Clasa 2

TRANSFERAZE EC: 2

1
Transferazele sunt enzime care transfer un radical
sau o grupare funcional de pe un substrat donor
de grupare funcional pe un substrat acceptor.

SA + SB SB + SA

2
 Clasificarea transferazelor n subclase i subsubclase
2. Transferaze
2.1. Enzime care transfer grupri cu un singur atom de carbon
2.1.1. Metiltransferaze
2.1.2. Hidroximetiltransferaze, formiltransferaze i transferazele similare
2.1.3. Carboxiltransferaze i carbamoiltransferaze
2.1.4. Amidinotransferaze
2.2. Enzime care transfer grupri aldehidice sau cetonice
2.3. Aciltransferaze 2.7. Enzime care transfer grupri care conin fosfor
2.3.1. Acetiltransferaze 2.7.1. Fosfotransferaze cu o grupare alcool ca acceptor
2.3.2. Aminoaciltransferaze 2.7.2. Fosfotransferaze cu o grupare carboxil ca
2.4. Glicoziltransferaze acceptor
2.7.3. Fosfotransferaze cu o grupare cu azot ca
2.4.1. Hexoziltransferaze
acceptor
2.4.2. Pentoziltransferaze 2.7.4. Fosfotransferaze cu o grupare fosfat ca acceptor
2.4.99. Enzime care transfer alte grupri glicozil 2.7.5. Nucleotidiltransferaze
2.5. Enzime care transfer grupri alchil sau aril 2.7.8. Transferaze pentru alte grupri cu fosfat
2.6. Enzime care transfer grupri care conin azot substituite
2.7.9. Fosfotransferaze cu acceptori pereche
2.6.1. Aminotransferaze (transaminaze)
2.8. Enzime care transfer grupri care conin sulf
2.6.2. Amidinotransferaze 2.8.1. Sulfurtransferaze
2.6.3. Oximinotransferaze 2.8.2. Sulfotransferaze
2.6.99. Enzime care transfer alte grupri cu azot 2.8.3. CoA-transferaze 3
COFACTORII TRANSFERAZELOR

4
COFACTORII TRANSFERAZELOR CARE TRANSFER
GRUPRI CU UN SINGUR ATOM DE CARBON
(EC 2.1)

Cofactorii metiltransferazelor (EC 2.1.1)

5
 Cofactorii metiltransferazelor (EC 2.1.1)

I. Acidul tetrahidrofolic (FH4) (vitaminele B9, B10, B11)

II. Cobalamina (vitamina B12)

6
 I. Acidul tetrahidrofolic cofactor enzimatic
OH O
5 9 10
4
N C NH C NH CH CH2 CH2 COOH
3 N H2
A B COOH
Acid para-
H2N N N aminobenzoic Acid glutamic
1 8

Pterina
pteridina
2-amino-4-hidroxi-6-metil-pterid

Acid folic (F)

Acidul folic este format dintr-un nucleu pteridinic substituit (pterina), unit
printr-o punte metilenic de acidul para-aminobenzoic, legat la rndul su
printr-o legtur peptidic de acidul glutamic.
Pteridina este rezultatul asocierii a dou nuclee condensate:
pirimidinic (nucleul A) i pirazinic (nucleul B). 7
 Biosinteza acidului tetrahidrofolic
OH O
5 9 10
4
N C NH2 C NH2 CH CH2 CH2 COOH
3 N H2
A B COOH
H2N N N Acid para-
1 8
aminobenzoic Acid glutamic
Pterina
pteridina
2-amino-4-hidroxi-6-metil-pterid
Acid pteroic Acid folic (F)

2 NADPH+H+

dihidrofolat reductaza

2 NADP+
OH O
H 9 10
4
N CH2 NH C NH CH CH2 CH2 COOH
3 N 5
H COOH
8 CH2
H2N N1 N
H Acid 5, 6, 7, 8 - tetrahidrofolic (FH4) Forma redus
a acidului folic
8
 Formele active ale acidului tetrahidrofolic
FH4 poate participa la transferul gruprilor cu un atom de carbon
pe care le leag la N5 i/sau N10
FH4 poate lega resturi metil, metilen, formil sau formimino => forme active
ale FH4.
Acceptorii acestor grupri sunt o gam variat de biomolecule.
O
O H
H3C HN 10 HN 10
H N 10
N N 5
5
5
N
H
N5-metil-FH4
N5-formil-FH4
N10-formil-FH4
H2C N 10 NH

N CH HN
10
5
N
5

N5-N10-metilen-FH4
N5-formimino-FH4 9
 Particulariti funcionale ale acidului teterahidrofolic

Acidul tetrahidrofolic (FH4) este transportor pentru gruparea metil

sub form de N5-metil-FH4.

Donorul de grupare metil este metionina, care este mai nti

activat sub form de sulf-adenozil metionin (SAM).

Deci, procesele de metilare sunt dependente att de SAM, ct i de

FH4, ele fiind procese importante n biosinteza a numeroase
biomolecule eseniale din organismul uman : colin, fosfatidilcoline,
adrenalin, tocoferoli, timin (din structura ADN) etc.

10
 Mecanismul de aciune al metiltransferazelor

Presupune existena:
Unui donor de grupri metil METIONINA
Unor substane acceptoare de grupri metil: etanolamin,
noradrenalin, uracil, etc

Are loc n 3 ETAPE:

1. Activarea metioninei donorul principal de grupri metil

2. Transferul gruprilor metil pe acidul tetrahidrofolic (FH4)
3. Metilarea diferitelor substrate

11
 1. Activarea metioninei

NH2
N
N
CH3 + N
N
metionin H3C S CH2
S
adenozil O
CH2 transferaza CH2 fosfat (Pi)
+
+ ATP CH2 pirofosfat (PPi)
CH2
H2N CH H2N CH OH OH
COOH COOH
L-metionina Sulf-adenozil-metionina (SAM)
("CH3" metil activat)

Sulf-adenozil metionina (SAM) = forma activat a metilului CH3

12
2. Transferul gruprilor metil active pe acidul tetrahidrofolic (FH4)
H3C HN 10
NH2 acid N5-metil-tetrahidrofolic
N
5

N sau
N acid N10-metil-tetrahidrofolic N5-metil-FH4

N N
+ NH2
H3C S CH2 N
CH2
O + N
+ FH4 N N
CH2
S CH2
H2N CH OH OH O
CH2
COOH
CH2
Sulf-adenozil-metionin (SAM)
H2N CH OH OH
COOH
Sulf-adenozil-homocistein

SAM reacioneaz cu FH4 i rezult acid N5-metil sau N10-metil-tetrahidofolic,

adevratul transportor al gruprii CH3.
Din reacie rezult i sulf-adenozil-homocisteina, care se va scinda ulterior n
L-homocistein i adenozin, sub aciunea unei hidrolaze. 13
 3. Metilarea diferitelor substrate (exemple)
Acizii N5-metil-tetrahidrofolic sau N10-metil-tetrahidrofolic transfer
grupri CH3 pe substratul acceptor, cu refacerea moleculei de FH4.
3 S-adenozil
3 SAM homocistein
H2C OH H2C OH
Metiltransferaza CH3
+
H2C NH2 H2C N CH3 + FH4
3 N5-metil-FH4
CH3
Etanolamin Colin

Fosfatidiletanolamine Fosfatidil coline (lecitine)

S-adenozil
"CH3" homocisteina
OH SAM N5-metil FH4 OH
-FH4
OH OH Transformarea
noradrenalinei n
Noradrenalin-N-metil transferaza adrenalin
EC: 2.1.1.28
HC OH HC OH
H2C NH2 H2C NH CH3
14
Noradrenalin Adrenalin
Formarea timinei.
N5-N10-metilen-tetrahidrofolatul realizeaz metilarea uracilului din structura
ARN cu formarea timinei, care intr n structura acizilor deoxiribonucleici (ADN).

