele toxinelor se manifest i procesul
infecios iniiat de celulele vii ingerate;
d) nfecia localizat (neinvaziv) este produs de agenii patogeni care de obicei rmn localizai la poarta de
intrare n cursul ntregului proces infecios. Toxinele eventual sintetizate, se rspndesc sistemic, pe cale sanguin
(de exemplu, C. diphteriae, Cl. tetani). In aceste cazuri, infecia local are caracterul unei toxiinfecii. O form
particular a infeciei locale este infecia de focar. Aceasta este nsoit de o reacie inflamatorie minim la nivelul
focarului iniial, dar se exprim prin fenomene morbide la distan. Maladia reumatismal este considerat ca o
infecie tipic de focar, n timpul creia streptococul localizat la poarta de intrare (amigdale) elimin substane cu
efect alterativ i alergizant. Uneori, infecia localizat este o caracteristic a microorganismelor lipsite de invazivitate
e) Infeciile invazive sunt produse de agenii infecioi care, dup o perioad iniial de multiplicare la poarta de
intrare, se rspndesc la distan pe diferite ci:
- prin contiguitate, tipic agenilor infecioi cu multiplicare intracelular (virusuri, rickettsii). Dup eliberare prin
necroza celulei, prin nmugurire, prin permeabilizarea sau ruperea membranei, agenii infecioi infecteaz
celulele sensibile nvecinate;
- prin continuitate, n cazul agenilor patogeni care se multiplic ntr-un esut prevzut cu un sistem canalicular.
Diseminarea se face din aproape n aproape. Astfel, infeciile respiratorii progreseaz spre bronhii (bronite),
esutul pulmonar (pnreumonii), pleure (pleurite). De la nivelul apendicelui, agentul diseminat produce
peritonita. La nivelul cilor urogenitale i biliare, agentul infecios ntlnete o rezisten minim conferit de
scurgerea secreiilor i de unele manifestri de mobilitate local, orientate n sens opus progresiei infeciei;
- pe cale limfatic. De la nivelul focarului infecios primar, agenii infecioi sunt preluai de curentul limfatic.
Consecina imediat este inflamarea vaselor limfatice i a ganglionilor regionali (limfadenita). Infecia poate s
progreseze pn la vrsarea limfei n snge i rezultatul este bacteriemia sau viremia. Agenii infecioi pot
trece direct n snge, la nivelul leziunilor pereilor vasculari.
Bacteriemia semnific prezena unui numr mic de bacterii n torentul circulator, pentru o perioad strict
limitat de timp. Sistemele de aprare, n special sistemul fagocitar, elimin bacteriile circulante. Bacteriemia este
consecutiv proceselor infecioase acute pulmonare, interveniilor chirurgicale, extraciei dentare, absorbiei
intestinale i chiar periajului dentar. In snge, cu rare excepii (bacilul carbunos, al pestei) bacteriile nu se multiplic.
De aceea, prezena lor n snge semnific o eliberare dintr-un focar de infecie, att de abundent, nct, temporar,
depete capacitatea protectoare a mecanismelor de aprare a organismului.
Extinderea infeciei pe una dintre cile menionate poate determina fie o infecie regional, care corespunde
extinderii infeciei (diseminrii) pe teritorii ntinse (de exemplu, sistemul limfatic regional i eventual vasele
sanguine tributare zonei), fie o infecie generalizat.
Dintr-o infecie regional, agenii patogeni diseminai pe o cale adecvat pot dobndi localizri secundare, n
orice esut sau organ, unde iniiaz noi focare infecioase. Aceste localizri pot fi unice (de exemplu, pe valvulele
cardiace, n plmni, meninge, ficat, vezica biliar, creier, rinichi etc.) sau multiple (miliare) denumite
septicopioemii, care evolueaz spre infecii generalizate.
Diseminarea sanguin determin infecii generalizate. Ele sunt precedate de trecerea masiv a bacteriilor
dintr-un focar infecios, n snge i semnific incapacitatea mecanismelor de aprare a gazdei de a reaciona eficient
fa de agentul infecios. Existena stabil a unui numr mare de bacterii n snge caracterizeaz infecia septicemic.
Septicemia este consecina descrcrii masive de bacterii dintr-un focar de infecie, vascularizat. Starea septicemic
poate fi nsoit de toxemie, ca urmare a difuziei toxinelor din focar (abces, meningit).
Uneori, faza septicemic nu este precedat de multiplicarea agentului patogen la poarta de intrare. Agenii
patogeni ai infeciilor transmise de insectele hematofage (tifos exantematic, febra recurent) sau prin muctur
(leptospiroze) strabat mucoasele i trec direct n snge.
Infecia bacterian produce modificri de tip alterativ ale organismului gazd. Ele sunt primare (directe),
datorate factorilor de patogenitate bacteriana (intoxicaii, toxiinfecii, bacteriemii) i secundare, mediate de factorii
umorali i celulari ai sistemului imunitar (strile de hipersensibilitate).
Posibiliti de evoluie a procesului infecios
Infecia poate evolua n dou modaliti: inaparent sau aparent, ca boal infecioas.
Infecia inaparent caracterizeaz acele situaii n care, procesul infecios nu se exteriorizeaz prin
simptomatologie clinic. De exemplu, infecia tuberculoas inaparent se detecteaz prin reacia de hipersensibilitate
ntrziat la tuberculin. Reacia este pozitiv la un procent mare de indivizi, dar maladia tuberculoas clinic se
manifest la un procent mic din totalul persoanelor pozitive pentru testul tuberculinei. De cele mai multe ori,
infeciile inaparente se detecteaz prin reacii serologice in vitro sau prin reacii de hipersensibilitate in vivo.
Uneori, infecia asimptomatic poate fi mortal. Explicaia const n paralizia mecanismelor de aprare a
gazdei.
Infecia aparent este cea care se manifest printr-un ansamblu de semne clinice obiective i subiective,
specifice i nespecifice, consecine ale alterrilor produse de agentul infecios i de produsele activitii sale.
Maladia infecioas prezint urmtoarele caracteristici; a)este produs de microorganisme vii sau de toxine
ale microorganismelor; b)poate realiza o imunitate specific de durat variabil; c)organismul bolnav poate deveni
sursa de mbolnvire a indivizilor sntoi; d)este specific, n sensul c aceiai maladie este produs totdeauna de
acelai agent cauzal, dei forma clinic se poate prezenta sub aspecte variate.
Etapele maladiei infecioase
In evoluia sa, procesul infecios aparent parcurge mai multe etape distincte, separate in timp.
Perioada de incubaie sau perioada iniial este intervalul de timp scurs ntre momentul ptrunderii
agentului patogen n organism i acela al debutului maladiei. Perioada este lipsit de simptome clinice evidente.
Durata ei este variabil, in funcie de natura agentului patogen, iar pentru acelai agent, n raport cu doza infectant,
cu virulena agentului patogen i cu reactivitatea imunitar a gazdei i se msoar n zile, sptmni, luni sau este
foarte scurt. Pentru infeciile exogene, durata incubaiei se poate determina relativ precis, prin infecia
experimental a animalelor de laborator sau a voluntarilor. Pentru infeciile endogene, perioada de incubaie nu se
poate determina. Din momentul contaminrii este posibil scurgerea unei perioade foarte lungi de timp pn cnd
agentul poate s iniieze un proces infecios. In aceast perioad, agentul patogen se multiplic, se localizeaz la
nivelul situsului receptiv i eventual elaboreaz substane toxice.
Cel mai adesea, agenii infecioi manifest un organotropism evident, deoarece, n general, i gsesc
condiiile optime de dezvoltare ntr-un anumit esut. De exemplu, indiferent de calea de ptrundere, vibrionul holeric
se localizeaz n intestinul subire, bacilul dizenteric n mucoasa intestinului gros, Brucella n placenta bovinelor
i ovinelor, datorit concentraiei mari de eritrol (dar nu n placenta uman), Rickettsia prowazeki n celulele
epiteliale ale capilarelor SNC, B. pertusis exclusiv n mucoasa bronsic.
B. anthracis se multiplic n orice esut, chiar i n snge.
Debutul bolii este marcat de momentul n care numrul de ageni infecioi i cantitatea de toxine acumulate
au atins un nivel critic. Debutul poate fi brusc sau lent i este caracterizat din punct de vedere clinic, prin instalarea
(brusc sau gradat) a semnelor bolii: febr, cefalee, frisoane, algii musculo-articulare. Debutul marcheaz nceputul
perioadei de invazie a agentului infecios de la locul multiplicrii primare sau a eliberrii unei cantiti prag de
toxin, spre noi zone sensibile, iar din punct de vedere cronologic i clinic semnific nceputul perioadei de stare.
Perioada de stare este intervalul de timp, n care maladiile infecto-contagioase i desfoar un tablou
clinic cu simptome caracteristice, de amplitudine maxim, decisiv pentru evoluia ulterioar. In aceast perioad
poate s survin decesul.
La sfritul perioadei de stare, simptomele dispar brusc in crisis (de exemplu, n pneumonia bacterian),
nsoit de sterilizarea bacteriologic sau lent in lysis (in cazul febrei tifoide). Organismul se poate steriliza sau
poate s rmn infectat pentru o perioad nedefinit de timp.
In perioada de stare, organismul se imunizeaz abundent cu antigene ale agentului patogen i se sintetizeaz
anticorpi. Imunizarea are ca rezultat, de regul, sterilizarea bacteriologic sau virologic a organismului. Uneori,
organismul nu se sterilizeaz i n focarele de infecie greu accesibile efectorilor raspunsului imun, agentul persist,
consecina fiind o infecie cronic.
Convalescena este perioada de timp n care organismul i reface potenialul de activitate, anterior
mbolnvirii.
Infecia cronic corespunde unei stri de echilibru ntre agentul infecios i organismul gazd, caracterizat
prin faptul c vindecarea clinic (dispariia simptomelor) nu este nsoit de sterilizarea organismului. Focarele de
infecie cronic au localizri greu accesibile factorilor de aprare a organismului sau medicaiei: n SNC, n viscerele
parenchimatoase (ficat, rinichi, splin), n sinusurile osoase, n glandele bine ncapsulate (prostata). Infecia cronic
poate s persiste fr simptome clinice (sifilisul latent) sau poate evolua cu reacutizri intermitente la diferite
perioade (bruceloza, tuberculoza, sifilisul teiar).
Starea de purttor este, fie consecina unei infecii cronice, fie a persistenei pentru o perioada de timp, a
unui focar de infecie, n organismele clinic sntoase. Uneori, fotii bolnavi tolereaz la nivelul mucoaselor, agentul
patogen pe care l elimin timp de cteva sptmni (Str. pyogenes, C. diphteriae, V. cholerae). Alteori, bacteriile i
virusurile sunt eliminate pentru perioade ndelungate (de ordinul anilor): S. typhimurium rmne localizat n vezica
biliar, de unde se elimin intermitent, iar bolnavii de difterie pot rmne purttori ai bacilului C. diphteriae.
Purttorii creeaz probleme epidemiologice dificile, deoarece reprezint izvoare de infecie greu de depistat.
Purttorii sunt foarte periculoi pentru sntatea public, mai ales dac vin in contact cu alimentele, ca manipulatori
sau preparatori ai acestora.
Tipuri de evoluie epidemiologic a infeciei
Din punct de vedere epidemiologic, maladia infecioas poate evolua pe mai multe nivele de extindere
spaio-temporal i incidental:
- evolutia sporadic semnific apariia cazurilor izolate de mbolnvire, att n timp ct i n spaiu;
- evoluia endemic este definit prin apariia cazurilor relativ rare de infecie, care se menin numeric constante
ntr-o colectivitate i apar cu relativ regularitate, de obicei sezonier, la intervale variabile de timp. Majoritatea
indivizilor populaiei sunt imunizai i deci indemni fa de agentul infecios;
- evoluia epidemic, caracterizeaz evoluia rapid a unei infecii ntr-un interval scurt de timp, cu un numr
mare de cazuri clinice intr-o colectivitate (cmin, cazarm, sat, regiune, ar). Se cunosc epidemiile de cium,
grip, rujeol, scarlatin;
- evoluia pandemic este aceea in care maladia infecioas se extinde foarte rapid pe un teritoriu foarte larg (ri,
continente), cu un numr foarte mare de cazuri clinice. Este caracteristic infeciei gripale i este usurat de
mijloacele de deplasare rapid, la distane foarte mari.
Fa de un agent patogen, absent n mod obinuit dintr-un areal, populaia poate fi foarte susceptibil. La
primul contact cu populaia receptiv, agentul patogen declanseaz o epidemie exploziv, dar odata cu instalarea
strii de imunitate specific, incidena maladiei scade.
Dac agentul patogen i modific specificitatea antigenic, epidemia evolueaz i ntr-o populaie
imunizat, deoarece, fa de noile variante antigenice, populaia nu posed anticorpi specifici.
Epidemiile sunt condiionate de standardul de via al comunitii. Maladia tuberculoas este o reflectare a
acestei condiii, n timp ce bolile venerice sunt favorizate de promiscuitatea sexual.
ROLUL MICROORGANISMELOR IN CIRCUITUL GLOBAL AL MATERIEI IN NATUR

Organismele fototrofe (plante, alge, bacterii fotosintetizante) sintetizeaz substane organice, pornind de la
CO2, apa i sruri minerale, utiliznd energia solar pe care o transform n energie chimic.
Unele substane minerale au un rol biologic primordial (C, N, O, H, S, P, Na, K, Fe), iar altele sunt necesare
numai n cantiti foarte mici (Mn, Mg, Zn, Cu, Co, Mo, B, etc.).
Biomasa produs n fotosintez este preluat parial de ctre organismele heterotrofe. Resturile organice
vegetale i animale se rentorc n sol i ape, dar sunt neutilizabile de ctre plante. Solul pierde astfel permanent
substane anorganice prin ncorporarea lor n substana organic. Se adaug pierderile determinate de eroziune, de
depunerea unor compui minerali n sedimente i roci sedimentare sau stocate sub forme ce evolueaz spre stadiul de
combustibili fosili (crbune, iei). Continuarea acestui proces ar produce n timp, epuizarea formelor utilizabile,
situaie incompatibil cu existena vieii. Fenomenul epuizrii este npiedicat de faptul c microorganismele din sol
i ape desfoar permanent o puternic aciune de mineralizare a substanelor organice de provenien vegetal sau
animal.
Ciclurile biogeochimice nsumeaz cile de circulaie a elementelor biogene n natur, prin care trec de la
forma anorganic, la forma organic, pentru a reveni la forma anorganic din compartimentul abiotic. n ciclul
biogeochimic intr n aciune reacii fizice (solubilizare, precipitare, volatilizare) i chimice (oxidri, reduceri,
hidrolize), precum i activiti biologice (degradri i mineralizri, conversie organic prin biosinteze).
Ciclurile diferitelor elemente biogene sunt strns interconectate i interdependente, realiznd n ansamblu,
ciclul global al materiei n natur. De exemplu, bacteriile proteolitice, care descompun proteinele la CO 2, NH3 i H2S
sunt implicate n trei cicluri: al C, N i S.
Influena omului perturb capacitatea proprie de echilibrare a unui ciclu, producnd, uneori, modificri
severe i greu reversibile ale mediului: creterea concentraiei CO 2 n atmosfer, ca o consecin a arderii
combustibililor fosili, poluarea sub diferite forme, cu un aport excesiv de materie i energie.
n circuitul materiei n natur, rolul microorganismelor este esenial. Fr microorganisme n-ar putea exista
plante, iar n lipsa lor, viaa animalelor ar nceta. Microorganismele sunt tot att de indispensabile vieii, ca i sursa
de energie pe care o reprezint soarele.
Circuitul biogeochimic al azotului
Azotul este un element esenial pentru existena vieii n biosfer, deoarece este inclus n structura tuturor
proteinelor i acizilor nucleici. Dei reprezint 79% din coninutul atmosferei, azotul se gsete aproape totdeauna n
forme inaccesibile plantelor i animalelor.
Azotul atmosferic, diatomic (NN) este un gaz inaccesibil majoritii sistemelor biologice. Se adaug
cantiti importante de azot organic din organismele vii i din humus, precum i din sedimentele din mri i oceane.
n circuitul azotului n natur, azotul mineral (NH 4+, NO3-) este nglobat de plante sub forma constituienilor
celulari. |esuturile vegetale i animale moarte sunt mineralizate n procesul de proteoliz i amonificare i convertite
prin nitrificare, la forme din nou accesibile plantelor. Pierderile de azot din sol, legate de recoltarea plantelor de
cultur, precum i de denitrificare i levigaie depesc (pentru solurile cultivate) cantitatea de azot accesibil. De aici
decurge necesitatea mbogirii solului n azot combinat, fie pe cale natural prin fixarea biologic a azotului
atmosferic, fie artificial, prin adugarea ngrmintelor azotate. Se adaug azotul fixat pe cale abiotic prin iradieri,
descrcri electrice din atmosfer i cel rezultat din procese de combustie (echipamente electrice, motoare cu
combustie intern, etc.).
Circuitul biologic al azotului este un proces lent, care se desfoar sub aciunea a peste 100 de genuri de
bacterii. Azotul gazos atmosferic este convertit la forme fixe (NH 4+, NO3-, NO2-), care sunt folosite de plante i
ncorporate sub forme organice n componente structurale.
Etapele eseniale ale circuitului azotului, unele desfurate n aerobioz, iar altele n anaerobioz sunt:
fixarea azotului molecular, amonificarea, nitrificarea (nitritarea i nitratarea), denitrificarea, toate mediate numai de
bacterii.
Fixarea biologic a azotului este realizat n exclusivitate de bacterii chimiotrofe i fototrofe.
Din numrul total de 260 de genuri de bacterii chemotrofe, circa 10% conin nitrogenaz i au capacitatea de
a fixa N2. Ele includ specii din genurile: Alcaligenes, Aquaspirillum, Arthrobacter, Azospirillum, Azotobacter,
Bacillus, Beijerinckia, Campylobacter, Citrobacter, Clostridium, Derxia, Desulfotomaculum, Desulfovibrio,
Enterobacter, Erwinia, Frankia, Klebsiella, Methylobacter, Methylosinus, Methylococcus, Mycobacterium,
Propionibacterium, Rhizobium, Thiobacillus, Xanthobacter. Unele (Rhizobium, Frankia, Azospirillum) formeaz
simbioze cu diferite grade de specificitate, iar celelalte sunt organisme libere, fixatoare de N 2. Unele sunt aerobe
(Azotobacter, Beijerinckia, etc.), altele anaerobe (Clostridium, Desulfovibrio, etc.), iar celelalte, n majoritate, aerobe
facultativ anaerobe (Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter).
Mulder i colab. (1965) consider c bacteriile libere fixatoare de N 2 au o contribuie minor la economia
global a acestui element n natur i la fertilitatea solului: 2-3 kg N/ha/an.
Din cele 12 genuri de bacterii fototrofe identificate pn acum, 92% au capacitatea de a fixa N 2:
Chlorobium, Chromatium, Pelodictyon, Rhodospirillum, Thiocapsa, Thiocystis, etc. Ele fac fotosintez anoxigenic
i de aceea importana lor este limitat la mediile anoxice, i anume la sedimentele din lacurile puin adnci.
Fixarea biologic a azotului n asociaie cu plantele este rezultatul unei cooperri mai mult sau mai puin
intime cu planta gazd. n aceast categorie sunt cuprinse: simbioza Rhizobium cu plante leguminoase i
neleguminoase; simbiozele asociative; simbiozele foliare; actinorizele; cianobacteriile simbiotice fixatoare de N 2, n
asociaii cu fungii din clasa Ascomycetes sau Basiomycetes n licheni; cu muchii din grupul Hepaticae; cu
pteridofitele n asociaia Azolla-Anabaena azollae; cu gimnospermele (Cycas, Ceratozamia, etc.); cu angiospermele
(Gunnera sp.).
Simbioza Rhizobium-plante leguminoase este sistemul fixator cel mai eficient. De exemplu, capacitatea
fixatoare a sistemului Rhizobium/lucern sau Rhizobium/lupin poate reprezenta ntre 350 i 600 kg N/ha/an.
Amonificarea
Cea mai mare parte a azotului din straturile superficiale ale solului este prezent sub form de combinaii
organice. El provine din proteinele vegetale sau animale, din biomasa microbian, din excretele animale etc.
n climatul temperat, o rezerv major de azot organic este asociat cu humusul i devine disponibil dup
mineralizare lent. Extractele de sol conin, practic, toi aminoacizii existeni, legai n diferite combinaii organice i
mici cantiti (2-400 ppb) ca aminoacizi liberi, glucide aminate, baze purinice i pirimidinice, etc.
Mineralizarea azotului organic din sol este un proces esenial pentru ciclul acestui element n natur,
deoarece asigur conversia la forme anorganice, utilizabile de ctre plante i microorganisme.
Amonificarea evolueaz n dou etape:
- etapa nespecific, de proteoliz, efectuat de microorganisme heterotrofe: Pseudomonas sp., Bacillus sp.,
Clostridium, Aspergillus, Mucor etc., crora li se adaug efectul proteazelor de origine vegetal sau animal. n
aceast etap, moleculele organice complexe sunt hidrolizate la molecule mai mici care pot ptrunde n celule, fiind
utilizate de microorganisme sau sunt degradate n etapa urmtoare. Enzimele implicate n etapa nescpecific sunt:
endopeptidaze, care atac lanul polipeptidic n interior, elibernd peptide de diferite lungimi. Unele endopeptidaze
au aciune nespecific, iar altele au aciune specific deoarece recunosc anumite resturi de aminoacizi i hidrolizeaz
legturile peptidice din vecintatea lor. Peptidazele sunt exopeptidaze (amino- sau carboxipeptidaze). Ambele tipuri
de enzime elibereaz di- sau tripeptide, care sub aciunea di- sau tripeptidazelor elibereaz aminoacizi liberi. Acest
proces intereseaz numai o mic fracie a azotului organic, restul fiind rezistent la degradare datorit formrii
complexelor ligninoproteice sau datorit ncorporrii n reeaua cristalin a argilelor minerale;
- etapa specific este rezultatul aciunii microorganismelor din sol care asigur degradarea aminoacizilor,
hidroliza acizilor nucleici i a ureii, a acidului uric, a glucidelor aminate i conversia lor la NH 3.
n sens strict, amonificarea este procesul de eliberare a NH 3, prin aciunea microorganismelor asupra
moleculelor rezultate din descompunerea proteinelor, acizilor nucleici etc. Producerea i eliberarea NH 3 sub aciunea
microorganismelor de putrefacie nu este un proces de amonificare.
NH3 este rezultatul reaciilor de dezaminare, care se produc pe mai multe ci:
1) Dezaminarea oxidativ, descris la Proteus sp., Ps. aeruginosa, E. coli etc., dup reacia:
2) Dezaminarea reductiv, caracteristic aproape exclusiv bacteriilor anaerobe (Clostridium sp.), urmeaz calea:
3) Dezaminarea desaturant, descris la E.coli, Proteus sp., Clostridium sp., Neurospora, evolueaz dup reacia:
4)Dezaminarea prin deshidratare, descris la E. coli i N. crassa are loc printr-o serie de reacii cuplate:
NH3 format, fiind volatil este parial eliberat n atmosfer, unde poate fi expus transformrilor fotochimice
sau reacioneaz direct cu oxizii formnd sulfat de amoniu. Acetia pot reveni n sol sau n ap, odat cu ploile sau
prin depuneri de particule.
O alt parte din NH3 este adsorbit temporar pe complexele argilo-humice, sau este convertit n condiii de
aerohioza la NH4+, care este oxidat la nitrii i ulterior la nitrai.
Amonificarea este un proces lent, care evolueaz n condiii optime n straturile superficiale ale solurilor
bine structurate i aerate, la pH apropiat de neutralitate.
n faza nespecific, acizii nucleici provenii din celulele vegetale, animale i din microorganisme sunt clivai
n polinucleotide i n final, rezult mononucleotide. Degradarea este catalizat de ribonucleaze, dezoxiribonucleaze
etc., sintetizate de bacterii.
n etapa urmtoare, purinele i pirimidinele neutilizate de alte microorganisme sunt degradate de bacterii
pn la stadiul de uree, care este supus procesului de amonificare.
Amonificarea ureei este rezultatul aciunii microorganismelor. Ureea din sol provine din excreii, din
metabolismul microorganismelor i din degradarea bazelor purinice i pirimidinice.
Conversia ureei la NH3 decurge dup reaciile:
Activitatea amonificatoare a urobacteriilor este foarte important, deoarece ureea conine 47% N, care altfel
ar rmne neutilizat de plante. Cantitatea de uree eliminat n natur este foarte mare (zeci de milioane de tone/an).
Amonificarea este o etap esenial a circuitului azotului n natur, prin care azotul organic este mineralizat
n forma amoniacal, utilizabil ca atare sau dup oxidarea la nitrai, n nutriia mineral a plantelor.
Nitrificarea
Nitrificarea este un proces biologic prin care NH 3 sau alte forme reduse ale azotului anorganic, rezultate n
procesul de amonificare sunt oxidate la nitrai, forma cea mai uor asimilabil de ctre plante.
Nitrificarea este realizat de bacterii chemolitotrofe obligate, n dou etape succesive strns cuplate:
Bacteriile care oxideaz NH3 (nitrit-bacteriile sau nitrosobacteriile) sunt Gram negative (Nitrosomonas
europea, Nitrosococcus nitrosus, Nitrosospira briensis, Nitrosolobus multiformis, Nitrosovibrio tenuis) i au sisteme
membranare complexe, intracelulare.
Bacteriile care oxideaz nitriii (nitrat-bacteriile) sunt reprezentate de Nitrobacter winogradskyi, Nitrococcus
mobilis, Nitrospira gracilis, N. marina.
Biochimia nitrificrii este relativ puin cunoscut, deoarece bacteriile se dezvolt foarte greu pe medii
artificiale (durata unei generaii este de 10 ore-cteva zile).
Se admite c nitrificarea are loc dup urmtoarele reacii:
1) NH4+ + 1/2 O2 NO2- + H2O + 2 H+ (Nitritarea)
2) NO2- + H2O NO3- + 2 H+ + 2e- (Nitratarea)
Nitriii apar constant n condiii de laborator ca produi intermediari de nitrificare, dar existena lor n sol nu
a fost evideniat. De aceea s-a presupus existena unor bacterii care oxideaz NH 3 direct la nitrai. n realitate, cele
dou grupuri fiziologice de bacterii coexist n strns asociere n sol i nitriii rezultai din oxidarea NH 3 sunt
utilizai imediat de nitratbacterii. Nitriii sunt toxici i de aceea, transformarea lor rapid are rol protector pentru
organismele din sol.
Procesul nitrificrii este favorizat prin ameliorarea aerrii solului. Nitraii sunt uor levigai i ajung n pnza
de ap freatic, unde produc efecte negative: levigarea reprezint o pierdere a azotului combinat din sol; nitritul
reacioneaz cu compui aminai din apa freatic i formeaz nitrozamine cancerigene; nitratul netoxic per se poate
fi redus la nitrii de ctre bacteriile din microbiota intestinal i determin fenomene toxice consecutive combinrii
lor cu hemoglobina.
Denitrificarea
Denitrificarea este un proces biologic catalizat n exclusivitate de bacterii i const n reducerea
dezasimilatorie a unuia sau a ambilor oxizi ionici ai azotului (NO 3- i NO2-), la oxizi gazoi, ca oxidul nitric (NO) sau
oxidul nitros (N2O); acetia pot fi ei nii redui la N 2. Simultan, are loc oxidarea materiei organice din mediu, cu
producerea energiei.
Bacteriile denitrificatoare formeaz un grup biochimic i taxonomic heterogen, care reunete peste 75 de
genuri diferite. Unele sunt autotrofe i se dezvolt n prezena CO 2 i a H2 sau a compuilor redui ai sulfului, dar
cele mai multe sunt heterotrofe: Alcaligenes faecalis, Azospirillum sp., Pseudomonas aerogenes, P. denitrificans etc.
Nici o bacterie denitrificatoare nu este strict anaerob. Ele prefer respiraia aerob i au catena
transportatoare de electroni.
Denitrificarea este mai activ n condiii de anaerobioz sau de tensiune sczut a O 2, n ape stagnante, n
soluri umede sau inundate, n sedimente acvatice etc.
Biochimia denitrificrii este complex i numai parial cunoscut. Este un proces multienzimatic determinat
de activitatea enzimelor nitrat-reductaz, nitrit-reductaz, oxidnitric-reductaza, care catalizeaz secvena de reacii:
NO3- NO2- NO N2O N2
Reducerea asimilatorie nitrailor este efectuat de un numr foarte mare de bacterii, fungi filamentoi,
levuri, alge, plante superioare. Rezultatul este producerea de NH 3, care nu se acumuleaz, deoarece este utilizat de
celule pentru biosinteza constituienilor celulari.
Circuitul oxigenului
O2 reprezint 21% din aerul atmosferic, dar se gsete i ntr-o serie variat de compui organici i
anorganici din organismele vii, precum i ca O2 fosil, legat de zcminte i depozite de combustibili fosili.
Acumularea de O2 liber n atmosfer, considerat cea mai profund transformare biogeochimic, a nceput
acum 1,8 miliarde ani. Fenomenul a avut o importan covritoare, deoarece organismele multicelulare au evoluat
numai dup ce atmosfera s-a mbogit cu acest element, prin fotosintez. Cloud i Gilbert (1970) apreciaz c cea
mai mare parte, daca nu chiar tot O 2 liber din atmosfer, este de origine biogen i provine prin fotoliza apei sub
aciunea energiei luminoase, n cursul fotosintezei.
Oxigenul este produs prin aciunea plantelor verzi, a algelor i a procariotelor din grupul Oxyphotobacteria
(Cyanobacteriales, Prochlorophytes i Halobacterium) n zona fotic a mediilor acvatice.
O parte din O2 eliberat n atmosfer este convertit sub aciunea radiaiilor ionizante la ozon (O 3) i sustras
din circulaia biogeochimic. O3 asigur funcia de ecran protector, oprind UV duntoare pentru organismele vii.
O alt parte din produii primari ai fotosintezei sunt convertii n biomasa vegetal - ca oxigen structural,
component al moleculelor din organismele vii (glucide, aminoacizi, lipide, etc.). Oxigenul reprezint 1/4 din atomii
materiei vii.
n sfrit, o parte din oxigen este scos din ciclul biologic ca parte a ionului carbonat (CO 32-), fiind precipitat
din soluie i stocat n rocile calcaroase.
Oxigenul provenit prin biofotoliza apei i se adaug cel provenit din surse nebiologice sub form de CO 2,
ap i oxizi anorganici. Ionii nitrat i sulfat sunt surse de oxigen pentru unele organisme, care i reduc NH 3 i
respectiv la H2S, care apoi sunt reoxidai, circulnd n biosfer. Rezervele de oxigen cele mai circulate sunt cel
atmosferic i dizolvat, din CO2 i din ap.
Rezervele de oxigen din materia organic vie sau neanimat, ca i cantitile mari de oxigen din compuii
minerali (inclusiv carbonai) sunt recirculate cu o rat foarte mic. Activitile umane influeneaza ciclul CO 2 n
biosfer, prin combustia crbunelui, a petrolului i a gazelor care mresc coninutul atmosferei n CO 2.
Rolul microorganismelor n circuitul oxigenului n natur este mai evident n mediile acvatice. Apele repede
curgtoare sunt bine oxigenate. Curenii oceanici asigur, n general, aportul de oxigen n apele oceanice i marine,
cu excepia apelor din golfuri, fiorduri sau din unele mri interioare.
O situaie special este aceea a unor bazine acvatice din regiunile temperate, n care vara are loc un proces
de stratificare, determinat de temperatur. Apele mai calde de la suprafa sunt separate de straturile profunde situate
sub termoclina (mai reci i mai dense). Straturile profunde devin anaerobe. Materia organic cade la fund, unde este
folosit ca surs nutritiv de organismele facultativ aerobe. Ele reduc i mai mult coninutul n oxigen al apelor
profunde. De aceea, n adncul acestor ape se gsesc numai microorganisme obligat anaerobe (cele care nu tolereaz
concentraii de O2 mai mari de 1% din cele atmosferice) i numai uneori de microorganisme microaerofile. La
nceputul iernii se realizeaz o rsturnare a straturilor de ap, care determin aerarea celor adnci: apele la
suprafa devin mai reci i mai grele dect cele profunde i asigur omogenizarea condiiilor pe ntreaga coloan de
ap. Datorit acestor fenomene, unele lacuri din regiunile temperate prezint un ciclu anual de trecere alternativ
sezonier a apelor profunde, de la aerobioz la anaerobioz i invers.
n rurile n care sunt deversate cantiti mari de substane organice sub form de ape uzate sau de poluare
industrial, concentraia oxigenului dizolvat scade semnificativ. Cantitatea mare de substan organic determin
creterea excesiv a bacteriilor heterotrofe i un deficit de oxigen.
Circuitul carbonului n natura
Carbonul, element biogen esenial pentru existena sistemelor biologice, se gsete n combinaii organice
sau anorganice, repartizate n rezervoare cu circulaie rapid, precum i stocat n forme care circul foarte lent sau
deloc.
Forma cea mai rapid circulant este CO 2 atmosferic, care reprezint 0,032% (320 ppm), echivalent cu o
cantitate global de 70.000 tone C. In apa mrii, C anorganic este prezent n soluie sub form de CO 2, H2CO3,
HCO3- i CO32- sau precipitat sub form de carbonai insolubili.
Atmosfera i hidro-ecosfera sunt strns legate, astfel nct asigur un schimb echilibrat de CO 2. Se apreciaz
c n fiecare an, 100 miliarde tone de CO 2 atmosferic sunt dizolvate n mare i o cantitate echivalent de CO 2 oceanic
este transferat n atmosfer. Un echilibru asemntor caracterizeaz schimburile dintre litosfer i atmosfer:
cantitatea de CO2 atmosferic fixat prin fotosintez rezult prin descompunerea substanelor organice [n etapa de
mineralizare. Cu excepia unor factori perturbatori de origine antropogen, concentraia CO 2 atmosferic nu este
expus unor variaii semnificative.
Circulaia CO2 (atmosfer sol i atmosfer ocean), ca i circulaia CO 2 C organic sunt foarte rapide,
datorit faptului ca rezervorul de CO 2 este limitat cantitativ. Dupa Stanier, Adelberg i Doudoroff (1970), n absena
recirculrii, [ntreaga rezerv de CO 2 ar fi fixat n fotosintez n circa 20 de ani, sau dup alii, n 40-50 de ani, dup
care orice form de via ar nceta s mai existe.
Circulatia biogeochimic a C implic existena a dou cicluri distincte: unul cu evoluie terestr i cellalt
oceanic, interconectate dinamic la interferena cu atmosfera.
Degradarea biologic a constituienilor vegetali
Substanele organice, componente ale peretului celular vegetal sunt polizaharidele, lignina i substanele
accesorii nestructurale.
Polizaharidele sunt glucide cu greutate molecular mare, cu rol predominat structural i sunt reprezentate
de celuloz, hemiceluloze, substane pectice (cu rol de liant), manani, galactani, glucani i xilani etc (fig 164).
Lignina, cel mai puin definit structural dintre constituienii lemnului, reprezint 20-35% din structura
acestuia.
Substanele accesorii (nestructurale) sunt extractibile (terpeni, fenoli, rini etc.) sau neextractibile (regsite
n cenui ca oxalai, carbonai, cristale de siliciu). Ele mresc rezistena celulozei la degradare i la atacul insectelor.
Fig. 164. a. Polimerizarea monozaharidelor. b. Structura polizaharidelor comune.
Structura i morfologia fibrelor de celuloz

