CUPRINS

PREFA!"... 1 CAP. 1 - INTRODUCERE N GENETIC!.... 3 1.1. Genetica - defini!ie, obiect de studiu.. 3 1.2. Scurt istoric al geneticii.. 4 1.3. Leg"tura geneticii cu alte #tiin!e. 8 1.4. Metode de cercetare folosite n genetic". 10 1.5. Materialul de cercetare n genetic". 12 1.6. Dezvoltarea geneticii vegetale n Romnia. 13 CAP. 2 - BAZELE CELULARE ALE EREDIT!"II #I VARIABILIT!"II (CITOGENETICA).................... 15 2.1. Structura celulei procariote 16 2.2. Structura celulei eucariote. 18 2.3. Organizarea genomului la eucariote.. 25 2.3.1. Morfologia cromozomilor...... 25 2.3.2. Structura molecular" a cromozomului... 33 2.3.3. Tipuri particulare de cromozomi.................................... 36 2.4. Organizarea genomului la procariote (bacterii #i virusuri)..... 38 2.5. Reproducerea celulei.............................................................. 39 2.5.1. Mitoza............................................................................. 39 2.5.2. Meioza............................................................................. 44 2.6. Gametogeneza #i syngamia..................................................... 48 2.6.1. Gametogeneza la animale................................................48 2.6.2. Sporogeneza #i gametogeneza la plante.......................... 49 2.6.3. Syngamia........................................................................ 51 CAP. 3 - BAZELE MOLECULARE ALE EREDIT!"II.................... 53 3.1. Proteine #i acizi nucleici......................................................... 53 3.2. Dovezi privind rolul genetic al ADN..................................... 55 3.2.1. Transformarea la procariote........................................... 56 3.2.2. Transfec!ia la procariote................................................ 57 3.2.3. Transformarea la eucariote............................................ 59 3.2.4. Materialul genetic al ribovirusurilor.............................. 59 3.3. Acizii nucleici #i rolul lor genetic.......................................... 60 3.3.1. Structura molecular" a acidului dezoxiribonucleic (ADN) ..............................................................................60 3.3.2. Alte tipuri de ADN......................................................... 63 3.3.3. Acidul ribonucleic (ARN).............................................. 65 3.3.4. Denaturarea #i renaturarea ADN.................................... 68 3.3.5. Specificitatea ADN........................................................ 69 3.3.6. Replica!ia ADN.............................................................. 69 3.3.7. Replica!ia acizilor nucleici la bacterii #i virusuri........... 71

3.3.8. Sinteza acizilor nucleici "in vitro"................................... 72 3.4. Codul genetic.......................................................................... 73 3.4.1. Caracteristicile codului genetic...................................... 76 3.5. Biosinteza proteinelor............................................................ 77 3.5.1. Transcrip!ia informa!iei genetice.................................... 77 3.5.2. Transla!ia informa!iei genetice....................................... 78 3.6. Reglajul genetic al activit"!ii genelor..................................... 80 3.6.1. Reglajul activit"!ii genetice la procariote...................... 81 3.6.2. Reglajul activit"!ii genelor la eucariote......................... 86 3.7. No!iunea de gen" #i evolu!ia ei............................................. 89 3.7.1. Gena n concep!ia geneticii clasice................................ 89 3.7.2. Gena n concep!ia geneticii moleculare......................... 91 3.7.3. Gene suprapuse #i gene s"ritoare................................... 93 3.8. Reproducerea #i recombinarea genetic" la procariote........... 95 3.8.1. Reproducerea bacteriilor #i virusurilor.......................... 95 3.8.2. Recombinarea genetic" la bacterii.................................. 96 3.8.3. Recombinarea genetic" la virusuri................................. 100 CAP. 4 - NO"IUNI DE INGINERIE GENETIC!............................... 102 4.1. Sinteza artificial" a genei....................................................... 103 4.2. Izolarea genei......................................................................... 104 4.3.Transferul de gene (transgeneza)............................................ 105 4.3.1. Principalii vectori utiliza!i n transgenez"...................... 109 4.3.2. Realiz"ri ale transgenezei la plante................................. 109 4.3.3. Transferul genelor fixatoare de azot................................110 4.4. Hibridarea celular" la animale.................................................111 4.5. Hibridarea celular" la plante....................................................113 4.6. Haploidia prin androgenez" la plante......................................115 CAP. 5 - EREDITATEA MENDELIAN!...............................................117 5.1. Terminologia folosit" n genetica mendelian".........................117 5.2. Legile mendeliene ale eredit"!ii...............................................118 5.2.1. Legea segreg"rii caracterelor (legea purit"!ii game!ilor)........................................................................ 119 5.2.2. Legea segreg"rii independente a perechilor de caractere...........................................................................121 5.3. Probabilitatea #i raporturile mendeliene de segregare.............123 5.4. Mecanismul citologic al segreg"rii caracterelor......................126 5.5. ncruci#area analizatoare......................................................... 127 CAP. 6 - INTERAC"IUNEA GENELOR.............................................. 130 6.1. Abateri aparente de la raporturile mendeliene de segregare....130 6.1.1. Abateri aparente datorate interac!iunilor alelice..............130 6.1.2. Abateri aparente datorate interac!iunilor nealelice..........138 6.2. Abateri reale de la raporturile mendeliene de segregare......... 145

CAP. 7 - TEORIA CROMOZOMIC! A EREDIT!"II....................... 148 7.1. Gene #i cromozomi................................................................. 148 7.2. Plasarea liniar" a genelor pe cromozomi................................ 150 7.3. Transmiterea nl"n!uit" a genelor (linkage)............................ 150 7.4. Schimbul reciproc de gene ntre cromozomii omologi (crossing-over)......................................................................... 152 7.5. Mecanismul citologic al crossing-over-ului........................... 153 7.6. Tipuri de crossing-over.......................................................... 156 7.7. Factorii care influen!eaz" crossing-over-ul........................... 160 7.8. H"r!ile cromozomice.............................................................. 161 7.9. H"r!ile citologice.................................................................... 163 CAP. 8 - DETERMINISMUL GENETIC AL SEXULUI......................165 8.1. Generalit"!i.............................................................................. 165 8.2. Teoria genetic" a determin"rii sexului.................................... 166 8.2.1. Determinismul cromozomic al sexelor........................... 166 8.3. Sexul n cazul nmul!irii partenogenetice................................ 168 8.4. Determinismul genetic al sexului la plante............................. 169 8.5. Determinismul genetic al sexului la organismele inferioare... 170 8.6. Teoria cantitativ" a determin"rii sexului................................ 171 8.7. Anomalii n ereditatea sexului................................................ 173 8.7.1. Ginandromorfismul......................................................... 173 8.7.2. Intersexualismul.............................................................. 174 8.8. Ereditatea caracterelor legate de sex....................................... 175 8.8.1. Ereditatea legat" de sex n cazul heterogamiei sexului mascul (Drosophila)........................................... 175 8.8.2. Ereditatea n cazul nondisjunc!iei cromozomilor sexului n meioz"............................................................ 177 8.8.3. Ereditatea legat" de sex n cazul heterogamiei sexului femel................................................................... 178 8.9. Caracterele influen!ate de sex..................................................180 8.10. Caracterele limitate de sex.....................................................180 8.11. Inversiunea sexului................................................................ 180 8.12. Raportul dintre sexe.............................................................. 181 CAP. 9 - EREDITATEA EXTRANUCLEAR!......................................183 9.1. Metode de eviden!iere a eredit"!ii extranucleare.....................183 9.1.1. Fenomenul merogoniei.................................................... 184 9.1.2. Ereditatea extranuclear" n hibridarea reciproc"............. 184 9.1.3. Testul heterocarion.......................................................... 185 9.1.4. Segregarea nemendelian"................................................ 185 9.2. Manifestarea eredit"!ii extranucleare.......................................186 9.2.1. Ereditatea prin plastide.................................................... 186 9.2.2. Ereditatea prin intermediul incluziunilor citoplasmatice................................................................. 187

9.2.3. Ereditatea mitocondrial"................................................. 188 9.2.4. Androsterilitatea citoplasmatic" #i nucleo-plasmatic"... 189 9.3. Aparatul genetic al eredit"!ii extranucleare............................ 192 9.4. Fenomene cu care se poate confunda ereditatea extranuclear"........................................................................... 192 9.4.1. Predeterminarea.............................................................. 192 9.4.2. Modific"rile de durat".................................................... 193 9.4.3. Ereditatea aparent"......................................................... 194 9.4.4. Alte surse de erori........................................................... 194 9.5. Raporturile genetice dintre genom #i plasmon........................ 194 9.6. Caracterele #i nsu#irile influen!ate de plasmotip................... 195 CAP. 10 - SISTEME GENETICE PENTRU CONTROLUL REPRODUCERII ORGANISMELOR................................ 196 10.1. Ereditatea n cazul reproducerii asexuate #i sexuate............ 196 10.2. Ereditatea n cazul unor forme particulare de reproducere...................................................................... 197 10.3. Sisteme genetice pentru controlul reproducerii................... 198 10.4. Vigoarea hibrizilor (heterozis)............................................. 200 10.4.1. Teorii care explic" fenomenul heterozis....................... 201 10.4.2. Manifestarea heterozisului............................................ 204 10.4.3. Consangvinizarea #i folosirea ei n crearea liniilor destinate ncruci#"rii..................................................... 204 10.4.4. Consangvinizarea la animale........................................ 207 10.5. Hibridarea sexuat" ndep"rtat".............................................. 208 10.5.1. Ob!inerea #i comportarea primei genera!ii hibride....... 208 10.5.2. Comportarea celei de a doua genera!ii hibride............. 211 10.5.3. Rolul hibrid"rii ndep"rtate n evolu!ia speciilor.......... 211 CAP. 11 - MUTA"IILE #I MECANISMUL LOR MOLECULAR.... 213 11.1. Clasificarea muta!iilor.......................................................... 213 11.2. Detectarea muta!iilor............................................................ 215 11.3. Muta!iile spontane................................................................ 217 11.4. Muta!iile artificiale............................................................... 219 11.4.1. Radia!iile mutagene...................................................... 220 11.4.2. Temperatura.................................................................. 224 11.4.3. Substan!ele chimice mutagene...................................... 225 11.4.4. Factorii mutageni biologici........................................... 229 11.4.5. Mecanismul molecular al muta!iilor............................. 229 11.5. Mecanisme de reparare a ADN............................................. 231 11.6. Importan!a muta!iilor............................................................ 232 CAP. 12 - MUTA"II N STRUCTURA CROMOZOMILOR............. 233 12.1. Tipuri de restructur"ri cromozomice #i comportarea lor n mitoz"..................................................... 234

12.2. Restructur"rile cromozomice #i mecanismul meiozei.......... 239 12.3. Efectul de pozi!ie.................................................................. 244 12.4. Restructur"rile cromozomice #i importan!a lor pentru evolu!ie.................................................................................. 245 CAP. 13 - MUTA"IILE DE GENOM..................................................... 247 13.1. Clasificarea varia!iilor numeric cromozomice...................... 248 13.2. Euploidia............................................................................... 249 13.2.1. Monoploidia.................................................................. 249 13.2.2. Poliploidia..................................................................... 250 13.3. Modific"rile morfologice #i fiziologice ale poliploizilor..................................................................... 254 13.4. Poliploidia natural" #i rolul ei n evolu!ie............................ 255 13.5. Poliploidia artificial"............................................................ 257 13.6. Poliploidia la animale........................................................... 259 13.7. Aneuploidia.......................................................................... 259 13.8. Pseudopoliploidia................................................................. 261 CAP. 14 - ELEMENTE DE GENETICA POPULA"IILOR............... 263 14.1. No!iunea de popula!ie........................................................... 263 14.2. Metodele folosite n studiul geneticii popula!iilor............... 264 14.3. Structura genetic" a unei popula!ii........................................ 265 14.4. Panmixia #i structura genetic" a popula!iilor, legea Hardy Weinberg....................................................... 265 14.5. Frecven!a genelor legate de sex............................................ 268 14.6. Frecven!a genelor n cazul a mai multor loci........................ 270 14.7. Frecven!a genelor n cazul nl"n!uirii locilor........................ 270 14.8. Frecven!a genelor n cazul alelelor multiple......................... 271 14.9. Factorii care modific" structura genetic" a popula!iilor........ 272 14.9.1. Selec!ia...........................................................................272 14.9.2. Migra!ia......................................................................... 273 14.9.3. Muta!ia.......................................................................... 274 14.9.4. Drift-ul genetic.............................................................. 275 14.9.5. Factorii care modific" frecven!a genotipurilor ntr-o popula!ie............................................................. 276 14.9.6. Homeostazia genetic" #i evolu!ia popula!iilor.............. 276 GLOSAR................................................................................................... 278 BIBLIOGRAFIE SELECTIV!............................................................... 295

Prefa!"
Tot mai mul!i oameni de "tiin!# sus!in c#, la nceputul mileniului trei, putem percepe derularea unei revolu!ii genetice care, prin realiz#rile din acest domeniu, genereaz# optimism n unele medii "tiin!ifice dar "i pesimism, n altele. Anul 2000 a fost considerat anul genomului uman. S-a reu"it descifrarea acestuia, dar au fost raportate "i multe alte realiz#ri n diferite domenii ale biologiei, c#rora genetica le-a furnizat informa!ii. n toate domeniile geneticii (microbian, vegetal, animal, uman) s-au produs muta!ii profunde n n!elegerea mecanismelor de stocare codificat# a informa!iei "i de traducere a acesteia n miliardele de molecule ale unui organism. Dac# la nceputuri, genetica era fericit# s# explice ereditatea "i variabilitatea organismelor prin acel dans al cromozomilor, ast#zi, aceste nsu"iri esen!iale ale lumii vii sunt explicate la nivel molecular, printr-un joc al moleculelor unde hazardul are loc din ce n ce mai pu!in. Acest manual ncearc# o parcurgere succint# a drumului informa!iei genetice, n limita programei analitice a cursului de Genetic! vegetal!, predat de autor studen!ilor de la facult#!ile de Agricultur# "i Horticultur# pe parcursul unui semestru. Am abordat, de la nceput, bazele celulare "i moleculare ale eredit#!ii "i variabilit#!ii cu gndul c# tinerii studen!i, cu mintea iscoditoare vor accepta, n final, c# toate aspectele geneticii clasice (segregarea caracterelor, recombinarea, muta!iile, heterozisul etc.) pot fi, "i trebuie explicate, la nivel molecular. Nu ne-am propus tratarea n detaliu a tuturor domeniilor geneticii. Complexitatea "i multitudinea lor, rapiditatea cu care se succed realiz#rile n aceast# "tiin!# fac imposibil acest demers. M#sura n care am reu"it prezentarea sintetic# a cuno"tin!elor despre microcosmosul ce-l reprezint# un organism unicelular sau multicelular, rolul fiec#ruia ntre celelalte, ne-o va da cititorul, c#ruia i mul!umim. Autorul

CAPITOLUL 1 INTRODUCERE N GENETIC!

1.1. GENETICA - DEFINI"IE, OBIECT DE STUDIU
Genetica, definit! succint, este "tiin#a eredit!#ii "i variabilit!#ii organismelor. Termenul genetic! provine din grecescul gennaein care nseamn! a na"te "i este atribuit "tiin#ei eredit!#ii "i variabilit!#ii, n anul 1905, de englezul William Bateson (1861-1926), la cea de a treia Conferin#! interna#ional! de hibridare "i ameliorare a plantelor de la Londra. Ereditatea (latinescul hereditas-mo"tenire) este o nsu"ire esen#ial! a organismelor, care denot! asem!narea dintre p!rin#i "i urma"i (descenden#i). Indiferent de gradul de evolu#ie al organismelor (procariote sau eucariote), informa!ia genetic" este codificat! n acizii nucleici (ADN sau ARN ), care intr! n structura cromozomilor p!rin#ilor, iar n urma proceselor de replica#ie, de tip semiconservativ, este transmis! la descenden#i. Diviziunea celular!, replica#ia acizilor nucleici, transcrip#ia "i transla#ia informa#iei genetice, asigur! constan#a caracterelor ereditare, dar aceast! constan#! nu trebuie apreciat! la modul absolut. Ca func#ie biologic!, ereditatea n general, dar mai ales a unor caractere morfo-fiziologice, biochimice "i de comportament, este influen#at!, ntr-o m!sur! oarecare, de factorii de mediu. Aceste interac#iuni ale informa#iei genetice cu factorii mediului, determin! apari#ia unor deosebiri de ordin calitativ sau cantitativ, ntre indivizii aceleia"i unit!#i sistematice, totalitatea acestora, fiind denumit! variabilitate. Variabilitatea, ca nsu"ire general! a lumii vii, poate fi determinat! de structura celulei - variabilitate intraindividual", de diferen#ele dintre indivizii unei grup!ri sistematice restrnse (popula#ie) - variabilitatea individual", sau de deosebirile dintre diferite popula#ii - variabilitate de grup. Variabilitatea este determinat!, pe de o parte de factorii genetici (mecanismele de recombinare intra "i intercromozomice "i prin mutan#i), dar "i de factori de mediu (fizici, chimici sau biologici). Dac! n primul caz, putem afirma c! varia#iile genetice se transmit cu mare fidelitate la urma"i, varia#iile determinate de factorii de mediu pot provoca modific!ri temporare, care de obicei nu se transmit n descenden#!. Obiectul de studiu al geneticii s-a diversificat, pe m!sura abord!rii eredit!#ii "i variabilit!#ii de la nivel individual la nivel molecular. Azi, distingem n mod curent, domenii ca: genetica clasic" (fenomenologic!), care studiaz! modul de transmitere a caracterelor de la un individ la altul; genetica molecular", studiaz! ereditatea la nivel molecular, de la structura molecular! a genei, pn! la mecanismele de codificare "i decodificare a informa#iei genetice, dar "i muta#iile "i recombin!rile genetice la acest nivel; genetica dezvolt"rii individuale
3

(ontogenetica) care "i propune cunoa"terea nceperii "i sist!rii activit!#ii genelor, a mecanismelor de diferen#iere celular!, a celor de reglaj genetic; genetica popula!iilor, studiaz! frecven#a genelor "i genotipurilor n vederea realiz!rii unui echilibru genetic, modific!rile acestora pe termen lung (evolu#ie); ingineria genetic", care are un domeniu din ce n ce mai amplu, de la izolarea "i sinteza artificial! a genelor la transferul interspecific al acestora, clonarea genelor, a organismelor, hibridarea celulelor somatice, ob#inerea de organisme transgenice. Dac! ne referim la grupe distincte de organisme, cercet!rile de genetic!, se realizeaz! la plante (genetic! vegetal!), la animale (genetic! animal!), la microorganisme (genetic! microbian!), la om (genetic! uman!). Amploarea cercet!rilor de genetic! molecular! dep!"e"te orice imagina#ie. Nu exager!m dac! afirm!m c!, genetica a realizat o coeziune a tuturor "tiin#elor biologice, prin tratarea unitar! a sistemului ereditar, care permite explicarea oric!rui proces biologic. n concluzie prin prisma geneticii moleculare, genetica se ocup! cu studiul genelor: codificarea "i decodificarea informa#iei genetice (corect! sau eronat!), reglajul activit!#ii genice la nivel molecular "i individual, recombin!rile "i muta#iile genice, identificarea "i sinteza genelor "i transferul acestora peste barierele de specie.

