Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
chirurgicale și postmortem
Repere
Aplicarea metodei în lucrările de caz ale examinatorului medical arată o serie de fentanili implicați în
decese, inclusiv 4-ANPP și beta-hidroxi fentanil.
Abstract
Criza opioidelor este legată de utilizarea abuzivă crescută a fentanilului, precum și a analogilor de
fentanil care provin de pe piața ilicită a drogurilor. O mare parte din înțelegerea noastră actuală a
utilizării fentanilului și analogului de fentanil în comunitățile noastre provine din constatările
toxicologice post-mortem. În setările clinice ale medicamentelor pentru dependență și gestionării
durerii, unde potențialul de abuz de opioide este ridicat, utilizarea fentanilului, precum și a
analogilor specifici de fentanil, poate fi subestimată din cauza testării plasmatice limitate și a
disponibilității limitate a testelor cu sensibilitate și selectivitate analitică adecvată. pentru a detecta
utilizarea abuzivă a fentanililor. Raportăm teste de plasmă și sânge pentru 17 fentanili (aceștia includ
fentanil, analogi de fentanil, metaboliți de fentanil și precursori sintetici) în clinică și examinator
medical, cauze. O extracție în fază solidă în mod mixt a plasmei diluate sau a sângelui precipitat a
fost optimizată pentru recuperarea maximă a fentanililor cu efecte de matrice minimizate. Analiza a
fost efectuată folosind un Waters ACQUITY UPLC I-Class interfațat cu un spectrometru de masă cu
microtandem Waters Xevo TQ-S. Parametrii metodei au fost optimizați și validați pentru precizie,
acuratețe, report, liniaritate și efecte matrice. Studiile de aplicare au fost efectuate în sângele
postmortem obținut în 44 de decese legate de fentanil și în probe de plasmă în serie de la 18
pacienți chirurgicali care au primit terapie intravenoasă cu fentanil în timpul tratamentului cu
paratiroidectomie. Fentanilii găsiți în cazurile postmortem au inclus fentanil, norfentanil,
despropionil-fentanil (4-ANPP), beta-hidroxi fentanil (β-OH fentanil), acetil fentanil, acetil
norfentanil, metoxiacetil fentanil, fentanil fentanil, ciclopropil fentanil și para-fluorobutiril fentanil,
cu fentanil, norfentanil, 4-ANPP și β-OH fentanil predominând în frecvență. Concentrațiile de fentanil
au variat între 0,2 și 56 ng / ml, iar fentanilul a fost aproape întotdeauna găsit cu 4-ANPP, norfentanil
și fentanil β-OH. Concentrațiile altor fentalogi au variat între <1 și 84 ng / ml (extrapolate). În cazurile
chirurgicale, fentanilul a fost detectat și cuantificat împreună cu fentanilul cu norfentanil și β-OH, dar
fără detectarea 4-ANPP în oricare dintre probe. Asocierea și concentrațiile relative de β-OH fentanil,
fentanil și norfentanil în studiile postmortem și clinice au indicat o sursă metabolică, mai degrabă
decât o sursă ilicită de fentanil β-OH. Concentrațiile de fentanil au variat între 0,2 și 56 ng / ml, iar
fentanilul a fost aproape întotdeauna găsit cu 4-ANPP, norfentanil și β-OH fentanil. Concentrațiile
altor fentalogs au variat între <1 și 84 ng / ml (extrapolate). În cazurile chirurgicale, fentanilul a fost
detectat și cuantificat împreună cu fentanilul cu norfentanil și β-OH, dar fără detectarea 4-ANPP în
oricare dintre probe. Asocierea și concentrațiile relative de β-OH fentanil, fentanil și norfentanil în
studiile postmortem și clinice au indicat o sursă metabolică, mai degrabă decât o sursă ilicită de
fentanil β-OH. Concentrațiile de fentanil au variat între 0,2 și 56 ng / ml, iar fentanilul a fost aproape
întotdeauna găsit cu 4-ANPP, norfentanil și fentanil β-OH. Concentrațiile altor fentalogi au variat
între <1 și 84 ng / ml (extrapolate). În cazurile chirurgicale, fentanilul a fost detectat și cuantificat
împreună cu fentanilul cu norfentanil și β-OH, dar fără detectarea 4-ANPP în oricare dintre probe.
