Laboratorul de analize medicale

Exemplar
nr.

PROCEDURA SPECIFICA
PS-10

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER

(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

PROCEDURA SPECIFICA

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER (H. PYLORI, Ag.HBs, HCV, HIV)

Prezenta procedur este proprietatea exclusiv a SC LASERMED MEDICAL SERVICES SRL.

Difuzarea ctre alte laboratoare se face numai cu acordul scris al Directorului General.
Documentul se afl sub incidena Legii nr.8/1996 referitoare la drepturile de autor.

Elaborat
Nume :
Funcia :
Data :

Verificat

Aprobat

STEFAN ROXANA

PATRINICHI BOGDAN

NICULAE BOGDAN

RAC

MEDIC SEF

DIRECTOR
GENERAL

04.11.2009

04.11.2009

04.11.2009

Semnatura :

Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES

srl

Page 1 / 10

EDIIA 1 / REVIZIA 0

Laboratorul de analize medicale

PROCEDURA SPECIFICA
DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER
(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

PS-10

Exemplar
nr.
1

LISTA DE DIFUZARE
Nume i
prenume

Funcia

Biol.Stefan
Roxana

RAC

Dr.Niculae
Bogdan

Director
general

RENAR

Evaluator
sef

Exemplar nr.:
Ediie:
Revizie:

Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES

srl

Semntura i data de primire i retragere

A reviziei / ediiei
A reviziei /
aplicabile
ediiei retrase

1
1
0
2
1
0
3
1
0

Page 2 / 10

EDIIA 1 / REVIZIA 0

Laboratorul de analize medicale

Exemplar
nr.

PROCEDURA SPECIFICA
PS-10

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER

(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

INDICATORUL EDITIILOR SI REVIZIILOR

Revizia /
Data aplicrii

Nr. Capitol /
Subcapitol i al
paginii revizuite

Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES

srl

Capitol /Subcapitol:

modificat
adaugat
suprimat

Page 3 / 10

Funcia
Elaborat

Verificat

Aprobat

EDIIA 1 / REVIZIA 0

Laboratorul de analize medicale

PROCEDURA SPECIFICA
PS-10

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER

(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

Exemplar
nr.
1

CUPRINS

1.

CUPRINS

2.

SCOP

3.

DOMENIU DE APLICARE

4.

DOCUMENTE DE REFERINTA

5.

DEFINITII SI ABREVIERI

6.

DESCRIEREA PROCEDURII

7.

RESPONSABILITATI

8.

INREGISTRARI SI ANEXE

Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES

srl

Page 4 / 10

EDIIA 1 / REVIZIA 0

Laboratorul de analize medicale

PROCEDURA SPECIFICA
PS-10

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER

(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

Exemplar
nr.
1

1.

SCOP
Scopul acestei proceduri este de a preciza modul de lucru pentru
determinarea calitativa a H. PYLORI, Ag.HBs, HCV, HIV i de a preciza importantele
responsabiliti pentru a asigura calitatea rezultatelor.
2.

DOMENIUL DE APLICARE

Procedura se adreseaza responsabililor de analiza din laboratorul de analize

medicale LASERMED MEDICAL SERVICES, care efectueaza testarea parametrilor de
mai sus.
3.
DOCUMENTE DE REFERINTA
3.1.SR EN ISO 15189:2005 Laboratoare medicale.Cerine particulare pentru calitate i
competen
3.3.SR ISO 15190: 2005Laboratoare medicale.Cerine pentru securitate
3.4.SR EN ISO 9000:2006 Sisteme de management al calitii. Principii fundamentale
i vocabular.
3.5. Virusologie medicala, Costin Cernescu, Editura medicala, Bucuresti 2003
3.6.Manual of Clinical Microbiology,American Society for Microbiology,P.R.Murray 1999
3.7.Clinical Laboratory Diagnostics,Use and Assesment of Clinical Laboratory
Result,Lothar Thomas,1998
3.8. Prospectele reactivilor
3.9.Instructiune de lucru-determinari imunologice in ser (H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV) ILPS10-01
3.10.Cartea tehnica si instructiunile de utilizare ale centrifugii IL-PS01A-02
3.11.Manual recoltare probe primare MRP-01
4. DEFINITII SI ABREVIERI
4.1 DEFINITII
4.1.1. Definitiile termenilor utilizati in procedura sunt cele din standardul SR EN ISO
9000/2006 "Sisteme de management al calitatii". Principii fundamentale si vocabular
Kit cutie cu reactivi i accesorii
4.2. ABREVIERI
H. Pylori = Helicobacter Pylori
AgHBs = antigen HBs, antigen de suprafata al VHB
VHC = virusul hepatitei C = HCV
HIV = human immunodeficiency virus = virusul imunodeficientei umane
Ag = antigen
Ac=anticorp
5.DESCRIEREA PROCEDURII
5.1 Echipamente utilizate :
Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES
srl

