Vol 49 2006

ISSN 1454-7406
UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR ION IONESCU DE LA BRAD IAI

ASOCIAIA GENERAL A MEDICILOR VETERINARI DIN ROMNIA
LUCRRI TIINIFICE
VOL. 49 (8) MEDICIN VETERINAR
EDITURA ION IONESCU DE LA BRAD
IAI - 2006
Volumul a fost editat cu sprijinul financiar al Ministerului Educaiei i Cercetrii
COLECTIVUL DE COORDONARE:
Redactor responsabil: Redactor adjunct: Membri: Prof. dr. Gerard JITREANU Prof. dr. Vasile VNTU Prof. dr. Neculai MUNTEANU Prof. dr. Constantin LEONTE Prof. dr. Gic GRDINARIU Prof. dr. Mircea-Ioan POP Prof. dr. Mihai CARP-CRARE
COLEGIUL DE REDACIE:
Redactor responsabil: Redactor adjunct: Membri: Prof. dr. Mihai CARP-CRARE Conf. dr. Liviu MIRON Prof. dr. H.C. Ioan PAUL Prof. dr. H.C. Liviu RUNCEANU Prof. dr. Octavian OPREAN Prof. dr. Corneliu COTEA Prof. dr. Tudor PERIANU Prof. dr. Ioan COMAN Prof. dr. Elena VELESCU Prof. dr. Franois CRESPEAU Prof. dr. Octavian OPREAN Prof. dr. Marc ELIOT Prof. dr. Gheorghe SOLCAN
Refereni tiinifici:
ISSN 1454-7406 Editura Ion Ionescu de la Brad Iai
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar
PARTICULARITI MORFOLOGICE ALE SISTEMULUI TENDO-FASCIAL I LIGAMENTAR AL AUTOPODIULUI TORACIC LA CERB (CERVUS ELAPHUS)
MORPHOLOGICAL PARTICULARITIES OF THE TENDO-FASCIAL AND LIGAMENTAR SYSTEM OF THE THORACIC AUTOPODIUM IN CERVUS ELAPHUS
V. COOFAN, Valentina HRICU E.V. INDILAR U.S.A.M.V. Iai A.C. HRICU D.S.V.S.A. Iai The research performed on 10 thoracic autopodia of Cervus elaphus highlighted some interesting morphological particularities of the systems: fascial, tendinous and ligamentar, not mentioned in the bibliography. Fascia palmaris in regio metacarpophalangea is split in four layers, from which originates: two ligamenta transversa (superficialis et profundum), placed between the basis of the secondary fingers II and V, two ligamenta abaxialia proximalia, which connect the secondary fingers to the metacarpus, two ligamenta abaxialia distalia, placed between the secondary fingers and the distal phalanx of the principal fingers and two rami digitales palmares which inserts bifid on the falanges distales of the principal fingers. Tendines mm. extensores et flexores distributes only to the principal fingers. M. flexor digitalis superficialis presents two corpora, continued with tendons which mentain their independence to the distal insert. Tendo m. flexoris superficialis IV surpasses the small palmar carpian sheath, and tendo m. flexoris superficialis III surpasses the great carpian sheath, surrounded by a cylindric sheath, formed of m. flexor digitalis profundus. M. interosseus, tendinous, emits two palmar straps which, together with the superficial flexor muscles, form long individual rings for the branches of m. flexor digitalis profundus. Its axial and abaxial straps are equal and unite simetrically with the tendons of mm. extensores proprii III et IV in the plan of the proximal phalanges. Ligamenta interdigitalia distalia are represented by two ligamenta cruciata (palmaris et dorsalis) and a ligamentum transversum. Ligg. cruciata are made each of two bundles which cross and reciprocal perforate in the interdigital space. In the thickness of the ligamentum capsularis of the regio metacarpophalangea there are two dorsal sesamoids, with tendency of ossification, and on the distal insert, in each tendon of m. extensor dig. communis develops a reduced cartilaginous sesamoid 3
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai
Between the proximal phalanges, there is a strong proximal interdigital ligament.

Key Words: anatomy, autopodium, Cervus elaphus
Studiul anatomic efectuat pe autopodiile toracale de Cervus elaphus a evideniat aspecte morfologice inedite ale sistemului tendo-fascial i ligamentar, nemenionate n literatura de specialitate. MATERIAL I METOD
Cercetrile au fost efectuate pe 10 autopodii toracale de cerb prin metoda diseciei stratigrafice. Dup piesele disecate au fost efectuate numeroase fotografii i plane anatomice, din care 4 nsoesc textul redactat.
REZULTATE OBINUTE Fascia carpian dorsal, mai puternic dect la taurine, particip dup norma comun la formarea tecilor carpiene prin care trec tendoanele muchilor extensori. Fascia metacarpian i acropodial dorsal este degenerat n esut conjunctiv lax, exceptnd extremitatea distal a metapodiului i regiunea degetelor, unde formeaz teci tubulare proprii, nguste, prin care trec ramurile tendonului muchiului extensor digital comun. Fascia carpian palmar, clivat n dou lame, delimiteaz marea i mica teac carpian palmar; ambele teci sunt mai nguste dect la taurine. Fascia metacarpian palmar (e), foarte puternic, formeaz peretele palmar al tecii n care sunt adpostite tendoanele muchilor flexori digitali i m. interosos median. Proximal articulaiei metacarpo-falangiene se cliveaz ntr-o lam superficial i una profund, care se continu n regiunea buletului. n regiunea articulaiei buletului, n planul degetelor secundare, fascia palmar se cliveaz, dispunndu-se pe patru straturi, din care se difereniaz adevrate ligamente, particulare speciei. Stratul 1, propriu regiunii, este reprezentat de o aglomerare de fibre elastice ce structureaz ligamentul transvers superficial (d), dispus ntre bazele degetelor secundare. Totodat, de pe baza fiecrui deget secundar fascia structureaz dou ligamente abaxiale: proximal i distal. Ligamentul proximal (g) are traiect ascendent i se inser bifid pe metacarpul principal i pe m. interosos median; lig. distal (g) are traiect descendent i se inser cu un fascicul scurt pe brida abaxial a m. interosos median i cu unul lung, puternic, pe faa abaxial a falangei distale. Stratul 2 continu lama superficial a fasciei metacarpiene i se mparte n dou ramuri divergente (e) care coboar pe feele palmare ale degetelor
4
principale. n planul falangei proximale, fiecare ramur fuzioneaz cu o ramur similar provenit din stratul 4 (e) i, dup un scurt traiect, emite dou bride care se inser pe faa axial i, respectiv, abaxial a falangei distale. Stratul 3, propriu regiunii, este reprezentat de ligamentul transvers profund (f), care leag ntre ele degetele secundare. Stratul 4 continu lama profund a fasciei metacarpiene i se mparte n dou ramuri care fuzioneaz cu cele provenite din stratul 2. n plan profund, fascia acropodial palmar structureaz, la fel ca la taurine, ligamentele inelare care contenioneaz tendoanele flexorilor digitali (a, a, a). Tendoanele de pe faa dorsal a meta- i acropodiului aparin muchilor extensor digital comun i extensori digitali proprii III i IV (5, 6, 6); au distribuie i inserii asemntoare cu cele descrise la taurine. M. flexor digital superficial prezint dou buri musculare continuate cu cte un tendon ce-i menine independena pn la inseria distal; n acest context, putem vorbi de flexorul superficial al degetului III (2) i, respectiv, al degetului IV (1). Tendonul m. flexor superficial al degetului III parcurge marea teac carpian palmar, unde este nconjurat de teaca cilindric (3) format de tendonul m. flexor profund, iar tendonul m. flexor superficial al degetului IV alunec prin mica teac carpian palmar. n regiunea palmar a metacarpului cele dou tendoane ale flexorilor superficiali parcurg un traiect paralel, n contact cu tendonul m. flexor profund. Proximal articulaiei buletului, fiecare tendon primete o brid a m. interosos median (4), formnd un inel (4) de forma unei teci lungi (cca 6 cm) prin care trece ramura corespondent a m. flexor profund. Cele dou teci sunt unite ntre ele printr-o lam conjunctiv. La extremitatea distal este perforat de ramura corespondent a flexorului profund i se inser bifid pe marele burelet glenoidian. Tendonul m. flexor digital profund (3), unic, parcurge marea teac carpian palmar, nivel la care formeaz o teac cilindric n care este inclus tendonul m. flexor superficial al degetului III. Proximal articulaiei buletului, tendonul m. flexor profund se mparte n dou ramuri egale i simetrice care alunec separat prin inelele formate de mm. flexori superficiali i bridele m. interosos median. n regiunea acropodial traiectul i inseriile tendoanelor muchilor flexori nu prezint diferene fa de bovine. M. interosos median, pur tendinos, ocup toat faa palmar a metacarpului principal (4). n treimea distal a regiunii, emite dou bride palmare care particip la formarea inelelor pentru flexorul profund (4). Proximal articulaiei metacarpo-falangiene, interososul median se mparte la fel ca la taurine. Bridele axial (4IV) i abaxial (4III) pentru extensorul propriu al degetelor sunt egale, puternice i, spre deosebire de taurine, abordeaz extensorul simetric, n planul treimii mijlocii a falangei proximale.
5
Fasciile, tendoanele i ligamentele metapodiului i acropodiului toracic la Cervus elaphus I - Aspectul palmar; II - Aspectul medial;
Fasciile, tendoanele i ligamentele metapodiului i acropodiului toracic la Cervus elaphus III - Aspectul dorsal;
Fasciile, tendoanele i ligamentele metapodiului i acropodiului toracic la Cervus elaphus IV - Aspectul axial Legenda comun pentru fig. I, II, III i 4: 1 - Tendonul m. flexor superficial al degetului IV; 2 - Tendonul m. flexor superficial al degetului III; 3-3 - M. flexor digital profund (3 - Tendonul comun; 3 - Teaca pentru IV flexorul superficial; 3 - Tendonul degetului III; 3 - Tendonul degetului IV); 4-4 - M. interosos median (4 - Tendonul comun; 4 - Brida palmar; 4 - Inelul pentru flexorul profund; 4III, 4IV - Bridele abaxial i axial pentru m. extensor digital propriu); 5-5 - M. extensor digital comun (5 - Tendonul comun; 5,5 - Inseriile distale cu sesamoizii cartilaginoi); 6 - Tendonul m. extensor propriu al degetului III; 6 - Tendonul m. extensor propriu al degetului IV; 7 - Lig. colateral abaxial al articulaiei metacarpo-falangiene; 8,8 Lig. colateral abaxial al articulaiei interfalangiene proximale (8 - Fasciculul palmar 8 Fasciculul dorsal)
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar a-c - Ligamentele interdigitale distale (a - Lig. decusat palmar; b - Lig. decusat dorsal; c Lig. transvers); c - Lig. interdigital proximal; c - Suprafaa de inserie a lig. interdigital proximal; a,a,a - Ligamentele inelare; d - Lig. transvers superficial; e - Fascia metacarpian palmar; e-e - Ramurile fasciale digitale palmare; f - Lig. transvers profund; g - Lig. colateral abaxial proximal al degetului II; g - Lig. colateral abaxial distal al degetului II; h - Falanga proximal a degetului III; hI - Falanga medie a degetului IV; hII Metacarpul III; hIII - Metacarpul IV; i - Sesamoidul dorsal; j - Marele sesamoid; l Sesamoidul din grosimea tendonului m. extensor digital comun; m - Micul sesamoid
Ligamentele articulaiilor acropodiale au dispoziie asemntoare cu cele descrise la taurine. Se remarc ns, dezvoltarea deosebit, n grosime i lungime, a ligamentelor colaterale axiale ale articulaiilor interfalangiene, tendina de osificare a sesamoizilor dorsali (i) la nivelul articulaiei metacarpo-falangiene i apariia a cte unui sesamoid cartilaginos, redus, n grosimea inseriei distale a ramurilor extensorului digital comun (l). Spre deosebire de taurine, legtura dintre degetele principale se realizeaz prin trei ligamente interdigitale distale: decusat palmar, decusat dorsal i transvers. Lig. decusat palmar (a), cel mai lung, este format din dou fascicule fibroase ce se ncrucieaz n spaiul interdigital, perforndu-se reciproc. Fiecare fascicul leag extremitatea posterioar a feei axiale a falangei distale de tuberculul palmar al falangei medii a degetului opus. Lig. decusat dorsal (b), cel mai puternic, la fel ca i precedentul, este acltuit din dou fascicule ce se ncrucieaz i se perforeaz reciproc n plan axial. Fiecare fascicul se inser distal alturi de cel palmar, iar proximal, pe marginea axial a falangei medii a degetului opus; la acest nivel se continu cu ligamentul inelar falangian distal, care contenioneaz tendonul m. flexor profund. Lig. transvers (c) este reprezentat de o band fibroas dispus ntre marginile axiale ale micilor sesamoizi. Lig. interdigital proximal (c) este alctuit din numeroase fibre scurte care se inser pe treimile superioare ale feelor axiale ale falangelor proximale, unde ocup o larg suprafa rugoas (c). Degetele secundare sunt legate ntre ele i de formaiunile adiacente prin ligamente derivate din fascii (d, f, g, g); articulaiile interfalangiene prezint ligamente colaterale reduse. CONCLUZII 1. Sistemul fascial, foarte dezvoltat la Cervus, realizeaz structuri specializate n vederea contenionrii i glisrii tendoanelor (tecile fibroase tubulare pentru ramurile tendonului extensor digital comun, ligamentele inelare pentru tendoanele flexorilor digitali). n regiunea articulaiei metacarpo-falangiene, fascia palmar se cliveaz n patru lame, din care se difereniaz formaiuni cu un important rol n apartul
9
pasiv i n amortizarea ocurilor: ligamentele transverse, dispuse ntre bazele degetelor rudimentare, bridele fasciale pentru degetele principale i ligamentele abaxiale, care leag baza fiecrui deget rudimentar de metacarpul principal i de falanga distal. 2. Tendoanele muchilor extensori i flexori digitali se repartizeaz exclusiv degetelor principale III i IV. Burile muchiului flexor digital superficial se continu cu tendoane ce-i pstreaz independena pn la inseria distal. La extremitatea proximal, tendonul m. flexor digital superficial III perforeaz tendonul flexorului profund, iar la cea distal, tendoanele flexorilor superficiali III i IV sunt perforate de ramurile flexorului profund. Acest sistem de perforare reciproc i succesiv a flexorilor le asigur o glisare perfect n acelai plan, determinnd o funcionare independent a degetelor III i IV. 3. Aspectele morfologice particulare ale ligamentelor sunt corelate cu alungirea falangelor, solicitarea deosebit a articulaiilor i a spaiului interdigital la aceast specie. Ligamentele colaterale axiale ale articulaiilor interfalangiene sunt foarte lungi i groase. n grosimea ligamentului capsular al articulaiei metacarpofalangiene se dezvolt doi sesamoizi dorsali mai mari dect la taurine i cu tendina de osificare, iar n tendoanele muchiului extensor digital comun, la nivelul inseriei distale, un sesamoid dorsal redus, cartilaginos. Unirea degetelor principale se realizeaz prin trei ligamente interdigitale distale: decusat palmar, decusat dorsal i transvers i un ligament interdigital proximal. Ligamentele decusate sunt formate din cte dou fascicule dispuse ntre falanga distal i falanga medie a degetului opus; n plan axial, fasciculele se ncrucieaz i se perforeaz reciproc, fcnd schimb de fibre. Ligamentul interdigital proximal este format din numeroase fibre scurte, inserate pe suprafee rugoase largi, dispuse n treimea superioar a falangelor proximale. Dezvoltarea deosebit a acestui ligament face ca flexia i extensia degetelor s se produc concomitent.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Coofan V. i col., 1999 Anatomia animalelor domestice, Vol., I, Editura Orizonturi Universitare, Timioara. Gheie V., 1971 Anatomia animalelor domestice, Vol., I, Editura Academiei RSR, Bucureti. Nickel R. i col., 1992 Lerhbuch der Anatomie der Haustiere, Band I, Verlag Paul Parey, Berlin und Hamburg.
10
ASPECTE PRIVIND MORFOLOGIA UNOR ARTICULAII ALE MEMBRULUI PELVIN LA STRU (STRUTHIO CAMELLUS)
ASPECTS REGARDING THE MOPRPHOLOGY OF SOME ARTICULATIONS OF PELVIC LIMB IN OSTRICH (STRUTHIO CAMELLUS)
C. BELU, G. PREDOI, I. DUMITRESCU, B. GEORGESCU, Carmen BIOIU, I. TOADER, D. PUN U.S.A.M.V. Bucureti As the information from specialized literature are summarily we realized a morphological study of femurotibiopatellar articulation in ostrich. Owing to great body weight of bird, this articulation is wellconsolidated. There are four solid ligaments two collateral and two cruciate. The principal movements of the femurotibiopatellar articulation as a whole are flexion and extension.
Key words: morphology, articulations, struthio.
Cu toate c literatura de specialitate cuprinde un numr nsemnat de lucrri referitoare la biologia, tehnologia de cretere i patologia speciilor din ordinul Ratite (1, 2, 3, 4), datele referitoare la morfologia acestor specii sunt relativ sumare sau, de cele mai multe ori tratate subiectiv (5, 6, 7). Lucrarea de fa i propune descrierea detaliat a unor formaiuni integrate sistemului articular al membrului pelvin la struul african, n scopul copletrii datelor din literatur, astfel nct aspectele descrise s poat fi de folos clinicienilor n cazul abordrii unor conduite trerapeutice adecvate. MATERIAL I METOD
Materialul de studiu a fost reprezentat de 5 exemplare adulte, sacrificate de necesitate, provenite de la diferii cresctori particulari. Metoda de lucru a constituit-o disecia, pn la limita vizibilitii folosind stereomicroscopul SMZ 2-T Nikon. Descrierea i omologarea formaiunilor s-a realizat n corelaie cu Nomina Anatomica Avium 1979.
REZULTATE I DISCUII Articulaia femuro-tibio-patelar este reprezentat de un complex articular realizat ntre oasele acestei regiuni. O prim articulaie se realizeaz ntre
11
trochleea anterioar a epifizei distale a femurului i faa articulart a patelei, care, pentru a corespunde trochleei femurale este completat cu dou mase fibrocartilaginoase. O a doua articulaie se realizeaz ntre cei doi condili femurali (dintre care cel medial apare mai dezvoltat) i tibie iar cea de-a treia, ntre trochleea femural i extremitatea proximal a fibulei.
Fig. 1. Articulaia femuro-patelotibial la struul african (vedere cranial) 1. menisc medial, 2. menisc lateral, 3. ligament meniscofemural cranial, 4. ligament transvers al genunchiului, 5. ligament meniscotibial cranial, 6. ligament menisco-colateral, 7. ligament meniscofibular cranial, 8. patela.
Fig. 2. Articulaia femuro-patelotibial la struul african (vedere caudal) 1. ligament colateral medial, 2. menisc medial, 3. menisc lateral.
12
ntre suprafeele articulare enunate se gsesc dou meniscuri fibrocartilaginoase. Meniscul medial are o form semilunar. n partea cranial este consolidat printr-un grup de fibre de partea medio-rostral a meniscului lateral, grup ce reprezint ligamentul transvers al genunchiului (lig. transversum genus). Tot din partea cranial a sa se desprinde un grup de fibre - ligamentul menisco-femural cranial, ce fixeaz meniscul la partea lateral a amprentei ligamentului ncruciat cranial (absent la psrile de curte). Caudal acest menisc prezint dou inserii. Cea mai puternic este reprezentat de ligamentul menisco-tibial (lig. meniscotibiale caudale), care nconjoar pe partea caudo-medial ligamentul ncruciat caudal i se inser pe partea posterioar a eminenei intercondiliene a tibiei. Cel de-al doilea ligament (lig. meniscofemorale) este mult mai redus i se inser n fosa intercondilian, la baza condilului femural medial. Meniscul lateral este o formaiune fibrocartilaginoas interpus ntre femur i condilul lateral al tibiei. Are aspect trapezoidal, cu baza mare orientat cranial. Inseria cranial a acestui menisc este reprezentat de un ligament (lig. meniscotibiale craniale) ce se fixeaz n partea cranial a condilului tibial medial. De asemenea, meniscul lateral este fixat pe partea cranial a extremitii proximale a fibulei printr-un veritabil ligament meniscofibular cranial. Un al treilea ligament foarte fin (lig. meniscocollaterale) fixeaz meniscul la ligamentul colateral lateral al articulaiei femuro-tibiale.
Fig. 3. Articulaia femuropatelo-tibial la struul african (vedere medial) 1. muschiul tibial cranial, 2. patela, 3. menisc medial, 4. ligament colateral medial, 5. menisc lateral, 6. epicondil medial.
Complexul articular este consolidat de urmtoarele ligamente: - ligamentul ncruciat anterior (lig. cruciatum craniale) care se inser pe vrful eminenei intercondiliene a tibiei, apoi se orienteaz caudo-dorsal, trecnd printre meniscuri, apoi prin anul dintre cei doi condili, ajungnd n cele din urm pe faa caudal a femurului, medial fa de fosa poplitee;
13
- ligamentul ncruciat caudal (lig. cruciatum caudale) este mai puternic dect precedentul. El se prinde caudal n partea posterioar a condilului tibial medial, apoi trece cranio-dorso-lateral pe sub meniscul medial, pentru a se insera cranial n anul intercondilar, mpreun cu ligamentul menisco-femural cranial; - ligamentul colateral lateral (lig. collaterale laterale) se prinde pe epicondilul femural lateral (slab reprezentat) i pe faa lateral a extremitii proximale a fibulei; - ligamentul colateral medial (lig. collaterale mediale) este inserat pe epicondilul medial al femurului (foarte redus la stru) i pe faa medial a extremitii proximale a tibiei. Articulaia tibiopatelar se realizeaz ntre patel i extremitatea proximal a tibiei. Ea este consolidat de un singur ligament ligamentul patelar (lig. patellae) care se ntinde de la marginea ventral a patelei la creasta patelar a tibio-tarsului. Ligamentul patelar formeaz peretele cranial al cavitii articulare a articulaiei femuro-tibiale. CONCLUZII Articulaia femuro-tibial include dou meniscuri diferite ca form, bine consolidate att la extremitatea proximal a tibiei, ct i la extremitatea distal a femurului. Ligamentul ncruciat caudal este mult mai bine reprezentat dect ligamentul ncruciat cranial. Ligamentele colaterale sunt extrem de bine reprezentate, fapt care contribuie la mrirea preciziei micrilor (articulaia realizeaz micri de extensie-flexie).
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Beattie I., 1992 - Applied ostrich physiology and anatomy. Ostrich workshop for veterinarians; April 11-12, Zimbabwe. Portland, Oregon: Island Ostrich Ranch; [1992]10 p. Bezuidenhout A., Burger W., 1993 - The Incidence of Tibiotarsal Rotation in the Ostrich (Struthio-Camelus). Journal of the South African Veterinary Association; 64(4): 159-161. Fedak M., Seeherman H., 1979 - Reappraisal of energetics of locomotion shows identical cost in bipeds and quadrupeds including ostrich and horse. Nature 1979; 282: 713-716. Fowler M.E., 1992 - Clinical anatomy of ratites. Proceedings of the Annual Conference of the Association of Avian Veterinarians; September 1-5, 1992; New Orleans. Florida: Association of Avian Veterinarians; 1992 307-309. Pavaux C., Lignereux Y. - A Myological Dissection of the Shank and Foot in an Ostrich (Struthio-Camelus). Journal of Veterinary Medicine Series C 1995; 24(2): 127-131. Ionescu V. i col., 2003 Struul cretere i patologie, Ed. CORAL SANIVET, Bucureti. Ioni Mariana, Mitrea L., 2006 Biologie animal, Ed. Medical veterinar, Bucureti.
14
ASPECTE HISTOLOGICE LA NIVELUL REELELOR ADMIRABILE INTRACRANIENE LA MAMIFERELE DOMESTICE

THE HISTOLOGICAL ASPECTS AT THE LEVEL OF RETE MIRABLE AT DOMESTIC MAMMALS
I. DUMITRESCU, G. PREDOI, N. CORNIL, C. BELU, B. GEORGESCU, Florina DUMITRESCU, Petronela ROU U.S.A.M.V. Bucureti The study of histological aspects was made by using the rete mirables from two taurines and four ovines. The space which is circumscribed by the venous cavernous sinus and without possibility to distend it, which is offered to the rete mirable induces an important polymorphism to the blood sanguiferous vessels which structures the rete mirable. The small arterys vascular wall from the rete has the median tunic flanked on both sides by endotelium, the adventitia beeing absent. The arterial endotelium can structure small intravascular pillows with meaning to control the sanguin flow capacity at the level of encephalon.
Key words: histological, rete mirables, mammals
Reelele admirabile epidurale joac, la speciile beneficiare, un rol fundamental n reglarea debitului sanguin la nivelul encefalului (1, 6, 9). ntruct n literatura de specialitate consultat nu am ntlnit date cu privire la particularitile histologice ale arteriolelor ce structureaz reeaua admirabil epidural, am considerat necesar studierea histologic a acestor structuri (2, 3, 4, 5, 7, 8, 10, 11, 12). MATERIAL I METOD
Studiul s-a realizat folosind reele admirabile epidurale provenite de la dou tauriune i patru ovine. n acest scop, imediat dup sacrificarea animalelor am realizat splarea substratului vascular de la nivelul reelelor admirabile epidurale, injectnd pe artera carotid comun ser fiziologic, pn cnd pe artera simetric soluia de ser fiziologic exprimat nu mai prezint urme de snge. Ulterior, am procedat la recoltarea reelei admirabile epidurale ptrunznd prin regiunea subsfenoidal. Dup recoltare, am imersat reeaua n soluie de formaldehid 10%, n vederea realizrii ulterioare de preparate histologice. Studiul histologic sa fcut n cadrul laboratorului de histologie al Facultii de Medicin Veterinar 15
Bucureti. Imaginile obinute au fost studiate i fotografiate cu ajutorul microscopului optic Nikon, prevzut cu dispozitiv de microfotografiere. Metoda de coloraie a fost cea cu hematoxilin - eozin, Giemsa i cea cu orcein pentru evidenierea fibrelor elastice din peretele vascular.
REZULTATE I DISCUII Spaiul limitat, i fr posibilitate de dilatare de la nivelul sinusului venos cavernos, impune o mare variabilitate conformaional a vaselor ce compun reeaua admirabil epidural. Aceast variabilitate este evideniat i histologic prin polimorfismul vaselor de la nivelul reelei. Reeaua admirabil epidural este strbtut de filete nervoase cu origine n principal n ortosimpaticul suprasfenoidal dar i ramificaii din perechile III, IV i VI de nervi cranieni. Histologic aceste fibre nervoase apar separate prin septumuri conjunctive de peretele vascular. n urma studierii preparatelor histologice efectuate s-a observat c vasele mari precum trunchiul bazilar, colateralele acestuia, artera carotid intern reconstituit din reeaua admirabil epidural, precum i terminalele acesteia etc. prezint caracteristicile arterelor de tip muscular. n structura peretelui predomin tunica medie, compus n principal din leiocite, dispuse n mai multe straturi de celule concentrice. Printre celulele musculare se ntlnesc fibre elastice identificabile prin coloraie cu orcein i de colagen. Adventicea cuprinde multe fibre elastice i de colagen, fibroblaste, vasa vasorum, limfocite i nervi vasorum. Arterele de tip muscular primesc o bogat inervaie vegetativ, ce le permite s desfoare o intens i rapid vasomotricitate (vasoconstricie i vasodilataie). Majoritatea arterelor ce intr n alctuirea reelelor admirabile epidurale sunt ns arteriole cu lumenul mult mai redus dect lumenul arterelor musculare mici, dar care prezint un perete gros n raport cu diametrul lumenului. Delimitarea ntre tunici apare mai puin evident iar diametrul este sub 0.5 mm. De cele mai multe ori deosebirea dintre arterele musculare mici i arteriole apare dificil de sesizat. n general, reelele admirabile includ arteriole mari, caracterizate prin urmtoarele: intima, foarte subire, format din endoteliu, strat subendotelial cu fibre de colagen i elastice; media, format din 2-6 straturi concentrice de celule musculare netede, fine fibre elastice i de colagen, n cazul reelei admirabile epidurale, peretele fiind limitat la exterior chiar de endoteliul sinusului venos ce nclude reeaua. Adventicea este absent n aceste cazuri. La nivelul arteriolelor amintite, s-a observat ngrori ale intimei, ce proemin n lumen i l nchide atunci cnd arteriola sufer un proces de vasoconstricie. Prezena structurilor vasculare speciale de tipul pernuelor arteriale este dictat de necesitatea asigurrii unui debit sanguin variabil, corelat
16
cu necesarul sanguin al encefalului la un anumit moment dat. Aceleai structuri se ntlnesc i n organe parenchimatoase cu activitate intens (rinichi, gland tiroid).
Foto 1 Aspect de ansamblu al reelei admirabile, col. Giemsa, ob. 4 x, 1 - ramificaii arteriale; 2- spaii venoase ale sinusului cavernos; 3 - endoteliu arterial; 4- endoteliul venos; 5 - leiocite.
Foto 2 Pernue intravasculare la nivelul unor vase din reeaua admirabil col. H-E, ob. 10 x, 1 - vas; 2- pernue intravasculare.
17
Foto 3 Fibre elastice n pereii vaselor reelei, col. orcein; ob. 10 x, 1 - lumen; 2- perete arterial, 3 - spaiul sinusului cavernos.
CONCLUZII 1. Spaiul limitat i fr posibilitate de dilatare oferit reelelor admirabile epidurale de ctre sinusul venos cavernos, impune un polimorfism accentuat al vaselor ce structureaz reeaua admirabil. 2. Reeaua admirabil epidural este strbtut de filete nervoase cu origine n principal n ortosimpaticul suprasfenoidal dar i ramificaii din perechile III, IV i VI de nervi cranieni. Histologic aceste fibre nervoase apar separate prin septumuri conjunctive de peretele vascular. 3. Tunica medie a peretelui vascular este structurat din fibre musculare netede dispuse n straturi concentrice; la acest nivel sunt abundente i fibrele elastice evideniate prin coloraia cu orcein. 4. Media arteriolelor ce structureaz reeaua admirabil epidural este tapetat la interior de endoteliul arterial, iar la exterior de ctre endoteliul sinusului venos cavernos. 5. La nivelul arteriolelor din reea, se ntlnesc ngrori ale intimei ce nchid lumenul atunci cnd arteriola sufer un proces de vasoconstricie. Aceste structuri endoteliale numite pernue vasculare particip la asigurarea unui debit sanguin variabil la nivelul encefalului.
18
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Baldwin B.A., 1964 The anatomy of the arterial supply to the cranial regions of the sheep and ox. Am. J. Anat., 115, 101 118. Barone R., 1996 - Anatomie compare de mamiferes domestiques, Tome V Angiologie, Ed. Vigot, Paris. Botrel S., Cotea C., Gaboreanu M., 1982 Histologie i embriologie, Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti. Coman T., Cornil N., 1999 Embriologie veterinar. Ed. Fundaiei Romnia de mine, Bucureti, 1999. Cornil N., 1993 Curs de biologie celular, histologie, embriologie, vol. 3. Lito. AMD UAMV, Bucureti. De Lahunta A., Habel E.R., 1986 Applied Veterinary Anatomy, W.B. Saunders comp.. Diculescu I., Doina Onicescu, 1987 Histologie medical, vol. I II. Ed. Medical, Bucureti. Godinho H.P., 1968 A comparative anatomical study of the cranial nerves in goat, sheep and bovine; their distribution and releated autonomic components. Ph. D. Thesis, Iowa State University Amer. Lagutchick M.S., Sturgis J.W., Martin D.G., Bley J.A., 1992 Review of the carotid artery loop procedure in sheep. Journal of Investigative Surgery 5 (2), 79 89. Patea E., Cornil N., 1973 Morfotopografia lojei hipofizare la oaie. n Lucr. t. IANB, CXVI, Bucureti, 7 11. Predoi G., Belu C., 1994 Cercetri comparative privind vascularizaia venoas cefalic la ovine i caprine. Conferina Jubiliar 20 de ani de nvmnt superior medical veterinar n Republica Moldova, Chiinu. Sisson S., Grossman J.D., Getty R., 1975 - The Anatomy of the Domestic Animals, vol. I. W.B. Saunders Comp., Philadelphia London Toronto
19
STUDII PRIVIND MORFOSTRUCTURA BURSEI CLOACALE LA PALMIPEDELE DOMESTICE

STUDIES CONCERNING MORPHOLOGY OF CLOACAL BURSA IN DOMESTIC PALMIPEDES
B. GEORGESCU, G. PREDOI, N. CORNIL, Emilia CIOBOTARU, C. BELU, L. ENACHE, I. DUMITRESCU, A.I. TOADER U.S.A.M.V. Bucureti Cloacal bursa is a primary specific lymphoid organ of birds. This organ has a median dorsal position given cloaca. Cloacal bursa is a sackshaped organ, with cranially orientated free extremity. The study was performed on 30 individuals of palmiped domestic species: domestic duck (Anas domesticus), Muscovy duck (Cairina moschata) and domestic goose (Anser domesticus). 10 individuals of 6 mouth-old were studied for each species. Cloacal bursa is fusiform organ in all studied species. The values of lengh and diameter were between 2.5 - 3.5 cm, respectively 1.5 - 1.7 cm in ducks. The lengh and diameter of cloacal bursa in goose were between 2.7 3.5 cm, respectively 1.5 2.0 cm. Histologically, submucosal infiltration of lymphociytes occured in dorsal cloacal wall in goose. Tending of lymphonodules formation was obvious.
Key words: morphology, cloacal, palmipedes
Bursa cloacal este un organ limfoid primar caracteristic psrilor. Aceast formaiune se afl dispus n plan median dorsal fa de cloac. Bursa cloacal are aspectul unui sac cu extremitatea liber orientat cranial. MATERIAL I METOD
Studiul a fost realizat pe 30 de exemplare aparinnd celor 3 specii de palmipede domestice si anume raa domestic (Anas domesticus), raa leeasc (Cairina moschata) i gsca domestic (Anser domesticus), pentru fiecare specie studiindu-se cte 10 exemplare n vrsta de 6 luni. Dup sacrificarea psrii prin injecie intrabulbar de sol. Xilina 1% i deschiderea cavitii abdominale se ridic ansele intestinale i se abordeaz segmentul intestinal terminal. Se identific cloaca i pe peretele dorsal al acesteia se remarc prezena bursei cloacale. Se secioneaz peretele cloacal anterior i posterior de pediculul bursal i se recolteaz bursa mpreun cu o redus poriune de perete cloacal n vederea studiului histologic. 20
Pentru studiul histologic bursele cloacale rezultate au fost incluse n parafin si apoi realizate preparate ntre lam si lamel, preparate colorate cu metode uzuale (hematoxilin, eozin, albastru de metil).
REZULTATE I DISCUII Forma bursei cloacale nu difer n cadrul speciilor de psri studiate, la toate speciile de palmipede bursa cloacal aprnd fusiform (fig. 1, 2)
Fig. 1 - Aspectul bursei cloacale (1) la ra leeasc n vrst de 6 luni
Fig. 2 - Aspectul bursei cloacale (1) la gsc n vrst de 6 luni
Dimensiunile bursei cloacale difer n funcie de specie. La psrile la care bursa se afl n deplin activitate (aproximativ vrsta de 6 luni) au fost constatate urmtoarele dimensiuni: la speciile de rae au fost obinute valori medii de 2,5 3,5 cm lungime i 1,5 1,7 cm diametru; iar la gsc lungimea medie a fost de 2,7 3,5 cm i diametrul de 1,5 2,0 cm. Valorile medii ale bursei cloacale sunt prezentate n tabelul 1.
21
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 1 Dimensiunile medii ale bursei cloacale la unele specii de psri domestice Specia Rae (Anas domesticus + Cairina moschata) Gsc (Anser domesticus) Vrsta (luni) 6 6 Dimensiuni medii (cm) Lungime Diametru 2,5 3,0 2,7 3,5 1,5 1,7 1,5 2,0
La toate speciile de psri bursa este un organ cavitar ataat peretelui dorsal al cloacei printr-un scurt pedicul. Lumenul bursal comunic printr-un canal (canal bursal) dispus n pedicul cu cavitatea proctodeumului. Cu toate c literatura consultat menioneaz prezena destul de frecvent a unor formaiuni bursale accesorii, la psrile studiate aceste formaiuni nu au fost observate. n general histostructura bursei cloacale la psrile studiate respect structura histologic prezentat n lucrrile consultate. La toate speciile de psri peretele bursei este format din trei tunici suprapuse: seroas, musculoas i mucoas. Seroasa este reprezentat de peritoneul local care acoper bursa. Musculoasa este format din fibre musculare netede dispuse pe dou straturi: longitudinal extern i circular intern.
Fig. 3 - Burs cloacal la ra n vrst de 6 luni (H.E.A., ob. 4). Foliole foarte lungi ce prezint la vrf numeroase celule productoare de mucus
Mucoasa ocup cea mai mare parte din grosimea peretelui bursei avnd lamina propria ocupat aproape n totalitate de foliculi limfoizi foliculi bursali (foliculi Stannius). Mucoasa este puternic cutat, constituindu-se pliuri groase (foliole bursale) (fig. 3, 4), al cror centru este ocupat de foliculi, cu contur poliedric, iar suprafaa plurilor este acoperit cu un epiteliu simplu sau pseudoprismatic columnar.
22
Fig. 4 - Burs cloacal la ra de 6 luni (H.E.A., ob. 20). Se remarc aspectul clar al celulelor epiteliale de la nivelul vrfului foliolei bursale
La nivelul epiteliului sunt prezente trei tipuri de celule columnare (tipul I, II i III) n funcie de granulele pe care le conin. Caracterul de epiteliu simplu columnar este mai evident atunci cnd acesta acoper proeminenele determinate de proliferarea fiecrui folicul. Epiteliul prolifereaz n profunzime, celulele epiteliale amestecndu-se cu celulele din foliculi. Foliculii bursali pot prezenta dou aspecte: aspect uniform (n cazul foliculilor primari) i foliculi cu dou zone, cortical i medular (n cazul foliculilor secundari) (fig. 5, 6, 7). Foliculii bursali secundari prezint la periferia medularei un strat de celule epiteliale nedifereniate, cubice i un strat de capilare. Corticala este separat de medular printr-o membran bazal. Zona cortical apare mai nchis la culoare i cuprinde numeroase limfocite, limfoblaste, celule n mitoz i numeroase macrofage. Medulara apare mai deschis la culoare i cuprinde celule nedifereniate, limfoblaste i limfocite.
Fig. 5 - Burs cloacal la ra de 6 luni (H.E.A., ob. 20). Foliculii primari ncep s se tranforme n foliculi secundari.
23
Fig. 6 - Bursa cloacal la gsc n vrst de 6 luni (H.E.A., ob. 10). Se observ c epiteliul asociat foliculului i limitanta foliculului se afl n continuitate cu membrana bazal a epiteliului bursal
Fig. 7 - Burs cloacal la gsc n vrst de 6 luni (H.E.A., ob. 40). Folicul bursal epiteliul asociat foliculului i limitanta n continuitate direct cu membrana bazal a epiteliului
Fig. 8. - Perete dorsal al cloacei la gsc n vrst de 3 luni (H.E.A., ob. 20). Noduli limfoizi n curs de organizare
24
esutul limfoid este prezent i n peretele dorsal al cloacei. S-a observat infiltrarea cu limfocite a submucoasei i tendina de a ajunge pn n vecintatea musculoasei. De asemenea s-a remarcat tendina de organizare a limfocitelor n limfonoduli. Epiteliul, de tip digestiv, acoper agregatele limfoide i include un mare numr de celule caliciforme. Acest esut limfoid n peretele dorsal al cloacei este ns inconstant. n cazul psrilor studiate a fost observat numai la 3 gte n vrst de 6 luni (fig. 8). CONCLUZII Pe baza rezultatelor cercetrilor proprii efectuate pe 90 psri domestice aparinnd unui numr de 3 specii de palmipede domestice ( ra, ra leeasc, gsc) se pot desprinde urmtoarele concluzii cu privire la morfostructura bursei cloacale: 1. Bursa cloacal reprezint un organ limfoid primar caracteristic psrilor. Este dispus dorsal, pe peretele proctodeumului i cavitatea sa comunic cu cavitatea proctodeal prin canalul bursal situat n pedicul. 2. Forma i dimensiunile bursei difer de vrst i de specie. La palmipede forma este alungit, ovoidal i dezvoltarea maxim este atins la vrsta de 6 luni. 3. Din punct de vedere histologic peretele bursal apare alctuit din trei tunici suprapuse (seroas, musculoas i mucoas). Seroasa este reprezentat de peritoneul local. Musculoasa este format dintr-un strat longitudinal extern i un strat circular intern. 4. Lamina proprie a mucoasei la toate speciile este ocupat aproape n totalitate de foliculi limfoizi primari i secundari. Foliculii bursali secundari prezint dou zone: medular i cortical. Medulara apare mai deschis la culoare i cuprinde celule nedifereniate, limfoblaste i limfocite. Corticala, mai nchis colorat, cuprinde numeroase limfocite, limfoblaste, celule n mitoz i numeroase macrofage. 5. La gsc a fost observat infiltrarea cu limfocite a submucoasei peretelui dorsal al cloacei. S-a remarcat tendina de organizare a limfocitelor n limfonoduli.
BIBLIOGRAFIE 1. 2. 3. 4.
Breuil G.A., 1980 Aspects normaux et pathologiques du sytme lymphode des oiseaux. Thse, Ecole Nationale Vtrinaire de Toulouse. Coofan V., Palicica R., Valentina Hricu, Carmen Gan, Enciu V., 2000 Anatomia animalelor domestice. Vol. III. Ed. Orizonturi Universitare, Timioara. Georgescu B., 2001 Cercetri morfotopografice asupra formaiunilor limfoide la psrile domestice. Tez, F.M.V. Bucureti. King A.S., J. McLelland, 1984 BIRDS their structure and function. Second Edition. Ed. Bailliere Tindall, London Philadelphia Toronto Mexico City Rio de Janeiro Sydney - Tokyo Hong Kong.
25
5. 6. 7. 8. 9.
Nickel R., Schummer A., Seiferle E., 1973 Lehrbuch der Anatomie der Haustiere. Band V Anatomie der Hausvgel. Verlag Paul Parey, Berlin und Hamburg. Patea E., Coofan V., Chiescu t., Miclea M., Cornil N., Nicolescu V., Radu C., Popovici I., Palicica R., 1985 Anatomia comparat a animalelor domestice. Vol. I II. Ed. didactic i pedagogic, Bucureti. Sisson S., J.D. Grossman, R. Getty, 1975 The Anatomy of the Domestic Animals. Vol. I II (Fifth Edition). W.B. Saunders Company, Philadelphia London Toronto. * * * - Nomina Anatomica Avium. Academic Press, London Toronto New York Sydney San Francisco, 1979. * * * - Nomina Anatomica Veterinaria (Fourth Edition), together with Nomina Histologica (Revised Second Edition) and Nomina Embryologica Veterinaria. Zrich and Ithaca, New York, 1994.
26
CERCETRI PRIVIND VASCULARIZAIA VENOAS A GLANDEI MAMARE LA OAIE

RESEARCH REGARDING THE VENOUS VASCULARITY OF MAMMARY GLAND IN EWE
G. PREDOI, C. BELU, I. DUMITRESCU, B. GEORGESCU, N. CORNIL, Carmen BIOIU, I. TOADER U.S.A.M.V. Bucureti The study material was represented by 15 sheeps, from which were collected udders. We followed the detailed description of the venous formations from the mammary gland and also the description of any individual particularities which hadnt been discovered until recently days in the literature. The drainage venous ways and its many anastomosis between the halfs of the udder were represented.
Key words: vascularity, mammary gland, sheep
Literatura de specialitate cuprinde relativ puine date referitoare la vascularizaia glandei mamare la ovine, descrierea formaiunilor vasculare fiind relativ sumar, uneori fiind ntlnite date contradictorii. Din acest motiv am considerat necesar continuarea i aprofundarea cercetrilor n scopul completrii datelor existente i pentru clarificarea datelor contradictorii. MATERIAL I METOD
Materialul de studiu a fost reprezentat de 15 exemplare de ovine, caracterizate printr-o heterogenitate accentuat a vrstei, rasei, strii de ntreinere i a strii fiziologice. Unele animale au fost sacrificate n abator sau n diferite puncte de tiere iar altele au fost utilizate n scop didactic n cadrul laboratorului de Anatomie de la F.M.V. Bucureti. Formaiunile venoase au fost cercetate dup injectarea lor cu o substan plastic contrastant (AGO), dizolvat n aceton (20-30%). Injectarea masei plastice dizolvate s-a realizat dup splarea patului venos cu ser fiziologic, prin vena pudend extern. Dup injectare piesa a fost supus unui proces de formolizare timp de 24 de ore. Studierea, descrierea i omologarea formaiunilor s-a fcut n concordan cu Nomina Anatomica Veterinaria - 1994.
27
REZULTATE I DISCUII Venele principale de descrcare ale ugerului sunt reprezentate prin cele dou vene pudende externe. Secundar sngele este descrcat i prin venele pudende interne (Foto 1).
Foto 1 - Aspect de ansamblu al venelor glandei mamare la ovine - vedere dorsal (original) 1- vena pudend extern; 2- vena pudend intern; 3 - rdcina lateral a venei pudende externe; 4- rdcina median; 5- rdcina medial; 6- limfonod mamar
Fiecare ven pudend extern rezult prin confluarea la nivelul inelului inghinal superficial a 3 rdcini venoase: lateral, median, medial. Rdcina lateral are calibrul cel mai redus i urmrete marginea lateral a ugerului, avndu-i originea la extremitatea antero-lateral a acestuia. Rdcina median urmrete aproximativ planul dorso-median al fiecrei mamele, fiind cea mai dezvoltat dintre rdcinile venei pudende externe (Foto 2-4). Originea acestei ramuri o constituie n regiunea abdominal ventral, anterior de baza ugerului, vena epigastric caudal superficial. n a doua jumtate a gestaiei i n perioada lactaiei, vena epigastric caudal superficial apare foarte dezvoltat i reprezint principalul vas de descrcare a sngelui venos de la nivelul ugerului. n general, rdcinile mediane au calibru inegal (80% din cazuri). Cranial de baza ugerului, la aproximativ 3-4 cm, n 30% din cazuri, rdcinile mediane ale celor 2 vene pudende externe sunt conectate transversal printr-o ramur cu
28
traiect oblic i uor sinuoas (Foto 2-6). Pe traiect rdcina median primete numeroi aflueni ce abordeaz trunchiul principal att din sens lateral i medial ct i din plan profund.
Foto 2 - Aspect diferenial privind originea i traiectul rdcinilor celor dou vene pudende externe la oaie (original) 1 -vena pudend extern stng; 2 - vena pudend extern dreapt; 3 - rdcina lateral; 4 - rdcina median; 5 - rdcina medial; 6 - ramur de anastomoz ntre rdcinile mediane; 7 limfonod mamar;
La limita dintre treimea anterioar i mijlocie a bazei ugerului, rdcina median a pudendei externe primete un puternic afluent, ce i are rdcinile att n regiunea subcapsular n planul median ventral al ugerului, ct i la faa medial a mamelei de partea opus. Pe tot traiectul su exist ramuri comunicante ntre afluenii celor 3 rdcini ale venelor pudende externe. La aproximativ 2 cm de locul de convergen a celor 3 rdcini, rdcina median a venei pudende externe primete un ultim mare afluent, ce i are originea la faa ventral a glandei mamare corespunztoare, n esutul conjunctiv subcutanat, apoi urc i abordeaz rdcina la faa ventral a acesteia. n general, rdcinile mediale au un traiect diferit pe dreapta fa de situaia de pe partea stng. Astfel, mai frecvent (70% din cazuri) am ntlnit situaia n care rdcina medial a venei pudende externe drepte i are originea la extremitatea anterioar a mamelei corespunztoare, apoi n traiectul su caudal i mrete progresiv volumul, plasndu-se pe toat lungimea la aproximativ 1,5 cm de planul sagital al ugerului.
29
Pe partea opus, rdcina medial a venei pudende externe stngi i are originea, n aceste cazuri, n regiunea subcutanat a planului median ventral al ugerului, apoi urc pe direcia septumului mamar median i se unete n final la zona de convergen dintre vena pudend extern i vena pudend intern. n 70% din cazuri rdcinile mediale ale celor dou vene pudende externe sunt conectate n poriunea terminal printr-o ramur venoas dispus transversal (Foto 3)
Foto 3 - Aspectul ramurii de anastomoz a rdcinilor mediale a venelor pudende externe (original) 1 - rdcini mediale ale venelor pudende externe; 2- ramura anastomotic; 3 - rdcinile mediane; 4 - limfonodurile mamare.
Venele pudende interne se detaeaz din zona de convergen a radciniilor median i medial ale venelor pudende externe . n 20% din cazuri s-a observat c vena pudend intern stng apare ca o continuare direct, n sens caudal, a rdcinii mediale aparinnd venei pudende externe stngi. Cele dou vene pudende interne se orienteaz caudal, n regiunea perineal i, n 90% din cazuri, sunt anastomozate antero-ventral de arcada ischiatic printro ramur dispus transversal (Foto 4). n partea caudal a bazei ugerului, rdcinile mediale ale celor dou vene pudende externe sunt anastomozate printr-o ramur transversal bifurcat la extremitatea dreapt.
30
Foto 4 - Aspectul venelor pudende interne atunci cnd ele sunt conectate printr-o ramur anastomotic (original) 1- venele pudenda externe; 2- venele pudende interne; 3- ramur anastomotic; 4 - rdcina lateral a venei pudende externe; 5 - rdcina median a venei pudende externe; 6-rdcina medial a venei pudende externe; 7- ramur anastomotic; 8 - limfocentrul mamar.
CONCLUZII Fiecare ven pudend extern, ce reprezint vasul principal de descrcare a ugerului, este format din trei rdcini: lateral median i medial. n a dou parte a perioade de gestaie principalul vas de descrcare este reprezentat de vena epigastric caudal superficial. Cranial de baza ugerului, la aproximativ 3-4 cm, n 30% din cazuri, rdcinile mediane ale celor dou vene pudende externe sunt conectate transversal printr-o ramur cu traiect oblic i uor sinuoas. Ramuri mai reduse, inconstante ca numr i topografie, conecteaz afluenii celor trei rdcini ale venelor pudende externe. S-au observat conexiuni transversale ntre rdcinile mediale dar i ntre venele pudende externe.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. Barone, R., 1996 - Anatomie compare de mamiferes domestiques, Tome V Angiologie, Ed. Vigot, Paris. Benzie, D.; Cresswell, E.; 1962 Studies on the lactation of sheep. Res. Vet. Sci. 3(3), 231 235.
31
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 3. 4. 5. 6. 7. Coofan, V., 1986 Anatomia i fiziologia animalelor domestice. Ed. Ceres, Bucureti. May, N.D.S., 1970 The anatomy of the sheep (a dissection manual), Third ed. University of Queensland Press, St. Lucia, 225 240. Nickel, R.; Schummer, A.; Seiferle, E., 1973 Lehrbuch der Anatomie der Haustiere. Verlag Paul Parey, Berlin Hamburg. Patea, E.; Coofan, V.; Chiescu, t.; Miclea, M.; Cornil, N.; Nicolescu, V.; Radu, C.; Popovici, I.; Palicica, R., 1985 Anatomia comparat a animalelor domestice, vol. I i II. Ed. didactic i pedagogic, Bucureti. Sisson, S.; Grossman, J.D.; Getty, R., 1975- The Anatomy of the Domestic Animals, vol. I. W.B. Saunders Comp., Philadelphia London Toronto.
32
ANATOMICAL PARTICULARITIES OF THE PELVIS OF THE CARPATHIAN BEAR

PARTICULARITILE ANATOMICE ALE PELVISULUI LA URSUL CARPATIN
C. SPTARU, Mihaela-Claudia SPTARU, D. ANIA U.S.A.M.V. Iai At the bear similar to domestic mammals, the pelvis is composed of (ilium, ischium and pubis), coxal articulated dorsally with the sacrum. The ilium is particular through an iliac palette of triangular form, provided with a wide gluteus fosse. The neck of the ilium is short and the tubercle of the small psoas muscle if found in the vicinity of the cotillion cavity. The ischium has a massive body, provided with a rounded off ischiatic spine. The ischial tuberose is very developed in a triangular form. The caudal edge of the ischium attains an ischial arch in a V shape with a dorsal opening. The pubis has a triangular form with a sharp cranial edge and medial of the cotillion cavity it is provided with a developed tuberous eminence. The sacrum has a trapezoidal form, with callous wings and the articulation area oriented dorsum-ventrally. The median sacral crest, modicum, represented of 4 distanced spines.
Key words: anatomy, osteology, Carpathian bear.
The Carpathian bear is an animal with an especial cynegetic interest for Romania. The study of the pelvis and its components constitutes an important material that can be used in litigation situations as for the settlement of certain morph-functional peculiarities of this species. MATERIAL AND WORK MODE
The study has been made on bear bones provided form gunshot animals. The bones have been prepared by boiling or by disencumbering of the adjacent tissue. It was pursued the shape, the lengthiness and development of bone processes and of the articulate surfaces, in comparison with the reference species, the particularities being illustrated by photographing.
RESULTS AND ARGUMENTS The pelvis, as on the majority of mammals is formed of the two coxal (ilium, ischium and pubis) and the sacral bone. The coxal at the bear is particularized through:
33
- The ilium has a wide ileac palette, oriented ventral-lateral, being provided with a deep gluteus fosse. It has an almost triangular aspect, with a geminated dorsal angle and at a distance of 7-12 cm. one of another. The ventral angle presents only a tendency of germination. On the medial face of the ilium the iliac palette is convex being provided with muscular tubercles. Auricular surface is well delimited by a circular bony crest that stretches from the base of the iliac palette on the body of the ilium to the neck of the ilium (fig. 1).
Fig. 1 - Dorsal view of pelvis. A - coxal, a - ilium, b - ischium, c - pubis, 1 - wing of ilium, 2 - sacral tuber, 3 - coxal tuber, 4 - iliac crest, 5 - incisura iliac, 6 - acetabulum, 7 - incisura ischium, 8 - ischial tuber, 9 - ischial arch, 10 - ischial spine, 11 - obturator foramen, B - sacrum, 1 - sacroiliac joint, 2 - spinous process, 3 - dorsal sacral foramina. C - caudal vertebras.
The ilium crest is convex being very callous and covered in fibro-cartilage which solidifies at the adult. The neck of the ilium is very short, having near the circumference of the cotillion cavity an evident tubercle for the insertion of the little tuber muscle positioned next to the preacetabulum tubercle. - The ischial has a massive body, the dorsal margin provides a round ischiatic crest. The ischial tuber is very developed, in shape of a triangle, with a tendency of splitting itself in cuspizi (ticuspida) the lateral cuspid being more obvious and it has a slight ventral orientation.
34
The caudal margin of the ischium is slightly rounded off, being covered with a fibrocartilage partially ossified it has o dorso-ventrally, easy lateral-medial, realizing this way a ischial arch in shape of a V with a dorsal opening. The ischiatic table is modicum and together with the caudal portion of the pubis forms the ischio-pubic simfiza, respective the paving of the pelvic cavity. - the pubis has a triangular form with the cranial edge sharpened, provided with a tuberous eminence close to the cotillion cavity that is the place for insertion for the prepubic tendon (fig. 2).
Fig. 2 - Ventral views of pelvis 1 - auricular articular surface, 1 - scral tuber, 1 - coxal tuber, 2 - iliac crest, 3 - acetabulum tuber, 4 - transverse processes, 5 - ischial tuber, 6 - pelvic symphysis, 7 - iliopubic eminence, 8 - promontory, 9 - caudal vertebras, 10 - transverse diameter.
The cotillion cavity is deep, provided caudal-medial with a deep incision, bordered by a strong transverse ligament, it continues with a wide rough surface up to the center of the cavity splitting the cotillion cavity in articulate surface and rough surface. On the anterior edge of the cavity we can see a strong preacetabulary tuber that determines the thickening of the anterior wall of the cavity and also the extension to the anterior of the articulate cavity (fig. 3). The sacrum has a trapezoid form, the wings of the sacrum are thickened having the articulate surface with the coxal oriented dorsal-ventrally, being widespread on the entire lateral surface of it.
35
Fig. 3 - Acetabulum cavity. a - ilium, b - ischium, c - pubis 1 - ligamentary face of the acetabulary cavity, 2 - lunate articular surface, 3 - transverse ligament, 4 - acetabulum, 5 - preacetabulary tuber, 6 - ischial spine.
The median sacrum crest is represented by 4 reduced and distanced spines, the first having a height of 2-3 cm the rest decreasing and rounding off taking the aspect of tubercles. Ventrally the sacrum presents 4 subsacral holes symmetrical, wide that open up to the level of the suprasacral holes. The sagital axe is a little curb cranial-caudal. The diameters of the pelvis: sagital, vertical and of the caudal aperture are almost equal. CONCLUSIONS 1. The ilium presents a developed iliac palette, with a wide iliac fosse. The auricular articulate surfaces are wide, set medial at the limit from the palette ant the neck of the ilium. 2. The cotillion cavity is deep, the anterior edge is thickened and provided anterior with a developed preacetabulary tubercle. 3. The ichiatic arcade is in a V shape, the dorsal opening and the line that connects the ischiatic tuberoses forms an equilateral triangle. 4. The diameters of the pelvis are almost equal. The axe of the coxal is of 130.
36
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. Grasse P.P., 1972 - Traite de Zoologie, Anatomie. Systematique, Biologie. Tome XVI, Fascic. VII, Paris. Konig H.E., Liebich H.C., 1999 Anatomie der Haussngentiere. Band I, Schattauer, Stuttgart, New York. Nickel R., Schummer A., Seiferle E., 1992 Lenbuch der Anatomie der Haustiere. Band I, Verlag Paul Parey, Berlin und Hamburg. Tudor Denisa, Constantinescu Gh., 2002 - Nomina Anatomica Veterinaria. Ed. Vergiliu, Bucureti.
37
PARTICULARITI MORFO-FUNCIONALE ALE MEMBULUI TORACIC LA VEVERI (SCIURUS VULGARIS)

MORPHO-FUNCTIONAL PARTICULARITIES OF THE THORACIC MEMBER ON THE SQUIRREL (SCIURUS VULGARIS)
Mihaela-Claudia SPTARU U.S.A.M.V. Iai Framed in the big group of the rodents, the squirrel manages to harmonize the conformation of the skeleton in conformity with its needs for locomotion and alimentation in the environment where it lives. Hereby in what concerns the morpho-functional particularities of the skeleton, on the squirrel we can observe the intermediary characteristics between the conformations of the same structures on the rodents and cat.
Key words: scapula, humerus, squirrel.
ncadrat n grupul mare al roztoarelor, veveria reuete s-i armonizeze conformaia scheletului conform nevoilor de locomoie i de alimentaie dependente de mediul n care triete. Astfel, n ceea ce privete particularitile morfo-funcionale ale scheletului, la veveri se observ caractere intermediare ntre conformaia acelorai structuri la roztoare i pisic. MATERIAL I METOD
Studierea particularitilor morfo-funcionale ale scheletului la veveri s-a realizat prin disecarea i prepararea pieselor osoase raclnd esuturile adiacente de pe acestea, urmrind lungimea i aspectul proceselor nearticulare i ntinderea suprafeelor de articulare corespunztoare fiecrui os. Particularitile gsite au fost fotografiate, descrise i comparate cu structurile asemntoare ntlnite la alte specii, urmrindu-se permanent interpretarea acestora, conform principiilor anatomice de baz, sub raportul cauz-efect.
REZULTATE I DISCUII Membrele anterioare sunt mai scurte dect cele posterioare i sunt folosite pentru crat i inerea hranei. Oasele centurii scapulare au particulariti morfologice asemntoare mai mult cu cele de la feline, fiind reprezentate prin spat i o clavicul de aproximativ 2 cm. Spata, de form triunghiular (asemntor leporidelor) are restul caracterelor foarte apropiate cu cele ale pisicii. Unghiul cervical este rotunjit prin
38
continuarea marginii dorsale cu cea cervical, cartilajul suprascapular fiind redus la o buz epifizar. Spina scapular este nalt, se desprinde perpendicular de pe faa lateral a spetei pe care o mparte n cele dou fose ntr-un raport egal. Ventral, spina scapular se termin ventral cavitii glenoide cu un acromion ce se articuleaz cu clavicula. Paracromionul este scurt i lit. Particularitatea spetei la veveri o constituie detaarea pe faa medial a spetei a unei spine scapulare mediale, ce mparte suprafaa n dou fose, fosa subscapular medial cranial i o fos subscapular medial caudal, ntr-un raport de 1 la 3. Aceast spin ncepe i se termin la nivelul planului osos, separnd ariile de inserie pentru musculatura subscapular, separat n dou grupe. Procesul coracoid are aproape 0,5 cm fiind orientat caudo-ventral. Cavitatea glenoid este ntins i pe tuberculul supraglenoidal astfel nct axul longitudinal este de dou ori mai mare dect cel latero-medial.
Fig. 1 A - Spata la veveri, faa lateral 1 - unghiul cervical, 2 - spina scapular, 3 - acromion, 4 - paracromion, 5 - fosa supraspinoas, 6- fosa infraspinoas B Clavicula; C Humerusul; D - Radius i Ulna
Fig. 2 A - Spata la veveri, faa medial 1 - unghiul cervical, 2 - buza epifizar, 3 - spina subscapular, 4 - proces coracoid B Clavicula; C Humerusul; D - Radius i Ulna
Humerusul este lung i rectiliniu, anul brahial este superficial, fiind limitat de creasta deltoidien redus i de o puternic creast a epicondilului.
39
Extremitatea proximal a humerusului se caracterizeaz printr-un cap articular aproape hemisferic, mrginit de cei doi tuberculi humerali ce nu depesc planul articular. Tuberculul mare este foarte redus, marcnd doar anul bicipital, n schimb medial se deta un tubercul mic cruia I se pot identifica vrful i convexitatea. Extremitatea distal este lit transversal prin detaarea epicondililor. ncepnd din treimea distal a humerusului se deta creasta epicondilului lateral ca o lam osoas tioas. Asemntor felinelor, humerusul la veveri prezint o epitrohlee masiv cu aspect de tubercul, deasupra acesteia formndu-se gaura epitrohlear prin detaarea unei lame osoase ce unete corpul humeral de epitrohlee.
Fig. 3 - Extremitatea distal a humerusului la veveri, aspect medial 1 - epicondil, 2 - epitrohlee, 3 - creasta epicondilului, 4 - trohleea humeral, 5 - fos olecranien
Fig. 4 - Extremitatea distal a humerusului la veveri, aspect lateral 1 - capitulum humeri, 2 - condilul medial al trohleei, 3 - creasta epicondilului, 4 - epitrohlee, 5 - gaur epitrohlear, 6 - fos radial
Articulaia cotului la veveri este n aa fel structurat nct s permit micri ample de supinaie, asemntor felinelor, dar conserv i caractere comune cu alte roztoare. Suprafaa articular distal a humerusului are un caracter mixt. Lirea extremitii distale a humerusului este consecina mririi suprafeei articulare a humerusului. Aceasta este compus dintr-un condil care manifest caracterul de capitulum humeri numai cranial, caudal suprafaa articular se ngusteaz, transformndu-se ntr-o creast ce delimiteaz o veritabil trohlee. Condilul humeral se articuleaz cu cavitatea glenoid a radiusului. Medial de condil, condilul medial al trohleei limiteaz suprafaa articular a humerusului printr-o creast evident. Trohleea humeral devine un an larg i superficial, perfect structurat caudal unde are o orientare oblic n sens medial.
40
Radiusul i ulna sunt lungi i uor curbate, independente i separate printr-o arcad radio-ulnar ngust. La veveri ulna are un olecran patrulater, orientat cranio-medial. Incizura semilunar are form de S , ntins att pe prile laterale ale ciocului olecranului ct i pe procesul coronoid medial al ulnei. Dintre oasele complexului carpien cel mai dezvoltat este semilunarul care se articuleaz cu radiusul printr-un condil asemntor unui cap articular, permind astfel micri de hiperextensie i flexie ale regiunii. Veveria prezint cinci degete la membrul toracic, degetul I fiind redus la un rudiment de metacarp. Metacarpienele II- V au aproximativ aceeai lungime i aspect cu al falangelor corespunztoare proximale i medii, falanga distal este scurt la fiecare dintre degete, fiind acoperite de gheare.
Fig. 5 - Extremitatea proximal a radiusului Fig.6 - Oasele antebraului i autopodiului la veveri, aspect cranio-lateral i ulnei la veveri, aspect cranial 1 - radius, 2 - ulna, 3 - complexul osos 1 - olecranul, 2 - proces coronoid, carpien, I - metacarpul I, II- V - metacarpele 3 - incizura semilunar, 4 - cavitate II-V, a - falanga I, b - falanga medie, glenoid 3 - falanga distal
CONCLUZII 1. Chiar dac este ncadrat n grupul roztoarelor, la veveri, datorit tipului de via arboricol, oasele membrului anterior se apropie mai mult de caracteristicile celor de la feline. 2. Caracteristic spetei de veveri este detaarea unei spine scapulare mediale ce separ suprafeele de inserie pentru cei doi muchi subscapulari.
41
3. Asemntor felinelor, humerusul la veveri are la extremitatea distal o gaur epitrohlear i un capitulum humeri. 4. Incizura semilunar are suprafaa articular cu aspect de S, prin ntinderea acesteia att pe prile laterale ale ciocului olecranului ct i pe procesul coronoid lateral al ulnei. 5. Degetul I este rudimentar, metacarpienele II-V au aproximativ aceeai lungime cu primele dou falange corespunztoare fiecrui deget.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Barone R., i colab., 1973 Atlas danatomie du lapin. Ed. Masson et C-ie, Paris. Coofan V., Palicica R., Valentina Hricu, Enciu V., 1999 Anatomia animalelor domestice. vol. I, Ed. Orizonturi Universitare, Timioara. Hricu Valentina, Coofan V., 2000 Anatomia animalelor de blan- Nutria i Dihorul. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai. Konig H.E., Liebich H.C., 1999 Anatomie der Haussngentiere. Band I, Schattauer, Stuttgart, New York. Tudor Denisa, Constantinescu Gh., 2002 - Nomina Anatomica Veterinaria. Ed. Vergiliu, Bucureti.
42
PARTICULARITI ANATOMO- FIZIOLOGICE ALE MEMBRULUI PELVIN LA VEVERI (SCIURUS VULGARIS)

MORPHO-FUNCTIONAL PARTICULARITIES OF THE PELVIC MEMBER ON THE SQUIRREL (SCIURUS VULGARIS)
Mihaela-Claudia SPTARU, C. SPTARU U.S.A.M.V. Iai The conformation and aspect of skeleton components of the pelvic member on the squirrel (Sciurus vulgaris) it conserves the general characteristics met also on the rest of the representatives of the Rodentia group. The differences demonstrated through morpho-functional particularities, are the adaptation of the bone-ligametary and muscular structures on the arboreal lifestyle.
Key words: squirrel, sacrum, femur, metacarp
Conformaia i aspectul componentelor scheletului membrului pelvin la veveri conserv n mare msur caracteristicile generale ale tuturor reprezentantelor grupului Rodenia. Deosebirile descrise ca structuri morfofuncionale particulare veveriei nu sunt altceva dect adaptri ale sistemului locomotor la modul de via arboricol. MATERIAL I METOD
Prin disecia, prepararea prin raclare i fierbere a pieselor osoase ce compun scheletul membrelor pelvine la veveri a fost posibil evidenierea caracterelor morfologice ale acestora. Descrierea, msurarea i fotografierea acestora a permis efectuarea unui studiu comparativ ntre structurile osoase provenite de la veveri (un roztor arboricol) i ale altor specii de roztoare i carnivore cu care, datorit particularitilor de deplasare, prezint foarte multe asemnri.
REZULTATE I DISCUII La veveri, comparativ cu restul roztoarelor, sacrumul este format doar din dou vertebre sudate ntre ele. Prima vertebr sacral are aceeai lime cu a vertebrelor lombare iar datorit detarii pe toat lungimea corpului a aripilor sacrumului acesta are aspect dreptunghiular. Aripile sunt masive, prezint pe toat lungimea suprafaa de articulare cu coxalul care este orientat n plan vertical. Procesele articulare craniale sunt masive i au suprafaa articular orientat
43
vertical. Procesul spinos este redus la o lam scurt de aproximativ 1 mm, fiind cel mai redus proces spinos, contrastnd cu nlimea proceselor spinoase ale celorlaltor vertebre. Suprafaa articular a corpului vertebrei se reduce la jumtate comparativ cu cea cranial, fiind sudate mpreun cu discul i suprafaa articular cranial a urmtoarei vertebre sacrale. Procesele spinoase sunt independente. Procesele mamiloarticulare se sudeaz ntre ele delimitnd gurile suprasacrale. Procesele transverse formeaz creasta sacrat lateral. Cea de-a doua vertebr sacral ngusteaz pn la jumtate limea sacrumului i are caracterele morfologice foarte asemntoare cu cele ale vertebrelor coccigiene. La veveri coxalul este rectiliniu i are o lungime de numai 4 - 4,5 cm.
Fig. 1 - Sacrumul la veveri, aspect latero- dorsal
Fig. 2 - Sacrumul la veveri, aspect ventral
Fig. 3 - Coxalul la veveri, aspect lateral A - Ilium, B - Ischium, C - Pubis 1 - palet iliac, 2 - creasta iliac, 3 tubercul muscular, 4 - cavitate acetabular, 5 - tuberozitate ischiatic, 6 - creasta ischiatic, 7 - simfiza-ischiopubien, 8 - gaura obturat
Fig. 4 - Coxalul la veveri, aspect medial A - Ilium, B - Ischium, C - Pubis 1 - palet iliac, 2 - suprafa muscular, 3 creasta supracotiloid, 5 - tuberozitate ischiatic, 6 - creasta ischiatic, 7 - simfiza ischio-pubien, 8 - gaura obturat, 9 -suprafa articular
Poriunea preacetabular reprezint aproximativ 2 / 1 (ca la pisic, la iepure 1/ 1). Paleta iliac este dreptunghiular, reprezentnd 2/3 din lungimea total a iliumului. Faa lateral este ornat cu o creast gluteen lung. Pe faa medial a
44
paletei iliace se observ o redus suprafa articular pentru sacrum cu aspect uniform, aezat pe gtul iliumului. Cranial de cavitatea cotiloid se deta un tubercul sub form de creast destinat inseriei muchiului dreptul femural. Tuberozitatea ischiatic este simpl, arcada ischiatic este larg, aproape rectilinie, fiind cptuit de o buz epifizar ngroat. Creasta supraacetabular este nlocuit cu o spin orientat caudal. Simfiza ischio-pubien este lung. Femurul la veveri are aspect rectiliniu, fiind de aproximativ 5 cm lungime. Procesele detaate la nivelul extremitii proximale ale femurului sunt asemntoare cu cele ale leporidelor, fiind reprezentate prin capul femural i cei trei trocamteri. Capul femural are suprafaa articular extins la de sfer, fosa ligamentar fiind situat central. Gtul capului femural este lung, deplasndu-l medial. Astfel, planul articulaiei coxo-femurale este plasat medial de femur i de planul axial al acestuia, ceea ce demonstreaz c greutatea i fora este distribuit i susinut de gtul i capul femural, fcnd posibile micri mult mai ample de abducie i adducie necesare deplasrii. Lateral capului femural se gsete trocanterul mare ce nu depete nlimea acestuia, avnd aspect patrulater. Sub trocanterul mare, pn la limita distal a sfertului proximal al femurului se desprinde sub form de creast triunghiular n unghi obtuz trocanterul al treilea. Trocanterul al doilea apare detaat mult medial, puternic i cu aspect de triunghi isoscel.
Fig. 5 - Femurul la veveri, aspect cranial 1 - capul femural; 2 - trocanter mare 3 - trocanterul II; 4 - trocanterul III 5 - trohleea femural; 6 - condil medial
Fig. 6 - Femur, aspect cranial A - pisic; B - iepure C - veveri
Formaiunile extremitii distale a femurului la veveri se aseamn mult cu cele ntlnite la feline, astfel trohleea femural este larg i superficial iar condilii sunt detaai mult n sens caudal, nafara axului longitudinal al femurului,
45
permind micri de extensie i flexie extrem de ample. Deasupra fiecrui condil se gsete cte o suprafa articular pentru sesamoizii femurali. Tibia i fibula la veveri sunt oase independente, articulate la ambele extremiti, formnd o larg arcad tibio-fibular. La extremitatea proximal, tibia este reprezentat prin cei doi condili care au suprafeele articulare uor excavate, separate de spinele tibiale foarte reduse n nlime.
Fig. 7 - Tibia i fibula la veveri, aspect lateral
Fig. 8 - Oasele autopodiului membrului pelvin la veveri, aspect dorsal 1 - tibie, 2 - fibul, 3 - oasele tarsiene, 4 - oase metatarsiene I-V, 5 - acropodiu a - falanga proximal, b - falanga medie, c - falanga distal
Pe lng micrile clasice de flexie i extensie, articulaia genunchiului poate executa micri de rotaie Creasta tibial cranial se ntinde pn la jumtatea tibiei. Cohleea este completat lateral de maleola fibular. La veveri membrul posterior prezint cele cinci degete cu lungime aproximativ egal. Degetul I este format din dou falange, falangele distale sunt scurte i acoperite de gheare puternice.
46
CONCLUZII 1. La veveri sacrumul este format doar din dou vertebre. 2. Coxalul la veveri prezint caractere intermediare ntre cel de pisic i iepure. 3. Extremitatea proximal a femurului la veveri este reprezentat printrun cap articular ce susine i preia greutatea i fora aplicate femurului. 4. Particularitile de conformaie ale extremitilor oaselor ce particip la realizarea articulaiei genunchiului permit efectuarea micrilor de rotaie.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Barone R., i colab., 1973 Atlas danatomie du lapin. Ed. Masson, Paris. Coofan V., Palicica R., Valentina Hricu, Enciu V., 1999 Anatomia animalelor domestice. Vol. I, Ed. Orizonturi Universitare, Timioara. Hricu Valentina, Coofan V., 2000 Anatomia animalelor de blan- Nutria i Dihorul. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai. Konig H.E., Liebich H.C., 1999 Anatomie der Haussngetiere. Band I, Schattauer, Stuttgart, New York, 1999. Tudor Denisa, Constantinescu Gh., 2002 - Nomina Anatomica Veterinaria. Ed. Vergiliu, Bucureti.
47
PARTICULARITI ALE COLATERALELOR I TERMINALELOR ARTERELOR ILIACE EXTERNE LA ECVINE

PARTICULARIRIES OF SOME COLLATERALS AND TERMINAL ARTERIES OF EXTERNAL ILIAC IN HORSE
F. STAN, A. GUDEA, A. DAMIAN, I. PAPUC U.S.A.M.V. Cluj Napoca The present study deals with some aspects observed during the study of the circulatory system in horse during the normal didactical activities in the Department of Comparative Anatomy of Faculty of Veterinary Medicine Cluj Napoca. Based on the dissections carried on 20 horse hind limb parts we concluded that there is a certain amount of individual plasticity in the case of some arteries, considered as collaterals or terminals in the pelvic and thigh area.
Key words: anatomy, arteries, horse
INTRODUCERE Artera iliac extern (Arteria iliaca externa) la cabaline, reprezint una dintre terminalele aortei descendente sau caudale la aceast specie. Ea se situeaz la marginea cranial a aperturii cavitii pelvine, naintea trunchiului venos omonim, i parcurge un traiect uor oblic ventro-caudal, din regiunea sublombar, pn la inelul femural, unde se termin prin artera femural. n traiectul su, emite artera circumflex iliac profund, artera cremasteric - la mascul sau artera uterin medie - la femel, i artera femural profund. La rndul su, artera femural profund (Arteria femoris profunda) are originea aproape de inelul femural i dup un traiect scurt de 4-5cm se termin prin artera circumflex femural medial i trunchiul arterial pudendoepigastric. Artera circumflex femural medial (Arteria circumflexa femoris medialis) trece pe faa medial a femurului, printre muchii pectineu i iliac, ramificndu-se terminal n muchii caudo-laterali ai coapsei. Trunchiul arterial pudendoepigastric (Trunchus arteriae pudendoepigastricus) poate avea originea direct din artera iliac extern. Face o inflexiune cranial, dorsal de inelul femural, iar la marginea cranial a inelului inghinal profund se bifurc terminal, prin artera epigastric caudal i artera pudend extern.
48
Artera epigastric caudal (Arteria epigastrica caudalis) trece medial de inelul inghinal profund i urmrete planeul cavitii abdominale, pe marginea lateral a muchiului drept abdominal. Artera pudend extern (Arteria pudenda externa) sau artera ruinoas extern, este mai dezvoltat dect artera epigastric caudal. Ptrunde n canalul inghinal, pe la nivelul comisurii caudale a inelului inghinal profund i se situeaz ntre inelul i canalul vaginal pe de o parte, i inelul i canalul inghinal, pe de alt parte. Prsete canalul inghinal la nivelul comisurii mediale a inelului inghinal superficial, unde se termin bifurcat, prin artera dorsal cranial a penisului i artera subcutanat abdominal, numit i arter epigastric superficial caudal, care la masculi emite artera prepuial, iar la femele, artera mamar cranial i artera mamar caudal. De la nivelul inelului femural artera iliac extern se continu cu artera femural (Arteria femoralis) care este considerat terminala sa. MATERIAL I METOD
Lucrarea s-a efectuat n laboratorul de Anatomie comparat al facultii de Medicin Veterinar din Cluj Napoca, pe un numr de 20 de cabaline de ambele sexe i de vrste diferite. Acetia au constituit material didactic pentru studenii anului II, Medicin Veterinar, n perioada 2002 2005. Ca i tehnic de lucru am folosit: disecia, observaia, fotografia i schiele.
REZULTATE I DISCUII n urma acestor cercetri, am observat la un individ de sex mascul, castrat, n vrst de 12 ani, absena arterei circumflexe femurale mediale ca i terminal a arterei femurale profunde. Topografic artera femural profund, este situat n vecintatea inelului femural, deasupra acestuia, la civa centimetrii mai sus de terminarea arterei iliace externe. Artera circumflex femural medial este prezent mai jos, sub inelul femural, avnd originea n artera femural, fiind chiar o colateral n sens caudal al acesteia. Din punct de vedere al calibrului vasului, aceasta este mult groas comparativ cu artera femurala profund, dei ea n mod normal (conform datelor din literatura de specialitate) ea reprezint doar una din cele dou terminale a acesteia, cea de-a doua fiind trunchiul pudendoepigastric. n cazul nostru, artera femural profund se confund cu trunchiul arterial pudendoepigastric, care n toate celelalte cazuri disecate de noi, precum i coform datelor din literatura de specialitate, ea reprezint mpreun cu artera circumflex femural medial, terminalele acesteia. Astfel, n cazul de fa, observm c trunchiul pudendoepigastric sau artera femural profund sunt colaterale sau mai
49
bine spus rmn colaterale ale arterei iliace externe, in timp ce artera circumflex femural medial devine colateral a arterei femurale.
Fig. 1 1 trunchiul pudendoepigastric; 2 epigastrica caudal; 3 pudenda extern; 4 circumflexa femural lateral; 5 muchiul sartorius; 6 iliaca extern; 7 inelul femural; 8 circumflexa femural medial; 9 limfocentrul inghinal profund
50
Fig. 2 1 a. iliac extern; 2 trunchiul pudendoepigastric; 3 inelul femural; 4 epigastrica caudal; 5 pudenda extern
51
CONCLUZII Aceste observaii arat, c n ce privete morfologia sistemului vascular, exist o mare variabilitate individual, att n sensul originii, ct i a traiectelor i raporturilor anumitor vase. n ce privete diferena de calibru ntre aceasta i artera femurala profund sau trunchiul arterial pudendoepigastric (cazul nostru), nclinm s credem c fiind vorba de un animal de talie mare (de traciune), este firesc, deoarece artera circumflex femural medial reprezint unul din principalele vase trofice ale muchilor propulsori. Calibru mai redus a arterei femurale profunde sau trunchiului arterial pudendoepigastric (cazul nostru) se datoreaz i faptului c este vorba de un mascul castrat, astfel c n cazul acesta artera pudenda extern este putin mai secundar ca importan
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. Barone R., 1996 - Anatomie comparee des mamiferes domestique, Tome 5 Angiologie, Ed. Vigot, Paris, 687-878 Coofan V., Palicica R., Hricu V., Carmen G., Valeriu E., 2000 - Anatomia animalelor domestice, vol.III., Ed.Orizonturi Universitare, Timioara, 93 - 95 Popovici I., Damian A., Popovici N., Chirilean I,. 2000 Angiologia animalelor domestice, Ed.Genesis, Cluj-Napoca, 179-210 Pastea E., Cotofan V., Chitescu St., Miclea M., Cornila N., Nicolescu V., Radu C., Popovici I., Palicica R., 1985 - Anatomia comparata a animalelor domesticeVol. I, Ed. Didactica si pedagogica Bucuresti, 394-397 Damian A., 2001 - Sistemul cardiovascular, Edit. Genesis Cluj-Napoca, 111 115 Papuc I., Cristina Paca, Vioara Mirean, 2001 - Anatomie comparat i histologie, Aparatul Cardiovascular, vol. I, Editura Risoprint Cluj-Napoca, pag 281 289.
52
CERCETRI PRIVIND NIVELUL PLASMATIC AL UNOR COMPONENTE BIOCHIMICE ENZIMATICE LA OBOLANI WISTAR GREFAI IP. CU ASCITA TUMORAL WALKER, CORELAT CU CONSUMUL DE AP SRCIT N DEUTERIU*
RESEARCHS CONCERNING THE PLASMA LEVEL OF SOME HEPATIC ENZYMES IN WISTAR RATS GRAFTED IP. WITH WALKER ASCITE TUMOR, CORRELATED WITH DEUTERIUM DEPLETED WATER INTAKE*
I.B. MARCUS, S. IANCU, B. SEVASTRE U.S.A.M.V. Cluj-Napoca The aim of the experiment was to perform an evaluation of the plasma level of some hepatic enzyme in Wistar rats inoculated ip. with Walker ascite tumor, correlated with the deuterium depleted water intake. Were made up 4 groups of adults rats, each of them containing 5 animals per group. To the groups 2 and 4 were given, ad libitum, deuterium depleted water (DDW) daily, during 6 months. In this time, the animals were clinically evaluated and the body weight was weekly determined. After that, the animals from the groups 3 and 4 were inoculated ip. with Walker ascite tumor. After 4 weeks all animals were killed, under narcose, and blood, plasma and tissues samples were gathered. From plasma samples were measured the values of some hepatic enzime, as ASAT, ALAT, PAL and GGT. The values recorded for the majority of the evaluated parameters are constantly situated over the superior limit considered normal for this species/category of animals.
Key words: Walker ascite, deuterium depleted water, enzimes.
INTRODUCERE Utilizarea apei superuoare, cunoscut i sub numele de ap srcit n deuteriu, n clinica oncologic dateaz din a doua jumtate secolului XX. Privite la nceput cu suspiciune i nencredere (Redston Griffiths, 1975, Schroeter, 1992), cercetrile ultimelor decenii realizate n acest domeniu au demostrat (Samlay i col., 1993, 2001), n baza unor investigaii pe ct de riguroase, pe att de laborioase, faptul c, printr-un mecanism nc incert, apa superuoar intervine n controlul creterii tumorale spontane i experimentale. Cercetrile realizate n aceast direcie au dus la dezvoltarea i lansarea pe piaa romneasc i strin (Samlay i col.,
Studiu finanat printr-un Grant de cercetare ncheiat cu CNCSIS, Tema 11, Cod CNCSIS 790. Realizarea cercetrilor a fost susinut material i de ctre RAAN, Drobeta Turnu Severin.
*
53
2001) a unor produse cu valoare terapeutic n oncologie, i nu numai, pe baz de ap srcit n deuteriu, utilizate mai ales n controlul creterii tumorale la om, dar i la animale (Bild i col., 1999). n acest moment, pe piaa romneasc exist doi productori de ap superuoar, dintre care cel mai important este reprezentat de RAAN (Regia Autonom pentru Activiti Nucleare), situat n Drobeta Turnu Severin, cu sprijinul i participarea cruia a fost realizat acest studiu.
MATERIAL I METOD DE LUCRU

Experimentul a fost realizat pe un numr de 20 de obolani Wistar, aduli, femele, care au fost distribuii n 4 loturi, a cte 5 animale per lot, dup cum urmeaz: Lotul 1 (n=5), cu o greutate medie/animal la introducerea n experiment de183,67,33 g/animal, a fost utilizat ca lot martor de referin. Lotul 2 (n=5), cu o greutate medie/lot la introducerea n experiment de 214,436,3 g/animal, a fost utilizat pentru evaluarea aciunii apei srcite n deuteriu. Lotul 3 (n=5), cu o greutate medie/animal la introducerea n experiment de 156,211,7 g/animal, a fost utilizat ca lot martor tumoral, inoculat cu ascita Walker. Lotul 4 (n=5), cu o greutate medie/animal la introducerea n experiment de204,421,1 g/animal, a fost utilizat pentru evaluarea efectului apei superuoare asupra creterii tumorale experimentale. In acord cu protocolul experimental stabilit, animalele din loturile 2 i 4 au consumat ap srcit n deuteriu timp de 6 luni, interval dup care loturile 3 i 4 au fost inoculate intraperitoneal (ip.) cu tumora ascitic Walker. n tot acest timp, animalele au fost urmrite clinic, nregistrndu-se lunar evoluia masei corporale. Dup realizarea transplantului tumoral, evaluarea clinic i determinarea greutii corporale s-a fcut sptmnal, iar dup un interval de 4 sptmni animalele au fost sacrificate prin puncia cordului, dup o prealabil narcoz cu eter. S-au recoltat probe pentru determinri hematologice, biochimice i gravimetrice. Din probele de plasm obinute s-a determinat concentraia enzimelor hepatice, respectiv ALAT, ASAT, PAL i GGT. Datele obinute au fost prelucrate statistic, prin determinarea mediei aritmetice simple (x), a deviaiei standard (s), deviaiei procentuale (%) i a testului t de semnificaie statistic.
REZULTATE I DISCUII n tabelul care urmeaz (tabel 1) sunt prezentate datele prelucrate statistic ale rezultatelor obinute la sfritul experimentului, din punctul de vedere al valorilor nregistrate n ce privete concentraia plasmatic a unor enzime cu specificitate hepatic i tisular, respectiv transaminazele ALAT i ASAT, fosfataza aclanin (PAL) i gamaglutamiltransferaza (GGT).
54
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Valori ale concentraiei plasmatice a enzimelor determinate la loturile experimentale la sfritul experimentului Enzimograma plasmatic Fosfataza ASAT alcalin GOT, AST PAL (UI/L) (UI/L) 96,06 68,2 36,95623 5,514073 124,76 180,5 12,36074 47,85269 62,21607 23,00417 7,84E-05 0,863325 119,36 121,34 45,62552 34,67381 43,7943 19,52078 -4,52413 -48,7556 0,00359 0,692976 0,026774 0,54794 195,54 213,88 97,86794 74,60166 50,8745 68,11296 36,1972 15,60688 38,95878 43,26725 0,085671 0,000176 0,001464 0,410776 0,168486 0,166903
Calcul startistic Lotul 1 (n=5) Lotul 2 (n=5) x s x s D% 1 T test 1 x s D% 1 D% 2 T test 1 T test 2 x s D% 1 D% 2 D% 3 T test 1 T test 2 T test 3
ALAT GPT, ALT (UI/L) 31,44 15,52701 47,26 12,00242 33,4744 0,724353 29,2 23,89236 -7,67123 -61,8493 0,424289 0,210902 44,22 16,14921 28,90095 -6,87472 33,96653 0,941125 0,579466 0,466687
GGT (UI/L) 6,12 3,435404 4,14 0,971082 -47,8261 0,037523 4,02 2,070507 -52,2388 -2,98507 0,350319 0,171614 3,12 2,513364 -96,1538 -32,6923 -28,8462 0,559789 0,092463 0,716352
Lotul 3 (n=5)
Lotul 4 (n=5)
Un prim aspect care trebuie menionat este faptul c, n ce privete corelaiile dintre consumul de ap srcit n deuteriu i particularitile evolutive ale diferitelor forme de cancer la animale, respectiv valorile enzimelor plasmatice investigate, n literatura de specialitate nu se gsesc date relevante n acest sens. Din acest motiv, interpretarea rezultatelor care urmeaz a fi prezentate i discutate va lua ca punct de referin valorile acestor componente plasmatice la animale de laborator sntoase sau bolnave de afeciuni nrudite. Valorile normale ale enzimelor plasmatice investigate, pentru specia de animale i categoria de vrst pe care s-a lucrat (Cathy A. Johnson-Delaney, 1996), prezint variaii, uneori foarte largi, situate ntre 17,5 30,2 UI/L pentru ALT, 45,7 80,8 UI/L pentru AST, i 56,8 128,0 UI/L pentru PAL. Un prim aspect care se impune la analiza rezultatelor obinute l constituie faptul c valorile nregistrate la lotul martor (1), utilizat ca lot martor de referin, se situeaz n mod constant la limita superioar de oscilaie furnizat de literatura de specialitate (Cathy A. Johnson-Delaney, 1996), i considerat a fi normal
55
pentru aceast specia i categoria de animale. n raport cu aceast situaie se poate constata faptul c, la lotul 2 (fig. 1), care a consumat zilnic ap srcit n deuteriu, valorile ALAT, ASAT i PAL se afl mult peste limita superioar a celor obinute la lotul de referin, i implicit a datelor furnizate de literatur, diferena maxim fiind obinut n cazul fosfatazei alcaline (+62,2%), a crei cretere este foarte semnificativ statistic (p<0,001). n schimb, GGT nregistreaz o scdere a concentraiei plasmatice la 4,14 UI/L, ceea ce reprezint o diferen de - 47,82% fa de martor, fr s aib, ns, i semnificaie statistic.
Fig. 1. Diagrama valorilor medii ale enzimelor plasmatice determinate la loturile 1 (M) si 2 (DDW)
200 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 ALAT (ui/l) ASAT (ui/l0 PAL (ui/l) GGT (ui/l)
180,5 ***
Lotul 1 (M) Lotul 2 (DDW)
- 47,8%
Fig. 2. Diagrama valorilor medii ale enzimelor plasmatice determinate la lotul tumoral (3) comparativ cu lotul de referinta (1) 140 120 100 80 60 40 20 0 Lotul 1 (M)
- 7,67% - 52,.2%
ALAT (ui/l) ASAT (ui/l) PAL (ui/l) GGT (ui/l)

+ 19,5% + 43,8% **
Lotul 3 (AW)
O situaie asemntoare (fig. 2) poate fi constatat i n cazul lotului 3 (inoculat ip. cu tumora Walker, forma ascitic) care, raportat la lotul martor (1) i la valorile furnizate de literatur, nregistreaz diferene intens pozitive pentru ASAT
56
(+19,5%) i, mai ales pentru PAL (+43,6%), n timp ce valorile ALAT i GGT scad vizibil, nregistrnd diferene procentuale de -7,67%, respectiv de -52,2%. Determinarea comparativ a valorilor enzimelor plasmatice la loturile 3 (martor tumoral) i 4 (inoculat cu tumora Walker i care a consumat ap srcit n deuteriu) evideniaz o situaie cel puin interesant. Astfel, dac diferenele nregistrate n cazul lotului 3 fa de martor (1) sunt pozitive pentru ASAT i PAL, respectiv negative pentru ALAT i GGT, pe fondul unei dezvoltri insidioase a tumorii ascitice Walker, la lotul 4, oscilaiile nregistrate sunt i mai mari, n ciuda faptului c lipsesc semnele clinice i necropsice care s sugereze dezvoltarea tumoral. Practic nici unul din animalele lotului 4 nu a dezvoltat ascita Walker inoculatat ip i, cu toate acestea, valorile enzimelor plasmatice investigate se situeaz, constant, mult peste limita superioar a lotului martor de referin (1) i, inclusiv a lotului martor tumoral (3), aspect care reiese cu claritate i din fig.3.
Fig. 3. Diagrama valorilor medii ale enzimelor plasmatice determinate la loturile 3 (Walker) i 4 (DDW+Walker)
Lotul 3 (AW) 250 200 150 100 50 +33,9% 0 +38,9% +43,2% Lotul 4 (DDW+W)
-28,8%
ALAT (ui/l)
ASAT (ui/l)
PAL (ui/l)
GGT (ui/l)
In sfrit, din fig. 4 rezult c, pentru toate enzimeme plasmatice determinate, valorile i diferenele procentuale nregistrate comparativ cu lotul martor sunt, n cazul loturilor 2, 3 i 4 constant pozitive pentru ASAT i PAL, constant negative pentru GGT, i cu o evoluie inconstant pentru ALAT. Diferenele cele mai pregnante afecteaz, i n cazul lotului 4, ASAT (+50,8% fa de lotul martor, i +38,9% fa de lotul 3), fosfataza alcalin (+ 68,1% fa de lotul 1, i +43,26% fa de lotul 3), respectiv GGT (-96% fa de lotul martor i 28,8% fa de lotul 3). Raportat la aceste rezultate, trebuie menionat c un nivel plasmatic crescut al unor enzime cum sunt alanin-amino-transferaza (ALAT), aspartat-aminotransferaza (ASAT), fosfataza alcalina (PAL) i gama-glutamil-transferaza (GGT) la animale poate fi rezultatul unor modificri/leziuni reversibile sau ireversibile ale membranelor hepato-celulare, asociate cu aspecte de necroz hepatic, colestaz, hipoxie sau inflamarea ficatului determinat de agenii infecioi sau
57
toxine bacteriene. Ct privete specificitatea modificrii valorii acestor componente biochimice plasmatice, ALAT este considerat o enzim specific ficatului, dei este prezent n concentraie redus i n alte esuturi, iar ASAT este, de asemenea, prezent n concentraii mari n hepatocite, astfel nct trebuie urmrit atent n cazul n care aceasta crete fr s antreneze o cretere corespunztoare a ALAT. Referitor la PAL i GGT, acestea sunt enzime asociate membranei celulare, iar creterea concentraiei lor plasmatice este asociat cu leziuni ale zonei pericanaliculare structurilor biliare (Ghergariu i col., 2000).
Fig. 4. Diagrama valorilor medii ale enzimelor plasmatice determinate la loturile experimentale luate n studiu.
220 210 200 190 180 170 160 150 140 130 120 110 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Lotul 1 (M) Lotul 2 (DDW) Lotul 3 (AW) Lotul 4 (DDW+W)
ALAT (ui/l)
ASAT (ui/l)
PAL (ui/l)
GGT (ui/l)
CONCLUZII Concluziile care se desprind din analiza i discutarea rezultatelor prezentate mai sus, coroborate cu informaiile furnizate de literatura de specialitate privitor la valorile normale i situaiile clinice care antreneaz modificri ale concentraiei enzimelor plasmatice investigate, au n vedere urmtoarele aspecte principale: 1) Concentraiile plasmatice ale enzimelor studiate (ASAT, ALAT, PAL i GGT) n cadrul acestui experiment la loturile martor se ncadreaz n limitele de oscilaie considerate normale pentru specia i categoria de animale pe care s-a lucrat, cu specificarea c ele se situeaz uor peste sau sub limita superioar. 2) Este, practic, imposibil de precizat, n acest stadiu al experimentului, dac consumul ndelungat de apa srcit n deuteriu (DDW) este responsabil de creterea semnificativ a concentraiei enzimelor investigate, avnd n vedere diferenele foarte mari nregistrate comparativ cu lotul martor de referin. 3) n acelai timp, este dificil de explicat cauza pentru care la lotul martor tumoral (3), inoculat ip. cu tumora ascitic Walker, valorile nregistrate se
58
ncadreaz n limitele de oscilaie considerate normale normale n cazul ALAT, PAL i GGT, i sunt doar foarte uor crescute fa de normal n cazul ASAT. 4) Considerm, de asemenea, mai mult dect interesant, asocierea celor mai crescute (n cazul ALAT, ASAT, PAL), respectiv mai sczute (n cazul GGT) valori ale enzimelor investigate la lotul 4 (inoculat ip. cu tumora ascitic Walker i care a consumat ap srcit n deuteriu), mai ales n condiiile n care la nici unul din animalele acestui lot nu au fost evideniate aspecte ale dezvoltrii tumorale.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. Bild W., Stefanescu I., Haulica I., Lupusoru C., Titescu G., Iliescu R., Nastasa V., 1999 - Research concerning the radioprotective and immunostimulating effects of deuterium-depleted water, Rom J Physiol. Jul-Dec;36 (3-4):205-218. Ghergariu S., Marina Spanu, Pop Al., Kadar L., 2000 - Manual de Laborator Clinic Veterinar, Ed. All Educational, Bucuresti, 34-67. Joseph J. Katz, 1965 - Chemical and Biological Studies with Deuterium, Thirty-Ninth Annual Priestley Lectures, Pennsylvania State University, 26-29. Kritchevsky D., 1960 - Deuterium Isotope Effects in Chemistry and Biology Annals of the New-York Academy of Science vol. 84, New-York: Academy of Science. Lamprect J., 1990 - Mitosis Arrested By Deuterium Oxide light microscopic, immunofluorescence and ultrastructural characterization European Journal of Cell Biology 51: (2) 303-312, Wissen-schaftliche Verlag GMBH. Redston Griffiths T., 1975 - The Possible Roles of Deuterium in the Initiation and Propagation of Aging and Other Biological Mechanisms and Processes, Proceedings of the Second International Conference on Stable Isotopes, Oak Brook Illinois, October 20-23. Samlay G., 1993 - Naturally occurring deuterium is essential for the normal growth rate of cell, FEBS Lett.,vol 317, Nr.1,2,1-4,februarie, SAMLAY si colab., The biological effect of deuterium-depleted water, a possible new tool in cancer terapy.,Z. Onkol. / J.of Oncol, 30:4,1998. Samlay G, 2001 - The biological effect of deuterium-depleted water, a possible new tool in cancer therapy. Anticancer Research, 21:1617-1621, Schroeter D., 1992 - Deuterium Oxide Arrests the Cell-Cycle of PTK2 Cells During Interphase European Journal of Cell Biology 58:(2) 365-370 Stuttgart, Germany: Wissenschaftliche Verlag MBH.
7.
8. 9.
59
INVESTIGAII BIOCHIMICE PRIVIND VALORILE TRANSAMINAZELOR SERICE I ALE COLESTEROLEMIEI CORELATE CU SENESCENA LA CINI CLINIC SNTOI
BIOCHEMICAL INVESTIGATIONS REGARDING THE VALUES OF SERIC HEPATIC ENZYMES AND CHOLESTEROL CORRELATED WITH AGING IN CLINICALLY HEALTHY DOGS
S. IANCU, I.B. MARCUS U.S.A.M.V. Cluj-Napoca The aim of the study was to reveal some clinical and para-clinical modifications that appear with the installation and evolution of aging in clinically healthy dogs. The study was conducted on 24 individuals, male and female dogs, with age ranges between 8 and 15 years, fed and raised as pets, in apartment conditions. The subjects were divided in two groups: group 1 (n - 12) with an age range between 8 and 10 years, and group 2 (n - 12) with an age range between 10 and 15 years. Following, every group was divided on genders males and females, so that 4 groups resulted, as mentioned below. Blood samples were collected from all 4 groups, and with a bicromatic fotometer, the hepatic enzymes (ALAT, ASAT), GGT, PAL and cholesterol level were determined for the evaluation of modifications that appear with aging. The obtained results revealed that the value of the investigated parameters increases together with the aging process. A part of the obtained values is situated in normal ranges or slightly above the average of animals from groups 1 and 2 (age between 8 and 10 years), but for groups 3 and 4 (age between 10 and 15 years), the obtained values are constantly situated above the normal average of this species.
Key words: dogs, aging, clinically healthy, blood biochemistry.
INTRODUCERE mbtrnirea sau senescena reprezint un fenomen biologic natural, ireversibil, care afecteaz lumea vie n ansamblul ei, constnd n procese de uzur la nivel celular, tisular i sistemic care premerg moartea celulei, esuturilor i, n final a organismului (Paolisso i col., 2000; Morley, 2004). Manifestarea cea mai pregnant a mbtrnirii o constituie declinul progresiv al funciei celulelor, esuturilor i organelor, nsoit de accentuarea producerii de radicali liberi i fenomene de liz celular, disfuncii mitocondriale, dezechilibre endocrine i instabilitate genomic (Mac Lean i col., 2004; Irina M. Conboy i col., 2005). Capacitatea regenerativ a esuturilor este mult afectat odat cu naintarea
60
animalelor n vrst, iar acest lucru se manifest la nivel sanguin prin tulburri care afecteaz funcia hematopoietic a mduvei osoase i, n acelai timp, prin modificri ale valorilor unor parametri celulari, biochimici i enzimatici serici (Mac Lean i col., 2004). Astfel, creterea sau scderea valorilor unor enzime serice poate constitui un indiciu valoros n aprecierea sensului i a severitii tulburrilor paraclinice care nsoesc instalarea i evoluia procesului de senescen la animale (Morley, 2004). n acest sens, creterea nivelului seric al unor enzime cum sunt fosfataza alcalina (PAL), gamaglutamiltransferaza (GGT), alanin-aminotransferaza (ALAT) i aspartat-amino-transferaza (ASAT) la cine poate fi rezultatul: 1) schimbrilor reversibile sau ireversibile ale membranelor hepatocelulare, asociate cu necroza hepatic, colestaz, hipoxie, hipoperfuzia sau inflamarea ficatului determinat de agenii infecioi, toxine sau de mbtrnire; 2) din depozite excesive de lipide (ficat gras), de cupru sau glicogen n hepatocit. Ct privete specificitatea acestor componente biochimice serice, ALAT este considerat o enzim specific ficatului la cine i pisic dei ea este prezent n concentraie redus i n alte esuturi, iar ASAT este, de asemenea, prezent n concentraii mari, astfel nct trebuie urmrit atent n cazul n care aceasta crete fr o cretere corespunztoare a ALAT. PAL i GGT sunt enzime asociate membranei celulare. Inducia enzimatic apare, n cazul lor, nainte de a se realiza creteri importante n snge. Aceste enzime sunt asociate cu leziuni ale zonei pericanaliculare structurilor biliare i reticului endoplasmatic. Hipercolesterolemia apare la pacieni suferinzi de: ocluzia cilor biliare, diabet, pancreatite, hipotiroidism, hiperadrenocorticism, sindrom nefrotic, hiperlipidemie postprandial, hipelipidemia idiopatic a Schnauzerului (Hostkins, 2004). MATERIAL I METOD DE LUCRU
Studiul a fost realizat pe animale cu vrste cuprinse ntre 8 i 15 ani, care au fost mprite n 4 loturi, dup cum urmeaz: Lotul 1 (n=7) i Lotul 2 (n=5) alctuite din femele i masculi de rase diferite, cu vrste cuprinse ntre 8-10 ani; Lotul 3 (n=7) i Lotul 3 (n=5) alctuite din femele i masculi de rase diferite, cu vrste cuprinse ntre 11-15 ani. Toate animalele din cele 4 loturi au fost supuse unui minuios examen clinic n prealabil, n urma cruia nu a fost depistat nici un semn clinic care s sugereze prezena sau evoluia unei mbolnviri, cu excepia faptului c o parte din indivizi examinai au fost supraponderali, iar din anamnez s-a desprins faptul c marea majoritate aveau o alimentaie dezechilibrat. Determinrile biochimice efectuate din probele de ser recoltate de la animalele luate n studiu au fost realizate cu ajutorul unui fotometru bicromatic de uz general, STAT FAX 1904 PLUS, compact, controlat de un microprocesor cu 6 filtre i bloc de incubare la 37C. Aparatul poate fi utilizat pentru a msura absorbane sau concentraii bazate pe reacii cinetice sau cu punct final. Orice test care necesit citire la lungimile de und identice sau apropiate cu cele ale filtrelor din dotare, pot fi efectuate cu ajutorul aparatului. Aparatul are inclus un bloc de incubare cu 12 poziii. Ca principiu de lucru, fasciculul de lumin de la o lamp cu 61
halogen trece mai nti printr-o lentil, apoi este direcionat printr-o apertur, iar n final traverseaz orizontal prin prob. Valorile obinute n urma determinrilor efectuate la cele 4 loturi de animale luate n studiu au fost prelucrate statistic, determinndu-se media aritmetic, deviaia standard i diferena procentual.
REZULTATE I DISCUII n tabelul 1 sunt prezentate limitele de oscilaie furnizate de literatura (Ghergariu i col., 2000; Marcus, 2004) pentru toi componeni biochimici i enzimatici luai n studiu, calculndu-se pentru fiecare parametru media aritmetic, n vederea raportrii i interpretrii statistice a rezultatelor obinute la loturile de animale investigate.
Tabelul 1 Valori normale ale parametrilor investigai (Ghergariu i col., 2000; Marcus, 2004) Parametrul biochimic Valori Valori de referin (limite de oscilaie) X ALAT (U/l) 5 102 53,5 ASAT (U/l) 10 55 32,5 GGT (U/l) 10 15 12,5 PAL (U/l) 20 156 88 COLESTEROL (mg/dl) 173 173
Analiza rezultatelor obinute la cele 4 loturi de animale luate n studiu a evideniat urmtoarele aspecte clinice i paraclinice: la examenul clinic toate animalele prezentau semne mai mult (cele din categoria 10-15 ani) sau mai puin (categoria 8-10 ani) accentuate ale instalrii fenomenelor de mbtrnire. n ce privete determinrile biochimice, pentru majoritatea parametrilor investigai, limitele de oscilaie se ncadreaz n limite normale pentru aceast specie de animale (Ghergariu i col., 2000; Marcus, 2004), cu cteva variaii mai semnificative fa de valorile de referin, care privesc, la lotul 1 (tabel 2 i fig. 1), scderea ALAT (-40,95%), creterea valorii GGT (-53,51%) i PAL (+43,05%) inclusiv creterea colesterolemiei (+40,95%). Situaia se menine asemntoare i n ce privete lotul II (n=5), n componena cruia intr masculi cu vrsta cuprins ntre 8 i 10 ani, i la care nivelurile serice obinute pentru componentele investigate sunt i mai apropiate de cele considerate normale pentru aceast specie de animale, exceptnd i n acest caz uoara scdere a ALAT (-17,22%) i creterea cu 27,09 procente a fosfatazei alcaline (PAL).
62
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 2 Valori ale parametrilor investigai la lotul I () (8 -10 ani) Parametrul biochimic Cazul LOTUL 1 (n=7) X +S D% 37.96 14.30 -40.95 39.07 13.04 16.82 8.14 3.04 -53.51 154.5 33.16 43.05 Calcul statistic ALAT (U/l) ASAT (U/l) GGT (U/l) PAL (U/l) COLESTEROL (mg/dl) 292.97 149.74 40.95
Fig. 1. Diagrama valorilor medii ob inute la loturile 1 i 2 (8-10 ani) comparativ cu date le de refe rin din lite ratur
160 140 120 100 80 60 40 20 0 ALAT ASAT GGT PAL
37,96 45,64 39,07 52,56 8,14 12,64
Valori de referinta Valori lotul 1(n=7 ) Valori lorul 2 (n=5 )
154,51 120,7
Tabelul 3 Valori ale parametrilor investigai la lotul II () (8-10 ani) Parametrul biochimic Cazul LOTUL II (n=5) X +S D% 45.64 32.96 -17.22 52.56 8.85 38.17 12.64 2.98 1.11 120.7 50.09 27.09 Calcul statistic ALAT (U/l) ASAT (U/l) GGT (U/l) PAL (U/l) COLESTEROL (mg/dl) 165.46 42.89 -4.56
Semnificaia diferenelor statistice obinute n cazul valorii componentelor serice investigate la loturile 3 () i 4 (), n componena crora intr animale cu vrsta cuprins ntre 11 i 15 ani (tabel 4 i 5, fig. 2), se amplific n cazul tuturor parametrilor.
63
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Fig. 2. Diagrama valorilor medii obinute la loturile 3 i 4 (11-15 ani) comparativ cu datele de referin
180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 ALAT ASAT GGT PAL
44,51 10,41 17,52 64,12 82,44 60,26 Valori de referinta Valori lotul 1(n=7 ?) Valori lorul 2 (n=5 ?) 176,36 160,8
Tabelul 4 Valori ale parametrilor investigai la lotul III () (11 -15 ani) Parametrul biochimic Cazul LOTUL III (n=7) X +S D% 44.51 21.93 -20.19 82.44 71.46 60.58 10.41 3.49 -20.03 160.9 70.98 45.31 Calcul statistic ALAT (U/l) ASAT (U/l) GGT (U/l) PAL (U/l) COLESTEROL (mg/dl) 250.53 93.60 30.95
Astfel, comparativ cu valorile de referin (tabel 1) furnizate de literatura de specialitate (Ghergariu i col., 2000; Marcus, 2004), n cazul cinilor cu vrsta cuprins ntre 11 i 15 ani diferenele procentuale (%) nregistreaz variaii pozitive pentru ASAT (+60,58%), PAL (+45,31%) i Colesterol (+30,95%), respectiv negative pentru ALAT (-20,19%) i GGT (-20,03) n cazul lotului 3.
Tabelul 5 Valori ale parametrilor investigai la lotul IV () (11 -15 ani) Parametrul biochimic Cazul LOTUL IV (n=5) X +S D% 64.12 39.15 16.56 60.26 25.61 46.07 17.52 13.08 28.65 176.36 10.58 50.10 Calcul statistic ALAT (U/l) ASAT (U/l) GGT (U/l) PAL (U/l) COLESTEROL (mg/dl) 205.2 74.51 15.69
n cazul lotului IV, constituit din masculi cu vrsta cuprins ntre 11 i 15 ani, pentru toate componentele investigate, diferenele procentuale nregistreaz variaii pozitive, mai mult sau mai puin accentuate, exprimate prin creterea
64
valorii serice a ALAT (+16,56%), ASAT (+46, 07%), GGT (+28,65%), PAL (+50,1%) i, inclusiv Colesterol (+15, 69%).
Fig. 3. Diagrama valorilor medii ale colesterolemiei la loturile de animale investigate, comparativ cu valorile de referin
Valori de referinta Lotul I Lotul II Lotul III Lotul IV
300 250 200 150 100 50 0
292,97 250,53 205,2 173 165,46
Colesterolul (mg/dl)
Dac pentru majoritatea parametrilor enzimatici determinai diferena % fa de valorile de referin de ncadreaz n limitele de oscilaie normale, uneori cu uoare depiri ale limitei superioare, n cazul colesterolemiei, valorile medii obinute i, implicit diferenele % nregistrate se situeaz cu mult peste media normal de 173 mg/dl. Ceea ce rezult din analiza informaiilor prezentate i discutate mai sus este c, dac din punct de vedere clinic instalarea senescenei se exprim prin modificri vizibile i relativ uor de cuantificat la un examen obiectiv al animalelor, n ce privete tabloul paraclinic corelat acestui fenomen, lucrurile nu mai sunt att de limpezi. Considerat din aceast perspectiv, mbtrnirea este un fenomen lent, progresiv, care, n primele faze (considernd vrsta de 8-10 ani la carnasiere) nu se exprim prin modificri semnificative la nivelul componentelor biochimice i enzimatice serice, acestea instalndu-se abia peste limita de 10 ani, i doar la intensiti care nu depesc dect rareori limita superioar considerat normal pentru specia de animale investigat. Foarte probabil c semnificaia biologic redus a variaiilor nregistrate pentru parametri determinai se datoreaz tocmai unor limite de oscilaie extrem de largi, care merg de la 5 la 102 UI n cazul ALAT, sau de la 20 la 156 UI n cazul fosfatazei alcaline (PAL), pentru ca n cazul altor enzime serice (ex: GGT), aceste limite de oscilaie normale s se situeze constant ntre 10 i 15 UI. Interesant de remarcat este i faptul c, n cazul unora din componentele serice determinate, valorile medii situate mult peste limita superioar considerat normal se coreleaz cu o dispersie foarte larg a valorilor individuale, exprimate, de exemplu, prin valori ale deviaiei standard de pn la 149,74 n cazul colesterolului la lotul I, 50,09 n cazul PAL la lotul II, 71,46 i 70,98 n cazul ASAT i PAL la lotul III, respectiv 74,51 n cazul colesterolemiei la lotul IV.
65
CONCLUZII Analiza rezultatelor prezentate i discutate mai sus, coroborate cu datele din literatura de specialitate, permit cteva concluzii cu privire la urmtoarele aspecte: 1) Senescena este un fenomen biologic care se instaleaz progresiv, antrennd, ntr-o prim etap modificri exprimate printr-un tablou clinic specific; 2) Din punct de vedere paraclinic, la animalele vrstnice, clinic sntoase, tabloul biochimic sanguin nu nregistreaz modificri notabile, cel puin n faza incipient a mbtrnirii, considerat n cazul prezentului studiu, la vrsta de 8-10 ani. 3) n faze mai avansate ale mbtrnirii (11-15 ani), specificitatea tabloului clinic se coreleaz i cu alterri ale tabloului biochimic i enzimatic sanguin, exprimate prin scderea sau creterea concentraiei unor componente la acest nivel. 4) Variaiile cele mai semnificative afecteaz, n acest caz, valorile colesterolemiei, care nregistreaz constant nivele situate mult peste media considerat normal la cine. 5) Nu se poate constata o specificitate determinat de sex n ceea ce privete sensul i severitatea tulburrilor nregistrate, respectiv tipul componentei biochimice afectate.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Ghergariu S, Marina Spanu, Pop Al., Kadar L., 2000 - Manual de Laborator Clinic Veterinar, Ed. All Educational, Bucuresti, 34-67. Irina M. Conboy, Michael J. Conboy, Amy J. Wagers, Eric R. Girma, Irving L. Weissman, Thomas A. Rando, 2005 - Rejuvenation of aged progenitor cells by exposure to a young systemic environment; Nature, Vol 433, 17. Ittai Ben-Porath, Robert A Weinberg, 2004 - When cells get stressed: an integrative view of cellular senescence. Journal of Clinical Investigation. Ann Arbor: Vol. 113, Iss.1; 8-13. Jeffrey A. Klein and Susan L. Ackerman, 2003 - Oxidative stress, cell cycle, and neurodegeneration; J. Clin. Invest. 111:785-793. John E. Morley, 2004 - The Top 10 Hot Topics in Aging; The Journal of Gerontology; Vol. 59, Iss. 1; pg. 24-33. Johnny D. Hostkins, 2004 - Geriatric and gerontology of the dog and cat, Saunders, 56-87. Jolly C. A., 2004 - Dietary Restriction and Immune Function; J. Nutr. 134: 1853-56 Marcus I.B, 2004 - Biologia i Patologia Animalelor de Laborator, Edit. Risoprint, Cluj-Napoca, 156 -178. Mc Lean AL and David G. Le Couteur, 2004 - Aging Biology and Geriatric Clinical Pharmacology; Pharmacol. Rev. Vol. 56 Nr. 2:163-184. Olovnikov A.M., 2003 - The redusome hypothesis of aging and the control of biological time during individual development; Biochemistry (Mosc); 68(1):2-33. Paolisso G, M. Barbieri, M. Bonafe, C. Franceschi, 2000 - Metabolic age mode-ling: the lesson from centenarians; European Journal of Clinical Investigation, 30, 888894 Pop Al., I.B.Marcus, 2004 - Fiziopatologie, Edit. Risoprint, Cluj-Napoca, 36-68.
66
EVALUAREA EFECTULUI CHEMOPREVENTIV AL UNOR PLANTE APARINND FAMILIEI LAMIACEAE PARTEA 1: APRECIEREA EFECTULUI CHEMOPREVENTIV-HEPATOPROTECTOR AL UNOR FITOPREPARATE PRIN PRISMA ALANIL AMINOTRANSFERAZEI SI ASPARTAT AMINOTRANSFERAZEI
THE CHEMOPREVENTIVE EFFECT EVALUATION OF SOME PLANTS FROM LAMIACEAE FAMILY PART 1: THE CHEMOPREVENTIVE-HEPATOPROTECTOR EFFECT ESTIMATION OF SOME PHYTOPREPARATIONS BY POINT OF VIEW OF ALANIL AMINOTRANSFERASE AND ASPARTAT AMINOTRANSFERASE
Cornelia PRISCARU U.S.A.M.V- Iai Anca-Irina BURLACU U.M.F.Gr. T. Popa Iai The experiment reproduced in this work aims at finding of some plants with active elements which are able to exercise a chemopreventive action against the hepatotoxic aggression of the various xenobiotics. The experiment directed its attention on some plants of Lamiaceae family, starting from specialty literature data which relieve the chemopreventive effect of the rosemary (Rosmarinus officinalis) at the exposure with the carcinogen mycotoxins with difuranic structure. The experiment included 5 lots of the white rats, Wistar line: the first lot represented the reference lot, while the second lot was used for the experimental reproduction of the intoxication with sterigmatocystin, furo-furanic mycotoxin. The three last lots had the designation to detectable the existence of the eventual chemopreventive effect at the rosemary, garden sage (Salvia officinalis) and lavender (Lavandula angustifolia) on the background of the intoxication with sterigmatocystin. The estimate of the chemopreventive-antitoxic action made by some biochemical parameters which offer the informations about the hepatocit integrity: alanil aminotransferase and aspartat aminotransferase.
Key words: sterigmatocystin, chemopreventive, Rosmarinus officinalis, Salvia officinalis, Lavandula angustifolia
67
INTRODUCTION Vegetal systematic studies which are correlated with the existence of the therapeutic virtues conduct at the conclusion that plants of the same family or order manifest farmacognostic similitudes. The rosemary (Rosmarinus officinalis, Lamiaceae family), prevalent appreciated plant for its alimentary value, is imposed at the end of the last century by the antitoxic effect (1). The merit to attract the attention on this aspect belongs to some mycotoxicologists who relieve the rosemary property to stimulate the synthesis of an enzyme implicated on the secondary metabolism action of the aflatoxins, the mycotoxins which are considered by IARC uman carcinogens of the rank I. The active principle of the rosemary leaves structure, capable to induce the synthesis of glutation-Stranspherase is a ditiol-tione, named by who that put it in the evidence oltipraz (2). In this way the xenobiotics of the difuranic mycotoxin type are facile excreted in the shape of glutationo-conjugates, preventing the formations of the adducts between the reactive form of the mycotoxin and the elite molecules of the molecule (AND, ARN, enzymes, a.s.o.), which constitutes the biochemical lesion. Starting from these arguments, this work proposes to verify the possibility of the chemopreventive/antitoxic effect existence at the plants on systematic criteria (Lavandula angustifolia and Salvia officinalis). For the chemopreventive action test of the vegetal products of the respective plants it was selected as the toxicity standard sterigmatocystine, the ubiquitous mycotoxin in the geographical area with the temperate-continental climate in which our country is also situated. The chemical and biogenetic relation of the aflatoxin, the sterigmatocystine exercises its toxic effects at the hepatic level, where it is subdued to the metabolism action, so as it results from the fig. 1 (3).
Fig. 1 - The primary transformation of the sterigmatocystine
68
MATERIAL AND METHOD

For to detect as well as possible the virtual chemopreventive intervention of the vegetal products, it was imagined an experimental model which to watch the parameters with the biggest relevance for the hepatocit integrity (table 1). The experiment included 5 lots of the white rats Wistar 7 months old and 189.26g medium weight. The first lot, formed of 5 rats , represented the reference lot, was fed with the standard fodder and maintained in the standard conditions of habitat. The second lot, also formed of 5 animals, was the lot on which it reproduced the intoxication with sterigmatocystine. In this way the animals of this lot were daily treated with 8 ppm sterigmatocystine. The third lot (5 animals), concomitant with the dose of 8 ppm sterigmatocystine, was also given fitopreparat 5% of Rosmarini folium, ad libitum. The animals of the fourth lot (5 animals), concomitant with the dose pro die of mycotoxin difuranic, was also given extract 5% of Salviae herba. The last lot of the experiment, formed of 5 white rats, served for the estimate of the virtual chemopreventive effect of the lavender flowers. Consequently, the animals of this lot were treated with 8 ppm sterigmatocystine and phytopreparat 5% de Lavandulae flores, in the drunken water ad libitum. The experiment carried on the period of 6 weeks, when the animals were treated according to the scheme of the experimental model (table 1). At the end of these 6 weeks the animals were sacrificed, and the gathered blood was biochemical examined. The transaminaze serice activity (ALT and AST) was performed by Reitman-Frenkel method, with the fixed time of the incubation (4,5).
Table 1 Experimental model LOTS Sterigmatocystine [ppm] Rosmarini folium 5% Salviae herba 5% ad libitum Lavandulae flores 5% ad libitum Biochemical parameters
Lot 1 Lot 2 8 Lot 3 8 ad libitum Lot 4 8 Lot 5 8 Legend: AST = aspartat aminotransferase ALT = alanil aminotransferase
AST, ALT
RESULTS AND DISCUSSIONS The evolution of the aspartat aminotransferase activity, so it results of the
table 2, makes evident a significant development in the serum of the intoxicated
lot with mycotoxin furo-furanic (131.38 UI), in comparison with the witness lot (54.67 UI). For the treated lots with the phytopreparations on the basis of the
69
rosemary and the garden sage, it registers the lightly grown values, but though closed of the reference lot values (57,94 UI, respectively 65.69 UI), what it suggests the favorable intervention of the active principles from the respective plants. Not the same evolution registers the enzyme activity for the treated lot with the lavender extract, its value being about 133.92 UI, what it makes evident grave affectations of the hepatocit integrity. Referring to the alanil aminotransferase activity, which is in accordance with the table 2, it may come to the conclusion of the existence of a citolize hepatic for the exclusively treated lot with sterigmatocystine (45.40 UI in comparison with only 17.50 UI of the witness lot), but also for the protected lots with the phytopreparations on the basis of the garden sage (50.95 UI) and the lavender (46.42 UI). Only the value ALT of the lot which profited of the exogenous contribution of the rosemary phytopreparation indicates a hepatic protection, its activity being about 19.2 UI, the very closed value of the witness lot (17.50 UI).
Table 2 Transaminase evolution AST [ UI ] Minimum 48.15 100.50 49.50 45.95 120.00 Medium 54.67 131.38 57.94 65.69 133.92 Maximum 68.30 142.50 66.30 88.60 148.90 Minimum 20.38 40.50 15.40 33.40 38.90 ALT [ UI ] Medium 17.50 45.40 19.20 50.95 46.42 Maximum 23.50 49.51 25.95 88.15 55.41
LOTS Lot 1 Lot 2 Lot 3 Lot 4 Lot 5
CONCLUSIONS The aspartat aminotransferase evolution makes evident the existence of a chemopreventive-antitoxic potential of the active principles from the rosemary and the garden sage; The aspartat aminotransferase oscilation does not suggest the appearance of a chemopreventive-antitoxic effect exercised by the lavender; The alanil aminotransferase activity confirms the antitoxic action of the active principles from Rosmarini folium; The alanil aminotransferase evolution refutes the existence of the chemopreventive potential at the phytopreparations both at the lavender and the garden sage.
70
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. Istudor Viorica, 2001 Farmacognozie, Fitochimie, Fitoterapie, Vol. II, Editura Medical, Bucureti, 122; Kensler T.W., 1997 Chemoprevention by inducers of carcinogen detoxification enzymes, Environ Health Perspect., 965-970; Priscaru Cornelia, 1998 Cercetri privind incidena micotoxinelor n produse de origine vegetal i animal din zona Podiului Moldovei i mecanismele de toxicocinetic i toxicodinamie ale acestora, Tez de doctorat, UMF Gr. T.Popa, 188; Filip Maria, Pduraru Ioana, aramet I., 1993 Biochimie-Lucrri practice, Editura Gr. T. Popa, Iai, 61-68, 105-107; Mihele Denisa, Pavlovici M., 1996 Biochimie clinic, Editura Medical, Bucureti, 99-103.
4. 5.
71
EVALUAREA EFECTULUI CHEMOPREVENTIV AL UNOR PLANTE APARINND FAMILIEI LAMIACEAE PARTEA 2: APRECIEREA EFECTULUI CHEMOPREVENTIV-HEPATOPROTECTOR AL UNOR FITOPREPARATE PRIN PRISMA ACTIVITII GLUTAMIL TRANSPEPTIDAZEI SI COLINESTERAZEI
THE CHEMOPREVENTIVE EFFECT EVALUATION OF SOME PLANTS FROM LAMIACEAE FAMILY PART 2: THE CHEMOPREVENTIVE-HEPATOPROTECTOR EFFECT ESTIMATION OF SOME PHYTOPREPARATIONS BY POINT OF VIEW OF -GLUTAMIL TRANSPEPTIDAZE AND CHOLINESTERASE
Cornelia PRISCARU, Liliana ROTARU U.S.A.M.V. Iai The present work represents a stage of a more detailed experiment which has mission to discover the virtual chemopreventive action against the hepatotoxic aggression of the various xenobiotics. There were aimed at the plants of Lamiaceae family due to some bibliographical details which relieve the chemopreventive effect of the rosemary (Rosmarinus officinalis) at the exposure with the carcinogen mycotoxins with difuranic structure and due to their relation with this plant. The experiment includes 5 lots of the white rats, Wistar line. The first lot represented the reference lot (the control lot), while the second lot served for the experimental reproduction of the intoxication with sterigmatocystin, hepatotoxic mycotoxin, chemical related with the aflatoxins. The three last lots served for to verify the existence of the eventual chemopreventive effect at the rosemary (Rosmarinus officinalis), garden sage (Salvia officinalis) and lavender (Lavandula angustifolia) on the background of the intoxication with sterigmatocystin. The estimate of the chemopreventive-antitoxic action made by some biochemical parameters with the relevance for the integrity and hepatic function: -glutamil transferaze and seric cholinesterase.
Key words: hepatoprotector effect, Rosmarinus officinalis, Salvia officinalis, Lavandula angustifolia
INTRODUCTION The rosemary (Rosmarinus officinalis, Lamiaceae family), the known plant for its quality to spice of the aliments, but also its therapeutic virtutes (1), surprises the scientific world of the mycotoxicology domain in the end of the last century by the antitoxic effect (2). It was proved that the daily administration of
72
some capable substances to induce the synthesis of some enzymes implicated in the second stage of the xenobiotic metabolism action at the liver level, prevents the formations of the mycotoxin-ARN, mycotoxin-AND, mycotoxin-protein adducts with high specialized function, the adducts which constitutes the biochemical carcinogen lesion (3). The rosemary contains in its leaves a ditioltion with the chemopreventive action at the treatment with the daily doses of the aflatoxin B1 (2). These reasons constituted the arguments on which is based the present work which tried to verify the possibility of the chemopreventive/antitoxic effect existence at the plants which are related with the rosemary, namely the lavender (Lavandula angustifolia) and the garden sage (Salvia officinalis). For the chemopreventive action estimate of the vegetal products of the respective plants it was selected as the toxicity standard sterigmatocystine, the ubiquitous mycotoxin in the geographical area with the temperate-continental climate in which our country is also situated. MATERIAL AND METHOD The experimental model on which is appeared this work is presented in the
table 1. This included 5 lots of the white rats Wistar 7 months old and 189.26 g
medium weight.
Table 1 Experimental model LOTS Sterigmatocistine [ppm] Rosmarini folium 5% Salviae herba 5% ad libitum Lavandulae flores 5% ad libitum Biochemical parameters
Lot 1 Lot 2 8 Lot 3 8 ad libitum Lot 4 8 Lot 5 8 Legend: GGT = -glutamil transpeptidaze ChE = cholinesterase
GGT, ChE
The first lot, formed of 5 rats, represented the reference lot, was fed with the standard fodder and maintained in the standard conditions of habitat. The second lot, also formed of 5 animals, was the lot on which it reproduced the intoxication with sterigmatocystine. In this way the animals of this lot were daily treated with 8 ppm sterigmatocystine. The third lot (5 animals), concomitant with the dose of 8 ppm sterigmatocystine, was also given phytopreparat 5% of Rosmarini folium, ad libitum. The rats of the fourth lot (5 animals), concomitant with the dose pro die of sterigmatocystine, was also given extract 5% of Salviae
73
herba. The fifth lot, formed of 5 white rats, served for the estimate of the possible chemopreventive effect of the lavender flowers. The animals of this last lot were treated with 8 ppm sterigmatocystine and phytopreparat 5% of Lavandulae flores, in the drunken water ad libitum. The experiment carried on the period of 6 weeks, when the animals were treated in accordance with the scheme of the experimental model (table 1), after that they were sacrificed, and the gathered blood was biochemical examined. The -glutamil transpeptidaze activity was quantized by the colorimetric method with -glutamil-p-nitroanilide. For the estimate of the seric cholinesterase activity utilized the standard method with the acid 5.5ditiobis-2-nitrobenzoic (Ellman reagent) (4, 5, 6). RESULTS AND DISCUSSIONS The biochemical investigations, consist of the determination of the seric cholinesterase activity and -glutamil transpeptidaze activity, are presented in the table 2 and fig. 1. Watching the cholinesterase activity, the synthesized enzyme in the liver, the possessor of a slow turnover, we find an evident diminution of this for the exclusively treated lot with the mycotoxin, its value being about 190.08 UI, by comparison with 235.97 UI, the witness lot value. This dramatic diminution of this biochemical parameter activity is the confirmation of the proteosynthesis capacity affecting of the attacked liver by the mycotoxin presence. The quantification of this parameter in the serum of the protected animals by the phytopreparation administration of Rosmarini folium, makes evident a value which is significantly closed of the registered value at the witness lot (227.75 UI).
Table 2 Cholinesterase and -glutamil transpeptidaze evolution ChE [ UI ] Minimum 228.10 158.37 199.55 180.19 185.25 Medium 235.97 190.08 227.75 190.94 191.95 Maximum 258.88 226.69 295.65 213.00 200.65 Minimum 3.35 16.00 4.25 4.25 11.55 GGT [ UI ] Medium 5.30 19.00 5.50 5.29 19.86 Maximum 12.6 23.60 7.12 6.95 29.35
LOTS Lot 1 Lot 2 Lot 3 Lot 4 Lot 5
Although this lot was subjected to the impact with the sterigmatocystine, the proteinic synthesis capacity of this lot was not affected, what it suggests the rosemary intervention by the chemopreventive effect. A complete distinct situation was registered for the two last lots, on which was verified the antitoxic effect of the garden sage and the lavender. It may observed that in the treated lot with the garden sage the seric cholinesterase value is 190.94 UI, and at the lot
74
what was subdued to the exogenous contribution of the lavender phytopreparation, the enzyme activity oscillates about the value 191.95 UI, what it conducts to the conclusion of the chemopreventive effect absence of the active principles from this two plants which are related to the rosemary. Referring to the -glutamil transpeptidaze, the biochemical parameter used as the enzymatic induction marker, the tumor marker and also the hepatotoxic lesion indicator, we may find, as it results from the table 2 and fig. 1, an increase about 4 times greater at the lot subdued to the sterigmatocystine intoxication (19 UI), by comparison with the witness lot (5.30 UI). The similar values to the witness lot registers GGT from the serum of the animals which profited of the exogenous contribution of the phytopreparations obtained from Rosmarini folium and Salviae herba on the background of the intoxication with sterigmatocystine, the values which confirm their hepatoprotecting effect. Not the same situation may be described in the case of the lot treated, concomitant with the mycotoxin, with the extract of Lavandulae flores, the GGT activity from the animals serum of this lot being of 19.86 UI, the characteristic value of a toxic lesion from the intoxication with the furanic mycotoxin.
250 200
Lot 1 Lot 2 Lot 3 Lot 4 Lot 5
[UI]
150 100 50 0
ChE
GGT
Fig. 1 - Cholinesterase and -glutamil transpeptidaze evolution (the graphic of the above table)
CONCLUSIONS The seric cholinesterase activity for the exclusively treated lot with the sterigmatocystine suggests a grave affectation of the proteosynthetic function of these animals liver;
75
The seric cholinesterase level for the animals which were treated concomitant with the mycotoxin and the phytopreparations from the three plants makes evident the exercise of the chemopreventive effect only for Rosmarinus officinalis; The -glutamil transpeptidaze evolution from the serum of the exclusevily treated animals with the sterigmatocystine registers a significant increased value; The GGT oscillation suggests the positive intervention of the phytopreparations on the basis of Rosmarini folium and Salviae herba; The GGT value from the serum of the animals treated with the Lavandulae flores invalidates the existence of a chemopreventive effect of the active principles from this plant.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. 6. Grigorescu, E., Lazr, M.I., Stnescu Ursula, Ciulei, I., 2001 Index fitoterapeutic, Editura Cantes, Iai, 421; Kensler, T.W., 1997 Chemoprevention by inducers of carcinogen detoxification enzymes, Environ Health Perspect., 965-970; Mace, K., Offord, E. A., Harris, C.C., 1998 Development of in vitro models for cellular and molecular studies in toxicology and chemoprevention, Arch. Toxicol. Suppl., 227-236; Filip Maria, Ioana Pduraru, aramet I., 1993 Biochimie-Lucrri practice, Editura Gr. T. Popa, Iai, 61-68, 105-107; Mihele Denisa, Pavlovici M., 1996 Biochimie clinic, Editura Medical, Bucureti, 99-103; erban, M., Cmpeanu, G., Ionescu, E., 1993 Metode de laborator n biochimia animal, EDP, Bucureti, 198.
76
ANALYSIS OF THE NATURAL AND INDUCED ECHINOCYTOSIS FOR TWO SPECIES OF MAMMALS
Servilia OANCEA1, Dorina CREANGA2, Alina RAPA3, Geta PAVEL1 1 U.S.A.M.V. Iai, Romnia 2 Univ. Al.I.Cuza, Iai, Romnia 3 West Vancouver Secondary School, BC, Canada The normal erythrocyte shape is that of a biconcave discocyte. The relationship between cell surface area and volume determines the extent to which a cell can deform. Abnormalities of red cell shape can be easy classified according to the degree of echinocytic or stomatocytic transformation but are difficult to quantify. Traditional mechanical and mathematical methods have proved to be insufficient for describing the echinocytosis process. Over the last several years, fractal analysis has been applied with great success to many biological systems. Many physiological systems have been found to be both spatial and temporal fractals. In this work we studied the morphological changes of erythrocytes determining the fractal dimension for the contour of the erythrocyte. We suggested that, if we develop an easy method to measure the images fractal dimension, fractal dimension may be a good measurement of echinocytosis.
Key words: red blood cell deformability, HarFA soft, echinocyte contour
INTRODUCTION The mechanical properties of erythrocytes are greatly influenced by the membrane, especially by its cytoskeletal structure and by geometrical factors. The RBC membrane is viscoelastic; thus the viscous component limits the rate of deformation in addition to the elastic moduli, which mainly determine the extent of deformation. Both the viscous and the elastic components are determinants of deformability and primarily depend on the protein cytoskeleton. Geometrical factors affecting red cell deformability are the size, shape and surface area/volume ratio of the cell. The normal erythrocyte shape is that of a biconcave discocyte. The relationship between cell surface area and volume determines the extent to which a cell can deform. Thus an excess of surface area over that needed to enclose the cell volume is needed for deformation. The normal red cell has an excess area of about 50%. Any loss of surface or increase in volume will tend to restrict the ability of the cell to pass through a narrow aperture. It is well established that this shape represents equilibrium between two opposing shape changes. Abnormalities of red cell shape can be easy classified according to the degree of echinocytic or stomatocytic transformation but are difficult to quantify.
77
The data indicate that erythrocyte shape changes have an important influence on blood rheology [2]. Discocytes had higher oxygen transport efficiency than either echinocytes or stomatocytes. Echinocytosis increased viscosity especially at low shear rates and may be explained by increased cell-cell interaction, i.e. the tangling of the spicules of echinocytes. At high shear rates the spiculated surface of echinocytes is at least partly smoothed. During the echinocytic transformation the content of inorganic ions change. There are different methods to measure the individual cell deformability. Noji and coworkers [3] estimated the average of whole cell deformability using electron paramagnetic resonance (EPR). The authors showed that the decrease in the cell deformability was often found in haematological disorders involving erythrocytes abnormalities (sickle cell anaemia, pregnancy) and also in nonhaematological diseases (for example diabetics, hypertension etc). In [4] was investigated the effect of different lipid A concentration on RBC deformability. Morphology of RBC was studied on video recordings and to characterise echinocytes and spherocytes, the criteria established by Becker and Bessis [5]. In [6] is presented influence of nitrovasodilators on rheology of blood. Treatment of whole blood with sodium-nitroprusside (SNP) at 10-3 M induced a market echinocytosis and increased blood viscosity at a high shear rate and a low shear rate whereas NO(nitric oxide) do not affect RBC shape and blood viscosity. Donath and co-workers [7] studied the spicula distribution during echinocytosis using a histogram of the Voronoi froth. Traditional mechanical and mathematical methods have proved to be insufficient for describing the echinocytosis process. The fractal theory has been well utilised in many domains of physics and biology [8-10]. It is possible, therefore, by using fractals to study and quantify in a much more concise way and much less approximately those structures which were described as granulous, tentacular, ramified, etc. Over the last several years, fractal analysis has been applied with great success to many biological systems. Many physiological systems have been found to be both spatial and temporal fractals. Fractal theory permeates the study of the cardiovascular system both in physiological and pathological conditions. Fractal images permit to analyse the regional flow of the pulmonary parenchyma, and to quantify pulmonary damage from thromboembolism. Kang et al. [11] found by analysing the aggregation images that RBC aggregation shows fractal characteristics. Their research presents the time dependence of the information dimension for RBCs for human blood samples. In some recent works we also applied the fractal analysis to research the fractal structure of biological objects. In [12] the fractal analysis upon various forestry arbour leaves was carried out in order to find the fractal dimension in each case and We found that average values of fractal dimension are increased when the complexity degree of leaf shape is increasing (from poplar to ash tree
78
and to false acacia etc.). In [13] the fractal anlysis, was applied to the study of erythrocytes and Jurkat cell aggregates (lymphoblastoid T-cell line). The method revealed the fractal character of blood cell with modified shape because of relatively high concentrations of urea and LPC (lysophosphatidylcholine). Fractal dimension was found proportional to the urea and LPC concentration or to the time of cell aggregation. In this work we studied the morphological changes of erythrocytes determining the fractal dimension for the contour of the erythrocytes. HarFA soft was utilised to visualise the fractal dimension. In HarFA a modification of traditional Box Counting is used. By this modification one obtains 3 fractal dimensions, which characterise the properties of black plane DB, the properties of white background DW and the black-white border of black object DBW, which is the most interesting information. MATERIALS AND METHOD
Samples from peripheral sheep blood and cow blood were performed using May-Grwald Giemsa colorature. By means of the microscope we obtained many photos; two of these photos from every species of mammals are presented in Fig.1 and Fig.2
Fig.1 - Blood sample from sheep blood
Fig.2 - Echinocytes from cow blood
RESULTS AND DISCUSSION From our photos we selected 10 blood cells for the two species of mammals in order to determine the fractal dimension of their contour. Our results for fractal dimension of the echinocyte contour from sheep and cow blood are presented in the table below.
79
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Nr. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Average Standard deviation Relative error Fractal dimension (sheep) 1.0367 1.0705 1.0210 1.0143 1.0402 0.9999 1.0304 1.0207 1.0358 1.0256 1.02951 0.01873 1,81% Fractal dimension (cow) 1.0556 1.1123 1.0768 1.0631 1.1092 1.0800 1.1092 1.1094 1.0341 1.1088 1.08585 0.028 2.57%
From this table we can see that the fractal dimension from cows cells is higher than from sheep cells (the average value for cow cells is 1.08585 and for sheep cells it is 1, 01873). Generally speaking in the sheep sample there is no echinocytosis because the fractal dimension is near 1. For cow blood echinocytosis is induced by a disease. CONCLUSION We can suppose that if we develop an easy method to measure the images fractal dimension, fractal dimension may be a good measurement of echinocytosis. The fractal analysis can be a method to find the stage of echinocytosis, measuring the fractal dimension from the contour of the cells. A disease bring about the echinocytosis in cow blood. Measuring the degree of echinocytosis we can suggest then the disease that produces this process. Weiss and co-workers [15] evaluated echinocytosis in both healthy and sick dogs and they concluded that two diseases, glomerulonephritis and lymphosarcoma may be associated with this phenomenon. The shape of the erythrocytes can also be altered by a great variety of chemical agents, such as many detergents due to their amphiphilic nature [16]. The crenated erythrocytes from animals exposed to detergent appeared either with border irregularities or undulations, without distinct spicules, or with numerous short spikes. In [17] Geor and co-workers showed that the most frequent diagnosis for horses, which present echinocytosis, was colitis and they concluded that hyponatremia was associated with increased incidence of echinocytosis. They suggested that systemic electrolyte depletion might be involved in the induction of echinocyte formation. To evaluate the hypothesis that echinocytes are dehydrated erythrocytes, in [18] the authors decreased blood sodium and potassium concentrations in 4 horses by administering furosemide.
80
Due the fact that the average value of the fractal dimension is not very high compared with 1, which is for normally blood, we suggest that the cow is experiencing the first fase of the disease.
REFERENCES
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Shiga T., Maeda N., Kon K., 1990 - Erythrocyte Rheology, Oncology/Hematology, Vol.10. Issue 1, 9-48. Reinhart W.H., Singh-Marchetti M., Straub P.W., 1992 - The influence of errythrocyte shape on suspension viscosities, Eur. J. Of Clinical Investigation, 22, 38-44. Noji S., Taniguchi S., Kon H., 1991 - An EPR Study on Erythrocyte deformability, Progr.Biophys. molec. Biol., Vol. 55, pp. 85-105. Pschl J.M.B., Linderkamp O., 1992 - Effect of lipid A on the deformability, membrane rigidity anf geometry of human adult red blood cells, Eur. J. Of Clinical Investigation, 22, 625-629. Bessis, M., Weed, R.,J. - Red cell shape, Springer Verlag,Berlin, New Walter R., Mark M., Gaudenz R., Harris L.G., Reinhart W.H., 1999 - Influence of nitrovasodilators and endotelin-1 on rheology of human blood in vitro, British J. Of Pharmacology, 128, 744-750. Donath E., Pomorski T., Pastushenko F., 1993 - On the lateral distribution of spicula on echinocytes, Biorheology, 30, 463-470 Nonnenmacher T.F., Losa G.A., Weibel E.R, 1993 - Ed., Fractals in Biology and Medicine, Boston, USA. Nonnenmacher T.F., Baumann G, Barth A, Losa GA, 1994 - Digital image analysis of self-similar cell profiles, Int J Biomed Comput , 37(2), 131-138 Guarini G, Onofri E., 1993 - New horizons in medicine. Fractals, Recenti Prog Med., 84(6), 438-42 Grasman J., Brascamp J.W., Van Leeuwen J.L., Van Putten B., 2003 - The multifractal structure of arterial trees, J Theor Biol, 220 (1), 75-82 Kang M.Z., Zeng Y.J., Liu J.G., 2000 - Fractal research on red blood cell aggregation, Clin. Hemorheol. Microcirc. 22, 229-236 Creanga I., Oancea S., Tudorie M., Creanga D., Bara I., 2002 - Oak leaves fractality, Int. J.of Chaos Theory and Application, 7 (1-2), 85-90 Creanga D., Tudorie M., Oancea S., Rapa A., 2003 - Semi-quantitative analyse of cells and cell aggregates, Sci. Ann. USAMV Iasi, XLVI, v. 2, Proceedings of the Annual Symposium on Mathematics applied in Biology & Biophysics, Univ. of Agricultural Science and Veterinary Medicine, Iasi, 293-298 Weiss D.J., Kristensen A., Papenfuss N., McClay C.B., 1990 - Quantitative valuation of echinocytes in the dog, Vet Clin Pathol., 19(4), 114-118 Zeni C., Bovolenta M.R., Stagni A., 2002 - Occurrence of echinocytosis in circulating RBC of black bullhead, Ictalurus melas (Rafinesque), following exposure to an anionic detergent at sublethal concentrations, Aquat Toxicol, 57(4), 217-24 Geor R.J., Lund E.M., Weiss D.J., 1993 - Echinocytosis in horses: 54 cases (1990), J Am Vet Med Assoc. 202(6), 976-80. Weiss D.J, Geor R.J., Smith C.M., McClay C.B., 1992 - Furosemide-induced electrolyte depletion associated with echinocytosis in horses, Am J Vet Res., 53 (10), 1769-72
15. 16.
17. 18.
81
SPECTROPHOTOMETRIC ANALYSIS OF THE BLOOD PLASMA

Servilia OANCEA, Iuliana MOTRESCU, U.S.A.M.V. Iai
lioancea@univagro-iasi.ro imotrescu@yahoo.com
Alina RAPA, West Vancouver Secondary School, Canada

alinarapa@yahoo.com
A. AIRINEI Institute of Macromolecular Chemistry P. Poni, Iasi, Romania

airineia@icmpp.ro
In this paper an analysis of the blood plasma spectrum is performed in order to establish the relationship between protein concentration and their absorbance in the UV region. We found a direct dependence of these quantities correlating the spectra and the refractive index measured for the same protein concentrations. This suggests that the specific properties and protein concentration of plasma influence the blood behavior.
Key words: absorption spectra, protein band, refractive index
INTRODUCTION Blood plasma, a yellow fluid contains proteins, nutrients, metabolic end products, hormones, and inorganic electrolytes. It is a very complex and not fully understood mixture of proteins that performs and enables many housekeeping and other specialized bodily functions. In blood plasma, by far the most prevalent protein is albumin, approximately 32 to 35 grams per liter, which helps to maintain osmotic balance of the blood. Many studies reported quantitative results on blood plasma properties for human samples [1, 2]. The spectrophotometric analysis of the blood plasma was used to investigate small molecules in human plasma and determine protein concentration using FTIR [3]. Human plasma retinol-binding protein and transthyretin was also studied [4]. Fluorescence characteristics of blood plasma were studied in the visible spectral region, at two different excitation wavelengths, 405 and 420 nm, to discriminate patients with different stages of oral malignancy from healthy subjects [5]. The authors showed that the fluorescence spectra of blood plasma of oral malignant. subjects exhibit characteristic spectral differences with respect to
82
normal subjects. Analysis of blood plasma protein is also used to study the Alzheimer's disease [6]. There is a little data on plasma properties and protein content for different animals. Specific properties of plasma of different mammalian species influence the blood behavior. In this work we studied the characteristic spectrum of the blood plasma, which is determined by the protein absorbance band in the UV domain in order to determine the concentration of protein. MATERIALS AND METHOD
To analyze the blood plasma spectrum, blood samples were collected in test tubes containing EDTA as an anticoagulant. About 20 ml of blood from cow and horse are sampled for this test. The sampled blood is centrifuged to separate blood plasma (4000 g during 5 minutes). Then we prepared different solutions from blood plasma in distilled water. Measurements of plasma refractive index were performed with an Abbe refractometer. Spectrophotometric analysis in UV and Visible domains of the blood plasma were performed with a spectrophotometer Specord M-42.
RESULTS AND DISCUSION

Fig. 1 and Fig. 2 present the characteristic spectrum of the blood plasma in the VIS and UV domains.
Fig. 1. Plasma spectrum in VIS domain (horse blood)
83
Fig. 2. Plasma spectrum in UV domain (horse blood)
The protein absorbance band in the UV domain (about 280 nm) determines the characteristic spectrum of the blood plasma. The value of the absorption band strongly depends on the blood plasma concentration. This dependence is presented in fig. 3.
0,6 0,5 absorbance 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0 50 100 150 concentration of plasma (*10-4)
y = 0,0031x + 0,0599 R2 = 0,9772
Fig. 3. Plasma absorption at 280nm versus concentration
We observed that the protein absorption at 280nm exhibit a good linear dependence on the concentration as well as the refractive index as shown in fig. 4.
84
1,355 refractive index 1,35 1,345 1,34 1,335 1,33 0 0,5 1 1,5 concentration of plasm a y = 0,0174x + 1,332 R2 = 0,9895
Fig. 4. Plasma refractive index versus concentration
CONCLUSION The present study suggests that the spectrophotometric analysis of the blood plasma is a useful tool for determination plasma protein content and also is an easier method than the other ones. Due the fact that the protein absorbance band at 280nm determines the characteristic spectrum of the blood plasma and the value of the absorption band strongly depends on the blood plasma concentration, this method permits the determination of a small content of protein from plasma blood. This means we can use a very small quantity of plasma, which is diluted in distilled water.
REFERENCES
1. Narayahan, S., Galloway, L., Nonoyama, A., Leparc, G.F., Garcia-Rubio, L-H., Potter, R.L., 2002 - UV-visible spectrophotometric approach to blood typing II: phenotyping of subtype A2 and weak D and whole blood analysis, Transfusion, 42(5), 619-626 Zahao, B., Tham, S.Y., Lu, J., Lee, L., Moochhala, S., 2004 - Simultaneous determination of vitamins C, E and -carotene in human plasma by highperformance liquid chromatography with photodiode-array detection, J Pharmaceut Sci, 7(2), 200-204 Petibois, C., Cazorla, G., Cassaigne, A., Deleris, G., 2001 - Plasma Protein Contents Determined by Fourier-Transform Infrared Spectrometry, Clinical Chemistry, 47, 730-738 Raghu, P., Ravinder, P., Sivakumar, B., 2003 -A new method for purification of human plasma retinol-binding protein and transthyretin, Biotechnology and Applied Biochemistry, 38, 19-24 Mahduri, S., Vengadesan, N., Aruna, P., Koteeswaran, D., Venkatesan, P., Ganesan, S., 2003 - Native Fluorescence Spectroscopy of Blood Plasma in the Characterization of Oral Malignancy, Photochemistry and Photobiology, 78 (2), 197-204 Ueno, I., Sakai, T., Yamaoka, M., Yoshida, R., Tsugita, A., 2000 - Analysis of blood plasma proteins in patients with Alzheimer's disease by two-dimensional electrophoresis, sequence homology and immunodetection, Electrophoresis, 21(9), 1832-1845.
2.
3. 4. 5. 6.
85
THE HEMATOLOGICAL PROFILE OF LIMOUSINE HEIFERS DURING THE ADAPTATIONACCLIMATIZATION PERIOD

PROFILUL HEMATOLOGIC LA JUNINCILE DE RAS LIMOUSINE N PERIOADA DE ADAPTARE-ACLIMATIZARE
C. FALC,, Gh. CIORBA, Cristina PETRUSE inndu-se cont de faptul c sngele prin constituenii si celulari i biochimici, constituie oglinda sntii animalului (reacionnd rapid i de multe ori specific la agresiunea determinat de factorii interni sau externi), am optat n principal pentru realizarea unor investigaii de ordin hematologic, att din punct de vedere cantitativ, ct i calitativ la junincile de ras Limousine clinic sntoase aflate n perioada de adaptareaclimatizare. Investigaiile paraclinice se refer la junincile de ras Limousine importate n ara noastr n anul 2002, de ctre o unitate de producie din zona de vest a rii i la produii acestora testai n anul 2005. Rezultatele obinute au fost comparate cu cele provenite de la junincile mame din anul 2002, care au fost recent aduse n ar. Parametri hematologici (leucocite i trombocite) au avut o valoare mai sczut cu aproximativ 16 % la junincile din anul 2005 fa de junincile din anul 2002, diferenele nefiind ns asigurate statistic. Pentru eritrocite valorile medii au fost aproape identice (p > 0,01). Hemoglobina, hematocritul, VEM-ul, HEM-ul i CHEM-ul au prezentat valori mai mari la junincile din anul 2002 comparativ cu junincile din anul 2005, diferenele variind ntre 0,95 % i 14,36 %. La aceste valori diferenele ntre cele dou perioade sunt nesemnificative.
Key words: Limousine heifers, blood, hematological parameters
Pathology`s current orientation to know the metabolic health status aims at an as quick as possible discovery of the critical metabolic area between normal and abnormal, the prevention of the status of clinical disease, the establishment of the limits concerning the physiological oscillations of the various metabolites within the internal environment. Such variations represent undoubtedly a useful step to achieve data useful to make possible in the future to prevent some dysmetabolic affections (2, 3). Under intensive systems, nutrition and metabolism diseases interfere into breeding, and, through their frequently clinical evolution, dysmetabolic affections represent an important cause for economic losses (1). The major objective of this paperwork is to establish reference data regarding the hematological profile of Limousine heifers, recently imported in our country, and also its evolution during the adaptation-acclimatization period.
86
MATERIAL AND METHOD

The hematological investigations were carried out on 11 Limousine heifers from a farm located in the Western part of the country. Blood samples were taken from the jugular vein (about 3-4 ml, on EDTA anticoagulant). Immediately after the sample taking, we sent them to laboratory for an analysis with the hematological analyzer MS 9 VET. In order to assess properly the erythrocytary system in the case of the studied individuals, we determined the direct erythrocytary constants (erythrocyte number, hematocrit, hemoglobin) and the indirect erythrocytary constants (VEM, HEM, CHEM). The completion of the hematological examination consisted of investigations upon the leukocytary series and of the determination of thrombocyte number. The survey upon the white cellular series was carried out through quantitative determinations the determination of the total leukocyte number, and qualitative the percentage rhyming of the different categories of leukocyte from the leukocytary formula. The obtained data was processed through biostatistic methods, using the software Excel for calculations. In order to test the difference significance we used the test Mann-Withney.
RESULTS AND DISCUSSIONS Analyzing the information within table 1, we observe that in heifers (2002) the number of erythrocytes was 8.74 0.42 mil/mm3, and in heifers (2005) it was almost like that from the first investigation 8.62 0.46 mil/mm3. We do not observe any significant difference between these values. Hemoglobin concentration in heifers from 2002 was 12.39 0.62 g/dl, and in those from 2005, 11.47 0.93 g/dl. In the case of this parameter, no significant difference is revealed between the two investigations, too. The hematocrit in heifers from 2002 had a value of 47.99 2.28%, respectively 46.14 1.30 % in heifers from 2005. Any significant difference is not observed between the two animal groups. Regarding VEM, there is not any significant difference between the values obtained in heifers from 2002 (54.96 1.12 3) and those from 2005 (54.44 2.18 3). HEM had the value of 14.17 0.40 pg in heifers from 2002, and 13.19 0.53 pg in heifers from 2005, there being not any significant difference. CHEM was 25.79 0.34 g/dl in heifers from 2002 and 22.55 1.87 g/dl in those from 2005. There is not any significant difference concerning this constant between the two paraclinical investigations. We mention that VEM and CHEM values are according to the reference values from the literature of speciality.
87
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Table 1 The evolution of hematological parameters in heifers (n = 1) and the significance of the differences Specification Erythrocytes Hemoglobin Hematocrit VEM HEM CHEM Heifers 2002 Heifers 2005 Heifers 2002 Heifers 2005 Heifers 2002 Heifers 2005 Heifers 2002 Heifers 2005 Heifers 2002 Heifers 2005 Heifers 2002 Heifers 2005
Cv% 12,60 14,07 13,17 21,46 12,52 7,46 5,38 10,59 7,42 10,64 3,47 21,94
Differences abs + 0,12 + 0,92 + 1,83 + 0,52 + 0,98 + 3,24 % 1,39 8,02 3,96 0,95 7,42 14,36
8,74 0,42 8,62 0,46 12,39 0,62 11,47 0,93 47,99 2,28 46,14 1,30 54,96 1,12 54,44 2,18 14,17 0,40 13,19 0,53 25,79 0,34 22,55 1,87
Significances (MannWithney) 1,0000 0,5229 0,8480 0,5656 0,4432 0,3379
In Table 2, we present the values of the hematological parameters in heifers and the difference significance. We might note that in the case of the heifers (2002) the number of leukocytes was 5.92 0.64 thousand/mm3, compared to heifers (2005) 5.08 0.45 thousand/mm3, without any significant difference between the two periods.
Table 2 The values of hematological parameters in heifers (n = 1) and the significance of the differences Specification Leukocytes
Cv%
Differences abs %
Significances (MannWithney) 0,3379 0,6547 0,4062 0,8480 0,3066
Heifers 2002 5,92 0,64 Heifers 2005 5,08 0,45 Heifers 2002 61,77 1,01 Lymphocytes Heifers 2005 62,31 3,49 Heifers 2002 6,90 0,77 Monocytes Heifers 2005 7,57 1,20 Heifers 2002 31,24 1,00 Granulocytes Heifers 2005 30,11 2,44 Heifers 2002 268,43 30,52 Thrombocytes Heifers 2005 230,00 24,37
28,48 +0,84 16,53 23,45 4,32 -0,54 0,86 14,78 29,30 -0,67 8,85 42,01 8,45 +1,13 3,75 21,36 30,02 +38,43 16,70 27,98
Regarding lymphocyte number, the obtained values are 61.77 1.01 % in the case of the heifers (2002), respectively 62.31 3.47 % in heifers (2005). Monocyte number in heifers (2002) was 6.90 0.77, respectively 7.57 1.20 in heifers (2005). There are no any significant differences from a statistic
88
point of view. Granulocytes had almost the same values in heifers (2002) 31.24 1.00 %, respectively 30.11 2.44 % in heifers (2005). Thrombocyte number was 268.43 80.52 thousand/mm3 in heifers (2002), respectively 230.00 24.37 thousand/mm3 in heifers (2005). CONCLUSIONS The values of the hematological parameters (leukocytes and thrombocytes) are lower with about 16% in the heifers from 2005 compared to those from 2002, the differences being not statistically supported. For lymphocytes, monocytes and granulocytes, the differences are insignificant between heifers from 2005 compared to those from 2002, the lowest difference appears in the case of lymphocytes 0.86%. Regarding erythrocytes, the average values are almost identical (p > 0.01). Hemoglobin, hematocrit, VEM, HEM and CHEM have higher values in the heifers from 2002 compared to those from 2005, the differences varying between 0.95% and 14.36%. But the differences between the two periods are insignificant at these values.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. Falc, C., 2004 Semiologie medical veterinar, vol II, Ed. Cosmopolitan Art, Timioara. Ghergariu, S., 1995 - Patologia nutriional i metabolic a animalelor, Ed. Medical Veterinar, Bucureti. Prvu, Gh., 1992 Supravegherea nutriional metabolic a animalelor de ferm. Ed. Ceres, Bucureti. Reibel, Ch., 2003 Charollais et Limousine en haut des preferens, Reussin Bovins Viande, 99. Stanciu, G., Acatinci, S., Cziszter, L., 1994 Tehnologia creterii bovinelor, Ed. Euroart, Timioara.
89
THE EFFECTS OF CALCIUM, PHOSPHOR AND OF THE LACK OF ANIMAL PROTEIN WITHIN BROILER FOOD UPON SOME SANGUINE AND BIOPRODUCTIVE PARAMETERS
EFECTUL NIVELULUI CALCIULUI, FOSFORULUI I AL PRIVRII DE PROTEIN DE ORIGINE ANIMAL DIN HRANA PUILOR DE CARNE ASUPRA UNOR PARAMETRII BIOCHIMICI SANGVINI I BIOPRODUCTIVI
C. FALC, Gh. CIORBA, Daniela LUPESCU Cercetrile au fost efectuate pe un efectiv de 36 pui de carne hibridul Ross 308, repartizai n 4 loturi (lotul martor i trei loturi experimentale), pe o durat de 42 de zile. Durata experimentului fost de 42 de zile, fiind structurat pe dou subperioade de vrst (1-21 zile i 22-42 zile). Furajarea puilor din lotul martor s-a fcut cu nutre combinat standard, n timp ce n raia puilor din loturile experimentale s-a exclus proteina de origine animal (fina de pete). De asemenea, puii din loturile experimentale au beneficiat de niveluri diferite de calciu i fosfor n raie. n urma investigaiilor paraclinice privind influena raiilor furajere difereniate, asupra parametrilor biochimici sangvini la puii de carne, repartizai n 4 loturi: lotul martor (furaj standard 21-1); lotul experimental E1 (privai de carbonat de calciu); lotul experimental E2 (cu aport de carbonat de calciu, fosfat monocalcic, fr protein de origine animal); lotul experimental E3 (fr carbonat de calciu, fosfat monocalcic i protein de origine animal, dar cu supliment vitaminic AD3E), s-au conturat urmtoarele concluzii: proteinemia i calcemia au fost semnificativ mai mari la puii din lotul martor fa de cei din loturile experimentale; calcemia i fosforemia puilor din lotul martor a fost semnificativ mai sczute comparativ cu cei din lotul experimental E2. Evoluia masei corporale a confirmat o scdere n greutate a puilor din loturile experimentale E1, E2, E3 comparativ cu pui din lotul martor. Sporul mediu zilnic pe toat durata experimental a fost mai mare la puii din lotul martor comparativ cu cei din loturile experimentale.
Key words: broiler, macroelements, protein, blood, biochemical parameters, bioproductive parameters
There is a strong correlation between the nutrition-based food contribution and the metabolism of the animal organism. The maintenance of the internal environment homeostasis is based upon the assurance through ration of the necessary nutritive substances (proteins, glucides, lipides) and biologically active substances (vitamins and minerals). It is obligatory to apply the optimal percentage between the various nutrients (proteins, energizers, cellulosis, protein,
90
calcium, phosphor, sodium, potassium, etc.). The assurement of the nutritive principles through ration must have a rhythmic and equilibrate character, in terms of quantity, and also quality (2). Many observations revealed that the proteic amount in poultry influences the proteinemia, albuminemia and uricemia`s levels (4). A protein-lacking feeding during a period of 2-3 weeks leads to the decrease of egg production and delays development in chicken, and causes hypoproteinemia, too. Taking into account these aspects, in this paperwork we intend to survey the influence of a differentiate food regime upon the sanguine and bioproductive parameters in broiler chicken. MATERIAL AND METHODS
Researches were performed upon a number of 36 chickens, hybrid Ross 308, distributed into four groups (the control group and the experimental groups 1, 2, 3), within a long term experimentation (42 days). In the first experimental subperiod (1-21 days), we introduced the combined forage (C.F.) 21-1 into chicken food, and in the second subperiod (2242 days) we used C.F. 21-2. Chicken were kept in multi-stage battery cages (3 levels), with surfaces of 0.60 m2, namely 0.05 m2/individual. Chicken feeding in the control group was carried out with standard combined forage, while regarding the experimental groups (E1, E2, E3) we excluded the animal protein from the ration. The differentiation between the experimental groups E1, E2, E3 was carried out through the amounts of calcium and phosphor administrated within food, as follows: the experimental group E1 without calcium carbonate and monocalcic phosphate; the group E2 benefitted from double amounts of calcium and phosphor, while in the case of the experimental group E3, due to the total lack of calcium and phosphor, vitamins A, D3 and E were supplemented in the drinkable water. At the end of the experimental period, we took blood samples, and with the help of the semiautomatic biochemical analysor VET-SCREEN we determined the following sanguine parameters: proteinemia, albuminemia, calcemia, phosphoremia, magnesiemia, alkaline phosphatase. The obtained results were quantized and interpreted biostatistically (the test Mann-Withney).
RESULTS AND DISCUSSIONS In Table 1, we present the comparative evolution of the sanguine biochemical parameters in broilers - the control group and the experimental group E1, which were deprived of calcium, phosphor and animal protein in their rations. We observe that proteins in control group had a value of 4.790.18 g/dl compared
91
to those from the experimental group, which had a significantly lower value (4.010.18 g/dl), also the albuminemia in control group had a bigger value (2.310.06 g/dl) compared to broilers from the experimental group (2.190.09 g/dl).
Table 1 The evolution of the sanguine biochemical parameters in broilers (n=7) and the differences` signification Sanguine biochemical parameters Total protein g/dl Albumine g/dl Calcium mg/dl Phosphor mg/dl Magnesium mg/dl Alkaline phosphatase U/L *p < 0.05; **p < 0.01 Group M E1 M E1 M E1 M E1 M E1 M E1 4,790,12 4,010,18 2,310,06 2,190,09 10,640,17 8,040,20 9,000,21 7,740,48 2,200,12 1,960,13 2539,8620,50 4566,57821,22 CV% 6,65 11,98 7,24 11,03 4,33 6,53 6,25 16,30 13,89 17,66 2,13 47,48 Differences Abs +0,78* +0,12 +2,60** +1,26* +0,24 -2026,71* % 19,45 5,47 32,33 16,27 12,24 44,38 MannWithney test 0,0106 0,2248 0,0017 0,0253 0,3066 0,0253
Calcemia in control group chickens had the value of 10.640.17 mg/dl, compared to the chickens from the experimental group, where we observed a significantly reduced concentration (8.040.20 mg/dl). Phosphoremia in the control group was 9.000.21 mg/dl, while that belonging to the experimental group was significantly lower (7.740.48 mg/dl) compared to that in the control group. Calcium and phosphor requirements in broilers depend up to a level upon the level of vitamin D in food. Ca and P amounts in ration may decrease if we add a bigger quantity of vitamin D in food and reversely. Researches performed by Statov et al. (5) regarding calcium and phosphor adsorption in chicken and young substitution poultry upon groups with a calcium level reduced with 25% and 50% revealed the fact that the body weight decreases when the calcium levels in food increase or decrease, without being assured statistically. Calcemia and phosphoremia decreases, too, depending on the increased or decreased calcium level within food. Magnesiemia in the control group chickens was 2.200.12 mg/dl, significantly bigger compared to the chickens in the experimental group (1.960.13 mg/dl).
92
Alkaline phosphatase in the chickens within the control group had a value of 2539.8620.5 U/L, recording a significantly distinct increase in the experimental group (4566.57821.224 U/L). This increase might be due to an intense osteoblasts and osteoclasts activity, phenomena that occurs during the bones development in young chicken, the egg laying period in hens, in rickets and osteomalacia (4). In Table 2, we present the evolution of the sanguine biochemical parameters from the experimental group E2, in which ration we had added a double Ca and P level, without animal protein.
Table 2 The evolution of the sanguine biochemical parameters in broilers (n=7) and the differences` signification Sanguine biochemical parameters Total protein g/dl Albumine g/dl Group M E2 M E2 M E2 M E2 M E2 M
CV% 6,65 3,32 7,24 16,43 4,33 6,51 6,25 5,20 13,89 15,50 2,13 53,86
Differences abs +0,23 +0,87** -1,32** -0,74** +0,77** -1441 % 5,04 60,41 11,03 7,59 53,84 37,20
MannWithney test 0,1598 0,0017 0,0049 0,0214 0,0021 0,5653
Calcium mg/dl Phosphor mg/dl Magnezium mg/dl Alkaline phosphatase E2 U/L *p<0.05; **p<0.01
4,790,12 4,560,06 2,310,06 1,440,09 10,640,17 11,960,29 9,000,21 9,740,19 2,200,12 1,430,08 2539,8620,50 3980,0821,02
Analysing the information presented in the table, we observe that there is a less significant difference between the proteinemia values in both chicken groups. In the control group, proteinemia had a value of 4.790.12 g/dl, respectively 4.560.06 g/dl in the experimental group E2. Albuminemia is distinctly significant between the two chicken groups. We observe a decrease (1.440.09 g/dl) in the experimental group, while in chicken from the control group albuminemia had a value of 2.310.06 g/dl. This decrease might be due to the lack of amount, hepatic disorders, dehydration, etc. Calcemia was much increased in the experimental group (11.960.17 mg/dl), compared to the control group (10.640.17 mg/dl). This increase is due to a ration supplementation with bog amounts of calcium and phosphor, and phosphoremia has bigger values (9.740.19 mg/dl) in the case of the experimental group compared to the chickens from the control group (9.000.21 mg/dl).
93
Magnesiemia has a much reduced concentration in the experimental group chickens (1.430.08 mg/dl) compared to those from the control group (2.200.12 mg/dl). Alkaline phosphatase had a more intense activity in broilers within the experimental group (3980.0821.02 U/L) compared to those within the control group (2539.8620.50 U/L). In Table 3, we present the values of the sanguine biochemical parameters in broiler chickens from the experimental group E3, deprived of calcium, phosphor and animal protein, but with a vitamin supplement (AD3E).
Table 3 The evolution of the sanguine biochemical parameters in broilers (n=7) and the differences` signification
Sanguine biochemical Group parameters Total protein M g/dl E3 Albumine M g/dl E3 Calcium M mg/dl E3 Phosphor M mg/dl E3 Magnesium M mg/d E3 Alkaline M phosphatase E3 U/L *p<0.05; **p<0.01
CV% 6,65 9,40 7,24 15,02 4,33 4,45 6,25 7,76 13,89 18,73 2,13 49,15
Differences abs +0,92 +0,22 -2,34** +1,89** +0,3 +1019,52** % 23,77 10,52 28,19 26,58 15,78 67,05
MannWithney test 0,0017 0,1252 0,0017 0,0021 0,0639 0,0017
4,790,12 3,870,14 2,310,06 2,090,12 10,640,17 8,300,14 9,000,21 7,110,21 2,200,12 1,900,13 2539,8620,50 1520,342813,03
Proteinemia was significantly lower (3.780.14 g/dl) in the experimental group compared to the control group chickens (4.790.12 g/dl). In the case of albuminemia, too, we observe that there is a difference between the broiler groups. In the experimental group, it was 2.090.12 g/dl compared to chicken from the control group (2.310.06 g/dl). Phosphoremia was distinctly significant in the case of the experimental group chicken (7.110.21 mg/dl) compared to those from the control group (9.000.21 mg/dl). This decrease is justified by the lack of amount. Magnesiemia in the experimental group was lower (1.900.13 mg/dl) that that in the control group (2200.12 mg/dl). Both values are concordant with the references values within the literature of specialty. Alkaline phosphatase is significantly lower in the case of the chicken from the experimental group E3 (1520.34283.03 U/L) compared to those from the control group (2539.8620.50 U/L).
94
Ciulan (1), carrying out researches regarding the activity of alkaline phosphatase and creatinin phosphokinase, in broilers, fed with supplements of vitamin E and selenium, observes a distinctly significant increase of the alkaline phosphatase activity in broilers from the groups whose food was supplemented with vitamin E and selenium. Reversely, creatinin phosphokinase values are concordant to the physiological ones. Supplements with organic selenium assured a better hepatic and muscle protection through a lower activity of creatinin phosphokinase. In Table 4, we present data concerning the average weight and the average daily gain for the whole experimental period. The evolution of the body mass confirms a weight decrease of the chicken from the experimental groups (E1, E2, E3) compared to those from the control group (M: 2311.1 g/individual, E1: 1941.2 g/ind., E3: 2105.5 g/ind.). The average daily gain, during the whole experimental period, was bigger in the case of the control group, compared to the experimental ones.
Table 4 Body weight and average daily gain in broiler during the experimental period Specification Average weight (g) at the age of 1 day Average weight (g) at the age of 14 days Average gain (g) at the age of 14 days Average weight (g) at the age of 28 days Average gain (g) at the age of 28 days Average weight (g) at the age of 42 days Average gain (g) at the age of 42 days Control 45 166,6 8,68 755,5 25,37 2311,1 53,95 E1 45 153,3 7,73 650,5 21,62 1941,2 45,14 E2 45 164,4 8,52 660,3 21,97 2021,1 47,05 E3 45 147,7 7,33 680,6 22,7 2105,5 49,05
CONCLUSIONS Total proteins (+19.45%) and sanguine calcium (32.33%) are significantly higher (p<0.05) in the control group compared to those in the experimental group E1, and phosphor (-7.59%) and alkaline phosphatase (-44.38%) are significantly lower in the control group, compared to the experimental group E1. In the case of albuminemia (+5.47%) and magnesiemia (+12.24%), we do not observe significant differences (p>0.05) between the control group and the experimental group E1. Albuminemia (+60.41%) and magnesiemia (+53.84%) have significantly higher concentrations (p<0.01) in the chickens from the control group compared to those from the experimental group E2, and calcemia (-11.03%) and phosphoremia (-7.59) are significantly lower (p<0.01) in the control group compared to the chicken from the experimental group E2. We didnt observe any significant differences (p<0.01) between the broiler within the control group and those from the experimental group E2 concerning proteinemia (+5.04%) and alkaline phosphatase (-37.20%).
95
Total protein (+23.77%), calcemia (+28.19), phosphoremia (26.58%) and the alkaline phosphatase (+67.05%) have significantly higher values (p<0.01) in the control group compared to the experimental group E3. We didnt record any significant differences (p>0.05) between the chicken within the control group and those from the experimental group E3 concerning magnesiemia (+15.78%). The evolution of the body mass confirms a weight decrease in the case of the broiler within the experimental groups E1, E2, E3 compared to the broiler within the control group (M: 2311.1 g/individual, E1: 1941.2 g/individual, E2: 2021.1 g/individual, E3: 2105.5 g/individual). The average daily gain during the whole experimental period was higher in the broiler within the control group compared to those from the experimental groups.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. 6. Ciulan, L.V., 2004 Cercetri privind activitatea fosfatazei alcaline i a creatinfosfokinazei la puii de carne hrnii cu adaosuri de vitamina E i seleniu, Lucr. t. de Med. Med. Vet. Timioara, XXXVII, 250-252. Criniceanu, E., Olimpia Colibar, Falc, C., 1994 Evoluia indicilor productivi la puii de carne hrnii difereniat, Lucr. t. de Med. Vet. Timioara, XXVII, 65-69. Falc, C., Ciorba, Gh., 1997 Semiologie veterinar practic, Ed. Eurobit, Timioara. Prvu, Gh., 1992 Supravegherea nutriional metabolic a animalelor, Ed. Ceres, Bucureti. Statov, C., Ognean, L., Mihai, Gh., Pusta, D., Statov, D., Gondo Maria, 1995 Aspecte privind interrelaia dintre diferite nivele de calciu i vitamina D3 n alimentaia ginilor outoare, Buletin U.S.A.M.V. Bucureti, 49, 149-155. Stilborn, H., Waldroup, P.W., 1990 Production of broiler chicken on low protein diets, utilising commercially avaiable amino-acids, Poultry Science, 69, 12071211.
96
ON THE BIOCOMPATIBILITY OF POLY (URETHANEUREA) DOPED WITH SILVER NANOPARTICLES

OBSERVAII PRIVIND BIOCOMPATIBILITATEA UNUI POLIURETANUREE DOPAT CU NANOPARTICULE DE ARGINT
B.A. HAGIU, L.C. BURTAN U.S.A.M.V. Iai Maria Sultana MIHAILOVICI U.M.F. Iai V. URA Univ. Al. I. Cuza Iai C. CIOBAN ICMPP Petru Poni Iai FERARIU D. Spitalul Sf. Spiridon Iai The biocompatibility study of Silver nanoparticles doped poly(urethaneurea) by subcutaneous implants on rabbits revealed that these materials are very well accepted, the inflammatory reaction being extremely weak. By contrast to the poly(lactate urethanes) previously investigated, the polyurethanes doped with Silver nanoparticles do not adhere to tissues, and promote very fast high quality skin regeneration, even of hair follicles.
Key words: silver, poly(urethaneurea), skin, regeneration
The polyurethanes are high biocompatible materials (1, 2, 4, 5, 6, 7, 8). Previous works of our team were revealed that fibroblasts adhered on poly(lactate)urethane film surface treated with Ar ion beams of various energies, and the implant stimulates proliferation of the collagen material. These properties enabled the poly(lactate)urethane films to adhere to the derma. (3, 9). The pores existing in the polyurethane film act as traps for antigens and inside them polymorphonuclear neutrophyles, fibroblasts and macrophages accumulate. The macrophages secrete growth factors that create a neoformation vascular network which expands on the entire film thickness. In the tissue near the implant, a moderate inflammatory reaction was observed. In the present work we evaluated the biocompatibility of poly (urethaneurea) doped with silver nanoparticles, by analyzing the local reactions at skin level.
97
MATERIALS AND METHODS

The investigations were performed on 6 adult rabbits on which 2 subcutaneous implants (1 x 1 cm2) were performed in the lombosacral region. One of the implant was the simple poly (urethaneurea) and the other was the doped material with 20 ppm silver nanoparticles (2-10 nm diameters). The implants were done observing the animal protection rules (Novocain anesthesia). After two weeks, under local anesthesia, the implants were extracted together with the tissue next to the postoperatory cicatrices. The tissue and the poly (urethaneurea)s samples were first preserved in neutral formol (15%). Subsequently, the samples were included in paraffin and cut in slices of 4 m thickness using a microtome, cutting being performed perpendicularly on the implant and skin surfaces. The slices were colored by hematoxylin-and-eosin method.
RESULTS AND DISCUSSIONS By contrast to the poly(lactate)urethane that strongly adhered to the tissue (3), tissue adhesion was not observed in case of the polyurethane doped with 20 ppm silver nanoparticles (2-10 nm diameters). But, the silver doped poly (urethaneurea) determined a fast cicatrisation of the operatory plague, phenomenon that was not observed for poly(lactate)urethane or simple polyurethane. In case of the simple polyurethane implant, the microscopically investigation revealed an inflammatory reaction of moderate intensity at skin level, and a moderate quantity of inflammatory exudation was observed (fig. 1).
Fig. 1. - Moderate inflammatory reaction at skin level. Histological section (H.E. ob. 20x).
98
The investigated samples show a small quantity of inflammatory exudates present inside the poly (urethaneurea) pores. On the implant surface, fibroblasts adhesion and collagen synthesis was observed (fig. 2).
Fig. 2 - Transversal cut through a poly (urethaneurea) film implant (H.E. - Ob.10x).
Fig.3. - Low inflammatory reaction at skin level. Good regeneration, even for hair follicles. Histological section (H.E. ob. 4x).
The cutaneous tissue prelevated from the cicatriceal area around the implant of polyurethane doped with silver nanoparticles showed some interesting aspects during the photonic microscopy investigations. Besides the low inflammatory reaction (small quantity of exudates), a very good epidermal regeneration, also observed in some treatments with ionic silver, but at higher
99
concentrations (10), and a low derma proliferation were observed. The most interesting phenomenon observed was the regeneration of hair follicles (the hair follicles from regeneration area were compared to those from surrounding areas). A very important fact observed in our study was that in case of simple polyurethane implants, the skin regenerated without hair follicles (fig. 1, 3, 4).
Fig. 4. - Hair follicles of normal aspect. Histological section (H.E. ob. 10x).
The transversal sections of the Silver doped poly (urethaneurea) implants showed fibroblast adhesion and collagen synthesis on the surface. Inside pores, the inflammatory exudate is almost absent and there are no polymorphonuclear neutrophyles or macrophages, which are arguments for the very low inflammatory reaction observed (fig. 5).
Fig. 5. - Transversal section through poly (urethaneurea) (H.E. Ob. 4x).
100
One can conclude that doping the poly (urethaneurea) with silver nanoparticles give rise to some important properties that promote a very rapid cicatrisation and, probably, makes impossible the tissue adhesion. CONCLUSIONS An implant of polyurethane doped with Silver nanoparticles determines a very low inflammatory reaction. By contrast to the polyurethanes previously investigated, the doped material investigated in the present work did not adhere to tissue. An important feature of the Silver doped polyurethane is the favorization of rapid and good quality skin regeneration, which could be of interest for the hair follicles, also.
REFERENCES
1. 2. 3. Anderson, A.J., 1998 - Biocompatibility of poly(etherurethane urea) containing dehydroepiandrosterone, J. Biomed. Mater. Res., Aug;41(2):192-201. Gutowska, A., Bae, Y.H., Jacobs, H., Feijen, J., Kim, S.W., 1995 - Heparin release from thermosensitive polymer coating: In vivo studies, Journal of Biomedical Materials Research, 29: 811. Hagiu, B.A., Fntnaru, M., Burtan, L.C., Maria Sultana Mihailovici, Elena-Doina Murarescu, Melnig, V., ura, V., 2003 - In Vivo Intradermic Study of Cell Adhesion to Ion-Implanted Polyurethanes, Lucrri tiinifice, vol 46, seria Medicin Veterinar, pag 83-88. Han, H.S., et al., 2001 - Studies of a novel human thrombomodulin immobilized substrate: surface characterization and anticoagulation activity evaluation, Journal of Biomaterials Science Polymer Edition Vol. 12, No. 10:1075-1089. Jayabalan, M., Rathinam, K., Kumary, T.V., Mohanty, M., 1989 - In vivo biocompatibility o aliphatic segmented polyurethane in rabbit, Journal of Biosciences. Sep, 14(3): 289-99. Kwon, I. C., Bae, Y.H., Kim, S.W., 1994 - Heparin release from polymer complex, Journal of Controlled Release 30: 155. Lamba, N.M.K., Woodhouse, K.A., Cooper, S.L., 1998 - Urethanes in biomedical applications, Boston, CRC Press. Park, K.D., Kim, W.G.; Jacobs, H., Okano, T., Kim, S.W., 1992 - Blood compatibility of SPUU-PEO-heparin grafted copolymers, Journal of Biomedical Material Research, 26: 739. ura, V., Apostu, M.O., Melnig, V., Ciobanu, C., Hagiu, B.A., 2003 Preparation and characterization of biocompatible polylactaturetane, Timioara Medical Journal, Vol. 53, Suppl. 2, pag. 127-130. Konrad, D. Tsunoda, M. Weber, K. Corney, S.J. Ullmann, L., 2002 Effects of a topical silver sulfadiazine polyurethane dressing (Mikacure) on wound healing in experimentally infected wounds in the pig. A pilot study, Journal of experimental animal science, Vol.42, Part 1, pag. 31-43.
4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.
101
CERCETRI PRIVIND LEUCOCITEMIA, EOZINOCITEMIA I BAZOFILECITEMIA LA IEPURELE DOMESTIC

RESEARCHES REGARDING LEUCOCYTEMY, EOSINOCYTEMY AND BASOPHILCYTEMY AT DOMESTIC RABBIT
Roxana LAZR, M. LAZR U.S.A.M.V. Iai Researches were made upon leucocytemy, eosinocytemy, basophilcytemy on a number of 30 rabbits belonging to the races New Zeeland White, Butterfly and Chinchila, raised in small husbandries, distributed in 5 groups depending upon their age, sex and physiological state. The results obtained showed the fact that the number of total circulatory leucocytes increased proportionally with age until 1 year old after which they lightly decreased maintaining constant until adult age. There were no variations depending on sex, at pregnant females the leucocytemy being more raised. Eosinophiles showed increases proportional with the age and didnt show great variations depending on sex and physiological state. The basophiles also increased proportionally with the age, sex and physiological state, at males and pregnant females being registered bigger values.
Examenul hematologic prezint o deosebit importan n evaluarea integritii nutriional metabolice a efectivelor de animale i o semnificaie major n aprecierea strii de sntate i reactivitate specific natural a organismului (componenta leucocitar a sngelui). Necesitatea evalurii integritii nutriional metabolice a efectivelor de animale rezid din faptul c multe carene nutriionale pot produce boli tot att de grave sau uneori chiar mai grave, dect bolile produse de germeni patogeni, iar pagubele produse de tulburrile nutriionale sunt mai mari ntruct nregistreaz adeseori o evoluie subclinic. O importan deosebit o prezint alimentaia femelelor gestante, acestea avnd apetitul i asimilaia mrite, asigurnd necesarul de substane nutritive i pentru ft. Creterea necesarului de protide, glucide, minerale, vitamine (A, B, D, E) este asigurat de ficatul gestantei care i intensific funciile. n ficatul i sngele gestantelor scade glicogenul i crete glucoza, colesterolul, srurile minerale (Ca, P) i cantitatea de aminoacizi, care sunt transportate spre placent cu prioritate. Aceste considerente justific utilizarea testelor de profil metabolic i n investigarea strilor de boal. Datele obinute n acest mod arat strile de dezechilibru homeostatic al organismului i servesc totodat la aplicarea celor mai adecvate msuri de prevenire a agravrii lor i redresarea echilibrului.
102
MATERIAL I METODE
Experimentul a fost efectuat pe un numr de 30 de iepuri metii din rasele Alb Neozeelandez, Fluture i Chinchila, crescui n sistem gospodresc. Conform protocolului experimental, animalele au fost distribuite cte 6 capete pe 5 loturi dup cum urmeaz: Lot 1 (n=6 ) - iepuri tineri n vrst de 4-6 luni masculi i femele; Lot 2 (n=6) - iepuri n vrst de 6 12 luni, masculi i femele; Lot 3 (n=6) - femele n vrst de 12 luni negestante; Lot 4 (n=6) - femele n vrst de 12 luni gestante; Lot 5 (n=6) - masculi n vrst de 12 luni. Pentru efectuarea determinrilor cantitative i calitative ale elementelor figurate sanguine s-au utilizat metodele clasice (numrare n camer BurkerTrk). Rezultatele obinute au fost prelucrate statistic, determinndu-se valorile aritmetice medii i deviaia standard.
REZULTATE I DISCUII n tabelele 1-5 sunt prezentate valorile medii i deviaia standard a numrului de leucocite, eozinofile i bazofile, n funcie de vrst, stare fiziologic i sex.
Tabelul 1 Variaiile individuale i valorile medii ale leucocitemiei, eozinofilelor i bazofilelor la iepurii n vrst de 4-6 luni (L1) Nr. Crt. 1 2 3 4 5 6 Leucocite Nr./mm 4500 4750 5350 6950 7950 13850 7225,00 1432,47 48,56 Eozinofile nr./mm 90 0 53,5 69,5 159 158,5 88,42 25,36 70,25 Bazofile nr./mm 90 142,5 214 347,5 318 415,5 254,58 51,59 49,64
% 2 0 1 1 2 1 1,17 0,31 64,52
% 2 3 4 5 4 3 3,50 0,43 29,97
X sX
CV %
X = media aritmetic; s X = abaterea standard a mediei;

CV % = coeficientul de variabilitate
Valorile medii ale leucocitemiei (nr./mm) la lotul alctuit din 6 iepuri n vrst de 4-6 luni a fost de 7225 1434,35. Limitele de variaie au fost cuprinse
103
ntre 4500 i 13850. Media bazofilemiei este de 254,58 bazofile/mm snge, reprezentnd 3,5% din numrul total de leucocite circulante. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 90 i 415,5 bazofile/mm snge (2-5%). Din analiza datelor tabelului 1 se constat c media eozinofilemiei la iepurii n vrst de 4-6 luni a fost de 84,41 eozinofile/mmsg, reprezentnd 1,16% din numrul total de leucocite circulante. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 53,5 i 159 eozinofile/mm de snge (1-2%). La lotul de iepuri cu vrsta 6-12 luni (tabelul 2) s-a constatat c valorile medii ale numrului de leucocite (nr./mm) au fost de 10700 936,20. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 7100 i 13350. n ceea ce privete media bazofilemiei aceasta a fost de 863,16 bazofile/ mm snge, reprezentnd 10% din numrul total de leucocite circulante. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 336 i 1202,5 bazofile/mmde snge (5-16%).
Tabelul 2 Variaiile individuale i valorile medii ale leucocitemiei, eozinofilelor i bazofilelor la iepurii n vrst de 6-12 luni (L2) Nr. Crt. 1 2 3 4 5 6 Leucocite Nr./mm 7100 9250 10500 11400 12600 13350 10700,00 934,97 21,40 Eozinofile nr./mm 42 92,5 105 114 126 267 124,42 30,89 60,82 Bazofile % 16 13 10 9 5 7 10,00 1,63 40,00 nr./mm 336 1202,5 1050 1026 650 934,5 866,50 129,73 36,67
% 2 1 1 1 1 2 1,33 0,21 38,73
X sX
CV %
Media eozinofiliei a fost de 124,41 eozinofile/mm snge, reprezentnd 1,33% din numrul total de leucocite circulante, limitele de variaie fiind cuprinse ntre 42 i 267 eozinofile/mm de snge (1-2%). Variaii medii ale leucocitemiei (nr./mm) la lotul alctuit din 6 femele n vrst de peste 1 an au fost de 9083,35 194,14. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 7600 i 10700. Media eozinofiliei la femelele adulte a fost de 140,66 eozinofile/mm de snge, reprezentnd 1,5% din numrul total de leucocite circulante. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 76 i 214 eozinofile/mm de snge (1-2%). Media bazofilemiei la femelele adulte a fost de 774,5 bazofile/mm de snge, reprezentnd 8,33% din numrul total de leucocite circulante. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 380 i 1070 bazofile/mm de snge (5-10%).
104
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 3 Variaiile individuale i valorile medii ale leucocitemiei, eozinofilelor i bazofilelor la femelele de 12 luni negestante (L3) Nr. Crt. 1 2 3 4 5 6 Leucocite Nr./mm 7600 7900 9100 9500 9700 10700 9083,33 474,99 12,81 Eozinofile nr./mm 76 79 91 190 194 214 140,67 26,53 46,19 Bazofile nr./mm 380 553 819 855 970 1070 774,50 106,25 33,60
% 1 1 1 2 2 2 1,50 0,22 36,51
% 5 7 9 9 10 10 8,33 0,80 23,60
X sX
CV %
Tabelul 4 Variaiile individuale i valorile medii ale leucocitemiei, eozinofilelor i bazofilelor la femelele n vrst de 12 luni gestante (L4) Nr. Crt. 1 2 3 4 5 6 Leucocite Nr./mm 8100 9310 9250 10500 12750 14650 10760,00 1010,25 23,00 Eozinofile nr./mm 162 93,1 146,5 105 255 107,6 144,87 24,55 41,51 Bazofile nr./mm 486 1024,1 1318,5 735 1612,5 1829,2 1167,55 210,61 44,19
% 2 1 1 1 2 1 1,33 0,21 38,73
% 6 11 9 7 15 17 10,83 1,80 40,62
X sX
CV %
Valorile medii ale leucocitemiei ( nr./mm) la lotul de 6 femele gestante au fost de 10760 1011,58. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 8100 i 14650 dintre care 4 iepuri au avut valori mai mici dect valoarea medie (8100, 9250, 9310, 10500) i ceilali 2 iepuri au avut valori peste valoarea medie (12750; 14650). n urma analizei datelor prezentate n tabelul 4 se constat c media eozinofilemiei la femelele gestante este de 144,86 eozinofile/mm snge, reprezentnd 1,33% din numrul total de leucocite circulante. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 93,1 i 255 eozinofile/mm de snge (1-2%).
105
Media bazofilemiei la femelele gestante este de 1167,55 bazofile/mm snge; reprezentnd 10,5% din numrul total de leucocite circulante. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 486 i 1829,2 bazofile/mm de snge ( 6-17%).
Tabelul 5 Variaiile individuale i valorile medii ale leucocitemiei, eozinofilelor i bazofilelor la masculii n vrst de 12 luni (L5) Nr crt. 1 2 3 4 5 6 Leucocite Nr./mm 6650 8050 9120 9720 9720 10900 9026,67 607,78 16,49 Eozinofile nr./mm 66,5 0 273,6 194,4 97,2 219 141,78 42,37 73,20 Bazofile nr./mm 1130,5 805 1641,6 1166,4 1555,2 1423,5 1287,03 127,50 24,27
% 1 0 3 2 1 2 1,50 0,43 69,92
% 17 10 18 12 16 13 14,33 1,28 21,91
X sX
CV %
Lotul alctuit din 6 masculi aduli a nregistrat valori medii ale leucocitemiei (nr./mm) de 9360 630,78. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 6650 i 10950. Media eozinofilemiei la masculii aduli este de 141,78 eozinofile/mm snge, reprezentnd 1,5% din numrul total de leucocite circulante. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 66,5 i 273,6 eozinofile/mm de snge (0-3%). Media bazofilemiei a fost de 1287,03 bazofile/mm snge, reprezentnd 14,33% din numrul total de leucocite circulante. Limitele de variaie au fost cuprinse ntre 805 i 1641,6 bazofile/mm de snge(10-18%). Din analiza general i prelucrarea matematic a rezultat c numrul de bazofile a variat nesemnificativ ntre loturile L1, L 3 i foarte semnificativ ntre loturile L1, L2, L5 i ntre L3,L5 . Leucocitele pot prezenta variaii foarte mari (4000- 14000) i sunt n numr mai mic la iepurii tineri. La vrsta de peste un an majoritatea autorilor arat o cretere a numrului de leucocite cu peste 2000/mm fa de tineretul sub 6 luni. Bazofilele la iepuri se deosebesc prin numr i aspect morfologic de bazofile de la alte specii de mamifere. Iepurele este singurul animal domestic la care numrul de bazofile este crescut, cu o valoare medie de 3,8-12,5% dup Marcu (1993) ;2,4-31% dup Nemi (1986); 6,5-30% dup Scherner (1967).
106
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 6 Semnificaia statistic a diferenelor dintre mediile caracterelor analizate la cele 5 loturi experimentale (L1L5) Semnificaia statistic (Tukey) a diferenelor dintre medii pentru caracterele: Eozinofile Bazofile Leucocite nr/mm % nr./mm % nr./mm n.s. n.s. n.s. semnif. pt. w1 (0,05) semnif. pt. w1 (0,05) w (6,50)>w1 (5,35) w (611,92)>w1 (559.05) n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. semnif. pt. w2 (0,01) semnif. pt. w2 (0,01) w (7,33)>w2 (6,61) w (912,97)>w2 (690,87) n.s. n.s. n.s. semnif. pt. w2 (0,01) semnif. pt. w2 (0,01) w (10,83)>w2 (6,61) w (1032,45)>w2 (690,87) n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. semnif. pt. w1 (0,05) n.s. w (6,00)>w1 (5,35) n.s. n.s. n.s. n.s. n.s. *** n.s. n.s. n.s. ***
Loturile comparate L1 X L2 L1 X L3 L1 X L4 L1 X L5 L2 X L3 L2 X L4 L2 X L5 L3 X L4 L3 X L5 L4 X L5 Testul Fisher
> F 0,001 (4,25 F

G.L.) 9,3675 > 6,4900
> F 0,001 (4,25 F

G.L.) 8,8943 > 6,4900
W = diferena dintre mediile loturilor comparate W1 = valoarea tabelar pentru pragul 0,05 W2 = valoarea tabelar pentru pragul 0,01 *** = valori foarte semnificative pentru testul Fisher n.s. = diferene nesemnificativ.
CONCLUZII Analiza rezultatelor obinute la iepurele domestic (Oryctologus Cuniculus), crescut n sistem gospodresc, a scos n eviden c indicii seriei albe studiai (numrul de leucocite, eozinofilemia i bazofilemia) prezint variaii legate de vrst, sex i stare fiziologic astfel: 1. Numrul de leucocite totale circulante a crescut proporional cu vrsta pn la un an dup care au sczut uor meninndu-se constante la vrsta adult. Nu s-au nregistrat variaii n funcie de sex. La femelele gestante leucocitemia a fost mai crescut.
107
2. Eozinofilele au nregistrat creteri proporionale cu vrsta i nu au prezentat variaii mari n funcie de sex i stare fiziologic . 3. Bazofilele au crescut de asemenea proporional cu vrsta i n funcie de sex i stare fiziologic, la masculi i femele gestante nregistrndu-se valori mai ridicate.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. Ames A, Li YY., Heher E.C., Kimble C.R. Energy metabolism of rabbit retina as related to function: high cost of Na transport Argente M.J, Santacreu M.A., Climent A., Blasco A Effecs of intrauterine crowding on uterine available space per fetus in rabbits ,Valencia, Spain Ciudin Elena - Biologia animalelor de laborator, Editura Alfa, Iai 2004 Blasco A., Ortega A.J., Santacreu A.M., Climent A. - Divergent selection for uterine capacity in rabbits. Genetic parameters and response to selection Marcu Elena, Condrea M., Costachescu Elena, Hagiu N., Pavel Geta Aspectul profilului hematologic la iepurele domestic . Lucrare tiin ific , Universitatea Agronomic Ia i, vol. 35-36, 1992-1993 Marcu Elena, Costachescu Elena, Condrea M., Hagiu N., Pavel Geta Corela ie privind interrela iile fenotipice principale, nsu iri productive i unii indici ai profilului metabolic la iepurele domestic . Lucrare tiin ific , Universitatea Agronomic Ia i, vol. 35-36, 1992-1993. Moise KJ Jr. Saade G., Knudsen L. - Ultrasound-guided cardiac blood sampling of the rabbit fetus . Departament of Obstetrics and Gynecology, Baylor College of Medicine, Houston, Tex. Moce M.L., Santacreu M.A., Climent A., Peiro R. - In vivo development of vitrified rabbit embryos: effects on prenatal survival. Preliminary results. Departamento de Ciencia Animal, Universidad Politecnica de Valencia, Spain Michael L. Jennings - Volume-sensitive K+/Cl cotransport in rabbit Erytrocites: Analysis of the rate - limiting activation and inactivation events - The Journal of General Psyiology, vol 114, number 6, December 1, 1999 Navaro J.A., Sottovia-Filho D., Taga R., Toledo-Filho J.L. - Histological study on the prenatal development of the cheek-teeth of rabbits. Arch Histol Jpn. 1978 Jun;41(3) Vanessa K. Lester, DVM; Heather L. Tarpley, DVM; Kenneth S. Latimer, DVM Small Mammal hematology: Leucocyte identification in rabbits. College Veterinary Medicine, University of Georgia, Athens GA 30602-7388. Sandi Koi - Domestic Baby Bunnies and Their Mom *** - Histological different from neutrophil *** - Domestic Rabbit *** - Biochemistry Reference Values *** - Bun or Blood Urea Nitrogen in rabbits *** - Lowering Blood Calcium *** - Embryonic development of the rabbit pineal gland www.pubmed.gov www.Kindplanet.org www.Medirabbit.com
7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21.
108
APRECIERI ASUPRA SEMNIFICAIEI MORFOFUNCIONALE A COMPLEXELOR NEUROINSULARE

APPRECIATIONS ABOUT THE MORPHO FUNCTIONAL SEMNIFICATION OF THE NEURO ISLET COMPLEXES
V. MICLU, A. DAMIAN, L. OANA, C. LISOVSCHI, F. STAN Histological examination was performed on pancreas samples collected from two male nutria. We observed the presence of the neuro islet complexes, alongside the Langherans isles with classical structure. The placement and the aspects of the endocrine cells and of the vegetative neurons in these neuro isle complexes do not suggest a significant morphofunctional change; possibly that these complexes appeared during embryogenesis.
Key words: islet of Langherans; pancreas; vegetative neurons
INTRODUCERE Inervaia insulelor endocrine pancreatice a fcut obiectul a numeroase cercetri, care au evideniat faptul c ele sunt deservite de o inervaie foarte bogat, att simpatic ct i parasimpatic (Samols, 1991; Hornet, 1992). Cu toate informaiile acumulate de-a lungul anilor, inervaia insulelor pancreatice nu este pe deplin lmurit nici la ora actual. Ca o curiozitate a aprut semnalarea n imediata vecintate a insulelor pancreatice a unor ganglioni vegetativi. Mai mult, unii cercettori au remarcat faptul c uneori pot fi observate celule nervoase vegetative, chiar n interiorul insulelor pancreatice (Capenhaut, 1927; Simard, 1942, Fujita, 1969; Miclu, i col. 2003). Totui, numrul cercettorilor care au semnalat astfel de formaiuni de-a lungul timpului, este destul de mic, iar semnificaia morfofuncional a lor a rmas nc nelmurit. MATERIAL I METODE
Studiul a fost realizat pe doi masculi de nutrie n vrst de 8, respectiv 10 luni, clinic sntoi i cu stare de ntreinere foarte bun. Au fost recoltate fragmente de pancreas , sub form de felii cu grosimea de 3-4 mm i fixate n amestec Stieve 24 de ore. Dup includere n parafin s-au practicat seciuni cu grosime de 5 micrometrii, care au fost colorate cu metoda tricromic Masson, modificat de Goldner. 109
REZULTATE I DISCUII Examinarea microscopic a seciunilor de pancreas a evideniat c nu exist diferene structurale semnificative ntre componenta endocrin a pancreasului de nutrie i cea de la alte mamifere. i n cazul nutriei, componenta endocrin este reprezentat de insule Langerhans de diferite forme i mrimi, rspndite neuniform printre acinii pancreatici. Pe lng insulele Langerhans cu structur clasic, au fost evideniate complexe neuroinsulare, n care alturi de celule endocrine existau i neuroni vegetativi. Numeric, insulele Langerhans predominau net, dar i complexele neuroinsulare erau relativ bine reprezentate. Complexele neuroinsulare apar bine conturate printr-o capsul conjunctiv discret i cu structur lax. Ele sunt foarte diferite ca mrime, de la complexe foarte mari pn la formaiuni alctuite din cteva celule. Ca form ele sunt de asemenea polimorfe, existnd complexe neuroinsulare rotunde, ovale, alungite, foarte alungite, septate. Raportul ntre componenta endocrin i cea nervoas este foarte diferit de la o formaiune la alta. n unele complexe celulele endocrine sunt majoritare (fig. 1), n altele predomin celulele nervoase (fig. 2). ntre cele dou extreme, exist foarte multe situaii intermediare, dar indiferent care component predomin, ele nu apar intercalate ci fiecare ocup o parte a complexului neuroinsular. Aspectul este uor de sesizat chiar i n cazul complexelor n care una dintre componente este net majoritar, cealalt chiar dac conine doar cteva celule, ele apar dispuse grupat la periferia formaiunii. Aceste aspecte sugereaz c inervaia celulelor endocrine nu necesit neaprat contact intim ntre ele i neuroni. Din acest punct de vedere, prezena neuronilor n interiorul complexelor neuroinsulare nu pare neaprat un avantaj n comparaie cu inervarea insulelor Langerhans clasice, care este asigurat de neuroni de la nivelul ganglionilor vegetativi aflai la distan mai mare sau mai mic de insule. Ganglioni vegetativi au fost evideniai, fie la distan de insulele Langerhans fie n apropierea acestora. Unii ganglioni apar dispui n contact att de intim cu insulele nct pe o anumit poriune, capsula pare comun celor dou formaiuni. Dar relaia intim dintre cele dou formaiuni pare mai mult de vecintate i nu o necesitate morfofuncional. De altfel, insulele Langerhans aflate n apropierea ganglionilor vegetativi sunt comparabile din toate punctele de vedere cu cele aflate la distan. Asta sugereaz c inervaia celulelor endocrine pancreatice se poate face eficient de neuroni aflai la distan de insulele Langerhans, prezena ganglionilor vegetativi n apropierea acestora pare ntmpltoare i dup toate probabilitile nu asigur o inervaie mai eficient dect cei aflai la distan.
110
Fig. 1 - Complex neuroinsular n care celulele endocrine sunt majoritare (Col. Tricromic Goldner, 500X).
Fig. 2 - Complex neuroinsular n care neuronii sunt majoritari (Col. Tricromic Goldner, 500X).
111
Celulele endocrine din componena complexelor neuroinsulare apar comparabile, din toate punctele de vedere cu cele din insulele Langerhans. Nici neuronii vegetativi din complexe nu sunt cu nimic diferii fa de cei din ganglionii vegetativi. Aceste aspecte, alturi de polimorfismul att de accentuat al complexelor neuroinsulare, cu raporturi i proporii att de diferite ntre componenta endocrin i cea exocrin, ne fac s credem c dispunerea n complexe neuroinsulare nu pare a avea o semnificaie morfofuncional, cel puin nu una sesizabil prin examen microscopic. Se pare c prezena complexelor neuroinsulare alturi de insulele Langerhans n pancreasul de nutrie, nu este o necesitate morfofuncional, ci ele pot apare conjunctural. Se pare c ele, nu realizeaz neaprat o inervaie mai eficient a celulelor endocrine, comparativ cu cea asigurat de neuronii din ganglionii vegetativi. Cea mai plauzibil explicaie a prezenei complexelor neuroinsulare, ar fi formarea lor n cursul embriogenezei. Dac este aa, atunci se pare c celulele endocrine pancreatice i neuronii vegetativi provin din aceeai foi embrionar. Sporadic au mai fost fcute afirmaii (Buligescu i col. 1982) conform crora celulele insulare provin din crestele neurale i nu din endoderm, cum susin cei mai muli autori (Adlersberg i col. 1955; Diculescu i col. 1971; Bareliuc i Neagu, 1987; Raica i col. 2004). CONCLUZII 1. Examenul histologic al pancreasului de nutrie a evideniat insule Langerhans de form, mrime i distribuie, comparabile cu cele de la alte mamifere. 2. Pe lng insule pancreatice cu structur clasic, au fost evideniate complexe neuroinsulare diferite ca mrime i raport ntre componenta endocrin i cea nervoas. 3. Distribuia celulelor endocrine i a neuronilor vegetativi n cadrul complexelor este variabil, astfel c ea nu sugereaz un aranjament ce ar putea avea vreo semnificaie funcional. 4. Polimorfismul accentuat i gruparea caracteristic a celulelor endocrine i a neuronilor vegetativi din complexele neuroinsulare, ne fac s credem c ele nu sunt o necesitate morfofuncional ci , probabil, au luat natere n cursul embriogenezei.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Adlersberg, L., S. Brtianu, C. Crian, M. Gundisch, A. Hagi Paraschiv, T. Niculescu, C. Rmniceanu, A. upa, 1955 - Histologie, Editura medical, Bucureti. Bareliuc, Lucia, Natalia Neagu, 1987 - Embriologie uman, Editura Medical, Bucureti. Buligescu, L., B. Gheorghescu, I. Puca, I. Teodorescu Exarcu, 1982 Fiziologia i fiziopatologia digestiei, Edit. Medical, Bucureti.
112
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Van Capenhaut, E.,1927 - Contributions a letude de lhistogenese du pancreas chez quelques mammiferes. Les complexes sympaticos-insulaires, Arch. Biol. Liege, 37, 121-171. Diculescu I., D. Onicescu, C. Rmniceanu, 1971 - Histologie, Editura didactic i pedagogic, Bucureti. Fujita, T., 1969 - Histological studies on the neuro-insular complex in the pancreas of some mammals, Zellforsch, 50, 94-107. Hornet, N.N.,1992 - Pancreasul endocrin, Editura Academiei Romne, Bucureti. Miclu, V.,C. Crciun, I. Groza, 2003 - Complexe neuroinsulare n pancreasul endocrin de nutrie, Analele Societii Naionale de Biologie Celular, 453-460, Editura Risoprint, Cluj-Napoca. Raica, M., O. Mederle, I.D. Cruntu, Alina Pntea, A.M. Chindri, 2004 - Editura Brumar, Timioara. Samols, E., 1991 - The Endocrine Pancreas, 46-47, Ed. Raven Press, New York. Simard, L.C.,1942 - Le complexe neuro-insulaire du pancreas, Rev. Can. Biol.,1, 249.
113
STRUCTURI FOLICULARE N LOBUL INTERMEDIAR AL HIPOFIZEI DE TAUR

THE FOLLICULAR STRUCTURES IN PARS INTERMEDIA OF THE BULL HYPOPHYSIS
C. COTEA, O.Z. OPREAN, Carmen SOLCAN U.S.A.M.V. Iai I. COTEA U.M.F.Gr. T. Popa Iai As a research material we have used the hypophysis of 14 Holstein bulls at of 3-8 years. The samples have been fixed in Orth, Carnoy, and Helly, led up to paraffin and serially sectioned at 5 m. We have finally obtained 420 serial sections stained through the methods: Novelli, PAS, Fontana, Steedman-Mowry, Bielschowsky, Bodian and Holmes. The intermediate lobe is well developed in the bull. It is always adjacent to the posterior lobe of the bull hypophysis, separated from it by a discontinuous layer of connective tissue. Follicular structures (110-360 m) containing colloid in the lumen were found in the pars intermedia of 14 bulls hypophysis. This follicular structures are separated by thin connective tissue strands, they form cysts which contain colloid. The colloid is palestaining materials, PAS-positive and is surrounds by simple squamous or cuboidal epithelium.The colloid consists chiefly of a glycoprotein in the Steedman-Mowry stain. The pars intermedia of the hypophysis makes a hormone MSH (Melanocyte Stimulating Hormone) which is responsible for the expansion of melanocytes from the animal skin.
Key words: follicular structures, pars intermedia, bull hypophysis
Structuri foliculare au fost observate n adenohipofiza de om, cine, porc, berbec i obolan (1, 5, 6, 7, 8, 9, 12). Pentru a extinde aceste investigaii i la alte specii, s-a intreprins prezenta lucrare. MATERIAL I METOD
Ca material de cercetat au servit hipofizele de la 14 tauri Holstein, n vrst de 3-8 ani. Cele 28 de fragmente rezultate din secionarea medio-sagital a hipofizelor au fost fixate n Carnoy i Helly, incluse n parafin i secionate la 5 m. Coloraiile folosite au fost: PAS, Papanicolau, Novelli, MH2, Fontana, Steedman-Mowry, Bielschowsky, Bodian i Holmes.
114
REZULTATE I DISCUII n lobul intermediar al adenohipofizei la taurii luai n studiu au fost evideniate structuri foliculare de dimensiuni variabile (110 - 360 m). Acestea sunt structurate dintr-un epiteliu cubic de 7-9 m, cu celulele epiteliale ce conin nuclei ovalari de 4 m (fig. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16). Unele structuri foliculare conin n lumenul lor un coloid omogen, PASpozitiv i fr vacuole de resorbie marginale. De menionat faptul c alte structuri foliculare din lobul intermediar al adenohipofizei de taur, coloidul apare cu vacuole de resorbie marginale, semn al unei elaborri intense de MSH. Faptul c structurile foliculare apar frecvente n lobul intermediar al hipofizei de taur, la care coloidul apare cu vacuole de resorbie marginale, demonstreaz elaborarea la un nivel ridicat de MSH.
Fig. 1. Hipofiz - lobul intermediar de taur Holstein n vrst de 4 ani. Vezicul cu o secreie n lumen . Col. MH2; x 200
Fig. 2. Hipofiz - lobul intermediar de taur Holstein n vrst de 4 ani. Vezicul cu o secreie n lumen . Col. MH2; x 200
Fig. 3. Hipofiz - lobul intermediar de taur Holstein n vrst de 4 ani. Trei vezicule cu o secreie n lumen. Col. MH2 x 200
Fig. 4. Hipofiz - lobul intermediar de taur Holstein n vrst de 4 ani. O vezicul cu lumen neregulat. Col. MH2 x 400
115
Fig. 5. Hipofiz - lobul intermediar de taur Holstein n vrst de 5 ani. Vezicule cu secreie n lumen. Col. MH2 x 200
Fig. 7. Hipofiz - lobul intermediar de taur Holstein n vrst de 5 ani. O vezicul cu secreie n lumen. Col. MH2 x 200
116
Fig. 11. Hipofiz - lobul intermediar de taur Holstein n vrst de 7 ani. O vezicul cu secreie n lumen. Col. MH2 x 400
Fig. 12. Hipofiz - lobul intermediar de taur Holstein n vrst de 7 ani. Dou vezicule cu secreie n lumen. Col. MH2 x 400
Fig. 13. Hipofiz - lobul intermediar de taur Holstein n vrst de 7 ani. Dou vezicule cu secreie n lumen. Col. PAS x 80
117
CONCLUZII 1. n lobul intermediar al adenohipofizei de taur au fost remarcate structuri foliculare, care au dimensiunile variabile (110-360 m), ce sunt delimitate de un epiteliu cubic de 7 - 9 m. 2. n lumenul unor structuri foliculare s-a remarcat un coloid omogen, PASpozitiv, fr vacuole de resorbie marginale. 3. La unii tauri, coloidul din structurile foliculare apare cu vacuole de resorbie marginale, semn al unei elaborri intense de MSH.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Bergland, R.M., & Torack R.M., 1969 - An ultrastructural study of follicular cells in the human anterior pituitary. Am. J. Pathol. 57, 273-297. Cotea C. i colab., 1986 - Dinamica celulei beta-FSH din adenohipofiza suinelor femele n proestrus din rasa Landrace n vrst de 150- 280 zile. Lucr. t. Inst. Agr. Iai, II, Zooteh. Med. Vet., p. 75-76. Cotea C. i colab., 1988 - Aspectele morfologice i histochimice ale foliculogenezei din ovar, n corelaie cu dinamica celular din adenohipofiza la scrofiele din rasa Landrace. Lucr. t. Inst. de Cercetare i producie pentru creterea porcilor Peri, vol. IV, p. 201-209. Cotea C., Arseni O., 1994 - Hipotalamusul la suinele femele. Lucr. t. Univ. Agr. i Med. Vet., seria Med. Vet., vol. 37, p. 25-27. Cotea C., Solcan Carmen, Arseni O.V., 1997 Structuri foliculare n lobul intermediar al hipofizei la suinele femele din rasa Landrace. Lucr. t. Univ. t. Agricole i Med. Vet. Iai, vol. 40, p. 20 22. Cotea C., Carmen Solcan, Cotea I., 2004 - Structuri foliculare n lobul intermediar al hipofizei la berbec. Lucr. t., vol. 47 (6), p. 26-29. Horvat E., and all., 1974 - Origin, possible function and fate of follicular cells in the anterior lobe of the human pituitary. An electron microscopic study. Am. J. Pathol. 77, 199-212. Kagayama, M., 1965 - The follicular cell in the pars distalis of the dog pituitary gland : an electron microscope study. Endocrinol. 77, 1053- 1060. Kubo M. and all., 1992 - Follicular structures in the hypophysis of pigs. Bull. Natl. Inst. Anim. Health 98, 9-13. Liwska, J., 1978 - Investigations of ultrastructure of the adenohypophysis in the domestic pig (Suis scrofa domestica). Part II: Dark cells in the pars anterior. Folia Histochemica Cytochemica 16 (4),315-322. Runceanu L., Cotea C., 2001 Reproducie, obstetric i ginecologie veterinar. Ed. Ion Ionescu de la Brad, Univ. de tiine Agricole i Medicin Veterinar, Iai. Vila-Porcile, E., 1972 - Le reseau des cellules folliculo-stellaires et les follicules de ladenohypophyse du rat (pars distalis). Z. Zellforsch. 129, 328-369.
4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.
118
NUCLEII HIPOTALAMICI LA VAC

THE NUCLEI OF THE HYPOTHALAMUS COW
C. COTEA C., O.Z. OPREAN, P.C. BOITEANU, Carmen SOLCAN, U.S.A.M.V. Iai I. COTEA U.M.F. Iai As a research material we have used the hypothalamico-hypophyseal complexs of 21 cows in the phases of their sexual cycle. From the 21 samples, we have obtained only ten hypothalamico-hypophyseal complexs; at the 11 females the hypothalamus has been obtained separately from the hypophysis, because of the difficulty in getting the complex of the whole. The samples have been fixed in Orth, Carnoy and Helly, led up to paraffin and serially sectioned at 5 m. We have finally obtained 550 serial sections stained through the methods: Novelli, PAS, Fontana, Steedman-Mowry, Bielschowsky, Bodian, Holmes and Nissl. In the cow hypothalamus we have found the following groups of neurons: anterior (nuc. supraopticus NSO; nuc. paraventricularis NPV), middle (nuc. infundibularis), lateral (nuc. hypothalamicus dorsomedialis; nuc. hypotalamicus ventromedialis) and posterior (nuc. periventricularis caudalis; nuc. premamilaris; nuc. corporis mamilaris). The name of the groups has been given according to their site compared to the hypothalamo-hypophyseal tract. In the walls of the third hypothalamus ventricle in the cow are localized the neurons which elaborate the releasing hormones (RH) for the gonadotrophic hormones. These neurons structure de infundibularis nucleus of the cow hypothalamus. The neurons are multipolars with an average dimension of 10-12 m, which a vesiculous nucleus 5 m large and nucleolated. In the neuroplasm of the axon hillock we have found the numerous PAS positive granules. These granules are positive in Mikami stain, get stained in blue, which demonstrates that they are polipeptidic nature. FSH-RH and LH-RH are polipeptids and stimulate the secretions of the gonadotrophic hormones in the -FSH and the -LH cells from the cow adenohypophysis.
Key words: cow, hypothalamus, nuclei, releasing hormones (RH)
Hipotalamusul a fost studiat la scroaf i la oaie (1, 5, 7, 8, 9), cu evidenierea neuronilor secretori de polipeptide FSH-RH i LH-RH. n vederea descrierii neuronilor din nucleii hipotalamici implicai n reproducie la vaci, s-a ntreprins prezenta lucrare.
119
MATERIAL I METOD
Ca material de cercetat au servit hipotalamusurile i hipofizele de la 21 vaci n fazele ciclului sexual, recoltate imediat dup sacrificarea animalelor. Fragmentele au fost fixate n Orth, Carnoy i Helly, incluse n parafin i secionate la 5 m. Numai la 11 femele s-a obinut complexul hipotalamohipofizar, la restul femelelor hipotalamusul a fost obinut separat de hipofiz, dat fiind dificultatea recoltrii complexului n totalitatea sa. Din cele 11 piese obinute s-au efectuat pentru fiecare caz cte 240 seciuni seriate, pentru a urmri neuronii hipotalamici n funcie de axul hipotalamo-hipofizar i n raport cu ventriculul III i infundibulul acestuia. Coloraiile folosite au fost: Novelli, PAS, Fontana, Steedman-Mowry, Bielschowsky, Bodian, Holmes i Nissl.
REZULTATE I DISCUII n hipotalamus la vac se delimiteaz mai multe regiuni i arii de neuroni. Importana major n sistemul funcional endocrin o au aceste regiuni cunoscute sub numele de nuclei hipotalamici (1, 5, 7, 8) care sunt structurai din neuroni secretori. n hipotalamus s-au evideniat urmtoarele grupuri de neuroni: anterior, mijlociu i posterior. Denumirea grupurilor de neuroni a fost dat n raport cu poziia fiecruia fa de fasciculul hipotalamo-hipofizar, fa de ventriculul III i infundibulul acestuia (Plana I). n grupul anterior n raport cu localizarea cmpurilor de neuroni se evideniaz nucleul supraoptic (NSO) i nucleul paraventricular (NPV) (fig. 1, 2, 3, 4, 5, 6). NSO se remarc deasupra chiasmei optice, n timp ce NPV este situat anterior ventriculului al III-lea. Neuronii din NSO i NPV sunt de talie mare (24-31 m), multipolari, cu nucleul veziculos, localizat excentric i nucleolat. Axonii acestor neuroni, n seciunile impregnate argentic, pot fi urmrii n cmpul microscopic pe distane de sute de micrometri. n lungul acestor axoni se remarc granule n iraguri, de diferite dimensiuni i PAS-pozitive. Aceleai granule se evideniaz i n corpii Herring ai neurohipofizei. n substana interstiial a lobului posterior se remarc de-alungul fibrelor nervoase formaiuni ovalare rotunde sau cu contur neregulat, de dimensiuni variabile numite corpii Herring. Acetia sunt considerai ca fiind forma sub care se stocheaz secreia neuronilor hipotalamici n lobul posterior, deoarece dup secionarea fasciculului hipotalamo-hipofizar (9) (totalitatea axonilor din nucleii supraoptici i paraventriculari ai hipotalamusului), substana Herring se acumuleaz la extremitatea proximal a neuronului secionat. Fibrele nervoase sunt n majoritate mielinice i reprezint axonii neuronilor secretori din nucleii hipotalamusului: nucleul supraoptic (NSO) i paraventricular (NPV). Aceste fibre sunt dispuse paralel n tija hipofizar, au o dispoziie neregulat n lobul posterior i se termin prin dilataii n form de mciuc n jurul capilarelor sanguine i a pituicitelor.
120
Plana I. Sistemul hipotalamo-hipofizar i epitalamo-epifizar la vac: - Grupul anterior (1. nuc. supraopticus; 2. nuc. paraventricularis); - Grupul lateral (3. nuc. hypotalamicus dorsomedialis; 4. nuc. hypotalamicus ventromedialis); - Grupul mijlociu (5. nuc. infundibularis); - Grupul posterior (6. nuc. periventricularis caudalis; 7. nuc. premamilaris; 8. nuc. corporis mamilaris) E epifiza; MI masa intermediar; CO chiasma optic; CM corpul mamilar * 3, 4, 5, 6, 7 formeaz aria hipofizotrop a hipotalamusului la vac, cu neuroni multipolari secretori de RH i IH
121
Fig. 1. Complexul hipotalamoneurohipofizar la vac. Col. Novelli; x 100
Fig. 2. Infundibulul ventriculului al III-lea la vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 80
Fig. 3. Nucleul supraoptic (NSO) din hipotalamusul de vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 200
Fig. 4. Nucleul supraoptic (NSO) din hipotalamusul de vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 400
Fig. 5. Nucleul paraventricular (NPV) din hipotalamusul de vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 200
Fig. 6. Nucleul paraventricular (NPV) din hipotalamusul de vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 200
122
Neuronii din nucleul supraoptic secret hormonul antidiuretic (ADHAntidiuretic Hormone) sau vasopresina cu aciune antidiuretic prin resorbia apei la nivelul tubilor contori distali i colectori, reducnd n acest mod diureza. n schimb, nucleul paraventricular secret ocitocina (OXT-Ocitocin) care stimuleaz contraciile uterine n iniierea travaliului din timpul parturiiei i contracia celulelor mioepiteliale ale canalelor galactofore, determinnd prin aceasta eliminarea laptelui. Neuronii secretori ai celor doi nuclei din hipotalamus au citoplasma bogat n corpii Nissl, un nucleu mare nucleolat, dendrite scurte i o prelungire unic-axonul. Totalitatea axonilor acestor neuroni din cei doi nuclei constituie fasciculul hipotalamo-neurohipofizar. Neuronii secret cei doi hormoni ce sunt legai de o protein specific (neurofizin) i sunt transportai n lungul axonilor i depozitai la nivelul lobului posterior al hipofizei, n corpii Herring. Neurosecreia mai apare i ca material fin granular aglomerat n jurul capilarelor i fibrelor nervoase terminale. Acest mod de secreie a hormonilor n lungul fibrelor nervoase se numete neurocrinie. Morfologic, aceste fapte au fost dovedite prin punerea n eviden a granulaiilor de secreie n pericarionul neuronilor secretori, n lungul fibrelor nervoase (axonii acestor neuroni) care merg de la neuroni, prin tija neurohipofizar, n lobul posterior al hipofizei i la nivelul terminaiilor nervoase n jurul capilarelor. Coloraiile speciale au mai evideniat n aceti corpi Herring proteoglicani i acidul L-ascorbic. Eliberarea hormonilor din corpii Herring este operat de pituicite care i separ de neurofizin i i cedeaz sngelui. Grupurile laterale sunt situate n raport cu axul medio-sagital al hipotalamusului, de o parte i de alta a ventriculului III. n structura unui grup lateral intr doi nuclei: nucleul hipotalamic dorsomedial (fig. 7, 8) i nucleul hipotalamic ventromedial. Aceti nuclei se deosebesc numai prin poziia lor, n timp ce sub aspect structural cuprind neuroni cu morfologie similar. Neuronii au dimensiunea de 14-15 m, sunt multipolari i conin n neuroplasm granule PAS-pozitive.
Fig. 7. Nucleul hipotalamic dorso-medial din Fig. 8. Nucleul hipotalamic dorso-medial din hipotalamusul de vac. Impregnare hipotalamusul de vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 200 argentic tehnica Holmes; x 200
123
Grupul mijlociu se remarc n jurul originii infundibulului ventriculului III, de unde i denumirea de nucleu infundibular (fig. 9, 10, 11, 12), care este structurat din neuroni multipolari, cu dimensiunea de 10-12 m i cu numeroase granule n citoplasm.
Fig. 9. Nucleul infundibular din hipotalamusul de vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 80
Grupul posterior include neuronii localizai posterior ventriculului III. Unii neuroni cu dimensiunea de 10 m sunt dispui n apropierea epiteliului ependimar al ventriculului III, structurnd nucleul periventricular caudal, n timp ce ali neuroni apar anterior corpului mamilar, cu dimensiunea de 12 m, formnd nucleul premamilar (fig. 13, 14). n corpul mamilar s-au evideniat neuroni multipolari cu dimensiunea de 16-18 m, ce structureaz nucleul mamilar (fig. 15, 16).
124
Sistemele de interrelaie ntre hipotalamus i hipofiz sunt: sistemul hipotalamo adenohipofizar i sistemul hipotalamo-neurohipofizar.
Fig. 13. Nucleul premamilar din hipotalamusul de vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 200
Fig. 14. Nucleul premamilar din hipotalamusul de vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 200
Fig. 15. Nucleul mamilar din hipotalamusul de vac. Impregnare argentic tehnica Holmes; x 200
Fig. 16. Nucleul mamilar din hipotalamusul de vac. Col. Nissl; x 200
Sistemul hipotalamo-neurohipofizar este reprezentat de nucleii din zona hipotalamic anterioar - nucleii supraoptici i paraventriculari. Axonii formeaz fasciculul hipotalamo-neurohipofizar. Nucleii supraoptici i paraventriculari secret vasopresina (ADH) i ocitocina (OXT). Aceti doi hormoni sunt legai de o protein specific - neurofizina - fiind transportai de-a lungul axonilor n neurohipofiz. Sistemul hipotalamo-adenohipofizar este caracterizat prin existena neuronilor secretori din aria hipofizotrop a hipotalamusului care sintetizeaz hormoni hipofizotropi de stimulare i eliberare (Releasing-Hormones R.H.) i inhibitori (Inhibiting Hormones -IH) ai secreiilor adenohipofizare.
125
n neuronii nucleilor dorsomedial, ventromedial, infundibular, periventricular caudal i premamilar s-au evideniat granule PAS-pozitive, ceea ce pledeaz pentru o secreie de natur polipeptidic n aceti neuroni. Ei structureaz aria hipofizotrop n hipotalamusul de vac, deoarece s-a demonstrat c hormonii de eliberare i de inhibare (RH i IH) sunt din punct de vedere chimic polipeptide. Axonii acestor neuroni se evideniaz n jurul capilarelor sanguine din pereii infundibulului ventriculului al III-lea, unde i elibereaz secreiile specifice pentru stimularea sau inhibarea celulelor secretoare din adenohipofiz. CONCLUZII 1. n hipotalamus la vaci se evideniaz urmtoarele grupuri de neuroni: anterior, laterali, mijlociu i posterior. 2. Grupul anterior este structurat din nucleul supraoptic (NSO) i nucleul paraventricular (NPV) cu dimensiunea pericarionului de 24 - 31 m. 3. Grupurile laterale sunt structurate din nucleul hipotalamic dorsomedial i nucleul hipotalamic ventromedial cu neuroni al cror pericarion este de 1415 m. 4. Grupul mijlociu (nucleul infundibular) este structurat din neuroni multipolari, cu dimensiunea de 10-12 m, localizai n jurul infundibulului ventriculului al III-lea i sunt secretori ai FSH-RH i LH-RH. 5. Grupul posterior include neuronii cu dimensiunea de 10 12 m, localizai posterior ventriculului III i sistematizai n nucleul periventricular caudal i nucleul premamilar.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Cotea C., Arseni O.V., 1994 Hipotalamusul la suine. Lucr. t. Med. Vet. Iai, vol. 37, p. 25 27. Cotea C., Carmen Solcan, Arseni O.V., 1997 Structuri foliculare n lobul anterior al hipofizei la femelele suine din rasa Landrace. Lucr. t. Med. Vet. Iai, vol. 40, p. 20 22. Cotea C., Arseni O.V., 1998 Foliculogeneza n ovarul suinelor femele. Lucr. t. Med. Vet. Iai, vol. 41, pag. 13 23. Cotea C., Arseni O.V., Carmen Solcan, 1998 Glanda tecal ovarian la suinele femele. Lucr. t. Med. Vet. Iai, vol. 41, pag. 6 12. Cotea C., Arseni O.V., 1999 Hipofiza la suinele femele. Lucr. t. Med. Vet. Iai, vol. 1 (42), p. 24 31. Cotea C., 2001 - Biologie celular, Embriologie general, Histologie general, Ed. Tehnopress, Iai. Cotea C., Runceanu L., Carmen Solcan, Cotea I., 2002 Neurosecreia nucleilor hipotalamici la oaie. Lucr. t. Med. Vet. Iai, vol. 45 (4), p. 16 22. Cotea C., 2003 Histologie special. Ed. Tehnopress, Iai. Runceanu L., Cotea C., 2001 Reproducie, obstetric i ginecologie veterinar. Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai.
126
OBSERVAII PRIVIND METAPLAZIA CARTILAGINOAS I OSOAS A PIELII LA VACI CU CETOZ

OBSERVATIONS CONCERNING CARTILAGINOUS AND OSSEOUS METAPLASIA OF THE SKIN IN DAIRY COWS WITH KETOSIS
Carmen SOLCAN, O.Z. OPREAN, C.V. COTEA, Gh. SOLCAN, U.S.A.M.V. Iai In 15 dairy cows slaughtered because of ketosis the histological lesions of the skin from different regions (periorbital, sternum, base of the tail and ventral abdominal) were studied. On the skin from sternum region, chondral and osseous metaplasia was observed in 3 of cases (20%). The new formed osseous tissue had a structure like a spongious osseous tissue. Degenerative and metaplasic lesions of the skin were related with degenerative lesions of the liver and kidney
Key words: dairy cows, ketosis, skin, osseous metaplasia
Metaplazia osoas a pielii se caracterizeaz prin transformarea esutului conjunctiv dermic n esut osos. Fibrele de colagen se transform n esut osteoid iar fibroblastele n osteoblaste (5). La vaci este rareori semnalat n literatura de specialitate. Cetoza vacilor pentru lapte este consecina unei perturbri progresive a metabolismului energetic, constnd n insuficiena cronic a aportului de glucide uor digestibile, tradus prin instalarea treptat a unor leziuni ale organelor interne i ale glandelor endocrine implicate n metabolismul energetic, constnd n steatoz hepatic i renal, hiperfuncie hipofizar i corticosuprarenal i hipofuncie tiroidian. S-a urmrit depistarea leziunilor cutanate asociate cetozei. MATERIAL I METODE
S-au efectuat investigaii morfologice ale pielii la 15 vaci sacrificate de necesitate datorit cetozei. Recoltarea fragmentelor de piele s-a realizat din urmtoarele regiuni corporale: periorbital, stern, baza cozii, regiunea abdominal. Recoltrile s-au efectuat n luna iunie. Piesele au fost prefixate n formaldehid 10% soluie apoas, timp de 12 ore, apoi n fixator Bouin timp de 48 de ore, apoi incluse n parafin i secionate la 5m. Au fost efectuate coloraii HEA, Acid Periodic Fuxin Schiff, Giemsa pe esuturi i Pappenheim. S-au efectuat investigaii morfometrice i histochimice urmrindu-se grosimea epidermei, infiltraiile limfoide, particulariti morfologice i modificrile histologice ale pielii n regiunile cu leziuni.
127
REZULTATE I DISCUII Pielea din regiunea sternal i de la baza cozii prezenta leziuni macroscopice locale de hiper- i paracheratoz i depilaii difuze. Pielea din regiunea sternului i a bazei cozii se caracterizeaz printr-o hipercheratoz pronunat. La nivelul epidermei se contat prezena spiculilor hiperkeratozici, iar n derm absena glandelor sebacee, sudoripare i a foliculilor piloi (fig. 1). La 3 cazuri (20%) s-au ntlnit diferite stadii de evoluie a metaplaziei osoase. ntr-un prim stadiu dermul este foarte dens, bogat celule, respectiv fibroblaste care sunt implicate n sinteza fibrelor de colagen i a substanei fundamentale (fig. 2). Fibroblastele se metaplaziaz n condroblaste care vor structura esutul cartilaginos elastic (fig. 3). Ulterior are loc depunerea srurilor de calciu i magneziu care duc la calcificarea cartilajului (6, 7, 8). esutul osos format este asemntor celui spongios (fig. 4), dar prezint o cretere a densitii osului datorit fibrelor conjunctive (osteoscleroz), corelat cu disfuncia hepatic. n areolele esutului osos sunt prezente elemente figurate dintre care predomin hematiile i plachetele sanguine situate pe un citoreticul.
Fig. 1. Piele din regiunea sternului. Spiculi hiperkeratozici la nivelul epidermei. Derm bogat n fibroblaste. Col PAS; x 200; x 400
Modificrile pielii din aceaste zone (stern i baza cozii) se pot corela dup unii autori (6, 8) cu disfunciile hepatice i renale, la cazurile noastre acestea fiind determinate de cetoz, caracterizndu-se prin hepatoz i nefroz gras pronunat.
128
Fig 2. Piele din regiunea sternului. Activitatea intens a fibroblastelor de sinteza a fibrelor de colagen i a substanei fundamentale. Col. Giemsa; x 100; x 200.
Fig.3. Piele din regiunea sternului. esut cartilaginos elastic n derm. Col. PAS; x400.
129
Fig. 4. Piele din regiunea sternului. esut osos cu travee dense, fibroase (osteoscleroz). Col PAS; 100; x200x 400.
Epiderma n regiunea periorbital i la nivelul pleoapei superioare i inferioare are un diametru de 120-134 m, iar dermul mpreun cu glandele Meibomius un diametru de 2500-2800 m. n lamina propria a acestor canale i n dermul pleoapelor apar infiltraii limfoide difuze. Alturi de limfocite se pot evidenia i plasmocite. Pielea din regiunea pliului iei prezint epiderma cu un diametru de 120 m, iar mpreun cu dermul are o grosime de 1020- 1570 m. Glandele sebacee, sudoripare i foliculii piloi au dispoziie oblic, n unghi ascuit de 30-40. n stratul papilar al dermului se observ aglomerri limfoide sub forma unor insule formate din limfocite, plasmocite, eozinofile, rare mastocite i plasmocite. CONCLUZII 1. Se semnaleaz leziuni histologice de metaplazie cartilaginoas i osoas a pielii din regiunea sternului i a bazei cozii la 3 din 15 vaci cu cetoz (20%), leziuni care sunt mai rar menionate la bovine. 2. Metaplazia cartilaginoas i osoas poate fi pus pe seama disfunciilor hepatice i renale existente la bovinele cu cetoz. 3.esutul osos format este asemntor celui spongios, dar prezint o cretere a densitii osului datorit fibrelor conjunctive (osteoscleroz).
130
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Cotea C., 2003 - Histologie Special. Ed. Tehnopress, Iai. Gengoux Vincke P., 1990 - Immunite de la peau in Pastoret P.P., Govaerts A., Bazin H., Immunologie animale - Flammarion, Paris, 239-241 Gross T.L., Ihrke P.J., Walder E.J., 1992 Veterinary Dermatopathology. A macroscopic and microscopic evaluation of canine and feline skin disorders. Mosby Yearbook, St. Louis Mitrea I.L., Solcan Gh., 2006 - Dermatopathologia animalelor de ferm, Ed Medical Veterinar, Bucureti Paul I., 1989 Morfologia proceselor patologice fundamentale, Ed. Soc. Med. Vet. din Romnia, Bucureti Ruiz Genao D.P., Pascual Lopez M.P., Fraga S., Aragues M., Garcia Diez A., 2005 - Osseous metaplasia in the setting of nefrogenic fibrosing dermathopathy. Pub. Med., Febr., 32(2); 172-5. Scott D.W., 1988 - Large animal dermatology, WB Saunders Co, Philadelphia Yager J.A., Scott D.W., 1993 - The Skin and Appendages n Patology of Domestic th Animals.4 ed., vol.I., 531-738, ed. by Jubb K.V.F., Kennedy P.C., Palmer N., Academic Press Inc, New York.
131
HISTOCHIMIA SINUSULUI INTERDIGITAL LA OAIE