Dei structura primar a celulozei este relativ simpl, structura sa teriar (sau cuaternar) este foarte
complicat, fapt care explic marea sa rezisten la degradarea enzimatic.
n structurile naturale, circa 100 molecule de celuloz sunt legate mpreun pentru a forma fibrile
elementare sau protofibrile. Ele au lungimea de circa 100 A, limea de 40 A i grosimea de 30 A i sunt alctuite din
molecule de celuloz aliniate paralel i legate prin puni de H. Un numr de circa 20 ( 5) fibrile elementare se
agreg ntr-un fascicul lung i subire numit microfibril. Prin asocierea a circa 250 microfibrile rezult o fibril, iar
din unirea a 1500 fibrile rezult fibra macroscopic, vizibil cu ochiul liber.
De-a lungul microfibrilelor, moleculele de celuloz conin zone extinse cu organizare ordonat,
corespunznd regiunile cristaline, ce alterneaz cu zone mai puin ordonate, numite paracristaline sau amorfe, uor
atacate de enzime i agenii fizici i chimici.
O consecin a modului de organizare foarte ordonat a fibrelor de celuloz este c nici o molecul de ap
sau de enzime nu poate intra n structura lor, motiv pentru care celuloza este inert n intestinul multor animale.
Pretratarea in vitro cu acizi sau alcali creeaz strucuturi deschise ce favorizeaz atacul enzimatic.
In celuloza nativ, regiunea cristalin poate reprezenta pn la 70% din lungimea microfibrilelor.
In plantele ierboase i n legume, celuloza reprezint circa 15% din greutatea uscat, iar n plantele
lemnoase, peste 50%.
Degradarea biologic a celulozei. Celuloza este constituient major al materialelor vegetale i cel mai
abundent material organic prezent n natur. Degradarea biologic a celulozei are o importan fundamental pentru
circuitul C n natur (fig. 165).
Din punct de vedere chimic, celuloza este un polimer linear, alctuit din uniti repetate de celobioza (4-o(-D-glucopiramozil)-D-glucopiranoza, respectiv din 8000-12000 uniti de anhidro-D-glucoza, unite prin legturi
glicozidice 1,4--D. Numrul unitilor i gradul de polimerizare sunt variabile n funcie de proveniena
moleculelor.
n condiii de laborator sau industriale se pot obine celuloze modificate fizic sau chimic prin tratare cu acizi
sau alcani, sau substituite chimic (de exemplu, trinitrofenil-celuloza sau carboximetil-celuloza).
Fig. 165. Structura chimic a celulozei (a) i hemicelulozei (b).
Microorganisme celulozolitice
Peste 200 de specii de microorganisme (eubacterii, actinomicete, microfungi (levuri, i fungi filamentoi) i
protozoare produc celulaze i degradeaz celuloza: Clostridium cellulovorans, C. cellulolyticum, C. thermocellum,
Bacillus cereus, B. polymyxa, B. licheniformis, B. subtilis, Cellulomonas fini, C. flavigena, Cytophaga sp.,
Sporocytophaga, Aspergillus sp., Phoma, Trichoderma, Verticilium Alternaria, Botrytis, Cephalosporium,
Chaetomium, Fusarium, Macrosporium, Penicillium, etc.
Sistemul enzimelor celulazice
Toate microorganismele care degradeaz celuloza cristalin produc sisteme celulazice, formate dintr-o
varietate de enzime care acioneaz cooperant. Sistemul enzimatic descris la Trichoderma reesi este alctuit din trei
tipuri majore de enzime:
1) Endo--1,4-glucanaza (EG) hidrolizeaz aleatoriu legturile -1,4-glicozidice din mijlocul moleculei de
glucoz. Nu atac celobioza, dar hidrolizeaz celodextrinele i celulozele substituite (carboximetilceluloza).
2) Celobiohidrolaza (CBH) este o exo--1,4-glucanaz. Acioneaz asupra celulozei, secionnd treptat
uniti de celobioz de la extremitatea nereductoare a catenei de polimer. Are o mare specificitate de substrat i este
capabil s degradeze peste 80% din celuloza cristalin.
3) -glucozidaza hidrolizeaz celobioza i celooligozaharidele, la glucoz. Nu atac celuloza i nici
celodextrinele cu g.m. mare. Dei nu este o celulaz per se, ci, n special o celobioz, - glucozidaza favorizeaz
procesul de degradare enzimatic a celulozei. Hidrolizeaz celobioza, mpiedicnd acumularea ei n mediu.
Capacitatea de a degrada celuloza natural implic sinteza ntregului sistem enzimatic. Multe
microorganisme pot degrada celuloza parial degradat, nu ns i celuloza nativ. Ele produc anumite enzime
celulozolitice, dar le lipsete una dintre enzimele eseniale.
Degradarea microbiana a hemicelulozelor. Hemicelulozele, polizaharide asociate cu celuloza n

structura peretelui celulelor vegetale, reprezint principala fraciune necelulozic a
polizaharidelor vegetale, reprezentnd 5-25% din greutatea uscat a acestora, n funcie de
specie i de vrsta plantelor.
Hemicelulozele izolate din esuturile vegetale, dupa tratamentul cu acizi minerali la cald elibereaz pentoze,
hexoze i uneori, acizi uronici. Pentozele sunt reprezentate de xiloz i arabinoz, hexozele, de manoz sau
galactoz, iar acizii uronici, de acidul glucuronic (C 6H10O7) sau de acidul galacturonic (C6H10O5).
Hemicelulozele apar sub forma unor polimeri lineari alctuii dintr-o singur pentoz (pentozani) sau hexoz
(hexozani). Pentozanii sunt xilani sau arabani, iar hexozanii sunt manani sau galactani. Hemicelulozele care conin
acizi uronici se numesc hemiceluloze poliuronidice, iar cele lipisite de acetia, celulozani.
Cel mai important celulozan este xilanul, format exclusiv din 50-150 resturi de xiloza, legate -1,4 sau
conine cantiti mici de L-arabinoz.
Degradarea enzimatic a hemicelulozelor este realizat de enzime extracelulare i evolueaz n dou etape
succesive:
- etapa conversiei moleculelor polimerice la oligoglucide sau la monomeri (xilotrioz, xilobioz, xiloza- n
cazul xilanului);
- etapa utilizarii moleculelor simple, ca sursa de C si energie.
Dupa modul de actiune, hemicelulazele sunt de doua tipuri: unele xilanaze sunt de tip endo, deoarece
scindeaza legaturile -1,4 din interiorul catenei polizaharidice; altele sunt de tip exo i atac polimerul la nivelul
extremitilor libere.
Microorganismele active sunt reprezentate de bacterii (Achromobacter, Bacillus, Cytophaga, Pseudomonas,
Streptomyces, Vibrio, etc) sau fungi (Aspergillus, Chaetomium, Penicillium, Rhizopus).
Degradarea microbiana a ligninei. Lignina este cel mai abundent material aromatic renoibil i, dup
celuloz, cantitativ, al doilea material organic n natur.
Lignina este un polimer aromatic tridimensional, insolubil n ap, alctuit din uniti fenil-propan, rezultat
prin cuplarea aleatorie a trei tipuri de alcooli precursori:
1) Alcoolul p-cumarilic, care n polimer formeaz uniti de p-hidroxifenil;
2) Alcoolul coniferilic, care formeaz uniti de guaiacil;
3) Alcoolul sinapilic, n polimer formeaz uniti de siringil.
Copolimerizarea relativ aleatorie a acestor alcooli determin formarea unui polimer heterogen, cu o mare
heterogenitate de structur i rezisten la degradare. Unitile de baz sunt meninute asociat prin legturi C-C sau
aril-eter.
Alcoolii precursori ai ligninei i nomenclatura atomilor de carbon din structura lor.
Cei trei monomeri precursori sunt prezeni n proporii variabile n funcie de specia
plantei, de tipul de esut etc.
Lignina este degradat de fungi i bacterii. Aciunea ligninolitic a bacteriilor este moderat. Principalii
ageni ai degradrii ligninei n natur sunt fungii putregaiului alb. Cel mai studiat este Sporotrichum pulverulentum,
care secret enzime ce degradeaz lignina i ali constituieni ai lemnului. Eficiena deosebit a fungilor putregaiului
alb, dupa Atlas i Bartha (1987), se datoreaz producerii unor ageni oxidani ca H 2O2, anionul superoxid (O2-),
radicalul hidroxil(-OH), oxigenul singlet ( 1O2), care rup legturile dintre subunitile componente ale ligninei,
producnd depolimerizarea acesteia.
Enzima esenial pentru degradarea ligninei este ligninaza (ligninperoxidaza), o oxireductaz, care conine hem. A
fost definit ca o oxigenaz care necesit H 2O2 (Tien i Kirk, 1984). In prezena H 2O2, ligninaza catalizeaz oxidarea
ligninei i a compuilor nrudii, cu producere de radicali cationici.
Mn-peroxidaza, prezent n mediul de cretere al fungilor putregaiului alb oxideaz fenolii i particip,
probabil la producerea apei oxigenate.
Fenoloxidazele sunt enzime extracelulare produse de fungii putregaiului alb. Rolul lor n degradarea ligninei
este puin cunoscut.
Descompunerea ligninei este un proces oxidativ, stimulat de creterea tensiunii oxigenului i are loc numai
n prezena unei surse de C mai uor metabolizabil i n condiiile limitrii sursei de azot.
Degradarea chitinei. Chitina este un polimer de N-acetil glucozamin, cu o structur asemntoare

celulozei, de care se deosebete prin prezena azotului n structura sa. Formula chimic
global este (C6H9O4.NH-CO-CH3)n. Este format dintr-un lan lung de uniti de N-acetil
glucozamin, dispuse ntr-un aranjament linear.
Structura chimic a chitinei.
Chitina este insolubil n ap, n solveni organici i n alcali concentrai. Poate fi solubilizat enzimatic sau
cu acizi minerali concentrai. Se gsete n peretele celular al fungilor (2,6-26% din greutatea uscat), la unele alge
verzi, la nematode, anelide, molute, celenterate, artropode. Chitina este degradat de unele bacterii de unii fungi.
Toate microorganismele chitinolitice produc o chitinaz extracelular care atac polimerul lung, producnd
separarea subunitilor de baz de N-N-diacetilchitobioza. Acestea sunt atacate de chitobiaz i hidrolizate la
glucozamin (2-amino-glucoz) i acid acetic, utilizabile ca surs de C i energie de alte microorganisme.
Chitinoliza are o amploare deosebit n mediul marin i oceanic i este un proces semnificativ pentru ciclul
biogeochimic al C.
Scoaterea din circuit a C organic sau anorganic
Unele substane rezistente sau chiar recalcitrante la degradare sunt scoase pentru perioade mai lungi sau
mai scurte din circuitele naturale. Scoaterea din circuit a unor cantiti mari de compui ai C, organici sau
anorganici, inaccesibile vieii reprezint imperfeciuni ale ciclului.
Humusul constituie o mare parte a substanei organice din sol. El se formeaz prin conversia intermediarilor
fenolici rezultai din degradarea ligninei. Humusul este foarte rezistent la degradarea microbian, componentele sale
avnd o vechime cuprins ntre 20 si 2 000 ani, stabilit prin studiile de datare cu C 14. Substanele humice reprezint
o situaie intermediar n raport cu cea a combustibililor fosili.
Depozitele anorganice de C se formeaz prin precipitarea CaCO 3, rezultat din combinarea acidului carbonic
dizolvat n apa mrii, cu Ca2+ n condiii slab alcaline.
Formaminiferele, molutele, coralii etc., formeaz depozite biologice de C anorganic.
Circuitul fosforului
Fosforul este un element esenial pentru existena sistemelor biologice, datorit prezenei sale n moleculele
de ADN, ARN, n fosfoplipidele din structura membranelor celulare, n glicerofosfai, unele coenzime, precum i n
moleculele de ADP i ATP. Fosforul este prezent n moleculele de fitin provenite din esuturile vegetale, n
compoziia oaselor, ca fosfat de Ca (85%) i ca fosfat de Mg(1,5%).
Rezervorul major de fosfor n natur este roca fosfatic apatita (3Ca3(PO4)3.CaF2), insolubil. In sol se gsete
sub forma fosfailor hidratai (FePO4.2 H 2O i AlPO4.2 H2O), ce provin din eroziunea lent a apatitei. Fosforul din
sol se gsete n proporie de 95-99% n forme inaccesibile direct plantelor i microorganismelor. Din aceasta, 3085% sunt compui organici, provenii din resturile vegetale, animale i din microorganisme (fitina, acizii nucleici,
fosfolipide, glucide fosforilate).
Fosfaii anorganici sunt insolubili (fosfai de calciu, fier, aluminiu) i solubili. In fosfaii primari (NaH2PO4),
numai una din cele trei valene ale PO 43- este legat de un metal. Fosfaii secundari (Na 2HPO4) au numai un atom de
H, iar cei teriari (Na3PO4) nici unul. Solubilitatea lor este progresiv mai mic. In mediile acvatice, concentraia
fosfailor este foarte mic, dar crete de cteva ori n celulele algelor i ale altor microorganisme. De aici sunt
transferai sub forma combinaiilor organice la animale care se hrnesc cu fitoplancton.
Microorganismele sunt implicate n patru mecanisme majore ale transformrii fosforului n circuitul su n
natur.
1) Mineralizarea compuilor organici ai fosforului din sol de ctre microorganisme heterotrofe i