O FADH2 FAD O
H2C N 10 CH3
HN HN
+ N5, N10
N-metilen-FH4 + FH4
5
ribotimidil-sintaza
O N folat dependent O N
H EC 2.1.1.74
H
Uracil N5-N10-metilen-FH4
(ARNt) Timin
(ARN)
(ADN)
Interconversia glicocol serin, deci transferul gruprilor hidroximetil se
realizeaz cu intervenia N5-N10-metilen-tetrahidrofolatului, proces catalizat
de glicin-hidroximetil transferaza (EC 2.1.2.1.)
CH2 OH
CH2 NH2 PLP
N5-N10-metilen- H2 N CH + FH4
+ + H2 O
COOH tetrahidrofolat
hidroximetiltransferaza
COOH
Glicocol
L-Serina 15
 Cobalamina (vitamina B12)
- CH3

Nucleu corinic - conine n

centrul su un atom de cobalt
(Co) trivalent i hexacoordinat.
Acesta se leag de o grupare
metil (-CH3) sau de
5-deoxiadenozin (cu formarea
unei legturi speciale cu atomul
de cobalt) = cofactori enzimatici

Formele biologic active

ale vitaminei B12
metilcobalamina i
5-deoxiadenozil cobalamina

16
 Biosinteza formelor coenzimatice ale cobalaminei

Formarea lor presupune reducerea Co3+ la Co2+ i preluarea unei grupri

deoxiadenozil de la ATP sau a unei grupri metil de la S-adenozil
metionin (SAM)

Cobalamina
(Co3+)
FADH2 sau
NADH+H+ Metilcobalamina
+ SAM

Cobalamina
(Co2+)
+ ATP 5- Deoxiadenozil cobalamina

17
 Metilcobalamina cofactor pentru metil-transferaze
SH H3C S
CH2 CH2
Metionin-sintaza
CH2 CH2
EC 2.1.1.13
N5-metil-FH4 + H2N CH FH4 + H2N CH
Cobalamina
metilcobalamina
COOH COOH
L-Homocisteina L-Metionina

Intervine ca metil transferaz n refacerea (regenerarea) metioninei

(aminoacid esenial) i a acidului tetrahidrofolic (FH4) = reacie de
transmetilare
Interconversia homocistein-metionin se realizeaz prin cooperarea acidului
N5-metil-tetrahidrofolic cu coenzima metilcobalaminic.
Se nchide ciclul metilului activat
Acizii folici se afl ntr-o strns relaie metabolic cu vitamina B12 !
n lipsa vitaminei B12 homocisteina (cu aciune proaterogen) se acumuleaz
n snge i determin modificri patologice la nivelul sistemului
18
cardiovascular i a sistemului nervos.
 Cobalamina - cofactor i pentru unele izomeraze (EC 5)

O Metilmalonil - O
1 2 1 2 3
CoA mutaza
HOOC CH C ~ SCoA HOOC CH2 CH2 C ~ SCoA
5'-deoxiadenozil
3 CH cobalamin
3
Metilmalonil~SCoA EC: 5.4.99.2 Succinil ~SCoA

Gluconeogenez

Biosinteza hem-ului

Reactia de izomerizare are loc prin transferul ntregii grupri tioesterice (CO~SCoA) de
la atomul C2 al metilmalonil ~SCoA la atomul de carbon al gruparii metilice, concomitent
cu transferal unui atom de hidrogen legat tranzitoriu de C5 al nucleotidului;
Metilmalonil-CoA este un compus intermediar;
n anemia pernicioas, datorit coninutului redus al vitaminei B12 i a acizilor folici,
scade biosinteza hemoglobinei i crete coninutul fierului seric liber.
19
Mecanismul reaciei de izomerizare
dependent de 5-deoxiadenozil
cobalamin
20

The three-dimensional
structure of the cofactor was
determined by Dorothy
Crowfoot Hodgkin in 1956,
using x-ray crystallography.
Nobel Price for Chemistry
(1965)
Vitamin B12 deficiency results in serious disease.
This vitamin is not made by plants or animals and
can be synthesized only by a few species of
microorganisms.
It is required by healthy people in only minute
amounts, about 3 g/day. The severe disease
pernicious anemia results from failure to absorb
vitamin B12 efficiently from the intestine, where it is
synthesized by intestinal bacteria or obtained from
digestion of meat. Individuals with this disease do
not produce sufficient amounts of intrinsic factor, a
glycoprotein essential to vitamin B12 absorption.
The pathology in pernicious anemia includes
reduced production of erythrocytes, reduced levels
of hemoglobin, and severe, progressive impairment
of the central nervous system. Administration of
large doses of vitamin B12 alleviates these symptoms
in at least some cases.
Lehninger Principles of Biochemistry, 2013
21
 Clasificarea transferazelor n subclase i subsubclase
2. Transferaze
2.1. Enzime care transfer grupri cu un singur atom de carbon
2.1.1. Metiltransferaze
2.1.2. Hidroximetiltransferaze, formiltransferaze i transferazele similare
2.1.3. Carboxiltransferaze i carbamoiltransferaze
2.1.4. Amidinotransferaze
2.2. Enzime care transfer grupri aldehidice sau cetonice
2.3. Aciltransferaze 2.7. Enzime care transfer grupri care conin fosfor
2.3.1. Acetiltransferaze 2.7.1. Fosfotransferaze cu o grupare alcool ca acceptor
2.3.2. Aminoaciltransferaze 2.7.2. Fosfotransferaze cu o grupare carboxil ca
2.4. Glicoziltransferaze acceptor
2.7.3. Fosfotransferaze cu o grupare cu azot ca
2.4.1. Hexoziltransferaze
acceptor
2.4.2. Pentoziltransferaze 2.7.4. Fosfotransferaze cu o grupare fosfat ca acceptor
2.4.99. Enzime care transfer alte grupri glicozil 2.7.5. Nucleotidiltransferaze
2.5. Enzime care transfer grupri alchil sau aril 2.7.8. Transferaze pentru alte grupri cu fosfat
2.6. Enzime care transfer grupri care conin azot substituite
2.7.9. Fosfotransferaze cu acceptori pereche
2.6.1. Aminotransferaze (transaminaze)
2.8. Enzime care transfer grupri care conin sulf
2.6.2. Amidinotransferaze 2.8.1. Sulfurtransferaze
2.6.3. Oximinotransferaze 2.8.2. Sulfotransferaze
2.6.99. Enzime care transfer alte grupri cu azot 2.8.3. CoA-transferaze 22
 Cofactorii enzimelor care transfer grupri
aldehidice sau cetonice (EC 2.2.)

