Biletul nr.

1
1. Care dintre elementele figurate prezintă o proporție de 1-4% în sângele
periferic? Definiți structura și funcțiile.
Eozinofilele sunt elementele figurate ale sângelui care se găsesc în proporție de
1-4% în sângele periferic. Au formă rotunjită, nucleu bilobat, cei 2 lobi sunt uniți
prin punți fine de cromatină, lobii nucleari conțin eucromatina dispusă central și
heterocromatina lângă membrana nucleară.Citoplasma este intes acidofila,se
coloreaza in rosu,contine organite celulare bine reprezentate.Ca si functii este un
microfac cu putere redusa de fagocitoza,selectiva pentru factori bacterieni
solubili,are rol
antihistaminic, acumulându-se în țesuturile sau zonele cu histamină în
concentrație ce depășește normalul, intervenind astfel în bolile parazitare și
alergice care sunt însoțite de eozinofilie. Prezintă reacții de tip imun în tumori,
mai ales în boala Hodgkin. Intervin în procesele de coagulare sanguină,
conținând profibrinolizină.
Biletul nr. 2
1. Când și cum utilizăm criofracturarea?
Criofracturarea este o metodă de analiză folosită în tandem cu procedura de
examinare la microscopul electronic de transmisie (TEM). Este o
metodă de vizualizare a feței interne a biomembranelor. Este folosită la nivel
molecular.
-pentru criofracturare este necesara fixarea in glutaraldehida si congelarea
pieselor, acestea fiind imersate in glicerol pentru crioprotectie
-piesele congelate sunt fracturate sub vid cu o lama de microtom racita in azot
lichid, prin tensiunea de forfecare sau dispozitiv articulat de fracturare
-replica se realizeaza prin umbrire: vaporizarea in directie oblica a unui strat de
platina, care este opac la electroni; si intensificare: depunerea verticala prin
vaporizare a unui strat de carbon care este transparent la electronii utilizati de
TEM
-replica este curatata cu hipoclorit sau acid cromic
-replica este amplasata pe grile de examinare metalice pentru TEM
Biletul nr. 3
1. Descrieți celulele sangvine regăsite în proporție de 0,5-1%.
Bazofilele se regasesc in proportie de 0.5-1%.Aceastea sunt celule usor
rotunjite,in nr mai mic decat euzinofilele si neutrofilele.Nucleul apare
incomplet segmentat, având forma unei frunze incomplet lobare, a literei
„S” sau de trifoi. Citoplasma este bazofilă, conține puține organite
celulare, dar multe granule colorate metacromatic în albastru-violet închis.
Membrana este lipoproteică, acoperită de glicocalix, prezentând pe suprafața
externă, receptori pentru IgE.
-intervin in stari se soc, stres, histamina si serotonina cu actiune asupra vaselor,
heparina cu rol in hemostaza
Biletul nr. 4
1. Definiți un microfag majoritar în sângele periferic. Realizați o comparație
funcțională între acesta și un eozinofil.
 Microfagul majoritar în sângele periferic este neutrofilul. Acesta se găsește
într-un nr de 3000-4500/mm3. Are formă rotunjită în sângele circulant,
emite pseudopode la trecerea în țesuturi (formă neregulată,
uneori de rachetă). Prezintă 2-5 lobi nucleari, legați prin filamente fine de
cromatină. Unul din lobi prezintă la femei, corpusculul Barr, iar în
colorația May-Grumwald-Giemsa are tentă roșie violacee. Citoplasma este ușor
acidofilă, se colorează în roz palid. Membrana este lipoproteică, acoperită de
glicocalix, emite pseudopode bogate în microfilamente de
actină și microtubi. Spre deosebire de eozinofile, care au putere de
fagocitoză, rol antihistaminic și conține profibrinolizină (coagulare
sangvină), neutrofilele au funcție de apărare (fagocitează particule de talie mică)
și funcție de secreție (produce transcobalamina I, alfa-globulină- fixează și
transportă B12 în ser.
Biletul nr 5.
1. Care este principiul cromatografiei pe hârtie? Care este faza mobilă în acest
caz?
Cromatografia pe hârtie a fost descoperită în 1944 de cercetătorii Martin și
Synge. Este prima formă de cromatografie planară. Principiul constă în
distribuția inegală a componentelor unui amestec între faza mobilă și cea
imobilă. Această distribuție este determinată fie de afinitatea diferită a
componentelor amestecului față de cele 2 faze, fie de capacitatea diferită de a
difuza în acestea. In cromatografia pe hartie, faza stationara este constituita din
hartia cromatografica impreuna cu solventul, iar faza mobila este formata din
solventul ce migreaza pe hartie.
Biletul nr 6.
1. Diferențele dintre etapele care succed fixării în cazul folosirii unui fixator
chimic față de cel fizic
Metodele fizice au la bază folosirea unor temperaturi scăzute, deshidratarea
inertă și metoda de substituție prin înghețare
La folosirea fixarii prin desicare la temperatura laboratorului, desicarea trebuie
completata in momentul colorarii frotiurilor prin actiunea unui alt fixator- alcool
metilic.