Asocierea și concentrațiile relative de β-OH fentanil, fentanil și norfentanil în studiile postmortem și
clinice au indicat o sursă metabolică, mai degrabă decât o sursă ilicită de fentanil β-OH. dar fără
detectarea 4-ANPP în oricare dintre probe. Asocierea și concentrațiile relative de β-OH fentanil,
fentanil și norfentanil în studiile postmortem și clinice au indicat o sursă metabolică, mai degrabă
decât una ilicită, de fentanil β-OH. dar fără detectarea 4-ANPP în oricare dintre probe. Asocierea și
concentrațiile relative de β-OH fentanil, fentanil și norfentanil în studiile postmortem și clinice au
indicat o sursă metabolică, mai degrabă decât o sursă ilicită de fentanil β-OH.
Abrevieri
Cuvinte cheie
1 . Introducere
La nivel global, decesele cauzate de supradoze cauzate de opioide au crescut dramatic în ultimii ani
[1] , [2] , [3] . În America de Nord, situația rămâne deosebit de dificilă; în timp ce decesele cauzate de
heroină și alte opioide naturale și semi-sintetice au crescut substanțial, decesele cauzate de
opioidele sintetice, cum ar fi fentanilul și analogii de fentanil (fentanili), au crescut de trei ori în
perioada 2015-2017 și de 10 ori în perioada 2013-2017 [3] . Confiscările crescute de fentanil și
analogi de fentanil de către agențiile de aplicare a legii în această perioadă indică producția ilicită ca
un factor major în alimentarea crizei de opiacee [4] , [5]. Aceste date indică, de asemenea, nevoia tot
mai mare de identificare și cuantificare a fentanililor în criminalistică, precum și toxicologie clinică.
Identificarea sensibilă și selectivă și cuantificarea unui număr tot mai mare de fentanili din punct de
vedere structural în matricile biologice este o provocare analitică. În lucrările de caz ale
examinatorului medical și toxicologia clinică, unde urina și sângele post-mortem sunt adesea
specimenele primare de testare a medicamentelor, s-au înregistrat progrese semnificative în
dezvoltarea și aplicarea metodelor definitive pentru analiza fentanililor [6] , [7] , [8] ] , [9] . Ca
urmare, au fost raportate multe decese legate de fentanil, precum și fentanil legate de analogi,
împreună cu metode de analiză a acestor agenți în cazurile criminalistice [10] , [11] , [12] , [13] ,[14] ,
[15] , [16] , [17] . Metodele pentru matrici alternative, cum ar fi lichidul oral, au fost, de asemenea,
raportate recent [18] , [19] . În plus față de provocarea analitică, există și o lipsă de certitudine în
interpretarea cu privire la originea metabolică față de subprodusul sintetic al unui număr de fentanili
găsiți în cazurile post-mortem. Se știe, de exemplu, că 4-ANPP este un produs secundar al sintezei de
fentanil și poate fi prezent ca o impuritate în preparate. Cu toate acestea, a fost propus și ca un
metabolit inactiv minor al fentanilului și altor alți analogi de fentanil [20] , [21] , [22] , [23] , [24], în
consecință, contribuția producției sau a metabolismului la nivelurile de 4-ANPP măsurate în sângele
post-mortem rămâne o întrebare. În plus, deși este bine stabilit că norfentanilul este un metabolit
major al fentanilului, studiile hepatice microsomale sugerează că hidroxi fentanilul poate proveni și
din metabolismul fentanilului [21] , [25] . Măsurarea clinică a fentanilului 4-ANPP și β-OH la pacienții
tratați cu fentanil este limitată, dar ar putea adăuga la cunoștințele noastre despre o sursă
metabolică versus ilicită a acestor agenți. Prin urmare, pe lângă testarea sângelui postmortem, este
necesară determinarea plasmatică a fentanililor prin metode sensibile și selective, care să permită
monitorizarea clinică a populației cu risc crescut de opiacee și care să ne îmbunătățească în
continuare înțelegerea fentanililor.