Tiamin pirofosfatul (TPP) cofactor enzimatic

23
 Tiamin pirofosfatul (TPP)
forma activ a vitaminei B1

6
1 5 CH 2 + 4' CH 3
N 3' N OH OH
2'
HC
H 3C 2 N 4 NH 2 S 5' CH 2 CH2 O P O P O
3 1'
O O Enzima

TPP se formeaz n celul prin esterificarea gruprii - OH a alcoolului primar din

structura vitaminei B1 (tiaminei) cu o molecul de acid fosforic, legat la rndul
su de a doua molecul de acid fosforic printr-o legtur tip anhidrid.
A doua grupare fosfat se leag de partea proteic a enzimei (E) printr-o legtur
covalent, deci TPP este un cofactor legat de partea proteic a enzimei TPP
dependent.
24
 Tiamin pirofosfatul (TPP) - Mecanism de aciune

6
1 5 CH2 + 4' CH3
N N
2'
OH OH
HC
H 3C 2 N 4 NH2 S 5' CH2 CH2 O P O P O
3 1'
O O Enzima

atom de carbon reactiv

proton disociabil

TPP - cofactor enzimatic pentru enzime din 2 clase diferite:

transferaze, subclasa transferaze ale gruprilor aldehidice i cetonice (EC 2.2)
liaze, subclasa liaze carbon-carbon (EC 4.1), care catalizeaz reacii de
decarboxilare oxidativ ale -cetoacizilor, eseniale pentru metabolismului
intermediar.
25
 TPP cofactor pentru TRANSFERAZE
1. TRANSCETOLAZE (EC 2.2)

Reaciile catalizate de transcetolaz i transaldolaz din ciclul pentozo-

fosfat de degradare a glucozei:
CH2 -OH

O C=O
CH2 OH C TPP
H HO CH
O
C=O HC OH Transcetolaza HC OH
EC 2.2.1.1 C
HO CH + H
+ HC OH HC OH HC OH
HC OH HC OH Mg2+ HC OH H2 C O PO3 H2
H2 C O PO3 H2 CH2 O PO3 H2 CH2 O PO3 H2

Sedoheptulozo-7-fosfat Gliceraldehid-
Xilulozo-5-fosfat Ribozo-5-fosfat
3-fosfat
(5C) (5C) (7C) (3C)

26
 CH2 -OH
C=O CH2 -OH

HO CH TPP O C=O
O C
HC OH
Transaldolaza H HO CH
C EC 2.2.1.2 HC OH
H
HC OH + + HC OH
HC OH HC OH
HC OH Mg2+ HC OH
H2 C O PO3 H2 O PO3 H2
H2 C
CH2 O PO3 H2 H2 C O PO3 H2
Gliceraldehid-
3-fosfat Eritrozo-4-fosfat Fructozo-6- fosfat
Sedoheptulozo-7-fosfat
(7C) (3C) (4C) (6C)

Calea pentozo-fosfailor este o cale alternativ de degradare a glucozei

n celul, dependent de tiamin.

27
 TPP cofactor pentru LIAZE
Subclasa liaze carbon-carbon (EC 4.1)
decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic ;
decarboxilarea oxidativ a acidului -cetoglutaric.
TPP E1
acid E2
lipoic
Acid piruvic Acetil~SCoA + NADH + H+ + CO2
FAD E3
NAD+ Go' = - 33,44 kJ/mol (- 8,0 kcal/mol)
E1 E2 complex multienzimatic !
COOH COOH
CH2 TPP Acid lipoic; HS-CoA CH2
CH2 CH2 + NADH + H+ + CO2
NAD+ FADH2
C O O C ~ SCoA
COOH
E3 Succinil~SCoA Go' = -7,2 kcal/mol
28
Acid -cetoglutaric
 Clasificarea transferazelor n subclase i subsubclase
2. Transferaze
2.1. Enzime care transfer grupri cu un singur atom de carbon
2.1.1. Metiltransferaze
2.1.2. Hidroximetiltransferaze, formiltransferaze i transferazele similare
2.1.3. Carboxiltransferaze i carbamoiltransferaze
2.1.4. Amidinotransferaze
2.2. Enzime care transfer grupri aldehidice sau cetonice
2.3. Aciltransferaze
2.3.1. Acetiltransferaze
2.3.2. Aminoaciltransferaze
2.4. Glicoziltransferaze
2.7. Enzime care transfer grupri care conin fosfor
2.4.1. Hexoziltransferaze 2.7.1. Fosfotransferaze cu o grupare alcool ca acceptor
2.4.2. Pentoziltransferaze 2.7.2. Fosfotransferaze cu o grupare carboxil ca
2.4.99. Enzime care transfer alte grupri glicozil acceptor
2.5. Enzime care transfer grupri alchil sau aril 2.7.3. Fosfotransferaze cu o grupare cu azot ca
2.6. Enzime care transfer grupri care conin azot acceptor
2.6.1. Aminotransferaze (transaminaze) 2.7.4. Fosfotransferaze cu o grupare fosfat ca acceptor
2.6.2. Amidinotransferaze 2.7.5. Nucleotidiltransferaze
2.6.3. Oximinotransferaze 2.7.8. Transferaze pentru alte grupri cu fosfat
2.6.99. Enzime care transfer alte grupri cu azot substituite
2.7.9. Fosfotransferaze cu acceptori pereche
2.8. Enzime care transfer grupri care conin sulf
2.8.1. Sulfurtransferaze
2.8.2. Sulfotransferaze
2.8.3. CoA-transferaze 29
2.3 ACIL TRANSFERAZE

30
 2.3 ACIL TRANSFERAZE
O
Catalizeaz transferul radicalilor acil R C
de la substrate donoare (acizi organici)
la diferii acceptori, substane cu structuri diferite

Cofactorii pentru aciltransferaze sunt:

coenzima A (HS-CoA)
acidul lipoic
ACP (acyl carrier protein) enzim din complexul multienzimatic
ce intervine n biosinteza acizilor grai.
Coenzima A
HS-CoA

O O
CH3 C ~ SCoA R C ~ SCoA

Acetil~SCoA Acil~SCoA
31
 Coenzima A (HS-CoA) = coenzima acilant sau acetilant

cisteamin
adenin
O C NH CH2 CH2 SH
NH2
CH2
N
rest de CH2 N
-alanin
NH CH3 O O N
2 N
O C CH C CH2 O P O P O CH2
1 3 4
O
OH CH3 OH OH
Pirofosfat Ribozo-3-fosfat
ac. 2,4-dihidroxi
3,3-dimetil butiric O OH

O P OH
3fosfo-ADP-pantoil -alanil-cisteamina
OH

32
 Coenzima A (HS-CoA)
O C NH CH2 CH2 SH
CH2 NH2

CH2 N
N
NH
CH3 O O N N
5
O C CH C CH2 O P O P O CH2
O
OH CH3 OH OH 4 1

3 2
Acid pantotenic (vitamina B5) O OH
O P OH
OH
Centrul activ se afl la gruparea SH a cisteaminei din structur !
Funcia coenzimei A (HS-CoA) se bazeaz pe capacitatea gruprii -SH a cisteaminei (care este
de fapt cistein decarboxilat) de a lega radicalii acil sau acetil prin legturi tioesterice,
macroergice (notate ~). Astfel, aceti radicali pot fi transferai pe acceptorii
corespunztori. 33
Coenzima A (HS-CoA) O O
R C ~ S CoA H3 C C ~ SCoA
coenzima acilant sau acetilant