La folosirea fixarii prin desicare la temperatura scazuta, piesa este deshidratata
in momentul desicarii sub vid, iar in momentul includerii nu vom mai face cele 5
bai in alcool.
La folosirea fixarii prin congelare-substitutie, este extrasa apa din piesa, aceasta
fiind deshidratata, nu mai este necesara spalarea si deshidratarea din timpul
includerii.
Biletul nr. 7
1. În cazul unui frotiu de sânge periferic precizați criteriile pe baza cărora se
stabilește clasa unui element și/sau gradul lui de maturare.
Stabilirea clasei unui element sau a gradului lui de maturare se face pe baza
unor criterii ce privesc: -bazofilia citoplasmei elementelor tinere
- afinitatea tinctoriala a granulatiilor granulocitelor
- acidofilia eritrocitelor mature
Cu cât o celulă este mai tânără cu atât citoplasma ei este bazofilă, dat fiind
concentraţia mare de acid ribonucleic. Pe măsură maturării, celula devine tot
mai acidofilă deoarece scade concentraţia în acid ribonucleic (ex: evoluţia
eritroblaştilor). Termenii de eozinofil, bazofil, acidofil, indică afinitatea faţă de
coloranţii acizi.
Afinitățile pentru diferiții coloranți utilizați pentru frotiul de sânge sunt:
bazofilia – afinitatea pentru albastrul de metil
azurofilia – afinitatea pentru produșii de oxidare ai albastrului de metil –
numiți azuri – care determină o colorație roșiatic-violetă
acidofilia – afinitatea pentru eozină
neutrofilia – afinitatea pentru un complex de coloranți în amestec (așa cum
este soluția Wright gata preparată) – care induce o
colorație lila-palidă.
Pentru frotiul de sânge
 eritrocitele vor cupla eozina datorită hemoglobinei și vor
apărea roz-portocalii,
 nucleii leucocitelor apar albastru-violeți,
 granulațiile bazofile sunt colorate albastru-violet închis,
 granulațiile eozinofile sunt colorate roșu-portocaliu,
 trombocitele sunt colorate violet,
 citoplasma limfocitelor este colorată albastru palid.
Biletul nr. 8
Aprecierea eritrocitelor pe frotiul de sânge periferic; variații de număr și formă
Anomaliile de formă ale eritrocitelor sunt regrupate sub numele de
poikilocitoză. Poikilocitele sunt eritrocite cu forme variate, dar anormale. Aceste
forme anormale pot fi permanente sau temporare. Cauzele apariției acestor
forme anormale țin de structura membranei eritrocitare sau de traume ale întregii
celule.
Variatii de forma(poikilocitoza)
Reversibile:
-sferocite-forma unei sfere, apare in icterul hemolitic congenital
-stomacite- eritrocite care prezinta o gaura/stoma-alcoolism, boli hepatice,
la PH scazut
-echinocite-prezinta pe suprafata lor prelungiri de dimensiuni egale, “tepi”,
plasate la distanta egale, apare cand scade concentratia ATP
-eliptocite-hematii de forma ovala, pot sa apara si in mod normal in sangele
periferic
Ireversibile:
-drepanocite-hematii in forma de secera, apar in talasemie, deficit de fier
-acantocite-“spurr cells”-prezinta 5-15 prelungiri inegale, plasate la distante
diferite, prezente in ciroze si anorexia nervoasa
-codocite-celule care au o deficienta ini hemoglobina, de obicei hipocrome,
in boli hepatice, talasemie, postsplenectomie, anemie feripriva
-degmacite-hematii care prezinta o gaura sub forma de muscatura la
marginea lor-deficit de G6P, indusa de medicamentele oxidante
 -knitocite-eritrocite din care s a desprins un fragment, apare in protezele
valvulare
-schizocite- prezinta 2 3 capete ascutite in forma de triunghi, apar in rejetul
de grefa, valvulopatii, arsuri severe, anemie feripriva severa
Variatii de numar:
-valoare normala: 4,5-5,5 milioane B, 4-5 milioane F
-cresterea se numeste poliglobulie si apare in: tetralogia Fallot, bronho
pneumopatia cronica obstructiva,policitemia verra, splenectomie, crestere
fiziologica: sarcina, sportivi de performanta
-scaderea se numeste anemie si apare in: talasemie, siclemie, splenomegalie,
postchimioterapie, postradioterapie, reactie la medicamente, proteze
valvulare, hemodilutie, insuficienta renala-deficit de eritropoietina
Biletul nr. 9
1. Caracterizarea morfologică a trombocitului.
Trombocitele se găsesc în nr de 150000-400000/mm3.
Modificări cantitative:
- Trombocitopenii (sub 100.000/mm3)- tendinta crescuta de sangerari
spontane, hemoragii cutanate (echimoze, petesii) si mucoase
(epistaxis, gingivoragii).
- Trombocitoze (pese 400.000/mm3)- risc crescut de fenomene
trombotice
Membrana este lipoproteică, acoperită de un strat de glicoproteine, care permite
absorbția unor proteine plasmatice (factorul 8, fibrinogen), joacă rol în
interacțiunea dintre trombocit si peretele vascular sau alte suprafețe externe. Pe
suprafata externa se gasesc si diferite lucruri specifice antigenice, pca si
receptori pentru agentii stimu;atorisau inhibitorui ai procesului de agregare
plachetara.
Citoplasma se prezinta alcatuita din 2 zone: una externa, clara, numita
