Absorbţia / Emisia Moleculară – tranziţii electronice

Spectrosopie UV-VIS, Spectroscopie de fluorescenţă

Pigmenții (pigments) sunt molecule cu spectru caracteristic de absorbție. Culoarea specifică a

pigmentului depinde de lungimile de undă ale luminii care nu sunt absorbite.

Cromoforul (chromophore) – un grup de atomi dintr-o moleculă (pigment) responsabil de absorbţia

(culoarea) moleculei. Legăturile dintre atomii dintr-un cromofor permit cromoforilor să absoarbă
parte din lumina vizibilă şi de a reflecta restul luminii din domeniul vizibil.

Auxocromul (auxochrome) - un grup de atomi atașat la un cromofor, grup ce modifică capacitatea

cromoforului de a absorbi lumina. El nu reușeşte să producă culoare, dar atunci când este prezent
alaturi de cromofor într-un compus organic intensifică culoarea intregului compus. Exemple:
gruparea hidroxil (-OH), amino (-NH2), aldehidă (-CHO).

Luminoforul (luminophore) - un grup de atomi dintr-o moleculă ce manifestă luminiscenţă (emisie

de lumină). Cauzele emisie luminiscente pot fi diverse ca de exemplu:
• Chemoluminescență, ca rezultat al unei reacții chimice;
• Bioluminiscență, ca urmare a unei reacții biochimice produsă de către un organism viu;
• Electrochemiluminiscenţă, ca rezultat al unei reacții electrochimice (descărcare în gaz);
• Catodoluminescenţă, ca rezultat al bombardării unui material cu electroni;
• Fluorescență, ca urmare a tranziţiei molecurare de relaxare electronică singlet-singlet
(durata de viață: nanosecunde)
• Fosforescență, ca urmare a tranziţiei molecurare de relaxare electronică triplet-singlet
(durata de viață: de la milisecunde la ore)

Fluoroforul (fluorophore) - un grup de atomi dintr-o moleculă ce manifestă fluorescenţă. 1

Pigmenţi naturali

2
Pigmenţi naturali – spectre de absorbţie UV-VIS

3
 Pigmenţi sintetici

Cei mai vechi pigmenți cunoscuţi au fost minerale naturale. Oxizii de fier dau o
gamă diversă de culori și se găsesc în multe picturi rupestre paleolitice și neolitice.
Două exemple includ anhydrous Red Ochre (Fe2O3) și hydrated Yellow Ochre
(Fe2O3.H2O). Cărbunele sau negru de fum, a fost de asemenea folosit ca un
pigment negru din timpuri preistorice.

Doi dintre primii pigmenți sintetici au fost ceruza (white lead) (carbonat de plumb
(PbCO3)2Pb(OH)2) și albastru egiptean (Egyptian Blue - CaCuSi4O10). Ceruza,
folosită la fabricarea vopselelor albe, se realizează prin reacţia plumbului cu oțetul
(acid acetic, CH3COOH), în prezență de CO2. Egyptian Blue fost realizat din sticlă
colorată silicat de calciu amestecată cu un minereu de cupru, cum ar fi malachit.
Azuritul (de culoare albastră) este un alt mineral care face parte din clasa 4
mineralelor carbonate anhidre Cu3(CO3)2(OH)2.
 Pigmenţi sintetici albi

Dioxidul de Titan este cel mai utilizat pigment

datorita strălucirii de un alb imaculat.

• Dioxid de Titan (TiO2)

• Oxid de Zinc (ZnO)

• Oxid de Aluminiu (Al2O3)

Compozitia chimica
Solvent (lichid)
a vopselelor
Pigment
Aditivi

Răşini (liant)
5
5
 Sângele – spectre de absorbţie UV-VIS

oxyHb – oxyhemoglobin (purtătoare de oxigen)