HISTOCHEMICAL STUDY OF THE INTERDIGITAL SINUS (BIFLEXUS GLAND) IN SHEEP
A. POPESCU, C. COTEA, Carmen SOLCAN U.S.A.M.V. Iai For this paper, 72 interdigital sinuses served as study, they have been collected immediately after the animal's sacrification immediately. These glands were sectioned transversally or medio-sagittally, so it was possibe to obtain from each gland 7 fragments: A, B, C, D, E, F, G. For the histochemical study there were used 18 glands that were sectioned medio-sagittally, and 54 were sectioned conforming to the areas,obtaining 378 samples. These were enclosed in paraffin and cut into five-micrometer thick pieces. The stains were: PAS, PAS- Alcian blue, Novelli, Papanicolau. 1584 slides which have been interpreted and photographed at light microscope. We have identified numerous hair follicles, and nearby them sebaceous glands. Sinuous and tubular glands which form interdigital gland are grouped in glandular lobules separated by thin conjunctival septa. The secretion of the gland is abundant in proteoglicans and cells present secretor cycle, relieving the accumulation stage of PAS-positive secretion especially.
Key words: interdigital sinus, sheep, tubular gland.
Din bibliografia consultat rezult o serie de date histologice i histochimice contradictorii privind glanda biflex la ovine, fapt ce a determinat ntreprinderea prezentei lucrri. Acest studiu era impetuos, innd cont de faptul c n literatura de specialitate nu se gsesc date referitoare la glanda biflex la ovinele din rasa Karakul brumariu. S-a efectuat n premiera o zonare a glandei, efectundu-se numeroase seciuni medio-sagitale i transversale prin urmtoarele 7 zone: A, B, C, D, E, F, G (Fig. 1). MATERIAL I METODE
Glandele au fost disecate att la membrele anterioare ct i la cele posterioare imediat dup sacrificare i apoi s-a efectuat zonarea, rezultnd 7 zone (A, B, C, D, E, F, G) (Fig. 1). Coloratiile folosite au fost: PAS, PAS- albastru alcian, Novelli, Papanicolau. S-au obtinut 1584 preparate permanente ce au fost citite si fotografiate la microscop Au fost obinute 30 de microfotografii color. 132
Fig. 1. Glanda biflex (sinusul interdigital) la oaie, schi cu seciunile transversale din care s-au recoltat fragmente pentru prelucrarea histologic A, B, C, D, E, F, G: Po - poriunea orizontal (A); Pd - poriunea descendent (B, C); Pa - poriunea ascendent (E, F, G); A - poriunea orizontal (treimea superioar); B - treimea mijlocie; C - treimea inferioar; D - jonciunea dintre Pd i Pa; E - treimea inferioar; F - treimea mijlocie; G - treimea superioar (fundul de sac).
Glanda biflexa - zona A Pe seciuni transversale se remarc lumenul uor festonat, cu o secreie abundent. Epiteliul luminal este pavimentos stratificat cheratinizat, n care la suprafa apar lame desprinse de cheratin. Epiteliul se sprijin pe un derm n care se evideniaz foliculi piloi, n vecintatea crora apar glande sebacee (Plana I, fig. 3, 4). Glandele sudoripare sunt foarte dezvoltate. Acestea sunt mai rare, satelite foliculilor piloi, formate din uniti secretoare de diferite forme i dimensiuni.
133
Glandele sebacee apar cu o structur caracteristic de sac. De obicei apar grupate n apropierea foliculilor piloi. Ele se remarc n apropierea epidermului. n jurul orificiului de deschidere a glandei biflexe s-au remarcat foliculi piloi de dimensiuni mari, a cror tij formeaz smocuri de peri (Plana I, fig. 6). n vecintatea foliculilor piloi se remarc glande sebacee, care prin secreia lor asigur lubrefierea tijelor din smocul de peri (Plana I, fig. 5). n profunzime apar glande sudoripare, asemntoare cu cele ale pielii ca structur. Lobulii structurai din glandele sudoripare se remarc n profunzimea dermului, cu celule secretoare n diferite faze ale elaborrii secreiei. Unele glande sunt pline cu secreie PAS-pozitiv.
134
Glanda biflex zona B n lumenul glandei biflexe apare o secreie abundent PAS-pozitiv. Epiteliul luminal este pavimentos stratificat cheratinizat, la care stratul cornos este gros (Plana II, fig. 8). n structura dermului se remarc numeroase fibre de colagen i foliculi piloi, n jurul crora apar glande sebacee dezvoltate (fig. 1). n unele zone, adiacente foliculilor piloi dezvoltai, se evideniaz foliculi piloi solitari cu diametrul mare (Plana II, fig. 9, 11). Unele glande sebacee s-au observat n apropierea epiteliului luminal, pavimentos stratificat cheratinizat (Plana II, fig. 10). Foliculii piloi foarte dezvoltai asigur tijele groase din smocul de peri din jurul orificiului.
Glandele sebacee sunt de tip holocrin, cu un strat generator evident. n

plana II, figura 9 se evideniaz un folicul pilos cu diametru mare. Foliculii piloi
n unele seciuni apar numeroi, i n teaca lor extern se remarc fibre musculare netede, ce structureaz muchiul erector al firului.
135
Glandele sudoripare sunt situate mai n profunzime. Se grupeaz n mici lobuli. n cadrul lobulului, unitatea secretoare poate fi surprins n diferite faze de secreie. Astfel se remarc glande sudoripare n faza de acumulare a secreiei n epiteliul glandular care devine nalt i cu citoplasma apical de aspect vacuolar. Nucleii celulelor sunt veziculoi i nucleolai. n jurul unitilor secretoare se remarc fibre musculare netede. Glanda biflex zona C Secreia apare abundent n lumen, PAS-pozitiv i omogen, uneori aceast secreie ader intim de epiteliul pavimentos stratificat cheratinizat. Epiteliul ce delimiteaz lumenul glandei n aceast zon este pavimentos stratificat cheratinizat, la care stratul cornos este evident, pe unele zone se observ desprinderea lamelelor de cheratin. n derm se remarc foliculi piloi cu diametru mare.
Glandele sudoripare sunt grupate n lobuli separai printr-un esut conjunctiv delicat (Plana III, fig. 13, 14, 15, 16). Uneori, adenomerul glandei sudoripare prezint pinteni, pentru a mri suprafaa de secreie a glandei.
136
Formaiunile secretoare au aspect diferit pe seciunea transversal i conin n citoplasma celulelor epiteliale glandulare numeroase granule de secreie. Aceast secreie PAS-pozitiv (Plana III, fig. 13, 14) umple pn la refuz formaiunile glandulare. Unele glande sunt surprinse n faza de elaborare a secreiei, caracterizat printr-o exocitoz masiv a produsului de secreie. esutul conjunctiv delicat dintre formaiunile secretoare este intens vascularizat, ceea ce sugereaz o aprovizionare cu substane nutritive la un nivel ridicat a glandei. Vasele sanguine sunt reprezentate prin arteriole cu media format din dou-trei rnduri de leiocite, i venule, n peretele crora se evideniaz leiocite izolate. n vecintatea laminei bazale a formaiunilor secretoare se remarc reele de capilare sanguine, care prin transcitoz asigur metabolismul intens al celulelor secretoare. Glanda biflex zona D
137
Lumenul este delimitat de epiteliul pavimentos stratificat cheratinizat, la care stratul cornos se deprinde n lambouri. n lumenul glandei apare secreia abundent, omogen i PAS-pozitiv, desprins de epiteliul pavimentos stratificat cheratinizat ce delimiteaz zona intern. n cadrul unor seciuni histologice a fost observat secreia de aspect vacuolar. n unele zone stratul cornos este foarte dezvoltat, iar stratul granular al lui Unna conine n citoplasma celulelor granule ncarcate cu cheratohialin, iar stratul lucidum prezint granule de eleidin. Foliculii piloi din aceast zon sunt mai rari i cu diametru mare. n vecintatea lor se remarc glande sudoripare grupate n lobuli (Plana IV, fig. 18, 19). Unitile secretoare ale glandelor sudoripare pot fi surprinse n diverse faze de secreie. n funcie de aceste faze, epiteliul secretor prezint morfologie caracteristic. n lumenul adenomerului se remarc o secreie crescut PASpozitiv (Plana IV, fig. 20, 21), ce rezult n urma exocitozei materialului secretor ce se acumuleazla polul apical al celulelor epiteliale glandulare. Glanda biflex zonele E si F Secreia apare n exces n aceast zon, evideniat prin faptul c unitile secretoare sunt pline cu produsul de secreie PAS-pozitiv (Plana V, fig. 23, 24). Uneori, secreia apare de aspect vacuolar n lumenul formaiunilor secretoare. Unitile secretoare prezint numeroi pinteni, epiteliul secretor este nalt i manifest semne intense de exocitoz. Formaiunile secretoare sunt dezvoltate, realiznd un strat glandular compact. Epiteliul glandular este cubic sau nalt, n funcie de faza n care sunt surprinse formaiunile glandulare. Dup eliberarea secreiei, epiteliul glandular este cubic i se pregtete pentru refacerea organitelor citoplasmatice n vederea relurii unui nou ciclu secretor Lobulii glandulari sunt aezai pe dou-trei rnduri structurnd un strat glandular compact. Pe seciune, unitile secretoare prezint lumenul ncarcat cu secreie omogen i PAS-pozitiv (Plana V, fig. 25, 26). Unii lobuli sunt surprini n faza n care secreia este eliminat din cadrul formaiunilor glandulare. Au fost evideniai lobuli n care procesul secretor se desfoar la un nivel ridicat n unitile secretoare, a cror epiteliu ncepe s devin prismatic simplu. n ali lobuli, epiteliul glandular este aplatizat, datorit acumulrii n exces a secreiei PAS-pozitiv. n lumenul glandei, secreia este vscoas, PAS-pozitiv i ader intim de epiteliul luminal pavimentos stratificat cheratinizat, la care procesul de cheratinizare este mai puin intens dect n celelalte zone, demonstrat prin acumularea unor granule mai rare de cheratohialin i eleidin.
138
Glanda biflex zona G Formaiunile secretoare sunt dezvoltate, realiznd un strat glandular compact (Plana VI, fig. 28, 29, 30, 31). Epiteliul glandular este prismatic, n unele zone cubice, cu o secreie abundent PAS-pozitiv n lumen (Plana VI, fig. 29). Unele formaiuni glandulare prezint pinteni epiteliali pentru mrirea suprafeei de secreie. Celulele epiteliale prezint n citoplasma polului apical cantiti crescute de granule de secreie care sunt eliminate prin exocitoz (Plana VI, fig. 29, 30).
139
REZULTATE I DISCUII Din studierea sistematic a celor 7 zone ale glandei biflexe la oaia Karakul brumriu, se evideniaz diferene structurale ntre ele. n primul rnd, pe msura apropierii de zona G se constat dezvoltarea deosebit a stratului glandular ce intereseaz glandele sudoripare, ceea ce ne determin s afirmm c glanda biflex este o gland sudoripar modificat, n sensul c unitile secretoare pe lng faptul c excret, secret i o cantitate crescut de material PAS-pozitiv.
140
Prezena glandelor sudoripare ca formaiuni secretoare de diferite forme n seciunile histologice, demonstreaz ca morfologie aspectul tubulo-sinuos. Formaiunile secretoare sunt n numr variabil n cadrul unui lobul, ce este delimitat de un esut conjunctiv delicat i foarte vascularizat. Histochimic s-a demonstrat prezena att n lumenul glandelor sudoripare, ct i n cel al polului apical al celulelor secretoare, a proteoglicanilor, ceea ce demonstreaz c secreia acestor glande este foarte bogat n glicoproteine, n care fraciunea proteic este bine reprezentat, aspect menionat i de ali autori (2, 3, 4, 7). n cadrul aceluiai lobul, unitile secretoare pot fi surprinse n diferite faze ale secreiei. Prezena unui epiteliu nalt, cu aglomerare de proteoglicani la polul apical al celulelor secretoare, demonstreaz faza de acumulare a secreiei, stadiul presecretor. n unele formaiuni secretoare ale glandei biflexe s-a evideniat secreie PAS-pozitiv ce umple pn la refuz lumenul acestora. Epiteliul glandular n acest caz este cubic sau de cele mai multe ori aplatizat, indicnd stadiul postsecretor al glandelor sudoripare. Modalitatea de secreie este apocrin; dup ce secreia se acumuleaz la polul apical, celulele sufer procesul de decapitare, asemntoare celulelor din glanda mamar (2, 3, 4, 7). Unele formaiuni glandulare prezint pinteni sau pliuri pe seciunea transversal cu rolul de a mri suprafaa de secreie a epiteliului. Printre celulele epiteliale ataate de lamina bazal s-au remarcat celule mioepiteliale cu rol n elaborarea secreiei, prin sistemul motil actin-miozin. Cei mai dezvoltai lobuli glandulari se remarc n zonele F i G, ceea ce demonstreaz c aceste zone particip cel mai intens la elaborarea secreiei. Faptul c foliculii piloi au diametrul mai mare n zona de deschidere a glandei biflexe, demonstreaz grosimea mai mare a tijelor smocului de peri din aceast regiune. Glandele sebacee au structur de sac alveolar cu lamina bazal pe care se sprijin stratul generator, i straturi celulare implicate n procesul de holocrinie. n aceste celule s-au evideniat cantiti variabile de lipide, sub form de picturi mari n apropierea zonei centrale de necrobioz. Ele sunt mai frecvente n zona A i zona B, n apropierea epiteliului cheratinizat. n ceea ce privete epiderma (epiteliul pavimentos stratificat cheratinizat), ce cptuete lumenul glandei biflexe, este mai groas, cu stratul cornos mai evident n zona orificiului de deschidere a glandei. Epiteliul cheratinizat se pstreaz pe toat lungimea glandei, n care s-au evideniat granule de cheratohialin i eleidin dispuse n irag. n unele zone ale lumenului glandular se remarc procesul de exfoliere n lambouri a lamelelor de cheratin. Secreia este omogen, intens PAS-pozitiv i ader intim de epiteliul luminal pavimentos cheratinizat. n unele zone, materialul secretor apare intens vacuolar sau de aspect retiform, n sensul c secreia ia aspect filamentar la punctul de contact cu epiteliul luminal.
141
CONCLUZII 1. Glanda biflex la ovinele din rasa Karakul negru este o gland sudoripar modificat, n care formaiunile secretoare se organizeaz n lobuli. 2. Lobulii sunt delimitai de un esut conjunctiv delicat, foarte vascularizat i n cadrul lor, unitile secretoare sudoripare pot fi surprinse n diferite faze ale secreiei. 3. Cea mai dezvoltat zon glandular este fundul de sac al glandei biflexe (zona E), unde lobulii glandulari sunt mai numeroi i mai voluminoi, manifestnd o activitate secretorie intens. 4. Procesul de elaborare a secreiei acestor glande este de tip apocrin, cu morfologia caracteristic ce decurge din aceasta. 5. Evidenierea proteoglicanilor n secreia luminal, ct i la polul apical al celulelor glandulare, demonstreaz c secreia glandei conine cantiti crescute de proteine n cadrul compuilor glicoprotidici. 6. Lumenul glandei biflexe este delimitat de un epiteliu pavimentos stratificat cheratinizat cu stratul cornos mai bine reprezentat n primele 3 zone i care se menine de tip cornos pe toat suprafaa luminal a glandei. 7. Glandele sebacee sunt prezente n vecintatea foliculilor piloi, mai ales n zonele A i B ale glandei biflexe. 8. Foliculii piloi sunt mai dezvoltai n zona A, unde formeaza tijele groase ale smocului de peri n zona orificiului. 9. Prezena a numeroase glande sebacee n zonele A i B, demonstreaz o secreie bogat n lipide, ce asigur lubrefierea smocului de peri din zona orificiului de deschidere a glandei biflexe.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Botrel S., Cotea C., Gaboreanu M., 1982 - Histologie i embriologie medical veterinar, Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti. Cornil L., Manolescu N., 1995 - Structura i ultrastructura organelor la animalele domestice, Editura Ceres, Bucureti. Cotea C., Gall C., 1985 - Aspecte histologice i histochimice ale glandei biflexe la ovine. Seminarul Tehnologia reproduciei i patologia animalelor de ferm, vol. X, p. 331-336, Institutul Agronomic Cluj-Napoca. Cotea C., 2003 - Histologie special. Ed. Tehnopress, Iai. Coofan V., 1975 - Anatomie topografic a animalelor domestice. Lito., vol. II, Institutul Agronomic Iai. Coofan V., Palicica R., Valentina Hricu, Enciu V., 1999 Anatomia animalelor domestice, vol. I. Aparatul de susinere i micare. Ed. Orizonturi universitare, Timioara. Grigorescu E., Moisescu M., Olarian Elena, Vcaru C., 1957 Contribuii la studiul sinusului interdigital la oaie. Lucrrile Sesiunii tiinifice, Institutul Agronomic Timioara, p. 273-281, 1957.
142
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Janicki Z., Hrarste A., Slavica A., Konjevi D., Marinovi Z., Stubian D., 2003 Morphohistological characteristics of the interdigital gland in the roebuck (Capreolus capreolus L.). Vet. Arhiv 73, 27 37. Knig E.H., Liebich G.H., 1999 Anatomie der Haussugetiere. Lehrbuch und Farbatlas fr Studium und Praxis. Band I, Bewegungsapparat Schauttauer Stuttgart, New York. Knig E.H., Liebich G.H., 1999 Anatomie der Haussugetiere. Lehrbuch und Farbatlas fr Studium und Praxis. Band II, Organe, Kreislauf-und Nervensystem, Schauttauer Stuttgart, New York. Liebich H.G., Bck P., Budras K.D., Maierl J., Reese S., 1999 Funktionelle Histologie der Haussugetiere. Lehrbuch und Farbatlas fr Studium und Praxis. Schattauer Stuttgard, New York. Mihai M., 1984 Cercetri histologice, citologice, ultrastructurale i morfochimice asupra glandelorsebacee i sudoripare n decursul ciclului estral i al gestaiei la ovine. Tez de doctorat, Institutul Agronomic Iai. incai Mariana, 2000 Histologie veterinar, vol. II, Organe i embriologie. Ed. Mirton, Timioara. Verde N., Pop T., Manolescu N., 1982 Contribuii la ontogeneza i structura sinusului interdigital la oaie. Seminarul tiinific "Metode noi de sporire a produciei la animale" Iai, p. 66-67, 1982.
143
MORFOLOGIA SINUSULUI INTERDIGITAL (GLANDEI BIFLEXE) LA OAIE

MORPHOLOGY OF THE INTERDIGITAL SINUS (BIFLEXUS GLAND) IN SHEEP
A. POPESCU, C. COTEA, Carmen SOLCAN U.S.A.M.V. Iai The extremity of the thoracic and pelvic limbs from 18 sheep black Karakul breed beetwen 3 and 8 years old were sectioned for observation of the interdigital sinus. This apears like a pipe that opens through an orifice of 2-4,5 mm diameter,which is situated in the interdigital space of the dorsal side of acropodyal area. The gland was systematised in 4 areas: horizontal, descendent, the jonction of two areas, ascendent. The total length of the gland for frontal limbs is beetwen 36,5 mm, but it may vary beetwen 31-44 mm. For the posterior limbs, the length can amount to 25- 36 mm, with an average of 33 mm. In the present work presented are shown the dimensions of the studied areas that may vary depending on the limb and age.
Key words: interdigital sinus, sheep, limb.
Datele din literatura de specialitate privitor la marimea glandei biflexe la oaie, la functia sa si ontogeneza prezinta date contradictorii. (2, 3, 4, 5, 7, 10, 12, 13, 14) Dimensiunile acestei glande variaza dupa diferiti cercetatori, dar nu se refera la aceiasi rasa in functie de varsta. (7) Avand in vedere aceste aspecte contradictorii din bibliografia consultata, sa intreprins prezenta lucrare. MATERIAL SI METODA
Ca material de studiat au servit glandele interdigitale atat de la membrele anterioare cat si de la cele posterioare de la 18 ovine din rasa Karakul brumariu in varsta de 3-8 ani sacrificate de necesitate, cate trei pentru fiecare categorie de varsta. Regiunile acropodiale de la toate membrele au fost disecate pentru evidentierea glandei biflexe in vederea fotografierii (fig. 1) si efectuarii unor schite clare privind topografia acestei glande (fig. 2), deoarece in literatura de specialitate nu se prezinta clar morfologia acestei glande.
144
Fig. 1 Glanda biflexa la oaia Karakul brumariu in varsta de 5 ani: a - orificiul de deschidere, b - sinusul interdigital
145
Fig. 2. Glanda biflex (sinusul interdigital) la oaie: a - orificiul de deschidere; b - sinus interdigital; c - falanga proximal; d - ligament interdigital; e - extremitatea distal a metacarpului; Po - poriunea orizontal; Pd - poriunea descendent; Pa - poriunea ascendent.
REZULTATE SI DISCUTII Greutatea in grame si dimensiunea glandei biflexe in milimetrii si pe zone la ovinele din rasa Karakul brumariu in varsta de 3-8 ani sunt redate in Anexele: 1, 2, 3, 4. In privinta greutatii glandei de la membrul anterior drept,aceasta variaza de la 8-9 g la varsta de 3 ani la 11-12 g la varsta de 8 ani. Lungimea totala a glandei variaza de la 31-32 mm la varsta de 3 ani la 4344mm la varsta de 7-8 ani. In cadrul principalelor segmente ( portiunea orizontala -Po ; descendentaPd ; ascendenta -Pa ) se constata ca portiunea orizontala are aceiasi lungime de 2mm si latime de 2mm la toate cele 18 cazuri. In privinta portiunii descendente se constata ca aceasta variaza ca lungime de 16-17 mm la varsta de 3 ani la 23-25 mm la varsta de 7-8 ani.Latimea sa este constanta de 3mm , cu atingerea unei dimensiuni de 4mm la varsta de 7-8 ani.
146
147
148
149
150
La portiunea ascendenta care este cea mai dezvoltata sub aspectul volumului se constata ca lugimea este de 13-14 mm la varsta de 3 ani ,atingand 17-18 mm la 7-8 ani.Latimea glandei este de 5-7 mm la varsta de 3 ani ,in schimb la varsta de 7-8 ani este de 7-8 mm. Greutatea glandei de la membrul anterior stang variaza intre 8-9 g la varsta de 3 ani la 10-13g la varsta de 7-8 ani. Lungimea sa totala variaza intre 30-32 mm la varsta de 3 ani la 42-44 mm la varsta de 8 ani. Portiunea orizontala are dimensiuni constante lungimea si latimea de 2 mm indiferent de varsta. Lungimea portiunii descendente variaza intre 15-16 mm lungime si 3 mm latime la varsta de 3 ani la 22-24 mm lungime si 3-4mm latime la varsta de 7-8 ani. Portiunea ascendenta prezinta lungimea de 12-16 mm si latimea de de 5-6 mm la varsta de 3 ani si de 16-19 mm lungime si 5-7 mm latime la varsta de 7-8 ani. Membrul posterior drept prezinta variatii ale greutatii glandei cuprinse intre 6-7 g pentru varsta de 3 ani si 10-12 g pentru varsta de 7-8 ani. Lungimea sa totala variaza intre 25-27 mm la varsta de 3 ani pana la 32-36 mm la varsta de 8 ani. Lungimea si latimea portiunii orizontale ramane aceiasi de 2 mm indiferent de varsta . Lungimea portiunii descendente ests cuprinsa intre 13-16 mm la 3-4 ani si 18-21 mm la varsta de 7-8 ani.Latimea sa este cuprinsa intre 2,5-3 mm cu dimensiunea cea mai mica la doua cazuri la varsta de 5 ani. Portiunea ascendenta are lungimea de 10-11 mm la varsta de 3-4 ani si de 11-15 mm la varsta de 7-8 ani. Latimea sa este de 4-6 mm indiferent de varsta. Greutatea glandei la membrul posterior stang variaza intre 6-8 g la varsta de 3-4 ani la 10-12 g la varsta de 8 ani. Lungimea sa totala este de 25-28 mm la 3-4 ani si de 32 -36 mm la 7-8 ani. Portiunea orizontala prezinta lungimea si latimea de 2 mm ce ramane constanta. Portiunea descendenta are lungimea de 13-16 mm la 3-4 ani si de 18-20 mm la 7-8 ani. Latimea variaza intre 2,5-3 mm. Portiunea ascendenta are lungimea de10-11 mm la 3-4 ani si de 12-14 mm la 7-8 ani. Latimea se incadreaza intre 4- 6 mm la toate varstele. Din analiza tabelelor 1, 2, 3, 4 se constata ca dimensiunile glandei de la membrele anterioare respectiv lungimea totala 31-32 mm la varsta de 3-4 ani si 43-44 mm la varsta de 8 ani sunt mai mari decat la membrele posterioare drept si stang respectiv 25-29 mm la 3-4 ani si de 32-36 mm la varsta de 7-8 ani. Corespunzator acestor diferente, si greutatea glandei este mai mare la membrele anterior, variind intre 8-13 g, iar la cele posterioare intre 6-12 g.
151
In privinta zonelor luate in studiu: portiunea orizontala , descendent si ascendenta ultimile doua variaza ca lungime si latime in timp ce portiunea orizontala este constanta pentru toate varstele. Aceasta zona se afla in imediata vecinatate a deschiderii glandei si are o lungime si o latime constanta de 2 mm. Portiunea descendenta care se intinde de la portiunea orizontala pana la ligamentul interdigital, avand directie oblica dinaint-inapoi si de sus in jos este mai mare la membrele anterioare 15-18 mm lungime la 3-4 ani si 22-25 mm la 8 ani fata de dimensiunile de la membrele posterioare 13-16 mm la 3-4 ani si 18-21 mm la 7-8 ani. Latimea glandei pe toata lungimea portiunii distale este costanta de 2,5-3 mm pentru toate varstele. Portiunea ascendenta este mai scurta ca cea descendenta. Pozitia este oblica de jos in sus si dinapoi inainte, portiunea terminala, prin peretele sau inferoanterior venind partial in raport direct cu fata posterioara a portiunii descendente. Aceasta are o latime mai mare, de 5-7 mm la 3 ani si de 5-8 mm la 8 ani la membrele anterioare fata de 4-5 mm la varsta de 3-4 ani si de 4-6 mm la 8 ani la cele posterioare. Lungimea variaza intre 12-16 mm la 3-4 ani si 16-19 mm la varsta de 7-9 ani la membrele anterioare fata de 10-11 mm la varsta de 3-4 ani si 11-15 mm la varsta de 7-8 ani la cele posterioare. CONCLUZII 1. Glanda interdigitala examinata la 18 ovine din rasa Karakul brumariu in varsta de 3-8 ani a prezentat variatii in ceea ce priveste greutatea si lungimea totala a glandei in functie de varsta si de bipedul anterior fata de cel posterior . 2. Greutatea glandei prezinta mici variatii intre membrele anterioare si cele posterioare totusi ea este mai mare la membrele anterioare. 3. Lungimea totala este mai mare la membrele anterioare decat la cele posterioare. 4. Glanda interdigitala este sistematizata in 3 zone: portiunea orizontala ; portiunea descendenta ; portiunea ascendenta. 5. Portiunea orizontala la toate varstele luate in studiu atat la bipedul anterior cat si la cel posterior prezinta o lungime de 2mm si o latime tot de 2mm constante pentru toate varstele. 6. Lungimea portiunii descendente este mai mare la membrele anterioare fata de cele posterioare. 7. Latimea portiunii descendente este mai mare la membrele anterioare fata de cele posterioare. 8. Lungimea portiunii ascendente este mai mare la membrele anterioare mai ales la membrul stang decat la cele posterioare.
152
9. Latimea portiunii ascendente este mai mare la membrele anterioare in special la membrul drept fata de cele posterioare.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Botrel S., Cotea C., Gaboreanu M., 1982 - Histologie i embriologie medical veterinar, Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti. Cornil L., Manolescu N., 1995 - Structura i ultrastructura organelor la animalele domestice, Editura Ceres, Bucureti. Cotea C., Gall C., 1985 - Aspecte histologice i histochimice ale glandei biflexe la ovine. Seminarul Tehnologia reproduciei i patologia animalelor de ferm, vol. X, p. 331-336, Institutul Agronomic Cluj-Napoca. Cotea C., 2003 - Histologie special. Ed. Tehnopress, Iai. Coofan V., 1975 - Anatomie topografic a animalelor domestice. Lito., vol. II, Institutul Agronomic Iai. Coofan V., Palicica R., Valentina Hricu, Enciu V., 1999 Anatomia animalelor domestice, vol. I. Aparatul de susinere i micare. Ed. Orizonturi universitare, Timioara. Grigorescu E., Moisescu M., Olarian Elena, Vcaru C., 1957 Contribuii la studiul sinusului interdigital la oaie. Lucrrile Sesiunii tiinifice, Institutul Agronomic Timioara, p. 273-281. Janicki Z., Hrarste A., Slavica A., Konjevi D., Marinovi Z., Stubican D., 2003 - Morphohistological characteristics of the interdigital gland in the roebuck (Capreolus capreolus L.). Vet. Arhiv 73, 27 - 37 Knig E.H., Liebich G.H., 1999 Anatomie der Haussugetiere. Lehrbuch und Farbatlas fr Studium und Praxis. Band I, Bewegungsapparat Schauttauer Stuttgart, New York. Knig E.H., Liebich G.H., 1999 Anatomie der Haussugetiere. Lehrbuch und Farbatlas fr Studium und Praxis. Band II, Organe, Kreislauf-und Nervensystem, Schauttauer Stuttgart, New York. Liebich H.G., Bck P., Budras K.D., Maierl J., Reese S., 1999 Funktionelle Histologie der Haussugetiere. Lehrbuch und Farbatlas fr Studium und Praxis. Schattauer Stuttgard, New York. Mihai M., 1984 Cercetri histologice, citologice, ultrastructurale i morfochimice asupra glandelorsebacee i sudoripare n decursul ciclului estral i al gestaiei la ovine. Tez de doctorat, Institutul Agronomic Iai, 1984. incai Mariana, 2000 Histologie veterinar, vol. II, Organe i embriologie. Ed. Mirton, Timioara. Verde N., Pop T., Manolescu N., 1982 Contribuii la ontogeneza i structura sinusului interdigital la oaie. Seminarul tiinific "Metode noi de sporire a produciei la animale" Iai, p. 66-67, 1982.
153
OBSERVAII ASUPRA UNOR CAZURI DE FORM CUTANAT A BOLII LUI MAREK LA BROILERI
OBSERVATION ON SOME CASES OF CUTANEOUS MAREKS DISEASE AT BROILERS
Cristina BORCIL, S. PACA, M. LAZR U.S.A.M.V. Iai Research was made using skin samples from broilers 40 to 47 days from an intensive raising unit. They were unvaccinated against Mareks disease, and presented cutaneous tumors 3 and 5 mm in diameter, scattered on the whole surface of the body. The histopathologyical exam on horizontal and sagittal sections, showed underepidermic presence of some lymphoid follicles made of lymphoid elements and new formatted vessels as well as agglomerations with muffy aspect around the vessels. At the feather follicles level was found a light lymphoid hyperplasia around the external and internal epithelial sheath. Presence of lymphoid follicles was noticed at the adipous tissue also. Thus based on the distribution of limphoid elements, it is considered that the starting point of this hyperplasia is the Skin Associated Lymphoid Tissue.
Key words: broiler, Marek's disease, lymphoid elements
Boala lui Marek este cea mai important boal limfoproliferativ a ginilor, produs de virusuri din familia Herpesviridae, subfam. Alphaherpesvirinae. Vrsta de apariie a bolii la puii nevaccinai este de 35-90 de zile, iar la psrile vaccinate 114-224 de zile (5). Transmiterea virusului se face numai orizontal pe cale respiratorie, prin descuamatele epiteliale ale foliculilor plumiferi. ntr-o prim faz se produce citoliza limfocitelor B, iar apoi o hiperplazie reticular. Boala lui Marek, n forma cronic, are urmtoarele localizri: neural, ocular i cutanat. Forma acut se caracterizeaz printr-o proliferare nodular sau difuz, la nivelul ficatului, splinei, rinichilor, cordului, ovarului, proventriculului i pielii (1). n localizarea cutanat la broileri se remarc o ngroare a pielii, care apare cutat, foliculii plumiferi fiind turgesceni i mrii n volum pn la 3mm (3). Leziunile de ordin histologic ale pielii pot fi grupate n 5 tipuri: A: mici agregate de celule limfoide (LCA) ce conin limfocite mici, limfoblaste i rare figuri mitotice;
154
B: mari agregate de celule limfoide cu limfocite mici, un numr considerabil de plasmocite i rare figuri mitotice; C: agregate limfocitare cu un numr egal de limfocite mici i limfoblaste; D: agregate limfocitare foarte mari n principal coninnd limfoblaste i doar cteva limfocite mici; E: agregate limfocitare mari ce conin aproape exclusiv limfoblaste. Nodulii de dimensiuni mici de la nivelul foliculilor plumoi corespund tipurilor B i C asociate cu A, iar nodulii fuzionai, mai mari, corespund tipurilor D i E. Studiile au artat c leziunile de tip A le preced pe cele de tip B. Similitudinea unor leziuni din boala lui Marek cu cele din encefalomielitele i nevritele alergice ale psrilor sugereaz mecanismul imun de producere a leziunilor (6). S-au fcut teste imunohistochimice pentru studierea topografiei proteinelor fosforilate specifice (PP) ale MVD-1 i genelor lor . PP au fost detectate masiv n zonele de necroz ale unor limfoame cutanate. Zonele de necroz de la nivelul pulpei penelor corespund n special limfoblastelor necrozate (2). Vrsta de apariie a bolii, polimorfismul celulelor hiperplaziate, prezena incluziilor n epiteliul foliculilor plumiferi i testul de imunofluorescen a antigenului de suprafa asociat tumorilor sunt elemente de diagnostic diferenial al bolii (4). La puii de carne, conform programelor de supraveghere, profilaxie i prevenire a transmiterii de boli de la animale la om i protecie a mediului, vaccinarea nu este obligatorie i n mod curent la noi n ar nu se face. MATERIAL I METOD
Examenele macroscopice i histopatologice s-au efectuat pe probe de piele de la 6 broileri, cu vrsta cuprins ntre 42 i 47 zile, nevaccinai, provenii de la unitatea A. Fragmentele recoltate au fost fixate n formaldehid soluie apoas 10%, timp de 5 zile i apoi cu soluie Bouin, timp de 2 zile. S-a utilizat metoda includerii n parafin, seciunile obinute fiind colorate prin metoda HEA.
REZULTATE I DISCUII La examinarea necropsic a cadavrelor am observat la nivelul pielii de pe toat suprafaa corpului, o ngroare a acesteia i o mrire n volum a foliculilor plumiferi pn la dimensiuni ntre 3 i 5 mm n diametru (Fig. 1, Fig. 2).
155
Fig. 1
Fig. 2
La examenul histologic pe seciuni orizontale i sagitale s-a constatat prezena subepidermic a unor foliculi constituii din elemente limfoide i vase de neoformaie ct i aglomerri perivasculare cu aspect manonal (Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6).
Fig. 3
Fig. 4
Fig. 5
Fig. 6
156
La nivelul foliculilor plumiferi am constatat, de asemenea, o uoar hiperplazie limfoid n jurul tecilor epiteliale extern i intern (Fig. 7, Fig. 8, Fig. 9, Fig. 10).
Fig. 7
Fig. 8
Fig. 9
Fig. 10
Prezena foliculilor limfoizi a fost semnalat i la nivelul esutului adipos din hipoderm (Fig. 11, Fig. 12).
Fig. 11
Fig. 12
157
Cercetrile curente au avut ca scop reducerea pierderilor prin sacrificare a broilerilor. n cercetrile viitoare urmeaz s stabilim vrsta real de apariie a infeciei i raportul dintre aceasta i pierderile prin confiscare. CONCLUZII Se semnaleaz localizarea cutanat a bolii lui Marek la puii broiler, nevaccinai, n vrst de 40-47 zile. Macroscopic modificrile constau ntr-o mrire n volum a foliculilor plumiferi, tradus la nivel structural printr-o proliferare limfoid ce se extinde de la nivelul dermului pn n esutul conjunctivo-adipos al hipodermului i chiar n muchii pieloi. Pe baza distribuiei considerm c punctul de plecare al hiperplaziei limfoide este esutul limfoid asociat pielii.
BIBIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. Ctoi C., 2003 - Diagnostic necropsic veterinar, Ed. Academic Press, Cluj-Napoca,; Cho K.O., Endoh D., Kimura T., Ochiai K., Itakura C., 1997 - Significance of Mareks disease virus serotype 1 specific phosphorylated proteins in Mareks disease skin lesions. Avian pathology, 26, 4, 707-720; Cho K.O., Ochiai K., Fujikawa Y., Itakura C., 1997 - Cutaneous lesions in broiler chickens spontaneously affected with Mareks disease, Avian Pathology, 26, 2, 277-291; Moga Mnzat R., 2005 - Boli virotice i prionice ale animalelor, Ed. Brumar, Timioara. Paul I., 1996 - Etiomorfopatologie veterinar, Ed. All, Bucureti, 1996. Riddell C. - Avian Histopathology
158
ASPECTE LEZIONALE ALE INVAZIILOR PARAZITARE CU LOCALIZARE BRANHIAL LA CIPRINIDELE DE CRESCTORIE

M. LAZR1, V. VULPE1, E. BOZ2, L. MIRON1, B. PSRIN1, O.Z. OPREAN1 1 U.S.A.M.V. Iai 2 Rompescaris SRL Iai Necropsy exams were made immediately after the extraction from the natural medium of 64 fishes from the species: carp (Cyprinus carpio), big head (Aristichthys nobilis) and silver carp (Hypophthalmichthys molitrix). The rapid examination of the curettage from the surface of the brachial lamellas lead to the identification of the fishes from genders Sinergasillus spp., Dactylogyrus spp. and Trichodina spp. The histopathological exams revealed gradual irritative lesions, finalized by hyperplasic mainly lymphocitary of reparation.
Key words: Cyprinidae, gills, parasitical invasion, lesions
Cunoaterea strilor de boal la peti, diagnosticul precoce i aplicarea corect a msurilor de combatere sunt condiii eseniale pentru asigurarea unei activiti normale i a unei productiviti crescute n unitile piscicole. Manifestrile clinice de tip hipoxic apar fie ca urmare a aportului sczut de oxigen ctre organism, fie datorit leziunilor de la nivelul branhiilor (ectoparazitoze, toxine endogene sau exogene), fie prin scderea cantitii de hemoglobin, ca urmare a unor anemii (boli infecioase i parazitare) (1, 2, 4). Bolile parazitare cu localizare branhial mai des ntlnite sunt: criptobioza (Cryptobia branchialis), mixosporidioza (Myxobolus pavlovskii, Myxobolus dispar), dactilogiroza (Dactylogyrus spp.), sinergasiloza (Sinergasilus lieni, Sinergasilus major), trichodinoza (Trichodina mutabilis, Trichodina nigra, Trichodina nobilis, Trichodina acuta) (3, 5, 6). MATERIAL I METOD
Cercetrile noastre au avut ca obiectiv modificrile produse de unii parazii la nivelul branhiilor, la urmtoarele specii de peti dulcicoli din amenajri piscicole din judeul Iai: crap (Cyprinus carpio) 20 cazuri, caras (Carassius auratus gibelio) 6 cazuri, snger (Hypophthalmichtys molitrix) 9 cazuri i novac (Aristichtys nobilis) 11 cazuri. Branhiile au fost examinate dup secionarea parial sau total a operculilor, urmrindu-se culoarea i prezena hemoragiilor ca rezultat al atacului
159
paraziilor, prezena unei cantiti excesive de mucus (urmare a iritaiilor parazitare i a reaciei de aprare a organismului). S-a efectuat un examen microscopic direct al branhiilor dilacerate cu un ac spatulat (i izolarea paraziilor) sau a raclatelor de pe branhii. Pentru realizarea examenului histopatologic s-au extras branhii ntregi de la petii de talie mic sau poriuni de 1-2 cm din arcul branhial la petii de talie mare care au fost fixate n formaldehid 10% soluie apoas, incluse n parafin, secionate la 5 m i colorate cu metodele Hematoxilin Eozin Albastru de metil (HEA) i Acid periodic Fuxin Schiff (PAS).
REZULTATE I DISCUII Dup efectuarea investigaiilor epidemiologice i morfopatologice (macroi microscopice) au fost diagnosticate trei invazii parazitare cu localizare branhial la speciile de ciprinide luate n studiu: sinergasiloza, dactilogiroza i trichodinoza. Sinergasiloza Agentul etiologic care produce boala la ciprinidele asiatice (snger, novac) este Sinergasilus lieni. S-a constatat c vara invazia parazitar atinge cotele cele mai ridicate, n iulie-august i afecteaz n general petii n vrst (vara II i vara III). La examinarea macroscopic, paraziii apar sub forma unor filamente scurte, albicioase, ncorporate n esutul muscular, de la marginea branhiilor; la vrful lamelelor branhiale se observ acumulri de mucus translucide (Fig. 1, Fig. 2).
Fig.1 Hiperplazii branhiale difuze
Fig.2 Sinergasillus lieni Armtura bucal.
Examenele histologice au pus n eviden reacii tisulare de grade diferite i prezena parazitului care dilacereaz lamelele branhiale, hiperplaziile celulelor clorale i cele limfohistioplasmocitare interlamelare (Fig. 3, Fig. 4, Fig. 5, Fig. 6, Fig. 7).
160
Fig. 3 Lam branhial. Vacuolizarea. celulelor clorale. Col. HEA x 400
Fig. 4 Hiperplazia celulelor clorale. Col. HEA x 400
Fig.5 Sinergasillus lieni. Seciune transversal. Saci ovigeri. Col. HEA x 400
Fig.6 Chistizarea spaiilor interlamelare. Col.HEAx100
Fig.7 Lam branhial. Hiperplazie limfohistioplasmocitar interlamelar. Col. HEA x 400
Dactilogiroza Aceasta este o parazitoz branhial ce produce pierderi importante la puietul din fermele ciprinicole i salmonicole. Agenii etiologici ai dactilogirozei sunt specii ale genului Dactylogyrus. Parazitul are ca particulariti morfologice patru papile contractile i patru pete pigmentare la extremitatea cefalic a corpului. La extremitatea posterioar se afl discul de fixare prevzut cu dou crlige mari centrale, n form de secer i 14 crlige mici, aezate marginal (Fig. 9). La examenul histologic, se observ la locul de fixare a paraziilor procese inflamatorii, tumefiere, iar branhiile devin mai groase ducnd la o ngreunare a circulaiei sngelui i a schimbului de gaze. ngreunarea circulaiei sanguine nu mai permite hrnirea esutului branhial, ducnd la moartea acestuia i la apariia unor zone ntinse de necroz la nivelul lamelelor branhiale (Fig. 10, Fig. 11, Fig. 12, Fig. 13, Fig. 14). Lezarea esutului branhial conduce la o insuficien respiratorie a petelui bolnav, petele prezentnd operculele deprtate (Fig. 8).
161
Fig. 8 Hiperplazii branhiale nodulare
Fig. 9 Dactylogyrus spp. Pete oculare
Fig.10 Denudarea vrfurilor lamelelor branhiale. Col. HEA x 100
Fig.11 Lamele branhiale. Epiteliul superficial cuboidizat. Col. HEA x 400
Fig.12 Lame branhiale. Hiperplazii la baza lamelelor. Col. HEA x 400
Fig. 13 Lam branhial. Degenerarea cartilajului bazal. Col. HEA x 100
Fig. 14 Lam branhial. Cartilaj degenerat. Hiperplazie la baza lamelelor. Col. HEA x 100
Trichodinoza Agenii etiologici ai trichodiniozei sunt reprezentai de un grup de ciliate aparinnd familiei Urceolariidae, cele mai comune fiind speciile genurilor Trichodina, Trichodinella i Tripartiella (Fig. 16).
162
Aspectul acestor ciliate este de clopot mult turtit, de dimensiuni variabile, pe margini avnd o coroan de cili cu ajutorul creia se deplaseaz pe corpul gazdei sau de la un pete la altul. Examinarea microscopic a raclatului profund din zonele afectate permite identificarea paraziilor. La examenul histologic, leziunile de la nivelul lamelelor branhiale constau n descuamarea epiteliului respirator, hemoragii punctiforme, mucus abundent, necroze branhiale (Fig. 15, Fig. 17, Fig. 18).
Fig. 15 Necroza branhiilor
Fig. 16 Trichodina nobilis
Fig. 17 Lam branhial. Congestie bazal. Hemoragii interlamelare. Col. HEA x 100
Fig. 18 Necroza lamei branhiale. Col. HEA x 100
CONCLUZII Investigaiile epidemiologice i morfologice, macro- i microscopice ntreprinse ntr-o ferm piscicol, pe 64 ciprinide din speciile crap, caras, snger i novac au condus la formularea urmtoarelor concluzii: 1. Examenul necropsic al branhiilor evideniaz necroze i ngrori difuze sau nodulare pe marginea arcului branhial.
163
2. Examenul microscopic extemporaneu al raclatului branhial permite identificarea agenilor etiologici (Sinergasillus lieni, Dactylogyrus spp., Trichodina nobilis). 3. La examinarea microscopic a seciunilor obinute prin metoda includerii la parafin se observ n general reacii tisulare de rspuns la aciunea iritativ a paraziilor. 4. Predomin hiperplaziile celulelor clorale i cele limfohistioplasmocitare interlamelare. 5. Invaziile parazitare prelungite duc la necroze lamelare i depolimerizarea mucopoliozidelor acide (MPZA) din cartilajul branhial.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. Bud I., Diaconescu ., Mudure M., 2004 Creterea crapului i a altor specii, Ed. Ceres, Bucureti. Grozea A., Bura M., 2002 Crapul: biologie, sisteme de crestere, patologie; Ed. de Vest, Timisoara. Munteanu G., Bogatu D., 2003 Tratat de ihtiopatologie, Ed. Excelsior Art, Timisoara. Oel V., Constantin Gh., 1989 Ghid ihtiopatologic pentru piscicultura din Delta Dunrii, Buletin de Cercetri Piscicole, Supliment II. Rdulescu I., Lustun L., Voican V., 1976 Bolile petilor, Ed. Ceres, Bucureti. Vulpe V., 2002 Investigaii privind epidemiologia, etiologia i morfologia afeciunilor parazitare la petii din amenajrile sistematice, Tez de Doctorat.
164
FORENSIC EXAMINATION IN BITTEN WOUNDS CAUSED BY DOGS TO MAN

EXPERTIZA MEDICAL LEGAL N PLGILE MUCATE PROVOCATE DE CINE LA OM
Anca BULU1, C. SCRIPCARU2, O.Z. OPREAN1 1 U.S.A.M.V. Iai 2 I.M.L. Iai The investigations have as starting point 35 forensic certificates released by the Legal Medicine Institute (LMI) during 1.01.2003 31.12.2005, in cases of bitten wounds made by dog to people. The channel of prevention and fighting the main zoonosis transmissible through dog bite was followed. Juridical aspects of the approached problems are presented.
Key words: dog, bite, legislation
Prin muctur i zgrietur, cinele poate transmite la om rabia i pasteureloza (4). Virusurile rabice aparin Familiei Rhabdoviridae, Ord. Monomegavirales. Familia e mprit n dou genuri distincte: G. Vesiculovirus include virusuri care produc stomatitele veziculoase, iar G. Lyssavirus include virusul rabic i virusuri nrudite cu cel rabic. Prin utilizarea tehnicilor serologice moleculare sunt recunoscute n prezent 4 serotipuri de lyssavirusuri, cu 6 genotipuri (2). Transmiterea bolii se produce atunci cnd virusul prezent n saliva unui animal infectat contamineaz esuturile victimei. Virusul rabic nu poate penetra tegumentul intact, dar poate ptrunde n organism traversnd mucoasele intacte (nazal, bucal, anal, conjunctival, a organelor genitale externe). Infecia uman pe cale aerian este extrem de rar, nsa pare a fi posibil (4). Mecanismul patogenetic al infeciei rabice const n propagarea centripet a virusului pe calea filetelor nervoase de la periferie spre neuronii sistemului nervos central, capacitate denumit de tefan S. Nicolau neuroprobazie. Viteza de naintare a virusului de-a lungul axonilor este de 3 mm pe or (1). Diagnosticul se realizeaz n dou etape: izolarea virusului prin inocularea intracerebral a oarecilor sugari sau nrcai, urmat de testul cu anticorpi fluoresceni (9). Pasteurelozele includ o multitudine de entiti morbide produse de diferite specii din genul Pasteurella spp. la animale i la om. Speciile patogene sunt: Pasteurella multocida, P. septica (mamifere, om, psri), P. gallicida (pui), P. dagmatis (cine, pisic, om), P. canis biotip 1 (cine, om), P. canis biotip 2 (viei), P. stomatis (cine, pisic, se transmite la om prin muctur), P. anatis (rae), P. avium (psri) (4).
165
La om, infecia cu Pasteurella multocida e zoonoza cea mai frecvent raportat, fiind rezultatul mucturilor pisicilor i cinilor infectai. P. haemolytica a fost de asemeni asociat cu plgile prin muctur de cine. Infeciile cu P. dagmatis i P. canis biotip 1 au fost asociate cu mucturi i zgrieturi produse de cine i de alte animale. Dintre aceste specii, P. dagmatis poate produce i infecii sistemice (1). MATERIAL I METOD
Investigaiile au fost efectuate la trei obiective (instituii). Au fost luate n studiu cazurile de muctur de cine la om, pentru care au fost eliberate certificate medico-legale de ctre Institutul de Medicin Legal (IML), Iai, pe durata a trei ani: 2003, 2004, 2005. Cazuistica a fost clasificat pe arii sociale de provenien (Iai i mediul rural), sexe i vrste. La Centru Antirabic al Spitalului de Boli Infecto-Contagioase Sf. Cuvioas Paraschiva Iai a fost luat n studiu numrul de pacieni care figureaz n evidene n perioada 2003-2005 i schemele de vaccinare preexpunere si postexpunere. La Direcia Sanitar Veterinar i pentru Sigurana Alimentelor (DSVSA), Iai, au fost cercetate registrele de monitorizare a rabiei pe teritoriul judeului Iai, n care au fost nregistrate 281 probe n perioada 2003-2005.
REZULTATE I DISCUII La Institutul de Medicin Legal, unde a fost iniiat studiul, n perioada urmrit au fost eliberate 35 certificate medico-legale, ntr-o uoar progresie numeric (7 n 2003, 12 n 2004 i 16 n 2005) (Tabel 1).
Tabelul 1 Certificate medico-legale eliberate de IML Iai n perioada 2003-2005 An Nr. crt. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Cine Necunoscut Identificat * * * * * * * * * * * * * Om Sex F F M F M M M F M F M M M
Mediu social Rural Urban Rural Rural Urban Urban Rural Urban Urban Rural Urban Rural Rural
Vrst 14 30 62 77 17 38 40 35 58 22 14 72 21
2004
2003
166
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar An Nr. crt. 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 Cine Necunoscut Identificat * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * Mediu social Urban Urban Urban Rural Urban Urban Rural Urban Urban Urban Urban Rural Urban Urban Urban Rural Urban Urban Rural Urban Urban Urban Om Sex M M M M F M M F F M M F M F F M M F F M F M Vrst 13 17 8 35 46 12 12 1 53 66 44 50 36 10 47 6 19 46 32 10 29 30
n mediul urban (Municipiul Iai) apar mai multe cazuri dect n cel rural (66% din cazuistic) datorit numrului mare de cini comunitari nesupravegheai (Diagrama 1).
Diagrama 1 Incidena mucturilor de cine la om n mediile sociale urban i rural.
2005
2004
Rural 11
Urban 23
167
n ceea ce privete sexul victimelor, se constat un plus de 20% al victimelor brbai (Diagrama 2).
Diagrama 2 Incidena mucturilor de cine la om n relaie cu sexul victimelor
Barbati 20
Femei 14
Dintre cele 35 cazuri, cele mai numeroase (10) sunt copii i adolesceni cu vrsta ntre 10 i 20 ani. Au fost mucai doar 3 ceteni n vrst de peste 60 ani i doar 5 copii n vrst de pn la 10 ani, acetia din urm ieind pe strad mai ales nsoii de prini (Diagrama 3).
Diagrama 3 Incidena mucturilor de cine la om n relaie cu vrsta
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
10 8 8
5 3
0-10 ani 10-20 ani 20-40 ani 40-60 ani >60 ani
168
Certificatele medico-legale conin descrierea morfoclinic a leziunilor, data producerii acestora i necesarul de zile de ngrijiri medicale pn la poteniala vindecare. Nu sunt menionate date anamnetice cu privire la identificarea i statusul sanitar al cinilor care produc plgi prin muctur i nici msuri legale care privesc proprietarii acestora. n perioada investigat, la Centrul Antirabic din cadrul Spitalului de Boli Infecioase Iai s-a nregistrat o medie de 60 de pacieni pe lun care au prezentat mucturi provocate de cini necunoscui sau nevaccinai i n cazul crora s-a instituit una dintre schemele de tratament. Este de semnalat c numrul de pacieni variaz considerabil n funcie de perioada anului, incidena mucturilor vara fiind mai mare dect iarna. ntre 1.01.2003 si 31.12.2005, n evidenele Centrului Antirabic figureaz 1443 de persoane care au urmat tratament. Profilaxia pentru rabie sau tratamentul preexpunere se aplic persoanelor cu risc mare de expunere la infecie (din laboratoare de diagnostic i cercetare care manipuleaz virusul rabic); se utilizeaz un vaccin antirabic cu virusul WISTAR RABIES PM/WI 38-1503-3M inactivat i purificat VERORAB. Tratamentul postexpunere, dup contactul confirmat sau suspectat cu agentul etiologic, este diferit n funcie de statusul imun al pacientului. La subiecii neimunizai se administreaz 5 injecii cu vaccin VERORAB n zilele 0, 3, 7, 14 i 28. La subiecii vaccinai n ultimii 5 ani se aplic dou injecii n zilele 0 i 3. Serul antirabic, obinut din sngele cailor hiperimunizai cu ser antirabic, se administreaz persoanelor mucate grav de animale turbate sau suspecte de rabie. Seroterapia este urmat obligatoriu de vaccinoterapie antirabic, care se instituie n aceeai zi sau n ziua imediat urmtoare. La Direcia Sanitar Veterinar i pentru Sigurana Alimentelor Iai, registrele care monitorizeaz rabia pe teritoriul judeului Iai evideniaz 281 probe analizate n perioada 2003-2005. Dintre acestea 212 (75%) sunt probe de la cini, un singur caz fiind pozitiv, n anul 2004 (Tabel 2, Tabel 3, Tabel 4).
Tabelul 2 Situaia rabiei n perioada 1.01.2003 31.12.2003, pe aria judeului Iai Specie Cine Pisic Bovin Ovin Vulpe Nr. total de cazuri 86 9 1 2 7 Pozitive 0 0 0 0 0 Negative 83 9 1 2 6 Improprii 3 0 0 0 1
Total cazuri: 106 (negative)
169
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 3 Situaia rabiei n perioada 1.01.2004 31.12.2004 pe aria judeului Iai Specie Cine Pisic Bovin Ovin Caprin Vulpe Dihor Nr. total de cazuri 87 11 1 4 2 8 2 Pozitive 0 0 0 0 0 4 0 Negative 87 11 1 4 2 4 2 Improprii 0 0 0 0 0 0 0
Total: 115 cazuri, din care 4 pozitive, la vulpe: 2 vulpi din localitatea Schitu Duca, o vulpe din satul Ciorleti i o vulpe din pdurea de la Dobrov. Tabelul 4 Situaia rabiei n perioada 1.01.2005 31.12.2005 pe aria judeului Iai Specie Cine Pisic Bovin Vulpe Nr. total de cazuri 39 5 2 12 Pozitive 1 1 0 1 Negative 38 4 2 11 Improprii 0 0 0 0
Total: 60 de cazuri, din care 3 pozitive: un cine din comuna Mirosloveti, satul Merce, o pisic din comuna Bivolari i o vulpe din localitatea Schitu Duca.
Din totalul de 212 probe de la cini suspeci, doar 7 au provenit de la cini necunoscui, restul fiind, n majoritate, cini cu stpn, provenii din mediul rural si nevaccinai. Este de remarcat faptul c n judeul Iai, n perioada 2000-2002, au fost diagnosticate doua cazuri mortale de rabie la om, ceea ce atrage atenia asupra unei foarte stricte supravegheri a bolii n zon. n Laboratorul Judeean Sanitar Veterinar Iai se fac examene complete i prin tehnici moderne de diagnostic al turbrii: necropsii, examene histopatologice, proba biologic, identificarea imunochimic a virusului rabic. Cadrul legal care reglementeaz situaia cinilor din Romnia se refer in principal la animalele cu stpn: legea nr. 61/27.09.1991 pentru sancionarea faptelor de nclcare a unor norme de convieuire social, a ordinii i linitii publice (10) i Ordonana de Urgena nr. 55/30.04.2002 privind regimul de deinere a cinilor periculoi sau agresivi (7). Msurile legale adoptate n vederea rezolvrii problemei cinilor comunitari (care provoac de altfel majoritatea accidentelor) nu au dat pn n prezent rezultatele scontate (5).
170
CONCLUZII Investigaiile efectuate cu privire la importana epidemiologic i impactul sanitar i social al mucturilor de cine la om n trei obiective (instituii): Institutul de Medicin Legal, Direcia Sanitar Veterinar i pentru Sigurana Alimentelor i Spitalul de Boli Infecto-Contagioase din Municipiul Iai, relev o discontinuitate n colaborarea celor trei instituii cu privire la gravitatea mucturilor de cine la om i la importana acestora n meninerea sntii publice.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Carp Crare M., 2001 - Microbiologie veterinar Virusologie; Ed. Venus, Iai; Enache T., Paul I., Popescu O., Stnescu V., Iordache I., 1997 - Medicina legal veterinar, Vol. I; Ed. ALL, Bucureti; Oprean O.Z., 2002 - Diagnosticul necropsic la carnivorele de companie; Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai; Palmer S.R., Lord Soulsby, Simpson D.I.H., 2005 - Zoonoze; Ed. tiine Medicale, Bucureti; Scripcaru C., Scripcaru Gh., Astarastoae V., 2005 - Medicina legal pentru juriti; Ed. Polirom, Iai; X X X - Legea sanitar veterinar nr. 75/1991; X X X - Legea nr. 61 din 27 septembrie 1991 pentru sancionarea faptelor de nclcare a unor norme de convieuire social, a ordinii i linitii publice; X X X - Ordonana de Urgen nr. 55 din 30 aprilie 2002 privind regimul de deinere al cinilor periculoi sau agresivi; X X X - Ordinul 156/1999 pentru aprobarea Normei sanitare veterinare privind anunarea, declararea i notificarea unor boli transmisibile ale animalelor; X X X - Manual OIE/2004
171
LEZIUNILE HIPERPLAZICE/DISPLAZICE ADIACENTE TUMORILOR MAMARE MALIGNE

HIPERPLASTIC/DISPLASTIC LESIONS IN TISSUE SURROUNDING MAMMARY MALIGN TUMORS
A. GAL, A.I. BABA, C. CTOI, Sorina IACOB, E. DOMBAY, I. RUS The aim of the study was to notify the displastic/hiperplastic transformations from mammary tissue surrounding mammary malign neoformations. It is known that displastic/hiperplastic mammary lesions could be preneoplastical stages. There was established, histologically, the types of mammary neoplasms, the lesion character and displastic/hiperplastic lesions from adjacent area. There were studied 76 mammary tumors, 15 of them presented displastic/hiperplastic changes in mammary parenchyma adjacent to malign areas. The tumors were from 14 bitches and 1 female cat. The most affected breed were Caniche (6 cases), Cocker (3 cases), Stray dog (2 cases), Hungarian vijla, Pitt/Bull, German dog (1 case). The age varied from 5-12 years; the majority displastic lesions were noticed in 10 years old dog, with a mean incidence of 8,3 years. The mammas with such kind of lesions were: M5 46,1%, M4 38,4%, M3 7,6%, M2 7,6%. The tumor types with displastic/hiperplastic lesions were: complex tubular carcinoma (5 cases), complex tubulopapillary carcinoma (2 cases), simple tubulo-papillary carcinoma (2 cases), solid carcinoma (1 case), complex carcinoma in benign mixed tumor (3 cases), in situ carcinoma (1 case), mammary sarcoma (1 case). The most important displastical lesions were lobular hyperplasia such us typical epitheliosis (12 cases), atypical epitheliosis (1 case) and simple/complex adenosis (6 cases); ductal hyperplasia such us: tipical epiteliosis (4 cases), papilomatosis (1 case). Displastic lesions were: cyst displasia (8 cases) and ductal ectasia (3 cases). In conclusion, displastic/hiperplastic transformations are quite frequent encountered in pericarcinomatous areas. These lesions increase the tumor risk development of 2-5 times, especially typical and atypical epitheliosis. As a recommendation, surgical therapy must involve excision of displastic/hiperplastic mammary tissue too, not only mammary tumor.
Key words: bitch, mammary gland, tumors
MATERIAL I METOD
Materialul prezentei lucrri a fost constituit din cadavrele aduse pentru examenul necropsic la FMV Cluj Napoca, precum i biopsiile tumorale provenite de la cabinetele veterinare sau de la disciplina de chirurgie. Examenul necropsic a constat n aprecierea dimensiunii, consistenei, aspectului pe seciune, 172
localizarea neoformaiunii, integritatea limfonodulilor regionali, urmnd apoi recoltarea de fragmente pentru preparatele histologice. Fragmentele au fost recoltate din zonele periferice ale tumorii, din 2-3 pri ale acesteia, evitndu-se ns zonele necrotice, necrotico-purulente sau chistice. Poriunile recoltate au vizat ntotdeauna i zonele marginale ale tumorii, n vederea prevelrii i de esut mamar limitrof. Fragmentele prelevate au fost fixate n formol neutru 10%, prelucrarea fcndu-se ulterior prin technica la parafin. Seciunile au fost colorate prin technica Tricrom Masson i hematoxilin-eozin.
REZULTATE OBINUTE Cazul 1: Cea, rasa Cocker, 10 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: femela prezenta trei formaiuni tumorale mamare, localizate la nivelul lantului mamar stng, respectiv n mamela abdominal posterioar i n mamela inghinal. Una dintre tumori avea aproximativ 1,5 cm diametru iar celelalte dou erau mici, globuloase, ct un bob de mazre (0,5 cm diametru). Aspecte histologice: formaiune tumoral de natur malign caracterizat de structuri tubulare care de obicei delimiteaz un lumen, unele structuri tubulare fiind chistizate, intraluminal evideniindu-se un coninut cu tinctorialitate variabil. Celulele tumorale prezint nuclei mari, cu nucleoli evideni, uneori chiar monstruoi. Se poate evidenia un pleiomorfism celular moderat, unele celulele din structurile tubulare fiind de dimensiuni mici, cu nuclei relativ uniformi, existnd ns i structuri tubulare n care se poate evidenia un pregnant polimorfism celular. Pe alocuri se pot evidenia poliferri tumorale cu celule mioepiteliale, precum i structuri ductale cu creteri papilifere. Diagnostic histologic: carcinom tubular complex. Leziuni displazice/hiperplazice: hiperplazie lobular tipul adenozis (o proliferare netumoral a ductelor intralobulare), la nivelul unui singur lobul mamar observndu-se zone cu hiperplazie epitelial acinar, cu celule tinere i nuclei evideni. Cazul 2: Cea, rasa Caniche, 12 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: formaiune tumoral mamar de aproximativ 2 cm diametru, limfonodurile inghinale fiind hipertrofiate, dense la palpare i mobile. Formaiunea tumoral a aprut n urm cu 6-7 luni, n urm cu un an ceaua fiind operat pentru o formaiune proliferativ de la nivel vaginal. Tumora mamar nu era aderent la piele, fiind ns aderent la mamela inghinal. Glanda mamara inghinal opus prezenta o formaiune calcificat ct un bob de mazre, de sub 1 cm diametru. Femela a fost sterilizat i avea endometrit hiperplastic i chiti ovarieni. Aspecte histologice: formaiune tumoral malign caracterizat de structuri tubulare, reprezentate din celule epiteliale n multistrat, cu numeroase protruzii
173
papilare i/sau micropapilare intraductale. Din loc n loc se observ proliferri de celule mioepiteliale ntr-o mas de mucus care n unele zone are o tent uor bazofil. Stroma conjunctiv este abundent, pe alocuri infiltrat cu limfohistiocite. Diagnostic histologic: carcinom tubulo-papilar complex. Leziuni displazice/hiperplazice: se pot evidenia lobuli hipertrofiai cu hiperplazie lobular de tipul adenozis simplu sau lobuli hipertrofiai datorit chisturilor acinare. Numeroi lobuli mamari sunt transformai n ntregime n structuri cu aspect chistic. Unele ducte extralobulare sunt i ele chistizate (ectazii ductale extralobulare). La nivelul unor acini mamari se poate observa o hiperplazie acinar netumoral - epiteliozis tipic. Cazul 3: Cea, rasa Caniche, 9 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: formaiune tumoral mamar de mrimea unui ou de porumbel, cu aspect globulos, consisten moale, neoplasmul fiind aderent la piele, cu o perioad evolutiv de aproximativ 5 luni. Aspecte histologice: tumor mamar malign caracterizat printr-o poliferare tumoral mixt epitelial i mioepitelial. Celulele epiteliale sunt dispuse sub form de tubi, la nivelul acestora existnd mai mult de dou rnduri de celule tumorale, uneori chiar cu formarea de papile ductale. Componenta mioepitelial este bine reprezentat sub form de noduli care de multe ori au tendina de a forma esut cartilaginos. Stroma conjunctiv este groas cu fibrocite i fibre groase de colagen, pe alocuri aceasta fiind infiltrat de limfocite, histiocite i macrofage. Diagnostic histologic: carcinom tubular complex. Leziuni displazice/hiperplazice: parenchimul mamar adiacent tumorii prezint leziuni displazice i hiperplazice, evideniindu-se chisturi acinare precum i hiperplazii lobulare cu aspectul de epiteliozis papilar tipic, aspect ntlnit att la nivelul acinilor ct si la nivelul unui duct intralobular. Pe lang cele prezentate anterior, am evideniat i o hiperplazie ductal de tipul epiteliozis papilar tipic ntr-un canal extralobular. Cazul 4: Cea, rasa Pitt-bull, 5 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: formaiune tumoral mamar de mrimea unei alune, globuloas, localizat ntr-o gland mamar pectoral, tumora fiind dens i aderent la parenchimul mamar adiacent. Timpul de evoluie a tumorii a fost de cteva sptmni. Aspecte histologice: neoformaiune tumoral malign, caracterizat prin poliferri cu aspect tubular i papilar intraductal. Proliferrile papilifere intraductale prezint sau nu o strom conjunctivo-vascular de susinere, n unele ducte papilele formnd chiar puni transversale. esutul conjunctiv este cu aspect
174
tnr, nucleii fiind mari, evideni, cu nucleoli proemineni. n masa tumorii se pot ntlni hemoragii i focare necrotice. Diagnostic histologic: carcinom tubulo-papilifer simplu. Leziuni displazice/hiperplazice: n jurul tumorii se pot evidenia lobuli hiperplaziai cu aspect de adenozis tipul simplu i tipul complex, la nivelul ductelor intralobulare i chiar la nivelul acinilor observndu-se hiperplazii de tipul epiteliozis atipic. Cazul 5: Cea, rasa Caniche, 6 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: formaiune tumoral localizat n mamela abdominal anterioar pe lanul mamar stng, dimensiunea fiind de aproximativ 1 cm, respectiv ct un bob de mazre. Tumoara era bine circumscris i neaderent la esuturile din jur. Aspecte histologice: neoformaiune tumoral cu un caracter malign caracterizat printr-o proliferare a celulelor epiteliale, n general cu aspect solid sau pe alocuri tubular, cu un epiteliu n multistrat care umple lumenul tubular. Celulele tumorale sunt agresive cu nucleii mari, nucleoli evideni, supranumerari, observndu-se mitoze i focare de necroz n masa tumorii. Stroma conjunctiv este discret, pe alocuri fibroblastele avnd un aspect tnr cu nuclei i nucleoli mari. n stroma conjunctiv se ntlnete un abundent infiltrat limfo-histiocitar i macrofagic. Diagnostic histologic: carcinom solid. Leziuni displazice/hiperplazice: n lobulii mamari peritumorali se observ displazie chistic acinar precum i atrofia de compresiune a lobulilor mamari iar la nivelul ductelor intralobulare se observ i o hiperplazie lobular epitelial tipic. Cazul 6: Cea, rasa Caniche, 6 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: prezena unui nodul n lanul mamar drept, la nivelul mamelei inghinale. Dimensiunea nodulului era de 1,5 cm diametru, consistena fiind crmoas. Neoformaiunea a fost extirpat mpreun cu mamela inghinal, efectundu-se n acelai timp i ovario-histerectomia. Aspecte histologice: neoformaiune tumoral malign, reprezentat printrun caracter proliferativ de tip papilifer, aspect ntlnit i n unii lobuli mamari, att la nivelul ductelor intralobulare ct i la nivelul acinilor mamari. Datorit pstrrii n unele zone a structurii lobulare, precum i datorit evidenierii n masa de proliferare a microfocarelor de necroz, se poate zice c avem de-a face cu focare de carcinom in situ i nu cu noduli hiperplazici. Stroma conjunctiv este abundent, reprezentat de un esut conjunctiv matur, pe alocuri cu infiltrat mononuclear. Diagnostic histologic: carcinom tubulo-papilar simplu.
175
Leziuni displazice/hiperplazice: la nivelul unui duct galactofor se observ structuri cu aspect de papilom. Pe lng lobulii transformai tumoral se pot observa i lobuli nemalignizai hiperplaziai, cu aspect de adenozis simplu. La nivelul unor acini se pot evidenia focare de hiperplazie epitelial lobular respectiv epiteliozis tipic. Cazul 7: Cea, rasa Vijla maghiar, 5 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: formaiuni tumorale multiple cu aspect slninos, culoare alb-sidefie, localizate la nivelul mai multor mamele. Unii noduli tumorali au aspect chistic cu coninut hemoragico-necrotic. Aspecte histologice: neoformaiune tumoral de natur malign, caracterizat prin proliferri epiteliale de tip tubular, n masa tumorii existnd i o component tumoral benign, respectiv un esut cartilaginos care pe alocuri prezint focare de mineralizare. ntre structurile tubulare se pot evidenia att celule mioepiteliale proliferate sub form de noduli, precum i o strom conjunctiv reprezentat de un esut conjunctiv tnr. Prezena unor microfocare necrotice n masa tumorii denot o leziune malign. Diagnostic histologic: carcinom complex n tumor mixt benign. Leziuni displazice/hiperplazice: n jurul tumorii, parenchimul mamar rmas prezint o hiperplazie lobular netumoral de tipul adenozis simplu. La nivelul unor acini mamari se pot observa att hiperplazii epiteliale tipice (epiteliosis tipic), ct i hiperplazii ductale epiteliale la nivelul ductelor extralobulare. Unii acini de la nivelul unor lobuli sunt chistizai. Cazul 8: Cea, rasa Caniche, 9 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: femela prezenta trei formaiuni nodulare de diferite dimensiuni n parenchimul mamelelor inghinale, un nodul fiind ct un ou de gin iar celelalte dou formaiuni avnd dimensiunea unei alune. Pe seciune, nodulul cel mai mare exprima un material purulent, formaiunea fiind bine delimitat de o capsul groas. Aspecte histologice: proliferare tumoral de natur malign reprezentat de structuri tubulare discrete, celulele avnd n general un aspect fusiform, alungit sau stelat, unele structuri tubulare fiind chistizate i cu un coninut oxifil bogat n neutrofile. Pe alocuri se observ focare de metaplazie cartilaginoas, uor bazofile. Pe zone ntinse ntlnim proliferri mioepiteliocitare cu aspect polimorf iar stroma conjunctiv peritubular prezint macrofage cu un pigment brun. Diagnostic histologic: carcinom complex n tumor mixt benign. Leziuni displazice/hiperplazice: displazie chistic acinar i hiperplazie lobular cu aspect de epiteliozis tipic acinar, tipul papilar.
176
Cazul 9: Cea, rasa Dog german, 8,5 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: formaiune tumoral mamar cu dimensiunea de 1 cm, de form alungit, bine delimitat de esuturile din jur, cu o uoar reacie pe cordonul limfatic posterior. Formaiunea tumoral era localizat pe lanul mamar drept, la nivelul mamelei abdominale posterioare. Ceaua a nscut o singur dat la vrsta 4 ani i, de atunci, a prezentat de dou ori lactaie fals. Aspecte histologice: formaiune tumoral malign caracterizat de un aspect histologic tubulo-chistic, la nivelul unor chisturi evideniindu-se structuri micropapilare cu sau fr strom conjunctiv de susinere. Structurile papilifere se pot observa n majoritatea tubilor. Epiteliul tubular este n multistrat, cu nuclei mari, veziculoi, nucleoli evideni, n masa tumorii ntlnindu-se i zone de proliferare mioepitelial, precum i focare de hemoragie i necroz. Stroma conjunctiv este n general, discret pe alocuri evideniindu-se i infiltrat limfohistiocitar. Diagnostic histologic: carcinom tubulo-papilar complex. Leziuni displazice/hiperplazice: la nivelul unui lobul mamar s-au evideniat displazii de tipul chisturilor intralobulare. ntr-o alt seciune histologic la nivelul unui lobul mamar peritumoral se pot observa leziuni hiperplazice lobulare de tipul epiteliozis tipic, chiar cu formarea la nivelul unor acini de puni celulare. Cazul 10: Cea, metis, 10 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: formaiune tumoral mamar localizat pe lanul mamar drept, ntre M4 i M5, de 5 cm diametru. n M4 era prezent o alt tumor de dimensiuni mai mici, nodulul fiind sub tensiune, neaderent la piele i la parenchimul mamar adiacent. Formaiunea localizat ntre cele dou mamele era un chist purulent. Femela prezenta la nivel vulvar un material purulent, cenuiu. Aspecte histologice: formaiune tumoral malign caracterizat prin proliferri tumorale cu aspect tubular i cu o pregnant proliferare mioepiteliocitar. Celulele tumorale epiteliale formeaz structuri tubulare, cu prezena mai multor straturi de celule care formeaz n unii tubi structuri papilare. La nivelul unor tubi proliferativi componenta epitelial este slab reprezentat, predominnd componenta mioepitelial. De asemenea, n masa tumorii se observ o strom conjunctiv groas, abundent, n care se ntlnete pe alocuri infiltratul limfo-histiocitar sub form de noduli. Diagnostic histologic: carcinom tubular complex. Leziuni displazice/hiperplazice: lobulii mamari prezeni peritumoral sufer o atrofie de compresiune, la nivelul acestora evideniindu-se aspecte de hiperplazie lobular, respectiv epiteliozis tipic n unii lobuli i atipic n ali lobuli.
177
Cazul 11: Cea, rasa Cocker, 7 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: formaiune tumoral mamar localizat pe lanul mamar drept, n glanda mamar inghinal. Aspecte histologice: neoformaiune de natur malign caracterizat de structuri tubulare cu o proliferare epitelial i mioepitelial, n lumenul unor tubi evideniindu-se uneori un material uor bazofil, n general invadat de granulocite neutrofile. Unii tubi sunt destini cu aspect chistic, prezentnd un coninut purulent. Celulele tumorale epiteliale sunt polimorfe, cu nuclei mari, nucleoli evideni. Mioepiteliocitele ntlnite n unii tubi au aspect stelat, cu nuclei n general coluroi. Tumora prezint o strom conjunctiv abundent cu fibre groase de colagen, infiltrat pe alocuri cu celule histiocitare. Diagnostic histologic: carcinom tubular complex. Leziuni displazice/hiperplazice: la nivelul unor acini mamari se pot observa structuri displazice de natur chistic. Cazul 12: Pisic, ras European, 10 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: formaiune nodular mamar cu aspect chistic, consisten moale, cu chiti multipli de cca. 1-2 mm, ce prezint un lichid citrin, limpede. Formaiunea a aprut n urm cu un an pe lanul mamar stng, la nivelul mamelei abdominale posterioare. Aspecte histologice: formaiune tumoral malign caracterizat printr-o proliferare tumoral intralobular, lobulul afectat fiind mult destins, datorit proliferrii intraacinare i intraductale a celulelor epiteliale. Acestea sunt celule mari i polimorfe, cu nuclei mari, citoplasm slab colorat, nucleoli evideni. Datorit prezenei microfocarelor de necroz n zonele de proliferare, avem de-a face cu o leziune malign, respectiv cu un carcinom in situ. Diagnostic histologic: carcinom lobular in situ. Leziuni displazice/hiperplazice: lobulii mamari netransformai tumoral sunt mrii n volum, cu aspect de hiperplazie lobular tipul adenozis simplu, iar la nivelul canalelor intralobulare se observ hiperplazii de tipul epiteliozis cu celule bine difereniate care umplu lumenul ductului mamar. n ductele extralobulare se observ ectazii ductale, precum i hiperplazii epiteliale tipice. Cazul 13: Cea, metis, 10 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: ceaua a fost sterilizat n urm cu 2 ani. Tumora mamar a aprut n decursul ultimului an, avnd dimensiuni mari (ct o nuc de cocos) i o consisten crnoas la palpare. Aspecte histologice: neoformaiune tumoral de natur malign cu un caracter sarcomatos, caracterizat printr-o proliferare cu celule fusiforme sau cu aspect dendritic, care pe alocuri formeaz o matrice proteic parial mineralizat, cu tendin de a forma lame cartilaginoase sau osoase. Diagnostic histologic: sarcom mamar.
178
Leziuni displazice/hiperplazice: n esutul conjunctiv din jurul tumorii se poate evidenia la nivelul unui lobul, att n ductele lobulare ct i la nivel acinar, hiperplazii lobulare cu aspect papilar, celulele fiind bine difereniate, diagnosticul fiind de epiteliosis tipic. Cazul 14: Cea, rasa Cocker, 8 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: ceaua a fost sterilizat n urm cu 3 ani, tot atunci efectundu-se i ablaia mamelei inghinale drepte. n urm cu 2 ani a aprut o alt tumor la nivelul mamelei M4 de la nivelul aceluiai lan mamar, dimensiunea fiind de aproximativ 1 cm diametru. Aspecte histologice: neoformaiune tumoral malign caracterizat att prin proliferri epiteliale cu aspect tubular ct i prin proliferri mioepiteliale. Structurile tubulare n general au un lumen discret, celulele tumorale n cele mai multe cazuri umplnd lumenul tubular, nucleii fiind mari, veziculoi, nucleolii supranumerari i evideni. Celulele mioepiteliale proliferate au un aspect nodular, fiind delimitate de o strom conjunctiv fin. n unele zone ale tumorii se ntlnesc hemoragii i infiltrat macrofagic abundent, celulele prezentnd un pigment brun verzui n citoplasm. Diagnostic histologic: carcinom tubular complex. Leziuni displazice/hiperplazice: la nivelul parenchimului mamar din vecintatea tumorii, respectiv n ductele extralobulare, se observ hiperplazii ductale cu aspect papilifer fr atipii celulare (epiteliozis papilar ductal tipic), iar n stroma conjunctiv peritumoral se observ hemoragii. Cazul 15: Cea, rasa Caniche, 10 ani. Anamnez i aspecte macroscopice: tumor mamar recidivat. Prima ablaie n urm cu 1an. Aspecte histologice: formaiune tumoral de natur malign caracterizat prin multiple formaiuni cu aspect chistic, cu prezena unor protruzii epiteliale intrachistice, papilele prezentnd n general strom conjunctivo-vascular de susinere. n unele formaiuni chistice se poate observa un material oxifil cu macrofage i cristale de colesterol. Stroma conjunctiv a tumorii este abundent, slab celularizat, cu fibre groase de colagen, proliferrile epiteliale avnd un aspect tubular, chiar cu prezena de micropapile. De asemenea se pot evidenia la nivelul stromei conjunctive zone de calcificare intens bazofile. Diagnostic histologic: carcinom papilar chistic n tumor mixt benign. Leziuni displazice/hiperplazice: la nivelul unui lobul mamar se pot observa hiperplazii epiteliale cu aspect tipic (epiteliozis ductal papilar tipic), proliferrile fiind cu un aspect digitiform de tip punte la nivelul unui duct intralobular. Ca leziuni displazice secundare, ntlnim chisturi i ectazii ductale intra i extralobulare.
179
DISCUII
Tabelul 1. Leziuni displazice/hiperplazice mamare diagnosticate la periferia unor neoplasme maligne mamare Nr. Rasa caz 1 Cocker 2 Caniche Vrsta Mamel Castrare Diagnostic (ani) afectat 10 nu M4-M5S - carcinom tubular complex 12 nu M5 - carcinom tubulo-papilar complex 9 nu - carcinom tubular complex - carcinom tubulo-papilifer simplu - carcinom solid - carcinom tubulo-papilar simplu - carcinom complex n TMB - carcinom complex n TMB - carcinom tubulo-papilar complex - carcinom tubular complex - carcinom tubular complex - carcinom in situ - sarcom mamar - carcinom tubular complex - carcinom papilar chistic n TMB Leziuni displazice/hiperplazice -adenozis -adenozis simplu -ectazie ductal -displazie chistic -epiteliosis tipic -displazie chistic -epiteliosis papilar tipic -epiteliosis ductal papilar tipic -adenozis simplu i complex -epiteliosis atipic -displazie chistic -epiteliosis tipic -papilomatoz -adenozis simplu -epiteliosis tipic -adenozis simplu -epiteliosis ductal tipic -displazie chistic -displazie chistic -epiteliosis papilar tipic -displazie chistic -epiteliosis tipic -epiteliosis tipic -epiteliosis atipic -displazie chistic -adenozis simplu -epiteliosis tipic -ectazie ductal -epiteliosis ductal tipic -epiteliosis tipic -epiteliosis ductal papilar tipic -epiteliosis ductal papilar tipic -displazie chistic -ectazie ductal
Caniche
4 5 6 7 8 9 10 11 12
Pitt-Bull Caniche Caniche Vijla maghiar Caniche Dog german R. c. Cocker Pisic
5 6 6 5 9 8.5 10 7 10
nu nu nu nu nu nu nu nu nu
M2 M3S M5D M5 M4D M4-M5D M5D M4S
13 14 15
R. c. Cocker Caniche
10 8 10
da da nu
M4D -
180
Tumorile mamare la cea sunt hormonodependente iar riscul de apariie crete dup fiecare ciclu estral. Celulele tumorale mamare, fie c sunt benigne, fie c sunt maligne, au receptori pentru estrogeni i progesteron, ceea ce provoac hipertrofia parenchimului mamar, fapt evident dup estrus. Incidena mai ridicat a tumorilor n perechile posterioare ale mamelelor, se coreleaz cu volumul mai mare al acestora i secreia mai abundent n perioada de lactaie. n studiu a fost luat un numr de 76 de formaiuni tumorale mamare, din acestea fiind reinute, datorit evidenierii histopatologice de leziuni displazice/hiperplazice n esutul mamar adiacent, un numr de 15 tumori de natur malign. Cele 15 cazuri cu neoplasme mamare au provenit de la 14 cele de diferite rase i vrste, precum i de la o pisic din rasa european. n ceea ce privete rasele de cini la care s-au ntlnit displaziile mamare, sa observat o inciden crescut a acestor leziuni la rasa Caniche (6 cazuri), Cocker (3 cazuri), Rasa comun (2 cazuri) i Vijla maghiar, Pitt-Bull, Dog german (cte 1 caz). Cei 15 subieci au avut vrste cuprinse ntre 5 i 12 ani, cele mai multe leziuni displazice fiind ntlnite la femele n vrs de 10 ani (5 cazuri), media fiind de 8,3 ani. Mamelele la nivelul crora s-au evideniat cele mai multe hiperplazii/displazii au fost: M5 46,1%, M4 38,4%, M3 7,6% i M2 7,6%. Referitor la tipurile de neoplasme n jurul crora s-au ntlnit leziuni displazice, acestea au fost: carcinom tubular complex - 5 cazuri, carcinom tubulopapilar complex - 2 cazuri, carcinom tubulo-papilar simplu - 2 cazuri, carcinom solid - 1 caz, carcinom complex n tumor mixt benign - 3 cazuri, carcinom lobular in situ -1 caz, sarcom mamar - 1 caz. Rezultatele investigaiilor noastre arat c leziunile displazice/hiperplazice mamare peritumorale sunt frecvent ntlnite, multe din acestea, dup cum s-a observat n partea bibliografic a lucrrii, putnd reprezenta de fapt leziuni preneoplazice. Unele leziuni cum ar fi hiperplaziile lobulare sau ductale de tipul epiteliozis atipic sau adenozisul, de multe ori pot duce la erori de diagnostic. Din aceast cauz sunt necesare elemente de diagnostic diferenial al hiperplaziilor fa de leziunile maligne carcinomatoase. Investigaiile histologice efectuate de ctre noi au demonstrat necesitatea excizrii i recoltrii esutului mamar adiacent tumorii datorit incidenei ridicate a acestor leziuni peritumorale hiperplazice, din care se pot dezvolta ulterior neoplasme mamare. Principalele leziuni displazice evideniate au fost hiperplaziile lobulare, iar din acestea cele mai numeroase au fost leziunile de epitelioz tipic la 12 cazuri, iar la 1 caz s-a observat epiteliozisul slab difereniat denumit i epiteliozis atipic. Acesta din urm este foarte greu de difereniat de carcinomul ductal in situ. Hiperplazia lobular de tip adenozis simplu i complex a fost ntlnit la 6 din cazuri. Tot leziuni hiperplazice se pot ntlni i la nivel extralobular, respectiv la nivelul ductelor extralobulare, fiind ntlnite i aici
181
modificri ca epiteliozisul tipic la 4 cazuri i leziuni de papilomatoz la 1 caz. Ca leziuni displazice, cele mai numeroase au fost chisturile mamare lobulare la 8 cazuri, iar la 3 cazuri s-a ntlnit ectazia ductal. Aceste leziuni pot fi confundate cu carcinoamele chistice mamare (destul de rar ntlnite), existnd anumite criterii de difereniere a celor dou tipuri lezionale, cele dou tipuri lezionale necesit un tratament complet diferit. Studiul efectuat de noi indic faptul c leziunile displazice/hiperplazice sunt frecvent ntlnite n esutul mamar adiacent tumorii, iar extirparea neoplasmului cu nendeprtarea esutului adiacent preneoplazic, poate duce la o recidiv tumoral nu din cauza rezeciei incomplete a tumorii ci din cauza acestor hiperplazii care se pot maligniza. O alt problem ar fi diferenierea leziunilor displazice/hiperplazice de cele tumorale. Astfel trebuie difereniat hiperplazia epitelial de carcinomul ductal bine difereniat; hiperplaziile papilare de carcinomul papilar; mastopatia fibrochistic de carcinomul chistic; proliferrile ductale atipice de carcinomul in situ, hiperplazia hipersecretoare chistic de carcinomul hipersecretor chistic, adenozisul microglandular de carcinomul tubular, adenozisul sclerozat de carcinomul mamar, hiperplazia lobular atipic (ALH) de LCIS, hiperplazia ductal atipic de carcinomul ductal in situ (1, 3, 4, 6, 8, 10, 11). Anumite leziuni displazice/hiperplazice cresc foarte mult riscul apariiei de tumori mamare, astfel adenozisul i adenozisul sclerozat, cicatricea radial, hiperplazia ductal epitelial tipic i papilomatoza cresc riscul apariiei carcinoamelor de 1,5-2 ori, iar hiperplazia ductal i lobular atipic (ADH i ALH) cresc riscul dezvoltrii tumorilor maligne de 4-5 ori (9). Stabilirea tipului i subtipului de neoplasm mamar, precum i a leziunilor displazice/hiperplazice mamare are o importan predictiv deosebit, deoarece n funcie de aceast clasificare histologic se poate aplica tratamentul precum i predicia speranei de supravieuire a celei sau pisicii respective. CONCLUZII 1. n studiu au fost luate i examinate histologic un numr de 76 de tumori maligne, din care 15 prezentau leziuni hiperplazice/displazice n esutul mamar adiacent, cele 15 cazuri provenind de la 14 cele i de la o pisic. 2. Rasele de cini cu tumori mamare care prezentau leziuni displazice/hiperplazice au fost: Caniche (6 cazuri), Cocker (3 cazuri), Ras comun (2 cazuri), Vijla maghir, Pitt-Bull, Dog german (cte 1 caz). 3. Cele 15 cazuri au avut vrste cuprinse ntre 5-12 ani, cele mai multe leziuni displazice fiind la vrsta de 10 ani (5 cazuri), media fiind de 8,3 ani. 4. Mamelele la nivelul crora s-au evideniat cele mai multe hiperplazii/displazii au fost: M5 46,1%, M4 38,4%, M3 7,6% i M2 7,6%.
182
5. Tipurile de neoplasme diagnosticate: carcinom tubular complex (5 cazuri), carcinom tubulo-papilar complex (2 cazuri), carcinom tubulo-papilar simplu (2 cazuri), carcinom solid (1 caz), carcinom complex n tumor mixt benign (3 cazuri), carcinom lobular in situ (1 caz), sarcom mamar (1 caz). 6. Leziunile displazice/hiperplazice evideniate au fost: hiperplazii lobulare: adenozis simplu (6 cazuri), epiteliosis tipic (12 cazuri), epiteliosis atipic (1 caz); hiperplazii ductale: epiteliosis tipic (4 cazuri), papilomatoz (1 caz); displazii chistice: 8 cazuri; ectazii ductale: 3 cazuri. Pentru a efectua un examen histopatologic ct mai complet recomandm ca prelevarea probelor s se fac i cu parenchimul mamar adiacent tumorii, deoarece anumite leziuni hiperplazice cresc foarte mult riscul apariiei de tumori mamare: adenozisul, hiperplaziile ductale epiteliale tipice, papilomatoza ductal, de 2 ori, iar hiperplazia ductal i lobular atipic (ADH- ALH) de 4 - 5 ori. Terapia chirurgical a tumorilor mamare trebuie s aib n vedere i excizia acestor leziuni hiperplazice care sunt puncte de recidiv pentru tumorile mamare.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Azzopardi J.G., 1979 - Papilloma and papillary carcinoma in problems in breastpathology. Azzopardi JG ed. Philadelphia. Sauderrs 150-166. Baba A.I., 2002 - Oncologie comparat, Editura Academia Romn, Bucureti Catallioti L., Bianchi S., Ciatto S., 1999 - Patologia mammaria benigna in Senologia oncologica. Veronesi U. Ed. Milano Masson, 194-197. Gobbi H., Jensen R.A., Simpson J.F., Olson S.J., Page D.L., 2001 - Atypical ductal hyperplasia and ductal carcinoma in situ of the breast associated with perineural invasion, Hum Pathol, Aug. 32(8):785-90. Misdorp W., Else R.W., Hellmen E., Lipscomb T.P., 1999 - Histological classification of mamary tumors of the dog and cat. Page D.L., Anderson T.G., 1987 - Papilloma and related lesions, in Page DL, Anderson TG ed. Diagnostic Histopathology of the breast. New York, Churchill Livingstone, 104-119. Page D.L., Rogers L.W., 1992 - Combined histologic and cytological criteria for the diagnosis of ductal atypical ductal hyperplasia. Hum Pathol 23:1095-1097. Purcel C.A., Norris H., 1998 - Intraductal proliferation of the breast: a review of histologic criteria for atypical intraductal hyperplasia and ductal carcinoma in situ, including, apocrine and papillary lesions. Ann. Diagno. Pathol. 2(2): 135-145. Shaaban A.M., Sloane J.P., West C.R., More F.R., Jarvis C., Williams E.M., Foster C.S., 2002 - Histopathologic types of benign breast lesions and the risc of breast cancer, Am J Surg Pathol, Apr., 26(4): 421-30. Shin S.J., Rosen P.P., 2000 - Pseudolactational hyperplasia: a primary diagnosis in mamographically detected lesions of the breast and its relationships to cystic hipersecretory hiperplazia, Am J Surg Pathol, Dec., 24(12): 1670-4. Usha R., Vertes D., 1996 - Breast papillomas with atypical ductal hyperplasia; A clinical pathologic study, Hum Pathol. 27(11): 1231-1228.
183
FATTY LIVER IN NEWBORN AND YOUNG PIGLETS

B. SAVI1., H. AMANC2., V. STOJI2., V. IVETI1 1 Institute of Veterinary Medicine of Serbia, Belgrade 2 Faculty of Veterinary Medicine, Belgrade Fatty liver occurs quite rare in newborn and young piglets. By some authors it can be develop already during intrauterine live of piglets. Pathogenesis of fatty liver metamorphosis in newborn piglets is still unknown, presupposes that is consequent of lipotropic substances or biologically importantly proteins deficit in sows feed in late gestation period. Also the same changes could be effect of contamination of sows feed with mycotoxins, which inhibit synthesis of appoproteins like one of the important carrier of fats from liver or they contaminate sows milk. Authors described clinical picture and pathomorphologycal changes on fatty metamorphosed livers and discussed about ethological factors responsible for fatty liver appearances in newborn and young piglets in first week of live.
Key words: piglets, fatty liver, micotoxins
INTRODUCTION Enzootic hepatosis, liver degeneration, hepatodistrophy and steatosis are synonyms for fatty degenerations of the pig liver. It appears rarely on single or many newborn or nursery piglets in the same litters, most often between 1 and 14 days of piglets live. According to Stamatovic and Samanc, 2001 this condition in newborn piglets may already appear within intrauterine live apropos though last third period pregnancy of sows. Herds with frequently appearance of this condition have severe loss of piglets without clear expressed clinical symptoms. Pathogenesis is still unknown, although central role within steatos metamorphosis of liver have fats metabolisms disorders (Stojic, 2004). Disorders can be qualified with many different factors, while in industrial pig productions accent is applied on nutritive aspects (Peader and Brendan, 2001). Hypoxia associated with lipotropic substances deficiencies during intrauterine live of piglets apropos in late gestation pregnant female nutrition are triggers for irreversible metabolic processes in hepatocytes appearance (Thomas at all, 1972; Knezevic and Jovanovic, 1999). In ethiopathogenesis of liver degeneration secondary metabolites of mould-mycotoxins participate significantly, which affect in many different levels cells metabolism by inhibition of lipotropic essences substances synthesis, which is essential in fatty transport from liver (Pegorier at all., 1983). Also fatty liver increases the risk for infectious diseases and therefore may be a causative factor in development of postnatal bacterial infections (Martini
at all., 2001). 184
MATERIAL AND METHODS

We followed health status on three pigs farms and systematically noted all relevant criteria in connection with health. First two, were small individual farms with 40 sows capacity, third, were big industrial type farm with 1500 sows capacity. We noted liver fatty metamorphosis in nursery piglets 1 to 10 days old. Mortality rate increased on 15% on two small farms and 17% on third farm in first 10 days postnatal nurseries live. In addition, piglets were avital, born with less than 1200 g body weight and though first days of suck period they were loosing their weight and rapidly retarded. Some piglets were having non infective diarrhea. In severe cases in some litters piglets were depressed, mostly lay on creep and often were crashed by dams. On third farm besides described clinical picture, hyperemia and vulvae edema, skin necrosis on tail and carpal joints were noted. This symptoms are related with mycotoxicosis respectfully zearalenontoxicosis. Unfortunately we did dont have access to nutrient contents in sows feed ingredients on both smaller farms. Only we were told that during all gestation period nutrition was not modulated according to pregnant sows needs. On third farm manly component in nutrient content was corn (around 60%) wheat grain (around 20%) and sunflower meal (around 10%). High levels of mycotoxins, 9.2 mg/kg of zearalenone and 2.4 mg/kg of ochratoxins was detected in diet samples for pregnant sows. Morphopathological exam was provided in all died piglets. Twenty tree piglets originated from first two farm and twelve piglets from third farm were autopsied. Liver and kidneys tissues were fixed by immersion in 10% buffered formalin. Fixed tissue was dehydrated, embedded in paraffin wax, sectioned at 5 m, and stained with haematoxylin and eosin (H&E). Cryosections tissues were stained with Sudan III.
RESULTS Gross pathology: All examined carcasses were very emaciated. Macroscopically livers were enlarged with rotund edges and intense capsules. In lightly cases (26 piglets, 75% of total number) livers were decolorized with yellow - reddish foci, which were markedly accented compared with normal tissue. At 9 piglets (25% of total number) cases were severe with diffuse clay liver tissue colorization and pulpy consistency. Cut surface bulge when incised. Liver parts moreover all lobes floated when was placed in water in almost all cases. Total or partial liver ruptures with sub capsular or intra abdominal blood extravasations were detected in 7% cases . Besides described morphopathological changes on liver macroscopically kidneys were pale and yellowish, rare with cortical punctiform hemorrhage in all died piglets originated from third farm.
185
Microscopic finding: Under light microscope perinuclear hepatocytes vacuolization were detected. Usually one small vacuole was detected. In some parts of liver tissue vacuoles coalesced to form large empty spaces with consequent nucleus dislocating on cells periphery. Regressive changes were commonly located on lobe periphery or they have panlobullary prevalence. In kidneys epithelial cells, especially in proximal convoluted tubules epithelias many small vacuoles whether diffuse filled cytoplasm was detected. Vacuoles from cryostat sections liver tissue stained with Sudan III were orange colorized and undoubtedly confirmed fat origin apropos liver fatty metamorphosis. Parenchyma cells of the kidneys in cryosections contained many orange fat droplets in cytoplasm as well. DISCUSSION To complete understand liver fatty metamorphosis mechanisms we will briefly specified basic lipids metabolic pathways in organism and liver role in this processes. By tasks in organism lipids are divides on labile and stabile components. Labile lipids originate from feed, or generates from carbon hydrates and some amino acids. They consist of neutral lipids, which are used for normal substance exchange in hepatocytes, at why excesses are accumulated in fat depots in organisms. From fat depots neutral lipids could be activated and transported to the liver or other organs. In lipids metabolisms liver has several roles: fatty acids -oxidation to acetyl coenzyme-A, which is included in Krebs cycles of tricarbon acids from whose acquire energy; free fatty acids (FFA) esterification to triglycerides which is transported in blood plasma like very low density lipoproteins (VLDL) banded with apoproteins; phospholipids and cholesterol synthesis from fatty acids. From classical pathologic view, four factors are important for fatty changes appearance in hepatocytes: increase lipids intake after intestinal resorbtion; increase fatty acids intake from fat depots; decrease -oxidation process in hepatocites; decrease synthesis of apoproteines and thereby decrease productions and release of lipoproteins (VLDL) from hepatocytes. Causes of fatty metamorphosis in hepatocytes are numerous but most often are: hypoxia with very low oxygens levels in blood; anemia; CO poising; oxygens free radicals poising; mycotoxins intoxications with consequences nonsaturated fat acids hepatocytes membranes phospholipids peroxidations; essentials fatty acids, methionin, holing, B- complex vitamins especially B12 lack. All mentioned mechanisms dont have equal significance in hepatocytes fatty changes. Not only one, but also two or more mechanisms could be involved
186
in disorders pathogenesis. Last tree are especially accentuated in connections with diet hepatosis in pigs. As mentioned before phospholipids have central role in lipotrop and antilipotrop events in liver. Phospholipids molecules are composed from one hydrophilic and one hydrophobic end. Polarized choline group in ester conjunction with glycine and phosphoric acid make hydrophilic end, and nonpolarized fatty acids residues make hydrophobic end. Substances with hereby physically and chemically attributes react as emulgators. Consequently phospholipids significantly affect on hylomicrons - triglycerides forming which important transport form of neutral fats from liver. On the other hand, cholines participate in phospholipids synthesis in cells like methyl group donor in reactions of transamination. In hepatocytes it has an important role in lipoids, especially biological membranes phospholipids and acetylcholine synthesis. Choline is quatern ammonium basis esterifically banded with glycine and phosphoric acid embedded in phospholipids lecithin. It is synthentised from serine amino acids products (ethanolamine) by decarboxilation. Ethanolamine (cholamine) will be methylated by methionine CH3 labile groups. In this reaction, as methyl and transmethyl cofactors, thetrahydropholic acid and cobalamin B12 vitamin participate too. The coenzyme of vitamin B12 is a carrier of methyl groups. Because of its methyl transfer role, vitamin B12 is active in the synthesis of the amino acid methionine from its precursors, homocysteine. The coenzyme transfers methyl groups from methyl folate, a derivate of folic acid, to homocysteine and methionine is formed. Second role of vitamin B12 is izomerisation of malonyle coenzyme A to succinyle coenzyme A. Therefore choline and its precursors (serine, ethanolamine and methionine) deficit are relate to irreversible processes in hepatocytes, which cause fatty liver metamorphosis. Choline deficiency decreases phospholipids syntheses, which assist in fats transport from liver. Vitamin B12 plays a secondary role in the lipid pathway. Moreover very complexly micotoxins reaction mechanisms inhibited synthesis of phospholipids like overall effect. A complexes mechanism which is involving in choline deficit and its influence on phospholipids synthesis is schematized below. Altogether suspend of phospholipids synthesis by choline deficit or either another reason, disarrange fats transport between liver and fat tissue which itself repercuting on fats accumulation in the liver. Fatty liver in nursery piglets is most likely consequence of pregnant sows nutritive deficits respectfully essential nutritive substances principally lipotropic factors choline, methionine, bethaine and vitamin B12 lack. By Forenbacher, 1993 poor choline sows nutrition during gestation qualified avital newborn piglets with fatty liver. Besides induced, trophopathic liver damage in fetuses is result of high valuable proteins deficits. Undoubtedly
187
those mycotoxins play important role in this changes most likely inhibiting appoproteines synthesis, which is required in fats transport from liver by lipoproteins complexes.
CONCLUSIONS Fatty metamorphosis in nursery piglets is consequence of: Pregnant sows nutrition deficits (choline, methionine, bethaine, vitemine B12 and biologically highfalutin proteins deficits), which probable occurred on two small farms; Sows feed contamination with mycotoxins, which is inhibiting appoproteines synthesis, which were detected in sows feed samples; Fatty liver conditions in newborn piglets could increase mortality rate in first 5 to 6 day nurseries live; Fatty liver changes could be detected in stillborn piglets, what is in agreement with thesis that changes appeared in last third of gestation.
REFERENCES
1. 2. 3. Stamatovi S.M., H.A. amanc, 2001 - Swine diseases. VKS. Belgrade Stoji V., 2004 - Veterinry phisiology. Scientific book KMD. Belgrade Peader G. Lawlor, P. Mrendan Lynch, 2001 - Mycotoxins in pig feed 2: clinical aspects. Irish Veterinary Journal, volume 54 (4).
188
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 4. 5. 6. 7. 8. Bownhemer T., Richard J. Havel, John A. Long, 1972 - Physiological fatty liver hyperlipemia in the fetal guinea pig: chemical and ultrastructural characterisation. Journal of Lipid Research, Vol. 13, 371 382. Kneevi Milijana, M. Jovanovi, 1999 - General pathology. Makrije, Belgrade. Pegorier J.P., P.H. Duee, J. Girard, J. Peret, 1983 - Metabolic fate of non-esterified fatty acids in isolated hepatocytes from newborn and young pigs. Biochemical J. 212, 93 97. Martini, Wenjun Z, Irtun, Oivind, Chinkes, David L, Rasmussen, Blake, 2001 Alteration of hepatic fatty acid metabolisms after burn injury in pigs. Journal of Pareneteral and Enternal Nutrition, Nov/Dec 2001. Forenbacher S., 1993 - Digestive system and metabolisms clinical pathology. NAZU, kolska knjiga Zagreb.
189
MODIFICRI MORFOLOGICE ALE ORGANELOR GENITALE N PSEUDOHERMAFRODITISMUL MASCULIN LA CAPRA DOMESTIC (CAPRA HIRCUS)
T.M. TOPAL, G. BALMU, C. COTEA, S. PACA, O.Z. OPREAN U.S.A.M.V. IAI At a 6 months old goat with pronounced female phenotipical aspect, but with a very developed clitoris was made euthanasia. Necropsy exam shows two testicles inside the pelvis and genital ways with tubular aspect. Histological exams reveal the testicular parenchyma with seminal epitheliums vacuolized and with rare spermatogonies and interstitial Leydig glands rudimentary. The tubular organ is uterus, with lamina propria intensively collagenized and underdeveloped endometrial glands. In the wall of uterus are incorporated glandular structures with typical aspect for the seminal vesicles.
Key words: Capra hircus, hermaphroditism, malehermaphroditism
Hermafroditismul poate fi considerat ca fiind adevrat de tip bilateral, unilateral i alternant. Hermafrodismul fals sau pseudohermafroditismul poate fi de tip masculin i feminin. Hermafroditismul fals (pseudohermafroditismul) masculin, const n prezena la acelai individ a gonadelor masculine i a cilor genitale feminine. MATERIAL I METOD
Cercetrile noastre au avut ca obiect de studiu o capr din rasa Carpatin n vrst de 6 luni. Din punct de vedere al aspectului fenotipic acesta era femel, deoarece glanda mamar era prezent. Metodele de lucru folosite au fost eutanasia cu soluie T61, examenul necropsic i examenul histopatologic. Pentru realizarea examenului histopatologic s-au extras fragmente tisulare de 1-2 cm din aparatul genital care au fost fixate n formaldehid 10% soluie apoas, inclus n parafin , secionate la 5m i colorate cu metoda Hematoxilina-Eozina-Albastru de metil (HEA).
REZULTATE I DISCUII Dup efectuarea investigaiilor morfologice macro- i microscopice a fost pus diagnosticul de pseudohermafroditism masculin deoarece aparatul genital
190
(Fig. 1) prezenta gonadele de tip masculin (Fig. 2, 3) aceasta n condiiile n care la exterior capra prezenta aspect fenotipic femel prin prezena glandei mamare i a vulvei (Fig. 4).
Fig. 1 - Aparatul genital
Fig. 2 - Gonada masculina dreapta
Fig. 3 - Gonada masculina stng
Fig. 4 - Clitoris
n urma examenului histologic, la nivelul testiculelor se observ albugineea intens colagenizat i vascularizat (Fig. 5) i vacuolizarea epiteliului tubilor seminiferi (Fig. 6). La nivelul epiteliului seminifer se observ o distrofie hidric (Fig. 7), iar epididimul prezint o hipoplazie epitelial i fibroz interstiial (Fig. 8).
Fig. 5 Albuginee colagenizat i vascularizat Col. HEA, x100
Fig. 6 Vacuolizarea tubilor seminiferi Col.HEA, x400
191
Fig. 7 Epiteliul seminifer.Distrofie hidric Col. HEA, x400
Fig. 8 Epididim. Hipoplazie epitelial Col. HEA, x100
n urma examenului histologic la nivelul uterului se constat hiperplazia musculoasei (Fig. 9), hiperplazia limfohistiocitar i colagenizare n lamina propria (Fig. 10, Fig. 11). Totodat se observ chistizarea glandelor endometriale (Fig. 12), precum i hiperplazie i cheratinizare epitelial la nivelul mucoasei (Fig. 13), i vezicula seminal intraparietal (Fig. 14).
Fig. 9 Uter. Hiperplazia musculoasei Col.HEA, x100
Fig. 10 Uter. Hiperplazie limfohistocitar n lamina propria. Col. HEA, x400
Fig. 11 Uter. Colagenizare n lamina propria Col. HEA, x400
Fig. 12 Uter.Chistizarea glandelor endometriale. Col.HEA, x400
192
Fig. 13 Uter. Mucoasa. Hiperplazie si cheratinizare epiteliala. Col.HEA, x400
Fig. 14 Uter. Vezicula seminala intraparietala. Col.HEA, x100
CONCLUZII Hermafroditismul fals (pseudohermafroditismul) masculin const n prezena la acelai individ a gonadelor masculine i a cilor genitale feminine. La o capr n vrsta de 6 luni cu aspecte fenotipice femele ( glanda mamar dezvoltat anatomic normal ) dar cu un clitoris dezvoltat, examenele radiologic i ecografic evideniaz la intrarea n cavitatea pelvin dou formaiuni ovoide cu diametrul de 1,8 cm foarte asemntoare cu testiculele. Examenul necropsic evideniaz pe ambele pri testicule i epididim, un conduct genital cu diametrul de 0,5 cm i un clitoris foarte dezvoltat . Examenele histologice relev structuri testiculare epididimare afuncionale: albuginee intens colagenizat, distrofie hidric a epiteliului seminifer, glande interstiiale Leydig rudimentare, hipoplazie tubular i fibroz interstiiala n epididim. Organul tubular are structuri tipic uterine dar modificate spre fenomene intens proliferative: miometru hiperplaziat, proliferri polimorfe n lamina propria, glande endometriale chistizate, hipoplazia i cheratinizarea endometrului. n peretele uterin se evideniaz dou formaiuni bine delimitate cu aspecte structurale caracteristice veziculelor seminale.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Cernescu H., 1989 Patologia reproduciei i clinic obstretical. Lito. USAMVB.,Timioara; Cotea V.C., 2003 - Histologie special, Ed. Tehnopress Iai; Groza I., Munteanu M., 2002 - Elemente de fiziologia reproduciei la animale. Ed. Academic press, Cluj-Napoca; Paul I., 1990 - Morfopatologia aparatelor i sistemelor organice. Soc. de Med. Vet din Romania, Buletin Inf. nr. 23-24., , Bucureti; Runceanu L., Cotea C., 2001 Reproducie, obstetric i ginecolgie veterinar. Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai;
193
FIBROADENOMUL MAMAR LA PISIC

MAMMARY FIBROADENOMA IN CATS
Gabriela URSACHI1, Otilia COOFAN2, Iulia FLORITEAN1 1 D.S.V.S.A. L.V.S. Iai 2 F.M.V. Iai Fibroadenoma, also known as the benign or fibroglandular mammary hypertrophy, feline mammary adenomatosis, mammary fibroadenomatous hyperplasia was diagnosed in a 4 years old cat. Clinical investigation revealed small nodules, about 5 mm in diameter in the right caudal pectoral mammary gland. The nodules, well circumscribed, were rounded, relative smooth, mobile, with a gummy consistence section surface having white, shiny and fasciculate pattern. Microscopically, the tumor parenchyma consists of elongated , irregular and widely branched tubular systems covered by mono- or multistratified columnar epithelium without notable atypia or mitotic activity. The proliferating stroma forms massive and concentric cuffs of fine fibers consisting in fine fibers and spindle cells close to the tubes and thick collagen bands farther . The peripheral demarcation of the lesion is produced by the condensation of the mammary stroma. The aspects of the lesion correspond to the intermediary stage between the peri- and intracanalicular types of fibroadenomas.
Key words: fibroadenoma, hypertrophy, adenomatosis.
Fibroadenomul mamar este cunoscut i sub denumirea de hipertrofie mamar benign sau fibroglandular, hiperplazie fibroadenomatoas mamar i adenomatoza mamar felin Este descris i la cine i semnalat foarte rar la capr i bivoli. La femei ocup locul al treilea n mastopatii dup mastoza Reclus i carcinoame; la brbai se dezvolt dup tratamentul intens cu estrogeni n cancerul de prostat. Afecteaz cel mai frecvent pisicile tinere n plin activitate genital, n faza de estru, n gestaie, dup tratamentele cu medroxyprogesteron-acetat o lung perioad de timp pentru prevenirea estrului, precum i la motani dup administrarea compuilor progesteronici. Afecteaz una sau mai multe glande, uni- sau bilateral i se manifest prin noduli solitari sau multipli (n 20% din cazuri), cu diametrul variind ntre 1-2 mm i maximum 3 cm la pisic i 5-7 cm la cea. Nodulii sunt rotunjii, sferoizi sau polilobulai, fermi, elastici, bine delimitai, dar nencapsulai, mobili fa de esuturile vecine, enucleabili; culoarea
194
este alb-sidefie, alb-rozat sau brun roiatic, suprafaa de seciune fiind umed i strlucitoare i proeminent fa de esutul mamar adiacent (Sternberg, 1989). Se comport ntotdeauna benign, evolueaz lent, uneori regreseaz spontan sau dup ovariectomie. MATERIAL I METOD
Materialul de studiu a fost reprezentat de o pisic n vrst de 4 ani, care prezenta noduli mici, n glanda mamar pectoral caudal dreapt. Nodulii tumorali au fost prelevai n totalitate, fixai n formaldehid 10%. Fragmente de noduli au fost incluse n parafin, secionate la 5 micrometri i colorate prin metodele HEA, PAS i impregnare argentic Gmori.
REZULTATE I DISCUII Macroscopic, la examenul clinic s-au sesizat noduli mici cu diametrul de 5 mm n glanda mamar pectoral caudal dreapt.Nodulii erau bine delimitai, netezi, mobili, de consisten gumoas, cu suprafaa de seciune alb-sidefie i cu aspect fasciculat. Microscopic, parenchimul tumoral este mixt, format din structuri epiteliale i esut conjunctivo-vascular. Cazul luat n studiu exprim un amestec din subtipurile de fibroadenom pericanalicular i intracanalicular. La periferia nodulului tumoral se identific capsula groas i dens format prin condensarea esutului conjunctiv fibros mamar, mpins de creterea tumorii (fig. 1). Din capsul se desprind septe conjunctivo-vasculare compacte care alctuiesc stroma i delimiteaz lobulii tumorali (fig. 2) constituii din parenchimul tumoral mixt (epitelial i conjunctival) (fig. 4).
Fig.1. Fibroadenom mamar la pisic. Capsula, sept interlobular. PAS x40
Fig. 2. Fibroadenom mamar la pisic. Septe interlobulare. HEA x 100
195
Fig. 3. Fibroadenom. Gomori x 100
Fig. 4. Fibroadenom mixt. Sisteme tubulare alungite i amplu ramificate i zone fibromixomatoase. HEAx100
n tipul pericanalicular, componenta epitelial este organizat n tubuli mici i rotunjii sau ovalari, cptuii cu ambele tipuri de celule (luminale i mioepiteliale), fr atipii sau cu lumene deschise i uneori cu secreie bazofil i PAS pozitiv.
Fig. 5 Fibroadenom intracanalicular mamar la pisic. Secreie i tubi nconjurai de esut fibros edemaiat. PAS x 100
Fig. 6. Fibroadenom intracanalicular la pisic. Componenta epitelial cu ambele tipuri de celule. HEA x200
Componenta fibromatoas constituit din fibre fine i celule fibroblastice fusiforme, cu un numr variabil de celule adipoase, se nfoar n jurul tubulilor formnd manoane concentrice. n subtipul intracanalicular, tubulii epiteliali se alungesc i se ramific, se turtesc i se deformeaz datorit mugurilor conjunctivi care mping pereii i proemin n lumen. Cu timpul ncep s semene cu coarnele de cerb. Celulele epiteliale au tendin spre pleomorfism. Componenta conjunctiv a fibroadenomului este texturat lax, mixomatoas, fiind format din celule
196
fusiforme i stelate, derivate din celulele mioepiteliale spaiate de substan intercelular mucoid abundent (fig. 5, 6). Proliferarea stromei conjunctive este mult mai difuz i aspectul lobular mult mai ters. CONCLUZII Se prezint aspectele macroscopice i microscopice ale fibroadenomului mamar , diagnosticat la o pisic de 4 ani. Microscopic,aspectul corespunde stadiului intermediar de evoluie ntre tipurile pericanalicular i intracanalicular vegetant.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Baba A.I., 2002 Oncologie comparat - Editura Academiei Romne, Bucureti Bostock D.E., 1986 Canine and feline mammary neoplasms Br Vet J. 142(6):506-515,Nov-Dec; Hayden D.W.Y., Johnston S.D., Kiang D,T., Johnson K.H., Barnes D.M., 1981 Feline mammary hypertrophy/fibroadenoma complex: clinical and hormonal aspects, Am J Vet Res.; 42(10):1699-1703, oct; Jubb K.V.F., Kennedy P.C., Palmer N., 1993 Pathology of Domestic Animals, Fourth Edition, V.M. 3 Academic Press, New York; Sternberg S.S., 1989 - Diagnostic surgical Pathology, Raven Press, LTD, New York
197
MASTOPATIA FIBROCHISTIC LA CANIDE

FIBROCYSTIC MASTOPATY IN DOGS
Gabriela URSACHI D.S.V.S.A.-L.V.S. Iai Otilia COOFAN U.S.A.M.V. Iai G. HUEAL D.S.V.S.A.-L.V.S. Buzu I. PAVLOVIC Scientific veterinary Institute of Serbia The fibrocystic or sclerocystic mastopathy, cystic mastosis, Reclus disease, Schimmellbusch disease mamary fibroadenomatous hyperplasia is the most common benign disease, well known in the women, described also in bitches and rarely in cats. In our investigations, the disease was localized in the caudal mammary glands III-V in three bitches aged 6, 7 and 9, had 5-18 cm in long diameters, and irregular shapes determined by the conglomeration of small, hard, withe-yellowish nodules combined with fluctuant cysts of various sizes, with an yellow or brown content, all sustained by a sclerotic stroma. Gelatinous areas alterning with greasy foci and rough sandy nodules were observed on the cut surfaces. Zonal lymphonodes were slightly enlarged and had a firm consistency. Microscopically, lesions are developed in TDLU. The cysts are covered by a columnar, atrophic, papillary or partially exfoliated epithelium and contain a PAS positive secretion with lipids, xanthomatous cells, cholesterol, calcium precipitates, dead cells or cellular dust. These aspects are associated with ductular or alveolar epithelial hyperplasia, proliferation of the connective tissue, hyalinization of the collagen, multiplication of the myoepithelial cells forming a myxoid or chondroid stromal matter, stromal infiltrations with mononuclear cells and hemosiderophages and sometimes a pericystic chronic, granulomatous reaction with giant cells. A lymphoplasmocytic hyperplasia and sinusal reactive histiocytosis in the zonal lymphonodes were also noticed. Some zones with massive epithelial proliferation, high mitotic ratio, moderate pleomorphism , and discontinous basal membranes suggest the potenial for malignant transformation of this disease.
Key words: sclerocystic mastopathy, dogs
Mastopatia sclerochistic (fibrochistic) sau boala Reclus este cea mai banal afeciune mamar la femeie, constatat la 53% din cazurile necropsiate cu frecvena cea mai mare n a patra decad a vieii (Niculescu, 1980). Procesul
198
patologic afecteaz una sau ambele mamele, debuteaz i evolueaz n TDLU i se caracterizeaz prin hiperplazii epitelio-mezenchimale i dilataia chistic a unitilor asociate cu scleroz i metaplazii ale stromei. n oncologia veterinar, mastopatia este semnalat la carnivore, la canidele tinere fiind mai frecvent dect la pisicile de orice vrst. Descrierea tabloului lezional este lapidar i vag, cu att mai mult cu ct afeciunea denumit mastoz sau mastopatie sclero(fibro)chistic sau chiar hiperplazie fibroadenomatoas mamar este asimilat categoriei de fibroadenom. MATERIAL I METODE
Materialul de studiu a fost reprezentat de 3 canide femele care prezentau procese tumorale ale glandelor mamare. De la fiecare caz s-au prelevat fragmente de esut tumoral sau chiar tumora n totalitate. Fragmentele recoltate au fost fixate n formaldehid 10 % sau lichid fixator Bouin, incluse n parafin, secionate la 5 micrometri i colorate prin metodele HEA, PAS, Pappenheim, Van Gieson.
REZULTATE I DISCUII Aspecte macroscopice. Cazul 1. Femel de ras comun n vrst de 9 ani a prezentat dou tumori localizate n lanul stng. Glanda mamar M3 stng avea diametrul de 18 cm i un contur neregulat datorat multitudinii de chisturi mici, izolate sau conglomerate, i prezenei chisturilor mari alternnd cu structuri nodulare mici, glbui i dure care dau la palpare senzaia de alice i bile de plumb. Chisturile mari sunt bine circumscrise, relativ mobile fa de esuturile adiacente, elastice i au un coninut galben-verzui sau brun-roiatic sub tensiune.
Fig. 1. Mastopatia chistic. Aspectul exterior al tumorii. M3 stng
199
Glanda mamar M5 stng avea diametrul de 5 cm i se prezenta ca o mas tisular bine delimitat , uor indurat avnd n suprafaa de seciune zone gelatinoase i noduli albi-glbui i crnoi. Limfonodurile inguinale superficiale homolaterale apreau mrite, avnd lungimea de 3 cm i grosimea de 1 cm. Un limfonod inguinal profund era de asemeni uor mrit i avea o consisten ferm. Cazul 2. Femel de ras comun n vrst de 7 ani, a prezentat o tumoare localizat n M4 din lanul drept , cu dimensiunile de 12 cm lungime, 8, 5 lime i 10 cm nlime. Aspectul exterior era comparabil cu un ciorchine de strugure, iar suprafaa de seciune cu un vaier datorit cavitilor chistice pline cu o substan gelatinoas galben sau roiatic. Cazul 3. Femel de ras comun n vrst de 6 ani, a prezentat o formaiune nodular cu diametrul de 5 cm localizat n M5 lanul drept, relativ bine circumscris, avnd zone albicioase i dure i structuri cavitare cu coninut glbui. Aspecte microscopice. Mastopatia debuteaz i evolueaz n unitile lobulare alveole-ducte terminale (engl. terminal duct lobular unit sau TDLU) i se caracterizeaz prin hiperplazia de tip adenotic i dilataia chistic a unitilor, asociate cu dezvoltarea esutului fibros, colagenizare, hialinizare i metaplazie stromal. Coninutul chisturilor este variat fiind reprezentat de material proteic amorf sau din secreie glicoprotidic intens PAS pozitiv (fig. 3) n care se pot gsi celule epiteliale descuamate, lipofage cu citoplasma spumoas, picturi lipidice i grsimi saponificate, detritus celular, depozite de calciu, cristale negative romboidale de colesterol libere sau compactate sub form de tablete, rezultate din stagnarea secreiei i dezintegrarea lipofagelor. Dilataia saccular alveolar i ductular genereaz chisturile mici, multiple i adiacente, delimitate de esut conjunctiv dens care, prin ruperea pereilor despritori, conflueaz n chisturi mai mari (fig. 2). Acestea sunt cptuite cu celule epiteliale secretorii (luminale) monostratificate, prismatice, cubice sau atrofiate prin compresiune, dublate de celule mioepiteliale, formnd un tapet neted n forma nepapilar. n forma papilar, are loc hiperplazia epitelial cu pluristratificare (fig. 4) urmat de formarea unor proeminene intracavitare constituite din axe conjunctivo-vasculare ramificate, arborescente, acoperite cu epiteliu bimorfic ale crui celule luminale pot fi bogate n glicogen. n unele chisturi voluminoase hiperplazia epitelial poate fi parial sau complet disprut datorit descuamrii celulelor n cavitate.Se remarc prevalena net a celulelor mioepiteliale n procesul proliferativ; plasate ntre celulele epiteliale secretorii i membrana bazal, frecvent vacuolizate, prin multiplicare excesiv pot genera noduli adenomioepiteliomatoi stromali sau intrachistici. n interstiiul tumorii, la periferia chisturilor se gsesc numeroase mononucleare (monocite-macrofage, limfocite, plasmocite), frecvente hemosiderofage, dar i celule gigante multinucleate care sugereaz deversarea
200
coninutului chisturilor n strom i iniierea unor reacii inflamatorii de tipul granulomului de corp strin.
Fig. 2. Mastopatia fibrochistic. Conglomerat de chisturi. HEA x 40
Fig.3. Conglomerat de chisturi cu secreie. PAS x 40
Fig. 4. Hiperplazie epitelial intrachistic. PAS x 40
Fig. 5. Metaplazie cartilaginoas stromal. Pappenheim x 100
n unele cmpuri (cazul 1), stroma tumorii conine zone de metaplazie cartilaginoas, bazofil n HEA, PAS pozitiv i metacromatic la MGG i Pappenheim (fig. 5). CONCLUZII 1. Mastopatia sclerochistic a fost identificat la trei femele de ras comun n vrst de 6-9 ani, leziunile de dimensiuni mari (ntre 5 i 18 cm) fiind localizate n mamelele caudale, multiple ntr-un singur caz i caracterizate prin consistena chisturilor i a unor noduli mici, glbui, duri.
201
2. Microcopic, mastopatia se dezvolt n TDLU i se particularizeaz prin hiperplazia de tip adenotic a epiteliului bimorfic i dilataia chistic a unitilor lobulare, asociate cu colagenizare, hialinizare i metaplazie condroid stromal. 3. Hiperplazia epitelial marcat, topirea membranelor bazale i tendina de invazie a stromei, creterea raportului N/C i a indicelui mitotic, anizocarioza pledeaz pentru potenialul de transformare carcinomatoas a mastopatiei.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Manolescu N., Bolte S., Miclu I., 1993 - Oncologie veterinar, vol. II, Editura Ceres, Bucureti Misdorp W., 2002 - Tumors of the Mammary Gland. In. Tumors in Domestic Animals. 4 th Ed.,Iowa State Press Niculescu t., 1980 - Morfopatologia glandei mamare. n Moraru, I. (sub redacia) Anatomie patologic, Editura Medical, Bucureti Tavasoli F.A., Devilee P., 2003 - World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Tumours of the Breast and Female Genital Organs. IARC Press: Lyon Theilen H. Gordon, Madewell R. Bruce, 1978 Veterinary cancer Medecine, Second Edition, Lea & Febiger, Philadelphia,
202
ASPECTE HISTOPATOLOGICE N TUMORILE SPONTANE LA CINE

HISTOPATHOLOGICAL ASPECTS IN SPONTAN TUMOURS IN DOGS
M. COMAN, I. OLARIU-JURCA, A. STANCU, D. ROOGA U.S.A.M.V.B. Timioara We investigated histologically 54 tumours in dogs, taken from animals within Timioara. Our researches aimed at the incidence of spontan neoplasms, their major locations depending on breed, sex, age, and also their histopathological forms. Benign epithelial tumours (adenoma, papilloma) seem to be more numerous (54.54%), while the benign mesenchymal tumours (fibroms, leiomyoma) are slightly reduced (45.45%). Regarding malign tumours, the proportion between epithelial tumours (carcinoma, adenocarcinoma) and mesenchymal tumours (sarcoma) is categorically in the favour of the epithelial ones (81.25%). The degree of malignity of the tumours diagnosed histologically does no always corelate with the macroscopical aspects, this aspect being more evident in the case of adenocarcinoma.
Key words: dog, tumours, organs, histopathological forms.
Procesul neoplazic se caracterizeaz prin elemente constant comune majoritii tumorilor, cum ar fi comportamentul biologic, anatomie, proliferare necontrolat, invazivitate i metastazare, formarea de clone celulare noi i ireversibilitate. O alt serie de proprieti comune sunt cele morfologice, ncepnd cu aspectele moleculare i ultrastructurale, pn la aspectul histopatologic i macroscopic al esutului neoplazic (5, 6, 7, 8). Investigaiile ntreprinse au avut drept scop urmrirea incidenei neoplasmelor spontane pe raza municipiului Timioara, a principaleleor localizri n funcie de ras, sex sau vrst, precum i formele histopatologice ale acestora. MATERIALE I METODE
Investigaiile prezentei lucrri au fost efectuate pe 54 tumori din diverse esuturi i organe la cine de pe raza Municipiului Timioara. Pentru examen histopatologic fragmentele prelevate din tumori au fost fixate n formaldehid soluie 10 %, a urmat tehnica la parafin, secionate la 6 micrometri i au fost colorate prin metoda tricromic Masson modificat de V. Ciurea cu albastru de metil pentru orientarea general, respectiv metoda Giemsa pentru detalii celulare. 203
REZULTATE I DISCUII Rezultatele obinute n urma citirii preparatelor histopatologice sunt consemnate n tabelele 1 i 2 privind diagnosticul tumorilor benigne i maligne la cine.
Tabelul 1 Tipul i localizarea tumorilor benigne la cine Nr. crt. 1 2 3 4 Denumirea tumorii Adenom Papilom Fibrom Leiomiom Nr. cazuri 9 3 6 4 22 Localizarea Mamel Pulmon Prostat Cutanat Uter Vagin Subcutanat Uter Vagin Nr. cazuri 5 3 1 3 1 1 4 2 2 22 Sex M 2 1 2 4 9 F 5 1 1 1 1 2 2 13 Vrsta ani 10-12 8-10 10-12 8-10 10-12 8-10 6-8 10-12 8-10
TOTAL
Din Tabelul 1 rezult c cele 22 tumori benigne se ncadreaz n grupa tumorilor epiteliale (54,54%): adenom (9 cazuri), papilom (3 cazuri), respectiv diferena (45,45%) aparine tumorilor mezenchimale: fibrom (6 cazuri), leiomiom (4 cazuri). Se poate deduce faptul c n cazul tumorilor benigne se nregistreaz o evoluie relativ asemntoare la cele dou sexe, existnd o inciden maxim la aceeai categorie de vrst (8-12 ani). Cu alte cuvinte, frecvena apariiei tumorilor benigne nu este influenat de sex ci, n principal, de vrst. Adenomul este tumora benign a epiteliilor glandulare; dup organizarea celulelor hiperplaziate am identificat mai multe tipuri de adenoame: compacte, tubulare, chistice i papilifere. A fost diagnosticat n 9 cazuri: mamela (5 cazuri); pulmonar (3 caz) i prostat (1 caz). Papilomul, tumora benign epiteliilor pavimentoase stratificate de tip cornos, evolueaz prin trei tipuri de papiloame: hipercheratozice, acantozice i fibropapilomul. A fost diagnosticat n trei cazuri la nivelul pielii, papilomul acantozic. Fibromul, tumora benign a esutului conjunctiv, a fost diagnosticat de noi n structurile genitale la cele. n ambele localizri tumorile au fost alctuite din fibre conjunctive organizate sub form de fascicule orientate n toate direciile. Leiomiomul, tumora benign a esutului muscular neted, s-a diagnosticat n uter i vagin. Este constituit din fibre musculare netede inegale dispuse n fascicule sau cu orientri diferite.
204
n Tabelul 2 sunt expuse tipul i localizarea tumorilor maligne la cine. Aprecierea malignitii unei tumori, n funcie de origine (ncadrare histopatologic) se face dup mai multe aspecte legate de morfologia celulelor (aspectul nucleului, uniformitatea celular, prezena sau absena membranelor bazale, tipul de cretere, frecvena diviziunilor i atipiilor de diviziune, raportul nucleocitoplasmatic etc.).
Tabelul 2 Tipul i localizarea tumorilor maligne la cine Nr. crt. 1 2 3 4 5 Denumirea tumorii Adenocarcinom Carcinom solid Carcinom folicular Carcinom scuamos Sarcom Localizarea Mamel Prostat Mamel Tiroid Cutanat Mamel Subcutanat Testicul esut conj. Nr. Cazuri 16 1 2 1 3 1 3 2 3 32 Sex M 1 2 3 2 3 11 F 16 2 1 1 1 21 Vrsta ani 7-12 10-11 10-12 9-10 6-8 4-6 8-10 6-7 Metastaze 2 2 -
6 Seminom 7 Fibrosarcom TOTAL
Din tabelul de mai sus rezult c 59,37% din tumorile maligne au localizare mamar, n timp ce diferena (40,62%) au localizri diferite (tiroid, testicul, esut conjunctiv, subcutanat, etc.). Frecvena tumorilor maligne n cazul femelelor crete odat cu vrsta, pn n jurul vrstei de 12 ani, urmnd apoi o descretere mai mult sau mau puin lent. n cazul tumorilor maligne la masculi, incidena este sczut pn n pragul vrstei de 4 ani, dup care aceasta crete, i se menine la valori apropiate. Adenocarcinoamele, tumori maligne ale epiteliilor glandulare, difer prin aranjamentul celular i raportul dintre strom i parenchim. Adenocarcinoamele identificate de noi se ncadreaz n tipurile tubular i papilar. Metastazele ntlnite n dou cazuri au afectat limfonodurile lomboaortice i inghinale. Carcinomul bronhoalveolar are o structur alveolar cu aspect glandular. Histoarhitectonica pstreaz linii celulare tumorale att din alveole ct i din bronhiile terminale. Adenocarcinomul folicular se identific microscopic uor datorit dispunerii celulelor n foliculi. Celulele tumorale sunt relativ mari, formnd foliculi de diferite dimensiuni, forme i coninut coloid. Leiomiosarcomul, tumora malign a fibrelor musculare netede, se caracterizeaz prin fascicule celulare ai cror nuclei apar mult alungii, au indicele mitotic ridicat i uneori cu microfocare de necroz.
205
Carcinomul cu celule scuamoase este un neoplasm cu nalt grad de malignitate, frecvent asociat cu dermatoza solar, fiind tumora celulelor stratului malpighian din epiderm. Se recunoate dup prezena perlelor cheratozice, n centrul crora se observ cheratina lamelar pe cale de necroz. Fibrosarcomul este tumora malign a fibroblastelor, dar cu participarea i a altor celule mezenchimale, respectiv a colagenului. Se constat o structur format din fibroblaste cu aspect fusiform sau/i stelat, separate prin fascicule de colagen puin abundent. Sarcomul rotundocelular se recunoate dup parenchimul tumoral alctuit din celule rotunde mici, cu nucleu mare, bogat n cromatin, iar citoplasma srac, din care cauz hiperplaziile tumorale par a fi formate numai din nuclei. Stroma este foarte redus. Seminomul, tumora malign a parenchimului testicular, a fost identificat sub dou forme: seminom intratubular i seminom de tip difuz. Adenocarcinomul de prostat la cine evolueaz insidios i cu malignitate crescut. Se dezvolt din epiteliul ductelor sau al acinilor. Se recunoate dup hiperplaziile de celule rotunde sau ovale ce se dezvolt pe o fin tram conjunctiv n lumenul alveolelor glandulare (tipul alveolar papilar). Datele obinute de noi privind incidena tumorilor spontane la cine n perioada investigat corespunde cu datele prezente din literatura de specialitate (1, 2, 3, 4, 5). Gradul de malignitate al tumorii diagnosticate histopatologic nu se coreleaz uneori cu aspectele macroscopice, mai evident n cazul tumorilor maligne epiteliale, adenocarcinoame. Datorit numrului mic de cazuri investigate, nu s-a putut stabili o relaie direct ntre inciden i anumite rase. Rezultatele comparative ale anchetelor epidemiologice efectuate n ultimii 30 de ani, arat o schimbare spectaculoas a localizrilor n diferite esuturi i regiuni anatomice. Astfel, dac n anul 1968 tumorile pielii la cine erau cele mai frecvente (28,1%), astzi acestea au fost depite de cele cu localizri mamare care au atins procente ntre 57% (perioada 1979 1984) i 45% n perioada 1987 1989. Femelele sunt afectate ntr-un procent dublu fa de masculi datorit incidenei mai mari a localizrilor mamare, uterine i vaginale (1, 4). CONCLUZII Histopatologic din totalul de 54 de tumori spontane la cine: 20 cazuri au fost diagnosticate la sexul mascul (37,03%); 34 cazuri au fost diagnosticate la sexul femel (62,96%). Tumorile epiteliale benigne (adenoame, papiloame) par a fi mai numeroase (54,54%) n timp ce tumorile mezenchimale benigne (fibroame, leiomioame) sunt uor mai reduse (45,45%).
206
n cazul tumorilor benigne se nregistreaz o evoluie asemntoare la cele dou sexe. Cu alte cuvinte, frecvena apariiei tumorilor benigne nu este influenat de sex ci, n principal, de vrst. n cazul tumorilor maligne raportul dintre tumorile epiteliale (carcinoame, adenocarcinoame) i tumorile mezenchimale (sacroame, fibrosarcoame) este net n favoarea tumorilor epiteliale (81,25%). Frecvena tumorilor maligne n cazul femelelor crete odat cu vrsta pn n jurul vrstei de 12 ani. n general, tumorile diagnosticate au fost ncadrate n categoria neoplaziilor maligne (59,25%).
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Baba A.I., 2002 - Oncologie comparat, Ed. Academiei Romne, Bucureti, 49-87. Dorn C.R., 1976 Epidemiology of canine and feline tumors, J.Am.Anim. Hosp. Assoc., 12, 307-334. Jubb, K.V.F., Kennedy P.C., Palmer N., 1993 Patologhy of Domestic Animals, vol. I-III, Acad. Press, New-York. Manolescu N., Bolte S., 1991 Oncologie veterinar, vol. I i II, Ed. Ceres, Bucureti, 9-51. McGavin M.D., Carlton W.W., Zachary J.F., 2001 - Special veterinary pathology, Ed. Mosby, USA. Owen L.N., 1980 TNM clasification of tumours in domestic animals, OMS Geneva Paul, I., 1990 - Morfopatologia aparatelor i a sistemelor organice, Bul. Inf. Soc. Med,Vet. nr. 23-24, Bucureti. Slauson D.O., Cooper B.J., 2002 - Mechanisms of disease, Ed. Mosby, USA. Withrow, S.J., MacEwen, E.G., 2001 - Small animal clinical oncology, Ed. Saunders, USA.
207
MORPHOPATHOLOGICAL CHANGES IN THE INFECTIOUS PERITONITIS IN CAT AND ASPECTS RELATED TO THE HISTOPATHOLOGICAL DIAGNOSIS OF THIS DISEASE
I. OLARIU1, M. COMAN1, AL. LAZU1, S. LAZU2, A. STANCU1 1 U.S.A.M.V. Timioara 2 Bioveti Farm Timioara Cat infectious peritonitis or feline infectious peritonitis (angeitis with coronavirus or immune mediated coronoviral vasculitis) is a progressive and mortal disease that affects domestic cats and also the wild free or under captivity felines (1, 2, 7, 9). This disease is determined by one or many coronaviruses antigenic similar with the virus of swine transmissible gastroenteritis, canine coronavirus and the virus 229E of human bronchitis (Padersen et al., 1978) (10). Cats of all ages are receptive to this disease, especially those with the age of 6 months - 2 years, with a 100% mortality in the case of the perfectioned breeds and of the cats from breeding units. Its clinical signs are anaemia, weakening, bad general status and peritonitis (3, 4, 7, 11, 12). According to the way of infection and the immune status of the infected cats, there are two forms or types of this disease: the effusive form (moist, exudative) and the non-effusive form (dry, granulomatous) (1, 5, 6, 7, 10, 11).
Key words: cat, infectious peritonitis, lesions

The researches were carried out during October 2005 February 2006, through the necropsy of five cat bodies (four Birmanese and a common breed one), with the ages between 6 months and 2 years, that presented gingival ulcers, jaundice and abdominal distention, successive to a serious serofibrinous peritonitis. We took samples from these bodies from lungs, cord, liver and mesenter. The samples were fixed in formaldehyde solution 10%, processed withthe help of the paraffin technique, sectioned at 6 micrometres and coloured with the trichromic Masson method modified by V. Ciurea with methyl blue (H.E.A.). After the examination and interpretation of the preparations histopathologically obtained, we took some microphotos to illustrate the most specific histopathological changes.
208
RESULTS AND DISCUSSIONS Necropsically, within the peritoneal cavity we observed the presence o a bad-senelling liquid, yelow-red, in a quantity of 800 ml, in which the rohole gastrointestinal mass was incorporated serohemorrhagic peritonitis (fig. 1) Lungs Macroscopically, both lungs had increased volumes, weight and a mosaiclike aspect, the pleura was tensioned, shiny and covered with fibrine on some areas. The section surface was dry, mat, finely granular (rough), with colour differences between the densed tissue and the bronchial apparatus, this one having a lighter shade than the red-brown lung background (marmorate aspect) and a positive docimasia the fibrinous pleurobronchopneumonia (fig. 2).
Fig. 1. Cadavru pisic- PIF (effusive form) Serohemorrhagic peritonitis
Fig. 2. Fibrinous pleurobronchopneumonia PIF, effusive form
Microscopically, we observed the hyperemia of the alveolar capillars, intraalveolar fibrino-haemorrhagic exudate, within the bronchic and peribronchic lumen. The fibrino-haemorrhagic and leukocytary exudate is consisted of a fibrine network in whose loops are present numerous hematia and/or leukocytes and descuamated alveolar cells that removes completely the air from alveolas. There are many areas with compensatory alveolar pulmonary emphysema adjacent to the focuses of pulmonary compaction. These aspects are concordant to the croupous pneumonia the stage of red hepatisation (fig. 3). Cord Macroscopically, in three cases, the pericardic sack was slightly relaxed due to the serofibrinous exudate. The miocard was whitish-grey, not glistering, with a mat aspect and friable consistence, and the right cord was flabby. Microscopically, we observed fragmentations and dissociations of the miocardic fibres; basophil granulations of various dimensions within the sarcoplasm; plasmexodia, perivascular leuko- and erythrodiapedesis.
209
Liver Macroscopically, it had an increased volume and weight, the colour yellowochre at surface and upon the section, and a friable consistence. The capsule was tensioned, shiny and covered in some places with greish-yellow membranes of fibrine, easily detachable fibrinous perihepatitis and hepatic steatosis (fig. 4).
Fig. 3. Croupous pneumonia the stage of red hepatisation - PIF ,effusive form. Col. HEA x 100
Fig. 4. Fibrinous perihepatitis and hepatic steatosis PIF, effusive form
Fig. 5. Nodular mesenteritis-PIF - effusive form
Fig. 6. Pyogranuloma mesenteritis PIF Col. HEA x 200
Microscopically, we observed granulations and vacuoles optically empty within the hepatocyte cytoplasm, the congestion of the centrolobular vein, of the perilobular sanguine vessels and of those within the portobiliar space, the ectasy of the sinusoid capillars; the presence of some optically empty areas of various forms and sizes within the structure of the hepatic cordons hepatic necrosis.
210
Mesentery Macroscopically, we observed the presence of numerous nodular systems, with the size of a millet grain, greish-yellow, uniformly distributed upon the mesenteric surface nodular mesenteritis (fig. 5). Microscopically, we identified mesothelial hyperplasia and neoformation saguine capillars an rare nodules consisted of neotrophil cells, big monocyte cells, plasmocytes and lymphocytes, which are delimited by a slight fibrilar mesenchimal response pyogranuloma (fig. 6). CONCLUSIONS Infectious peritonitis (the exudative, moist or effusive form) was identified necrospically and histopathologically in five domestic cats of various breeds and with ages between 8 months and 2 years old. Necrospically, we observed: gingival ulcers, jaundice and abdominal distension; fibrinous pericarditis, protidic miocardosis and right cardiac dilatation; fibrinous pleurobronchopneumonia the stage of red hepatisation; fibrinous hepatitis, steatosis and miliar hepatic necrosis; nodular mesenteritis. Histopathologically, we observed: fibrinous poli serositis (pleuritis disease, pericarditis and perihepatitis); vascular, degenerative and necrotic changes of various cardic-hepatic intensities and mesenteric pyogranuloma. The histopathological diagnosis of infectious peritonitis, the effusive form, was determined taking into account the serious vascular changes present within the examined tissues and organs.
BIBLIOGRAHPY
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Baba A.I., 1996 - Diagnostic necropsic veterinar, Ed. Ceres, Bucureti. Ctoi C., 2003 Diagnostic necropsic veterinar, Ed. Academic Pres, Cluj-Napoca. Green C.F., 1998 Infectious Disiases of the Dog and Cat. Ilt edition, W.B. Saunders Company Philadelphia, London, Toronto, Montreal, Sydney, Tokyo. Horzinek M. http:/www, newman veterinary.Com/F.I.P. Peritonitis, p.d.f (accesat 06.03.2006). Jubb K.V.F., Kenedy P.C., Palmer N., 1993 Pathology of domestic Animals, vol. 1, 2, 3, Ed. Academic Press, San Diego, California, U.S.A. McGavin M.D., Cartlon W.W., Zachary J.F., 2001 Special Veterinary Pathology, Ed. Mosby, Inc, Missouri, U.S.A. Moga Mnzat, R. Coordonator, 2005 Boli virotice i prionice ale animalelor, ed. Brumar, Timioara. Olariu-Jurca I., 2006 Diagnostic necropsic i medicin legal veterinar, Ed. Brumar, Timioara. Paul I., 1982 Diagnostic morfopatologic veterinar, Ed. Ceres, Bucureti. Paul I. 1996 Etiomorfopatologie veterinar, vol. 1, Ed. All Bucureti. Vasiu C., 2003 Viroze i boli prionice la animale. Ed. Neremia Napocal. xxx http:/www. winnfelineheath. org/health/F.I.P. html (accesat 06.03.2006)
211
EFECTUL PRODUCTIV AL UNUI PREBIOTIC ASUPRA PERFORMANELOR PRODUCTIVE LA PUII BROILER DE GIN
THE PRODUCTIVE EFFECT OF A PREBIOTIC OVER THE PRODUCTIVE PERFORMANCES AT BOILER CHICKEN
D. SIMEANU, Gh. STAN, B. PSRIN U.S.A.M.V. Iai Pentru a stabili efectului productiv al prebioticului NUTRI-SURE DW1 asupra puilor broiler de gin s-au format dou loturi experimentale (E1 i E2), a cte 25 pui fiecare, i un lot martor (M) alctuit din 50 pui. Puii din loturile experimentale au primit n apa de but 2 respectiv 2,5, factor experimental, n perioada de via a puilor 1-21 zile i 1 respectiv 1,25 n perioada 22-35 zile. Utilizarea acestui prebiotic la puii broiler de gin a avut efecte benefice, n special n prima sptmn de via a puilor, determinnd sporuri de producie mai mari cu 3,2-4,08% mai ridicate la loturile experimentale fa de lotul martor. Consumul specific de hran a fost foarte puin influenat, diferenele fiind nesemnificative. Starea de sntate a fost corespunztoare, pierderile din efectiv nscriindu-se n limite normale pentru aceast categorie de animale.
Key word: broiler chicken; prebiotic.
MATERIAL AND WORK METHOD

The experiment was carried out within the Nutrition and Alimentation Biobasis from the Agricultural sciences and Veterinary Medicine Iasi on a total number of 100 broiler hen chickens that were divided in three lots, of which a witness lot (M) and two experimental lots. (E1 and E2) (tab.1). The purpose of this experiment was to establish the influence of the prebiotic NUTRI-SURE DW1 on the growth performances, the valorization of food and health state of the hen broiler chickens HUBBARD FLEX. The food administered was elaborated by FNC AviTop Tomesti, in three periods: 1 14 days, the starting period, 15-28 days, the growth period and 29-35 days, the ending period. The structure and the nutritive characteristics of the combined forages administered are presented in tab. 2. The experimented prebiotic is a mixture of formic, lactic and acetic acid, that acts selectively against some bacteria like: Campylobacter and Salmonella, reducing the pH from the stomach and the thin intestine, which determined a good health state and a good valorization of food. This preparation is not administered during the use of antibiotics. 212
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Table 1 Experimental schema Number of chickens /lot Experimental factor * 50 2 1-21 zile E1 35 25 1 22-35 zile 2,5 1-21 zile E2 35 25 1,25 22-35 zile Note: * acidifying NUTRI-SURE DW1, administered in water.. Table 2 Structure and the nutritive characteristics of the combined forages Raw Materials (%) Maize Soy groats Full Fat soy Maize gluten Barley Fish flour Molasses Monocalcic phosphate Calcium carbonate Wafolin Premix Rhodimet L-Lizin Salt Knob 50% BioPlus 2B Cycostat Cygro Kemzyme Ms dry L-Treonin Sodium bicarbonate Nutritive characteristics EM kcal/kg nc PB% GB% CB% Ca P disponibil % Ca/P L% M+C% Treonin% Starting 46,22 30,00 10,00 5,00 3,72 1,65 1,16 0,70 0,50 0,29 0,24 0,18 0,12 0,10 0,06 0,05 0,02 3215,41 24,00 7,06 3,82 1,00 0,50 2,00 1,44 1,09 0,93 Growth 49,45 22,00 17,53 4,50 2,00 1,74 1,39 0,50 0,20 0,14 0,27 0,10 0,05 0,06 0,05 0,02 3249,00 21,00 7,15 3,43 0,94 0,45 2,10 1,15 1,06 0,79 Finishing 40,21 12,97 26,67 4,00 10,00 2,00 1,46 1,26 0,60 0,39 0,03 0,18 0,08 0,05 0,10 3225,00 20,00 7,89 3,90 0,85 0,42 2,02 1,05 0,96 0,75 Lots Experimented period (days) M 35
213
RESULTS AND DISCUSSIONS The use of the product was benefic especially during the first period (1-7 days), when the weight increases were superior with 3,2% in the case of E1 lot respectively, 4,08% in the case of E2 lot, compared to lot M (tab. 3)
Table 3 The evolution of body weight The average weight at the beginning of the period (g) 1-7 zile M 42,35 E1 41,19 E2 41,05 7-14 zile M 164,32 E1 167,06 E2 167,99 14-21 zile M 435,12 E1 432,58 E2 436,92 21-28 zile M 842,73 E1 817,23 E2 816,69 28-35 zile M 1329,67 E1 1327,91 E2 1273,78 Lots The average weight at the end of the period (g) 164,32 167,06 167,99 435,12 432,58 436,92 842,73 817,23 816,69 1329,67 1327,91 1273,78 1856,49 1866,21 1762,74 Weekly daily gain (g) 17,42 17,98 18,13 38,68 37,93 38,41 58,23 54,95 54,25 69,56 72,95 65,29 75,26 76,90 81,58 Cumulated increase (g) 121,97 125,87 126,94 392,77 391,39 395,87 800,38 776,04 775,64 1287,32 1286,72 1232,73 1814,14 1825,02 1803,79 % comp. to M +3,20 +4,08 -1,38 +0,79 -3,04 -3,09 -0,60 -4,24 +0,60 -0,57
During the period 7-14 days, the results were different thus, the E1 lot registered a decrease of weight with 1,38% while E2 lot registered an increase of 0,79% in contrast with the comparison lot. During the period 14-28 the results from the experimental lots were inferior to lot M, fact that indicates that in this period the product is not recommended. Starting the 22nd day the use doses of the acidifying were reduced at half (1% at E1 and 1,25% at E2). In the last week, the E1 lot registered an increase of +0,6% compared to lot M, while lot E2 had a decrease of 0,57%, compared to M, which can be considered inconclusive. We appreciate the fact that the product had a visible positive effect in the first period of age having a stimulatory effect on the enzymatic secretion, but especially on the gastric and pancreatic lipase synthesis.
214
The food was well used in all the experiment lots, which was due to the special quality of the combined forages used, the differences between the three lots being insignificant (tab. 4).
Table 4 The food consume The total Number of consume of Lots chickens combined forage /lot (kg/lot) M 159,23 48 E1 83,21 25 E2 79,25 24 Average consume daily/head (g) 94,77 95,10 94,34 Av. Daily gain (g) 60,09 60,45 59,74 IC (kg n.c./kg increase) 1,577 1,573 1,579 % comp. to M -0,25 +0,12
The health state was similar, the losses registered being found in the normal limits for this category of birds, but we still noticed a highly increased mortality at the witness lot compared to the two experimental lots (tab. 5).
Table 5 The evolution of discrepancies with the group Lots M E1 E2 The number of chickens at the beginning of the experiment 50 25 25 Total losses The no. of chickens of at the end of the experiment 48 25 24 4% Losses (chickens) 3 0 1 % 6,25 4,00
CONCLUSIONS We appreciate the fact that the influence of the acidifying was manifested especially in the first week of age, when the increases were 3,2-4,08% higher at the experimental lots compared to the witness lot. The specific food consume was very little influenced by the NUTRI-SURE DW1 prebiotic, the differences being significant. The health state was similar, the collectivity losses being found in the normal limits for this category of animals.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. Stan Gh., I.M. Pop, 1997 The alimentation and nutrition of animals, Junimea Publishing House, Iasi. Simeanu D., 2004 Biostimulators in the bird alimentation, Alfa Publishing House, Iasi. Stan Gh., D. Simeanu, 2005 - Animal nutrition, Alfa Publishing House, Iasi. Stan Gh., D. Simeanu, 2005 The bird alimentation, Alfa Publishing House, Iasi.
215
ASPECTE HEMATOLOGICE, BIOCHIMICE I IMUNOLOGICE CONSECUTIV SUPLIMENTRII HRANEI CU SEL-PLEX I ZN-BIOPLEX LA VACILE LACTANTE
THE HEMATOLOGICAL, BIOCHEMICAL AND IMMUNOLOGICAL ASPECTS TO LACTATING DAIRY COWS FEEDED WITH ORGANIC ZINC AND SELENIUM
D. CURC1, A. LIONIDE2, ADriana ORANU3, Ioana CONSTANTINESCU3, M. SAMARINEANU4, M. CORNIL1 1 U.S.A.M.V., Bucureti 2 I.C.P.B.M.V., Bucureti 3 I.D.S.A., Bucureti 4 S.N. Institutul Pasteur Recently trace minerals have been given more attention because of their implication in several disorders that include heart disease, cancer, early aging, malabsorption and immune disorders. Several elements play important roles in controlling and catalyzing chemical reactions that are vital for living organisms. Essential trace elements are used for a multitude of purposes that include being the backbone of energy exchange systems, controlling free radicals and holding together proteins. Less specific clinical signs indicating a lack of Selenium and vitamin E relate to unthriftiness of livestock, including poor growth, diarrhea and susceptibility to disease. Are also described the hematological and biochemical modifications in dairy cows feeded with Sel-Plex and Zn-Bioplex. It was evaluated the efect of feeding of organic sources of zinc (as Zn-Bioplex) and selenium ( as SelPlex ) to lactating dairy cows on lymphocyte reactivity. The experiment show, that feeding Sel-Plex increase phytohemagglutinin lymphocyte stimulation index with 32,4%, Zn-Bioplex with 56,7% and both Sel-Plex and Zn-Bioplex with 67,5%. Our results demonstrate the positive influence of this supplemental zinc and selenium sources to lactating dairy cows on hematological parameters and lymphocyte transformation involved in cell-mediated immunity response.
Key words: Dairy cows, Zn-Bioplex, Sel-Plex, biochemical modification, cell-mediated immunity
Zincul i seleniul sunt necesare att pentru buna cretere i dezvoltare a plantelor, ct i pentru animale, orice celul conine o anumit cantitate din aceste bioelemente ce intervin n numeroase procese metabolice, aflndu-se totodat n interrelaii sinergice sau antagonice cu alte bioelemente (2, 6, 7, 8). Zincul are un rol important n stimularea secreiei de insulin i implicit n reglarea metabolismului glucidic, intervine n procesele de reproducie, a celui de protecie
216
a vitaminei B1 i hormonilor TSH i LH, favoriznd fecundarea, regleaz concentraia de vitamin A n plasma sanguin i n mobilizarea ei din ficat (4, 10, 11, 16, 17). Este implicat de asemenea, n sinteza keratinei, a acizilor nucleici din piele, precum i n sinteza colagenului. Particip la reglarea echilibrului hidroelectrolitic din organism, prin schimbul de cationi/anioni. Bovinele, n general, i n special vacile pentru lapte au nevoie de zinc suplimentar n hran pentru asigurarea unei funcii normale a organismului, fie n cazul unui aport sczut de zinc din ingredientele hranei, fie datorit prezenei factorilor antagonici care duc la scderea biodisponibilitii acestui bioelement (3, 9, 13). Seleniu era considerat n prima jumtate a secolului XX, drept un agent toxic, ce provoca tulburri ale membrelor i moartea animalului consecutiv consumului de plante bogate n acest bioelement, ulterior pe baza cercetrilor experimentale i a observaiilor clinice, a fost considerat drept un nutrient esenial, fiind un component al enzimelor implicate n protecia antioxidant, n metabolismul hormonilot tiroidieni etc. (18, 19, 20). Seleniu joac un rol important n creterea tineretului i n fertilitate la bovine (12, 15), activnd sinergic cu vitamina E, substituindu-se cu succes n prevenirea i tratamentul mai multor entiti morbide care au la baz stresul oxidativ. Activitatea enzimelor glutationperoxidazice (GSH-Px) depinde de nivelul seleniului furnizat de hran, influennd mpreun cu vitamina E procesele energogene respectiv sistemele enzimatice importante pentru respiraia celular intervenind n stabilizarea membranelor lizozomale i al esuturilor bogate n glutationperoxidaz. Dar, trebuie s se in cont de faptul c, seleniul are o aciune antioxidant de 500 2000 ori mai mare dect vitamina E (1, 5). Meninerea echilibrului antioxidant prooxidant n tractul digestiv, n snge i esuturi prin utilizarea seleniului organic, este cheia prevenirii declinului performanei productive i reproductive la animale, n condiii de stres asociate cu sistemele de cretere intensiv (8, 14, 18, 19). Sel-Plex-ul i-a dovedit avantajele, comparativ cu alte surse de seleniu, deoarece furnizeaz acelai amestec de selenoaminoacizi aflai n ingredientele naturale precum: grul, orzul, soia, porumbul etc. Plecnd de la aceste considerente, s-au investigat efectele surselor organice de zinc i seleniu (Bioplex Zn i Sel-Plex) prin suplimentarea hranei vacilor pentru lapte, asupra unor indici hematologici, biochimici i imunobiologici (prin aprecierea activitii limfocitelor T, cu ajutorul testului de transformare blastic, considerat ca un indicator al dezvoltrii rspunsului imun). MATERIAL I METOD
Cercetrile experimentale au fost efectuate un numr de 20 vaci pentru lapte, rasa BNR, aflate n lunile a treia i a patra de lactaie, avnd o producie medie de 24 l lapte/zi, iar starea de ntreinere fiind corespunztoare. Animalele 217
au fost repartizate n 4 loturi a cte 5 vaci/lot, care au beneficiat de acelai regim furajer. Suplimentarea cu zinc organic i respectiv seleniu organic s-a realizat prin folosirea produselor comercializate de firma Alltech Romnia i anume: BioplexZn i Sel-Plex, astfel: lotul M (martor) care nu fost suplimentat cu cele 2 bioelemente; lotul E1 suplimentat cu 5 g Sel-Plex, echivalentul a 4,8 mg seleniu/vac/zi; lotul E2 suplimentat cu 1,2 g Bioplex-Zn, echivalentul a 180 mg Zn/vac/zi; lotul E3 suplimentat cu 5 g Sel-Plex (echivalentul a 4,8mg seleniu/vac/zi) i 1,2 g Bioplex-Zn (echivalentul a 180 mg Zn/vac/zi). Durata experimentului a fost de 45 de zile, la sfritul acestei perioade s-au recoltat probe de snge pentru efectuarea investigaiilor de laborator i anume: pentru examenul hematologic sngele a fost recoltat pe EDTA, iar determinrile s-au fcut la un aparat automat Coulter-Counter, ACT 5 diff CP-Beckman; investigaiile biochimice s-au efectuat prin utilizarea analizorului de biochimie umed Eppendorff ECOM 1022, folosindu-se reactivii furnizai de Linear Chemicals-Spania; s-au recoltat probe de snge pe heparin pentru determinarea indicelui de stimulare (IS) a limfocitelor, folosindu-se testul de transformare blastic a limfocitelor cu PHA (fitohemaglutinin).
REZULTATE I DISCUII Rezultatele obinute n urma investigaiilor hematologice au evideniat tendina de scdere a constantelor eritrocitare directe: eritremia, hemoglobinemia i hematocritul. Scderile au fost marcate la lotul E1 suplimentat cu Sel-Plex; iar la lotul E2 suplimentat cu Zn-Bioplex i lotul E3 suplimentat cu Sel-Plex + ZnBioplex, scderile au fost mai reduse. n schimb, constantele eritrocitare derivate au prezentat variaii n sensul creterii, fie al scderii nesemnificative. Leucocitemia la vacile din lotul E1 a prezentat o cretere fa de vacile din lotul martor cu 5,19%, iar la cele din lotul E2 creterea a fost nesemnificativ, n timp ce la vacile din lotul E3 s-a constatat o scdere de 10,90%. Trombocitemia la vacile din loturile experimentale a prezentat o scdere marcat la lotul E1 (21,50%); la E2 scderea a fost de 31,46%, iar la E3 scderea a fost doar de 30,30% (tabelul 1). Valorile VSH-ului la 24 h au evideniat creteri marcate la vacile din lotul experimentale, ndeosebi la lotul E2 unde creterea a fost de 95,10% fa de vacile din lotul martor, urmat de vacile din lotul E1 unde creterea a fost de 82,51% i E3 unde creterea a fost de 54,54% (fig. 1.). La nivel biochimic s-au constatat modificri ale albuminemiei care a prezentat creteri la vacile din loturile E2 i E3, n timp ce la E1 s-a evideniat o scdere, n sens invers s-au modificat valorile globulinemiei (Tabelul 2). Uremia a prezentat scderi vacile din lotul E1 i E3, n timp ce la vacile din lotul E2 s-a remarcat tendina de cretere. Creatininemia a crescut semnificativ la vacile din loturile experimentale comparativ cu cele din lotul martor, la E1 creterea a fost de 30,18%.
218
219
60 50 40 30 20 10 0 Martor
52,2
55,8
44,2 28,6
Suplimentat cu Sel-Plex
Suplimentat cu Zn-Bioplex
Suplimentat cu Se si Zn
Fig. 1. - Modificrile VSH-ului dup 24 h, la bovinele crora li s-au administrat per os seleniu i zinc, form organic.
Investigaiile privind coninutul unor bioelemente (calciu, magneziu, fosfor), au evideniat creteri ale calcemiei n special la vacile din lotul E3 (83,52%), creteri ale magneziemiei la vacile din loturile E2 i E3, n timp ce la vacile din lotul E1 scderea a fost de 50%. Raportul Ca/Mg a evideniat creteri la vacile din loturile E1 i E3, n timp ce la cele din lotul E2 scderea a fost de 61,99%. Fosforemia a prezentat o tendin de cretere minim la vacile din loturile experimentale. La nivel enzimatic, s-a remarcat creterea GOT-ului la vacile din lotul E1 i E3, n timp ce la E2 s-a constatat o uoar scdere. GPT-ul a prezentat tendina de scdere la vacile din loturile E1 i E2 i uoar cretere la vacile din E3. Raportul GOT/GPT evideniaz creterea marcat la vacile din loturile E1 i E3. GGT-ul scade la vacile din loturile experimentale, ndeosebi la E3 unde scderea a fost de 45,46%. Fosfataza alcalin are tendina de scdere la vacile din lotul E2 i E3 n timp ce la E1 se observ o uoar cretere de 6,62% (tabelul 3). Rspunsul imun constituie n fapt o amplificare a funciilor celulelor anticorpoformatoare, consecutiv unor modificri foarte reduse n echilibrul homeostatic, ce debuteaz iniial prin reacii locale i apoi prin diseminarea efectorilor, extinzndu-se progresiv n ntreg organismul. Principalele celule implicate n rspunsul imun sunt cele prezentatoare de antigen i limfocitele, procesul de amplificare fiind bidirecional: macrofagele instruiesc limfocitele care prolifereaz i recruteaz mai multe macrofage n vederea amplificrii fenomenelor i restaurrii homeostaziei (Tizard, 1992).
220
221
Implicarea limfocitelor T n procesul de anticorpogenez se realizeaz prin proliferarea clonal n prezena macrofagelor, care elaboreaz un al doilea semnal i anume, interleukina 1 (IL-1), care este transmis prin contact direct celul la celul sau chiar la distan. De aceea, proliferarea limfocitelor T se poate face i n afara contactului cu macrofagele prin semnale constituite din mediatorii solubili eliberai de ctre acestea, fiind cunoscute sub denumirea de limfokine, ce particip alturi de semnalele elaborate de monocite, ce poart numele de monokine. Elaborarea acestor semnale poate fi modulat de echilibrul homeostatic al organismului, care vizeaz n primul rnd aportul de nutrieni: aminoacizi, glucide, lipide, vitamine i bioelemente. ntruct exist puine informaii privitoare la modularea transformrii blastice a limfocitelor T la bovine sub influena suplimentrii hranei cu Zn i respectiv Se sau ambelor, s-a efectuat prezentul studiu care ofer informaii demne de luat n seam. Loturile suplimentate cu Bioplex Zn i Sel-Plex au nregistrat o valoare medie a indicelui de stimulare a limfocitelor mai ridicat comparativ cu lotul de control M, astfel: n cazul lotului E1 s-a constatat o cretere a IS fa de lotul martor cu 32,4%, n cazul lotului E2 cu 56,7 %, lotul E3 nregistrnd o valoare cu 67,5% mai mare dect lotul martor (fig.2).
25 20 15 10 5 0 Martor
23 19.6 14.8
24.8
Suplimentat cu Sel-Plex
Suplimentat cu Zn-Bioplex
Suplimentat cu Se si Zn
Fig. 2. Indicele mediu de stimulare a limfocitelor tratate cu PHA la vacile de lapte suplimentate cu Bioplex Zn i Sel-Plex
222
De asemenea, se constat c lotul E3 (suplimentat cu Bioplex Zn i SelPlex) nregistreaz valoarea medie a indicelui de stimulare cea mai mare, 24,8 (cu 6,8% mai mare dect n cazul lotului E2 i cu 26% fa de lotul E1), urmat de lotul E2 cu o valoare a IS mediu de 23,2 (cu 18,3% mai ridicat dect n cazul lotului E1) i de lotul E1 cu o valoare medie a IS de 19,6. CONCLUZII 1. Modificrile hematologice la vacile a cror hran a fost suplimentat cu bioelemente, s-au caracterizat prin tendina de scdere a constantelor eritrocitare directe, ndeosebi la lotul E1, n timp ce, constantele eritrocitare derivate au prezentat variaii nesemnificative. Leucocitemia a prezentat o tendin de cretere, n timp ce trombocitemia, o tendin de scdere. 2. Modificrile biochimice au prezentat tendina de cretere a calcemiei i magnezemiei la loturile E2 i E3, n timp ce la lotul E1 s-a remarcat tendina de scdere; variaiile fosforemiei au fost nesemnificative. 3. La nivel enzimatic s-a remarcat creterea GOT-ului, scderea GPT-ului i fosfatazei alcaline. 4. Se remarc o cretere a indicelui de stimulare limfocitar indus de PHA: cu 32,% n cazul lotului E1; cu 56,7% n cazul lotului E2; cu 67,5% n cazul lotului E3 . 5. Rezultatele obinute n urma investigaiilor experimentale prin suplimentarea hranei cu Sel-Plex i Zn-Bioplex, evideniaz influenele favorabile asupra statusului indicilor hematologici, biochimici, precum i a imunitii determinate prin aprecierea indicelui de stimulare limfocitar.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Azizi E.S., Klesius P.H., Frandsen J.C., 1984 Effects of selenium on polymorphonuclear leucocyte function in goats. American Journal of Veterinary Research, 45, 1715-1719. Combs G.F. Jr., 1999 Chemopreventive mechanisms of Selenium. Medizinische Klimik, 94 (Suppl. 3), 18-24. Ghergariu S., 1981 Profilul metabolic la vaci; semnificaia clinic n stri de infertilitate. Rev. de Creterea Animalelor, nr. 2. Ghergariu S. i col., 1984 Indicatorii sanguini ai sntii hepatice la taurine. Relaii morfofuncionale la vaci negestante, nelactante. Revista Creterea Animalelor, nr. 7. Gutzwiller A., 1998 Erythrocyte resistance to oxidative damage and leucocyte capacity to reduce nitroblue tetrazolium in selenium deficient cattle. Zentralblatt fr Veterin rmedizin Reihe A 45 (5), 271 278. Harris B. Jr., 2003 The effcet of feeding zinc proteinate to lactating dairy cows. University of Florida, Gainesville, USA. Hemken R.W., Harmon R.L., 1998 Selenium for dairy cattle; A role for organis selenium. Feed Componuder., October, 22 24.
223
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. Kohrle J., Gartner R., 2000 Selenium in biology. Facts and medical perspectives. Biol. Chem., 381, 849 867. Lionide A., Curc D., Samarineanu M., 2005 Modificrile reactivitii limfocitare la vacile de lapte consecutiv suplimentrii raiei cu forme organice de zinc i seleniu. Lucrri tiinifice, seria C, XLVIII, 212 218. Lowe J.A., 2003 An investigation into the metabolism of supplemental protected zinc with reference to the use of isotopes. Gilbertson and Page Ltd., UK, Nottingham University, Leicestershire, UK. McDowel L.R., 1992 Minerals in Animal and Human Nutrition. Academic Press Inc., Harcourt Brace Jovanovich Publishers, San Diego, CA, USA. Mihai D., 1996 Boli de nutriie i metabolism la animale. Ed. Ceres, Bucureti. Reffett J.K., Spears J.W., Brown T.T., 1988 Effect of dietary selenium on the primary and secondary immune response in calves challenged with infectious bovine rhinotracheitis virus. Journal of Nutrition, 118, 229 235. Rotruck J.T., Pope A.L., Ganther H.E., Swanson A.B., 1973 Selenium: biochemical role as a component of glutathion peroxidase. Science, 179, 588 590. Schrauzer G.N., 2000 Selenomethionine: a review of its nutritional significance; metabolism and toxicity. J. Nutr., 130, 1653 1656. Spain Jim, Harris Barney Jr., 1997 Le rle du Zinc dans làlimentation des vaches laitires. Feedings Times, vol. 2, no. 1, p. 17. Spears J.W., 2000 Micronutrients and immune function in cattle. Proc. Nutrition Society, 59, 1 8. Surai K.P., Surai P.F., Speake B.K., 2003 Antioxidant prooxidant balance in the intestine. Food for though. Nutritional Genomics and Functional Foods, vol. 1, 51-70. Surai P.F., 2002 Antioxidant protection in the intestine: a good beginning is half the battle. Nutritional Biotechnology in the Feed and Food Industries, 301-321. Underwood E.J., Suttle N.F., 1999 Selenium. In the Mineral Nutrition of Livestock, CAB International, Oxon, 421 475.
224
OBSERVAII PRIVIND VARIAIILE PROFILULUI HEMATOLOGIC LA OVINE CU FASCIOLOZ

ON THE VARIATIONS OF THE HAEMATOLOGICAL PROFILE IN OVINES WITH FASCIOLIASIS
Geta PAVEL U.S.A.M.V. Iai E. PURICE CSV Vidra, jud.Vrancea Haematological measurements on a number of 35 adult sheeps (3-6 years old) from a herd of ovines infested with Fasciola hepatica took place in October 2005 when the beginning phase of the chronic fascioliasis occurred. Results emphasized a small towards medium anaemia in all investigated animals (Hb, Ht, E showed values under the inferior limit of the species). The anaemic morphologic type proved by VEM and CHEM modifications was variable: macrocytic hypochromic, of reactive type (with reticulocyte within the peripheral blood); macrocytic normochromic, due to the deficit hepatic synthesis of the transport protein B12; normocytic normochromic, typically to an insufficient erythrogenese or to the lifetime reduction of the erythrocytes. Leukogram emphasized different leukocytary reactions: sometimes moderate neutrophily with a left shift of the nuclear index, accentuation of the lymphopoiesis with the presence of the lymphoblasts and active lymphocytes in the peripheral blood; other times neutropenia with lymphocytose; and in other cases eosinophilia. No leukocytosis occurred, although the total number of circulating leukocytes showed values close to the superior limit of the species, while the number of the trombocytes was close to the inferior limit of the normal values.
Key words: fascioliasis, sheeps, anaemia, leukocytary reaction, eosinophilia
La ovine, strile anemice sunt relativ frecvente. In afar de anemiile careniale, datorate aportului insuficient de proteine, vitamina B12, Fe, Cu, Co, ovinele prezint anemii posthemoragice n cursul invaziilor parazitare, cnd se produc leziuni traumatice ale vaselor de snge (9). Fascioloza ovin nu ntmpltor este denumit i anemie verminoas sau anemie de iarn. Boal cu caracter sezonier, evolueaz acut n perioada septembrie-octombrie, sau cronic, cu o faz de debut n septembrie-noiembrie, o faz de stare n decembrie-ianuarie i o faz final n februarie-martie (3, 8). Anemia se manifest n toate formele de evoluie i n toate stadiile fasciolozei. Fasciolele tinere, aflate n migraie, sap tunele n parenchimul hepatic producnd hemoragii apoi fibroz. Formele adulte de Fasciola hepatica,
225
ajunse n canalele biliare, devin hematofage, absorbind sngele din capilarele pereilor canalelor biliare. In plus, se consider c fasciolele elimin cantiti mari de prolin, care provoac, printre altele, i perturbri ale sintezei hemoglobinei (8). Scopul prezentei lucrri este evidenierea modificrilor parametrilor hematologici la ovine dintr-un efectiv la care infestrile i reinfestrile cu metacercari s-au produs masiv n ultimii ani, datorit ploilor abundente ce au permis dezvoltarea gazdelor intermediare (gasteropode din familia Limneidae). MATERIAL I METOD
Cercetrile s-au efectuat pe un numr de 35 oi dintr-un efectiv de ovine expus infestrii cu Fasciola hepatica. S-au selectat pentru investigaii animale adulte, femele, n vrst de 3-6 ani, care au exteriorizat semnele clinice caracteristice fazei de debut a fasciolozei cronice (octombrie, 2005). De la aceste animale s-au recoltat probe de snge pentru efectuarea determinrilor hematologice. S-au investigat eritrocitele, leucocitele i trombocitele, determinndu-se hematocritul (Ht), concentraia hemoglobinei (Hb), numrul de eritrocite (E), constantele eritrocitare derivate (VEM, HEM, CHEM), procentul de reticulocite, numrul de leucocite totale circulante (L), formula leucocitar (N, Eo, Ba, Lf, Mo), numrul de trombocite i morfologia elementelor figurate. Determinrile cantitative s-au efectuat prin metodele clasice de laborator (hemocitometrie, metoda colorimetric Sahli, microhematocrit), iar explorarea calitativ s-a realizat prin analiza citomorfologic a frotiului de snge colorat MayGrnwald-Giemsa i prin coloraia vital cu albastru de briliant crezil pentru determinarea reticulocitelor (4, 5, 6).
REZULTATE I DISCUII Rezultatele obinute la ovinele investigate sunt prezentate n tabelele 1, 2

i 3.
Din analiza rezultatelor se constat c toate animalele cu fascioloz au prezentat valori ale numrului de eritrocite, hematocritului i hemoglobinei sub sau la limita inferioar a speciei. Majoritatea autorilor raporteaz pentru oile adulte sntoase urmtorile valori normale: E 9-15 x106/l (cu o medie de 12); Hb 9-15 g/dl (cu o medie de 11,5), Ht 27-45 % (cu o medie de 35) (4, 7, 10). La ovinele investigate de noi, am obinut valori sczute, dar nu drastic sczute, astfel c dup gravitate anemia este uoar sau medie, cu valori pentru Hb ntre 7,4 i 10,0 g/dl, pentru Ht ntre 22 i 34 %, iar pentru E ntre 5,03 i 6,82 x106/l. Valorile constantelor eritrocitare derivate au permis diagnosticarea tipului morfologic al anemiei pentru fiacare caz n parte. Unele animale au prezentat anemie macrocitar hipocrom, altele tipul de anemie macrocitar normocrom, iar altele tipul de anemie normocitar normocrom.
226
227
228
Anemia macrocitar hipocrom este de tip reactiv, fiind nsoit i de apariia reticulocitelor n sngele periferic. Anemia macrocitar normocrom este cauzat de o deficien de sintez hepatic a proteinei de transport pentru vitamina B12, necesar procesului de eritrogenez medular. Tipul normocitar normocrom de anemie diagnosticat s-ar putea datora depresiei medulare, dar n bolile hepatice cauza cea mai probabil a anemiei este reducerea duratei de via a hematiilor. Acest lucru a fost dovedit de Ogunrinade i Anosa, 1981, care au constatat c timpul de njumtire a hematiilor marcate cu 51Cr s-a redus (128,8 ore) la oile infestate cu Fasciola gigantica, comparativ cu timpul de njumtire al hematiilor la oile de control (288 ore). Dup ali autori, n general, bolile hepatice se asociaz cu o reducere a sintezei eritropoetinei de origine hepatic, diminundu-se i n acest mod eritropoeza medular (4, 10). Analiza frotiurilor de snge a evideniat modificri morfologice ale eritrocitelor (anizocitoz, poikilocitoz, prezena anulocitelor, prezena acantocitelor) i o redus reticulocitoz (ntre 0,8% i 1,6%), care are semnificaie diagnostic, avnd n vedere faptul c la ovine, ca i la celelalte rumegtoare, reticulocitele nu se elibereaz n sngele periferic n condiii fiziologice (1, 4, 5, 9). Rezultatele privind seria leucocitar la ovinele cu fascioloz n stadiu de debut arat absena eozinofiliei sau prezena unei creteri a procentului de eozinofile numai pn la valoarea de 20 % din totalul leucocitelor. Literatura de specialitate prevede valori normale ale numrului de eozinofile la ovinele adulte de 0-10% (cu o medie de 5%) (Jain, 1986), iar pentru fascioloza uman, este prevzut o eozinofilie accentuat (80-90%) (Gherman, 1990) (2, 4). Acest aspect nu s-a nregistrat la cazurile de fascioloz ovin studiate. Numrul de trombocite la oile cu fascioloz nu au prezentat variaii fa de valorile nregistrate n literatura de specialitate (2,5-7,5 x105/l, cu o medie de 4,0 x105/l, citate de 4). Astfel valorile gsite de noi pentru numrul de trombocite au variat ntre 2,7 i 4,2 x 105/l, majoritatea valorilor fiind sub media normal a speciei. Numrul de leucocite totale s-a situat ctre limita superioar, peste valoarea medie citat n literatura de specialitate (8000/l, cu limite de 4000-12000/l) (4). Astfel, la oile cu fascioloz investigate, numrul leucocitelor totale a variat ntre 9,1 i 11,6 x 103/l; se poate vorbi de o tendin ctre leucocitoz sau de o leucocitoz moderat la unele animale. Analiza formulei leucocitare i a numrului absolut de N tinere, N mature, Eo, Ba, Mo, Lf, la oile cu fascioloz investigate, evideniaz un tablou extrem de variabil. Unele animale (10 cazuri) au prezentat neutrofilie moderat, cu o uoar deviere spre stnga a indicelui nuclear, raportul N:Lf fiind de 1,1:1, uor n favoarea neutrofilelor, aspect care se abate de la normal (la ovine, raportul N:Lf fiind de 1:2). Aadar, la animalele investigate s-a surprins o reacie inflamatorie acut, probabil cu localizare hepatic. Alte 15 cazuri de ovine cu fascioloz au
229
prezentat neutropenie i limfocitoz, raportul N:Lf fiind de 1:7,2, iar alte 10 cazuri au evideniat un raport N:Lf normal (1: 2,5), dar au prezentat eozinofilie (numrul de Eo ajungnd la 20%). Studiul citomorfologic al frotiului de snge a evideniat pentru seria leucocitar prezena de neutrofile tinere, chiar metamielocite la unele cazuri, alturi de neutrofile mature hipersegmentate, eozinofile vacuolizate, limfoblati i limfocite active (cu granulaii, cu bazofilie accentuat). CONCLUZII 1. In fascioloza ovin cronic, tipul morfologic de anemie este variabil: fie macrocitar hipocrom, de tip regenerativ (cu prezena unei modeste reticulocitoze), fie macrocitar normocrom, caracteristic deficienei de vitamina B12 (n cazul fasciolozei fiind implicat o deficien de sintez hepatic a proteinei de transport a vitaminei B12 ), fie normocitar normocrom, datorat reducerii duratei de via a hematiilor sau a sintezei hepatice a eritropoetinei. 2. Migraia fasciolelor tinere prin esutul hepatic i fixarea formelor adulte n canaliculele biliare genereaz o reacie inflamatorie local, reflectat sistemic, fie prin neutrofilie, cu devierea spre stnga granulocitar, dar i limfocitar (prezena limfoblatilor n sngele periferic), fie prin neutropenie i limfocitoz, fie prin eozinofilie. 3. La oile cu fascioloz investigate n luna octombrie, eozinofilia nu a fost constant i nu a a depit valoarea de 20 % n formula leucocitar. 4. Numrul leucocitelor totale circulante, la oile cu fascioloz, a prezentat valori peste media normal a speciei, ctre limita superioar, iar numrul trombocitelor a nregistrat valori sub medie, ctre limita inferioar a speciei.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Ghergariu, S., AL. Pop, L. Kadar, Mariana Spnu, 2000 Manual de laborator clinic veterinar, Ed.All, Bucureti. Gherman, I., 1990 Dicionar de parazitologie, Ed. tiinific, Bucureti. Iacob, Olimpia, 2002 Diagnosticul bolilor parazitare la animale, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. Jain, N.C., 1986 - Schalm's Veterinary Hematology. Lea-Febiger, Philadelphia. Kerr, M.G., 1989 - Veterinary Laboratory Medicine. Clinical Biochemistry and Haematology. Blackwell Scientific Publication, Oxford. Kondi, V., 1981 - Laborator clinic de hematologie. Ed. Medical, Bucureti. Manolescu, N. i colab., 1999 Tratat de hematologie animal, vol I, Ed. Fundaiei Romnia de mine, Bucureti. Mitrea, I.L., 2002 Boli parazitare la animale, Ed Ceres, Bucureti. Prvu Gh., 1992 Supravegherea nutriional-metabolic a animalelor, Ed.Ceres, Bucureti. Straus, J.H., 1998 Anemia. Polycythemia, in Merck Veterinary Manual, Eight Edition, Merck-Co., Inc. Whitehouse Station, N.J., USA.
230
STUDIU COMPARATIV AL REACTIVITII VASCULARE ARTERIALE LA MAI MULTE SPECII DE MAMIFERE: 1. REACTIVITATEA MUSCULATURII NETEDE ARTERIALE LA AGENII VASOCONSTRICTORI
S. BECHEA-CHIRIAC1, W. BILD2, Veronica NASTASA3, I. HULIC2 1 U.S.A.M.V. Iai 2 Academia Romn, Filiala Iai - L.F.E.A. 3 U.M.F. Iai Vascular reactivity is one of the three pillars on which lies the regulation of arterial pressure in living organisms. Arterial pressure is one of the main determinants of the activity state of various organs and systems both in healthy and in pathologically-altered states. The present study aims toward identifying similarities and differences between the resistance arteries belonging from various mammal species that are most involved in veterinary practice: rats, cats, dogs and horses. The arterial fragments prelevated from animals dead due to various clinical and traumatic conditions unrelated to vascular pathology were normalized using a newlyintroduced system of quantification, the force index system. This has been calculated using the wet-weight parameter and the force generated after administration of various pharmacological agents that cause vasoconstriction. The artery fragments were fitted in organ baths using the Krebs-Henseleit saline, thermostated at 37 C and bubbled with a mixture of 95% O2 and 5%CO2. Vascular endothelium was either kept or removed using gentle rubbing with moist filter paper. Control of endothelial removal was made both functionally, using carbachol (synthetic derivative of acetylcholine) and microscopically, after testing. The force generated was measured using isometric force transducers coupled to a computerized acquisition system. The pharmacological vasoconstricting agents used were phenylephrine (synthetic derivative of epinephrine), KCl (potassium chloride 40-80 mM, as depolarizing agent) angiotensin II, and vasopressin. The results were statistically investigated using the t-test and ANOVA testing. The preliminary results show a dependence of the force generated an the amount of muscle present in the various species from which the arteries were taken, a specifically increased response of feline-derived arteries to angiotensin and a specifically increased response of caninederived arteries to vasopressin. These results will be used as controls for further testing in various pathological conditions and for various other pharmacological agents used in the therapy of vascularly-induced pathological states.
Key words: vascular, reactivity, arterial, vasoconstrictor agent..
231
Studiul de fa dorete s investigheze modificrile de reactivitate vascular arterial care ar putea fi implicate n patologia diverselor specii de animale ntlnite mai frecvent n practica veterinar. S-a urmrit realizarea unei investigaii comparative a reactivitii vasculare la segmente arteriale similare din punct de vedere histologic i funcional, recoltate de la diverse specii de mamifere ntlnite mai des n patologia veterinar. Investigarea mecanismelor ce stau la baza reglrii tonusului arterial i a metabolismului fibrei musculare netede arteriale s-a bazat n ultimele dou decenii pe foarte cunoscutul model al traductorilor izometrici i al preparatului inelar de diverse artere. Vasul arterial de elecie folosit pentru astfel de investigaii este aorta de obolan, deoarece ntrunete majoritatea condiiilor de stabilitate, accesibilitate, disponibilitate i control unor investigaii de ncredere. La aceasta se adaug criteriul de pre, care nu este deloc un element de pierdut din vedere. Totui, dei acest model este arhicunoscut, obolanul nu este un model perfect din punct de vedere al modelrii cardiovasculare, care s fie similar cu omul i cu att mai puin cu alte mamifere. Perioada de-a lungul creia se ntind aceste studii ce au implicat acest model experimental ncepe acum jumtate de secol [3]. Astfel, s-au folosit fragmente de artere recoltate de la cini, pisici i cai, care au fost supuse investigrii experimentale comparativ cu inele de aort toracic standardizate, recoltate de la obolani Wistar. MATERIAL I METOD
Reactivitatea inelelor arteriale a fost msurat att n termeni de for absolut, msurat ca indice de for (fora n mN dezvoltat de preparat raportat la greutatea acesteia n mg) ct i ca reacie relativ, fa de un martor standardizat. De asemeni, acolo unde a fost posibil (n funcie de disponibilitatea preparatelor) s-au efectuat curbe doz/efect ce au implicat majoritatea substanelor vasorelaxante i vasoconstrictoare cunoscute i bine caracterizate farmacologic. Studiul comparativ a fost fcut pe artere similare din punct de vedere a dimensiunilor, care s fac parte din segmentul de rezisten, n spe ramuri din artera coronar gastric sau mezenterica superioar, care au avut dimensiuni similare: lungime maxim: 2 mm, = 1 mm, greutate 10-15 mg. Cuantificarea forei de contracie a fost realizat n N/mg greutate umed [4]. Piesele de organ au fost prelevate de la Clinica Medical i de la Clinica Chirurgie a Facultii de Medicin Veterinar de la animale moarte n urma unor afeciuni fr implicare vascular sau supus eutanasiei n condiiile legii [8]. Dup disecie, vasele au fost exsanguinate, splate n soluie de ser fiziologic, secionate n fragmente de 5-10 cm i apoi au fost plasate n ser KrebsHenseleit (preparat conform formulei) i transportate in timp maxim, 30 minute la locul experimentului. 232
Fragmentele de aort au fost fixate prin intermediul unei serfine metalice pe fundul bailor de organ izolat, inelul tensionndu-se prin intermediul vernierelor mrcilor tensiometrice la o tensiune iniial de 100 mN. Atunci cnd caracteristicile experimentale au cerut-o, endoteliul vascular a fost ndeprtat prin frecare blnd cu hrtie de filtru umed. Prezena endoteliului vascular funcional a fost verificat farmacologic (folosind carbachol) i prin microscopie direct. Inelele de arter au fost montate n bi de organ coninnd 4 ml de ser fiziologic Krebs-Henseleit (compoziie (mM): NaCl 118; KCl 4.7; CaCl2 2.52; MgSO4 1.64; NaHCO3 24.88; KH2PO4 1.18; glucoz 5.55), termostatate la 37C i barbotate cu carbogen (amestec de oxigen 95% i CO2 5%). Pentru nregistrarea contraciilor musculaturii netede vasculare s-au folosit traductori izometrici de for conectai la un sistem computerizat de achiziie a datelor. Preparatele au fost lsate la echilibrat timp de 60-90 minute, sub o tensiune de repaos de 100 mN. Inele de arter au fost apoi precontractate cu fenilefrin (10-7 10-6)M i K+ (40-70 mM) i tratate cu carbachol (10-6M) pentru eliberarea de NO endotelial [6]. Magnitudinea absolut a contraciilor a fost de 175 25 mN pentru fenilefrin (106 M) i K+ (40-70 mM).
REZULTATE I DISCUII Fenilefrina este un agonist -adrenergic sintetic folosit n practica medical ca midriatic, decongestionant nazal, iar n practica medical veterinar, rareori, ca agent cardiotonic. Receptorul su este reprezentat de adrenoceptorul 2 A. Acesta este un receptor ubiquitar la nivelul sarcolemei muchiului neted, cuplat cu proteina G. Efectul su se realizeaz prin intermediul inhibrii adenilat ciclazei prin aciunea proteinelor G de tip q. Acestea, odat activate, stimuleaz activiatea fosfolipazei C, stimulnd eliberarea de IP3 i DAG. Acetia acioneaz ca mesageri secunzi ce mediaz eliberarea de Ca2+ intracelular cu efect direct asupra contraciei musculare, i accesor, activeaz PKC [4]. Aciunea sa principal se realizeaz la nivelul receptorilor 2-adrenergic la nivelul musculaturii netede arteriale, indiferent de localizare, producnd vasoconstricie. Administrarea de fenilefrin produce un efect stabil, puternic i reproductibil la toate preparatele arteriale. De asemeni, s-a preferat substana respectiv datorit faptului c fiind sintetic, este complet hidrosolubil i stabil n soluie de-a lungul mai multor sptmni (fig. 1). Datorit disponibilitii substanei respective, s-a folosit ca martor de contracie n toate experimentrile ulterioare.
233

2000 1900 1800 1700 Forta (mgF) 1600 1500 1400 1300 1200 1100 1000 7500 8000 8500 9000 9500 10000 10500 11000 11500 12000 timp (secunde)
Fig. 1 Aspectul tipic al contraciei fenilefrinice a unei artere din segmentul de rezisten (Phe momentul administrrii, w splarea preparatului cu ser proaspt)
S-a realizat o curb doz efect la fenilefrin la preparate cu endoteliul vascular pstrat ct i ndeprtat (fig. 2). Investigarea efectelor substanelor vasoconstrictoare s-a realizat att ca apreciere a indicelui de for (F/gu) ct i ca apreciere a contraciei raportat la contracia indus de fenilefrin 10-6 M, care a fost considerat contracie de referin (100%).
7 6 5 4 3 2 1 0 -10 -9 -8 -7 log conc Phe -6 -5 -1 -4 Endotelizat Dezendotelizat
IF - mN/mg
Fig. 2 - Curba doza-efect la fenilefrina - grup control
Indicii de for la vase endotelizate recoltate de la animale fr afectare vascular. obolan IF = F/gu = 2,5 gf /5 mg 25 mN/5 = 5 Pisic IF = F/gu = 3,1 gf/ 5mg = 6,2 Cine IF = F/gu = 3,4 gf / 5mg = 6,8 Cal IF = F/gu = 4,8 gf/5mg = 8,16
234
unde: F reprezint fora dezvoltat de preparat, exprimat n mN (N x 10-3) iar gu reprezint greutatea umed, exprimat n miligrame de esut. Dup cum se poate observa n fig. 3, fora preparatelor de inel arterial recoltate de la animalele luate n studiu a fost din ce n ce mai mare, pe msur ce animalul de la care s-a recoltat fragmentul de vas a fost mai mare. Ca urmare, responsivitatea adrenergic s-a dovedit a fi direct proporional cu cantitatea de muchi neted vascular prezent la nivelul preparatelor.
10 9 IF (mN/mg tesut umed) 8 7 6 5 4 3 2 1 0 Inele arteriale endotelizate sobolan pisica caine cal
Fig. 3 - Variaia indicelui de for al inelelor arteriale la administrarea de Phe 10-6M
Efectul fenilefrinei la nivelul preparatelor dezendotelizate: dup cum se poate observa din fig. 4, dezendotelizarea a avut un efect de cretere a reactivitii la fenilefrin cu valori cuprinse ntre 16 % (obolan), 9,25% (pisic), 8,39 (cine) i 9,27 % la cal. Aceasta este n concordan cu rezultatele din literatur i cu ateptrile noastre conform rezultatelor anterioare.
12 10 IF (mN/mg tesut umed) 8 6 4 2 0 1 2 3 4 inele arteriale dezendotelizate
sobolan pisica caine cal
Fig. 4 Variaia indicelui de for al inelelor arteriale dezendotelizate la administrarea de Phe 10-5 M
n fig. 5 se prezint graficul cumulativ ce rezult din ambele seturi de date. Se poate observa c efectul de stimulare a rspunsului contractil este mai redus la arterele provenite de la animalele mari (cal, cine), ceea ce poate sugera o implicare mai puin semnificativ a reglrii tonusului arterial bazal de ctre catecolamine n condiiile arterelor de rezisten ce prezint mase musculare foarte mari.
235
16 14 IF (mN/mg tesut umed) 12 10 8 6 4 2 0 1 2 3 4 5 6 7 8 sobolan pisica caine cal Linear (sobolan) Linear (pisica) Linear (caine) Linear (cal)
Fig. 5 - Rezultate cumulative (endotelizat-dezendotelizat), la care s-au adugat liniile de regresie ale variaiilor ntre contracia preparatelor endotelizate i a celor dezendotelizate
CONCLUZII Din rezultatele prezentate mai sus se pot trage urmtoarele concluzii: Reactivitatea -adrenergic la toate speciile luate n studiu este similar, dependent de doz. Singurele diferene semnificative observate sunt cele cantitative, determinate posibil de reprezentarea cantitativ a muchiului neted vascular la nivelul diverselor tipuri de artere luate n studiu. Raportndu-ne la datele histologice putem spune c, raportndu-se la procentul de muchi neted, rezultatele se nscriu n limitele normalitii.
BIBLIOGRAFIE
1. Armstead W.M., Lippton H.L., Hyman A.L., Kadowitz P.J., 1984 - Analysis of adrenergic responses in the mesenteric vascular bed of the cat; evidence that vascular beta 2-adrenoceptors are innervated. Can J Physiol Pharmacol. 62(12):1470-8. Bechea Chiriac S., Serban D.N., 2001 - Mechanisms involved in the vascular action of phenamyl, Lucr. St. vol. 44., USAMV Iai, p. 151-159; Beznak M., 1956 - Hemodynamic changes following aortic constriction in normal and in hypophysectomized rats. - Can J Biochem Physiol., 34(4):791-8. Guimares S., Moura D., 2001 - Vascular Adrenoceptors: An Update - Pharmacol Rev. 53: 319-356. Haulica I., Bild W., Mihaila C.N., Ionita T., Boisteanu C.P., Neagu B., 2003 Biphasic effects of angiotensin (1-7) and its interactions with angiotensin II in rat aorta. - J Renin Angiotensin Aldosterone Syst. 4(2):124-8 Jiang H., Halayko A.J., Rao K., Cunningham P., Stephens N.L., 1991 Normalization of force generated by canine airway smooth muscles. - Am J Physiol. 260(6 Pt 1):L522-9. Moncada S., Palmer R.M.J., Higgs E.A., 1991 - Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology. Pharmacol. Rev., 43: 109-142 * * * - LEGE nr.471 din 9 iulie 2002 Buletinul Oficial al Romniei, privind aprobarea Ordonantei Guvernului nr. 37/2002 pentru protectia animalelor folosite n scopuri stiintifice sau n alte scopuri experimentale.
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
236
CLINICAL, ULTRASONOGRAPHICAL AND CYTOLOGIC ASPECTS OF PERITONEAL EFFUSION IN FELINE SUSPECTED OF INFECTIOUS PERITONITIS
ASPECTE CLINICE, ECOGRAFICE I CITOLOGICE ALE LICHIDULUI DE PUNCIE LA FELINE SUSPECTE DE PERITONITA INFECIOAS
V BOGHIAN, Gh. SOLCAN, Geta PAVEL, M. MUSTEA, R. SAUCIUC U.S.A.M.V. Iai Au fost examinate 14 cazuri de motani i pisici care prezentau manifestri clinice de peritonit: febr intermitent, inapeten, slbire, dispnee, comportament inhibat, i semnele fizice ale coleciei lichide peritoneale. Lichidul de puncie peritoneal era incolor sau uor glbui, vscos, uor coagulabil i cu coninut ridicat de proteine (5,51,5 g/dl). n frotiul colorat panoptic s-au observat numeroase fagocite mari (neutrofile i macrofage), limfocite i uneori hematii. La examenul ecografic s-au observat modificri de ecogenitate ale ficatului i rinichiului (zone de hiperecogenitate) i prezena de lichid n cavitatea peritoneal.
Cuvinte cheie: peritonita felin, semne clinice, ecografie, citologia lichidului peritoneal
The Feline infectious peritonitis (PIF) is an infectious disease of viral origin of the feline, produced by a Corona virus and characterized by general troubles, weakness and peritonitis. Clinical symptoms are the results of the vascular and per vascular alterations. As a consequence it is produced the extravasation of plasma and the accumulation of this intracellular or in serous cavities (wet form of evolution) and without cavitar overflowing (dry form of evolution). These aspects make the clinical manifestation to be varied from case to case. Taking in consideration that the clinical symptoms are polymorphous we tried to appreciate which are the constant clinical aspects in peritonitis, and correlated with the echographic aspects and the cytology of the peritoneal liquid, can be used to put diagnosis (1, 2). MATERIAL AND METHOD
The researches were made on 14 animals, males and females, of different ages, clinical suspected of Infectious Feline Peritonitis (PIF). Using the clinical examination were appreciated the constant aspects of the clinicinal symptoms. Using the ultrasound examination were noticed the echostructure modification at the level of the parenchymatos organs from the abdominal cavity, especially of the liver and kidneys, and the presence or the absence of the peritoneal liquid 237
collection. Related to the presence or the absence of the peritoneal liquid, the investigations were completed with the sampling of the liquid from peritoneal puncture and is exanimate from organoleptic point of view, morphological smear stained May Grnwald Giemsa, and protein concentration using the direct refractometric method.
RESULTS AND DISCUSSIONS The constant clinical sings were: intermittent fever, inappetence, progressive weakness, dyspnoea, inhibitive behavior, and the physical sings of the peritoneal liquid collection in exudative form (wet form) of evolution of the disease (fig. 1).
B A Fig. 1. - A- Inhibitive behavior; B - Physical signs of the peritoneal liquid collection
In the dry form of the disease, clinical aspects were varied and not characteristic, with predominant clinical sings depending on the localization of the visceral lesions (hepatic, renal, medullar, encephalic granuloma or hydrocephalus). The lesions of the organs from the abdominal cavity were observed by ultrasonographic examination. At the ultrasonographic examination the echostructure alter of the liver, such as milliary zones of hyperechogenity and liquid collection inside the peritoneal cavity were observed in exssudative form (fig. 2 and fig. 3). The peritoneal liquid, present only in the exudative form of evolution of the disease, was clear or yellowish, very viscous and rich in proteins; the total proteins had the value of 5,51,5 g/dl. On the smear made after ultracentrifugation of the liquid stained May Grnwald Giemsa were noticed red cells and numerous leucocytes: big phagocytes, neutrophiles and lymph cells, aspects characterizing the inflammatory liquid (fig. 4 and fig. 5).
238
B A Fig. 2. A-B: Liver with hiperechogenity zones and the presence of the liquid inside the peritoneal cavity
A B Fig. 3. A - The liquid inside the peritoneal cavity (perirenal); B - Liver with hyperechogenic structure
A B Fig. 4. A-B: Peritoneal liquid with red cells and numerous leucocytes (col.MGGx900)
239
A B Fig. 5. - Peritoneal liquid: A - big phagocytes and erytrophagocitosis; B - neutrophiles, lymph cells, red cells (col.MGGx1500)
CONCLUSIONS The symptoms of peritonitis in cats were: intermittent fever, progressive weakness, inhibitive behavior, and the physical signs of the peritoneal liquid collection in the exudative form of evolution of the disease. In the dry form of evolution of the disease the most important clinical signs were: intermittent fever, weakness and hyperechogenic lesions of the liver. At the ultrasonographic examination were noticed hiperechogenity milliary zones on liver and the presence of the liquid inside the peritoneal cavity, very useful for the diagnosis. The peritoneal liquid was clear or yellowish, and very viscous, rich in proteins (5,51,5 g/dl). Cytological exam of peritoneal liquid revealed numerous leucocytes (big phagocytes, neutropyiles and lymphocytes).
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. Horzinek M., 2001 - Unravellig the Secrets of Feline infectious peritonitis-Sotal, World Small Animal Veterinary Association World Congress Proceedings. Moga-Mnzat R., 2005 - Boli virotice i prionice, Ed. Brumar, Timioara, p. 323-328. Perianu T., 1997 - Boli infecioase ale animalelor, viroze (vol. II), Ed. Fundaiei Chemarea, Iai, p. 150-151. Solcan Gh., Boghian V., Rollin F., 2005 - Patologie i clinic medical veterinar, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. Solcan Gh., Luminia Diana HRICU, Bechea Chiriac S.I., Boghian V., 2003 Paraclinical, and ultrasonographic aspects in some hepatobiliary diseases of dogs and cats, Bull. USAMV Cluj Napoca, seria Med. Vet., 60, p. 315-318.
240
POST-PARTUM KETONEMIA DETERMINED BY BETAHYDROXYBUTYRATE ON HOLSTEIN FRIZE DAIRY COWS

CETONEMIA POSTPARTUM PRIN DETERMINAREA BETAHIDROXIBUTIRATULUI LA VACILE PENTRU LAPTE HOLSTEIN FRIZ
V. BOGHIAN U.S.A.M.V. Iai La un lot de 115 vaci pentru lapte, aflate n primele 3 luni de lactaie, s-a determinat -hidroxibutiratul seric. S-au diagnosticat 12 vaci cu valori crescute ale -hidroxibutiratului, ceea ce reprezint 10,43% din efectiv. Din acestea, 10 vaci (8,69% din efectiv) au avut valori ale hidroxibutiratului ce caracterizeaz cetoza subclinic i 2 vaci (1,73% din efectiv) au avut valori ale -hidroxibutiratului ce caracterizeaz cetoza clinic. n funcie de starea fiziologic a animalelor, cele 12 cazuri pozitive s-au diagnosticat astfel: 3 (25,0%) n primele 2 sptmni postpartum, 5 (41,66%) n sptmnile 2-4 postpartum, 3 (25,0%) n sptmnile 4-6 postpartum, i 1 caz (8,33%) n sptmnile 6-8 postpartum. Dup a aptea sptmn de lactaie nu s-au mai ntlnit cazuri cu concentraii serice ale -hidroxibutiratului de peste 14,4 mg/dl, ceea ce confirm faptul c vacile aflate n primele 6 sptmni de lactaie au un risc mai mare de a dezvolta cetoza comparativ cu cele aflate dup aceast perioad.
Cuvinte cheie: cetoza, vaci pentru lapte, -hidroxibutirat, diagnostic
Ketosis is as a metabolic state characterized through the transitory increase of ketonic bodies concentration in organism. Taking in consideration this fact, ketosis can be diagnosed determining the ketonemia. The -hydroxybutyrate represents 78% from the total of ketonic bodies, is more stabile and can be easily determined. At the same time is a usual metabolite at cows. It is physiologic formed at the level of the luminal wall through the metabolisation of the butyric acid (volatile fatty acid) contained by the fodder ration, or has endoluminal origin. It also synthesized at the liver level. Because of this reason, at some concentration, it is considered a physiologic metabolite on milk cows. The level of the serous concentration of -hydroxybutyrate of over 1400 mol/l characterizes subclinical ketosis, and the concentration of over 2600 mol/l characterizes sub clinical ketosis. To change the measure unit of hydroxybutyrate to mg/dl is by multiplying the value mol/l with 0,0103. This number represents the molecular mass of -hydroxybutyrate which is 103 divided to 10.000, meaning the difference from g/l and mg/dl.(14000,0103=14,4 mg/dl). (2, 5).
241
MATERIAL AND METHOD

The researches were made on a herd of 115 postpartum cows whit an average production of milk of 29 l/day. On serum testes taken from the entire herd at once, the -hydroxybutyrate was determined using the biochemical semiautomatic analyzer EOS 880 PLUS and specific kit. The obtained results were interpreted related to the value of -hydroxybutyrate and the physiological state of the cows (the number of days which passed after giving birth).
RESULTS AND DISCUSSIONS The dates obtained at the -hydroxybutyrate determination are presented in
table 1 and fig. 1.
35 30 25 20 15 10 5 0 0 20 40 60 80
BHB (mg/dl)
Fig. 1. The post-partum values of the -hydroxybutyrate on a herd of 115 dairy cows
Were diagnosed 12 cows, representing 10,43% of the total exanimated herd, with the value of serum -hydroxybutyrate over 14,4 mg/dl. From these, 2 cows had the value of -hydroxybutyrate which characterizes the clinical ketosis (1,73% from the examinated herd) and 10 cows had the value of hydroxybutyrate which characterizes subclinical ketosis (8,69% from the delaminated herd). 41,66% (5 cases) were diagnosed in the 2-4th post-partum week. In the first 2 post-partum weeks were diagnosed 3 cases, representing 2,60% from the total examinated herd, or 25% from the 12 positive cases. Same situation happened in 4-6th post-partum week. In the period 6-8th post-partum week was diagnosed only one positive case, and in 8-10th post-partum week and 10-12th week there was not diagnosed any positive case. To add, in these weeks the average value of serum hydroxybutyrate was less in comparison with the beginning of the nursing period.
242
243
These dates confirm the fact that the cows being in the first 6 weeks of postpartum have a higher risk to develop ketosis in comparison with the cows being after this period. The cows which are in the 2-6th post-partum week period have the higher risk to develop subclinical ketosis. The weekly dynamics of the subclinical ketosis by determining hydroxybutyrate is presented in figure number 2.
4 3 2 1 0 I II III IV V VI VII VIII IX Vaci cu cetoz subclinic (n)
Fig. 2.- The numerical post-partum incidence on cows with the value of -hydroxybutyrate over 14,4 mg/dl
The most cases, meaning 4, were diagnosed in third post-partum week. After the 7 th postpartum week there were not discovered any cases with serum hydroxybutyrate concentration over 14,4 mg/dl. It is also specified that the examiated herd was formed from cows in first 75 postpartum days. Was also noticed that the period in which the serum value of hydroxybutyrate is over the limit 14,4 mg/dl is sometimes very short, reason which leads to the fact that some of the cows which will develop subclinical ketosis have small serum concentration of -hydroxybutyrate, when they are tested for the diagnosis of ketosis. The serum concentration of aceto-acetate and -hydroxybutyrate represents the relative total (without acetone) of the kenotic bodies. The value of the serum concentration of these two kenotic bodies summing up over the level of 9 mg/dl is a sign for subclinical ketosis. The summing up value of 9 mg/dl for the subclinical ketosis is smaller than the one of the -hydroxybutyrate alone, of 14,4 mg/dl, due to the fact that -hydroxybutyrate can have also endoluminal origin by consuming fodder with accentuated butyric fermentation. At the level of the luminal wall, through the metabolisation of the butyric acid (volatile fatty acid) contained by the fodder ration or with endoluminal origin, there are being formed small
244
quantities of -hydroxybutyrate. In this case -hydroxybutyrate is not related to the hepatic ketogenesis; it is not formed from aceto-acetate. This is why some serum concentration of -hydroxybutyrate, without aceto-acetate are considered to be physiological at the milk cow. When at the serum concentration of hydroxybutyrate is added also the one of the aceto-acetate, it is obtained the relative value of the total ketonemia, which suggest a hepatic ketogenesis, considered to be pathological over a certain level. CONCLUSIONS From 115 examinated cows, 12 representing 10,43% of the herd had increased values of -hydroxybutyrate. 10 cows (8,69%) had value of -hydroxybutyrate characterizing the subclinical ketosis, and two cows (1,73%) had value of -hydroxybutyrate characterizing clinical ketosis. Related to the physihological state of the animals, those 12 positive cases were diagnosed as follows: 3 (25,0%) in first two post-partum weeks, 5 (41,66%), in 2-4 th post-partum week, 3 (25,0%) in 4-6 th post-partum week, and one case (8,33%) in 6-8 th post-partum week. After the 7 th postpartum week there not diagnosed any cases with serum concentration of -hydroxybutyrate over 14,4 mg/dl, this confirming the fact that the cows being in the first 6 postpartum weeks have a higher risk to develop ketosis in comparison with the cows being after this period.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. Boghian V., Hagiu N., 2003 - Valoarea diagnostic a testelor de profil metabolic n cetoza subclinic a vacilor pentru lapte, Lucr. t. Med. Vet., Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai, vol., 46 (5), pag. 262-265. Duffield T.F., Kelton D.F., Leslie K.E., Lissemore K.D., Lumsden J.H., 1997 - Use of test day milk fat and milk protein to detect subclinical ketosis in dairy cattle in Ontario, Can. Vet. J., vol. 38 (11), pag. 713-718. Geishauser T., Leslie K., Tenhag J., Bashiri A., 2000 - Evaluation of eight cowside ketone tests in milk for detection of subclinical ketosis in dairy cows, J. Dairy Sci., vol. 83 (2), pag. 296-299. Holtenius P., Holtenius K., 1996 - New aspects of ketone bodies in energy metabolism of dairy cows, A review. J. Vet. Med., vol. 43 (10), pag. 579 587. Oetzel G.R., 2001 - Ketosis and hepatic lipidosis in dairy herds, Preconvention Seminar 8: Dairy herd problem investigations strategies, American Association of Bovine Practitioners 34 th, Annual Convention, sept. 1112, Vancouver BC.
245
EFECTELE DEFICITULUI HIDRIC PRELUNGIT LA CERVIDEE, PE PERIOADA DE IARN

EFFECTS CONCERNING THE PROLONGED HIDRIC DEFFICIENCY IN STAGS, IN WINTER PERIOD
Iuliana CODREANU, N. DOJAN, M. CODREANU U.S.A.M.V. Bucureti Ioana CONSTANTINESCU I.D.S.A., Bucureti The stag evolution like fellow of a population it is influence all the time by the hereditary and natural factors. Between these factors, part of it is not depends of population density, this factor are: humidity, temperature and light. The other factors that depend of population density that influence the distribution and population level are: forage, water, shelter. The aim of this study is to realize the biochemical the biochemical profile of a lot of stags who it hast been secure the drink water for about 2-3 weeks in a winter months with snow and a lot of stags who it has been secure the drinking water. Comparing the results, it has been notice a increased of the seric urea for about 4-5 times over the normal value of the species and also a bad health conditions.
Att cadrul socio-economic al rii, ct i nivelul sczut al cercetrii i educaiei cinegetice - i al neglijrii acestora - pe considerentul c cervideele din mediul silvatic al Carpailor Orientali evolueaz natural, pozitiv, mai bine ca oriunde n Europa, au condus la o serie de incertitudini referitoare la activitatea de administraie i de gestiune a fondurilor cinegetice [5]. Factorii care influeneaz evoluia cantitativ i calitativ a cervideelor din Carpaii Orientali sunt concurena acerb i mortalitile numeroase. Evoluia cervideelor, ca indivizi ai populaiilor, are loc sub influena nentrerupt a aciunii factorilor de mediu i a ereditii [1]. nsi ereditatea trebuie acceptat ca un rezultat al adaptrii speciei la condiiile de mediu n care a evoluat. Dintre aceti factori, o parte sunt independeni de densitatea populaiei (mortalitatea cervideelor crescnd sau scznd n funcie de intensitatea i durata aciunii lor) cum ar fi: umiditatea, temperatura, lumina i pot deveni, n unele situaii, limitativi pentru rspndirea cervideelor [4]. Ceilali factori sunt dependeni de densitatea populaiei, influennd distribuia spaial i nivelul populaional: hrana, apa, adpostul, linitea, competiia intra- i interspecific, prdarea i parazitismul [4].
246
MATERIALE I METODE
Investigaiile de ordin clinic s-au efectuat pe perioada 6-25 ianuarie 2005, pe 22 de indivizi de aceeai vrst (1,6 ani), din cadrul Farming Group Transilvania SRL, cu sediu n Reghin, judeul Mure, crora proprietarul nu le-a asigurat ap de but, considernd c, fiind lun de iarn, acetia i vor asigura necesarul de ap din zpad. Dup dou sptmni, proprietarul a observat modificari grave ale strii de sntate a cervideelor. n urmtoarele zile, 5 animale au decedat. Astfel, proprietarul a hotrt s recolteze probe de snge de la animalele rmase n via pentru efectuarea unor examene de specialitate. Investigaiile biochimice au fost realizate prin metodele clasice, n Laboratorul de Biologie molecular i Biochimie din cadrul Institutului de Diagnostic i Sntate Animal Bucureti. Investigaiile biochimice s-au realizat pe probe de ser sanguin prin metodele titrimetrice clasice, curent efectuate n laboratoarele de specialitate descrise [2,3]. n realizarea i aprecierea profilului biochimic la cervidee am considerat oportun i semnificativ realizarea urmtoarelor investigaii: constituenii principali ai profilului proteic (protein total, albumine, globuline), uree, creatinin; constituenii principali ai profilului mineral (Ca, Mg, P). Studiile privind homeostazia unor factori umorali corelai cu starea de sntate a cervideelor, s-a efectuat pe un numr de 22 de indivizi, mprii n 2 loturi, dup cum urmeaz: lotul LA lot martor - alctuit din 10 cervidee, crora li s-a asigurat ap de but; lotul LB - alctuit din 12 cervidee, crora nu li s-a asigurat ap de but (n perioada de iarn).
REZULTATE I DISCUII n urma analizei comparative ale valorilor medii obinute n urma examenelor biochimice, la cele dou loturile de cervidee, sunt redate , pentru fiecare element de profil investigat, n tabelele 1-3. n urma investigaiilor efectuate la cele dou loturi de cervidee, s-a constatat existena unor diferene nesemnificative ntre valorile medii ale proteinei totale, ele ncadrndu-se n limitele normale ale speciei (5,6-9,9 g/dl), n cazul ambelor loturi. De asemenea, i n cazul valorilor medii ale albuminelor i globulinelor s-a constatat existena unor diferene nesemnificative din punct de vedere statistic (p>0,05), ceea ce demonstreaz faptul c principalii constituieni ai profilului proteic nu sunt afectai (modificai) n cazul cervideelor cu deficit hidric sever (tabelul 1).
247
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 1 Valorile medii ale proteinei totale, albuminelor i globulinelor la lotul martor (LA) i respectiv la lotul de cervidee cu deficit hidric sever (LB) Lotul LA LB Protein total (g/dl) 7,16 6,21* Albumine (g/dl) 3,18 2,64* Globuline (g/dl) 3,98 3,56* Raport A/G 0,80 0,74*
* p >0,05 diferene nesemnificative
Valoarea medie a ureei n cazul lotului de cervidee cruia nu i s-a asigurat ap de but, a fost de 123,2 mg/dl (cu limite cuprinse ntre 83 mg/dl i 138 mg/dl), distinct semnificativ mai mare din punct de vedere statistic (p<0,01), fa de valorile medii ale lotului LA (format din animale sntoase). ntre valorilor medii ale creatininei, s-a constatat existena unor diferene nesemnificative (p>0,05), n cazul celor dou loturi de cervidee (tabelul 2).
Tabelul 2 Valorile medii ale ureei i creatininei la lotul martor (LA) i respectiv la lotul de cervidee cu deficit hidric sever (LB) Lotul LA LB Uree (mg/dl) 27,2 123,2*** Creatinin (mg/dl) 1,13 1,23*
* p >0,05 diferene nesemnificative *** p <0,01 diferene distinct semnificative
Se poate remarca faptul c, la indivizii cu privare hidric sever (LB), se nregistreaz constant creteri severe ale ureei serice pe fondul hemoconcentraiei i deshidratrii, modificri care au fost invariabil corelate cu prezena semnelor de retenie azotat (insuficien renal acut) de tip progresiv agravant. Cortegiul clinic aferent insuficienei renale acute, a constituit dominanta clinic la indivizii privai de ap (LB). Creterea nesemnificativ a valorii medii a creatininei serice i ncadrarea ei n limitele normale ale speciei, n cazul indivizilor cu deficit hidric sever, indic o agresiune renal de tip acut, fr instalarea unor veritabile alterri morfologice la nivelul substratului filtrant renal. Dezechilibrele n plan umoral cu consecine detrimentale sistemice, au stat la baza agravrii progresive a strii clinice pn la faza de insuficien renal de tip decompensat. Valorile medii ale calciului i fosforului au fost de 11,1 mg/dl i respectiv de 7,2 mg/dl la lotul de cervidee sntoase i de 12,5 mg/dl i 6,17 mg/dl la lotul de cervidee crora nu li s-a asigurat ap de but.
248
Diferenele dintre aceste valori medii, n cazul celor dou loturi de cervidee, sunt nesemnificative din punct de vedere statistic (p>0,05) i se ncadrau n limitele caracteristice speciei (9-12 mg/dl pentru calciu i 5,7-10 mg/dl pentru fosfor), citate de literatura de specialitate (tabelul 3).
Tabelul 3 Valorile medii ale calciului, magneziului i fosforului seric la lotul martor (LA) i respectiv la lotul de cervidee cu deficit hidric sever (LB) Lotul LA LB Ca Calcium (mg/dl) 11,1 12,5* Fosfor Phosphor (mg/dl) 7,2 6,17* Mg Magnesium (mg/dl) 2,8 3,02* Vitamina E Vitamin E (/ml) 1,8 2,29*
* p >0,05 diferene nesemnificative
De asemenea, diferenele dintre valorile medii ale magneziului i vitaminei E, la cele dou loturi de cervidee au fost nesemnificative, ncadrndu-se i acestea n limitele normale ale speciei (1,8-3 mg/dl pentru magneziu i de 1,2-2 /ml pentru vitamina E). CONCLUZII Analiznd comparativ rezultatele obinute n urma examenului biochimic la lotul de cervidee la care s-a asigurat ap de but (lot martor) i la lotul de cervidee cu deficit hidric sever (cruia nu i s-a asigurat ap de but pe considerentul c, fiind iarn, animalele i asigur necesarul de ap din zpad), se pot desprinde urmtoarele concluzii: n cazul celor dou loturi de cervidee, ntre valorile medii ale principalilor constituieni ai profilului proteic nu exist diferene semnificative, ele ncadrnduse n limitele caracteristice speciei. Valorea medie a ureei serice la lotul de cervidee crui nu i s-a asigurat ap de but pe perioada de iarn, a fost de 123,2 mg/dl (cu limite cuprinse ntre 83 mg/dl i 138 mg/dl), constatndu-se o cretere distinct semnificativ (p<0,01), fa de lotul martor. Creterile severe ale ureei serice pe fondul hemoconcentraiei i deshidratrii la indivizii cu privare hidric sever, au fost corelate cu prezena semnelor de retenie azotat (insuficien renal acut) de tip progresiv agravant i au stat la baza insuficien renal de tip decompensat. Diferenele dintre valorile medii ale creatininei, n cazul celor dou loturi de cervidee, au fost nesemnificative (p>0,05), ncadrndu-se n general ntre limitele caracteristice speciei.
249
Meninerea valorii medii a creatininei ntre limitele normale ale speciei indic, n cazul indivizilor cu privare hidric, o agresiune renal de tip acut, fr instalarea unor veritabile alterri morfologice la nivelul substratului filtrant renal. ntre valorile medii ale principalilor constituieni ai profilului mineral (calciu, magneziu, fosfor), s-a constatat existena unor diferene nesemnificative din punct de vedere statistic (p>0,05).
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Bentley A., 1999 An Introduction to Deer of Australia, Bunyip, Sydney Dojan N., 2000 Fiziologia animalelor domestice, Printech, Bucureti Dojan N., 2003 Compendiu de fiziologie animal, Printech, Bucureti Fanning L., 2001 Mountain Majesty, Mill Ponn Press, USA Nesterov V., 1987 Bolile vnatului, Ceres, Bucureti, 1987.
250
DATE DE PROFIL METABOLIC (BIOCHIMIC SANGUIN) LA CERVIDEE, N FUNCIE DE VRST

ASPECTS CONCERNING METABOLIC PROFILE (SERIC BIOCHEMICAL) IN STAGS, DEPENDING ON AGE
Iuliana CODREANU, N. DOJAN, M. CODREANU U.S.A.M.V. Bucureti Ioana CONSTANTINESCU I.D.S.A., Bucureti The stag had obtained richly the quality of the Romanian symbol save that nourishment but also for the national and world trophy value. The generally health status in stags can be proper evaluate only after the realising of the hematological and biochemical blood analyses, and after that, the obtained results must be compared with the normal values, registered or described for that breed. In many cases the blood constituents - components of the biochemical profile - are helpful in the evaluation of the body status. The aim of this study is to realise the biochemical profile, containing the major components of the specific profile in stags depending on age. Are described and compared the obtained results after the investigations of these biochemical parameters in young animals (females and males) 7 months, and adults (2,5 years).
In pdurile de munte principalul vnat este cerbul, cu o greutate medie de 240-250 kg la masculi, care populeaz sectorul oriental al Carpailor pn n zona curburii precum i unele zone din Carpaii Meridionali i Munii Apuseni pn n Podiul Trnavelor. Efectivul de cervidee calculat este de circa 30.000 de exemplare i prin vntoare se pierd, anual, 1-2 mii de exemplare. ngrijortor este faptul c n ultimii 8-10 ani numrul cerbilor s-a redus de cca 10 ori [5]. Disprut din alte ri europene, la noi n ar cerbul este nc un vnat de foarte mare importan. Este unanim recunoscut c n Carpaii Orientali ai Romniei habiteaz, cei mai puternici cerbi din Europa [5]. Cerbul i-a dobndit, pe deplin, calitatea de emblem a vnatului romnesc, att ca surs de hran, dar mai ales pentru trofeele impozante, de valoare naional i chiar mondial [1, 4].
251
MATERIALE I METODE
n realizarea i aprecierea profilului biochimic la cervidee am considerat oportun i semnificativ realizarea urmtoarelor investigaii: constituenii principali ai profilului proteic (protein total, albumine, globuline); constituenii principali ai profilului mineral (Ca, Mg, P); constituenii principali ai profilului enzimatic: transaminazele serice GOT (transaminaza glutamicoxalacetic), GPT (transaminaza glutamic-piruvic), GGT (gammaglutamiltrans-feraza), FA (fosfataza alcalin). Investigaiile biochimice au fost realizate prin metodele clasice, n Laboratorul de Biologie molecular i Biochimie din cadrul Institutului de Diagnostic i Sntate Animal Bucureti. Investigaiile biochimice s-au realizat pe probe de ser sanguin prin metodele titrimetrice clasice, curent efectuate n laboratoarele de specialitate descrise [2, 3]. Investigaiile de ordin clinic s-au efectuat pe loturi de cervidee cu vrste diferite, din cadrul Farming Group Transilvania SRL, cu sediu n Reghin, judeul Mure. Studiile privind homeostazia unor factori umorali corelai cu starea de sntate a cervideelor s-a efectuat pe un numr de 20 de indivizi (femele i masculi), mprii n 2 loturi, dup cum urmeaz: lotul L1 - alctuit din 10 indivizi n vrst de 7 luni; lotul L2 - alctuit din 10 indivizi n vrst de 2,5 ani.
REZULTATE I DISCUII Analiza comparativ a rezultatelor obinute n urma examenelor biochimice la cele dou loturile de cervidee, alctuite din indivizi n vrst de 7 luni i respectiv 2,5 ani, sunt redate n tabelele 1-3. Valorile medii ale calciului i fosforului au fost de 13,99 mg/dl i respectiv de 6,71 mg/dl la lotul de cervidee n vrst de 7 luni i de 12,7 mg/dl i 6,90 mg/dl la lotul de cervidee n vrst de 2,5 ani (tabelul 1).
Tabel 1 Valorile medii ale calciului, magneziului i fosforului seric la loturile de cervidee n vrst de 7 luni i respectiv 2,5 ani Ca (mg/dl) L1 7 luni 13,99 L2 2,5 ani 12,7* * p >0,05 diferene nesemnificative Lotul Vrsta Fosfor (mg/dl) 6,71 6,90* Mg (mg/dl) 2,58 2,75* Vitamina E (/ml) 1,78 2,18*
Diferenele dintre valorile medii ale celor dou loturi sunt nesemnificative (p>0,05) i se ncadrau n limitele caracteristice speciei (9-12 mg/dl pentru calciu
252
i 5,7-10 mg/dl pentru fosfor), citate de literatura de specialitate [1, 5]. De asemenea, diferenele dintre valorile medii ale magneziului i vitaminei E, la cele dou loturi de cervidee au fost nesemnificative, ncadrndu-se i acestea n limitele caracteristice speciei (1,8-3 mg/dl pentru magneziu i de 1,2-2 /ml pentru vitamina E). La cele dou loturi de cervidee, s-a obinut aceeai valoare medie a proteinei totale, ea ncadrndu-se n limitele normale ale speciei (5,6-9,9 g/dl) oferite de literatura de specialitate [1]. ntre valorile medii ale albuminelor i globulinelor s-a constatat existena unor diferene nesemnificative din punct de vedere statistic (p >0,05) ntre cele dou loturi cu vrste diferite, valori care se ncadrau de asemenea, n limitele caracteristice speciei (tabelul 2).
Tabel 2 Valorile medii ale proteinei totale, albuminelor i globulinelor la loturile de cervidee n vrst de 7 luni i respectiv 2,5 ani Protein total (g/dl) L1 7 luni 6,55 L2 2,5 ani 6,54* * p >0,05 diferene nesemnificative Lotul Vrsta Albumine (g/dl) 2,88 3,05* Globuline (g/dl) 3,67 3,49* Raport A/G 0,78 0,88*
Analiza comparativ a activitii transaminazelor serice GOT (ASAT) i GPT (ALAT) n funcie de vrst la cervideele investigate, a evideniat creteri constante ale activitii GOT-ului, odat cu naintarea n vrst (tabelul 3).
Tabel 3 Valorile medii ale activitii transaminazelor serice i fosfatazei alcaline la loturile de cervidee n vrst de 7 luni i respectiv 2,5 ani Lotul Vrsta GOT (UI) 14,9 30,3** GPT (UI) 30,4 22,7* F.A. (U/l) 51,7 52,6*
LNI 7 luni LNS 2,5 ani * p >0,05 diferene nesemnificative **p< 0,05 diferene semnificative
Se poate aprecia faptul c activitatea seric a GOT-ului este crescut la o valoare medie/lot de 30,3 UI (cu limite cuprinse ntre 19-48 UI), cretere semnificativ din punct de vedere statistic (p<0,05), ce poate fi explicat pe baza efortului i rolului metabolic deosebit, inclusiv la nivel hepatocitar, la vrst mai naintat. Variaiile GPT-ului n cadrul aceluiai lot (ntre valori de 11 UI i 48 UI), precum i diferenele nregistrate ntre cele dou loturi de cervidee (fr semnificaie statistic deosebit), indic o relevan mai redus a acestuia ca indicator biochimic sanguin, inclusiv al funciei hepatocitare.
253
Valorile activitii fosfatazei alcaline, att n cadrul aceluiai lot, ct i prin comparaie ntre loturile investigate, precum i variaiile reduse nregistrate, denot faptul c este un parametru ce sufer flucuaii nesemnificative, n funcie de grupa de vrst. CONCLUZII Analiznd comparativ rezultatele obinute n urma examenului biochimic la cele dou loturi de cervidee, alctuite din indivizi n vrst de 7 luni i respectiv 2,5 ani, se pot desprinde urmtoarele concluzii: ntre valorile medii ale principalilor constituieni ai profilului mineral (calciu, magneziu, fosfor) la loturile de cervidee investigate, s-a constatat existena unor diferene nesemnificative din punct de vedere statistic (p>0,05). Valorile medii ale principalilor constituieni ai profilului proteic se ncadrau n limitele caracteristice speciei, constatndu-se existena unor diferene nesemnificative (p>0,05) n cazul celor dou loturi. Odat cu naintarea n vrst a cervideelor, se constat o cretere semnificativ din punct de vedere statistic (p<0,05) a activitii GOT-ului, cretere ce poate fi explicat pe baza efortului i rolului metabolic mai intens (inclusiv la nivel hepatocitar). Diferenele nesemnificative (p>0,05) ale activitii GPT-ului ntre cele dou loturi cu vrste diferite, indic o relevan mai sczut a acestuia ca indicator biochimic sanguin, inclusiv al funciei hepatocitare. De asemenea, i fosfataza alcalin este un parametru care nu sufer fluctuaii semnificative n funcie de vrst, la cervidee.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Bentley A., 1999 An Introduction to Deer of Australia, Bunyip, Sydney Dojan N., 2000 Fiziologia animalelor domestice, Printech, Bucureti Dojan N., 2003 Compendiu de fiziologie animal, Printech, Bucureti Fanning L., 2001 Mountain Majesty, Mill Ponn Press, USA Nesterov V., 1987 Bolile vnatului, Ceres, Bucureti, 1987.
254
ASPECTE CLINICE, HEMATOLOGICE I ECOGRAFICE NREGISTRATE N UNELE AFECIUNI ALE SPLINEI LA CINE
CLINICAL, HEMATOLOGICAL AND ULTRASONOGRAPHIC INVESTIGATIONS IN SPLENIC DISEASES IN DOG
M.D. CODREANU, V. CRIVINEANU, Gh. SOLCAN, Iuliana CODREANU, M. CORNIL U.S.A.M.V. Bucureti The present paper represents our investigations concerning the ultrasonographic modifications of this organ corelated with the clinical and paraclinical changes registered in dog pathology. The investigations has been performed on 28 dogs which were ultrasonographic examinated and included in this study. The advantages of the echographic investigation (non-invasive and performed in real time) and the value of the obtained results recomand this kind of exam for certifying diagnosis, evaluating the spleen echostructure and echogenity, in different degrees of spleen diseases. The study is based on the data obtained in the Internal Medicine Clinic of the Veterinary Faculty and is completed by supplementary hematotological and biochemical tests of these patients. This present work reveals the importance of the splenic ultrasonography for evaluating the state of health of the dog patients. This method of investigation is perfect integrated in the current veterinary practice of splenic diseases diagnosis in dog.
SCOPUL LUCRRII Scopul lucrrii de fa este de a ncerca stabilirea unor corelaii ntre modificrile de ordin clinic, hematologic i ultrasonografic n unele afeciuni ale splinei la cine. Sunt prezentate rezultatele investigaiilor proprii n urma evalurii ecografice a splinei n corelaie cu rezultatele examenului clinic i hematologic la cinii inclui n observaiile noastre (n = 28), crora li s-a indicat efectuarea unui examen ultrasonografic. Particularitile speciale ale acestui organ (organ limfatic situat pe traiectul circulaiei sangvine) i particularitile morfostrucurale l recomand drept un organ filtru, toate afeciunile sistemice de natur n special septic influennd parametrii de ecostrucur splenic lucru care s-a dorit a fi evideniat n prezenta lucrare.
255
Faptul c simptomatologia afeciunilor splenice este nespecific i este corelat n foarte multe cazuri,cu afeciuni sistemice grave face ca examinarea organului s fie de mare ajutor n corelarea datelor anamnetice, n orientarea diagnosticului i a eventualelor examene suplimentare. Avantajele examenului ecografic (non invaziv i realizat n timp real), alturi de valoarea datelor obinute l recomand ca examen de elecie pentru depistarea prin intermediul evaluarii parametrilor de ecostructur i ecogenitate splenic, a unor afeciuni de gravitate i intensitate diferit. LOCUL DE DESFURARE Studiul descris n prezenta lucrare a fost realizat n cadrul Clinicii de Medical a Facultii de Medicin Veterinar Bucureti, n perioada 2002 2005, pe un numr de 28 de subieci canini de diverse rase i vrste, la care investigaia ultrasonografic a splinei a constituit obiectivul prioritar sau conjunctural al evalurii pacienilor prezentai n vederea evalurii clinice, ultrasonografice i paraclinice i pentru stabilirea unui protocol terapeutic optim, adecvat diagnosticului n cauz. Investigaiile de ordin clinic i cele ultrasonografice au fost realizate n cadrul Clinicii Medicale a Facultii de Medicin Veterinar, iar examenele hematologice (i biochimice sanguine) au fost efectuate n cadrul Laboratorului Clinicilor, aparinnd Facultii de Medicin Veterinar Bucureti. MOD I METOD DE LUCRU
Investigaiile ultrasonografice au fost realizate cu ajutorul unui ecograf Concept Dynaming Imaging (cu sond microconvex cu dubl frecven 5-7,5 MHz) i a unui ecograf PICUS - Doppler color, Pie-Medical (cu sond cu tripl frecven 5-7,5-10 MHz), la Clinica de Medical a Facultii de Medicin Veterinar Bucureti. Animalele supuse examenului ecografic, au fost pregtite corespunztor prin ndeprtarea prului de pe abdomen i au fost contenionate i poziionate n decubit dorsal. Pe zona abdominal a fost aplicat gelul ecografic, iar dup realizarea timpului de ateptare (10-20 minute) s-a procedat la efectuarea examenului ultrasonografic. Principalul obiectiv al studiului a fost aprecierea parametrilor de topografie, volum, ecostructur i ecogenitate splenic, datele obinute prin examenul ecografic fiind coroborate cu analize hematologice i biochimice dup caz acolo unde acest lucru se impunea . Din punct de vedere hematologic au fost analizai urmtorii indicatori: numrul de eritrocite, hematocrit, numrul de elemente figurate albe, hemoglobina, hematocritul i Volumul Eritrocitar Mediu (V.E.M.) i numrul de trombocite.
256
n unele cazuri au fost disponibil formula leucocitar i analiza calitativ a elementelor figurate roii.
REZULTATE I DISCUII Rezultatele investigaiilor clinice au fost menionate i nregistrate n fia individual, ulterior au fost centralizate i sistematizate, iar aspectele ecografice relevante sunt prezentate n cele ce urmeaz. Pentru fiecare caz menionat datele sunt nscrise sub form de fi individual la care a fost ataat imaginea ecografic precum i rezultatele examenelor paraclinice sub form de tabelul 1.
Tabelul 1 Descrierea cazurilor investigate ecografic Nr.crt. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. Rasa Pitbull Caniche pitic Bichon maltez Ciobnesc german Pekinez Snautzer uria Metis Rottweiller Ciobnesc german Ciobnesc mioritic Ciobnesc german Metis Bull Terrier Ciobnesc carpatin Golden Retriever Rottweiller Teckel Cocker spaniol Boxer Ciobnesc german Metis Brac german Ciobnesc german Ciobnesc german Teckel Caniche Rottweiller Collie Sex Mascul Mascul Femel Femel Femel Mascul Femel Femel Mascul Mascul Femel Femel Mascul Mascul Femel Femel Femel Mascul Mascul Mascul Mascul Femel Femel Femel Mascul Femel Mascul Femel Vrst 4 ani 7 ani 11 ani 12 ani 10 ani 8ani 11 ani 3 ani 8 ani 7 ani 6 ani 7 ani 11 ani 4 ani 8 ani 10 ani 12 ani 8 ani 6 ani 10 ani 9 ani 9 ani 11 ani 10 ani 17 ani 14 ani 6 ani 2 ani
Analiza individual i sintetic a rezultatelor investigaiilor ecografice a evideniat faptul c splina poate prezenta modificri de topografie, volum,
257
ecostructur i ecogenitate care s nu fie corelate ntotdeauna cu existena unor modificri clinice.
Tabelul 2 Modificri clinice i ecografice nregistrate la pacienii investigai Nr.caz. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Semne clinice nregistrate Sensibilitate la abordarea palpatorie. Distensie abdominal moderat. Sindrom de febr. Anorexie, apatie, sensibilitate la palparea pe aria splenic. Aprarea abdominal. Sindrom de febr. Anorexie, polidipsie, sensibilitate moderat la palparea abdomenului. Hipertermie, disorexie, polidipsie, sensibilitate dureroas la palparea pe aria splenic. Sindrom de febr. Anorexie, apatie, sensibilitate dureroas la palpare. Distensie abdominal. Acumulare de lichid la nivel abdominal (ascit). La palpare se identific o formaiune ce proemin pe suprafaa splinei. Splina se identific palpatoriu la nivelul prepubian cu tendina de a invada abdomenul stng i mediu. Fenomene digestive discrete. Semne clinice terse, fr interesarea sau corelarea cu modificrile ecografice nregistrate. Abordarea palpatorie a splinei este posibil la nivel prepubian cu tendina de a invada abdomenul posterior. Fenomene digestive discrete Fr corespondent clinic Abordarea splinei poate fi realizat n plan mediolateral stg. pn la nivelul bazinului, cu evidente fenomene digestive (vom, diaree). Fr corespondent clinic. n antecedente din anamnez reiese expunerea la un accident rutier. Semne clinice discrete, fr corelaii directe cu modificrile ecografice depistate. Distensie abdominal, distensie gastric prin coninut gazos, sensibilitate la palparea abdomenului. Inapeten, vom. Abdomen destins de lichid abundent, slbire progresiv, anorexie. Semne de insuficien cardiac (congestie pulmonare, oboseal, dispnee, tuse) Prezena la palpare pe aria splenic a unei formaiuni de dimensiuni mari, contur regulat, moderat sensibilitate la abordarea palpatorie. Slbire progresiv, inapeten, discrete modificri digestive. Distensie abdominal, ascit moderat, vom, inapeten, slbire progresiv. Modificri ecografice Splenomegalie moderat Abces splenic Abces splenic Abces splenic. Abces splenic. Formaiune macronodular intraparenchi-matoas. Splenomegalie evident. Splenomegalie evident. Splenomegalie evident. Chist splenic. Splenomegalie evident. Hematom splenic. Splenomegalie evident. Aspect congestiv. Torsiune incomplet de splin. Splenomegalie moderat. Ascit sever. Splenomegalie evident. Tumor splenic. Formaiune tumoral intraparenchimatoas.
15.
16. 17. 18.
258
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Nr.caz. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. Semne clinice nregistrate Sindrom de febr, splenomegalie, anemie, icter, hemoglobinurie (Diagnostic confirmat: Babesioz) Identificarea splinei se realizeaz la nivelul abdomenului posterior (n plan medio-lateral stg.) evidente fenomene digestive (vom, diaree). Abdomen retractat, fr sensibilitate evident pe aria de proiecie a splinei. Fr fenomene de ordin digestiv. Prezena la palpare pe aria splenic a unei formaiuni de dimensiuni mari, sensibilitate la palpare, discrete fenomene de staz. Splina mult mrit n volum, margini regulate, sensibilitate evident la abordarea palpatorie, semne digestive discrete. Sindrom febril. Anorexie, apatie, sensibilitate evident la palparea pe aria splenic. Ascit, distensie abdominal evident. Fenomene discrete, cu aprare abdominal i semne de intoleran digestiv. Discrete semne clinice, fr interesarea sau corelarea cu modificrile ecografice identificate. Poliadenopatie (ln. explorabili mult mrii n volum, fr sensibilitate). Distensie abdominal, sensibilitatea crescut la palpare. Anorexie, vom. Fr modificri clinice. Modificri ecografice Splenomegalie evident. Formaiune tumoral gigant la nivel splenic. Tumor splenic. Tumor splenic. Tumor splenic. Abces splenic. Tumor splenic. Formaiune tumoral splenic. Splenomegalie cu adenopatie evident. Chist splenic.
n studiul prezentat, modificrile de volum au atras invariabil i modificri de topografie splenic. Neomogenitile splenice, difuze sau localizate, au avut n general un corespondent clinic real, oferind indicii importante privind diagnosticul n cauz. Modificrile astfel nregistrate, corelate cu extensivitatea i invazivitatea procesului patologic, au permis stabilirea elementelor de prognostic. Modificrile de volum splenic pot fi singulare (fiind vorba de entiti morbide distincte), dar pot fi i rezultatul unei afeciuni sistemice (babesioz, insuficien cardiac, insuficien hepatic etc.). Semnele suferinei splenice sunt nespecifice, ele putnd uneori trece neobservate sau chiar lipsi, alteori ele fiind violente (cum un veritabil corespondent clinic), chiar aparinnd strilor de urgen, aa cum este cazul torsiunii gastro-splenice, nregistrat n 3,5% din cazuri (n = 1), sau al rupturii splenice. Modificrile ecografice n sensul alterrii ecogenitii i/sau ecostructurii parenchimului splenic pot fi ncadrate n dou mari categorii: localizate i difuze. n cazul congestiei splenice ecogenitatea splenic rmne perfect omogen, dominant fiind splenomegalia evident. Chisturile splenice, nregistrate n 7,2% din cazuri (n = 2) sunt reprezentate de colecii lichide anecogene delimitate de un perete fin. Datorit coleciei lichidiene (slabei ecogeniti), ele sunt nsoite de fenomenul de ntrire
259
posterioar. Hematoamele splenice, n acest studiu, au nregistrat o inciden relativ redus, de 3,5% din cazuri (n = 1), mbrcnd aspecte ecografice caracteristice. Ecogeniatea hematoamelor depinde de momentul n care au fost surprinse, aspectul iniial fiind hiperecogen i ulterior prezint insule anecogene. n cazul hematoamelor mari acestea pot fi iniial hipoecogene. Abcesele splenice, nregistrate n 17,8% din cazuri (n = 5) recunosc de asemenea un aspect caracteristic, contur relativ regulat, coninut hipo/anecogen, perete bine reperezentat (mediu spre nalt ecogen). Tumorile splenice primare sau secundare, difuze sau localizate, au nregistrat 35,8% din cazuri (n = 10), fiind responsabile de modificri de volum, de contur, de ecostructur i ecogenitate la nivelul parenchimului splenic, cu localizare i ntindere diferit. Examenele paraclinice au venit n completarea examenului ecografic, dominante fiind investigaiile hematologice i biochimice. De multe ori, n cazul tumorilor splenice, s-a apelat la splenectomie pentru punerea diagnosticului de certitudine. CONCLUZII 1. Studiul de fa a fost efectuat pe 28 de cazuri, considerate relevante, cu modificri ecografice ale splinei. Examenul ecografic a permis evaluarea topografiei, dimensiunilor (volumului), ecostructurii i ecogenitii parenchimului splenic la cine, iar evaluarea ecografic s-a realizat n strns corelaie cu rezultatul investigaiilor clinice i cu eventualele modificri paraclinice i ecografice conexe. 2. Modificrile de topografie au fost induse de torsiunea, congestia i splenomegalia (cu etiologie diferit) difuz i/sau focalizat. 3. Modificrile de volum (focalizate sau difuze) au avut drept corespondent entiti morbide distincte i specifice, pentru fiecare dintre acestea. 4. Modificrile de ecostructur splenic (leziuni focale) au fost reprezentate de abcese, n 17,8% din cazuri (n = 5), hematoame, n 3,5% din cazuri (n = 1), chisturi, n 7,2% din cazuri (n = 2) i neomogenitile focale ce nsoeau afeciunile neoplazice (primare sau metastazice). 5. Splenomegalia nregistrat n 32% din cazuri (n = 9) a recunoscut diferite cauze (insuficien cardiac, babesioz, limfom/limfosarcom). 6. Babesioza din punct de vedere ecografic a fost nsoit constant de splenomegalie, iar clinic de anemie, icter, hemoglobinurie i hemoglobinemie. 7. n categoria afeciunilor neoplazice, nregistrate n 35,8 % (n = 10), tumorile difuze ale splinei au fost generate preponderent de afeciuni cu origine limfatic i sangvin (limfoame i limfosarcoame), suferind constant modificri de volum i ecogenitate i inconstant de ecostructur, care coroborate cu rezultatele examenului hematologic certific diagnosticul. Din punct de vedere ecografic, hemangiosarcoamele s-au caracterizat prin heterogenitate crescut, cu
260
existena constant a cavitilor hipo/anecogene mrginite de zone nalt ecogene. Analiza comparativ a rezultatelor investigaiilor ecografice n cazul tumorilor altor organe abdominale a evideniat faptul c splina este una dintre organele care pot dezvolta tumori de dimensiuni mari sau foarte mari (gigant). 8. Simptomatologia n cazul afeciunilor splenice investigate a fost nespecific, incluznd i semne la distan care in de afectarea sistemic i a organelor de la nivelul cavitii abdominale. 9. Se poate aprecia c prin coroborarea rezultatelor investigaiilor ecografice (ofer date privind topografia, volumul, ecostructura, ecogenitatea organului) cu cele ale examenului clinic, hematologic i biochimic se poate stabili diagnosticul de certitudine.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6.
7.
8.
Badea, I.R., Dudea, S.M., Mircea, P.A., Stamatian, Fl., 2000 Tratat de ultrasonografie clinic, vol.I; Ed. Medical, Bucureti. Bhadwal, M.S., Mirakhur, K.K., 2001 - Sonography of the canine healthy and diseased spleen, Veterinary Bulletin, vol.71, No. 3, Art. 2103, Pag. 339. Burk R.L., Ackerman N., 1996 - Small Animal Radiology and Ultrasonography. A nd diagnostic atlas and text, 2 Edition; W.B. Saunders Company, U.S.A. Codreanu, M., 2000 - Aspecte ecografice nregistrate n cazul tumorilor abdominale la cine; Al VIII-lea Congres Naional de Medicin Veterinar, Bile Felix, 17-20 octombrie. Codreanu, M., 2001 - Importana examenului ecografic n diagnosticul coleciilor cavitare la carnivore.; Revista Romn de Medicin Veterinar, vol. 11, nr.2, p.139-146. Codreanu M, Diaconescu A., 2003 Diagnosticul ecografic la animalele de companie, Ed. Coral Sanivet, Bucureti. Crnganu, D., Codreanu, M., Preda, Cristina, Mocanu, Jaqueline, Britreanu, S., 2001 - Diagnosticul oncologic multidisciplinar i diferenial ntre leucemiile limfoide i limfom la cine, Simpozion a 140 ani Alma Mater Veterinaria Bucurescensis, Ed. All, pg. 84, Bucureti, 2001. Ramirez, S., Douglass, J.P, Robertson, I.D., 2002 - Ultrasonographic features of canine abdominal malignant histiocytosis, Veterinary Bulletin, vol. 72, No. 8, Art. 6248, Pag. 1099.
261
REZULTATELE INVESTIGAIILOR CLINICE I ULTRASONOGRAFICE N DIAGNOSTICUL REVRSATELOR CAVITARE LA CINE I PISIC

