a) Material sensibil

Materia din plantă și prepararea extractului vegetal

Pentru prepararea extractului vegetal, fructele jurubeba au fost congelate 24 de ore înainte de a fi
tratate. Apoi au fost procesate în aplicatorul Yononas. A fost posibil să se obțină o pastă congelată numită
ICEjur: înghețată de jurubeba. Apoi, 20 g de înghețată a fost diluată în 100 mL de 0,05 M fosfat de sodiu
tampon (pH 6.0), omogenizat pentru 10 minute sub mișcarea unui agitator magnetic și strecurată într-un
filtru TNT de fabrică, apoi obținându-se 20% extract crud vegetal (JEE) (pH 6.0). A fost aplicată o
temperatură de 20 +sau-2°C.
b) Tehnica/metoda de detecție
Determinarea activității enzimatice
Pentru a determina activitatea enzimatică a PPO (polifenoloxizilor), o apropiere
spectrofotometrică a fost folosită. Pentru aceasta, au fost amestecate 100 uL JEE și 3 mL 0,07 M
pirocatechină soluție (în 0,05 M fosfat de sodiu tampon, pH 6.0), apoi după 10 minute, valoarea ansorbită
la 420 nm a fost măsurată utilizând un spectrofotometru vizibil UV. Locul gol a fost setat la 0,07 M
pirocatechină soluție în 0,05 M fosfat de sodiu tampon, cu 100 uL JEE. Activitatea PPO a fost exprimată
în U/mg proteină. Toate experimentele au fost realizate la temperatura camerei ( 20 +sau-2°C).

c) Caracteristici
Dezvoltarea analizei: biosenzor, efectul pH-ului si parametri electrochimici

Pasta de carbon a fost preparată utilizând pudră de grafit și ulei mineral, ambele din Sigma-Aldrich,
USA. Construcția biosenzorilor a fost înlăturată după imobilizarea enzimatică în pasta de carbon JEE prin
tehnica fizică de adsorbție. Extractul enzimatic a fost adăugat direct pudrei de grafit, care a fost
omogenizată și uscată la temperatura camerei (20 °C). Ulterior, uleiul mineral a fost adăugat și texturile
au fost amestecate.
S-a utilizat: 0,1 M soluție fosfat tampon, în care pH-ul a fist ajustat de la 3.0 la 9.0. Analizele au fost
realizate ținând cont de următorii parametri optimizați: o amplitudine a pulsului de 50 mV, un puls de
lățime de 0,5 s, si o rată de scanare de 10 mV s‐¹. Pulsul diferențial voltamogram a fost scăzut și corectat,
apoi toate datele au fost analizate și tratate cu softul Origin 8 (USA).
Distanța lineară sau liniaritatea a fost determinată (exprimată prin regresia coeficientului R²), in timp
ce repetabilitatea a fost exprimată prin deviația standard relativă (RSD). Acuratețea și recuperarea au fost
evaluate, luând în calcul metoda oficială și evaluarea standard a mostrelor, care a fost obținută de
sensurile ecuațiilor regresiei.

d) Aplicații pe probe reale

Biosenzorul optimizat a fost evaluat împotriva a 100 uM soluții apoase de paracetamol, acetil
salicilic, metildopa, si acid ascorbic în standarde 0,1 M PBS, pH 7.0.
Pregătirea mostrelor
Mostrele au fost pregătite în acord cu procedurile farmaceutice. Pe scurt, 10 tablete din fiecare
mostră au fost strivite într-o mortieră, din care a fost luată o cantitate potrivită de mostră pentru a prepara
1mM de soluții de stoc. Soluția formatoare a fost filtrată și diluată până la 100 uM, si această soluție
finală a fost folosită în analize voltametrice (metoda propusă) și spectrofotometrice (metoda oficială).
Măsurătorile în spectrofotometria UVau fost făcute la 257 nm. Toate experimentele au fost realizate în
exemplare triple și la temperatura camerei.
e) Metoda de validare
Jurubeba este o sursă promițătoare de enzime PPO, dat fiind că răspunsul biosenzorului a fost mai
mare decât cel observat pentru alte dispozitive. Astfel, pentru a evalua potrivirea reutilizării și a
condițiilor păstrării, stabilitatea pastei preparate pentru a construi biosenzorul JCP100 a fost păstrată în
pachete individuale și într-un singur pachet. În ambele cazuri, pastele au fost păstrate la temperatura de
4°C până a fi utilizate pentru a atinge temperatura camerei de 20°C, după care analizele au fost
făcute……

Concluzii
Extractul enzimatic crud a fost obținut din fructul S. paniculatum, fiind o eficientă sursă de PPO,
care a fost cu succes aplicată în dezvoltarea pastei de carbon bazată pe biosenzori pentru determinarea
paracetamolului în medicină.
Biosenzorul propus a arătat o bună repetabilitate și stabilitate, precum și o bună senzitivitate și
selectivitate. A fost stabilit că biosenzorul CP/JCP100 are o distanță lineară de la 5 la 250 uM pentru
analize de paracetamol și o limită de detecție de 3 uM. Mai mult, prețul ieftin, simplitatea, si producția
rapidă a scos în evidență atractivitatea acestui dispozitiv alternativ în analize și calitatea controlului
formulelor farmaceutice.