O O
sau ~C
~C CH3
R
O C NH CH2 CH2 SH legtur
tioesteric NH2
CH2 macroergic
N
CH2 N
NH CH3 O O N
N
O C CH C CH2 O P O P O CH2
O
OH CH3 OH OH

O OH
O P OH
34
OH
 Acetil coenzima A intermediar metabolic bogat n energie

Acetil SCoA O
~ H3 C C ~ SCoA
Legtur tioesteric macroergic
(Go = - 7,5 kcal/mol)
O
O C NH CH2 CH2 S ~ C CH NH2
3
CH2
N
CH2 N
NH CH3 O O N
N
O C CH C CH2 O P O P O CH2
O
OH CH3 OH OH

O OH
O P OH
OH 35
 Coenzima A cofactor al tiokinazelor (clasa LIGAZE)
Exemplu: Activarea ACIZILOR GRAI -dou ETAPE:
1. NH2

N N
PPi
O O
O N N
R C + ATP R C O P O H2C O
OH OH
acid gras OH OH
acil adenilat (acil activat)
EC: 6.2.1.3 acid organic: HS-CoA ligaza (AMP forming) (tiokinaze)
2. O
acil-adenilat + HS-CoA R C ~ SCoA + AMP

Acil ~SCoA
Reacia global

O O
R C + ATP + HS-CoA R C ~ SCoA + AMP + PPi
OH
Acil ~SCoA 36
 Exemple de ACETIL-TRANSFERAZE

Biosinteza acetilcolinei (mediator chimic n sistemul nervos central)

O
CH3 CH3 C ~ SCoA CH3
O
+ Colinacetilaz +
HO CH2 CH2 N CH3 H3C C O CH2 CH2 N CH3

Colin CH3 Acetilcolin CH3

HS-CoA

(EC:2.3.1.6) Acetil~SCoA: colin O-acetil transferaz

37
 Reacia de acetilare a unor compui care intervin n sinteza
glicozaminoglicanilor din matricea extracelular

EC : 2.3.1.3 Acetil~SCoA : D-glucozamin N-acetiltransferaza

CH2 OH CH2 OH
O
O O
CH3 C ~ SCoA + OH OH + HSCoA
2 2
OH OH OH OH
NH2 NH C CH3
D-glucozamina O
N-acetil D-glucozamina
6
COOH CH2-OH
O O O
4 5
OH 4
1 3 Acid hialuronic
3 2 OH
OH NH
Keratan sulfai
D-glucuronat N-acetil-D-glucozamina
CH2-OH
O Dermatan sulfai
COOH H3C C O
O O O
4 OH 1 1 (produse
3
O OH condroprotectoare)
OH NH

H3C C O
n Dizaharidul din structura acidului hialuronic38
 ACIDUL LIPOIC- Rest de lizin din proteina
enzimatic
O HN
H2 H2 H2
transportor de 8
H2C
C 6
CH
C
C
C
C 1 H

C N CH2 CH2 CH2 CH2 CH

grupri acil S S
H2 H2
O
C

Acid lipoic legat de proteina enzimatic

(forma oxidat)

O
R C
OH
Acid gras
Prin ruperea punii
disulfurice, acidul lipoic are H2 O HN
capacitatea de a transporta 8 C 6 C N CH2 CH2 CH2 CH2 CH
H2C CH H
C
i o grupare acil O
SH S HSCoA
Acil
Acil~SCoA

H2 O HN
C C N CH2 CH2 CH2 CH2 CH
transportul concomitent H2C
8 6
CH H
C
de hidrogen i de SH SH
O

grupri acil Acid lipoic legat de proteina enzimatic

(forma redus) 39
 Acyl-carrier-protein HS-ACP
(protein transportoare de grupri acil)
Rol specific n transferul gruprii acil, n biosinteza acizilor grai
ACP are o structur similar coenzimei A
HS-ACP reprezint proteina central a complexului enzimatic denumit
acid gras sintetaza

O C NH CH2 CH2 SH
CH2 Lan polipeptidic al ACP (77 aminoacizi)

CH2
NH CH3 O
C O
O C CH C CH2 O P O CH2 CH Rest de serin (poziia 36)
OH CH3 OH NH

40
 Clasificarea transferazelor n subclase i subsubclase
2. Transferaze
2.1. Enzime care transfer grupri cu un singur atom de carbon
2.1.1. Metiltransferaze
2.1.2. Hidroximetiltransferaze, formiltransferaze i transferazele similare
2.1.3. Carboxiltransferaze i carbamoiltransferaze
2.1.4. Amidinotransferaze
2.2. Enzime care transfer grupri aldehidice sau cetonice
2.3. Aciltransferaze
2.3.1. Acetiltransferaze
2.3.2. Aminoaciltransferaze
2.4. Glicoziltransferaze
2.7. Enzime care transfer grupri care conin fosfor
2.4.1. Hexoziltransferaze 2.7.1. Fosfotransferaze cu o grupare alcool ca acceptor
2.4.2. Pentoziltransferaze 2.7.2. Fosfotransferaze cu o grupare carboxil ca
2.4.99. Enzime care transfer alte grupri glicozil acceptor
2.5. Enzime care transfer grupri alchil sau aril 2.7.3. Fosfotransferaze cu o grupare cu azot ca
2.6. Enzime care transfer grupri care conin azot acceptor
2.6.1. Aminotransferaze (transaminaze) 2.7.4. Fosfotransferaze cu o grupare fosfat ca acceptor
2.6.2. Amidinotransferaze 2.7.5. Nucleotidiltransferaze
2.6.3. Oximinotransferaze 2.7.8. Transferaze pentru alte grupri cu fosfat
2.6.99. Enzime care transfer alte grupri cu azot substituite
2.7.9. Fosfotransferaze cu acceptori pereche
2.8. Enzime care transfer grupri care conin sulf
2.8.1. Sulfurtransferaze
2.8.2. Sulfotransferaze
2.8.3. CoA-transferaze 41
 Glicoziltransferazele (EC 2.4)

- catalizeaz transferul unui rest de monoglucid

(hexoze, pentoze) de pe un donor pe un acceptor

DONORI
esteri fosforici ai glucidelor, oligo, polizaharidele

ACCEPTORI
H3PO4
monozaharidele
oligozaharidele
diferii agliconi

42
 Ageni de glicozilare cu rol de transportori de
monozaharide n form activat
Denumire Rol

UTP uridin trifosfat Activarea i transportul glucozei i galactozei

GTP guanozin trifosfat Activarea i transportul manozei i a manozaminei

ATP adenozin trifosfat Activarea i transportul diferitelor hexoze, pentoze

CTP citidin trifosfat Activarea colinei

CDP-colina este implicat n biosinteza lecitinelor

Retinil-fosfat Coenzim pentru enzimele care transfer manoz i

Este vitamina A activat manozamin

Dolicol-monofosfat Transportul monozaharidelor i oligozaharidelor sub

Dolicol-difosfat form aminat: glucozamina, galactozamina i
manozamina
43
 Ageni de glicozilare - derivai ai nucleotidelor purinice i
pirimidinice ce conin n molecula lor legturi fosfat macroergice

HN
uracil

O N
O O O

HO P ~O P ~O P O CH2

OH O
OH OH

riboz
UTP (uridin trifosfat) OH OH

Rol n activarea i transportul glucozei i galactozei

44
 Exemple de glucozil transferaze (EC:2.4)

FOSFORILAZA EC : 2.4.1.1 n MUCHI

1-4 -D glucan : ortofosfat -D glicozil transferaza FICAT

are loc deci scindarea glicogenului n molecule de glucoz componente + transferul

unui rest de glucoz pe molecula de H3PO4. Procesul se numete FOSFOROLIZ !