1.2. SCURT ISTORIC AL GENETICII

Primele observa#ii referitoare la asem!n!rile "i deosebirile dintre indivizii aceleia"i grup!ri sistematice, dateaz! din cele mai vechi timpuri. n timp s-au conturat dou! concep#ii diferite, ce au ncercat s! dea o explica#ie concret! asupra transmiterii caracterelor de la p!rin#i la urma"i "i asupra variabilit!#ii caracterelor: transmiterea direct" a caracterelor "i transmiterea indirect" a acestora. Concep#ia clasic! a transmiterii directe a caracterelor, sus#inea participarea unor substan#e sau particule, sintetizate de diferite p!r#i ale organismului, la formarea "i transmiterea direct! a caracterelor, de la p!rin#i la urma"i. Aceast! concep#ie o g!sim formulat! n diferite moduri, chiar n perioada antic!, n gndirea unor filozofi, particulele materiale, responsabile de transmiterea caracterelor ereditare, primind diferite denumiri: gemule, micele, plastidule etc. Anaxagora (500-428 .e.n.) a formulat prima teorie preformist!, conform c!reia n celulele sexuale mascule, se formeaz! organismul n miniatur! (homunculus), dezvoltarea sa ulterioar! fiind simple acumul!ri cantitative. Hippocrates (460-377 .e.n.), cel mai mare medic al antichit!#ii, n privin#a eredit!#ii a elaborat teoria pangenezei (panspermiei), ce sus#ine participarea tuturor p!r#ilor corpului n formarea substan#ei ereditare, care, se acumuleaz! n celulele sexuale ale p!rin#ilor. Aristotel (384-322 .e.n.), cel mai mare filozof al antichit!#ii, n domeniul eredit!#ii, a elaborat teoria hematogen! a spermei,
4

conform c!reia, sngele st! la baza originii "i transmiterii caracterelor ereditare de la o genera#ie la alta. Galenos (129-199 e.n.), anatomist, medic "i filozof grec, a observat "i demonstrat participarea n egal! m!sur! a celor dou! sexe la transmiterea caracterelor la descenden#i, explicnd prin acesta, apari#ia unor caractere intermediare a hibrizilor, fa#! de cei doi p!rin#i. Sfr"itul secolului XVI este marcat, n domeniul biologiei de inventarea microscopului (Z. "i H. Jansen 1590), ceea ce a constituit nceputul apari#iei citologiei "i embriologiei, cu implica#ii directe n conturarea geneticii ca "tiin#! de sine st!t!toare. n anul 1667, fizicianul englez R. Hooke n lucrarea Micrographia descrie pentru prima dat! celula, iar n anul 1831, R. Brown, a descoperit nucleul n celulele orhideelor. ntr-un interval de timp relativ scurt, pe baza datelor acumulate de citologie, M. Schleiden (1838) "i Th. Schwann (1839), au elaborat teoria celular", potrivit c!reia, unitatea structural! "i func#ional! a corpului plantelor "i animalelor este celula. Descoperirea diviziunii mitotice (W. Flemming, 1882) "i a diviziunii meiotice la plante (L. Guignard, 1891), au permis studiul cromozomilor, denumi#i astfel de W. Waldeyer (1888). De"i citologia nregistra progrese n studiul structurii celulei, n domeniul strict al geneticii, secolul XIX a fost dominat de teoriile corpusculare ale eredit"!ii. Aceste teorii ncercau o explica#ie a eredit!#ii, prin existen#a unor particule materiale (corpusculi), existente n fiecare celul!, #esut sau organ, care se acumuleaz! n celulele organismului iar n urma fecund!rii difuzeaz! n noul organism. Aceste particule materiale, difer! ca m!rime, structur!, func#ie "i denumire, de la o teorie la alta. Charles Darwin (1809-1882), formuleaz! teoria pangenezei (1868), conform c!reia caracterele se transmit prin intermediul gemulelor, care se formeaz! n tot corpul, apoi migreaz! n celulele sexuale, iar prin acestea se transmit la urma"i. Teoria plastidulelor, formulat! de Ernst Haeckel (1834-1919) a fost elaborat! n anul 1876. Plastidulele, sunt molecule complexe, care au capacitatea de a se reproduce. Karl Wilhelm Nageli, n anul 1884, a formulat teoria micelian", potrivit c!reia, particulele materiale, denumite micele sunt prezente numai n idioplasm" (plasma ereditar!), sunt capabile de autoreproducere, trofoplasma (plasma nutritiv!), nefiind implicat! n ereditate. Cea mai complex! teorie corpuscular! a fost teoria continuit"!ii plasmei germinative, formulat! n anii 1875-1876, definit! n anul 1902 de zoologul german August Weismann (1834-1914). A preluat de la K. W. Nageli, mp!r#irea corpului n dou! p!r#i distincte: ideoplasma (plasma germinativ!) "i trofoplasma (plasma nutritiv!). Teoria lui A. Weismann, admite existen#a unor particule materiale, de diferite m!rimi, cu anumite func#ii n ereditate, prezente numai n plasma germinativ!, plasma nutritiv! nefiind implicat! n ereditate. Plasma germinativ! este structurat! n particule complexe denumite idante, prezente n nucleul celulelor, acestea se structureaz! n unit!#i mai simple, ide, iar idele con#in
5

particule elementare numite determinan!i, care particip! la formarea "i transmiterea fiec!rui caracter ereditar. Plasma germinativ! se separ! de cea nutritiv!, chiar la prima diviziune a celulei ou (zigotului). Celulele germinale (game#ii), se formeaz! numai din plasma germinativ!, transmi#ndu-se, ca atare, la descenden#i, n timp ce, trofoplasma nu are dect rol nutritiv. Teoriile corpusculare au avut meritul c! au intuit un suport material al eredit!#ii, particulele materiale avnd capacitatea de a se autoreproduce "i de a se transmite la descenden#i. Prima teorie care explic! transmiterea indirect! a caracterelor ereditare a fost teoria factorilor ereditari, elaborat! de Johann Gregor Mendel (1822-1884). Experien#ele de hibridare la maz!re , devenite celebre, i-au permis lui G. Mendel s! formuleze cele dou! legi ale eredit!#ii: legea segreg"rii caracterelor "i legea segreg"rii independente a perechilor de caractere. Factorii ereditari intui#i de Mendel, sunt particule elementare, responsabile de formarea "i transmiterea caracterelor, se g!sesc n celulele somatice sub form! de perechi, iar n celulele sexuale, sub form! simpl!. n urma fecund!rii game#ilor, dup! legile hazardului, factorii ereditari se combin!, (ca apoi s! se separe n procesul de meioz!), rezultnd o mare diversitate de indivizi. Cercet!rile lui G. Mendel, sintetizate n lucrarea Versuche uber Pflanzenhybriden (Experien!e asupra hibrizilor la plante), publicate n anul 1866, au r!mas necunoscute pn! n anul 1900, cnd au fost redescoperite de Hugo de Vries (1848-1935) (Olanda), Carl Correns (1864-1933) (Germania) "i Erich Tschermak (1871-1962) (Austria), independent unul de cel!lalt. Anul 1900, este considerat anul apari#iei geneticii ca "tiin#! biologic!. n anul 1905, William Bateson (1861-1926), propune denumirea de genetic#, pentru noua "tiin#! biologic!, care are ca obiect de studiu, ereditatea "i variabilitatea organismelor. Wilhelm L. Johannsen (1857- 1917), n anul 1909, propune termenii de: genotip (totalitatea genelor unui individ), fenotip (totalitatea caracterelor "i nsu"irilor unui individ) "i gen" (particul! material! care determin! apari#ia unuia sau a mai multor caractere). nceputul secolului XX este marcat de o dezvoltare rapid! a citologiei, care precizeaz! rolul structurilor celulare n via#a celulelor "i a organismelor, urmnd apoi, descoperirea rolului genetic al unor componente celulare, care a nsemnat un nou domeniu, respectiv citogenetica. Bazele citogeneticii, "tiin#! de contact ntre genetic! "i citologie, au fost puse de Thomas Hunt Morgan (1866-1945), n urma elabor!rii teoriei cromozomice a eredit"!ii. Aceast! teorie, presupunnd plasarea liniar! a genelor n cromozomi, transmiterea nl!n#uit! a genelor (linkage) "i schimbul reciproc de gene ntre cromozomii omologi (crossing-over), a permis apoi alc!tuirea primelor h!r#i cromozomice la plante "i animale. Iat! unele din marele descoperiri ale geneticii, majoritatea fiind ncununate cu premiul Nobel, din perioada ultimelor decenii:
6

O. T. Averi, C. M. Mac Leod "i M. Mc Carty (1944) demonstreaz! c! substan#a chimic! a materialului genetic din cromozomi este acidul dezoxiribonucleic (ADN). M. Delbruck, W. T. Bailey (1946), J. Lederberg "i E. L. Tatum (1946) descoper! recombinarea genetic!, primii la bacteriofagi "i ceilal#i la bacterii. J. D. Watson "i F. H. C. Crick (1953) descoper! structura acidului dezoxiribonucleic. S. Benzer (1955) determin! structura fin! a cromozomului fagic "i bacterian. F. Jacob, J. Monod "i Andre Lwoff (1961), presupun existen#a acidului ribonucleic (ARN) mesager care transport! informa#ia genetic! de la ADN la ribozomii din citoplasm! "i descriu mecanismul de reglaj al biosintezei enzimelor la procariote. S. Ochoa, W. Nirenberg "i H. G. Khorana (1966) au descifrat codul genetic. R. H. Holley (1968) pentru prima oar! reu"e"te s! izoleze gene. H. G. Khorana (1970) realizeaz! sinteza unei gene specifice. Earl Wilbur Sutherland Jr. - mecanismul de tip hormonal, molecula de tip AMP ciclic (AMPc) prin intermediul c!reia, numero"i hormoni, dar "i alte substan#e ac#ioneaz! asupra celulei (premiul Nobel n 1971). Albert Claude, George Emil Palade, Christian de Duve, completeaz! prin noi descoperiri, organizarea structural! "i func#ional! a celulei eucariote (mitocondriile - centrul respira#iei celulare, ribozomii centre de sintez! a proteinelor, biogeneza membranelor, lizozomii "i peroxizomii), (premiul Nobel n anul 1974). Renato Dulbecco, Howard Martin Temin "i David Baltimore, descoper! interac#iunile dintre virusurile tumorale "i materialul genetic al celulei. Dogma central! a geneticii, ADN ARNm protein! este modificat!, descoperindu-se reverstranscriptazele, se demonstra c!, ARNv poate fi transcris n ADN (premiul Nobel n 1975). Werner Arber, Daniel Nathans "i Hamilton O. Smith, descoper! enzimele de restric#ie, adev!rate bisturie moleculare care sec#ioneaz! molecula de ADN n situsuri de recunoa"tere precise, deschiznd etapa manipul!rilor genetice, avnd ca efect modificarea structurii genetice a unui organism (ingineria genetic!) (premiul Nobel n 1978). Jean Dausset, George Snell "i Baruj Benacerraf, descoper! structura suprafe#elor celulare genetic determinate, care regizeaz! reac#iile imunologice (premiul Nobel n anul 1980). Barbara Mc Clintock, este laureat! a premiului Nobel (1983) pentru descoperirea elementelor mobile de reglare a genomului (transpozoni), implicate n dezvoltarea organismelor; existen#a elementelor mobile a fost semnalat! nc! din anul 1950, dar aceast! descoperire nu a atras aten#ia geneticienilor vremii, care considerau c! genomul este foarte stabil, chiar rigid. Susumu Tonegawa, descoper! principiul genetic care genereaz! diversitatea anticorpilor a descifrat unul din cele mai mari mistere ale
7

ma"in!riei moleculare din organismul uman: n timp ce ntreg genomul uman con#ine circa 100.000 gene, organismul este capabil s! produc! n jur de un bilion de tipuri deferite de anticorpi. (premiul Nobel n anul 1987) (V. Rusu, 1996). Michael Bishop "i Harold Varmus au descoperit originea celular! a oncogenelor retrovirale (premiul Nobel n anul 1989). Erwin Neher "i Bert Sakman, descoper! tehnica patch clamp, care permite m!surarea activit!#ii individuale a canalelor ionice membranare, metod! care permite explicarea a numeroase procese celulare (excitabilitate, contractilitate, secre#ia, transportul transmembranar al moleculelor, fecundarea etc.) (premiul Nobel n anul 1991). Edmond H. Fischer "i Edwin G. Krebs, descoper! procesul de fosforilare reversibil! a proteinelor ca mecanism general de reglare biologic!, conturndu-se o imagine aproape complet! asupra rolului fosforil!rii reversibile a proteinelor n func#ionarea celulei (premiul Nobel n 1992). Richard Roberts "i Phillip Sharp, au fost laurea#i ai premiului Nobel n 1993 pentru descoperirea genelor cu structur! discontinu!: genele organismelor superioare sunt alc!tuite din fragmente informa#ionale denumite exoni, separate de por#iuni noninforma#ionale denumite introni. n 1994, premiul Nobel a fost acordat pentru descoperirea proteinelor G, profesorilor Martin Rodbell "i Alfred G. Gillman (S.U.A.). Edward B. Lewis, Christiane Nuesslein Voehard "i Eric F. Wieschaus, au fost distin"i cu premiul Nobel n 1995, pentru descoperirea controlului genetic al dezvolt!rii precoce a embrionului; mecanismele moleculare responsabile de morfogeneza tuturor animalelor sunt universale. Peter C. Doherty "i Ralf M. Zinkernagel, au descoperit specificitatea ap!r!rii "i imunit!#ii, mediate de celul! (premiul Nobel n 1996). Stanley B. Prusiner, a fost laureat al premiului Nobel n anul 1997, pentru descoperirea prionilor un principiu nou al infec#iei. Guten Blobel, a descoperit c! proteinele au semnale intrinsece care guverneaz! transportul "i localizarea lor n celul! (premiul Nobel n 1999). n anul 2001, Leland Hartwell, Tim Hunt "i Paul Nurse au fost laurea#i ai premiului Nobel pentru cercetarea celulei canceroase.

1.3. LEG!TURA GENETICII CU ALTE $TIIN"E

Pentru a studia problemele pe care le implic! ereditatea, genetica se serve"te de o serie de discipline: Evolu%ionismul, ce studiaz! procesul de evolu#ie n lumea vie#uitoarelor, de la apari#ia lui pn! n ziua de ast!zi, legile dup! care organismele vii au ap!rut "i s-au modificat n decursul vremurilor. Se ocup! de acea parte a biologiei care se mai nume"te "i filogenetic" (de la phyle - neam, gen "i genesis - na"tere, origine). Fiziologia se ocup! cu studiul fenomenelor vitale ce au loc n organismele vegetale "i animale. ntre metabolism "i procesele vitale este o strns! leg!tur!, iar partea de genetic! care se ocup! cu modul de ac#iune al
8

factorilor ereditari pentru realizarea caracterelor, se mai nume"te "i genetic" fiziologic". Botanica "i zoologia se ocup! cu studiul plantelor "i a animalelor "i ne ajut! s! determin!m caracterele, nsu"irile "i variabilitatea lor, furnizndu-ne no#iuni de morfologie "i anatomie vegetal! "i animal!. Pe baza acestor date putem clasifica formele noi, studiul cu care se ocup! sistematica. Sistematizarea indivizilor are la baz! asem!n!rile "i deosebirile din interiorul fiec!rui grup, care se men#ine prin existen#a unui mecanism ereditar. Citologia studiaz! celula, unitatea de baz! a organismelor vii. Ea ne d! posibilitatea de a descoperi baza material! a eredit!#ii "i structurile celulare cu rol n ereditate. Biochimia "i biofizica sunt "tiin#e care se ocup! cu procese fizice "i chimice ce au loc n materia vie "i leg!tura lor n cadrul metabolismului. Ele ne ajut! s! studiem structurile chimice "i fizice care r!spund de ereditatea organismelor. O foarte strns! leg!tur! exist! ntre genetic! "i ameliorarea plantelor &i animalelor, cea dinti constituind baza teoretic! a celei de a doua. Nu putem crea rase noi de animale "i soiuri noi de plante, dac! nu le cunoa"tem legile dup! care se pot crea. Genetica a descoperit aceste legi pe baza c!rora ameliorarea elaboreaz! metode practice de mbun!t!#ire "i creare de soiuri "i rase. Microbiologia, studiaz! via#a microorganismelor. Cu ajutorul lor s-au adus contribu#ii serioase la identificarea, descrierea "i func#iile materialului genetic. Colaborarea strns! dintre genetic! "i celelalte ramuri ale "tiin#elor a dus la apari#ia de noi ramuri ale geneticii. Din colaborarea geneticii cu citologia s-a n!scut citogenetica. Ea studiaz! structurile "i func#iile celulare ce stau la baza fenomenelor ereditare. Din colaborarea geneticii cu fizica nuclear! s-a n!scut genetica radia!iilor, care cerceteaz! influen#a radia#iilor ionizante "i neionizante asupra bazei materiale a eredit!#ii. Din colaborarea geneticii cu biochimia s-a n!scut genetica molecular", care studiaz! fenomenele biochimice ale eredit!#ii la nivelul molecular. Din colaborarea geneticii cu sistematica s-a n!scut genetica popula!iilor, al c!rui obiect de studiu este structura genetic! a popula#iilor de plante "i animale "i factorii care o modific!. Din colaborarea geneticii cu medicina s-a n!scut genetica uman", de mare importan#! pentru prevenirea "i combaterea bolilor ereditate la om. Am enumerat principalele ramuri ale "tiin#elor cu care genetica colaboreaz!. Mai sunt "i alte "tiin#e care aduc geneticii mari servicii, cum sunt de exemplu matematica "i altele. Genetica are un vast cmp de activitate. n afar! de agricultur!, zootehnie, medicin! veterinar!, silvicultur!, s-a interferat cu toate ramurile biologiei. Dup! domeniile mari n care se studiaz! fenomenul de ereditate deosebim genetica vegetal!, animal!, uman!, microbian! ".a.