Descriem metode pentru analiza fentanililor din plasmă și sânge, cu aplicarea ulterioară la 44 de
decese care implică fentanilii și la probe de plasmă secvențiale de la 18 pacienți chirurgicali care au
primit terapie cu fentanil intravenos în timp ce erau supuși paratiroidectomiei.
2 . Materiale și metode
Probele de sânge integral aruncate după mortem din fentanil și decese legate de analogul
fentanilului au fost inițial colectate sub ordinele medicului examinator și testate de Laboratorul de
toxicologie criminalistică de la Centrul Medical Albany (Albany, NY) în perioada decembrie 2018 -
august 2019. După toate testele medicului examinator finalizate, în conformitate cu protocolul
criminalistic al laboratorului, probele au fost dezidentificate și testate în studiu.
Probele de plasmă aruncate, dezidentificate, utilizate în studiu au fost inițial colectate intraoperator
sub ordinele medicului pentru măsurarea nivelurilor de hormoni paratiroidieni din brevetele care au
fost supuse paratiroidectomiei minim invazive la Spitalul din Centrul Medical Albany și Campusul
Clinic Sud din Centrul Medical Albany. După ce măsurarea hormonului paratiroidian a fost completă,
probele au fost utilizate pentru acest studiu actual. Studiul a fost realizat cu revizuire și aprobare de
către Albany Medical College Institutional Review Board.
S-a adăugat sânge de sânge negativ de analit (300 pl) la 300 pl de reactiv standard intern conținând
0,1 M sulfat de zinc și acetat de amoniu. Probele au fost amestecate cu vortex și s-au lăsat să stea 5
minute. S-au adăugat apoi șase sute de microlitri de ACN răcit cu gheață: metanol (50:50 v / v) și
probele au fost amestecate pe scurt vortex și s-au lăsat să stea încă 5 min înainte de centrifugare
timp de 10 min la 7000 × g. Patru sute de microlitri de supernatant au fost diluați cu 1 ml acid
fosforic 4% și apoi adăugați, în două alicote, pe o placă Waters Oasis PRiME MCX µElution (Waters
Corp, Milford, MA, SUA). După încărcarea plăcii, godeurile au fost spălate cu 200 uL de 0,1 M formiat
de amoniu conținând 2% acid formic, urmat de 200 uL de metanol. Probele au fost eluate cu două
volume de 25 pl de ACN: metanol (50:50 v / v) conținând 5% soluție de amoniac puternic. Toate
probele au fost apoi diluate cu 50 uL de apă: ACN: acid formic (97: 2: 1 v / v / v). Cinci microlitri de
eluați diluați au fost injectați pe sistemul UPLC-MS / MS. Curbele de calibrare pentru probele de
sânge integral au variat între 50 și 20000 pg / ml. Grupurile de control de calitate scăzută, medie și
înaltă au fost preparate la concentrații combinate de analit de 75, 2500 și, respectiv, 15000 pg / ml.
