ACADEMIA DE TIINE A MOLDOVEI

INSTITUTUL DE MICROBIOLOGIE

Cu titlul de manuscris
C.Z.U.: 635.8:582

STEPANOV VITALIE

BIOTEHNOLOGIA CULTIVRII CIUPERCII PLEUROTUS

OSTREATUS I OBINERII BIOPRODUSELOR VALOROASE

03.00.23-biotehnologie

Tez de doctor n biologie

Conductor tiinific:
RUDIC Valeriu,
academician, profesor universitar
Om Emerit al Republicii Moldova
Autor: STEPANOV Vitalie

Chiinu 2005
CUPRINS

INTRODUCERE...............................................................................................................
.......................................................................................................................................4
CAPITOLUL I. BAZIDIOMICETELE - OBIECTE ALE CERCETRILOR
BIOTEHNOLOGICE.....................................................................................................................

...................................................................................................................................................9
CAPITOLUL II. MATERIAL I METODE DE CERCETARE................................................

.......................................................................................................................................20
2.1Obiectul de studiu...........................................................................................................................
............................................................................................................................................................. 20
2.2Metode de cercetare........................................................................................................................
............................................................................................................................................................. 20
 2
2.2.1 Izolarea i pstrarea culturii pure. Prepararea materialului semincer......................... 20
2.2.2 Studierea caracterelor morfo-culturale........................................................................ 20
2.2.3 Determinarea compoziiei biochimice........................................................................ 21
2.2.4 Mediile de nutriie...................................................................................................... 23
2.2.5 Productivitatea........................................................................................................... 24
2.2.6 Valoarea nutritiv........................................................................................................ 25
2.2.7 Consumul de celuloz i lignin................................................................................. 25
2.2.8 Activitatea fiziologic a extractelor de P. ostreatus................................................ 25
2.2.9 Analiza statistic......................................................................................................... 25
CAPITOLUL III. SELECTAREA TULPINILOR DE PLEUROTUS

OSTREATUS N FAZELE LICHID I SOLID DE CULTIVARE................................................... 26

3.1 Obinerea biomasei i activitatea hidrolitic la cultivarea submers a ciupercii P. ostreatus
.....................................................................................................................................................................
................................................................................................................................................... 26
3.2 Estimarea coeficientului de cretere a ciupercii P. ostreatus pe medii agarizate la temperaturi diferite
................................................................................................................................................. 29
3.3 Recolta carpoforilor la cultivarea n faza solid de fermentare a ciupercii P. ostreatus........... 31
CAPITOLUL IV. PARTICULARITI BIOLOGICE DE CULTIVARE A

CIUPERCII PLEUROTUS OSTREA TUS N FAZA SOLID DE FERMENTARE............................ 39

4.1 Cultivarea ciupercii P. ostreatus pe medii nutritive agarizate........................................................ 39
4.1.1 Aciunea surselor de carbon i azot asupra creterii miceliului P. ostreatus pe
medii agarizate ................................................................................................................................... 39
4.1.2 Influena criteriului termic asupra creterii miceliului P. ostreatus........................... 43
4.2 Cultivarea intensiv a ciupercii P. ostreatus pe diverse substraturi nutritive.................................. 47
4.2.1 Selectarea substraturilor nutritive................................................................................ 47
 3

4.2.2 Componena biochimic a substraturilor la cultivarea P. ostreatus

61
4.2.3 Valoarea nutritiv a carpoforilor P. ostreatus

70
CAPITOLUL V. PARTICULARITI BIOLOGICE DE CULTIVARE A
CIUPERCII PLEUROTUS OSTREA TUS N FAZA LICHID DE FERMENTARE..................
79
5.1 Aciunea surselor de carbon i azot asupra creterii miceliului P. ostreatus cultivat
submers
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
79
5.2 Valoarea nutritiv a miceliului P. ostreatus cultivat submers
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
84
5.3 Dinamica biosintezei unor enzime hidrolitice i a acumulrii biomasei proteice la
cultivarea submers a ciupercii P. ostreatus pe medii nutritive complexe
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
89
CAPITOLUL VI. PROCEDEE BIOTEHNOLOGICE DE CULTIVARE A
CIUPERCII PLEUROTUS OSTREATUS I OBINEREA BIOPRODUSELOR
VALOROASE.....................................................................................................................................
102
6.1 Elaborarea procedeelor de obinere a bioproduselor P. ostreatus....................................................
102
6.1.1 Procedee de obinere a carpoforilor cu valoare nutritiv nalt

102
 4
6.1.2 Procedeu de sporire a rentabilit ii procesului tehnologic

103
6.1.3 Procedee de obinere a produselor proteice furajere

106
6.1.4 Procedee de obinere a biomasei alimentare

107
6.1.5 Procedeu de preparare a materialului semincer granulat

109
6.2 Activitatea fiziologic a extractelor de P. ostreatus asupra germinrii i creterii
seminelor de gru................................................................................................................................
110
SINTEZA REZULTATELOR OBINUTE
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
114
CONCLUZII
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
117
RECOMANDRI PRACTICE
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
118
REFERINE BIBLIOGRAFICE
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
119
ADNOTARE
 5
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
132
PE3IOME
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
133
ABSTRACT
.............................................................................................................................................
.............................................................................................................................................
134
 6
INTRODUCERE

Actualitatea temei investigate

Ritmul de dezvoltare, valoarea sa incontestabil i eficacitatea biotehnologiilor moderne
nu cedeaz unor aa domenii, ca cosmonautica i tehnicile de calcul, impactul socioeconomic
determinnd caracterul revoluionar al acestei disciplini [43, 50, 72, 80, 136, 161]. Una din priorit
ile majore ale biotehnologiei este susinerea ramurii agrare prin orientarea ei spre utilizarea
tehnologiilor avansate, prin promovarea culturilor agricole profitabile, generatoare de venituri
sporite. Ca obiect biotehnologic, n ultimii ani, n rndurile microbiologilor i biotehnologilor se
acord o tot mai mare atenie cultivrii ciupercilor bazidiale. Priorit ile ciupercilor Pleurotus
fa de alte bazidiomicete sunt: viteza sporit de cretere a miceliului i competitivitatea nalt
fa de microflora concurent; capacitatea utilizrii ca substrat nutritiv a resturilor vegetale
rezultate din industria agro-industrial, alimentar i silvicultur; simplitatea relativ a tehnicilor
de cultivare i de prelucrare a substraturilor utilizate; desfurarea procesului tehnologic n lipsa
solului de acoperire; folosirea substraturilor celulozice uzate la furajarea animalelor sau n calitate
de ngrminte bioorganice valoroase; rezistena la boli virotice, bacteriene i fungice; valoarea
nalt nutritiv a carpoforilor i miceliului cultivat submers; caracteristicile organoleptice
remarcabile i capacitatea de meninere ndelungat a calitilor tehnice [1, 3, 11, 13, 64, 93, 108,
114, 115, 116, 134, 135, 142, 183, 184].
n ultimul timp, datorit deficitului de alimente i a polurii excesive a mediului
nconjurtor, noiunea de deeu a fost reevaluat, punndu-se accent pe reutilizarea deeurilor n
general, i a celor celulozice n special, n vederea asigurrii de substraturi abundente i ieftine
pentru orice proces tehnologic, realizat cu ajutorul microorganismelor capabile s hidrolizeze
celuloza [19]. Sporirea resurselor proteice pe calea sintezei microbiologice poate fi realizat prin
producerea n mas a miceliului i carpoforilor ciupercilor, care prin calitile nutritive i
delicioase ale acestora posed avantaje eseniale fa de alte produse de origine vegetal.
Numeroase cercetri [11, 40, 99, 115, 151, 181] au evideniat capacitatea de cretere intensiv a
ciupercilor putregaiului alb pe diverse substraturi celulozice, printre care i celor ce aparin
speciei Pleurotus ostreatus. Totui, aceast capacitate nu i-a gsit o larg utilizare n
 7
biotehnologia proceselor de convertire a resurselor locale n produse cu valoare nutritiv ridicat,
iar starea n care se afl cercetrile tiinifice privind hidroliza materiei vegetale nu corespunde
cerinelor practice ale economiei naionale.

Necesitatea utilizrii complete a reziduurilor agro-industriale de natur vegetal i

convertirea resurselor locale n produse cu valoare nutritiv ridicat sunt impuse de cererea
economiei de pia, pe de o parte i de situaia ecologic precar, pe de alt parte. n contrast cu
progresele nregistrate n domeniile aplicative i teoretice referitor la tehnologiile de cultivare a
ciupercilor bazidiale comestibile, ncadrarea lor efectiv n rezolvarea cerinelor practice ale
economiei naionale rmne nc o problem insuficient rezolvat i un domeniu deschis
cercetrii, problema conversiei microbiologice a materiei vegetale fiind destul de actual pentru
Republica Moldova, att din punct de vedere al soluionrii deficitului proteic, ct i al redresrii
situaiei ecologice create. De aceea, deosebit de actuale sunt cercetrile orientate spre obinerea
tulpinilor nalt productive ale ciupercii bazidiale Pleurotus ostreatus, utilizarea diverselor
substraturi reziduale celulozice, optimizarea parametrilor tehnologici de cultivare a tulpinilor de
perspectiv i elaborarea tehnologiilor de obinere a produselor proteice, nutreurilor i a
substanelor bioactive[11, 56, 114, 115, 116, 127, 134, 142, 181, 184].

Pornind de la cele expuse, scopul investigaiilor tiinifice a constat n studierea

particularitilor biologice de cultivare a ciupercii Pleurotus ostreatus i elaborarea procedeelor
biotehnologice de obinere a bioproduselor fungice valoroase cu o aplicare larg n diverse
domenii aplicative.

Pentru realizarea acestui scop au fost trasate urmtoarele obiective:

Screeningul raional ealonat pentru selectarea unor tulpini Pleurotus ostreatus cu

mai multe caliti preioase;
Determinarea aciunii unor factori, ca sursele de azot i carbon, temperatura,
iluminarea, ventilarea, umiditatea asupra caracterelor morfo-culturale i
biochimice la Pleurotus ostreatus;
Utilizarea practicilor de diversificare a mediilor nutritive din rndul materialelor
lignocelulozice provenite din reziduurile agro-industriale poluante, dar inofensive
pentru om;
 8
Elucidarea posibilitii de obinere a proteinei furajere prin ameliorarea valorii
nutritive a diverselor substraturi reziduale celulozice la cultivarea n faza solid i
lichid de fermentare a ciupercii Pleurotus ostreatus;
Evaluarea valorii biologice (nutritive) a carpoforilor Pleurotus ostreatus cultivai
n faza solid de fermentare pe diverse substraturi lignocelulozice;
Cercetarea exigenelor de nutriie i a altor factori ce contribuie la o cretere i
dezvoltare abundent a ciupercii Pleurotus ostreatus pe diverse medii nutritive

ieftine i nedeficitare - pentru utilizarea acesteia ca productor valoros al

biomasei miceliene cultivate submers i al enzimelor hidrolitice;
Evaluarea valorii biologice (nutritive) i organoleptice a miceliului de Pleurotus
ostreatus cultivat submers - pentru stabilirea posibilitii de valorificare a
biomasei culturale n alimentaie;
Stabilirea posibilitii de utilizare a extractelor de Pleurotus ostreatus n calitate
de stimulatori de origine natural n fitotehnie;
Elaborarea procedeelor noi de obinere a bioproduselor de P. ostreatus.

Inovaia tiinific:
Se propun trei tulpini autohtone noi de Pleurotus ostreatus (P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04), ce prezint interes prin productivitatea i calitatea biologic
(nutritiv) nalt a carpoforilor cultivai pe diverse substraturi reziduale celulozice, prin sinteza
componentelor proteice valoroase i a altor substane bioactive la cultivarea submers.
Pentru tulpinile P. ostreatus testate au fost determinate diferenele morfo-culturale i
biochimice, selectate mediile optime de nutriie i caracterizat valoarea nutritiv a carpoforilor i
miceliului cultivat submers.
Au fost perfecionate metodele de eviden a productivitii culturii P. ostreatus i
propus o modalitate nou de evaluare a rentabilitii procesului tehnologic n condiii
experimentale.
n baza tulpinilor P. ostreatus selectate au fost elaborate diverse procedee tehnologice de
cultivare i obinere a bioproduselor fungice valoroase.
 9
Semnificaia i valoarea aplicativ a lucrrii:
Din punct de vedere al perspectivei biotehnologice a fost apreciat potenialul biologic al
unor tulpini ce aparin speciei P. ostreatus, trei din acestea (P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-
FB-03 i CNMN-FB-04) fiind selectate i recomandate att pentru obinerea unei recolte nalte de
carpofori, ct i pentru o productivitate major a biomasei i biosintezei de enzime hidrolitice la
cultivarea submers.
A fost propus un procedeu de sporire a rentabilitii procesului tehnologic, implementarea
n practic fiind aplicat n cadrul unei structuri specializate de producere intensiv a ciupercilor
comestibile de ser.
Este propus modalitatea de preparare a materialului semincer granulat i producerii
miceliului comercial prin utilizarea biopreparatului n baza miceliului P. ostreatus cultivat
submers.

Datorit efectului stimulator pe care-l produc, substraturile nutritive uzate - folosite la

cultivarea ciupercii P. ostreatus - reprezint o surs de substane bioactive, astfel nct acestea pot
fi utilizate n fitotehnie n calitate de regulatori ai creterii seminelor de gru.
A fost demonstrat posibilitatea obinerii bioproduselor fungice valoroase prin
valorificarea materiei vegetale secundare i convertirea acesteia n produse proteice alimentare i
furajere.

Postulatele de baz prezentate pentru susinere:

1. Tulpinile selectate de P. ostreatus (P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04) - obiecte biotehnologice de perspectiv, graie productivitii
nalte i coninutului biochimic de calitate.
2. Integrarea tehnologiilor de cultivare a tulpinilor ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-
02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 n procesul de valorificare a reziduurilor
secundare vegetale - prin producerea proteinei furajere i alimentare.
3. Biomasa miceliului P. ostreatus cultivat submers - supliment proteic valoros
pentru produsele alimentare i furajere.
 10
4. Substratul celulozic uzat, dup recoltarea carpoforilor P. ostreatus - surs de
stimulatori naturali n fitotehnie.
5. Perspective ale biotehnologiei aplicate - noi procedee de obinere a bioproduselor
fungice valoroase.

Aprobarea lucrrii:
Rezultatele cercetrilor au fost comunicate i discutate la a IlI-a Conferin Naional
Microorganismele i metaboliii lor n economia naional" (Chiinu, 1996), A II-a Conferin
Internaional Romnia i romnii n tiina contemporan (Braov, 1997), Congresul al VII-lea
al Societii tiinifice a Geneticienilor i Amelioratorilor din R. M. Genetica i ameliorarea
plantelor i animalelor n Republica Moldova" (Chiinu, 1999), Simpozionul Biodiversitatea
vegetal a Republicii Moldova" (Chiinu, 2001), Conferina a VI-a Internaional PeryjraTopbi
pocra u pa3BHTH5i pacreHHH B GHOTexHOJiorirax" (Moscova, 2001), Conferina tinerilor
cercettori consacrat aniversrii a 40-a a A..M. i a 55-a de la formarea primelor instituii
academice (Chiinu, 2001), Congresul II al Societii de Fiziologie i Biochimie vegetal din
Republica Moldova Fiziologia i biochimia plantelor la nceput de mileniu: realizri i
perspective" (Chiinu, 2002), Simpozionul Tehnologii biologice avansate i impactul lor n
economia Moldovei" (Chiinu, 2002), Conferina a II-a Internaional MeTogojiorHHecKHe
OCHOBM no3HaHira GiiojiorHHecKHx ocoGeHHocTen rpuGoB - npogyieHToB
4)H3HojiorHHecKH aKTHBHbix
 11

BemecTB H numeBbix npogyKTOB" (Donetsc, 2002), Conferina tinerilor savani ai Academiei

de tiine a Moldovei (Chiinu, 2003), Conferina tiinific republican Valorificarea
rezultatelor tiinifice - baza dezvolt rii durabile a economiei naionale" (Chiinu, 2004),
Conferina tinerilor savani ai Academiei de tiine a Moldovei (Chiinu, 2004).

Aportul personal:
Ideia efecturii investigaiilor tiinifice aparine conductorului tiinific academicianului
Valeriu Rudic i subsemnatului. Partea experimental aparine n cea mai mare parte autorului.
Analiza aminoacizilor a fost ndeplinit de colaboratorii Centrului de Automatizare i
Metrologie, iar unele consultaii au fost generos oferite de ctre dr. Alexandra Deseatnic i Alla
Dvornina, crora le exprim sincerele mulumiri i respect.

Publicaii:

La tema tezei au fost publicate 22 lucrri tiinifice, inclusiv 14 de

unul singur. Structura i volumul tezei:

Teza este constituit din introducere, revista literaturii, materiale i metode de cercetare,
rezultatele investigaiilor i discuiile prezentate n patru capitole, sinteza rezultatelor obinute,
concluzii, recomandri practice, bibliografie, ce conine 187 surse tiinifice citate i rezumatele
n limbile romn, englez i rus. Teza este prezentat pe 134 pagini de text tehnoredactat la
computer, inclusiv 35 tabele i 28 figuri, dintre care - 14 fotografii.

Cuvinte-cheie: Pleurotus ostreatus, screening, faz solid de fermentare, protein

furajer, protein alimentar, valoare nutritiv, cultivare submers, biomas, aminoacizi,
fitotehnie, bioproduse.
 12

CAPITOLUL I BAZIDIOMICETELE -
OBIECTE ALE CERCETRILOR
BIOTEHNOLOGICE
Rezolvarea problemei deficitului proteic constituie o preocupare major, utilizarea
ciupercilor n acest scop oferind posibilit i ncurajatoare de solu ionare a acesteia. Iniial, n
calitate de productori proteici, prin anii 50-60 ai secolului trecut au fost utilizate specii de
micromicete aparinnd genurilor Aspergillus, Penicillum, Alternaria i Fusarium [51]. Totodat,
tehnologiile de obinere a produselor proteice pe baz de ascomicete prezint dificulti majore
din cauza pericolului de sporulare, iar ciupercile genurilor Aspergillus i Penicillium n anumite
condiii de cultivare pot produce diverse micotoxine cu efecte mutagen i cancerigen [182].
Utilizarea ciupercilor bazidiale n aceste scopuri prezint un interes sporit datorit lipsei
dezavantajelor susmenionate. Astfel, miceliul ciupercilor bazidiale Pleurotus ostreatus, Panus
tigrinus i Flammulina velutipes cultivat submers nu este toxic i conine pn la 40-60%
protein brut. Digerabilitatea produsului obinut constituie circa 80%, ceea ce depete valoarea
nutritiv a unor aa produse de origine vegetal, ca grul, orezul, soia. Aminoacizii ce predomin
sunt: glicina, acizii aspartic i glutamic, de asemenea pentru P. ostreatus - lizina i alanina, pentru
F. velutipes - fenilalanina i tirozina. Biomasa ciupercilor bazidiale conine toi aminoacizii
eseniali [134, 184]. n timpul de fa miceliul ciupercilor comestibile este folosit sub form de
praf uscat ca supliment alimentar valoros pentru supe, sosuri, concentrate de legume i crnuri.
Graie structurii filamentoase miceliul de ciuperci poate fi adugat i n cacavaluri, produse de
panificaie, mezeluri i semifabricate din carne [54, 87]. Cercetrile medico-biologice i clinice
ale biomasei fungice Trametes pubescens 932-2 a stabilit caracterul non-toxic a acesteia, prezena
aciunii oncostatice, hepatoprotectoare i imunomodulatoare. Preparatul n baza T. pubescens este
certificat n calitate de supliment alimentar cu un coninut valoros al proteinei brute (35-60%),
acizilor grai eseniali, fosfolipidelor, ergosterinei, vitaminelor din grupul B, macro- i
microelementelor [140]. Pe baza miceliului ciupercilor Panus tigrinus i Daedalea confragosa n
Rusia au fost elaborate preparatele pantigrin i daedalin, coninutul proteinei pentru 1kg de
produs obinut fiind echivalent cu cel al unui kilogram de carne [175]. n Ucraina preparatul
alimentar pe baz de P. ostreatus este recomandat ca supliment proteic valoros pentru produsele
 13
din crupe i legume [135], iar n Japonia n baza extractului de ciuperci se prepar buturi
speciale [87].
Miceliul ciupercilor este apreciat i datorit marei varieti de vitamine cu activiti
fiziologice i farmacodinamice deosebit de importante ca cel al tiaminei, riboflavinei, biotinei,
piridoxinei, ergosterinei, acizilor pantotenic, folic, nicotinic i ascorbic [128, 180]. O mare parte a
ciupercilor pot acumula cantit i importante de vitamine, depind chiar i depozitul vitaminos"
al ficatului de bovine [166].
Bazidiomicetele prezint surse mai puin importante de lipide (2-12%), componentele
cruia sunt similare uleiurilor vegetale [127,164]. Dup Morozova G. i col. [166], coninutul i
calitatea acizilor grai pentru ciuperci se apropie de cea a uleiurilor de ctin i floarea-soarelui.
n faza lichid i solid de cultivare, pe medii sintetice i agarizate, miceliul P. ostreatus a
prezentat acizi grai valoroi, majoritatea aparinnd acizilor grai saturat i nesaturat: palmitic i
respectiv linoleic [5, 125]. Dup cum se tie, acidul linoleic face parte din categoria acizilor grai
eseniali, deficitul cruia duce la reprimarea creterii i funciilor reproductive, micorarea
rezistenei la infecii, afectarea i lezarea esuturilor epiteliale.
Aproximativ 40% din numrul total al bazidiomicetelor sintetizeaz antibiotice de o mare
diversitate biochimic i fiziologic caracterizate prin terpenoizi, purine, pirimidine, chinone,
radicali fenolici etc. [7, 23, 24]. Reprezentanii familiilor Polyporaceae i Agaricaceae au
demonstrat o activitate antibiotic major, preparatele cele mai cunoscute fiind lenzitina (izolat
din Lenzites septaria), pleurotina (izolat din Pleurotus griseus) i psaliotina (izolat din
Psalliota xanthoderma) [185]. Pe baz de bazidiomicete n timpul de fa sunt utilizate mai mult
de 14 antibiotice antibacteriene i 3-4 antifungice [184].
Datorit resurselor genetice considerabile i calitii biologice remarcabile, ciupercile
comestibile pot soluiona problema deficitului proteic i deschid calea unor noi aplicaii practice
de perspectiv. Din cele aproximativ 2000 specii de ciuperci comestibile mai mult de 20 specii
sunt valorificate n scopuri comerciale i doar numai 3-5 specii sunt cultivate la modul industrial.
Numeroase cercetri sunt dedicate cultivrii unor aa specii, ca Agaricus bisporus, Pleurotus
ostreatus, Lentinus edodes, Flammulina velutipes, Volvariela volvacea, Stropharia rugoso-
annulata. Actualmente, cercetrile sunt orientate spre cutarea noilor specii valoroase de ciuperci,
 14
realizarea tehnologiilor avansate, procedeelor de pregtire a substraturilor nutritive, obinerii
produselor proteice i a substanelor bioactive [9, 12, 38, 68, 123, 155, 172].
Tehnologiile moderne de cultivare a bazidiomicetelor permit obinerea unei recolte de 120
-150 kg/m2 pentru 4 - 6 cicluri tehnologice pe an. Realizarea unui randament eficient la cultivarea
intensiv a ciupercilor comestibile este determinat de selectivitatea substratului nutritiv,
utilizarea tulpinilor hibride nalt productive, folosirea maxim a spaiului de cultivare, reglarea
automatizat a condiiilor de microclim, mecanizarea proceselor tehnologice, ndeplinirea
msurilor profilactice i de igien a muncii [114, 121]. O larg utilizare de interes biotehnologic o
au ciupercile comestibile ce aparin genului Pleurotus. n ultimii ani se remarc o cretere
continu a produciei de ciuperci Pleurotus, care ntre timp s-a consolidat ntr-o ramur de o
importan economic deosebit pentru industria alimentar [11]. Situndu-se pe al treilea loc n
lume i al doilea n Europa ca volum de producere, ciupercile Pleurotus prezint caracteristici
organoleptice remarcabile, sunt bogate n proteine, fibre, hidrai de carbon, vitamine i sruri
minerale. Pe lng cantiti importante de substane proteice, lipide, vitamine pstrvul de fag
(Pleurotus ostreatus) sintetizeaz i diveri compui de natur aromatic, polizaharide de o nalt
activitate antioxidant [118]. Este cunoscut faptul, c compuii fenolici reprezint antioxidani
remarcabili, eficiena fiindu-i determinat de capacitatea acestora de a neutraliza formele active
oxigenate [85] sau de imobilizare a ionilor de fer [171]. Studiul repartiiei cantitative a
compuilor fenolici n carpofori, miceliu i n lichidul cultural la P. ostreatus a stabilit prezena
lor maxim (1600 mg%) n carpofori, fapt ce le permite a fi recomandai n calitate de materie
valoroas, att n industria alimentar, ct i n medicina netradiional [117]. De asemenea,
datorit compoziiei chimice valoroase, biomasa (miceliul, carpoforii) Pleurotus spp. este folosit
la elaborarea preparatelor profilactice i medicamentoase de un spectru larg de aciune:
antivirotic, antitumoral, antibiotic, imunomodulator. Astfel, din P. ostreatus s-a separat o fracie
de heteropolizaharide, iar din Fomes fomentarius - un glucan extracelular, ambele cu activiti
antitumorale i antitoxice [2].
Potrivit concepiilor actuale, statutul antioxidant al organismului fungic este determinat
de radicalii peroxizi ai lipidelor care sunt implicai nemijlocit n atacul acestuia asupra ligninei
[152]. Extractele din miceliul macromicetelor au o activitate antioxidant mult mai mare fa de
 15
micromicete, fapt ce se datoreaz constituiei i funcionrii diferite n organizare [119].
Obinerea principiilor bioactive de origine fungic cu diverse efecte fiziologice cum sunt
antioxidanii este actual, datorit importanei acestora pentru industria farmaceutic, medicin,
cosmetologie etc. [67, 120]. Activitatea antioxidant a lichidului cultural pentru unele specii de
bazidiomicete ce aparin genurilor Agaricus, Tremella i Ganoderma este propus n calitate de
remediu pentru prevenirea i combaterea unor forme a cancerului, cardiopatiei, hepatitei,
ulcerului stomacal, nefritei, hipertoniei, proceselor de mbtrnire a organismului [96].
Capacitatea de aprare a ADN-ului celular fa de stresul oxidativ este specific speciilor
Pleurotus ostreatus, P. sajor-caju, Flammulina velutipes, Agaricus bisporus, Lentinus edodes,
Ganoderma lucidum, Volvariella volvacea, Phellinus linteus, Auricularia auricula-judae i
Hypsizygus marmoreus [22, 39, 79, 90,
114].
Utilizarea particularitilor unor specii de bazidiomicete de a adsorbi i a ndeprta
metalele grele este de perspectiv, fapt pentru care acestea pot servi n calitate de bioindicatori ai
polurii mediului nconjurtor [10, 21, 70, 138]. S-a stabilit, c fungii putregaiului alb (Pleurotus
ostreatus (Fr.) Kumm., Coriolus hirsutus (Fr.) Murill., Coriolus zonatus (Fr.) Quel., Cerrena
maxima (Fr.) Murill., Cerrena unicolor (Fr.) Quel.) sunt capabili de sorbia cromului din mediul
de nutriie (6g la

100g de miceliu uscat), ceea ce poate fi folosit pe larg la ndeprtarea Cr din deeurile industriale
lichide [21]. Adsorbia maxim a Cd2+ (80-92%) de ctre miceliul P. sajor-caju din mediul lichid
a fost observat n faza exponenial de cretere a biomasei ciupercii, fapt pentru care este
susinut ideea utilizrii acesteia n scopul ndeprtrii metalelor grele i a bioregenerrii [10].
Fungii implicai n degradarea lemnului au fost grupai dup modul n care altereaz
structura lemnului n trei mari categorii: fungii putregaiului alb, brun i moale. Fungii
putregaiului alb sunt considerai ca principalii ageni ai degradrii ligninei n natur, atacul
acestora ducnd la o decolorare a esuturilor i la pierderea rezistenei mecanice a lemnului.
Bazidiomicetele cu activitate lignolitic major sunt capabile de utilizarea substanelor
persistente, rezistente la degradarea natural, ce au influiene distructive asupra biosului i, n
mod special, asupra omului. Codificate sub denumirea de POP-uri (poluani organici persisteni),
 16
acestea sunt dioxinele, fenolii, pesticidele, vopselele etc.[138]. Soluiile de 25 i 200 mg/ml de
pentaclorfenol dup 72 ore sunt degradate n proporie de 100 i respectiv 60% de ctre lacaza
bazidiomicetului Coriolus versicolor [94]. Erbicidul atrazin dup 5 i 40 zile a fost consumat n
proporie de 50 i respectiv 80-92% de ctre fungii putregaiului alb Cerrena maxima, Coriolopsis
fulvocenera i Coriolus hirsutus - productori activi al lacazei [156]. O capacitate excepional de
a degrada lignina o au fungii putregaiului alb aparinnd genului Pleurotus, condiiile de cultivare
i n special compoziia mediului de nutriie influennd mult modul de degradare a acesteia.
Activitatea complexului de enzime lignolitice pus n eviden la ciupercile Pleurotus este
utilizat n biotehnologia proceselor de convertire a materialelor celulozice n produse alimentare
i furajare, de biodegradare a poluanilor organici persisteni, xenobioticilor i a deeurilor
industriale [11, 18]. De ctre cercettorii japonezi au fost studiate aciunea i mecanismul
degradrii poluantului 2,2bis (4-hidroxilfenil) propan (bisfenol A) -larg folosit n chimie i
medicin. Pentru degradarea biologic a poluantului a fost folosit bazidiomicetul Pleurotus
ostreatus, care dup 12 zile de cultivare a metabolizat aproximativ 80%
bisfenol A [33].
Producerea industrial a ciupercilor este nsoit de acumularea sporit a substraturilor
reziduale fermentate - aproximativ 5kg la fiecare kilogram de ciuperci colectate. Substratul uzat
reprezint un produs agro-industrial rezidual, colonizat cu miceliul activ al ciupercii i mbogit
cu diveri metabolii secundari, printre care i ai enzimelor lignolitice - principalii ageni ai
biodegradrii hidrocarburilor aromatice poluante. Astfel, substratul celulozic uzat, dup recoltarea
carpoforilor, poate fi utilizat n calitate de produs ce contribuie la degradarea xenobioticilor i a
remedierii solului contaminat de diveri poluani organici persisteni. Dup 4 sptmni de
incubare a substratului uzat cu solul contaminat de pesticidul DDT, concentraia iniial a
xenobioticului persistent, sub influena ciupercii P. ostreatus, s-a micorat de la 573mg pn la
356mg DDT/kg sol. n acelai mod, cultura ciupercii Lentinus edodes a metabolizat
fenaclorfenolul, ceea ce a contribuit la remedierea cu 60% a solului contaminat [75].
Resursele mondiale silvice ocup aproximativ 30% din suprafaa uscat a pmntului. O
bun parte din ele sunt expluatate n industria lemnului ca sortimente inferioare sau deeuri, sub
form de achii, rumegu, fibre lemnoase etc. din care se obin plci aglomerate i fibro-lemnoase
ce se utilizeaz n construcie. Procesul tehnologic de fabricare a plcilor se desfoar la
 17
temperaturi nalte sub presiune i este precedat de aglomerarea materialelor lemnoase cu rini
fenol-formaldehidice sau ureo-formaldehidice cu proprieti adezive. Lianii sintetici au
proprietatea de a se descompune n timp n fenoli i formaldehide - compui foarte toxici pentru
om, astfel nct fabricarea plcilor ecologic pure fr utilizarea lianilor sintetici a ajuns s fie o
prerogativ a biotehnologiilor avansate. n tehnologia fabricrii plcilor lemnoase ecologic pure
se folosesc bazidiomicetele ce aparin genurilor Panus, Pleurotus, Coriolus. Ciuperca este
cultivat submers n fermentatoare mari (de volumul 0,1-1m 3) pn la realizarea nivelului maxim
de sintez a enzimelor lichidului cultural, dup care se trece la tratarea materialelor
lignocelulozice, procesul tehnologic n faza a doua desfurndu-se n condiii nesterile la
temperaturi obinuite [132, 173,
174, 179].
Din punct de vedere chimic lignoceluloza este alctuit din fibrile de celuloz incluse
ntr-o matrice de lignin i hemiceluloz. Ciupercile putregaiului alb sunt productori
caracteristici de fenoloxidaze extracelulare cu caracter oxidativ n care moleculele de oxigen sunt
folosite n dearomatizarea nucleului benzenic (demetilare, hidroxilare, oxidare a lanurilor laterale
etc.) i descompunerea produilor alifatici rezultai. Prin cuplarea acestora, radicalii formai
(fenolici, carboxilici etc.) pot suferi transformri, inclusiv i polimerizri, astfel nct n prezena
agentului termic i a presiunii exercitate asupra biocompozitelor polizaharidele i produii
degradrii ligninei sunt implicai n diverse reacii de polimerizare cu constituirea legturilor
suplimentare ntre fibrele lignocelulozice. Acest fapt duce la mbuntirea indicilor fizico-
mecanici i igienici ai biocompozitelor i exclude utilizarea lianilor sintetici costisitori i toxici
pentru sntatea omului. n scopul evidenierii corelrii ntre profunzimea biodegradrii ligninei
i indicilor fizico-mecanici a plcilor aglomerate a fost cercetat aciunea inoculumului Panus
tigrinus asupra rumeguului de lemn [173]. Timpul optim de expunere a fost de 5-6 zile. La
aceast etap degradarea ligninei este maxim, fapt ce duce la formarea unui numr mare de
grupe funcionale cu proprieti adezive. Transformrile ligninei i formarea unor noi produi la
biodegradarea ligninei majoreaz coerena ntre materialul folosit. n acest mod, elaborarea
biotehnologiei de fabricare a plcilor aglomerate prin intermediul bazidiomicetelor se refer la
una din cele mai avansate direcii n obinerea materialelor de construcie ecologic pure [132, 174,
179]. Importana acestui proces biotehnologic rezid i din utilizarea multipl a lichidului
 18
cultural, care poate fi completat cu obinerea enzimelor, biomasei alimentare i zaharurilor
fermentescibili, ceea ce se concretizeaz ntr-o realizare nu numai ecologic pur, ci i economic
rentabil.
n scopul obinerii proteinei alimentare i furajere a fost elaborat, prin intermediul
ciupercii Pleurotus ostreatus, tehnologia de prelucrare a deeurilor de foioase i conifere din
industria lemnului [183]. Introducerea acestei tehnologii la un ir de intreprinderi de expluatare i
industrializare a lemnului a artat un randament sporit al recoltei de carpofori - pn la 20-30%
fa de substratul nutritiv utilizat. Calitatea carpoforilor obinui corespunde n totalitate normelor
igienice i ecologice. Coninutul proteinei pentru rumeguul i cojile copacilor de conifere a fost
majorat de 4 i respectiv 7,5 ori. Valoarea unitilor furajere pentru cojile copacilor de conifere s-
a mrit de la 0,09 la 0,56.
Ciupercile unor specii ce aparin genurilor Pleurotus i Coriolus au demonstrat n faza
solid de fermentare o nalt activitate a enzimelor hidrolitice (celulaze, xilanaze, pectinaze) i a
oxidoreductazelor (peroxidaze, lacaze) [176]. Datorit complexului de enzime hidrolitice i
oxidoreductoare de o specifitate nalt fa de substrat n procesele de hidroliz i oxidare
-macromicetele studiate au majorat de 3-15 ori coninutul zahrului n substrat, degradarea
materialelor lignocelulozice constituind 30-42% pentru celuloz i 15,0-16,8% pentru lignin. A
fost stabilit o majorare a substanelor proteice cu un coninut nalt al lizinei, acidului glutamic,
fenilalaninei i treoninei, hidrailor de carbon fermentescibili, acizilor grai. Graie coninutului
mic al acizilor nucleici i lipsei substanelor toxice, substraturile fermentate pot fi folosite pe larg
la furajarea animalelor (bovine, porcine).
Substratul mpnzit cu miceliul de pstrv posed un miros plcut de ciuperci i poate fi
folosit ca supliment proteic valoros n calitate de nutre, eficacitatea maxim realizndu-se la
utilizarea acestuia n stare proaspt. n acelai timp, n cazul depozitrii sau transportrii
substratului fermentat, acesta necesit o pasteurizare cu abur la 60 0C timp de 1-2 zile [144].
Substituirea a 5-10% a raiei zilnice la porci, oi, viei i gini cu substratul fermentat i pasteurizat
(600C timp de 2 zile), dup recoltarea carpoforilor de pstrv, nu a exercitat vre-o influien
negativ asupra strii fiziologice a animalelor i psrilor [32]. Suplimentarea cu 200g de substrat
fermentat a raiei zilnice majoreaz greutatea vieilor de 25-50kg cu 10-17%, iar pentru vieii cu
greutatea de 200-220kg a fost stabilit raionalitatea substituirii acesteia cu 40%, ceea ce duce la o
 19
micorare a costului nutreului cu 23% [63, 107]. Substratul fermentat, dup recoltarea
carpoforilor Pleurotus, poate fi utilizat i n calitate de ngrmnt bioorganic valoros. Folosind
substratul fermentat n calitate de ngrmnt, savanii cehi [45] au obinut o majorare a recoltei
castraveilor de ser cu 29%.

Ciupercile bazidiale sunt privite nu numai din punctul de vedere al obinerii proteinei
furajere i alimentare, ci i ca material preios pentru obinerea substanelor biologic active i a
medicamentelor. Substanele biologic active ce se conin n aceste ciuperci nltur efectele
nocive ale elementelor radioactive din corpul uman, iar coninutul mare de protein previne i
vindec hepatita, ulcerul gastric, micoreaz procentul de colesterol i acioneaz ca
anticancerigen [61, 78, 96, 140, 154]. n acest scop sunt folosii carpoforii i miceliul vegetativ
cultivat pe substraturile solide sau lichide. Astfel, din miceliul ciupercilor Trichotecium roseum,
Pleurotus ostreatus i Lentinus edodes cultivat n faza solid de fermentare de ctre o grup de
cercettori [154] a fost preparat o form medicamentoas, numit micoenzimol". Preparatul
conine un complex de enzime hidrolitice, proteinaze cu efect fibrino-trombolitic, antibiotice de
un spectru larg de aciune, precum i vitamine din grupul B, acid ascorbic, vitamina A,
aminoacizi eseniali etc. Graie compoziiei sale preioase, preparatul medicamentos este
recomandat pentru folosirea lui local ca unguent n scopul tratrii arsurilor, ulcerului trofic,
exemelor, candidomicozelor etc.
Actualmente, ciupercile comestibile pot servi drept surse non-convenionale a unui ir de
remedii curative, profilactice i medicinale [15, 16]. Utilizarea n scopuri terapeutice a
carpoforilor i biomasei fungice cu un coninut sporit de microelemente este de perspectiv,
studiul potenialului terapeutic al ciupercii P. ostreatus fiind susinut de prezena n componena
acestuia a 44 de microelemente. Prin cultivarea ciupercilor n condiii controlate poate fi sporit i
coninutul de microelemente cu efect sanogen. Introducerea iodului, zincului i a manganului n
substratul celulozic supus fermentrii de ctre P. ostreatus a sporit de 14,4-16,0 ori fa de martor
nivelul microelementelor n ciuperci, capacitatea excepional de metabolizare a bioelementelor
prezentnd un interes sporit n elaborarea unor preparate bioactive fungice [89].
Printre polimerii eseniali, constitueni ai biomasei fungice chitina, polizaharidele i
pigmenii sunt cunoscui pentru aplicaiile lor n medicin. n prezent, componentele bioactive
 20
menionate anterior sunt utilizate la elaborarea preparatului Mycoton - un biopolimer complex
non-toxic obinut din peretele celular al bazidiomicetelor, care conine chitin -70%, P-1,3 i P-
1,6-glucane -20%, melanin -10%. Chitina manifest o capacitate unical de adsorbie a metalelor
grele (Pb, Hg, Bi, Cr, etc), elementelor radioactive (U, Pu, Am, Sr, etc), endotoxinelor; fr a
afecta, n acelai timp, metabolismul salin i de adsorbie a unor microelemente biogene (Na, K,
Ca, etc). Polizaharidele sunt cunoscute, n special, datorit efectelor antitumorale, antivirale i
imunostimulatoare. Melaninele protejeaz celula fungic de aciunea negativ a factorilor nocivi,
manifestnd prin aceasta o activitate antioxidant, antimutagen, antibacterial, foto- i
radioprotectoare [26, 27, 61, 78, 82].