regenerarea ortofosfailor solubili. Degradarea implic participarea unui numr de enzime de tipul nucleazelor,
fosfolipazelor, fosfatazelor, glicerofosfatazelor. Fitina, sarea de Ca i Mg a acidului fitic este degradat lent sub
aciunea fitazei produs de unele bacterii i microfungi. Compuii cu fosfor originari n celulele microbiene i
animale sunt degradai mai rapid i este favorizat de autoliza celulelor moarte. Ortofosfaii solubili rezultai la
sfritul procesului de mineralizare urmeaz dou ci: o parte sunt asimilai de microorganismele care i-au
solubilizat; o alt parte este convertit la forme greu solubile (fosfai de Ca, Mg, Fe, Al).
2) Solubilizarea fosfailor anorganici (Ca3(PO4)2 i a fosfailor de Fe, Mg, Al) i eliberarea fosfailor solubili
accesibili plantelor. In sol procesul are loc cu precdere n rizosfer.
3) Imobilizarea fosforului n celulele microorganismelor. Procesul are loc i n organismele plantelor i
animalelor, prin sinteza acizilor nucleici, fosfolipidelor, fitinei, glucidelor fosforilate, etc.
4) Procese de oxidare a P anorganic. Ortofosfatul este forma cea mai oxidat a P. Unele microorganisme
aerobe pot utiliza fosfiii (HPO32-), convertindu-i la fosfat dup reacia:
H3PO3 + 1/2/ O2 H3PO4
Acid fosforos
Acid ortofosforic
In anaerobioz, Cl. butyricum face reacia invers, de reducere a fosfatului la fosfit i la hipofosfit dup
reacia:
H3PO4 H3PO3 H3PO2
Acid hipofosforos
Recicularea fosforului n biosfer este numai parial, deoarece este asociat cu pierderi continue, care
sustrag cantiti importante din compuii necesari sistemelor biologice. Imperfeciunile ciclului determin fenomene
de deficit de P n sol i n mediile acvatice cu consecine negative asupra produciei primare a ecosistemelor
respective.
O alt pierdere este transferul permanent, unidirecional de P din sol n mare. Cantiti importante de P din
mediile acvatice se sedimenteaz n straturile profunde, devenind inutilizabile pentru via.
Circuitul sulfului
Sulful este un component esenial al biosferei, ca parte a structurii chimice a organismelor vii. Se gsete n
sol, ape i atmosfer i ocup locul 13 n ceea ce privete distribuia cantitativ a elementelor n natur. Citoplasma
conine ntre 0,4-1% S sub forma unor compui organici.
S este prezent n natur sub dou forme:
1) In form anorganic, n depozitele de S elementar (S0) sau ntr-o varietate de compui redui (H 2S), sau
oxidai ca SO2, SO3, tiosulfai (S2O32-), tetrationai (S4O62-), sulfai (SO42-) sau H2SO4.
2) In form organic, n compoziia unor aminoacizi (cistin, cistein, metionin), a glutationului.
Hidrogenul sulfurat (H2S) se gsete n bli, izvoare sulfuroase, gaze naturale i n medii cu substane
organice n curs de descompunere. Are origine vulcanic, hidrotermal sau biologic (produs al activitii
microorganismelor). H2S nu se acumuleaz n natur, deoarece n prezena O 2 se oxideaz rapid, spontan la SO2.
Dioxidul de sulf (SO2) rezult din oxidarea H2S, din gazele industriale. SO2 reprezint circa 95% din
compuii S rezultai din arderea combustibililor fosili. SO 2 este redus la H2S prin aciunea bacteriilor, iar n aer este
oxidat la SO3 prin aciunea radiaiilor UV. SO2 poate interaciona cu O dup reacia:
SO2 + O + M SO3 + M, n care M este o molecul de O 2 sau N2 i are rolul de a prelua excesul de energie
din reacie, mpiedicnd reversia ei.
Trioxidul de sulf (SO3) reacioneaz prompt cu vaporii de ap i formeaz acid sulfuric.
Sulfaii provin din roci sau din apa de ploaie, n care deriv probabil de la SO 2 din aer. Sulfatul este extrem
de stabil la reducere chimic. Cel mai adesea, reducerea sa este rezultatul aciunii directe a bacteriilor sulfat
reductoare. In anaerobioz, sulfaii sunt redui la H 2SO4 i S0.
Ciclul biologic al S n natur implic participarea a patru tipuri de reacii:
1) Mineralizarea compuilor organici ai S din componena celulelor.
2) Oxidarea compuilor anorganici i din aminoacizi.
3) Asimilarea compuilor anorganici i ncorporarea lor n materia vie.
4) Reducerea sulfatului i a S0 la sulfuri (reducerea dezasimilatorie i asimilatorie a sulfatului).
Mineralizarea compuilor organici ai sulfului
Compuii organici ai S depui n sol, odat cu dejeciile animale i cu esuturile vegetale i animale moarte
nu pot fi utilizai ca atare de plantele superioare. Mineralizarea este rezultatul aciunii directe a unor microorganisme
de putrefacie: E. coli, P. aeruginosa, Proteus sp., Clostridium sporogenes, etc. Reacia are la baz proteoliza urmat
de eliberarea S din compoziia aminoacizilor cu S:
Produii majori ai degradrii sunt, n anaerobioz H 2S, iar n aerobioz H2S, mercaptanii i diferii compui
minerali, parial sau complet oxidai (H2SO4).
Oxidarea compuilor anorganici ai S
H2S produs n natur pe diferite ci (descompunerea produilor cu S, reducerea sulfatului, activitatea
vulcanic, etc) este numai ntr-o mic msur imobilizat ca sulfuri instabile sau oxidat spontan la S 0 n prezena O2.
Cea mai mare parte a H2S, ca i a S0 sunt oxidate pe cale biologic.
Cele mai studiate sunt bacteriile din g. Thiobacillus cu speciile: T. thiooxidans, T. thioparus, T. ferooxidans,
etc, precum i din g. Thiomicrospira i Sulfolobus. Triesc n medii bogate [n S0 i H2S (lacuri, bli, mri, apa de
canal, izvoare termale acide). Oxideaz S0 i diferii compui anorganici ai acestuia, dup reaciile:
Th. thiooxidans: 2 S0 + 3 O2 + 2 H2O 2 H2SO4
Th. thioparus: H2S + 2O2 H2SO4
Na2S2O3 + 2O2 + H2O Na2SO4 + H2O
2Na2S4O6 + 7O2 + 6H2O 2Na2SO4 + 6H2SO4
Oxidarea So la sulfat este nsoit de o producere masiv de H +. Mediul se acidific pn la pH 1,0.
Th. ferooxidans este n acelai timp sulf- i ferooxidant, deoarece oxideaz S o, H2S, S2O62-(tetrationat), SO32(sulfit) la H2SO4 i respectiv la sulfai, dar i Fe3+:
2FeS2 + 2H2O + 7O2 2FeSO4 + 2H2SO4
4 FeSO4 + O2 + 2H2SO42Fe2(SO4)3 + 2H2O
Al doilea grup de bacterii sulfoxidante este reprezentat de bacteriile din genurile: Beggiatoa Thiotrix,
Thioploca, Thiobacterium, Thiospira etc. Cele mai multe nu au fost izolate n culturi pure i se gsesc n medii care
conin H2S i O2. Reacia major este:
2H2S + O2 2So + 2 H2O
Sulful elementar este depus sub forma unor granulaii refrigente. Reacia este reversibil: dup epuizarea
H2S din mediu, So din incluziuni este oxidat la H2SO4.
Al treilea grup de bacterii sulfooxidante este reprezentat de bacteriile fotosintetizante sulfuroase. Ele aparin
la dou categorii:
a) Bacteriile sulfuroase purpurii (Thiorhodaceae), care se deosebesc n funcie de modul n care depun
incluziile de So: Ectothiorhodospira depune So extracelular, iar Thiospirilium, Thiocystis, Thiocapsa, Chromatium,
Lamprocystis i Rhodothecae depun So intracelular.
b) Bacteriile sulfuroase verzi - Chlorobiaceae (Chlorobium, Chloropseudomonas, Pelodictyon) utilizeaz
H2S ca donor de e- pentru reducerea CO2. So format ca intermediar n oxidarea sulfurilor la sulfat este depus
extracelular.
Bacteriile fototrofe purpurii i verzi utilizeaz compui ai S (H 2S, S2O32-, SO32-), iar unele chiar compui
organici. Energia stocat ca rezultat al fotosintezei este folosit pentru sinteza constituienilor celulari de la CO 2,
dup reacia:
H2S + 2 CO2 + 2H2O H2SO4. + 2(CH2O)
Reducerea asimilatorie a sulfailor este efectuat n exclusivitate de bacterii, de unele levuri i de plante, dar
niciodat de organismele animale. Produsul final al reducerii asimilatorii a sulfatului este cisteina, de la a crei
grupare -SH deriv ceilali aminoacizi cu sulf, precum i biotina, tiamina, acidul pantotenic, glutationul.
Reducerea dezasimilatorie a sulfailor semnific utilizarea lor ca acceptor final de e - n procese de
dezasimilare a unor substraturi organice n respiraia anaerob. Procesul s-a denumit respiraia sulfatului. Numai o
mic parte din sulfatul redus este asimilat de organism, cea mai mare parte fiind eliberat n mediul extern ca S 2- sau
ca H2S liber.
Hidrogenul necesar pentru reacie poate fi furnizat de compui organici ca lactatul, dup reacia:
2C3H5O3Na + MgSO4 H2S + 2C3H3O2Na + MgCO3 + CO2 + H2O
sau de H2, pentru reductorii de sulfat autotrofi, dup reaciile:
4 H2 + SO42- S2- + 4 H2O

3 H2 + SO32- S2- + 3 H2O
4 H2 + S2O32- S2- + H2S + H2O
9 H2 + S4O62- S2- +3 H2S +6 H2O
4 H2 + CaSO4 H2S + Ca(OH)2 + 2 H2O
Bacteriile sulfat reductoare reprezint principalul productor de H 2S n natur.
D
epozitele de sulf au cel mai adesea o origine biogen i s-au fornmat prin reducerea sulfailor, urmat de o etap de
oxidare, la care au participat bacteriile sulfoxidante. Dovada o constituie existena sulfuretelor n care se acumuleaz
i n prezent.
Bacteriile sulfat-reductoare ce se dezvolt n apele de canal, n apele stagnante i n apele din porturile
intens poluate, determin mirosul neplcut datorit producerii intense de H 2S. Reducerea masiv a sulfailor n
natur este rezultatul activitii bacteriene sulfat-reductoare.
NOIUNI DE MICROBIOLOGIA APELOR

Importana prezenei i activitii microorganismelor n aproape toate tipurile de acumulri de ap, de la
cele subterane la cele mici i temporare, de suprafa i la cele mari, cum sunt mrile i oceanele, a devenit evident
curnd dup apariia Microbiologiei ca tiin.
Microbiologia acvatic studiaz comunitile de microorganisme prezente n izvoare, ruri i fluvii, lacuri,
bli, mri i oceane. Ea studiaz interaciunile dintre microorganismele componente sau cu alte organisme (plante
sau animale), rolul lor n fluxul de materie i energie i n circuitul biogeochmic al elementelor n ap i sedimente,
precum i comportamentul formelor terestre n mediile acvatice.
Diveristatea mediilor acvatice
In funcie de natura habitatelor caracteristice, mediile acvatice naturale se mpart n:
1) Ape de suprafa. Ele reprezint medii adecvate pentru numeroase microorganisme i se difereniaz prin
proprietile fizicochimice ale apei. Apele de suprafa sunt de dou tipuri:
a) ape dulci sau limnetice, care la rndul lor sunt de dou tipuri:
- ape lentice (stagnante), de tipul lacurilor, blilor, mlatinilor, etc. sau ape care se deplaseaz lent;
- ape lotice (curgtoare), de tipul izvoarelor, rurilor, fluviilor;
b) ape marine i oceanice.
2) Ape subterane (engl. ground water), freatice sau acvifere.
In funcie de concentraia lor n sruri, apele naturale pot fi clasificate ca: ape dulci (0-1 g/l); ape salmastre
(1-25 g/l); ape srate (25-50 g/l); ape foarte srate (50 g/l).
In apele deschise, la distan de sol sau de sedimente, precum i n lipsa altor organisme, densitatea
microorganismelor atinge rareori limita minim de 10 6/ml (106/g), considerat ca semnificativ pentru o contribuie
eficient n ecosistem. Cele mai multe bacterii nu triesc libere n ape naturale, ci legate de plancton de diferite
detritusuri sau sunt agregate. Cele prezente n stare liber n apele dulci sunt rareori autohtone, cel mai adesea fiind
n tranzit dintr-o localizare n alta. Cel mai adesea, bacteriile din ape sunt mobile, dar deplasarea lor activ este puin
semnificativ pentru c se realizeaz pe distane foarte mici.
Sub raportul dispersrii microorganismelor exist o deosebire fundamental ntre apele dulci i marine.
In apele marine, microorganismele sunt rspndite pe suprafee mari prin deplasarea lateral a curenilor
orizontali, prin micrile curenilor verticali i prin amestecul apelor de suprafa produs de vnt. Oceanele sunt, n
foarte mare msur interconectate, formnd un mediu unic, n care bacteriile pot fi purtate dintr-o regiune n alta fr
o intervenie semnificativ a microorganismelor din sol sau din aer.
Apele dulci sunt mai puin interconectate i, ca urmare, microorganismele respective au mai multe
caracteristici comune cu cele terestre dect cu cele marine.
Apele curgtoare repezi transport frecvent microorganisme din sol la distane mari. Ajunse n ultim
instan n mri, microorganismele din apele dulci nu supravieuiesc, datorit condiiilor nefavorabile (salinitate,
temperatur, presiune, diluia nutrienilor, etc.).
Apele freatice sunt lipsite, de cele mai multe ori, de microorganisme, deoarece sunt reinute n straturile
superioare ale solului, pe msur ce apele se infiltrez. Cu excepia cazurilor de poluare accidental, ele au o
ncrctur microbian mic, n comparaie cu apele de suprafa.
Factorii fizici i chimici care influeneaz prezena microorganismelor n mediile acvatice
Lumina reprezint un factor esenial pentru asigurarea vieii n ecosistemele acvatice deoarece iniiaz fluxul
de energie, prin conversia energiei radiante solare n energie chimic, asigurnd dezvoltarea productorilor primari
care stau la baza lanului trofic.
In funcie de gradul de turbiditate al apei, lumina poate fi util pentru fotosintez numai pe o adncime de
civa metri, n timp ce n largul oceanelor zona fotic se poate extinde ntre 0-200 m. Dup Campbell (1977), la
adncimea de 3-4 m ptrunde numai 50% din lumina incident, iar la 50 m, numai 10%.
Zonele mai puin iluminate, improprii pentru dezvoltarea algelor sunt populate de bacteriile fototrofe
anaerobe, Rhodospirilalles (purpurii) i Chlorobiales (verzi). Ele fac fotosinteza anoxigenic, utiliznd H 2S i diferii
compui organici ca donatori de H2, folosind cantiti foarte mici de lumin.
Microorganismele fototrofe mobile i pot regla poziia n coloana de ap datorit fenomenelor de fototaxie,
n funcie de intensitatea luminii.
Lumina intens poate produce efecte inhibitorii sau chiar distructive (prin fotooxidare) asupra
microorganismelor din straturile superficiale ale apelor. Aceste efecte ar explica numrul redus de bacterii la
suprafaa apelor oceanice clare. Microorganismele care conin pigmeni carotenoizi sunt protejate de efectele
duntoare ale radiaiilor.
Temperatura, alturi de oligotrofie, este rspunztoare de ncetinirea activitilor metabolice. Temperatura