CLINICAL AND ULTRASONOGRAPHIC INVESTIGATIONS IN CAVITARY EFUSIONS IN DOGS AND CATS
M.D. CODREANU U.S.A.M.V. Bucureti Clinical and interventional ultrasonography is considered the prefferable method of investigation of the parenchimatous and/or cavitary organs in veterinary practice, for the non-invasive character and for its valuable real time results. The utility of the ultrasonographic investigation in parenchimatous organs diagnosis is well known. Althought, based on the physical properties of the intraparenchimatous effusions (abcesses, hematoms, chists) and intracavitary effusions (around the abdominal organs), these liquid acumulations are easy to identify on the ultrasonographic image. The ultrasonographic images of the effusions are characterised as omogene anechoic zones through which the ultrasonic echoes pass whithout resistence. The present paper aim to reveal the results of our work in presenting the importance and the limitations of ultrasonographic exam in diagnosis of the cavitary effusions in dogs and cats.
SCOPUL LUCRRII n lucrarea de fa am ncercat s conturm tabloul clinic propriu acumulrilor de lichid la nivelul diferitelor caviti ale organismului n strns corelaie cu aspectul ecografic pentru fiecare din localizri, pentru a evidenia relevana acestui examen de imagine n diagnosticul complex al revrsatelor cavitare la animalele de companie. Prezentarea cazurilor este realizat pe categorii de afeciuni, respectiv n funcie de sediul acumulrii de lichid, imaginile ecografice relevante fiind prezentate i descrise n cadrul lucrrii, iar dominantele clinice sunt grupate de asemenea n funcie de spaiul, cantitatea i tipul revrsatului. LOCUL DE DESFURARE Examenele clinice i utrasonografice au fost realizate pe 36 cini i pisici cu diverse afeciuni, care prezentau efuziuni cavitare, la nivelul spaiului
262
peritoneal, pleural sau pericardic, sau policavitare prezentate n vederea evalurii la Clinica de Medical a Facultii de Medicin Veterinar Bucureti. MOD I METOD DE LUCRU
Investigaiile ultrasonografice la animalele cu diferite acumulri cavitare (suspicionate pe baza datelor clinice i ale altor tehnici de investigaie paraclinic) s-au realizat n perioada 2002 2005 la Clinica Medical a Facultii de Medicin Veterinar Bucureti, cu ajutorul : unui ecograf Concept Dynamic Imaging, folosind o sond sectorial microconvex cu dubl frecven 5 - 6,5 MHz i a unui ecograf Picus Pie Medical cu sond convex cu tripl frecven: 5; 7,5 i respectiv 10 MHz. Acumulrile de lichid de la nivelul cavitii abdominale, toracice i a spaiului pericardic pot fi identificate i accidental la examenul ecografic de rutin, prin vizualizarea unei colecii de lichid situate post -, sau prediafragmatic. n cazul acumulrilor de la nivelul cavitii peritoneale, acestea sunt identificate cu uurin datorit aspectului anecogen, situat ventral de sonda ecografic. Examenul general al abdomenului, premergtor investigrii diferitelor organe abdominale, se realizeaz pentru obinerea unei imagini de ansamblu a peretelui abdominal i a topografiei organelor abdominale. Cauzele revrsatelor cavitare sunt extrem de numeroase, insuficiena cardiac dreapt, hipoproteinemia, neoplasmele, infeciile specifice, leziuni posttraumatice soldate cu compresiuni vasculare, rupturi vasculare (hemotorax) sau ale vaselor limfatice (chilotorax), procese inflamatorii etc. Natura coleciei lichide este greu de apreciat ecografic, dar existena unor cauze evidente, ca i asocierea unor entiti morbide de aceeai natur (afeciuni ale cordului drept, prezena unor formaiuni la nivelul pericardului, pleurei, torsiunea unui lob pulmonar sau hernia diafragmatic), inclusiv alte epanamente cavitare (pericardice, peritoneale), pot susine un anumit diagnostic etiologic prezumptiv. n cazul suspiciunii acumulrilor de lichide de la nivel cavitar toracice s-a procedat la tunderea/raderea zonelor cutanate corespunztoare (regiunea abdominal ventral, spaii intercostale, zona abdominal lateral), care au servit ca fereastr acustic pentru investigarea zonelor de interes i s-a aplicat gelul ecografic, dup care s-a trecut le efectuarea examenului ecografic.
REZULTATE I DISCUII Cazurile prezentate n vederea evalurii la Clinica de Medical a Facultii de Medicin Veterinar Bucureti au fost examinate clinic i utrasonografic, realiznd fie individuale, grupate n funcie de sediul i tipul afeciunii, pe cini i pisici care prezentau efuziuni cavitare, la nivelul spaiului peritoneal, pleural sau pericardic, sau acumulri policavitare.
263
n lucrarea de fa descrierea diferitelor cazuri de cini i pisici este fcut n funcie de categoria de afeciuni, respectiv n funcie de sediul acumulrii de lichid. Rezultatele examenului ecografic au fost consemnate n fiele individuale, iar imaginile cele mai relevante sunt prezentate n cele ce urmeaz, iar semnele clinice nregistrate au fost grupate de sediul acumulrii, cantitatea i tipul acesteia. Aprecierea naturii coleciei lichide doar pe baza examenului ecografic a fost dificil, dar existena asociat a unor entiti morbide, cum ar fi (afeciuni ale cordului drept, prezena unor formaiuni la nivelul pericardului, pleurei, decelarea unor formaiuni nlocuitoare de spaiu la nivel parenchimatos sau cavitar, coexistena altor epanamente cavitare au venit n completarea diagnosticului prezumtiv. Cazurile investigate sunt reprezentate de cini i pisici aparinnd unor rase diferite, de vrste diferite cu afeciuni primare sau secundare de hidropizie (tabelul 1).
Tabelul 1 Distribuia cazurilor investigate Nr.crt. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 SPECIA Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Cine Pisic Pisic RASA Metis Cocker spaniol Labrador Cocker spaniol Metis Metis Terrier Ciobnesc german Setter irlandez Cocker american Ciobnesc carpatin Snautzer uria Brac german Doberman Ciobnesc german Teckel Bichon maltez Ciobnesc mioritic Ciobnesc german Ciobnesc german Golden Retriever Doberman Setter irlandez Caniche Chow chow Ciobnesc german Ciobnesc german Persan Birmanez SEX Femel Femel Femel Femel Femel Femel Mascul Femel Mascul Mascul Mascul Femel Mascul Mascul Femel Mascul Mascul Mascul Femel Mascul Mascul Femel Mascul Femel Femel Mascul Femel Mascul VRSTA 8 ani 10 ani 4 ani 8 ani 9 ani 5 ani 11 ani 12 ani 7 ani 6 luni 2 luni 9 ani 5 ani 5 luni 16 ani 9 ani 4 ani 6 ani 1,5 ani 3 ani 7 ani 11 ani 14 ani 9 ani 9 ani 7 ani 3 ani 7 ani
264
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Nr.crt. 29 30 31 32 33 34 35 36 SPECIA Cine Cine Pisic Pisic Cine Pisic Cine Cine RASA Setter irlandez Metis Metis Birmanez Metis Metis Bichon Frise Caniche SEX Mascul Femel Mascul Mascul Mascul Femel Mascul Mascul VRSTA 8 ani 6 ani 10 ani 2 ani 9 ani 4 ani 9 luni 14 ani
Lichidul ascitic a putut fi evideniat cu uurin prin tehnica ecografic, graie particularitilor sale ecografice unice. Prezena n cantitate redus a lichidelor n cavitatea abdominal, a facilitat vizualizarea organelor abdominale, iar acumularea masiv a fluidelor reduce n primul rnd, posibilitatea abordrii organelor de la nivelul cavitii abdominale (prin reducerea compresibilitii peretelui abdominal). n realizarea examenului ecografic, pentru organele cavitii abdominale, se recomand nceperea cu abordarea celor situate n abdomenul superior i continuarea cu investigarea celor din abdomenul posterior stng i apoi drept. La examenul ecografic de rutin au putut fi identificate colecii de lichid att postdiafragmatic ct i prediafragmatic (lichidotorax). Se poate aprecia c din punct de vedere ultrasonografic structurile tisulare de la nivelul cavitii toracice (mai puin cordul) nu au caracteristici ecografice specifice. Evidenierea modificrilor din cavitatea toracic, prin examen ecografic, este facil n special n cazul localizrii la nivel superficial, imediat prediafragmatic sau n cazul acumulrilor de lichid (inflamator sau neinflamator). Prezena epanamentelor la acest nivel se poate identifica cu uurin, sub forma unor zone anecogene, situate ntre pulmoni i peretele toracic. Examenul cordului - ecocardiografia s-a realizat folosind tehnici aparte de abordare, msurare i interpretare, apelnd la: modulul B pentru aprecierea dimensiunilor, ecogenitii i micrilor diferitelor structuri i modulul M care permite realizarea reprezentrii grafice a unei poriuni izolate a cordului i micrile acestuia n raport cu alte formaiuni anatomice, precum i msurarea diametrelor cavitilor cordului. Am optat pentru cele trei abordri ecografice recomandate pentru ecografia cordului: fereastra parasternal dreapt (la nivelul spaiilor intercostale IV i V, ntre stern i jonciunea costocondral), fereastra parasternal stng caudal (apical): la nivelul spaiilor intercostale V-VII n imediata vecintate a sternului i respectiv fereastra parasternal stng cranial: la nivelul spaiilor intercostale III IV, ntre stern i jonciunea condrocostal. Ca i n medicina uman imagini satisfctoare am putut obine prin plasarea sondei imediat napoia apendicelui xifoidian.
265
Existena asociat a unor entiti morbide: afeciuni ale cordului drept, prezena unor formaiuni la nivelul pericardului, pleurei, torsiunea unui lob pulmonar sau hernia diafragmatic, sau alte epanamente cavitare (pericardice, peritoneale) vin n completarea diagnosticului prezumtiv. Obinuit toracocenteza i respectiv analiza lichidului de puncie sunt relevante (examen citologic). Existena asociat la nivelul cavitilor de multe ori, corelat cu simptomatologia i cu examenul lichidului de puncie reprezint suficiente elemente, care pot conduce la un diagnostic de certitudine. Sunt frecvente situaii n care datele anamnetice sunt extrem de sugestive n ceea privete etiologia epanamentului cavitar i tipul acesteia (ex. traumatismele, accidente rutiere etc.) Afeciunile diafragmului au putut fi puse n eviden cu ajutorul tehnicii ecografice att cele de la nivelul feei anterioare, ct i cele de la nivelul feei posterioare. Herniile diafragmatice sunt uor de evideniat, de exemplu hernierea unui lob hepatic sau hernierea unui lob pulmonar (caudal sau accesoriu). Cel mai frecvent este implicat i antrenat ficatul n hernierea transdiafragmatic, caz n care, prezena unei structuri anterior diafragmului (dar cu structura i ecogenitatea caracteristic ficatului) certific diagnosticul. CONCLUZII 1. Acumulrile de lichide de la nivelul cavitii toracice pot fi identificate folosind drept fereastr acustic spaiile intercostale sau prin abordarea la nivel abdominal (transdiafragmatic). 2. Acumulrile de la nivelul cavitii peritoneale pot fi identificate cu uurin datorit aspectului anecogen (caracteristic coleciilor de lichid), situate ventral de sonda ecografic. 3. Tehnica ecografic este mai precis n evidenierea fluidelor peritoneale, comparativ cu tehnica radiografic. 4. Natura acumulrilor de lichid nu poate fi precizat cu ajutorul tehnicii ecografice, dar poate fi evideniat existena celularitii crescute i/sau acumulrile de fibrin. 5. Examenul ecografic este util n realizarea punciilor cavitare (att n scop de diagnostic, ct i aspirativ-evacuator), fiind recomandat n special pentru stabilirea omogenitii lichidului, ct i pentru evitarea penetrrii unor eventuale structuri aderente peretelui abdominal intern (n regiunea propus pentru realizarea centezei). 6. Cu limitele amintite (generate de imposibilitatea abordrii corespunztoare a structurilor de interes), examenul ecografic furnizeaz elemente de diagnostic extrem de importante, plasnd tehnica ultrasonografic n ansamblul de diagnostic imagistic al afeciunilor cavitii toracice.
266
7. Caracteristicile ecografice generale ale mediilor lichide, relevana i acurateea rezultatelor obinute, recomand examenul ecografic ca o veritabil alternativ de diagnostic, de un real folos n abordarea clinic i terapeutic a efuziunilor cavitare.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Burk R.L., Ackerman N., 1996 - Small Animal Radiology and Ultrasonography. A diagnostic atlas and text, 2nd Edition; W.B. Saunders Company, U.S.A. Codreanu M., 2000 - Examenul ecografic n diagnosticul epanamentelor cavitare la carnivore. Al VIII-lea Congres Naional de Medicin Veterinar, Bile Felix, 17-20 Octombrie. Codreanu M., 2001 - Importana examenului ecografic n diagnosticul coleciilor cavitare la carnivore. Revista Romn de Medicin Veterinar (ISSN 12203173), vol. 11, nr.2, p.139-146. Codreanu M, Diaconescu A., 2003 Diagnosticul ecografic la animalele de companie, Ed. Coral Sanivet, Bucureti. Han C.M., Hurd C.D., Kurklis L., 1994 - Practical Guide to Diagnostic Imaging:Radiograpy and Ultrasonography; American Veterinary Publications, Inc. Ionacu I., Codreanu M., J. Mocanu, 2002 Chilotoraxul la pisic prezentare caz - Sesiune tiinific dedicat srbtoririi a 150 de ani de la nfiinarea nvmntului agricol n Romnia, 11 octombrie, FMV. Bucureti. Lungu A., Codreanu M., Balint E., Constantinescu C., Brslau D., Fernoag C., 2003 Dubl localizare la nivelul seroaselor cavitii toracice la pisic. Al XXXIVlea Simpozion Naional de Morfologie Normal i Patologic Actualiti n patologia aparatului cardiovascular, Institutul Naional Victor Babe, 5-7 Noiembrie, pag. 58-59. Penninck D.G., 1998 - Ultrasonography; Veterinary Clinics of North America, Small Animal Practice, 28(4). Pop T., 1998 - Ecografie clinic diagnostic i intervenional; Editura Medical, Bucureti.
8. 9.
267
MODIFICRI HEMATOLOGICE, BICHIMICE SANGUINE I HISTOPATOLOGICE INDUSE DE SULFATUL DE CUPRU LA OAIE

HEMATOLOGICAL, SERUM BIOCHEMICAL AND HYSTOPATHOLOGYCAL CHANGES INDUCED BY COPPER SULPHATE IN SHEEP
G.V. GORAN, M.D. CODREANU, V.CRIVINEANU U.S.A.M.V. Bucureti The investigations described in this study were realised on adult sheep batches, after the oral administration of CuSO4 , in different doses, from 5 to 20 mg/kg body weight (0,1% solution), depending on the experimental batch, after this were realised the laboratory analysis. The hematological investigations reveals an obvious hemoconcentration (the elevation of the RBC and of the PCV), in correlation with the dehydration consecutively status (induced by the polyuria and diarrhoea), esspecially in ewes from the batches were was administered the cooper sulphate in doses of 10 and respectively 20 mg/kg. From the biochemical point of view, consistent elevations registered the seric specific hepatic enzymes (esspecially ALAT), at ranges of 92 UI and 118 UI (for last two doses) changes what indicate the hepatic alterations and of the creatininemia and uremia, what also indicate and obvious nephrotoxicity (esspecially in doses of 20 mg/kg). The most frequent lesional aspects were the congestive and the hemoragic lesions identified in liver, kidneys and gastrointestinal tractus, in the same time the cytological examinations reveals an intensive hemolysis, hepatic cell distructions and granulo-vacuolary dystrophy, distructions of the renal epithelium. From hystopathologycal point of view, the most frequent aspects were the evident mesenchymal reactions in portobiliar space in the liver, and in kidney more relevant were the congestions in renal parenchym and the tubular cell distructions (with the remaining of the basal membrane), intraglomerular hypercellularity. In the same time, constant myocardic lesions were the congestions and the mesenchymal reactions correlated with microvacuolisations in miocardyc cells. All this results reveals the intensivity and the extensivity of the pathological processes, correlated with the administration of the copper sulphate at this doses in sheep.
Copper sulphate is frequently involved in inducing of accidental poisoning in animals. The ruminants, especially the sheep, are more sensistive to CuSO4 intoxications.
268
Compounds containing this salt are steel in fitosanitary and phramacotherapeutic use, and consequently the risk of oral intake of large amounts or supradosing in animals, is continuously a realy problem in veterinary medicine. The purpose of this study is achieving important informations about the the hematological and biochemical parameters variations, and histopathologycal changes, after administration of coppers ulphate in different doses in sheep, and to establish possible correlations between the degree of the registered changes and the used dose. MATERIAL AND METHODS
The experimental investigations were realised on adult sheep batches (n=6), after oral administration of CuSO4 solution 1%o, in doses ranging from 5 to 20 mg/kg b.w. The experiment wass carried out on 4 batches, the first (control batch) and 3 experimental batches in which we used the individual dose of 5, 10 and respectively 20 mg/kg b.w. After the administration (24 hours), were taken blood samples for laboratory analysis. The hematological investigated parameteres were the levels of direct values erythrocytic constants: Red Blood Cells (RBCs = mil/l), hemoglobinemia (Hb = g/dl), Hematocrit = Packed Cell Volume (PCV = %) and the values of some derived erythrocytic parameters: Mean Corpuscular Volume (MCV = 3), Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH = pg), Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC = g/dl). The biochemical investigation weas realised on blood serum, and was consistiing from the determination of seric transaminase activity (ALAT and ASAT), creatininemia and uremia. After the sacrification, the lesional changes were revealed by nechropsic and histopathologyc examination (using the Hematoxiline-Eosine-Methilen blue method).
RESULTS The results of the hematologycal investigations of the experimental batches in comparison with the results obtained in control batch are presented in table 1. The hematological investigations reveals an obvious hemococncentration (the elevation of the RBC and of the PCV) in correlation with the dehydration consecutively status (induced by the the polyuria and diarrhoea), esspecially in ewes from the the batches were was administered the copper sulphate in doses of 10 and respectively 20 mg/kg b.w. The results of the biochemical investigations are presented in table 2.
269
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Table 1 Average values of the hematological parameteres in control and in experimental baches Batch/ Parameters RBCs Hb Hct MCV MCH MCHC Control batch 9.23 7.3 27.55 30.11 7.93 26.43 Batch No.1 (5 mg/kg b.w.) 9.64 7.76 29.15 30.29 8.05 26.73 Batch No.2 (10 mg/kg b.w.) 10.92 8.3 34.03 31.3 7.85 24.14 Batch No.3 (20 mg/kg b.w.) 11.56 9.26 33.7 29.2 8.07 27.67 Table 2 Average values of the biochemical investigated parameteres Batch/ Parameters Control batch Batch No.1 (5 mg/kg b.w.) Batch No.2 (10 mg/kg b.w.) Batch No.3 (20 mg/kg b.w.) ASAT (UI) 69.16 69.83 92.66 118.3 ALAT (UI) 7.75 6.7 9.5 13.5 Uremia (mg/dl) 35.16 35.16 72 95.16 Creatininemia (mg/dl) 1.45 1.40 1,65 2.14
From the biochemical point of view, cosistent elevations registered the seric specific hepatic enzymes activity (esspecially ASAT at ranges of 92.66 UI and 118 UI, for last two doses), changes what indicates the hepatic alterations, and of the uremia and creatininemia, which also indicate and obvious nephrotoxicity (esspecially in doses of 20 mg/kg b.w.). The morphopathologycal changes are very severe, esspecially in case of using the dose of 20 mg copper sulphate/kg b.w. Generally, the most frequent changes were congestive and hemoragic lesions in gastrointestinal tractus and parenchymatous organs. In liver, from the hystopathologycal point of view, more constant and consistent changes were the congestive and hemoragic aspects, correlated with hepatic cell distructions, evident mesenchymal reactions in portobiliary space. In kidneys, more relevant changes were the congestions in renal parenchym corticaly and medulary areas, intravasculary and intraglomerulary hemolysis and congestion in glomerular spaces and intraglomerular hypercellularity, and tubular cell distruction with the remaining of the basal membrane. In pulmonary and myocardic tissues samples, the lesions were less severe and inconsistent. These lesions were more severe and constant in animals from the batch were was used the copper sulphate in 20 mg/kg b.w. dose.
270
CONCLUSION The administration of CuSO4 in sheep, at doses beginning from 5 mg/kg b.w. to 20 mg/kg b.w., was followed by consistent changes of the hematological and biochemical parameteres, correlated with the specific induced action at this level. The hematological investigations reveals an constant hemoconcentration, due to the consecutively dehidration and an evident hemolysis. The biochemical changes were dominated by an consistent elevation of the seric enzymatic activity (especially ASAT), which indicate serious hepatic cell morphologic and functional alterations, and high values of the uremia and creatininemia, which also indicate the nephrotxicity of this salt in sheep. The consistant and constant histopathologycal aspects can represent a realy morphologycal support of these paraclinical modifications, esspecially in liver and in kidneys, induced by the copper sulphate. The morphopathologycal registerted changes are demonstrating the acute and brutal action of the copper sulphate for the investigated parenchymatous organs, which indicate her extreme hepato- and nephrotoxicity. All these results reveals the intensivity and the extensivity of the pathological processes, correlated with the oral administration of the copper sulphate (at these doses), in sheep.
REFERENCES
1. Codreanu, M., A. Ionescu, ueanu,E., Adriana Oranu, Iuliana Codreanu, 1999 Hematological, biochemical and toxicologycal aspects in experimental poisoning with copper sulphate in sheep; 9th Sci.Sess., Spiru Haret F.M.V., Bucharest, p.51-52, April, 29. Codreanu, M.D., 1999 Contribuii la farmacotoxicologica unor substane methemoglobinizante implicate n patologia ovinelor, Tez de doctorat, Bucureti, 2 iulie. Crivineanu, V., M. Codreanu, 1998 Laboratory diagnosis in veterinary toxicology, U..A.M.V., Bucureti. Crivineanu V., Goran G.V., 2004 Toxicologie veterinar, Editura Printech, Bucureti Goran G.V., Crivineanu V., Manuella Militaru, Camelia Papuc, 2004 Aspecte enzimatice i histopatologice n intoxicaia experimental cu sulfat de cupru la oaie, Lucrri tiinifice Medicin Veterinar, vol. XXXVII, 2004, Timioara, ISSN 1221-5295 Osweiller, G.D. Toxicology, The National Veterinary Medical Series for Independent Study, Williams and Wilkins, 93, Iowa, US
2. 3. 4. 5.
6.
271
MODIFICRI HISTOPATOLOGICE I ELECTRONOMICROSCOPICE INDUSE DE NITRATUL DE SODIU N EXPERIMENT ACUT I CRONIC LA OAIE
HYSTOPATOLOGYCAL AND ELECTRONOMICROSCOPIC CHANGES IN ACUTE AND CHRONIC EXPERIMENT INDUCED BY SODIUM NITRATE IN SHEEP
G.V. GORAN, M.D. CODREANU, V.CRIVINEANU, Manuella MILITARU, Iuliana CODREANU, Emilia CIOBOTARU U.S.A.M.V. Bucureti Structural changes alterations can be better observed and understood in their deeply intimity, by understanding the ultrastuctural (electronomicroscopical) correlated with hystopathologycal changes, in different tisular structures after sodium nitrite administration in sheep. For this purpose, sodium nitrite was administered in dose of 150 mg/kg (acute experiment) and 20 mg/kg (in chronic experiment) in adult sheeps. After sacrification, were colected samples for the anatomopathological and electronomicroscopycal examinations (TEM). Myocardic lesions were dominated by vacuolar dystrophy and other alterative lesions, such as congestive and necrotic modifications, and the ultrustructural changes were dominated by intra- and interfascicular oedema, mytochondrial vacuolisations and mytochondrial distructions, necrosis and disruptions in myocardial fibres, and alterations in Z myofibrilar bands . In the liver, the lesional aspects were dominated by the vacuolar intracytoplasmic dystrophy, caryolysis in connection with a reduced cellularity and oedema in Disse spaces, and the ultrustuctural examinations reveals mytochondrial distructions and vacuolisations. In kidneys, the most important were the evident alterations of the brush border in tubular structures, and an obvious intraglomerular hypercellularity, with the growing of the vascular glomerulus, constant associated with lesions of intracytoplasmic mycrovacuolisations of the nephrocytes.
In ruminants, nitrogenous compounds intake, especially the sodium nitrite, in high doses (in case of intoxication), is frequently involved in inducing serious damages to different tisular structures. Morphologycal alterations can be better observed and understood in their deeply intimity, by understanding the ultrastuctural (electronomicroscopical) correlated with hystopathologycal changes, in different tisular structures after sodium nitrite administration in sheep.
272

For this purpose, sodium nitrite was administered in dose of 150 mg/kg (acute experiment) and 20 mg/kg (in chronic experiment) in 5 adult sheeps/experiment. In acute experiment sodium nitrite was oral administered, in 1% solution. In chronic experiment sodium nitrite was oral administered in daily dose of 20 mg/kg, for 14 days consecutively After slaughtering, were colected samples for the anatomopathological and electronomicroscopycal examinations (TEM). For the hystopathologic examinations were used the trichromic strains (Hematoxiline-Eosine - Methilen blue) and Toluidine blue method. Electronomycroscopical examinations were realised by TEM (transmision) method.
RESULTS AND DISCUSION The results of our study showed that the registered lesions are very complex, with a high degree of specificity in parenchyma. Myocardic lesions were dominated by vacuolar dystrophy and other alterative changes, such as congestive and necrotic modifications, and the ultrastructural changes were dominated by intra- and interfascicular oedema, mytochondrial vacuolisations and distructions, necrosis and disruptions in myocardial fibres, alterations in Z myofibrilar bands. In kidneys, the most constant and consistent changes were the severe alterations of the brush border in tubular structures, with majore reducing of the filtration area, and an obvious intraglomerular hiperecellularity, with the growing of the vascular glomerulus, constant associated with lesions of intracytoplasmic microvacuolisation of the nephrocytes. In the liver, the lesional aspects were dominated by the vacuolar intracytoplasmic dystrophy, caryolysis, in connection with a reduced cellularity and oedema in Disse spaces and the electronomicroscopical examinations reveals major mytochondrial distructions and vacuolisations. In chronic experiment, the lesional complex was evident reduced and nonspecific, generally being dominated by moderate congestive and distrophyc lesions in parenchymatous organs. CONCLUSION The given results showed the consistent changes in different tissues (internal organs) after hystopatologycal and ultrastructural (electronomicroscopic) examinations, in acute experiment, after sodium nitrite administration in sheep.
273
These findings reveals a constant and consistent complex of changes, registered in parenchymatous organs, and recognize a high degree of specificity (characteristic for the acute agresion of these structures). The lesional complex is in accordance with the registered clinical manifestations, and with other studies, described by the specific literature. In chronic experiment the anatomoclinical complex is less severe and without obvious specificity. Our results try to complete the avalanche of bybliographycal informations about the serious damages induced by oral intake of different amounts of sodium nitrite in sheep.
REFERENCES
1. 2. 3. 4. 5. 6. Baba, A.I., 1997 Diagnostic necropsic veterinar, Ed. Ceres, Bucureti. Codreanu M.D., Manolescu N., Adriana Oranu, Iuliana Codreanu, 2001 th Ultrastructural changes induced by sodium nitrite in sheep. 5 ESVCN th th Conference, 13 14 September, Sursee, Switzerland. Codreanu M.D., 1999 Contribuii la farmacotoxicologia unor substane methemoglobinizante implicate n patologia ovinelor, Tez de doctorat, Bucureti, 2 iulie. Crivineanu V., Goran G.V., 2004 Toxicologie veterinar, Editura Printech, Bucureti Goran G.V., Crivineanu V., M.D. Codreanu, 2005 - A study about induced methaemoglobinaemia by copper based products in sheep, Buletinul USAMV Cluj-Napoca, Seria Medicin Veterinar, volumul 62, ISSN 1454-2382 Cornil, N., Manolescu, N., 1995 Structura i ultrastuctura organelor la animalele domestice, Editura Ceres
274
STUDIU COMPARATIV PRIVIND ARTROGRAFIA CU SUBSTANE DE CONTRAST IONICE I NONIONICE (ODISTON I ULTRAVIST 300)
COMPARATIVE STUDIES IN ARTROGRAPHY WITH IONIC AND NONIONIC CONTRAST SUBSTANCES (ODISTON AND ULTRAVIST 300)
I. PAPUC, R. LCTU U.S.A.M.V. Cluj-Napoca The objectives of this studies is to establish the possibilities for atrography examination utilizing Odiston, witch is a ionic contrast substance, compare to Ultravist 300, a nonionic contrast substance, regard the qualities of artrographyc images, optimal time for radiological exposure, the quantities of using substance, the concentration and the side effects witch can occur at administration.
MATERIALE I METOD
Pentru efectuarea acestui studiu am folosit 8 cini de vrst i talie diferit. 6 dintre aceti cini au fost folosii pentru determinarea dozei utile pentru articulaiile n studiu. Animalele au fost lotizate dup talie, astfel: - Animale de talie mare cu greutate cuprins ntre 20-24 kg; - Animale de talie mijlocie cu greutate medie de 10 kg. Substanele folosite au fost reprezentate de Odiston substan de contrast organoiodat i Ultravist 300 substan de contrast nonionic, cu osmolalitate sczut. Odistonul a fost foosit n concentraie de 30% ca atare, ct i diluat cu ap distilat n raport de 1:1 i 1:3, obinndu-se soluii de 15% i 7,5% Odiston. Substana nonionic Ultravist 300, gsit n flacoane de 100 ml cu 0,623 g iopromid/ml n concentraie de 30%, a fost folosit ca atare, ct i diluat cu ap distilat n raport de 1:1. Dozele folosite au fost n funcie de mrimea articulaiei i talia animalului. Pentru articulaia umrului doza a fost cuprins ntre 2,0-2,5 ml; articulaia cotului 2,0 ml; articulaia grasetului 2,5-3 ml, la animalele de talie mare. Pentru animalele de talie mijlocie am folosit pentru articulaia umrului 1,5 ml; articulaia cotului 1,5 ml; articulaia grasetului pn la 2,0 ml. Pregtirea animalului am efectuat-o prin anestezie general folosind Acepromazin n doz de 0,15 ml/10 kg corp i.v., n asociaie cu Ketamin 10 mg/kg corp. Local s-a efectuat toaleta mecanic respectndu-se regulile de asepsie i antisepsie. Punciile articulare, au fost efectuate cu ace sterile, adaptate dup talia animalului. Toate examinrile s-au efectuat folosindu-se procedura stabilit fr premedicaie. 275
Radiografiile diferitelor articulaii cuprinse n studiu au fost examinate n funcie de intensitatea de contrast, claritatea cartilajului i a conturului sinovial. Pentru articulaia umrului animalul a fost contenionat n decubit lateral, cu membrul anterior liber, tras, n extensie. Puncia a fost realizat prin orientarea acului uor oblic, pe partea lateral a articulaiei. Pentru articulaia cotului animalul a fost contenionat n decubit lateral, membrul uor tracionat, puncia efectund-o n faa olecranului, la aproximativ 1 cm, pn n momentul ajungerii n spaiul articular. Pentru articulaia grasetului animalul a fost contenionat n decubit lateral, efectund puncia pe faa anterioar i uor lateral articulaiei. Dovada efecturii punciei a constat n exteriorizarea lichidului sinovial. Pentru toate articulaiile s-a efectuat o aspiraie a lichidului, pentru a putea fi nlocuit cu substana de contrast. Injectarea substanei de contrast a fost efectuat lent n max. 20 de secunde. Expunerile cu raze X au fost efectuate cu ajutorul unui aparat SK-7-3 Medicor, din inciden latero-lateral i ventro-dorsal. Intervalele de expunere au fost stabilite imediat dup administrare, dup 30 minute i la 24 h, animalele fiind sub observaie clinic pentru evaluarea strii generale.
REZULTATE I DISCUII Informaia obinut n urma examenului radiologic asupra articulaiilor este important n modul de orientare a conduitei terapeutice, motiv pentru care trebuie respectate toate etapele execuiei. Realizarea punciei articulare a constituit n general cea mai dificil etap n realizarea artrografiei, fiind posibil sub control radiologic sau prin evidenierea lichidului sinovial. Pentru stabilirea dozei utile, am fcut mai multe tatonri pentru a stabilii cantitatea de substan ce poate fi administrat ntr-o articulaie, punndu-se n eviden opacifierea spaiului articular i gradul de distensie a fundului de sac. Substana s-a administrat cu grij, pentru a evita ruperea capsulei articulare ce ar fi dus la diseminarea substanei periarticular, compromind investigaia. Gradul de opacifiere a spaiului articular, precum i a elementelor articulare au depins de tipul de substan folosit i de diluia acesteia. n general, Odistonul introdus n spaiul articular a produs opacifierea pe o durat variabil n timp, claritatea imaginii fiind mai bun imediat dup administrarea soluiei, diminundu-se progresiv la 15 minute de la administrare, n timp ce contrastul i calitatea imaginii obinute n urma administrrii de Ultravist 300 au fost excelente n toate cazurile, cu opacizarea corespunztoare a spaiilor comune, precum i contrast detaliat. A existat doar un singur caz n care rezultatul a fost considerat slab, din cauza diluiei rapide a mediului de contrast. Calitatea imaginii cu Ultravist 300 a
276
fost foarte bun la 30 minute, comparativ cu a Odistonului, care a fost mult mai diminuat. Tolerabilitatea a fost diferit, la injeciile intraarticulare. Astfel injeciile intraarticulare cu Odiston au fost dureroase, iar o parte din pacieni au prezentat o inflamaie local.
Fig. 1 - Poziia corect a acului n cavitatea articular. Ultravist 300 expunere laterolateral la 5 minute articulaia scapulohumeral
Fig. 2 - Imagine radiologic a articulaiei cotului expunere medio lateral n poziie neutr (Ultravist 300) la 10 minute
Fig. 3 - Artrografia umrului expunere din inciden medio lateral, obinut prin injectare de Odiston. Expunere la 10 minute
Fig. 4 - Imaginea radiologic a articulaiei, expunere din inciden medio lateral (Odiston). Expunere la 20 minute
n cazul administrrii de Ultravist 300, injectarea intraarticular nu a fost dureroas i nu s-au pus n eviden reacii sistemice imediate. Reaciile locale au
277
fost absente. Imagini bune s-au obinut att n cazul folosirii de substane ca atare ct i de substane diluate. Dozele folosite au fost obinute prin tatonare, iar pentru a pune n eviden diferitele componente ale articulaiei am recurs la expuneri multiple n ceea ce privete incidena, ct i a razelor osoase ce contribuie la structura articulaiei. Pentru un singur caz am utilizat diluia de 1:3, situaie n care s-au pus n eviden imagini radiologice de calitate slab. CONCLUZII Utilizarea Ultravistului 300 n artrografii este mult mai bine tolerat, comparativ cu preparatele clasice iodate (Odiston), chiar n cazul unor concentraii i doze mai mari, iar frecvena i intensitatea reaciilor secundare au fost mult diminuate. Asocierea substanei de contrast cu anestezice locale a redus intensitatea reaciilor secundare dureroase n momentul injectrii substanelor. Concentraia optim de substan activ de contrast non ionic este ceea de 0,623 g iopromid/ml din produsul comercial Ultravist 300. Dozele utilizate n artrografii difer n funcie de talia animalului i de tipul de articulaie dup cum urmeaz: Pentru articulaia scapulo humeral s a utilizat 2,0 2,5 ml la cini de talie mare i 1,5 ml la cini de talie mijlocie. Pentru articulaia femuro tibio rotulian: 2,5-3 ml la cinii de talie mare i 2,0 ml la cini de talie mijlocie. Pentru a articulaia humero radio ulnar: 2,0 ml la cine talie mare i 1,5 ml la cini de talie mijlocie. Artrografia este mai valoroas la articulaiile prevzute cu capsul articular, cu condiia utilizrii de concentraii i doze adecvate, n vederea opacifierii moderate a spaiului articular, oferind posibilitatea diferenierii pe imagine a structurilor articulare. Calitatea opacifierii n artrografie se reduce pe msur ce crete intervalul de la injectare, perioada optim fiind de pn la 5 minute, precum i de tipul de preparat utilizat. Preparatul non ionic Ultravist 300 produce o opacifiere de lung durat. Examinare fizic a lichidului sinovial confirm tolerana mai bun a organismului la preparatul non ionic comparativ cu cel ionic. Preparatul Ultravist 300 prezint reale avantaje n investigaiile artrografice, ns are un foarte mare dezavantaj, acela al preului ridicat. Atunci cnd nu se respect cu strictee modul de administrare i doza, substana poate extravaza din articulaie ca urmare a ruperii capsulei articulare i s mascheze prin opacifiere unele elemente articulare: de tipul fundurilor de sac, ligamentele articulare sau unele formaiuni tendinoase.
278
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Bonati F., A. Lombardo, L. Moschini, 1987 Non ionic contrast media Preclinical and clinical data on Iopamidol Updated to december 1987, Milano, Centro studi Bracco. Damian A., I. Papuc, I. Chirilian, 2001 Anatomia comparat. Sistemul de susinere i micare, Cluj-Napoca, Ed. AcademicPres. Railhac I.I., I. Putois, 1983 Experimentation de liopamidol en arthrographie opaque. Ann Rdiol 26: 812-816, 1983. Ulici-Petru I., 1996 Contribuii privind utilizarea substanelor de contrast radiologic la cine. Teza de doctorat U.S.A.M.V. http://www.farmaline.ro/index.php?cid=5&pid=4394&&04ceddaf7cc18f3a8575a2417b 87e774=78374487
279
OBSERVES REGARDING FELINE UROLOGIC SINDROME INCIDENCE

OBSERVAII PRIVIND INCIDENA SINDROMULUI UROLOGIC FELIN
Luminia Diana HRICU U.S.A.M.V. Iai n ara noastr s-a observat n ultimii 10 ani o cretere a cazurilor diagnosticate cu afeciuni urinare n special la felinele domestice. Prin studiile efectuate ne-am propus s observm creterea procentual a cazuisticii cu sindrom ulrologic felin i s stabilim ce loc procentual ocup fa de celelalte afeciuni constatate la felinele domestice.
Key words: Urological sindrome, domestic feline, incidence
In the last 15 years in special literature it was observed frequently urolithiasis in pets. In our country in the last 10 years it was observed an increased of frequency of urinary affections at domestical feline, especially an important increased by year to year. We proposed to observe what percent have urinary affection comparing with others affections diagnosed. Regarding to analyze urinary affections incidence, it was made observations for more pathological entities diagnosed at the urinary apparatus. We must mentioned that all three pathological entities in study are in urologic feline syndrome (cystitis, uretritis, obstructive uropathy caused by crystals, sand, real calculi, and urethral stenosis. MATERIAL AND METHODS
The studies were made at Medical Clinic from Faculty of Veterinary Medicine Iasi and at an Private practice in a period of 8 years meaning 1996 2003. It was studied all domestic feline diagnosed with urinary affections and was named at start Feline Urologic Syndrome and then it was made comparative percentages between them and other affections diagnosed in the same period. It was studied all cases male and female came for consultation in the period 1996 2003 and diagnosed with hemorrhagic cystitis, urolithiasis or spastic retention. In the study period it was consulted 2057 domestically feline.
280
RESULTS AND DISCUSSIONS The casuistic offer by Medical Clinic and Private practice shoed that incidence of urinary affections at domestic feline it was by 310 cases, registered into 1996 2003. Regarding the incidence of affections by years repartition, dates are evidenced in table 1.
Table 1 Incidence of urinary disturbances F.U.S. in domestic felines in the period 1996 2003 Years No. cases % comparing by total 1996 15 4.83 1997 45 14.51 1998 18 5.80 1999 18 5.80 2000 32 2001 44 2002 41 1.22 2003 97 3.28 Total 310
10.32 14.19
Analyzing the dates from table1, it was observed that the most rich year in casuistic was 2003, when was diagnosed 97 cases with feline urological syndrome who represent 31,28% by total. High frequency it was registered in 1997 too which represent 14,51%. In the next years the incidence was low, meaning in 2001, 2002, and 2000, when was registered approximately the same number of cases. So then, in 2001 are mentioned 44 cases who represent 14,19 percent by total, in 2002, was registered 41 cases domestic feline diagnosed, who represent 13,22% by total and in 2000 was diagnosed 32 cases number who represent 10,32% by total (310 cases). In the 1998 and 1999 years it was observed a coincidence of number of cases, so the prevalence in itch of them is 18 cases, meaning 5,80% by total. 1996 is the year with the lower number of cases diagnosed, 15 cases who represent 4,83% by total. Referring to urinary affections incidence in the period for study (1996 2003), excepting 1997, where the prevalence is high, it was observed a real increased of number of cases. That might by due the one side, by increase of the owners of animals and of course the increase of domestic feline population for pets and by the other side the increase of interest of owners for the health of pets. Another reason might be the explosion of the different sorts of food (especially dry) and adopted of them by owners (the easiest food for animals). Knowing the incidence of urinary affections by each year we tried to determined the percentage of urinary affections comparing of domestic feline population with another medical affections in every year and finally in 8 years of study.
281
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Table 2 Incidence of F.U.S. (feline urologic syndrome) cases vs. domestic feline population under treatment in the period 1996-2003 Year 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 Total Total number of cases presented 248 325 126 98 149 240 298 573 2057 No. cases with FUS 15 45 18 18 32 44 41 97 310 % FUS comparing with total no. of cases 6.04 13.84 14.28 18.36 21.47 18.33 13.75 16.92 15.07
Analyzing table 2 it was observed that highest percent of urinary affections it was in 2000 year, when it was consulted and diagnosed with different medical affections 149 domestic feline. By them, 32 was diagnosed with one by three pathological entities from study who represent 21,47 percent. In decrease is 1999 year when by total of 98 domestic feline consulted, 18 was diagnosed with feline urologic syndrome, who represent 18,36 percent. In 2001 and 1999 years, the percents are equal, but in 2001 the number total of cases presented for consult was highest, meaning 240 cases, and urinary affections was diagnosed in 44 cases from total. 2003 year was the most rich in casuistic (573 feline) and by them 97 was diagnosed with feline urologic syndrome, number represented in 16,96 percent. In 1998 it was consulted 126 domestic feline and by them 18 was diagnosed with urinary affections (meaning 14,28%). 1997 was an urologic casuistic reach year, 45 cases, but low percentage is due to high number of consulted cases of domestic feline. The next was 2002 year, with a decreasing percentage (13,75) similar with 1997, so it was consulted 298 pets and by them 41 was studied. The year with the low cases diagnosed with urinary affections was 1996, when was consulted 248 domestic feline and by them only 15 meaning 6,04% had urinary affections. Making a rapport of consulting in this period (2057) we can say that FUS was diagnosed in 15,07%.
282
CONCLUSIONS In the period of study it was observed an increase of cases diagnosed with Feline urological syndrome starting at 4,83% in 1996 to 31,28% cases diagnosed in 2003. Comparing with other types of affections in 8 years of study it was observed a increase of FUS starting 6,04% in 1996 and an peaks of 21,47% in 2000. After our studies in 8 years it was observed that incidence of cases with feline urologic syndrome have a 15,07 percent from consulting feline.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Brz H., 1981 Patologie i clinic medical veterinar. Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti. Cotard, J.P., 1992 L'urolithiase feline. Le Point Vet., vol. 24, nr. 146, aug. sept Ettinger S.J., 1983 Disease of the dog and cat, Textbook of veterinary internal medicine vol II, Ed bz W.B. Saunders Company Philapelphia USA. Ghergariu, S., 1995 Patologia nutriional i metabolic a animalelor. Ed. Medical Vet. Bucureti. Hagiu, N., 1993 Patologie medical veterinar. Curs Lito. Vol. 2. C.M. Institutul Agronomic Iasi, FMV Mihai D., 1994 Patologie i clinic medical veterinar. Ed. Ceres, Bucureti., Vol. 2; Bolile aparatului urinar. Osborne C.A., Finco D.R., 1977 - Urinary tract infections: New solutions to old problems. In Scientific Proceedings of the 44 th Annual Meeting of the American Animal Hospital Association. South Bend, Indiana, Am Anim. Hosp. Assoc.
283
DIAGNOSTIC ASPECTS REGARDING ESTABLISH TYPE OF UROLITHIASIS TO A DOMESTIC FELINE (CASE STUDY)
ASPECTE DE DIAGNOSTIC N VEDEREA STABILIRII TIPULUI DE UROLITIAZ LA O FELIN DOMESTIC (STUDIU DE CAZ)
Luminia Diana HRICU, Gabriela RILEANU U.S.A.M.V. Iai n lucrarea de fa ne-am propus un studiu de caz pentru a evidenia importana corectitudinii diagnosticrii urolitiazei. Pentru stabilirea exact a diagnosticului de urolitiaz s-au utilizat pe lng examinarea clinic, o serie de examene suplimentare de diagnostic (ecografia, radiografia, microscopia optic i microscopia electronic). n urolitiaz este foarte important de stabilit att tipul de cristalurie sau de urolit ct i nivelul localizrii calculozei (renal, ureteral, vezical sau uretral). Doar dup stabilirea unui diagnostic cert se poate recurge la efectuarea unui tratament n funcie de tipul de urolit.
Urolithiasis is known affection at animals and in human. In speciality literature the urolithiasis is considered disease of century. After last study made in our country regarding the incidence it may say that urolithiais at the domestic feline is very frequent so, at consultation are presented numerous cases male and female. MATERIAL AND METHODS
The study was effected in a cat, commune breed, in 7 year age, with thenesma, disury, frequent urinate and low quantity, urine colour was red. In attentive examination it was observed that the cat was eliminated calculi in urinate time on the consult table. The exam was made by know methods (observation, inspection, palpation). For confirm the urolithiais it was used secondary means of diagnosis, especial ultrasonography, and radiography. For a good therapeutically decision it was harvest the urine (for the sediment exam). It was executed a simple test with strip type DEKA-PHAN-LEUCO. Because in sediment were small calculi (eliminated by natural way) it was exam almost the sediment and the small calculi at optic microscope and then just calculi at scanning microscope electronic. The sediment it was obtained from centrifuge of fresh urine.
284
It was exam at microscope between two lames, without coloration, or with simple coloration with metal blue or iron tincture. A few probes were exam at scanning microscope electronic for evidence the structure of stone surface. It was used the scanning microscope electronic TESLA BS 300. The clarification was made with aetilic alcohol solution 980, then the probes it was fixed in aluminum cylindrical supports (using a paint with conduction proprieties), and after that it was introduced in methalisor. The methalisor method consist in silver evaporation in vide and set down the atomic powder of an angle on the probe. The metal set down layer had a great power to spread the electrons which ensure the contrast wish of image. The tension of acceleration of electrons was till 20 kV
RESULTS AND DISCUSSIONS At the consult it was observed the attitude for urinate frequent taken by cat, at palpation of bladder it was observed the pain express by long mewed and a low urine quantity of red colour in which was very small calculi. At the exam of urine with strip it was observed a pH-8, abundant urinary sediment, urinary density 1.030, high number of hematites, and high proteins. Ultrasonography evidenced a large bladder wall, abundant urinary sediment, a calculus with 12 mm dimension and numbers small calculi. At radiography was evidenced a radio opaque addition in the bladder. By sediment exam at optical microscope it was evidenced the existence of hematies, leukocytes, the I and II level cells and the crystals of struvite and calcium carbonate. To the scanning microscope electronic image of fragments of calculi it was observed that the sediment contained highest struvites and fracture of calculus contained a lot of calcium carbonate crystals.
Fig. 1 - Scanned image of fraction surface of calcium carbonate calculi x 69
285
Fig. 3 - Scanned image of fraction surface of calcium carbonate calculi x660
CONCLUSIONS After clinical examination and testing the urine with strip it can establish only the diagnostic of Feline urologic syndrome (FUS). Only supplementary tests for diagnostic (ultrasonography and radiography), can establish existence of urolithiasis. Identification of crystals type or a type of calculi is necessary for establish efficacious therapy. Unorganised elements who composed the urine are represented by hasten salts crystalline or amorphous form. Always, crystallizations depend by urine concentration and by the urinary pH. Alkaline reaction favour crystallisations of struvites and calcium carbonate. To identification the calculi had a bimineral mixture meaning ammonium magnesium phosphates and calcium carbonate, both of them crystallising to alkaline pH.
286
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4.
5.
Codreanu M., Diaconescu A., 2003 Diagnosticul ecografic al animalelor de companie. Ed. Coral Sanivet Bucureti. Cotard J.P., 1992 Lurolitiase feline. Le Point Vet .vol 24, nr.146, aug-sept. Ghergariu S., 1988 Patologie medical a animalelor. Ed Ceres Bucureti Hesse A., Sanders G., Leusmann D.B., 1986 Analyses of feline urinary stones using infrared, spectroscopy and scaning electron microscopy. Kleintiepraxis 35:10,505 512. Hricu Luminia Diana, Vulpe V., 2001 Aspecte privind metodologia diagnosticului afeciunilor aparatului urinar la cine i pisic. Lucr t.vol 44 seria MV, p 340.
287
ASPECTS OF ENZYMATIC DIAGNOSIS OF HEPATO-BILIARY DISEASES IN DOG

ASPECTE ALE DIAGNOSTICULUI ENZIMATIC N AFECIUNILE HEPATO-BILIARE LA CINE
R.M. SAUCIUC, N. HAGIU, Gh. SOLCAN, M. MUSTEA, V. BOGHIAN U.S.A.M.V. Iai The goal of this study was to establish specificity and sensibility of serum enzymes with hepatic primary origin in diagnosis of hepato-biliary diseases in dog and also the influence of induction of enzymatic activity produced by treatement with phenobarbital. Serum biochemical tests accomplished on dogs with hepato-biliary diseases reveald a 100% sensibility of AST (aspartate aminotransferase) and also a relative sensibility of ALT (alanine aminotransferase), ALP (alkaline phosphatase) and GGT (gamma glutamyl transferase). The study revealed also a high specificity of all four enzymes(ALT, AST, ALP, GGT) demonstrated by significant increases of mean values for each of these. In epileptic syndrome cases the influence of phenobarbital treatment on enzymatic serum activity was minimum, mean values of ALT, ALP and GGT were in reference range. A relatival high sensibility of AST serum activity was observed at 6 from 10 dogs treated with phenobarbital but these increasing were moderate indicating a possible induction of enzymes activity or an extrahepatic origin of serum AST.
Key words: dog, hepato-biliary enzymes, enzymatic induction, phenobarbital
The main serum enzymes included in routine tests of hepato-biliary diseases in dog are reperesented by: liver transaminases (ALT- alanine aminotransferase, AST aspartate aminotransferase), ALP alkaline phosphatase and GGT gamma glutamyl transferase. After Bain P.J. (2003) the tissues with highest activity of ALT at animals are liver and muscular tissues (cardiac and skeletic). Certain researches showed that in dogs the highest ALT activity is in hepatic cells unlike the ruminants, pigs, horses and birds hereupon serum ALT activity originated from the liver is very low. In this way increasing in serum ALT activity are considered relative specific for liver diseases. The mechanism of increasing of serum ALT activity include both enzyme releasing folowing cells injuries and induction of enzyme activity (increase of ALT synthesis) folowing treatments with certain medicines (glucocorticoids, anticonvulsivants). Plasma half life of ALT in dogs is about 60 hours. (9)
288
AST is present in high concentrations in a great variety of tissues. In dog the tissues with highest concentrations of AST are: heart, liver, skeletal muscle tissue, kidney and brain. Plasma half life of AST in dog is about 12 hours. (5) ALP is associated with cells membranes in many tissues. Certaines isoenzymes named by their origin are known in this way. Just three of these isoenzymes have clinical meaning, these contributing widley at serum activity of ALP: bone isoenzyme (BALP), liver isoenzyme (LALP), corticosteroids induced isoenzyme (CALP). (8) CALP is present in low concentrations in serum but high levels can be induced by exposure at high concentrations of exogenous and endogenous glucocorticoids. LALP and CALP originate from portion of hepatocytes membrane and biliary channels. BALP have osteoblastic origine and her functions are not completely elucidated. GGT is known also by her old name of gamma glutamyl transpeptidase. In dog the tissue with highest concentrations in GGT is kidney. In this case liver have a low concentration of GGT. Because of preponderant urinary excretion of kidney-originated GGT is supposed that major source of GGT serum activity is represented by liver. Same as ALP, increasing of serum GGT is a result of de novo liver synthesis than from release of free enzyme from cytoplasm. MATERIALS AND METHODS
The study was made on clinical cases from Clinic of Internal Medicine from Faculty of Veterinary Medicine of Iasi and included analyses of serum enzymes activity on 30 dogs divided in three categories: ten healthy dogs, ten dogs with different hepato-biliary diseases and ten dogs with epileptic symptoms treated at least two month with phenobarbital. Investigations consisted in biochemical analyses of serum regarding serum enzymes activity and certains parameters which reflect the activity of hepatobiliary system. In this way ALT (alanine aminotransferase), AST (aspartat aminotransferase), ALP (alkaline phosphatase), GGT (gamma glutamyl transferase), BT (total bilirubin), BUN (blood ureea nitrogen), PT (total proteins), CHOL (total cholesterol), TGL (triglycerides) were analyzed by using of semiautomatc biochemical analyzer. EOS 880 Plus.
RESULTS AND DISCUSSIONS Since variation of serum enzymes activity limits are different from an researcher to another and in this situation is difficult to establish exactly the maximum and minimum limit having pathological significance, was necessary to establish the normal values of our cases and to compare these with those from literature. Dogs selected for this category were represented by healthy animals, from different breeds, between 1,5 and 12 years old. We avoided to introduce in
289
this group dogs with with age below 1 year hereupon serum values of ALP are influenced by osteoblastic originated isoenzime (BALP). The results obtained on healthy dogs are presented in tabel 1 and revealed that values of serum enzymes activity are quite similarly with those from medical literature. (1, 4)
Tabel 1 Nr. ALT U/L 73,1 25,6 40,0 22,0 18,0 86,0 71,8 26,7 92,0 54,3 50,95 28,13 AST U/L 23,0 16,2 50,2 41,6 58,5 42,0 53,1 69,3 18,4 19,2 39,15 18,94 ALP U/L 41,2 28,0 21,3 124,0 90,6 44,3 81,0 34,1 61,8 74,0 60,03 34,42 GGT U/L 2,3 4,1 3,2 5,4 1,4 1,6 3,2 6,0 1,6 2,8 3,16 1,6 1,26,4 BT mg/dl 0,4 0,2 0,2 0,3 0,1 0,1 0,3 0,6 0,3 0,1 0,26 0.157 0,1-0,3 BUN mg/dl 23,0 12,7 14,8 25,1 37,0 22,0 48,9 52,0 16,4 42,1 29,4 14,47 15 - 50 PT mg/dl 7,0 6,8 6,4 5,9 7,7 7,2 6,0 7,1 7,6 7,2 6,89 0.61 5,57,5 CHOL mg/dl 145,0 231,2 248,0 186,8 151,1 221,4 174,4 220,7 192,3 262,0 203,29 39.72 125250
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Mean values obtained Reference 5-102 10-55 20-156 ranges* *(Aielo ES et all, 1998, Ghergariu S et all, 2000
The second category of dogs studied was represented by ten dogs from different breeds and with different age and sexes which were diagnosed with some primary or secondary hepatobiliary diseases (table 2).
Table 2 Nr. crt. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Breed and age Dog German sheepard 10 years Dog Pekinez 4 years Bitch Crossbreed 4 years Dog Crossbreed 10 years Dog German Sheepard 10 years Dog German sheepard 9 years Bitch German sheepard 12 years Dog Crossbreed 11 years Bitch Akita Inu 5 years Dog German sheepard 10 years Diagnosis Acute hepatitis Jaundice -Gallblader stone Liver cirrhosis, Liver steatosis Liver carcinoma - jaundice Limfosarcoma difuse liver localization Cervical adenocarcinoma liver congestion Liver cirrhosis ascitic syndrome Chronic active hepatitis Chronic hepatitis Limfosarcoma nodular liver localization
Results of these serum analyze are presented in table 3. A high sensibility of AST wich was observed it increasing in 100% from cases of hepato-biliary
290
diseases. Also AST demonstrated a high specificity for hepato-biliary diseases, its mean value increasing five time normal. A relative high sensibility was noticed in case of ALT wich increased in 8 from 10 cases (excepting cases of liver cirrhosis and gallbladder stone). Mean value observed for those 10 cases increased four time normal showing a high specificity for hepatobiliary diseases. Values of ALP demonstrated significant increases in 8 from 10 cases (excepting liver congestion and chronic hepatitis cases) showing a relative high specificity. Though mean value for those 10 cases for ALP increased two time normal demonstrating a high specificity for liver diseases. GGT showed a relative high sensibility, it serum activity increasing in 7 from 10 cases (excepting acute hepatitis, liver congestion, and chronic hepatitis). The mean value increased five time normal demonstrating a high specificity of GGT for liver diseases in dog.
Table 3 Nr. ALT U/L 138,1 57,41 87,75 866,8 206,7 343,4 442,2 900,7 234 952,9 Mean values AST U/L 306,0 225,7 523,6 613,2 214,5 256,0 146,4 181,9 143,2 371,0 ALP U/L 162,4 218,8 145,6 272,9 327,2 6,145 365,9 154,8 169,8 495,0 GGT U/L 0,793 7,394 13,32 134,0 6,615 5,12 18,54 90,48 5,2 51,61 BT mg/dl 43,82 41,79 5,037 7,9 1,022 0,589 0,392 3,453 0,281 2,508 BUN mg/dl 95,0 32,0 41,06 11,74 47,46 61,67 14,38 56,06 67,45 72,0 PT mg/dl 6,4 6,1 5,0 8,0 6,5 7,8 5,4 11,0 6,2 4,5 6,69 1.87 5,57,5 CHOL mg/dl 151,7 221,5 168,9 322,9 158,5 256,6 127,3 413,1 278,0 176,0 227,45 90,43 125250
422,99 298,15 231,85 32,80 10,67 49,88 353,14 167,38 143,42 45,19 17.10 26.42
Reference 5-102 10-55 20-156 1,2-6,4 0,1-0,3 15 - 50 ranges * *(Aielo ES et all, 1998, Ghergariu S et all, 2000)
Results of analysis on the third category of dogs showed a minimum influence of treatment with phenobarbital on serum enzymes activity. In this way six cases of slowly increases of AST value were noticed and one case with increased GGT value. Mean values in 3 from 4 cases were between normal ranges (tabel 4). Only mean value for AST was moderate increased indicating a possible process of enzymatic induction or a extrahepatic origin of serum enzyme.
291
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabel 4 ALT U/L 1 Dog-Bichon Malthese-2,6 years 56,7 2 Bitch -German shepard-3 years 86,5 3 Bitch - Pekinez-10 years 43,11 4 Dog - German shepard -6 years 22,41 5 Dog - Crossbreed 4 years 16,02 6 Dog -Boxer-2,5 years 50,04 7 Bitch - Crossbreed -4,6 years 77 8 Dog Pekinez 8 years 80,5 9 Dog -Doberman-6 years 16 10 Dog Husky- 2 years 69 51,72 Mean values obtained 33,15 Reference ranges* 5-102 *(Aielo ES et all, 1998, Ghergariu S et all, 2000) Nr. Sex, breed, age AST U/L 75 206,5 68,98 53,87 38,0 97,1 21 163 41 74 83,84 58,37 10-55 ALP U/L 43,16 23,0 67,12 26,40 23,09 43 102 128 94 36.07 53,63 39,52 20-156 GGT U/L 1,8 2,06 1,74 3,2 4,5 8,0 3,0 5,0 2,22 3,2 3,47 1,93 1,2-6,4
CONCLUSIONS 1. In hepato-biliary diseases liver enzymes presents a high specificity demonstrated by significant increasing of ALT, AST, ALP and GGT mean values. 2. Sensibility for those four liver enzymes was relatively high, at least two from four enzymes beeing increased in each case. A special sensibility was demonstrated by AST which increased values in all these ten cases of hepatobiliary diseases. Surprisingly in some severe injury like liver cirrhosis and gallbladder stones ALT values were between reference ranges. We conclude that one set of analysis is helpful for diagnosis only when are used all those four enzymes together, otherwise there is a great risk of error in diagnosis. 3. The influence of phenobarbital treatment on serum enzymes activity is reduced, only AST demonstrated a moderate sensibility but in this case increasing can be explained by possible enzymatic induction or by an extrahepatic origin of serum AST.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. Aielo E. Susan et all., 1998 - The Merck Veterinary Manual, Eighth edition, National Publishing, Inc. Philadelphia, Pennsylvania.p.2192-2193 Bain P.J. in: Latimer K.S., Mahaffey E.A., Prasse K.W., 2003 - Duncan and th Prasses Veterinary Laboratory Medicine: Clinical Pathology, 4 ed. Ames, Iowa State Press, p. 193 214.
292
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 3. Center S.A., Slater M.R., Manwarren T., Prymak K., 1992 - Diagnostic efficacy of serum alcaline phosphatase and gamma glutamyltransferase in dogs with histologically confirmed hepatobiliary disease: 270 cases (1980-1990). J Am Med Vet Assoc vol. 201 p. 1258-1264 Ghergariu S., Pop A., Kadar L., Spnu Mariana, 2000 - Manual de laborator clinic veterinar, Editura ALL Educaional Bucuresti. Meyer D.J., Harvey J.W., 1998 - Veterinary laboratory medicine: Interpretation and diagnosis. Philadelphia W.B.Saunders Co. p. 157 186 Muller P.B., Taboada J., Hosgood G., Partington P.B., VanStenhouse J.L., Taylor H.W., Wolfsheimer K.J., 2000 - Effects of long-term phenobarbital treatment on the liver in dogs. J Vet Intern Med vol. 14, p. 165 171 Solcan Gh., Boghian V., Rollin F., 2005 - Patologie i clinic medical veterinar, Edit. Ion Ionescu de la Brad Iai Sykalima M., Takiguchi M., Yasuda J., Hashimoto A., 1997 - The age dependent levels of serum ALP isoenzymes and the diagnostic significance of corticosteroid induced ALP during long-term glucocorticoid treatment. J Vet Med Sci vol. 59(10), p. 905 909 Stockham S.L., Scott M.A., 2002 - Fundamentals of Veterinary Clinical Pathology. Ames, Iowa State University Press, p. 434 - 459
4. 5. 6. 7. 8.
9.
293
STUDIUL EFECTELOR APITERAPIEI CU PRODUSUL HEPRO N AFECIUNI HEPATICE LA CINE

A STUDY ON HEPRO PRODUCT API-THERAPEUTICAL EFFECTS IN DOG LIVER DISEASES
I. RDOI1, Agripina APCALIU2 Carmen NEGOI1, Crengua PAVEL1 D. CONDUR3 1 U.S.A.M.V. Bucureti 2 I.C.D.A. Bucureti 3 Universitatea Spiru Haret Bucureti The worldwide increasing interest on alternative and complementary medicine, especially on veterinary api- and phyto-therapy, encouraged us to research the HEPRO api-therapeutic product effects in some dog liver diseases. Unless classical phyto- and api-therapy, which uses the brute bee products, our modern api-phyto-therapy uses the product HEPRO, made and conditioned by ICDA in co-operation with Veterinary Faculty from Bucharest, following the researches made in 2002-2006 period. The healthy effects on internal organs and tissues were observed after six weeks treatement with HEPRO product, in miscellaneous liver diseases (minor liver failure, cholestatic diseases, acute hepatitis, liver cirrosis). HEPRO nutritional therapy methods applied in presented liver diseases had at least the same effectiveness as standard therapeutical methods.
MATERIAL I METOD
Investigaiile clinice i examenele ecografice i de laborator au fost realizate n Clinica de Medical a Facultii de Medicin Veterinar Bucureti, selectndu-se 17 cazuri pentru experiment. Cercetrile s-au realizat pe cini cu vrste i rase diferite (tabel 1, 2), cu diverse afeciuni hepatobiliare, care au fost tratai prin mijloace terapeutice clasice, comparativ cu protocolul terapiei nutritionale cu produsul HEPRO. Examenele de laborator au urmrit n principal att determinarea bilirubinemiei, a activitii transaminazelor (ALAT, GT) i fosfatazei alcaline (PAL) din snge pe Reflotron (chituri uscate) ct i efectuarea examenului complet al urinei (COMBUR-TEST). Testele au fost repetate sptmnal. Valorile normale de referin la cine pentru parametrii determinai n laborator au fost urmtoarele: bilirubinemie: < 0.61 mg/dl; transaminaza ALAT: < 40 U/l; transaminaza GT: <5 U/l; fosfataza alcalin (PAL): 20-150 U/l; proteinemia 5,4-7,7 g/dl; albuminemia 2,5-3,7 g/dl; bilirubinuria +. 294
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabel 1 Afeciunile hepatice diagnosticate la cini i protocolul terapeutic aplicat Afeciune Hepatit acuta Colestaz Mica insuficien hepatic Ciroza hepatic Tratament medicamentos Apiterapia cu HEPRO Cazul 1 Cazurile 11, 13 Cazul 4 Cazurile 8, 10, 12 Cazul 3 Cazurile 6, 14, 17 Cazul 2 Cazurile 15, 16 Tabel 2 Apiterapia cu produsul hepro,dozele zilnice Specificare Cini talie mic Cini talie mijlocie Cini talie mare Mica insuf. hepatic 3cp/10kg 2cp/10kg 1cp/10kg Colestaz 4cp/10kg 2cp/10kg 2cp/10kg Ciroz hepatic 4cp/10kg 3cp/10kg 3cp/10kg
Protocolul terapeutic a fost instituit n funcie de fiecare caz, iar pentru pentru apifitoterapie a fost utilizat produsul HEPRO, rezultat al cercetarilor pe o perioada de peste 3 ani, n doze de 1-4 cp/10 kg greutate vie, zilnic, n trei pro dosis, cu 30-60 minute nainte de mas, timp 44 zile.
REZULTATE I DISCUII Rezultatele cele mai spectaculoase ale apiterapiei cu produsul HEPRO s-au constatat la cini cu mic insuficien hepatic, unde analizele au artat revenirea la normal a valorilor bilirubinemiei i transaminazelor, cu rezultate superioare chiar, tratamentului medicamentos. n colestaz, rezultatele tratamentului cu produsul HEPRO sunt de asemenea superioare tratamentului medicamentos, ducnd la o normalizare a parametrilor biochimici studiai. n hepatita acut i n ciroza hepatic, rezultatele analizelor de laborator dup 44 zile de tratament, arat o tendin accentuat de vindecare, ns necesit mai multe edine de apifitoterapie nutritionala cu produsul HEPRO, pn la revenirea la normal a parametrilor biochimici investigai, n corelaie cu o evoluie clinic favorabil ce caracterizeaz vindecarea. Parametrii biochimici analizai arat o eficien, cel puin egal a apiterapiei cu HEPRO, fa de terapia clasic n toate cele 4 tipuri de afeciuni hepatice, rezultatele fiind prezentate n tabelele 3-6. Rezultatele analizelor nu pot fi raportate la rezultatele altor experimente efectuate pe cini afeciuni hepatice prin utilizarea apiterapiei, ns pot fi comparate rezultatele obinute n urma apiterapiei cu produsul HEPRO, faa de tratamentului medicamentos dup 44 zile de tratament.
295
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 3 Rezultatele investigaiilor biochimice nainte de tratament i dup 44 zile de tratament la cini cu mic insuficien hepatic Valoare iniial Caz 3 0,7 78 105 Caz 6 0,9 80 108 Caz 9 1 85 100 Caz 14 1 83 115 Tratament Apiterapia cu medicamentos HEPRO Caz Caz Caz Caz Caz Caz 17 3 9 6 14 17 0,8 69 107 0,6 67,8 76 0,5 60 62 0,3 51,5 60 0,3 41,2 91 0,5 33 84
Parametru Bilirubinemie (mg/dl) ALAT (U/l) PAL (U/l)
Tabelul 4 Rezultatele investigaiilor biochimice nainte de tratament i dup 44 zile de tratament la cini cu colestaz Valoare iniial Caz 4 1,6 103,5 107 11,24 +++ Caz 7 2,1 108 112 12 ++ Caz 8 1,1 102 105 10 ++ Caz 10 0,8 Tratament Apiterapia cu medicamentos HEPRO Caz Caz Caz Caz Caz Caz 12 4 7 8 10 12 2,5 0,8 86,8 64 9,8 + 0,85 68 58 7,5 + 0,6 79 41 4,1 + 0,5 55 53 6,4 + 0,85 36 60 4,2 +
Parametru Bilirubinemie (mg/dl) ALAT ( U/l) PAL (U/l) GT (U/l) Bilirubinurie
105 107 60 115 10,2 13,3 ++ +++
Tabelul 5 Rezultatele investigaiilor biochimice nainte de tratament i dup 44 zile de tratament la cini cu hepatit acut Valoare iniial Cazul 1 2,7 160 105 11 1,2 ++ Cazul 5 2,2 180 130 12 1,5 ++ Cazul 11 3 165 107 12 2,1 ++ Cazul 13 2,5 140 105 11,3 2,5 ++ Tratament medicamentos Cazul Cazul 1 5 2,2 88 77 9,1 2,6 + 1,9 109 88 8,1 2,7 + Apiterapia cu HEPRO Cazul Cazul 11 13 0,85 68 69 9,4 2,44 + 1,1 36 85 8,7 2,95 +
Parametru Bilirubinemie (mg/dl) ALAT ( U/l) PAL (U/l) GT (U/l) Albuminemie (g/dl) Bilirubinurie
296
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 6. Rezultatele investigaiilor biochimice nainte de tratament i dup 44 zile de tratament la cini cu ciroz hepatic Valoare iniial Cazul 2 1 102 110 1 4 ++ Cazul 15 1,3 105 115 1,3 3,8 ++ Cazul 16 0,9 98 107 2,5 4,5 ++ Tratament medicamentos Cazul 2 0,9 56 96 2,95 4,85 + Apiterapia cu HEPRO Cazul Cazul 15 16 0,8 0,9 59 56 101 94 2,4 2,8 4,96 4,7 + +
Parametru Bilirubinemie (mg/dl) ALAT ( U/l) PAL (U/l) Albuminemie (g/dl) Proteinemie (g/dl) Bilirubinurie
Rezultatele investigaiilor biochimice (tabel 3) la cini cu mic insuficien hepatic au artat dup 44 zile de tratament o revenire la normal a bilirubinemiei (0,3-0,5 mg/dl), n urma apiterapiei cu produsul HEPRO, fa de tratamentul medicamentos (0,5-0,6 mg/dl) i o scdere a activitii transaminazice ALAT (3351,5 U/l) fa de tratamentul medicamentos 60-67,8 U/l). La cini cu colestaz investigaiile biochimice au artat valori apropiate ale bilirubinemiei n urma tratamentului cu produsul HEPRO,de 0,5-0,85 mg/dl fa de 0,8-0,85 mg/dl n urma tratamentului medicamentos. Valorile activitii transaminazei GT au fost ntre 4,1-6,4 U/l n urma apiterapiei, comparativ cu limitele 7,5-9,8 U/l n urma tratamentului medicamentos. Transaminaza ALAT a sczut n urma apiterapiei la valori cuprinse ntre 36-79 U/l fa de 68-86 U/l n urma tratamentului medicamentos. Fosfataza alcalin (PAL) i bilirubinuria au sczut semnificativ prin ambele procedee terapeutice, nct se poate concluziona c efectul apiterapiei cu produsul HEPRO a fost cel puin la fel ca i terapia medicamentoas dup 6 sptmni de tratament. La cinii cu hepatit acut, scderea bilirubinemiei la valori de 0,85-1,1 mg/dl n urma apiterapiei fa de 1,9-2,2 mg/dl n urma tratamentului medicamentos, ct i scderea transaminazei ALAT la valori cuprinse ntre 36-68 U/l fa de 88-109 U/l n urma tratamentului medicamentos, ceea ce justific utilizarea apiterapiei cu produsul HEPRO. Valorile albuminemiei, ale fosfatazei alcaline, GT i bilirubinuriei fiind sensibil apropiate n ambele procedee terapeutice, aceasta arat tendina accentuat spre vindecare ns necesit o perioad de terapie nutritionala cu produsul HEPRO mult mai lung, pn la o vindecare complet. La cini cu ciroz hepatic, rezultatele apiterapiei arat o scdere a activitii transaminazei ALAT pn la valori de 56-59 U/l (fa de 40 U/l care este limita superioar a valorilor normale) cu o cretere semnificativ a proteinemiei i albuminemiei ns sub limitele normale, concomitent cu scderea
297
bilirubinei la 0,9 mg/dl (ns peste limita superioar a valorilor de referin 0,6 mg/dl), rezultate foarte apropiate de cele obinute n urma tratamentului medicamentos. Eficiena tratamentului medicamentos i a apiterapiei cu produsul HEPRO n ciroza hepatic, nu poate fi demonstrat dup o perioad de 44 zile, astfel nct investigaiile trebuie efectuate dup mai multe luni de zile de tratament. Exist ns o tendin de revenire la normal a parametrilor biochimici sanguini i urinari, corelat cu evoluia clinic favorabil a cazurilor urmrite n experiment. Investigaiile trebuie efectuate pe un numr mai mare de animale i o perioad de timp prelungit n cazul animalelor cu ciroz hepatic, ns rezultatele analizelor biochimice sugereaz o posibil asociere a apiterapiei si fitoterapiei cu tratamentul medicamentos (inclusiv perfuzii cu albumin, aminoacizi soluii rehidratante). CONCLUZII 1. Metodele de apifitoterapie cu produsul HEPRO n afeciunile hepatice prezentate, au fost cel puin la fel de eficiente ca i metodele terapeutice standard. 2. La cini cu mic insuficien hepatic, dup 44 se constat revenirea la normal a bilirubinemiei, sub 0,61 mg/dl n urma ambelor procedee terapeutice i scderea activitii ALAT (33-51,5 U/l) n urma apiterapiei , fa de (60-67,8 U/l) dup tratamentul medicamentos. 3. La cini cu colestaz, n urma terapiei cu produsul HEPRO, bilirubinemia a sczut la 0,5-0,85 mg/dl, fa de 0,8-0,85 mg/dl n urma tratamentului medicamentos, corelat cu scderea GT (4,1-6,4 U/l) fa de 7,59,8 U/l prin tratamentul medicamentos i cu scderea ALAT (36-79 U/l) n urma apiterapiei comparativ cu 68-86 U/l prin tratamentul medicamentos i cu scderea fosfatazei alcaline i a bilirubinuriei prin ambele metode de tratament. 4. La cini cu hepatit acut, scderea bilirubinemiei la valori de 0,85-1,1 mg/dl n urma apiterapiei fa de 1,9-2,2 mg/dl prin tratamentul medicamentos corelat cu scderea activitii ALAT (36-68 U/l) dup terapia nutritionala cu produsul HEPRO fa de 88-109 U/l n urma tratamentului medicamentos, justific utilizarea apiterapiei, artnd tendina de vindecare, demonstrat i de corectarea albuminemiei, bilirubinuriei i a activitii enzimelor PAL i GT. 5. n ciroza hepatic la cine n urma apiterapiei produsul HEPRO se constat scderea ALAT (56-59 U/l) i a bilirubinemiei (0,8-0,9 mg/dl) corelat cu creterea foarte semnificativ a albuminemiei (2,4-2,8 g/dl) i a proteinemiei (4,7-4,96 g/dl), cu rezultate aproape identice cu tratamentul medicamentos, arat o tendin spre corectare a valorilor parametrilor investigai, care sugereaz necesitatea prelungirii tratamentului pe durata de peste 2 luni de zile.
298
BIBLIOGRAFIE
1. Sapcaliu Agripina, I. Radoi si colab., 2004 - Cercetri privind elaborarea formulei farmaceutice i caracterizarea proprietilor fizico-chimice i microbiologice ale produsului apiterapeutic (referat 1 la contractul 4532/2004)-susinut la data de 30.11.2004 Sapcaliu Agripina, I. Radoi si colab., 2006 - Testarea preclinica a produsului obinut. (referat 3 la contractul 4532/2004)-susinut la data de 15.11.2005.2006) Sapcaliu Agripina, I. Radoi si colab., 2005 - Cercetri privind posibilitile de condiionare a produsului apiterapeutic (referat 2 la contractul 4532/2004)susinut la data de 28.02.2005) Mihai D., 2000 - Medicina intern a animalelor, vol. 1, Edit. GEEA, Bucureti. Neacsu C., 2002 - Compendiu de apiterapie. Edit Tehnica, Buc Rdoi I. M. Cornila, 2001 - Principii generale de terapie alternativ i complementar. Edit. Material didactic USAMV, Bucureti. Schoen Allen M., Susan G. Wynn, 1998 - Complementary and veterinary medicine : principles and practice. Mosby Inc. St. Louis, Missouri. Willian Collinge, 1997 - Cartea Medicinei. Ghid complet de medicin complementar, Ed. Lucman
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
299
VRSTA I GREUTATEA CORPORAL - FACTORI DE RISC PENTRU BOALA PARODONTAL LA CINE

AGE AND BODY WEIGHT AS RISK FACTORS FOR PERIODONTAL DISEASE DOG
Luminia COSTINAR, Corina Mariana PASCU U.S.A.M.V. Timioara Periodontal disease is a common oral disease in dogs. Periodontal disease means a series of changes that are associated with the inflammation and loss of the deep supporting structures of the teeth. Numerous studies demonstrated a significant correlation between greater dental calculus and advanced age. Periodontitis was also demonstrated to increase significantly along with increasing age and decreasing body weight resulting in a markedly greater incidence of disease in the older dogs, belonging to small breeds.
Boala parodontal este considerat a fi una dintre cele mai frecvente afeciuni care apare la animalele de companie i n mod special la cine. Ea este considerat a fi o boal inflamatorie cronic manifestat clinic prin pierderea esuturilor de suport ale dintelui i resorbia osului alveolar. Cauza primar a bolii este reprezentat de placa dentar. Conform datelor recent publicate n literatura de specialitate, aproximativ 75-85% din cinii aduli sufer de diverse boli ale cavitii orale, i aproape toi cinii n vrst de peste 5 ani au boala parodontal (1, 2, 3). MATERIAL I METOD
A fost luat n studiu un numr de 94 de cini de rase i sexe diferite, cu vrste cuprinse ntre 5 luni i 14 ani. Cazuistica luat n studiu a fost reprezentat de animalele care au fost consultate n Clinica de Boli Infecioase i Serviciul de Gard al Facultii de Medicin Veterinar Timioara i Clinica Bioveti-Farm Timioara, n perioada ianuarie 2004 ianuarie 2006. Examinarea cavitii orale s-a fcut pe animale contiente, atunci cnd a fost posibil, sau pe animale anesteziate. Unii cini au prezentat diverse grade de evoluie a bolii parodontale iar alii nu au prezentat leziuni ale parodoniului. Pentru fiecare cine s-a ntocmit o fi stomatologic. Evaluarea stadiilor bolii parodontale s-a realizat conform metodologiei de specialitate (1, 3, 5) i anume: stadiul 0 gingie sntoas i dini fr depunere de tartru; stadiul I (stadiul timpuriu) gingivit incipient i depozite reduse de tartru pe o suprafa mai mic de 24% din suprafaa dentar, halen, uoar desprindere gingival i depozite de exsudat ntre dinte i gingie; 300
stadiul II (stadiul moderat) gingivit cronic, hemoragii gingivale la palpaie i la sondajul cu sonda parodontal, depunere de tartru pe o suprafa a dintelui de 24-49%, parodontit incipient, pierderea aderenei gingivale cu formarea de pungi parodontale, mobilitatea dentar nc nu este prezent. stadiul III parodontit evoluat, gingivit cronic-ulcerativ, retracie gingival cu pn la 40% n cazul caninilor i premolarilor, acoperirea cu tartru peste 50-74% din suprafaa dentar; apare o uoar mobilitate dentar. stadiul IV (sever) parodontit avansat, cu retracie gingival care depete 50%, descoperire radicular, halen, depozite purulente i alimentare, pungi parodontale adnci, tartrul acoper peste 75% din suprafaa dentar., mobilitate dentar exagerat.
REZULTATE I DISCUII n perioada anilor 2004-2006 au fost examinai n Clinica de Boli Infecioase i Serviciul de Gard al Facultii de Medicin Veterinar Timioara i n Clinica Bioveti-Farm Timioara un numr de 94 de cini. Din analiza datelor prezentate n tabelul 1 rezult c, din numrul total de 94 de cini examinai, la un numr de 58 de cini adic la 61,7% a fost diagnosticat boala parodontal n diverse stadii de evoluie.
35 nr. cini examinai 30 25 20 15 10 5 0 0-1an 1-3 ani 3-6 ani vrsta 6-9 ani 9-14 ani
Graficul 1 - Numrul cinilor examinai i categoriile de vrst
301
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 1 Distribuia pe vrste i sexe a parodontopatiilor la cinii examinai Categoria de vrst < 12 luni 1an-3 ani 3 6 ani 6 - 9 ani 9-14 ani Total Total 8 25 31 13 17 94 Cini examinai Femele Masculi Nr. % Nr. % 5 62,5 3 37,5 13 52,0 12 48,0 17 54,8 14 45,1 9 69,2 4 30,7 10 58,8 7 41,1 54 57,4 40 42,5 Cini cu parodontopatii Total Procent 1 12,5 10 40 20 64,5 11 84,6 16 94,1 58 61,7 Tabelul 2 Distribuia parodontopatiilor pe rase i vrste Categoria de vrst 1-3 3-6 6-9 ani ani ani Cini cu parodontopatii
Talia rasei
Nr. Procentul Talie mic* 4 (1)**** 7 (3) 14(12) 6 (6) 11 (11) 43 33 76,74 Talie 1 10 (6) 7 (6) 2 (1) 5 (4) 26 17 65,38 mijlocie** Talie 3 8 (1) 10 (2) 5 (4) 1 (1) 25 8 32,0 *** mare Total cini 8 25 31 13 17 94 58 61,7 examinai Legend: * cini de talie mic: Pudell, Pekinez, Beagle, West Highland white Terrier, Yorkshire Terrier; ** cini de talie mijlocie: Fox Terrier, Shar-pei, Cocker, Boxer, Pudell mijlociu, Bull Terrier, Samoyed; *** cini de talie mare: Ciobnesc german, Vizsla, Ciobnesc de Berna, Rotweiller, Ciobnesc mioritic; **** cifrele din parantez reprezint numrul de cini cu afeciuni parodontale.
< 12 luni
9-14 ani
Total
Din tabelul 1 i graficele 1 i 2 se poate observa c frecvena apariiei parodontopatiilor la cine este n strns corelaie cu vrsta. Astfel, la cinii din categoria de vrst sub 12 luni au fost examinai 8 cini, 5 femele i 3 masculi. La aceast categorie de vrst a fost diagnosticat doar un singur cine cu stadiul I de boal parodontal (gingivit incipient). La categoria de vrst cuprins ntre 1 an i 3 ani, 40% (10 cini) examinai au prezentat leziuni ale parodoniului (tabelul 1). La aceast categorie cinii care au prezentat afeciuni parodontale au avut vrste peste 2 ani. n aceast categorie de vrst s-au examinat 13 femele i 12 masculi, dintre care 9 au prezentat stadiul I de boal parodontal i un singur cine, n vrst de 3 ani, a prezentat stadiul III.
302
100 80 60 40 20 0 0-1 an 1-3 ani 3-6 ani 12,5% 40% 64,5%
94,1% 84,6%
6-9 ani
9-14 ani
Graficul 2. Distribuia procentual a parodontopatiilor pe categorii de vrste
Din tabelul 1 i graficul 2 se poate constata c semnele clinice de gingivite i parodontite pot s apar nc de la vrsta de 3 ani. Rezultate similare au fost descrise i n literatura de specialitate (1, 2, 3). La categoria de vrst cuprins ntre 3-6 ani s-a depistat boala parodontal la 20 de animale, respectiv 64,5% din totalul de 31 de cini examinai (17 femele i respectiv 14 masculi). Cinii au prezentat diverse grade de evoluie a bolii parodontale, n sensul c: 6 cini au avut stadiul I de boal parodontal (gingivit), 3 cinii stadiul II, 9 stadiul III, iar 2 cini au avut stadiul IV. La categoria 6-9 ani au fost examinai 13 cini (9 femele i 4 masculi). Din totalul acestora, 11 cini (84,6%) au prezentat leziuni parodontale n toate stadiile de evoluie a bolii (1 cine stadiul I, 4 stadiul II, 6 stadiul III i respectiv 1 stadiul IV). n categoria de vrst 9-14 ani au fost examinate un numr de 17 animale, dintre care 10 femele i 7 masculi. La aceast categorie rezultatele examinrii clinice arat un maxim de mbolnvire, de 94,1% (16 cini). Menionm c la aceast categorie de vrst predomin stadiile finale ale bolii parodontale, avnd n stadiul III al bolii 4 cini, iar n stadiul IV, 11 cini. n urma cercetrilor efectuate se constat c frecvena bolii parodontale exprimat procentual crete progresiv odat cu vrsta, de la 12,5% la categoria de vrst sub 1 an, la un maxim de 94,1% la categoria de vrst cuprins ntre 9 i 14 ani. Din tabelul 2 se poate constata faptul c incidena bolii parodontale este mult mai mare la cinii din rasele mici comparativ cu cei care aparin raselor de talie mare.
303
Astfel, la cinii de talie mic - Pekinez, Pudell, Terrier- s-a nregistrat procentul cel mai ridicat de mbolnvire, respectiv 33 cini cu afeciuni ale parodoniului, (76,74%) dintr-un numr total de 43 de cini examinai. De Bowes i col. (1996) gsesc chiar c 90% din cinii care aparin raselor mici, cu vrste peste 3 ani, prezint diverse grade de evoluie a bolii parodontale (4). La cinii din rasele mijlocii (Fox Terrier, Cocker, Boxer, Pudell mijlociu) au fost examinai 26 de cini, din care 65,38% (17 cini) au prezentat parodontopatii. Au fost examinai i un numr de 25 de cini din rase cu talie mare. La aceste rase s-a constatat c procentul de mbolnvire a fost de 32,0%. Aceste rezultate concord cu cele din literatura de specialitate, i sunt reprezentate n graficul 3.
80 % cini cu parodontopatii 70 60 50 40 30 20 10 0 rase mici rase mijlocii rase mari
Graficul 3 - Distribuia parodontopatiilor n funcie de ras
ntr-un studiu efectuat de Bolte i col. (2004) pe 1325 de cini, procentul afeciunilor parodoniului a fost de 4,3% la categoria de vrst 6-12 luni i de 65,4% la vrsta cuprins ntre 11-14 ani (5). CONCLUZII Ponderea cazurilor de boal parodontal din totalul cinilor examinai n Clinica de Boli Infecioase, Serviciul de Gard al Facultii de Medicin Veterinar Timioara i Clinica Bioveti-Farm Timioara n perioada anilor 20042006, a fost de 61,7% din numrul total de 94 al cinilor luai n studiu.
304
Rezultatele noastre arat c exist o strns corelaie ntre vrsta cinelui i boala parodontal: frecvena apariiei bolii parodontale crete progresiv, odat cu vrsta. Odat cu naintarea n vrst a cinelui, crete i severitatea bolii parodontale. Rasa are un rol major n dezvoltarea bolilor dentare, n special a bolii parodontale, cei mai susceptibili fiind, din acest punct de vedere, cini din rasele: Pudell, Pekinez, Terrier. Dup vrsta de 3 ani se pot observa la nivelul parodoniului leziuni care se pot ncadra n stadiul III i chiar n stadiul IV al bolii parodontale, manifestnduse prin formarea pungilor parodontale, retracie gingival i, uneori, mobilitatea dinilor afectai.
BIBLIOGRAFIE
1. Braga Bitencourt A., Carla, Silva, Rezende, Faria, Costa, J.E., Franco Da Silva, L.A., Farias, L.M., Carvalho de Roque, Maria Auxiliadora, 2004 - Importncia da avaliao clinica no diagnstico de doena periodontal em ces da raa pastor alemo, Cincia animal Brasileira, 5, 1, jan.-mar., 33-38 Lepine, A.J., Cox, E.R., 2001 - Nutritional Influences on Dental Health, Current perspectives in senior Dog and Cat Nutrition, Tufts Animal Expo, 47-51 Harvey, C.E., O'Brien, J.A., Rossman, L.E., Stoller, N.H., 1983 - Oral, Dental, Pharyngeal, and Gland Disorders, In: Textbook of Veterinary Internal MedicineDiseases of the Dog and Cat, Ettinger, S.J., second Edition, California Animal Hospital, Los Angeles, California, p. 1126-1160 De Bowes, L.J., Mosier, D., Logan, E., 1996 - Association of periodontal disease and histologic lesions in multiple organs from 45 dogs, J. Vet. Dent., 13(2)57-60 Bolte, S., Igna, C., Petru, H., Nicoar, F.R., Sala, A., Larisa, Schuszler, 2003 Aspecte epidemiologice i morfoclinice n periodontopatii la cinele din mediul urban, Lucr. t. Timioara, vol. XXXVII, 560
2. 3.
4. 5.
305
INFLUENELE DIETEI ASUPRA BOLII PARODONTALE DE LA CINE

DIETARY INFLUENCES ON PERIODONTAL DISEASE IN DOG
Luminia COSTINAR U.S.A.M.V. Timioara The primary etiologic agent associated with periodontal disease is bacterial plaque and by-products. Specific risk factors that contribute to the severity and progression of dental diseases include: breed, age, species, characteristics food and nutrition, imunocompetence and systemic health (5, 7). Food texture and composition can directly affect the oral health and oral environment. The consistency of a diet as well as the nutritional components can affect the rate of calculus accumulation. The aim of the study was to determine the health condition of the mouth cavity in dogs associated with their feeding. Dogs fed the soft diet accumulated more plaque and developed more gingivitis than when they were fed the hard diet.
Cauza primar a gingivitelor i parodontitelor este reprezentat de prezena plcii bacteriene pe suprafeele dentare. Dac placa dentar nu este ndeprtat, n aproximativ dou zile va ncepe mineralizarea acesteia, rezultnd n final tartrul dentar. Periajul sau splarea dinilor este un mijloc important de ndeprtare a unui mare numr de bacterii, bacterii care se gsesc att n placa dentar ct i n tartrul dentar (3, 4, 6). Consistena i textura dietei au un rol deosebit n acumularea depozitelor dentare i, ca urmare, n dezvoltarea i progresia parodontopatiilor la cine. Sntatea oral, att a cinilor ct i a pisicilor, este influenat ntr-o mare msur de consistena alimentelor (6, 7, 8). Boala parodontal mai are nc multe necunoscute n ceea ce privete etiologia i evoluia, n special la animale, la care se poate considera c cercetrile se gsesc undeva la nceput. Acest studiu a avut drept scop elucidarea, sau completarea cunotinelor existente asupra unui singur aspect, respectiv a relaiei dintre diet i evoluia parodontopatiilor la cinii din oraul Timioara. MATERIAL I METOD
A fost luat n studiu un numr de 94 de cini de rase i sexe diferite, cu vrste cuprinse ntre 5 luni i 14 ani. Cazuistica luat n studiu a fost reprezentat de animalele care au fost consultate n Clinica de Boli Infecioase, Serviciul de 306
Gard al Facultii de Medicin Veterinar Timioara i Clinica Bioveti-Farm Timioara n perioada ianuarie 2004 ianuarie 2006 . Pentru fiecare pacient s-a ntocmit o fi stomatologic, pe aceast fi, printre altele s-a nregistrat i tipul hranei. n funcie de textura hranei, cinii au fost mprii n 3 grupe i anume: Cini hrnii cu o mncare uscat preparat industrial, avnd o consisten dur (crochete, biscuii). Cini hrnii cu o mncare variat sau mixt. Cini hrnii exclusiv cu o mncare umed, cu consisten moale (conserve sau mncare preparat n cas resturi menajere). Din pcate, nu a fost posibil alegerea animalelor astfel nct media de vrst a celor 3 grupe s fie egal. Media de vrst a grupului 1 a fost de 3,5 ani, la grupul 2 media a fost 5,3 ani, iar ultimul grup a avut o medie de vrst de 6,4 ani. Din anamnez a reieit faptul c igiena dentar a cinilor a fost deficitar sau chiar absent, n majoritatea cazurilor. Aceste date se bazeaz, n totalitate, pe relatrile proprietarilor cinilor examinai.
REZULTATE I DISCUII Din analiza datelor prezentate n tabelul 1 rezult c, din numrul total de 94 de cini examinai, 21 de cini au fost hrnii exclusiv cu hran uscat. La acest grup de cini procentul parodontopatiilor a fost de 47,6%, respectiv 10 cini au prezentat semne clinice de gingivite i/sau parodontite.
Tabelul 1 Distribuia parodontopatiilor la cine n funcie de tipul alimentaiei Grupul 1 2 3 Tipul hranei Hran uscat Hran mixt Hran umed Numrul de cini examinai 21 28 45 Cini cu parodontopatii Numrul Procentul 10 47,6 22 78,5 40 88,8
Un regim alimentar cu o consisten dur va duce la ndeprtarea mecanic a plcii dentare i deci a florei bacteriene, avnd loc o curire parial a cavitii orale. Ca urmare, se reduce severitatea bolii parodontale sau evoluia bolii poate ncetini, dar aceast msur nu este considerat protectiv. La cinii din grupul 2, care au fost hrnii cu mncare variat sau mixt, procentul mbolnvirilor a fost de 78,5%, respectiv din totalul de 28 de cini examinai, 22 de cini au prezentat leziuni ale parodoniului. La grupul 3 de cini, care au fost hrnii cu mncare cu consisten moale (mncare preparat n cas sau conserve) s-a constatat un procent de 88,8% a parodontopatiilor. Se cunoate din literatur faptul c o diet care este compus din alimente moi va duce la formarea unui numr mai mare de plci dentare. Acest fapt se
307
datoreaz, probabil, adezivitii mai mari a acestor alimente. n aceast situaie, posibilitatea reteniei mecanice a florei bacteriene i aderarea la suprafeele dentare este foarte mare i, ca urmare, incidena afectrii parodoniului este ridicat (3, 4). Aa se explic i procentul mare al parodontopatiilor ntlnit la cinii care au fost hrnii cu mncare preparat n cas. Alimentele moi favorizeaz ptrunderea lor n anurile gingivale i, n consecin, are loc retenia i nmulirea florei bacteriene, n principal a florei anaerobe, flor care este responsabil de distruciile tisulare de la nivelul parodoniului. Menionm c toate aceste constatri sunt n concordan cu datele raportate i de ali autori, n literatura de specialitate (2, 6). nc din anul 1939 Burwasser i Hill (1) au constatat faptul c o diet moale duce la apariia unor modificri patologice la nivelul esutului gingival. De-a lungul anilor au fost efectuate numeroase studii care susin ideea c, la cinii care sunt hrnii cu alimente care au o consisten moale crete viteza de acumulare a plcii dentare i a tartrului i, ca urmare, procentul afeciunilor parodontale este mai mare. Tot la aceti cini se constat o creterea a incidenei i severitii parodontopatiilor, n comparaie cu animalele hrnite cu alimente care au o consisten crescut (2).
100 80 60 40 20 0 hran uscat hran mixt hran moale
cini examinai
% parodontopatii
Graficul 1 - Prevalena parodontopatiilor la cini i tipul de hrnire al acestora
Acest grafic demonstreaz rolul important pe care l deine tipul dietei i msurile de ngrijire dentar asupra sntii cavitii orale.
308
Lipsa complet sau insuficienta ngrijire dentar de acas a cinelui va permite plcii i tartrului s se formeze n mod continuu i, ca urmare, incidena bolii parodontale va fi foarte ridicat. n ultimii ani au aprut formule diferite de hran uscat care conin diverse componente, cum ar fi polifosfaii, care au rolul de a preveni mineralizarea plcii i transformarea ei n tartru dentar. Prin sechestrarea calciului n placa dentar are loc formarea unor complexe de calciu solubile, care vor difuza n saliv i, ca urmare, placa dentar nu va deveni tartru. Unii autori (5), susin ideea c, singura i cea mai eficient metod de prevenire i control a bolii parodontale este reprezentat de splarea regulat pe dini - zilnic dac este posibil iar alii (6) recomand metode mecanice de reducere a plcii i tartrului printr-o textur dur a dietei. CONCLUZII Tipul dietei este un factor de risc n dezvoltarea bolilor dentare la cine. Frecvena apariiei parodontopatiilor este mult mai ridicat la cinii care sunt hrnii cu o mncare umed, moale de tipul conservelor sau resturilor menajere, dect la cei care sunt hrnii cu o mncare uscat comercial. Ponderea cazurilor de boal parodontal din totalul cinilor examinai de noi n perioada ianuarie 2004 - ianuarie 2006, a fost de 88,8% la cinii hrnii cu o diet cu textur moale, 78,5% la cinii hrnii cu hran mixt, i de doar 47,6% la cei cu o diet uscat, dur. Consistena dietei, precum i compoziia ei, poate afecta rata acumulrii tartrului dentar.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Burwasser, P., Hill, T.J. 1939 - J. D. Res., 18:237 Gawor, J.P., Jodkowska, K., Kurski, G., Kurek, A., Wojtacki, M.P., 2005 - Pet Smile Campaign in Poland-Promotion of Oral Hygiene and survey of oral cavity in Polish pets, www.wsava 2005.com Lepine, A.L., Murray, S.M., Cox, E.R., 2003 - Recent advances in Dental Health Management 26-32 Harvey, C.E., Shofer, P.S., Laster, L., 1996 - J. Vet. Dent., 13:101-105 Tromp, J.A., van Rijn, L.J., Jansen, J. 1986 - J. Clin. Periodontol. 13:190-194 Wattson, A.D.J., 1994 - Australian Veterinary Journal, 313-318 Hoffmann, Th., Geangler, P., 1996 - Journal of Small Animal Practice, 37, 309-316 Rawlings J.M., Gorrel, Cecilia 1997 - J. Small Anim. Pract., 38: 147-151
309
DATE PRIVIND STATUSUL SELENIULUI IN FURAJELE DIN MOLDOVA

FODDER PLANT SELENIUM DEFICIENCY FROM MOLDOVA COUNTY
L. MIRON, Maria SERDARU, D. ACATRINEI This paper present some preliminary data regarding the distribution an deficency of slenium in 231 samples of different plants used like fodder for domestic animals, from 67 localities covering 7 departmens of Moldova county. The spectrofluorimetric examination of samples revealed a marginal deficiency of this nonmetallic element (32,46%), a critical deficiency (59,4 %) and a severe deficiency (3,6%) of examinated samples.
Key words: selenium status , fodder
Studiul de fa prezint date preliminare privind deficitul de seleniu din plante utilizate ca furaj n judeele Moldovei. A fost realizata o ancheta nutriional colectnd date privind natura furajelor utilizate pentru alimentaia animalelor din gospodariile populaiei, randomizat, pentru a acoperi uniform suprafaa fiecrui jude din Moldova. Prin ancheta nutriional s-au superpozat factorii de mediu cu cei abiotici, stabilindu-se interferenele plurifactoriale ale acestora, cum ar fi: specia cea mai atractiv de animal utilizat pentru cretere ntr-o anumit zon geografic a rii, obinuina localnicilor de a cultiva numai anumite specii de plante, creterea ainmalelor numai cu anumite tipuri de furaje, furaje concentrate sau combinate furajere administrate obinuit n hrana animalelor de curte, utilizarea mai mult sau mai puin corect a unei alimentaii corespunztoare pentru animalele de rent. Contextul acestui studiu este mai larg, urmrindu-se evaluarea statusului seleniului din Romnia i efectuarea unor cartri ale zonelor pentru a cunoate limitele de variaie ale acestui element n lanul trofic plant-animal-om. MATERIAL I METOD
Au fost colectate 231 de probe de furaj din 67 de localiti din 7 judee ale Moldovei, s-a realizat ancheta nutriional pentru fiecare gospodrie sau exploataie zootehnic n parte. Probele colectate au fost investigate prin metoda spectrofluorimetric folosind un spectrofotometru SPEKOL echipat cu anexe pentru fluorimetrie i 2,3 diaminonaftalina ca reactiv specific.
310
REZULTATE I DISCUII In mod sintetic, tabelul 1 prezint tipurile de furaje administrate n gospodriile populaiei sau la ferme de animale n judeele enumerate mai jos. Se constat administrarea deopotriv a furajelor fibroase, leguminoase, concentrate, n procente diferite n mod particular de la un jude la altul, indeosebi la cresctorii particulari cu efective mici de animale destinate consumului sau produciei de lapte.
Tabelul 1 Tipuri de furaje administrate Cereale Ferm G.P. Nume jude LegumiOleagiFibroase noase noase Ferm Ferm Ferm G.P. G.P. G.P. Fin Ferm G.P. Pleav Ferm G.P. Concentrate Ferm G.P. Fn Ferm G.P.
Bacu Iai Botoani Vaslui Suceava Neam Brila Galai Buzu
5 2 15 19 59 11 1 2
5 12 3 5 2 9 2 3
1 1 2 9 29 3 2 5
2 2 2 3 2 2
2 1 2 3 20 1 3
3 5 2 1
1 1 2 2 -
1 3 -
1 -
1 -
1 -
1 1 1 2 1 1
1 2 4 1 3
3 1 2 11 7 10 6 49 2 16 5 11 2
Se poate observa c ponderea furajer este ocupat de cereale, n toate judeele, att la gospodriile populaiei ct i la ferme. Urmeaz fnurile i leguminoasele. Fibroasele, oleaginoasele i pleava sunt n ordine descresctoare slab reprezentate. Pentru judeul Bacu, furajele pe care le administraz proprietarii sunt : fasole boabe, porumb boabe, gru (boabe sau tre), soia, ovz, mazre, orz. Dintre fibroase, puini particulari administreaz lucern, majoritatea fiind axai pe grosiere de tipul borceag, otav, fn de iarb. ntruct aceast compoziie poate influena deficitul de seleniu, ne asteptm ca unele probe din totalul celor analizate s confirme acest lucru. Pentru jud. Botoani, creterea bovinelor se face preponderent pe seama fibroaselor, constatnd un amestec cvasiomogen la cresctorii particulari de fnuri naturale sau fn de lucern sau borceag, in combinaie cu boabele de secar, floarea soarelui, a ovzului, grului, orzoaicei i soia. La ovine, raia este asigurat de cca. 1 kg fn de deal, porumb uruit 1 kg, , paie de orz i sare , ori siloz (1 kg) dac ovinele sunt crescute n ferme.
311
Judeul Iai are ca particularitate amestecul grosier de strujean i lucern, administrat alturi de lucern, flor spontan de deal iar la unele gospodrii administreaz i borceag. Otava, soia, porumbul , orzul i grul completeaz raiile pentru animale mari. Sunt administrate i concentrate, n amestecuri particulare de la un cresctor la altul. Sfecla furajer este administrat la ovine, cam 0,5 kg, alturi de porumbul boabe mcinat, cu mas verde sau vrejuri de soia. n judeul Vaslui, cocenii de porumb per se sau tocai, fnurile de trifoi, lucern precum i paiele de ovz sunt baza alimentaiei fibroase, borceagul fiind rar ntlnit. Boabele de porumb, gru i secar, constituie baza raiilor la gospodriile populaiei. Proprietarii mai fac un furaj combinat n care amestec graminee i leguminoase uruite. Suceava este dominat de prezena unor fnuri de bun calitate, fn de lucern, de timotei, fn de trifoi sau fn de ierburi de munte, care asigur un complet mineralo-vitaminic la care se adaug concentrate substaniale n raii, comparativ cu celelalte judee. Grul, ovzul secara, fasolea i porumbul n diferite cantiti se admnistreaz uruite. O vac primete zilnic o raie compus din 8-10 kg fn, la care proprietarul (privat, cu 5-10 capete bovine) adaug aa zisul ciubr compus din suculente 10-15 kg (toctur): tre, cartof fiert, coceni tocai, dovleac, gulii, mai puin sfecl. Se adaug maxim 2 kg concentrate (tre de porumb) la muls. Producia lactat este n medie de 10 litri de lapte. n Neam, deasemeni, cresctorii sunt interesai de produciile ridicate de lapte i de creterea ovinelor n condiii bune, n zonele de deal i de munte. Pentru raia bovinelor, reeta este compus din 5+8 kg fn, 10-15 kg sfecl, 15+20 kg siloz, paie, coceni, i 2 kg de concentrate (tre gru + rot floarea soarelui).uruiala de porumb nu prea este administrat, dect cernut (tre). Cobornd spre Brila- Galai, constatm o cretere n raii a concentratelor i administrarea de uruial de coceni, tiulei de porumb i lucern. Ca i boabe, se administreaz ovz, mzriche, porumb, mazre, orz, fiind completate cu fn de sparcet, iarb de Sudan, fn de borceag, rapi, fn de es sau fn de deal. Deasemeni, n Galai se obinuiete administrarea de malat(praf de moar) amestecat cu fn, coceni i paie la bovine. La oi, tot n acest areal se administreaz fn lucern, cu porumb tiulei (cu totul), orz, gru, soia i rapi, la care se adaug vreji (fasole, soia). Din cele 231 de probe colectate, pn n acest moment au fost analizate 111 (48,05%). Conform NRC 1996, nivelul normal al seleniului n plante se ncadreaz ntre 0,15-0,3 ppm. Deficiena de seleniu este marginal la nivelul 0,10,15 ppm, critic n intervalul 0,1-0,01 ppm i sever la valori mai mici de 0,01 ppm. Status-ul seleniului n probele colectate de noi este redat n valori absolute i procentual n tabelul nr. 2. i n graficul nr. 1.
312
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 2 Status-ul seleniului n probele de furaj colectate Nivel normal Nr probe % din probe analizate 5 4,5 Deficien Critic 66 59,45
Marginal 36 32,43
Sever 4 3,6
Graficul deficitului de seleniu n plantele folosite ca furaj n zona Moldovei (%)
3.6
4.5 32.43
Normal Marginal Critic Sever
59.45
CONCLUZII Patru din cele 5 probe n care seleniul a fost gasit n concentraii normale provin din jud. Vaslui (Perieni, Vleni, Tutova, Vaslui) iar una din jud. Neam (Praznov). Probele cu deficit sever au fost recoltate din jud. Suceava (Rdui i aru Dornei), jud. Bacu (Buhui) i una din jud. Iai (Ciurea). Deficitul marginal i cel critic de seleniu sunt repartizate relativ uniform ca dispoziie geografic. 95,5 % din probele de furaj analizate prezint un deficit de seleniu care trebuie compensat.
313
BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Banuelos, G.S., D.W. Meek, 1990 - Accumulation of selenium in plants grown on selenium-treated soil. J.Environ. Qual. 19:772-777. Beath, O.A., H.F. Eppson, C.S. Gilbert, 1937 - Selenium distribution in and seasonal variation of vegetation occurring on seleniferous soil. J. Am. Pharm. Assoc. 26:394-398. Behne, D., P. Brtter, D. Gawlik, U. Fosick, W. Wolters, 1978 - Proc. 3rd Int. Symp. on Trace Element Metabolism in Man and Animals, M. Kirchges-sner, Techn. Univ. Munchen, 441 447. Brown, D.G., R.F. Burk, R.J. Seely, K.W. Kiker, 1972 - Int. J. Vitam. Nutr. Res., 42, 588-591. Brown, R.G., P.R. Sweeney, J.C. George, D.W. Stanley, E.T. Moran, Jr., 1974 Poult. Sci., 53, 1235-1239. Fordyce, F.M., Z. Guangdi, K. Green, Liu Xinping, 2000 - Soil, grain and water chemistry in relation to human selenium-responsive diseases in Enshi District, China. App. Geochem. 15:117-132. Jenkins, K.J., K.A. Winter, 1973 - Can J. Anim. Sci., 53,561-567. Leibetseder, J., A. Kment, M. Skalicky, 1974 - Proc. 2nd Int. Symp. On Trace Element Metabolism in Animals, W.G. Hoekstra, J.V. Suttie, H.E. Gant-her, W. Meri/., 1975, Am. J. vet. Res., 36, 273-281. Poll, E., 1968 - Contribuia la rolul seleniului in patologia puilor de gin, Tez doctorat, Inst. Agron. Bucureti. Salaniu, V., 1970 - Carenele in seleniu la viei, miei, purcei i malaci, Tez doctorat, Inst Agron. Cluj. Spallholz, J.E., L.M. Boylan, 2002 - Amelioration of arsenic toxicity in rats given dietary seleniumsupplements; an animal model for applied amelioration of arsenic toxicity in Bangladesh. A research proposalto UNICEF. Wang, Wuyi, Yang Linsheng, Hou Shaofan, Tan Jianan, Li Hairong, 2001 Prevention of endemic arsenism with selenium. Current Sci. 81:1215-1219.
314
DATE PRELIMINARE PRIVIND DEFICITUL SERIC DE SELENIU LA BOVINELE DIN MOLDOVA

PRELIMINARY DATA REGARDING SELENIUM SERICAL EFICIENCY TO THE CATTLE IN MOLDAVIA
L. MIRON, D. ACATRINEI U.S.A.M.V. Iai Maria SERDARU S.N. Inst. Pasteur S.A. This paper continue some researches regarding the monitoring of selenium in plant-animal-human being, coordinated by Pasteur Institute, in an complex research Programme, started in 2005. Analysing 451 samples of bovine serum, prelevated from 80 sites from Moldova county, along the years 2005-2006, up to 2/3 of total samples presented values under normal limits of selenium status, so we concluded a marginal deficiency of this oligoelement in this area.
Key words: selenium, status, cattle, Moldova
Lucrarea de fa continu unele cercetri privind monotorizarea statusului seleniului n lanul trofic- plant-anima-om coordonate de Inst. Pasteur SA n cadrul unui program complex de cercetare ncepnd cu anul 2005. Analiznd 451 de probe de snge de bovine recoltate din peste 80 de localiti ale Moldove in decursul anilor 2005-2006, peste dou treimi au prezentat valori ale seleniului seric sub limitele normale. n organismele vii, seleniul este implicat n procese fiziologice importante, unde substituie rolul sulfului n sistemele enzimatice i de transport, acioneaz ca antioxidant atunci cnd intr n compoziia glutation-peroxidazei, protejnd organismul de aciunea radicalilor liberi i influeneaz fertilitatea (6, 7). Acolo unde solurile conin cantiti suficiente de sruri de seleniu s-a constatat scderea incidenei cancerelor de sn i colon. Organizaia Mondial a Sntii recomand administrarea zilnic a 80 de mg de seleniu la brbai i 60 mg la femei iar Institutul American de Cercetare a Cancerului majoreaz doza profilactic antitumoral de seleniu la 200 mg (7). n New Epoch Time, ediia electronic din 14 februarie 2007 se precizeaz c la Universitatea Montpellier s-a constatat c administrarea de seleniu previne declinul cognitiv la vrstnici. La Universitatea din Carolina de Nord s-a descoperit c dieta cu deficit de seleniu permite creterea ratei mutaiilor virusului gripal la oarece. La om sunt cunoscute trei boli legate strict de deficitul de seleniu: maladia Keshan caracterizat prin dilatarea cordului, maladia Kashin-Beck manifestat
315
prin osteoartropatii i o form de hipotiroidism numit Cretinism Endemic Mixedematos (CEM) soldat cu ntrziere mintal (5). Avnd n vedere implicaiile deficitului i excesului de seleniu a devenit necesar identificarea surselor de seleniu, stabilirea concentraiilor de seleniu din sol, gradul lui de ncorporare n plante, transformrile pe care le sufer n lanul trofic plant-animal-om i msurile care trebuiesc luate pentru a controla eficient deficitul de seleniu. Astfel a aprut necesitatea realizrii unui studiu complex iniiat de Institutul Pasteur n parteneriat cu cele patru faculti de medicin veterinar din ar, proiect care i-a propus monitorizarea statusului seleniului i cartarea acestui oligoelement n ntreaga Romnie, ambele, utile pentru asigurarea sntii omului i animalelor. MATERIAL I METOD
Pentru evaluarea statusului seleniului la animalele din zona Moldovei s-au recoltat 545 de probe de snge, n principal de la bovine (535), din care pn n prezent au fost procesate 451. Determinarea seleniului seric s-a realizat prin metoda spectrofotometric, folosind spectrofotometrul SPEKOL iar ca reactiv 2,3 diaminonaftalina. Limitele de referin privind concentraia seleniului seric dup care s-a fcut interpretarea rezultatelor sunt preluate din literatura de specialitate i se regsesc n tabelul 1.
Tabelul 1 Limitele de variaie ale concentraiei serice de seleniu la animale Specificare Bovine Ovine Suine Nivel adecvat (ppm) 0.040-0,1 0.100-0.200 0.140-0.300 Deficien (ppm) Critic Sever 0,005-0,010 Sub 0,005 0.010-0.050 Sub 0.010 0.005-0.060 -
Marginal 0.010-0,040 0.050-0.100 0.060-0.140
REZULTATE I DISCUII Din 451 de probe analizate, la 313 s-a nregistrat deficien marginal de seleniu (69.4%), la 7 probe deficien critic (1.5%), o singur prob s-a situat sub pragul deficienei severe (0,2%) iar nivelul adecvat a fost atins la 130 de probe (28.8%) (graficul 1). Deficitul seleniului seric este neuniform sub raport geografic, deficiena marginal fiind prezent n jumtate din probe n judeele Bacu i Neam, peste dou treimi din probele provenite din judeele Botoani i Iai, i peste trei sferturi din probele din Suceava, Galai i Brila (tabelul 2).
316

Graficul concentraiei seleniului seric la animale n zona Moldovei
1.5 28.8
Deficiena marginal Nivel adecvat Deficien critic Deficien sever 0.2
69.4
Graficul 1
Nivelul deficienei critice a fost atins doar n 7 probe iar cel al deficienei severe ntr-o singur prob, toate provenite din judeul Suceava (tabelul 2).
Tabelul 2 Tabel centralizator pe judee privind concentraia seric de seleniu Specificare Jud. Suceava Jud. Neam Jud. Iai Jud. Bacu Jud. Vaslui Jud. Galai Jud. Brila Nivel adecvat (ppm) Nr. % 14 10,3 9 47,36 6 20,69 53 45,3 45 37,7 2 15,38 1 6,25 Deficien (ppm) Critic Nr. % 7 5,15 0 0 0 0 0 0 -
Marginal Nr. % 114 83,8 10 52,34 23 79,31 64 54,7 76 62,3 11 84,62 15 93,75
Sever Nr. % 1 0,75 0 0 0 0 0 0 -
n judeul Suceava, deficiena critic a fost constatat la probe provenind din localitile Neagra, Breaza, Gura Putnei, Flticeni i Voitinel. Din curtea unui fermier din Voitinel s-au recoltat o prob cu deficit critic i unica proba cu deficit sever din Moldova. n judeul Iai, cele ase probe cu nivel normal al concentraiei seleniului au fost recoltate dintr-o singur localitate, Poieni, n celelalte localiti luate n studiu nregistrndu-se deficit marginal.
317
n judeul Vaslui unele localiti au furnizat probe n care seleniul avea nivel normal n majoritatea cazurilor (Vaslui, Tutova, Soleti) sau n care deficitul marginal era preponderent (Chilia, Laza, Brlad, Perieni). Din Brlad provine o prob n care seleniul era la un nivel mai mare dect cel normal, probabil ca urmare a unei administrri de seleniu n scop profilactic sau curativ. La Galai i Brila predomin deficitul de seleniu iar n judeul Neam n fiecare localitate se ntlnesc valori ale deficitului marginal i ale nivelului normal n proporii aproape egale. CONCLUZII Deficitul de seleniu este ntlnit la peste dou treimi din probele de snge recoltate din judeele Moldovei. Judeele Suceava, Brila, Galai i Iai sunt cele mai afectate de deficitul de seleniu. n partea de nord-est a judeului Vaslui sunt mai multe probe cu coninut normal de seleniu dect n sud i sud-vest.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Fordyce, F.M., Z. Guangdi, K. Green and Liu Xinping, 2000 - Soil, grain and water chemistry in relation to human selenium-responsive diseases in Enshi District, China. App. Geochem. 15:117-132. Golubkina, N.A., G.V. Alfthan, 1999 - The human selenium status in 27 regions of Russia. J. Trace Elem.Med. Biol. 13: 15-20. Johnson, C.M., 1975 - Selenium in soils and plants: contrasts in conditions providing safe but adequate amountsof selenium in the food chain. In: Trace Elements in Soil-Plant-Animal Systems. D.J.D. Nicholas and A.R.Egan, Eds. Academic Press, NY, pp. 165-180. Spallholz, J.E., L.M. Boylan, 2002 - Amelioration of arsenic toxicity in rats given dietary selenium supplements; an animal model for applied amelioration of arsenic toxicity in Bangladesh. A research proposalto UNICEF. http://autoimmunedisease.suite101.com/article.cfm/selenium_deficiency http://www.scienceagogo.com/news/20010511055027data_trunc_sys.shtml http://www.ingentaconnect.com/search/article?title=Selenium+deficiency&title_type=t ka&year_from=1998&year_to=2007&database=1&pageSize=20&index=1
4. 5. 6. 7.
318
TESTAREA EFECTULUI ANTIEIMERIAN AL UNOR EXTRACTE DE PLANTE N EIMERIOZA EXPERIMENTAL A PUILOR DE PREPELI
THE ANTIEIMERIAN EFFECTS OF PLANT EXTRACTS IN QUAIL EXPERIMENTAL EIMERIOSIS
H. BACIU, V. COZMA, Maria TRUTA, M. CERNEA U.S.A.M.V. Cluj-Napoca The intensiv breeding of quails knows large development perspectives. The japonese quail Coturnix coturnix japonica,the smallest tamed avian specie is used not only for egg production but also for meat production. Fast growing ritm ,early sexual maturity ,short period between generation,great egg production small fadder needs, and small space comparativ to other bird species exploited for the for the same purpose ,those are the main caracteristics of this avian specie. This study is the gathering of data regarding the evolution and pathogeny of eimeriosis in quail ,as well as the establishment of some phitoterapeutical programs in order to reduce as much as posible the incidence of this deseases in prepelite breeding compexes.
MATERIALE I METODE
Cercetrile privind testarea efectului extractelor alcoolice din afin i schinduf n eimerioza experimental a puilor de prepeli au fost realizare n perioada 6 februarie 10 martie 2006, n cadrul disciplinei de Boli Parazitale a Facultii de Medicin Veterinar, Cluj-Napoca. Puii de prepeli luati n studiu, au fost lotizati astfel: Lotul I (10 pui de prepeli) - infectai cu oochisturi evoluate de eimeria i tratai cu extract de schinduf; Lotul II (10 pui prepeli) - infectai cu oochisturi evoluate de eimeria i tratai cu extract de afin; Lotul III (10 pui prepeli) - infectai cu oochisturi evoluate de eimeria si netratai; Lotul IV (10 pui prepelita) - neinfectai i netratai; Specificare: primele trei loturi au fost infectate doua zile consecutiv cu cte 5000 oochisturi, iar fitoterapia s-a realizat conform dozajului prescris de producator. Prezentarea produselor testate Trigonella foenum-graecum (Schinduf) Este o plant anual, ierboas, care crete spontan n culturile de cereale, este erect, nalt de 30-60-70 cm, neramificat sau ramificat la partea superioar i are rdcina pivotant. Tulpina este cilindric, fistuloas i glabr, 319
frunzele sunt lung peiolate (1-2 cm), cu stipele lanceolate, foliole oborate, uor alungite i dinate glabre pe faa superioar i slab proase n cea inferioar. Florile sunt grupate cte 1-2 la subsuoara frunzelor superioare, lungi de 12-18 mm, de tip papilionat, de culoare glbuie sau slab liliachie. Fructul este o pstaie alungit dreapt sau uor curbat, lung de 8-10 cm i lat de 0,5-1 cm, ce conine 10-20 semine comprimate, prismatice, de culoare glbuie, cu miros de cumarin (Munteanu, 1996). Seminele de schinduf (Trigonellae semen) sunt cunoscute nc din antichitate de ctre medicii greci i arabi, care le acordau o deosebit atenie i le cultivau pentru creterea ponderal n anemie, convalescen i tuberculoz. Aceste indicaii se menin i n zilele noastre, n plus fiind folosite ca antihelmintice, depurative, n diateza antritic i n tratamentul pelagrei. Cercetrile recente au artat efecte favorabile i n diabet, gua exoftalmic, tulburri digestive, nevroze, subnutriie i anorexie la copii (El Shabrawy i Nada, 1996). Dintre substanele chimice puse n eviden pn n prezent, se remarc proteinele, uleiul gras, mucilagiile, saponozidele steroidice, taninurile, cumarinele i substanele cu caracter alcaloidic (numite trigoneline). Nu se poate preciza care dintre substanele chimice coninute confer produsului Trigonellae semen proprietile menionate anterior, ceea ce face ca, n fitoterapie, s se foloseasc seminele integrale sau macerate apoase. Este de menionat faptul c nici produsul vegetal medicinal i maceratele apoase nu sunt standardizate n principii active. Nu sunt cunoscute forme farmaceutice cu acest produs sau cu extracte ale acestuia (Franz, 1996). n Romnia, asupra acestei plante nu a fost efectuat nc un studiu farmaceutic sistematic. Vaccinum Myrtillus L. (Afinul) Aparine Fam. Ericaceae i este cel mai raspsndit arbust din zona alpin a rii noastre, formnd aa numitele afiniuri pduri miniaturale de aproximativ 50 cm. nalime, formate din arbuti ramificati,cu ramurile permanent verzi, cu frunze alterne de, aproximativ 3cm. lungime i 2 cm. laime, scurt peiolate, de form oval-eliptic, cu varful ascuit, glabre i cu marginea fin dinat. Planta nflorete din mai pn la sfarsitul lunii iunie i are flori mici, de culoare roz, solitare, actinomorfe pentamere, cu caliciul concrescut, cu ovarul de form globuloas-urceolat. Fructul matur este o baca zemoasa de culoare albastrui-negricioasa, brumat de 6-10 mm diametru i are un suc violaceu cu gust placut, dulceagacrior. n afara afinului spontan exist aproximativ 200 specii, din care n Europa s-au identificat numai 4. ncepnd din anul 1925 s-a introdus afinul de cultur, cu tufa nalt, original din America de Nord. O serie de glicozide ale cianidolului, delfinidolului, malvidolului i petunidolului dau culoarea specific a fructelor, care sunt bogate n: zaharuri 713%; substante pectice 0.350-0.490%; tanini 0.300-0.430%; vitamina C 12-20 mg%; vitamina A 280 U.I.; PP 0.2 mg.%; B1 0.02 mg.%; B2 0.02 mg.%; E, acizi organici, etc. De asemenea conine cantiti mari de sruri minerale, dintre care amintim: K 50 mg.%; Ca 10 mg.%; P 8 mg.%; S 8 mg.%; Mg. 6 mg.%; Cl. 5 mg.%; Mn. 3 mg.%; Fe. 1 mg.%. 320
n scopuri medicinale se utilizeaz fructele(Fructus myrtilli) i frunzele (Folium myrtilli). Frunzele se recolteaz vara i se usuc la umbr, iar fructele se recoltez dup ce ajung la maturitate iunie-august i se usuc la temperaturi de 60-70C. n frunze se gasesc derivati flavonici; ele mai contin timina, riboflavina, vaccinina, arbutina, ericolina, o serie de acizi ( miristic, palmitic, chininic) alcooli cerilic, miricilic precum si o glicozida a acidului galic denumita neomirtilin care ar fi responsabil de aciunea hipoglicemiant, iar fructele conin tanini, derivati antocianici (mirtilina a si b) 3-glucozida i respectiv 3- galactozid delfinolului, care dau coloraia lor specific; mai conin vitamina C i complexul B, provitamina A, principii bacteriostatice sau bactericide nc neizolate. Proprietaile astringente i antiseptice (antibiotice) ale plantei sunt importante, este ocrotitoarea pereilor vasculari, antisclerotica, de asemenea are i aciune hipoglicemiant (folosit n madicina noastr popular). Frunzele intr n compoziia ceaiurilor antidiabetice. Se foloseste ceaiul (1-2 g%) sau decoctul (0.5-3 g%) de frunze de afin n combaterea tuturor formelor de diaree, dizenterie cronic, ameliorand procesele de fermentaie i putrefacie intestinal. Fructele sunt ntrebuinate n unele produse de cofetrie (gem, dulcea, etc) afinata, precum i ca antidiareice, antidizenterice, antitifice, astringente, stomahice, n stimularea acuitatii vizuale a aviatorilor, conducatorilor auto, ele pot fi folosite cu bune rezultate n: hemoragii prin fragilitate capilar, retinopatii, insuficiena biliar, azotemie i altele. Prin vitamina P i prin aciunea trofic antiaterogen, protejeaza pereii vaselor sanguine. De asemenea au rol coronaro-dilatator nlesnind reglarea cardiovascular. Rezultatele bune obinute n tratamentul cu fructe de afin se datoresc unui comlex format din trei factori curativi: unul astringent, unul antiseptic i al treilea absorbant. Bolul fecal devine usor acid, disparand mirosul neplacut. Antocianii patruni n epiteliul mucoasei intestinale formnd o pelicul protectoare gri-negr, care diminu inflamaia locala i secreia, eliminnd i stresul mecanic. La aceasta se mai adaug efectul de inhibiie al perisaltismului intestinal exagerat (amplitudine, tonus, frecven). Obiective urmrite 1. Sporul n greutate i rata de conversie a hranei la loturile experimentale 2. Dinamica coproeliminrilor oochisturilor i scorul fecalelor la loturile experimentale 3. Indicele eimeriostatic i procentul performanei eimeriostatice
REZULTATE I DISCUII n urma cercetrilor efectuate pentru stabilirea efectului eimeriostatic, rezultatele obinute folosind extractele de Trigonella semen i Vaccinum myrtillus se evideniaz prin: Sporul n greutate i rata de conversie a hranei la loturile experimentale
321
322
Datele referitoare privind diferenele sporului n greutate la loturile experimentale sunt redate n Tabelul 1i n Tabelul 2. Analiznd datele obinute s-a observat c sporul n greutate la lotul martor negativ a fost 310 g , superior celui tratat cu Trigonella i Vaccinum la care sporul a fost de 255 g, respectiv 265 g dar media lor a fost net superioar lotului martor pozitiv care a avut valoarea de 225 g. n cazul lotului martor pozitiv, se obsrv c pentru a produce un kg spor n greutate sunt necesare 3 kg furaj. n acest sens, este cunoscut faptul c eimerioza puilor de prepeli determin nerealizarea sporului de greutate i ntrzieri n cretere i maturizare sexual, producnd pagube economice importante.
Tabelul 2 Conversia hranei la loturile experimentale Lot I Trigonella II Vaccinum III "M+" IV "M-" Spor (kg/lot) 0,255 0,265 0,225 0,310 Perioada (zile) 17 17 17 17 Consum furaje (kg) 0,638 0,662 0,675 0,620 Conversia hranei (kg furaj/kg spor) 2,50 2,49 3,0 2,0
Dinamica coproeliminrilor oochisturilor i scorul fecalelor la loturile experimentale Urmrind dinamica coproeliminrilor oochisturilor de Eimeria spp., s-a observat c la 4 zile post infectant numrul oochisturilor eliminate a fost foarte mare (cuprins ntre 50000 - 82000 OPG la M+). n urmtoarea perioad a experimentului s-a observat o tendin accentuat de scdere a oochisturilor coproeliminate, n cazul tuturor loturilor, ajungnd la limita de 400 la lotul tratat cu Vaccinum, respectiv 1400 la lotul tratat cu Trigonella. Extractele de Trigonella foenum-graecum i Vaccinum administrate pe tot parcursul experimentului au acionat ca: protectoare ale mucoasei digestive; antiinflamator; imunostimulator, iar prin alcaloizii coninui (trigonelin) ar putea inhiba dezvoltarea i multiplicarea formelor schizogonice i gametogonice ale parazitului. Indicele eimeriostatic i procentul performanei eimeriostatice Fitoterapia folosind extractele de Trigonella si de Vaccinum au pus n evidenta indici eimeriostatici superiori martorului pozitiv (IC=346,5 respectiv IC=356,5 comparativ cu 297,7), iar procentul performantei eimeriostatice a avut valori apropiate la ambele loturi tratate cu valori de 85,6% Trigonella si 88,1% Vaccinum .
323
CONCLUZII Cercetrile efectuate n perioada 6.02.2006 10.03.2006, n direcia stabilirii efectului de stimulare a cresterii i antieimerian al extractelor de Trigonella semen si Vaccinum myrtillus, n eimerioza experimental la puii de prepelit, au relevat urmtoarele: 1. Cel mai mare spor n greutate a fost nregistrat la lotul tratat cu Vaccinum cu o medie/pui de 26,5g faa de lotul martor pozitiv la care am nregistrat valori de 22,5g. 2. Rata de conversie a hranei la loturile tratate a avut valoari apropiate, 2,50 respectiv 2,49 kg furaj/kg spor ,comparativ cu M+ care a consumat 3 kg furaj/kg spor. 3. Loturile tratate au avut media coproeliminrilor de oochisturi de Eimeria spp inferioara lotului M+ 4. Indice eimeriostatic si procentul performantei eimeriostatice a avut valori apropiate la cele doua loturi tratate.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. El Shabrawy, O.A.; Nada, S.A., 1996 Biological evaluation of multicomponent tea used as hypoglycemic in rats. Fitoterapia, 67(2): 99-102. Franz, G., 1996 Planta Medica, 14. Munteanu, L.S., 1996 Cultura plantelor medicinale i aromatice. Edit. Dacia, ClujNapoca. uteu, I. Cozma, V., 2004 Bolile parazitare la animalele domestice. Edit. CERES, Cluj-Napoca. Williams, W., 1999 - A compartmentalized model for the estimation of the cost of coccidiosis to the worlds poultry production industry. International Journal for Parasitology, 1209-1229.
324
RELATIONS AMONG WEIGHT AND NUMBER OF EGGS LAID BY DERMACENTOR MARGINATUS AND HAEMAPHYSALIS PUNCTATA AND SOME ENVIRONMENT FACTORS
Lidia CHIIMIA* U.S.A.M.V. Timioara The eggs weight, laid by both species, had a high variability, thus: eggs of Dermacentor marginatus were weighing between 0.119 and 0.524 g with a mean value of 0.3523.816x10-2 g, and the Haemaphysalis punctata was weighing 0.047-0.253 g with a mean value of 0.1711.806x10-2. In natural conditions, D. marginatus females laid between 2290 and 9606 eggs with a mean of 6274.33624, and the H. punctata laid between 947 and 5900 eggs with a mean of 3550.33466. There are correlations between the number of eggs and the maximum temperature (r = +0.957 at p<0.001) and minimum temperature (r = 0.797 at p<0.001). It was found a significant correlation between the number of eggs and the mean temperature at soil level (r = +0.939 at p<0.001), maximum temperature at soil level (r = +0.827 at p<0.001), minimum temperature at soil level (r = +0.793 at p<0.001), and the difference between maximum and minimum temperature at soil level (r = +0.621 at p<0.001). There are significant correlations between the number of eggs laid by the ixodid females and the sunlight length (r = +0.473 at p<0.001). During the study period it was observed that females begin to lay eggs in the evening time. In this case it was found that there are negative correlation between the number of eggs laid and relative humidity (r = -0.516 at p<0.001) and rainfall (r = -0.276 at p<0.12). It was observed that the interaction effect with some climatic factors (for example, temperature and humidity) influence differantly and significantly the number and eggs weight.
The ixodid ticks have a cosmopolitan and irregular spread. There are areas where ticks presence is constant among very important populations, as well as areas where the climatics and/or biocenotics condition permit only a sporadic and inconstant survival [5]. The adaptation of a certain tick species to a particular microclimat depends on its evolutive history and on the one of its host. It is in relation with genetic factors which interact with the microhabitat specific features. The wide distribution of tick species is based on different structural, physiological, and
*
Corresponding author: Tel. +40256277140, Fax: +40256277118 E-mail address: lidychitimia@yahoo.com
325
behavioural characteristics, which is up to ticks euryoecious species on excellence [5]. The effective presence in favorable biotopes depends on the regional climatic fluctuations and the hosts availability in past and in present [4]. The temperature and relative humidity are the principal factors which determine the main aspects of ticks life cycle. The mortality of ticks is the result of a complex interaction between temperature, relative humidity, rainfall and evaporation [8]. The geographic distribution of tick species, and indirectly of tickborne diseases, is limited by climatic factors. The range of any tick species is not static, and can retreat or advance with the humidity and drought cycles [9]. MATERIALS AND METHODS
The tick females were collected in April from naturally infected sheep. After identification according to morphological features using the determination keys of Feider [10] and Babos [1], it was established that the species are Dermacentor marginatus and Haemaphysalis punctata. The samples of engorged females were chosen through drawing of lots from all the collected ticks; there were selected 12 females. Females were weighed with the analytic balance and were put in test tubes prepared according to Metianu method. Thus, glass test tubes of 18 cm high were used. Each test tube was half filled with water then two layers of water cotton-logged (about 5 cm high) were placed in each tube. The test tubes were closed with wrapped cotton plugs. During the entire experimental period the test tubes were kept outside under the direct influence of climatic factors. The test tubes were placed on the ground, under different bushes so that they werent exposed to direct sunlight. Females were kept in individual test tubes in order to determine biological characteristics. The environment factors considered to have influence on ixodide ticks biology were: minimum, maximum and mean air and soil temperature, rainfall, relative humidity and sunlight duration. Meteor data were obtained from BanatCrisana Regional Meteorological Center from Timisoara. During the study there were used daily values of these factors and mean value, standard deviation and variance of these factors. Data were processed with Microsoft Excel and statistical analysis. The statistical analysis was carried out using SPSS 7.5 application to obtain correlations, t test and ANOVA in order to determine, environment factors effects on some biological parameters of these species.
RESULTS AND DISSCUTIONS The eggs weight laid by both species was very different, thus: eggs of Dermacentor marginatus was weighing between 0.119 and 0.524 g with a mean value of 0.3523.816x10-2 g, and the Haemaphysalis punctata was weighing 0.047-0.253 g with a mean value of 0.1711.806x10-2. The egg mass weight of D. marginatus taken into study by Ionita (2003) varied between 1.123 and 0.566 g
326
with a mean of 0.326. It can be observed that there were very many differences between the eggs weight of the females exposed to direct influence of climatic factors and the ones kept in laboratory conditions. The number of eggs laid by each female depends on the female weight and on the environmental factors. In natural conditions, D. marginatus females laid between 2290 and 9606 eggs with a mean of 6274.33624, and the H. punctata laid between 947 and 5900 eggs with a mean of 3550.33466. The number of eggs laid by each ixodid female depends on females weight, field conditions, and the tick species (t = 3.494 at P0.002).
Tabel 1 Number of eggs value and variability depends by tick species Tick species Dermacentor marginatus Haemaphysalis punctata N 12 12 Mean 6274.3333 3550.3333 Std. Error of Minimum Maximum Mean 624.4584 466.7711 2290.00 947.00 9606.00 5900.00 Std. Deviation 2163.1873 1616.9425
Dermacentor reticulatus females laid 5000-7000 eggs [3]. In laboratory conditions Boophilus annulatus laid 2004 342 [16], 1982); 3877 [7]; 79872064 eggs [14]. Dermacentor reticulatus and Rhipicephalus sanguineus females laid about 4000 eggs [5]. In laboratory conditions D. marginatus females laid 236510115 eggs [13]. In the following statistical analysis it was observed that between the number of eggs and air temperature there are positive correlations: between the number of eggs and maximum temperature (r = +0.957 at P<0.001) and minimum temperature (r = 0.797 at P<0.001). In the model where the mean of maximum air temperature and the mean of rainfall (P<0.001) was introduced, a significant association between simultaneous action of both factors and the number of eggs laid by females (P<0.014, R2 = 0.583) was observed during oviposition. There was found a significant correlation between the number of eggs and mean temperature (r = +0.939 at P<0.001), maximum temperature (r = +0.827 at P<0.001) and minimum temperature at soil level (r = +0.793 at P<0.001), and the difference between the maximum and minimum value of temperature at soil level (r = +0.621 at P<0.001). The difference between the number of eggs laid by the females of both species were not strongly significant (F = 12.20 la p<0.02). Introducing simultaneously the soil temperature and rainfall quantities we can obtain a statistic model where it can be noticed the influence of these factors on the number of laid eggs. It can be seen that the simultaneous action of temperature and rainfall on the number of laid eggs is not representative and significant.
327
Taken into consideration how the number of eggs are correlated with air and soil temperature we can certainly assert that the number of eggs is influenced more by temperature of the soil level then by air temperature. Moreover, the number of eggs is correlated with all values of temperature at soil level. This data come to confirme what other authors said [2, 4] that temperature is a dynamic and an essential factor for oogenesis and survival. The development of many tick species is also influenced by humidity and can be stopped when ambient humidity conditions are unfavorable [6]. In this case it was found that there is a negative correlation between the number of eggs laid by females and relative humidity (r = -0.516 at P<0.001) and rainfall (r = -0.276 at P<0.12). The relative humidity is always necessary to ensure the eggs development and survival. The relative humidity of biotop needed by a certain species is comprised between some specific limits of the respective species. Nevertheless, when it is studied the effect of environmental factors on some biological parameters is taken into consideration more the cumulative effect of temperature and humidity. Thus, the number of eggs produced by engorged I. rubicundus females varied from 2045.7 (temperature 10oC and relative humidity 93%) to 3777.7 (temperature 20oC and relative humidity 93%). The number of eggs laid by a female from this species were 2700 at 25-35oC, but it decreased significantly at 20oC (about 2300 eggs/female), at 15oC (about 1800 eggs/female) and at 40oC (about 30 eggs/female) [17]. Humidity factors can also influence the number of laid eggs, the number of ovipositing females, the duration of oviposition or the moulting of the developmental stages of ixodid ticks [11, 12]. When humidity is low and the ticks continuously lose water this stage is known as a critical equilibrium of humidity. This humidity threshold varies between 75 and 94% relative humidity for the majority of tick species and can differ also in different developmental stages or sexes of the same species [15]. It was observed that the number of eggs is not influenced by environmental factors oscillations in preoviposition period. On the other hand, neither between the environmental factors variations during oviposition and the number of eggs laid by the ixodid tick females were individual associations obtained but only associations between the number of laid eggs and the concomitent action of some factors (r = +0.473 at P<0.001). There are significant correlations between the number of eggs laid by the ixodid females and the sunlight length (r = +0.473 at p<0.001). During the experiment it was observed that females begin to lay eggs during the night. The tubes, in which the ticks were placed, were examinated twice a day (at 9 a.m. and 5 p.m.) and it was observed that neither female began to lay eggs in day time. The ixodid oviposition takes place mainly in scotophase time [5]. At the beginning of the ovipositon period the rythm of laying eggs is more intense. Iwuala and Okpala [14] found that 11% of eggs were laid during the
328
day, and 89% during the night, the eggs laying being maximum at dawn and dusk. It were found similar results for A. variegatum as well. This observation is in contradiction to that reported by Outhelli et al. [16], according to them the engorged females exposed in laboratory at different light and darkness periods dont influence the number of eggs. Numerous reports have described the influence of solar radiation, temperature and humidity on the biological cycle of ticks. Overall, the most important factor seems to be the photoperiod, which has an impact on the mechanisms regulating diapause in ticks and the length of their development cycle. There are two basic types of responses to photoperiod expressed by most ticks: 1) long-day (LD) responses, which initiate active development; and 2) short-day (SD) responses, in which development is accelerated when perceived by the ticks [6]. In addition, a more complex, two-step photoperiodic response is also known in certain ticks; however, in this case, development proceeds only after certain increases or decreases in day length. The LD or SD reaction and the oneor two-step reactions vary in different tick species, developmental stages or populations. Oogenesis, for instance, is regulated by the SD reaction in I. ricinus, D. marginatus, D. reticulatus sau Ornithodoros gurneyi. In contrast, it is regulated by the LD reaction in Hyalomma anatolicum or Argas arboreus,. Larval development is accelerated by the LD period in I. ricinus, I. persulcatus and I. trianguliceps. This two-step photoperiodic reaction also occurs in the development of nymphal I. ricinus [6]. The development of this species is strongly influenced by photoperiod rather than by temperature, humidity and food quantity, which is considered to be of secondary importance. The minimal induction of daily photoperiod ranges from about 14 hours light and 10 hours darkness in connection with a minimal light intensity of 15 lux. Larvae can be adapted partly to full darkness in the laboratory, but nymphs are unable to metamorphose under a shorter light exposure [6]. The correlation between eggs weight and environmental factors taken into study have the same values with the correlations between the number of eggs and environmental factors. The correlations between the number of eggs and temperature were observed by other authors as well [16, 17] and in these cases the ticks were kept at certain values of temperature and relative humidity in laboratory condition. Regarding eggs weight it was not found an association between this variable and the environment factors variations during preoviposition period and we can say, thus, that environmental factors oscillation from this period dont influence the eggs weight. But during the oviposition period the eggs weight is dependent on some environmental factors variations. In the model where the mean values of mean temperature of air and rainfall (P<0.001) were introduced, it was observed an association between the interaction of the two factors and eggs weight (P<0.001, R2 = 0.600). As well, an association
329
(P<0.05, R2 = 0.529) between eggs weight and concomitant action of mean values of maximum air temperature and the mean values of rainfall was observed. The model where the mean values of the mean soil temperature and the mean values of rainfall (P<0.001) were introduced, it was observed an association between these factors interaction and eggs weight at P<0.05 and R2 = 0.521. The same type of association was found when the variables were the mean values of sunlight length and the mean values of rainfall. Between the mean values of maximum soil temperature and the mean values of rainfall and eggs weight introduced in the model (P<0.001) were recorded associations (P<0.07). In the model where the difference values of maximum and minimum soil temperature and the mean values of rainfall were introduced (P<0.001), it were observed associations between concomitant action of these factors and the eggs weight (P<0.07, R2 = 0.512). So, for the development of ixodid ticks life cycle, the values of environment factors from microhabitat are more important than those from the macrohabitat. The microhabitat can be defined as the smallest part of the habitat, which is the actual living environment of ticks and other small organisms. Microhabitat size varies in relation to the size of the organism, its ecological requirements and its mobility in the terrain. The obtained data in the following statistical analysis show us very clearly that the effect of environmental factors interaction (temperature and humidity) influence differently some biological parameters of ticks. CONCLUSIONS Between the number of eggs, eggs weight and sunlight length were found significant correlations (P<0.001), correlations that were not recorded in special literature. The eggs weight and the number of laid eggs by both studied female species were influenced by tick species and the environmental factors. It was observed that, as well between eggs weight as between the number of eggs and maximum and minimum values of air temperature and maximum, minimum and mean values of temperature at soil level and the difference between maximum and minimum temperature at soil level were significant positive correlations (P<0.001). Due to these correlations we can assert that the values of temperature at soil level influence more the eggs weight varieties and the number of eggs in the ixodid ticks. The correlations existent between the two biological parameters and relative humidity and rainfall were negative (P<0.001and respectively, P<0.12). All females began to lay eggs during the night.
330
It was observed that the cumulative effect of the action of some environmental factors (temperature and humidity) influence differently and significantly some biological parameters of ticks, such as the number of eggs and eggs weight.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. Babos S., 1964 - Die Zeckenfauna Mitteleuropas. Akademiai Kiado, Budapest. re Bourdeau P., 1993 - Les tiques dimportance vtrinaire et mdicale. 1 partie: Principales caractristiques morphologiques et biologiques et leurs consquences. Point Vet., 25, 151, 13-26. Cernianu C.C., 1957 - Piroplasme i piroplasmoze. Vol. I, Ed. Academiei Republicii Populare Romne. Chartier C., Itard J., Morel P.C., Troncy P.M., 2000 - Prcis de Parasitologie Vtrinaire Tropicale. Ed. TEC&DOC, Paris. Cosoroab I., 2000 - Parazitologie veterinar. Acarioze i entomoze. Ed. Mirton, Timioara. Daniel M., Dusbbek F., 1994 - Micrometeorological and microhabitat factors affecting maintenance and dissemination of tick-borne diseases in the environment. n Sonenshine, D.E., Mather, T.N., 1994. Ecological dynamics of tick-borne zoonoses. Oxford University Press. Davey R.B., Garza J.Jr., Thompson G.D., 1982 - Seasonal observations on the development and ovipositional capability of Boophilus annulatus and B. microplus reared on bovines. J. Med. Entomol., 19, 1, 24-28. Drummond R.O., Whetstone T.M., 1970 - Oviposition of the Gulf Coast tick. J. Economy Entomol., 62, 934-936. Estrada-Pea A., 2001 - Forecasting habitat suitability for ticks and prevention of tick-borne diseases. Vet. Parasitol., 98, 111-132. Feider Z., 1965 - Fauna R.P.R. Arachnida. Vol. 2, Ed. Academiei Republicii Populare Romne. Fujimoto K., 1990 - Ecological studies on ixodid ticks 7. The effects of humidity on oviposition development and survival of Ixodes ovatus Neumann (Acarina, Ixodidae). Jap. J. Sanit. Zool., 41, 331. Hussein S.H., Mustafa B.E., 1987 - Temperature and humidity effects on the life cycle of Haemaphysalis spinulosa and Rhipicephalus simus (Acari: Ixodidae). J. Med. Entomol., 24, 77. Ioni Mariana, 2003 - Cercetri privind ecologia familiei Ixodidae n unele zone subcarpatice; aspecte epidemiologice ale parazitozelor ce pot fi transmise de acestea. Tez de doctorat, Bucureti. Iwuala M.O.E., Okpala I., 1977 - Egg output in the weights and states of engorgement of Amblyomma variegatum and Boophilus annulatus. Folia Parasitol., 24, 162-172. Knlle W., Wharton G.W., 1964 - Equilibrium humidities in arthropods and theier ecological sifnificance. Acarol., 6, 299. Ouhelli H., Pandey V.S., Choukri M., 1982 - The effects of temperature, humidity, photoperiod and weight of the engorged female on oviposition of Boophilus annulatus. Vet. Parasitol., 11, 231-239. Van Der Lingen F.J., Fourie L.J., Kok D.J., Van Zyl J.M., 1999 - Biology of Ixodes rubicundus ticks under laboratory conditions: observations on oviposition and egg development. Exp. Appl. Acarol., 23, 513-522.
7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17.
331
IN VITRO ACTIVITY OF A PYRETHRINES CONDITIONING AGAINST IXODIDAE AND ARGASIDAE TICKS

R.T. CRISTINA*, I. OPRESCU, Lidia CHIIMIA, Eugenia DUMITRESCU In vitro activity of Piretrin extra, a pyrethrum (0, 05g-10.) and permethrine (0, 20g-10) A.U.V. association, against Ixodidae and Argasidae ticks study it is proposed. Parasitic species identified after Babos, Feider and Estrada-Pea for Ixodidae spp., and after Cosoroaba, for Argasidae spp., were Dermacentor marginatus, Haemophysalis punctata, respectively Argas persicus. Collected ticks were maintained for 48 hours before experiments to 211C at 555 % relative moisture and for 14h: 10h (light/dark) photoperiod, and four experimental and one control lot of 100 females and 100 males (for each lot) constituted. Ticks were scattered in Petri plates (simulating living conditions) and the studied product was uniformly dusted over plates. Ticks watching accomplished at 12, 24, 36, 48 (for D. marginatus and H. punctata) respectively 72 hours (for A. persicus) after contact, followed ticks viability following the locomotors activity, amplitude and locomotors appendices frequency, ortho and versostasys and death. Results for treated D. marginatus lots concluded that females are more resistant than males. 15% mortality ratio for females in comparison with 16,5% for males at 12h, 23, and 5% comparatively with 22% at 24h respectively 73%, for females versus 82% for males at 36h. After 48 hours, registered mortality was of 100% for both genders. In case of H. punctata lot, results shows again that males are more sensitive than females, their absolute mortality registering after 36 hours. In A. persicus lots, death of all individuals supervene in 72 hours, but is to notice that, 49% of tick population were found dead after 12 hours. Analysing comparatively it can observed that Argasidae are more resistant to the studied product than Ixodidae. In case of D. marginatus and H. punctata eggs, experiments observed viability of 1000 eggs for each lot. Results showed in all cases, that after dusting with tested compound, embryonic mortality was absolute, comparatively with control lots were hatching rate was of 100%.
Corresponding author: Prof. Romeo Th. Cristina, PhD Faculty of Veterinary Medicine Timioara, RO Veterinary Pharmacology and Pharmacy Dept. e-mail rtcristina@yahoo.com
332
The in vitro tested product proven a very good contact acaricidal activity against Ixodidae and Argasidae ticks, dead of Dermacentor and Haemaphysalis individuals supervened in 24 to 48 hours.
Key words: ticks, pyrethrines, in vitro, efficacy
Ticks put control problems mainly because of them vector role of Anaplasma, Babesia, Cowdria, Theileria and for other nosogenic agents, and for them direct action upon productions, blood loss and/or them toxic secretions (2, 8, 11). Fight against ticks is fundamentally an economic issue and success demands right conception and execution. Therapeutic arsenal against ticks is wide, from the avoided (because of them disadvantages) old mineral and organoclorurates (e.g. Toxaphene, Gamatox, Pecusanol) to organophosphorates: dympylate (Diazinon, Dimpygal), dioxathion (Delvan), coumaphos (Asuntol), phoxim (Sebacil), quintiofos (Oxinothiophos, Bacdip), chlorfenvinphos (Supona), carbamates: Propoxur (Sevin, Carbaryl), Bendiocarb, Methomyil. Also the recent formamidines: chlorphenamide (Clordimephorm, Galeron), amitraz (Taktic), cymiazole and fermentation compounds (Spinosad), macrolides: Doramectin Eprinomectin, Ivermectin, Milbemycin-oxime, Moxidectin, Selamectin or phenylpirazoles (Fipronil) are widely used in the fight against acari. To these groups is joining also the pyrethroid group from first: (e.g. Allethrin, Bioallethrin, Permethrin, Phenothrin, Resmethrin and Tetramethrin) and second: (-Cypermethrin, Cyfluthrin, Cyhalothrin, Cypermethrin, Deltamethrin, Fenvalerate, Flucythrinate, Flumethrin and Fluvalinate), generation substances. Comparatively with the up mentioned ones, this presents, the advantage of a rapid environmental degradation, low bioaccumulation tendency, and toxicity in birds and mammals, and not in last line, lack of restrictions for meat and milk products (3, 6, 7, 8).
*
Present work follow the in vitro activity of an acaricidal conditioning on Ixodidae and Argasidae ticks, proposing two objectives: 1. In vitro efficacy, against: females, males, and eggs of Ixodidae spp. 2. In vitro activity against Argasidae spp. ticks (sexually undifferentiated). Experiments were realised in the some time interval and in the same conditions respecting known methodology of other scientific researches (9, 10). MATERIALS AND METHODS
Piretrin extra (Phylaxia-Pharma RT) is an A.U.V. association, tested, approved and recently introduced in our country.
333
The studied product is an association of 0,05g pyrethrum (Fig. 1) and 0,20g permethrine (Fig. 2), and silicone dioxide (0,005g), benzocaine/norcaine (0,001g), and talcum ad 1000g as excipients, conditioned like dusting powder. Structure:
O H3C H H3C C R C H CH3 COO CH2CH CHCH CH2
H3C CH3 O Cl
H H
CH3
C Cl
CH
COOCH2
Fig. 1 Pyrethrine (C21H28O3) Acid (2, 2-dimethyl-3-(2-methyl-1-propenyl)cyclopropane-carboxylic) 2methyl-4oxo 3(2, 4-pentadienyl) -2-cyclopenten-1-yl ester
Fig. 2 Permetrine (C21H20Cl2O3) (Sin. Ambush, Ectiban, Pouce) Acid 3-(2, 2-dichloroethenyl)-2, 2-dimentylclopropane-carboxylic-(3-phenoxyphenyl) methyl ester
The products compounds are efficiently used in many European countries, because of them low risk and efficient integrated arthropods control in humans and animals. Activity of the two components assures long time acaricidal activity and efficacy, preventing the appearance of resistances. Beside of its quick and time constant effect, the association has a permanent alarm activity, acting as an invasion repellent (6, 7). Piretrin extra is recommended in louse parasitism against: Haematopinus eurysternus, H. suis, Linognathus oviformis, L. setosus), malofages in birds and mammals: Menopon gallinae, Goniocotes gallinae, Lipeurus caponis, Trinoton anserinus, Damalinia bovis, Bovicola ovis, Trichodectes canis, Gyropus ovalis, Gliricola porcelli, against Argasidae spp.: A. persicus, A. reflexus and Ixodidae spp.: I. ricinus, Rhipicephalus spp., Dermacentor spp., Haemaphysalis spp. For the destruction of kitchen bugs: Blatta orientalis, Blattella germanica, bedbugs: Cimex lectularius, C, hemipterus, and ants: Formica rufa, F. fusca, F. sanguinaea the product is also recommended. Piretrin extra is applied in thin coating in places where insects living, and in them access areas and routes. For 1 m surface is required 5-10g of powder, In case of external parasitism skin of animal will be dusted, operation being repeated, if required, to 2-3 weeks. In case of intoxication, atropine is the specific antidote. Ticks collecting and identification Ticks naturally collected, in March-April 2005, from sheep from Timi County (western part of Romania), respectively from 9 traditional aviaries were placed in paper bags and brought in laboratory where they were transferred into plastic jars with sieve cowls. 334
Both, Ixodidae and Argasidae ticks were maintained for 48 hours before assays at 211C to 555%, Relative Moisture, to a 14h: 10h (light/dark) photoperiod. Parasitic species identified after Babos (1) and Feider (4) and after Estrada-Pea (4) were Dermacentor marginatus and Haemophysalis punctata predominant species in western part of Romania, respectively Argas persicus1, after Cosoroab (2). Experiment I Experimental lots Four experimental lots and one control (C) were constituted, of 100 females and 100 males, for each lot and for each parasitic species DM1 and DM2 (Dermacentor marginatus), respectively HP1 and HP2 (Haemaphysalis punctata). The arthropods were scattered on filter paper and humidified wool (stimulating body conditions), placed in Petri plates. After 48 hours, the studied product was dusted, uniformly over all surfaces of Petri plates (Figures 3 to 6).
Fig. 3 Females of Dermacentor marginatus (dusted Petri plate)
Fig. 4 Males of Dermacentor marginatus (dusted Petri plate)
Fig. 5 Females of Haemaphysalis punctata (dusted Petri plate)
Fig. 6 Males of Haemaphysalis punctata (dusted Petri plate)
For testings were used unsexed adults (sex knowing being unnrelevant in this case).
335
Readings Ticks watching accomplished (with the stereoscopic magnifier at 20 x 2,5) at 12, 24, 36, respectively 48 hours after contact with antiparasitary powder observed ticks viability following: the locomotors activity; amplitude and locomotors appendices frequency; ortho and versostasys and death of the acarians after the conceived key presented in Table 1.
Table 1 Evaluation of tick locomotors activities Large Large movements movements hipermotility Slow motility ++++ +++ Ortho or versostasys Slow limb movement ++ Versostasys Very low limbs movements + Exitus Motility absence -
Experiment II Lots Four experimental and one control (C) of 100 individuals for each lot AP1 and AP2 (Argas persicus) were constituted and placed on humidified filter paper. After 48 hours Piretrin extra was dusted uniformly over all surface of Petri plates and argasides viability was expressed in the same parameters like above. Mortality percent was calculated.
RESULTS AND DISCUSSION In Tables 2, 3, and 4 is illustrated the mortality evolution in experimental lots. Analysing the results for treated Dermacentor marginatus lots was concluded that females are more resistant than males: 15% mortality ratio for females by comparison with 16,5% for males at 12h, 23,5% by 22% at 24h respectively 73% for females versus 82% for males at 36h. After 48 hours, registered mortality was of 100% for both genders. In case of Haemophysalis punctata lot, results have shown again that males are more sensitive than females, their absolute mortality installed after 36 hours. In case of Argas persicus lot, a death of all induals supervenes in 72 hours, but is to notice that 49% of tick population found dead after 12 hours. In case of Dermacentor marginatus and Haemaphysalis punctata eggs, experiments were accomplished observing viability of 1000 eggs for each lot. Results showed in all cases, that after dusting with tested compound, embryonic mortality was absolute, comparatively with control lots were hatching rate was of 100%. However, the action against eggs is very good; this fact has only scientific information2, the eggs identification in nature being a utopia with any applicability in the field practice.
2
Even if, in nature will be possible eggs identifications, the product use it is not recommended acaricidal activity being unselective.
336
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Table 2 Situation of sexed Dermacentor marginatus lots treated in vitro with Piretrin extra Treated Dermacentor marginatus Males Females Hours 12h 24h 36h 48h 12h 24h 36h DM 1. 15 5 63 17 17 8 51 DM 2. 18 6 57 19 13 9 48 Average% 16,5 22 82 100 15 23,5 73 Note: DM: Dermacentor marginatus Control lot 48h 24 30 100 12h 24h 36h 48h -
Table 3 Situation of sexed Haemophysalis punctata lots treated in vitro with Piretrin extra Treated Haemophysalis punctata Males Females Hours 12h 24h 36h 48h 12h 24h 36h 48h HP 1. 72 28 64 26 10 HP 2. 67 33 51 38 11 Average % 69,5 30,5 100 57,5 32,0 10,5 100 Note: HP: Haemophysalis punctata Control lot 12h 24h 36h 48h -
Situation of Argas persicus lots treated in vitro with Piretrin extra Treated lots Adults 100 viable individuals/lot Hours AP1. AP2. 12h 59 39 24h 30 23 36h 48h 19 19 19 12 10 11 60h 10 9 9,5 72h 100
Table 4
Control lot 100 viable individuals/lot 12h 24h 36h 48h 60h 72h -
Average % 49,0 26,5 Note: AP: Argas persicus
CONCLUSIONS The in vitro tested product proved to be a very good contact acaricidal against Ixodidae and Argasidae ticks, dead of Dermacentor and Haemaphysalis individuals supervened in 24 to 48 hours. The Ixodidae females are more resistant comparatively with males (due probably because of them size) dying after 36h (for Haemaphysalis females), respectively 48 hours (for Dermacentor females). Analysing comparatively it can ascertained that Argasidae are more resistant to the studied product than the Ixodidae.
337
REFERENCES
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Babos S., 1964 - Die Zeckenfauna Mitteleuropas. Akademiai Kiado, Budapest. Cosoroab I., 2000 - Parazitologie veterinar. Acarioze i entomoze. Ed. Mirton, Timioara. Davey R.B., 1995 - Efficacy of topically applied pyrethroids against eggs of Boophilus microplus. J. Agric. Entomol. 12, 1, 67-73. Estrada-Pea A., Bouattour A., Camicas J.L., Walker A.R., 2004 - Ticks of domestic animals in the mediterranean region. A guide to identification of species. ICTTD. Feider Z., 1965 - Fauna R.P.R. Arachnida. Vol., 2, Ed. Acad. RPR. Sangster N.C., 1996 - Pharmacology of anthelmintic resistance. Parasitol. 113, 201216. Samish M., 2000 - Biocontrol of ticks. Ann. N. Y. Acad. Sci. 916, 172-178. Samish M., Glazer I., 1991 - Killing ticks with parasitic nematodes of insects. J. Invert. Pathol. 58, 281-282. Stendel W., Fuchs R., 1982 - Laboratory evaluation of Flumethrin, a new synthetic pyrethroid for the control of one- and multi-host ticks. Vet. Med. Rev. 2, 115-129. *** - www.unine.ch/tiques *** - Parasitology Laboratory. Acari (ticks and mites) in Biology 625. Animal parasitology, [on-line], http://www.ksu.edu/parasitology/classes/625arth47.html.
338
REZULTATE AL INVESTIGAIILOR ARHEOFAUNALE NTR-O CLDIRE DIN ORAULUI ROMAN NAPOCA I O AEZARE RURAL DIN LOCALITATEA UCEAGU (JUD. CLUJ)
RESULTS OF ARCHAEOFAUNAL INVESTIGATIONS IN A ROMAN CIVILIAN BUILDING IN THE ROMAN TOWN NAPOCA AND A RURAL SETTLEMENT IN SUCEAGU VILLAGE (CLUJ COUNTY)
A. GUDEA, F. STAN F., A. SOCACIU, A. DAMIAN U.S.A.M.V. Cluj-Napoca The present study presents briefly the results of two archeozoological investigations (as part of a much more complex study concerning the roman fauna in the province of Dacia) carried on two small archaeofaunal samples from a civilian building in the roman city of Napoca and another roman rural settlement from Suceagu village, 10 km far from Napoca. These two archaeological sites provided us small samples of animal bones (below 100 pieces) and the results showed in case of the civilian building in Napoca that the only species identified is cattle(Bos taurus). A MNI of 2 was established and, based on the osteometrical data, a hight of 111 and 124 cm recalculated (based on the Matolcsis formula). Both identified individuals were over 2,5 years old. The sample from the rural settlement from Suceagu is larger, showing the existence of cattle, capriovids, horse and dog (as domestic species) and roe deer (as game). Statistically, the predominance of cattle is shown as primary meat-source species, followed by capriovids and horse. Osteometrical data is available in case of cattle, showing the existence of an male individual with 131 cm high (Matolcsi) and in case of one Ovis individual of 65 cm high.
DATE PRELIMINARE Studiile arheofaunale sau arheozoologice sunt importante att din punct de vedere al datelor de ordin morfologic care se pot desprinde prin analizele resturilor de oase descoperite n spturile arheologice efectuate n diferitele obiective ct i prin datele de ordin socio-economic desprinse ca element de ilustrare al nivelului vieii economice prin prisma tiinei creterii animalelor. Datele analizelor sunt cuprinse ntr-un studiu amplu al primului autor, studiu ce vizeaz diferitele aspecte ale creterii i ngrijirii animalelor n epoca roman. Materialul osos recoltat provine dintr-o prim sptur efectuat ntre anii 1995-1996 de ctre dr. Coci Sorin (Institutul de Arheologie Cluj Napoca) ca
339
urmare a demolrii fostei sli a clubului de box din centrul oraului Cluj Napoca. Obiectivul studiat se gsete i astzi n apropierea parcului I.L Caragiale, pe strada Victor Deleu, vis-a-vis de Liceul de Muzic i constituie una din atraciile turistice amenajate din centrul oraului. Primele spturi (de unde ne-a parvenit materialul osos- singurul recoltat n decursul acestor investigaii) au scos la iveal pri ale unor cldiri datate n ca fiind de secol XI-XII iar ntr-un strat mai adnc cteva pri ale unor cldiri atribuite perioadei romane, cldiri a cror construcie era predominant fcut din lemn cu ziduri mici de piatr. Eantionul osos este foarte mic ca numr de oase, fazei romane fiindu-i corespondente doar 36 de fragmente iar celei de secol XI-XII-130. Aezarea rural roman de lng localitatea clujan Suceag a fost investigat printr-o sptur de control efectuat n cursul anilor 1995-1997 tot sub coordonarea dr. Coci Sorin. Eantionul osos recoltat cuprinde 612 oase, din care doar 50 oase identificabile provin din stratul datat pentru epoca roman, restul de 443 sunt provenite din stratul de secol IV p.Ch. Rezultatele investigaiei osteologice vizeaz aici doar acest mic eantion atribuit perioadei romane. MATERIAL I METOD
Materialul osos igienizat la locul de recoltare a fost preluat de la locul de depozitare i transportat la Laboratorul de Anatomie Comparativ a Facultii de Medicin Veterinar Cluj-Napoca. Analiza arheofaunal a constat n separarea oaselor pe zona anatomice i ndeprtarea fragmentelor neidentificabile, urmat de identificarea speciilor prin observaii anatomice. S-a fcut repartizarea la membrul aparintor (n scopul determinrii numrului minim de indivizi. S-au fcut observaii cu privire la urmele de prelucrare uman. Aprecierile cu privire la vrst s-au fcut prin observarea stadiului de epifizare a oaselor ct i asupra stadiului de erupie i uzur dentar. Msurtorile s-au fcut utiliznd msurtorile etalon folosite n osteometrie.
REZULTATE I DISCUII Eantionul de dimensiuni foarte mici recoltat din cldirea din str. DeleuNapoca 36 fragmente - nu este foarte reprezentativ, mai ales datorit faptului c au fost identificate oase ale unei singure specii. Pentru fragmentele identificate atribuite bovinelor- se pot trage cteva concluzii a cror interpretare poate fi fcut doar ntr-un context mai larg - cel al comparaiilor datelor metrice cu cele surprinse n cazul altor situri contemporane. Este destul de dificil de apreciat numrul minim de indivizi din acest context. Singurele date ce se pot obine sunt cele referitoare la vrst - individul sau indivizii identificai sunt de peste 2,5 ani. O oarecare departajare ar fi posibil datorit existenei a 2 fragmente indiciu al unei vrste de peste 3,5 ani i alte 2 indiciu al unei vrste de peste 2,5 ani, aadar fiind posibil o apreciere a unui
340
minim de 2 indivizi. Datele metrice surprind de asemenea 2 indivizi, din care unul a fost apreciat drept femel, cu o talie de 1240 mm iar altul de 1109 mm (Boessnek). Pentru eantionul provenit din aezarea rural de la Suceagu a crui dimensiune mai mare a permis identificarea mai multor specii ct i desprinderea a mai multor date, rezultatele sunt concentrate iniial sub form tabelar pentru ca mai apoi s fie trase cteva concluzuii referitoare la acesta.
Specii identificate Specii domestice Bos Taurus Ovis aries Capra hircus Equs cabalus Sus scrofa domesticus Canis familiaris Specii slbatice Capreollus capreollus
++ ++ + ++ ++ ++ ++
++ specie identificat cert + specie a crei prezen este posibil Specia Rumegtoare mari Ovicaprine Sus scrofa dom Equs caballus Canis familiaris Total NISP 32 8 2 6 2 50 % 64 16 4 12 4 MNI 3 3
Bovine (Bos taurus) Numrul foarte mic al fragmentelor osoase atribuit acestei specii nu permite concluzii tranante. Putem aprecia doar posibila provenien a oaselor identificate de la minim 2 sau 3 indivizi. Datele despre stadiul de osificare surprinse la nivelul oaselor lungi arat 2 indivizi de peste 2-2,5 ani din care unul de peste 3,5-4 ani i probabil un alt individ sub 2,5 ani. Datele metrice parial surprinse n cazul metatarsului permit aprecierea unei talii de 1315 mm (Matolcsi), cel mai probabil provenit de la un mascul. Urmele de prelucrare indic destul de clar utilizarea speciei n scop alimentar. Ovicaprine (Ovis et Capra) Concluziile ce se pot surprinde pe baza materialului analizat sunt foarte puine. Vorbim despre existena a minim 2 sau 3 indivizi ai grupului ovicaprinelor (fr ca specia s poat fi desemnat), dintre care 1 sau 2 sunt de peste 2,5-3 ani i un alt individ este sub 18-21 luni. Unul din indivizii de peste 2,5-3 ani are o talie de 65 cm.
341
Cabaline Nu se poate aprecia dect existena unor indivizi robuti (apreciere subiectiv). CONCLUZII n ciuda faptului c n lucrarea de fa avem de-a face cu dou eantioane mici ca dimensiuni, acestea ne permit cteva concluzii de ordin general, att n privina datelor de ordin morfologic desprinse din studiul asupra oaselor descoperite ct i n privina elementelor socio-economice ce deriv din acestea. Concluziile desprinse sunt importante att ca date de sine stttoare (date biometrice, osteometrice) ,atunci cnd facem referire la rezultatele pentru fiecare sit arheologic n parte, ct i ca date integrate, alturate celor desprinse din analizele arheozoologice efectuate n situri contemporane. Se poate spune c n ambele situri specia predominant este cea bovin (rumegtoarele mari) a cror exploatare se fcea n scop alimentar (carne) dar i utilitar (munc, produse). Urmtoarele specii ca importan sunt reprezentate de ovicaprine i suine. Speciile secundare (cabaline, canide) sunt identificate n eantionul de la Suceagu i aspectele surprinse n privina lor nu sunt neobinuite pentru epoca roman. Speciile slbatice- cpriorul (n cazul eantionului de la Suceagu) sunt slab reprezentate numeric, indiciu al unei lipse de preocupare n privina vnatului, ns dovad a existenei acestei specii n biotopurile nconjurtoare. Elementele de morfologie care se pot desprinde arat n cazul bovinelor valori ale taliilor ce ncep de la 110 cm pn la 130 cm, elemente care arat, la fel ca i n cazul altor situri de epoc roman, creterea valorii taliilor bovinelor fa de epoca precedent. n privina ovicaprinelor s-a putut recalcula o singur talie pentru un individ matur- 65 cm- valoare care este nscrs n tendina cresctoare a valorii taliilor pentru ovicaprinele epocii romane, rod al ameliorrii speciei. Pentru suinele domestice i pentru cabaline datele surprinse n cazul celor dou situri nu sunt relevate.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Chaix, L. & P. Meniel, 2001 - Archeozoologie.Les animaux et l'archeologie. Paris: Edition Errance. Davies, S.J.M., 1987 - The Archaeology of Animals. London: B.T.Batsford Ltd. Desse, J., L. Chaix & N. Desse-Berset, 1986 - "Osto" Base-Rseau de dones ostometriques pour làrchozoologie.Procdures, codages, exploitation des donns, organisation du rseau. Paris: Centre National de la Recherche Scientifique. El Susi, G., 1996 - Vntori, pescari si cresctori de animale n Banatul mileniilor VI .Ch- I d.Ch. Timisoara.
4.
342
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 5. 6. 7. 8. Grant, A., 1985 - The use of Toothwear as a guide to the Age of Domestic Ungulates. In Palaeobiological Investigations. Research, Design, Methods and Data Analysis: BAR Int.Ser 266, 91-108. Gudea, A. & N. Gudea, 1999 - Contributii la cunoasterea faunei domestice la daci nainte de cucerirea roman. Apulum, XXXVI:145-173. Gudea, A. & N. Gudea, 2000 - Despre cresterea animalelor, cunostinte de zootehnie si medicin veterinar n provinciile dacice (106-275). O ncercare metodologic pentru stadiul actual al cercetrilor II. Apulum, XXXVII:241-278. Gudea, A., 2002 - Uber die Haustiere Im Rmischen Dakien-Ein Archozoologhischer Gesichtpunkt. In Interregionale Und Kulturelle Beziehungen im Karpatenraum (2.Jahrtausend V.Chr.-1.Jahrtausend N.Chr.), ed. Gudea, N. & Cosma C. Cluj-Napoca: Nereamia Napocae, 61-103. Gudea, A., 2005 - Civilizatie si comert pe teritoriul Daciei Romane.Cresterea animalelor si implicatiile ei. Studiu arheozoologic, statistic si comparativ. In Comert si civilizatie. Transilvania in contextul schimburilor comerciale si culturale in antichitate, ed. C.Cosma & A.Rustoiu. Cluj Napoca: Ed.Mega, 211-264. Lauwerier, R.C.G.M., 1988 - Animals in Roman Times in the Dutch Eastern River Area. Amersfort: ROB. Pastea, E., E. Muresianu, G. Constantinescu & V. Cotofan, 1978 - Anatomia comparativa si topografica a animalelor domestice. Bucuresti: Editura Didactic si Pedagogic. Peters, J., 1998 - Rmische Tierhaltung und Tierzucht. Eine Synthese aus archozoologischer Untersuchung und schriftlich-bildlicher berlieferung. Leidorf: Passauer Univesitts Schriften zur Archologie. Popovici, I., A. Damian, I. Papuc, E. Cristea, N.C. Popovici & I.D. Chirilean, 1995 - Anatomie comparat Osteologia-Artrologia-Miologia. Cluj Napoca: Ed.Genesis. Prummel, W. & H.J. Frisch, 1986 - A Guide for the Distinction of Species, Sex and Body Side in Bones of Sheep and Goat. Journal of Archaeological Science, 13:576-577. Prummel, W., 1988 - Distinguishing features on postcranial skeletal elements of cattle, Bos primigenius f. taurus, and red deer, Cervus elaphus. Schriften aus der Archaologisch-Zoologishen Arbeitsgruppe Schleswig-Kiel, Heft 12:3-52. Schmid, E., 1972 - Atlas of Animal Bones for Prehistorians, Archeologists and Quaternary Geologists. Amsterdam-London-New York: Elsevier Publishing Company. Udrescu, M.S., L. Bejenaru & C. Hriscu, 1999 - Introducere n arheozoologie. Iasi: Corson. Von Driesch, A., 1976 - Das Vermessen von Tierknochen aus Vor- und Fruhgeschichtlichen Siedlungen. Mnchen.
9.
10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18.
343
CALITATEA HRANEI I IMPACTUL ACESTEIA ASUPRA RELAIEI LUNGIME-GREUTATE LA JUVENILII RACULUI DE RU

FOOD QUALITY IMPACT UPON THE RELATION BETWEEN LENGTH AND WEIGHT OF YOUNG NOBLE CRAYFISH
L. MIRON U.S.A.M.V. Iai Manuela MIRON Univ. AL.I.CUZA Iai Three varieties of food were tested during this study: commercial trout pellets, fresh fish ,carrots and potatoes (ready-cooked vegetables). Food quality impact upon the relation between length and weight was studiet of young noble crayfish Astacus astacus.The alometry rate of the relation between length and weight of the differents clusters is approximately 3.The ratios of relative condition are greater than 1. However, the maxima value is observed for crayfish feed with commercial trout pellets.During this test, water analysis revealed some traces of nitrogenous elements in the troughts where crayfish were feed with trout pellets.
Key words: crayfish, relation length-weight, food quality
n aceast lucrare, a fost realizat un studiu experimental al impactului hranei asupra creterii juvenililor de rac de ru i asupra calitii apei, a diferitelor tipuri de alimente disponibile pe pia: legume prefierte (morcov i cartofi) ca surs de proteine vegetale, pete proaspt -ca surs de proteine animale i hran compactat sub form de granule, ca aliment complet (2, 4, 7). Rezultatele experimentelor au vizat un dublu obiectiv: testarea unor alimente susceptibile de promovare a astaciculturii; determinarea performanelor de cretere la puii de rac de ru n mediul artificial. MATERIAL I METOD
Racii folosii pe durata experimentului, la Staiunea Biologic Potoci, au fost capturai din lacul Bicaz. Lungimea total a acestor exemplare (msurat de la rostru la telson) a variat ntre 50 i 60 mm. Instalaia de cretere a juvenililor de rac a fost compus din cuve din fibr de sticl (2m lungime;0,5 m lime; 0,5 m adncime) alimentate cu ap de izvor (4 litri/min). Aceste cuve au fost prevzute cu adposturi etajate din P.V.C., cu diametrul de 40 mm fabricate local, 344
respectndu-se biologia acestei specii, care n tinpul zilei st retras n refugii. Masa pentru distribuirea alimentelor a fost aezat ntre adposturi. Racii au fost repartizai n 6 loturi a cte 20 de exemplare n 6 cuve. Raia de alimente a fost stabilit astfel: 100 g pete proaspt pentru loturile A1i A2; 100 g legume prefierte pentru loturile A3 i A4; 100 g granule pentru pstrv pentru loturile A5 i A6. Lungimea i greutate racilor din fiecare lot, a fost controlat la fiecare 15 zile. Temperatura, pH-ul i coninutul n oxigen dizolvat au fost msurate in-situ. Ceilali parametri urmrii au fost determinai n laboratorul de analiz a calitii apei. Pentru a pune n eviden impactul calitii alimentelor asupra creterii racilor, parametrii studiai s-au referit la relaia dintre lungime i greutate a indivizilor din diferitele loturi. Aceast relaie este: P= a. x Lb (1) unde P reprezint greutatea individului, a=constant iar b este coeficientul de cretere relativ sau coeficientul de alometrie. Plecnd de la aceast formul, substituirea valorilor lungimii = Lcu lungimile medii observate n cursul experimentului, permite obinerea valorii greutii medii calculate. Coeficientul de condiie relativ este raportul ntre greutatea observat i greutatea calculat. Acest coeficient se traduce prin condiia fizic a animalului i prin starea de bonitate.
REZULTATE I DISCUII Relaia lungime- greutate a celor 6 loturi de raci a relevat o variabilitate a creterii n funcie de alimentul administrat. Pe timpul derulrii experimentului s-a remarcat existena a trei faze de cretere: A - debuteaz cu nceputul experimentului i dureaz 2 sptmni; este faza de adaptare a racilor la mediu; B - faza se ntinde pe parcursul a 4 sptmni i coincide cu perioada de cretere a racilor (nprlire); faza are un vrf de cretere care variaz ntre 75% i 90% pentru cele 6 loturi de juvenili; C - faza dureaz 16 sptmni i se caracterizeaz prin diminuarea indicelui de cretere ce coincide cu debutul fazei de oprire a creterii racilor, faz numit internprlire Corelaia ntre greutate i lungime la raci, ne permite s apreciem gradul de adaptare la mediu. Ca i la peti, aceast relaie este foarte important, de tip cretere (1). Trebuie remarcat c pentru creterea n lungime, a fost pus n eviden o variaie a vrfului de cretere n funcie de loturi. Astfel la diferitele loturi, cuplul lungime- greutate a descris o curb de tip cretere, n tabelul 1 fiind prezentai parametrii acestei relaii.
345
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 1 Parametrii relaiei lungime- greutate la diferite loturi de raci n cretere Loturi A1 A2 A3 A4 A5 A6 Model P= 3x 10-5 L3,0052 P= 3x 10-4L2,4261 P= 2x 10-5L3,1295 P= 4x 10-5L2,9520 P= 2x 10-5L3,1680 P= 3x 10-5L3,1302 Corelare R = 0,97 R = 0,89 R = 0,97 R = 0,89 R = 0,98 R = 0,88
Aceste rezultate arat c pentru diferite loturi, valoarea alometriei este foarte aproape de 3. Creterea este deci izometric. Totui trebuie notat c valoarea alometriei la loturile alimentate cu granule de pstrv, este uor superioar celorlalte loturi iar indivizii acestor loturi se afl ntr-o foarte bun stare de sntate (3,6). Creterea ponderal i coeficientul de condiie a diferitelor loturi este prezentat n tabelul 2.
Tabelul 2 Creterea ponderal a diferitelor loturi de raci Loturi A1 A2 A3 A4 A5 A6 Cretere ponderal (g) 9,7 9,9 11,7 10,9 13,2 14,5 Coeficientul de condiie relativ 1,01 1,01 1,07 1,05 1,25 1,30
Compararea valorilor prin testul T Student nu a artat diferene semnificative ntre loturile cu acelai regim alimentar (o probabilitate mai mic de 5%). Ctigul n greutate la exemplarele hrnite cu granule de pstrv este semnificativ superior loturilor hrnite cu legume prefierte i cu pete proaspt. Creterea n lungime a nregistrat rezultate mai sczute la racii crescui cu pete proaspt. Loturile de raci hrnii cu legume prefierte prezint valori intermediare. Datele confirm superioritatea granulelor de pstrv ca aliment complet ce asigur o cretere optim care reflect i o stare bun i o condiie fizic bun a animalelor. Examinnd compoziia granulelor de pstrv, constatm c ele conin produi azotai de origine vegetal, co- produi de transformare a cerealelor, produi i co- produi de transformare a zaharurilor, ulei, grsimi, substane minerale i vitamine. Aadar hrana granulat reprezint un aliment ce asigur nevoile energetice ale racilor. Va fi interesant de pus la punct un aliment comercial pentru raci, care s permit obinera unor performane de cretere.
346
Procentul de mortalitate a fost urmrit pe parcursul experimentului mai ales n faza de adaptare a racilor, care au fost introdui ntr-un mediu nou diferit de cel de origine, aceast modificare putnd induce moartea la crustacee, mai ales n acest stadiu al dezvoltrii. Regimul pe baz de granule de pstrv asigur un procent de 95% de supravieuire. Hrnirea cu pete permite supravieuirea ntr-un procent de 85% iar hrnirea cu legume conduce la un procent de 70% supravieuire a subiecilor. Impactul calitii apei Controlul calitii fizice i chimice a apei s-a fcut la interval de 15 zile. Valorile parametrilor fizicochimici au rmas constante n toate cuvele de cretere. Valorile medii ale temperaturii, pH-ului i oxigenului dizolvat au fost: 13,6oC; 7,2; respectiv 8,4 mg/l. Analiza apei a confirmat starea satisfctoare de calitate n toate cuvele experimentale, ca i absena elementelor azotate. n tabelul 3 sunt prezentate valorile parametrilor msurai.
Tabelul 3 Valorile medii ale parametrilor fizicochimici n apa de izvor Factori analizai Loturi ToC PH O2 mg/l OxMnO4K Mg/lO2 Ca mg/l Mg mg/l Sulfat.mg/l Clor mg/l NO3 mg/l NO2 mg/l NH4 mg/l Ap izvor 13,6 7,3 8,5 0,35 70 32 34,5 14,0 0 0 0 Cuva1 A1 13,6 7,3 8,3 0,45 70 32 34,5 14,3 0 0 0 Cuva2 A2 13,6 7,3 8,3 0,5 70 32 34,5 14,3 0 0 0 Cuva3 A3 13,6 7,3 8,3 0,5 70 32 34,5 14,2 0 0 0 Cuva4 A4 13,6 7,3 8,3 0,5 70 32 34,5 14,2 0 0 0 Cuva5 A5 13,6 7,3 8,3 0,6 74 33 34,5 14,2 urme urme urme Cuva6 A6 13,6 7,3 8,3 0,65 74 33 34,5 14,2 urme urme urme
Apa este caracterizat printr-o temperatur i pH. constante. Valorile coninutului n oxigen dizolvat i n calciu sunt optime pentru dezvoltarea racilor Astacus astacus (1, 2, 6) . S-au nregistrat doar slabe urme de derivai azotai n cuvele unde hrnirea loturilor de juvenili s-a fcut cu granule de pstrv. CONCLUZII Experimentul a avut ca scop dezvoltarea creterii intensive a racilor de ru Astacus astacus L.i definirea unor metode de gestionare ct mai rentabile. S-a demonstrat superioritatea hranei granulate folosite i n creterea pstrvului, fa de petele proaspt i legumele prefierte, determinnd o mai bun cretere n lungime i greutate. Hrana granulat prin compoziia sa complet,
347
favorizeaz creterea racilor i starea fizic a exemplarelor, fapt dovedit i de procentul de supravieuire. Remarcm necesitatea fabricrii unui aliment specific pe baza produselor locale care s rspund nevoilor energetice ale racilor pe parcursul ciclurilor de dezvoltare. n ceea ce privete calitatea apei, nici unul din alimentele testate nu prezint un efect poluant. Prezena urmelor de nitrii, nitrai i amoniac n cuvele n care s-a folosit hrana granulat, trebuie s incite la noi cercetri pentru verificarea impactului la o scar mai mare, a acestui tip de hran, asupra calitii apei
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Austin, C.M., 1995 - Length-weight relationships of cultured species of Australian freshwater crayfish of the genus Cherax. Freshwater crayfish 10: 410-418. Gydemo, R., 1988 - Growth of the noble crayfish, Astacus astacus, in a pond-stoking experiment. Freshwater crayfish 7: 251-258. Henttonen, P., 1993 - Moulting, growth, survival and colour of Astacus astacus L. juveniles fed diet with and without green plant material and maintained in individual cages and communal tanks. Freshwater crayfish 9: 426-441. Laurent, P.J., 1989 - Les ecrevisses dans le monde. LAstaciculteur de France nr. 21: 9-17. McMahon, B.R:, 1986 - The adaptable crayfish: mechanisms of hpysiological adaptation. Freshwater crayfish 6: 65-72. Miron Manuela, 2006 - Compendiu de astacicultur. Ed. Stef. Institutul European, 254p. Pursiainen, M., & al, 1988 - Moulting and growth of the noble crayfish Astacus astacus in an oligotrophic lake. Freshwater crayfish 7: 155-164. Sevilla, C., 1993 - Biochemical study of the growth of Astacus astacus fed with plant diets by quantitative variations of muscular DNA and proteins. Freshwater crayfish 9: 226-234.
348
ANALYSIS OF FOOD UTILISED BY THE CRAYFISH ASTACUS ASTACUS L. FROM BICAZ LAKE
ANALIZA HRANEI UTILIZATA DE RACUL DE RAU ASTACUS ASTACUS L. DIN LACUL BICAZ
Manuela MIRON Univ. "AL. I. CUZA" Iai L. MIRON U.S.A.M.V. Iai The food consumed by crayfish (Astacus astacus L.) was investigated in Bicaz Lake, NE of Roumania, during the ice-free period. The stomach content of crayfish of different sizes and from different habitats were examined. Despite a transition from oligotrophic to mesotrophic conditions in the shallow areas of the lake, the food composition had not changed markedly since the last study in 1980 (Miron et al., 1983). The majority of individuals from all size groups contained detritus and/or benthic macrophytes on all sampling dates. Benthic algae also constituted a considerable part of their diet, while benthic crustaces, insects, zooplankton and fish only made up a minor part of the diet. The frequency of crayfish with empty stomachs was higher during late autumn and during molting than at other times.
The ecological role of crayfish in benthic communities and their overall trophic positlon in the lake eco-system are often unknown and overlooked (Mason 1963, Vannote 1963, Momot et al. 1978). However, food choice by Astacus astacus has been of little interest despite the need for such information when attempting to evaluate the importance of crayfish in the benthic communities. We studied food choice and determined the importance of various food items in the diet of A. astacus in Lake Bicaz in 2004-2005. This lake provides aproximately, 2 kg/ha (Manuela Miron, 1999) and is probably a good habitat for A. astacus in Romania today. During the last few decades, there has been a transition from oligotrophic to mesotrophic conditions in the lake. The feeding of crayfish was examined in Bicaz lake 10 years ago (Manuela Miron, 2004) providing comparative data, to reveal long-term changes in feeding. Further, we discuss the importance of crayfish with respect to the turnover rate of organic deposits from the littoral habitats. MATERIALS AND METHODS
Crayfish were sampled during July 2004- June 2005 at Biological Station Potoci, located near Bicaz lake. In June, July, August and September, 349
crayfish were handly collected within a defined boundary. In the shallow (< 1.5 m), littoral area where the bottom substratum consisted of stones and gravel. Areas with thin cover of waterweed were avoided. In October, crayfish aere located in deeper water and sampling was therefore conducted by diving (1,5-10 m). After sampling, a 10 % formaline solution was injected into the stomach of each crayfish which was stored in a deep-freezer. A total or 171 individuals (size 4.5-10.0 cm) had their stomach contents (not intestines) examined under a binocular microscope and the food remains were identified when possible. Stomach fullness was subjectively evaluated using a numerical index; 0designated empty and 4 designated fully extended. The size, sex and carapax status (stage of molting) were determined for each individual.
RESULTS Food Items Throughout the summer, benthic macrophytes and detritus were the main food components, with macrophytes dominating during early summer and detritus dominating during late summer. Although that two major food groups were often found together in the same stomach, extended stomachs (degree 4) often consisted exclusively of either macrophytes or detritus. Animal remains occurred most often together with plants, whlle benthic algae always co-occurred wlth sediments. Plant remains were most often composed of brownish, decaying stems. Fresh green plants were only occasionally recorded; cccasionally decaying plants and detritus were hard to differentiate, usually, however, and especially in extended stomachs, the detritus component consisted of soft mud containing few larger particles. A large number of animals was found, neither of which made significant contributions to that diat (Tab. 1). Most frequent were the remains of the lacustris crustaceans, the larvae and pupae of trichopteran and eurytopic chironomidae like Chironomus plumosus. Fish remains and fish scales were frequently recorded in all seasons. Scales of bleak Alburnus alburnus L. were identified mostly in the medium size. This fish species was commonly used as bait in the crayfish traps. Relative importance of food items Although a large number of pray types were identified from crayfish stomachs, most of these were only a small fraction of them total volume (Tab. 1). In September, animal remains were found in more than 60 % of the stomachs, accounting for less than 30% of volume. In July, the corresponding values were 28% and 7%, respectively. In total, plant remains and detritus were by far the most important food items, each of these food types accounting for more than 40 % of the food volume. This change from mainly macrophytes in early summer to mainly detritus in late summer and autumn is noteworthy.
350
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Table 1. Relative amounts (volume %) of various types of prey in stomachs (volume %) of A. astacus Food groups Benthic macrophytes Benthic algae Sediment Leaves Seeds Fish Trichoptera Chironomidae Cyclops Bosmina Chitinous fragments Other subjects June 74 21 1 0.5 1 2 July 59 3 23 2 2 0.5 2 0.5 2 4 August 10 8 71 3 2 1 2 September 26 9 37 9 5 1 1 0.5 3 0,5 October 20 60 1 4 3 1 Mean 37.8 4 42.4 0.6 0.6 2.7 1.8 1.0 0.4 0.2 2,2 1,5
Feeding Activity Stomach fullnes used as a measure of feeding activity, showed considerable variatlon during the summer. Feeding was most intense around mid-summer and during early autumn; it was lower in early summer and in October when almost 90% of the sampled crayfish had empty or almost empty stomachs. Although all individuals caught between June-September came from shallow areas (< 1.5 m depth), only a single individual was caught at this depth in October. The rest were collected by a Scuba diver (1.5-10 m). This single individual found in the shallows, was the only crayfish collected in October that had its stomach full of food. No correlations were found between sex or size and stomach fullness. There was, however, a slight tendency for larger animals to feed more than smaller animals during June, August and September. In July, the individuals with empty or almost empty stomachs were significantly larger than then the well-fed individuals (P < 0.05, t-test). This relationship coincided wlth molting, which occurred during this time among the largest individuals. All individuals at different stages of the molting cycle had almost empty stomachs. Feeding activity in eggcarrying females was not significantly different from the rest of the crayfish population. Organic detritus dominated: it was found in 74% of the stomachs; 53% contained macrophytes, 46% algae, 9% seeds, 15% Chironomidae, and 7% Nematoda. Fish, zooplankton and other animals were only found in sma11 numbers. The frequency of crayfish with empty stomachs was only 7%. However, most of these were found in early August.
351
DISCUSSIONS The present results are basically in agreement with other studies concerning crayfish feeding. They all concluded that benthic macrophytes and detritus are the major food components (Abrahamsson 1966, Prins 1968, Momot et al. 1978). Compared with these studies, however, the detritus component in our study was relatively large (21-71%, mean 42%), while the vascular plant (10-39%, mean 30%) and benthic algae components (0-9%, mean 4%) were relatively less. The proportion of animal material was typically ca. 14% (range 3.5-27.5%). During June and July, benthic macrophytes constituted more than 66% (volume) of the ingested food, while detritus only accounted for 22%. This situation was reversed in August-October. Thus during spring, crayfish appear to feed on decaying plant material left over from previous years, gradually shifting to detritus which becomes enriched with organic material and bacteria as the sesson progresses. Furthermore, in late summer, the detritus component contained large amounts of diatom fragments, providing an additional food source. The largest proportion of detritus in the stomach semples coincided with periods of lowered feeding activity (August-September). The crayfish is a potential fish predator, although fish have been rarely recorded as food. The fish remains and large fish-scales found in stomach samples during autumn probably originated as bait in traps used between AugustSeptember. Thus if fish are excluded as a potential food source in nature, then animal material makes up for only 11% of the total food volume. Fish roe, crayfish roe and young crayfish were never recorded in stomachs, despite the crayfish's reputation as a roe-predetor and cannibal. The nutritive value of the various food types is uncertain. The nutritive value of detritus probably varies between seasons and between different localities. Whether or not crayfish benefit from small amounts of animal proteins has also been debated. Although information on crustaceans is scarce, there is some evidence that omnivores on a mixed diet grow better than those limited exclusively to either plant or animal material (Kinne 1959, Covich 1977). With the exception of detritus and benthic algae no food groups were found to be significantly linked in this study. Many kinds of food were often found together in the same stomach, indicating a non-selective feeding mode. There was, however, a tendency for larger individuals to exploit a single food source (either macrophytes or detritus), and the increased amount of animal material in smaller individuals agrees with the findings of Lund (1944) and Vannote (1963). Large numbers of crayfish only containing detritus were found supporting the hypothesis that detritus alone may be a sufficient food source for parts of the sampling period. The value of detritus as food is probably high since it may contain large amounts of protein (bacteria, decaying plant and animal material) and minerals.
352
Several individuals had fed exclusively on macrophytes, inferring the presence of cellulase in the crayfish (cf. Lund 1944, Van Weel and Scheer 1970). This inference is supported by the findings of Moshiri and Goldman (1969), who found an assimilation efficiency of nearly 50% for crayfish fed solely on plants.The crayfish is obviously of great importance in the benthic ecosystem, due to its high densities and omni- and detrivorous feeding habits (cf. Momot et al. 1978). Thus it is probably the main contributor to the benthic fauna.
LITERATURE CITED
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Abrahamsson, S.A.A., 1966 - Dynamics of an isolated population of the crayfish, Astacus astacus Linne. - Oikos 17: 96-107. Covich, A.P., 1977 - How do creyfish respond to plants and mollusca as alternate food sourcea? - Freshw. Crayfish 3: 165-179. Kinne, O., 1959 - Ecological dats on the amphipod Gammarus duebeni. A monograph. - Veroff. Inst. Meeres Forsh. Bremerh. 6: 177-202. Kjellberg, G. Bunndyr I. Tyrifjordan - In: D. Berge (ed.), Tyrifjorden.156 pp. (In Norvegian). Lund, H.M.K., 1944 - A study of the food of the crayfish. - Nytt Mag. For Nat. vitensk. B4: 219-250. Mason, J.C., 1963 - Life history and production of the crayfish, Pacifastacus leniusculus. M.S. Thetis, Oregon State Univ., Cornvallis. 204 pp. Miron I. & col., 1983 Lacul de acumulare Izvoru Muntelui Bicaz . Monografie limnologica. Ed. Acad RSR. Miron M., 1999 Cercetari asupra biologiei crustaceelor din lacul Bicaz si a posibilitatilor de crestere dirijata a unor specii cu valoare economica ridicata. Teza de doctorat. Momot, W.T., H, Gowing, P.D. Jones, 1978 - The dynamics of crayfish and their role in ecosystems. - Am. Mid. Nat. 99: 10-35. Moshiri, G.A., C.R. Goldman, 1969 - Estimation of assimilation efficiency in the creyfish Pacifastacus leniusculus (Dana) (Crustacea: Decepode). - Arch. Hydrobiol. 66: 298-306. Skurdal, J., T. Qvenild, 1986 - Growth, maturity and fecundity of Astacus astacus in Norvey. - Freshwater Crayfish 6. Vannote, R.L. 1963. Community productivity and energy flow in an enriched warm water stream. - Ph.D. Thesis, Michigan State Univ., E. Lansing.156 pp. Van Weel, P.B., B.T. Scheer, 1970 - Chemical Zoology 5. - In: M. Elorkin Arthropoda. Acad. Press, New York.
12.
353
AGRESIUNE PARAZITAR MULTIPL ASUPRA ESUTULUI HEPATIC LA CAPRA NEAGR (RUPICAPRA RUPICAPRA)
MULTIPLE PARASITICAL AGGRESSION ON THE HEPATIC TISSUE OF THE BLACK GOAT (RUPICAPRA RUPICAPRA)
Otilia COOFAN, Olimpia IACOB, I. POP, Gabriela RILEANU U.S.A.M.V. Iai The research has been made on two cases, the Black Goat species (Rupicapra rupicapra) who died because of transporting stress. The hunts support state was showing a deficit, with pronounced weakening. The general necropsical examination was followed by the morphopatological examination of the liver, from which samples of tissue were fixed on formaldehyde 10% and after that were included in paraffin The samples were sectioned at 5 m, colored through the HEA, MGG, PAS methods, examined and microphotographed at MC5 with 10, ob. 10, 20, 40, and Imm. 63 oc. The histopathological examination revealed recent aggressions on the hepatic tissue characterized by hemorrhagic, necrotic paths and acute angiocolitis also hemorrhagic-necrotic paths, a previous aggressions expressed by chronic angiocolitis and hepatitis. These modifications are characteristic for the traumatic hepatitis produced by Cysticercus tenuicollis (cysticercosa hepatitis) during the hepatical migration, extremely aggressive, metacestod identified along with other parasitical structures disposed in the hepatical tissue.
Key words: Hunt, Black goat (Rupicapra rupicapra), liver, Cysticercus tenuicollis, multiple parasitical aggression
Parazitozele hepatice ale vnatului rumegtor, (capra neagr - Rupicapra rupicapra), afeciuni cu evoluie cronic, insidioas, rareori acut, determin perturbarea proceselor metabolice, influennd negativ procesul de cretere la tineret, scderea rezistenei i reactivitii la boli, diminuarea produciilor la animalele adulte i frecvent, mortalitate. Condiiile de via ale vnatului sunt din ce n ce mai dificile ca urmare a limitrii spaiului vital i n consecin aglomerrile teritoriale contribuie la apariia i perenizarea parazitozelor (3). Carnivorele slbatice, gazde definitive pentru numeroase specii de cestode, sunt responsabile pentru poluarea parazitar a suprafeelor punabile i apariia metacestodozelor hepatice la vnatul rumegtor. Agresiunea hepatic, exercitat
354
de mai multe specii de paraziti, se desfoar de obicei, simultan, genernd o aciune concertat cu efect letal asupra vnatul rumegtor. Scopul cercetrilor este relevarea agresiunii parazitare multiple asupra esutului hepatic la capra neagr (Rupicapra rupicapra) i consecinele asupra vnatului rumegtor. MATERIAL I METOD
Cercetrile au fost ntreprinse asupra a dou exemplare de capra neagr (Rupicapra rupicapra) sucombate n urma stresului de transport. Starea de ntreinere a vnatului a fost precar, cu slbire accentuat. Examenul necropsic general a fost urmat de examenul morfopatologic al ficatului. S-au prelevat fragmente de esut hepatic care au fixate n formol 10%, apoi incluse n parafin, secionate la 5 m i colorate prin metodele HEA, MGG, PAS. Examninarea i microfotografierea s-au efectuat la MC5 cu oc. 10, ob. 10, 20, 40, i 63 Imm.
REZULTATE I DISCUII Examenul histopatologic a relevat agresiuni recente asupra esutului hepatic exprimate prin trasee hemoragice, angiocolit acut (fig. 1.), precum i trasee hemoragico-necrotice, leziuni ale unor invazii anterioare exprimate prin hepatit i angiocolit cronic (fig. 2., fig. 3.).
Fig. 1. Capr neagr. Ficat cu agresiune recent: hepatocite distruse, hemoragii, traseu hemoragic, mrginit de infiltrat limfohistiocitar. Col. MGG, oc. 10. x ob. 10
355
Fig. 2. Capr neagr. Ficat cu agresiuni anterioare: trasee necrotice, rare hemoragii, pigmeni hepatici, infliltrat eozinofilic. Col. MGG, oc. 10. x ob. 10
Fig. 3. Capr neagr. Ficat cu Cysticercus tenuicollis i angiocolit cronic. Reacia conjunctiv este bogat, celulele macrofage au invadat peretele parazitului inducnd, n cele din urm, moartea. Col. MGG, oc. 10. x ob. 20
356
Pe msur ce procesul evolueaz intervine exsudaia sero-fibrinoas i eozinofilic i ncep fenomene de hemoliz, fibrinoliz i resorbia componentei lichide. Inflamaia eozinofilic este ntreinut printr-o reacie mezenchimal care se instituie la periferia focarului, avnd ca punct de plecare fie capilarele sinusoide fie mezenchimul perivascular din spaiile porte (4). Aceste modificri sunt caracteristice hepatitei traumatice (hepatitis cysticercosa), produs de Cysticercus tenuicollis (fig. 4.) n perioada migraiei hepatice, extrem de agresiv, cauza exprimrii acute a metacestodozei. Invaziile successive determin instalarea rezistenei i trecerea n forma cronic, dar cu persistena leziunilor hepatice (1, 4).
Fig. 4. Capr neagr. Ficat cu Cysticercus tenuicollis n perioada dezvoltrii. Se observ celule multinucleate n contact cu peretele parazitului i reacia conjunctiv cu tendin de incapsulare. Col. MGG, oc. 10. x ob. 20
ntr-o faz avansat limfocitele sensibilizate i componentele fosfolipidice care au aprut n timpul degradrii tisulare acioneaz asupra macrofagelor transformndu-le n celule epitelioide. Detritusul necroctic bogat n eozinofile intoxicate, constituie un corp strin pentru organism i induce sinciializarea celulelor epitelioide sub forma unor complexe celulare mari, celule gigante de corp strin care se dispun n coroan n jurul detritusului necrotic (fig. 5.). Cysticercus tenuicollis a fost identificat, n acelai timp, alturi de alte structuri parazitare care au amplificat agresiunea multipl asupra esutului hepatic.
357
Fig. 5. Capr neagr. Ficat cu Cysticercus tenuicollis mort, incapsulat, cu centrul necrozat. Se observ celule gigante, de corp strin, dispuse n coroan, marginal, n interiorul veziculei parazitare cu coninut necrozat. Reacia conjunctiv periferic este bogat. Col. MGG, oc. 10. x ob. 20
Fig. 6. Capr neagr. Ficat parazitat concomitent i de alte structuri parazitare neidentificate, alturi de Cysticercus tenuicollis. Col. MGG, oc. 10. x ob. 20
Cysticercus tenuicollis este metacestodul speciei Taenia hydatigena, care paraziteaz ca adult n intestinul subire la cine, vulpe, lup, acal,. Cysticercus tenuicollis paraziteaz animalele domestice (rumegtoare, porc, rareori la cal),
358
animalele slbatice (mistre, cprior, capra neagr, muflon, cerb carpatin i mai rar la cerbul loptar) i uneori omul. Determin cisticercoza seroaselor, metacestodoz cunoscut n toate rile, cu pierderi economice importante, ca urmare a nevalorificrii ficatului i a diminurii produciei de carne. Dup migraia hepatic, C. tenuicollis traverseaz capsula Glisson i se fixeaz pe seroasele abdominale, intrnd ntr-o faz de laten. Este o vezicul de culoare albicioas, cu dimensiuni de 0,8-5 cm, monochistic, monocefalic, cu membrana flasc. Conine lichid transparent i o pat opac, reprezentat de scolexul viitorului cestod. Vezicula este ataat la seroase i suspendat de o prelungire conjunctiv ca un pedicul (1, 2). Carnivorele, gazd definitiv se infesteaz prin consumul viscerelor provenite de la erbivore sau de la alte gazde intermediare. Carnivorele domestice i slbatice rspndesc elementele parazitare (ou) odat cu fecalele, polund spaiile de punare al erbivorelor. Infestarea erbivorelor se face pe cale digestiv prin consumul vegetaiei sau i a apei contaminate cu ou de Taenia hydatigena (5). CONCLUZII Examenul histopatologic al ficatului provenit de la exemplare de capr neagr (Rupicapra rupicapra) a relevat agresiuni multiple acute i cronice asupra esutului hepatic. Suprapunerea evoluiei acute a agresiunilor peste agresiuni anterioare cronice a contribuit la agravarea strii de boal cu depirea capacitii de reactivitate a organismului i moartea animalelor. Leziunile hepatice descrise s-au ncadrat n complexul patologic numit hepatitis cisticercosa produs de Cysticercus tenuicollis n perioada migraiei hepatice i a reactivitii celulare de corp strin. Agresiunea asupra ficatului a fost multipl, exercitat i de alte structuri parazitare neidentificate, alturi de Cysticercus tenuicollis.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Dulceanu, N., Cristina Terinte, 1994 Parazitologie veterinar. Ed. Moldova, vol. II th Georgi, R., J., Marion E., Georgi, 1990 Parasitology for veterinarians. 5 edition, Ed. W.B. Saunders Co. Philadephia, London, Toronto, Montreal, Sydney, Tokyo. pag. 125-128 Nesterov, V., 1984 Bolile vnatului. Ed. Ceres, Bucureti, pag. 167-168. Paul, I., 2001 Etiomorfopatologie veterinar, vol. III- Dismetabolii i parazitoze. Ed. I.I. de la BradIai. pag. 195-197. uteu, I., V. Cozma, 2004 Parazitologie clinic veterinar. Vol. I. Ed. Risoprint, Cluj-Napoca, pag. 297-299.
359
THE EFFECT OF ASCARIDIA GALLI INFESTATION ON CHICKENS

M. S. ILIE*, I. COSOROAB, Gh. DRBU, I. OPRESCU, S. MORARIU, Narcisa RADBEA, Alina ILIE, Florica MORARIU U.S.A.M.V. Timioara We carried out the infestation of 7 days old chickens through the administration of earthworms taken from households affected by ascaridiosis. Then we supervised the chicken weight and the water and forage intake. The aim of this paperwork was to determine the losses caused by the infestation with the nematode Ascaridia galli upon chicken production. At the end of this study, we observed that earthworms play an important role in transmitting Ascaridia galli in free range and that chickens infested with Ascaridia galli gained an inferior body weight compared to those not infested and kept under similar conditions.
Ascaridia galli is a common parasite in poultry, with a cosmopolite distribution. The main host for this nematode is the domestic chicken (Gallus gallus domesticus), but it was also found as parasite in turkey, pheasant, partridge, goose and wild birds (13). Ascaridiosis is one of the causes for the economic losses recorded within the modern poultry breeding (2). A study made in Denmark showed that Ascaridia galli prevalence, under free range / organic conditions, was 100%, and under an intensive system on permanent bedding 25% (9). Ascaridia galli is the most frequently met species of parasite nematode in the traditional breeding from the South of Romania (7). Natural infestation develops clinically in most of the cases and it produces rarely losses caused by mortality (8). Ascaridia galli infestation is many times associated to weight loss, the decrease of egg production, diarrhoea depending on the parasitism intensity (8). The aim of this paperwork was to identify losses caused by Ascaridia galli infestation upon chicken production. MATERIALS AND METHODS
Experimental animals We purchased 32 one day old broilers (Flex Clasic hybrid from the company Hubbard) from a company located in Bucov, Timi County. Chickens were maintained on permanent bedding in a parasite free environment. Water
*
E-mail: marius.ilie@fmvt.ro
360
administration and feeding with commercial forage containing anticoccidic incorporated by the producer was made ad libitum. The recipe was prepared by the company Agrobiotic on the base of a Biomin premix. Experimental design Up to the age of six days, chickens were bred together within a single group, after that we randomized them into two groups. We constituted the experimental groups, each with 16 chickens: C control; E in which we administrated earthworms at the age of seven days. We took earthworms from 3 intensely parasited households (Ticvaniul Mare Cara-Severin county, Puuri Dolj county, erbneti Olt county). They were administrated in two series, in tray, after a preceding diet of three hours, to group E, cut into small pieces in order to maintain the possible parasitary elements integer. They were alive at the administration moment to attract chickens with their movements for eating. We carried out vaccinations against Newcastle diseases in days 9 and 14 and against infectious bursitis in the 21st day of life. The microclimate was assured according to the exploitation requirements for broilers bred on permanent bedding. After infestation, chickens were weighted in days 6, 10, 15, 20, 30, 40 52 and we supervised forage and water intake. Besides weighing, we carried out the coproscopical examination of faeces. The identification of nematode species was performed depending on the determination keys (1, 4, 5, 12, 14). Statistical method The obtained experimental data were introduced in the software SPSS version 7.5 and submitted to test t.
RESULTS AND DISCUTIONS In the first experimental day, namely at the age of six days, chickens were weighed, and the average weight obtained, in each group, had similar values, so that the average weight in the infested group was 85.93 g, while in the control group it was 84.68 g. In days 5, 10, 15 after infection, the values of the average weights were also similar, namely 112.5 g; 205.62 g; 366.78 g for the infested group, respectively 113.43 g; 210.93 g and 371.25 g for the control group. The decrease of the average weight might be observed in the infested group in day 25 after infestation 895.35 g, and in the control group it is 928 g. In days 35 and 47 the differences are important, so that the control group is heavier that the infested one with about 91 g (E = 1533.92 g; C = 1625.33 g) in 34 days post infection and with about 228 g in 47 days p.i. (E = 1993.07 g; C = 2221.53 g). After the statistical analysis with the test t, we observed that there were significant differences between the weights of the two groups, control C and infested E. So, at the weighing performed in 15 days p.i., t value was 18.135 for group C and 8.311 for group E, the significance being lower than 0.001 (p<0.001)
361
at an interval of confidence of 95%. Similarly, data recorded at the weights within days 35 and 47 p.i., significance p<0.001 between the groups C and E.
Table 1 Data obtained in the infested group E Age (days) 6 10 15 20 30 40 52 Exp. day 1 5 10 15 25 35 47 Forage (g) 430 1185 805 590 1795 2640 2000 Water (ml) 360 680 860 1425 4530 5220 3250 Number of chicken 16 16 16 14 14 14 13 CMZ Forage (g) 26.87 74.06 50.31 42.14 128.21 188.57 153.8462 CMZ water (ml) 22.5 42.5 53.75 101.78 323.57 372.85 250 Average weight (g) 85.93 112.5 205.62 366.78 895.35 1533,92 1993,07 Table 2 Data obtained in the control group C Age (days) 6 10 15 20 30 40 52 Exp. day 1 5 10 15 25 35 47 Forage (g) 440 885 785 780 1955 2640 2000 Water (ml) 300 860 960 1550 5400 5535 3400 Number of chicken 16 16 16 16 15 15 15 CMZ Forage (g) 27.5 55.3125 49.0625 48.75 130.3333 176 133.3333 CMZ water (ml) 18.75 53.75 60 96.875 360 369 226.6667 Average weight (g) 84.68 113.43 210.93 371.25 928 1625.33 2221.53
The results presented in the literature of speciality mention the fact that there werent observed any significant differences until day 21 p.i., but after this period, body weight has decreased significantly in the infested group. Weight decrease became significant in the same time with the apparition of the first clinical signs, around day 30 post infestation (2, 11). The decrease of the body weight might due to intestinal mucosa disorders. Glandular necrosis, within submucosa, induced by larva migration during tissue phase and worms presence in the intestinal phase is the cause for adsorption disorders and alteration of nutrients` metabolic processes at the level of the intestinal wall (2). Ascaridia galli infestation has a negative effect upon chicken weight. Some authors specify that weight decrease is directly proportioned with the number of ascarides within fowls intestine (10, 11).
362
The number of the nematodes identified within the chickens` small intestine, in group E, was different, so that we took a single individual from two intestines, and from the others: two, four, nine, 10, 11, 12, respectively 13 individuals. Among the 13 digestive tracts, two were negative in terms of Ascaridia galli presence and 11 were parasited. Due to the fact that infestation was performed using earthworms, which can ingest parasite eggs and transmit them to chicken, they represent an important risk factor in transmitting Ascaridia galli infestation when they are consumed. There are data for and against the earthworms role of paratenic host and egg/larva transporter for A. galli in the literature of speciality (1, 3).
2400 2200 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 1 2 3 4 5
Lot E
6
Lot C
Age (week)
Fig. 1. Graphic representation of the experimental groups weight
CONCLUSIONS Earthworms play an important role in transmitting Ascaridia galli under traditional systems. Chickens infested with Ascaridia galli had an inferior body weight compared to those not infested and kept in similar conditions.
REFERENCES
1. 2.
nd Anderson, R.C., 2000 - Nematodes parasites of vertebrates 2 Edition: their development and transmission, CAB International - CABI Publishing. Anwar H., Rahman, Y., 2002 - Effect of Ascaridia galli infestation on electrolytes and vitamins in chickens. OnLine Journal of Biological Sciences 2 (10), 650-651.
363
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. Augustine P.C., Lund E.E., 1974 - The fate of eggs and larvae of Ascaridia galli in earthworms. Avian Diseases 3: 394-398. Calnek, B.W., 1997 - Diseases of Poultry. Tenth Edition. Ed. Iowa State University Press. Eckert, J., Kutzer, E., Rommel, M., Burger, H.J., Korting, W., 1992 Veterinarmedizinische Parasitologie. Vol. IV. Auflage. Ed. Paul Parey, Berlin. Ikeme M.M., 1971 - Weight changes in chickens placed on different levels of nutrition and varying degrees of repeated dosage with Ascaridia galli eggs. Parasitology 63: 251-260. Ilie, M.S., 2005 Helmintoze ale psrilor domestice crescute n sistem trediional n unele judee din sudul Romniei, Scientia Parasitologica, 1-2, 84-88. Juhl, J., Permin, A., 2002 The effect of Plasmodium gallinaceum on a challenge infection with Ascaridia galli in chickens, Vet. Parasitol., 105, 11-19. Permin, A., Bisgaard, M., Perman, M., Kold, J., Nansen, P., 1999 - Prevalence of gastrointestinal helminthes in different poultry production system. British Poultry Science, 40, 439-443. Permin, A., Bojesen, M., Nansen, P., Bisgaard, M., Frandsen, F., Pearman Margrethe, 1997 - Ascaridia galli populations in chickens following single infections with different dose levels. Parasitol. Res. 83, 614 - 617. Reid W.M., Carmon J.L., 1958 - Effects of numbers of Ascaridia galli in depressing weight gains in chicks. Journal of Parasitology 44: 183-186. Skryabin, K.I., 1991 - Key to Parasitic Nematodes, vol. 2, Oxyurata i Ascaridata, Ed. E J. Brill. Snabel, V., Permin, A., Magwisha, H.B., Suo, X., Varady, M., Tomasovicova, O., 2001 - On the species identity of Ascaridia galli (Schrank, 1788) and Ascaridia dissimilis (Perez Vigueras, 1931): a comparative genetic study, Helminthologia, 38, 4, 221-226. Soulsby, E.J.L., 1982 - Helminths, Arthropods and Protozoa of Domesticated Animals. 809 pp. Baillire Tindall. London.
14.
364
DINAMICA SEZONIER A POPULAIILOR DE IXODIDE DIN DIFERITE ZONE GEOGRAFICE ALE ROMNIEI
SEASONAL DYNAMICS OF IXODIDAE POPULATIONS IN DIFFERENT GEOGRAPHIC AREA FROM ROMANIA
Mariana IONI, I.L. MITREA, M.C. BUZATU U.S.A.M.V. Bucureti The study about dynamics of ticks (Acari: Ixodidae) in three different geographic areas from north-east and south, south-east of Romania, with different ecological particularities, during 1999-2003 period, was performed. Four species were identified: Ixodes ricinus, and Dermacentor marginatus in all studied regions, while Rhipicephalus bursa was found only in south area, and Hyalomma plumbeum plumbeum in south-east area. The annual dynamics showed a seasonal activity with two different peaks for Ixodes and Dermacentor: first one, in the spring and the begin of the summer (June) and the second one in autumn (September, October). The second peak represented 25,42-30% from the first one. The seasonal activity of ticks populations from south and south-east areas started earlier than those from north-east area. The annual dynamics of the thermophile species - Rhipicephalus bursa and Hyalomma plumbeum plumbeum, presented a seasonal activity with only one peak, during of June.
Key words: ticks, dynamics, seasonal activity
Cpuele ixodide sunt artropode parazite temporar, a cror importan este datorat att aciunii lor directe, ct i posibilitii transmiterii a numeroi ageni patogeni (virusuri, rickettsii, parazii), rolul inoculator al cpuelor reprezentnd un element de importan patogen i epidemiogen esenial (3, 11). Combaterea eficient a ixodidelor se poate realiza doar pe baza cunoaterii exacte a bioecologiei acestor acarieni, corelat cu particularitile geo-climatice ale ariilor lor de rspndire (2, 10). Abundena cpuelor n orice habitat este determinat de diveri factori, cum ar fi covorul vegetal, clima - factori care afecteaz supravieuirea i desfurarea fazelor care au loc n mediul extern (ponta, incubaia oulor, ecloziunea, nprlirea), dar i de prezena gazdelor - pentru realizarea fazelor parazite ale acestor artropode. Cunoaterea factorilor care determin densitatea populaiilor de cpue are valoare predictiv, privitoare la consecinele anumitor fenomene, cum ar fi modificri ale climei, modificarea raporturilor numerice ntre diferite specii poteniale gazde (5, 8).
365
Prezentul studiu a avut ca obiectiv prezentarea dinamicii sezoniere a populaiilor de ixodide din diferite regiuni geografice ale Romniei, cu anumite particulariti ecologice. MATERIAL I METOD
Studiile au fost efectuate pe o perioad de 5 ani (1999-2003), n 3 zone geografice diferite ale Romniei: Judeul Suceava (n nord-est), caracterizat prin: clim temperat cu pronunat caracter continental, cu izoterme medii anuale cuprinse ntre 8,4-9,28C i precipitaii anuale cuprinse ntre 418,3-706,2 mm; relief cu forme variate: muni, depresiuni intramontane, dealuri, podiuri joase, lunci; vegetaie de pdure, rinoase i foioase, cu arboret dezvoltat, pajiti naturale i secundare, cu flor dominat de graminee; Judeul Dmbovia (n sud): clim temperat, cu izoterme medii anuale de 10,57-11,21C i precipitaii anuale cuprinse ntre 354,9-758,1 mm; relief dispus n trepte, de la nord la sud, cu: muni, zone subcarpatice, depresiuni, cmpii, cu vegetaie de pdure (rinoase i fag n etajul alpin, gorunete n zona subcarpatic i pduri de esen moale); Judeul Teleorman (n sud): clim temperat continental de silvostep, cu izoterme medii anuale cuprinse ntre 11,69-12,92C i precipitaii anuale cuprinse ntre 291,3-696,4 mm; relief cu cmpii uor nclinate, versani i lunci, cu altitudini de 50-130 m; vegetaie de pdure, cu strat arbustier foarte dezvoltat, adesea compact, zvoaie (n luncile marilor ruri), tufriuri i pajiti de step; Judeul Tulcea (n sud): clim temperat, cu slab caracter continental arid, cu izoterme medii anuale cuprinse ntre 11,78-12,26C i precipitaii anuale de 419,5640,89 mm; relief variat: podiuri, dealuri, cmpii (cu o zon de step i una de silvostep); vegetaie xerofil, pduri de lunc- zvoaie, cu arboret dezvoltat i flor ierboas cu specii stepice, calcifile. Colectarea cpuelor s-a realizat att din mediu metoda steagului (Nutall), ct i de pe animale (manual, cu ajutorul unei pense) (6, 9, 10). Cpuele recoltate au fost transportate la laborator n tuburi de sticl cu alcool de 70; pentru identificarea speciilor au fost folosite chei de determinare (4, 7).
366
REZULTATE I DISCUII Analiza fenotipic a cpuelor colectate (9615 exemplare), a evideniat prezena, ntr-o pondere variat, n zonele studiate (nord-est i sud-sud-est), a 4 specii de ixodide (Acari: Ixodidae): Dermacentor marginatus Sulzer 1776, cu o pondere de 37%, identificat att n zonele din nord-estul Romniei, ct i n regiuni din sud i sud-est; Ixodes ricinus Line 1758, cu pondere de 34,24%, prezent n toate zonele de studiu; Rhipicephalus bursa Canestrini et Fanzago 1877, cu o pondere de 16,68%, identificat n zona de sud (judeul Dmbovia); Hyalomma plumbeum plumbeum Panzer 1795, cu o pondere de 12,06%, identificat n zona de sud-est (judeul Tulcea). Pe baza datelor nregistrate (tabele 1-4) n perioada de studiu, au fost ntocmite diagrame comparative ale dinamicii anuale a populaiilor de ixodide identificate (figurile 1, 2). Astfel, n cazul populaiilor de ixodide identificate n regiunile din nordestul rii (Ixodes ricinus i Dermacentor marginatus - specii cu valen ecologic larg), s-au observat variaii interspecifice ale dinamicii lor anuale. Debutul invaziei a fost nregistrat mai timpuriu la Dermacentor marginatus - n a doua decad a lunii martie, fa de populaiile de Ixodes ricinus, care a prezentat un debut al activitii parazitare constant, n ultima decad a lunii martie. De asemenea, maxima indicilor invazionali a fost observat mai devreme la Dermacentor spp. -sfritul lunii aprilie-nceputul lunii mai, fa de Ixodes - la care valoarea maxim a indicilor invazionali a fost atins n ultima decad a lunii mai i prima jumtate a lunii iunie. La populaiile ambelor specii identificate n zona de nord-est, curba dinamicii anuale a regresat n lunile de var, fr a atinge ns, punctul zero, crescnd din nou toamna (septembrie-octombrie), amplitudinea medie a maximei de toamn reprezentnd 25,42% din maxima de primvar - pentru Ixodes, respectiv 17,25% pentru Dermacentor. Aceleai diferene n dinamic au fost nregistrate i la populaiile din sudsud-estul rii ale celor dou specii, al cror areal se extinde la sud de izoterma medie anual de 10. n aceste zone, debutul activitii parazitare a fost nregistrat mai devreme fa de populaiile din nord-est, prima jumtate a lunii martie- la ambele specii, cu un maxim al indicilor invazionali la sfritul lunii aprilie-prima jumtate a lunii mai - pentru Dermacentor, respectiv a doua decad a lunii mai, pentru Ixodes ricinus. Curba dinamicii a descris o regresie pronunat n lunile iulie i august, n unele zone din sud chiar pn la zero. Atacul de toamn a avut valori mai ridicate ale indicilor invazionali fa de cel din zonele de nord-est, maxima de toamn reprezentnd 31,04% din maxima de primvar - la Dermacentor, respectiv 30,47% - la Ixodes ricinus.
367
368
369
370
371
50 40 30 20 10 0 I II III IV V VI DmSE VII VIII IX X XI XII
DmNE
IxNE
IxSE
Fig. 1. Reprezentarea grafic sintetic a dinamicii anuale a populaiilor de Ixodes ricinus i Dermacentor marginatus n regiunile nord-estice i sud-sud-estice cercetate
60 50 40 30 20 10 0 I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII
DmSE
IxSE
Rh.b.
Hy.p.
Fig. 2. Reprezentarea grafic sintetic a dinamicii anuale a populaiilor de Ixodes ricinus, Dermacentor marginatus, Rhipicephalus bursa i Hyalomma plumbeum plumbeum n regiunile sud-sud-estice cercetate
Aceste diferene privind dinamica celor dou specii cu arii de rspndire relativ asemntoare, cu un debut mai timpuriu pentru Dermacentor o maxim a activitii parazitare atins mai devreme i o perioad mai restrns de parazitare
372
fa de Ixodes, pot fi explicate pe baza exigenelor fa de umiditate pe care le manifest Dermacentor marginatus; aceasta prefer biotopuri cu lstriuri i flor iubitoare de umezeal, fiind ntlnit mai puin n regiunile sau n perioadele uscate, aspecte semnalate i de ali autori (1, 4). Ixodes ricinus prefer pdurile de foioase, fiind frecvent ntlnit n margini de pdure i zone defriate. n cazul celorlalte dou specii identificate doar n zonele din sud-sud-est Rhipicephalus bursa i Hyalomma plumbeum plumbeum - specii termofile, diagrama dinamicii anuale a descris un singur peak evident - n luna iunie pentru ambele specii, peak-ul de toamn, atunci cnd a fost prezent (la Rhipicephalus bursa) a reprezentat n medie doar 10% din maxima de primvar. CONCLUZII 1. n perioada 1999-2003 au fost efectuate observaii privind dinamica ixodidelor n 3 zone geografice ale Romniei, cu particulariti ecologice diferite: judeul Suceava (nord-est), judeele Dmbovia i Teleorman (n sud) i Tulcea (n sud-est). 2. Analiza fenotipic a cpuelor colectate (9615 exemplare), a evideniat prezena a 4 specii aparinnd familiei Ixodidae (Acari): Dermacentor marginatus (pondere 37%), Ixodes ricinus (34,24%), identificate n toate zonele de studiu; Rhipicephalus bursa (16,68%), n zona de sud; Hyalomma plumbeum plumbeum (12,06%), identificat n zona de sud-est. 3. Dinamica anual a speciilor de ixodide identificate n zonele de studiu a evideniat diferene n momentele de debut i, respectiv, parazitism maxim la animale, n funcie de arealul de distribuie i de evoluia anual a principalilor factori ecologici (temperatur, umiditate, vegetaie). 4. La populaiile din regiunile sud-sud-estice, debutul i maximul activitii parazitare a fost mai timpuriu fa de cele din zonele nord-estice; maxima de toamn a avut valori medii de peste 30% din maxima de primvar, fa de speciile din nord-est la care maxima de toamn a reprezentat 25,42% din cea de primvar - pentru Ixodes, respectiv 17,25% pentru Dermacentor. 5. La speciile termofile - Rhipicephalus bursa i Hyalomma plumbeum plumbeum, identificate numai n regiunile sudice i sud-estice, curba dinamicii anuale a descris un singur vrf evident, nregistrat n luna iunie, pentru ambele specii.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Bdescu C., 1969 - Contribuii la studiul ecologiei cpuelor din familia Ixodidae Murray 1877, din differite zone ale Romniei, Comunicri tiinifice, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 381-394 Bourdeau P., 1993 - Les tiques dimportance Vtrinaire et mdicale. Le Point Vtrinaire, 25 (151): 13-42 Cosoroab I., 2000 - Acarologie veterinar, Editura Mirton, Timioara
373
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Feider Z., 1965 - Fauna R.P.R. Arachnida, vol V, Fasc.2, Editura Academiei Gray J.S., 1991 - The development and seasonal activity of the tick, Ixodes ricinus: a vector of Lyme borreliosis. Rev Med Vet Entomol 79: 323-333. 6. Ioni Mariana, Mitrea L.I., Moise G., Gin D., Onofrei O., Marinescu C., 2001 Influena factorilor ecologici asupra structurii fenotipice i dinamicii sezoniere a populaiilor de Ixodidae n unele regiuni ale Romniei. Simpozion la 140 de ani, Alma Mater Veterinaria Bucurescensis, 192 7. Keirans J.E., Robbins R.G., 1999 - A world checklist of genera, subgenera and species of ticks (Acari: Ixodidae). Published from 1973-1997. J. Vector Ecol., 24: 15-129 8. Lindgren E, Tlleklint L, Polfeldt T., 2000 - Impact of climatic change on the northern latitude limit and population density of the disease-transmitting European tick Ixodes ricinus. Environ Health Persp 108: 119-123. 9. Mitrea L.I., Ioni Mariana, Moise G., Gin D., Onofrei O., 2001 - Aspecte privind infestaiile cu cpue Ixodidae la animale n regiuni din N i S-E Romniei, Lucrri tiinifice, USAMV, Iai, vol. 44 (3), fasc. II: 523-529 10. Sonenshine D.E., 1993 - Biology of ticks. Oxford, Oxford University Press, vol. 2 11. uteu I., N. Dulceanu, 2001 - Parazitozele cutanate la animale, Editura Risoprint, Cluj-Napoca 4. 5.
374
TESTAREA EFICACITII MOXIDECTINEI N HELMINTOZE INTESTINALE LA GALINACEE

