1 Prelevare si transport inaintea tratamentului local sau general cu antibiotic prelevarea cu tamponul de pe amigdale (sau amigdala in cazul amigdalitei

unilaterale), de pe valul palatin si partea posterioara a faringelui. 2 tampoane: etalarea pe lama insamantare Daca insamantarea nu se realizeaza in maxim 2 ore se foloseste un mediu de transport tip Stuart sau Amies. Recomandari de realizare a examenului bacteriologic al exudatului oro- faringian
Angina acuta Medii de cultura: Geloza sange sau geloza sange cu inhibitori incubata in atmosfera cu 10% CO2 sau anaerobioza. Anaerobioza este recomandata pentru o mai buna evidentiere a -hemolizei. Evidentierea de Arcanobacterium haemolyticum (bacil Gram pozitiv coryneform) se poate realiza pe geloza sange, inse trebuie prelungita incubarea cu 24-48 ore pentru a se putea evidentia zona de -hemoliza care se formeaza in jurul coloniilor cu un aspect asemanator streptococului. Pentru H.influenzae: geloza cu sange tratat termic sau geloza chocolat imbogatita cu polivitamine, incubata in atmosfera cu 10% CO2 cu sau fara bacitracina), Angina ulcero-necrotica

Exudatul oro-faringian

Principalele obiective
Izolare de Streptococcus pyogenes (grup A) si de streptococci -hemolitici din grupele C si G. Daca angina este insotita de o iritatie cutanata: Streptococcus pyogenes si Arcanobacterium haemolyticum (mai ales la adultul tanar). In cazul anginei recidivante se analizeaza suplimentar: H. nfluenzae (S. aureus, Moraxella (Branhamella) catarrhalis (pe medii uzuale, insa creste mai repede pe geloza chocolat)

Este esentiala realizarea frotiului Se evidentiaza asociatia de fusospirochete caracteristica anginei Vincent Izolare Corynebacterium diphtheriae

Angina cu membrane false Mediu de cultura: Mediul Loffler sau Tinsdale Sunt prelevate si membranele false Candidoza orofaringiana Recoltarea se efectueaza de la nivelul limbii, palatului si fetei interne a obrajilor. Mediu de cultura: Sabouraud cu cloramfenicol sau gentamicina incubat la 30 grade C.

Izolare Candida albicans

Bilantul initial al unei boli cu transmitere sexuala Pentru N. gonorrhoeae daca nu se poate realiza imediat insamantarea este indispensabila folosirea unui mediu de transport tip Stuart sau Amies Mediu de cultura: Geloza chocolat imbogatita cu polivitamine si un inhibitor (tip VCAT) si incubata in atmosfera cu 10% CO2
Pneumonie interstitiala Flegmon amigdalian

Izolare de N. gonorrhoeae

Izolare de Chlamydia pneumoniae Examen citobacteriologic al produsului obtinut prin punctie Izolare de : S. pyrogenes, H. influenzae, S. aureus, anaerobi (Fusobacterium spp., B. fragilis, Peptostreptococcus spp.)

2 Examen direct Examenul microscopic al frotiului dupa coloratia Gram :

Exudatul oro-faringian

M. catarrhalis

Semnalizarea prezentei sau absentei leucocitelor, indicatori ai inflamatiei Evidentierea asociatiei fuso-spirochete caracteristica anginei Vincent Eventualul sumar al florei (calitativ si cantitativ) al microbiotei
M. catarrhalis Neisseria gonnorhoeae