hialoplasma si alta interna, neclara, numita granulomer. Hialomerul contine
microtubi, microfilamente si diferite proteine implicate in procesul de coagulare
sangvina. Granulomerul este un ansamblu de granule si vacuole de marimi
diferite, el este alcatuit din mitocondrii mici, cativa lizozomi ce apar pe frotiu ca
granulatii azurofile. Este o celula direct implicata in procesul de coagulare a
sangelui, intervenind si in procesele inflamatorii, reactiile imune, vindecarea
ranilor, poate endocita particule foarte mici.
Biletul nr.10
Prezentați comparativ structura moleculară a granulelor din neutrofile și
eozinofile
1. Granulele neutrofilelor pot fi azurofile (primare) sau specifice (secundare)
colorate in brun mai mult sau mai putin inchis.
Granulele azurofile sunt prezente in exclusivitate in primele etape de
dezvoltare a neutrofilelor la nivelul maduvei hematogene, reducandu-se
treptat pe masura diferentierii celulelor si trecerii ei in sangele periferic,
contin mieloperoxidazam prin intermediul careia sunt bactericide, actioneaza
asupra H2O2, elibereaza si activeaza O2.
Granulele specifice- 70-80% contin lizozim, lactoferin (cu rolul de a lega Fe
circulatn), fagocitine, cu rol bacteriostatic, fosfataza alcalina, acid lactic,
acizi grasi si lecitina, toate avand rol inhibitor asupra dezvoltarii
microorganismelor.
Granulele eozinofilelor sunt colorate in portocaliu stralucitor (coloratia M-G-
G) care contin hidrolaze acide de tip lizozomal si histone.
Bilet nr .11
1. Studiul cromatinei X pe frotiul de sange periferic
Se evidentiaza in nucleu PMN neutrofile pe frotiuri dcolorate cu solutie
MGG.
Aspectul cromatinei:
- Apendici nucleari de tip A au forma de bat de toba, prezinta un
cap ovalar sau rotund legat printr-un filament subtire de unul din
lobii nucleului PMN
- Apendici nucleari de tip B sau noduli sesili sunt legati de direct la
nucleu printr-o baza de implantare
- Culoarea este intens bazofila, iar marimea este de 1.5 microni.
 Frecventa normala la femeie este de 1/38 PMN (1/6-1/98 PMN)
Interpretarea se realizeaza prin
𝑛𝑟 𝑎𝑝𝑒𝑛𝑑𝑖𝑐𝑖 𝑛𝑢𝑐𝑙𝑒𝑎𝑟𝑖 = 𝑛𝑟 𝑐𝑟𝑜𝑚𝑜𝑠𝑜𝑚𝑖 𝑋 − 1
Bilet nr. 12
1. Indicați o metodă utilă în investigarea unei citopenii fără o cauză aparentă; ce alte
indicații are aceată metodă.
Pentru identificarea citopeniilor se foloseste medulograma- frotiul de maduva. Examinarea
maduvei osoase prezinta interes epidemiologic pentru multe boli hematologice. De cele
mai multe ori, medulograma este corelata cu examenul histologic al biopsiei osteo-
medulare (ofera informatii suplimentare – cantitative si calitative. Alte indicatii prezentate
de medulograma sunt:
- Diagnosticarea anemiei megaloblastice
- Diagnosticul mielomului mulyiplu
- Diagnosticul lipidazelor: boala Gaucher, boala Niemann-Pick
- Sindromul „histocitelor albastre ca marea”
- agranulocitoza
Bilet nr. 13
1. Care din tehnicile utilizate poate fi folosită pentru detecția calitativă a tipurilor
oncogene ale virusului papilomatozei umane; ce alte utilizări are această tehnică.
Pentru detectarea virusului papilomatozei umane este folosita tehnica PCR(polimerase
chain reaction), mai exact PCR conventional(detectia si analiza produsilor PCR la finalul
procesului).
PCR este o tehnica moleculara genetica in vitro, care reproduce capacitatea naturala
de replicare a ADN si consta in generarea unor copii multiple a unei secvente nucleotidice
tinta.Aceasta cuprinde 3 etape:
- Denaturarea
- Legarea complementara a primerilor
- Elongatia
Au la baza o detectie si o analiza a produsilor PCR la finalul procesului (detectie end-
point)
Alte utilizari pot fi in determinarea HLA B27 – spondilita ankilopoietica
Bilet nr. 14
1. În cazul în care doriți să studiați fibrele de colagen care dintre mijloacele tehnice și
tehnicile învățate ați folosi?
Pentru studierea structurilor a caror compozitie chimica macromoleculara au un aspect
liniar, cum sunt si fibrele de colagen, vom alege examinarea acestora cu microscopul
polarizant.Pune in evidența o serie de fenomene luminoase care iau naștere in structurile
biologice primare (naturale) sau in cele provocate de catre substanțe numite fluorocromi.
Metodele
citologice de fluorescența prezinta o serie de avantaje, care le fac foarte utile in cercetarea
histochimica cantitativa și a biologiei celulare, atat pe celule vii cat și pe celule fixate.
Principiul metodei: anumite substanțe radiate cu un fascicol luminos cu o lungime de unda
mica și cu o frecvența inalta ( cum este cazul celor ultraviolete de 300-400milimicroni) emit
radiații cu o lungime de unda mare și o frecvența mai joasa, deci de culoare diferita. Aceste
substanțe se numesc fluorescente. Cu ajutorul fluorocromarii cu acridin orange se pot
identifica fibrele de colagen, elastice și de reticulina- fluorescența verde.
Bilet nr. 15