Aplicarea unor factori fizici nepoluani de reglare a cilor metabolice ofer o posibilitate
de valorificare complex a potenialului biotehnologic pentru bazidiomicete. O aplicabilitate
practic din acest punct de vedere prezint iradierea obiectului biologic, proces fizic ce se explic
prin absorbia energiei fotonilor i inducerea unei stri de excitare a moleculei sistemului
biologic. n dependen de intensitatea i componena spectral a sursei de iradiere se poate
constata o stimulare sau o inhibare a unei din fazele de dezvoltare a ciupercii (creterea miceliului
vegetativ, fructificarea), schimbarea particularitilor fiziologo-biochimice (pigmentarea,
activitatea biochimic) etc. [147]. Ca urmare a iradierii cu raze UV i gama a ciupercilor
Agaricus bisporus i Pleurotus ostreatus, unii cercettori [139] au stabilit o aciune pozitiv
privind recolta carpoforilor. De asemenea, utilizarea sursei de iradiere lazer de diferite lungimi de
und, n special a luminii monocromatice roie i verde, a stimulat creterea miceliului vegetativ
la L. edodes, P. ostreatus i H. erinaceus pe diverse substraturi nutritive, a micorat esenial
timpul necesar fructificrii, recolta carpoforilor fiind majorat cu 36-60% [169, 170].
Studiile unui grup de cercettori [145] au vizat stabilirea modului de accelerare a creterii
miceliului P. ostreatus prin modificarea componenei mediului nutritiv cu ajutorul stimulatorilor
de cretere. Efectul biostimulatorilor de cretere, dup prerea cercettorilor, este condiionat de
nlturarea stresului de adaptare exprimat prin acomodarea efectiv a sistemului enzimatic al
fungilor la noile condiii i surse de nutriie. Astfel, preparatul de natur steroidal epin - n
concentraia de 2,5><10-7mg/ml - a majorat de 1,4-1,6 ori fa de martor creterea miceliului P.
ostreatus pe mediu agarizat i de 1,5-1,9 ori la cultivarea submers.
 21
Datorit ratei de descompunere limitat, macromoleculele de lignin sunt compuii
organici cei mai persisteni n biosfer. Eficiena cea mai mare n degradarea ligninei o au
ciupercile filamentoase din grupul bazidiomicetelor, i anume cele care produc putregaiul alb [20,
42]. Pn n prezent s-au emis numai scheme ipotetice asupra modului n care microorganismele
degradeaz lignina. n acelai timp, se tie, c biodegradarea ligninei este nsoit de implicarea
nemijlocit att a enzimelor lignolitice, ct i a radicalilor peroxizi ai lipidelor [119]. Degradarea
ligninei de ctre fungii putregaiului alb reprezint un proces al metabolismului secundar ca
rspuns la insuficiena surselor de azot i carbon din mediul de nutriie [150]. Deficitul azotului
pentru ciuperci duce la sintetizarea intens a enzimelor lignolitice i trecerea culturii n faza
staionar de cretere. Utilizarea surselor suplimentare de azot asigur ridicarea nivelului de
sintez a proteinelor cu metabolizarea preferenial a polizaharidelor (celuloz). n acelai timp,
are loc inhibarea degradrii ligninei, ceea ce duce la micorarea digerabilitii in vitro [151]. De
aceea, folosirea unor concentraii mari de compui ai azotului pentru obinerea produselor cu o
digerabilitate major nu este recomandat. Cercetrile n ceea ce privete majorarea coninutului
azotului total n substraturile fermentate de ctre bazidiomicete are ca obiectiv obinerea
produselor proteice furajere. Pentru a constata majorarea digerabilitii paielor de gru Hatakka,
ntr-un studiu experimental, a cultivat bazidiomicetul P. ostreatus [29, 30]. Dup 36 de zile
coninutul ligninei i celulozei n substratul fermentat a sczut cu 10-45% i respectiv 15-55%, iar
la a 90 zi de cultivare digerabilitatea produsului fermentat a constituit 50%. Digerabilitatea
paielor de gru dup 90-120 zile de cultivare cu P. ostreatus, P. ostreatus f. florida i P.
cornucopiae s-a majorat de la 40% la 50-59,8%, ceea ce corespunde indicilor digerabilitii
fnului de calitate superioar [49]. La cultivarea ciupercii P. ostreatus pe un substrat compus din
rumegu de lemn i tre de gru (9:1) coninutul azotului s-a majorat cu 22-32%, tulpina testat
utiliznd 31-33% celuloz i 21-26% lignin [128].
Formarea prin fotosintez a hidrailor de carbon ridic problema productivitii de
biomas -ca purttor de energie. Dac biomasa este recoltat ca purttor de energie, criteriul de
evaluare al culturii agricole nu mai este cantitatea de boabe, tuberculi, fibre etc. recoltat la
hectar, ci producia anual de biomas ca substan uscat [60]. Prelucrarea biomasei n condiii
de fermentare, n afar de biogaz, ne poate oferi produse alimentare de o nalt calitate: furaje
pentru nutriia animalelor i ngrminte bioorganice valoroase. Spre exemplu, pentru cultura
 22
ciupercilor Pleurotus substratul nutritiv poate fi pregtit din paie de gru, randamentul constituind
aproximativ 0,5kg ciuperci la 1kg paie uscate [56], ceea ce depete de 3-5 ori valoarea de pia
a produsului primar - grul [86]. n plus, substratul celulozic uzat poate fi folosit fie la furajarea
animalelor sau ca ngrmnt organic de calitate [98, 129, 151, 175].
Pentru a cerceta majorarea digerabilitii paielor de gru, cercettorii cehi i slovaci au
studiat perspectiva de cultivare a 13 bazidiomicete din grupul fungilor putregaiului alb (Pleurotus
ostreatus, Tramates giblosa, Lentinus tigrinus etc.).Cercetrile au relevat, c cea mai mare parte a
bazidiomicetelor studiate pot fi folosite la convertirea paielor de gru ntr-o hran mai calitativ
pentru rumegtoare [37]. La cultivarea bazidiomicetelor pe diverse substraturi vegetale se
formeaz un complex proteino-enzimatic ce conine pe lng proteine i zaharuri solubile. n
componena sa intr la fel i aminoacizi liberi, ceea ce ofer posibilitatea folosirii lui ca hran
pentru rumegtoare i psri [1].
Capacitatea de producie Pleurotus exprimat prin randament, respectiv prin cantitatea de
ciuperci rezultat la 100 kg material celulozic nsmnat reprezint 10-24%, respectiv 30-70%
fa de materialul celulozic uscat [57]. Randamentul maxim realizat n urma screeningului
tulpinilor i speciilor de Pleurotus (P. ostreatus, P. cornicopiae, P. pulmonarius, P. eryngii i P.
citrinopileatus) a fost gsit pentru P. ostreatus i P. pulmonarius - 16,4% fa de substratul
nutritiv nsmnat [181]. Cultivarea ciupercii Pleurotus sajor-caju pe paie de gru, orez, sorg,
soia i bumbac (cu adaos organic DaI") a permis obinerea unor randamente superioare,
rezultatele privind recolta fiind urmtoarele: paiele de gru - 650 g/kg, paiele de orez - 701 g/kg,
paiele de sorg - 475 g/kg, paiele de soia - 1019 g/kg, tulpinile i frunzele de bumbac - 1039 g/kg.
[64].
Realizarea unui ciclu tehnologic finisat, fr deeuri, impune cu necesitate i utilizarea
substratului uzat. Astfel, dup recoltarea carpoforilor de pstrv, substratul celulozic neconsumat
poate fi convertit cu ajutorul viermilor n biogumus, folosit n continuare n calitate de
ngrmnt la cultivarea plantelor agricole [55].
Pentru producerea prin intermediul ciupercii Pleurotus a proteinei furajere i alimentare
-cea mai de perspectiv materie vegetal n condiiile Republicii Moldova sunt paiele de
cerealiere. Anual, n RM se acumuleaz sute de mii tone de paie, dintre care numai o parte mic
sunt folosite n ramura agro-industrial, restul nu sunt deloc valorificate sau sunt arse. Paiele
 23
reprezint hrana cea mai ieftin i energetic pentru rumegtoare, astfel nct conform valorii
energetice aceasta din urm se apropie de cea a grului. n acelai timp, din cauza coninutului
mic al proteinei i mare al celulozei, valoarea nutritiv este mic. Digerabilitatea sczut a paielor
se datoreaz faptului, c n procesul de dezvoltare a plantelor hidraii de carbon i proteinele de
calitate nalt sunt transferate n gru, cele de o calitate mai joas meninndu-se n paie [111].
n Republica Moldova o mare atenie se acord i valorificrii prin intermediul
ciupercilor Pleurotus a resturilor vegetale obinute la curarea de primvar a viei de vie i
livezilor. La cultivarea ciupercii P. ostreatus pe resturile obinute de la curarea pomilor fructiferi
eficacitatea biologic a fost maxim - 42%, azotul total dup 10-12 zile de fermentare atingnd
valoarea de 0,63% fa de 0,40% pentru martor. Dup recoltarea carpoforilor, consumul celulozei
i ligninei pentru aceast cultur a atins cotele de 16,2% i respectiv 12,7% [142].
Aspectul metodologic al direciei de cercetare privind cultivarea n faza lichid la
bazidiomicete a fost iniiat prin anii 50 ai secolului trecut. Cultivarea submers a bazidiomicetelor
ofer posibiliti majore de intensificare a tuturor proceselor biotehnologice, permite ameliorarea
unor aa indici biochimici, ca coninutul de proteine, aminoacizi, lipide i a altor componente ale
miceliului ciupercii. Sub acest aspect exist opinii, care susin, c n viitorul apropiat tehnologia
clasic de cultivare a ciupercilor n faza solid de fermentare va fi nlocuit cu cultivarea
submers [184]. n acelai timp, studiul indicilor tehnico-economici la valorificarea deeurilor
celulozice n fazele lichid i solid de cultivare a fungilor a stabilit superioritatea procesului
tehnologic n faza solid de fermentare, sinecostul produsului proteic obinut fiind de 1,5-3,0 ori
mai mic [105]. Viesturs V. i col. [95] au alt opinie: fermentarea n faza solid nu realizeaz
avantaje eseniale fa de cultivarea submers.
 24

Sinecostul biomasei proteice la cultivarea bazidiomicetelor este relativ nalt - de 2-10 ori
fa de cel al drojdiilor, ceea ce denot faptul c n timpul apropiat ciupercile, dup prerea unor
cercettori [151], nu vor concura cu drojdiile la producerea proteinei furajere. n acelai timp, din
cauza coninutului nalt al acizilor nucleici numai pn la 10% din raionul proteic poate fi
nlocuit cu biomasa drojdiilor sau bacteriilor. Proteinele ciupercilor bazidiale, ns, pot fi folosite
n alimentare n cantiti mari, pn la substituirea total a proteinelor animaliere [162].
Sporirea eficienei economice a proceselor biotehnologice de cultivare a bazidiomicetelor
comestibile poate fi realizat prin includerea, ca pri componente, a dou domenii: obinerii, pe
de o parte a produsului finit, respectiv a proteinei alimentare, furajere i a substanelor bioactive,
i, pe de alt parte - a utilizrii complete a reziduurilor agro-industriale ce polueaz mediul
nconjurtor. Importana acestor procese biotehnologice este confirmat i susinut de
multitudinea cercetrilor tiinifice privind cultivarea n fazele lichid i solid de fermentare a
ciupercilor bazidiale, capacitatea redutabil de convertire a reziduurilor vegetale n produse
valoroase de sintez prezentnd o realizare nu numai economic rentabil, ci i ecologic pur.
 25

CAPITOLUL II MATERIAL I
METODE DE CERCETARE

2.1 Obiectul de studiu. Ca obiect de studiu au fost utilizate 12 tulpini de P.

ostreatus
(P. ostreatus M1, M2, M3, M4, M5, M6, M7, H-7, M8, M9, 1010, M11) depozitate n colecia
Institutului de Microbiologie al A..M., trei din ele (P. ostreatus M1, M4 i 1010) fiind selectate i
propuse spre cercetare n posibilitatea de aplicare ale acestora n diverse practici biotehnologice.
n
continuare, tulpinile P. ostreatus M1, M4 i 1010 au fost depozitate n Colecia Naional de
Microorganisme Nepatogene, numerele de nregistrare atribuite fiind: P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i respectiv CNMN-FB-04.
Fructificarea bazidiomicetelor reprezint cel mai sigur procedeu de identificare la nivel de
specie [127, 134], astfel nct apartenena tulpinilor la specia Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.)
Kummer a fost determinat conform caracterelor morfologice a carpoforilor ciupercii n perioada
maturizrii acestora.

2.2 Metode de cercetare. Tehnicile de investigare i metodele utilizate sunt

acceptate

de toi cei care lucreaz cu culturi pure nepatogene, inclusiv i cu ciuperci bazidiale.

2.2.1 Izolarea i pstrarea culturii pure. Prepararea materialului semincer. Conform

metodei propuse de autori [126, 127], tulpinile P. ostreatus au fost izolate n cultur pur din
carpoforii ciupercii pe mediul agarizat cu mal de bere 60Balling la 2710C. Caracterele morfo-
culturale ale ciupercii P. ostreatus au fost meninute prin rensmnarea periodic la fiecare 6-8
luni pe medii agarizate proaspete, pstrarea ei fiind asigurat la temperatura de 410C. Materialul
semincer a fost preparat n baz de suport granulat (gru) n flacoane de sticl (1l) conform
metodei
 26
[127]. n calitate de inoculum pentru miceliul de nsmnare granulat a servit cultura ciupercii P.
ostreatus crescut n eprubet (20 cm3) cu mal de bere 60Balling agarizat, iar n calitate de
inoculum pentru cultivarea submers - miceliul ciupercii P. ostreatus obinut n faza lichid de
cultivare pe mediile nutritive Czapek i mal de bere. n scopul majorrii punctelor de cretere i
intensificrii proceselor metabolice la cultivarea submers a ciupercii P. ostreatus, inoculumul a
fost preventiv omogenizat cu dispozitivul MPW-302 (Polonia) i introdus n mediul de nutriie n
cantitate de 10%V.

2.2.2 Studierea caracterelor morfo-culturale. La selectarea tulpinilor P. ostreatus n faza

solid de fermentare s-a estimat coeficientul de cretere pe medii agarizate [77]. n calitate de
mediu nutritiv standard a fost folosit mediul agarizat cu mal de bere 6 0Balling, cercetrile fiind
efectuate pe cutiile Petri a cte 5 repetri fiecare la temperaturile de 22 0 i 280C. La a 3-ea i a 6-
ea zi de cultivare s-a msurat diametrul i nlimea coloniilor (mm), iar densitatea s-a apreciat
conform gradaiei: 1-rar, 2-medie, 3- dens. Estimarea coeficientului de cretere (CC) s-a
efectuat conform formulei [134]: CC=dhg/t, unde d-diametrul coloniei (mm), h-nlimea
coloniei (mm), g-densitatea (1, 2, 3) i t-vrsta coloniei (zile).
Caracterele morfo-culturale ale tulpinilor P. ostreatus selectate (P. ostreatus CNMN-FB-
02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04) au fost studiate pentru temperaturile de 4 0, 70, 200, 250, 300 i
380C [112, 127, 149]. Estimarea creterii liniare i a coeficientului de cretere pentru
temperaturile optime de cultivare (200, 250 i 300C) s-au efectuat ncepnd cu ziua a treia pn la
mpnzirea total a cutiei Petri, iar pentru temperaturile limite de cretere (4 0, 70 i 380C) - pn la
26 zile de cultivare.
Exigenele de nutriie pentru tulpinile P. ostreatus testate au fost stabilite n fazele solid
i lichid de cultivare ale acestora. Tulpinile P. ostreatus selectate au fost cultivate pe mediul
nutritiv Czapek cu nlocuirea surselor de azot sau carbon testate. n calitate de inoculum la
cultivarea solid a servit miceliul culturii de 5 zile crescut pe mediul agarizat cu mal de bere
60Balling, fiecare cutie Petri experimental fiind nsmnat cu cte-un disc de miceliu (0=7mm)
i incubat la temperatura de 271 0C. La a 3-ea i a 6-ea zi de cultivare au fost studiate
caracterele morfo -culturale. Sursele de carbon din mediul sintetic Czapek s-au prezentat sub
 27
form de monozaharide (glucoza, galactoza xiloza, arabinoza), dizaharide (maltoza, zaharoza,
lactoza), polizaharid (amidon) i alcool (manit). Sursele anorganice ale azotului s-au prezentat
sub forma srurilor de amoniu (NH4NO3, (NH4)3PO4, (NH4)2SO4) i nitrailor (NaNO3, NH4NO3), iar
cele ale azotului organic - sub forma aminoacizilor (asparagina, acidul aspartic). Sursele de
carbon i azot menionate mai sus au fost testate i la cultivarea submers a tulpinilor P. ostreatus
CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04. Tulpinile P. ostreatus selectate au fost cultivate
pe mediul nutritiv Czapek cu nlocuirea surselor de azot sau carbon testate, intensitatea de
cretere i caracterele morfo-culturale fiind caracterizate dup 240 ore de fermentare.
Pentru efectuarea studiilor privind caracterele morfo-culturale ale carpoforilor P.
ostreatus cultivai pe diverse substraturi celulozice au fost msurate lungimea picioruelor,
diametrul plriilor, greutatea carpoforilor, calculat recolta i periodicitatea valurilor de recolt.

2.2.3 Determinarea compoziiei biochimice. Biomasa, carpoforii i probele de substrat

au fost uscate i mrunite la moara electric de laborator, trecute printr-o sit cu diametrul de
1mm i plasate n sticlue cu capace, pstrarea lor fiind asigurat la rcoare i ntuneric pn la
efectuarea
analizelor biochimice. Compoziia biochimic a substraturilor celulozice fermentate a fost
determinat n fazele mpnzirii complete (12 zile) i fructificrii (dup 2-3 valuri de recolt -90
zile). Pentru determinarea n dinamic a compoziiei biochimice a substraturilor i carpoforilor au
fost propuse metodele cunoscute n biochimie [112, 126, 146, 165].
Azotul total i proteina brut. Metoda se bazeaz pe arderea i mineralizarea probelor cu
acid sulfuric concentrat n prezena catalizatorului (metoda Kielhdal) [112]. Dup ardere, n
soluiile
probelor testate se adaug reactivul Nessler i se colorimetreaz la lungimea undei 400nm,
densitatea optic a probelor fiind stabilit fa de curba de calibrare a soluiilor standardizate cu
NH4+. Azotul total (%) se determin conform formulei:
mT a xd
x 100
N =--------------,
unde
p
 28
a - cantitatea azotului total obinut dup colorimetrare, mg; d - diluia; p - masa
probei, mg.
Cantitatea de protein brut a fost calculat n baza coeficientului 6,25.
Carbonul (%) a fost determinat conform metodei Nikitin [165]. Metoda se bazeaz pe
oxidarea substanelor organice cu amestecul de H 2SO4 concentrat i a bicromatului de potasiu
(K2C2O7) la 1500C. Soluiile cu carbon se rcesc, se colorimetreaz la lungimea de und 590 nm,
densitatea optic a probelor fiind stabilit fa de curba de calibrare a soluiilor standardizate cu
glucoz.

Calculul cantitii de carbon (%) s-a realizat n

baza relaiei: C(%) =-^^, unde

P
F - densitatea optic a probei; K - ctg unghiului de nclinare a curbei de calibrare fa de
coordonata abscisei; P - masa probei, g.
Celuloza brut a fost determinat prin metoda Kursner-Ganek [146]. Metoda se bazeaz
pe oxidarea, dizolvarea i solubilizarea diverilor compui chimici, n afar de celuloz, prin
folosirea amestecului (1:10) de HNO3 concentrat i acid acetic (80%). Dup hidroliz proba a fost
splat n ap distilat, alcool etilic i eter, uscat la 105 0C i cntrit.
Coninutul celulozei brute (%) se determin conform formulei:
X=(A1-A)x100/P, unde
A-masa uscat a filtrului; A1-masa uscat a filtrului i precipitatului; P-masa probei,
(1g0,0002g).
Lignina brut a fost determinat prin cntrirea probelor rezultate din hidroliza celulozei
i hemicelulozei cu soluia de acid sulfuric (72%) conform metodei Klasson [146].

Componena calitativ i cantitativ a aminoacizilor a fost determinat prin metoda

hidrolizei acide urmat de identificarea acestora la analizatorul AAA-339 MnicpoTexHa".
Hidrolazele. Activitatea endopolimerazelor (celulaza, amilaza, proteaza) a fost determinat
conform aciunii filtratului de cultur asupra substratelor corespunztoare (CMC-Na-1%, amidon
solubil - 1%, jelatin - 1%) - prin metoda vscozimetric [126]. Activitatea celulazic a fost
determinat colorimetric prin dozarea zaharurilor reductoare formate n urma aciunii enzimelor
 29
asupra soluiei de 1% a carboximetilcelulozei de sodiu (CMC-Na) timp de 30 minute la
temperatura 500C i asupra hrtiei de filtru timp de 60 minute la temperatura de 50 0C [84].
Reacia enzimatic se stopeaz prin fierbere la baia de ap timp de 10 minute, activitatea
enzimatic aflndu-se prin diferena dintre cantitatea de zahr reductor rezultat n condiii
standard de activitate. Ca unitate de activitate enzimatic s-a considerat acea cantitate de enzim,
care n condiii specifice dup 30 de minute i respectiv 1 or de aciune asupra filtratului
formeaz 1mg de glucoz.
Activitatea amilazic a fost determinat la valoarea PH-ului 4,7 prin metoda colorimetric
cu
iod [159].

Activitatea lipolitic s-a determinat prin metoda titrimetric n zilele a 7-ea i a 14-ea,
utiliznd n calitate de substrat emulsia de 40% ulei de msline n alcool polivinilic de 2% [159].

Substana absolut uscat a fost determinat prin uscarea probei la 105 0C pn la o mas
constant i cntrirea ei la cntarul analitic [146]. Toi parametrii biochimici au fost raportai la
substana absolut uscat.

2.2.4 Mediile de nutriie. Pentru efectuarea studiilor privind cultivarea intensiv a

tulpinilor P. ostreatus n faza solid de fermentare au fost folosite substraturile nutritive n
urmtoarele proporii:
1. paie (100%) - (PG),
2. paie + rumegu de lemn (2/3+1/3) - (PGL),
3. paie + coji de floarea-soarelui (2/3+1/3) - (PGFS),
4. paie + coceni de porumb (2/3+1/3) - (PGC).
Prelucrarea termic a substraturilor celulozice a fost realizat conform tehnologiei
hidrotermice, pentru care s-au aplicat dou procedee de preparare ale acestora: fermentarea
substraturilor celulozice la temperatura de 500-550C timp de 32 ore i prelucrarea termic la 950C
timp de 1 or [157]. Umiditatea substraturilor nutritive dup pasteurizare a prezentat valori
cuprinse ntre 70-76%, iar pentru inoculare a fost folosit miceliu crescut pe suport de gru n
cantitate de 3,84,8% fa de substratul celulozic umed.
 30
Substratul nsmnat (4-8kg) a fost introdus n saci de polietilen neperforai de
dimensiunile 50x70 i 30x50cm. Sacii cu substratul celulozic nsmnat au fost tasai i plasai n
camera de incubare n condiii de obscuritate la temperatura de 26 020C, unde au fost inui pn
la mpnzirea lor deplin. Dup mpnzirea complet a substraturilor nutritive sacii au fost scoi
i trecui n camera de fructificare, unde s-au meninut parametrii necesari fructificrii ciupercii P.
ostreatus: temperatura 70-170C, umiditatea 75-95%, iluminarea 50-200 luci/or i aeraia 6-8
schimburi/or.
Screeningul tulpinilor P. ostreatus privind acumularea biomasei la cultivarea submers a
fost efectuat folosind mediul nutritiv complex n baz de fin de soia (0,5%) i fin de porumb
(2%) [149]. Diversitatea i activitatea enzimelor hidrolitice a fost realizat n dou variante: a)
fin de soia (0,5%) + fin de porumb (2%) i b) fin de soia (0,5%) + coji de floarea-soarelui
(2%). Cultivarea submers a pstrvului de fag s-a desfurat n baloane Erlenmeyer cu cte
150ml mediu nutritiv fiecare la temperatura de 27 010C. Aerarea a fost realizat printr-o agitare
pe un dispozitiv rotativ cu 180 r.p.m. timp de 10 zile. Pentru a stabili posibilitatea de valorificare
a biomasei miceliene n alimentaie a fost utilizat mediul de nutriie n baza malului de bere
60Balling.

2.2.5 Productivitatea. Recolta carpoforilor a fost calculat conform: a) raportului

procentual ntre masa carpoforilor proaspei i masa substratului umed; b) eficacitii biologice
(EB,%). Calcularea eficacitii biologice (EB, %) permite o caracterizare mai exact a
productorului i se determin prin formula [71]:
EB=(m/m1)x100, unde m - masa carpoforilor proaspei, g.; m1 - masa substratului uscat, g.
Relaia de mai sus exclude unele erori legate de diferenele ntre umiditatea substraturilor
nutritive.
Deoarece umiditatea carpoforilor variaz n limite destul de largi, masa lor a fost
recalculat conform formulei [148]: A=BC/D, unde A - masa carpoforior dup recalculare; B -
masa carpoforilor din eantionul de prob; C - coninutul substanelor uscate la 100g ciuperci din
eantionul de prob; D=0,1 - cantitatea substanelor uscate ce se conine n carpoforii cultivai n
 31
condiii optimale (10%). Includerea masei carpoforilor recalculai n formula EB exclude erorile
legate de diferenele ntre umiditatea carpoforilor colectai.
Biomasa tulpinilor P. ostreatus testate a fost separat de lichidul de cultur prin filtrare pe
hrtia de filtru, uscat la 1050C pn la o mas constant i cntrit la cntarul analitic [146].

2.2.6 Valoarea nutritiv a carpoforilor i miceliului P. ostreatus a fost estimat prin

calcularea indicilor aminoacizilor eseniali (EAA) i nutritiv - conform metodelor propuse de
autori [14, 62]. Calculul a fost realizat n baza relaiilor:
Suma de aminoacizi esentiali in produsul examinat
Indicele EAA
 32

Suma de aminoacizi esentiali in albumina oului de gaina (FAO)

Indicele nutritiv = Indicele EAA x coninutul de proteina, %

100 '
 33

2.2.7 Consumul de celuloz (C) i lignin (L) s-au calculat conform formulelor [113]:
C(%)=100-K(100-D)/Ko L(%)=100-K(100.D)/Ko, unde
D-consumul substratului nutritiv, %;
K i K0 - coninutul procentual de celuloz sau lignin pentru varianta martor i respectiv pentru variantele
rezultate n urma cultivrii ciupercii pe diverse substraturi nutritive.
Raportul cantitativ de asimilare a celulozei i ligninei a fost caracterizat prin indicele xilolizei:
Ic=C/C+L, unde C i L reprezint consumul celulozei i ligninei, % [178].
Pentru fiecare variant de mediu, la sfritul fermentaiei, s-a calculat coeficientul de utilizare a
substratului: k=Y/Mc, unde Y - masa uscat a carpoforilor colectai (kg) i Mc -consumul masei uscate a
substratului nutritiv (kg) [163].

2.2.8 Activitatea fiziologic a extractelor P. ostreatus. La finisarea ciclului tehnologic

substraturile uzate au servit drept surse de substane bioactive. Extractele P. ostreatus au fost obinute prin
diluarea substraturilor nutritive uzate cu ap n raport de 0,1 i 1% timp de 1 or. Aciunea extractelor P.
ostreatus asupra capacitii de germinare i cretere a seminelor de gru a fost testat pe soiul Seleanka". n
calitate de martor au servit seminele tratate cu ap distilat, cercetrile fiind ndeplinite a cte 3 repetri
fiecare conform metodei [137]. Capacitatea de ncolire a seminelor a fost apreciat conform energiei
germinative, care exprim numrul de semine germinate n decursul a trei zile.

2.2.9 Analiza statistic. Comparaia n perechi a variantelor din test cu varianta martor i
diferenele semnificative au fost apreciate prin metoda statistic cu utilizarea t-criteriului Student. Datele
experimentale au fost supuse prelucrrii statistice i analizei de corelaie n baza programului computerizat
Microsoft Excel.

CAPITOLUL III
SELECTAREA TULPINILOR DE PLEUROTUS OSTREATUS N FAZELE LICHID I SOLID
DE CULTIVARE

Studiul comparativ a mai multor tulpini de Pleurotus ostreatus cu referin la exigenele de nutriie,
acumularea biomasei, activitatea biosintetic, precum i alte particulariti biologice caracteristice
organismelor vii, este un factor ce determin eficiena procesului selectiv. Aprecierea potenialului biologic
din punct de vedere al perspectivei biotehnologice este determinat, n primul rnd de rata creterii miceliului
ciupercii n fazele lichid i solid. Fstimarea coeficientului de cretere [77], mrimea cruia se determin
prin calcularea diametrului, densitii, nlimii i vrstei coloniei caracterizeaz cel mai bine dinamicul i
particularitile creterii ciupercii pe medii agarizate. Dei, o atare evaluare nu poate fi comparat n mod
obiectiv cu cele cultivate pe medii lichide, unde se calculeaz biomasa acumulat pe unitate de timp, totui,
pentru etapa iniial de selectare este suficient pentru a caracteriza gradul de cretere al tulpinilor studiate.
Scopul cercetrilor pentru Capitolul III este screening-ul celor mai productive tulpini Pleurotus
ostreatus ce evideniaz aa activiti metabolice, ca acumularea biomasei i biosinteza enzimelor hidrolitice
la cultivarea submers, viteza de cretere pe medii nutritive agarizate, recolta de carpofori - n posibilitatea
utilizrii tulpinilor selectate n diverse procese biotehnologice.

3.1 Obinerea biomasei i activitatea hidrolitic la cultivarea submers a

 34

ciupercii Pleurotus ostreatus

Cercetarea capacitii de cretere intensiv a miceliului P. ostreatus cultivat submers n faza lichid
este necesar pentru evidenierea celor mai productive tulpini n scopul elaborrii unui proces economic
rentabil de obinere a biomasei i a substanelor bioactive.
Pentru investigri au fost folosite 12 tulpini de pstrv: P. ostreatus M1, M2, M3, M4, M5, M6, M7, H-
7, M8, M9, 1010 i M11. Cultivarea submers a tulpinilor P. ostreatus n scopul obinerii biomasei a fost
efectuat pe mediul nutritiv complex, utiliznd ca surse organice de azot i carbon fin de soia (0,5%) i
fin de porumb (2%) [149]. Creterea pstrvului de fag s-a desfurat n baloane Erlenmeyer de 750 ml cu
cte 150 ml mediu nutritiv fiecare la temperatura de 271 0C. Aerarea a fost realizat n condiii de agitare
continu pe un dispozitiv rotativ cu 180 r.p.m. timp de 10 zile. Biomasa tilpinilor P. ostreatus s-a separat de
lichidul de cultur prin filtrare pe hrtia de filtru, filtratul mediului de cultur servind drept surs de enzime
hidrolitice extracelulare.

Potrivit unor studii [83], la cultivarea submers a ciupercilor comestibile n scopul obinerii biomasei
alimentare, productivitatea acestora nu trebuie s cuprind valori sub lg/l/zi sau s acumuleze mai puin de
10g/l BAU n etapa iniial de selectare. n urma studiului efectuat s-a stabilit, c tulpinile P. ostreatus testate
corespund cerinelor naintate de autori [83], valorile acumulrii biomasei la cultivarea submers a tulpinilor
P. ostreatus testate fiind cuprinse ntre 1013 g/l BAU (Fig. 1). Cele mai productive tulpini de pstrv s-au
dovedit a fi P. ostreatus M1 cu 13g/l BAU i P. ostreatus M2 cu 12,4 g/l BAU.

M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 H7 M8 M9 1010 M11
Tulpinile P. ostreatus

Figura 1. Acumularea biomasei la cultivarea submers a tulpinilor P. ostreatus testate (g/l BAU)

Metabolismul organismelor vii se realizeaz prin intermediul enzimelor care particip la degradarea
diverilor polimeri de origine organic, asigurnd prin aceasta energia necesar pentru biosinteze, cretere,
multiplicare etc. n majoritatea lor aceti compui organici se prezint ca nite biopolimeri vegetali care
trebuie descompui pn la monomeri, astfel pentru aceasta e necesar ca organismul heterotrof s secrete n
mediu enzime extracelulare de o specificitate nalt fa de substratul de nutriie n procesele de hidroliz i
oxidare. Hidrolazele sunt enzime ce catalizeaz degradarea biologic a substratului de nutriie i se prezint
la ciuperci, n majoritatea lor, ca enzime extracelulare. Deosebim enzime constitutive ce se formeaz de la
nceputul ontogenezei i inductive, care apar n dependen de condiiile mediului nconjurtor [122]. n
cazul enzimelor hidrolitice inductive pentru biosinteza celulazelor este necesar includerea unor compui cu
pi-4 legturi (celuloz), de aceea, n mediul de nutriie, am utilizat n calitate de inductor - coji de floarea-
soarelui, substrat bogat n celuloz. Diversitatea i activitatea biosintetic ale enzimelor hidrolitice au fost
testate pe dou medii nutritive: I) fin de soia (0,5%) + coji de floarea soarelui (2%) i II) fin de soia
(0,5%) + fin de porumb (2%) [149], (Tab. 1).
 35

Tabelul 1
Biosinteza enzimelor hidrolitice la cultivarea submers a ciupercii Pleurotus ostreatus pe
mediile cu coji de floarea-soarelui (I) i fin de porumb (II)

Astfel, caracterul inductiv s-a manifestat pe deplin la tulpinile P. ostreatus M4 i M6, la care sinteza
celulazelor a avut loc numai pe mediul cu coji de floarea-soarelui.
Cu toate acestea, unele tulpini ale speciei P. ostreatus (P. ostreatus M3, M7, H7, M9) au manifestat o
nalt activitate celulazic i pe substratul ce nu coninea coji de floarea-soarelui n calitate de inductor, ceea
ce denot prezena caracterului constitutiv de sintez al hidrolazelor. Manifestarea ambelor caractere:
inductiv i constitutiv - sunt specifice tulpinilor P. ostreatus M1, M2 i M5. Activitatea de zaharificare a
acestor tulpini n prezena inductorului (coji de floarea-soarelui) este aproximativ de 1,8-2,6 ori mai mare
fa de mediul cu fin de porumb.
Tulpinile studiate sunt i amilolitic active. Amilazele sunt considerate n majoritatea cazurilor ca
enzime constitutive, complexitatea acestora n ontogenez schimbndu-se att calitativ, ct i cantitativ i
depinde de vrsta culturii [122]. Activitatea amilazic de zaharificare pe mediul cu coji de floarea-soarelui
pentru tulpinile P. ostreatus M5 i M8 a fost de 2,0 - 2,5 ori mai mare dect pe mediul cu fina de porumb.
Cele mai active tulpini din punct de vedere al sintezei proteazei s-au dovedit a fi P. ostreatus M1, M3,
M4, M8 i 1010, dar numai tulpina P. ostreatus 1010 a manifestat o nalt activitate proteazic pentru ambele
medii de cultivare.
Analiza succint a rezultatelor obinute n vederea trierii tulpinilor P. ostreatus ce corespund unui
randament maxim al acumulrii de biomas i al sintezei de enzime hidrolitice la cultivarea submers a
permis selectarea a cinci tulpini de pstrv: P. ostreatus M1, M2, M5, M8 i 1010. La aceast etap a
procesului selectiv au fost evideniate i alese cu preponderen acele tulpini P. ostreatus, care au avut o
nalt activitate hidrolitic pentru ambele medii de cultivare, ceea ce din punct de vedere al diversificrii
mediilor nutritive poate fi avantajos. Tulpinile P. ostreatus M1 i M2 din punct de vedere al sintezei celulazei
lichefiante (85-92%) i a celei de zaharificare (0,7-1,6 U/ml) pentru mediile nutritive cu coji de floarea-
 36

soarelui i fin de porumb sunt cele mai active. Indicii acumulrii biomasei cultivate submers pentru aceste
tulpini (P. ostreatus M2 i M1) au nregistrat valori maxime - 12,4 i respectiv 13,0g/l BAU. Cele mai active
tulpini privind nivelul activitii amilazice de zaharificare au fost P. ostreatus M5 i M8: 3,7-3,8 U/ml pentru
mediul cu fin de porumb i 7,5-9,5 U/ml pentru mediul cu coji de floarea-soarelui. Activitatea amilazic
lichefiant la aceste tulpini (P. ostreatus M5 i M8) a constituit 72-85%. O nalt activitate proteazic n cazul
ambelor medii de cultivare s-a nregistrat la tulpina P. ostreatus 1010, proteaza lichefiant avnd valori
cuprinse ntre 84-87%.
Rezultatele obinute in s confirme i unele date bibliografice de specialitate [115, 116, 127, 134]
privind perspectiva cultivrii submerse a ciupercii P. ostreatus n scopul obinerii biomasei miceliene i a
substanelor bioactive.

3.2 Estimarea coeficientului de cretere a ciupercii P. ostreatus pe medii nutritive

agarizate la temperaturi diferite
n studiul caracterelor morfo-culturale ale diferitelor grupe sistematice, inclusiv i a bazidiomicetelor,
viteza de cretere pe medii agarizate adesea se estimeaz prin calcularea diametrului coloniei [134]. Totui,
coloniile cu acelai diametru nu sunt identice. Avnd un mediu nutritiv favorabil cultura formeaz o colonie
mai dens i mai nalt, iar pe un mediu nefavorabil cultura crete repede pe toat suprafaa agarului, dar cu o
densitate i o nlime redus. De aceea, la aceiai cretere liniar, coloniile se deosebesc prin densitate i
nlime, ceea ce caracterizeaz biomasa acumulat la unitate de suprafa.

Folosind modelarea matematic , s-au ntreprins ncercri de estimare mai exact a vitezei de cretere
pe medii agarizate [65, 69]. n studierea caracterelor morfo-culturale la ciuperci se estimeaz coeficientului
de cretere (CC) [77], care pe lng diametrul coloniei ia n consideraie att densitatea, ct i nlimea ei.
Densitatea se determin reieind din lungimea sumar a hifei principale i ramificaiilor de orice ordin pe o
unitate de suprafa, iar nlimea coloniei se msoar de la suprafaa mediului agarizat (mm).
Pentru o caracterizare mai complet a capacitii de cretere a tulpinilor de P. ostreatus cultivate pe
mediul standard cu mal de bere s-au ales dou regimuri de temperatur: 22 oC i 28oC. n tabel sunt
prezentate rezultatele obinute la estimarea CC pentru 12 tulpini de Pleurotus ostreatus (Tab.2).
 37

Estimarea coeficientului de cretere (CC) la cultivarea ciupercii Pleurotus ostreatus pe medii

* CC = dhg/t, unde
d - diametrul coloniei, mm; h - nlimea coloniei, mm; t- timpul cultivrii, zile; g - densitatea coloniei (dup sistemul: 1-rar, 2-medie, 3-dens).

Tabelul 2

Comparnd CC al coloniilor P. ostreatus crescute pe mediile agarizate cu mal de bere, constatm o

diversitate n ceea ce privete atitudinea unor tulpini la factorul temperatur. Astfel, valorile CC pentru unele
tulpini de P. ostreatus cultivate la temperatura de 22oC s-au dovedit a fi mai mari dect fa de cele cultivate
la 28oC, fapt ce se datoreaz nlimii (h) majore a hifelor ciupercii. Pentru tulpinile P. ostreatus M1, M4, M6
i 1010 cultivate la temperatura de 22oC, CC la a 3-ea i a 6-ea zi au avut valori cuprinse ntre 128,3-141,6 i
respectiv 160,6-186,3 uniti convenionale (u.c.). n acelai timp, conform literaturii de specialitate i a
observrilor proprii, temperatura de 26o-28oC este optimal creterii i dezvoltrii miceliului pstrvului de
fag. Aceasta corespunde cu datele din tabel la msurarea diametrului i densitii coloniilor, care s-au dovedit
a fi mai mari dect fa de cele cultivate la temperatura de 22 oC. Cu un CC de 147,1-175,5 u.c. n ziua a 3-ea
i 170,9-218,9 u.c. n ziua a 6-ea, temperatura de 28 oC a fost cea mai eficient creterii tulpinilor P. ostreatus
1010, M5, M11 i M1. E de menionat faptul, c tulpina P. ostreatus M1 n ziua a 3-ea nu a manifestat o
cretere notabil, totui, pe parcursul cultivrii aceasta a dat dovad de un potenial ridicat, valorificndu-se
printr-un CC de 173,2 uniti convenionale la ziua a 6-ea.
Astfel, n rezultatul estimrii coeficientului de cretere la temperaturi diferite, au fost selectate 6 tulpini
de pstrv: P. ostreatus M1, M4, M5, M6, 1010 i M11. Aceste tulpini posed o cretere sporit (CC=160,6-
218,9) pe mediul agarizat cu mal de bere i vor fi utilizate n etapa urmtoare de selectare - pentru obinerea
carpoforilor.

3.3 Recolta carpoforilor la cultivarea n faza solid de fermentare

 38

a ciupercii P. ostreatus
Cultivarea n vederea obinerii recoltei de carpofori reprezint o etap important n procesul selectrii
tulpinilor de perspectiv. Rezultatele unor cercetri [73,129] indic o corelare pozitiv ntre activitatea
metabolic a miceliului i recolta de carpofori. Reieind din cele expuse i conducndu-ne de datele
experimentale ce evideniaz activiti metabolice, precum nivelul acumulrii biomasei cultivate submers,
capacitatea de cretere pe medii agarizate la temperaturi diferite, biosinteza unor enzime hidrolitice (celulaza,
amilaza, proteaza) - am ales 7 tulpini, i anume P. ostreatus M1, M2, M4, M5, M6, 1010 i M11. Aceste
tulpini au fost cultivate n continuare pe paie de gru (100%) - substratul tradiional la creterea pstrvului
de fag [48, 102].
Calitatea substratului celulozic la nsmnare este determinat de selectivitatea acestuia i se prezint
ca o nsuire a materialului nutritiv pentru care sunt create condiiile optime necesare unei colonizri rapide
i eficiente de ctre cultura ciupercii. Crearea selectivitii se realizeaz prin dezinfectarea termic a
substratului nutritiv care urmrete scopul eliminrii din masa acestuia a competitorilor i duntorilor
animali i vegetali. Aceasta permite obinerea unei recolte nalte i stabile pe tot parcursul ciclului
tehnologic, contribuind la degradarea hidrolitic a substratului i la utilizarea materiei vegetale ca surse de
energie i sinteze. Prelucrarea termic a substratului a fost realizat conform tehnologiei hidrotermice - cea
mai rspndit metod de pasteurizare folosit de ctre cultivatorii de ciuperci [157].
Pentru pasteurizare s-a dispus de un vas cu volumul de lucru - 4m 3 i o capacitate de ncrcare a
materialului celulozic - 10 baloturi de paie cu greutatea de 9-11 kg fiecare. Umezirea baloturilor de paie s-a
efectuat direct n vasul de fermentare i reprezint o etap foarte important, fapt ce are ca scop asigurarea
unei rezerve de umiditate pe tot parcursul cultivrii.
Umiditatea paielor la cultivarea bazidiomicetelor poate varia n limite destul de largi. Totui,
umiditatea mai mic de 70% duce la ncetinirea proceselor microbiologice ce au loc n substratul supus
fermentrii. Cnd umiditatea substratului depete 80% - se micoreaz volumul fazei gazoase i se
activeaz dezvoltarea bacteriilor anaerobe de putrefacie, nrutind prin aceasta colonizarea substratului de
ctre miceliul ciupercii [142]. Astfel, prin stropiri repetate a baloturilor de paie substratul celulozic a fost
umezit pn la 70-75%.
Sursa termic a servit aburii fierbini provenii de la elementele de nclzire a apei. Dispuse n partea
de jos a vasului, elementele de nclzire au fost acoperite cu ap i desprite de substratul celulozic printr-o
plas metalic, astfel ptrunderea aburului s-a fcut direct n masa substratului. Aburul a fost injectat
progresiv timp de 3 ore - pn la realizarea temperaturii de 60-65 0C, dup care a sczut la 50-550C, unde s-a
meninut 32 ore (Figura 2).