( 1 - 4 -D-glucoz ) + H3PO 4
n
(1-6)
Glicogen
fosforilaz

( 1 - 4 -D-glucoz ) + - D glucoz - 1 - fosfat

n-1
(1-6)

45
 Exemple de glucozil transferaze

Glicogen- sintaza EC : 2.4.1.11

UDP-glucoz + ( 1 - 4 -D-glucoz ) n-1
( 1 - 6 )
Denumirea sistematic
UDP glucoza : glicogen 4 -D glucozil transferaza
glicogen sintaza

UDP + ( 1 - 4 -D-glucoz ) n
( 1 - 6 )

Glucoza activat sub form de UDP-glucoz este transferat la o molecul

de pre-glicogen cu (n-1) molecule de -D glucoz.
GLICOGENOGENEZA

46
 Exemple de glucozil transferaze

n glandele
Lactoz sintaza (sintetaza) EC : 2.4.1.22
mamare !
Denumirea sistematic
UDP galactoza : D-glucoza 4 -D galactotransferaza

UDP galactoz + -D-glucoz

Agent de glicozilare Acceptor Biosinteza lactozei din galactoz
activat sub form de UDP-
lactoz sintaza galactoz i glucoz

UDP + Lactoz

47
 Ageni de glicozilare

O
Rol de coenzim pentru
CH2 O P OH
enzimele care transfer
manoz i manozamin
OH
Este vitamina A activat !
Retinil-fosfat

Retinil fosfatul este transportor de manoz, fiind coenzim pentru

glicoziltransferaze, care intervin n sinteza unor glicoproteine cu rol major n
organism, cum ar fi anticorpii sau glicoproteinele de grup sangvin.

48
 Retinil fosfatul cofactor pentru glicozil transferaze i
transportor de manoz
n biosinteza
glicoproteinelor (care au
Manoza + GTP GDP - manoza + Pi
n structur manoza)
O

CH2 O P OH + GDP - manoza

OH
Retinil-fosfat

6 CH2OH GDP
5
O
Retinil-fosfat-manoza
4 OH OH 1
PROTEINE
OH 3 2
OH

GLICOPROTEINE (cu manoz)

Manoz 49
 Clasificarea transferazelor n subclase i subsubclase
2. Transferaze
2.1. Enzime care transfer grupri cu un singur atom de carbon
2.1.1. Metiltransferaze
2.1.2. Hidroximetiltransferaze, formiltransferaze i transferazele similare
2.1.3. Carboxiltransferaze i carbamoiltransferaze
2.1.4. Amidinotransferaze
2.2. Enzime care transfer grupri aldehidice sau cetonice
2.3. Aciltransferaze
2.3.1. Acetiltransferaze
2.3.2. Aminoaciltransferaze
2.4. Glicoziltransferaze 2.7. Enzime care transfer grupri care conin fosfor
2.4.1. Hexoziltransferaze
2.7.1. Fosfotransferaze cu o grupare alcool ca acceptor
2.4.2. Pentoziltransferaze
2.7.2. Fosfotransferaze cu o grupare carboxil ca
2.4.99. Enzime care transfer alte grupri glicozil
2.5. Enzime care transfer grupri alchil sau aril acceptor
2.6. Enzime care transfer grupri care conin azot 2.7.3. Fosfotransferaze cu o grupare cu azot ca
2.6.1. Aminotransferaze (transaminaze) acceptor
2.6.2. Amidinotransferaze 2.7.4. Fosfotransferaze cu o grupare fosfat ca acceptor
2.6.3. Oximinotransferaze 2.7.5. Nucleotidiltransferaze
2.6.99. Enzime care transfer alte grupri cu azot 2.7.8. Transferaze pentru alte grupri cu fosfat
substituite
2.7.9. Fosfotransferaze cu acceptori pereche
2.8. Enzime care transfer grupri care conin sulf
2.8.1. Sulfurtransferaze
2.8.2. Sulfotransferaze
2.8.3. CoA-transferaze 50
Enzime care transfer grupri cu azot EC: 2.6

Aminotransferaze EC: 2.6.1

51
 Aminotransferaze EC: 2.6.1
(sau transaminaze)

Enzime care transfer grupri amino NH2 de la un substrat donor

(de regul un aminoacid) la un acceptor (un cetoacid) cu formarea
unui nou aminoacid i unui cetoacid nou.

Cofactorii transaminazelor sunt formele biologic active ale vitaminei

B6 reprezentate de piridoxal-5-fosfat (PLP) i piridoxamin-5-fosfat ce
rezult prin fosforilarea piridoxalului i a piridoxaminei cu ATP

O CH2-NH2 O
CHO
HO CH2 O P O HO CH2 O P O
3 4 5

O O
2 1 6
H3C N H3C N
Piridoxal -5-fosfat Piridoxamin- 5-fosfat
(PLP)
52
 Structura enzimelor PLP dependente

NH CH C

(CH2)4 apoenzima
proteinic
N

4'CH O
5'
4
HO CH2 O P O
5
+ O
H3C N
H

Piridoxal fosfatul (PLP) i legtura de tip aldiminic cu restul de lizin al

proteinei enzimatice (apoenzim)

53
 Mecanismul general de aciune al PLP

Structura complexului enzim-substant

c H a
Natura apoenzimei imprim
O
R1 C C specificitatea de substrat
O Apoenzima va antrena specific
ruperea uneia din legturile atomului
b
H N de carbon din poziia => reacii de:
4' C O
5' transaminare (a)
HO 4 CH2 O P decarboxilare (b)
O
5 transfer de radicali ( c)
+ O
H3C N
H

Formarea complexului de tip baz Schiff

ntre aminoacid (substrat) i cofactorul
piridoxal-fosfat (PLP).
54
 PLP funcie de cofactor enzimatic

Piridoxal-fosfatul intervine n toate transformrile neoxidative ale aminoacizilor :

transaminri, decarboxilri, racemizri, scindri ale legturilor i

1. Transaminarea aminoacizilor

1. Decarboxilarea aminoacizilor (liaze)

1. Izomerizarea aminoacizilor (D-aminoacizi L-aminoacizi)

55
 Reacia general a transaminrii
R1 CH COOH + R2 C COOH

HN22
NH O
PLP

R2 CH COOH + R1 C COOH

HN
NH22 O

Aminoacid 1 Piridoxal Aminoacid 2

fosfat

-Cetoacid 2 Piridoxamin -Cetoacid 1

fosfat

Gruparea NH2 nu se gsete liber ci este n permanen legat

de un substrat !!
56
 Mecanismul transaminrii ETAPA I
H C O
H H2O
HO CH2 O P

+ R1 C COOH
+
H3C N
H NH2
Enzim - piridoxal fosfat Aminoacid 1
H

R1 C COOH R1 C COOH

N N

H C izomerizare CH2
HO CH2 O P HO CH2 O P

+ +
H3C N H3C N
H H

Baz Schiff I Baz Schiff II

(ALDIMIN)
+ H2O CH2 NH2
HO CH2 O P

R1 C COOH + +
Transiminare H3C N
Tautomerizare O H

Hidroliz Cetoacid 1 Enzim - piridoxamin fosfat

57
 Mecanismul transaminrii - ETAPA a-II-a
CH2 NH2
H2O
HO CH2 O P
+ R2 C COOH
+
H3C N
H
O

Enzim - piridoxamin fosfat Cetoacid 2 H

R2 C COOH R2 C COOH

N
N

CH2 izomerizare H C

HO CH2 O P HO CH2 O P

+ +
H3C N H3C N
H H

Baz Schiff II Baz Schiff I

+ H2O

H H C O
HO CH2 O P
R2 C COOH +
+
NH2 H3C N
H
Aminoacid 2 58
Enzim - piridoxal fosfat
 Exemple de reacii de transaminare