20-50% 25%
136,1 4
4 18
20 Acetil Norfentanyl- 13 C 6
5 15
15 Norfentanil-d5
259,2 5
5 14
10 Norfentanil-d5
113,0 5
5 30
18 Acetil Fentanyl 13 C 6
228,1 5
5 30
20 Acetil Fentanyl 13 C 6
105,1 10
10 22
37 Acetil Fentanyl 13 C 6
105,0 5
5 34
22 Acetil Fentanyl 13 C 6
204,2 10
10 26
25 Acetil Fentanyl 13 C 6
105,0 8
8 16
30 Fentanil-d5
105,0 5
5 22
35 Fentanil-d5
105,0 5
5 22
38 Fentanil-d5
105,1 10
10 25
35 Fentanil-d5
105,0 5
5 22
35 Sufentanil-d5
113,1 10
10 16
32 Sufentanil-d5
105,0 5
5 22
38 Sufentanil-d5
105,0 5
5 24
40 Sufentanil-d5
1,80 Sufentanil 387.2 238,1
355,2 10
10 18
18 Sufentanil-d5
Probele de plasmă (250 uL) au fost diluate cu 250 uL de soluție standard de plasmă internă (4% acid
formic conținând etanșe interne la 200 pg / ml) și încărcate pe o placă Waters Oasis PRiME MCX
µElution. Ca și în cazul testului de sânge post-mortem, godeurile au fost apoi spălate cu 200 uL de
100 mM formiat de amoniu conținând 2% acid formic, urmat de 200 uL de metanol. Probele au fost
eluate cu două volume de 25 pl de ACN: metanol (50:50 v / v) conținând 5% soluție de amoniac
puternic. Toate probele au fost apoi diluate cu 50 uL de apă: ACN: acid formic (97: 2: 1 v / v / v). Cinci
microlitri de extract diluat au fost injectați pe sistemul UPLC-MS / MS. Analiza plasmatică a fost, de
asemenea, efectuată pe un spectrometru de masă Waters TQ-S. Separarea a fost realizată pe un
Waters CSH C 18 coloană analitică (1,7 µm, 2,1 × 100 mm) și gradientul de fază mobilă a fost același
cu cel utilizat pentru analiza sângelui integral.
Ambele metode au fost validate în conformitate cu liniile directoare SWGTOX pentru recuperare,
efecte matrice, precizie, precizie, liniaritate, specificitate, selectivitate, sensibilitate [27] . Efectele de
recuperare și matrice au fost determinate cantitativ prin experimente de adăugare a analitului [28] ,
[29] . Efectele și recuperările matricei de sânge întreg au fost evaluate la trei concentrații diferite,
250, 1000 și 10000 pg / ml. Recuperările plasmatice și efectele matricei au fost, de asemenea,
determinate prin experimente de adăugare a analitului. Datorită intervalului mai limitat al testului
plasmatic, recuperările și efectele matricei au fost determinate la o concentrație unică de 1000 pg /
ml.
Validarea cantitativă a fost realizată prin analiza a 6 replici pentru precizie și precizie între zile și 5
replici între zile la 4 niveluri QC. Limitele inferioare de cuantificare au fost definite ca acele
concentrații la care acuratețea era în limita a 20% din concentrațiile țintă și precizia era mai mică de
20%. Cerințele de precizie și precizie pentru toate celelalte concentrații au fost în limita a 15% din
țintă și mai puțin de 15% RSD.
3 . rezultate si discutii
3.1 . Analiza sângelui integral: dezvoltarea metodelor și studii de validare
Optimizarea și validarea testului au fost efectuate pentru toate procedurile pre-analitice și analitice.
Pregătirea preanalitică a sângelui postmortem a utilizat sulfat de zinc și tratament cu acetat de
amoniu cu precipitare de proteine înainte de extracția în fază solidă. Condițiile solventului de
precipitații au fost optimizate pentru recuperarea analitului și s-a selectat o precipitare cu metanol:
ACN (50:50 v / v) deoarece a rezultat în supernatanți vizibil mai clari, pelete de precipitate etanșe
compacte și recuperări consistente. Adăugarea de acid fosforic la probă, înainte de etapa de
încărcare a extracției în fază solidă, sa dovedit, de asemenea, că îmbunătățește recuperările, în
special printre fentanilii mai polari care includeau nor-metaboliții și acidul remifentanil. Fig.
1prezintă recuperările medii și abaterile standard rezultate în urma analizei cu patru bazine de sânge
analit negativ suplimentat cu fentanil la o concentrație de 1000 pg / ml. Recuperările au variat între
53,6 și 84,5%, cu abateri standard relative sub 10% pentru toți analiții care demonstrează eficiența
extracției. Recuperarea generală a fost un echilibru între dezvoltarea unui flux de lucru simplificat
care a permis încărcarea directă a probei precipitate pe placa µEluție. Procentul relativ mare de
solvent organic (20%) care a rezultat din această etapă de pretratare a dus la recuperări mai mici
pentru unii dintre compușii de eluare timpurii. Au fost disponibile standarde interne stabile cu izotop
pentru cei mai afectați doi analiți, iar recuperările s-au dovedit a fi consistente și reproductibile. Nu
au fost necesare condiționări sau echilibrări pentru nici o matrice,
Fig. 1 . Recuperarea medie și efectele matricei în analiza de sânge post-mortem. Patru loturi de
sânge integral gol au fost evaluate pentru efectele de recuperare și matrice, așa cum este descris în
secțiunea Materiale și metode. Barele solide reprezintă efectul mediu de recuperare (albastru) sau
de matrice (portocaliu). Barele de eroare indică abaterile standard. Recuperările au variat între 53,6
și 84,5%. Efectele matricei au fost mai mici de 13%. (Pentru interpretarea referințelor la culoare din
această legendă a figurii, cititorul este trimis la versiunea web a acestui articol.)
