DIAGNOSTICUL DE

LABORATOR
ÎN INFLUENŢE

- teste rapide de teren

- teste de laborator: virusologice, serologice, PCR
 Testele rapide de teren
- Utilizate în influenţa aviară - orientative
- Evidenţiază antigenul viral în fecalele păsărilor
- Testul imunocromatografic:
- identifică subtipul H5
- cu anticorpi monoclonali
- detector MoAb
- RapiGEN AIV Ag. Test
- probe de fecale recoltate cu tampoane din
cloacă
- reacţie pozitivă - două benzi roşii (pe linia de
control-C şi pe linia testului-T)
- reacţia negativă – o bandă roşie pe linia de
control (C)
 Examenele de laborator

-Confirmă boala
-Identifică virusul
-Testează patogenitatea
-Examenele efectuate:
-virusologic
-serologic
 Examenul virusologic

1. Materialele patologice utilizate:

-păsări: tampoane cloacale şi traheale,

pulmoni, saci aerieni, intestin, splină,
rinichi, ficat, creier şi cord.

-porci: tampoane nazale, trahee, pulmoni,

limfonoduri

-cal: tampoane nazale, trahee, pulmoni,

limfonoduri
2. Izolarea virusului:
-pe ouă embrionate SPF de găină
-inoculare intraalantoidiană
-embrioni de 9-11 zile
-5 embrioni pentru fiecare probă
-utilizată în influenţa
aviară , influenţa
porcului şi influenţa
calului
3. Identificarea virusurilor izolate:
-identificarea Influenzavirus A aviar:
-reacţia de hemaglutinare(virus
hemaglutinant în lichidul alantoidian)
-reacţia de ID(antigenele specifice: NP-
nucleoproteina, M-proteinele M)
-testul ELISA cu anticorpi monoclonali
(antigenele specifice NP-nucleoproteina)
-reacţia de inhibare a hemaglutinării:
-identificarea finală
-identifică hemaglutininele (H1-H15)
-inhibarea neuraminidazei(N1-N9)
-reacţia de RT-PCR(subtipurile H5 şi H7)
-identificarea Influenza virus A ecvin şi suin:
-reacţia de inhibare a hemaglutinării:
-identificarea finală
-identifică hemaglutininele (H1-H15)
3. Testarea patogenităţii:
-obligatorie pentru tulpinile de Influenza virus
aviar
-testul de virulenţă “in vivo”
-pui SPF de găină de 6 săptămâni
-inoculaţi intravenos
-stabileşte indicele de patogenitate
intravenoasă (IPV)
-mai mare de 1,2 – tulpini HPAI
-criteriul antigenic:
-bazat pe reacţia de inhibare a hemaglutinării
-tulpinile cu hemaglutininele H5 şi H7 produc
forme grave de boală
-metoda RT-PCR identifică nucleotidele
situsurilor de clivare a genei HA pentru H 5 şi H7
4. Identificarea directă a Influenza virusurilor
aviare, suine şi ecvine în materialul patologic
-reacţia IF
-testul ELISA
-reacţia PCR
 Examenul serologic

-Pune în evidenţă prezenţa anticorpilor

postinfecţioşi în sângele animalelor
-Se lucrează pe seruri perechi - evidenţierea
seroconversiei
Influenţa aviară: -IHA, ELISA, ID, inhibarea
neuraminidazei
-utilizat în epidemiosupraveghere
-utilizat în strategia DIVA(diferenţierea
păsărilor vaccinate de cele infectate)
Influenţa porcului: IHA
Influenţa calului: IHA, VN, ELISA, RFC
 Reacţia de inhibare a hemaglutinării (IHA)
Materiale: - antigen viral
- ser martor pozitiv
- ser martor negativ
- eritrocite de pui 0,5% în TFSt
- tampon fosfat salin (TFS) pH = 7,2
- plăci
- dilutoare
Etapele reacţiei:

I. titrarea antigenului: - stabilirea unităţilor

hemaglutinante
aspectul reacţiei de hemaglutinare lentă pentru determinarea UH

1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256

Diluţiile antigenului
III. Citirea reacţiei – după 40 – 60 min. la
temperatura camerei
- martorul pentru eritrocite – lipseşte
hemaglutinarea
- martorul pentru ser - lipseşte hemaglutinarea
- martorul pentru antigen – hemaglutinare la
diluţiile 1/2, 1/4, 1/8, 1/16
- serurile de cercetat – titrurile IHA sunt
reprezentate de diluţia cea mai mare care inhibă
hemaglutinarea, înmulţite cu numărul de UH
Ex. TIH = 160 x 10 = 1600
 Testul imunoenzimatic (ELISA)

Utilizat în:
-epidemiosupraveghere (evidenţiază
anticorpii postinfecţioşi)
-strategia DIVA (diferenţierea păsărilor
vaccinate de cele infectate)
-identificarea nucleoproteinei virale
(comună Influenza virusurilor A)

Kituri comerciale.