1.4. METODE DE CERCETARE FOLOSITE N GENETIC!

Simplele observa#ii asupra modului de transmitere a caracterelor "i nsu"irilor ereditare, au generat o multitudine de ipoteze care ncercau s! explice, n diferite moduri, ereditatea "i variabilitatea organismelor vii. Ini#ierea, perfec#ionarea metodelor "i tehnicilor de cercetare specifice, au determinat apari#ia "i extinderea geneticii ca "tiin#!, n rndul celorlalte "tiin#e biologice. Aceste metode de cercetare, cronologic vorbind, au determinat abordarea aspectelor legate de ereditate "i variabilitate, de la nivel individual, la nivel popula#ional "i mergnd apoi spre nivelurile celular "i molecular. Principalele metode de cercetare folosite n genetic! sunt: metoda hibridologic! (hibridarea experimental!), metoda biometric!, metoda analizei genealogice, metoda citogenetic!, metoda biochimic! "i biofizic!, metoda ontogenetic!, metoda culturilor de celule "i embrioni, metoda ADN recombinat. Metoda hibridologic" const! n ncruci"area dintre indivizi ce posed! caractere ereditare distincte, urmat! de analiza modului de manifestare a acestora, la indivizii din diferite genera#ii. n genera#iile segregante (F2, F3,Fn) se analizeaz! statistic modul de manifestare a caracterelor luate n studiu. Hibridarea s-a utilizat de mult! vreme ca metod! de ob#inere a unor forme noi, dar bazele teoretice ale acesteia au fost stabilite de Johann Gregor Mendel, de aceea metoda hibridologic! se mai nume"te analiz! genetic! mendelian!. A"a cum a procedat "i Gr. Mendel, indivizii ce urmeaz! a se ncruci"a, sunt studia#i n prealabil, cteva genera#ii, pentru a vedea dac! caracterele luate n studiu se transmit constant, cu alte cuvinte, dac! organismele sunt homozigote pentru celelalte caractere. Structura genetic! a organismelor luate n studiu, fenomenele linkage "i crossing-over se pot stabili printr-o ncruci"are analizatoare (retroncruci"are, backcross), cnd hibrizii cu caractere dominante se ncruci"eaz! cu un individ homozigot recesiv (tester). Metoda biometric", aplicat! ini#ial la caracterele calitative s-a extins "i n domeniul caracterelor cantitative, n cadrul unui grup mai restrns sau mai mare de indivizi. Legilor mendeliene ale eredit!#ii, le-au urmat tezele teoriei cromozomice ale eredit!#ii, T. H. Morgan tot pe baza statisticii, stabilind modul de interac#iune dintre gene, probabilitatea recombin!rilor inter "i intracromozomice, pozi#ia "i distan#a dintre gene, n cadrul h!r#ilor cromozomice. Metoda analizei statistice s-a extins "i n analiza modului de transmitere a caracterelor cantitative, conturndu-se un domeniu foarte important al geneticii, genetica cantitativ". Pe baza m!sur!torilor biometrice (m!rimea "i greutatea fructelor, num!rul semin#elor pe plant!, cantitatea de lapte la taurine, num!rul de ou! la p!s!ri etc.) se calculeaz! o serie de valori biometrice, care dau indica#ii deosebit de importante privind: interac#iunea genotip-mediu n exprimarea fenotipic! a acestor caractere "i tipurile de interac#iuni genice, corela#iile dintre diferite caractere, gradul de repetabilitate a acestora pe parcursul mai multor genera#ii.
10

Studiul matematic se aplic! "i n genetica popula#iilor (naturale sau artificiale), obiectul acestei ramuri a geneticii fiind studiul frecven#ei genelor "i genotipurilor dintr-o popula#ie "i cauzele ce determin! modificarea echilibrului acestora. Metoda citogenetic", studiaz! componen#ii celulari implica#i n ereditate, n mod direct sau indirect (cromozomii "i evolu#ia lor n timpul diviziunii celulare, plastidele, mitocondriile, plasmidele etc.) "i efectul unor agen#i mutageni asupra acestor componen#i. Metoda citogenetic! s-a perfec#ionat pe m!sura noilor cuceriri ale fizicii optice "i electronice, ce au dus la modernizarea diferitelor tipuri de microscoape (de la cele optice pn! la cele electronice). n ultimul timp se utilizeaz! "i alte metode de studiu a materialului genetic: cromatografia de diferite tipuri, cristalografia, autoradiografia, citofotometria "i difrac#ia n raze X. Cercet!rile de citogenetic! coreleaz! modific!rile materialului genetic la nivel celular, cu modific!rile caracterelor ereditare ale organismelor, aducnd numeroase informa#ii privind activitatea genelor, grupelor de gene, a cromozomilor sau a altor componente celulare. Metoda biofizic" #i biochimic". n ultimul timp, materialul genetic a putut fi studiat n imensa sa complexitate "i din punct de vedere fizico-chimic. Arhitectura structural! deosebit de complex! a moleculelor de ADN "i ARN de diferite tipuri, a fost descifrat! prin metode biofizice "i biochimice. Perfec#ionarea microscopului electronic, izolarea componentelor celulare prin ultracentrifugare, analiza lor prin autoradiografie, microcinematografie, analiza componen#ei atomice, moleculare "i spa#iale ale acizilor nucleici sunt realiz!ri recente ale biofizicii "i biochimiei. Metoda biofizic! "i biochimic! studiaz! "i efectul diver"ilor agen#i mutageni asupra materialului genetic, vorbindu-se frecvent de o genetic! a radia#iilor, iar genetica molecular! constituie un domeniu f!r! de care, azi, nu putem explica nici un aspect la eredit!#ii, dac! nu accept!m stocarea informa#iei genetice n molecule de ADN (sau ARN-v), copierea unor mesaje mai scurte sau mai lungi, n molecula de ARNm "i transmise neschimbat de la o celul! la alta, de la o genera#ie la alta. Metoda ADN recombinat. Constituie metoda cea mai modern! de studiu a geneticii care reune"te cele mai rafinate tehnici de lucru, pentru izolarea moleculelor acizilor nucleici sau numai a unor segmente din ace"ti acizi "i realizarea de molecule hibride ale acestora. Izolarea genei, sinteza artificial! a genei, inser#ia genelor ntr-o serie de vectori genetici (virusuri "i plasmide), transferul genelor de la o specie la alta, sunt realiz!ri recente ale unui nou domeniu al geneticii, ingineria genetic". Acestui domeniu apar#in "i tehnicile de manipulare a celulelor, embrionilor "i #esuturilor care, pe medii nutritive, n condi#ii aseptice, pot fi nmul#ite, reproducnd fie clone celulare sau organisme ntregi (la plante).

11

1.5. MATERIALUL DE CERCETARE N GENETIC!

n cercetarea eredit!#ii caracterelor, o importan#! deosebit! l are materialul cu care experiment!m. De acesta depind, n foarte mare m!sur!, rezultatele ob#inute. Alegerea lui se face n func#ie de scopul cercet!rii. Sunt totu"i cteva condi#ii generale, de care trebuie s! #inem seama n alegerea acestui material: - s! prezinte caractere distincte, u"or de precizat "i urm!rit, la p!rin#i "i la urma"i; - s! aib! ciclul vital scurt; - s! posede un num!r mic de cromozomi; - s! produc! mul#i urma"i; - s! produc! muta#ii, sub influen#a factorilor mutageni; - s! poat! fi reprodus u"or n laborator; - s! men#in! n descenden#! caracterele "i nsu"irile ce ne intereseaz!. Dintre mamifere, se folosesc mult "oarecii, care au ciclul de dezvoltare de numai 2,5 luni "i sunt destul de prolifici. Dintre insecte, a fost folosit! foarte mult musculi#a de o#et, Drosophila melanogaster. Aceasta se nmul#e"te destul de repede, muteaz! foarte u"or, are pu#ini cromozomi (2n=8), iar n glandele salivare con#ine cromozomi gigantici. La plante, se aleg de obicei plante anuale ce prezint! caractere distincte, u"or de sesizat "i urm!rit (culoarea pericarpului, a endospermului, culoarea spicului, a aristelor ".a.). Se folosesc cu succes plante autogame, care pot fi reproduse, fie prin fecundare str!in!, fie prin autofecundare. Dintre ciuperci s-a folosit foarte mult, n ultimul timp, Neurospora crassa. O importan#! deosebit! s-a acordat n special n ultimele decenii, bacteriilor "i virusurilor, care au ciclul de via#! foarte scurt, cu func#ii limitate, uneori numai la cea de reproducere "i infec#iozitate. Genetica molecular! "i-a cl!dit descoperirile cu privire la structura macromolecular! a acizilor nucleici, procesele biochimice ce stau la baza substratului material al eredit!#ii, structura fin! a genei, folosind virusurile "i bacteriile ca material de studiu. Pentru genetica animal!, "i n special pentru genetica dezvolt!rii, s-a g!sit un model ideal, n nematodul Caenorhabdites elegans (Crlan M., 2001): adul#ii au dimensiuni mici, aproximativ 1 mm, o genera#ie se realizeaz! ntr-un ciclu de 3 zile, necesit! condi#ii simple de cre"tere, produce un num!r mare de descenden#i (200-300), indivizii sunt alc!tui#i din exact 959 celule, dintre care 300 de neuroni. n genetica uman!, studiul gemenilor are o importan#! deosebit!. Gemenii care se dezvolt! din acela"i zigot (monovitelini sau monozigotici) au o ereditate identic!, iar deosebirile morfo-fiziologice dintre ei se datoreaz! n special condi#iilor de via#!. n felul acesta, se poate distinge n mod separat contribu#ia mediului sau a eredit!#ii asupra exterioriz!rii unor caractere. Nu acela"i lucru se poate spune despre gemenii bivitelini (bizigotici), care provin din ovule diferite "i cu leg!turi genetice asemenea fra#ilor "i surorilor.
12

1.6. DEZVOLTAREA GENETICII VEGETALE N ROMNIA

Primele cercet!ri de genetic! n Romnia au fost efectuate de Constantin Vasilescu (1840-1902), profesor la $coala Superioar! de Medicin! Veterinar! Bucure"ti (actuala Facultate de Medicin! Veterinar!), care, n urma hibrid!rii la suine, a urm!rit modul de transmitere al monodactiliei (piciorul are o singur! unghie) "i al caracterului normal. n urma acestor ncruci"!ri a semnalat pentru prima dat!, dominan#a "i recesivitatea caracterelor n genera#ia F1 "i segregarea acestora n genera#ia F2, ntr-un raport de aproximativ 3:1 (caracteristic monohibrid!rii). Rezultatele cercet!rilor sale au fost comunicate naintea celor lui Gregor Mendel (18221884), putnd fi considerat un precursor al mendelismului. n domeniul geneticii vegetale, primele cercet!ri de genetic! au fost ini#iate de Constantin SanduAldea (18741927), care s-a ocupat de ameliorarea grului, reu"ind s! creeze o serie de linii valoroase. Public! n anul 1915, primul tratat romnesc de specialitate intitulat Ameliorarea plantelor agricole, cu un amplu capitol de genetic!. Gheorghe IonescuSise"ti (18851968), doctor n "tiin#e la Universitatea din Jena, a contribuit la dezvoltarea amelior!rii plantelor "i a "tiin#ei experimentale agricole romne"ti. n urma selec#iei individuale simple, din soiul de gru Tenmarq, a ob#inut soiul de gru A-15, cultivat de aproape 25 de ani n #ara noastr!. nfiin#area Academiei de $tiin#e Agricole "i Silvice, a Institutului de Cercet!ri Agricole a Romniei (I.C.A.R.) "i a primei Societ!#i de Genetic! din Romnia, sunt legate de activitatea acestui savant. Genetica vegetal! din Romnia a acumulat noi realiz!ri prin activitatea "tiin#ific! de excep#ie a profesorului Nicolae S!ulescu (18981977), care, dup! o specializare la Institutul de Cercet!ri de Ereditate din Berlin, condus de Erwin Baur (18751933) a realizat numeroase hibrid!ri la specia Antirrhinum majus (2n=16), a stabilit grupele de linkage a mai multor gene "i a ntocmit prima hart! genetic! la aceast! specie (1925). Studii de cariologie "i citogenetic! la plante a efectuat profesorul Victor Ghimpu (18961952), fiind printre primii romni care au abordat acest domeniu. Creatorul "colii romne"ti de citologie este considerat profesorul Dimitrie Voinov (18671951), cnd citogenetica mondial! era la nceputurile ei. Cercet!tor de mare fine#e, Dimitrie Voinov, a semnalat primul caz de aneuploidie, n anul 1912, la insecta Gryllotalpa gryllotalpa, a studiat formarea celulelor sexuale la insecte "i a demonstrat c! diviziunea mitocondriei are loc independent de regele celulei nucleul , putnd fi considerat "i un pionier al eredit!#ii extranucleare. Pentru aportul s!u n dezvoltarea "tiin#ei, UNESCO, a comemorat n 1967, 100 de ani de la na"terea lui Dimitrie Voinov. n domeniul hibrid!rii la plante, n vederea realiz!rii de noi forme, amintim contribu#ia profesorului $tefan Popescu (18881961), care a statornicit bazele cercet!rilor "tiin#ifice de genetic! "i ameliorare a plantelor n Moldova, comb!tnd viguros ideile ne"tiin#ifice ale lui T. D. Lsenko. Cursul de genetic!,
13

editat n 1947, printre primele din #ara noastr! cuprindea "i o parte de citogenetic!, explicnd bazele citologice ale principalelor fenomene genetice. Genetica vegetal! "i ameliorarea plantelor agricole au fost impulsionate de activitatea rodnic! a academicianului Nechifor Ceapoiu (19111992), fiind cunoscute rezultatele sale n cercet!rile de genetic! a grului, crearea unor soiuri noi de gru "i cnep!, fondarea revistei Probleme de Genetic" Teoretic" #i Aplicat" "i organizarea Simpozioanelor Na!ionale de Genetic" Vegetal" #i Animal". Petre Raicu (19291997) a avut contribu#ii deosebite n dezvoltarea geneticii vegetale, animale "i umane "i a nv!#!mntului romnesc de genetic!. A contribuit la nfiin#area sec#iei de Genetic" n cadrul Societ!#ii de $tiin#e Biologice din Romnia "i a organizat primele simpozioane na#ionale de genetic! din Romnia, dup! nl!turarea dogmei lui T. D. Lsenko (1964, 1967). George Emil Palade (n!scut n 1912), laureat al premiului Nobel n 1974, savant de origine romn!, stabilit n S.U.A., a perfec#ionat metodele de microscopie electronic!, a descoperit ultrastructura ribozomilor (granulele lui Palade) "i implicarea acestora n func#ionarea celulei. Institutul de Biologie "i Patologie Celular!, a fost nfiin#at de Nicolae Simionescu, cu sprijinul lui G. E. Palade. Cercet!rile de genetic! vegetal!, se desf!"oar! n principalele Universit!#i Agronomice din Romnia (Bucure"ti, Ia"i, Timi"oara, ClujNapoca, Craiova), n Sta#iunile de Cercet!ri Agricole, Institutul de Cercet!ri pentru Cereale "i Plante Tehnice Fundulea (coordonate de Academia de $tiin#e Agricole "i Silvice). n ameliorarea porumbului, primele linii homozigote ob#inute din haploizi artificiali, a fost realizat! de C. Panfil "i C. Botez (Universitatea Agronomic! ClujNapoca). Soiuri valoroase de trifoi tetraploid au ca autor pe Mircea Savatti (Universitatea Agronomic! ClujNapoca). Lucr!rile minu#ioase de mutagenez! experimental!, s-au realizat la Universitatea din Craiova (Marghitul Valeria "i Corneanu G.), la Universitatea Agronomic! Bucure"ti (Nicolae I.), la Universitatea Agronomic! Ia"i (%rdea Gh). Genetica "i ameliorarea grului "i orzului, au cunoscut progrese importante prin activitatea unor personalit!#i n domeniu (Ceapoiu N., Mure"an T., S!ulescu N. N., Dr!ghici L., Bude At.). Hibrid!rile intergenice "i interspecifice, n special pentru ob#inerea de Triticale au fost coordonate de Gallia Butnaru (Universitatea Agronomic! Timi"oara) "i Ga"par I. (Sta#iunea de Cercet!ri Agricole Suceava). n Romnia, numeroase reviste "i publica#ii de specialitate, fac cunoscute realiz!rile n domeniul geneticii vegetale "i animale: Probleme de Genetic" Teoretic" #i Aplicat" (ICCPTFundulea), Cercet"ri de Genetic" Vegetal" #i Animal" (ICCPTFundulea), Genetics and Evolutions (Universitatea A.I. CuzaIa"i), Evolution and Adaptation (Universitatea BabesBolyai Cluj-Napoca).
14

CAPITOLUL 2 BAZELE CELULARE ALE EREDIT!"II #I VARIABILIT!"II (CITOGENETICA)

Moto: "Precum istoria P!mntului este nscris! n straturile sale geologice, tot astfel istoria unui organism este nscris! n cromozomii s!i" H. Kihara