apei mrii, la suprafa, se apropie de 28C la tropice i de punctul de nghe n regiunile polare.
In funcie de nivelul termic s-a produs o zonare ecologic a apelor: termenul de psichrosfer desemneaz
regiunile cu temperaturi mai mici de 10C, iar cel de termosfer cuprinde regiunile mai calde.
Mediul marin este populat de microorganisme psichrofile, care cresc lent pe medii nutritive la 0-5C, dar se
dezvolt mai repede la 20-25C.
Presiunea hidrostatic crete linear cu adncimea (1 atm. la fiecare 10 m) i influeneaz natura
microorganismelor i procesele biologice din mediul marin. Presiunea hidrostatic influeneaz proprietile fizicochimice ale apei, modificndu-i gradul de ionizare, pH-ul i vscozitatea. Ea influeneaz solubilitatea i viteza de
transport a nutrienilor prin membranele celulare, cinetica enzimatic, structurile teriar i cuaternar ale proteinelor
i morfologia bacteriilor. Microorganismele alohtone nu se pot dezvolta sub 200 m. Bacteriile din marile abisuri (la
500 m adncime) nu cresc la presiuni mai mici de 350 atm, creterea optim fiind la 690 atm.
Barofilia este frecvent asociat cu copiotrofia. Microorganismele barofile sunt abundente n habitatele
bogate n nutrieni ca, de exemplu, provenii din dejeciile animalelor marine, din carcasele lor n curs de
descompunere, unde au un avantaj competitiv fa de mediul acvatic oligotrof. Din punct de vedere ecologic,
fenomenul este avantajos pentru c mrete rata degradrii substanelor organice din adncuri, a cror conversie pn
la mineralizarea complet este asigurat de microorganismele oligotrofe.
Turbiditatea apei este determinat de materia particulat vie i nevie aflat n suspensie i care determin
formarea sedimentelor. Turbiditatea condiioneaz adncimea pn la care radiaiile solare pot asigura procesul de
fotosintez.
Curenii determin importante efecte ecologice ale apelor. In funcie de prezena sau de absena lor, mediile
acvatice se mpart n curgtoare (izvoare, ruri, fluvii) sau stttoare (stagnante), cum sunt lacurile, blile, mrile i
oceanele. De fapt, apele stttoare sunt expuse unor cureni verticali i orizontali care mobilizeaz masele de ap.
Curenii produc amestecul unor mase importante de ap, amestecul nutrienilor i o redistribuire a microbiotei.
Gazele dizolvate i valoarea pH. Bazinele acvatice naturale conin cantiti mici de gaze dizolvate, n special
CO2, O2, N2 i n condiii speciale, H2, CO, H2S, etc.
CO2 i are originea n atmosfer i n respiraia organismelor acvatice. Este necesar pentru fotosintez,
pentru metabolismul de biosintez al microorganismelor chemoautotrofe. Concentraia CO 2 crete cu adncimea.
Variaiile concentraiei de CO2 se coreleaz cu valorile pH ale apelor naturale. CO 2 se poate gsi n stare liber, sub
form de H2CO3, bicarbonat (HCO3-) i carbonat (CO32-).
O2 provine din atmosfer sau este produs prin fotosinteza oxigenic a algelor i cianobacteriilor.
Concentraia sa este mai mare n apele curgtoare i scade n raport cu adncimea, n apele lente i stagnante.
Diminuarea este net n apele cu ncrctur organic mare. In lacurile adnci, ca i n mri, concentraia O 2 se
coreleaz invers cu cea a CO2.
Cu excepia bazinelor relativ nchise (Marea Neagr, etc), apele din adncul mrii, ca i straturile superioare
ale celor mai multe sedimente sunt oxigenate.
Sedimentele marine prezint o a doua zonare a concentraiei O 2. La suprafaa lor, concentraia relativ mare
de O2 este asociat cu prezena nitrailor, a Fe feric i cu o concentraie mic de CO 2.
Aceti parametri se modific progresiv cu adncimea, astfel nct, dup zona intermediar de tranziie se
instaleaz o zon de anaerobioz fundamental modificat: dispariia O 2, conversia CO2 la CH4, a nitrailor i nitriilor
la NH4+ i a Fe3+ la Fe2+ (feros). Zona profund este anaerob, caracterizat prin acumularea H 2S n concentraii
toxice pentru cele mai multe organisme (deoarece leag Fe din citocrom oxidaz) i nu poate fi populat dect de
bacteriile tolerante la H 2S, care l folosesc ca surs de energie (bacteriile sulfuroase chemoautotrofe), H 2S este oxidat
i furnizeaz potenialul reductor n fotosinteza anoxigenic.
Salinitatea i compoziia ionic sunt caracteristicile care difereniaz net mediile acvatice dulci de cele
marine i oceanice, i, n consecin influeneaz natura microorganismelor care le pot popula. Puine
microorganisme sunt comune ambelor tipuri de ape.
Concentraia medie a srurilor n apele oceanice este de 3,5% (3,2-3,8%). Concentraiile extreme de sruri se
gsesc n Marea Moart. In condiii de iradiere solar intens, nivelul de salinitate atinge 340 g sruri/l, n special
sub form de NaCl i MgCl2.
Salinitatea apelor oceanului este relativ constant. Fac excepie mrile interioare, care n zona estuarelor
sufer un proces de diluie ampl, la gura marilor aflueni, cu formarea unui gradient de salinitate, la interfaa apelor
dulci cu cele marine.
Aproximativ 99% din srurile dizolvate sunt formate prin combinarea a 10-12 ioni anorganici majori (Cl -,
+
Na , Mg2+, K+, SO42-, HCO3-, CO32-), crora li se adaug Fe, Mn, Cu, Zn, Mb.
Bazinele naturale cu ap dulce (ape curgtoare sau lacuri) prezint diferene fizice i chimice att de mari
nct creeaz o varietate enorm de condiii ecologice, care fac ca, practic, s nu existe dou ape identice. In cazul
apelor curgtoare, a lacurilor mici i n zona malurilor, situaia este complicat de influena solului prin eroziune, de
resturile vegetale i animale, etc. Microorganismele alohtone supravieuiesc numai temporar. Deoarece solul este un
mediu relativ bogat n nutrieni, supravieuiesc numai microorganismele capabile s se adapteze la condiiile
oligotrofe din mediul acvatic. Ca urmare, stabilirea unor coordonate privind numrul, diversitatea pe grupe de
organisme (bacterii, microfungi, microalge, protozoare) sau pe grupe fiziologice este lipsit de orice semnificaie.
Izvoarele sunt medii acvatice formate prin apariia la suprafaa terestr a apelor subterane. Difer foarte mult
ca debit, temperatur i compoziie chimic. In apropiere de surs sunt oligotrofe. Microbiota este foarte redus i
format din microorganisme provenite din apele freatice sau splate din straturile subterane n trecerea spre
suprafa. Sunt prezente n special bacterii Gram negative (Pseudomonas) i forme prostecate (Hiphomicrobium,
Caulobacter, etc).
Izvoarele minerale au un coninut ridicat de sruri minerale dizolvate de apele care strbat diferitele
formaiuni geologice. Izvoarele care conin compui ai Fe sunt populate de ferobacterii (Gallionella, Leptothrix).
Izvoarele termale i au originea n solurile vulcanice i provin, n general, de la adncimi mari. Au
temperaturi de peste 50C, care permit numai dezvoltarea organismelor procariote. Pot fi izvoare acide (bogate n
H2CO3) sau srate (cu sruri de Mg, Fe sau S).
Rurile prezint un numr mare de factori variabili (viteza de curgere, debitul, adncimea, coninutul
mineral). Mrimea deosebit a interfeei cu litosfera de-a lungul malurilor determin fenomene de eroziune, de
mbogire cu substane minerale i organice din sol, de la cele mai simple pn la acizii humici, precum i cu
microorganisme alohtone.
Cursul superior este mai pur i mai clar, cu grad ridicat de oxigenare, rapid, temperatur sczut i
productivitate primar redus. In cursul mijlociu ncep s se manifeste influene antropogene. Cursul inferior este
lent, cu turbiditate crescut i depunere de sedimente, putnd fi poluat cu ngrminte, pesticide, cu ape uzate
oreneti sau industriale, cu metale grele, cu numeroi compui toxici, etc.
Dup gradul de poluare pot exista trei tipuri majore:
1) ape oligosaprobe, cu coninut redus de substan organic i concentraie mare de O 2;
2) ape mezosaprobe, avnd un grad mediu de poluare i cu diminuarea concentraiei de O 2;
3) ape polisaprobe, cu o foarte mare concentraie de materie organic i cu concentraie redus sau chiar absent de
O2.
Microbiota rurilor este heterogen, n funcie de condiiile locale. Microorganismele autohtone se adaug
celor alohtone provenite din sol i din diferite surse de contaminare. Cele alohtone au o existen efemer, datorit
incapacitii de adaptare la condiia oligotrof (n rurile curate), la efectele radiaiilor UV i ale competiiei
bacteriofagilor i protozoarelor bacteriovore.
Lacurile sunt bazine acvatice stagnante, localizate n depresiuni ale scoarei terestre cu origine tectonic,
vulcanic, glacial sau clastocarstic. In funcie de concentraia srurilor conin ap dulce, salmastr sau srat.
Adncimea este variabil (de la civa metri pn peste 1000 -Lacul Baikal, 1741 m).
Pe baza gradului de troficitate se disting:
- lacurile oligotrofe sunt adnci, cu o concentraie mic de nutrieni minerali i au productivitate primar
redus;
- lacurile eutrofe sunt mai puin adnci i conin ap eutrof (bogat n nutrieni). Conin un mare numr de
organisme saprobionte. Au o productivitate mare n stratul superior, iluminat, al coloanei de ap. Fitoplanctonul se
dezvolt rapid. Dup moarte, componentele se depun i sunt descompuse de microorganisme, cu un consum mare de
O2. Final, microorganismele aerobe sunt nlocuite cu cele anaerobe, de bacteriile sulfat-reductoare i de cele
sulfuroase incolore. Se acumuleaz H 2S. Toamna, cnd datorit reducerii temperaturii are loc circulaia apei,
izbucnesc nfloriri planctonice;
- apele distrofice sunt ape dulci, care conin o mare cantitate de substane organice dizolvate, coloizi i
fragmente de resuturi vegetale, de provenien predominant alohton.
Lacurile cu ap dulce au o microbiot foarte heterogen, care include practic toate categoriile de
microorganisme: eubacterii, actinomicete, cianobacterii, microfungi, microalge i protozoare.
Lacurile srate sunt caracterizate printr-o salinitate foarte diferit, ajungnd chiar pn la saturare, cu
formarea de precipitate pe maluri, n regiunile cu evaporare mare, datorit temperaturii ridicate. Ele pot conine
NaCl, MgCl2, NaHCO3, borax (Na2Br4O7) sau MgSO4 (lacurile amare). Lacurile srate sunt populate de un numr
limitat de bacterii halotolerante i, n special halofile (optimum de salinitate 20-30%), care conin frecvent vacuole
cu gaze ce le permit modificarea compoziiei pe vertical i pigmeni carotenoizi cu rol protector fa de intensitatea
prea mare a luminii solare, care le coloreaz coloniile n rou sau oranj strlucitor.
Habitate i comuniti specifice microbiotei acvatice
Comunitile de microorganisme ocup diferite habitate care se prezint adecvate pentru creterea i
multiplicarea lor. Comunitile de organisme prezente n straturile superioare ale apei sunt reprezentate de neuston i
plancton.
Neustonul (gr. neuo a aluneca) este o comunitate complex format din eubacterii, cianobacterii, alge,
microfungi i protozoare, dezvoltat ca un monostrat sau ca un microstrat la interfaa ap/aer. Este un habitat foarte
aerat, intens luminat i supus la fluctuaii rapide de temperatur.
Este alctuit din epineuston, respectiv din organisme care triesc n filmul de la suprafaa apei i din
hiponeuston, organisme care triesc imediat sub suprafa.
La nivelul neustonului are loc o concentrare masiv de nutrieni minerali i organici (n special, lipide),
datorit acumulrii lor din masa acvatic i din aer, din cauza tensiunii superficiale ridicate.
Neustonul se comport ca un substrat solid pe care se pot dezvolta numeroase bacterii (cteva milioane/cm 2)
aderente.
Planctonul (grec, planktos care cltorete) este reprezentat de organisme a cror distribuie este
dependent de micarea apei sau a aerului.
Planctonul are cea mai mare densitate n zona aerob, n care n special
fitoplanctonul se dezvolt intens, realiznd producia primar de materie organic a
bazinului acvatic.
Bentosul (grec, benthos adncul mrii) este reprezentat de organisme ataate de sau trind pe sau
aproape de fundul apei, adic la interfaa dintre hidrosfer sau litosfer reprezentat de sedimente.
Sedimentul bentonic este un mediu foarte favorabil pentru dezvoltarea microorganismelor. Aerob la
suprafa i progresiv anaerob n adncime permite dezvoltarea masiv a productorilor secundari, care folosesc
compuii organici depui din coloana supradiacent.
Pleustonul (grec, pleo a nota, a naviga) este un termen folosit [n dou accepiuni. Dup Lincoln (1982)
pleustonul reprezint totalitatea organismelor acvatice care rmn n permanen la suprafaa apei prin propria lor
capacitate de plutire. In mod normal, sunt parial imersate n ap i parial n contact direct cu aerul. Include
macrofitele plutitoare. Dup Cheng (1975), pleustonul este un habitat situat la interfaa dintre mare i aer, incluznd
bacterii, microfungi, microalge i protozoare, reprezentnd echivalentul marin al neustonului.
Oligotrofia. Capacitatea microorganismelor acvatice de a dezvolta n medii cu concentraii minime de
substane organice a fost descris de Zobell (1943). Conceptul de oligotrofie are o importan ecologic deosebit i
este definit de capacitatea microorganismelor de a crete cu o rat mare, la concentraii mici de substane organice.
Aceast proprietate le permite s domine n comunitile bacteriene naturale din bazinele acvatice.
Kuznetsov (1979) precizeaz c atributul de oligotrof se atribuie bacteriilor acvatice care se dezvolt la
prima cultivare in vitro, pe medii cu un coninut de 1-15 mg C organic dizolvat la litru i care cresc pe aceste medii
i n recultivrile ulterioare, dei se pot adapta i la medii cu concentraii mai mari de substane organice.
Kuznetsov (1979) propune gruparea bacteriilor oligotrofe n patru grupuri, n funcie de rspunsul lor fa de
substanele organice din mediu:
1) Organisme care se dezvolt la prima cultivare pe apa sterilizat provenit din mediul studiat, dar nu se
mai dezvolt n recultivrile ulterioare nici pe medii srace i nici pe medii bogate. Aceste bacterii nu s-au
identificat, fiind cunoscute numai pe baza morfologiei la microscopul electronic.
2) Microorganisme care dup cultivarea n apa testat (sterilizat n prealabil) i transferat pe medii bogate
cresc lent sau deloc. Ele ncep s se dezvolte bine pe medii bogate n nutrieni, dup recultivare pe ap steril sau
mediu agarizat, srac n substane organice.
3) Bacterii izolate pe medii speciale, n principal srace, sau chiar prin metode speciale de izolare.
4) Bacterii studiate la microscopul electronic, dar nc nu au fost cultivate pe medii artificiale.
Bacteriile oligotrofe nglobeaz cu mare eficien nutrienii prezeni n concentraii minime n mediu. Ele
posed structuri specializate, cum este prosteca, reprezentnd un avantaj adaptativ important pentru fixarea pe
diferite substraturi, dar i pentru mrirea suprafeei de absorbie.
Durata unei generaii n cazul bacteriilor oligotrofe este de 4-8 ore. Incapacitatea lor de a se dezvolta pe
medii bogate n nutrieni, s-ar datora, probabil, producerii unor metabolii toxici. Majoritatea microorganismelor
oligotrofe produc H2O2, dar nu au catalaza pentru a o degrada. Importana acestui mecanism este demonstrat de
faptul c ele se pot dezvolta pe medii bogate, suplimentate cu catalaz. Probabil c microorganismele oligotrofe se
dezvolt n asociaie cu organismele copiotrofe productoare de catalaz.
Comportamentul microorganismelor n mediul salin
Microorganismele provenite din apele dulci sunt halofobe. Dup ce sunt transferate n mediul salin, rezist o
perioad scurt de timp, dup care mor.
Cele halotolerante, n special cele eurihaline supravieuiesc, dar se dezvolt mai lent dect n mediul lor
natural.
Cele halofile, autohtone n mediul salin nu se dezvolt n ap dulce. Ele prefer o salinitate optim de 2,54%. Majoritatea microorganismelor halofile nu au nevoie de o presiune osmotic crescut a mediului, ci unele au
nevoie absolut de Na+, iar altele de Cl-.
Unele microorganisme (fungi, microalge-Dunaliella) realizeaz o echilibrare a mediului intern, n raport cu
cel extern prin acumularea de K +, paralel cu excluderea Na +. Alte microorganisme realizeaz acest echilibru prin
acumularea unor osmoregulatori organici ca prolina, glucidele simple, poliolii (glicerina, manitolul, glucozilglicerolul) sau betaina (C5H11NO2).
Devierea de la salinitatea optim are consecine negative asupra bacteriilor, determinnd modificri
morfologice sau fiziologice. Celulele cocoide i cele bacilare devin filamentoase, iar durata unei generaii este
prelungit. Creterea salinitii interfer cu mecanismul diviziunii.
Analiznd halofilia n lumea microorganismelor, Stewart (1983) ajunge la concluzia c aceast proprietate
este, cel mai adesea, asociat cu capacitatea de utilizare a energiei solare i de fixare a CO 2 prin fotosintez. Halofilia
este frecvent ntlnit la alge, cianobacterii, i la bacteriile care fac fotosintez anoxigenic ( Anoxybacteria). Aceasta
demonstreaz capacitatea microorganismelor fotoautotrofe de a se adapta cel mai bine la concentraiile ionice mari i
de a realiza un echilibru osmotic ntr-un mediu n care ele sunt productori primari.
Bacteriile chemoheterotrofe marine autohtone sunt reprezentate de 4 genuri: Vibrio, Alteromonas,
Alcaligenes i Pseudomonas (Bauman, 1981). Salinitatea apelor marine influeneaz densitatea apei, determinnd o
temperatur de nghe mai sczut.
Apele dulci au o salinitate foarte redus. Compoziia lor ionic este diferit, fiind reprezentat, n special, de
Ca2+, Mg2+, Na+, K+, bicarbonat (HCO3-), SO42- i Cl-.
Marea - mediu natural pentru microorganisme
Mediul marin este unic prin suprafaa i volumul foarte mare, coninutul sczut n nutrieni organici,
salinitatea relativ mare i coninutul ionic ridicat, temperatura sczut i un gradient presional n funcie de
adncime. Mediul marin ocup 70,8% din suprafaa planetei. Aproximativ 97,6% din volumul total al apei marine
este cuprins n oceane i 88% din suprafaa lor are adncimi de peste 1000 m.
Zonarea ecologic a mediului marin. Mediul marin este divizat convenional, n domenii, zone i subzone, pe
baza a dou criterii majore: adncimea i mediul bentic (fundul mrii) dup cum urmeaz:
1) Coloana de ap este divizat n domeniile neritic (cu adncime mai mic de 200 m) i oceanic sau pelagic
(de la marginea platformei continentale n larg).
2) Regiunea de fund (bentic) este divizat n zonele: litoral, sublitoral, batial, abisal i hadal.
Domeniul neritic (grec, nerites cochilie marin) corespunde zonei marine de mic adncime situat
deasupra platformei continentale. Microbiota este dominat de microalge, microorganisme chimioautotrofe i
heterotrofe, aerobe i facultativ anaerobe.
Domeniul oceanic corespunde coloanei de ap situat n largul mrii, dincolo de platforma continental.
Zona litoral reprezint interfaa dintre ecosfera marin i litosfer. Predominant este aciunea de eroziune,
splare i solubilizare a substanelor minerale i transportul lor n mare. Microbiota dominant este cea caracteristic
solului.
Zona sublitoral se ntinde de la limita inferioar, cea mai joas a zonei litorale, pn la marginea
platformei continentale (200 m adncime).
Zona bathial (grec, bathos adnc) corespunde regiunii de fund a oceanului, ntre adncimile de 200 i
4000 m. Include panta continental n care adncimea scade rapid.
Zona abisal (grec, abissos fr fund), situat ntre 4000 i 6000 m, include zonele de activitate
microbiochimic i geochimic.
Zona hadal (Hades, zeul infernului n mitologia greac) include zonele mai adnci de 6000 m.
Microbiota marin
Este alctuit din trei categorii de microorganisme:
1) autohtone sau permanente, adaptate la condiiile specifice mediului marin. Sunt caracteristice pentru
largul oceanului i sedimente;
2) alohtone, temporare sau contaminate, provenite din sol, aflueni, canale sau ambarcaiuni. Sunt mai
frecvente n zonele litorale i supravieuiesc puin n mediul marin;
3) ubicvitare, comune solului i mediului marin (exemplu, Welchia perfringens).
Bacteriile marine cresc optim la concentraia srurilor de 33-35%, nu se dezvolt sau se dezvolt slab n
absena NaCl, sunt oligotrofe, psichrofile, cu excepia celor din apele tropicale de suprafa. In funcie de habitat,
sunt barofobe (la suprafaa apei), barotolerante sau barofile. Cele care triesc la suprafa sunt frecvent cromogene
(60-70%). Coloniile se coloreaz n galben, portocaliu, brun, verde, rou, negru etc. Pigmenii au rol protector fa
de efectul nociv al luminii. Majoritatea (80-95%) sunt Gram negative, mobile, aerobe, facultativ anaerobe, iar cele
din adncul sedimentelor sunt obligat anaerobe. Pot fi fototrofe, chemoautotrofe i heterotrofe.
Rolul lor funcional este ilustrat de diversitatea grupelor fiziologice: amonificatori, nitrit- i nitrat-bacterii,
denitrificatori, sulf-oxidante i sulfat-reductoare, ferobacterii, proteolitice, fermentative, chtinolitice, celulozolitice,
lipoclastice etc. i uneori, patogene pentru diferite animale marine. Speciile cel mai frecvent ntlnite aparin
genurilor: Achromabacter, Alcaliganes, Alteromonas, Bacillus, Corynebacterium, Cytophaga, Flavobacterium,
Hyphomicrobium, Micrococcus, Nocardia, Pseudomonas, Sarcina, Spirillum, Vibrio, Streptomyces etc.
Numrul lor real este greu de estimat deoarece, bacteriile provenite din adnc i pierd capacitatea de
multiplicare, ori se pot liza datorit modificrilor de temperatur i presiune ori sunt asociate cu diferite suprafee
inerte sau vii, unde gsesc condiii mai bune dect n mediul oligotrof. Numrul bacteriilor, n general este maxim n
regiunile litorale, n estuare i scade progresiv n zonele pelagice, odat cu adncimea i cu deprtarea de rm. In
primii civa cm ai sedimentelor marine pot ajunge la 10 7-108 celule/g. Scade mult n profunzimea nutrienilor
datorit anaerobiozei i lipsei nutrienilor.
Cianobacteriile marine sunt rspndite ubicvitar, dar numrul speciilor autohtone pare a fi mic
(Trichdesmium, Dernocarpa ). Foarte multe specii sunt halotolerante, iar unele (Anabaena flosaquae, Nodularia
spumigena) produc nfloriri n zonele eutrofizate.
Fungii marini sunt reprezentai de forme autohtone, halofile sau de specii halotolerante terestre sau
limnetice. Levurile sunt reprezentate de circa 200 de specii: Candida, Saccharomyces, Torulopsis etc.
Algele marine sunt productori primari, cu importan fundamental pentru existena vieii n mediul marin.
Ele formeaz fitoplanctonul, cu densitate maxim n stratul superior al zonei eufotice. Imensa lor majoritate sunt
fotoautotrofe, dar unele cresc i heterotrof la ntuneric, prin asimilarea unor substane organice (glucide, acizi
organici etc.). Altele nu cresc la ntuneric, dar creterea lor la lumin poate fi accelerat de prezena substanelor
organice (fac fotoasimilare).
Cei mai importani productori primari sunt Chlorophyta (Dunaliella euchlora, Chlorela sp.,
Clamydomonas, Chlorococcus), Diatomeae (Cyclotella, Melosira sp., Nitzschia brevirostris, etc.), Dinoflagellatae,
Chrysomonadacea i Cryptophyceae. Se adaug numeroase specii de Rhodophyceae i Euglenophyta.
Algele brune (Phaeophycophyta) reprezentnd 1500 de specii se dezvolt n apele tropicale clare, pn la
adncimea de 200 m.
Protozoarele marine sunt flagelate, rizopode i ciliate, componente ale zooplanctonului. Cele autohtone au
un grad important de halofilie. Cel mai important constituient al zooplanctonului marin sunt flagelatele
Cocolithophoridae, la care se adaug specii de Acantharia i Tintinnidium i, n special radiolari, care se gsesc
ntre 350-5000 m.
Microorganismele din adncuri se caracterizeaz prin ritmul lent al activitii metabolice, datorat
disponibilitii reduse a nutrienilor, presiunii hidrostatice crescnde n raport cu adncimea i temperaturii sczute a
mediului ambiant.
Pe baza unor experiene in situ, Jannasch i Wirsen (1977) au demonstrat c la adncimea de 5300 m,
nutrienii sunt degradai cu o vitez de 100 de ori mai mic dect la aceeai temperatur la suprafa. Timpul de
generaie a bacteriilor la 5500 m este de 210 ore. Presiunea ridicat influeneaz etapa iniial de legare a nutrienilor
de membrana bacteriilor, transportul intracelular, biosinteza proteinelor i activitatea respiratorie. Dac bacteriile ar
funciona cu particularitile lor metabolice normale, ar utiliza ntreaga energie i ar determina moartea prin
nfometare a tuturor organismelor din ecosistemul marin.
In mediul marin, n absena total a plantelor verzi, funcia de productor primar revine integral algelor i
bacteriilor fototrofe. Producia net de materie organic prin fotosintez variaz n funcie de temperatura apei, de
concentraia nutrienilor, etc. i ar fi ntre 0,03-10 g C organic/m 2/zi.
Degradarea substanelor organice n ocean
Se apreciaz (Jannasch i Taylor, 1984) c 90-95% din totalul substanelor organice, produse prin fotosintez
sunt degradate i reciclate n stratul superior, respectiv n cei 100-300 m de la suprafaa oceanului. Acest proces
afecteaz, practic, totalitatea carbonului organic dizolvat (DOC) i o parte din cel prezent n form particulat
(POC). Restul de 5-10% sunt materiale organice prezente sub form de particule, este depus prin sedimentare spre
fundul oceanului, cu o vitez care depinde n primul rnd de densitatea i dimensiunea particulei.
Viteza teoretic de depunere a fitoplanctonului, ca i a agregatelor de particule floculate, care constituie
zpada marin este apreciat la 0,1-1 m/zi, sau 1-50 ani pentru adncimea de 5000 m.
Un aport cu totul deosebit de C organic particulat este cel reprezentat de reziduuri fecale provenite de la
zooplancton, care sedimenteaz cu o vitez de 50-200 m/zi sau de la necton (pn la 2700 m/zi).
Se apreciaz c numai 1% din totalul de C organic produs prin fotosintez ajunge pe fundul oceanului. Cel
mai puin degradate sunt fragmentele de esuturi sau particule mari, ce ajung ca atare pe fundul oceanului i la acest
nivel sau pe parcurs sunt detectate i capturate de animalele mari.
O situaie special o are ploaia de particule fecale provenite de la zooplancton care sedimenteaz, nvelite
fin de un strat de mucus populat de numeroase bacterii ce se multiplic, utiliznd materialele nedigerate de
zooplancton. Pe parcursul sedimentrii lor pn la fundul oceanului, aceste particule pot fi ingerate de mai multe ori
de animalele marine. Fecalele care ajung pe fundul oceanului devin o surs de materie organic disponibil pentru
animalele mici, imobile i pentru microorganismele din sedimente. Celulele microorganismelor sunt depuse la
fundul mrilor sub form de celule moarte nelizate (datorit inactivrii enzimelor n condiiile temperaturii sczute i
a presiunii ridicate), n stare de laten, sau de celule nfometate, cu metabolism foarte atenuat. Nutrienii
acumulai la fundul mrii pot fi readui la suprafa prin cureni ascendeni, dar procesul este foarte lent, evaluat la
mai multe mii de ani.
Substanele rezistente la degradare (lignina, resturile celulozice, lipidele) sunt depuse i se acumuleaz pe
fundul oceanului, unde, mpreun cu o serie de compui rezultai din degradare sau din bioconversie formeaz
humusul marin.
Caracteristica fundamental a apelor adnci i a sedimentelor organice, ca habitat pentru microorganisme
este oligotrofia.
Se recunoate rolul esenial al bacteriilor i al microorganismelor n mineralizarea substanelor organice,
asigurnd refacerea nutrienilor necesari creterii plantelor. Mineralizarea complet este atins numai n prezena O 2.
In anaerobioz, degradarea substraturilor este incomplet.
O funcie deosebit de important a bacteriilor este aceea de conversie a materiei organice dizolvate n
celulele bacteriene i reintroducerea acesteia n lanul trofic sub o form particulat (biomas nutritiv), accesibil
animalelor care se hrnesc prin filtrare. Wright i Hobby (1965) au demonstrat experimental capacitatea bacteriilor
de a ngloba i asimila compuii organici dizolvai n concentraii foarte mici, cu o mare eficien. Aceast
proprietate le confer un avantaj selectiv fa de microalgele heterotrofe n mediile acvatice oligotrofe.
ACTIVITATEA GEOLOGICA A MICROORGANISMELOR

Geomicrobiologia sau litobiologia este un domeniu al ecologiei microorganismelor, cu carcater
interdisciplinar, rezultat din confluena unor concepte aparinnd microbiologiei generale, geologiei, ecologiei i
tiinelor solului.
Formarea i degradarea unor minerale, iniial s-a realizat fr intervenia microorganismelor. In prezent este
demonstrat n mod cert c, dup formarea lor, diferite tipuri de roci situate la suprafaa scoarei sau aproape de
suprafa sunt expuse forelor fizice, chimice i biologice, care le degradeaz la particule mici sau la compui
hidrosolubili.
Geomicrobiologia studiaz rolul microorganismelor n transformrile substanelor minerale, n formarea,
eliberarea i migrarea ieiului n zcmnt, precum i n formarea zcmintelor de crbuni.
Unele microorganisme folosesc direct substanele minerale, ca surse de energie (donori de e - sau de
hidrogen) sau ca acceptori de e - sau hidrogen. Nevoia de substane minerale este foarte mare, atunci cnd ele sunt
utilizate ca surs de energie.
Unele microorganisme din mediile naturale pot transforma cantiti mari de substane minerale prin dou
mecanisme diferite:
1) prin aciune enzimatic direct (oxidare, reducere, hidroliz);
2) pe cale neenzimatic (indirect), prin aciunea unor produi finali de metabolism. Pe aceast cale se pot
realiza patru tipuri de interaciuni: a) coroziunea materiei insolubile prin efectul acizilor anorganici (azotic, sulfuric,
carbonic) sau acizilor organici; b) precipitarea carbonailor, a sulfailor i a sulfurilor produse n metabolism; c)
adsorbia oxizilor de Fe i Mn pe structurile extracelulare a bacteriilor; d) chelatarea, reacie prin care un compus
organic produs pe cale metabolic poate complexa un ion metalic, protejndu-l de precipitare, oxidare sau reducere.
Procesele de transformare ale mineralelor sunt cel mai mult studiate n cazul bacteriilor, dar au loc i sub
aciunea fungilor, a algelor, a protozoarelor, a lichenilor, a unor plante superioare i chiar a unor metazoare.
Transformrile microbiene ale fierului i manganului
Fierul, al patrulea element ca abunden n natur este prezent n cea mai mare parte, n forme insolubile,
inaccesibile circulaiei biogeochimice. Ciclul fierului poate fi redus la reacii de oxidare ale Fe feros la Fe feric i de
reducere a Fe feric la Fe feros.
Reaciile de oxido-reducere sunt importante att pentru compuii anorganici, ct i pentru cei organici ai Fe.
Fe3+ i Fe2+ au solubiliti diferite: Fe3+ (feric) precipit n mediul alcalin ca hidroxid feric, iar n condiii
anaerobe poate fi redus la forma feroas mai solubil. In condiii naturale, n habitate aerobe Fe este prezent n
special n stare oxidat (feric). In anerobioz se acumuleaz Fe feros.
Bacteriile provenite din medii naturale sau cultivate pe medii cu Fe i Mn, examinate la microscopul
electronic au evideniat existena depozitelor de Fe i Mn cu localizri selective.
Magnetosomii sunt depui intracelular, dar compuii cu Fe i Mn pot fi depui extracelular, la nivelul
polimerilor ce formeaz stratul mucos. Matricea polimeric este impregnat cu metale. Fixarea metalelor ar fi
rezultatul unui proces de precipitare nespecific, ulterior adsorbiei fierului coloidal pe gruprile acide ale
polimerilor.
Pe baza observaiilor privind asocierea frecvent a depozitelor de Fe cu unele structuri celulare i cu
polimerii extracelulari se consider c depozitarea Fe s-ar putea realiza prin mecanisme biologice, dar i pe cale
abiotic.
Oxidarea biologic a Fe2+ s-ar realiza n condiii de microaerofilie, la pH 6,6, dar i n apele oligotrofe bine
aerate, slab alcaline. Dup depunerea oxizilor de Fe n matricea polimeric, fenomene de cataliz abiotic ar accelera
fenomenele de depunere. Apa care se scurge prin formaiunile de nisip dizolv srurile feroase. Cnd ajung la
suprafa, mecanismele oxidative convertesc Fe 2+ la Fe3+, care precipit ca hidroxid feric, ce formeaz depozite brunruginii n izvoare, pe suprafaa pietrelor n apele care curg lent ca o pelicul iridescent de Fe(OH) 3.
Autooxidarea are loc rapid n condiii de aerobioz, la pH neutru. Se formeaz Fe(OH) 2 i Fe(OH)3, oxizi
ncrcai pozitiv, care se pot lega de polimerii bacterieni electronegativi.
Datorit O2 atmosferic, cel mai mult Fe din biosfer este n stare oxidat (Fe 3+). Reducerea Fe feric (Fe3+) la
2+
Fe este rezultatul activitii bacteriilor heterotrofe din g. Alcaligenes, Bacillus, Proteus i Pseudomonas, precum i
a unor fungi (Mulder, 1972).
Manganul, element esenial pentru toate organismele se gsete n natur fie n form redus (Mn 2+), fie n
form oxidat (Mn3+).
Oxidarea ionului manganos (Mn2+) la ion manganic (Mn3+ sau Mn4+) se poate realiza pe trei ci:
1) Calea pur chimic, realizabil n anaerobioz, la pH 9,0, cu formare de MnO 2, insolubil n ap.
2) Oxidarea n prezena hidroxiacizilor (acid malic, citric, gluconic) este posibil la pH mai mare de 8,0 i n
prezena unor concentraii mari de Mn. Mecanismul ei nu exclude intervenia unor microorganisme.
3) Oxidarea biologic este realizat de manganobacterii i de unii fungi: Leptothrix sp., Gallionella,
Hyphomicrobium, Sphaerotilus, Metallogenium, etc. Reacia dup care bacteriile i fungii ar oxida Mn 2+ este:
Mn2+ + 1/2 O2 MnO2 + 2H+
Oxidarea s-ar produce pe suprafaa celulelor bacteriene sub aciunea oxidazelor sau a catalazelor, fr
beneficiu pentru microorganisme.
Microorganismele se pare c au rol important n geneza nodulilor de Mn. Nodulii sunt concreiuni minerale,
bogate n oxizi de Fe i Mn, prezeni pe fundul mrilor i oceanelor. Pot conine pn la 65% MnO 2. Mrimea lor
variaz ntre 1 mm i 20 cm diametru. Microorganismele ar constitui suprastructura solid pe care s-ar acumula
oxizii de Fe i Mn.
Biosolubilizarea metalelor. Leierea bacterian
Procedeele de biosolubilizare sunt reunite sub denumirea de leiere (engl. leaching, de la to leach a
extrage; fr. lixiviation de la lat. lixivium leie). Termenul caracterizeaz ansamblul procedeelor tehnice i
tehnologice, care duc la eliberarea metalelor din zcminte sau din depozitele de steril. Ele includ: sfrmarea
minereului, extracia i selecia unei anumite categorii de minerale i de concentrate, solubilizarea propriu-zis
realizat de bacterii sau de metaboliii lor i extracia metalelor din soluie.
Procedeele se ncadreaz n preocuprile cunoscute sub denumirea de hidrometalurgie microbian (Brierley,
1986).
Rolul bacteriilor n acest proces a fost sugerat de Colmer i Hinkle (1947), care au remarcat prezena
constant a bacteriei T. ferooxidans, n apele de drenaj ale minelor de crbune. Aceast bacterie, n asociere cu T.
thiooxidans dizolv metalele din zcminte.
Microorganismele care produc leierea metalelor sunt, n special, chemolitotrofe, acidofile. Au fost implicate T.
ferooxidans, T. thiooxidans, Leptospirillum ferooxidans i Sulfolobus acidocaldarius.
T. ferooxidans are rol fundamental n procesele de biosolubilizare. Se izoleaz curent din apele acide ale
minelor de crbune i are rolul de a converti Fe 2+ la Fe3+. In plus, oxideaz compuii sulfului, cu diferite grade de
oxidare: sulfurile (S2-) solubile i insolubile, sulful nativ (S0), tiosulfatul (S2O32-) sau tetrationatul (S4O62-). Produsul
oxidrii este sulfatul.
Oxidarea Fe2+ i a S0 se pot realiza spontan, fr intervenia bacteriilor, sub aciunea O 2 n aer, dar procesul
este lent i lipsit de semnificaie practic. Reacia este accelerat de 200000-500000 ori n prezena bacteriei T.
ferooxidans.
Mecanismele biosolubilizrii. In procesul de solubilizare a metalelor din zcminte, bacteriile pot aciona pe
dou ci:
- pe cale direct, respectiv prin oxidarea mineralelor sulfurate;
- pe cale indirect, participnd la oxidare prin producerea Fe3+ i a acidului sulfuric.
Biosolubilizarea indirect este procedeul prin care metalele sunt eliberate din mineralele insolubile, prin
intermediul oxidanilor chimici produi de microorganisme. Reaciile chimice caracteristice leierii indirecte se pot
produce i ca oxidri pur chimice, dar activitatea microorganismelor accelereaz mult viteza reaciilor chimice.
In leierea indirect, bacteriile produc Fe feric (Fe 3+) ca Fe2(SO4)3 prin oxidarea Fe feros (Fe2+) solubil.
Fe2(SO4)3 este un oxidant puternic i dizolv o mare varietate de metale pe care le transform n ioni oxidani solubili
ntr-o soluie de acid sulfuric.
Leierea produs sub aciunea Fe2(SO4)3 este numit indirect, deoarece are loc n absena bacteriilor viabile,
ca i n absena O2. In cursul acestei reacii, reapare Fe feros, care este rapid reoxidat de bacterii. De aceea, leierea
indirect se numete leiere asistat.
In acest proces, intervenia bacteriei T. ferooxidans mrete viteza reaciei de oxidare de peste 1 000 000 ori.
Reaciile de oxidare asistat a piritei (FeS2) sunt urmtoarele:
Biosolubilizarea direct se realizeaz fr participarea sulfatului feros produs pe cale bacterian, deoarece
metalele sunt eliberate din minereul insolubil direct, prin metabolismul oxidativ al microorganismelor. Bacteriile se
leag fizic pe suprafaa sulfurilor metalice i transfer n cursul metabolismului lor energetic, e - de la Fe sau S, pe
atomii de oxigen. Existena acestui mecanism aerob a fost demonstrat la T. thiooxidans. Consecina este
solubilizarea metalului, dup reacia:
SM (sulfur metalic) + 2O2 MSO4. M este un metal bivalent.
Recuperarea metalelor prin acumulare de ctre microorganisme.
Capacitatea microorganismelor acvatice de a concentra ionii metalici din soluiile