THE EFFICACY OF MOXIDECTINE IN INTESTINAL HELMINTOSIS OF GALLINACEAE
C. MAGDA, Daniela MOTOGNA, V. COZMA The aim of our study was to test the efficacy of moxidectine in inthestinal helmintosis of Gallinaceae. The researches performed during June 2005, on birds bred in exthensive system, from Bistria Nsud county. We have used Cydectin 1%, applied by subcutaneus injection, 0.3 mg/bw. The results showed that moxidectine had a good efficacy after 7 days, in ascaridiosis/heterakidosis, capilariosis and strongyloidosis.
INTRODUCERE Introducerea avermectinelor pentru uzul veterinar a reprezentat un eveniment major n terapia i profilaxia multor boli parazitare (Ciser et Galiano, 1997). Aceasta s-a datorat att eficacitii antiparazitare la un dozaj redus (0,20,5mg/kc), ct i spectrului terapeutic larg extins asupra nematodelor, arachnidelor i insectelor (Campbell, 1989). Milbemicina, descoperit n 1974, este o lacton macrociclic obinut prin fermentaia miceilor din genul Streptomyces. Moxidectina, este un derivat obinut prin modificri chimice ale nemadectinei, produsul obinut prin fermentaia micetului Streptomyces cyanogriseus. Diferena ntre milbemicine i avermectine o constituie prezena unui dizaharid, substituient al carbonului 13, prezent n avermectine i absent n milbemicine (William, 1999). Dei proprietile acaricide ale milbemicinei au fost recunoscute iniial, eficacitatea antihelmintic a acesteia a fost demonstrat ulterior descoperirii avermectinelor, neexistnd diferene n ceea ce privete modul lor de aciune (Fisher et al, 1990). MATERIAL I METOD
Cercetrile privind efectul moxidectinei asupra helmintozelor intestinale la galinacee au fost efectuate n luna iunie 2005, pe psri crescute n sistem gospodresc, n judeul Bistria-Nsud. Probele coproparazitologice au fost prelucrate i examinate n cadrul disciplinei de Boli Parazitale a Facultii de Medicin Veterinar, Cluj-Napoca. Galinaceele luate n studiu, au fost lotizate astfel: 375
Lotul I (60 psri) tratate cu moxidectin (Cydectin 1%) n doz de 0,3 mg/kg corp, s.c., o administrare; Lotul II (60 psri) - tratate cu moxidectin (Cydectin 1%) n doz de 0,3 mg/kg corp, s.c., dou administrri, la interval de 7 zile; Lotul III (60 psri) lot martor pozitiv, netratat. n vederea diagnosticrii infestaiilor parazitare, ante-terapeutic s-au recoltat probe coproparazitologice de la toate trei loturile. Probele au fost prelucrate prin metoda Willis, sedimentare activ, i McMaster pentru evidenierea intensivitii acestora (OPG). Recoltrile de fecale au fost efectuate n ziua 0, 7 i 14 al experimentului.
REZULTATE I DISCUII Rezultatele examenelor coproscopice efectuate ante-terapeutic la cele 3 loturi de psri luate n studiu i intensivitatea parazitismului, sunt prezentate n tabelul 1. Profilul endoparazitar ante-terapeutic n cazul lotului I a fost reprezentat de infestaii parazitare cu: Ascaridia / Heterakis, cu o medie a intensivitii de 150 OPG, Capillaria spp. cu o medie a intensivitii de 200 OPG i Strongyloides avium, cu o medie a intensivitii de 50 OPG.
Tabelul 1 Valoarea intensivitii infestaiilor endoparazitare la galinacee, ante-terapeutic Lot/ Eimeria O.P.G. Ascaridia/ O.P.G. Capillaria O.P.G. (X) (X) (X) Specie spp. Heterakis spp. Lot I. Lot II. Lot III. + + 100 50 + + + 150 50 100 + + + 200 550 350 Strongylo O.P.G. ides (X) avium + 50 -
La lotul II s-au diagnosticat infecii cu Eimeria spp., cu media intensivitii de 100 OPG, infestaii cu Ascaridia/Heterakis, cu o medie a intensivitii de 50 OPG i Capillaria spp. cu o medie de 550 OPG. n cazul lotului III, martor netratat, s-au diagnosticat infecii cu Eimeria spp. cu media intensivitii de 50 OPG, infestaii cu Ascaridia/Heterakis cu media intensivitii de 100 OPG i Capillaria spp. cu media intensivitii de 350 OPG. Ante-terapeutic, valoarea cea mai ridicat a intensivitii infestaiei helmintice, a fost diagnosticat n cazul lotului II, la Capillaria spp, cu 550 OPG (fig. 1). n urma unui studiu epidemiologic efectuat n judee din sudul trii, Ilie (2005) semnaleaza la gini din sistem gospodresc, infestaii cu Ascaridia galli, Heterakis gallinae, Capillaria spp., Raillietina spp., Gongylonema ingluvicola i Cheilospirura hamulosa.
376
600 500 400 O.P.G. 300 200 100 0 0 Lotul I 150 200 50 100 50
550
350
50
100 0
Lotul II
Capillaria spp.
Lotul III
Strongylloides
Eimeria spp.
Ascaridia/Heterakis
Fig. 1 - Valoarea intensivitii infestaiilor endoparazitare la galinacee, ante-terapeutic (OPG)
Rezultatele obinute n urma examenelor coproparazitologice efectuate la loturile I, II, i III, post-terapeutic la 7 zile dup prima administrare a moxidectinului sunt prezentate n tabelul 2.
Tabelul 2 Valoarea intensivitii infestaiilor endoparazitare la galinacee, la 7 zile post-terapeutic Lot/ Eimeria O.P.G. Ascaridia/ O.P.G. Capillaria O.P.G. (X) (X) (X) Specie spp. Heterakis spp Lot I. Lot II. Lot III. + + 50 100 + 100 + 400 Strongylo O.P.G. ides (X) avium -
n cazul loturilor I i II se observ dispariia infestaiilor helmintice la 7 zile post-terapeutic, evideniindu-se doar infecii cu Eimeria spp. cu o medie a intensivitii de 50 OPG. n cazul lotului III, netratat, n ziua a 7-a a experimentului, au fost diagnosticate infecii cu Eimeria spp. cu o medie a intensivitii de 100 OPG, observndu-se persistena infestaiei helmintice cu Ascaridia/Heterakis, cu 100 OPG, identic cu cea constatat la controlul precedent i creterea mediei intensivitii n cazul infestaiei cu Capillaria spp., la 400 OPG (fig. 2).
377

400
400 350 300 O.P.G. 250 200 150 100 50 0 0 0 0 0 50 0 0 0 100 100
0 Lotul III Strongylloides
Lotul I
Lotul II Capillaria spp.
Eimeria spp.
Ascaridia/Heterakis
Fig. 2 - Valorea intensivitii infestaiilor endoparazitare la galinacee, la 7 zile postterapeutic (OPG)
Rezultatele obinute la 14 zile post-terapeutic n cazul lotului I, respectiv la 7 zile de la cea de a doua administrare a moxidectinului la lotul II, ct i la lotul martor netratat, sunt redate n tabelul 3.
Tabelul 3 Valorea intensivitii infestaiilor endoparazitare la galinacee, la 14 zile post-terapeutic Lot/ Specie Lot I. Lot II. Lot III. Eimeria spp + + OPG (X) 50 50 Ascaridia / Heterakis + OPG (X) 50 Capillaria spp. + OPG (X) 600 Strongylo ides avium 600
OPG (X) -
600 500 400 O.P.G. 300 200 100 0 0 0 0 0 Lotul I 50 0 0 0 50 50
Lotul II Capillaria spp.
Lotul III Strongylloides
Eimeria spp.
Ascaridia/Heterakis
Fig. 3 - Valorea intensivitii infestaiilor endoparazitare la galinacee, la 14 zile post-terapeutic (OPG)
378
n cazul loturilor tratate cu moxidectin, n ziua a 14-a a tratamentului, se observ o situaie identic cu cea precedent, respectiv lipsa infestaiilor helmintice. La lotul martor netratat s-au meninut infecia cu Eimeria spp. i infestaiile cu Ascaridia/Heterakis (OPG=50) i Capillaria spp. (OPG=600) (fig. 3). Melhorn i colab. citat de uteu i Cozma (2004) recomand n lipsa antihelminticelor moderne, n capilarioz la psri, avermectine n doz de 0,2mg/kg corp, s.c.. De asemenea uteu i Cozma (2004) recomand n amidostomoz i singamoz la psri avermectine n doz de 0,2 mg/kg, s.c.. Fenomene de toxicitate n cazul utilizrii ivermectinei la psri apar la dozajul de 5,4 mg/kg mas corporal, manifestate printr-o somnolen ce dureaz circa 4 ore, n timp ce doza de 48,6 mg/kg mas corporal a determinat moartea psrilor dupa 5 ore p.i. (Zeman, 1987). Coles (1987) recomand n cazul psrilor administrarea oral a avermectinelor, considernd eficacitatea acesteia similar cu cea pe cale injectabil. Mufit i colab. au tratat cu succes ria cnemidocoptic la perui, prin aplicri spot-on de moxidectin (Cydectin Injection for cattle), n doz de 1mg/pasre (0,1 ml Cydectin), fr a nregistra fenomene de intoxicaie, dei doza administrat a fost de circa 25-29 mg/kc (Mufit et al, 1999). Experimentri de neurofiziologie arat faptul c lactonele macrociclice blocheaz ireversibil transmisia neuromuscular, acionnd la nivelul sinapselor, stimulnd producerea acidului gama-aminobutiric (GABA), care este inhibitor al stimulilor nervoi (uteu 1995). Stimularea producerii de GABA presinaptic, modific biochimismul receptorilor postsinaptici, neuronii motori rmn ncrcai negativ, astfel nct stimulii excito- i inhibitori nu mai pot fi receptai de celulele musculare i astfel se instaleaz paralizia (Campbel i colab. 1979). n plus acestea intervin direct asupra ionilor de clor, independent de prima relaie. Ionii de clor ptrund n celula postsinaptic, aceasta avnd sarcin negativ, nu mai primete semnale prin neuronii motori, producndu-se paralizia. Nu toate formele evolutive ale unei specii sunt deopotriv receptive la aciunea avermectinelor, iar modul de hrnire influeneaz esenial vulnerabilitatea acestora. CONCLUZII Cercetrile efectuate n iunie 2005, pe un efectiv de 180 de psri, crescute n sistem gospodresc, n judeul Bistria-Nsud, au relevat urmtoarele: Moxidectina (Cydectin 1%), administrat s.c., n doz de 0,3 mg/ kg greutate corporal, a avut eficacitate maxim la 7 zile post-terapeutic in ascaridioz/heterakidoz, capilarioz i strongiloidoz. n cazul lotului netratat, infestaiile helmintice s-au meninut pe tot parcursul experimentului.
379
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Campbell W., 1989 Ivermectin and abamectin, Merk Institute for Therapeutic Research, 216-227 Campbell W., Blair S., Lotti J. 1979 J. Helminthology, 53, 254-256 Ciser L., Galiano I., 1997 - Indexul produselor de uz veterinar din import, Edit. Ceres Bucureti Coles B.H., 1987 - Ivermectin for birds, vet. Rec., 120:604 Fisher M.H., Mrozic H., 1990 Ivermectin and abamectin, Campbel WC, ed., Berlin/Heidelberg, Springer-Verlag Ilie M.S., 2005 Helmintoze ale psrilor domestice crescute n sistem tradiional n unele judee din sudul Romaniei, Rev. Scientia Parasitologica, vol 6 nr 1-2, 84-88 Mufit T., Erkut T., Aysen G., Aynur G., 1999 Therapy of Knemidocoptic mange in budgerigars with spot-on application of Moxidectin, Tr. J. Of Veterinary and Animal Science, 23, 173-174 uteu E. 1995 Utilizarea avermectinelor n terapia parazitozelor la animale, Rev. Rom. Med. Vet., vol 5, nr 4, 344-354 uteu E., Cozma V., 2004 Parazitologie clinic veterinar, Edit. Risoprint, ClujNapoca. Zeman P., 1987 Systemic efficacy of ivermectin against Dermanyssus gallinae (De Geer, 1778) in fowls, Vet. Paras., 23:141-146 William G.R., 1999 Ivermectin / Doramectin /Moxidectin - Structure and generation, A scientific review, Veterinary Bulletin Merial
380
ISOSPOROZA CARNIVORELOR DOMESTICE: ASPECTE TERAPEUTICE I CLINIC-EVOLUTIVE

THERAPEUTICAL AND CLINCAL ASPECTS IN ISOSPOROSIS OF DOMESTIC CARNIVOROUS
I.L. MITREA, Violeta ENCHESCU, Mariana IONI, M.C. BUZATU U.S.A.M.V. Bucureti The therapeutical and clinical evolution in isosporosis of dogs and cats was registered. The studies included 21 animals (13 dogs and 8 cats) with clinical signs due of Isospora (Cystoisospora) infections and confirmed by coproparasitological examinations. The treatment included specific medication (sulphamides, triazones (toltrazuril) and amprolium) in association with diet and symptomatic treatment. The clinical amelioration was registered beginning in the second day after treatment with normal consistence of feces in 3-4 days. In some cases, the reappearance of clinical signs after 10 days was registered. The second treatment was salutary. After the treatment, the coproparasitological exams were negative.
Key words: isosporosis, dog, cat, therapy, clinical, coproparasitological examination
Isosporoza este o coccidioz produs de Isospora (Cystoisospora) spp., protozoare ncadrate n genul Eimeria, familia Eimeridae, ordinul Eucoccidiida/Eucoccidiorida, subclasa Coccidia (Coccidiasina), clasa Sporozoa (Apicomplexa) (8, 9, 12). La cine se ntlnesc patru specii de Cystoisospora: C. canis, C. ohioensis, C. burrowsi i C. neorivolta. Aspectul microscopic al oochisturilor nu permite diferenierea dup morfologie sau mrime a speciilor C. ohioensis, C. burrowsi i C. neorivolta care sunt uneori regrupate ntr-o singur entitate: complexul C. ohioensis (1, 3, 4, 7). La pisic paraziteaz Cystoisospora (Isospora) felis (foarte des identificat n fecalele pisicilor domestice) i Isospora rivolta (6, 14). Dei sunt unele dintre cele mai rspndite boli parazitare ale animalelor de companie, coccidiozele, n spe isosporozele, nu sunt diagnosticate n mod curent, fiind adesea neglijate, chiar total ignorate sau confundate cu alte boli predominant digestive, datorit evoluiei de multe ori insidioase (13). Totui, isosporoza este o ameninare serioas pentru sntatea carnivorelor domestice. Afectnd preponderent animalele tinere, mai ales n perioada nrcrii, boala evolueaz ndeosebi la animalele crescute n colectiviti cu condiii igienice necorespunztoare, unde determin pierderi nsemnate. Astfel, exist cazuri severe
381
cnd se poate produce o enterit cataral-hemoragic cu diaree, anemie, emaciere rapid, depresie i slbiciune, uneori ameninnd chiar viaa animalului (16). n general isosporoza nu este considerat o cauz important a diareei la animalele adulte. De multe ori infecia este asimptomatic chiar i la animale tinere. Infeciile eimeriene, inclusiv cele cu Isospora constituie, ns i un factor favorizant pentru intervenia altor ageni patogeni i evoluia unor maladii asociate. Numrul speciilor de Isospora care sunt patogene pentru cini i pisici este controversat (5). Identificarea oochisturilor n fecalele animalelor sntoase indic o infecie comensal autolimitant, care rareori necesit tratament (17), dei acesta poate ajuta la reducerea contaminrii mediului, scurtnd perioada patent i durata bolii. Dac semnele clinice sunt atribuite unei coccidioze, trebuie instituit un tratament cu anticoccidiene eficiente (10, 11, 12). Tratamentul isosporozei carnivorelor include un tratament specific, cruia i se asociaz i unul simptomatic. Astfel, concomitent cu tratamentul specific se intervine pentru rehidratarea animalelor cu diferite soluii rehidratante, precum i administrarea de vitamine, antidiareice i antihemoragice (15). Se trateaz anemia. Se recomand i un regim alimentar dietetic. MATERIAL I METOD
Pentru determinarea eficacitii terapeutice i a evoluiei clinice a isosporozei la carnivore, n urma tratamentului, au fost luai n studiu 21 pacieni (13 cini i 8 pisici) examinai n cabinete veterinare din Bucureti, diagnosticul confirmndu-se n cadrul laboratorului de Parazitologie-Boli parazitare al Facultii de Medicin Veterinar, Bucureti. Cazurile studiate au fost alese dintre pacieni ce prezentau semne clinice atribuite isosporozei, confirmate prin examen de laborator. Suspiciunea de isosporoz a avut la baz coroborarea semnelor clinice (diaree cu un aspect necaracteristic, eventual cu prezena de mucus i snge, cu evoluie n general acut i neacompaniat de febr, cu sau fr modificarea strii generale), cu datele epidemiologice (animale de vrst tnr sub 6 luni, provenite, n general, din colectiviti). n cazul unei colectiviti, boala se prezenta ca o enzootie de enterite, uneori hemoragice, afectnd de obicei numai tineretul, frecvent n perioada din preajma nrcrii sau la cteva zile dup aciunea unui factor stresant (transport, schimbarea locuinei etc.); ntrzierile n cretere au afectat inegal indivizii de la aceiai ftare. Diagnosticul de laborator a fost stabilit n urma examenului microscopic al fecalelor, prin depistarea oochisturilor specifice [2]. S-a folosit o metod ovoscopic de concentrare - metoda de flotaie (Willis), folosind soluia suprasaturat de clorur de sodiu. Terapia celor 21 de pacieni s-a efectuat cu diferite substane, singure sau n asociere, conform tabelului 1. Au fost ncercate formule terapeutice variate, de la medicaie pe cale oral, medicaie injectabil sau asocieri ntre acestea.
382
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Tratamente utilizate la carnivore cu isosporoz Posologie Doza i calea de administrare 1 2ml/5kg corp/zi s.c., (doza initiala), apoi 0,5ml/5kg/zi 1ml/5 kg s.c. Durata tratamentului 3 pn la 6 zile 4 5 zile
Medicamente utilizate Sulfamethoxidiazina sol. 20 % (Ultrasol ) Combinaia sulfamerazin, sulfadiazin, sulfatiazol cu trimetroprim (Trimethosulf ) soluie injectabil Combinatia sulfametoxazol 200mg trimetroprim 40mg (Alfatrim soluie injectabila) Sulfadimidina trimetroprim (Sultrim suspensie buvabila) Scourban Plus (sulfadimidina, sulfaguanidina, sulfadiazina, streptomicina, neomicina, hioscina, clorura de sodiu, gluconat de calciu, sulfat de magneziu, clorura de potasiu, caolin, pectina, glicina) Toltrazuril (Baycox) soluie orala 2,5% Amprolium (Amprolium 20%) Furazolidon Galiprotect (oxitetraciclina, furazolidona, vitamine, magneziu, zinc, metionina)
1ml/20 kg s.c. 20 mg sulfadimidina i 5 mg trimetroprim/kg corp, per os.
5 zile 5 zile
0,5 1 ml/1 kg corp de 2 ori/zi
3 5 zile
30 mg/kg corp la pisica 20 mg/kg corp la cine 100 mg amprolium/animal/zi 10 mg/kg corp, de 2 ori/zi 1 - 2 cp./kg corp/zi
O singura administrare, repetare la 10 14 zile 7 zile 5 zile 3 zile
n majoritatea cazurilor tratamentului medicamentos i-a fost asociat, dup caz, un tratament simptomatic, tratament de susinere a organismului, tratament igieno-dietetic i alte tratamente endoparazitare (n cazuri de poliparazitism).
REZULTATE I DISCUII Aspectele clinice consemnate consecutiv tratamentelor efectuate, sunt prezentate n tabelele 2 i 3.
383
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 2 Rezultate obinute n terapia isosporozei la cine Medicaia utilizat Nr. cazuri Evoluia semnelor clinice dup tratament La 48 h p.t. s-a observat o ameliorare a semnelor clinice. Semnele clinice au reaprut la o sptmn de la ncetarea tratamentului s-a impus reluarea tratamentului. Dup 3 zile de tratament s-a nregistrat o recuperare total, la un caz, fie ameliorarea vizibil, la cellalt caz, n funcie de gravitatea iniial a semnelor clinice. La 10 zile dup ncheierea tratamentului, examenul coproparazitologic a fost pozitiv (la unul din cazuri) repetarea tratamentului. Dup 2 sptmni, la un caz s-a constatat reapariia diareei i a fost reluat tratamentul. Dup o lun, examenul coproparazitologic a fost negativ. A 2-a zi de la nceperea tratamentului, s-a constatat o ameliorare a strii pacientului (recuperarea apetitului, scaun de consisten mai tare), iar n a 3-a i a 4-a zi, scaunul era normal. La unul din cazuri s-a constatat reapariia diareei, la un interval de 2 sptmni, cnd a fost repetat tratamentul. Dup 2 zile de tratament: ameliorare vizibil (dispariia vomei, fecale pstoase). Examenul coproparazitologic la o sptmn negativ. Recuperare complet n 3-5 zile; examenul coproparazitologic la o sptmn negativ. Diareea a ncetat din a 4-a zi de tratament. Diareea s-a redus din a 2-a zi i a disprut n a 4-a zi. Apetitul a revenit la normal n a 3-a zi. Diareea a reaprut, la un caz, la o sptmn de la terminarea tratamentului reluarea terapiei. n 5 zile pacientul era refcut complet.
Sulfamethoxidiazin sol. 20 % (Ultrasol ) Suspensie antidiareic Scourban Plus (sulfadimidin, sulfaguanidin, sulfadiazin, streptomicin, neomicin, hioscin, clorur de sodiu, gluconat de calciu, sulfat de magneziu, clorur de potasiu, caolin, pectin, glicin) Amprolium
Toltrazuril
Combinaia sulfamerazin, sulfadiazin, sulfatiazol cu trimetroprim (Trimethosulf) soluie injectabil Sulfamerazin, sulfadiazin, sulfatiazol cu trimetroprim + suspensie antidiareic Galiprotect(oxitetraciclina, furazolidona, vitamine, magneziu, zinc, metionina) Sulfadimidina trimetroprim (Sultrim suspensie buvabila) Combinatia sulfametoxazol 200mg trimetroprim 40mg (Alfatrim soluie injectabil)
1 1
384
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 3 Rezultate obinute n terapia isosporozei la pisic Medicaia utilizat Nr. cazuri Evoluia semnelor clinice dup tratament Ameliorarea semnelor clinice dup 2 3 zile de tratament, recuperare complet dup 5 6 zile de tratament; la un caz, diareea a reaprut dup 12 zile repetarea tratamentului Dup 3 zile s-a nregistrat ameliorarea semnelor clinice i scaun de consisten pstoas. Dup 6 zile examenul coproparazitologic a fost negativ. Scaunul a devenit de consisten normal din a 2-a zi de tratament. Scaun normal i apetit refcut n 2 3 zile. La un caz, diareea a reaprut dup 2 sptmni reluarea tratamentului. Absena semnelor clinice, dar examen coproparazitologic pozitiv, la o sptmn de la nceperea tratamentului.
Sulfamethoxidiazina sol. 20 % (Ultrasol ) Suspensie antidiareic - Scourban Plus (sulfadimidin, sulfaguanidin, sulfadiazin, streptomicin, neomicin, hioscin, clorur de sodiu, gluconat de calciu, sulfat de magneziu, clorur de potasiu, caolin, pectin, glicin) Sulfamethoxidiazin + suspensie antidiareic Toltrazuril Furazolidon
1 2 1
Analiza comparativ a tratamentelor efectuate la cazurile diagnosticate ne-a permis unele evaluri: - Rezultate bune s-au obinut prin folosirea toltrazurilului (Baycox) soluie 2,5% n doz de 30 mg/kg la pisoi i 20 mg/kg la cei; apetitul a revenit la normal chiar de a doua zi dup instituirea tratamentului, iar scaunul a revenit la consistena normal n 2 zile la pisoi, respectiv 3 - 4 zile la ceii tratai cu toltrazuril. - S-a remarcat eficiena produsului Scourban Plus care reprezint o asociere de 3 sulfamide (sulfadimidin, sulfaguanidin, sulfadiazin), 2 antibiotice eficiente pe tubul digestiv (streptomicin, neomicin) i alte compo-nente (hioscin, clorur de sodiu, gluconat de calciu, sulfat de magneziu, clorur de potasiu, caolin, pectin, glicin). Produsul se prezint sub form de suspensie buvabil avnd efect anticoccidian i n acelai timp un spectru larg antibacterian, contribuie la restabilirea echilibrului electrolitic i reduce motilitatea intestinal. Prin tratamentul cu Scourban Plus s-a obinut o ameliorare vizibil a semnelor clinice dup 2 zile de tratament, pacientul fiind complet refcut dup 5 zile de tratament, cu dispariia oochisturilor din fecale. n alte cazuri, fecalele i-au recptat consistena normal n 3 zile - 5 zile, n funcie de gravitatea semnelor clinice.
385
- Au existat cazuri (5 cei din 13, respectiv 2 pisoi din 8), n care semnele clinice i eliminarea de oochisturi au reaprut la 1 - 2 sptmni dup tratamentul cu anticoccidiene. n aceste cazuri, tratamentul a fost repetat, o nou reut nemaifiind nregistrat. Repetarea tratamentului dup 10 zile a avut efect salutar. Durata de evoluie a bolii la animalele tratate a fost n medie de 3 - 5 zile, mbuntiri ale strii clinice observndu-se dup 2 - 3 zile de tratament. Dup 5 6 zile de tratament, n majoritatea cazurilor nu au mai fost identificate oochisturi n fecale sau numrul acestora a sczut dramatic. S-au nregistrat totui, remisiuni ale semnelor clinice la 1 - 2 sptmni de la ncheierea tratamentului, asociate cu reapariia oochisturilor n fecale, la unele animale tratate cu sulfamide i amprolium, dar i ntr-un caz n care tratamentul s-a efectuat cu toltrazuril. Situaii asemntoare au fost relatate i de ali autori [10, 11]. Revenirea semnelor clinice ar putea fi pus pe seama unei aciuni coccidiostatice sau coccidiocide imperfecte a medicamentelor, unei contaminri intense a adposturilor, ineficienei dezinfectantelor folosite mpotriva oochisturilor sau sporulrii rapide a acestora. Reinfectarea pare s nu se mai produc dup un al 2-lea tratament cu anticoccidiene, dar aici pot interveni i creterea vrstei sau imunitatea protectoare, care pot limita infecia sau pot extinde perioada prepatent. La revenirea semnelor clinice pot contribui i posibilele infecii tisulare latente. CONCLUZII Studiul a fost realizat pe 13 cini i 8 pisici, avnd drept scop evaluarea terapiei cu diverse medicamente n isosporoza carnivorelor. Tratamentele s-au efectuat n principal cu sulfamide, triazone (toltrazuril) i amprolium. Msurile igienodietetice i tratamentul simptomatic au fost ntotdeauna asociate celui specific antiparazitar. Rezultate terapeutice bune s-au obinut prin folosirea toltrazurilului; de asemenea, folosirea pe cale oral a unei suspensii antidiareice ce conine o combinaie de 3 sulfamide, 2 antibiotice specifice tubului digestiv, electrolii i substane antidiareice (Scourban Plus) s-a dovedit eficient att pentru scurtarea evoluiei bolii, ct i pentru reducerea numrului sau chiar oprirea eliminrii oochisturilor prin fecale. Durata de evoluie a bolii la animalele tratate a fost n medie de 3 5 zile, mbuntiri ale strii clinice observndu-se dup 2 3 zile de tratament. Tratamentul a condus la dispariia oochisturilor din fecale sau micorarea drastic a numrului acestora. La unele cazuri, s-au nregistrat remisiuni ale semnelor clinice la 1 2 sptmni de la ncheierea tratamentului, asociate cu reapariia oochisturilor n fecale. Remisiile nu au mai aprut dup un al 2-lea tratament cu anticoccidiene. Din studiul efectuat, rezid importana diagnosticului infeciilor eimeriene, inclusiv cu Isospora la carnivore, n special la tineret, care este n mod particular sensibil i expus la multiple infecii. Existena bolii n cresctorii duce la creterea
386
presiunii infecioase (alturi de ali ageni patogeni), cu riscul apariiei de enzootii de boli cu manifestri digestive n perioada nrcrii sau cu ocazia unui stres (vnzare, transport). n mod particular, n cresctorii este necesar un diagnostic etiologic corect i instituirea unui tratament susinut cu repetri periodice pentru reducerea contaminrii mediului i evitarea exprimrilor clinice. Un diagnostic etiologic corect i rapid la animalele cu diaree scurteaz considerabil evoluia clinic a bolii. Fiind uor de efectuat, examenul coproscopic se impune ori de cate ori avem de-a face cu evoluia unui episod de diaree la animale tinere, mai ales n perioada de nrcare.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Andre H., Pierson P., Polak B., 2001 - La coccidiose a Isospora spp. chez le chien. Le Point Veterinaire, No. 219: 32 - 37 Bourdoiseau G., 2003 - Comment realiser une coproscopie lors de diarrhee aigue chez le chien et le chat, Le Nouveau Praticien Veterinaire, 14, 3: 25 26 Charles V., Trayser DVM, MS, Kenneth S. Todd.,Jr., PHD, 1978 - Life Cycle of Isospora burrowsi spp. (Protozoa: Eimeriidae) from the Dog Canis familiaris, American Journal of Veterinary Research, vol. 39. no. 1: 95 - 98 Conboy G., 1998 - Canine coccidiosis, Can Vet J, Vol 39,: 443 - 444 Dubey P.J., 1978 - Pathogenicity of Isospora ohioensis Infecion n Dogs, Jurnal of the American Veterinary Association, vol.173, no 2: 192 197 Dubey J.P., Streitel R.H., 1976 - Isospora felis and I. rivolta infections n cats induced by mouse tissue or oocysts, Br. vet. J., 132, 649 651 Dubey J.P.. Weisbrode E. Steven, William A. Pogers, 1978 - Canine Coccidiosis Attributed to an Isospora ohioensis -like organism: A Case Report, Jurnal of the American Veterinary Medical Association, vol.173, no 2: 185-192 Dulceanu N., 1980 - Coccidioze i alte sporozooze la animale, Ed. Ceres, Bucureti Dulceanu N., Cristina Terinte, Mitrea I.L., Carmen Palcovnicu, 2002 - Dicionar enciclopedic de parazitologie, Ed. Academiei Romne, Bucureti Dunbar M., Foreyt J., 1985 - Prevention of coccidiosis n domestic dogs and captive coyotes (Canis latrans) with sulfadimethoxine-ormetroprim combination, Am. J. Vet. Res., vol. 46, 9: 1899 -1902 Lloyd S., Smith J., 2001 - Activity of toltrazuril and diclazuril against Isospora species n kittens and puppies, The Veterinary Record, 16: 509 - 511 Mitrea I.L., 2002 - Boli parazitare la animale, Ed. Ceres, Bucureti, 2002. OBrien C.R., Pope S.E., Malik R., 2002 - Vomiting, diarrhoea and inappetence n a Young cat with hypoproteinaemia, Aust. Vet. J., vol.80, 9:544-551 Omata Y., Oikawa H., Kanda M., Mikazuki K., Florencia G. Claveria, Cecilia Dilorenzo, Takehara T., Saito A., Suzuki N., 1991 - Humoral Immune Response to Isospora felis and Toxoplasma gondii n Cats Experimentally Inoculated with Isospora felis, J. Vet. Med. Sci. 53(6): 1071-1073 Pierson P., 2003 - Conduire a tenir face a un episode de diarrhee aigue en elevage canin, Le Nouveau Praticien Veterinaire, 14: 17-23 Pierson P., 2003 - Observaion clinique dune diarrhee aigue liee a une infection parasitaire dans un elevage canin, Le Nouveau Praticien Veterinaire, 14: 33-35 Valkounova J., 1982 - Parasitological investigation of childrens sand boxes and dog faeces from public areas n old housing districts of Prague, Folia Parasitologica (Praha) 29:25-32
15. 16. 17.
387
INCIDENA HIDATIDOZEI N SUDUL I VESTUL ROMNIEI N PERIOADA 1999 - 2004

THE INCIDENCE OF CYSTIC ECHINOCOCCOSIS IN WESTERN AND SOUTHERN ROMANIA BETWEEN 1999 AND 2004
S. MORARIU, I. COSOROAB, Gh. DRBU, I. OPRESCU, I. IACOBICIU, Florica MORARIU, Narcisa RADBEA Cystic Echinococcosis (CE) is one of the most important parasitic zoonosis. In many parts of the world CE has an increased incidence. This study reveals the incidence of CE in three districts of western and southern part of Romania. Considering all slaughtered animals, the highest incidence was recorded in Gorj district (7.60%), followed by Timi district (4.20%) and Cara-Severin district (1.66%). Bovines were the most infested species, with a highest incidence in Gorj district (48.38%), followed decreasingly by Timi district (24.04%) and Cara-Severin district (11.75%). CE had a highest incidence in pigs in Timi district (5.02%). In sheep, CE prevailed in Gorj district (10.90%).
Key words: cystic echinococcosis, incidence, Timi, Cara-Severin, Gorj districts.
n Romnia, incidena hidatidozei este, n general, ridicat, dar diferit n funcie de specia gazd i dup regiune. n urma nregistrrilor efectuate n abatoare s-au raportat infestaii ce au variat ntre 10 i 65%. Dac s-ar lua, ns, n calcul i prezena hidatidelor la animalele moarte sau sacrificate n afara abatoarelor, cifrele ar fi mult mai mari. n Europa, infestaia hidatic variaz de la o ar la alta. Astfel, n Bulgaria, rata infestaiei a fost de 22,55% la ovine, 12,30% la bovine i 2,88% la suine (8), n Iugoslavia a fost de 58,63% la ovine, 11,70% la bovine i 35,37% la suine (2), iar n Italia, Lorenzini i Ruggieri (4) identific 0,7% bovine, 5,4% ovine i 0,4% suine infestate. Avnd n vedere aceste date i lipsa unor studii privind situaia epizootologic a hidatidozei n vestul Romniei, s-a considerat oportun efectuarea unei anchete epidemiologice n patru judee din zona de vest i sudvest a rii. MATERIALE I METODE
Determinarea incidenei infestaiei cu chisturi hidatice la bovinele, ovinele i suinele din partea de vest a Romniei s-a fcut pe baza datelor obinute de la Direciile Sanitare Veterinare ale judeelor Timi, Cara-Severin i Gorj. Rezultatele obinute sunt prezentate n tabelele 1, 2 i 3 i se refer la perioada 1999 - 2004. 388
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1. Incidena infestaiei hidatice la animalele sacrificate n judeul Timi, n perioada 1999 2004 Total animale examinate examinate Pozitive (%) Anul Ovine Pozitive (%) Bovine examinate examinate Pozitive (%) Suine Pozitive (%) 45.445 (7,18) 29.078 (11,43) 6.200 (2,60) 1.820 (0,91) 5.781 (2,41) 1.917 (0,82) 90.241 (5,02) Suine examinate Pozitive (%) 367 (0,26) 1.195 (1,77) 368 (0,85) 92 (0,52) 193 (1,06) 175 (0,95) 2.390 (0,78)
1999 2000 2001 2002 2003 2004
645.620 264.686 243.488 205.575 244.880 238.491
TOTAL 1.842.740
47.962 (7,42) 11.076 (4,18) 7.033 (2,88) 2.720 (1,32) 6.317 (2,57) 2.401 (1,01) 77.509 (4,20)
1.313 2.597 2.031 2.164 1.980 1.778 11.863
87 (6,62) 141 (5,42) 112 (5,51) 97 (4,48) 117 (5,91) 102 (5,73) 656 (5,53)
11.638 7.730 3.337 4.791 3.251 2.842 33.589
2.430 (20,87) 1.857 (24,02) 721 (21,60) 803 (16,76) 419 (12,88) 382 (13,44) 6.612 (19,68)
632.669 254.359 238.120 198.620 239.649 233.871 1.797.288
Tabelul 2 Incidena infestaiei hidatice la animalele sacrificate n judeul Cara - Severin, n perioada 1999 2004. Total animale examinate examinate Pozitive (%) Anul Ovine examinate Pozitive (%) Bovine Pozitive (%) 531 (10,35) 526 (10,97) 424 (11,75) 49 (3,86) 142 (8,01) 161 (8,92) 1.833 (9,97)
1999 2000 2001 2002 2003 2004 TOTAL
149.928 83.081 55.035 20.125 25.522 23.004 357.417
1.348 (0,89) 2.068 (2,48) 1.041 (1,89) 239 (1,18) 710 (2,78) 545 (2,36) 5.951 (1,66)
4.739 10.882 8.636 1.441 5.649 2.842 34.189
450 (9,49) 347 (3,18) 249 (2,88) 98 (6,80) 375 (6,63) 209 (7,35) 1.728 (5,05)
5.126 4.791 3.607 1.268 1.773 1.804 18.369
140.063 67.408 42.792 17.416 18.100 18.358 304.137
389
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 3. Incidena infestaiei hidatice la animalele sacrificate n judeul Gorj, n perioada 1999 2004 Total animale examinate examinate Pozitive (%) Anul Ovine examinate Pozitive (%) Bovine examinate Pozitive (%) Suine Pozitive (%) 941 (8,28) 721 (12,17) 142 (3,00) 127 (2,38) 141 (1,49) 167 (0,97) 2.239 (4,14)
1999 2000 2001 2002 2003 2004 TOTAL
14.679 9.836 7. 252 6.865 11.750 19.746 70.128
1.888 (12,86) 1.883 (19,14) 483 (6,66) 295 (4,29) 405 (3,44) 381 (1,92) 5.335 (7,60)
1.026 2.307 1.872 958 1.429 1.943 9.535
108 (10,52) 384 (16,64) 259 (13,83) 71 (7,41) 83 (5,80) 135 (6,94) 1.040 (10,90)
2.299 1.608 653 572 870 609 6.611
839 (36,49) 778 (48,38) 82 (12,55) 97 (16,95) 181 (20,80) 79 (12,97) 2.056 (31,09)
11.354 5.921 4.727 5.335 9.451 17.194 53.982
REZULTATE I DISCUII Ancheta epidemiologic realizat n judeul Timi relev o inciden contrastant a hidatidozei la speciile de animale luate n studiu (tabelul 1 i figura 1). Astfel, la ovine i suine, valorile incidenei bolii sunt apropiate: 5,53%, respectiv, 5,02%. n schimb, la bovine, aproape o cincime din animalele sacrificate a fost parazitat (19,68%). La ovine, cea mai mare inciden a fost constatat n anul 1999 (6,62%), iar cea mai mic, n anul 2002 (4,48%). Cele mai multe bovine parazitate au fost nregistrate n anul 2000 (24,02%), iar cele mai puine, n anul 2003 (12,88%). n anul 2000 au fost consemnate statistic cele mai multe suine parazitate (11,43%), iar n anul 2004, cele mai puine animale afectate (0,82%) din aceast specie. Surprinde totui procentul mare de suine afectate, avnd n vedere faptul c pn n anul 1999 ponderea a fost deinut de suinele din Holdingul COMTIM, unde msurile de igien erau mult mai atent aplicate i respectate. Pe msura afluirii grsunilor din gospodriile populaiei, procentul animalelor infestate a crescut, astfel c n anul 2000 a atins apogeul (11,43% animale parazitate).
390
1999
2000
2001
2002
2003
2004
Suine
0,82 2,41 0,91 2,6 7,18 11,43 13,44 12,88 16,76
Bovine 5,73 5,91 4,48 5,51 5,42 6,62
21,06 24,02 20,87
Ovine
Fig. 1. Incidena hidatidozei (%) la animalele sacrificate n judeul Timi (A) n perioada 1999 2004.
Contrastant este i numrul mare de bovine infestate. Peak-ul a fost semnalat n anul 2000 (24,02%), dup care urmeaz o descretere semnificativ, pn la 12,88%, n anul 2003. Pentru judeul Cara-Severin, situaia este oarecum asemntoare cu aceea din judeul Timi (tabelul 2 i figura 2). Ovinele au fost parazitate ntr-o proporie apropiat de cea din judeul Timi (5,05%), iar la suine incidena este cea mai mic (0,78%). i n judeul Cara-Severin, bovinele au fost mai intens parazitate (9,97%), comparativ cu celelalte specii, ns incidena a fost mai mic dect n celelalte judee (19,68% pentru Timi i 31,09% pentru Gorj). La ovine, incidena maxim a fost consemnat n anul 1999 (9,49%), dup care urmeaz o scdere treptat a cazurilor de hidatidoz, astfel c n anul 2001 a fost nregistrat incidena minim (2,88%). n anii urmtori infestaia s-a situat la un nivel mai ridicat, dar relativ constant, cu mici fluctuaii n jurul valorii de 7%. La bovine, cele mai numeroase cazuri au fost semnalate n anul 2001 (11,75%), iar cele mai puine, n anul 2002 (3,86%), dup care valorile au revenit la valori aproximativ egale n anii urmtori (8,01% i 8,92%). Aceast scdere brusc n anul 2002, urmat de revenirea la valorile apropiate de cele anterioare, rmne inexplicabil. Pentru suine, rata infestaiei se menine sczut, cu un maxim de 1,77% n anul 2000, urmat de o descretere treptat. Minimul infestaiei a fost nregistrat n anul 1999, cu 0,26% animale parazitate. De altfel, suinele sacrificate n judeul Cara-Severin au prezentat cea mai sczut rat a infestaiei dintre animalele examinate n cele patru judee.
391

0,95 1,06 0,52 0,85 1,77 0,26 8,92 8,01
1999
2000
2001
2002
2003
2004
Suine
Bovine
3,86 11,75 10,97 10,35 7,35 6,63
Ovine
6,8 2,88 3,18 9,49
Fig. 2. Incidena hidatidozei (%) la animalele sacrificate n judeul Cara-Severin (B) n perioada 1999 2004.
n judeul Gorj, contrasteaz de la nceput numrul mic de animale sacrificate cu coresponden n actele oficiale (70.128) cu procentele mari ale infestaiei, cel puin pentru anii de debut ai anchetei. Astfel, se poate constata cu uurin faptul c anul 2000 deine recordul infestaiilor la toate cele trei categorii de animale investigate (16,64% la ovine, 48,38% la bovine, respectiv 12,17% la suine. Pare de necrezut c jumtate din bovinele sacrificate sunt purttoare de hidatide, cel mai adesea sterile ns.
0,97 1,49 2,38 3
1999
2000
2001
2002
2003
2004
Suine
12,17 8,28 20,8 16,95 12,55 36,49 12,97
Bovine
48,38
Ovine
6,94 5,8 7,41
13,83 16,64 10,52
Fig. 3. Incidena hidatidozei (%) la animalele sacrificate n judeul Gorj (C) n perioada 1999 2004.
392
La ovine incidena minim a fost consemnat n anul 2003 (5,80%), la bovine n anul 2001 (12,55%), iar la suine n anul 2004 (0,97%). Se poate remarca i pentru acest jude c la suine numrul animalelor infestate este mai mic. De fapt se situeaz pe locul doi ca procent minim de suine infestate (4,14%), dup judeul Cara-Severin (0,78%), dar naintea judeului Timi (5,02%). Dac s-ar lua n considerare i animalele sacrificate n gospodriile populaiei sau n diverse puncte de sacrificare mai mult sau mai puin clandestine, n care controlul sanitar veterinar este sumar sau chiar lipsete, atunci procentul animalelor infestate ar fi, probabil, mai mare. Comparnd situaia existent n cele patru judee din vestul i sud-vestul Romniei cu datele statistice din unele ri europene, mai ales din jurul Mediteranei, putem spune c n ara noastr, infestaia se menine la o cot medie fa de aceste ri. Astfel, n Bulgaria, rata infestaiei ovinelor a fost de 30,26% n 1996, iar la bovine, n funcie de zon, a variat ntre 9,2% i 25,9% (8); n Turcia, 30,6% la ovine i 25,9% la bovine, n perioada 2000-2001; n Grecia, 0,23-21% la ovine i 0-53% la bovine, pe o perioad de 10 ani (1989 - 1998) (1); la nceputul programului de control n Grecia, n 1984, prevalena infestaiei a fost de 82% dintre bovine, 80% dintre ovine, 24% dintre capre i 5% dintre porci (6, 7); n Italia, tot pe o perioad de 10 ani (1990 1999), la ovine a fost de 86,9% i 23,7% la bovine (4). n Spania, la nceputul programului de control, n 1986, prevalena infestaiei la ovine a fost de 82,3%, iar n anul 2000 aceasta a ajuns la doar 20% (3).
35 Ovine 30 25 20 15 10 5 0 Tim i Cara Gorj Bovine Suine Total anim ale
Fig. 4. Incidena cazurilor de hidatidoz (%) la animalele sacrificate n perioada 1999 2004.
393
Dac se analizeaz atent datele prezentate n cele patru tabele i n graficele aferente fiecrui tabel, se poate observa cu uurin faptul c, n toate cele patru judee, este nregistrat o scdere lent i progresiv a cazurilor de hidatidoz la animalele de interes economic. Aceast scdere nu are la baz, ns, un suport real. Ea se bazeaz, n mare parte, pe reducerea drastic a efectivelor de animale, att n sistemul de stat, ct i n cel privat. De asemenea, efectuarea unor tratamente antihelmintice generale cu substane benzimidazolice sau pro benzimidazolice ar fi putut contribui ntr-o oarecare msur la reducerea incidenei bolii. Factorii de mediu (temperatur, umiditate) par a fi avut i ei un rol n limitarea transmiterii bolii. ncepnd cu anul 2002, verile au devenit din ce n ce mai clduroase i secetoase. n astfel de condiii, supravieuirea oulor de Echinococcus granulosus pe pune devine problematic, ceea ce duce la diminuarea transmiterii hidatidozei. Totui, meninerea infestaiei la cote relativ ridicate, poate fi explicat prin faptul c toate cele trei specii menionate puneaz, n multe regiuni, mpreun, iar cinii ciobneti i cei hoinari contribuie la macularea cvasipermanent a punilor. Pentru zonele submontane i montane din cele trei judee nu trebuie exclus nici intervenia canidelor slbatice, ca gazde definitive, n lanul epidemiologic al parazitozei. CONCLUZII n toate cele trei judee luate n studiu: Timi Cara-Severin i Gorj, incidena hidatidozei se menine la un nivel ridicat. Cea mai mare rat a infestaiei hidatice este ntlnit n judeul Gorj: 7,60%. Dintre cele trei specii de animale investigate, bovinele sunt cel mai intens parazitate, cu un maxim n judeul Gorj (48,38%, fa de 24,02% n Timi i 11,75% n Cara-Severin). Aceasta nseamn un dublu de bovine infestate fa de judeul Timi i de patru ori mai mult comparativ cu judeul Cara-Severin. Diversele transformri n structura proprietii, tratamentele antihelmintice cu substane benzimidazolice i presiunea de selecie exercitat de factorii de mediu au contribuit la reducerea transmiterii hidatice. Fluctuaiile anuale se pot explica i prin faptul c, n abatoare nu vin n fiecare an animale din aceleai ferme sau localiti, iar aceast reducere a incidenei nu poate fi apreciat dect aproximativ.
394
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Altinta, N., 2003 Past to present: echinococcosis in Turkey. Acta Tropica, 85, 105 112. Damnjanovic, D.; Kulisic, Z.; Pavlovic, I., 1995 - Prevalence hydatidosis in Valjeva area. XVII International Congress of Hydatidology, 6 10 November, Limassol, Cyprus. Jimenez, S.; Perez, A.; Gil, H.; Schantz, P.M.; Ramalle, E. ; Juste, R.A., 2002 Progress in control of cystic echinococcosis in La Roja, Spain: decline in infection prevalences in human and animal hosts and economic costs and benefits. Acta Tropica, 83, 213 221. Lorenzini, R.; Ruggieri, A., 1987 - Distribution of echinococcosis - hydatidosis in Italy. J. Helminthol., 61, 3, 261 267. Morariu, S.; Cosoroab, I.; Drbu, Gh.; Florica Morariu; Oprescu, I., 2005 The incidence of hydatid disease in western part of Romania. Lucr. t. Med. Vet. Timioara, XXXVIII, 598 - 603. Seimenis, A., 2003 Overview of the epidemiological situation on echinococcosis in the Mediterranean region. Acta Tropica, 85, 191 195. Sotiraki, S.; Himonas, C.; Korkoliakou, P., 2003 Hydatidosis echinococcosis in Greece. Acta Tropica, 85, 197 201. Zheliaskov, P.; Tanchev, T.; Toncheva, A., 1995 Epizootological investigation an Echinococcosis Hydatidosis among dogs and animals intermidal hosts in some parts in Bulgaria. XVII International Congress of Hydatidology, Limassol, Cyprus.
4. 5. 6. 7. 8.
395
THE NEMATODE OF RED FOXES (VULPES VULPES L.) HUNTED IN BELGRADE AREA
INFESTAIA CU NEMATODE LA VULPILE (VULPES VULPES L.) VNATE N ZONA BELGRADULUI
I. PAVLOVI1, Z. KULI2, S.STANOJEVI1 Scientific Veterinary Institute of Serbia, Belgrade, Yugoslavia 2 Institute of Parasitology, Faculty of Veterinary Medicine, Belgrade
1
Large number of foxes, known to carry various parasites, lives in the vicinity of Belgrade. Therefore we conducted a postmortem parasitological (patho-anatomic) examination of a total of 719 adult and 156 fox puppies hunted in the Belgrade area. Ten species of nematodes were found: Toxocara canis, Toxocara mystax, Toxascaris leonina, Ancylostoma caninum, Uncinaria stenocephala, Spirocerca lupi, Capillaria plica, Rictularia affinis, Gonglyonema pulchrum, Trichinella spiralis and Trichuris vulpis. Comparing these results with the results of examination of stray dogs we concluded that many nematoda species were found in both populations. This is of great epizootological and epidemiological significance in terms of expansion of helminthoses, because of possible urban environment contamination and subsequent human infection, particularly with Ascaridae and Ancylostomidae species.
Key words: Fox, nematodes, dog, epidemiology
INTRODUCTION In most European countries and as in many other parts of the world, research surveys have been carried out to study of helminthes fauna of the fox (Petrov & Potehina 1953; Irgaov & Sadikov,1966; Lubke,1972; Dent,1974;
Williams,1976; Hinaidy,1976; Kozlov,1977; Jancev&Ridjakov,1977; Edwards et al.,1979; Nickel et. al.,1980; Borgstede,1984; Petavy et al.,1985; Ballek et al.,1992; James & Walters,1992; Willingham et al.,1996; Papadopulos et al.,1997; Shimalov & Shimalov,2003).
In Serbia, in Belgrade area, some information regarding the helminthes of foxes has been given by Lozani, 1965; Bokovi & Valter,1979; Pavlovi.1994. and Pavlovi et al.,1997. Those results represented that foxes in Belgrade area were carriers of many species of nematode, including same species of importance for human health.
396

In the period 1994 - 2000 a total of 875 red foxes (Vulpes vulpes L.) (719 adult and 156 puppies) were examined in the laboratory of Veterinary institute in Belgrade. Foxes were hunted at spread area of Belgrade. After necropsy, we have examined trachea, lung, heart, complete gastrointestinal tract, liver, kidney and urinary bladder. The stomach, intestine and the other organs were slit opened and visible helminthes removed. Afther that (especially to intestine) the contents washing out. The contents and washing were scened over a gauze sieve, mesh aparature 150 mm, under jet water and the retained material examined, small quantities at a time, in a large whistle enamel tray. Found parasites were fixing in 10% formalin, were mounted in lactophenol for identification, and mounted in Canada balsam. Determination we have done by keys given by Watson (1963) and Soulsby (1977).
RESULTS AND DISCUSSION During examination we recorded parasitic infection in 91,08% (797) foxes, caused by 5 trematoda species, 11 cestoda and 11 species of nematode. Mixed infection was more common then single ones. Poliparasitic infections were found at 706 (80.68%) foxes. Infections with nematoda were found at 703 (80.34 %) adult foxes. Puppy foxes were infected with only one nematoda species. Toxocara canis was found at 62 (39,74%).
Table 1 Nematode infections of red foxes in spread area of Belgrade1988-2003 Nematode species Toxocara canis Uncinaria stenocephala Trichuris vulpis Ancylostoma caninum Toxocara mystax Trichinella spiralis Capillaria plica Rictularia affinis Toxascaris leonina Spirocerca lupi Gonglyonema pulchrum Number infected 383 245 184 166 94 54 47 45 29 9 1 Prevalence (%) 43,78 28,00 21,57 18,91 10,74 6,17 5,37 5,14 3,31 1,05 0.01 Number of helminthes (min max) 2-29 6-112 4-23 2-18 3-8 2-71 0-9 3-15 2-3 11
The results we obtained in our examination have shown that a considerable number of foxes carriers of number of nematoda species. The most prevalent among the species was Toxocara canis which was observed in 43,78 % of adult and 39,74 % puppy foxes. Followed by Uncinaria stenocephala (28,00%), Trichuris vulpis (21.57%), Ancylostoma caninum (18.91%), Toxocara mystax
397
(10,74%), Capillaria plica (5,37%), Trichinella spiralis (6,17%), Toxascaris leonina (3,31%) Rictularia affinis (5,14%), Spirocerca lupi (1,05%) and Gonglyonema pulchrum at 0,01% of the foxes examined (table 1). CONCLUSION Foxes inhabited in Belgrade area are carriers for many nematoda species, especially Ascaridae and Ancylostomidae, which caused human larval syndrom. REFERENCES
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. Balek, D., Takla, M., Ising-Voler, S. & Stoye, M., 1992 Zur Helminthenfauna des Rotfushes (Vulpes vulpes, Linne, 1758) in Nordhessen und Ostewestfalen, Teil 2: Nematoden. Deutsche Tierarztliche Wochenscrift 99, 435-437. Bjotvedt, G., Tomikiewitcz, S.M.Jr. & Goliqhtly, R.T.Jr., 1980 - A description of helminths of kit fox (Vulpes macrotis). Veterinary Medicine and Small Animal Clinical 75 (5), 661-884. Borgsteede, F.H.M., 1984 - Helminths parasites of wild foxes (Vulpes vulpes L.) in the Nederlands. Zentralblat fur Parasitekude 70, 281-285. Bokovi, V.& Valter, D., 1979 - Parazitska fauna lisica i jazavaca sa podruja Beograda. Veterinarski glasnik 33 (12), 1023-1025. Coman, B.J., 1973 - Helminth parastes of the red fox (Vulpes vulpes) in Victoria. Australian Veterinary Journal 49, 378-384 Deblock, S., Petavy, A.F. & Gilot, B., 1988 - Helminthes intestinaux du renard commun (Vulpes vulpes L.) dans la Masif Central (France). Canadian Journal of Zoology 66, 1562-1569. Diebble, E.D., Font, W.F. & Wittrock, D.D., 1983 - Helminths of red fox, Vulpes vulpes L. in west central Wisconsin. Journal of Parasitology 69 (6), 213-214. Hackett, F. & Walters, T.M., 1980 - Helminths of the red fox in Mid-Wales, Veterinary Parasitology 7, 181-184. Hinaidy, H.K., 1976 - Ein Weiterer Beitrag zur Parasitenfauna des Rotfuches Vulpes vulpes (l) in Osrterreich. Zentralblat fur Veterinaremedizine B, 23, 66-73. Irgaov, I.H. & Sadikov, V.M., 1966 - O gelmintofaune lisic Uzbekistana. Materiali k naunoj konferensii vsesojouznogo obsestva gelmintologov, Tom III, 125-126. Jancev, J. & Ridjakov, N., 1977 - Helminth fauna of the fox (Vulpes vulpes rucigera Becstein) in Nortwestern Bulgaria. Helminthologia Bulgaria 4, 73-96. Koanov, E.K., 1972 - Gelminti dikih mlekopitajunih Uzbekistana, Materiali Akademii Nauk Uzbekskoi SSR, Takent, 72-73. Kovaluk, E.S., 1974 - Gelminti mlekopitajunih v Tjomenskom priirtisje, mlekopitajunih analiz, Izdatelstvo Ministarstvo hojzovstva SSSR, Moskva. Kozlov, D.P., 1977 - Opredeljitel gelmintov hinih mlekopitajunih SSSR. zdatelstvo Akademii Nauk SSSR, Moskva. Loos-Frank, B. & Zeyhle, E., 1982 - The intestinal helminths of the red foxes and some other carnivores in south germany. Zentralblat fur Parasitekude 67, 99113. Lozani, B., 1961 - Prilog poznavcanju helmintoza lisica, I nematode. Vetrinarski glasnik 15 (3), 207-209.
398
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. Lozani, B., 1965 - Contribution to know of helminthose of foxes (Vulpes vulpes) from hunting area of spread area of Belgrade. Doctoral thesis, Faculty of Veterinary Medicine, University in Belgrade. Nickel, S., Hiepe, T., Hansel, U. & Jurke, E., 1980 - Contribution to the parasitic fauna of the GDR, Investigation of the prevalence of the helminths in red fox (Vulpes vulpes L.). Angewandt Parasitologie 21 (2), 94-100. Papadopoulos, H., Himonas, C., Papazahriadou, M. & Asntoniado -Satiroadou K., 1991 - Helinthews of foxes and other wild carnivores from rural area of Greece. Journal of Helminthology 71, 227-231. Pavlovi, I., 1994 - Helmnthoses of red foxes (Vulpes vulpes L.) hunting at Belgrade area in period 1988-1992., Doctoral thesis. Faculty of Veterinary Medicine, University in Belgrade. Pavlovi, I., Kulii, Z. & Milutinovi, M., 1997 - The role of foxes (Vulpes vulpes L.) in the epizootiology and epidemiology of nematoda parasitic zoonoses. Acta Veterinaria 47 (2-3), 177-182 Petavy, A.F.& Deblock, S., 1980 - Helminthes of the common fox (Vulpes vulpes) from Masif Central (France). Annales de Parasiotologie Humane et Comparee 55 (4), 379-391. Petavy, A.F., Deblock, S., Cantat, F. & Gilot, B., 1985 - Le renard et ses helminthes et France. Revue d Ecologie la Terre et la Vie 40, 231-237. Petrov, A.M. & Potehina, L.F., 1953 - K gelmintofaune hinih mlekopitajunih Tadikistana. Trudi Vsesojouznoga instituta gelmintologov imena Skrajbin 5, 167-172. Ryan, G.E., 1976 - Helminth parasites of the fox (Vulpes vulpes) in West South Wales, Australian Veterinary Journal 52, 126-130. Richards, D.T., Harris, S. & Lewis, J.W., 1995 - Epoidemiogical studies on intestinal helminth parasites of rural and urban red foxes (Vulpes vulpes) in the United Kingdom. Veterinary Parasitology 59, 39-51. Scoffel, I., Schein, E., Wittstadt, U. & Hentsce, J., 1991 - Zur parasitenfauna des rotefuschs in Berlin (West). Berliner Tierarztliche Wochenschrift 104, 153-157. Soulsby, E.J.L., 1977 - Helminths, arthropods and protozoa of domesticated animals, Baille, Tindall and Cassell Co, London. Williams, B.M., 1976 - The intestinal parasites of the red fox in South Wales. British Veterinary Journal, 132 (3) 309-312. Willingham, A.L., Ockens, N.W., Kapel, C.M. & Monrad, J., 1996 - A helminthological survey of wild red foxes (Vulpes vulpes) from the metropolitan area of Copenhagen. Journal of Helminthology 70, 259-263. Wessbecher von H., Dalchow W. & Stoye, M., 1994 - Zur helmintenfauna des Rotfuisches (Vulpes vulpes Linne 1758) in Regierungsbezirk Karlshrue, Teil 2: Nematoden, Deutsche Tierarztlishe wochenschrift 101, 362-364
399
EVOLUTION OF CANINE DEMODICOSIS IN DOGS WITHOUT ACARICID TREATMENT

Narcisa RADBEA* U.S..M.V. Timioara We study 14 dogs diagnosticated with canine demodicosis. The dogs were diagnosed with LD (9 cases), GD (3 cases) and PD (2 cases). The therapy consisted in: animal preparation (deparasitation for helmintic parasites, general antibiotherapy for PD, balanced nutrition, optimal hospitalising conditions); daily wadding over the whole body with an acid solution (apple vinegar+honey 100 ml+ sunflower oil 100 ml+ 800 ml water); no topical or systemic acaricide was administered. Changing of the microclimate and of the life conditions, ageing, shifting of the skin pH by daily wadding over with an acid solution (apple. vinegar with honey+oil+water) are possible causes of healing with LD and of the circumscribing of the lesions in a dog with GD, in the absence of the acaricide treatment. In the case of the 2 dogs diagnosed with PD, systemic antibiotherapy associated with local application of the acid solution (apple vinegar) determined the exacerbation of the purrulent lesions.
Canine demodicosis treatment has long passed the era of prescribing cedar or Chaulmoogra oils . At present time, antidemodecic therapy involves a complex of factors and attitudes: analysis of exach case, exmination of individual factors, diagnosis of the clinical evolutive form (localised, generalised demodicosis or piodemodicosis), evaluation of the general clinical state of the animal, the individualisation of the therapeutic protocols, choosing of the acaricide by the reactions of the animal, the extension and gravity of the lesions, the cost and the commodity in administration. Localised demodicosis (LD) is considered an easy form that heals spontaneously in 80 90% of cases (1, 2), whereas, in the general non infected form (GD), spontan healings are reported to 20 50% of cases, especially in dogs aged from 1 to 2 years (6). Piodemodicosis (PD) is unanymously considered a severe evolution form, difficult to treat (1, 2, 3, 4, 5, 6). Considering these references, this pioneering study followed the evolution of canine demodicosis without acaricide treatment. MATERIALS AND METHOD
Due to the fact that initally we havent had the possibility of follow up for spontan healings in owned dogs, he have started the experiment with 14 unowned dogs. The dogs were diagnosed with LD (9 cases), GD (3 cases) and
*
E-mail: narcisa.radbea@fmvt.ro
400
PD (2 cases). The therapy consisted in: animal preparation (deparasitation for helmintic parasites, general antibiotherapy for PD, balanced nutrition, optimal hospitalising conditions); daily wadding over the whole body with an acid solution (apple vinegar+honey 100 ml+ sunflower oil 100 ml+ 800 ml water); no topical or systemic acaricide was administered. All the dogs were registered at the Clinic of Parasitic Diseases of the University for 6 months. After release, they were clinically and parasitologically monitored.
RESULTS AND DISCUSSION At 4 months from the beginning of the treatment I have noticed interesting results: 2 dogs diagnosed with LD presented the first signs of clinical healing (apparition of hair in initially alopecic areas); in one dog diagnosed with GD I have noticed the localisation of initially generalised lesions; in the 2 dogs diagnosed with PD the clinical signs of healing did not appear, moreover, I have noticed violent reactions to the application of the acid solution, that behaviour determined me to stop administering the acid solution and to continue antibiotic treatment. At the end of the treatment (after 6 months), the situation was unchanged: 2 dosg with LD clinically healed with no tendance to recurrence, one dog with GD in which the initially generalised lesions have healed, 2 dogs with PD in which the lesions were drying and 9 dogs (7 with LD and 2 with GD in which the initial lesions agravated). Every dog which, at the end of the initial treatment, received acaricide (Amitraz, Ivermectine) healed clinically and parasitologically in the next 6 months. The problem of spontan healing in canine demodicosis is still subject to controversy. Havrileck et al. (1990) claims that there is no difference between the evolution of LD with or without treatment, and the time necessary for remissions and healings is imprevisible. Some authors (Scott et al., 1995) do not find the tratment with acaricide substances in LD justified, because, in their opinion, this would favour the development of a population of antiparasitic resistant acariens. These affirmatios do not answer the main problem of initial parasite proliferation: why some of the dogs with the dry forms heal spontaneously, while others do not react to acaricides; from the percent of the healed dogs, how much do the efficiency of the treatment represent and whch percentage is due to spontan healing? We reinforce these opinions with the claim that, from the practical point of view, it is difficult to foresee the healing or the extending of the disease. Moreover, the owners are not content with the situation when the physician waits for spontaneous healing, without administating no medicine to the ill dog. The same attitude is found at the owner if the physician administered only an adjuvant
401
therapy (antihelmintics, antiseptics, antiseborrheics, immunostimulants) in expectative to spontaneous healings. In the present study, the apparition of clinical healing in two dogs with LD, the transformation of generalised lesions present to a dog in circumscrise lesions and the persistance of the lesions to the dogs with PD support multiple explanations. The healings in the dogs with the dry form can owe, on one side, to the changing of the microclimate, of the anterior life conditions (deficitary diet, crowding, precarious hygiene conditions, intense parasitism) with new life conditions (balanced diet, rich in vitamins and minerals, internal and external deparasitations, and individual hosting spaces with the possibility of outdoor exercise). The alkalinisation of the skin pH, modifications to the composition of the lipidic layer, hydrolising oh the sterols and the lipidic esthers, the main components of the sebum, the increase of the concentration of fatty acids at the skin surface are reactions (signalled by some authors) that characterise the demodecic skin (1, 4). On the other hand, the healing of the dry lesions may be explained also by the aging of the dogs (from 8 9 months at the beginning of the treatment to 16 18 months at the end). In both situations there is an increase of the canines immunocompetence against the parasite and its effects. To all these may be added the changes to the skin microenvironment by daily wadding over the body with acid solution (apple vinegar) with the purpose of shifting the skin pH to acid, as it becomes alkaline in the presence of the acarian Demodex Canis. In the case of the dogs diagnosed with PD (2 dogs), there is some confirmations of early data that claim that adjuvant treatment (antibiotics, antiseborrheics, acid solutions) do not heal the piodemodicosis (5, 6). The iritation of the skin reduces, the purulent lesions dry, but the main cause of these skin lesions, Demodex Canis, can not be eliminated only by antibacterial or antiseborrheic treatment. Moreover, the association of antibiotics with the topic acid solution has proven not convenient to the 2 dogs with PD; the primary lesions produced by the acarian Demodex Canis, with the secondary bacterial ones, have increased in contact with the acid solution and remitted only when I ceased this therapy and continued with systemic antibiotherapy. The presented reasons justify the small number of cases in which this last experiment was carried out. In this situation, no conclusion can be drawn, but the wise choise is to report the results and to leave place for interpretations. CONCLUSIONS Changing of the microclimate and of the life conditions, ageing, shifting of the skin pH by daily wadding over with an acid solution (apple. vinegar with
402
honey+oil+water) are possible causes of healing in 2 dogs with LD and of the circumscribing of the lesions in a dog with GD, in the absence of the acaricide treatment. In the case of the 2 dogs diagnosed with PD, systemic antibiotherapy associated with local application of the acid solution (apple vinegar) determined the exacerbation of the purrulent lesions.
REFERENCES
1. 2. 3. 4. 5. 6. Cadiergues, Marie-Christine, Franc, M., 1995 La dmodcie canine, Rev. Md. Vt., 171, 6/7: 383. Guagure, E., 1995 La dmodcie du chien adulte. A propos de 22 cas. Prat. Md. Chir. Anim. Comp. 26: 411. Hamann, F., Wedell, H., Bauer, J., 1997 Zur Demodikose des Hundes, Kleintierpraxis, 42, 9: 745. Havrileck, B., 1990 Contribution a ltude de la dmodcie canine, Laction Vt., 11: 1150. Kwochka, K.W., Kunkle, G.A., Foil, C.O., 1986 Canine demodicosis, Current Vet. Therapy., IX, 9: 531. Scott, D.W., Miller, W.H., Griffin, C.E., 1995 Small Animal Dermatology, 5th edition., W.B. Saunders Co., Philadelphia.
403
IMUNOHISTOCHEMICAL RESULTS IN CANINE PIODEMODICOSIS

Narcisa RADBEA1*, O. MEDERLE2, Gh. DRBU1, I. OPRESCU1, S. MORARIU1, M. ILIE1, D. IZVERNARIU2 1 U.S.A.M.V. Timioara 2 U.M.F. Timioara We study 20 dogs, 10 infected with Demodex canis mite (piodemodicosis) and 10 control group. We performed immunohistochemmically method using LSAB2 system with following antibody: Langerhanh cells, Lymphocyte and citokeratine, visualization with DAB. Immunohistochemical staining reveals an intense process of neutrophils and eosinophils migration as well as a hiperplasia of melanocytes and macrophages. In piodemodicosis, there is a certain modification of the skin: the number of the keratinocytes and Langerhans cells decreases and that of the B cells increases as a consequence of the umoral immune response.
INTRODUCERE The Immunohistochemical diagnosis reveals only immune response in skin canine demodicosis. There for he must associated with histopathological and cytopathological exams to complete diagnosis. MATERIALS AND METHODS
Skin biopsies from each dog of the two series (one of 10 dogs infected with Demodex Canis and one of 10 healthy dogs used as control) were harvested and immunohistochemmically stained using the LSAB2 system. Langerhans cells and lymphocytes were primary immunophenotypised by the S100 protein. Citokeratin CK and pan citokeratin with DAB visualization were used to mark the presence of keratinocytes and melanocytes of the basal layer. Fibroblasts and basal cells were identified by vimentin and, respectively, CK 20.
RESULTS AND DISCUSSION Immunohistochemical staining revealed interesting aspects concerning the presence of immunocompetent cells (Langerhans cells, keratinocytes), and the reaction of dermis and epidermis of those cells as a response to he foreign body: Demodex Canis.
*
E-mail: narcisa.radbea@fmvt.ro
404
The complication of demodicosis by bacterial infections generate an immunohistochemical picture characterised by the amplification of celular reactions: hiperplasia and migration of the Langerhans cells towards the basal layer and the dermis, intensely stained keratinocytes, vascular proliferations accompanied by the hypertrophy of the fibeoblasts and of the basal cells, presence in high numbers of granulocytes, B type lymphocytes and melanocytes. This acute cellular response is present in all the members of the series with non signifiant differences between individuals.. In the control series, immunohistochemical staining revealed the presence of immunocompetent cells (Langerhans cells), of keratinocytes, and also basal cells and fibrocytes, without any modification of number and cellular shape (Figure 1, 2, 3, 4).
Fig. 1. - Hyperplasia of keratinocytes immunopositive with pancitokeratina
Fig. 2. - Keratinocytes hyperplasia.
Fig. 3. - Keratinocytes and Langerhans cel hipertrophia
Fig. 4. - Langerhans cel migrations into horny layer
Immunologic cellular reactions from skin lesions in demodicosis are studied by a considerable number of authors (1, 2, 3, 4). T type lymphocytes, keratinoctes and Langerhans cells are most involved in skin immune response: Langerhans cells and keratinocytes present the antigen Demodex to T cells, they respond by he inflammatory reactions induced into the folliculary epithelium. By
405
interleukin synthesis, the Langerhans cells and the keratinocytes start an avalanche of messages that lead to migration of immunocompetent and inflammatory cells. Most of the authors (3, 4) claim that, besides the dry form of demodicosis, the intensity of cellular reactions gradually increases and becomes strong in piodemodicosis. Other authors (1, 2) associate the evolution of demodicosis, from the localised form to the generalized one and then to piodemodicosis with an immunosupression, which yields a minimal cellular reaction that becomes absent during the evolution of the disease. The immunohistochemical images obtained in the present study show an immune response of ummoral type, marked by an increased number of B cells, a simultaneous decrease of T cells, keratinocytes and Langerhans cells number, and an obvious intervention of granulocytes and melanocytes. The immunocompetent cells response (reaction of Langerhans cells, keratinocytes and T cells) as well as the umoral reaction by the B cells, neutrophils, eosinophils and macrophages are normal reactions to the presence of a foreign body - Demodex Canis and later the bacterial flora in the dogs skin. CONCLUSIONS In piodemodicosis, there is a certain modification of the immunohistochemistry of the skin: the number of the keratinocytes and Langerhans cells decreases and that of the B cells increases as a consequence of the umoral immune response. Immunohistochemical staining reveals an intense process of neutrophils and eosinophils migration as well as a hiperplasia of melanocytes and macrophages.
REFERENCES
1. Caswell J.L., 1995 - Establishment of Demodex canis on canine skin engrafted onto severe combined immunodeficient / beige mice. In: Investigation of the immunopathology of canine demodicosis, pp. 96107. DVSc Thesis, University of Guelph, Guelph, ON, Canada. Caswell J.L., Yager J.A., Ferrer L., Weir J.A.M., 1995 - Canine demodicosis: a reexamination of the histologic lesions and description of the immunophenotype of infiltrating cells. Vet Dermatol 6:9-19. 1995 Ferrer L., Fondevila D., Rabanal R., Ramis A., 1992 - Detection of T lymphocytes in canine tissue embedded in paraffin wax by means of antibody to CD3 antigen. J Comp Path-ol 106:311-314. Nickoloff B.J., Turka L.A., 1994 - Immunological functions of non-professional antigen-presenting cells: new insights from studies of T-cell interactions with keratinocytes. Immunol Today 15:464-469, 1994
2. 3. 4.
406
DE LA MALARIOTERAPIE LA PARAZITICA (1927-2005): PROGRESE N PARAZITOTERAPIE I COMBATERE BIOLOGIC

FROM THE MALARIO-THERAPY TO PARAZITICA (1927-2005): PROGRESS IN THE PARASITO-THERAPY AND THE BIOLOGICAL CONTROL
E. UTEU The present project outstands the progress of the past 8 decades regarding the use of parasites to mans benefit. We have obtained results in parasitotherapy, consisting of parasite samples with oncostatic, anti-parasitic and immunomodelling effects in the treatment of other ailments, such as Crohn disease. Host self-deparasitation occurs under certain conditions, as a consequence of some immunological phenomena, of hypersensitivity and so on. Biological treatment has developed by means of the use of hyperparasites in fighting parasitosis and interspecific hybrids, reflected in the control of ticks and hypodermosis.
n medicina popular, utilizarea paraziilor i substanelor parazitare, pentru efectele lor benefice, se cunoate din vremuri ndeprtate. n terapia anticoagulant i hipotensiv se aplicau pe corpul bolnavilor lipitori (Hirudo medicinalis, parazit facultativ), cu aciune hematofag. Apoi din glandele salivare ale acestora a fost extras hirudina (hemofilina) i utilizat n farmacologie (21). ns un eveniment medical important, cu impact asupra oamenilor de tiin, s-a produs n anul 1927, cnd profesorului J. Wagner-Jauregg din Viena i s-a acordat premiul Nobel pentru descoperirea efectului curativ al hematozoarului palustru (Plasmodium malariae) la pacieni cu demen paralitic, tabes (sifilis nervos) (19). Inocularea bolnavilor cu P. malariae era urmat de un sindrom febril, cu efecte treponemocide. Aceast aciune, recunoscut ca malarioterapie (5, 13, 19), a reprezentat o nou direcionare a cercetrilor parazitologice, n scopul valorificrii paraziilor n terapie sau alte ramuri, cu efecte benefice. La trecerea a opt decenii de la aceast important descoperire, pn la apariia primului volum - Parazitica, n 2005 (39) - despre folosirea paraziilor cu aciuni benefice n activitatea uman au avut loc cercetri i rezultate tiinifice notabile. Din multitudinea rezultatelor obinute n acest interval, n reputate centre de cercetare tiinific, ne vom referi la cele de: 1) parazitoterapie, 2) autodeparazitare i 3) combatere biologic.
407
1. PARAZITOTERAPIA S-a dezvoltat i diversificat treptat, echipe de cercettori recurgnd la utilizarea unor specii de parazii sau extracte parazitare, pentru aciunile lor n oncoterapie, terapie antiparazitar sau n afeciuni cu alt etiologie (22, 18, 19). 1.1. Oncoterapia. Exist parazii cu aciune cancerigen, ns exist i specii a cror prezen n organismul gazdelor are influen antitumoral. Keller i colab. (cit. 39) au observat la oareci i obolani cu boal canceroas, infestai cu Nippostrongylus brasiliensis sau cu Schistosoma mansoni, c s-a produs involuie tumoral. Spaldanova i colab. (31) au constatat c la loturi de oareci infestai experimental cu chiti de Trichinella spiralis sau T. pseudospiralis, crora li s-a administrat, la 7-25 zile p.i., suspensie de celule de melanom B16, s-a produs treptat o regresie tumoral, comparativ cu loturi martor, la care dezvoltarea a fost mai mare. T. pseudospiralis a avut efect antitumoral mai puternic. n 1978, King (cit. 39) a experimentat extracte de mduv osoas i de splin, obinute de la taurine infectate cu Babesia bigemina, Theileria mutans sau/i Anaplasma marginale, pe oareci inoculai cu virus fibrosarcomatos. Rezultatele obinute, comparativ cu oareci martori, injectai cu aceleai extracte de la taurine sntoase, au demonstrat c extractele de la animalele infestate au coninut factori cu aciune citotoxic, antitumoral. Efectul protectiv (antitumoral) cel mai ridicat (81-91%) l-a avut extractul medular de la cazuri cu babesioz; urmate de cele cu theilerioz (58-69%) i foarte redus - cele cu anaplasmoz. Extractele splenice au fost cu aciune citotoxic moderat. Mecanismele n-au putut fi elucidate. Diveri cercettori au experimentat lizate de parazii privind efectele anticanceroase. Miyahara i colab. (23) au obinut un lizat antigenic de Toxoplasma (Toxoplasma lysate antigen) care a fost injectat la loturi de oareci cu tumori cutanate (induse prin injectare de metilcolantren). Tratamentul s-a fcut n dozaje diferite, repetabile la 7 zile. Dimensiunile tumorale cele mai mici, fa de ale martorilor, s-au obinut la loturile injectate cu 100 mg TLA/oarece. Aceiai autori (22) au demonstrat, experimental, c oareci sensibilizai iniial cu TLA induc celulelor splenice inoculate altor animale efecte oncostatice. Autorii recomand folosirea produsului n oncologie veterinar. 1.2. Terapia antiparazitar. Dezvoltarea paraziilor n organismul gazd, simultan cu ali germeni, declaneaz fenomene extrem de diferite: competivitate, potenri patogene, antagonisme .a. Procesele antagonice demonstreaz c unii parazii sau extracte din acetia pot fi utilizai cu efecte terapeutice. Astfel, s-a observat c Toxoplasma gondii inoculat la oareci determin o inhibare a dezvoltrii infeciei cu Plasmodium berghei, de unde cercetrile au urmrit valoarea antiparazitar a lizatelor de Toxoplasma (TLA), de Babesia sau de Theileria.
408
TLA a avut efect antimalaric la oareci (Omata i colab., cit. de 39). Administrat la oareci cu babesioz experimental (B. rodhaini), unic sau asociat cu limfokine de la oareci sensibilizai n prealabil cu Babesia sau Toxoplasma, a avut efect preventiv antibabesian. Comparativ cu martori, supravieuirea oarecilor a fost de 66%, iar la martori n-au rmas supravieuitori. Efectele antibabesian, antimalaric i antitheilerian al TLA se datoresc unor factori multipli celulari i moleculari (24, 29, 39). 1.3. Terapia altor boli. Observaii recente ale unor medici, cercettori din SUA, au relevat c n rile neindustrializate populaiile sunt mai frecvent infestate cu parazii intestinali, ns nu sufer de boala Crohn (ileit, enterocolit cu etiologie incert). Populaiile din rile hiperindustrializate nu sunt infestate frecvent, dar sunt mai afectate de boala Crohn (6, 20, 34). De aici premisa c infestaiile intestinale pot avea aciune antiinflamatoare (42). Khan i colab. (2002) au dovedit c nematode intestinale la oareci au avut efect ameliorant asupra colitelor. La Universitatea din Jova, Summers i colab., n 2005 (34), au experimentat pe pacieni cu boala Crohn, voluntari, Trichuris-terapia. Un numr de 29 de bolnavi au fost infestai cu ou de Trichuris suis, per os, cte 2500 per pacient, repetabil la 3 sptmni, timp de 24 sptmni. S-au monitorizat: tabloul clinic i indicele de activare al bolii (CDAI). Post-terapeutic s-a observat o descretere semnificativ a CDAI, la 79,3% (la 23 din 29 cazuri), fr a induce fenomene adverse. Helminii administrai au redus procesele inflamatorii intestinale, au diminuat rspunsul imun i ameliorat starea, influennd populaiile biocenozei intestinale cu ameliorarea sntii bolnavilor (6, 34, 42). Exist rezultate cu alte sindroame la animale imunosupresive, de hipersensibilitate, n care s-au folosit extracte parazitare cu rezultate favorabile (1, 4, 12, 14, 17, 30). 2. AUTODEPARAZITAREA (SELF-CURE) Este un fenomen medical foarte important prin semnificaie i din perspectiv terapeutic. Uneori, att la om ct i la animale infestate, s-au observat eliminri spontane de helmini intestinali, prin excremente (ascarizi, strongili etc.) avnd drept cauze factori multipli. Se tie, n prezent, c intervin trei grupe de factori: intraspecifici parazitali; intrinseci gazdei i exogeni (ecologici). Unii autori consider c baza antagonismului este de natur imunitar, o stare de hipersensibilitate sau paraimunitate (Eberman, 1961; Dorchies i colab., 1994) sau ali factori. Efectul distrugerii helminilor i al eliminrii spontane de ou degenerate a fost semnalat, n premier mondial, de Gherman (7, 10), la pacieni cu Hymenolepis nana, n faza de convalescen, ca manifestare a strii imunitare. Apoi, Gherman i colab. (8, 9) au urmrit dinamica autovindecrilor spontane n himenolepidoz la om i importana practic medical a prezenei oulor
409
degradate n masa fecal. n acelai sens, Gherman (11) a descris mecanismele patogenetice n giardioz (lamblioz) la om; precum i semnificaia patogen a florei microbiene i faunei parazitare din ductele biliare i intestinale asupra suelor de Giardia (11, 14). Recent, Dorchies i Alzien (4) au semnalat autodeparazitarea ovinelor cu trichostrongilidoze, ca efect al reinfestrilor cu Oestrus ovis. n estroz, se induce o stare imunosupresiv la ovine, dar reinfestarea declaneaz hipersensibilitate succedat de deparazitarea spontan de ali parazii, precum Trichostrongylidae (Haemonchus, Ostertagia). Remarcm faptul c instituirea malarioterapiei (n 1927) a fost urmat peste timp de parazitoterapie i n cazul altor afeciuni: autodeparazitarea n himenolepidoz la om 1960 (7, 9, 10), n trichostrongilidoze la ovine, consecutiv reinfestaiei cu Oestrus ovis (4) i mai recent (2005) prin Trichuris terapia la om n boala Crohn (6, 34). 3. COMBATEREA BIOLOGIC Pe plan mondial s-au diversificat metodele de combatere biologic a parazitozelor i duntorilor la om i animale. Dup decenii de utilizare a chimiopreveniei, au aprut populaii de parazii rezistente, iar concomitent s-au resimit efectele negative ale polurii chimice a ecosistemelor. Combaterea biologic a aprut ca o alternativ necesar (36, 37). Din multitudinea mijloacelor de combatere ne referim la aplicarea experimental a hiperparazitismului i la metodele de sterilizare a unor specii parazite. n acest scop, cercetri premergtoare de biochimie au relevat mijloacele de comunicare intraspecific feromonale (15, 16, 18, 38, 40). 3.1. Hiperparazii n combaterea parazitozelor. Lucrrile iniiale au urmrit o mai exact cunoatere a speciilor hiperparazite i a efectelor patogene ale acestora asupra paraziilor (hipergazde). Apoi s-au experimentat metode de cultivare n laborator i diseminarea lor n mediul exterior n zone populate cu hipergazde. Sunt cercetri care au experimentat aciunea patogen a unor protozoare, n special microsporidii, n controlul trematodozelor la peti (18, 26, 27, 28). La noi n ar s-au fcut experimentri cu microsporidia Unikarion, hiperparazit al formelor larvare (sporociti, redii i cercari) de Diplostomum spathaceum, care paraziteaz melcii, Limnaea spp. n controlul diplostomozei (metacercarioza) petilor. Oel (1991; 1999) a obinut culturi de spori de Unikarion care dispersate n bazine piscicole, populate cu melci infestai cu forme larvare de D. spathaceum, au provocat mortalitate ridicat melcilor i, implicit, ntreruperea ciclului evolutiv al parazitului. Ali autori au experimentat i ali hiperparazii: Palmieri i colab. (28) au folosit Nosema strigeoidea n controlul metacercariozei oculare la peti, cu rezultate favorabile.
410
n controlul anaplasmozei, babesiozei i ectoparazitismului cu insecte hematofage la bovine, n combaterea integrat Programul Poseidon s-au cultivat n laborator himenoptere, Tachininaephagus, parazitoide ale larvelor i pupelor de Stomoxys. Lansate n preajma fermelor de bovine, n decurs de 3 ani (1995-1998), au produs scderea populaiilor de stomoxine i reducerea incidenei anaplasmozei (33). 3.2. Hibridarea interspecific n controlul ectoparazitismului. Dintre metodele de combatere autocidial s-au experimentat pe mai multe specii de acarieni i insecte parazite sau duntoare. Rezultatele n combaterea cpuelor ectoparazite sunt favorabile. n experimentri s-au folosit reproducerea ntre masculi de Boophilus decoloratus i femele de B. microplus, iar ponta acestora a fost cu ou infecunde. Introducerea masculilor hibrizi n biotopuri populate de B. decoloratus a provocat n anii urmtori o scdere semnificativ a numrului populaiei de cpue din aceast specie (32). Hibrizii masculi dintre aceste specii de Boophilus au fost sterili pn la a treia generaie. Dup doi ani de competiie ntre masculi s-a observat, n zon, o reducere important a densitii acestei cpue (25). Rezultate pozitive s-au obinut i n experimentri cu insecte. Prin cuplarea masculilor de Hypoderma bovis cu femele de H. lineatum, masculii hibrizi rezultai au fost infecunzi. Masculi F1 de H. lineatum, obinui n laborator, au fost dispersai n zone populate cu H. bovis care, n competiie, au fecundat o parte dintre femele, a cror pont a fost cu ou sterile. Dup 2-3 ani, n biotopurile respective s-a constatat o reducere important a populaiei i a incidenei hipodermozei la taurine (2, 3). Metodele de combatere biologic sunt mult mai diversificate i se refer i la antagonismul interspecific i intergenic (41), la sterilizarea masculilor, combaterea feromonal, mijloace genetice .a. (33, 35, 40, 41), depind limitele unui referat. Aspectele prezentate privind utilizarea i valorificarea paraziilor n parazitoterapie i combaterea biologic ne conduc la urmtoarele concluzii. CONCLUZII n aproape opt decenii de la aplicarea malarioterapiei n premier mondial (1927), s-au realizat progrese importante care au finalizat cu elaborarea primului volum de Parazitica (2005), ramur a parazitologiei avnd scop utilizarea paraziilor n aciuni benefice activitii umane. Parazitoterapia s-a dezvoltat i diversificat; s-au descoperit parazii i lizate parazitare cu efecte: oncostatice, antitumorale, antiparazitare, imunosupresoare, imunomodelatoare, antiinflamatoare .a. Autodeparazitarea gazdelor, urmat de eliminarea oulor deformate i nsntoirea pacienilor a fost semnalat n premier n himenolepidoz la noi n ar.
411
n combaterea biologic, folosirea hiperparaziilor a avut efecte pozitive n controlul neodiplostomozei (metacercariozei), iar hibridarea interspecific a paraziilor a avut efecte favorabile n controlul hipodermozei i ectoparazitismului cu cpue. Cercetrile i experimentrile autohtone au contribuit la: semnalarea n premier a fenomenelor de autodeparazitare n himenolepidoz la om; aplicarea hiperparazitismului n controlul diplostomozei petilor; studii de sintez asupra parazitoterapiei, hiperparazitismului i elaborarea primului volum de Parazitica.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. Anene B.M., 1989 - Immunosuppression of humoral immune response in canine trypanosomiasis. Microbios Letters, 40, 157, 37-46. Boulard C., 1988 - Hypodermose bovine. Point Vtrinaire, 20, 112, 17-24. Boulard C., Argent G., Hellion E., 1988 - Hypodermose bovine, Diagnostic et traitement. Point Vtrinaire, 20, 112, 105-115. Dorchies Ph., Alzien J.P., 1997 - Loestrose ovine: revue. Rev. Md. Vt. 148, 7, 565-574. Dulceanu N., Terinte C., Mitrea L.I., Polcovnicu C., 2000 - Dicionar enciclopedic de Parazitologie. Edit. Academiei Romne, Bucureti. Elliott D.E., Urban J.F jr., Arga C.K., 2000 - Does the failure to acquire helminthic parasites predisposes to Crohns disease? Faber J. 14, 2848-55. Gherman I., 1960 - Dgnrescence des oeufs dHymenolpis nana observe chez les personnes en voie de gurison spontane. Ann. Parasit. Humaine et Compare, Paris, V, 35, 5/6, 755. Gherman I., Filoti P., Tutu Lidia, Plecias M., Dresher E., Garofeanu M., Sedroiu L., 1961 - Dinamica infestrilor i vindecrilor spontane n himenolepidoz. Igiena, 2, 135-143. Gherman I., Juvara Ana-Maria, 1962 - Semnificaia i importana practic a apariiei oulor degradate n himenolepidoz cu Hymenolepis nana. Pediatria, 5, 417430. Gherman I., 1962 - Dgnrescence spontane des oeufs dHymenolpis nana forme de manifestation de limmunit de cette parasitose. Ann. Parasit. Humaine et Compare, Paris, 4, 513-518. Gherman I., 1963 - Despre unele mecanisme patogenetice i unele manifestri clinice ntlnite n lambliaz. Rev. de Microb. Parazit. i Epid. 4, 353-359. Gherman I., Angelescu C., 1966 - Observations sur la signification pathologique de la flore bactrienne et de la faune parasitaire de la bile. Revue Internat. dHepatologie, Paris, 8. Gherman I., 1993 - Compendiu de Parazitologie Clinic, Edit. All, Bucureti. Gherman I., 1994 - Giardiaza (Lambliaza). Observaii de ultim or. Viaa Medical, 51, 23 dec. Gothe R., 1983 - Pheromones in ixodid and argasid ticks. 1. Ixodid ticks. Vet. Res. Rev. 16-37. Graf J.F., 1975 - Mise en vidence dune pheromone chez Ixodes ricinus. Acarologie, 17, 436-441. Holmes P.H., Mammo E., Thomson A., Knight P.A., Lucken R., Murray P.K., Junnings F.W., Urquart G.M., 1974 - Immunosuppression in bovine trypanosomiasis. The Vet. Record, 27, 86-87. Iacob N., Lctuu M., Beratlief C., Mihalache G., Ceianu I., 1975 - Combaterea biologic a duntorilor. Edit. tiinific, Bucureti. Iftimovici R., 1994 - Istoria medicinei. Edit. All, Bucureti.
412
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41. 42. Khan W.I., Blennerhasset P.A., Varghese A.K., 2002 - Intestinal nematode infection ameliorates experimental colitis in mice. Infect. Immun. 70, 5931-37. Licperta E., 1958 - Farmacologie veterinar. Edit. Agro-Silvic, Bucureti. Miyahara K., Tose S., Sakurai H., Igarashi I., Saito A., Hirose T., Suzuki N., 1992 - Role of adherent spleen cells in the induction of cytotoxic activity by Toxoplasma lysate antigen (TLA). J. Vet. Med. Sci., 54, 4, 629-635. Miyahara K., Yoko N., Sakurai H., Igarashi I., Sakata M., 1992 - Antitumor activity of Toxoplasma lysate antigen against methylcholanthrene induce tumor-Bearing rats. J. Vet. Med. Sci., 54, 2, 221-228. Ogawa R., Sato M., Hirose T., Suzuki N., 1985 - Preventive effect of Toxoplasma lysate antigen (TLA) on fatal infection with mouse piroplasma. Jpn. J. Vet. Sci., 47, 225-236. Osburn R.L., Knipling E.F., 1982 - The potential use of sterile hybrid Boophilus ticks as a supplemental eradication technique. J. Medical Entomology, 19, 6, 637-644. Oel V., 1991 - Preliminary data concerning the biological control of fish th Diplostomosis by hyperparasiting. In: European Assoc. Fish Pathologist. V Conf., Budapest. Oel V., 1999 - Cercetri asupra diplostomozei la peti n mediul piscicol amenajat i natural din Delta Dunrii. Tez de doctorat. U.S.A.M.V. Cluj-Napoca. Palmieri J.R., Cali A., Heckmann R., 1976 - Experimental biological control of the eye fluke, Diplostomum spathaceum, by a protozoan hiperparasite Nosema strigeoidea. J. Parasitol. 62, 2, 325-326. Sato M., Hori Z., Hirose T., Suzuki N., 1985 - Immune effect of TLA (Toxoplasma lysate antigen) on cattle against Theileria sergenti infection. Jpn. J. Vet. Sci. 47, 6, 921-926. Silegem M., Darji A., De Baeltselier P., 1991 - In vitro simulation of immunosuppression caused by Trypanosoma brucei. Immunology, 73, 246-248. Spaldanova R., Oeleny S., Zemberyova A., 1990 - Trichinella spiralis and th Trichinella pseudospiralis as inhibitors of tumors growth. VII Congr. Intern. Parasitol. Bull Soc. Franc. Parasitol. (resumes), 8, 1, 14. Spickett A.M., Malan J.R., 1978 - Genetic incompatibility between Boophilus decoloratus and B. microplus and hybrid sterility of australian and south african B. microplus. Anderstepoort. J. Vet. Res., 45, 3, 149-153. Squarzoni C., 2001 - Lutte biologique contre stomoxes des bovins 0020 la reunion: lexemple de Poseidon Vtrinaire. Thse de doctorat. Ecole Vt. Toulouse. Summers R.W., Elliott D.E., Urban J.F. jr., Thompson R., Weinstock J.V., 2005 Trichuris suis therapy in Crohns disease. Gut, 54, 87-90. uteu E., 1993 - Parazitoterapia probleme actuale i perspective. Simp. Actualiti n patologia animalelor domestice, XX, Cluj-Napoca, 149. uteu E., 1994 - Consideraii asupra hiperparazitismului ca fenomen biologic i metod de combatere. Rev. Rom. Med. Vet. 4, 2, 121-126. uteu E., 2003 - Combaterea biologic, posibil alternativ a chimiopreveniei unor helmintoze la animale. Rev. Rom. Med. Vet. 13, 1, 55-60. uteu E., Cozma V., 2004 - Parazitologie clinic veterinar. Vol. I, II, Edit. Risoprint, Cluj-Napoca. uteu E., 2005 - Parazitica. Edit. Risoprint, Cluj-Napoca. Toma M., Unguruan I., Costea V., Costea Gheorghina, 2003 - Studiu comparativ privind combaterea duntorului Hyphantria cunea cu insecticide biologice i insecticide chimice. Rev. Rom. Parasitol. XIII, 1, 103-105. Yusuf J.N., Piekarski G., Pelster B., 1980 - Concurrent infection of Trichinella spiralis and Toxoplasma gondii in mice. Z. Parasitenkd., 62, 230-240. Weinstock J.V., Summers R., Elliott D.E., 2004 - Helminths and harmony. Gut, 53, 7-9.
413
TREATMENT OF ANAEROBIC INFECTIONS

TRATAMENTUL INFECIILOR ANAEROBE
Gh. CRISTEA C.S.V. uletea P. CURA, V. NASTASA U.S.A.M.V. Iai Although the existence of anaerobic bacteria has known for over a century, it is only relatively recently that their importance as agents of disease in both humans and animals has been realized. Our increased awareness stem largely from improvements in anaerobic bacteriology and increases in the number of clinical bacteriologic specimens processed for isolation of anaerobic bacteria. A number of excellent reviews highlighting the importance of anaerobic infection in persons have appeared over the past 15 years. Lately, reports of the microbiologic and clinical features of anaerobic infection in animals have also appeared. Currently, it is accepted that anaerobic infection occurs frequently in animals, is associated with distinctive clinical characteristics, and requires specific treatment that in many instances differs from that required for treatment of aerobic infections.
Key words: anaerobic infections, antibiotics, therapy, animals
MEDICAL MANAGEMENT OF ANAEROBIC INFECTION Antimicrobials are generally administered concurrent with surgery for treatment of anaerobic infection. Unless surgical debridement is very thorough, infected tissues and bacteria often remain at the original wound site. Antimicrobials are administered primarily to eradicate the residual bacteria and to prevent spread into adjacent healthy tissues. Generally, antibiotics are administered at high doses and for prolonged times because blood supply and delivery of antibiotics to devitalized tissues is often unpredictable. High concentrations of bacteria, a characteristic of abscesses, promote synthesis of enzymes capable of inactivating antibiotics. High serum antibiotic concentrations create a favorable concentration gradient for penetration of antibiotics into chronic, often walled-off, sites of infection. In most instances, selection of antibiotics for treatment of anaerobic infection is largely empiric. Results of anaerobic culture, because of difficulties inherent to culture methodology and to isolation and identification of multiple species of bacteria, are often slow to return. Therefore, initial selection of
414
antimicrobials is based on results of cytologic examination of wound specimens together with clinical suspicion of anaerobic infection. Technical difficulties also preclude routine determination of antibiotic selection. Therefore, a priori knowledge of antibiotic spectrum of activity and likely anaerobic bacterial resistance patterns becomes particularly important for optimal medical management of anaerobic infection. Awareness of antibiotic tissue penetrability is also required, especially when treating infections in relatively inaccessible sites such as the central nervous system and walled-off abscesses. Table 1 lists antimicrobial useful for treatment of anaerobic infection as well as their predicted spectrum of activity against important anaerobic pathogens. Five classes of antibiotics are generally considered to be consistently effective against anaerobic bacteria, both in vitro and in vivo. Penicillin remains the antibiotic used most widely for routine treatment of anaerobic infection. Alternatives to penicillines are usually selected when antibiotic resistance is encountered or for increased tissue penetration. These antimicrobials include choramphenicol, clindamycin, metronidazole and cefoxitin. Penicillins Penicillins are effective against most anaerobic pathogens, with one notable exception, and bactericidal, inhibiting cell wall synthesis in both aerobic and anaerobic bacteria. Excretion of penicillins occurs primarily via a combination glomerular filtration and renal tubular secretion. Penicillin/induced toxicity, uncommon in animals, usually resemble acute anaphylaxis. Nausea and vomiting, which may represent an acute hypersensitivity reaction, are observed relatively frequently when concentrated solutions of penicillin G are rapidly administered intravenously. Dilution of the drug concentration and slowing the infusion rate usually resolve these signs. Penicillin G is the prototype penicillin for treatment of anaerobic infection. For treatment of severe infections, penicillin G should be administered intravenously in order to achieve effective serum concentrations. For clostridia infections and infections caused by anaerobic streptococci, penicillin G remains the drug of choice. Penicillin G also has good activity against most species of Actinomyces and Fusobacterium and some species of Bacteroides. However, several species of Bacteroides, especially B. fragilis, are uniformly resistant to penicillins. In the case of B. fragilis, production of -lactamases is chromosomally mediated. Penicillin resistance is less predictable in other strains of Bacteroides but has been observed intermittently in nearly all, including two important veterinary pathogens, B. melaninogenicus and B. assacharolyticus. Bacteroides resistance to penicillins appears to be increasing, both in veterinary and human isolates. B. fragilis is isolated relatively infrequently from animals, suggesting that penicillin resistance may also be relatively common amongst nonfragilis isolates. Because antibiotic resistance in Bacteroides is also conferred by plasmid transfer, antibiotic selection pressure is probably responsible for much of
415
the increase in penicillin resistance. Resistance to penicillins also appears to be increasing among some strains of Fusobacterium and Clostridium isolated from humans. Several strains of Fusobacterium resistant to penicillin have also been isolate recently from cattle. The anaerobic spectrum of activity of aminopenicillins (ampicillin, amoxicillin) closely parallels that of penicillin G. Because amoxicillin achieves consistently higher serum concentrations, it generally is preferred over ampicillin for both parenteral and oral administration. Amoxicillin given orally is more completely absorbed than ampicillin, resulting in less disruption of normal gastrointestinal bacterial flora. Antistaphylococcal penicillins, such as oxacillin and cloxacillin, are considered less effective than penicillin G against most anaerobic bacteria. Expanded spectrum penicillins, including carbenicillin and ticarcillin, may in some instances be more effective against B. fragilis but in general offer little advantage over other penicillins for treatment of anaerobic infection. Newer broad-spectrum penicillins (for example, azlocillin, piperacillin, mezlocillin), although very effective against Pseudomonas and other gramnegative bacilli, are roughly equivalent to ticarcillin and carbenicillin in activity against anaerobic bacteria, including B. fragilis. One attempt to expand the antibacterial spectrum of penicillins has been to combine them with -lactamase inhibitors, since -lactamases mediate most bacterial resistance to penicillins. Clavulanic acid, which by itself has little antibacterial activity, has been used most often for this purpose. When amoxicillin is combined with potassium clavulanate, its antibacterial spectrum is expanded to include penicillinase-producing staphylococci and many strains of bacteria in the Enterobacteriaceae family. Activity against obligate anaerobes, including most strains of B. fragilis, is improved significantly. Clindamycin A lincosamide antibiotic1, clindamycin is primarily bacteriostatic, exerting its antibacterial effect by binding to the bacterial 50S ribosomal subunit and inhibiting synthesis of peptide bonds. Clindamycin is well/absorbed orally, reaching peak serum concentrations 2 to 4 hours after administration. Tissue concentrations of clindamycin generally exceed serum concentrations. Effective therapeutic concentrations are achieved in most body tissues, including bone and joints, with the exception of the central nervous system, where concentrations are low. At least 60 per cent of clindamycin undergoes hepatic metabolism and biotransformation, producing some metabolites that are more active than the parent compound. Some active clindamycin is excreted unchanged in urine, although biliary excretion is the primary route of elimination. For these reason, clindamycin should be used cautiously in patient with hepatic dysfunction. Pseudomembranous colitis (a potentially fatal disease of the large bowel caused by antibiotic-induced colonic overgrowth of cytotoxic strains of Clostridium difficile).
416
An important characteristic of clindamycin is its ability to penetrate to effective concentrations in walled-of abscesses, surpassing concentrations achieved by florphenicol and penicillins. In addition, clindamycin is selectively concentrated within leukocytes by an energy-dependent process, reaching concentrations 5 to 50 fold greater than serum concentrations. This has important implications for treatment of chronic, persistent infections characterized by intracellular localization of bacteria. Bacteria sequestered within leukocytes are protected, since few antibiotics, with the exception of clindamycin, rifampin, and to a lesser degree, florphenicol are capable of penetrating into white blood cells. Berg and coworkers determined experimentally that clindamycin was more effective than its parent compound, lincomycin, for treatment of anaerobic infections n cows. Metronidazole Metronidazole2 has excellent activity against many anaerobic bacteria. Reduction of metronidazole`s nitro group by susceptible bacteria possessing nitroreductases results in formation of short-lived, highly reactive intermediates that disrupt bacterial DNA. This reaction precedes best under low redox conditions (typical of anaerobic infection) in susceptible bacteria possessing low redox electron transport proteins. Under these conditions, electrons are readily available for nitro reduction; under aerobic conditions, oxygen competes for electrons, inhibiting the reduction reaction. Onset of antibacterial activity is abrupt, as opposed to the more gradual onset of action of penicillin and clindamycin. Metronidazole is very well absorbed orally, with a serum half-life of 3 to 13 hours; bioavailability after oral administration cows ranges from 50 to 100 per cent. Tissue distribution is quite wide; effective concentrations are attained in bone, bile, cerebrospinal fluid, and brain parenchyma. Metabolism occurs primarily in the liver and major routes of excretion are via urine and feces. Metronidazole should be used cautiously in animals with hepatic disease. Adverse reactions (largely gastrointestinal disturbances) from metronidazole are uncommon in humans. Occasional neurologic abnormalities, including peripheral neuropathy, seizures, and ataxia, have been observed in human patients receiving high doses of metronidazole or prolonged treatment. Previously, few adverse effects were associated with administration of metronidazole to cows. Recently, however, serious neurotoxicity has been observed both clinically and experimentally in a number of cows treated with high doses of metronidazole. In a few cases, doses administered were close to a currently recommended dose, 66 mg per kg per day. Onset of neurologic signs was usually acute, often preceded for 12 to 24 hours by anorexia. Characteristic neurologic abnormalities have included severe ataxia, vertical or rotatory nystagmus, and occasionally seizures. After drug discontinuation, most cows have slowly recovered over a period of 1 to 2 weeks.
417
Metronidazole is unique in that it is the only antimicrobial currently available with consistent bactericidal activity against B. fragilis and most other strains of Bacteroides. In addition, metronidazole is active against other gramnegative and gram-positive spore-forming anaerobes. Activity is poor against Actinomyces, Propionobacterium, and microaerophilic streptococci (technically, not anaerobes). Metronidazole is generally considered to be completely inactive against aerobic bacteria, though there is evidence to suggest that metronidazole, when used to treat experimentally created mixed infections, has activity against coliform bacteria; anaerobic bacteria may convert metronidazole to intermediates active against coliform bacteria. Effective tissue penetration and consistent bactericidal activity make metronidazole the drug of choice for severe anaerobic infections, particularly those involving Bacteroides. Specific indications for use of metronidazole include anaerobic osteomyelitis, anaerobic endocarditis, anaerobic brain abscesses, and intra-abdominal abscesses that cannot be completely eradicated surgically. Cephalosporins Cephalosporins3 are a broad class of bactericidal antibiotics possessing a lactam ring and exhibiting antibacterial activity similar to that of penicillins. They are divided into three categories (generations) based on time of development, structural characteristics, and spectrum of activity. In general, first-generation cephalosporins are most active against gram-positive bacteria, whereas thirdgeneration cephalosporins have increased activity against gram-negative pathogens and reduced effectiveness against gram-positive bacteria. Most cephalosporins, with the exception of cefaperazone (biliary excretion), are eliminated primarily via the kidneys. Adverse reactions are relatively uncommon and tend to vary widely amongst various cephalosporins. Cephalosporins are relatively active against most species of anaerobic bacteria except B. fragilis. This is especially true of first-generation cephalosporins (cephalothin, cephapirin, cefazolin, cefadroxil). Isolates of Bacteroides from domestic animals have been shown to have high rates of resistance to first-generation cephalosporins. Bacteroides resistance to cephalosporins is mediated by a constitutive -lactamase. On the other hand, cefoxitin, a cephamycin antibiotic classified as a second-generation cephalosporin, is -lactamase resistant and is effective against most strains of B. fragilis. Cefoxitin is currently considered the most effective cephalosporin for treatment of anaerobic infections, especially those caused by Bacteroides. Broadspectrum activity, including activity against multiresistant strains of bacteria in the Enterobacteriaceae family, is another advantage of cefoxitin. For these reason, cefoxitin is considered useful for monotherapy of mixed infections containing obligate anaerobes and coliform bacteria. In the authors experience, cefoxitin has been effective in treatment of mixed infections of bone and lungs in cows.
418
Imipenam Imipenam5, the first of a new class of -lactam antibiotics known as carbapenams, has significant activity against most medically important species of bacteria, including multiresistant strains of Pseudomonas. Imipenam undergoes extensive renal tubular metabolism and is therefore combined with cilastatin, an inhibitor of renal tubular depeptidase. The combination results in much higher urine concentrations of imipenam and also reduces nephrotxicity associated with administration of imipenam alone. Activity of imipenam against anaerobic bacteria exceeds that of all other lactam antibiotics and is considered equivalent to the activity of clindamycin and metronidazole. Obviously, a potent broad-spectrum, relatively nontoxic antibiotic such as imipenam offers important advantages for treatment of serious mixed infections, particularly when culture and susceptibility information is not known. Although it has good efficacy in human beings, there has been little clinical experience with this antibiotic in veterinary medicine. Antibiotics with Limited Effectiveness Against Anaerobes Anaerobic bacteria are uniformly resistant to aminoglycoside antibiotics4, due to the fact that transfer of aminoglycosides across the bacterial cell membrane requires enzymes that are lacking in anaerobic bacteria. Polymyxin antibiotics are also ineffective, for reasons similar to those for aminoglycosides. Widespread resistance to tetracycline has greatly limited its usefulness in treatment of anaerobic infection. Hirsch and colleagues found tetracycline resistance in a number of Bacteroides isolates from veterinary patients. Sulfonamides also have limited efficacy for treatment of anaerobic infection because in environment typical of anaerobic infection, by product of cellular breakdown, including para-aminobenzoic acid, are present in abundance. Many of these substances competitively inhibit the activity of sulfonamides. Trimethoprim was also shown to be clinically ineffective against anaerobic bacteria. Sulfonamide with trimethoprim performed poorly in an anaerobic infection treatment model and failed to reduce abscesses formation or produce cures. Despite evidence of in vitro activity against obligate anaerobes isolated from animals, trimethoprim-sulfamethoxazole was found clinically to be an ineffective treatment for anaerobic infections in calves and foals and was associated with a significant number of treatment failures. SUMMARY Successful management of anaerobic infection first requires an accurate diagnosis. Cytologic examination of wound exudates and inspection for characteristic clinical clues greatly facilitates an accurate initial diagnosis of anaerobic infection. Knowledge of antimicrobial activity against specific
419
anaerobic pathogens is essential, since antibiotic susceptibility information is not routinely available. Whenever possible, antimicrobial and surgical therapy should be combined in managing anaerobic infections. Florphenicol, clindamycin, and metronidazole provide the most consistently reliable activity against pathogenic anaerobes, including Bacteroides. Penicillins are also generally effective, except for treatment of infections caused by penicillinase-producing strains of Bacteroides. Cephalosporins are not considered drugs of choice for anaerobic infections, although cefoxitin may in some instances be useful as monotherapy of mixed infections containing obligate anaerobes and coliform bacteria. Aminoglycosides and sulfonamides are ineffective and should be avoided for treatment of anaerobic infection.
REFERENCES
1. 2. 3. 4. 5. Berg, J.N. et al.,1994 Clical models for anaerobic bacterial infections of cows and their use in testing the efficacy of clindamycin and lincomycin. Am. J. Vet. Res., 40:1299-1306. Nastasa, V, 2005 - Farmacologie veterinar I, 145-170 Papich, M.G., 2004 Clinical pharmacology of cephalosporin antibiotics. J. Am. Vet. Med. Assoc., 184:344-347 Pechere, J.C., Delisk, R., 1993 Early selection of antibiotic in anaerobic infections. Surgery, 93:134-144. Tally, F.P., Jacobus, N.V., 2003 Susceptibility of anaerobic bacteria to imipenem. J. Antimicrob Chemother 12 (Suppl D): 47:51.
420
CLASSIC USE OF LOCAL ANAESTHETICS IN A BALANCED ANAESTHESIA PROTOCOL

UTILIZAREA ANESTEZICELOR LOCALE CLASICE N PROTOCOLUL DE ANESTEZIE ECHILIBRAT
N. MUNTEANU1, P. CURA2, Gh. CRISTEA1, V. NASTASA2 1 D.V.S.A. Vaslui 2 U.S.A.M.V. Iai A combination of local or locoregional anaesthesia with general anaesthesia has several very important advantages: 1) A satisfactory surgical plane of anaesthesia can be obtained with much lesser doses of general anaesthetics (volatile or intravenous agents). This means less cardiovascular and respiratory depression, a more stable anesthesia,less metabolisation efforts, quicker recoveries. 2) The phenomenon know as "winding-up" of the central nervous system (CNS) will be at least less pronounced. Winding up results in a prolonged sensitization of the CNS and hyperalgesia. With the combination of the local techniques and a general (light) anaesthesia the postoperative analgesia will be better/longer or at least easier to control with additional medication. Complications are few if the recommended maximum dosis of the local anaesthetics are respected.
Key words: local anaesthetics, analgesia, general anaesthesia.
The advantages of this philosophy cannot be overestimated and are particularly attractive and easy to apply in practice. The classic agents are the more short acting (1-2 hrs) lidocaine (1% to 2%)1 with a fast (5 min) onset and the longer (4-6 hrs) acting bupivacaine2 (0.25%-0.7%) with a slow (20 min) onset. Both agents can be mixed together. The possibilities include: a) topical application; b) tissue infiltration; c) ring block; d) nerve blockade; e) intravenous regional anaesthesia; f) spinal anaesthesia (epidural, subdural). Off all these techniques topical application, tissue infiltration, ring blocks are very easy to do but their potential benefit is often unrecognised for reasons difficult to explain. Intravenous regional anaesthesia is also an easy procedure. Epidural anaesthesia is in the reach of each practitioner. 1. Topical application Even if a general anaesthesia procedure is done, noxious output from the operated area can be reduced by application of local anaesthetic ointments, liquid solutions or sprays (lidocaine)3. Remember that the intact skin is not penetrated except following application of a special formula of prilocaine (EMLA).
421
Application on nasal and oral mucous membranes, esophagus, trachea and urogenital mucosae is possible. Straightforward simple applications during surgical procedures are e.g., splash of lidocaine on the spermatic cord during male castration and on the ovarian pedicle during ovariectomy. Local anaesthetics do not retard wound healing and an increase in the tendency to diffuse bleeding has not been documented as a problem. 2. Infiltrations/ring block These remain a very simple but often neglected possibility. Aspiration before injection will limit the risk for intravascular injection. Examples of a possible use are e.g., removal of small skin tumors, suturing skin wounds, surgery on the toes (distal phalanx amputation, interdigital wounds or cysts, wounds etc), incisional infiltration of subcutis and fascia before a caesarean or a laparotomy in critical cases. 3. Intravenous regional anesthesia (Bier's block) Although a simple and effective technique for distal extremity surgery not exceeding 1.5 hrs this anaesthetic technique is not always favoured by some surgeons because of the lack of bleeding in the operated area. It can be very useful for relatively minor surgery on the extremities of critical or debilitated patients. Using a tourniquet and/or cuff combined with intravenous lidocaine an effective analgesia after 5-10 minutes in all tissues distal to the tourniquet/cuff can be obtained, sensibility returns within minutes after release of the tourniquet or cuff. 4. Plexus Brachialis block This is an excellent technique to be used, e.g., for radius/ulna surgery. It is a block of the n. axillaris, n. medianus, n. ulnaris, n. musculocutaneus, n. radialis following successful infiltration of the area of the plexus brachialis situated at the level of the shoulder joint at the medial side of the scapula. The exact quantities of local anaesthetic to use are not described and depend on the size of the patient and the toxic dosis (e.g., 2-20 ml lidocaine 1 or 2% mixture). Electrolocation of the plexus with a nerve stimulator is a useful way to obtain maximum block with a small amount of local anaesthetic. If successful there will be analgesia and motoric paralysis (not appreciated when this block is performed under anaesthesia). Analgesia extends from the elbow to distal. Successful block will be apparent when conducting general anaesthesia: low concentration of inhalation agent necessary, stable vital parameters. Complications are rare but pneumothorax, nerve trauma, bleeding and intravascular injection are possible. 5. Intercostal blocks These are used before the start of a thoracotomy (most logic approach for "preventive") or when starting to close the thorax; the technique can also be used
422
for analgesic support when managing rib fractures. The technique consists of: injection in the intercostal muscles at the level of the caudal aspect of the rib close to its origin 0.2 to 1 ml 2% lidocaine (or bupivacaine, or a mix of bupivacaine and lidocaine) and this in two intercostal spaces before and two spaces after the thoracotomy incision; this can be done from outside or from inside the thorax. 6. Spinal anesthesia Mostly used is epidural anesthesia. Accidental puncture of the duramater and collection of cerebrospinal fluid however is possible when attempting an epidural injection. This will happen more often in the cat were the dural sac is longer than in the dog. The combination of an epidural anaesthesia and general anaesthesia is a very good technique for surgery caudal to the ribs (orthopedics, soft tissues, and caesareans). It allows a light level of general anaesthesia, a stable plane of anaesthesia, and post operative pain relief. In general local anaesthetics are used but they can be combined with opioids. The local anaesthetic can be combined with an opioid for epidural injection. They will have an interesting and practical synergistic analgesic effect. This way a good and prolonged postoperative analgesic effect can be obtained. Addition of 0.1 mg/kg methadone or morphine can give up to 10 hours of postoperative analgesia (motoric effects having disappeared). Local anaesthetics offer the opportunity to obtain prolonged postoperative pain relief by using a long acting preparation like bupivacaine, by repeating the described applications (e.g., re-doing an epidural), by combining with other drugs (e.g., epidural with local anaesthetic and an opioid), or by continuous infusion in the epidural space via an epidural catheter. Incisional and intraabdominal application of lidocaine preceding closure of laparotomy wounds has been described in human and in dogs as a mean of postoperative analgesia. INTRAVENOUS LIDOCAINE IN BALANCED ANAESTHESIA PROTOCOL AND POSTOPERATIVE PAIN MANAGEMENT Intravenous lidocaine has been shown to reduce the minimum alveolar concentration (MAC) of isoflurane (and halothane) in several species including dogs. For this reason it can be used in a balanced anaesthesia protocol for critical patients. Furthermore it has distinct analgesic properties and can be used as and adjunct in iv infusion to manage difficult cases with postoperative pain; it is claimed particularly useful in protocols for visceral pain and for more chronic pain. Dose iv: 1.5-3 mg/kg followed by a loading dose of 5-200 mcg/kg/min.
423
SUPPLEMENTARY USEFUL ASPECTS OF LIDOCAINE THERAPY Lidocaine as an antiarrhythmic1 agent is classically used to treat ventricular extrasystoles. Dogs presented with gastric volvulus often show these rhythm disturbances. Lidocaine therapy can both treat/prevent ventricular extrasystoles and offer at the same additional analgesia during and after surgery. There is also a large body of evidence from animal experiments that supports the potential of lidocaine as an anti-oxidant and inflammatory modulator useful in preventing reperfusion injury. Therefore it seems attractive to consider it for the treatment/ prevention of systemic inflammatory response (SIRS) and multiple organ dysfunction syndrome (MODS). Although conclusive clinical evidence is lacking lidocaine infusions are also used for their prokinetic properties to prevent/treat postoperative ileus (human, horses)4. Propulsive activity at the level of the proximal duodenum is enhanced.
REFERENCES
1. 2. 3. 4. B.H. Cassuto, R.W. Gfeller, 2003 - Use of intravenous lidocaine to prevent reperfusion injury and subsequent multiple organ dysfunction syndrome, J vet emergency and critical care 13 (3), 2003, 137-148 R.E. Carpenter, D.V. Wilson, A.T. Evans, 2004 - Evaluation of intraperitoneal and incisional lidocaine or bupivacaine for analgesia following ovariohysterectomy. Veterinary Anaesthesia and Analgesia 31 (1), 2004, 46-52. L.J. Smith, E. Bentley, A. Shih, P.E. Miller, 2004 - Systemic lidocaine infusion as an analgesic for intraocular surgery in dogs: a pilot study Veterinary Anaesthesia and Analgesia 31 (1), 2004,53-61 P. Brianceau, H. Chevalier, A. Karas, M.H. Court, L. Bassage, C. Kirker-Head, P. Provost, M.R. Paradis, 2002 - Intravenous lidocaine and small-intestinal size, abdominal fluid and outcome after colic surgery in horses J Vet Intern Med 16, 736-741
424
PHARMACOCLINICALS CONSIDERATIONS ON THE EVOLUTION OF CARDIOVASCULARES VARIABLES AND ACID-BASE BALANCE UNDER THE COMBINATION ACEPROMAZINEBUPRENORPHINE IN DOG
CONSIDERAII FARMACOCLINICE ASUPRA EVOLUIEI VARIABILELOR CARDIOVASCULARE I A ECHILIBRULUI ACIDO-BAZIC SUB COMBINAIA ACEPROMAZIN BUPRENORFIN LA CINE
V. NASTASA1, P. CURA1, N. MUNTEANU2, FL. CURA1, Mariana GRECU1 1 U.S.A.M.V. Iai 2 D.V.S.A. Vaslui The objective of this paper was to appreciate the intensity of the modification of principals variables heart-respirators under the anaesthesia with a combination between acepromazine - buprenorphine at dog.
Key words: anesthesia, acepromazine, buprenorphine, dogs.
MATERIAL AND METHOD

The researchers were realised on 16 dogs healthiness from an ordinary breed. Before starting the experiment on the body of the dog was introduced a catheter intravenous in the femoral artery and cephalic vein previous brachial for prelevation the proved of blood for analysis the pressures of blood gases (PaCO2, PaO2, PvCO2, PvO2), pHa, pHv, HCO-3a, HCO-3v using Compact 2 AVL analyser. To measuring the arterial blood pressure was used an electronic apparatus noninvasive (made in Tokyo, Japan). The cardiac frequency was appreciated using a precordial stethoscope. The respiratory frequency was determinate by measurement of "trip of thorax". Acepromazine (Vetranquil, solution 1%)2 was administered after the recording the basic values in dosage 0.4 mg/kc intravenous during over than 30 seconds. The measurement of cardiorespiratory variables was repeated at 15 minutes after the administration of acepromazine. Immediately after the realising the second set of measurements was administered intravenous the first dose of buprenorphine1, respectively 0.02 mg/kc during the same interval by 30 seconds. The measurements of cardiorespiratory variables were realised afterwards 15 minutes. The second dose of buprenorphine respectively 0.18 mg/kc was administered after measurements the total doses cumulate were 0.2 mg/kc. The measurements were realised after 15 minutes that the injection was done.
425
The scale used to appreciate the level of sedation was imagined after the degree of conscious and maintenance of laterally recumbency. So, was noted with 0-dog conscious, 1-dog semiconscious and laterally recumbency inconstant and 2-dog unconscious, laterally recumbency permanent. The statistic evaluation was realised using the ANOVA test (variance analysis) for repeated measurements. So, for a value of P<0.05, the results were considerate significant. The data are presented like X SX.
RESULTS AND DISCUSSIONS The level of sedation was significant more high after the administration the combination acepromazine-buprenorphine comparatively with the bases values. This is present in a rapport by 23% after the administration of acepromazine (0.5 mg/kc the level 1st), next in percent by 89% after the administration intravenous of the fist dose of buprenorphine (0.01 mg/kc, the second level) and into a percent by 100% after the administration of the next dose of buprenorphine (0.2 mg/kc, the second level). Instead, was recorded an important reducing of respiratory frequency into a ratio by 59% after the administration intravenous of acepromazine (Table 1).
Table 1 The evolution of modifications of cardiorespiratory variables and blood gases in 16 dogs after administration the combination acepromazine-buprenorphine Variables PAS (mm/Hg) PAD (mm/Hg) PAM (mm/Hg) FC (beats/min.) FR (respirations/min.) pHa (U) PaCO2 (mm/Hg) PaO2 (mm/Hg) H2CO-3a (mEq/l) pHv (U) PvCO2 (mm/Hg) PvO2 (mm/Hg) H2CO-3v (mEq/l) Values for ACE Buprenorphine Buprenorphine ANOVA references (0.4 mg/kc) (0.02 mg/kc) (0.2 mg/kc) P value 154 15 118 12 117 8 113 6 < 0.001 92 14 75 11 * 72 10 65 10 < 0.001 120 13 97 12 * 90 9 88 9 < 0.001 98 14 96 21 80 25 69 18 < 0.01 48 35 25 11 * 23 22 7.41 0.04 33.0 3.2 * 87.9 5.4 19.6 1.9 7.38 0.02 * 38.3 2.5 * 40.9 4.0 21.5 1.5 17 13 7.40 0.02 33.9 3.7 90.9 9.8 21.0 1.7 7.38 0.02 * 39.6 2.9 * 40.7 2.3 22.4 1.5 * < 0.01 < 0.001 < 0.01 NS NS < 0.001 < 0.001 NS < 0.05 7.42 0.02 7.42 0.02 31.8 3.0 28.8 4.7 87.8 5.9 90.0 90.2 21.1 2.0 19.0 2.6 7.40 0.01 7.40 0.01 34.9 3.6 34.6 2.8 41.0 3.8 41.0 5.0 21.8 1.5 21.0 1.6
*-the significant difference (P<0.05) versus the value immediately previously. The data are presented like X Sx; PAS-the systolic heart pressure; PAD-the diastolic heart pressure; PAM-the media heart pressure; FC-the heart frequency; FR-the respiratory frequency; pHa-the arterial pH; PaCO2-the tension of CO2 arterial; H2CO-3a-the concentration in bicarbonate arterial; pHv-the venous pH; PvCO2-the tension of CO2 venous; PvO2-the tension of oxygen; H2CO 3v-the concentration in venous bicarbonate; NS-insignificant.
426
The majority of variables modifications of haemodinamic function are recorded after the administration of acepromazine. Although, the media heart rate are reduced into a ratio by 11 % after the administration of acepromazine. This value doesnt significant different versus the basis values. Also, the arterial pressure was reduced after the administration of the acepromazine (ACE). Buprenorphine doesnt induced modifications significant statistic in variables of haemodinamic function excepting the heart rate that recorded a reducing with 7% after the administration the high level of buprenorphine (Table 1). CONCLUSIONS The results of these experiment proved that the association between acepromazine-Buprenorphine in a dose clinical underlined it is well tolerate from point of view of haemodinamic function. The reducing of the data recorded in the heart pressure had media intensity and could be attributed to draining of simpatico-activity. This activity could be growled during the period of measurements of the basic values and after the administration of acepromazine. Also, the aditioning of Buprenorphine into a dosage until 10 times over than clinical usually dosage are determinate the obtaining of an important sedative effect without an essential damage of heart-respirators variables at heartless dogs unpreanesthesiated. A range of dosage varied between 0.2-0.5 mg/kc acepromazine associated with 0.02-0.2 mg/kc buprenorphine administered intravenous could be considered satisfactory after the results obtained in our experiments.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. Short, C.E., 1987 Pain, analgesics, and related medications. In: Short CE, ed. Principles and practice of veterinary anaesthesia. Boltimore: Williams & Wilkins Co, 28 46. Both, N.H., 1982 Neuroleptanalgesics, narcotic analgesics and analgesic antagonists. In: Booth N.E., McDonald LE, eds. Veterinary pharmacology and therapeutics. 5th ed. Ames, Iowa: Iowa State University Press: 267 - 296.
427
EVALUATION OF ETOMIDATE AND ALFENTANYL IN DOG ANAESTHESIA

EVALUAREA ANESTEZIEI CU ETOMIDAT I ALFENTANIL LA CINE
V. NSTAS, Maria-Magdalena NECHIFOR, Mariana GRECU U.S.A.M.V. Iasi The usefulness of etomidate2 for short periods of anaesthesia (e.g. perform biopsy, skin suture, radiography) is related both to its short duration of action and the absence of significant side - effects. The aim of this study has been to monitor the course of anaesthesia using a combination of etomidate and alfentanyl1.
Key words: anaesthesia, etomidat, alfentanyl, dog.

30 apparently healthy dogs were studied. They were allocated to three groups. Dosage regimes for etomidate and alfentanil were respectively: group 1 (n = 22): 1 mg/kg etomidat and 4 g/kg alfentanyl; group 2 (n = 20): 1 mg/kg etomidat and 8 g/kg alfentanyl; group 3 (n = 18): 1,5 mg/kg etomidat and 4 g/kg alfentanyl. Doses were administered by intravenous route. For each group, the heart rate and respiratory frequency, the level and duration of muscle relaxation and analgesia were recorded. Assessment of muscle relaxation was made qualitatively. It was graded as deep when the animal was immobile and moderate when some spontaneus movements (tail, legs) were observed. Analgesia was considered to be marked when no response was evoked by a painful stimulus (prick with a needle) and when the interdigital reflex was absent Analgesia was considered to be moderate when the interdigital reflex was again recorded. In addition, rotation of the eyeball and the times between administration and the first righting of the head and between administration and the first attempt to walk were measured.
RESULTS AND DISCUTION Results for relaxation, analgesia and recovery parameters are summarized in Table 1. When the 30 anaesthetized dogs were considered, 4 cases of excitation were observed, which necessitated and additional ketamine administration (3,5 mg/kg). Most of the excitated dogs were very nervous prior the induction of anaesthesia as a results of prolonged travel. In all three groups, bradycardia occurred after the first minute postinjection: in the first group, return to control
428
values occured before the end of anaesthesia (13th minute). When marked bradycardia occurred, several dogs displayed arrhytmias. Other side-effects were: vomiting (n = 1) and recovery excitation (n = 3). This study confirm previously reported data. The normally recommended dosage regim (group 1) is generally sufficient for most purposes. In 9,5% of the cases, doses of etomidate had to be increased by 50 %. This combination of drugs produces only slight cardiovascular effects and has the shortest duration of action. In contrast, when the dose of fentanyl is doubled, analgesia is prolonged by 4 min but the depressant effects on the cardiovascular system become a limiting factor. The dose levels used in the third group led also to undesirable side-effects (the depressant effect on the cardiovascular system is the most important and, in addition, awakening is delayed).
Tabel 1 Respose (duration in minutes or minutes after administration) of dogs to the administration of a combination of etomidate and alfentanyl 1 2 (n = 22) (n = 20) Etomidate (mg/kg) 1,0 1,0 Alfentanyl (g/kg) 4,0 8,0 Muscle relaxation Deep 84 73 Moderate 11 3 12 2 Analgesia Marked and moderate 98 14 1* Eyball rotation 4 5 67 Awakening 11 4 104 First righting of the head 12 9 14 7 First attempt to stand 17 2 19 6 Walking 21 9 22 8 Values are expressed as mean SD * Significant (p < 0,05) with group 1 as control Groups 3 (n = 18) 1,5 4,0 92 16 1* 15 3* 7 5* 19 1* 25 3* 30 6*
CONCLUSSION The following: main advantages of etomidate alfentanil combination are the
a short duration of action; sufficient analgesia for minor surgery; few side-effects on the cardiovascular system which makes this combination useful in cases of shock. The main disadvantages are: excitation in about 10% of dogs which necessitates ketamine administration;
429
the occurrence of panting, which makes radiographic examination difficult especially in the large dogs; the volume of the administered dose is important (6,5 ml/kg) and necessitates and intravenous catheter; the combination s expensive.
REFERENCES
1. 2.
Arndt J.O., Bednarski B., Parasher C., 1986 Anesthesiology 64, 345. Janssen P.A.J. et al., 1975 Archives of International Pharmacodynamics and therapeutics 214, 96.
430
OBSERVAII PRIVIND EFECTUL UNOR MEDICAMENTE ANTIPARAZITARE ASUPRA PARAMETRILOR HEMATOLOGICI LA OVINE CU FASCIOLOZ
ON THE EFFECT OF SOME ANTIPARASITIC DRUGS ON THE HAEMATOLOGICAL PARAMETERS IN OVINES WITH FASCIOLIASIS
E. PURICE C.S.V. Vidra, jud.Vrancea P. CURA, Geta PAVEL U.S.A.M.V. Iai In order to apply an antiparasitic therapy with different drugs, from a herd of ovines infested with Fasciola hepatica, a number of seven flocks (n=35) were made up. To establish the degree of the anaemia reduction and of the influence on leukocytemia and trombocytemia, before administration and 30 days after therapy, haematological measurements were performed. Results of the research showed up the fact that the benzimidazolic substances (Fasciocid Triclabendazol 10%; Ovizol 300 Albendazol 300mg/bolus) had the highest efficiency, implying a complete reduction of anaemia (leukopenia and trombocytopenia have been observed as well). Also, it has been observed that the same substance (Albendazol) administrated as bolus (Ovizol 300) is more efficient than when its administrated as a drinkable solution (Helmizol 2,5). The compound Fascioxamid has diminished neither the anaemia degree nor the leukocyte count. Levamisol has not reduced the anaemia degree, but due to its immunomodulator effect, determines the restoration of the physiological leukocytemia.
Key words: fascioliasis, sheeps, benzimidazolic therapy, anaemia, leucopenia, trombocytopenia
In zonele cu ploi abundente, datorit imposibilitii de eradicare a limneelor (gazdele de intermediare ale fasciolelor), infestrile i reinfestrile conduc la instalarea fasciolozei cronice, manifestat prin anemie, cahexie, colangit hiperplazic i ciroz hipertrofic cu acumulare de lichid ascitic, pierderile economice fiind importante (3, 9). In aceste condiii, este necesar utilizarea unor medicamente care s distrug att fasciolele adulte, ct i formele tinere aflate n migraie prin parenchimul hepatic ctre canaliculele biliare (11). Eficiena medicamentelor antiparazitare fasciolocide este variabil, dependent de substana activ, concentraia acesteia, timpul de aciune a medicamentului i mecanismul de aciune asupra paraziilor. Substanele antiparazitare fasciolocide produse n ultimii ani sunt mai puin toxice i au eficacitate crescut asupra fasciolelor n toate stadiile de dezvoltare (9).
431
MATERIAL I METOD
Intr-un efectiv de ovine dintr-o regiune cu terenuri fasciologene (Cdimani, judeul Vrancea) s-a diagnosticat clinic i s-a confirmat morfopatologic fascioloza. In luna octombrie, 2005, oile au fost supuse terapiei cu diverse substane antiparazitare fasciolocide, urmrindu-se gradul de reducere a strii de anemie i influena asupra leucocitemiei i trombocitemiei. Substanele antiparazitare utilizate i modul lor de administrare sunt prezentate n tabelul 1 (2, 5, 9, 11). Animalele tratate au fost grupate n 7 loturi de cte 5 animale (35 oi): 6 loturi au primit medicaie antiparazitar diferit, iar un lot a constituit martorul, nefiind supus terapiei antiparazitare. Inainte de admnistrarea medicamentelor i la interval de 30 zile dup terapie, de la animalele investigate s-au recoltat probe de snge pentru evaluarea eritronului (numrul de eritrocite, concentraia de hemoglobin, hematocritul), a leucocitemiei i trombocitemiei (4, 6, 7, 8, 10).
Tabelul 1 Substanele antiparazitare administrate la ovinele cu fascioloz investigate Nr. crt. 1. Preparatul administrat Fasciocid Substana activ Forma i modul de administrare Doza folosit 5 ml/ 50kg g.v. Stadiile parazitare distruse ou, fasciole tinere, adulte trematode adulte trematode adulte
Triclabendazol Soluie buvabil, 10% per os Suspensie, per os Boluri, per os Soluie injectabil, s.c. Boluri, per os Soluie injectabil, s.c.
2. 3. 4. 5.
Helmizol 2,5
Albendazol 2,5% Ovizol 300 Albendazol 0,3 g/un bol de 4 g Romavermectin Avermectin B1 plus (prep.n 1% + omologare) Clorsulon 10% Fascioxamid Rafoxanid
3 ml/10 kg g.v. 2 boluri/animal
0,1 ml/5 kg g.v. trematode adulte 1 bol/20 kg g.v. Fasciole tinere mai mari de 6 spt. 0,25 ml/10 kg Imunog.v., 3 zile stimulator
6.
Levamisol
Levamisol 7,5 %
REZULTATE I DISCUII Rezultatele obinute sunt prezentate n tabelul 2. Preparatul Fasciocid (s.a. Triclabendazol), administrat sub form de soluie buvabil, a determinat o reducere marcant a gradului de anemie, cu revenirea parametrilor eritrocitari n limite normale (valori medii): E de la 5,94 la 9,64 x 106/l, Hb de la 8,6 la 11,8 g/dl, iar Ht de la 28 la 32%.
432
433
Se observ totodat un puternic efect leucopenic (leucocitele totale se reduc de la 8,43 la 3,40 x 103/l) i trombocitopenic (trombocitele se reduc de la 3,6 la 1,1 x 105/l). Aciunea exercitat de acest medicament asupra oulor de parazit, asupra fasciolelor tinere i adulte, i asigur eficacitatea (9). Preparatul Ovizol 300 (s.a. Albendazol), administrat oral sub form de boluri, 0,3 g Albendazol/bol, a fost cel mai eficient dintre preparatele administrate, determinnd restabilirea complet a numrului de E (de la 6,43 la 9,94 x 106/l), a Hb (de la 8,8 la 14 g/dl) i a Ht (de la 27 la 39 %); leucocitemia s-a diminuat, reducndu-se de la 11,20 la 7,50 x 103/l (fiind n limite normale), iar trombocitemia a cobort sub limita fiziologic inferioar (de la 2,70 la 0,80 x 105/l) (4). Dei acioneaz doar asupra formelor adulte de Fasciola hepatica, acest preparat devine eficient prin eliberarea i absorbia treptat a substanei active, cu distrugerea lent a paraziilor pe msura migrrii n canaliculele biliare, nainte ca noi forme adulte s devin hematofage. Preparatul Helmizol 2,5 (s.a. Albendazol), suspensie buvabil 2,5 %, administrat per os, nu a avut un efect evident asupra eritronului, hematocritul meninndu-se sczut (28 %), dei E i Hb au nregistrat o uoar cretere (de la 6,43 la 7,54 x 106/l, respectiv de la 9,2 la 10,2 g/dl). Leucocitele totale din sngele periferic au diminuat uor de la 9,05 la 8,45 x 103/l, iar trombocitele s-au redus remarcabil, de la 6,7 la 2,5 x 105/l. Eficiena acestui preparat este redus comprativ cu a preparatului Ovizol 300, dei conine aceeai substan activ. Preparatul Romavermectin B1 plus, o combinaie ntre un antibiotic cu aciune asupra nematodelor i artropodelor, i clorsulon, o sulfamid cu aciune asupra trematodelor adulte, este eficient asupra endo- i exoparazitozelor. Administrat lotului de ovine cu fascioloz, acest preparat a exercitat un efect asupra eritronului, diminund uor gradul de anemie (E au crescut de la 5,80 la 8,47 x 106/l, Hb de la 8,6 la 12,2 g/dl, iar Ht de la 28 la 30 %). Totodat s-a observat o diminuare a numrului de leucocite circulante de la 10,3 la 6,6 x 103/l i a numrului de trombocite de la 3,5 la 2,1 x 105/l. Preparatul Fascioxamid (s.a. Rafoxanid), administrat per os, sub form de boluri, n-a determinat reducerea gradului de anemie; dimpotriv, boala a evoluat, accentundu-se starea de anemie (valori mai mici pentru E: 6,23, respectiv 6,17 x 106/l, Hb: 10,3, respectiv 9,3 g/dl i Ht : 28, respectiv 25 %) i meninndu-se leucocitoza (nr. de L peste media normal a speciei : nainte de tratament 9,48 x 103/l, dup tratament 9,05 x 103/l). Valoarea medie normal pentru ovine adulte este de 8 x 103/l (Jain, 1986). De asemenea, s-a constatat o uoar cretere a numrului de trombocite de la 3,3 la 5,1 x 105/l (rmnnd ns n limitele normale ale speciei 2,5-7,5 x 105/l) (4).
434
Dei acest preparat, derivat al salicil-anilidei, este cunoscut ca eficient (96%) fa de trematodele tinere de peste 6 sptmni (9), efectul nu a fost observat la oile luate n studiu, probabil datorit aciunii reduse asupra fasciolelor adulte hematofage, deja ajunse n canaliculele biliare. Preparatul Levamisol (s.a. Levamisol, izomerul levogir al Tetramisolului), dei nu este trematodocid, s-a administrat unui lot de ovine cu fascioloz, avnd n vedere efectul su imunomodulator. Intr-adevr, Levamisolul nu a redus starea de anemie (E, Hb, Ht meninndu-se sczute : 6,52 x 106/l, 9,4 g/dl, Ht 27 %) ; s-a constatat ns o diminuare a numrului de leucocite (de la 9,85 la 6,25 x 103/l) i absena modificrii numrului de trombocite (3,4 x 105/l nainte de terapie, 3,2 x 105/l dup terapie). Este cunoscut faptul c Levamisolul restabilete funcionalitatea celulelor imunocompetente (polimorfonucleare, macrofage, limfocite) (1). Lotul de ovine cu fascioloz la care nu s-a administrat nici un medicament antiparazitar, a evideniat o accentuare a gradului de anemie prin diminuarea valorilor parametrilor eritrocitari (nr. de E a continuat s scad de la 6,60 la 5,02 x 106/l, Hb de la 9,6 la 8,6 g/dl, iar Ht de la 30 la 26 %) i meninerea numrului de leucocite ctre limita superioar a speciei (10,3 x 103/l la prima examinare i 11,0 x 103/l la a doua examinare, dup 30 zile de evoluie a bolii). Numrul de trombocite a rmas nemodificat (3,50, respectiv 3,20 x 105/l) (4). CONCLUZII 1. La ovinele infestate cu Fasciola hepatica, substanele benzimidazolice: Ovizol 300 (avnd ca substan activ Albendazolul) i Fasciocid (preparat n omologare, avnd ca substan activ Triclabendazolul) au aciune evident de restabilire a valorilor normale ale eritronului (E, Hb, Ht) i au ca efect secundar trombocitopenia. 2. Preparatul Helmizol 2,5, administrat per os, ca soluie buvabil, dei are aceeai substan activ, nu are aceeai eficien ca Ovizol 300, administrat per os sub form de boluri. 3. Romavermectin B1 plus (s.a Clorsulon - sulfamid) a determinat o uoar reducere a gradului de anemie la oile cu fascioloz, precum i o diminuare a leucocitemiei. 4. Preparatele Fascioxamid (s.a Rafoxanid derivat al salicilanilidei) i Levamisol (s.a. izomerul levogir al tetramisolului derivat imidazo-tiazolic) administrate ovinelor cu fascioloz au meninut starea de anemie i chiar au accentuat gradul de anemie al animalelor bolnave (E, Hb, Ht au continuat s scad). 5. Aciunea imunostimulatoare a levamisolului s-a evideniat prin diminuarea numrului leucocite totale, rezultat al accenturii marginaiei i a diapedezei leucocitare, cu infiltrarea esutului hepatic traumatizat.
435
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Dobrescu, D., 1989 Farmacoterapie practic, vol.1, Ed. Medical, Bucureti. Dulceanu, N., Terinte Cristina, Mitrea I.L., Polcovnicu Carmen, 2000 - Dicionar Enciclopedic de Parazitologie, Ed. Academiei Romane, Bucuresti. Iacob, Olimpia, 2002 Diagnosticul bolilor parazitare la animale, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. Jain, N.C., 1986 - Schalm's Veterinary Hematology. Lea-Febiger, Philadelphia. Ingeborg, B., 1985 - Farmacodinamie pentru medici veterinari, Ed. Ceres, Bucuresti. Kerr, M.G., 1989 - Veterinary Laboratory Medicine. Clinical Biochemistry and Haematology. Blackwell Scientific Publication, Oxford. Kondi, V., 1981 - Laborator clinic de hematologie. Ed. Medical, Bucureti. Manolescu, N. i colab., 1999 Tratat de hematologie animal, vol I, Ed. Fundaiei Romnia de mine, Bucureti. Mitrea, I.L. 2002 Boli parazitare la animale, Ed Ceres, Bucureti. Parvu Gh., 1992 Supravegherea nutriional-metabolic a animalelor, Ed.Ceres, Bucureti. Suteu, I., Varctic N., Cozma V., 1996 - Diagnosticul i tratamentul parazitozelor la animale, Ed. Ceres, Bucuresti.
436
OBSERVAII PRIVIND EFECTUL UNOR SUBSTANE ANTIPARAZITARE ASUPRA ENZIMELOR SERICE DE ORIGINE HEPATIC LA OVINE CU FASCIOLOZ
ON THE EFFECT OF SOME ANTIPARASITIC SUBSTANCES ON THE SERUM ENZYMES OF HEPATICAL ORIGIN IN OVINES WITH FASCIOLIASIS
E. PURICE C.S.V. Vidra, jud.Vrancea P. CURA, Geta PAVEL, V. BOGHIAN U.S.A.M.V. Iai Different antiparasitic drugs were administrated to 6 flocks of ovines with fascioliasis, each flock being made of 5 sheeps. A flock has been kept as a non-treated witness (Fasciocid; Ovizol 300; Helmizol 2,5; Romavermectin B1 plus; Fascioxamid; Levamisol). Before and after 30 days from drug administration Serum transaminase (AST, ALT and GGT) and alkaline phosphatase (ALP) were measured in all investigated animals. Before the application of the therapy with various antiparasitic substances, high averaged values for AST and ALP and averaged values between the physiological limits for ALT and GGT have been measured in ovines with fascioliasis. After the antiparasitic substance administration, in most of the cases AST (which reflects the hepato-cellular dysfunction), kept staying at a high value, over the superior limit of reference, although by comparation with its initial values, it oscillates. The seric level of ALP (indicator of some moderate destruction of the liver parenchyma, but mainly of the hepato-biliary dysfunction) kept growing after the therapy with the following antiparasitic substances: Fasciocid, Ovizol 300, Helmizol, Romavermectin and Levamisol. An exception makes the therapy with Fascioxamid which determines the return of the ALP level at its physiological limit. ALT increased over the initial value, sometimes over the physiological superior limit, and GGT (chronicity indicator of the hepatocellular damage) kept staying within the physiological limits or dropped bellow the inferior limit of reference (for the therapy with Fasciocid and Levamisol).
Key words: fascioliasis, sheeps, benzimidazolic therapy, AST, ALT, GGT, ALP
In fascioloza ovin, n faza de stare a bolii, examenul paraclinic evideniaz o serie de modificri ale profilului biochimic hepatic: creterea transaminazelor, creterea fosfatazei alcaline i scderea proteinelor serice. Aceste modificri se datoreaz distruciilor masive ale parenchimului hepatic i ale canaliculelor biliare (1, 3, 6).
437
In prezenta lucrare se urmrete efectul substanelor antiparazitare asupra transaminazelor serice i asupra fosfatazei alcaline, n condiiile n care acestea prezint modificri importante n cursul evoluiei fasciolozei. MATERIAL I METOD
Cercetrile s-au efectuat ntr-un efectiv de ovine cu fascioloz (diagnosticat clinic i paraclinic). De la 35 de animale grupate pe loturi de cte 5 animale s-au recoltat probe de snge nainte i dup aplicarea terapiei cu diverse substane antiparazitare. Din probele de snge s-au determinat enzimele: AST (aspartat aminotransferaza), ALT (alanin aminotransferaza), PA (fosfataza alcalin) i GGT (gama-glutamiltransferaza), utiliznd analizatorul semiautomat EOS 880 Plus i chituri specifice. Lotul 1 a fost tratat cu Fasciocid (s.a. Triclabendazol 10%), administrat sub form de soluie buvabil, 5 ml/50 kg g.v. Lotul 2 a fost tratat cu Ovizol 300 (Albendazol 0,3mg/bol de 4 g), administrat per os, 2 boluri/animal. Lotul 3 s-a tratat cu Helmizol 2,5 (s.a. Albendazol 2,5%), administrat per os, 3 ml/10 kg g.v. Lotul 4 s-a tratat cu Romavermectin B1 plus (s.a. avermectin 1% i clorsulon 10%), soluie injectabil, administrat s.c., 0,1 ml/5 kg g.v. Lotul 5 a fost tratat cu Fascioxamid (s.a. Rafoxanid), administrat per os, un bol/ 20 kg g.v. Lotul 6 s-a tratat cu Levamisol 7,5%, administrat sub form de soluie injectabil, s.c., 0,25 ml/10 kg g.v., 3 zile (4, 6, 7). Lotul 7 nu a fost supus terapiei antiparazitare i a constituit lotul martor.
REZULTATE I DISCUII Rezultatele obinute sunt prezentate n tabelul 1. Se remarc faptul c la toate animalele supuse investigaiilor, inainte de administrarea medicaiei antiparazitare, enzimele serice AST i PA au valori crescute peste limita superioar a speciei. AST aspartat aminotransferaza - este o enzim ubicvitar, dar se gsete predominant n ficat, muchi i eritrocite. La oile cu fascioloz, migraia fasciolelor tinere prin parenchimul hepatic determin distrucii masive celulare, astfel c enzimele se elibereaz n cantitate mai mare n snge (2, 5). PA fosfataza alcalin este, de asemenea, o enzim larg rspndit n organism, dar se gsete n special n osteoblaste, ficat i peretele intestinului subire. Dup definitivarea creterii, originea acestei enzime serice rmne predominant hepatic. PA seric este un indice al funciei hepato-biliare. Bolile parenchimului hepatic determin creteri moderate ale PA, pe cnd cele ale canaliculelor biliare, cauzeaz creteri accentuate ale acestei enzime serice (2, 5). La loturile de animale cu fascioloz luate n studiu, valorile medii pentru AST au avut creteri moderate sau accentuate (ntre 193,7 U/l i 292 U/l) fa de valorile de referin (49-123 U/l), n timp ce valorile medii pentru PA au prezentat i valori n limitele fiziologice (102,1 U/l), precum i creteri (intre 182,3 i 302,4 U/l) fa de valorile de referin (26,9-156,1 U/l) (8).
438
In fascioloz, creterea PA se explic prin aciunea mecanic-iritativ a fasciolelor adulte din canalele biliare, care determin imflamaie cronic, colangit i ciroz pericanalicular; se poate produce i obstruarea canaliculelor biliare de dimensiuni mici, creterile PA fiind drastice n acest caz (6). ALT i GGT, nainte de terapie, la oile cu fascioloz investigate, au prezentat valori n limitele fiziologice. ALT a prezentat valori medii ntre 32,4 i 43,2 U/l, ctre limita superioar a valorilor de referin ale speciei (14,8-43,8 U/l). GGT a avut valori medii ntre 19,8 i 38,3 U/l, extrem de variabile, dar ncadrndu-se n limitele de referin (19,6-44,1 U/l) (8). ALT, dei este considerat fr semnificaie la erbivore (fiind de mare valoare diagnostic n afeciunile hepatocelulare la om i carnivore), ea a fost determinat cu scopul evidenierii efectului substanelor antiparazitare (2). GGT are semnificaie clinic pentru bolile hepatice, inclusiv la erbivore, nregistrnd creteri ntr-o faz mai avansat a bolii, cnd celelalte enzime ncep s scad (2, 5).
Tabelul 1 Valorile medii ale enzimelor serice la ovinele tratate cu substane antiparazitare fascilocide Parametrii biochimici investigai Momentul exam. AST ALT PA GGT biochimic U/l U/l U/l U/l I 258,2 33,6 302,4 19,8 Lot 1 (n=5) Fasciocid II 179,4 41,9 327,5 10,1 I 215,0 32,4 102,1 29,3 Lot 2 (n=5) Ovizol 300 II 183,3 42,6 222,4 35,4 I 292,3 32,6 233,4 38,3 Lot 3 (n=5) Helmizol 2,5 II 442,8 46,4 312,7 40,9 Romavermectin I 218,3 43,2 189,4 33,3 Lot 4 (n=5) B1 plus II 225,4 52,4 224,5 24,4 I 276,7 33,5 182,3 26,9 Lot 5 (n=5) Fascioxamid II 254,0 45,7 126,7 30,2 I 260,3 38,5 281,2 23,6 Lot 6 (n=5) Levamisol II 258,9 45,6 316,3 18,4 Lot 7 (n=5) I 193,7 41,9 231,0 31,3 II 195,7 44,8 107,3 20,5 Valori de referin (Merck, 1998) 49-123 14,8-43,8 26,9-156,1 19,6-44,1 I - Inainte de tratam; II La 30 zile dup tratament Lot de animale Preparatul antiparazitar administrat
In urma terapiei cu Fasciocid, AST se reduce dar nu revine n limite fiziologice, PA continu s creasc uor, ALT crete, dar rmne n limitele fiziologice, iar GGT se reduce sub limitele fiziologice (fig.1a). Dup terapia cu Ovizol 300, de asemenea, se reduce AST fr a reveni n limitele fiziologice, iar PA crete de la valori fiziologice peste limita superioar a speciei; att ALT, ct i GGT nregistreaz creteri reduse fr a depi limitele fiziologice de referin (fig.1b).
439
Dup 30 zile de la administrarea preparatului Helmizol 2,5, AST i PA continu s creasc mult peste limita superioar a speciei, uoare creteri nregistrnd i ALT i GGT (GGT nedepind limita superioar de referin) (fig.1c).
Nivelul seric al enzim elor hepatice la ovine tratate cu Fasciocid
Nivelul seric al enzim elor hepatice dupa terapia cu Ovizol 300
U/l 350 300 250 200 150 100 50 0 AST ALT PA GGT
U/l 250 200

Inainte de tratament Dupa 30 zile
150 100 50 0 AST ALT PA GGT
Inainte de tratament Dupa 30 zile
a
Nivelul seric al enzim elor hepatice dupa terapia cu Helm izol
b
Nivelul seric al enzim elor hepatice dupa terapia cu Rom averm ectin B1 plus
U/l 500 400 300 200 100 0 AST ALT PA GGT Inainte de tratament Dupa 30 zile
U/l 250 200 150 100 50 0 AST ALT PA GGT Inainte de tratament Dupa 30 zile
c
Nivelul seric al enzim elor hepatice dupa terapia cu Fascioxam id
d
Nivelul seric al enzim elor hepatice dupa terapia cu Levam isol
U/l 300 250 200 150 100 50 0 AST ALT PA GGT Inainte de tratament Dupa 30 zile
U/l 350 300 250 200 150 100 50 0 AST ALT PA GGT Inainte de tratament Dupa 30 zile
f e Fig.1. Modificarea nivelului seric al enzimelor hepatice dup terapia cu substane antiparazitare fasciolocide.
Dup tratamentul cu Romavermectin B1 plus, AST s-a meninut la un nivel ridicat, ca i PA, peste limitele fiziologice superioare, ALT a crescut de la valori normale peste limita superioar a speciei, iar GGT a sczut uor rmnnd ns n limitele fiziologice de referin (fig.1d).
440
Dup administrarea preparatului Fascioxamid, s-a nregistrat o uoar reducere a AST, cu meninerea valorii medii peste limita superioar, precum i reducerea Pa la valori medii care se ncadreaz n limitele fiziologice de referin. ALT a crescut, depind limitele fiziologice, iar GGT a crescut uor fr a depi limita superioar a speciei (fig.1e). In urma terapiei cu Levamisol, AST s-a meninut la un nivel ridicat peste limita superioar, PA a continuat s creasc, ALT a crescut, de asemenea, peste limita superioar de referin, iar GGT a sczut uor sub limita inferioar a speciei (fig.1f). Oile cu fascioloz din lotul martor, care n-au fost tratate cu medicaie antiparazitar, au prezentat o valoare crescut a AST, cu meninerea aceleiai valori pe parcursul a 30 zile, o uoar cretere a ALT, o uoar reducere a GGT i o scdere evident a fosfatazei alcaline, cu revenirea n limitele fiziologice (fig.2). AST, ca i n cazul lotului martor netratat, la cele ase loturi supuse tratamentului cu substane antiparazitare fasciolocide, se menine la un nivel seric ridicat, peste limita superioar fiziologic , dei s-au nregistrat i valori mai sczute, sau creteri accentuate fa de valoarea iniial. Astfel, preparatele Fasciocid i Ovizol 300 se dovedesc mai eficiente n privina diminurii distruciilor celulare hepatice, n timp ce Helmizol 2,5, dimpotriv a accentuat distruciile tisulare.
Nivelul seric al enzim elor hepatice la ovine cu fascioloza - lot m artor netratat
U/l 250 200 150 100 50 0 AST ALT PA GGT Prima investig. Dupa 30 zile
Fig.2. Modificarea nivelului seric al enzimelor hepatice la oile cu fascioloz nesupuse terapiei cu medicaie antiparazitar
ALT, avnd iniial valori n limite fiziologice, att la lotul martor netratat, ct i la loturile supuse terapiei antiparazitare, dup 30 zile, a nregistrat uoare creteri n limitele fiziologice sau peste acestea, aspect ce se coreleaz cu modificarea AST. PA a nregistrat creteri i meninerea peste valorile normale de referin la toate loturile supuse investigaiei, excepie fcnd lotul martor i lotul tratat cu Fascioxamid, la care fosfataza alcalin a sczut la valori care se ncadreaz n limitele fiziologice ale speciei. In acest caz, s-ar putea presupune c Fascioxamid care distruge formele tinere de Fasciola hepatica aflate n migraie, determin o diminuare a procesului inflamator hepatic, astfel c nivelul seric al PA se restabilete. In acelai mod, procesul patologic celular, chiar n absena terapiei,
441
urmeaz un proces rezolutiv la nivelul parenchimului hepatic, iniial distrus, i abia ntr-un stadiu mai avansat al bolii, probabil peste mai mult de 30 zile, fasciolele adulte produc colestaz, colangit i, ca urmare o nou cretere a PA. GGT nu a nregistrat la nici unul dintre loturile investigate creteri peste limitele fiziologice, ceea ce arat c evoluia procesului patologic nu a fost suficient de ndelungat pentru a determina creterea nivelului seric al acestei enzime. CONCLUZII 1. Inainte de aplicarea terapiei cu diverse substane antiparazitare, ovinele cu fascioloz au nregistrat valori medii crescute pentru AST i PA i valori medii n limitele fiziologice de referin pentru ALT i GGT. 2. Dup administrarea substanelor antiparazitare diferite la cele 6 loturi de ovine investigate, AST i PA, n majoritatea cazurilor, rmn la valori ridicate, peste limitele superioare de referin, dei fa de valorile iniiale se nregistreaz unele oscilaii (n sensul creterii sau scderii). 3. Creterea nivelului seric al PA se accentueaz dup terapia cu substane antiparazitare: Fasciocid, Ovizol 300, Helmizol, Romavermectin i Levamisol; face excepie terapia cu Fascioxamid, care determin revenirea nivelului PA n limite fiziologice, ca i n cazul lotului martor netratat. 4. Sub aciunea substanelor antiparazitare, dup 30 de zile de la administrare, ALT nregistreaz o cretere fa de valoarea iniial, uneori peste limita superioar fiziologic, iar GGT rmne n limite fiziologice sau nregistreaz o scdere sub limita inferioar de referin (n cazul terapiei cu Fasciocid i Levamisol). 5. Modificrile variabile observate dovedesc faptul c preparatele antiparazitare utilizate n experiment au eficien n terapia fasciolozei, dar prezint i un anumit grad de hepatotoxicitate.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Dulceanu, N., Terinte Cristina, Mitrea I.L., Polcovnicu Carmen, 2000 - Dicionar Enciclopedic de Parazitologie, Ed. Academiei Romane, Bucuresti. Ghergariu, S., AL. Pop, L. Kadar, Mariana Spnu, 2000 Manual de laborator clinic veterinar, Ed.All, Bucureti. Iacob, Olimpia, 2002 Diagnosticul bolilor parazitare la animale, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. Ingeborg B., 1985 - Farmacodinamie pentru medici veterinari, Ed. Ceres, Bucuresti. Kerr, M.G., 1989 - Veterinary Laboratory Medicine. Clinical Biochemistry and Haematology. Blackwell Scientific Publication, Oxford. Mitrea I.L., 2002 Boli parazitare la animale, Ed Ceres, Bucureti. Suteu, I., Varctic N., Cozma V., 1996 - Diagnosticul i tratamentul parazitozelor la animale, Ed. Ceres, Bucuresti. ***, 1998 - Merck Veterinary Manual, Eight Edition, Merck-Co., Inc. Whitehouse Station, N.J., USA.
442
CASTRATION OF DOG BY SCROTAL SEPTUM ECTOMY

S. CIOBANU, I. BURTAN, M. FNTNARU, L.C. BURTAN, Roxana TOPAL U.S.A.M.V. Iai Castration (orchiectomy) is one of the more frequently performed surgical procedures in veterinary practice. The male gonads ablation is the main purpose and can be done in many ways. One of this is the ectomy of scrotal septum and partial ectomy af scrotum. The first step is to identify and distinguish the scrotal septum with two hemostatic forceps placed anterior and posterior. Vertical traction is then applied and the scrotum forms a wrincle that will be exciset with surgical scissor. By this procedure the testis are exteriorizated and operator is able tu performe an open or close castration. The surgical wound is sutured with a simple continous or interrupted suture.
Castration of the dog is a routine intervention with many indications. Although the orhidectomy tehnique is well known the operation has postoperative complications. Those postoperative complications depends on applied method and acces way that we chose for testis ablation. In this paper work we presented the tehnique that involves the ectomy of scrotal septum. This acces way has many advantages and can be applied on heathy dogs and on dogs with testis and scrotal diseases. MATERIAL AND METHOD
The researche was perfomed on 30 dogs that were castrated by this tehnique in Surgycal Clinic of Veterinary Medicine Faculty. Equipment: Standard general surgical pack and suture. For general anesthesia we used xylasin 2% and ketamin 10% in proper doses, and for local anesthesia we used xilin 2% infiltrated in scrotum. The animal is placed in dorsal recumbency and prescrotal area is aseptically prepared. Operatory tehnique: - Identify and distinguish the scrotal septum with two hemostatic forceps placed anterior and posterior (foto 1). - By excision of the wrinkle that formed under those two hemostatic forceps we executated the ectomy of scrotal septum (foto 2). The wrinkle is formed by a part of scrotum and scrotal septum. If the hemostatic forceps are placed in a large distance one from another, the wrinkle will be bigger. To avoid tension of the suture we have to leave enough skin after excision. After the extomy the testis are exteriorizated and we can proced an close castration (foto 3). We assured
443
hemostasis using transfixation ligature on the spermatic cord, with absorbable suture material (foto 4, 5). - Surgical wound is sutured by using a two-layer suture (foto 6). The first suture it was a simple interrupted suture with absorbable material and the second was an intradermic simple continuous suture.
Foto 1. Identify and distinguish the scrotal septum
Foto 2. Ectomy of scrotal septum
Foto 3. Exteriorization of testis
Foto 4. Ligature on the spermatic cord and testis ablation
Foto 5. Aspect of surgical wound afer the first layer suture
Foto 6. Final aspect of surgical wound
444
RESULTS AND DISCUSSIONS By ectomy of scrotal septum and partial ectomy of scrotum we remove the unnecesary tissue. To avoid tension of the suture we have to leave enough skin after excision. The purpose of the two-layer suture is to draw the skin near the subcutaneous tissue, avoiding exsudat apparition. We recomand intredermic suture to prevent licking or chewing the suture. The ectomy tehnique is relative simple and can be performed on heathy dogs and on dogs with testis and scrotal diseases. CONCLUSIONS We evaluated a new surgical acces way for orhiectomy at dogs This new acces way by ectomy of scrotal septum is easy to perform, faster and more secure avoiding the risks of postoperative complications Comparing with other tehniques, this one can be performed in any situation that requires orhiectomy.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Birchard S., Sherding R. Small Animal Practice, W.B. Saunders Co., Philadelphia Bojrab M.J., Birchard S., Tomlinson J., 1990 Current Tehniques in Small Animal Surgery, Lea and Febiger, Philadelphia Burtan I., 1991 Curs de propedeutica si tehnica chirurgicala. C.M. Inst.Agr. Iasi Cristea I. si colab., 1983 Propedeutica chirurgicala si tehnica operatorie veterinara. Ed. did. si pedag. Bucuresti Gourley I.M., Clare Gregory, 1992 Small Animal Surgery, Gower Medical Publishing, New York Grigorescu I., 1973 Propedeutica si medicina operatoare. Ed. did. si pedag. Bucuresti Igna C., 2005 Tehnici chirurgicale veterinare. Ed. Brumar. Mialot J.P. Pathologie de la reproduction chez les carnivores domestiques. Ed. du Point Veterinaire.
445
POSIBILITI DE PREVENIRE N NEOPLAZIA MAMAR LA CANINE

PREVENTION POSIBILITIES IN MAMMARY NEOPLASIA AT CANINES
L.C. BURTAN, I. BURTAN, M. FNTNARU, S. CIOBANU, Roxana TOPAL U.S.A.M.V. Iai The prevention of mammary tumours is easier than the treatment, therefor we identified some posibilities to reduce or to supress mammary cells modifications. Mammary cells are able to multiplicate uncontrolled in cases of mammary traumatisms, chemical control of heat cycle, unwanted pregnancy supress and pseudopregnancy lactation. An suitable treatment of mammary open traumatisms and ovariectomy are some posibilities to prevent mammary cells revolution.
Key words: canine, mammary cancer, cicatrization, unwanted pregnancy, pseudopregnancy lactation, chemical control of heat cycle, ovariectomy
Dei profilaxia neoplaziei mamare este o himer totui exist suficiente momente n viaa unei femele, care, dac sunt evaluate i tratate cu atenie pot preveni o cancerogenez mamar. n acest sens amintim traumatismele mamare i revoluiile celulare de la acest nivel (2, 5, 10). Revoluiile celulare mamare, reprezentate de transformrile care au loc la acest nivel, se pot ntlni n ntreruperea gestaiei nedorite, n lactaia de pseudogestaie i n controlul chimic al estrului (1, 3, 4, 6, 8, 9). De asemenea, ntreruperea brusc a lactaiei, imediat dup parturiie, duce la modificri celulare mamare (5, 7). Pentru prevenirea acestor revoluii mamare s-a utilizat controlul chirurgical al reproduciei prin ovarectomie sau ovareohisterectomie (7, 8, 10). MATERIAL I METOD
Materialul de studiu a fost reprezentat de cazuistica oferit de Clinica Chirurgical a Facultii de Medicin Veterinar Iai i Cabinete medicale veterinare private. Traumatismele mameloanelor sau esutului mamar, care creeaz soluii de continuitate, au fost urmrite pentru a putea concluziona asupra apariiei momentului n care, o celul capabil s se multiplice pentru regenerare deviaz de la activitatea programat. n acest sens au fost urmrite 15 femele cu plgi accidentale n regiunea mamar. Plgile nu au fost supuse prelucrrii chirurgicale 446
i suturii fiind lsate prad instinctelor terapeutice ale animalului, respectiv lingerii care irit continuu esutul de reparaie. ntruct glanda mamar se afl sub controlul secvenial al steroizilor ovarieni, investigaiile au fost orientate spre stabilirea unor cauze capabile a produce revoluii celulare n acest esut. n acest sens, au fost luate n studiu 276 femele necastrate, la care, pe baza datelor anamnetice au primit medicaie pentru ntreruperea gestaiei nedorite, pentru combaterea lactaiei de pseudogestaie sau pentru controlul chimic al estrului, evenimente care s-au repercutat asupra esutului mamar.
REZULTATE I DISCUII Procesul de reparaie tisular, la cele 15 cazuri, s-a desfurat ntr-un timp relativ lung, evolund spre vindecare prin nmugurire, spre cicatrizare excesiv, lipsa cicatrizrii sau spre cancerizare, datele fiind prezentate n tabelul 1.
Tabelul 1 Date centralizate privind influena iritaiilor asupra cicatrizrii plgilor mamare la cea Nr. de plgi 15 Rezultatele tratamentului instinctiv Plag aton Cheloidizare Nr. % Nr. % 2 13,3 3 20
Vindecare Nr. % 7 46,7
Tumorizare Nr. % 3 20
Analiznd datele din tabelul 1 constatm gravitatea lipsei de intervenie terapeutic n plgile mamare. Iritaiile produse de animal prin toaletarea plgii, la care se adaug cele determinate de factorii de mediu, tulbur evoluia normal a procesului de nmugurire, nct numai 46,7% din cazuri nregistreaz o evoluie normal. Totusi, trebuie s menionm c reparaia s-a produs dup 25-35 de zile. Dei timpul de vindecare trebuie corelat cu mrimea plgii, putem aprecia c acesta a fost suficient de mare, comparativ cu cel realizat n practic prin prelucrare chirurgical i sutur primar care este de 10-12 zile. La dou cazuri, respectiv 13,3% traumatizarea prin lingere a esutului de nmugurire a determinat aplatizarea acestuia i lipsa de reacie perifocal, transformnd plaga ntr-un esut aton. n acest caz s-a intervenit prin extirparea esutului aton i sutur primar. Iritaiile produse prin lingere pot determina o tulburare a prezenei celulare implicate n reparaia tisular. Ruperea echilibrului ntre factorii care stimuleaz vindecarea i cei care o inhib, conform reparaiei programate, face ca esutul de nmugurire s creasc n exces. n final este influenat epidermizarea ducnd la creterea n volum a esutului de reparaie care se transform ntr-o pseudotumor, respectiv cheloid, diagnosticat la 20% din cazuri.
447
La 3 cazuri, respectiv 20% din femelele urmrite, procesul hiperplazic cutanat a interesat i esutul mamar care a crescut n exces. Baza mamelonului avea dimensiunile unei prune, cu consisten crescut, iar pielea cptase aspectul unei cicatrici hipertrofice. Din anamnez a rezultat c plgile accidentale aveau vechime de 65-75 zile. n ceea ce privete rolul modificrilor celulare, din glanda mamar, pentru declanarea tumorigenezei, datele obinute sunt centralizate n tabelul 2.
Tabelul 2 Corelarea prevalenei tumorilor mamare cu tulburri ale ciclului sexual la cea Femele cu ciclul sexual normal Nr 106 % 38,4 Femele cu tulburri ale ciclului sexual Din care Controlul Total Gestaie Lactaie de chimic nedorit pseudogestaie intermitent al estrului Nr % Nr % Nr % Nr % 170 61,6 25 14,7 114 67 31 18,3
Nr. femele cu tumori mamare 276
Analiza detelor nscrise n tabelul 2 evideniaz faptul c ocurile hormonale aprute n viaa unei femele pot sta la baza neoplaziei mamare. Glanda mamar, ca organ hormono-dependent, suport aceste ocuri prin modificri n populaia celular. Astfel, din cele 276 de femele cu tumori mamare, 38,4% au prezentat anual o evoluie normal a ciclului sexual, iar 61,6% au inregistrat diferite tulburri ale ciclului sexual, impunnd administrarea de produse hormonale pentru reglare. Din cele care au prezentat tulburri 14,7% au primit tratament hormonal (Sintofolin, Mesalin) pentru a evita instalarea gestaiei nedorite, iar 18,3% au fost supuse tratamentului hormonal (Medroxiprogesteron) pentru controlul chimic al estrului. De asemenea, 67% din femelele cu tulburri ale ciclului sexual au primit tratament hormonal pentru combaterea lactaiei de pseudogestaie. Tratamentul hormonal a fost local (Mastoprofen, Progestagel) i general (Covinan, Bromocriptina), medicaie capabil s determine inhibarea secreiei de prolactin, reducnd astfel brusc activitatea acinilor glandulari. Prezentarea acestor posibile cazuri ale tumorigenezei mamare i modul n care pot fi combtute sunt argumente care conduc la concluzia c neoplazia mamar poate fi o iatropatie. Neglijena n terapia plgilor regiunii mamare, abuzul de hormoni pentru combaterea dereglrilor ciclului sexual, sau pentru stoparea acestuia sunt momente care tulbur dinamica celular a glandei mamare, expunnd la apariia celulei capabile s se multiplice anarhic. De asemenea, rezultatele prezentate evideniaz rolul controlului chirurgical al reproduciei la canine prin ovarectomie.
448
Planningul canin prin ovarectomie este o metod tiinific i sigur, care contribuie la prevenirea tumorilor mamare. n acest sens am efectuat un studiu pe 123 femele care au fost supuse ovarectomiei la vrste diferite pentru a corela riscul apariiei neoplaziei cu numrul ciclurilor sexuale, datele obinute fiind prezentate n tabelul 3.
Tabel 3 Corelarea vrstei la castrare cu frecvena tumorilor mamare Femele castrate care Nr cazuri au contractat 123 tumori % mamare Vrsta n ani la castrare 3 4 5 6 17 21 26 33 13,8 17 21,1 27
1 2 1,6
2 7 5,7
7 9 7,3
8 6 4,9
9 2 1,6
Datele nscrise n tabelul 3 demonstreaz c ovarectomia executat la vrst timpurie reduce posibilitatea apariiei tumorilor mamare. Astfel, 1,6% din femelele cu tumori mamare au fost supuse ovarctomiei la vrsta de 1 an, deci dup primul ciclu sexual, iar 5,7% au fost castrate la vrsta de 2 ani. Pe msur ce femela nainteaz n vrst crete riscul apariiei tumorilor mamare, curba fiind ascendent pn la vrsta de 7 ani cnd proprietarul accept ovariectomia ca soluie de a elimina monta i lactaia de pseudogestaie. Femelele castrate la 4-6 ani prezint cel mai mare risc de a face tumori mamare, cu 17% castrate la 4 ani, 21,1% la 5 ani i 27% la 6 ani. Pn la aceast vrst femelele au fost folosite la reproducie, iar la unele s-a ntrerupt ciclul sexual pe cale chimic. CONCLUZII Plgile mamare, dac nu sunt tratate corespunztor pot fi plasate n rndul factorilor oncoinductori. Consecutiv acestor incidente 20% din plgi pot tumoriza dup o perioad de 65-75 zile, iar 20% pot evolua spre cheloid cicatriceal care este o pseudotumor. Tulburrile ciclului sexual pot interveni n cancerogeneza mamar. Acestea sunt reprezentate de gestaia nedorit (14,7%), lactaia de pseudogestaie (67%) i controlul chimic intermitent al estrului. Ovarectomia executat la vrst timpurie reduce considerabil riscul de a face tumori mamare. Riscul crete de la 1,6% din femele cu tumori dac ovarectomia s-a executat la 1 an, respectiv dup 1-2 cicluri sexuale. Femele castrate dup 4-6 ani pot face tumori mamare n proporie de 21,1% respectiv 27%.
BIBLIOGRAFIE
1. Avallone, L., Lombardi, P., Florio, S., 1994 Steroid receptors distribution in canine mammary tumour. Acta Medica Veterinaria, 40, 2, 105-112.
449
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Baba, A.I.r 2002 - Oncologie comparat. Ed, Academiei Romne. Buc. Baker, R.W., 1994 - Use of tamoxifen in the control of canine mammary neoplasia. Vet. Record 134, 1-24. Broiu, I.A., Seiciu, FL., 2004 Tratat de reproducie la animale. Ed. BIC ALL Buc. p.254-258. Burtan L.C., 2005 Contribuii la studiul oncopatiilor mamare la cine, Tez de doctorat, U. S. A. M. V., Iai Bonca, Gh., Cernescu, H., Ardelean, V., Mircu, C, Bedrosian, Ed., 1995 Cercetari comparative ale terapiei lactaiei nervoase la cea cu steroizi sexuali, derivai ergolinici i revulsive locale. Rev. Rom. M.V., vol.5, nr.3, p.265-269. Burtan, I., 2004 - Patologie chirurgical general veterinar. Ed. I. Ionescu de la Brad Iai 122-131 Buff, S., 2001 Sterilisation tres precoce: de nombreux avantages. Le Point Veterinaire, 221, 52-54. Picavet Sophie, 1992 - Lactation de pseudogestation chez la chiene - Reproduction du chien et du chat. P.C.M.A.C. 179-195. Tnase, A., 1999 - Tratamentul complex chirurgical, chimio i imunoterapeutic al cancerelor mamare la canidae i feline. Teza de doctorat U.S.A.M.V. Buc.
450
REDUCEREA CHIRURGICAL N HERNIA PERINEAL A VEZICII URINARE LA UN CINE PEKINEZ: RAPORT DE CAZ
SURGICAL REDUCTION IN THE PERINEAL HERNIA OF URINARY BLADDER IN A PEKINGESE DOG: CASE RAPORT
P. CAZACU, M. MARE U.S.A.M.V. Iai In this paper is presented a case of perineal hernia of urinary bladder in a 11- year- old male dog, Pekingese that after anamnestic investigations and clinical examination, it was diagnosed with perineal hernia of urinary bladder and subsequently confirmed during the surgery. We presented the mode of surgical resolution by using of trick in basic techniques for reconstruction of pelvic diaphragma. The reconstruction of serous hernial sac, through the torsion and ligature, like in techniques applied from ombilical hernia and subsequently closure of muscular pelvic diaphragma.
Key words: male dog, Peckingese, perineal hernia of urinary bladder, peritoneal closure, muscular pelvic diaphragma closure.
Hernia perineal a vezicii urinare (H.P.V.U.) este o modificare topografic caracterizat prin retroflexia vezicii urinare i hernierea acesteia, acoperit sau nu de peritoneu, lateral anusului, prin penetrarea structurilor ce alctuiesc diafragma pelvin (m. ridictor al anusului, m. coccigieni, m. sfincter anal extern, fascia perineal). H.P.V.U. este o afeciune chirurgical rar ntlnit n practica medical veterinar, prevalena sa fiind cuprins ntre 0,1-0,4 % din cazurile prezentate n clinicile veterinare (1). Rasele cel mai frecvent afectate, citate n literatur sunt: Boxer, Boston Terrier, Pekinez, Teckel, Welsh Corgi, Collie i Ciobanesc englez Bobtail. (1, 2, 6, 13, 14, 19). Totui, rase ca Boston Terrier, Peckinez i Boxer prezint i un risc familial (12, 14). H.P.V.U. afecteaz cel mai frecvent cinii masculi, necastrai, cu vrsta cuprins ntre 7 i 9 ani (1, 6, 16). n etiopatogenza H.P.V.U., sunt ncriminai mai muli factori: imbalan hormonal, predispoziia congenital, slabirea structurilor diafragmei pelvine, bolile prostatei i constipaia cronic (3, 6, 14, 16). Expresia nalt a receptorilor pentru relaxin n musculatura diafragmei pelvine sugereaz c aceasta joac un rol important n patogeneza herniei perineale (H.P.) (15).
451
Pentru c nici unul din aceti factori nu a fost demonstrat, originea acestor tulburri este probabil o combinaie a acestora (3). La cine, fundul de sac dorso-rectal al peritoneului parietal (excavaia sacro-rectal), n regiunea pelvin, este foarte profund ajungnd aproape de diafragma pelvin, foarte aproape de anus, aspect anatomic ce favorizeaz apariia frecvent a herniilor perineale la aceast specie (10, 17). Clinic, H.P.V.U. se caracterizeaz prin apariia unei tumefacii n regiunea perineal. Aceasta poate fi uni- sau bilateral. Hernia perineal unilateral este observat aproximativ la 2/3 din cazuri, iar 80% dintre acestea se gsesc pe partea dreapt (2, 3, 6). H.P.V.U. se ntlnete cu o frecven de 29% din cazurile de H.P. dup Brissot, iar Hosgood o ntlnete cu o frecven de 20%. Organele pot hernia printre m. coccigien i m. ridictor al anusului sau frecvent ntre m. sfincter anal extern, m. ridictor al anusului i m. obturator intern (6, 12, 16). MATERIAL I METOD
Subiectul este un cine mascul Peckinez, n vrst de 11 ani, criptorhid, prezentat la consultaie cu un istoric de inapeten, polidipsie, vomituriie i voma apei imediat dup consum, apariia unei tumefacii n regiunea perineal, anurie i lipsa defecrii i nrutirea strii generale a animalului. Aceste simptome au aprut i s-au accentuat nainte cu 24 ore de prezentarea animalului la consultaie. n momentul consultaiei, la examenul clinic, animalul prezenta depresie a sistemului nervos central, ataxie i astazie, schimbndu-i frecvent decubitul lateral stng cu cel drept. Reflexul palpebral este ntrziat, cinele prezint o deshidratare medie (6-8%), iar mucoasele aparente sunt colorate normal. Periodic (la interval de 3-5 minute) animalul prezint o stare de agitaie, manifestat prin ridicarea capului, nsoit de polipnee, care nceteaz dup 1-2 minute. n regiunea perineal este prezent o tumefacie paraanal dreapt, de mrimea unei jumti de portocal, anusul este deformat i deviat spre stnga, iar mucoasa rectal este vizibil la examenul clinic din apropiere. La examenul transrectal se constat devierea lateral stng a rectului, neputndu-se preciza alte aspecte legate de cauza tumefaciei. Pielea din regiunea tumefiat este integr, iar consistena tumefaciei este crnoas, asemntoare muchilor i nedureroas (fig. 1). Glandul penian este prolabat i congestionat, probabil prin compresia i staza produs de vezic pe vasele ce irig penisul (fig. 2). Temperatura rectal a animalului este de 38C, frecvena cardiac 180 contracii/minut, iar fecvena respiraiei este de 65/minut. Corelaia ntre datele anamnetice i istoricul afeciunii, precum i a informaiilor obinute la examenul clinic au condus la diagnosticul prezumtiv de hernie perineal a vezicii urinare. Dup Brissot, H.P. prin retroflexia vezicii urinare este o H.P. complicat, iar dup Ferreira este o urgen medical. ntruct hernia perineal a vezicii urinare (prin retroflexia acesteia) a fost nsoit de anurie i deci insuficien postrenal, am considerat oportun 452
intervenia chirurgical de urgen pentru repunerea vezicii urinare n poziie fiziologic (n cavitatea abdominal) i refacerea diafragmei pelvine.
Fig.1. Hernie perineal unilateral dreapt (aspect clinic)
Fig. 2. Congestia i prolapsul penisului
Preoperator, cu 2 ore nainte de intervenie, sacii anali au fost vidai (rectul nu coninea fecale) i am aplicat animalului o linie de perfuzie intravenoas (i.v.) administrnd soluie de glucoz 5%, hidrocortizon hemisuccinat 25 mg i.v., atropin 1% - 0,4 ml subcutanat (s.c.), Etamsilat 2 ml intramuscular (i.m.), vitamina C sol. 10 % - 8 ml (i.v.), vitamina B-complex (Vitamin B-complex-Veyx) 4 ml i.v. S-a utilizat neuroleptanalgezia prin administrarea injectabil i.m. a xilazinei n timpul I i a ketaminei n timpul II (la 15 minute interval, i.v.), infiltraie pe linia de incizie cu procain 2 %. Pe masa de operaie am poziionat animalul n decubit lateral stng, cu membrul posterior stng (dedesubt) deplasat caudal pn se formeaz un unghi de 45 cu membrul posterior drept. Att membrele anterioare ct i cele posterioare se fixeaz la masa chirurgical. Coada se trage dorsal i se fixeaz, de asemenea la mas (fig. 3). n etapa urmtoare am practicat cateterismul vezical cu scopul de a goli vezica urinar pentru a confirma diagnosticul de H.P.V.U. ntruct nu am reuit cateterizarea, am decis nceperea interveniei, evitnd efectuarea cistocentezei. Pe toat perioada interveniei chirurgicale, animalul a fost perfuzat i.v. cu soluie de ser fiziologic (1 pictur/ sec.). O incizie uor curb lateral este aplicat peste masa perineal tumefiat, de la baza cozii pn la baza masei herniate, avnd grij s nu fie prea profund, pentru a proteja coninutul acesteia. Apoi am dilacerat bont aderenele dinte piele i sacul herniat (fig. 4). Diagnosticul prezumtiv de H.P.V.U. devine n acest moment definitiv. Am secionat peritoneul parietal evideniind vezica urinar retroflexat n totalitate (fig. 5). Peretele vezical avea un aspect hemoragic (cistit hemoragic) (fig. 6). 453
Fig. 3. Contenia animalului pe masa de operaie
Fig. 4. Incizia cutanat i evidenierea sacului herniar seros cu vezica urinar i desprinderea aderenelor
Fig. 5. Deschiderea sacului herniar seros
Fig. 6. Vezica urinar retroflexat
Dup acest timp operator am rencercat cateterizarea vezicii urinare, de data aceasta cu succes (probabil din cauza scderii presiunii asupra vezicii, s-a permeabilizat zona retroflexat), extrgnd aproximativ 250 ml urin uor hemoragic (fig. 7). Dup vidare am repoziionat vezica urinar n cavitatea abdominal, prin defectul muscular perineal (fig.8, 9). Marginile peritoneului parietal deschis au fost unite i prinse ntr-o pens Kocher i apoi am rsucit pensa i peritoneul pn la nchiderea orificiului hernial. Apoi am aplicat o ligatur transfixic simetrica (8) la baza helixului creat de rsucirea peritoneului pentru a-l nchide definitiv, cu mtase chirurgical nr. 8 (fig. 10). Excesul de peritoneu a fost excizat. Bontul peritoneal a fost nfundat i apoi am practicat nchiderea defectului muscular al diafragmei pelvine (fig. 11). Astfel am unit prin aplicarea a 2-3 fire de sutur, n fire separate (Maxon 30), m. sfincter anal extern cu m. obturator, apoi ntre m. coccigian i m. sfincter anal extern i o ultim sutur ntre ligamentul sacrotuberos i m. sfincter anal extern (fig. 12).
454
Fig. 7. Vidarea vezicii prin sondaj urinar
Fig. 8. Vezica urinar dup vidare
Fig. 9. Aspectul conductului pelvin herniar dup repunerea vezicii n poziie fiziologic
Fig. 10.Torsionarea sacului herniar seros i sutura transfixic a acestuia
Fig. 11. Bontul peritoneal restant
Fig. 12. Sutura diafragmei pelvine musculare
Grsimea i pielea n exces au fost excizate. esutul conjunctiv subcutanat a fost suturat n surjet continuu cu fir sintetic absorbabil Maxon 3-0 (fig. 13). Apoi am mai aplicat trei puncte de sutur n fire separate prin sutura anterioar a 455
esutului conjunctiv, dar mai profund pentru a prinde planul inferior al musculaturii diafragmei pelvine. Pielea a fost suturat de rutin (cu mtase nr. 8 n fire separate), dup care s-a administrat spray cu antibiotice (oxitetraciclin) (fig. 14).
Fig. 13. Sutura esutului conjunctiv subcutanat i adipos
Fig. 14. Sutura pielii
Imediat, postoperator am administrat pacientului antibiotice (amoxicilin i enrofloxacin) i vitamina C, parenteral. Spasmium (caroverina i novaminsulfon) 0,5 ml i.m. ca spasmolitic, analgezic i antiinflamator, i 20 ml soluie 5 % KCl per rect preparat extemporaneu, pentru a corecta hipokalemia care se instaureaz imediat relurii tranzitului urinar consecutiv unei obstrucii urinare. Pacientul a fost monitorizat timp de cinci zile postoperator, examinndu-se starea general, aspectul plgii chirurgicale i eventualele complicaii renale. n acest interval cinelui i s-au administrat antibiotice (amoxicilin i enrofloxacin), vitamine (complexul AD3E, C, B-complex), lichide hidroenergoelectrolitice (glucoz 5%, ser fiziologic), pansamente gastro-intestinale (Smecta), spasmolitice, analgezice i antiinflamator (Spasmium), Hidroxizin (sedativ i antipruriginos).
Fig. 15. Hrnirea cu alimente lichide, administrate prin sond nazo-gastric
Fig. 16. Aspect clinic al plgii operatorii la 30 zile postoperator
456
La 24 ore dup operaie, animalului i-a fost introdus o sond alimentar naso-gastric pentru hrnirea animalului cu alimente lichide, n vederea prevenirii formrii de fecale voluminoase i a eforturilor de defecare (fig. 15). Sonda a fost meninut timp de cinci zile. La sfritul perioadei de monitorizare, cinele prezenta o stare general bun, cu apetit prezent pentru hran i ap, evoluia plgii operatorii fiind normal, spre vindecare. Firele de sutur au fost scoase la 14 zile de la intervenia chirurgical, iar la 30 zile plaga operatorie i regiunea perineal evoluau favorabil (fig. 16).
REZULTATE I DISCUII Dup Bojrab, animalul se plaseaz n decubit sternal, cu trenul posterior ridicat, iar Bruhl recomand decubitul lateral n special la animalele n vrst, pentru c asigur o bun poziie a capului i o bun ventilaiei pulmonar prin evitarea compresiei exercitate de viscere pe diafragm, un output cardiac i o presiunea arterial satisfctoare, evitnd astfel posibilele complicaii anestezice. Din aceste considerente i noi am adoptat poziionarea n decubit lateral a animalului (fig.3). Bojrab, Howard, Bruhl i Burtan recomand aplicarea unui tampon n rect i a unei suturi n burs a anusului, pentru a evita eliminarea de fecale sau a scurgerilor lichidului de clism, n timpul operaiei. Noi am considerat inadecvat aceast manoper i chiar clisma, dac animalului i-au fost ndeprtate fecalele din rect, evitndu-se asfel lezionarea suplimentar a acestuia. Bruhl, Howard, Bojrab i Burtan recomand cistocenteza n caz de nereuit a sondajului vezicii urinare, preoperator. Noi am evitat cistocenteza pentru c: incizia pielii, debridarea peritoneului i incizia acestuia au fost mai facile de realizat, prezentarea acestora operatorului fiind mult mbuntit; cistocenteza poate fi un factor de contaminare a plgii operatorii; coagulii creai de hemoragia intravezical consecutiv punciei ar putea cauza obstrucia vezicii, fapt constatat anterior de noi n practic. Pentru prevenirea recurenelor Bojrab i Bongartz recomand imediat dup refacerea diafragmei pelvine, efectuarea castrrii animalului, iar Howard recomand castrarea nainte de intervenia de refacere a diafragmei pelvine. ntruct cinele prezenta criptorhidie bilateral, nu am putut realiza orhiectomia acestuia prin tehnica clasic. Aplicarea tehnicii chirurgicale pentru castrarea masculilor criptorhizi, avnd n vedere vrsta i insuficiena postrenal a pacientului (cu creterea plasmatic a ureei i a concentraiei creatininei, hiperkalemie, hiperfosfatemie i neutrofilie, dup Howard), precum i alte afeciuni asociate, am considerat a fi riscant de efectuat. Cistopexia efectuat cu acelai scop, de a preveni recurena retroflexiei vezicii urinare, recomandat de Brissot, Howard i Burtan care implic efectuarea laparatomiei, nu am efectuat-o din aceleai considerente.
457
Refacerea diafragmei pelvine cunoate mai multe procedee chirurgicale: tehnica clasic, prezentat n orice manual de chirurgie a animalelor mici, presupune nchiderea diafragmei pelvine prin aplicarea unor suturi ntre m. coccigian i m. sfincter anal extern, apoi ntre ligamentul sacrotuberal i sfincterul anal extern i o ultim sutur ntre m. obturator ventral i m. sfincter anal extern (3). n tehnica prezentat de Earley i Kolata, marginea caudal a m. obturator intern este incizat i muchiul este folosit pentru acoperirea defectului diafragmei pelvine. O prim sutur este plasat ntre m. sfincterul anal extern i ligamentul sacrotuberos (Howard propune suturarea m. sfincter anal extern de m. coccigian), pentru a se crea suportul de prindere al apexului m. obturator intern. Astfel, marginea caudo-lateral a m. obturator intern se sutureaz la marginea caudomedial a lig. sacrotuberos, marginea caudo-medial a m. obturator intern este suturat de m. sfincter anal extern. Bongartz, propune refacerea diafragmei pelvine cu ajutorul unei grefe din fascia lata, izolat de pe coapsa ipsilateral i direcionat ctre defectul perineal. Chambers, propune folosirea jumtii proximale a m. semitendinos care se transpoziioneaz pentru refacerea diafragmei pelvine. Vnuk et al. a utilizat o me de polipropilen pentru nchiderea defectului diafragmei pelvice. Strategia chirurgical adoptat a urmrit efectuarea celei mai simple tehnicii chirurgicale, celei mai expeditive i raionale tehnici din punct de vedere terapeutic, avnd n vedere terenul biologic, eliminnd manoperele operatori care ar fi crescut timpul i traumatismul operator. Noi am folosit tehnica clasic la care am adugat un artificiu reprezentat de nchiderea sacului herniar seros (peritoneul parietal) prin torsionarea i ligatura acestuia, similar tehnicii din hernia ombilical (fig. 10, 11), prin aplicarea unei ligaturi transfixice simetrice (8). Din tehnicile prezentate anterior, doar Burtan recomand refacerea sacului herniar seros prin sutura cu catgut n fire separate, ceilali autori nefcnd nici o precizare n acest sens. Astfel, pentru uurina ei, tehnica clasic de refacere a diafragmei pelvine, aceasta implicnd i peritoneul, am considerat-o a fi mai facil i mult mai fiabil dect celelalte tehnici pe care le-am considerat inoportune prin complexitatea lor, crescnd timpul i traumatismul operator, dar i riscul unor complicaii postoperatorii. CONCLUZII 1. ntr-un cabinet veterinar privat a fost diagnosticat un caz de hernie perineal a vezicii urinare la un cine Peckinez n vrst de 11 ani. 2. Diagnosticul prezumtiv a fost precizat prin coroborarea datelor anamnetice cu examenul clinic general i confirmat intraoperator.
458
3. Modalitate terapeutic n hernia perineal a vezicii urinare este intervenia chirurgical de repunere a vezicii urinare n poziie fiziologic i refacerea diafragmei pelvine. 4. Tehnica chirurgical clasic de refacere a diafragmei pelvine a fost modificat prin refacerea sacului hernial seros prin nchiderea acestuia prin torsiune i ligatur, aplicnd o ligatur transfixic simetric. 5. Astfel, pentru uurina ei, tehnica clasic de refacere a diafragmei pelvine care implic i peritoneul, am considerat-o a fi mai facil i fiabil dect celelalte tehnici pe care le-am considerat inoportune prin complexitatea lor, crescnd timpul i traumatismul operator, dar i riscul unor complicaii postoperatorii.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Barnes R., 2004 Perineal hernias in the dog and cat., www.acvs.org/ AnimalOwners/ HealthConditiond/ SmallAnimalTopics/ Peritoneal Herniasinthe DogandCat. Bellenger C.R., 1980 Perineal hernia in dogs. Aust vet J. Sept; 56(9): 434-8. Bojrab M.J., Toomey A.A., 1983 Perineal Hernia n Current Techniques in Small Animall Surgery - Joseph Bojrab, Stephen W. Crane, Steven P. Arnoczky, Lea & Febiger. Philadelphia pp.401-405. Bongartz A, Carofiglio F, Balligand M, Heimann M, Hamaide A., 2005 Use of autogenous fascia lata graft for perineal herniorrhaphy in dogs. Vet Surg. JulAug; 34(4): 405-13. Brissot H.N., Dupre G.P., Bouvz B.M., 2004 Use of laparotomy in a staged approach for resolution of bilateral or complicated perineal hernia in 41 dogs. Vet Surg. Jul-Aug; 33(4): 412-21. Brhl-Day R., Mangieri J., 2002 Perineal Hernia, Lateral vs. Caudal Approach, Scientific Prezentation, 27th World Small Animal Veterinary Association Congress, Granada, Spain. Burtan I., 2000 Chirurgie regional veterinar, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. Cazacu P., Mare M., 2004 Hemostaza cu un nou tip de ligatur transfixic n ovariectomie la cea i pisic, Lucr. t. Med. Vet., USAMV, Iai; 47(6): 519-526. Chambers J.N., Rawlings CA., 1991 Applications of a semitendinosus muscle flap in two dogs. J Am Vet Med Assoc. Jul 1; 199(1): 84-6. Ciubar V.C., 1954 Medicina operatoare veterinar, Ed. Agro-Silvic de Stat, Bucureti. Earley D.T., Kolota J.R., 1983 Perineal Hernia in the Dog: An Alternative Method of Correction n Current Techniques in Small Animall Surgery - Joseph Bojrab, Stephen W. Crane, Steven P. Arnoczky, Lea & Febiger. Philadelphia pp.405407. Ferreira F., Delgado Esmeralda, 2003 - Hrnias perineais nos pequenos animaisPerineal hernias in small animals, Revista Portuguesa de Cincias Veterinrias,98 (545), p. 3-9. Hosgood G, Hedlund CS, Pechman RD, Dean PW., 1995 Perineal herniorrhaphy: perioperative data from 100 dogs. J Am Anim Hosp Assoc. Jul-Aug; 31(4): 33142. Howard B., 2001 Perineal Hernia Repair; Proceedings; Atlantic Coast Veterinary Conference, Atlantic City, New Jersey, USA.
12. 13. 14.
459
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 15. Merchav R., Feuermann Y., Shamay A., Ranen E., Stein U., Johnston D.E., Shahar R., 2005 Expression of relaxin receptor LRG7, canine relaxin, and relaxin-like factor in the pelvic diaphragm musculature of dogs with and without perineal hernia. Vet Surg. Sep-Oct; 34(5): 476-81. Mortari Carolina Ana, Rahal Canevese Sheila, 2005 Hrnia perineal em, Cincia Rural, Santa Maria, v35, n.5, p.1220-1228. Patea E., Coofan V. et al., 1985 Anatomia comparat a animalelor domestice, Vol. II, Ed. Didactic i pedagogic, Bucureti. Vnuk D., Maticic D., Kreszinger M., Radisic B., Kos J., Lipar M., Babic T., 2006 A modified salvage technique in surgical repair of perineal hernia in dogs using polypropylene mesh, Veterinarni Medicina, 51, 2006 (3): 111117. www.petsurgery.com/perinealhernias.html
16. 17. 18. 19.
460
TRATAMENTUL CHIRURGICAL AL CATARACTEI LA CINE PRIN EXTRACIA EXTRACAPSULAR A CRISTALINULUI OPACIFIAT

SURGICAL REMOVAL OF CATARACTS IN DOGS BY EXTRACAPSULAR EXTRACTION
Fl. BETEG, N. MATES, A. MUSTE, L. OANA, A. TIMEN Cataracts in dogs belong to the eye pathology. It occurs whatever the breed and age of the dog. Its ethiology is equivocal. The clinical sign consists in the opacities of the lens, resulting in progressive loosing of the vision on one or both eyes. Men were preoccupied over the years to reestablish or at least to improve the vision of the affected dog by conservative treatment or surgery. The results of these treatments and efforts arent always the desired ones. The efforts were made in an attempt to reestablish (or at least to improve) the vision of mans unselfish companion or defender, the dog, knowing the inefficacy of the medical conservative treatment. It is only the cataract surgery that can be useful. Although the opinion of the national and international specialists concerning the ethiopatogeny, the opportunity for lens extraction, the technique, the costs, the instruments and materials needed are disputed, I view it as a justified intention because of the aspects stated above.
MATERIAL I METODA
n vederea efecturii extraciei extracapsular a cristalinului(EEC) opacifiat au fost luate n studiu urmtoarele cazuri: Cazul 1. Mascul, ras comun, 11 ani cataract bilateral Cazul 2. Mascul, ras comun, 14 ani cataract bilateral Cazul 3. Femela, ras Cocker Spaniol, 12 ani cataract bilaterala Cazul 4. Mascul, ras Ciobnesc German, 7 ani cataract unilateral. Aceast variant a extraciei extracapsulare a cristalinului (EEC) am preluat-o din oftalmologia uman i prezint avantajul unei deschideri mai reduse a camerei anterioare, deoarece n cazul EEC la cine, dup deschiderea camerei anterioare, apare colabarea corneei i hipotonia globului ocular (6). Preoperator animalele au fost supuse unui examen clinic, pentru operaie fiind selectate doar animale clinic sntoase cu stare general bun, fr afeciuni intercurente ale globului ocular.Dup ce animalele au fost examinate i au fost selectate pentru tratamentul operator, au fost supuse unor pregtiri preoperatorii dup cum urmeaz. Cu 3 zile preoperator am administrat un antibiotic pe cale general, iar topic am focut instilaii zilnice cu colire pe baz de antibiotice i antiinflamatorii. Am folosit produsul Spersadex un produs al firmei Novartis pe baz de Cloramfenicol i Dexametazona. n ziua interveniei 461
operatorii am efectuat instilatii oculare cu atropin 1% cu dou ore naintea nceperii operaiei din 15 n 15 minute pentru producerea midriazei necesare actului operator (3). De asemenea am utilizat si Tropicamid (Mydrium) Anestezia. Anestezia general pentru efectuarea extraciei cristalinului a fost de tip N-NLA (narconeuroleptanalgezie) (1, 8). Aceast anestezie am efectuat-o astfel: prima dat am procedat la administrarea Xilazinei i.m. n doz de 2 mg/kc, iar la 10 minute dup prima injecie am administrat Ketamina n doz de 2-5 mg/kc. nainte de nceperea interveniei operatorii am procedat la administrarea Tiopentalului i.v. n doz de aproximativ 11 mg/kc, administrndu-l pn n momentul dispariiei reflexelor i apariia akineziei globului ocular (5, 8). Pentru o akinezie a globului ocular ct mai bun i pentru o propulsare a globului ocular din orbit am efectuat i o anestezie retrobulbar cu xilin 1%. Contenia animalului. Pe masa de operaie s-a efectuat n decubit lateral, capul animalului fiind fixat de ctre un ajutor astfel ncat globul ocular s fie expus pe ct posibil orizontal pentru a se putea asigura drenajul lichidului de perfuzare a camerei anterioare. Timpii operatori. Meninerea larg deschise a fantei palpebrale am realizat-o prin aplicarea blefarostatului. Efectuarea port-side-urilor corneene Port-side-urile corneene reprezint dou mici bree (incizii) corneene realizate cu ajutorul cuitului de cornee (Vlance), similare cu breele realizate la nivelul abdomenului n cazul chirurgiei laparoscopice. Un port-side se efectueaz la nivelul orei 5 sau 6 pentru aplicarea mainteiner-ului, iar o alta bresa se execut la nivelul orei 9 sau 10 pentru introducerea acului discizor pentru capsulotomie. Aplicarea mainteiner-ului. Mainteiner-ul reprezint o canul pe care l-am introdus la nivelul port-side-ului de la nivelul 5, racordat manual printr-un perfuzor la o sursa de ser fiziologic. Rolul su este de a perfuza continuu camera anterioar i practic globul ocular, de a ajuta la expulzarea nucleului opacifiat, prevenind colabarea corneei dup deschiderea camerei anterioare. Conjunctivotomia perilimbica. Incizia conjunctivei s-a efectuat la nceput cu cuitul oftalmologic, iar apoi s-a continuat cu foarfeca de conjunctiv, uor oblic n raport cu limbul sclerocorneean, i la o distan de 3 mm de limb. Lungimea inciziei conjunctivei bulbare a fost de aproximativ 120-150 de grade. Ea se efectueaz cu scopul descoperirii sclerei n vederea deschiderii camerei anterioare pe de o parte, ct i pentru acoperirea rnii sclerale pentru o mai bun cicatrizare. Locul de elecie la nivelul globului ocular a fost la nivelul limbului superior centrat pe ora 12. Deschiderea camerei anterioare. Deschiderea am realizat-o prin metoda sclerocorneeana. Pentru aceasta am efectuat incizia sclerei cu ajutorul cuitului de sclera pe o lungime de 120 grade centrat pe ora 12, iar apoi cu ajutorul cuitului Crescens (un cuit oblic) s-a continuat tunelizarea sclerei respectiv a corneei, meninnd tot timpul cuitul cu lama i vrful orientat de jos n sus. n momentul deschiderii camerei anterioare manoperele se vor efectua cu mare finee pentru evitarea atingerii irisului respectiv al endoteliului corneean. Rana sclerocorneean rezultat trebuie s fie ca i un tunel, forma ei trebuie s fie ca i un trunchi de con pe seciune cu baza mare spre camera anterioar. Aceast 462
form este foarte important pentru expulzarea cristalinului opacifiat care se va mula etan pe marginile rnii i astfel prin presiunea creat de mainteiner prin perfuzare s-l foreze s progreseze puin cte puin spre exterior, fenomene similare cu cele derulate n timpul naterii, folosindu-se chiar i termenul de naterea nucleului. Aceast metod de abord tunelizat sclerocorneean prezint marele avantaj al unei suprafee de contact mai mare ntre cele dou buze ale rnii i datorit acesteia pierdera de lichide camerulare sunt minime, iar etaneitatea globului ocular n vederea cicatrizrii este bun. Capsulotomia anterioar. Reprezint deschiderea cristaloidei anterioare n vederea extraciei cristalinului opacifiat din sacul su. Capsulotomia a fost realizat prin tehnica beer can opener. Capsulotomia anterioar s-a efectuat cu ajutorul acului discizor, care este un ac de sering special pregtit i modelat. Acul discizor se introduce n camera anterioar pe la nivelul port-side-ului de la ora 9 sau 10. Apoi acul perforeaz capsula i efectueaz incizii radiare mici de la periferie spre centru cu mare grij pentru a nu leziona endoteliul corneean i a nu deira zonula Zinn care practic ar putea compromite succesul interveniei. Hidrodisecia capsulei posterioare. Reprezint detaarea capsulei posterioare a cristalinului n vederea luxrii cristalinului n camera anterioar. Luxarea cristalinului opacifiat n camera anterioar. Dup ce s-a efectuat hidrodisecia, cristalinul trebuie adus n camera anterioar n vederea extraciei finale. Pentru aceasta am procedat la creterea debitului lichidului perfuzat, iar nucleul cristalinului a fost luxat n camera anterioar cu ajutorul acului Annel. Luxarea se face cu mare grij pentru a nu deira capsula posterioara. Evacuarea nucleului cristalinian opacifiat. Dup ce cristalinul este n camera anterioar, cu ajutorul unei pense sau a unui crlig am procedat la rotirea lui pentru a ne asigura c nu mai exist legturi ntre nucleu i capsula posterioar. Dup ce cristalinul a fost rotit se crete debitul de lichid n camera anterioar astfel nct cristalinul s se angajeze la nivelul inciziei corneosclerale spre evacuare. Dup ce cristalinul s-a angajat la nivelul inciziei cu ajutorul glide (o bucata de plexiglas de 3cm/5mm) se depreseaz buza inferioar a inciziei pentru a permite angajarea progresiv, concomitent cu presiuni sclerale. Excizia resturilor de cortex i a celor capsulare Acest timp se face prin irigarea n continuare a camerei anterioare care va duce la mobilizarea acestora urmat de aspirarea lor cu ajutorul unei seringi prevazut cu canul. Resturile capsulare se excizeaz cu foarteca oftalmologic curb puin cte puin. Sutura rnii operatorii. Se refer la nchiderea rnii de la nivelul conjunctivei bulbare n cteva puncte separate. Sutura conjunctivei s-a efectuat cu Prolene 8.0 in 3 puncte de sutur separate cu nodurile plasate la interior pentru a preveni iritaiile conjunctivale. Refacerea camerei anterioare. Se face scoaterea mainteinr-ului iar apoi cu o seringa se introduce ser fiziologic, iar la final se introduce puin aer cu rolul de a poziiona irisul. Pe msur ce umoarea apoas se reface are loc resorbia aerului fr alte complicaii secundare din cauza prezenei aerului. Introducerea aerului n camera anterioar are efect benefic meninnd deschis camera anterioar, el resorbndu-se mai greu, prezena fiind util pn la refacerea umorii apoase care n aceast perioad postoperatorie se reface mai greu. (4, 7, 10). Zilnic animalele 463
au fost examinate clinic, fcndu-se instilaii cu colir Spersadex comp. timp de 714 zile postoperator pn la reducerea fenomenelor inflamatorii.
REZULTATE I DISCUII n urma examinrii celor 4 cazuri menionate mai sus, EEC a fost efectuat pe 3 globi oculari. Cazul 1. Cinele prezenta o cataract bilateral, cu pierderea total a acuitii vizuale. La examenul atent al globului ocular stng am constatat luxaia cristalinului opacifiat in vitros, mai exact era prezent o zonuloliz total dar fr pierdere de vitros. n urma anamnezei proprietarul ne-a spus c, cinele a suferit un accident i n urma acestui accident au aprut opacifierile cristaliniene. Decizia terapeutic a fost lensectomia cristalinului drept, proprietarul acceptnd efectuarea interveniei operatorii. Diagnosticul stabilit a fost de cataract bilateral traumatic matur, luxaie cristalinian stng. Cazul 2. Cinele prezenta cataract bilateral, cu pierderea total a acuitii vizuale, cu dificulti de deplasare n mediu. n urma prezentrii situaiei proprietarul a acceptat efectuarea interveniei operatorii. n momentul examinrii diagnosticul stabilit a fost de cataract senil bilateral. Cazul 3. Cinele prezenta cataract bilateral, dar n urma prezentrii anselor de reuit, a riscurilor operatorii proprietarul nu a fost deacord cu efectuarea interveniei operatorii prefernd administrarea de colire topice. Cazul 4. Cinele prezenta cataract unilateral dreapt matur, proprietarul neputnd furniza date despre vreun posibil traumatism. Fiind unilateral cinele descurcndu-se fr dificulti n mediu, proprietarul a decis amnarea tratamentului chirurgical. Practic EEC a fost efectuat n cazurile 1 si 2, pe 3 globi oculari, cazul numarul 2 fiind operat bilateral, cazul 1 fiind operat doar la ochiul drept. n ceea ce privete anestezia general a animalelor combinaia folosit Xilazin + Ketamin, completat cu Tiopental Sodic i.v. ofer condiiile necesare interveniei operatorii, chiar dac n literatura de specialitate se citeaz necesitatea intubaiei i narcoza gazoas, totui metoda aplicat ne-a permis efectuarea interveniei fr dificultai. La om EEC se efectueaz doar sub anestezie retrobulbar i aceasta este suficient pentru confortul operator. n cadrul EEC metoda mini-nuc, o atenie deosebit trebuie acordat conteniei, mai precis modului de fixare al capului. Capul trebuie fixat aproximativ orizontal, cu unghiul extern uor decliv pentru drenarea lichidului de perfuzare a camerei anterioare. Midriaza operatorie trebuie s fie foarte bun, iar aceasta la cine spre deosebire de om se obine destul de greu, fiind necesar administrarea preoperatorie topic a Atropinei 1% cu cteva ore nainte de nceperea actului operator pentru obinerea unei midriaze adecvate i durabile. n cazul 1 am ntmpinat dificulti din acest cauz deoarece dup deschiderea camerei
464
anterioare n momentul capsulotomiei s-a produs o mioza deosebit de puternic care nu a permis continuarea interveniei. Instilaiile n acest caz au fost facute doar cu o jumtate de or preoperator. n cazul al doilea la ochiul drept am utilizat produsul Mydrium (tropicamida) care a fost instilat tot aa cu o jumtate de or nainte repetndu-se aceeai mioza n momentul capsulotomiei, cu toate c tropicamida este un midriatic foarte bun n producerea midriazei. Rezultate foarte bune am obinut prin efectuarea de instilaii oculare cu atropin 1% cu 5 ore preoperator, combinate cu tropicamid alternativ rezultnd astfel o midriaza foarte bun i de durata n cazul EEC de la ochiul stng (2, 9) Postoperator, cinii au fost inui sub observaie strict n mediu fr praf i gaze iritante timp de 14 zile. Zilnic s-au fcut instilaii cu colir Spersadex i s-au urmrit ndeaproape evoluia fenomenelor inflamatorii intraoculare i a reaciei locale postoperatorii. n prima zi postoperator toate cazurile au prezentat o pronunat reacie inflamatorie a corneei care era tulbure uor opacifiat cu nuan albstruie. Aceast intumescent a corneei s-a observat chiar din momentul efecturii portside-urilor sclerale, la locul respectiv aprnd instantaneu o opacifiere localizat. Lichidul din camera anterioar este opalescent usor tulbure. Aceste fenomene inflamatorii i pstreaz intensitatea pn n ziua a cincea postoperator cnd ele incep sa regreseze dar transparena corneei si clarificarea lichidului camerular apare dupa 7-10 zile devenind aproape clare dup 14 zile postoperator. Cu aceast ocazie acuitatea vizuala a cainelui a inceput sa se amelioreze semnificativ. La 7 zile postoperator din cauza cicatrizrii ranii conjunctivale apare pruritul iar animalul incepe s se grateze destul de violent, iar dac nu e supravegheat ii poate produce leziuni oculare grave. Pentru evitarea unor asemenea complicaii nedorite proprietarii trebuiesc pregatiti in aceasta privinta, si s ne asigurm de cooperarea lor deplin. CONCLUZII Operaia de extracie extracapsular a cristalinului opacifiat prin metoda mini-nuc este o intervenie operatorie complex care necesit instrumentar, aparatur adecvat si deprinderi chirurgicale de specialitate. Nu toi cinii cu cataract se preteaz pentru operaia de extracie a cristalinului opacifiat. Se justific operatia EEC doar in caz de cataract bilaterala matur, cnd animalul nu se descurc in mediul i ii modific comportamentul. Contenia cinilor, in mod special imobilizarea capului intraoperator trebuie efectuat astfel inct globul ocular s fie expus orizontal n vederea unei abordri ct mai facile. Deschiderea camerei anterioare s se fac prin incizie sclerocorneean tunelizat pentru c altfel intraoperator apare pierderea umorii apoase i hipotomia globului ocular.
465
Corneea este deosebit de sensibil, in momentul inciziei apare instantaneu o intumescent localizat, iar in momentul deschiderii camerei anterioare dac nu se asigur perfuzarea continu apare colabarea ei. Fenomenele inflamatorii postoperatorii sunt semnificative traducndu-se clinic prin opacifierea corneei si turbiditatea lichidului din camera anterioara care persist chiar cu tratament antiinfectios si antiinflamator timp de 7-10 zile. Extractia extracapsular a cristalinului opacifiat, metoda mini-nuc este avantajoas pentru c se realizeaza o incizie sclerocorneean mai mic dect n tehnica clasic, reducnd astfel riscul hipotoniei intraoperatorii a globului ocular. EEC prin metoda mini-nuc este avantajoas comparativ cu extracia intracapsulara pentru c nu duce la pierderea de vitros, iar comparativ cu facoemulsificarea este de preferat pentru c nu necesit o aparatur att de sofisticat, permitnd in acelasi timp efectuarea implantului de cristalin artificial de camera posterioar.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Birchard S.J., Sherding R.G., 1994 - Manual of Small Animal Practice, W.B. Saunders Company, p.1208-1212. Douglas H. Slatter, 1981 - Fundamentals of Veterinary Ophthalmology, W.B. Saunders Company Philadelphia , London, Toronto, p.489 526. Dziezyc J., 1990 - Cataract surgery-current approaches, Vet Clin North Am [Sm Anim Pract-Sm Anim Ophthalmol] 20:737-754. Gelatt K.N., 1999 - Veterinary Ophtalology, Lippincott Williams &Wilkins, p.797-857. Gelatt K.N., Janice P. Gelatt, 2001 - Small animal Ophtalmic Surgery, p.286334.Butterworth Heinemann Gwin R.M., Gelatt K.N., 1981 - The canine lens. In Gelatt KN, Veterinary Ophthalmology. Philadelphia: Lea & Febiger, p.435-473. Magrane, W.G., 1977 - Canine Ophthalmology, 3rd Ed.Lea&Febiger, Philadelphia, p.65-84. Moldovan M., Bolte S., 1984 - Oftalmologia veterinara, Ed. Ceres, Bucuresti. Ronald C. Riis, 2002 - Small Animal Ophthalmology Secrets, A Hanley&Belfus Publication, p.184-192. nd Severin, G.A., 1976 - Veterinary Ophthalmology, Notes, 2 Ed. Fort Collins, Colorado. p.77-82, p.134-148.
466
OSTEOSINTEZA COLULUI FEMURAL LA CAINE CU TIJE DE ACID POLIGLICOLIC

FEMORAL NECK OSTEOSYNTHESIS OF THE DOG WITH POLYGLICOLIC ACID ROD
C. IGNA, Larisa SCHUSZLER, M. SABU The purpose of this study was to examine the effects of polyglycolic acid rod (SR-PGA) and their applicability in the fixation of a femoral neck fracture in dogs. In 5 dogs a Biofix rod were insert into proximal femoral and drive into the femoral head to fix a femoral neck fractures. The followup intervals were, 4, 6, 8, 10, and 24 weeks. Solid union of the fracture site without secondary displacement was seen radiographically 6-8 weeks after the operation in all dogs. Persistent avascular necrosis of the femoral head and progressive osteoarthritis does not appear as a complication in dogs treated.
Fracturile colului femural ridic probleme deosebite, inventariate minuios de literature de specialitate: reducerea i fixarea dificil a focarului de fractur, colapsul gtului femurului, lezarea vaselor sangvine responsabile de nutriia capului femural i consecutiv apariia necrozei avasculare, vicii de calusare, osteoartrit progresiv (1-8, 10, 12-14, 17-19, 21, 22). Avnd n vedere faptul c de o parte din dificulti sunt responsabile mijloacele metalice (broe, uruburi, tije, plci) de fixare a focarului de fractur, inserate n montaje de compresiune (5-7, 12, 14, 17, 22) i bazai pe studii care au testat materialele resorbabile sintetice pentru fixarea fracturilor diafizare ale femurului (15) am considerat util verificarea clinic a tijelor de acid poliglicolic (Biofix Braun GmbH) pentru stabilizarea fracturilor colului femural la cine. MATERIAL I METOD
Materialul biologic a fos reprezentat de 5 cazuri clinice, cini de talie mare cu fracturi unilaterale ale colului femural tabelul 1, fig. 1. Abordarea operatorie a articulaiei s-a efectuat prin acces lateral cu osteotomia trocanterului mare al femurului (20). Intervenia chirurgical, la toi cinii, s-a desfurat sub anestezie general de tip N-NLA (xylazin -1 mg x kgcorp-1, ketamine - 2 mg x kgcorp-1, inducie cu thiopenthal sodic - autodozaj i narcoz inhalatorie n circuit nchis cu halothan - 4 2%). Dup examinarea situaiei patologice locale (amploarea distruciei capsulei, integritatea capului femural, congruena cavitaii acetabulare) s-a efectuat reducerea manual-instrumental a focarului de fractur.
467
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 1 Materialul biologic Nr crt 1 2 3 4 5 Greutate (kg) 24 28 22 45 36 Vrsta (ani) 2 2 4 8 3 Diagnosticul Fractura colului Luxaia capului femural femural x x x x x x x
Rasa Brac german Ciobnesc german Collie Ciobnesc mioritic Rottweiler
Fig. 1. Radiografie preoperatorie a cazului cu nr. crt 5 fractura colului femoral cu dislocaie coxofemural
Fig. 2. Imagine intraoperatorie a fixrii fracturii colului femural cu tije
Fig. 3. Radiografie postoperatorie a cazului cu nr. crt 5.
Pentru fixarea focarului s-a recurs la forarea cu un burghiu de 2,5 mm a trei traiecte osoase transfixice dinspre capul femural spre cel de al treilea trocanter al femurului tehnica triangulaiei (2-4, 8, 17-19, 21, 22) pentru cazurile nsoite i de luxaia capului femural. La cele trei cazuri care prezentu numai fractura simpl a colului femural, traiectele osoase au fost forate dinspre cel de al treilea trocanter al femurului nspre capul femural, nepenetrnd suprafaa articular a acestuia. n traictele forate s-au introdus forat trei broe de Biofix cu diametrul de 2,6 mm. Asigurarea compresiunii n focar s-a facut prin sertizarea termic a capetelor broelor, conform indicaiilor productorului Braun GmbH fig. 2. n cele dou cazuri (cu fractura colului i luxaia capului femural) s-a recurs la capsulorafie parial urmat de protezarea cu fir de Nylon 4-6 m a marginii craniale a capsulei articulare (9). 468
Fixarea trocanterului mare osteotomizat s-a efectuat cu dou broe Krschner i o ligatur metalic de tensionare fig. 3. Postoperator s-a efectuat o radiografie de control, verificnd corectitudinea reducerii i fixrii. Pentru prevenirea complicaiilor septice, timp de 5 zile, s-a administrat cefalexin 50 mg x kgcorp-1. Un pansament de tip Ehmer a asigurat imobilizarea suplimentar a membrului afectat, timp de 14 zile. Evoluia postoperatorie a fost monitorizat n ambulator de ctre proprietar i de medicul curant, fiecare individ beneficiind i de 2-4 reevaluri prin examen clinic i radiografic n intervalul 14 180 de zile postoperator. S-a urmrit: stabilitatea montajului, modul i calitatea vindecrii osoase, locomoia i mobilitatea articular.
REZULTATE I DISCUII Evoluia postoperatorie a celor cinci cazuri a fost excelent. Postoperator, dup primele 14 zile, trei animale au prezentat o chioptur de gradul 3 i 4 iar doi cini o schioptur de gradul 2, timp de 10-14 zile. Dup alte 10 14 zile, locomoia a devenit normal la toi cei cinci indivizi. Nu s-a semnalat nici o complicaie postoperatorie. Mobilitatea pasiv a articulaiei coxofemurale operate este redobndit n totalitate, la toi cei cinci indivizi, dup 3-4 sptmni de la operaie. La 45 de zile postoperator, analiza mersului nu a relevat, la cazuistica luat n studiu, deosebiri de mobilitate articular (extensie, flexie, abducie, rotaie) ntre piciorul operat i cel integru. Imaginile radiografice au surprins o vindecare osoas complet la 6-8 sptmni postoperator. Integritatea i corectitudinea amplasrii tijelor de acid poliglicolic nu a putut fi surprins radiografic la nici unul din cele cinci cazuri. La controalele radiografice efectuate la 4, 6, 8, 10 si 24 de sptmni nu au fost surprinse modificri care s indice instalarea necrozei avasculare a capului femural, vicii de calusare i / sau semne de osteoartrit. Abordarea focarului de fractur prin acces lateral cu osteotomia trocanterului mare al femurului (20) permite o expunere larg, o identificare i o manipulare facil a fragmentelor osoase din focarul de fractur-dislocaie, permind, fa de alte procedee (2-4, 8, 10, 18, 19, 21, 22), efectuarea reducerii i fixrii.sub controlul vizual deplin a tuturor elementelor anatomice implicate. Tijele de acid poliglicolic (Biofix) inserate dup tehnica triangulaiei, practicat pentru inseria broelor metalice (4, 8, 18, 21), asigur o stabilitate excelent a fracturilor colului femural la cine. Vindecarea focarelor de fractur are loc cu 1-4 sptmni mai rapid dect n fixrile cu mijloace metalice (1, 3, 6, 14, 17, 18, 21, 22), confirmnd rezultatele raportate n osteosinteza cu tije resorbabile a fracturilor diafizei femurului (15). Absena modificrilor radiografice patognomonice pentru necroza avascular a capului femural i osteoartrit (oz) coxofemural, nregistrat la
469
cele cinci cazuri, a fost semnalat i de ali autori care au recurs ns la fixri metalice n montaje de compresiune (3, 6, 8, 11, 16, 17), atestnd stabilitatea i eficacitatea utilizrii broelor de acid poliglicolic pentru fixarea fracturilor colului femural la cine. CONCLUZII Fixarea fracturilor colului femural cu tije de acid poliglicolic, inserate dup tehnica triangulaiei, permite realizarea unui montaj stabil, comparabil cu cel obinut cu mijloacele metalice, asigurnd o vindecare fr complicaii. n fracturile colului femural la cine montajele cu tije de acid poliglicolic asigur o vindecare mai rapid a dect cea obinut prin fixrile cu materiale metalice.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Beale B., 2004 - Orthopedic clinical techniques femur fracture repair. Clin Tech Small Anim Pract. 19 (3): 134-50. Pub. Med. Index: 15712460 Bojrab M.J., 1990 - Current Techniques in Small Animal Surgery. 3rd ed., Philadelphia, Lea & Febiger, 682-685 Brinker W.O., Piermattei D.L., Flo G.L., 1990 - Handbook of Small Animal Orthopaedics and Fracture Treatment. 3rd ed., Philadelphia, W. B. Saunders, 486-488 Brinker W.O., Olmstead M.L., Sumner-Smith G., Prieur W.D., 1998 - Manual of Internal Fixation in Small Animals. 2nd ed., Springer, 155-158 Brown B.C., 1972 - Femoral neck fracture in a dog. J Am Vet Med Assoc., 1;161 (7): 800-2. Pub. Med. Index: 5074262 DeCamp C.E., Probst C.W., Thomas M.W., 1989 - Internal fixation of femoral capital physeal injuries in dogs: 40 cases (1979-1987). J Am Vet Med Assoc. Jun 15; 194 (12): 1750-4, Pub. Med. Index: 2753801. Engel E.E., Volpon J.B., Shimano A.C., 1997 - Mechanical testing of the tension band wire fixation in the proximal femur. Arch Orthop Trauma Surg., 116 (5): 266-70. Pub. Med. Index: 9177801 Fossum Theresa Welch, 1999 Manual of Small Animal Surgery. Ed. Mosby, St. Louis, 689-691. Igna C., 2005 - Contribuii la tratamentul chirurgical al luxaiei coxo-femurale. Lucr. t. USAMVB Timioara, Med. Vet., vol XXXVIII, 238-241. LEplattenier H.F., Montavon P.M., 1997 - Avulsion fractures of the femoral head: internal fixation using a ventral approach to the hip joint. VCOT, 1: 23-26 Kaderly R.E., Anderson W.D., Anderson B.G., 1982 - Extraosseous vascular supply to the mature dogs coxofemoral joint. Am J Vet Res, 43: 1208-1214. Kuzma A., Sumner-Smith G., Miller C., Mc Laughlin R., 1989 - A technique for repair of femoral capital epiphyseal fractures in the dog. J Small Anim Pract, 30: 444-448 Matis U., Waibl H., 1985 - Proximal femoral fractures in cats and dogs. Tierarztl Prax Suppl, 1: 159-78. Pub. Med. Index: 4012774 Miller A., Anderson T.J., 1993 - Complication of articular lag screw fixation of femoral capital epiphyseal separations. J Small Anim Pract 34: 9-12
470
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 15. Miettinen H., Makela E.A., Rokkanen P., Tormala P., 1992 - Fixation of femoral shaft osteotomy with intramedullary metallic or absorbable rod: an experimental study on growing dogs. J Biomater Sci Polym Ed., 4 (2): 135-43. Pub. Med. Index: 1336673 Moon M.S., Cho D.Y., 1980 - Trochanteric intra-osseous venography in femoral neck fractures in the dog. Int Orthop.; 3 (4): 265-9. Pub. Med. Index: 7399765 Necas A., Dvorak M., 2003 - Surgical treatment of a saggital intraarticular femoral head fracture with coxofemoral dislocation in two mature dogs. Acta Vet. Brno, 72: 261265. Nunamaker D.M., 1973 - Repair of femoral head and neck fractures by interfragmentary compression. J Am Vet Med Assoc., 1, 162 (7): 569-72. Pub. Med. Index: 4692824 Olmstead M.L., 1995 - Small Animal Orthopaedics. Mosby, 228-230 Piermattei D.L., Greeley R.G., 2003 - An atlas of surgical approaches to the bones th of the dog and cat. Ed. Ed. W.B. Saunders Comp., Philadelphia, 4 ed., 300305. Slatter D.H., 1993 - Textbook of Small Animal Surgery. Vol. 2. Philadelphia, W. B. Saunders, 1805-1808. Vernon F.F., Olmstead M.L., 1983 - Femoral Head Fractures Resulting in Epiphyseal Fragmentation: Results of Repair in 5 Dogs. Vet Surg, 12: 123-125
16. 17. 18. 19. 20. 21. 22.
471
INCIDENA I CONDUITA TERAPEUTIC N PARODONTOPATII LA CINE