Figura 2. Variaia temperaturii (0C) substratului n procesul de pasteurizare a paielor de

gru
 39

Procedeul de pregtire a substratului nutritiv prin pasteurizare urmrete scopul creterii i

multiplicrii n mas a bacteriilor termofile care utilizeaz toate formele de zaharuri existente, ceea ce
condiioneaz lipsa nutrienilor pentru mucegaiurile competitoare. Aplicarea acestei metode a fost dictat de
necesitatea crerii unei selectiviti biologice prin multiplicarea n masa substratului nutritiv a bacteriilor
termofile care asigur protecia biologic mpotriva competitorilor P. ostreatus. Mecanismul aciunii
bacteriilor temofile const i n crearea unui antagonism tipic pasiv, care are mai mari urmri asupra
ciupercilor competitoare, dect asupra miceliului P. ostreatus [59].
Rcirea materialului celulozic pasteurizat s-a executat n condiii igienice, utiliznd pentru aceasta
iradierea n prealabil a spaiului de dezinfectare termic cu lmpi bactericide. Dup micorarea temperaturii
pn la 24-280C, substratul nutritiv a fost nsmnat cu cultura ciupercii. Calitatea i cantitatea miceliului
introdus n substrat sunt factorii ce determin obinerea unei recolte stabile de carpofori. La cultivarea
industrial a ciupercii Pleurotus se folosete miceliu semincer crescut pe suport de graminee, cantitatea
necesar unei colonizri rapide i eficiente la cultivarea intensiv fiind de 3-5% fa de masa substratului
[40]. Pentru inoculare a fost folosit miceliu semincer n cantitate de 4,0 - 4,8% fa de substratul nutritiv
umed. nsmnarea miceliului granulat s-a fcut prin dispersarea i amestecarea acestuia n masa
substratului, astfel, prin numeroasele puncte de contact pe care le prezint, acesta reduce cu mult timpul
mpnzirii i posibilitatea de a se contamina.
Pentru incubare au fost folosii saci de polietilen neperforai de mrimea 50><70cm, fiecare sac cu
substrat celulozic nsmnat atingnd o greutate de 6-8kg. Dup inocularea substratului cu miceliul
ciupercii, n rezultatul proceselor metabolice, are loc majorarea coninutului de CO 2 n substrat. Crearea
condiiilor de anaerobioz nu mpiedic creterea i maturarea miceliului deoarece cultura ciupercii se
dezvolt bine i n prezena unei cantiti nsemnate de CO 2 n substrat. Coninutul nalt de CO2 nu numai c
stimuleaz creterea miceliului bureilor, dar i inhib dezvoltarea microorganismelor concurente pentru
substratul nutritiv [99]. Astfel, stabilitatea nalt fa de concentraiile mrite de CO 2 n substraturi este un
factor esenial n biotehnologia cultivrii intensive a ciupercii P. ostreatus.
Termostatarea substratului nutritiv nsmnat s-a executat la temperatura de 24-26 0C n condiii de
obscuritate deoarece lumina nu influeneaz mpnzirea materialului celulozic. Dup 2-3 zile, n rezultatul
intrrii miceliului granulat n vegetaie, paiele au nceput s se mpnzeasc (Fig. 3). Temperatura
substratului n aceast perioad a crescut cu 4-5 0C, de aceea, pentru evitarea situaiei de autoaprindere a fost
necesar ventilarea i amplasarea termometrului n masa acestuia.
 40

Figura 3. Termostatarea substratului nutritiv la cultivarea ciupercii P. ostreatus

mpnzirea complet a substratului celulozic cu miceliul ciupercii a durat 16-23 zile, dup care sacii au
fost trecui n camera de fructificare. Sacii cu substrat au fost aranjai unul peste altul pe crucioare mobile,
astfel nct nlimea brichetelor a ajuns pn la 1,5-1,8m, ceea ce a dus la o folosire maxim posibil a
suprafeii de cultivare (Fig. 4).
Cercetarea morfogenezei carpoforilor Pleurotus (Fig. 5) arat c dezvoltarea bazidiocarpului se afl
ntr-o dependen de anumii factori fizici, ca temperatura, umiditatea, iluminarea i coninutul de CO 2.
Realizarea unui randament sporit la cultivarea intensiv a ciupercii P. ostreatus poate fi asigurat prin
utilizarea camerelor cu reglare automatizat a condiiilor de microclim, de aceea, camera de fructificare a
fost amenajat cu aparataj tehnic de reglare a tuturor condiiilor (temperatura, umiditatea, aeraia) de
meninere a microclimei necesare fructificrii pstrvului de
fag (Fig. 6).
Regimul termic are o semnificaie important n toate etapele de cretere i dezvoltare ale ciupercii,
temperatura optimal de fructificare a speciei Pleurotus ostreatus aflndu-se n limitele 13-150C. Aplicarea
ocului termic pentru cultura P. ostreatus este obligatorie i const n scderea temperaturii cu 10-20 0C fa
de cea a incubrii. Cu ct temperatura ocului termic este mai joas, cu att perioada aplicrii lui este mai
scurt. Astfel, temperatura mediului ambiant din camera de fructificare a fost de 7-14 0C - suficient pentru
declanarea ocului termic, dar mai joas dect cea optimal indicat fructificrii acestei specii. Dup 10 zile
de la nceputil ocului termic s-a efectuat deschiderea sacilor prin terea i ndeprtarea foliei de polietilen.
 41

Figura 4. Cultivarea ciupercii Pleurotus ostreatus pe crucioare mobile

Figura 5.Morfogeneza carpoforilor Pleurotus ostreatus

 42

Figura 6. Aparatajul tehnic pentru crearea condiiilor de microclim la cultivarea ciupercii

Pleurotus ostreatus

Atitudinea fa de condiiile umiditii la cultivarea pstrvului sunt diferite. Dac n timpul iniierii
fructificrii umiditatea relativ a aerului a fost de 90-95%, apoi pentru dezvoltarea normal a carpoforilor -
75-80%. Stropirea a fost aplicat prin pulverizare, utiliznd n acest scop presiunea din reeaua orneasc.
Aeraia i concentraia de CO2 n aer are o influen asupra ambelor faze morfologice: formarea
primordiilor i maturizarea carpoforilor. n perioada de maturizare-recoltare, cnd depirea concentraiei
bioxidului de carbon de peste 0,1% poate duce la o dezvoltare anormal a carpoforilor, aerisirea are un rol
primordial [52, 53]. De aceea, aerisirea necesar s-a efectuat prin asigurarea a 6-8 schimburi de aer/or, fr
cureni de aer puternici pentru a nu provoca uscarea brichetelor.
Sub influena luminii au loc diverse procese biochimice i biofizice ce conduc la reacii morfologice i
fototrope. n condiii de iluminare insuficient piciorul se alungete, iar plria rmne mic. Lipsirea cu
desvrire a luminii duce la o depigmentare total n rezultatul creia ciupercile iau forma unui coral [98,
102]. Astfel, dac la iniierea fructificrii este necesar iluminarea ciupercii Pleurotus cu 30-40 luci, apoi
pentru fructificarea propriu-zis - 80-100 luci n decurs de 12 ore/zi. Totodat, pentru dezvoltarea normal a
carpoforilor, ncepnd cu faza de primordie, o importan deosebit o are cantitatea total a iluminrii [28].
Asigurarea iluminrii necesare a fost realizat prin amplasarea a cte dou tuburi fluorescente de 60W
deasupra crucioarelor la fiecare 3m., astfel nct iluminarea tulpinilor testate de P. ostreatus a fost de 60-80
luci n decursul a 12 ore, cantitatea total fiind de 720-960 luci/zi, ceea ce este ndeajuns pentru
morfogeneza fructificrii normale a culturii pstrvului de fag.
Ciclul tehnologic de cultivare a durat mai mult dect se preconiza: 95-148 zile pentru 3-4 valuri de
recoltare. Recolta medie la diferite tulpini P. ostreatus a variat de la 17,6 pn la 24,7% fa de substratul
nutritiv nsmnat (Tab.3).
Tabelul 3
Recolta carpoforilor la cultivarea ciupercii Pleurotus ostreatus pe paie de gru
Tulpina I val de II val de III val de IV val de Desfurarea Recolta
Pleurotus recoltare, recoltare, recoltare, recoltare, ciclului medie,
ostreatus % fa de total % fa de total % fa de total % fa de total tehnologic, zile % fa de
substratul
nutritiv
M1 49,3 31,2 19,5 - 135 24,72,7
M2 47,2 23,8 25,3 3,7 148 17,61,6
M4 53,0 23,1 19,8 4,1 148 23,02,5
M5 46,3 39,0 14,7 - 95 18,01,2
M6 50,6 30,5 12,8 6,1 148 20,12,2
1010 50,1 27,6 22,3 - 108 20,72,3
M11 44,2 36,5 19,3 - 108 17,92,0

Procentual, media recoltei obinute pentru 3-4 valuri de fructificare este urmtoarea: I val - 4453% (n
medie circa 50%); II val - 23-39% (media - 26%); III val - 13-25% (media - 19%); IV val
- 4-6% (media - 5%).
Desfurarea ciclului tehnologic n timp s-a prezentat astfel: I val - 67-74 zile; II val - 85-100; III val -
109-130; IV val -148. Pentru dou valuri de recolt a fost necesar 85-100 zile, recolta ajungnd la 74-80%
din totalul ei.
Din culturile examinate cele mai productive tulpini s-au dovedit a fi P. ostreatus M1 cu recolta de
24,7%, P. ostreatus M4 cu 23,0% i P. ostreatus 1010 cu 20,7%. Conform datelor din literatura de
specialitate [129], recolta medie a bureilor cultivai pe paie de gru la modul intensiv este de circa 15%
 43

pentru dou valuri de recoltare, deoarece valurile III i IV sunt nesemnificative i ineficiente. n cazul nostru,
dac nu lum n consideraie al III-ea i al IV-ea val de recolt, obinem circa 16-20%, ceea ce denot c
tulpinile sus-menionate au un potenial mare, graie rezultatelor obinute.
Eficacitatea biologic a tulpinilor testate de P. ostreatus la cultivarea acestora pe paie de gru se
prezint astfel (Fig. 7):

M1 M2 M4 M5 M6 1010 M11 Tulpinile P. ostreatus

Figura 7. Eficacitatea biologic (EB) a unor tulpini P. ostreatus cultivate pe paie de gru

Cei mai mari indici ai eficacitii biologice au fost nregistrai la tulpinile P. ostreatus M1, M4 i 1010:
88,2, 82,1 i respectiv 82,8%.
Astfel, n cadrul procesului selectiv al ciupercii P. ostreatus s-a utilizat un screening raional ealonat,
ceea ce a permis alegerea unor tulpini cu mai multe calit i dorite. n consecin, n urma studiului efectuat
am selectat tulpinile P. ostreatus Ml, M4 i 1010, care pot fi recomandate att pentru obinerea unei recolte
nalte de carpofori, ct i pentru o productivitate major a biomasei i biosintez de enzime hidrolitice la
cultivarea submers. Tulpinile P. ostreatus Ml, M4 i 1010 au fost depozitate n Colecia Naional de
Microorganisme Nepatogene (CNMN), numerele de nregistrare atribuite fiind: P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i respectiv CNMN-FB-04.
n funcie de caracterele morfo-culturale i biochimice ale tulpinilor selectate de pstrv acestea i pot
gsi urmtoarele aplicaii:
tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 - surs de carpofori (EB=88,2%), biomas (13,0g/l BAU)
i celulaze extracelulare (85-90% i 0,7-1,5 U/ml pentru celulaza lichefiant i respectiv
zaharolitic);
tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 - surs de carpofori (EB=82,1%) i biomas (12,0g/l
BAU);
tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 - surs de carpofori (EB=82,8%) i proteaze (8487%
pentru proteaza lichefiant).
Reieind din acest fapt, se va elucida posibilitatea de utilizare a tulpinilor selectate n elaborarea unei
baze tiinifice cu o aplicare larg n biotehnologie.
 44

39

CAPITOLUL IV
PARTICULARITI BIOLOGICE DE CULTIVARE A CIUPERCII
PLEUROTUS OSTREATUS N FAZA SOLID DE FERMENTARE

4.1 Cultivarea ciupercii P. ostreatus pe medii nutritive agarizate

Utilizarea mediilor nutritive agarizate prezint cele mai accesibile i eficiente tehnici de referin
pentru elucidarea caracterelor morfo-culturale la bazidiomicete, mediile universale standardizate cele mai
practicate fiind mustul i malul de bere agarizate [127].

4.1.1 Aciunea surselor de carbon i azot asupra creterii miceliului P. ostreatus pe medii
agarizate. Determinarea aciunii surselor de carbon i azot asupra creterii miceliului P. ostreatus pe mediu
agarizat constituie o metod potrivit, dat fiind gradul nalt de operativitate pe care-l asigur. Totui,
rezultatele obinute n acest caz sunt numai de ordin orientativ i nu pot fi comparate n mod obiectiv cu cele
cultivate pe medii lichide unde se calculeaz biomasa acumulat pe unitate de timp.
Scopul investigaiilor este elucidarea caracterelor morfo-culturale i stabilirea necesitilor nutritive n
funcie de sursa de carbon sau azot asimilat - n posibilitatea de aplicare a rezultatelor obinute la
producerea pe scar larg a miceliului de ciuperci P. ostreatus. Stabilirea adecvat a exigenelor de nutriie n
funcie de sursele de C sau N testate necesit prezena substanelor definite i exact dozate, propriu mediilor
nutritive sintetice. Pentru aceasta, mediul standard agarizat cu mal de bere a fost nlocuit cu mediul agarizat
Czapek, dat fiind faptul c ultimul corespunde cerinelor naintate i este des practicat la cultivarea fungilor.
Cercetarea caracterelor morfologice i culturale ale reprezentanilor tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-
02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 a fost efectuat pe mediul nutritiv agarizat Czapek cu nlocuirea surselor
de azot sau carbon testate. n calitatea sursei unice de carbon au fost studiate monozaharidele - glucoza,
galactoza xiloza, arabinoza; dizaharidele - maltoza, zaharoza, lactoza; polizaharidul - amidon i alcoolul -
manit. Sursa de azot a servit mediul nutritiv cu NaNO 3 (0,2 g/l), intensitatea de cretere fiind caracterizat
prin calcularea coeficientului de cretere (CC) la a 3-ea i a 6-ea zi de cultivare (Tab. 4).
Observrile fcute ne demonstreaz, c glucoza nu este ntocmai cea mai preferenial surs unic de
carbon pentru tulpinile P. ostreatus studiate, iar pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 pe mediul cu
glucoz s-a nregistrat o cretere foarte slab.
Sursa cea mai puin preferenial pentru toate tulpinile studiate de P. ostreatus s-a dovedit a fi lactoza.
Sursa optimal de carbon pentru P. ostreatus CNMN-FB-02 a fost maltoza, pentru P. ostreatus CNMN-FB-03
- zaharoza, arabinoza, xiloza i maltoza, iar pentru P. ostreatus CNMN-FB-

04 - manitul i zaharoza. Utilizarea preferenial a maltozei explic faptul creterii abundente a miceliului P.
ostreatus pe mediul cu mal de bere standardizat, astfel nct 90-92% din substana uscat a acestuia
reprezint hidrai de carbon, dintre care mai mult de jumtate (52,2%) - maltoz [177]. Alte surse de carbon
sunt mai puin preferate nutriiei tulpinilor P. ostreatus testate.
Tabelul 4
Coeficientul de cretere (CC) al tulpinilor ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03
i CNMN-FB-04 pe mediul nutritiv Czapek agarizat cu diverse surse de carbon
Sursa de CNMN-FB-02 CNMN-FB-03 CNMN-FB-04
carbon Mm Mm Mm
3 zi 6 zi 3 zi 6 zi 3 zi 6 zi
glucoza 21,90,4 13,90,3 22,50,1 17,20,3 16,40,9 12,80,4
galactoza 21,50,2 16,21,2 20,61,1 13,30,7 19,50,5 17,00,4
xiloza 18,70,8 15,50,5 27,30,7 19,20,6 18,61,3 16,00,6
arabinoza 20,60,7 17,10,5 23,20,8 19,50,6 20,50,9 16,70,6
maltoza 22,50,2 22,01,5 27,31,7 19,00,3 34,31,0 16,21,2
zaharoza 21,90,6 15,31,1 27,00,1 19,50,5 32,70,4 26,50,5
 lactoza 17,00,6 9,80,2 14,61,1 14,30,7 19,61,2 11,20,1
amidon 22,50,8 16,00,5 19,20,4 13,20,3 23,30,1 17,70,5
manit 21,30,1 19,20,7 21,81,5 16,60,2 28,61,2 26,90,7

Rezultatele obinute nu confirm unele date bibliografice de specialitate [91] cu privire la folosirea
preferenial a monozaharidelor fa de dizaharide, graie fosforilrii mai uoare a primelor. Pentru sursele de
carbon cu dizaharide, CC este mai mare dect pentru cel al surselor cu monozaharide, cu excepie arabinozei
pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03.
Tulpinile studiate de P. ostreatus folosesc att sursele de azot anorganice, ct i cele organice, ns
gradul lor de asimilare este diferit (Tab. 5). Sursele principale ale azotului anorganic se prezint sub forma
srurilor de amoniu (NH4NO3, (NH4)3PO4, (NH4)2SO4) i nitrailor (NaNO3, NH4NO3), iar cele ale azotului
organic - sub forma aminoacizilor (asparagina, acidul aspartic). Sursa de carbon a mediului nutritiv agarizat
Czapek a servit glucoza (4 g/l).
Tabelul 5
Coeficientul de cretere (CC) al tulpinilor ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03
i CNMN-FB-04 pe mediul nutritiv Czapek agarizat cu diverse surse de azot

n conformitate cu rezultatele obinute, srurile de amoniu pentru creterea tulpinilor studiate ale
ciupercii P. ostreatus sunt cele mai eficiente. Sursa de azot optimal pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-
02 s-a dovedit a fi (NFLO2SO4 i (NFLO3PO4, pentru P. ostreatus CNMN-FB-03 -asparagina i (NH4)2PO4,
iar pentru P. ostreatus CNMN-FB-04 - (NH4)3PO4 i (NH4)2SO4. Numai n cazul sursei cu NaNO 3 s-a

04 cultivate pe medii agarizate cu diverse surse de carbon i azot nregistrat o cretere slab pentru
toate tulpinile de P. ostreatus, ceea ce
denot faptul, c nitraii sunt folosii mult mai slab fa de sursele organice i anorganice cu amoniu. Aceste
rezultate sunt diferite de cele din literatura de specialitate care susine c sursele de azot anorganice sunt
folosite de P. ostreatus mai slab fa de cele organice [44]. S-a constatat c asparagina este cea mai bun
surs de azot pentru multe bazidiomicete celulozolitice [8]. n cazul nostru - numai pentru tulpina P.
ostreatus CNMN-FB-03 sursa de azot organic optimal a fost asparagina, pentru P. ostreatus CNMN-FB-02
i CNMN-FB-04 prefereniale au fost sursele anorganice (NH 4)3PO4 i (NH4)2SO4. Datorit variabilitii
fenotipice existente n cadrul speciei, caracterele morfo-culturale la cultivarea tulpinilor P. ostreatus CNMN-
FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pe medii nutritive cu diverse surse de carbon i azot variaz (Tab. 6).
Totodat, rezultatele cptate la selectarea surselor de carbon i azot pe medii agarizate nu ntotdeauna se
afl ntr-o interdependen reciproc cu cele cultivate pe medii lichide, fapt confirmat att n literatura de
specialitate, ct i n cercetrile proprii.
Generaliznd cele expuse, putem meniona remarcabila diversitate i individualitate fa de nutrienii
consumai la tulpinile P. ostreatus testate. Dintre sursele de carbon studiate dizaharidele, ca maltoza (P.
ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03) i zaharoza (P. ostreatus CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04),
monozaharidul - galactoza (P. ostreatus CNMN-FB-03) i alcoolul - manit (P. ostreatus CNMN-FB-04) s-au
dovedit a fi cele mai eficiente creterii i dezvoltrii tulpinilor de P. ostreatus testate. n acelai timp, sursa de
carbon cea mai puin preferenial pentru nutriia ciupercii P. ostreatus este lactoza. Dintre sursele de azot
studiate srurile de amoniu - (NH 4)3PO4, (NH4)2SO4 (P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-
04) i asparagina (P. ostreatus CNMN-FB-03) sunt cele mai eficiente pentru nutriia tulpinilor P. ostreatus
testate. Srurile cu nitrai sunt folosite mai slab dect cele cu amoniu, cea mai slab cretere pentru toate
tulpinile P. ostreatus studiate nregistrndu-se n cazul sursei cu NaNO3.
Rezultatele cercetrilor efectuate pot fi folosite la elaborarea practicilor de diversificare a mediilor
nutritive agarizate i obinerii inoculumului de pstrv pentru reproducerea pe scar larg a materialului
semincer.

Tabelul 6
Caracterele morfo-culturale la P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-
 46

4.1.2 Influena criteriului termic asupra creterii miceliului P. ostreatus. Spre deosebire de
temperaturile extreme, care sunt nocive, temperaturile moderate permit desfurarea normal a proceselor
metabolice, ansamblul acestor valori termice reprezentnd zona temperaturilor de dezvoltare - n care exist
temperaturi minime, optime i maxime de dezvoltare pentru specia dat [106].
Scopul cercetrilor propuse a constat n stabilirea temperaturii optime creterii miceliului P. ostreatus
i a particularitilor de termotoleran - pentru elucidarea capacitii de adaptare n sistemele biotehnologice.
Diferenele de cretere la cultivarea tulpinilor P. ostreatus este rezultatul variabilitii fenotipice, un
interes deosebit prezentnd stabilirea optimului i limitei de temperatur. Valorile termice minime, optime i
maxime pentru specia dat sunt indicate n unele surse bibliografice de specialitate [127, 129, 134]. Astfel,
limita minim de cretere la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 a fost
cercetat pentru temperaturile de 4 0 i 70C, maxim -pentru 380C, optim - pentru 200, 250 i 300C. n calitate
de mediu nutritiv standard a fost folosit mediul cu mal de bere agarizat, cercetrile fiind efectuate pe cutiile
Petri a cte 5 repetri fiecare. Pentru temperatura optim estimarea creterii liniare i a coeficientului de
cretere (CC) s-au efectuat ncepnd cu ziua a treia pn la mpnzirea total a cutiei Petri, iar pentru
temperaturile limite de cretere - pn la 26 zile de cultivare. Rezultatele influenei regimului termic asupra
creterii tulpinilor P. ostreatus studiate sunt prezentate n tabelul 7.
n conformitate cu rezultatele obinute, tulpinile P. ostreatus testate au avut valori ale CC cuprinse
ntre 3,2 i 6,9 unit i convenionale (u.c.) pentru temperatura de 4 0C, 5,9 - 11,4 u.c. pentru 70C, 28,4 - 53,5
u.c. pentru 200C, 31,1 - 66,7 u.c. pentru 25 0C i 39,3 - 63,6 u.c. pentru 30 0C. Temperaturile de 250 i 300C s-
au dovedit a fi n limitele creterii optimale a miceliului tulpinilor P. ostreatus studiate. Indicii creterii
liniare i ai CC la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pentru toate temperaturile testate au
avut aproximativ aceleiai valori, deosebirile cele mai mari fiind nregistrate la tulpina P. ostreatus CNMN-
FB-02 fa de P. ostreatus
CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04.
Potrivit literaturii de specialitate, pentru identificarea bazidiomicetelor la nivel de specie criteriul
termic poate servi ca un indice taxonomic suplimentar, diferenele cele mai mari fiind nregistrate la
minimele i maximele de temperatur [134]. Tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 a demonstrat o capacitate
valoroas din punct de vedere al creterii miceliului la temperatur nalt (38 0C). Rezistena fa de
temperatura nalt este propriu speciei P. florida, n acelai timp, consistena i mrimea carpoforilor tulpinii
P. ostreatus CNMN-FB-02 a prezentat caracteristici ale speciei P. ostreatus. Fiind nrudite genetic i
apropiate din punct de vedere al caracterelor morfoculturale, P. florida este considerat de unii cercettori
[34] ca o ras geografic a speciei P. ostreatus.
Tabelul 7
Estimarea coeficientului de cretere pentru tulpinile ciupercii P. ostreatus
CNMN-FB-

CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 la diferite valori ale regimului termic_______________
P.ostreatusTulpina
Temperatura

Durata cultivrii (zile)

3 6 7 8 12 19 26

0 40C - - - - 3,20,2 4,20,4 4,80,3

2 03 5,20,1 5,90,6 6,90,4
04 6,60,3 5,90,5 6,30,5
0 70 C - - - - 5,90,1 6,00,6 5,90,8
2 03 11,40,3 10,40,3 8,70,5
04 9,90,5 8,60,7 9,00,8
0 200C 28,41,2 38,42,4 38,42,0 36,11,5 - - -
2 03 43,72,2 45,92,0 44,81,8 45,22,1
04 43,62,8 49,93,0 51,02,8 53,53,2
0 250C 31,11,2 44,21,8 57,81,6 - - - -
2 03 52,61,1 57,22,7 62,92,2
04 52,91,0 56,73,2 66,72,7
0 300C 39,31,2 49,52,4 60,32,0 - - - -
 2 03 57,81,5 55,11,5 60,41,8
04 49,81,2 57,11,5 63,62,0
0 380C - - - - 20,01,6 26,01,8 24,21,4
2 03
04

Tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 nu au manifestat nici o cretere notabil la

temperatura de 380C. Dup 15 zile, aceste tulpini au fost reamplasate la temperatura de 15 0C unde au
nceput s creasc, n acelai timp, CC a fost mic (3 - 6 uniti convenionale), creterea fiindu-i vizibil
afectat de temperatura anterioar (380C).
Coloniile P. ostreatus prezint o bun dezvoltare pe mediul agarizat cu mal de bere, totodat,
caracterele morfologice fa de variaia temperaturii sunt diferite. Astfel, cea mai bun dezvoltare a
miceliului aerian la P. ostreatus a fost pentru temperatura de 20 0C, iar tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02
pentru temperaturile nalte (300 i 380C) a prezentat colonii de o densitate major (Tab.8).
Astfel, n rezultatul cercetrii influenei criteriului termic asupra creterii miceliului tulpinilor de P.
ostreatus, au fost stabilii parametrii optimi i minimi de cretere pentru P. ostreatus CNMN-
FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04. Conform temperaturii minime de cretere (40), valorile CC
au fost cuprinse ntre 3,2-4,8 uniti convenionale pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02, 5,26,9
u.c. pentru P. ostreatus CNMN-FB-03 i 5,9-6,6 u.c. pentru P. ostreatus CNMN-FB-04. Temperatura
maxim de cretere (380C) a avut un efect fungistatic fa de P. ostreatus CNMN-FB-
 48

03 i CNMN-FB-04, iar pentru P. ostreatus CNMN-FB-02 CC a prezentat valori cuprinse ntre

20,026,0 uniti convenionale. Optimum de dezvoltare coincide cu intervalul termic cuprins ntre
250 i 300C, la care s-a nregistrat cele mai mari valori ale CC la a 7-ea zi de cultivare: 57,8-60,3
u.c. pentru P. ostreatus CNMN-FB-02, 60,4-62,9 u.c. pentru P. ostreatus CNMN-FB-03 i 63,6-
66,7 u.c. pentru P. ostreatus CNMN-FB-04. Tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 a avut o cretere
relativ mai
slab fa de P. ostreatus CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pentru temperaturile 40, 70, 200, 250 i
300C. n acelai timp, P. ostreatus CNMN-FB-02 a manifestat o nsuire preioas de cretere a
miceliului la temperatur nalt (380C). Aceast capacitate prezint un interes practic i poate fi
utilizat n cadrul procesului selectiv n scopul ameliorrii speciei P. ostreatus.
 49

Tabelul 8
Caracterele morfo-culturale ale tulpinilor termic ciupercii P. ostreatus la diverse
valori ale regimului
 50
4.2 Cultivarea intensiv a ciupercii P. ostreatus pe diverse substraturi
nutritive
Elaborarea tehnologiilor moderne de utilizare a reziduurilor agro-industriale, ct i
majorarea eficacitii de sintez a produselor proteice corespund cerinelor practice la realizarea
bioconversiei materiei vegetale. Capacitatea de cretere intensiv a ciupercilor putregaiului alb pe
diverse substraturi celulozice i-a gsit o larg utilizare n biotehnologia proceselor de convertire
a materiei secundare vegetale n produse cu valoare nutritiv ridicat. Astfel, la cultivarea
bazidiomicetelor din genurile Pleurotus, Panus, Flammulina, Coriolus etc. se pot obine
carpofori, care sunt ntrebuinai n alimentare, iar substratul fermentat mbogit cu proteine i
substane bioactive - ca adaos furajer sau biongrminte [40, 97, 98, 151].
Din punct de vedere tehnologic, principalele avantaje ale biotehnologiei cultivrii intensive
a bazidiomicetelor sunt urmtoarele:
- sunt energoeconomice, deoarece se pot desfura perfect la temperaturi obinuite n
intervalul 15-30 0C i la presiuni normale;
- se pot realiza n camere cu reglarea automatizat a condiiilor de microclim, astfel c
sunt independente de condiiile climaterice i asigur un randament sporit de utilizare a
resurselor umane, energetice i materiale;
- reprezint cicluri tehnologice finisate fr deeuri, astfel c nu produc poluarea mediului
nconjurtor, iar substraturile celulozice uzate se folosesc fie n furajarea animalelor sau
ca ngrminte bioorganice valoroase;
- utilizeaz ca materie prim iniial deeurile poluante rezultate din industria agro-
industrial, alimentar, silvicultur etc.

4.2.1 Selectarea substraturilor nutritive. Anterior, n urma cercetrii unor aa

caracteristici ca capacitatea de cretere intensiv la temperaturi diferite, acumularea biomasei i
activitatea biosintetic la cultivarea submers, recolta carpoforilor etc. au fost selectate trei tulpini
nalt productive de Pleurotus ostreatus: CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 (Capitolul
III). Obiectivul cercetrilor const n trierea substraturilor nutritive pentru obinerea unei
productiviti majore de carpofori la cultivarea intensiv a tulpinilor ciupercii P. ostreatus
 51
CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 selectate anterior. Pentru realizarea acestui
obiectiv se impune necesitatea folosirii substraturilor celulozice ce corespund unui randament
maxim de valorificare, cheltuielilor minime la recoltarea, transportarea i pstrarea acestora,
accesibilitii etc. n Republica Moldova cele mai accesibile i potrivite substraturi nutritive
pentru prelucrare sunt: paiele de graminee, cocenii i tulpinile lor, cojile de floarea-soarelui,
deeurile rmase de la industria de prelucrare a sfeclei de zahr i viei de vie, diverse tulpini de
plante, rumeguul de lemn etc. Calitatea tehnologic a substratului nutritiv la cultivarea
pstrvului este determinat, n primul rnd de capacitatea acestuia de a ndestula necesitile
fiziologice ale ciupercii n cretere. Materiile prime ce intr n componena substratului de nutriie
se difereniaz n funcie de caracteristicile lor fizice i sunt determinate de aa parametri, ca
mrimea particulelor, porozitatea, capacitatea de reinere a apei, densitatea specific etc. [129,
157].
Datorit structurii sale afnate, capacitii remarcabile de mbibare a apei i densitii
optimale (0,4-0,6kg/l) obinute prin brichetare n saci de polietilen, paiele de gru asigur ct se
poate de bine schimbul de gaze, de ap i substane nutritive pentru miceliul introdus la
nsmnare [108, 157]. Caracteristicile parametrilor fizici (mrimea particulelor, porozitatea,
capacitatea de umectare, densitatea specific) pentru unele substraturi celulozice, ca rumeguul de
lemn, cojile de floarea-soarelui, cocenii de porumb - sunt inferioare paielor, astfel nct utilizarea
acestora n procesul de fermentare nrutete calitatea tehnologic a substratului, iar eficacitatea
biologic este sczut [6, 157, 183].
Substratul tradiional la cultivarea bureilor sunt paiele de graminee. Totui, majorarea
recoltei de carpofori pentru unele specii ce aparin genului Pleurotus poate fi realizat prin
amestecul n diferite proporii a substraturilor celulozice [6]. Eficacitatea nlocuirii pariale a
paielor de graminee cu alte substraturi celulozice este demonstrat de multe cercetri ce in de
domeniul biotehnologiei cultivrii ciupercii P. ostreatus [36, 47, 102, 148]. Efectund cercetri n
aceast direcie am constatat, c substituirea n proporie de pn la 1/3 a paielor de gru cu alte
substraturi nutritive (rumegu de lemn, coji de floarea-soarelui, coceni de porumb) nu a nrutit
parametrii fizici ai mediilor de cultivare. Astfel, reieind din cele expuse mai sus, pentru obinerea
carpoforilor P. ostreatus au fost alese substraturile nutritive n urmtoarele proporii:
 52
1. paie (100%) - (PG),
2. paie + rumegu de lemn (2/3+1/3) - (PGL),
3. paie + coji de floarea-soarelui (2/3+1/3) - (PGFS),
4. paie + coceni de porumb (2/3+1/3) - (PGC).
n etapa selectrii celor mai productive tulpini P. ostreatus (Capitolul III), dezinfectarea
termic a fost realizat prin fermentarea substratului celulozic la temperatura 50 0 - 550C timp de
32 ore. O alt metod de dezinfectare a substratului nutritiv este prelucrarea termic a acestuia
prin ridicarea, n scurt timp, a temperaturii apei pn la 80 - 95 0C pentru o perioad de 1 - 5 ore
[128,129]. Imediat dup dezinfectare apa se scurge, iar substratul se rcete i se nsmneaz cu
cultura ciupercii. Acest mod de pasteurizare, folosit la acest capitol, nu urmrete crearea unei
selectiviti biologice a substratului, ci reprezint un oc termic pentru toat microflora
substratului; este scurt n timp i decurge practic fr pierderea masei uscate a substratului
nutritiv.

Prin meninerea n ap n stare submers timp de 16 - 18 ore, substraturile testate au fost

umezite (72-76%), apoi supuse agentului termic la 95 oC timp de 1 or. Pentru inoculare a fost
folosit miceliu semincer n cantitate de 3,8 - 4,2 % fa de substratul nutritiv umed.
Ca i pentru multe specii de bazidiomicete temperatura optimal creterii miceliului
P.ostreatus nu coincide cu temperatura necesar fructificrii. Conform rezultatelor obinute n
vederea aciunii temperaturii asupra creterii i dezvoltrii miceliului tulpinilor P. ostreatus
CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 (Capitolul 4.1.2), temperatura optimal se afl n
limitele de 25-300C. Astfel, pentru temperatura de 280C mpnzirea complet a substraturilor a
durat 11-12 zile. Diferene vizibile la mpnzirea substraturilor nu au fost nregistrate.
Dup mpnzirea complet a substraturilor (12 zile), sacii au fost scoi din termostat i
plasai n camera de fructificare, unde s-au meninut parametrii necesari fructificrii pstrvului
de fag. innd cont de faptul, c condiiile optimale fazelor vegetativ i reproductiv sunt
diferite, pentru fructificare au fost meninui urmtorii parametri: temperatura 152 0C, umiditatea
80-90% (n funcie de dezvoltarea carpoforilor), iluminarea - utiliznd un sistem de tuburi
fluorescente (50-200 luci timp de 12 ore/zi) i aeraia - printr-un sistem de ventilare artificial
(6-8 schimburi/or).
 53
Desfurarea ciclului tehnologic pentru patru valuri de recoltare s-a prezentat astfel
(Tab.9): S I val de recoltare - 30-37 zile pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02, 32-
36 zile pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 i 36-55 zile pentru tulpina P.
ostreatus
CNMN-FB-04;
al II-lea val de recoltare - 40-57 zile pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02, 48-
62 zile pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 i 56-86 zile pentru tulpina P.
ostreatus
CNMN-FB-04;
al III-lea val de recoltare - 70-88 zile pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02, 70-87
zile pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 i 74-113 zile pentru tulpina P.
ostreatus
CNMN-FB-04;
S al IV-lea val de recoltare - 100-117 zile pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02, 88-

117 zile pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 i 102-114 zile pentru tulpina P.
ostreatus CNMN-FB-04. Primordiile la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-
03 pentru toate tipurile de substraturi nutritive au aprut ntr-un interval de 22-28 zile, iar pentru
tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 - la 30-49 zile (Fig. 8). Totui, carpoforii tulpinii P. ostreatus
CNMN-FB-04 s-au maturizat mai repede, i anume: la 5-6 zile fa de 7-10 zile pentru tulpinile P.
ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03. Fructificarea s-a manifestat n 3-4 valuri de recoltare cu
o peridiocitate de la 15 pn la 32 zile fiecare. Pe parcursul experienei au fost msurate lungimea
picioruelor, diametrul plriilor, precum i greutatea carpoforilor (Tab. 10, 11).
 54
Tabelul 9
Desfurarea n timp a ciclului tehnologic la tulpinile P. ostreatus CNMN-
FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivate pe diverse substraturi celulozice
Tulpina Apariia I II III IV recolt,
P.ostreatus Substratul primordiilor, zile recolt, recolt, recolt, zile
CNMN-FB-
zile zile zile
02 22-23 31 35 56 61 78 87 102-117
03 04 PG 25 36-48 61-69 90-97 117
30-43 114
02 24-28 30-34 33- 56-57 55- 8 113 100-
03 04 PGL 23-24 34 62 6 77 104
48 54 86 113
02 PGFS 22-23 30 36 45-52 56- 70-88 74- 104
03 26 48-55 62 84
04 42-49 78-82 106
02 24-28 32-37 32 52-57 48 80-84 70- 100 88-100
03 PGC 23 31- 37-50 56-73 80 102
04 44 74-87

Analiznd datele din tabel, observm c pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04

carpoforii au dimensiuni i greuti mai mari dect pentru tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02 i
CNMN-FB-03. Plria ciupercii este socotit ca cea mai valoroas parte a carpoforului. De aceea,
tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 este mai valoroas din punct de vedere al calitilor tehnice n
ceea ce privete raportul dintre picior i plrie. Cu mici excepii, media greutii, lungimii
piciorului i diametrului plriei carpoforilor dup primul val de recoltare au indicii cei mai mari.
Aceasta denot faptul, c n prima faz de cultivare mediul nutritiv este optim dezvoltrii i
creterii ciupercii, dup ce selectivitatea substratului scade.
Pstrvul de fag are carpoforul gimnocarp, lipsit de velum i din aceast cauz eliberarea
sporilor se face pe msur ce plria se formeaz. Cu plrie n prima faz de primordie, la sfrit
carpoforul capt aspectul unui cornet (Fig. 9).
Aspectul exterior al carpoforilor P. ostreatus a fost examinat i exemplificat conform
fazelor fenologice. Dup Mateescu N. [57] se disting urmtoarele faze fenologice: primordii,
cornet de tineree, margine convex, margine dreapt, margine concav, margine rsucit i
cornet de btrnee (Fig. 8, 9, 10, 11).
 Tabelul 10

Caracterele morfo-culturale ale

carpoforilor P. ostreatus cultivai pe
I recoltII recoltIII recoltIV recolt
1111111
diverse substraturi celulozice
 56

Figura 8. Fazele fenologice primordii i cornet de tineree la Pleurotus ostreatus cultivat pe paie
de gru

Tabelul 11
Caracterele morfo-culturale ale carpoforilor P. ostreatus cultivai pe diverse substraturi
___________celulozice (media ciclului tehnologic pentru 3-4 valuri de fructificare)_____________
Tulpina Substratul Lungimea Diametrul Greutatea Numrul
P.ostreatus piciorului, cm plriei, cm medie a unui carpoforilor la 1
CNMN-FB- Mm Mm carpofor, g kg de substrat
Mm
02 03 04 4,60,4 6,10,5 17,32,8 10,4 10,9
PG 2,00,1 5,40,4 14,81,6 8,6
4,00,3 6,60,9 22,62,6
02 03 04 4,10,3 6,00,5 13,71,2 10,2 11,4
PGL 1,70,1 4,70,4 11,31,2 8,6
4,70,4 6,20,6 22,52,2
02 03 04 3,30,3 5,60,4 11,21,7 11,1 8,7
PGFS 2,10,1 5,50,5 15,41,7 5,4
4,90,5 6,90,7 27,03,1
02 03 04 4,00,3 5,30,5 10,91,5 13,7 12,0
PGC 2,10,1 4,70,3 11,21,2 6,3
4,90,4 7,50,7 28,63,1
 Figura 10. Fazele fenologice de margine convex i margine dreapt la tulpina ciupercii
Pleurotus ostreatus CNMN-FB-02 cultivat pe paie de gru

Figura 11. Faza fenologic margine dreapt la tulpina ciupercii Pleurotus ostreatus CNMN-FB-03
 58

Piciorul este situat marginal, de aceea carpoforul are plria puternic excentric, situat asimetric fa
de picior. Suprafaa plriei la tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 este neted, deseori ondulat, de nuan
alb-cenuie pn la galben-brun (Fig. 10). Pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 suprafaa plriei este
neted, de o nuan crem-alb (Fig. 12) pn la cenuie (Fig. 13, 14) sau brun-nchis (Fig. 11), iar la tulpina
P. ostreatus CNMN-FB-04 - de o nuan brun-nchis pn la cenuie, cu marginile mai nchise (Fig. 5, 9).
Ciupercile apar n buchet, cuprinznd de la 1-2 pn la 10-15 carpofori cu plriile suprapuse (Fig. 10). La
baza buchetului carpoforii au dimensiuni mai mari dect cele amplasate superior i ating n medie 50-70 mm
n diametru.
Culorile gri sau galben-brun a plriilor Pleurotus se datoreaz acumulrii n prezena unei intensiti
luminoase sporite a pigmenilor galbeni (flavonelor) sau oranj (carotinoidelor). Deficitul de lumin sau
ntunericul profund duce la depigmentarea plriilor i, ca rezultat, acestea devin albe. n afar de aceasta,
exist tulpini de P. ostreatus la care culoarea alb a plriilor are un caracter ereditar i e controlat de o
singur gen recesiv [4]. Speciile de Pleurotus ce fructific la temperaturi mai mari de 240C pot avea la fel
plrii albe [17, 48]. n acelai timp, carpoforii P. ostreatus CNMN-FB-03 cultivai n condiii de ser la
temperaturi mai nalte (1910C) dect cele ce sunt indicate acestei specii (152 0C) au prezentat plrii de
culoare crem-alb (Fig. 12). Dup I val de recolt, tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 a fost reamplasat n
condiii naturale (temperatura 930C, iluminarea natural i aerisirea liber), carpoforii aprui deosebindu-
se esenial fa de cei cultivai n condiii de ser.