Asocierea fuso-spirochetiana in angina Vincent

Interpretare
Corynebacterium diphteriae Streptococcus pyogenes

Angina acuta: singurul patogen recunoscut este Streptococcus pyogenes (grup A). La comunicarea analizei microoganismelor potential patogene se fac evaluari semicantitative. Nu se mentioneaza prezenta bacteriilor din microbiota comensala. Streptococcus pyogenes indiferent de cantitatea in care se regaseste, se analizeaza cel putin pentru penicilina G, eritromicina, lincomicina, tetraciclina. Se efectueaza antibiograma pentru; streptococii din grupurile C si G, cand sunt izolati in cantitati semnificative A. haemolyticum N. gonorrhoeae In celelalte cazuri realizarea antibiogramei depinde de cantitatea de microorganisme izolata. In cazul anginei recidivante - la H. influenzae si M. catarrhalis este necesara antibiograma pentru detectarea tulpinilor porducatoare de betalactamze

A. haemolyticum

EXAMENUL CITOBACTERIOLOGIC AL URINII (ECBU)

Prelevare si transport caz general- Prelevare din jetul mijlociu* *Urina din primul jet (dupa un eventual masaj prostatic) , in caz de suspiciune de infectie uretrala sau prostatica cu Mycoplasma sau Chlamydia trachomatis: punctie suprapubiana dupa dezinfectia tegumentului ; cateterism uretral permite obtinerea de urina separat din rinichiul drept sau stang , ureterostomie, recoltarea intregului volum al mictiunii dupa 3 zile de restrictie hidrica ( Mycobacterium)
Enterobacterii (mai ales E. coli, Proteus mirabilis), mai rar Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, S. saprophyticus (la tinere). + La imunodeprimati: Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Burkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia, Staphylococcus coagulazo-negativ, Corynebacterium urealyticum (vechiul grup D2), Candida spp (albicans si glabrata), mai rar: Oligella urethralis, Aerococcus urinae, Lactobacillus spp

PROBA DE URINA- REPARTIZARE STERILA IN 2 RECIPIENTE 1. CENTRIFUGARE 5 MIN, 1800RPM 2. INSAMANTARE CANTITATIVA PE MEDII DE CULTURA

SEDIMENT
EXAMENUL CITOLOGIC
calitativ Examinarea frotiurilor colorate Gram realizate permite observarea eventualelor microorganisme prezente si orientarea catre alegerea mediilor de cultura in functie de morfologia si afinitatea lor tinctoriala. cantitativ Camera de numarare stare fiziologica, urina contine sub 10 000 leucocite si 5 000 hematii per ml. Infectiei urinara =proces inflamator: >50 000 leucocite/ml >10 000 hematii/ml Celule urotepiteliale frecvente Cristale

EXAMENUL BACTERIOLOGIC = UROCULTURA

Dilutii zecimale al probei de urina / Tehnica ansei calibrate/ Metoda lamei imersate Medii de cultura: geloza singe si mediu lactozat (CLED/MacConkey fara inhibitor) sau mediu cromogen Incubare 24 ore, 37oC

EXAMENUL CITOBACTERIOLOGIC AL URINII (ECBU)

1. Interpretarea calitativa a cresterii pe medii de cultura: Crestere pe geloza singe 1 singur tip de colonii 1 singur tip de colonii 1 singur tip de colonii 2 sau mai multe tipuri de colonii + + Crestere pe mediu lactozat + Rezultat BGN, levuri CGP, corineformi Bacterii fastidioase, intracelulare, urocultura sterila Contaminare : Nu se lucreaza !!! Exceptie: pacienti cateterizati

2. INTERPRETAREA REZULTATELOR UROCULTURII

Bacteriurie <103 UFC/ml absenta infectiei Bacteriurie >105 UFC/ml posibila infectie / identificare/ antibiograma Bacteriurie 103 si 104 UFC/ml incertitudine (se repeta)

3. Interpretarea rezultatelor ECU Bacteurie Colonizare Infectie asimptomatica Infectie simptomatica + + + Piurie + + + Simptome + + Tratame nt +* + Categorii

4. Interpretarea bacterio-clinica Criterii microbiologice 10 000 L/ml 103 UFC/ml recunoscuti 10 000 L/ml 104 UFC/ml recunoscuti 10 000 L/ml 105 UFC/ml recunoscuti 10 000 L/ml 105 UFC/ml uropatogeni