1. Un pacient prezintă o formațiune subcutanată de consistență crescută la nivelul

bicepsului. Ce metodă de prelevare și prelucrare a materialului se recomandă în
vederea stabilirii unui protocol chirurgical?
As recomanda o punctie-biopsie, mai exact biopsia cu ac gros, aceasta avand indicatie
pentru formatiuni mai mari, eventual tumorile care apar solide la examenul ecografic:
-foloseste un ac de puncte mai gros, prevazut cu un sistem de taiere

-se obtine un cilindru de tesut suficient pentru diferentierea intre tipul invaziv si
neinvaziv de leziune

-obtinem fragment cu suficienta celularitate pentru detectarea unei celule maligne

In cazul in care formatiunea este chistica, voi recomanda o biopsie cu ac fin, aceasta
avand ca avantaj rapiditatea executarii, fiind minim invaziva si cu costuri reduse.
Data fiind celularitatea redusa a materialului recoltat, nu putem face diferenta intre o
leziune in situ si una invaziva.

Bilet 16
 Precizați pe scurt caracteristicile legate de număr, morfologie și funcții ale tipului celular
din sângele periferic ce prezintă la nivelul plasmalemei o serie de glicoproteine ce permit
absorbția unor proteine plasmatice și au rol în interacțiunea acestor celule cu  diferite
suprafețe și/sau peretele vascular
1. Trombocitele se găsesc în sângele periferic în proporție de 150.000- 400.000/mm3.
Membrana lor este lipoproteică, acoperita de un strat de glicoproteine care permite
absorbtia unor proteine plasmatice, in special fibrinogen si factorul 8, jucand un
rol important in interactiunea dintre trombocit si peretele vascular sau alte
suprafete straine (adeziune) si cu alte plachete (agregare). Pe suprafata externa a
membranei celulare se gasesc diferite lucruri specificeantigenice, ca si receptori
pentru agentii stimulatori sau inhibitori ai procesului de agregare plachetara.
Membrana trombocitului mai prezinta si mici ondulatii si prelungiri dendritiforme
rare.
Citoplasma prezinta 2 zone: una clara, externa, ectoplasmica, numita hialomer si alta
centrala, intunecata, numita granulomer. Hialomerul contine microtubi,
microfilamente si diferite proteine implicate in procesul de coagulare sangvina.
Granulomerul este un ansamblu de granule si vacuole de marimi diferite. El este
alcatuit din mitocondrii mici, cativa lizozomi ce apar pe frotiu ca granulatii azurofile,
cativa peroxizimi ce contin catalaza, microvezicule golgiene, putin RE si granule
dense ce contin serotonina, epinefrina, ioni de Ca.
Este o celula direct implicata in procesul de coagulare, intervenind si in procesele
inflamatorii, reactiile imune, vindecarea ranilor, poate endocita particule foarte
mici.
Biletul nr. 17
 Care sunt particularitățile etapelor realizării și colorării frotiului de sânge comparativ cu
celelalte tehnici învățate? Unde se mai utilizează principiile executării unui frotiu de
sânge?
Principiile realizarii unui frotiu de sange se mai utilizeaza pentru examinarea celulelor
descuamate sau exfoliate, a amprentelor de organe. Este o metoda utilizata in citologie,
devine prioritara atat in domeniul cercetarii biologice, cat si ca procedeu de diagnostic
in practica medicala. Colorarea frotiului trebuie efectuata imediat dupa realizarea lui
sau in primele 24 de ore, deoarece celulele isi pierd afinitatea tinctoriala.
Biletul nr. 18
Prezentați comparativ tehnicile utilizate în diagnosticarea afecțiunilor mitocondriale
In diagnosticarea afectiunilor mitocondriale se foloseste microscopia prin contrastul de
faza și fractionarea celulara. Contrastul de faza este o tehnica ce utilizeaza faptul ca
lumina care traverseaza o parte din transparenta a preparatului microscopic va fi
incetinita in raport cu lumina a carei traiectorie nu este modificata. Sistemul
accentueaza defazarea la jumatatea unei lungimi de unda prin intermediul unei
placi de faza transparenta, care transforma defazarea in diferenta de amplitudine a
undei. Este folosita pentru a evidentia celulele tumorale. Fractionarea celulara este
o tehnica ce se bazeaza pe caracteristicile structurilor subcelulare (forma,
dimensiune, densitate), care reuseste sa le diferentieze, permitand separarea lor.
Bilet nr 19
1. În cazul în care aveți un pacient cu o posibilă boală lizozomală ce tehnici veți solicita
a fi utilizate pentru evidențierea lizozomilor și a morfologiei acestora în vederea
precizării diagnosticului?
Pentru a evidenția lizozomii și morfologia lor în vederea precizării diagnosticului,
metoda folosită ar fi fracționarea celulară. Această metodă evidențiază structurile
subcelulare, reușind să le diferențieze și să le
separe apoi
-biopsie cu ac fin
-pregatirea sectiunilor ultrafine pentru observarea la microscopul electronic de
transmisie
-eventuala medulograma-frotiu de maduva-care are indicatie pentru boala Niemann-
Pick-boala lizozomala
Bilet 20
 Caracterizați pe scurt microscopia electronică de transmisie comparativ cu cea de baleiaj.
Microscopul electronic de transmisie (TEM) folosește electroni primari, emiși de un
tun electronic ce conține un filament de tungsten, pe când microscopul electronic de