Figura 12. Morfogeneza carpoforilor P. ostreatus CNMN-FB-03 cultivai n condiii de

ser la temperatura 191C_________________________ ______

Figura 13. Morfogeneza carpoforilor P. ostreatus CNMN-FB-03 cultivai n prezena

factorilor abiotici naturali la temperatura de 93C_______________________
 Figura 14.Faza fenologic margine convex la carpoforii tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-03
cultivai n prezena factorilor abiotici naturali la temperatura de 93 0C

Morfogeneza carpoforilor P. ostreatus CNMN-FB-03 n prezena factorilor abiotici naturali atest

structuri reproductive difereniate: plria ciupercii este de o culoare bej, la maturitate convex, de o
consisten mai compact dect pentru cele cultivate la temperaturi mai nalte (191 0C) (Fig. 13, 14).
Piciorul nserat lateral este robust, de culoare gri deschis, ngroat i acoperit parial cu puf alb (Fig. 14).
Procentual, media recoltei obinute pentru 3-4 valuri de recoltare a fost urmtoarea: pentru I val - 40-
68% (media circa 55%); al Il-lea val - 22-34% (media 29%); al IlI-lea val - 4-25% (media 12%); al IV-lea
val - 1-12% (media 4%) (Tab. 12).
Tabelul 12
Recolta carpoforilor la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04
________________________cultivate pe diverse substraturi celulozice________________________
Recolta
Tulpina I val de II val de III val de IV val de medie, (%
P.ostreatus Substratul recoltare, recoltare, recoltare, recoltare, fa de
CNMN-FB- % % % % substratul
nutritiv)
02 61,6 30,5 2,1 5,8 18,22,3
03 PG 61,5 25,0 9,5 4,0 19,52,0
04 52,5 22,0 24,7 0,8 21,82,8
02 63,7 22,9 12,5 0,9 17,51,9
03 PGL 53,4 33,0 10,8 2,8 14,1 2,2
04 46,7 36,9 16,4 - 20,82,5
02 68,3 26,7 5,0 - 13,52,2
03 PGFS 64,0 25,1 9,1 1,8 13,31,1
04 60,2 33,0 6,8 - 16,41,4
02 49,0 28,5 14,3 8,2 16,42,0
03 PGC 40,4 32,3 17,4 9,9 14,21,9
04 45,8 30,7 11,6 11,9 22,21,1

Recolta carpoforilor a fost calculat conform raportului procentual ntre masa carpoforilor proaspei i
masa substratului umed. Din culturile examinate cea mai productiv tulpin pentru toate substraturile testate
s-a dovedit a fi P. ostreatus CNMN-FB-04 cu recolta cuprins ntre 16,4 i 22,2% fa de substratul nutritiv
umed pentru 3-4 valuri de recoltare. Substratul de paie (PG), tradiional la creterea bureilor, s-a dovedit a fi
aproape optimal cultivrii celor trei tulpini testate, valorificnd o recolt de ciuperci de la 18,2 pn la
21,8%.
Este notabil faptul, c tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 cultivat pe mediul PGC a nregistrat cea mai
nalt recolt - 22,2%. Fa de tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03, tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 a fost
mai productiv la recolta de carpofori pentru toate mediile nutritive, cu excepia paielor (PG), unde P.
ostreatus CNMN-FB-03 a acumulat 19,5% fa de 18,2% pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02. Cea mai
mic recolt de carpofori la toate tulpinile de P. ostreatus s-a nregistrat pe mediul PGFS - 13,3-16,4%.
 60

Eficacitatea biologic a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-

04 cultivate pe diverse substraturi celulozice se prezint astfel (Figura 15).

Pleurotus ostreatus
 61

0
100 80 80,8
^1
74,3 68,9 686 68
,2
CNMN-FB-
53,2
452 48ji 02 CNMN-
UJ ^ffi FB-03 O

CNMN-FB-04

60 40

20
 62

PG PGL PGFS PGC

 63

Figura 15. Eficacitatea biologic (EB, %) a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03

i CNMN-FB-04 cultivate pe diverse substraturi celulozice

Cei mai mari indici ai eficacitii biologice la toate tulpinile de P. ostreatus au fost nregistrai pentru
paie de gru (PG) - 68,9-80,8%, iar tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 s-a dovedit a fi cea mai productiv
pentru toate substraturile testate: 53,2-80,8%. Cu toate c tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 cultivat pe
substratul PGC a nregistrat cea mai nalt recolt de carpofori (22,2%, Tab.10), eficacitatea biologic este
mai sczut, fapt ce se datoreaz umidit i nalte a carpoforilor
(92%).
Conform literaturii de specialitate [144] al IlI-lea i al IV-lea valuri de recoltare sunt nesemnificative,
de aceea nu sunt colectate. Rentabilitatea valorificrii carpoforilor n funcie de valurile de recoltare poate fi
estimat reieind din raportul costului produciei de ciuperci realizate i a cheltuielilor de consum. Analiznd
datele experimentale privind obinerea recoltei de carpofori (Tab. 12) i reieind din timpul necesar
desfurrii ciclului tehnologic (Tab. 9) s-a ajuns la anumite concluzii cu privire la raionalitatea colectrii
carpoforilor de pe al III-lea i al IV-lea valuri de recoltare.
Pentru estimarea eficacitii economice la cultivarea ciupercii Pleurotus este necesar divizarea
procesului tehnologic n dou etape. Prima etap a procesului tehnologic include n sine costul manoperei,
miceliului semincer, substraturilor nutritive utilizate, inclusiv depozitarea, transportarea, pasteurizare,
nsmnarea etc. A doua etap tehnologic se realizeaz prin termostatarea, urmat de mpnzirea
substraturilor nutritive, introducerea brichetelor deja mpnzite n camera de fructificare i const n
cheltuieli fixe pentru fiecare zi de ntreinere: manopera, arenda spaiului de cultivare, serviciile de ntreinere
etc.

Astfel, rentabilitatea economic a procesului tehnologic poate fi calculat prin formula propus de noi:
10 aEB
R=---------, unde
b + cT
R - rentabilitate economic de cultivare a ciupercii P. ostreatus; EB-
eficacitatea biologic;
10- corecia la calcularea rentabilit ii economice pentru 1t substrat nutritiv ; a - costul
1kg de ciuperci, lei;
b - bilanul cheltuielilor efectuate n I-a etap tehnologic, lei;
c - bilanul cheltuielilor efectuate n a II-a etap tehnologic, lei/zi;
T - durata de cultivare a ciupercii, zile.
Conform estimrilor noastre la valorificarea unei tone de substrat celulozic uscat pentru cultivarea
ciupercilor Pleurotus bilanul cheltuielilor efectuate n prima etap constituie circa 3000 lei. n etapa a doua
cheltuielile reprezint circa 70 lei/zi. Lund n consideraie preul mediu de achiziie a carpoforilor - 20 lei/kg
- valorile rentabilitii economice pentru tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04
cultivate pe diverse substraturi nutritive au fost estimate (Tab. 13).
Valoarea maxim supraunitar a raportului dintre venitul net obinut la realizarea recoltei de carpofori
i a costurilor de consum reprezint varianta tehnologic optim de cultivare. Dei EB a tulpinii P. ostreatus
CNMN-FB-04 pentru toate mediile nutritive utilizate este cea mai nalt, rentabilitatea acestuia nu
nregistreaz valori maximale, fapt ce se datoreaz ciclului tehnologic prelungit. Totodat, valorificarea
recoltei de carpofori de pe al III-lea val pentru substraturile PG, PGL i PGC este rentabil, ceea ce, probabil,
este condiionat de particularitile culturale ale tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-04.
Datorit ciclului tehnologic redus i a productivit ii majore pentru I val de recolt , tulpinile P.
ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03 pentru substratul nutritiv PG i tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02
pentru substratul nutritiv PGL au demonstrat o rentabilitate major a procesului tehnologic chiar dup I
 64

recolt (1,24-1,77). Al IV-lea val de recolt nu este rentabil de colectat, astfel nct valoarea rentabilitii este
fie depit de valul de recolt precedent sau mai mic ca unitatea.
n condiii de laborator estimarea rentabilitii procesului tehnologic este dificil de realizat. O
modalitate de evaluare a rentabilit ii procesului tehnologic n condiii experimentale const n determinarea
indicelui randamentului (Ir), care poate fi determinat prin formula propus de noi: Ir = EB/T, unde EB -
eficacitatea biologic (%), iar T - durata ciclului tehnologic, zile. Relaia de mai sus permite stabilirea unei
distincte importante la elucidarea corect a productivitii raportat la unitate de timp. Reieind din
rentabilitatea ciclului tehnologic s-a calculat raportul optimal dintre durata de cultivare i recolta de carpofori
colectat pentru 2-3 valuri de recoltare (Tab. 14).
Tabelul 13
Eficacitatea economic de cultivare a ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03
i CNMN-FB-04 pe diverse substraturi nutritive
Val de cultivare
Substratul

Pleurotus ostreatus
CNMN-FB-02 CNMN-FB-03 CNMN-FB-04
Bi

Bi

Bi
R

R
PG I 5170 9150 1,77 5450 8470 1,55 5940 8480 1,43
II 6920 13680 1,98 7270 11920 1,64 7550 12040 1,59
III 8460 13990 1,65 9090 13230 1,46 9580 16030 1,67
IV 10700 14850 1,39 11190 13780 1,23 10980 16160 1,47
PGL I 5240 6500 1,24 5380 4910 0,91 6780 6410 0,95
II 6920 8840 1,28 7060 7950 1,13 9020 11470 1,27
III 9020 10110 1,12 8390 8940 1,07 10910 13720 1,26
IV 10910 10200 0,93 10140 9200 0,91 - - -
PGFS I 5100 6170 1,21 5520 6160 1,12 6640 6400 0,96
II 6360 8580 1,35 7130 8570 1,20 8600 9910 1,15
III 8530 9030 1,06 8530 9450 1,11 10420 10630 1,02
IV - - - 10280 9620 0,94 - - -
PGC I 5380 5440 1,01 5240 4190 0,80 6010 6250 1,04
II 6850 8600 1,26 6360 7540 1,19 7480 10440 1,40
III 8740 10190 1,17 8250 9350 1,13 8600 12020 1,40
IV 10000 11100 1,11 9440 10380 1,10 10140 13640 1,35
Conform indicilor Ir, tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 este cea mai productiv. Cu toate c EB pentru
tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 este cea mai nalt pentru toate mediile nutritive, I r este cel mai mic, fapt
ce se datoreaz ciclului tehnologic prelungit. Urmrind relaia dintre valorile I r (Tab. 14) i a rentabilitii
procesului tehnologic (Tab. 13), se constat, c acestea sunt interdependente. Astfel, calcularea indicelui
randamentului constituie o metod indirect potrivit de estimare a rentabilitii procesului tehnologic n
condiii de laborator i poate fi utilizat n cadrul selectrii celor mai productive tulpini de P. ostreatus.
Tabelul 14
Productivitatea tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivate
pe diverse substraturi celulozice

dovedit a fi substratul optimal de cultivare pentru toate tulpinile P. ostreatus testate, ceea ce se confirm
adugtor i la calcularea indicelui randamentului. Comparnd nivelul rentabilitii economice pentru
tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 (59-98%) cultivate pe substratul PG cu
cel al ciupercii Agaricus bisporus (38-84%) [127], concluzionm, c acestea sunt eficace i prezint valori
superioare fa de o aa cultur nalt tehnologic cum este ampinionul.
nlocuirea parial a paielor cu alte substraturi celulozice nu au dat rezultate pozitive n vederea
majorrii eficacitii biologice la P. ostreatus. n acelai timp, paiele de graminee -material celulozic provenit
din agricultur sunt regenerate n fiecare an, iar n urma prelucrrii industriale a prilor valoroase din aceste
plante rezult mari cantiti de materie secundar vegetal bogat n celuloz, puin sau deloc valorificat.
Spre exemplu, la un hectar de gru de toamn cu o productivitate de 4 tone de semine se poate obine ca
produs secundar circa 3 tone paie de graminee. Valorificarea total a paielor de gru prin intermediul
tulpinilor Pleurotus ostreatus selectate anterior ar aduce un beneficiu substanial de circa 1,8 - 2,1 tone
carpofori, ceea ce depete de 4,5 - 5,2 ori valoarea de pia a produsului primar - grul. Conform unor
estimri volumul de producere de 1,5 - 2,0 tone de ciuperci ealonat pe parcursul ntregului an ar asigura o
 65

persoan cu un loc stabil de lucru i un venit satisfctor, valorificarea util a paielor de pe un hectar de gru
pentru cultivarea ciupercilor Pleurotus constituind, de fapt, i o oportunitate de creare a unui loc de munc
[86].

4.2.2. Componena biochimic a substraturilor la cultivarea ciupercii P. ostreatus.

Biodegradarea substraturilor celulozice este un proces natural pe baza cruia are loc circuitul carbonului n
natur. Hidroliza materialelor celulozice este nfptuit de diverse asociaii de microorganisme. Totui, o
capacitate redutabil de degradare ale acestora o au fungii putregaiului alb, care consum n mod special
lignina, ceea ce permite folosirea lor n diferite procese biotehnologice legate de majorarea valorii nutritive a
substraturilor valorificate. De asemenea, muli autori indic o reducere aproape proporional a ligninei i
celulozei, nsoit de o majorare a substanelor uor asimilabile n substraturile supuse fermentrii la
cultivarea P. ostreatus, ceea ce nemijlocit conduce la majorarea digerabilitii produsului fermentat [49, 104].
Scopul investigaiilor este elucidarea proceselor biochimice ce au loc n substraturile
lignocelulozice fermentate de tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04
- n posibilitatea utilizrii substraturilor valorificate n diverse domenii ale biotehnologiei aplicate. Mediile
nutritive i condiiile de cultivare a ciupercii P. ostreatus sunt prezentate n Capitolul 4.2.1.
Dinamica degradrii biologice a celulozei i ligninei depinde ntr-o mare msur de aa factori, ca
particularitile biologice ale speciei, condiiile de cultivare, fazele de dezvoltare ale culturii, substratul de
nutriie etc. Starea iniial a substratului: umiditatea, aeraia, mrimea particulelor, prezena substanelor
nutritive are o influen major asupra proceselor de fermentare i asimilare a substratului de ctre miceliul
ciupercilor [129]. Majorarea suprafeei de contact a miceliului cu particulele substratului poate fi realizat
prin mrunirea mecanic a substratului, fapt ce duce la o asimilare mai activ a ligninei i celulozei. Dac
rumeguul de lemn i cojile de floarea-soarelui sunt accesibile fermentrii fr de mrunirea mecanic, apoi
paiele i cocenii necesit a fi mrunii pn la mrimea de 30-50 mm.
Un criteriu de apreciere a capacitii ciupercii de a degrada selectiv lignina l constituie indicele
xilolizei, care reprezint raportul cantitativ al consumului de celuloz fa de suma consumului de celuloz i
lignin [178]. Indicele xilolizei mai mic de valoarea 0,5 stabilete un consum mai mare al ligninei fa de
celuloz. Folosind acest criteriu, s-a cercetat pentru tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04 capacitatea de degradare a ligninei i celulozei. Rezultatele cu referin la modificarea
componentelor de celuloz i lignin n procesul de fermentare, precum i raportul cantitativ de asimilare al
acestor constituieni vegetali (indicele xilolizei I c) sunt prezentate n tabelul 15.
Dup cum se vede din tabel, n faza mpnzirii totale a substraturilor nutritive (12 zile), consumul
ligninei pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 este mai mare dect cel al celulozei, indicele xilolizei
variind de la 0,06 pn la 0,37. De asemenea, pentru substraturile PG i PGFS consumul ligninei la toate
tulpinile testate a fost mai mare dect al celulozei i a constituit 3,914,5% pentru lignina fa de 0,9-5,6%
pentru celuloz. Rezultatele multor cercetri confirm observrile proprii: degradarea ligninei n faza de
incubare a ciupercii P. ostreatus prezint valori maxime i este mai mare dect pentru celuloz [49]. n acela
timp, degradarea celulozei pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 pe substraturile PGL i PGC a fost mai
intens dect pentru lignin, indicele xilolizei avnd valorile de 0,62-0,69. Cu toate acestea, consumul masei
uscate a substraturilor testate dup 12 zile de cultivare cu P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04 a fost mic: aproximativ 2-4% (Figura 16).

Pleurotus ostreatus

CNMN-
FB-02 M
CNMN-
FB-03
 66

PG PGL PGFS PGC

Figura 16. Consumul masei uscate (CMU) a substraturilor dup 12 zile de cultivare cu tulpinile
ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 (%)

n faza fructificrii la P. ostreatus predomin procesul de utilizare a celulozei [143], raportul dintre
degradarea ligninei i a celulozei dup 90 zile de cultivare cu P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04 variind aproape proporional. Astfel, pierderea greutii masei uscate a substraturilor nutritive
dup 90 zile de cultivare a fost de 36-50%, dintre care 36-46% a constituit celuloza, iar 30-44% lignina
(Figura 17, Tabelul 15). Utilizarea avansat a ligninei la cultivarea tulpinilor P. ostreatus testate (30-44%)
vine s confirme datele din literatura de specialitate conform creia rata de descompunere a ligninei pentru
reprezentanii ciupercilor putregaiului alb este superioar i prezint valori pn la 40-42% fa de 15-20%
pentru micromicete [97].
Indicele xilolizei pentru toate tulpinile cultivate pe substratul PGL a fost de 0,49-0,50, consumul
celulozei i ligninei fiind foarte apropiate ca valori: 41,2-41,8% pentru celuloz i 42,142,6% pentru lignin.
Pentru acest mediu nutritiv utilizarea ligninei a atins cote nalte i stabile, totui, cel mai mare consum al
ligninei a fost nregistrat la cultivarea tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-04 pe paie de gru (PG) - 43,9%.
Astfel, tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 cultivat pe paie de gru a nregistrat att o productivitate sporit la
recolta de carpofori, ct i o capacitate redutabil pentru degradarea ligninei n procesul conversiei materiei
vegetale.
Tabelul 15
Componena biochimic a substraturilor celulozice la cultivarea tulpinilor Pleurotus ostreatus
CNMN-FB-02, CNMN-FB-03, i CNMN-FB-04 (%BAU)
elC
uS

gnLi

In
Ti
T

C
C

PG 39,4 23,5
Martor* 02 12 90 39,6 38,1 1,0 45,8 22,5 5,8 33,3 0,15
28,0 0,58
03 04 12 90 39,5 40,9 1,2 45,8 22,6 5,2 34,5 0,18
29,5 0,57
12 90 39,5 43,1 1,6 45,2 22,9 4,4 43,9 0,26
26,3 0,51
PGL 43,0 29,6
Martor 02 12 90 43,3 41,2 2,2 41,2 27,8 9,0 42,1 0,20
28,0 0,49
03 04 12 90 43,8 43,3 0,5 41,8 29,2 3,6 42,6 0,11
29,4 0,50
12 90 42,2 43,2 5,6 41,4 29,6 2,4 42,4 0,62
28,7 0,49
PGFS 40,7 31,6
Martor 02 12 90 42,1 39,7 0,9 38,0 28,5 13,8 0,06
33,9 32,0 0,54
03 04 12 90 41,0 39,7 2,9 41,2 31,6 3,9 35,4 0,42
33,9 0,54
12 90 39,9 38,3 5,6 41,4 28,2 14,5 0,28
32,0 37,0 0,53
PGC 43,0 24,8
Martor 02 12 90 43,7 41,6 1,2 40,3 24,9 2,1 30,6 0,37
27,8 0,57
03 04 12 90 43,2 41,2 2,2 42,7 25,0 1,6 30,3 0,58
28,9 0,58
12 90 42,4 42,7 4,5 36,1 25,0 2,0 32,9 0,69
25,8 0,52
*martor - substratul nutritiv nefermentat.
 67

E de menionat faptul, c cel mai mare consum al masei uscate la toate tulpinile testate a fost stabilit
dup 90 zile de cultivare pe paie de gru: 44-50%. Eficacitatea biologic (EB, %) pentru acest mediu
nutritiv a fost cea mai nalt : 68,9-80,8% fa de substratul nutritiv uscat, ceea ce poate reiei din
consumul mare al masei uscate i, n special, al celulozei (45-46%), deoarece unii autori [81] indic o
corelaie pozitiv dintre consumul de celuloz i recolta de carpofori colectat. Totodat, cu o recolt nalt
de carpofori (68,2%) tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 pe mediul nutritiv PGC a avut un consum relativ
mai mic al masei uscate (35,6%) i al celulozei (36,1%), ceea
 68
ce nu permite a face o legtur sigur ntre consumul substratului i celulozei, pe de o parte i recolta
obinut la cultivarea ciupercii, pe de alt parte.

Pleurotus ostreatus

CNMN-
FB-02 M
CNMN-
FB-03

PGPGLPGFSPGC

Figura 17. Consumul masei uscate (CMU) a substraturilor dup 90 zile de cultivare
cu tulpinile ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 (%)

Reieind din consumul masei uscate s-a estimat coeficientul utilizrii substratului - k =
Y/Mc, unde Y - masa uscat a carpoforilor colectai (kg) i M c - consumul masei uscate a
substratului nutritiv (kg) [163], (Tab.16).
Tabelul 16
Coeficientul utilizrii substraturilor nutritive la cultivarea tulpinilor P. ostreatus CNMN-
FB-
02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04
Substratul Pleurotus ostreatus
CNMN-FB-02 CNMN-FB-03 CNMN-
FB-04
PG 0,169 0,144 0,162
PGL 0,132 0,109 0,169
PGFS 0,124 0,121 0,141
PGC 0,145 0,129 0,191

Analiznd datele din tabel, observm c pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04

coeficienii de utilizare a substraturilor nutritive sunt cei mai mari, cu excepia tulpinii P.
ostreatus CNMN-FB-02 cultivat pe paie de gru (PG), la care coeficientul este puin mai mare
 69
dect pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04: 0,169 fa de 0,162. Cel mai mare coeficient de
utilizare a substratului a fost nregistrat la tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 cultivat pe mediul
nutritiv PGC, ceea ce rezult din consumul relativ mic al substratului celulozic (35,6%) i recolta
nalt de carpofori (EB=68,2%).

O particularitate important la cultivarea intensiv a ciupercii P. ostreatus este majorarea

coninutului de azot n substratul fermentat [128]. Pentru asigurarea unui nivel nalt de sintez a
proteinelor n substraturile supuse cultivrii n faza solid de fermentare se adaug, de regul,
diverse surse sintetice ale azotului organic sau anorganic. Majorarea concentraiei de azot duce n
majoritatea cazurilor la utilizarea selectiv a celulozei i inhib degradarea ligninei. Astfel, poate
fi obinut un produs cu un coninut nalt de proteine, ns cu o digerabilitate sczut. Dup
Zadrazil [102, 104], micorarea cantitativ a ligninei coreleaz cu majorarea digerabilitii in
vitro. De aceea, n acest context, am considerat necesar de a nu utiliza la cultivarea tulpinilor P.
ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 nici o surs de azot suplimentar n
substraturile valorificate.
Coninutul azotului total n substraturile celulozice testate dup 12 zile de cultivare a
tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 a fost cu 3-54% mai mare
fa de cel iniial. Dup 90 zile de cultivare, n rezultatul colectrii carpoforilor, coninutul
azotului total n substraturile fermentate s-a micorat cu 1-33% fa de martor. Excepie constituie
doar tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 cultivat pe mediul nutritiv PGFS, n care azot a fost cu
15% mai mult dect n substratul iniial. Reieind din coraportul azotului ce se coninea n
substrat i a celui extras prin intermediul ciupercilor, coninutul sporit al azotui total din substratul
PGFS deriv din cantitatea relativ mic a recoltei de carpofori colectat (Tab. 17).
Majorarea coninutului de azot la cultivarea P. ostreatus poate fi explicat prin pierderea
unei pri a masei uscate n rezultatul descompunerii pariale a substratului de nutriie pn la
CO2 i H2O, mrind astfel coninutul relativ al azotului n substratul supus fermentrii [101].
Totodat, analiznd rezultatele referitor la sporirea coninutului de azot dup 12 zile de cultivare
pentru
tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04, s-a stabilit o majorare a
 70
azotului total mai mare dect aceea care se coninea iniial n substratul propriu-zis. n aceast
privin exist preri contradictorii, totui, studiile lui Kurtzman [46] despre activitatea
microorganismelor azotfixatoare n substraturile destinate cultivrii P. ostreatus par a fi mai
elocvente. Efectund cercetri n aceast direcie s-a stabilit, c materiile prime ce intr n
componena substratului de nutriie pasteurizat sunt populate de bacterii termofile azotfixatoare
ce aparin genului Bacillus, contribuind prin aceasta la majorarea coninutului de azot n
substratul supus fermentrii [131].
n elucidarea posibilitii de valorificare a substraturilor nutritive i obinerii proteinei
furajere la cultivarea ciupercii P. ostreatus - a fost selectat tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04,
care a atins cele mai mari valori privind majorarea azotului total n substraturile fermentate.
Aminoacizii reprezint sursa cea mai important de azot, componena acestora n substraturile
testate la cultivarea tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-04 fiind prezentat n tabelul 18.
 71
Valoarea biologic a proteinei furajere poate fi estimat prin raportul sumei
Coninutul azotului total, carbonului i proteinei brute (% fa de martor) n substraturile nutritive la cultivarea tulpinilor P. ostreatus CNMN
aminoacizilor eseniali fa de suma aminoacizilor accesibili. Pentru substraturile fermentate
PGFS i PGC acest raport variaz n limitele de 0,64-0,70, fapt pentru care aceste valori se
apropie de cea a proteinei de referin - cazeinei (0,75). Valorile maxime (0,94-1,10) au fost
obinute pentru substraturile PG i respectiv PGL, proteinele acestora caracterizndu-se printr-o
valoare biologic nalt. Cantitatea total a aminoacizilor substraturilor testate a variat ntre 6,7 i
8,6 g/100g BAU.
Tabelul 18
Coninutul de aminoacizi n substraturile celulozice fermentate prin intermediul
'________tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-04 (g/100g BAU)
________
Pleurotus ^ostreatus CNMN-FB-04
Aminoacizii PG PGL PGF PGF PGC
12 zile 12 zile S 12 zile S 90 zile 12 zile
Acidul cisteinic 0,098 0,1508 0,1394 0,2189 0,
9 1376
Taurin 0,141 0,2082 0,0647 0,1402 0,
2 0648
Acidul aspartic 0,645 0,4513 0,7635 0,8437 0,
4 9843
Treonin 0,440 0,4539 0,4697 0,4398 1,
2 2972
Serin 0,436 0,4616 0,4834 0,4889 0,
0 6308
Acidul glutamic 0,909 1,0085 1,0757 0,9668 1,
0 3153
Prolin 0,161 0,1418 0,1542 0,1257 0,
9 1912
Glicin 0,516 0,4698 0,4566 0,4148 0,
1 4708
Alanin 0,388 0,4382 0,4309 0,3678 0,
4 5553
Valin 0,399 0,3274 0,3098 0,2781 0,
7 3945
Cistein 0,530 0,3957 0,5441 0,5131 0,
*martor8- substratul nutritiv nefermentat. 6523
Metionin 0,034 0,0466 0,0588 0,0672 0,
1 0328
Izoleucin 0,676 0,7782 0,2551 0,1782 0,
3 3563
Leucin 1,004 1,3313 0,4167 0,2949 0,
8 3559
 72
Tirozin 0,163 0,1873 0,1816 0,1056 0,
7 1484
Fenilalanin 0,332 0,3623 0,2653 0,2066 0,
4 2500
Acidul aminooleic 0,031 0,0109 0,0129 0,0104 0,
0 0103
Ornitin 0,022 0,0264 0,0305 0,0284 0,
1 0209
Etanolamin 0,056 0,0860 0,0286 0,0216 0,
3 0136
Lizin 0,145 0,1270 0,1933 0,1419 0,
6 1261
Histidin 0,085 0,0745 0,1133 0,0841 0,
3 0750
Triptofan 0,294 0,2771 0,4885 0,6331 0,
1 3477
Arginin 0,109 0,1192 0,0627 0,1693 0,
1 2046
Amoniac 0,120 0,1553 0,3090 0,1594 0,
7 1174
Suma aminoacizilor 7,622 7,9338 6,9993 6,7392 8,
identificati 3 6359
Suma aminoacizilor 3,521 3,8974 2,6332 2,4932 3,
esentiali 6 4402
Suma aminoacizilor 3,751 3,5541 4,0900 3,8264 4,
accesibili 2 9485
Suma aminoacizilor 4,559 4,2835 5,0222 4,9461 6,
imunoactivi" 7 6482
% aminoacizilor 0,462 0,491 0,376 0,370 0
ES/ST1 ,400

ca fenilalanina, valina, iar dup coninutul treoninei i triptofanului - o depesc cu mult.

Totodat, rezultatele obinute ne demonstreaz c substraturile fermentate sunt srace n
metionin i lizin.

1- eseniali; ST - suma total.Cercetarea n dinamic a coninutului de aminoacizi pentru

substratul nutritiv PGFS dup 12 i 90 zile de cultivare cu tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 a
stabilit faptul, c componena calitativ a aminoacizilor se menine la acelai nivel, cu excepia
triptofanului i argininei.
Produsele proteice obinute la cultivarea tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-04 n faza solid de
fermentare nu cedeaz proteinei de referin FAO privind coninutul unor aa aminoacizi
eseniali,
 73
Coninutul aminoacizilor eseniali din produsele proteice obinute au fost comparate cu
rezultatele unor cercettori [162] (Tab. 19).
Tabelul 19
Coninutul aminoacizilor eseniali n unele produse proteice fungice recomandate
[162, p. 148] i n cele obinute n rezultatul cultivrii ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-04 pe
diverse
substraturi lignocelulozice (12 zile de cultivare), %
Aminoacizii Produsul proteic
recomandat obinut
treonin 0,28 0,44-1,30
valin 0,32 0,31-0,40
metionin 0,22 0,03-0,06
izoleucin 0,22 0,26-0,78
leucin 0,49 0,36-1,33
fenilalanin 0,32 0,25-0,36
lizin 0,45 0,13-0,19
protein 8,0-10,0 7,3-8,8

Astfel, rezultatele obinute privind degradarea substraturilor lignocelulozice i mbogirea

acestora cu compui azotai confirm posibilitatea utilizrii ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-04
n obinerea proteinei furajere. Substraturile fermentate testate pot fi folosite la furajarea
animalelor agricole dup 12 zile de cultivare cu P. ostreatus CNMN-FB-04, iar pentru mediul
complex PGFS -i dup recoltarea a dou valuri de carpofori (90 zile).
Este cunoscut faptul, c asimilarea azotului depinde ntr-o mare msur de sursa i de
cantitatea carbonului prezent n mediul de nutriie, de aceea creterea miceliului ciupercii este
determinat de raportul dintre carbon i azot. Raportul carbon/azot optimal creterii miceliului i
fructificrii n faza solid de fermentare se afl conform unor studii n limitele 30/1 [35]. n
substraturile iniiale destinate cultivarii ciupercii P. ostreatus s-a primit un indice mult mai mare:
58-95/1, ceea ce ne demonstreaz faptul c miceliul culturii testate utilizeaz cu succes i
concentraii joase ale azotului prezent n mediile solide nutritive. Totodat, majorarea azotului
total n substraturi dup 12 zile de cultivare duce la o descretere a raportului carbon/azot.
Aceasta rezult din asimilarea carbonului ca surs energetic unde o parte semnificativ a
carbonului se pierde la respiraie sub form de CO 2, iar azotul este metabolizat i reinut de
 74
biomasa culturii. Astfel, micorarea raportului dintre carbon i azot la valorile cuprinse ntre 48-
83/1 a stimulat, probabil, inducerea i apariia fructificrii la tulpinile P. ostreatus testate [35].
Dup 90 zile de cultivare cantitatea de carbon n substraturi s-a micorat puin fa de cea
iniial. Datorit pierderii unei pri a azotului n rezultatul colectrii carpoforilor, indicele
 75

carbon/azot s-a majorat, cu excepia tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-04 pe mediile nutritive PGFS
i PGC.
n rezultatul investigaiilor efectuate s-a stabilit, c tulpinile P. ostreatus testate au
manifestat o capacitate redutabil de degradare a substraturilor lignocelulozice provenite din
reziduurile agroindustriale. ncadrarea efectiv a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-
FB-03 i CNMN-FB-04 la convertirea reziduurilor vegetale locale, relativ srace n compui
azotai, n produse cu valoare nutritiv ridicat, poate fi folosit n diverse procese biotehnologice
ce in de producerea proteinei furajere i alimentare. Cercetrile n ceea ce privete degradarea
enzimatic a constituenilor vegetali, ca celuloza i lignina, precum i majorarea coninutului
azotului total n substraturile nutritive valorificate au elucidat posibilitatea integrrii tehnologiilor
de cultivare a ciupercii P. ostreatus n lanul de valorificare util a reziduurilor vegetale. Astfel,
dup 12 zile de cultivare cu tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04, coninutul proteinei brute pentru
substraturile nutritive testate s-a majorat de la 3,6-5,8% la 7,3-8,8%, degradarea substraturilor
nutritive constituind 4,5-5,6% pentru celuloz i 2,0-14,5% pentru lignin. Acest fapt duce
nemijlocit la majorarea valorii nutritive i digerabilitii produsului fermentat, ceea ce poate fi
folosit pe larg la fabricarea nutreurilor combinate pentru animale (bovine, porcine). Semnificativ
este faptul, c substratul complex PGFS pentru P. ostreatus CNMN-FB-04 poate fi folosit la
furajarea animalelor i dup recoltarea a dou valuri de carpofori, coninutul azotului total dup
90 zile de cultivare avnd valoarea de 115% fa de martor. Aceasta permite obinerea ntr-un
singur ciclu tehnologic a proteinei furajere i alimentare, prezentnd un proces biotehnologic
finisat, fr poluarea mediului nconjurtor.
 76

4.2.3 Valoarea nutritiv a carpoforilor Pleurotus ostreatus. n present lipidele i hidraii

de carbon nu sunt deficitari n alimentarea omului. De aceea, la estimarea valorii nutritive a
ciupercilor o importan major se acord compuilor proteici. Carpoforii Pleurotus ostreatus
constituie o bun surs de proteine, ntruct coninutul n substane proteice raportat la substana
absolut uscat este cuprins ntre 7,0-41,6% [129]. Proteinele sunt constituite din 20 de
aminoacizi, eseniali pentru om fiind 9 din ele - treonina, valina, metionina, izoleucina, leucina,
tirozina, fenilalanina, lizina i triptofanul. Dezichilibrul raportului ntre aminoacizi duce la o
dereglare a echilibrului proteic, administrarea corect asigurndu-i organismului viu o activitate
normal a funciilor cu o semnificaie esenial n metabolismul celular.
Valoarea biologic (nutritiv) a proteinei se afl ntr-o dependen de echilibrul
aminoacizilor si, reglementarea normelor ce caracterizeaz echilibrul aminoacizilor proteici fiind
consemnat de organizaia FAO (Food and Agricultural Organization), care a stabilit i a aplicat
dou standarde -cel al proteinei oului de gin (albumina) i al laptelui uman (cazeina). La
estimarea valorii nutritive a carpoforilor este necesar cercetarea a trei factori condiionai
reciproc : digerabilitatea proteinei, coninutul proteinei i componena aminoacizilor [14].
Numeroase cercetri au descris destul de amnunit compoziia chimic a carpoforilor de P.
ostreatus [129, 142]. Totui, parametrii biochimici ai carpoforilor cultivai pe diverse substraturi
nutritive difer unul de altul, astfel nct cunoaterea aminoacizilor naturali ce intr n compoziia
ciupercilor este oportun pentru elucidarea posibilitii de utilizare a tulpinilor selectate n
biotehnologie. Este cunoscut faptul, c coninutul sporit al azotului total n substraturile
celulozice duce la o majorare a acestuia i n carpofori, ceea ce determin valoarea nalt nutritiv
a ciupercilor cultivate [103, 129]. nlocuirea parial a paielor de gru cu alte substraturi naturale
(coji de floarea-soarelui, rumegu de lemn, coceni) cu un coninut mai mare al azotului total
(Capitolul 4.2.2) reprezint o soluie potrivit, dat fiind ncadrarea efectiv ale acestora la
convertirea reziduurilor locale n produse cu valoare nutritiv mai ridicat dect pentru paiele de
gru (100%). Obiectivul cercetrilor const n ameliorarea valorii nutritive a carpoforilor P.
ostreatus prin nlocuirea parial a paielor de gru relativ srace n azot cu alte componente
naturale mai bogate n compui ai azotului. Eficiena utilizrii componentelor naturale rezult i
din faptul, c acestea reprezint reziduuri regenerabile ale complexului agroindustrial, deci sunt
 77
accesibile i ieftine. Mediile nutritive, condiiile de cultivare i tulpinile P. ostreatus utilizate sunt
prezentate n Capitolul 4.2.1.
Cunoscnd faptul, c coninutul aminoacizilor n carpoforii ciupercilor depinde de mediul
nutritiv a fost studiat compoziia aminoacizilor la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-
FB-03 i CNMN-FB-04 cultivate pe diverse substraturi celulozice. Rezultatele determinrii
componenei aminoacizilor totali n masa absolut uscat a carpoforilor la cultivarea tulpinilor P.
 78
ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pe diferite substraturi celulozice sunt
prezentate n tabelele 20, 21.
Tabelul 20
Coninutul de aminoacizi n carpoforii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-
FB-04 cultivai pe diverse substraturi celulozice (g/100 g BAU)

*ES - eseniali; ST - suma total.

 79

Coninutul de aminoacizi n carpoforii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivai pe diverse substraturi celulozic

*ES - eseniali; ST - suma total.

 Carpoforii P. ostreatus conin toi aminoacizii eseniali omului, iar n componena aminoacizilor
predomin acizii glutamic i aspartic, ceea ce este tipic ciupercilor comestibile [14]. Rezultatele cercetrilor
au artat c carpoforii tulpinilor P. ostreatus conin 18 aminoacizi, dintre care 9 aminoacizi sunt eseniali -
treonina, valina, metionina, izoleucina, leucina, tirozina, fenilalanina, lizina i triptofanul. Menionm
prezena aminoacizilor considerai imunoactivi"[124] n carpoforii ciupercii P. ostreatus, acestea fiind:
acidul glutamic (3,02-9,77g/100g BAU), acidul aspartic (0,57-3,72g/100g BAU), cisteina (1,15-7,69g/100g
BAU), alanina (0,94-2,59g/100g BAU), glicina (1,09-2,43g/100g BAU), serina (0,38-2,01g/100g BAU),
treonina (0,31-2,06g/100g BAU), valina (0,48-1,20g/100g BAU) i triptofanul (0,09-0,39g/100g BAU).
Important este cantitatea foarte nalt a aminoacidului ce conine sulf - cisteina, care tradiional este un
aminoacid deficitar n carpoforii ciupercilor [14, 129]. Dac comparm indicele S/T*a albuminei (0,47) cu
cel al carpoforilor P. ostreatus (0,53-1,67), constatm o diferen de 1,1 - 3,5 ori fa de proteina standard a
oului de gin. Asparagina i glutamina nu au fost depistate n carpofori, n schimb, acizii acestor aminoacizi
au constituit valori mari i aproape constante : 8 - 9% pentru acidul aspartic i 18 - 22% pentru acidul
glutamic.
Tulpinile studiate au avut diferene att n ceea ce privete coninutul n parte a fiecrui aminoacid, ct
i n cantitatea total a aminoacizilor proteinei totale. Astfel, de exemplu, cantitatea total a aminoacizilor
carpoforilor pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 a variat ntre 26,1 i 30,9 g/100g biomas absolut
uscat (BAU), pentru P. ostreatus CNMN-FB-03 - 31,6-41,0 g/100g BAU, iar pentru tulpina P. ostreatus
CNMN-FB-04 - 15,3-45,3 g/100g BAU.
Comparnd cantitatea aminoacizilor eseniali cu normele ntrite de FAO pentru proteina ideal", s-a
demonstrat c carpoforii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cu unele excepii ntrec
cantitativ proteina ideal" cu 5 din 9 aminoacizi (Tab. 22). Acesta se refer la treonin (115-130 % fa de
martor), leucin (101-170 %), lizin (104-207 %), tirozin (113120%) i fenilalanin (103-160%) (Figura
18).
Deficitare din punct de vedere al coninutului de aminoacizi eseniali sunt metionina (6 - 31 % fa de
albumin), izoleucina (33 - 63 %), triptofanul (30-90%) i valina (44 - 90%). Aceste date corespund celor din
literatura de specialitate, cu excepia cisteinei i lizinei, care au fost superioare fa de coninutul de
aminoacizi ce se conine n albumin. Cantitatea sporit a lizinei (104-207% FAO) pentru ciupercile
Pleurotus constituie un avantaj esenial fa de produsele de origine vegetal - tradiional deficitare n
coninutul acestui aminoacid.