metHb – Methemoglobin – ionul Fe2+ este înlocuit de Fe3+
HbNO – hemoglobin (purtătoare de oxid de azot)
deoxyHb - deoxyhemoglobin (fără oxigen)
carboxyhemoglobin (purtătoare de dioxid de carbon CO2)
Alte grupări funcţionale ce au afinitate de legătură ridicată faţă de fier:
cianurile (CN-), monoxidul de sulf (SO), hidrogen sulfurat (H2S), etc.
6
 Tehnica Thin Layer Chromatography TLC
Cromatografie - tehnici de laborator pentru separarea amestecurilor.
Cromatografiea în strat subțire (Thin Layer Chromatography) este realizată pe o placă de sticlă,
plastic sau folie de aluminiu, care este acoperită cu un strat subțire de material adsorbant, de
obicei gel de siliciu, oxid de aluminiu sau de celuloză (hârtie sugativă). TLC este o tehnică
analitică utilizată pe scară largă din cauza simplității sale, costul relativ scăzut, sensibilitate mare
precum și viteza mare de separare. TLC este o procedură simplă care oferă un răspuns rapid cu
privire la modul în care mai multe componente sunt amestecate.
O cantitate mică de amestec de analizat este picurat în
partea de jos a plăci TLC. Placă TLC este apoi plasată
într-un recipient ce conţie un amestec de solveţi astfel
încât numai partea de jos a plăcii este în lichid. Solvenţii
dizolvă amestecul și-l ridică încet pe placa TLC prin efectul
de capilaritate.

Factorul de retenţie – Rf
După o separare completă compușii individuali apar ca
pete separate vertical. Fiecare spot are un factor de
retenție (Rf) care este egală cu distanţa la care a migrat
spotul împărţită la distanța totală acoperită de solvent.

7
 Tehnica Thin Layer Chromatography TLC

Thin Layer Chromatography1 http://www.youtube.com/watch?v=ac9vALSoxbY

Thin Layer Chromatography2 http://www.youtube.com/watch?v=eNIU4yzQGLs

Thin Layer Chromatography3 http://www.youtube.com/watch?v=jzf0stGQhrk

Thin Layer Chromatography4 http://www.youtube.com/watch?v=rbp_Qc4jMAc

Thin Layer Chromatography5 http://www.youtube.com/watch?v=w0FyQ_tO15U

Thin Layer Chromatography6

www.youtube.com/watch?v=zEXO6TxaJTI&index=1&list=PLkikvDyD7It7m6yUiolB
Sb_bH7VH5OFjI
8
Bibliografie (UV-VIS şi TLC – pix cu bilă)

Craig Adam
Shedding light on evidence: forensic applications of UV/visible spectroscopy
Spectroscopy Europe/Asia, vol. 21. no.2 (2009)
http://3debooks.annikassociates.co.uk/?userpath=00000016/00005601/00041825/&page=11

Craig D. Adam, Sarah L. Sherratt, Vladimir L. Zholobenko

Classification and individualisation of black ballpoint pen inks using principal component analysis of UV–vis absorption spectra
Forensic Science International 174 (2008) 16–25
http://www.fsijournal.org/article/S0379-0738%2807%2900132-6/abstract

Mal–gorzata Szafarska, Agnieszka Solarz, Renata Wietecha-Posl–uszny, Michal– Woz´niakiewicz and Pawel– Kos´cielniak
Extraction of Colour Inkjet Printing Inks from Printouts for Forensic Purpose
Acta Chim. Slov. 2010, 57, 963–971
http://acta.chem-soc.si/57/57-4-963.pdf

Murphy G. Brasuel, Alexis D. McCarter, and Nathan W. Bower

Forensic Art Analysis Using Novel Reflectance Spectroscopy and Pyrolysis Gas Chromatography – Mass Spectrometry
Instrumentation
Chem. Educator 2009, 14, 150–154
http://chemeducator.org/sbibs/s0014004/spapers/14090150nb.htm

Djavanshir Djozan, Tahmineh Baheri , Ghader Karimian , Masomeh Shahidi

Forensic discrimination of blue ballpoint pen inks based on thin layer chromatography and image analysis
Forensic Science International 179 (2008) 199–205
http://www.deepdyve.com/lp/elsevier/forensic-discrimination-of-blue-ballpoint-pen-inks-based-on-thin-layer-vdnvkxJtYD

B. Spangenberg , B. Ahrens, K.-I-. Klein

TLC-Analysis in Forensic Sciences Using a Diode-Array Detector
Chromatographia Supplement Vol. 53,2001
http://link.springer.com/article/10.1007%2FBF02490372?LI=true#page-1