baleiaj (SEM) folosește electroni secundari. Ambele tipuri de microscopii electronice
utilizează vidul și folosesc lentile electromagnetice și electrostatice. Puterea de
rezoluția e TEM este de 0,2 nm, în timp ce puterea de rezoluție a SEM este de 0,4 nm.
TEM oferă informații legate de elemente de ultrastructură și componente
celulare, pe când SEM oferă informații legate de ultramorfologia suprafețelor.
SEM realizează imagini tridimensionale color, iar TEM- imagini bidiminensionale
alb-negru.
Bilet 21
 Precizați scopul utilizării xilolului în tehnica colorării unui preparat cu hematoxilin-eozină
 În tehnica colorării unui preparat cu hematoxilin-eozină, xilolul este folosit ca
metodă de clarificare pentru substanțele ce conțin încă impurități. Xilolul nu
este miscibil cu apa, de aceea, înainte de a fi
clarificate, secțiunile trebuie să fie deshidratate, iar după clarificare, ele trebuie
rehidratate, deoarece soluția de colorare este apoasă.
Bilet 22
 Ce tipuri celulare pot fi examinate prin tehnica frotiului ?
Prin tehnica frotiului pot fi examinate
-celulele sangvine(periferice si medulare)
-Materiale biologice provenite din organe ușor accesibile care prezintă o
descuamare fiziologică (secreții vaginale, mamare, bronșice, din celule provenite
din descuamarea epiteliilor mucoaselor)
-Materiale biologice provenite din organe mai puțin accesibile: spălături gastrice,
puncții pleurale, peritoneale (pleurezie, ascită), puncții ganglionare. Ele se
centrifughează timp de 10-30 de minute și apoi, după îndepărtarea lichidului
supernatant se recoltează material biologic din sediment pentru frotiu
Bilet 23
 În cazul unui pacient cu hepatită C care din tehnicile studiate o veți utiliza pentru
determinarea cantitativă a viremiei ? Ce alte utilizări ale acestei tehnici cunoașteți ?
.Pentru determinarea viremiei unui pacient cu hepatită C, se poate folosi tehnologia
real-time PCR. Aceasta prezintă numeroase avantaje față de cea convențională. Se
mai poate folosi pentru analiza mutației genei factorului V Leiden, a mutației genei
protrombinei, a virusului hepatitei B sau HIV.
Bilet nr 24
1. Definiți și caracterizați pe scurt electroforeza. Enumerați tipurile de electroforeză
cunoscute
Electroforeza este o tehnică de separare a proteinelor, bazată pe migrarea lor în câmp
electric. Este utilă ca metodă analitică. Este o metodă standard utilizată în studiile de
biologie moleculară. Principiul se bazează pe migrarea în câmp electric a moleculelor
încărcate negativ în funcție de dimensiunea și forma lor. Astfel, moleculele de mici
dimensiuni vor migra mai rapid spre polul pozitiv
Tipuri: Electroforeza pe gel de agaroza- ofera cea mai buna rezolutie, indicatie pentru
moleculele mari de acizi nucleici, nu interactioneaza cu moleculele hidrofobe
Electroforeza pe gel de poliacrilamida-indicatie pentru separarea ADN de mici
dimensiuni, migrarea fiind in functie de dimensiune si forma
Bilet 25
 Ce reprezintă criofracturarea? Care sunt diferențele majore de pregătire a materialului
tisular pentru examinarea prin această metodă față de metoda secțiunilor ultrafine?
Criofracturarea este o metodă folosită în tandem cu procedura de
examinare în microscopie electronică. Celulele sunt congelate în N2 lichid, indirect, într-
un sistem de bain-marie cu izopentan: piesa este imersată în izopentanul răcit indirect de
azotul lichid. Congelarea are loc în prezența unui agent de crioprotecție, pentru a preveni
distorsiunile determinate de formarea cristalelor de gheață. Ulterior, blocul de gheață
format este spart cu ajutorul unui cuțit. Fețele de fractură rezultate sunt acoperite prin
pulverizare sub vid cu un strat subțire de platină-carbon. Stratul de carbon se face prin
 depunere verticală, iar cel de platină sub un anumit unghi. Se obține astfel,o replică de
platină-carbon, care va fi curățată și examinată la microscopul electronic de transmisie.
Curățarea se realizează la presiune
atmosferică și temperatura camerei, cu ajutorul unei soluții de hipoclorit de sodiu.
În cazul secțiunilor ultrafine, țesutul recoltat este spălat cu PBS pentru
îndepărtarea sângelui sau a altor secreții. Cu ajutorul unor lame tăioase,
umectat în PBS se taie fragmente din țesutul recoltat.
Bilet 26
 Indicați modalitatea tehnică care plecând de la principiul fluorescenței permite analiza
proteinelor G
Proteinele G reprezintă cea mai mare familie de receptori si ținte farmacologice.
Analiza acestora se realizeaza cu ajutorul microscopului confocal produce imagini digitale
de calitate superioara a diferitelor probe, pornind de la principiul fluorescentei, utilizand
probe marcate simplu, dublu sau triplu marcate fluorescent.
-permite controlul adancimii de camp
-elimina perturbatiile imaginii
-imbunatateste contrastul si rezolutia
Blocarea razelor nefocalizate se face cu ajutorul ecranului de focalizare care este un ecran
opac cu un orificiu foarte mic in centrul lui(pinhole aperture). Se pot uni imagini dintr un
plan rezultand o imagine mai mare. Unirea mai multor planuri va da imagini
tridimensionale.

