Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Enzime
Enzime
OBIECTIVELE:
Natura chimică şi rolul biologic al enzimelor. Dovezile naturii
proteice a enzimelor. Diferenţa dintre acţiunea enzimelor şi
catalizatorilor nebiologici.
Structura enzimelor. Proenzimele (zimogenii). Noţiune despre
centrul activ şi centrul alosteric al enzimelor.
Izoenzimele şi rolul lor.
Cofactorii enzimelor. Coenzimele şi ionii metalici. Funcţiile de
coenzime a vitaminelor şi microelementelor.
Natura chimică (structura) vitaminelor B1, B2, B6, PP şi rolul lor
ca coenzime.
Mecanismul de acţiune al enzimelor. Centrul activ al enzimelor şi
rolul lui în formarea şi transformarea complecşilor intermediari
dintre enzimă şi substrat. Rolul modificărilor conformaţionale
reciproce ale moleculei enzimei şi substratului la favorizarea
catalizei (reacţiei).
Nomenclatura (denumirea) şi clasificarea enzimelor. Caracteristica
generală a claselor şi subclaselor principale de enzime. Numărul de
cod al enzimei.
ENZIMĂ – de la grecescul
“EN ZYME”- în drojdii
Enzimodiagnostica Enzimoterapia
- este determinarea - este utilizarea E,
activitătii E, extrase şi purificate sau
care se pot modifica în sintetizate în laborator,
diferite patologii cu în tratamentul
scop de diagnoză. diferitor patologii.
Natura chimică a E
E- sunt proteine şi posedă toate proprietăţile
fizico-chimice specifice acestor molecule (solubilitate,
proprietăţi osmotice, sarcină electrică netă, denaturare
termică)
Dovezile experimentale:
1. Sunt alcătuite din AA
2. Prezintă macromolecule
3. În apă formează sol. coloidale cu propriet. sale
specifice
4. Prezintă electroliţi amfoliţi
5. Se supun denaturării
6. Au fost sintetizate în condiţii de laborator din AA
(ribonucleaza, lizozima)
Asemănările E cu catalizatorii
neorganici
1. catalizează numai reacţiile posibile
din punct de vedere energetic
2. nu modifică echilibrul reacţiilor
reversibile
3. nu modifică direcţia reacţiei
4. nu se consumă în procesul
reacţiilor.
Deosebirile E de catalizatorii
neorganici
1. Viteza catalizei enzimatice este cu mult mai
mare decât a celei nebiologice (1 mg de Fe în
componenţa catalazei poate înlocui o tonă de Fe
metalic).
2. E posedă specificitate înaltă.
3. E catalizează reacţiile chimice în condiţii blânde
(presiunea obişnuită, temperatura 37C, pH
aproape neutru).
4. E catalizează reacţiile fără formarea produselor
intermediare – randamentul este de 100%
5. Activitatea E, de aici şi reacţiile enzimatice se
reglează.
6. Viteza reacţiilor este direct proporţională cu
cantitatea E.
Structura enzimelor
Masa moleculară a E e de mii de ori mai mare decât
masa moleculară a substratului (S)
S - substanţa asupra căreia acţionează E
E acţionează nu cu toată molecula dar cu un anumit
sector – denumit centrul activ (CA)
CA - locul care asigură interacţiunea E cu S şi
transformarea ulterioară a acestuia.
Particularităţile CA
1. Este o combinare unicală în spaţiu şi în timp a anumitor
resturi de AA
2. E o structură tridimensională (AA aflaţi în locuri diferite)
3. Are formă de adâncitură sau cavitate, căptuşită cu AA
hidrofobi,unde nu-i acces de apă (ex. când apa este un
reagent al reacţiei)
4. Ocupă o parte relativ mică din volumul E şi majoritatea
resturilor de AA în molecula E nu contactează cu S
5. S relativ slab se leagă cu E
6. CA este alcătuit din 2 sectoare:
Sectorul de contact (de legare)
Sectorul catalitic
Centrul alosteric
Unele E posedă şi un alt centru (sau alte centre) decît
cel activ – centru alosteric (allo stereos –alt loc)
C alos - are o poziţie spaţială pentru fixarea
metabolitului reglator, numit efector sau modulator
Modulatorii se fixează necovalent şi pot fi: activatori
sau inhibitori
E cu centrul alos – se numesc E alosterice sau
reglatoare
La fixarea modulatorului, E alos îşi modifică
conformaţia. Modulatorii accelerează sau inhibă
utilizarea S de enzima respectivă.