Page 5 / 10

EDIIA 1 / REVIZIA 0

Laboratorul de analize medicale

PROCEDURA SPECIFICA
PS-10

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER

(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

Exemplar
nr.
1

Teste de detectie sub forma de casete

Diluent (continut de unele Kit-uri)
Pipete automate (5-50l,20-200l)
Centrifuga ELEKTRO MAG seria 07080913
Tipul recipientului si al aditivilor
- se recolteaza sangele in recipiente vidate fara anticoagulant(dop rosu)

5.2 Principiu :
5.2.1. Ag HBs este un test imunocromatografic destinat determinarii calitative a AgHBs
din ser sau plasma umana. Caseta contine o membrana impregnata cu Ac monoclonali
HBs in zona de test (T). Dupa pipetare, serul reactioneaza cu particolele invelite cu
anticorpi anti-HBsAg. Amestecul format migreaza de-a lungul membranei prin capilaritate,
determinand aparitia unei linii colorate, a carei prezenta indica un rezultat pozitiv. O a doua
linie colorata va aparea in zona de control (C), pentru a valida testul.
Senzitivitatea relativa a testului este >99%.
Specificitatea relativa a testului este >99%.
Acuratetea testului >99%
5.2.2. HCV este un test rapid imunocromatografic, pentru determinarea calitativa a Ac
HCV in ser sau plasma. Caseta de test contine o membrana impregnata cu Ag HCV. Serul
de pacient va migra prin capilaritate de-a lungul membranei, acoperind cele doua zone,
test (T), respectiv control (C), reactionand cu antigenul care o inveleste. Daca testul este
pozitiv, in zona T va aparea o linie colorata.In caz contrar testul este negativ. Validitatea
testului este data de aparitia unei linii colorate in dreptul zonei C.
Senzitivitatea relativa a testului este >96,8%.
Specificitatea relativa a testului este >99,0%.
Acuratetea testului >98,9%
5.2.3. HIV test este un test rapid, calitativ, bazat pe un sistem dublu antigenic de
determinare a anticorpilor anti-HIV1/2 in ser sau plasma. Daca proba de testat contine Ac
anti-HIV1/2, in dreptul zonei de test va aparea o linie colorata care va indica un rezultat
pozitiv in caz contrar testul este negativ.
Senzitivitatea relativa a testului este >99,0%.
Specificitatea relativa a testului este >99,0%.
Exista doua tipuri de HIV, fiecare cu mai multe subtipuri, diferentiate pe zone geografice:
HIV-1
mai virulent;
responsabil de epidemia globala actuala;
severitatea infectiei variaza de la o persoana la alta;

Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES

srl

Page 6 / 10

EDIIA 1 / REVIZIA 0

Laboratorul de analize medicale

PROCEDURA SPECIFICA
PS-10

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER

(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

Exemplar
nr.
1

HIV-2
descoperit initial in vestul Africii;
transmiterea nu este atat de eficienta ca in cazul HIV-1;
genomul sau este mai inrudit cu genomul SIV decat in cazul HIV-1.
HIV se transmite prin sange contaminat si derivate de sange, prin contact sexual si de la
mama infectata la copil, in timpul si dupa nastere. Principalele grupe de risc sunt:
homosexualii, hemofilicii si primitorii de sange, prostituatele, toxicomanii care folosesc
droguri injectabile, personalul medico-sanitar3.
In ceea ce priveste infectia neonatala, 40% dintre sugarii nascuti de mame infectate
dobandesc infectia HIV si 30% dintre sugarii infectati sunt pozitivi la nastere (ARN-HIV
prezent), element ce sugereaza infectie in utero, in timp ce 75% sunt HIV-negativi la
nastere, dar pozitivi dupa 7 zile, ceea ce sugereaza infectie intrapartum. >90% dintre
sugarii infectati sunt HIV-pozitivi la 14 zile4.
Depistarea gravidelor HIV-pozitive este esentiala pentru prevenirea transmiterii infectiei la
fat. ACTG 076 a fost primul studiu clinic care a demonstrat eficienta terapiei antiretrovirale
in prevenirea transmiterii verticale a infectiei. Astfel administrarea orala de zidovudin (AZT)
in saptamanile 14-34 de sarcina, urmata de administrarea intravenoasa de AZT in cursul
travaliului reduce rata de transmitere a infectiei cu 67%1.
Evolutia infectiei HIV se desfasoara in decurs de cel mult 10 ani, finalul survenind prin
SIDA, al carui sfarsit letal se consuma in cateva luni sau ani de la debutul bolii4.
Productia de anticorpi este detectabila dupa 4-12 saptamani de la infectie si dureaza toata
viata3.
5.2.4.H. Pylori este un test rapid imunocromatografic, pentru determinarea calitativa a Ac
anti-Helicobacter pylori IgG specifici in ser , plasma,sange integral. Caseta de test contine
o membrana impregnata cu particule tapetate cu Ag Helicobacter pylori si Ac IgG. In acest
test Ac IgG sunt imobilizati in regiunea de testare a casetei.Dupa adaugarea probei in
godeu reactioneaza cu particulele acoperite cu Ag.Acest amestec migreaza si
interactioneaza cu Ac imobilizati.Daca proba contine Ac H.pylori,va aparea o linie colorata
in regiunea T indicand un rezultat pozitiv.Daca aceasta linie colorata nu apare,testul este
negativ.Pentru a servi drept control,o linie colorata va aparea intotdeauna in regiunea C
indicand faptul ca a fost adaugata suficienta proba.
Senzitivitatea relativa a testului este >93%.
Specificitatea relativa a testului este >89,2%.
Acuratetea testului >90,7%
Probele de ser de la pacienti infectati cu C.jejuni pot produce o reactivitate incrucisata
scazuta in acest test.
Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES
srl

Page 7 / 10

EDIIA 1 / REVIZIA 0

Laboratorul de analize medicale

PROCEDURA SPECIFICA
PS-10

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER

(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

Exemplar
nr.
1

5.3 Masuri de protectie a personalului

purtarea echipamentului de protectie
stativul sa se manevreze cu atentie, fiind plasat pe o suprafata orizontala in
imediata vecinatate a zonei de lucru.
spalarea pe maini
respectarea precautiunilor standard si a instructiunilor privind securitatea
muncii
5.4 Primirea si verificarea vacutainerului
Prelevarea probei de sange se face in sala aferenta recoltarii, sau la nivelul altor
unitati sanitare. Proba de sange recoltata pe vacuteiner este receptionata, de laboratorul
de analize medicale LASERMED MEDICAL SERVICES, unde este preluata de
responsabilul de analiza, care verifica daca corespunde ID-ului inscriptionat pe fisa de
lucru.
5.5. Mod de lucru:
5.5.1. Pregatirea probelor :
Se utilizeaza ser,plasma proaspat obtinute prin centrifugarea sangelui.
Serul sau plasma se separa cat mai repede posibil de cheag/celulele sanguine.
Serul poate fi tinut la 2-8C pentru 48 ore inainte de a fi lucrat.
Pentru o perioada mai lunga de timp serul trebuie congelat.
Serul se aduce la temperatura camerei;serurile congelate se lasa la desghetat si se
omogenizeaza bine inainte de testare.Serul o data dezghetat nu se mai ingheata;a
nu se utiliza congelator cu auto-dezghetare.
Serul hemolizat, lipemic sau contaminat nu se lucreaza si e preferabil de a se
efectua daca este posibil o noua recoltare.
5.5.2. Metoda de lucru:
Se aduc reactivii la temperatura camerei
Se scoate caseta din ambalaj si se foloseste imediat;
Se pune caseta pe un plan drept si curat;
Se tine pipeta vertical si se transfera cantitatea de ser sau plasma indicata in
prospect in fereastra S a casetei;
Se adauga diluentul(atunci cand e necesar)
Se citeste rezultatul dupa expirarea timpului de expunere prevazut in prospectul
lotului
5.6.Opinii si Interpretari:
Pozitiv, cand apar doua linii colorate, una in dreptul regiunii test (T), a doua in
dreptul regiunii de control (C).
Intensitatea culorii benzii de test depinde de concentratia in serul sau plasma
pacientului antigenilor, respectiv a anticorpilor in sange.
Negativ, cand singura linie care apare este in dreptul regiunii de control (C)
Invalid, cand linia de control nu apare. Semnifica un volum de proba insuficient
sau nerespectarea procedurii de lucru.

Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES

srl

Page 8 / 10

EDIIA 1 / REVIZIA 0

Laboratorul de analize medicale

PROCEDURA SPECIFICA
PS-10

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER

(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

Exemplar
nr.
1

5.7. Transmiterea rezultatelor, modul lor de exprimare si pastrarea datelor

Rezultatele sunt apoi transcrise de catre responsabilul de analiza pe fisa de lucru
de unde este inregistrat in calculator de catre operator calculator.
Rezultatele sunt confirmate prin semnatura medicului sef de laborator
Buletinul de analize al fiecarui pacient in parte este validat de medicul sef de laborator
5.8. Aprovizionarea cu reactivi
Responsabilul de analiza are responsabilitatea de a alege tipul reactivului cu care se
lucreaza. Comandarea necesarului de reactiv se face prin inscriere in registrul de comenzi..
Atunci cand este necesar se solicita opinia sefului de laborator. Stabilirea tipului de reactiv cu
care se lucreaza este documentata de o analiza care nu este neaparat scriptica cantitatea
utilizata pentru o determinare, stabilitatea reactivului, pierderi inregistrate, usurinta la folosire.
Atunci cand se hotaraste schimbarea tipului de reactiv se fac determinari in paralel,
reactivul anterior si cel care se doreste a fi introdus. Reactivul nou trebuie sa ofere
performante superioare calitativ celui anterior. Aceste determinari se pastreaza si
constituie documentatie care sustine activitatea care se desfasoara cu reactivul
respectiv.
5.9. Interval biologic de referinta
In buletinul informativ al valorilor biologice de referinta PG-21-F01 se regasesc
intervalele biologice de referinta.
5.10. Indepartarea probelor biologice dupa efectuarea investigatiilor
Probele biologice si containerele in care au fost recoltate, se vor colecta in cutii din carton
inscriptionate cu simbolul Pericol biologic, furnizate de firma contractata pentru
indepartarea deseurilor, urmand a fi ridicate spre incinerare .
5.11 Depozitarea probelor biologice dupa efectuarea investigatiilor
Probele de sange sunt sortate la sfarsitul zilei de lucru. Serurile pozitive se pastreaza in
tuburi de plastic cu capac, pe care se noteaza ID-ul al pacientului caruia ii apartin.
Serurile se patreaza la congelator la o temperatura de -20-25C, timp de 72 ore.
6. RESPONSABILITATI
6.1.

Responsabil analize
Respect prezenta procedur.
nregistreaz rezultatele analizelor n fisa de lucru.
inscrie cererea de reactivi in registrul de comenzi

6.2.

Medicul sef de laborator

asigura implementarea si mentinerea prezentei proceduri
valideaza rezultatele si supervizeaza buletinul de analiza
verifica prin sondaj activitatea desfasurata
supravegheaza transferul manual al datelor

Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES

srl

Page 9 / 10

EDIIA 1 / REVIZIA 0

Laboratorul de analize medicale

PROCEDURA SPECIFICA
PS-10
6.3

6.4

Exemplar
nr.

DETERMINARI IMUNOLOGICE IN SER

(H. pylori, Ag HBs, HCV, HIV)

Responsabil recoltare
recolteaza si receptioneaza probele de sange
asigura transportul probelor in spatiul de lucru
Operator calculator
Introduce rezultatele analizelor in calculator

7. INREGISTRARI SI ANEXE
7.1
7.2
7.3
7.4

Fisa de lucru
Dosar fise de lucru
Buletin de analize medicale
Buletin informativ al valorilor biologice de referinta

Creat de SC LASERMED MEDICAL SERVICES

srl

Page 10 / 10

Cod PG-15-F01
cod PG-21-F01
Cod PG-21-F02

EDIIA 1 / REVIZIA 0