INCIDENCE AND TERAPEUTICAL GUIDANCE PARODONTOPHATY IN DOGS
A. MUSTE A., N. MATE, L. OANA, A. TIMEN, Fl. BETEG, C. OBER U.S.A.M.V. Cluj-Napoca Parodontal diseases are frequently seen in dogs. From twenty dogs, fourteen of them were diagnosed with parodontal diseases.In early stages of parodontal diseases surgical removal of necrotic tissues was performed. In deep tissues infections the surgical method is more complex using mucosal membranes to cover the affected area. Complete healing depends on the surgical technique and the quality of the mucosal membrane from surrounding area.
La specia canin parodontopatiile sunt frecvent ntlnite, cu repercursiuni directe asupra strii de sntate. n catalogarea i aprecierea acestor stri, trebuie s inem cont de particularitile speciei, de tipul masticaiei, felul alimentelor, regimul alimentar, igiena bucal, tulburri endocrine, boli metabolice, perturbri i maladii sanguine. Cauzele parodontopatiilor sunt cu preponderen de origine alimentar, traumatic i accidental (prin lezionarea tisular bucal) urmat de contaminare i suprainfectare cu germeni patogeni. Adesea suprainfectarea determin formarea de granuloame dentare sau pungi gingivale cu urmri directe asupra integritii esutului osos. Cauzele apariiei, terenul biologic, incidena acestora i manifestrile clinice, evoluia, prognosticul, reuita terapiei sunt aspecte deosebit de complexe tocmai prin faptul c n derularea acestor entiti intervin o serie de factori favorizani sau determinani. n aceast lucrare am ncercat s urmrim unele aspecte privind incidena i terapia parodontopatiilor. MATERIAL I METOD
Cazuistica luat n studiu a fost format dintr-un numr de 20 cini de rase i vrste diferite (tabel 1) prezentai la Clinica de Patologie i Clinic Chirurgical a Facultii de Medicin Veterinar Cluj-Napoca, avnd o simptomatologie de disconfort bucal. Din cei 20 de cini examinai la 14 dintre ei s-au identificat leziuni de parodontopatii. La examenul clinic efectuat individual s-a apreciat prezena sau absena acestor leziuni, localizarea acestora i modificrile locale existente. La toate cazurile luate n observaie poriunea din zona afectat prezenta semne de 472
inflamaie, tumefiere, edem, esuturi devitalizate, pungi parodontale i resorbie osoas n diferite grade.
Tabelul 1 Incidena parodontopatiilor la cine Nr. Crt. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. Rasa Ras comun Ciobnesc german Tekel Rottweiler Mastino Napolitano Ras comun Saint Bernard Ciobnesc german Ras comun Rottweiler Ras comun Chow-chow Setter irlandez Cocker spaniel Caniche Cocker spaniel Brac german Brac german Cocker spaniol Caniche Sex Mascul Mascul Femel Mascul Femel Mascul Femel Femel Mascul Femel Mascul Mascul Femel Mascul Mascul Femel Mascul Mascul Femel Femel Vrsta 8 9 2,5 7 4 7 7 4 7 6 6 4 6 6,3 5,5 6 5 4 6 9 Parodontopatii +
+ + + + + + + + + + + + +
Pentru cazuistica luat n studiu am folosit dou metode chirurgicale cu scopul de a ndeprta esuturile devitalizate sau necrozate i crearea de condiii pentru regenerarea esutului osos. Prima metod folosit a fost chiuretajul parodontal. Acest procedeu l-am utilizat la 6 subieci care au prezentat: pungi inactive, leziuni localizate la un dinte, leziuni parodontale strmpte, pungi supraosoase sau ca metod alternativ n parodontitele severe. Cinii sunt anesteziai prin neuroleptanalgezie, dup care sunt aezai n decubit lateral sau sternoabdominal. Chiuretajul const n eliminarea feei interne a peretelui pungii parodontale cu ajutorul unei chiurete. Consecutiv se ndeprteaz tartrul subgingival, cementul compromis, se elimin esuturile inflamate i se realizeaz surfasajul radicular. Prin aceste manopere se urmrete ndeprtarea pungii parodontale i obinerea unui ataament nou. A doua metod folosit este tot chirurgical i este cunoscut ca operaie cu lambou. Principiul metodei const n descoperirea osului alveolar prin decolarea lambourilor mucoperiostale, ndeprtarea elementelor patologice, 473
chiuretajul pungilor subgingivale sau osoase, nivelarea osului, urmate de sutur. Este metoda care se folosete n cazul pungilor osoase adnci situate la un dinte, la un numr redus, sau generalizate. Aceast metod s-a aplicat la 8 subieci din cei 14 luai n tratament. Tehnica operatorie const n efectuarea a dou incizii vertical oblice pe versantul vestibular i oral de o parte i alta a grupului de dini care vor fi operai unite printr-o incizie orizontal de-a lungul marginei libere gingivale, secionnduse papilele interdentare, care de obicei se gsesc tumefiate n urma procesului inflamator. n acest fel inciziile formeaz un trapez, cu baza spre fundul de sac vestibular. Inciziile de pe versantul vestibular merg n general pn la limita mucoasei fixe, iar inciziile din bolta palatin vor fi scurte pentru a nu seciona vasele. n situaiile n care se face intervenia pe toat arcada ntr-o edin se traseaz nti incizia marginal orizontal de la un capt la cellalt al arcadei i apoi dou incizii vertical-oblice, de o parte i de alta, n dreptul caninilor sau primilor premolari n raport cu forma arcadei. Cu ajutorul unui decolator fin se desprind lambourile gingivoperiostice i se rstoarn vestibular i oral. Decolarea trebuie fcut cu manopere blnde, pentru a nu perfora lamboul. Lambourile vestibulare sunt meninute ndeprtate cu deprttorul cu gheare, descoperindu-se astfel osul alveolar pe ntinderea necesar pentru a se avea sub control pungile osoase. Cu chiurete de diferite mrimi se chiureteaz toate fongozitile i esutul de granulaie, insistnd n mod cu totul deosebit n pungile osoase, de-a lungul rdcinilor dentare. Se face apoi netezirea osului, aceast regularizare urmrete transformarea atrofiei verticale ntr-o atrofie orizontal, respectiv obinerea unei margini alveolare uniforme, netede, cu pante line n jurul dinilor desfinndu-se pungile osoase n jurul rdcinilor. In finalul manoperelor osul trebuie s rmn curat, neted, fr poriuni necrotice, fr proeminene i anfractuoziti, iar pungilor de osteoliz periarticular s li se dea forma de plnie foarte evazat, care s nu favorizeze nici un fel de retenie. Se completeaz chiuretajul de pe poriunea decolat a lambourilor mucoperiostatice, pentru a nltura orice urm de esut de granulaie sau de epiteliu invaginat, de pe peretele intern al fostelor pungi paradontice. Lambourile periosteomucoase sunt readuse peste plaga osoas i suturate cu ethicon, prolene, dexon, fire care vor fi trecute prin spaiile interdentare. n aceast etap trebuie avut grij s nu rmn spaii moarte care s favorizeze formarea de colecii, motiv pentru care periosteomucoasa va trebui s se adapteze intim la suprafaa osoas. Chiuretajul gingival precum i operaia cu lambou se pot asocia n tratamentul parodontopatiilor marginale n raport de forma leziunilor i topografia acestora. Astfel la nivelul poriunii de arcad, n care pungile nu depesc 2-3 mm, se face chiuretajul chirurgical, iar n poriunile n care pungile depesc 3-4 mm se poate face fie gingivectomia fie operaia cu lambou. Cteva zile (5-7) postoperator la nivelul inciziilor gingivale se aplic o medicaie bazat pe antibiotice i antiinflamatoare (mibazon unguent, Hidrocortizon unguent, Asocilin unguent, Oxi-vet spray, Oximanirom pulvis). Dup aproximativ 8-10 zile, firele se scot, iar mucoasa trebuie s fie complet vindecat. 474
REZULTATE I DISCUII Aa cum s-a menionat, la tehnicile operatorii interveniile chirurgicale de lambou dau rezultate foarte bune atunci cnd esutul osos afectat este ndeprtat complet pn la esutul sntos, urmat de aplicarea unei medicaii specifice. n cazuistica noastr din cei 12 cini la 10 dintre ei am practicat operaie radicular prin utilizarea lamboului chirurgical, iar la 2 exemplare a fost nevoie doar de chiuretaj chirurgical. Intervenia chirurgical a decurs normal, iar postoperator nu am ntreprins complicaii cu excepia a 2 cazuri la care s-a produs deschiderea rnii cu decolarea lamboului. Acest neajuns s-a remediat prin nlocuirea firelor vechi. Considerm c este nevoie de atenie la afrontarea lambourilor decolate pentru chiuretajul osos i realizarea unei hemostaze ngrijite n timpul actului operator. CONCLUZII Leziunile inflamatorii i necrotico-supurative sunt prezente att la nivelul esuturilor moi ct i la nivelul esuturilor dure ale cavitii bucale indiferent de vrst (tabel. 1), regim alimentar sau stare de ntreinere, caracterul profilactic avnd o importan mult mai nsemnat. Parodontopatiile marginale sau vestibulare mandibulare sau palatine pot fi tratate chirurgical prin diferite metode sau tehnici cu respectarea a cel puin dou criterii: acela al ndeprtrii n totalitate a esutului necrozat, devitalizat i acoperirea complet cu lambou a cmpului operator. Pentru o vindecare complet i ntr-un timp relativ scurt recomandm ca inciziile care se practic s fie scurte i paralele pe direcia de cretere a miofibrilelor. La nchiderea rnii postoperatorii, se va evita formarea de hematoame i buzunare care s duc la acumularea de secreii. n funcie de talie, starea de sntate a lambourilor, lipsa de substan. distana dintre firele de sutur va fi mic (2-4mm) iar grosimea firelor potrivit.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. Baredstein A., Nilveus R., Egelberg J., 1985 Effect of nonsurgical periodontal therapy. Bleeding, suppuration and probing depth in sites with robing attachement loss. J. Clin. Periodont 12: 432 440. Bercy P., Tenembaum , 1996 Paradontologie. Du diagnostic la practique. Bruxelles: De Boeck Universit. Haryey C.E., Emily P.P., 1993 Small Animal Dentistry. Philadelphia, CY Mosby Co. Holmstrom S.E., 1989 Periodontal disease, Compendium 11: 1485.
475
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 5. 6. 7. 8. 9. Lamont McNeil R., Somerman M., 2000 Development and regeneration of the periodontium: parallels and contrasts Periodontology, Vol. 19: 8- 20. Morgan J.P., Miyabayaschi T., Anderson J., Klinge B., 1990 - Periodontal bone loss in the aging bucale dog a radiographia study, J Clin Periodont 17: 630. Muste A., A. Serbnescu, P. Magler, 2003 Implantul dentar la cine, Simpozion tiinific Internaional 70 de ani ai Universitii Agrare de Stat din Moldova, Chiinu 7-8 octombrie 2003, pag. 112-113. Muste A., N. Mate, L.Oana, A. Timen, Fl. Beteg, 2004 Tratamentul edentaiei la cine, Simpozion tiinific Timioara , Vol.XXXVII, pag. 546. Polimeni G., Albandar J.M, and Wikesju M.E., 2002 Prognostic factors for alveolar regeneration: osteogenic potential of rezistent bone. Journal of clinical Periodontology 31 (10) pag. 840 844.
476
TRANSPOZIIONAREA CANALULUI STENON CU DESCHIDEREA ACESTUIA N SACUL CONJUNCTIVAL

STENON CHANNEL TRANSPOSITION IN THE CONJUNCTIVAL REGION
L. OANA, A. TIMEN, A. MUSTE, N. MATE, Fl. BETEG Keratoconjunctivitis sica in not frequently seen in animals.In dogs 5% of cases with eye problems have also this disease. Tear secretion may be totally reduced causing keratitis and blindness. The paper presents the surgical procedure consisting in Stenon chanel transposition in the eye region. Surgical procedure was performed in one dog with keratoconjunctivitis sica and the results were very good.
MATERIAL I METOD
Operaia chirurgical s-a efectuat pe un cine, mascul de ras comun avnd vrsta de 5 ani, prezentnd simptome ale cheratoconjunctivitei uscate cronice bilaterale, care a fost tratat cu colire i unguente oftalmice dar nu ntr-un mod susinut, ci doar sporadic, ceea ce nu a dus la nlturarea consecinelor dezastruoase ale uscrii polului anterior a globului ocular. Pacientul prezenta urmtoarele semne clinice: corneea s-a uscat progresiv, aparnd vlurit, acoperit de secreii uscate, micrile pleoapelor fiind dificile. Aceasta a dus la iritarea suprafeei corneei care mai trziu a dezvoltat pe suprafaa sa , n mod normal transparent, vase de snge i pigmeni. Tabolul clinic, alturi de testul Schirmer au permis stabilirea diagnosticului de cheratoconjunctivit ursac. Pentru testul Schirmer am folosit o fie de hrtie de filtru Whattmann N=41, lat de 5 mm i lung de 35 mm. La extremitate, am ndoit 5 mm folosind o pens din material plastic, ne fiind indicat a se folosi degetele. Partea ndoit a hrtiei de filtru am introdus-o sub pleoapa inferioar i am lasat-o timp de un minut. Interpretarea se face citindu-se umezirea pe fia de hrtie de filtru. Umezirea pe o lungime mai mic de 9 mm este considerat nesatisfctoare, ntre 9 mm i 22 mm cu media de 14 mm este normal, iar peste 22 mm este excesiv. Rezultatul nostru la testul Schirmer a fost de 6 mm, fapt ce dovedete insuficiena de secreie lacrimal. Tehnica operatoare Locul de elecie este reprezentat de regiunea maseterin, pe zona de proiecie a canalului Stenon. ncizia pielii se ntinde pe o distana de 6 cm, la mijlocul distanei dintre glanda lacrimal i papila canalului Stenon care se deschide la nivelul molarului 3 superior.
477
esutul conjunctiv subcutanat a fost dilacerat cu ajutorul unei foarfeci chirurgicale boante, evideniindu-se fascia muchiului maseter, adiacent se gsete treimea mijlocie a canalului Stenon. Canalul Stenon este situat ntre nervul facial i nervul bucal dorsal. Diferenierea se face destul de greu, deoarece au aceeai grosime, fiind totui difereniate prin coloraie astfel, canalul Stenon are o culoare alb-roz, pe cnd nervii au o culoare alb. Dilacerarea canalului Stenon se face cu greutate deoarece este bine ataat de fascia muchiului maseter. De asemenea se evit lezionarea formaiunilor nvecinate cum ar fi nervii bucali i multiplele ramuri ale venei faciale. n continuare se izoleaz n sens oral canalul Stenon, pn la papila ce se deschide n cavitatea bucal, apoi am secionat mucoasa bucal n jurul papilei. Dup ndeprtarea papilei, plaga din mucoasa bucal se sutureaz. Trebuie acordat o mare grij poriunii terminale a canalului din cauza traiectului su prin submucoasa cavitii bucale, traiect ce poate avea o lungime de 0,5 1,0 cm. Urmtoarea etap a operaiei este tunelizarea subcutanat i crearea noului traiect, astfel cu o sond butonat se construiete un tunel subcutanat pn n sacul conjunctival.
Sonda este mpins cu presiune n esutul subcutanat pn apare la nivelul mucoasei conjunctivale, fr a o penetra. Cu ajutorul bisturiului efectum o mic incizie desupra sondei butonate crend o deschidere n care se aduce captul canalului Stenon. Cu ajutorul unui fir de sutur se prinde papila canalului Stenon pentru a fi dirijat mai uor spre deschiderea din sacul conjunctival. Papila i canalul sunt dirijate prin tunelul subcutanat creat, pn la apariia papilei canalului Stenon, la nivelul mucoasei conjunctivale. Papila se sutureaz la mucoas cu ajutorul a trei fire de sutur (Vicryl 2.0 ). Plaga operatorie de la nivelul zonei maseterine se sutureaz n dou straturi. nti fascia superficial a muchiului maseter cu fire resorbabile i apoi pielea cu a chirurgical.
REZULTATE I DISCUII Postoperator am urmrit evoluia strii generale a animalului, vindecarea plgilor ct i evoluia cheratoconjunctivitei uscate.
478
I-am administrat pe cale general antibiotice timp de trei zile i am urmrit evoluia procesului de vindecare a plgilor. Zilnic am efectuat toatetarea marginii palpebrale pentru ndeprtarea secreiilor i a crustelor formate, aplicnd n sacii conjunctivali unguent oftalmic pe baz de kanamicin i hidrocortizon. Secreia salivar a glandei parotidiene se putea observa cu uurin la nivelul globului ocular, mai ales n timpul mesei, crend falsa impresie de epifor, cile lacrimale nereuind s canalizeze ntreaga cantitate de secreii. Tratamentul la nivelul sacilor conjunctivali s-a continuat timp de o lun , pn la revenirea transparenei corneei i dispariia complet a semnelor de cheratoconjunctivit. Tratamentul medicamentos n cheratoconjunctivita uscat trebuie s identifice n primul rnd, cauzele care au determinat boala. n prima perioad se recomand tratament medicamentos simplu, care urmrete lubrefierea i reumezirea corneei. Se va alege un unguent oftalmic cu pilocarpin pentru a activa secreia lacrimal, la care se adaug vitamina A uleioas i se poate alterna cu instalaii de soluie 20% de acetilcistein, de 4-5 ori pe zi, cte 3 picturi. Se va institui i un tratament general cu vitaminele B1, B2, C, A , D, E, n caz de infecie se aplic o dat la 2-3 zile unguent iodoformat 3-4%. Terapia medical la a cheratoconjunctivitei acute include substitueni de lacrimi , msur alternativ de tratament ce are inconvenientul frecvenei mari cu care trebuie aplicate acestea (aproximativ 4-6 ori pe zi ). O alt abordare a tratamentului medicamentos este stimularea secreiilor lacrimale deja existente, pentu a crete umiditatea ochiului, folosind unguente cu cyclosporine (Optimmune) de dou ori pe zi, timp de mai multe sptmni (Kirk i col. 1995). Administrarea oral a pilocarpinei (de 1- 3 ori pe zi) poate stimula producia de lacrimi, dar pilocarpina cauzeaz hipersalivaie i uneori emez i diaree. Cauzele acestei boli sunt mai greu identificabile de aceea tratamentul vizeaz n special nlocuirea lacrimilor mai degrab dect corectarea cauzei. Postoperator nu s-au observat disfuncii n masticaie, deglutiie i digestie. Complicaiile ce ar putea s apar dup efectuarea operaiei sunt secionarea i rsucirea n jurul propriului ax a canalului Stenon. Rsucirea canalului Stenon cu mai mult de 180 se manifest prin secreie intermitent, redus sau absent. O consecin a transpoziionrii canalului Stenon poate fi apariia la nivelul globului ocular, la nivelul conjunctivei, al pleoapelor, a unui precipitat cristalin de sruri minerale ( carbonat de calciu, fosfai, oxalai sau o combinaie dintre acetia). Se pare c apariia acestui precipitat este strns legat de hiperactivitatea glandei parotide (5). La cazul nostru nu s-a identificat nici un fel de precipitat.
479
CONCLUZII n cheratoconjunctivitele acute se aplic iniial un tratament medicamentos, care const n introducerea n sacul conjunctival a unor produse ce urmresc lubrefierea i reumezirea corneei; n cheratoconjunctivitele cronice, datorit inconvenientelor tratamentului medicamentos, se indicat transpoziionarea canalului Stenon la nivelul mucoasei conjunctivale; Datorit similitudinii compoziiei secreiei lacrimale cu cea a salivei parotidiene, saliva este foarte bine tolerat de ctre mucoasa conjunctival i cornee. Dei unii autori consider c saliva i lichidul sinovial pot da reacie de corp strin n organism, la nivelul mucoasei conjunctivale noi nu am sesizat nici un fel de reacie, dect cea dat de traumatismul operator; Faptul c intervenia operatoare se execut fr necesitatea unei aparaturi i materiale speciale, preferm tratamentul chirurgical n cheratoconjunctivita uscat fa de cel medicamentos care trebuie aplicat de 4-6 ori pe zi; Nu am constatat modificri cauzate de aportul insufucient de saliv, deglutiia, masticaia i toate procesele digestive i metabolice desfurndu-se normal.
BIBLIOGARFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Betts, D.M., 1977 - The surgical correction of parotid duct transposition failures, J. Am. Anim. Hosp. Assoc. 13: 695-700. Brooks, W.C., 2002 - Dry eye, Keraconjunctivitis sicca, The Pet Health Library. Gelatt, K.N., Peterson Gelatt, J., 2001 - Small Animal Ophthalmic Surgery, pg. 128140. rd Grahn, B.H., 1999 - Diseases and surgery of the canine nasolacrimal system, 3 edition, Baltimore , pg.569-581. Kirk, R.W. and Bonagura, J.D., 1995 - Keratoconjuctivitis sicca. Kirk's Current Veterinary Therapy XII Small Animal Practice. p. 1231-1239. W.B. Saunders Co., Toronto. Lavignette, A.N., 1996 - Keratoconjunctivitis sicca in a dog treated by transposition of the parotid salivary duct. J. Am. Vet. Med. Assoc. 148: 778-786. Mate, N., 2004 - Patologia chirurgical a animalelor domestice, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj Napoca, pg. 302-367. Moldovan, M. Bolte, S., 1984 - Oftalmologie veterinar, Editura Ceres, pg. 193-205. Moore, C.P., 2000 - Dry eye sindroms: KCS and other tear deficent disease. Transactions North American Veterinary of 14, pg. 560-562. Ognean, L., Dojan, N., Roioru, C., 2000 - Fiziologia animalelor Vol. I, Editura Presa Universitar Clujean, pg. 54-57.
480
TEHNICA PROSTATECTOMIEI TOTALE LA CINE

TOTAL PROSTATECTOMY IN DOG
L. OANA, A. MUSTE, N. MATE, A. TIMEN, Fl. BETEG Prostatic diseases especially the tumours are frequently seen in dogs.Current medication can not resolve always the problems being necessary the prostatectomy. Total prostatectomy with urethral resection was the best procedure applied.
Animalele de companie de cele mai multe ori sunt privite ca i un membru al familiei. Datorit acestui fapt, afectivitatea i ngrijirea primit din partea stpnilor precum i ataamentul fa de acetia, sunt factori care duc la atingerea unor vrste naintate, uneori chiar impresionante. Din pcate, odat cu naintarea n vrst apar i o serie de boli grave care la tineret sau n cazul animalelor de rent nu se manifest clinic. Aa este cazul afeciunilor meoplazice ale prostatei la cine, afeciune care n multe cazuri nu ced la tratament medicamentos i trebuie intervenie chirurgical. n cazul n care carcinomul a fost descoperit nainte de apariia metastazelor, conduita de urmat este intervenia chirurgical cu ndeprtarea prostatei n ntregime, fiind recomandat i un tratament cu citostatice. MATERIAL I METOD
Operaiile s-au efectuat pe 5 cini de vrste diferite, ras comun (tabel 1) care prezentau semne clinice specifice afeciunilor prostatei (miciuni dese i cu dificultate, la tueul rectal s-a constatat mrirea n volum a prostatei).
Tabelul 1 Pacientul Rasa Vrsta 1 comun 9 ani 2 comun 15 ani 3 comun 14 ani 4 comun 11 ani 5 comun 12 ani
Instrumentarul i materialele utilizate au fost cele folosite curent n interveniile chirurgicale. n experimentul nostru am utilizat metoda prin ablaia prostatei cu rezecia unei poriuni de uretr urmat de anastomoza termino-terminal a acesteia. Preoperator. Animalele au fost supuse unei diete alimentare cu 12 ore nainte de intervenia chirurgical. nainte de operaie am determinat timpii de sngerare i de coagulare, care trebuie s se ncadreze n limitele fiziologice. 481
Anestezie general prin neuroleptanalgezie i anestezie local. Tehnica operatoare Trebuie menionat de la bun nceput c aceast tehnic necesit prezena a dou ajutoare care s aib un minimum de cunotine de medicin n general i de chirurgie n special. n vederea operaiei animalul a fost contenionat n decubit dorsal. S-a efectuat laparatomie paramedian, de la nivelul cicatricei ombilicale pn n regiunea prepubian. Pentru vizualizarea prostatei, marginile plgii sunt ndeprtate cu ajutorul deprttoarelor simple Farabeuf, iar masa gastrointestinal este izolat ntr-un cmp steril i mpins cranial, fr a fi scoas din cavitatea abdominal. Acest lucru se realizeaz cu scopul evitrii periclitrii intestinelor i de asemenea pentru a oferi condiii de lucru mai bune. De menionat c masa intestinal, vezica urinar i cavitatea abdominal au fost irigate periodic cu soluii fiziologice pe toat durata interveniei operatorii. n urmtoarea etap am evideniat vezica urinar i am introdus un cateter uretral pentru vidarea acesteia. Dup vidarea complet, pentru evidenierea prostatei, a gtului vezical i al uretrei am dilacerat esutul adipos periprostatic i am ncercat mobilizarea ct mai mult a prostatei i a uretrei n sens cranial. Dup evidenierea gtului vezical i a uretrei i vidarea vezicii urinare cateterul se retrage uor din vezic pentru a facilita rezecia uretrei. Am aplicat dou fire de traciune pe poriunea caudal a uretrei pentru a uura realizarea anastomozei. Se asigur hemostaza la nivelul prostatei dup care cu ajutorul foarfecelor chirurgicale drepte are loc ndeprtarea prostatei i a unei poriuni de uretr. Trebuie evitat rezecia unei poriuni mari din uretr pentru a conserva ct mai mult din gtul vezicii i din poriunea caudal a uretre (Fig. 1). Dup ndeprtarea prostatei cateterul se redirecioneaz spre vezic. Capetele secionate ale uretrei se afronteaz i se trece la anastomozarea lor n puncte separate cu fir resorbabil polidioxanol mrimea 4.0. Anastomozarea s-a fcut iniial n puncte cardinale urmnd completarea celorlalte puncte de sutur (Fig. 2). Afrontarea trebuie fcut ct mai bine i mai corect pentru a evita rmnerea de spaii prin care s aib loc revrsarea urinei n cavitatea abdominal.
Fig. 1 Ablaia prostatei
Fig. 2 Sutura uretrei
482
Se verific nc odat dac nu exist hemoragii sau corpi strini la nivelul cavitii abdominale dup care se face lavajul peritoneal cu soluie fiziologic i antibiotice dup care se aplic intraabdominal un unguent cu antibiotic pentru a mpiedica apariia aderenelor i a eventualelor infecii. Urmtoarea etap este dat de nchiderea peretelui abdominal pe dou straturi anatomice. Primul strat reprezentat de peritoneu i esutul muscular s-a suturat n fir continuu cu Catgut mrimea 2.0. Aceast etap trebuie efectuat cu mare pruden pentru a evita ciupirea unei anse intestinale sau suturarea acesteia la peretele abdominal. Al doilea strat reprezentat de esutul conjunctiv subcutanat i piele s-a suturat n puncte separate cu mtase chirurgical lsnduse loc pentru dren. Acest loc de dren este necesar pentru a evita formarea unor colecii datorate dilacerrilor ce au loc. Pe locul inciziei s-au fcut aspersiuni cu eter iodoformat, iar cateterul s-a fixat printr-un punct de sutur la pielea prepuului. Tratamentul postoperator Postoperator animalele au fost supuse unei antibioticoterapii, la primul pacient cu penicilin (1.000.000 U.I.) i streptomicin (1 g) zilnic, iar la ceilali cu enrofloxacin n doz de 1 ml/10 Kg mas corporal, zilnic timp de 5 zile. De asemenea s-a fcut lichido-terapie timp de dou zile iar cateterul a fost fixat pentru patru zile. Animalele au fost supuse unui regim dietetic pentru a evita coprostaza i a reduce riscul deirrii peretelui abdominal. Dup operaie animalele au fost termometrate zilnic timp de ase zile. Tratamentul plgii operatorii a constat n aplicarea zilnic de eter iodoformat n scopul grbirii cicatrizrii i prevenirii infeciei.
REZULTATE I DISCUII Evoluia postoperatorie a pacienilor a fost n general bun, n primele patru zile urinarea s-a efectuat prin cateter dup aceea pe cale natural. Pentru a mpiedica nchiderea cateterului, zona abdominal a fost protejat printr-un pansament Alfort. La doi cini datorit faptului c n primele 2 zile postoperator au refuzat consumul de hran, le-am administrat glucoz n perfuzie. La un pacient, la locul plgii operatorii s-a acumulat o secreie purulent care a necesitat nlturarea a 2 fire i realizarea drenajului. n medie, vindecarea s-a realizat n 12 zile de la operaie, fr apariia unor complicaii majore. La cazurile la care examenul histopatologic pune n eviden o tumor malign, este necesar completarea tratamentului operator cu citostatice. CONCLUZII Interveniile chirurgicale pe prostat n practica medical veterinar se fac rar i necesit respectarea cu strictee a unor reguli operatorii specifice.
483
n urma rezultatelor obinute dup operaia de prostatectomie total am ajuns la urmtoarele concluzii: 1. Deoarece operaia nu necesit aparatur i instrumentar special aceasta se poate executa n bune condiii n orice clinic veterinar, cu condiia respectrii tehnicii operatorii i a tratamentului postoperator specific operaiei de prostatectomie. 2. n urma acestui experiment s-a constatat c uretra prezint o capacitate mare de cicatrizare. n urma rezeciei i a anastomozrii ei, vindecarea plgii uretrale s-a realizat suficient de bine n 12 zile de la operaie. 3. Trebuie evitat rezecarea unei poriuni prea mari din uretr pentru a reduce riscul apariiei unor complicaii postoperatorii, amintind aici riscul cedrii suturilor uretrale care duc la uroperitoneu i peritonit, acestea fiind unele dintre cele mai grave. De asemenea trebuie asigurat un tratament postoperator adecvat n special cel cu antibiotice i cateterizarea uretrei timp de cteva zile pn cnd se realizeaz o cicatrice uretral suficient de rezistent. 4. Rezultatele obinute n urma operaiei de prostatectomie total arat c aceast tehnic aplicat corect duce la rezultate bune i la reducerea riscurilor majore pentru pacient. Datorit faptului c este o metod radical, duce la reducerea riscurilor de recidiv, pretndu-se efectuarea ei i n condiii de teren deoarece nu necesit o aparatur sofisticat, instrumentar special i condiii deosebite. n unele situaii tratamentul poate fi completat cu medicaie citostatic.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Bbasinger R.R., Rawlings C.A., 1987 - Surgical management of prostatic disease, Comp Cont Educ Pract Vet 9:993. Berry S.J., et al, 1986 - Effect of age, castrtation and testosterone replacement on the development and restoration of canine benign prostatic hyperplasia, Prostate 9:295. Bojrab Joseph M., 1998 - Curent tehniques in small animal surgery, fourth edition, Williams &Wilkins: 461-511. Harari J., Dupuis J., 1995 - Surgical Treatmens for prostatic disease in dog. Semin Vet Med Surg 10:43-47. Hardie E.M., 1989 - Peritonities from urogenital conditions, probl Vet Med 1:36. Heradie E.M. et al, 1984 - Complications of prostatic surgery, J Am Anim Hosp Assoc 20:50. Hargiss A.M., Miller L.M., 1983 - Prostatic carcinoma in the dog, Comp Cont Educ Pract Vet 5:647. Johnston G.R., 1991 - Diagnostic Imaging of the male canin reproductiv organs: Methods and limitations, Vet Clin North Am 21:553-590.
484
UTILIZAREA UNOR MATERIALE SINTETICE PENTRU NLOCUIREA LIGAMENTELOR NCRUCIATE LA CINE

SYNTHETIC MATERIALS USED FOR DOG CRUCIATE LIGAMENTS REPLACEMENT
A TIMEN, A. MUSTE, L. OANA, Monica COVACIU
There is no material accepted to substitute in perfect conditions the cruciate ligaments in dogs. Different surgical techniques depending on the pacient size and presence or absence of degenarative joint changes were performed. Every technique have advantages and desadvantages and thats why is very difficult to choose the perfect one. The paper presents the results obtained in using Mersilene and Nailon tape in cruciate ligaments replacement in dogs.
MATERIAL I METOD
Cercetrile au fost efectuate pe 11 cazuri clinice prezentate la consultaie cu chioptur de gradul I si II la unul sau ambele membre posterioare. n funcie de talia animalelor, vrsta i caracterul acut sau cronic al afeciunii am folosit tehnica operatoare pe care am considerat-o optim. Cazurile urmrite sunt prezentate n tabel. Vrsta animalelor a fost cuprins ntre 1 i 3 ani. Examenul radiologic efectuat cu dubl expunere medio-lateral i cranio-caudal a zonei grasetului a furnizat date importante referitoare la afeciunile intraarticulare. Mrirea spaiului articular femuro-tibial sau evidenierea artrofitelor pe condilii femurali au fost indicii importante pentru diagnosticul afeciunilor ligamentelor ncruciate. Datorit faptului c aceast afeciune apare la pacieni cu mas corporal i vrste foarte diferite alegerea tehnicii chirurgicale este un pas foarte important pentru chirurgul veterinar. Decizia terapeutic trebuie s in seama de talia cinelui, temperamentul acestuia, caracterul acut sau cronic al afeciunii, eventualele modificri articulare i nu n ultimul rnd de cooperarea proprietarului pentru recuperarea animalului.
485
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 1 Animalele luate n studiu care au prezentat ruptura ligamentelor ncruciate Nr. Crt. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Rasa Copoi ardelenesc Mastino napoletano Pittbull Schnauzer urias Labrador Terra Nova Dog German Greutatea Varsta Sex corporala (ani) (kg) 2 3 1 2 3 3 1 2,5 5 3 2 M M M F M M F M M F M 28 60 30 32 35 50 45 30 9 9 28 Diagnostic Ruptura LI CR. Dr. Ruptura LI CR. Dr. Ruptura LI CR. Stg. Ruptura LI CR. Dr. Ruptura LI CR. Stg. Ruptura LI CR. Dr. Ruptura LI CR. Stg. Ruptura LI CR. Stg. Ruptura LI CR. Dr. Ruptura LI CR. Stg. Ruptura LI CR. Dr. Metoda de tratament Banda de Mersilene Fir de Nylon Fir de Nylon Banda de Nylon Banda de Mersilene Banda de Nylon Banda de Mersilene Banda de Nylon Fir de Nylon Fir de Nylon Banda de Nylon
Ciobanesc german 9. Caniche 10. Cocker spaniel 11. Ciobanesc german
REZULTATE I DISCUII n cazul pacienilor de talie mic n cazul ruperii ligamentului ncruciat cranial este n general suficient excizia resturilor ligamentare. Aceast manoper se poate face uor prin artroscopie nefiind necesar intervenia chirurgical clasic. Rezultatul unei intervenii chirurgicale corect executate poate s fie compromis de nesupravegherea atent sau dezinteresul proprietarului n perioada de convalescen a cinelui. Nu am semnalat procese septice consecutive actului operator iar recuperarea funcional a membrului a fost foarte rapid. Astfel la 7-8 zile dup intervenie a reaprut sprijinul pe vrful degetelor membrului operat pentru ca la 3 sptmni chioptura s dispar complet. Tensionarea prea puternic a firului poate duce la deirri ale ligamentului patelar. Pentru a asigura o rezisten i stabilitate mai mare recomandm ca firul s fie trecut prin ligamentul patelar sub forma literei U, perpendicular pe traiectul fibrelor acestuia. n plus n cazul unor defecte minore de conformaie ale scheletului membrului posterior asociate cu rotaia intern minor a tibiei, prin folosirea acestei metode se realiniaz ligamentul tibio-rotulian.
486
n cazul ruperii firului de nylon, chioptura revine dup o perioad de restabilire complet a pacientului. Leziunile meniscale trebuie suspectate cnd la micri succesive de flexie-extensie se percepe un uor pocnet intraarticular. La unul dintre cazuri n zona crestei tibiale am executat dou orificii la distan de 5 mm unul de altul. Cele dou fire de nylon le-am trecut prin aceste orificii sub forma literei U iar apoi n jurul sesamoizilor femurali. Prin acest procedeu s-a realizat o mai bun stabilitate articular dect n cazul cnd firele sunt trecute printr-un singur orificiu tibial. Contactul permanent al firelor cu creasta tibial, n timp poate produce erodarea acestora urmat de ruperea lor. Tehnicile intracapsulare de refacere a ligamentului ncruciat anterior rupt constau n nlocuirea ligamentului rupt cu o gref provenind din materiale sintetice (Mersilene, Nylon). La alegerea tehnicii trebuie s se in cont de greutatea corporal a animalului i de caracterul acut sau cronic al leziunii, prezena sau absena fenomenelor degenerative articulare i vrsta animalului. Chiar dac din punct de vedere operator tehnicile sunt apropiate , rolul deosebit de important al operatorului este acela de a alege metoda terapeutic optim pentru fiecare caz n parte. Ca material de substituire a ligamentului am folosit banda de Mersilene i banda de Nylon. Banda de Mersilene utilizat este folosit n chirurgia abdominal uman pentru uteropexie. Limea acesteia este de 4 mm fiind ambalat steril de firma productoare. Banda a fost introdus iniial prin orificiul de la nivelul crestei tibiale unde captul acesteia a fost nnodat. n continuare banda strbate tunelul tibial n sens ventro-dorsal iar apoi cel femural, captul ajungnd n zona condilului lateral femural. Tensionarea benzii s-a realizat meninnd articulaia grasetului n extensie iar captul proximal al acesteia l-am suturat n puncte separate cu fir neresorbabil, Nylon, la esuturile moi din zona periarticular lateral. Dup verificarea stabilitii articulare, nchiderea plgii operatorii se realizeaz dup tehnica uzual. n primele 5-6 zile postoperator dup dispariia edemului operator vindecarea a decurs normal. Sprijinul pe membrul operat nu s-a reluat ns nici dup 21 zile de la intervenie la unul dintre cazurile la care am aplicat aceasta tehnica. La 4 sptmni de la prima intervenie, pacientul a fost supus unei noi intervenii chirurgicale prin care am ndeprtat banda de Mersilene i am nlocuito cu un ligament obinut din fascia lata. Vindecarea a decurs normal, fr complicaii i la 30 zile de la a doua intervenie sprijinul pe membrul operat a fost reluat. Dup 45 de zile chioptura a disprut complet.
487
Faptul c dup eliminarea benzii de Mersilene i nlocuirea acesteia cu fascia lata, fenomenele supurative au disprut ne-au condus la concluzia c materialul din care era fabricat ligamentul artificial a generat in acest caz reacia de respingere a grefei. n alte 4 cazuri am folosit banda de Nylon pentru nlocuirea ligamentului ncruciat cranial rupt .Fixarea benzii am realizat-o n dou moduri. n doua cazuri traiectul benzii a fost identic cu cel descris la banda de Mersilene iar n 2 cazuri capetele benzii au fost nnodate pe faa lateral a crestei tibiale. Prin folosirea acestui material sintetic nu am sesizat reacii de respingere sau ruperea implanturilor. Procesele de cicatrizare au decurs normal iar reluarea complet a sprijinului pe membrul operat s-a realizat n medie dup 30 zile. Problema gsirii unui material perfect pentru nlocuirea ligamentelor ncruciate rupte a preocupat i continu s preocupe chirurgii veterinari. Multe materiale incluznd Teflon , Nylon sau Dexon au fost ncercate dar nici unul nu a fost considerat perfect. Acesta ar trebui s aib o rezisten mare, o uoar elasticitate i s suporte fore de ntindere n interiorul articulaiei timp de cteva luni, totodat nefiind iritant. De aceea cercetrile pentru gsirea materialului ideal continu.. n cercetrile ntreprinse am ncercat aplicarea benzii sub forma unei anse astfel nct cele dou capete se reunesc i se nnoad pe faa lateral a crestei tibiale. Prin folosirea acestei tehnici am observat c reluarea sprijinului pe membrul operat este mai rapid, dect n cazurile utilizrii metodei clasice. Probabil acest fapt se datoreaz elasticitii mai mari a ligamentului aplicat astfel i eliminrii traciunii pe esuturile moi n zona suturii pe faa lateral a condilului femural lateral. La cazurile operate i urmrite chiar pe parcursul a 2 ani nu am observat apariia fenomenelor de respingere a grefei artificiale din Nylon sau erodarea urmat de ruperea acesteia. n cazul folosirii benzilor de Nylon pentru nlocuirea ligamentului ncruciat cranial trebuie avut n vedere masa corporal a pacienilor. Adaptarea limii benzii n funcie de talia fiecrui pacient este una din etapele cele mai importante ale interveniei. O band cu lime mic de 3 mm nu va putea suplini funcia unui ligament ncruciat la un cine de 50-60 kg i se va rupe. n acelai timp o band cu lime mare de 6-8 mm pentru a putea fi aplicat la un cine de talie mic (sub10 kg), necesit efectuarea unor orificii n epifiza distal femural i cea proximal tibial cu diametrul de cel puin 5-6 mm. Acestea vor micora rezistena osoas n aceste zone mrind riscul unor fracturi epifizare.
488
CONCLUZII Ruptura ligamentului ncruciat cranial poate s fie ntlnit la cini indiferent de vrsta i rasa acestora. Totui sunt predispui cinii aparinnd raselor cu greutate corporal mare. Afeciunea debuteaz cu chioptur de gradul I care se agraveaz treptat ajungnd la evitarea efecturii sprijinului pe membrul afectat. Diagnosticarea precoce limiteaz fenomenele degenerative datorate instabilitii articulare marcante. Conduita terapeutic trebuie s in seama de talia, vrsta i de prezena sau absena unor afeciuni asociate ca luxaia rotulian, leziuni ale meniscurilor articulare sau fenomene degenerative articulare secundare. Dei nc nu s-a descoperit un material sintetic perfect pentru nlocuirea ligamentului ncruciat, prin folosirea benzii de Nylon la rasela de talie corporala mare si a firului de Nylon la rasele mici am obinut rezultate foarte bune.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Arnoczky S.P., 1990 - Cranial cruciate ligament repair. In: Bojrab MJ, ed. Current Techniques in small animal surgery. 3rd ed. Philadelphia: Lea&Febiger, 708. Arnoczky S.P., 1981 - Surgery of the stifle: The cruciate ligaments. Compendium on Continuing Education for the Small Anim Pract 2:106. Butler D.L., et al., 1989 - Mechanical properties of primate vascularized vs. nonvascularized patellar tendon graft: changes over time. J Orthop Res; 7: 6879. Butler H.C., 1964 - Teflon as a prosthetic ligament of ruptured anterior cruciate ligaments. Am J Vet Res 25:55, 1964. Piermattei D.L., 1993 - An atlas of surgical approaches to the bones and joints of the dog and cat. 3rd ed. Philadelphia: WB Saunders, 114.
489
EPIDEMIOLOGIA OTITEI EXTERNE LA CARNIVORE

EPIDEMIOLOGY OF OTITIS EXTERNA AT CARNIVORES
Roxana TOPAL, I. BURTAN, M. FNTNARU, S. CIOBANU., L.C. BURTAN, M. TOPAL U.S.A.M.V. Iai Otitis externa is the most common disease of the canine and feline ear canal, which involves an acute or cronic inflammation of the epithelium of the external auditory meatus. The goal of this study was to determinate the prevalence rate of otitis externa and the influence of species, breed, age, sex and climatic variation. The researche was performed on 356 canine and 83 feline which were atended in Clinics of Veterinary Medicine Faculty and private veterinary clinics. Dogs and cats of all breeds and ages may be affected, but some groups are at higher risk:Cocker, Labrador, Setter, German Shepherd had the highest incidence. Dogs between 5-8 years of age and cats under 1 year are commonly affected. There is no apparent sex predisposition to otitis externa in either species.
Key words: otitis, incidence, prevalence, canines, felines
Otita extern, denumit n literatura de specialitate i catar auricular, reprezint inflamaia acut sau cronic a epiteliului conductului auditiv extern, uneori i a pavilionului urechii (1, 3, 6, 8). Este o afeciune cu etiologie polifactorial i patogenez neelucidat pe deplin. Baba, 1981, precizeaz c otita extern afecteaz cini i pisici de toate rasele i vrstele, cu inciden mai mare la unele rase datorit unor particulariti anatomice si fiziologice. Examenele histologice comparative ale conductului auditiv, la diferite rase de cini, indic diferene privind numrul i distribuia glandelor ceruminoase, explicnd astfel predispoziia unor rase la otit (1, 6). Studiul epidemiologic al otitei externe se impune, att pentru elucidarea etiopatogenezei, ct i pentru stabilirea corelaiei ntre frecvena otitei externe i anumii factori, printre care am inclus: rasa, vrsta, sexul i variaiile climatice. MATERIAL I METOD
Materialul de studiu a fost reprezentat de cazuistica oferit de Clinicele din cadrul Facultii de Medicin Veterinar Iai i Cabinete medicale veterinare. Pentru stabilirea frecvenei otitei externe la carnivore, studiile au fost efectuate pe perioada 2002 2005 inclusiv. 490
REZULTATE I DISCUII Parametrii de baz ai studiului epidemiologic sunt morbiditatea i mortalitatea. Morbiditatea se refer la stabilirea numrului total de cazuri de otit nregistrate la carnivore, n perioada luat n studiu. n cadrul morbiditii s-a operat cu doi indicatori: incidena i prevalena. Incidena se refer la numrul de cazuri noi nregistrate ntr-un interval de timp, raportat la totalul populaiei studiate. Prevalena const n stabilirea numrului total de cazuri nregistrate, respectiv noi i vechi, la un anumit moment, conform studiului la sfritul perioadei de patru ani (7). Analiza noastr nu opereaz cu termeni adecvai de morbiditate, inciden, prevalen datorit lipsei unor populaii mari de referin, respectiv toate carnivorele de pe un anumit areal, ci cu termenul de frecven relativ, ntruct nu toate animalele bolnave sunt prezentate la medicul veterinar, astfel nct doar cele care beneficiaz de asisten sunt supuse anchetei epidemiologice. Evidenele unitilor care au furnizat datele ne permit stabilirea frecvenei relative a otitei la carnivore, datele fiind prezentate n tabelul 1.
Tabel 1 Frecvena relativ a otitei externe la carnivore n perioada 2002-2005 Specia Cini Pisici Animale consultate 4275 3864 Din care cu otit Nr. 356 83 % 8,3 2,15 Masculi Nr. 185 37 % 52 44 Femele Nr. 171 46 % 48 56
Din analiza datelor din tabel se observ c otita extern are o frecven relativ mai mare la cini, reprezentnd 8,3% din cazuistic, fa de pisici la care frecvena relativ este de 2,15%. Frecvena relativ sczut a otitei externe la pisici se datoreaz poziiei erecte a pavilionului urechii i lipsei prului din conductul auditiv extern, care permit ventilaia i drenajul (1, 2, 6). Analiza datelor din tabel evideniaz, de asemenea, faptul c nu exist o corelaie clar ntre sexul animalului i frecvena relativ a otitei externe. Afirmaia se bazeaz pe faptul c procentele oferite de cele dou sexe sunt apropiate sau uor crescute n favoarea masculilor la canine sau femelelor la feline. n cadrul studiului epidemiologic am evideniat rolul speciei, rasei, vrstei i sexului n apariia otitei externe la carnivore, precum i repartizarea lunar a cazuisticii, datele fiind prezentate n tabelele 2, 3, 4, 5 i 6. Analiza datelor din tabel evideniaz rolul rasei n apariia otitei externe la cine, constatndu-se c otita extern apare mai frecvent la unele rase datorit unor particulariti anatomice i fiziologice. Astfel, 73,2% din cazuri apar la cinii cu urechile atrnnde i doar 26,8% la rasele cu urechile erecte. Dintre cei cu
491
urechile atarnnde o frecvena relativ crescut s-a nregistrat la rasele Cocker (26%), Labrador (18%) i Setter (13,3%). La rasele cu urechile erecte cea mai mare frecven se nregistreaz la Ciobnescul german (14%).
Tabelul 2 Frecvena relativ a otitei externe la cini n raport cu rasa Cu urechile atrnnde Brac Caniche Cocker Labrador Pechinez Setter Ras comun Total Cu urechile erecte Akita Boxer Ciobnesc german Doberman Dog Argentinian Pit-Bull Rottweiler Ras comun Total TOTAL GENERAL Nr. 20 13 92 64 12 47 12 260 Nr. 7 7 51 4 6 6 11 4 96 356 % 5,8 3,7 26 18 3,2 13,3 3,2 73,2 % 2,1 2,1 14 1,1 1,6 1,6 3,2 3,1 26,8 100 Tabelul 3 Frecvena relativ a otitei la pisici n raport cu rasa Rasa Birmanez Persan Siamez Ras comun Total Nr. 26 21 22 14 83 % 31,3 25,4 26,5 16,8 100
La pisici, frecvena relativ a otitei externe n raport cu rasa, nregistreaz procente asemntoare ca valoare. Mai predispuse la otit sunt pisicile din rasa Birmanez, la care s-au nregistrat 26 de cazuri, reprezentnd 31,3%, cele din rasa comun nscriind procentul cel mai mic, respectiv 16,8%. n ceea ce privete corelaia dintre vrst i frecvena relativ a otitei externe, observm c exist diferene ntre cele dou specii de carnivore.
492
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 4 Frecvena relativ a otitei externe la cine n raport cu vrsta Vrst sub 1 an 1 2 ani 2 5 ani 5 8 ani peste 8 ani Total Nr 23 60 109 121 43 356 % 6,4 17 30,6 33,8 12,2 100
Din analiza datelor din tabelul 4 remarcm faptul c otita extern afecteaz cini de toate vrstele. S-au nregistrat 23 de cazuri (6,4%) la cinii sub 1 an, apoi se observ o cretere progresiv a numrului de cazuri n raport cu vrsta: 60 de cazuri (17%) la cei cu vrsta cuprins ntre 1-2 ani, 109 cazuri (30,6) la cinii de 2-5 ani i 121 de cazuri (33,8%) la cinii cu vrsta cuprins ntre 5 i 8 ani. Frecvena relativ a otitei externe scade la cinii mai mari de 8 ani nregistrnduse 43 de cazuri (12,2%). Creterea incidenei este recunoscut de majoritatea autorilor ca fiind plasat n jurul vrstei de 5-8 ani, deoarece n acest interval apar tulburrile de cheratinizare i de hipersensibilizare (1, 2, 8).
Tabelul 5 Frecvena relativ a otitei externe la pisic n raport cu vrsta Vrst Sub 1 an 1 2 ani 2 5 ani Peste 5 ani Total Nr 29 19 23 12 83 % 35 23 28 14 100
Analiznd datele din tabelul 5 observm c otita extern afecteaz cel mai frecvent pisicile tinere, 35% din cazuri nregistrndu-se la pisicile sub un an. Frecven crescut ntlnim i la pisicile cu vrsta cuprins ntre 2 i 5 ani (28%) deoarece dup vrsta de doi ani exist o posibilitate mai mare de apariie a otitei parazitare (5). n tabelul 6 sunt centralizate datele prezentrii la consultaie a celor 356 de cini i 83 de pisici cu otit extern. Analiznd datele din tabel remarcm o concentrare a cazuisticii n perioada de var: iunie 14,6% la cine, respectiv 13,2% la pisic, iulie 15,7% la cine i 15,6% la pisic, august 13,8% la cine, iar la pisic 14,4%. Aceste procente ne orienteaz spre o evoluie sezonier a otitei externe la carnivore, influenat de condiiile de mediu. Creterea temperaturii i a umiditii mediului extern determin o cretere a frecvenei relative a otitei externe la carnivore (1,6). De
493
asemenea, exist i o probabilitate mai mare de apariie a otitei externe datorat corpilor strini (ariste), dar i a otitei parazitare (2, 6).
Tabelul 6 Repartizarea lunar a cazuisticii Specia Cine Pisic Nr. % Nr. % Prezentarea la consultaie n luna IV V VI VII VIII IX 29 38 52 56 49 31 8,1 10,6 14,6 15,7 13,8 8,7 7 9 11 13 12 10 8,4 10,8 13,2 15,6 14,4 12,4
I 9 2,5 2 2,4
II 13 3,6 2 2,4
III 17 4,8 4 4,8
X 27 7,6 6 7,2
XI 20 5,8 4 4,8
XI 15 4,2 3 3,6
CONCLUZII Epidemiologia otitei externe la carnivore reprezint un studiu complex care trebuie corelat cu o serie de factori: specie, ras, vrst, sex, variaii climatice. Incidena i prevalena otitei externe sunt indicatori orientativi deoarece nu toi indivizii speciei, de pe un anumit areal, au fost prezentai la medicul veterinar. Frecvena relativ a otitei externe este mai mare la canine, n comparaie cu felinele. Rasa influeneaz frecvena relativ a otitei la canine, procente mari fiind nregistrate la cinii cu urechile atrnnde (73,2%). Cele mai multe cazuri au fost nregistrate la caninele cu vrsta cuprins ntre 5-8 ani i la felinele sub 1 an. Nu exist o corelaie evident ntre sex i frecvena relativ a otitei externe la cini i pisici. Otita extern la carnivore are o evoluie sezonier, nregistrndu-se o frecven relativ crescut n lunile de var.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. August, J.R., 1986 Diseases of the ear canal In The Complete Manual Of Ear Care, Lawrenceville, New Jersey, Veterinary System Co., Inc., 37-51 Baba, E., 1981- Incidence of otitis externa in dogs and cats in Japan, Vet. Rec., 108393 Burtan I., Eugenia Burtan, Burtan L.C., Mihai M., 1999 Contribuii la studiul otitei externe la pisic, Lucr.t. vol.42 seria M.V., Ed. I. I. de la Brad Iai, 82-86 Burtan, I., 2000 Chirurgie regional veterinar, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai Cosoroab, I., 2000 Parazitologie veterinar, Ed. Mirton, Tim. Griffin, C.E., 1981 Otitis externa, Comp. Contin. Ed. Pract. Vet., nr. 3, 741-750 Savu, Gh., 2001 - Epidemiologie veterinar general, Ed. I.I. de la Brad Iai Solcan, Gh., Miron L., Mitrea, I.L., Carmen Solcan, 2003 Dermatopatologia animalelor de companie, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai.
494
OBSERVAII PRIVIND INCUBAIA OLOR DE STRU

M. BADEA Lucrarea trece n revist dinamica procesului produciei de ou, incubaia i ecloziunea ntr-o ferm de strui i perspectivele de mbuntire a acestor indicatori. Studiul a luat n considerare factorii care pot influena indicatorii de producie ntr-o ferm privat de cretere a struilor, prin cunoaterea elementelor ce caracterizeaz evoluia, comportamentul i viaa struilor n vederea unei creteri eficiente.
Struul face parte din clasa Aves, subclasa Palaeognathae, familia Struthionidae, reprezentat prin singura specie actuala Struthio camelus, care a dat natere la diferite rase geografice i populeaz natural regiunile de step i semideert din Asia i Africa. (Deeming, D., 1988, Bonaiu, I., 1996, Vacaru Opri, I., 2002) Creterea struilor n fermele de producie mai mari sau mai mici a luat un avans deosebit n ultimii ani datorit importanei mari i valorii deosebite a tuturor produselor lor ct i a productivitii lor. (Smith, W.A., 1995) Observaiile noastre au urmrit dinamica procesului de incubaie i ecloziune ntr-o ferm privat de cretere a struilor. MATERIAL I METOD
Cercetrile au fost efectuate pe 8 familii de strui compuse din 24 de indivizi (16 femele i 8 masculi). Pe parcursul a 5 ani s-au fcut observaii comparative a mai multor parametri ai incubaiei astfel: nr. total de ou; ou cu defecte (ou sparte, cu coaja moale, coaja poroas, ou cu depuneri neregulate de calciu); ou puse la incubat; ou eliminate la primul i al II lea miraj; ou cu pui mori; nr. pui eclozionai.
REZULTATE I DISCUII Avndu-se n vedere faptul c ferma a fost populat la data de 02.07.2001 rezultatele obinute n acest an nu sunt foarte concludente. Astfel s-au obinut 56 de ou, 6 prezentau defecte, majoritatea nefiind fertile. S-au pus la incubat 13 ou (24%) din acestea 4 ou (31%) eliminndu-se la primul miraj. n total, n 2001 au eclozionat 9 pui (69%).
495
n anul 2002 producia de ou a crescut la 196 din care; 8 ou (4%) prezentau defecte. S-au pus la incubat 146 de ou (75%), eliminndu-se la examenul ovoscopic 24 de ou (16%). Datorit furajului slab calitativ, nembuntit n vitamine i oligoelemente 24 de ou (16%) aveau puii mori n diferite stadii de cretere. Astfel n 2002 au eclozionat 88 pui (60%) din cele 147 ou puse la incubat.
Tabelul 1 Rezultatul incubaiei pe ani OU TOTAL 56 196 339 391 307 1.289 Ou la incubat nr. % 13 147 209 244 58 671 24 75 62 62 19 52 Eliminate la ovoscopie nr. % 4 35 98 133 38 308 31 24 47 55 66 46 Pui mori Pui n ou eclozionai nr. % nr. % 24 19 27 4 74 16 9 11 7 11 9 88 92 84 16 289 69 60 44 34 28 43 Ou cu defecte nr. % 6 8 14 4 5 37 11 4 4 1 2 3
Anul 2001 2002 2003 2004 2005 Total
n 2003 ncepnd cu jumtatea lunii februarie furajul s-a mbuntit cu concentrat LIKRA bogat n vitamine i oligoelemente, furaj special pentru stimularea ouatului la strui. Astfel n 2003 s-a obinut o producie de ou de 339 buc, 14 ou prezentnd defecte (4%). S-au pus la incubat 209 ou (62%), eliminndu-se la examenul ovoscopic 98 de ou (47%). Din cele rmase 19 ou (9%) aveau puii mori n diferite stadii, reuind s eclozioneze la finele anului un numr de 92 pui (44%), aproape jumtate din totalul olor puse la incubat. Datorit unor afeciuni cronice 2 femele bune outoare au murit n iarna anului 2003 fapt care a influenat negativ producia de ou din anul 2004. n anul 2004 s-au obinut 391 ou din care 4 (1%) prezentau defecte minore. S-au pus la incubat 244 ou (62%) eliminnd dup primul miraj 133 de ou (55%) i 27 de ou (11%) prezentau puii mori n diferite stadii. Astfel, n anul 2004 au eclozionat 84 pui (34%) din totalul oulor puse la incubat. n anul 2005 datorit unor probleme organizatorice i tehnice (defeciuni ale sistemului de incubaie) valorile acestor parametri nu au fost mai sczute. Astfel, s-a obinut o producie de ou de 307 buc din care 5 ou (2%) prezentau defecte de structur. S-au pus la incubat 58 ou (19%) eliminndu-se la examenul ovoscopic 38 ou (66%) iar 4 ou (7%) aveau embrionii mori n ou. Au eclozionat 16 pui, doar 28% din totalul olor puse la incubat. Fcnd un studiu centralizat al incubaiei pe toat perioada de 5 ani constatm urmtorii indicatori de producie : - total ou obinute = 1.289 buc ; - din care ou cu defecte = 37 buc (3%) ; - ou puse la incubat = 671 buc (52%) ;
496
- ou eliminate la examenul ovoscopic = 308 buc (46%) ; - ou cu puii mori n ou = 74 buc (11%) - pui eclozionai = 289 cap. (43%). CONCLUZII
Din studiile efectuate pentru evaluarea indicatorilor de producie i incubaie n perioada de cercetare constatm urmtoarele : 1. nceputul i continuarea perioadei de ouat este dependent de factori de mediu: condiiile climatice existente, factori de stres, calitatea furajului (vitaminele i oligoelementele necesare acestei perioade). Lumina influeneaz ouatul i stimularea glandei pituitare de a produce hormoni, maturarea ovulei i stimularea produciei de sperm la mascul. Corelaia pozitiv ntre lumin i temperatur favorizeaz fecunditatea i eclozionabilitatea. 2. Alimentaia complet, dar nu excesiv, evitnd ngrarea acestora (punnd la dispoziie sfrmtur de scoici, iarb, fn i combinatele s aib valori optime de aminoacizi, vitamine i oligoelemente) influeneaz pozitiv fecunditatea. 3. Formarea familiilor selectnd indivizi de mare productivitate (F113 = 67 ou, F140 = 67 ou, F148 = 53 ou) cu masculi buni reproductori este important n exploatare. 4. Procentul total de fecunditate obinut pe aceast perioad este de 52% 5. Procentul de ecloziune (43%) este influenat de unii parametri tehnici de incubaie (t umed 24,8 26,2 : t uscat 36,2 36,6). 6. Din observaiile efectuate de noi, procentul de ou cu deformaii se ncadreaz ntre 1 i 4.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Blescu, M., 1999 Creterea struilor. Bonaiu, F., 1996 Farmecul columbofiliei. Ed. POPAS ART Timioara. Deeming, D.C., 1988 Ostrich Chick Rearing. United Kingdom. Smith, W.A., 1995 Feeding and Feed Management. Rep. South Africa. Vacaru, Opri, I., 2002 Tratat de avicultur. Ed. Ceres Bucureti.
497
OBSERVAII PRIVIND DINAMICA RETENIILOR NVELITORILOR FETALE I INFLUENA ACESTORA ASUPRA UNOR PARAMETRI DE REPRODUCIE
OBSERVATIONS CONCERNING THE DYNAMIC OF FETAL MEMBRANES RETENTIONS AND THEIR INFLUENCE ON SOME REPRODUCTION PARAMETERS
M. CANTEMIR The fetal membranes retentions and endometritis are frequent affections of milk cows bred in intensive sistem. The presence of these affections is influenced by milk production, the monthly dynamic of retentions and endometritis and by the animals age. An increasment frequence of fetal retentions rep until 36, 25% is observed at productions over 5000 l on normal lactation. In the cold season the most frequent cases : 47,5% are registred unlike 7,5% during the summer season.
La vacile pentru lapte crescute n sistem intensiv, reteniile nvelitorilor fetale i endometritele sunt afeciuni ce apar destul de frecvent (Boitor, I., 1987;
Gluhovschi, N., 1971; Gluhovschi, N., Drugociu, Gh., Seiciu, Fl., Dumitrescu, I., 1972; Grunert, E., 1978; Hricu Valentina, 1982; Runceanu, L., 1995; Scheideger, G.A., Melendez, R.P., 1994; Seiciu, Fl., Drugociu, Gh., Boitor, I., 1989; Broiu, I., Seiciu, Fl., 2004; Cernescu, H., 2004).
Prezena acestor afeciuni este influenat de producia de lapte, de dinamica lunar a reteniilor i a endometritelor, precum i de vrsta animalelor. Se constat c frecvena reteniilor fetale crete pn la 36,25%, la produciile de peste 5000l pe lactaie normal. Cele mai frecvente cazuri se nregistreaz n anotimpul rece 47,5%, fa de numai 7,5% n anotimpul de var. MATERIAL I METOD DE LUCRU
Observaiile noastre au fost efectuate n cadrul unei ferme de cretere industrial a vacilor pentru lapte. Diagnosticul cazurilor cu retenia anexelor fetale s-a efectuat clinic lunduse n considerare mai multe aspecte: momentul parturiiei perioada eliminrii anexelor fetale eliminarea total sau parial a acestora n acest sens s-a considerat fa de media de 12 ore (eliminarea normal a placentei la vac), c supravegherea parturientei se efectueaz pn la 24 ore postpartum. La acest termen intervenia medicului veterinar este obligatorie.
498
REZULTATELE OBINUTE I INTERPRETAREA LOR Procentul mare de retenii ale anexelor fetale, la produciile de peste 5000 litri lapte anual, poate fi explicat prin factorul de stres pe care-l reprezint nivelul ridicat al produciei, acionnd prin sistemul feed-back negativ suprarenalhipotalamus-adenohipofiz, ca un factor al centrilor responsabili de producia lactat. Totodat, aceti factori acioneaz negativ asupra dinamicii uterine postpartum, contraciile uterine fiind unul din cei mai importani factori care asigur eliminarea nvelitorilor fetale.
Fig. 1. Frecvena endometritelor n funcie de producia de lapte.
Din analiza graficului din fig. 1 constatm influena pe care o are producia de lapte asupra apariiei endometritelor la vaci. Astfel, n cazul vacilor cu producii de 2500-3000 litri lapte pe an , cazurile de endometrite sunt rare, de 9,2-10%. n cazul vacilor cu producii mari de lapte , de 4000-5000 litri pe an, numrul cazurilor de endometrit crete considerabil, atingnd valori de 2537,4%. Datorit factorilor care condiioneaz creterea ponderii reteniei anexelor fetale n funcie de producia de lapte, observaiile noastre reliefeaz i o cretere a infeciilor endometriale puerperale. Cercetrile noastre arat c nu numai nivelul produciei de lapte influeneaz apariia reteniilor nvelitorilor fetale i a endometritelor, ci i unii factori de mediu. Analiza datelor din tabelul 1 arat c cele mai frecvente cazuri se nregistreaz n anotimpul rece 47,5%, fa de numai 7,5% n anotimpul de var i 12,5% n anotimpul de toamn. De asemenea , reteniile nvelitorilor fetale sunt diagnosticate cu o frecven mare n anotimpul de primvar (32,5%). Ponderea ridicat a reteniilor nvelitorilor fetale n cele dou anotimpuri, iarna i primvara, se datoreaz unor carene alimentare, unor condiii zooigienice
499
necorespunztoare i stabulaiei permanente. Odat cu schimbarea alimentaiei (furaje verzi), asociat cu micarea la pune, tonusul general al organismului se revigoreaz, dinamica uterin este mai bun i n consecin frecvena reteniilor nvelitorilor fetale scade foarte mult.
Tabelul 1 Frecvena reteniilor nvelitorilor fetale pe luni i anotimpuri Luna Nr. cazuri % fa de nr. total de cazuri Anotimp Nr. cazuri %fa de nr. total de cazuri I 4 10 II 8 20 III 6 15 IV 3 7,5 V 4 10 Var 3 7,5 VI 2 5 VII 1 2,5 VIII 2 5 Toamn 5 12,5 IX 3 7,5 X 2 5 XI 2 5 Iarn 19 47,5 XII 2 7,5
Primvar 13 32,5
Frecvena reteniilor nvelitorilor fetale pe luni ale anului este prezentat n

tabelul 1, unde se constat c n lunile februarie i martie se ntlnesc cele mai
sczute cazuri, 20% respectiv 15%, n timp ce n luna iulie am ntlnit un singur caz de retenie a nvelitorilor fetale, reprezentnd 2,2% din numrul total de cazuri. n cazul apariiei reteniilor, constatm i o cretere a I.G. (indice de gestaie), numrul de nsmnri artificiale pentru obinerea unei gestaii ajungnd pn la 3,8, de unde concluzia c productivitatea i rentabilitatea sunt mult diminuate. CONCLUZII 1. Reteniile nvelitorilor fetale sunt influienate de producia de lapte. La vacile cu producii mari de lapte, frecvena acestor afeciuni crete foarte mult, ajungnd pn la 36,25%, n timp ce la o producie de 2500 litri pe an frecvena reteniilor nvelitorilor fetale scade considerabil ajungnd pn la 8,45%. 2. Reteniile nvelitorilor fetale i endometritele puerperale apar cu o frecven mai mare iarna 47,5%, respectiv 40% i primvara 32.5%, respectiv 33.3% i mai rar vara 7,5%, respectiv11,1% i toamna 12,5% respectiv 15,5%. 3. Ponderea reteniilor nvelitorilor fetale n cele dou anotimpuri, iarna i primvara, se datoreaz unor carene alimentare, unor condiii zooigienice necorespunztoare i stabulaiei prelungite. 4. Frecvena reteniilor nvelitorilor fetale n lunile februarie i martie este mult mai crescut ntlnindu-se n 20% din cazuri n luna februarie i 15% din cazuri n luna martie, n timp ce n luna iulie s-a ntlnit un singur caz de retenie a nvelitorilor fetale reprezentnd 2,2% din numrul total de cazuri.
500
5. Analiznd variaiile principalilor indici de reproducie concluzionm faptul c n cazul vacilor cu o retenie a anexelor fetale, S.P. (service-period) ajunge la o medie de 115,3 zile, constatndu-se totodat o prelungire a C.I. (calving-interval), care are o valoare medie de 410,2 zile.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Broiu, A., Seiciu, Fl., 2004 Tratat de reproducie la animale. Ed. All. Buc. Boitor, I., 1987 Diagnosticul i tratarea bolilor obstetrico-ginecologice i ale glandei mamare la bovine, vol. I i II. Ed. Dacia, Cluj-Napoca. Cernescu, H., 2004 Ginecologie veterinar. Ed. Mirton. Timioara. Gluhovshi, N., 1971 Reproducia animalelor domestice, vol. II, Ed. Ceres, Bucureti. Gluhovschi, N., Drugociu, Gh., Seiciu, Fl., Dumitrescu, I., 1972 Biologia i patologia reproduciei, Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti. Grunert, E., 1978 Etiology of Retained Bovine Placenta Tenogenology, Curent Therapy. Runceanu, L., 1995 Reproducia i patologia reproducie, U.A.M.V., Iai. Seiciu, Fl., Drugociu, Gh., Boitor, I., 1989 Reproducia patologic la animalele de ferm, vol. II, Ed. Ceres, Bucureti. Scheiger, G.A., Melendez, R.P., 1994 Retainde fetal membranes and other puerperal reproductive disorders their effect on postpartum fertility in Holstein catlle, Veterinary Bulletin.
501
CERCETRI PRIVIND APRECIEREA VALORILOR REZISTENEI SPERMATOZOIZILOR DE VIER

SEARCHES ABOUT BOAR SPERMATOZOA VALUES OF RESISTANCE
t.G. CIORNEI, L. RUNCEANU U.S.A.M.V. Iai G. AGAPE S.C. Suinprod Roman S.A. The spermatozoides resistance at the noxious action of a 1% NaCl electrolites solution it is confered by the seminal cell lipoproteic membrane. If this lipoproteic membrane is not enough structuraly and functionaly consolidated, the spermatozoids will have a less longiviability and fecundity, because of the aggression done by Na+ and Cl- ions.The literature of specialty does not say which are the limits of variations for the spermatozoids resistance; its only stating that the minimal limit must be 1000. Thats way this work want to examine this parameter relating him to the temperature of examination and preservation. Taking in observation a number of 23 boars and examining the spermatozoids resistance of the fresh, the diluted and the preserved sperm, shows that the parameters are much higher than those mentioned in the literature of specialty.
Cuvinte cheie: vier, spermatozoizi, rezisten
Rezistena spermatozoizilor este dat de proprietatea acestora de a rezista la aciunea nociv a unui toxic. Soluia de clorur de sodiu, concentraie 1% este folosit n acest scop. Rezistena la aciunea nociv a electroliilor din soluia de NaCl 1% este conferit de membrana lipoproteic a celulei seminale [6, 8]. Celulele seminale o dobndesc in epididim, in cursul procesului de maturare, ce dureaz la vier in medie 8 zile [1, 4, 5, 7, 8]. Dac membrana lipoproteic este insuficient consolidat structural i funcional, spermatozoizii sub agresiunea ionilor de Na+ i Cl-, vor fi intoxicai de un volum mic din aceast soluie i i vor pierde proprietatea de micare. Din contr, spermatozoizii care au membran lipoproteic integr, vor avea capacitatea de a rezista la un volum mai mare din soluia electrolitic, n acest caz rezistena fiind mai ridicat [6, 8]. Unii autori afirm c longiviabilitatea i fecunditatea spermatozoizilor este cu att mai ridicat cu ct spermatozoizii i menin mobilitatea ntr-un volum mai mare de soluie NaCl 1% [6, 8]. Rezistena se exprim prin numrul de ml de soluie NaCl 1% care opresc micarea de naintare (rectilinie) a spermatozoizilor ce se gsesc ntr-un ml de material seminal [2, 6, 8]
502
Valoarea rezistenei unui material seminal de vier, pentru a putea fi folosit la nsmnri artificiale, trebuie s aib minim 1000 [2, 3, 6, 8, 9]. Literatura de specialitate nu precizeaz limitele de variaie ale acestui parametru, ci doar valoarea minim; fapt ce constituie scopul acestei lucrri. MATERIAL I METOD
Cercetrile s-au efectuat pe un numr de 23 vieri, clinic sntoi, de rase, linii i vrste diferite. Vierii sunt crescui n condiiile corespunztoare ale complexului industrial S.C. SUINPROD ROMAN S.A. Programul individual de recoltri a variat de la 3 la 10 zile de pauz. Dup recoltare materialul seminal este supus examenelor generale i speciale. Rezistena spermatozoizilor se determin la microscop pe sperma brut i / sau diluat. ntr-un pahar Berzelius se depun cu ajutorul unei pipete Sahli un volum de 0,02 ml sperm, peste acesta se adaug 10 ml solutie NaCl 1%. Se omogenizeaz uor, se ia cu o baget o picpur de amestec i se examineaz la microscop n pictur liber. Dac se ntlnesc spermatozoizi cu micri rectilinii se continu titrarea adugndu-se cte 10 ml soluie, pn cnd micrile rectilinii dispar. Fiecare titrare a fost urmat de examinarea la microscop a 2-3 picturi din paharul de amestec. n cmpul microscopic s-au observat, spermatozoizi cu diferite tipuri de micri: anormale - micri n manej, micri retrograde, micri vibratorii precum i spermatozoizi fr micri; Aprecierea s-a efectuat n funcie numai de micrile rectilinii. Pentru calculul s-a utilizat formula: R= V/v; n care: R - este rezistena spermatozoizilor, V - este volumul soluiei de Na Cl 1% folosit n titrare i v volumul de material seminal (0,02). Precizm c soluia de NaCl de concentraie 1% a fost preparat extemporaneu folosind ap bidistilat deionizat. Deionizarea apei bidistilate s-a fcut cu ajutorul unui aparat Seradest USF ce are la baz un sistem modern de desalinizare total a apei, printr-un schimb mixt de anioni i cationi. Observaiile s-au efectuat pe sperma brut, pe sperma diluat proaspt, dar i pe sperma diluat i conservat n dozele necesare repetrii nsmnarii artificiale la 24 de ore. n condiii de izotermie s-a utilizat baia de ap reglat la temperatura de 37C, iar examinarea s-a fcut la un microscop cu fond ntunecat dotat cu platin nclzitoare, n pictur liber i obiectiv de puterea 10. Examenele au fost efectuate i la temperatura de 25C.
REZULTATE I DISCUII Vierii ce au fost luai n studiu aparineau unor rase i linii diferite: 18 din liniile sintetice: (L 62, L CN, L 19, L 64, L RK) i 5 din rasa Mangalia (graf.1). Vrstele lor sunt cuprinse ntre 12 i 48 de luni. Programul de utilizare a vierilor la recoltare a fost ntre 4 i 11 zile (Tabel 1).
503
Valorile rezistenei spermatozoizilor obinute la cei 23 de vieri au fost cuprinse ntre 4500 i 17000, cu o valoare medie de 11564. Valorile minime i maxime sunt puse pe baza variaiei individuale i a a rasei. Se observ c la rasa Mangalia valorile rezistenei sunt mult crescute fa de a celelorlalte rase studiate, iar valoarea cea mai mic s-a nregistrat la vierii din linia sintetic CN a rasei Landrace.
Tabelul 1 Caracteristicile biotehnolgice ale vierilor luai n studiu Nr. Crt. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. Vrsta (luni) 18 13 31 18 15 19 41 42 41,5 26 22 18 21 25 22,4 48 21 34,5 13 13 13 12 12,75 15 24 19,5 24 24 24 24 Programul de recoltare (zile) 5 5 6 6 10 6,4 4 7 5,5 4 4 7 5 7 5,4 4 4 4 5 9 6 5 6,25 8 11 9,5 9 7 5 7 Rezistena S.B. (ml) 37C 15500 17000 11000 12000 12000 13500 13000 10500 11750 13000 10000 10000 11000 12000 11200 9000 11500 10250 10500 10500 8000 10000 9750 13000 14000 13500 10500 14500 8000 11000 25C 10500 12500 10000 11000 4500 9500 7000 8500 8500 7500 6000 6750 8000 12000 6000 8667 Rezistena S.D. Proaspt 9000 9500 7500 8666 6000 9500 7750 6000 6000 8500 7000 9000 7300 7500 7000 7250 7500 6500 5000 6333 11000 12500 11750 7000 7500 7000 7167 Conservat 24 h 7500 7500 8500 8500 6000 8500 7500 7333 7000 7000 7000 7000 9000 9000 6500 6500
Rasa / Linia Mangalia Mangalia Mangalia Mangalia Mangalia Media Pietrain L62 Pietrain L62 Media PIC L62 PIC L62 PIC L62 PIC L62 PIC L62 Media Pietrain L64 Pietrain L64 Media Landrace LCN Landrace LCN Landrace LCN Landrace LCN Media Pietrain LRK Pietrain LRK Media Duroc L19 Duroc L19 Duroc L19 Media
504
Duroc L19 13% Pietrain LRK 9%
Mangalia 21%
Pietrain L62 9% Landrace LCN 17% Pietrain L64 9% PIC L62 22%
Grafic 1 - Distribuia vierilor luai n studiu n funcie de ras/linie
Lucrndu-se n condiii de izotermie (37C), cele mai ridicate valori au fost obinute pe sperma brut (proaspt recoltat) cu o medie de 11664; valoarea acesteia a sczut cnd s-a lucrat pe sperm dup diluare, (cu o medie de 8031). Valorile cele mai sczute au fost obinute pe sperma diluat i pe cea conservat 24 de ore, (media fiind de 7548). Cu ct sperma este examinat ntr-un timp ct mai scurt dup recoltare cu att valoarea rezistenei este mai ridicat. Prin conservarea materialului seminal timp de 24 de ore s-a observat o uoar scdere a valorilor rezistenei spermatozoizilor, dar neconcludent.
Tabelul 2 Media rezistenei spermatozoizilor n funcie de programul de recoltare la temperatura de 37C Nr. ctr. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Rasa / Linia Mangalia Pietrain L62 PIC L62 Pietrain L64 Landrace LCN Pietrain LRK Duroc L19 Media Programul de recoltare (zile) 6,4 5,5 5,4 4 6,25 9,5 7 6,3 Sperm brut 13500 11750 11200 10250 9750 13500 11000 11564 Sperm diluat 8666 7750 7300 7250 6333 11750 7167 8031 Sperm conservat 24 h 7500 8500 7333 7000 7000 9000 6500 7548
505
Duroc L19 Pietrain LRK Landrace LCN Pietrain L64 PIC L62 Pietrain L62 Mangalita 0 2000 4000 6000
6500 7167 9000 7000 6333 7000 7250 7333 7300 8500 7750 7500 8666 8000 9750
11000 11750
13500
10250 11200 11750 13500
10000 12000 14000
Sperma bruta
Sperma diluata
Sperma conservata 24 h
Grafic 2 - Media rezistenei spermatozoizilor pe categorii de sperm
n condiiile n care temperatura de lucru a soluiei de NaCl 1% a fost de 25C, valorile obinute la determinrile efectuate pe sperma brut au fost n medie de 8667, constatndu-se o scdere constant la toate rasele/liniile. Diferena dintre valorile rezistenei determinate la 37C i la 25C poate fi pus pe seama faptului c temperatura sczut grbete procesul de intoxicare al spermatozoizilor
Tabelul 3 Influena temperaturii de examinare asupra mediei indicilor de rezisten Nr.Crt. 1. 2. 3. 4. 5. Rasa / Linia La temperatura de 37C 13500 11200 10250 9750 11000 11140 La temperatura de 25C 11000 7000 8500 6750 8667 8338
Mangalita PIC L62 Pietrain L64 Landrace LCN Duroc L19

-
Vierii care au avut programul de recoltare la 4 zile au avut valori n medie de 10250. la un program de 9,5 zile valoarea medie a rezistenei a fost de 13500; cu ct programul de recoltare a vierilor are mai multe zile de pauz cu att valoarea rezistenei spermatozoizilor crete.
506
16000 14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000 0 Mangalita 1 PIC L62 2 Pietrain L64 Landrace LCN Duroc L19 5
13500 11000 11200 7000 10250 8500 9750 6750 11000 8667
La temperatura de 37C 3 4 La temperatura de 25C
Grafic 3 - Influena temperaturii asupra indicilor de rezisten
14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000 0 4 zile 5,4 zile 5,5 zile 6,25 6,4 zile 7 zile 9,5 zile zile Sperma bruta
Sperma diluata Sperma conservata 24 h
Grafic 4 - Rezistena spermatozoizilor n funcie de media zilelor de recoltare
CONCLUZII La rasa Mangalia s-au ntlnit cele mai mari valori ale rezistenei spermatozoizilor la soluiea de NaCl 1%, astfel: valoarea medie a spermei brute a fost de 13500 la temperatura de 37C i de 11000 la temperatura de 25C; 8666 pe sperma dup diluare; i de 7500 dup conservarea timp de24 de ore. Diluarea i conservarea materialului seminal scade valoarea rezistenei spermatozoizilor, dar rmne mult peste limita superioar descris n literatura de specialitate;
507
Optimizarea programului de recoltare a materialului seminal n direcia creterii lui influeneaz n sens favorabil rezistena spermatozoizilor.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Bogdan A.T., Mantea St., Bogdan Dorina, 1999 Tratat de reproductie si insamantari artificiale la suine , Ed. Tehnica Agricola, Bucuresti Drugociu D., 2001 Reproducie, nsmnri artificiale i ginecologie veterinar, Ed.Venus, Iai. Gary C., Althause, 2000 - Optimizing productivity of the AI boar, Department of veterinary Clinical Medicine University of Illinois Urbana, IL 6802. Manzatu I., Bogdan A.T., 2003 Dictionar explicativ de Biotehnologie , vol. I, Ed. Global, Bucuresti Nacu G., 2005 Cercetari privind unele posibilitati de optimitare a functiei de reproductie la suine , Texa de doctorat, USAMV, Iasi; Runceanu L., Nicorici R., 1986 - Patologia reproduc iei i clinic obstetrical , lucr ri practice, Ia i. Runceanu L., Cotea C., 2001 Reproduc ie, obstretic i ginecologie veterinar , Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iasi; Runceanu L., Drugociu D., Ro ca P., Anton C., 2002 - Reproduc ie, obstetric i andrologie clinic , Ed. Venus. Kevin J. Rozeboom - Evaluating boar semen quality, Extension Swine specialist department of animal science North Carolina State University.
508
METODE DE DETERMINARE A MOMENTULUI OPTIM PENTRU MONT SAU NSMNARE LA CEA

OPTIMAL BREEDING TIME AND ARTIFICIAL INSEMINATION MOMENT IN BITCHES, ESTABILISHED BY DIFFERENT METHODS
Ana- Monica COVACIU*, I. PAPUC** U.S.A.M.V. Cluj- Napoca Ovulation appears in the 1-4 estrus day, two days after LH peak involving the progesterone level increasing before ovulation approximate value being 5,4 ng/ml. Behavioural changes also appear at this time. Reproductive tract diseases are caused by many factors concerning genital tract diseases and also behavioural problems. I tis very important to determine the ovulation moment to estabilish the optimal mating time or artificial insemination to increase the number of puppies and decrease the costs and the stress caused by long distances transport.
Key words: ovulation, estrus, bitch.
INTRODUCERE Importana reproduciei la specia canin, n ultimii ani, a cunoscut o cretere spectaculoas, datorit interesului acordat de ctre proprietari acestei specii, n vederea obinerii unui numr sporit de pui pe un cuib. Acest fapt a impus specialitilor ca pe lng metodele clasice de depistare a momentului ovulaiei la cea, cum ar fi: examenul clinic, examenul frotiului vaginal, examenul ecografic, s fie identificate i utilizate noi metode a cror aplicabilitate s fie superioar celor clasice. (1, 3) Cteva din noile metode utilizate sunt reprezentate de : dozarea hormonilor progesteron i LH i msurarea rezistenei electrice a secreiei vaginale, n scopul supravegherii corecte a estrului la cea. (4, 6) MATERIAL I METOD
Lucrarea de fa i propune s determine prin diverse metode, faza ciclului estral la cea, n vederea unei sincronizri ct mai exacte a momentului ovulaiei cu monta natural sau nsmnarea artificial (I.A.), precum i evaluarea performanele metodelor hormonale n comparaie cu celelalte metode utilizate n mod curent n supravegherea estrului la cea
**
E-mail: covaciumonica@yahoo.com E-mail: i_papuc@yahoo.com
509
n scopul efecturii acestui experiment s-au utilizat un numr de 4 cele adulte din rasele: Rotweiller (1 ), Labrador (1 ), Amstaff (1 ), Ciobnesc german (1 ), cu vrste cuprinse ntre 3 i 5 ani, care au fost aduse la consultaie n clinica de reproducie a facultii. Experimentele s-au efectuat n perioada Aprilie 2003 Mai 2005. Ca metode de lucru au fost utilizate: Observaii clinice i comportamentale asupra femelelor n clduri Efectuarea de frotiuri vaginale n fiecare etap a ciclului sexual Determinarea concentraiei hormonilor: LH i progesteron.
REZULTATE I DISCUII Pe baza examenului clinic s-au urmrit modificrile de la nivelul aparatului genital i s-a ntocmit etograma comportamentului sexual n perioada de clduri. La debutul ciclului, n primele 4-7 zile, femela devine nelinitit, agitat, sociabil fa de masculi, apoi vulva ncepe s se tumefieze progresiv. ncepnd cu ziua a opta, femela prezint o congestie puternic a mucoasei genitale aparente, nsoit de un mucus clar, filant, uneori sangvinolent. Etograma comportamentului sexual la cea i modificrile organelor genitale externe:
Fig. 1, 2 - Modificrile organelor genitale externe
Efectuarea de amprente vaginale i examenul frotiului vaginal:
Fig. 3. Frotiu vaginal, debut de estru
Fig. 4. Frotiu vaginal estru.
Fig. 5. Optim pentru mont sau .A.
510
Realizarea frotiului citovaginal include urmtoarele etape: Prelevarea Etalarea Colorarea Metoda de colorare cu albastru de metilen Metoda de colorare cu albastru policrom La debutul estrului, frotiul prezint numeroase celule poliedrice cu nuclei picnotici sau fr nucleu, dispuse n grmezi (celule Scholen). Nu se gsesc celule parabazale sau intermediare. E posibil ca n frotiu s fie surprinse i cteva hematii. n estru frotiul prezint numeroase celule poliedrice cu nuclei picnotici sau fr nuclei, dispuse n grmezi, lipsesc celulele parabazale i intermediare mici. Dozri hormonale Momentul optim al ovulaiei poate fi determinat i prin dozarea hormonilor, mai ales a LH-ului (care indic exact stadiul n care se afl ovula) i a progesteronului Concentraia celor doi hormoni este sczut n timpul proestrului. FSH ul i LH ul ating vrful concentraiei la nceputul estrului, inducnd ovulaia Determinrile hormonale au fost efectuate la Laboratorul SYNEVO din cadrul Institutului Oncologic Cluj-Napoca Probele au fost prelevate n zilele 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 ale perioadei de clduri Toate dozrile s-au efectuat dup o supraveghere a ciclului estral prin metoda frotiului citovaginal
Tabelul 1 Cazuri luate n studiu Nr.crt 1 2 3 4 Nume femel Kimba Alfa Rita Linda Ras Amstaff Ciobnesc german Labrador Rottwailer Valori obinute Ziua 1 3 5 7 9 11 13 Valorile progesteronului 0,19 ng/ml 0,308 ng/ml 1,96 ng/ml 2,34 ng/ml 3,08 ng/ml 7,86 ng/ml 7,92 ng/ml Vrst 4 ani 3 ani 4 ani 5 ani Debutul cldurilor 19.03.2005 10.02.2005 22.04.2005 04.02.2005 Tabelul 2
511
Fig. 6 - Buletin de analiz, caea 3 ani, ziua 11 a ciclului
CONCLUZII Stabilirea momentului optim de ovulaie la celele de mare valoare biologic, att din canise ct i de la cresctorii individuali, constituie o prioritate pentru a evita pierderile de gestaie. Depistarea momentului optim pentru mont la cea, este recomandat a se face prin coroborarea datelor obinute la examenul comportamentului sexual, pe baza frotiurilor vaginale efectuate seriat (din prima zi pn n ultima zi a cldurilor) i a determinrilor hormonale. Utilizarea dozrilor hormonale n depistarea momentului ovulaiei la cea sunt superioare celorlalte metode utilizate la aceast specie, fapt ce determin creterea numrului de pui/mont Metodele permit aprecierea concentraiei serice de LH i progesteron, n consecin ofer date importante n ceea ce privete dinamica funciei ovariene, alturi de examenele clinice clasic. Pe baza frotiurilor citovaginale i a determinrii progesteronului i LH-ului se recomand efectuarea montei naturale sau I.A. n zilele 9-13 ale ciclului estral .
BIBLIOGRAFIE
1. Botrel, S., C., Cotea, M., Gaboreanu, 1982 Histologie i embriologie, Editura Didactic i Pedagogic Bucureti.
512
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 2. 3. 4. 5. 6. Boichard, G., Youngquist, R.S., et al, 1991 - Seasonality and variability of the interestrous interval in the bitch Therio 36: 41-50. Cociu, M., 1999 - Etologia i comportamentul animal, Editura.All Bucureti. Feldman, Nelson, 1996 - Ch 22 Infertility, associated breeding disorders and disorders of sexual development, In: Canine and Feline Endocrinology and Reproduction, W.B. Saunders, Philadelphia P.A., (619- 648). Groza I., Muntean, M., 2002 - Elemente de fiziologia reproduciei la animale, Editura AcademicPres Cluj- Napoca. Kolb, E., 1981 - Despre viaa i comportamentul animalelor domestice, Editura Ceres Bucureti.
513
OBSERVAII PRIVIND INFLUENA SALPINGITELOR ASUPRA UNOR PARAMETRI DE REPRODUCIE LA VACI

OBSERVATIONS REGARDING SALPINGITIS INFLUENCE ABOUT CERTAIN REPRODUCTION PARAMETERS OF COWS
I. DOROBANU, C. GALAN The investigations have been performed on 215 cows regarding the salpingitis weight in reproduction pathology and their influence on certain synthetic reproduction parameters. A number of 18 cases were diagnosed with tubar inflamation (8,4%). The regestred Service Period had a value between 170 and 500 days. Accordingly increased values of Calving Interval Indicator (until 785 days) and Pregnacy Index were rgistred.
Key words: reproduction, salpingitis, cow
MATERIAL I METOD DE LUCRU

Observaiile efectuate pe 215 femele crescute n sistem industrial au urmrit: anamneza, examenul ginecologic extern i examenul clinic intern colposcopic i transrectal, n vederea stabilirii ponedrii salpingitelor. Examenul clinic intern s-a refrit la: inspecia vulvei i regiunii perivulvare eliminarea i caracterul secreiilor permanena sau intermitena scurgerilor uterine. Examenul clinic intern, manual sau colposcopic. La vac, examinarea segmentelor componente ale tractusului genital s-a efectuat ntr-o anumit ordine : gtul uterin, corpul uterin, coarnele uterine, oviductele i ovarele. n aceai manier, s-a acordat atenie ligementelor largi, mai ales n cazurile n care se constat deformri ale zonei perisalpingiene. n mod normal, la femelele sntoase, gtul uterin este destul de lung i plasat pe planeul cavitii pelvine; este uor deplasabil i consistent. Pierderea n elasticitate i consisten poate fi identificat n caz de gestaie, pe cnd creterea consistenei denot o cervicit cronic. Coarnele uterine s-au examinat sub aspect topografic, al consistenei, sensibilitii i a tonusului. n cazul endometritelor s-a observat lipsa reaciei la palpaie i o uoar indurare. Oviductele, la cazurile examinate de noi s-au prezentat mult ngroate, pn la dimensiunea de aproximativ 0,5 cm, urmnd traectul sinuos caracteristic (mai ales n formele acute). Alteori au avut aspectul unor cordoane de consisten dens, cu unele aderene (n salpingitele cronice). Se apreciaz: caracterele mucoasei vaginale 514
forma pliurilor, care n general sunt terse, dar pot deveni evidente n inflamaiile cronice uterine Dat fiind c cervicitele sunt adeseori cauze de infecunditate s-a procedat la explorarea segmentului vaginal al gtului uterin. n acest sens s-a acordat o atenie deosebit la volumul gtului uterin, topografia, forma, abundena i caracterul secreiilor.
REZULTATE I DISCUII Onservaiile noastre privind incidena ginecopatiilor au scos n eviden mai multe entiti patologice localizate att la nivelul gonadelor ct i a tractusului genital.
Tabelul 1 Incidena ginecopatiilor Specificare Endometrite Distocii CL persistent Chiti ovarieni Salpingite Cervicite Retenia anexelor fetale Total Femele examinate Nr. % 65 30,1 20 9,4 20 9,4 40 18,5 18 17 35 215 8,4 8,0 16,2 Diagnostic prin tehnica insuflrii de aer
Salpingite unilaterale 31,43 Salpingite bilaterale 17,14
Examinarea a 215 femele a scos n eviden faptul c cel mai ridicat procent a fost ntlnit n cazul endometritelor (65 cazuri, reprezentnd 30,1%). n ordinea frecvenei urmeaz boala chistic ovarian (40 cazuri, reprezentnd 18,5%), urmate de retenia anexelor fetale (35 cazuri, reprezentnd 16,2%). Afeciunile ovariene au reprezentat un procent egal cu distociile 9,4%. Salpingitele, diagnosticate numai prin examen clinic intern transrectal, au reprezentat 8,4% (18 cazuri). Remarcm faptul c diagnosticul clinic nu precizeaz n totalitate existena unor salpingite i mai ales a obstruciilor salpingiene considernd c este necesar aplicarea i a altor metode n vederea precizrii diagnosticului. n acest sens, datele comunicate de ctre Khasatya 1999 arat c diagnosticul prin tehnica insuflrii de aer n vederea precizrii permeabilitii oviductelor pune n eviden un procent mai mare dect examenul clinic de rutin. Astfel, autorul evideniaz prin aceast tehnic salpingite unilaterale ntr-o proporie de 31,43% iar salpingitele bilaterale ntr-o proporie de 17,14%. Considerm n acest caz c diagnosticul numai prin examen clinic nu evideniaz n totalitate cazurile de salpingit sau obstrucie tubar.
515
Observaiile noastre au urmrit i evoluia ciclurilor sexuale n diverse ginecopatii. Au fost investigate mai multe elemente: intervalul de repetare a estrului (zile) - SP service period - CI calving interval - IG indice de gestaie
Tabelul 2 Evoluia ciclurilor sexuale n ginecopatii Specificare Endometrite acute Endometrite cronice CI persistent Chiti foliculari Salpingite acute Salpingite cronice Retenia nvelitorilor fetale Interval de repetare a estrului (zile) 70 70-160 9-18 21-28 Neregulat ntre 40-300 48-60 SP 204,3 249 200 90-120 170 500 68 CI 489 534 485 375-405 445 785 353 IG 6 14 12 16 8 4
Legend: S.P. = Service Period ; C.I. = Calving Interval ; I.G. = Indice Gestaie
Apreciate pe baza parametrilor de reproducie influena diverselor ginecopatii este diferit n funcie de forma clinic. Astfel, observaiile noastre scot n eviden urmtoarele: intervalul parturiie fecundaie este foarte variabil n cazul salpingitelor, n unele cazuri (cronice) depind 500 zile. intervalul dintre dou parturiii este cu mult peste asigurarea unei rentabiliti a exploatrii acestor female: cel mai mic (salpingitele acute 445 zile). indicele de gestaie ajunge la valori foarte mari mai ales n formele clinice acute (16). intervalul de repetare a estrului este foarte variabil, n unele cazuri, funcionabilitatea ovarian fiind cel puin parial pstrat. CONCLUZII 1. Observaiile noastre effectuate pe 215 femele au artat o inciden de 8,4% salpingite, diagnosticate prin examen clinic. Procentul observat de noi prin metodele clinice este mult mai mic dect diagnosticul prin metode de verificare a permeabilitii tubare asociat cu examenul clinic. 2. Analiza unor parametric de reproducie privind intervalul de repetare a estrului, SP, CI, i IG arat unele diferene ntre formele clinice diagnosticate. 3. Intervalul de repetare a estrului n cazul salpingitelor a fost cuprins ntre 21-28 zile (formele acute) i 40-300 zile (n formele cornice).
516
4. SP a fost cuprins, n funcie de forma de evoluie, ntre 170-500 zile cu maximum n formele cronice. 5. CI a realizat un interval de 785 de zile n formele de salpingit cronic, nregistrndu-se tot odat un IG cuprins ntre 8-16. 6. Cervicitele s-au caracterizat printr-un SP de 118 zile, un CI de 403 zile i IG de 11.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Ardelean, V., 1998 Reproducia animal. Ed. Agroprint. Timioara. Bogdan, A.T., 1984 Fertilitatea, natalitatea i prolificitatea n zootehnie. Ed. Dacia, Cluj. Boitor, I., 1981 Sterilitatea la femelele animalelor de ferm. Ed. Dacia, ClujNapoca. Cernescu, N., 2004 Ginecologia veterinar. Ed. Cecma, Timioara. Drugociu, D., 2004 Bolile obstetrical ginecologice la animale. Drugociu., Gh., 1977 Patologia reproduciei i clinic obstetrical. Ed. Didactic i Pedagogic Bucureti. Gluhovschi, N., 1970 Ginecologie veterinar. Ed. Ceres, Bucureti. Hafez, E.S.E., 1987 Reproduction in farm animals. Runceanu, L., Cotea, C., 2001 Reproducie, obstetric i ginecologie veterinar. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai. Seiciu, Fl., i col., 1987 Reproducia normal i patologic la animalele domestice. Ed. Ceres, Bucureti. Thibault, Ch., 1991 La reproduction chez les mamiferes et lhome. Ed. Marketing Paris.
517
THE DIAGNOSTIC IMPORTANCE OF OVARIAN AND ADENOHYPOHYSIS DOSAGE IN DAIRY COWS OVARIAN FUNCTIONAL DISORDERS
D. DRUGOCIU, L. RUNCEANU, P. ROCA U.S.A.M.V. Iai The results of the hormonal dosages in females having ovarian hypotrophy of I degree, emphasized an ovarian hypofunction by hyposecretion adenohypophyseal, having a F.S.H., L.H. and progesterone secretory insufficiency and an increase of the prolactin level. The same situation was registered in the cows presenting ovarian hypotrophy of II degree. In the females diagnosticated with persistant luteal corps the value of F.S.H./L.H. ratio is almost fair. In the females presenting the I.A. repetition syndrome, the F.S.H./L.H. ratio was of 1.29/l for F.S.H. so, we can say that the main factor of repeated I.A. is an adenohypophyseal hyposecretion of L.H.
Key words: cows, reproduction, hormonal, dosage.
Lately there were many concerns in elucidating the possibilities and limits of using hormonal therapy in animal reproduction proces (1, 3, 7). Some of the practitiones specialists are sceptical in using hormonal therapy, because of the female individual reactions after the therapy. These reactions may appear due to the fact that there is no differential therapy, depending on the degree of the functional disorder (2, 6). In order that these negative aspects of hormonotherapy not to appear it is indicated thet the clinical diagnosis be corroborated with the laboratory one (the hormonal). Once the titre of the gonadotropic hormones and of the sexual hormones is established, depending on their level the hormonal therapy can be applied (4, 5, 8). MATERIAL AND METHODS
In order to perform the hormonal dosage, blood samples have been taken, depending on the diagnosis, after the gynaecology investigation and the clinical diagnosis are made. In accordance with the clinical diagnosis, the females have been grouped in desease categories: dairy cows with ovarian hypotrophy (stage I and II), females with repeated artificial insemination and females with persistent corpus luteum.
518
The blood sample has been proccesed after the usual technique in order to obtain the blood serum. To establish the hormonal diagnosis it was followed the progesterone dosage, LHs (luteinizing hormone), FSHs (follicle stimulating hormone) and the seric prolactins. The seric progesterone tests determination was performed with the ELISA test, using streptanidina technology. The dosage of the LH, FSH and seric prolactin levels was performed through the ELISA sandwich test in one step, with amplified signal.
RESULTS AND DISCUSSIONS The hormonal dosage at the females diagnosticated with stage I ovarian hipotrophy, shows an ovarian hypofunctions through adenohypophysis hyposecretion. This is caused by a secretory insufficiency of the adenohypophysis hormones, FSHs and LHs. The titre of the gonadotropic hormones, produces an inhibation of the gonadotropin releasing factors (gonadotropin LH/FSH Releasing Hormons). Due to this fact the low level of the LH at dairy cows with stage I ovarian hypotrophy was 2,12 m UI/ml, and FSHs was 4,02 m UI/ml at the inferior limit of the basic level. At the same females it was established a low medium level of progesterone and a high level of prolactin. 6,24 mg/ml. Because of the high titre of prolactin and a hypoprogesteronemie (an average of 1,07 mg/ml) it causes the block of the sexual cicle, with the instalation of the anestrus. A similar situation was found at a group of females clinical diagnosticated with stage II ovarian hypotrophy. So at these females the medium level of seric progesterone is low (0,23 mg/ml), the FSHs at the basic minimum level (1,08 m UI/ml) adn the prolactins of 2,7 mg/ml. Clinical, these females diagnosticated with stage II ovarian hypotrophy, showed an prolonged state of anestrous. Comparing these results with the ones from the witness lot it was noticed that at the females with stage II hypotrophy, the seric concentration of the progesterone (0,23 mg/ml), prolactins and titres (1,08 m UI/ml) was significant smaller, producing this way severe modifications alterations to the genital apparatus. In case thet corpus luteum persists the decisive factor is the value of the medium raport FSH/LH (1,28/1m UI/ml) that is almost equal to the high medium level of the prolactin (3,59 mg/ml). To all these factors it adds a secretory insufficiency of PGF2 (prostaglandin 2 alpha), that causes the installation of an prolonged state of anestrous. That is why it is recommended that at the females diagnosticated with an persistent corpus luteum to be administrated a dose of PGF2 .
519
At the females, clinical diagnosticated with artificial insemination repeated sindrom, was noticed that the statistic value media of the FSH is 3,65, and LHs is 2,81. Following the statistic calculation, the value of the FSH/LH report is 1,29/1 in favour of the FSH. So it can be estimated thet the primary cause of the repeated A.I. is an adenohypophysis hyposecretion of LH. Because of this restoring the physiological report between FSH and LH (1/3, so thet the ovulation can take place) it has to be administrated, to the females, products with LH effect, a few hours before the A.I. CONCLUSIONS 1. At the dairy cows, clinical diagnosticated with stage I and II ovarian hypotrophy, was established an ovarian hypofunction with adenohypophisis hyposecretion. 2. To resume the genital activities it is recommended thet to the dairy cows with ovarian hypotrophy be administrated products with FSH or PMSG in dose of 1000 UI/animal. 3. In case of the females with A.I. repeated sindrom because of the hormonal dosage, it was established an adenohypophysis hyposecretion of LH. 4. To restore the normal titre of LH and start the ovulation it is recommended thet those females be administrated products with LH effect (HCG 1500 U.I.; Gn-RH 2,5 ml)
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. Aguer, D., 1981 Les progestagenes dans la matrise des cycles sexuels chez les bovins. Rec. Med. Vet., 157(1) : 53-60. Broiu, A., Seiciu, Fl., 2002 Ginecologie i andrologie veterinar. Ed. Fundaiei Romnia de mine. Brueuel, K.F., Lewis, P.E., 1990 Endocrine profiles and follicular development in early weaned postpartum cows. Journal of Reprod. and Fertility, vol. 97, no. 1. Galvin, J., Ryan, D.P., Boland, M.P., Roche, J.F., Yaakub, H., Snyders, S., OFarrel, K.Y., 1995 Ovarian follicular development following progestiv and gonadotropin treatments at varying stages of the follicular wave and oestrus cycle. J. Reprod. Fertil. Abstract, 15, 13. Gong, J.K., Campbell, B.K., Bramley, T.A., Peters, A.R., Webb, R., 1955 Evolution of the requirements for F.S.H. and L.H. during ovarian follicle growth and development in cattle. J. Reprod. Fertil. Abstract, 15,7. Nelis, P.C., 1995 Compendium of Animal Reproduction Publisher Intervet International B.V. Second edition. Paraipan, V., 1982 Hormonoterapia n reproducia animal. Ed. Ceres, Bucureti. Parez, V., 1994 Matrise de la reproduction dans lespece bovine. Laction veterinaire LHV. Supplement An. Nr. 1277.
5. 6. 7. 8.
520
OBSERVAII ASUPRA FRECVENEI ENDOMETRITELOR I CONSECINELE ACESTORA N PATOLOGIA REPRODUCIEI LA VAC

ENDOMETRITIS FREQUENCE OBSERVATIONS AND THEIR RESULTS ON REPRODUCTION PATHOLOGY OF COWS
C. GALAN, I. DOROBANU The acute endometritis diagnosed especially in the puerperal period were represented by two clinically dominant forms : catarrhal and purulent. The observations were about the diseases dynamic in three years period, the ratio of chronic and acute forms and the evolution of the chronic endometritis as a continuation of undiagnosed acute inflammations or inadequate treated. It comes out that the acute forms of purulent endometritis represents 8,03% cases and catarrhal endometritis 5,12%. The recoveries of acute forms have been catharrhal forms and 76,3% in purulent forms.
Cuvinte cheie: Reproducie, vac, endometrit.
Infertilitatea femelelelor nu reprezint o boal propriu-zis, ci un sindrom corespunztor diferitelor tulburri ale fucniei de reproducie. (Drugociu, Gh.,
1977, Gluhovschi, N., 1971, Seiciu, Fl., 1987, Runceanu, L., Cotea, C., 2001, Cernescu, H., 2004, Broiu, A., 2004, Huba, I., 1997).
Infertilitatea la vac poate fi o consecin a numeroase cauze (plgi, anomalii, inflamaii, etc), ncepnd cu perioada puerperal. Endometritele sunt inflamaii ale mucoasei uterine, ce pot apare primar, sau ca urmare a infeciei unui segment genital nvecinat, de cele mai multe ori pe cale ascendent prin contiguitate. Infeciile uterine la bovine, grupeaz toate strile patologice, produse de agenii patogeni n perioada puerperal, respectiv, pn la 21 zile (Seiciu, Fl., 1987). Infeciile ce depesc aceast perioad sunt (Martius, H., 1986) considerate a fi trecut n forma cronic de evoluie. n funcie de intensitatea reaciei inflamatorii, apare o gam variat de exprimri clinice. Endometrita cataral acut este diagnosticat de cele mai multe ori n perioada puerperal. Boala apare la 8-12 zile de la parturiie, n funcie de ritmul involuiei uterine, puterea de aprare local i gradul de patogenitate al germenilor. Evoluia endometritei catarale acute poate urma calea vindecrii n decurs de 8-10 zile, timp n care secreia scade cantitativ, se clarific treptat, iar involuia uterin progreseaz. n multe cazuri ns endometrita acut se cronicizeaz, iar forma cronic evolueaz extrem de insidios sau se transform n endometrita purulent.
521
Endometrita purulent acut se caracterizeaz prin inflamaia endometrului i acumularea de mucopuroi n cavitatea uterin. n aceste cazuri, starea general se altereaz, apare febra, diminuarea apetitului i a secreiei lactate. Pe ovare se palpeaz corpul luteal persistent (Muntean, C., 2005) MATERIAL I METODE DE LUCRU
Observaiile noastre au fost efectuate n perioada 2003-2005 lundu-se n eviden un numr de 578 femele, apreciindu-se frecvena endometritelor acute (cataral i purulent), forma morfoclinic a acestora precum i posibilitatea cronicizrii inflamaiei. Diagnosticul a fost stabilit prin examen ginecologic i completarea fiei ginecologice : anamneza, examenul clinic extern (modificri ale organelor genitale extern i caracterul secreiilor), examenul clinic intern (colposcopic i transrectal). Prin examen colposcopic s-au evideniat modificrile mucoasei vaginale i cervicale, culoarea, forma i aspectul pliurilor, natura secreiilor. Examenul transrectal a urmrit evidenierea componentelor tractusului genital (forma, mrimea, consistena, topografia, precum i starea funcional a ovarelor).
Tabelul 1 Apariia endometritelor cronice ca o continuare a endometritelor acute Endometrita acut Anul 2003 2004 2005 Media pe cei 3 ani Cataral Nr. 31 40 20 27 %1 5,38 5,97 60 4,08 24 5,12 47 8,03 4,89 8,95 Purulent Nr. 59 %1 10,26 Endometrita cronic Cataral Nr. 5 8 7 8 4 5 5 7 %2 16,1 13,5 17,5 13,3 20 20,8 17,8 15,4 Purulent Nr. 1 6 2 3 1 2 1 3 %2 3,2 10,1 5 5 5 8,3 4,4 7,8 Endometrita acut vindecat dup tratament Nr. %2 25 83,3 45 76,4 31 77,5 49 81,7 15 75 17 70,9 23 78,6 37 76,3
REZULTATE I DISCUII Din analiza datelor, s-a nregistrat un numr de 75,3 cazuri (pe cei trei ani): 114 n anul 2003, 123 n anul 2004 i 60 n anul 2005. Numrul crescut de cazuri n anii 2003-2004 se datoreaz n special alimentaiei necorespunztoare din punct de vedere cantitativ i calitativ. Din datele tab. 1 constatm c numrul mediu de cazuri cu endometrit cataral acut a fost de 27, reprezentnd 5,12%. Se observ un numr relativ
522
constant al acestei forme n anii 2003 i 2004: 5,38% i respectiv 5,97%, fiind ceva mai sczut n anul 2005. Forma acut purulent nregistreaz o medie de 47,6 cazuri. Procentual, fa de valorile medii (8,03%), se constat variaii ntre 10,26 n anul 2003, 8,95 n 2004 i 4,89 n anul 2005. Urmrind evoluia endometritelor acute care se pot croniciza, constatm, n dinamica anilor 2003-2005 c n unele cazuri formele acute catarale sau purulente, se cronicizeaz. Astfel, n anul 2003 au fost nregistrate un numr de 31 cazuri cu endometrit acut cataral , reprezentnd 5,38% din totalul femelelor examinate. Dintre acestea 83,3% s-au vindecat, 16,1% au trecut n forma cataral cronic, iar 3,2% n forma purulent cronic. n anul 2004 au fost diagnosticate 40 cazuri (5,97%) cu endometrit cataral acut ; dintre acestea 31 cazuri (76,4%) s-au vindecat, 7 cazuri (17,5%) au trecut n forma cataral cronic, iar 2 cazuri (5,0%) s-au transformat n endometrit cronic purulent. Rezultate asemntoare sunt nregistrate i n anul 2005. Observaiile privind modificrile formei clinice de endometrit acut purulent arat c n anul 2003 au fost diagnosticate 59 cazuri (10,26%), dintre care 45 s-au vindecat, 8 (13,5%) au trecut n forma cataral cronic, iar 6 cazuri (10,1%) s-au cronicizat. Date asemntoare se nregistreaz i n anul 2004: 8,95% femele diagnosticate, 81,7% vindecri iar 5,0% s-au cronicizat. n anul 2005, dinamica evoluiei clinice este apropiat de anii anteriori. CONCLUZII 1. Forma morfoclinic de endometrit purulent acut a fost cea mai frecvent diagnosticat (8,03%), urmat de endometrita cataral acut (5,12%). 2. Dinamica evoluiei acestor afeciuni n anii 2003-2005 arat o asemnare n procentul de vindecri sau recidive. 3. Trecerea formei clinice din acut n cronic (cataral sau purulent) arat, importana deosebit a precizrii diagnosticului i instituirea unui tratament judicios, ntruct n medie 21,8% din formele catarale acute i 23,2% din formele purulente acute, se transform n forme cronice. 4. Tratamentul femelelor cu endometrit dup aceiai formal terapeutic, fr a ine seama de variabilitatea florei patogene i individualizarea cazurilor, complic unele forme acute fr o mare gravitate, n forme cronice, uneori ireversibile.
523
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Broiu, A., 2004 Tratat de reproducie la animale. Ed. ALL Bucureti Cernescu, H., 2004 Ginecologie veterinar. Ed. CECMA Timioara. Drugociu, Gh., 1977 Patologia reproduciei i clinic obstetrical. Ed. Didactic i Pedagogic Bucureti. Gluhovschi, N., 1971 Reproducia animalelor domestice. Ed. Ceres, Bucureti. Huba, I., 1997 Corelation between milk yield and fertility of dairy cows. Zivocisna 282 Slovakia. Mialot, I.P., 1989 Pathologie de la Reproduction chez les carnivores domestiques. Ed. Du Point Veterinaire Paris. Runceanu, L., Cotea, C., 2001 Reproducie, obstetric i ginecologie veterinar. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai. Runceanu, L., 1995 Patologia reproduciei i clinic obstetrical. I.A. Iai. Seiciu, Fl., 1987 Reproducia normal i patologic la animalele domestice. Ed. Ceres, Bucureti. Vaissaire, I.P., 1977 Sexualite et reproduction des mammiferes domestiques et de laboratoire. Ed. Maloine, Paris.
524
STUDIU PRIVIND INCIDENA MAMITELOR CLINICE LA VACILE CU LAPTE DE RAS BNR

STUDY REGARDING THE INCIDENCE OF CLINICAL MASTITIS AT DAIRY COWS BNR BREED
N. HROMEI A.N.S.V.S.A. - PIF Sculeni Mariana SOFRONIE, M. PNTEA, Elena RUGINOSU, C. BDELI, Anca LUPU S.C.D.B. DANCU Iasi The study made in a farm of BNR breed milk cows, belonging to SCDB Dancu, during the period 2001-2005, on a number of 2326 cows. Out of the total of 588 sacrificed cows, it was observed that a percentage of 8 % was represented by the the chronic (clinical) mastitis. The analysis made was related to the percentage of representation of clinical mastitis depending on the season, stabulation season and lactation range. Thus the highest incidence of clinical (chronic) mamitis takes place in spring (38%) and the lowest in winter (17%). The highest values (23,7%) are record for the 4th and 5th lactation and the lowest (10,5%) for the 2th lactation. The preventing sanitary-veterinary actions, precocious diagnosing and treatment administering according to optimum timing lead to diminishing loses in cow farms.
Words key: dairy cows, chronic (clinical) mastitis, season, loses.
Pstrarea nemodificat a compoziiei chimice a laptelui i mai ales asigurarea salubritii lui, constituie o condiie esenial pentru biosecuritatea alimentar, cu privire la sntatea uman. Laptele este un mediu favorabil dezvoltrii unei game variate de microorganisme. Unele dintre acestea, care pot fi patogene i contagioase se elimin la nivelul glandei mamare, mai ales cnd aceasta prezint leziuni i exercit o aciune nociv asupra consumatorilor. n cazul mamitelor clinice s-a constatat c, frecvent vacile rmn purttoare de germeni , cu un grad foarte mare de risc de diseminare a bolii n efectivul de vaci din ferm, reprezentnd un pericol deosebit de grav pentru sntatea animalelor, salubritatea produselor lactate i sntatea consumatorilor umani (1, 2, 3). Intensivizarea produciei de lapte presupune o cretere proporional a capacitii individuale de lactogenez. Pentru a se asigura eficiena economic a
525
fermei, cresctorii de vaci, n colaborare cu serviciul sanitar veterinar trebuie s acioneze n direcia creterii produciei de lapte, ridicarea calitii laptelui i s supravegheze starea de sntate a glandei mamare a vacilor cu lapte printr-un program adecvat de prevenire i tratament (4, 5). Numeroase studii de specialitate evideniaz faptul c, mamitele la vacile n lactaie produc pierderi economice deosebit de pgubitoare, estimate la 100-140 $/vac, prin scderea produciei de lapte, eliminarea laptelui vacilor tratate cu antibiotice, scderea calitii laptelui, costul medicamentelor, costul forei de munc suplimentare, serviciile veterinare i reformarea timpurie a vacilor (1, 2, 3, 5, 9). Diferite studii de specialitate au indicat o frecven variabil a mamitelor clinice la vacile cu lapte, de la o ferm la alta, n relaie cu aria geoclimatic, practicele manageriale i cu ali muli factori tehnologici, terapeutici, de zooigien, fapt ce impune o monitorizare permanent la nivelul fiecrei ferme de vaci pentru a se lua msurile cele mai potrivite de reducere a acestor pierderi att de costisitoare din punct de vedere economic. Scopul lucrrii este de a efectua o analiz mai complex la nivelul unei ferme de cretere i exploatare a taurinelor de rasa BNR privind dinamica manifestrii mamitelor clinice la vacile n lactaie, n relaie cu unii factori de variaie. MATERIAL I METOD
Studiul a fost efectuat n perioada 2001-2005 n ferma de cretere i exploatare a vacilor de lapte, de rasa BNR a SCDB Dancu Iasi, pe un efectiv rulat de 2326 capete. Din analiza efectuat a rezultat c animalele au beneficiat de condiii n general bune de furajare i exploatare, starea de ntreinere fiind apreciat ca bun i foarte bun. Nucleul existent n ferm este reprezentat de vaci de nalt valoare genetic, care nregistreaz producii de 5000-8000 l / vac/ lactaie normal i o producie medie de lapte n anul 2005 de 6700 l. / vac / lactaie. Activitatea de prevenire i control a mamitelor a fost bine organizat, primvara i toamna efectundu-se controlul strii de sntate a glandei mamare i a calitii laptelui printr-un test rapid de grajd cu reactiv R. Mastitest (produs de Institutul Pasteur Bucureti). Cu toate aceste msuri s-au nregistrat unele deficiene n sistemul de exploatare, ct i n cel de colectare a laptelui, care direct sau indirect au condus la apariia i manifestarea unor afeciuni ale glandei mamare cu implicare n cantitatea de lapte muls, calitatea laptelui, genernd unele pierderi la nivel economic. Pentru studiul iniiat s-a efectuat o anchet epidemiologic, lundu-se n considerare datele oficiale din unitate. Atfel, pentru perioada 2001-2005 s-au ierarhizat ieirile din efectiv a vacilor sacrificate pe diferite cauze i s-au analizat
526
cele datorate afeciunilor glandei mamare stabilind dinamica incidenei mamitelor clinice n funcie de variate cauze, cum sunt: anotimpul, sezonul, rangul lactaiei.
REZULTATE I DISCUII Rezultatele obinute sunt prezentate n tabelele i graficele de mai jos. Analiznd datele din tabelul 1 se constat c la efectivul rulat de 2326 vaci n perioada 2001-2005, un numr de 588 capete, reprezentnd 25,3% au fost sacrificate din diverse cauze. Din totalul sacrificrilor un numr de 47 capete (8,0%) au avut drept cauze mamitele clinice, entiti patologice care nu au rspuns favorabil la tratamentele aplicate sau care au recidivat la anumite intervale de timp (tab.1, fig. 1).
Tabelul 1 Date privind sacrificrile de necesitate la vacile de lapte din diverse cauze (2001-2005) Cauza sacrificarii Total Afectiuni Afectiuni Efectiv animale ale podale si Mamite Afectiuni Anul matca sacrificate Diverse clinice medicale aparatului ale mediu genital membrelor n % n % n % n % n % n % 2001 522 77 14,7 32 41,6 23 29,9 6 7,8 12 15,6 4 5,2 2002 446 84 18,8 43 51,1 18 21,5 7 8,3 11 13,1 5 6,0 2003 451 171 37,9 52 45,6 78 45,6 11 6,4 21 12,3 9 5,3 2004 447 139 31,1 51 36,7 43 31,0 15 10,8 25 18,0 5 3,6 2005 460 117 25,4 42 35,9 47 40,2 8 6,8 20 17,1 0 0 Total 2326 588 25,3 220 37,4 209 35,5 47 8,0 89 15,1 23 3,9
Fig. 1 Dinamica sacrificrilor de necesitate ntr-o ferm de vaci cu lapte (2001-2005)
527
Fig. 2. Valorile medii ale sacrificrilor de necesitate cauzate de mamitele clinice la vaci (2001-2005).
n figura 2 sunt prezentate valorile medii ale sacrificrilor de necesitate datorate mamitelor cronice n raport cu alte cauze care au determinat ieirile din efectiv a vacilor. Din totalul iesirilor din efectiv, mamitele clinice ocup locul patru, dup afeciunile aparatului genital (37,4%), afeciunile membrelor (35,5%) i afeciunile medicale (15,1%). Analiznd incidena mamitelor clinice n perioada 2001-2005, se constat o valoare medie de 8,0%, limitele de variaie fiind cuprinse ntre 6,4% (2003) i 10,8% (2004), (fig. 3). Rezultatele obinute sunt similare cu cele ale altor autori (7, 9).
Fig. 3 Dinamica incidenei mamitelor clinice la vacile cu lapte (2001-2005)
n anul 2005, incidena mamitelor clinice n efectivul matc de 460 capete a fost de 32,2% (148 vaci), repartiia pe sezoane fiind de 96 vaci (64,8%) n cel cald i de 52 vaci (35,2%) n cel rece. n urma tratamentelor aplicate cu antibiotice 94,6% (140 vaci) s-au vindecat, iar 6,8% (8 vaci) au fost sacrificate.
528
Studiind incidena mamitelor clinice la vaci n funcie de rangul lactaiei s-au constatat valori maxime la a-IV-a i a-V-a lactaie (23,7%), perioad care coincide cu vrful lactaiei, cnd vacile ajung pn la 8000 l / lactaie normal i valori minime la a-VI-a lactaie (5,3%), cnd curba lactaiei este n scdere (fig. 4). Aceast situaie a fost constatat i de ali autori (9). Astfel, se confirm faptul c vacile cu producii mari de lapte de peste 5000- 6000 l / lactaie normal prezint o inciden a mamitelor clinice mai mare comparativ cu vacile care au producii mai mici.
Fig. 4 Dinamica incidenei mamitelor clinice la vaci n funcie de rangul lactaiei (2001-2005).
n funcie de anotimpuri incidena mamitelor clinice a nregistrat valori minime iarna (17%) i valori maxime primvara (38,0%). Aceast situaie se explic prin faptul c, spre sfritul iernii i nceputul primverii se nregistreaz un vrf al ftrilor, cnd se manifest i o scdere a reaciilor de autoaprare n perioada postpartum, cnd femelele prezint o susceptibilitate crescut la infecii pe fondul unei imuniti sczute, dup o perioad de hrnire cu furaje din stoc, furaje conservate, deficitare n principii vitamino-minerali (fig. 5).
Fig. 5 Incidena mamitelor clinice n funcie de anotimpuri (2001-2005)
529
Fig. 6 Incidena mamitelor clinice n funcie de sezonul de stabulaie (2001-2005).
n funcie de sezon incidena mamitelor clinice a prezentat valori maxime n sezonul de stabulaie de primvar-var (62%) i valori minime n cel de toamn- iarn (38%), (fig. 6). n sezonul de var temperaturilor caniculare i ventilaia necorespunztoare din adposturile cu vaci acioneaz ca factori de stress scznd rezistena la infecii . Factorii tehnologici, cu referire la lungimea patului la animale, modul de evacuare a dejectiilor din adpost, felul aternutului (paie, covor de cauciuc, nisip) trebuie luai n considerare n programul general de prevenire a mbolnvirii animalelor, deoarece ei reprezint de asemenea factori importani care influeneaz starea de sntate a glandei mamare i salubritatea laptelui obinut, fapt constatat i de alti autori (4, 5, 6). Pe lng efectele negative asupra produciei de lapte, vacile cu mamite clinice prezint o rat de concepie sczut i o rat crescut a avorturilor, ceea ce afecteaz funcia de reproducie a femelelor cu repercusiuni negative asupra indicilor de producie i eficien economic a fermei (8). n condiiile n care incidena mamitelor n ferma de vaci cu lapte prezint valori ridicate, care variaz n funcie de diveri factori, se impun msuri de prevenire a acestor afeciuni, cu referire la modernizarea tehnologiilor de ntreinere, exploatare, furajare a animalelor, mbuntirea ventilaiei n adposturi, igiena glandei mamare, igiena mulsului, nrcarea corect a vacilor gestante n ultimele dou luni, nainte de ftare, aplicarea de tratamente de prevenire a infeciilor mamare n perioada de repaus mamar, tratarea corect i rapid a cazurilor clinice i reformarea cazurilor cronice, care recidiveaz, stopnd rspndirea bolii n efectivul de animale.
530
CONCLUZII 1. Incidena mamitelor clinice n perioada 2001-2005 a fost cuprins ntre 6,4% (2003) i 10,8% (2004), media multianual fiind de 8,0% ; 2. Mamitele clinice la vacile n lactaie sunt pe locul patru, cu o medie de 8% n clasamentul cauzelor de ieiri din efectiv prin sacrificare, dup afeciunile aparatului genital (37,4%), afeciunile membrelor (37,5%) i afeciunile medicale (15,1%); 3. Incidena mamitelor clinice raportat la rangul lactaiei a prezentat valori maxime de 23,7% la lactaiile IV-V i valori minime la a VI-a lactaie (5,3%); 4. n funcie de anotimp, incidena mamitelor clinice nregistreaz valori maxime primvara (38%) i valori minime iarna (17%), iar n funcie de sezon, valori maxime n sezonul primvar var (62%) i valori minime n sezonul toamn- iarn (38%); 5. Pentru a reduce pierderile cauzate de manifestarea mamitelor la vacile n lactaie se impune aplicarea unui program complex de msuri de prevenire, monitorizare a strii de sntate a glandei mamare, igien a mulsului, exploatare i furajare corespunztoare, nrcarea corect a vacilor gestante i reformarea cazurilor de mamit cronic.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Cengiz, Yalin, 1999 - Cost of Mastitis in Scottish Dairy Herds with Low and High Subclinical Mastitis Problems - Department of Livestock Economics, Faculty of Veterinary Science; Hillerton J.E., E.A. Berry, 2005 - Treating mastitis in the cow a tradition or an archaism- Journal of Applied Microbiology- Vol. 98, Pg 1250, England; Hurley W.L, D.E Mori, 2000 Mastitis - Lactation Biology, Illinois, USA; John H. Kirk, 1999 - Principle- based mastitis prevention - Nature Biotechnology, 70 DVM, MPVM, Veterinary Medicine, Extension, University of California- Davis, Veterinary Medical Teaching and Research Center, Tulare, CA, USA; Krznari, Marko, 1995 - Evaluation of damage caused by mastitis in cows SVIBOR - Veterinarski Institut, Zagreb (48); Rosca P., L. Runceanu, D. Drugociu, Liliana Rosca, 2002 - Clinical mastitis dairy cows: Frequency and variations in function of season and breeding condition Lucrri tiintifice, vol. 45(4), Edit. Ion Ionescu de la Brad, Iasi, pg. 422-426; Rosca P., L. Runceanu, D. Drugociu, Liliana Rosca, 2002 - Researches regarding the correlation between the frequency of clinical mastitis and level of milkproduction at dairy cows - Lucrri tiintifice, vol.45(4), Edit. Ion Ionescu de la Brad, Iasi, pg. 418-421; Santos J.E.P., R.L.A. Cerri, M.A. Ballou, G. Higginbotham, J.H. Kirk, S.O. Juchem, 2001 - Effect of clinical mastitis incidence on lactational and reproductive performance of Holstein dairy cows. - J. Anim. Sci. Vol. 80, Suppl. 1/J. Dairy Sci. Vol. 85, Suppl. 1 373, Sherbrooke University, Quebec, Canada; Winston Ingalls, 2003 - Clinical Mastitis - West Agro, Inc., Aug 2, Kansas City,USA.
8.
9.
531
STUDII PRIVIND INCIDENA MAMITELOR SUBCLINICE LA VACI N FUNCIE DE UNII FACTORI DE VARIAIE
THE STADIES REGARDING THE INCIDENCE OF SUBCLINICAL MASTITIS AT DAIRY COWS IN FUNCTION OF SOME VARIATION FACTORS
N. HROMEI A.N.S.V.S.A. - PIF Sculeni Elena RUGINOSU, Mariana SOFRONIE, M. PNTEA, C. BDELI, Anca LUPU S.C.D.B. DANCU Iasi The researches were made into a dairy farm, Black and White Spoted breed, exploited in an intensive system, the milk production being of 6700 milk l.cow/ year. The objective of the study was to establish the dynamic incidence of the subclinical mastitis according to some variation factors: season, lactation range and milk production /day. In this purpose were taken samples of milk from 90 lactation cows, which were tested with a reactive R. Mastitest in a fast stable test and from the interpretation of the date (positive and doubtful test) was established the state of udder health regarding the incidence of subclinical mastitis. The results obtained were indicated the following variations of the values regarding the incidence of subclinical mastitis at cows: the higher values with 11,7% on the posteriore mammare quartiers, comparative with the anteriore mammare quartiers (44,6% and 32,9%, respectively) and with 3,2% on the left mammare quartiers, comparative with the right side of the udder (40,3% and 37,1%, respectively); higher values with 19,4% in the summer, comparative with the winter season, significantly difference (P < 0,05), (54,54 and 35,07%, respectively); in raport with lactation range, smaller values with 14,1%, 16,7% and 19,9% at the first lactation (24,4%), comparative with the following lactations: the second, the third and the four lactation (38,5% , 41,1% and 44,3% , significantly differences (P < 0,05); in raport with milk production were smaller values with 7,1% and 26,7% (significantly differences, P < 0,01) at the cows with 10-20 l. milk/day (31,2%), comparative with the cows with 21-30 l. milk/ day (38,3% and respective 57,9% ).
Key Words: dairy cows, R. Mastitest, subclinical mastitis, incidence, variation factors.
Mamitele la vacile cu lapte sunt cele mai importante afeciuni ale glandei mamare cu implicaii zooeconomice deosebite, fiind dintre cele mai pgubitoare afeciuni.
532
S-a constatat c n efectivele de vaci cu mamit se nregistreaz pierderi n producia de lapte estimate la 100-140 $ / vac, ceea ce reprezint 70% din costul total al mamitelor (costuri cu medicamentele, fora de munc suplimentar, serviciile veterinare, eliminarea laptelui dup tratamentele cu antibiotice, scderea calitii laptelui i n consecin preuri mai mici ale acestuia, reformarea timpurie a animalelor). Din totalul costurilor, 10-26% sunt datorate mamitelor subclinice (5). Lund n considerare aceste aspecte economice, dar i cele ce privesc biosecuritatea consumatorilor umani, pstrarea strii de sntate a glandei mamare la vacile cu lapte trebuie s fie un obiectiv important al programului general de prevenire i supraveghere a sntii animalelor din ferm, condiie pentru asigurarea eficienei fermei i salubritatea produselor obinute. Respectarea unei igiene corespunztoare a mulsului, asigurarea de condiii optime de microclimat n adposturi, controlul periodic al parametrilor de funcionalitate a aparatelor de muls, supravegherea strii metabolice i imunologice a animalelor, un sistem mbuntit de ntreinere, furajare i exploatare a vacilor pentru lapte, precum i controlul periodic al mamitelor subclinice, tratarea preventiv la nrcare i tratarea formelor clinice de mamit n perioada de lactaie sunt cteva din aspectele ce privesc acest program complex de prevenire a mamitelor (2, 4, 6). Numeroasele studii efectuate au evideniat o frecven variabil a mamitelor subclinice la vacile cu lapte, datorit complexitii i diversitii factorilor implicai n etiopatogenia acestei entiti patologice i deseori datorit unei slabe eficiene a msurilor de prevenire i tratament (1, 2, 7, 8). Scopul studiilor a fost acela de a stabili dinamica incidenei mamitelor subclinice la vacile cu lapte n funcie de unii factori de variaie: sezon, numrul lactaiei i producia de lapte/ vac /zi. MATERIAL I METOD DE LUCRU
Cercetrile au fost efectuate n perioada ianuarie 2004 - decembrie 2005, n ferma de cretere i exploatare a vacilor cu lapte SCDB Dancu Iasi, indemn de boli infecto-contagioase, LEB i TBC. Materialul de studiu a fost reprezentat de vaci, ras Blat cu Negru Romneasc, la care efectivul matc a fost n medie de 400 vaci cu lapte. Sistemul de exploatare a fost de stabulaie permanent, cu excepia sezonului cald cnd s-a practicat un sistem mixt, cu meninerea animalelor n tabara de var, n sistem liber, cu padoc de pmnt, cu front de furajare betonat i prevzut cu umbrar. Furajarea animalelor s-a fcut cu furaje obinute n propria ferm i cu reziduri industriale provenite de la fabricile F.N.C. i fabrica de vin-alcool (borhoturi de bere). Raia furajer a fost alctuit difereniat n funcie de starea fiziologic a animalelor, producia de lapte, sezon, vrst. Mulsul vacilor s-a efectuat mecanic cu instalaii la bidon, tip Banat, de dou ori pe zi (dimineaa i seara). Repausul mamar de dou luni nainte de 533
ftare a fost respectat cu strictee pentru refacerea rezervelor corporale a animalelor i susinerea viitoarei lactaii la parametrii ridicai. Producia medie de lapte realizat pe lactaie normal a fost de 6700 l. / vac. n vederea depistrii mamitelor subclinice la vacile n lactaie s-au aplicat teste rapide de grajd cu ajutorul reactivului R. Mastitest produs de Institutul Pasteur Bucureti). S-a stabilit incidena mamitelor subclinice n funcie de unii factori de variaie, cum ar fi sezonul, rangul lactaiei, producia de lapte, precum i repartiia afeciunii pe sferturile mamare. Interpretarea rezultatelor s-a fcut dup aspectul amestecului lapte reactiv R. Mastitest (1): reacie negativ (-) = amestecul rmne fluid, omogen i subire ; reacie dubioas () = n amestec apar filamente i flocoane; reacie pozitiv (+) = amestec uor consistent, cu flocoane i fluiditate sczut; reactie intens pozitiv (+ +) = amestec foarte consistent i vscos. Dac se nclin placa amestecul rmne prins de plac sau se scurge ca un lichid filant. Rezultatele au fost prelucrate statistic i au fost prezentate n grafice i tabele.
REZULTATE I DISCUII Rezultatele investigaiilor efectuate n cadrul acestui studiu referitoare la incidena mamitelor subclinice, prezentate sintetic n tabele i grafice evideniaz unele variaii n raport cu diferii factori. Analiza datelor indic o inciden a mamitelor subclinice mai mare cu 11,7% la sferturile situate n partea posterioar a glandei mamare, comparativ cu cele din partea anterioar (44,6% fa de 32,9%) i cu 3,2% la sferturile din partea stng, comparativ cu cele din partea dreapt a ugerului (40,3% fa de 37,1%), (tab. 1a, tab. 1b, fig. 1). Rezultate similare au fost evideniate i de ali autori (7).
Partea anterioar posterioar
dreapta
stnga
Fig. 1 Incidena mamitelor subclinice la vaci pe sferturi mamare
534
535
n raport cu sezonul incidena mamitelor subclinice la vaci nregistreaz valori cu 19,4% mai mari n sezonul de var, comparativ cu cele din iarn, diferena fiind semnificativ (P < 0,05), (54,54% fa de 35,07%), (tab. 2, fig. 2).
Tabelul 2 Rezultate privind manifestarea mamitelor subclinice la vaci n funcie de sezon Sezonul Var n Probe negative ( - ) Total probe mamit subclinic ( ) si ( + ) din care: - dubioase ( ) - pozitive ( + ) - intens pozitive ( ++ ) Total sferturi mamare testate 30 36 17 10 9 66 % 45,50 54,54 25,80 15,20 13,60 n 187 101 74 17 10 288 Iarn % 64,90 35,07 25,70 5,90 3,50 Total probe n 217 137 91 27 19 354
Interpretarea reactiei R. Mastitest
Fig. 2 Dinamica incidenei mamitelor subclinice la vaci n funcie de sezon
Analiznd manifestarea mamitelor subclinice n funcie de numrul lactaiei se constat valori mai mici cu 14,1%, 16,7% i 19,9% la prima lactaie (24,4%), comparativ cu lactaiile a-II-a, a-III-a i a-IV-a (38,5%, 41,1% i respectiv 44,3%), diferenele fiind semnificative (P< 0,05), (tab.3, fig. 3).
536
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 3 Rezultate privind manifestarea mamitelor subclinice la vaci n funcie de numrul lactaiei. Numrul lactaiei Interpretarea reaciei R. Mastitest Probe negative ( - ) Total probe mamit subclinic ( ) si ( + ), din care: - dubioase ( ) - pozitiv ( + ) - intens pozitiv ( ++ ) Total sferturi mamare testate n 31 10 10 41 I-a % 75,6 24,4 24,4 a-II-a n 96 60 38 12 10 156 % 61,5 38,5 24,4 7,7 6,4 a-III-a n 46 32 24 8 78 % 58,9 41,1 30,7 10,2 a-IV-a i peste a-IV-a n % 44 55,7 35 19 15 1 79 44,3 24,1 18,9 1,3 Total probe n 217 137 91 27 19 354
Fig. 3 Dinamica incidenei mamitelor subclinice la vaci n funcie de numrul lactaiei
n funcie de producia de lapte /zi se constat valori ale incidenei mamitelor subclinice mai mici cu 7,1% la vacile cu producii de 10 - 20 l / zi (31,2%), comparativ cu vacile cu producii de 21- 30 l/ zi (38,3%) i mai mici, respectiv cu 26,7% (diferen distinct semnificativ, P < 0,01 ) fa de vacile cu producii de 31-35 l/ zi (57,9%), (tab.4, fig. 4). Literatura de specialitate indic faptul c, probele pozitive la testele de control (R.Mastitest, CMT), ct i probele dubioase pun n eviden creteri ale numrului de celule somatice peste limitele permise, precum i a numrului total de germeni din lapte, ceea ce indic existena unei infecii la nivelul glandei mamare (7). Analiza rezultatelor din acest studiu prezint faptul c, incidena mamitelor subclinice variaz n funcie de unii factori, care acioneaz ca supresori ai sistemului imunitar scznd rezistena organismului la diferii ageni patogeni din mediul extern sau intern. Astfel, n sezonul de var temperaturile caniculare au
537
indicat un efect negativ asupra strii de sntate n general i a glandei mamare, n mod special, fapt ce a determinat o cretere a susceptibilitii la diferite infecii. Acest fapt a fost confirmat i de ali autori (6, 7).
Tabelul 4 Rezultate privind manifestarea mamitelor subclinice la vaci n funcie de producia de lapte Producia de lapte l./ zi 10 - 20 21 - 30 31 - 35 n % n % n % 42 69,8 169 61,6 8 42,1 19 12 5 2 61 31,2 19,7 8,2 3,3 105 74 15 16 274 38,3 27,0 5,5 5,8 11 7 3 1 19 57,9 36,8 15,8 5,3 Total probe n 217 137 91 27 19 354
Interpretarea reaciei R.Mastitest Probe negative ( - ) Total probe mamit subclinic ( ) si ( + ), din care: - dubioase ( ) - pozitive ( + ) - intens pozitive ( ++ ) Total sferturi mamare testate
Fig. 4. Dinamica incidenei mamitelor subclinice la vaci n funcie de producia de lapte/zi.
Factorii de zooigien a mamelei au un rol deosebit de important n asigurarea sntii glandei mamare. O deficien n aceast direcie i mai ales la nivelul posterior a sferturilor mamare are efecte negative, crescnd incidena mamitelor, aa cum s-a constatat n studiul de fa i cum a fost confirmat i de ali autori (7). Datele nregistrate n acest studiu indic faptul c, vacile cu producii ridicate de lapte aflate n faza de vrf a lactaiei sunt mai susceptibile la infecii, datorit metabolismului lor mai intens i a necesarului crescut de nutrieni energoproteici i vitamino-mineral, care n anumite situaii este greu de asigurat la nivelul cerinelor. La vacile cu mai multe lactaii (peste a- IV-a) s-a constatat de asemenea o inciden crescut a mamitelor datorit scderii sistemului imunitar
538
pe fondul unor deficiene metabolice i a predispozitiei spre mamite prin recidivarea unor infecii anterioare. n vederea reducerii incidenei mamitelor n general i a celor subclinice n mod special se impune aplicarea unui program de supraveghere permanent a strii de sntate a glandei mamare, n aceast direcie acest test rapid de grajd cu reactiv R. Mastitest poate fi de un real ajutor. Cunoscnd factorii de variaie a acestor afeciuni se poate interveni n sensul minimalizrii aciunii lor, contribuind la reducerea pierderilor economice i la creterea eficienei exploatrii vacilor cu lapte. CONCLUZII 1. n funcie de repartiia pe sferturile mamare s-a constatat inciden a mamitelor subclinice mai mare cu 11,7% la sferturile situate n partea posterioar a glandei mamare, comparativ cu cele din partea anterioar (44,6% fa de 32,9%) i cu 3,2% la sferturile din partea stng, comparativ cu cele din partea dreapt a ugerului (40,3% fa de 37,1%); 2. n raport cu sezonul incidena mamitelor subclinice la vaci nregistreaz valori cu 19,4% mai mari n sezonul de var, comparativ cu cele din iarn, diferena fiind semnificativ (P < 0,05), (54,54% fa de 35,07%); 3. n funcie de numrul lactaiei se constat valori mai mici cu 14,1%, 16,7% i 19,9% la prima lactaie (24,4%), comparativ cu lactaiile a-II-a, a-III-a i a-IV-a (38,5%, 41,1% i respectiv 44,3%, diferenele fiind semnificative (P< 0,05) 4. n funcie de producia de lapte /zi se constat valori ale incidenei mamitelor subclinice mai mici cu 7,1% i respectiv cu 26,7% (diferene distinct semnificative, P < 0,01) la vacile cu producii cuprinse ntre 10-20 litri lapte/ zi (31,2%), comparativ cu vacile cu producii de 21-30 l. lapte/ zi i respectiv 31-35 l. lapte / zi (38,3% i respectiv 57,9%)
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Broiu A., 2002 - Diagnosticul mamitelor la vacile de lapte- Buletin informativ ,vol. I, nr. 2; Gheorghiu Anna, Statov C., Harmat Eugenia, 1979 - Calitatea igienic a laptelui n raport cu sistemul de evacuare a dejeciilor i tipul de aternut din adposturile de vaci de lapte- Lucr. St. Taurine, ICDB Balotesti, pg. 119- 125; Groza I., Bogdan L., Simona Ciupe, R. Pop, Moser F., Cenariu M, Trenisan T., Filip D., 2004 - Cercetri privind incidena i tratamentul mamitelor subclinice i clinice la vac - Lucrari stiintifice, USAMV, Seria C., vol. XLVI-XLVII, Facultatea de Medicina Veterinara Cluj-Napoca; Jones G.M., T.L. Bailey, Jr., 1998 - Mastitis Control in Heifers and First Lactation Maryland College of Veterinary Medicine, and Extension Veterinarian, Virginia Tech Publication Number 404-281 Hurley W.L, D.E Mori, 2000 Mastitis - Lactation Biology, Illinois, USA
4. 5.
539
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 6. 7. 8. Ken E. Leslie, 1997 - Fine-Tuning Mastitis Control Programs Department of Population Medicine, University of Guelph, Guelph, Ontario, Canada N1G 2W; Kikkers B.H., L. zsvri, F.J.C.M. Van Eerdenburg, L. Brzsnyi, O. Szenci, 2004 - The incidence of mastitis treated with antibiotics in large- scale Hungarian Holstein-Frisian dairy farms - Acta Veterinaria Hungarica 52 (1), pp. 1932; Mi McFadden, 1996 - Influence of Dry Cow Management on Mastitis Michigan Dairy Review 1(4):12, USA.
540
HOOP STRUCTURES DESIGN FOR GESTATING SOWS: REVIEW

STRUCTURI UOARE PENTRU NTREINEREA SCROAFELOR GESTANTE: RECENZIE
I. HUTU* U.S.A.M.V.B. Timioara Structurile uoare semicirculare pot fi alternative ieftine, practice i aplicabile n sectorul creterii suinelor din Romnia. Structurile hoop se caracterizeaz prin investiii reduse, ntreinere n grupuri i pe aternut permanent. Conform citrilor bibliografice parametri bunstrii, unele caractere productive i reproductive sunt, n bun msur, superioare sau comparabile altor sisteme de producie. Scopul acestei lucrri este derularea unui parteneriat cercettor extensionist - fermieri i nceperea cercetrii, extensiei i practicii productive n astfel de strcucturi.
Key words: hoop, structures, gestation and, sows
The hoops, which originated in the prairie provinces of Canada, are low cost and easy to erect. They rely on the use of large amounts of bedding to absorb the pig feces and urine and also for the pig sleeping areas. During the past fifteen years, hoop structures or hoops have become a popular alternative for housing finishing pigs in Australia, Canada, Korea, Nederland, Ukraine and USA. Hoops are large tentlike structures that are deep bedded with cornstalks or straw. [3, 6, 7] For Romanian transition period hoop structures can be a cheaper alternative at expensive conventional structures. In 2005, February 8th in the Agroinfo Forum (http://forum.agroinfo.ro/) was start hoop structure topic and till 2006 February 8th 63 replies and 21.812 views was done. [11] We believe that Romanians farmers' attitudes will be open for lowinput technology as well as other farmers. [9] The aims of this paper it to start on a partnership relation researcherextensionit-farmers in order to promote and use these structures.
E-mail: office@unitate-extensie.org.ro
541
MATERIALS AND SYSTEM DESIGN OF HOOP FOR GESTATING SOWS

Hoop structures, or hoops, consist of arched pipes or trusses in a Quonsetshaped structure covered with an ultraviolet-resistant polyethylene fabric tarp. The hoops are attached to wooden posts with wood sidewalls that are 1.22 m high. The basic particularities of hoop are: the system uses group housing of sows in deep straw during breeding and/or gestation. the stalls have front access gates that open into the feeding alley. the group housing helps stimulate estrus and reduce stress on the sows by allowing them to live in groups, which they prefer. fighting is minimized by using feeding stalls and introducing new sows to the groups at optimum times, such as at farrowing. Examples of design: Pen layout is dependent on feeding system. Several layouts are shown by Honeyman and all (1997). The gestation hoops sown in figure 1 are designed for two groups of 32 sows. Feed stalls are placed on a raised (+0.40 cm) concrete pad at the end of the hoop. Feeding stalls are placed so that only one group of sows at one time may be allowed to feed. This design minimizes the equipment cost by allowing feeding stalls to be shared but some space is wasted to accommodate the feeding stalls. Shared feeding stall usage on a daily feeding system will require some added labor.
Fig. 1. Hoop housed gestation with shared feeding stalls for two groups of 32 sows (Honeyman, Harmon, Lay and Richard, 1997, Iowa State University)
Figure 2 illustrates a relatively simple feeding stall system for 64 sows. This system is efficient and simple. The main disadvantage is the cost of the feeding crates. Figure 3 shows four groups of 25 that share a feeding area in the center of the building.
542
This design minimizes the area devoted for feeding but animals will be exposed to different conditions depending on where in the system they are housed. Added labor may be required because more than one group may need to be fed in a day.
Fig. 2. Hoop housed gestation with 64 feed stalls (Honeyman, Harmon, Lay and Richard, 1997, Iowa State University)
Fig. 3. Hoop housed gestation with interval feeding for four groups of 25 sows (Honeyman, Harmon, Lay and Richard, 1997, Iowa State University)
PRACTICAL RESULTS AND DISCUSSIONS The performance efficiency of gestating and breeding pigs may be affected by the management and environment in which they are housed. Layout and management considerations: Depends of the type, the floor plan includes lockable feeding stalls with front access doors, a feeding and service alley and a deep bedded area for the group-housed sows. Number of sows per pen or group is a factor of farrowing room/house capacity and conception rate. Pens should be at least 4.60 or 4.90 m wide to minimize control by aggressive sows
543
and allow timid sows to pass freely. All floor areas of the hoop structure are concrete or partial concrete and partial soil. Most of the floor is earthen and covered with bedding. Swedish guidelines for bedded space of 2.25-2.50 m2/ gestating sow are recommended. Temperature. Reproduction efficiency of boars and sows is generally unaffected by cold temperatures unless scrotal frost-bite occurs with boars or gestating sow feeding level is too low. Sows and boars housed in colder conditions will require additional feed. The recommendation is 0.33 kg of additional feed per every 5C colder than 13C. Hoop structures are designed to serve as cold housing. Heat is not added to the structure and the indoor air temperature will generally remain 3 to 6C above the outdoor temperature. Sows should be maintained with effective temperatures below a daily average of 26C and below 30C as a maximum. To achieve this, less bedding will be used and an interval sprayer or dripper system will probably be necessary. This may prompt the sow to burrow into moist places in earthen floors, resulting in a problem during clean-out. Ventilation. The structure is naturally ventilated and drippers were installed over the feeding stalls to aid in cooling the sows on hot days. During summer months both ends of the hoop should be left open to allow air flow through the structure. During winter the north end of the hoop will generally remain closed. Air comes in through slots on either side of the frame walls, rises to the top of the hoop, and moves out the south end, which remains open. If the structure is closed too tightly the humidity will build up and cause possible respiratory problems. Sows remain comfortable in cold conditions because they can modify their environment with the use of bedding and huddling with other animals. They will, however, require more feed because they will use more energy to maintain homeothermic conditions. A high quality bedding source is essential to the success of this structure. Feeding and sow management. Usually, the feeding stalls and energy-free waterers are place on a raised (+40 45 cm) concrete platform. During gestation the sows are fed daily in individual feeding stalls with rear gates that can be closed after the sows have entered the stalls. The feeding stalls offer the advantages of individual gestation crates: individual feeding, control of the sow for vaccinations and artificial insemination, and easy sorting of sows. The group housing helps stimulate estrus and reduce stress on the sows by allowing them to live in groups. Fighting is minimized by using feeding stalls and introducing new sows to the groups at optimum times, such as at farrowing. Bedding and manure management. Bedding can be cornstalks, straw, wood shavings, or other absorbent organic material. Materials (kg per sow turn) are:
544
corn stalks (300 to 450), barley straw (360 to 1200), oat straw (600 to 550), wheat straw (340 to 510) or pine shavings (380 to 570). [1, 2] Animals bed and dung on a bedded manure pack, which generates heat and contributes to animal comfort during winter months. Access for adding bedding is from the south end. The north end is closed in winter with a fabric curtain. The south end is partially closed in winter. Large, round bales of straw or cornstalks can be used for bedding. The bedded-pack is normally cleaned out after each group of sows is sent to farrowing house, 3 to 4 times a year. [8] Initial investment cost. In hoop 2.20-2.50 m2 per sow and in confinement crate 1.30-1.50m2. In those cases the cost for on sow in gestation sector is $180 to $325 per sow in hoop structures and $300 to $550 per sow in confinement crate. The confinement facilities are depreciated over 16 years (6.25% annually), while the hoops are at 10 years (10% annually). [5] The reproductive performances in comparison hoops vs. individual gestation crates are comparable. Lammers and Honeyman (2004) communicated preliminary trends 0.7 more pigs per liter (10.9 vs. 10.1) and lower sows removal from hoop structures (7% vs. 14%). In conclusion the conception rates are high, sow longevity is long, and sow mortality and culling rates are low. Animal welfare. Weng et al., (1998) concluded that in group housed sows and floor space a minimum of 2.4 to 3.6 m2 required promoting good welfare. It was demonstrated that hoops sows: performed fewer abnormal behaviors, had lower plasma cortisol concentrations, greater rate of play behavior and fewer leg injuries. Thus indicating they had better welfare. CONCLUSIONS The hoops have the advantages of low initial cost, versatility, and simplicity. Hoops offer an alternative to conventional confinement housing systems. Hoops are a sustainable alternative for producing pigs because they are 1) environment-friendly with solid manure that can be composted and, 2) farmerfriendly with low capital cost and competitive cost of production. The Romanian family farmer can compete and be a viable entity in the Romanian swine industry
REFERENCES
1. Honeyman, M.S., Harmon, J.D., Kliebenstein, J.B., Richard, T.L., 2001 Feasibility of hoop structures for market swine in Iowa: Pig Performance, Pig Environment, and Budget Analysis. Applied Engineering in Agriculture 17(6):869874. Honeyman, M.S., Kent, D, - Reproductive Performance of Young Sows from Various Gestation Housing Systems In: 1999 ISU Swine Research Report. ASL-R1678 Iowa State University, Ames Iowa State University Management/Economics.
2.
545
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 3. Honeyman, M.S., Harmon. J., Lay, D., Richard, T. - Gestating Sows in Deepbedded Hoop Structures ASL-R1496 Management/Economics Iowa State In: 1997 ISU Swine Research Report. AS-638. Dept. of Animal Science, Iowa State University, Ames Lammers, P., Honeyman, M. - Effects of bedded gestation housing on litter size and culling rates: preliminary results National Conference of Hoop Barns and Bedded th Systems for Livestock Production. September 14 2004, Ames, Iowa State University, abstract Lawrence, J., Vontalge, A. - Livestock Enterprise Budgets for Iowa - 1998. Iowa State University, University Extension, Ames. Maltman J. - Manitoba Agriculture, Food and Rural Initiative. Hoop barns in Canada. National Conference of Hoop Barns and Bedded Systems for Livestock Production. September 14th 2004, Ames, Iowa State University, presentation Richard, T.L. - Alternative swine housing opportunities for innovation. National Conference of Hoop Barns and Bedded Systems for Livestock Production. th September 14 2004, Ames, Iowa State University, abstract Richard, T.L., Harmon, J., Honeyman, M., Creswell, J., 1998 - Hoop Structure Bedding Use, Labor, Bedding Pack Temperature, Manure Nutrient Content, and Nitrogen Leaching Potential. ASLR1499. In: 1997 ISU Swine Research Report. AS-638. Dept. of Animal Science, Iowa State University, Ames, IA. pp 71-75 Sharp, Julie T., Hinrichs, C.C., 2001 - Farmer support for publicly funded sustainable agriculture research: The case of hoop structures for swine. American Journal of Alternative Agriculture 16(2): 81-88. Weng, R.C., Edwards, S.A., English, P.R., 1998 - Behaviour, social interactions and lesion scores of group-housed sows in relation to floor space allowance. Appl. Anim. Behav. Sci. 59 4, 307-316 http://forum.agroinfo.ro/
4.
5. 6. 7. 8.
9. 10. 11.
546
CORELAIILE EVIDENIATE NTRE NIVELUL PRODUCIEI DE LAPTE, PERFORMANELE REPRODUCTIVE I NIVELURILE SERICE ALE UNOR HORMONI N PUERPERIUMUL VACILOR DE LAPTE DIN RASA BLAT CU NEGRU ROMNEASC
CORRELATIONS BETWEEN MILK YIELD, REPRODUCTION AND HORMONAL STATUS DURING POST PARTUM PERIOD IN ROMANIAN BLACK SPOTTED DAIRY COWS
C. MIRCU, H. CERNESCU, G. OTAV, Ilinca FRUNZ, Timea CZAPP, M. MOISII, A. ARDELEAN U.S.A.M.V.B. Timioara First ovulation and pregnancy rate at first service are influenced by a lot of factors during puerperal period of lactating dairy cows. On medium milk yielding (G1, n=10) and high yielding (G2 n=10) Romanian Black Spotted dairy cows we followed serum progesterone, thyroid homones (T3 and T4), glucose,insulin,IGF1 variations and BCS loss during first 60 days and corellations to reproductive performance. We found that progesterone and thyroid hormones levels arround insemination are crucial for embryo survival and low T3 and T4 after 45 post partum days exert a negative influence on pregnancy rate subsequent first insemination. We also found a constant serum glucose and insulin level rises during puerperal, compared to parturition moment, in both groups and also that cows with high milk yield displays IGF1 serum values lower than values registered in medium milk yielding cows. We concluded that in Romanian Black Spotted dairy cows, irrelevant to milk yield, thyroid hormones, glucose, insulin and IGF1 levels, but no BCS loss do influence reproductive performances during post partum period.
Pe parcursul perioadei puerperale, rezervele energetice ale organismului matern trebuie s satisfac att cerinele produciei de lapte ct i pe cele ale instalrii unei noi gestaii. Creterea necesarului energetic pentru producia de lapte ar putea genera un bilan energetic negativ de-a lungul primelor sptmni post partum, conducnd la tulburarea funciei de reproducie. Au fost evideniate relaiile existente ntre nivelul produciei de lapte, bilanul energetic, aprecierea conformaiei corporale (BCS) i rata gestaiei la prima inseminare, fiind de asemenea identificai factorii care influeneaz n mod direct aceste procese (ritmul eliberrii LH, nivelurile glicemiei, insulinei, IGF1, progesteronului i hormonilor tiroidieni). Glucoza reprezint o surs major de energie pentru ovar (Beam i Butler, 1999), n timp ce insulina influeneaz secreia GnRH i a LH
547
(Butler, 2000). Efectele exercitate de IGF1 se regsesc n procesul dezvoltrii foliculare (Lucy, 2000) i n cel al steroidogenezei (Whates i col., 2003). Dei hormonilor tiroidieni li s-a relevat implicarea n termoreglare i homeostazia metabolismului energetic, studii recente au evideniat implicarea lor n reglarea funciei ovariene la rumegtoare, cu precdere la vacile aflate n puerperium (Huszenicza i col., 2002). Reluarea ciclicitii sexuale post partum este nsoit de creterea corespunztoare a progesteronului seric, nivelul atins de acest hormon pe parcursul ciclului sexual fiind relevant pentru fertilitate (Lucy, 2001). Evoluia bilanului energetic se reflect corespunztor n modificrile BCS, fiind demonstrat relaia existent ntre bilanul energetic, BCS i fertilitate. n studiul nostru am luat n considerare factorii relevani pentru metabolismul energetic (glucoza, insulina, T3 i T4), pentru steroidogenez i dezvoltarea folicular (IGF1 i progesteronul) i am urmrit modificrile BCS, ncercnd s evideniem prezena unor relaii ntre aceti parametri i performanele reproductive. MATERIAL I METOD
n acest studiu desfurat n ferma de vaci a staiunii didactice a USAMVB Timioara, n perioada aprilie octombrie 2005, au fost incluse 20 de vaci din rasa Blat cu Negru Romneasc (BNR), aflate la a doua sau a treia ftare (n medie 2,8). Femelele nu au avut antecedente obstetrical-ginecologice, au ftat normal i nu au nregistrat retenia nvelitorilor fetale. Vacile au fost incluse n lotul 1 (L1, n = 10, vaci cu producie medie de lapte, 4172182,4 litri) i n lotul 2 (L2, n = 10, vaci cu producie mare de lapte, 5418114,2 litri pe lactaie). Pentru determinrile hormonale i ale glicemiei, probele de snge au fost recoltate la 7, 15, 30, 45 i 60 de zile post partum n ideea de a acoperi ntreaga perioad puerperal. Pentru determinarea glicemiei i a hormonilor tiroidieni, au fost recoltate probe de snge i la momentul parturiiei. La 20 de zile post partum a debutat recoltarea sngelui, n vederea depistrii momentului primei creteri a nivelului progesteronului. Probele de snge au fost recoltate prin puncia venei jugulare, de dou ori pe sptmn (n zilele de luni i joi, dup mulsul de diminea). Dup coagularea spontan la temperatura camerei, serul a fost separat prin centrifugare (5 minute la 3000 rpm) i congelat (-20C) pn la efectuarea determinrilor. Nivelurile IGF1, progesteronului i hormonilor tiroidieni au fost determinate prin tehnica ELISA, utiliznd truse de uz uman DRG Diagnostics (Germania), truse care, opernd cu anticorpi policlonali, pot fi utilizate la analizarea serului provenit de la vaci. Determinrile au fost executate n duplicat, citirea fcndu-se pe cititorul ELISA PR 1100 (BIO RAD). Glicemia a fost determinat prin intermediul metodei spectrometrice, cu ajutorul analizatorului VET SCREEN. Valorile medii i deviaiile standard au fost calculate pentru fiecare lot, la fiecare dintre momentele de referin anterior stabilite. Diferenele statistice au fost stabilite prin intermediul testului ANOVA. 548
Nivelurile insulinei au fost determinate cu ajutorul trusei DRG Diagnostics (Germania) pentru insulin bovin. Pentru IGF1 a fost utilizat o trus de uz uman, bazat pe anticorpi policlonali. Deoarece structura IGF1 este identic la om, bovine i suine, n cazul utilizrii anticorpilor policlonali, procedeul este validat pentru toate cele trei specii (Nikolic i col., 1996). Determinarea corect a IGF1 presupune ndeprtarea proteinelor de cuplare a IGF1, datorit afinitii lor similare pentru ligandul anticorpilor specifici utilizai n acest tip de reacie. Probele au fost analizate dup o prealabil extracie cu acid-etanol, conform metodei prezentate de Nikolic i col. (1996). Valorile BCS (conformaia corporal) au fost estimate cu ajutorul metodei descrise de Ferguson i col. (1994) la momentul parturiiei, i apoi la fiecare 15 zile, pn la 60 de zile postpartum. ncepnd cu cea de-a 40-a zi post partum, vacile au fost atent urmrite pentru depistarea estrului (de trei ori pe zi, cte 20 de minute). Vacile au fost nsmnate la 12 ore de la depistarea strii de estru, urmrind regula AM/PM. Femelele au fost urmrite n continuare, pentru a depista i utiliza estrul aprut n cazul neinstalrii gestaiei. Diagnosticarea gestaiei s-a fcut prin examen transrectal executat la 45-60 de zile de la nsmnare.
REZULTATE I DISCUII Conform rezultatelor inserate n tabelul 1, prima cretere post partum a progesteronului seric peste pragul de 1 ng/ml (nivel care indic prezena esutului luteal i implicit ovulaia anterioar) a fost nregistrat la 29 de zile (pentru L1) i la 37 de zile pentru L2, diferena fiind semnificativ (p<0,05). n cazul femelelor din L1, ciclicitatea sexual a fost reluat cel trziu pn la cea de-a 34-a zi post partum, iar pentru vacile lotului 2, nu mai trziu de ziua 41; de menionat c niciuna dintre femele nu a manifestat anestru post partum.
Tabelul 1 Variaia nivelurilor serice ale progesteronului (XSx) Lotul L1 L2 Prima cretere nregistrat a P4 (zile postpartum) 29 2,38 37,85 2,34 Nivelul mediu al P4 dup 7 zile (ng/ml) 3,8 0,35 3,1 0,29 Prima IA (zile post partum) 46,6 3,11 53 3,21 Nivelul mediu al P4 la 7 zile post IA (ng/ml) 5,11 1,37 3,75 0,80
Staples i col. (1990) evideniaz prezena primei ovulaii la 22 de zile post partum la vaci cu producii medii de lapte, n timp ce Opsomer i col. (2000) semnaleaz prima cretere a nivelului P4 la 37 de zile post partum la vacile cu producii mari de lapte. La interval de o sptmn de la creterea iniial a nivelului P4, valorile progesteronemiei nu au diferit semnificativ ntre cele dou loturi (3,8 ng/ml pentru L 1, comparativ cu 3,1 ng/ml pentru L 2), situaie schimbat radical la 7 zile consecutiv nsmnrii artificiale, cnd diferena a fost semnificativ p<0,01 - (5,11 ng/ml pentru L 1, fa de 3,75 ng/ml pentru L 2). 549
Este interesant de menionat c dac, n cazul lotului 1, s-a evideniat o diferen semnificativ (p<0,01) ntre nivelurile P4 luate n discuie (dup prima ovulaie i consecutiv primei nsmnri artificiale), nu acelai lucru poate fi observat n cazul lotului 2, unde concentraia seric a progesteronului nu a crescut semnificativ. Acest aspect se coreleaz cu rata concepiei la prima IA, care este complet nesatisfctoare la lotul 2. Meninerea gestaiei este condiionat i de suportul progesteronic corespunztor, iar n cazul unor concentraii sczute ale P4 se poate presupune existena unor corpi luteali deficieni, a cror secreie nu poate susine pstrarea gestaiei. Capacitatea de a produce i menine concentraii optime ale P4 este important pentru fertilitate datorit efectului reglator pe care acest hormon l exercit asupra funciei endometrului; n zilele 4-7 post IA, P4 a fost crescut la vacile care au rmas gestante, comparativ cu cele care nu au rmas (Lucy, 2001). Este posibil ca nivelul relativ sczut al P4 n zilele 4-5 s permit recunoaterea prezenei gestaiei i extinderea perioadei luteale, dar gestaia nu va progresa deoarece embrionul a fost compromis pe parcursul dezvoltrii sale. Dac n mod normal se observ o cretere progresiv a progesteronemiei ntre primul i al doilea ciclu sexual post partum, precum i ntre al doilea i al treilea (Staples i col., 1990), valorile medii obinute n prezentul studiu indic o scdere progresiv a P4 ntre primul i al doilea ciclu n cazurile a dou femele (25%) din L 1, i a dou femele (28,5%) din L 2. Trebuie menionat c aceste femele au necesitat 3,5 nsmnri artificiale (L 1), respectiv 2,5 (L 2) pentru a rmne gestante. Cele dou femele mai sus menionate ale lotului 1 au nregistrat pe parcursul primelor 60 de zile post partum niveluri ale T3 (tabelul 2) cuprinse ntre 0,2 i 0,8 ng/ml, iar n cazul celor dou femele din lotul 2 la care am fcut anterior referire, valori cuprinse ntre 0,6 i 1,1 ng/ml. Chiar dac este normal ca n primele sptmni consecutiv parturiiei vacile n lactaie s manifeste hipotiroidism (Pezzi i col., 2003), studiul lui Jooritsma i col. (2003) a artat c nivelurile serice ale T3 i T4 sunt mai sczute n cazul vacilor fr activitate ovarian, precum i faptul c valori ale T3 situate sub 1,4 ng/ml sunt asociate cu concentraii sczute ale estrogenilor i cu o slab exprimare a estrului. Analiznd nivelurile T3, sesizm c n cazul femelelor aparinnd lotului 2, intervalul de valori cuprinde concentraii mai crescute, ceea ce denot o eficient selecie a vacilor pentru producia de lapte, cunoscndu-se faptul c declanarea secreiei lactate este urmat de scderea nivelului T3. Analiznd valorile incluse n tabelul 2, se evideniaz un hipotiroidism marcant, persistent de-a lungul ntregii perioade considerate. Valorile medii ale T3 sunt cele care ne atrag atenia, n cazul T4 scderea nefiind aa de accentuat. Acest aspect este explicabil prin nsui mecanismul producerii T3 i al intensificrii eliberrii rT3 n lapte (Pezzi i col., 2003).
550
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 2 Variaia parametrilor investigai de-a lungul puerperiumului Parturiie L1 L2 L1 L2 L1 L2 L1 L2 L1 L2 L1 L2 0,930,49 1,010,36 25,753,69 23,144,74 3.030.3 2.670.3 3.030.1 3.170.2 15 zile 30 zile T3 (ng/ml) 0,900,54 1,050,41 0,780,34 0,800,45 T4 (ng/ml) 21,36,93 27,06,23 21,282,75 21,715,7 Glicemia (mmol/l) 3.060.3 3.110.34 3.280.45 2.600.3 2.800.37 2.920.28 Insulina (U/l) 8.200.5 8.460.56 9.110.79 7.871.0 8.251.19 9.181.06 IGF 1 (ng/ml) 74.8311.43 81.6112.8 88.9812.59 68.179.06 71.4712.2 88.1012.47 BCS 2.870.18 2.780.16 2.960.22 2.820.37 7 zile 45 zile 1,200,45 1,140,44 60 zile 1,120,46 1,240,32
26,875,20 28,258,86 23,143,71 24,204,27 3.330.48 2.950.49 9.751.20 10.051.64 94.4311.83 94.9512.87 2.620.23 2.640.31 3.320.53 2.950.43 2.650.26 2.640.3
n cazul T3, nu exist o opinie unanim privind valorile minime i maxime (Pezzi i col., 2003, 0,28-2,02 ng/ml; Pusta 2004, 0,2-2; Pechova i col., 2000, 0,68-1,68; Pavlata i col., 2004, 0,71-1,88), ns valoarea medie se situeaz n jurul a 1,1 1,2 ng/ml. Pentru tiroxin, valoarea minim admis pare a fi de 20 ng/ml (Pusta, 2004), regsind i n cazul acestui parametru diversitatea de opinii menionat anterior (31,6 ng/ml Pezzi i col., 2003; 26,25 ng/ml Pechova i col., 2000; 33,2 ng/ml Pavlata i col., 2004). Pe parcursul primelor 60 de zile post partum de-a lungul crora au fost urmrite nivelurile T3 i T4, nu au fost evideniate diferene semnificative ntre valorile medii ale celor dou loturi, ns a putut fi observat o corelaie ntre nivelurile T3 i T4 la 45 de zile post partum i instalarea gestaiei consecutiv primei nsmnri artificiale. Raportul T3:T4 a variat ntre 0,035 i 0,044 pentru L1, i ntre 0,036 i 0,051 pentru L2, valori similare cu cele raportate de ali autori. Astfel, Pusta (2004) nregistreaz valori ale raportului T3:T4 cuprinse ntre 0,026 i 0,035, iar Pavlata i col. (2004), valori cuprinse ntre 0,039 i 0,055. Dac pentru femelele lotului 1 rmase gestante n urma primei I.A., valoarea medie a T3 la 45 de zile post partum a fost de 1,66 ng/ml, iar pentru cele din lotul 2 de 1,60 ng/ml, pentru cele care nu au rmas gestante consecutiv primei I.A., nivelul mediu al T3 la 45 de zile a fost de 0,92 ng/ml n cazul femelelor din L1 i de 0,96 ng/ml pentru cele din L 2.
551
Valorile glicemiei au variat n limite fiziologice (2,1 la 3,9 mmol/l) la toate cazurile luate n studiu. La vacile lotului 1 se observ o cretere uniform ncepnd cu parturiia i ajungnd la 60 de zile post partum (tabelul 2), nregistrndu-se diferene semnificative (p>0,05) ntre valorile nregistrate la momentul parturiiei i cele de la 30 i 60 de zile, dovendindu-se n acest mod disponibilitatea organismului pentru neoglucogenez precum i o bine echilibrat homeostazie a glucozei. Valorile medii ale glicemiei (3,56 mmol/l) nregistrate la 60 de zile pp. la acele vaci care au avut nevoie de 1-2 inseminri pentru a rmne gestante sunt superioare celor care au necesitat 3 sau 4 inseminri pentru instalarea gestaiei. Dac n cazul L1 doar dou vaci au necesitat 3 inseminri / gestaie, n cazul L2, patru femele au avut nevoie de cte 3 inseminri pentru instalarea gestaiei. Femela din L1 care a necesitat 4 inseminri pentru a rmne gestant a avut cea mai sczut valoare a glicemiei (2,5 mmol/l) nregistrat pe parcursul ntregii perioade de supraveghere, semnificnd necesitatea unei perioade mai lungi pentru refacerea energiei ovariene disponibile. Chiar dac variaiile s-au ncadrat n limitele fiziologice, vacile lotului L2 au nregistrat la parturiie niveluri ale glucozei semnificativ sczute , comparativ cu cele ale lotului 1. La vacile L2, chiar dac glicemia a crescut pe msura naintrii n puerperium, valoarea medie nregistrat la 60 de zile pp este mai sczut dect valorile nregistrate de-a lungul ntregii perioade analizate pentru L1. Glucoza reprezint o surs major de energie pentru ovar, iar scderea disponibilului de glucoz la nceputul lactaiei poate afecta negativ reluarea activitii ovariene post partum (Rabiee i col., 1999). Nivelurile sczute ale glicemiei n anumite momente post inseminare pot afecta cel puin parial supravieuirea embrionului (Diskin i col., 2001). Din acest motiv am considerat util urmrirea nivelului glucozei chiar i la 60 de zile pp., ns nu am gsit nicio corelaie ntre valorile glicemiei i fecunditatea nregistrat la prima inseminare. Concentraia plasmatic a glucozei poate fi utilizat n vederea estimrii statusului energetic la vacile lactante, iar nivelurile sczute nregistrate de-a lungul puerperiumului au fost corelate cu o scdere semnificativ a parametrilor reproductivi (Harrison i col., 1990). n studiul nostru am nregistrat att n cazul L1, ct i n cel al L2, valori ale insulinei (INS) situate ntre limitele fiziologice. n ambele loturi, valorile INS au crescut semnificativ (p<0,05) de la momentul parturiiei, la 30 i 45 de zile pp. La nivel individual, trebuie valorile sczute ale INS nregistrate la vacile cu index de inseminare inferior, att pentru L1 (7,33U/l), ct i pentru L2 (7,5 U/l). Aceste valori corespund punctului de vedere expus de Wathes i col. (2003). Astfel, n puerperiumul timpuriu, cnd vacile se parcurg bilanul energetic negativ, receptorii pentru somatotropin sunt inactivi, consecina fiind un nivel crescut al hormonului somatotrop, precum i unul sczut al INS i al IGF1. Chiar dac nu au
552
fost evideniate diferene semnificative ntre valorile medii nregistrate la ambele loturi, indiferent de momentul de referin, parametri reproductivi necorespunztori (rata gestaiei i indexul de inseminare) ar putea fi determinai de nivelurile INS. Slaba rat a concepiei la prima inseminare ar putea fi influenat de nivelurile INS la 30 i 45 de zile pp, dup cum am observat n acest studiu. Rezultatele noastre sunt n acord cu cele prezentate de Beam i Butler (1999) i Butler (2000). Aceti autori afirm c fertilitatea necorespunztoare a vacilor de lapte este determinat de bilanul energetic negativ nregistrat n puerperium precum i de nivelurile sczute ale INS i IGF1. Nivelurile serice ale IGF1 au nregistrat curbe similare celor parcurse de nivelurile INS, la ambele loturi. Concentraiile IGF1 cresc pe msura derulrii puerperiumului, dovedind capacitatea ficatului de a rspunde necesitilor energetice crescnde impuse de producerea laptelui. Chiar dac nivelurile IGF1 sunt mai sczute la L2 comparativ cu L1 la 7 i 15 zile pp., nu exist diferene semnificative (p>0,05) ntre valorile acestor parametri nici la momentele menionate i nici la 30 sau 45 de zile pp. Rezultatele noastre sunt contrare celor prezentate de Snijders i col. (2001), conform crora valorile IGF1 sunt semnificativ sczute la vacile cu producii mari de lapte comparativ cu cele cu producii medii, n intervalul cuprins ntre 2 i 10 sptmni post partum. Trebuie subliniat faptul c nivelurile sczute ale glicemiei, insulinei i IGF1 determin reducerea producerii estrogenilor n foliculul dominant, inhibnd ovulaia. Este probabil cazul celor dou femele din L1 i al celor trei din L2, care au avut nevoie de trei sau mai multe inseminri pentru a rmne gestante. Dac n primele patru sptmni ale puerperiumului nivelul optim al IGF1 este esenial pentru creterea i dezvoltarea folicular, ulterior este benefic pentru steroidogenez. n cazul vacilor cu producie medie de lapte (L1), valoarea medie a BCS la 60 de zile pp a sczut cu 0,38 de uniti comparativ cu momentul parturiiei, indicnd un efort metabolic echilibrat, suportat corespunztor de ctre organism. Scderea valorilor acestui parametru a fost de 0,53 uniti pentru L2, ambele valori fiind inferioare celor prezentate de ali autori. Astfel, Ling i col. (2003) au raportat o scdere de 1,51 a BCS la acele vaci care au avut antepartum un BCS mai mare de 3,5 i o scdere de 0,89 n cazul unui BCS antepartum inferior valorii de 3,5 . La momentul parturiiei, valorile medii ale BCS au fost de 3,03 (L1) i 3,17 (L2), scderea acestor indici fiind semnificativ n ambele loturi att la 30 ct i la 60 de zile pp, moment la care au atins valori similare (2,65 pentru L1 i 2,64 pentru L2). Femelele care nu au rmas gestante consecutiv primei inseminri au pierdut ntre momentul parturiiei i 60 de zile pp ntre 0,5 i 0,75 uniti BCS (L1) i maximum o unitate BCS (cazul unei femele din L2). Avnd n vedere rezultatele obinute putem afirma c slabele performane reproductive nu sunt
553
influenate de variaiile BCS, n special dac ne raportm la rezultatele lui Ling i col. (2003), conform crora vacile care pierd mai mult de o unitate BCS la debutul lactaiei nregistreaz o rat a concepiei la prima inseminare cuprins ntre 17 i 38%. Modificrile BCS reprezint un bun indicator al bilanului energetic (Britt, 1992). Dac bilanul energetic negativ timpuriu influeneaz rata concepiei la prima inseminare, pierderea BCS ar trebui s fie mai nsemnat la vacile care nu rmn gestante, comparativ cu cele care rmn, dup cum am observat c s-a petrecut cu femelele lotului 1, dar nu i cu cele ale lotului 2. Bilanul energetic negativ este corelat de asemenea cu valori sczute ale glicemiei i ale IGF1. Harrison i col. (1989) au semnalat faptul c glicemia sczut se regsete la femelele cu producii mari de lapte i performane reproductive modeste. Rezultatele noastre, conform crora nivelul glicemiei nu este corelat cu performanele reproductive se nscriu pe direcia celor prezentate de Kapel i col. (1984). Aceste valori, corelate cu nivelul sczut al progesteronului dup prima I.A. ofer o explicaie obiectiv pentru procentul sczut al fertilitii rezultat consecutiv primei nsmnri artificiale. n cazul ambelor loturi (tabelul 3) rata concepiei la prima I.A. (40% pentru L1 i 30% pentru L2) se situeaz mult sub nivelul acceptabil n cadrul rentabilitii economice, ns se ncadreaz n tendina actual de descretere a fertilitii evideniat pe plan mondial (Bousquet i col., 2004).
Tabelul 3 Principalii parametri reproductivi ai celor dou loturi (X Sx) Lotul L1 L2 Prima IA (zile post partum) 46,6 3,11 53 3,21 Rata concepiei la prima IA (%) 40 30 Indicele de inseminare 2 2,1 Service period (zile) 70,221,875 77,120,425
Chiar dac studiul nostru a fost ntreprins pe un numr redus de femele (L1, n=10 ; L2, n=10), diferena semnificativ dintre valorile ratei concepiei la prima I.A. evideniaz relaia de invers proporionalitate existent ntre nivelul produciei de lapte i fertilitate. Indicele de inseminare se afl la cote mult peste cele acceptate i semnalate n literatur (Van der Lende, 2002). n studiul menionat, la un service period de 71,7 zile a corespuns indice de inseminare de 1,28, iar la un service period de 84,7 zile, un indice de inseminare de 1,49. Dei intervalul dintre parturiie i instalarea unei noi gestaii, att pentru lotul 1, ct i pentru lotul 2 se ncadreaz n limitele acceptate, exist o diferen semnificativ (p>0,05) ntre valorile medii ale acestui parametru nregistrate pentru L 1 (70,2 21,875 zile) i L 2 (77,1 20,425 zile).
554
CONCLUZII Nivelurile progesteronului i ale hormonilor tiroidieni nregistrate n jurul momentului inseminrii sunt decisive pentru soarta produsului de concepie. Nivelurile sczute ale T3 i T4 dup 45 de zile post partum pot influena negativ instalarea gestaiei consecutiv primei nsmnri artificiale. Glicemia crete constant pe msura avansrii n puerperium, valorile medii nregsitrate fiind mai sczute n cazul vacilor cu producii mari de lapte. Nivelurile relativ sczute nregistrate n ambele loturi pot fi corelate cu slaba rat a concepiei la prima inseminare. Nivelul insulinei crete semnificativ pentru ambele loturi la 30 i 45 de zile post partum comparativ cu momentul parturiiei. Valorile insulinemiei la 30 i 45 de zile post partum influeneaz rata concepiei. Vacile cu producie mare de lapte din rasa BNR au valori serice ale IGF1 mai sczute comparativ cu femelele cu producie medie de lapte, diferenele nefiind ns semnificative. Pe msura scderii valorii IGF1 se constat c sunt necesare tot mai multe inseminri pentru instalarea gestaiei. Raporat la momentul parturiiei, scderea BCS a fost semnificativ la 30 i 60 de zile post partum, pentru ambele loturi. Referitor la momentul apariiei post partum a primului estru precum i la durata intervalului parturiie-inseminare fecund, exist diferene semnificative ntre vacile BNR cu producie medie de lapte i cele cu producie mare. Rezultatele obinute ne determin s afirmm c n cazul vacilor de lapte din rasa Blat cu Negru Romneasc, indiferent de nivelul produciei de lapte, performanele reproductive n perioada puerperal sunt influenate de nivelurile hormonilor tiroidieni, ale glicemiei, insulinei i IGF1, dar nu i de variaiile BCS.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Beam S.W., W.R. Buttler, 1999 - Effects of energy balance on follicular development and first ovulation in postpartum dairy cows. JRF Suppl. 54:411-424. Buttler W.R., 2000 - Nutritional interactions with reproductive performance in dairy cattle. Anim. Reprod. Sci. 60-61:449-457. Bousquet D., Bouchard E., DuTremblay D., 2004 - Decreasing Fertility in Dairy Cows: Myth of Reality? , 23rd World Buiatric Congress 2004, 239-247 Britt, J.H., 1992 - Influence of nutrition and weight loss on reproduction and early embryonic death in cattle, Proceedings of the XVII World Buiatrics Congress, St. Paul, MN, 2, 143 - 149. Diskin, M.G., Boland, M.P., Dunne, L.D., Sreenan, J.M., 2001 - The effect of changes in freed intake around the time of insemination on systemic progesterone and embryo development and survival in cattle. In: Diskin, M. G., (Ed.): Fertility in the high-producing dairy cow. British Society of Animal Science, Edinburgh, Occasional publications, 26, 2, 211-217 Ferguson, J.D., David, T., Galligan, T., Thomsen, N., 1994 - Principal description of body condition score in Holstein cows, J. Dairy Sci, 77, 2695 - 2703.
6.
555
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 7. 8. Harrison, R.O., Ford, S.P. Young, J.W., Conley, A.J., Freeman A.E., 1990 Increased milk production versus reproductive and energy status of high producing dairy cows, Journal of Dairy Science, 73, 2749 - 2758 Harrison, R.O., Young, J.W., Freeman, A.E., Ford, S.P., 1989 - Effects of lactational level on reactivation of ovarian function, and interval from parturition to first visual oestrus and conception in high producing Holstein cows, Anim. Prod., 49: 23. Huszenicza, Gy., Kulcsar, M., Nikolic, J.A., Schmidt, J., Korodi, P., Katai, L., Dieleman, S., Ribiczei-Szabo, P., Rudas, P., 2001 - Plasma leptin concentration and its interrelation with some bloode metabolites, metabolic hormones and the resumption of cyclic ovarian function in postpartum dairy cows supplemented with Monensin or inert fat in feed. In: Diskin, M. G., (Ed.): Fertility in the high-producing dairy cow. BritishSociety of Animal Science, Edinburgh, Occasional publications, 26, 2, 405 - 409. Jooritsma, R., Wensing, Th., Kruip, TAM., Petu, LAM., Noordhuizen, J.P., 2003 Metabolic changes in early lactation and impaired reproductive performance in dairy cows, Vet. Res., 34, 11 - 26. Kapel, L.C., Ingraham, R.H., Morgan, E.B., Zeringue, L., Wilson, D., Babcock, D.K., Stat, M., 1984 - Relationship between fertility and blood glucose and cholesterol Ling, K., Jaakson, H., Samarutel, J., Leesmae, A., 2003 - Blood metabolites of Estonian Holstein cows and their relation to some fertility parameters, Veterinarija ir Zootechnika. T. 24 , 46, 94 101. Lucy M.C., 2000 - Regulation of ovarian follicular growth by somatotropin and insulin-like growth factors in cattle. J. Dairy Sci. 83:1635-1647. Lucy M.C., 2001 - Reproductive loss in high-producing dairy cattle where will it end? J Dairy Sci 84:1277-1293 Nikolic, Judith Anna, Ratkovic Marija, Nedic Olgica, 1996 Determination of insulin-like growth factor I by radioimmunoassay, J. Serb. Chem. Soc. 61, 1149 1157. Opsomer G., Grohn Y.T., Hertl J., Coryn M., Deluyker H., de Kruif A, 2000 - Risk factors for post partum ovarian dysfunction inhigh producing dairy cows in Belgium: a field study. Theriogenology 53:841-857. Pavlata L., Prasek J., Filipek J., Pechova A., 2004 - Influence of parenteral administration of selenium and vitamin E during pregnancy on selected metabolic parameters and colostrums quality in dairy cows at parturition. Vet. Med. Czech, 49(5):149-155 Pechova A., Illek J., Liska I., Halouzka R., Pavlata L., 2000 - Concentration of free amino acids in blood plasma of dairy cows with developing hepatic steatosis. Acta Veterinaria Brno 69(2):93-99 Pezzi C., Accorsi P.A., Vigo D., Govoni N., Gaiani R., 2003 - 5-deiodinase activity and circulating thyronines in lactating dairy cows. J Dairy Sci 86:152-158 Pusta Dana-Liana, 2004 - Influena radiaiilor calorice solare asupra vacilor de lapte n condiiile climatice din Transilvania. Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Cluj-Napoca, Tez de doctorat, pag. 158-169 Rabiee, A.R., Leon I.J., Gooden, J.M., Miller, B.G., 1999 - Relationships among metabolites influencing ovarian function in the dairy cow, Journal of Dairy Science, 82:39-44. Snijders, S.E.M., Dillom, P.G., OFarrel, K.J., Diskin, M., Wylie A.R.G., OCallaghan, D., Rath, M., Boland, M.P., 2001 - Genetic merit for milk production and reproductive success in dairy cows, Animal Reproduction Science, 65, 17 31.
9.
10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17.
18. 19. 20. 21. 22.
556
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 23. 24. 25. Staples C.R., Thatcher W.W., Clark J.H., 1990 - Relationship between ovarian activity and energy status during the early postpartum period of the high producing dairy cow. J Dairy sci 73:938-947 Van der Lende T., 2002 - Physiological aspects of reproduction and fertility in dairy cows. J Dairy Sci 85 (6): 1578-1585 Wathes D.C., V.J. Taylor, Z. Cheng, G.E. Mann., 2003 - Follicle growth, corpus luteum function and their effects on embryo development in postpartum dairy cows, Reproduction Supplement 61:1-19
557
INTRAUTERINE INSEMINATION OF SOWS

NSMNAREA ARTIFICIAL INTRAUTERIN LA SCROAF
P. ROCA, L. RUNCEANU, D. DRUGOCIU, V. PACHIANU U.S.A.M.V. Iai For obtaining high and constant fecundity and natality at sows, in our country are being used doses containing between 3 and 5 billion spermatozoids. Our research was oriented into a new insemination method, called intrauterine, which consist in depositing the seminal material in uterus, thus reducing the number of inseminated spermatozoids. For this was used the DeepgoldenpigTM device. This method was compared with the classical artificial insemination, which implies the use of the Goldenpig device and depositing the seminal material at cervical level. Doses containing 3, 2, and 1 billion spermatozoids, diluted with X Cell gel were packaged in 80 ml Cochette bags. The females with a weaning to estrus interval of 2 11 days were inseminated twice at an interval of 12 hours. Pregnancy was determined at 28 30 days from insemination using an ultrasound scan. The standard inseminating method produced fecundity rates of 90.6%, 87.9%, and 60.5% per doses with 3, 2, and 1 billion spermatozoids while the intrauterine method obtained rates of 91.6%, 90.8% and 59.5%. In similar way the farrowing rates was 90.2%, 87.4%, and 59.5% in case of classical method and 90.9%, 90.3%, and 81.1% for intrauterine method. Significant differences were obtained using 1 billion spermatozoids doses. In conclusion intrauterine insemination is simple, safe and effective, and allows the sperm dose to be reduced to 1 billion spermatozoa.
Key words: swine, gestation, fertility, prolificacy.
Practiced for many years, artificial insemination of pigs implies the use of 3 5 billions spermatozoa per dose for obtaining a high fecundity. Seminal material can be crude, freshly diluted, diluted and conserved for 3 7 days at 17oC or frozen (1, 3, 4). For insemination can be used various kinds of catheters, some of them who simulates the corkscrew tie of boars penis but all of them allow seminal material to be deposited at cervical level. For overcome the barrier represented by the cervix in the way of spermatozoids, is necessary to deposit a large amount of seminal material at cervical level to ensure a sufficient number of spermatozoa in the isthmus of the oviduct. Overcoming this barrier and depositing the seminal material directly in uterus allows the reducing of the number of spermatozoids per dose, assuring a sufficient number of spermatozoids at the place of fecundity (2, 5).
558
Knowing these aspects, the scope of this study was the comparative testing of the two methods of insemination, intrauterine and classical, with the reducing of the number of spermatozoids per dose. MATERIALS AND METHOD
The study was performed on 2685 PIC Camborough sows with a weaning to estrus period of 2 11 days. The seminal material used was diluted with X Cell packaged in 80 ml Cochette bags. The sows were reinseminated in 12 hours. The intrauterine method was tested comparative with the classical method of insemination. In the classical method is being used the Goldenpig standard device, which allows seminal material to be deposited at cervical level. The intrauterine method implies the use of the DeepgoldenpigTM inseminating device, who is in fact a DeepgoldenpigTM standard catheter, through which is inserted a narrow inner tube with a diameter of 4 mm and which extends 200 mm beyond the tip of the outer catheter, reaching the body of the uterus, where the seminal material is deposited. In parallel with the testing of the two methods, was reduced the number of spermatozoids per dose, sows being inseminated with doses of 3, 2, and 1 billion spermatozoids in both methods. Gestation was established with ultrasounds at 28 30 days from insemination.
RESULTS AND DISCUSSIONS The comparative results for the two methods and the three concentrations are presented in Table 1.
Tabel 1 Comparison between fecundities and fertilities obtained after the Inseminations with the standard device Goldenpig and the newer device Deepgoldenpig Dose Inseminated (billions) No. % 3 450 2 415 1 200 3 650 2 620 1 350 2685 Gestation No. % 408 90.6 365 87.9 123 60.5 596 91.6 563 90.8 292 83.4 2347 Parturition No. % 406 90.2 363 87.4 119 59.5 591 90.9 560 90.3 284 81.1 2323 Litter size No. % 5034 12.3 4428 12.1 1167 9.8 7388 12.5 6886 12.2 3378 11.8 28281
Device Goldenpig DeepgoldenpigTM Total
The rates of pregnancy in case of using doses with 3 billions spermatozoids were, with the classical method, 90.6% and 91.6 with the intrauterine method and they did not differ significantly from the 2 billion spermatozoids doses. This demonstrates that, for a good fertility, are necessary at least 2 billions spermatozoids per dose. For doses of 1 billion spermatozoids, inseminated with the classical method, the fertility rates are only of 60.5%, which means that this
559
concentration is insufficient to assure the necessary amount of functional spermatozoids in utero-tubal junction and implicit in the isthmus of the oviduct. With intrauterine insemination of doses with 1 billion spermatozoids were obtained a higher fecundity rate, 83.4%. The obtained results demonstrates that the intrauterine insemination with a reduced number of spermatozoids is not an disadvantage. Analyzing the parturition, with the classical method of insemination, the rates are 90.2%, 87.4% and 59.5% for doses of 3, 2 and 1 billion spermatozoids, while, for the same doses, with the intrauterine method the rates of the parturition are 90.9%, 90.3% and 81.1%. Only in case of insemination of 1 billion spermatozoids with the classical method the differences are significant from the doses of 2 and 3 billions spermatozoids inseminated with the same method. A similar evolution had and the litter size. With the classical method the litter size was 12.3, 12.1 and 9.8, while with the intrauterine method the litter size was 12.5, 12.2 and 11.8. Considering the results can affirm that intrauterine insemination at sows is simple, safe and effective, allowing reducing the number of spermatozoids per dose at 1 billion. CONCLUSIONS With the classical insemination method the fecundity rates were 90.6%, 87.8% and 60.5%, for doses with concentrations of 3, 2 and 1 billion spermatozoids. With the intrauterine insemination method the fecundity rates were 91.6%, 90.8% and 83.4%, for doses with the same concentrations. Similar results were obtained for the farrowing and the litter size. Only with the use of 1 billion spermatozoids doses the differences were significant in favor of the intrauterine method. The use of the intrauterine insemination method, associated with the reducing of the concentration of the doses, offer important earnings by the more rational usage of the genetically superior boars.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. Bogdan, A.T., Mantea, t., Bogdan Dorina, 1999 Tratat de reproducie i nsmnri artificiale la suine. Ed. Tehnic Agricol, Bucureti. Krueger, C., Rath, D., 2000 Intrauterine insemination in sows with reduced sperm number. Reprod. Fertil. Dev. 12 : 113-7. Runceanu, L., Cotea, C., 2001 Reproducie, obstetric i ginecologie veterinar. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai. Runceanu, L., Drugociu, D., Roca, P., Anton, C., 2002 Reproducie, obstetric i andrologie clinic. Casa de editur Venus, Iai. Watson, P.F., Behan, J.R., 2002 Intrauterine insemination of sows with reduced sperm number: results of a commercially based field trial. Theriogenology. 57 : 1683-1693.
560
CERCETRI ASUPRA UNOR CONSTANTE SANGUINE N ENDOMETRITELE SCROAFELOR

RESEARCHES ON SOME SANGUINE CONSTANTS IN SOWS ENDOMETHRITIS
L. RUNCEANU, D. DRUGOCIU, P. ROCA U.S.A.M.V. Iai Researches made shows that approximative 25.84% from females presents modified puerperal remaining with mucopurulent aspect, in bigger rate at multipares .Females with genital infections presents a significant decrease of erythrocytes average values in comparison with witness lot (5,93 0,92 witness lot in comparison with 4,91 0,15 experimental lot phenomenon meet and in the case of hemoglobin. Leucocytes number shows a growth at the lot with endomethritis in comparison with the witness lot (12,5 2,46 of 11,36 2,92)
INTRODUCERE Perioada puerperal la scroaf dureaz 2-8 zile, loiile eliminndu-se complet n 2-5 zile (Bogdan, A.T., i col., 1999). Persistena loiilor peste aceast limit de timp, constituie o stare patologic, atestnd o stare de infecie consecutiv traumatizrilor tractusului genital n perioada parturial sau a reteniilor placentare pariale i contaminrilor ascendente (Berner, 1980, Mandiu
i col., 1980, Boitor, 1981, Runceanu Margareta, 1992, Runceanu, L., Cotea, C., 2001, Broiu, A., Seiciu, Fl., 2004, Thibault, 1991, Tarocco, 1986, Vaissaire, J.P., 1977, Bilrot, P., i col., 1980, Drugociu, D., 2005).
Cu toate c boala poate evolua uneori fr apariia unor semne generale evidente, se produc unele modificri decelabile numai prin examenele paraclinice. MATERIAL I METOD DE LUCRU
Cercetrile au fost efectuate pe un numr de 35 scroafe ce prezentau endometrit puerperal. Femelele au fost n vrst ntre 1,5 i 3 ani iar condiiile de ntreinere au fost corespunztoare. Probele de snge au fost recoltate n primele zile post partum, cnd a fost diagnosticat afeciunea. Prelevarea s-a efectuat prin puncia confluentului jugular iar ca anticoagulant a fost folosit EDTA. Examinarea seriei roii i a numrului de leucocite s-a realizat folosind tehnicile uzuale. Cantitatea de hemoglobin a fost determinat prin metoda Sahli. Lotul martor a fost constituit din 30 scroafe n aceiai faz puerperal, dar la care nu a fost diagnosticat endometrita. Rezultatele cercetrilor au fost prelucrate statistic: media eroarea standard a mediei i semnificaia. 561
REZULTATELE I DISCUII Analiznd variaia constantelor hematologice luate n studiu constatm pentru unele din ele, valori ce pun n eviden existena fenomenului de boal cu repercusiuni asupra strii generale a organismului.
Tabelul 1 Valorile medii ale constantelor hematologice Nr. Crt. 1 2 3 4 5 6 7 8 Denumirea constantei Globule roii mil/mm3 Hemaglobulina mil/mm3 Leucocite mil/mm3 Euzinofile % Neutrofile % Bazofile % Limfocite % Monocite % Lot martor 5,93+0,92 14,4+0,93 11,36+2,92 3,5+0,22 44,1+1,40 0,6+0,1 36+1,37 5,4+0,26 Scroafe cu endometrit 4,91+0,15 10,02+0,19 12,5+2,46 3,82+0,14 49,12+0,96 0,7+0,04 40,97+1,05 4,99+0,21
Din datele prezentate constatm c la scroafele cu endometrit valorile medii ale eritrocitelor (4,91+0,15) au sczut foarte semnificativ n comparaie cu valorile medii ale lotului martor (5,92+0,22). n mod asemntor scade i cantitatea de hemoglobin : de la 0,02+0,19 la scroafele cu endometrit, la 14,4+0,93 la lotul martor. Modificrile aprute n evoluia elementelor seriei roii, se coreleaz cu starea particular a animalelor n perioada post partum, la care se adaug procesul patologic. Cercetrile referitoare la numrul total de leucocite i la elementele formulei leucocitare atest urmtoarele aspecte: la femelele cu endometrit valoarea medie a lotului este de 12,5+2,46, mai crescut, dar nesemnificativ fa de valoarea medie a lotului martor (11,36+2,92). evoluia elementelor albe n formula leucocitar pledeaz pentru existena unui proces inflamator, o reacie de sensibilizare a organismului. Astfel, cresc semnificativ neutrofilele (49,12+8,96) la femelele bolnave, fa de (44,1+1,40) la lotul martor, limfocitele (40,97+1,05) la lotul cu endometrit fa de (36+1,37) la lotul martor i eozinofilele (3,82+0,14) la animalele bolnave fa de (3,5+0,22) la lotul martor. Creterea neutrofilelor atest inflamaiile septice de la nivelul organelor genitale, dup cum creterea semnificativ a limfocitelor poate fi asociat cu natura infecioas a procesului inflamator conferind astfel organismului capacitatea de a lupta mpotriva agentului patogen.
562
Monocitele au avut o valoare de 5,4+0,26 la lotul martor fa de 4,99+0,21, iar bazofilele o cretere nesemnificativ la lotul experimental (0,7+0,04) fa de lotul martor (+0,1). CONCLUZII 1. Valorile medii ale numrului de eritrocite la femelele cu endometrit scad semnificativ n comparaie cu lotul martor (4,91+0,15 fa de 5,92+0,22). 2. Cantitatea de hemoglobin prezint o scdere la femelele cu endometrit (10,02+0,19 fa de lotul martor). 3. La femelele cu endometrit, valoarea medie a numrului total de leucocite este de 12,5+2,46, mai crescut dect la lotul martor. 4. Evoluia elementelor albe n formula leucocitar pledeaz pentru un proces inflamator, crescnd semnificativ neutrofilele, limfocitele i eozinofilele.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Berner, K., 1980 Reasons for culling of gilts in relation to age at first mating. The Vet. Bul. 50. Bilrot, P., Dekeyser, P., 1980 Rol of infections in the SMEDI and abortion syndrome on Sows. The Vet. Bul. 50. Boitor, I., 1985 Fiziologia i fiziopatologia reproduciei animalelor de ferm. Ed. Ceres, Bucureti. Broiu, A., Seiciu, Fl., 2004 Tratat de reproducie la animale. Ed. ALL, Bucureti Bogdan, A.., i col., 1999 Tratat de reproducie i I.A. la suine. Ed. Cerces, Bucureti. Drugociu, D., 2005 Bolile obstetrical ginecologice la animale. Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. Runceanu Margareta, 1992 Cercetri privind influena afeciunilor genitale asupra fertilitii suinelor crescute n sistem industrial. Tez de doctorat. Runceanu, L., Cotea, C., 2001 Reproducie, obstetric i ginecologie veterinar. Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. Tarrocco, C., 1986 Tulburri ale aparatului de reproducie femel produse de cauze neinfecioase (la suine). Med. Vet. XII, Bucureti. Thibault, C., Levasseur, M.C., 1991 La reproduction chez les mammiferes et lhome. Ed. Marketing. Paris. Vaissaire, J.P., 1972 Sexualite et reproduction des mammiferes domestiques et de laboratoire. Ed. Maloine, Paris.
563
THE THERAPY OF PLACENTA RETENTION WITH PGF2

TERAPIA RETENIEI PLACENTARE CU PGF2
M.I. VIZMAN The parturition mechanism is very complex and it consist, generally, of passing the uterus muscle from a relative stillness state to an intense contraction state, but only after the cervix is opened. The parturition mechanism has at his base two theories: a neuroendocrine theory and an imunologic theory. According to the first theory the neurohormonal complex represented by the cortical centres, throughout the hipotalamus-pituitary-uterine axe and the hipotalamuspituitary-corticosuprarenalian foetal, axe conditions the parturition. The gestagen, estrogen and prostaglandins hormone levels, and specially the hormons from PGF2 influence the parturition. According to these neurohormonal theory, the beginning and the maintenance of the foetal and the foetal annexes expulsion is accomplished as a consequent of the disruption of the balance between the gestagen and estrogen hormones.
In cow the parturition is harder than in the rest of the farm animals because of the bone structure in the pelvic aria that is unfavourable to birth doe to the next particularises: the anterior opening is lining to vertical axe and is hardening the foetal engage in the birth canal the subcotiledonian crest are very well developed the insertion of the prepubian ligament is under the anterior margin of the ischiopubian simphise, fact that is making the pelvic axe to look like a broken line. the ischiadic arcade is narrow and the ischiadic tuberoses have three ends and are high is the last part of the pelvic aria The parturition is easier in the sternal-abdominal or coast-abdominal position. The uterine involution is starting right after the closer of the parturition, and at 10-15 minutes MATERIAL AND METHOD
The clinical studies were conducted on 20 cows at which after the parturition there was the retention of the foetal annexe. These cows were treated according to the next protocol: at 24 hours from parturition there was administrated 500 mg of cloprostenol (synthetic analogue of PGF2), 500 ml from a suspension containing saline solution, oxitetraciline 5g and 30 ml of ethylic alcohol 70 volume, was administrated inside the uterus. In some cases the treatment was repeated. 564
This treatment was applied to the females that suffer from foetal annexes retention and which represented the experimental lot. The objectives that we followed were: the time interval from parturition to the elimination of the foetal annexe the vaginal secretions dynamics the time interval in which the uterine involution was completed (monitored throw trans-rectal exam) the time interval from the resume of the sexual activity The cows that were threaded with prophylactic treatment represented the witness lot with SEL-E-VIT, used to reduce the incidence of foetal annexe retention The mean duration of pregnancy at the studied cows was 285 days. After the foetal annexe retention there was no alteration of the general being of the cows, there was no febrile state registered.
RESULTS AND DISCUSSION The results regarding the elimination of the foetal annex after the parturition, obtained after the clinic study conducted at cows with placenta retention after the PGF2 treatment are presented in the table 1
Tabel 1 Results attained No. Registration Fecund Artificial crt. no. Insemintion Data 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 01008 010082 010076 010084 010092 010016 010030 010086 743 640 652 749 546 010038 010046 010062 757 610 010070 010048 16.02.2003 10.02.2003 02.03.2003 25.03.2003 02.04.2003 04.04.2003 21.04.2003 15.05.2003 17.05.2003 25.05.2003 15.06.2003 28.06.2003 10.07.2003 21.07.2003 23.07.2003 27.07.2003 29.05.2003 15.05.2003 01.07.2003 29.06.2003 Parturition data 10.12.2003 11.12.2003 21.12.2003 12.01.2004 21.01.2004 25.01.2004 05.02.2004 20.02.2004 27.02.2004 02.03.2004 07.03.2004 20.03.2004 03.04.2004 12.04.2004 21.04.2004 28.04.2004 27.03.2004 26.03.2004 13.04.2004 08.04.2004 Treatment data 11.12.2003 12.12.2003 22.12.2003 13.01.2004 22.01.2004 26.01.2004 06.02.2004 21.02.2004 28.02.2004 03.03.2004 08.03.2004 21.03.2004 04.04.2004 13.04.2004 22.04.2004 29.04.2004 28.03.2004 27.03.2004 14.04.2004 09.04.2004 Parturitionfetal annexe elimination interval 9 days 9days 9 days 7 days 9 days 9 days 8 days 8 days 9 days 7 days 8 days 8 days 9 days 9 days 8 days 7 days 9 days 8 days 7 days 7 days
565
The percent representation of the dynamic of the foetal annex elimination is represented in the table 2.
Tabel 2 The dynamics of the foetal annexes elimination Parturition-fetal annexe elimination interval 7 days 8 days 9 days Nr. % Nr. % Nr. % 5 25 6 30 9 45
No. Cows 20
From the table we can see that at the majority of the cows the placenta elimination was accruing at 9 days after the parturition. The percent of elimination in the 7,8 and 9 day after the parturition is presented in the table 2. The second objective that was monitored after the administration of the treatment is the dynamic of the genital secretion. The genital secretions in the first 10 days are more abundant at the treated cows, they are reddish in colour. The clearing and the reduction of the volume of the genital secretions started in the 12-day after the parturition. The genital secretions was clear in the 16-day, and at 21 days after the parturition the vaginal secretions stopped. In regarding to the uterine dynamic, there was observed a rapid involution of the uterus immediately after the elimination of the conception product. The uterus is at 60% from the volume before the parturition. From this moment until the elimination of the foetal annexe the uterine involution wasnt noticed or it was much reduced, undetectable at the transrectal exam. From the moment of the foetal annexe elimination, the involution was resumed, and in the 15-16 days form the parturition the uterus was at 50% volume from the volume at parturition. The uterine involution was completed at 22 days after the parturition. In respect to the resuming of the ovarian activity, the results were varied. The following of the ovarian activity was made at 100 days after the parturition. The period until the resuming of the oestrus cycling was extended in the majority of the cases; this fact has as consequence the extending of the service period duration and at the calving interval. The presenting of the resuming of the ovarian activity after parturition is presented in the table 3.
Table 3 The resume of the ovarian activity Nr.crt. 1. 2. 3. 4. 5. Nr. matricol 01008 010082 010076 010084 010092 Nr. de zile scurse pn la reluarea ciclului estral Peste 100 96 82 70 64
566
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Nr.crt. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. Nr. matricol 010016 010030 010086 743 640 652 749 546 010038 010046 010062 757 652 010070 00148 Nr. de zile scurse pn la reluarea ciclului estral 38 68 85 48 Peste 100 68 64 48 43 50 82 Peste 100 75 56 52
CONCLUSIONS After clinical study of the efficiency of the foetal annexe retaining treatment after the protocol described by Robertson, the following conclusions can be made: the foetal annexes were eliminated in average 8,33 days the clearing of the genital secretions is starting in the 12 day postpartum, and they become clear in the 16 day and they stop in the 21 day after parturition the uterine involution was completed in the 22 day after the parturition the resuming of the ovarian activity was between the 38 and 100 days after the treatment the foetal annexes were eliminated with out complications, although the elimination was completed in 9 days also it can be noticed that the period of time when the resuming of the ovary activity took place was extended (even over 100 days), fact that led to the prolonging of the service period. because of these drawback the protocol of treatment throw Robertsons method is not applicable in the case of the milking cows, at which the milking period must be 305 days and at which the goal is to attain one calf from one cow every year also the long remanence of the placenta in the uterus can determine the apparition of endometrites which could lead to the dropping of the productive potential of the females.
567
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. Ardelean, V., 2003 - Fiziologia si patologia gestaiei si parturiiei la animale. Ed. Mirton Timioara Broiu, A., Robertson, Ed., Seiciu, Fl., Negoia, D., Petcu, M., Ghencioiu, C., 2000 - Studii privind o noua terapie a reteniei nvelitorilor fetale la vac, Rev. Rom. Med. Vet.., vol. XIII, nr. 2, pag. 60-64. Bucureti Bonca, Gh., Cernescu, H., Cristescu, E., Ardelean, V., 1989 - Cercetari privind profilaxia reteniei anexelor fetale la vac. Sem. Actualiti in patologia animalelor domestice, vol. XIII, Cluj-Napoca. Cernescu, H., Bonca, Gh., Mircu, C., Ardelean, V., Farca, I., Mari, M., 1992 Cercetri privind combaterea endometritelor la vaci cu Germisan si fluide magnetice. Rev. Rom. Med. Vet., vol.II., Bucureti. Cernescu, H., 2004 - Ginecologie veterinara, Cecma Partner, Timioara.
568
ARMONIZAREA CU LEGISLAIA EUROPEAN SOLUIA COMPETITIVITAII PE PIAA EUROPEAN

ASOCIAIA OAMENILOR DE AFACERI IAI 2003
Contientiznd importana politicii agricole comune, Asociaia Oamenilor de Afaceri (AOA) Iai 2003, n parteneriat cu Direcia Agricol i Dezvoltare Rural Iai, a lansat proiectul AVI-RO n EUROPENE, proiect finanat de UNIUNEA EUROPEAN prin programul Phare 2003 Consolidarea Societii Civile n Romnia. Obiectivul general al acestui proiect este accelerarea procesului de armonizare i implementare a acquis-ului comunitar n domeniul agriculturii, ca ramur integrant a politicii agricole comune. Obiectivele specifice constau n: 1. nfiinarea unui departament de afaceri europene n cadrul AOA Iai 2003 care s asiste firmele din domeniul agriculturii si industriei alimentare din Iasi i pe cele din aria creterii psrilor i procesrii crnii de pasre din ara, n demersul lor de armonizare i implementare a acquis-ului comunitar. 2. Creterea gradului de contientizare a importanei armonizrii cu legislaia european i implementarea ct mai rapid a acquis-ului comunitar nc din perioada de pre-aderare a Romniei la UE. 3. Realizarea unui studiu pilot la una din unitile importante din domeniul avicol. 4. Valorificarea rezultatului studiului pilot prin elaborarea unei metodologii de armonizare i implementare a acquis-ului comunitar n cadrul Departamentului Afaceri Europene, realizm documentare i cercetare n vederea acumulrii de informaii referitoare la acquis-ului comunitar, norme i standarde europene, acestea centralizndu-se ntr-o baz de date disponibil gratuit grupului int al proiectului De asemenea, desfaurm o campanie de contientizare a importanei implementrii legislaiei europene, distribuind materiale informative (brouri, pliante, CD-uri) celor din grupul int. Broura InfoACQUIS Informaii privind adoptarea i implementarea acquis-ului comunitar este disponibil n format electronic, pe pagina web a proiectului, http://www.aoai.ro/aviro/, i poate fi procurat n format tiprit, gratuit, la sediul asociaiei. Prin acest proiect se va edita i un manual metodologic cu algoritmul de urmat n demersul implementrii acquis-ului comunitar, avnd la baz un studiu pilot ce se va efectua la o societate comercial din Iai, pentru diagnosticarea situaiei actuale a acesteia i trasarea msurilor corective necesare implementarii acquis-ului comunitar, de-a lungul fluxului tehnologic.
569
Manualul se va distribui gratuit, ntr-un tiraj de 150 de exemplare i un numar de 500 de CD-uri cu varianta electronic a studiului, fiind un exemplu de cum trebuie sa functioneze o firma performant la nivel comunitar. Mai adaugm c popularizarea rezultatelor finale ale acestui proiect se va face i prin organizarea unui seminar de 2 zile (7-8 septembrie 2006) la Iai, care va avea ca participani reprezentani ai grupului int i ca invitai speciali, consultani i specialiti din domeniul aviculturii.
570
OPORTUNITATEA IMPLEMENTRII MANAGEMENTULUI SIGURANEI ALIMENTELOR N NTREPRINDERI IEENE

APPROPRIATENESS OF FOOD SAFETY MANAGEMENT IMPLEMENTATION IN IASI ENTERPRISES
Gh. BRDAN U.S.A.M.V. Iasi This study was carried out to evaluate the opportunity and the necessity to implementation a management system for guarantied the food safety in two enterprises of Iasi, Romania. The risks for food chain at various stages of processing were assessed and the reduction of the risk analyzed. The paper presents the advantages of controlled food dangers for internal and external medium of alimentary enterprise.
Key words: European laws, food safety, management system.
INTRODUCERE Stilul de via contemporan este mult diferit fa de cel al generaiilor din trecut. n ultimii 15 ani, societatea romneasc s-a transformat profund, fiind influenat de trsturile epocii post-industrializrii i a informatizrii, ce fac parte din fenomenul complex de globalizare (5). Pe plan social se remarc o schimbare a conceptului de familie, considerat nc unitatea de baz a societii. Asistm la o cretere a numrului de familii monoparentale, de persoane celibatare i de femei care sunt angajate n cmpul muncii. Lipsa de timp i modificarea relaiilor dintre membrii familiei au condus la apariia de noi obiceiuri culinar. Domeniul agro-alimentar s-a adaptat noilor cerine, pentru a rspunde schimbrilor profunde ale nevoilor consumatorilor n prepararea alimentelor (3). Un rezultat pozitiv al acestor schimbri a impus apariia de noi tehnologii prin care industria agro-alimentar s poat asigura cantitile necesare de alimente. n ciuda a numeroase progrese, riscul sanitar legat de alimente nu a disprut i se propag fie n mod natural, fie accidental att prin contaminare ct i prin practici greite de fabricare (4). Calitatea i sigurana alimentelor depinde de eforturile depuse de fiecare actor al lanului alimentar, de la agricultor la consumator. Sigurana sanitar a alimentelor este afacerea tuturor, de la ferm la farfurie (6). Crizele alimentare succesive ale anilor 1990 au alarmat consumatorii i au incitat puterile publice s pun n practic noi dispozitive de control a siguranei alimentelor. n majoritatea rilor europene au fost create structuri adecvate
571
responsabile de analiza riscurilor i de gestiunea lor. Politica de siguran a alimentelor este bine ncadrat de norme comunitare i internaionale (2, 5, 7). Punerea n practic a prevederilor legale referitoare la calitatea i sigurana sanitar pe ntregul lan alimentar necesit proceduri bine puse la punct i aplicate n mod permanent, pentru a garanta c alimentul destinat consumatorului este lipsit de factori care s i pun n pericol sntatea (1). Obiectivul acestui studiu este de a analiza condiiile de punere n practic a viitoarelor prevederi legale din domeniul siguranei sanitare a alimentelor, n uniti agro-alimentare din Iai. Pornind de la cerinele legale i de la situaia existent, la cteva luni nainte de aderarea Romniei la Uniunea European, se discut necesitatea implementrii unui sistem de management, eficient, care s garanteze consumatorului sigurana sanitar a alimentelor oferite. MATERIAL SI METODA
Studiul a fost efectuat n perioada februarie - mai 2006. Prima etap a constat din identificarea aspectelor legislative, generale, referitoare la garantarea siguranei sanitare a alimentelor, aplicate n ara noastr, i mai ales a noilor hotrri de guvern (2) care transpun n dreptul naional regulamentele europene din pachetul igien (7). Acestea vor deveni obligatorii ncepnd cu 1 octombrie 2006. Analiza minuioas a prevederilor textelor legislative a fost urmat de parcurgerea informaiilor prezente pe web-siturile instituiilor naionale i europene (1, 2, 5). n etapele preliminare de implementare a sistemului HACCP n dou ntreprinderi din municipiul Iai, un abator i o brutrie, care au ca obiect de activitate producerea i comercializarea de produse alimentare, s-a efectuat o analiz a situaiei existente att din punct de vedere a infrastructurii existente ct i a punerii n practic de proceduri operaionale, n care implicarea personalului s fie elementul central. Prin coroborarea prevederilor legislative cu posibilitile de modernizare a ntreprinderilor respective, s-a evideniat importana implementrii sistemului de management al siguranei alimentului, modalitate de continuare cu succes a activitii economice.
REZULTATE I DISCUII Cadrul legal european. Ameliorarea sntii i a ncrederii cetenilor reprezint elemente foarte importante ale politicii Uniunii europene. Consumatorii au dreptul de a dori ca alimentele pe care le consum s fie lipsite de pericole pentru sntatea lor i proprii consumului (6). Sigurana alimentar este un demers raional efectuat pentru a produce alimente lipsite de riscuri biologice, chimice sau fizice (4). Reguli generale n materie de igien a produselor alimentare au fost stabilite nc din 1993. Experiena a artat c aceste principii au constituit o baz solid pentru a ine sub control sigurana sanitar a alimentelor. n cadrul politicii agricole comune, au fost adoptate numeroase alte directive i regulamente pentru
572
a stabili obligaii sanitare specifice pentru producerea i punerea pe pia a produselor alimentare. Ele au redus obstacolele comerului cu astfel de produse ceea ce a contribuit la realizarea unei piee interioare, asigurndu-se n acelai timp un nivel ridicat de protecie a sntii publice (6). Totui, experiena crizelor alimentare din ultimii douzeci de ani a artat c lanul alimentar trebuie luat n globalitatea sa dac se dorete cu adevrat s se garanteze sigurana alimentelor. n prezent politica de siguran a alimentelor din Uniunea european are ca element distinctiv responsabilitatea productorilor i furnizorilor de a menine calitatea alimentelor, regulamentele europene fiind cele mai stricte din lume (5). Abordarea integrat n materie de siguran alimentar vizeaz msuri coerente pe ntreg lanul alimentar i o supraveghere adecvat, care s garanteze funcionarea eficace a pieei interioare. Punerea n practic a acestui concept implic punerea n practic de dispoziii legislative care s asigure controlul eficace i s evalueze respectul normelor comunitare, s gestioneze relaiile internaionale cu rile tere i organizaiile internaionale. Legislaia european n materie de siguran a alimentelor a fost complet rescris ncepnd cu anul 2000, cnd a aprut Cartea Alb ce prevedea revizuirea tuturor legilor existente, pentru a le face mult mai transparente i cldite pe o baz tiinific (6). Primul fruct ale noii viziuni a fost Regulamentul 178/2002, cel care a introdus noi noiuni ca: analiza riscurilor, principiul precauiei i protecia consumatorului n materie de siguran alimentar. n plus s-a stabilit nfiinarea unui organism independent care s lucreze n colaborare cu numeroasele agenii tiinifice i instituii ale statelor membre. Aceast nou creat Agenie European pentru Sigurana lanului alimentar (EFSA) furnizeaz date tiinifice asupra domeniile ce au o relaie direct sau indirect cu sigurana alimentelor, de la producia primar la livrarea ctre consumator. EFSA se ocup de asemenea cu evaluarea riscurilor din interiorul lanurilor alimentare i evaluarea tiinific a tuturor materiilor n raport cu alimentaia (1). Alt treilea pas important al refacerii legislative a fost publicarea n Jurnalul Oficial al UE, n data de 30 aprilie 2004, a unui ansamblu de texte oficiale, regulamentele 852, 853, 854 i 882, numite i Pachetul igien (7). Astfel, au fost regrupate obligaiile exploatanilor sectorului alimentar n materie de igien a alimentelor i apoi s regrupate obligaiile n materie de controale oficiale pe care Statele membre trebuie s le respecte. Toate aceste noi reguli generale i specifice n materie de igien au ca principal obiectiv s asigure consumatorului un nivel de protecie ridicat n materie de siguran sanitar a alimentelor. Fiecare exploatant al sectorului alimentar, inclusiv cel situat n Iai, la extremitatea estic a UE, trebuie s supravegheze s nu fie compromis sigurana alimentelor, posibil de realizat doar printr-o abordare integrat.
573
Avantaje ale garantrii siguranei alimentelor. n spiritul consumatorilor, calitatea i sigurana sunt noiuni primordiale pentru produsele alimentare. Sigurana alimentelor reprezint conceptul esenial al existenei unitilor productoare, transformatoare sau distribuitoare de produse alimentare. Dei vehiculat doar de civa ani, sintagma de sigurana alimentar este prezent n vocabularul tuturor productorilor dar i al consumatorilor. n contextul economiei de pia care a devenit funcional n ara noastr, productorii de alimente din Iai au neles deja c singura cale spre succesul economic, este de a garanta consumatorului livrarea de produse lipsite de orice pericol ce ar putea prejudicia sntatea. Pentru societile analizate s-a constatat c exist dou grupe de factori care impun introducerea unui sistem de management al siguranei sanitare a alimentului. a) Mediul extern al organizaiei este reprezentant de constrngerile legale, de satisfacerea nevoilor clienilor i a altor organisme. Intrarea n Uniunea european deschide calea unei confruntri de tip concurenial care presupune exigene la care trebuie s se adapteze productorii. Pentru a-i putea pune pe pia produsele, ntreprinderile trebuie s demonstreze c respect cerinele impuse de legi, directive i regulamente referitoare la produsele respective. Satisfacia clientului este esenial pentru supravieuirea economic a ntreprinderilor. Dup convingerea autoritilor c sunt ndeplinite constrngerile legale, trebuie convini clienii. Clientul este cel care alege produsul, asigurnd vnzrile. Client este numele de cod pentru unde sunt banii. Acetia vnd bani cu care cumpr satisfacie; mereu mai mult satisfacie. Nu a satisfacerii cerinelor sale ci a satisfaciei. Conceptul de management al calitii este centrat pe creterea continu a satisfaciei clienilor iar managementul siguranei alimentare permite garantarea continu a fabricrii de produse care s nu duneze sntii. Prin urmare, n pia, pe terenul pragmaticilor, al oamenilor ordonai, orientai spre succes, nu este loc pentru vechile metode de organizare. ntreprinderile analizate depind i de alte organisme care sunt foarte interesate de viabilitatea afacerilor, mai ales de bncile de credit ce supravegheaz ndeaproape att evoluia financiar ct i noile constrngeri. Persoanele situate n imediata vecintate a ntreprinderilor dar i comunitatea local, cea din care fac parte clienii direci sunt sensibili la variaiile de credibilitate ale organizaiilor. b) Angajaii ntreprinderilor analizate nzuiesc de asemenea spre conceptul de siguran alimentar. Nu doar prevenirea amenzilor, a pedepselor, a pierderilor i motiveaz pe angajai ci mai ales creterea mulumirii sufleteti generate de lucrul organizat, n care managementul siguranei alimentare este proiectat, implementat, verificat i actualizat periodic. Pentru a deveni un mediu compatibil cu stimulii din exterior, principiile legale ale siguranei alimentelor au fost tratate cu respect, att n cadrul relaiilor verticale ct i orizontale din interiorul ntreprinderilor.
574
Pornindu-se de la realitatea c oamenii adaug valoare din valoarea pe care o au, n cadrul procesului de implementare a sistemului de management al siguranei sanitare a alimentului, au fost efectuate instruiri periodice ale personalului, tocmai pentru a ridica nivelul de pregtire profesional. S-a dovedit c aceast investiie uman este minim n termeni financiari dar foarte important pentru ndeplinirea obiectivelor stabilite. Implementarea conceptului de siguran sanitar a alimentelor. Punere n practic a unui sistem de management care s garanteze sigurana produselor alimentare ncepe ntotdeauna cu abordarea igienic a problemei (4). Patru puncte sunt n mod particular importante: respectul legislaiei; luarea n considerare a programelor prealabile (GMP); cunoaterea punctelor tari i punctelor slabe ale ntreprinderilor n materie de inere sub control global a igienei; angajamentul i motivarea ntregului personal. S-a dovedit c nu este oportun s se lanseze demersul HACCP dac nu sunt ndeplinite toate prealabilele operaionale i de infrastructur. Respectarea scrupuloas a bunelor practici de igien i de producie (GMP) condiioneaz eficacitatea sistemului HACCP. Aceste bune practici de includ ansamblul msurilor de igien definite pentru fiecare sector de producie. CONCLUZII Evoluia regulilor comerului i exigenele crescute ale consumatorilor au fcut din sigurana alimentar o preocupare major a actorilor filierei alimentare, inclusiv n ntreprinderi alimentare din Iasi. Sigurana alimentelor nu este garantat dect atunci cnd responsabilitatea este partajat de toi membrii ntreprinderii alimentare, de la managementul de vrf i operatori pn la muncitori i chiar stagiari. Pentru ca alimentul ce ajunge la masa consumatorului s fie propriu pentru a fi mncat i c riscurile de contaminare s fie minimalizate, este absolut necesar s fie implementat un sistem de proceduri i mecanisme de control. Deoarece nu exist riscul zero, doar o bun implementare pe baza principiilor de baz a respectrii igienei i bunelor practici de producie poate s garanteze alimente care s nu afecteze sntatea celor care le consum.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Autoritatea European de Siguran a Alimentelor: http://efsa.eu.int. Autoritatea Naional Sanitar veterinar i pentru Sigurana Alimentelor - Legislaie specific, http://www.ansv.ro/legislatie.php?cmd=index&tip=HOTA Brdan Gh. - note de curs Sigurana alimentelor, USAMV Iasi (manuscris). Codex Alimentarius CAC/RCP 1-1969, Rev. 4-2003. - Code d'usages international recommande - principes gnraux d'hygine alimentaire, http:// www.codexalimentarius.net Comisia european - Sigurana alimentelor: http://europa.eu.int/comm/food/index_fr.htm
575
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 6. 7. 8. 9. 10. Livre blanc sur la securite alimentaire Commission des Communautes europeenes, http://ec.europa.eu/dgs/h ealth_consumer/library/pub/pub06_fr.pdf. Pachetul igien Regulamente ale Parlamentului european i ale Consiliului (29.09.2004) http:// europa.eu.int/ eur-lex/ pri/ fr/ oj/ dat/ 2004/ l_226/ l_22620040625fr00030021.pdf http://europa.eu.int/eur-lex/pri/fr/oj/dat/2004/l_226/l_22620040625fr00220082.pdf http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/site/fr/oj/2004/l_226/l_22620040625fr00830127.pdf http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/site/fr/oj/2004/l_165/l_16520040430fr00010141.pdf
576
AGRICULTUR DURABIL I SECURITATE ALIMENTAR N UNIUNEA EUROPEAN PROGRAME DE ACIUNE ADOPTATE DE ROMNIA N DOMENIUL AGRICULTURII DURABILE I A SIGURANEI ALIMENTELOR
Teofilia BANU, O. LUCHIAN
n perioada actual, politica agricol a Uniunii Europene are ca obiective prioritare asigurarea securitii alimentare i crearea condiiilor de punere n practic a principiilor unei agriculturi durabile la nivel continental. Reformele majore ntreprinse la nivel european n politica agricol, de mediu i macroeconomic, a rilor dezvoltate sau a celor n curs de dezvoltare, au creat condiii propice pentru promovarea unei agriculturi durabile i a dezvoltrii rurale. Scopul dezvoltrii agricole i rurale durabile este acela de a determina o cretere susinut a produciei alimentare i de a asigura securitatea alimentar. Crizele sanitare care s-au succedat n domeniul alimentar n ultimii ani au diminuat ncrederea consumatorilor europeni n sigurana produselor alimentare. Rspunsul autoritilor europene la aceast provocare s-a concretizat ntr-o strategie global de asigurare a unui nivel ridicat de siguran alimentar. Aceasta se bazeaz pe un control riguros al produselor alimentare i o supraveghere permanent a drumului lor de la ferm pn pe masa consumatorilor. Politica agricol la nivel european are n vedere gestionarea pe baze tiinifice a riscurilor n domeniul alimentar, promovarea diversitii produselor alimentare i a dreptului consumatorilor de a alege n cunotin de cauz. n vederea integrrii n Uniunea European i a implementrii acquis ului comunitar principalul instrument financiar de preaderare pentru agricultur i dezvoltare rural de care dispune Romnia este Programul SAPARD. Operaionalizarea acestuia n ara noastr se realizeaz prin Programul Naional pentru Agricultur si Dezvoltare Rural, ce pune accent pe prioritile identificate pentru perioada de pre-aderare, respectiv : mbuntirea structurilor de prelucrare i marketing a produselor agricole i piscicole; controlul calitii alimentelor; controlul veterinar i fito-sanitar; mbuntirea infrastructurii pentru dezvoltare rural si agricultur; dezvoltarea economiei rurale si a resurselor umane. Programele elaborate de Autoritatea Naional Sanitar Veterinar i pentru Sigurana Alimentelor au menirea s supravegheze implementarea practicilor Uniunii Europene n domeniul siguranei alimentelor i s creeze condiiile pentru adoptarea de reacii adecvate n situaii de criz pentru a asigura protejarea intereselor i sntii cetenilor.
577
CONSIDERAII ASUPRA CALITII IGIENICE A UNOR PROBE DE LAPTE DESTINATE CONSUMULUI PUBLIC
CONSIDERATIONS REGARDING THE HYGIENIC QUALITY OF SOME MILK SAMPLES FROM PUBLIC CONSUMPTION
Ioana DALEA, G. ZEGREAN U.S.A.M.V. Cluj-Napoca A verification of the hygienic quality of high temperature pasteurized milk from sale was conducted, from A provider, in the way of which, the following methods were applied: total mesophillic germ number determination, impurities determination and somatic cell presence determination. 20% of the 20 examined samples were situated outside the maximum limit of consumption and sold like this in a market with a fridge that didnt have any thermometers. These samples had a much higher total germ number that the legal one (8.9 times higher). 10% of the samples had impurities in the sediment and also somatic cells, and only 55% didnt contain any mesophillic germs.
INTRODUCERE Supravegherea continu i constant a calitii igienice a laptelui din consum este deosebit de important pentru sntatea public. Un numr excesiv de mare de germeni poate produce alterarea calitilor organoleptice ale laptelui dar n acelai timp pericliteaz sntatea consumatorilor. Pe de alt parte, celulele somatice pot adposti germeni patogeni, fiind ele nsele un indicator al eficienei metodelor de igienizare a produsului. n laptele pasteurizat nalt teoretic, nu ar trebui s mai existe celule somatice iar NTG m.a., conform normelor din ara noastr, ar trebui s fie de maxim 300.000/ml. [1, 2, 3, 4] MATERIAL I METOD
Au fost luate n lucru 20 de probe de lapte igienizat prin pasteurizare nalt, procurate din comer, respectiv lapte de la furnizorul notat A, ambalat la cutie de carton. S-a determinat numrul total de germeni mezofili aerobi (NTG m.a.), prin obinerea de diluii succesive n ser fiziologic steril i nsmnare pe agar steril. Citirea s-a fcut la 24 de ore, dup termostatare la 37C. De asemenea, laptele a fost centrifugat la 3000 rpm timp de 10 minute, n vederea obinerii lactosedimentului, din care s-au executat frotiuri colorate cu albastru de metilen i Gram. Frotiuri s-au executat i din coloniile care au crescut n plcile nsmnate, colorate prin metoda Gram.
578
REZULTATE I DISCUII Din cele 20 de probe luate n lucru, 5 se aflau n afara limitei maxime de consum i comercializate astfel (20% dintre probe), din care 3 probe cu dou zile, iar restul, cu trei zile. Din punct de vedere organoleptic, doar probele care depiser limita maxim de consum cu 3 zile, au prezentat miros i gust acid. n cazul celor 15 probe care se situau n perioada de consum, NTG m.a. s-a situat n limitele admise n ara noastr, respectiv sub 300.000 germeni/ml lapte. 55% dintre probe nu prezentau germeni mezofili aerobi. n cazul probelor cu termenul limit de consum depit, valorile NTG m.a. se situau cu mult peste limita admis, valorile fiind prezentate n tabelul 1. Flora microbian prezent n toate probele a constat stafilococi i streptococi Gram pozitivi, cocobacili Gram negativi i bacili Gram pozitivi i negativi. Impuriti i celule somatice au fost prezente doar n dou dintre probe (10%), acestea din urm fiind reprezentate de neutrofile, limfocite i macrofage activate (Fig 1, 2), n numr mic, n medie 1020 celule pe frotiu. Sedimentul acestor probe a avut o culoare glbuie, cu impuriti la examinarea cu obiectivul x40 i era cantitativ crescut fa de al celorlalte probe de lapte.
Tabelul 1 Parametrii calitii igienice a probelor de lapte luate n lucru destinate consumului public Proba NTG m.a./ml 1 2 23.000 3 4 4.000 5 1.000 6 7 8 9 10 11 82.000 12 13 14 15 16* 1.230.000 17* 480.000 18** 2.140.000 19* 749.000 20** 2.680.000 * n afara limitei de consum (2 zile) ** n afara limitei de consum (3 zile) Celule somatice Prezente Prezente Impuriti Prezente Prezente -
579
Este de menionat faptul c vitrina frigorific a unitii de comercializare a produselor lactate nu era prevzut cu un sistem de monitorizare electronic vizibil a temperaturii.
Fig. 1. Neutrofile i macrofage n laptele de la furnizorul A, coloraie cu albastru de metilen, x1000
Fig. 2. Neutrofile n laptele de la furnizorul A, coloraie cu albastru de metilen, x1000
CONCLUZII Deoarece s-a constatat prezena celulelor somatice i mai ales a impuritilor n laptele pasteurizat nalt (10% din probe), este evident c metodele de igienizare, respectiv filtrarea i pasteurizarea nu sunt supravegheate constant i corespunztor n cazul furnizorului A. Pstrarea necorespunztoare i peste limita menionat pe ambalaj, duce la multiplicarea excesiv a germenilor mezofili aerobi cu mult peste limitele admise (chiar de aproape 10 ori n cazul probei 20), care produc alterri de gust i miros ale laptelui. Exist uniti care comercializeaz lapte i produse lactate pstrate n condiii precare de temperatur i care nu in cont de recomandrile productorilor, nscrise pe ambalaj. Concluzia clar care se desprinde din datele obinute este aceea c supravegherea calitii igienice a laptelui destinat consumului public necesit mbuntiri, ncepnd de la procesarea primar a laptelui pn la desfacere.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. http://www.promediapublishing.it/CMS/PDF/articoli/Art_pdf_164_DossierLatte Rotaru O., Gu Camelia, M. Mihaiu, 1999 - Controlul sntii produselor de origine animal, Editura Hipparion, Cluj-Napoca Rotaru O., M. Mihaiu, 2004 - Igiena veterinar a produselor alimentare, Vol 2, Editura Risoprint, Cluj-Napoca The Raw Milk: International Journal of Food Sciences and Nutrition, Volume 52, nov 2001
580
INFLUENA TEMPERATURII ASUPRA CRETERII TULPINILOR DE BACILLUS CEREUS IZOLATE DIN ALIMENTE
TEMPERATURE INFLUENCE ON GROWTH CHARACTERISTICS OF FOOD ISOLATES OF BACILLUS CEREUS
V. FLORITEAN1, Elena IAN2, C. SRBU2, M. CARP CRARE1 1 U.S.A.M.V. Iai 2 L.S.V. Iai Refrigerated foods have a relevant potential in the food market, although the potential risk posed by sporulated emerging psycrotrophs pathogens has to be evaluated. Bacillus cereus is one of these pathogenic microorganisms. In this paper, the ability to grow of several food isolates of Bacillus cereus was evaluated. Twenty strains of Bacillus cereus isolated from milk and meat products have been used to study growth characteristics on solid and liquid media in detail. The analysis revealed a large biodiversity within the Bacillus cereus food strains. Fourteen strains were able to grow at 7C and could be considered as psychrotolerant. All the milk and dairy isolates could grow at 7C. However, none of these strains could grow at 48C. Only five of the strains (20%) have grown at 48C. All strains grew well at 20C and 42C.
Key words: Bacillus cereus, Psychrotolerant, Growth
Bacillus cereus este un microorganism sporulat, Gram pozitiv aerob, larg rspndit n mediu cunoscut att pentru aciunea s-a spoliatoare ct mai ales pentru capacitatea acestuia de a produce, n anumite condiii toxiinfecii alimentare. Bacillus cereus produce dou tipuri de toxiinfecii alimentare sindromul diareagen i cel vomitiv denumite astfel dup manifestrile clinice predominante ale celor dou entiti. (7, 8) Abilitatea de a sporula face ca bacteria s reziste tratamentelor termice uzuale aplicate alimentelor n procesul tehnologic de obinere iar prezena n cadrul speciei a tulpinilor psichrotolerante permite acesteia s se dezvolte la temperatura de refrigerare. Aceste caracteristici fiziologice permit supravieuirea i chiar dezvoltarea bacteriei n alimente mai ales n cazul alimentelor semipreparate ceea ce constituie un risc permanent pentru consumatori i o preocupare permanent a specialitilor din industria alimentar pentru a se reduce pierderile. (1, 5, 6, 9)
581
Lucrarea de fa investigheaz abilitatea de a se dezvolta a unor tulpini de Bacillus cereus izolate din alimente de origine animal pe medii solide i lichide la diferite temperaturi. Cunoaterea comportamentului tulpinilor de Bacillus cereus cu origine alimentar sub aciunea unor factori de mediu este important fiind util att n evaluarea riscului prezenei bacteriei n alimente ct i n stabilirea msurilor adecvate pentru reducerea incidenei acestuia n alimente. MATERIAL I METOD
Influena temperaturii asupra creterii tulpinilor din specia Bacillus cereus a fost testat pe un numr de 20 tulpini de Bacillus cereus izolate din produse alimentare de origine animal. Testarea s-a efectuat att pe mediu solid ct i n mediu lichid. Pe mediul solid. Pentru a determina capacitatea de dezvoltare la diferite temperaturi tulpinile izolate au fost cultivate iniial pe bulion tripton-soia (TSB), incubate la 30C pentru 24 ore. Din culturile tinere un inocul de 0,1 ml s-a nsmnat, prin striere, pe agar tripton-soia (TSA). Plcile nsmnate au fost incubate la temperaturi diferite (7, 20, 42 i 48C) timp de 6 zile. Plcile au fost examinate zilnic pentru a se depista momentul apariiei coloniilor vizibile pe mediu. Coloniile dezvoltate au fost confirmate conform protocolului impus prin SR ISO 7932/1997. n mediul lichid. Pentru o mai bun caracterizare a creterii tulpinilor de Bacillus cereus sub influena temperaturii s-au efectuat i teste pe medii lichide. Tulpinile testate au fost cultivate iniial pe bulion creier cord (BHI) i incubate timp de 24 ore la 30C. Pentru fiecare tulpin testat s-au pregtit cte patru baloane Erlemeyer cu cte 30 ml bulion creier-cord i cte patru eprubete cu cte 10 ml bulion creier-cord, toate fiind nsmnate cu cultur tnr de Bacillus cereus pn la aprox. 103 104 UFC/ml. Pentru testarea creterii la temperatur sczut, baloanele au fost incubate, cte dou, la temperatura de 7C timp de 14 zile i la 20C timp de 5 zile. Monitorizarea creterii s-a efectuat prin metoda diluiilor seriate la intervale de timp variabile (n funcie de temperatura de incubare). Diluiile seriate s-au preparat pe ap peptonat salin, din fiecare diluie fiind prelevat cte 0,1 ml care cu care s-a nsmnat prin striere plci Petri cu agar creier-cord care au fost incubate la 30C timp de 24 ore. Pentru testarea creterii la temperatur ridicat eprubetele inoculate cu cultur tnr i incubate la 42C timp de 48 ore i la 48C timp de 10 zile. Monitorizarea creterii s-a fcut prin metoda diluiilor seriate la intervale de timp variabile. Curbele de cretere au fost generate pe baza rezultatelor obinute cu ajutorul unui program statistic folosindu-se o funcie Gompertz modificat recomandat i/sau utilizat i de ctre ali autori (3, 10, 11, 12, 13). Pentru caracterizarea creterii tulpinilor de Bacillus cereus s-a estimat timpul de generaie, rata de cretere i durata fazei de lag folosindu-se parametrii matematici (A,B,C,M) calculai n prima etap. 582
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Y= A + C*EXP(-EXP(-B*(X-M)))
n care:
Y - populaia bacterian la momentul X (log UFC/ml) X - timpul (ore) A - inoculul iniial (log UFC/ml) B - rata de cretere relativ la momentul M (generaii/or) C - maximul statistic atins de populaia bacterian (log UFC/ml) M - momentul la care se atinge creterea maxim (ore) RCE (Rata de cretere exponenial) (log UFC/ml/or) = B*C/e DFL (Durata fazei de lag) (ore) = M-(1/B) TG (Timp de generaie) (ore) = (log102)e/B*C
REZULTATE I DISCUII Rezultatele obinute sunt prezentate n tabelele 1-3 i fig. 1. Pe mediu solid la 70C tulpinile de Bacillus cereus s-au dezvoltat lent, coloniile fiind vizibile ncepnd cu ziua a treia de incubaie. Din cele 20 tulpini testate doar 14 au fost capabile s se dezvolte, n condiii care s conduc la colonii vizibile n cele 6 zile ct a durat experimentul. La temperatura de 20C toate tulpinile testate s-au dezvoltat dnd colonii vizibile nc din primele 24 ore de incubaie. La 42C creterea s-a produs n bune condiii, toate tulpinile au dat colonii vizibile dup dou zile de incubaie. Temperatura ridicat s-a dovedit a fi un factor care a inhibat dezvoltarea unui numr mare din tulpinile testate (15), iar la tulpinile la care s-au evideniat colonii, acestea au aprut dup 48 de ore de incubaie (2 tulpini) i dup 72 de ore (3 tulpini). (Tabelul 1)
Tabelul 1 Dezvoltarea tulpinilor de Bacillus cereus pe medii solide la diferite temperaturi Nr. de tulpini care au dat colonii vizibile/timp (ore) 24 20 16 48 6 2 72 2 3 96 9 120 3 144 Tulpini testate 20 din care: au crescut 14 20 20 5 nu au crescut 6 15
Temperatura C 7 20 42 48
n ceea ce privete comportamentul tulpinilor de Bacillus cereus n funcie de originea acestora se poate observa o predominan a tulpinilor care au abilitatea de a se dezvolta la temperaturi sczute (psichrotolerante) n lapte i produse lactate n vreme ce tulpinile izolate din carne i produse din carne s-au dezvoltat mai bine la temperaturi ridicate, fiind singurele tulpini care s-au dezvoltat la 48C. (Tabelul 2) Pe medii lichide au fost testate doar tulpinile la care s-a evideniat cretere pe mediul solid. Pe mediul lichid creterea a fost mai rapid, ncepnd dup o
583
perioad de lag medie cuprins ntre 1,037 ore i 74,53 ore. Cea mai lung perioad medie de lag a fost constatat la temperatura de 7C iar cea mai scurt la temperatura de 42C. Comparativ cu tulpinile izolate din carne, cele din lapte sau dezvoltat bine la temperatura de 7C dar mult mai lent la temperatura de 42C.
Tabelul 2 Dezvoltarea tulpinilor de Bacillus cereus pe medii solide la diferite temperaturi n funcie de originea lor Tulpini dezvoltate/origine Carne i produse din Lapte i produse lactate carne (n =10) (n = 10) Nr. % Nr. % 10 100 4 40 10 100 10 100 10 100 10 100 5 50
Temperatura C 7 20 42 48
Total 14 20 20 5
La temperatura de 20C toate tulpinile, indiferent de origine s-au dezvoltat foarte bine ceea ce nseamn c meninerea la temperatura camerei a alimentelor contaminate cu Bacillus cereus constituie un risc, alimentele fiind expuse degradrii rapide iar n cazul tulpinilor toxigene apare riscul apariiei toxiinfeciilor alimentare la consumatori. Cea mai rapid cretere s-a estimat la tulpinile din carne la 42C urmate de tulpinile din lapte la 20C i respectiv 42C, tulpinile din carne la 20C. La 48C pe mediul solid tulpinile au nceput creterea dup o faz de lag relativ scurt (aprox. 22 ore) i au ajuns la faza staionar n timp scurt, rata de cretere exponenial fiind destul de ridicat.
Fig. 1 Comportamentul tulpinilor de Bacillus cereus la diferite temperaturi n funcie de originea lor
584
585
Nivelul maxim atins de tulpinile de Bacillus cereus n condiiile studiului au fost cuprinse ntre 107 i 109 fiind dependent, n principal, de temperatura de incubaie, de tulpina bacterian i mai puin cu dimensiunea inocului iniial. (Tabelul 3 i Fig. 1) Rezultatele obinute sunt comparabile cu cele publicate de ali autori dar cu unele diferene generate de condiiile n care s-au desfurat experimentele i de modelul matematic utilizat pentru prelucrarea datelor. De asemenea, n interpretarea rezultatelor obinute pe medii lichide trebuie s inem cont de faptul c metoda folosit (funcia Gompertz modificat), dei elocvent n caracterizarea creterii bacteriene, are tendina de a supraestima rata de cretere exponenial (cu pn la 15% dup unii autori). (2, 4, 11, 12) CONCLUZII Rezultatele obinute reflect marea biodiversitate care se manifest n cadrul speciei Bacillus cereus, tulpinile cu origine alimentar caracterizate prin acest studiu fiind capabile s se dezvolte ntr-un interval larg de temperatur; Tulpinile care au abilitatea s se dezvolte la temperaturi sczute (7C) au fost evideniate cu o frecven mai mare n lapte i produse din lapte, ceea ce denot posibilitatea unei selecii a acestor tulpini pe parcursul procesului tehnologic de prelucrare i depozitare a laptelui i a produselor lactate; Tulpinile izolate din carne s-au dezvoltat mai bine la temperaturi medii i ridicate n comparaie cu tulpinile din lapte. Prezena bacteriei n carne i produse din carne este rezultatul contaminrii cu tulpini din mediu iar n cazul produselor din carne i cu tulpini de origine vegetal cunoscute pentru abilitatea lor de a crete la temperaturi ridicate; Dei au origine comun, n sol, tulpinile de Bacillus cereus din alimente manifest diferene apreciabile n modul de reacie la aciunea factorilor de mediu i aceasta datorit faptului c aceste tulpini se adapteaz, n funcie de specificul fiecrui aliment, la anumite condiii supravieuind n/pe instalaiile din industria alimentar i constituie, astfel, surse perpetue de contaminare a alimentelor. Abilitatea bacteriilor din specia Bacillus cereus de a sporula, combinat cu adaptabilitatea mare a formelor vegetative la cele mai variate nie ecologice fac din aceast specie o problem pentru industria alimentar i pentru sigurana alimentar n special. Chiar dac datele din prezenta lucrare au la baz doar unul din multitudinea de factori care influeneaz creterea bacteriilor din specia Bacillus cereus n alimente, astfel de modele sunt utile pentru evaluarea riscului reprezentat de prezena acestei bacterii n alimente i n stabilirea unor msuri eficiente prin care s se previn atingerea unui numr de bacterii capabil s produc tulburri la consumatori.
586
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Andersson, A., Rnner, U., Granum, P.E., 1995 - What problems does the food industry have with the spore-forming pathogens Bacillus cereus and Clostridium perfringens? International Journal of Food Microbiology 28: 145-155 Benedict, R.C., Partridge, T., Wells, D., Buchanan, R.L., 1993 - Bacillus cereus: aerobic growth kinetics. Journal of Food Protection 56: 211214. Chorin, E., Thuault, D., Cleret, J.J., Bourgeois, C.M. (1997) Modelling Bacillus cereus growth. International Journal of food Microbiology 38: 229234. Delignette-Muller M.L., Rosso L., 2000 - Biological variability and exposure assessment. International Journal of Food Microbiology 58: 203212 Dufrenne, J., Soentoro, P., Tatini, S., Day, T., Notermans, S., 1994 Characteristics of Bacillus cereus related to safe food production. International Journal of Food Microbiology 23: 99-109. Korn, R., 1981 - Incidena speciei Bacillus cereus n unele alimente de origine animal i proprietile tulpinilor izolate. Tez de doctorat, I.A.N.B., Bucureti Kramer, J.M., Gilbert, R.J., 1989 - Bacillus cereus and other Bacillus species. Foodborne Bacterial Pathogens, Ed. by M. P. Doyle, Marcel Dekker,INC. New York and Basel 21-70 McKillip, J.L., 2000 - Prevalence and expression of enterotoxins in Bacillus cereus and other Bacillus spp., a literature review. Antonie van Leeuwenhoek 77, 393399 Mureanu, I., 2000 - Cercetri privind incidena n unele alimente de origine animal i particularitile morfologice ale speciei Bacillus cereus, potenial patogen pentru om, n zona central a Transilvaniei. Tez de doctorat U..A.M.V. Bucureti Pinon, A., Zwietering, M., Perrier, L., Membr, J.M., Leporq, B., Mettler, E., Thuault, D., Coroller, L., Stahl, V., Vialette, M., 2004 - Development and Validation of Experimental Protocols for Use of Cardinal Models for Prediction of Microorganism Growth in Food Product. Applied and Environmental Microbiology, 70:1081-1087 Rajkowski, K.T., Mikolajcik, E.M., 1987 - Characteristics of selected strains of Bacillus cereus. Journal of Food Protection 50: 199-205. Zaika, L.L. Scullen, O.J., 1996 - Growth of Shigella flexneri in foods: comparison of observed and predicted growth kinetics parameters, International Journal of Food Microbiology, 32: 91-102 Zwietering, M.H., De Koos, J.T., Hasenack, B.E., De Witt, J.C., Van'T Riet, K., 1991 - Modeling of bacterial growth as a function of temperature. Applied Environmental Microbiology, 57: 1094- 1101
10.
11. 12. 13.
587
IDENTIFICAREA PRINCIPALELOR SURSE DE CONTAMINARE CU MICROORGANISME A CARCASELOR DE PASRE N ABATOR