Ereditatea, proprietate esen!ial" a vie!ii, trebuie s" fie determinat", ca #i celelalte propriet"!i, de un substrat material cu o anumit" localizare, structur" #i func!ie. Preocup"rile filozofilor #i oamenilor de #tiin!" pn" n secolul XIX pentru a g"si un suport material al eredit"!ii s-au soldat cu formularea a numeroase ipoteze, de multe ori speculative. De abia n secolul XIX, odat" cu apari!ia #i dezvoltarea citologiei s-a putut trece la studiul sistematic al celulei, aceasta constituind unitatea structural" de baz", comun" organismelor vii, cu excep!ia virusurilor. Pentru cunoa#terea eredit"!ii, studiul celulei #i a mecanismelor diviziunii celulare prezint" o importan!" deosebit". ntr-adev"r, cuno#tin!ele acumulate au permis identificarea materialului genetic, descoperirea mecanismului de transmitere a genelor de la o celul" la alta, de la un organism la altul #i a modului cum se realizeaz" recombinarea genetic". Toate aceste fenomene sunt determinate de un complex de structuri #i func!ii celulare. Inven!ia microscopului la sfr#itul secolului al XVI-lea a deschis o nou" er" n cercetarea structurilor materiei vii. Astfel, n anul 1665 fizicianul englez R. Hooke, cu ajutorul microscopului, descoper" celula. n anul 1831, R. Brown, cercetnd celulele din epiderma plantelor Orchideae #i Asclepiadeae, descoper" nucleul. Pe baza datelor acumulate despre celul", botanistul M. J. Schleiden (1838) #i zoologul T. Schwann (1839) elaboreaz" teoria celular", potrivit c"reia celula reprezint" unitatea structural" a materiei vii. O mare importan!" pentru dezvoltarea geneticii a avut-o descoperirea mitozei sau diviziunii nucleare indirecte (cariokineza) la plante, de c"tre W. Flemming (1882). La interval scurt a fost descoperit" meioza #i fecundarea la animale de c"tre E. van Beneden (1883), A. Weismann (1883) #.a. #i la plante de c"tre L. Guignard (1889). Descoperirea diviziunii nucleului a permis studiul cromozomilor, denumi!i astfel de W. Waldeyer (1888), c"rora, datorit" propriet"!ilor pe care le au, li s-a atribuit un rol esen!ial n ereditate. Dependen!a fenomenelor ereditare de nucleu, respectiv de cromozomi a deschis drumul cercet"rilor privind substratul
15

material al eredit"!ii. n ultimele decenii, mijloacele moderne de cercetare au contribuit la mari descoperiri n domeniul citologiei. Pentru studiul celulei se folose#te ast"zi microscopul cu contrast de faz", fluorescent, electronic #i microscopul cu raze ultraviolete. Se ob!in imagini m"rite pn" la cteva sute de mii de ori. Al"turi de succesul din domeniul opticii, progrese nsemnate s-au f"cut #i n domeniul metodelor biofizice #i biochimice. Tabloul general al structurilor celulare s-a completat #i s-a complicat mereu cu elemente noi. Pentru a rezolva multiplele probleme pe care le ridic" citologia se face apel la chimie, fizic", fiziologie #i alte discipline; genetica utilizeaz" descoperirile citologice pentru elucidarea mecanismelor eredit"!ii. Din colaborarea dintre genetic" #i citologie s-a n"scut un domeniu nou al biologiei numit citogenetic!. Celula este unitatea morfo-func!ional" elementar" a oric"rui organism procariot sau eucariot, constituind principalul nivel de organizare a materiei vii, capabil de autoreglare, autoconservare #i autoreproducere. Celula poate fi considerat", conform organiz"rii sistemice a lumii vii, un sistem biologic deschis, n echilibru dinamic cu mediul ambiant (celula procariot") sau ca un subsistem, cnd constituie parte component" a unui !esut, organ sau organism pluricelular (celula eucariot"). Celulele tuturor organismelor au acela#i plan general de organizare, fiind formate din membran" #i protoplasm", ns" analiznd evolu!ia aparatului genetic se disting dou" mari grupe de organisme: procariote #i eucariote.

2.1. STRUCTURA CELULEI PROCARIOTE

Procariotele sunt organisme cu o structur" simpl", ce cuprind vie!uitoare acelulare, din care fac parte viroizii, virusurile #i micoplasmele #i vie!uitoare celulare, bacteriile #i algele albastre-verzi (cianoficeele). Materialul genetic este reprezentat de o molecul" de ADN sau ARN, necomplexat cu proteine histonice sau nehistonice. Cromozomul procariotelor se g"se#te n contact direct cu citoplasma, deoarece compartimentarea celular" #i specializarea membranelor este abia schi!at". Viroizii sunt agen!i infec!io#i reprezenta!i de o molecul" scurt" de ARN, lipsi!i de nveli# proteic. Primii viroizi au fost identifica!i ca agen!i ce produc boala cartofilor fuziformi sau stelarea cartofilor, ulterior identificndu-se n cazul mai multor boli grave. Majoritatea viroizilor se g"sesc n nucleul celulei gazd", replicarea ARN viroidal depinznd strict de complexul enzimatic al celulei gazd". Virusurile sunt particule infec!ioase acelulare, submicroscopice, care produc bolile cunoscute sub denumirea de viroze. Virusurile atac" toate organismele, de la bacterii (bacteriofagi), pn" la celulele animale #i vegetale. Virusurile sunt lipsite de complexul enzimatic necesar sintezei de substan!e energetice #i reproducerii. De aceea, virusurile folosesc mecanismele #i organitele celulei gazd" pentru reproducere, fiind considerate organisme parazite obligatoriu sau, altfel spus, parazite la nivel genetic. Celula gazd" produce #i
16

furnizeaz" precursorii necesari replic"rii moleculei de acid nucleic viral #i a proteinelor virale, care apoi se asambleaz", rezultnd o nou" particul" viral". Particulele virale, de obicei, lizeaz" (distrug) membrana celulei gazd", putnd produce noi infec!ii. Structura particulei virale a fost descoperit" de A.D. Hershey #i M. Chase, n anul 1952. Particula viral" este alc"tuit" dintr-un nveli# proteic, denumit capsid!, format" dintr-o singur" protein" sau din mai multe proteine stratificate, iar la virusurile mai mari se adaug" lipide #i glucide. Capsida poate avea diverse forme, n func!ie de natura subunit"!ilor proteice, care au fost denumite capsomere. La unele virusuri (R17, F2, virusul herpesului), capsida poate fi nconjurat" de un nveli# proteic extern (anvelop" extern") cu ajutorul c"ruia fagul ader" pe membrana celulei gazd". n interiorul capsidei se g"se#te materialul genetic reprezentat de o molecul" de ADN (dezoxiribovirusuri) sau o molecul" de ARN (ribovirusuri), de m"rimi diferite, specifice fiec"rui tip de virus. La unii bacteriofagi (virusuri ale bacteriilor) capsida se continu" cu o coad" cu simetrie elicoidal", la ale c"rei extremit"!i sunt prezente mai multe filamente codale, ce asigur" contactul cu celula parazitat" (figura 2.1.).

Fig. 2.1. Structura celulei la procariote: A-dezoxiribovirus; B-micoplasm"; C-bacterie; D-cianoficee (mz-mezozom, rb-ribozom, p-peretele celular, pl-plasmalema, r-produs de rezerv", t-tilacoid) (dup" Roland #i Sz$ll$si)

Micoplasmele sunt organisme extrem de simple, care nu au perete celular fiind delimitate de plasmalem", n interiorul c"reia se g"sesc cteva sute de ribozomi #i un cromozom reprezentat de o molecul" de ADN. De#i au o structur" foarte simpl", sunt capabile s"-#i sintetizeze n mod independent proteinele #i ATP necesare metabolismului. Micoplasmele produc o serie de boli att la animale (pleuropneumonia taurinelor), ct #i la plante (stolburul solanaceelor, cloroza asterului, nanismul porumbului etc.).
17

Celula bacterian!. Este delimitat" la exterior de un perete celular rigid, alc"tuit din glicoproteine complexe (de tipul mureinelor), care, n func!ie de structura chimic", confer" acesteia caracteristicile de imunitate #i patogenitate. Plasmalema, de natur" lipo-proteic" este situat" pe fa!a intern" a peretelui celular, delimitnd citoplasma. Citoplasma nu este omogen" din punct de vedere structural, nglobnd o serie de vezicule membranoase, microfibrile, ribozomi, glucide de rezerv" etc. Zona central" a citoplasmei cuprinde o mas" dens" de microfibrile, reprezentnd molecula de ADN, ce constituie materialul genetic. ADN este bicatenar, circular, necomplexat cu histone, cu o lungime de aproape 1 mm. Aceast" molecul" de ADN constituie cromozomul sau genoforul bacterian. n jurul s"u citoplasma este mai dens", rezultnd a#a numitul nucleoid, care este lipsit de membran" #i nucleol. Cercetarea electronomicroscopic" a bacteriilor a eviden!iat o serie de invagin"ri tubulare sau lamelare ale plasmalemei, denumite mezozomi. Mezozomii sunt accesorii ale genoforilor implica!i n activitatea respiratorie, replicarea semiconservativ" a ADN #i diviziunea celulei (F. Jacob, 1966). Cianoficeele (algele albastre-verzi) sunt cele mai vechi organisme cunoscute, unicelulare, de form" filamentoas" (Oscillatoria), globuloas" (Spirulina), care au o organizare destul de apropiat" celei bacteriene. La cianoficee, invagina!iile plasmalemice au forme aplatizate, grupate n pachete de vezicule membranoase, denumite tilacoide, ce con!in pigmen!i fotosintetizatori.

2.2. STRUCTURA CELULEI EUCARIOTE

Celula eucariot", vegetal" sau animal", delimitat" de membrana celular" este alc"tuit" din protoplasm", care con!ine dou" componente fundamentale: citoplasma #i nucleul. Citoplasma are o compartimentare strict", con!innd organite citoplasmatice lipsite de membran" (microtubuli, centrioli, microfilamente, ribozomi), cu membran" simpl" (reticul endoplasmic, aparatul Golgi, lizozomi, peroxizomi, glioxizomi, lomazomi) #i cu membran" dubl" sau anvelop" (nucleu, plastide, mitocondrii) (Toma C. #i colab., 1995). Membrana celular!. Constituie nveli#ul extern al celulei #i are rol de efector al controlului schimburilor de substan!e dintre con!inutul celulei #i mediul ambiant. Ea este reprezentat" de stratul bimolecular fosfolipidic, care poart" pe fa!a sa extern" un strat proteic bogat n hidra!i de carbon, iar pe fa!a sa intern" un singur lan! proteic. La microscopul electronic apare format" din dou" straturi, fiecare de cte 20 grosime, ntre care se afl" un spa!iu clar de 35 . La animale, celula are la exterior doar membrana plasmatic". La plante, celulele sunt nvelite n plus, la exterior, de un perete celular impregnat cu celuloz", lignin", s"ruri sau alte substan!e. Aceasta prezint" o mare importan!" economic", cum ar fi de exemplu n cazul plantelor textile, de la care se ob!in fibre pentru industria textil".
18

Structura #i func!iile membranei plasmatice sunt determinate genetic. Ea are un rol fiziologic #i biochimic n via!a celulei, f"r" a participa direct la activit"!ile formative #i de transmitere ereditar". Citoplasma. Reprezint" partea celulei situat" ntre membrana plasmatic" #i membrana nuclear". Este alc"tuit" dintr-o matrice citoplasmatic" #i organite citoplasmatice. Matricea const" dintr-o plasm" coloidal", reprezentnd un sistem heterogen format din lan!uri macromoleculare #i agregate moleculare, precum #i enzime, substan!e metabolice de rezerv" etc. Organitele citoplasmatice, caracteristice principial pentru toate celulele sunt: reticulul endoplasmic, mitocondriile, ribozomii, corpusculii Golgi (prezente n toate celulele), cloroplastele (la speciile vegetale fototrofe), centriolii (n celulele animale, la unele alge #i ciuperci), lizozomii (n celulele animale #i, probabil, ale unor plante). Reticulul endoplasmic. La microscopul electronic n citoplasm" a fost descoperit un sistem de cisterne, vezicule #i canalicule, denumite de K. Porter (1953) reticul endoplasmic. Canaliculele au un diametru de 500 , iar cisternele pn" la 1500 . Starea n care la plante #i animale ribozomii sunt ata#a!i de reticulul endoplasmic s-a numit ergastoplasm!. Mitocondriile. Sunt organite citoplasmatice care se g"sesc n mod obi#nuit n toate celulele. Ele au fost studiate la animale mai mult dect la plante, de#i, n general, au aceea#i structur" #i func!ie. Mitocondriile variaz" ca m"rime, de la 0,2 (limita de rezolu!ie a microscopului obi#nuit) pn" la c!iva . Mitocondriile au diferite forme, dup" celulele din care fac parte (bastona#e, filiforme, sferice etc.). n celula vie ele apar mobile, fiind antrenate de mi#c"rile citoplasmice. Num"rul acestor organite variaz" de la un !esut la altul; astfel, se g"sesc n num"r mare n celulele ce apar!in unor !esuturi cu activitate intens" (celulele meristematice, miofibrile, tuburile renale etc.). Mitocondriile sunt nconjurate de o membran" dubl", asem"n"toare aceleia de la exteriorul celulei. Membrana intern" formeaz" numeroase invagin"ri (criste mitocondriale), care m"resc foarte mult suprafa!a activ" a mitocondriilor. Aceste organite constituie centrul unor trepte ale procesului de respira!ie aerob". Ele posed" enzimele necesare cu rol n oxidarea gr"similor #i de fosforilare. Studiul complex al mitocondriilor a relevat existen!a unui ADN mitocondrial #i a unui aparat enzimatic propriu, ce permite sinteza unor proteine caracteristice. ADN din mitocondrii este bicatenar, circular, asem"n"tor ADN bacterian. De asemenea, cercet"rile asupra ribozomilor mitocondriali au relevat faptul c" ace#tia sunt de tip bacterian (cu o constant" de sedimentare de 70 S). Pe aceast" baz" s-a tras concluzia c" mitocondriile (ca #i plastidele) deriv" din organisme procariote, care au invadat celulele eucariotelor #i s-au subordonat nucleului acestora. ntr-o mitocondrie pot exista pn" la 6 molecule de ADN, n cantitate de 10-6-10-7 g (Borst #i colab., 1967). Aparatul genetic mitocondrial explic"
19

localizarea unor nsu#iri la nivelul citoplasmic, deoarece ast"zi se #tie precis c" mitocondriile au proprietatea de a cre#te, de a se divide #i posed" continuitate celular" #i genetic". Genomul mitocondrial la metazoare este constant, alc"tuit din 37 gene, cu diferite roluri: 13 gene codific" sinteza diferitelor proteine mitocondriale, 22 de gene responsabile de sinteza moleculelor specifice de ARNt #i 2 gene ce de!in informa!ia genetic" necesar" sintezei subunit"!ilor mari #i mici ale ribozomilor (ARNr). Genomul mitocondrial al plantelor este mult mai complex, dar, func!ional, difer" foarte pu!in de cel al metazoarelor. Genele mitocondriale se transmit pe cale citoplasmatic", pe linie matern". Muta!iile care apar la nivelul mitocondriilor afecteaz" n primul rnd func!iile de respira!ie. Aceste muta!ii pot s" apar" cu o frecven!" relativ mare #i se transmit pe linie matern" la descenden!i. Ribozomii. Sunt corpusculi submicroscopici cu dimensiuni cuprinse ntre 50-300 , care se g"sesc n citoplasm", cloroplaste, mitocondrii. Ribozomii con!in acizi ribonucleici ribozomali #i proteine ribozomale n propor!ie de aproximativ 1:1. Din cauza con!inutului ridicat n acid ribonucleic ribozomal (ARNr), G. E. Palade (1953), descoperitorul acestor particule, le-a denumit ribozomi. Ei se g"sesc liberi n citoplasm" sau fixa!i de reticulul endoplasmic. n celul", ribozomii ndeplinesc un rol deosebit de important, prin participarea lor la sinteza proteinelor. Ei se g"sesc n cantitate mare n !esuturile cu diviziuni celulare intense, n care sinteza proteic" se realizeaz", de asemenea, intens. n sinteza proteic", ribozomii devin activi prin asocierea lor cu moleculele de acid ribonucleic mesager (ARNm) mpreun" cu care formeaz" poliribozomi. Ribozomii liberi particip" la sinteza proteinelor necesare proceselor de diferen!iere celular", a unor proteine cu func!ii specifice #i de formare a organitelor citoplasmatice, n timp ce ribozomii ata#a!i reticulului endoplasmic particip" la sinteza proteinelor destinate secre!iei celulare #i depozit"rii proteinelor sintetizate la nivelul celulei. n ceea ce prive#te originea ribozomilor, cercet"rile au ar"tat c" la nivelul nucleolului se produce sinteza componentelor de baz" ale acestora (ARNr #i proteine ribozomale), care la nivelul citoplasmei se asambleaz" n propor!ie egal". Ribozomii au m"rimi diferite #i se pot clasifica dup" constanta de sedimentare (S) la ultracentrifugare n: categoria de 70 S (140-180 ) prezen!i la bacterii #i alge verzi #i de 80 S (260-300 ) prezen!i n celulele eucariotelor (plante superioare, criptogame #i animale). Sub ac!iunea ionilor de Mg2+, ribozomii se pot uni ntre ei formnd structuri polimere sau se pot descompune n subunit"!i. A#a de exemplu, la Escherichia coli s-a descoperit c" ribozomii de 100 S sunt forma!i din 2 particule ribozomale de 50 S. Cloroplastele. Sunt organite prezente n citoplasma celulelor vegetale. Ele con!in clorofil" ce imprim" culoarea verde !esutului n care se g"sesc, iar prin implicarea lor n procesul de fotosintez" de!in rolul de produc"tori primari.
20