S/T - raportul sumei aminoacizilor ce conin sulf (metionin+cistein) la suma azotului.

 81
Tabelul 22
Coninutul de aminoacizi eseniali (g/100g protein) n proteina ideal" i n
proteina carpoforilor P. ostreatus CNMN-
FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04
cultivai pe diferite medii nutritive

Aminoacizii PG PGL PGFS

CNMN- CNMN- CNMN- CNMN- CNMN- CNMN- CNMN- CNMN- CNMN
FB-02 FB-03 FB-04 FB-02 FB-03 FB-04 FB-02 FB-03 FB-04
treonin 4,7 4,8 3,4 4,9 5,0 4,7 4,6 5,2 1,4
valin 2,9 2,3 4,5 2,2 2,3 2,5 2,7 2,5 2,2
metionin 1,1 0,2 0,4 1,1 0,9 0,9 1,1 0,7 0,9
izoleucin 1,3 1,4 2,4 1,5 1,6 1,5 1,5 1,6 2,5
leucin 6,2 7,0 11,8 7,1 7,8 7,4 7,9 7,3 11,9
tirozin 1,5 2,1 3,4 2,3 2,7 2,4 2,4 2,3 3,6
fenilalanin 2,3 2,4 4,8 3,0 3,1 2,5 3,3 3,0 4,9
lizin 5,0 5,4 11,4 4,8 5,5 5,7 7,5 6,7 10,3
triptofan 0,4 0,4 0,9 0,5 0,5 0,3 0,6 0,5 1,7
25,4 26,0 43,0 27,4 29,4 27,9 31,6 29,8 39,4
Suma
aminoacizilor
eseniali
 Figura 18. Coninutul de aminoacizi eseniali (% fa de proteina ideal FAO) n
carpoforii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivai pe diverse
substraturi celulozice
Un indice important ce caracterizeaz proteina este digerabilitatea acesteia, care reprezint
un raport dintre aminoacizii uor i greu hidrolizabili i poate fi calculat prin raportul dintre suma
argininei i lizinei fa de prolin. Cu ct acest indice este mai mare, cu att digerabilitatea
proteinei este mai nalt . Astfel, pentru proteina orezului acest indice se apropie de 4, la soia -
2,1, iar la graminee - n jurul valorii 1 [168]. La tulpinile testate acest raport variaz n limite
destul de largi, majoritatea avnd valorile cuprinse ntre 3,4 - 5,0, proteinele carpoforilor
caracterizndu-se printr-o valoare nalt nutritiv.
Pentru estimarea valorii nutritive a carpoforilor P. ostreatus se propune calcularea indicelui
aminoacizilor eseniali (EAA), care reprezint raportul sumei aminoacizilor eseniali ce se conine
n produsul examinat la suma aminoacizilor eseniali din proteina oului de gin [62]. Valoarea
nutritiv nu depinde numai de coninutul aminoacizilor eseniali, ci i de cantitatea de protein, de
aceea pentru o caracterizare mai exact a valorii nutritive se estimeaz i indicele nutritiv [14],
care este produsul indicelui EAA i a coninutului de protein (%) raportat la 100% (Tab. 23).
Astfel, datorit coninutului nalt al proteinelor din carpoforii tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-03,
indicele nutritiv a atins valorile 23,8 - 33,1, fapt ce a permis a fi raportai la valorile nutritive a
leguminoaselor pentru boabe (indicele nutritiv = 21), ciupercilor de calitate superioar (indicele
nutritiv = 28) i soia (indicele nutritiv = 31).
Tabelul 23
Valoarea nutritiv a carpoforilor P. ostreatus cultivai pe diverse substraturi celulozice
 83
Tulpina Indicele EAA Indicele nutritiv
P.ostreatus PG PGL PGFS PGC PG PGL PGFS PGC
CNMN-FB-
02 70,5 76,1 87,8 79,4 17,9 22,1 26,2 19,6
03 72,2 81,6 82,7 76,9 25,9 31,4 33,1 23,8
04 119,4 77,5 109,4 82,7 17,2 23,2 24,8 36,2

Indicele aminoacizilor eseniali (EAA) la carpoforii tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-04

pentru paie de gru (PG) a fost superior proteinei de referin FAO i a atins valoarea de 119,4.
Totui, datorit coninutului mic al proteinelor carpoforilor, indicele nutritiv a fost cel mai mic
(17,2). Cea mai nalt valoare a indicelui nutritiv a fost obinut la carpoforii tulpinii P. ostreatus
CNMN-FB-04 pentru mediul PGC - 36,2 i poate fi raportat la cea a crnii de porc (indicele
nutritiv = 35). Totodat, din cauza coninutului de substane greu digerabile, mai cu seam a
chitinei i celulozei, ciupercile cedeaz crnii, digerabilitatea carpoforilor constituind valori mai
mici de 70% [14]. Pentru substratul celulozic PGFS, indicii nutritivi la tulpinile P. ostreatus
CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03 au fost cei mai mari - 26,2-33,1. Astfel, valoare nutritiv a
carpoforilor P. ostreatus constituie o trstur distinctiv a tulpinii (P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03) i depinde de substratul nutritiv pe care este cultivat (P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03, CNMN-FB-04).

Generaliznd rezultatele expuse n Capitolul IV, conchidem urmtoarele:

n urma studierii tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04
selectate anterior, s-au determinat diferenele morfo-culturale i biochimice, au fost selectate
mediile optime de nutriie i caracterizat valoarea nutritiv a carpoforilor.
Diferenele n ceea ce privete asimilarea diverselor surse de carbon i azot au fost
elucidate la utilizarea diverselor medii nutritive, tulpinile din aceiai specie deosebindu-se ntre
ele prin exigenele de nutriie, regimul termic, particularit ile morfo-culturale.
Potrivit criteriului termic, tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 a demonstrat o capacitate
valoroas din punct de vedere al creterii la temperatur nalt (38 0C). Prin intermediul
hibridizrii intraspecifice aceast nsuire poate fi utilizat n cadrul procesului selectiv n scopul
ameliorrii speciei P. ostreatus.
Selectarea tulpinilor P. ostreatus numai dup principiul productivitii nu este suficient.
Pentru elucidarea particularitilor biotehnologice este necesar i determinarea unui ir de indici,
ca cel al randamentului (Ir), eficacitii economice, xilolizei (I c), consumului masei uscate (CMU),
coeficientului de utilizare a substratului (k), valorii nutritive a carpoforilor (indicele nutritiv i
indicele aminoacizilor eseniali - EAA) etc. Astfel, n procesul seleciei mediilor nutritive, paiele
(PG) s-au dovedit a fi substratul optimal de cultivare pentru toate tulpinile P. ostreatus testate,
fapt confirmat att de productivitatea major (EB=59,6-80,2%), ct i de indicele randamentului
(0,861,22). Totodat, indicii nutritivi ai carpoforilor P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-04
cultivai pe paie de gru au fost cei mai mici (17,2-17,9), ceea ce minimalizeaz evenimentul
obinerii unei recolte nalte prin valoarea nutritiv sczut a acestora.
Cel mai mare coeficient de utilizare a substratului (0,191) a fost gsit la tulpina P. ostreatus
CNMN-FB-04 cultivat pe mediul nutritiv PGC. Pentru acest mediu nutritiv tulpina P. ostreatus
CNMN-FB-04 a atins cea mai nalt valoare a indicelui nutritiv (36,2), ceea ce a permis a fi
raportat la valoarea nutritiv a proteinelor animaliere (indicele nutritiv = 35). Dei, nlocuirea
parial a paielor de graminee cu coceni de porumb nu a majorat productivitatea ciupercilor la P.
ostreatus CNMN-FB-04, datorit calitilor nutritive superioare acest substrat poate fi recomandat
pentru cultivarea intensiv la obinerea carpoforilor cu valoare nutritiv nalt.
Tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 a manifestat att o productivitate sporit la recolta de
carpofori, ct i o capacitate redutabil pentru degradarea ligninei, indicele xilolizei dup 90 zile
de cultivare atingnd valorile de 0,49 - 0,53. Coninutul proteinei brute pe mediile nutritive testate
dup 12 zile de cultivare cu tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 s-a majorat de la 3,6-5,8% la 7,3-
8,8%, degradarea materialelor celulozice constituind 4,5 -5,6% pentru celuloz i 2,0 - 14,5%
pentru lignin. Acest fapt duce nemijlocit la majorarea valorii nutritive i a digerabilitii
produsului fermentat, ceea ce poate fi folosit pe larg la obinerea nutreurilor combinate pentru
animale (bovine, porcine).
Cei mai mari indici ai randamentului au fost obinui pentru substraturile nutritive PG, PGL
i PGFS la tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 (0,79-1,22), fapt confirmat i de rentabilitatea
major a procesului tehnologic (1,28-1,98). Eficacitatea biologic pentru P. ostreatus CNMN-FB-
02 este mai mic dect pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04. n acelai timp, datorit ciclului
tehnologic redus (48-56 zile) i tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 prezint interes deosebit n
vederea selectrii tulpinilor cu o productivitate precoce. Dei EB a tulpinii P. ostreatus CNMN-
FB-04 pentru toate mediile nutritive utilizate este cea mai nalt, rentabilitatea procesului
 85
tehnologic nu nregistreaz ntotdeauna valori maximale, fapt ce se datoreaz ciclului tehnologic
prelungit (80-93 zile).
Carpoforii tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-03 pot fi caracterizai prin coninutul nalt al
proteinelor i calitilor tehnice deosebite (raportului optim dintre picior i plrie). Indicii
nutritivi au constituit 23,8 - 33,1 uniti convenionale, fapt ce au permis a fi raportai la valorile
nutritive a leguminoaselor pentru boabe (indicele nutritiv = 21), ciupercilor de calitate superioar
(indicele nutritiv = 28) i soia (indicele nutritiv = 31). Indicii nutritivi ai carpoforilor obinui n
baza substratului de nutriie PGFS pentru tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03 au
fost cei mai mari - 26,2 i respectiv 33,1 uniti convenionale, ceea ce rezult din coninutul nalt
al azotului total ce se conine n acest substrat (0,93%).
Studierea carpoforilor P. ostreatus cu referin la capacitatea de sintez a aminoacizilor
-principalii compui organici ce particip la sinteza proteinelor - a artat c tulpinile testate
formeaz aminoacizi n limite destul de largi: de la 15,3 pn la 45,3 g aminoacizi la 100 g BAU,
n care partea aminoacizilor eseniali alctuete 26,1 - 42,4% din totalul de aminoacizi
identificai. Componena acestora se caracterizeaz i printr-un coninut sporit al aminoacizilor
imunoactivi": 18,30-21,41%BAU pentru P. ostreatus CNMN-FB-02, 22,54-29,03%BAU pentru
P. ostreatus CNMN-FB-03 i 8,98-31,51%BAU pentru P. ostreatus CNMN-FB-04. De asemenea,
carpoforii P. ostreatus ntrec cantitativ normele ntrite de FAO pentru proteina ideal" cu 5 din
9 aminoacizi eseniali : treonina (115-130%), leucina (101-170%), lizina (104-207%), tirozina
(113-120%) i fenilalanina (103-160%). Aminoacizii ce predomin sunt acizii glutamic, aspartic
i cisteina. Menionm cantitatea foarte nalt a aminoacidului ce conine sulf - cisteina, care
tradiional este un aminoacid deficitar n carpoforii ciupercilor.
Investigaiile efectuate relev faptul c valoarea nutritiv a carpoforilor este determinat
att de compoziia substratului nutritiv, ct i de particularitile biologice ale tulpinilor Pleurotus
ostreatus.

CAPITOLUL V
PARTICULARITI BIOLOGICE DE CULTIVARE ALE CIUPERCII
PLEUROTUS OSTREATUS N FAZA LICHID DE FERMENTARE
 5.1 Aciunea surselor de carbon i azot asupra creterii miceliului
P. ostreatus cultivat submers
Pentru a caracteriza exigenele de nutriie a microorganismului heterotrof este nevoie de
anumite studii de laborator ce prevd utilizarea practicilor de diversificare a mediilor culturale
nutritive. Aceste studii includ n mod obligatoriu i cercetarea aciunii surselor de azot i carbon
asupra creterii i a altor manifestri biologice ale microorganismului, astfel nct compuii C i
N ndeplinesc funcii cu o semnificaie esenial n metabolismul celular. Cercetrile privind
necesitile fiziologice n utilizarea diverselor surse de carbon i azot, precum i elaborarea unui
proces economic rentabil de obinere a biomasei proteice prin cultivarea submers a
bazidiomicetelor reprezint obiectivul multor studii n domeniul biotehnologiei microbiologice
[74, 88, 110, 127, 134].
Scopul investigaiilor const n elucidarea caracterelor morfo-culturale i n determinarea
acumulrii biomasei la P. ostreatus n funcie de sursele de carbon i azot asimilate - n ncercarea
de a stabili exigenele nutriionale pentru utilizarea acestuia n diverse procese biotehnologice.
Pentru cercetri au fost folosite tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04 selectate anterior (Capitolul III). Tulpinile P. ostreatus selectate au fost cultivate n
baloane Erlenmeyer cu cte 150ml mediu nutritiv fiecare n condiii submerse, aerarea fiind
realizat printr-o agitare pe un dispozitiv rotativ cu 180 r.p.m. timp de 10 zile. Componena
mediului nutritiv este urmtoarea: KH 2PO4 - 1g., MgSO4x7H2O i KCl - cte 0,5g. fiecare, FeSO 4
- 0,1g., F^Odist. -1000ml, sursa de azot - 0,2g., sursa de carbon - 4g., P H iniial - 5,6 [129]. n
calitatea sursei unice de carbon pe mediul sintetic au fost studiate monozaharidele - glucoza,
galactoza, xiloza, arabinoza; dizaharidele - maltoza, zaharoza, lactoza; polizaharidul - amidon i
alcoolul - manit. Sursa de azot a servit mediul nutritiv cu NaNO 3 (0,2 g/l), intensitatea de cretere
fiind caracterizat prin acumularea biomasei absolut uscate (BAU,g/l) dup 240 ore de cultivare
(Tab. 24).
Astfel, rezultatele obinute nu permit de a alege o surs preferenial pentru toate tulpinile
P. ostreatus testate i confirm unele date din literatura de specialitate privind asimilarea
diferitelor surse de carbon de ctre aceast cultur [130]. Dac pentru tulpina P. ostreatus CNMN-
FB-02 sursa de carbon optimal este zaharoza, pentru tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04 -nici o surs nu este de preferin.
 87

Acumularea biomasei miceliene (BAU, g/l) la cultivarea tulpinilor ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pe

Tulpinile P. ostreatus testate utilizeaz att sursele de azot anorganice, ct i cele

organice, totodat gradul lor de asimilare este diferit (Tab. 25). Sursele anorganice ale azotului se
prezint sub forma srurilor de amoniu (NH 4NO3, (NH4)3PO4, (NH4)2SO4) i nitrailor (NaNO3,
NH4NO3), iar cele ale azotului organic - sub forma aminoacizilor (asparagina, acidul aspartic).
Sursa de carbon a mediilor nutritive cu azot testate a servit glucoza (4 g/l).
Azotul organic asigur o cretere mai eficient a miceliului ciupercii fa de srurile
minerale ale azotului [186]. n urma unor investigaii, se menioneaz, c asparagina este sursa de
azot optimal pentru multe bazidiomicete [8]. Prin cercetrile efectuate, s-a stabilit, c asparagina
este sursa de azot optimal pentru tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03. n acelai
timp, pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 cele mai bune surse de azot sunt cele anorganice -

NaNO3 i (NH4)3PO4.
Tabelul 25
Acumularea biomasei miceliene (BAU, g/l) la cultivarea tulpinilor ciupercii P. ostreatus
CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pe mediul nutritiv Czapek cu diverse surse
de
Sursa de azot
carbon Pleurotus ostreatus
CNMN-FB-02 CNMN-FB-03 CNMN-FB-04
Mm Mm Mm
NaNO3 1,22 0,02 1,22 0,03 1,64 0,06
NH4NO3 1,42 0,08 1,23 0,02 1,22 0,02
(NH4O2SO4 1,60 0,07 1,51 0,13 1,40 0,14
(NH4)3PO4 1,82 0,02 1,49 0,02 1,60 0,04
asparagina 2,53 0,13 1,87 0,07 1,50 0,07
ac. aspartic 2,31 0,06 1,69 0,16 1,53 0,12

Tulpinile P. ostreatus testate se caracterizeaz printr-o stabilitate a caracterelor morfo-

culturale, manifestat prin capacitatea de meninere i pstrare a identitii taxonomice i
fenotipice. Cercetrile privind caracterele morfo-culturale ale tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-
02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 evideniaz la toate mediile nutritive utilizate structuri
miceliene n form de sfere rotunde, pufoase, uneori alungite, neregulate de diverse mrimi - de la
0,5 la 6mm n diametru, sau buci de filamente, conglomerate - toate fiind specifice culturii P.
ostreatus. S-a constatat, c forma i diametrul sferelor miceliene depinde de viteza agitrii
acestora, majorarea rotaiilor dispozitivului de cultivare submers pn la 500 r.p.m. ducnd la
omogenizarea i micorarea sferelor miceliene asemeni terciului de gri". n acelai timp,
existena unei legturi ntre formele morfologice a miceliului ciupercii cultivat submers i nivelul
acumulrii biomasei nu a fost stabilit [127].
Totaliznd rezultatele cercetrilor efectuate, constatm faptul, c tulpina P. ostreatus
CNMN-FB-02 este cea mai eficient privind asimilarea diferitelor surse ale carbonului i azotului,
valorile acumulrii biomasei (BAU) n majoritatea lor fiind superioare fa de cele ale lui P.
ostreatus CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04. De aceea, n continuare, pentru selectarea mediului
nutritiv optim acumulrii biomasei a fost utilizat tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02. n
conformitate cu rezultatele obinute privind cultivarea submers a tulpinii P. ostreatus CNMN-
FB-02 zaharoza, glucoza, amidonul i asparagina au fost selectate ca surse de C i N eficiente
acumulrii biomasei. n acelai timp, melasa, care reprezint un produs rezidual provenit de la
extragerea zahrului de sfecl, conine pn la 52% zaharoz [177], utilizarea acesteia ca
nlocuitor al zaharozei contribuind la ieftinirea mediului de cultivare pentru cultura ciupercii.
S-a stabilit [110, 127], c melasa, malul de bere, peptonul i ureea reprezint surse de
carbon i azot eficiente acumulrii biomasei la cultivarea submers a ciupercii P. ostreatus.
Astfel, pentru selectarea mediului nutritiv la cultivarea ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02 au
fost utilizate att surse sintetice, ct i complexe: glucoza, amidonul, melasa, peptonul,
asparagina, ureea i malul de bere.
Rezultatele privind caracterele morfo-culturale i de acumulare a biomasei (BAU) la
cultivarea submers a ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02 variaz n funcie de concentraiile
surselor de C i N asimilate (Tab.26).
Dup cum se vede din tabel, productivitatea maximal a tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-
02 s-a obinut la utilizarea malului de bere. Majorarea concentraiei malului de bere de la 4 0 la
120Balling duce la o intensificare a acumulrii biomasei miceliene, n acelai timp, la sporirea
concentraiei acestuia randamentul ciupercii se micoreaz. n acest mod, concentraiile malului
de bere 60-80Balling corespund randamentului optimal al acumulrii biomasei tulpinii P. ostreatus

CNMN-FB-02. Valorile BAU - 16,51-17,84 g/l depesc cu mult valorile acumulrii biomasei
pentru restul surselor de carbon i azot testate, astfel nct malul de bere 6 0-80Balling asigur o
 89
intensitate maxim a activitii metabolice, prezentndu-se ca mediu de nutriie eficient
acumulrii biomasei pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02.
Tabelul 26
Caracterele morfo-culturale i acumularea biomasei absolut uscate (BAU, g/l) la cultivarea
submers a tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-02 pe diverse medii nutritive sintetice i
complexe
Sursa Concentraia Caracterele morfo-culturale i BAU, g/l
g/l ' organoleptice
glucoza 10 20 40 Sfere mici rotunde cu diametrul 1-3mm, buci de 0,40 0,03
60 hife i conglomerate; la extremitatea superioar a 0,49 0,04
fazei lichide pe colb se formeaz un inel de hife 0,84 0,05
miceliene de substrat i aeriene cu limea de 1- 1,14 0,07
2mm, miros plcut, slab floral
melas 10 Sfere rotungite, pufoase, uneori ovale cu 0 -1-5mm; 0,43 0,03
30 pe colb se formeaz un inel de hife miceliene de o 1,40 0,06
60 culoare castanie din cauza mediului nutritiv, miros 0,92 0,06
neutru sau slab de ciuperci
amidon 10 Sfere mici rotunde, stelate 0 - 0,5-3mm, albe; la 0,24 0,01
20 extremitatea superioar a fazei lichide pe colb se 0,95 0,04
40 formeaz un inel de hife miceliene de limea 2- 1,58 0,03
60 3mm, miros foarte plcut de ciuperci 2,60 0,12
malt de 40Balling Cretere abundent n form de sfere rotunde sau 10,22 0,90
bere 60Balling stelate, unele puin ovale cu 0 - 2-6mm, buci de 16,51 1,24
80Balling hife mici - 0,5mm; pe colb, la extremitatea 17,84 1,06
100Balling superioar a fazei lichide se formeaz un inel din 17,86 1,46
120Balling filamente aeriene i de substrat cu limea de 5- 19,02 1,88
10mm, miros foarte plcut de ciuperci
pepton 1,5 3,0 6,0 Conglomerate de filamente, sfere rotunde sau 2,06 0,16
neregulate 0 - 0,5-5mm, inel de hife miceliene de 2,49 0,12
limea 2-5mm, miros slab, puin floral 3,54 0,24
asparagin 0,5 1,0 2,0 Conglomerate de hife miceliene, sfere rotungite 0,67 0,03
pufoase 0 - 0,5-4mm, inel de culoare alb de 0,89 0,05
limea 2-3mm, miros plcut de ciuperci 1,38 0,10
uree 0,5 1,0 2,0 Buci de filamente i conglomerate rotunde mici 0 0,35 0,02
- 0,5-2mm, inel de hife miceliene slab pronunat de 1,24 0,06
limea 1-2mm, miros slab de ciuperci 1,07 0,09

De rnd cu datele experimentale ale unor autori [127, 134] referitor la capacitatea de
asimilare a diferitelor nutrieni de ctre P. ostreatus, menionm faptul c mediile complexe
bogate n zaharide, aminoacizi, vitamine i diverse substane bioactive n condiiile cultivrii
submerse sunt mai eficiente acumulrii biomasei miceliene dect cele sintetice. Eficacitatea
mediilor nutritive complexe fa de cele sintetice poate fi explicat prin faptul, c unii constitueni
intermediari necesari activit ii metabolice ale ciupercii sunt deja prezeni n mediul de nutriie i
nu necesit a fi sintetizai de novo. n componena mediilor nutritive complexe, ca de exemplu al
malului de bere, pe lng zaharide, substane azotate, vitamine i acizi grai se mai conin i
compui ai fosforului, sulfului, diverse microelemente, rolul crora n metabolismul
bazidiomicetelor nu este elucidat pe deplin. De aceea, realizarea unui mediu sintetic ce ar
corespunde n totalitate exigenelor nutriionale a unei tulpini de bazidiomicet este dificil,
utilizarea pe scar larg a unui astfel de mediu fiind puin probabil [127].
n concluzie, pe baza datelor experimentale obinute se poate afirma, c malul de bere
poate fi propus n calitate de mediu nutritiv eficient acumulrii biomasei miceliene pentru tulpina
P. ostreatus CNMN-FB-02. Valorile maxime ale acumulrii biomasei - 16,51-17,84 g/l BAU au
fost primite pentru concentraiile 6 0-80Balling a malului de bere. Biomasa obinut posed i un
miros puternic i plcut de ciuperci, ceea ce este semnificativ n cazul utilizrii acesteia ca produs
alimentar. O alt particularitate pe lng obinerea biomasei alimentare este utilizarea miceliului
cultivat submers n calitate de inoculum pentru replicarea pe scar larg a materialului semincer
[127, 134]. Prin cercetrile efectuate am constatat, c folosirea a 8-10%V de inoculum P.
ostreatus cultivat submers duce la micorarea cu 2 zile a duratei de cultivare, ceea ce reduce i
ieftinete procesul tehnologic de preparare a materialului semincer granulat. Materialul semincer
granulat obinut n baza inoculumului P. ostreatus cultivat submers este fertil, capacitatea de
fructificare fiindu-i demonstrat n figura 19.

Figura 19. Fructificarea pstrvului de fag n baza inoculumului Pleurotus ostreatus

cultivat submers
 91
Rezultatele obinute in s confirme i unele date din literatura de specialitate [74, 102, 127,
134] cu privire la perspectiva cultivrii submerse a ciupercii P. ostreatus n scopul obinerii
biomasei alimentare.
5.2 Valoarea nutritiv a miceliului P. ostreatus cultivat submers
Studiul cultivrii submerse a unor specii de bazidiomicete n scopuri alimentare impune cu
necesitate cercetarea nivelului i randamentului de acumulare a biomasei miceliene, determinarea
inofensivitii i valorii nutritive a acesteia, analiza comparativ i stabilirea gradului de
similaritate a componentelor proteice a biomasei miceliene cu a carpoforilor ciupercii - produsul
tradiional folosit n alimentaie.
Posibilitatea utilizrii miceliului de ciuperci comestibile n scopuri alimentare se
apreciaz, mai nti de toate prin estimarea valorii nutritive, determinate de coninutul proteinei,
componentelor calitative i digestibilitii biomasei culturale.
Digestibilitatea proteinelor n carpoforii ciupercilor comestibile se estimeaz la valori de
pn la 70% [14]. Unii autori [88, 134] au stabilit, c n dependen de sursa de carbon utilizat,
digestibilitatea proteinei fungice la cultivarea submers a miceliului de Lentinus edodes,
Pleurotus ostreatus, Panus tigrinus, Flammulina velutipes ajunge pn la 80-90%.
Prin cercetrile efectuate asupra animalelor de laborator, menite s pun n eviden
inofensivitatea miceliului P. ostreatus cultivat submers, s-a constatat c biomasa acestuia nu este
toxic i poate fi folosit n alimentaie [134]. Semnificativ este i faptul, c bazidiomicetele la
cultivarea submers nu formeaz spori care pot provoca boli alergice pentru personalul de
deservire, un astfel de pericol existnd real la cultivarea ascomicetelor [184].
Scopul cercetrilor efectuate a constat n evaluarea valorii biologice (nutritive) a
miceliului tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivate submers
- pentru stabilirea posibilitii de valorificare a biomasei miceliene n alimentaie.
Tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 au fost cultivate n
baloane Erlenmeyer cu cte 150 ml mal de bere 6 0Balling fiecare n condiii submerse la
temperatura de 2710C, aerarea fiind realizat printr-o agitare pe un dispozitiv rotativ cu 180
r.p.m. timp de 10 zile. Biomasa obinut a fost uscat, cntrit i analizat din punct de vedere al
componenei aminoacizilor totali (Tab.27).
 Rezultatele cercetrilor au artat c biomasa P. ostreatus obinut conine 18 aminoacizi,
dintre care 9 sunt eseniali. Cantitatea total a aminoacizilor biomasei miceliene pentru tulpinile
P. ostreatus testate a variat ntre 21,3-34,2% (g/100g BAU), n componena aminoacizilor
predominnd acizii glutamic i aspartic, ceea ce este caracteristic carpoforilor de bazidiomicete
[14].
Componena calitativ a aminoacizilor eseniali pentru toate tulpinile P. ostreatus testate
se menine aproape la acelai nivel, cantitativ acestea fiind comparate cu normele ntrite de FAO
pentru proteina ideal" (Tab.28).

Procentual, cantitatea aminoacizilor eseniali raportat la protena de referin FAO se

prezint astfel: treonina - 168-182%, valina - 178-274%, metionina - 14-31%, izoleucina - 75-
112%, leucina - 66-101%, tirozina - 47-63%, fenilalanina - 83-87%, lizina - 33-40%, triptofan
-80-140% (Fig.20).
Tabelul 27
Coninutul de aminoacizi n biomasa P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i

*ES - eseniali; ST - suma total.

 93

Tabelul 28
Coninutul de aminoacizi eseniali (g/100g protein) n proteina ideal" (FAO) i proteina
miceliului P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivat submers pe mal
de bere (60Balling)
 94

Pleurotus ostreatus

200

thr val met ile leu tyr phe lys trp

CNMN-FB-02 CNMN-FB-03 0 CNMN-FB-04

300

100 0
 95

Figura 20. Coninutul de aminoacizi eseniali (% fa de proteina ideal" FAO) n

miceliul P0. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivat submers pe mal
de bere (60Balling)

Astfel, biomasa P. ostreatus cultivat submers pe mediul nutritiv cu mal de bere conine o cantitate
ce depete de 1,68-2,74 ori valorile aminoacizilor eseniali ntrite de FAO pentru treonin i valin, n
acelai timp, aminoacizii limitativi sunt metionina i lizina.
Pentru estimarea valorii nutritive a biomasei tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04 au fost calculai indicii aminoacizilor eseniali (EAA) i indicii nutritivi [14, 62], (Tab.29).
Nivelul acumulrii biomasei miceliene i indicele aminoacizilor eseniali (EAA) au atins pentru
tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 cele mai mari valori - 17,3 g/l BAU i respectiv 104,2%.

Pentru acest indice EAA, valoarea indicelui nutritiv a fost de 21,6, fapt ce a permis a fi raportat la valoarea
nutritiv a leguminoaselor pentru boabe (indicele nutritiv=21). Biomasa obinut ntrece cantitativ proteina
ideal" cu 3 din 9 aminoacizi eseniali. Aceasta se refer la treonin (175%), valin (274%) i triptofan
(140%). Limitate din punct de vedere al coninutului aminoacizilor eseniali sunt metionina (31%), lizina
(33%) i tirozina (47%).
Tabelul 29
Biomasa absolut uscat (g/l, BAU) i valoarea nutritiv a miceliului P. ostreatus

Tulpina BAU, g/l Indicele EAA Indicele nutritiv

P. ostreatus
CNMN-FB-02 17,31,2 104,2 21,6
CNMN-FB-03 9,50,8 91,9 24,3
CNMN-FB-04 8,00,7 99,4 33,1
Unii autori [14, 31] indic faptul, c proteinele unor specii de bazidiomicete posed calit i
deosebite i pot fi raportate la valoarea proteinelor animaliere. Astfel, datorit coninutului nalt i valoros al
proteinelor biomasei miceliene indicele nutritiv pentru P. ostreatus CNMN-FB-04 a atins valoarea 33,1, fapt
pentru care acesta se apropie de valoarea nutritiv a crnii de porc (indicele nutritiv =35). Biomasa P.
ostreatus CNMN-FB-04 este cea mai echilibrat din punct de vedere al componenei aminoacizilor si,
totodat, nivelul acumulrii biomasei miceliene este cel mai mic -8,0 g/l BAU. Tulpina P. ostreatus CNMN-
FB-04 nu cedeaz proteinei de referin FAO privind coninutul unor aa aminoacizi, ca leucina, izoleucina i
triptofanul, iar dup coninutul treoninei i valinei - o depete cu mult. n acelai timp, biomasa obinut
este srac n lizin i metionin.
Mrirea cantitii de biomas nu reflect n mod obligatoriu o cretere echilibrat, deoarece ea poate
rezulta din sinteza i acumularea substanelor de rezerv, n absena sintezei componentelor proteice - ceea ce
determin valoarea nutritiv sczut a acesteia. Valoarea biologic (nutritiv) a ciupercii nu poate nregistra o
majorare nelimitat deoarece este condiionat, pe de o parte de epuizarea nutrienilor disponibili, n special a
compuilor azotai din mediu i, pe de alt parte - de acumularea biomasei care se supune legitii distribuirii
normale a componentelor proteice, n acord cu particularitile de cretere i dezvoltare a organismului
heterotrof. n conformitate cu rezultatele obinute, se constat o corelare invers ntre productivitate i
valoarea nutritiv la carpofori i biomasa P. ostreatus. Spre exemplu, productivitatea carpoforilor P. ostreatus
pentru mediul nutritiv PG este major, n acelai timp valoarea nutritiv este sczut (Capitolul IV., Tab.14,
23). Aceasta se refer i la biomasa cultivat submers pentru care indicele nutritiv mic corespunde unui nivel
major al acumulrii biomasei miceliene (Tab.29).
Analiza comparativ a compoziiei chimice ntre carpoforii ciupercii i biomasa cultural pentru
tulpinile P. ostreatus testate a determinat faptul, c pe lng similaritatea acestora au fost evideniate i
 96

deosebiri (Tab.20, 21, 27). Cele mai mari diferene privind coninutul aminoacizilor eseniali au fost gsite
pentru valin i lizin. Coninutul aminoacizilor totali n carpofori i biomas pentru tulpinile P. ostreatus
testate sunt date n tabelul 30.
Tabelul 30
Date compararive privind coninutul aminoacizilor totali (g/100g BAU) n carpofori i miceliu
la cultivarea n fazele solid i lichid a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04
Tulpina Carpofori cultivai pe Miceliu cultivat submers (mal
P. ostreatus diverse substraturi de bere 60Balling)
lignocelulozice
CNMN-FB-02 26,1 - 30,9 21,3
CNMN-FB-03 31,6 - 41,0 27,2
CNMN-FB-04 15,3 - 45,3 34,2
Dup cum rezult din tabel, coninutul aminoacizilor totali n carpofori este mai mare dect n
biomasa cultivat submers. Excepie prezint carpoforii tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-04 cultivai pe
substraturile nutritive PG, PGL i PGFS (Tab.20, 21) pentru care sumele aminoacizilor totali au constituit
valori mai mici dect pentru biomasa cultivat submers: 15,3-30,8 g/100g BAU fa de 34,2 g/100g BAU.
Dei muli cercettori consider biomasa cultivat submers mai valoroas dect carpoforii ciupercii n ceea
ce privete coninutul proteinei [31, 186], datele referitoare la componena chimic i valoarea biologic a
carpoforilor i miceliului cultivat submers sunt contradictorii. Cantitativ, diferenele componentelor chimice
pentru carpofori i miceliul cultural pot fi semnificative - pn i la nivel de tulpin, acestea fiind determinate
de aa factori, ca vrsta culturii, mediul de nutriie, condiiile de cultivare etc. Asigurarea condiiilor optime
de dezvoltare la cultivarea submers ofer posibiliti majore de intensificare a tuturor proceselor
biotehnologice, permite ameliorarea unor aa indici biochimici, ca coninutul de proteine, aminoacizi i a
altor componente ale miceliului ciupercii, i obinerea, n final, a biomasei culturale cu caliti prognozate.
Astfel, n rezultatul studierii tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04
selectate anterior au fost stabilite diferenele morfo-culturale i biochimice, a fost selectat mediul optim de
nutriie i caracterizat valoarea nutritiv a miceliului cultivat submers. Nivelul acumulrii biomasei
miceliene a atins cea mai mare valoare la cultivarea tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-02 pe mediul nutritiv cu
mal de bere (16,51-17,84g/l BAU). Cercetrile privind determinarea valorii nutritive a miceliului tulpinilor
P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivate submers au elucidat posibilitatea
valorificrii biomasei miceliene n alimentaie. Miceliul obinut posed un miros plcut de ciuperci i se
caracterizeaz printr-o valoare nutritiv nalt, fapt pentru care acesta poate fi utilizat ca supliment proteic
valoros.

5.3 Dinamica biosintezei unor enzime hidrolitice i a acumulrii biomasei

proteice la cultivarea submers a ciupercii Pleurotus ostreatus
pe medii nutritive complexe
Bazidiomicetele xilotrofe n contrast cu alte ciuperci din aceiai diversitate ecologic posed o
capacitate redutabil de cretere intensiv n condiiile cultivrii submerse. Acestea secret enzime hidrolitice
i oxidoreductoare de o specificitate nalt fa de substrat, provocnd astfel degradarea materialelor
celulozice n compui uor asimilabili, proprii necesitilor fiziologice constructive i energetice.
O larg utilizare de interes biotehnologic o au ciupercile xilotrofe ce aparin genului Pleurotus. Pe
lng cantiti importante de substane proteice, fibre, hidrai de carbon, vitamine pstrvul de fag (Pleurotus
ostreatus) sintetizeaz i diverse enzime ale complexelor celulazice, hemicelulazice i ligninazice [116, 118].
Obinerea n exclusivitate a biomasei proteice prin convertirea de ctre bazidiomicete a materiei prime
 97

vegetale nu este de perspectiv. Una din condiiile determinante care asigur eficacitatea biotehnologiilor n
timpul de fa este obinerea, de rnd cu biomasa fungic, a produselor valoroase de sintez, n special a
enzimelor hidrolitice (celulaze, xilanaze, pectinaze, amilaze, proteaze) i oxidoreductazelor (peroxidaze,
lacaze) [187]. Diversitatea i activitatea biosintetic a componentelor enzimatice la cultivarea submers a
ciupercii P. ostreatus sunt influenate de compoziia mediului nutritiv i durata de cultivare [116]. Scopul
cercetrilor a fost studierea n dinamic a biosintezei unor enzime hidrolitice (celulaza, amilaza, lipaza) i a
acumulrii biomasei proteice la cultivarea submers a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04 pe medii nutritive complexe. Activitatea biosintetic a enzimelor hidrolitice a fost testat n
dinamic timp de 14 zile pe dou medii nutritive: 1) fin de soia (0,5%) + fin de porumb (2%) i 2) fin
de soia (0,5%) + coji de floarea soarelui (2%).
Un rol esenial n asigurarea unui randament sporit al biomasei i biosintezei de metabolii celulari
revine cantitii i strii fiziologice a miceliului ciupercii introdus n mediul de nutriie. Rezultatele
cercetrilor au artat, c pentru nsmnarea mediilor nutritive lichide este necesar folosirea unui inoculum
fiziologic activ, aflat n faza de cretere exponenial a ciupercii P. ostreatus (4-6 zile). n scopul majorrii
punctelor de cretere i intensificrii proceselor metabolice la cultivarea submers a ciupercii P. ostreatus,
inoculumul a fost preventiv omogenizat i introdus n mediul de nutriie n cantitate de 10%V, ceea ce
reprezint 1,2-1,6 g/l BAU.
Concentraia ionilor de hidrogen n mediu exercit o influen major asupra caracterului procesului
metabolic, PH-ul optim creterii i dezvoltrii miceliului de ciuperci Pleurotus fiind stabilit pentru valorile 5-
6 i 9 [134]. PH-ul iniial al mediilor complexe cu coji de floarea-soarelui i fin de porumb a fost de 5,6 i
respectiv 6,7. Pe parcursul cultivrii ciupercii P. ostreatus CNMN-

FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04, PH-ul mediului nutritiv a oscilat n limitele 5,9...8,4 pentru ca
ulterior, la sfritul cultivrii (14 zile) s devin 8,3-8,4 (Tab. 31).
Rata de cretere maximal (u) - o caracteristic a acumulrii biomasei ciupercii n faza exponenial
de cretere - prezint valori cuprinse ntre 0,034 or -1 pentru P. ostreatus CNMN-FB-
03 i 0,04 or-1 pentru P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-04. Aceste date corespund rezultatelor unor
cercettori [134] privind estimarea ratei specifice de cretere la cultivarea submers a ciupercii P. ostreatus.
Timpul de generaie (g), respectiv timpul necesar pentru dublarea biomasei este de 20,4 ore pentru P.
ostreatus CNMN-FB-03 i 17,3 ore pentru P. ostreatus CNMN-
FB-02 i CNMN-FB-04.
Optimiznd mediul nutritiv i condiiile de cultivare submers n fermentatoare de 3 i 10 l a ciupercii
P. ostreatus, Solomko E. [82] a obinut rezultate ce totalizaz 16-18 g/l BAU dup 4-5 zile de fermentare.
Productivitatea maxim la cultivarea submers n fermentatoare a fost obinut n faza exponenial de
cretere a tulpinilor brevetate Pleurotus ostreatus 1300 i Panus tigrinus 131 -4-7 g/l/zi [134]. Aceste date
corespund rezultatelor proprii, valorile acumulrii biomasei pentru mediul complex cu fin de soia (0,5%) i
porumb (2%) constituind 16,20 i 15,67 g/l BAU la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-04
cultivate submers timp de 4 zile. Perioada creterii exponeniale ale acestora este de 48 ore i corespunde
zilelor 2-4, productivitatea maxim obinut fiind de 6-6,2 g/l/zi (Fig. 21).
n cazul tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-04 cultivate submers pe mediul organic
complex n baza finii de porumb substratul fermentabil este aproape integral convertit la biomas chiar n
ziua a 4-a (Fig. 22). Pentru mediul cu coji de floarea-soarelui tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-
FB-03 i CNMN-FB-04 au nregistrat valori maxime dup 6 zile de cultivare
 98

- 22,00, 20,27 i respectiv 21,60 g/l BAU (Tab. 31). n acela i timp, substratul fermentabil n baza cojilor de
floarea-soarelui nu a fost convertit n biomas, de aceea nu poate fi utilizat dect numai n calitate de adaos
furajer pentru animale. O alt modalitate de obinere a biomasei alimentare este separarea miceliului de
substratul insolubil neutilizat. Datorit fenomenului specific de cretere a biomasei miceliene n form de
pelete (conglomerate, sfere), acestea pot fi uor separate, ceea ce prezint un avantaj n procesele
biotehnologice de fermentare [58].
Determinarea activitii sumare a complexului celulazic n baza hidrolizei hrtiei de filtru (HF) este o
metod pe larg utilizat i acceptat datorit simplitii de realizare a acesteia i faptului, c hrtia de filtru
reprezint celuloz nativ, rezistent la degradare. n acelai timp, activitatea nalt a complexului celulazic
n baza hidrolizei hrtiei de filtru nu coincide n timp cu viteza maxim de formare a glucozei rezultat din
degradarea carboximetilcelulozei substituite. Activitatea maxim de zaharificare a hrtiei de filtru n prezena
inductorului (coji de floarea
 99

soarelui) a fost stabilit pentru P. ostreatus CNMN-FB-03 n zilele 6 i 11 de cultivare i a

constituit 0,102 Uml-1 i respectiv 0,139 Uml-1. Capacitatea maxim de acumulare a celulazelor
capabile s hidrolizeze HF pentru mediul cu fin de porumb a fost mai tardiv, tulpina ciupercii
P. ostreatus CNMN-FB-04 nregistrnd o activitate de 0,108 Uml-1 la a 14-a zi de fermentare (Tab.
31, Fig. 23).