lor diluate prin adsorbie sau absorbie direct din ap a fost demonstrat de
Riley (1965) i este consecina proprietii de a fixa i precipita intracelular sau
pe suprafaa lor, metalele din soluie. In prima etap are loc interaciunea
stoichiometric a metalului din soluie cu gruprile chimice reactive de pe
suprafaa peptidoglicanului. Ulterior, dup complexare, situsurile respective
devin centre de nucleare, la nivelul crora continu procesul de depunere a
metalului sub form de precipitate chimice.
Se admite existena a dou modaliti majore de bioacumulare:
1) complexarea metalelor cu sarcini electropozitive, la gruprile funcionale electronegative ale suprafeei
celulare sau ale polimerilor extracelulari;
2) acumularea metalelor n citoplasma microorganismelor. Ambele modaliti au fost demonstrate att n
variantele lor active, prin intervenia celulelor vii, ct i pasive, adic n prezena celulelor moarte.
Procesele active de acumulare a metalelor sunt asociate cu celulele vii i au la baz interaciunile cu
suprafaa celulelor, reacii de oxido-reducere, de schimb ionic, de precipitare, de nglobare intracelular. Procesele
de acumulare se realizeaz prin urmtoarele mecanisme:
1) Reducerea metalelor de ctre microorganisme, ceea ce implic o diminuare a valenei lor. Este cel mai
bine cunoscut n cazul reducerii Hg. Ionul mercuric (Hg 2+) este nglobat de un sistem de transport activ i este redus
de reductaza mercuric la Hg0, care difuzeaz din celul n faza apoas, fiind pierdut prin volatilizare. Ionii de Fe
feric acioneaz ca acceptori de e - i sunt redui n condiii de microaerofilie sau anaerobioz. Oxizii de mangan sunt
redui sub aciunea unor produi de metabolism, iar S0 este redus la H2S i sulfit.
2)Precipitarea metalelor sub aciunea sulfurilor produse de bacteriile sulfat-reductoare. Desulfovibrio sp.,
Desulfotomaculum produc H2S care reacioneaz cu cationii metalici liberi sau adsorbii, pe care i precipit sub
form de sulfuri metalice.
3)Recuperarea argintului din suspensiile acvatice este un proces foarte eficient, al crui mecanism nu este
precizat.
Acumularea intracelular a metalelor are loc dup un mecanism incomplet elucidat, dar este extrem de
rapid: Ps. aeruginosa acumuleaz 100 mg uraniu/litru de suspensie n mai puin de 10 secunde, iar uraniul ajunge
s reprezinte circa 50% din greutatea celular uscat. Explicaia fenomenului este urmtoarea: bacteriile posed
sisteme de transport dependente de temperatur i energie, necesare prelurii din mediu a ionilor de Mg 2, Ca2, K+,
Na+, SO42-, etc. Dei aceste mecanisme sunt foarte selective, nu este exclus posibilitatea unor substituiri. In
consecin, anumii ioni cu sarcin negativ (CrO 42-, SeO2-, VO42-, WO42-, MoO42-) pot folosi sistemul de transport al
sulfatului (SO42-), acumulndu-se n celul. In plus, unele microorganisme posed proteine foarte specifice pentru
legarea metalelor. Una dintre ele, metalotioneina, conine numeroi aminoacizi cu sulf. Prin plierea catenei
polipeptidice se formeaz situsuri active de chelatare, de exemplu, situsuri HS -. Aciunea metalotioninei explic
posibilitatea cianobacteriei Synechoccus de a fixa 1,28 atomi de Cd/molecul.
Depozitarea intern este bine cunoscut la bacteria Aquaspirillum magnetotacticum, care include n structura
sa magnetosomi alctuii din magnetit (FeO4). Magnetosomii sunt acoperii de o membran, asemntoare ca
structur chimic, celorlate membrane celulare.
Procesele pasive de acumulare a metalelor (biosorbia) sunt consecina sarcinii electronegative nete a
celulelor bacteriene. Polizaharidele capsulare au o sarcin net negativ. Astfel, biosorbia descris de Brierley
(1990) este rezultatul atraciei electrostatice dintre cationii metalici i situsurile anionice ale suprafeei bacteriene. Pe
aceast cale ionii de fosfat (PO 43-), carboxil (R-COO-), hidroxil (HO-) i sulfhidril (HS-) adsorb ioni metalici
electropozitivi, rapid i reversibil, independent de temperatur i de metabolismul energetic.
Descoperirea fenomenelor de bioacumulare a deschis calea unor biotehnologii menite s asigure ndeprtarea
metalelor (Cu, Cr, Al, Ni, Fe, U, Pb, Cd) din apele uzate industriale. Procedeul poate fi folosit pentru combaterea
polurii, refacerea apelor de suprafa sau freatice contaminate, precum i pentru recuperarea metalelor respective,
cu consecine economice importante.
Biosorbanii produi n prezent sunt reprezentai de granule de biomas microbian sau de polimeri
(exopolizaharide sau componente ale peretelui celular). Ei sunt compactai ntr-o mas rezistent la influenele
mediului nconjurtor, cu forme i dimensiuni adecvate, precum i cu capacitate de regenerare.
Biosorbanii leag metalele prin reacii de schimb ionic, prin precipitare consecutiv fenomenului de
nucleare amorsat de metalul legat iniial i prin complexare. Rolul lor este asemntor cu al rinilor schimbtoare
de ioni, dar capacitatea de legare a complexelor metalice este mult mai mare dect al acestora. Dup desorbia
metalelor legate, biosorbanii pot fi refolosii n mod repetat. Pentru producerea lor poate fi folosit biomasa
microbian rmas neutilizat de la alte biotehnologii (producia de antibiotice, fermentaii etc).
Biosorbanii se folosesc n special pentru ndeprtarea cationilor metalelor grele din apele uzate, n special
Cd, Cu, Pb i Zn.
Rolul microorganismelor n formarea zcmintelor de petrol
Petrolul (latin, petra roc, oleum ulei) este un amestec complex, extrem de heterogen, de hidrocarburi
gazoase, lichide i solide, la care se adaug numeroi compui ai carbonului i hidrogenului cu O, N, S, P.
Dup ZoBell (1963), proporia diferitelor elemente este urmtoarea: C - 82,2-87,1%; H - 11,7-14,7%; S 0,1-5,5%; N - 0,1-1,5%; O - 0,1-4,5%; sruri minerale - 0,1-1,2%.
Teoriile asupra genezei petrolului nu au explicat caracterul reaciilor chimice din care a rezultat complexul
ce conine mii de hidrocarburi.
In prezent exist un acord general asupra faptului c petrolul s-a format ca i crbunele, din materia
organic, supus unor condiii speciale de mediu i continu s se formeze i n prezent.
Sursa de baz pentru formarea combustibililor fosili este reprezentat de plantele superioare n mediul
terestru, iar n mediul acvatic, furnizorul de biomas este fitoplanctonul alctuit de diatomee, dinoflagelate i unele
Chrysophyceae, n special cocolitoforidele. Se adaug resturile organice provenite din lanul trofic complex al
mediului acvatic (din zooplancton, animale marine, microorganisme).
Formarea petrolului, la temperaturi i presiuni moderate ar avea loc n dou etape: una iniial, biologic, n
cursul creia masa organic este atacat i modificat de bacterii i o a doua, foarte ndelungat, de transformri
fizico-chimice.
In favoarea participrii microorganismelor la formarea zcmintelor pledeaz mai multe argumente:
- petrolul este absent n formaiunile geologice pur anorganice;
- n zcminte a fost evideniat frecvent prezena unor microfosile de animale marine,
fragmente de lemn pietrificat, crustacee mici, spori fungici, rini vegetale etc;
- prezena n zcmintele de mare adncime (2000-2950 m) a unor bacterii care pentru
cretere necesit temperaturi i presiuni mari;
- unele bacterii, n condiii artificiale sintetizeaz unele hidrocarburi simple;
- prezena, n special n fraciunile grele ale petrolului, a unor molecule chimice fosile provenite din
organismele vii: alcani de tipul C15H32 (probabil originari din alge), alcani de tipul C 29H60 (originari, se pare din
plante superioare), acid cholanic (de origine animal) etc.
Bacteriile acioneaz n mod cert asupra materiei organice precursoare, pentru a o transforma ntr-un produs
care seamn mai mult cu petrolul dect cu materialul original, protopetrol. Stadiile finale de conversie a
protopetrolului n iei brut sunt de natur fizico-chimic.
Faza iniial - biologic corespunde transformrii constituienilor majori (glucide, proteine, lipide) din
structura organismelor moarte, sub aciunea bacteriilor. Iniial, acioneaz bacteriile facultativ anaerobe care
consum O2 dizolvat n apele din adnc, diminu cantitatea de substan organic i deschid calea aciunii
microorganismelor anaerobe.
Faza a doua - fizico-chimic este de lung durat. Cea mai mare parte a materiei organice trece n aceast
faz. In cursul ei, lipidele, prin modificri structurale minore formeaz molecule din categoria fosilelor
geochimice, iar aminoacizii i glucidele simple, prin policondensare, formeaz acizii humici i fulvici, asemntori
celor descrii n sol. Ei formeaz humusul marin, produs complex, coloidal, asemntor celui din sol. Continuarea
procesului de policondensare i a celui de sedimentare realizeaz transformarea sedimentului organic n kerogen,
care reprezint sursa principal de formare a petrolului, a gazelor i a isturilor bituminoase.
Procesul de sedimentare continu zeci, chiar sute de milioane de ani, n condiii n care temperatura crete cu
circa 30oC/km. Kerogenul, format din nuclei poliaromatici, legai prin lanuri alifatice sufer un proces de degradare
termic menajat, care are drept consecin dispariia gruprilor funcionale (acid, ester, ceton, etc.) i meninerea
nucleilor poliaromatici. Se produc rearanjri moleculare, eliminarea CO 2, H2O i a produilor oxigenai, degradarea
lanurilor alifatice, determinnd formarea ieiului.
ieiul conine cantiti variabile de sulf, ntre 0,025 i 6%, sub form legat n peste 200 de molecule
organice complexe sau ca S elementar, sulfai, sulfuri, tiosulfat.
Se admite c sulful din petrol este rezultatul activitii bacteriilor sulfat-reductoare, active n faza de
sedimentogenez asupra compuilor cu sulf din mediu pe care i introduce n combinaii organice complexe.
Microorganismele realizeaz i interaciile inverse, de desulfurizare in situ, prin degradarea compuilor sulfului cu
eliberare de H2S.
Dup formare, ieiul este regsit n stare dispersat i conservat ca atare n roca-mam. Pentru a forma
zcminte, el trebuie s migreze i s se acumuleze n rezervorul poros (migrarea primar). Apoi se deplaseaz n
interiorul rezervorului pentru a se acumula la nivelul unei capcane anticlinale sau a unor crpturi n strat (migrare
secundar).
Bacteriile au un rol esenial n procesul complex de eliberare, migrare i acumulare a ieiului, realizabil pe mai
multe ci:
1) degradarea matricei organice a resturilor vegetale, cu eliberarea picturilor de iei, care se reunesc prin
coalescen;
2) dizolvarea carbonailor din rocile pe care este adsorbit i formarea de canalicule i spaii goale;
3) producerea de CO2, CH4, H2 i alte gaze, care reduc vscozitatea, n special cnd se afl sub presiune,
favoriznd scurgerea pn la capcane;
4) producerea de acizi grai i substane tensioactive, care acioneaz asupra ieiului adsorbit sau aflat n
emulsia apoas.
NOTIUNI DE MICROBIOLOGIA SOLULUI

Solul ca mediu natural pentru microorganisme
Solul poate fi definit ca un complex de substane - surse de nutrieni i de energie pentru unele organisme. Este
un sistem dinamic cu trei faze: solid, lichid i gazoas.
Solul este rezultatul dezagregrii rocilor parentale sub aciunea factorilor fizici i chimici i a unor activiti
biologice care determin evoluia substratului spre stadiul de sol.
Faza solid reprezint circa jumtate din volumul solului i este alctuit din substane minerale i organice.
Fraciunea mineral are o compoziie variabil n funcie de natura rocilor parentale, care pot fi:
- roci vulcanice (rezultate din solidificarea lavei): granitul, bazaltul
- roci sedimentare rezultate din depunerea i consolidarea produselor rezultate din degradarea altor roci
(gresia, marna, dolomite, isturi argiloase, calcare)
- roci metamorfice (isturi cristaline, cuarite, gnaisul, marmora) provenite din modificarea rocilor vulcanice
sau sedimentare sub influena temperaturii i/sau a presiunii ridicate.
Rocile sunt infertile, dar pot adposti cianobacterii, alge, unele eubacterii, care iniiaz procesele de
degradare a rocilor.
Fraciunea organic este alctuit din resturi organice neanimate provenite din litier, lemn, rdcini, diferite
organisme i microorganisme, ce corespund fraciei nealterate, dar i din fragmente i particule aflate n diferite
grade de descompunere, incluznd i constituienii eseniali ai solului, reprezentai de materialele humice.
Diferitele substane cu rol de nutrieni se gsesc fie n form solubil, fie adsorbite pe diferite substraturi, fie n stare
insolubil. Dei solul conine cantiti suficiente sau chiar n exces de nutrieni, acetia sunt frecvent n forme
inaccesibile plantelor i transformarea lor n forme accesibile este una dintre aciunile majore ale microorganismelor
din sol.
Faza lichid este reprezentat de apa din porii solului i de pe suprafaa particulelor de sol. Ea conine n
stare dizolvat sau de dispersie coloidal, diferite substane minerale i organice i este cunoscut sub denumirea de
soluia solului. Reprezint ntre 0,1 i 1% din greutatea solului.
Faza gazoas corespunde aerului prezent n porii liberi din ap i are o compoziie modificat fa de aerul
atmosferic, avnd o cantitate mai mic de O2 i una mai mare de CO2.
Componenta major a solului o formeaz substanele minerale. Dintre acestea, siliciul sub form de SiO 2
reprezint 75,42% din masa total a solului. La acesta se adaug: Al 2O3 (9,68%), Fe2O3 (3,44%), K2O (1,78%), Na2O
(0,96%), TiO2 (0,72%), MnO (o,11%) din compoziia mineralelor argiloase, precum i CaO (1,33%), MgO (0,85%),
P2O5 (0,11%), SO3 (0,1%) i N (0,11%). Cantitatea de C echivalent cu materia organic este de 5,29%.
Fraciunea cea mai impotant pentru activitatea microorganismelor din sol este cea a mineralelor argiloase,
dispuse discontinuu pe suprafaa particulelor de nisip. In lipsa substanelor organice, bacteriile nu pot adera,
deoarece nu pot sintetiza suficiente substane organice proprii cu rol de aderen.
Argilele au compoziii diferite n funcie de condiiile n care a evoluat procesul de pedogenez. Din punct
de vedere chimic sunt alctuite din aluminosilicai secundari (rezultai prin alterarea i hidratarea n diferite grade a
silicailor primari), asociai cu oxizi hidratai de Fe, Al, Mn sau ali produi finali de alterare.
Importana excepional a argilelor deriv din particularitatea general a microorganismelor de a se localiza i de a
fi active pe suprafaa particulelor din sol, n sistemul porilor, n apropierea imediat a particulelor.
Datorit dimensiunilor mici, argilele au un raport mare suprafa/volum, favoriznd fenomenele de adsorbie
i interaciune.
Mineralele argiloase, ca i materialele humice au o mare afinitate pentru moleculele de ap. De aceea,
nutrienii organici i anorganici i microorganismele au tendina s se concentreze la interfeele argil/ap sau
substane humice/ap.
Argilele au funcia de reinere fizico-chimic i de cedare prin schimb a unor cationi ca, de exemplu,
nlocuirea Si4+ i Al3+ cu ioni cu o valen mai mic.
Formarea solului
Formarea solului (solificare) este un proces complex i foarte ndelungat, n cursul cruia, prin intervenia
unor mecanisme fizice, chimice i biologice, roca parental, steril i inert dobndete caracterul de fertilitate, fiind
convertit la stadiul de sol.
Principalele etape ale acestui proces sunt:
1)Dezagregarea - un proces fizic de fragmentare a rocilor compacte sub aciunea factorilor de mediu.
2)Alterarea - dezagregarea chimic sau biochimic, n cazul colonizrii cu microorganisme - pionier
(cianobacterii i alge) sau cu licheni. In aceast faz se formeaz complexul mineral al solului.
3)Instalarea i dezvoltarea biocenozelor proprii este o etap esenial deoarece asigur fertilitatea, adic
aprovizionarea plantelor cu nutrieni.
4)Formarea i acumularea humusului asigur prin aciunea mezofaunei i a microorganismelor, depozitul
organic specific solului, component esenial al fertilitii acestuia.
Textura solului este una dintre proprietile care influeneaz natura i biologia microorganismelor i este
definit ca rezultat al proporiilor relative ale diferitelor particule din sol (nisip, praf, argil, etc.). Solurile dominate
de o anumit clas de particule poart numele clasei: sol nisipos, argilos, sau sol prfos. Cele care nu au ca
dominant o anumit clas de particule sunt denumite luturi.
Structura solului se formeaz n procesul de pedogenez, ca rezultat al modificrilor fizico-chimice, de
formare a argilelor i a altor coloizi, a humusului i a activitii organismelor vii. Structura solului este definit de
aranjamentul particulelor de sol i al porilor dintre ele. Structurile ce pot fi observate cu lupa (x4) se numesc
macrostructuri, iar cele mai mici, microstructuri.
In solul structurat, particulele elementare sunt legate ntre ele, n uniti structurale mai mari denumite
agregate. Particulele de sol dintr-un agregat sunt legate prin fore mai puternice de ct forele dintre agregatele
adiacente.
Structura solului, adic modul de grupare a particulelor componente este un bun indicator pentru activitatea
biologic, deoarece agregatele de sol delimiteaz cele mai importante microhabitate pentru microorganismele din
sol. Ca faz solid a solului, agregatele controleaz cantitatea i distribuia apei i a aerului.
Un sol este considerat ca avnd o structur bun, dac menine suficient umiditate pentru a mpiedica
deficitul n jurul rdcinilor n perioadele de uscciune, dar care permite drenajul suficient pentru a evita bltirea n
perioadele umede. El trebuie s aib pori plini cu gaze, pentru a permite schimbul cu atmosfera, reducnd riscul
formrii zonelor anaerobe.
Structura optim a solului este cea glomerular (mzrat), rezultat din asocierea particulelor de sol n
agregate sferoidale, cu diametrul de 0,2-5 mm, cu suprafa neregulat, cu convexiti i cu concaviti. Rezult o
structur friabil, afnat, datorit creia agregatele mari pot fi uor disociate la agregate de particule mai mici.
Structura solului este rezultatul a dou procese complementare: agregarea particulelor i fragmentarea masei
solului.
Gruparea particulelor n agregate necesit prezena unor substane cimentante, cele mai importante fiind
particulele de argile coloidale, din solul argilos saturat n Ca 2+ i Mg2+. Microorganismele au un rol complex n
formarea structurii solului, condiionat n esen, de capacitatea lor de a produce polizaharide sau alte materiale
aderente. Cele mai active n stabilizarea structurii solului sunt cele cu g.m. de 100 kDa.
Humusul considerat de Chiri (1974) ca principalul formator de structur, datorit rolului su de aglutinare
i cimentare a particulelor, influeneaz formarea de agregate prin intermediul polizaharidelor, proteinelor,
poliuronidelor aminate i al substanelor similare ligninelor pe care le conine.
Substanele organice derivate din exudatele radiculare, din esuturile vegetale muribunde, ca i produii
rezultai din degradarea lor favorizeaz agregarea i este sursa major de substane stabilizatoare.
Rdcinile plantelor i regiunile periradiculare au un rol complex n structura solului nisipos nestructurat.
Dup dezvoltarea plantelor, o bun parte din particulele de sol rmn asociate cu rdcinile.
Fauna din sol (n special rmele) inger cantiti mari de materiale vegetale i sol, care sunt mrunite i atacate
de enzimele proprii i bacteriene din intestin. Ulterior, depun cantiti imense de sol i dejecii sub forma unor
agregate coprogene cu structur glomerular.
Sistemul poros al solului reprezint acea parte a spaiului pedologic n care se desfoar procesele de
schimb ntre fazele lichid, gazoas i solid ale solului sau, altfel spus, ntre coninutul porilor i peretele lor. Porii
reprezint habitatul microorganismelor i asigur reglarea hidric i gazoas a acestuia. Ei reprezint 31-45% din
volumul solului. Porii difer prin form, lungime, sinuozitate, continuitate, diametru. Porii fini (diametru mai mic
dect 0,2 m) rein apa ntr-o form puternic fixat, inaccesibil plantelor. Porii mijlocii (0,2-10 m) rein apa i o
nmagazineaz, disponibil organismelor vii. Porii mari (cu diamterul mai mare de 50 m) au rol esenial n
aeroreglare i reprezint principalul biotop pentru organismele din sol. Apa trece cu uurin prin ei.
Materia organic din sol
Materia organic, absolut necesar pentru existena microorganismelor heterotrofe, provine n cea mai mare
parte din afara acestuia i este format din diferite tipuri moleculare n care predomin C, O, H, N i cantiti mici de
alte elemente.
Materia organic din sol conine trei fracii majore:
- fraciunea relativ uor accesibil microorganismelor, provenit n principal din descompunerea resturilor
vegetale, care se rennoiesc anual;
- produii rezultai din degradare la forme relativ stabile, prin metabolismul organismelor din sol, avnd o
vechime de circa 25 de ani;
- materia organic foarte rezistent la degradare, n special de natur humic: substane complexe rezultate
din conversia unor produi de degradare a ligninei sau din sinteza de novo de ctre microorganisme, din precursori
aromatici i nearomatici, cu o vechime de 250-2500 de ani.
In funcie de proprietile chimice i de relaiile fizice cu constituienii solului, substanele organice aparin
urmtoarelor categorii:
1)Molecule organice mici i difuzibile, solubile n faza apoas a solului: monoglucide, aminoacizi, acizi
organici, monomeri aromatici. Ele provin din degradarea resturilor organice adugate recent n sol (litier, exudate
radiculare, etc). Se adaug substanele solubile provenite din resturi i excremente animale, deosebit de importante
prin aportul de compui cu azot, fosfor i sulf.
2)Substraturile macromoleculare includ o varietate de structuri polimerice, a cror utilizare necesit o
degradare prealabil sub aciunea unor enzime extracelulare: celuloza, hemicelulozele, lignina (cel mai important
substrat vegetal, dup celuloz), polimerii de natur microbian (chitin, peptidoglicani, acizi teichoici, polizaharide
- levanii, dextranii, xanthanii, alginaii, etc), surse importante de glucoz, arabinoz, manoz, galactoz, ramnoz,
xiloz, acizi uronici (acidul glucuronic i galacturonic), glucozamin, etc.
O mare parte din substanele organice sunt asociate cu fraciunea mineral din sol, n special cu argilele.
Fenomenul adsorbiei polizaharidelor are ca rezultat scderea sensibilitii lor la biodegradare.
Substanele organice pot fi asociate cu substanele humice din sol, efectul fiind de cretere a rezistenei la
degradare.
Humusul
Principalul constituient specific al solului i factor esenial al fertilitii acestuia, humusul este un complex
de substane coloidale amorfe, de culoare brun-neagr, format prin descompunerea parial a resturilor vegetale,
animale i microbiene.
Humusul este alctuit din sisteme coloidale, interconectate tridimensional, de natur predominant aromatic,
cu caracter fenolic, chinoinic sau cetonic, cu dimensiuni moleculare variate i aparinnd heteropolicondensatelor cu
mare rezisten la atacul microbian.
Humusul este alctuit din dou grupuri principale de constituieni: constituienii specifici sau substanele
humice propriu-zise i constituienii nespecifici (nehumici) reprezentai de diferite substane organice, n diferite
grade de degradare i eliberare din esuturi din care provin (lignine, celuloz, hemiceluloze, pectine, proteine),
precum i diferii intermediari de descompunere (monoglucide, aminoacizi, acizi organici, fenoli, etc).
Substanele humice propriu-zise n funcie de gradul de solubilitate pot fi grupate n urmtoarele fraciuni:
1)Fraciunea solubil n soluii alcaline este reprezentat de acizii humici. Componenii ei pot fi separai n
acizi fulvici hidrosolubili i neprecipitabili cu acizi (HCl, H2SO4) din soluia alcalin i acizi huminici, precipitabili
cu acizi din soluia alcalin.
Acizii fulvici, heterogeni din punct de vedere chimic reprezint stadiul iniial de transformare a produilor
intermediari rezultai din descompunerea masei reziduale organice (g.m. 2000-8000 Da).
Acizii huminici sunt constituieni majori ai humusului din solurile fertile. Solubili n soluii alcaline,
insolubili n ap, au un grad mare de polimerizare (g.m. 50 000-100 000 Da). Se pot forma prin polimerizarea
acizilor fulvici.
2)Fraciunea insolubil este reprezentat de humine. Ele sunt complexe macromoleculare de acizi fulvici i
huminici, strns legate de materiale minerale. Insolubile n alcali, huminele formeaz fraciunea cea mai stabil a
solului. Huminele marcheaz stadiul final al biosintezelor humice. Pot avea vechime ntre 2000 i 5000 de ani. Dau
culoarea caracteristic (brun-nchis spre brun-negru) a straturilor superficiale ale solului.
Materialele humice au o importan esenial pentru viaa din sol. Cel mai adesea, ele se asociaz intim cu
argilele pentru a forma complexe organo-minerale.
Structura chimic a humusului nu este definit exact. Exist tendina de a considera c materialele humice
nu au o structur chimic definit, deoarece sunt polimeri asamblai neregulat.
Modelul structural propus de Stevenson (1976) are la baz existena unei poriuni centrale (core), constnd
n cicluri aromatice, heterociclice i chinoidale condensate, conectate i interconectate prin legturi C-C, amino i
azo. Ciclurile poart o serie de grupri funcionale de tip carboxil, hidroxil, fenolic i carbonilic. De poriunea
central a moleculei sunt legate glucide, aminoacizi i fenoli, care la rndul lor formeaz alte interconexiuni. Astfel,
rezult o structur complex tridimensional, ca un burete, care absoarbe apa, ionii i moleculele organice n mod
reversibil. Diferiii compui organici naturali sunt legai sau absorbii n structura sa. Datorit structurii
tridimensionale, polimerii humici se pot extinde, expunnd diferite zone ale suprafeei lor, ce pot influena
interaciunile cu enzimele din sol, cu microorganismele i cu diferite substraturi.
Procesul de humificare este puin cunoscut. Pe plan global, el reprezint o stare intermediar ntre procesele
de reciclare imediat i rapid, care determin degradarea resturilor de substane organice (n special vegetale) ajunse
n sol i cele de depunere de combustibil fosil. Se consider c majoritatea humusului este de origine biogen i
corelat cu procesul de ligninoliz. Lignina este abundent n esutul lemnos matur (18-30%) i mpreun cu celuloza
i hemicelulozele formeaz pereii celulelor vegetale, un substrat greu degradabil. Totui, n 6-8 luni, 60-75% din
lignin este degradat de fungii putregaiului alb.
Paralel cu acest proces, n strns apropiere fizic are loc procesul de formare a humusului. Detaliile
procesului nu se cunosc, pentru c nici structura ligninelor i nici cea a humusului nu au fost elucidate. Se tie ns
c macromoleculele complexe ale humusului prezint un grad nalt de variabilitate. Procesul de humificare
evolueaz extrem de lent. Substanele humice au vechimi cuprinse ntre 20 i 5000 de ani. In acest interval, ele sunt
continuu reciclate (mineralizate) i resintetizate.
Humificarea, ca proces secundar ligninolizei evolueaz n etape succesive, n cursul crora procesele de
descompunere sunt nsoite de reacii de sintez i polimerizare a unor molecule de baz.
Structura de baz a humusului, reprezentat de ciclurile aromatice, poate avea originea n produii de
degradare a ligninei sau poate fi sintetizat de novo de unele microorganisme, din alte substraturi. Nu este exclus
nglobarea unor resturi aromatice ale unor molecule artificiale, cum sunt unele pesticide.
Procesul de humificare este extrem de lent, dar are un caracter permanent. Componentele humusului se
rennoiesc treptat, cu o rat dependent de complexitatea i stabilitatea lor. De aceea, compoziia sa nu este stabil.
Din acest punct de vedere, humusul se comport asemenea unui organism viu.
In absena activitii biologice, n condiiile unui pH acid, temperatur sczut, umiditate mare, coninut
crescut de materie organic srac n compui azotai are loc humificarea abiologic, foarte lent, avnd ca rezultat
producerea de turb (aglomerare masiv de materie organic, saturat cu ap, puin degradat, n condiii de
anaerobioz).
Humusul reprezint una dintre cele mai rspndite i mai abundente materii organice din sol, substratul
dezvoltrii microorganismelor i al fertilitii solului, pentru c asigur nutrienii n forme accesibile. Fertilitatea este
consecina degradrii permanente a humusului de ctre microorganisme. Materialele humice sunt ntr-o stare de
echilibru dinamic: descompunerea lor treptat este compensat prin resintez.
Factorii de mediu care influeneaz natura, numrul i activitatea microorganismelor
Apa i umiditatea asigurat de ea sunt eseniale pentru creterea, activitatea, supravieuirea i germinarea sporilor
diferitelor categorii de microorganisme. Umiditatea solului este expus la mari fluctuaii sezoniere i chiar diurne.
Apa gravitaional se scurge sau se infiltreaz datorit gravitaiei. O parte este reinut contra gravitaiei i poate fi
utilizat de sistemele biologice.
Apa din sol acioneaz ca solvent pentru nutrienii minerali, care vor fi preluai de plante i de
microorganisme. Solurile foarte uscate ct i cele foarte umede limiteaz dezvoltarea microorganismelor. Bacteriile
devin inactive cnd solul argilos conine mai puin de 12% ap. Umiditatea n exces stimuleaz procesul negativ de
denitrificare. Fungii sunt mai rezisteni la uscciune. Necesarul lor de umiditate este foarte diferit. Aa se explic de
ce unele boli fungice sunt limitate la anumite regiuni.
Prezena apei n sol influeneaz deplasarea microorganismelor ntre pori, de-a lungul rdcinilor i n jurul
resturilor vegetale.
Aerarea reprezint procesul prin care gazele produse sau consumate sub suprafaa terestr sunt schimbate cu
cele din aerul atmosferic. Porii din sol care nu sunt ocupai de ap conin gaze ce formeaz atmosfera solului.
Atmosfera solului conine o concentraie mai mic de O 2, iar a CO2 este de 10-100 de ori mai mare dect a aerului
atmosferic. Distribuia celor dou gaze n sol, influenat de fenomenele de difuzie i de respiraie a
microorganismelor este inegal, astfel nct unele zone pot fi aerobe, iar altele anoxice. Sub acest raport, solul nu
este uniform, ci este o colecie de microhabitate n care condiiile de aerobioz i anaerobioz coexist n teritorii
foarte apropiate.
Lipsa O 2 sau prezena peste o anumit concentraie a CO 2 inhib creterea rdcinilor al cror apex este foarte
sensibil la lipsa O2.
Temperatura este un factor variabil n straturile de la suprafaa solului, putnd s creasc datorit razelor
calorice solare pn la 55o n regiunile temperate, 70o la tropice i 88o n Valea Morii din California. Prezint variaii
diurne, ca i variaii sezoniere. Variaiile sunt mai mari n solurile lipsite de vegetaie.
Solurile au, n general, valori pH cuprinse ntre 4,8 i 8,5. Ele posed un sistem tampon complex, dependent
de capacitatea de schimb ionic a argilelor i a materiei organice coloidale, dar valorile pH sunt influenate de
activitatea metabolic a microorganismelor. Degradarea litierei poate s produc un pH acid n straturile de
suprafa, iar reducerea nitrailor la N2 i a sulfatului la sulfuri n condiii anoxice favorizeaz alcalinizarea solului.
Adncimea influeneaz densitatea microorganismelor prin efectele concentraiei O 2 i CO2, a nutrienilor, a
umiditii, etc. Frecvena microorganismelor n sol scade brusc cu adncimea, n raport cu numrul mare prezent la
suprafa.
Microbiota din sol