Prezen!a cloroplastelor n celule nu este permanent", ele se formeaz", ca #i mitocondriile, cu care au tr"s"turi comune, din forma!iuni submicroscopice, cu dimensiuni de aproximativ 500 , numite proplastide. Studiile de microscopie electronic" au eviden!iat 3 componente structurale ale cloroplastului: membrana dubl! la exterior, stroma sau substan!a fundamental" a cloroplastului #i grana, un ansamblu de structuri bogate n clorofil". Membrana cloroplastului este dubl", ntre cea extern" #i cea intern" fiind un spa!iu liber. De obicei, la majoritatea plantelor, cele dou" membrane sunt netede, ns" la unele (plantele de tip C4), membrana intern" prezint" o serie de cute duble, care m"resc suprafa!a func!ional" a acesteia. Din punct de vedere biochimic #i fiziologic, cele dou" membrane se deosebesc: membrana extern" este permeabil" pentru moleculele cu greutate molecular" mic", iar cea intern" regleaz" schimburile moleculare ntre strom" #i hialoplasm" printr-o serie de molecule transportoare ce le con!ine (Toma C., 1995). Stroma este alc"tuit" din substan!a fundamental" #i o serie de incluziuni, cum ar fi: granule de amidon, nucleotide grupate n fibrile de ADN, ribozomi, plastoglobule osmiofile. Substan!a fundamental" este constituit" din proteine, n mare parte enzime ce particip" la replicarea ADN cloroplastic, sinteza ARNm (transcrip!ie) #i a moleculelor specifice fotosintezei. Pe lng" proteine, substan!a fundamental" con!ine un num"r mare de molecule organice, din grupa zaharurilor, aminoacizilor, nucleotidelor, dar #i ioni de Mg2+ #i PO3-. Grana este un sistem membranar complex alc"tuit din particule verzi denumite granum, bogate n clorofil", de diferite tipuri, implicat" n fotosintez". Prin constan!a #i continuitatea celular", cloroplastul ndepline#te caracteristicile de baz" ale materialului genetic. ADN cloroplastic este o molecul" bicatenar", circular", cu o circumferin!" de 40-50 , ata#at de membrana cloroplastului asem"n"tor cromozomului bacterian. Pe lng" ADN, ce stocheaz" informa!ia genetic", cloroplastul posed" ntregul complex macromolecular necesar replica!iei, transcrip!iei #i transla!iei acesteia: ADN-polimeraze, ARNpolimeraze, ARNm, ARNs, ARNr. La plantele superioare, genomul cloroplastic este alc"tuit din aproximativ 120 de gene: 4 gene pentru sinteza proteinelor ribozomale din cloroplast, gene ce codific" subunit"!i ale polimerazelor, proteinele fitosistemelor I #i II, ATP-sintetazei, 30 de gene pentru ARNs #i n jur de 40 de gene ce codific" proteine cu func!ii nc" necunoscute (Raicu P., 1997). O caracteristic" important" a plastidelor, #i deci #i a cloroplastelor, este aceea c", de regul", se transmit pe cale citoplasmatic", cel mai frecvent pe linie matern". Aparatul Golgi. A fost descoperit de Camillo Golgi (1844-1926), n anul 1898, mai nti n celulele nervoase animale. Ulterior, s-a eviden!iat n toate celulele animale #i vegetale. Aparatul Golgi este bine dezvoltat n toate celulele active, reducndu-#i extinderea n celulele aflate n repaus #i dispare n celulele b"trne. Este alc"tuit
21

din unit"!i morfologice #i structurale denumite dictiozomi, complexate cu vezicule golgiene. Dictiozomii sunt forma!i din elemente de form" tubular" sau vezicular", aplatizate, curbate #i dilatate la capete, delimitate de o membran" lipoproteic". Veziculele golgiene, delimitate de membrane lipoproteice rezult" din dictiozomi, printr-un proces de nmugurire lateral" a tuburilor sau veziculelor. Cercet"rile recente sus!in c" originea aparatului Golgi este membrana nuclear" (unele ciuperci #i alge brune) sau ergastoplasma (n celulele animale #i ale plantelor superioare). Complexul Golgi este localizat n apropierea nucleului, avnd un rol deosebit de important n transformarea unor substan!e sintetizate la nivelul reticulului endoplasmic #i orientarea acestora spre plasmalem", pentru a fi utilizate n alte sinteze sau pentru a fi eliminate n exteriorul celulei. n afara rolului de!inut de aparatul Golgi n procesele de secre!ie, la plante, veziculele golgiene particip" la formarea fragmoplastului #i a lamelei mediane n citokinez" #i chiar n regenerarea plasmalemei. Dup" Fain-Maurel, 1992, aparatul Golgi, prin interac!iunile sale cu reticulul endoplasmic granular (ergastoplasma), unde are loc sinteza #i descompunerea proteinelor de secre!ie #i biogeneza membranelor celulare, constituie "placa turnant" a metabolismului celular #i a traficului membranar" (Toma C. #i colab., 1997). Centrozomul. Este o forma!ie citoplasmic" ce se g"se#te n apropierea nucleului #i care apare la microscop sub forma unei zone clare, luminoase, omogene, cu un centru granular opac, alc"tuit din doi centrioli. El este prezent n toate celulele animalelor #i la plantele inferioare (lipse#te la angiosperme). n jurul centrozomului se observ" filamente radiare ce formeaz" a#a-numitul aster, precum #i tubulii fusului de diviziune. Acestea apar numai n timpul diviziunii mitotice. Centrozomul joac" rol important n diviziunea celular". El se divide n doi centrozomi-fii, numi!i sfere directrice. n jurul fiec"ruia se formeaz" cte un aster. Sferele directrice se deplaseaz" apoi spre cei doi poli ai celulei. Datorit" autoreplic"rii, n fiecare centrozom se g"sesc doi centrioli. Ace#tia sunt nzestra!i, n general, cu continuitate genetic". Centriolii se separ" n structuri duplex la nceputul fiec"rei noi diviziuni (profaza urm"toare). n citoplasm" se afl" factorii ereditari responsabili pentru ereditatea extranuclear" - plasmagenele. O schem" general" a structurii celulei, alc"tuit" dup" imaginile ob!inute la microscopul electronic este prezentat" n figura 2.2. NUCLEUL Datorit" componentelor sale principale, cromozomii, nucleului i s-a acordat o deosebit" aten!ie n cercet"rile de genetic". De peste 200 de ani de cnd se studiaz" acest principal element al celulei s-au acumulat multe date n leg"tur" cu structura lui fizic", chimic" #i func!ional".
22

La organismele eucariote, n majoritatea cazurilor, nucleul are o form" ovoid" #i ocup" zona central" a celulei. La celulele cu metabolism intens, nucleul ia contururi foarte neregulate. De exemplu, nucleii din celulele endospermului leguminoaselor au form" spiralat". Forme neregulate iau #i nucleii unor !esuturi bolnave, a c"ror activitate metabolic" se m"re#te (celula canceroas").

Fig. 2.2. Schema unei celule alc"tuit" dup" datele ob!inute cu microscopul electronic (dup" Brachet, 1961)

n timpul diviziunii, nucleul sufer" schimb"ri structurale. n perioada dintre dou" diviziuni, n interfaz!, nucleul se caracterizeaz" printr-o intens" activitate de schimb cu citoplasma, din care cauz" acestei perioade i s-a dat denumirea de perioad! metabolic! sau energetic!. Nucleul ocup", de obicei, 10-20% din volumul celulei #i con!ine 1525% din azotul acesteia. Excep!ie fac spermatozoizii #i anterozoizii, la care citoplasma ocup" un volum foarte mic.
23

La microscopul fotonic, nucleul apare cu o structur" omogen", iar la cel electronic cu o structur" mai complex", constituit" dintr-o re!ea fin" de fibre. Pentru a studia compozi!ia chimic" a nucleului, el trebuie izolat de restul celulei. Pe baza analizei cantitative s-a stabilit c" nucleul con!ine 14% ADN, 12% ARN, 22,5% proteine bazice #i 51,5% proteine stabile. Din proteinele bazice fac parte protaminele #i histonele, bogate n aminoacizii lizin", histidin" #i mai ales arginin". ADN se g"se#te n structurile cromatice, n timp ce ARN mai ales n nucleoli. n nucleu se mai g"sesc enzime, lipide, ioni de Ca2+, Mg2+, Cu2+ etc. Nucleul este delimitat la exterior de o membran" nuclear" #i con!ine n interior nucleoplasma, cromatina #i nucleolii. A#a cum s-a precizat, la procariote, reprezentate de organisme unicelulare, nucleoidul este difuz #i f"r" membran". Nucleoidul nu este complexat cu proteine bazice de tipul histonelor. Acesta se divide prin amitoz". Membrana nuclear!. Datele actuale cu privire la membrana nucleului au fost ob!inute cu ajutorul microscopului electronic. Ea apare format" din 2 foi!e, lipoproteice tripartite, fiecare cu o grosime de 75 , separate printr-un spa!iu de 100 pn" la 1000 . Structura membranei nucleare este foarte asem"n"toare cu aceea a membranei mitocondriilor. Spre deosebire de aceasta, ea este prev"zut" cu un sistem de pori ce permite schimbul de substan!e ntre nucleu #i citoplasm" #i chiar direct cu exteriorul celulei. Marginile unui por sunt n leg"tur" cu 8 fibre de cromatin" cu diametru de 200 , alc"tuite din ADN #i proteine histonice, dispuse sub forma unui ghem. Ultrastructura membranei nucleare este foarte complicat" #i joac" un rol tot att de complex n schimburile nucleo-plasmatice. Mul!i cercet"tori consider" membrana nuclear" un domeniu n care se acumuleaz" substan!e, se organizeaz" n structuri, de unde migreaz" n citoplasm". Cromatina. Este un complex biochimic constituit din fibre nucleoproteice (proteine #i ADN) n propor!ie de aproximativ 96%, mai multe tipuri de holoproteine #i fosfolipide. Se prezint" sub forma unor aglomer"ri granulare, n vecin"tatea membranei nucleare. Unit"!ile structurale ale cromatinei sunt nucleosomii, alc"tui!i din molecule de ADN #i 4 frac!ii de proteine histonice (H2A, H2B, H3 #i H4). La fiecare nucleosom se asociaz" frac!ia histonic" H1, care joac" un rol important n spiralizarea fibrelor de cromatin". Cariolimfa. n interiorul nucleului se g"se#te un lichid n stare de sol numit cariolimf", nucleoplasm" sau suc nuclear. El con!ine proteine, lipoizi, enzime, acizi nucleici, o serie de cationi (Na, Ca, Mg) #.a. n ultimul timp s-a determinat n cariolimf" prezen!a unei structuri reticulare, asem"n"toare reticulului endoplasmic, dar mult mai fin", care con!ine bicatene de ADN ce formeaz" complexe cu histonele #i cu proteinele nehistonice, reprezentnd procromozomii. Filamentul de cromatin" este lung #i se g"se#te sub form" despiralizat". Se cunosc pu!ine date n leg"tur" cu structura filamentului de cromatin", deoarece este prea fin" pentru puterea de m"rire a microscopului obi#nuit #i prea
24

mare pentru cea a microscopului electronic. Densitatea #i compozi!ia chimic" a cariolimfei variaz" n func!ie de starea func!ional" a celulei. Nucleolul. Nucleolii sunt globuli refringen!i, vizibili la microscopul obi#nuit sau cu contrast de faz", n interfaz". Num"rul lor variaz" n func!ie de specie, fiind ns" constant n celulele aceleia#i specii. Dimensiunile nucleolilor depind de m"rimea nucleului, durata interfazei, func!ia celulelor #.a. Nucleolii se formeaz" n zona constric!iei secundare a cromozomilor, asocia!i cu o anumit" regiune denumit" organizator nucleolar. n timpul diviziunii mitotice, nucleolii sufer" un ciclu de transform"ri inverse acelora prin care trec cromozomii. Ei sunt vizibili n interfaz", dispar n profaz" #i reapar la sfr#itul anafazei. La microscopul electronic nucleolii apar constitui!i din aglomer"ri granulare de elemente filiforme. Din punct de vedere chimic nucleolii cuprind dou" grupe de substan!e (proteine #i acid ribonucleic), care formeaz" un complex ribonucleoproteic. Pe lng" aceste substan!e, nucleolul mai con!ine #i o cantitate mare de fosfolipide #i alte lipide. El sintetizeaz" o mare cantitate de ARN care migreaz" n citoplasm".

2.3. ORGANIZAREA GENOMULUI LA EUCARIOTE

Cromozomii sunt structuri permanente n nucleul celulei #i constituie materialul genetic de baz". n cromozomi sunt localizate genele. La microscopul fotonic cromozomii devin vizibili numai n timpul diviziunii celulare. Cu ajutorul unor tehnici perfec!ionate de investiga!ie s-a stabilit c" ei sunt prezen!i tot timpul n celul", dar sufer" unele schimb"ri n diferitele etape care se succed n via!a celulei. Num"rul #i structura lor genetic" r"mn ns" constante de-a lungul genera!iilor.

2.3.1. Morfologia cromozomilor

Aspectul cromozomilor poate fi bine studiat n cursul diviziunii celulare mitotice, n metafaz", cnd se coloreaz" foarte intens. Ei sunt constitui!i din perechi identice, dar diferi!i ca m"rime #i form" de la pereche la pereche. La speciile dioice exist" o pereche de cromozomi, care difer" morfologic de la un sex la altul, denumi!i heterozomi sau cromozomi ai sexului, avnd un rol special n determinarea sexului. Celelalte perechi de cromozomi, care alc"tuiesc majoritatea cromozomilor poart" numele de autozomi. Segmentul cromozomic situat terminal fa!" de constric!ia secundar" a c"p"tat denumirea de satelit. Satelitul serve#te la identificarea cromozomilor cu organizator nucleolar. Deci, num"rul nucleolilor dintr-un nucleu este egal cu num"rul cromozomilor cu satelit. Fiecare cromozom este format din dou" cromatide unite printr-o forma!ie cu diametrul mai mic dect al cromozomului numit" centromer. Deoarece n zona centromerului cromozomul are diametrul mai mic, acestei zone
25

i s-a dat denumirea de constric"ie primar! (spre deosebire de constric!ia secundar" din regiunea organizatorului nucleolar). Centromerul are un rol important n timpul diviziunii celulare deoarece serve#te la ata#area cromozomilor de fibrele fusului nuclear, fiind considerat motorul neurochimic ce determin" deplasarea cromozomilor n mixoplasma celulei n diviziune, iar n meioz" determin" sinapsa cromozomilor omologi #i constituie locul ce marcheaz" separarea cromatidelor la sfr#itul metafazei #i nceputul anafazei. Structura centromerului cuprinde trei zone: kinetocorul, situat pe fa!a extern" a fiec"rei cromatide, o zon" central" cu o grosime mai mare #i o zon" intern" responsabil" de interac!iunea dintre cromatide n subfaza G2, profaz" #i metafaz". Kinetocorul este un complex proteic sintetizat pe baza informa!iei genetice a ADN din regiunea centromerului. Pozi!ia centromerului n cromozom determin" formarea a dou" bra!e egale sau inegale, prin urmare existen!a mai multor tipuri morfologice de cromozomi: - metacentrici, centromerul este plasat la jum"tatea distan!ei dintre cele dou" capete, bra!ele fiind egale; - submetacentrici, centromerul este localizat submedian, bra!ele fiind inegale; - acrocentrici, centromerul este localizat subterminal, bra!ele fiind accentuat inegale (figura 2.3.). Cromozomii telocentrici, cu centromerul situat strict terminal, nefiind stabili, s-a renun!at la aceast" grup" morfologic" (Swanson #i colab., 1981, cita!i de Crlan M.,1996).

Fig. 2.3. Tipuri de cromozomi: a-metacentric; b-submetacentric; c-acrocentric; d-cromozomi de Lilium; P-constric!ie primar"; S-constric!ie secundar", zona organizatorului nucleolar

Extremit"!ile cromatidelor sunt delimitate de forma!iuni denumite telomere. Telomerele reprezint" zone n care cromatina este puternic condensat", asigurnd stabilitatea #i individualitatea cromozomilor pe parcursul diviziunii celulare. Telomerele mpiedic" fuzionarea cromozomilor cap-la-cap n metafaz" #i anafaz".
26

Fragmentele de cromozom f"r" centromer sunt capabile de a se replica, dar incapabile de a se orienta n mitoz" spre polii celulelor. Unele cercet"ri efectuate la coccidii #i scorpioni, dar #i la plante (Luzula) au pus n eviden!" prezen!a unor centromeri dispersa!i pe toat" lungimea cromozomului (centromeri difuzi). Ace#ti cromozomi policentromerici, n timpul diviziunii mitotice se pot fixa prin oricare segment, de tubulii fusului de diviziune. Centromerul este o forma!iune capabil" de autoreplicare. Diviziunea cromozomului este precedat" de diviziunea centromerului, care implic" replicarea ADN centromeric, ce ac!ioneaz" ca un locus al form"rii kinetocorului. El se coloreaz" foarte pu!in #i adesea este acromatic #i Feulgen negativ. Forma cromozomilor. Este caracteristic" fiec"rei specii, dar poate varia, n func!ie de specializarea celulei n !esut, de starea fiziologic" a celulei #i de influen!a diferi!ilor factori externi. O celul" somatic" de la Drosophila melanogaster n cursul diviziunii mitotice (figura 2.4.) are patru perechi de cromozomi #i anume: dou" perechi de forma literei V, o pereche de form" sferic" #i o pereche heteromorf": la masculi, alc"tuit" dintr-un cromozom sub form" de bastona# #i unul sub form" de crlig, n timp ce la femel" ambii cromozomi ai perechii sunt identici. Ace#ti cromozomi au rol n determinarea sexului.