Figura 21. Biomasa absolut uscat (BAU) la cultivarea submers a tulpinilor P.

ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pe mediul cu fin de soia i
porumb
Figura 22
 100
A.Biomasa ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02 cultivat submers pe mediul fin
de
soia (0,5%) + fin de porumb (2%) (4 zile)
B. Biomasa ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02 cultivat submers pe mediul
fin de
soia (0,5%) + coji de floarea-soarelui (2%) (4 zile)
 Pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 cultivat pe mediul nutritiv bogat n celuloz
(coji de floarea-soarelui) acumularea maxim a celulazelor ce determin degradarea
carboximetilcelulozei a fost prezent n ziua a 7-a, valoarea acesteia constituind 0,938 Uml -1.
Tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 a manifestat o nalt activitate celulazic n zilele 9, 11 i
13, nivelul biosintezei enzimelor studiate fiind mai redus dect n ziua a 7-a, nregistrnd
0,830-0,843 Uml-1. Pentru tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-04 valorile
maxime de biosinteza a celulazelor capabile s hidrolizeze substratul solubil (Na-CMC) a fost
de 0,386 i 0,832 Uml -1 n zilele 12 i respectiv 13 de cultivare. O nalt activitate hidrolitic
(celulazic) n cazul ambelor medii de cultivare utilizate s-a nregistrat n zilele 11 (P.
ostreatus CNMN-FB-04) - 0,392-0,446 Uml-1, 12 (P. ostreatus CNMN-FB-02) - 0,375-0,386
Uml-1 i 14 (P. ostreatus CNMN-FB-04) -0,387-0,448 Uml-1. Aceast perioad corespunde
fazei de declin i, ca urmare, concentrarea hidrolazelor s-ar datora trecerii n mediu a
celulazelor intracelulare n urma proceselor de autoliz produse de enzimele proteolitice
endogene.
Pentru tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivate submers
figurile 24 i 25 prezint dinamica biosintezei amilazelor n decursul a 4-14 zile. n dependen de
durata cultivrii, s-au nregistrat dou maxime distincte de biosintez a amilazelor, manifestarea
celui de-al doilea maxim de activitate enzimatic cantitativ fiind mai nsemnat dect primul.
Pentru mediul ce conine fin de porumb primul punct maxim se nscrie pe curb n zilele
67, iar pentru mediul cu coji de floarea-soarelui - n zilele 8-10, activitatea amilazic constituind
1,44-2,07 Uml-1 i respectiv 1,22-2,88 Uml -1. Fa de mediul cu fin de porumb al doilea punct
maxim se nscrie pe curb n zilele 10-11, iar fa de mediul cu coji de floarea-soarelui - n zilele
11-12, valorile activitii amilolitice oscilnd ntre 2,20-2,88 Uml -1 i respectiv 1,84-3,07 Uml -1.
Tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 cultivat submers pe mediul ce conine coji de floarea-soarelui
a nregistrat cea mai nalt activitate amilolitic n zilele 10 i 12, valorile activitii hidrolitice
determinate n condiii standard la PH-ul 4,7 constituind 2,88 i respectiv 3,07 Uml -1. Cel de-al
doilea punct maxim coincide cu trecerea culturii n faza de declin n cursul creia are loc iniierea
proceselor de autoliz a celulelor fungice. Ca urmare, n urma lizei celulelor, are loc eliberarea i
acumularea suplimentar n lichidul de cultur a amilazelor intracelulare, ceea ce determin
activitatea amilolitic ridicat la a 10-12 zi de cultivare a ciupercii.
 Tabelul 31
Dinamica biosintezei unor enzime hidrolitice i acumularea biomasei absolut uscate (BAU) la
Durata cultivrii, zile
Mediul de nutriie

cultivarea submers a ciupercii Pleurotus

CNMN-FB-
P.ostreatusTulpina

Activitatea hidrolitic a Amilaza, Lipaza, H

BAU, g/l P -ul
celulazelor (Uml-1) asupra Uml-1 Uml-1
carboximetilcelulozei de hrtiei de filtru
sodiu (Na-CMC) (HF)
02 I II 4 0,054 0,01 0 16,20 6,7 7,0
0,196 60 0 20,13
03 I II 0,109 0 0 10,80 7,4 6,7
0,087 0 0 20,73
04 I II 0 0 0 15,67 6,8 6,8
0,174 0,060 0 18,60
02 I II 6 0,065 0,04 0 16,13 6,7 7,1
0,210 4 0,076 urme 22,00
03 I II 0,462 0,05 2 11,40 7,3 6,3
0,775 6 0,102 ,07 0,46 20,27
04 I II 0,022 0,06 0 15,87 7,0 7,4
0,103 0 0,071 0 21,60
02 I II 7 0,011 0 1 375 375 15,33 6,7 7,8
0,144 0,020 ,87 0 20,93
03 I II 0 0 0,42 urme 125 375 11,20 7,7 6,7
0,938 0,027 19,87
04 I II 0 0,03 1 250 250 14,67 7,4 7,0
0,076 3 0,065 ,44 0,30 20,47
02 I II 8 0,141 0,02 0 15,33 6,6 8,1
0,196 5 0,014 ,78 0,46 21,20
03 I II 0,081 0 0 10,13 5,9 6,3
0,380 0,046 ,46 1,67 19,80
04 I II 0 0 1 15,13 6,9 6,3
0,158 0,017 ,06 1,22 18,67
02 I II 9 0,136 0,02 0 14,33 6,8 7,7
0,185 7 0,022 ,46 1,60 21,47
03 I II 0,428 0,03 urme 1,45 10,92 7,1 7,9
0,843 0 0,058 19,67
04 I II 0 0 0 14,33 6,2 6,3
0,223 0,038 ,74 0,32 19,20
02 I II 10 0,242 0,02 0 13,00 7,5 7,4
0,152 7 0,016 ,62 0,22 21,93
03 I II 0,136 0,01 0 13,20 6,4 7,9
0,680 1 0,036 ,46 2,88 19,60
04 I II 0,032 0,02 2 13,27 6,5 7,2
0,255 0 0,043 ,20 0,46 20,00
02 I II 11 0,120 0,02 2 14,00 8,1
0,228 2 0,033 ,32 1,84 19,93 8,3
03 I II 0,054 0,03 2,48 urme 12,40 6,3 8,1
0,830 0 0,139 19,60
04 I II 0,392 0,06 0 12,33 7,5 8,3
0,446 5 0,065 ,63 2,56 19,80
02 I II 12 0,375 0,05 urme 13,47 7,6 8,0
0,386 4 0,033 0,86 21,13
03 I II 0,150 0 1 11,80 7,1 8,4
0,490 0,082 ,16 3,07 20,00
04 I II 0,419 0,04 urme 1,67 11,73 8,2
0,185 9 0,011 18,20 8,0
02 I II 13 0,098 0 1 13,07 8,2
0,381 0,060 ,60 0,42 20,20 8,2
03 I II 0,214 0,01 urme urme 12,00 8,0
0,843 0 0,041 19,33 8,3
04 I II 0,218 0,01 0 11,27 7,4 7,9
0,832 1 0,044 ,32 1,60 18,93
02 I II 14 0,367 0,00 0 375 250 11,93 8,3
0,280 3 0,022 ,46 0,32 20,06 8,4
03 I II 0,160 0 0 375 250 11,73 8,3
0,435 0,041 ,67 0,57 18,13 8,4
04 I II 0,387 0,10 0,46 urme 625 250 12,53 8,3
0,448 8 0,047 18,73 8,3
 Figura 23. Biosinteza celulazelor (Uml1) la cultivarea submers a tulpinilor P. ostreatus
CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pe mediile complexe cu fin de porumb
(1,3) i coji de floarea-soarelui (2,4)

Figura 24. Biosinteza amilazelor (Uml-1) la cultivarea submers a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pe
 Pleurotus ostreatus
-O-CNMN-FB-02 -n-CNMN-FB-03 -a-CNMN-FB-04

3,5 3 2,5
E 2
3 1,5
1
0,5 0
4 6 7 8 9 10 11 12 13 14
zile

Figura 25. Biosinteza amilazelor (Uml-1) la cultivarea submers a tulpinilor/*, ostreatus CNMN-
FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pe mediul complex cu coji de floarea-soarelui

Unele micromicete posed o capacitate biosintetic sporit a lipazelor [76], n acelai timp studierii
metaboliilor lipolitici sintetizai de ctre ciupercile bazidiale nu se acord atenia cuvenit .
Datorit coninutului nalt de grsimi fina de soia stimuleaz efectiv biosinteza lipazelor, fapt pentru
care aceasta este pe larg utilizat n componena mediilor nutritive la selectarea unor tulpini de fungi -
perspectivi productori de lipaze. Cercetarea activitii lipolitice la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 a fost efectuat pe mediile complexe ce conin fin de soia n zilele 7 i 14
de cultivare. Activitatea lipolitic a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-04 dup 7 zile de
cultivare a constituit 375 i respectiv 250 Uml -1 pentru ambele medii nutritive testate. Mediul cu coji de
floarea-soarelui pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 s-a dovedit a fi mai eficient acumulrii enzimelor
lipolitice, activitatea acestuia constituind 375 Uml -1 fa de 125 Uml -1 pentru mediul cu fin de porumb. La
sfritul cultivrii (14 zile) s-a nregistrat o
activitate lipolitic de 250 Uml -1 la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-
FB-04 pe mediul cu coji de floarea-soarelui i 375 Uml -1 la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-
FB-03 pentru mediul cu fin de porumb. Valoarea major a activit ii lipolitice a fost stabilit n ziua a 14-a
de fermentare la tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 pentru mediul fin de soia (0,5%) + fin de porumb
(2%) - 625 Uml-1.
Rezultatul activit ii metabolice de biosintez este reflectat n compoziia chimic a ciupercii,
constituirea fiecrui component celular fiind dirijat prin mecanisme de control care coordoneaz biosinteza
n funcie de condiiile oferite de mediu i a necesitilor vitale ale organismului heterotrof. Determinarea
calitativ a componentelor biomasei fungice este relevant deoarece aceasta reflect i caracterizeaz
valoarea biologic a produsului obinut. n dependen de substratul nutritiv fermentat procesul de biosintez
maxim a proteinelor se desfoar n diferite perioade ale creterii i dezvoltrii ciupercii P. ostreatus.
Dinamica acumulrii proteinei cu referin la suma aminoacizilor identificai atest o majorare a acesteia fa
de martor pentru ambele medii nutritive testate. Pentru mediul complex ce conine fin de porumb
acumularea maxim a proteinelor ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-04 a fost nregistrat la a
4-a zi de cultivare i corespunde valorilor maxime ale acumulrii biomasei fungice: 11,9-15,0% protein i
respectiv 15,7-16,2g/l BAU. n cazul tulpinii P. ostreatus CNMN-FB-03 biosinteza maxim a proteinelor
(17,9-18,0%) se atest n zilele 4-6 i corespunde fazei de ncetinire a creterii ciupercii de pstrv (Fig. 26).
 106

P. ost rejtu

d440__
^ ^13

^87 ttI mr
20 18 16
^g-g (gir
14 .12 10
8
"G 1 11 1 1 1 11 1 1 1 11 1 1 1 , 1 1
4 1 1
2 0
107

10 12 14
 108

Figura 26. Dinamica acumulrii proteinei n biomasa absolut uscat (BAU) a ciupercii P.
ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivat submers pe mediile nutritive cu coji
de floarea-soarelui (I) i fin de porumb (II)

Studiul metabolismului de biosintez a proteinelor n cazul mediului de nutriie cu coji de floarea-

soarelui a artat, c acumularea compuilor proteici se realizeaz treptat, valorile maxime de biosintez ale
acestora fiind obinute la sfritul cultivrii ciupercii P. ostreatus - la a 12-14 zi de fermentare (8,2-11,0%
protein). Aceasta se datoreaz faptului c cojile de floarea soarelui reprezint un substrat mai puin accesibil
i este convertit la biomas mult mai anevoios dect fina de porumb.
Biomasa ciupercii P. ostreatus cultivat submers conine 18 aminoacizi, dintre care 9 sunt eseniali.
Rezultatele determinrii n dinamic a coninutului aminoacizilor eseniali (g/100g protein) pentru toate
tulpinile P. ostreatus cultivate submers pe mediile de nutriie n baza finii de porumb i a cojilor de floarea-
soarelui sunt date n Tab. 32 i Tab. 33, acestea fiind comparate cu martorul i cu normele ntrite de FAO
pentru proteina ideal".

Dinamica coninutului de aminoacizi eseniali (g/100g protein) n proteina ideal" (FAO) i proteina miceliului P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultiv
mediul nutritiv cu fin de s
Aminoaciz

* martor - mediul nutritiv iniial nefermentat, **ES - eseniali; ST - suma total.

Cele mai nalte valori privind suma total a aminoacizilor eseniali pentru mediul cu fin de porumb
au fost obinute n ziua a 4-a (31,6-35,7g/100g protein), iar pentru mediul cu coji de floarea-soarelui - la a
12-14 zi de fermentare (37,0-41,6g/100g protein). Suma total a aminoacizilor eseniali n cazul martorului
a fost mult mai mic, valoarea acestuia constituind 27,8g/100g protein pentru mediul cu fin de porumb i
38,1g/100g protein pentru mediul cu coji de floarea-soarelui.
Pentru mediul complex cu fin de porumb cantitatea aminoacizilor eseniali raportat la proteina de
referin FAO se prezint astfel: treonina 103-252%, valina 60-218%, metionina 6-26%, izoleucina 55-83%,
leucina 69-117%, tirozina 47-150%, fenilalanina 93-230%, lizina 55-75%, triptofanul 30-100%. Cantitatea
aminoacizilor esenilai raportat la proteina de referin FAO pentru mediul cu coji de floarea-soarelui se
ncadreaz n urmtoarele limite: treonina 105-172%, valina 90-348%, metionina 3-20%, izoleucina 63-90%,
leucina 51-90%, tirozina 40- 87%, fenilalanina 77-163%, lizina 56-104, triptofanul 30-140%. Astfel,
biomasa P. ostreatus cultivat submers ntrece cantitativ proteina ideal" cu 3-4 din 9 aminoacizi eseniali.
 109

Deficitare din punct de vedere al coninutului de aminoacizi eseniali sunt: metionina, izoleucina, leucina,
tirozina, lizina i triptofanul.

aminoacizilor imunoactivi"
Tabelul 33

aminoacizilor eseniali
Dinamica coninutului aminoacizilor eseniali (g/100g protein) n proteina ideal" (FAO) i proteina
niiceliului P. ostreatus CNMN-FB-02 CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivat
submers pe mediul nutritiv cu fin de soia i coji de floarea-soarelui

ES/ST**% aminoacizilor
P. ostreatus Tulpina

zile

Aminoacizii eseniali
liva
etm

oliz

ucle

inliz
iptr
roti
eotr

FAO 4,0 5,0 3,5 4,0 7,0 3,0 nife

3,0 5,5 1,0 36,0 - -
Martor* 6,5 0,9 0,4 2,7 5,7 2,0 4,0 5,5 0,4 28,1 0,296 65,0
4 6,9 6,5 0,6 2,9 5,4 1,7 2,3 3,4 0,6 30,3 0,334 67,3
CNMN-FB-02

6 6,4 8,9 0,7 2,9 5,3 1,5 3,2 3,1 0,6 32,6 0,379 63,0
8 5,7 7,6 0,4 3,3 5,7 2,0 4,0 3,7 0,5 32,9 0,335 67,4
10 5,7 10,3 0,6 3,1 5,5 1,9 3,6 3,4 0,3 34,4 0,348 67,7
12 6,0 13,6 0,4 3,4 5,8 2,2 3,9 4,9 0,6 40,8 0,411 64,3
14 6,4 16,5 0,6 3,1 5,1 1,9 3,6 4,0 0,4 41,6 0,421 68,2
4 6,5 4,5 0,6 2,9 5,6 1,7 3,5 4,1 0,9 30,3 0,334 66,4
CNMN-FB-03

6 4,2 6,8 0,5 2,5 5,3 1,2 3,1 5,7 0,9 30,2 0,459 53,8
8 6,1 5,5 0,1 3,0 5,5 1,8 3,7 4,6 0,7 31,0 0,345 66,2
10 5,6 8,3 0,7 3,1 5,1 2,0 3,6 4,4 0,5 33,3 0,341 68,6
12 5,6 15,9 0,7 2,9 4,8 2,1 3,9 4,0 0,9 40,8 0,416 68,5
14 5,4 17,4 0,6 2,8 4,3 1,8 2,7 3,9 0,7 39,6 0,408 70,0
4 5,8 5,0 0,6 3,2 6,3 1,5 4,4 5,4 1,4 33,6 0,343 65,1
CNMN-FB-04

6 5,3 6,5 0,6 2,6 3,6 2,2 4,9 4,8 0,7 31,2 0,423 57,1
8 4,4 6,0 0,5 3,6 6,2 2,6 4,8 4,6 0,7 33,4 0,354 62,0
10 5,8 9,6 0,6 3,1 5,3 1,9 3,7 4,4 0,3 34,7 0,346 69,3
12 6,0 11,5 0,5 2,6 4,9 2,0 3,3 4,3 0,4 35,5 0,370 67,6
14 6,2 12,5 0,3 2,8 4,9 1,8 3,4 4,6 0,5 37,0 0,391 66,9
* martor - mediul nutritiv iniial nefermentat,
**ES - eseniali; ST - suma total.

Coninutul aminoacizilor eseniali raportat la suma total a aminoacizilor proteici (ES/ST*) pentru P.
ostreatus este de 0,313-0,487, iar a aminoacizilor considerai imunoactivi" - 53,8-71,5%.
Aminoacizii necesari pentru sinteza proteinelor fungice pot fi gsii n mediul de nutriie, unde provin,
de regul, din aciunea enzimelor proteolitice. n cazul mediilor srace n anumii aminoacizi, acestea trebuie
sintetizai n cursul metabolismului. Cantitativ, coninutul valinei este mic la martor: 0,3 g/100g BAU pentru
mediul nutritiv cu fin de porumb i 0,9 g/100g BAU pentru mediul cu coji de floarea-soarelui. Acesta nu
acoper necesitile ciupercii P. ostreatus n valin astfel, nct are loc iniierea biosintezei aminoacidului
deficitar. Determinarea n dinamic (4-14 zile) a coninutului de valin n produsele vegetale convertite n
biomas de ctre P. ostreatus a stabilit o cretere progresiv care depete cu mult cantitatea iniial a
aminoacidului dat (martorului): de 10-40 ori pentru mediul cu fin de porumb i de 5-19 ori pentru mediul
cu coji de floarea-soarelui (Tab. 32, 33).
 110
Pentru estimarea n dinamic a valorii nutritive a biomasei tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 au fost calculate indicele aminoacizilor eseniali (EAA) i indicele nutritiv
(Tab. 34).
Tabelul 34
Dinamica valorii nutritive a biomasei P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB
04 cultivata s ii nutritive ce conin faina de po rumb i coji de floarea-soarelui
Tulpina ubmers pe med Indice e EAA Indicele nutritiv
Pleurotus faina coji floarea- faina coji floarea-
ostreatus zile porumb soarelui porumb soarelui
Martor* 77,2 82,2 6,7 6,4
CNMN-FB-02 4 99,2 84,2 11,8 5,6
6 95,0 90,6 10,3 4,7
8 96,7 91,4 10,2 5,9
10 91,4 95,6 9,0 6,4
12 - 113,3 - 9,3
14 - 115,6 - 12,7
CNMN-FB-03 4 93,6 84,1 16,7 5,6
6 82,2 83,9 14,8 4,4
8 75,6 86,1 11,8 5,8
10 86,9 92,5 11,3 7,3
12 - 113,3 - 12,2
14 - 110,0 - 9,4
CNMN-FB-04 4 87,8 93,3 13,2 5,2
6 87,8 86,7 11,5 5,1
8 79,2 92,8 8,1 4,8
10 87,2 96,4 9,9 6,3
12 - 98,6 - 7,6
14 - 102,8 - 8,4

o intensitate superioar de acumulare a aminoacizilor totali, sporul nregistrat prezentnd o

majorare de 1,5-4,2 ori fa de restul mediilor testate. Aceast diferen s-ar datora compoziiei
diferite a mediilor nutritive testate, malul de bere prezentnd o surs mult mai bogat n
carbohidrai simpli -eficieni n reaciile de metabolism.
Rezultatele obinute n Capitolul V pot fi expuse ntr-o sintez:
n urma studiului efectuat privind cultivarea submers a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-
02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 selectate anterior au fost determinate caracterele morfo-
culturale i biochimice, alese mediile de nutriie, durata de cultivare ce corespunde randamentului
 111
optimal al acumulrii biomasei proteice i ale biosintezei unor enzime hidrolitice, caracterizat
valoarea nutritiv a biomasei fungice.
Exigenele nutriionale a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-
04 cultivate submers au fost estimate prin utilizarea mediilor nutritive sintetice cu includerea
diverselor surse de carbon i azot i a mediilor nutritive complexe, malul de bere (6-8 0Balling)
prezentndu-se ca un mediu de nutriie eficient acumulrii biomasei (16,5-17,8g/l BAU).
Cercetrile privind determinarea valorii nutritive a miceliului tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-
02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivate submers pe mal de bere au elucidat posibilitatea
valorificrii biomasei miceliene n alimentare. Cantitatea total a aminoacizilor biomasei
miceliene pentru tulpinile P. ostreatus testate a variat ntre 21,3-34,2%(g/100g BAU), biomasa
obinut ntrecnd cantitativ proteina ideal" (FAO) cu 2-3 aminoacizi eseniali. Indicii nutritivi
au constituit 21,6-33,1 unit i convenionale, fapt pentru care acetea pot fi raportai la valorile
nutritive a leguminoaselor pentru boabe (indicele nutritiv = 21) i se apropie de valoarea nutritiv
a proteinelor animaliere (indicele nutritiv pentru carnea de porc = 35). Miceliul obinut posed un
miros plcut de ciuperci i se caracterizeaz printr-o valoare nutritiv nalt, astfel nct acesta
poate fi utilizat ca supliment proteic valoros.
Miceliul P. ostreatus cultivat submers n baza malului de bere poate fi utilizat i n calitate
de inoculum pentru replicarea pe scar larg a materialului semincer granulat, folosirea a 8-10%V
de inoculum reducnd i ieftinind procesul tehnologic de preparare a acestuia.
Pentru mediul complex cu fin de soia (0,5%) i porumb (2%) productivitatea maxim a
fost obinut la cultivarea submers a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-04 i CNMN-FB-02
(15,67 -16,2g/l BAU) dup 4 zile de fermentare.
Activitatea maxim a hidrolazelor studiate a fost obinut la cultivarea tulpinii P. ostreatus
CNMN-FB-03 pe mediul bogat n celuloz (coji de floarea-soarelui). Pentru aceast tulpin,
acumularea maxim a celulazelor ce determin degradarea carboximetilcelulozei a fost prezent
n ziua a 7-a - 0,938 Uml -1, iar a activit ii de zaharificare a hrtiei de filtru - n zilele 6 i 11 de
cultivare (0,102 i respectiv 0,139 Uml -1). Nivelul acumulrii celulazelor (Na-CMC-aza, HF-aza)
pentru mediul de nutriie ce conine n calitate de inductor coji de floarea-soarelui este mai nalt,
demonstrnd prin aceasta caracterul inductiv de sintez al acestora. Valorile maxime ale activitii
amilolitice determinate n condiii standard la P H-ul 4,7 au fost nregistrate pentru tulpina P.
 112
ostreatus CNMN-FB-03 n zilele 10 i 12 (2,88 i respectiv 3,07 Uml -1). Tulpinile studiate posed
i
activitate lipolitic (125-625 Uml -1).
Studiul metabolismului de biosintez a proteinelor n cazul mediului de nutriie cu coji de
floarea-soarelui a artat, c acumularea compuilor proteici se realizeaz treptat, valorile maxime
de biosintez ale acestora fiind obinute la sfritul cultivrii ciupercii P. ostreatus - la a 12-14 zi
de fermentare (8,2-11,0% protein). Majorarea coninutului de protein pentru acest mediu
nutritiv a fost de 105-141% fa de martor, iar a aminoacizilor eseniali - de 139-201%. Pentru
mediul complex ce conine fin de porumb concentraia maxim a proteinelor ciupercii P.
ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-04 a fost nregistrat la a 4-a zi de cultivare i corespunde
valorilor 11,9-15,0% protein. Fa de martor aceasta reprezint o cretere cu 138-174% a
coninutului de protein i cu 177-199% a coninutului de aminoacizi eseniali.
n acest mod, cercetrile efectuate ne permit a concluziona c tulpinile P. ostreatus testate
prezint un interes deosebit pentru biotehnologie, graie faptului, c acestea pot acumula ntr-un
timp relativ scurt o cantitate major de biomas proteic fungic, ct i diveri metabolii celulari
valoroi, n special, a enzimelor hidrolitice (celulaze, amilaze lipaze). Acumularea maxim a
proteinelor (18,0%) a fost gsit la tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 n ziua a 6-a i corespunde
unui nivel nalt al biosintezei enzimelor celulozolitice (0,462 Uml -1 pentru Na-CMC-aza i 0,056
Uml-1 pentru HF-aza) i amilolitice (2,07 Uml -1). Maximum de biomas obinut la ziua a 4-a
pentru mediul complex cu fin de porumb i a 6-a pentru mediul cu coji de floarea-soarelui nu
corespunde nivelului major de biosintez a enzimelor testate la tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-
02 i CNMN-FB-04. Concentrarea maxim a hidrolazelor studiate corespunde fazei de declin a
ciupercii P. ostreatus i se datoreaz trecerii n lichidul cultural a enzimelor intracelulare n urma
procesului de liz a celulelor fungice. n consecin, realizarea eficient a procesului
biotehnologic de obinere n comun att a biomasei fungice, ct i a enzimelor hidrolitice pentru
tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-04 s-ar datora unui compromis" n ceea ce
privete durata de cultivare deoarece este condiionat, pe de o parte de acumularea constituenilor
celulari (biomasa, proteina) i, pe de alt parte - de biosinteza metaboliilor celulari (enzimele
hidrolitice).
 113

CAPITOLUL VI
PROCEDEE BIOTEHNOLOGICE DE CULTIVARE A
CIUPERCII PLEUROTUS OSTREATUS I OBINEREA
BIOPRODUSELOR
VALOROASE
Bazidiomicetul P. ostreatus prezint un obiect biotehnologic cu perspective deosebite n
diverse domenii aplicative [11, 27, 55, 57, 75, 179], eficiena cultivrii acestuia fiind determinat
de extinderea i intensificarea procedeelor tehnologice avansate, i de obinerea bioproduselor
valoroase.

6.1 Elaborarea procedeelor de obinere a bioproduselor P. ostreatus

Cercetrile privind elaborarea procedeelor de obinere a bioproduselor P. ostreatus sunt
destinate obinerii carpoforilor i biomasei cu un coninut nalt al proteinei, aminoacizilor
eseniali, inclusiv i a celor imunoactivi". Valorificarea materiei vegetale secundare i
convertirea acesteia n produse proteice alimentare i furajere este determinat de condiiile i
componena mediilor de cultivare, precum i de utilizarea tulpinilor P. ostreatus nalt productive.
Procedeele elaborate sunt bazate pe utilizarea:
tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 (hotrrile
acordrii brevetelor de invenii MD, nr.4520, 4521 i cererii de brevet MD a.2005
0147);
componenei mediilor de nutriie care asigur creterea, dezvoltarea i biosinteza
produselor necesare (paie, rumegu de lemn, coji de floarea-soarelui, mal de bere,
fin de porumb, soia).
condiiilor i parametrilor tehnici de cultivare a ciupercii P. ostreatus
(temperaturii, umiditii, aeraiei, iluminrii, preparrii mediilor nutritive,
cantitii de inoculare a materialului semincer, timpului de cultivare etc.).
 114
6.1.1 Procedee de obinere a carpoforilor cu valoare nutritiv nalt. Rezultatul tehnic
nregistrat const n obinerea unei recolte majore de o calitate nutritiv valoroas, utiliznd
pentru aceasta medii nutritive accesibile i ieftine - PGL, PGFS, PGC. Pentru realizarea
procedeelor de obinere a carpoforilor cu valoare nutritiv nalt se propun dou tulpini noi de
pstrv - P. ostreatus CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 (hotrrile acordrii brevetelor de invenii
MD, nr.4520 i 4521 din 19.08.2005), condiiile de cultivare fiind descrise n Capitolul IV.

Obinerea carpoforilor cu valoare nutritiv nalt n baza tulpinii Pleurotus

ostreatus CNMN-FB-03
A. Mediul nutritiv de cultivare sunt paiele de gru i rumeguul de lemn (2:1) umezite
pn la
72% i supuse pasteurizrii la 950C timp de 1 or. Pentru inoculare a fost folosit miceliu semincer
n
cantitate de 4,00,2% fa de substratul nutritiv umed. Desfurarea n timp a ciclului tehnologic
pentru dou valuri de recolt a fost de 58 zile, pentru care s-a colectat 39,7% carpofori fa de
substratul nutritiv uscat. Indicele nutritiv al carpoforilor constituie 31,4 uniti convenionale.
Aminoacizii totali ai biomasei absolut uscate (BAU) reprezint 385 mg/g, dintre care partea
aminoacizilor imunoactivi"-278mg/g BAU, iar a aminoacizilor eseniali -119 mg/g BAU.
B. Mediul nutritiv de cultivare sunt paiele de gru i cojile de floarea-soarelui (2:1)
umezite
pn la 72% i supuse pasteurizrii la 950C timp de 1 or. Pentru inoculare a fost folosit miceliu
semincer n cantitate de 4,00,2% fa de substratul nutritiv umed. Desfurarea n timp a ciclului
tehnologic pentru dou valuri de recolt a fost de 59 zile, pentru care s-a colectat 42,9% carpofori
fa de substratul nutritiv uscat. Indicele nutritiv al carpoforilor constituie 33,1 uniti
convenionale. Aminoacizii totali ai biomasei absolut uscate (BAU) reprezint 400 mg/g, dintre
care partea aminoacizilor imunoactivi"-290 mg/g BAU, iar a aminoacizilor eseniali -126 mg/g
BAU.
Obinerea carpoforilor cu valoare nutritiv nalt n baza tulpinii Pleurotus
ostreatus CNMN-FB-04
 115
Mediul nutritiv de cultivare sunt paiele de gru i cocenii de porumb (2:1) umezite pn la
72% i supuse pasteurizrii la 950C timp de 1 or. Pentru inoculare a fost folosit miceliu semincer
n cantitate de 4,00,2% fa de substratul nutritiv umed. Desfurarea n timp a ciclului
tehnologic pentru trei valuri de recolt a fost de 81 zile, pentru care s-a colectat 60,1% carpofori
fa de substratul nutritiv uscat. Indicele nutritiv al carpoforilor constituie 36,2 uniti
convenionale. Aminoacizii totali ai biomasei absolut uscate (BAU) reprezint 438 mg/g, dintre
care partea aminoacizilor imunoactivi"-315 mg/g BAU, iar a aminoacizilor eseniali -138 mg/g
BAU.

6.1.2 Procedeu de sporire a rentabilitii procesului tehnologic. Rentabilitatea

economic de cultivare a ciupercii P. ostreatus este determinat de durata perioadei de desfurare
a ciclului tehnologic. Capacitatea fructificrii precoce la tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02
(cererea brevetului de invenie MD a.2005 0147 din 23.05.2005) reprezint o nsuire preioas,
asigurndu-se n felul acesta o rentabilitate superioar (98%) n cadrul procesului tehnologic de
cultivare a ciupercii de pstrv. Mediul nutritiv de cultivare sunt paiele de gru (100%) umezite
pn la 72% i supuse pasteurizrii la 950C timp de 1 or. Pentru inoculare a fost folosit miceliu
semincer n cantitate de 4,00,2% fa de substratul nutritiv umed. Desfurarea n timp a ciclului
tehnologic pentru dou valuri de recolt a fost de 56 zile, pentru care s-a colectat 68,4% carpofori
fa de substratul nutritiv uscat.
Implementarea n practic a ciupercii Pleurotus ostreatus CNMN-FB-02 n cadrul procesului
tehnologic de cultivare intensiv pe paie de graminee Cercetrile privind cultivarea intensiv a
pstrvului de fag in s se finalizeze cu aplicarea rezultatelor obinute n producerea pe scar
larg a carpoforilor P. ostreatus. Introducerea tulpinilor P. ostreatus de productivitate
performant, n special pentru spaiile rurale i suburbane, ofer posibilitatea de lansare a unui
business durabil pentru antreprenorii interesai, care la rndul su va rezolva i sarcina social de
asigurare a populaiei cu produse alimentare autohtone de calitate. Randamentul nalt i
rentabilitatea sporit pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-02 cultivat la modul intensiv pe paie
de gru (Capitolul IV) constituie o siguran de circulaie rapid a fondurilor bneti investite,
utilizarea acesteia n cadrul structurilor specializate de producere intensiv a ciupercilor
 116
comestibile de ser prezentnd o oportunitate de creare a locurilor de munc i de obinere a unui
profit stabil.
Implementarea n practic a fost aplicat n cadrul structurii specializate de producere a
ciupercilor - SRL Ciuperci" n perioada 15.09.2003 / 05.06.2004. n aceast perioad au fost
executate 4 cicluri tehnologice, durata fiecrui ciclu de cultur, respectiv a perioadei de recoltare
fiind de 55-60 zile pentru dou valuri de recolt .
Prelucrarea termic a paielor a fost realizat conform tehnologiei hidrotermice - prin
dezinfectare cu abur, aburul tehnologic fiind dirijat prin conducte ntr-un vas de capacitatea 2-2,5
tone substrat celulozic umectat. Paiele de gru au fost preventiv mrunite i inute 24 ore
submers n ap pentru mbibare. La nsmnare s-a utilizat miceliul ciupercii de pstrv crescut
pe suport granulat (gru), cantitatea folosit fiind de 3-4% fa de substratul celulozic umed.
Capacitatea de producie exprimat prin cantitatea de ciuperci raportat la 100kg material
celulozic uscat a fost de 64-71% pentru dou valuri de recolt. Rata rentabilitii pentru tulpina
P.ostreatus CNMN-FB-02 cultivat pe paie de gru a fost estimat la 85-95%, ceea ce reprezint
aproape o dublare a mijloacelor bneti investite.
Cercetrile de implementare n practic a pstrvului de fag au servit drept baz pentru
elaborarea regulamentului tehnologic de cultivare intensiv a ciupercii P. ostreatus, rezultatele
obinute fiind prezentate schematic (Fig. 27).
Figura 27. Schema fluxului tehnologic de cultivare intensiv a ciupercii P. ostreatus pe diverse substraturi celulozice
 118

6.1.3 Procedee de obinere a produselor proteice furajere. n studiul realizat anterior (Capitolul IV)
a fost demonstrat posibilitatea obinerii unor produse furajere cu coninut sporit de substane azotate.
Capacitatea ciupercii P. ostreatus de convertire a materiei vegetale secundare i de sintez a unor substane
cu proprieti biologice unice cum sunt proteinele, enzimele etc. poate fi asigurat prin cultivarea acesteia
att n faza solid de fermentare, ct i n cea lichid (Fig. 27, 28).
Obinerea produselor proteice furajere la cultivarea n faza solid de fermentare a ciupercii
P.ostreatus CNMN-FB-04
A. Mediul nutritiv de cultivare sunt paiele de gru i cocenii de porumb (2:1) umezite pn la
72% i supuse pasteurizrii la 950C timp de 1 or. Pentru inoculare a fost folosit miceliu semincer n
cantitate de 4,00,2% fa de substratul nutritiv umed. Dup repartizarea n saci a amestecului
0
nsmnat acetea sunt plasai n camera de termostatare la temperatura de 28 C n condiii de
obscuritate. Faza de cretere vegetativ, respectiv a mpnzirii substratului nutritiv cu miceliul
ciupercii se desfoar ntr-o perioad de 11-12 zile de la nceputul nsmnrii. Coninutul
proteinei brute dup 12 zile de cultivare cu P.ostreatus CNMN-FB-04 se majoreaz pn la 8,8%,
ceea ce nseamn o cretere cu 154% fa de martor (substratul iniial nefermentat). Aminoacizii
totali ai produsului furajer obinut constituie 86 mg/g BAU, dintre care partea aminoacizilor
imunoactivi" - 66 mg/g BAU, iar a aminoacizilor eseniali - 34 mg/g BAU.
B. Mediul nutritiv de cultivare sunt paiele de gru i cojile de floarea-soarelui (2:1) umezite
pn la 72% i supuse pasteurizrii la 95 0C timp de 1 or. Pentru inoculare a fost folosit miceliu
semincer n cantitate de 4,00,2% fa de substratul nutritiv umed. Dup recoltarea a dou valuri de
carpofori (EB=49,6%), coninutul proteinei brute la a 90 zi de cultivare este de 6,9%, ceea ce
reprezint o majorare cu 115% fa de martor(substratul iniial nefermentat). Aminoacizii totali ai
produsului furajer obinut constituie 67 mg/g BAU, dintre care partea aminoacizilor imunoactivi" -
49 mg/g BAU, iar a aminoacizilor eseniali - 25 mg/g BAU. Astfel, substratul celulozic PGFS
fermentat prin intermediul ciupercii P.ostreatus CNMN-FB-04 poate fi folosit n calitate de produs
furajer i dup recoltarea a dou valuri de carpofori. Aceasta permite obinerea ntr-un singur ciclu
tehnologic a proteinei alimentare i furajere, prezentnd un proces biotehnologic finisat, fr
poluarea mediului nconjurtor.
Obinerea produselor proteice _furajere la cultivarea n _faza lichid de _fermentare a
tulpinilor ciupercii P.ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03.
Mediul nutritiv n baza finii de soia (0,5%) i cojilor de floarea-soarelui (2%) este sterilizat timp de
40min la 1210C. Inoculumul P.ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03 se omogenizeaz i se introduce n
mediul de nutriie n cantitate de 10%V, sau 12-16g BAU. Durata cultivrii este de 12-14 zile, timp n care
coninutul proteinei se majoreaz pn la 10,8-11,0%, ceea ce reprezint 138-141% fa de martor. Indicele
nutritiv al produsului furajer constituie 12,2-12,7 uniti convenionale. Aminoacizii totali ai biomasei
absolut uscate (BAU) reprezint 111-113 mg/g, dintre care partea aminoacizilor considerai imunoactivi" -
74-75 mg/g BAU, iar a aminoacizilor eseniali - 46-47 mg/g BAU. Lichidul cultural al mediului de nutriie
dup 12-14 zile de cultivare cu tulpinile P.ostreatus CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03 posed activitate
celulazic (0,28-0,49 Uml-1), amilazic (0,32-3,07 Uml-1), lipazic (250 Uml-1).