Solul este un mediu potrivit pentru dezvoltarea microorganismelor. Numrul i diversitatea lor sunt mai mari
dect n mediul acvatic. Solul ofer condiii foarte heterogene i de aceea poart populaii de microorganisme cu
particulariti biologice i biochimice foarte diferite. Micropopulaiile din sol sunt alctuite din bacterii (eubacterii,
actinomicete, cianobacterii), microfungi, alge i protozoare.
Winogradski (1949) a propus diferenierea ecologic n dou categorii:
Microorganismele autohtone (indigene, permanente sau constante) sunt cele mai numeroase i caracteristice
unui anumit tip de sol. Ele sunt adaptate la viaa n solul normal, adic n solul care nu conine substane organice
n curs de fermentaie sau putrefacie. Microorganismele indigene cresc lent, utiliznd nutrieni prezeni n sol,
inclusiv substane stabile cum sunt cele humice. Dezvoltarea lor nu este dependent de surse exogene de nutrieni i
de aceea nu sunt expuse fluctuaiilor numerice semnificative.
Microorganismele zimogene (temporare sau de fermentaie) au o activitate periodic, intermitent, cu faze de
activitate i de repaus. Nu pot utiliza substanele complexe din sol i se dezvolt pe substane organice, uor
utilizabile, provenite de la exterior: resturi vegetale, excrete i resturi animale, etc. In mod obinuit sunt puin
numeroase, dar se dezvolt luxuriant dup adugarea substanelor organice exogene. Dup epuizarea substratului
numrul lor scade brusc.
Cele dou categorii de microorganisme nu pot fi separate n mod cert. Unii cercettori consider c
microorganismele zimogene intr n sol odat cu resturile organice pe care le degradeaz, n timp ce alii le consider
ca microorganisme heterotrofe autohtone cu anumite particulariti fiziologice i biochimice, prezente permanent n
stare latent n sol. Ei limiteaz termenul de alohton la patogenii pentru plante, animale i om care ajung n sol cu
esuturile vegetale infectate sau bolnave, apele reziduale cu dejeciile i cadavrele animalelor bolnave. Ele formeaz
microbiota de tranziie, deoarece, n general, nu gsesc condiii de multiplicare ci numai de supravieuire temporar.
Puine specii patogene (de exemplu, Cl. tetani) pot persista ndelung n sol.
Determinrile numerice ale diferitelor categorii de microorganisme au evideniat dependena lor de natura, de
orizontul i de adncimea de la care au fost recoltate, de particularitile de umiditate, de pH, de coninutul n
substane organice i de gradul de oxigenare.
Bacteriile se dezvolt ntr-un numr imens de habitate, cu dimensiuni milimetrice sau mai ales micrometrice,
iar n restul solului doar supravieuiesc. Ele formeaz microcolonii (uneori cu mai puin de 10 celule) pe suprafaa
particulelor de sol. Creterea este mult mai important pe particulele de humus, pe diferite substraturi organice, dect
pe cele de nisip.
Unele minerale argiloase stimuleaz rata de cretere a bacteriilor, dar inhib creterea fungilor.
Factorul care influeneaz decisiv creterea microorganismelor este concentraia nutrienilor. Pentru alge i
bacteriile autotrofe este esenial concentraia nutrienilor organici.
Abundena protozoarelor este corelat cu numrul bacteriilor, dei protozoarele saprozoice depind direct de
prezena i de cantitatea de materie organic n mediu.
Viaa microorganismelor din sol este, influenat n mare msur de fenomenele de adsorbie.
Microorganismele, ca i nutrienii organici sunt frecvent adsorbii i concentrai pe anumite particule.
Bacteriile reprezint grupul cel mai numeros i mai activ din sol. Predomin bacteriile Gram negative. Cele
Gram pozitive sunt mai frecvente dect n mediile acvatice i li se adaug bacterii care dau reacii Gram variabile.
Bacteriile prezint un pleomorfism accentuat n comparaie cu morfologia descris drept clasic. Valorile medii
furnizate de tehnicile actuale sunt de 10 6-108-109 celule/g sol uscat, prin tehnica cultivrii celulelor viabile i de 10 10
celule, prin tehnicile de numrare direct, care nsumeaz celulele vii i moarte.
Bacteriile sunt rareori libere n faza lichid a solului. Ele se gsesc frecvent sub form de microcolonii pe
diferite resturi vegetale, adsorbite pe argile i pe humus sau, inclavate n mase de humus. In funcie de gradul de
dispersie pe mediile de cultur, o microcolonie sau un agregat de bacterii din sol poate forma pe mediile de cretere,
o singur colonie sau un numr de colonii mai apropiat de numrul celulelor individuale.
In general, tehnicile de apreciere a numrului de bacterii din sol prin cultivare n laborator reflect numai 110% din situaia real, deoarece nici un mediu de cultivare nu poate satisface enorma diversitate a exigenelor lor
nutriionale.
Cunoscnd numrul aproximativ al bacteriilor din sol se poate calcula biomasa lor, fie n funcie de volumul
mediu ocupat, fie ca greutate la unitatea de suprafa (ha).
Alexander (1971) propune ca baz de calcul, un volum de 1 m 3/celul i o greutate umed de 1,5 x 10 -12
g/celul. La o densitate de 108 celule/g sol uscat, bacteriile ocup 0,01% din volumul total al solului, iar la densitatea
de 109 bacterii, 0,1%. Raportat la greutate, la densitatea de 10 8 celule, bacteriile reprezint 0,015%, iar n cazul a 10 9
celule, 0,15% din masa total a solului.
In sol se gsesc toate bacteriile implicate n circuitul carbonului, a azotului, a fosforului, a sulfului, a fierului
i a celorlate elemente n natur, a celor implicate n formarea i degradarea humusului, n solubilizarea compuilor
organici i anorganici, insolubili i inaccesibili plantelor. Se adaug o serie de bacterii heterotrofe, relativ constante
n toate solurile: Acinetobacter, Achromobacter, Agrobacterium, Alcaligenes, Arthrobacter, Bacillus, Brevibacterium,

Cellulomonas, Chromobacterium, Clostridium, Corynebacterium, Flavobacterium, Micrococcus, Mycobacterium,
Pseudomonas, Sarcina, Staphylococcus, Streptococcus, Xanthomonas, etc.
Rolul bacteriilor din sol este imens. Ele particip la procesele de mineralizare, eseniale pentru nutriia
plantelor i asigurarea fertilitii solului. Sunt organisme capabile s mbogeasc solul n azot combinat prin
fixarea N2. Prin polizaharidele extracelulare particip la agregarea particulelor de sol i la formarea humusului.
Actinomicetele sunt la fel de numeroase ca i bacteriile propriu-zise (10 5-108 /g sol), dei determinrile nu
reflect densitatea lor real i nici activitatea lor n sol. Coloniile in vitro pot s aib originea, deopotriv, n spori,
fragmente de hife sau hife ntregi. Sunt prezente n sol, n special, sub form de spori. Sunt mai numeroase n
straturile de la suprafaa solului. Nu se dezvolt sub pH 5,0. Prefer solurile bogate n substane organice. Dup
adugarea acestora n sol, iniial se dezvolt bacteriile i fungii. Actinomicetele se dezvolt mai lent, cnd nutrienii
tind s devin limitani pentru bacterii i fungi. Ele se dezvolt heterotrof, utiliznd surse de C simple sau complexe
(glucide, acizi organici, polizaharide, hidrocarburi alifatice). Degradeaz molecule rezistente: celuloza (Nocardia
cellulans, Streptomyces violaceus, S. cellulosae), chitina, parafinele, fenolii, etc. Sursa de azot este NH 3 i nitritul,
dar utilizeaz i aminoacizii i peptonele.
Speciile cele mai frecvente aparin genurilor: Actinomyces, Actinoplanes, Mycobacterium, Mycoccus,
Micromonospora, Nocardia, Streptomyces i Thermoactinomyces.
Actinomicetele au rol n mineralizarea compuilor rezisteni (chitina) la aciunea bacteriilor i fungilor,
contribuie la formarea humusului prin producerea de compui aromatici i la formarea structurii solului, fixeaz N 2
(g. Frankia) i formeaz simbioze de tipul actinorizelor, produc o gam larg de substane antibiotice (streptomicin,
tetracicline, cloramfenicol, kanamicin, micostatin), unele sunt fitopatogene (S. scabiei produce ria comun a
cartofului), iar cele termofile pot fi dominante n substraturile vegetale ncinse, n platformele de gunoi unde
temperatura ajunge la 80-90o.
Cianobacteriile se dezvolt n stratul superior, iluminat al solului. Genurile cele mai frecvent ntlnite:
Anabaena, Aulosira, Calothrix, Chrococcus, Cylindrospermum, Lyngbya, Microcoleus, Nodularia, Nostoc,
Oscillatoria, Phormidium, Plectonema, Scytonema, Tolypothrix.
Se
pot dezvolta i la ntuneric, chemoorganotrof, fcnd transformarea unor compui organici simpli, eseniali pentru
meninerea fertilitii solului.
Fungii reprezint o parte important din biomasa microbian din anumite tipuri de sol. Dei mai puin
numeroi n comparaie cu bacteriile, datorit creterii hifale depesc adesea greutatea global a acestora.
Tehnicile pentru evaluarea cantitativ a fungilor n sol ofer rezultate denaturate de o serie de condiii
specifice. Rezultatele oferite de tehnicile de examinare direct sunt falsificate de faptul c hifele moarte persist n
sol peste 6 luni i numrul lor este foarte mare. In plus, cele vii pot fi metabolic active i cresc pe medii artificiale,
metabolic active care nu cresc, metabolic inactive dar capabile de cretere n cultur i metabolic inactive care cresc
numai dup ce sunt supuse unor artificii de tehnic.
Cultivarea pe medii selective (pentru inhibiia creterii bacteriilor) favorizeaz speciile care cresc repede, pe
cele ce sporuleaz abundent i pe cele care pot folosi eficient nutrienii din mediul de cretere. Agitarea probei
influeneaz numrul de colonii, pentru c determin dezintegrarea hifelor ntr-un numr imens de fragmente i
eliberarea sporilor din sporofori. Majoritatea coloniilor sunt generate de spori, astfel c datele obinute pe aceast
cale reflect activitatea fungilor ntr-o perioad anterioar examenului de laborator. Se apreciaz c numrul
unitilor fungice /g de sol variaz ntre 20 000-1 000 000 (unitatea fungic este structura generatoare a unei colonii:
un spor, o hif, un fragment de hif).
Dup Burges (1966), fungii din sol aparin la peste 600 de specii, ntre care 200 Phycomycetes, 32
Ascomycetes i 385 Fungi Imperfecti.
Clasa Phycomycetes este reprezentat de fungi din ord. Mucorales, cu genurile Absidia, Cunninghamella,
Mortierella, Mucor, Rhizopus Zyorhynchus etc i ord. Peronosporales, cu g. Pythium.
Clasa Ascomycetes este reprezentat de g. Chaetomium i Morchella.
Clasa Fungi Imperfecti, cea mai numeroas este reprezentat de g.: Alternaria, Aspergillus, Botrytis,
Cephalosporium, Cladosporium, Curvularia, Fusarium, Geothricum, Myrothecium, Penicillium, Phoma,
Trichoderma, Turbecularia, Verticillium, etc.
Fungii din sol sunt organisme indigene sau alohtone, care triesc liber sau n asociaie cu rdcinile
plantelor. Sunt rspndii la suprafaa solului, unde descompun materia organic. In condiii favorabile se dezvolt
masiv i degradeaz o gam larg de substane organice, de la cele simple, la cele complexe (proteine, celuloz,
lignin). In absena nutrienilor trec n stare de laten. Particip la formarea structurii solului i au rol n formarea
humusului, deoarece multe specii produc substane aromatice asemntoare ligninelor. Unii fungi sunt prdtori,
participnd la meninerea echilibrului biologic n sol, iar alii produc substane antibiotice sau formeaz asociaii
micorizice cu rdcinile plantelor.
Algele sunt abundente n habitatele umede i iluminate de la suprafaa solului i n stratul superior de civa
mm pn la civa cm. Ele aparin ncrengturilor Chlorophyta, Diatomeae i Xanthophyta.
Algele verzi (Chlorella) sunt mai frecvente n solurile acide: Chlamydomonas, Chlorella, Cladophora,
Pleurococcus, Protococcus, Scenedesmus, Ulothrix, Chlorococcus etc. Unele specii (Chlorococcus humicola) sunt
specifice pentru sol.
A
ctivitatea microalgelor este puin semnificativ pentru transformrile biochimice din sol. Dezvoltarea intens a algelor
pe suprafaa solului umed l mbogete n compui organici (biomas algal) rezultai prin fotosintez. Algele verzi
sunt, alturi de cianobacterii, primii colonizatori ai solurilor denudate, necultivate sau lipsite de forme de via (ca, de
exemplu, dup erupiile vulcanice).
Protozoarele din microbiota permanent sunt prezente mai ales la suprafaa solului umed i n stratul
superficial (15 cm). Numrul lor variaz ntre 10 000-300 000, dar ca biomas sunt mai importante dect bacteriile.
Acest numr prezint fluctuaii mari de la o zi la alta, corelate invers cu mrimea populaiilor bacteriene. De
asemenea, pot prezenta fluctuaii numerice diurne, n funcie de temperatur, de umiditate, disponibilitatea
nutrienilor, etc.
Condiiile de mediu favorabile dezvoltrii protozoarelor sunt relativ puin cunoscute. Umiditatea este esenial
pentru existena formelor active, pentru mobilitatea i dispersia n sol, iar uscciunea favorizeaz nchistarea. Chitii
protozoarelor au o rezisten mare la condiiile de mediu (temperatur, uscciune, pH).
Unele protozoare sunt saprozoice (utilizeaz compui organici solubili). Foarte multe sunt holozoice (nutriie
de tip animal, ingernd materie organic complex) i inger bacterii, alge sau chiar protozoare.
Nutriia protozoarelor cu bacterii are un pronunat caracter de selectivitate, n sensul c unele bacterii sunt
prdate uor, altele rar, iar altele chiar deloc. Fenomenul ine, probabil, de particularitile protozoarelor de a
recunoate anumite specii gazd.
Cele mai rspndite protozoare din sol aparin la trei grupuri majore: Rhizopoda (Sarcodina), Flagellata
(Mastigophora) i Ciliata.
Clasa Sarcodina: Acanthamoeba, Amoeba, Biomyxa, Euglypha, Nuclearia, Naegleria i Leptomyxa, etc.
Clasa Flagellata include subgrupa Phytomastigophora (flagelate care conin clorofil i cresc fotosintetic) i
subgrupa Zoomastigophora (flagelate heterotrofe): Bodo, Cercomonas, Tetramitus, etc.
Clasa Ciliata este reprezentat de genurile Balantidium, Colpidium, Oxytricha, Urotricha, Vorticella, etc.
Protozoarele au rol n pstrarea echilibrulului biologic al solului, corelat cu capacitatea multora de a ingera i
distruge o serie de bacterii. Un singur protozoar (Sarcodina) poate ingera zilnic 30-40 000 bacterii.
Interaciuni ntre rdcinile plantelor i microorganismele din sol. Rizosfera
Rdcinile plantelor reprezint microhabitate pentru microorganismele din sol. Raider (1947) a descris colonizarea
rdcinilor unor angiosperme de ctre hifele fungice.
Rizosfera este definit cu ambiguitate. Ea este regiunea din sol care conine rdcinile unei plante i
microorganismele care le nsoesc.
Splarea cu diferite grade de agitare a rdcinilor unei plante evideniaz diferene importante ntre
regiunile rizosferei. De aceea, rizosfera a fost definit ca stratul de sol ce ader de sistemul radicular dup agitarea
uoar, care ndeprteaz solul legat lax, iar termenul de rizoplan definete ceea ce rmne legat ferm de rdcini
dup o agitare puternic n apa steril pentru a ndeprta solul strns aderent.
Din punct de vedere fiziologic, rizosfera ar fi regiunea din sol periradicular n care se resimt efectele
substanelor exudate de plant, care realizeaz aa numitul efect de rizosfer. Aceast zon se poate extinde cu 2
cm de la suprafaa rdcinii n teritoriul bogat n nutrieni (aminoacizi, glucide, vitamine) pentru care
competiioneaz microorganismele permanente din sol.
Situaia este mai complex pentru c limitele rizosferei depind nu numai de cantitatea de substane exudate
din rdcini, ci i de proprietile fizice i chimice ale solului, care afecteaz difuzia lor ca i numrul i natura
microorganismelor. Dac microorganismele din rizoplan sunt abundente, ele pot consuma substanele exudate i
efectul de rizosfer are o extindere limitat. Invers, ntr-un sol nisipos, cu puine microorganisme, rizosfera poate
avea mai muli centimetri. In solul bogat n substane organice, spre deosebire de solul srac, efectul de rizosfer nu
se resimte.
In concluzie, rizosfera nu este un teritoriu uniform, bine definit, ci o regiune periradicular care conine un
gradient de microorganisme i de activiti mai importante n solul adiacent sistemului radicular, diminund
progresiv pe msur ce distana fa de acesta crete.
Cu excepia micorizelor la care hifele fungice acoper complet rdcinile scurte laterale, relaia dintre
microorganisme i rdcini este diferit, colonizarea acestora avnd un caracter discontinuu. Ele sunt, cel mai
adesea, grupate n mici agregate i colonizeaz jonciunile celulelor epidermice, la nivelul crora eliberarea de
exudat este maxim.
Microscopia electronic a interfeei sol/rdcin a evideniat c bacteriile care se dezvolt pe rizoplan,

izolate sau ca microcolonii sunt inclavate ntr-un mucigel cu grosimea de 1-10 um. Mucigelul, de natur
polizaharidic, cu componeni fenolici i structur granular sau fibrilar este repartizat inegal, fiind depus n straturi
mai groase la jonciunea celulelor epidermice i n zona de cretere a rdcinilor.
Frecvent, bacteriile de pe rdcinile plantelor sunt asociate cu hifele fungilor.
Dinamica creterii bacteriilor pe suprafaa rdcinilor este diferit de cea observat n laborator i depinde de
disponobilitatea nutrienilor exudatului radicular.
Zonele periradiculare sunt populate de comuniti extrem de numeroase i de active de microorganisme.
Efectul stimulator este maxim pe rizoplan, unde se gsesc i cele mai numeroase populaii de microorganisme i
scade treptat spre numrul solului normal pe msur ce distana fa de rdcin crete. Fenomenul este determinat
de faptul c rdcinile elibereaz un exudat cu o compoziie complex, cu efect stimulator, descris sub denumirea de
efect de rizosfer.
Cele mai frecvente substane ale exudatului sunt glucidele (glucoz, fructoz, xiloz, maltoz, ramnoz,
rafinoz, arabinoz, zaharoz), aminoacizii (alanin, acizi aspartic i glutamic, glicocol, leucin, valin, serin, iar la
unele plante i/sau prolin, fenilalanin, cistein, metionin, lizin, triptofan, treonin), acizi organici (acid acetic,
propionic, butiric, oxalic, citric, tartric, fumaric, glicolic, malic, succinic, etc), vitamine (biotin, tiamin, niacin,
acid pantotenic, piridoxin, mezoinozitol), factori de cretere (auxine, etc).
Prezena microorganismelor stimuleaz producerea de exudate. Plantele de gru i orz, cultivate n solul
nisipos steril elibereaz prin exudate 8% din carbonul total, iar n condiii septice elibereaz 15%. In solul normal
fertil, care conine o mai mare diversitate de microroganisme, cantitatea de C eliberat n exudate este de 5-20 ori mai
mare dect n culturile hidroponice aseptice.
Rizosfera stimuleaz multiplicarea bacteriilor i a fungilor. Bacteriile din rizosfer sunt reprezentate de o
mare proporie de bacili Gram negativi i un numr mai mic coci, bacili i forme pleomorfe Gram pozitive. Numrul
bacteriilor prezente n rizosfer este estimat la 5x10 6-1x109 celule/g, iar al celor din rizoplan, la mai multe
miliarde/g.
Efectele microorganismelor asupra plantelor
Numeroase observaii pledeaz pentru o serie de efecte benefice, fr a exclude, n anumite cazuri,
posibilitatea unor consecine negative. Plantele dezvoltate n solul obinuit, nesteril sunt mai viguroase dect plantele
-martor cultivate n soluri sterile.
Microroganismele faciliteaz sau particip la absorbia nutrienilor din sol, n special cnd acetia sunt
limitani pentru cretere. Ele desfoar permanent o aciune de reciclare i solubilizare a nutrienilor minerali,
intensificat de efectul de rizosfer. Microorganismele din rizosfer au o influen benefic asupra nutriiei cu
fosfor. Katznelson (1965) a evideniat n rizosfera unor plante, microorganisme care solubilizeaz fosforul din
fosfaii organici i anorganici insolubili. Bacteriile din rizosfer mresc solubilitatea compuilor cu Fe, prin
producerea de chelatori organici, precum i rata prelurii Ca, a crui solubilitate este mrit prin producerea de CO 2
n rizosfer.
Interaciunile nutriionale cele mai cunoscute sunt cele din asociaiile simbiotice, de tipul celor fixatoare de
N2 sau al micorizelor.
Fungii din micorize exercit un efect benefic complex prin :
- stimularea creterii i ramificrii rdcinilor;
- dezvoltarea hifelor exploreaz un volum mai mare de sol;
- hifele nglobeaz eficient concentraiile mici de nutrieni;
- rdcinile cu micorize sunt mai rezistente la infecii;
- micorizele ectotrofe au propria lor rizosfer.
Sistemul radicular al plantelor crescute n sol nesteril este mai bogat dect al plantelor cu rdcini sterile, are
mai multe rdcini laterale i mai muli peri radiculari. Plantele cresc mai repede, sunt mai verzi, nflorirea este
grbit i fructele apar mai timpuriu.
Bacteriile Ps. aurantiaca, Ps. fluorescens, Ps. radiobacter i Bacterium herbicola produc vitamine ca:
tiamina, biotina, riboflavina i acidul pantotenic. Numeroase bacterii din rizosfer produc acid indolil-3-acetic, n
special cnd triptofanul este prezent n mediu.
Microorganismele din rizosfer pot exercita i unele efecte negative asupra plantelor cnd competiioneaz
pentru nutrini minerali sau pentru oxigen, cnd interfer cu absorbia nutrienilor, cnd intensific activitatea unor
ageni patogeni sau cnd produc substane fitotoxice.
In categoria efectelor negative se nscriu i cazurile de potenare a patogenitii unor ageni patogeni puin
viruleni.
Rizosfera i populaiile de microorganisme care o colonizeaz n mod normal constituie o barier pentru
patogenii cu care competiioneaz. Bacteriile din rizosfer, denumite generic rizobacterii exercit un biocontrol
riguros asupra unor ageni patogeni redutabili, mpiedicnd apariia bolii.
Mecanismele inhibiiei microorganismelor fitopatogene sunt diferite i includ:
- inhibarea germinrii sporilor i a creterii tubului germinativ;
- limitarea activitii patogene n esutul radicular infectat;
- inducia rezistenei gazdei;
- suprimarea microorganismelor nocive din spaiul rizosferei.
Dup Schippers (1988), mecanismul major implicat n controlul biologic al patogenilor este reprezentat de
competiia pentru Fe. Fe are un rol esenial n metabolismul energetic al microorganismelor aerobe sau
microaerofile. Dar, pe msur ce valorile pH cresc peste 6,0 disponibilitatea Fe 3+ pentru plante i microorganisme
este mult redus. Microorganismele competiioneaz pentru Fe 3+ elibernd siderofori, mici proteine cu afinitate mare
de legare a Fe3+. Afinitatea sideroforilor pentru Fe 3+ variaz foarte mult la diferite microorganisme. Ea este de circa
10 ori mai mare n cazul sideroforilor de la Pseudomonas, comparativ cu cei ai fungilor.
BIODEGRADAREA I BIODETERIORAREA MICROBIAN