Fig. 2.4. Cromozomii somatici la Drosophila melanogaster (%)

n celulele somatice cromozomii sunt perechi. Cromozomii unei perechi au aceea#i form", m"rime #i acelea#i gene alele #i se numesc cromozomi omologi. n fiecare pereche de cromozomi omologi, unul este de provenien!" matern", iar cel"lalt, patern", caracteristic" determinat" de faptul c" celula-ou (zigotul), rezultat al fecund"rii, cumuleaz" setul haploid de cromozomi ai mamei #i ai tat"lui. n metafaz", cromozomii se prind de fibrele fusului de diviziune la nivelul centromerului, lund forma de U, L, V, #.a. Clivajul longitudinal ncepe ntotdeauna n acela#i loc. Toate acestea demonstreaz", n plus, individualitatea pronun!at" a cromozomilor. M$rimea cromozomilor. Variaz" n func!ie de specie #i, ntr-o m"sur" foarte mic", de unele condi!ii de mediu. Ca lungime, pot atinge valori cuprinse ntre 0,1-30 , iar ca grosime valori de 0,1-2 . S-ar p"rea, n general, c" m"rimea
27

lor este propor!ional" cu m"rimea celulei #i invers propor!ional" cu num"rul lor. De asemenea, cercet"rile arat" c" lungimea cromozomului este, n general, propor!ional" cu num"rul de gene pe care le con!ine. Anumi!i factori de mediu pot influen!a m"rimea cromozomilor. De exemplu, sc"derea temperaturii face ca n celulele vegetale n plin" diviziune s" apar" cromozomi mai contracta!i, mai scur!i. Prezen!a alcaloidului colchicin", n timpul diviziunii celulare, scurteaz", de asemenea, cromozomii. Num$rul de cromozomi. Este relativ constant pentru indivizii ce alc"tuiesc o specie de plante sau animale. Acest num"r variaz" n limite mari la diferite specii, de la doi c!i ntlnim n celulele somatice la Ascaris megalocephala, pn" la cteva sute (Amoeba proteus). n celulele somatice num"rul lor este dublu (diploid) #i se noteaz" cu 2n, iar n celulele sexuale este redus la jum"tate (haploid) #i se noteaz" cu n. n tabelul 2.1. se indic" la cteva specii de plante #i animale num"rul n #i 2n de cromozomi. Tabelul 2.1. Num"rul de cromozomi la diferite specii de plante #i animale
Plante Triticum monococcum Triticum durum Triticum aestivum Zea mays Oryza sativa Secale cereale Hordeum sativum Medicago sativa Medicago lupulina Trifolium pratense Trifolium repens Trifolium hybridum Vicia sativa Vicia faba Pisum sativum Solanum tuberosum Helianthus annuus Beta vulgaris Cannabis sativa Vitis vinifera Pyrus communis Malus baccata Neurospora crassa Escherichia coli n 7 14 21 10 12 7 7 16 16 7 14 8 6 6 7 24 17 9 10 19 17 17 7 1 2n 14 28 42 20 24 14 14 32 32 14 28 16 12 12 14 48 34 18 20 38,76 34,51 34 --Animale Drosophila melanogaster Culex pipiens Bombyx mori Plasmodium malariae Ascaris megalocephala Cyprinus carpio Musca domestica Blatta orientalis Apis melifera Rana esculenta Gallus domestica Columba liva Lepus cuniculus Mus musculus Cannis familiaris Capra hircus Equus caballus Sus scrofa Ovis aries Bos taurus Felis domestica Felis tigris Cotumix cotumix Homo sapiens sapiens n 4 3 14 1 1,2 52 6 24 8,16 13 38 40 22 20 39 30 33 20 27 30 19 19 40 23 2n 8 6 28,56 2 2,4 104 12 48 16,32 26 76,78 79,80 44 40 78 60 66 40 54 60 38 38 80 46

Simbolul x indic" num"rul haploid de cromozomi ai speciilor diploide str"mo#e#ti denumit num!r de baz!, num!r monoploid sau genom.
28

n celulele somatice cromozomii sunt perechi, iar din punct de vedere morfologic apar, n general, ca nediferen!ia!i. De#i num"rul lor reprezint" un caracter de specie, se pot ntlni specii cu acela#i num"r de cromozomi, cu toate c" apar!in unor grupe ndep"rtate din punct de vedere sistematic. Acest num"r nu este legat deci de pozi!ia sistematic" a speciei n lan!ul filogenetic. Num"rul #i morfologia cromozomilor pentru diferite forme apropiate pot ns" s" fie folosite ca indica!ii pentru nrudirea filogenetic" a formelor de plante sau animale. Pe aceste constat"ri se bazeaz" ramura sistematicii numit" kariosistematica. Constan!a num"rului de cromozomi este totu#i relativ". Starea organismului #i condi!iile externe pot produce modific"ri asupra num"rului de cromozomi n celul". Num"rul de cromozomi poate varia n func!ie de !esutul n care se afl" celula. Astfel, n ficatul animalelor num"rul garniturilor de cromozomi este un multiplu al num"rului de cromozomi din celulele sexuale ale aceluia#i organism (4x, 8x etc.). La speciile de plante angiosperme, nucleii din celulele endospermului, datorit" fenomenului dublei fecund"ri, con!in trei garnituri de cromozomi, fiind simbolizat 3n. Num"rul, forma #i m"rimea cromozomilor n metafaz", din celulele somatice ale unui organism, sunt indicate prin no!iunea de cariotip. n figura 2.5. sunt redate cariotipurile la diferite specii. Nu de mult s-au elaborat diferite metode pentru o identificare mai precis" a cromozomilor la diferite specii de plante #i animale. Una dintre acestea este #i metoda de bandare. n anul 1940, C. Darlington #i La Cour au elaborat o metod" de colorare a celulelor din !esuturile meristematice prin tratarea lor cu temperaturi sc"zute. Sub influen!a acestui factor pe cromozom apar benzi mai intens #i mai pu!in colorate. Principalele tehnici moderne de bandare se mpart n 2 categorii: - tehnici bazate pe folosirea unor fluorocromi (quinacrina) ce se leag" de ADN. n acest caz benzile caracteristice care apar se numesc benzi Q; - tehnici ce se bazeaz" pe procesul de denaturare #i renaturare a ADN, urmate de colorare cu colorantul Giemsa. Benzile care apar sunt notate cu G. n afar" de benzile Q #i G au mai fost descoperite #i alte tipuri cum ar fi: C, R, T, N. Procedeele de bandare conduc la identificarea cert" a perechilor de cromozomi #i a modific"rilor lor structurale (figura 2.6.) Structura cromozomului. Cromozomii sunt forma!i din dou" unit"!i alipite n lungul lor numite cromatide. Cu ajutorul microscopului electronic s-a descoperit c" aceste unit"!i se compun, la rndul lor, din cte dou" subunit"!i numite cromoneme. n fiecare cromozom, dou" cromoneme alc"tuiesc cte o cromatid". n preajma diviziunii celulare, cromonemele se spiralizeaz" #i se scurteaz". Spiralizarea este inegal", a#a c" exist" zone cu spire mai dense #i mai pu!in dense. La microscopul optic aceste por!iuni apar ca o succesiune de granule, n#irate ca m"rgelele ntr-un #irag, denumite cromomere. S-a crezut mult timp c" aceste cromomere ar reprezenta unit"!i
29

func!ionale - genele. n realitate, aceste ngro#"ri vizibile sunt por!iuni de spirale mai dense ce dau aspectul de granule de culoare mai nchis". Cromomerele includ un num"r variabil de gene. Spiralizarea #i scurtarea cromozomului este maxim" n metafaz", cnd cromozomii apar destul de compac!i. n telofaz", ncepe procesul de despiralizare al cromozomilor (figura 2.7.).

Fig. 2.5. Cariotipul la diferite specii de plante 30

O structur" important" care joac" un rol n evolu!ia cromozomului este heterocromatina. n leg"tur" cu particularit"!ile ei s-au adunat multe date, unele contradictorii, a#a nct, pn" n prezent, nu s-a cristalizat o concep!ie unitar" asupra acestei forma!iuni. Se #tie ns" precis c" n toate stadiile ciclului mitotic unele sectoare ale cromozomului se coloreaz" intens. Acestea s-au denumit sectoare heterocromatice, spre deosebire de altele eucromatice, care se coloreaz" mai slab. Colorarea mai intens" se explic" prin cre#terea densit"!ii spirelor cromonemelor. Sectoarele cu heterocromatin" se g"sesc, n general, n apropierea centromerului.
Fig. 2.6. Reprezentarea diagramatic" a benzilor cromozomice la om (Maximilian C., 1978)

Ele ns", ca localizare, sufer" varia!ii determinate de influen!a diferi!ilor factori externi. Se consider" c" regiunile eucromatice con!in, n general, marea majoritate a genelor, n timp ce regiunile heterocromatice sunt practic lipsite de gene. Heterocromatina se poate prezenta sub trei forme: - heterocromatina constitutiv" este prezent" n to!i cromozomii nucleului #i este localizat" de o parte #i de alta a centromerului. Ea se aglomereaz" ntr-o mas" compact" cromatic", care se nume#te cromocentru. - heterocromatina facultativ", care inactiveaz" genele pentru unul din cromozomii X. Se #tie c" la Drosophila melanogaster, la femel", care are doi cromozomi X, numai unul este activ. n felul acesta se realizeaz" o egalitate n func!ionarea genelor celor dou" sexe la mamifere, deoarece sexul mascul are numai un cromozom X activ. - heterocromatina condensat" este distribuit" diferit la celulele din diferite !esuturi #i blocheaz" ac!iunea genelor ce se g"sesc n regiunea ei.
Fig. 2.7. Schema evolu!iei cromozomilor n mitoz": 1-interfaza; 2,3,4-profaza; 5-prometafaza; 6-metafaza.

31

La unii cromozomi de porumb, n pozi!ii diverse, se observ" prezen!a unor noduli, care se coloreaz" puternic, cunoscu!i sub denumirea de knobi. Num"rul #i pozi!ia knobilor sunt constante pentru anumi!i cromozomi. Nu se cunoa#te precis rolul acestor forma!iuni, dac" con!in sau nu gene. Se presupune c" ar avea rol n procesul de gametogenez". O schem" general" privind structura microscopic" a cromozomului este prezentat" n figura 2.8.

Fig. 2.8. Morfologia #i structura unui cromozom (dup" Raicu P., 1997)

Compozi%ia chimic$ a cromozomilor. Analiza chimic" a cromozomilor a relevat faptul c" ei sunt constitui!i din macromolecule de ADN #i ARN, proteine cu nsu#iri bazice (histone), proteine acide (nehistone), al"turi de alte substan!e n cantit"!i mai mici: lipide, magneziu, calciu, enzime. Complexul ADN-histone constituie substan!a structural" fundamental" a cromozomului, n timp ce ARN, care se formeaz" la nivelul cromozomului, este transferat n citoplasm", avnd rol n procesul de biosintez" a proteinelor. Dintre to!i componen!ii cromozomilor, ADN se g"se#te n cantitate constant". n celulele somatice cantitatea lui este dubl" fa!" de cantitatea din celulele sexuale ale aceluia#i organism, variind ns" de la specie la specie. ARN se g"se#te n cromozomi n cantit"!i foarte variabile, de la 3 la 35%. La fel de
32

variabil" este #i cantitatea de proteine nehistonice, aceasta fiind sub dependen!a activit"!ii genelor. n tabelul 2.2. este prezentat" compozi!ia chimic" a cromozomilor. Tabelul 2.2. Compozi!ia chimic" a cromozomilor (%)
Sursa Embrion de maz"re Mugure de maz"re Cotiledon de maz"re Ficat de #obolan Timus de vi!el Blastul" de arici de mare Larv" de arici de mare ADN 39,0 40,0 43,5 47,0 40,2 39,0 33,4 Histone 40,0 52,0 34,5 37,0 46,0 41,0 29,0 Nehistone 11,0 4,0 16,0 15,0 13,0 19,0 35,0 ARN 10,0 4,0 6,0 1,0 0,3 1,0 2,6 ADN activ n transcrip%ie 12,0 6,0 32,0 20,0 15,0 10,0 20,0

2.3.2. Structura molecular$ a cromozomului

S-au acumulat multe date n leg"tur" cu compozi!ia chimic" a cromozomilor. Nu acela#i lucru se poate afirma despre structura molecular" a cromozomilor de la organismele eucariote, a configura!iei structurale a elementelor ce alc"tuiesc aceast" compozi!ie chimic". Microscopia optic" nu poate oferi detalii, iar microscopia electronic" nu ne ofer" nc" imagini clare, deoarece cromozomii sunt foarte neregula!i #i au o lungime prea mare pentru a putea fi observa!i n ntregime. Din aceast" cauz" s-a ncercat a se crea diferite modele de structur", care s" !in" seama de prezen!a unui num"r mare de molecule de ADN, de dispunerea unui num"r mare de gene pe cromozomi, de posibilitatea dubl"rii unei singure cromatide, de stabilirea structurii cromozomice #i de replica!ia ADN. Pn" n prezent s-au conturat mai multe ipoteze privind modelul de structur" molecular" al cromozomului: Ipoteza polifibrilar! presupune existen!a n fiecare cromatid" a unui m"nunchi de fibre ce corespund macromoleculelor de ADN. Cromozomul ar avea, n acest caz, diametrul de 4000 , fiind format din dou" cromatide de cte 2000 . Acestea ar con!ine subunit"!i de dimensiunea ADN de 20 . Ipoteza este criticat" pentru mai multe motive. Num"rul mare de fibre identice ar constitui o risip" de material genetic. Se #tie c" muta!ia genetic" afecteaz" o por!iune din molecula de ADN, de asemenea afecteaz" o por!iune din lungimea cromozomului. Din moment ce afecteaz" numai o por!iune de fibr" nu mai poate fi prezent" pe tot segmentul de cromozom. Odat" cu clivarea cromozomilor, n timpul diviziunii celulare, muta!ia ar fi repartizat" numai la una din cele dou" celule care se formeaz"; ori aceasta contravine propriet"!ii muta!iilor de a fi ereditare. Ipoteza structurii monofibrilare a cromozomului este reprezentat" de diferite modele. Potrivit modelului lui J. A. Taylor (1957, 1960, 1963) #i E. Freese (1958) fiecare cromatid" este constituit" dintr-un num"r mare de molecule
33

de ADN, dispuse cap la cap, legate ntre ele prin leg"turi de tipul 3, formate din resturi de fosfoserin" asociate nucleotidelor terminale de ADN #i leg"turi de tipul 5 formate din pun!i difosforice. Al treilea tip de leg"turi ntre moleculele de ADN ar fi de natur" peptidic" (leg"turi H), care au rolul de a asigura stabilitatea structurii cromatidei (figura 2.9.). Un alt model presupus de J. A. Taylor (1958), sus!ine c" n lungul cromatidei ar exista o coloan" dubl" la care de o parte #i de alta se leag" moleculele de ADN. Replicarea cromatidei s-ar realiza prin clivarea coloanei centrale #i separarea catenelor de ADN, dup" care fiecare jum"tate #i reface jum"tatea complementar" (figura 2.10.).

Fig. 2.9. Modelul lui Taylor #i Freese cu privire la structura monofibrilar" a cromozomului

Fig. 2.10. Modelul lui Taylor privind structura molecular" a cromozomului

Ipoteza fibrei cutate a lui E. J. Du Praw (1970) consider" c" fiecare cromatid" este constituit" dintr-o molecul" lung" de ADN asociat" cu proteine, cutat" neuniform transversal #i longitudinal. n interfaz", fibrele elementare se cuteaz", constituind cromozomul, cu ajutorul unor proteine contractate n metafaz" (figura. 2.11.). Aceast" ipotez" a fost sugerat" lui Du Praw de existen!a inelului de transloca!ie la Oenothera, unde to!i cromozomii sunt asocia!i. Ca urmare, ntregul set de cromozomi haploizi ar fi format dintr-o singur" molecul" de ADN gigantic" #i circular". Modelul nucleosomului a fost conceput pe baza cercet"rilor de biochimie, de microscopie optic", electronic" #i de difrac!ie n raze X. n alc"tuirea cromozomului de tip eucariot ADN este n cantitate de 1315%, ARN 12-13%, iar proteinele de 68-72%. Aceste procente difer" de la specie la specie. La aceea#i specie ns", m"rirea cantit"!ii de ADN se poate realiza prin
34

multiplicarea num"rului de garnituri cromozomice, ad"ugarea unui anumit num"r de cromozomi, duplica!ia genelor #i m"rirea cantit"!ii de ADN repetitiv.

Fig. 2. 11. Modelul lui Du Praw cu privire la dispozi!ia fibrelor ntr-o cromatid": a-transversal"; b-longitudinal"; c-combinat"; d-structura cuaternar" a fibrei

ADN din cromozomii de tip eucariot este format din gene structurale (secven!e unice de nucleotide) #i por!iuni care nu de!in informa!ie genetic" #i au rolul de a ocupa spa!iul dintre gene. A doua categorie sunt secven!ele de nucleotide intermediar repetitive #i care se g"sesc n mai multe copii. A treia categorie sunt secven!ele de nucleotide nalt repetitive ce se repet" ntr-un num"r mare de copii #i sunt localizate n heterocromatin". Dintre aceste categorii varia!ia cantit"!ii de ADN din genom este datorat" secven!elor de nucleotide repetitive, care n cea mai mare m"sur" sunt nefunc!ionale. n afar" de aceste categorii de secven!e mai exist" forma!iunile denumite palindroame. Ele sunt formate din secven!e inversate dnd na#tere la ni#te bucle. Privit" la microscopul electronic, cromatina apare format" din granule cu diametrul de 70-100 , legate ntre ele cu o fibr" de 20 . O granul" este de fapt un nucleosom, care cuprinde un cilindru turtit de natur" histonic" n jurul c"ruia se nf"#oar" un filament de ADN format din 100-140 nucleotide.
Fig. 2.12. Modelul nucleosomului 35

n nucleu, cromatina formeaz" un filament de 100 , alc"tuit din aranjarea liniar" a nucleosomilor #i un filament cu diametrul de 200-300 format din r"sucirea filamentului sub!ire (figura 2.12.).

2.3.3. Tipuri particulare de cromozomi

n afara tipului obi#nuit al cromozomilor din celulele somatice (autozomi #i heterozomi), au fost descoperi!i n anumite celule #i alte tipuri de cromozomi: cromozomi uria#i, cromozomi tip "perie de lamp"" #i cromozomi accesorii sau de tip "B". Cromozomii uria"i au fost pu#i n eviden!" de Balbiani (1881) n glandele salivare ale larvelor de Chironomus. Ulterior, au fost eviden!ia!i #i la Drosophila melanogaster, n glandele salivare, n celulele intestinului #i a tuburilor lui Malpighi. Ace#ti cromozomi s-au format prin multiplicarea cromatidelor de peste 1000 de ori, care au r"mas ns" alipite, neseparate (sinaps" mitotic") #i despiralizate, f"r" ca nucleul s" se divid". Din cauza num"rului mare de cromatide, ace#ti cromozomi se mai numesc #i polyteni. Structura cromozomilor polyteni este aceea#i ca a celorlal!i cromozomi somatici, deosebindu-se de ace#tia prin lungimea #i grosimea lor mult mai mari. Dimensiunile lor foarte mari permit cercetarea unor detalii de structur". Configura!ia cromozomilor uria#i este alta comparativ cu aceea a cromozomilor somatici obi#nui!i. De exemplu, la Drosophila melanogaster formeaz" cinci bra!e lungi #i unul scurt, unite ntr-un singur punct, numit cromocentru. Cromozomii sexului sunt n prelungire formnd un singur bra!, cromozomii perechii a doua #i a treia formeaz" alte patru bra!e, iar cromozomii perechii a patra un singur bra!, foarte scurt (figura 2.13.).