Aplicatii:-examinarea in dinamica a celulelor vii

-detectarea celulelor nemarcate intr-o populatie de celule marcate fluorescent
-analiza interactiunilor dintre celulele din cultura
Bilet 27
 Care sunt cele mai utilizate metode pentru investigarea suprafețelor? Precizați câteva
caracteristici ale uneia dintre ele.
Microscopul confocal produce informații digitale de calitate superioara a diferitelor
probe, pornind de la principiul fluorescentei, utilizand probe simplu, dublu sau triplu
marcate fluorescent. Permite controlul adancimii de camp si eliminarea perturbatiilor
imaginii care apar datorita lipsei de focalizare, imbunatateste contrastul si rezolutia.
Microscopul cu forta atomica (AFM) este folosit pentru inverstigarea suprafetelor.
Este cea mai folosita tehnica a SPM (Scenning Probe Microscopy), servind pentru
analiza topografica a suprafetelor. Se pot obtine imagini tridiminensionale cu
rezolutie de ordinul nm. Se utilizeaza in cercetare fundamentala, chimie, fizica,
biologie, deschizand era nanotehnologiei.
Bilet 28
 Definiți și precizați principiul metodei utilizate pentru studiul mielinei.
Microscopia in lumina polarizata
Metoda folosită pentru studiul mielinei este microscopia în lumină polarizantă.
Microscopul polarizant este un tip de microscop optic ce
folosește două filtre polarizante: unul polarizor și unul analizor. Este util în
special în mineralogie, biologie și cercetarea biomedicală. Principiul acestui tip
de microscopie: lumina naturală sau artificială, are natură dublă: ondulatorie și
 corpusculară. Este o undă electromagnetică ce vibrează în toate direcțiile, într-un
plan perpendicular pe traiectoria de propagare. Dacă este filtrată cu un filtru
polarizant, aceasta va vibra pe o singură direcție, devenind polarizată. Lumina
trece prin filtrul polarizant și devine lumină polarizată neanalizată: este formată
doar din unde care
vibrează în același plan. Un al doilea filtru, cel analizor lasă să treacă atât lumina,
cât și undele care vibrează, într-un singur plan. Planul
polarizorului și analizorului sunt perpendiculare.
Bilet 29
 Definiți termenul de cromofori și fenomenul realizat de aceștea; aplicații biomedicale.
. Cromoforii sunt grupări chimice conținute în moleculele capabile să realizeze
fenomenele de fluorescență. Fluorescența este un fenomen prin care moleculele
sensibile emit fotoni, atunci când ajung în stări de
excitație electronică induse prin factori fizici, mecanici sau mecano-
chimici. Identifică și deosebesc pe un preparat biologic substanțe care nu pot fi
deosebite în mod normal prin colorații uzuale. La microscopul fluorescent vor
apărea spoturi luminoase, colorate diferit, pe un fond negru, care vor arăta prezența
substanțelor fluorescente. Acest tip de
microscopie se adresează atât secțiunilor de țesut fixat cât și celulelor vii, în culturi
primare sau secundare.
Bilet 30
Precizați tipul de microscop utilizat pentru examinarea celulelor de cultură; alte
aplicații biomedicale ale acestui tip de microscopie.
Pentru examinarea celulelor de cultură se utilizează microscopul inversat cu contrast de
fază (pentru examinarea formei celulelor, a gradului de granularitate a citoplasmei, a
conturului nucleului).
Microscopul cu contrast de fază se mai utilizează și pentru a studia
evenimente celulare în dinamică, în special în celulele vii, nefixate,
necolorate. Tehnica acestui tip de microscopie este aplicată la scară largă în
citologie și histologie. Pot fi examinate organite celulare, membrane
celulare, nuclei, mitocondrii, corpuscul Golgi, fusul de diviziune și
cromozomii. Mai este folosită și pentru a pune în evidență celulele
tumorale.
Bilet 31
Precizați care din tehnicile studiate se utilizează pentru generarea unei ”amprente genetice”
specifice fiecărui individ. Precizați câteva caracteristici ale uneia dintre ele.
Pentru generarea unei „amprente genetice” se utilizează tehnica PCR, mai exact
determinarea STR (short tandem repeats) prin tehnica PCR, urmată de electroforeza
produșilor obținuți. STR are aplicații în testele de
paternitate sau în stabilirea persoanelor în cadrul biocriminalisticii
Bilet 32
 Care din tehnicile studiate se bazează pe specificitatea biologică unică a interacțiunilor
ligand-receptor. Caracterizați pe scurt această tehnică.
Cromatografia de afinitate funcționează pe baza mecanismului cheie-yală. Ligandul
este cuplat covalent cu matricea care formează materialul de tapetare a coloanei.
 Separarea are loc după ce macromoleculele devin specific (dar nu ireversibil) cuplate
cu ligandul. Se modifică apoi pHul solventului de extracție în scopul diminuării
interacțiunilor cu ligandul, facilitând disocierea și facilitarea extracției.
Biletul nr.33
1. Indicați modalitatea prin care este posibilă determinarea efectelor asupra
comportamentului celular a unor molecule specifice (hormoni sau factori de creștere)
precizând și materialele necesare.
. Prin tehnica culturii celulare se pot determina efectele asupra
comportamentului celular prin adăugarea sau extragerea de molecule specifice
(hormoni sau factori de creștere). Pentru a realiza o cultură de celule, avem nevoie de
arie de lucru sterilă, sticlări și instrumente fine,
dispozitive de curățat și sterilizat, recipiente de stocare pentru mediu, ser, sticlărie și
instrumentar specific, incubator și hotă cu flux laminar, sursă de apă pură, microscop,
agitator magnetic, balanță analitică, centrifugă și substanțe chimice. Totodată, mediile
de cultură celulară trebuie să asgur un echilibru ionic obținut cu soluții izotone, un pH
optim (menținut cu
substanțe tampon – tampon fosfat, tampon bicarbonat de sodiu-CO2), temperatură
optimă, elemente nutritive.
Biletul nr. 34 
1. Prezentare comparativă: recoltarea și fixarea materialului biologic pentru microscopia
fotonică (parafină, gheață) și pentru microscopia electronică