6.1.4 Procedee de obinere a biomasei alimentare. Biomasa P. ostreatus cultivat submers pe diverse
medii lichide este recomandat n calitate de supliment alimentar valoros cu un coninut major al proteinelor,
acizilor grai eseniali, vitaminelor, hidrailor de carbon, substanelor bioactive. Realizarea procedeelor
eficiente de un randament sporit la cultivarea ciupercii n faza lichid de fermentare este determinat de
componena mediilor de nutriie, de utilizarea tulpinilor nalt productive, de condiiile i perioada de
cultivare, de cantitatea i calitatea inoculumului de nsmnare etc. [87, 125, 134, 135, 184] (Fig. 28).
Obinerea biomasei proteice alimentare la cultivarea submers a tulpinii Pleurotus ostreatus
CNMN-FB-02
A. Mediul de nutriie este malul de bere 6 0Balling sterilizat timp de 20min la 116 0C.
Inoculumul de pstrv preventiv omogenizat este introdus n mediul de nutriie n cantitate de
10%V. Tulpina P.ostreatus CNMN-FB-02 este cultivat submers timp de 10 zile la temperatura de
2710C, aerarea fiind realizat printr-o agitare la 180 r.p.m. Randamentul obinut este de
17,31,2g/l BAU. Indicele nutritiv al produsului alimentar constituie 21,6 uniti convenionale.
Aminoacizii totali ai biomasei absolut uscate (BAU) reprezint 213 mg/g, dintre care partea
aminoacizilor imunoactivi" - 163 mg/g BAU, iar a aminoacizilor eseniali - 83 mg/g BAU.
Biomasa obinut posed un miros plcut de ciuperci.
B. Mediul de nutritiie este fina de soia (0,5%) i porumb (2%) sterilizat timp de 40min la
1210C. Inoculumul de pstrv (4-6 zile) este preventiv omogenizat i introdus n mediul de nutriie
n cantitate de 10%V, ceea ce reprezint ~16g/l BAU. Tulpina P.ostreatus CNMN-FB-02 este
cultivat submers timp de 96 ore la temperatura de 271 0C, aerarea fiind realizat printr-o agitare la
180 r.p.m. Randamentul obinut este de 16,2g/l BAU, iar coninutul proteinei - 11,9%, ceea ce
reprezint o majorare de 1,38 ori fa de martor (substratul iniial nefermentat). Aminoacizii totali ai
produsului alimentar obinut constituie 122 mg/g BAU, aminoacizii imunoactivi" - 84 mg/g BAU,
iar cei eseniali - 43 mg/g BAU. Miceliul posed un miros plcut de ciuperci.
 Cultivarea n faza solid de
n fermentare a ciupercii P. ostreatus
CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04 pe diverse
substraturi celulozice (paie,
rumegu de lemn, coji de floarea-
soarelui, coceni).
 121

Obinerea subs (tulpina

proteinei trat P.
alimentare ostreatu
(carpoforii ul s
tulpinilor P. uzat CNMN-
ostreatus i FB-04)
CNMN-FB- utili > me
02, CNMN- diul de
zare
FB-03 i nutriie
CNMN-FB- a - PGC;
04) acest > con
> mediile de ora dii
nutriie: n ile
PG, PGR, cult
PGFS, f iv
PGC; it rii:
> condi o tem
iile t per
cultiv atu
rii:
e ra -
temp h 280
eratur n C,
a- i um
1520 idit
e
C; ate
umidi a
tatea -72
relati %,
v - Pre dur
80- par ata
90%; are cult
ilumi a iv
narea rii
-50- ma -12
200 teri zile
luci alul .
12 ui > con
ore/zi inutul
se
; proteine
aerai mi i - 8,8%
a -6-8 nce
schim r > me
buri gra diul de
aer/or nutriie:
;
nul PGFS;
durat at > con
a de n dii
cultiv baz ile
are - a cult
48-86 iv
zile; ino rii:
> productivi cul tem
tatea (EB) um per
- pn la ulu atu
80%; ra
i de
> indicii -15
nutritivi - Ple -
pn la uro 280
36,2 u.c.; tus C,
> rentabilita ost um
tea idit
economic
rea ate
- pn la tus a
98%. cult -72
Ex ivat %
sub dur
tragerea ata
p me de
rin rs cult
cip Ob iva
ine re -
iil 90
or rea
zile
bi pro ;
oa tein > con
cti ei inutul
fur proteine
ve i - 6,9
di aje %.
n re
 >

> Cultivarea n faza lichid de fermentare a

ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-
FB-03 i CNMN-FB-04 pe medii nutritive cu
mal de bere, fin de porumb, soia, coji de
floarea-soarelui.
 123

> O N
-
b F
B-
i 0
n 4)
e >
m
r ed
e iil
a e
de
nu
p tri
r ie
o -
t m
al
e de
i be
n re
e 60
(B
i ),
f
a in
l
de
i so
m ia
e (0
n ,5
t %
):
a f
r in
e
de
po
ru
> ( m
t b
u (2
l %
p );
i te
n m
i pe
l ra
e tu
ra
-
P 27
.
10
o C,
s ae
t ra
r ia
e -
a 18
t 0
u r.
s p.
m
.,
C
du
N
ra
M
ta
N
cu
-
lti
F
v
B
rii
-
-
0
4-
2
10
,
zil
e,
C ca
N nt
M ita
N te
- a
F in
B oc
- ul
0 u
3 m
ul
ui
i 10
%
V.
C pr
N od
M uc
tivit i
atea C
- 8,0 N
- M
17,3 N
g/l -
BA F
U; B-
coni 0
nutu 3)
l > m
prot ed
einei iu
- l
11,9 de
- nu
34,1 tri
%; ie
indic -
ii f
nutri in
tivi
-11, de
8- so
33,1 ia
u.c. (0
> ,5
%
O
):
b co
ji
i de
n fl
oa
e re
r a-
e so
a ar
el
ui
p (2
r %
o );
te
t m
e pe
i ra
n tu
ra
e
-
i 27
f
u 10
r C,
ae
a ra
j ia
e -
r 18
0
e r.p
> ( .m
t .,
u du
l ra
p ta
i cu
n lti
i v
l rii
e -
12
P -
. 14
zil
e,
o ca
s nt
t ita
r te
e a
a in
t oc
u ul
s u
m
C ul
N ui
M 10
N %
- V.
F pr
B od
- uc
0 ti
2 vi
 125

t n
a in
t ut
e ul
a pr
ot
- ei
ne
p i-
10
n ,8
-
11
l ,0
a %
;
2 in
0 di
cii
g nu
/ tri
l ti
vi
B -1
A 2,
U 2-
; 12
,7
c u.
o c.
 >

> Figura 28. Perspectivele utilizrii tulpinilor

ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i
CNMN-FB-04 n diverse domenii ale biotehnologiei
aplicate.
 127

> Obinerea biomasei proteice alimentare la cultivarea submers a tulpinii

Pleurotus ostreatus CNMN-FB-03
> Mediul de nutritiie este fina de soia (0,5%) i porumb (2%) sterilizat timp de 40min la
1210C. Inoculumul de pstrv (4-6 zile) este preventiv omogenizat i introdus n mediul de
nutriie n cantitate de 10%V, ceea ce reprezint ~12g/l BAU. Tulpina P.ostreatus CNMN-FB-03
este cultivat submers timp de 96 ore la temperatura de 271 0C, aerarea fiind realizat printr-o
agitare la 180 r.p.m. Randamentul obinut este de 10,8g/l BAU, iar coninutul proteinei - 17,9%,
ceea ce reprezint o majorare de 2,07 ori fa de martor (substratul iniial nefermentat).
Aminoacizii totali ai produsului alimentar obinut constituie 182 mg/g BAU, aminoacizii
imunoactivi" - 119 mg/g BAU, iar cei eseniali - 57 mg/g BAU. Biomasa posed un miros plcut
de ciuperci.
> Obinerea biomasei proteice alimentare la cultivarea submers a tulpinii
Pleurotus ostreatus CNMN-FB-04
> A. Mediul de nutriie este malul de bere 6 0Balling sterilizat timp de 20min la 1160C.
Inoculumul de pstrv preventiv omogenizat este introdus n mediul de nutriie n cantitate de
10%V. Tulpina P.ostreatus CNMN-FB-04 este cultivat submers timp de 10 zile la temperatura de
2710C, aerarea fiind realizat printr-o agitare la 180 r.p.m. Randamentul obinut este de
8,00,7g/l
BAU. Indicele nutritiv al produsului alimentar constituie 33,1 uniti convenionale. Aminoacizii
totali ai biomasei absolut uscate (BAU) reprezint 342 mg/g, dintre care partea aminoacizilor
imunoactivi" - 245 mg/g BAU, iar a aminoacizilor eseniali - 133 mg/g BAU. Miceliul obinut
posed un miros plcut de ciuperci.
> B. Mediul de nutritiie este fina de soia (0,5%) i porumb (2%) sterilizat timp de
40min la
1210C. Inoculumul de pstrv (4-6 zile) este preventiv omogenizat i introdus n mediul de
nutriie
n cantitate de 10%V, ceea ce reprezint ~14g/l BAU. Tulpina P.ostreatus CNMN-FB-04 este
cultivat submers timp de 96 ore la temperatura de 271 0C, aerarea fiind realizat printr-o agitare
la
180 r.p.m. Randamentul obinut este de 15,67g/l BAU, iar coninutul proteinei - 15,0%, ceea ce
reprezint o majorare de 1,74 ori fa de martor. Aminoacizii totali ai produsului alimentar obinut
constituie 155 mg/g BAU, aminoacizii imunoactivi" - 105 mg/g BAU, iar cei eseniali - 48 mg/g
BAU. Biomasa obinut posed un aromat plcut de ciuperci.
>

> 6.1.5 Procedeu de preparare a materialului semincer granulat. Tradiional, prepararea

materialului semincer granulat se face n baza inoculumului de pstrv cultivat n eprubete pe
coloane oblice cu mal de bere agarizat [2, 126, 144]. Dezavantajul procedeului dat este durata
relativ mare de mpnzire a materialului semincer, procesul de cultivare fiind influenat de
numrul mic al punctelor de cretere.

> Prepararea materialului semincer granulat (gru, 100%) n baza miceliului P. ostreatus
cultivat submers este lipsit de acest dezavantaj. Capacitatea miceliului cultivat submers de a
reduce perioada de mpnzire este determinat de numrul major al punctelor de contact cu
substratul nutritiv granulat. Pentru aceasta miceliul ciupercii este cultivat submers pe mediul
lichid cu mal de bere 60(B) timp de 6-10 zile, dup care acesta se omogenizeaz i se introduce n
mediul de nutriie n cantitate de 8-10%V. Inoculumul omogenizat reprezint un preparat biologic
pregtit n condiii sterile de laborator din cultura pur a ciupercii P. ostreatus, capabil de a
asigura fructificarea i de a realiza o producie sporit i stabil. Acesta este un lichid albicios, de
consistena laptelui, alctuit din hifele ciupercii dezagregate n mediul de nutriie lichid, cu
concentraia de 12-16g/l BAU. mpnzirea total a substratului nutritiv cu miceliul de pstrv
cultivat submers (101zile) duce la micorarea cu dou zile a duratei de cultivare, ceea ce reduce
i ieftinete procesul tehnologic de preparare a materialului semincer granulat. Acest procedeu
poate fi folosit pentru prepararea pe scar larg a materialului semincer granulat i producerea
miceliului comercial (Fig. 27, 28).
>

> 6.2 Activitatea fiziologic a extractelor

Pleurotus ostreatus asupra germinrii i creterii
seminelor de gru
 129
> Procesele biochimice ce au loc n faza germinrii seminelor sunt strns legate cu
schimbul de substane al plantei n cretere. Viabilitatea i energia germinativ a seminelor
exercit o influen determinant asupra roadei, de aceea naintea semnatului seminele sunt
tratate cu diveri stimulatori chimici costisitori.
> O metod avantajoas de tratare a seminelor nainte de semnare este cea biologic ce
propune folosirea metaboliilor de natur bioactiv: lichide native, extracte etc. Dup cum este
bine cunoscut, ciupercile bazidiale prezint surse de principii bioactive de o mare diversitate
biochimic, ca polizaharide, lipide, proteine, enzime, vitamine, antibiotice, diveri compui
aromatici etc. [117, 184], o performan n aplicarea metaboliilor fungici reprezentnd obinerea
unor preparate medicamentoase [61, 78, 125].
> Pierderea greutii masei uscate a substraturilor nutritive la cultivarea tulpinilor P.
ostreatus
> CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 a fost de 36-50% (Capitolul 4.2.2), ceea
ce
> reprezint 1/3-1/2 din materialul celulozic iniial. Acumularea sporit a substraturilor
celulozice uzate - aproximativ 1kg la fiecare 0,6-1,6 kg ciuperci Pleurotus necesit o
revalorificare, astfel nct acestea s nu polueze mediul nconjurtor. Substratul uzat
reprezint un produs fermentat, colonizat de ctre miceliul activ al ciupercii i nnobilat
cu diveri metabolii secundari - surse ale unor substane de natur bioactiv [32, 45, 63,
75, 107]. Printre substanele bioactive studiate se afl i fitohormonii, cei mai cunoscui
la ciuperci fiind giberilinele [153]. Producerea industrial a fitohormonilor este un proces
nc destul de costisitor, n acelai timp problemei valorificrii metaboliilor fungici nu se
acord atenia cuvenit [167]. n prezent se distinge o direcie de dezvoltare a unor noi
principii i tehnologii fondate pe utilizarea netradiional a bazidiomicetelor ca
produceni de substane bioactive. Astfel, substratul celulozic uzat, dup recoltarea
carpoforilor, poate servi drept surs de stimulatori naturali n fitotehnie [133]. Aceiai
autori [133, p.142] evideniaz faptul, c extractul nu manifest efecte mutagenice, astfel
nct influena pozitiv a substanelor bioactive este satisfcut i de aciunea moderat i
inofensiv a acestuia asupra plantelor de cultur utilizate.
 > n pofida interesului viu pe care-l suscit, criteriile i principiile n vederea stabilirii
modului i metodelor de utilizare a substanelor bioactive fungice nu sunt elucidate pe deplin.
Deficiena n cauz necesit o studiere mai ampl - n dependen de specie, tulpin fungic, de
substratul nutritiv utilizat la cultivarea acestuia, de doz, faza de tratare etc. Scopul cercetrilor
efectuate a fost studierea aciunii extractelor P. ostreatus asupra germinrii i creterii seminelor
de gru n funcie de substratul nutritiv uzat, de tulpina utilizat i doza de aciune.
> Pentru cercetri tulpinile ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-
FB-04 au fost cultivate pe urmtoarele substraturi nutritive:
1. paie de gru (100%)-(PG);
2. paie de gru + rumegu de lemn (2/3+1/3) - (PGL);
3. paie de gru +coji de floarea-soarelui (2/3+1/3) - (PGFS);
4. paie de gru + coceni de porumb (2/3+1/3) - (PGC).
> Ciclul tehnologic a durat 100-117 zile pe parcursul cruia s-au colectat carpoforii aprui,
substraturile uzate servind drept surs de substane bioactive. Extractele au fost obinute
prin amestecul substraturilor uzate cu ap n raport de 0,1 i 1% timp de 1 or. Aciunea
extractelor P. ostreatus asupra germinrii i creterii seminelor de gru a fost testat
asupra soiului Seleanca", cercetrile fiind ndeplinite a cte 3 repetri fiecare conform
metodei [137]. Capacitatea de ncolire a seminelor a fost apreciat conform energiei
germinative, care exprim numrul de semine germinate n decursul a trei zile. Drept
martor au servit seminele tratate cu ap distilat. Pentru aprecierea diferenelor
semnificative dintre variante s-a aplicat comparaia n perechi a variantelor din test cu
varianta martor dup t-criteriul Student.
> Investigaiile efectuate asupra germinrii i creterii seminelor de gru au demonstrat
faptul, c tratarea seminelor naintea semnatului cu extractul apos - rezultat din diluia
substraturilor nutritive folosite la cultivarea ciupercii P. ostreatus - manifest aciune stimulatoare
fa de lotul martor n diluiile de 0,1 i 1% (Tabelul 35). Efectul diluiilor propuse - n
dependen de tulpin sau substratul utilizat - difer de la caz la caz. Astfel, diluia extractului
apos de 1% manifest aciune stimulatoare asupra acumulrii biomasei totale la plantulele
grului, n acelai timp sporul nregistrat pentru unele variante este mic, de aceea prezint lips de
 131
autenticitate pentru P=0,05. La diluia de 0,1% sporul de acumulare a biomasei totale pentru
variantele testate statistic este autentic i prezint o majorare de 110,8 - 121,8% fa de martor.
> Conform metodei efectuate [137], msurarea greutii rdcinilor este mai demonstrativ,
de aceea se recomand msurarea n parte a greutii coleoptilelor i rdcinilor. Ulterior, s-a
stabilit un efect mai pronunat de stimulare a rdcinilor fa de coleoptile, masa uscat a
sistemului radicular prezentnd un spor de 109,6 - 129,2% fa de martor. Pentru masa uscat a
coleoptilelor acest spor este de 109,0 - 120,9% fa de martor.
> Energia germinativ a martorului se caracterizeaz printr-un procent relativ nalt (88,6%),
astfel nct raportul dintre seminele germinate pentru variantele care au fost tratate cu extractele
propuse spre testare i cea de referin au avut valori apropiate. Referitor la analiza comparativ a
efectului extractelor P. ostreatus asupra ncolirii seminelor de gru nu s-a stabilit o corelaie
cert, partea seminelor germinate prezentnd valori cuprinse ntre 95,9 - 108,6% fa de lotul
martor.
> Reieind din datele prezentate n tabel constatm o sporire mai pronunat a biomasei
totale (119,0-121,5%) a seminelor ncolite pentru ambele diluii la tulpina P. ostreatus CNMN-
FB-04 pentru substratul complex PGC, procentul de germinare avnd valorile de 102,8-107,4%
fa de martor. Efectul pozitiv al diluiilor de 0,1 i 1% este prezent i la tulpina P. ostreatus
CNMN-FB-02 pentru substraturile complexe PGL i PGFS, la care s-a stabilit o majorare fa de
martor cu 15,7 -23,1% a biomasei totale i cu 0,9 - 8,6% a seminelor germinate. Diluia de 0,1%
pentru paie de gru la tulpina P. ostreatus CNMN-FB-03 a fost cea mai eficient acumulrii masei
totale (121,8%), procentul de germinare a seminelor fiind de106,2% fa de martor.
> Astfel, datorit efectului stimulator pe care-l produc, substraturile nutritive uzate -
folosite la cultivarea ciupercii P. ostreatus - reprezint o surs de substane bioactive, care
pot fi utilizate n fitotehnie n calitate de regulatori ai creterii seminelor de gru (Fig.
28). Efectul de stimulare a proceselor de cretere la gru s-ar datora prezenei n
componena extractului P. ostreatus a complexului celulazic (Capitolul V) capabil s
asigure o degradare parial a tegumentului seminei, determinnd prin aceasta o majorare
a permiabilitii pentru ap fa de endospermul embrionului. Mai mult ca att,
capacitatea tulpinilor P. ostreatus de a sintetiza diveri ageni bioactivi - n funcie de
tulpin, substrat i doz de aciune - poate exercita o influen determinant asupra
proceselor de reactivare metabolic i morfogenetic a seminelor de gru aflate n
repaus.
 >

Aciunea extractului Pleurotus ostreatus asupra germinrii i creterii seminelor de gru

*T-valoarea criteriului autenticit ii teoretice Tteoretic 0^5 = 2,78.

 134

> SINTEZA REZULTATELOR OBINUTE

> 5
> Elaborarea tehnologiilor moderne de utilizare a reziduurilor vegetale agro-industriale i
convertirea acestora n produse cu valoare nutritiv nalt reprezint obiectivul multor cercetri n domeniul
cultivrii ciupercilor bazidiale.
> Actualitatea tematicii abordate a fost determinat de lipsa unor tulpini autohtone nalt
productive a ciupercii bazidiale de Pleurotus ostreatus, ct i a procedeelor simple i economic avantajoase
de convertire a resurselor vegetale locale n produse cu valoare nutritiv ridicat pentru economia naional.
> ncadrarea efectiv a ciupercii Pleurotus ostreatus la convertirea reziduurilor vegetale n produse cu
valoare nutritiv mai ridicat poate fi folosit n diverse procese biotehnologice ce ine de producerea
proteinei furajere i alimentare. Cercetrile efectuate n acest domeniu au condus la selectarea, depozitarea i
brevetarea a trei tulpini noi de pstrv: P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 -
perspectivi productori de nsemntate industrial.
> Referitor la analiza comparativ a rezultatelor bibliografice s-a stabilit, c tulpinile selectate de P.
ostreatus posed o productivitate i o valoare nutritiv mai nalt dect productorii existeni [57, 129, 142,
144]. Randamentul maximal al recoltei de carpofori pentru tulpina P. ostreatus 7bis cultivat la modul
intensiv n Romnia este de 14-16% fa de substratul celulozic nsmnat [57]. Recolta maxim realizat n
urma screeningului a mai multor tulpini de Pleurotus a fost gsit pentru P. ostreatus i P. pulmonarius -
16,4% fa de substratul celulozic nsmnat [181]. Pentru
> tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 selectate de noi i cultivate pe
paie de gru randamentul a fost de 18,2-21,8%, ceea ce reprezint o majorare cu aproximativ 3033%
fa de alte tulpini P. ostreatus cunoscute.
> Rentabilitatea economic de cultivare a ciupercii P. ostreatus este determinat de durata perioadei de
desfurare a ciclului tehnologic. Durata perioadei de recoltare pentru tulpina P. ostreatus 7bis este de 70-80
zile pentru 2-3 valuri de fructificare [57]. Capacitatea fructificrii precoce la tulpina P. ostreatus CNMN-FB-
02 (48-56 zile) selectat de noi reprezint o nsuire preioas (cererea brevetului de invenie MD a.2005
0147 din 23.05.2005), asigurndu-se n felul acesta o rentabilitate superioar (98%) n cadrul procesului
tehnologic de cultivare a ciupercii de pstrv.
> Tulpinile de bazidiomicete P. ostreatus 853 i 928 cultivate la modul intensiv n Ucraina sunt
productori de carpofori de o calitate nutritiv valoroas: indicii nutritivi ai carpoforilor au constituit 19,29-
21,63 uniti convenionale [129, p. 127]. Pentru realizarea procedeelor de obinere a carpoforilor cu valoare
nutritiv nalt au fost propuse dou tulpini noi de pstrv - P. ostreatus

> CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04, la cultivarea acestora utilizndu-se medii nutritive accesibile i

ieftine - PGL, PGFS i PGC (hotrrile acordrii brevetelor de invenii MD, nr.4520 i 4521 din
19.08.2005). Indicii nutritivi ai carpoforilor au constituit 31,4-36,2 uniti convenionale, fapt pentru
care acetea pot fi raportai la valorile nutritive a soiei (indicele nutritiv = 31) i a proteinei
animaliere (indicele nutritiv = 35).
> Biomasa P. ostreatus cultivat submers pe diverse medii lichide este recomandat n calitate
de supliment alimentar valoros cu un coninut major al compuilor proteici [134, 135, 184]. Randamentul
maximal al biomasei absolut uscate (BAU) pentru tulpina bazidiomicetului P. ostreatus OB-2 cultivat
submers timp de 12 zile pe mediul complex cu mal de bere 6 0Balling constituie 6,45 g/l BAU [142]. Suma
total a aminoacizilor biomasei proteice pentru tulpinile P. ostreatus 109 i HMBF-1300 cultivate submers pe
mediul de nutriie anorganic cu concentrat din suc de cartofi reprezint 24,2-29,2% BAU [180]. Cercetrile
privind determinarea randamentului i valorii nutritive a miceliului tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 cultivate submers au elucidat posibilitatea valorificrii biomasei miceliene n
alimentare, rezultatele obinute constituind valori mai nalte dect n sursele bibliografice citate. Nivelul
acumulrii biomasei miceliene pentru tulpinile selectate de pstrv a atins valorile de 8,0-17,3g/l BAU dup
10 zile de cultivare pe mediul nutritiv n baza malului de bere 6 0(B). Cantitatea total a aminoacizilor
biomasei fungice pentru tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 reprezint 34,2% BAU, iar indicele nutritiv - 33,1
uniti convenionale, fapt pentru care valoarea nutritiv a acesteia se apropie de cea a proteinei animaliere
(cererea brevetului de invenie MD a.2005 0255 din 05.09.2005). Miceliul P. ostreatus cultivat submers n
baza malului de bere poate fi utilizat i n calitate de inoculum pentru replicarea pe scar larg a materialului
semincer granulat, folosirea a 8-10%V de inoculum reducnd i ieftinind procesul tehnologic de preparare a
acestuia.
> O productivitate major a biomasei proteice alimentare a fost obinut la cultivarea submers a
tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 pe mediul de nutriie n baza finii de
soia (0,5%) i porumb (2%). Randamentul biomasei fungice dup 4 zile de cultivare a fost de 10,8-16,2 g/l
BAU, iar coninutul proteinei a prezintat o majorare de 1,38-2,07 ori fa de martor. Biomasa obinut posed
un miros plcut de ciuperci i poate fi utilizat ca supliment alimentar valoros.
> Cercetrile n ceea ce privete degradarea enzimatic a constituenilor vegetali ca celuloza i lignina,
precum i majorarea coninutului azotului total n substraturile nutritive valorificate au elucidat posibilitatea
integrrii tehnologiilor de cultivare a ciupercii P. ostreatus n lanul de valorificare util a reziduurilor
vegetale. Astfel, dup 12 zile de cultivare cu tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04, coninutul proteinei brute
pentru substraturile nutritive testate s-a majorat pn la

> 154%, degradarea constituenilor substraturilor nutritive reprezentnd 4,5-5,6% pentru celuloz i
2,0-14,5% pentru lignin. Acest fapt duce nemijlocit la majorarea valorii nutritive i digerabilitii
produsului fermentat, ceea ce poate fi pe larg folosit la fabricarea nutreurilor combinate pentru
animale (bovine, porcine). Semnificativ este faptul, c substratul complex PGFS pentru P. ostreatus
CNMN-FB-04 poate fi folosit la furajarea animalelor i dup recoltarea a dou valuri de carpofori,
coninutul azotului total dup 90 zile de cultivare avnd valoarea de 115% fa de martor. Aceasta
permite obinerea ntr-un singur ciclu tehnologic a proteinei furajere i alimentare, prezentnd un
proces biotehnologic finisat, fr poluarea mediului nconjurtor.
> Capacitatea ciupercii P. ostreatus de convertire a materiei vegetale secundare i de sintez a unor
substane cu proprieti biologice unice cum sunt proteinele poate fi asigurat prin cultivarea acesteia i n
faza lichid de fermentare. Coninutul proteinei la cultivarea submers a tulpinilor ciupercii P. ostreatus
CNMN-FB-02 i CNMN-FB-03 dup 12-14 zile de fermentare pe mediul de nutriie n baza finii de soia
(0,5%) i a cojilor de floarea-soarelui (2%) s-a majorat pn la 10,811,0%, ceea ce reprezint o cretere de
138-141% fa de martor. Lichidul cultural posed activitate celulazic, amilazic, lipazic.
> n afar de produse alimentare de o nalt calitate i furaje pentru nutriia animalelor, prelucrarea
materiei vegetale secundare n condiii de fermentare ne poate oferi i principii bioactive cu diverse efecte
fiziologic active. Datorit efectului stimulator pe care-l produc, substraturile nutritive uzate - folosite la
cultivarea ciupercii P. ostreatus - reprezint o surs de substane bioactive, care pot fi utilizate n fitotehnie n
calitate de regulatori ai creterii seminelor de gru. Efectul de stimulare a proceselor de cretere la gru
(pn la 24% fa de martor) s-ar datora prezenei n componena extractului P. ostreatus a complexului
celulazic capabil s asigure o degradare parial a tegumentului seminei, determinnd prin aceasta o
majorare a permeabilitii pentru ap fa de endospermul embrionului. Mai mult ca att, capacitatea
tulpinilor P. ostreatus de a sintetiza diveri ageni bioactivi - n funcie de tulpin, substrat i doz de aciune
- poate exercita o influen determinant asupra proceselor de reactivare metabolic i morfogenetic a
seminelor de gru aflate n repaus.
 136

> Examinnd aspectele socio-economice i ecologice ale valorificrii reziduurilor vegetale

locale, concluzionm, c acest domeniu ne ofer posibilitatea integrrii tehnologiilor de cultivare a
ciupercilor Pleurotus n dezvoltarea complex i durabil a regiunilor rurale i suburbane, rezolv sarcina
social de asigurare a populaiei cu produse alimentare de calitate i de ndestulare cu hran a animalelor.
> CONCLUZII
1. Tulpinile P. ostreatus CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 reprezint obiecte biotehnologice de perspectiv ca
productori de carpofori cu valoare nutritiv nalt, indicii nutritivi ai carpoforilor cultivai pe diverse
substraturi celulozice constituind 31,4-36,2 uniti convenionale. Aminoacizii totali ai biomasei absolut
uscate (BAU) reprezint 385-438mg/g BAU, dintre care partea aminoacizilor imunoactivi" - 278-
315mg/g BAU, iar a aminoacizilor eseniali - 119-138mg/g BAU. Tulpinile sunt depozitate n CNMN a
RM i protejate de brevete de invenii.
2. n procesul de triere a mediilor nutritive solide, paiele de gru s-au dovedit a fi substratul optimal de
cultivare pentru toate tulpinile P. ostreatus testate, fapt confirmat att de productivitatea nalt a recoltei
de carpofori (EB=59,6-88,2%), ct i de indicele major al randamentului (0,86-1,22).
3. Valoarea maxim a rentabilitii economice (1,98) a fost stabilit la cultivarea ciupercii P. ostreatus
CNMN-FB-02 pe paie de gru, utilizarea acesteia n cadrul structurilor specializate de producere
intensiv a ciupercilor comestibile de ser prezentnd un domeniu de activitate ce ofer importante
beneficii socio-economice i ambientale. Tulpina este depozitat n
> CNMN a RM.
4. Cultura pstrvului de fag a demonstrat un randament superior de utilizare a reziduurilor lignocelulozice
agro-industriale, rata de descompunere a masei uscate fiind de 36-50%, dintre care 36-46% celuloz i
30-44% lignin. Convertirea reziduurilor vegetale de P. ostreatus n produse cu valoare nutritiv nalt a
constituit circa 0,45-0,88kg ciuperci proaspete la 1kg materie vegetal uscat.
5. Majorarea azotului total n substraturile nutritive fermentate a elucidat posibilitatea de obinere a
proteinei furajere, coninutul proteinei brute pentru materiile vegetale utilizate -dup 12 zile de cultivare
cu tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 - majorndu-se de la 3,65,8% la 7,3-8,8%. Degradarea avansat a
ligninei i asigurarea unui nivel nalt de sintez a proteinelor n substraturile supuse fermentrii de ctre
tulpina P. ostreatus CNMN-FB-04 duce la majorarea valorii nutritive i a digerabilitii produsului
fermentat, ceea ce poate fi pe larg folosit n furajarea animalelor (bovine, porcine).
6. La cultivarea submers a tulpinilor P. ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 au fost
obinute bioproduse de o valoare nutritiv nalt (pn la 21,6-33,1 uniti convenionale) cu un coninut
sporit al aminoacizilor totali, eseniali, imunoactivi". Bioprodusele obinute n baza mediilor de nutriie
ce conin fin de soia (0,5%), fin de
 137

7. porumb (2%) i coji de floarea-soarelui (2%) prezint o majorare fa de martor

cu 138207% a componentelor proteice, posed un miros plcut de ciuperci i pot fi
utilizate n calitate de supliment proteic valoros pentru produsele alimentare i furajere.
7. Miceliul P. ostreatus cultivat submers duce la micorarea cu dou zile a duratei de
preparare a materialului semincer granulat i poate fi utilizat n calitate de inoculum
pentru replicarea pe scar larg a miceliului comercial.
8. Datorit efectului stimulator pe care-l produc, substraturile nutritive uzate - folosite la
cultivarea ciupercii P. ostreatus - reprezint o surs de substane bioactive, care pot fi
utilizate n fitotehnie, n calitate de regulatori ai creterii seminelor de gru.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17. RECOMANDRI PRACTICE
18. Conform procedeelor elaborate, tulpinile ciupercii P. ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04 sunt recomandate pentru cultivare industrial n calitate de surse
proteice alimentare i furajere, productori ai metaboliilor fungici de natur bioactiv cu
perspective deosebite n diverse domenii aplicative.
 138
19. REFERINE BIBLIOGRAFICE
20.

21. 1.AGUILAR A., MARTINEZ WET. A sustainable model for rural production of edible
mushrooms in Mexico. Micologia-Neotropical-Aplicada. 1998, N11. p.77-96.
2.AKHMEDOVA Z. R., DALIMOVA G. N. Biotechnology for production of different
hydrolytic, oxidative enzymes from fungi. International Symposium Modern Problems
of Microbial Biochemistry and Biotechnology". Pushcino, 2000. c.139. 3.ANDRIE V.
Producerea ciupercilor. UASM. Chiinu, 2002.-182p.
22. 4.ASRITA J. Genetic study of white fruit-bodies of Pleurotus ostreatus. Rept. Tottori
Micol. Inst. Jap.- 1974. -11.- Ni 1. -P. 58-68.
23. 5.BABITSKAYA V., PUCHKOVA T., SCHERBA V., OSADCHAYA O. Biologically
active substances of mycelia and fruiting bodies of mushrooms Lentinus Fr. and
Pleurotus (Fr.) P. Karst. IJMM. Vol. 3. 2001. p.106.
24. 6.BALAZS S. Effect of composition and head-treatment of culture medium on formation
of fruit bodies Pleurotus ostreatus and Pleurotus florida. Publ. Univ. Horticult.,
Budapest, 1979, N10, p.
25. 191-198.
26. 7.BERDY J. Adv. Microbiol. 1974. V.18. JJ22. p.309-406.
27. 8.BERRY D. R. The enviromental control of the physiology of filamentous fungi. The
Filamentous Fungi. London, 1975, p. 16-32.
28. 9.CHANG S. T., MILES P.G. Mushroom biology - a new discipline. The Mycologist.
1992. Vol.6.
29. p.64-65.
30. 10.CIHANGIR N., SAGLAM N. Removal of cadmium by Pleurotus sajor-caju
basidiomycetes. Acta biotechnol. -1999. -19, JJ22. -p. 171-177.

31. 11.COLEH R., RESKY L., HADAR Y. Biotechnological applications and potential of
wood-
32. degrading mushrooms of the genus Pleurotus. Appl. Microbiol. and Biotechnol. 2002.
-58. J 5,
33. c.582-594.
 139
34. 12.COLGER R. Growing and showing exotic mushrooms. Mycologist. 1993. Vol.7. N2.
p.71-72. 13.COSTENCO T., COSTENCO C. Ciuperci din Moldova. ARC. Chiinu,
2004.-96p. 14.CRISAN E. V., SANDS A. Nutritional value. The biology and cultivation
of edible mushrooms. New York: Acad.press, 1978. -p. 137-168.
35. 15.DENISOVA N. Traditions of using medicinal mushrooms among the Nations of the
Words. IJMM. Vol. 3. 2001. p.98.

36. 16.DVORNINA A., RUDIC V., DVORNINA E. Dietary supplements with curative and
prophylactic properties made from the edible and medicinal mushroom Lentinus edodes
(Berk.) Sing. biomass. IJMM. Vol. 3. 2001. p.137.
37. 17.EGER G., EDEN G., WISSING E. Pleurotus ostreatus - breeding potential of a new
cultivated mushroom. Theor. And Appl. Genet.- 1976.-47.^3. p. 155-163.
38. 18.ELISASHVILI V., KACHLISHVILI E., CHUCHUA D., TSIKLAURI N.,
KHARDZIANI T. Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. and Lentinus edodes (Berk.)
Sing. lignocellulolytic enzyme activity. IJMM. Vol. 3. 2001. p. 140.
39. 19.ENACHE E., ZARNEA G. Microbiologie industrial i biotehnologie. Iai, 1986.
p.203. 20.ERIKSSON K.-E. L., BLANCHETTE R. A., ANDER P. Microbial and
enzymatic degradation of wood and wood components. Berlin: Springer - Verlag,
Hedelberg, Fed. Rep. Germany, 1990.
40. 407p.
41. 21.EVANS CHRISTINE S., VENESS ROBERT G., ULLAH MILLIE A. Breakdown of
plant polymers by fungi and their potential for use bioremediation. J. Chem. Technol. and
Biotechnol. -1998. -71, Ni>4. -p.357-359.
42. 22.FEDOTOV O. V. Antioxidizing activity of micelium of mushrooms stocks Pleurotus
(Fr.) Kumm. and Flammulina (Curt.: Fr) Sing. IJMM. 2001. Vol. 3. M2-3. p.143.
43. 23.GAVRILOVA L., FOMINA V. Antibiotic action of cultivated basidiomycetes. IJMM.
Vol. 3. 2001. p.145.
44. 24.GERASIMENYA V., EFREMENKOVA O., KAMZOLKINA O. et al. Antimicrobian
and antitoxic action of Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. Extracts. IJMM. Vol. 3.
 140
2001. p.147. 25.GINTEROVA A., JANOTKOVA O., VALOVIC K. Hliva ustricova.
Pestovanie a spracovanie. Bratislava: Raca. 1976. -67c.
45. 26.GONTCHAROVA I., BABITSKAYA V., SCHERBA V. et al. Melanin pigments of
medicinal mushrooms. IJMM. Vol. 3. 2001. p.148.
46. 27.GOROVOJ L. Biotechnology for chitin-containing materials production from
mushroom biomass. IJMM. Vol. 3. 2001. p. 149.
47. 28.GYRKO P. Die Rolle der Belichtung bei dem Anbau des Austernsietlings (Pleurotus
ostreatus). Mushroom Science. VIII: Proc. Eighth Intern. Sci. Congr. Cultivat. Edible
Fungi. London. 1972. s.
48. 461-469.
49. 29.HATAKKA A. Appl. Biochem. Biotechnol. 1983. Vol.18.
Ni>6. p.350-357. 30.HATAKKA A. Appl. Biochem. Biotechnol. 1984. Vol.9.
Ni>4. p.363-364.
50. 31.HATTULA M.L., GYLLENBERG H.G. Adaptability to submerged culture and amino
acid
51. contents of certain fleshy fungi common in Finland. -Karstenia, 1969, N9., p.39-45.
52. 32.HEZZIG J., DVORAK M., VEZNIK Z. Treatment of litter straw by application of the
fungus Pleurotus ostreatus (Jacq.) Fr. Biol. Chem. Vyz.Hospod. Zvirat. 1968. N3. p.249-
253. 33.HIRANO TAEKO, HONDA YOICHI, WATANABE TAKASHI, KUWAHARA
MASAAKI. Degradation of bisfenol A by the lignin - degrading enzyme, manganese
peroxidase, produced by the white-rot basidiomycete Pleurotus ostreatus. Biosci.,
Biotechnol. and Biochem. -2000. -64. Ni>9. -c.1958-1962.
53. 34.HILBER O. Die Gattung Pleurotus (Fr.) Kummer. Bibl. Mycol. 1982. s.464.
54. 35.HORRIERE F. Etudie compative des exigences trophiques de quelque basidiomycetes
superieurs fructufiant sur milieux synthetiques. Analyse bibliographique. Mushroom Sci.
1979. 10, pt. 1, p. 665-683.
55. 36.IMBERNON M., BRIAN C., GRANIT S. New strains of Pleurotus. Mushroom
J.,1983.-N 124,
56. p. 117-123.
 141
57. 37.JALC D., NERUD F., SIROKA P. Biological treatment of wheat straw by white-rot
fungi. 17 Int. Symp. Anim. Physiol., Kosice, 1997.
58. 38.JONG S. C., BIRMINGHAM J. M. Medicinal and therapeutic value of the Shiitake
Mushroom. Adv. Appl. Microbiol. 1993. Vol. 39. p.153-184.
59. 39.JOSE N., AJITH T. A., JANARDHANAN K. K. Antioxidant, antiinflammatory and
antitumor
60. activities of Pleurotus sajor-caju (Fr.) Sing. IJMM. 2001. Vol. 3. M2-3. p.166.
61. 40.KALBERER P. The cultivation of Pleurotus ostreatus: experiments to elucidate the
influence of
62. different culture conditions on the crop yield. Mush., Tokyo, 1974, p. 653-661.
63. 41.KANESHIRA T. Lignocellulosic agricultural waste degraded by Pleurotus ostreatus.
Develop.
64. Ind. Microbiol., 1977, JV 4, p.591-597.
65. 42.KIRK T. K., FARELL R. L. An. Rev. Microbiol. 1987. V.71. JJfe4. p.465-505.
66. 43.KISHORE G., SHEWMAKER C. Biotechnology: Enhancing human nutrition in
development
67. and developing worlds. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1999.-96. p.5968-5972.
68. 44.KOVACS G. Nitrogenforrasok hatusa Pleurotus ostreatus torzsekre. Micol. Kozl.,
1978. N1-2.
69. s.57-62.
70. 45.KRIZ J., STANEK M., KAUSAR T. Vliv bedly cervanahici Lepiota rhacoides Vit a
hlivy
71. ustriche Pleurotus ostreatus (Jacq.) Kumm. na rust okurek (Cucumes sativus L. ) pri
spolecnem pestovani na stame. Vestn. pest., 1980. N1. s.55.
72. 46.KURTZMAN R.H. Nitrogen fixation by Pleurotus? Mushroom Science, X: Proc.
Tenth. Intern. Sci. Congr. Cultivat. Edible Fungi. Paris, 1978, p. 427-435.
73. 47.LABORDE J.,DELMAS J. Le pleurote : Un nouveau shampignon comestible cultive.
Bull. Fed. Nat. Syndicate Agricol.Cult.Champignons.-1974.-32. Jfe!, s. 631-652.
 142
74. 48.LI S. F. Studies on the tolerance to elevated temperatures in Pleurotus ostreatus . B-ca
micol.-1980.-65. JN1. p.1-86.
75. 49.LINDENFELSER L. A., DETROY R. W., RAMSTACK J. M. et al. Biological
modification of the lignin and cellulose components of wheat straw by Pleurotus
ostreatus. Dev. Ind. Microbiol. 1979, JN20, p.541-551.
76. 50.MACER D., MARY A. Changing attitudes to biotechnology in Japan. Nature
Biotechnol. 2000. -18. JN9. p.945-947.
77. 51.MACRIS J., KOKKE R. Eur. J. Appl. Microbiol. 1977. -4. JN1. p.93-99.
78. 52.MANACHERE G. Morphogenese des carpophores de basidiomycetes superieurs. Rev.
mycol.-1978.- 42. JN2.-s. 191-251.
79. 53.MANACHERE G. Conditions essential for controlled fruiting of macromycetes - a
review. Trans.Brit.Mycol.Soc. - 1980. - 75, JN2.-p.255-270.
80. 54.MANE A., MANE G., BANTEY V. et al. Oyster mushroom powder: an effective
supplement for daily bread of Indians. IJMM. Vol. 3. 2001. p.178.
81. 55.MANUKOVSKY N. S., KOVALEV V. S., RYGALOV V. Y. et al. Waste
bioregeneration in live support CES: development of soil organic substrate. Advances in
Space Research. 1997. Vol.20. JN10. p.1827-1832.
82. 56.MATEESCU N. Cultura ciupercilor Pleurotus. Editura CERES. Bucureti, 1992. 57.
MATEESCU N. Ciupercile Pleurotus., M.A.C.T., Bucureti,1999, -143 p. 58.METZ B.
From pulp to pellet: An engineering study on the morphology of molds. Ph. d. thesis.
-Delft. 1976. p.23-27.
83. 59.MRAZKOVA L., STANEK M. Antagonismus bacterii osidlujicic slamu vuci
Pleurotus ostreatus, Chaetomium olivaceum, Trichoderma sp. Vestn. pest. 1978. -14.
JV2. s.42-44. 60.MUSC G., GIURC R. Microbiologie industrial i biotehnologie.
Iai, 1986. p.36. 61 .NAKONECHNAYA A., DRANNIK G., GOROVOJ L. et al. Effect
of a Mycoton preparation on biochemical and immunological parameters of a syndrome
of endogenic intoxication and secondary immunodeficiency. IJMM. Vol. 3. 2001. p.187,
188.
 143
84. 62.OSER B.L. An integrated essential aminoacid index for predicting the biological value
of proteins. Protein and amino acid nutrition. New York: Acad. Press, 1959. -p. 221-229.
63.PASMIK M. Vyskum skrmovania aktivolanej slamy miceliom Pleurotus ostreatus
vykrmovymi osipanymi. Zborniki Celostatni zjazd pestovatelov hlivy. Bratislava: Raca,
1985. s.47-56. 64.PATIL M. B, JADHAV V. T. Studies on preservation of oyster
mushroom Pleurotus sajor-caju.
85. J. Maharashtra Agr. Univ. 1999. -24. J 3. c.302-303.
86. 65.PIRT S. J. A kinetic study of the mode of growth of surface colonies of bacteria and
fungi. J. Gen. Microbiol. 1967. -47. Ni>2. p.181-197.
87. 66.PLATT M., CHIT J., HENIS J. Growth of Pleurotus ostreatus on cotton straw.
Mushroom J., 1982, Ni 120, p.425-427.
88. 67.POTTERAT O. Antioxidants and free radical scavengers of natural origin. Curr. Org.
Chem. 1997. Vol.1. p.415-440.
89. 68. RAJARATHNAM S., SCHASHIREKA M., BANO Z. Biopotentialites of the
Basidiomacromycetes. Adv. Appl. Microbiol. 1992. Vol. 37. p.233-361.
90. 69.RIGHELATO R. C. Growth kinetics of micelial fungi. In: The filamentous fungi.
Vol.1. Industrial mycology. Eds. J.E. Smith. D. R. Berry. London: Edward, 1975. p.79-
103.
91. 70.ROVBEL N.,GONTCHAROVA I., SOCOLOVA T. Sorption of toxic metals by
medicinal
92. basidiomycetes. Int. Journ. of Med. Mush. Vol. 3. 2001. p.213.
93. 71.ROYSE D. J., BATLER C. C. Effects of genotype, spawn run time and substrate
formulation on biological efficiency of shiitake. Appl. Envir. Microbiol., 1976, vol. 52,
N6, p. 1425-1427. 72.RUDIC V. Aspecte noi ale biotehnologiei moderne. Chiinu:
tiina. 1993. -140p. 73.RYSAVA J., STANEK M. Vyuzivove pozadavky micelia a
vynosy plodnic kmenu Agaricus bisporus. In: 3 Intern. symp. physiology. Ecology and
cultivation of edible fungi. Prahue. 1979. p.
94. 20-22.
95. 74.SAKAMOTO R., NIMI T., TAKAHASHI S. Effect of carbon and nitrogen sourses on
submerged culture of edible fungi. J. Agr. Chem. Soc. Jap. -52, N2., 1978. p.75-81.
 144
75.SASEK V., EGGEN T. Use of edible and medicinal mushrooms spent compost in
remediation of polluted soils. IJMM. Vol. 3. 2001. p.235.
96. 76.SRBU T., DESEATNIC A., TIURIN J., LABLIUC S. Obinerea de tulpini
microbiene productoare de lipaze. Fiziologia i biochimia plantelor la nceput de
mileniu: realizri i perspective. Chiinu, 2002. p. 273-276.
97. 77.SEMERDZIEVA M., CEJP K. Investigation of micelial growth in some gill fungi
under laboratory conditions. Folia microbiol. 1966. -11, N2. p.146-154.
98. 78.SENYUK O., GOROVOJ L. Health protection and restoration under low-level
irradiation conditions using a Mycoton preparation. IJMM. Vol. 3. 2001. p.219, 220.
99. 79.SHI Y.-L., JAMES A. E., BENZIE I.-F. F., BUSWELL J. A. Prezention of oxidative
damage to
100. cellular DNA by mushrooms - derived components. IJMM. 2001. Vol. 3. M2-3.
p.221.
101. 80.SIME J. Sustaining the growth of UK biotechnology. Nature Biotechnol.
1999.-17. M5. p.442-