In sensul larg, conceptul de biodegradare se refer la modificarea proprietii unor materiale, determinat de
activitatea biologic a microorganismelor. Biodegradarea se exercit, n special asupra materialelor organice, dar nu
exclude pe cele anorganice. Biodegradabilitatea reprezint capacitatea unui compus de a fi modificat sructural de
ctre un agent biologic.
Biodegradarea este un proces cu efecte pozitive, att n natur, ct i n economia societii umane. Pe plan
global, ele au o contribuie major la circulaia elementelor biogene n natur, iar pe plan local mpiedic acumularea
materialelor reziduale, a diferiilor contaminani ai mediului etc.
Biodeteriorarea reprezint aciunea prin care microorganismele determin transformarea unui material
valoros ntr-unul rezidual. Este un proces cu efecte negative, care trebuie evitat sau ntrziat.
Diferenele dintre cele dou procese sunt ilustrate de urmtoarele exemple: degradarea hrtiei care polueaz
un sol de pdure de ctre Chaetomium globosum reprezint un proces de biodegradare. Prin contrast, atacul hrtiei
dintr-un depozit, determin pagube economice, reprezint un proces de biodeteriorare. In mod asemntor,
descompunerea ieiului deversat n apele marine este un proces util, de combatere a polurii prin biodegradare, n
timp ce procesele similare ce au loc n rezervoare sau in situ reprezint o biodeteriorare.
Biodegradarea compuilor organici este capacitatea de descompunere aerob, prin mineralizare pn la CO2, H2O
i NH3 sau anaerob, cu produi finali ca H2S, CH4, CO2 i H2O.
Pentru compuii anorganici, biodegradabilitatea ar corespunde degradrii acestora la compui prezeni n
ciclul lor natural, ca de exemplu, NH3, NO2-, NO3- i, mai ales, N2.
Modificri induse de aciunea microoganismelor
Activitatea microorganismelor expuse biodegradrii i/sau biodeteriorrii determin: 1)alterri fizice; 2) modificri
chimice; 3) impurificri; 4) modificri funcionale.
1)Modificrile fizice sunt foarte diverse, n funcie de natura substratului atacat: caracterul friabil al hrtiei
atacate, decolorarea i modificarea consistenei vopselelor, caracterul friabil al lemnului, gonflarea i pierderea
elasticitii cauciucului, ruginirea i perforarea conductelor metalice, distrugerea izolatorilor cablurilor electrice.
2)Modificrile chimice sunt determinate prin procese de asimilare sau de dezasimilare. Modificarea prin
procese de asimilare este tipic pentru celuloz. Glucoza rezultat este convertit la biomas microbian.
Modificrile produse prin procese de dezasimilare corespund unor procese de degradare.
3)Impurificarea i ptarea se datoreaz dezvoltrii miceliului fungic care acoper suprafee mari i formeaz
diferite substane colorate intens.
4)Modificrile funcionale sunt consecina fenomenelor de fuling. Iniiat de microorganisme, fuling-ul
suprafeelor submerse ale navelor este completat prin asocierea nevertebratelor (Teredo, alte molute, polichete, etc).
Ef
ectele negative sunt directe (degradarea lemnului, a cauciucului, a vopselelor, a unor materiale plastice, coroziunea,
etc.) sau indirecte (creterea n greutate, mrirea rezistenei la deplasare).
Biodegradarea petrolului
Numeroase microorganisme au capacitatea de a utiliza hidrocarburile gazoase, lichide i solide din seria
alifatic, aromatic i asfaltic, drept unic surs de carbon i energie, descompunndu-le la molecule mai simple sau
chiar la CO2 i H2O.
Microorganismele atac petrolul, gazolina, kerosenul, uleiurile minerale, parafina, gazul de iluminat, gazele
de sond, cauciucul natural i sintetic, uleiurile de rcire, suprafeele asfaltate, conductele subterane (pipe-line) i
cablurile electrice protejate de coroziune cu materiale impregnate n parafine etc.
Degradarea microbian a ieiului este un proces complex, a crui evoluie depinde de compoziia petrolului
i de natura comunitilor de microorganisme caracteristice mediilor naturale.
|ieiul este un amestec complex de hidrocarburi, nsumnd sute de compui individuali. Alturi de
hidrocarburi se gsesc fenoli, tioli, acizi naftenici, compui heterociclici cu azot (piridine, piroli, indol, etc.),
compui cu S (alchiltioli, tiofen, etc).
|ieiul conine mai multe clase de hidrocarburi:
1) Fraciunea alifatic (saturat) este reprezentat de alcani, compui saturai cu formula general C nH2n+2.
Hidrocarburile cu lan lung sunt atacate mai uor dect cele cu caten scurt.
2)Fraciunea aromatic este reprezentat de compui aromatici nesaturai, cel mai simplu fiind benzenul.
Compuii aromatici sunt mai greu atacai n procesul de biodegradare, cea mai grea etap fiind cea de clivare a
ciclului.
3)Fraciunea asfaltic include componente cu structur complex, mai puin cunoscui din punct de vedere
chimic.
Se apreciaz c anual, 3,2 milioane tone de petrol ajung pe diferite ci n oceane, fie prin eliminri lente, fie
prin deversri cu caracter brusc i masiv, consecutive accidentelor navelor petroliere sau ale platformelor de foraj
maritim.
Dup deversrile masive, procesul de degradare evoluez n trei faze:
Faza ntia, cu o durat de la cteva ore la cteva zile, corespunde etalrii rapide a ieiului pe o suprafa
mare a mediului marin, fiind asociat cu procese fizice (evaporare, dizolvare, emulsionare). In aceast faz,
poluantul se separ n dou structuri diferite:
1)Stratul superficial conine fraciunile cele mai uoare, care reine i concentreaz poluanii chimici,
detergeni, metale grele.
2)|ieiul din coloana de ap, supus unui proces de emulsionare.
Faza a doua de degradare a hidrocarburilor are loc pe dou ci:
1)Biodegradarea este realizat n ecosistemele acvatice, n special de bacterii. Unele microorganisme
planctonice (fito- sau zooplancton i chiar unele bacterii) nmagazineaz temporar hidrocarburi sub form de
picturi, pe care le elimin netransformate n mediu.
2)Degradarea chimic (abiotic) se realizeaz n absena luminii prin fenomene de autooxidare i prin
fotooxidare, adic prin fotoliz mediat de radicalii liberi foarte reactivi.
Faza a treia, de restabilire a echilibrului ecologic, are o durat variabil n funcie de intensitatea polurii i
de condiiile n care a evoluat biodegradarea.
Degradarea ieiului are loc nu numai n mediul marin, ci i n sol. Numeroase microorganisme din sol pot
folosi ca surs de C i energie, toluenul, dar i ali compui (xilen, naftalen, hexan, clorbenzen, etc).
Deversarea de iei brut n sol produce o cretere numeric a populaiilor de bacterii, cu o reducere
concomitent a diversitii lor.
Poluarea cu doze mari omoar vegetaia, dar todeauna, n special n condiii de aerobioz, n intervale
variabile are loc degradarea i revenirea la normal.
Microorganismele care degradeaz hidrocarburile sunt eubacterii, actinomicete, cianobacterii, levuri, fungi
filamentoi i alge. Ele sintetizeaz enzime care degradeaz hidrocarburile individuale. Sursa de izolare este solul
sau apa poluat cu resturi petroliere.
Biodeteriorarea cauciucului
Cauciucul sub diferitele sale forme (latex, cauciuc pur, comercial sau sintetic) este atacat lent de mai multe
microorganisme.
Latexul pur este un produs relativ instabil, oxidabil n prezena O 2, mai ales la lumin.
Cauciucul perfect pur este un amestec de hidrocarburi cu formula (C5H8)n.
Microorganismele degradeaz cauciucul natural, determinnd pierderea n greutate (cu circa 22% n 2 ani), dar i
alte modificri ca gonflarea, slbirea structurii, pierderea elasticitii.
Cauciucul sintetic este produs prin asamblarea unor polimeri sau copolimeri de hidrocarburi nesaturate ca
butadien, metilbutadien (izopren), cloropren (clorbutadien), izobutilen, stiren.
Dei difer mult de cauciucul natural, ca i cauciucul natural prezint riscul biodeteriorrii, n special prin
meninere ndelungat n medii umede. In condiii naturale, degradarea microbian a hidrocarburilor din cauciuc este
cantitativ nensemnat n raport cu cea produs de cldur, lumin, alcali, acizi, prin abraziune, etc. Ea devine
important n cazul atacrii nveliului izolator din cauciuc al cablurilor electrice ngropate n sol sau imersate n ap.
Biodeteriorarea vopselelor este un proces complex ce se realizeaz att asupra vopselelor din recipiente, ct
i asupra celor etalate prin procedeele de vopsire. Biodeteriorarea vopselelor implic decolorarea, producerea de
gaze, modificarea proprietilor fizice i chimice, cu efecte negative asupra posibilitii utilizrii lor.
Biodeteriorarea vopselelor n pelicul pe lemn sau alte substraturi implic apariia fisurilor, a desprinderii de
substrat prin formare de vezicule, a caracterului friabil sau a petelor datorate, n special hifelor i sporilor fungici.
Biodeteriorarea vopselelor are un caracter de gravitate extrem pentru operele de art (pictur n ulei, fresc,
etc).
Degradarea esuturilor vegetale asociat cu termogeneza microbian
Degajarea cldurii de ctre microorganisme n cursul activitii biologice este un fenomen general.
Coeficientul de folosire a energiei de ctre microorganisme, n cursul metabolismului rareori depete 40-50%, iar
restul se pierde n mediu sub form de cldur.
Acest proces este deosebit de intens n cazul microorganismelor termofile, ceea ce poate produce pagube
economice, datorate autonclzirii i chiar aprinderii cerealelor depozitate, a clilor de fn, a silozurilor sau a
combustibililor (turb i crbune).
Procesul de nclzire este iniat de respiraia celulelor vegetale, dup care sursa principal de cldur devin
microorganismele. Iniial, creterea temperaturii se datoreaz unor microorganisme saprobionte banale, dar la 60-80o
se creeaz condiii optime pentru microorganismele termotolerante i termofile.
Autonclzirea la temperaturi mai mari de 80 o nu mai este determinat de activitatea microorganismelor, ci
deriv din procese pur chimice de oxidare exoterm, care pot ridica temperatura ambiant la peste 200 o, producnd
unele gaze carburante. Dezvoltarea acestor procese n depozitele de cereale le poate transforma ntr-o mas
carbonizat compact.
Fenomene de autonclzire determinate de activitatea microorganismelor se produc i n depozitele de
combustibil, n special n cazul turbei brichetate.
Procesele de termogenez au loc n gunoiul de grajd, constituit din paie i dejecii, coninnd un numr
imens de microorganisme diferite.
Coroziunea bacterian a metalelor
Coroziunea metalelor este rezultatul unui proces complex, determinat de mecanisme multiple,
interdependente: chimice, mecanice, electrice i biologice. Datorit lor, Fe, oelul, fonta i alte metale meninute ntrun mediu umed sufer procese de coroziune, prin care un metal trece de la condiia elementar la o stare de
combinaie chimic. Una dintre formele cele mai atenuate ale acestui proces chimic este patina (oxidarea natural
sau artificial), evident n cazul bronzului, care se acoper cu un strat de carbonat de cupru, de culoare verzuie.
Coroziunea bacterian este frecvent la conductele de ap potabil i rezidual, de gaze i de petrol, ca i
cele ce deservesc instalaiile sanitare. Iniial apar pete de rugin, adnci de 1-6 mm. Ulterior, se produc pierderi de
substan. Coroziunea se extinde determinnd perforarea conductelor.
Microorganismele sunt implicate n coroziunea anaerob, prin depolarizare catodic, producerea de
metabolii corozivi, producerea de fenomene de aerare diferenial i concentrarea celulelor pe suprafaa acestora
etc.
Coroziunea bacterian anaerob are importan major pentru instalaiile de forare i exploatare a sondelor.
Mecanismul coroziunii nu este unanim acceptat, dar a priori s-a acordat atenie deosebit bacteriilor sulfatreductoare, izolate frecvent de la adncimi de peste 1000 m, unde se pot dezvolta bine n formaiunile purttoare de
iei.
Teoria depolarizrii catodice explic fenomenele de coroziune ale fierului i oelului meninute n solul
umed sau n contact cu ape poluate cu substane organice. Coroziunea este asociat cu apariia unui produs de
culoare neagr, ataat lax de metal (grafitizare). Dup ndeprtarea lui, rmne vizibil metalul lucios.
In medii umede, elementele catodice ale Fe sunt polarizate de H, n absena O 2. Bacteriile sulfat-reductoare
(Desulfovibrio, Desulfotomaculum), care au hidrogenaze folosesc H2 catodic. Ele acioneaz n reacia normal de
depolarizare ca un substituient al O2, oxidnd H catodic.
Produii de coroziune sunt FeS i Fe(OH) 2, dup reaciile:
(1) 4 Fe 4 Fe2+ + 8 e- (soluie anodic)
(2) 8 H2) 8 H+ + 8 (OH)(3) 8 H+ + 8 e- 8 H (reacie catodic)
(4) H2SO4 + 8 H H2S + 4 H2O (depolarizare catodic prin oxidarea H de ctre bacteriile sulfat-reductoare
(5) Fe2+ + H2S FeS (produs de coroziune)
(6) 3 Fe2+ + 6 (OH)- 3 Fe(OH)2 (produs de coroziune)
Reacia global:
4 Fe + H2SO4 + 4 H2O FeS + 3 Fe(OH)2 + 2 (OH)- + H2
Depolarizarea catodic este realizat numai de bacteriile cu activitate hidrogenazic. Reacia cheie a
coroziunii catodice este a patra, a reducerii sulfatului cu H. Prin acest mecanism, bacteriile intr direct ntr-o serie de
reacii la suprafaa substratului metalic, fie pentru a iniia, fie pentru a accelera o reacie potenial.
In bazinele de pstrare a ieiului, coroziunea este mai ampl pe faa intern i la baz unde se acumuleaz
substane organice necesare microorganismelor. O conduct de oel groas de 1 cm poate fi corodat n circa patru
ani.
Fenomenele de coroziune pot fi produse pe alte ci: producerea de acizi organici; producerea H 2S (foarte
coroziv) de ctre bacterii prin descompunerea compuilor organici ai sulfului; formarea S elementar prin reducerea
sulfatului n anaerobie; producerea NH3 din degradarea proteinelor.
Producerea aerrii difereniale sub aciunea biomasei bacteriene i a precipitatelor de hidroxid feric.
Creterea bacteriilor aderente de suprafaa metalelor are drept consecin distribuia neuniform a concentraiei O 2.
Aerobele creeaz anaerobioza, consumnd O2 i apar diferene de aerare fa de zonele n care aprovizionarea cu O 2
rmne nemodificat. Regiunile anaerobe devin anodice n raport cu cele aerobe i, n consecin, vor deveni centre
de pierdere a metalului prin coroziune.
Fenomenul a fost descris ca tipic pentru bacteria Gallionella ferruginea, care oxideaz Fe feros la Fe feric,
producnd precipitarea hidroxizilor ferici. Acetia pot forma pe suprafaa intern a conductelor, excrescene tari
numite tuberculi, legate ferm de suprafaa metalului. Ca urmare, n regiunile situate la marginea depozitului,
concentraia O2 este mai mare, n timp ce zonele de la baz protejeaz suprafaa conductei de contactul cu oxigenul
dizolvat n ap.
In consecin, suprafaa acoperit de tuberculi devine anodic n raport cu regiunile suprafeei interne a
conductei neacoperite de depozitele de bacterii i precipitate de Fe, care sunt catodice. Zonele anodice devin sediul
unor fenomene de corodare foarte intens, care perforeaz conductele. In zona bazal, anaerob a tuberculilor,
cresc frecvent bacterii sulfat-reductoare, care accentueaz fenomenul coroziunii.
Coroziunea oxidativ (coroziunea acid)
Coroziunea oxidativ are ca substrat producerea de metabolii corozivi (acizi minerali sau organici), respectiv a
unui exces de H+ i se realizeaz n condiii naturale, cel mai adesea prin aciunea asociat a bacteriilor Thiobacillus
sp. i Th. ferooxidans.
Primele obin energia S0, a tiosulfailor i a tetrationatului, cu producerea H 2SO4, dup reaciile:
T. thiooxidans:
2 S0 + 3 O2 + 2 H2O 2 H2SO4
T. thioparus:
Na2S2O3 + 2 O2 + H2O Na2SO4 + H2SO4
2 Na2S4O6 + 7 O2 + 6 H2O 2 Na2SO4 + 6 H2SO4
In culturi pure in vitro, prin aceste reacii, pH-ul scade la 0,6.
T. ferooxidans oxideaz depozitele de pirit i obine energie din reacia:
Fe2+ Fe3+ + eFe feric rezultat oxideaz compuii sulfului la H 2SO4, dup reacia:
2 FeS2 + 2 H2O + 7 O2 2 FeSO4 + 2 H2SO4
Aceste reacii explic acidifierea apelor de drenare din minele de crbuni i corodarea sever a instalaiilor.
Degradarea microbian a substanelor xenobiotice
Capacitatea microorganismelor de a degrada mai mult sau mai puin uor diferitele molecule complexe existente
n natur este recunoscut fr echivoc. In acest sens pledeaz imposibilitatea acumulrii n mediu, chiar a celor mai
greu degradabile i renoibile anual (celuloz, hemiceluloze, lignin etc) precum i rolul esenial al
microorganismelor n circulaia elementelor biogene n natur. Atunci cnd s-a realizat (cazul combustibililor fosili),
acumularea s-a produs numai n condiii de mediu nefavorabile pentru biodegradare.
Aceste observaii au dus la formularea principiului infailibilitii microorganismelor, conform cruia, orice
substan este degradat de un microorganism sau de un grup de microorganisme, n condiii favorabile de mediu.
Substanele organice cu diferite grade de complexitate, utilizate n agricultur ca pesticide, precum i n
industrie, medicin etc., a infirmat aceast doctrin, evideniind caracterul refractar la degradarea microbian, a
substanelor diferite chimic de cele obinuite ale sistemelor biologice.
Substanele xenobiotice (strine de sistemele biologice) sunt substane chimice organice sintetice, care sunt
introduse n ecosistemele naturale, fie n mod deliberat, fie accidental. Fiind, n general, rezistente la biodegradare,
se pot acumula n concentraii care depesc anumite limite de toleran, determinnd efecte negative asupra
organismelor vii datorit persistenei i concentrrii lor, precum i dificultii de a fi introduse n circuitul global al
elementelor biogene.
In anii 8o, producia anual a celor peste 5 milioane de compui chimici era de 300 milioane t/an. Unii sunt
biodegradabili, dar cei mai muli sunt recalcitrani.
Clasificarea substanelor xenobiotice cu caracter de poluani ai mediului nconjurtor
Pe baza compoziiei chimice, substanele xenobiotice poluante sunt grupate n trei categorii majore: 1)
compuii organoclorurai; 2) alchil benzen-sulfonai; 3) compuii organo-fosforici.
1) Compuii organoclorurai (sau organohalogenai, deoarece unii pot conine i atomi de fluor) reprezint
grupul cel mai numeros i au grade diferite de rezisten la degradare. Grupul cuprinde molecule obinute prin adiia
de clor sau fluor la unele hidrocarburi alifatice, aromatice sau heterociclice.
Legtura C-Cl sau C-F este foarte stabil i necesit consum de energie pentru clivare. Ea confer stabilitate
chimic i biologic, dar agraveaz efectul poluant deoarece asigur o persisten ndelungat n mediu.
Compuii organoclorurai au utilizri multiple n agricultur, medicin i n industrie.
a) Substanele insecticide sunt reprezentate de :
- DDT (4,4-diclorfenil-tricloretan);
- Lindan, izomer al hexaclorciclohexanului (HCH);
- Derivai ai ciclopentadienului (aldrin, dieldrin, heptaclor);
b) Bifenilii policlorurai (BPC) sunt amestecuri de bifenil, avnd 1-10 atomi de clor/molecul. Au o mare
stabilitate biologic, proporional cu creterea gradului de clorinare. Sunt substane uleioase, folosite ca izolatori
sau cu rol de rcire n sistemele electrice nchise (transformatori, condensatori), lichide hidraulice i de transfer de
cldur, n ignifugare, industria lacurilor i vopselelor, a cernelurilor tipografice, ca ulei de imersie pentru
microscopie etc.
Dioxinele, prezente n circa 60 de formule chimice. Reprezentanii tipici sunt 2,3,7,8-tetraclor-dibenzo-dioxina
i 2,3,7,8-tetraclor-dibenzo-furanul. Sunt rezistente la degradare i au efecte toxice pentru om, chiar n concentraii
foarte mici.
c) Freonii sunt hidrocarburi alifatice cu g.m. mic, respectiv alcani C 1 - C2, n care toi sau aproape toi
atomii de H sunt nlocuii de combinaii F-Cl. Cei mai cunoscui sunt freonii F-11 (CCl 3F), F-12 (CCl2F2) i foranul114 (CF2Cl-CF2Cl).
Sunt gaze inerte, foarte volatile, utilizate ca solveni sau ca propulsori pentru dispozitive de spray, n
cosmetic, vopsele, insecticide, precum i n sisteme de rcire (frigidere, aparate de condiionare a aerului). Freonii
sunt fotolizai n atmosfer, unde sunt eliminai n cantiti de cica 10 6 tone/an i sunt incriminai n distrugerea
parial a stratului de ozon, consecina fiind creterea iradierii UV.
d) Polimerii sintetici, de tip polietilen, clorur de vinil, polistiren sunt foarte rspndii datorit utilizrilor
multiple. Rezistena la degradare pare s fie asociat cu g.m. mare. Polietilena pare s aib o rezisten indefinit la
biodegradare.
2) Alchil-benzen-sulfonaii (ABS) sunt componeni majori ai detergenilor anionici, datorit capacitii lor de
surfactani. Sunt complexe organice cu molecule amfipatice, a cror activitate de suprafa are ca efect muierea,
desorbia, emulsionarea, suspendarea i stabilizarea particulelor dislocate de pe o suprafa. Rezultatul acestor efecte
este detergena sau curirea.
Molecula este asimetric, cu o extremitate alchil hidrofob (lipofil) i una sulfonat, hidrofil. Agentul
tensioactiv aflat n soluia apoas vine n contact cu o suprafa lipidic. Moleculele lui se orienteaz astfel nct
gruprile hidrofobe (alchil) se adsorb la stratul lipidic, iar cele hidrofile, polare (sulfonat) se orienteaz spre ap. Se
creeaz astfel un monostrat de adsorbie care face legtura ntre cele dou medii insolubile, apa i lipidele
determinnd efectul de muiere.
Sunt rezisteni la degradare i produc spum la suprafaa apelor poluate.
Degradarea compuilor halogenai implic dehalogenarea reductiv anaerob, adic [nlocuirea halogenului
cu un atom de hidrogen. In toate procesele biologice cunoscute, halogenul este eliberat sub form ionic. Dup
dehalogenare, compuii xenobiotici sunt mai puin toxici i mai uor degradabili. Dehalogenarea este treapta
primar, esenial pentru degradarea anaerob a compuilor aromatici halogenai. Dehalogenarea reductiv anaerob
este singurul mecanism de biodegradare pentru poluani ai mediului ca bifenilii clorurai, hexaclorobenzenul i
tetracloretilena.
Efectele ecologice ale substanelor xenobiotice
Substanele xenobiotice pot polua toate mediile naturale majore: atmosfera, litosfera i hidrosfera.
Exist dou modaliti de poluare chimic (Reinicke, 1988):
1) Poluarea localizat realizat pe zone mici de eflueni industriali, accidente de transport sau de utilizare i
n care poluantul poate fi eliminat la concentraii relativ mari.
2) Poluarea dispersat realizat la concentraie mic, pe suprafee mai extinse, rezultnd din volatizare,
practici agricole.
Efectele poluante sunt agravate de marea diversitate chimic a pesticidelor.
Unele pesticide pot fi degradate n mediu, dar altele sunt rezistente la degradarea sub aciunea
microorganismelor i pot persista timp ndelungat. Clarke (1980) propune gruparea lor n patru categorii: 1)
nepersistente, cu un timp de njumtire de 2 sptmni; 2) slab persistente (cu un timp de njumtire de 0,5-1,5
luni); 3) moderat persistente (cu timpul de njumtire de 1,5-6 luni); 4) persistente (timpul de njumtire mai
mare de 6 luni).
Conceptul de molecule recalcitrante a fost formulat de Alexander (1965) pentru a caracteriza substanele
care pot persista perioade ndelungate n natur, fiind refractare la degradare sau sunt mineralizate foarte lent. Iniial,
termenul s-a referit la polimerii din ambalaje i la agenii surfactani de tipul alchil-benzen-sulfonat nalt ramificai,
inclui n forma unor detergeni. Particularitatea de rezisten la degradare nu este limitat exclusiv la substanele de
sintez chimic deoarece substanele poliaromatice i unii constituieni humici au un timp de njumtire, apreciat
cu radiocarbon, lung de cteva mii de ani.
Alte materiale de origine biologic (lignine, taninuri, melanine, etc) i unele materiale paleobiochimice
prezint grade importante de recalcitran: piele tbcit, lemn din turbrii, spori fungici, aminoacizi legai (din
sedimente), chitina din fosile, etc.
Degradarea compuilor xenobiotici
Termenul de biodegradare este folosit cu o mare doz de ambiguitate deoarece semnific orice transformare
care are ca rezultat obinerea unui produs cu o molecul mai mic dect cea originar. In cazul substanelor
xenobiotice situaia este mai complicat deoarece degradarea poate duce la apariia unor produi noi, refractari i
toxici (uneori chiar mai toxici dect produsul originar) sau cu efect oncogen. Un exemplu tipic este al DDT-ului,
convertit la un produs final (DBP), nc recalcitrant i biologic activ (Wedemeyer, 1976).
Substanele xenobiotice sunt degradate prin dou mecanisme majore: mineralizarea i co-metabolismul.
Mineralizarea, mecanismul cel mai avantajos pentru protecia mediului natural este consecina unui proces
de biodegradare complet. Pentru moleculele xenobiotice halogenate, ea implic conversia scheletului de carbon al
acestora la intermediari de metabolism i, n final, revenirea substanelor organice halogenate la starea mineral
(Reineke, 1988).
Mineralizarea este condiionat de:
1) ptrunderea substanelor strine n celule;
2) existena unor sisteme enzimatice degradative;
3) existena unor mecanisme de reglare susceptibile s fie activate la nevoie.
Procesul de mineralizare permite degradarea pesticidelor, de regul pe durata unui anotimp i are
urmtoarele caracteristici:
1) secvenele enzimatice sunt caracteristice metabolismului microorganismelor i n final convertesc
substanele organice la substane anorganice;
2) o parte din carbonul substratului iniial este convertit la constituieni celulari, astfel c mineralizarea este
asociat cu creterea numrului i a biomasei celulare;
3) este asociat cel mai adesea cu detoxifierea. Dac unul din produii intermediari este toxic, el poate
exercita efecte nocive asupra mediului, dar, n general, acetia au via scurt.
Co-metabolismul. Numeroi compui xenobiotici, n special pesticidele organo-clorurate nu pot fi folosite de
microorganisme ca unic surs de C i energie i, ca urmare, nu pot fi ndeprtate din mediu. Ele pot fi ns
modificate pe cale biologic, n natur, prin aciunea unor populaii mixte de microorganisme.
In cultur pur, nici un organism nu poate folosi substratul respectiv pentru cretere, dar n prezena unei
surse alternative de C i energie l poate modifica, transformndu-l chimic, nct, adeseori, poate fi utilizat n
continuare de alte microorganisme.
Methilomonas methanica utilizeaz pentru cretere metanul i realizeaz concomitent, un proces de oxidare
a altor co-substraturi, ca de exemplu, etanul la acid acetic, propanul la acid propanoic i aceton, butanul la acid
butanoic i metilaceton, etc. Bacteria metanotrof utilizeaz pentru cretere numai substratul C 1 caracteristic tipului
su de nutriie, dar nu poate utiliza ca unic surs de C i energie nici cosubstraturile enumerate i nici produii
oxidrii lor.
Procesul prin care o bacterie oxideaz o substan fr s fie capabil s o utilizeze ca surs de C i energie
pentru cretere a fost numit co-oxidare (Foster, 1962). Ulterior, Jensen (1963) a propus termenul de co-metabolism
pentru a include i alte reacii (dehalogenri, etc) i pentru a evidenia necesitatea prezenei concomitente a unui
substrat menit s asigure creterea.
Conceptul de co-metabolism a fost redefinit (Skryabin, 1978) pentru a caracteriza procesul de transformare a
unui substrat, care nu permite creterea unui microorganism n prezena unui substrat de cretere sau a altui compus
transformabil.
In acest context, degradarea unor compui organici rezisteni la atacul unui microorganism devine posibil
dac sistemul substrat-mediu-microorganism este suplimentat cu unul sau mai multe substraturi, utilizabile de ctre
microorganismul respectiv.
Procesele de co-metabolism au urmtoarele caracteristici majore:
1) au loc numai n medii naturale (ap, sol);
2) nu se poate izola niciodat un singur microorganism capabil s utilizeze substanele xenobiotice n mod
eficient ca surs de C i energie;
3) populaia rspunztoare de degradare nu crete ca numr sau ca biomas dup introducerea substratului n
ap sau n sol. Explicaia este c populaiile de microorganisme care fac co-metabolism sunt mici, degradarea
compuilor xenobiotici este lent i rata multiplicrii lor nu crete n timp, cum este cazul microorganismelor care
metabolizeaz diferite substraturi pn la mineralizare;
4) produii rezultai din co-metabolism sunt lipsii, de cele mai multe ori, de orice funcie metabolic, dac
nu sunt atacai n continuare de alte enzime aparinnd catabolismului. De aceea, o particularitate frecvent a cometabolismului este acumularea n mediu a compuilor intermediari, care nu mai pot fi metabolizai.
Procesul de co-metabolism este activ pentru degradarea unor pesticide comune (DDT, 2,5 T, aldrin,
heptaclor) i a multor molecule clorinate i neclorinate (Clarke, 1980).
Procesele de co-metabolism n natur. Importana co-metabolismului n natur este demonstrat
experimental i argumentat de observaii. Astfel, degradarea ligninei la CO 2 sub aciunea fungilor putregaiului alb
(Phanerochaete chrysosporium i Coriolus versicolor) necesit prezena unui substrat de cretere ca glucoza sau
celuloza. Cantitatea de lignin degradat depinde de cantitatea de substrat de cretere adiional, iar creterea fungilor
pe lignin, ca unic surs de C i energie este nensemnat.
In sol, prezena unei game largi de substane organice excretate de rdcinile plantelor, n special n
rizosfer, creeaz condiii favorabile pentru co-metabolismul substanelor refractare la degradare, n special
xenobiotice. Dup Skryabyn (1978), rolul primordial al substratului adiional, ca surs de C asimilabil, necesar
pentru a realiza co-metabolismul este de a furniza energie, cofactori sau ali metabolii necesari pentru transformarea
substratului recalcitrant.
Co-metabolismul substanelor xenobiotice n ecosistemele naturale are loc cu o rat sczut, permind
acumularea intermediarilor nemetabolizabili, iar n unele cazuri, chiar a unor compui mai toxici dect cei iniiali
(Alexander, 1981).
Este greu de apreciat n ce msur degradarea moleculelor complexe i a celor xenobiotice revine
metabolismului i respectiv co-metabolismului, dar este evident c multe dintre cele care nu permit creterea nici
unui organism individual sunt degradabile n prezena unor populaii complexe.
In natur, substanele xenobiotice sunt degradate de circa 50 de genuri de microorganisme (bacterii i
microfungi). Metabolizarea anaerob a DDT la DDD, precum i a altor poluani (lindan, heptaclor i posibil aldrin)
este realizat de E.coli, Aerobacter aerogenes, K. pneumoniae, de unele actinomicete i levuri, dar i de organisme
fitoplanctonice.
Algele Chlorella vulgaris i Chlamydomonas reinhardtii metabolizeaz lindanul, prin declorinare la
pentaclor. Parationul i pentaclorfenolul sunt degradate rapid n natur sub aciunea microorganismelor. Aspergillus
fumigatus, Fusarium roseum i Tricoderma degradeaz triazinele (atrazin, simazin).
Reaciile chimice sunt complexe, puin cunoscute i includ dehalogenri, dezaminri, decarboxilri, metiloxidri, -oxidri,hidroxilri, reacii de oxidare a azotului sau a sulfului, reducerea oxizilor de sulf, reducerea unor
duble sau triple legturi etc.
De menionat c nu toate reaciile produc doar modificarea limitat a moleculelor sau a intermediarilor, cu
apariia unor derivai prin nitrare, acilare, dimerizare, formarea de heterocicluri azotate etc. (Burs, 1980).
Dup Knackmuss (1981), degradarea xenobioticelor n natur este rezultatul aciunii fortuite a enzimelor
peexistente ale catabolismului produilor naturali. Enzimele destinate aciunii unor constituieni naturali din mediu
reacioneaz cu unele grupri funcionale analoge structural, din compoziia moleculelor xenobiotice. De exemplu,
erbicidul sintetic 2,4-D(acid 2,4-diclor-fenoxiacetic) se aseamn structural cu o serie de compui aromatici naturali
i poate fi degradat n sol de Achromobacter, Arthrobacter, Flavobacterium peregrinum, Pseudomonas, etc.
Phanerochaete chrysosporium degradeaz DDT, lindanul i ali produi clorurai la CO 2 i H2O sub aciunea
sistemelor enzimatice extracelulare implicate n mod obinuit n degradarea ligninei.
In concluzie, mediile naturale contaminate cu substane recalcitrante (organoclorurate sau de alt natur) pot
fi mai uor detoxifiate i epurate dac li se adaug un analog structural natural biodegradabil, care stimuleaz
multiplicarea microorganismelor active. Pe aceast baz, Horvath (1972) a propus ca aplicarea erbicidelor n
ecosistemele naturale s se fac simultan cu o mbogire n analogi.
Bazele genetice ale degradrii compuilor organici halogenai
Degradarea substanelor xenobiotice se poate realiza, teoretic, pe dou ci majore:
1) Prin utilizarea echipamentului enzimatic al celulei, n cazul n care substratul nou are un anumit grad de
analogie chimic i structural cu anumite produse naturale. Limitrile cinetice care decurg din utilizarea unui
substrat nrudit, dar nu specific sunt depite pe mai multe ci: a)prin supraproducie de enzime; b)prin producerea
de enzime cu specificitate modificat prin mutaie; c)prin inhibarea sau modificarea controlului riguros asigurat de
genele reglatoare;
2) Prin activiti enzimatice noi, codificate de genele preexistente sau de gene heterologe, n urma unor
rearanjri i recombinri genetice legitime sau nelegitime i n special prin aport de gene noi de origine
plasmidial.
Bazele genetice ale substanelor xenobiotice sunt puin cunoscute. Pentru puinele cazuri studiate, genele
sunt cel mai adesea situate grupat, n structura unor plasmide sau transpozoni, o form mai uor transmisibil de la
un genom la altul, intra- sau intercelular. Datorit structurilor genetice transmisibile, microorganismele din mediile
naturale au dobndit capacitatea de a degrada numeroi compui halogenai, n special pe cei cu puini atomi de
halogeni.
Tulpinile de microorganisme din mediile naturale (sol, ap, etc.) ar fi caracterizate printr-o accentuat
flexibilitate a informaiei genetice, ceea ce le-ar asigura o adaptabilitate rapid ca rspuns la variabilitatea
substratelor din medii. Ele s-ar deosebi de tulpinile bacteriene utilizate curent n studiile de genetic bacterian (E.
coli, S. typhymurium), limitate la un habitat unic (intestinul), lipsite de versatilitate catabolic i supuse unor
controale foarte riguroase.
Tulpinile bacteriene saprobionte n mediile naturale, confruntate permanent cu o gam larg de nutrieni i
de condiii de mediu, ar reprezenta un potenial de evoluie biochimic mai rapid, n special catabolic, ceea ce le-ar
permite s degradeze compui chimici sintetici, fr echivalent n natur.
Cauzele rezistenei la degradare. Perspectiva obinerii i utilizrii unor pesticide noi este condiionat de
calitatea de biodegradabilitate i de cunoaterea mecanismelor care determin caracterul de molecul recalcitrant.
1) Biodegradarea este condiionat de ptrunderea substanei n celul, aceasta fiind determinat de
mrimea moleculei. Moleculele organice prea mari sau prea complexe i insolubile trebuie mai inti s fie degradate
la compui mai mici, care pot fi internalizai i utilizai intracelular n catabolism. Degradarea iniial este rezultatul
aciunii enzimelor extracelulare. Rezistena cvasiabsolut a polietilenei este determinat de g. m. mare i de absena
enzimelor extracelulare capabile s o fragmenteze.
2) Structura molecular pare s aib un rol esenial: modificri chimice minore pot transforma un substrat
biodegradabil ntr-unul recalcitrant. De exemplu, erbicidul 2,4-D(acidul 2,4-diclorfenoxiacetic) este degradabil n sol
n cteva zile, n timp ce 2,4,5-D(acidul 2,4,5-triclorfenoxiacetic), care difer printr-un singur atom de Cl rezist
cteva luni. Polietilena (polimer sintetic - (CH2CH2)n este refractar la atacul microorgansimelor, dar
polietilenglicolul (CH2CH2O)n este degradat.
Relaia direct dintre structura molecular i gradul de biodegrabilitate este ilustrat de diferena de
rezisten la degradare a celulozei i ligninei. Celulazele cliveaz n mod repetat acelai tip de legtur chimic ntre
subuniti identice ale celulozei. Chiar n cazul proteinelor, legturile peptidice succesive sunt identice, dei leag
aminoacizi diferii.
Situaia este diferit n cazul ligninei i humusului. Ele sunt mineralizate lent, deoarece sunt alctuite din
molecule i legturi diferite ntre blocurile de construcie.
3) Absena echipamentului enzimatic necesar pentru biodegradare. Spre deosebire de biopolimeri, care sunt
degradai mai mult sau mai puin lent, substanele xenobiotice sunt frecvent refractare la biodegradare din cauza
absenei enzimelor active asupra structurii lor. Compuii xenobiotici avnd structuri chimice foarte variate i
adeseori complexe, au aprut ntr-un timp scurt i conin grupri chimice, n general nerecunoscute de enzimele
microbiene. Cei care prezint anumite grade de asemnare cu compuii naturali pot fi degradai mai mult sau mai
puin lent. Degradarea compuilor xenobiotici necesit modificri structurale extensive nainte de a intra n cile
centrale ale metabolismului bacterian. In consecin, vor fi parial sau total rezistente la degradare i se vor acumula
n mediu (Janke i Fritsche, 1985).
Incapacitatea poluanilor de a induce sinteza enzimelor degradative
Concentraia prea mic a poluantului (ppm, ppb) este insuficient pentru a induce enzimele necesare
degradrii. Biodegradarea compuilor sintetici are loc numai n niele ecologice n care concentraia lor este suficient
de mare pentru a exercita funcia de presiune n selecie.
Rezistena la biodegradare a unor poluani poate fi determinat de adsorbia lor pe diferite substraturi din sol
i sedimente. Adsorbia poate masca situsul substratului la care se leag enzima i astfel o molecul biodegradabil
devine refractar.
Caracterul recalcitrant al unei substane xenobiotice nu este totdeauna intrinsec, ci este uneori determinat de
factori de mediu: a)absena oxigenului n cazul substanelor degradabile numai n anaerobioz; b)prezena unor
factori (acizi organici, toxine, sruri) inhibitori ai multiplicrii microorganismelor active; c)efectul combinat al
temperaturii sczute i al presiunii mari n adncul mrilor; d)sedimentarea compuilor ntr-un situs inaccesibil
microorganismelor; e)concentraia sczut a nutrienilor care limiteaz multiplicarea microorganismelor.
Consecine ecologice ale prezenei substanelor xenobiotice n natur. Larga utilizare a pesticidelor n
practica agricol a determinat un caracter global al rspndirii lor n sol, n apele interioare i marine.
Diferite modaliti de rspndire pot determina efecte nocive la distane mari de locul de aplicare. DDT-ul a
fost gsit n zpezile din Antartica, la peste 6 000 km de locul cel mai apropiat de administrare.
Toxicitatea pentru microorganisme. Microorganismele au o mare capacitate de adsorbie a pesticidelor, n
special din mediile acvatice, dei se gsesc n concentraii foarte mici, favorizate de 2 factori:
a) suprafaa mare de contact cu mediul nconjurtor;
b) caracterul lipofil al majoritii pesticidelor i, n special al insecticidelor. Ele au o mare afinitate pentru
fosfolipidele din membranele celulare.
Multe pesticide au efecte perturbatoare asupra circuitului azotului, inhib fotosinteza i celulozoliza,
diminu randamentul produciei primare a fitoplanctonului, au efecte toxice asupra zooplanctonului.
Fenomenul de bioacumulare. Datorit solubilitii lor reduse n ap, pesticidele au tendina de a se localiza
n interiorul celulelor vii. Ca urmare, microorganismele, fitoplanctonul i plantele macrofite, precum i fauna de
toate dimensiunile pot acumula i stoca n celulele i esuturile lor cantiti importante de pesticide, n concentraii
inverse fa de solubilitatea lor n ap.
Procesul de bioacumulare (Biomagnification) este agravat de faptul c, dup concentrare, acestea nu sunt
nici degradate i nici excretate n cantiti semnificative, ci sunt introduse i transmise ca atare n reeaua trofic.
Astfel, procesul de concentrare continu de-a lungul diferitelor verigi ale lanului trofic, teoretic cu circa 1 ordin de
mrime pentru fiecare nivel trofic succesiv. Afirmaia are la baz observaia c din biomasa utilizat la un anumit
nivel trofic, numai 10-15% este transferat la nivelul trofic superior, restul de 85-90% fiind disipat n cursul
activitilor metabolice prin respiraie. In consecin, la nivelul trofic cel mai nalt (animale prdtoare), poluantul
poate fi prezent n esuturi, la concentraii care depesc de 10 4-106 ori i n cazuri extreme de 2,5 x 106 ori
concentraia sa n mediul natural.
Msurarea concentraiei DDT-ului la toate verigile lanului trofic ilustreaz un principiu general al polurii
n sensul c, cu ct un organism este mai sus n piramida trofic, cu att poluantul este mai concentrat n esuturile
sale. Dac productorii primari concentreaz poluantul n concentraii mai mari dect n mediu i fiecare nivel trofic
succesiv l concentreaz peste nivelul existent n hrana sa, devine evident c un erbivor poate acumula mai mult
poluant dect plantele pe care le consum, iar un carnivor de la vrful piramidei trofice acumuleaz o cantitate i mai
mare. In felul acesta, unele molecule recalcitrante, netoxice la concentraii existente n natur devin toxice prin
acumulare n concentraii mari n esuturi, determinnd efecte negative asupra speciilor situate la sau aproape de
vrful lanului trofic.
Fenomenul de bioacumulare are un caracter universal n natur, deoarece la fiecare nivel trofic exist
organisme concentratoare. Restrngerea biomasei la nivelele trofice superioare este asociat cu acumularea de
substane recalcitrante.
Aplicaii practice. Biodegradarea i ndeprtarea poluanilor recalcitrani, respectiv detoxifierea i
mineralizarea lor de ctre microorganisme reprezint un factor esenial n ncercarea de a atenua efectele lor
ecologice. Procedeele menite s realizeze acest obiectiv sunt:
- producerea unor pesticide mai uor degradabile, prin includerea n structura lor a unor grupri chimice
cu echivalente naturale sau introducerea unor modificri care le transform n substraturi nutritive pentru
microorganismele din ap i din sol;
- utilizarea unor teste care s stabileasc gradul de biodegrabilitate ntr-un interval rezonabil, precum i
lipsa de toxicitate i inocuitatea .
Construcia unor tulpini bacteriene capabile s degradeze substanele xenobiotice, prin metode genetice
(schimbul natural de gene prin cocultivare) i prin tehnici de inginerie genic.
Pe baza acestor principii, Knackmuss (1984) a obinut tulpini de Pseudomonas capabile s degradeze o
gam larg de clorbenzoai i clorfenoli. Prin transferul de plasmide, Ghossal (1985) a obinut o tulpin de P.
cepacia capabil s catabolizeze erbicidul 2,4,5-T, dei nici un microorganism natural nu a realizat aceast
degradare.
Nu se tie dac n ecosistemele naturale are loc un schimb similar de gene codificatoare ale enzimelor capabile s
degradeze substane xenobiotice i nici dac transconjuganii i exercit capacitile degradative fa de compuii
xenobiotici.