Un avantaj suplimentar al metodei de extracție în fază solidă a fost reducerea efectelor matricei la
mai puțin de 13%, prezentată și în Fig. 1 . Efectele matricei în sânge pot fi rezultatul co-eluției
fosfolipidelor care determină suprimarea ionilor [29] , [30] , [31] , [32] și se acumulează pe coloana
analitică și în regiunea sursă a spectrometrului de masă . Extracția în fază solidă în mod mixt a redus
semnificativ nivelurile și efectele acestor fosfolipide. Fig. 2prezintă profilurile fosfolipidice ale
probelor de sânge integral preparate prin precipitarea proteinelor numai în comparație cu
rezultatele după utilizarea combinată a precipitațiilor și extracția în fază solidă. Combinația a
eliminat mai mult de 99% din fosfolipidele reziduale din extractul final. S-au efectuat, de asemenea,
studii de recuperare și de efect al matricei la concentrații mai mici (250 pg / ml) și mai mari (10000
pg / ml) de analiți; nu s-au observat efecte dependente de concentrație, ceea ce indică recuperarea
consecventă a analitului și efecte ale matricei scăzute în intervalul analitic al testului.
Descărcare: Descărcați imaginea de înaltă rezoluție (130 KB)Descărcare: descărcați imaginea la
dimensiune completă
Fig. 2 . Comparația conținutului de fosfolipide cu și fără extracția în fază solidă (SPE). În stânga sunt
cromatogramele ionice totale ale fosfolipidelor reziduale din probele de sânge supuse numai
precipitării proteinelor (superioare) și precipitării proteinelor urmate de extracția în fază solidă
(inferioară). Zona medie din fiecare set de eșantioane este afișată în dreapta. SPE a eliminat mai
mult de 99% din fosfolipidele reziduale din probele de sânge integral, comparativ cu precipitarea de
proteine.
Fig. 3 . Cromatografia fentanililor extrasă din probe de sânge integral. Separarea a fost realizată pe o
coloană Waters BEH C 18 coloană, 1,7 pm; 2,1 × 100 mm așa cum este descris în Materiale și
metode. Toți analiții au eluat în mai puțin de 2 minute.
În momentul dezvoltării testului, erau disponibile doar 5 standarde interne stabile etichetate
izotopic. Analitele au fost atribuite standardelor interne bazate pe similarități în eficiența extracției
(recuperare) și efectele matricei, urmate de timpul de reținere.
Testul a fost validat în continuare pentru liniaritate, precizie, precizie, sensibilitate, specificitate și
reportare în conformitate cu ghidurile SWGTOX [27] . Curbele de calibrare pentru probele de sânge
integral (50-20000 pg / ml) au fost liniare cu valori r 2 ≥ 0,997. Toți analiții au fost validați pentru
limite inferioare de cuantificare (LLOQ) de 50 pg / ml, în afară de acidul remifentanil și 4-ANPP, care
au validat ambele pentru LLOQ-uri de 100 pg / ml. Medii (interval) prejudecăți inter-test ( N = 5
loturi) pentru concentrațiile de fentanil la 750, 7500 și 15000 pg / ml în sânge au fost de -1,0% (-4,5
până la 3,0%), -1,1% (-8,3 până la 0%) și -0,2% (-4,4 până la 1,5 %) respectiv. Abaterile standard
medii inter-test (interval) pentru fentanil în concentrațiile de replică scăzute, medii și ridicate au fost
de 3,3% (1,1-16,1%), 2,0% (1,0-3,0%) și 4,5% (3,1-8,9%) . Transferul mediu ( N = 6) a fost de 0,05%
(0,00-0,65%) pentru analiza probei de control negativ în urma analizei concentrației ridicate a
calibratorului la o concentrație de 20000 pg / mL. laborator de referință folosind 30 de probe de
sânge postmortem testate în laboratorul de referință pentru 4-ANPP, para-fluorobutiril fentanil și
furanil fentanil. Fig. 4 prezintă date de comparație compuse pentru cei trei analogi de fentanil cu o
ecuație de regresie de y = 0,87x - 0,004 și un coeficient de corelație de 0,96.