Recoltarea: in microscopia fotonica: se recolteaza probe care sunt umectate in

PBS(tampon fosfat salin) pentru indepartarea sangelui si a altor secretii
se taie cu o lama tinuta in PBS fragmente de 10x10x3
in microscopia electronica: se lucreaza cu microscop binocular
piesele sa fie de mici dimensiuni 0,5x0,5x0,5 mm,
fragmentele preluate si puse in fixator racit la 4*C
fragmentele puse pe fata fara azotat de argint a unei
hartii fotografice peste care se pun 2 3 picaturi din lichidul fixator ptr a opri actiunea
destructiva a enzimelor

Fixarea:in microscopia fotonica: metode fizice- desicare la temp camerei, criodesicare

sau congelare-substitutie; metode chimice: fixatori coagulanti: HCl, HCr, alcooli,
fixatori noncoagulanti: formalina 10% formaldehida 4%, oxizi
In cazul prelucrarii pentru gheata fixarea presupune si
includerea si se realizeaza in incinta criotomului la -58*
In microscopia electronica:metoda fizica:- racire in N2 lihcid; metoda chimica: se
foloseste o dubla fixare: prefixare cu glutaraldehida 2% si postfixare cu solutii tampon
cacodilat, fosfat, veronal si tetraoxid de osmiu
Bilet 35
 Care sunt celulele sangvine ce intervin în apărarea imună? Cum se diferențiază acestea de
principalele macrofage?
Limfocitele sunt celulele sagvine ce intervin în apărarea imună. Se
deosebesc de monocite (principalele macrofage) prin:
1. Dimensiune (sunt cele mai mici celule)
 2. Culoare (asemănată cu cerul senin, la macrofage este albastru- cenușie)
3. Nr de organite celulare (macrofagele prezintă organite celulare relativ
abundente, pe când limfocitele conține organite celulare slab reprezentate)
4. Membrana limfocitelor este lipoproteică, organizată în mozaic și acoperită
cu un strat subțire glicoproteic, pe când membrana
monocitelor prezintă numeroase vilozități, vezicule de pinocitoză și
micropinocitoză, emite pseudopode, pentru ca monocitul să se
poată deplasa în afara vasului, dar mai încet ca granulocitul, conține receptori
pentru IgG (IgG1 și IgG2)
Bilet 36
Precizați grupul de tehnici care permite identificarea rapidă a caracteristicilor unor
suprafețe ; care dintre ele permite obținerea unei imagini tridimensionale cu rezoluție de
ordinul nm.