Infectie urinara acuta fara complicatii la femeie Pielonefrita acuta simpla

uropatogeni

Inflamatie fara infectie

Simptome fara infectie *in unele circumstante

ITU cu risc sau complicate

uropatogeni

Bacteriurie asimptomatica (controlata prin 2 ECU)

Examenul secretiilor vaginale

1. Prelevarea si transportul produselor patologice:
uretrite: Prelevat endo-uretral cu tamponul sau raclaj uretral (Chlamydia) ulceratii ano-genitale: Recoltarea serozitatilor se va efectua de la nivelul bazei sau marginii ulceratiei cu un vaccinostil, o chiureta sau un tampon Biopsiile sau punctia ganglionului satelit se poate realiza de preferinta la cabinetul medicului sau spital Pustule: colectarea continutului cu seringa sau tamponul Recoltarea primului jet de urina uretrite cu Chlamydia Vulvo-vaginite -recoltarea cu tamponul a secretiilor din orificiul vaginal si vestibul vaginal posterior Bartolinitele - aspirarea cu seringa din canal sau prelevarea cu tamponul. Cervicite - recoltare cu tamponul din endocol si se analizeaza intotdeuna la acest nivel gonococul si Chlamydia. Endometrite - prelevat din endocol si eventual aspirarea transcervicala prin cateter . Anexite -lichidul abcesului este prelevat cu seringa si celulele tubo-peritoneale prin periere in cadrul unei interventii chirurgicale. material intra-uterin

Transportul prelevatelor
Daca prelevarile nu sunt efectuate in laborator, probele trebuiesc transportate rapid prin medii de transport adecvate( gonococ, Chlamydia, Mycoplasma, virus).
Microorganisme ale cailor genitale feminine
Microorganisme intotdeauna patogene Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis Trichomonas vaginalis Herpes virus Microorganism patogene Candida albicans Gardnerella vaginalis Mobiluncus spp Mycoplasma, Ureaplasma Staphylococcus aureus Streptococcus spp Bacterii strict anaerobe Enterobacterii Papillomavirus comensale eventual Microorganism fara patogenitate cunoscuta Lactobacillus Corynebacterium Neisseria alte decat gonorrhoeae Staphylococcus non aureus

amenul citobacteriologic direct

Ulceratii: Examen extemporaneu la microscop cu fond negru al serozitatii sancrului - Treponema pallidum (alternativ imunofluorescenta directa, impregnarea cu argint sau coloratia Vago). Coloratia May-Grundwald-Giemsa a frotiurilor realizate din serozitatile sancrului- Haemophilus ducreyi Uretrite, cervicite si vaginite: Preparat proaspat lama-lamela - Trichomonas vaginalis sau Candida albicans Coloratia Gram -diagnosticul gonoreei, al candidozei determinate de Candida albicans, si mai ales studiul microbiotei bacteriene vaginale si echilibrul sau scor de la 0 la IV (scor 0, I microbiota echilibrata, scor II, III- dezechilibru de microbiota cu lactobacili prezenti, scor IV microbiota normala complet substituita, lactobacili absenti) In vaginoza bacteriana se observa dezechilibrul florei comensale in favoarea anaerobilor sau Gardnerella vaginalis, scor 3 sau 4 Neisseria gonnorrhoeae Chlamydia trachomatis -imunofluorescenta.