Testul plasmatic a fost validat inițial pentru acetil norfentanil, norfentanil, metoxiacetil fentanil,
acetil fentanil, β-OH fentanil, 4-ANPP și fentanil numai. S-a observat un report de nivel scăzut, dar
consistent, al 4-ANPP în analiza de sânge total (medie 0,65%, interval 0,55-0,73%), dar a îndeplinit
criteriile de validare pentru intervalul de concentrație utilizat în studiile de caz post-mortem. Cu
toate acestea, în dezvoltarea ulterioară a unei analize plasmatice, a fost necesară o limită inferioară
de cuantificare și a fost atinsă prin utilizarea unei coloane analitice alternative. Studiile cu o coloană
analitică CSH C 18 au relevat o reportare medie ( N = 6) 4-ANPP de numai 0,15% (interval 0,11-
0,18%) în plasma analit negativă analizată după analiza plasmei conținând o concentrație ridicată de
4-ANPP de 2500 pg / ml. CSH C 18coloana a fost, prin urmare, adoptată pentru utilizare în testul
plasmatic și efectuată cu o selectivitate comparabilă și un timp de retenție ușor scurtat pentru
fentanilii individuali comparativ cu coloana BEH.
Studiile de performanță analitică cu testul plasmatic au dus la recuperări de extracție cuprinse între
88 și 95% și abateri standard sub 9,5% în toate fentanilii. Efectele matricei au variat de la -8% la -22%
cu abateri standard mai mici de 14%. Toate calibrările au fost liniare cu valori r 2 ≥ 0,997. Limitele
inferioare de cuantificare (LLOQ) au fost de 2 pg / ml pentru acetil norfentanil, 4 pg / ml pentru
norfentanil și fentanil și 5 pg / ml pentru compușii rămași. Biasurile medii între teste la concentrații
scăzute, medii și ridicate de control al calității au fost de 0,3% (interval -4,3-6,7%), 1,6% (-12,0-
13,40%) și, respectiv, -2,3% (-5,5-0,7%), respectiv. Studiile de precizie au arătat abateri standard
relative între teste pentru concentrațiile corespunzătoare ale grupului de control de 8,0% (3,0-
17,1%), 5,3% (2,8-9,3%) și 3,3% (2,1-5,2%).
Tabelul 2 . Fentanilii și concentrația lor (pg / ml) în sângele postmortem dezidentificat colectat din
decese care implică fentanil și analogi de fentanil.