Fig. 2.13. Cromozomii uria#i din glandele salivare ale larvelor de Drosophila melanogaster #i formarea "puff"-urilor: 1-cromozomii sexului; 2-cromozomii II; 3-cromozomii III; 4-cromozomii IV; a-un disc; b-formarea inelului lui Balbiani; c-un "puff"; d-ipoteza lui Beerman despre structura unui "puff". 36

De-a lungul lor, aceste bra!e formeaz" benzi (discuri) ntunecoase, care alterneaz" cu alte benzi, luminoase. Unii autori au presupus c" aceste discuri ("discurile lui Balbiani") ar reprezenta locul genelor. Sunt aproximativ 6000 asemenea discuri ntunecoase. n anumite locuri, structura dens" a lor se deslneaz" formnd funde n jurul cromozomului, c"rora li s-a dat denumirea de "puff"-uri sau "bulbi". Aici are loc sinteza ARN, sugernd activitatea intens" a genelor ce se g"sesc n aceste segmente. Cromozomii lampbrush (perie de lamp!) au fost pu#i n eviden!" n ovocitele vertebratelor n timpul profazei meiozei. Ating lungimea de peste 1000 #i sunt considera!i cei mai lungi cromozomi care se cunosc pn" n prezent. Spre deosebire de cromozomii uria#i, ei sunt foarte sub!iri, ajungnd uneori la limita vizibilit"!ii microscopice. Cromozomii perie de lamp" posed" un ax central, n lungul c"ruia sunt n#irate cromomerele, din care ies lateral perechi de bucle filiforme, dnd aspectul firelor de p"r ale unei perii de lamp" (figura 2.14.). Aceste bucle se presupune c" sunt spirale ale cromonemei, active din punct de vedere genetic. Ele cresc n profaza I #i descresc c"tre metafaza I a meiozei. Nu se #tie cum au ap"rut ace#ti cromozomi. Noua configura!ie corespunde unei activit"!i intense, care contribuie la formarea de rezerve viteline n citoplasma ovocitelor.

Fig. 2.14. Cromozomii perie de lamp" (lampbrush) a-schema unui bivalent; b-sec!iune printr-un singur cromozom; c-structura unei bucle #i a cromonemelor

Cromozomii accesorii se g"sesc n plus fa!" de cromozomii autozomi #i ai sexului. Spre deosebire de cromozomii obi#nui!i, nota!i cu "A", cromozomii accesorii se mai numesc #i "cromozomii B". Num"rul lor difer" de la un organism la altul #i de la un !esut la altul #i nu sunt omologi nici ntre ei #i nici cu cromozomii obi#nui!i pe lng" care se g"sesc. Sunt heterocromatici, mici #i iner!i din punct de vedere genetic. n meioz" #i mitoz" nu se distribuie n mod egal n celulele n care se formeaz". Nu se cunoa#te nc" originea lor, dar dup" toate probabilit"!ile s-au format din por!iunile mijlocii ale cromozomilor normali, ale
37

c"ror extremit"!i s-au ata#at altor cromozomi. Nici rolul lor nu este cunoscut. Ei pot lipsi f"r" a perturba via!a organismelor. Mai curnd s-ar putea considera p"gubitoare existen!a lor. Astfel, la secara tetraploid", atunci cnd cromozomii "B" sunt prezen!i, scade fertilitatea polenului #i viabilitatea plantelor. Cromozomii suplimentari au fost pu#i n eviden!" la insecte, p"s"ri, porumb, secar" #.a.

2.4. ORGANIZAREA GENOMULUI LA PROCARIOTE (BACTERII #I VIRUSURI)

Spre deosebire de eucariote, la procariote cromozomul are o organizare mai simpl", nu ns" n ceea ce prive#te #i structura lui molecular", care este aceea#i la toate organismele. Aceasta a favorizat cercet"rile de genetic", virusurile #i bacteriile constituind materialul de baz" pentru genetica molecular". Virusurile, care sunt cele mai simple forme de via!", con!in ca material genetic un singur cromozom, n care genele sunt dispuse liniar. Cu unele excep!ii, num"rul de gene este destul de mic. La bacteriofagul T4, de exemplu, sunt prezente cca 200 de gene, n timp ce la fagul &2 num"rul lor este de 4-5. La virusuri genomul viral este destul de variat fiind alc"tuit fie din ADN, fie din ARN (figura 2.15.). Ace#ti acizi pot fi monocatenari sau bicatenari. Volumul moleculei este aproximativ egal cu volumul particulei virale, ceea ce denot" c" ea este foarte strns torsionat". Virusurile se reproduc pe seama celulei gazd" #i din aceast" cauz" manifest" o strict" specificitate. Lungimea moleculei de acid nucleic poate fi foarte diferit". La fagul T2 masa este de 1,3 x 108 dal, cu 166.000 pb. La fagul ' masa este de 3,2 x 107 dal, alc"tuit din 47000 nucleotide. La bacterii, cromozomul este format din ADN. El este circular #i nu este separat de citoplasm" printr-o membran", nct rela!iile lui cu citoplasma sunt directe.

Fig. 2.15. Cromozomul (ADN) fagului '

Cromozomul bacterian reprezint" cea mai mare molecul" cu rol genetic #i con!ine 2000-3000 de gene. La bacteria Escherichia coli masa moleculei este de 2 x 109 dal, iar lungimea de 1 mm. Genele situate n molecul" constituie un grup de nl"n!uire. Tot la bacterii, pe lng" cromozomul circular, mai pot exista #i alte molecule de ADN tot de form" circular", de dimensiuni mult mai mici, localizate n citoplasm" sau ata#ate cromozomului, numite plasmide. Acestea reprezint" un material genetic accesoriu. Exist" #i o clasificare a materialului genetic accesoriu n mai multe categorii:
38

- plasmide propriu-zise, constituite din unit"!i genetice cu replica!ie (reproducere) autonom", cum ar fi factorul col (care determin" sinteza de colicine, cu ac!iune bactericid"), factorul F (care determin" sexualitatea la bacterii #i asigur" capacitatea lor de conjugare), factorul R (care transfer" rezisten!a la antibiotice prin conjugare) etc. - plasmide care pot func!iona fie sub form" autonom", fie integrate n cromozomi;

2.5. REPRODUCEREA CELULEI

Una din caracteristicile materialului genetic este continuitatea lui celular". Aceasta este asigurat" prin reproducerea sa cu mare fidelitate, transmi!ndu-se de la celul" la celul", de la p"rin!i la urma#i. La eucariote, materialul din cromozomi care dicteaz" aceast" reproducere este ADN. Procariotele con!in n cromozomul lor fie ADN, fie ARN. Reproducerea acestor acizi nucleici dicteaz", n ultim" instan!", reproducerea materialului genetic, a celulelor organismului.

2.5.1. Mitoza
Reproducerea cromozomilor are loc odat" cu reproducerea celulelor. Dintre formele de reproducere celular", mitoza este cea mai important" #i cuprinde duplicarea cromozomilor, a centrilor mitotici #i separarea cromozomilor la cei doi poli ai celulei, n vederea form"rii a dou" celule fiice. Dintr-o celul" ini!ial", prin diviziuni mitotice repetate, se formeaz" n mod succesiv 2, 4, 8, 16 celule cu acela#i num"r de cromozomi care exist" n celula ini!ial". Prin mitoz", materialul genetic, cromozomii, #i men!in structura #i num"rul constant. n procesul mitozei se desprind dou" etape de baz": diviziunea nucleului (kariokineza) #i diviziunea citoplasmei (citokineza). n perioada dintre dou" diviziuni succesive, nucleul se afl" n interkinez! (interfaz"). Interfaza. n interfaz" nucleul cre#te #i se preg"te#te de o nou" diviziune. Cercet"rile efectuate cu izotopi radioactivi #i puse n eviden!" prin autoradiografiere au demonstrat c", n interfaz", cromozomii sunt monocromatidici, iar apoi, fiecare cromatid" #i reconstituie cromatida pereche, n urma unui proces de sintez" a elementelor ce o compun. Dup" unele observa!ii, aceast" faz" se mparte n trei perioade: G1, n care are loc sinteza proteic", S, n care se produce dublarea cantit"!ii de ADN din celul" #i G2, n care nceteaz" sinteza ADN #i se desf"#oar" kariokineza. n interfaz" cromozomii sunt despiraliza!i #i con!in gene active. Profaza. Este prima faz" a mitozei. n nucleu, structura lui reticular" se transform" n filamente vizibile, r"sucite sub forma unui ghem numit spirem. Filamentul, prin r"sucire (spiralizare) n jurul axei sale, se scurteaz", se ngroa#" #i prin fragmentare d" na#tere la cromozomi. nc" de la nceputul profazei se observ" natura dubl" a lor. Prin dizolvarea membranei nucleului, cromozomii
39

r"mn liberi n citoplasm". Se disting bine cele dou" cromatide ca ni#te benzi longitudinale, paralele sau r"sucite. De asemenea, se distinge #i centromerul, ca un segment ce une#te ntr-o singur" structur", cele dou" cromatide. C"tre sfr#itul profazei, n celul" se formeaz" un fus central filamentos, orientat c"tre cei doi poli ai celulei. n celula animal", la sfr#itul profazei are loc diviziunea centrozomului, duplicarea #i desp"r!irea centriolilor, care migreaz" c"tre cei doi poli, dup" care imediat ncepe formarea astrosferei #i a fusului de diviziune. Terminarea profazei este indicat" de dizolvarea nucleolilor #i a membranei nucleare. Substan!a nuclear" se r"spnde#te n apropierea cromozomilor #i sunt nc" controverse dac" ea se depune pe ace#tia sau r"mne n apropierea lor. Aceast" substan!" nso!e#te cromozomii n tot timpul diviziunii #i ajunge astfel n nucleii celor dou" celule care iau na#tere. Membrana nuclear" se fragmenteaz" n particule foarte mici, care p"streaz" ultrastructura dubl" #i porii membranei. Se preconizeaz" #i un stadiu intermediar ntre profaz" #i metafaz", numit prometafaz!. Acesta ar corespunde perioadei de dizolvare a membranei nucleare, a migr"rii cromozomilor spre ecuatorul celulei #i a form"rii incomplete a fusului de diviziune. Ansamblul polilor, asterii, fusul acromatic #i cromozomii formeaz" aparatul mitotic. Apari!ia fusului constituie cea mai important" schimbare structural" a celulei de la sfr#itul profazei. Fusul acromatic este format din fibrile care, privite la microscopul electronic, alc"tuiesc microtubuli cu diametrul de 200 #i din fibre cromozomice ce unesc centromerii de polii fusului. Fusul ncepe s" se formeze n citoplasm", cnd nc" nucleul mai este delimitat de membran" #i probabil c" structura lui este datorat" orient"rii paralele a moleculelor proteice ce intr" n compozi!ia lui. Mitocondriile, microzomii #i alte organite citoplasmice nu p"trund n zona din interiorul fusului. n ce prive#te originea fibrelor exist" p"rerea c" ele se formeaz" la poli, cresc spre cromozomi de ai c"ror centromeri se prind. O alt" p"rere sus!ine c" fibrele se formeaz" la nivelul cromozomilor, de unde cresc c"tre polii celulelor; aceast" p"rere este mai r"spndit" de#i nu poate explica formarea fusului, care poate avea loc #i n lipsa cromozomilor. Metafaza. Cromozomii se inser" pe filamentele fusului de diviziune prin cte un punct de inser!ie din regiunea centromerului. Ei se dispun pe un plan perpendicular la mijlocul fusului, formnd placa ecuatorial!. n metafaz", planul ecuatorial se m"re#te, iar odat" cu el #i fusul. n acest timp, cromozomii se ndep"rteaz" u#or unul de altul #i manifest" tendin!a de a-#i orienta bra!ele paralel cu axul fusului. ntotdeauna ei r"mn la periferia fusului. n metafaz", cromozomii pot fi bine studia!i la microscop, deoarece sunt spiraliza!i la maximum, compac!i #i se coloreaz" intens. Anafaza. Cromozomii #i despart cromatidele prin clivarea lor, dup" ce n prealabil s-a produs diviziunea centromerilor. Ei devin cromozomi monocromatidici #i alunec" pe fusul nuclear c"tre cei doi poli ai s"i. Simultan cu deplasarea cromozomilor, fusul se stranguleaz" la ecuator, gr"bind astfel
40

alunecarea cromozomilor c"tre polii celulei. Centromerii nainteaz" spre poli #i trag dup" ei bra!ele cromozomilor. n cazul n care un cromozom #i pierde centromerul, el r"mne dezorientat #i produce o deviere a mitozei de la mersul normal. Un astfel de cromozom se poate p"stra #i poate participa la mitoz" numai dac" se aloc" altui cromozom ce posed" centromer. Nu se cunoa#te ast"zi precis care este cauza #i mecanismul de mi#care al cromozomilor spre cei doi poli ai celulei. n leg"tur" cu explica!ia acestor fenomene exist" diferite ipoteze, dintre care unele pot fi luate n seam". Astfel, se consider" c" fiecare cromozom se deplaseaz" n urma unei atrac!ii dintre poli #i centromeri, altele c" ar exista o extindere #i apoi o contrac!ie a fibrelor fusului, ceea ce ar contribui la deplasarea cromozomilor. Mai exist" #i ipoteza c" aparatul mitotic ar fi un fel de gel, n care are loc contractarea fibrelor cromozomice, drept consecin!" a hidrat"rii acestui gel. Contractarea fibrelor a fost comparat" de unii cercet"tori cu contrac!ia fibrelor musculare. Telofaza. n cursul telofazei, aparatul mitotic se transform". Fibrele fusului dispar, iar cromozomii ajung la cei doi poli, se despiralizeaz", reconstituind filamentele de cromatin", care se sub!iaz", se alungesc #i iau forma unui ghem. Fragmentele membranei nucleare migreaz" spre poli, se agreg" n jurul filamentelor de cromatin", dnd na#tere cte unei membrane pentru fiecare din cei doi nuclei care se formeaz". n timpul acesta are loc procesul de reconstituire a nucleolilor n num"rul n care au fost prezen!i n nucleul ini!ial. Totodat", corpul celulei se #tranguleaz" #i, prin formarea unui perete desp"r!itor, iau na#tere dou" celule. n figura 2.16. este redat" schema mitozei. Timpul n care are loc mitoza depinde de !esutul n care se g"se#te celula, de starea fiziologic" a organismului #i de anumi!i factori externi. Ea poate dura de la cteva minute pn" la 200 minute. S-a stabilit, de asemenea, c" mitoza este mai activ" n timpul odihnei #i somnului la animale sau ntunericului la plante. Dintre toate fazele din tot ciclul mitotic, profaza este cea mai lung" (cca 60%), telofaza mai scurt" (cca 30%), iar metafaza #i anafaza sunt #i mai scurte (cca 5%). Citokineza. Diviziunea nucleului este nso!it" aproape ntotdeauna #i de diviziunea citoplasmei. Se crede c" aparatul mitotic ar r"spunde #i de diviziunea citoplasmei, dar este greu de precizat dac" el este absolut necesar pentru realizarea ei. De#i nu se cunosc toate procesele de leg"tur" dintre kariokinez" #i citokinez", nu trebuie s" ne ndoim c" ele exist" #i trebuie s" existe. P"rerea c" aparatul mitotic, n special centrele mitotice de la polii fusului au un rol n citokinez" pare a avea o confirmare experimental". n cazul cnd se formeaz" un singur pol, ciclul mitotic decurge n ntregime n afara mi#c"rii cromozomilor n anafaz", ns" niciodat" celula nu se divide, nu are loc diviziunea citoplasmei. n cursul diviziunii mitotice structura citoplasmei sufer" modific"ri importante. Membrana nuclear" dispare, con!inutul cromozomic al nucleului se disperseaz" n citoplasm", iar reticulul endoplasmic #i modific" structura, reducndu-se.
41

Vscozitatea celulei scade treptat, ajunge la minimum n metafaz", dup" care cre#te din nou, ajungnd la starea ini!ial" n telofaz".

Fig. 2.16. Reprezentarea schematic" a mitozei la un organism cu 2n=4 cromozomi A-profaz" timpurie; B-profaza; C-metafaza; D-anafaza; E-telofaza F-interfaza. 42

Cercetndu-se la microscop mitoza, s-a descoperit c" citoplasma se mi#c" n jurul fusului, la nceput paralel cu axul fusului, apoi perpendicular pe el. n acela#i timp, n telofaz" se formeaz" fragmoplastul la ecuatorul celulei, alc"tuit din totalitatea unor por!iuni limitate de membran". Acestea vor forma membrana ce va desp"r!i cele dou" celule rezultate n urma mitozei. Formarea peretelui desp"r!itor ntre cele dou" celule este ajutat" #i de #trangularea celulei care se divide. To!i constituien!ii citoplasmatici se repartizeaz" n p"r!i egale n cele dou" celule fiice. Din punct de vedere fiziologic, n mitoz" celula trece printr-o perioad" de sc"dere a activit"!ii sale. Procesul de sintez" proteic" scade, dup" p"rerea unora, pn" la ntrerupere. Diviziunea mitotic" prezint" importan!", deoarece n timpul ei are loc procesul de dedublare a materialului genetic, iar cromozomii, care apar destul de vizibil n metafaz", pot fi u#or studia!i la microscop. Amitoza. n afar" de mitoz" se observ" n multe !esuturi la plante sau animale o diviziune simpl", n care nucleul #i citoplasma se mpart n dou" sau un multiplu de doi, formnd mai multe celule. Amitoza a fost constatat" n endospermul angiospermelor, n antipodele sacilor embrionari, n celulele somatice ale !esuturilor reproduc"toare, n celulele epiteliului uterin al mamiferelor etc. Caracteristica amitozei este lipsa fusului acromatic. Este posibil ca la originea amitozei s" stea dublarea sau multiplicarea cromozomilor n interiorul membranei nucleare, fenomen numit endomitoz!. n ultimul timp s-au intensificat cercet"rile pentru clarificarea cauzelor ce determin" amitoza. Observa!iile f"cute la endospermul angiospermelor arat" c" amitoza este prezent" nu n fazele timpurii ale dezvolt"rii, ci n cele trzii, deci n faza cnd func!iile endospermului se reduc la acumularea de substan!e de rezerv" sau la trecerea acumul"rii de substan!e energetice n embrion. Amitoza este caracteristic" celulelor cu activitate fiziologic" redus". Sunt date care arat" c" diviziunea mitotic" se poate restabili la celulele care una sau mai multe genera!ii s-au reprodus pe cale amitotic". Endomitoza. Prin endomitoz" se n!elege multiplicarea num"rului de cromozomi n nucleu f"r" ca membrana nuclear" s" se dezorganizeze. Cromozomii rezulta!i se duplic" f"r" a se individualiza, con!in un num"r mare de cromatide #i se numesc politeni. Endomitoza este urmat" de cre#terea n volum att a nucleului, ct #i a celulei. Endomitoza se ntlne#te la celulele din diferite !esuturi, cum ar fi acelea ce c"ptu#esc anterele de la Spinacea oleracea. n nucleul acestor celule se observ" la microscop apari!ia cromozomilor, scurtarea lor (ca #i la profaza mitozei), dup" care ei nu mai sunt vizibili. Endomitoza este condi!ionat" de anumite st"ri fiziologice ale celulei, care mpiedic" formarea aparatului mitotic.