Examenul secretiilor vaginale

Mobiluncus
Haemophilus ducreyi

Gardnerella vaginalis

Mobiluncus

Candida albicans

Trichomonas

Insamantarea:
Geloza cu sange tratat termic cu si fara inhibitori pentru izolarea de Neisseria gonorrhoeae incubat in atmosfera de 10% CO2 Geloza sange pentru bacterii Gram pozitive: Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus. Izolarea de Gardnerella vaginalis pe geloza cu sange uman nu are semnificatie decat daca este insotita de o apreciere semicantitativa. Geloza lactozata : izolarea diferitelor bacteria Gram negative, in particular enterobacteriile care nu sunt luate in consideratie in cazul uretritelor si vaginitelor. In cazul unei recomandari explicite: Culturi celulare pentru a se izola Chlamydia trachomatis. medii artificiale imbogatite cu ser de vita si extract de levuri pentru Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum. Geloza sange cultivata in anaerobioza pentru endometritele postpartum sau dezvoltate pe dispozitive intrauterine pentru a determina Prevotella. Medii speciale pentru micobacterii in cazul endometritelor (rare), epididimitelor cu Mycobacterium tuberculosis. Antibiograma: Se realizeaza in mod sistematic in infectiile endocervicale ale aparatului genital superior pe germenii patogeni izolati, pe tulpinile de gonococ cu determinarea producatorilor de betalactamaze. Nu se realizeaza pe bacteriile care colonizeaza in mod normal aparatul genital in special la femeie exceptie facand streptococul de grup B in cursul celui de-al treilea semestru de sarcina pentru a se preveni posibilitatea unei infectii neonatale.

Examenul coproparazitologic si coprocultura

Principalele microorganisme care determina diaree Bacterii Virusuri Protozoare Helminti Salmonella, Shigella, Campylobacter, Yersinia, EPEC, ETEC, EHEC, EIEC, Vibrio, Aeromonas, Staphylococcus, Bacillus, Clostridium Rotavirus, Adenovirus, Astrovirus, Calicivirus, Coronavirus, virusul Norwalk Entamoeba, Giardia, Isospora, Cryptosporidium, Balantidium Schistosoma, Strongyloides, Ancylostoma, Necator, Trichuris, Trichinella

Examenul microscopic direct

1. Preparate lama/lamela
Sol. Lugol- protozoare Verde malachit- helminti Orientarea diagnosticului bacteriologic: - germeni invazivi - prezenta leucocitelor (Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp.) - germeni enterotoxigeni leucocite absente (V. cholerae, Aeromonas spp., C. Difficile)

2. Frotiuri colorate Gram:

Aprecierea procentajului celor doua tipuri tinctoriale. Microbiota echilibrata este formata in majoritate de bacilli gram negativi insa sunt prezenti intotdeauna si bacilli Gram pozitivi. Orice perturbare notabila a acestui elichibru trebuie semnalata.

Insamantarea
Adult sau copil peste 2 ani: Salmonella si Shigella. mediu selectiv de izolare (geloza SS, XLD, DCL, Hektoen) mediu de imbogatire (3-6h) pentru Salmonella (bullion Mueller-Kauffmann, Selenit) Campylobacter spp. - mediu specific (Karmali, Skirrow sau Buztler). Culturile sunt incubate minim 48 ore in mediu microaerofil. Yersinia enterolitica mediu de imbogatire (mediu Rapapport), incubare 24-48 ore la +40C si repicare pe medii specific pentru Yersenia mediu Wauters (geloza SS imbogatita cu dezoxicolat) mediu Irgasan-cefsulodin si novobiocin incubate pana la 48 ore la 300C. Copil sub 2 ani EPEC- medii tip EMB sau Drigalski.

Contexte epidemico-clinice particulare:

V. cholerae - imbogatire in apa peptonata alcalina si repicare la fiecare 3 ore pe mediu gelozat specific (de ex. TCBS) Aeromonas spp pe geloza sange cu adaos de ampicilina Bolnavi aflati sub tratament cu antibiotic Clostridium difficile - punerea in evidenta a toxinei B in filtratele de scaun prin determinarea ECP pe culture celulare (fibroblaste, cellule Vero, MRC-5, Mac Coy). Citirea se face dupa 24-48 de ore. metode rapide imunoenzimatice pentru detectia rapida de toxina A sau de toxina A si B cand rezultatele se citesc in maxim 3 ore. Sindrom hemolitic uremic - Izolarea de E. coli O157 se realizeaza pe geloza MacConkey cu sorbitol, coloniile sorbitol (-) sunt agglutinate pe latex.