COOH COOH COOH

COOH CH2 CH2
CH2
AST (GOT) CH2
CH2 CH2
+ C O +
H2 N CH C O PLP H2 N CH
COOH
COOH COOH COOH
Acid L-aspartic Acid -cetoglutaric Acid oxalilacetic Acid L-glutamic

COOH COOH
CH3 CH2
CH2
CH3 ALT (GPT) CH2
CH2 C O +
H2 N CH +
C O PLP COOH H2 N CH
COOH
COOH COOH
L-Alanina Acid -cetoglutaric Acid piruvic Acid L-glutamic

59
 Transaminazele markeri biochimici de lezare celular

Enzime intracelulare (mitocondrii i citosol), n mod normal se

gsesc n cantiti mici n snge
Afeciunile care lezeaz celulele unor organe determin
eliberarea lor n snge
Se determin mpreun dar au semnificaie biochimic diferit:
Aspartat aminotransferaza (AST) marker de lezare miocardic
Alanin aminotransferaza (ALT) marker de lezare hepatic

60
 GABA-transaminazele
COOH
COOH COOH COOH
CH2
CH2 GABA-T CH2 CH2
CH2
+ CH2 CH2 + CH2
CH2 PLP
C O CH H2N CH
NH2
COOH O COOH
Acid -aminobutiric Acid -cetoglutaric Semialdehida succinic Acid L- glutamic
(GABA)

COOH
COOH
CH2
CH3 CH2 CH3
CH2
GABA-T
+ C O CH2 + H2 N CH
CH2 COOH PLP CH COOH
NH2
O
Acid -aminobutiric Acid piruvic Semialdehida succinic L- Alanina
(GABA)
61
 GABA-transaminazele
PLP COOH PLP
COOH
glutamat decarboxilaza GABA - Transaminaze
CH2
CH2 EC 4.1.1.15 EC 2.6.1.19
CH2
CH2 Semialdehida succinic
CH2
H2N CH
CO 2 NH2
COOH Aminoacizi

Acid L-glutamic Acid -aminobutiric

(GABA)

GABA este prezent la nivel neuronal, unde se sintetizeaz din acid glutamic, sub
aciunea glutamat-decarboxilazei (GAD)
GABA are receptori GABA A i GABA-B; are rol de neuromediator inhibitor la nivel
SNC

La nivelul mitocondriilor celulelor gliale, GABA se transamineaz la semialdehida

succinic, iar aceasta trece apoi n acid succinic

Activitatea acestor enzime este excesiv la unii pacieni cu epilepsie.

GABA-transaminazele reprezint inte terapeutice pentru medicamente antiepileptice

i analgezice cunoscute sub numele de inhibitori de GABA-transminaza (acid valproic,
vigabatrin, L-cicloserina, etc) . Exist i compui naturali care acioneaz ca inhibitori ai
acestor enzime (Melissa officinalis, acid rosmarinic, etc)
62
 PLP cofactor al unor LIAZE (EC 4).
Decarboxilarea aminoacizilor
PLP
aminoacid decarboxilaz
R CH COOH R CH2 NH2
NH2 Amin
CO 2 "biologic activ"
Aminoacid

Aminoacidul Produsul de decarboxilare Funcia biologic

Acid glutamic -Aminobutiric (GABA) Neuromediator
Dihidroxifenilalanina Dopamina Neuromediator
(DOPA)
Triptofanul Triptamina Neuromediator
5-Hidroxitriptofanul Serotonina Neuromediator
Tirozina Tiramina Neuromediator
Histidina Histamina Hormon tisular
Serina Etanolamina Constituent al fosfolipidelor *
Arginina Agmatina Produs de putrefacie
Lizina Cadaverina Produs de putrefacie
Ornitina Putresceina Produs de putrefacie
Treonina Propanolamina Constituent al vitaminei B12
Acid aspartic -Alanina Constituent al coenzimei A i al ACP
Cisteina Cisteamina Constituent al coenzimei A i al ACP
63
 PLP-cofactor al unor liaze
Decarboxilarea aminoacizilor

Aminoacid amin biogen + CO2

4
COOH C1O2 H2C CH2 COOH -alanin
CH2 NH2
PLP
H2N CH
C4O2 -alanin
1 COOH H3C CH COOH
Acid L-aspartic NH2

PLP COOH
COOH
glutamat decarboxilaza
CH2
CH2 EC 4.1.1.15
CH2
CH2
CH2
H2N CH
CO 2 NH2
COOH

Acid L-glutamic Acid -aminobutiric

64
(GABA)
 PLP-cofactor al unor liaze
Decarboxilarea aminoacizilor
COOH

H2N CH
PLP CH2 CH2 NH2
CH2
histidin decarboxilaza
EC 4.1.1.22 N NH
N NH

L-Histidin CO 2 Histamin

PLP
H2C OH
serin decarboxilaza H2C OH
H2 N CH
H2C NH2
COOH
L-Serin Etanolamin
CO 2
PLP
Fosfatidilserine Fosfatidiletanolamine + CO2
EC 4.1.1.65

65
 PLP n reaciile de izomerizare ale aminoacizilor
(racemizare i epimerizare)
CH3 CH3
PLP Catalizeaz interconversia formelor D i
HC NH2 alanin racemaza H2N CH L ale unui substrat.
(EC 5.1.1.1)
COOH Asemenea reacii sunt importante
COOH
pentru metabolismul celular, n
D--alanin L--alanin
conversia din forma D n forma L a
aminoacizilor ce ptrund n organism
CH3 CH3
PLP prin intermediul nutrimentelor,
HC OH treonin racemaza HC OH organismul utiliznd numai forma L a
(EC 5.1.1.1.6) moleculelor respective.
HC NH2 H2 N CH
n tumorile canceroase, se constat o
COOH COOH eliminare crescut n urin de
D-treonin L-treonin aminoacizi aparinnd seriei D rezultai
Aa esenial, implicat n sub aciunea racemazelor specifice.
modificrile post-
translaionale ale
proteinelor (glicozilri)