IDENTIFICATION OF THE MAJOR SOURCES OF MICROBIAL CONTAMINATION OF CHIKEN CARCASSES IN ABATTOIRS
Carmen CREU, V. FLORITEAN, M. CARP-CRARE U.S.A.M.V. Iai The study was carried out in a poultry slaughterhouse from Iai county. A total number of 270 swab samples were taken from different sites of 54 poultry carcasses in order to evaluate the microbiological status and to identify the most common sources of carcass contamination during various unit operations. The total viable counts and two important indicator microorganisms (coliforms and Escherichia coli) were monitored. According to the region of carcasses the total viable counts varied between: 6.2-6.6 (log cfu/cm2) after bleeding, 3.8-4.5 after scalding, defeathering and washing, 5.3-6.1 after evisceration, 4.35.1 after washing and 4.14.8 after chilling. The indicator microorganisms (coliforms and E. coli) prevalence was quite high. Legs showed the maximum level of contamination and high prevalence of indicator microorganisms being one of the most critical carcass region. Proper monitoring of each step in poultry slaughterhouse processing it is important in order to establish control measures in meat quality assurance process.
Key words: poultry, poultry microbiology, coliforms, E. coli, poultry quality
Consumul de carne de pasre, datorit valorii nutritive i a digestibilitii ridicate, este ntr-o continu cretere. La ora actual exist o preocupare continu pentru a se asigura calitatea crnii de pasre, prin controlul strii de sntate a psrilor destinate sacrificrii i prin mbuntirea metodelor de control a strii de igien n abatoarele de psri (implementarea HACCP). Carnea de pasre sufer pe parcursul procesrii manipulri multiple, contaminarea fiind posibil pe tot fluxul tehnologic. Sursele microorganismelor contaminante sunt diverse i numeroase, cea mai important fiind psrile nsi, care pot purta n special n tractul digestiv o microflor bogat i diversificat (1, 2, 3, 8, 9, 11). Prezena pe carcasele de pasre, n numr mare, a unor microorganisme, indic lipsa de igien pe parcursul procesrii n abator sau o serie de deficiene legate de transportul i/sau depozitarea crnii (4, 5 , 6, 7 ,11). Prezentul studiu i propune s evalueze, prin intermediul unor microorganisme indicator al strii de igien, nivelul contaminrii cu microorganisme n diferite stadii ale prelucrrii psrilor n abator i s identifice,
588
n acest fel, etapele unde calitatea microbiologic a crnii de pasre poate fi ameliorat prin stabilirea prin msuri corective adecvate. MATERIAL SI METODA
Au fost examinate un numr de 270 de probe. Probele au fost recoltate de pe fluxul tehnologic de la un abator din judeul Iai dup cum urmeaz: dup sngerare, dup oprire, deplumare i splare, dup eviscerare, dup splare i dup rcire. Probele s-au recoltat cu ajutorul unor tampoane de vat sterile umezite cu ap peptonat steril, prin tergerea repetat (timp de 15-30 sec.) a unei suprafee de aprox. 100 cm2 din diferite zone ale carcasei (picioare, piept i aripi). Tampoanele de vat au fost introduse n 10 ml ser fiziologic peptonat 1%, n tuburi cu capac sterile. Tuburile au fost transportate la laborator n condiii corespunztoare. Tuburile au fost agitate 30 sec. cu ajutorul unui Vortex dup care din serul fiziologic peptonat s-au preparat diluii seriate pn la 10-6. Numrul total de germeni aerobi mezofili a fost determinat pentru diluiile 10-4 i 10 -5 pe agar nutritiv prin nglobarea a 0,1 ml inocul. Pentru fiecare diluie sau efectuat cte dou plci. Plcile nsmnate au fost incubate la 37C timp de 24 - 48 ore. Pentru determinarea microorganismelor indicator s-au folosit medii selective specifice. Pentru determinarea numrului probabil de bacterii coliforme s-au efectuat diluii zecimale, din fiecare diluie introducndu-se cte 1 ml n cte 3 eprubete cu mediu BBLV (bulion lactozat cu sruri biliare i verde briliant) i tub Durham. S-a incubat 24 48 ore la 37 C. Interpretarea s-a fcut dup producia de gaz i calcularea mediei de 3 cifre (funcie de nota primit de fiecare din cele 3 eprubete cu mediul BBLV), media obinut fiind interpretat cu ajutorul tabelului Mac Grady. n paralel s-a utilizat i metoda de determinare a numrului de bacterii coliforme prin numrarea coloniilor (ISO 4832). Din diluiile zecimale se repartizeaz cu pipete sterile cte 1 ml n cte 2 plci Petri. n fiecare plac se toarn mediu VRBL (geloz cu lactoz sruri biliare cristal violet i indicator) topit i rcit la 45 C. Plcile pregtite se incubeaz la 35 C timp de 24 ore. Dup incubare se numr coloniile rou violacee i se calculeaz media cu formula: N = c / (n1 + 0,1 n2) d [n care c reprezint suma coloniilor numrate; n1 este numrul de cutii de la prima diluie reinute pentru numrare; n2 este numrul de cutii de la a doua diluie reinute pentru numrare; d este rata diluiei care corespunde primei diluii folosite] Pentru identificarea bacteriei Escherichia coli STAS ISO 4832, pentru determinarea numrului probabil de E. coli SR ISO 7251 Conform acestui standard se nsmneaz serii de cte trei eprubete, coninnd mediu de mbogire selectiv i tuburi Durham, cu proba de analizat i cu diluiile decimale ale acesteia. Acest mediu este reprezentat de bulion cu tripton i lauril sulfat. Eprubetele astfel pregtite se incubeaz la 35C sau 37C, pentru 24 h - 48 h. Dup acest interval, din fiecare eprubet n care s-a observat degajare de gaz, se nsmneaz cel de-al doilea mediu de mbogire selectiv, respectiv 589
bulionul E.C. Eprubetele se incubeaz la 45C pentru 24 h - 48 h. n continuare, din fiecare cultur care a prezentat degajare de gaz se nsmneaz cte o eprubet cu ap triptonat care se incubeaz la 45C, pentru 48 h. Dup incubarea eprubetelor cu ap triptonat, n fiecare se adaug 0,5 ml reactiv Kovacs pentru identificarea prezenei indolului. Se consider reacie pozitiv dac la suprafaa culturii apare un inel rou. Calculul numrului cel mai probabil de E. coli se realizeaz, n funcie de numrul eprubetelor care conin cultur considerat pozitiv, folosind tabelul Mac Grady.
REZULTATE I DISCUII Prezena microorganismelor pe i n carne poate fi n anumite condiii periculoas pentru consumator. Evaluarea microflorei crnii, calitativ i cantitativ, precum i identificarea etapelor fluxului tehnologic care prin specificul acestora pot contribui la modificarea acesteia este important n stabilirea msurilor preventive i corective prin intermediul crora evoluia microflorei poate fi controlat.
Tabelul 1 2 Valorile NTG/cm pe diferite regiuni ale carcaselor de pasre pe parcursul fluxului tehnologic de prelucrare n abator Etapa tehnologic Sngerare Oprire deplumare Eviscerare Regiunea carcasei Aripi Picioare Piept Aripi Picioare Piept Aripi Picioare Piept Aripi Picioare Piept Aripi Picioare Piept Nr. probe examinate 54 54 54 54 54 54 54 54 54 54 54 54 54 54 54
2 NTG (log UFC/cm eroarea standard) Valoare Valoare Media minim maxim 5,2 6,8 6,2 0,19 5,5 6,5 6,3 0,13 5,8 6,8 6,6 0,23 3,4 5,1 3,8 0,12 3,8 5,6 4,5 0,21 3,6 5,8 4,2 0,14 4,5 6,3 5,3 0.20 5,6 7,1 6,1 0,17 5,3 6,8 5,5 0,26 3,1 5,1 4,3 0,22 4,2 6,3 5,1 0,20 4,1 5,3 4,8 0,04 3,1 4,5 4,1 0,19 3,8 5,2 4,8 0,32 3,7 4,8 4,5 0,27
Splare
Rcire
Numrul total de germeni (NTG), determinat pe parcursul fluxului tehnologic al prelucrrii psrilor n abator, a furnizat valori cuprinse ntre 3,1 0,1 log ufc/cm2 i 7,1 0,02 log ufc/g. Valorile cele mai mari au fost depistate dup efectuarea sngerrii i a eviscerrii, la polul opus, valorile cele mai mici fiind obinute dup oprire i n cursul etapelor finale ale prelucrrii, dup splare
590
i respectiv dup rcirea carcaselor. Diferene au fost constatate i n cazul celor trei regiuni examinate, astfel, NTG a avut valorile cele mai mari n mod constant pe suprafaa picioarelor i n anumite situaii pe suprafaa pieptului (Tabelul 1). Valorile obinute sunt asemntoare cu cele publicate, n literatura de specialitate, de ali autori (5, 10, 11). Valorile mari ale NTG dup sngerare sunt consecina unei ncrcturii mari de microorganisme cu care ajung psrile n abatoare iar dup eviscerare valorile mari ale NTG se explic prin specificul acestei operaiuni cnd carcasa poate veni n contact cu masa gastro-intestinal i chiar cu coninutul acesteia, situaie care este mai frecvent atunci cnd operaiunea se efectueaz defectuos. Coliformii i E. coli, doi parametri microbiologici utilizai n industria alimentar pentru aprecierea strii de igien a produselor alimentare i a spaiilor tehnologice, au fost identificai la 24,8% respectiv 18,57% din carcasele examinate. Valorile obinute pentru coliformi au fost cuprinse ntre 2,04 i 3,98 log cfu/cm2, distribuia acestora fiind strns corelat cu cea evideniat n cazul valorilor NTG. n ceea ce privete regiunile corporale examinate, coliformii au fost prezeni n mod constant pe suprafaa picioarelor, tot aici nregistrndu-se i valorile cele mai mari (Tabel 2).
Tabelul 2 2 Valorile indicatorului coliformi/cm pe diferite regiuni ale carcaselor de pasre pe parcursul fluxului tehnologic de prelucrare n abator Etapa tehnologic Sngerare Regiunea carcasei Probe pozitive Nr. probe Nr. % 33 36 21 48 45 27 36 36 18 9 6 61,1 66,6 38,8 88,8 83,3 50,0 66,6 66,6 33,3 16,7 11,1 Probe negative Nr. 21 18 33 54 6 9 27 18 18 54 36 45 54 48 54 % 38,8 33,3 61,1 100 11,2 16,7 50 33,3 33,3 100 66,6 83,3 100 88,8 100 3,69 0,12 2,91 0,16 2,85 0,24 2,42 0,44 2,21 0,26 3,3 0,23 3,9 1,04 3,2 0,52 2,11 0,32 1,86 0,46 1,75 0,19 -
Media*
Aripi 54 Picioare 54 Piept 54 Aripi 54 Oprire Picioare 54 deplumare Piept 54 Aripi 54 Eviscerare Picioare 54 Piept 54 Aripi 54 Splare Picioare 54 Piept 54 Aripi 54 Rcire Picioare 54 Piept 54 * log UFC/cm2 eroarea standard
591
Escherichia coli, specie ncadrat n categoria coliformilor, care cuprinde i tulpini cu potenial patogen, a fost identificat mai frecvent pe suprafaa picioarelor i a aripilor imediat dup eviscerare. Valorile obinute s-au ncadrat ntre 2,03 i 3,1 log ufc/cm2 fiind n marea majoritate a cazurilor cu valorile coliformilor (Tabelul 3).
Tabelul 3 Valorile indicatorului E. coli/cm2 pe diferite regiuni ale carcaselor de pasre pe parcursul fluxului tehnologic de prelucrare n abator Etapa tehnologic Sngerare Regiunea carcasei Probe pozitive Nr. probe Nr. % 9 9 9 6 18 36 6 9 6 3 16,7 16,7 16,7 11,1 33,3 66,6 11,1 16,7 11,1 5,5 Probe negative Nr. 45 45 45 54 48 54 36 18 48 54 45 48 54 51 18 % 83,3 83,3 83,3 100 88,8 100 66,6 33,3 88,8 100 83,3 88,8 100 94,5 100 1,23 0,18 1,51 0,12 1,31 0,42 1,12 1,41 1,40 0,22 1,82 0,63 1,33 0,09 1,10 0,10 1,02 0,09 1,12 0,02 -
Media*
Aripi 54 Picioare 54 Piept 54 Aripi 54 Oprire Picioare 54 deplumare Piept 54 Aripi 54 Eviscerare Picioare 54 Piept 54 Aripi 54 Splare Picioare 54 Piept 54 Aripi 54 Rcire Picioare 54 Piept 54 2 * log UFC/cm eroarea standard
Rezultatele obinute n cazul celor doi indicatori - coliformi i E. coli relev un procent uor mai ridicat de probe pozitive dect cele publicate de ali autori. Acest fapt se explic prin condiiile de prelucrare i folosirea unor utilaje mai puin performante n abatorizarea psrilor. CONCLUZII Studiul a relevat c din punct de vedere microbiologic etapele care contribuie cel mai mult la contaminarea carcaselor de pasre n abatorul sunt sngerarea i eviscerarea, etape care necesit o atenie deosebit pentru a reduce gradul de contaminare a carcaselor n abatoare. Dintre regiunile corporale analizate, picioarele reprezint regiunea cu cele mai mari deficiene din punct de vedere microbiologic, furniznd cel mai des rezultate pozitive la parametrii examinai.
592
Rezultatele obinute nu au permis stabilirea unei corelaii pozitive constante ntre NTG i cei doi indicatori ai strii de igien (coliformi i E. coli). Stabilirea unor msuri, pornind de la instruirea permanent a personalului din abatoare privind punctele critice, aplicarea unor tehnologii performante i ntreinerea n stare bun de igien i de funcionare a instalaiilor i a spaiilor sunt absolut necesare pentru reducerea contaminrii carcasei i mbuntirea calitii microbiologice a crnii de pasre.
BIBLIOGRAFIE
Anand, S.K., Mahapatra, C.M., Pandey, N.K., Verma, S.S., 1989 - Microbial changes on chicken carcasses during processing. India Journal of Poultry Sciences 24: 203-209. 2. Brzoi, D., Apostu, S., 2002 - Microbiologia produselor alimentare Ed. RISOPRINT, Cluj-Napoca, 124-133. 3. Berrang, M.E., Ladley, S.R., Buhr, R.J., 2001 - Presence and level of Campylobacter, coliforms, E. coli and total aerobic bacteria from broiler parts with and without skin. Journal of Food Protection 64: 184-188. 4. Carp-Crare M., indilar E., Guguianu Eleonora, 1991 - Unele aspecte privind portajul cu Yersinia enterocolitica i Campylobacter jejuni la gin. Lucr. tiinifice U..A.M.V. Iai, 33-34: 156-159. 5. Kotula, K.L., Pandya, Y., 1995 - Bacterial contamination of broiler chickens before scalding. Journal of Food Protection 58: 1326-1329. 6. indilar E., Grecianu Al., Verde Elena, Carp-Crare M., 1988 - Izolarea i identificarea microflorei psichrotrofe de pe carcasele de pasre conservate prin frig. Lucr. tiinifice U..A.M.V.Iai, 31: 81-83. 7. indilar E., Grecianu Al., Carp-Crare M., Negrea A., Bondoc I., 1994 - Unele aspecte privind reducerea gradului de poluare microbian a crnii de pasre, Lucr. tiinifice, U..A.M.V.Iai, 37: 101-106. 8. indilar E., Bondoc I., Moroan .Z., indilar E.V., 1997 - Unele aspecte privind sursele de poluare microbian a carcaselor de pui broiler I, Lucr. tiinifice U..A.M.V.Iai, 40: 80-93. 9. indilar E., Bondoc I., indilar E.V., 1997 - Unele aspecte privind sursele de poluare microbian a carcaselor de pui broiler II, Lucr. tiinifice U..A.M.V.Iai, 40, 9499. 10. Vayda, V.M., Paturkar, A.M., Waskar, V.S., Zende, R.J., Rawool, D.B., 2005 Detection of indicator microorganisms on poultry carcass sites in an organized slaughterhouse. Journal of Muscle Foods 16: 289-297. 11. Yashoda, K.P., Sachindra, N.M., Sakhare, P.Z., Rao, D.N., 2001 - Microbiological quality of broiler chicken carcass processed hygienically in a small scale poultry processing unit. Journal of Food Quality 24: 249-259. 1.
593
APLICAREA SISTEMULUI HACCP NTR-UN ABATOR DE PORCI DIN REGIUNEA DE NORD-EST A ROMANIEI
IMPLEMENTATION OF THE HACCP SYSTEM IN THE PORK SLAUGHTERING HOUSE IN NORD-EAST REGION OF ROMANIA
Gh. BRDAN, B. PSRIN U.S.A.M.V. Iasi From November 2005 to July 2006, the hazard analysis, critical control points (HACCP) system was implemented to the benefit of the swine abattoir in Nord-Est region of Romania. The technological process was initially analyzed and the samples for bacteria indicators were realized. Microbiological analyses revealed a poor sanitary quality of samples from all the production lines tested. Implementation of HACCP method resulted in reduction of microbiological contamination, but this decrease was not significant compared with other steps of process. This method, which in effect seeks to plan out unsafe practices, differs from traditional "produce and test" quality assurance methods which are less successful and inappropriate for highly perishable foods.
Key worlds: HACCP, pig, slaughtering house, management system.
INTRODUCERE Politica siguranei alimentelor din cadrul Uniunii Europene ia n considerare ntregul lan al alimentelor/furajelor destinate consumului uman, respectiv furajrii animalelor (4). Reglementrile aprute n ultimii ani subliniaz responsabilitatea productorilor i a furnizorilor n ceea ce privete participarea lor la asigurarea calitii alimentelor (6). Sistemul HACCP este un demers raional preventiv pentru a garanta sigurana sanitar a alimentelor, prin supravegherea deosebit i inerea sub control a acelor etape ale procesului tehnologic care sunt eseniale pentru eliminarea contaminanilor periculoi pentru sntatea consumatorilor (1). n timp ce programele tradiionale de supraveghere a siguranei alimentelor erau concepute pentru a identifica problemele n produsul finit, HACCP este implementat pentru a identifica riscurile poteniale i a garanta inerea lor sub control n timpul procesului de producere sau de transformare a alimentelor (2). Pentru carnea de porc, cele mai multe cauze raportate ale mbolnvirilor datorate alimentelor obinute pe baza acesteia sunt de origine microbiologic (5). Microbii sunt prezeni pretutindeni i pot intra n lanul alimentar n orice punct al acestuia.
594
Lucrarea de fa are ca obiectiv s prezinte eficacitatea implementrii sistemului HACCP ntr-un abator de porci, pentru a garanta a sigurana sanitar a crnii, evalund riscul contaminrii microbiologice. MATERIAL I METODA
Studiul s-a desfurat ntr-un abator de dimensiuni medii situat n regiunea de Nord-Est a Romniei, n trei etape, din luna noiembrie 2005 i pn n iulie 2006. Conducerea ntreprinderii a decis efectuarea acestui demers, att pentru a respecta cerinele legislative (6, 7), ct i din dorina de a garanta clienilor o carne de calitate i sigur din punct de vedere sanitar. n prima etap, dup realizarea unei diagrame de producie, preciznd manipulrile necesare fiecrei etape a fluxului tehnologic, timp de trei sptmni a fost evaluat nivelul de igien al muncitorilor, curenia spaiilor de producie i condiiile de lucru din ntreg abatorul. Au fost efectuate prelevri sanitare sptmnale din numeroase puncte de lucru pentru a stabili gradul de contaminare bacteriologic, cuprinznd cinci markeri: flora total mezofil, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, Salmonella sp. n a doua etap s-a analizat i s-a conceput un sistem bazat pe principiile HACCP, n dousprezece etape, conform recomandrilor lui Codex alimentarius (3, 5). Pentru implementarea sistemului s-a dispus realizarea de investiii materiale, prin schimbarea unor mijloace de producie dar i instruiri ale personalului, mai ales formare pe tema bunelor practici de producie i a respectrii regulilor de igien personal i tehnologic. Dup analiza pericolelor i stabilirea riscurilor, echipa desemnat de conducerea ntreprinderii pentru realizarea planului HACCP, a identificat etapele din fluxul tehnologic n care aceste riscuri pot fi inute sub control. Stabilirea punctelor critice de control a fost realizat prin schema de ntrebri succesive ale arborelui de decizie (3). Fiecrui punct critic de control i s-au stabilit anumii parametrii tehnologici, limite critice, care permiteau supravegherea precum i un sistem de monitorizare i de nregistrare a lor. Fiecrui post de lucru i mai ales celor considerate ca fiind critice pentru inerea sub control a siguranei sanitare a alimentelor, au fost concepute instruciuni de lucru i proceduri care au fost discutate cu cei implicai. Au fost desemnate responsabiliti clare att pentru aciunile de monitorizare ct i pentru activitile preventive, corective i de verificare. n ultima etap a studiului s-a controlat stabilitatea sistemului prin supravegherea ntregului flux tehnologic. Pentru verificarea eficienei din punct de vedere bacteriologic, timp de trei sptmni au fost efectuate prelevri,n regim matinal, de pe suprafee ale ustensilelor i ale carcaselor, prin metoda clasic a testelor de sanitaie, care au fost trimise aceluiai laborator de bacteriologie, acreditat, cu respectarea cerinelor referitoare la evitarea contaminrii. Toate analizele bacteriologice au fost iniiate n maxim o or din momentul sosirii n laborator, pentru aceiai cinci markeri din prima etap. Analizele bacteriologice au utilizat metodele normalizate, oficiale. Rezultatele au fost exprimate n uniti formatoare de colonii (ufc) pentru unitatea 595
de suprafa. Interpretarea global a analizelor a inut cont de nivelul valorilor admisibile, aprobate de reglementrile legale n vigoare.
REZULTATE I DISCUII Prima etap, caracterizarea stadiului de igien a personalului i al spaiului de producie, a prezentat numeroase neajunsuri, mai ales n cazul echipamentelor care erau vechi, improprii sectorului agro-alimentar, mai ales conveierul i pereii, tavanul i pardoseala halelor. Toate eantioanele prelevate au prezentat o depire a nivelului acceptabil pentru flora mezofil total la 300C. Au fost identificate microorganisme potenial patogene, mai ales Escherichia coli i Salmonella spp. Investiiile materiale au constat din renovarea halelor de producie, a sistemelor de evacuare a efluenilor i de ventilaie, readaptarea fluxurilor de materiale i de personal pentru evitarea contaminrilor ncruciate i separarea zonelor murdare de cele curate ale abatorului. A fost achiziionat o nou camer frigorific cu sisteme de monitorizare a temperaturii, umiditii i curenilor de aer. La fiecare post de lucru au fost instalate sterilizatoare pentru cuite, cu ap fierbinte peste 830C, i o chiuvet pentru igiena minilor, dotat cu robinet acionat cu genunchiul. Personalul a primit un echipament adecvat precum i o instruire corespunztoare. Dup punerea la punct a acestor prealabile de infrastructur i operaionale, s-a trecut la conceperea sistemului HACCP de sigurana alimentar. S-a pornit de la caracterizarea produsului cu evidenierea tuturor caracteristicilor importante pentru sntatea consumatorului. Au fost evideniate constrngerile legale i contractuale ale ntreprinderii, precum i destinaia prevzut pentru carcasele de carne. De asemenea au fost evideniate caracteristicile materiilor prime porcii destinai pentru sacrificare i materialele care vin n contact cu alimentul, mai ales apa potabil. S-a constatat c la nivelul fermelor nu exist tehnici de gestiune care s permit reducerea populaiilor de ageni patogeni; doar o bun igien i respectarea biosecuritii la nivelul fermei precum i pstrarea strii de sntate a animaleor sunt exigenele inconturnabile pentru reducerea populaiilor de microorganisme. Principalele manipulri care se efectueaz n abator, importante pentru garantarea siguranei crnii i organelor interne, au fost descrise, insistndu-se asupra celor care ar permite inerea sub control a anumitor pericole n etape ale fluxului tehnologic. Analiza riscurilor asociate abatajului de porcine a fost realizat innd cont de gradul de periculozitate al acestora dar i de probabilitatea lor de realizare. Au fost identificate ase puncte critice (CCP) n care se pot ine sub control riscurile biologice, chimice i fizice: recepia porcilor, splarea de dup oprire i prlire, eviscerarea, controlul veterinar al crnii i organelor interne, toaletarea carcaselor i rcirea crnii i organelor.
596
Pentru fiecare punct critic de control au fost stabilite elemente de monitorizare i limite critice pentru a garanta inerea sub control a riscurilor. Au fost precizate i aciunile corective necesare a fi luate n cazul depirii limitelor critice. Procedurile i instruciunile de lucru au fost documentate iar nregistrrile arhivate pentru a demonstra viabilitatea sistemului iar verificarea funcionrii sale a fost realizat periodic. Dup implementarea sistemului HACCP s-a realizat cea de-a treia etap a acestui studiu, respectiv verificarea funcionrii acestuia, insistndu-se pe analiza microbiologic a carcaselor i a suprafeelor de lucru. Igiena mediului de lucru a fost considerat corect n toate etapele de fabricaie, la fel ca i starea de igien a materialului utilizat (cuite, crlige). Carcasele de porc obinute au avut o ncrctur microbian mai redus comparativ cu cea descris nainte de implementarea sistemului HACCP, fr s fie semnificativ statistic. Constatarea unei reduceri a nivelului de ncrctur bacterian la nivelul suprafeelor carcaselor a confirmat datele literaturii de specialitate (5). Implementarea sistemului HACCP a fost corect perceput i total acceptat de ctre angajaii abatorului, participarea i implicarea activ a acestora permind buna desfurare a produciei n condiiile sanitare nou create, fiind vorba i de un produs alimentar supus unor norme reglementare stricte (6, 7). CONCLUZII Analiza rezultatelor obinute dup implementarea unui sistem de siguran a alimentelor bazat pe principiile HACCP ntr-un abator de porci demonstreaz c garantarea producerii de carne i de organe interne de porc sigure din punct de vedere sanitar se realizeaz doar prin implicarea activ a productorilor i a transformatorilor, de la ferme i din abator. Riscurile microbiologice amintite n acest articol trebuie s motiveze autoritile pentru a ntri supravegherea sanitar a unor astfel de ntreprinderi, conform reglementrilor actuale, n care autocontrolul este principiul esenial. Educaia sanitar a personalului i promovarea igienei personale sunt componente de baz pentru implementarea cu succes a principiilor analizei i inerii sub control a riscurilor sanitare. Igiena alimentar din abatoarele de porci trebuie considerat de manier integrat n programul general de supraveghere sanitar a zonei n care se afl ntreprinderea (5), considernd-o ca o raportare fa de furnizarea apei potabile, de tratarea apelor uzate, de ntreinerea mediului nconjurtor etc., probleme care merit toat atenia pentru a garanta populaiei i mediului o stare de sntate durabil.
597
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Apostu S., 2004 Managementul calitii alimentelor. Sisteme moderne pentru asigurarea calitii alimentelor, Editura Risoprint, Cluj-Napoca, pp.16-17. Brdan Gh., 2006 Sigurana alimentelor, lucrri practice, FMV Iai, sept.- dec. Codex alimentarius - Systme d'analyse des risques - Points critiques pour leur matrise (HACCP) et Directives concernant son application (Appendice) Comisia european - sigurana alimentelor: http://europa.eu.int/comm/food/ index_fr.htm Generic HACCP Model for Pork Slaughter http://www.fsis.usda.gov/OPPDE/ nis/outreach/models/HACCP-14.pdf. Rglement (CE) N 852/2004 du Parlement Europen et du Conseil du 29 avril 2004 relatif l'hygine des denres alimentaires. Rglement (CE) 853 du Parlement Europen et du Conseil du 29 avril 2004 fixant des rgles spcifiques dhygine applicables aux denres alimentaires dorigine animale.
598
EVALUAREA I CONTROLUL RISCURILOR ASOCIATE PROCESRII CRNII PENTRU IMPLEMENTAREA SISTEMULUI HACCP
CONTROL AND EVALUATION OF RISKS ASSOCIATED WITH MEAT PROCESSING IN THE CONTEXT OF HACCP SYSTEM IMPLEMENTATION
L. ILIE, C. SAVU, Carmen PETCU U.S.A.M.V. Bucureti The industrial meat processing leads to the decrease of vitamin, macro elements and trace elements content, which are followed by a significant lower intake and the appearance of nutritional diseases. Likewise, due to a prolonged technological processing of meat, there can be noticed a decrease of certain mineral levels caused by the excessive use of polyphosphates, accompanied by a visible increase of other mineral levels. The evaluation of the risks associated with prime materials and ingredients fabrication, processing, handeling, storing, distribution, dishes preparation and consumption is considered the first step in HACCP (Hazard Analysis and Critical Control Points) evaluation procedure. This system aims at identifying and monitoring certain critical control points of the technological process.
Key words: quality, risk, processing, quality maintenance.
Specia uman, pe parcursul existenei sale i-a dezvoltat un metabolism i un echipament enzimatic complex care i permit s digere alimente procesate termic, alimente care pentru diferite specii de animale omnivore sau carnivore sunt greu de utilizat. Prelucrarea alimentului a determinat o serie de modificri structurale ale acestuia (prelucrarea alimentului duce la distrugerea compoziiei materiilor prime sau chiar la dispariia unor componeni), iar prelucrarea industrial a determinat reducerea la minimum a celulozei i a fibrelor alimentare din structura alimentelor, compui considerai iniial indezirabili i lipsii de valoare trofic, ns lipsa acestora a determinat n timp apariia tulburrilor intestinale i a altor afeciuni (constipaii cronice, diskinezii biliare, hipercolesterolemii, afeciuni cardiovasculare etc.) Procesarea industrial a crnii duce la scderea coninutului n vitamine, macroelemente i microelemente, situaie care determin reducerea aportului i apariia unor afeciuni careniale. De asemenea, datorit tehnologizrii crnii se constat un nivel sczut de anumite sruri minerale ca urmare a folosirii n exces a polifosfailor i creterea altor categorii de sruri minerale. Fosfatul tricalcic n exces determin scderea absorbiei fosforului la nivel intestinal i totodat reduce capacitatea metabolic de utilizare a acestuia la nivel organic.
599
Evaluarea riscurilor asociate cu obinerea materiilor prime i a ingredientelor, prelucrarea, manipularea, depozitarea, distribuia, prepararea culinar i consumul produselor alimentare reprezint primul pas n implementarea sistemului HACCP (Hazard Analysis and Critical Control Points), sistem care i propune s identifice i monitorizeze anumite puncte critice de pe traseul procesului tehnologic. inerea sub control a parametrilor care caracterizeaz aceste puncte critice i msurile corective aplicate, garanteaz securitatea alimentelor obinute. MATERIAL I METOD
Evaluarea riscurilor, primul principiu al sistemului HACCP, vizeaz identificarea pericolelor i modului n care acestea pot fi reduse sau eliminate. Analiza riscurilor este asociat cu monitorizarea aciunilor de obinere i recoltare a materiilor prime i auxiliare, de prelucrare, manipulare, depozitare i distribuie, inclusiv prepararea culinar i consumul produselor alimentare. Un potenial risc este considerat un agent biologic, fizic sau chimic, care prin proprietile sale poate compromite sigurana unui aliment. Evaluarea riscurilor se realizeaz n dou etape: evaluarea tipului de produs n funcie de riscurile asociate acestuia; evaluarea riscurilor n funcie de severitate. Includerea produsului ntr-o anumit categorie de periculozitate se face pe baza urmtoarelor caracteristici: produsul conine sau nu ingrediente sensibile; fluxul tehnologic presupune sau nu o etap n care este posibil distrugerea eficient a microorganismelor periculoase sau a celorlalte riscuri identificate; exist un risc major de contaminare a produsului dup ncheierea procesului de fabricaie; exist pericolul unei manipulri necorespunztoare n timpul transportului, vnzrii i pregtirii culinare care s fac produsul periculos pentru consum; dup ambalare, produsul necesit tratamente termice sau pregtire culinar.
REZULTATE I DISCUII Analiza riscului: activitatea de colectare i evaluare a informaiilor privind riscurile i condiiile care duc la apariia lor pentru a decide care dintre acestea sunt relevante pentru sigurana alimentului i care vor fi abordate n planul HACCP. Pericolele biologice sunt clasificate n urmtoarele categorii: bacteriene, virale sau parazitologice. Majoritatea produselor alimentare sunt un substrat ideal pentru dezvoltarea microorganismelor, n special atunci cnd acestea sunt pstrate perioade ndelungate la temperatura mediului ambiant.
600
Principalul obiectiv va fi aplicarea de msuri preventive n scopul distrugerii, eliminrii sau reducerii riscurilor, prevenirii recontaminrii i inhibrii dezvoltrii microorganismelor precum i a producerii de toxine. Microorganismele pot fi distruse prin tratament termic (pasteurizare sau sterilizare) sau inhibare prin refrigerare, congelare, uscare, adugarea unor conservani. Dup eliminarea microorganismelor, trebuie luate msuri pentru prevenirea recontaminrii. n situaia n care microorganismele nu pot fi total eliminate din produsele alimentare, vor fi luate msuri de inhibare a dezvoltrii microorganismelor remanente i a producerii de toxine. Dezvoltarea microorganismelor poate fi inhibat prin caracteristicile intrinseci ale produselor, prin adugarea de sare sau ali conservani sau alegerea unor metode de ambalare i temperaturi de depozitare corespunztoare. Pericole chimice: dei se cunoate faptul c toate substanele chimice pot fi toxice la o anumit concentraie, producia modern de alimente nu poate fi conceput fr utilizarea substanelor chimice. n tabelul 1 este prezentat clasificarea substanelor chimice prezente n produsele alimentare, care pot constitui un risc la adresa sntii consumatorilor.
Tabelul 1 Categorii de risc chimic Substane chimice naturale Micotoxine (ex. aflatoxine) Scombrotoxina (histamina) Ciguatoxina Toxine din ciuperci Toxine din crustacei (toxina crustaceica paralitica, diareica, neurotoxica, amnezica) Alcaloizi pirolizidinici Fitohemaglutinine Fenoli policlorurati Substane chimice agricole Pesticide, fungicide, ngrminte, insecticide, antibiotice, hormoni de cretere Substane interzise Metale toxice i combinaii ale acestora Pb, Zn, As, Hg, cianuri Aditivi alimentari Direci conservani, poteniatori de arom, aditivi nutriionali, colorani Indireci substane provenite de la utilaje : lubrifiani, ageni de curire i dezinfecie, substane de acoperire, vopseluri Substane chimice adugate intenionat (sabotaje)
Substane chimice adugate
n funcie de doza care a fost ingerat, aceste substane chimice pot determina mbolnvirea sau moartea imediat a consumatorului sau n timp, prin
601
acumularea lor n organism. n tabelul 2 sunt prezentate cteva modaliti de prevenire a apariiei riscurilor chimice la procesarea crnii.
Tabelul 2 Modaliti de meninere sub control a pericolelor chimice Control nainte de recepie Control nainte de utilizare Controlul condiiilor de depozitare i manipulare Inventarierea substanelor chimice existente Precizarea compoziiei materiei prime; Certificate de calitate emise de ctre furnizor; Teste de recepie. Stabilirea scopului utilizrii substanelor chimice; Verificarea calitii substanelor utilizate; Verificarea cantitii utilizate. Meninerea substanelor chimice n condiii conforme cu precizrile din avizele de nsoire ale acestora. Efectuarea unui inventar al substanelor chimice necesare, al dozelor i modului de utilizare a acestora.
Pericole fizice: orice particul sau corp fizic ce nu se gsete n mod normal n aliment i care poate provoca mbolnvirea sau rnirea unei persoane, constituie un risc fizic. Acest lucru se explic nu att prin periculozitatea pe care o prezint corpurile strine, ci mai ales prin faptul c ele pot fi uor detectabile i observabile cu ochiul liber. Cele mai rspndite corpuri strine sunt prezentate n tabelul 3.
Tabelul 3 Principalele pericole fizice Material Sticla Lemn Pietre Achii metalice Insecte Oase Plastic Efecte personale Efecte asupra consumatorului Tieturi, sngerare Surse Ambalaje, corpuri de iluminat, ecrane ale aparatelor de msur Terenuri, palei, cutii, cldiri Terenuri, cldiri Utilaje, terenuri, cabluri, lucrtori Terenuri, mediul de lucru Terenuri, prelucrare neglijent Terenuri, ambalaje, palei, angajai
Tieturi, nepturi Rniri Tieturi, infecii mbolnviri, traume Rniri, traume Rniri, tieturi, infecii Rniri, tieturi, spargerea Angajai dinilor
n general, prin practici bune de lucru aceste riscuri fizice pot fi prevenite cu uurin. Monitorizarea este o secven planificat de observaii i msurtori, realizate pentru a putea aprecia dac un punct critic de control este sub control i se finalizeaz printr-o nregistrare exact, utilizat ulterior n procesul de verificare.
602
Monitorizarea este esenial n managementul siguranei alimentelor. Dac monitorizarea indic o tendin de pierdere a controlului n punctele critice ale procesului de fabricaie, atunci se poate aciona pentru readucerea procesului sub control nainte de apariia unor abateri de la inocuitate. Monitorizarea este utilizat pentru a se determina momentul n care s-a pierdut controlul i au aprut abateri ntr-un punct critic de control i n acest moment, se vor aplica aciunile corective. Monitorizarea trebuie s fie capabil s detecteze orice pierdere a controlului i s furnizeze informaii n timp util, astfel nct s poat fi aplicate msuri corective, evitnd sau reducnd la minimum riscul producerii unor produse neconforme. Monitorizarea poate fi realizat prin msurtori efectuate asupra unor eantioane prelevate conform unui plan de eantionare realizat pe baze statistice sau pe baza cerinelor legale i de reglementare. Exist cinci modaliti principale de monitorizare a unui punct critic de control, i anume: observarea vizual, aprecierea senzorial, msurtori fizice, testri chimice i analize microbiologice. Pstrarea nregistrrilor este o parte integrant a monitorizrii i va demonstra c au fost urmate ntocmai procedurile de-a lungul procesului tehnologic. Existena acestor nregistrri ofer produsului i procesului o caracteristic foarte important, trasabilitatea. CONCLUZII 1. Specificitatea sistemului HACCP este dat de faptul c, n vreme ce nivelul calitativ al produselor fabricate poate fi la libera alegere a productorului sau poate face obiectul negocierii, inocuitatea produselor este un element obligatoriu. 2. Beneficiile acestui sistem sunt: sigurana produselor alimentare fabricate, utilizarea mai bun a resurselor i un rspuns mai rapid la problemele aprute n producie. 3. Este de importan vital, pentru societate i pentru consumatori, cooperarea ntre industrie, comer, organizaii ale consumatorilor i autoritile responsabile. Programele de instruire comun pot ncuraja i menine un dialog continuu ntre prile menionate i pot crea un climat de nelegere n aplicarea practic a sistemului HACCP.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. Barzoi D., Apostu S., 2002 - Microbiologia produselor alimentare, Editura Risoprint, Cluj-Napoca. Carol W., Sara Mortimore, 2001 - The HACCP Training Resource Pack, Publisher Springer.
603
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 3. 4. 5. 6. 7. 8. Deniss, R.A., 2002 - Quality Audits for Improved Performance, ASQ Quality Press. Kevin, M.Q., 2005 - A good guide to the HACCP Auditor Test, Illinois United States. Mitrea, I.S., Carmen Petcu, Savu, Gh., 2003 Sigurana alimentelor prin aplicarea sistemului HACCP, Editura Bogdana, Bucureti. Paster, T., 2006 - HACCP Food Safety Employee Manual, Publisher Wiley, John & Sons. Russell, J.P., 1999 - The Quality Audit Handbook, ASQ Quality Press. ***, 2001 - American Society for Quality - The Certified Quality Auditor's Haccp Handbook: Asq Food, Drug, and Cosmetic Division, ASQ Quality Press, 2001.
604
OBSERVAII PRIVIND MICROFLORA CRNII DE PASRE PROASPETE I REFRIGERATE

OBSERVATION CONCERNING FRESH AND REFRIGERATED POULTRY MICROFLORA
Elena Narcisa NECULI1, V. FLORITEAN2, Elena IAN3, M. CARP-CRARE2 1 D.S.V.S.A. Vaslui 2 U.S.A.M.V. Iasi 3 L.S.V.S Iai A study was carry out in order to examine the microflora of poultry carcasses before, during and after refrigeration storage on some common spoilage bacteria in the native microflora of broiler carcasses. Chilled carcasses, obtained from a commercial processing facility, were examined prior, during and after 7 days of storage at 4C. The total aerobic plate cont, coliforms, E. coli and Pseudomonas spp. in the bacterial flora were enumerated. The size of the population of spoilage bacteria on processed carcasses stored at 4 degrees C for 7days was determined. The total aerobic plate count /g, about log 3.5 on the beginning of the storage, increased by cca. 2.5 log after 7 day. Coliforms and Escherichia coli counts/g slightly decrease over this period of storage. The increase in the population of bacteria on the carcasses was the effect of phychrotrophic bacteria, Pseudomonas spp. being bacteria that have revealed the most important increasing values during the refrigeration storage.
Key words: Poultry meat, Meat refrigeration, Meat storage
Refrigerarea este la ora actual una dintre cele mai folosite metode de conservare a produselor animale de origine animal i n special a crnii, ntruct ofer consumatorului carne cu caracteristici organoleptice i nutritive foarte apropiate de cele ale crnii proaspete. Durata de conservare a crnii de pasre prin refrigerare este limitat n principal de microorganismele care contamineaz carcasa. Carnea de pasre, imediat dup prelucrarea n abator, are o ncrctur bacterian mic de ordinul a 3 - 4 log ufc/cm2 care ajunge, uneori, n reeaua de comercializare la 5 i chiar 7 log ufc/cm2, mai ales n cazul cnd intervin abuzuri ce expun carnea la aciunea nefavorabil a unor factori ce stimuleaz dezvoltarea bacterian. (2, 3, 4, 7, 9, 8, 10, 14) n plus microflora crnii de pasre refrigerat poate fi reprezentat uneori de microorganisme patogene (Salmonella spp., Listeria monocytogenes, Yersinia enterocolitica, Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus etc.) fapt care constituie un risc potenial pentru consumatori. (6, 8, 12, 13)
605
Prezenta lucrare are drept scop monitorizarea dinamicii microflorei de la suprafaa i din profunzimea crnii de pasre pstrat la temperatura de 4C, temperatur caracteristic pentru pstrarea crnii de pasre n reeaua de desfacere. MATERIAL I METODA
Cercetrile au fost efectuate n perioada iulie - octombrie 2005 pe un numr de 25 carcase de pasare provenite de la o unitate de abatorizare a psrilor din judeul Vaslui. De la carcase, imediat dup rcire, sau excizat aseptic probe de esut muscular cu si fr piele din regiunea pieptului de aproximativ 200g. Probele au fost ambalate aseptic i transportate la laborator n condiii corespunztoare pentru a se preveni modificarea caracteristicilor microbiologice ale acestora. In laborator fiecare prob a fost mprit n 8 porii mai mici (aprox. 25g) care au fost puse n plci Petri sterile i pstrate la termostat la 4C timp de 7 zile. Probele au fost examinate bacteriologic la scurt timp dup recoltare i apoi zilnic, pe toat perioada pstrrii la temperatura de refrigerare. S-a urmrit numrul total de germeni aerobi mezofili, bacteriile coliforme, E.coli i bacteriile din genul Pseudomonas. Prima diluie din care s-au preparat ulterior diluiile necesare examenului bacteriologic s-a obinut din 15 g esut muscular amestecat cu 135 ml apa peptonat steril n pungi speciale sterile i omogenizare la Stomacher timp de 5 minute. Determinarea NTG s-a efectuat pentru diluiile 10-2, 10-3 i 10-4, pe agar nutritiv, prin nglobarea a 0,1 ml inocul. Pentru fiecare diluie s-au efectuat cte dou plci. Plcile nsmnate au fost incubate la 37C timp de 24 - 48 ore. Pentru determinarea bacteriilor coliforme s-a utilizat metoda ISO 4832. n cazul ncrcturilor mici de coliformi (< de 2 log/ml) determinarea s-a efectuat prin diluii zecimale, din fiecare diluie introducndu-se cte 1 ml n cte 3 eprubete cu mediu BBLV (bulion lactozat cu sruri biliare i verde briliant) i tub Durham. S-a incubat 24 48 ore la 37 C. Interpretarea s-a fcut dup producia de gaz i calcularea mediei de 3 cifre (funcie de nota primit de fiecare din cele 3 eprubete cu mediul BBLV), media obinut fiind interpretat cu ajutorul tabelului Mac Crady. Pentru identificarea bacteriei Escherichia coli s-a utilizat metoda ISO 4832 iar pentru determinarea numrului probabil de E. coli s-a utilizat metoda SR ISO 7251. Identificarea i numrarea bacteriilor din genul Pseudomonas s-a efectuat din diluiile seriate conform ISO 13720 folosind mediul CFC (cephaloridinefucidin-cetrimide) cu incubare la 25C timp de 48 ore.
606
REZULTATE I DISCUII Studiile efectuate, pn n prezent, pentru a evalua microflora crnii de pasre proaspt i refrigerat au demonstrat marea diversitate a acesteia. Mai mult de 25 de genuri de microorganisme au fost evideniate ca fcnd parte din microflora crnii de pasre proaspete, majoritatea acestora fiind microorganisme de poluare dar i microorganisme patogene. (2, 7, 8, 10, 11, 13) Numrul total de germeni prezeni pe carcasele examinate a avut valori de 3,53 0,12 (log UFC/g eroarea standard) la scurt timp de la recoltarea probelor, valori asemntoare cu cele publicate de ali autori, dar care este mare dac inem cont c am efectuat determinrile preponderent pe esut muscular (6, 7, 10). Numrul total de germeni a crescut progresiv pe toat perioada de meninere la temperatura de 4C atingnd valori de 6,2 0,21 log ufc/g n cea dea aptea zi, moment n care am constatat i uoare modificri ale caracterelor organoleptice, carnea avnd suprafaa uor lipicioas i un miros slab acid. Coliformii sunt microorganisme Gram-negative, nesporulate, care fermenteaz lactoza i produc colonii negricioase cu luciu metalic pe mediul Endo. Coliformii sunt microorganisme ubicvitare care se folosesc, nc, n industria alimentar ca microorganisme indicator a strii de igien a fluxului tehnologic al alimentului. (2, 3, 8) n studiul efectuat coliformii au avut, iniial valoarea de 2,73 0,35, iar pe parcursul refrigerrii au sczut progresiv, lent, ajungnd la finalul celor apte zile la 2,46 0,44. Evoluia coliformilor nu este surprinztoare deoarece acetia sunt, n marea lor majoritate, microorganisme mezofile, creterea lor la temperaturi sczute fiind disgonic. (2, 3, 8) Evoluia numrului de E.coli a fost intens descresctoare fiind parametrul cel mai afectat de temperatura sczut. Astfel, dac iniial numrul de E. coli/g a fost de 2,12 0,11, reprezentnd cca. 78% din totalul coliformilor, la sfritul perioadei de pstrare a ajuns la 1,16 0,05 fiind aprox. 47% din numrul coliformilor. Dei marea majoritate a tulpinilor de E. coli izolate de la psri sunt inofensive, n cadrul speciei exist i tulpini cu patogenitate ridicat pentru om. Bacteriile din genul Pseudomonas, alturi de alte genuri (Acinetobacter, Moraxella, Enterococcus, Alcaligenes. etc), fac parte din categoria microorganismelor psichrotrofe i formeaz microflora predominant a produselor refrigerate. (1, 2, 3, 8) Aa cum era de ateptat, dei numrul iniial de Pseudomonas spp. a fost mai mic de 1 log ufc/g, acestea s-au dezvoltat bine la temperatura de 4C ajungnd la finalul testului la 3.13 0,42 ceea ce reprezint aprox. 50% din NTG. (Tabelul 1) Dup cum se poate observa, creterea NTG s-a realizat n special prin aportul microorganismelor psichrotrofe i mai puin a altor microoganisme. (Fig. 1)
607
Datele din literatur susin c la temperatura de 4-5C carnea de pasre i pstreaz nealterate caracterele organoleptice pn la 9 zile, perioad ce poate fi mrit prin reducerea temperaturii de pstrare i ambalarea carcaselor. Carnea de pasre devine inapt pentru consum datorit modificrilor organoleptice atunci cnd numrul total de germeni de la suprafaa crnii atinge valori mai mari de 7 log ufc/cm2. n condiiile studiului efectuat carnea s-a depreciat rapid datorit ncrcturii microbiene iniiale mari. Bacteriile psichrotrofe din genul Pseudomonas la care se adaug i unii coliformi din genul Enterobacter, se pot dezvolta la temperaturi sczute i prin metabolismul diversificat care induc degradarea crnii de pasre.
Tabelul 1 Evoluia parametrilor microbiologici in carnea de pasre la temperatura de 4C Parametrul NTG Coliformi Escherichia coli Pseudomonas spp.
7 6
0 3,51 2,73 2,14 <1
1 3,61 2,75 2,22 1,22
Durata de pstrare la 4C (zile) 2 3 4 5 3,84 4,27 4,35 4,66 2,78 2,64 2,61 2,53 2,15 2,11 1,83 1,55 1,48 1,92 2,33 2,64
6 5,48 2,52 1,35 2,91
7 6,22 2,46 1,16 3,10
Log CFU/g
5 4 3 2 1 0 -1 0 1 NTG 2 3 4 5 6 Coliformi 7 Escherichia coli Pseudomonas spp.
Fig. 1 Dinamica creterii microorganismelor din carnea de pasre la temperatura de 4C
CONCLUZII Microorganismele care formeaz microflora normala a crnii de pasre se pot dezvolta la temperatura de refrigerare conducnd la degradarea crnii de pasre ntr-un timp relativ scurt;
608
Microorganismele din specii psichrotrofe (genul Pseudomonas) se gsesc frecvent i n numr suficient de mare pentru a induce alterarea precoce a crnii de pasre conservate prin refrigerare; Un rol important n prelungirea perioadei de conservabilitate a crnii de pasre l are ncrctura microbian iniial, ca urmare este necesar respectarea tuturor msurilor de reducere a numrului de microorganisme prin folosirea unor tehnologii de prelucrare a psrilor n abatoare corespunztoare i prin respectarea msurilor de igien pe tot parcursul fluxului tehnologic; Se impune rcirea imediat a carcaselor de pasre, ambalarea acestora i respectarea temperaturii de refrigerare 2-4C pe tot fluxul, de la abator pn la consumator; n condiiile actuale este necesar reducerea timpului de pstrare la temperatura de refrigerare la 3 zile fapt care ar asigura calitatea crnii de pasre i ar reduce posibilitatea apariiei de neplceri consumatorilor
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. Ayres, J.C., 1960 - The Relationship of Organisms of the Genus Pseudomonas as the Spoilage of Meat, Poultry and Eggs. Journal of Applied Bacteriology 23, 471486 Barnes, E.M., Thornley, M.J., 1966 - The spoilage flora of eviscerated chickens stored at different temperatures. Journal of Food Technology 1:113-119 Brzoi D., 1986 - Microbiologia produselor alimentare de origine animal Editura Ceres, Bucureti Brzoi D., Apostu S., 2002 - Microbiologia produselor alimentare Ed. Risoprint, ClujNapoca Blood, R.M., Jarvis, B., 1974 - Chilling of Poultry: The Effects of Process Parameters on the Level of Bacteria in Spin-Chiller Waters Journal of Food Technology 9, 157-169 Cox, N. A. (1990) "The Presence of Yersinia enterocolitica and Other Yersinia Species on the Carcasses of Market Broilers" Poultry Science 69, 482-485 Elliott, R.P., Michener, H.D., 1961 - Microbiological Standards and Handling Codes for Chilled and Frozen Foods. A Review Applied Microbiology 9, 452-468 Jay, J.M., 2000 - Fresh meat and poultry in Modern Food Microbiology sixth ed. Aspen Publishers, Inc. Gaithersburg, Maryland, 59-87 Kraft, A.A., 1971 - Microbiology of Poultry Products Journal of Milk and Food Technology 34, 23-29 May, K.N., Irby, J.D., Carmon, J.L., 1961 - Shelf life and bacterial counts of excised poultry tissue. Food Technology 16, 66-68 McMeekin, T.A., 1975 - Spoilage association of chicken breast muscle. Applied Microbiology 29, 44-47 Sum, A.R. Editor, 2001 - Poultry Meat Processing CRC Press, 121-135 Sindilar E., Greceanu Al., Carp-Carare M., Elena Verdes, 1992-1993 - Investigatii experimentale privind modificarile produse de microflora psihrotrofa pe carnea refrigerata si congelata de pasare. Lucrari stiintifice, vol. 35-36, 416-420 Waldroup, A.L., 1996 - Contamination of Raw Poultry with Pathogens, World Poultry Science Journal 52, 7-25
609
INFLUENA CONDIIILOR DE CRETERE I A TRANSPORTULUI ASUPRA CALITII MICROBIOLOGICE ALE CRNII DE PASRE
INFLUENCE OF WELFARE AND TRANSPORTATION CONDITIONS ON MICROBIOLOGICAL QUALITY OF POULTRY MEAT
Elena Narcisa NECULI D.S.V.S.A. Vaslui V. FLORITEAN, M. CARP-CRARE U.S.A.M.V. Iai A study was conducted to determine effects of welfare, and transportation conditions on poultry carcasses microflora. Samples were taken from farm, from transportation vehicles and from chickens before transportation, prior to abattoir processing and from carcasses short time after defeathering. The aerobic plate count, coliforms and Escherichia coli were estimate. Under the conditions of this experiment, it appears that welfare and transportation condition do affect the level of contamination on the exterior of birds entering the processing facility. The flora identified was mainly the same and the level of contamination of carcasses was positive correlate with farm microflora and stress transportation of chickens.
Key words: Poultry meat, Poultry quality, Transportation, Welfare
Calitatea crnii de pasre este afectat de numeroi factori ce acioneaz att nainte ct i dup sacrificare. Factorii care acioneaz antemortem pot fi factori cu efect pe termen lung, pentru c acioneaz pe parcursul ntregii viei economice a psrilor (factori genetici, fiziologici, nutriionali, patologici, etc) i factori cu aciune de scurt durat care acioneaz cu preponderen pe parcursul ultimelor 24 de ore de via a psrilor (condiii de recoltare, de transport, dieta alimentar, imobilizarea, asomarea, sngerarea, etc.). Aceti factori influeneaz att greutatea carcasei i capacitatea metabolic a esutului muscular ct i calitatea microbiologic a carcasei. (1, 2, 3, 6) Aspectele care privesc factorii cu aciune de scurt durat, datorit importanei lor, au captat atenia procesatorilor de carne de pasre ntruct prin managementul corect al acestora se poate obine carne de pasre de calitate lipsit de pericole pentru consumator. (2, 5, 4) n acest studiu am urmrit modul n care unii factori de cretere din fermele de psri i transportul psrilor de la fermele de cretere la abator, influeneaz calitatea microbiologic a crnii precum i stabilirea unor msuri de corectare a deficienelor care pot conduce la deprecierea calitii crnii de pasre.
610
MATERIAL I METOD
Studiul a fost efectuat n perioada martie septembrie 2005 pe un numr de 90 pui destinai sacrificrii n cadrul unei ferme de profil din judeul Vaslui i n abatorul acesteia. Determinrile microbiologice au fost efectuate n laboratorul uzinal al unitii de tiere i n Laboratorul Sanitar Veterinar Judeean Vaslui. Puii au fost grupai n nou loturi n funcie de data atingerii greutii de sacrificare. Puii au fost crescui cte trei loturi n hale separate n condiii de microclimat diferite. Transportul s-a efectuat cu mijloace de transport autorizate prin gruparea a cte trei loturi (cte unul din fiecare hal de cretere). S-au monitorizat: microclimatul (temperatura i umiditatea) din halele de cretere pentru o perioad de 10 zile anterior sacrificrii; microbiota din halele de cretere (probe din ap, furaje, aternut i din aerul din adposturi), n ziua livrrii psrilor pentru sacrificare; durata perioadei de diet alimentar pentru fiecare lot n parte (timpul scurs din momentul sistrii furajrii n ferma de cretere pn n momentul sacrificrii); ncrctura microbian din mijlocul de transport nainte i dup transportarea psrilor la abator, calitatea microbiologic a carcaselor provenite de la pui, dup sngerare i dup oprire-deplumare. Temperatura i umiditatea s-a msurat i nregistrat cu aparatur adecvat de 4 ori pe zi, halele de cretere fiind dotate cu aparatur modern de monitorizare a parametrilor de microclimat cu posbilitatea corectrii deficienelor. Examenele microbiologice au constat n determinri ale urmtorilor parametri: NTG, bacterii coliforme, E. coli i bacterii sulfito-reductoare. Recoltarea probelor s-a efectuat cu respectarea procedurilor impuse prin standarde specifice pentru fiecare determinare. Pentru determinrile microbiologice s-au utilizat metode uzuale, impuse prin stasuri interne i internaionale, dup cum urmeaz: Pentru determinarea N.T.G - SR ISO 6610/1997; Pentru bacterii coliforme - SR ISO 4832 i tehnica MPN cnd a fost necesar; SR ISO 4832 i SR ISO 7251/1996 pentru stabilirea numrului de Escherichia coli; Determinarea numrului de bacterii sulfito-reductoare s-a efectuat pe mediul cu sulfit de sodiu i citrat de fier, topit i rcit la 45C n care sa nsmnat cte 1 ml din diluiile zecimale. S-a incubat n anaerobioz la 37C timp de 24 48 ore, dup care au fost numrate coloniile specifice. Rezultatele au fost interpretate statistic, calculndu-se media pentru fiecare lot i parametru determinat i coeficienii de corelaie caracteristici evoluiei parametrilor n condiiile studiului.
611
REZULTATE I DISCUII n perioada studiului, microclimatul din halele de cretere s-a pstrat n limite relativ constante. Temperatura, dei a nregistrat unele variaii, s-a meninut n medie, la cele nou loturi (grupate cte trei in hale diferite) ntre 20,4 i 24,6C. Umiditatea relativ a adposturilor, ca factor de confort, s-a meninut ntre 72 i 78% cu variaii relativ mari ntre zi i noapte. Cele nou loturi au fost supuse naintea sacrificrii unei diete difereniate ca timp pentru a evidenia efectul acesteia asupra calitii microbiologice a crnii. (Tabelul 1)
Variaia temperaturii i umiditii pe perioada analizat Lot 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Temperatura C Minim 18,1 18,1 18,1 19,6 19,6 19,6 20,2 20,2 20,2 maxim 22,3 22,3 22,3 23,5 23,5 23,5 25,1 25,1 25,1 media 20,4 20,4 20,4 22,1 22,1 22,1 24,6 24,6 24,6 Umiditatea relativ % minim 48 48 48 46 46 46 44 44 44 maxim 86 86 86 85 85 85 82 82 82 media 78 78 78 76 76 76 72 72 72 Tabelul 1 Durata dietei (ore) 6 8 10 6 8 10 6 8 10
n ceea ce privete microbiota adposturilor valorile cele mai mari au fost evideniate la nivelul pardoselii unde NTG a variat, n medie, ntre 5,9 i 7,5, numrul bacteriilor coliforme, ntre 3,5 i 4,9 iar bacteriile sulfito-reductoare ntre 3,1 i 3,4. Aerul i apa au fost mai puin contaminate, apa avnd un numr de coliformi ntre 1,1 i 1,6 (log UFC/cm2, g sau m3). (Tabelul 2)
Microbiota halelor de cretere a puilor destinai sacrificrii Media (log10 ufc/cm , m , ml) Pardoseal Aer B. B B. NTG B colif. NTG sulfitored Colif. sulfitored 6,2 4,2 3,1 4,8 2,5 2,1 7,5 4,9 3,4 5,6 3,4 2,7 5,9 3,5 3,3 4,3 2,1 2,6
2 3
Tabelul 2
Lot 1-3 4-6 7-9
Apa NTG 2,1 2,4 2.3 B colif. 1,6 1,2 1.1 E.coli 1,1 <1 <1
Mijloacele de transport i cutile cu care s-a efectuat transportul puilor la abator, pregtite (curate i decontaminate), au avut valori mici ale parametrilor microbiologici monitorizai, ns la determinrile fcute la abator, dup descrcarea puilor, ncrctura microbian a crescut n medie cu aproximativ 2 log. (Tabelul 3)
612
n tabelul 4 sunt prezentate valorile parametrilor microbiologici determinai dup sngerarea puilor, pentru a se putea evalua evoluia acestora. Determinrile au fost repetate i dup operaiunea de oprire deplumare, valorile obinute fiind semnificativ mai mici.
Tabelul 3 Rezultatele examenului microbiologic al mijloacelor de transport ncrctura microbian a mijloacelor de transport nainte de transport Dup transport B. B. B. B. E. coli NTG E. coli colif. sulfitored. colif. sulfitored. 2,2 1,4 2,1 5,9 4,7 3,3 2,7 2,8 1,5 2,3 6,1 4,8 3,7 2,5 2,4 1,1 3,1 6,3 4,6 3,4 2,2 1,4 2,1 5,9 4,7 3,3 2,7 2,8 1,5 2,3 6,1 4,8 3,7 2,5 2,4 1,1 3,1 6,3 4,6 3,4 2,2 1,4 2,1 5,9 4,7 3,3 2,7 2,8 1,5 2,3 6,1 4,8 3,7 2,5 2,4 1,1 3,1 6,3 4,6 3,4 Tabelul 4 Calitatea microbiologic a carcaselor de pasre n abator
2 Calitatea microbiologic a carcaselor (log10 ufc/cm ) Dup sngerare Dup deplumare B. B. B. colif. E. coli NTG B. colif. E. coli sulfitored. sulfitored. 4,3 1,5 2,4 5,1 3,6 2,1 1,7 3,8 1,4 2,8 5,2 2,4 1,2 2,2 3,7 1,4 2,1 4,6 2,4 1,5 1,9 4,5 2,1 2,2 6,3 2,8 2,2 1,5 4,2 1,7 2,9 6,1 2,6 1,8 1,2 4,1 1,5 2,3 5,5 3,1 1,4 1,6 3,6 1,2 2,7 4,8 2,1 1,1 1,1 3,5 1,1 1,2 4,1 2,2 1,6 3,9 1,3 1,5 4,2 2,4 1,6 -
Lot NTG 1 2 3 4 5 6 7 8 9 3,5 4,1 5,2 3,5 4,1 5,2 3,5 4,1 5,2
Lot NTG 1 2 3 4 5 6 7 8 9 6,8 6,5 6,2 7,5 7,1 6,7 6,2 6,3 5,9
Interpretarea statistic a rezultatelor obinute, pe parcursul tuturor punctelor enumerate, a relevat o corelaie pozitiv evident, n special, ntre valorile obinute n urma determinrilor fcute pe carcase i valorile obinute la determinrile efectuate n adposturi - pardoseal i aer (coeficient de corelaie apropiat de valoarea unitar). Rezultatele microbiologice de la carcase s-au corelat negativ dar mai puin evident cu variaiile temperaturii, cu durata dietei i cu valorile rezultatelor obinute la mijloacele de transport. (Tabele 5 i 6)
613
614
Relaia invers proporional cu durata dietei este explicabil prin faptul c psrile care au fost supuse unei diete mai lungi au tubul digestiv golit iar contaminarea pe timpul transportului este mult redus. Corelaie negativ cu temperatura se explic prin faptul c psrile consum mai puin hran atunci cnd temperatura este mai mare. Rezultatele obinute ne permite s afirmm c sursa cea mai important de contaminare cu microorganisme a carcaselor de pasre sunt psrile nsi. n ceea ce privete umiditatea, corelaia evideniat nu este elocvent ntruct variaiile constate pe parcursul studiului au fost prea mici. CONCLUZII Principalii factori cu aciune de scurt durat care afecteaz calitatea crnii de pasre, aa cum se desprinde din rezultatele obinute, sunt cei legai de igiena halelor de cretere a puilor destinai sacrificrii; Durata dietei alimentare are un rol important n obinerea unor carcase cu un grad redus de contaminare. Se recomand o dieta care s permit evacuarea coninutului intestinal, dar care s nu afecteze greutatea psrilor sau rezistena intestinelor la aciunea factorilor mecanici din cursul eviscerrii; Temperatura i umiditatea halelor de cretere, ca factori cu aciune de scurt durat, influeneaz indirect calitatea microbiologic a carcaselor prin disconfortul pe care l creeaz psrilor; Transportul puilor de la fermele de cretere la abator afecteaz calitatea microbiologic a carcaselor, mijlocul de transport fiind locul unde contaminarea ncruciat este frecvent, intensitatea acesteia fiind variabil; n contextul actual, avnd n vedere importana calitii microbiologice a crnii de pasre, se impune cu necesitate cunoaterea tuturor factorilor care pot influena acest aspect i stabilirea unor programe de supraveghere i control pentru un bun management al calitii crnii.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. Duke, G.E., Basha, M., Noll, S., 1997 - Optimum duration of feed and water removal prior to processing in order to reduce the potential for fecal contamination in turkeys, Poultry Science 76, 516 Hargis, B.M., Caldwell, D.J., Byrd, A.J., 2001 - Microbiological pathogens: live poultry considerations, in Poultry meat processing CRC Press Boca Raton Kotula, K.I., Wang, Z., 1994 - Characterization of broiler meat quality factors as influenced by feed withdrawal time. Journal of Applied Poultry Research, 3, 103 Northcutt, J., 2001 - Preslaughter factor affecting poultry meat quality in Poultry meat processing CRC Press Boca Raton, London, New - York, 5-19 indilar E., Greceanu Al., Carp-Crare M., Negrea A., Bondoc I, 1993 - Unele aspecte privind reducerea gradului de poluare microbiana a crnii de pasre. Lucrari stiintifice I.A.I., vol. 35-36, 101-106 Warriss, P.D., Wilkins, L.J., Knowles, T.J., 1999 - The influence of ante-mortem handling on poultry meat quality in Poultry Science Symposium, vol. 25, CABI Publishing, U.K.
615
IMPLEMENTAREA PROCEDURILOR DE IGIENIZARE N VEDEREA CERTIFICARII SISTEMULUI DE MANAGEMENT AL SIGURANEI ALIMENTELOR N UNITI DE PRELUCRARE A PETELUI
ADOPTING SANITATION PROCEDURES IN ORDER TO CERTIFY FOOD SAFETY MANAGEMENT SYSTEM IN FISH PROCESSING UNITS
Carmen PETCU, C. SAVU, L. ILIE, Elena MITRNESCU, Camelia PAPUC U.S.A.M.V. Bucureti The sanitation of production areas in fish processing units holds an important role in assuring safe products for the consumers. In order to prove that one has the knowledge of sanitation practices, there must be developed a specific protocol or a handbook for good hygienic practices, which must include the following: production and storing areas; equipment and packaging materials; personnel as well as working and protection equipment; facilities (looker rooms, sinks, toilets, working equipment); means of transportation auto vehicles; infrastructure (buildings, water supply network, and for evacuating residual, technological and disposable water); yard [1, 3]. Also, proper personnel instruction must be done and proved through providing a signed form; the proof of strict implementation of this procedure consists of registered adequate statements.
MATERIAL I METOD
Procedura general ntocmit pentru meninerea sub control a strii de igien, vizeaz toate locaiile i cuprinde modul de igienizare pentru: spaii de producie i depozitare; utilaje i ambalaje; personal i echipament de lucru i protecie; faciliti (vestiare, chiuvete, toalete, ustensile); mijloace auto de transport; infrastructur (cldire, reelele de alimentare cu ap i de evacuare ape reziduale tehnologice i menajere); curte [1, 3]. n vederea ntocmiri unei proceduri de igienizare sunt necesare o serie de documente de referin i conexe. Documente de referin pot fi reprezentate de: SR EN ISO 9000 : 2001 Sisteme de management ale calitii. Principii fundamentale, vocabular; SR EN ISO 9001 : 2001 Sisteme de managementul calitii. Cerine; DS 3027 E : 2002 Cerine privind sistemul de securitate alimentar conform principiilor HACCP; SR EN ISO 22000 : 2005 - Sisteme de management al siguranei alimentelor. Cerine pentru orice organizaie din lanul alimentar [5, 6]. Documentele conexe vizeaz o serie de normative legale i de reglementare care includ H.G. 1198/oct 2002 Privind aprobarea Normelor de igien a produselor alimentare, OMS 976/1998 pentru aprobarea normelor de igien privind producia, prelucrarea, depozitarea, transportul i desfacerea 616
alimentelor [7]; Ghidul privind curenia, dezinfecia i sterilizare n unitile de asisten medical Institutul de Sntate Public Bucureti; OMSF 933/2002; H.G. 924/2005 privind aprobarea Regulilor generale pentru igiena produselor alimentare; H.G. nr. 954/2005/CE privind aprobarea Regulilor specifice de igien pentru alimente de origine animal care transpune n legislaia naional Regulamentul 853/2004/CE, publicat n Monitorul Oficial nr. 805/05.09.2005 etc. Prin documentarea i aprobarea unei proceduri privind igienizarea sunt stabilite responsabiliti i limite de execuie a manoperelor necesare inerii sub control a condiiilor de igien. Toate procedurile din unitatea de producie vor fi codificate conform Procedurii de control a documentelor din organizaie. Procedura privind igienizarea va fi identificat astfel: PG (Procedur General) IG (Igienizare) 09 (numrul de ordine al procedurii), iar formulare vor prelua codul procedurii care l-a introdus, urmat de litera F (Formular) i dou cifre ce vor reprezenta numrul de ordine al formularului ntocmit. Ex.: PG-IG-09-F-01 este primul formular introdus de procedura de igienizare cu numrul 09 din cadrul Sistemului de management al siguranei alimentelor HACCP. Managementul unitii stabilete, prin decizie sau prin trecerea responsabilitilor n Fia de post, un responsabil care urmrete buna funcionare a reelelor de evacuare a apelor reziduale tehnologice i menajere. Acesta completeaz fia de urmrire a reelelor de evacuare ape reziduale i dispune corecii sau aciuni corective n cazul apariiei defeciunilor, precum i aciuni preventive pentru evitarea apariiei acestora. La recoltarea probelor de ape uzate este necesar prezena unui reprezentat al unitii care completeaz registrul de recoltri, iar buletinele de analiz se arhiveaz i se pstreaz un timp stabilit conform procedurii care reglementeaz pstrarea nregistrrilor. Igiena infrastructurii se va realiza conform programului de igienizare, iar persoana desemnat ca responsabil, va urmri realizarea acestuia i va stabili materialele, modul i momentul igienizrii infrastructurii astfel nct s nu fie afectat procesul de producie. Igiena utilajelor, a instalaiilor tehnologice i a ambalajelor se realizeaz cu respectarea Regulilor de buna practica pentru igienizare a acestora. Se va stabili frecvena cu care se igienizeaz fiecare utilaj, responsabilul cu igienizarea, substana folosit, concentraia substanei, modalitatea de utilizare (timp de aciune, timp de contact cu suprafeele, temperatura apei folosit la diluii, conduita de dup aplicare etc). Medicul veterinar al unitii de producie organizeaz i verific fia de urmrire zilnic a strii de igien a utilajelor i facilitilor, cod PG-IG-09-F-01, completat de responsabilul desemnat, instruit n acest sens i dispune corecii i aciuni corective n cazul n care utilajele nu sunt igienizate corespunztor; asist i nscrie n registrul de recoltare a testelor de sanitaie prelevarea de ctre organele de control abilitate a acestora i va urmri rezultatele [2, 3]. Este necesar dovada de inere sub control a strii de igien i sntate a personalului prin ncheierea unui contract cu un medic de medicina muncii i prin efectuarea analizelor medicale periodice, dovedite prin meninerea la zi a carnetelor de sntate pentru fiecare angajat n parte. Mai mult dect att, un 617
responsabil stabilit i instruit corespunztor, verific starea de igien i sntate a personalului i completeaz fia zilnic de urmrire, cod. PG-IG-09-F-02. n cazul n care se constat nereguli, lucrtorul respectiv nu va fi admis la lucru n spaiile de producie sau depozitare. inerea sub control a strii de igien a mijloacelor de transport auto se realizeaz conform programului de igienizare a mijloacelor auto i cu respectarea prevederilor OMS 976/1998-art.43 [4, 7]. oferul are obligaia de a prezenta mijlocul auto la rampa de igienizare conform programului de igienizare, iar dup efectuarea igienizrii, va prezenta executantului igienizrii carnetul cu evidena igienizrilor, pentru al tampila. Se poate accepta orice modalitate de lucru care s dovedeasc faptul c aciunile de igienizare sunt efectuate, iar corectitudinea manoperei este verificat. Este necesar stabilirea unei persoane care face selecia furnizorilor i substanelor dezinfectante, recepia substanelor dezinfectante i apoi completeaz registrul intrrilor de substane chimice de igienizare. Aceeai persoan sau un alt reprezentat este instruit cu privire la modul de preparare a soluiilor (conform instruciunilor de folosire) pe care le distribuie ori de cte ori este nevoie, verificarea acestuia fiind efectuat de un specialist. Ustensilele necesare aciunilor de igienizare din spaiile de producie sunt identificate i depozitare ntr-un loc special amenajat. De asemenea, nu trebuie omis o instruciune de lucru care sa stabileasc modalitatea de igienizare a ustensilelor folosite la igienizare.
REZULTATE I DISCUII Meninerea strii de igien a spaiilor de lucru sau depozitare, a facilitilor, utilajelor, ustensilelor, precum i starea de igien a personalului angajat poate fi meninut i dovedit prin documentarea unei proceduri generale de igienizare (PG-IG-09) i meninerea unor nregistrri care s fac dovada efecturii aciunilor ntreprinse. n toate unitile de producie unde se dorete implementarea i certificarea sistemului de management al siguranei alimentare sunt stabilite atribuii i responsabiliti pentru toi angajaii, ncepnd cu managementul de vrf i pentru toate activitile necesare. Managementul de vrf aprob programul de igienizare curte i vecinti ale tuturor locaiilor; aprob programul de igienizare infrastructur; aprob programul de igienizare a utilajelor i ambalajelor; necesarul de substane chimice de igienizare i ustensile de igienizare; aprob programul de igienizare faciliti; aprob programul de igienizare spaii de depozitare i producie; aprob programul de igienizare mijloace auto i aloc fondurile necesare bunei desfurri a acestor activiti. Echipa de igienizare sau un responsabil desemnat, ntocmete programul de igienizare curte i vecinti ale tuturor locaiilor; distribuie n toate locaiile programul aprobat de igienizare curte i vecinti; solicit necesar de ustensile i
618
substane pentru realizarea programului de igienizare curte i vecinti; numete, instruiete i verific realizarea programului de igienizare a curii i vecintilor seciei. Medicul veterinar ntocmete programul de igienizare a utilajelor i ambalajelor; ntocmete programul de igienizare al mijloacelor auto; stabilete substanele chimice de igienizare de achiziionat; vizeaz i supune aprobrii necesarul de substane chimice de igienizare i ustensile de igienizare; ntocmete programul de igienizare faciliti; ntocmete programul de igienizare spaii de depozitare i producie; instruiete personalul i verific realizarea programului de igienizare a utilajelor i ambalajelor; ine sub control carnetele de sntate a personalului,verific starea de igien i sntate a personalului i completeaz fia de urmrire etc. eful de secie organizeaz activitatea de igienizare a echipamentelor de lucru i protecie; verific zilnic starea de igien a facilitilor i completeaz fia de urmrire zilnic a strii de igien a facilitilor; instruiete i verific efectuarea programului de igienizare spaii de producie i depozitare;. Responsabilul cu igienizarea gestioneaz i completeaz registrul intrrilor de substane chimice de igienizare; completeaz registrul preparrilor soluiilor de igienizare; completeaz fia de urmrire zilnic a strii de igien a utilajelor i ambalajelor; solicit necesar de substane chimice de igienizare i ustensile de igienizare etc. Pentru a exista dovada ca ceea ce este scris n proceduri i instruciuni de lucru se respecta n practic, se fac nregistrri ale tuturor activitilor efectuate, fiind ntocmite fise specifice fiecrei activiti n parte. CONCLUZII 1. Pentru implementarea sistemului de management al siguranei alimentare n uniti de prelucrare a petelui se documenteaz o procedur general de igienizare. 2. Managementul de vrf al organizaiei trebuie s susin i s aloce resurse materiale, umane i de timp, necesare implementrii prevederilor procedurii stabilite. 3. Toi angajaii din unitatea de prelucrare a petelui trebuie s fie instruii, s cunoasc i s respecte prevederile procedurii de igienizare din societate. 4. Pentru fiecare unitate de industrie alimentar, procedura de igienizare este specific, iar nregistrrile care se efectueaz sunt o dovada a respectrii celor nscrise n procedura documentat.
619
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Bratu Iuliana, Spulber Graziella, Ioarga A., 2002 Controlul calitii i HACCP n industria alimentar, Editura Universitii Lucian Blaga, Sibiu; Mitrea I.S., Carmen Petcu, G. Savu, 2003 Sigurana alimentelor prin aplicarea sistemului HACCP, Ed. Bogdana; Savu, C., Carmen Petcu, 2002 Inspecia i controlul produselor i alimentelor de origine animal, Ed. Semne; DS 3027E, 2002 Securitatea alimentului conform HACCP (Analiza riscului i punctele critice de control) cerine care trebuie satisfcute de companiile productoare i contractanii lor; H.G. 924/2005 - privind aprobarea Regulilor generale pentru igiena produselor alimentare; H.G. nr. 954/2005/CE - privind aprobarea Regulilor specifice de igien pentru alimente de origine animal care transpune n legislaia naional Regulamentul 853/2004/CE, publicat n Monitorul Oficial nr. 805/05.09.2005 SR EN ISO 9000, 2000 - Sisteme de management al calitii Noiuni fundamentale i vocabular; R EN ISO 22000, 2005 - Sisteme de management al siguranei alimentelor. Cerine pentru orice organizaie din lanul alimentar
620
EVOLUIA I SEMNIFICAIA NUMRULUI I CONFIGURAIEI CELULELOR DIN LAPTE LA OAIE I CAPR

THE EVOLUTION AND SIGNIFICANCE OF THE SOMATIC CELL NUMBER AND CONFUGURANCE FROM GOAT AND SHEEP MILK
Diana SABU*, O. ROTARU U.S.A.M.V. Cluj-Napoca After somatic cells in milk have been found with almost a century ago, they have been considered as being part of the small milk components. The cytomorphological study of the milk sediment stained May-GrunwaldGiemsa, and the somatic cell count using ISO-13366-1 method applied on 50 goat and 50 sheep raw milk samples, gathered thru the whole lactating period, permitted us to establish with a great accuracy the hygienic quality of it. The somatic cell count differs from the European Community standards, in the case of 78% of goat milk samples and 72% for the sheep milk samples. The cytologic configuration of the sediment smears made possible to differentiate the following milk categories: healthy, normal milk, milked and presented in hygienic conditions; highly microbiologically polluted milk; milk from animals in the final period of lactation and mammary pause; milk from animals with chronic or subacute mastitis, animals which are carrying and eliminating germs.
INTRODUCERE Atenia asupra configuraiei populaiei celulare din lapte i mai ales variaia lor ca numr, a suscitat un mare interes atunci cnd s-a demonstrat o relaie direct ntre numrul lor i evoluia la nivelul mamelei, a unor procese inflamatorii (mamite) predominent exudative, care pot compromite grav calitatea igienic a laptelui, ca produs alimentar. n prezent, sunt stabilite limite ale numrului de celule pe mililitru lapte, pe baza crora se stabilete calitatea laptelui i care se iau n considerare la stabilirea preului de achiziie al acestuia, de la productor (3, 4). MATERIAL I METOD
Fr a minimaliza importana determinrii numrului total de celule, inclusiv prin metode electronice, studiul citologic al laptelui, att pe frotiuri realizate din lapte ca atare, ct mai ales din lactosediment, poate releva mult mai multe detalii
E-mail: didisab@clujnapoca.ro
621
legate de msurile care se impun n legtur cu valorificarea laptelui n consumul uman. Pentru a testa valoarea examenului citologic n supravegherea strii de sntate al acestuia, s-a procedat la recoltarea de probe de lapte proaspt (crud) de la o populaie de caprine i ovine din judeul Cluj. Au fost prelevate 50 probe lapte capr i 50 probe de lapte oaie, pe ntreaga perioad de lactaie (1 aprilie 20 august 2005), la care s-a determinat numrul celulelor somatice prin metoda ISO-13366-1, rezultatele fiind corelate cu examenul citologic pe frotiuri fixate i colorate prin metoda May-Grnwald Giemsa.
REZULTATE I DISCUII Trebuie s precizm de la bun nceput, c toate probele examinate au avut nsuiri senzoriale i fizico-chimice, caracteristice de lapte normal, sntos, care se admite n consum fr restricie, sub rezerva tratamentului termic (pasteurizare, fierbere) nainte de a fi consumat. Metoda de referin la noi n ar pentru numrarea celulelor somatice din lapte este metoda microscopic ISO-13366-1, standard identic cu norma internaional ISO-13366-11996 Lait-Denombrement des cellules somatiques, Partie 1: Methode au microscope (Methode de reference). Prezentul standard corespunde de asemenea i Directivei CE 91/180/CE din 14.02.1991. Numrarea celulelor somatice este o metod de baz n programele de control a laptelui. Comunitatea European a stabilit limita legal pentru laptele de vac, dar fr a face referiri i la laptele de oaie i capr, n Directiva EEC/92/46 (1992). Aceast situaie a fost temporar, deoarece UE a sugerat stabilirea pentru viitor a unei limite pentru celulele somatice i la rumegtoarele mici. n SUA, limita legal pentru numrul celulelor somatice la laptele de capr a fost stabilit la 1.000.000 celule/ml i pentru oaie la 750.000 celule/ml, iar cresctorii frecvent nu pot respecta aceast limita (2). La Simpozionul internaional Somatic Cells and Milk of Small Ruminants (Bella, Italia, 1993), s-a sugerat autoritilor Comunitii Europene ca pragul maxim al celulelor somatice pentru laptele de colectur de capr i oaie s fie de 1.500.000 celule/ml (1). Numrul de celule somatice (SCC Somatic cells count) obinut, depete limita maxim admis la 78% din probele de lapte de capr i la 72% la cele de oaie. Cu toate acestea, examenul citomorfologic a pus n eviden o proporie mai mic a laptelui de oaie cu caracter mamitic, fapt corelat i cu rezultatele numrtorii celulare unde valorile celulelor somatice sunt doar uor crescute peste standardul de 750.000 celule/ml. Stadiul lactaiei influeneaz numrul de celule somatice si indic faptul c SCC crete odat cu vrsta i stadiul lactaiei, dar modificrile sunt reduse la animalele sntoase. Argumentele citomorfologice care au permis identificarea urmtoarelor categorii de lapte:
622
Lapte cu aspect normal, unde populaia celular este puin reprezentat, celulele monocite macrofage nu sunt activate, unele fiind transformate n lipofage; PMN sunt rare, vrstnice, cu nucleul intens segmentat, iar celulele epiteliale se gsesc n diferite stadii de necrobioz (Fig. 1).
Fig. 1 Citosediment lapte de oaie sntos monocit macrofag (coloraie MGG, x1000)
Fig. 2 Citosediment lapte de capr normal, sntos: rare lactocite i resturi de celule epiteliale (coloraie MGG, x1000)
Totui, la unele probe, s-au obinut valori ale SCC peste limitele admise, dei nu au fost prezente semnele citomorfologice caracteristice unui proces inflamator, examenul morfologic evideniind un numr mare de celule sferice, cu nucleul periferic, semilunar - lactocitele caracteristice acestor specii. Preponderena acestor celule n frotiurile de lapte, cu modificarea semnificativ a numrului de celule somatice, dar fr reacia celular caracteristic procesului inflamator, rmne o curiozitate, dar i un aspect care trebuie elucidat. Prezena n laptele de capr, dar i n cel de oaie, a particulelor citoplasmatice, anucleate sau nucleate, de diferite dimensiuni, mascheaz i fac dificil interpretarea rspunsului leucocitelor la infecie, astfel nct diferenierea dintre celule ar putea fi de interes n diagnosticul mastitei neclinice (fig. 2). Metodele de identificare a leucocitelor sunt bazate n mod obinuit pe identificarea nucleelor. Lapte poluat microbiologic, unde componenta celular nu reacioneaz pentru fagocitarea germenilor, demonstrndu-se c este vorba de o contaminare a laptelui n timpul mulsului i/sau recoltrii, dei la numrtoarea celular nu s-au determinat abateri de la limitele maxime admise (Fig. 3). Se permite astfel evidenierea i aprecierea riscului microbiologic prin identificarea pe frotiu a microflorei prezente n lapte. Lapte de retenie, unde populaia celular se concentreaz ntr-un volum mic de lapte, cum este cel din finalul lactaiei, caracteristicile morfologice ale celulelor nu difer n mare msur de cele prezente n laptele normalO particularitate la laptele de la sfritul lactaiei, la ambele specii, este prezena unui numr mare de monocite macrofage, dar care au activitate fagocitar fa de structurile proprii, transformndu-se n lipofage (Fig. 4).
623
Fig. 3 - Citosediment lapte de oaie poluare microbiologic polimorf (coloraie MGG, x1000)
Fig. 4 Citosediment lapte de capr, lapte de retenie Monocit macrofag hiperactivat pe care ader o celul epitelial (coloraie MGG, x1000).
Laptele mastitic, a format dup centrifugare un sediment mai abundent, vscos, cu aspect filant, populaia celular fiind crescut numeric, predominnd celulele polimorfonucleare i prezena de microparticule de exudat purulent n mamitele cu evoluie acut i subacut si celulele monocite-macrofage activate i hiperactivate n cele cu evoluie cronic. n frotiurile din acest lapte, celulele au tendina de a se grupa n conglomerate, cte 2-3, stabilindu-se legturi celulare prin adevrate puni citoplasmatice (Fig. 5). n citoplasma multor polimorfonucleare i macrofage, sunt prezeni microbi fagocitai, uurnd astfel stabilirea i a unui diagnostic etiologic al procesului inflamator (Fig. 6).
Fig. 5 Citosediment lapte de capr, mamit supurat cu microcoaguli de puroi (coloraie MGG, x1000)
Fig. 6 Citosediment lapte de capr, mamit supurat strepto-stafilococic numeroase PMN i macrofage hiperactivate i microconglomerat purulent (coloraie MGG, x1000).
624
CONCLUZII Alturat metodei de numrare a celulelor, citodiagnosticul pe lactosediment poate constitui o metod sigur de diagnostic, pentru supravegherea calitii igienice (sntii) laptelui. Citodiagnosticul are fa de numrarea celulelor i cteva avantaje, printre care mai importante sunt: posibilitatea de a diferenia un lapte mastitic fa de un lapte colostral sau la final de lactaie, identificarea laptelui contaminat microbiologic i nu n ultimul rnd, poate s precizeze dac laptele este obinu sau nu n condiii igienice. Mai mult, chiar examenul citologic poate de multe ori stabili etiologia procesului inflamator naintea rezultatului examenului microbiologic prin identificarea morfologic a microflorei prezente n microparticolele de exudat fibrinopurulent i mai ales a microbilor fagocitai n citoplasma polimorfonuclearelor neutrofile i monocitelor macrofage.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. Barbosa M., Miranda R., 1984 Addendum to special publication No. 49. Changes to Contemporary Dairy Analytical Techniques, Royal Society of Chemistry, London, UK Droke E.A., Paape M.J., Di Carlo A.L., 1993 Prevalence of high somatic cell countc in bulk tank goat milk, Journal Dairy Sci. 76: 1035 1039 Park Y.W., 1991 Interrlationships between somatic cell counts electrical conductivity, bacteria counts, percent fat and protein in goat milk, Small Ruminant Research 5; 367-375. Elsevier Science Publishers B.V.Amsterdam. Rotaru O., L. Ognean, 1998 Morfologia i fiziologia populaiei celulare din lapte. Ed.Casa Crii de tiine, Cluj-Napoca. Directiva CE 91/180/CE din 14.02.1991 Directiva EEC / 92 / 46 1992
625
CALITATEA LAPTELUI - PARTE A CONCEPTULUI ,,SIGURANA ALIMENTELOR N PERSPECTIVA INTEGRRII EUROPENE

THE QUALITY OF RAW MILK - PART OF ,,FOOD SAFETY CONCEPT, PROSPECT FOR E.U. INTEGRATION
Claudia Gabriela DUMINIC D.S.V.S.A. L.S.V.S.J. Iai V. FLORITEAN, E. INDILAR U.S.A.M.V. Iai Milk is sterile at secretion in the udder but is contaminated by bacteria even before it leaves the udder. Except the case of mastitis, the bacteria at this point are almost always harmless and few in number. Further contamination of the milk with microorganisms can take place during milking, handling, storage, and other pre-processing activities. Information on the microbial content of milk can be used to judge its hygienic quality and the conditions of production. If permitted to multiply, bacteria in milk can cause spoilage of the product. Milk is potentially susceptible to contamination with pathogenic microorganisms. Precautions must be taken to minimize this possibility and to destroy pathogens that may gain entrance. Milk produced from conventional milk works, implying the production of a more hygienic product.
Key words: raw milk quality, milk hygiene, somatic cell count, E.U. integration, food safety
Riscul alimentar pentru om, conform evalurii experilor, este determinat, n proporie de 90% de alimentele de origine animal. (2, 3, 5, 7) Experiena comunitar a demonstrat c economia de pia postindustrial, caracterizat prin ncurajarea iniiativei individuale, dezvoltarea unui sistem concurenial i stabilirea prghiilor economico-financiare, conduce la realizarea de producii animaliere peste nivelul necesar (cantitativ) al populaiilor umane din rile respective i creeaz disponibiliti mari pentru export. (1, 8) Nu s-a rezolvat ns, problema siguranei alimentelor pentru populaie, fapt ce a determinat crearea i dezvoltarea unei autoriti reale - Autoritatea Europeana pentru Sigurana Alimentelor (E.F.S.A.) cu competene n: evaluarea riscului alimentar, gestiunea (managementul) riscului alimentar, comunicarea riscului alimentar organizarea sistemul rapid de alert (S.R.A.), care presupune: prevenirea ptrunderii pe pia sau returnarea din reeaua comercial a alimentelor de origine animal cu risc major pentru sntatea consumatorilor, prevenirea
626
ptrunderii n consumul animalelor a unor furaje care pot afecta indirect sntatea consumatorilor, informarea rapid, la cele 3 nivele (central, judeean i local) asupra problemelor sau riscurilor cu privire la producerea alimentelor de origine animal i la furajele care nu ndeplinesc cerinele impuse de sigurana alimentar. Prin intermediul S.R.A. pot fi transmise urmtoarele categorii de risc: modificri organoleptice, limite microbiologice depite, infestaii parazitare, contaminri cu reziduuri i elemente legate de falsificri, ambalare sau etichetare. Astfel, s-a concis c gestiunea riscului alimentar are cele mai mari anse s fie realizat sub coordonarea serviciilor veterinare, conform principiului ,,de la furc la furculisau de la ferm la masa consumatorului, pentru a se asigura trasabilitatea produselor i pentru a se garanta n cele din urm eliminarea riscului alimentar. Guvernul Romniei a adoptat strategia Comunitii Europene n domeniul siguranei alimentare i a nfiinat Agenia Naional Sanitar Veterinar i pentru Sigurana Alimentelor - Instituie public cu personalitate juridic Organism de specialitate al administraiei publice centrale - Autoritate a statului n domeniul veterinar i al siguranei alimentelor. Date citate de A.N.S.V.S.A. relev faptul c numai 6% din totalul de uniti sunt conforme cu normele U.E., n vreme ce 17% dei nu ndeplinesc condiiile impuse au ansa, ca prin investiii, si desfoare activitatea i dup 1 octombrie 2006. Unitile care proceseaz lapte au beneficiat de derogri de pn la 2 ani, cei care nu au posibilitatea de investiii n profilul de activitate desfurat, -i pot schimba profilul de activitate n uniti cu vnzare direct sau pot devenii fabrici de produse tradiionale. n domeniul igienei i sntii publice, unul dintre obiective l reprezint alinierea standardelor de igiena ale unitilor din industria alimentara la cerinele comunitare. n lucrarea de fa ne-am propus s evideniem unele corelaii ntre numrul de celule somatice i valorile unor parametri microbiologici pentru probele de lapte analizate de la centrele de colectare sau de la unitile de procesare lapte i evoluia acestora n vederea restructurrii, modernizrii ca scop al ncadrrii n uniti din categoria A, care ndeplinesc condiiile pentru desfurarea activitii conform normelor impuse de legislaia U.E., n uniti din categoria B care s-au angajat ca pn n decembrie 2006 vor finaliza programele de modernizare restructurare, n uniti de categoria C, care au primit derogare pn n 2009 pentru a-i realiza programul de modernizare restructurare i uniti de categoria D, care vor fi supuse lunar evalurilor din partea instituiilor cu atribuii n acest sens.
627
MATERIAL I METOD
n perioada ianuarie decembrie 2005 au fost investigate, n scopul evalurii calitii, un numr de 485 probe lapte materie prim, recoltate n cadrul Programului strategic (304 probe) i n cadrul Programului de autocontrol (181 probe). Probele investigate provin cu preponderen de la 15 centre de colectare lapte materie prim din judeul Iai, 8 aparinnd societii A, 3 aparinnd societii B, 3 aparinnd societii C i unul aparinnd societii D. La acestea sau adugat un numr mai mic de probe care au fost recoltate direct de la unitile de procesare, din cisternele de transport, i probe recoltate de ctre medicii concesionari de la animale din gospodriile populaiei. Probele recoltate din centrele de colectare i cele de la unitile de procesare lapte au fost, cu precdere, probe de lapte amestec n timp ce probele recoltate din gospodriile populaiei au fost reprezentate de probe individuale. Probele investigate au corespuns din punct de vedere al aspectelor senzoriale i a strii de prospeime. Pentru determinrile efectuate s-au respectat toate exigenele referitoare la condiiile de recoltare, reprezentativitate, manipularea i pstrarea probelor. Determinarea numrului total de celule somatice s-a efectuat n conformitate cu SR ISO 13366/1/1997 cu ajutorul analizorului CombyScope, alctuit din: unitate de procesare prob Sample Preparation Unit, Soma Scope MK 2 unitate de evideniere numrare i imprimanta matricial. Pentru determinrile microbiologice s-au utilizat metodele impuse de Asociaia Internaional de Standardizare, dup cum urmeaz: SR ISO 6610/1997 pentru determinarea N.T.G. stabilirea numrului de microorganisme, metoda prin numrarea coloniilor obinute la 30C, SR ISO 5541-1/94 pentru determinarea bacteriilor coliforme din lapte i produse lactate, SR ISO 5541-2/94 pentru stabilirea numrului de bacterii coliforme Metoda prin numrarea coloniilor la 30oC i tehnica numrului cel mai probabil (MPN) la 30oC, SR ISO 7251/1996 pentru stabilirea numrului de Escherichia coli prezumtiv - Tehnica numrului cel mai probabil, SR EN ISO 6888/1/2/2002 pentru determinarea stafilococilor coagulazo-pozitivi din lapte i produse lactate, SR ISO 6579/2003 pentru determinarea prin metod orizontal a bacteriilor din genul Salmonella, din lapte i produse lactate, SR ISO 7923/2003 pentru determinarea bacteriilor din genul Bacillus cereus, din lapte i produse lactate - Stabilirea numrului de B. cereus, metoda numrrii coloniilor la 30oC, SR ISO 11290/1/2/2000 pentru determinarea bacteriilor din genul Listeria, din lapte i produse lactate, metoda orizontal pentru detectarea i numrare. Identificarea bacteriilor sporulate anaerobe din lapte sa efectuat prin proba Weinzirl, conform metodei descrise n STAS 6349-5/80. 628
Pentru efectuarea analizelor s-au utilizat medii de cultur deshidratate, medii cu adaosuri de reactivi sau ingrediente specifice conforme cu metodologia impus de standardele menionate , reactivi i antiseruri specifice provenite din import, dar i produse biologice autohtone. Interpretarea rezultatelor obinute s-a fcut n conformitate cu Ordinul Ministerului Sntii 975/1998 si Ordinul M.A.P.M 1106/2003 (etapa a II a perioada 1 ianuarie 2005 31 decembrie 2006)
REZULTATE I DISCUII Au fost efectuate, n total, un numr de 2144 analize constnd n examene microbiologice i determinarea numrului total de celule somatice (N.C.S.) din lapte. Determinarea numrului total de germeni (N.T.G.) s-a efectuat la un numr de 416 probe de lapte materie prim (din care 304 n Programul strategic i 112 probe n cadrul Programului de autocontrol) Rezultatele examenelor de laborator au relevat ca necorespunztoare un numr de 107 probe din probele examinate n cadrul Programului strategic (35,2%) i 43 probe examinate n cadrul Programului de autocontrol (62,3%). Probele ncadrate ca fiind necorespunztoare au valori ale parametrului N.T.G./ ml ncadrate ntre 1.000.000 i 2.480.000 germeni/ml. Determinarea bacteriilor coliforme /ml s-a efectuat la un numr de 375 probe lapte materie prim (304 probe recoltate n cadrul Programului strategic i 71 probe n cadrul Programului de autocontrol) din care un numr de 141 37,6% (112 probe 29,9% recoltate n cadrul Programului strategic i 29 probe 7,7% n cadrul Programului de autocontrol) sunt ncadrate ca fiind necorespunztoare, valorile obinute fiind superioare celor admise de O.M.S./975/1998. Analiza probelor pentru decelarea Escherichia coli/ml relev c dintr-un numr de 366 probe lapte materie prim, (294 probe recoltate n cadrul Programului strategic i 72 probe n cadrul Programului de autocontrol), un numr de 103 28,14%, (77 probe 21,03% recoltate n cadrul Programului strategic i 26 probe 7,1% n cadrul Programului de autocontrol) au fost necorespunztoare, valorile obinute fiind superioare celor admise de O.M.S./975/1998 Laptele recoltat de la animale sntoase, exploatate n condiii de igien, muls n condiii de igien desvrite, conine un numr de microorganisme mic, ntre 300 i 500/ml n timp ce laptele muls de la animale cu diferite infecii mamare, exploatate n mod necorespunztor, la care manoperele de muls sunt efectuate n condiii precare de igien numrul de microorganisme crete pn la ordinul sutelor de mii i chiar al milioanelor/ml. n ceea ce privete parametrul microbiologic Stafilococi coagulazopozitivi/ml, examinarea probelor a relevat c dintr-un numr de 344 probe lapte
629
materie prim (294 probe recoltate n cadrul Programului strategic i 40 probe n cadrul Programului de autocontrol), un numr de 8 probe 2,32% (6 probe 1,74% recoltate n cadrul Programului strategic i 2 probe 7,1% n cadrul Programului de autocontrol) au fost ncadrate ca fiind necorespunztoare, valorile obinute fiind superioare celor admise de O.M.S./975/1998 Analizele pentru decelarea parametrului Bacillus cereus/ml relev c pentru un numr de 122 probe lapte materie prim, recoltate n cadrul Programului strategic rezultatele au fost corespunztoare limitelor admise de O.M.S./975/1998. Analizele pentru decelarea parametrului Salmonella/25 ml relev c pentru un numr de 304 probe lapte materie prim, recoltate n cadrul Programului strategic rezultatele sunt ncadrate ca fiind corespunztoare, limitelor admise de O.M.S./975/1998. Analizele pentru decelarea parametrului Listeria/25 ml c relev c pentru un numr de 128 probe lapte materie prim, recoltate n cadrul Programului strategic rezultatele sunt ncadrate ca fiind corespunztoare, limitelor admise de O.M.S./975/1998. Bacteriile anaerobe sporogene, productoare de gaz, au fost identificate la un nivel ridicat n 13 (8,55%) probe din cele 152 probe materie prim la care s-a efectuat acest parametru i au fost ncadrate ca fiind necorespunztoare, conform condiiilor impuse de STAS 6349-5/80. (Tabel 1)
Tabelul 1 Investigaii privind calitatea microbiologic a laptelui materie prim Anul 2005 NTG Numr /ml probe C N P.S. 197 107 304 P.A. 69 43 181 Parametrii microbiologici analizai B.colif. E.coli. Staph.cp. B.cereus Salm.* Listeria* Proba /ml /ml /ml /ml /25ml /25ml Weinzirl C N C N C N C N C N C N C N 192 112 217 77 42 29 46 26 298 38 6 2 122 0 0 0 304 0 0 0 128 0 0 0 72 67 8 5
*determinarea face referire la parametrii care nu au fost decelai, din motive tehnice, pentru toate probele (referire la programul de autocontrol)
Numrul total de celule somatice N.C.S./ml a fost determinat la 485 de probe, din acestea la 21,03% (85 probe recoltate n Programul strategic i la 17 probe recoltate n cadrul Programului de autocontrol) valorile obinute s-au ncadrat n intervalul 600.000. 3.400.000 NCS/ml, fiind necorespunztoare, la 53,20% din probe s-a obinut valori cuprinse ntre 400.000 i 600.000 N.C.S./ml iar la 25,77% din probe celulele somatice au fost sub 400.000/ml limita actual fiind de maxim 600.000/ml. (Tabel 2)
630
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 2 Investigaii privind valoarea numeric a celulelor somatice din laptele materie prim Anul 2005 P.S. P.A. Numr probe 304 181 NCS**/ml Corespunztoare a b 56 163 219 69 95 164 383 Necorespunztoare 85 17 102
** valori care se ncadreaz astfel: a -<400.000, b - 400.000 - 600.000, c - >600.000 i se raporteaz conform etapizrii specificate n Ordinul 1106/2003 al MAPM ** ncepnd cu anul 2004 valorile se consider necorespunztoare pentru probele care au NCS/ml: >600.000 cu raportare la condiiile impuse de Ordinul 1106/2003 al MAPM PS program strategic, PA program autocontrol
Numrul de celule somatice /ml se situeaz n jurul valorii de 80.000 /ml. pentru o vac sntoas, intervalul dintre 80.000/ml. i 300.000/ml. ncadreaz laptele ntr-un lapte dubios iar limitele cuprinse ntre 300.000/ ml. i 1.000.000/ ml. duce la aprecierea laptelui respectiv ca fiind suspect. (2, 6, 9) Elementele celulare sunt reprezentate de celulele epiteliului mamare sau fragmente ale acestora n procent de 60%- 80%, celule de origine sangvin n procent de 20% -30%, limfatic i microorganisme. (2, 6, 9) Celulele epiteliale de origine mamar se regsesc n laptele animalelor sntoase, recoltat n condiii corespunztoare de igien n cantitate neglijabil, numrul acestora crescnd considerabil n cazul evoluiilor proceselor inflamatorii de la nivelul glandei mamare. (2, 6, 9) Numrul de celule din laptele vacilor cu uger sntos variaz n intervalul de valori maxime - minime n funcie de ras, vrst, stare fiziologic a glandei mamare i chiar de la acelai sfert de la o recoltare la alta. La vacile aflate la prima lactaie valoarea numeric a celulelor somatice este mai mic, aceasta crescnd progresiv cu numrul de lactaii. Se consider c numrul de celule somatice crete ncepnd cu a III a lactaie i datorit stresului de muls, iar colostrul i laptele din primele sptmni de dup lactaie conine peste 10.000/ ml., la nceputul mulsului peste 100.000/ ml. i crete n primele 2-4 ore de la muls. Valoarea N.C.S./ml lapte de amestec probele recoltate de la centrele de colectare i unitile de procesare lapte, a prezentat variaii considerabile, rezultatele fiind ncadrate ntre 186.000/ml i 824.000/ml. Valoarea N.C.S./ml pentru laptele individual probe recoltate de la animalele din gospodriile populaiei este considerabil mai mic, aceasta ncadrndu-se ntre limitele, minim 3000/ml i 126.000/ml.
631
Se constat de asemenea c valoarea numeric a parametrului N.C.S./ml este mai crescut n perioada de var, fapt care se asociaz cu evoluia mamitelor subclinice, cnd sau nregistrat valori ncadrate n intervalul 400.000 - 600.000 N.C.S./ml. Tot n sezonul cald sau determinat pentru un numr mic de probe, valori ale N.C.S./ml cuprinse n intervalul 1.343.000 2.797.000, probe care proveneau de al animale cu mastit.
Fig. 1 - Harta Unitilor de procesare i a Centrelor de colectare lapte - judeul Iai. Unitii de procesare lapte - Categoria B: Promilch, Strunga, - Categoria D: SC Nicodan SA, SC Romlacta, SC, Trans -Gigel Centre de colectare lapte: - SC ISPA ECO SRL Romneti, Mirosloveti, Vereni, Erbiceni., Moca, Cristeti, Lespezi, Cozmeti - SC ILVAS Vaslui Probota, Crniceni, Trifeti, - SC Lactis SA Crniceni, Cotnari, Ceplenia,1- Camitex Cristeti
CONCLUZII Centraliznd rezultatele necorespunztoare putem concluziona c la nivel de uniti de procesare lapte, probele necorespunztoare sunt n procent de 30,92% pentru parametrul N.T.G./ml, 20,97% pentru parametrul Bacterii.coliforme./ml, 21,93% pentru parametrul Escherichia coli/ml, 1,64% pentru parametrul Stafilococi coagulazo-pozitivi/ml, 21,03% pentru parametrul N.C.S./ml, 2,68% pentru parametrul Bacterii anaerobe gazogene/ml, dintr-un total de 485 probe analizate, ceea ce denot existena unor deficiene, n modul su de recoltare i de manipulare a laptelui materie prim, n modul n care se monitorizeaz starea de sntate a animalelor productoare de lapte, n modul n
632
care sunt respectate condiiile de igien i nu n cele din urm n modul n care sunt aplicate msurile impuse de legislaia sanitar veterinar aflat n vigoare. Evaluarea neconformitilor care s-au constatat la nivel de recoltare a laptelui materie prim, corelate cu aprecierea amplasrii i compartimentrii, a fluxului existent n centrele de colectare i n unitile de procesare a laptelui, i nu n cele din urm a performanelor utilajelor, n perioada analizat, a condus la ncadrarea n judeul Iai doar a dou uniti de procesare a laptelui n categoria B, a unui numr de trei uniti n categoria D iar pentru un numr de patru uniti de procesare lapte s-a procedat la emiterea ordonanelor de suspendarea definitiv a activitii.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Apostu S., 2004 - Managementul calitii alimentelor, Ed. Risoprint, Cluj Napoca Brzoi D., Apostu S., 2002 - Microbiologia produselor alimentare, Ed. Risoprint, Cluj Napoca Enache T., Paul I., Stnescu V., Popescu O., Iordache I., 2001 - Tratat complet de medicin legal veterinar, Ed. All, Bucureti. Enache T., Paul I.,, Stnescu V., Popescu O., Iordache I., 1995 - Medicin legal veterinar. Ed.All, Bucureti. Headrick M.L., Korangy S., Bean N.H., Angulo F.J., Altekruse S.F., Potter M.E., Klontz K.C., 1998 - The epidemiology of raw milk-associated foodborne disease outbreaks reported in the United States, 1973 through 1992, Am. J. Public Health; 88:1219-21. Petkow P., Gergovkas J., and Radulova P., 2001 - The influence of some factors on somatic cells count in cows milk. Zhivotnov deni-Nauki, 38 (2) 86-89. Potter M.E., Kaufmann A.F, Blake P.A, Feldman R.A., 1984 - Unpasteurized milk: the hazards of a health fetish. JAMA 252:2048-52. Savu C., Georgescu N., 2004 - Sigurana alimentelor, riscuri i beneficii, Ed. SemnE,. Bucureti indilar E., 2000 - Controlul igienic al produselor i subproduselor de origine animal, Vol. II, Ed. I.N.S.C.R. Iai, **** Ordinul 975/1998 al M.S., Publicat n Monitorul Oficial, Partea I nr. 268 din 11/06/1999 **** Ordinul 1106/2003 al M.A.P.A.M., Publicat n Monitorul Oficial, Partea I nr. 61 din 23.01.2004 **** Standarde de stat, norme tehnice de calitate i de metode de analiza pentru laptele integral materie prim: Stas 6349/ 5-8- 1980, SR ISO 6610/1997, SR ISO 7923/2003, Norm sanitar veterinar preluat dup Directiva CEE 91/180,77/99, SR ISO 13366-1/ 98; **** Standarde de stat, norme tehnice de calitate i metode de lucru pentru produse lactate din lapte netratat termic: SR EN 12824/2001, SR ISO 11290/1/2000, SR ISO 5541-1-2 /94, SR ISO 7251/96, SR ISO 6888/02, SR ISO 6579/2003
6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.
13.
633
CONTROLUL STARII DE IGIEN I A CALITII APEI N UNELE UNITI IEENE DE PRELUCRARE A LAPTELUI, EFCTUAT PRIN TEHNICI CLASICE I RAPIDE
THE QUALITY HYGIENE CONTROL OF WORK, EQUIPAMENT OR HAND SURFACES, PLAN ENVIROMENT AND WATER, IN SOME MILKWORKS FROM IAI CITY BY USUAL AND FAST MICROBIOLOGICAL METHODS
Claudia Gabriela DUMINIC D.S.V.S.A. L.S.V.S.J. Iai E. INDILAR U.S.A.M.V. Iai This system, called Hazard Analysis and Critical Control Points HACCP, is a focus on critical milk safety areas as part of total quality programs. It involves a critical examination of the entire milk manufacturing process to determine every step where there is a possibility of physical, chemical, or microbiological contamination of the food which would render it unsafe or unacceptable for human consumption. Colilert/Enterolert is an easy, rapid, and accurate method for the detection of coliforms and E.coli/ enterococci in water.Colilert- 18/ Enterolert-E was developed for the European market and correlates with the EU Drinking Water Directive standard method for coliforms and enterococci, that gives you results in just 18 hours. A new Positive Control Kit for validation of a number of their hygiene and water monitoring devices, with systemSURE II ATP Hygiene Monitoring System and Snapshot Universal ATP swab for facilities which were previously using other luminometers. The Positive Control Kit allows users to check accuracy of devices. A crucial part of Food Safety Progra. A simple and fast way to validate the hygiene of a surface and demonstrate due diligence in a HACCP program. Slides for food and Water Screening, for the fast detection of coliforms, faecal coliforms, faecal Streptococi and Pseudomonas in water.
Key words: quality hygiene control, work or equipament surfaces and waterin, milkworks, etc.
Implementarea i aplicarea principiilor Sistemului HACCP i contientizarea cresctorilor particulari individuali sau a celor organizai n ferme, asupra importanei asigurrii asistenei sanitar veterinare pentru animalele productoare de lapte, asupra recoltrii, manipulrii i procesrii laptelui n condiii igienico-sanitare corespunztoare sunt condiii absolut eseniale pentru obinerea unui produs finit de calitate, care s ndeplineasc cerinele microbiologice impuse de U.E.
634
Starea de igien a materiei prime, a apei utilizate n procesul tehnologic, starea de igien a utilajelor, ustensilelor i a personalului implicat se rsfrng asupra calitii produsului finit. n lucrarea de fa s-a urmrit evidenierea unor aspecte legate de calitatea microbiologic a apei, a strii de igien pe fluxul tehnologic la nivelul a trei uniti de procesare lapte. MATERIAL I METOD
ntre ianuarie martie 2006 au fost investigate cu scopul determinrii ncrcturii microbiologice a apei un numr de 63 probe ap. Un numr de 9 probe recoltate n cadrul Programului strategic, la care sau efectuat 45 analize i un numr de 28 probe pentru care 78 analize au fost efectuate conform metodei de lucru impuse de Stas 3001. Un numr de 16 probe, recoltate n conformitate cu Programul de autocontrol, au fost investigate conform modului de lucru impus de testele rapide, 7 pe teste Colilert respectiv 9 pe teste Enterolert. Un alt numr de 10 probe recoltate n conformitate cu Programul de autocontrol, au fost investigate pe Slide food and water screening, cu un numr de 30 determinri microbiologice. Testele rapide Colilert respectiv Enterolert reprezint o metod colorimetric/fluorimetric care permite detecia unor enzime int specifice microorganismelor. Substratul nutritiv indicator este metabolizat de ctre enzima int, specific microorganismului i determin apariia unei culori caracteristice. Metabolizarea microoganismelor asociate este inhibat. Tehnica este rapida, rezultatele se obin n 24 de ore i se bazeaz pe utilizarea din substratul nutritiv a indicatorului ONPG n cazul coliformilor, a indicatorului MUG n cazul E.coli, i a indicatorului 4-methyl umbelliferyl D-glucoside pentru enterococi. Se evideniaz prezena sau absena coliformilor prin apariia culorii galbene, a E.coli. prin apariia culorii galbene fluorescente i a enterococilor fecali prin apariia culorii albastre fluorescente. Se poate executa i determinarea numrului cel mai probabil pentru coliformi sau enterococi prin utilizarea godeurilor Quanti-Tray, a sigilatorului Quanti-Tray sealer i a unei lmpi UV, cu interpretarea realizat prin utilizarea tabelului MPN .
A Fig. 1. - Aprecierea calitativ a apei
635
Fig. 2 - Aprecierea cantitativ a ncrcturii apei n coliformi sau enterococi prin MPN
Pentru aprecierea calitii apei raportarea s-a efectuat la Legea 458/2003 completat cu Legea 311/2004 i un numr de 10 probe cu 30 de analize raportate conform instruciunilor de lucru cu Slide food and water screening. Slide food and water, screening sunt utilizate sub formule diverse de detectie microorganisme cu: cod 71L52521 pentru NTG, drojdii i mucegaiuri, Enterobacteriaceae, cod 71L52523 pentru NTG, coliformi, staphylococi, cod 71L52524 pentru coliformi, Pseudomonas, streptococi fecali, cod 71L52525 pentru coliformi, staphylococi, drojdii i mucegaiuri,
LOW (+)
MEDIUM (++)
HIGH (+++)
Fig. 3 - Aprecierea concentraiei microbiene colonii/ml, pe Slide food and water
636
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Indicatorii testului IDEXX Colilert/ Enterolert, Microorganism Coliformi E.coli Enterococi Reagent Colilert sau Colilert 18 Colilert sau Colilert 18 Enterolert Enzima int galactozidaz glucuronidaz -glucozidaz Substratul nutritiv o- nitrophenyl galactopyrinozidaz -ONPG 4-methyl umbelliferyl - Dglucuronide - MUG
Tabelul 2 Interpretarea caractere culturale evideniate de Slide food and water Pseudomona s Staphylococi cretere inhibat cretere inhibat cretere inhibat rou galben negru galben cretere inhibat cretere inhibat Streptococi cretere inhibat cretere inhibat cretere inhibat rou galben cretere inhibat alb negru cretere inhibat cretere inhibat verde alb cretere inhibat -
Mediu
Caractere morfologice
Agar V.R.B.G.
Agar roz bengal Agar TCC (triptic soia) Agar Vogel Jonson Agar bil esculin Agar Cetrimide
Aspect colonie Culoare mediu Aspect colonie Culoare mediu Aspect colonie Culoare mediu Aspect colonie Culoare mediu Aspect colonie Culoare mediu Aspect colonie Culoare mediu
rou purpuriu rou purpuriu cretere inhibat rou galben cretere inhibat cretere inhibat
rou purpuriu rou purpuriu cretere inhibat rou galben cretere inhibat inhibiie parial
Klebsiella
E.coli
inhibiie parial rou galben cretere inhibat cretere inhibat
Pentru teste de sanitaie suprafee s-au utilizat metodele clasice admise, raportate la OMS 976/1998 i metoda rapid bazat pe utilizarea Ultrasnap -uri ATP Swab interpretate cu Luminat SystemSure II-uri , raportate i interpretate conform instruciunilor de utilizare ale aparatului. 637
Ultrasnap -uri ATP Swab, conin lichidul stabil luciferin/ luciferaz care induce i catalizeaz reacia de bioluminescen, la contactul cu ATP-ul molecular, energia regsit la nivelul celulelor bacteriene, a drojdiilor i mucegaiurilor. Reacia de bioluminescen are loc prin transformarea energiei chimice n care sunt implicate legturile pirofosforice ale ATP bacterian n energie luminoas.
Fig. 4 - Catalizarea n doi pai oxidativi, prin utilizarea ATP ului ,a luciferinului n oxiluciferin cu producerea unei luminiscene de 560 nm.
REZULTATE I DISCUII Determinarea calitii microbiologice a apei prin metoda clasic impus de Stas 3001/91 a fost efectuat pe un numr de 37 probe, din care 9 recoltate n conformitate cu programul strategic pe 2006, la care s-au analizat 45 de parametrii i 28 probe recoltate n cadrul programului de autocontrol la care s-au analizat 78 de parametrii, respectiv determinarea unitilor formatoare de colonii (UFC/ml), B. colif./100 ml, C. fecali./100 ml, Strept. fecali/100 ml i B. sulfito red./20 ml Determinarea calitii microbiologice a apei prin teste rapide de tip Colilert/ Enterolert 13 probe, la 7 dintre ele solicitarea a fost pentru determinarea bacteriilor coliforme iar la 5 pentru determinarea enterococilor. Determinarea calitii microbiologice a apei prin utilizarea Slide food and water screening s-a realizat pe un numr de 10 probe la care fost investigai parametrii Bacterii coliforme, Streptococi fecali i Pseudomonas Consecutiv elaborrii rezultatelor de laborator prin metoda impus de Stas 3001/91, cu raportate la Legea 458/2002, pentru cele 37 de probe se constat c un numr de 6 probe din cadrul Programului strategic, reprezentnd 16,21% sunt necorespunztoare - pentru parametrii NTG/ml B.colif./100ml, C.fecali /100ml, procentul reprezentnd pentru fiecare n parte cte 5,40%.
638
Pentru analizele din cadrul Programului de autocontrol s-au decelat 7 probe necorespunztoare, reprezentnd 18,9%, dupa cum urmeaz: cte 5,40% pentru parametrii NTG/ml B.colif./100ml, i 8,1% pentru parametrul C.fecali /100ml. Investigaiile rapide privind calitatea microbiologic a apei prin tehnica impus de modul de lucru al testelor Colilert/ Enterolert au evideniat un numr de 2 probe necorespunztoare pentru Bacterii coliforme reprezentnd 15,38 %. Investigaiile rapide privind calitatea microbiologic a apei prin tehnica impus de modul de lucru cu Slide food and water screening au evideniat un numr de 2 probe necorespunztoare, pentru parametrul Bacterii coliforme, reprezentnd 20% i o prob pentru parametrul Streptococi fecali reprezentnd 10%. Aprecierea strii de igien s-a efectuat prin recoltarea de teste de sanitaie de pe suprafee de lucru, de pe suprafee utilaje i ustensile, i prin recoltarea de teste de microaeroflor. n principal suprafeele de recoltare au fost reprezentate de suprafee de 10/10 cm ale cisternelor de transport lapte tancurilor de rcire, ale vanelor colectoare de lapte smntnit, conductelor de evacuare lapte smntnit, conductelor de la instalaiile de pasteurizare, ale crintelor, cuelor, harfelor, cuitelor, ambalajelor pentru produse finite etc. Testele de microaeroflor au fost recoltate cu precdere din spaiile destinate operaiilor tehnologice de presare, maturare i din depozitele produselor finite. Determinarea strii de igien s-a efectuat prin recoltarea unui numr de 63 teste de sanitaie din care 52 de pe suprafee utilaje, ustensile, ambalaje i 11 teste de microaeroflor. Din acestea 25 recoltate n cadrul Programului strategic cu 19 teste de sanitaie suprafee i 6 teste de microaeroflor i alte 38 recoltate n cadrul Programului de autocontrol, cu 33 teste de sanitaie suprafee i 5 teste de microaeroflor. Numrul testelor necorespunztoare este de 32 61,53%, din care 13 teste reprezentnd 25% pentru parametrul NTGMA, 2 teste pentru enterobacterii reprezentnd 3,85% pentru enterobacterii, 9 teste reprezentnd 17,3% pentru Bacterii coliforme i 4 teste pentru parametrul Levuri i fungi reprezentnd 7,69%. Testele investigate prin utilizarea system Sure II TM ATP relev 2 dintre ele au afiat o valoare a ATP ntre 11 i 29 ceea ce indic c suprafeele testate sunt inadecvate i alte 2 au afiat o valoare a ATP peste 30 ceea ce indic c suprafeele testate sunt murdare.
639
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 3 Investigaii clasice privind calitatea microbiologic a apei utilizate n procesarea brnzei telemea Anul Numr 2006 Ianuarie- probe Martie P.S. P.A. 9 28 NTG /ml C 7 20 N 2 2 B.colif. /100ml C 7 25 N 2 3 C.fecalii. /100ml C 7 15 N 2 2 Strept.fecali /100ml C 9 8 N 0 0 B.sulfito red. /20ml C N 9 0 3 0 Tabelul 4 Investigaii rapide privind calitatea microbiologic a apei utilizate n procesarea brnzei telemea - Colilert / Enterolert Anul 2006 Ianuarie Martie P.A. Numr probe 13 Coliformi C 7 N 2 C 5 Enterococi N 0 Tabelul 5 Investigaii rapide privind calitatea microbiologic a apei utilizate n procesarea brnzei telemea Food slide and water 3 Anul 2006 Numr Ianuarie - Martie probe P.A. 10 Coliformi C N 8 2 Streptococi fecali C N 9 1 Pseudomonas C N 10 0 Tabelul 6 Investigaii microbiologice privind controlul strii de igien n unitile de procesare lapte, prin teste de sanitaie Anul Strept. Numr NTGMA Enterobacterii Staph.cp. hemolitici B.colif Salm.spp. 2006 Ianuarie probe C N C N C N C N C N C N - Martie P.S. 19 9 4 4 2 4 0 4 0 9 4 4 0 P.A. 26 10 2 3 2 3 0 0 0 9 5 0 0 Tabelul 7 Investigaii microbiologice privind controlul strii de igien n unitile de procesare lapte, prin teste de microaeroflor Anul 2006 Ianuarie - Martie P.S. P.A. Numr probe 6 5 NTGMA 3 /600m C 3 5 N 3 2 C 4 5 D+M /300m3 N 2 2
640
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 8 Investigaii microbiologice privind controlul strii de igien n unitile de procesare lapte, prin utilizarea systemSure II TM ATP Valori ATP afiate < 10 11-29 >30 P.A. 7 3 2 2 ** rezultatele necorespunztoare au fost repetate n laborator prin metode clasice
Diagrama 1 - Investigaii privind calitatea apei prin metoda 25 clasica
20 15 9 15 9 3 0 0
Anul 2006 Ianuarie - Martie
Numr probe
7 2 2 NTG
7 2 B.colif 3
7 2 2
C.fecali
0 0 Strept.fecali B.s.red
Program Strategic corespunzatoare Program Autocontrol corespunzatoare
Program Strategic necorespunzatoare Program Autocontrol necorespunzatoare
Diagrama 2 - Investigaii privind calitatea apei prin tehnica Coililert /Enterolert
7 5 2 0 Colilert C Colilert C Colilert N Colilert N Enterolert C Enterolert C Enterolert N Enterolert N
641
Diagrama 3 - Investigaii privind calitatea apei prin utilizarea Slide Food and Water Screening
9 8
10
1 0
Coliformi
Streptococi fecali
Pseudomonas necorespunzatoare
corespunzatoare
Diagrama 4 - Investigaii microbiologice privind controlul strii de igien n unitile de procesare lapte, prin teste de sanitaie 10
9 9 9
5 4 2 4 4 3 2 2 0 0
NTG B.colif Enterobacterii Staphilococ cp.
4 3
0 0
0 0
Streptococ hemolitic
Salmonella spp.
642
Diagrama 5 - Investigaii microbiologice privind controlul strii de igien n unitile de procesare lapte, prin teste de microaeroflora
5 5 5 4 3 2 2 5
NTGMA
NTGMA
D/M
D/M
Diagrama 6 - Investigaii microbiologice privind controlul strii de igien n unitile de procesare lapte, prin systemSure II ATP
ATP < 10 ATP 11-29 ATP >30 2 2
CONCLUZII Procentul de 26,98% probe de ap necorespunztoare aparin unor uniti care nu sunt racordate la surs centralizat de ap i se alimenteaz prin reele proprii fntni prevzute cu hidrofor, lipsite de filtre i amplasamente necorespunztor n incita unitii.
643
Determinarea strii de igien a suprafeelor de lucru, a utilajelor, a minilor personalului i a microaeroflorei din spaiile de procesare lapte denot existena unor deficiene majore n ceea ce privete asigurarea igienei pe fluxul tehnologic. Procentul de 61,53% probe necorespunztoare, asociat cu lipsa implementrii sistemului HACCP, sau gestionare incorect a punctelor critice n documentele HACCP n unitile de procesare lapte indic, un management defectuos - lipsa de fonduri sau consiliere corespunztoare, i o lips a contientizrii procesatorilor asupra importanei inocuitii produselor, sunt elemente cu repercusiuni nefaste supra calitii produsului finit i nu n cele din urm asupra supravieuirii pe ,,piaa agroalimentar n condiiile impuse de U.E., pentru libera circulaie a produselor. BIBLIOGRAFIE
1. Brzoi D., Sanda Lzrescu, Natalia Maier, Lidia Tulu, R. Korn, Olga Nuc, Florina Dumitrescu, 1978 - Metode Microbiologice pentru examenul de laborator al produselor alimentare de origine animal, M.A.I.A., D.S.V., L.C.C.A.Bucureti Barzoi D., S. Apostu, 2002 - Microbiologia produselor alimentare, Ed.Risoprint, Cluj Napoca. Chintescu G., 1980 - ndrumtor pentru tehnologia brnzeturilor, Editura tehnic, Bucureti, Coman I., Helena-Maria Brhal, Rodica Florescu, 1997 - Decontaminarea vol I, Ed. Satya, Iai Cpri Rodica, A. Cpri, T. Vintil, 2004 - Aplicaion of the luciferin/luciferase bioluminescent system in hygiene monitoring of raw milk, Facultatea de chimie industrial i Protecia mediului, Timioara. Enache T., Paul I., Stnescu V., Popescu O., Iordache I., 1995 - Medicin legal veterinar. Ed.All, Bucureti. Enache T. Paul I., Stnescu V., Popescu O., Iordache I., 2001 - Tratat complet de medicin legal veterinar, Ed.All, Bucureti. Mark K., Mitchelland W., Stapp B., 1996 - Field Manual of Water Quality Monitoring Kendall Hunt Publishess, p.304, Stender H. i colab., 2001 Rapid detection, identification and numeration oe E.Coli cells in water by chemiluminiscent in situ Hybridization, Apl. Environ.Microbiol., 67,1,142, Standarde de stat, norme tehnice de calitate i metode de lucru: Stas 3001/1991,SR ISO 11290/1/2000, SR ISO 4833/1991, SR ISO 5541-1-2 /1994, SR ISO 7251/1996, SR ISO 6888/2002, SR ISO 6579/2003, SR ISO 7402/1996 OMS 976/98, Legea privind calitatea apei potabile 458/2002, Monitorul Oficial al Romniei, partea I nr. 552/ 29.07.2002, completat cu Legea privind calitatea apei potabile nr.311/ 2004, Monitorul Oficial al Romniei 582/ 30. 06.2004. http://www.orgenics.com/files/products/UTI. - Food slide and water, www.idexx.com/water/colilert / enterolert detection of coliforms, E.coli and enterococci in water.
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15.
644
NIVELUL UNOR NITROZAMINE VOLATILE N DIVERSE PRODUSE DIN CARNE I PETE AFUMAT
THE LEVEL OF SOME VOLATILE NITROSAMINES IN VARIOUS MEAT PRODUCTS AND SMOKED FISH
E.V. INDILAR, M. TOTOLIN, E. INDILAR U.S.A.M.V. Iai The research regarding the three nitrosamines NDMA, NDEA, NPYR in some meat and fish products trough gascromatographic method, have shown that NDMA and NDEA are present in different quantities in all seven products that were examined and NPYR was present only in three sortiments. The average values of NDMA were: 0,058 g/kg in Choriso sausages; 0.114 g/kg in Kaiser; 0.120 g/kg in Bnean salami; 0,135 g/kg in Cabanos; 0,160 g/kg in Sibiu salami; 0,193 g/kg in bacon; 0,331 g/kg in smoked fish. The average values of NDEA were: 0,043 g/kg in Choriso salami; 0,045 g/kg in Cabanos; 0,050 g/kg in Bnean salami; 0,051 g/kg in smoked fish; 0,099 g/kg in Sibiu salami; 0,150 g/kg in Kaiser. NPYR wasnt found in Sibiu, Choriso, or Bnean salami; it was present and had average values of: 0,163 g/kg in bacon; 0,260 g/kg in Kaiser and 0,762 g/kg in smoked fish.
Key words: meat products, level, volatile nitrosamines.
Nitrozaminele fac parte din marea grup a nitrozocompuilor. Ele conin gruparea N-nitrozo, iar radicalii pot fi reprezentai de grupri arilice, alchilice, aril-alchilice sau heterociclice. Pot fi n stare lichid sau solid i unele din ele sunt volatile (1, 2, 3, 7, 9). n organism sunt relativ repede biodegradate, dnd produi reactivi i instabili, dar care constituiesc substane cancerigene. Faza final a conversiei este un ion de carbeniu nalt electrofil, n cutare de locuri bogate n electroni cum sunt bazele purinice i piriminidice ale moleculelor de ARN, ADN, proteinele (2, 3). Structura lor chimic complex le permite s participe la diverse reacii chimice de reducere, oxidare, hidroliz i transformare fotochimic (3, 7). Nitrozaminele se pot forma exogen i endogen (n organism) din precursori reprezentai de nitrai, nitrii, prioritar amine secundare i aminoacizi (2, 7, 8, 11, 12). Viteza nitrozrii aminelor depinde de natura aminei, concentraia NaNO3 i NaNO2 i a altor nitrozani i prezena sau absena unor factori catalizatori sau inhibani (3, 7, 8). ntre factorii catalizatori se nscriu: pH-ul acid (2,5-3,5)
645
comparabil cu cel al sucului gastric, temperaturile ridicate, timpul de contact ntre amine i compuii nitrozani i activitatea metabolic a unor bacterii (2, 7, 10). ntre factorii inhibani ai formrii NA se nscriu: unii protectori coloidali (amidonul), acidul galic, acidul ascorbic i ascorbaii, tocoferolii (2, 7, 10). n alimentele bogate n substane proteice, supuse stocrii, maturrii, proceselor termice ridicate, fermentrii se pot elibera aminoacizii, care prin decarboxilare formeaz amine care n prezena nitriilor formeaz NA (7, 10). In vivo cea mai mare cantitate de NA se formeaz n mediul acid al stomacului i prin activitatea metabolic a unor bacterii n intestin i cile urinare (7, 10). nafara formrii NA n alimente se pot forma i n diverse buturi, ape, medicamente, pesticide, tutun, cosmetice, colorani, uleiuri, lubrefiani (2, 7). Rezult c expunerea uman la riscuri NA este dat de diverse modaliti, iar aciunea lor nociv este foarte divers. n prezent, pe baza observaiilor la om i animale, i a experimentelor pe animale, efectele nocive ale NA se pot manifesta prin toxicitate acut, embriotoxicitate, mutagenitate, carcinogenitate (4, 5, 6, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15). n lucrare ne-am propus s stabilim nivelul unor NA volatile n unele produse din carne i pete afumat. MATERIAL I METOD
Determinrile s-au fcut pe un numr de 6 sortimente de produse din carne i un sortiment de pete afumat totaliznd 35 probe. S-au determinat nivelurile de NDMA, NDEA i NPYR ca NA volatile. Determinrile acestor NA s-au fcut prin metoda gazcromatografic, respectnd metodologiile adecvate privind extracia, purificarea distilatelor, dozarea NA prin metoda gazcromatologic, confirmarea rezultatelor prin spectrometrie de mas i interpretarea cromatogramelor.
REZULTATE I DISCUII Rezultatele obinute sunt redate n tabelul nr. 1 i diagramele 1, 2, 3, 4. n cele 6 sortimente de produse din carne i sortimentul de pete afumat s-a pus n eviden dimetilnitrozamina (NDMA) n urmtoarele cantiti (diagrama 1): - 0,134-0,263 g/kg la bacon i o valoare medie de 0,193 g/kg; - 0,102-0,218 g/kg la salamul de Sibiu i media de 0,160 g/kg; - 0,104-0,160 g/kg la crnai Cabanos, iar media de 0,135 g/kg; - 0,100-0,150 g/kg la salamul Bnean i medie de 0,120 g/kg; - 0,092-0,147 g/kg la Kaiser cu valoare medie de 0,114 g/kg; - 0,040-0,070 g/kg la salamul Choriso cu media de 0,058 g/kg; - 0,200-0,512 g/kg la petele afumat i media de 0,331 g/kg.
646
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Valori medii ale coninutului de NDMA, NDEA i NPYR n unele produse din carne i pete afumat Produsul din carne sau pete Bacon Cabanos Kaiser Salam Bnean Salam Choriso Salam de Sibiu Pete afumat Limite/Media n = 5 : NDMA micrograme/kg Limite Media 0,134-0,263 0,193 0,104-0,160 0,135 0,092-0,147 0,114 0,100-0,150 0,120 0,040-0,070 0,058 0,102-0,218 0,160 0,200-0,512 0,331 0,040-0,512 0,159 n = 5 : NDEA micrograme/kg Limite Media 0,041-0,060 0,052 0,030-0,058 0,045 0,113-0,175 0,155 0,040-0,060 0,050 0,030-0,060 0,043 0,088-0,108 0,099 0,040-0,060 0,051 0,030-0,175 0,071 n = 5 : NPYR micrograme/kg Limite Media 0,104-0,206 0,163 urme urme 0,200-0,337 0,260 0 0 0 0 0 0 0,559-1,002 0,762 0-1,002 0,169
0,331
0,35 0,3 0,25 0,193 g/kg NDMA 0,2 0,15 0,1 0,05 0
S. Choriso Kaiser S. Bnean C. Cabanos S. Sibiu Bacon
0,16 0,114 0,058 0,12 0,135
Pete afumat
Diagrama 1. - Valori medii ale coninutului de NDMA n unele produse din carne i pete afumat (g/kg)
Nivelul de dietilnitrozamin (NDEA) n produsele de carne i pete a fost relativ mai mic ca cel al NDMA, cu excepia sortimentului Kaiser. NDEA a avut urmtoarele valori limit i medii (diagrama nr. 2): - 0,030-0,060 g/kg i media de 0,043 g/kg la salamul Choriso; - 0,030-0,058 g/kg cu media de 0,045 g/kg la crnai Cabanos; - 0,040-0,060 g/kg i valoare medie de 0,050 g/kg la salamul Bnean; - 0,040-0,060 g/kg i valoare medie de 0,051 g/kg la petele afumat; - 0,041-0,060 g/kg i media de 0,052 g/kg la bacon; - 0,088-0,108 g/kg i media de 0,099 g/kg la salamul de Sibiu; - 0,113-0,175 g/kg i media de 0,155 g/kg la Kaiser.
647

0,2 0,155 0,15 0,099 0,1 0,05 0,051 0,052
g/kg NDEA
0,05
0,043
0,045
0
S. Choriso C. Cabanos S. Bnean Pete afumat Bacon S. Sibiu Kaiser
Diagrama 2. Valori medii ale coninutului de NDEA n unele produse de origine animal
1 0,9 0,8 0,7 g/kg NPYR 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
C. Cabanos S. Bnean S. Choriso S. Sibiu Bacon Kaiser Pete afumat
0,762
0,26 0,163 0 0 0 0
Diagrama 3. Valori medii ale coninutului de NPYR n unele produse de origine animal
- 0,088-0,108 g/kg i media de 0,099 g/kg la salamul de Sibiu; - 0,113-0,175 g/kg i media de 0,155 g/kg la sortimentul Kaiser. NPYR, cea de a treia NA volatil cercetat n produsele din carne i pete (diagrama 3) a fost: - absent n salamul Bnean, salamul Choriso i salamul de Sibiu; - sub form de urme n crnaii Cabanos;
648
- prezent cu valori medii de - 0,163 g/kg (0,104-0,206 g/kg) la Bacon; 0,260 g/kg (0,200-0,337 g/kg) la Kaiser; 0,762 g/kg (0,559-1,002 g/kg) la petele afumat. Cumulate nivelurile celor trei NA (NDMA, NDEA i NPYR) din produsele cercetate, s-a putut constata urmtoarele valori medii (diagrama nr. 4): 1,114 g/kg la petele afumat; 0,529 g/kg la Kaiser; 0,408 g/kg la bacon; 0,259 g/kg la salamul de Sibiu; 0,180 g/kg la Cabanos; 0,170 g/kg la salamul bnean i 0,101 g/kg la salamul Choriso.
1,2 1,1 1 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0 1,114
g/kg
0,529 0,408 0,259 0,18 0,17
0,101
Pete afumat
Kaiser
Bacon
S. Sibiu
C. Cabanos
S. S. Choriso Bnean
Diagrama 4. Valori medii cumulate de NDMA, NDEA i NPYR n unele produse de origine animal (g/kg)
CONCLUZII Investigaiile privind nivelul de NDMA, NDEA i NPYR n unele produse din carne i pete afumat au evideniat: 1. Prezena NDMA la toate cele 7 sortimente cercetate la nivel mediu de 0,058 g/kg la salam Choriso i de 0,331 g/kg la petele afumat. 2. NDEA s-a identificat la fel n toate cele 7 sortimente, dar n cantiti inferioare fa de NDMA cu excepia produsului Kaiser. 3. NPYR a avut o valoare medie de 0,762 g/kg la petele afumat, 0,260 g/kg la Kaiser, 0,163 g/kg la bacon, ca urme n Cabanos i absent n salamurile de durat.
BIBLIOGRAFIE
1. Andrade R., Reyes G.R., Rath Susanne, 2005 A method for the determination of volatile N-nitrosamines in food by HS-SPME-GC-TEA. Food Chemistry, 91, 1, 173-179.
649
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. Hura Carmen, 1997 Poluarea chimic a alimentelor i sntatea. Ed. Socom Hermes, Iai. Hendrickson B.J., Cram J.D., Hamonand S.G., 1976 Chimie organic. Ed. t. i Enciclopedic, Bucureti. Jgerstad Margaretha, Skog K., 2005 Genotoxicity of heat procesed foods. Mutat. Reserche, 574, 1-2, 156-172. Montesano R., Bartsch H., 1976 Mutagenic and carcinogenic N-nitrocompouds: Posibil environmental hazard. Mutat. Res., 32, 179-227. Mirvish S.S., 1995 Role of N-nitroso compounds and nitrosation in etiologi of cancer gastric, oesophageal, nasopharyngeal and bladder cancer and contribution to cancer of known exposure to NOC. Cancer Lettres 93, 17-25. Popa G., Segal B., Dumitrache S., Segal Rodica, Apostol C., Teodoru V., 1986 Toxicologia produselor alimentare. Ed. Academiei Romne, Bucureti. Stnescu V., Stnescu Undina, Ciocrlie Nicoleta, 1996 Semnificaia igienicosanitar a nitrozaminelor n produsele alimentare. Rev. Rom. de Med. Vet., 6, 3, 347-359. indilar E., Bondoc I., 1994 Efectul toxic i cancerigen al nitrozaminelor din alimente. Tezele Conf. jubiliare 20 de ani de nvmnt vetrinar n R. Moldova 105. indilar E.V., 2005 Contribuii la studiul reziduurilor de nitrai, nitrii i nitrosamine n unele produse de origine animal. Tez de doctorat, F.M.V. Iai. Ukava-Ishikava S., Seki M., Mochizuki M., 1999 Mutagenity of potasium Alkanediazotates in Chinese Hamster V79 Cells and their Alkilanting Activity. Biol. Pharm. Bull., 22, 6, 577-581. Yurchenko S., Mlder U., 2005 Volatile N-nitrosamines in various fish products. Food Chemistry, Abstract, Article in Press. Environmental Protection Agency-IRIS, 2005 N-nitrosodimethylamine. http://www.epa.gov/subst/0045.htm Environmental Protection Agency-IRIS, 2005 N-nitrosodiethylamine. http://www.epa.gov Environmental Protection Agency-IRIS, 2005 N-nitrosopyrolidine. http://www.epa.gov/iris/subst/0081.htm
650
NIVELUL UNOR NITROZAMINE VOLATILE N UNELE SORTIMENTE DE BRNZETURI

THE LEVEL OF SOME VOLATILE NITROSAMINES IN VARIOUS CHEESES
E.V. INDILAR, M. TOTOLIN, E. INDILAR U.S.A.M.V. Iai Trough gascromatographic method we are examined the level of NDMA, NDEA and NPYR in varius cheese. In cheese, the following aspects regarding nitrosamines were shown: Neither NDMA, NDEA and NPYR were found in Balkan cheese; in Ceddar cheese there were found only traces of the three nitrosamines; only NDMA was found in Schweitzer cheese, with the average value of 0,069 g/kg; the three nitrosamines were present in smoked Cacaval cheese as follows: 0,111 g/kg for NDMA; 0,063 g/kg for NDEA; 0,025 g/kg for NPYR.
Key words: cheese, nitrosamines, level
Nitrozaminele sunt compui chimici toxici de risc cancerigen indirect, clasate n categoria toxicelor dup bioactivare (metabolizare). n laptele i brnzeturile proaspete, iaurt, unt, smntn sunt absente sau sub form de urme. n laptele pasteurizat s-au gsit NA n cantiti de 0,05-0,17 g/kg, iar n laptele praf n limite de 0-4 g/kg i o medie de 1,9 g/kg (4, 6). n brnzeturi, n special n cele maturate s-a stabilit niveluri de pn la 20 g/kg (6). Se consider c nivelul de nitrozare din aceste brnzeturi este dat de procesul de maturare i intervenia unor microorganisme. Astfel, Penicillium camemberti i ali micei favorizeaz formarea de NA. n brnza Ceddar i Camembert s-au evideniat niveluri cuprinse ntre 0,9-1,7 g/kg. n brnzeturile de tip Roquefort s-au identificat NDMA i NDEA, iar brnza Schweitzer NDMA, NDEA i NPIP, dar la niveluri relativ mici la unele probe (4, 6). n unele brnzeturi daneze, NA la niveluri de 0,1-0,3 g/kg s-a stabilit la 26% din 156 de probe cercetate (6, 7). Aciunea NA asupra oamenilor i animalelor se manifest extrem de diferit n raport de doz, structur chimic inducnd de la oc toxic la mutagenitate, carcinogenitate i embriotoxicitate (1, 2, 5, 8, 9, 10). Aciunea carcinogen a NA poate fi explicat prin ipoteza alchilrii. n organism NA sunt supuse unui proces de activare biologic printr-o reacie de
651
alchilare cu formare de alfa hidroxinitrozamin, care n final conduce la un agent alchilant-diazoalcan, care va aciona la nivelul sediilor nucleofile ale ADN i ARN (1, 3, 6, 9). n lucrare s-a urmrit stabilirea nivelului de NDMA, NDEA i NPYR la patru sortimente de brnzeturi: Ceddar, Schweitzer, Telemea i Cacaval afumat. MATERIAL I METOD
Pe 20 probe de diverse sortimente de brnzeturi s-au determinat prin metoda gazcromatografic trei NA volatile: NDMA, NDEA i NPYR. Determinrile s-au fcut respectnd cerinele complexe impuse de metodologia extraciei, purificarea extractelor, etalonarea corect, dozarea NA gazcromatografic, confirmarea rezultatelor prin spectrometrie de mas i interpretarea cromatogramelor.
REZULTATE I DISCUII Rezultatele obinute sunt redate n tabelul nr. 1 i diagrama 1.

Tabelul 1 Valori ale coninutului de NDMA, NDEA n unele brnzeturi Produsul din lapte Cedar vaier Telemea Cacaval afumat Media n=5: NDMA g/kg Limite Media urme urme 0,055-0,075 0,069 0 0 0,100-0,125 0-0,125 0,110 0,044 n=5: NDEA g/kg Limite Media urme urme 0 0 0 0 0,054-0,075 0-0,075 0,063 0,016 n=5: NPYR g/kg Limite Media urme urme 0 0 0 0 0,020-0,037 0-0,0,37 0,025 0,006
Datele obinute au evideniat urmtoarele valori ale nitrozaminelor n cele patru sortimente de brnzeturi cercetate: coninut 0 g/kg de NDMA, NDEA i NPYR n brnza telemea; urme de NDMA, NDEA i NPYR n brnza Ceddar; coninut ntre 0,055-0,075 g/kg i o medie de 0,069 g/kg de NDMA la brnza vaier i coninut 0 g/kg de NDEA i NPYR; coninut ntre 0,100-0,125 g/kg ( x = 0,110 g/kg) de NDMA, ntre 0,054-0,075 g/kg( x = 0,063 g/kg) de NDEA i ntre 0,020-0,037 ( x = 0,025 g/kg) de NPYR n cacavalul afumat.

652
Datele au evideniat cteva aspecte interesante: absena celor trei NA cercetate n brnza telemea ca produs lactat apreciat de consumatori; prezena numai a NDMA n brnza Schweitzer cu un nivel mediu 0,069 g/kg; prezena NDMA, NDEA i NPYR n cacavalul afumat. Aceste valori sunt sub LMA prevzut n normative.
0,11 0,1 0,09 0,08 0,07 g/kg 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0 NDMA NDEA NPYR 0 0 0 0 0 0 0 0 0,025 0,069 0,063 0,11
B. Cedar
B. telem ea
B. vai er
Ca caval afum at
Diagrama 1. Valori medii ale coninutului de NDMA, NDEA i NPYR n unele brnzeturi
CONCLUZII Investigaiile privind stabilirea nivelurilor de NA volatile din unele sortimente de brnzeturi ne-au condus la stabilirea urmtoarelor concluzii: 1. La toate sortimentele de brnzeturi, nivelul de NDMA, NDEA i NPYR s-a situat sub LMA normat. 2. n brnza telemea nu s-au evideniat NDMA, NDEA i NPYR. 3. Prezena de urme de NDMA, NDEA i NPYR n brnza Ceddar. 4. Prezena numai de NDMA cu valoare medie de 0,069 g/kg n brnza schweitzer. 5. Prezena NA volatile n cacavalul afumat cu nivel mediu de 0,110 g/kg de NDMA; 0,063 g/kg de NDEA i 0,025 g/kg de NPYR.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. Bartsch H., Ohsihima H., Shuker D.E., Pignatelli B., Calmels S., 1990 Exposure of humans to endogenous N-nitroso compounds implications in cancer etiology. Mutat. Res., 238, 255-267. Bruning-Fann C.S., Kaneene J.B., 1993 The effects of nitrate, nitrite and N-nitroso compounds on human health: a rewiew. Vet. Human Toxicology, 35, 521-538.
653
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Corne Jaqueline, 1992 Estimations de la concentration des nitrites, nitrates et nitrosamine dans quelques denre en France. Science des aliments, 12, 156197. Hura Carmen, 1997 Poluarea chimic a alimentelor i sntatea. Ed. Cermi, Iai. Mavelle T., 1991 Dosage de composs N-nitross. In: Technique danalyse et control dans les industries alimentaires. Technique et Documentation, Paris. Popa G., Segal B., Dumitrache S., Segal Rodica, Apostol C., Teodoru V., 1986 Toxicologia produselor alimentare. Ed. Academiei Romne, Bucureti. Renner E., 1983 Milck and Dairy Products in human nutrition W. Gmb. H, Volkswirtschaft Pichar Verlag, Mnchen. indilar E.V., 2005 Contribuii la studiul reziduurilor de nitrai, nitrii i nitrosamine n unele produse de origine animal. Tez de doctorat, F.M.V. Iai. Vermeer T.M. Ingrid, Pachen Danielle, Dallinga W.J., Kleijas C.S.J., Maanen M.S.J., 1998 Volatile N-nitrosamine Formation after Intake of Nitrat at the ADI Level in Combination with an Amine-rich Diet. Environ Heaakth Perspect., 106, 459-463.
654
APRECIEREA NIVELULUI DE NITRAI N CARNEA PROASPT DE BOVIN, OVIN, SUIN I PETI

THE ESTIMATION OF NITRATE LEVEL IN COW, EWE, PIG AND FISH RAW MEAT
E.V. INDILAR, E. INDILAR, I. BONDOC U.S.A.M.V. Iai We are examined 106 samples of raw meat and 20 samples of raw fish regarding the nitrate level trough spectrocolorimetric method. The results regarding the residual level of nitrates in raw meat and raw raw fish has the next values in ppm NaNO3: 0-24,00 ( x =8.72) for cow meat; 0-19,00 ( x =9,50) for ewe meat; 6,00-15,00 ( x =10,59) for fish meat; 0-48,00 ( x =17,25) for pig meat.
Key words: nitrates, level, fresh meat, fish.

Nitraii din sol provenii din biodegradare gunoiului i/sau din utilizarea substanelor nitrice ca fertilizani intr n lanul trofic alimentar sol plant animale om, produse animale om (9, 11). Principalele surse de nitrai pentru om sunt reprezentate de: unele vegetale care cumuleaz n anumite condiii nitraii n rdcini, frunze, tulpini, etc.; apa cu un coninut de peste 45 mg NO-3/l (1, 2, 7). Produsele animale procesate i carnea proaspt constituie surse secundare de nitrai. Dei animalele rumegtoare pot ingera cantiti relativ mari de nitrai odat cu furajele i apa, n carnea lor dup sacrificare i n laptele lor se regsesc cantiti relativ mici de nitrai (11, 12). Rumegtoarele folosesc azotaii ca materie prim pentru sinteza substanelor azotoase cu ajutorul simbionilor rumenali (11). La monogastrice , azotaii sunt absorbii n intestinul subire, trec n circulaia sanguin i sunt excretai prin rinichi (7, 11). n carnea procesat n produse din carne la care srarea se face din amestec de NaCl, NaNO3 i NaNO2 nivelul rezidual al nitrailor rareori depete LMA (11, 12). Nitraii sunt redui enzimatic n nitrii att exogen ct i endogen: pe baza nitratreductazelor proprii alimentelor i a celor bacteriene din alimente; reducere enzimatic pe baza nitratreductazelor bacteriene din tractusul digestiv buco-gastro-intestinal (3, 4, 7, 11).
655
Nitraii per se au aciune toxic relativ redus (9, 11). Convertii n nitrii induc efecte hemoglobinizante mai ales la copii (5, 7). Convertii n nitrii ei pot produce nitrozamine (7, 8, 10). Att nitraii ct i nitriii perturb la nivelul tubului digestiv, procesele metabolice ale vitaminelor B1, B6, A, betacarotenului, reduc absorbia proteinelor i lipidelor din raii, scad activitatea acetilcolinesterazelor, inhib captarea iodului de ctre tiroid, induc depresia sistemului imunitar i perturb fixarea fierului n hematii (6, 8, 10, 11). n lucrare ne-am propus s stabilim nivelul de nitrai din carnea proaspt de vit, oaie, porc i pete proaspt neprelucrat. MATERIAL I METOD
Pe 106 probe de carne proaspt de bovine, ovine i suine i 20 probe de pete proaspt s-a determinat nivelul nitrailor. Pentru determinare s-a folosit metoda colorimetric cu M-xilenol n care nitraii i nitriii s-au stabilit ca azot total, iar nitriii s-au determinat prin metoda Griess.
REZULTATE I DISCUII Sinteza investigaiilor este redat n tabelul nr. 1 i diagrama 1.

Tabelul 1 Valori ale nivelului de nitrai n carnea proaspt a unor animale de mcelrie i pete neprelucrat Specia de la care provine carnea Bovine Ovine Suine Pete afumat Total/Media Nr. probe 41 25 40 20 126 mg NaNO3/kg Intervale Media 0-24,00 8,72 0-19,00 9,50 0-48,60 17,25 6,00-15,00 10,69 0-48,60 11,90 Obs. -
Analiza datelor arat c nivelul nitrailor reziduali a variat n limite relativ largi n carnea celor trei specii cercetate. La cele 41 probe de carne de bovin, nitraii au avut valori limit ntre 0 ppm NaNO3 i 24,00 ppm NaNO3, iar valoarea medie de 8,72 ppm NaNO3. La cele 25 probe de carne de ovin nitraii au avut intervale cuprinse ntre 0-19,00 ppm NaNO3, cu valoare medie de 9,50 ppm NaNO3. La carnea de suine, constituit din 40 probe, nitraii au avut limitele cuprinse ntre 0-48,60 ppm NaNO3 i o medie de 17,25 ppm NaNO3. Nivelul nitrailor la cele 20 probe de pete proaspt a avut limite cuprinse ntre 6,00 i 15,00 ppm NaNO3 i media de 10,69 ppm NaNO3.
656
La carnea mamiferelor bovine, ovine i suine s-a observat absena nitrailor la 11 probe reprezentnd 10,37%. La carnea de bovine 6 probe (14,63%) din 41 nu au coninut nitrai. n carnea de ovine nitraii au avut valoarea 0 ppm la 8,00% din probe, iar carnea de porc a fost liber de nitrai la 7,5% din probe. n carnea petilor proaspei provenii din apele dulcicole din zona Iai, coninutul nitrailor a avut limite de variaii ntre 6,00 i 15,00 ppm NaNO3 i o medie de 10,69 ppm NaNO3.
18 16 14 12 11,9 8,72 9,5 10,69 17,25
mg/kg
10 8 6 4 2 0
Carne bovine Carne bovine
Carne ovine
Carne suine Carnea suine
Carne pete Carne pete
Media Media
Carne ovine
Diagrama 1. - Valori medii a reziduurilor de nitrai n carnea proaspt i pete neprelucrat
CONCLUZII n carnea proaspt de bovin i ovin coninutul nitrailor reziduali au avut valori medii sub 10 ppm NaNO3, dar a fost aproape dublu n carnea de porc (17,25 ppm NaNO3). Au fost libere de nitrai 11 probe de carne cercetat reprezentnd 10,37% din probe. Nitraii reziduali n carnea petilor proaspei au aprut uor crescui fa de carnea de bovine i ovine, avnd valoarea medie de 10,93 ppm NaNO3.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. Banu C., Preda N., Vasu S., 1982 Produsele alimentare i inocuitatea lor. Ed. Tehnic, Bucureti. Bara C., Laslo C., 1997 Elemente de ecotoxicologie i protecia mediului nconjurtor. Ed. Universitii Oradea.
657
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Bruning-Fann C.S., Kaneene J.B., 1993 The effects of nitrate, nitrite and N-nitroso compounds on human health: a rewiew. Vet. Human Toxicology, 35, 521-538. 4. Cotru M., 1991 Toxicologie. Ed. Did. i Ped. Bucureti. 5. Environmental Protection Agency (E.P.A.U.S), 2005 Nitrates http://www.epa.gov/iris/subst/0076.htm 6. FRASER P., 1985 Nitrates: epidemiologic evidence. IARC Sci. Publ., 65, 183-185. 7. Hura Carmen, 1997 Poluarea chimic a alimentelor i sntatea. Ed. Socom Hermes, Iai. 8. Hura Carmen, 2001 Contaminani chimici n produsele alimentare 1980-2000. Ed. Cermi, Iai. 9. Mitrnescu Elena, Savu C., 1998 Din riscurile polurii mediului i alimentelor. Ed. MAST, Bucureti. 10. Pignatelli B., 1994 Nitrates, source indirectes de composs N-nitross (CNO). Risque pour la sant houmain. Soc. Fr. Sant Publique, 1, 62-78. 11. Popa G., Segal B., Dumitrache S., Segal Rodica, Apostol C., Teodoru V., 1986 Toxicologia produselor alimentare. Ed. Academiei Romne, Bucureti. 12. indilar E.V., 2005 Contribuii la studiul reziduurilor de nitrai, nitrii i nitrosamine n unele produse de origine animal. Tez de doctorat, F.M.V. Iai. 3.
658
EVALUAREA NIVELULUI DE NITRII N UNELE PRODUSE DIN CARNE

THE ESTIMATION OF THE NITRITE LEVEL IN SOME MEAT PRODUCTS
E.V. INDILAR, E. INDILAR U.S.A.M.V. Iai We are investigated 1029 samples of meat products regarding the level of residual nitrites through spectrocolorimetric method. In all samples examined we are observed wide limits of nitrite level (4 ppm NaNO2 of smoked products and 121 ppm NaNO2 of fresh salami). We are established over MRL the level of residual nitrites in: 29,38% for fresh sausages; 8,99% for salami; 6,00% for length sausages; 4,24% for semismoked sausages and 3,09% for smoked products. For all meat products the residual nitrites over MRL was been in 9,23% of samples.
Key words: meat products, level, residuale nitrites.
Nitriii se folosesc ca adjuvani n produsele din carne n scop tehnologic i antibacterian (1, 2, 4, 5, 8, 12). Sub raport tehnologic, mai ales n procesrile care reclam tratamente termice ale produselor, nitriii alturi de sare induc cteva efecte benefice privind aroma, gustul i culoarea prin apariia pigmenilor roii de Mi i Hb (1, 2, 4, 5, 8). Aroma i gustul acestor produse sunt determinate de procesele biochimice din carne i nitrii (1, 2). Apariia pigmenilor roii azooximiocromogen i azooxihemocromogen d aspect plcut produselor asigurndu-le o culoare roie (1, 8, 12). Nitriii sunt redui n oxid de azot de ctre nitritreductaz, care la cald se combin cu mioglobina i hemeglobina dnd pigmenii roii (1, 2, 12). Efectul antibacterian al nitriilor, dei nu n totalitate explicat se manifest att asupra florei saprofite, dar cu precdere asupra florei patogene anaerobe: Cl. botulinum, Cl. perfringens (2, 4, 12). Efectul cid al nitriilor asupra clostridiilor trebuie privit ca o interaciune ntre temperatur, concentraia NaCl i a NaNO2, care induc scderea Aw-ului, pH, formarea de substane inhibitoare a clostridiilor de tip Efect Perigo, sau alte substane cu rol antimicrobian (1, 2, 4, 8). ntruct nitriii utilizai ca aditivi n produsele din carne s-au dovedit a fi precursorii formrii de nitrozamine cu efecte cancerigene prin biodegradare, s-au impus msuri restrictive asupra cantitilor folosite n inducerea efectelor scontate sub raport tehnologic i asigurarea stabilitii i securitii produselor (1, 2, 3, 4).
659
La fel s-a recomandat de ctre organismele internaionale (OMS, FAO) ca pe lng reducerea cantitilor de nitrii adugai produselor din carne s se foloseasc concomitent alturi de sare i nitrii, acidul ascorbic sau srurile lui care reduc nitriii n oxid de azot, coboar potenialul redox, protejeaz nitrozocromogenii formai i inhib formarea nitrozaminelor (6, 11, 12, 13, 14). Fiecare ar, innd cont de recomandrile mai sus artate i-a stabilit cantitile de nitrii adugai n produse n aa fel ca nivelul nitriilor reziduali din produse s fie ct mai mic, care pentru ara noastr apare ca LMA de 70 ppm NaNO2. Aceast cerin s-a impus pentru a se respecta recomandarea FAO-OMS ca ADI pentru NaNO2/kilocorp/zi s fie maximum 0,2 mg i pentru substana activ ca NO-2/kilocorp/zi de maximum 0,13 mg. ntruct nitriiiau un potenial toxic ridicat determinnd methemoglobinemie i sunt precursorii formrii de nitrozamine cancerigene prin combinarea lor cu aminele secundare prioritar, fiecare ar are obligaia s monitorizeze i s supravegheze permanent prin laboratoare agreate nivelul reziduurilor de nitrii din produse (7, 9, 10, 15, 16). n lucrare s-a urmrit nivelul rezidual al nitriilor la unele sortimente de mezeluri i afumturi comercializate pe piaa municipiului Iai n perioada a mai muli ani (2001-2004). MATERIAL I METOD
Prin tehnica spectrocolorimetric, folosind metoda Greiss s-au determinat nitriii reziduali din 177 probe de diverse sortimente de prospturi, 189 probe de diferite sortimente de crnai, 259 porbe de diferite sortimente de salamuri semiafumate, 354 probe de diverse afumturi i 50 probe de diferite sortimente de salamuri de durat.
REZULTATE I DISCUII n tabelul nr. 1 i figura nr. 1 se red nivelul rezidual al nitriilor din patru sortimente de prospturi indigene i trei sortimente de prospturi din import. Datele obinute la sortimentele indigene au evideniat faptul c nitriii reziduali prezint limite de variaii relativ largi pentru fiecare sortiment cercetat i la dou sortimente s-au observat depiri ale LMA, adic la 7,69% din probele de crenwurti i la 2% din probele indigene de parizer clasic. La cele trei sortimente de prospturi din import valorile limit dei au prezentat variaii relativ strnse, au avut depiri ale LMA la 93,33% din probele de parizer de curcan, la 95,00% din probele de parizer de porc i la 93,33% din probele de parizer de pui.
660
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Valori ale reziduurilor de nitrii n cteva sortimente de prospturi n perioada 2001-2004 i procentul depirii LMA Nr. crt. Nr. probe mg NaNO2/kg Media 29,64 26,98 36,60 26,45 28,76 74,53 83,10 85,73 81,32 43,61 Frecvena depirii LMA Abs. Rel. 4 1 0 0 5 14 19 14 47 52 7,69 2,00 0 0 3,93 93,33 95,00 93,33 94,00 29,38
Sortimentul
1 Crenwurti 2 Parizer clasic 3 Parizer pui 4 Polonez Total/Medie 1 Parizer curcan 2 Parizer porc 3 Parizer pui Total/Media Total gen./Media
Limite A. Prospturi indigene 52 10,20-121,00 50 10,00-72,80 10 29,00-45,00 15 10,80-46,00 127 10,00-121,00 B. Prospturi import 15 70,00-82,00 20 70,00-90,00 15 70,00-94,00 50 70,00-94,00 177 10,00-121,00
93,33 95 93,33
100 90 80 70 60 % 50 40 30 20 10 0
7,69
94
Crenwurti Parizer P. pui Polonez Media P. curcan

2
3,93
00
sortimente indigene
sortimente import
Figura 1. - Procentul depirii LMA de nitrii n unele sortimente de prospturi indigene i din import
Pentru cele 189 probe de crnai, aparinnd la nou sortimente, rezultatele sunt redate n tabelul nr. 2 i figura nr. 2. Analiza datelor a evideniat c nitriii reziduali prezint largi limite de variaii la circa 78% din cele nou sortimente cercetate cu valori cuprinse ntre 15 ppm NaNO2 la crnaii de porc i 111 ppm NaNO2 la crnaii Trandafir.
661
Cinci sortimente din cele nou cercetate (circa 55%) au prezentat depiri ale LMA de 70 ppm NaNO2. Aceste depiri ale LMA s-au ntlnit n procent de 3,70% la crnaii de Cluj; 14,28% la crnaii Cabanos; 14,28 la crnaii Trandafir; 20,00% la crnaii de porc i 20,00% la crnaii populari. La aceast categorie de produse s-au nregistrat depiri ale LMA la 8,99% din probe.
Tabelul 2 Valori ale reziduurilor de nitrii din unele sortimente de crnai i procentul depirii LMA n perioada 2001-2004 Nr. crt. Nr. probe 42 32 27 10 10 10 5 25 28 189 mg NaNO2/kg Limite 18,00-88,00 29,00-52,00 23,00-75,00 36,00-53,00 38,00-50,00 35,00-42,00 31,00-101,00 15,00-93,00 20,00-111,00 15,00-111,00 Media 49,37 38,71 44,71 43,60 46,10 37,20 54,80 49,16 45,52 45,33 Frecvena depirii LMA Abs. Rel. 6 14,28 0 0 1 3,70 0 0 0 0 0 0 1 20,00 5 20,00 4 14,28 17 8,99
Sortimentul
1 Crnai Cabanos 2 Crnai de cas 3 Crnai Cluj 4 Crnai Mnzteti 5 Crnai Muntenia 6 Crnai Olteneti 7 Crnai popularii 8 Crnai de porc 9 Crnai Trandafir Total/Medie
70 60 50 40 % 30 20 10 0
C. Cluj C. Cabanos C. Trandafir C. populari C. porc Media
14,28 3,7
14,28
20
20 8,99
Figura 2. - Procentul depirii LMA de nitrii n unele sortimente de crnai
Rezultatele privind nivelul reziduurilor de nitrii n unele sortimente de salamuri semiafumate sunt redate n tabelul nr. 3 i figura nr. 3. La cele 259 de probe de salamuri semiafumate, aparinnd la 14 sortimente diferite, valoarea medie a nitriilor reziduali a fost de 40,57 ppm NaNO2. i la
662
aceast categorie de produse s-a remarcat variaii largi ale valorilor limit cuprinse ntre 4 ppm NaNO2 la salamul de porc i 104 ppm NaNO2 la salamul de vit+porc.
Tabelul 3 Valori ale reziduurilor de nitrii n unele sortimente de salamuri semiafumate cu evidenierea depirii LMA Nr. crt. Sortimentul Nr. probe 10 8 50 10 18 5 40 10 10 12 56 10 8 12 259 mg NaNO2/kg Limite 32,80-40,50 30,00-65,00 25,00-53,00 35,50-72,10 36,00-42,00 41,00-46,00 11,00-55,00 38,80-40,50 33,00-41,00 4,00-68,00 7,00-102,00 35,50-47,70 14,00-104,00 7,30-79,00 4,00-104,00 Media 39,03 50,50 41,58 41,76 38,57 42,80 39,71 40,40 38,30 34,42 40,11 38,00 56,87 36,53 42,57 Frecvena depirii LMA Abs. Rel. 0 0 0 0 0 0 1 10,00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 4 7,14 0 0 2 25,00 1 8,33 8 3,09
10 Salam Bicaz 11 Salam Brate 12 Salam Bucureti 13 Salam Debrein 14 Salam Dumbrava 15 Salam Franuzesc 16 Salam Italian 17 Salam Mistreul 18 Salam Picant 19 Salam de porc 20 Salam de Vara 21 Salam Voinea 22 Salam vit+porc 23 Salam Vntoresc Total/Medie
70 60 50 40 % 30 20 10 0
S. Var S. Vntoresc S. Debrein S. vit+porc Total depiri LMA
25 7,14 8,33 10 3,09
Figura 3. - Procentul depirii LMA de nitrii n unele sortimente de salamuri semiafumate
Depiri ale LMA de nitrii reziduali s-au nregistrat pe sortimente n procent de: 7,14% la salamurile de var; 8,33% la salamul Vntoresc; 10,00% la
663
salamul Debrein i 25,00% la salamul vit+porc. Pentru toat gama sortimental de salamuri semiafumate depirea LMA s-a ntlnit la 3,09% din probele cercetate. La salamurile de durat, media nitriilor reziduali a fost de 56,96 mg NaNO2/kg, dar i la aceast categorie de produse s-au ntlnit variaii relativ largi ale nitriilor reziduali i depiri ale LMA (tabelul nr. 4 i figura nr. 4).
Tabelul 4 Valori ale reziduurilor de nitrii n unele sortimente de salamuri de durat i procentul depirii LMA Sortimentul S. Bnean S. Choriso S. Sibiu Total/Medie Nr. probe 15 15 20 50 mg NaNO2/kg Intervale 38,00-62,00 32,00-81,00 48,00-74,00 32,00-81,00 Media 49,33 53,93 64,95 56,96 Frecvena depirii LMA Abs. Rel. 0 0 1 6,66 2 10,00 3 6,00
15 13 11 9 % 7 5 3 1 -1 S. Bnean S. Choriso S. Sibiu Media 0 6,66 6 10
Figura 4. - Procentul depirii LMA de nitrii n unele sortimente de salamuri de durat
La aceste produse nitriii reziduali au prezentat limitele cuprinse ntre 32 ppm i 81 ppm NaNO2, iar depiri ale LMA s-au stabilit n procent de: 6,66% la probele de salam Choriso; 10% la probele de salam de Sibiu i 6% pentru toate probele cercetate. La cele 354 probe de produse din carne ca afumturi constituite din 16 sortimente s-au ntlnit depiri ale LMA de nitrii la 11 sortimente (68,75%). Depiri ale LMA la toate probele s-a stabilit la 4,24% din probe (tabelul nr. 5 i figura nr. 5).
664
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 5 Valori ale reziduurilor de nitrii n unele sortimente de afumturi n perioada 2001-2004 i procentul depirii LMA Nr. crt. Nr. probe 5 29 10 40 15 10 30 10 55 20 50 10 10 10 40 10 354 mg NaNO2/kg Limite 28,00-84,00 23,00-108,00 10,00-50,10 28,00-79,00 29,00-79,00 39,00-60,00 30,00-80,00 23,00-28,00 29,60-88,00 5,00-79,00 36,00-80,00 24,00-80,00 20,00-40,00 21,00-34,00 28,00-98,00 5,00-79,00 5,00-108,00 Media 46,40 45,90 29,02 41,66 49,27 48,50 38,87 25,60 47,36 39,45 47,27 50,10 33,30 26,90 48,90 36,30 43,35 Frecvena depirii LMA Abs. Rel. 1 20,00 1 3,45 0 0 1 2,50 1 6,66 0 0 1 3,33 0 0 3 5,45 1 5,00 2 4,00 1 10,00 0 0 0 0 2 5,00 1 10,00 15 4,24
Sortimentul
1 Bacon 2 Costi afumat 3 Kaiser 4 Muchi file 5 Muchi ignesc 6 Muchiule umplut 7 Muchiule Montana 8 Pastram Kosarom 9 Pastram porc 10 Pastram pui 11 Pastram vit 12 Rasoale porc 13 Rulad extra 14 unc Kosarom 15 unc porc 16 unc pui Total/Medie
2,5 3,33 3,45 4 5 5

5,45 6,66 10 10 20
0
Bacon Pastram porc Costi afumat
5
unc pui mg unc porc M. Montana
10
Rulad NaNO2/kg Pastram pui Mu chi file
15
M. ig nesc Pastram vit
20
Figura 5. - Procentul depirii LMA de nitrii n unele afumturi
665
CONCLUZII Investigaiile ne-au permis s formulm urmtoarele concluzii: 1. La toate sortimentele de produse din carne s-au observat variaii n limite foarte largi ale nivelului de nitrii reziduali (4 ppm NaNO2 la salamurile afumate i 121 ppm NaNO2 la prospturi). 2. Depiri ale LMA de nitrii s-a stabilit n procent de 29,38% la prospturi; 8,99% la crnai; 6,00% la salamurile de durat; 4,24% la afumturi i 3,09% la salamurile semiafumate. 3. Procentul depirii LMA de nitrii la toate produsele s-a cifrat la 9,23% din produse, mrete riscul asumat prin LMA pentru consumatori.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. Banu C., Alexa P., Vizireanu Camelia, 1998 Procesarea industrial a crnii. Ed. Tehnic, Bucureti. Casens R.G., 1995 Use of sodium nitrite in cured meats today. Food Technol. 49, 72-75. Casens R.G., 1997 Residual nitrite in cured meats. Food Technol. 51, 53-55. Dykhuisen R.S., Frazer R., Duncan C., Smith C.C., Golden M., Benjamin N., Leifert C., 1996 Antimicrobial effect of acidified nitrite on gut pathogens: Importance of dietary nitrite in host defense. Antimicrob. Agents Chemother., 40, 1422-1425. Haldan J., 1901 The red color of salted meat. Journal Hyg. Camb., 1, 115-118. Hansson L.E., Nyren O., Bergstrom R., Wolk A., Lindgren A., Baron J., 1994 Nutrients and cancer gastric risk. A population based caze control study in Sweden. Int. Journal Cancer, 57, 638-644. Hura Carmen, 1992 Coninutului de nitrai i nitrii din meniurile n Moldova. Rev. Med. Chirurgical. Iai, 96, 1-2, 41-43. Hura Carmen, 2001 Contaminani chimici n produsele alimentare 1980-2000. Ed. Cermi, Iai. Ian Elena, 2001 Observaii privind calitatea i salubritatea preparatelor din carne comercializate pe teritoriul jud. Iai. Lucr. t. USAMV Iai, 44, Fasc. 2, 714-721. Michalski M.M., 1996 Rezidues of nitrites and nitrates in selected meat products examined in veterinary laboratories within the framework of sanitary-hygiene supervision in the year 1995. Bull. of the veterinary Institute in Pulawy, Poland, 40, 2, 117-120. Perciballi M., Conboy J.J., Hotchkiss J.H., 1989 Nitrite cured meats as a source of endogenously and exogenously formed N-nitrosoproline in the ferret. Food Cosmet. Toxicol., 27, 111-116. Popa G., Segal B., Dumitrache S., Segal RODICA, Apostol C., Teodoru V., 1986 Toxicologia produselor alimentare. Ed. Academiei Romne, Bucureti. Sarasua S., Savitz A.D., 1994 Cured and broiled meat consumption in relation to childhood cancer. Cancer Causes Control, 5, 141-148. Schuddeboom L.J., 1993 Nitrates and nitrites in Foodstuffs. Council of Europe Press, Belgium. indilar E.V., indilar E., 2004 Cercetri privind nivelul de nitrai i nitrii n unele produse din carne. Lucrri t. USAMV Iai, 47, 6, 319-323. indilar E.V., 2005 Contribuii la studiul reziduurilor de nitrai, nitrii i nitrosamine n unele produse de origine animal. Tez de doctorat, F.M.V. Iai.
5. 6. 7. 8. 9. 10.
11. 12. 13. 14. 15. 16.
666
NOI MOLECULE UTILIZATE N TERAPIA ANTIFUNGIC

NEW MOLECULES DESIGNED FOR ANTIFUNGAL THERAPY
M. MARE, Luminia MALIC, Ingrid APETREI, P. CAZACU, L. MIRON U.S.A.M.V. Iai The fungal infections management implies a quick therapy started very soon after the detection of fungal aetiology. In opposition with antibiotics designed for bacterial infections, the arsenal of antifungals used for systemic mycoses is very poor only flucytozine, amphotericin B and few azoles like fluconazole, itraconazole and voriconazole complied the necessities of this kind of infections. The use of other new antifungal compounds like caspofungin micafungin, anidulafungin, posaconazole, ravuconazole is actually in a period of clinical trials. Antifungal resistance represents an actua and acute problem because of new trends of significant increase in strains isolated from superficial and systemic mycoses. In this paper we discuss four of the most important new antifungals recently marketed worldwide. The high rate of fungal resistance to current antifungal compounds has stimulated the research in order to obtain of new efficient molecules: posaconazole, ravuconazole, caspofungin, anidulafungin, albaconazole, propiconazole derivatives, mycafungin, FX 0685.
Cuvinte-cheie: antifungice, voriconazol, posaconazol, caspofungin, micafungin.
Micologia medicala este o stiinta relativ noua, a carei dezvoltare in ultimele decenii este strans legata de cresterea receptivitatii gazdelor la infectia fungica. Interesul crescand pentru fungii cu potential patogen este relevat si de numarul de articole publicate in lume pe aceasta tema; astfel, daca in anul 1980 pe PubMed se puteau inventaria doar 627 de articole despre Candida, in 2001, numarul articolelor citate de aceeasi retea informationala ajunsese la 2533, adica aproximativ un articol publicat la fiecare 3 ore. In plus, proportia articolelor stiintifice care semnaleaza diminuarea sensibilitatii la antifungice a izolatelor clinice este in continua crestere. Problematica terapiei antifungice este dominat n zilele noastre de dou aspecte majore: numrul redus de antifungice disponibile comercial (cca. 25 substane active), pe de o parte, i creterea rezistenei la aceste molecule datorit remarcabilei plasticiti adaptative a fungilor, pe de alta parte. De remarcat faptul ca unele micoze emergente (zygomicozele) nu pot fi controlate eficient prin terapie antifungic, existnd doar o singur molecul activ fa de acesteaposaconazolul. Costul ridicat al tratamentului cu antifungicele de ultim generaie destinate omului i animalelor, spectrul selectiv de aciune al acestora, precum i
667
toxicitatea rezidual uneori considerabil a celor clasice, reprezint argumente irefutabile care impulsioneaz cercetarea privind obinerea unor noi substane active. Un argument n plus la acest demers, l constituie i lipsa oricror mijloace de profilaxie specific (vaccinare). Dac la acestea adugam variabilitatea extrem de mare a surselor de infecie (endogene si exogene) i reactivitatea diferit a indivizilor, care conduc la limitarea drastic a posibilitilor de profilaxie nespecific, vom constata c, de fapt, arsenalul de lupt mpotriva micozelor este extrem de srac. n plus, este destul de dificil s luptm cu un microorganism eucariot (fungul) existent n interiorul unui macroorganism eucariot (omul si animalele) fr a-i aduce i acestuia prejudicii n urma interaciunii cu aceste molecule xenobiotice antifungicele. Managementul infeciilor fungice presupune interventia terapeutic prompt i susinut iniiat ct mai precoce dup precizarea etiologiei fungice a acestora. Spre deosebire de agenii antibacterieni (antibiotice), arsenalul terapeutic antifungic utilizabil n infeciile sistemice este extrem de redus. Alturi de amfotericina B si 5-flucitozina, doar civa compui azolici ntrunesc rigorile impuse de terapia infeciilor fungice sistemice: fluconazolul, itraconazolul i voriconazolul. Utilizarea celorlali compui antifungici de ultim generaie (caspofungina, posaconazol, ravuconazol) se afl nc n faza de studiu clinic. Rezistena la antifungice reprezint o problema actual, din ce n ce mai acut, n special pentru clinicieni, datorit noilor tendine de cretere semnificativ a frecvenei tulpinilor fungice rezistente, responsabile att de infecii sistemice ct i localizate. Pe lng rezistena genetic fa de unii agenti antifungici (Candida lusitaniae la amfotericina B, Candida krusei la fluconazol), actualmente se constat o rezisten dobndit fa de agentii antifungici n general i fa de unii derivai azolici n special. Aceast rezisten este mai important n cazul speciilor non-albicans ale genului Candida (C. glabrata, C.krusei, C. tropicalis, C.parapsilosis, etc.) i aproape nesemnificativ n cazul tulpinilor de Candida albicans - 2,7% . ntr-un studiu recent efectuat in Statele Unite pe 2000 tulpini izolate din fungemii, este semnalat o rat relativ ridicat de rezisten la derivai azolici a izolatelor aparinnd speciilor non-albicans ale genului Candida comparativ cu cele de Candida albicans. Astfel, 8% dintre tulpinile de C.glabrata, 8% dintre cele de C.tropicalis si 34% dintre cele de C.krusei prezentau rezistena la fluconazol, n timp ce rata rezistenei la acelai antifungic a tulpinilor de C.albicans era de 5%. Fenomenul se manifest la fel de pregnant i n cazul itraconazolului, fa de care 51% dintre tulpinile de C.glabrata, 12% dintre cele de C.tropicalis i 20% dintre cele de C.krusei erau de asemenea rezistente, spre deosebire de cele aparinnd speciei C.albicans la care rata rezistenei era de 8%. n Europa, studii multicentrice ale susceptibilitii la fluconazol a tulpinilor de Candida albicans implicate n apariia fungemiilor indic o rata mai redus a rezistenei (2,0-2,7%) comparativ cu situaia existent in SUA. Fenomenul de rezisten primar i secundar nu este doar apanajul fungilor levuriformi, el ntlnindu-se i la fungii
668
filamentoi de interes clinic (Aspergillus, Zygomicete, etc.). Astfel, s-au semnalat tulpini aparinnd speciilor genului Aspergillus cu rezisten la itraconazol, amfotericina B i ali agenti clasici, proporia acestora variind ntre 2-5%. Proporia crescnd a tulpinilor rezistente a impulsionat cercetarea n domeniul obinerii de noi molecule dotate cu capacitate antifungic: posaconazol, ravuconazol, caspofungina, anidulafungina, albaconazol, propiconazol, micafungina, FX 0685, etc. Voriconazolul Voriconazolul este un antifungic triazolic sintetic, de generaia a III-a, destinat terapiei infeciilor sistemice cu levuri i fungi filamentoi. (Fig.1) A fost sintetizat de firma Pfizer i n prezent este comercializat sub denumirea de Vfend. Mecanism de aciune Ca i ali derivai triazolici, voriconazolul acioneaz prin inhibiia lanosterol 14- demetilazei, blocnd astfel sinteza ergosterolului necesar edificrii structurilor membranare ale fungilor. Spectrul de aciune Voriconazolul este un antifungic cu spectru larg de aciune, ce include att fungi filamentoi, ct i levuri de importan medical. Trial-urile clinice au indicat eficacitate terapeutic fa de infecii cu Aspergillus spp. (A.fumigatus, A.flavus, A.terreus, A.niger, Fig. 1. Structura chimic a A.nidulans), Scedosporium spp. (S.apiospermum moleculei de voriconazol i S.prolificans), Fusarium spp. (F.solani, F.proliferatum .a.) i Candida spp. (C.albicans i alte specii cu rezisten crescut la fluconazol precum C.glabrata, C.dubliniensis, C.krusei, C. parapsilosis, C.inconspicua, C.tropicalis .a.). n cazul altor specii (Alternaria spp., Blastomyces dermatitidis, Blastoschizomyces capitatus, Cladosporium spp., Coccidioides immitis, Conidiobolus coronatus, Cryptococcus neoformans, Exserohilum spp., Exophiala spinifera, Fonsecaea pedrosoi, Madurella mycetomatis, Paecilomyces lilacinus, Penicillium marneffei, Phialophora spp., Scopulariopsis brevicaulis, Trichosporon spp.) s-au obinut rezultate ncurajatoare, ns datorit numrului redus de cazuri, indicaia terapeutic cu voriconazol nu este nc bine documentat. Fa de zygomicete (genurile Absidia, Mucor, Rhizopus etc.), voriconazolul nu manifest nici un efect terapeutic; n plus, s-a constatat c terapia cu voriconazol pentru aspergiloza pulmonar invaziv la pacienii neutropenici crete semnificativ riscul de apariie a zygomicozelor rino-cerebrale.
669
Absorbie Dup administrare oral, voriconazolul se absoarbe rapid i n proporie ridicat, variaiile pH-ului gastric neinfluennd absorbia sa. Concentraia seric maxim este atins n 1-2 ore, iar biodisponibilitatea absolut n urma administrrii orale este estimat la 96%. Metabolizare Voriconazolul este metabolizat la nivel hepatic, de ctre izoenzimele CYP2C19, CYP2C9 i CYP3A4 ale citocromului P450, dar farmacocinetica sa prezint o variabilitate mare la subiecii umani, din cauza diferenelor genetice. Toxicitate n urma efecturii unor studii de toxicitate pe animale de laborator, s-a demonstrat capacitatea teratogen i embriotoxic a voriconazolului, prin expunere la doze similare celor terapeutice recomandate la om. Hepatotoxicitatea se manifest prin creterea nivelului transaminazelor serice, ns ea mbrac doar arareori un caracter sever. n caz de supradozaj, excesul plasmatic de voriconazol se poate elimina prin dializ. Interaciuni medicamentoase Aceste interaciuni medicamentoase se refer la creterea, respectiv diminuarea concentraiei plasmatice a voriconazolului ca urmare a influenei diverselor molecule farmaceutice asupra izoenzimelor citocromului P450. Compuii cu rol inhibitor pentru aceste enzime (cimetidina, omeprazolul) determin creterea concentraiei plasmatice maxime a voriconazolului, n timp ce inductorii enzimatici (rifampicina, carbamazepina, fenobarbitalul, fenitoina, rifabutina) o diminueaz cu pn la 40-50%. Posaconazolul Posaconazolul este un nou derivat triazolic de sintez, cu spectru larg de aciune, destinat terapiei i preveniei infeciilor fungice invazive (fig. 2). Este comercializat sub denumirea de Noxafil de ctre firma Shering Plough Inc. Mecanism de aciune Inhibiia multiplicrii fungice se explic n cazul posaconazolului, ca i n cazul altor derivai azolici, prin blocarea unei enzime implicate n sinteza ergosterolului - lanosterol 14--demetilaza. Spectru de aciune Posaconazolul are un spectru larg de aciune care include majoritatea speciilor genului Candida, Cryptococcus neoformans, Aspergillus spp., Fusarium spp., zygomicete, feohifomicete i fungi endemici. n ceea ce privete rezistena la acest nou antifungic, s-au semnalat cazuri de rezisten ncruciat cu ali derivai azolici (fluconazol, itraconazol) n cazul unor tulpini de C. albicans (nu ns i n cazul celor de C. krusei) i Aspergillus fumigatus. Un studiu multicentric desfurat pe parcursul a 10 ani, privind profilul de sensibilitate la antifungicele de interes major a peste 18000 izolate clinice
670
att levuri, ct i fungi filamentoi a relevat efectul salutar al posaconazolului n cazul majoritii tulpinilor din genurile Candida i Aspergillus care prezentau rezisten microbiologic la voriconazol, fluconazol i amfotericin B.
Fig. 2. Structura chimic a moleculei de posaconazol
Farmacologie Posaconazolul este disponibil comercial sub form de preparate administrabile oral. Absorbia sa este mult mbuntit de co-administrarea alimentelor i suplimentelor nutritive (de cca. 2-6 ori). Concentraiile plasmatice terapeutice (cca. 1 g/ml) sunt de obicei atinse n urma administrrii n doze zilnice 6 mg/kg corp. Metabolizarea sa are loc preponderent n ficat unde sufer procese de glucurono-conjugare; metaboliii rezultai sunt inactivi i se elimin n proporie de peste 70% prin fecale. Excreia renal sczut permite utilizarea posaconazolului i n cazul pacienilor suferind de diverse nefropatii, la care administrarea amfotericinei B este contraindicat datorit nefrotoxicitii acesteia. Dei difuzeaz destul de greu prin bariera hemato-encefalic, studiile clinice au demonstrat eficacitatea posaconazolului n terapia micozelor sistemului nervos central. n cazul acestui antifungic, plasma nu este epurabil prin hemodializ. Interaciuni medicamentoase Au fost semnalate interaciuni cu molecule medicamentoase al cror rol de inhibare a CYP3A4 este binecunoscut. Astfel, clearance-ul posaconazolului se dubleaz n cazul co-administrrii rifabutinului un inductor al CYP3A4. De asemenea, administrarea concomitent cu fenitoina sau cimetidina va fi evitat datorit diminurii concentraiei plasmatice a antifungicului cu 50%, respectiv 40%. n alt sens, sunt necesare precauii cnd posaconazolul este administrat concomitent cu ritonavirul, indinavirul (le crete concentraia plasmatic). Caspofungina Caspofungina este o substan cu rol antifungic obinut prin semi-sintez n urma modificrii structurale a pneumocandinei B0 o lipopeptid elaborat de
671
Glarea lozoyensis (fig. 3). Este comercializat sub denumirea de Cancidas (caspofungin acetat) de ctre Merck Sharp & Dohme Ltd. Mecanism de aciune Caspofungina i exercit efectul antifungic prin inhibarea sintezei de (1,3)-D-glucan, o polizaharid-cheie din compoziia peretelui fungilor. Spectru de aciune Numrul speciilor inhibate este relativ restrns. Se recomand n terapia candidozelor i aspergilozelor invazive la aduli. C. parapsilosis i C. krusei sunt mai puin sensibile la aciunea caspofunginei, iar Cryptococcus neoformans este rezistent. Este activ i fa de Pneumocystis carinii, fiind singurul antifungic capabil s-l inhibe.
Fig. 3. - Structura chimic a molecului de caspofungin
Farmacocinetic Dup administrarea parenteral a unei doze uzuale (70 mg), concentraiile plasmatice terapeutice se ating n cca. 1 or. Aproximativ 10% din doz persist n snge timp de 36-48 ore, iar restul se distribuie n diferite proporii n organe i esuturi. Concentraia cea mai mare se regsete n ficat, la polul opus situndu-se lichidul cefalo-rahidian n care nu se detecteaz. Metabolizarea are loc la nivel hepatic, iar metaboliii inactivi rezultai sunt excretai prin bil (35%) i urin (40%). Doar 1% din doz se elimin netransformat prin urin. Caspofungina nu poate fi ndeprtat prin hemodializ, de aceea se impun precauii privind supradozarea la pacienii cu hepatopatii.
672
Interaciuni medicamentoase Doar ciclosporina interfereaz farmacocinetica caspofunginei determinnd creterea nivelului seric al acesteia, de aceea asocierea celor dou substane nu se recomand dect n cazuri n care beneficiile obinute exced riscurile. Micafungina Micafungina este un antifungic din categoria echinocandinelor, derivat al unui produs natural izolat din mediul de cultivare al fungului Coleophoma empetri, recent lansat pe pia sub denumirea de Mycamine (micafungin sodic) de ctre Astellas Pharma Inc. (fig. 4).
Fig. 4. - Structura chimic a moleculei de micafungin
Mecanism de aciune Micafungina blocheaz sinteza peretelui celular al fungilor prin inhibiia sintezei -(1,3)-D-glucanului; acest mecanism particular de aciune permite inclusiv inactivarea tulpinilor fungice aparinnd genurilor Candida i Aspergillus, care s-au dovedit rezistente la derivai azolici. Spectru de aciune Studiile clinice au confirmat efectul terapeutic al micafunginei n infecii produse de levuri aparinnd genului Candida (C.albicans, C.glabrata, C.parapsilosis, C.tropicalis, C.krusei, C.pelliculosa, C.inconspicua, C.lusitaniae) i fungi filamentoi din genul Aspergillus (cu excepia celor produse de A. terreus). Efectul profilactic al micafunginei a fost demonstrat n cazul infeciilor experimentale cu Pneumocystis jiroveci la oareci SCID.
673
Farmacocinetica Concentraiile plasmatice sunt direct proporionale cu doza administrat, iar timpul mediu de njumtire este de cca. 13,6 ore. Micafungina se distribuie cu predilecie n pulmoni, ficat, splin i rinichi. Nu este prezent n lichidul cefalorahidian, dei realizeaz concentraii detectabile n esutul nervos. Proprietile farmacocinetice ale micafunginei sunt similare la pacienii cu i fr afectarea funciei renale, neexistnd diferene semnificative ale clearanceului acesteia. Incidena hepatotoxicitii dup administrarea ndelungat (6 luni) este mult mai redus (16,6%) n cazul micafunginei dect al amfotericinei B (100%). Micafungina este metabolizat de ctre arilsulfataz i catechol-Ometiltransferaz, iar excreia sa este predominant digestiv (peste 70%). Datorit gradului nalt de cuplare cu proteinele serice, micafungina nu este o molecul dializabil. Interaciuni medicamentoase Administrarea concomitent a micafunginei cu sirolimus i nifedipin conduce la creterea concentraiei plasmatice a acestora cu peste 15-18%. De aceea, pacienii crora li se administreaz concomitent sirolimus sau nifedipin i micafungin vor fi atent monitorizai, iar dozele celor dou produse medicamentoase se vor ajusta corespunztor.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Richardson M.D., Warnock D.W., 2003 - Fungal infection- Diagnostic and Management; 3rd edition; Blackwell Publishing; 2003 Tortorano A.M., Prigitano A., Biraghi E., Rigoni A.L., Viviani M.A., 2004 - ECMM survey of candidemia in Italy: in vitro susceptibility isolates and biofilm production; Mikologia Lekarska ; 11(Suppl.1):46 Ostrosky-Zeichner L., Rex J.H., Pappas P.G., Hamill R.J., Larsen R.A. et al., 2003 - Antifungal susceptibility survey of 2000 bloodstream Candida isolates in the United States; Antimicrob. Agents Chemother; 47(10):3149-3154 Pfaller M.A., Diekema D.J., 2004 - Twelve zears of fluconazole in clinical practice: global trends in in species distribution and fluconazole susceptibility of bloodstream isolates of Candida; Clin. Microbial. Infect.; 10(suppl.1) :11-23 Chandrasekar P.H., 2005 - Antifungal resistance in Aspergillus; Medical Mycology; 43 (suppl. 1):S295- S298 Greenberg R.N., Mullane K., Burik J.A., Raad I., Abzug M.J. et al., 2006 Posaconasole as salvage therapy for zygomycosis; Antimicrob. Agents Chemother; 50(1):126:133 Valica V., 2003 - Studiu privind elaborarea unor produse farmaceutice antiinfecioase. Tehnologie, analiz i standardizare; Tez de Doctor habilitat n tiine Farmaceutice; Institutul Naional de Farmacie; Chiinu; 2003 Miller J.L., Schell W.A., Wills E.A., Toffaletti D.L., Boyce M.et al., 2004 - In vitro and in vivo efficacies of the new triazole albaconazole against Cryptococcus neoformans; Antimicrob. Agents Chemother; 48(2):384-387 Playfort E.G., Webster Angela, Sorell T.C., Craig C., 2006 - Antifungal agents for preventing fungal infection in non- neutropenic critically ill surgical patients:
674
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar systematic review and meta-analysis of randomized clinical trials; J. Antimicrob. Chemother. 57:628-638 Morera-Lopez Yolanda, Torres- Rodriguez J.M., Jimenez- Cabello Teresa, BaroTomas Teresa, 2005 - Cryptococcus gattii: in vitro susceptibility to the new antifungal albaconazole versus fluconazole and voriconazole; Medical Mycology; 43(6): 505-510 Takahata S., Okutomi T., Ohtsuka K., Hoshiko S., Uchida K., Yamaguchi H., 2005 - In vitro and in vivo antifungal activities of FX 0685, a novel triazole antifungal agent with potent activity against fluconazole- resistant Candida albicans; medical Mycology; 43(3): 227-234 Gonzalez G.M., Fothergill W.A., Sutton D.A., Rinaldi M.G., Loebenberg D., 2005 In vitro activities of a new and established triazoles against opportunistic filamentous and dimorphic fungi; Medical Mycology; 43(3): 281-284 Torres H.A., Hachem R.Y., Chemaly R.F., Kontoyiannis D.P., Raad I.I., 2005 Posaconazole: a broad spectrum triazole antifungal; Lancet Infect. DIS., 5:775785 Jarvis B., Figgitt D.P., Lesley J.S., 2005 - Micofungin; Drugs; 64(9): 969-982 Di Domenico B., 1999 - Novel antifungal drugs; Current opinion in Microbiology, 2:509-515
10.
11.
12. 13. 14. 15.
675
GRADUL DE CONTAMINARE CU MICETI I MICOTOXINE A UNOR SUBSTRATURI VEGETATALE FOLOSITE N HRANA OMULUI I A ANIMALELOR
I. COMAN, Rodica CUCIUREANU, Delia BULEA, Maria BOBUAC, Alina TEODOR, Luminita MALIC U.S.A.M.V. Iai Au fost analizate micologic si micotoxinic 82 de probe de substraturi vegetale reprezentate de: arahide neprajite vrac(9), cafea verde vrac(6), porumb boabe (38), soia boabe (8), seminte de dovleac (4), seminte de floarea soarelui (6), arahide prajite in cutii vidate (8) si furaje combinate (3). Investigatiile intreprinse au evidentiat o contaminare fungica extrem de variata,numarul unitatilor formatoare de colonii osciland intre 01400g/produs ij functie de natura sortimentului,de conditiile de stocare si tehnologiile de procesare.Astfel,incarcatura micotica a inregistrat valori cuprinse intre 910 si 280 10 in probele de arahide neprajite,intre 1510 si 11010 in esantioanele de cafea verde,intre 0 si 13410 in boabele de soia,intre 4 10-140010 in probele de porumb ,intre 111014910 in seminte de dovleac si intre 510 si 28010 respectiv 9710 si 46910 in seminte de floarea soarelui si nutret combinat. Examenul micotoxinic efectuat pe toate cele 82 de probe a permis izolarea,separarea si identificarea unui numar de 11 micotoxine dintre care 2 au fost confirmate ca aflatoxina B1 si aflatoxina G1,in una din probele de furaj combinat,5 dintre acestea s-au dovedit a fi precursorul acestora,si anume sterigmatocistina in boabe de cafea verde(3) si boabe de porumb(2) iar 4 spoturi fluorescente au fost incadrate pe baza fluorescentei si al Rfului in clasa achratoxinelor;acestea au fost prezente in probele de porumb boabe(2) si boabe de soia (2)
Amploarea fenomenului de contaminare micotoxinic este att mare nct se poate afirma fr teama de a fi greit c, micotoxinele au devenit un poluant planetar de vreme ce ele au fost evideniate pe toate meridianele lumii, din inuturile reci i umede ale Rusiei (Siberia) pn n zonele aride ale Africii de Sud, din Regatul Unit al Marii Britanii pn n arhipelagul Japoniei, n Australia i Noua Zeeland. Aceste afirmaii, ndrznee poate sunt susinute de cercetri riguroase care au evideniat micotoxine n boabele de cereale (gru, orz, porumb, ovz, org, secar) i leguminoase (soia, arahide, mazre, fasole), n toate produsele i subprodusele acestora (pine, aluat, prjituri, franzelue de mlai), n seminele de oleaginoase ( floarea soarelui, bostan, miez de nuc), n legume i fructe (morcov, ardei, tomate, ptrunjel, mere, pere, gutui, citrice, smochine, kiwi, piersici, caise),
676
n preparatele acestora (gem, dulcea, compot, peltea, sucuri naturale), n bere, must, vin, cidru, n condimente (piper verde, negru, alb), paprica, currey, oregano, cimbru, boia de ardei i n plantele medicinale (frunze de ptlagin, suntoare). Opinia public din rile civilizate a fost informat i chiar cu amanunte mai puin semnificative,asupra pericolului pe care agentii conservani, aditivii, insecticidele, fertilizanii chimici, pesticidele n general, l reprezint pentru sntatea animalelor i implicit a omului. Din pcate se trece sub tcere n mod inexplicabil posibilitatea contaminrii alimentelor i a furajelor cu micromicei toxigeni i riscurile pe care infestaiile respective le incumb. La ora actual micotoxinele nu mai pot fi considerate doar factori poteniali de risc pentru sntatea omului intrucat ele reprezint adevraii ageni cauzatori ai unor entiti morbide grave, deseori cu sfrit letal,considerate deja ca boli cu statut propriu precum aflatoxicoza, ochratoxicoza, nefrita endemic micotoxinic, sindromul Reyes, carcinomul hepatocelular primar, Aleukia toxic alimentar, boala Kershin-Berk, cancerul esofagian fumonisinic, Akakabi-byo,etc. MATERIALE I METODE DE LUCRU
Au fost analizate prin examen micologic cantitativ i calitativ precum i prin investigaii micotoxinice 82 probe recoltate din reeaua de comercializare sau din ferme de animale, reprezentnd substraturi vegetale folosite n hrana omului i a animalelor. Pentru izolarea i evaluarea numeric a micromicetelor s-au folosit tehnici uzuale de laborator i medii de cultivare adecvate (PDA, Sabouraud), iar pentru identificarea i ncadrarea taxonomic a speciilor dominante de micromicei s-au coroborat aspectele culturale ale coloniilor cu particularitile morfostructurale ale corpilor fructificani. Izolarea, separarea i identificarea micotoxinelor fluorescente s-au realizat prin tehnica cromatografiei n strat subire (CSS).
REZULTATE I DISCUII Au fost examinate micologic i micotoxinic 82 probe de substraturi vegetale reprezentnd arahide neprjite vrac (9), cafea verde vrac (6), porumb boabe (38), soia boabe (7), semine de dovleac (4), semine de floarea soarelui (6), arahide prjite n cutii vidate (8), furaj combinat (3). Examenul micologic cantitativ Investigaiile ntreprinse au evideniat o contaminare fungic absolut inegal, numrul unitilor formatoare de colonii (UFC) oscilnd ntre zero i 1400103/g produs, n funcie de natura sortimentului, de condiiile de stocare i tehnologiile de procesare (tabelul 1)
677
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 1 Rezultatele examenului micologic cantitativ si calitativ Nr. Limitele de probe variatie ale analizate UFC(10/g) 9 6 38 7 4 6 8 3 82 9-280 15-110 4-1400 0-134 11-149 5-280 0-50 97-469 0-1400 Proportia genurilor de micei identificate n probele analizate P 33,3 100,0 76,3 57,1 50,0 66,6 0 66,6 A 66,6 66,6 60,5 71,4 25,0 66,6 100,0 66,6 F Cl Lv Alte genuri 55,5 83,3 63,1 71,4 100,0 50,0 0 33,3
Nr. crt
Sortiment Arahide neprajite vrac Cafea verde vrac Porumb boabe Soia boabe Seminte dovleac Seminte floarea soarelui Arahide prajite in cutii vidate Furaj combinat TOTAL PROBE
1 2 3 4 5 6 7 8 9
11,1 11,1 100,0 0 66,6 0 17,9 42,8 50,0 16,6 0 33,3
73,6 26,3 14,8 28,5 75,0 50,0 50,0 50,0 0 0
66,6 33,3
Legenda: P Penicillium; A Aspergillus; F Fusarium; Cl Cladosporium; Lv - Levuri
ncrctura micotic a nregistrat valori cuprinse ntre 9103 i 280103/g n probele de arahide vrac neprjite, ntre 15103/g i 110103/g n probele de cafea verde vrac, ntre zero i 134103/g n probele de soia , ntre 4103/g i 1400103/g, respectiv 11103 /g i 149103 /g n probele de porumb si seminele de dovleac, ntre 5103/g i 280103/g n cele de floarea soarelui, ntre zero i 50103/g n probele de arahide prjite i comercializate n cutii ermetizate i ntre 97103 /gi 469103/g n nutreurile combinate. Cele mai poluate eantioane din punct de vedere micologic au fost cele de porumb boabe, dar se cuvine s accentum n acelai timp faptul c, arahidele prjite i comercializate n cutii vidate au fost lipsite de fungi levuriformi i filamentoi, cu excepia unei singure probe care la examenul organoleptic s-a dovedit de asemenea necorespunztoare, cutia fiind bombat. Cu siguran ca aceasta a prezentat o fisur la nivelul creia s-a i produs contaminarea.
678
Examenul micologic calitativ Prin protocolul iniial de lucru s-a prevzut s fie identificate i evaluate catitativ genurile de micromicei implicate mai frecvent n patologia omului i a animalelor. Aceast conduit intuitiv i-a dovedit ntr-adevr valabilitatea, ea fiind confirmat de rezultatele obinute i prezentate n tabelul 1. Singurul sortiment care a fcut excepie i a etalat o alt palet micotic au fost seminele de dovleac, a cror contaminare fungic a fost dominat de genuri neidentificate, care au atins cota procentual maxim 100%. Se impune deci, n cazul acestui parametru biologic, extinderea investigaiilor micologice, pentru catagrafierea corect a speciilor de micromicei ce-l caracterizeaz, cu att mai mult cu ct, seminele de dovleac s-au comportat diferit comparativ cu boabele de soia i seminele de floarea soarelui la aciunea unor ageni chimici utilizai ca elemente conservante (Coman i col. date n curs de publicare). Exprimarea procentual a genurilor dominante de micromicei a evideniat limite de variaii extrem de largi, n funcie de natura substratului i apartenena taxonului. Speciile aparinnd genului Penicillium au fost prezente n toate probele de cafea verde i au oscilat procentual ntre zero i 76,3% n celelalte substraturi. Micromiceii ncadrai n genul Aspergillus au fost contaminani solitari ai arahidelor prjite i pstrate n cutii vidate i au avut valori cuprinse ntre 25,0% i 71,4% n probele celorlalte sortimente vegetale. Extrem de interesant este repartiia genului Fusarium n eantioanele analizate, deoarece, n cafea, arahide i soia micromiceii acestui gen au fost abseni sau numrul lor a fost foarte mic (11,1%, respectiv 14,8%), n timp ce n boabele de porumb sau n seminele de dovleac gradul de reprezentabilitate a atins valori superioare de 73,6% sau 75,0%. Aceast repartiie inegal este justificat foarte probabil de gradientul de umiditate, psichrofilia fungilor ncadrai n genul Fusarium fiind recunoscut i dicteaz, iat, intensitatea fenomenului de multiplicare a formelor vegetative, a aparatului micelian n totalitate. Cladosporium s-a dovedit nc o dat un contaminant discret dar constant al substraturilor vegetale i aceasta datorit supleei sale ecologice care i permite s supravieuiasc n condiii de mediu foarte diferite. Fungii levuriformi de tipul Candidei i Rodotorulei i-au fcut simit prezena n unele sortimente, dar au lipsit din cafea i arahidele vidate. Surprinde ns gradul foarte ridicat de contaminare (100%) al probelor de arahide neprjite, care au fost meninute probabil n spaii de conservare improprii. Examenul micotoxinic Micotoxinele sunt metabolii fungici secundari cu aciune nociv extrem de sever pentru toate sistemele biologice cunoscute. Ele afecteaz metabolismul trofinelor, fiind implicate direct n tulburrile funcionale i structurale ale unor
679
organe vitale (ficat, rinichi), dar i statusul imunitar ce vizeaz deopotriv elementele celulare i umorale. Rezultatele examenului micotoxinic au evideniat n mod surprinztor prezena n substraturile analizate a unor micotoxine care pot afecta grav sntatea omului i a animalelor (Tabelul 2). Vom sublinia n primul rnd prezena n cafea a sterigmatocistinei, care este precursorul aflatoxinei B1, ambele micotoxine fiind implicate frecvent n stri morbide grave la om i animale. Faptul c 50% dintre probe au fost contaminate cu aceste micotoxine demonstreaz gradul ridicat de contaminare micotoxinic al boabelor de cafea verde i necesitatea introducerii unui program strategic preventiv, prin care se vor impune condiiile optime de recoltare transport i conservare a boabelor de cafea, controlul calitativ al acestora ,prin examene micologice i micotoxicologice periodice precum i perfectionarea tehnologiilor de procesare a boabelor verzi de cafea.
Tabelul 2 Rezulatele examenului micotoxinic Nr. crt. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Nr.probe analizate 9 6 38 7 4 6 8 3 82 Nr. Spoturilor fluorescente 0-2 2-6 0-5 0-3 0-2 0-4 0 1-5 0-6 Proportia genurilor de miceti identificate inprobele analizate AF ST O ZEA N.I. 2 2 3 2 5 2 2 4 -
Sortiment Arahide neprajite vrac Cafea verde vrac Porumb boabe Soia boabe Seminte dovleac Seminte floarea soarelui Arahide prajite in cutii vidate Furaj combinat TOTAL PROBE
Legenda:
AF Aflatoxine; ST Sterigmatocistina; O Ochratoxina; ZEA Zearalenona; N.I. - Neidentificate
Boabele de porumb s-au dovedit sortimentul cel mai poluat micotoxinic, dou probe fiind contaminate cu strigmatocistin iar altele dou cu ochratoxina A. Avnd n vedere faptul c aceste substraturi vegetale intr n proporie mare n compoziia nutreurilor combinate, riscul ca micotoxinele respective s ajung n hrana animalelor devine iminent. Ipoteza este susinut i de faptul c, una dintre micotoxine i anume sterigmatocistina se regsete n furajul combinat sub forma sa final de aflatoxin. n boabele de soia au fost puse n eviden spoturi fluorescente dintre care dou au fost identificate ca fiind ochratoxina A.
680
CONCLUZII Au fost examinate micologic i micotoxinic 82 probe de substraturi vegetale recoltate din reeaua de comercializare i fermele de animale. 1. Examenul micologic cantitativ a evideniat o contaminare fungic inegal, numrul unitilor formatoare de colonii (UFC) oscilnd ntre 01400103/g n funcie denatura sortimentului i tehnologia de procesare a acestuia. Cele mai poluate au fost boabele de porumb, iar cel mai puin contaminate arahidele prjite n cutii vidate. 2. Flora micotic evideniat a fost dominat de fungii filamentoi aparinnd genurilor Penicillium, Aspergillus, Fusarium, Cladosporum, dar i de micromiceii levuriformi de tipul Canidei albicans. 3. Investigaiile micotoxinice au permis izolarea, separarea i identificarea unor micotoxine fluorescente de tipul sterigmatocistinei n boabele de cafea verde i boabele de porumb, a ochratoxina A n boabele de porumb i soia, i a aflatoxinelor n probele de furaj combinat.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Akyama, H., Kikuchi Y., Chen, D., Goda, Y., Takatoki, K, Ichinoe, M., Toyoda, M., 1998 A rapid analytical method of ochratoxin A (OTA) in food and natural contamination in read pepper. Revue Med. Vet., 149, 6:493 Azemar, B., Pinelli, E., Plante, P., Escourron, G., Petkova-Bocharova, T., PfolilLeszkowicz, A., 1998 Some human kidney tumors in France exhibited a specific ochratoxin A DNA adduct pattern. Revue Med. Vet., 6:653 Battilani, P., Pietri, A., 2002 Ochratoxin A in grapes and wine. Eur. J. Plant Pathol., 108:638 Blanc, M., Pittet, A., Munoz-Box, R., Viani, R., 1998 Behavior of ochratoxin A during green coffee roasting and soluble coffee manufacture. J. Agric. Food. Chem., 46:673 Castegnaro, M., Mc Gregor, D., 1998 Carcinogenic risk assessment of mycotoxins. Revue Med. Vet., 149,6:671 Coman, I., Mare, M., Ancua Apreutesei, 2002 Rolul i importana epidemicosanitar a micotoxinelor. Lucr. t., fascicula II, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai, Vol. 45 (4):457 Coman, I., Popescu, O., 1985 Micotoxine i micotoxicoze. Ed. Ceres, Bucureti. Council for Agricultural Science and Technology cost, 1989: Mycotoxins: economic and health risks. Task Force Report, Anes, Iowa, 91 Majerus, P., Bresch, H., Ottender, H., 2002 Ochratoxin A in wines, fruit juices and seasonings. Achiv. Fur Lebensmittelhygene, 51:95 Pittet, A., 1998 Natural occurrence of mycotoxins in food and feeds an update review. Revue Med. Vet., 149:479 Tanaka, T., Hasegawa, A., Yamamato, S., Lee, U., Sugiura, Y., Ueno, Y., 1988 Worldwide contamination of cereals by the Fusarium mycotoxins nivalenol, deoxinivalenol and zearalenone. Survey of 19 countries, J. Agric. Food. Chem., 36:979
681
THE PREVENTION OF FUNGI AND MYCOTOXIN CONTAMINATION OF OILSEEDS BY CHEMICAL CONSERVATION USING VOLATILES REAGENTS
I. COMAN, Alina SRBU, Luminia MALIC, Maria BOBUAC U.S.A.M.V. Iai
INTRODUCTION Oilseeds, like soybeans, sunflower seeds and pumpkin seeds, are exposed to the mycotoxins attack, as much as the grains are. It is enough to remember the dbut of the turkey X disease in England, which result was the intoxication and the death of more than 100.000 turkeys, after the ingestion of soy grist contaminated with Aspergillus flavus and aflatoxin B1. The local and international researches, concerning the conservation possibilities of oilseed with high levels of moisture, are few, incomplete and convinctionless. Nearby the important factories of mixed feed there are laboratories, which have pharmaceutical formula with mycostatic activity. This formula inhibits the mycets development, but its effect is only on the final product until its consumption. The raw materials used in mixed feed or in silo preparation represent the true critical mass, which has to be conserved in order to prevent the mycets development and the mycotoxin production. This was the aim of this study, to prevent the fungi contamination by conservation of oilseeds with high levels of humidity, using unpolluant, volatile chemical substances in order not to affect their nutritive value. MATERIALS AND METHODS
1. Oilseed samples, micromycets strains, medium Soybeans, sunflower seeds and pumpkin seeds were taken from the field or silo spaces and were analyzed immediately in the lab in order to establish the humidity level and their nutritive value by usual procedures. The ten strains, most commonly found on grains, were selected from the collection of the Mycology and Mycotoxicology Laboratory of Veterinary Medicine Faculty from Iassy. These dominant strains were: Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus fumigatus, Alternaria alternata, Fusarium graminearum, Fusarium culmorum, Stachybotris alternans. As medium for these cultures development were used Sabouraud and Potates Dextrose Agar. 2. Experimental methods 682
Inocul preparation To obtain the biological material, the 10 strains of fungi were seeded in test tubes with inclined medium for 8 days at 25C, then they were passed-by 10 Roux-dishes in 200 ml Sabouraud medium and incubated in darkness at 25C. Every three days, the cultures were analyzed in progress to observe their phenotypic particularities and the development of spore, conidia and chlamydospore. After 25-28 days, when the sporulation was at its high level, in each Roux dish were introduced 50 ml physiological serum, which helped the obtaining of strains. These were centrifuged at 2500 rot/min. for 30 min. and the sediment was resuspended into an equivalent quantity of physiological serum. All the contents were introduced into an Erlenmeyer balloon and then kept at 4C. That represented the source of the biological material. Experimental model 33 samples, each of 100 grams, were analyzed in the experiment. Three samples of each assortment represent the witness: the first one with seeds only, the second with seeds and 2 ml sterile physiological serum and the third one with seeds contaminated with 2 ml of biological material. The next 3 samples were contaminated with 2 ml of selected strains and with 1 ml pure acetic acid at different concentration: 1%, 0,75% and 0,50%. Other 3 samples, contaminated with 2 ml inocul were treated with 1 ml formic acid at the same concentrations. The last 3 samples, also contaminated with 2 ml of biological material were treated with pure acetic acid and formic acid aa, the mixture being at 1%, 0,75% and 0,50% concentrations. The pumpkin seeds were not treated with this last mixture. All the 33 samples were introduced in boxboards and kept at room temperature for 9 months. The fungi dynamics of each sample was observed every month through quantitative and qualitative mycological exams.
RESULTS AND DISCUSSION

Table 1 shows the results of mycotical charge of soybeans, sunflower seeds and pumpkin seeds treated with pure acetic acid, formic acid and their combination at different concentrations during the 9 months experiment. The pure acetic acid, which the soybeans were treated with, even at its weakest concentration (0,50%), had a severe destructive effect upon the spore of micromycets. Thus, at 1% acid concentration, the number of CFUs were among 10-760, at 0,75%, between 10-830 and at 0,50% oscillated among 170-1600. The percentage reduction of mycotical charge of soybeans treated with formic acid at 0,50, 0,75% and 1% concentration was extremely severe, having values among 99,66% and 100%. 683
684
The number of the cells which survived the chemical treatment at 1% formic acid was between 0-40 and at 0,75% and 0,50% among 0-210. The cid effect of pure acetic acid and formic acid mixture was powerful, being in proportion of 98, 85%-100%. The efficiency of sunflower seed treatment with pure acetic acid was remarkable and it was between 96,26%-100%, the number of CFUs oscillating among 0-410 at 1% concentration, 80-4760 at 0,75% acid and 180-2230 at 0,50%. The formic acid reduced the CFUs in proportion of 99,87%-100% and the mixture with pure acetic acid demonstrated their compatibility, results revealed also by the destructive effect of this formula upon the micromycets growth. Thus, the number of CFUs oscillated among 0-605, depending on mixture concentration, the percentage being between 99,76% and 100%. It seems that the formic acid is more effective than pure acetic acid, because of its destructiveness upon the entire fungal charge, which was observed in 22,20% sunflower samples treated with formic acid and only in 3,6% samples treated with pure acetic acid. The reduction of CFUs from pumpkin seeds treated with pure acetic acid was only of 49,08%-90,90% at 1% concentration, between 31,36%-91,91% at 0,75% acid and 18,32%-73,08% at 0,50% concentration. After formic acid treatment, the number of CFUs was between 35,73%99,23%, depending on its concentration, subordinate those from soybeans and sunflower seeds. Also, the seeds coat became grey or dark, sometimes with red spots. Thus, these seeds could not be protected against fungi and mycotoxin contamination with these chemical reagents, which were successfully used upon soybeans and sunflower seeds. The qualitative mycological investigations revealed that, from all 10 strains of fungi, every month were observed constantly Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, Aspergillus flavus, Penicillium spp., alternating with the other species of Fusarium, Cladosporium, Alternaria, Stachybotris and Mucorunselected strains. The fungal mosaic, in its variety, is shown below in the Petri dishes from
figures 1, 2 and 3.
Witness+ inocul Acetic acid 1% Acetic acid 0.5%
Formic acid 1%
Formic acid 0,5%
Mixture 1%
Mixture0,5%
Fig.1 Inhibitory effects of chemical treatment of soybeans
685
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Witness+ inocul Acetic acid 1% Acetic acid 0.5%
Formic acid 1%
Formic acid 0,5%
Mixture 1%
Mixture0,5%
Fig. 2 Inhibitory effects of chemical treatment of sunflower seeds Witness+ inocul Acetic acid 1%
Acetic acid 0.5%
Formic acid 1%
Formic acid 0,5%
Fig. 3 Inhibitory effects of chemical treatment of pumpkin seeds
CONCLUSIONS The researches intended to preserve soybeans, sunflower seeds and pumpkin seeds with high levels of moisture (16-27%) by acid treatment at 1%, 0.75%, 0.50% concentration, in order to destroy the mycotical charge and to prevent the mycotoxin contamination. The pure acetic acid and formic acid assured a great conservation in time of soybeans and sunflower seeds, which remained unalterable as aspect, odor, color and shape during the entire period of experiment. The qualitative mycological exams revealed the severe destructive effect of these two acids single or mixed, which reduced the number of CFUs to 98.77%100% on soybeans and to 96.26%-100% on sunflower seeds. These values were stable during the entire experiment. The most acetic and formic acid resistant were the Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, Aspergillus flavus and Penicillium notatum. These species were
686
constantly found in the analyzed samples, but their activity during the 9 months was not explosive. The chemical treatment is not efficient on pumpkin seeds, because of its reduced proportion of destroyed fungi and the alteration of seeds coat, which became grey or dark with red spots on it.
REFERENCES
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. Ainsworth, G.C., 1971 - Dictionary of fungi, Ken Surrey. Alexopoulos, C.J., 1979 - Introductory mycology, 2end Ed., John Wiley and sons(ed), New York. Battilni, P., Pietri, A., 2002 - Ochratoxin A in grapes and wine. Eur. J. Plant Pathol. Blanc, P., Pittet, A., Minoz-Box, R., Viani, R., 1998 - Behaviour of ochratoxin A during green coffee roasting and soluble coffee manufacture. J. Agric. Food Chem. Bontea, Vera, 1985-1987 - Ciuperci parazii n Romnia, Ed. Acad. R.S. Romania, Vol.1 and 2, Bucureti. Booth, C., 1971 - The genus Fusarium. Commonwealth Mycological Institute. Kew, Surrey, England. Coman, I., Popescu, O., 1985 - Micotoxine i micotoxicoze, Ed. Ceres, Bucureti. Coman, I., Mare, M., Apreutese, Ancuta, 2003 - Aspecte inedite privind patogeneza i exprimarea clinic a intoxicaiei cu fumonisine. Rev. Romn de Med. Vet. Coman, I., Mare, M., Apreutese, Ancuta, 2002 - Rolul i importana epidemicosanitar a micotoxinelor. Lucr. t. Fascicula II, Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. Coman, I., Popescu, O., Bazgan, Olimpia, 1983 - Micotoxinele, problem actual a patologiei veterinare. Cercet. Agron. n Moldova. Coman, I., Popescu, O., Grundberg, N., 1978 - Separarea i identificarea cromatografic a unor micotoxine din materii prime furajere. Rev. De Creterea anim. Coman, I., Popescu, O., Halga, P., Grundberg, N., 1977 - Evidenierea cromatografic a unor micotoxine din furaje. Simpozion Micotoxicozele la animale, Iai. Coman, I., Popescu, O., Halga, P., 1987 - Aprecierea igienic a furajelor prin investigaii micotoxicologice. Cercet. Agron. n Moldova. Costa, L.L.F., Scussel, V.M., 1998 - Toxigenic fungi in beans. Symposium International Mycotox, Toulouse. Drochner, M., 1989 - Prezena fusariotoxicozelor n furaje. Dtsch. Tierarztl, Wschr. Gilbert, J., 1989 - Current views on the occurance and significance of Fusarium toxins. J. Appl. Bacteriol. Symp. Suppl. Holzapfel, C.W., 1968 -The isolation and structure of cyclopiazonic acid and toxin metabolite of Penicillium cyclopium Westling Tetrahedron. Hulea, Ana, Iliescu, P., 1994 - Determinator pentru identificarea mucegaiurilor potenial patogene. Societatea de Med. Vet. Din R.S. Romnia, Bucureti. Iacob, Viorica, 1994 - Fitopatologie, curs, Iai. Lillhoy, E.B.R., Garcia, W.J., Lambrow, M., 1974 - A. flavus infection and aflatoxin production. Influence of trace elements. Appl. Microbiol. Mititiuc, M., 1995 - Micologie. Ed. Univ. Al. I. Cuza, Iai. Yazdanpanah, H., Daraci, B., Esmaeil-Zadeh, F. - Natural occurence of Fusarium mycotoxins in 21 infants grain/ based food samples from Jiranian market. Revue Med. Vet
687
CERCETRI PRIVIND EVALUAREA BUNSTRII GINILOR OUTOARE EXPLOATATE N SISTEM ALTERNATIV, NTR-O FERM DIN ZONA DE SUD A ROMANIEI
RESEARCHES CONCERNING THE WELFARE ASSESSMENT OF THE FREE-RANGE LAYING HENS RAISED IN A UNIT FROM SOUTHERN ROMANIA
F. FURNARIS, Elena MITRNESCU, L. TUDOR, B. TABAC, C. TOGAN The researches had in view the assessment of animal welfare level in a farm of laying hens raised in alternative system, in the southern area of Romania - Olt County. The assessment consist of a single farm visit, that took place in 2005, the 16th of September, being applied the ANI (Animal Needs Index) 35L system in order to establish the welfare of 3500 hens housed in one shelter, with outdoor access. The main argument of choosing the above mentioned assessment method among others integrative numerical systems of hens welfare assessment (e.g. swede system, english system launched in Bristol Welfare Assurance Program, german system ANI 200) was its rapidity. The method consists in combining as a unique result engineering-based parameters (details concerning shelter architecture and endowments) with animalbased parameters (physiological e.g. feathers condition, skin condition or ethological e.g. number of cocks in the flock of hens). The parameters, gathered in 5 area of influence locomotion, social interaction, flooring, light and air, stockmanship were established either by measurements and direct observation of the flocks, or by last generation devices as BK 2250 sonometer (used to assess noises level) and Drager Miniwarn gas-meter (used to assess air quality). In order to assess the parameters feathers condition and skin condition were used up-to-date methods, which are based on awarding scores comparing the on-the-field aspects with photo guides. Every parameter receives a score which are added so that the final ANI 35 score can be established. The hens' welfare final score at the farm studied recorded 23.5 points. This value shows that housing conditions and flock management are fairly suitable with respect of welfare (final score between 21 and 24 points), a favorable and beneficent situation.
Problema bunstrii animalelor nu mai reprezint pentru societatea uman contemporan un deziderat sau o perspectiv, ci, din ce n ce mai acut, o necesitate stringent. n acest context, Romnia i-a crescut n ultimul timp exigenele fa de problema bunstrii animalelor, att din perspectiva aderrii la Uniunea
688
European, ct i din necesitatea meninerii n comerul internaional cu animale vii i cu produse de origine animal. Cercetri similare celor care fac obiectul acestei lucrri trebuie s se realizeze la scar larg n ara noastr, pentru a se crea n timp o baz de date cu suficiente nregistrri, fr de care nu poate fi stabilit pe baze obiective nivelul de bunstare a animalelor acceptat n mod oficial i nu poate fi creat un sistem propriu de evaluare a bunstrii animalelor, adaptat necesitilor din teren. Lucrarea de fa i propune dou obiective: s testeze aplicabilitatea unui sistem austriac de evaluare a bunstrii animalelor n condiiile Romniei i s demonstreze nivelul ridicat de bunstare a ginilor outoare exploatate n sistem alternativ, n condiiile unei productiviti comparabile celei din sistem intensiv. MATERIALE I METOD
Deoarece Romnia nu dispune nc de un sistem numeric propriu de evaluare a bunstrii ginilor outoare, am utilizat un sistem de evaluare oficializat n Austria, respectiv sistemul ANI 35L Animal Needs Index 35L. Principalul argument care a condus la alegerea acestuia din ntreaga gam a sistemelor numerice integrative (sistemul suedez, sistemul englez din cadrul Bristol Welfare Assurance Program, sistemul german ANI 200) a fost reprezentat de rapiditatea n aplicare. Sistemul ANI 35 const n combinarea sub forma unei unice rezultante a factorilor de bunstare engineering based (detalii privind arhitectonica adposturilor i dotrile acestora) cu factorii animal based (fiziologici: starea penajului, starea pielii sau comportamentali: numrul de cocoi din efectiv). Factorii relevani pentru bunstarea psrilor, clasificai conform ANI 35L n 5 grupe de factori, s-au apreciat fie prin observaii directe n efectivele de psri i msurtori metrice, fie apelnd la aparatur modern de tipul sonometrului BK 2250 (utilizat pentru determinarea factorului zgomotele din adpost) sau a gazometrului electronic Drager Miniwarn (utilizat pentru determinarea factorului calitatea aerului). Pentru aprecierea unor factori fiziologici (starea penajului, starea pielii) s-au folosit metode numerice moderne de apreciere, care au la baz acordarea de note prin comparare cu ghiduri foto. S-au acordat note pentru fiecare factor al grilei de evaluare, iar prin nsumare s-a obinut punctajul ANI final pentru efectivul de psri evaluat. Pe baza punctajului s-a interpretat nivelul bunstrii psrilor exploatate n sistem alternativ.
REZULTATE I DISCUII Punctajul final ANI obinut a fost de 23,5 puncte; ca urmare bunstarea ginilor outoare exploatate n sistem alternativ se nscrie n categoria bunstrii satisfctoare.
689
Notele acordate pentru fiecare factor din cadrul grilei de evaluare ANI 35L pentru gini outoare sunt prezentate n tabelele nr. 1-5.
Tabelul 1 Tabelul de evaluare a primei grupe de factori libertatea de micare Factorii evaluai Suprafaa minim disponibil Raportul dintre suprafaa de relaxare i scormonit i suprafaa pardoselii Suprafaa de micare n padoc Accesul n padoc n zile/an Suprafaa de teren nierbat Distana maxim ntre adpost i limita zonei nierbate PUNCTAJUL GENERAL/GRUP Calificativul sau valoarea msurat/observat 2 0,18 m /gin 25,03%
2 0,353 m /gin
Notele acordate 0,5 puncte - 0,5 puncte 0,5 puncte 0,5 puncte 0 puncte 0 puncte 1 punct - 2 9 puncte
255 zile 3,18 m /gin 130 m