Micro General A

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Micro General A

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

MICROBIOLOGIE GENERALA

Gr. Mihaescu, Carmen Chifiriuc, Lia Mara Ditu

Natura chimic a materialului capsular

Simetria complex (binar)

Recombinarea ca factor de evoluie

Principii de inginerie genetic

ACTIVITATEA GEOLOGIC~ A MICROORGANISMELOR

G. NOIUNI DE MICROBIOLOGIA SOLULUI

Incapacitatea poluanilor de a induce sinteza enzimelor degradative

Sisteme bactericide n PMNN

1997, Lippincot, Philadelphia, New York

Caracteristicile distinctive ale organismelor celor trei domenii

Permeabilitate foarte selectiv (pentru

Este ntr-o permanent stare de gel,

Are o plasticitate accentuat. Celula

Au organite delimitate de o membran

Flagelul cu structur simpl, format

Accesorii. Dac exist sunt cili sau

Diviziunea este indirect, cu aparatul

Nucleu tipic, cu nucleol.

Prin intermediul aparatului mitotic

Un numr constant de cromosomi, cu

80 S. In mitocondrii si cloroplaste sunt ribosomi 70 S.

Nu inhiba sinteza proteinelor in

Cicloheximida inhiba specific

Efectul inhibitor asupra sintezei

Inglobeaz frecvent celule pe care le

Fuziunea gameilor este intraspecific.

Eucariotele se disting prin existena a 3 ARN-polimeraze *: ARN-polimeraza I transcrie ARNr; ARN-polimeraza II

STRUCTURA I FUNCIILE CELULEI BACTERIENE

Grosimea peretelui este cuprins ntre l5-30 nm (uneori pn la 80 nm).

a. Acidul diaminopimelic, derivat al lizinei. b. Lizina.

La microscopul electronic, peretele celular apare pluristratificat, datorit structurii trilaminare a

Structura chimic a moleculei de LPS

Fig. 9. Reprezentarea schematica a structurii moleculei de LPS

Gruprile OH din poziiile 3, 4 si 6 ale

fiecrui dizaharid sunt substituite de acizi grai (lauric,

Grupul OH din poziia 3 se leag de componenta polizaharidic (acidul 2-ceto,3-deoxioctanoic)

Fig. 11. Structura pseudomureinei, polimerul peretelui celular la Methanobacterium sp.

Rezistena la decolorare se datoreaz compoziiei chimice a peretelui celular. Peptidoglicanul

Funciile peretelui celular

Clasa proteinelor periferice este mprit n dou subclase:

Cu excepia micoplasmelor i a metanotrofelor, membrana procariotelor se deosebete de cea a eucariotelor

Fig. 19. Intruzii veziculare la Azotobacter - imagine electrono-optica (original).

Fig. 23. Reprezentarea schematica a modului de aciune a proteinelor de transport.

Transportul activ necesit consum de energie, deoarece transportorii funcioneaz pe principiul

Funciile mezosomului. Mezosomul este o structur multifuncional:

Compui organici compatibili la microorganismele halofile i halotolerante.

Soluiile compatibile detectate la microorganismele halofile i halotolerante includ poliolii (glicerol,

Organizarea nucleoidului bacterian

Fig. 25. Imagine electrono-optica a nucleoidului bacterian (original).

Organizarea fizic a cromosomului

Fig. 29. Reprezentarea schematic a subunitilor ribosomale 30S i 50S.

Fig. 30. Rolul robosomilor n biosinteza proteinelor.

Din punct de vedere structural, la nivel electrono-optic, sporularea la B.

Fig. 31. Reprezentarea schematic a etapelor de formare a endosporului.

Structura intern a endosporului

Ca regul general, o specie bacterian formeaz un singur tip de depozit celular.

Fig. 34. Capsula bacteriana (coloratie negativa, original).

Natura chimic a materialului capsular

Exopolizaharidele se sintetizeaz prin dou mecanisme distincte:

Biosinteza heteropolizaharidelor are loc n 4 trepte:

Fig. 38. a. Poziia flagelilor la E. coli in timpul deplasrii