Caz 4-ANPP Fentanil Norfentanil β-OH fentanil Acetil fentanil Acetil norfentanil
Fentanil fentanil Metoxiacetil fentanil Ciclopropil fentanil para-fluorobutiril
fentanil
1 21.500 16.700
5 15.700 84.500
12 3500 36.500
13 8620 24.700
15 116 6130
44 3290 892 53
În total, 175 de identificări ale fentanililor au fost făcute în cele 44 de cazuri postmortem. În timp ce
fentanilul a fost prezent în multe dintre cazuri, analogii fentanilului au fost semnificativi printre
aceste descoperiri. Analogii para-fluorobutiril fentanil, metoxiacetil fentanil, furanil fentanil și
ciclopropil fentanil au fost prezenți în sânge din 20 dintre decese și au apărut în concordanță cu
administrarea analogului de fentanil și supradozajul. Acești patru analogi au fost găsiți împreună cu
utilizarea fentanilului în 12 cazuri, dar au fost găsiți, de asemenea, independent de utilizarea
fentanilului în opt cazuri suplimentare în care analogii au fost singurii opioizi detectați în sânge. Cei
patru analogi au predominat, de asemenea, în concentrație față de alți fentanili detectați în peste
70% din decesele în care au fost implicați. Metoxiacetil fentanil a fost găsit în cazurile colectate la
începutul studiului la concentrații care depășeau intervalul de calibrare al testului. Intervalele de
concentrație pentru ciclopropil fentanil (3420–6130 pg / ml), furanil fentanil (867–16700 pg / mL) și
para-fluorobutiril fentanil (141–20000 pg / ml) au variat considerabil, dar au rămas în limitele
cuantificării sângelui test. De asemenea, trebuie remarcat faptul că analogul acetil-fentanil a fost
găsit și în 13 cazuri post-mortem, două cu concentrații care depășesc 4000 pg / ml și restul cu
niveluri mai mici de 500 pg / ml.
Modelele de detectare ale fentanilului β-OH și 4-ANPP ridică întrebări suplimentare cu privire la
potențiale surse metabolice sau precursori în aceste cazuri. Fentanilul β-OH a fost menționat ca un
analog de fentanil produs ilicit asociat cu toxicitatea [33] , dar metabolismul fentanilului a fost
sugerat și de studii in vitro cu microzomi și hepatocite [20] , [21] . Studiile in vivo în sprijinul
metabolizării fentanilului la fentanilul β-OH nu au fost raportate anterior la cunoștința noastră. O
sursă metabolică de 4-ANPP a fost sugerată de un raport timpuriu al a trei pacienți cu identificare
calitativă a 4-ANPP după administrarea intravenoasă de fentanil [20] și de un studiu hepatic
microsomal.[21]. Se știe, totuși, că 4-ANPP este un intermediar precursor în sinteza fentanilului. O
sursă de producție metabolică versus ilicită de fentanil β-OH și 4-ANPP în cazurile noastre nu este
clară doar din datele post-mortem, dar pot fi făcute mai multe observații. În primul rând, fentanilul
β-OH a fost prezent în 28 dintre cazurile de deces, dar nu a predominat în concentrația de opioide în
niciunul dintre cazuri. Foarte important, fentanilul β-OH a arătat o asociere izbitoare de 100% cu
prezența fentanilului și, de asemenea, nu a fost detectat în cele opt cazuri în care nu a fost detectat
fentanilul. În medie, concentrațiile de fentanil β-OH au fost de 3,4% din concentrațiile de fentanil și
au variat până la 11%. Asocierea strânsă a fentanilului cu fentanilul β-OH și nivelurile mai scăzute de
fentanil β-OH față de fentanil în aceste supradoze sunt în concordanță cu o sursă metabolică a
fentanilului β-OH, dar nu se poate exclude posibilitatea utilizării ilegale exogene. În al doilea rând, 4-
ANPP a fost prezent în sânge din 38 de cazuri și a fost detectat în cazurile cu și fără dovezi ale
utilizării fentanilului. Concentrația de 4-ANPP a variat pe scară largă și nu pare să arate nicio
corelație cu fentanil sau cu oricare dintre analogi. Probele de fentanil fentanil și metoxiacetil fentanil
pozitive au avut concentrații substanțiale de 4-ANPP în comparație cu cazurile de ciclopropil fentanil,
sugerând o posibilă variație a sintezei sau a eficienței de curățare în producția ilicită de laborator.