2
LIMITELE DE VARIAIE ALE PUNCTAJULUI GENERAL/GRUP
Tabelul 2 Tabelul de evaluare a grupei a II-a de factori interaciunile sociale Factorii evaluai Mrimea lotului Suprafaa minim disponibil Calificativul sau valoarea msurat/observat 1698 gini/arc 0,18 m2/gin Notele acordate 0 puncte 0,5 puncte
Asigurarea hrnitorilor, adptorilor i Medie 0,5 puncte cuibarelor conform cerinelor psrilor Stinghiile Nu exist stinghii propriu - 0 puncte zise Numrul de cocoi din efectiv Nu exist cocoi n efectiv 0 puncte Frontul de acces n exterior 0,64 cm/gin 1 punct 0,5 puncte 0,5 puncte 3 puncte - 2 9 puncte Distana ntre centrul adpostului i 4,195 m deschiderile ctre exterior Calitatea facilitilor existente n padoc Medie PUNCTAJUL GENERAL/GRUP LIMITELE DE VARIAIE ALE PUNCTAJULUI GENERAL/GRUP
Aa cum se observ n tabele, cele mai mari punctaje au fost nregistrate de grupele de factori condiiile de ngrijire i ntreinere respectiv 8,5 puncte din maxim posibil de 9 i de tipul i caracteristicile pardoselii i suprafeelor n aer liber respectiv 7 puncte din maxim posibil de 9. Explicaia rezid n aceea c sistemul alternativ implic att posibiliti mrite de supraveghere a efectivelor i
690
de executare a aciunilor sanitare veterinare, ct i accesul la suprafee mari de padoc i teren nierbat, n care ginile i pot manifesta comportamentul natural.
Tabelul 3 Tabelul de evaluare a grupei a III-a de factori tipul i caracteristicile pardoselii i suprafeelor n aer liber Factorii evaluai Lungimea stinghiilor Calitatea stinghiilor Tipul pardoselii n zona de eliminare a dejeciilor Calitatea aternutului n zona de relaxare i scormonit Starea igienic a aternutului n zona de relaxare i scormonit Tipul de aternut utilizat pentru cuibare Tipul de padoc i starea igienic a padocului Calitatea terenului nierbat PUNCTAJUL GENERAL/GRUP LIMITELE DE VARIAIE ALE PUNCTAJULUI GENERAL/GRUP Calificativul sau valoarea msurat/observat 0,354 m/gin Medie Grtar de lemn Notele acordate 1punct 0,5 puncte 1 punct
Strat de 15 cm grosime - tala 1 punct Aternut uscat, afnat Covoare din plastic Padoc nebetonat, cu stare igienic corespunztoare Bun 1,5 puncte 0 puncte 1 punct 1 punct 7 puncte - 2,5 9 puncte
Tabelul 4 Tabelul de evaluare a grupei a IV-a de factori iluminarea, calitatea aerului i zgomotele Factorii evaluai Iluminarea Calitatea aerului Curenii de aer n zona de odihn Zgomotele din adpost Accesul la suprafee exterioare n zile/an Accesul la suprafee exterioare n ore/zi Efectivul pentru care sunt alocate umbrare PUNCTAJUL GENERAL/GRUP Calificativul sau valoarea msurat/observat I = 1/41 1,42 W/m2 Coef. unif. = 0,36 Necorespunztoare V = 0,05 m/s 20 dB 255 zile 2,92 ore/zi 74,23% Notele acordate 0 puncte 0 puncte 1 punct 1 punct 0,5 puncte 0 puncte 1,5 puncte 4 puncte - 2,5 9 puncte
LIMITELE DE VARIAIE ALE PUNCTAJULUI GENERAL/GRUP
691
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 5 Tabelul de evaluare a grupei a V-a de factori condiiile de ngrijire i ntreinere Factorii evaluai Calificativul sau valoarea Notele acordate msurat/observat 1,5 puncte 1 punct 0,5 puncte 1,5 puncte 1,5 puncte 1 punct 1,5 puncte 8,5 puncte - 3 9 puncte
Starea igienic a hrnitorilor, adptorilor Foarte bun i cuibarelor Funcionarea sistemelor i instalaiilor din Bun dotarea adpostului Numr mic, moartea s-a Numrul i starea cadavrelor produs de puin timp Starea penelor Foarte bun Starea pielii Registrele de sntate Starea de sntate a psrilor PUNCTAJUL GENERAL/GRUP LIMITELE DE VARIAIE ALE PUNCTAJULUI GENERAL/GRUP Foarte bun Riguros completate Foarte bun
Cele mai mici punctaje au fost nregistrate de grupele de factori libertatea de micare respectiv 1 punct din maxim posibil de 9 i interaciunile sociale respective 3 puncte din maxim posibil de 9. Aceste punctaje sunt generate de suprafaa prea mic alocat pe gin i de ponderea redus a suprafeei de relaxare i scormonit n raport cu suprafaa adpostului. CONCLUZII Cercetrile care fac obiectul lucrrii de fa au demonstrat aplicabilitatea sistemului ANI 35L n condiiile rii noastre. n consecin, sistemul poate fi propus, n urma verificrilor ulterioare cu rezultate ale evalurilor prin metode de laborator, spre a reprezenta metoda de evaluare oficial a bunstrii ginilor n Romnia. Punctajul final ANI obinut pentru adpostul de gini outoare exploatate n sistem alternativ a fost de 23,5 puncte; ca urmare bunstarea ginilor se ncadreaz n categoria bunstrii satisfctoare. Acest punctaj demonstreaz faptul c sistemul alternativ de exploatare a psrilor a fost conceput avnd ca principiu satisfacerea necesitilor acestora n condiiile unei productiviti comparabile sistemului intensiv. De aceea, se recomand aplicarea la scar larg a acestui sistem de exploatare a ginilor n Romnia, pentru creterea nivelului de bunstare a efectivelor.
692
BIBLIOGRAFIE
1. F. Furnaris, 2004 Evaluarea bunstrii ginilor outoare i a ginilor de reproducie din rase grele n unele state membre ale Uniunii Europene; Buletinul Informativ al Societii Medicilor Veterinari n Patologia Aviar i a Animalelor Mici din Romnia; Volumul 15; Nr. 23 F. Furnaris, C. Togan, Elena Mitrnescu, 2005 The assessment of the breeding hen welfare in a farm from Vrancea country; Lucrri tiinifice Medicin Veterinar; Seria C; XLVIII; Vol. I; pp. 337-342 Teudea V., 2003 Igien veterinar. Adpostirea animalelor. Vol. II, Editura Omega Print, Bucureti Teudea V., 2005 Bunstarea i protecia animalelor, Editura Omega Print, Bucureti *** - http://agriculture.de/acms1/conf6/ws5aindexing.htm *** - http://www.bal.bmlf.gv.at/publikationen/hens/ani01h.pdf
2. 3. 4. 5. 6.
693
UNELE ASPECTE PRIVIND ACIUNEA AEROIONIZRII ARTIFICIALE NEGATIVE ASUPRA PROCESULUI INFECIOS INFLAMATOR CUTANAT INDUS LA ANIMALELE DE LABORATOR
SOME ASPECTS REGARDING THE NEGATIVE AIRIONIZATION ACTION ON THE CUTANEOUS INFECTIOUS INFLAMMATION PROSESS INDUCED AT LABORATORY ANIMALS
Ileana GEORGESCU1, L. ENACHE1,2, C. FILIPESCU3, G. GEORGESCU2, I.U. SIMIONCA1, Sanda PENARIU 1 I.N.R.M.F.B. Bucureti 2 U.S.A.M.V. Bucureti 3 I.N.C.D.D.P..B. Victor Babe, Bucureti The environment is characterized by many parameters, as air ionization, that is important by its biological effects. In the frame of artificial ionization application, the action of the air ions could have therapeutical effects. The aim. The work intend to present the researches connected with the influence of the artificial negative ionization on time evolution of the wound surfaces produced by excoriation and infected with a pure culture of Staphilococcus aureus at laboratory animals, submited to these environment conditions. Materials and methods. It were selected 18 white rats Wistar line (males) alloted in 2 homogeneousness lots. The generation of the air ions was made with a Medico type apparatus. The determinations of the air ionization concentratios were made with ions counter Ebert type (classical method). Conclusions. The negative air ions exert a favorable effect on cure process evolution of wounds. The cure process take places at concentrations bigger than natural concentrations, beginning with values over 10,000 negative ions / cm3. The cure process takes place more rapidly in the case of the negative ions with concentrations of 230,000 ions / cm3.
Key words: airions, cutaneous, infection, macroscopy, microscopy.
Aerul pe care l respir organismele vii se distinge prin o serie de proprieti fizice, printre care i cele de natur electric, cum este, de exemplu, ionizarea aerului [1, 9, 10]. Un numr nsemnat de cercetri efectuate de medici, fizicieni, biologi au evideniat faptul c prezena ionilor atmosferici este una indispensabil vieii, ntruct aeroionii, n anumite condiii, produc efecte biologice i exercit influene
694
directe i indirecte asupra structurilor sau / i funciilor diferitelor nivele de organizare ale organismelor vii (n funcie de intensitatea ionizrii, polaritatea ionilor, durata expunerii) [2, 3, 5, 8]. n condiiile unei atmosfere ionizate artificial, cu un regim aeroelectric crescut, prin expuneri controlate, se pot asigura, relativ uor, condiii de valorificare a acestui factor de mediu prin inducerea unor influene potenial favorabile, terapeutice, pentru o serie de afeciuni specifice. Acest aspect aplicativ a cunoscut o larg rspndire, ndeosebi n occident, ns, din pcate, aproape de loc n ara noastr [4, 6, 7]. MATERIAL I METOD
Au fost selecionai un numr de 18 obolani albi de laborator linia Wistar (masculi) repartizai n 2 loturi omogene: lotul 1 - inflamat ionizat (9 animale), supus aciunii aeroionilor negativi n concentraie de 15.000 ioni / cm; lotul 2 inflamat ionizat (9 animale), supus aciunii aeroionilor pozitivi n concentraie de 230.000 ioni / cm. Animalele au fost anesteziate cu pentobarbital n concentraie de 12 mg / ml soluie n heparin i apoi, pe partea dorsal a acestora, li s-au provocat o plag prin grataj care a fost infectat cu o cultur pur de Stafiloccocus aureus n concentraie etiologic de 109 / ml. Din ziua a 2-a de la debutul procesului inflamator n cazul lotului 1 i respectiv din ziua a 4-a pentru lotul 2, animalele au fost supuse cte 4 ore / zi aciunii aeroionilor, timp de 3 sptmni, fiind crescute n condiii standard de biobaz. Generarea ionilor aerieni s-a fcut cu un aparat Medicor (Ungaria) care a permis obinerea de ioni de ambele polariti (pozitivi sau negativi), ale cror concentraii se modific proporional cu distana fa de generator. Determinarea valorilor de concentraie ale ionizrii aerului s-a fcut cu un contor de ioni de tip Ebert, bazat pe principiul descrcrii unui condensator electric cilindric (metod clasic).
REZULTATE I DISCUII Cercetrile privind influena aeroionizrii artificiale s-au concentrat asupra urmtoarelor aspecte: variaia n timp a suprafeei plgilor induse i a numrului animalelor vindecate. Msurarea suprafaei plgilor / lot este prezentat n tabelul 1.
695
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 1 Suprafaa plgii produse / lot la animalele supuse aciunii aeroionizrii de concentraii diferite Suprafaa plgii / lot (cm2) Aeroioni negativi (15.000 Aeroioni negativi (230.000 ioni / cm) ioni / cm) 3,75 16,333
Tipul de lot Inflamat ionizat
1. Dup cum rezult i din tab.1, n cazul animalelor supuse aeroionizrii negative n concentraie de 15.000 ioni / cm (lotul 1), suprafaa plgii produse / lot a fost de 3,75 cm. Crustele ce se formeaz sunt subiri, sero-hemoragice, cu margini uor sau marcat decolate. Evoluia n timp a suprafeei plgii / lot, n cazul animalelor din lotul 1 supuse aciunii aeroionizrii negative n concentraie de 15.000 ioni / cm, se poate urmri n graficul urmtor (fig.1).
4 3,5 3 2,5 2 1,5 1 0,5 0
1s td 5t ay h d 8t a y h 10 da y th 12 da th y 16 day th da y
Inflam . Ion. Inflam . Neion.
Fig. 1 - Evoluia n timp a suprafeei plgii / lot, n cazul animalelor din lotul 1 supus aciunii aeroionizrii negative concentraie de 15.000 ioni / cm
Evoluia n timp a procesului de vindecare al plgilor provocate la animalele din lotul 1 a fost urmrit zilnic i este ilustrat prin urmtoarele imagini macroscopice. Astfel, n ziua 1-a de inflamaie, ionizare din ziua a 2-a, aspectul macroscopic al plgilor la lotul inflamat ionizat este ilustrat n fig.1.1. n ziua a 4-a de la inducerea procesului inflamator, ziua a 3-a de aeroionizare negativ, plgile prezint urmtorul aspect macroscopic, ilustrat n
fig.1.2.
n ziua a 15-a de la inducerea procesului inflamator, ziua a 14-a de aeroionizare negativ, procesul de reepitelizare prezint urmtorul aspect macroscopic, ilustrat n fig.1.3.
696
n ziua a 20-a de la inducerea procesului inflamator, ziua a 19-a de aeroionizare negativ, ntreg lotul inflamat ionizat este vindecat, fapt ilustrat i n
fig. 1.4.
Evoluia n timp a procesului de vindecare al plgilor la lotul 1, supus aciunii aeroionilor negativi n concentraie de 15.000 ioni / cm, poate fi urmrit n graficul din fig. 2.
Fig. 1.1 Aspectul unor plgi de la lotul inflamat ziua 1-a, ionizat ziua a 2-a (concentraie de 15.000 ioni negativi / cm)
Fig. 1.2 Aspectul unor plgi de la lotul inflamat ziua a 4-a, ionizat ziua a 3-a (concentraie de 15.000 ioni negativi / cm)
Fig. 1.3 Aspectul unor plgi de la lotul inflamat ziua a 15-a, ionizat ziua a 14-a (concentraie de 15.000 ioni negativi / cm)
Fig. 1.4 Aspectul unor plgi de la lotul inflamat ziua a 20-a, ionizat ziua a 19-a ntreg lotul este vindecat (concentraie de 15.000 ioni negativi / cm)
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
10 y th da 12 y th da 20 y th da y y y da da da
Inflam. Ion.
Fig. 2 - Evoluia n timp a procesului de vindecare la lotul inflamat ionizat supus aciunii aeroionilor negativi concentraie de 15.000 ioni / cm3
4t h
6t h
Din experimentul efectuat pe animalele din lotul 1, se observ c procesul de vindecare este rapid, acesta aprnd nc din ziua a 5-a, cnd se nregistreaz 1 animal vindecat n acest lot. n ziua a 20-a de la inducerea procesului inflamator ntreg lotul inflamat ionizat este complet vindecat. innd cont de capacitatea de
697
8t h
regenerare foarte mare a animalelor i de suprafaa prea mic a plgii produse, la urmtorul lot suprafaa plgii provocate a fost mrit. Din punct de vedere microscopic, analiznd lamele obinute de la animalele supuse aciunii aeroionilor negativi n concentraie de 15.000 ioni / cm (lot inflamat ionizat), se observ la nivelul tegumentului recoltat din locul unde a fost produs plaga, prezena unui epiderm total regenerat, cu keratin prezent (fig. 1.5), cu o grosime de 0,02592 0,04752 mm, cu limita dermic liniar. n dermul superficial se constat prezena fasciculelor ngroate de fibre conjunctive orientate paralel cu suprafaa epidermului i formarea unui esut de granulaie alctuit dintr-un infiltrat inflamator cronic moderat sau intens, dispus difuz n zona subiacent epidermului, neocapilare n numr moderat, discret hiperemie, frecvente fibroblaste active dispuse n jurul capilarelor, unele cu aspecte de miofibroblaste, cu o intens activitate de sintez a matricei extracelulare i fibrocite n numr moderat. n dermul profund se observ o textur de fibre conjunctive groase orientate n toate direciile i un infiltrat inflamator cronic, discret sau moderat, dispus izolat sau n mici grupuri n special n hipoderm. La 2 animale din acest lot se remarc existena unei mici zone de hiperplazie epidermic, a crei grosime este de 0,0648 0,0864 mm (fig. 1.6, 1.7).
Fig. 1.5. - Epiderm regenerat; esut de granulaie n dermul superficial. H&E, 20x
Fig. 1.6 Zon cu hiperplazie epidermic. H&E, 10x
Fig. 1.7 - Detaliu la zona cu hiperplazie epidermic: esut de granulaie n dermul superficial. H&E, 40x
2. Animalelor supuse aciunii aeroionilor negativi n concentraie de 230.000 ioni / cm (lotul 2), li s-au indus plgi cu suprafee mrite comparativ cu lotul 1, de 16,333 cm. Crustele ce se formeaz la animalele din lotul 2 sunt mai mari, mai groase, sero-hemoragice, cu margini nedecolate sau parial decolate. Evoluia n timp a suprafeei plgii / lot, n cazul animalelor din lotul 2, supuse aciunii aeroionilor negativi n concentraie de 230.000 ioni / cm, se poate urmri n graficul din fig. 3. Evoluia n timp a procesului de vindecare al plgilor provocate la animalele din lotul 2 fost urmrit zilnic i este ilustrat prin urmtoarele imagini macroscopice. Astfel, n ziua 1-a de inflamaie, ionizare din ziua a 4-a, aspectul macroscopic al plgilor la lotul inflamat ionizat este ilustrat n fig.3.1 . n ziua a 4-a de la inducerea procesului inflamator, ziua 1-a de aeroionizare negativ, plgile prezint urmtorul aspect macroscopic, ilustrat n fig.3.2.
698
n ziua a 19-a de la inducerea procesului inflamator, ziua a 16-a de aeroionizare negativ, ntreg lot inflamat ionizat este complet vindecat (fig.3.4).
18 16 14 12 10 8 6 4 2 0
1s t 5t day h 8t day h 10 da th y 12 da th y 14 da th y 19 da th y da y
Inflam. Ion
Fig. 3 - Evoluia n timp a suprafeei plgii / lot, n cazul animalelor din lotul 2 supus aciunii aeroionilor negativi - concentraie de 230.000 ioni / cm
Fig. 3.1 Aspectul unor plgi de la lotul inflamat ziua 1-a, ionizat ziua a 4-a (concentraie de 230.000 ioni negativi / cm)
Fig. 3.4 Aspectul unor plgi de la lotul inflamat ziua a 19-a, ionizat ziua a 16-a ntreg lotul este vindecat (concentraie de 230.000 ioni negativi / cm)
Evoluia n timp a procesului de vindecare la lotul inflamat ionizat supus aciunii aeroionilor negativi n concentraie de 230.000 ioni / cm, poate fi urmrit n graficul din fig. 4. Aa cum rezult i din grafic, n ziua a 13-a apare 1 animal vindecat n lotul inflamat ionizat, iar n 19-a zi ntreg lotul este complet vindecat. Din determinrile efectuate pe cele dou loturi se poate observa c, n cazul animalelor supuse aeroionizrii negative n concentraie de 230.000 ioni / cm, lot inflamat ionizat, dei suprafaa plgii provocate a fost mrit comparativ cu cea de la animalele supuse la 15.000 ioni / cm, vindecarea ntregului lot este mai rapid (a 19-a zi), fa de cea din lotul 1 (a 20-a zi). Rezult din acest context faptul c, procesul de vindecare se produce la concentraii mai mari dect cele naturale, ncepnd cu valori de peste 10 000 ioni negativi / cm3, fiind mai rapid n cazul aeroionilor negativi n concentraie de 230.000 ioni / cm. Din punct de vedere microscopic, analiznd lamele obinute de la animalele supuse aciunii aeroionilor negativi n concentraie de 230.000 ioni / cm (lot inflamat ionizat), se observ la nivelul tegumentului recoltat din locul unde a fost produs plaga, prezena unui epiderm total regenerat, cu keratin prezent (fig.
699
3.5), cu o grosime de 0,02542 0,04968 mm, cu limita dermic liniar. n dermul
superficial se constat prezena fasciculelor ngroate de fibre conjunctive orientate paralel cu suprafaa epidermului i formarea unui esut de granulaie alctuit din neocapilare n numr moderat, hiperemie moderat, infiltrat inflamator cronic moderat dispus difuz n zona subiacent epidermului, fibroblaste active rare, moderate, sau frecvente, unele cu caractere de miofibroblaste i frecvente fibrocite. n dermul profund se observ o textur de fibre conjunctive groase orientate n toate direciile i un infiltrat inflamator cronic discret sau moderat dispus izolat sau n mici plaje i grupuri n special n hipoderm.
10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
13 th 14 da th y 15 da th y 18 da th y 19 da th y da y
Inflam. Ion.
Fig. 4 - Evoluia n timp a procesului de vindecare la lotul inflamat ionizat supus aciunii aeroionilor negativi concentraie de 230.000 ioni / cm3
Spre deosebire de lotul 1, n cazul lotului 2, se constat la 4 animale apariia unei zone de hiperplazie epidermic (fig. 3.6, 3.7) cu o grosime de 0,0648 mm (comparabil cu cea obinut la cel 2 animale din lotul 1).
Fig. 3.5 - Epiderm regenerat; esut de granulaie n dermul superficial. H&E, 20x
Fig. 3.6 - Zon cu hiperplazie epidermic. H&E, 40x
Fig. 3.7 - Detaliu la zona cu hiperplazie epidermic: esut de granulaie n dermul superficial. H&E, 40x
CONCLUZII Aeroionii negativi exercit un efect favorabil asupra evoluiei procesului de vindecare a plgilor.
700
Procesul de vindecare se produce la concentraii mai mari dect cele naturale, ncepnd cu valori de peste 10.000 ioni negativi / cm3 . Procesul de vindecare se produce mai rapid n cazul aciunii aeroionilor negativi n concentraie de 230.000 ioni / cm, dei suprafaa plgii provocate a fost mrit, comparativ cu acelai tip de lot supus aciunii aeroionilor negativi cu concentraie de un ordin de mrime mai mic.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Ardelean I., Barnea M., 1972 - Elemente de biometeorologie medical, Bucureti. Buckalew L.W., Rizzuto A., 1984 - Negative air ion effects on human performance and physiological condition, Aviation, space and environmental medicine, 55, 8, p. 731 734. Charry L., 1984 - Biological effects of small ions: a review of findings and methods, Environmental Research, 34, p. 351 389. Enache L., Andrian C., 1990 Determinri privind influena aeroionizrii asupra polurii aerului, Lucrri iinifice I.A.N.B., seria E, mbuntiri funciare, vol. XXXIII, Bucureti, p.35. Enache L., 1999 - Ionizarea aerului i efectele sale biologice, Sntatea plantelor, nr. 16 (9), Bucureti. Krueger A.P., 1972 - Are air ions biologically significant? A review of a controversial subject, Int. J. Biometeor., 16, p. 313 322. Inbar O., Rotstein A., Dlin R., Dotan R., Sulman F.G., 1982 - The effect of negative ion on various physiological functions during work in a hot environment, Int. J. Biometeor., 26 (2), 153 - 163. Moraru S., Barne M., 1981 Aeroionii, cmpul electric i organismul, Ed. tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1981. Sulman F.G., 1976 - Health, Weather and Climate, Karger, Baswel, 160pp. Tromp S.W., 1974 Progress in biometeorology, Swets & Zeitlinger B.V., Amsterdam.
701
CONINUTUL AZOTAILOR I AZOTIILOR N RAIE I CONCENTRAIA LOR N CARNE I OU LA RAE

THE CONTENT OF NITRATE AND NITRITE IN RATION AND THEIR CONCENTRATION IN DUCK MEAT AND EGGS
G. IACUB, Viorica GURDI We made investigations with the goal to determine the pollution with nitrate and nitrite of meat and eggs from ducks of domestic growth.Though the forage and the drinking water passed the admitted limit of nitrate, the poultry received a little quantity of those toxic,nitrate 103 -650 mg / kilocorpus and nitrite 0,6 4,0 mg / kilocorpus. The daily receive of those substances did not affect the ducks. Their eggs and meat had organoleptic propieties. The content of nitrate and nitrite was very reduced, so these products can be realised without any restrictions.
n ultimii ani s-a micorat considerabil coninutul de azotai n furaje. Aceast deminuare se datorete ncorporrii n sol a cantitilor mici de fertilizante (6). ns nectnd la aceasta, problema azotailor rmne actual din motivul polurii imense a surselor acvatice cu aceste substane (1, 5). MATERIAL I METOD
Investigaiile au fost efectuate n sectorul particular pe un lot de 83 de rae (8 masculi i 75 femele), cu vrsta de 10 luni. Psrile sau aflat sub supravegherea noastr n timp de 9 luni de zile (vara toamna i iarna), cu determinarea modului de comportare, apetitul i starea clinic, componena raiei, calitatea sanitar a furajelor i a apei. n furaje i apa potabil o dat n 10 zile s-a efectuat determinarea coninutului de azotai i azotii, i apoi s-a calculat coninutul lor n raie pe fiecare sezon aparte. La sfritul fiecrui sezon de la lotul de rae pentru analiz s-au colectat cte 10 ou i 3 probe de carne din muchii coapsei. n furaje, ap potabil, ou i carne coninutul de azotai i azotii s-a determinat prin metoda electrocolorimetric.
REZULTATELE OBINUTE n diferite perioade de timp coninutul de azotai i azotii n furaje i apa potabil variaz considerabil, tabelul 1. Datele tabelului 1 demonstreaz c n boabele de porumb, gru i amestecul de concentrate coninutul de azotai i azotii nu depesc limita admis ns aceast limit admis este depit n rotul de floarea soarelui, verdeaa tocat i mai cu seam n apa potabil.
702
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Coninutul de azotai i azotii n furaje (mg/kg) i apa potabil (n mg/l) Specia furajului Porumb (boabe) Gru (boabe) Amestec de concentrate rot de floarea soarelui Verdea tocat Apa potabil Limitele de variaie Azotai Azotii 50 - 245 0,90 - 1,75 75 - 195 1,75 - 1,80 295 - 330 2,50 - 2,75 260 - 295 1,20 - 3,50 380 - 1900 0,90 - 15,00 685 - 1300 2,50 - 25,00
Pe parcursul investigaiilor sau efectuat 11 sacrificri de necesitate cu diagnoza leziunilor traumatice (la cap, gt, aripi, regiunea abdominal i a membrelor). Traumele au fost cauzate probabil de plasa metalic care avea unele defecte. Alte careva patologii sau semne de intoxicaie cu azotai i azotii nu sau constat. Raele aveau un comportament adecvat, faciesul exprim voeciune, penajul era bine dezvoltat i lucios. Psrile deseori se scldau n bazinul cu ap sau se odihneau n poziie sterno-abdominal, ele consumau energic hrana i aveau o productivitate de ou bun. Furajele utilizate n raia psrilor ct i apa potabil posedau de proprieti organoleptice bune sau satisfctoare. Coninutul de azotai i azotii n raie i apa potabil s-a determinat o dat n 10 zile. Datele obinute sau utilizat pentru calcularea coninutului de azotai i azotii n raie pe fiecare sezon n parte, ct i cantitatea acestor substane ngerate de rae care revin la 1 kg de greutate corporal, tabelul 2.
Tabelul 2 Coninutul de azotai i azotii n raie i cantitatea lor ngerat de rae Perioada de investigaie Vara Toamna Iarna Coninutul total n raie (mg) Azotai Azotii 269,0 4,80 912,0 2,84 150,5 0,97 Greutatea corporal a raelor(kg) 1,2 1,4 1,5 Cantitatea ngerat de rae n mg/kilocorp Azotai Azotii 224,2 4,00 651,5 2,30 103,3 0,65
n dependen de varietatea i cantitatea furajelor utilizate coninutul de azotai n raie constituia n timpul de var 269 mg, toamna 912 i iarna 150,5 mg. Coninutul de azotai era mai mic. Referitor la 1 kg greutate corporal raele ngerau vara azotai cte 224,2 mg i azotii cte 4,0 mg, n timpul de toamn corespunztor cte 651,5 i 2,30 i n timpul ernii azotai cte 103,3 mg i azotai cte 0,65 mg. Proprietile organoleptice a crnii i a oulor erau bune i foarte bune, coninutul de azotai i azotii este redat n tabelul 3.
703
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 3 Coninutul de azotai i azotii n carne i ou n mg/kg Perioada de investigaie Vara Toamna Iarna Carne Azotai 0,6 9,8 2,0 Azotii 0,75 1,20 3,75 Azotai 1,44 0,72 1,62 Ou Azotii 0,51 0,43 1,10
Datele prezentate n tabelul 3 mrturisesc c n carne i ou se conin cantiti mici de azotii i azotai. n perioada de var carnea coninea azotai 0,6 mg/kg de product i azotii cte 0,75 mg/kg. Toamna cantitatea de azotai era mai majorat i constituia 9,8 mg/kg i azotii cte 1,20 mg/kg. n timpul iernei n carne se conineau azotai cte 2 mg/kg i azotii cte 3,75 mg/kg. Aa dar coninutul de azotai n carne este mult mai mic ca cantitatea permis care constituie 200 mg/kg. n ou cantitatea acestor substane tot este mic. Astfel n timpul de var cantitatea azotailor constituia 1,44 mg/kg i azotiii 0,51 mg/kg. Toamna oule conineau azotai cte 0,72 mg/kg i azotii cte 0,43 mg/kg. La finalul investigaiilor n ou se conineau azotai cte 1,62 mg/kg i azotii cte 1,10 mg/kg n melanj. DISCUII Investigaiile s-au efectuat cu scopul de a determina gradul de poluare cu azotai i azotii a crnii i oulelor obinute de la raele crescute n condiiile obinuite de cas. Determinarea coninutului de azotai i azotii n furaje demonstreaz c n majoritatea cazurilor concentraia lor nu depea limita admis, excepie fiind doar rotul de floarea soarelui i verdeaa tocat n care limita admis n unele cazuri este depit pn aproape de patru ori. Apa potabil este impurificat cu aceste substane considerabil. Astfel coninutul de azotai depete limita admis (45 mg/l) de 15 28 ori i concentraia de azotai depete limita admis (3,3 mg/l) pn la 75 de ori. Despre poluarea considerabil a surselor acvatice cu azotai i azotii mrturisesc i sursele literale (1, 2, 5). n diferite anotimpuri n dependen de cantitatea i asortimentul furajelor raele ngerau zilnic azotai de la 0,65 pn la 4,0 mg/kilocorp. Aceste cantiti sunt mici i nu au declanat careva dereglri n starea sntii animalelor la intoxicaia cronic cu azotai i azotii, ct i despre un coninut redus a acestor substane n produsele animaliere n literatura de specialitate sunt mai multe relatri (3, 4 etc). Investigaiile efectuate pe parcursul a 9 luni de zile au demonstrat c n carne i ou concentraia de atotai i azotii este foarte mic. Astfel coninutul de azotai n carne este de 22 77 ori mai mic ca doza permis. Lund n
704
consideraie c proprietile organoleptice sunt bune sau foarte bune noi considerm c aceste produse pot fi realizate fr restricii. CONCLUZII Admnistrarea cu hrana azotai de la 103 pn la 651 mg/kilocorp i azotii de la 0,6 pnla 4 mg/kilocorp nu provoac intoxicaii cu manifestri clinice la rae. La intoxicaia cronic a raelor cu azotai de la 103 pn la 651 mg/kilocorp i azotii de la 0,6 pn la 4 mg/kilocorp, carnea i oule posed propieti organoleptice bune i foarte bune iar coninutul acestor substane este mic i deci aceste produse pot fi realizate fr restricii.
BIBLIOGRAFIA
1. 2. Bumbu Ib., Eugenia Tropoel, 1999 - Ocrotirea mediului conform principiului ecologiei geochimice. Lucrri tiinifice 25 ani de nvmnt superior medical veterinar n Republica Moldova. Chiinu, p.20. Iacub G., Chiosa A., Slobodeniuc N., Rodidel V., Policiuc I., 2004 - Intensitatea de poluare cu azotai i azotii a apei potabile din zona central a Codrului. Simpozion tiinific internaional30 ani de nvmnt superior medical veterinar din Republica Moldova. Chiinu 1-2 octombrie, p.173 174. Iacub G., Balov S., Moraru I., Ceban R., Bejenaru M., 2004 - Coninutul de azotai i azotii n raie i concentraia lor n carne la suine. Simpozion tiinific internaional 30 ani de nvmnt superior medical veterinar din Republica Moldova. Chiinu 1-2 octombrie, p. 172 173 Iacub G., Chiosa A., Balov S., Poliiuc I., 2003 - Coninutul de azotai i azotii n carne i oule ginelor cu intoxicaie cronic. Simpozion tiinific internaional70 ani ai Universitii agrare de Stat din Moldova Medicin Veterinar, 7 8 octombrie 2003, Chiinu, p. 145. Litjens J.B., Eijkelenburg, F.P. Van., 1987 - Enkele gevallen van nitrietvergiftiging bij slachtknikenmolderieren. Tijdschr. diergeneesk, 112, N1, 27 28. Rusnac I., Renia E., 1999 - Nivelul nitrailor n nutreuri i profilaxia intoxicaiilor la animale. Lucrri tiinifice. 25 ani de nvmnt superior medical veterinar n Republica Moldova. Chiinu, p.32.
3.
4.
5. 6.
705
OBSERVATIONS CONCERNING THE AIR QUALITY IN THE INFLUENCE AREA OF A CHEMICAL UNIT
OBSERVAII PRIVIND CALITATEA AERULUI N ZONA DE INFLUEN A UNUI COMBINAT PETROCHIMIC
Elena MITRNESCU, Dana TPLOAG, L. IONI, Violeta SIMION, Fl. FURNARIS, Cristina DINU In the area of influence of Arpechim Pitesti Chemical Unit there was watched the air quality from samples harvested from five checkpoints: Pitesti, Bradu, Oarja, Prundu and Topoloveni. In these samples, the following parameters were measured: HCl, CO, H2CO, NO2, SO2, NH3 and phenols. Analyzes and the results interpretation were done on the basis of up-to-date standards. The measurements reach to the following conclusions: - all the assessed parameters have recorded smaller values than maximum admitted limits stipulated in STAS 12574/87, in all samples and all checkpoints; - the phenols concentrations was constant in all the watched area, which proves that these chemical compounds are not generated by the industrial activity of oil processing; - ammonium and HCl variation of concentrations indicates that there are others pollutants generators beside the industrial activity of oil processing. Industrial activity of Arpechim Pitesti was planed in such manner for reducing the environmental pollution and its objective is mostly accomplished.
Pollution became a reality for the most industrial areas and in the condition of lacking some strong measures of reducing it could produce dangers to the whole society. During the campaign for diminishing the pollution, information has got an essential role. Thus, the pollutant sources must be identified, described and monitored and also the main pollutants elements, their action, the interdependence between nixes, the permitted doses, their testing and measuring methods. The mediating of the pollutant phenomena led to the understanding of the phenomena and the drafting of their diminishing methods. The chemical unit Arpechim Piteti, being considered a pollutant source of the environment, has a permanent activity of monitoring the influence of the oil industrial processing activity on the environment, conformingly the aspects had in view by GEMS-Ro. The up-to-date study is a specific one to the environment protection activity and followed the pollutants elements impact on their air quality
706
in the area. The monitoring of the air quality in the influence area of Arpechim Piteti Chemical Unit is necessary to underline easily and in time of some nonfunction during the technologic processes, of some negative phenomena in the specific substances evolution, the sources and correction modality of these deficiencies, for avoiding the negative influence on the environment. MATERIALS AND METHODS
In the influence area of Arpechim Piteti Chemical unit there was followed the air quality by sampling in five points: Piteti (Environmental Protection Agency), Bradu, Oarja, Prundu and Topoloveni. By sampling there were carried out the next chemical parameters: HCl, CO, SO2, NO2, NH3, phenols and aldehyds. There were chosen the pollutants mentioned above because they cold have as emit tent the industrial activity of oil processing and they have major negative effects on plant development. The determination were carried out conformingly the law stipulated standards: for NH3 STAS 10712/76; NO2 STAS 10329/75; SO2 STAS 10194/75; HCl STAS 10943/77; fenoli STAS 11027/76 and H2CO STAS 11332/79. Analyze of the obtained date was made according to the limits stipulated in 12574/85 STAS.
RESULTS AND DISCUSSIONS The results of the determination regarding the chemical parameters of the air are shown in table 1.
Table 1 Air quality in the influence area of a Chemical Unit Sampling No. of point samples Piteti Environmental 199 Protection Agency Bradu 167 Oarja 167 Prundu 178 Topoloveni 178 CMA STAS 12574-87
3 Average values of the indicators (mg/dm ) NH3 NO2 SO2 CO H2CO
HCl 0,0087 0,013 0,014 0,014 0,012 0,1
fenoli 0,0008 0,0011 0,0017 0,0010 0,0010 0,03
0,0025 0,0033 0,0022 0,0014 0,0010 0,012
0,0022 0,028 0,030 0,020 0,0193 0,1
0,048 0,0147 0,0192 0,0142 0,0101 0,1
0,044 0,040 0,054 0,046 0,049 0,25
1,576 1,603 1,582 1,628 1,421 2,0
According to the data in the table, HCl recorded values under the limit of 0,1 mg/dm3 in all samples and all sampling points. Being into the atmosphere in concentrations under the limits of toxicity, with a maximum admitted
707
concentration of 0,1 ppm, HCl has a great effects on plant development, but in high concentration induce the chlorosis of the leaves and even the appearance of some necrotic points. According to the obtained results, the aldehyds didnt exceed the stipulated limit by STAS 12574/87 in all samples and also all sampling points. Aldehyds (photochemical oxidant pollutants) results into the air by oil catalytic transformation in explosive engines and exhausted gases. Ammonium, even it is not a specific toxic substance for the oil industrial processing activity and it could react with some specific compounds, constituting smog. The ammonium content in the atmosphere, being uniform spreaded in the tested area (table 1) situated more under the maximum admitted limit, along the whole monitored period. Nitrogen dioxide recorded values under the maximum admitted limit in all samples and sampling points. A nitrogen oxide into the air over the maximum admitted limit provoke chronic poisoning and leaves scale, and over 10 ppm appear general scales. Sulph dioxides, according to the tabular data touched concentrations under the maximum admitted limits by standards in all sampling points. It has a priority place in atmospheric pollutant group; they could come from different sources, the petrochemical industry and waste scale and also transportation. Sulph dioxide concentrations always vary due to the different moving of the air mass. People and animals, and also plants are sensible to its action, changing their enzyme systems and essential physiologic processes. Carbon monoxide, according to the obtained results recorded values under the maximum admitted limit in all samples. The amount of phenols in the air were situated at very low levels, more under the maximum admitted limit in all sampling points. CONCLUSIONS The concentration of the carried out parameters were place dat low levels according to the admitted limit (STAS 12574/87). The amount of phenols, along the monitored space, shows that they dont come from the oil industrial processing activity. The variation of ammonium and hydrogen chloride shows the existence of other generators than the oil industrial processing activity. The Chemical Unit oriented itself as the environmental pollution, be more reduce recording a permanent qualitative evolution of the environment.
REFERENCES
1. Ayres R.U., Ayres, Leslie, 1996 Industrial ecology Towards closing the materials cicle, Eduard Elgar Publishers, London
708
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Brown L.R. i colab., 1999 Probleme globale ale omenirii, Editura Tehnic, Bucureti Marinescu D., 1996 Dreptul mediului nconjurtor, Editura ansa SRL, Bucureti Mitrnescu Elena i col., 2002 Observaii privind poluarea industrial a aerului n judeul Teleorman, Lucrri tiinifice Med. Vet., Vol XXXV, Timioara, pp. 589591 Mitrnescu Elena i col., 2002 Observaii privind poluarea industrial a aerului din zona Trgovite, Revista Romn de Medicin Veterinar, Vol. XII, nr. 1-2, pp. 163-167 Negulescu M. i col., 1995 Protecia mediului nconjurtor, Editura Tehnic, Bucureti Teudea V., 2004 Protecia mediului, Ediia a III-a, Editura Omega Print, Bucureti Tumanev S., 1989 Calitatea aerului, Editura Tehnic, Bucureti *** STAS 12574/87 Parametri de calitate ai aerului *** Legea nr. 137/1995 Legea proteciei mediului
709
OBSERVATIONS CONCERNING COPPER AS A POLLUTANT ELEMENT IN SOL AND ITS INFLUENCE ON ANIMAL RAISED IN A LIMITROPH AREA OF A CHEMICAL UNIT IN THE SOUTH OF ROMANIA
OBSERVAII PRIVIND CUPRUL CA ELEMENT POLUANT DIN SOL I INFLUIENA ACESTUIA ASUPRA ANIMALELOR DINTR-O ZON LIMITROF UNUI COMBINAT CHIMIC DIN SUDUL ROMNIEI
Elena MITRNESCU, A. BUTARU, Dana TPLOAG, L. TUDOR Carmen PETCU, Elena STAICU Copper concentration was carried out by samples of soil and organs (liver, kidney, spleen), sampled from cattle and swine, in form locations: Isalnita, Almaj, Breasta and Mofleni situated at 2, 6, 8 and 12 km to the Chemical Unit Isalnita. Copper analyze was made by atomic absorption spectrophotometry. Following the researches it can be conclude these: Copper concentration in soil exceeded the normal and alert limits in all samples and sampling points, indifferently the distance to the pollutant source, respective Isalnita Chemical Unit. The highest copper concentration exceeded the admitted limit by 10 12 times in liver, by 7 19 times in kidney and spleen. Copper concentration in samples from swine in the influenced area recorded values over the admitted limit by 6 18 times conformingly the Health Minister 975/1998. The exceeding was lower in the sampling points situated at farther distances to the pollutant source. The light copper concentrations carried out in the soil and organ samples, correlated with the clinical and anatomic and pathologic examination confirm a chronic copper poisoning of animals in the area of the Chemical Unit.
Chemical industry development led to appearance of some recognized industrial pollution with implications on health status of environment and organism. Such a zone is represented by the village of Isalnita, due to the Chemical Unit, which pollutes large areas with (pollutant) elements and also copper. Copper is in the some time an essential and also a toxic element. The absorbed copper is vehiculated by plasmatic albumins and then fixed in some organs. The metabolism of copper into the animal organism could be disturbed by high zinc concentrations, leading to nephrocalcinosis, rib fractures, osteoporosis.
710

The researches had in view the establishing of the copper concentration in soil, ash and organs, respective liver, spleen and kidneys, sampled in four locations. Isalnita, Almaj, Breasta and Mofleni, placed at different distances to the Unit, 2 km, 6 km, 8 km and 12 km. The soil was sampled from 0 20 cm depth. The organs were sampled form cattle, sheep and swine in the form villages. The method of emphasizing the copper concentration in samples was the atomic absorption spectrophotometry. Analyze of the results was made conformingly the Order of the MAAPPM 184 / 1997 for soil samples and the Order of the Health Minister 975/1998.
RESULTS AND DISCUSSIONS The results of the analyze regarding the copper concentration in soil are shown in the table 1.
Table 1 Copper level in the soil samples in Isalnita Chemical Unit area Sampling points Isalnita Almaj Breasta Mofleni Sampling depht 0 20 cm 0 20 cm 0 20 cm 0 20 cm Distance to the Chemical Unit 2 km 6 km 8 km 12 km Sample type soil ash soil ash soil ash soil ash Average copper concentrations (ppm) 175,4 477,2 142,1 264,2 112,1 164,4 69,8 88,4 20,0 100,0
Normal value Alert limit - Ord. MAPPM 18 /1997
Analyzing the data in the table it could notice that the recorded values in the soil and also ash samples exceeded the normal limits in all sampling points, indifferently the distance to the Chemical Unit. The exceeding beside the normal limits was 3.45 8.77 times higher for soil and 4.42 24 times for ash. The alert limits are exceeded in three sampling points, respective Isalnita, Almaj, Breasta and Mofleni the values are under these limits. The copper concentrations both in soil ash decrease at the some time to the increasing distance to the Clinical Unit. The average concentration in liver, kidney and spleen form cattle raised around the Chemical Unit is shown in table 2.
711
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Table 2 Average copper concentration in organ samples in cattle in Chemical Unit area Sampling point Distance to the Chemical Unit Average copper concentration (ppm) spleen liver kidney 54,00 62,42 58,24 51.00 61,00 52,45 44.15 58,75 46,12 21,14 30,12 21,04 3,0
Isalnita 2 km Almaj 6 km Breasta 8 km Mofleni 12 km Admitted limit Conformingly Health Minister Order 97/1998
Analyzing the data in the table it notice an increasing of the copper concentration in liver for 10 12 times beside the maximum admitted limit conformingly the Order of Health Minister Order 975/1998, in spleen 7 -18 times and in kidneys 7 19,4 times. This exceeding recorded different values depending on the distance of sampling to the main pollutant source, the Isalnita Chemical Unit. In the table 3 there are shown the main concentrations of copper in sheep samples. As in cattle, in sheep samples it could notice an exceeding of the admitted limits in all sampling points, an indirect ratio with the distance to the pollutant source.
Table3 Copper average concentration in organ samples of sheep in Chemical Unit area Distance to the Chemical Unit Average copper concentration (ppm) spleen liver kidney 50,12 56,22 52,04 43,22 45,12 42,00 36,12 38,00 31,05 17,00 19,12 17,82 3,0
Sampling point
Isalnita 2 km Almaj 6 km Breasta 8 km Mofleni 12 km Admitted limit Conformingly Health Minister Order 975 / 1998
Thus, there were carried out the concentrations which exceed the admitted limit by 6 19 times in liver samples, and by 6 17 times in kidneys and spleen samples. Copper is centered upon liver in the central region of his lobule structure and upon kidneys at the proximal tube cells level. Bires (1983) [1], following a study, concluded that the copper level in sheep liver could be asses depending the copper concentration in wool, this increasing depending on copper liver concentration and Williams (1983) [6] considers the copper in wool a better indicator for copper liver assessment than plasma.
712
Copper concentration in swine organs is shown in table 4.

Table 4 Copper average concentration in organ samples from swine in Chemical Unit area Sampling point Distance to the Chemical Unit Average copper concentration (ppm) spleen liver kidney 49,.05 59,04 55,0 41,18 53,15 47,92 42,08 47,72 42,14 16,25 20,02 18,24 3,0
Isalnita 2 km Almaj 6 km Breasta 8 km Mofleni 12 km Admitted limit Conformingly Health Minister Order 97 /1998
Conformingly the tabular date it could notice an exceeding by 20 times in liver samples in Isalnita, by 18 times in Almaj, 17 times in Breasta and Mofleni. In kidneys samples, the exceeding beside the admitted limits were 18,6 times higher in Isalnita, 16,3 times in Almaj, 14 times in Breasta and 6,47 times in Mofleni. The copper concentration in spleen was over the admitted limit conformingly the Health Minister Order 975 /1998 by 16,6 times in Isalnita, 14 times in Almaj and Breasta and 6 times in Mofleni. The highest copper concentrations were established first in liver, then in kidney and spleen. These high copper concentrations, met in swine organ samples could be explained by the fact that the swine food consists of the forages raised in these influence area. These high copper concentrations in swine liver didnt allow the iron to be absorbed in the gastrointestinal tractus, leading to anemia by the lack of iron. The high copper concentration in soil, correlated to the ones in spleen, liver and kidneys could demonstrate a chronic copper poisoning. CONCLUSIONS Copper concentration in soil and samples exceeded the admitted limits in all sampling points, indifferently the distance to the Chemical Unit. Copper concentration in cattle organ samples exceeded the admitted limit by 10 12 times in liver and 7 19 times in kidney and spleen. The copper admitted limits in sheep organ samples were exceeded by 6 19 times in liver and 6 17 times in kidney and spleen. The average copper concentration in swine organ samples exceeds the admitted values conformingly the Order of Health Minister 975/1998 by 6 18 times, depending on the distance to the pollutant source and also on organ.
713
The high copper concentration in soil and organ samples and the clinic anatomopathologic examination confirm the chronic copper poisoning of the animals in the Isalnita Chemical Unit.
REFFERENCES
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Bires J., Vrzgula L., 1983 The content of copper iron, zinc, arsenic, cadmium and lead in the wool of sheep bred in the vicinity of a copper processing plant. Folia Vet 27, 2, 103 110 Hatch, R. .a., 1979 Chronic copper toxicosis in growing swine. I.A.V.M.A., 6, p 174 Elena Mitrnescu i col., 1994 Efectele poluante ale fluorului, cuprului i arsenului asupra animalelor din zona Valea Clugreasc. Lucrri tiinifice, U.S.B., seria C, vol XXXVII, (81 86) Elena Mitrnescu i col., 1997 Observaii privind efectele substanelor poluante asupra bovinelor din jurul Combinatului de ngrminte Chimice Valea Clugreasc. Lucrri tiinifice, U.S.B., seria C, vol XXXVII, 1994. Elena Mitrnescu, D. Butaru i col. Researches concerning copper pollution effects on animals in Isalnita Chemical unit area: Animals and Enviroment vol. 2, 290 293, Warsaw, Poland Walliams I.A. i col., 1983 The copper content of wool in relation to breed and the concentration of copper in the liver and plasma I. Agric. Sci.Camb 100, 505 507. *** Ordinul MS 975/1998 Norme igienico sanitare pentru alimente *** Ordinul MAPPM 184/1997 Proceduri de realizare a bilanurilor de medii.
714
CONTROLUL EFICIENEI DERATIZRII

I. IBRU, C. LZRESCU U.S.A.M.V. Timioara Rodents are a significant source of Salmonella enteritidis (SE) exposure for chickens. A single mouse produces 100 droppings a day and each can contain up to 230.000 SE bacteria. By defecating in feed troughs, on egg belts and in other areas, rodents can spread infection throughout the chicken house and contaminate eggs. It appears mice become infected with SE when exposed to contaminated manure. Placement of contaminated manure or manure containing infected mice near poultry facilities provides an additional source for SE exposure. In order to control Salmonella, new programs must be adopted at all stages of production, processing and preparation of foods. Key words: Salmonella enteritidis, rodent control, epidemiology.
Contaminarea cu Salmonella este considerat principala cauz a toxiinfeciilor alimentare. Cresctorii i comercianii de oua trebuie s colaboreze pentru a realiza, n continuare, procesul de reducere a ncrcturii bacteriene i pentru a asigura calitatea produselor specifice. Pentru a putea controla contaminarea cu Salmonella, trebuie adoptate programe de supraveghere aplicabile n toate fazele de producie, procesare i preparare a oulor sau a alimentelor pe baz de ou. La fel n fermele de cretere a puilor de carne ct i n continuare pe fluxul tehnologic, trebuie s lucreze mpreuna pentru a se asigura c procesul de reducere a bacteriilor i asigurarea calitii produselor nu este ntrerupt. n continuare sunt expui trei factori de risc identificai (din 1995 de ctre Pennsylvania SE Pilot Study) ca factori de risc semnificativi pentru contaminarea cu Salmonella enteritidis, SE. Aceste riscuri sunt: contaminarea cu SE a fermelor avicole; a roztoarelor; a puicuelor pentru reproducie. n prezent, n fermele acreditate ca libere de SE, foarte multe ou sunt produse sub autoritatea Programului pentru asigurarea calitii oulor (PACO), care stpnete cele trei puncte critice incluznd curenia i dezinfecia halelor pentru puicue i gini outoare ntre fluxuri, controlul roztoarelor i plasarea, n halele de cretere, doar a puilor indemni de SE. PACO este un program tip HACCP monitorizat i ajutat de ctre departamentul pentru agricultur din ara respectiv. Toate persoanele care iau parte la producerea, procurarea i procesarea alimentelor trebuie s contientizeze c oule trebuie tratate ca i alimente i nu ca altceva. Totui programele de tip HACCP nu pot garanta lipsa riscului de contaminare a cojilor de ou cu SE,
715
asigurnd consumatorii c n procesul de obinere al oulor se aplica toate msurile necesare pentru meninerea siguranei oulor. 1. Biosecuritatea factorilor de risc Biosecuritatea const n folosirea tuturor msurilor de control posibile pentru a monitoriza rspndirea bolilor cauzate de microorganisme, cum ar fi SE. Aceste msuri includ: controlul circulaiei oamenilor n fermele avicole; izolarea pasrilor de animalele sau echipamentele contaminate; controlul roztoarelor i insectelor, vaccinarea; dezinfecia; pstrarea cureniei n hale. Scopul biosecuritii este de a menine agenii etiologici la distan fa de psri. Aceste microorganisme sunt vehiculate dintr-un loc n altul odat cu gunoiul, praful i penele, prin intermediul aerului i de ctre oameni, echipamente, vehicule, animale i alte psri. De aceea cel mai mare factor de risc n introducerea bolilor cauzate de microorganisme sunt oamenii, echipamentele i animalele contaminate. Cele mai bune metode de management pentru un bun sistem de biosecuritate trebuie s cuprind urmtoarele cerine: pentru personal; pentru echipamente; pentru animale. Succesul programului de biosecuritate depinde n totalitate de fermier. 2. Curenia i dezinfecia dintre doua populri Materia organica constituie primul punct de control critic deoarece poate adposti bacterii, cum ar fi SE. Scopul cureniei i al dezinfeciei este de a reduce materia organica i bacteriile din mediu, n acest mod se reduce riscul de contaminare cu SE. Perioada tranzitorie cuprins ntre doua repopulri permite o buna curenie, dezinfecie, uscare i inspecia halei. Este de preferat s existe un interval de dou sptmni ntre dou populri. 3. Controlul roztoarelor Roztoarele sunt o surs semnificativ de SE pentru pui i constituie al doilea punct de control critic deoarece un singur oarece poate produce pn la 100 de crotine n fiecare zi, i fiecare crotin poate conine pn la 230000 de bacterii de SE. Prin defecare n hrnitori, pe banda transportoare a oulor sau n alte zone, roztoarele pot rspndi infecia n halele de cretere i pot contamina oule. Roztoarele se reproduc cu rapiditate n halele avicole, unde mncarea, apa i adpostul sunt disponibile. Civa oareci intrai ntr-o hal nou pot prolifera pn la un numr foarte mare (pn la 10000 sau chiar mai muli) pe durata de
716
exploatare a unei singure serii de psri. Roztoarele consum furajul, distrug izolaiile materialelor i slbesc structurile cldirilor prin sparea galeriilor i a cuiburilor. Un oarece de casa consuma 5.67 g de furaj de pui zilnic, deci 2000 de oareci consuma zilnic 11.339 kg de furaj. 3.1. Msuri de prevenire a ptrunderii roztoarelor n interiorul adpostului Meninerea aleilor betonate din jurul adposturilor ntr-o perfect stare de curenie pentru a permite observarea roztoarelor de ctre dumanii lor naturali i pentru a mpiedica accesul lor n interior Raticidele (momelile sau prfuirile de urmrire) sunt adesea folosite n programele de control al roztoarelor. Modul de administrare al momelilor este n funcie de tehnica de preparare a acestora. Staiile de intoxicare sunt cu succes folosite n multe programe destinate controlului populaiilor de roztoare. Acestea sunt amplasate de-a lungul aleilor dintre baterii la intervale de 3-6 metri. Roztoarele pot fi active pe tot timpul anului n poduri sau pot migra pe perioada cureniei i a dezinfeciei anexelor. Daca principalul duntor l constituie obolanul, staiile de intoxicare pot fi amplasate la intervale mai mari n locuri specifice adposturilor sau locurilor de hrnire, bazate pe tiparul lor de hrnire. Folosii Formularul de Evaluare al Roztoarelor pentru a le localiza poziiile. 3.2. Monitorizarea roztoarelor cu ajutorul Indexului pentru Roztoare Monitorizarea numrului de roztoare dintr-o hal de cretere a puilor este o parte important a procesului de control al roztoarelor. Indexul Roztoarelor (IR) este un instrument de nepreuit n monitorizarea roztoarelor. Indexul folosete, ca metod, att evaluarea vizual ct i un numr de 12 curse, de capturare a oarecilor vii, pentru aprecierea numrului relativ de roztoare din hal, ct i pentru verificarea calitii programului de control. Suplimentar IR poate fi folosit pentru evaluarea unei posibile contaminri cu SE a unei populaii de psri datorit oarecilor. Un numr crescut de contaminri a fermelor avicole poate fi pus pe seama oarecilor.
Tabelul 1 Indexul roztoarelor Numrul de oareci capturai 0-10 11-22 Peste 26 Indexul roztoarelor Sczut (1) Moderat (2) Ridicat (3)
Pentru a aprecia populaia de roztoare dintr-o ferm pe baza IR, trebuie completat Formularul de Evaluare al Roztoarelor, pe timpul zilei cu ajutorul unei
717
lanterne. n conformitate cu formularul, se vor amplasa capcane n zona de circulaie a roztoarelor, cum ar fi de-a lungul pereilor bateriilor, gurilor de canalizare i n apropierea sistemului de ventilaie. Se vor folosi, n total, 12 capcane. Partea de canalizare aflat dedesubtul zonelor de furajare poate constitui un loc bun de amplasare a capcanei. Se vor momi capcanele cu aproximativ 28-30 g de furaj pentru psri i apoi vor fi lsate timp de o sptmn, timp n care se vor verifica de dou ori. Capcanele n care nu au fost capturate roztoare, dup prima verificare (la 2-5 zile dup amplasare) trebuie s fie mutate n zone unde prezena acestora este evident. Distanta de mutare trebuie a fi de minimum 5 m. Scopul sau limita critica este de a menine numrul oarecilor sczut (IR=1). Dac IR are o valoare mai mare de 1, programul de control ar trebui supus unei reevaluri. Indexul Roztoarelor ar trebui fcut cel puin o data pe lun (pentru fiecare populaie de psri). Se va menine o eviden exact a eficienei fiecrei aciuni. Inspecia vizuala pe timpul nopii, dup lsarea ntunericului, cu luminile stinse sau diminea devreme, cu ajutorul unei lanterne, poate fi eficienta pentru detectarea roztoarelor. Roztoarele pot avea perioade reduse de activitate pe timpul nopii, de aceea sunt necesare mai multe verificri. 4. Verificarea programului In mod normal este nevoie de 2 8 sptmni pentru a atinge un IR sczut in halele care au fost puse in evident populaii de roztoare ridicat sau moderat. Pentru ca programul de control s fie corect aplicat este necesar ndeplinirea urmtoarelor cerine: ntreinerea corespunztoare a cldirilor; efectuarea reparaiilor la nivelul comunicrii cu exteriorul; amplasarea staiilor de intoxicare la intervale de 3 15 m n jurul gurilor de canalizare si a altor zone din adpost; complectarea periodic a staiilor de intoxicare cu momeal proaspt; verificarea permanent a calitii momelilor folosite; evacuarea periodic a dejeciilor din adpost.
Anexa 1 JURNAL DE CONTROL AL ROZATOARELOR
Data Capcane Verificarea Nr. de Substana Produsul Iniiale IR Momeala Luna/zi/an amplasate capcanelor roztoare activa utilizat
IR: sczut (1)=1-10 oareci; mediu (2)=11-25 oareci; mare (3)= 26 sau mai muli.
718
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Anexa 2 FISA DE EVALUARE A ROZATOARELOR Identificarea locaiei LOT Luna Ziua Anul
Nr. crt. 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Spaiul supus evalurii Prezena gurilor n alei i pereii laterali Prezena gurilor n pereii frontali Prezena gurilor lng sistemul de ventilaie Prezena urmelor pe ui sau n jurul acestora Guri sau spaii n ui Prezena gurilor n structura cuibarelor Prezena de guri i tuneluri n stratul de izolaie Prezena de guri i tuneluri n depozitul de ou Prezena de guri i tuneluri n camera de sortare a oulor Prezena de ierburi, vegetaie i arbuti n jurul adpostului
Verificai urmtoarele locuri Spaii greu Indexul roztoarelor accesibile, Absena sau care nu Sczut Moderat Mare roztoarelor au fost (1-5) (6-10) (>10) verificate
10
Populaia de roztoare: Roztoare prezente ____ oareci ______ obolani _______ ambele Estimarea populaiei de roztoare zero sau sczuta. medienumeroas ..necunoscut. Estimarea populaiei de roztoare s-a fcut prin:.inspecie .capturare ambele Note/comentarii: Verificare Evaluator
719
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Baker, R., 1996 Animal Pest management Service, Inc., Chino. 1996 Foster, S., Opitz, H.M., Dineen D., 1994 Traning and Reference Manual for Stapmling of Comercial Pullet and Layer House for Salmonella enteritidis. Univ. Maine. Henzler D.J., 1993 Determining the number of mice on farms is a dificult task. Poultry Times Henzler D.J., Opitz, H.M., 1992 The role of mice in the epizootiology of infection on chiken layer ferms. Avian Diseases nr. 36. p. 625 631 Schlosser, W., Henzler D.J., Mason, J., 1995 Salmonelle enteritidis. Pilot project progress Raport.
720
GHIDANCE FOR OPERATORS ON SLURRY AND MANURE MANAGEMENT

GHID PENTRU OPERATORII N MANAGEMENTUL DEJECIILOR SOLIDE I LICHIDE
I. IBRU U.S.A.M.V. Timioara n prezenta lucrare se prezint un model de calcul al modului de operare pentru integrarea dejeciilor animalelor. Pornind de la cantitatea de dejecii, volumul acestora, capacitatea de stocare i n final suprafaa de care este nevoie pentru a putea fi reintegrarte.
Slurries and solid manures from intensive livestock production are potentially valuable sources of plant nutrients, but may also be the cause of pollution. An IPPC installation should be able to demonstrate that the best use is being made of slurries and manures emanating from the farm and that pollution risks are being minimized. This can be achieved by preparing and following a Slurry and Manure Management Plan. The process of producing a manure management plan has been divided into eight steps. Where the operator is spreading on his or her own land then s/he is responsible for all the steps. When the guidance is being used where the manure or slurry is spread on third party land then Step 1 is the responsibility of the Operator, who should provide information on the volumes of manure generated by the installation to the landowner. The landowner/ Planner may then carry out the remaining steps. Step 1. Calculate manure and liquid waste production from the installation Step 2. Allow for other imports of manure effluents or liquid wastes on the land in the plant. Step 3. Calculate total manure, effluent and liquid wastes to be accommodated on the land in the plan. Step 4. Identify manure spreading areas. Step 5. Produce a suitable map. Step 6. Calculate maximum spreading rates. Step 7. Application methods and timing. Step 8. Contingency planning
721
Calculating manure and liquid waste production A - calculate total volume of excreta produced by Livestock Measured production figures can be used, or be taken from Table 1. You should take account of the number of stock on the unit, and the number of days the animals are housed to give the total volume produced per year. If the slurry/manure store is not emptied every year, the base volume should be taken into account to prevent application rates being higher than anticipated.
Table 1 Typical volumes of excreta produced Livestock unit Body weight kg Gilt 90 130 Sow & litter 130 225 Weaner 7 18 Grower 18 35 1000 Laying hens 2200 1000 broilers $ litter 2200 1000 broiler breeders 3400 Moisture % 94 94 90 90 70 40 70 Typical vol. L/d 10.7 10.9 1.3 2.7 115 60 217
B- calculate total volume of bedding material used Measured production figures can be used, or be taken from Table 2.
Table 2 Typical volumes of bedding material used Livestock Unit Pigs Poultry Broiler Housing System Pens Deep Litter Deep Litter Litter used Straw Wood shavings or chopped straw of paper Wood shavings or chopped straw of paper Tipical Amount used per place per year kg 102 1.0 0.5 per bird per crop
C- calculate the volume of cleaning water used Measured production figures can be used, or be taken from Table 3.
Table 3 Typical volumes of cleaning water Livestock unit Pig Poultry ( Broilers) Cleaning system Cleaning out pens after each batch 10 pigs per pen Cleaning houses after each crop Range litres 16 24 per batch Typical litres 18 per batch
2 6.8 per m house area per crop
722
D- calculate the volume of rainfall to be disposed of You should measure all areas draining to the slurry/manure store/system, in order to estimate: Any roof water not completely separated to the clean drain age system. Any contaminated yard water. Areas where livestock have regular access or food. Areas around feed storage and disposal systems. Where possible, allowance should also be made for Any water draining off adjacent land. Areas where leakage from hoses enter the system. You should measure the area of the storage system itself, unless the store is covered and rainwater separated to the clean system. This total calculated area should be multiplied by the rainfall onto that area to give the total volume of contaminated rainfall. Rainfall should be calculated on a minimum of a 5 year return basis (M5) and a 4 month period (1st Novto 28 Feb) (as a guide the M5 for this period is generally 45% - 50% of the long-term annual rainfall). Total Volume produced by the installation = A+ B + C + D
REFERENCES
1. Carton, O.T., Cuddihy, A., Lenehan, J.J., 1994 - Effect of slurry-spreading technique on silage dry matter yields. Proceedings of the 7th Technical Consultation on Animal Waste Management. Bad Zwischenahn, Germany. pp.231-236. Larney, F.J., Olson, B.M., Janzen, H.H., 1993 - Wheat responses to nutrient levels imposed by simulated erosion and soil amendments. 30th Ann. Alberta Soil Science Workshop Proc., February 22-24, 1993, Edmonton, AB. pp.131-136. Stevens, R.J., Loughlin, R.J., Frost, J. P., Anderson, R., 1992 - Evaluation of separation plus acidification with nitric acid and separation plus dilution to make cattle slurry a balanced efficient fertiliser for grass and silage. Journal of Agricultural Science, Cambridge, 119: 391-399. Tanaka, D.L., Aase, J.K., 1989 - Influence of topsoil removal and fertilizer application on spring wheat yields. Soil Sci. Soc. Am. J. 53: 228-232. Teagasc, 1994 - Soil analysis and fertiliser, lime, animal slurry and trace element recommendations. 36 pp. Teagasc, Johnstown Castle, Co. Wexford.
2. 3.
4. 5.
723
IMPLICAIILE ECOMONICE I SANITATR VETERINARE ALE DEZVOLTRII COMENRULUI CU ANIMALE I PRODUSE DE ORIGINE ANIMAL
THE ECONOMIC IMPLICATIONS OF GREATER GLOBAL TREDE IN LIVESTOCK AND PRODUCTS
I. IBRU U.S.A.M.V. Timioara GATT (Uruguay Round of the General Agreement on Tarrifs and Trade), care a fondat World Trade Organisation (WTO), a ajutat la uniformalizarea presiunilor internaionale pentru liberalizarea comerului, prin intermediul reducerii tarifelor, restricii cantitative referitoare la accesul pe pia i reducerea competiiei din partea exporturilor subvenionate. n acest context, reglementrile tehnice referitoare la sntatea animalelor i controlul sanitar al importurilor sunt considerate bariere non-tarif, ceea ce poate conferi posibilitatea unor ri, n special a rilor cu venituri mici, s profite de un mediu comercial mai liber. Aadar, aceste reglementri tehnice trebuie supuse unei analize atente, pentru a se stabili utilitatea lor real. n acelai timp, integrarea grupurilor de naiuni n zonele de comer liber sau n pieele comune necesit armonizarea msurilor sanitar veterinare de control al sntii animalelor. n ambele cazuri, trebuie s se pun n balan ctigurile economice, obinute n urma comerului liber, cu potenialele costuri ale relaxrii msurilor de control al bolilor i a msurilor de siguran i de sntate.
Key words: General agreement on tariffs and trade, international trade meat, sanitary regulations
PRESSURES FOR TRADE LIBERALIZATION With the development of improved communications of all kinds, recent decades have seen rapid growth of international trade. It is estimated that the total value of world trade is, as at 1998, equivalent to roughly one sixth of the aggregate income of the world; we all live and work in a global economy (1). However, the growth of international trade has suffered set-backs, such as the great economic depression of the 1930s. Among the lessons learned was that removal of trade barriers is likely to encourage economic recovery and growth. To this end the GATT was established in 1947, with the objective of liberalizing trade between the 23 countries which were party to the agreement: Since then, the volume of world trade has increased 16-fold, far more rapidly than aggregate income; while membership of GATT has risen to 132, with 30 other countries waiting to join, including Russia and China. The member nations are responsible
724
for over 90% of world trade (4). Over a series of rounds of negotiation, tariffs have been reduced from 40% by value in 1947, to less than 4% in 1998 (1). The growth of trade in agricultural products has allowed a greater diversity of diets throughout the world and the establishment of international agricultural processing industries. Trade in livestock products was largely limited to cross border movements of animals, until the development of refrigerated transport in the 1890s. This lead to the creation of major livestock trading routes from the New World of the Americas, Australia and New Zealand to the Old World of westem Europe. More recent patterns of livestock trade are discussed below. Price support for agriculture; including livestock, has long been the norm in the high income economies, although some countries, notably New Zealand and Australia, have abandoned the practice. In this context, the Common Agricultural Policy (CAP) of the European Union (EU) has become notorious for creating `mountains' of surplus produce (9). Meanwhile, many developing countries, before and after independence, taxed agricultural exports to finance the general economic development of the country. Over the 1970s and early 1980s many of these countries used direct taxes on agriculture, including livestock, and levied tariffs on exports, whilst others taxed exports indirectly, through the exchange rate, by maintaining an overvalued domestic currency. The latter results in foreign exchange being artificially cheap, and imports and exports being undervalued. In effect, this means that agricultural and other export producers are effectively taxed by receiving an artificially low price, in the local currency converted at the official exchange rate. Similarly, the prices of domestic food crops are taxed in the sense that they are depressed by competition from artificially cheap imports (10). These sets of conditions, whereby some countries subsidize agriculture, while others do not, provide scope for the former group to export surplus produce at a price below the cost of production in those countries where agriculture is not protected. This practice, known as dumping, provides unfair competition and a disincentive to domestic producers. In the latest round of GATT negotiations; known as the Uruguay Round (1986-1994), negotiations were extended to cover the problems of protectionism in the agricultural and textile industries. Under the Agreement on Agriculture, which was 'signed in April 1994, member countries were committed, by the year 2000, to: improve access to imports through the removal of non-tariff barriers such as quotas the reduction of tariff levels and the agreement of an upper limit or bound on tariff levels; reduce export subsidies by at least.36% (a measure linked with the anti-dumping code of GATT) reduce aggregate measures of support for domestic agricultural producers by at least 20%.
725
These are the main commitments which were agreed, but there are many detailed exemption clauses and modifications. In particular, less stringent rules are to apply to developing countries, which have until 2004 to complete implementation. Furchermore, there is a safeguard clause which allows any country to apply import restrictions or suspend tariff concessions if products are imported in such quantities and under such conditions that they may cause severe harm to domestic producers. However, there is speculation as to the extent that LICs will be able to benefit from these changes in market access given the stringency of technical regulations (12). THE EUROPEAN UNION AND OTHER TRADING BLOCKS World trade in agricultural products has been greatly affected by the formation and expansion of regional trading blocks. These range in closeness of integration, from the free trade area to the economic union, as follows: a free trade area has no trade barriers between member states, which remain independently responsible for trade relationships with the rest of the world; a customs union has no internal trade barriers, but has a mutually agreed set of tariffs and trade arrangements with the rest of the world; a common market, like a customs union, but has freedom of movement of factors of production between member countries; an economic union has even closer monetary, fiscal, social and legal integration. The European Common Market became the EU after ratification of the Maastricht Treaty in 1993. Except for the EU, regional integration has not generated a high proportion of total trade for member countries. The EU has succeeded in raising trade within the community to over 60% of all trade, and in achieving rapid growth of agricultural production. This has been achieved by imposing quotas and taxes (variable import levies) on imports to the community, and by subsidising exports. These policies have raised food prices to EU consumers, created budgetary problems for the community and, it is argued, encouraged over-intensive levels of agricultural production, with consequential environmental problems. World market prices for agricultural commodities have been depressed and destabilized by EU policies, while many non-EU producers have been denied access to European markets (1, 12). Recent reforms have reduced the levels of protection for EU producers. The Lome Agreement (first signed in 1975 and renewed on four occasions), allows for special, favoured nations agreements with former colonies of the African, Caribbean and Pacific (ACP) group. Certain commodity exports are allowed to enter the EU without tariffs, although are generally subject to quotas. Special arrangements exist for agricultural products, such as sugar and beef
726
(Protocol 7), which are also produced within the EU and are therefore govemed by the CAP (11). Other Lome provisions include the European Development Fund which provides aid to ACP countries, and the stabilization of export earnings (STABEX) scheme. Under the latter scheme, floor arid ceiling prices are agreed for cotton, cocoa, groundnuts, coffee and sisal, in regular negotiations.. Exporters are compensated, with cash or credit, when the export price falls below the agreed floor. Funds are recovered from the CAP exporters, when the ceiling (2). Over the miid-1990s, the ACP countries supplied 12% of agricultural goods imported by the EU. However, these agricultural exports accounted for over 40% of the total ACP exports to the EU. GLOBAL TRADE IN LIVESTOCK PRODUCTS Although initially, most world trade and exports from the developing world consisted of agricultural products, these products have steadily declined as a proportion of the total. Many' of the LICs which were largely dependent on agricultural exports, now rely more heavily on exports of oil, other minerals or manufactured goods (24). This tendency is to be expected, partly because human food requirements are limited. Thus, the income elasticity of demand for food (the percentage change in food purchases for a 1 % change in income) is generally well below unity. In addition, synthetic substitutes have been found or are emerging for many other non-food agricultural products, such as fibres. These tendencies have been diagnosed as potential causes of declining terms of trade for agricultural producers. Livestock products, by comparison with staple food crops, are relative luxuries. The value per tonne is much greater than for staple food crops, while the average consumption per person in the high income countries is several times higher than in the L1Cs (Table 1).
Table 1 Per capita consumption of livestock products (kg/year) in 1996 (10) Conrtry Developing countries in Africa Developing countries in Asia All developing countries All developed countries Meat 12.18 22.56 23.92 75.78 Milk 33.22 34.68 42:37 196.64
The income elasticities of demand for meat, dairy products and eggs are generally close to unity. This means that growth or decline, of incomes has a substantial effect on the quantities demanded. As populations and per capita incomes have risen in many parts of the world, so too has the demand for livestock produce. World production has expanded at a sufficient rate to raise
727
average consumption per capita, except possibly in the case of milk (8). However, growth in production has not occurred equally across countries or products. Pig and poultry production has expanded much more detail below. At the same time, trade in pig and poultry meat has grown faster than production of these commodities (7). In fact only a small proportion of the livestock production of the world is marketed internationally. For example, world beef exports in 1996 were 1,67 million tones. This may be explained by the high costs of transporting livestock and animal products from one country to another, except through cross-border trade. Generally animal products must be frozen to permit intercontinental transport. Furthermore, existing health and hygiene regulations limit the extent of trade. The importation of feed: grains and oilseeds to raise pigs and poultry domestically may be cheaper than the importation of the equivalent quantity of meat. Nonetheless, trade in these products greatly exceeds the trade in bovine meat as a percentage of total production (7,5% for pig meat (of 79.4 million tonnes produced annually) and 14% for poultry meat (of 56 million tonnes produced annually). Until a few years ago, bovine meat (including beef and veal represented the largest component of world meat trade in terms of both absolute quantity (in metric tonnes) and value. However, between 1986 and 1996, bovine meat trade declined in relative terms, growing by 3% annually while total trade in meats increased by over 5%. Worldwide production stagnated, with 0.4% growth. Quantities of ovine meat (mutton and lamb) produced (7.3 million metric tonnes) and traded (approximately 1.2 million tonnes), are much smaller than those of beef, and have declined by 0.39% annually over the period 1986-1996, although production has grown by a similar percentage. Pig meat production worldwide is growing by almost 2% per year, trade in pig meat is growing by 5.4% annually. Total world poultry meat production has grown rapidly, by more than 5.5% annually, over the period 1986 1996. THE BENEFITS AND COSTS OF TRADE The international enthusiasm and pressure for trade liberalization stem from the supposed advantages of trade to all participants. These advantages are illustrated by the theory of Comparative Advantage, originally formulated by the English politician and economist, David Ricardo in 1817 (5). He argued that if two countries (or regions, or continents) are considered, each with different relative costs of production of different commodities, then both countries will gain from trade, even if one has an àbsolute advantage' over the other, i.e. lower costs of production for all commodities (3). This is illustrated by the simple hypothetical example given in Table 2. According to the figures presented here, Europe has an àbsolute advantage' over
728
Latin America, in that productivity per worker is higher in both meat production and motor car manufacture. This implies that unit costs (at least for labour) are lower in Europe. However, while Europe also has a comparative advantage in: manufacturing motor cars Latin America has a comparative advantage in meat production This may be expressed in terms of opportunity cost, which is the cost of producing an item in terms of the alternatives foregone Thus the opportunity cost of producing a motor car in Europe is only 3.75 tonnes of meat, while in Latin America it is 5 tonnes of meat. By the same token, the opportunity cost of meat production, in terms of motor cars foregone, is lower in Latin America than in Europe (0.2 cars rather than 0.267).
Table 2 Comparative advantage and the benefits from trade 1. Production per worker in Europe and Latin America Continent Meat (tonnes) Motor cars Tonnes of meat/ car Europe 15 4 3.75 Latin America 10 2 5,0 2. Effects of transferring six European workers into motor car production and ten Latin American workers into meat production Continent Meat (tonnes) Motor cars Europe -90 +24 Latin America +100 -20 Total production +10 +4 3. Trade occurs with Europe selling 22 motor cars for a price of 4:5 tonnes of meat each Meat (tonnes) Motor cars Continent Europe +9(-90+99) +2(+24-22) Latin America +1 (+100 -99) +2(-20+22)
REFERENCES
1. 2. Heffernan S., Sinclair P., 1990 Modern international economics. Basil Blackwell, Oxford, p. 334 Leslie J., 1997 -The comparative cost of the-1973 of Newcastle disease in Northern Ireland under economic and industry conditions of 1973 and 1996. Veterinary Epidemiology and Economics Research Unit, Department of Agriculture, University of Reading, p. 50 Leslie J., Barozzi J., Otte J., 1997 - The economic implications of a change in FMD policy a case study in Uruguay. Epidemiol. Sante anim., 31/32 (2). Leslie J.,Upton M., 1999 The economic implication of greater global trade in livestock and livestock products. Rev. sci. tech. Off. int. Epiz., 18, (2) p. 440 457. MacDiarmid S.C., 1993 - Risk analysts and the importation of animals and animal products. In Risk analysis, animal health and trade (R.S. Morley, ed.). Reu. sci. tech. Off. int. Epiz., 12 (4), p. 1055-1092. Paula Lyra T.M. de, 1995 - Sanitary barriers to the beef trade. Agroanalysis, 15 (12), p. 18- 22.
3. 4. 5. 6.
729
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 7. 8. 9. 10. 11. Raffaelli M., 1995 - Rise and demise of commodity agreements: an investigation into the breakdown of international commodity agreements. Woodhead Publishing Limited, Cambridge, p. 240 Sere C., Steinfeld H., 1996 - World livestock production systems: current status, issues and trends. FAO Animal Production and Health Paper, No. 127. FAO, Rome, p. 82. Suvibank A., 1996 - Capping the CAP? Implementation of the Uruguay Round Agreement by the European Union. Food Pol., 21 (4/5), p. 393-407. Upton M., 1996 - The economics of tropical farming systems. Cambridge University Press, Cambridge, p. 374. *** Food and Agriculture Organization (FAO) (1994) - The Uruguay Round Final Act and its implications for the world ivestock and meat economy. l5th Session of the Intergovernmental Group on Meat. CCP:ME/94/4, October. FAO, Rome, p.49. *** Food and Agriculture Organization (FAO) (1996)- Technical barriers to imports of livestock and meat products from developing countries and progress in their reduction under the provision of the Uruguay Round Agreements. l6th Session of the Intergovernmental Group on Meat. FAO, Rome, p.12.
12.
730
POSIBILITI DE DETECIE RAPID A ENTEROVIRUSURILOR I TESCHOVIRUSURILOR SUINE

POSSIBILITYS FOR RAPID DETECTION OF PORCINE ENTEROVIRUSES AND TESCHOVIRUSES
Adriana Elena ANI, D.C. ANI U.S.A.M.V. Iai Porcine picornaviruses comprising at least 23 serotypes grouped into six species were described as causative agents of neurological disorders, reproductive failure, and aphthae-like dermal lesions of swine. Other viruses such as classical swine fever virus (CSFV), African swine fever virus, pseudorabies virus (PRV), vesicular stomatitis virus, vesicular exanthema virus, porcine respiratory and reproductive syndrome virus and porcine parvovirus (PPV) may cause diseases with similar clinical symptoms. Therefore, rapid and reliable PCR detection of the most frequent porcine picornaviruses is of interest. A nested RT-PCR protocol was described suited to detect all known porcine enterovirus and teschoviruses serotypes using three sets of primer pairs. These primer pairs were designed to amplify either highly conserved sequences of the 5nontranslated region (5-NTR) or the polymerase gene region of the relevant virus species.
Key words: porcine enterovirus, teschovirus, PCR, nested-PCR
In afar de virusul febrei aftoase i virusul encefalomiocarditei porcine au fost descrise nc 15 serotipuri de picornavirusuri porcine. Datorit prezenei genomului ARN i stabilitii virionilor n mediul acid, aceste virusuri au fost generic denumite enterovirusuri. Iniial au fost descrii agenii cauzali ai tulburrilor nervoase i de reproducie. Ulterior enterovirusurile porcine au fost izolate din leziuni cutanate de tip vezicular. Pe baza rezultatelor examenelor serologice, efectului citopatic (CPE) i proprietilor de replicare pe diferite linii celulare s-au identificat trei grupe citopatogene: (Zell, 2001, 2003)
Genul Enterovirus Virus Enterovirus porcin tipul 9, 10 Serotipuri 2 Boala Simptome Grupa CPE
Leziuni dermice de tip vezicular III
virusul bolii 1 veziculoase porcine (SVDV)
Boala veziculoas Leziuni porcin dermice de tip vezicular
731
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Genul Teschovirus Virus Teschovirus porcin (PTV) Serotipuri 11 Boala Boala TeschenTalfan Tulburri de reproducie Miocardit Simptome Grupa CPE I
Sapelovirus
Enterovirus porcin type 8
Tulburri nervoase Sindromul SMEDI Tulburri cardiace polioencefalomielit Tulburri nervoase
II
Pentru depistarea rapid i de certitudine a infeciilor cu aceste virusuri au fost dezvoltate tehnici de biologie molecular : PCR, nested RT-PCR i mai nou aprecierea cantitativ a materialului viral folosind real time-PCR. Specificitatea tehnicilor de biologie molecular se bazeaz pe faptul ca probele cu rezultat pozitiv la RT-PCR au fost gsite pozitive i n urma examenelor serologice specifice de depistare a PEV i PTV. (Krumbholz, 2003) In schimb tehnica PCR este o metod rapid i mai puin laborioas dect izolarea virusului pe culturi celulare ( prin pasaje succesive) i serotipizarea lui. Prin PCR sunt amplificate secvenele de material genetic cele mai conservate n cursul evoluiei filogenetice i ntre serotipuri. In cazul virusurilor porcine ncadrate n grupul CPE I, II i III, cercetrile au demonstrat c regiunea 5-NTR are cel mai crescut procent de conservabilitate. (Lukashev, 2003) Aceast secven este format dint-un numr crescut de perechi de baze (neobinuit de lung)i conine multipli codoni AUG cu rol important n iniierea translaiei virale. In plus aceste virusuri conin un IRES (internal ribosomal entry site n locul 5-cap structure. (Zell, 2005)
Reprezentarea schematica a regiunii 5NTR (Witwer, 2001)
732
Structurile conservate ale regiunii 5-NTR ale teschovirusurilor (Witwer, 2001)
PEV-8 PTV Omologia celor doua secvene ale regiunii 5-NTR ale enterivirusurilor (PEV-8) i teschovirusurilor (PTV) (Krumbholz, 2002)
Protocoalele descrise pentru depistarea acestor virusuri porcine prin PCR i nested RT-PCR difer n ceea ce privete secvena perechilor de primeri. Perechile de primeri caracteristice fiecrei grupe de citopatogenitate I, II si II amplific secvene diferite ale 5-NTR, n funcie de regiunea cea mai conservat: (Zell, 2003) Pentru CPE I: secvena de nucleotide 76396 (321 pb) Pentru CPE II: secvena de nucleotide 23435 (413 pb) Pentru CPE III: secvena de nucleotide 96556 (491 pb)
733
Amplificarea teschovirusurilor cu formarea segmentului caracteristic de 321 pb utiliznd cADN ( obinut prin revers-transcripie) ale serotipurilor PTV (Zell, 2000)
Amplificarea enterovirusurilor serotipul 9 i 10 cu formarea segmentului caracteristic de 491 pb utiliznd cADN ( obinut prin revers-transcripie) ale serotipurilor PEV 9 i 10. Deasemenea se observ amplificarea segmentelor de cADN ale virusului bolii veziculoase porcine (Zell, 2000)
Celelalte etape de lucru ale protocolului sunt identice. Deasemenea pentru o mai mare acuratee a diagnosticului au fost elaborate protocoale de lucru pentru nested RT-PCR ( n cazul n care cantitatea de material viral din eantion este redus).
734
Datorit faptului c infeciile cu PTV-1, dar nu i cu alte serotipuri de PTV sunt mai des ntlnite, este necesar serotipizarea. In acest scop a fost formulat o pereche de primeri ce amplific un segment de 683 pb caracteristic pentru tulpina PTV-1. Acest fragment corespunde secvenei de nucleotide 1967-2652 i amplifica regiunea genomicVP3/VP1. (Krumbholz, 2003) Concluzionnd putem afirma c necesitatea unei tehnici specifice de detecie a teschovirusurilor i enterovirusurilor porcine se explic prin faptul c dup epizootiile devastatoare din Europa din prima jumtate a secolului XX, infeciile cu teschovirusuri au devenit epizootice n multe ri. Dei infeciile cu aceste virusuri se exteriorizeaz clinic ntr-un procent foarte sczut, prezena unui agent patogen secundar (bacterii sau virusuri: PRRSV, circovirus porcin) transform o infecie inaparent intr-o boal clinic.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Kuppeveld F.J.M. van, A.S. de Jong, W.J.G. Melchers, P.H.G.M. Willems, 2005 Enterovirus protein 2B po(u)res out the calcium: a viral strategy to survive?; TRENDS in Microbiology ,Vol.13, nr.2, February, pg. 41-44; Krumbholz A., R. Wurmb, O. Scheck, E. Birch-Hirschfeld, R. Egerer, A. Henke, P. Wutzler, R. Zell, 2003 - Detection of porcine teschoviruses and enteroviruses by LightCycler real-time PCR; Journal of Virological Methods nr.113, pg. 5163; Zell R., A. Krumbholz, A. Henke, E. Birch-Hirschfeld, A. Stelzner, M. Doherty, E. Hoey, M. Dauber, D. Prager, R. Wurm, 2000 - Detection of porcine enteroviruses by nRTPCR: differentiation of CPE groups IIII with specific primer sets; Journal of Virological Methods nr. 88, pg. 205218; Krumbholz A., M. Dauber, A. Henke, E. Birch-Hirschfeld, N. J. Knowles, A. Stelzner, R. Zell, 2002 - Sequencing of Porcine Enterovirus Groups II and III Reveals Unique Features of Both Virus Groups; Journal of Virology, Vol. 76, nr. 11, June, pg. 58135821; Zell R., M. Dauber, A. Krumbholz, A. Henke, E. Birch-Hirschfeld, A. Stelzner, D. Prager, R. Wurm, 2001 - Porcine Teschoviruses Comprise at Least Eleven Distinct Serotypes: Molecular and Evolutionary Aspects; Journal of Virology, Vol. 75, nr. 4, Feb., pg. 16201631; Lukashev A.N., V.A. Lashkevich, O. E. Ivanova, G.A. Koroleva, A.E. Hinkkanen, J. Ilonen, 2003 - Recombination in Circulating Enteroviruses; Journal of Virology, Vol. 77, nr. 19, Oct., pg. 1042310431; Doherty M., D. Todd, N. McFerran, E.M. Hoey, 1999 - Sequence analysis of a porcine enterovirus serotype 1 isolate: relationships with other picornaviruses; Journal of General Virology, nr. 80, pg. 19291941; Kaku Y., A. Sarai, Y. Murakami, 2001 - Genetic reclassification of porcine enteroviruses; Journal of General Virology, nr. 82, pg. 417424; Witwer C., S. Rauscher, I.L. Hofacker, P.F. Stadler, 2001 Conserved RNA secondary structures in Picornaviridae genomes; Nucleic Acids Research, nr. 29, vol. 24, pg. 5079-5089; Zell R., S. Seitz, A. Henke, T. Munder, P. Wutzler, 2005 - Linkage map of protein protein interactions of Porcine teschovirus; Journal of General Virology, nr. 86, pg. 27632768.
4.
5.
6. 7. 8. 9. 10.
735
OBSERVATII PRIVIND PREVALENTA UNOR VIROZE RESPIRATORII LA BOVINE

PROLUSIONS REGARDING THE PREVALENCE OF SOME BOVINES VIRAL RESPIRATORY DISEASES
D.C. ANI, Adriana Elena ANI U.S.A.M.V. Iai Serological screening using blocking-ELISA assay on 114 serums taken from bovines that havent been vaccinated had positive results for BVD-MD in a percentage of 43% and for IBR-IPV of 68.42%. The presence of positive results can be explained by the presence of the viruses in bovine units (herds) in which the diseases have a subclinical evolution.
Key words: ELISA ,BVD-MD, IBR-IPV
Infeciile respiratorii ale bovinelor prezint o mare importanta att ca urmare a etiologiei polifactoriale ct i a susceptibiliti acestora. Dintre toate microorganismele incriminate n etiologia infeciilor respiratorii ale bovinelor, virusurile au un rol major, fiindu-le atribuit ceea mai mare importan. Ele produc infecii primare, cu particulariti epidemiologie i clinico-anatomice, care de regul sunt complicate cu infecii bacteriene secundare. Cercetrile efectuate au avut ca obiectiv stabilirea prin examen serologic a prevalentei infeciei cu virusul BDV-MD si IBR-IPV, n cteva uniti de cretere a bovinelor din Moldova. MATERIAL I METOD
Pentru stabilirea prevalentei infeciei cu IBR-IPV si BVDV au fost prelevate 114 probe de snge din trei ferme de bovine situate in Moldova. Pentru detecia anticorpilor specifici glicoproteinei B a virusului rinotraheitei bovine si ai proteinei P80 a virusului diareii virale bovine s-a utilizat testul blocking ELISA .
REZULTATE I DISCUII Examenul serologic efectuat pe cele 114 probe de ser recoltate de la bovine, in vederea stabilirii prevalentei infeciei cu virusurile IBR-IPV i BVD-MD au dus la obinerea urmtoarelor rezultate: (tabelul 1 i 2)
736
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Rezultatele testrilor serologice pentru BVD-MD Nr. Unitatea crt. 1 2 3 F1 F2 F3 Total Probe 20 80 14 114 Pozitive 4 30 6 40 Negative 16 45 7 68 Dubioase 0 5 1 6 % Pozitive 20 % 37,5 % 42,85 % 35,08 %
Rezultatele testrilor serologice pentru BVD-MD

80
80
70
60
50
45
40
30
30
20
20
16 4 0 F1 Total probe F2 Pozitive Negative 5
14 6 7 1 F3 Dubioase
10
Din analiza rezultatelor obinute se constata ca din cele 114 probe examinate, un numr de 40 (35.08 %) au reacionat pozitiv pentru BVD.
Tabelul 2 Rezultatele testrilor serologice pentru IBR Nr. Unitatea crt. 1 2 3 F1 F2 F3 Total Probe 20 80 14 114 Pozitive 4 60 14 78 Negative 16 19 0 35 Dubioase 0 1 0 1 % Pozitive 20 % 75 % 100 % 68,42 %
737

Rezultatele testrilor serologice pentru IBR
80
80
70
60
60
50
40
30
20
20
16 4 0
F1 F2
19 14 14
10
1
F3
Total probe
Pozitive
Negative
Dubioase
Procentajul ridicat in cazul probelor pentru IBR-IPV, 78 (68.42%) de rezultate pozitive din cele 114 ne arata caracterul enzootic al bolii, cu mare difuzibilitate in focar. Din tabelul 1 i tabelul 2 se observ c la toate probele examinate s-au depistat animale seropozitive pentru IBR-IPV si BVD-MD. Procentele reactiilor pozitive difer de la o unitate la alta. Trebuie precizat c rezultatele reflect situaia existent n anul 2005. Rezultatele obinute in urma testrilor serologice a probelor se arat c cele dou viroze evolueaz concomitent. In marea lor majoritate probele au fost declarate pozitive att la BVD-MD ct i la IBR-IPV. CONCLUZII 1. Ancheta serologica prin intermediul metodei blocking ELISA a stabilit seroprevalenta infeciilor cu BVD-MD si IBR-IPV la trei ferme din Moldova, prevalenta ceea mai ridicata nregistrndu-se in cazul IBR-IPV. 2. Prezenta reaciilor pozitive, colaborata cu lipsa fenomenelor clinice in efectiv se poate explica prin existena unor infecii latente. Acestea sub aciunea unor factorii abiotici sau biotici favorizani pot declana apariia boli in efectiv. 3. Rezultatele obinute sugereaz c este necesar o extindere a investigaiilor serologice in ct mai multe ferme pentru a depista animalele cu forme subclinice.
738
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. www.oie.int, 2004 - Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals Merk Veterinary Manual, seventh edition; Perianu T. i colab., 2005 Boli infecioase ale animalelor, Viroze, Vol II, Ed. UniversitasXXI, Iai; Ctan N., 1998 Infeciile respiratorii ale tineretului bovin, Editura Brumar, Timisoara; Carp-Crare M., 2001 Microbiologie veterinar. Virusologie, Casa de editur Venus, Iai; Sandvik T., 1999 - Laboratory diagnostic investigations for bovine viral diarrhoea virus infections in cattle, Veterinary Microbiology Thiry E., 2002 Maladies Virales des Ruminants, Collection Virologie clinique, Ed. Le Point Veterinaire;
739
INFECIILE LATENTE CU BHV-1: MECANISM I IMPORTAN

THE LATENCY OF BHV-1: MECHANISM AND IMPORTANCE
D.C. ANI, Adriana Elena ANI U.S.A.M.V. Iai Following primary infection of the eye, oral cavity, and/or nasal cavity, bovine herpesvirus 1 (BHV-1) establishes latency in trigeminal ganglionic (TG) neurons. Virus reactivation occur after natural or corticosteroid-induced stress. Reactivation from latency occurs sporadically, resulting in virus shedding and transmission to uninfected cattle. Infection of calves with BHV-1 leads to infiltration of lymphocytes in TG and expression of IFN- (interferon-gamma), even in latently infected calves. During latency, virus antigen and nucleic acid positive non-neural cells were occasionally detected in TG suggesting there is a low level of spontaneous reactivation.
Key words: herpesvirus bovin -1, IBR-IPV, stare de laten.
Herpesvirusul bovin-1 (BHV-1) este agent cauzal al rinotraheitei infecioase bovine (IBR), vulvovaginitei pustuloase (IPV) i balanopostitei infecioase (IBP) . Infeciile latente reprezint una din cele mai importante probleme asociate infeciei bovinelor cu virusul IBR-IPV: herpesvirusul bovin 1. Att tulpinile virulente circulante cat si cele vaccinale atenuate pot produce infecii latente ce pot fi reactivate de diferii stimuli precum utilizarea glucocorticoizilor (ex: dexametazona). Influena latentei BHV-1 asupra epidemiologiei infeciei: animalele rmn purttoare latente dup prima infecie cu tulpini virulente; tulpinile atenuate rmn latente dup vaccinare; nu se poate controla diseminarea tulpinilor atenuate; vaccinarea nu previne fixarea (infecia) n stare latent a tulpinilor virulente; poate fi posibil recombinarea ntre o tulpin atenuat i una circulant pe un animal cu infecie latent infectat cu ambele tulpini; statusul imun al animalului cu infecie latent influeneaz nivelul reexcreiei. Infeciile latente permit persistena BHV-1 ntr-o unitate fr a fi necesar ptrunderea unui virus exogen. n urma infeciei primare cu BHV-1 boala poate evolua sub form de rinotraheit sau conjunctivit, urmat de generalizarea infeciei pe diferite ci:
740
viremie; pe cale neuronal; prin intermediul punilor intercelulare evitnd lichidul extracelular (aa se explic diseminarea virusului de la o celul la alta n prezena titrurilor crescute de anticorpi) = principala cale de diseminare dup reactivare. Herpesvirusul bovin 1 (BHV-1) face parte din subfamilia Alphaherpesvirinae i prezint unele proprieti biologice asemntoare cu ale herpes simplex virus tipul 1 i 2 (HSV-1 i HSV-2) (Jones et al., 1990; Jones, 1998). BHV-1 prezint o perioada de laten destul de lung n ganglionii sistemului nervos periferic nainte de replicarea iniial n mucoasa epitelial. De cele mai multe ori virusul se reactiveaz i este eliminat dup un stres natural sau indus cu hormoni corticoizi. Cercetrile recente au demonstrat latena virusului rinotraheitei infecioase bovine (BHV-1) n neuronii senzitivi din ganglionul trigemen (TG) i in centrii germinativi ai tonsilelor faringiene. (Winkler et al., 2000) Reacia caracteristic la nivelul ganglionilor trigemeni n urma infeciei este reprezentat de infiltraie limfocitar. Cercetrile au artat ca limfocitele T controleaz infecia cu herpesvirus-1 n ganglionii senzitivi (Simmons et al., 1992) i s-a putut observa ca celulele neuronale infectate cu antigen viral sunt nconjurate de celule care elaboreaz IL-2, IL-6, IL-10 i IFN-. (Shimeld et al., 1997) In infecia acut a bovinelor cu BHV-1, zone de infiltraie limfocitar pot fi rapid detectate. Numeroase studii au dus la concluzia c celulele mediate ale rspunsului imun persist n ganglionii trigemeni la bovinele cu infecii latente produse de BHV-1. (Winkler et al., 2002). Persistena celulelor imune n TG este dat de expresia proteinei virale ntr-un neuron sau celul satelit. Examinarea atent a neuronilor TG a bovinelor cu infecii latente a artat c ntr-un neuron se gsete o cantitate crescut de material viral transcris, proteine virale i AND viral replicativ. (Feldman et al., 2002) Aceti neuroni care exprim material viral transcris i proteine sunt nconjurai de zone de infiltraie limfocitar i au fost descrii ca fiind locul de reactivare molecular spontan (spontaneous molecular reactivation) a infeciei. (Feldman et al., 2002) Persistena sistemului imun n TG pe parcursul infeciilor latente are rolul de reactivare a ciclului infecios. Limfocitele T care produc interferon- joac un rol important n prevenirea reactivrii infeciei latente. (Liu et al., 2001) In plus limfocitele citotoxice pot inhiba difuzarea virusului n TG prin inducerea apoptozei. IL-2 este o citotoxin neuroprotectiv elaborat de marea majoritate a neuronilor i a celulelor gliale (Lovato L. 2003) care stimuleaz expansiunea limfocitelor T i secreia de interferon- (Jones C., 2006)
741
Infiltraie cu celule mononucleare la bovine cu infecie BHV-1. Col. HEA, x 250 (la 6 zile post infecie i la 14 zile postinfecie) (Jones C., 2006)
In urma infeciei pe cale nazal sau ocular cu BHV-1 are loc transportul virusului n TG i instalarea infeciei latente. In cazul unei infecii acute n TG se observ exprimarea genelor virale urmate de instalarea strii de laten. (Jones, 2006) Astfel are loc o inflamaie cronic infiltrativ cu limfocite n ganglionii trigemeni ca urmare a infeciei cu BHV-1. Exprimarea citokinelor inflamatorii n timpul infeciilor latente este rezultatul exprimrii reduse a genelor virale sau a nivelului redus de reactivri spontane. (Shimeld et al., 1997). Leziunea caracteristic: infiltraii focale interstiiale cu celule mononucleare poate fi detectat dup 7 zile de la infecie. In cazul infeciei latente se pot observa discrete zone cu infiltraii cu mononucleare ca i la scurt timp de la debutul tratamentului cu dexametazon: dup 6 i 24 de ore. Dup 48 de ore de la administrarea de dexametazon zonele de infiltraie sunt mult mai largi i mai greu de localizat. Secreia de citokine de ctre celulele inflamatorii (IL-2, IFN- i IFN-) determin o inhibiie a infeciei productive n TG, deci pot media infecia cu BHV-1, dirijnd instalarea i reactivarea strii de laten. (Winkler M., 2002) Datorit faptului c s-a putut detecta in infeciile latente prezena acidului nucleic si a expresiei genelor virale in celulele non-neurale (celule satelit) din TG s-a concluzionat ca nivele sczute de reactivri spontane promoveaz prezena de limfocite pe perioada fazei de laten. Replicarea viral in acest numr sczut de celule nu a dus la excreia de virus pe care nazala sau ocular. (C. Jones, 2006) Este bine cunoscut faptul ca glucocorticoizii au capacitatea de a reactiva o infecie latent cu BHV-1, avnd efect imunosupresiv i putnd cauza apoptoza limfocitelor. (Schynts F., 2003). innd cont c secreia de citokine are rol in represia viral, odat cu moartea celulelor care secret cytokine este favorizat reactivarea infeciei. n schimb aciunea glucocorticoizilor de reactivare a infeciei este mai sczut in neuroni n comparaie cu cea din celulele non-neurale (satelit). De asemenea aciunea citokinelor secretate de celulele infamatorii ce nconjoar in cazul infeciei latente celulele infectate este mult mai puternica fa de neuroni dect fa de celulele satelit (ce conin ARN replicativ i expresii ale genelor virale). (Lovato L., 2003)
742
Infiltraie cu celule mononucleare n TG la bovine infectate cu BHV-1 Col. HEA, x250 A - infecie acuta: 7 zile de la infecie; B - infecie latent: 60 zile de la infecie; C - infecie latent: 6 ore de la administrarea dexametazonei; D - infecie latent: 24 ore de la administrarea dexametazonei; E - infecie latent 48 ore de la administrarea dexametazonei; F - infiltraie cu celule mononucleare; (Winkler M., 2002)
Pn n prezent este demonstrat c BHV-1 are capacitate de a infecta limfocitele T CD4+ n cazul unei infecii acute (Winkler et al., 1999) i c limfocitele conin ADN viral n infeciile latente. (Winkler et al., 2002) Concluzionnd se poate afirma c dei rspunsul imun este pronunat, virusul nu este niciodat ndeprtat (distrus complet) din organismul infectat ci el rmne intr-o stare de laten prelungit, putnd fi oricnd reactivat sub aciunea anumitor factori. Pentru depistarea i eradicarea bolii este strict necesar identificarea i eliminarea obligatorie a animalelor cu infecii latente, care sunt de fapt purttori sntoi de virus. Din pcate utilizarea vaccinurilor este doar o soluie temporar i limitat. Astfel inct aceast strategie de eradicare a purttorilor de virus presupune costuri ridicate pentru depistarea serologic.
743
Att controlul ct i eradicarea IBR nu sunt dect inte. Este nevoie de mbuntirea a metodelor de lucru: vaccinuri mai bune i mai bune posibiliti de testare.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. Jones, C., 1998 - Alphaherpesvirus latency: its role in disease and survival of the virus in nature. Adv. Virus Res., nr. 51, pg. 81133. Jones, C., Delhon, G., Bratanich, A., Kutish, G., Rock, D., 1990 - Analysis of the transcriptional promoter which regulates the latency-related transcript of bovine herpesvirus 1. J. Virol. nr. 64, pg. 11641170. Winkler, M.T., Schang, L.S., Doster, A., Holt, T., Jones, C., 2000 - Analysis of cyclins in trigeminal ganglia of calves infected with bovine herpesvirus-1. J. Gen. Virol. nr. 81 (Pt. 12), pg. 29932998. Winkler, M.T.C., Doster, A., Jones, C., 2000 - Persistence and reactivation of bovine herpesvirus-1 (BHV-1) in tonsils of latently infected cattle. Persistence and reactivation of bovine herpesvirus 1 in the tonsil of latently infected calves. J Virol. nr. 74, pg. 53375346. Winkler, M.T., Doster, A., Jones, C., 1999 - Bovine herpesvirus 1 can infect CD4(+) T lymphocytes and induce programmed cell death during acute infection of cattle. J. Virol. nr.73, pg. 86578668. Winkler, M.T., Doster, A., Sur, J.H., Jones, C., 2002 - Analysis of bovine trigeminal ganglia following infection with bovine herpesvirus 1. Vet. Microbiol. Nr. 86, pg 139155. Simmons, A., Tscharke, D., Speck, P., 1992 - The role of imune mechanisms in control of herpes simplex virus infection of the peripheral nervous system. Curr. Top. Microbiol. Immunol. nr. 179, pg. 3156. Shimeld, C., Whiteland, J.L.,Williams, N.A., Easty, D.L., Hill, T.J., 1997 - Cytokine production in the nervous system of mice during acute and latent infection with herpes simplex virus type 1. J. Gen. Virol.nr. 78, pg. 33173325. Feldman, L.T., Ellison, A.R., Voytek, C.C., Yang, L., Krause, P., Margolis, T.P., 2002 - Spontaneous molecular reactivation of herpes simplex virus type 1 latency in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. nr. 99, pg. 978983. Liu, T., Khanna, K.M., Carriere, B.N., Hendricks, R.L., 2001 - Gamma interferon can prevent herpes simplex virus type 1 reactivation from latency in sensory neurons. J. Virol. nr. 75, pg.1117811184. Lovato, L., Inman, M., Henderson, G., Doster, A., Jones, C., 2003 - Infection of cattle with a bovine herpesvirus 1 (BHV-1) strain that contains a mutation in the latency related gene leads to increased apoptosis in trigeminal ganglia during the transition from acute infection to latency. J. Virol. nr. 77, pg. 48484857. Jones C., V. Geiser, G. Henderson, Y. Jiang, F. Meyer, S. Perez, Y. Zhang, 2006 Functional analysis of bovine herpesvirus 1 (BHV-1) genes expressed during latency, Veterinary Microbiology nr.113, pg. 199210. Ackermann M., M. Engels, 2006 - Pro and contra IBR-eradication, Veterinary Microbiology, nr.113, pg. 293302 Schynts F., F. Meurens, B. Detry, A. Vanderplasschen, E. Thiry, 2003 - Rise and survival of bovine herpesvirus 1 recombinants after primary infection and reactivation from latency, Journal of Virology, Dec. 2003, Vol. 77, nr. 23 pg. 1253512542
5. 6. 7. 8. 9. 10. 11.
12. 13. 14.
744
EPIDEMIOLOGY OF EXPOSURES WITH HIGH RISK FOR RABIES INFECTION AND RABIES POSTEXPOSURE PROPHYLAXIS
P. CAZACU, M. MARES, U.S.A.M.V. Iai DANIELA CAZACU Center Medical, Trgu Frumos, Iai The aim of this study is to present the epidemiology of exposures with high risk for rabies infection (EHRRI) occurred in human population from Iasi county (Romania) between 1999 2003 and to emphasized the features of rabies postexposure prophylaxis. Information about EHRRI from St. Parascheva Infectious Diseases Hospital database was summarized for a period of five years. The incidence of EHRRI for county, various age and sex groups was calculated. Also, animal species involved in these EHRRI, location of wound and surgical procedures performed, features of rabies postexposure prophylaxis and period of hospital-stay were evaluated. In the period mentioned above, 925 individuals were involved in EHRRI. From age-groups, the highest incidence was in children less than 5 year-old (60/100,000 person-years) and from sex-groups, the highest incidence occurred in males (126/100,000 person-years). From 925 involved in EHRRI 920 received rabies postexposure prophylaxis (43.91% rabies serum, 23.36% rabies vaccine, 32.60% both and 0.13% no data about the administered product). The total duration of hospital-stay was 4,093 days and the number of individuals that required surgical procedures (sutures, amputations and reconstructive techniques) was 154 (16.64%). From 975 injuries (bites and scratches), 24.53% from lesions occurred on head, face or neck, 9.96% on trunk, back or buttocks, 50.43% on arm, hand or finger and 13.92% on leg, foot or toe. The exposures were due to dogs 66.16%, cats 15%, horses 8.32%, rats 4.21%, goats 1.83%, foxes 1.08%, other species 3.67%. Interventions such as education in order to prevent animal bite, vaccination of carnivores against rabies, children surveillance, reduction of stray-dogs and rodents control must be instituted, enhanced or better enforced in communities.
Key words: epidemiology, exposures with high risk for rabies infection, rabies postexposure prophylaxis, Iai-Romania.
Veterinarians are an important source of information for the public and their role in prevention of zoonoses is unanimously recognized.
745
Postexposure prophylaxis (PEP) is given in response to a perceived need for rabies prophylaxis in the event of a bite, scratch, or other human exposure to a potentially or definitively rabid animal. Often, PEP is administered without confirmation of rabies exposure (to err on the side of caution) even though guidelines for treatment exist. Rabies PEP is expensive and not without potential adverse effects. Local reactions at the injection site or systemic problems, such as muscle aches, fever, or vomiting may develop. Animal bite or exposure reports may be one source of information about PEP. The need for PEP is determined by obtaining an accurate history and decisions to administer PEP often are made in counsel with a rabies exposure expert. Surveillance data are important for identifying conditions that require further investigation and for providing sensible solutions from imperfect data to facilitate public health action (4). The aim of this study is to present the epidemiology of exposures with high risk for rabies infection (EHRRI) occurred in human population from Iasi county (Romania) between 1999 2003 and to emphasized the features of rabies postexposure prophylaxis. MATERIALS AND METHODS
Informations about EHRRI from St. Parascheva Infectious Diseases Hospital database was summarized for a period of five years (1999-2003). Copies of paper exposures with high risk for rabies infection reports were reviewed for Iasi county, and fields common to most reports were entered into a computerized database.The incidence of EHRRI for county, various age and sex groups was calculated. Also, animal species involved in these EHRRI, location of wound and surgical procedures performed, features of rabies postexposure prophylaxis and period of hospital-stay were evaluated. EHRRI consist in any penetration of the skin by teeth and resultant contamination of the wound with potentially infectious saliva, scratches, abrasions, open wounds, mucous membranes with saliva (lick) or other potentially infectious materials such as brain tissue from a rabid suspect animal (i.e. veterinarians, veterinary students, certain laboratory workers, spelunkers) and ingestion of meet belonging to contaminated animals or rarely in transplantation, casual contact such as petting a rabid suspect animal (1,2). Victim information was entered into a computerized database which included residence, age, location of wound and surgical procedures performed, and postexposure treatment. Incidences (numbers of new cases/population at risk) of EHRRI were calculated, using 1999 2003 populations. Data were analyzed, using a statistical software program (Excel for Windows Professional).
746
RESULTS Exposures with high risk for rabies infection (EHRRI) report were colected from Iasi county (Romania) between 1999 2003. In this period have been registered 925 EHRRI, with an average incidence of 22.36 exposures/100,000 person-years, from which only 920 individuals have received PEP. The highest incidence of EHRRI occurred in 2001 (i.e. 29.80 exposures/ 100,000 personyears) - see Table 1.
Table 1 Annual incidence of EHRRI from Iasi county (Romania) between 1999 2003 Year 1999 2000 2001 2002 2003 Number of exposures 109 185 251 181 199 Population 833 388 836 751 842 126 805 330 816 003 Rate per 100,000 person-years 13.07 22.1 29.8 22.47 24.38
From data registered at territorial laboratory for rabies diagnosis, in Iasi county (Romania) no cases of rabies in humans were confirmed between 1999 2003, but 27 cases of animal rabies were identified.
Table 2 Age-specific rates of reported animal exposures with high risk for rabies infection (EHRRI) Age-group (years) <5 5 to 9 10 to 14 15 to 19 20 to 24 25 to 29 30 to 34 35 to 39 40 to 44 45 to 49 50 to 54 55 to 59 > 59 Total Number of exposures 1999-2003 158 119 102 71 50 49 46 24 31 53 41 31 150 925 Mean 31.6 23.8 20.4 14.2 10.0 9.8 9.2 4.8 6.2 10.6 8.2 6.2 30.0 185 Population 1999-2003 1999-2003 259 878 252 219 332 643 355 306 411 035 355 878 333 942 223 076 259 715 276 654 233 799 162 244 677 191 4 133 580 Mean 51 975.6 50 443.8 66 528.6 710 612.0 82 207.0 71 175.6 66 788.4 44 615.2 51 943.0 55 330.8 46 759.8 32 448.8 135 438.2 826 719.6 Rate per 100,000 personyears 60.79 47.18 30.66 1.99 12.16 13.76 13.77 10.75 11.93 19.15 17.53 19.10 22.15 22.36
747
Age-specific rates for EHRRI were also calculated. Adjusting for the population size of each age group, children < 5 years old have the highest incidence of EHRRI - 60.79/ 100,000 person-years (Table 2). Incidence of EHRRI is maximal in individuals 20 year-old and less (1.69 fold greater than that observed in the group of individuals with age >59 and 2.68 fold greater than in group of individuals with ages between 20-59 years, the difference between the studied groups being statistically significant (p< 0. 001 ), Table 2. From the table below we can noticed that the incidence of EHRRI in men is greater than that observed in women (p < 0. 05), see Table 3.
Sex-specific rates of reported animal EHRRI. Date from Iasi county (Romania) between 1999 2003 Sex-group Men Women Number of exposures 518 407 Population 19992003 (Mean) 409407.2 417312.4 Table 3
Rate per 100,000 person-years 126.52 97.52
975 injuries (bites, scrapes) have been registered. Most victims have suffered injuries on the arm, hand, or finger (50.43 %); 24. 53 % were bitten on the head, neck, or face; 13. 92 % on the leg, foot, or toe; and 9. 96 % on the trunk, back, or buttocks. 1.12 % of reports lacked information on wound or injuries location. Children <10 years old were more likely to be exposure on injuries on the head, neck, or face compared with people >10 years old (P < 0.05, Table 4).
Frequency of animal injuries by wound location and victim age Date from Iasi county (Romania) between 1999 2003 * Age group (years) Table 4
Number of injuries (%) Head, face, Trunk, back, Arm, hand, Leg, foot, toe neck buttocks finger <5 118 (70.6 %) 10 (5.9%) 31 (18.5%) 6 (3.5%) 5 to 9 71 (54.1 %) 16 (12.2%) 33 (25.1%) 11 (8.3%) 10 to 14 34 (31.7 %) 17 (15.8%) 43 (40.1%) 11 (10.2%) 15 to 19 19 (25.3 %) 6 (8%) 41 (54.6%) 9 (12%) 20 to 24 12 (22.2 %) 8 (14.8%) 30 (55.5%) 4 (7.4%) 25 to 29 6 (11.5 %) 9 (17.3%) 30 (57.6%) 7 (13.4%) 30 to 34 7 (15.9 %) 2 (4.5%) 27 (61.3%) 8 (18.1%) 35 to 39 5 (17.2 %) 5 (17.2%) 17 (58.6%) 2 (6.8%) 40 to 44 10 (29.4 %) 4 (11.7%) 14 (41.1%) 6 (17.6%) 45 to 49 12 (21.8 %) 2 (3.6%) 30 (54.5%) 10 (18.1%) 50 to 54 4 ( 9 %) 3 (6.8%) 27 (61.3%) 8 (18.1%) 55 to 59 2 (6.4 %) 1 (3.2%) 21 (67.7%) 7 (22.5%) > 59 6 (3.9 %) 13 (8.5%) 91 (59.8%) 38 (25%) Mean % 24.53% 9.96% 50.43% 13.92% * 11 of 975 total reports injuries for Iasi County, 1999-2003, were missing wound location
748
Most animal EHRRI reports indicated the species of the involved animal. More than 66 % were dogs, 15 % cats, 8.32 % horses, 4.21 % rats, 1.83 % goats, 1.08 % foxes, 0.97 % ferret, and 2.7 % other species (Table 5).
Table 5 Frequency of animal species involved in EHRRI, from Iasi conty (Romania) between 1999-2003 Number of exposures 1999-2000 925 % Other species 25 2.7
Dog 612 66.16
Cat 136 15
Horse 77 8.32
Rat 39 4.21
Goat 17 1,83
Fox 10 1.08
Ferret 9 0.97
The incidence of dog exposures was 14.8/100,000 person-years (18/ 1,000 person-years, USA Overall, 2001) and the incidence of cat exposures was 3.29/100,000 person-years. From 925 involved in EHRRI 920 received rabies postexposure prophylaxis (43.91 % rabies serum, 23.36 % rabies vaccine, 32.60 % both and the number of individuals that required surgical procedures (sutures, amputations and reconstructive techniques) was 154 (16.64%), and 0.13 % no data about the administered product, Table 6).
Table 6 Frequency of rabies post-exposure prophylaxis (PEP) or / and surgery. Date from Iasi county (Romania) between 1999 2003 * Number of rabies post-exposure prophylaxis and surgery (%) Antirabies serum 404 (43.91%) Antirabies vaccine 215 (23.36%) Antirabies serum and Antirabies vaccine 300 (32.60%) Surgery 154 (16.64%) * 5 of 925 total reports didn't have PEP and one of 920 no information regarding PEP Type of PEP and treatment
The total duration of hospital-stay was 4,093 days (mean/ person 4.48 days hospital-stay/ person). DISCUSSION Exposures with high risk for rabies infection (EHRRI) are an important community health problem. Serious injuries, particularly to children, and the need for rabies PEP are major consequences. Because of the combined efforts of local and state health departments, animal control offices, and the veterinary community, rabies in humans is rare and results primarily from sporadic exposures to the foxes strain of rabies. Continued surveillance and rabies control
749
is still necessary to protect public health, but new issues such as the relative costs and benefits associated with various control measures have emerged . Reducing the need for PEP includes reducing rabies in wild animal populations through such methods as bait vaccination or foxes. Rabies in foxes is the most important reservoir for human and domestic animal exposure in Romania and Iasi county, and foxes exposures resulted in at least 10 PEP treatments between 1999-2003. Means by which the number of stray-dogs and rabies in stray-dogs may be reduced include euthanasia, neutering, and vaccination of these animals, eventually their adoption. Another way to reduce the need for rabies PEP is to increase vaccination rates for pet (owned) animals (3, 4). A final way to reduce the need for PEP is by educating children and adults about bite prevention and dog behavioral Dogs were responsible for most reported EHRRI in our study. The care and management of dogs and the interface between dogs and people appear to be major issues, especially for households with or near children. Reducing rabies PEP also includes minimizing unnecessary administration of PEP. When dealing with exposures to livestock, rodents, lagomorphs, physicians were asked to consult public health officials and reminded that bites from, hamsters, guinea pigs, gerbils, rats, mice, rabbits and hares almosts never required anti-rabies treatment. Administration of PEP to person EHRRI by animals currently vaccinated against rabies is not recommended. The estimated incidence of PEP was 22.25/ 100,000 person-years. Other studies indicate an incidence of 4.6/ 100,000 person-years (in Pennsylvania state, USA, 1995). So, in Iasi county it is of 4.83 more likely (4). Costs of PEP were still high, respectively 65 Euro/PEP/case, and 15 Euro/ day of hospitalization. The costs for EHRRI increase through the sick leaves, the surgical reconstruction procedures, or then patients remain with a body of psychic handicap after aggression or mutilation. CONCLUSIONS The highest incidence of EHRRI occurred in 2001 (i.e. 29.80 exposures/ 100,000 person-years). Adjusting for the population size of each age group, children < 5 years old have the highest incidence of EHRRI - 60.79/ 100,000 person-years. Incidence of EHRRI in men is greater than that observed in women (p<0. 05). 975 injuries (bites, scrapes) have been registered. Most victims have suffered injuries on the arm, hand, or finger (50.43 %). Children <10 years old were more likely to be exposure on injuries on the head, neck, or face in comparison with people >10 years old (p < 0.05).
750
The incidence of dog exposures was 14.8/100.000 person-years (the highest incidence). From 925 involved in EHRRI 920 received rabies postexposure prophylaxis. The estimated incidence of PEP was 22.25/ 100,000 person-years. Continued surveillance and rabies control is still necessary to protect public health, but new issues such as the relative costs and benefits associated with various control measures have emerged.
REFERENCES
1. 2. 3. 4. 5. 6. Corey L., 2001 Rabies virus and other rhabdoviruses, in Harrisons principles of internal medicine 15th edition, McGraw-Hill. Fishbein B.D., Bernard W.K., 1995 Rabies Virus, in Mandell, Douglas and Bennetts -Principles and Practice of Infections Diseases, 4th editions, Churchill Livingstone Inc. Krebs W.J., Noll R.H., Rupprecht E.C., Childs E.J., 2002 Rabies surveillance in the United States during. JAVMA, Vol. 221, No. 12, December 15, p. 1690-170. Moore A.D., Sischo M.W., Hunter A., Miles T., 2000 Animal bite epidemiology and surveillance for rabies postexposure prophylaxis. JAVMA, Vol. 217, No. 2, July 15, p. 190-194. Overall L.K., Love M., 2001 Dog bites to humans-demography, epidemiology, injury, and risk. JAVMA, Vol. 218, No. 12, June 15, p. 1923-1933. The National Association of State Public Health Veterinarias Committee (USA) Compendium of Animal Rabies Prevention and Control, 2003. JAVMA, Vol. 222, No. 2, January 15, 2003, p. 156-161.
751
PCR DETECTION OF V. PARAHAEMOLYTICUS WITH TLH GENE PRIMERS

Gh. BRDAN U.S.A.M.V. Iai The study describes the optimization of the parameters and the test of PCR to establish a specific and significant PCR method for detection tlh gene of Vibrio parahaemolyticus. The results show that the use of PCR clearly increases the effectiveness of the method by detecting this bacterium of soiled seafood. PCR-based developed improves considerably the speed and the sensitivity of detection of V.p. Through the development of the tools of molecular biology, the microbiological safety of the seafood for human consumption can be increased.
Key worlds: detection, V. parahaemolyticus, PCR, electrophoresis
INTRODUCTION Polymerase Chain Reaction (PCR) is a molecular biology technique that allows for quick replication of DNA (4). The principle of the reaction of gene amplification is to recopy a segment of DNA or RNA in many specimens, thanks to a DNA thermostable polymerase extracted from Thermus aquaticus (Taq polymerase) and with two oligonucleotidic starters which frame the amplified segment. A certain number of requirements are however related to the food diagnosis with knowing: need for distinguishing the bacteria alive from the dead bacteria, very weak test specimens used in these tests, many inhibitors present in food (2). These requirements prohibit any use on line of the genetic tests. Vibrio parahaemolyticus (V.p.) is frequently isolated in coastal water and the seafood in temperate zones throughout the world (3). It is the most frequent cause of the food borne disease in the areas where many residents eat believed fish. It is a halophytic Gram-negative bacterium usually associated with seafood. A high incidence of this pathogen undoubtedly originates from the frequent consumption of marine food. Some foods implicated in the US are crab, shrimp, and lobster, which unlike fish in Japan, typically were cooked before eating (5). Mishandling practices, such as improper refrigeration, insufficient cooking, crosscontamination, or recontamination are suspected in these outbreaks (3). Clinical manifestations have included diarrhea, abdominal cramps, nausea, vomiting, headache, fever, and chills, with incubation periods ranging from 4 to 96 hours (1). The objective of this study was to develop and evaluate PCR assays to confirm and characterize V. parahaemolyticus using primers for tlh gene.
752

Bacterial strains and microbiological media. Assay specificity was determined for the V. parahaemolyticus strains (ATCC 17.802). Bacterial strains were grown overnight at 37C in alkaline peptone water with 3% salt (APW3%). V. parahaemolyticus was cultured in T1N3 agar plates (10% tryptone, 3% NaCl) at 37C overnight. Other vibrio strains were grown and maintained as follows V. cholerae, V. alginolyticus, V metschnikovii and V. vulnificus. DNA purification for PCR optimization. Total genomic DNA from V. parahaemolyticus and other bacterial strains was purified as described by Wizard Genomic DNA purification kit (Promega Corporation, Madison, WI, SUA). The DNA concentration was measured at 260/280 nm. Selection of target and oligonucleotide primer sequences. A segment of the tlh gene of the V. parahaemolyticus (GenBank accession no. M36437) was used as the PCR target for specific detection. Potential primer sequences were analyzed for specificity by comparison with known gene sequences by using the GenBank database with the BLAST search program and by using the nucleotide sequence analysis developed in this study. It is located between bp 904 and 927 of the DNA segment with the sequence: 5'-AAA GCG GAT TAT GCA GAA GCA C-3' and 5'-CGT-TCA-TCT-CAA-GCA-CTT-TCG-CA-3'. The primers used in this study were custom synthesized by Eurogentec Liege, Belgium. Optimization of PCR and specificity of oligonucleotide primers. Purified genomic DNA from V. parahaemolyticus was used for the optimization of PCR amplification. All PCR reagents were obtained from Amersham Pharmacia Biotech, Holland). PCRs were performed at a final volume of 20 l. Each reaction mixture contained 2 l of buffer 10x; 2.0 mM MgCl2; 0.5 mM (each) dATP, dCTP, dGTP, and dTTP; 0.2 mM primers; 0.2 l Taq polymerase; 18l water ultrapure and 2 l of extracted DNA. All PCR amplifications were performed in a DNA thermal cycler Mastercycler Gradient Eppendorf (VWR, Leuven, Belgium), with the following PCR cycling parameters: initial denaturation at 94C for 5 min, followed by 40 cycles of amplification. Each amplification cycle consisted upon the denaturation at 94C for 30 s, primer annealing at 58C for 30 s, and primer extension at 72C for 30 s. Detection of amplified DNA. All PCR-amplified DNAs were separated at a constant voltage of 5 V/cm in 1% (wt/vol) agarose (Eurogentec, Lige, Belgique) with 1 TAE (per liter, 40 mM TrisCl [pH 8.0], 1.18 ml of acetic acid, 2 mM Na2EDTA). The separated DNA in the gel was stained with 2% ethidium bromide per ml and visualized on a U.V. illuminator (Bio-Rad, Nazareth, Belgium). The amplified DNA bands were photographed with a Kodak 1D (Thermolabsystems, Brussels, Belgium) Specificity of detection. The specificities of the oligonucleotide primers and the target DNA segment, tlh, for the detection of V. parahaemolyticus were tested by PCR amplification of the purified genomic DNA of all the strains listed above by using the optimum PCR conditions and cycling parameters described. Detection of V. parahaemolyticus in contaminated raws. V. parahaemolyticus was grown overnight in T1N3 plates at 37C, inoculated into 753
fresh APW3% broth, and grown at 37C to approximately 4,2 108 cells x ml-1 as determined by viable plate counting. Cells were 10-fold serially diluted to extinction in 25 g of sterile raws in 225 ml APW3%. These dilutions were incubated at 37C for 18 hours. After this interval the bacterial count indicated 3x108 ufc/ml.. DNA was isolated from 1 ml of the sample and then diluted 10-fold and PCR were performed.
RESULTS AND DISCUTIONS Specificities of oligonucleotide primers and optimization of PCR and cycling parameters. The oligonucleotide primers, L-tlh and R-tlh, amplified the targeted tlh gene segment of all V. parahaemolyticus isolates. PCR amplification was determined to be optimal at an annealing temperature of 58C, by a succession of assays. Decreased intensities of the amplified product in an agar gel were observed with gradient of dilutions DNA sample. At an annealing temperature of 56C, nonspecific amplicons in addition to the targeted tlh gene fragment were observed. PCR-amplified DNA bands was an expected molecular size of 130 bp (Fig. 1).
Fig. 1. Electrophoresis migration pattern of PCR assay detects the tlh gene. Reference strains of V. parahaemolyticus; lane 1 to 6, reference strains at T+, respectively 41; comparison of selected strains of other vibrios (45-48)
The present study provides the premise for developing a rapid, real-time fluorogenic detection of this pathogen in marine foodstuff and coastal waters. However, further optimization of the PCR amplification protocol and hybridization reactions may be necessary to achieve these objectives. The minimum level of detection was the third decimal dilution, respectively 4 3x10 V. parahaemolyticus cells x ml-1 in bivalvular mollusks (Fig. 2). Further study or modification of the commercially available DNA purification kits is necessary to achieve the necessary sensitivity for the detection of this pathogen in shellfish and shellfish-growing waters (2). This PCR approach can potentially be used to monitor with high specificity and well within the
754
required range of sensitivity the occurrence and distribution of this newly emerged pathogenic V. parahaemolyticus strain in coastal, marine, and ship ballast waters (3). Early detection will help increase seafood safety and decrease the risk of infectious outbreaks caused by this pathogen.
Fig. 2 Agarose gel electrophoresis of PCR-amplified tlh DNA segments from V. parahaemolyticus in contamination raw at diluted 10-fold. m: DNA size markers.
CONCLUSIONS The PCR protocol for the tlh gene of V. parahaemolyticus is specific and rapid, the detection can be achieved in 4 h, but the quantification is limited. Early detection of V. parahaemolyticus will help increase seafood safety and decrease the risk of infectious outbreaks caused by this pathogen.
REFERENCES
1. 2. 3. 4. 5.
Bacteriological Analytical Manual http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-9.html Bej, A.K., D.P. Patterson, C.W. Brasher, M.C.L. Vickery, D.D. Jones, C. Kaysner, 1999 Detection of total and hemolysin-producing Vibrio parahaemolyticus in shellfish using multiplex PCR amplification of tl, tdh and trh. J.Microbiol.Meth; 36: 215225. DePaola, A., L.H. Hopkins, J.T. Peeler, B. Wentz, R.M. McPhearson, 1990 - Incidence of Vibrio parahaemolyticus in U.S. coastal waters and oysters. Appl.Environ.Microbiol; 56: 22992302. McPherson M.J., Moller S.C., 2000 - PCR The basics of PCR, Bios Scientific Publishers Ltd., 2000, 89-119. Myers M., Panicker G., Bej A.K., 2003 - PCR Detection of a Newly Emerged Pandemic Vibrio parahaemolyticus O3:K6 Pathogen in Pure Cultures and Seeded Waters from the Gulf of Mexico. Appl Environ Microbiol.April; 69(4): 21942200
ACKNOWLEDGEMENTS I would like to thank Dr. Bernard China and Prof. Georges Daube of Liege University, Belgium, for their assistance in project and use the PCR protocol.
755
HYBRIDIZATION DNA-DNA SPECIESSPECIFY METHOD ON NYLON FILTERS FOR DETECTION OF V. PARAHAEMOLYTICUS TLH GENE
Gh. BRDAN U.S.A.M.V. Iai Methods of detection based on probes DNA was developed and was characterized like alternatives to the long and less specific conventional protocols bacteriological. Our objective was to develop and evaluate a genetic method for specific detection of V parahaemolyticus in bacterial colonies of insulation. Hybridization DNA-DNA of the evaluation of the method was carried out for the gene tlh of a standard stock (ATCC) of V. parahaemolyticus. Probes marked with digoxigenin were prepared by the PCR. Analyses of hybridization of colony were carried out using the nylon filters. The lyses of colony, hybridization, and the immunologic parameters of detection were optimized for the identification of the biotypes of target. The experimental process presented here can be filled in 2 day. The protocol was conceived specifically to identify V parahaemolyticus in the seafood. This methodology allows also the confirmation or the classification of the suspect colonies on filters when a culture was not recovered.
Key words: V. parahaemolyticus, detection, DNA hybridation
INTRODUCTION The principle of molecular hybridization is based on the capacity which two DNA strands (the target ADN and the ADN probe) have to pair in a specific way by their complementary bases to form a duplex. The technology of the probes uses this principle to connect the target chains of the micro-organism to test with called marked chain probes. Enormous progress was made in the no radioactive systems of marking: enzymatic marking, by fluorescence and luminescence (2). Vibrio parahaemolyticus is a halophilic bacterium often found within shellfish and in estuarine waters. Among a number of pathogenic vibrio species, it is commonly associated with oyster-borne gastroenteritis (4). In general, in optimum temperatures, V. parahaemolyticus grows more rapidly than other food poisoning-causing bacteria, and negligence in temperature control during food processing and storage is the major cause of poisoning by this pathogen. The most commonly accepted method for detection of V. parahaemolyticus in food is described in the FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) (1). It is established 1x104 V. parahaemolyticus cells g-1 as a level that warrants regulatory action for ready-to-eat seafood products (3). This includes pathogenic
756
(Kanagawa phenomenon-positive) and non-pathogenic (Kanagawa phenomenonnegative) strains, both of which must be enumerated in these foods. The purpose of this study was to evaluate a non-isotopic species-specific probe for thermolabile haemolysin (tlh) gene that is safe to handle and that can be used to reduce the time and effort necessary to verify the identity of V. parahaemolyticus from seafood products. MATERIALS AND METHODS
The study was made in Laboratory of microbiology of foodstuffs of animal origin (LMDA) at the University of Liege, Belgium. Bacterial strains and culture preparation. Three V.p. strains (ATCC 17.802) and other vibrio species strains (V. alginolyticus , V. cholerae O1, V. metschnikovii , V. vulnificus) were provided by LMDA culture collections. Many samples were analyzed by the FDA-BAM method (1) using a procedure with enrichment in APW3% salt and incubated at 37C for 18h, and isolation on thiosulphate-citrate-bile salts-sucrose (TCBS) agar plates. The sucrose-negative (green) colonies were selected from each plate for screening using API-20E diagnostic strips (BioMerieux, Paris, France). Unless otherwise stated, all media and equipment were sterilized by autoclaving for 15 min at 121C. Vibrio parahaemolyticus gene probe. The nucleotide base sequence for the probe was from bases 904927 of the V. parahaemolyticus tlh gene (accession number M36437) was synthetized by Eurogentec Liege, Belgium: 5'-X AAA GCG GAT TAT GCA GAA GCA C X-3' and 5'-CGT-TCA-TCT-CAA-GCACTT-TCG-CA-3'. The polymerase chain reactions (PCR) were realized with Mastercycler Gradient Eppendorf (VWR, Leuven, Belgium). Probe and filter preparation, hybridization and colorimetric detection were done according to Wizard Genomic DNA purification kit (Promega Corporation, Madison, WI, USA) and QIAquik PCR Purification Kit (Qiagen GmbH, Hilden, Germany). Detection of Vibrio parahaemolyticus by tlh gene probe. The bacteria grown in agar broth were plated on T1N3 agar (1% tryptone, 3% NaCl and 2% agar) using a tips of 1 l for each spot, with incubation at 37C, 18h (Fig. 1). The colonies (Fig. 2) were transferred to nylon filters HybondTM-N+ (Amersham Life Science, Buckinghamshire, England) and treated with alkaline solution for DNA denaturizing and cross-link with the filter. After pre-hybridization, the filters were probed with the Digoxigenine-labelled tlh probe by using DIG High Prime DNA Labeling and DetectionStarter Kit for color detection with NBT/BCIP (Roche Applied Science, Applied Science, Penzberg, Germany).
RESULTS AND DISCUSSIONS We prepared and verified a probe of DNA of V.p. by the PCR with starters for the gene tl (24 pairs of bases: 904-927). The probe was marked with Digoxignine. One carefully respected the indications of the manufacturer for the
757
hybridization of the ADN fixed on a nylon membrane, followed of an immunological detection of this hybridization (Fig. 3).
Fig 1. Disposition of the bacteria to transfer them on filter
Fig. 2 Agar T1N3 : bacteria colonies after 18h at 370C
Fig. 3. Nylon filter after immunologic detection: the arrow indicates the colored spot corresponding to V.p.
As the method was not used usually in the laboratory, we had many the difficulties by setting up it. After several tests, our conclusion is that this method is very delicate and tiresome. The difficulty of the technique is also related to the use of the many solutions. As sequence in time, the detection of V.p. takes approximately two days, almost half of detection by traditional bacteriology, and with a reduced reliability. One of the significant points of the technique consists in sowing, on an agar, small spots of solution of enrichment. According to the bacterial concentration, these drops can have 1, 2, 5 or 10 l; the sense of smell of the technician played an important part in the choosing of the volume necessary. As V.p. is a mobile bacterium, after a few hours of incubation, the bacterial colonies become increasingly large and can join, making difficult the interpretation of the results. To obtain a probe of ADN it is necessary to carry out a traditional PCR, to purify the product of PCR, to concentrate it and to mark it with Digoxygenine. The checking of marking still took a few hours. The process of hybridization is the most significant stage of the method. The temperature of 42C seemed to be highest with the fixed probe, but it was far from that of 58C used during the hybridization of the PCR. In addition, one attended with an incomplete hybridization, in spite of the continuous agitation of the membrane in the solution. One met several times the phenomenon of precipitation of the solution of hybridization, another limiting factor of the method. It should be added the fact that the use of the gene tlh does not make it possible to detect the pathogenic stocks of V. parahaemolyticus, i.e. that this method is not useful for the detection of routine. The team of Gooch (2) compared two known methods for detection of V. parahaemolyticus by hybridization of ADN species-specific, direct on membrane
758
nylon, by using two probes for the gene tlh: one marked with alkaline and different phosphatase and one with the digoxignine. Their conclusion was that hybridization is an easy and fast method. Recently, another American team proposed to carry out hybridizations with probes for the genes tlh and tdh marked with alkaline phosphatase, in order to detect the total number of V parahaemolyticus and to identify the pathogenic stocks (5). CONCLUSIONS These results suggest that the probes are possibly for detection of the V. parahaemolyticus tlh gene. Specific hybridization DNA on the nylon membrane is a difficult method to realize in the detection of V parahaemolyticus in routine process and comprises many difficulties. Through this method it is impossible to establish a quantification of the pathogenic bacteria in a food product.
REFERENCES
1. Elliot, E.L., Kaysner, C.A., Jackson, L., Tamplin, M.L., 1995 - Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus, V. vulnificus, and other Vibrio spp . In: Bacteriological Analytical Manual, 8th ed., pp. 9.019.25. Washington, D.C. Food and Drug Administration. Gooch J., DePaola A., Kaysner C., Marshall D., 1996 - Evaluation of two direct plating methods using nonradioactive probes for enumeration of V. parahaemolyticus in oysters, Appl. Environ. Microbiol., 67 (2): 721-724. ICMSF - International Commission on Microbiological Specifications for Food. Vibrio parahaemolyticus, In: Roberts T.A. (chairman Ed.), Microorganisms in foods, 5th edition: Characteristics of microbial pathogens, Blackie Academic Professional, London, New York, Melbourne, Tokyo, 1996, 426-435. McCarthy S.A. DePaola, A., Cook D.W., Kaysner C.A., Hill W.E., 1999 - Evaluation of alkaline phosphatase- and digoxigenin-labelled probes for detection of the thermolabile hemolysin (tlh) gene of Vibrio parahaemolyticus, Letters in Applied Microbiology; 28(1): 66-68. Nordstrom J.L., DePaola A., 2003 - Improved recovery of pathogenic Vibrio parahaemolyticus from oysters using colony hybridization following enrichment, Journal of Microbiological Methods, 52: 273-277. Taniguchi, H., Hirano, H., Kubomura, S., Higashi, K., Mizuguchi, Y., 1986 Comparison of the nucleotide sequences of the genes for the thermostable direct hemolysin and the thermolabile hemolysin from Vibrio parahaemolyticus. Microbial Pathogenesis; 1: 425 432.
2. 3.
4.
5. 6.
ACKNOWLEDGEMENTS We would like to thank Prof. Daube Georges and Dr. China Bernard of the Liege University, Belgium, for their assistance in design and development of primers and probes for use in this work. 759
REAL TIME PCR WITH SYBRGREEN TO DETECT THE PATHOGENICALLY STRAINS OF VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS
Gh. BRDAN U.S.A.M.V. Iai Vibrio parahaemolyticus (Vp) is an estuarine bacterium that is the principal cause of shellfish associated cases of bacterial gastroenteritis worldwide. There are pathogenic only the stocks which have the factors of virulence: the thermostable direct haemolysin (TDH) and TDH-related haemolysin (TRH). The thermostable direct haemolysin gene (tdh) and the thermostable-related haemolysin gene (trh) are both currently used as markers of pathogenicity for this micro-organism. The paper presents an alternative of the real time PCR, with SYBR Green, useful for the simultaneous detection of these genes. The principle of the analysis is to identify the melting curves, with the peaks of fluorescence at the specific Tm for each amplicon.
Key words: real time PCR, V. parahaemolyticus, SYBRGreen
INTRODUCTION The details of the pathogenesis of the V.p. are known since the years '50, when a bond was established between virulence for the man of an isolate of this bacterium and its capacity to produce a haemolyse on agar with blood (Wagastuma agar) - phenomenon of Kanagawa (3). In Japan, it was observed that 96,5% of 2720 human stocks were positive (K+ stocks) compared only 1% of 650 environmental stocks (stocks K-). Other authors brought back frequencies even weaker of K+ stocks among the stocks of the environment. There are experimental arguments in favour of a natural selection of the K+ stocks in the intestinal tract and a better survival of the K+ stocks in the ecosystems estuaries. Currently, it is knows three haemolysins at V.p.: thermostable direct haemolysin-TDH; thermostable related hemolysin-TRH; thermolabile haemolysin -TLH. The food toxi-infection is caused by TDH and/or TRH but only if this one is produced in the digestive tract (4). The stocks producing one of two haemolysins TDH or TRH (or more rarely both) is represent only a little part of the population of V.p. This organism is frequently isolated from coastal waters and seafood in temperate regions throughout the world. It is the most frequent cause of foodborne disease in Japan, where many residents eat raw fish. A number of common-source gastroenteritis outbreaks attributed to V.p. have been associated with oyster consumption (2).
760
The main target of this experiment was to development of a multiplex realtime PCR assay with SYBRGreen for the pathogenic (tdh+ and trh+) V.p. MATERIALS AND METHODS
The tests were developed in the Laboratory of microbial genetics of Faculty of Veterinary medicine of Liege (Belgium). Genomic DNA preparation. Selected V.p. strains [(tdh+), (trh+), (tdh+,trh+), and (tdh+,trh+)] used for real-time PCR bacterial detection from the Centre for Environment, Fisheries and Aquaculture Science CEFAS (Weymoth, England). Design of primers and fluorogenic probes for real-time PCR. The complete nucleotide sequences for all reported variants of the tdh and trh genes of V.p. were aligned and compared by GenBank to design oligonucleotide primers and TaqMan fluorogenic probes targeting regions for each of these genes. Multiple primer sets were designed and tested for specificity and compatibility in multiplex. Information on the primers and probes used in the assay can be seen in the following table:
Table 1 Primers and probes Target primers tdh 499U17 tdh 803 L20 trh 37 U24 trh 498 L25 Sequence 5-gct-ata-agc-gcg-gtc-at-3 5-cat-tgg-cat-gca-taa-att-ag -3 5-ttg gct tcg ata ttt tca gta tct -3 5- cat aac aaa cat atg ccc att tcg-3 Gene tdh tdh trh ToC hybrid. 50,7C 50,7C 54,1C 54,1C Amplicon ToC size (bp) melting 324 80C 324 80C 486 83,3C 486 83,3C
Real-time PCR amplification. The real-time PCR cycling protocol, fluorescent detection parameters, and reaction component concentrations were carefully optimized for the simultaneous detection and quantification of the tdh, and trh genes. PCR was conducted in a 25 l volume using the following reaction components (final concentrations shown): 12,5 l SYBRGreen SuperMix with ROX (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA, 2004) [2x tampons de reaction; 0,4 mM dATP; 0,4mM dCTP ; 0,4 mM dGTP; 0,8 mM dUTP; 50 U/ml enzyme iTaq DNA polymerase; 6 mM Mg2+; SYBRGreen I dye; 1 M ROX internal reference, stabilisations]; 400 nM of each of the dNTPs (Sygma Genosys), 250 nM of each primer (described above), and 9.75 l ultrapure water. Real-time PCR thermal cycling was conducted using the ABI Prism 7000 (Applied Biosystems). The negative control (sterile water added as template in the reaction) were prepared for each PCR master mix. For each reaction, a plot of the cycle threshold (Ct) vs. fluorescence (and log fluorescence) was examined for the FAM channel of the ABI Prism 7000 instrument. Cycling parameters. The two-step touchdown cycling parameters used are shown below:
761
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Table 2 Cycling parameters Etape No. cycles 1 1 Inactivation of uracyl-N-glycosilase 2 1 Denaturation/taq activation Amplification Dnaturation DNA segment, 3 40 Hybridation and collect and extension analyse data) Temperature 50C 95C 95C 60C Time 2 min. 3 min. 15 sec. 60 sec.
The ABI Prism 7000 instrument was programmed to measure the accumulated fluorescence in each reaction tube at the end of each amplification cycle using the sequence detection system. A sample was therefore considered to be positive when a signal of at least eight fluorescence units above baseline (after background correction) was observed in the FAM channel of the instrument within 40 cycles.
RESULTS AND DISCUSSIONS To obtain distinct curves of dissociation one carried out several real time PCR with different combinations from the primers: mix A (tdh), mix B (trh) and mix C (tdh and trh). The dissociation curve of the sample tdh+ and trh+ had two peaks, one, discrete, with 74C for tdh+ and another, very full, with 77C, for the trh. Only for the mix with the tdh+/trh+ ratio of 10/1 had a curve of dissociation with two peaks of comparable intensity (Fig. 1).
dh
rh
Fig. 1. Multiplex melting curves
When a stock of V.p. was highlighted on a selective agar, it is necessary to push the analysis further. Indeed, all the stocks of V.p. are not pathogenic. It is necessary to check the presence of genes of virulence tdh+ and trh+. The
762
detection of Vp by the PCR in real time with system SYBR Green, is one of the techniques of bacterial genetics least expensive. On the basis of work completed by Japanese and American teams (1, 2), techniques of fast detection of the bacterium by the PCR and the techniques with DNA probes, having as target the gene tdh were developed. A recent study in which the SYBR Green I-based PCR was compared with TaqMan assay for detection of faecal pathogens showed that the two assays had the same level of sensitivity of detection (1). Direct detection of the genes tdh+ and trh+ by the PCR in real time with system SYBR Green were gravitational in the identification by the PCR in real time, using specific TaqMan probes. The principle of the analysis is to identify the curves of dissociation, with a peak of fluorescence at the temperature of hybridization (Tm) specific for each amplicon (5). One used samples of DNA of Vp., checked for two genes: a sample contained DNA with only the gene tdh+, another sample, environmental, contained neither of tdh+ not of trh+, and the third, pathogenic, was positive for the tdh and the trh. CONCLUSIONS SYBRGreen (SG) will preferentially bind to selected amplicons during multiplex real-time PCR. With an increasing demand for high-throughput and multiplexing assays, the characteristics of SG described here may reduce optimisation times by avoiding the use of limiting concentrations of SG in assays. Rapid detection of V. parahaemolyticus pathogen in consumable oysters and in coastal water, especially in and around approved oyster-harvesting sites, at a level that meets the recent guidelines would help to reduce the incidence of illness and fatality that result from ingestion of raw shellfish or from exposure to coastal water.
REFERENCES
1. 2. 3. 4. Fukushima H, Tsunomori Y, Seki R., 2003 - Duplex real-time SYBR green PCR assays for detection of 17 species of food- or waterborne pathogens in stools. J. Clin. Microbiol; 41(11): 5134-5146. Kaysner Ch., DePaola A.Jr., 2004 - Vibrio, In: Bacteriological Analytical Manual Online, 8th Edition, Chapter 9, substantially rewritten and revised, url://vm.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-9.html. Nishibuchi M, Kaper JB., 1995 - Thermostable direct hemolysin gene of Vibrio parahaemolyticus: a virulence gene acquired by a marine bacterium. Infect. Immun; 64:2093-2099. Peterson K., 2000 - Molecular pathogenesis of Vibrio infections. In: Carry J.W., Linz J.E. et Bharnagar D. (Eds.) Microbial Foodborne Diseases mechanisms of pathogenesis and toxins synthesis, Technomic Publishnig Co. Inc., Lancaster, USA, 157-183. Robert-Pillot A., Guenole A., Lesne J., Delesmont R., Fournier J.M., Quilici M.L., 2004 - Occurrence of the tdh and trh genes in Vibrio parahaemolyticus isolates from waters and raw shelfish collected in two French coastal areas and from seafood imported into France, Int. J. Food Microbiol.; 91: 319-325.
5.
763
OBSERVATIONS ON THE FREQUENCY OF YERSINIA ENTEROCOLITICA IN PIGS

OBSERVAII PRIVIND FRECVENA YERSINIEI ENTEROCOLITICA LA SUINE
M. CONDREA, M. CARP-CRARE, T. PERIANU, Elena VELESCU U.S.A.M.V. Iai 230 pig samples were bacteriologically tasted during slaughters in slaughter houses, aiming at the presence of Yersinia enterocolitica. The samples were represented by the intestinal content and curettage of the intestinal mucous membrane, drawings from the tongue and skeleton. The method used was the one Enterobacteraceae, adapted to the biologic peculiarities of Yersinia enterocolitica. 9 stems of Yersinia enterocolitica were isolated, the isolation percentage being of 3.91%. The highest isolation frequency was registered from the curettage of the intestinal mucous membrane 6 stems (6.66%). Out of the 9 stems, 3 (5.17%) were isolated in spring, 2 (3.5%) in autumn, 2 (3.5%) in winter and 1 (1.75%) in summer. The isolated stems belonged to 2 biotypes (1 and 4), biotype 4 (7 stems 77.7%) being predominant. Biotype 1 comprised 2 stems (22.3%). The serotipia shows the predominance of the O3 serotype (7 stems), a serotype which was also frequently isolated from the clinical and asymptomatic forms in people (7, 8, 10). Two stems, comprised in biotype 1, belonged to serotypes O4 and O5. We notice that besides the serotypes traditionally considered as responsible for this disease in people O3, also occur new serotypes like O4 and O5 frequently isolated from the environment and considered till very recently as being neopathogenic. The frequency and variety of serotypes and biotypes isolated both from animals, especially the pig, and from people in clinical and asymptomatic cases, draw the attention on new epidemiologic situations.
Key words: Yersinia enterocolitica-pig-frequency
Many zoonoses have spread during the past few years to different regions of the world and their frequency index has increased, thus endangering public health by the variety of contamination possibilities. Yersiniosis with Yersinia enterocolitica is among them. The implications of this bacterium in the food chain in people started an increasing interest in the last few years among researchers from the whole world (1, 4, 7, 8). This bacterium with a high bacteriologic and epidemiologic heterogeneity (4, 7, 8) was isolated from an important number of domestic and
764
animals and from the environment (1, 2, 3, 9, 10). It is capable of disturbing public health both by its virulence and by its toxigenic capacity (6). Having regard to the great plasticity of the pathogenic agent and the possibility of adaptation to new species it is highly necessary to permanently discover this species, to evaluate its incidence in pigs, to evaluate the frequency and circulation of serotypes and biotypes known as with implications in human pathology, as well as serotypes which in the last few years modified their ecologic determinism and their pathogenic capacity. MATERIAL AND METHODS
230 pig samples taken during slaughtering were bacteriologically investigated. Each sample was represented by intestinal content and curettage of the intestinal mucous membrane, drawings from the tongue and skeleton. The methodology used was the one for enterobacteriaceae, adapted to the biologic peculiarities of Yersinia enterocolitica (4, 7).
RESULTS AND DISCUSSIONS The bacteriologic investigation of the 230 samples allowed the isolation of 9 stems of Yersinia enterocolitica; the isolation percentage was of 3.91%. This index of 3.91% places pigs among the main sources of infection with Yersinia enterocolitica. Back in 1971, Mollaret H.H. (4) issued the assumption according to which the pig would be the main source of infection for people and suggested the orientation of the investigations towards pigs. Ulterior research (2, 4, 9) confirmed this assumption by demonstrating the identity of the pig origin cultures with the ones isolated from the clinical cases in people. The results are comparable to the ones reported in the Scandinavian countries, Belgium and Netherlands, where the isolation percentage was of 3-5% (Acha, 1989). Both in Romania and in Belgium, Sweden, Denmark, Nigeria, Canada the incidence of Yersinia enterocolitica in sick people with acute diarrhea syndrome is between 1-4%, showing thus a slight connection between the pig carrier and the cases of diarrhea with this bacterium (2, 6, 7, 8). The stems were isolated only from the curettage of the intestinal mucous membrane, 6 (66.6%), from curettage and drawings from the tongue 2 (22.2%), from curettage, drawings from the tongue and skeleton 1 (11.1%). In Italy, Mazzeo (1993) isolated Yersinia enterocolitica 2.8% from the feces and 5.6% from the tonsils. Although some authors report increased frequencies of Yersinia enterocolitica in tonsils and on the pigs tongue, feces still represent the most frequent and constant source, which is also similar with our research. The 230 samples were equally distributed for the 4 seasons, that is spring, summer, autumn and winter. Out of 9 stems, 3 (5.17%) were isolated in spring, 3 (5.17%) in autumn, 2 (3.5%) in winter and 1 (1.75%) in summer. The higher
765
frequency of these isolations in the cold season is the feature which makes this bacterium different from the enteric infections which evolve with a high frequency in summer. The pick autumn winter spring in Romania (4, 10) is similar with other countries reports, October January: Belgium, November: Sweden, September November: Finland, December March: Chech Republic (8). The isolated stems belonged to the 2 biotypes (1 and 4), but biotype 4 (7 stems 77.7%) was predominant. Biotype 1 comprised only 2 stems (22.3%). The serotipia shows the predominance of serotype O3 (7 stems), a serotype frequently isolated also from the clinical and asymptomatic forms at people (8, 10). Two stems, the ones comprised in biotype 1, belonged to serotypes O4 and O5. Although the serotypes traditionally considered responsible for the human disease (4, 8, 10) were O3 and O9 and less O5, 27, during the last few years there is an increasing variety of serotypes depending on the disease; the variety is also in the case of the pig carrying this type of bacterium. Thus the presence in pigs of the serotypes O4 and O5 (biotype 1) which so far were considered wild nonpathogenic demonstrates the possibility for this bacterium to adapt under the influence of biologic pressures and announces a new epidemiologic situation. The same variety of the isolated serotypes, both from animals and from the human clinical cases, is more and more relevant. Chiesa and his collaborators (quoted by Felip, 1989) isolated many serotypes from the patients with diarrhea in Italy: O3 (57%), O6 (6.5%), O8 (6%), O9 (5%). The same author isolated mainly from clinically healthy pigs the same serotypes: O3 (29.2%), O6 (10.3%), O9 (9.1%), O10 (9.7%), O7,8 (10.9%). The conclusion is the predominance of biotypes 4 and 1. CONCLUSIONS 1. 9 stems of Yersinia enterocolitica were isolated from pigs; the isolation percentage was of 3.91%. 2. The 9 stems of Yersinia enterocolitica belonged to biotypes 4 (7 stems) and 1 (2 stems) and serotypes O3 (7 stems), O4 (1 stem) and O5 (1 stem). 3. In the cold seasons spring, autumn, winter the isolation frequency was higher (8 stems), as compared to the warm season summer (1 stem). 4. The highest frequency of isolations was from the intestinal content (6 stems).
REFERENCES
1. Acha N.P., Szyfres B., 1989 - Yersiniose enterocolitique - Zoonoses et maladies transmissibles communes l'homme et aux animaux. Deuxime dition, 207-212
766
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 2. 3. Adesyun A.A., Kaminijolo J.S., Loregnard R., 1993 - Frequency of Isolation Yersinia enterocolitica from Livestock in Trinidad, Vet Carp Carare M, Timofte D, Condrea M, Guguianu E, Carp Carare C, Solcan G, 2001 - Study of ecology and epidemilogical implications of Campylobacter and Yersinia bacteria. Buletinul Universitatii de Stiinte Agricole si Medicina VeterinaraCluj-Napoca, Seria Medicina Veterinara, 55-56, Condrea M., 1996 - Cercetari bacteriologice si serologice asupra Yersiniei enterocolitica izolata de la animale, Teza de doctorat, UAMV Condrea M., Straton A., 1994 Frecventa Yersiniilor la animale domestice si unele elemente de mediu, Lucr. st. zoot., Iasi 19-20 Cornelis G.R., 1995 - Le Plasmide pYV lment cl de la virulence de Yersinia, M. C. 11, 9, 1295-1304 Cover T.L., Aber R.C., 1989 - Yersinia enterocolitica, New Engle. J. Med., 321, 1, 16-24 Felip G.D., Orefice L., Medici D., Germoni S., 1989 - Raspndirea, patogeneza si prevenirea Yersiniozei cu Yersinia enterocolitica, Slez. vet. 30, 1, 15-18 Mazzeo A., Petrarca G., Iannito G., Calavita G., Porta L., 1993 - Yersinia enterocolitica: Isolation from Faeces and Tonsils of Pigs Slaughtered Normaly. Vet. Bul. 63, 5, 458. Straton A., Staton C., Beldiman N., Condrea M., 1992 - Incidenta Yersiniei enterocolitica la om si la unele specii de rozatoare ca posibila sursa de infectie. Congr. Nat. de biol. II, Iasi 196 197 V, Ed. Acad.
4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.
767
SOME ASPECTS REGARDING THE METHODOLOGY OF ISOLATING YERSINIA ENTEROCOLITICA

UNELE ASPECTE PRIVIND METODOLOGIA DE IZOLARE A YERSINIEI ENTEROCOLITICA
M. CONDREA, M. CARP-CRARE, Eleonora GUGUIANU, C. CARP-CRARE U.S.A.M.V. Iai 60 stems of Yersinia enterocolitica were bacteriologically searched, following some peculiarities regarding their morphology, mobility, breeding conditions and cultural aspect in order to improve the isolation methods in the veterinary labs. We rendered evident the pleiomorphism characteristic to the Enterobacteriaceae, mobility to 29oC and immobility to 37oC; direct insemination, without enrichment, adapts better in the veterinary labs; the slower development on the media for Enterobacteriaceae makes it necessary the repication 48 hours later, when the colonies become visible.
Key-words: Yersinia enterocolitica-isolating
As part of the zoonoses group, Yersinia enterocolitica is the cause of the acute diarrhea in people, having as a possible source of infection some animals (infected or carriers) and an indirect way of transmission through contaminated food and water (1, 5, 7). Although the bacterium was found in a big number of animals from different species, proving the identity of the isolated stems with the ones that started the disease in people (7), there is no proof of a direct transmission. Besides its epizoothologic role (source of infection), in the last few years researchers quote more and more the implication of Yersinia enterocolitica in veterinary pathology (5, 7). Now we have at our disposal a variety of data regarding the biology of Yersinia enterocolitica. Nevertheless there are still many unknown things, generated by the biologic peculiarities of this bacterium. Yersinia enterocolitica is approached more at the level of the research labs, without being the subject of current investigations in diagnosis labs. The every day more frequent implication in human and veterinary pathology makes it necessary the introduction of this bacterium in the routine investigations of the speciality labs. MATERIAL AND METHODS
60 stems of Yersinia enterocolitica were bacteriologically investigated after being isolated from pigs (44 stems), taurines (5 stems), and dogs (11 stems). We 768
aimed at its morphology, mobility, breeding conditions and cultural aspect on the media used for the isolation of Enterobacteriaceae, following the biologic peculiarities of this species in order to improve the isolation methods.
RESULTS AND DISCUSSIONS In all the speciality works Yersinia enterocolitica is presented as a Gram negative, non-sporulated, non-capsulated bacterium (1, 5, 7, 8, 11). The classical form is of coccus-bacillus (1, 11) with the tendency of pleiomorphism according to the incubation temperature, age of culture, mediums composition, and biotype. The pleiomorphism of Yersinia enterocolitica, mentioned in the speciality works (1, 7, 11) is a feature of the Enterobacteriaceae. In our research on the smear made of cultures in liquid media (peptonated water, simple tomato paste) there is a predominance of the oval coccus forms, when incubation was made at 22oC for 24 hours, while incubation at 37oC leads to the occurrence of bacillus forms. In the cultures on the solid media there is a predominance of short and thick bacilli. In old cultures pleiomorphism is very much stressed. Having regard to the studied smears we may confirm that the bacterium does not have a characteristic way of grouping; the singular forms coexist with the short chains and piles. The tendency towards bipolar colouring is present only on the smears made from cultures on liquid media. The results regarding the morphology of the isolated stems are compatible with the existing data (1, 7, 13). The fundamental feature of Yersinia enterocolitica referring to the synthesis of the cilia according to the incubation temperature is also present in the 60 studied stems. The best temperature allowed to render evident the mobility is between 22-30oC (1, 2, 4, 11). In our research of the 60 stems we indirectly studied the presence of the cilia, following the mobility on the medium M.I.U. (mobility indole urea) at 29oC and at 37oC. All the stems were mobile at 29oC and immobile at 37oC. Nevertheless 5 of the studied stems were lately slightly positive at 37oC. These stems of pig and canine origin were comprised in biotype 1 (O4, O5, O6) and biotype 2 (O8). Out of the 7000 stems from the National Centre Collection in Paris, investigated by Bercovier and his collaborators, 1980 (1) regarding the mobility at 28oC, 88% were mobile and 10% had a late reaction (mobile 3-4 days later). The conclusion was that the intensity of this phenomenon is slightly variable depending on the stem. The mobility of Yersinia enterocolitica at a lower temperature than 30oC and the lack of mobility over this temperature is a feature of all the species of the gender Yersinia, except for Yersinia pestis which is immobile.
769
Analysing the results regarding the mobility of Yersinia enterocolitica we conclude that, if for the rest of the species mobility is a helping test, for the identification of Yersinia enterocolitica it is an essential test which is recommended to be the first one when we suspect that we have to do with Yersinia according to the cultural and morphological features. All the stems isolated grew better at a pH of the media between 6.8-7.6. The researches (7, 11) have pH limits 5-9 and as the best pH: 7.2-7.4. According to Bougeois, 1990 (2), the minimum pH is 4 and the maximum one is 10. The bacterium may survive for 48 hours both at a pH of 3.6 (Kendal and Gilbert, 1980) and at a pH of 10-12 in alkaline conditions. Doyle (6) recommended the treatment with potassium 0.25-0.5% for the cultures after enrichment, aiming at inhibiting the other enterobacteriaceae, much more sensitive at the alkaline shock than Yersinia. The temperature area in which Yersinia enterocolitica develops is comprised between large limits, 4-43oC (11). The researches (1, 11) show as minimum temperature for development 4oC a temperature at which microorganisms multiply, but the rhythm of development is slow. As Mehlman (10) states, the development of Yersinia enterocolitica at a temperature of 4oC is due to inhibition of the association flora, consequently to the reduction of the interference of the metabolits produced by other Gram negative germs. Using in our researches as a method of enrichment peptonated water and a 4oC temperature with transfers to isolation media 7 or 14 days later, we found out a slight increase of the isolation percentage. Out of the 60 stems, two (3.3%) were isolated only on the variant with enrichment 14 days later, the rest of 58 being isolated on both variants. Besides the slight increase of the isolation percentage, enrichment in cold conditions, 14 days, offers better conditions of repication for Yersninia enterocolitica, by means of increasing the number of colonies on Petri plate and an inhibition of the association flora. We consider the feature of Yersinia enterocolitica of developing at temperatures of 0-4oC, without nutritive exigencies, as an adaptation and not as an accident in its evolution, important to the sanitary-veterinary control of food. Thus, cooling of food slows down the multiplication of this bacterium, but it does not inhibit it completely (it visibly increases in 2-5 days on meat extract at 4oC) (11). Swaninathan (13) states that at 4oC the bacterium is better cultivated at a neutral pH, but very few at pH 5.2-5.4. Enrichment in cold conditions, 4oC in peptonated water, phosphate tampon or tomato paste, uses the psychophril feature of the germ (Schieman). Analysing the results, we may conclude that this bacterium, though it develops at a cooling temperature, cannot be considered a psychophril because the best conditions for its development are 22-25oC and even 37oC.
770
Enrichment in the presence of selective sublayers often appeals to using the Rappaport medium, sometimes additionally with carbenicilin or on the gall oxalate sorbosis medium, with an incubation at 22-25oC, 1-5 days. According to Schieman (12), this method has only the advantage of being fast as compared to enrichment in cold conditions. The medium of selenite novobiocine allows a better enrichment at 37oC, but it does not offer selectivity (10). Although there is a multitude of researches concerning the enrichment conditions for Yersinia enterocolitica the conclusion is that there are not enough factors which stimulate the development of Yersinia enterocolitica on the one hand and factors which inhibit the development of the association flora on the other hand. The only selective agent is the 4oC temperature. No method seems so far usable in order to isolate or enrich the pathogenic cultures of Yersinia enterocolitica and disadvantage the non-pathogenic ones or the other species of Yersinia, except maybe the modified Rappaport medium (1, 11) which selects the cultures O3 and O9, but it inhibits O8 and O5, 27. Some researchers (7, 11) recommend different enrichment media according to the serotype, pathogenic cultures etc. Having regard to the results obtained by other researchers, as well as the results of our researches regarding the variety characterizing this species, we consider that we should use some enrichment media to favour a wide isolation of Yersinia serotypes under the conditions in which the dynamics of existence imposes an increase of variety. The best development for Yersinia enterocolitica is a temperature between 22-29oC (2, 11). Zarnea (1994) states that we cannot entirely talk about the best temperature for a certain species, but about the best temperature for each of its biologic activities. We noticed at the stems that we studied a faster disturbance of the tomato paste at 37oC, as compared to the incubation at 22oC. Nilehn and Wauters (quoted by Rusu) demonstrated that the highest number of cells is accumulated at 25oC, when the exponential stage is the longest, while at 34oC, when division is very fast, the quantity of biomass is insignificant. The stems of Yersinia enterocolitica studied develop well on the media for Enterobacteriaceae, without adding breeding factors (peptonated water, simple tomato paste, Mac Conkey, Leifson, Drigalski, simple gelose). The variant of isolation through direct insemination on Leifson medium and partially on Mac Conkey offered an index of positivism of 96.7%. Both Leifson and Mac Conkey medium allowed the isolation of 58 stems, 2 less, as compared to the enrichment variant. Comparing the results obtained to the ones of other researchers (4, 8, 11), the conclusion is that when it comes to the isolation of Yersinia enterocolitica from the feces there is almost an unanimous agreement on the efficiency of the
771
media based on gall salts and especially the ones with Leifson sodium deoxycolate or its variants. We aimed at the cultural aspect of Yersinia enterocolitica stems on liquid and solid media according to the incubation temperature and the age of the culture. On the liquid media, cultures brought up disturbances at different speeds depending on the incubation temperature. Old cultures have a deposit, sometimes a membrane. It does not have pigments. On the solid media the colonies of Yersinia enterocolitica are dull or translucent, with regulate, non-pigmented margins. On the blood gelosis (sheep blood defibrinated in proportion of 2%) it develops non-haemolytic colonies. 24 hours after incubation at 29oC or 37oC, the colonies of Yersinia enterocolitica have dimensions between 0.5-1mm in diameter, at the limit of visibility, contrasting with the other Enterobacteriaceae with dimensions between 2-4mm in diameter; the former ones may be repicated for identification. In order to be repicated the incubation time of the cultures was prolonged to 48 hours. This fact, also described in the speciality works (1, 5, 11) is useful within the work methodology for the diagnosis labs. Due to the slow breeding of Yersinia enterocolitica the inseminated plates for the isolation of Enterobacteriaceae must be monitored after 48-hour incubation or left for one day at the lab temperature and then checked again. CONCLUSIONS 1. 60 stems of Yersinia enterocolitica were bacteriologically tested; the analysis allowed us to select some biologic peculiarities of this bacterium in order to isolate it in the veterinary labs using fast methods. 2. The stems of Yersinia enterocolitica studied came from pigs (44 stems), taurines (5 stems) and dogs (11 stems). 3. The examination of the Gram coloured smear shows the polymorphism characteristic to Enterobacteriaceae. 4. The mobility of the stems of Yersinia enterocolitica at 29oC and their immobility at 37oC makes us recommend the introduction of this test when it comes about drawing the differences between this and the other Enterobacteriaceae, which are immobile at 29oC. 5. By studying isolation on the two variants (cold enrichment and direct insemination) we found out that the direct method adapts better to the methodology of work in the diagnosis labs when it comes to the isolation of Yersinia enterocolitica from feces. 6. On the solid media, Yersinia enterocolitica develops slower as compared to the other; this peculiarity makes Yersinia get away from repication once with
772
the other bacteria. While on the Leifson medium, after 24-hour incubation at 37oC, the colonies are under the limit of visibility, a prolongation of incubation up to 48 hours being necessary for the isolation, on the Mac Conkey medium the development is faster, the repication being possible 24 hours after the incubation, once with the other Enterobacteriaceae.
REFERENCES
1. 2. 3. Bercovier H., Brenner D. J., Ursing J., Steigerwalt A. G., Fanning G. R., Alonso J.M., Carter G.P., Mollaret H.H., 1980 - Characterization of Yersinia enterocolitica sensu stricto, Current Microb., 4, 201-206 Bourgeois C.M., Mescle J.F., Zucca J., 1990 - Yersinia enterocolitica, Microb. alim. Tom. 1 Colect. Scien. the. agro-alim., Paris 117-124 Carp-Carare M., Timofte D., Condrea M., Guguianu E., Carp-Carare C., Solcan G., 2001 - Study of ecology and epidemilogical implications of Campylobacter and Yersinia bacteria. Buletinul Universitatii de Stiinte Agricole si Medicina Veterinara Cluj-Napoca, Seria Medicina Veterinara, 55-56, Condrea M., 1996 - Cercetari bacteriologice si serologice asupra Yersiniei enterocolitica izolata de la animale, Teza de doctorat, UAMV Cover T.L., Aber R.C., 1989 - Yersinia enterocolitica, New Engle. J. Med., 321, 1, 16-24 Doyle M.P., Hugdahl M.B., 1983 - Improved Procedise for Recovery yersinia enterocolitica from Meats, Appl. and Environ. Microb., 45, 1, 127-135 Felip G.D., Orefice L., Medici D., Germoni S., 1989 - Raspandirea, patogeneza si prevenirea Yersiniozei cu Yersinia enterocolitica, Slez. vet. 30, 1, 15-18 Jacober F.X., 1968 - L'infection Yersinia enterocolitica. Une zoonose d'avenir, Thse doctorat vtrinaire, Paris Kendal M., Gilbert M.J., 1980 - Survival and Growth of Yersinia enterocolitica in Broth Media and in Food. Microb. Grow. and surv. Extrem. of Env., Ed. Gould. 215 - 226. Mehlman I.J., Ausilio C.G., Sanders A.C., 1978 - Problems in the Recovery and Identification of Yersinia from Food. J. Assoc. off. Anal. Chem., 61, 4, 761 - 771. Rusu V., 1985 - Bacteriologie medical vol. II (Blbie V. i col.), Ed. Medical, Bucureti, 345, 356 304-312 Shieman D.A., 1983 - Comparaison of Enrichment for Recovery of Virulent Strains of Yersinia enterocolitica from Inoculated Beef Stew. J. F. P. 46, 11, 957-964 Swaminathan B., Harmon M.C., Mehlman I.J., 1982 - A Review: Yersinia enterocolitica J. Appl. Bact. 52, 151 - 183. Straton A., Staton C., Beldiman N., Condrea M., 1992 - Incidenta Yersiniei la om si la unele specii de rozatoare ca posibila sursa de infectie. Congr. Nat. de biol. II, Iasi 196 197 V, Ed. Acad. Zarnea G., 1994 - Tratat de microbiologie general V, ed. Acad.
4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15.
773
ASPECTE CLINICE N GRIPA AVIAR LA LEBDA DE VAR

CLINICAL ASPECTS OF THE AVIAN FLU AT SUMMER SWAN (CYGNUS OLOR)
M. ARSENE, Marinela ARSENE D.S.V.S.A. Tulcea Gh. SAVUA, T. PERIANU U.S.A.M.V. Iai The research was made in the Delta of Danube piscicultural complex, Maliuc, district Tulcea.During 07-14.10.2005 were examined the birds of passage wich procured their meal from the basins belonging to the piscicultural complex. After our research we found out decay and decease at the summer swan, especially at the young birds.Tthe first signs noticed were the nervous signs.
Key words: avian influenza, summer swan, clinical diagnosis
Influena aviar, cunoscut i sub numele de gripa aviar sau pesta aviar, este o boal infecioas , contagioas care afecteaz mai multe specii de psri domestice i slbatice. (4). Agentul etiologic al influenei aviare este un virus ce face parte din genul Influenzavirus A, familia Orthomyxoviridae. (2, 4). Sursele de infecie sunt reprezentate de psrile bolnave sau aflate n perioada de incubaie, de cadavrele psrilor infectate, de resturile de la prelucrarea carcaselor i apele de la splarea acestora, de secreiile i excreiile psrilor infectate ca i de produsele i ustensilele ce au venit n contact cu virusul n diverse circumstane. (1). Populaiile de psri slbatice, ndeosebi cele acvatice, reprezint un important rezervor , care ntreine i vehiculeaz cele mai diverse subtipuri de virus gripal. (1). Virusul patrunde n organism pe cale respiratorie i mai puin pe cale digestiv. Perioada de incubaie este obinuit de 3-7 zile, fiind dependent de patogenitatea virusului. Clinic, boala evolueaz de regul supraacut , cu moartea subit a psrilor afectate sau n decurs de 24 - 48 ore , n unele cazuri manifestrile putnd mbraca forme acute, cu o durat de cel mult o sptman. Manifestrile clinice exprimate sunt urmarea tulburrilor circulatorii, respiratorii, digestive i ale sistemului nervos. Ele pot fi foarte diferite i dependente de mai muli factori, inclusiv de vrsta i specia psrilor afectate, de sistemul de exploatare i desigur de patogenitatea tulpinii de virus. (1, 2, 4).
774
MATERIAL I METODE
Investigaiile au fost efectuate la psrile slbatice din Delta Dunrii i n special la un crd de lebede de var (Cygnus olor), localizat pe amenajarea piscicol din vecintatea localitilor Maliuc i Vulturu, n luna octombrie 2005, cnd a fost declarat i primul focar de influen aviar la psrile slbatice din Romnia. Ferma piscicol respectiv aparine societii comerciale S.C. Maliuc S.A. i are o suprafa de aproximativ 2000 hectare , fiind format din mai multe canale i 46 bazine. Colonia de lebede investigat era constituit att din psri juvenile ct i adulte. S-au efectuat observaii clinice i s-au recoltat cadavre i probe de snge precum i tampoane cloacale pentru examene de laborator.
REZULTATE I DISCUII Ca urmare a observaiilor efectuate n perioada 7.10- 14.10.2005 la amenajarea piscicol Maliuc , s-au constatat mortaliti la psrile slbatice din acea zon i n special la lebedele de var (Cygnus olor). n data de 07.10.2005, n aceast zon s-a observat prezena unei aglomerri masive de lebede precum i existena unui numr de 45 lebede moarte, cadavrele fiind n diferite stadii de alterare. Aglomerarea de lebede a fost estimat la aproximativ 500 de exemplare, format din tineret i din psri adulte. n urma evalurii fcute s-au identificat 139 psri moarte i 98 bolnave. Din cele 237 de cazuri recenzate, proporia cea mai mare o reprezentau psrile tinere (70% ). Datorit anotimpului rece de iarn, cnd cantitatea de hran este mai mic, lebedele de var au rmas la iernat pe teritoriul Deltei Dunrii i s-au adunat n grupuri mari n bazinele piscicole , acolo unde apa era mic i se mai putea gsi hran. Densitatea crescut a psrilor a jucat un rol important n difuzarea bolii. Exemplarele bolnave dintr-un crd de lebede de var puteau fi vzute uor, deoarece acestea aveau un comportament atipic unei psri sntoase i anume: nu se mai hraneau, rmneau n urma celorlalte lebede, nu i mai puteau lua zborul sau dac reueau s se ridice de pe luciul apei zburau foarte puin (Fig. 1), dnd semne de oboseal i de lips a coordonrii la aterizare. Psrile erau epuizate iar pe luciul apei stteau abtute, n btaia vntului care le mpingea ctre maluri, unde puteau fi prinse uor cu mna (Fig. 2). Principalele manifestri clinice observate la psrile bolnave au fost semnele nervoase. Dupa o anumit perioada de acalmie, pe care o prezentau psrile n agonie, urmau crize nervoase de 30 secunde, caracterizate prin tremurturi ale capului i gatului , prin contracii spasmodice ale membrelor, ataxie, torticolis.
775
Fig. 1. Lebede n ncercarea de a-i lua zborul.
Fig. 2. Capturarea lebedelor cu mna liber.
Pe lng semnele nervoase, un numr redus de psri prezentau i semne respiratorii, cum ar fi secreii perinazale (Fig. 3), dispnee i respiraie zgomotoas. La un numr nesemnificativ de cazuri s-a observat i forma digestiv, caracterizat prin diaree apoas, de culoare galben-verzuie.
776
Dac n prima zi de observaie psrile bolnave erau n agonie, cu diverse manifestri clinice, a doua zi aceste psri erau gsite moarte (Fig .4) la malul apei, orientate n funcie de direcia vntului. S-au mai observat i alte semne clinice cum ar fi: mucoasa conjuctival congestionat i edemaiat, depresie puternic asociat cu horiplumaie , moarte subit fr manifestri clinice. Au fost afectate n numr mai mare psrile juvenile i n numr mai mic adultele.
Fig. 3. Scurgeri nazale la lebd cu influen.
Fig. 4. Cadavru de lebd ce plutete pe ap.
777
Pe tot parcursul acestor zile s-au recoltat probe de la cadavre iar de la psrile n agonie probe de snge (Fig. 5) , tampoane traheale i tampoane cloacale (Fig. 6), care au fost trimise la Laboratorul Sanitar Veterinar Tulcea cu suspiciunea de grip aviar A150. Psrile moarte au fost incinerate i ngropate zilnic sub protecie de dezinfectant.
Fig. 5. - Recoltarea sngelui la lebd cu influen
Fig. 6. - Recoltarea tampoanelor cloacale la lebd.
778
n data de 14.10.2005, Institutul de Diagnostic i Sntate Animal Bucureti a confirmat suspiciunea de grip aviar i faptul c n zona Maliuc Vulturu s-a constatat prezena virusului gripei aviare, tulpina H5N1, la lebedele de var. Acestea coabitau cu alte specii de psri slbatice migratoare , cum ar fi garlia, gsca mare, raa mic, lisia, pelicanul, tiganuul etc. care au jucat un rol important n mbolnvirea lebedelor de var din aceast zon. CONCLUZII La lebedele din focarul de influen aviar examinat la Maliuc, boala a avut o evoluie rapid. Cele mai afectate au fost psrile juvenile. Acestea nu i puteau lua zborul i puteau fi prinse cu mna. La aterizare, prezentau tulburri de coordonare i erau epuizate. Principalele sindroame clinice au fost cele nervoase, urmate de semnele respiratorii i n numr redus de semnele digestive. Manifestrile nervoase au constat n crize de 30 secunde, caracterizate prin tremurturi ale capului i gtului, contracii spasmodice ale membrelor, ataxie, torticolis. Semnele respiratorii s-au tradus prin secreii perinazale, dispnee i respiraie zgomotoas. S-a mai constatat depresie puternic, asociat cu horiplumaie i adesea moarte subit, fr manifestri clinice.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Brougere-Picoux Jeanne, 2006 - Le point sur linfluenza aviaire. Supplement technique, nr. 97 a La Depeche Veterinaire. Mnzat Moga R., 2001 - Boli infecioase ale animalelor. Ed. Brumar, Timioara. Olaru E., 2005 - Instruciuni pentru recunoasterea Influenei aviare i diferenierea de alte afeciuni ale psrilor. IDSA Bucureti. Perianu T., 2005 - Boli infecioase ale animalelor. Viroze II. Editura Universitas XXI, Iai Savua Gh., 2001 - Epidemiologie veterinar general. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai. *** Programul aciunilor de supraveghere, prevenire i control al bolilor la animale, ANSVSA Bucureti, 2005. *** O.I.E., Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, 5th edition,2004, www.oie.int.
779
ASPECTE CLINICE N GRIPA AVIAR LA GINI

CLINICAL ASPECTS OF THE AVIAN FLU AT THE CHICKENS
M. ARSENE, Marinela ARSENE D.S.V.S.A. Tulcea T. PERIANU, Gh. SAVUA U.S.A.M.V. Iai The research was made in a farm stead in Vulturu, district of Tulcea, placed near by the piscicultural complex where were find out deceases at the summer swan. During 08-14.10.2005 were recorded deceases and decays at the adult chickens. the domestic birds lived together with the savages ones because of the bird- keeping system in the open. After our research we find out the presence of the aviar flu virus at the domestical birds who showed as principals signs: head and neck edema,crest cyanosis, anorexia.
Key words: avian influenza, clinical diagnosis
Influena aviar (IA) sau pesta aviar clasic este o boal infecioas i extrem de contagioas, ce se caracterizeaz prin tulburri generale grave, prin simptome respiratorii, digestive i nervoase , nsoite de o infiltraie edematoas a esutului conjunctiv i cutanat din regiunea capului i gtului. (2, 4). Agentul etiologic este ncadrat n familia Orthomyxoviridae, genul Influenzavirus, tipul A, suele nalt patogene aparinnd sub-tipurilor H5 i H7. (1, 7). Infeciile cu virus nalt patogen, reduse ca inciden nc, nu trebuie confundate cu cele cu virus slab patogen. Influena aviar afecteaz n condiii naturale toate galinaceele, dar sunt susceptibile i multe alte specii de psri domestice i salbatice (anseriforme, passeriforme etc.). (1). Ginile adulte sunt mai sensibile dect puii iar boala are un pronunat caracter septicemic, cu evoluii supraacute i acute. Dup o incubaie de 3-5 zile, manifestrile apar brusc, cu un aspect exploziv. (1, 2, 4, 7). Semnele clinice mai importante sunt reprezentate de o stare depresiv sever, inapeten, reducerea produciei de ou, edeme cefalice, tulburri circulatorii, digestive, respiratorii, reproductive i ale sistemului nervos, mortalitatea putnd atinge 100% din efectiv. (1, 3, 4). MATERIAL I METODE
Studiul s-a efectuat la psrile domestice din gospodriile individuale ale populaiei din localitile Maliuc i Vulturu din judeul Tulcea , localiti situate n 780
Delta Dunrii. Cercetrile au fost fcute n luna octombrie 2005, cnd s-a identificat i declarat focarul de grip aviar n aceste localiti. Primele semne au aprut n gospodriile din vecintatea amenajrilor piscicole unde s-au semnalat n aceeai perioad mbolnviri i mortalitate la lebedele de var. Suspicionarea s-a bazat pe criterii epidemiologice i clinice iar confirmarea s-a realizat prin examene de laborator (virusologic, PCR) efectuate la IDSA Bucureti.
REZULTATE I DISCUII Observaiile au fost fcute ntr-o gospodrie situat pe malul stng al braului Sulina, n localitatea Vulturu din judeul Tulcea, n perioada 08 14.10.2005, cnd n aceast zon a fost declarat i primul focar de grip aviar la psrile slbatice (lebda de var). Ca urmare a suspiciunilor de grip aviar la lebedele de var (Cygnus olor) din amenajarea piscicol care se afla n vecintatea gospodriilor populaiei, s-a demarat aciunea de supraveghere a efectivelor de psri domestice susceptibile de a contracta boala (A 150, dupa lista OIE), conform planului naional privind supravegherea i controlul bolilor la animale (6). n timpul supravegherii clinice, dup o metodologie bine stabilit (3), n una din gospodriile din satul Vulturu s-au depistat dou cadavre de gin. Din anamnez a reieit c n aceeai gospodrie, n cursul aceleeai zile, au mai murit 7 gini i dou curci, toate fiind psri adulte. n gospodrie mai existau 46 de gini, din care 6 pui i 40 adulte , precum i doi pui de curc. Deoarece efectivul de psri din gospodrie era crescut n sistem extensiv, avnd acces liber la balt , se presupune c aceste psri au coabitat cu psrile migratoare din amenajarea piscicol din vecintate . S-au constatat mortaliti la psrile domestice ncepnd din data de 08.10.2005 (Fig. 1). n dimineaa urmtoare au mai fost gsite nc dou cadavre de gini adulte i au fost observate alte cteva psri cu semne clinice. n sintez, semnele clinice observate la psrile bolnave din focarul studiat au fost: moarte subit fara manifestri clinice; adinamie i depresie puternic, asociat cu horiplumaie; inapeten i sete excesiv; cianoza crestei i brbielor (Fig. 2, 3); respiraie greoaie i zgomotoas (Fig. 3); edemul capului i gtului; seroziti nazale i oculare; semne nervoase (torticolis, ataxie i lips de coordonare a micrilor). Au fost recoltate i expediate la Laboratorul Sanitar Veterinar Tulcea probe de cadavre de gin, snge (Fig. 4) i tampoane cloacale (Fig 5), cu suspiciunea de influen aviar. n data de 14.10.2005, Institutul de Diagnostic i Sntate Animal Bucureti a confirmat prezena virusului H5 n gospodria respectiv. Tot la aceast dat a fost confirmat suspiciunea de grip aviar i la lebedele de var din amenajarea piscicol Maliuc.
781
Fig. 1. Cadavre ale ginilor gsite moarte n adpost
Fig. 2. Cianoza crestei i brbielor la o gain cu influen
782
Fig. 3. Respiraie greoaie i cianoza crestei i brbielor
Fig. 4. Recoltarea probelor de snge
Fig. 5. Recoltarea tampoanelor cloacale
783
CONCLUZII Focarul de grip aviar declarat la gini n comuna Vulturu, judeul Tulcea a aprut n urma contactelor psrilor domestice cu psrile migratoare. Acest lucru s-a ntamplat n preajma luciului de ap limitrof, pe care au poposit lebede de var la care s-a diagnosticat n acelai timp boala. Au fost afectate ndeosebi psrile adulte, evoluia fiind de tip supraacut, cu moarte subit n multe cazuri. Principalele semne clinice ntlnite la psrile examinate au fost: edemul capului i gatului , cianoza crestei i barbielor, seroziti nazale i oculare, horiplumaie, inapeten, respiraie greoaie. Diagnosticul s-a confirmat prin examen virusologic i RT-PCR de ctre IDSA Bucureti, fiind identificat virusul influenei aviare, subtipul H5.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Brougere-Picoux Jeanne, 2006 Le point sur linfluenza aviaire. Supplement technique, nr. 97 a La Depeche Veterinaire. Mnzat Moga R., 2001 - Boli infecioase ale animalelor. Ed. Brumar, Timioara. Olaru E., 2005 - Instruciuni pentru recunoasterea Influenei aviare i diferenierea de alte afeciuni ale psrilor. IDSA Bucureti. Perianu T., 2005 - Boli infecioase ale animalelor. Viroze II. Editura Universitas XXI, Iai. Savua Gh., 2001 - Epidemiologie veterinar general. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai. *** Programul aciunilor de supraveghere, prevenire i control al bolilor la animale, ANSVSA Bucureti, 2005. *** O.I.E., Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, 5th edition,2004, www.oie.int.
784
ASPECTE EPIDEMIOLOGICE I CLINICE N LISTERIOZA OVIN

C. CARP-CRARE, T. PERIANU, Elena VELESCU, Irina-Oana TNASE, C. PAVLI, G. CIOBANU U.S.A.M.V. Iai
In two ovine breeding units, between 2004 2005, epidemiological, morphoclinical and therapeutical investigations, regarding ovine listeriosis were made. From the total number of 1139 (692 from unit S and 447 from unit D) different breeds and ages ovine, 34 (2,98%) got ill, 8 (23,52%) of them died, 23 (67,66%) were sacrified by necessity and 3 (8,82%) have healed. The ilnesses have occured in the cold season within live stock kept in strict stabulation and fed preponderently with silo fodder. The disease manifested clinically acute septicemicaly, in 7 (20,58%) cases and with encephalomyelites manifestations in 27 (79,42%) cases. The cultures made on usual cultivation mediums as well on blood mediums from the different brain segments permetted the isolation of 10 Listeria monocytogenes strains. The strains were identified by their morphological, cultural and biochemical characteristics and their pathogenity was tested on mice and rabbits. The treatment with ampyciline in dosis of 0,025mg/kg i.v. has led to healing in 3 cases with septicemical acute evolutive forms.
Key words: Listeria monocytogenes, ovine, pathogenity, encephalomyelitis.
Incidena crescut a infeciilor cu listeria la cele mai variate specii de animale, pierderile economice pe care le determin, polimorfismul manifestrilor clinico-epidemiologice cu un procent ridicat de infecii inaparente sau atipice, starea de purttor de lung durat, precum i pericolul pe care l prezint animalele cu potenial infecios pentru om, au fcut ca listerioza s devin o problem de mare actualitate att pentru patologia veterinar, ct i pentru medicina uman; infecia fiind o zoonoz. Incredinai de existena bolii i n aceast parte a rii, am socotit util s investigm factorii epidemiologici, manifestrile clinice i posibilitile de tratament, n condiii de teren, n dou focare de listerioz ovin.
785
MATERIAL I METODE
Investigaiile s-au efectuat n perioada 2004-2005, n dou uniti (S i D) de creterea ovinelor, cu un efectiv total de 1.139 (692 n unitatea S i respectiv 447 n unitatea D) de rase i vrste diferite, unde s-au nregistrat cazuri de mbolnvire. Pentru stabilirea diagnosticului s-au ntreprins investigaii epidemiologice, morfoclinice i de laborator. Confirmarea diagnosticului s-a fcut pe baza examenului bacteriologic. n vederea izolrii germenului s-au fcut nsmnri pe medii de cultur din organele parenchimatoase i din mai multe zone ale encefalului, de la 10 ovine care au murit i care n via prezentau manifestri ce suspiciona listerioza. Au fost examinate n aceast direcie 16 probe de la 10 ovine, provenind din cele dou uniti, izolndu-se un numr de 10 tulpini de L. monocytogenes. Controlul patogenitii tulpinilor a fost fcut prin inoculri la oareci a culturilor de 24 ore din bulion. oarecii inoculai au murit dup 4-7 zile, prezentnd n mod constant leziuni de hepatit necrotic din care au fost izolate de fiecare dat listerii. Instilarea conjunctival a culturii de 24 ore la iepure a produs o conjunctivit acut seroas, transformat apoi n purulent.
REZULTATE I DISCUII Primul focar de listerioz din unitatea S a fost identificat la sfritul lunii ianuarie 2004, ntr-o turm de 692 ovine. n decurs de 15 zile, n perioada 29 ianuarie 13 februarie 2004, s-au mbolnvit 18 oi, ceea ce reprezint 2,60%. Din cele 18 ovine mbolnvite 6 (33,33%) au murit , 9 (50,00%) au fost sacrificate de necesitate, iar 3 (16,67%) s-au vindecat 3 (16,67%). mbolnvirile au aprut n urma introducerii n alimentaia oilor, a porumbului nsilozat provenit dintr-un siloz proaspt nceput. Aceasta a dus la bnuiala c furajul nsilozat a constituit factorul favorizant n apariia manifestrilor de boal. Mai mult, afirmaia se sprijin i pe faptul c n urma schimbrii alimentaiei prin eliminarea furajului murat i a introducerii concentratelor n raie, nu au mai fost nregistrate cazuri de mbolnvire. Al doilea focar de listerioz a fost confirmat bacteriologic n perioada februarie-martie 2005, ntr-o alt turm de ovine, cu un efectiv de 447. De la 21 februarie i pn la 26 martie 2005, ntr-o perioad de 34 de zile, s-au mbolnvit 16 ovine, reprezentnd 3,57%. Din cele 16 ovine cu simptome de boal 2 (12,50%) au murit iar 14 (87,50%) au fost sacrificate de necesitate. Vindecri nu s-au nregistrat, cu toate c oile bolnave au fost tratate cu antibiotice (ampicilin). Turma de ovine a primit n raie, pe lng alte sortimente i furaj nsilozat. Apariia primelor cazuri de mbolnvire i n aceast unitate, a coincis cu administrarea n hran a silozului de lucern, nou nceput. mbolnvirile au ncetat brusc, fr a se lua msuri privind mbuntirea condiiilor de igien, alimentaie i fr aplicarea unor msuri speciale de profilaxie i combatere.
786
Din investigaiile epidemiologice ntreprinse n cele dou uniti rezult c, din totalul de 1139 ovine s-au mbolnvit 34 (fig. 1), ceea ce reprezint 2,99%, au murit 8 (23,52%), au fost sacrificate de necesitate 23 (67,66% ) i s-au vindecat 3 (8,82 %).
Fig. 1 Rezultatele investigaiilor epidemiologice n cele dou uniti cu listerioz la ovine
mbolnvirile au aprut numai n sezonul rece, la efective inute n stabulaie strict i numai pn la nceperea punatului. De menionat, c n cele dou focare examinate nu s-au nregistrat avorturi, dei cazurile de boal au aprut n a doua jumatate a perioadei de gestaie a oilor. De asemenea, din aceleai investigaii rezult c, boala a aprut sub form enzootic sezonier, n lunile ianuarie aprilie, cu o morbiditate cuprins ntre 2,6 i 3,57%, foarte apropiat de cea descris i n literatura de specialitate. ntruct odat cu mbuntirea factorilor de microclimat (creterea temperaturii mediului ambiant), ntroducerea n alimentaie a furajului concentrat i scoaterea animalelor la pune, nu s-au mai semnalat alte cazuri de mbolnvire ne face s considerm c, la apariia bolii au contribuit unii factori climatici (umezeala, frigul), deficienele de alimentaie i ali factori de ordin igienic. La apariia bolii, n mare msur a contribuit i alimentaia ovinelor, care, n special n a doua perioad a iernii, a fost deficitar att cantitativ, ct i calitativ, folosindu-se excesiv furaje nsilozate, unele mucegite, n majoritate fibroase i n cantiti insuficiente. Aspectul clinic al bolii n focarele descrise a fost aproximativ acelai, corespunznd datelor din literatura de specialitate (fig. 2). Astfel din cele 34 ovine cu manifestri de listerioz la 7 (20,58%) evoluia a fost acut septicemic, iar 27 (79,42%) ovine au prezentat simptome de encefalomielit, evoluie subacut. De
787
menionat c nu s-au nregistrat nici un caz de avort listeric. De fapt n literatura de specialitate se afirm c, localizarea genital exprimat prin avort se ntlnete rar, de obicei la oile primipare i niciodat nu evolueaz concomitent cu manifestrile de meningoencefalit (forma nervoas). De asemenea, menionm c formele evolutive acute, septicemice, au fost diagnosticate numai la mieii sugari i la tineretul ovin.
Fig. 2. Forme evolutive n listerioza ovin
La ovinele mbolnvite s-a observat de la nceput o stare de abatere, reducerea total a poftei de mncare, sau chiar dispariia apetitului. Respiraia era accelerat, iar temperatura corporal varia n limite mari, nregistrndu-se o hipotermie, n faza iniial, revenind aproape n limitele normale n ultima perioad a evoluiei bolii. n unele cazuri s-au semnalat conjunctivite, iar unele exemplare prezentau scurgeri seroase din cavitile nasale, altele salivaie abundent (fig. 3).
Fig. 3. Aspect clinic salivaie abundent; pedalri.
788
Majoritatea oilor mbolnvite au prezentat manifestri clinice din partea sistemului nervos central, reprezentate prin dromomanie, vertije, opistotonus (fig. 4).
Fig. 4. Aspecte clinice (opistotonus, devierea lateral a capului)
Tulburrile nervoase au progresat concomitent cu evoluia n timp a bolii. Ulterior au aprut paralizii ale membrelor, oile bolnave nu se mai puteau scula, iar ridicate de jos cadeau. n majoritatea cazurilor oile stteau n decubit lateral i executau cu picioarele micri de pedalare. Deseori s-au observat tulburri oculare manifestate prin amauroz. nsmnrile efectuate pe medii obinuite de cultur, ca i pe medii cu snge (agar cu snge), din organele parenchimatoase (ficat, splin ) ca i din diverse segmente ale encefalului de la 10 cadavre au dus la izolarea i identificarea a 10 tulpini de Listeria monocytogenes. Germenii s-au izolat mai frecvent de la nivelul bulbului n toate cazurile (100%), apoi din tuberculii cuadrigemeni (80%) i pedunculii cerebrali i cerebeloi (70%). ncercrile de izolare din organele parenchimatoase (ficat i splin) i din snge, chiar la animalele de la care Listeria monocytogenes s-a izolat din bulb, au fost negative. Biochimic, tulpinile de Listeria monocytogenes izolate au produs indol i hidrogen sulfurat; au fermentat glucoza, maltoza i dextrina; erau mobile i au hemolizat globulele roii de iepure i de oaie. Inoculrile celor 10 tulpini, culturi n bulion glucozat, de 24 de ore n doz de 0,2 ml pe cale intraperitoneal au determinat moartea oarecilor albi n decurs de 4-7 zile. Din cele 10 tulpini, una izolat de la un miel s-a dovedit slab patogen. Instilat n sacul conjunctival la iepure, listeria a determinat n decurs de 23 zile o conjunctivit de tip granular i o cheratit difuz. Procesul inflamator ocular s-a resorbit n cteva zile, dar animalul a rmas cu opacitatea permanent a corneii.
789
Toate cele 34 de ovine cu simptome de listerioz au fost supuse tratamentului cu ampicilin n doz de 0,025 mg/kg, pentru 24 de ore. Inocularea s-a fcu pe cale intravenoas. Din cele 34 de animale tratate, numai n 3 cazuri sau obinut vindecri. De menionat, c cele trei vindecri s-au obinut la animalele (miei i tineret) cu forme evolutive acute, septicemice. Nici un animal cu manifestri nervoase, nu s-a vindecat ca urmare a tratamentului aplicat. CONCLUZII Investigaiile epidemiologice, morfoclinice i de laborator n dou episoade de listerioz ovin au condus la desprinderea urmtoarelor concluzii: 1. mbolnvirile s-au nregistrat n perioada ianuarie-aprilie, n condiii de stabulaie strict i prelungit, cu o alimentaie n care predomina furajul nsilozat. 2. Din totalul de 1.139 ovine, s-au mbolnvit 34, ceea ce reprezint 2,99%, iar din acestea 8 (23,52%) au murit, 23 (67,66%) au fost sacrificate de necesitate, iar 3(8,82%) animale s-au vindecat. 3. Clinic boala a evoluat acut septicemic n 7(20,58%) cazuri, prezente numai la tineretul ovin(miei i tineret) i subacut cu manifestri nervoase la 27 (79,42%) de ovine. 4. n evoluia subacut cu manifestri din partea sistemului nervos s-a nregistrat dromomanie, vertije, opistotonus, pareze i paralizii ale buzelor, membrelor, decubit i moarte. 7. De menionat c nu s-au nregistrat avorturi la oile gestante. 8. nsmnrile pe medii de cultur cu snge i pe medii glucozate, din diverse zone ale sistemului nervos central, din organele parenchimatoase (ficat i splin) i din snge au dus la izolarea a 10 tulpini de Listeria monocytogenes, identificate pe baza caracterelor morfologice, culturale, biochimice i de patogenitate. 9. Determinarea patogenitii tulpinilor izolate s-a fcut prin inocularea culturilor de 24 de ore n bulion, att la oricei albi ct i prin instilare n sacul conjunctival la iepure. 10. Tratamentul cu ampicilin n doz de 200 mg/kg i zi administrat pe cale intravenoas a dus la obinerea videcrii la 3 animale cu manifestri acute septicemice de boal. Nu s-a nregistrat nici o vindecare la animalele cu manifestri din partea sistemului nervos.
790
BIBLIOGRAFIE
1. 2. Larpent J.P., 2000 - Listeria, Ed. Tec.DOC, 2e Edition, Paris. Marly J., Heuchel V., Ribaud D., 2004 - Evaluation de l'efficacit des conservateurs sur la prvention du dveloppement de Listeria monocytogenes dans les ensilages. 11me Rencontres autour des Recherches sur les Ruminants, Paris (FRA). Moga-Mnzat R., (colaborator), 2001 Boli infecioase ale animalelor. Bacterioze. Editura Brumar, Timioara. Perianu T., tefan N., CarpCrare M., Velescu Elena, Alexandru N., uc C.I., 2003 Boli infecioase ale animalelor. Bacterioze. Vol. I. Editura Venus, Iai. Rpuntean Gh., Rpuntean S., 1999 - Bacteriologie special veterinar. Ed. TipoAgronomia, Cluj-Napoca. Zundel E, Bernard S., 2004 - In vivo imaging of the spread of Listeria monocytogenes in sheep. 15th International Symposium on Problems of Listeriosis (Isopol), Uppsala (SWE).
3. 4. 5. 6.
791
OBSERVATIONS REGARDING THE ISOLATION OF LISTERIA MONOCYTOGENES IN SILO FODDER

C. CARP-CRARE U.S.A.M.V. Iai The researches have followed the isolation of Listeria monocytogenes from the silage. The silage samples were taken from a ovine breeding unit, where listeriosis cases have been diagnosticated. In the examined unit the main fodder was the silage, because of the indoor breeding periode during the cold season (February -March). From the 42 analysed silage samples there were isolated 3 (7,14%) Listeria monocytogenes stems. Two (4,76%) from the three identified stems have been isolated from the silage surface and one of them (2,38%), from the edges of the silage platform. It is important to mention that from the silage samples with the pH value below 5, there hasn't been isolated any Listeria monocytogenes stem.
Key words: Listeria monocytogenes, silage, ovine.
Irrational alimentation, specially with silage excess, of inadequate quality, incomplete fermented, with a pH over 5,5, is the main factor in disease starting and the rason why listeriosis was called "silo disease" as well. Also, often, in listeriosis focuses, after the improvement of some alimentary deficiencies, the diseases reduction or cessation is observed. In ovine, the using of inadequate quality silage and in excesive quantities represents one of the main factors of infection susceptibility raising. Its may be said that alimentation has a favourable role, sometimes even decisive in disease staring and that the infections with Listeria monocytogenes have a very powerfull conditioned character. MATERIAL AND METHOD
The researches were executed on a number of 42 samples obtained from a unit with listeriosis cases in sheeps which had silage as a basic alimentation, because of the indoor breeding periode. The samples were obtained from different zones of the silage, the number of prelevated samples being in function of the pH. Because the pH in silo depth was under 5, pH which not allows the listeria multiplication, was choosed a small samples number, respectively 6, while the surface and the edges of the silage platform ph varied between 5,5 and 6, being prelevated a number of 18 samples (table 1).
792
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Table 1 Silage samples sourse Total sample number 42 Surface samples (pH-6) 18 Edges samples (ph 5,5-6) 18 Depth samples (ph<5) 6
50 40 30 20 10 0
42
18
18 6
Total sample number
Surface Edges samples samples (pH-6) (ph 5,5-6)
Depth samples (ph<5)
Fig. 1- Silage samples sourse
Thesamples were prelevated as steril as possible and were complied to microbiological control for listeria isolation. In keeping with to some score system for silage quality, in function of pH it may be observed that the analysed samples didnt fulfilled the characteristics of some good quality silage, having 2 from a maximum of 5 points (table 2).
Table 2 The score system of silage quality on a base of pH value Ph value 4,2 4,2-4,6 4,6-5,1 5,1-6,1 6,1-6,4 6,4-7,2 Ph indicating colour Red Red - orange Orange Yellow Yellow greenish Green Score 5 4 3 2 1 0
As a work technics was used a standard isolation technics (Centre National d'Etudes Vtrinaires et Alimentaires-CNEVA Pr 116/2000) specially recomanded for silage, very similar with the one applied in our country. In keeping with this method, from the samples brought in the laboratory were weight 25 gramme of silage, which were introduced in pre-enrichment demi Fraser broth. The samples were left for incubation 24 hours at 300C. After incubation periode a sowing on selective Palcam and Oxford culture mediums was made and 0,1 ml from pre-enrichment broth was transferred in 793
enrichment Fraser broth, which was incubated 36-48 hours at 370C. From those ones sowing in 24 as well as in 48 hours on Palcam and Oxford selective culture mediums were realized, the plates being incubated and observed for two days long. The suspect colonies (Palcam gray greenish center surrounded of a black halo and on Oxford-black colonies surrounded of a black halo) were transplanted on selective culture mediums such as TSYA agar (triptonis, soya) with ram blood, in order to observe haemolysis. The plates were incubated at 370C for 24 hours and then, the specific colonies were submitted to minimum identification tests (Api-Listeria, CAMP). The stems pathogenity was observed in vitro using strains cropping on ram blood agar, as well as in vivo, inoculating little laboratory mice.
RESULTS AND DISCUTIONS After the researches for Listeria monocytogenes isolation in fodders, the fact that from a total number of 42 analysed silage samples, were isolated 3 (7,14%) Listeria monocytogenes strains was observed. From the 3 identified strains, 2 (4,76%) were isolated from the silage surface, 1 strain (2,38%) from the edges of the silage platform, while in depth samples there hasn't been isolated any Listeria monocytogenes stem (table 3). For the bacteria isolation from the silage samples, Palcam and Oxford mediums have been proved eficient and intensely selective. The identification was realized using 2 tests (CAMP and Api-Listeria) which allow Listeria monocytogenes difference from other genus species, considered unpathogenes. The pathogenity of isolated stems was proved inoculating little mice.. After some fresh culture centrifugation, from the obtained sediment the culture was reconstituted in 1 ml physiological serum. After this the mice were intraperitoneal inoculated with 0,1 ml reconstituded suspension, their death happening between 7 -10 days, all 3 isolated strains being proved to be pathogenes. It is important to mention that Listeria monocytogenes stems isolation from the silage was realized during its administration as a basic alimentation and in the same time with some listeriozis cases appearance in some adult sheeps, with nervous signs. An important aspect is represented by the fact that once the silage changing is made, the isolated listeriozis case disapeared. The pH over 5 present in some silage areas had a decisive role in bacteria excessive developement. This aspect, which follows from our reseach too, by the fact that Listeria couldnt be isolated from the silage depth where the pH was under 5, but only from the samples where pH were over 5, argues the statement that listeriosis in sheeps is a disease owed to alimentation deficiencies, specially bad quality silage ("silo disease").
794
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Table 3 Listeria monocytogenes frequency in silage Samples sourse 1. 2. 3. 4. Surface samples Edges samples Depth samples Total Samples number No. 6 5,5-6 <5 18 18 6 42 % 42,86 42,86 14,28 100 Positive samples No. % 2 1 3 4,76 2,38 7,14 Negative samples No. % 16 17 6 39 38,1 40,48 14,28 92,86
pH
50 40 30 20 10 0
42,86 42,86 38,1
40,48
14,28 4,76
Samples number
14,28 2,38 0
Negative samples
Depth sam ples
Positive samples
Edges sam ples
Surface sam ples
Fig. 3 - Listeria monocytogenes frequency in silage
CONCLUSIONS The analyses regarding Listeria monocytogenes presence in silage, brought the following conclusions: 1. In the silage Listeria monocytogenes was isolated in 7,14% from the total of the 42 analysed samples. 2. From the 3 isolated strains, 2 (4,76%) were taken from the surface and one (2,38%) of the platform edges. 3. In depth samples, where the pH was under 5 it has been izolated no Listeria monocytogenes strain.
795
4. Listeria monocytogenes isolation from the silage a coincided with some isolated listeriosis cases appearence. 5. All the isolated stems were proved to be pathogenes by intraperitoneal inoculation of little mice, using fresh culture, the inoculated quantity being of 0,1 ml.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. Gitter M., Stebbings R.S., Morris J.A., Hannam D., Harris C., 1986 - Relationship between ovine listeriozis and silage feeding. Vet. Rec., 118 (8), 207-208 Larpent J.P., 2000 - Listeria, Ed. Tec.DOC, 2e Edition, Paris Perianu T., 2003 - Boli infecioase ale animalelor domestice, Bacterioze, Vol.I, Ed. Venus-Iai, p. 429-436 Rpuntean Gh., Rpuntean S., 2005 - Bacteriologie veterinar special, Ed. Academic Pres, Cluj-Napoca, p.38-46 Y. Milleman, D. Remy, J. Brugere-Picoux., 2000 - La listeriose des ruminantsetiologie, pathogenie et epidemiologie. Point Vet., vol. 31, nr. 208, 313-316
796
DIAGNOSTIC DE LABORATOR COMPLEX AL TUBERCULOZEI LA BOVINELE SACRIFICATE

THE COMPLEX DIAGNOSIS OF TUBERCULOSIS INFECTION AT THE SACRIFICED CATTLE
Adriana CHIRIAC1, M. CARP- CRARE2, C. NECULI 1 D.S.V.S.A. Vaslui 2 U.S.A.M.V. Iai Bovine tuberculosis infection is usually diagnosed by post-mortem examination and histopathological and bacteriological techiques. Traditional bacterial culture remains the routine method for confirmation of infection. Bacteriological examination may comprise the demonstration of acid-fast bacilli by microscopic examination, and the isolation of mycobacteria on selective culture media and their subsequent identification by cultural and biochemical tests. Animal inoculation is slightly more sensitive than culture, but should be used when histopathology lesions are compatible with mycobacteriosis infection and when isolation in culture is negative. During 2000-2005, 69 samples were processed within Sanitary Veterinary Laboratory Vaslui for necropsy, bacteriological examination, histhopatological examination and animal inoculation. We have examinated 21 samples through microscopic examination and the isolation of mycobacteria on selective culture (Lweinstein Jensen). The necropsy and the bacteriological examination were positive at 11 samples (13,34%), all the samples beeing confirmed by histhopatological examination.
Key words: diagnosis, mycobacteria, bacteriological and histopathological examination.
MATERIALE I METODE
n perioada 2000-2005, n Laboratorul Sanitar Veterinar Vaslui s-au examinat 69 de probe n vederea examenelor anatomopatologice, bacteriologice, histopatologice i a bioprobei pe cobai n direcia tuberculozei bovine. Dintre acestea, 50 de bovine au fost tuberculino- negative. De asemenea, 15 probe limfonoduri i organe au provenit de la bovine reacionate pozitiv la testul EIAs- IFN.
797
Din totalul animalelor sacrificate pentru stabilirea diagnosticului de tuberculoz, s-au primit la laborator 29 probe poriuni de organe (ficat, splin, rinichi, pulmon, aparat genital). Examenul bacteriologic a fost efectuat prin 3 metode astfel: examen bacterioscopic pe un numr de 735 frotiuri colorate prin metoda Ziehl- Neelsen att din cazeum, ct i din zona periferic a nodulului tuberculos; examen bacterioscopic n lumin fluorescent pe un numr de 27 frotiuri colorate cu substane fluorocrome (auramina-rodamina); examen cultural s-a efectuat la un numr de 21 probe: 4 probe provenite din pulmon i limfonodurile aferente; 15 probe provenite din limfonodurile capului, toracelui, mezenterici, hepatici, iliaci i din ficat, splin, rinichi, pulmon, aparatul genital; 2 probe din leziuni de la cobaii cu bioproba pozitiv. nsmnrile s-au fcut pe mediul Loweinstein Jensen cu i fr glicerin.S-au nsmnat pentru fiecare prob cercetat cte 4 tuburi cu mediu Lowenstein - Jensen (2 cu glicerin i 2 fr glicerin). Culturile au devenit vizibile dup a 50-a zi de la nsmnare. Coloniile au prezentat o cretere disgonic, de tip S, avnd suprafaa i marginile netede i lucioase, nepigmentate, cu aspect uor bombat, de obicei mici i izolate (tabelul 2). S-au dezvoltat mai bine pe mediile fr glicerin i n cele neaerate. Testele biochimice folosite pentru identificarea micobacteriilor au fost: testul catalazei, testul nitratreductazei i testul niacinei. Metodele de colorare a seciunilor de esuturi etalate pe lam au fost: hematoxilina eozina - albastru de metil (HEA) i Ziehl- Neelsen modificat.
REZULTATE I DISCUII Examen anatomopatologic Rezultatele examenului anatomopatologic sunt sintetizate n tabelul 1.
Tabelul 1 Leziunile limfonodulare de la bovinele examinate n laborator n perioada 2000-2005 Specificare Probe analizate pentru diagnosticul de laborator al tuberculozei bovine Probe negative pentru tuberculoz bovin Probe pozitive pentru tuberculoz bovin Alte leziuni Hiperplazii anatomolimfoide patologice Focare de limfonodulare antracoz 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total Procent 19 19 0 0 0 18 16 2 1 5 14 9 5 1 1 5 3 2 2 1 9 7 2 1 0 4 4 0 0 4 69 58 11 5 11 100 84,06 13,34 6,84 15,06
798
Leziuni suspecte de tuberculoz s-au constatat doar la 11 animale, care n final au fost confirmate prin alte examene de laborator. Leziunile au fost sub form de focare pulmonare acino-nodoase, cenuii-glbui, nconjurate de esut pulmonar sclerozat (fig. 1).
Fig. 1 Focare cazeo-calcaroase tuberculoase pe seciune n limfonodurile mediastinale
Examenul bacteriologic Examenul bacterioscopic a fost pozitiv la 11 din cele 69 de probe analizate (13,34 %), toate probele fiind confirmate prin examenul histopatologic. Are o valoare de diagnostic redus n tuberculoza bovin, datorit faptului c leziunile sunt de obicei paubacilare . n urma examenului bacteriologic s-au izolat 11 tulpini bacteriene cu urmtoarele caractere culturale i morfologice (tabelul 2):
Tabelul 2 Identificarea tulpinilor micobacteriene Nr. crt. 1. 2. Timp de incubaie (zile) 55 DISGONIC 59 DISGONIC Tip cultural S S Examen macroscopic al culturii Colonii cu margini neregulate, opace, alb-glbui,2-4 mm, cu rofizare ulterioar Colonii cu margini ondulate, opace, conopidiforme,glbui, 2-4 mm, cu rofizare ulterioar Colonii rotunde, opace, albglbui, 3-4 mm, cu rofizare ulterioar Examen microscopic al culturii Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate. Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate. Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate.
3.
60 DISGONIC
799
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Nr. crt. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Timp de incubaie (zile) 60 DISGONIC 65 DISGONIC 55 DISGONIC 60 DISGONIC 60 DISGONIC 65 DISGONIC 55 DISGONIC 65 DISGONIC Tip cultural S S S S S S S S Examen macroscopic al culturii Colonii cu margini neregulate, opace, glbui, bombate, 2-3 mm, cu rofizare ulterioar Colonii rotunde opace, albglbui,3-4 mm, cu rofizare ulterioar Colonii crateriforme, opace, glbui, 3-5 mm, cu rofizare ulterioar Colonii rotunde, opace, albglbui, 3-4 mm, cu rofizare ulterioar Colonii cu margini neregulate, opace, glbui, bombate, 2-3 mm, cu rofizare ulterioar Colonii rotunde opace, albglbui,3-4 mm, cu rofizare ulterioar Colonii crateriforme, opace, glbui, 3-5 mm, cu rofizare ulterioar Colonii rotunde opace, albglbui,3-4 mm, cu rofizare ulterioar Examen microscopic al culturii Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate. Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate. Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate. Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate. Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate. Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate. Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate. Bacili acidorezisteni aezai n grmezi neregulate.
Teste biochimice folosite pentru identificarea micobacteriilor S-a observat la examinarea caracterelor biochimice a unui numr de 11 tulpini izolate la examenul cultural c 6 tulpini (54,55%) au fost catalazo-pozitive, 5 (49,45%) tulpini au fost catalazo-negative, toate cele 11 tulpini nu au redus nitriii i au dat un rezultat negativ la testul niacinei (tabelul 3).
Tabelul 3 Rezultatele examenelor biochimice (testul catalazei, nitratreductazei i a niacinei) Nr.crt. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. Catalaza + + + + + + Nitratreductaza Testul niacinei -
800
Examenul histopatologic Prin coloraia HEA s-a efectuat un examen de ansamblu al modificrilor citologice, cu evidenierea structurii histopatologice a granulomului tuberculos, fcndu-se n acelai timp i examen diferenial fa de alte granuloame nespecifice (actinobacilar, micotic, de corpi strini etc.). Metoda de colorare Ziehl-Neelsen modificat a permis evidenierea structurii histopatologice a esutului i a bacililor acidoalcoolorezisteni.Prin aceast metod de colorare s-au putut evidenia i bacilii acido-alcoolorezisteni prezeni n citoplasma celulelor epitelioide, gigante i n zona de necroza a granulomului (fig. 2).
Fig. 2 Limfonod bovine: proliferare epitelioid. Coloraia Ziehl-Neelsen modificat.
Bioproba Bioproba s-a efectuat pentru cele 69 probe primite n laborator n perioada analizat. La 7 probe recoltate de la animale tuberculino-negative, nu s-a efectuat bioproba pe cobai, ntruct rezultatele examenelor: anatomopatologic, bacterioscopic i histopatologic au fost negative pentru tuberculoza bovin. Studiu statistic al activitii de supraveghere bovin din judeul Vaslui prin examene de laborator n perioada 2000-2005, s-au sacrificat pentru precizarea diagnosticului un numr de 57 de bovine tuberculino-reagente (3,03%). Din cele 69 de probe analizate, boala s-a confirmat la 11 capete, reprezentnd 13, 34% procent mediu de contaminare pe ntreaga perioad de studiu. S-a constatat o rat de confirmare de 0,11% ( 2/18) n 2001, de 0,35% (5/14) n 2002, de 0,50% (2/5) n 2003 i de 0,22% (2/9) n 2004. Din analiza rezultatelor acestor examene, se poate aprecia sensibilitatea i specificitatea testelor de diagnostic pe animale sacrificate.
801
Ss = a/ a+c% = 11/ 11 + 3 % = 78,57% Sp= d/ d+b% = 59/59 + 10 % = 85,51% a = real pozitive; b = fals pozitive; c = fals negative; d = real negative;
6
5,0
Numr probe pozitive
2,0
0 2000
0,0 0 2001
0 2002
0 Perioada 2003
0,0 2004
0,0
0,0 0 2005
Numrul probelor pozitive din colectiviti Numrul probelor pozitive din gospodriile populaiei
Graficul 1- Situaia probelor pozitive prin examen de laborator n perioada 2000-2005
CONCLUZII ntre anii 2000-2005, s-au primit n laborator probe de la un numr de 69 bovine, care au fost analizate pentru stabilirea diagnosticului de tuberculoz bovin. Din acestea, 19 probe proveneau de la animalele tuberculino-reagente i 50 probe de la animale tuberculino-negative. La examenul anatomo-patologic efectuat n laborator la marea majoritate a limfonodurilor provenite de la animalele tuberculino-reagente, care au fost n final confirmate, s-au decelat leziuni caracteristice de dimensiuni i aspecte diferite. Din totalul animalelor sacrificate pentru stabilirea diagnosticului de tuberculoz bovin, s-au primit n laborator 29 probe de organe, la care s-au constatat leziuni susupecte de tuberculoz la 11 probe, la care n final boala a fost confirmat. Examenul bacterioscopic a fost pozitiv la cele 11 probe confirmate. Dei acest examen presupune examinarea unui numr mare de cmpuri microscopice, valoarea sa de diagnostic asigur susinerea acestuia.
802
Au fost analizate prin examen cultural 21 de probe, din care 11 au fost pozitive, fiind confirmate n final i prin bioprob. S-au examinat histopatologic toate cele 69 de probe primite n laborator. Dintre acestea, la 11 probe cu diagnostic de tuberculoz bovin confirmat s-au decelat constant detaliile morfopatologice patognomonice bolii. Avnd n vedere valoarea de diagnostic a examenului histopatologic prin utilizarea metodei de colorare Ziehl-Neelsen modificat, se sugereaz propunerea ca probele cu leziuni patognomonice n care se deceleaz bacilii acidoalcoolorezisteni, s aib valoare decizional n stabilirea diagnosticului, fr a mai fi necesar bioproba, reducnd astfel perioada de emitere a buletinului de analiz. Bioproba s-a efectuat pentru toate probele primite n laborator. Dintr-un numr de 29 probe organe, care au nsoit probele de limfonoduri, 20 probe (68,57%) prezentau leziuni parazitare, n special de echinococoz, fapt care ar putea explica o parte din reaciile nespecifice ntlnite la examenul alergic.
1. 2. 3. 4. 5. Alexandru N., 1994 - Tehnic simpl, rapid de prelevare i colorare a elementelor citopatologice n tuberculoza limfonodal, Al VI-lea Congres de Medicina Veterinara, 63 Bercea I., Popescu t., Sandu I., 1999 - Diagnostic alternative proceedings of cattle tuberculosis in Romania, Proceedings 26 th World Veterinary Congress WSA, Lyon, France, CD Carp - Crare M., Eleonora Guguianu, Dorina Timofte, 1997 - Lucrri practice de microbiologie veterinar, Uz intern, U.A.M.V. Iai Corner L.A., 1994 - Past mortem diagnosis of Mycobacterium bovis infection in cattle, Veterinary Microbiology , 40, 53-63 Dumitrache Mihaela, 2005 - Cercetri asupra diagnosticului de supraveghere i de confirmare - infirmare a tuberculozei bovine n municipiul Bucureti i n judeul Ilfov, Tez de doctorat, Universitatea de tiine Agronomice i Medicin Veterinar Bucureti, Bucureti, pag. 175- 186 Ionic C., Grigore C., Leonte I., eveloiu I., 1988 - Localizarea leziunilor macroscopice de tuberculoz la taurine infectate, Simp.,, Tuberculoza la om i animale, Slobozia, 14 Ni C., 2006 - Cercetri privind epidemiologia, diagnosticul i profilaxia tuberculozei bovine n judeul Vaslui, tez de doctorat, Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Bucureti One E., Virginia Constantinescu, 1978 - Diagnosticul de laborator n medicina veterinar, Ed. Ceres, Bucureti, 74-78 Popescu t., Sandu I., 1997 - Preocupri i perspective n domeniul diagnosticului, prevenirii i combaterii tuberculozei bovine, Ed. L.C.S.V.D. Bucureti, pag. 5-33 Rducnescu H., Bica-Popii Valeria, 1986 Bacteriologie veterinar, Editura Ceres, Bucureti *** Diagnosticul de laborator al tuberculozei la animale - Instruciuni MAIA nr.80296/ 1984 *** Manual O.I.E.(2004) - Manual of Diagnosis Tests and Vaccines for terrestrial Animals, part 2, section 2.3., chapter 2.3.3.
6. 7. 8. 9. 10. 11. 12.
803
SINDROMUL DERMATITEI SI NEFRITEI PORCINE (PDNS) O NOU ENTITATE MORBID N PATOLOGIA SUIN DIN ROMNIA
PORCINE DERMATITIS AND NEPHROPATHY SYNDROME (PDNS) A NEW PATHOLOGICAL ENTITY IN ROMANIAN SWINE HERDS
D. CADAR1, Marina SPNU1, V. MICLU1, L. KBLKUTI1, T. TUBOLY2, G. CZIRJK1, A. DN3, A. CSGOLA2 1 U.S.A.M.V. Cluj Napoca 2 Faculty of Veterinary Sciences, Budapest, Hungary 3 Central Veterinary Institute, Budapest, Hungary PDNS is a relatively new and often fatal disease that primarily affects recently weaned and feeder pigs from 1.5 to 4 months of age (Smith et al., 1993; Thibault et al., 1998). The syndrome was first recognized in the UK in 1993 (Smith et al., 1993). PDNS is generally sporadic. Pigs affected with PDNS are older pigs, particularly animals ranging from 12 to 14 weeks of age, but PDNS has also been described in finishing pigs and replacement gilts. The first signs were skin lesions that were multifocal, well circumscribed, slight raised, dark red, circular to irregular and 120 mm in diameter. The pathological changes are consistent with an immunecomplex disorder,with severe renal lesions usually causing fatal azotaemia. Porcine circovirus type 2 (PCV2), believed to be an important cause of PDNS. Significant gross lesions are present consistently in the skin and kidneys of swine with PDNS, although other organs may also be affected (Choi and Chae, 2001; Duran et al., 1997; Thibault et al., 1998). Gross skin lesions consist of several round to irregularly shaped red to purple macules and papules that coalesce over the perineum and distal limbs to form large irregular patches. The kidneys are enlarged and have pale cortices with multiple red circular haemorrhagic cortical foci measuring 2 4 mm in diameter. Renal and inguinal lymph nodes are usually enlarged and red (Ramos-Vara et al., 1997). The characteristic microscopic lesions of PDNS are generalized severe necrotizing vasculitis and fibrinonecrotic glomerulonephritis (Choi and Chae, 2001; Choi et al., 2002; Duran et al., 1997; Ramos-Vara et al., 1997). This paper described the first PDNS cases from romanian swine herds. Porcine circovirus type 2 was detected in kidneys and other tissues by in situ hybridization and polymerase chain reaction (PCR).
Cunoaterea principalelor semne clinice ct i a celor anatomopatologice n sindromul dermatitei i nefritei porcine (PDNS) este foarte important att n direcia diagnosticului pozitiv, ct i n diagnosticul diferenial, existnd
804
numeroase semne clinice i anatomopatologice care se pot confunda cu cele din alte boli, cum ar fi cele din pesta porcina clasic, rujet. Scopul acestui studiu a fost, evidenierea, respectiv prezentarea principalelor manifestri clinice si anatomopatologice ale sindromului dermatitei i nefritei porcine (PDNS), precum i diagnosticul acestui sindrom i prin acesta diagnosticul circovirusului porcint tip 2 (PCV2). MATERIAL I METOD
Acest studiu cuprinde observaiile nregistrate din perioada martie 2003 ianuarie 2006 n cteva ferme din centrul i nord-vestul Transilvaniei. Avnd n vedere faptul c prevalena acestui sindrom n fermele de suine este cuprins ntre 0,001- 0,03%, pe perioada studiului au fost nregistrate doar 5 cazuri de PDNS. Animalele au fost examinate clinic, dup care au fost eutanasiate pentru examenul anatomopatologic i au fost recoltate probe pentru examenul histopatologic i pentru detectarea circovirusului porcin tip 2 (PCV2) din esuturile afectate.
REZULTATE I DISCUII Tabloul clinic. Manifestrile clinice pe care le-am observat au fost similare cu cele descrise n bibliografia internaional. Suinele afectate au fost cu vrste cuprinse ntre 3-5 luni. Cele mai reprezentative semne clinice nregistrate au fost urmtoarele: prezena unor pete hemoragice multifocale, uneori eritematoase, de dimensiuni cuprinse ntre 1-4 cm, uneori mai mari, cu confluarea acestora prezente pe ambele pri ale corpului, mai ales la nivelul membrelor posterioare, regiunea perineal, zona flancului, regiunea inferioar a abdomenului. La 4 din cele 5 cazuri de PDNS, leziunile cutanate au fost prezente si la nivelul membrelor anterioare, respectiv la nivelul urechilor (Fig. 1-2). Aceste animale au fost anorexice, apatice, cu edeme declive mai ales la nivelul membrelor posterioare.
1 2 Fig.1, Fig. 2. Aspectul clinic al suinelor afectate de PDNS. Zone ntinse de pete hemoragice pe membre, zona inferioar a abdomenului i a urechilor
805
Tablou anatomopatologic. Leziunile majore semnificative au fost nregistrate la nivelul pielii, rinichilor i limfoganglionilor. Leziunile cutanate au fost cele descrise la tabloul clinic, cu meniunea c aceste leziuni au fost prezente i subcutan (Fig. 3). S-a nregistrat o reacie limfoganglionar generalizat, mai pronunat a celor inghinalor superficiali, suprarenali, submandibulari si traheobronici. Limfoganglionii au fost foarte reacionai, congestionai, uneori hemoragici (Fig. 4). Rinichii au fost mrii n volum, de aproximativ 3-4 ori fa de normal, cu numeroase pete hemoragice att pe suprafa ct i n profunzimea organului (Fig.5). Din punct de vedere histologic principalele modificri au fost :la nivelul pielii, vasculite necrotice severe generalizate; de la nivelul rinichilor, glomerulonefrite fibrinonecrotice, supurate, necroza fibrinoid a vaselor de snge, trombi hialini n tubii uriniferi, infiltrat masiv limfocitar perivascular, corpusculi renali modificai cu acumulare de material proteic n spaiul Bowmann, uneori chiar hematii, pe alocuri cu aspectul vestigial al corpusculilor renali (Fig. 7); de la nivelul limfoganglionilor, limfadenit hemoragico-necrotic cu tendin de omogenizare a foliculilor, dispariia foliculilor secundari germinativi, uneori cu apoptoz limfocitar masiv.
Fig. 3. Aspectul leziunilor cutanate la un caz de PDNS.
Fig. 4 Limfoganglionii de la un caz de PDNS.
Fig.6. Rinichi de la un caz de Fig 5. Rinichi de la un caz de PDNS, mrit PDNS.Glomerulonefrita interstitila, cu n volum cu pete hemoragice pe suprafa afectarea severa a glomerulilor;trombi hialini nefrit interstiial. in tubii uriniferi.Coloratie Tricrom-Goldner.
806
Diagnosticul. n ceea ce privete diagnosticul sindromului dermatitei i nefritei porcine (PDNS) acesta se bazeaz pe urmtoarea triad: prezena semnelor clinice caracteristice (1), prezena leziunilor histopatologice specifice(2), i detectarea circovirusului porcin tip 2 (PCV2) din aceste leziuni. Pentru detectarea PCV2 se utilizeaz diferite tehnici de imunodiagnostic cum ar fi, testul ELISA, imunoperoxidaza n monostrat, imunohistochimia, i de biologie molecular cu ar fi PCR i hibridizarea in situ. Pentru detectarea PCV2 din esuturi am utilizat PCR (Fig. 8) i hibridizarea in situ (Fig. 7).
Fig 7. Seciune din rinichi.Detectarea ADN-ului PCV2 (culoare negricioas) n celulele multinucleate gigante (sgeat mare) i n histiocite (sgeat mica).Hibridizare in situ.
Fig 8. Detectarea ADN-ului PCV2 de la cazurile de PDNS din limfoganglioni. Tehnica PCR: probe pozitive (sgeata mic), martor pozitiv (cap de sgeat), martor negativ (sgeat mare).
807
CONCLUZII Semnele clinice i leziunile anatomopatologice observate au fost caracteristice sindromului dermatitei i nefritei porcine (PDNS) cauzat de circovirusul porcin de tip 2, fiind corespunztoare celor descrise n literatur. PDNS este aparent o condiie emergent caracterizat prin leziuni primare la nivelul pielii, rinichilor i limfoganglionilor asociate cu vasculita multisistemic. Aceste leziuni sunt probabil rezultatele reaciei de hipersensibilizare prin complexe imune (reacie de hipersensibilitate tip III) (Rosell i col., 2000). PDNS a fost frecvent asociat cu PCV2 i uneori cu PRRSV, aceste virusuri putnd fi ntlnite uneori n acelai esuturi. Rmne de determinat dac aceste virusuri sunt factorii declanatori ai bolii, precum i modul n care ele contribuie la dereglarea sistemului imun avnd ca rezultat acumularea patologic. Deasemea, cunoaterea principalelor semne clinice ct i a celor anatomopatologice n sindromul dermatitei i nefritei porcine (PDNS) este foarte important att n direcia diagnosticului pozitiv, ct i n diagnosticul diferenial, existnd numeroase semne clinice i anatomopatologice care se pot confunda cu cele din alte boli, cum ar fi cele din pesta porcina clasic, rujet.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Choi, C., Chae, C., 2001. - Colocalization of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and porcine circovirus 2 in porcine dermatitis and nephropathy syndrome by double-labeling technique. Veterinary Pathology 38, 436441. Choi, C., Kim, J., Kang, I.J., Chae, C., 2002. - Concurrent outbreak of PMWS and PDNS in a herd of pigs in Korea. Veterinary Record 151, 484485. Duran, C.O., Ramos-Vara, J.A., Render, J.A., 1997 - Porcine dermatitis and nephropathy syndrome: a new condition to include in the di.erential diagnosis list for skin discoloration in swine. Swine Health and Production 5, 241245. Ramos-Vara, J.A., Duran, O., Render, J.A., Craft, D., 1997 - Porcine dermatitis and nephropathy syndrome in the USA. Veterinary Record 141, 479480. Rosell, C., J. Segales, J.A. Ramos-Vara, J.M. Folch, G.M. Rodriguez-Arrioja, C.O. Duran, M. Balasch, J. Plana-Duran, M. Domingo 2000 - Identification of porcine circovirus in tissues of pigs with porcine dermatitis and nephropathy syndrome. Vet. Rec. 146, 4043. Smith, W.J., Thomson, J.R., Done, S., 1993 - Dermatitis/nephropathy syndrome of pigs. Veterinary Record 132, 47. Thibault, S., Drolet, R., Germain, M.C., DAllaire, S., Larochelle, R., Magar, R., 1998 - Cutaneous and systemic necrotizing vasculitis in swine. Veterinary Pathology 35, 108116.
6. 7.
808
TESTAREA CLINIC A UNUI VACCIN POLIVALENT INACTIVAT DESTINAT IMUNOPROFILAXIEI UNOR CLOSTRIDIOZE BOVINE
THE CLINICAL TRIALS OF INACTIVATED POLYVALENT VACCINE USED IN THE SPECIFIC IMMUNOPROFILAXY OF SOME BOVINE CLOSTRIDIOSIS.
N. CTAN, V. HERMAN, M. NECSULESCU, Ionica FODOR U.S.A.M.V.B. Timioara The objective of the study was to clinically test the efficiency of an inactivated, polyvalent vaccine against some bovine clostridiosis. Twentyfive adult, lactating cows were administered the vaccine at four weeks interval. Local and general reactions were investigated, and the postvaccinal antibody titres were established using the serum neutralization method, which was corried out on mice, for all the three antigenic components. The antibody titres raised gradually after each vaccination, a significant raise being registered after the second inoculation. The obtained results recommend the use of the vaccine in bovine clostridiosis immunoprophilaxy.
Evoluia mai multor boli toxiinfecioase, produse de bacterii din genul Clostridium, la bovine, a determinat, n timp, obinerea unor produse imunobiologice destinate profilaxiei acestor boli (1, 3). Obinerea unui vaccin cu eficacitate deosebit este dependent de mai muli factori: mediul de cultur, adjuvantul folosit, doza de inoculare i schema de vaccinare. La aceti factori se adaug existena mai multor specii patogene precum i a mai multor serotipuri patogene n cadrul speciei de Cl. Perfringens (2, 4, 5). Din motivele expuse, n prezent, exist mai multe tipuri de vaccinuri inactivate polivalente destinate profilaxiei mai multor clostridioze i care sunt folosite la bovine i ovine (3, 4). Cercetrile efectuate se nscriu n acest context i au avut ca obiectiv testarea clinic, a unui nou vaccin polivalent inactivat destinat imunoprofilaxiei unor clostridioze ale bovinelor. MATERIAL I METOD
Vaccinul polivalent inactivat, denumit comercial ULTRACHOICE 8, a fost testat clinic n ferma zootehnic a staiunii didactice a USAMVB Timioara, iar examenele de laborator au fost efectuate n cadrul I.C.P.B.M.U.V. Bucureti.
809
Vaccinul conine: Cl. chauvoei - tulpina F (2,28 U.O*); Cl. haemolyticum tulpina IRP 135 (216 UT** i 3,6 U.O.); Cl. novyi tulpina 8296 (6000 D.L.M.***); Cl. perfringens tip C tulpina PC8 (300 U.T.); Cl. perfringens tip D tulpina 317 (100 U.T.); Cl. septicum tulpina A/IRP 111 (32 U.T.); Cl. sordellii tulpina 5918 (20 U.T.); formaldehid 0,2 % i stimugen (adjuvant hidrosolubil), ph ul final fiind de 6,2 6,4. Masa antigenic a componentelor existente n vaccin este exprimat diferit: U.O* (uniti de opacifiere a culturii); UT** (unitile toxinei nainte de inactivare); D.L.M.*** (doza limit letal a toxinei nainte de inactivare). Vaccinul a fost administrat la un lot de 25 vaci adulte aflate n lactaie (lotul experimental), iar lotul martor (nevaccinat) a avut un efectiv egal. Vacile din ambele loturi au fost sntoase clinic, normotermice, fiind cazate i furajate n acelai condiii. Vaccinul a fost administrat n doz de 2 ml s.c. n regiunea gtului, treimea mijlocie, sub forma a dou administrri (V I a i V a II a) la nterval de 4 sptmni. Animalele au fost examinate clinic local i general pentru depistarea reaciilor adverse la 7, 14, 21 i 30 de zile, dup fiecare vaccinare. Pentru testarea rspunsului imun, de la animalele vaccinate i nevaccinate, au fost prelevate probe de snge, n vederea obinerii serurilor, dup cum urmeaz: T0 nainte de prima vaccinare; T1 - la 4 sptmni dup vaccinare I - a i T2 la 4 sptmni dup vaccinarea a II a. Evaluarea rspunsului imun postvaccinal a fost efectuat prin reacia de seroneutralizare pe oareci (5) n cadrul I.C.P.B.M.U.V. Bucureti. Serurile au fost comasate n trei probe medii (V1, V2, V3), pentru fiecare recoltare fiind testai numai anticorpii pentru Cl. perfringens tipul C, Cl. perfringens tipul D i Cl. novyi.
REZULTATE I DISCUII Datele obinute furnizate n urma testrii clinice i a examenelor de laborator au fost prelucrate i redate n tabele. Vaccinul testat a produs, dup fiecare administrare, reacii locale exprimate prin noduli sau edem dur a cror intensitate i durat sunt redate n tabelul 1. Reaciile locale au fost mai intense n primele 7 zile dup inocularea vaccinului, ulterior diminund n intensitae, astfel c la 21 zile nodulul a fost prezent la un numr mic de animale. Reaciile generale (febra, diminuarea produciei de lapte), au fost absente la toate vacile vaccinate. De asemenea, nu au fost semnalate nbolnviri, la animalele din ambele loturi, pe toat durata experimentului. Rezultatele examenelor serologice privind rspunsul imun postvaccinal sunt redate n tabelele 2, 3 i 4. Rspunsul imun postvaccinal a fost testat numai pentru trei componente antigenice existente n structura vaccinului. Rspunsul imun postvaccinal, respectiv titrul anticorpilor obinui prin reacia de seroneutralizare pe oareci a fost exprimat n U.I/ ml.
810
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Reaciile locale i evoluia lor la bovinele vaccinate cu vaccinul ULTRACHOICE 8 Nr. Nr. Vaccinarea crt. matricol ntia 7 zile 14 zile 21 zile dup dup dup V1 V1 V1 3 4 5 ED=10 N ED=10 N ED=10 ED=5 N ED=10 N ED=10 ED=5 N ED=10 N N N N ED=5 N N ED=5 N ED=10 N ED=10 N N ED=10 N N ED=10 N ED=5 ED=10 N ED=5 N N N N Vaccinarea a doua 6 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 V2 7 zile 14 zile 21 zile dup dup dup V2 V2 V2 7 8 9 ED=5 N ED=10 N N ED=5 N ED=10 N N ED=5 ED=10 N ED=5 N ED=10 N N ED=10 N ED=5 N N ED=5 N ED=5 N ED=5 N N N -
0 1 2 V1 1 784 V1 2 776 V1 3 735 V1 4 813 V1 5 547 V1 6 543 V1 7 515 V1 8 506 V1 9 1051 V1 10 1074 V1 11 1000 V1 12 787 V1 13 799 V1 14 504 V1 15 1080 V1 16 801 V1 17 986 V1 18 606 V1 19 717 V1 20 514 V1 21 508 V1 22 749 V1 23 650 V1 24 741 V1 25 643 Legend: - ED=10 i ED=5 reprezint reacii locale sub forma unor edeme dure cu diametrul de aproximativ 10 sau 5 cm; - N = nodul (diametrul 2 cm).
Analiznd rezultatele obinute se obser c nainte de vaccinare animalele nu au avut anticorpi fa de cele trei componente antigenice testate, valorile obinute fiind egale cu limitele de admisibilitate stabilite de firma productoare. Dup vaccinarea Ia valorile rspunsului imun au depit limitele de admisibilitate pentru cele trei componente antigenice, valorile probelor medii exprimate n U.I/ml fiind prezentate n tabele 2, 3 i 4. Dup vaccinarea a II a (de rapel) valorile rspunsului imun postvaccinal au fost foarte semnificative, mediile geometrice fiind net superioare limitelor de admisibilitate pentru toate cele trei componente antigenice testate (tabele 2, 3 i 4).
811
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 2 Rezultatele examenelor serologice la vacile imunizate cu vaccinul ULTRACHOICE 8 (Clostridium perfringens tipul C) Limita de admisibilitate T1 Limita de admisibilitate T0 Limita de admisibilitate T2 10 U.I./ml 10 U.I./ml 10 U.I./ml
Proba comasat
Valoarea obinut T0
Valoarea obinut T1
784 776 735 813 547 543 515 506 1051 1074 1000 787 799 504 1080 801 986 606 717 514 508 749 650 741 643
V1
0,1 U.I./ml
<0,1 U.I./ml
3 U.I./ml
>6 U.I./ml
20 U.I./ml
V2
0,1 U.I./ml
<0,1 U.I./ml
3 U.I./ml
>6 U.I./ml
15 U.I./ml
V3
0,1 U.I./ml
<0,1 U.I./ml
3 U.I./ml
>6 U.I./ml
15 U.I./ml
V1+V2+V3= 16,5 U.I./ml (MG)
Intensitatea rspunsului imun postvaccinal este consecina utilizrii, n compoziia vaccinului, a unor tulpini bine selecionate, bune productoare de toxin, dar i a utilizrii unui adjuvant modern, care stimuleaz rspunsul imun postvaccinal (4, 5).
812
Valoarea obinut T2
Numr matricol
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 3 Rezultatele examenelor serologice la vacile imunizate cu vaccinul ULTRACHOICE 8 (Clostridium perfringens tipul D) Limita de admisibilitate T1 Limita de admisibilitate T0 Limita de admisibilitate T2
Proba comasat
Valoarea obinut T0
Valoarea obinut T1
784 776 735 813 547 543 515 506 1051 1074 1000 787 799 504 1080 801 986 606 717 514 508 749 650 741 643
V1
0,1 U.I./ml
<0,1 U.I./ml
0,5 U.I./ml
1 U.I./ml 2 U.I./ml
2 U.I./ml
V2
0,1 U.I./ml
<0,1 U.I./ml
0,5 U.I./ml
1 U.I./ml 2 U.I./ml
2 U.I./ml
V3
0,1 U.I./ml
<0,1 U.I./ml
0,5 U.I./ml
1 U.I./ml 2 U.I./ml
4 U.I./ml
V1+V2+V3= 2,51 U.I./ml (MG)
Rezultatele obinute n urma vaccinrii, dovedesc c vaccinul ULTRACHOICE 8 a indus un rspuns imun protectiv, cu titruri semnificative, mai ales dup vaccinarea de rapel, ceea ce recomand folosirea acestui vaccin n profilaxia unor clostridioze la bovine. La lotul martor, nefiind nregistrate titruri ale anticorpilor specifici, rezultatele nu au mai fost redate n tabele i comentate.
813
Valoarea obinut T2
Numr matricol
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 4 Rezultatele examenelor serologice la vacile imunizate cu vaccinul ULTRACHOICE 8 (Clostridium novyi) Limita de admisibilitate T1 Limita de admisibilitate T0 Limita de admisibilitate T2
Proba comasat
Valoarea obinut T0
Valoarea obinut T1
784 776 735 813 547 543 515 506 1051 1074 1000 787 799 504 1080 801 986 606 717 514 508 749 650 741 643
V1
0,01 U.I./ml
<0,01 U.I./ml
0,2 U.I./ml 3 U.I./ml 0,5 U.I./ml 6 U.I./ml
V2
0,01 U.I./ml
<0,01 U.I./ml
V3
0,01 U.I./ml
<0,01 U.I./ml
V1+V2+V3= 5,76 U.I./ml (MG)
CONCLUZII Vaccinul ULTRACHOICE 8 administrat la bovinele adulte sub forma a dou inoculri nu a produs reacii generale, iar reaciile locale (nodul i edem dur) s-au remis, n timp, dup fiecare inoculare; Vaccinul ULTRACHOICE 8 a indus un rspuns imun intens numai dup vaccinarea a doua (de rapel), diferena ntre mediile geometrice ale titrurilor anticorpilor i limitele de admisibilitate fiind semnificativ;
814
Valoarea obinut T2
Numr matricol
Rezultatele obinute n urma testrii clinice i de laborator recomand utilizarea vaccinului ULTRACHOICE 8 n imunoprofilaxia unor clostridioze la bovine.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Carter, G.R., Chengapa M.M., 1993 Microbial diseases, Ed. Iowa State University Press, Ames. Gherghariu S., Pop Al., Kadar L., Marina Spnu, 2000 Manual de laborator clinic veterinar, Ed. All Educational, Bucureti. Nascimento R.A.P., Lorato F.C.F., Abreu V.L.V., Martins N.E., Assia R.A., Carvalho Filho M.B., 2004 Evaluation of vaccines against Clostridium novyi type B, Brasiliero de Medicina Veterinaria e Zootehnia, 56, 1, 1-6. Radostis O.M., Gay C.C., Blood D.C., Hinchcliff K.W., 2000 Veterinary Medicine 9th edition, Ed. W.B. Saunders Company Ltd., London, New York, Philadelphia, San Francisco, St. Louis, Sydney. Secaiu V., 2001 - Boli produse de germeni din genul Clostridium, n: Boli infecioase ale animalelor - bacterioze, sub redacia Moga Mnzat Radu, pag. 481-611, Ed. Brumar, Timioara.
815
OBSERVAII PRIVIND ETIOLOGIA PARATIFOZELOR AVIARE