9
 Legea Lamber Beer – legea absorbţiei soluţii

I0 – intensitatea radiaţiei incidente (unitate

de măsură Watt);
I – intensitatea radiaţiei transmisă prin
probă (aceeaşi unitate ca şi I0);
b – lungimea drumului parcurs de radiaţiile
optice (exprimată în cm sau mm);

Definiţie: Transmitanţa T (transmittance) T = I / I0

Limite: T = 0 - mediul absoarbe in totalitate radiaţia incidentă;
T = 1 sau T=100% - mediul este transparent (nu absoarbe);
Legea Lambert – Beer: Aλ = - log (I / I0) = ελ b c
unde Aλ – Absorbanţa (absorbance) nu are unitate de măsură (adimensională),
ελ - coeficientul zecimal de extincţie – constantă de material,
c este concentraţia speciei analizate.

Experimental se măsoară Transmitanţa şi folosind formula Aλ = log (1/ T) se obţine Absorbanţa

10
 Spectre de Absorbţie

Legea Lambert – Beer: Aλ = ε λ b c

Spectroscopia UV-VIS constituie tehnica principala de determinare a concentratiei

(cantitatii) de substanta activa in cazul medicamentelor / drogurilor 11
 Spectre de absorbţie – etalonare concentraţie
-Cu ajutorul spectrofotometrului se trasează spectrele de absorbţie, corespunzătoare unor soluţii
de diferite concentraţii, în domeniul spectral corespunzător absorbţiei (peaks at 213 & 261 nm)
- Cu creşterea concentraţiei, valoarile maxime ale absorbanţei la 216nm si 261nm cresc liniar
conform legii Lambert – Beer: A λ = ελ b c

Reprezentarea grafică a valorilor A261 (cn) funcţie de cn se numeşte grafic de etalonare

Pentru o soluţie de concentraţie necunoscută se măsoară valoarea A261(cx)
şi din graficul de etalonare se determină cx 12
 Cuvele spectrofotometrice
Recipientele în care se pun soluţiile de analizat trebuie sa fie transparente pentru
domeniul spectral la care se face analiza.
Cuvele din cuart sau din oxid de siliciu sunt cele mai potrivite pentru spectroscopia
radiaţiilor ultraviolete 190 – 400 nm. Aceste recipiente sunt transparente si pentru
lumina vizibilă.
Cuvele din sticle de silicat sau plastic pot fi folosite pentru spectre cu valori între 350
şi 2000 nm.
Cuvele trebuie pastrate curate – urmele de degete dispersează si absorb lumina.

13
13
 Spectrofotometre cu dublu fascicul
(double beam spectrophotometer)

Instrumentele optice destinate achiziţiei spectrelor de absorbţie se numesc

spectrofotometre.
Spectrofotometrul cu dublu fascicul functioneaza divizand fasciculul de la sursă in
două fascicule aproape identice ca intensitate si ca durată (cu ajutorul unui chopper).
Jumătate din lumină trece prin soluţia de analizat (de o anumită concentraţie) şi
jumatate prin soluţia de referinţă, ce conţine doar solvent pur.

Rolul solutiei de referinţă este acela de a elimina din spectrul de absorbţie prezenţa
14
cuvei şi a solventului.
Bibliografie (spectrofotometrie UV-VIS probe biologice)

Ajai Pillai, G. Sunita, V.K. Gupta

A new system for the spectrophotometric
determination of arsenic in environmental and biological samples
Analytica Chimica Acta, Volume 408, Issues 1–2, 9 March 2000, Pages 111–115
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0003267099008326

B Narayana, Tom Cherian, Mendalin Mathew & Chand Pasha

Spectrophotometric determination of arsenic in environmental and biological samples
Indian Journal of Chemical Technology, Vol. 13, January 2006, pp. 36-40
http://nopr.niscair.res.in/bitstream/123456789/6993/1/IJCT%2013%281%29%2036-40.pdf

Chand Pasha, Badiadka Narayana

Determination of Arsenic in Environmental and Biological Samples Using Toluidine Blue or
Safranine O by Simple Spectrophotometric Method
Bull Environ Contam Toxicol (2008) 81:47–51
http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs00128-008-9454-1?LI=true#page-1

15
16