Aceste descoperiri sugerează o origine a produsului de sinteză al 4-ANPP, mai degrabă decât
metabolismul, dar din nou,
Testul plasmatic a fost, de asemenea, aplicat într-un studiu al probelor clinice de la pacienții cărora li
s-a administrat fentanil de calitate farmaceutică și aceste rezultate pot arunca o lumină suplimentară
asupra întrebărilor ridicate în studiile de caz postmortem, în special în ceea ce privește sursa de
acetil fentanil, β-OH fentanil și 4 -ANPP. Am analizat 70 de probe inițiale și post-doză de plasmă de la
18 persoane care au primit fentanil intravenos în timpul unei proceduri chirurgicale. Metoxiacetil
fentanil, acetil fentanil, noracetil fentanil și 4-ANPP nu au fost detectabile. Cu toate acestea, fentanil,
norfentanil și β-OH fentanil au fost prezenți așa cum se arată în Tabelul 3. Așa cum era de așteptat,
nivelul de fentanil determinat cu utilizarea clinică este mult mai mic decât cel observat în cazurile de
supradozaj letal și limita inferioară de cuantificare utilizată în testul plasmatic era în mod clar
necesară. În concordanță cu doza și recenta administrare a fentanilului în aceste cazuri clinice,
fentanilul a fost găsit în cea mai mare concentrație, cu o medie de 397 pg / ml și variind de la 7 la
1500 pg / ml. Chiar și cu administrarea acută de fentanil, metabolismul la norfentanil a fost
cuantificabil în 52 din cele 53 de probe care conțin fentanil. Concentrația medie de norfentanil a fost
de 14 pg / ml cu un interval de 4-45 pg / ml. Norfentanilul a reprezentat în medie 6% din
concentrația de fentanil, cu un interval de până la 17%. Fentanilul β-OH a fost, de asemenea,
măsurabil în 24 dintre probele de fentanil pozitiv, dar la o concentrație mai mică decât norfentanilul,
cu o concentrație medie de fentanil β-OH de 9 pg / ml și un interval de 5 până la 20 pg / ml.
Cuantificarea β-OH a fentanilului a avut în medie 44% (19-86%) de norfentanil și 2% (interval 0,5-4%)
de fentanil. Pentru comparație, nivelurile de fentanil β-OH din sânge postmortem au avut în medie
19% (5 până la 42%) din concentrația corespunzătoare de norfentanil și 3% (1-11%) din concentrația
de fentanil. Aceste date ar susține concluzia că fentanilul β-OH este un metabolit semnificativ al
fentanilului care este prezent în circulație după administrarea acută de fentanil în doze terapeutice
sau fatale. nivelurile de fentanil β-OH din sânge postmortem au avut în medie 19% (5 până la 42%)
din concentrația corespunzătoare de norfentanil și 3% (1-11%) din concentrația de fentanil. Aceste
date ar susține concluzia că fentanilul β-OH este un metabolit semnificativ al fentanilului care este
prezent în circulație după administrarea acută de fentanil în doze terapeutice sau fatale. nivelurile de
fentanil β-OH din sânge postmortem au avut în medie 19% (5 până la 42%) din concentrația
corespunzătoare de norfentanil și 3% (1-11%) din concentrația de fentanil. Aceste date ar susține
concluzia că fentanilul β-OH este un metabolit semnificativ al fentanilului care este prezent în
circulație după administrarea acută de fentanil în doze terapeutice sau fatale.
Tabelul 3 . Fentanilii și concentrația lor în plasmă din probe de sânge seriale dezidentificate colectate
pentru măsurarea hormonului paratiroidian în 18 cazuri de paratiroidectomie la Centrul Medical
Albany (AMC).
Probă Norfentanil (pg / ml) β-OH Fentanil (pg / ml) Fentanil (pg / ml)
4 . Concluzii
Au fost dezvoltate și validate metode sensibile și selective pentru analiza unui panou de fentanili
pentru testarea sângelui sau a plasmei. Testele au fost validate pe baza standardelor actuale de
practică și sunt aplicabile atât testelor criminalistice, cât și testelor clinice. Aplicarea în analiza
sângelui postmortem arată utilizarea concomitentă de fentanil și analogi de fentanil împreună cu o
frecvență ridicată de 4-ANPP asociată cazurilor. Studiile clinice efectuate pe plasmă de la pacienții
cărora li s-a administrat fentanil de calitate farmaceutică au relevat o asociere a fentanilului cu
norfentanilul și fentanilul β-OH. Rezultatele clinice și post-mortem indică o sursă metabolică pentru
fentanilul β-OH determinat în aceste cazuri.