Lucrare de laborator nr.

3
Determinarea conţinutului de zaharuri reducătoare prin metoda
spectrofotometrică

Această metodă testează prezenţa grupărilor libere carbonil (C=O), aşa numitele zaharuri
reducătoare. Aceasta presupune oxidarea grupărilor funcţionale ale aldehidelor (ec. 1) simultan cu
reducerea acidului 3,5 dinitrosalicilic în acid 3-amino, 5 nitrosalicilic (ec.2), în condiţii alcaline şi
măsurarea absorbanţei cu un spectrofotometru, la lungimea de undă de 575 nm.

gruparea aldehidică oxidare gruparea carboxil (1)

acid 3,5- dinitrosalicilic reducere acid 3-amino, 5- nitrosalicilic (2)

Cu ajutorul metodei DNS se poate determina concentraţia tuturor glucidelor reducătoare, nu

doar a glucozei.
Deoarece oxigenul dizolvat poate interfera cu oxidarea glucozei, sulfitul de Na, care nu este
necesar pentru reacţia de culoare, este adăugat în reactiv pentru a absorbi oxigenul dizolvat.

Reactivi şi echipamente:
A. Echipamente
- Eprubete
- pipete
- spectrofotometru
B. Reactivi
- Acid Dinitrosalicylic, soluţie 1%
 Acid Dinitrosalicylic: 10 g
 Fenol: 2 g (opţional)
 Sulfit de Sodiu: 0.5 g
 Hidroxid de Sodiu: 10 g
 se aduc la 1 L în balon cotat cu apă distilată
- Tartrat de sodiu şi potasiu, soluţie 40%

Procedură:

1. Se adaugă 3 ml reactiv DNS în 3 ml probă de analizat într-o eprubetă.

2. Se încălzeşte amestecul la 90 ºC timp de 5-15 minute pentru dezvoltarea culorii roşu-maro.
3. Se adaugă 1 ml soluţie 40% tartrat de sodiu şi potasiu (Sare Rochelle) pentru stabilizarea culorii.
4. După răcire la temperatura camerei, se citeşte absorbanţa la 575 nm cu ajutorul unui
spectrofotometru.
5. Se realizează curba de calibrare utilizând soluţii etalon de lucru cu concentraţii cuprinse între 200-
2000 mg/L. Se urmează paşii descrişi la punctele 1-4. Se reprezintă grafic curba de etalonare.