Enzime alosterice
Moleculele enzimelor alosterice sunt mai mari, mai
complexe şi sunt oligomere pare
Au cinetica lor – viteza reacţiilor în dependenţă de c%
S are formă sigmoidală, dar nu hiperbolică, cauzată de
urmările interacţiunii între protomerii ce leagă S în
mod cooperativ
Sunt 2 tipuri de E alosterice
1. Homotrope - modulatorul şi S constituie aceeaşi
substanţă Acumularea S activează v reacţiei catalizate
de această E (ex: alcoolul activează alcoolDH, E ce îl
scindează)
2. Heterotrope - modulatorul se deosebeşte după
structură de S.
Cofactorii enzimelor
Deosebim:
1. E simple – alcătuite numai din AA
2. E conjugate - sunt formate din:
a. partea proteică - apoenzimă
b. partea neproteică - cofactor.
Cofactori – molecule (sau ioni) mici, mai stabili la acţiune
decât apoE (gr prostetică, Co; ioni metalici)
Cofactorul strâns legat în structura E – grupare
prostetică
Cofactorul slab legat, uşor disociabil – coenzimă
În calitate de cofactori apar frecvent cationii unor
metale şi, foarte rar, unii anioni
Rolul Co
1. stabilizează conformaţia activă a moleculei
2. Prezintă veriga de legătură între S şi CA prin
leg. coordinative
3. Co pot îndeplini actul de cataliză
-catalizează scindări de
legături covalente cu
adiţionarea apei ;
Temperatura
PH
Concentraţia S
Concentraţia E
electroliţii
Termolabilitatea (t°)
E – sunt termolabile
t optimă a majorităţii E se află în
limitele 20- 40 grade
odată cu creşterea t cu 10 grade
(dacă luăm punctul de plecare 0
grade) - V reacţiei enzimatice
sporeşte de 1,5 ori, atingând max la
t 40grade.
Majorarea de mai departe duce la
micşorarea activităţii enzimatice
ceea ce mărturiseşte despre
denaturarea proteinei. La 100 grade
toate E organismului sunt inactive.
Unele E a microorganismelor
termofile sunt active la t de 80
grade.
La t joase E se inactivează
(excepţii: catalaza: activitate max la
t=0 grade)
Termolabilitatea (t°)
Creşterea vitezei reacţiei odată
cu creşterea t° este înterpretată prin
prisma "energiei de activare".
Pentru fiecare E se poate stabili o
t° optimă la care V atinge valoarea
max, mai departe V scade din
cauza denaturării.
Acţiunea pH asupra activităţii enzimatice
Fiecare E are un pH optim propriu la care îşi
manifestă activitatea maximală.
Majoritatea E celulare au pH-ul optim- 7,4
(excepţii: hidrolazele acide lizozomale pH= 5;
monoaminooxidaza din membrana mitocondrială
externa pH= 10).
La E digestive pH-lui optim este cel al sediului lor
de acţiune:
Pepsina – pH 1,5 – 2,
Amilaza pancreatică - pH 6,4-7,2,
Tripsina - pH 7,8
Arginaza- pH 9,5-10 etc.
In CA al E se află grupări ionizabile, acide sau
bazice. Acestea interacţionează direct cu ionii H+ si
OH-, rezultatul fiind creşterea sau scăderea gradului
lor de disociere
Dependenţa activităţii E de variaţia pH-ului este
deseori descrisă de o curbă în forma de clopot.
Deci mărind sau micşorind pH-ul mediului, se poate
regla activitatea catalitica a E.
pH optim e dependent de: gradul de ionizare a
grupelor functionale, afinităţii E faţă de S, stabilităţii
E.
De [E] – în condiţii standard 2 mol
de E într-o anumită perioadă de
timp vor transforma de 2 ori mai
multe molecule decît 1 mol de E
(relaţie direct proporţională).
De [S] – în perioada iniţială a
reacţiei V creşte pe măsură ce
creşte [S]. La un moment dat cînd
CA al E se ocupă de S – V nu mai
creşte. Ea rămîne constantă şi
corespunde V max a reacţiei.
Specificitatea