66
 Clasificarea transferazelor n subclase i subsubclase
2. Transferaze
2.1. Enzime care transfer grupri cu un singur atom de carbon
2.1.1. Metiltransferaze
2.1.2. Hidroximetiltransferaze, formiltransferaze i transferazele similare
2.1.3. Carboxiltransferaze i carbamoiltransferaze
2.1.4. Amidinotransferaze
2.2. Enzime care transfer grupri aldehidice sau cetonice
2.3. Aciltransferaze
2.3.1. Acetiltransferaze
2.3.2. Aminoaciltransferaze
2.4. Glicoziltransferaze
2.7. Enzime care transfer grupri care conin fosfor
2.4.1. Hexoziltransferaze 2.7.1. Fosfotransferaze cu o grupare alcool ca acceptor
2.4.2. Pentoziltransferaze 2.7.2. Fosfotransferaze cu o grupare carboxil ca
2.4.99. Enzime care transfer alte grupri glicozil acceptor
2.5. Enzime care transfer grupri alchil sau aril 2.7.3. Fosfotransferaze cu o grupare cu azot ca
2.6. Enzime care transfer grupri care conin azot acceptor
2.6.1. Aminotransferaze (transaminaze) 2.7.4. Fosfotransferaze cu o grupare fosfat ca acceptor
2.6.2. Amidinotransferaze 2.7.5. Nucleotidiltransferaze
2.6.3. Oximinotransferaze 2.7.8. Transferaze pentru alte grupri cu fosfat
2.6.99. Enzime care transfer alte grupri cu azot substituite
2.7.9. Fosfotransferaze cu acceptori pereche
2.8. Enzime care transfer grupri care conin sulf
2.8.1. Sulfurtransferaze
2.8.2. Sulfotransferaze
2.8.3. CoA-transferaze 67
 EC: 2.7. FOSFOTRANSFERAZE

Trifosfaii nucleozidelor purinice sau pirimidinice, precum i ali derivai

fosforilai ndeplinesc un rol de cofactori, pe lng enzimele denumite kinaze.
Aceti ageni de fosforilare pot fi considerai cosubstrate.
68
 CARACTERISTICI:
- compui macroergici: prin hidroliza legturilor macroergice se
elibereaz energia biochimic necesar biosintezei diferiilor
compui organici endogeni

- rezervoare energetice celulare

- se formeaz, se consum, i se regenereaz n cursul
proceselor metabolice
- rol de cofactori ai enzimelor denumite kinaze
- pot fi considerai cosubstrate = donori de grupri fosfat
- fosfotransferazele se clasific n funcie de molecula
acceptoare de grupri fosfat

69
 ATP COFACTOR ENZIMATIC
legturi fosfat anhidridice, NH2
macroergice
N
N
Adenin
O O O N
N
HO P~O P~O P O CH2 legtur N-glicozidic
O
OH OH OH
Riboz
legtur fosfat esteric OH OH

AMP (acid adenilic)

ADP

Adenozin trifosfat (ATP) exist n toate celulele i se formeaz n interiorul lor, pe

seama energiei eliberate n procesele metabolice.
ATP conine dou legturi macroergice, prin a cror hidroliz rezult energia necesar
proceselor endergonice de biosintez.
Grupele fosfat din molecula de ATP pot fi scindate treptat sau total, din hidroliza ATP
putnd rezulta ADP, AMP, adenozin i ioni fosfat sau pirofosfat. 70
 ATP - Intervine n 4 tipuri de reacii de transfer

1. Transfer de grupri ortofosforice (Pi)

2. Transfer de grupri pirofosforice (PPi) DIFOSFOTRANSFERAZE
3. Transfer de AMP pe un acceptor
4. Transfer de adenozil pe un acceptor

legturi fosfat anhidridice, NH2

macroergice
N
N
Adenin
O O O N
N
HO P~O P~O P O CH2 legtur N-glicozidic
O
OH OH OH
Riboz
legtur fosfat esteric OH OH

AMP (acid adenilic)

ADP
71
ATP

1. Transfer de grupri ortofosforice (Pi)

HEXOKINAZA (EC: 2.7.1.1)

GLUCOKINAZA (EC: 2.7.1.1)

O

CH2 O P OH
6 CH2OH
5
O Mg2+ O OH
ATP + 4 OH 1 OH + ADP
2

OH 3
OH OH OH
OH OH

- D-Glucoz Glucoz 6-fosfat

72
2. Transfer de grupri pirofosforice (PPi) - DIFOSFOTRANSFERAZE
TIAMIN PIROFOSFOKINAZA
ATP: tiamin pirofosfotransferaza

tiamin pirofosfokinaz
(EC: 2.7.6.2)
Tiamin + ATP Tiaminpirofosfat (TPP) + AMP
Mg2+

RIBOZO-FOSFAT PIROFOSFOKINAZA (EC: 2.7.6.1)

ATP:riboz 5-fosfat 1-pirofosfotransferaz

O O
O ATP O
HO P O H2C OH HO P O H2C O P O P OH
O O
OH OH OH OH

HO OH HO OH
AMP
5-fosfo-ribozil-1-pirofosfat
(PRPP)
(precursor n biosinteza purinelor, NAD+, NADP+) 73
4. Transfer de adenozil pe un acceptor

Metionin adenoziltransferaza (EC:2.5.1.6)

ATP:L-metionin S-adenozil transferaza
NH2

H2O N N
S-CH3 CH3
N N
+
(CH2)2 S H2C
+ ATP O + Pi + PPi
(CH2)2
H2N CH
H2N CH
COOH OH OH
L-metionin COOH

Sulfadenozil metionin
(SAM)
"CH3" metil activat

74
 Clasificarea transferazelor n subclase i subsubclase
2. Transferaze
2.1. Enzime care transfer grupri cu un singur atom de carbon
2.1.1. Metiltransferaze
2.1.2. Hidroximetiltransferaze, formiltransferaze i transferazele similare
2.1.3. Carboxiltransferaze i carbamoiltransferaze
2.1.4. Amidinotransferaze
2.2. Enzime care transfer grupri aldehidice sau cetonice
2.3. Aciltransferaze
2.3.1. Acetiltransferaze
2.3.2. Aminoaciltransferaze
2.4. Glicoziltransferaze
2.7. Enzime care transfer grupri care conin fosfor
2.4.1. Hexoziltransferaze 2.7.1. Fosfotransferaze cu o grupare alcool ca acceptor
2.4.2. Pentoziltransferaze 2.7.2. Fosfotransferaze cu o grupare carboxil ca
2.4.99. Enzime care transfer alte grupri glicozil acceptor
2.5. Enzime care transfer grupri alchil sau aril 2.7.3. Fosfotransferaze cu o grupare cu azot ca
2.6. Enzime care transfer grupri care conin azot acceptor
2.6.1. Aminotransferaze (transaminaze) 2.7.4. Fosfotransferaze cu o grupare fosfat ca acceptor
2.6.2. Amidinotransferaze 2.7.5. Nucleotidiltransferaze
2.6.3. Oximinotransferaze 2.7.8. Transferaze pentru alte grupri cu fosfat
2.6.99. Enzime care transfer alte grupri cu azot substituite
2.7.9. Fosfotransferaze cu acceptori pereche
2.8. Enzime care transfer grupri care conin sulf
2.8.1. Sulfurtransferaze
2.8.2. Sulfotransferaze
2.8.3. CoA-transferaze 75
 2.8. ENZIME CARE TRANSFER GRUPRI SULFAT

COFACTORII SULFOTRANSFERAZELOR (EC: 2.8.2)

Coenzima: PAPS 3-fosfoadenozin 5-fosfosulfat
NH2
Sulfatare
N
N n biosinteza esterilor sulfurici a
N adenin compuilor organici (reacia de
N
O O
5' sulfatare = reacie de eliminare)
HO S O P O CH2 O
n biosinteza unor compui
O OH 1'
O 3' endogeni biologic activi N- sulfatai
riboz
HO P O OH
i O- sulfatai: heparin, keratan
sulfat, dermatan sulfat i condroitin
OH
sulfat
PAPS (3'-fosfo adenozin 5'-fosfosulfat)
("sulfat activ") 76
 Exemple de biocompui N-sulfatai i O-sulfatai:

Dizaharide cu esteri sulfurici

din structura proteoglicanilor Structura keratansulfatului

Produse
condroprotectoare!!!

