Membrana celular

1
 Microscopie
La M.O. membrana celulara nu este
vizibil deoarece grosimea sa , de
ordinul zecilor de nm , este sub limita
de rezolutie a acestuia.
Examinate la M.E. cu o mrire de
ordinul zecilor de mii , celula apare
delimitat de o linie intunecat
subire, continu.
2
3
 Ultrastructur
Plasmalema
Glicocalix
Schelet asociat membranei

4
5
 PLASMALEMA
La mriri de peste 50000 de ori, membrana celulara
are o structura trilaminar , fiind alcatuit din dou
benzi ntunecate si una clar , care le separ. Acest
aspect trilaminat este clasic denumit PLASMALEMA
substrat molecular: bistratul lipidic i proteinele
asociate acestuia.
Cele dou benzi electronodense ale plasmalemei se
evideniaz datorit contrastrii cu CITRAT DE
PLUMB, care se leag de gruprile fosfat ale
fosfolipidelor.

6
 GLICOCALIX
Pe versantul extern al plasmalemei exist o
reea de filamente fine , ramificate ce
alctuiesc GLICOCALIXUL sau
GLICOLEMA
substrat molecular: lan uri de oligozaharide.

7
 CITOSCHELETUL ASOCIAT
MEMBRANEI
reea alcatuit din microfilamente orientate
neregulat, anastomozate ntre ele
alcatuire proteic. Prin reeaua de proteine
care l formeaz, citoscheletul este ancorat
la plasmalem i se continu spre interiorul
celulei cu CITOSCHELETUL ASOCIAT
MaTRICEI

8
 MODALITATI DE STUDIERE A
MEMBRANEI CELULARE

1. STUDIUL ULTRASTRUCTURAL
GENERAL
a. Microscopie electronic de transmisie
i. Pe seciuni
ii. Pe preparate de ngheare- fracturare
b. Microscopie electronic de baleiaj

9
 TEHNICA DE
INGHETARE FRACTURARE
Fracturare la nivelul poriunii hidrofobe a
bistratului lipidic membranar.
Se pot studia feele interne ale celor dou
straturi lipidice ale membranei : fa a extern
E si cea intern P
Proteinele membranare sunt mai bogate pe
fata P fiind ancorate de citoschelet.

10
Inghetare C u tit

- fracturare
F a ta P

F a ta E

F a ta P F a ra E

S e re a liz e a z a o
re p lic a in C s i P t F a t a e x te rn a

F e te d e
fra c tu ra

F a ta 11
c ito p la s m a tic a
 STUDII SPECIFICE
Citochimie ultrastructural
trasori electronodensi cu
i. Feritina
ii. Peroxidaza de hrean
iii. Citocrom c ( hempeptizi)
iv. Aur coloidal

12
 Metode biochimice

i. Marcare pe celule intacte

1. radioactiv
2. pentru interaciuni afine ( n sistem
haptene/anticorp sau biotina/avidina )

ii. Separare de fraciuni purificate de membrane

13
 Metode biochimice
Haptenele sunt molecule mici , care inserate
pe un lan polipeptidic devin puternic
imunogene. mpotriva lor se pot astfel ridica
anticorpi. Ei se pot utiliza apoi in
cromatografia de afinitate pentru purificarea
proteinelor de membrana pe care a fost
inserat haptena.

14
 Metode biochimice
Sistemul biotin/avidin are la baza afinitatea
deosebit a avidinei, o protein , fa de
biotin. Aceast interaciune specific este
utilizat n separarea biochimic prin afinitate
a unor proteine de membran pe care s-a
inserat biotina. Acest sistem este folosit i n
studii citochimice folosind trasori
electronodeni cu avidin.

15
 STUDIUL CITOCHIMIC AL
LIPIDELOR
a. FILIPINA pentru colesterol, form nd agregate
care dezorganizeaz membrana i se observ
la M.E.
b. POLIMIXINA B pentru fosfolipidele anionice-
PS i PI .
se poate evidentia distribu ia asimetric a
lipidelor n cele dou straturi ale bistratului
lipidic:
1. colesterolul este distribuit preferential pe fata E
2. fosfolipidele pe fata P
16
 STUDIUL BIOCHIMIC AL
LIPIDELOR
- dup fracionarea membranelor i
extragerea lipidelor
a. Cromatografie n strat subire
b. Cromatografie n faz lichid de nalt
performan ( HPLC)
i. Cu faze normale clase de lipide
ii. Cu faze inversate tipuri de lipide dintr-
o clas
c. Cromatografie in faz gazoas
17
 STUDIUL PROTEINELOR
- prin citochimie
a. liganzi marcai cu feritin , peroxidaz de hrean
etc. pentru receptori
b. anticorpi marcai pentru orice protein

- metodele biochimice
a. electroforeza n una sau dou dimensiuni
b. cromatografie n faz lichid clasic i /sau de
nalt performan
i. gel-filtrare
ii. schimb ionic
iii. prin afinitate 18
 STUDIUL COMPONENTEI
GLUCIDICE
LECTINELE sunt proteine sau glicoproteine ce
interacioneaz specific cu anumite secvene
glucidice, au cel puin dou situsuri de interaciune
identice i nu sunt de origine imun
se folosesc fie prin marcarea direct radioactiv
sau prin compui electronodeni
- n citochimie
a. lectine marcate
b. lectina + glicoproteina marcat
c. (endo)glicozidaze + citochimie cu lectine
19
 STUDIUL COMPONENTEI
GLUCIDICE
Cele mai cunoscute lectine sunt
a. Concanavalina A care leaga specific structuri ce
conin manoz sau glucoz
b. lectina din germeni de gru care recunoate
anumite tipuri de acizi sialici
c. lectina din arahide care recunoaste galactoza
terminal
- tehnici biochimice
a. cromatografie de afinitate (pentru glicoproteine)
b. cromatografie n strat subire (pentru glicolipide)-
dup fracionare i separarea lipidelor
20
 MODELUL MOZAIC FLUID
Membrana celulara este o structura fluida
alcatuita din proteine , lipide si glucide.
lipidele alcatuiesc un bistrat continuu,
proteinele sunt dispuse in mozaic fiind
ataate de o parte i de alta a bistratului
lipidic sau ptrund n acesta, strbtndu-l
glucidele sunt situate pe versantul extern al
membranei si sunt oligozaharide ata ate la
proteine sau lipide.

21
22
 JONCTIUNI CELULARE
Structuri membranare cu rol n adezivitatea
celulelor n cadrul unui esut
Observabile doar la MET

Clasificare
Simple
Speciale
spaii intercelulare
strnse
denticulare

digitiforme
de ataare
de
comunicare
23
 Jonciuni speciale - zonula
occludens
Jonciunea strns =
zonula occludens
ME: nchiderea

spaiului intercelular,
prin apoziia
membranelor a 2 celule
adiacente

24
 Jonciuni speciale - Desmozomii
2 tipuri:
Desmozomi n band

(zonula adherens)
Desmozomi n spot

(macula adherens)

ME: condensare
membranar care prezint
pe versantul citoplasmatic
placa desmozomal
25
 Jonciuni speciale
-Hemidesmozomii
Implicai n ME: componenta celular
adeziunea celul- are acelai aspect ca
matrice extracelular desmozomii, dar
localizarea difer la
polul bazal al celulei

26
 Complexul joncional

Succesiunea de la polul
apical spre cel bazal a
urmtoarelor tipuri de
jonciuni:
Jonciunea strns

Zonula adherens

Macula adherens

27
Jonciuni speciale de comunicare
= jonciuni gap
2 membrane alturate strbatute de canale
hidrofile = conexoni

28