102. 81.SIVAPRAKASAM K., KANDASWAMY T.K. Influence of the growth of

Pleurotus ostreatus (Fr.) Sing on cellulose content of the substrate. Madras Agr.J.,1981,
N9, p.628-630. 82.SOLOMKO E. Nutritional and medicinal benefits of Pleurotus
ostreatus (Jacq.: Fr.) Kumm. submerged cultures. IJMM. Vol. 3. 2001. p.223.
103. 83.SOLOMONS G. L. Submerged culture production of micelial biomass. In:
The Filamentous fungi. Industrial mycology. London: Edward Arnold. 1975. p. 249-263.
84.SOMOGYI M. J. Biol. Chem., 19, JJM, 1952.
104. 85.SORATA V., TAKAHAMA U., KIMURA M. Biochem. Biophis. Acta. 1984.
Vol. 799. p. 313317.
105. 86.SPINU V. Considerente privind importana dezvoltrii agricultirii cu mediu
controlat n Moldova. Ed. AGEPI. Chiinu, 2002. p. 97-102.
106. 87.STAMETS P. Growing gourmet medical mushrooms. Hong Kong: Ten Speed
Press, 1993. -
107. 552p.
 145
108. 88.SUGIMORI T., OYAMA Y., OMICHI T. Studies on Basidiomycetes I.
Production of micelium and fruit body from moncarbohydrate organic substances. J.
Fermant. Technol. -1971.-49. J 5. -
109. p.435-446.
110. 89.TEPLYAKOVA T. V. Mushroom-based biologically active substances. IJMM.
Vol. 3. 2001.
111. p.231.
112. 90.TOWERS G-H. N., PAGE J. E., HUDSON J. B. Light-mediated biological
activities of natural
113. products from plants and fungi. Curr. Org. Chem. 1997. Vol.1. N4. p.395-414.
114. 91.TSAO G. T. Production of oxalic acid by a wood-rotting fungus. Appl.
Microbiol., 1963. 11.
115. J 3. p.249-255.
116. 92.TRANDAF F., TRANDAF V., LEOCA R. Suporturi noi de cretere i
rezultatele preliminare la cultura ciupercii Pleurotus ostreatus n ser. Inst. Cerc. Legume
i fructe, 1978, J 9, p. 205-212. 93.TUDOR I. Ciuperci comestibile Agaricus i
Pleurotus. Alex-Alex. Bucureti, 2001.-127p. 94.ULLAH M. A., BEDFORD C. T.,
EVANS C. S. Reactions of pentachlorphenol with laccase from Coriolus versicolor. Appl.
Microbiol. and Biotechnol. -2000. -53, J 2. -p.230-234. 95.VIESTURS V., LEITE M.,
STRIKAUSKA S. Monitoring and control of plant raw material bioconversion: VTT
Symp. Espoo, 1985. p. 103-124.
117. 96.WANG G. Dismutase compound as ant-senility nutrient liquid. CN Patent
N1107713, publ.
118. 09.06.1995.
119. 97.ZADRAZIL F., SCHLIEMANN J. Einfluss der Temperatur auf Habitus und
Farbung des
120. Basidiocarps von Pleurotus. Art. Champignon, 1972, J 12, s. 25-32.
 146
121. 98.ZADRAZIL F. The ecology and industrial production of Pleurotus ostretus,
Pleurotus florida, Pleurotus cornucopiae and Pleurotus eryngii. Mushroom Sciense, IX:
Proc. Ninth Intern. Sci. Congr. Cultivat. Ediblec. Fungi, Tokyo, 1974, p. 621-652.
122. 99.ZADRAZIL F. Influence of CO2 concentration of the mycelium growth of
three Pleurotus species. Eur. J. Appl. Microbiol. Biotehnol., 1975, N2I, p. 327-335.
100.ZADRAZIL F. Eur.J. Appl. Microbiol. Biotehnol. 1977, Vol.4, Ni>4, p.273-281.
101.ZADRAZIL F. The conversion of straw into feed by Basidiomycetes. Eur. Appl.
Microbiol Biotehnol., 1977, Ni>4, p. 273-281.
123. 102.ZADRAZIL F. Cultivation of Pleurotus. The biology and cultivation of
edible mushroom. -New York Etc.:Acad. Press, 1978, p.521-557.
124. 103.Zadrazil F. Influence of ammonium nitrate and organic supliments on the
yield of Pleurotus
125. sajor-caju (Fr) Sing. Eur. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 1980. N9. p.31-35.
126. 104.ZADRAZIL F., Brunnert H. Investigation of physical parameters important
for the solid state
127. fermentation of straw by white rot fungi. Eur. J. Appl. Microbiol. 1981, 11. p.
183-188.
128. 105.ZADRAZIL F., Peerally A. Biotechnol. Lett. 1986. Vol.8. Ni>9. p.663-666.
129. 106. ZARNEA G. Tratat de microbiologie general. Editura Academiei Romne.
Bucureti, 1994.
130. p. 170-174.
131. 107.ZATKA P. Vyuzitie vyplodeneho substratu pri vykrnic hovadzieho dobytka.
Zborniki Celostatni zjazd pestovatelov hlivy. Bratislava: Raca, 1985. s.40-46.
132. 108.ZHANG R., LI X. Mushroom cultivation with rice and wheat straw. Annual
International Meeting. Orlanda, Florida. USA. 1998. -10p.
133. 109.ABPAMOBHH ILJL, 030JTHJHS H.P., CEPrEEBA B.H. XHMH*
gpeBecuHbi, 1987, Ni>2, c.
134. 88-94.
 147
135. 110.A.C. 427993 CCCP, (51) M.KJI.C12K/00. HlraMM rpu6a Pleurotus
ostreatus (Fr) Kummer HMBF-1300 - npoflyieHT 6iiOMaccbi. niigonjiHHKO H.M.,
Eyxano A.C., IlapxoMeHKO JJ.n., MapneHKO M.n. - 0ny6ji. 29.10.74. BK>JI.
136. 111.AHBA30B O. A. OepMeHTaTHBHMH cnoco6 o6pa6oTKH COJIOMM. M.,
1984. 112.APHHYHKHHA E. B. PyKoBogcreo no xuMmecwoMy aHanroy nonB. H3A-
BO MOCKOBCKOFO yHHBepcirreTa, 1970. - 487 c.
137. 113.AJEKCAHflP0BA T. n., nETPOB A. H. 0T6OP jiHFHHHpa3pymaioiiiHx
rpu6oB gjia 6HoTexHojioFHHecKHx npoieccoB. npuKji. 6uox. H MHKPO6HOJI. T. 34,
N3, 1998. c. 270-276. 114.AJJEKCEEBA K. JJ. HHTeHciiBHbie TexHonoruu
BbipamuBaHHi BemeHKu H 3amirra OT 6ojie3Hefi H BpeguTejiefi. rABPHHL 2001.
JVM. c. 20-22.

138. 115.AXMEfl,OBA S. P. BuogerpagauHa pacTHTeibHbix OTxogoB rpu5oM

Pleurotus ostreatus. I. O5pa3OBaHHe 5HOiiorHHecKH ijeHHbix npogyKTOB.
BHOTexHOiorua. M5. 1991. c.65-68. 116.AXMEfl,OBA S. P. BuogerpagauHa
pacTHTeibHbix OTxogoB rpu5oM Pleurotus ostreatus. II.O5pa3OBaHHe
cbepMeHTOB. BHOTexHOiorua. M5. 1991. c.69-71.
139. 117.BABHLJKAJI B. F., UTEPBA B.B., OHEmKO B. C., OCA^HAS O. B.
Pleurotus ostreatus -npogyieHT KOMnieKca 5HOJiorHHecKH aKTHBHbix BemecTB.
HpHKi. 5uoxHMua H MHKPO5HOJI. 1996. T. Sl. Ml. 10S-110.
140. 118.BABHLJKAJI B. F., JHJEPBA B. B., OCAfl.HAJI O. B.
AHTHOKHciHTeibHaa aKTHBHocTb HeKOTopwx MHKpo- H MaKpoMHieTOB -
gecTpyKTopoB ^HrHO^e^^ro^O3HMx cy5cTpaTOB. HpHKi. 5HOXHMH3 H

MHKpo5uoi. 1997. T.SS. M5. c.559-56S.

141. 119.BABHLJKAI B. F., JHJEPBA B. B. AHTHOKcugaHTHaa aKTHBHocTb
rpu5oB - gecTpyKTopoB jiHrHO^jiJiio.jiO3Hbix cy5cTpaTOB. HpHKi. 5HOXHMH3 H
MHKpo5HOJi. 1001. T.S8. Ml. c.169-17S. HO.BA^AH^H C. M., FACHAPJIH A. B.,
FAPHB^H H. F. HcciegoBaHue aHTHOKcugaHTHo aKTHBHocTH HeKOTopbix
5a3HguaibHbix MaKpoMHijeTOB. MuKOiorua H cburonaTOiorHa. T.S7. M5. 100S.
-c.6S-68.
 148
142. 111.BA/KAH C. B. HpHHLHn po5OTH3HpOBaHHOH TexHOJOrHH
BWpa^HBaHHa rpu5OB. H3B. By3OB
143. CeB.-KaBK. peruoH. TexH. H., 1000. M4. c.10l-10S, 1S9.
144. 111.BEKKEP S. 3. <DH3HOJiorua H 5HOXHMH* rpu5oB. M. 1988. c. 145-155.
145. 11S.BEHOBA H. H., HCYPJJEBA H. B. CoBpeMeHHwe HanpaBieHua
3KcnepuMeHTaibHoro ucciegoBaHHa 5a3HgHOMHu,eTOB. MuKOiorua H
c[)HTonaTOiorHa. T.S1. M6. 1997. -c.64-75. 114.BEHOKPLIHOB F., MOJWAHOBA
H. KoimecTBeHHaa xapaKTepucTHKa gecTBua Ha HMMyHHbiH OTBeT
HeKOTopwx aMHHOKuciOT. Boi. 3Kcn. 5HOI. H Meg. 1986. M7. -c.61-64.
115.BECHAHOBA H. A., MAKAPOB O. E., AHTOHEOK H.H., HFHATOB B. B.
Oco5eHHocTH iunoreHe3a 5a3HgHOMHu,eTOB Pleurotus ostreatus H Flammulina
velutipes npu KyibTHBupoBaHHH Ha pa3JiHHHbix cpegax. HpHKi. 5uoxHMua H
MHKPO5HOJI. 1001. T.S8. M4. c.405-411. 116.BHHAH B. H. MeTogw
3KcnepuMeHTaibHo MHKOioruH. H3g-BO HayKOBa ,HyMKa, KueB, 197S.-140
c.
146. 117.BHCBKO H.A., BYXAHO A. C., BACCEP C. H. Bwcmue ctego5Hwe
5a3HgHOMHueTbi B noBepxHocTHOH H riy5HHHOH KyibType. KueB. HayKOBa
,HyMKa, 198S. c.lS8-l50. 118.BHCBKO H.A OOMJHHA B.H BHHAH B.T
BOHO^HHA E.H. Oco5eHHocTH H3MeHeHua xHMHHecKoro cy5cTpaTa npu
KyibTHBupoBaHHH Pleurotus ostreatus. MuKOiorua H cbuTonaTOiorua, 1986,
M5 c. S91-S95.
147. 119.BHCBKO H.A., ZTYflKA H.A. Buoiorua H KyibTHBupoBaHue
cbego5Hbix rpu5oB poga
148. BemeHKa, 1987, c. 74-84.
149. 130.BHCBKO H.A. POCT iirraMMOB Pleurotus ostreatus Ha epegax e
pa3JiHHHbiMH HCTOHHHKaMu a3OTa H yrjiepoga. MuKOJiorua H

cburonaTOJiorHa. T.22. M 6, 1988. e. 516-519. 131.BHCBKO H.A., BHJIAH B. T.

BnuaHue 5aKTepuH poga Bacillus Ha >KH3HegeaTe.jibHOCTb BemeHKH
o5wKHOBeHHo Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr) Kumm. B nacTHHHO 3aMKHyTOH
 149
HCKyecTBeHHOH 3KOCHCTeMe. MuKOJiorua H cbuTonaTOJiorHa, T. 29, M5-6,
1995. e. 1-7. 132.BOJJOBOBA A. B. HoBaa TexHOJiorua nojiyneHHa
3KOJiorHHecKH HHCTMX CTpoHTejibHbix MaTepua^OB Ha ocHOBe
cbepMeHTHOH 5HogecTpyKu,HH gpeBecHbix OTxogoB. npHKji. 5uoxHMua H
MHKPO5HOJI. 1999. T.35. M5. e.590-595.
150. 133.BOJBmAKOBA M. A., MyCATEHKO JJ. H., HECTEPOBA A. H.
LtHTOCTaTHHecKoe H LHToreHeTHHecKoe gecTBue 3KCTpaKTOB H3
5a3HgHOMHneTOB. IV Me:cgyHapogHaa KOHcbepeHLtua. PeryjiaTopw pocTa H
pa3BHTua pacTeHHH B 5HOTexHOJiorHax. MocKBa. 2001. e.142. 134.ByXAJJO A.
C. BbieniHe ci>ego5Hbie 5a3HgHOMHu,eTbi B HHCTOH KyjibType. KueB. HayKOBa
gyMKa, 1988. -144e.
151. 135.BACTKKOBA A. T., TPHCKOBA C. A. MeTogojiormecKHe
OCHOBW no3HaHua 5HO^orHHecKHx oco5eHHOCTeH rpu5oB - rrpogyLteHTOB
cbH3HOJiorHHecKH aKTHBHbix coeguHeHHH H riHmeBbix npogyKTOB. AoHeuK:
H3g-BO Hau,. aKag. HayK yKpauHbi, 1997. e. 37-38. 136.BHHAPOB A. JK).
npoMbmijieHHaa 5HOTexHOJiorHa: aKTyanbHbie npo5jieMbi. CocToaHue H
nepcneKTHBbi pa3BHTua. HOB. TexH. MOCK. roe. OTKp. yH-T. 1999. M2. e.93-104.
137.BO3HJJIKOBCKAJI K. M. MHKpo4)jiopa pacTemi H ypo^a. JJeHHHrpag, 1969.
e. 188-189. 138.FABPHJJOBA B. n., KOBJTEBA H. C., IHAMOJTHHA H. H.,
CKOPOBOFATBKO O. B. nepeneKTHBM HeTpagHUHOHHoro Hcnojib3OBaHHa
5a3HgHOMHu,eTOB gjia 3amHTbi OKpy:caiomeH epegw. npo5ji. 5oTaH. Ha py5ee
20-21 BB.: Te3. goKji. npegcTaBji. 2(10) Cte3gy Pye. 5oTaH. o-Ba, CaHKT-neTep5ypr.
1998. T.2, e.49.
152. 139.FOPHOBA H. B. CoBpeMeHHaa MHKOJiorHa B POCCHH. Te3. goKji.
nepBoro ei>e3ga MHKOJioroB POCCHH. M., 2002. e. 286-287.
153. 140.FOPHIHHA E. C. Fjry5HHHoe KyjibTHBHpoBaHHe 5a3HgHajibHbix
rpu5oB poga Trametes Fr. e Lenbio nojiyneHHa 5HOJiorHHecKH aKTHBHOH
5HOMacew: ABTopecb. gue. Ha COHCK. yn. CTen. KaHg. 5HOJI. HayK. M.:Poee.
xHM.-TexHOJi. yH.-T. 2003. -24 e.
 150
154. 141.FPEKOBA F. A., AOJJFOB H.JJ., FABPHJJOB A.B., H gp. npeBpamemie
gpeBeeuHw npu 3H3HMaTHHecKOM H MHKpo5HOJiorHHecKOM
BO3geHCTBHax: Te3. goKji. Hayn. ceMHHapa, Pura, 1985, e. 62-67.
155. 142.ABOPHHHA A. A. Ba3HgHajibHbie ei>ego5Hbie rpu5w B

HCKyecTBeHHOH KyjibType. H3g-BO HTHHHLa. KumuHeB, 1990. -112e.

156. 143. ,H,y,HKA H. A. nHTaTe^bHaa LeHHocrb cy6crpaTa nocie

KyibTHBHpoBaHHH ci>ego6Horo rpu6a Pleurotus ostreatus (Jacq.: Fr) Kumm.
MiiKojiorira H c|)HTonaTO.jiorH5i, T. 22, N5, 1988. c. 399-403.
157. 144.,ZryAKA H. A., BHCBKO H. A., BHJJAH B. T. KyibTHBHpoBaHHe
ctego6Hbix rpu6oB. KueB ypo^an. 1992. -160 c.
158. 145.EBAOKHMOBA O. A., nOJJBCKHX C. B., AKCEHOBCKAI B. E.,
yCAHEBA P. B. BjimHiie 3nH6paccHHOJiHga Ha pocT H pa3BHTHe MHu,ejiH5i
Pleurotus ostreatus. MHKOJiorHi H 4)HTonaTOJiorH>i. T.36. JVM. 2002. -c.44-47.
159. 146.EPMAKOB A. H., APACHMOBHH B. B., IPOHI H. n. H gp. MeTogw
6uoxHMHHecKoro HcanegoBaHHi pacreHuii. JJeHHHrpag. AponpoMH3gaT, 1987.
-430c.
160. 147.vK,ZLAHOBA H. H., BACHJJEBCKAI A. n. 3KcTpeMajibHa5i
3KOJiorH5i rpu6oB B npupoge H 3KcnepuMeHTe. KueB: HayKoBa ,H,yMKa, 1982.
-168c.
161. 148.HBAHOB A. H., rAPHBOBA JJ. B. MeTogHKa oieHKH ypo:scaHHocTH
HOBMX mTaMMoB P. ostreatus. MuKo^orua H c|)HTonaTO.jiorH5i. 1989, T. 23, N5, c.
485-487.
162. 149.HJJBHHCKAII C. n., KyiIIHHP C. H., CTEIAHOB B. C. CKpHHHHr
BWCUIHX 6a3HgHOMHieTOB poga Pleurotus no cnoco6HocrH npogyuHpoBaTb
rHgpojia3bi B rjry6HHHbix ycjioBHix. Genetica i ameliorarea plantelor i animalelor
n Republica Moldova. Chiinu, 1999. p.748-751.
163. 150.KAflHMAjjHEB ^. A., PEBHH B. B., ATBIKIH H. A., CHTKHH B. B.,
CMHPHOB A. B. no^yneHue aKTHBHoro HHOKyjirra rpu6a Panus tigrinus BKMF-
3616D gia 6HOMogHc|)HKau,HH gpeBecHoro cwpba. PauHOHajibHoe
 151
ucnoib3OBaHue necHbix pecypcoB: MaTep. Me:scgyHap. Hayn.-npaKTHH. KOH^.
1999. HouiKap-Ojia. -c.71-72.
164. 151.KAnHH A. H., CTAXEEB H. B., BABHTJ,KAII B. r.
AepeBopa3pymaioniHe 6a3HgHOMHueTbi - npogyieHTbi 6eiKa. MHHCK. 1984. -69c.
165. 152.KAITHll A. H. Te3. goKi. Me:scgyHap. KOHCH. MojieKyjrapHai
reHeTHKa H 6HOTexHOJiorH5i. MHHCK: IpaBO H 3KOHOMHKa, 1998. -c.185-188.
166. 153.KAHHHA H. A., XPIUHH B. H. BuoiorunecKaa aKTHBHocrb
ropMOHOB B niogoBbix Teiax BemeHKH po^KOBugHOH H maMmuHbOHa
gBycnopoBoro. III ci>e3g Bcepoc. o6-Ba 4)H3HO.jioroB pacTeHHH. Te3. goKi. C.-
IeTep6ypr. 1993. c.311.
167. 154.KOJTBII,OBA H. O., TOKAPCKAI H. H. CocraB H TexHOJiorm
noiyneHua gepMaTOiorunecKoro cpegcrea MHKoeH3HMOi. Microorganismele i
metaboliii lor n economia naional. III Conferin naional cu participare
internaional. Chiinu. 1996. p. 74-75.

168. 155.KOPOBAH JI. n. TepMOo6pa6oTKa jiHrHO^JiJiK)Ji03Hbix cycTpaTOB

npu HHTeHcuBHOM Ky^bTHBHpoBaHHH rpu6a mHHTaKe - Lentinus edodes.
MHKOJiorua H ajibrojiorHa-2004. H3g. npOMeTen. MOCKBa. 2004. c. 77.
169. 156.KOPOJTEBA O. B., CTEnAHOBA E. B., JIAH^ECMAH E. O. H gp.
HMMyHO^epMeHTHWH aHanro pa3Jio:>KeHHa rep6Hu,Hga noHBeHHbiMH H
gepeBopa3pyinaK)mHMH rpu6aMH. npHKji. 6uoxHMua H MHKPO6HOJI. 2000. T.38.
N4. c.413-418.
170. 157.KPABHYK C. B., BHCBKO H. A. KpuTepuu Bbi6opa cy6cTpaTOB.
MaTepuajibi II Me^gyHapogHOH KOHcCepeHUHH. floHeuK, 2002, c.21-31.
171. 158.KY3YBOBA H. A., JTEBAHOBA., B.IL, nAPMACTO 3.X. H gp.
BuoKOHBepcua pacTHTe^bHoro cwpba: ,H,OK.JI. BcecoK3. cuMno3. Pura, 1982, T.2,
c.227-228.
172. 159.JIa6opaTopHbiH npaKTHKyM no TexHonoruH ^epMeHTHMx
npenapaTOB. MocKBa: UerKaa H
173. numeBaa npoMbmxjieHHocTb. 1982. c. 57-62, 75-75.
 152
174. 160. JIAKHH r. BuoMeTpua. M., Bbicmaa niKOJia 1980, 293 c.
175. 161.JIEIHHHHCKAII H. B. CoBpeMeHHaa npoMbimjieHHaa
MHKpo6HOJiorHa. Copoc. o6pa3. ac. 2000.-6. M4.c.14-18.
176. 162.JOBAHOK A. r., BABHUKAH B. r., BOrflAHOBCKAH ~K. H.
MHKPO6HMH cuHTe3 Ha ocHOBe u,eji.mK>.jiO3bi. MHHCK. HayKa H TexHHKa,
1988, 261 c.
177. 163.MAHYKOBCKHH H. C., KOBAJEB B. C. BjiuaHue 6uoryMyca Ha pocT
BemeHKH cbjiopHgcKOH H inaMmuHbOHa gBycnopoBoro. MHKOJiorua H
^HTonaTO^orua, T. 32, N5, 1998. c.
178. 67-70.
179. 164.ME3KHHH r. P., KPHCTAnOHCE M. ~K., KAJTHBIHH fl. 3.
BuoTexHOJiorua 6e:iKOBbix npenapaTOB gjia KopMonpou3BogcTBO. M.: 1982.
180. 165. MHHEEB B. r. IlpaKTHKyM no arpoxuMuu. M.: H3g-BO MTY, 1989.
-304 c. 166.MOPO3OBA r. P., nOnPABKO C. A., MAKAPOBA M. A. Hcnojib3OBaHue
6uoMaccw MHKpoopraHH3MOB gjia nu^eBwx LteneH. C6. Hayn. Tp., ITymHHO.
1985. c. 21-38. 167.MYCATEHKO JL H., BOUBIHAKOBA M. A., rPOfl3HHCKAI A.
A. OroHOJiormecKaa aKTHBHocTb 3 KCTPaKTOB H3 nnogoBbix Ten
6a3HgHOMHijeTOB. Fiziologia i biochimia plantelor la nceput de mileniu: realizri i
perspective. Mater. Congr. II. Societatea de Fiziologie i Biochimie Vegetal din
Republica Moldova. Chiinu. 2002. p.153-157.
181. 168.OJTEIHKO B. C., BABHTJKAII B. r. AMHHOKHCJIOTHMH H
(JDpaKLHOHHbi cocTaB 6ejiKOB rpu6Horo npoucxo^geHua. MuKonorua H
cbuTonaTonorHa, T. 25, N3, 1991. c. 233-239. 169.IIOEAHHOK H. JL, nOTEMKHHA
~K. B., BYXAUO A. C. H gp. BuoTexHonorua. 2003. M2.

182. c.59-64.

183. 170.nOEAHHOK H.JJ., BHCBKO H.A. noBbinieffiie 3cbcbeKTHBHOCTH

npoMbinineHHoro KynbTHBupoBaHHa etego5Horo rpu5a BemeHKH
o5wKHOBeHHOH. BHOTexHonorua. 2004. M5. e.64-
184. 67.
 153
185. 171.nOTAnOBHH A. H., KOCTKK B. A., TEPEHJJEHKO C. M.,
AOAHACBEB H. B. KuenopogHbie paguKanw B XHMHH, 5uonorHH, MegHUHHbi.
Pura: PMH, 1988. -25e. 172. ny^KOBA T. A. Fny5uHHbiH MHuenu rpu5a Lentinus
edodes: eocTaB H 5HonorHnecKaa aKTHBHOCTb. H3g. npoMeTe. MocKBa. 2004. e.
108.
186. 173.PEBHH B. B., KAAHMAJJHEB A. A., myTOBA B. B., TAPAKAHOBA O.
A. BnuaHue 5uogerpagaLHH gpeBecHoro ewpba rpu5oM Panus tigrinus Ha
c()H3HKO-MexaHHHecKHe CBOHCTBa 5HonnacTHKOB. MaTep. Hayn.-npaKT.
KOHC(). -1999. HomKap-ona. e. 61-62.
187. 174.PEBHH B. B., KAAHMAJJHEB A. A. myTOB B. B., CAMyHJJOB B. A.
Mogu^HKaLua nurHHHa gpeBeeuHbi rpu5oM Panus tigrinus. npuKn. 5uoxHMua H
MHKpo5uon. 2002. T.38. M5. e.529-533.
188. 175.PEmETHHKOBA H. A. MuLenun rpu5oB KaK HCTOHHHK KopMOBoro H
numeBoro 5enKa. M.: H3g-BO MFy, 1989. -55e.
189. 176.CAJJOBAPOBA B. n., TPHOOHOBA T. M., CTEnAHOBA K. M.,
3LIPJIHOBA H. B. Henonb3OBaHHe 5HOTexHonorHHecKHx MeTogoB gna
yTHnroauHH nHrHO-u,enniono3Hbix OTxogoB. HenoBeK-Cpega-BeeneHHaa: Te3.
goKn. Me^gyHapogH. Hayn.-npaKT. KOH^., HpKyTCK. 1997, T.1. e.131-132.
190. 177.CEMEHOB C. M. JJa5opaTopHbie epegw gna aKTHHOMHu,eTOB H
rpu5oB. CnpaBOHHHK. M.: ArponpoMH3gaT. 1990. -240e.
191. 178.COJJOBBEB B. A., MAJTblLUEBA O. H., MAJJEBA H. JJ., CATOTHHA
B. H. XuMua gpeBecHHbi. M6, 1985. e. 94-100.
192. 179.COJJOMATOB B. H., HEPKACOB B. A., EPOOEEB B. T.
CTpouTenbHwe 5HOTexHonoruH H 5HOKOMno3HTM. M.:MHHT, 1998. -166e.
193. 180.COJJOMKO 3. O., EJJHCEEBA F. C., PBWK B. A. H gp. CocTaB
nnogoBwx Ten H MHLenua BMcmero Cbego5Horo rpu5a - Pleurotus ostreatus (Fr.)
Kumm. npuKn. 5uoxHMua H MHKpo5uon. 1987. T.23. M2. e.230-236.
194. 181.TPyXOHOBELi, B. B. CeneKLHOHHbin OT5op mTaMMOB cbego5Hbix
rpu5oB poga Pleurotus (Fr.) Kumm. C5. Hayn. Tp. HH-T neea HAH Benapyeu. 2001.
M53. e.293-296. 182. TyTEJIBiEHU, B. A., KPABHEHKO JJ. B. MHKOTOKCHHW. M.:
 154
MeguuHHa, 1985. 319e. 183.yOHMIJJEB A. E., TOHKOB B. A., KOJJECHHKOBA C.
A., MyPATUEBA E. K. Me^gyHap. KOHC(). OuH.-yrop. Mup: eocToaHue npupogw H
peruoH. CTpaTerua 3amHTbi OKpy:c. cpegbi. CwKTWBKap. 1997. e. 179-180.
 155

195. 184.0EOOHHOBA E. IL CoBpeMeHHbie HanpaBjieHm B royneHue 5H0JiorHHecKH

aKTHBHbix Bemecre 5a3H7THajrbHbix rpu5oB. LlpHKji. 5HOXHMHH H MHKPO5HOJI. 1998.

T.34. N26. c.597-608. 185.mHBPHHA A. H. BuonormecKH aKTHBHbie Bemecrea BMCLUHX

rpu5oB. M.-H.: HayKa, 1965.

196. 194c.
197. 186.IHBPHHA H.H., HH3KOBCKAS O L L,OOMHHA H.H. H gp.

BuocuHTeTunecKaa gerrejibHocTb BMCLUHX rpu5oB. H., 1969. c. 243.

198. 187.3HHCAIBHJIH B. H. BH0K0HBepcua pacTHTejibHoro cwpba BMCLUHMH

5a3HgH0MHiieTaMH. MuKonorua H 4)HTonaT0JiorH5i. T.27. N26. 1993. c.83-93.
 156
199. ADNOTARE
200. Stepanov Vitalie Biotehnologia cultivrii ciupercii Pleurotus ostreatus
i obinerii
201. bioproduselor valoroase". Teza de doctor n biologice. Chiinu, 2005, 35 tab.,
28 fig., 187 referine bibliografice.
202.

203. Cuvinte-cheie: Pleurotus ostreatus, screening, faz solid de fermentare,

protein furajer, protein alimentar, valoare nutritiv, cultivare submers, biomas,
aminoacizi, fitotehnie, bioproduse.
204.

205. Lucrarea reprezint un studiu comparativ a mai multor tulpini de Pleurotus

ostreatus cu referin la unele particulariti morfo-culturale i biochimice de cultivare ale
acestora, o apreciere a potenialului biologic al ciupercii de pstrv din punct de vedere al
perspectivei biotehnologice.
206. n rezultatul selectrii tulpinilor ce prezint interes prin capacitatea de cretere
sporit pe mediile solide i lichide de cultivare, prin sinteza componentelor proteice valoroase i a
metaboliilor fungici bioactivi, au fost izolate, cercetate i depozitate n Colecia Naional de
Microorganisme Nepatogene trei tulpini noi de pstrv - Pleurotus ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04.
207. A fost demonstrat posibilitatea obinerii carpoforilor cu valoare nutritiv nalt
i a furajelor cu coninut sporit de substane azotate, aminoacizi eseniali i "imunoactivi". La
cultivarea tulpinii Pleurotus ostreatus CNMN-FB-04 pe substratul complex n baza paielor i
cocenilor de porumb (2:1) au fost obinui carpofori cu un coninut nalt al aminoacizilor totali n
biomasa absolut uscat: 438mg/g BAU, dintre care 315mg/g BAU reprezint partea aminoacizilor
imunoactivi", iar 138mg/g BAU - a aminoacizilor eseniali . Capacitatea ciupercii Pleurotus
ostreatus de a degrada complexul lignocelulozic i de a converti reziduurile vegetale n produse
proteice de sintez duce la majorarea valorii nutritive i poate fi utilizat n calitate de procedeu
de obinere a bioproduselor fungice valoroase.
208. Tulpinile Pleurotus ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 i CNMN-FB-04
sintetizeaz
 157
209. diveri exometabolii celulari n mediul de nutriie, n special, enzime hidrolitice
(celulaze, amilaze, proteaze, lipaze). La tratarea seminelor de gru cu exometaboliii de
Pleurotus ostreatus se atest o sporire a biomasei totale a seminelor ncolite (pn la
24%), ceea ce permite utilizarea acestora n calitate de biostimulatori ai proceselor
fiziologice i biochimice n fitotehnie.
210. Miceliul Pleurotus ostreatus cultivat submers poate fi utilizat i n procesul
tehnologic de preparare pe scar larg a materialului semincer i de producere a carpoforilor.
211. PE3IOME
212. CTenaHOB Buranu EHoTexHojiorHH Ky.ibTiiBiipoBaHim rpiia
Pleurotus ostreatus u nojiyneHiie ueHHux nonpoayKToB". AuccepT. goKTopa
5uonorHHecKHx HayK. KumuHeB, 2005, 35 Ta5., 28 puc., 187 5H5JI. Ha3B.
213. KjiiOHeBbie cjioBa: Pleurotus ostreatus, CKpuHHHr, TBepgocba3Ha5i
cCepMeHTauua, KopMOBo 5enoK, numeBo 5ejiOK, nuraTenbHaa ueHHOCTb,
rny5uHHoe KynbTHBHpoBaHue, 5uoMacca, aMHHOKHC^OTM, c|)HTOTexHHa,
5HonpogyKTbi.

214. B pa5oTe npegcraBneHbi pe3ynbTaTM royneHua Mopc|)o-KynbTypanbHbix H

5uoxHMHnecKHx oco5eHHOCTe rpu5a Pleurotus ostreatus B CBa3H c oueHKo
Hcnonb3OBaHua mTaMMOB BemeHKH B KanecTBe nepcneKTHBHbix o5i>eKTOB
5uoTexHonorHH.
215. B pe3ynbTaTe noucKa mTaMMOB, o5nagaiomHx cnoco5HOCTbio K
HHTeHCHBHOMy pocTy, npogyuupoBaHHio 5enKa H BTOPHHHMX MeTa5onuTOB B
ycnoBuax TBepgo^a3Ho H rny5HHHo cCepMeHTauHH 5binH BbigeneHbi, royneHbi H
genoHupoBaHM B HauHOHanbHo KonneKUHH HenaToreHHMx
MuKpoopraHH3MOB Tpu HOBMX mTaMMa rpu5a BemeHKa - Pleurotus ostreatus
CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 H CNMN-FB-04.
216. Ha ocHOBe npegcTaBjieHHbix pe3ynbTaTOB noKa3aHa BO3Mo:cHOCTb
nonyneHua
217. BMCOKOnHTaTenbHMX nnOgOBMX Ten H KOpMa gna
CenbCKOXO3aHCTBeHHbIX HBOTHMX, o5orameHHbIM a3OTOM H, B
HaCTHOCTH, He3aMeHHMMMH H HMMyHHOaKTHBHbIMH"
 158
218. aMHHOKHcnoTaMH. ycTaHOBneHO, HTO Ha nogo5paHHOM
KOMnneKCHOM cy5cTpaTe (conoMa:KOHepbDKKH, 2:1) cogep^aHue
aMHHOKucnoT y BMCOKonpogyKTHBHoro mTaMMa rpu5a Pleurotus ostreatus
CNMN-FB-04 cocTaBnaeT 438 Mr/r a.c.B., B TOM nucne HMMyHHoaKTHBHbie"
-315 Mr/r a.c.B. H He3aMeHHMwe - 138 Mr/r a.c.B. Cnoco5HOCTb rpu5a Pleurotus
ostreatus pa3naraTb nHrHOu,enniono3HbiH KOMnneKC cy5cTpaTa H o5oramaTb
rpu5HWM 5enKOM pa3nuHHwe pacTHTenbHwe OTxogw cenbCKoro xo3acTBa
BegeT K yBenmeHHio HX KopMOBo ueHHOCTH H MO^eT 5wTb Hcnonb3OBaHa
KaK cnoco5 nonyneHua KopMOBoro 5enKa.
219. ycTaHOBneHO, HTO uiTaMMbi rpu5a Pleurotus ostreatus CNMN-FB-02,
CNMN-FB-03 H CNMN-FB-04 cnoco5HM BbigenaTb B nuraTenbHyio cpegy pa3nuHHwe
3K3OMeTa5onuTbi, B nacTHOCTH, KOMnneKC rugponuTunecKux c|)epMeHTOB
(uenniona3a, aMuna3a, npoTea3a, nuna3a). npuMeHeHue 3K3OMeTa5onuTOB P. ostreatus gna
npegnoceBHo o5pa5oTKH ceMaH mneHHUbi noBwmaeT y HHX HaKonneHue MaccM
npopocTKOB (go 24%) H MoryT 5wTb Hcnonb3OBaHM B KanecTBe 5uocTHMynaTopoB
4)H3Honoro-5HOXHMHHecKHx npoueccoB B ^HTOTexHHH.
220. Fny5uHHWH MHuenu rpu5a P. ostreatus HaxoguT npuMeHeHue H B
TexHonoruu npoH3BogcTBa nnogoBwx Ten KaK oguH H3 cnoco5oB 5wcTporo
nonyneHua 5onbmoro Konunecrea noceBHoro MaTepuana.
221. ABSTRACT
222. Stepanov Vitalie "Biotechnology of cultivation of Pleurotus ostreatus
mushroom and obtaining valuable bioproducts" Dissertation submitted for the degree of
Doctor of Biological Sciences. Chisinau, 2005, 35 tables, 28 figures, 187 bibliographical
references.
223.

224. Key words: Pleurotus ostreatus, screening, solid state fermentation, fodder
protein, food protein, nutritive value, submerged cultivation, biomass, amino acids, phytotechny,
bioproducts.
225.
 159
226. Morphological, cultural and biochemical properties of Pleurotus ostreatus strains
were studied to estimate the biotechnological perspectives of this oyster mushroom.
227. Three new strains of Pleurotus ostreatus - CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 and
CNMN-FB-04 were isolated, investigated and deposited in the National Collection of
Nonpathogenic Microorganisms as a result of the search for the strains with high growth rates,
protein and secondary metabolite production under the solid state and submerged fermentation
conditions.
228. The presented results demonstrate possibilities of obtaining fruit bodies of high
nutritive value and fodder for agricultural animals, rich in nitrogen and particularly in essential
and "immunoactive" amino acids. It was found that the strain Pleurotus ostreatus CNMN-FB-04,
treated with a special complex substrate (straw:corn stump, 2:1), was able to accumulate 438
mg/g a.d.m. of amino acids, including 315 mg/g a.d.m. of "immunoactive" and 138 mg/g a.d.m.
of essential amino acids. The abilities of Pleurotus ostreatus to decompose lignocellulose and to
enrich with fungal protein different plant residues from agriculture increases the fodder value of
the latter and can be used as a means of production of fodder proteins.
229. The strains of Pleurotus ostreatus CNMN-FB-02, CNMN-FB-03 and CNMN-FB-
04 were found to be active in producing different exometabolites into the media and, in particular,
in producing a complex of hydrolytic enzymes (cellulase, amylase, proteinase, lipase). These
exometabolites can be used as biological stimulators of physiological and biochemical processes
in phytotechny. The treatment of the wheat seeds (before sawing) with the exometabolites
increased the biomass of the seedlings (up to 24%).
230. The submerged mycelium of Pleurotus ostreatus can be also used in the
technologies of production of fruit bodies as one of the means of quick obtaining of large
quantities of fungal mycelium for sawing.