In toate cazurile este necesara realizarea antibiogramei mai ales pentru Salmonella, Shigella, E. coli, V. cholerae

Examenul bacteriologic al sputei

1. Recoltarea dimineata, dupa clatirea bucodentara cu apa distilata sterila, dupa un efort de tuse
2. Examenul microscopic- frotiu colorat Gram (clasificarea Bartlett, adaptata de Murray si Washington) Clasa 1 Celule Epiteliale/cimp Leucocite/cimp
1 2 >25 >25 <10 - contaminare puternica cu saliva 10-25 - contaminare puternica cu saliva

3 4

>25 10-25

>25 >25

- comtaminare redusa cu saliva - comtaminare redusa cu saliva

<10

>25

- corespunzator pentru cultivare

3. Diluarea probei cu SF si insaminatarea pe:

-Geloza chocolat imbogatita -Geloza singe -Geloza selectiva pentru bacili Gram-

4. Principalele specii implicate in etiologia pneumoniilor nosocomiale, comunitare si a suprainfectiilor bronsice:

S. pneumoniae, H. influenzae, S. aureus, M. cattarrhalis, K. pneumoniae, Alti BGN, P. aeruginosa. Burkholderia caepacia

5. Antibiograma pentru speciile care depasesc cantitativ pragul de >=107UFC/ml

Pneumonii comunitare S. pneumoniae H. influenzae S. aureus M. catharallis nosocomiale

Suprainfectii bronsice

Mucoviscidoza

K. pneumoniae
Alti BGN P. aeruginosa Burkholderia caepacia Micobacterii Chalamydia pneumoniae Mycoplasma Legionella Coxiella Anaerobi Candida Aspergillus

Metoda disc difuzimetrica CLSI, 2009

Testarea sensibilitatii la antibiotice

Determinarea valorii CMI E-test confirmarea unui mecanism de rezistenta -E-TEST ESBL (CGIII/CgIII+ Inhib.) --E-TEST Metalobetalactamaze (IMP/IMP+EDTA) -E-test vancomicina Metoda microdilutiilor -sol. stoc de antibiotic cf. CLSI -Suspensie batceriana 0.5 McFarland -Placi cu 96 de godeuri -MH lichid (200 ul)- dilutii binare de antibiotic - Martor +, Martor -

Prepararea inoculului Ser fiziologic steril 0.5 MacFarland

Insamintarea inoculului Mediu Muller Hinton (4mm) Mediu MH cu singe (streptococi) MH singe chocolat (Haemophylus) Tehnica insamintarii in pinza cu tamponul Depunerea discurilor Pensa Dispencer 3 cm intre centrul discurilor, 1.5 cm de marginea placii Preincubare- 20 min, temp. camerei Incubare- 18-24 h, 37oC

Incubare- 18-24 h, 37oC Citire si interpretareMartor- = mediu clar Martor _= mediu tulbure Primele godeuri- mediu clar, absenta cresterii microbiene Ultimele godeuri- mediu tulbure, crestere microbiana CMI- ultimul godeu la care se observa inhibarea cresterii microbiene

Citirea si interpretarea rezultatelor: -Masurarea diametrului zonei de inhibitie -Consultare tabele CLSI, convertire in R, I, S Interpretarea fenotipica amecanismelor de rezistenta: -Antagonism IMP, AMC si peniciline sau cefalosporine- betalactamaza inductibila -Sinergism AMC si peniciline, cefalosporine gen. I, II betalactamaza sensibila la inhibitori -Sinergism AMC si cefalosporine gen. III, IV- betalactamaza de spectru larg (ESBL) -Antagonism Ery si Cli (fenotip MLSb inductibil)