Structura heparinei
77
Structura dizaharidului component al heparinei
78
 Enzime implicate n metabolismul
xenobioticelor
Organismele vii sunt expuse n mod continuu aciunii numeroaselor substane
chimice exogene = xenobiotice;
Xenobioticele -> origine diferit: medicamente, compui poluani din aer i ap,
aditivi alimentari;
-> structuri extrem de variate, pot fi toxice sau pot induce toxicitate n urma
acumulrii lor n organism;
pe scara evoluiei organismelor vii a aprut, nc din stadii incipiente, un
sistem de protecie ce permite transformarea i eliminarea unui spectru larg
de molecule potenial toxice = ansamblul enzimelor de metabolizare i de
transport a xenobioticelor
realizeaz transformarea compuilor liposolubili n substane polare, fapt
care faciliteaz eliminarea lor pe cale renal sau biliar;

n organism, detoxifierea i eliminarea xenobioticelor se realizeaz dup o schem

secvenial, ordonat n trei etape, grupate n funcie de tipul de procese
desfurate, i anume: oxidare, conjugare i excreie.

Fiecare dintre aceste etape este realizat de diferite clase de enzime i proteine.

79
 Enzimele de biotransformare a xenobioticelor: faza I i II

R-XH R-H
Monooxigenaze H2 O Reductaze
Hidrolaze
F
a I. Funcionalizare reducere
hidroxilare hidroliz
z
a Substrat redus
I R-OH R-OH (R-XH)

UDP-
F Glutation N-acetiltransferaze
glucuronoziltransferaze Sulfo-transferaze
a S-transferaze
z II. Conjugare
a
II R-X-GlcUA R-O-SO3H R-S-G R-X-Ac

R XH: substrat supus direct aciunii enzimelor de faz II

R H : substrat supus aciunii enzimelor de faz I
R X GlcUA : substrat glucuronoconjugat
R O SO3H : substrat sulfat-conjugat
R S G : substrat conjugat cu glutation
80
R X Ac : substrat acetil-conjugat
 Enzimele de faz I (de funcionalizare):
citocromii P450, monooxigenazele flavin dependente, monoamin-oxidazele
(MAO), hidroxilazele, lipooxigenazele, ciclooxigenazele, peroxidazele, i
numeroase alte oxidaze, dioxigenazele, chinon reductazele, aldo-ceto
reductazele, alcool-dehidrogenazele NAD+ i NADP+ dependente, aldehid-
dehidrogenazele, steroid dehidrogenazele, dehalogenazele;

Enzimele de faz II (de conjugare):

UDP-glucuronoziltransferazele, glutation S-transferazele, sulfotransferazele,
aciltransferazele, glicoziltransferazele, aminotransferazele, acetil transferazele,
metiltransferazele;

Enzimele de faz III (de excreie sau eliminare):

enzimele de scindare i / sau hidrolitice: glicozidaze, amidaze, esteraze,
glucuronidaze, paraoxonaze, epoxid hidrolaze i numeroase alte hidrolaze,
carboxil esterazele, acetilcolinesteraze i alte esteraze.

FOARTE IMPORTANT: toate sistemele enzimatice din faza I i a-II-a metabolizeaz n

primul rnd substrate endogene, i deci prin competiia lor cu un xenobiotic
(medicament, compus toxic exogen) pentru centrul catalitic activ al unei enzime
implicate n sinteza de molecule fiziologice, pot rezulta tulburri funcionale.
81
 UDP-glucuronoziltransferazele (UGT, EC 2.4.1.17; UDP-glucuronat -D-
glucuronoziltransferaze)

Glucuronoconjugarea = favorizeaz biotransformarea i detoxifierea unor molecule de

natur endogen i exogen;

UGT = o familie multigenic de izoenzime, cu proprieti diferite de cataliz, cu sensibilitate

la inducie i cu specificitate pentru substrat, exprimate n ficat, intestin, creier..., la nivelul
reticulului endoplasmic neted;

UGT catalizeaz transferul acidului glucuronic de la cosubstratul UDPGA (acidul uridin-5-

difosfo--D-glucuronic) pe diferite substrate acceptoare (sau agliconi) avnd structuri
variate, pentru a forma O-, N-, S- i C- glucuronizi.
Aceste substrate pot fi compui endogeni (bilirubin, acizi biliari, tiroxin, hormoni
steroizi), metabolii toxici i/ sau cancerigeni (benzo[a]piren, fenoli, canabinoide), poluani
ai mediului nconjurtor (naftalin) sau medicamente [morfin, propranolol, acetaminofen,
zidovudin (AZT)...].

DECI, funcia UGT nu este restrns la detoxifierea xenobioticelor !

82
 Reacia general a procesului de glucuronoconjugare

R-OH
Ar-OH R-O-Gluc
R-NH2 Ar-O-Gluc
UGT
Ar-NH2 R-NH-Gluc
R-COOH Ar-NH-Gluc
Ar-COOH -UDP R-COO-Gluc
O
Ar-COO-Gluc
Substrate
Substrate
Produsi de reactie
exogene sau
exogene sau
endogene
endogene Produi de reacie
(HX -R)
R- grupare alchil UDPGA
Ar- grupare aril (acid uridin-5-difosfo--D-glucuronic)

Transferul gruprii glucuronil de la acidul uridin 5difosfoglucuronic (UDPGA) pe o

molecul lipofil exogen sau endogen numit aglicon. Punctul comun al acestor
agliconi, care pot avea origini diferite, este prezena unei grupri funcionale nucleofil
necesar reaciei de glucuronoconjugare.
Rezult O, S i Nglucuronizi, precum i esteri ai glucuronizilor (n cazul acizilor carboxilici).
83
 Mecanismul reaciei de glucuronoconjugare

Substrat

HX R
COOH
COOH
O
UGT O X R
OH 1
OH 1 +
O UDP
UDP
OH H
OH
OH
OH

UDPGA Substrat glucuronozil conjugat

1 - D- glucuronid

Substituia agliconului (HX R, substratul) pe carbonul C1 al UDPGA.

Rezult un 1-D-glucuronid mai hidrofil dect agliconul iniial.

Compuii transformai n glucuronizi devin mai hidrosolubili, i deci mai puin toxici,
fiind uor eliminabili pe cale renal sau biliar.

84
Glucuronoconjugarea nu asigur numai funcia de detoxifiere, ea poate genera i
glucuronizi ce prezint activiti farmaco-toxicologice mai ridicate dect agliconii.

Exemplu: glucuronidul morfinei n poziia 6, prezint o aciune analgezic mult mai

puternic dect morfina nsi.
85