Pentru investigarea suprafetelor, cele mai folosite metode sunt SEM (Scanning Electron
Microscopy) si SPM. SPM cuprinde un grup de tehnici care permite accesul rapid la
caracteristicile fizice ale suprafetelor prin scanarea unei suprafete cu un varf foarte
ascutit si crearea unei imagini de inalta rezolutie a
materialului studiat. AFM (micros. Cu forta atomica) este cea mai folosita tehnica a
SPM, servind pentru analiza topografica a suprafetelor, obtinandu-se imagini 3D cu
rezolutie de ordinul nm.
Bilet 37
 Aveți un pacient cu suspiciune de tumoră cerebrală. Ce tehnică veți utiliza în vederea
stabilirii protocolului terapeutic?
. Pentru stabilirea protocolului terapeutic în cazul unei tumori cerebrale, dacă
este în timpul operator, atunci se folosește tehnica de secționare a pieselor
congelate. Proba suspectă se prelucrează prin congelare și
secționare la criotom, iar rezultatul decide dacă procedura operatorie va urma un
sens radical sau unul conservator.
Biletul nr. 38
1. Prezentați comparativ etapele prelucrării secțiunilor fine și ultrafine.
a.Prelucrarea sectiunilor fine:
a.Prelucrarea sectiunilor fine:
1.Recoltarea- probe de dimensiunea 10x10x3 mm max, umectate in PBS
2.Fixarea-metode fizice- desicare t camera, desicare t scazuta-criodesicare, congelare-
substitutie, metode chimice- fixatori coagulanti si necoagulanti
3.Spalarea- cu apa curenta
4.Includerea: deshidratare 5 bai alcool concentratii crescatoare 15 minute
Indepartarea alcoolului: 3 bai de acetona 5 minute fiecare
Clarificarea- 3 bai de xilol 15 minute fiecare
Impregnare: 3 bai de parafina a cate 15 minute
Includerea: in bare Euckart
5.Fasonarea
6.Sectionare la microtom- prevede cutit metalic
7.Etalare pe lama- indirect cu bain marin si direct cu albumina Mayer
8.Colorare cu hematoxilina eozina:
a.deparafinare- 3 bai de xilol a cate 10 minute
b.hidratare: 6 bai de alcool concentratii descrescatoare
c.spalare prin scufundarea in apa distilata cate 10 secunde
d.colorarea propriu zisa: 10 minute in hematoxilina, spalare 5 minute,
diferentierea cu solutie acid alcool 30 de secunde, spalarea in apa curenta 1 minut,
contracolorarea cu eozina 5 minute
e.deshidratare
f.clarificare 5 bai de xilol
9.Montare-cu Balsam de Canada
10.Etichetare

b.Prelucrarea sectiunilor ultra-fine:

1.Recoltarea- fragmente de maxim 0,5x0,5x0,5 mm, introduse in fixator racit la 4*c ptr a
opri procesele enzimatice
2.Fixare: metoda fizica: azot lichid, metoda chimica: dubla fixare: prefixare cu
glutaraldehida2% postfixare cu solutii tampon cacodilat fosfat veronal
3.Spalarea cu solutia tampon folosita mai sus
4.Deshidratare: in cazul in care pentru includere se va folosi epon se va face cu etanol, in
cazul in care se va folosi vestopal se va face cu acetona
5.Includerea: suport pe capsule de gelatina sau capsule de polietilena
6.Fasonare doar pentru capsulele de gelatina
7.Sectionarea cu ultramicrotomul care prevede cutite de sticla/diamant
8.Etalare pe grile metalice
9.Contrastare: acetat de uranil ,acid cromic, citrat de plumb
Bilet 39
 Care sunt principalele celule implicate în coagulare ? Cum se deosebesc acestea de
eritrocite ?
Principalele celule implicate în coagulare sunt trombocitele. In comparatie cu
eritrocitele,care apar pe frotiu de forma rotunda,anucleate,uniforme ca marime si
forma cu diametrul de 7-8 micrometri,trombocitele au culoarea albastru deschis cu
mici granulatii azurofile difuze,de forma rotund ovalara.
Membrana trombocitului este lipoproteică,
acoperită de un strat de glicoproteine, care permite absorbția unor proteine
plasmatice (fibrinogen, factorul 8). Membrana eritrocitului prezintă antigeni
numiți aglutinogeni după a căror prezență sau absență se pot
identifica grupele sangvine. Citoplasma trombocitului prezintă 2 zone: hialomerul
și granulomerul, pe când în citoplasma eritrocitului se găsesc în special
macromolecule proteice structurale și protein-enzime precum și cantități mici de
lipide, vitamine și Hb.
Biletul nr. 40
1. Care din elementele sângelui periferic prezintă pe suprafața externă a membranei
receptori pentru IgE ? Ce alte caracteristici prezintă acest element?

1. Bazofilele prezintă pe suprafața externă a membranei, receptori pentru IgE.

Acestea au o formă ușor rotunjită, sunt mai mici ca eozinofilele și neutrofilele.
Nucleul apare incomplet segmentat, are forma unei frunze incomplet lobate, a
literei „S” sau de trifoi. Citoplasma este bazofilă,
conține puține organite celulare, precum și mai multe granule de formă și
dimensiuni diferite, care apar colorate metacromatic în albastru-violet închis.
Membrana este lipoproteică, acoperită de glicocalix.