Doina Anca HRU, T. PERIANU T., Irina-Oana TNASE, C. PAVLI U.S.A.M.V. Iai Considering the increasing role played by domestic and wild birds in food poisoning in human, we started a study regarding etiology and prevalence of paratiphic infections in birds. 121 birds were necropsied, 43 from unit A and 61 from unit B. In unit A, 18 birds (43, 9%) been diagnosed positively, in comparison with unit B with 22 birds (36, 06%) diagnosed positively. The bacteriologic determinations performed from ovarian follicles, conducted to nine Salmonella enteritidis strains and three Salmonella typhimurium strains in comparison with liver determinations that revealed two Salmonella enteritidis strains and one salmonella typhimurium strain. Key words: Salmonella, food poisoning, ovarian follicles.
n trecut dintre animalele domestice, bovinele erau unul din cele mai importante rezervoare de infecie cu Salmonella enteritidis i Salmnonella typhimurium, n timp ce astzi, n toate rile evoluate (dezvoltate), paralel cu extinderea creterii industriale a psrilor, acestea au devenit principalele specii purttoare i eliminatoare. Totui, fenomenul nu se manifest stereotip nregistrndu-se i aspecte caracteristice de la o ar la alta i chiar de la o zon la alta. Dintre speciile de psri, o importan sanitar veterinar mai mare o au ginile i palmidele (raa i gsca), iar infeciile se pot grupa n dou categorii. n prima categorie se include infecia determinat de Salmonella pulorumgallinarum, care afectez n special ginile i curcile determinnd tifoza i puloroza. A doua categorie de infecie este produs de Salmonele mobile, denumite i paratifice. ntruct se observ o cretere a rolului psrilor domestice i slbatice, ca i a produselor acestora (ou i carne) in apariia imbolnvirilor, dar i a toxiinfeciilor alimentare la om, ne-am propus a investiga etiologia i prevalena (frecvena) infeciilor paratifice la psri. MATERIAL I METOD
Observaiile s-au efectuat n perioada 2003 - 2004, n dou uniti de creterea psrilor pentru ou de reproducie, unde la examenul necropsic sau nregistrat leziuni ce suspicionau o infecie salmonelic. De menionat c 816
psrile din cele dou uniti au dat n totalitate reacii negative la examenul serologic pentru tifopuloroz. Coninutul foliculilor ovarieni cu modificri evidente (pediculai, boselai i de culoare verzui-albstruie) a celor102 psri, s-a nsmnat n bulion, pe geloz nclinat sau n plci Petri i n mediul de mbogire (Kauffman-Muller).
REZULTATE I DISCUII S-au necropsiat un numr de 102 psri, din care 43 din unitatea A i 61 din unitatea B. Din unitatea A au fost diagnosticate cu leziuni de paratifoz 18 (43,9%) psri, iar din unitatea B 22 de psri, adic 36,06%, (tabel 1, fig. 1)
Tabelul 1 Rezultatul examenului necropsic Nr. crt. 1. 2. A B Total Unitatea Psri necropsiate 41 61 102 Leziuni de paratifoz Nr. 18 22 40 % 43,9% 36,06% 39,2%
70 60 50 40 30 20 10 0 P s ri n e c ro p s ia te N r. L e z iu n i d e p a ra tifo z A B
Fig. 1 Reprezentarea examenului necropsic
Leziunile anatomopatologice sunt redate n tabel 2 i fig. 2.
817
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 2 Leziunile anatomopatologice Leziuni macroscopice Nr. Nr. psri Unitatea crt. necropsiate Salpingite 1. A 2. B Total 41 61 102 Ficat mrit hipercolie Nr. % Nr. % Nr. % Nr. % Nr. % 6 14,65 14 36,58 7 14,87 6 14,42 8 19,84 9 14,75 16 26,95 15 23,88 11 18,03 10 16,39 15 14,70 30 29,70 22 21,56 17 16,66 18 17,38 Ovarite Peritonit vitelin Splenomegalie
35 30 25 20 15 10 5 0 S a lp in g ite O v a r ite P e rito n it v ite lin S p le n o m e g a lie F ic a t m rit h ip e rc o lie n r. %
Fig. 2 Leziunile anatomopatologice
S-au observat un nr. de 15 (14,70%) leziuni de salpingit, 30 (29,70%) leziuni de ovarit, 22 (21,56%) leziuni de peritonit vitelin, 17 (16,66%) cazuri de splenomegalie i 18(17,38%) cadavre cu ficat mrit. Pentru izolarea tulpinilor de salmonela i confirmarea suspiciuniide infecie paratific, nsmnrile pentru examenul bacteriologic s-au efectuat din foliculii ovarieni modificai i din ficat. n acest scop s-au folosit medii de cultur obinuite (geloz i bulion), medii de mbogire (Kauffman-Mler) i medii selective (Wilson-Blair). Coloniile de pe mediile selective cu aspect asemntor celor de salmonela au fost examinate n ceea ce privete aglutinabilitatea cu ser antisalmonelic polivalent O (A, B, C, D, D ). Cele pozitive au fost transplantate pe geloz nclinat i cercetate cu privire la aspectul cultural, aglutinabilitatea cu ser de grup, mobilitatea i caracterele biochimice. Pe geloza nclinat unele tulpini s-au dezvoltat sub form de colonii mari, rotunde, cu marginile netede asemntoare celor de colibacili, iar altele sub form
818
de colonii mici asemntoare celor de pasteurela. Toate tulpinile izolate au fost mobile. Rezultatele examenului bacteriologic sunt redate n tabel 3 i fig. 3.
Tabelul 3 Rezultatele examenului bacteriologic Nr. Salmonella Salmonella Esch. Germeni Proteus tulpini enteritidis typhimurium coli coliformi v. izolate Nr. % Nr. % Nr. % Nr. % Nr. % Nr: % 21 52,5 9 42,85 3 14,29 4 19,05 4 19,05 2 9,52 22 55,0 2 9,07 1 4,58 8 4,58 8 36,36 4 18,18
Nr. Organ probe Ovar Ficat 40 40
25 20 15 10 5 0
Nr. tulpini izolate Salmonella enteritidis Salmonella typhimurium Esch.coli Germeni coliformi Proteus v.
numar
ovar ficat
Fig. 3 - Rezultatele examenului bacteriologic
Din rezultatele obinute se constat c germenii izolai din ficat i din ovar difer ca pondere.Astfel nsmnrile din foliculii ovarieni au dus la izolarea a 9 (42,85%) tulpini de Salmonela enteritidis i a 3 (14,29%) tulpini de Salmonela typhimurium, n timp ce din ficat s-au izolat numai 2 (9,07%) tulpini de Salmonela enteritidis i 1 (4,58%) tulpini de Salmonela typhimurium. n schimb n ficat au predominat ali germeni Gram negativi cum sunt Escherichia coli 8 (36,36%) tulpini,germeni coliformi 7 (31,81%) tulpini i 4 (18,18%) Proteus vulgaris. De menionat c de la 3 psri din ovar s-au izolat att Salmonela enteritidis ct i Escherichia coli. Datele din literatura de specialitate redau c n Romnia, incidena infeciilor cu salmonele mobile la psri investigat ntr-un centru de selecie i hibridare a raselor grele i unul de hibridare al raselor uoare a fost: Salmonella enteritidis 50,8% , Salmonella typhimurium 30,4%, Salmonella gallinarum 5,8%, Salmonella heidelberg 2,4% , Salmonella agona 2,10% , Salmonella derby 2,9% , Salmonella haifa 2,4% , Salmonella newport 2,4%.
819
Rezultatele obinute evideniaz faptul c din foliculii ovarieni modificai se pot izola salmonele mobile,n special Salmonela enteritidis i Salmonela typhimurium. Aceste date sunt asemntoare cu cele obinute de Robert Davies i col.2oo3 care arat c salmonelele mobile se pot izola din foliculii ovarieni dar nu se cunoate dac acestea se pot transmite la patogeni i ce rol epidemiologic joac n difuziunea infeciei. CONCLUZII Investigaiile efectuate au dus la desprinderea urmtoarelor concluzii: 1. Examenul necropsic a 102 psri a evideniat leziuni de paratifoz n 39,20% cazuri. 2. Leziunile evideniate au fost de salpingit (14,70%), ovarit (21,56%), peritonit vitelin (16,66%) i spenomegalie (17,38%). 3. nsmnrile efectuate din ficat i ovar pe medii de cultur, au dus la izolare din foliculii ovarieni a 9(42,85%) tulpini de Salmonela enteritidis i 3 (14,29%) tulpini de Salmonela typhimurium, iar din ficat a 2 (9,07%) tulpini de Salmonela enteritidis i 1 (4,58%) tulpini de Salmonela typhimurium.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Carp-Crare M., Guguianu Eleonora, Timofte Dorina, 1997 Lucrri practice de Microbiologie veterinar Uz intern, Universitatea Agronomic i de Medicin Veterinar Ion Ionescu de la Brad Iai. Cooper & Gerard I., 1994 Salmonellosis infections in man end the chicken pathogenesis and the development of live vaccines a review Veter. Bull. Vol.64, no.2,123-135. Davies R., Liebane E., Breslin M., 2003 - Investigation of the distribution and control of Salmonella enterica serovar Enteritidis PT6 in layer breeding and egg production. Avian Pathology (June 2003) 32(3),227-237. Gast R.K., Holt P.S., 1998 - Persistence of Salmonella enteritidis from one day of age until maturity in experimentaly infected layer chickens.-Poultry Science, 77 m1 759-1762. Keller L.H., Schifferli D.M. ,Benson C.E. , Aslam S., Eckroade R.J., 1997 Invasion of chicken reproductive tissues and forming eggs is not unioue to Salmonella enteritidis. Avian Diseases , 41, 535-539. Mnzat Moga R., 2001 - Bolile infecioase ale animalelor bacterioze Ed. Brumer, Timioara. Perianu T. (coordonator), 2003 - Bolile infecioase ale animalelor domestice. Bacterioze. Vol l, Ed. Venus, Iai.
820
DETERMINAREA PATOGENITII SPECIILOR BACTERIENE IMPLICATE N PATOLOGIA INFECIOAS DE INCUBAIE

EGGS INCUBATION PATHOLOGY AND PATHOGENICITY OF THE BACTERIA ISOLATED
Emilia CIOCRLAN, T. PERIANU, Irina-Oana TNASE, C. PAVLI U.S.A.M.V. Iai The isolated germs were tested regarding pathogenicity in vivo and in vitro. Tests were conducted on mousses using 0, 1-0,4ml intraperitoneal inoculation. The isolated and analyzed strains proved to be pathogen inducing death to test animals in eighteen twenty-four hours.
Unele indicii privind patogenitatea bacteriilor pot fi obinute in vitro pe baza testelor biochimice, n cazul cnd unele activiti enzimatice sunt corelate cu intervenia lor ca factori de agresivitate. Aa este cazul testului de hemoliz, de coagulare a plasmei citrate la stafilococi etc. Tehnicile in vitro dau ns indicaii mult mai precise asupra patogenitii germenilor. MATERIAL I METOD
Patogenitatea in vitro s- a analizat pe baza caracterelor biochimice. La Staphylococus aureus s-a studiat activitatea hemolitic pe geloz cu 5% snge de oaie defibrinat. Activitatea cuagulazic s-a efectuat n tub care evideniaz coagularea liber. Activitatea fosfotazic s-a studiat pe medii care conin fenolftalein difosfat. Patogenitatea in vivo a fost cercetat prin inoculri la animale de laborator, pe oarece fiind executate inoculri cu doze subletale, n puncte separate, pe cale subcutan.
REZULTATE I DISCUII Hemolizina a produs o zon de hemoliz total, iar hemolizina o zon de hemoliz parial, dar care s-a identificat devenind total n situaia cnd culturile au fost trecute de la 37oC la 4oC.
821
Activitatea cuagulazic s-a determinat amestecnd 0,9 ml suspensie de germeni cu 0,1 ml plasm recoltat EDTA. S- a incubat amestecului la 37oC i s-a urmrit formarea coagului n interval de 30 minute 3 ore. S-a mai recurs la testul de aglutinare pe lam, mai rapid obinndu-se apariia coagului n 10 secunde i mai economic, suspensia de germeni se amestec cu o pictur de plasm. Mediile care conin fenolftalein difosfat sunt descompuse de fosfataz cu eliberare de fenolftalein a crei prezen s-a pus n eviden prin adugarea la cultur a 0,5 ml soluie aminoantipirin (6%) i soluie 2,4% de ferocianur de potasiu. Culoarea rou intens a indicat activitatea fosfatazic. Caracteristicile biochimice ale genurilor familiei Enterobacteriaceae studiate sunt prezentate n tabel 1.
Tabelul 1 Caracterele biochimice difereniale ntre principalele genuri ale familiei Enterobacteriaceae Escherichia + + + + d d + + d + d + + d + Salmonella + d d d d d + d d + + d + d d + Proteus + d d + d + + d + + d + + d d + d
Mobilitate Indol H2S Ureaz Citrat Malonat Mucat KCN Fenilalanindeaminaza Lizindecarbozilaza Omitindecarboxilaza Argininhihrolaza Lichefierea gelatinei Rou metil Voges-Proskauer D-Glucoza fr gaz D-Glucoza cu gaz Lactoza Betagalactozidaza Zaharoza Maltoza Trehaloza Dulcitol D-manitol D-adonitol
Patogenitatea in vivo a fost studiat pe oarecii de laborator, dozele inoculate fiind reprezentate n tabelul 2.
822
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 2 Dozele germenilor inoculai Specia Proteus Cantitate cultur inoculat ml 0,1 Cantitate cultur inoculat ml 0,2 Cantitate cultur inoculat ml 0,3 Staphylococus 0,4 0,3 0,2 Escherichia 0,1 0,2 0,3 Salmonella 0,2 0,3 0,4
oarecii inoculai au fost omori n 18 24 ore, timp sensibil mai redus dect al loturilor martori, inoculate de asemenea cu doze subletale, la care moartea s-a produs n 7 pn la 13 zile. La nivelul locului de inoculare s-a constat prezena unui edem mai mult sau mai puin ntins. De la oarecii inoculai s-au reizolat n toate cazurile tulpinile cu care s-a efectuat infecia experimental. oarecii inoculai au fost omori n 14-20 ore, timp sensibil mai redus dect al loturilor martori, inoculate de asemenea cu doze subletale, la care moartea s-a produs n 5 pn la 12 zile. La nivelul locului de inoculare cu Proteus s-a constat prezena unui edem mai mult sau mai puin ntins. De la oarecii inoculai s-au reizolat n toate cazurile tulpinile cu care s-a efectuat infecia experimental. CONCLUZII Investigaiile au dus la sintetizarea urmtoarelor concluzii: 1. Infecia experimental pe oarece prin asocierea tulpinilor Proteus vulgaris Escherichia coli n doze subletale, indic potenarea reciproc a acestora.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Brzoi D., Meica S., Negu M., 1999 Toxiinfeciile alimentare. Editura Diacon Coresi, Bucureti. Bergdoll M.S., 1998 Staphylococcus aureus in: Foodborne Bacterial Pathogenes. Ed. By M.P.Doyle (Marcel Dekker Inc., New York, Basel). Cooper &Gerard I., 1994 Salmonellosis infections in man end the chicken pathogenesis and the development of live vaccines a review Veter. Bull. Vol.64, no.2,123-135. Carp Crare M., Guguianu Eleonora, Timofte Dorina, 1997 Lucrri practice de microbiologie veterinar. U.S.A.M.V. Iai. Davies R., Liebane E., Breslin M., 2003 - Investigation of the distribution and control of Salmonella enterica serovar Enteritidis PT6 in layer breeding and egg production. Avian Pathology (June 2003) 32(3),227-237. Mnzat Moga R., 2001 -Bolile infecioase ale animalelor bacterioze Ed. Brumer, Timioara. Perianu T., (coordonator), (2003) - Bolile infecioase ale animalelor domestice. Bacterioze. Vol l, Ed. Venus, Iai.
823
CTEVA ASPECTE VIRUSOLOGICE N GRIPA AVIAR

SOME VIRUSOLOGICAL ASPECTS IN BIRD FLU
Elena IAN, tefania MERTICARIU, Iulia FLORITEAN, Eugenia BURTAN L.S.V.S. Iai The name of bird flu or avian influenza includes several pathological states, produced by various flu virus sub-types. The flu virus forms part of the Influenzavirus group, A type (species). The A flu virus infects both human beings and some animals (such as horses, pigs, birds) and is responsible for the emergence of the pandemics and extended epidemics. All fowl and wild birds are considered to be predisposed to bird flu infection. Birds of passage (wild ducks especially) are the natural cause for bird flu, these birds being at the same time the most resistant to this infection. The outbursts of the most pathogenic forms up to now have been caused by the A-type flu virus (the H5 and H7 sub-types). The H5N1 flu represents a threat for the public health, due to the emergence of the bird flu cases in human beings and the danger of occurring a new pandemic. Currently, efforts are being made to eliminate the virus reservoir, to monitor the flu virus isolates, to implement new efficient measures that will considerably limit the virus transmission to human beings, and to develop an efficient vaccine against the avian H5N1 strains. A number of tests were made in the county of Iasi, and the laboratory exams for the diagnosis of the bird flu were made using 3 diagnosis methods: 874 tests made using the immunochromatographic test or the rapid immunomigration on cloak pads, 1480 tests were made using the ELISA test on serum samples from birds and 1109 tests, using the PCR test on cloak pads and trachea pads and the organic tests, which made us conclude that the county of Iasi is free of this horrible disease. From a total of 3463 laboratory exams, a dead turkey hen, originating from Belcesti, proved to be positive both to tic and PCR.
Key words: H5N1 avian flu virus, pandemic, monitoring, prevention, Iasi, immunochromatographic kit, PCR.
Denumirea de grip sau influen aviar include mai multe stri patologice, produse de ctre diverse subtipuri ale virusurilor gripale. Cea mai cunoscut form de grip aviar este cea numit pest aviar clasic, care nu a mai aprut n ara noastr din anul 1941. n ultimii ani etiologia gripei a fost intens studiat i este bine cunoscut, constituind un model de adaptare a virusului la diferite gazde, cu consecine importante sub aspect epidemiologic. Virusul gripal este ncadrat n grupul Influenzavirus, tipul (specia) A. Virusul gripal A infecteaz att omul ct i
824
unele animale (calul, porcul, psrile) i este responsabil de apariia pandemiilor i a epidemiilor extinse. Acesta are dimensiunea de aproximativ 80-120 nanometri i prezint n zona central un filament de ARN. Este un virus relativ mare i conine 8 bucle de ARN, ce faciliteaz reasortarea (deci modificarea structural a urmtoarelor generatii de virioni), atunci cnd aceeai celul este infectat n acelai timp cu dou virusuri gripale. nveliul extern al particulei virale - numit pericapsid, este de natur lipoproteic i prezint pe suprafa dou tipuri de spiculi, alctuii din hemaglutinin (H) i neuraminidaz (N). Hemaglutinina (H) joac un rol important n adsorbia virusurilor pe suprafaa celulei - gazd i n realizarea infeciei virale, iar neuraminidaza (N) este o enzim care determin eliberarea virusului din celule i confer capacitatea de a se rspndi repede. Sub aspect epidemiologic, virusurile gripale (de tip A) sunt submprite n subtipuri pe baza caracteristicilor antigenice ale glicoproteinelor de suprafa (H i N). Se cunoate existena a 16 subtipuri distincte dup hemaglutinin (H) i 9 subtipuri dup neuraminidaz (N). Aceste antigene sunt supuse variaiei. Subtipurile se caracterizeaz fiecare printr-o formul antigenic proprie, care reflect asemnrile i deosebirile dintre diferitele tulpini. Gripa aviar, o boal infecioas a psrilor cauzat de mutaia de tip A a virusului gripal a fost descoperit n urm cu mai mult de 100 de ani n Italia, de atunci rspndindu-se n ntreaga lume. Toate psrile domestice i slbatice, sunt considerate predispuse la infecie cu gripa aviar (palmipedele, gina, curca, mai rar fazanul, punul, bibilica, sunt mai sensibile psrile adulte dect puii), dei unele specii sunt mai rezistente la infecie dect altele. (Doar un amunit izolat viral poate produce o boal sever la galinacee, fr ca alte specii de pasri s fie afectate clinic). Psrile migratoare (raele slbatice, n mod special) sunt sursa natural de grip aviar, aceste psri fiind de asemenea cele mai rezistente la infecie. Psrile domestice n schimb, inclusiv ginile i curciile sunt deosebit de predispuse la epidemiile de grip fatale. Evoluia la palmipede poate fi mai puin sever, iar n cazul raelor n multe cazuri chiar inaparent, dar acestea rmn purttoare i excretoare de virus. Infecia a fost descris la foarte multe specii de psri slbatice, mai frecvent la cele acvatice, cu un procent de mortalitate foarte variabil (0-90%). Infecia a fost descris i la multe specii de mamifere, la care s-au observat forme severe de boal, de exemplu la pisici slbatice i domestice, porc i anima1e n captivitate, (tigri, leopard, nevstuic, maimu,) reuindu-se chiar infecie experimental pe pisici domestice, iepuri albi neozeelandezi i obolan. Omul face de asemenea forme foarte severe de boal cu procent mare de mortalitate, consecutiv contactului nemijlocit cu psri bolnave sau moarte. Izbucnirile formelor foarte patogenice pn acum au fost cauzate de virusul gripal de tip A (subtipurile H5 si H7).
825
Prima infecie cu un virus de grip aviar nregistrat la om a aprut n Hong Kong n 1997, cnd tulpina de tip H5N1 a cauzat boli respiratorii acute la 18 persoane, dintre care 6 au murit. Infecia la oameni a coincis cu o epidemie de gripa aviar, cauzat de aceeai tulpin, la populaia de psri domestice din Hong Kong. Cea mai grava pandemie de gripa nregistrat n istorie a avut loc n 1918 i a ucis 40 de milioane de oameni. n continuare vom prezenta unele caracteristicii privind semnele clinice ale acestei bolii devastatoare. Perioada de incubaie este obinuit de 3-7 zile, fiind dependent de patogenitatea inocului de virus, de doza de inocul, de specie i de vrsta psrilor. Boala evolueaz n mod normal supraacut, cu moarte subit a psrilor afectate n 24 sau 48 ore, n unele cazuri poate evolua acut, cu o durat de cel mult o sptmn. Manifestrile clinice sunt urmarea tulburrilor circulatorii, respiratorii digestive, reproductive i a sistemului nervos: moarte subit fr manifestri clinice; adinamie i depresie puternic asociat cu horiplumaie; inapeten, asociat adesea cu sete excesiv; scderea dramatic a produciei de ou, ntlnindu-se adesea ou cu coaja moale sau cu defecte de structurare i de form a cojii; edemele crestei, brbielor i a zonei perioculare. Uneori edemul capului este extins i n zona gtului mai frecvent la ginile adulte; crestele sunt adesea cianotice la vrf i pot avea mici vezicule cu plasm sau chiar snge pe suprafa uneori asociate cu hemoragii echimotice sau focare de necroz; colorare purpurie sau cianotic a crestei, brbielor i uneori a picioarelor; mucoasa conjunctiv este congestionat sau edemaiat; pe pielea solzoas a picioarelor, se pot ntlni hemoragii difuze; diareea iniial apoas, verzuie poate deveni pe parcursul bolii aproape n totalitate alb; manifestrile respiratorii, constnd din jetaj i acumulri de mucoziti adesea sanguinolente, dispnee i respiraie zgomotoas, pot fi de asemenea un semnal timpuriu al bolii; manifestrile nervoase constau n torticolis, ataxie i lips de coordonare a micrilor. Modificrile anatomopatologice constatate la psrile moarte n urma unor forme supraacute de boala i psrile tinere nu sunt reprezentate de leziuni importante, doar congestia sever a musculaturii i deshidratare. Evoluiile mai lungi sau n cazul ginilor adulte determin urmtorul tablou lezional: edeme subcutanate ale capului i gtului; vasele de snge sunt puternic ngroate; acumulri de lichide n nri i cavitatea bucal; mucoasa conjunctival congestionat; coninut abundent de exsudat n trahee sau traheit hemoragic; hemoragii peteiale pe suprafaa grsimii abdominale i a seroaselor, n masa musculaturii pectorale, pe suprafaa cordului, n proventricul, pe mucoasa i seroasa intestinului;
826
rinichii puternic congestionai; ovare hemoragice sau degenerate, n cavitatea peritoneal se pot gsi pseudoconcremente de ou. MATERIAL I METOD
Studiul a fost realizat pe un numr de 539 probe recoltate de la psri n perioada noiembrie decembrie 2005, dup cum urmez:
Tabelul 1 Nr. Crt. 1 2 3 Specificaie probe Tampoane Seruri cloacale 38 401 4 91 5 47 492
Specia Galinacee Palmipede Psri slbatice Total
Iar n perioada 01.01. 25.05.2006, cercetrile au fost efectuate pe un numr total de 2 922 probe, astfel:
Tabelul 2 Nr. crt. 1 2 3 4 Galinacee Palmipede Psri slbatice Psri vii - galinacee i palmipede TOTAL Specificaie probe Tampoane Seruri cloacale 219 188 13 800 107 345 141 825 988
Specia
Din totalul de 3 463 teste de laborator efectuate, 1 109 probe (organe i tampoane cloacale) sunt reprezentate de analize efectuate prin reacia polimerazei n lan (PCR). Ca metode de lucru au fost utilizate: examenele clinice pe psrii vii, examen necropsic (leziunile ntlnite la psri cu influen nu pot fi difereniate de leziunile ce se gsesc n forma velogenic viscerotrop a bolii de Newcastle); efectuarea testelor rapide pentru detecie de antigen al virusului influenei aviare pe probele de tampoane cloacale i teste ELISA pe probe de ser. Ca teste rapide de detecie a antigenului virusului influenei aviare din tampoane cloacale sau fecale s-a utilizat: - kitulul imunocromatografic Anigen Rapid AIV Ag Test Kit i a variantei acestuia H5 AIV Ag Test Kit, produse de Animal Genetics Inc. din Corea, care are ca principiu: detecia calitativ a antigenului viral al influenei A, sau a antigenului viral al influenei A tipul H5. n dispozitivul nchis de testare (cuv) exist 2 litere 827
"T" i "C" n dreptul crora vor deveni vizibile dup efectuarea testului linii purpuriu-grena. Aceste linii nu exist iniial i definesc validarea testului (n dreptul literei C) indiferent dac proba este pozitiv sau negativ i prob pozitiv (atunci cnd apare n dreptul literei T). Testul utilizeaz un panel de anticorpi selectat n scopul deteciei virusului IA. - Trusa Flu DetectTMTest Strip este un test in-vitro de imunomigrare rapid de detecie calitativ a virusului influenei tip A n tampoanele traheale i cloacale de pasre. Acest test detecteaz cele 15 subtipuri ale virusului influenei tip A. Testul utilizeaz doi anticorpi specifici virusului influenei tip A (un anticorp antiinfluena A leag antoigenul present n prob i un al doilea anticorp de captur pentru acest complex atg-atc.). Iar pe probele de seruri de pasre s-au efectuat teste ELISA: - Detecia rapid de anticorpi ai influenei aviare, pe seruri de la gini i curci vii, prin indirect ELISA (kitulul "FlockChek", produs de firma IDEXX Laboratories din SUA. Testul msoar nivelul relativ al anticorpilor produi ca urmare a contactului nemijlocit cu virus al influenei aviare. Pe microplcile cptuite cu antigen viral sunt repartizate i incubate seruri. n cazul serurilor pozitive, anticorpii: anti virus a'l influenei aviare, vor forma imunocomplexe cu antigenul de cptuire a micrciplcii, aceste complexe fiind ulterior vizualizate dup legarea cu un conjugat anti IgG de gin i curc, marcat cu peroxidaz, prin adugarea unui substrat TMB, ce va produce n prezena peroxidazei o culoare albastr cu intensitate dependent de nivelul relativ al anticorpilor anti virus al influenei aviare existent n probe. - Detecia rapid de anticorpi ai influenei aviare, pe seruri de palmipede, prin ELISA competitive.
REZULTATE I DISCUII n urma efecturii examenelor de laborator n direcia diagnosticrii gripei aviare pe un numr de 3463 de probe, prin cele 3 metode de diagnostic: - Testul imunocromatografic rapid (t.i.c.) sau imunomigrare rapid pe tampoane cloacale (874 probe) recoltate de la psri vii i cadavre; - Testul ELISA pe probe de ser provenite de la pasri vii (1480 probe); - Reacia polimerazei n lan (PCR) efectuat pe tampoane cloacale i traheale i probe organe, recoltate de cadavre de psri domestice i slbatice. Recoltarea probelor de seruri i a tampoanelor cloacale de la pasri vii, a vizat n special localitile int, n numr de 32 la nivelul judeului Iai, stabilite pe baza riscului pe care l-au prezentat prin existena suprafeelor de luciu de ap i a psrilor slbatice. Au fost monitorizate toate localitile int prin t.i.c., frecvena probelor recoltate a respectat prevederile Ord. 148/2006, de 20 tampoane/localitate int. De asemenea, au fost efectuate t.i.c. la toate cadavrele de psri sosite la nivelul laboratorului. Teste ELISA s-au efectuat pe probe de ser recoltate de la psri domestice vii, conform prevederilor legale.
828
Au fost efectuate analize PCR la cadavrele de psri domestice i slbatice sosite la nivelul laboratorului sanitar veterinar i care indicau unele modificri morfopatologice similare celor care se ntlnesc n gripa aviar. Rezultatele obinute au condus la concluzia c n judeul Iai s-au luat msuri eficiente de supraveghere a teritoriului pentru aceast epidemie. n urma efecturii testului imunocromatografic pe cele 874 probe de tampoane cloacale recoltate de la: 602 galinacee, 158 palmipede i 112 psri slbatice, rezultatul testelor a fost negativ. Rezultatul unui test rapid imunocromatografic efectuat pe tampoane cloacale, pentru detecia de antigen viral al virusului influenei aviare tip A, a fost pozitiv (Fig. 1). Acest test pozitiv a reprezentat un cadavru de curc care provenea din GP, localitatea Belceti. Investigaiile au fost continuate cu efectuarea de teste PCR, att pe tampoane cloacale, traheale, ct i din organele interne i creierul recoltate de la cadavrul de curc suspect de A150. Rezultatele obinute au fost pozitive, motiv pentru care s-au expediat probe de tampoane cloacale, traheale i omogenate de organe la IDSA Bucureti pentru confirmare. n localitatea Belceti s-au efectuat teste rapide la toate gospodriile nvecinate i prin sondaj la ntreg teritoriul comunei Belceti, dar nu s-a mai obinut nici o reacie pozitiv, prin testul rapid imunocromatografic. La nivelul laboratorului, din totalul de 825 de tampoane cloacale la care sau efectuat t.i.c., doar 3 probe (1 tampon cloacal recoltat de la o gin, 1 tampon cloacal recoltat de la o turturic i un 1 tampon cloacal recoltat de la un porumbel viu) au reacionat FALS pozitiv, la testul imunocromatografic de grup (acesta poate detecta antigenul tuturor virusurilor influenei aviare de tip A de joas sau nalt patogenitate, si nu a subtipului H5), ns la testul imunocromatografic de tip au reacionat negativ.
Fig. 1. Test imunocromatografic cu reacie pozitiv. (curc, Belceti)
829
Testul imunocromatografic de grup (fig. 2.) presupune urmtoarea procedura de testare:
Fig.2. Test imunocromatografic
- se preleveaz un tampon cloacal; - fig.3
Fig. 3. Prelevarea probei de tampon cloacal
- se introduce tamponul n tubul cu diluant; - fig.4 - se mixeaz tamponul n diluant pn la dizolvarea coninutului; se las puin pentru sedimentarea particulelor grosiere; - se dezambaleaz cuva de lucru i se pune pe un suport plan i uscat; - se extrage cu pipeta picurtor coninut de suprafa din tubul de diluie a probei; se pun 4-5 picturi (nu mai mult), n orificiul pentru prob a cuvei de lucru; - fig 5 - se observ culoarea roie care migreaz de-a lungul ferestrei centrale a cuvei de lucru; fig 6.
830
Fig. 4. Introducerea tamponului cloacal n tubul cu diluant
Fig. 5. Extragerea cu pipeta picurtor din tubul de diluie a probei, a coninutului de la suprafa
Fig. 6. Observarea culoarei roii care migreaz de-a lungul ferestrei centrale a cuvei de lucru
Fig. 7. Prezenta unei singure benzi roii indic un rezultat negativ i valideaz funcionarea testului
Interpretarea rezultatelor se face n 20-30 de minute i se face astfel: - n partea dreapt a ferestrei de citire a rezultatelor va apare o band roie ce indic funcionarea corespunztoare a testului; - prezenta unei singure benzi roii indic un rezultat negativ; fig. 7 - prezena a dou benzi colorate n fereastra de citire (nu are important care apare prima) indic un rezultat pozitiv; - absenta oricrei linii colorate n fereastra de citire, indic test invalid, fiind recomandat a se retesta aceiasi prob. Iar n urma analizrii celor 1480 de probe ser de pasre (589 seruri provenite de la galinacee i 891 seruri de palmipede) prin testul Elisa pentru detecia de anticorpi, au fost obinute rezultate negative. Prin efectuarea celor 1109 probe reprezentate de tampoane cloacale, traheale i probe organe prin metoda PCR s-au obinut rezultate negative, cu excepia un singur caz (un cadavru de curc) provenit din localitatea Belceti, la care rezultatul testului PCR a fost pozitiv.
831
Din extrasele de organe i tampoanele cloacale i traheale expediate la IDSA Bucureti, s-a efectuat testul PCR, al crui rezultat a fost tot pozitiv, pe baza acestuia a fost emis notificarea de suspiciune pentru gripa aviar pentru judeul Iai. Notificarea suspiciunii s-a efectuat pe baza rezultatelor de laborator coroborate cu datele furnizate de ancheta epidemiologic. Confirmarea bolii se face numai prin izolare de virus, de ctre IDSA Bucureti, Laboratorul Naional de Referin pentru grip aviar. n curtea suspect identificat cu reacie pozitiv pentru A150, s-a stabilit un complex de msuri privind prevenirea difuzrii bolii i combaterea acesteia. Toate psrile psrile din gospodria infectat i zona stabilit de Comandamentul Antiepizootic Judeean au fost eutanasiate. CONCLUZII n complexul de msuri stabilite pentru supravegherea teritoriului judeului Iai, n direcia gripei aviare, un loc important a fost reprezentat de examenele de laborator. S-au efectuat teste rapide imunocromatografice pe 874 probe de tampoane cloacale recoltate de la psri domestice i slbatice vii i cadavre ale acestora. Teste ELISA au fost efectuate pe 1 480 probe de ser de la psri domestice i slbatice vii S-au efectuat teste rapide imunocromatografice de grup pentru influena aviar tip A, pe ntreg teritoriu al judeului Iai, pentru monitorizarea virusurilor gripale la psrile domestice i slbatice vii i de la cadavrele acestora. Detecia timpurie a atigenului viral specific prin t.i.c. s-a continuat cu efectuarea de teste imunocromatografice rapide de tip H5 i cu teste PCR. Reacia polimerazei n lan s-a efectuat pe probe de tampoane cloacale i traheale, precum i la probele de organe interne i creier provenite de la aproape toate cadavrele psrilor domestice i slbatice expediate la laborator. Reacia polimerazei n lan a fost efectuat pe 1 109 probe de tampoane cloacale i traheale i organe recoltate de la cadavre de psri. S-a identificat un caz pozitiv att la teste imunocromatografice de grup i tip, ct i la testul PCR, pe probele recoltate de la un cadavru de curc, provenit de la gospodriile populaiei, din comuna Belceti. n judeul Iai s-au luat msuri concrete i eficiente de prevenire a unei epidemii de mare difuzibilitate, de tipul gripei aviare. Raportarea i investigarea focarelor de grip aviar are ca scop protejarea populaiei umane.
BIBLIOGRAFIE
1. Cernescu C., Ru S., 2004 - Progrese n controlul i prevenirea virozelor cu potenial bioterorist. Gripa aviar, Editura Universitar Carol Davila Bucureti, 157-167.
832
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Chen H., Smith G.J.D., 2005 - H5N1 virus outbreak in migratory waterfow, Nature, 436, 191. Li K. S., Guan Y., Wang I., et al., 2004 - Genesis of highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in Eastern Asia, Nature, 430, 209-313. Olaru E., 2006 - Instruciunile pentru recunoaterea cazurilor de influen aviar i diferenierea lor de alte afeciuni ale psrilor, IDSA, nota de serviciu nr. 818/13.02.2006. Perianu T., 1997 - Bolile Infecioase ale animalelor. Viroze. vol. II, Ed. Fundaiei Chemarea, Iai, 203-208. Rpuntean Gh., Boldizar E., 2002 Virusologie special veterinar, Editura AcademicPres, Cluj-Napoca, 153-155. Vasiu C., 2003 - Viroze i bolile prionice la animale, Editura Nereamia Napocae Cluj Napoca, 435-439. http://www.who.int/csr/don/2004_01_22/en/, Avian influenza H5N1 infection in humans: urgent need to eliminate the animal reservoir, Jan. 2004, WHO. http://www.who.int/csr/don/2005_08_18/en/index.html, Geographical spread of H5N1 avian influenza in birds, Aug. 2005, WHO. http://www.who.int/csr/don/2005_05_19/en/, Avian Influenza-cumulative number of cases, May 2005, WHO.
833
EPIDEMIOLOGICAL SCREENING OVER THE MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE WEARERS IN TWO SWINE BREEDING UNITS
Cristina REBEGEA, M. CARP-CRARE, C. CARP-CRARE U.S.A.M.V. Iai C. ANTON, D. FODOR PHIZER ROMANIA SRL Enzootic pneumoniae or mycoplasmal pneumonia of swine (MPS), a chronic disease with a high morbidity and a low mortality, is caused by M. hyopneumoniae. The clinical signs include a chronic nonproductive cough, retarded growth, slow onset and spread and repeated occurence of the disease. The DakoCytomation M. hyopneumoniae ELISA allows rapid screening for the presence of antibodies to M. hyopneumoniae, which can be an indicator of exposure to the agent. Monitoring the immune status of a herd with regard to M. hyopneumoniae can play an important role in the control of this disease. It were tested 90 animals, four to five months old, from two breeding units and the results showed a grately high incidence of the antibodies in the analised serum samples (46,6%). From the first unit with imported swine, the number of positive samples was 17 (37,7%) and from the second unit with native swine the number of positive samples was 25 (55,5%). The presence of the M. hyopneumoniae specific antibodies in unvaccinated animals shows a subclinical infection or the wearer status.
Key words: ELISA, Mycoplasma hyopneumoniae, antibodies, enzootic pneumonia
M. hyopneumoniae produces swine enzootic pneumonia, a chronical respiratory disease who afectes swines, characterized through dry cough, a mortality rate decrease, but a very high morbidity percent. This malady major effects consist in economical losses owened to daily weight decrease, food conversion rate reduction, increasing of time periode till the slaughter weight is reached, the tratament costs. There isnt a susceptibility of age for the infection with M. hyopneumoniae, piglets and adults being equaly affected. Piglets infect itselves through mothers respiratory secretions after 4 - 6 weeks of age, during firsts weeks being protected by the maternal antibodies. (Kobisch i Friis, 1996). M. hyopneumoniae acts as a primary pathogen agent, but it can act sinergically with other infectious agents causing a hard pneumonia, as in swine respiratory complex case where it acts together with Porcine Respiratory and
834
Reproductive Syndrome (PRSS), Pasteurella multocida, Streptococcus suis and Actinobacillus pleuropneumoniae. For the M. hyopneumoniae antibodies detection in swine serum it was developed ELISA blocking (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) using monoclonal antibodies. The monoclonal antibody (mAb) reacts with a conserved epitip of the M. hyopneumoniae 74 kDa proteine. Only the antibodies from M. hyopneumoniae infected porcine serum are capable of bloching the mAb binding, even though M. flocculare antibodies likewise recognize a 74 kDa molecule. ELISA blocking seems to be a helpful method for surveillance and serodiagnostic of porcine M. hyopneumoniae infections. (Feld NC i col., 1992) ELISA sensibility was estimated to 98-100% and specificity to 93-100%.
(Sorensen V, 1999) MATERIAL AND METHOD There were analized 90 serum samples from porcine 4-5 months old in two breeding units. From each animal were taken 10 ml blood punctioning the jugular confluent, in vacutainers without anticoagulant. The blood samples were maintained to room temperature for 1 hour and after that the coagul was detached from the tubes walls with a metalic shaft and the samples were introduced in the refrigerator (+40C, 24h) for the complete serum expression. The serum samples were transfered in sterile Eppendorf tubes. For ELISA it was used DakoCytomation kit (wich contains Microtitration Plate, White Streeps, Sealing Tapes, Sample Diluent, Positive Control Serum, Negative Control Serum, Conjugate, Wash Buffer Concentrate, Substrate, Stop Solution), ELISA NUNC Washer and ELISA Rosys Athos 2010 Reader. Porcine serum samples were diluted 1:10 and incubated for 90 minutes in microwells pre - coated with M. hyopneumoniae antigen. Peroxidase conjugated monoclonal antibody to M. hyopneumoniae is then added to the wells containig the diduted samples. The conjugated antibody competes with any M. hyopneumoniae antibody present in the porcine serum for binding epitopes on the immobilised antigen. n all the wells a yellow-brown colour appears. After 15 minutes, wells are washed and a chromogenic substrate is added. The color reaction is stopped by the acid addition. The higher the antibody concentration in the porcine serum is, the less conjugate monoclonal antibody is able to bind to the immobilised antigen, resulting in a lower colour intensity. Conversly in porcine samples containing low levels or no antibody, more conjugate monoclonal antibody is able to bind, resulting in a a higher colour intensity. Results are read at 450nm in Optical Density Units (OD) and samples OD is compared with the measure one (Buffer solution). Positive samples present OD values 50% lower then buffer solution OD.
835
RESULTS AND DISCUTIONS Serological screening of swine from the analysed breeding units was realized for M. hyopneumoniae wearers identification. Results interpretations was made having as a measure Buffer control optical density value (BCOD). The results are considered corect if there are performed the following critera: BSOD values between 0,750 and 2,500, Positive
836
Control Serum OD 50% of the BCOD (PCOD) and Negative Control Serum OD 75% of the BCOD (NCOD). The obtained results are: BCOD 2,043 (Buffer control) PCOD 0,730 (Positive control) NCOD 2,032 (Negative control) In function of BCOD, were considered: positive samples 50% of the BCOD (1,021) negative samples 65% of the BCOD (1,327) doubptful samples = 1,021 - 1,327 (require repetition after 2 weeks). The obtained values after the reading were systematized in tables 1 and 2.
Table 1 Serological examination results in each of the two breeding units rapported to total animal number First unit animals number 17 20 8 45 % 37,7 44,4 17,9 100 Second unit animal number 25 8 12 45 % 55,5 19,9 26,6 100
Positives Negatives Doubtful TOTAL
Table 2 Rezultats obtained after the serological exam on the total animal number Animal number 42 28 20 90 % 46,6 31,2 22,2 100
Pozitives Negatives Doubtful TOTAL
The animals from the first unit, with imported porcine didnt presented clinical signs of disease, the aim of this screening being the establishing of M. hyopneumoniae wearers between those animals. The animals from the second breeding unit, with native porcine, presented clinical signs (dry cough, dispneic respiration). The obtained results showed that M. hyopneumonie specific antibodies are present in a number of 42 serum samples (46,6%) from the total of the 90 examined, 17 samples (37,7%) deriving from a breeding unit with imported porcine and the other 25 samples (55,5%) from a plot of native porcine. Because of the lack of clinical signs in the animal from the first unit, must be considered the wearer state of those animals after healing (a 66 weeks periode) (Perianu Tudor, 1996) or an ocult infection. The animals with doubtful results must be retested after 2 weeks, using the same method, but after various studies through this assay, it was established that
837
this doubtful results can be included in the negative category in the statistical interpretation. Being a sensitive test, which can discriminate M. hyopneumoniae specific antigenes, the screening values must be considered. The serology in M. hyopneumoniae enzootic pneumonia present different limites, the seroconversion after the infection being, generaly, delayed and various. (Sitjar and col., 1996; Calsamiglia and col., 1999a), those data suggesting that the serological results extrapolation to clinical infection is difficult. In infected effectives, mortality rate can reach 1 - 5%, lower then morbidity, which can reach 40 - 60%. M. hyopneumoniae actions in high density effectives, inproper ventilation, high level of ammonia in atmosphere, defficient sanitary conditions, maintaining of various ages animales in the same place, increasing the possibility of horizontal transmition. (Marco Ibarra C.. and col. 2000). Literature data confirmes our results, 90% of the Belgic porcine effectives being infected. In SUA, morbidity in adult animals is of 90-100% and of the youth is of 74-85% (Bush Eric, 2002). Respiratory problems are frequent in all the countries with intensive porcine breeding. There are affected over then 97% of animals, more of the 70% presenting specific lesions (Davies and col., 1993). CONCLUSIONS For M. hyopneumoniae specific antibodies detection were analized 90 serum samples from two porcine breeding units. From the first unit with imported porcine, the number of positive samples was of 17 (37,7%). In the second unit with native porcine, the number of positive samples was of 25 (55,5%), corelated with clinical signs presence. From the total of 90 analized sample serums 46,6% were positive, concluding that M. hyopneumoniae wearing is very high in porcine from import as well as in the native ones breeded in industrial system. The presence of M. hyopneumoniae specific antibodies in unvaccinated animals, signifies un ocult infection or the wearer state.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. Bush E., 2002 - The epidemiology of Mycoplasma hyopneumoniae, Swine Mycoplasma Pneumonia Workshop, Kansas City, MO, March 6 Carp-Crare M., Dorina Timofte, 2002 Immunology and Immunopatology, Venus Pub,lishing House, Iai; Davies P.R., Dial G.D., Marsh W.E., Bahnson P.B., 1993 - Feasibility of implementing a national swine slaughter monitoring system for the collection of health data from American swine heards. University of Minnesota;
838
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar 4. 5. Feld N.C., Qvist P., Ahrens P., Friis N.F., Meyling A., 1992 - A monoclonal blocking ELISA detecting serum antibodies to Mycoplasma hyopneumoniae, Veterinary Microbiology. , 30(1):35-46; Ibarra M., Norma No M., Arnaldo Alvarado S. Rosa Perales C., 2000 Evidencia de la presencia de anticuerpos de Mycoplasma hyopneumoniae en cerdos provenientes de granjas de crianza artesanal del sur de Lima, Rev Inv Vet Per; 11(2):164-168; Kobisch M., N.F. Friis, 1996 - Swine mycoplasmoses, Rev Sci Tech, 15(4):1569605; Perianu T., 1996 Animals Infectious diseases, Bacteriozis, vol. I, Ed. Venus Iai; Sorensen V., Barfod K., Feld N.C., 1999 - Evaluation of a monoclonal blocking ELISA and IHA for antibodies to Mycoplasma hyopneumoniae in SPF-pig herds , The Veterinary Record, Vol. 130, Issue 22, 488-490; Sitjar M., Noyes E., Moreso J.M., Fernadnez de Aragon J., Pijoan C., 1996 Relationship among seroconversion to Mycoplasma hyopneumoniae, lung lesions, and production parameters in pigs, Swine Hlth Prod. 4:273-277.
6. 7. 8. 9.
839
EVALUARE EPIDEMIOLOGIC I ECONOMIC A PROGRAMULUI DE COMBATERE A TUBERCULOZEI BOVINE N ROMNIA

EPIDEMIOLOGICAL AND ECONOMICAL EVALUATION OF THE ERADICATION PROGRAM IN BOVINE TUBERCULOSIS IN ROMANIA
Gh. SAVUA1, A. STOICHICI2, D. ANI1, Adriana ANI1, C. BUTUNOI1, Roxana POPOVICI-BIBIRU1 1 U.S.A.M.V. Iai 2 I.D.S.A. Bucureti In this study we are presenting an epidemiological and economical analisis of the strategic surveillance program of bovine tuberculosis in Romania. Based on the analises of the national oficial data raported to OIE and of the sanitary evidences from three counties in Romania, we ascertain a constant tendency to the reduction of the incidence of the tuberculosis infection in Romania after 1900, this beeing situated at the amount of 0,04% in 2004. In these circumstances the exhaustive testing of the bovine older than six weeks, action that costs aproximativelly 10 mil. EUR annually is no longer justificated.
Key words: bovine tuberculosis, diagnosis, epidemiology, economy,
Tuberculoza bovin este o bacterioz cronic ce afecteaz animale domestice i slbatice, ndeosebi bovidee i este transmisibil la om prin intermediul laptelui. Este produs de Mycobacterium bovis i constituie nc o grav problem de sntate n multe ri din lume. (1, 3, 4). Infecia tuberculoas la bovinele n via se depisteaz, n mod obinuit, prin testarea hipersensibilitii specifice de tip ntrziat (test alergic intradermic) iar mai recent s-au pus la punct tehnici bazate pe evidenierea diferiilor markeri din snge (testul de proliferare a limfocitelor, testul gamma-interferonului, testul imunoenzimatic etc), teste a cror valori intrinseci de diagnostic, sensibilitatea i specificitatea, mai trebuie ameliorate i ale cror costuri sunt nc ridicate pentru a deveni accesibile pe scar larg. (9). Dup moarte ori sacrificare, diagnosticul se confirm prin examene anatomopatologice, histopatologice, bacterioscopice i bacteriologice. Izolarea i identificarea bacilului tuberculos specific, prin metode biochimice i genetice (PCR) constuie metodele de certitudine. (2). Lupta mpotriva acestei boli se axeaz pe depistarea ct mai timpurie a animalelor infectate i eliminarea sistematic a acestora din efective, pe baza unor
840
programe strategice adecvate i adaptate prevalenei infeciei i circumstanelor epidemiologice specifice ale fiecrei ri sau chiar regiuni. (8, 9). Ca i n multe alte boli, aceste programe de combatere se doresc a fi eficiente att din punct de vedere epidemiologic ct i economic. (6). Pentru a interveni eficient i cu justee n combaterea i limitarea rspndirii unei boli, trebuie ca fiecare aciune de sntate animal, de depistare a unui fenomen epidemiologic s cuprind i un bilan economic, viznd att costurile directe ct i cele indirecte, precum i costurile sociale pe care le implic acel program. (5). MATERIAL I METODE
n vederea realizrii acestui studiu s-au utilizat informaii din bazele de date raportate i publicate la Oficiului International de Epizootii (OIE) precum i din evidenele primare ale serviciilor veterinare din trei judee ale Romniei, n limita posibilitii accesului la acestea i n condiiile unei neconcordane formale ntre diversele organisme i trepte erarhice n ceea ce privete modalitatea de nregistrare, prelucrare primar i de raportare a datelor. Rezultatele investigaiilor nu au fost corelate ntre cele trei judee, urmrindu-se doar evidenierea nivelului prevalenei tuberculozei bovine i evaluarea economic brut a eforturilor cuantificabile fcute n cadrul aciunilor de supraveghere i de combatere a acestei boli. Datele au fost sintetizate i prezentate sub form de tabele iar evaluarea economic s-a facut lund drept reper preurile medii anuale ale diferitelor manopere i consumabile, fr o actualizare strict din punct de vedere financiar. S-a urmrit, n primul rnd, evidenierea grandorii efortului fcut n virtutea programului strategic naional de supraveghere i control a bolilor la animale i aprecierea justeei unei astfel de strategii, n condiiile date de frecven a tuberculozei bovine n Romnia.
REZULTATE I DISCUII Din informaiile raportate i nregistrate n baza de date a Oficiului International de Epizootii, referitor la incidena tuberculozei bovine n Romnia n perioada 1996-2004, s-au putut sintetiza i analiza aspecte privind evoluia focarelor, a cazurilor i a msurilor de combatere aplicate (Tabelul 1). Fa de o populaie de referin aproape constant anual, care oscileaz n jurul unui efectiv de aproximativ trei milioane bovine, n perioada 1996-2004 se observ o tendin staionar a focalitii tuberculozei bovine (ntre 30 i 163 de focare anual) i o scdere a reactivitii individuale a bovinelor la testul alergic, de la 22 774 de reacii pozitive n 1997 la 74 cazuri n 2002, cu o uoar cretere n 2003 i 2004.
841
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 1 Incidena anual a tuberculozei bovine n Romnia n perioada 1996-2004 Anul 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 Populaia de referin (mii cap.) 3 496 3 436 3 236 3 143 3 061 2 870 2 800 2 878 2 897 Focare (nr.) 79 163 71 46 68 30 30 113 148 Cazuri reagente (nr.) 11 700 22 774 304 82 130 361 74 786 1 099 Inciden cazuri (%) 0,335 0,663 0,009 0,003 0,004 0,013 0,003 0,027 0,038 Animale sacrificate (nr.) 6 600 8 112 141 61 61 297 1 901 1 481 541
Apreciind dinamica rspunsurilor pozitive n valori procentuale, deci frecvena relativ a fenomenului, se constat valori cuprinse ntre 0,33% n 1996 i 0,003% n 2002, ceea ce situeaz Romnia pe o poziie foarte bun din punct de vedere epidemiologic privind tuberculoza bovin. Este de remarcat scderea progresiv a cazurilor de tuberculoz bovin dup anii 1990, ceea ce valideaz reuita strategiei de pn n acest moment n combaterea tuberculozei bovine. (7). n continuare se pune problema meninerii statutului de indemnitate a efectivelor de bovine n condiii de mare eficien epidemiologic dar i economic, tiut fiind faptul c tuberculinarea reprezint o aciune accesibil dar care implic i costuri cu materialele i manopera, ca s nu mai vorbim despre stress-ul provocat animalelor dar i de inconvenientele induse proprietarilor. Pentru a ilustra mai bine i pentru a putea susine ideea eficientizrii economice a luptei mpotriva tuberculozei bovine, am efectuat scurte analize ale frecvenei infeciei n trei judee, B,V i N, pe parcursul unor perioade diferite de timp dar sugestive ca situaie epidemiologic.
Tabelul 2 Frecvena tuberculozei bovine n judeul B n perioada 2002- 2005 Anul 2002 2003 2004 2005 Populatia de referinta (nr. bovine) 77 556 73 769 76 272 75 671 Numar total de animale tuberculinate 58 630 70 923 60 060 62 024 Animale reagente 754 386 377 363 Cazuri pozitive (confirmate) 13 16 22 44
Din datele prezentate n tabelul nr. 2 se observ c la nivelul judeului B proporia de animale reagente are o tendin descresctoare n timp, de la 1,29%
842
la 0,58% din animalele testate dar numrul cazurilor confirmate este n uoar cretere (de la 13 cazuri, n 2002, la 44 de cazuri n 2005). Din investigaiile noastre am reinut faptul c aceste cazuri provin ndeosebi din gospodriile individuale, ceea ce sugereaz un risc al sistemului extensiv de cretere a bovinelor, nc dominant n regiune.
Tabelul 3 Frecvena tuberculozei bovine n judeul V n perioada 2003 - 2005 Anul 2003 2004 2005 Populatia de Numar animale referinta tuberculinabile (nr. bovine) (varsta >6 sapt.) 74 966 68 258 77 274 76 123 85 358 80 891 Nr. operatii Nr. tuberculinare anim. (total /an) reagente 141 126 810 148 666 795 187 539 696 Cazuri pozitive (confirmate) 10 7 3
n judeul V (tabelul 3) se observ o tendin descresctoare a numrului de reacii pozitive la testul alergic ns i o scdere a numrului de cazuri confirmate, ceea ce este n consonan cu situaia naional prezentat anterior.
Tabelul 4 Frecvena tuberculozei bovine n judeul N n perioada 1995 - 2004 Anul 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 Populaia de referin (nr. bovine) 84 913 86 863 79 363 82 340 88 030 93 373 92 867 98 461 96 117 97 758 Nr. operaii tuberculinare (total /an) 152 660 152 500 143 147 125 210 128 261 138 133 141 395 150 800 171 568 167 517 Cazuri pozitive (confirmate) 2 2 2 -
Tabelul 4 prezint o situaie sintetic a efortului de supraveghere a tuberculozei ntr-un jude n care prevalena infeciei s-a redus practic pn la zero, timp de ase ani consecutivi nemaifiind nregistrat nici un rspuns pozitiv. n aceste condiii se pune ntrebarea dac se mai justific testarea semestrial a tuturor bovinelor n vrst de peste ase sptmni ? O analiz simpl, dar sugestiv, a costurilor unei aciuni de tuberculinare ne arat faptul c efortul financiar este apreciabil i poate fi considerat o risip n condiii de indemnitate fa de tuberculoza bovin a unor efective i chiar zone mai mari, judee i regiuni.
843
Astfel, pe baza informaiilor obinute, costurile aciunii de tuberculinare la nivelul judeului V, pe parcursul a trei ani consecutivi, se prezint asfel:
Tabelul 5 Evaluarea costurilor aciunii de tubeculinare a bovinelor n judeul V ANUL 2003 2004 2005 Nr. total de Cost /tuberculinare tuberculinri 141 126 5,1060 148 666 6,1145 187 539 7,0330 TOTAL ( RON ) 720 589,356 909 018,257 1 318 961,787
Cifrele din tabelul de mai sus nu mai necesit comentarii. Dac am extrapola la ntreaga ar valorile medii estimate pentru anul 2005 n acest jude, am putea evalua efortul financiar ca fiind de aproximativ 35 000 000 RON, adic echivalentul a 10 000 000 EUR anual. CONCLUZII Conform datelor oficiale, incidena tuberculozei bovine n Romnia are o tendin de scdere continu, ceea ce confirm succesul programului naional de combatere a acestei boli, program adoptat i aplicat dup 1990. n acelai timp, se remarc un efort financiar i logistic considerabil n fiecare an, n condiiile testrii semestriale exhaustive a tuturor bovinelor n vrst de peste ase sptmni. n condiiile unei prevalene a tuberculozei bovine care tinde spre zero, un asemenea efort nu se justific. Indemnitatea efectivelor se poate menine prin aplicarea unor msuri sanitare susinute i prin testri periodice prin sondaj, la intervale de timp din ce n ce mai mari i difereniat pe zone epidemiologice cu statut diferit.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Mnzat Moga R., 2001 - Boli infecioase ale animalelor. Ed. Brumar, Timioara. Paul I., 2005 - Etiomorfopatologia bacteriozelor la animale. Ed. Pim, Iai Perianu T., 2004 - Boli infecioase ale animalelo r- bacterioze. Vol.1, Ed. Venus, Iai. Rpuntean Gh., Rpuntean S., 2005 - Bacteriologie veterinar special, Ed. Academic Pres, Cluj - Napoca. Savua Gh., 2001 - Epidemiologie veterinar general. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai. Toma B., Dufour Barbara, Sanaa M., Benet J.J.,Ellis P., Moutou F., Louza A., 1996 Epidmiologie appliqu a la lutte collective contre les maladies animales transmissibles majeures. Ed. AEEMA, Maisons-Alfort; *** - Programul aciunilor de supraveghere, prevenire i control al bolilor la animal, ANSVSA, Bucureti, 2000-2004. *** - O.I.E., Manual de standarde pentru testele de diagnostic i vaccinri, www.oie.int
844
EPIDEMIOLOGIA PARATUBERCULOZEI RUMEGTOARELOR N ROMNIA

THE EPIDEMIOLOGY OF RUMINANTS PARATUBERCULOSIS IN ROMANIA
Gh. SAVUA, Irina MATEI, Selma MURAT, D. ANI U.S.A.M.V. Iai We have made a retrospective study of the ruminants paratuberculosis in Romania between 1990 and 2004, based on the national documents and epidemiological raports and in particulary raportated to two counties in the East of Romania . From the data raported to OIE, results that the evolution of the disease had a descendent incidence in the period of the sudy. But in the two counties studied, the depistation test made, shows an aparent prevalence wich varies in large limits between different groups of animals and in time, raported to the test. These observations show an evident lack of correlation among the data. For the estimation of the disease real prevalence is necessary to made an epidemiological investigation based on a scientific method of sampling and on the concomitent use of more specific and sensible depistation methods.
Key words: paratuberculosis, ruminants, epidemiology, epidemiological investigation.
Paratuberculoza (boala lui Johne, enterita cronic hipertrofiant) este produs de ctre Mycobacterium avium, subspecia paratuberculosis (8) i se caracterizeaz printr-o enterit cronic, cu caracter granulomatos, ce afecteaz mai multe specii de rumegtoare domestice i slbatice precum i alte specii de animale de pe tot globul. Diagnosticul acestei boli se bazeaz pe semnele clinice, coroborate cu leziunile specifice de tip granulomatos de la nivelul tubului digestiv i se confirm prin identificarea bacilului lui Johne n fecale i esuturi, prin examen bacteriologic, histopatologic sau prin PCR (polymerase chain reaction). (6, 10). Depistarea animalelor infectate subclinic, individual sau la nivel de turm, constituie ns o problem delicat i ea se bazeaz pe detectarea anticorpilor specifici prin serologie, pe identificarea bacilului n culturi din fecale i esuturi sau prin evidenierea imunitii mediate celular.(6). Testele serologice utilizate curent pentru depistarea animalelor infectate subclinic sunt: reacia de fixare a complementului (RFC), testul imuno-enzimatic (ELISA) i imunodifuzia n gel de agar (ID), pentru evidenierea imunitii umorale i testul gamma-interferonului pentru evidenierea imunitii mediate celular. Aceasta din urm, respectiv hipersensibilitatea de tip ntrziat, se mai
845
evideniaz i prin testul alergic intradermic, n varianta sa unic-TU sau comparativ simultan - TCS. (6, 9). Alegerea unora sau combinarea mai multor teste de depistare a paratuberculozei reprezint decizia esenial pentru controlul infeciei subclinice i ea trebuie luat n funcie de circumstane i de sensibilitatea i specificitatea fiecrei metode aplicate la nivel de individ i la nivel de turm. (7, 10). MATERIAL I METODE
Pentru realizarea prezentei analize, privind incidena i prevalena paratuberculozei rumegtoarelor din Romnia, s-au utilizat informaii din bazele de date raportate i publicate la Oficiul Internaional de Epizootii precum i rezultatele unor studii efectuate separat n dou judee din estul Romniei, B i C, pe diferite segmente de timp din perioada 1990-2004, funcie de datele disponibile. S-a urmrit frecvena infeciei paratuberculoase la bovine i ovine, n consonan cu strategia de supraveghere aplicat n teritoriu i cu evoluia reglementrilor n vigoare, att n sectorul extensiv ct i n ferme organizate, pe baza datelor i nregistrrilor existente n documentele de eviden din cadrul serviciilor de specialitate i a laboratoarelor sanitare veterinare din cele dou judee luate n studiu. Informaiile prelevate din evidenele studiate au fost analizate i interpretate prin metodele epidemiologice descriptive, fr o comparabilitate ntre ele ci doar cu intenia de a aprecia gradul de pertinen al strategiei aplicate vis a vis de situaia raportat .
REZULTATE I DISCUII Analiznd informaiile nregistrate n baza de date a OIE, privind incidena paratuberculozei n Romnia pentru perioada 1996-2004, s-au putut identifica sincope n raportarea situaiei, aa cum rezult din Tabelul 1. Astfel, dac n 1996 sunt raportate doar trei cazuri de paratuberculoz la ovine, n urmtorii trei ani, 1997,1998 i 1999, lipsesc informaiile naionale, ceea ce nu nseamn c boala a disprut din Romnia ci mai degrab faptul c sistemul de supraveghere din partea serviciilor veterinare trecea printr-o perioad dificil. Considernd c la nivel naional au fost luate n considerare i au fost raportate drept cazuri doar cele confirmate etiologic, n urma sacrificrii animalelor suspecte i a examenelor de laborator, am efectuat o analiz detaliat a rezultatelor obinute la nivel local n cadrul aciunii de depistare a infeciilor subclinice cu Mycobacterium paratuberculosis prin testele uzuale. Ca urmare, la nivelul judeului B, au fost identificate i sistematizate rezultatele testrilor efectuate la bovine n perioada 1990-2002 prin TCS, RFC si bacterioscopie (Tabelul 2).
846
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Incidena anual a paratuberculozei rumegtoarelor n Romnia n perioada 1996-2004 Nr. crt. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Anul Focare 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 Bovine Cazuri 0 0 ? ? ? ? ? ? 2 6 2 3 43 149 52 180 2 198 Ovine/Caprine Focare Cazuri 1 3 ? ? ? ? ? ? 0 0 1 33 54 579 89 6191 32 762
Tabelul 2 Prevalena aparent a paratuberculozei la bovinele testate prin TCS, RFC i bacterioscopie pe fecale n judeul B n perioada 1990 2002 Anul 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 T.C.S. + 35 20 10 8 3 R.F.C. + 18 13 5 2 BACT. + 2 -
Nr. 8460 7730 6660 7530 7030 6815 6470 6720 6530 5990 5870 5975 5890
% 0.4 0,3 0,2 0,1 0,04 -
Nr. 7300 6750 5700 6200 6900 5700 6100 6400 5840 5500 5300 5450 4500
% 0,2 0,2 0,1 0,02 -
Nr. 370 250 140 190 150 180 130 72 45 -
% 0,05 -
Se constat faptul c frecvena rezultatelor pozitive este n scdere vizibil n perioada 1990-1994, pentru ca din 1995 s nu se mai nregistreze reacii pozitive la nici unul din testele folosite. Comparnd cele trei metode ntre ele, se observ c reactivitatea cea mai mare se manifest la testul alergic (TCS), fapt studiat i prezentat anterior de ctre noi (6) i de ctre ali autori (3, 4, 8). Efectund aceeai analiz i n cazul ovinelor din judeul B, testate prin metode identice, am putut sintetiza situaia prezentat n tabelul 3.
847
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 3 Prevalena aparent a paratuberculozei la ovinele testate prin TCS, RFC i bacterioscopie pe fecale n judeul B n perioada 1990 2002 Anul Nr. 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 17452 16250 12740 15420 12494 10710 9380 9500 9250 12030 10100 9140 8500 T.C.S. + 1470 480 380 430 120 70 82 37 42 25 18 R.F.C. + % 289 213 135 147 132 85 70 105 98 180 58 7 2,3 1,7 1,2 1,4 1,2 0,8 0,6 0,9 0,9 0,7 0,6 0,08 BACT. + 5 3 2 2 -
% 8,4 3,0 2,4 2.8 1.0 0,7 0,9 0,4 0,5 0,2 0,2 -
Nr. 12500 12300 11250 10450 10650 11190 12000 11750 10500 10300 9100 8120 7500
Nr. 95 77 58 60 42 27 13 27 18 21 35 28 17
% 5,3 5,2 3,3 4,7 -
n cazul ovinelor se constat o frecven mai mare a rezultatelor pozitive la toate cele trei metode utilizate, cu un procent de pn la 8,4% n cazul testului alergic i cu existena de reacii pozitive, n descretere ns, pn n anul 2000, dup care efectivele se negativeaz. Acest aspect este explicabil dac lum n considerare faptul c n fiecare an exemplarele reagente au fost eliminate, conform programului naional strategic de supraveghere i combatere a bolilor transmisibile ale animalelor. (9). Analiznd situaia epidemiologic a paratuberculozei la bovine n judeul C, pe baza rezultatelor obinute la aceleai teste aplicate n perioada studiat s-a constatat o frecven a reaciilor pozitive la testul alergic ce a variat ntre 0,81% i 5,26% la diferite efective controlate n anul 2000 i ntre 0,76% i 2,88% n anul 2002. Examenele serologice (RFC) aplicate n aceleai efective au relevat o frecven a rspunsurilor pozitive cuprins ntre 0% i 22,64% (??) n anul 2000 i ntre 0,5% i 11,9% n anul 2002, ceea ce ilustreaz nc odat necorelarea reactivitii umorale cu cea celular i relativitatea testelor utilizate, ndeosebi a RFC, test cu o sensibilitate redus i de multe ori variabil. Referitor la frecvena infeciei paratuberculoase la ovinele din acelai jude, am remarcat doar situaia dintr-o ferm contaminat i supus unui program de asanare, procentul reaciilor pozitive la TCS fiind de 12% n anul 2000 i de 10,5% n anul 2002 iar al rezultatelor pozitive la RFC fiind de 16% n anul 2000 i de 10,5% n anul 2002 . Toate aceste rezultate nregistrate la nivel judeean nu se coreleaz, n final, cu situaia raportat la nivel naional, ceea ce ne face s apreciem cu nencredere rezultatele aciunii de supraveghere a acestei boli n ara noastr i s afirmm
848
faptul c prevalena real a paratuberculozei este nendoielnic alta dect cea consemnat n rapoarte. CONCLUZII Analiza acestor rezultate scoate n eviden prezena i evoluia paratuberculozei rumegtoarelor n Romnia, cu o tendin de scdere a frecvenei, conform datelor oficiale. Metodele de depistare i de diagnostic folosite nu sunt suficient de sensibile i specifice, lipsind ndeosebi metodele de identificare cert a agentului patogen (examenul bacteriologic, PCR etc.). Rezultatele obinute prin diferitele teste aplicate acelorai efective nu se coreleaz ntre ele, ceea ce face ca prevalena real s fie greu de apreciat. Relativitatea rezultatelor obinute prin testele aplicate i deficienele n aplicarea programului de supraveghere i n raportarea datelor au generat neconcordane ntre diferitele situaii epidemiologice analizate. Se impune un studiu epidemiologic de prevalen a paratuberculozei rumegtoarelor n Romnia bazat pe utilizarea unei metodologii tiinifice de eantionare i prin utilizarea concomitent a metodelor directe (etiologice) i indirecte (serologice i alergice) de depistare, a cror sensibilitate i specificitate s fie luate n calcul la interpretarea rezultatelor.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Carp-Crare M., 1998 - Metodologii de diagnostic imunologic. Ed. Ion Ionescu de la brad, Iai. Mnzat Moga R., 2001 - Boli infecioase ale animalelor. Ed. Brumar, Timioara. Paul I., 2005 - Etiomorfopatologia bacteriozelor la animale. Ed. Pim, Iai. Perianu T., 2004 - Boli infecioase ale animalelo r- bacterioze. Vol.1, Ed. Venus, Iai. Rpuntean Gh., Rpuntean S., 2005- Bacteriologie veterinar special, Ed. Academic Pres, Cluj - Napoca. Savua Gh., 2000 Paratuberculoza rumegtoarelor. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai Savua Gh., 2001 - Epidemiologie veterinar general. Ed. Ion Ionescu de la Brad Iai. Thorel Marie-Francoise, 1990 Recherches taxonomiques et genotipiques sur les mycobacteries mycobactines-dependentes. These Doct. dUniv.,Universite Paris XII,158 *** Programul aciunilor de supraveghere, prevenire i control al bolilor la animale, ANSVSA, Bucureti, 2000-2004. *** O.I.E., Manual de standarde pentru testele de diagnostic i vaccinri, www.oie.int.
849
MODIFICAREA STRUCTURII BURSEI LUI FABRICIUS SUB ACIUNEA TULPINILOR VACCINALE FIERBINI CONTRA BURSITEI INFECIOASE AVIARE
THE ACTIONS OF HOT STRAIN BG AGAINST IBD TO STRUCTURAL MODIFICATIONS OF TISSUES OF CLOACAL BURSA
N. STARCIUC, I. SCUTARU, S. ZELENIN U.A.S. Republica Moldova
Meninerea efectivelor de psri n stare epizootic satisfctoare att n condiiile industriale ct i a sectoarelor particulare se datoreaz faptului utilizrii mijloacelor specifice de profilaxie a bolilor infecioase. Actual se folosete o gam destul de mare de vaccinuri n prevenirea bolilor infecioase la psri, dintre care o importan mai deosebit le revine vaccinurilor contra pseudopestei aviare, bronitei infecioase, bursitei infecioase. Comparativ cu aciunea altor vaccinuri cele utilizate n scopul prevenirii bursitei infecioase aviare (BIA) este deosebit. n funcie de gradul de reactogenitate vaccinurile contra BIA sunt clasate ca tulpini moi, intermediare i fierbini. Toate aceste tulpini vaccinale provoac modificri structurale ale esuturilor bursei lui Fabricius care difer n funcie de gradul de reactogenitate. Scopul cercetrilor a fost de a stabili deosebirile modificrilor esutului bursei lui Fabricius sub aciunea tulpinei vaccinale fierbinte BGcontra BIA. MATERIAL I METOD
Cercetrile au fost efectuate pe un lot de 50 capete pui de gin care au fost vaccinate contra BIA cu tulpina fierbinte, BG de dou ori la vrsta 10 i 20 zile prin adpare i respectiv grupa lot martor. Pn la vaccinare i a 10, 20, 35 i 45 zile dup vaccinare, din fiecare grup sau sacrificat cte 5 capete de pui, de la care sa recoltat probele de snge i bursa lui Fabricius pentru examenul histologic. Preparatele histologice sau vopsit cu hematoxilin i eozin, structura esuturilor bursei lui Fabricius s-a examinat la microscopul cu obiectivul 40 i ocularul 12,5.
REZULTATELE OBINUTE La puii din grupul lot martor epiteliul bursei lui Fabricius este pluristratificat, cilindric. n esutul epitelial al submucoasei se observ plasmocite unice. Foliculii limfoizi nu prezint hiperplazie. n unii foliculi predomin
850
prezena limfocitelor i a limfoblastelor, n centrul se observ un numr mic de macrofage. n esutul burselor puilor din grupa experimental unde au fost vaccinai cu tulpina BG, la a 10-a i 20-a zi dup a doua vaccinare, bursa lui Fabricius era constituit din foliculi mici i medii. n esutul perifolicular se obsevau fenomene infiltrative limfohistocitare, exudaii i unele celule necrotizate, care de regul sunt localizate la periferiile foliculilor. La a 35-a i 45-a zi dup vaccinare foliculii limfoizi sunt de diferite dimensiuni cu predominarea celor medii i mici. n majoritate foliculilor se observ fenomene infiltrative, focare necrotice, procese fibroplazice cu tendin de nlocuire a esutului limfoid propriu-zis sau formarea unor chisturi. CONCLUZII Vaccinul fierbinte din tulpina BG utilizat n scopul prevenirii BIA, provoac unele modificri inflamatorii distinctive n foliculii bursei lui Fabricius ce prin urmare duce la o stare de imunosupresie la pui.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. Hassan M.K., Saif Y.M., 1996 - Influence of the host sistem on the pathogenicity, immunogenicity and antigeniticy of infections bursal disease viruses. Avian Dis., 40 : 553-561 Sivanandon V.Y., Sasipreeyajan D.A., Halvarson, Newman Y.A., 1986 Histopathologic changes indused by serotype infectious bursal disease virus in specific- pathogen- free chickens. Avion Dis., 30 : 709-715 Colnek B.W. - Diseases of poultry. Tenth edition. Infectious Bursal Disease. Iawa State University Press. USA. p. 721-760
851
ASPECTE EPIDEMIOLOGICE PRIVIND BRUCELOZA OVIN (INFECTIA CU BRUCELLA OVIS) N JUDEUL VASLUI
THE EPIDEMIOLOGICAL ASPECTS ABOUT THE INFECTION WITH BRUCELLA OVIS IN VASLUI COUNTY
C. NECULI1, M. CARP CRARE2, Narcisa NECULI1, Adriana CHIRIAC3 1 D.S.V.S.A. Vaslui 2 U.S.A.M.V. Iai 3 L.S.V.J. Vaslui During 2000-2005, an epidemiological study was effected on the rams in Vaslui county, through processing of dates concerning the evolution of infection with Brucella ovis. The researches were effected on the blood samples coming from the rams on Vaslui county, processed through the complement fixation test (CFT). We established the incidence and the prevalence of the infection with Brucella ovis in six years of study. This way, in Vaslui county, the biggest incidence was in 2000 (123 cases - 1,33%) and in 2002 (155 cases - 1,46%). During 2000-2005, the incidence of infection with Brucella ovis was 8,97 %. In this teritory, the prevalence of this disease was 0,20%.The evolution of Brucella ovis in Vaslui county between 2000 and 2005, had a relatively decrease of its incidence.
Key words: Brucella ovis, diagnosis, the complement fixation test, incidence, prevalence.
Brucella ovis produce infecii clinice sau subclinice la ovine caracterizate prin leziuni genitale la berbeci i infecii placentare la oi (6). Consecina principal a bolii o reprezint reducerea fertilitii la berbeci, avorturi periodice la oi i creterea mortalitii perinatale (1). Conform programului strategic anual, este prevzut efectuarea a 2 testri serologice pe an, la berbecii de reproducie, cu dou sptmni nainte de mont i dup mont, n perioada octombrie noiembrie. MATERIALE I METODE
Examenele de supraveghere s-au realizat prin reacia de fixare a complementului (RFC), (2, 3, 4). S-au prelucrat i valorificat o serie de date multianuale referitoare la evoluia brucelozei la berbeci n judeul Vaslui n perioada 2000-2005. Cercetrile s-au efectuat pe probele de snge provenite de 852
la berbecii de reproducie din jude. Rezultatele obinute au fost sintetizate n tabelul 3.
REZULTATE SI DISCUTII Analiznd activitatea de supraveghere a brucelozei la berbeci finalizat prin examene de laborator i de combatere prin eliminarea animalelor pozitive, se constat c un procent mic (de 19,85%) din animalele depistate pozitiv la testul serologic prin RFC au fost tiate pentru precizare de diagnostic. Aprecierea activitii de supraveghere sub raportul brucelozei la berbeci prin testul serologic se realizeaz prin stabilirea ratei examenelor serologice. Rata examenelor serologice a fost calculat prin raportul dintre efectivul de berbeci existent i efectivul de berbeci controlat, comparat cu cifra de referin 2 (2 testri serologice pe an): tabelul 3. Prin prelucrarea datelor s-au putut stabili incidena si prevalena real (5) a bolii n cei 6 ani luai n studiu (tabelul 1 i 2).
Tabelul 1 Incidena brucelozei la berbeci n judeul Vaslui n perioada 2000-2005 Anul 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Centralizare Efective berbeci 4 836 5 567 5 448 5 616 5 765 6 158 33 390 Animale mbolnvite n anul curent 123 33 155 71 50 2 434 Incidenta anuala 123 33 155 71 50 2
Tabelul 2 Prevalena brucelozei la berbeci n judeul Vaslui n perioada 2000-2005 Anul 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total Efective berbeci 4 836 5 567 5 448 5 616 5 765 6 158 33 390 Probe confirmate 17 2 23 10 4 1 57 Prevalena anual 134 50 157 94 60 6
853
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Pr = a+c/ n% = 57 + 10 / 33 390 % = 0, 20 % n = nr. total de animale = 33 390 b = fals pozitive; b = 434 - 57 = 377 a = real pozitive; a = 57 c = fals negative; d = real negative; d = 33 390 - 434 = 32 95
c = 10
Datele utilizate n calculul incidenei i prevalenei provin din: rezultatele activitii de supraveghere a brucelozei la berbeci n judeul Vaslui n perioada 2000-2005 (tabelul 3); rezultatele activitii de supraveghere prin metode de laborator a brucelozei la berbeci (tabelul 4.); Conform tabelului 3, n perioada 2000-2005 s-au sacrificat n judeul Vaslui 57 de berbeci serologic pozitivi.
Tabelul 3 Rezultatele activitii de supraveghere a brucelozei la berbeci in judeul Vaslui n perioada 2000-2005 Nr. crt. 1 2 3 Specificare Efectiv ovine Efectiv existent berbeci Efectiv controlat Rata controalelor Numr berbeci depistati pozitiv la RFC Numr berbeci sacrificati pentru diagnostic Total pozitive confirmate dup sacrificare Examen supraveghere U/M 2000 cap. 222475 cap. cap. 2 cap. % cap. % 4836 9235 1,91 123 1,33 22 17,89 2001
225086
2002
212226
2003
216226
2004
225533
2005
238238
Total
1340209
5567 10697 1,92 33 0,31 6 18,18
5448 10612 1,95 155 1,46 30 19,36
5616 10755 1,92 71 0,66 13 18,31
5765 10816 1,88 50 0,46 9 18,00
6158 12111 1,97 2 0,02 2 100
33390 64226 1,92 434 0,68 82 18,89
5 6
cap.
17
23
10
57
Dintre probele examinate serologic prin RFC (7) i cu rezultat de anticomplementaritate (anume 45), s-au confirmat prin metode de laborator (examen bacteriologic) un numr de 10 capete (tabelul 4), ce constituie elementul de calcul pentru reaciile fals negative (c).
I = nabt6 / nast0 % nabt6= nr. animale mbolnvite n cei 6 ani; nast0= nr. animale sntoase la nceputul perioadei de observaie. I = 434 / 4 836 = 8, 97 % 854
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 4 Rezultatele activitii de supraveghere de laborator a brucelozei la berbeci in judeul Vaslui n perioada 2000-2005 Nr. probe examinate Rezultat examen serologic P 123 30 148 71 50 2 424 D 2 1 3 Ac 3 27 15 45 N 9110 10663 10437 10684 10751 12109 63754 P 3 7 10 Retestare serologica La 21 de zile D Ac N 20 15 35 P 123 33 155 71 50 2 434 Rezultat final D 2 1 3 Ac N 9110 10663 10457 10684 10766 12109 63774
Anul
2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total
9235 10697 10612 10755 10816 12111 64226
CONCLUZII n judeul Vaslui, n perioada analizat, att incidena ct i prevalena real a bolii au fost sczute, cu posibiliti reale de asanare a teritoriului din punct de vedere al infeciei cu Brucella ovis. Prevalena real a bolii fost foarte redus n teritoriul analizat (0,20 %). n perioada 2000-2005, datele prelucrate au permis stabilirea unei incidene a infeciei cu Brucella ovis n judeul Vaslui de 8,97 %, ceea ce creaz premisele unei asanri rapide a teritoriului. Incidena cea mai mare a cazurilor depistate serologic a fost n anii 2000 (de 123 cazuri) i 2002 (de 155 cazuri), media multianual a cazurilor de bruceloz la berbeci fiind de 72,33. S-a observat o rat medie de supraveghere prin examene serologice pe parcursul celor 6 ani analizai de 1,92, cu minima de 1,88 n anul 2004 i maxima de 1,97 n anul 2005.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. American Sheep Industry, U.S.A., Denver, Colorado, 1996 - Chapter ,,Health ,,Sheep production handbook, pag. 350-351 Carp-Crare M., Eleonora Guguianu, Dorina Timofte, 1997 - Lucrri practice de microbiologie veterinar, Uz intern, U.A.M.V. Iai. One E., Virginia Constantinescu, 1978 - Diagnosticul de laborator n medicina veterinar, Ed. Ceres, Bucureti, 103-127. Rducnescu H., Bica-Popii Valeria, 1986 Bacteriologie veterinar, Editura Ceres, Bucureti Svua Gh., 2001 - Epidemiologie veterinar general Editura ,,Ion Ionescu de la Brad, Iai.
855
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai 6. 7. 8. *** Border Disease in a Flock of Sheep: Epidemiology, Laboratory and Clinical Findings (1992) - Journal of American Veterinary Medical Association, 189 (1), 61- 66. *** Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, 5 th edition, 2004, Part 2, section 2.4., chapter 2.4.1. *** Programul aciunilor de supraveghere, prevenire i control al bolilor la animale, al celor transmisibile de la animale la om, protecia animalelor i protecia mediului pentru anul 2006.
856
REAL-TIME PCR ASSAY WITH TAQMAN PROBE TO DETECT THE TLH GENE OF V. PARAHAEMOLYTICUS
Gh. BRDAN U.S.A.M.V. Iai B. CHINA, G. DAUBE Universitatea Liege, Belgia Importance of the fast detection of V: parahaemolyticus (V.p.) is related to the bacteriological risk associated the consumption of the row or undercooked seafood. The traditional bacteriological methods are long and vague; in many cases being no conclusive. This work forms part of a series of research directed for the development of a routine method, rapid and reliable, of detection and quantitative appreciation of V.p. by the PCR in real time, with a TaqMan probe, by using the gene tlh like target. This established communication that the lower limit of detection, the sensitivity, is of a bacterium per ml culture. By carrying out a standard threshold of quantitative appreciation of V. parahamolyticus it is possible to make a sorting of the samples to continue the research only for the honest ones which exceeds this limit.
Key Words: detection, real time PCR, V. parahaemolyticus, tlh gene.
INTRODUCTION The genus Vibrio includes Gram-negative bacilli, anaerobic facultative, oxidase positive and mobile (10). These bacteria are halophylic meaning that NaCl stimulates their growth. Among this genus, three species were responsible for food poisoning due to the ingestion of seafood, V. cholerae the cholera agent, V. vulnificus responsible for septicaemia and V. parahaemolyticus (V.p ) responsible for gastroenteritidis (5). The clinical signs of V.p. intoxication are: nausea, fever, vomiting, and headaches. All V.p. isolates produce a thermolabile haemolysin (TLH). The tlh gene was used as a target for specific real-time PCR in order to detect V.p. in seafood (9). The objective of this work is to check the specificity and the efficiency of the detection of V.p. by real-time PCR, using like target a sequence of nucleotides of the tlh gene. MATERIAL AND METHODS
Bacterial strains and microbiological methods. Like bacterial culture one used the stock of collection ATCC 17.802 (LMG 2850) of V.p., which was revivified by a 24 hours passage in 10 ml APW 3% salt. The bacteriological 857
handling carried out at the time of this project accurately respected the indications of the standardized method ISO-8914 (1) which describes the method of routine for the research of the vibrios in the products intended for human consumption by enrichment. Checking of the purity of the bacterial stock was carried out by successive passages to 370C, 24h: peptone water salt, selective mediums : TCBS (agar with thiosulfate, citrate, bile and sugar) and CHROMagar medium. Characteristic colonies were mended on agar medium nutritive salted and then tested with the biochemical oxydase and identified with API gallery 20NE (BioMrieux, Paris, France). DNA extraction and purification for PCR. The samples of DNA were obtained after extraction by respecting the indications of the Wizard Genomic DNA purification kit (Promega Corporation, Madison, WI, USA). Selection of probe sequences. The sequence of nucleotides was obtained with the BlastN software of Genbank (8). The complementary and specific primers oligonuclotides of specific DNA sequence of the tlh gene of V.p. were worked by Eurogentec (Liege, Belgium): 5' - CGT CAG CGT TGT GAA GCA A - 3' and 5' - GTC AGC GGC GAA GAA CGT A - 3'. The sequence of tlh probe was 5' TAG ATT TGG CGA ACG AGA ACG CAG ACA-3 '; Conditions of real time PCR. The basic equipment to carry out the realtime PCR was ABI PRISM 7000 thermocycler (Applied Biosystem), with his software ABI PRISM 7000 SDS (2). To carry out, the mix of the reaction was used: a) 12.5 l iTaqTM Supermix with ROX (BioRad Laboratories, Hercules, CA, USA) b) 0.25 l of each primers, c) 0.25 l tlh probe and 9,75l of ultrapure water. The workings conditions are presenting in Table 1. Interpretation of the results held in account the values of the cycle threshold (Ct) of the amplification curves. The experiment was carried out in triple.
Table 1 Real-time PCR amplification conditions N cycles 1 cycle 1 cycle 40 cycles Temperature 50C 95C 95C 60C 72 C Time 2 min. 3 min. 15 sec. 60 sec. 60 sec.
Initiation Denaturation Amplification of the t Denaturation of DNA segment (PCR Hybridisation cycling, collect and Extension data analysis)
Efficiency. DNA from V.p. strain SR27 was prepared and decimal dilutions were made. Real time PCR was performed using tlh primers and double dye probe selected using the primer express software. Specificity. The bacteria enumeration was made on TCBS in spiral (6). From the pure culture one carried out a series of decimal dilutions, until dilution 10-7, numbered A0-A7, by using APW 3% salt medium. One carried out the extraction of the ADN of each dilution, by respecting the protocol carefully describes for the negative Gram bacteria. From this ADN one carried out a series of numbered decimal dilutions V0-V7. 858
Artificial contamination of mussels and shrimps. Twenty five grams of mussels flesh were homogenised in 225 ml of alkaline buffered peptone with 3% of NaCl. The homogenate was inoculated with serial dilutions of a fresh culture of SR27 strain V.p.. The plates were incubated at 42C for 18 h. One ml of the mixture was withdrawn and used to perform a DNA extraction and a real time PCR experiment.
RESULTATS AND DISCUSSIONS Specificity.To detect V.p. by PCR in real time, it was initially necessary to choose a specific target gene, primers and a specific tlh probe (4). If the literature is looked, at one note that several genes target are used to detect V.p. by PCR (3); it acts of the genes toxR, orf8 and tlh (9). However, the gene orf8 is specific serotype 03:K6 and the PCR of toxR is not positive for all the stocks of V.p., whereas all the stocks of V.p. have the gene tlh. Consequently, the tlh gene seemed the target of choice to quickly detect V.p. (5). Efficiency. The results of Ct obtained after the PCR in real time with the TaqMan probe are presented in Fig. 1. The limit of detection was 1.2 copies, corresponding to 40 CFUs/ml. One noticed a difference of Ct between amplifications of the series coming from dilution from the DNA (Fig. 3) from reference and the series coming from bacterial dilutions which holds of the more important concentration in the sample of ADN of reference. For each series of bacterial dilutions and DNA dilutions, it obtained two standard lines with almost identical slopes: for the series of bacterial dilutions R2=0,988966 (Fig. 2) and for the series of dilutions of bacterial DNA R2=0,993507 (Fig.4).
R2=0,98 Slope= -2,89 Efficiency= 121%
Fig. 1 Amplifications curves: bacteria dilutions (A0 A7)
Fig. 2 Standard line: bacteria dilutions (A0 A7)
859

R2=0,99 Slope= -3,29 Efficiency= 101%
Fig. 3 Amplifications curves: DNA dilutions (V0 V7)
Fig. 4 Standard line: DNA dilutions (V0 V7)
However, the extreme sensitivity of the real time PCR is not without problem. Indeed, the least contamination of the PCR will be detected, it is thus necessary to be particularly careful at the time of handling. It is consequently recommended to use the system of the uracyl-nglycosylase to get rid of the products of preceding PCR which could come to distort the results. Moreover, one must take care to the maximum to avoid the contaminations of well. Moreover, one notes that the PCR in real time is a technique more significant than the traditional PCR, since contaminations are detected in PCR in real time but not in traditional PCR (7). Artificial contamination of mussels and shrimps. The detection limit was between 1 and 10 CFUs/25g. It was possible to detect V.p. in mussels and shrimps. The limits of detection were: 12.6 CFUs/g of mussels and 40 CFUs/g of shrimps. CONCLUSIONS It is possible to detect effective and fast V. parahaemolyticus in the fishery products by the real time PCR with a TaqMan probe for tlh gene, and, in same time, quantitatively to appreciate the load of this bacterium in the sample. The fragment of the gene tlh, which is considered to mark it species by its presence in the pathogenic stocks of V.p. and the environmental stocks, nonpathogenic. Although, no obvious inhibition of PCR was noted, it is recommended when one works with complex matrices like the food matrices to use an internal control of PCR.
860
REFERENCES
1. AFNOR - Association Franaise De Normalisation. Norme franaise NF - ISO 8914:1990 (F): Directives gnrales pour la recherche de V. parahaemolyticus, e In : Association franaise de normalisation (Ed.), Microbiologie alimentaire, 8 dition, Tome 2 : Mthodes de routine et valuation dune mthode alternative, Association franaise de normalisation, Paris, 2002, 147-163. Applied Biosystems, Handbook for ABI PRISM 7000 Sequence Detection System, adresse URL: http://www.applied-byosytems.com, consult le 12 octobre 2004 . Blackstone G., Nordstrom J., Vickery M., DePaola A., 2003 - Detection of pathogenic V. parahaemolyticus in oyster enrichments by real time PCR, J. Microbiol Meth., 53 (2): 149-155. Bradatan G., China B., Daube G., 2005 - Detection an characterisation of V. parahaermolyticus in seafood using real time PCR. 10-th Conference on Food Microbiology. Lige, 23-34 June 2005, poster. CEE - Communaute Europeenne. Opinion of the Scientific Committee on Veterinary Measures relating to Public Health on V. vulnificus and V. parahaemolyticus (in row and undercooked seafood). 19-20 sept. 2001, http://www.europe.eu.int. CEFAS - The Centre For Environment Fisheries & Aquaculture Science. Enumeration of total and pathogenic V. parahaemolyticus, reference SOPwa3.3, Weymouth Laboratory, Angleterre, 2004 China B., Ghafir Y., Daube G., 2002 - Estimation quantitative et qualitative par amplification gntique des bactries prsentes dans les denres alimentaires, Ann. Md. Vt, 147, 99-109. Genbank : http://www.ncbi.nlm.nih.gov ICMSF - International Commission On Microbiological Specifications For Food. V. parahaemolyticus, In: Roberts T.A. (chairman Ed.), Microorganisms in foods, e 5 : Characteristics of microbial pathogens, Blackie Academic Professional, London, New York, Melbourne, Tokyo, 1996, 426-435. Roberts T., 1996 - V. parahaemolyticus. In: Roberts T. et al. Microorganismes in foods characteristics of microbial pathogens, Blackie Academic Professional, London, 1996, 426-435.
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
10.
861
SENSIBILITATEA I SPECIFICITATEA UNOR TESTE DE DIAGNOSTIC SEROLOGIC UTILIZATE N TUBERCULOZA BOVIN

THE SENSIBILITY AND THE SENSITIVITY OF THE SEROLOGYCAL DIAGNOSIS TESTS USED IN THE DIAGNOSIS OF THE BOVINE TUBERCULOSIS
Adriana CHIRIAC1, M. CARPCRARE2, C. NECULI1 1 D.S.V.S.A. Vaslui 2 U.S.A.M.V. Iai The necessity of introducing some complementary tests in tuberculosis into practice, results from the fact that the tuberculin testing doesn t allways track down the incipient forms of infection and doesn t dissociate the infection from the evoluting tuberculosis. In this meaning, in this investigation we describe three of the serologycal diagnosis tests used in infection with Mycobacterium bovis: enzyme - linked immunosorbent assay (EIAs - IFN ), the glutaraldehyde test and the complement fixation test. During 2000-2005, a number of 743 blood samples of the bovine with intradermal reaction to the single test (IDR-TU) and the simultaneous test (IDR-TCS) were processed within Sanitary Veterinary Laboratory Vaslui by enzyme - linked immunosorbent assay ( EIAs - IFN ) test. Afterwords, we have taken the glutaraldehyde test and the complement fixation test on a number of 168 bovine (166 bovine with intradermal reaction) . As a result of these tests, that s how we have apreciatted the sensibility and the sensitivity in this way: the enzyme - linked immunosorbent assay have the sensibility 84,62 % and the sensitivity 80,9 %, the glutaraldehyde test have the sensibility 81,82 % and the sensitivity 50,00 % and the complement fixation test have the sensibility 75,00 % and the sensitivity 69,23%.
Key words: tuberculosis, diagnosis, enzyme - linked immunosorbent assay, the glutaraldehyde test, the complement fixation test, sensibility, sensitivity
MATERIALE I METODE
Testul imunoenzimatic EIAs- IFN a fost folosit din necesitatea de a demonstra c testele de depistare a tuberculozei ,,in vivo sunt mult mai rapide i au o sensibilitate i o specificitate crescut fa de metodele clasice utilizate curent.Studiul a fost efectuat pe efectivele de bovine n vrst de peste 6 luni care au fost supuse testului intradermotuberculinic simplu (IDR-TU). Animalele 862
reagente (pozitive i/ sau dubioase) la IDR- TU au fost recontrolate dup 15-30 de zile prin metoda imunoenzimatic de detecie a gamma-interferonului, procedeul sandwich (EIAs- IFN), folosind trusa omologat sub denumirea de ,,BOVIGAm - kit- EIAs (4).De la aceste animale s-au recoltat probe de snge pe anticoagulant (heparin), probele au fost apoi stimulate cu PPD bovin i PPD aviar.Dup incubarea culturilor de snge integral la 370C, timp de 16-24 de ore, s-a recoltat plasma.Pentru fiecare prob s-a luat n calcul un martor de control, nestimulat. Limfocitele stimulate separat cu PPD bovin i PPD aviar au eliberat gamma-interferonul, al crui nivel de detecie a fost apreciat spectrofotometric n densitate optic( DO450 nm). Rezultatele obinute au fost trecute n tabelul 1. Materialul cercetat a constat n 743 probe snge prelevate pe anticoagulant de la bovine reagente la testele alergice (TU i TCS). Testul glutaraldehidei reprezint o metod extrem de simpl, rapid i puin costisitoare, care nu necesit examinarea ulterioar a animalelor, ca n cazul testului alergic (1). Testul glutaraldehidei ar putea fi utilizat n paralel cu tuberculinarea la animalele care reacioneaz pozitiv la testul alergic (2). Tehnica de lucru: se recolteaz cte 2 ml snge de la fiecare animal, pe anticoagulant (EDTA) n cantitate de 15 mg/ ml de snge.Se omogenizeaz foarte bine. Din probele recoltate, s-a luat cte 1 ml de snge care a fost amestecat n proporii egale cu o soluie proaspt de glutaraldehid 1,25% n tuburi Wassermann. Soluia de aldehid glutaric s-a obinut prin amestecarea a 20 ml ap distilat cu 1 ml de aldehid glutaric 25%. Probele au fost examinate din minut n minut pentru a observa apariia gelifierii, timp de 15 minute. Cercetrile s-au efectuat pe 168 probe de snge provenite de la bovine reacionate pozitiv la tuberculinare (testul simplu i testul comparativ simultan). Rezultatele obinute au fost sintetizate n tabelul 2. Reacia de fixare a complementului se bazeaz pe proprietatea complementului de a interaciona cu complexele antigen-anticorp (sistemul bacterian). Cnd combinarea unui antigen cu anticorpul specific are loc n prezena complementului, acesta se fixeaz pe complexele imune (6). Serurile de examinat se dilueaz n sol. fiziologic n proporia 1/5 i apoi se inactiveaz 30 de minute la 56C. Dup inactivare, se adaug antigenul diluat conform titrului i calculat la volumul de 0,5 ml pentru fiecare tub.n aceast reacie s-a folosit ca antigen tuberculin bovin (PPD bovin). Apoi se adaug complementul, diluat n momentul folosirii n reacie, conform titrului stabilit n titrarea preliminar i calculat la volumul de 0,5 ml pentru fiecare tub. Tuburile se agit i apoi se introduc la baia de ap la 37C timp de 30 minute, pentru incubarea reaciei. Dup incubare, n fiecare tub se distribuie cte 1 ml din sistemul hemolitic preparat n prealabil. Tuburile se agit din nou i se introduc la baia de ap la 37 timp de 15 minute, pentru incubarea reaciei, apoi se scot i rezultatele se apreciaz i se interpreteaz imediat. Citirea reaciei i interpretarea rezultatelor se face prin aprecierea gradului de hemoliz, respectiv a lipsei hemolizei. 863
Cercetrile s-au efectuat pe 168 probe de snge provenite de la bovine reacionate pozitiv la tuberculinare (testul simplu i testul comparativ simultan). Rezultatele obinute au fost sintetizate n tabelul 3.
REZULTATE I DISCUII Testul imunoenzimatic EIAs- IFN Analiza datelor din tabelul 1 relev c un procent de 5,25% dintre bovine au prezentat reacii pozitive la testul EIAs- IFN. Peste 26,5% dintre ele au fost ncadrate la categoria reactante aviare. Procentul relativ crescut de reacii pozitive la PPD aviar sugereaz infecii cu micobacterii atipice, cele din complexul M. avium sau intervenia altor ageni etiologici care pot determina alte afeciuni (echinococoz, fascioloz, bruceloz, leucoz etc.) (3, 5, 7). Un numr de 8 animale au reacionat neconcludent (1, 08%).
Tabelul 1 Rezultate test EIAs- IFN Anul 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total Nr. de bovine testate S.C. G.P. 89 310 188 78 30 29 19 245 498 Pozitiv S.C. 2 14 4 6 4 30 G.P. 5 4 9 Reactant aviar S.C. G.P. 45 70 18 32 8 15 9 109 88 Negativ S.C. 42 28 18 4 6 98 G.P. 235 166 401 Neconcludent S.C. 4 4 8 G.P. -
Pe un numr de 168 de animale s-au aplicat testele de diagnostic a tuberculozei pe animalele n via. Dintre acestea, 22 de animale au reacionat pozitiv la testul EIAs- IFN (13,1%) i 144 au fost reactante aviare (85,71%). Din cele 168 de bovine luate n studiu, 166 reagente la examenul alergic (testul unic i testul comparativ simultan) i examinate prin testul imunoenzimatic EIAs- IFN, testul glutaraldehidei i reacia de fixare a complementului, s-a diagnosticat tuberculoz n urma diagnosticului complex de laborator la numai 11 animale (6,55%). n contextul examenului complex de laborator, s-a apreciat sensibilitatea i specificitatea acestui test n urma rezultatelor obinute. Ss = a/ a+c% = 11/ 11 + 2 % = 84,62 % Sp= d/ d+b% = 88 / 88 +13 % = 87,13 % a = real pozitive; b = fals pozitive; c = fals negative; d = real negative;
864
Testul glutaraldehidei Studiul s-a efectuat pe cele 168 de bovine reagente la testul EIAs- IFN. Analiza datelor din tabelul 2 relev c 37,5% din bovine au reacionat pozitiv la test, iar 17,26% au fost dubioase. Animalele reacionate pozitiv la tuberculinare au reacionat pozitiv i la testul glutaraldehidei, doar c timpul de gelificare a sngelui a fost diferit. Testul glutaraldehidei a fost dubios la un numr de 24 de bovine reacionate pozitiv la tuberculinare. S-a calculat sensibilitatea i specificitatea acestui test, lund n considerare confirmarea sau infirmarea rezultatului testului n funcie de rezultatele examenului complex de laborator. Ss = a/ a+c% = 9/ 9+ 2 % = 81,82 % Sp= d/ d+b% = 8 / 8 + 8 % = 50,00 % a = real pozitive; b = fals pozitive; c = fals negative; d = real negative;
Tabelul 2 Rezultate test glutaraldehid Nr. de bovine testate S.C. G.P. 27 44 19 32 12 13 21 105 63 Pozitiv S.C. 10 6 10 12 38 G.P. 14 11 25 Dubios/ Neconcludent S.C. G.P. 6 5 5 4 3 2 4 19 10 Negativ S.C. 21 18 3 1 5 48 G.P. 25 3 28
Anul 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total
Reacia de fixare a complementului Studiul s-a efectuat pe cele 168 de bovine reagente la testul EIAs- IFN. Analiza datelor din tabelul 3 demonstreaz c 7,14% din animale au reacionat pozitiv, 45,24% au fost dubioase. Din cele 76 animale reacionate dubios la RFC, 60 au fost pozitive la testul glutaraldehidei . Cele 12 animale reacionate pozitiv la RFC au reacionat pozitiv i la testul glutaraldehidei, gelificnd sngele n primele 6 minute 7 cazuri, iar restul ntre 7 i 10 i mai mult de 10 minute . n funcie de rezultatele examenului complex de laborator, s-au calculat aceeai parametri (sensibilitate i specificitate): Ss = a/ a+c% = 6 / 6 + 2 % = 75 % Sp= d/ d+b% = 9/ 9 + 4 % = 69,23 % a = real pozitive; b = fals pozitive; c = fals negative; d = real negative;
865
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 3 Rezultate test R.F.C. Nr. de bovine testate S.C. G.P. 27 44 19 32 12 13 21 105 63 Pozitiv S.C. 4 2 1 3 10 G.P. 1 1 2 Dubios/ Neconcludent S.C. G.P. 7 17 15 7 8 11 11 44 32 Negativ S.C. 20 21 2 1 7 51 G.P. 26 3 29
Anul 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total
Sensibilitatea i specificitatea testelor de diagnostic ,, in vivo n ansamblu Ss = a/ a+c% = 7/ 7+ 2 % = 77,77 % Sp= d/ d+b% = 2/ 2+ 4 % = 33, 33 % a = real pozitive; b = fals pozitive; c = fals negative; d = real negative; n tabelul 4 s-a efectuat un studiu de comparare a sensibilitii i specificitii testelor de diagnostic,,in vitro.
Tabelul 4 Compararea sensibilitii i specificitii fiecrui test de diagnostic Testul Testul alergic EIAs- IFN Testul glutaraldehidei R.F.C. Combinarea testelor Sensibilitate % 78,57 84,62 81,82 75,00 77,77 Specificitate % 99,53 80,9 50,00 69,23 33,33
Aceast schem de diagnostic ar putea fi utilizat n campaniile de eradicare a tuberculozei cnd maximum de sensibilitate este necesar i o reducere a specificitii poate fi tolerat. n lucrarea de fa s-a demonstrat c testele celulare, respectiv EIAs- IFN, au o sensibilitate i specificitate mult mai mare dect testele de detectare a anticorpilor (R.F.C.), lucru susinut i de literatura de specialitate (8). CONCLUZII Testul EIAs- IFN, procedeul sandwich, este o metod expeditiv fa de testul alergic (IDR- TU), rezultatele obinndu-se n 24 - 48 de ore, fa de 72 de ore, n testele clasice.
866
Testul EIAs- IFN poate fi repetat ori de cte ori este necesar, fr a influena statusul imunitar al animalului, spre deosebire de testul alergic care necesit un interval cuprins ntre 45 - 60, chiar 90 de zile, pentru a fi repetat. Fiind un test biologic, EIAs- IFN poate furniza i unele rezultate falspozitive i deci trebuie interpretat n contextul datelor epidemiologice i n completarea testelor ,, in vivo. Testul EIAs- IFN detecteaz infecia tuberculoas recent la bovine. Toate animalele reacionate pozitiv la tuberculinare (testul unic i simultan) i la reacia de fixare a complementului au reacionat pozitiv i la testul glutarlaldehidei. Se observ c prin combinarea testelor de diagnostic se obine o sensibilitate ridicat (77.77%), prin comparaie cu o specificitate redus (33,33%). Coroborarea rezultatelor testelor alergice cu rezultatele testelor complementare tuberculinrii ( testul EIAs- IFN, testul glutaraldehidei, reacia de fixare a complementului) poate constitui un suport mai raional i mai fidel n ceea ce privete decizia de a ndruma la sacrificarea n abator a unui animal reagent la tuberculin, dect testele alergice privite n mod singular.
BIBLIOGRAFIE
1. Carp-Crare M., Eleonora Guguianu, Marcel M., Eugenia Burtan, Dorina Timofte, Moroan ., 1997 - Evaluarea preliminar a unei metode simple pentru diagnosticul tuberculozei bovine prin testul glutaraldehidei, Universitatea Agronomic i de Medicin Veterinar Iai, Lucrri tiinifice, vol.40, pag.164167. Larsson S., 1988 A preliminary study an inexpensive method for the detection of tuberculosis in cattle using the glutaraldehyde test, J.Nepal Med.Assoc.26, 9-17. Miciora R., 1996 - Surse de eroare n diagnosticul alergic al tuberculozei bovine, Revista Romn de Medicin Veterinar, vol.6, nr.1, 39-47. Ni C., 2005 - Reacii specifice i nespecifice n diagnosticul tuberculozei bovine, Revista Romn de Medicin Veterinar, vol.15, nr.2, 91-97. Popescu t., Sandu I., 1997 - Preocupri i perspective n domeniul diagnosticului, prevenirii i combaterii tuberculozei bovine - Ed. L.C.S.V.D. Bucureti, pag. 5-33. Rducnescu H., Bica-Popii Valeria, 1986 Bacteriologie veterinar, Editura Ceres, Bucureti Rothell J.S., Jones S.L., Corner L.A., Wood P.R., 1992 - The gamma- interferon assay for diagnosis of bovine tuberculosis in cattle; condition affecting the production gamma-interferon in whole blood culture, Australian Veterinary Journal, 69, 1-4. Wood P.R., Rothel J.S., Corner L.A., Baldock C., Jones S.L., Mc Cormick B., Francis B.R., Creeper J., 1991 - Field compararison of the interferon - gamma assay and the intradermal tuberculin test for diagnosis of bovine tuberculosis, Vet.Microbio., 31, 71-79.
2. 3. 4. 5. 6. 7.
8.
867
INVESTIGAII PRIVIND CALITATEA MICROBIOLOGIC A LAPTELUI COMERCIALIZAT DE PRODUCTORII PARTICULARI

INVESTIGATIONS REGARDING THE MICROBIOLOGICAL QUALITY OF THE MILK SOLD BY THE PRIVAT PRODUCERS
Eleonora GUGUIANU, Ana-Maria BLTESCU U.S.A.M.V. Iai In conformity with the actual legislation, the microbiological investigation of milk is obligatory only in milk industry. In this context, the fresh milk sold at market by peasantes is not investigated for sanitation. In this work, we present the quantitative microbiological exams results (N.T.G./ml and reductasis test) from 40 milk samples. N.T.G.MA./ml oscilated between 50000 and 5350000 germs/ml, corelated with reductasis test results. Most of the samples were corect with the internel microbiological normes (M.H. Order 975/1999),but there were incorect with the A.W.F.M Order 389/2002 imposed by the necessity of armonisation with European Community.
Conform legislaiei n vigoare, n ara noastr examenul microbiologic al laptelui se efectueaz obligatoriu doar n unitile de prelucrare. Deoarece, n acest context legislativ, laptele crud comercializat n piee de ctre productorii particulari nu este supus unor investigaii de laborator privind salubritatea, ne-am propus s testm gradul de poluare bacteriologic a acestui sortiment de lapte prin determinarea numrului total de germeni mezofili aerobi (NTGMA/ml) i proba reductazei. MATERIAL I METAD
Investigaiile au fost efectuate pe un numr de 40 probe de lapte din sector particular, recoltate din pieele agroalimentare ale oraului Iai, n perioada iunieiulie 2005. Laptele, recoltat n eprubete sterile, a fost supus examenului microbiologic dup aproximativ o or de la recoltare, n laboratorul de microbiologie alimentar al Facultii de Medicin Veterinar Iai. Aprecierea ncrcturii bacteriene a laptelui s-a efectuat prin determinarea NTGMA/ml i proba reductazei metod indirect, simpl i expeditiv (2, 3). NTGMA/ml a fost determinat prin metoda culturilor n plci pentru determinarea unitilor formatoare de colonii la temperatura de 300C iar pentru proba reductazei s-a folosit ca reactiv soluia de albastru de metilen 5% (5 ml soluie alcoolic saturat de albastru de metilen i 195 ml ap distilat steril). 868
Rezultatele obinute au fost raportate la normele microbiologice ale ordinului Ministerului Sntii 975/1999 si ale ordinului Ministerului Agriculturii, Alimentaiei i Pdurilor 389/2002, armonizate cu cele ale Uniunii Europene, care se vor aplica ncepnd cu anul 2011.
REZULTATE I DISCUII Examenele efectuate au evideniat niveluri variate de contaminare bacterian a celor 40 de probe de lapte (tabelul 1).
Tabelul 1 Rezultatele testelor de apreciere a calitii microbiologice a laptelui Proba Nr. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 NTGMA/ml 780000 50000 185000 84000 350000 5350000 630000 825000 600000 740000 560300 120450 68500 220000 783500 595000 85300 975000 630000 550000 275000 125000 370000 590000 325000 220800 925000 700000 250200 100000 935000 970500 Proba reductazei Calitatea laptelui satisfctoare buna buna buna buna nesatisfacatoare satisfctoare satisfctoare satisfctoare satisfctoare satisfctoare buna buna buna satisfctoare satisfctoare buna satisfctoare satisfctoare satisfctoare buna buna buna satisfctoare buna buna satisfctoare satisfctoare buna buna satisfctoare satisfctoare
Timp 3h 9h 25min 7h 40 min 8h 45 min 5h 45 min 25 min 3h 45 min 2h 15 min 3h 30 min 3h 30 min 4h35min 8h 20 min 8h 30min 7h 30 min 3h 15 min 4h 10 min 8h 40 min 2h 45 min 3h 30 min 4h 25 min 6h 20 min 7h 6h 10 min 5h 6h 7h 20 min 2h 45 min 3h 15 min 7h 20 min 8h 10 min 2h 55min 2h 30 min
869
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Proba Nr. 33 34 35 36 37 38 39 40 NTGMA/ml 945000 820000 970000 620000 500000 695000 580000 730000 Timp 2h 45 min 2h 15 min 2h 45 min 3h 30 min 4h 45 min 3h 15 min 4h 05 min 3h 10 min Proba reductazei Calitatea laptelui satisfctoare satisfctoare satisfctoare satisfctoare satisfctoare satisfctoare satisfctoare satisfctoare
Analiznd datele din tabel prin raportarea lor la normele microbiologice prevzute de legislaia n vigoare rezult c din cele 40 de probe: 39 probe (97,5%) au o ncrctur bacterian situat sub limita maxim admis pentru laptele crud integral ( 1000000 germeni/ml); 1 prob - proba nr. 6 - (2,5%) depeste limita maxim admis pentru laptele crud integral; Rezultatele obinute la testul reductazei concorda cu N.T.G. si indic doua categorii de calitate: lapte bun (sub 500000 germeni/ml) 15 probe (37,5%); lapte satisfctor (500000-4000000 germeni/ml) - 25 probe (62,5%); Calitatea ,,lapte satisfacator din punct de vedere microbiologic permite o incarcatura microbiana de 4 ori mai mare comparativ cu valoarea maxima admisa a indicatorul NTG/ml, incluzand proba de lapte nr.6. In raport cu cerintele ordinului M.A.A.P 389/2002 (N.T.G. /ml lapte crud <= 1000000), doar 5 din cele 40 de probe investigate - probele nr. 2,4,13,17 si 30 - (12,5%) sunt salubre din punct de vedere microbiologic. CONCLUZII S-au efectuat examene microbiologice cantitative (NTGMA/ml i proba reductazei) pe 40 probe de lapte crud, comercializat in piata de producatori particulari; NTGMA/ml a oscilat intre 50000 si 5350000 germeni/ml lapte; Majoritatea probelor (97,5%) s-a incadrat in normele microbiologice interne ale legislatiei in vigoare ( Ordinul M.S. 975/1999); Calitatea microbiologica a laptelui a fost necorespunzatoare la 87,5% din probe in raport cu exigentele ordinului M.A.A.P 389/2002 (87,5%).
870
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Brzoi D., Apostu S., 2002 Microbiologia produselor alimentare. Ed. RISOPRINT, Cluj-Napoca. Bondoc I., indilar E.V., 2002 - Controlul sanitar veterinar al calitii i salubritii alimentelor. Ed. Ion Ionescu de la Brad. Iai. Sindilar E., 2000 Controlul igienic al produselor i subproduselor de origine animal. Vol.1, 2. Ed. I.N.R.C.S. Iasi. *** Ordinul M.S. 975/1998 privind aprobarea Normelor igienico-sanitare pentru alimente. *** Ordinul M.A.A.P. 389/2002 pentru aprobarea Normei sanitare veterinare privind conditiile de sanatate pentru producerea si comercializarea laptelui crud, a laptelui tratat termic si a produselor pe baza de lapte.
871
EFFICACY OF SAME ANTIMICROBIAL SUBSTANCE AT PATHOGEN MICROORGANISMS ISOLATED IN POULTRY BREEDING OBJECTS
. ILI1, LJ. SPALEVI1, B. MILJKOVI1, I. PAVLOVI1, G. UGI2, S. STANOJEVI1 1 Scientific Veterinary Institute of Serbia 2 Medicines and Medical Devices Agency of Serbia Diseases of bacterial ethiology presenc important factors in poultry production, therefor source to spread infection in poultry flocks and eventual econimc losess which they induced. Our examination was aimed to determinate main bacterial contaminant at breeding objects at poultry farms and influence of several most utilizes disinfectant to isolated pathogen microorganism. During examination we occurred presence of Salmonellae spp., E.coli, Staphylococcus spp. and Aspergillus spp. To our examination we tested antibacterial efficacy of next disinfectant: phenol, potassium hydroxide, potassium dichloride izocyanurat, perchlor vinegar acid, iodophor, kaliumperoxisulfat, amphotenzide, and formaldehyde. Formaldehyde we outstanding like disinfectant with best antibacterial action because they destroyed tested microorganism in both using concentration promptly after exposure. Perchlor vinegar acid and iodophor was efficiency after exposition of 5 minutes in both concentrations to all of tested microorganisms. Kaliumperoxisulfate, phenol and amphotenzide were efficiency in all concentration after 10 minutes to all tested microorganisms. Potassium dichloride izocyanurat was show efficacy against all microorganisms after 24 hours exposition.
Key words: Salmonella spp., E. coli, Staphylococcus spp., Aspergillus spp., disinfectants, poultry farm
INTRODUCTION Diseases of bacterial etiology presence important factors in poultry production, therefore source to spread infection in poultry flocks and eventual economic losses, which they induced. Great agglomeration of poultry at object induced increased of pathogenesis of same microbial agents, especial bacterial, which induced infection with high rate of morbidity and mortality (Langsrud and Sundheim 1998., Hristov et al.. 1996). Zoonotic potential of same microbial agents like Salmonella spp, presence a special epidemiological problem in poultry breeding (Pavlovi et al.1988.,Mayhall 1996). From these reason in mind we performed our examination, which was aimed to determinate main bacterial contaminant at breeding objects at poultry
872
farms, and influence of several most utilizes disinfectant to isolated pathogen microorganism. MATERIAL AND METHODS
During the period 2000-2005 we performed an examination of 24 poultry farms. Examination of microorganisms species in object was performed using swabs at various parts of object (floor, walls, etc.), which examined with routine microbiological laboratory methods for bacteriology cultivation and determination at laboratory of Dep.of Poultry Diseases in Scientific Veterinary Institute of Serbia To our examination we tested antibacterial efficacy of next disinfectant: phenol (1 and 2% concentration), potassium hydroxide (2 and 3%), potassium dichloride izocyanurat (0.02 and 0.04%), perchlor vinegar acid (2 and 3%), iodophor (0.1 and 0.3%), kaliumperoxisulfate (1 and 2%), amphotenzide (1 and 2%), and formaldehyde (5 and 10%). Survive of found bacterial strain were examined 1, 5 and 10 minutes and 24 hours after exposition to each of disinfectant. That control we performed using swabs at various parts of objects and its microbiological examination by method described by Cremieux and Fleurette (1991).
RESULTS AND DISCUSION During examination we detected the presence of Salmonellae spp., E.coli, Staphylococcus spp., and Aspergillus spp. During our examination, formaldehyde we outstanding like disinfectant with best antibacterial action because they destroyed tested bacterial microorganism in both using concentration promptly after exposure. Followed by perchlor vinegar acid and iodophor was efficiency after exposition of 5 minutes in both concentrations to all of tested microorganisms. Kaliumperoxisulfate, phenol and amphotenzide were efficiency in all concentration after 10 minutes to all tested microorganisms. Potassium dichloride izocyanurat was show efficacy against all bacterial microorganisms after 24 hours exposition. With fungal agents best result showed formaldehyde, because they destroyed tested fungal microorganism promptly after exposure; followed by perchlor vinegar acid, iodophor and amphotenzide which destroyed it at first 1 minute of application. Kaliumperoxisulfate and phenol were efficiency in all concentration after 5 minutes. Potassium dichloride izocyanurat was show efficacy after 10 minutes. Those results especially at results of formaldehyde efficacy are similar like results of examination performed by Tucker et al. (1975): Andryunin (1982), and Dietz et al (1980). Efficacy of other disinfectants was analogous with results of
Bodiroga et al. (1996), Mijatov et al. (1998) and Ili (2004).
873
CONCLUSION Results of our examination shown that formaldehyde we outstanding like disinfectant with best antibacterial and antifungal action because they destroyed tested microorganism in both using concentration promptly after exposure. Other disificiant present minimum wariation at exposition time and efficacy against bacterial and fungal microorganisms.
REFERENCE
1. 2. Andryunin Y.I., 1982 - Theoretical basis of the bactericidal activity of an alkaline solution of formaldehyde. Vestnik Selskokhozyaistvennoi Nauki, USSR,9, 8084. Bodiroga Jovanka, Viakci M. Aanin Ruica, Pisarev Mira, 1996 - Nove mogunosti dezinfekcije vode za pie, prostora i opreme preparatom Peral-S na ivinarskim farmama. VII savetovanje DDDD u zatiti ivotne sredine, Sutomore, 32-33. Cremieux A., J. Fleurette, 1991 - Methods of testing disinfectans u Block, S.S.: Disinfection, sterilization and preservation. Philadelphia, Lea Febiger (4 izdanje) 1009-1027. Dietz P., Bohm R., Strauch D., 1980 - Effectivenss and safty of formaldehyde gas and aerosol of peracetic acid and hydrogen peroxide. Zentralblatt fr Veterinarmedizin, German federal Republic, 27B(4), 268-279, Hristov S., Anoji B., Vuini Marija, Stankovi B., 1996 - Uticaj praine vazduha na organizam ivotinja. Zbornik radova,VII savetovanje DDDDD u zatiti ivotne sredine, Sutomore, 268-275. Ili M., Damnjanovi N., Plea M., 1993 - Ispitivanje Galisepta u laboratorijskim i praktinim uslovima. IV simpozijum DDD u zatiti ivotne sredine, Vrnjaka Banja, 27-30. Ili ., 2004 - Influence of antimicrobial substance at pathogen bacterial strains and fungal in objects of poultry breeding, MsC thesis, faculty of Veterinary Medicine in Belgrade Langsrud S., Sundheim G., 1998 - Factory influencing a suspension test method for microbical activity of disinfectans. Journal of Appl. Mycrobiology, 1006-1012. Mayhall C.G., 1996 - Hospital epidemiology and infection control. London: Willians and Wilkins, 927. Mijatov Lj., Sajti G., Grbovi Mirjana, Molnar-Vojni Danica, 1997 - Prednosti i preimustva DESU amfotenzida u praksi. VIII savetovanje DDDDD u zatiti ivotne sredine.Zbornik radova, Subotica, 39-40. Mijatov Lj., Mirjana Grbovi, Danica Molnar, 1998 - Dejstvo DESU amfotenzida na animalne patogene bakterije. Zbornik radova, IX savetovanja DDD. Pavlovi I., Blain Vesna, Ili ivka, 1988 - Salmoneloza ivine tokom 1987.godine na uoj teritoriji SR Srbije i njihovo suzbijanje Zbornik radova ivinarski dani Jugoslavije, Pritina, 133-144; Payne D.N., Babb J.R., Bradlly Cr., 1999 - Anerotnation of the smitability of the European suspension test to reflect in vitro activity of antiseptics against clinically significant organisms. Letters in Appl. Mycrobiology, 7-12. Tucker J.F., Harry E.G., Wainman H.E., 1975 - The effect of fumigation with methyl bromide or formaldehyde on the infectivity of poultry house litter naturrally contaminated with Salmonella virchow. British Veterinary Journal, UK, 131(4), 474-485.
3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14.
874
EVALUAREA IZOLRII SPECIILOR VIBRIO NONHOLERICE DIN PROBE DE AP PRELEVATE DIN SUDUL I SUD-ESTUL RII
THE ISOLATION EVALUATION OF NON-CHOLERIC VIBRIO SPECIES IN SOUTH AND SOUTHEAST ROMANIAN WATERS
L. TUDOR, I. OGOE U.S.A.M.V. Bucureti The investigations have searched the harvesting frequency of bacterial species of non-choleric Vibrio from aquatic samples. There were harvested substantiations from fresh waters and salted waters. These researches are continuing the last years began studies, for realize a completed and detailed statistics. Between 1997-2005 have been prelevated and prepared a total number of 4585 water substantiations for south and southeast Romanian waters. From the total number of analyzed substantiations were isolated 161 stems of non-choleric Vibrio species representing a total harvesting frequency of 3.51 %. The annual harvesting frequency has been: in 1997 of 4,05%; in 1998 of 3,92%; in 1999 of 4,237; in 2000 3,26%; in 2001 of 4,18; in 2002 of 4,36%; in 2003 of 2,51%; in 2004 of 2.03% and in 2005 of 3.08%.
Key-words: incidence, vibrions, non-choleric, freshwater, saltwater
Speciile bacteriene ncadrate n genul Vibrio care au semnificaie clinic (sunt patogene pentru om sau diferite specii de animale) sunt de obicei prezente n mediul exterior i formeaz o microflor autohton a apelor din bli, lacuri srate, estuare, mri i oceane din vecintatea rmurilor situate n zonele temperate i calde (3, 14). Unii specialiti consider c sunt specii ubiquitare, deoarece supravieuiesc i se multiplic n cele mai variate medii sau n produsele alimentare (3, 6, 10). Dei pe plan mondial s-au fcut numeroase acumulri tiinifice privind toxiinfeciile alimentare pe care le produc la om unele bacterii ale genului Vibrio, n ara noastr exist puine date referitoare la incidena toxiinfeciilor alimentare produse de vibrionii non-holerici (Vibrio vulnificus, Vibrio fluvialis, Vibrio mimicus, Vibrio alginolyticus, Vibrio metschinikovii, Vibrio parahaemolyticus, Vibrio furnissii, etc) i mai ales studii referitoare la prezena acestor bacterii n ape, pe suprafaa corpului sau n cavitile naturale ale diferitelor organisme acvatice, precum i n diferite tipuri de alimente. Aceste motive relev oportunitatea investigaiilor referitoare la prevalena speciilor bacteriene ncadrate
875
n genul Vibrio, din diferite produse alimentare cu origine acvatic: pete, crustacee, molute, etc. Mai muli autori au prezentat studii ample privind izolarea vibrionilor nonholerici din diferite tipuri de medii (ape dulci, ape srate, sedimente) constatnd totodat capacitatea deosebit a acestor bacterii de a se adapta i multiplica (2, 3, 6, 8, 11, 14). La nivel animal, vibrionii au fost izolai din zooplancton, molute (lamelibranhiate, cefalopode sau gasteropode), din organele interne i musculatura diferitelor crustacee acvatice, din intestinul i ficatul petilor, din musculatura i diferitele organe interne ale mamiferelor acvatice (2, 3, 6, 8, 11, 14). n ultimii ani s-au evideniat probe despre existena unor rezervoare de vibrioni n diferite tipuri de medii naturale (sedimente, plancton), bacteriile fiind preluate i concentrate n organism de ctre animalele acvatice. Studiile fcute n apele de coast ale SUA i Australiei au demonstrat existena unor rezervoare de vibrioni non-holerici n crustaceii i molutele cu cochilie. De aceea n unele ri, cum ar fi SUA, sursa principal de infecie pentru om o reprezint consumul stridiilor, iar unele episoade de toxiinfecii alimentare apar n urma consumrii de alimente cu origine marin, n principal carne netratat termic provenit de la specii acvatice. Prevalena toxiinfeciilor alimentare produse de diferitele specii Vibrio non-holerice poate s ating n unele ri (cum ar fi Japonia) valori de peste 70% din totalul cazurilor de infecii cu etiologie bacterian. Numrul de cazuri din fiecare episod variaz de la o persoan la mai multe sute de persoane. Aceste studii efectuate n alte ri au impulsionat demararea cercetrilor noastre, pentru a constata existena vibrionilor n apele salmastre din Romnia, frecvena de izolare din diferite tipuri de medii naturale i probe biologice. Un alt motiv pentru care am considerat necesar studierea vibrionilor non-holerici n unele biotopuri a fost determinat de necesitatea cunoaterii modului n care aceste bacterii circul n ecosistemele acvatice. MATERIAL I METODE
Au fost prelevate probe de ap din reeaua de lacuri a zonei de sud i sudest, din sistemul Razelm - Sinoe, zona Delta Dunrii i din zona litoral a Mrii Negre. Recoltrile au fost fcute pe o perioad de 9 ani, anual examinnd un numr reprezentativ de probe (tabelul 1). Probele recoltate au fost prelucrate prin metode speciale pentru izolarea i identificarea speciilor bacteriene ncadrate n genul Vibrio, utiliznd comparativ diferite metode (STAS ISO 8914, metodele FAO-OMS, metodele sintetice James D. Oliver, metodele originale).
876
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Probele de ap recoltate i prelucrate n vederea identificrii vibrionilor non-holerici Zona de recoltare Perioada 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total perioad Lacuri din zona de sud i sud-est 116 124 107 115 98 112 121 127 1116 1036 Complex RazelmSinoe 78 67 92 81 86 102 95 98 97 796 Zona Delta Dunrii 124 115 139 127 117 132 121 116 119 1110 Zona litoral Marea Neagr 127 179 211 198 154 204 182 201 187 1643 Total probe 445 485 549 521 455 550 519 542 519 4585
Probele de ap transportate n recipiente sterile i ermetic nchise sau n medii de transport, n laborator au fost introduse n cte dou tipuri de medii de mbogire. O parte a probei a fost introdus n cte 250 ml ap peptonat salin alcalin, apoi incubat timp de 20 24 de ore la 370C; alt parte din prob a fost introdus n cte 250 ml bulion salin cu polimixin B, apoi incubat la 35 370C timp de 7 8 ore. Dup incubare, din cultura total obinut, au fost striate cte 2 tipuri de medii solide de izolare selectiv (de obicei au fost utilizate geloza tiosulfat-citratbil-zaharoz TCBS i geloza tripsin-pepton-soia-clorur de trifeniltetrazolium TSAT). Incubarea s-a realizat timp de 18 24 ore, la 35 370C. Din culturile caracteristice obinute pe mediile de izolare selectiv (colonii netede galbene mari sau colonii netede verzui cu centrul albastru-verzui pe TCBS, sau colonii rou-viinii pn la rou-brun pe mediul TSAT) au fost preluate fragmente care s-au transplantat pe agar nutritiv salin i n bulion nutritiv salin; subculturile obinute, prin incubare 18 24 ore la 35 370C, au fost utilizate n etapa de identificare. Identificarea s-a efectuat fie pe baterie de teste biochimice, fie pe galerii de identificare Api (Api Campy sau Api 20 E).
REZULTATE I DISCUII Dintr-un numr total de 4066 probe de ap au fost izolate 145 tulpini bacteriene aparinnd genului Vibrio. Rezultatele obinute sunt redate sintetic n tabelul 2.
877
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 2 Frecvena de izolare a vibrionilor non-holerici din probe de ap Zona de recoltare Perioada Lacuri din zona de sud i sud-est 0 0 1 0,81 0 0 0 0 1 1,02 1 0,89 0 0 1 0,79 1 0,86 5 0,48 Complex RazelmSinoe 1 1,28 0 0 1 1,09 1 1,23 2 2,33 2 1,96 0 0 1 1,02 1 1,03 9 1,13 Zona Delta Dunrii 7 5,65 6 5,22 8 5,76 5 3,94 4 3,42 7 5,30 6 4,96 3 2,59 5 4,20 51 4,59 Zona litoral Marea Neagr 10 7,87 12 6,70 15 7,11 11 5,56 12 7,79 14 6,86 7 3,85 6 2,99 9 4,81 96 5,84 Total probe 18 4,05 19 3,92 24 4,37 17 3,26 19 4,18 24 4,36 13 2,51 11 2,03 16 3,08 161 3,51
1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total perioad
Nr. tulpini % Nr. tulpini % Nr. tulpini % Nr. tulpini % Nr. tulpini % Nr. tulpini % Nr. tulpini % Nr. tulpini % Nr. tulpini % Nr. tulpini %
Analiza rezultatelor obinute demonstreaz o prevalen total pentru perioada luat n studiu de 3,51%. n cadrul zonelor analizate, incidena cea mai ridicat a fost constatat n zona litoralului Mrii Negre (5,97%), iar cea mai sczut inciden a fost gsit n zona lacurilor din sud i sud-est (0,43%). CONCLUZII Prevalena total a izolrii de bacterii din genul Vibrio (vibrioni nonholerici) pentru perioada luat n studiu a fost de 3,51. Variaiile anuale s-au situat n limite strnse, ntre un maximum de 4,37% i un minimum de 2,03%. Prin analiza statistic a datelor obinute s-a constatat c frecvena de izolare a vibrionilor non-holerici este mai mare pentru probele prelevate din zona litoral (cu un maxim de 7,79% n anul 2001) comparativ cu zonele fluviale (cu un maxim de 1,02 % n anul 2001). Frecvena de izolare a vibrionilor non-holerici din probele de ap cunoate variaii anuale care dovedesc o ciclicitate (perioade de maximum nregistrate n
878
toate apele i perioade de declin), pn n prezent putndu-se constata o periodicitate de cretere a incidenei de izolare de cca. 3 ani.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. Cerda-Cuellar M., Jofre J., Blanch A.R., 2000 A selective medium and a specific probe for detection of Vibrio vulnificus. Appl & Environ. Microbiol. 66 (2): 855-9 Oliver J.D., 1989 Vibrio vulnificus. In M. P. Doyle Bacterial pathogens in foods. Ed. M. Dekker, New York Oliver J.D., Kaper J.B., 1997 Vibrio species, cap 13, in M. P. Doyle Bacterial pathogens in foods. Ed. M. Dekker, New York Rpuntean Gh., Marica D., Pop M., Manolescu N., Rudreanu Natalia, 1993 An Original Soft-Agar for Selective Isolation of Vibrio cholerae and Vibrio furnissi from Waters, Foods and Pathological Materials. Simpozion WAVFH, Bangkok, Thailanda, 514-515 Tudor L., ogoe I., Stnescu V., 2001 Schem simplificat pentru izolarea i identificarea unor specii aparinnd genului Vibrio. Al IV-lea Simpozion aniversar al Institutului de Diagnostic i Sntate Animal 35 de ani de activitate n diagnosticul medical veterinar pentru aprarea sntii animale i umane, Bucureti, 145 Tudor L., Stnescu V., ogoe I., 2001 Prevalena speciilor patogene de Vibrio n ape, sedimente, animale acvatice i unele produse de origine animal. Al IV-lea Simpozion aniversar al Institutului de Diagnostic i Sntate Animal 35 de ani de activitate n diagnosticul medical veterinar pentru aprarea sntii animale i umane, Bucureti, 144. Tudor L., ogoe I., Stnescu V., 2001 Frecvena izolrii unor specii de Vibrio patogene pentru om, n zona de sud i sud-est a rii. Al IV-lea Simpozion aniversar al Institutului de Diagnostic i Sntate Animal 35 de ani de activitate n diagnosticul medical veterinar pentru aprarea sntii animale i umane, Bucureti, 146 Tudor L., 2001 Prevalena bacteriilor din genul Vibrio n alimente de origine animal, potenial implicate n toxiinfecii alimentare la om i nsuirile morfobiologice ale acestora. Tez de doctorat, FMV Bucureti Tudor L., ogoe I., 2001 Un nou mediu selectiv pentru izolarea speciilor nonholerice din genul Vibrio. Simpozion omagial 140 de ani de nvmnt medical veterinar romnesc, FMV Bucureti, 45 Tudor L., 2001 Evaluarea contaminrii produselor alimentare de origine acvatic cu specii Vibrio non-holerice. Simpozion omagial 140 de ani de nvmnt medical veterinar romnesc, FMV Bucureti, 135 Tudor L., 2002 Morfologia, biologia i implicaiile pentru patologie ale vibrionilor non-holerici. Ed. Printech, Bucureti Tudor L., Mitrnescu Elena, ogoe I., 2003 Evaluarea contaminrii cu vibrioni non-holerici a petilor capturat din apele zonei de sud i sud-est a rii. Lucr. t. Med. Vet. Timioara, Vol. XXXVI Tudor L., Mitrnescu Elena, ogoe I., 2003 Prevalena izolrii speciilor Vibrio non-holerice la molute acvatice capturate sau comercializate n zona de sud i sud-est a rii. Rev. Rom. Med. Vet., Bucureti, vol. 13, p. 114 Twed R.T., 1989 Vibrio parahaemolyticus. In M.P.Doyle Bacterial pathogens in foods, Ed. M. Dekker, New York, p. 569
5.
6.
7.
8. 9. 10. 11. 12. 13. 14.
879
EVALUAREA CALITII MICROBIOLOGICE A UNOR BRNZETURI COMERCIALIZATE PE PIEELE BUCURETENE

THE EVALUATION OF MICROBIOLOGICAL QUALITY FOR SOME TYPES OF CHEESE TRADED ON BUCHAREST MARKETS
L. TUDOR, I. OGOE, Elena MITRNESCU U.S.A.M.V. Bucureti The researches have been effectuated for determining the contamination grade of market cheese, following the supposition that all products are delivered on right analysis documents. It was analyzed a total number of 954 cheese samples. The samples have been harvested from 9 kinds of cheese from different market places. The obtained statistical analyzed results have been permitted the conclusion that entire types of cheese have been recorded unconformity samples. It have been remarked either the getting over of some microbial parameters (coliformes, coagulase-positive staphylococci, sulfite-reducing bacteria) or the presence of some pathogen and pathogen-conditioned bacteria (Clostridium perfringens has been isolated from 1.68% samples, Proteus sp. has been isolated from 0.84% samples).
Key words: cheese, evaluation, quality, bacteria, contamination
Calitatea microbiologic a brnzeturilor reprezint un domeniu al siguranei alimentare, deoarece prin prezena n produsul alimentar a speciilor bacteriene patogene sau condiionat patogene, sau datorit degradrii substratului nutritiv i formrii unor compui toxici, pot fi generate o serie de entiti morbide consumatorilor [2, 4, 5]. Avnd n vedere aceste considerente, n ultimii ani au fost derulate programe ample de modernizare a unitilor de procesare a laptelui i au fost achiziionate utilaje performante care asigur scderea numrului de contaminani n produsul finit, n acelai scop fiind preluate i adaptate noi tehnologii i fluxuri de procesare, mai eficiente i care corespund cerinelor actuale de igien n procesare [5, 8]. Efectul direct al acestor msuri s-a reflectat n primul rnd n calitatea produselor lactate n general, mbuntirea parametrilor microbiologici i fizicochimici ai semifabricatelor i produselor finite analizate imediat dup procesare, ns nu a influenat considerabil calitatea produselor finite analizate n cadrul punctelor de comercializare. n special brnzeturile sunt comercializate, chiar i n puncte de desfacere a unor super-marketuri, n condiii necorespunztoare: sunt
880
expuse tipuri diferite de brnzeturi (cu sau fr mucegai n past) fr a respecta condiii minime de prevenire a inter-contaminrii, sunt prezentate produse fr a fi preambalate, multe produse sunt expuse n vitrine deschise, felierea produselor se execut fr respectarea unor cerine igienice minimale. Este important ca agenii economici care au domeniile de interes n industria alimentar s-i nsueasc noile concepte igienice i s se concentreze asupra ntregului lan: materie prim produs finit comercializare. Numai o analiz dinamic a produselor lactate va asigura comercializarea unor produse salubre, care s-i pstreze n totalitate caracteristicile igienice. MATERIAL I METODE
Au fost prelevate probe de brnzeturi din diferite puncte de comercializare ale Municipiului Bucureti, n lucrarea de cercetare urmrindu-se cuprinderea unor tipuri sortimentale diferite, produse de diferii ageni economici i comercializate n diferite uniti de profil. Pentru acest studiu au fost alese mai multe sortimente de brnzeturi: cauri, brnzeturi srate (telemele) i brnzeturi cu past oprit i filat, brnzeturi fermentate. Probele prelevate au fost introduse n recipiente sterile i au fost transportate n condiii optime de temperatur. Prelucrarea probelor a fost efectuat n laboratorul de microbiologie alimentar conform normelor microbiologice STAS i metodelor standardizate ISO [10, 11]. Studiul s-a desfurat pe o perioad de 1 an (n cursul anului 2005), analizndu-se un numr total de 954 probe (125 probe de cauri, 114 probe de brnzeturi srate din lapte de vac, 96 probe de brnzeturi srate din lapte de oaie, 89 probe de brnzeturi srate din lapte amestec, 128 probe de cacaval Dalia, 157 probe de cacaval Rucr, 79 probe de mozarella, 54 probe de Tilsit i 112 probe de cacaval afumat). Pentru determinarea numrului total de germeni mezofili i aerobi, au fost efectuate diluii zecimale n ap peptonat, din fiecare diluie s-a repartizat cu pipete sterile cte 1 cm3 n cte 2 plci Petri. n fiecare plac s-a turnat agar topit i rcit la 40 45 C, s-a omogenizat i s-a incubat 24 ore la 37 C. S-a determinat media numrului de colonii / g produs [1, 3, 11]. Pentru determinarea numrului probabil de bacterii coliforme s-au efectuat diluii zecimale, din fiecare diluie introducndu-se cte 1 ml n cte 3 eprubete cu mediu BBLV (bulion lactozat cu sruri biliare i verde briliant) i tub Durham. S-a incubat 24 48 ore la 37 C. Interpretarea s-a fcut dup producia de gaz i calcularea mediei de 3 cifre (funcie de nota primit de fiecare din cele 3 eprubete cu mediul BBLV), media obinut fiind interpretat cu ajutorul tabelului Mac Grady. n paralel s-a utilizat i metoda de determinare a numrului de bacterii coliforme prin numrarea coloniilor (ISO 4832). Din diluiile zecimale se repartizeaz cu pipete sterile cte 1 ml n cte 2 plci Petri. n fiecare plac se toarn mediu VRBL (geloz cu lactoz, sruri biliare, cristal violet i indicator), topit i rcit la 45 C. Plcile pregtite se incubeaz la 35 C timp de 24 ore. Dup incubare se numr coloniile rou violacee i se calculeaz media cu formula: N 881
= c / (n1 + 0,1 n2) d [n care c reprezint suma coloniilor numrate; n1 este numrul de cutii de la prima diluie reinute pentru numrare; n2 este numrul de cutii de la a doua diluie reinute pentru numrare; d este rata diluiei care corespunde primei diluii folosite] [1, 3, 11]. Determinarea numrului de stafilococi patogeni s-a fcut printr-o tehnic asemntoare celei utilizate pentru determinarea NTGMA, folosind ca mediu solid geloza Chapman sau agar Baird Parker [3, 9]. Determinarea numrului de bacterii sulfito-reductoare s-a efectuat pe mediul cu sulfit de sodiu i citrat de fier, topit i rcit la 45 C n care s-a nsmnat cte 1 ml din diluiile zecimale. S-a incubat n anaerobioz la 37 C timp de 24 48 ore, dup care au fost numrate coloniile negre [1, 3, 11]. Pentru determinarea speciilor de patogeni i condiionat patogeni au fost utilizate metodele standardizate ISO: pentru identificarea bacteriilor din genul Salmonella SR ISO 6597, pentru identificarea stafilococilor plasmo coagulazo pozitivi STAS ISO 6888, pentru identificarea bacteriilor din genul Proteus SR 2356/1, pentru identificarea bacteriei Escherichia coli STAS ISO 4832, pentru determinarea numrului probabil de E. coli SR ISO 7251, pentru identificarea speciei Bacillus cereus SR ISO 7932, pentru determinarea numrului de mucegaiuri STAS 12965 91, pentru determinarea numrului de drojdii STAS 12964 91, etc [1, 11]. Toate tulpinile bacteriene izolate care au fost identificate prezumtiv ca aparinnd unor patogeni sau condiionat patogeni au fost testate biochimic pentru diagnostic de confirmare, datele tiinifice obinute fiind astfel riguros demonstrate.
REZULTATE I DISCUII Pentru a avea un element de comparaie i pentru a nelege semnificaia rezultatelor obinute, s-a utilizat pentru interpretarea rezultatelor Ordinul Ministrului Sntii nr. 975/1998, privind normele igienico sanitare pentru alimente. Parametrii microbiologici prevzui n acest ordin sunt redai n tabelul 1. Rezultatele obinute n urma analizei bacteriologice complete a fiecrei probe recoltate i prelucrate au fost prelucrate statistic calculndu-se medii pentru fiecare tip de produs. Numrul total de germeni mezofili aerobi a avut valori medii cuprinse ntre limite relativ mari: cauri - 2,4 x 103 ; telemele obinute din lapte de vac nepasteurizat - 1,7 x 104; telemele de oaie - 1,2 x 102; telemele proaspete obinute din lapte amestec - 2,9 x 102; cacaval Dalia 2,1 x 102; cacaval Rucr - 4,8 x 104; Mozarella - 6,7 x 103; brnz Tilsit 2,1 x 102; cacaval afumat - 2,7 x 102. Dei pentru tipurile sortimentale de brnzeturi analizate acest parametru nu este normat, considerm c valorile obinute relev un numr important de contaminani.
882
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 1 Condiii microbiologice pentru alimente i materii prime (extras din Ord. M. S. 975 / 1998) Nr. crt 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Denumirea alimentului Brnzeturi proaspete din lapte pasteurizat Brnzeturi proaspete din lapte nepasteurizat Brnzeturi proaspete: ca, telemea proaspt din lapte pasteurizat Brnzeturi proaspete: ca, telemea proaspt din lapte nepasteurizat Brnz proaspt din zer (urd) Brnzeturi maturate n saramur: ca, telemea din lapte pasteurizat Brnzeturi maturate n saramur: ca, telemea din lapte nepasteurizat Brnzeturi fermentate Brnzeturi cu past oprit i filat Brnzeturi frmntate Bacterii coliforme 100 1.000 10 100 1.000 10 100 10 10 100 E. coli 10 100 1 10 100 abs. 10 abs. abs. 10 Salmonella abs. abs. abs. abs. abs. abs. abs. abs. abs. abs. SPCP 10 10 10 100 10 10 100 10 10 10 NTDM 100 300 1.000 2.000 2.000 1.000 200
Analiza microbiologic pentru evaluarea numrului de bacterii coliforme, Escherichia coli i stafilococi coagulazo-pozitivi a demonstrat o serie de depiri comparativ cu valorile maximale admise. Analiza microbiologic pentru evaluarea numrului de bacterii sulfito-reductoare i Bacillus cereus a demonstrat prezena acestor specii bacteriene n probele studiate; dei acestea nu sunt normate au fost considerate necorespunztoare probele care au nregistrat valori mai mari dect limitele de admisibilitate stabilite la nivel european. Numrul de probe care au nregistrat depiri i procentul de probe necorespunztoare sunt redate n tabelul 2. Analiza statistic a rezultatelor a permis constatarea c majoritatea produselor au nregistrat un numr de probe necorespunztoare.
883
Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai Tabelul 2 Rezultatele analizei microbiologice a probelor de brnzeturi examinate The microbiological analysis results for cheese product samples Parametrul bacteriologic investigat Bacterii E. coli SPCP B. cereus Sortimentul coliforme Nr. Nr. Nr. Nr. % % % % probe probe probe probe Cauri 12 9,68 4 3,22 15 12,09 4 3,23 Brnzeturi 14,78 7 6,09 21 18,26 2 1,74 srate (lapte 17 de vac) Brnzeturi 5 5,10 1 1,02 5 5,10 2 2,04 srate (lapte de oaie) Brnzeturi 4 4,59 2 2,29 1 1,15 srate (lapte amestec) Cacaval 2 1,57 1 0,79 1 0,79 Dalia Cacaval 28 17,83 11 7,01 22 14,01 4 2,55 Rucr Mozarella 14 17,95 Brnz Tilsit 2 3,57 Cacaval 7 6,25 afumat SPCP stafilococ coagulaz - pozitiv Bacterii SR bacterii sulfito reductoare
Bacterii SR Nr. probe 1 5 2 10 % 0,81 4,35 2,29 6,37 -
Din totalul probelor analizate nu au fost izolate bacterii ncadrate n genul Salmonella. n schimb au fost izolate bacterii aparinnd genului Proteus, Clostridium, sau avnd o ncrctur n drojdii i mucegaiuri (NTF) mai mare de 1 x 104. De asemenea la unele brnzeturi a fost constatat prezena unor specii de mucegaiuri care fie produc compui toxici (Aspergillus), fie degradeaz structura biochimic a proteinelor i lipidelor i modific indicatorii organoleptici (Mucor sp.). Numrul probelor pozitive i procentul determinat din totalul probelor analizate pentru fiecare sortiment este redat n tabelul 3. Pe baza rezultatelor obinute n urma analizelor bacteriologice efectuate se demonstreaz faptul c o serie de produse sunt contaminate fie n timpul transportului, fie direct la comercializare, datorit depozitrii n condiii necorespunztoare sau datorit meninerii la temperaturi neadecvate tipului de produs.
884
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Tabelul 3 Rezultatele analizei microbiologice a probelor de brnzeturi examinate The microbiological analysis results for cheese product samples Parametrul microbiologic investigat Clostridium Aspergillus NTF perfringens sp. Nr. Nr. Nr. % % % probe probe probe 2 1,61 2 1,61 4 1 2 4 1 2 3,48 1,02 1,27 5,13 1,79 1,79 1 4 4 2 1,15 2,55 7,15 1,79 1 4 2 2 0,64 5,13 3,57 1,79
Sortimentul
Proteus Nr. probe %
Mucor sp. Nr. probe 7 1 % 8,97 0,89
Cauri Brnzeturi srate (lapte de vac) Brnzeturi srate (lapte de oaie) Brnzeturi srate (lapte amestec) Cacaval Dalia Cacaval 1 0,64 Rucr Mozarella 2 2,56 Brnz Tilsit 1 1,79 Cacaval 4 3,57 afumat NTF numr total de fungi
Prezena speciilor de Aspergillus i Mucor am constatat-o la cacavalul Rucr i cacavalul afumat meninute la temperaturi de refrigerare (0 6 C), acest fapt determinnd umezirea stratului protector i favoriznd, practic, dezvoltarea sporilor de mucegaiuri (constatare frecvent la cacavalurile meninute la temperaturi sczute mai multe sptmni) [4, 5, 6, 7]. CONCLUZII Toate tipurile sortimentale analizate au nregistrat probe necorespunztoare din punct de vedere microbiologic. Se remarc n mod deosebit 3 sortimente: cauri, brnzeturi srate (telemele) din lapte de vac i cacaval Rucr, care au nregistrat numrul cel mai mare de probe necorespunztoare, la majoritatea parametrilor microbiologici analizai. n urma analizei microbiologice nici un produs nu a nregistrat probe contaminate cu germeni ncadrai n genul Salmonella.
885
Examenul microbiologic pentru identificarea bacteriilor ncadrate n genul Proteus a relevat prezena acestor bacterii n 8 probe, din care 4 probe aparinnd unui singur tip de produs (Cacaval afumat). Specia Clostridium perfringens a fost identificat n 16 probe (1,68% din totalul probelor examinate), numrul cel mai ridicat de probe pozitive fiind nregistrat de sortimentele: brnzeturi srate (telemele) din lapte de vac (3,48%) i Mozarella (5,13%).
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. Brzoi D., 1985 Microbiologia produselor alimentare de origine animal. Ed. Ceres, Bucureti. Brzoi D., Meica S., Negu M., 1999 Toxiinfeciile alimentare. Ed. Diacon Coresi, Bucureti. Brzoi D., Apostu S., 2002 Microbiologia produselor alimentare. Ed. Risoprint, Cluj-Napoca. Bondoc I., indilar E.V., 2002 Controlul sanitar veterinar al calitii i salubritii alimentelor, Vol I. Ed. Ion Ionescu de la Brad, Iai. Popa G., Stnescu V., 1981 Controlul sanitar veterinar al produselor de origine animal. Ed. didactic i pedagogic, Bucureti. Popescu N., Meica S., 1995 Bazele controlului sanitar veterinar al produselor de origine animal. Ed. Diacon Coresi, Bucureti. Rotaru O., Mihaiu M., 2001 Igiena veterinar a produselor alimentare. Ed. Risoprint, Cluj-Napoca. Savu C., Carmen Petcu, 2002 Igiena i controlul produselor de origine animal. Ed. SemnE, Bucureti. Tudor L., 2005 Controlul sanitar veterinar i tehnologia produselor de origine animal. Ed. Printech, Bucureti. xxx SR ISO Standarde de analize microbiologice pentru produsele de origine animal.
886
OBSERVATIONS REGARDING BACTERIOLOGICAL AND MYCOLOGICAL MICROFLORA IN VARIOUS CATS AND DOGS INFECTIONS
Elena VOICU, Cristina REBEGEA, Ingrid APETREI, C. CARP-CRARE, M. CARP-CRARE, Eleonora GUGUIANU U.S.A.M.V. Iai The aim of this study was the isolation and identification of bacteriological and mycological microflora from various dogs and cats secretions and excretions in Medical and Surgical Clinics of the Faculty of Veterinary Medicine between 10.2005 - 04.2006. The analizes were executed in the University Center of Medical Research Microbiology Immunology Laboratory Iai. There were analized a number of 17 samples of pathological matherial from 13 dogs and 4 cats After the microbiological examination there were isolated and identificated 27 bacteria stems and 6 mycological stems. From the 27 bacteria stems, 9 (33,33%) of them were Escherichia coli, 5 (18,51%) Staphylococcus spp., 5 (18,51%) Arcanobacter pyogenes, 3 (11,11%) Clostridium perfringens, 3 (11,11%) Streptococcus spp., 1 (3,70%) Pseudomonas aeruginosa, 1 (3,70%) Proteus spp. From the 6 isolated mycetes stems, 3 (50%) of them were represented Candida spp 2 (33,33%) of 2 (33,33%) Malassezia spp. and 1 (16,66%) Cryosporium spp. For all the isolated species pathogenity tests and antibiograma were executed. The association between bacteria and mycotic flora was observed in 4 case, 1 case of mycotic flower only and the rest of 12 cases were with bacteriological flora.
Key words: microbiological exam, , antibiograma, pathogenity
The microbiological flora isolated from dogs and cats with different infections is various, bacteriological and mycotic species potentate most of the time their pathogenity. In majority of cases pathological matherials represented of different secretions, excretions contain an association of bacteriological and mycotic flora. The isolation and identification of involved species is very important establishing the diagnostic, but for the vetenarian present importance the antibiograma results on total flora, for an efficient tratament. (1, 2, 3, 4, 6) MATERIALS AND METHODES
Between 10.2005 04.2006 were analised 17 samples of pathological material from 13 dogs (with ages between 7 months and 10 years) and 4 cats (with ages between 4-9 years) of different breed: 3 samples of otical secretions, 3 887
samples of pharingian exudat, 6 urine samples, 4 dermical samples and 1 sample of vaginale secretion. The pathological material was harvested in sterile conditions and direct microscopic exam was made on Gram stained slides. For microbiological flora isolation and identification the samples were cultured on usuales and diagnostic culture mediums specific to aerobe and anaerobe bacteria, as well as to mycetes (agarosis, bulion, Sabouraud, PDA, mediums with potatoes extract). The tubes were incubated in thermostat at 37oC, 2448 hours for bacteria and at 22-25oC, 3-5 days for mycetes. In function of morfoculturale characteristics there were cultered on selective and identification mediums (Chapmann, Levine, TSI, MIU, Simmons, MacConkey). Biochemical tests used have followed to evidence catalasyc activity, manitol (Staphylococcus spp.), glucosis, lactosis, zaharosis fermentation, indol production (Escherichia coli). In species potential pathogenes it was determined the pathogenity using haemolysis test on the sheep and rabbit erhytrocites, the test of rabbit citratated plasma coagulation, inoculation of laboratory animals. The sensibility to antibiotics and chimioterapics of the isolated germs was dertermined using antibiograma, diffusimetric method (OXOID Dispenser and antibiotics and chimioterapics microcomprimates OXOID and PHIZER: AMP Ampicillin, AMC- Amoxycillin/Clavulanic acid, NA Nalidixic acid 30g, CN Gentamicin 10g, E Erythromicyn 15g, K Kanamycin - 30g NOR Norfloxacin 10g, OB Orbenin 25g, RD Rifampicin 30g, TE Tetracycline 30g, W Trimetroprim 5g), except the samples bacteriological negative examined only mycological on native slides with lactophenol-eosine or glycerine.
RESULTES AND DISCUTIONS The studied cases and the microbiological exam results are sinthetized in
tables 1 and 2.
Table 1 Synthesis of analised samples and the results of microbiological exam and antibiograma in cats Samples Cats Microbiological isolated species E. coli Proteus spp. E. coli E. coli, Cl.perfringens Candida spp. E. coli Antibiograma results S - RD R - OB, AMP, TE, E, NA S - RD, CN R - NA, AMP, TE, E, K S - RD, K R - CN, TE, W, AMC, AMP, E S - W, RD, NOR R -TE, E, CN
Pharingiane Tomcat, 5 years - acute exudate laryngotraheitis Birmanez tomcat, 9 years - chronical nephritis Urine Persane cat , 4 years heamoragical cystitis Tomcat, 5 years chronical nephritis
888
Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar Table 2 Synthesis of analised samples and the results of microbiological exam and antibiograma in dogs Samples Dogs Rottwailer, 5 years Otical secretions Cocker, 7 years - otitis German shepard , 7 years Pharingiane exudate Cocker , 5 years pharyngitis Ciobnesc mioritic, 7months Female dog , 9 years cystitis Urine Boxer, 10 years chronical nephritis Peckinez, 3 years nephritis Dermical samples Dog, 7 years dermatitis of bacteriological hypersensibilization Cocker, 1year Raclat plantar German shepard, 9months pyodermitis Bull terrier, 2 years Female dog, 5 years Microbiological isolated species Staphylococcus spp. Malassezia spp. Pseudomonas aeruginosa Arcanobacter pyogenes Cryosporium spp., Malassezia spp. Arcanobacter pyogenes Antibiograma results S - CN, AMP, RD R - K, E, TE S - RD R - CN, E, TE, K, W, AMC, AMP -
S - RD R - CN, E,TE, K, AMC, AMP, W Staphylococcus spp., E. S - NOR coli R - TE,E, AMP, Arcanobacter pyogenes AMC, RD, W MS - AMP, RD Arcanobacter pyogenes R - OB, K, CN, NA, Candida spp E, TE S - NOR E. coli R - TE, AMP, AMC, E, CN S - AMP, Streptococcus spp. R - TE, K, RD, E, E. coli AMC, W Staphylococcus spp. Cl. perfringens Arcanobacter pyogenes Cl. perfringens Streptococcus spp.Staphylococcus spp. E. coli Streptococcus spp. Staphylococcus spp E. coli Candida spp. S - OB, RD, R NA, AMP, TE, E S -RD, CN R - E, K, TE, W, AMC, AMP S - NOR, R - W, RD, TE, AMC, AMP, CN, E S -RD R -TE, NOR, W, CN, E S - NOR R - W, RD, TE, AMC, AMP, CN, E
Plantar exudate Vaginale secretion
After the microbiological exam there were isolated and identificated 27 bacteriological stems and 6 mycetes stems. From the 27 bacteria stems, 9 (33,33%) of them were Escherichia coli, 5 (18,51%) Staphylococcus spp., 5 (18,51%) Arcanobacter pyogenes, 3 (11,11%) Clostridium perfringens, 3 (11,11%) Streptococcus spp., 1 (3,70%) Pseudomonas aeruginosa, 1 (3,70%)
889
Proteus spp. From the 6 isolated mycetes stems, 3 (50%) of them were represented Candida spp 2 (33,33%) of 2 (33,33%) Malassezia spp. and 1 (16,66%) Cryosporium spp. For all the isolated species pathogenity tests and antibiograma were executed. Association of more bacteriological and/or mycotical species is frequent, being observed in 5 (29,41%) of the 17 analised samples (4 of the dogs and 1 of the cats). Staphylococcus spp. was isolated in association with Malassezia spp., Arcanobacter pyogenes (1 case) and Escherichia coli (2 cases) with Candida spp, . Malassezia spp. with Cryosporium spp. (1 case). Micoorganisms sensibility to different antibiotics and chimioterapics action varies in function of microbiological flora association, but there are observed differences of sensibility of defferent stems from the same identificated specie. Results statistics sinthetized in tables 1 and 2 shows a variable sensibilitaty of more frequent isolated species to various antibiotics and chimioterapics action: Staphylococcus spp. (Gram positive): in association with Malassesia spp. is sensitive to Ampicilline action, in the other cases being resistent (5); in association with Gram positive (Arcanobacter pyogenes or Streptococcus spp.) and Gram negatives germs (Escherichia coli) is sensitive to Norfloxacin action and resistent to Rifampicin action; in association with another Gram positive germ (Streptococcus spp.) is sensitive to Rifampicin action and resistent to Norfloxacin action. Arcanobacter pyogenes (Gram positive): alone or in association with other Gram positive germs (Clostridium perfringens) is sensitive to Rifampicin and Gentamicin action towards which Gram negativeflora is resistent. in association with Gram negative flora (Pseudomonas aeruginosa) is sensitive to Rifampicin action only. in association with mycetes (Candida spp.) is sensitive to Ampicillin action, towards which it it usualy resistent. Escherichia coli (Gram negative): izolated in pure culture it is sensitive to Rifampicin and Norfloxacin. in association with Gram pozitive flora (Staphylococcus spp, Streptococcus spp.) and mycetes (Candida spp) is resistent to Rifampicin. in association with Streptococcus spp. it is sensitive to Ampicillin, towards which it is usualy resistent. Antibiograma results analyse reveals the fact that isolated species from all samples are, with small exceptions, sensitives to Rifampicin and resistent to Erythromicin, Tetracycline, Kanamycin.
890
CONCLUSIONS There were analysed 17 samples of pathological material from 13 dogs and 4 cats (3 samples of otical secretions, 3 samples of pharyngian exudat, 6 urine samples, 4 dermical samples and 1 sample of vaginale secretion). From the 27 bacteria stems, 9 (33,33%) of them were Escherichia coli, 5 (18,51%) Staphylococcus spp., 5 (18,51%) Arcanobacter pyogenes, 3 (11,11%) Clostridium perfringens, 3 (11,11%) Streptococcus spp., 1 (3,70%) Pseudomonas aeruginosa, 1 (3,70%) Proteus spp. From the 6 isolated mycetes stems, 3 (50%) of them were represented Candida spp 2 (33,33%) of 2 (33,33%) Malassezia spp. and 1 (16,66%) Cryosporium spp. Association of more bacteriological and/or mycotical species is frequent, being observed in 5 (29,41%) of the 17 analised samples (4 from the dogs and 1 from the cats). Staphylococcus spp. was isolated in association with Malassezia spp., Arcanobacter pyogenes (1 case) and Escherichia coli (2 cases) with Candida spp, . Malassezia spp. with Cryosporium spp. (1 case). Isolated bacteriological species from all the samples are sensitive, each one, to Rifampicin (except some bacteriological associations: Staphylococcus spp.E.coli Arcanobacter pyogenes, Streptococcus spp. E.coli, Streptococcus spp. E.coli - Staphylococcus spp or bacterio-mycotic: E.coli Candida spp.) and resistent to Erythromicin, Tetracycline, Kanamycin. Association between Staphylococcus spp. or Arcanobacter pyogenes with Malassesia spp. or Candida spp. confers sensitivity to Ampicillin, towards which Gram positive bacteria are resistent.
BIBLIOGRAPHY
1. 2. 3. 4. 5. 6. Carp-Crare M., Eleonora Guguianu, Timofte Dorina, 1997 Practical works of Veterinary Microbiology. Intern use, UAMV, Iai; Guguianu Eleonora, 2002 General Bacteriology, Venus Publishing House, Iai; Rucnescu H., Bica Popii Valeria, 1986 Veterinary Bacteriology, Ed. Ceres, Bucureti Rpuntean Ghe., Rpuntean S., 2005 Special Bacteriology, Ed. Academic Pres, Cluj-Napoca. ogoe I., Dobrea Mimi, 2006 Veterinary Bacteriology, Ed. Printech Bucureti. Zarnea G. General Microbiology Tratate , Ed. Academiei Romne, Bucureti, vol. I-IV, (1993-1990).
891
INVESTIGAII EPIDEMIOLOGICE PRIVIND LEUCOZA ENZOOTIC BOVIN N JUDEUL VASLUI

EPIDEMIOLOGICAL INVESTIGATIONS ON THE ENZOOTIC BOVINE LEUKOSIS (LEUKEMIA) THROGHOUT VASLUI COUNTY
Ani DMCEANU D.S.V.S.A. Vaslui Investigations on monitoring the bovine enzootic leukosis (Bovine Leukosis Virus BLV infections) throughout Vaslui county since 2000 until 2005 have been performed by serological tests of early detection of the specific antibodies (the immuno-diffusion test in agar gel ID and the immuno-enzymatic ELISA). During this period, a number of 427394 serological tests have been performed of which 350182 by ID and 77212 by ID and ELISA. A number of 1643 positive samples have been diagnosed. The incidence of BLV infections in Vaslui county recorded a continuous dropping from 0.64% in 2000 to 0.16% in 2005. Meanwhile, a stepwise decrease of the number of infested spots occurred, from 55 in 2000 to 14 in 2005. The spatial distribution of BLV infections throughout Vaslui county has been monitored by drawing up cartograms. These ones highlighted the fact that in 2000, 21 villages were free of BLV, while during the period 2001-2004 the number of free BLV villages increased to a number varying from 37 to 41, while in 2005 the number of free BLV villages reached 62. Thus, one can conclude that throughout Vaslui county, the degree of BLV spreading dropped, due to the efficiency of the profilaxic measures (draining by extraction, depopulation) enforced by the commencement of the national program of identification, which has as goal the limitation of the free movement of the ill animals.
Key words: BLV infections, Vaslui county, ID test, ELISA test, cartograms
Leucoza enzootic bovin (LEB) este o infecie viral produs de un virus din familia Retroviridae, subfamilia Oncovirinae, transmisibil pe cale vertical, de la mama la ft, ca i pe cale orizontal, de la animal la animal i de la ferm la ferm sau de la o gospodrie la alta (1, 2, 6, 7) Virusul leucozei bovine (VLB) produce o infecie cronic, actualmente larg rspndit pe tot globul, dar numai 1-5% din bovinele infectate dezvolt leucemia limfoid sau limfomul malign. Ultimele investigaii efectuate de un colectiv de cercettori de la Universitatea din California au dovedit prezena ADN-ului VLB n esutul mamar al femeilor bolnave de cancer mamar. Acesta constituie un un motiv n plus pentru investigaiile epidemiologice privind LEB, n vederea evitrii rspndirii virusului n efectivele de bovine, care constituie sursa principal de lapte i produse lactate pentru populaie (3, 4, 5).
892
In Romnia, lichidarea unitilor de cretere a animalelor organizate sub form de CAP-uri cu preluarea necontrolat a animalelor de populaie, apoi circulaia clandestin a animalelor, au condus la contaminarea cu VLB a taurinelor din sectorul gospodriilor populaiei.
MATERIAL I METOD Obiectivul prezentei lucrri este studiul incidenei i rspndirii LEB pe teritoriul judeului Vaslui. In acest scop s-au efectuat observaii epidemiologice prin analiza datelor din evidenele sanitar-veterinare judeene i prin efectuarea testelor de depistare LEB incluse n Programul strategic naional de supraveghere, profilaxie i combatere a bolilor la animale. Dintre tehnicile serologice disponibile pentru detectarea infeciei cu VLB sau utilizat n cadrul Laboratorului DSVSA Vaslui, urmtoarele teste: imunodifuzia n gel de agar (ID) i testul imuno-enzimatic (ELISA), conform metodologiei prevzute n instruciunile oficiale (Manual OIE 2000). Investigaiile s-au bazat pe metodele epidemiologice descriptive, lundu-se n considerare: spaiul (ntreg teritoriul judeului Vaslui) i timpul (intervalul 20002005). Rezultatele au fost prelucrate n tabele, grafice i valorificate sub form de indicatori de frecven (prevalen, inciden) i localizare topografic (cartograme).
REZULTATE I DISCUII Frecvena i dinamica LEB, pe baza testelor serologice, n judeul Vaslui, pe parcursul a 6 ani, din 2000 pn n 2005, sunt prezentate n tabelele 1, 2 i 3 i evideniate grafic n fig. 1. Analiza centralizat a datelor din tabelul 1 evideniaz faptul c n perioada 2000-2005 s-au efectuat 427.394 de examene serologice pentru depistarea LEB (350.182 examene ID i 77.212 examene ID i ELISA), nregistrndu-se un total de 1643 probe pozitive. Urmrind evoluia n dinamic a incidenei LEB n perioada studiat se constat c numrul animalelor serologic pozitive, raportat procentual la numrul de animale examinate, ca i numrul focarelor nregistrate pe teritoriul judeului Vaslui se reduc treptat de la 556 (0,64%) probe pozitive, respectiv 55 focare n 2000 la 102 (0,22%), respectiv 44 focare n anul 2005. Intocmirea cartogramei judeului Vaslui a permis evidenierea evoluiei focarelor de boal, precum i a gradului de infecie n focar n perioada 20002005. Se remarc faptul c numrul de localiti cu grad de infecie peste 5% este redus: 1 focar n anul 2001 la SC Cerealcom SA Roieti (6,59%) i 1 focar n 2004 la Crja (8,18%). Pe parcursul celor 5 ani investigai, numrul localitilor indemne a crescut de la 21 n anul 2000 la 62 n anul 2005 (fig.2).
893

Tabelul 1 Situaia supravegherii prin diagnostic serologic a leucozei enzootice bovine (LEB) n perioada 2000-2005, n judeul Vaslui Anul 2000 2001 2002 2003 2004 2005 Total Nr. probe examinate ID 64.296 99.116 97.738 43.898 45.134 350.182 ID + ELISA 22.674 54.538 77.212 Total 86970 99.116 97.738 54.538 43.898 45.134 427.394 Probe pozitive Numr 556 383 306 171 154 102 1.643 % 0,64 0,39 0,31 0,31 0,35 0,22 -
Tabelul 2 Evoluia focarelor de LEB n judeul Vaslui n perioada 2000-2005 Nr. CSV-uri n care s-a diagnosticat boala 55 40 36 37 35 Nr. focare Numr declarate curi din infectate GP n care LEB s-a diagn. (GP+SC) boala 55 529 38 44 42 44 350 304 166 149 Numr SC n care s-a diagn. boala 1 Numr total de animale serologic pozitive 556 383 * 306 171 154 Variaia gradului de infecie n focar (%) 0,09-4,65 0,06-6,59 0,03-3,39 0,08-2,13 0,08-8,18 0,1-3,0
Anul
2000 2001 2002 2003 2004
2005 14 44 102 102 * din care 6 animale la SC Cerealcom SA Roieti, cu grad de infecie peste 5 %.
Tabelul 3 Gradul de infecie n localitile cu LEB n judeul Vaslui n perioada 2000-2005 Nr.localit. cu infecie >5% 0 1 0 0 1 Nr. localit. cu infectie 1-5 % 12 6 6 6 3 4 Nr. localit. cu infecie <1% 43 33 30 31 31 10 Nr. localit. indemne 21 36 40 39 41 62
Anul 2000 2001 2002 2003 2004 2005
894
0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
0,64 0,39 0,31 0,31
0,35 0,22
2000
2001
2002
2003
2004
2005
Fig.1. Incidena LEB n judeul Vaslui n perioada 2000-2005.
Fig. 2. Focare de LEB la sfritul anului 2005, n judeul Vaslui. Localitile nemarcate sunt indemne de leucoz enzootic bovin.
895
CONCLUZII 1. In perioada 2000-2005 n judeul Vaslui s-au efectuat 427.394 teste serologice pentru detectarea timpurie a LEB, utilizndu-se testul de imunodifuzie n gel de agar ID i testul imunoenzimatic ELISA. Pe ntreaga perioad studiat s-au diagnosticat 1643 probe pozitive. 2. Incidena LEB n judeul Vaslui a nregistrat o reducere continu de la 0,64% n anul 2000 la 0,22% n anul 2005. In acelai timp, numrul de focare a sczut treptat de la 55 n anul 2000 la 44 n anul 2005. 3. Distribuia spaial a LEB pe teritoriul judeului Vaslui s-a urmrit prin ntocmirea de cartograme. Acestea evideniaz faptul c n anul 2000 erau libere de LEB 21 de localiti; n perioada 2001-2004, numrul localitilor indemne a crescut, variind ntre 37 i 41, iar n 2005 s-a nregistrat o cretere a numrului de localiti indemne la 62. 4. In judeul Vaslui, gradul de rspndire a LEB s-a redus, datorit eficientizrii msurilor de profilaxie (asanare prin extracie, depopulare) dublate i de iniierea programului naional de nmatriculare (identificare), prin care se urmrete limitarea circulaiei libere a animalelor bolnave.
BIBLIOGRAFIE
1. 2. 3. 4. 5. Arp, L.H., 1998 Leukocytic Disorders, in Merck Veterinary Manual, Eight Edition, Merck-Co., Inc. Whitehouse Station, N.J., USA. Barna, I., Gh. Prvu, C. Iugan, 1995 Leucozele i bolile de imunosupresie SIDAlike la animale, Ed. Ceres, Bucureti. Collins, D.F., H.L. Tarpley, K.S. Latimer, 2005 - A Review of Enzootic Bovine Lymphosarcoma, College of Veterinary Medicine, The University of Georgia, Athens. Jain, N.C., 1986 - Schalm's Veterinary Hematology. Lea-Febiger, Philadelphia. Mayr B., Resch S., Hepperle S., Brem G., Reifinger M., Schaffner G., 2000 Comparative studies in the promoter and exon 1 regions of tumour suppressor p53 in several mammalian species: absence of mutations in a panel of spontaneous domestic animal tumours, J Vet Med A Physiol Pathol Clin Med., 47(10), 593-597. Grimshaw, W.T., A. Wiseman, L. Petrie, I.E. Selman, 1979 - Bovine leucosis (lymphosarcoma): a clinical study of 60 pathologically confirmed cases, The Veterinary Record, vol 105 (12), 267-272. Perianu T., S. Nicolae, M. Carp-Crare, Elena Velescu, N. Alexandru, Th. Sptaru, Oana Tnase, 2005 Boli infecioase ale animalelor. Viroze, Vol.II, Ed. Universitas., Iai
6. 7.
896
INVESTIGAII PRIVIND STAREA DE PURTTOR I ELIMINATOR DE SALMONELE MOBILE

Doina Anca HRU U.S.A.M.V. Iai Salmonella typhimurium is carried out in chickens intestine being considered a transit infection because isnt located in tissues. Some salmonellas have been isolated by different researchers from ovaries and oviducts and in a single case from a young chicken. Twenty healthy reproduction birds, serologically negative, were inoculated with Salmonella enteritidis and Salmonella typhimurium. The incubated eggs (sixty) from analyzed birds delivered thirty-two chickens whose feathers, lachrymal secretion, brain, lungs, liver, spleen, intestinal content and vitelus were tested bacteriological using KaufmanMuller and Wilson Blair growth mediums.
Cuvinte cheie: Salmonella spp., stare de purttor, paratifoz.
Din literatura de specialitate reiese c majoritatea cercetrilor sunt de acord c psrile infectate cu salmonele mobile sunt excretoare de germeni. Totui sunt nc discuii asupra stadiului de purttor n paratifoza ginilor i curcilor. S-a demonstrat posibilitatea ca salmonelele s se poat transmite i vertical. Se recomand a nu se renuna n programul de supraveghere, la controlul serologic n efectivele infectate,cu toate c o prob serologic negativ nu denot ntotdeauna indemnitate. Examenul serologic poate da unele indicii asupra prezenei n efectiv al unui numr de psri infectate. MATERIAL I METOD
Pentru a evidenia rspunsul n anticorpi aglutinani dup infecia experimental cu salmonele i starea de purttor i eliminator, un numr de 20 gini de reproducie, serologic negative pentru tifopuloroz, n vrst de 28 sptmni, au fost inoculate cu Salmonella enteritidis i Salmonela typhimurium. Psrile inoculate au fost controlate serologic prin reacia de hemaglutinare cu antigen pulorum, nainte de inoculare i dup infectarea lor din 7 n 7 zile n prima lun i din 14 n 14 zile n a doua lun de observaie. Fiecare examen serologic a fost nsoit de efectuarea controlului bacteriologic al excreiilor uro-digestive folosind aceleai medii uzuale, de mbogire i selective.
897
898
REZULTATE I DISCUII Studiile s-au efectuat n perioada 2003 2004, n dou uniti de creterea psrilor pentru ou de reproducie. Din cele 20 gini, 10 au fost inoculate per os i 10 subcutanat (cte 5 pentru fiecare specie de salmonela). Doza infectant a fost de 200 000 germeni dintr-o cultur de 24 ore de Salmonella enteritidis i Salmonella typhimurium (tabel 1). Cele 20 de gini inoculate cu cele dou specii de salmonela pe dou ci (per os i subcutanat) au fost meninute n acelai adpost, iar oule produse de ele n decurs de 60 de zile de observaie au fost recoltate n cuibare capcan, individualizate i supuse examenului bacteriologic. Un numr de 18 ou, produse n primele 2 zile dup inocularea tulpinilor de salmonela au fost examinate bacteriologic prin prezena salmonelelor pe coaj i n coninut. Alte 60 de ou, produse dup a treia zi de la infecie au fost cercetate numai pentru prezena salmonelelor pe coaj i apoi puse la incubat. Oule clare i embrionii mori la cele dou miraje sau la ecloziune, precum i cei rmai n coaj au fost cercetate bacteriologic prin nsmnri directe n mediile obinuite. Din oule puse la incubat (60 ou) au eclozionat un numr de 32 pui care au fost sacrificai la scoaterea lor din incubator i examinai bacteriologic pentru prezena salmonelelor pe puf, secreiile lacrimale, creier, pulmon, ficat, splin, coninut intestinal, vitelus . nsmnrile s-au fcut pe medii simple, cu excepia celor efectuate de pe coaja oulor, pufului i coninutului intestinal, pentru care s-au folosit i medii de mbogire (Kauffman-Muller) i selective (Wilson Blair). Dup 90 zile de la infectarea lor ginile au fost sacrificate, examinate anatomopatologic i bacteriologic. La examenul serologic efectuat prin reacia de hemaglutinare rapid pe lam i seroaglutinare lent n tuburi, la cele 20 de gini inoculate cu cele dou salmonele mobile pe cale subcutanat i per os nu s-a obinut nici un rspuns imun, prin apariia de aglutinine serice la titruri care s poat fi socotite pozitive. O singur pasre (nr. 7) inoculat per os cu Salmonella enteritidis arat din a 14-a si pana in a 56-a zi dup inoculare un titru serologic sczut (1/100) n reaia de seroaglutinare lent, antigen pulorum. n dou cazuri negative serologic prin reacia de seroaglutinare lent, sau nregistrat reacii slab pozitive n reacia de hemaglutinare rapid pe lam; ntrun caz acestea apar la 7 zile dup infecie (pasrea nr. 2), iar n altul se menin de la 7 la 56 de zile dup infecie (pasrea nr. 9). Stadiul de excretor de salmonele a putut fi pus n eviden la dou psri (nr. 12 i nr. 14) inoculate pe cale subcutanat cu Salmonella typhymurium n a 14-a i a 21-a zi dup inoculare. Salmonella enteritidis folosit n infecia celor 10 gini (5 pe cale oral i 5 pe cale subcutanat), nu a putut fi izolat din secreiile
899
uro-genitale, ns a fost prezent n dou cazuri pe coaja oulor produse de psrile cu nr. 6 i nr. 17, n a 7-a zi dup infecie. Coabitarea psrilor din cele dou grupe a dus i la realizarea infeciei cu Salmonella typhymurium a ginii nr.5, infectat pe cale subcutanat cu Salmonella enteritidis i care a murit n a 76-a zi dup infecie din cauza unei forme septicemice de paratifoz. La sacrificarea celor 19 gini din experien, dup 90 de zile de la inoculare, nu s-a nregistrat nici o modificare anatomopatologic specific pentru paratifoz, iar examenul bacteriologic al organelor parenchimatoase, ovarul i coninutul intestinal nu au pus n eviden n nici un caz salmonele. Examenul bacteriologic al coninutului celor 18 ou produse de 17 gini din lotul experimental n primele dou zile dup inoculare nu a permis izolarea de salmonele din albu i glbenu. La examenul bacteriologic al celor 60 de ou produse de lotul experimental din a 3-a la a 60 zi dup infecie i folosite la incubaie nu a dus la izolarea de salmonele din coninutul oulor i nici din embrionii mori la cele dou miraje i nici dup ecloziune. La examenul bacteriologic al celor 32 pui eclozionai din cele 60 de ou puse la incubat, sacrificai la scoaterea din incubator, s-a obinut: izolarea tulpinii de Salmonella typhymurium folosit la infectarea psrilor din lotul experimental, de la puful unui singur pui eclozionat dintr-un ou produs la 10 zile de infecie; restul puilor eclozionai i examinai au dat n totalitate rezultate negative n ceea ce privete prezena salmonelelor. nsmnrile efectuate de pe puful lor, din secreiile lacrimale, organele interne parenchimatoase (ficat, splin), creier, vitelus i din coninutul intestinal au fost sterile i negative pentru prezena salmonelelor. Stadiul de excretor de germeni a putut fi demonstrat la 14 i 21-a zi dup infecia pe cale subcutanat a psrilor cu Salmonella enteritidis i o alt pasre infectat cu Salmonella typhymurium arat c i psrile inoculate cu Salmonella enteritidis sunt eliminatoare de germeni. Coabitarea celor dou grupe de psri inoculate a pus n eviden caracterul de infecie de tranzit n cazul Salmonellei typhymurium i mai ales n cazul Salmonellei enteritidis. CONCLUZII Din investigaiile efectuate privind starea de purttor i eliminator de salmonele mobile, reies urmtoarele concluzii: 1. Ginile infectate experimental au produs ou, din coninutul crora nu s-a putut izola salmonela mobil folosit la infecie, n schimb aceste bacterii s-au izolat de pe coaja oulor produse de aceste psri n a 10 zi de la infectarea lor, iar din excreiile uro-genitale la 35 zile de la infecie.
900
2. Coaja oulor se contamineaz mecanic cu salmonele mobile(paratifice) dup perioada de formare. 3. Sursa principal de infecie n paratifoza aviar o constituie excretorii de germeni, iar calea principal de transmitere este reprezentat de coaja oului infectat n timpul trecerii lui prin cloac. 4. Msur principal de prevenire o constituie modul de pstrare a oulor de gin destinate incubaiei.
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Brzoi D., Meica S., Negu M., 1999 - Toxiinfeciile alimentare. Ed. Diacon Coresi, Bucureti. Carp-Crare M., Guguianu Eleonora, Timofte Dorina, 1997 Lucrri practice de Microbiologie veterinar Uz intern, Universitatea Agronomic i de Medicin Veterinar Ion Ionescu de la Brad Iai. Christensen J.P., Olson J.F., Hansen H.C., Brisgaord M., 1993 Characterization of Salmonella enterica serovar gallinarum biovars gallinarum end pullorum by plasmid prifiling biochimical analysis Avian Pathology (1992) 21 (3),461-470. Davies R., Liebane E., Breslin M., 2003 - Investigation of the distribution and control of Salmonella enterica serovar Enteritidis PT6 in layer breeding and egg production. Avian Pathology (June 2003) 32(3),227-237. Davies R.H., Breslin M., 2001 - Environmental contamination and detection of Salmonella enterica serovar Enteritidis in laying flocks. - Veterinary Record, 149, 699-704. Perianu T. (coord.), 2003 - Bolile infecioase ale animalelor domestice. Bacterioze. Vol l, Ed. Venus, Iai. Rapuntean Gh., Rapuntean S., 1999 Bacteriologie special veterinar Tipografia Agronomia, Cluj-Napoca.
901
CUPRINS
I I CI IC NI IN LI CL EC RE PR I.. P
1. Coofan V., Hricu Valentina, indilar E.V., Hricu A.C - Particulariti morfologice ale sistemului tendo-fascial i ligamentar al autopodiului toracic la cerb (Cervus elaphus) - Morphological particularities of the tendo-fascial and ligamentar system of the thoracic autopodium in Cervus elaphus ..................................................................................................................... 3 2. Belu C., Predoi G., Dumitrescu I., Georgescu B., Bioiu Carmen, Toader I., Pun D. - Aspecte privind morfologia unor articulaii ale membrului pelvin la stru (Struthio camellus) - Aspects regarding the moprphology of some articulations of pelvic limb in ostrich (Struthio camellus) ..................................... 11 3. Dumitrescu I., Predoi G., Cornil N., Belu C., Georgescu B., Dumitrescu Florina, Rou Petronela - Aspecte histologice la nivelul reelelor admirabile intracraniene la mamiferele domestice - The histological aspects at the level of rete mirable at domestic mammals .................................................. 15 4. Georgescu B., Predoi G., Cornil N., Ciobotaru Emilia, Belu C., Enache L., Dumitrescu I., Toader A.I. - Studii privind morfostructura bursei cloacale la palmipedele domestice - Studies concerning morphology of cloacal bursa in domestic palmipedes .......................................................................................... 20 5. Predoi G., Belu C., Dumitrescu I., Georgescu B., Cornil N., Bioiu V., Toader I. - Cercetri privind vascularizaia venoas a glandei mamare la oaie - Research regarding the venous vascularity of mammary gland in ewe ........ 27 6. Sptaru C., Sptaru Mihaela-Claudia, Ania D. - Anatomical particularities of the pelvis of the Carpathian bear - Particularitile anatomice ale pelvisului la ursul carpatin...................................................................................... 33 7. Sptaru Mihaela-Claudia - Particulariti morfo-funcionale ale membului toracic la veveri (Sciurus vulgaris) - Morpho-functional particularities of the thoracic member on the squirrel (Sciurus vulgaris).......................................... 38
902
8. Sptaru Mihaela-Claudia, Sptaru C. - Particulariti anatomo- fiziologice ale membrului pelvin la veveri (Sciurus vulgaris) - Morpho-functional particularities of the pelvic member on the squirrel (Sciurus vulgaris).................. 43 9. Stan F., Gudea A., Damian A., Papuc I. - Particulariti ale colateralelor i terminalelor arterelor iliace externe la ecvine - Particulariries of some collaterals and terminal arteries of external iliac in horse ...................................... 48 10. Marcus I.B., Iancu S., Sevastre B. - Cercetri privind nivelul plasmatic al unor componente biochimice enzimatice la obolani Wistar grefai ip. cu ascita tumoral Walker, corelat cu consumul de ap srcit n deuteriu Researchs concerning the plasma level of some hepatic enzymes in Wistar rats grafted ip. with Walker ascite tumor, correlated with deuterium depleted water intake.............................................................................................. 53 11. Iancu S., Marcus I.B. - Investigaii biochimice privind valorile transaminazelor serice i ale colesterolemiei corelate cu senescena la cini clinic sntoi - Biochemical investigations regarding the values of seric hepatic enzymes and cholesterol correlated with aging in clinically healthy dogs ........................................................................................................................ 60 12. Priscaru Cornelia, Burlacu Anca-Irina - Evaluarea efectului chemopreventiv al unor plante aparinnd familiei Lamiaceae Partea 1: Aprecierea efectului chemopreventiv-hepatoprotector al unor fitopreparate prin prisma alanil aminotransferazei si aspartat aminotransferazei - The chemopreventive effect evaluation of some plants from Lamiaceae family Part 1: The chemopreventive-hepatoprotector effect estimation of some phytopreparations by point of view of alanil aminotransferase and aspartat aminotransferase..................................................................................................... 67
13. Priscaru Cornelia, Rotaru Liliana - Evaluarea efectului chemopreventiv al unor plante aparinnd familiei Lamiaceae Partea 2: Aprecierea efectului chemopreventiv-hepatoprotector al unor fitopreparate prin prisma activitii -glutamil transpeptidazei si colinesterazei - The chemopreventive effect evaluation of some plants from Lamiaceae family Part 2: The chemopreventive-hepatoprotector effect estimation of some phytopreparations by point of view of -glutamil transpeptidaze and cholinesterase ......................................................................................................... 72 14. Oancea Servilia, Creanga D., Rpa Alina, Pavel Geta - Analysis of the natural and induced echinocytosis for two species of mammals ............................ 77 15. Oancea Servilia, Motrescu Iuliana, Rpa Alina, Airinei A. Spectrophotometric analysis of the blood plasma ................................................. 82
903
16. Falc C., Ciorba Gh., Petruse Cristina - The hematological profile of Limousine heifers during the adaptation-acclimatization period - Profilul hematologic la junincile de ras Limousine n perioada de adaptareaclimatizare ............................................................................................................ 86 17. Falc C., Ciorba Gh., Lupescu Daniela -The effects of calcium, phosphor and of the lack of animal protein within broiler food upon some sanguine and bioproductive parameters - Efectul nivelului calciului, fosforului i al privrii de protein de origine animal din hrana puilor de carne asupra unor parametrii biochimici sangvini i bioproductivi ..................................................... 90 18. Hagiu B.A., Burtan L.C., Mihailovici Maria Sultana, ura V., Ciobanu C., Ferariu D. - On the biocompatibility of poly (urethaneurea) doped with Silver nanoparticles - Observaii privind biocompatibilitatea unui poliuretanuree dopat cu nanoparticule de argint..................................................... 97 19. Lazr Roxana, Lazar M. - Cercetri privind leucocitemia, eozinocitemia i bazofilecitemia la iepurele domestic - Researches regarding leucocytemy, eosinocytemy and basophilcytemy at domestic rabbit ......................................... 102 20. Miclu V., Damian A., Oana L., Lisovschi C., Stan F. - Aprecieri asupra semnificaiei morfofuncionale a complexelor neuroinsulare Appreciations about the morpho functional semnification of the neuro isle complexes............................................................................................................. 109 21. Cotea C., Oprean O.Z., Solcan Carmen, Cotea I. - Structuri foliculare n lobul intermediar al hipofizei de taur - The follicular structures in pars intermediar of the bull hypophysis ....................................................................... 114 22. Cotea C., Oprean O.Z., Boiteanu P., Solcan Carmen, Cotea I. - Nucleii hipotalamici la vac - The nuclei of the hypothalamus cow................................. 119 23. Solcan Carmen, Oprean O.Z., Cotea C., Solcan Gh. - Observaii privind metaplazia cartilaginoas i osoas a pielii la vaci cu cetoz - Observations concerning cartilaginous and osseous metaplasia of the skin in dairy cows with ketosis........................................................................................................... 127 24. Popescu A., Cotea C., Solcan Carmen -Histochimia sinusului interdigital la oaie - Histochemical study of the interdigital sinus (Biflexus gland) in sheep..... 132 25. Popescu A., Cotea C., Solcan Carmen - Morfologia sinusului interdigital (glandei biflexe) la oaie - Morphology of the interdigital sinus (biflexus gland) in sheep...................................................................................................... 144 26. Borcil Cristina, Paca S., Lazr M. - Observaii asupra unor cazuri de form cutanat a bolii lui Marek la broileri - Observation on some cases of cutaneous Mareks disease at broilers .................................................................. 154 904
27. Lazr M., Vulpe V., Boz E., Miron L., Psrin B., Oprean O.Z. - Aspecte lezionale ale invaziilor parazitare cu localizare branhial la ciprinidele de cresctorie............................................................................................................. 159 28. Bulu Anca, Scripcaru C., Oprean O.Z. - Forensic examination in bitten wounds caused by dogs to man - Expertiza medical legal n plgile mucate provocate de cine la om ........................................................................ 165 29. Gal A., Baba A.I., Ctoi C., Iacob Sorina, Dombay E., Rus I. -Leziunile hiperplazice/displazice adiacente tumorilor mamare maligne Hiperplastic/displastic lesions in tissue surrounding mammary malign tumors................................................................................................................... 172 30. Savi B., amanc H., Stoji V., Iveti V. - Fatty liver in newborn and young piglets ................................................................................................................... 184 31. Topal T.M., Balmu G., Cotea C., Paca S., Oprean O.Z. - Modificri morfologice ale organelor genitale n pseudohermafroditismul masculin la capra domestic (Capra hircus) ........................................................................... 188 32. Ursachi Gabriela, Coofan Otilia, Floritean Iulia - Fibroadenomul mamar la pisic - Mammary fibroadenoma in cats........................................................... 194 33. Ursachi Gabriela, Coofan Otilia, Hueal G., Pavlovic I. - Mastopatia fibrochistic la canide - Fibrocystic mastopaty in dogs........................................ 198 34. Coman M., Olariu-Jurca I., Stancu A., Rooga D. - Aspecte histopatologice n tumorile spontane la cine - Histopathological aspects in spontan tumours in dogs .................................................................................................................. 203 35. Olariu I., Coman M., Lazu Al., Lazu S., Stancu A. - Morphopathological changes in the infectious peritonitis in cat and aspects related to the histopathological diagnosis of this disease ........................................................... 208 36. Simeanu D., Stan Gh., Psrin B. - Efectul productiv al unui prebiotic asupra performanelor productive la puii broiler de gin - The productive effect of a prebiotic over the productive performances at boiler chicken ........................... 212 37. Curc D., Lionide A., Oranu Adriana, Constantinescu Ioana, Samarineanu M., Cornil M. - Aspecte hematologice, biochimice i imunologice consecutiv suplimentrii hranei cu Sel-Plex i Zn-Bioplex la vacile lactante - The hematological, biochemical and immunological aspects to lactating dairy cows feeded with organic zinc and selenium ........................... 216
905
38. Geta PAVEL, Emil PURICE - Observaii privind variaiile profilului hematologic la ovine cu fascioloz - On the variations of the haematological profile in ovines with fascioliasis ......................................................................... 225
I I CI IC NI IN LI CL I.. C II
39. Beschea-Chiriac S., Bild W., Nastasa Veronica, Haulica I. - Studiu comparativ al reactivitii vasculare arteriale la mai multe specii de mamifere: 1. Reactivitatea musculaturii netede arteriale la agenii vasoconstrictori .................................................................................................... 231 40. Boghian V., Solcan Gh., Pavel Geta, Mustea M., Sauciuc R. - Clinical, ultrasonographical and cytologic aspects of peritoneal effusion in feline suspected of infectious peritonitis - Aspecte clinice, ecografice i citologice ale lichidului de puncie la feline suspecte de peritonita infecioas .................... 237 41. Boghian V. - Post-partum ketonemia determined by beta-hydroxybutyrate on Holstein frize dairy cows - Cetonemia postpartum prin determinarea betahidroxibutiratului la vacile pentru lapte Holstein friz .................................. 241 42. Codreanu Iuliana, Dojan N., Codreanu M., Constantinescu Ioana Efectele deficitului hidric prelungit la cervidee, pe perioada de iarn Effects concerning the prolonged hidric defficiency in stags, in winter period.................................................................................................................... 246 43. Codreanu Iuliana, Dojan N., Codreanu M., Constantinescu Ioana - Date de profil metabolic (biochimic sanguin) la cervidee, n funcie de vrst Aspects concerning metabolic profile (seric biochemical) in stags, depending on age.................................................................................................. 251 44. Codreanu M.D., Crivineanu V., Solcan Gh., Codreanu Iuliana, Cornil M. - Aspecte clinice, hematologice i ecografice nregistrate n unele afeciuni ale splinei la cine - Clinical, hematological and ultrasonographic investigations in splenic diseases in dog .............................................................. 255 45. Codreanu M.D. - Rezultatele investigaiilor clinice i ultrasonografice n diagnosticul revrsatelor cavitare la cine i pisic - Clinical and ultrasonographic investigations in cavitary efusions in dogs and cats.................. 262 46. Goran G.V., Codreanu M.D., Crivineanu V. - Modificri hematologice, bichimice sanguine i histopatologice induse de sulfatul de cupru la oaie Hematological, serum biochemical and hystopathologycal changes induced by copper sulphate in sheep.................................................................................. 268
906
47. Goran G.V., Codreanu M.D., Crivineanu V., Militaru Manuella, Codreanu Iuliana, CIOBOTARU Emilia -Modificri histopatologice i electronomicroscopice induse de nitratul de sodiu n experiment acut i cronic la oaie - Hystopatologycal and electronomicroscopic changes in acute and chronic experiment induced by sodium nitrate in sheep....................... 272 48. Papuc I., Lctu R. - Studiu comparativ privind artrografia cu substane de contrast ionice i nonionice (Odiston i Ultravist 300) - Comparative studies in artrography with ionic and nonionic contrast substances (Odiston and Ultravist 300)........................................................................................................ 275 49. Hricu Luminia Diana - Observaii privind incidena sindromului urologic felin - Observes regarding feline urologic sindrome incidence ............................ 280 50. Hricu Luminia Diana, Rileanu Gabriela - Aspecte de diagnostic n vederea stabilirii tipului de urolitiaz la o felin domestic (studiu de caz) Diagnostic aspects regarding establish type of urolithiasis to a domestic feline (case study)................................................................................................. 284 51. Sauciuc R.M., Hagiu N., Solcan Gh., Musteata M., Boghian V. - Aspects of enzymatic diagnosis of hepato-biliary diseases in dog - Aspecte ale diagnosticului enzimatic n afeciunile hepato-biliare la cine............................. 288 52. Rdoi I., apcaliu Agripina, Negoi Carmen, Pavel Crenguta, Condur D. - Studiul efectelor apiterapiei cu produsul Hepro n afeciuni hepatice la cine - A study on Hepro product api-therapeutical effects in dog liver diseases................................................................................................................. 294 53. Costinar Luminia, Pascu Corina Mariana - Vrsta i greutatea corporal factori de risc pentru boala parodontal la cine - Age and body weight as risk factors for periodontal disease dog ................................................................ 300 54. Costinar Luminia - Influenele dietei asupra bolii parodontale de la cine Dietary influences on periodontal disease in dog ................................................. 306 55. Miron L., Serdaru Maria, Acatrinei D. - Preliminary data regarding selenium deficiency fodder plant from Moldova county - Date preliminare privind deficitul de seleniu din plantele din zona Moldovei ............................................. 310 56. Miron L., Serdaru Maria, Acatrinei D. - Preliminary data regarding selenium serical deficiency to the cattle in Moldavia - Date preliminare privind deficitul seric de seleniu la bovinele din Moldova .............................................. 315 57. Baciu H., CozmaV., Truta Maria, Cernea M. - Testarea efectului antieimerian al unor extracte de plante n eimerioza experimental a puilor de prepeli - The antieimerian effects of plant extracts in quail experimental eimeriosis........................................................................................ 319 907
58. Chiimia Lidia - Relations among weight and number of eggs laid by Dermacentor marginatus andhaemaphysalis punctata and some environment factors ................................................................................................................... 325 59. Cristina R.T., Oprescu I., Chiimia Lidia, Dumitrescu Eugenia - In vitro activity of a pyrethrines conditioning against Ixodidae and Argasidae ticks........ 332 60. Gudea A., Stan F., Socaciu A., Damian A. - Rezultate al investigaiilor arheofaunale ntr-o cldire din oraului roman Napoca i o aezare rural din localitatea Suceagu (jud.Cluj) - Results of archaeofaunal investigations in a roman civilian building in the roman town Napoca and a rural settlement in Suceagu village (Cluj county)......................................................... 339 61. Miron L., Miron Manuela - Food quality impact upon the relation between length and weight of young noble crayfish - Calitatea hranei si impactul acesteia asupra relatiei lungime-greutate la juvenilii racului de rau..................... 344 62. Miron Manuela, Miron L. - Analiza hranei utilizata de racul de rau Astacus astacus L. din lacul Bicaz - Analysis of food utilised by the crayfish Astacus astacus L. From Bicaz lake................................................................................... 349 62. Coofan Otilia, Iacob Olimpia, Pop I., Rileanu Gabriela - Agresiune parazitar multipl asupra esutului hepatic la capra neagr (Rupicapra rupicapra) - Multiple Parasitical Aggression on the Hepatic Tissueof the Black Goat (Rupicapra rupicapra)........................................................................ 354 64. Ilie M.S., Cosoroab I., Drbu Gh., Oprescu I., Morariu S., Radbea Narcisa, Ilie Alina, Morariu Florica - The effect of Ascaridia galli infestation on chickens ......................................................................................... 360 65. Ioni Mariana, Mitrea I.L., Buzatu M.C. - Dinamica sezonier a populaiilor de Ixodide din diferite zone geografice ale Romniei - Seasonal dynamics of Ixodidae populations in different geographic area from Romania ............................................................................................................... 365 66. Magda C., Motogna Daniela, Cozma V. - Testarea eficacitii moxidectinei n helmintoze intestinale la galinacee - The efficacy of moxidectine in intestinal helmintosis of Gallinaceae................................................................... 375 67. Mitrea I.L., Enchescu Violeta, Ioni Mariana, Buzatu M.C. - Isosporoza carnivorelor domestice: aspecte terapeutice i clinic-evolutive Therapeutical and clincal aspects in isosporosis of domestic carnivorous ........... 381 68. Morariu S., Cosoroab I., Drbu Gh., Oprescu I., Iacobiciu I., Morariu Florica, Radbea Narcisa - Incidena hidatidozei n sudul i vestul Romniei n perioada 1999 2004 - The incidence of cystic echinococcosis in western and southern Romania between 1999 and 2004.................................. 388 908
69. Pavlovi I., Kuli Z., Stanojevi S. - The nematode of red foxes (Vulpes vulpes L.) hunted in Belgrade area - Infestaia cu nematode la vulpile (Vulpes vulpes L.) vnate n zona Belgradului .................................................... 396 70. Radbea Narcisa - Evolution of canine demodicosis in dogs without acaricid treatment............................................................................................................... 400 71. Radbea Narcisa, Mederle O., Drbu Gh., Oprescu I., Morariu S., Ilie M., Izvernariu D. - Imunohistochemical results in canine piodemodicosis .............. 404 72. uteu E. - De la malarioterapie la parazitica (1927-2005): progrese n parazitoterapie i combatere biologic - From the malario-therapy to parazitica (1927-2005): progress in the parasito-therapy and the biological control................................................................................................................... 407 73. Cristea Gh., Cura P., Nastasa V. - Treatment of anaerobic infections Tratamentul infeciilor anaerobe .......................................................................... 414 74. Munteanu N., Cura P., Cristea Gh., Nastasa V. - Classic use of local anaesthetics in a balanced anaesthesia protocol - Utilizarea anestezicelor locale clasice n protocolul de anestezie echilibrat ............................................. 421 75. Nastasa V., Cura P., Munteanu N., Cura Fl., Grecu Mariana Pharmacoclinicals considerations on the evolution of cardiovasculares variables and acid-base balance under the combination AcepromazineBuprenorphine in dog - Consideraii farmacoclinice asupra evoluiei variabilelor cardiovasculare i a echilibrului acido-bazic sub combinaia Acepromazin Buprenorfin la cine ................................................................ 425 76. Nstas V., Nechifor Maria-Magdalena, Grecu Mariana - Evaluation of Etomidate and Alfentanyl in dog anaesthesia - Evaluarea anesteziei cu Etomidat i Alfentanil la cine ............................................................................. 428 77. Purice Emil, Cura P., Pavel Geta - Observaii privind efectul unor medicamente antiparazitare asupra parametrilor hematologici la ovine cu Fascioloz - On the effect of some antiparasitic drugs on the haematological parameters in ovines with Fascioliasis ................................................................. 431 78. Purice Emil, Cura P., Pavel Geta, Boghian V. - Observaii privind efectul unor substane antiparazitare asupra enzimelor serice de origine hepatic la ovine cu Fascioloz - On the effect of some antiparasitic substances on the serum enzymes of hepatical origin in ovines with Fascioliasis ............................ 437 79. Ciobanu S., Burtan I., Fntnaru M., Burtan L.C., Topal Roxana Castration of dog by scrotal septum ectomy......................................................... 443
909
80. Burtan L.C., Burtan I., Fntnaru M., Ciobanu S., Topal Roxana Posibiliti de prevenire n neoplazia mamar la canine - Prevention posibilities in mammary neoplasia at canines ...................................................... 446 81. Cazacu P., Mare M. - Reducerea chirurgical n hernia perineal a vezicii urinare la un cine pekinez: raport de caz - Surgical reduction in the perineal hernia of urinary bladder in a pekingese dog: case raport ...................... 451 82. Beteg FL., Mates N., Muste A., Oana L., Timen A - Tratamentul chirurgical al cataractei la cine prin extracia extracapsular a cristalinului opacifiat Ical removal of cataracts in dogs by extracapsular extraction .............................. 461 83. Igna C., Schuszler Larisa, Sabu M. - Osinteza colului femural la caine cu tije de acid poliglicolic - Femoral neck osteosynthesis of the dog with polyglicolic acid rod ............................................................................................ 467 84. Muste A., Mate N., Oana L., Timen A., Beteg Fl., Ober C. - Incidena i conduita terapeutic n parodontopatii la cine - Incidence and terapeutical guidance parodontophaty in dogs ......................................................................... 472 85. Oana L., Timen A., Muste A., Mate N., Beteg Fl. - Poziionarea canalului stenon cu deschiderea acestuia n sacul conjunctival - Stenon channel transposition in the conjunctival region................................................................ 477 86. Oana L., Timen A., Muste A., Mate N., Beteg Fl. - Tehnica prostatectomiei totale la cine - Total prostatectomy in dog.......................................................... 481 87. Timen A., Muste A., Oana L., Covaciu Monica - Utilizarea unor materiale sintetice pentru inlocuirea ligamentelor incrucisate la caine - Synthetic materials used for dog cruciate ligaments replacement ....................................... 485 88. Topal Roxana, Burtan I., Fntnaru M., Ciobanu S., Burtan L.C., Topal M. - Emiologia otitei externe la carnivore - Epidemiology of otitis externa at carnivores ......................................................................................................... 490 89. Badea M. - Observaii privind incubaia olor de stru ............................................. 495 90. Cantemir M. - Observaii privind dinamica reteniilor nvelitorilor fetale i influena acestora asupra unor parametri de reproducie - Observations concerning the dynamic of fetal membranes retentions and their influence on some reproduction parameters......................................................................... 498 91. Ciornei t.G., Runceanu L., Agape G. - Cercetri privind aprecierea valorilor rezistenei spermatozoizilor de vier - Searches about boar spermatozoa values of resistance............................................................................................... 502
910
92. Covaciu Ana- Monica, Papuc I. - Metode de determinare a momentului optim pentru mont sau nsmnare la cea - Optimal breeding time and artificial insemination moment in bitches, estabilished by different methods .................... 509 93. Dorobanu I., Galan C. - Observaii privind influena salpingitelor asupra unor parametri de reproducie la vaci - Observations regarding salpingitis influence about certain reproduction parameters of cows .................................... 514 94. Drugociu D., Runceanu L., Roca P. - The diagnostic importance of ovarian and adenohypohysis dosage in dairy cows ovarian functional disorders.............. 518 95. Galan C., Dorobanu I. - Observaii asupra frecvenei endometritelor i consecinele acestora n patologia reproduciei la vac - Endometritis frequence observations and their results on reproduction pathology of cows ...... 521 96. Hromei N., Mariana Sofronie, Pntea M., Elena Ruginosu, Bdeli C., Anca Lupu - Studiu privind incidena mamitelor clinice la vacile cu lapte de ras BNR - Study regarding the incidence of clinical mastitis at dairy cows BNR breed................................................................................................... 525 97. Hromei N., Elena Ruginosu, Mariana Sofronie, M. Pntea, C. Bdeli, Anca Lupu - Studii privind incidena mamitelor subclinice la vaci n funcie de unii factori de variaie - The stadies regarding the incidence of subclinical mastitis at dairy cows in function of some variation factors ............ 532 98. HUTU I. - Structuri uoare pentru ntreinerea scroafelor gestante: recenzie Hoop structures design for gestating sows: review .............................................. 541 99. Mircu C., Cernescu H., Otav G., Ilinca Frunz, Timea Czapp, Moisii M., Ardelean A. - Corelaiile evideniate ntre nivelul produciei de lapte, performanele reproductive i nivelurile serice ale unor hormoni n puerperiumul vacilor de lapte din rasa Blat cu Negru Romneasc Correlations between milk yield, reproduction and hormonal status during post partum period in Romanian Black Spotted Dairy Cows ............................... 547 100. Roca P., Runceanu L., Drugociu D., Pachianu V. - nsmnarea artificial intrauterin la scroaf - Intrauterine insemination of sows .................. 558 101. Runceanu L., Drugociu D., Roca P. - Cercetari asupra unor constante sanguine in endometritele scroafelor - Researches on some sanguine constants in sows endomethritis ........................................................................... 561 102. Vizman M.I. - Terapia reteniei placentare cu PGF2 - The therapy of placenta retention with PGF2 ............................................................................................. 564
911
I C IC LI BL UB PU EP TE AT TA T N N S I.. S II II
103. Asociaia oamenilor de afaceri Iai 2003 - Armonizarea cu legislaia european soluia competitivitaii pe piaa european ........................................ 569 104. Brdan Gh. - Oportunitatea implementrii managementului siguranei alimentelor n ntreprinderi ieene - Appropriateness of food safety management implementation in Iasi enterprises................................................... 571 105. Banu Teofilia, Luchian O. - Agricultur durabil i securitate alimentar n uniunea european. Programe de aciune adoptate de Romnia n domeniul agriculturii durabile i a siguranei alimentelor. ................................................... 577 106. Dalea Ioana, Zegrean G. - Consideraii asupra calitii igienice a unor probe de lapte destinate consumului public - Considerations regarding the hygienic quality of some milk samples from public consumption ....................... 578 107. Floritean V., Elena Ian, Srbu C., Carp Crare M. - Influena temperaturii asupra creterii tulpinilor de Bacillus cereus izolate din alimente - Temperature influence on growth characteristics of food isolates of Bacillus cereus ................................................................................................. 581 108. Creu Carmen, Floritean V., Carp-Crare M. - Identificarea principalelor surse de contaminare cu microorganisme a carcaselor de pasre n abator Identification of the major sources of microbial contamination of chiken carcasses in abattoirs ............................................................................................ 588 109. Brdan Gh., Psrin B. - Aplicarea sistemului HACCP ntr-un abator de porci din regiunea de nord-est a Romaniei - Implementation of the HACCP system in the pork slaughtering house in Nord-East region of Romania.............. 594 110. Ilie L., Savu C., Carmen PETCU - Evaluarea i controlul riscurilor asociate procesrii crnii pentru implementarea sistemului HACCP - Control and evaluation of risks associated with meat processing in the context of HACCP system implementation........................................................................... 599 111. Neculi Elena Narcisa, Floritean V., Elena Ian, Carp Crare M. Observaii privind microflora crnii de pasre proaspete i refrigerate Observation concerning fresh and refrigerated poultry microflora ...................... 605 112. Neculi Elena Narcisa, Floritean V., Carp Crare M. - Influena condiiilor de cretere i a transportului asupra calitii microbiologice ale crnii de pasre - Influence of welfare and transportation conditions on microbiological quality of poultry meat ............................................................... 610
912
113. Petcu Carmen, Savu C., Ilie L., Elena Mitrnescu, Camelia Papuc Implementarea procedurilor de igienizare n vederea certificarii sistemului de management al siguranei alimentelor n uniti de prelucrare a petelui Adopting sanitation procedures in order to certify food safety management system in fish processing units ............................................................................ 616 114. Sabu Diana, Rotaru O. - Evoluia i semnificaia numrului i configuraiei celulelor din lapte la oaie i capr - The evolution and significance of the somatic cell number and confugurance from goat and sheep milk....................... 621 115. Duminic Claudia Gabriela, Floritean V., indilar E. - Calitatea laptelui parte a conceptului ,,sigurana alimentelor n perspectiva integrrii europene - The quality of raw milk - part of ,,food safety concept, prospect for E.U. integration.............................................................................................. 626 116. Duminic Claudia Gabriela, indilar E. - Controlul starii de igien i a calitii apei n unele uniti ieene de prelucrare a laptelui, efctuat prin tehnici clasice i rapide - The quality hygiene control of work, equipament or hand surfaces, plan enviroment and water, in some milkworks from iai city by usual and fast microbiological methods ................................................... 634 117. indilar E.V., Totolin M., indilar E. - Nivelul unor nitrozamine volatile n diverse produse din carne i pete afumat - The level of some volatile nitrosamines in various meat products and smoked fish ...................................... 645 118. indilar E.V., Totolin M., indilar E. - Nivelul unor nitrozamine volatile n unele sortimente de brnzeturi - The level of some volatile nitrosamines in various cheeses ..................................................................................................... 651 119. indilar E.V., indilar E., Bondoc I. - Aprecierea nivelului de nitrai n carnea proaspt de bovin, ovin, suin i peti - The estimation of nitrate level in cow, ewe, pig and fish raw meat.............................................................. 655 120. indilar E.V., indilar E. - Evaluarea nivelului de nitrii n unele produse din carne - The estimation of the nitrite level in some meat products ....................... 659 121. Mare M., Malic Luminia, Apetrei Ingrid, Cazacu P., Miron L. - Noi molecule utilizate n terapia antifungic - New molecules designed for antifungal therapy................................................................................................. 667 122. Coman I., Cuciureanu Rodica, Bulea Delia, Bobuac Maria, Teodor Alina, Malic Luminia - Gradul de contaminare cu miceti i micotoxine a unor substraturi vegetatale folosite n hrana omului i a animalelor .................... 676 123. Coman I., Alina Srbu, Luminia Malic, Maria Bobuac - The prevention of fungi and mycotoxin contamination of oilseeds by chemical conservation using volatiles reagents......................................................................................... 682 913
124. Furnaris F., Elena Mitrnescu, Tudor L., Tabac B., Togan C. - Cercetri privind evaluarea bunstrii ginilor outoare exploatate n sistem alternativ, ntr-o ferm din zona de sud a Romaniei - Researches concerning the welfare assessment of the free-range laying hens raised in a unit from southern Romania ................................................................................. 688 125. Georgescu Ileana, Enache L., Filipescu C., Georgescu G., Simionca I.U., Penariu Sanda - Unele aspecte privind aciunea aeroionizrii artificiale negative asupra procesului infecios inflamator cutanat indus la animalele de laborator - Some aspects regarding the negative airionization action on the cutaneous infectious inflammation prosess induced at laboratory animals .... 694 126. Iacub G., Gurdi Viorica - Coninutul azotailor i azotiilor n raie i concentraia lor n carne i ou la rae - The content of nitrate and nitrite in ration and their concentration in duck meat and eggs .......................................... 702 127. Mitrnescu Elena, Tploag Dana, Ioni L., Simion Violeta, Furnaris F., DINU Cristina - Observations concerning the air quality in the influence area of a chemical unit - Observaii privind calitatea aerului n zona de influen a unui combinat petrochimic .................................................... 706 128. Mitrnescu Elena, Butaru A., Tploag Dana, Tudor L., Petcu Carmen, Staicu Elena - Observations concerning copper as a pollutant element in sol and its influence on animal raised in a limitroph area of a chemical unit in the south of Romania - Observaii privind cuprul ca element poluant din sol i influiena acestuia asupra animalelor dintr-o zon limitrof unui combinat chimic din sudul Romniei................................................................................... 710 129. ibru I. Lzrescu C. - Controlul eficienei deratizrii ......................................... 715 130. ibru I. - Ghid pentru operatorii n managementul dejeciilor solide i lichide - Ghidance for operators on slurry and manure management............................... 721 131. ibru I. - Implicaiile ecomonice i sanitatr veterinare ale dezvoltrii comenrului cu animale i produse de origine animal - The economic implications of greater global trede in livestock and products ............................ 724 132 Ani Adriana Elena, Ani D.C. - Posibiliti de detecie rapid a enterovirusurilor i teschovirusurilor suine - Possibilitys for rapid detection of porcine enteroviruses and teschoviruses .......................................................... 731 133. Ani D.C., Ani Adriana Elena - Observaii privind prevalena unor viroze respiratorii la bovine - Prolusions regarding the prevalence of some bovines viral respiratory diseases ..................................................................................... 736
914
134. Ani D.C., Ani Adriana Elena - Infeciile latente cu BHV-1: mecanism i importan - The latency of BHV-1: mechanism and importance ........................ 740 135. Cazacu P., Mare M., Cazacu Daniela - Epidemiology of exposures with high risk for rabies infection and rabies postexposure prophylaxis...................... 745 136. Brdan Gh. - PCR detection of V. Parahaemolyticus with TLH gene primers.................................................................................................................. 752 137. Brdan Gh. - Hybridization DNA-DNA speciesspecify method on nylon filters for detection of V. Parahaemolyticus TLH gene ....................................... 756 138. Brdan Gh. - Real time PCR with sybrgreen to detect the pathogenically strains of Vibrio parahaemolyticus ...................................................................... 760 139. Condrea M., Carp Crare M., Perianu T., Elena Velescu - Observations on the frequency of Yersinia enterocolitica in pigs - Observatii privind frecventa Yersiniei enterocolitica la suine............................................................ 764 140. Condrea M., Carp Crare M., Guguianu Eleonora, Carp Crare C. Some aspects regarding the methodology of isolating Yersinia enterocolitica - Unele aspecte privind metodologia de izolare a Yersiniei enterocolitica ........................................................................................................ 768 141. Arsene M., Arsene Marinela, Savua Gh., Perianu T. - Aspecte clinice n gripa aviar la lebada de var (Cygnus olor) - Clinical aspects of the avian flu at the summer swan (Cygnus olor).................................................................. 774 142. Arsene M., Arsene Marinela, Perianu T., Savua Gh. - Aspecte clinice n gripa aviar la gin - Clinical aspects of the avian flu at the chickens ............... 780 143. Carp-Crare C., Perianu T., Velescu Elena, Tnase Irina-Oana, Pavli C., Ciobanu G. - Aspecte epidemiologice i clinice n listerioza ovin ................... 785 144. Carp-Crare C. - Observations regarding the isolation of Listeria monocytogenes in silo fodder ............................................................................... 792 145. Chiriac Adriana, Carp- Crare M., Neculi C. - Diagnostic de laborator complex al tuberculozei la bovinele sacrificate - The complex diagnosis of tuberculosis infection at the sacrificed cattle........................................................ 797 146. Cadar D., Spnu Marina, Miclu V., Kblkuti L., Tuboly T., Czirjk G., Dn ., Csgola A. - Sindromul dermatitei si nefritei porcine (PDNS) o nou entitate morbid n patologia suin din Romnia - Porcine dermatitis and nephropathy syndrome (PDNS) a new pathological entity in Romanian swine herds.......................................................................................... 804
915
147. Ctan N., Herman V., Necsulescu M., Fodor I. - Testarea clinic a unui vaccin polivalent inactivat destinat imunoprofilaxiei unor clostridioze bovine - The clinical trials of inactivated polyvalent vaccine used in the specific immunoprofilaxy of some bovine clostridiosis. ...................................... 809 148. Hru Doina Anca, Perianu T., Tnase Irina-Oana, Pavli C. - Observaii privind etiologia paratifozelor aviare ................................................................... 816 149. Ciocrlan Emilia, Perianu T, Tnase Irina-Oana, Pavli C. - Determinarea patogenitii speciilor bacteriene implicate n patologia infecioas de incubaie - Eggs incubation pathology and pathogenicity of the bacteria isolated ................................................................................................................. 821 150. Ian Elena, Merticariu tefania, Floritean Iulia, Burtan Eugenia - Cteva aspecte virusologice n gripa aviar - Some virusological aspects in bird flu ...... 824 151. Rebegea Cristina, Carp-Crare M., Carp-Crare C., Anton C., Fodor D. - Epidemiological screening over the Mycoplasma hyopneumoniae wearers in two swine breeding units.................................................................................. 834 152. Savuta Gh., Stoichici A., Anita D., Anita Adriana, Butunoi C., PopoviciBibirus Roxana - Evaluarea epidemiologica si economica a programului de combatere a tuberculozei bovine in Romania - Epidemiological and economical evaluation of bovine tuberculosis in Romania .................................. 840 153. Savua Gh., Matei Irina, Murat Selma, Ania D. - Epidemiologia Paratuberculozei rumegatoarelor n Romnia - Epidemiology of ruminants Paratuberculosis in Romania ................................................................................ 845 154. Starciuc N., Scutaru I., Zelenin S. - Modificarea structurii bursei lui Fabricius sub aciunea tulpinilor vaccinale fierbini contra bursitei infecioase aviare. - The actions of hot strain BG against IBD to structural modifications of tissues of cloacal bursa. ............................................ 850 155. Neculi C., Carp Crare M., Neculi Narcisa, Chiriac Adriana - Aspecte epidemiologice privind Bruceloza ovin n judeul Vaslui - The epidemiological aspects about the infection with Brucella ovis in Vaslui county ................................................................................................................... 852 156. Bradatan Gh., China B., Daube G. - Real-time PCR Assay with Taqman probe to detect the tlh gene of V. Parahaemolyticus ............................................ 857 157. Chiriac Adriana, CarpCrare M., Neculi C. - Sensibilitatea i specificitatea unor teste de diagnostic serologic utilizate n tuberculoza bovin - The sensibility and the sensitivity of the serologycal diagnosis tests used in the diagnosis of the bovine tuberculosis .......................................... 862
916
158. Guguianu Eleonora, Bltescu Ana-Maria - Investigatii privind calitatea microbiologic a laptelui comercializat de productorii particulari Investigations regarding the microbiological quality of the milk sold by the privat producers.................................................................................................... 868 159. Ili ., Spalevi L.J., Miljkovi B., Pavlovi I., ugi G., Stanojevi S. Efficacy of same antimicrobial substance at pathogen microorganisms isolated in poultry breeding objects ..................................................................... 872 160. Tudor L., ogoe I. - Evaluarea izolrii speciilor Vibrio non-holerice din probe de ap prelevate din sudul i sud-estul rii - The isolation evaluation of non-choleric Vibrio species in south and southeast Romanian waters............. 875 161. Tudor L., ogoe I., Mitrnescu Elena - Evaluarea calitii microbiologice a unor brnzeturi comercializate pe pieele bucuretene - The evaluation of microbiological quality for some types of cheese traded on Bucharest markets ................................................................................................................. 880 162. Voicu Elena, Rebegea Cristina, Apetrei Ingrid, Carp-Crare C., CarpCrare M., Guguianu Eleonora - Observations regarding bacteriological and mycological microflora in various cats and dogs infections.......................... 887 163. Dmceanu Ani - Investigaii epidemiologice privind Leucoza enzootic bovin n judeul Vaslui - Epidemiological investigations on the Enzootic bovine leukosis (Leukemia) throghout Vaslui county.......................................... 892 164. Hru Doina Anca Investigaii privind starea de purttor i elimonator de salmonele mobile.................................................................................................. 897
917
Consilier editorial Tehnoredactor: Corector:
Vasile VNTU Rodica TRIFAN Liviu MIRON Gheorghe SOLCAN 30.10.2006 2006, 70x100/16 Ion Ionescu de la Brad Iai Aleea M. Sadoveanu nr. 3 Tel.: 0232-218300 E-mail: editura@univagro-iasi.ro
Bun de tipar: Aprut: Editura:
ISSN: 1454-7406
Tiparul executat la PIM Iai
PRINTED IN ROMANIA

Vol 49 2006

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Vol 49 2006

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

ISSN 1454-7406

UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR ION IONESCU DE LA BRAD IAI

EDITURA ION IONESCU DE LA BRAD

Volumul a fost editat cu sprijinul financiar al Ministerului Educaiei i Cercetrii

ISSN 1454-7406 Editura Ion Ionescu de la Brad Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Between the proximal phalanges, there is a strong proximal interdigital ligament.

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

ASPECTE HISTOLOGICE LA NIVELUL REELELOR ADMIRABILE INTRACRANIENE LA MAMIFERELE DOMESTICE

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

STUDII PRIVIND MORFOSTRUCTURA BURSEI CLOACALE LA PALMIPEDELE DOMESTICE

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Fig. 1 - Aspectul bursei cloacale (1) la ra leeasc n vrst de 6 luni

Fig. 2 - Aspectul bursei cloacale (1) la gsc n vrst de 6 luni

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

CERCETRI PRIVIND VASCULARIZAIA VENOAS A GLANDEI MAMARE LA OAIE

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

ANATOMICAL PARTICULARITIES OF THE PELVIS OF THE CARPATHIAN BEAR

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

PARTICULARITI MORFO-FUNCIONALE ALE MEMBULUI TORACIC LA VEVERI (SCIURUS VULGARIS)

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

PARTICULARITI ANATOMO- FIZIOLOGICE ALE MEMBRULUI PELVIN LA VEVERI (SCIURUS VULGARIS)

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Fig. 1 - Sacrumul la veveri, aspect latero- dorsal

Fig. 2 - Sacrumul la veveri, aspect ventral

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Fig. 6 - Femur, aspect cranial A - pisic; B - iepure C - veveri

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

Fig. 7 - Tibia i fibula la veveri, aspect lateral

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar

Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Iai

PARTICULARITI ALE COLATERALELOR I TERMINALELOR ARTERELOR ILIACE EXTERNE LA ECVINE

Lucrri tiinifice vol. 49 seria Medicin Veterinar