43

2.5.2. Meioza
Meioza reprezint" o form" de diviziune celular" caracteristic" organismelor ce se nmul!esc pe cale sexuat" #i n urma c"reia din celulele somatice cu 2n cromozomi se formeaz" celulele sexuale cu n cromozomi. Reducerea num"rului de cromozomi este fenomenul invers procesului de dublare al lor, care are loc n urma fecund"rii. Dac" organismele ar forma celule sexuale cu acela#i num"r de cromozomi ca n celulele somatice, n fiecare genera!ie num"rul de cromozomi din celulele organismelor s-ar dubla. Meioza asigur", deci, men!inerea constant" a num"rului de cromozomi de-a lungul genera!iilor la organismele ce se nmul!esc sexuat. Meioza cuprinde dou" diviziuni succesive: meioza primar", numit" #i heterotipic! sau reduc!ional", n care din celulele diploide se formeaz" celule haploide #i meioza secundar" sau homeotipic!, n care din celulele haploide se formeaz" tot celule haploide. n meioza primar", fazele prin care trece diviziunea celular" sunt acelea#i ca la diviziunea mitotic", numai c" profaza este mult mai complex" #i cuprinde mai multe stadii: leptonema, zigonema, pachinema, diplonema #i diachineza. Profaza I. n stadiul de leptonema, nucleul se m"re#te n volum. Cromozomii apar ini!ial sub forma unor filamente foarte fine, n lungul c"rora se pot distinge ni#te ngro#"ri, cromomerele, ca urmare a unor zone mai dense de spiralizare a lor. Aparent, filamentul este format dintr-o singur" cromatid", din care cauz" cromozomii se numesc monovalen"i, iar num"rul lor este egal cu 2n. Stadiul de zigonema corespunde cu mperecherea cromozomilor omologi, doi cte doi, formnd perechi sau cromozomi bivalen"i. Fenomenul de al"turare a celor doi cromozomi n lungul lor poart" numele de sinaps!. n fiecare pereche se g"se#te un cromozom de origine matern" #i unul de origine patern". Sinapsa ncepe ntr-un anumit punct de pe lungimea cromozomului #i se continu" apoi n tot lungul acestuia, fiind att de perfect", nct toate segmentele omoloage se al"tur" fa!" n fa!". Prin omologie se n!elege similitudinea structural" #i func!ional" a cromozomilor. Dac" dintr-un cromozom lipse#te un segment, por!iunea corespunz"toare a cromozomului pereche face o bucl", asigurnd sinapsa pentru celelalte regiuni ale cromozomilor. Sinapsa are loc n dou" etape: n prima etap" se produce o aliniere a cromozomilor omologi, iar n a doua etap" apropierea lor fie la unul din capete sau ambele, fie n mai multe puncte pe lungimea cromozomilor, dup" care se continu" pe toat" lungimea. Aceast" apropiere duce la formarea a#a-numitelor complexe sinaptinemale. Apropierea cromozomilor constituie unul din cele mai importante momente ale meiozei. n leg"tur" cu for!ele ce ac!ioneaz" pentru atragerea cromozomilor, exist" ast"zi mai multe ipoteze neconfirmate. Astfel, se presupune c" ele ar fi de natur" electrostatic" sau, datorit" structurii lor moleculare, ar poseda o energie de rezonan!". n stadiul de pachinema, cromozomii se scurteaz", se ngroa#", iar
44

leg"tura dintre perechi devine din ce n ce mai intim", fapt care a determinat denumirea de gemeni cromozomici. n stadiul de diplonema, la fiecare dintre membrii bivalentului se pot observa cte dou" cromatide surori, astfel c" perechea de cromozomi este constituit" din patru cromatide care alc"tuiesc a#a numita tetrad! cromozomic!. Cromozomii omologi au tendin!a de a se ndep"rta unul de altul; cromatidele nesurori sunt ns" re!inute n mai multe puncte de contact numite chiasme. Chiasma este considerat" ca reprezentnd manifestarea citologic" a crossing-overului. Acest fenomen va fi analizat ntr-un capitol urm"tor, el prezentnd o mare importan!" n studiul eredit"!ii. n stadiul de diachinez$, cromozomii ce alc"tuiesc perechile se ndep"rteaz", scurtarea lor devenind #i mai accentuat". Spa!iile dintre chiasme se l"rgesc, acestea se deplaseaz" c"tre extremit"!ile perechilor de cromozomi, a#a nct, la sfr#itul acestui stadiu, ei apar conecta!i numai la extremit"!ile lor. Cu aceasta se ncheie profaza primar". Metafaza I. Membrana nuclear" dispare #i se formeaz" fusul de diviziune. Tetradele cromozomice se repartizeaz" n planul ecuatorial al celulei. Fiecare cromozom omolog alc"tuit din dou" cromatide surori se ata#eaz" la nivelul centromerului de firele fusului, pentru a conduce cromozomii la polii celulari. Odat" cu ndep"rtarea lor dispar #i ultimele chiasme. Anafaza I. Cromozomii bicromatidici migreaz" la polii celulei. Ei pot diferi din punct de vedere genetic, n urma schimbului de segmente care a avut loc n stadiile anterioare. Telofaza I. Cromozomii ajun#i la cei doi poli ai celulei formeaz" cte un nucleu cu un num"r haploid de cromozomi. Fenomenul care duce la separarea celor dou" celule poart" numele de plasmodierez!, iar cele dou" celule haploide formeaz" o diad!. Odat" cu ncheierea acestei faze nucleii intr" n interchinez!. Cromozomii prezint" cromatidele perechi separate, dar unite numai prin centromeri, aspect caracteristic numai meiozei. Dup" un interval scurt ncepe a doua faz" a diviziunii meiotice, homeotipic", care cuprinde urm"toarele faze: Profaza II #i metafaza II. Cromozomii apar forma!i din cromatide surori, care se orienteaz" n planul ecuatorial al fusului de diviziune, ce apare la sfr#itul profazei secundare. Cromozomii se cliveaz" imediat dup" clivarea centromerilor. Anafaza II #i telofaza II. Cele dou" cromatide se ndep"rteaz" spre cei doi poli, unde constituie doi nuclei. Din diada ini!ial" cu celule haploide s-au format, deci, patru celule haploide ce formeaz" o tetrad! celular". Aceste celule, n urma unor procese, vor da na#tere la game!i. n figura 2.17. este redat" schema general" a meiozei.

45

Fig. 2.17. (partea I) - Schema meiozei la un organism cu 2n=4 cromozomi A-leptonem; B-zigonem; C-pachinem; D-diplonem E-metafaza I; F-anafaza I. 46

Fig. 2.17. (continuare) - Schema meiozei la un organism cu 2n=4 cromozomi G-telofaza I; H-interfaza; I-profaza II; J-metafaza II; K-anafaza II; L-telofaza II 47

2.6. GAMETOGENEZA #I SYNGAMIA 2.6.1. Gametogeneza la animale

La animale, game!ii (n) sunt reprezenta!i prin ovule #i spermatozoizi, produ#i n organe speciale, ovare #i, respectiv, testicule. La originea lor se afl" celulele somatice (2n), care, n urma unui #ir de diviziuni, dau na#tere la celule sexuale primare, nediferen!iate din punct de vedere citologic. Din acestea se formeaz" goniile, foarte asem"n"toare la nceput pentru ambele sexe, dup" care, se diferen!iaz" n spermatogonii primare, la masculi #i ovogonii primare, la femele. La rndul lor, acestea, prin diviziuni mitotice repetate, se dezvolt" #i devin spermatogonii #i ovogonii secundare. Urmeaz" o alt" serie de diviziuni mitotice, care duc la formarea celulelor sexuale nemature, cu un num"r de cromozomi diploid, spermatocite #i ovocite. Pn" la acest stadiu ntreaga evolu!ie s-a desf"#urat n stare de diploidie, iar ca proces de multiplicare al celulelor a fost mitoza. Procesele ce urmeaz" n continuare #i care duc la formarea celulelor sexuale diferite sunt diferen!iate #i se vor trata n mod separat. Formarea celulelor sexuale poart" denumirea de gametogenez!. Spermatogeneza. Spermatocitele primare sufer" un proces de diviziune meiotic" #i dau na#tere la spermatocite de gradul doi, cu un num"r haploid de cromozomi. Urmeaz" apoi a doua diviziune, ns" de tip mitotic, rezultnd patru spermatide, tot haploide. n sfr#it, prin procesul spermiogenezei, destul de complex, din spermatide se formeaz" spermatozoizii. Nucleul spermatidei devine partea voluminoas" a lor. Organitele citoplasmice devin componen!i citologici seminali ce-i asigur" mi#carea #i p"trunderea n ovul (de exemplu, mitocondriile formeaz" filamente spiralate). Citoplasma reprezint" numai o p"tur" foarte sub!ire ce nconjoar" nucleul. Forma spermatozoizilor este variat" #i caracteristic" speciei. Ovogeneza. ntre formarea celulelor sexuale mascule, spermatozoizii #i formarea celulelor sexuale femele, ovulele, se poate face un paralelism, de#i exist" #i diferen!e ntre ele. Astfel: - ovocitele cresc ntr-o perioad" de timp mai lung" dect spermatocitele, deoarece au nevoie de acumularea de materii de rezerv" mai mari pentru viitoarele ovule. n aceast" perioad", uneori, cromozomii apar sub form" specific" numit" "perie de lamp""; - ovocitul, prin dou" diviziuni meiotice, produce un singur gamet capabil de a participa la fecundare, celelalte trei celule fiind avortate (numite #i corpi polari); - diviziunea I #i diviziunea a II-a meiotic" din ovogenez" poate dura pn" n momentul cnd ovulul particip" la fecundare sau chiar dup" p"trunderea spermatozoidului n citoplasma ovulului. n cazul spermatogenezei I #i a II-a, diviziunea meiotic" se termin" pn" n momentul form"rii spermatozoidului.
48

n figura 2.18. este reprezentat" schema spermatogenezei, iar n figura 2.19. cea a ovogenezei.

Fig. 2.18. Schema spermatogenezei

Celulele sexuale provin din celule somatice nediferen!iate. Ele se pot forma n stadiul embrionar, cum este cazul la mamifere, iar la altele n stadii #i mai timpurii, ca la Ascaris megalocephala. La aceasta, primii doi blastomeri din diviziunea ovulului se deosebesc prin faptul c" unul formeaz" numai celule somatice cu 2n cromozomi, iar altul, mai mic, embrionul sexual, cu n cromozomi.

2.6.2. Sporogeneza &i gametogeneza la plante

Procesul de gametogenez" la plante se aseam"n" ntr-o oarecare m"sur" cu acel al animalelor, dar prezint" o serie de tr"s"turi specifice. Formarea celulelor sexuale mascule la plante se aseam"n" cu cea de la animale pn" la stadiul de spermatid", iar formarea celulelor sexuale femele pn" la stadiul de oosfer" nematur". Sporul haploid rezult" n urma diviziunii meiotice, proces numit sporogenez". Din spor se dezvolt" gametofitul, form" sub care se prezint" unele organisme n cea mai mare parte a vie!ii lor, cum este la ciuperci, mu#chi, ferigi. La angiosperme, faza haploid" este redus" ca timp #i game!ii se formeaz" dup" ce nucleii sporului mascul #i femel sufer" unele diviziuni mitotice.
49

Fig. 2.19. Schema ovogenezei

Microsporogeneza &i microgametogeneza. n zona profund" a anterelor florilor, dup" mai multe diviziuni mitotice repetate se formeaz" celulemam" ale gr"unciorilor de polen. Acestea sunt analoage cu spermatocitele de ordinul I de la metazoare #i cu ele se ncheie diplofaza. Fiecare celul"-mam" a gr"unciorilor de polen d" na#tere n urma diviziunii meiotice la o tetrad" de microspori, adic" la patru gr"unciori de polen haploizi. Gr"unciorul de polen constituie gametofitul mascul. Megasporogeneza &i megagametogeneza. n ovar se formeaz" #i se dezvolt" sacul embrionar (megasporul). El poate s" aib" origine diferit": din mai multe celule ale nucelei; dintr-o celul" din nucel"; dintr-o celul" din subepiderma nucelei. Se va urm"ri cazul al doilea, care este mai simplu #i mai general la plante. Celula ini!ial" din care #i are originea sacul embrionar se divide n dou", formnd o celul" superioar", care prin diviziuni repetate va da na#tere la un !esut numit calot" #i o celul" inferioar" (celula-mam" a tetrasporilor). Celula-mam" a tetrasporilor sufer" dou" diviziuni, dintre care prima este reduc!ional" #i din care iau na#tere patru celule haploide. Una din ele cre#te mai mult, devine sac embrionar, n timp ce celelalte trei se resorb.
50

Cu formarea megasporului se ncheie megasporogeneza. Megasporul (megasporangele) sufer" urm"toarele transform"ri: nucleul se divide n doi nuclei, care se deplaseaz" c"tre cei doi poli ai megasporului. Fiecare se divide, dnd na#tere la cte patru nuclei. Cte unul din ace#tia se ndreapt" spre centrul megasporului, unde fuzioneaz", dnd na#tere la nucleul secundar al sacului embrionar sau nucleul de fuziune. Cei #ase nuclei r"ma#i se nconjoar" cu citoplasm" #i devin celule; la un pol este situat" oosfera #i dou" sinergide, iar la cel"lalt pol trei antipode. O schem" mai detaliat" asupra etapelor care se succed n ciclul vital la o plant" superioar" (porumbul) #i n care se poate urm"ri sporogeneza #i gametogeneza este prezentat" n figura 2.20.

Fig. 2.20. Sporogeneza #i gametogeneza la porumb

2.6.3. Syngamia
Este fenomenul prin care se unesc doi game!i (n) pentru a forma un zigot (2n). Ea asigur" trecerea de la faza haploid" la faza diploid" n ciclul de dezvoltare a unui organism. Cnd game!ii sunt diferen!ia!i din punct de vedere morfologic se spune c" ei sunt heterogami sau anisogami, iar fenomenul a fost denumit heterogamie sau anisogamie. De obicei, gametul femel este mai voluminos. La metazoare
51

poart" numele de ovul, iar la plantele superioare de oosfer!. Gametul mascul este mai mic #i redus la un nucleu nconjurat de pu!in" citoplasm". El se nume#te spermatozoid la animale #i la plantele inferioare. La conifere #i angiosperme, nucleul haploid al gr"unciorului de polen, dup" o prim" diviziune, d" na#tere nucleului vegetativ #i nucleului germinativ, iar dup" o alt" diviziune a nucleului germinativ rezult" dou" spermatii. Una din spermatii se une#te cu oosfera, dnd na#tere zigotului diploid, iar a doua se une#te cu nucleul diploid al sacului embrionar, dnd na#tere endospermului triploid. La animale, gametul mascul (spermatozoidul) vine n contact cu ovulul #i prin eliberare de enzime hidrolizante dizolv" membrana ovulului, p"trunznd n interior. Apoi, cei doi nuclei, acel al spermatozoidului #i acel al ovulului realizeaz" syngamia. Din punct de vedere genetic, syngamia reconstituie perechile de cromozomi omologi, ntrunind n acela#i genotip eredit"!ile celor doi p"rin!i. n acela#i timp, fecundarea asigur" continuitatea materialului genetic n genera!iile urm"toare.

52

CAPITOLUL 3 BAZELE MOLECULARE ALE EREDIT!"II

Moto: "Genetica molecular! a luat na"tere cnd s-a recunoscut c! gena este subdivizibil!" Salvador Luria "Structura ADN trebuie n#eleas! n raport cu toate func#iile sale, a"a cum n#elegerea func#iei necesit! o cunoa"tere a structurii. Fiecare func#ie trebuie descompus!, apoi reconstituit! n detaliile sale moleculare "i, n final, orientat! n arhitectura "i economia celular!" A. Kornberg

Progresele nregistrate n genetica clasic! au ridicat, ulterior, numeroase probleme legate de natura biochimic! a materialului genetic, respectiv a genelor. Identificarea "i studierea aprofundat! a materialului genetic ridicau numeroase probleme, de aceea nu au putut fi rezolvate dect prin cercet!ri interdisciplinare de genetic!, biochimie, medicin!, fiziologie, fizic!, matematic! "i altele. Aceste cercet!ri constituie realiz!rile cele mai importante ale "tiin#ei contemporane "i au pus bazele geneticii moleculare, care studiaz! ereditatea "i variabilitatea organismelor la nivel molecular. Complexitatea structurilor macromoleculare, interac#iunile de ordin informa#ional dintre acizii nucleici "i proteine, multitudinea tipurilor de proteine ce alc!tuiesc organismele, au generat structuri supramoleculare care asigur! existen#a, variabilitatea "i continuitatea materiei vii. n urm! cu trei decenii nimeni nu "i-ar fi nchipuit c! oamenii vor cunoa"te structura genelor "i modul lor de exprimare ntr-un sistem celular. ntr-o perioad! scurt! de timp s-a demonstrat c! moleculele de acid dezoxiribonucleic "i acid ribonucleic, att la organismele inferioare ct "i la cele superioare, con#in n mod codificat informa#ia genetic! pentru sinteza proteinelor. S-au descifrat mecanismele intime care stau la baza complicatelor reac#ii prin care se sintetizeaz! o protein! n organism, fenomene ce au fost reproduse apoi "i n laborator, a"a cum se va vedea ntr-un alt capitol referitor la ingineria genetic!.

3.1. PROTEINE #I ACIZI NUCLEICI

Studiile de biochimie privind substratul material al eredit!#ii pretind o cunoa"tere temeinic! a componentelor chimice din celul!, precum "i a proceselor de transformare a acestora.
53

Din multitudinea de componente chimice ce intr! n alc!tuirea celulei, principalul substrat al materiei vii l constituie proteinele "i acizii nucleici. Proteinele sunt grupate n holoproteine, constituite numai din aminoacizi "i heteroproteine care, pe lng! aminoacizi, mai posed! o grup! prostetic!. Din grupul heteroproteinelor fac parte: fosfoproteinele, glicoproteinele, cromoproteinele, lipoproteinele "i nucleoproteinele. Nucleoproteinele sunt formate dintr-o protein! "i o grupare prostetic! reprezentat! de nuclein!. Se cunosc mai multe tipuri de holoproteine, unele apar#innd grupului de polipeptide cu greutate molecular! mic!, denumite protamine, care con#in pn! la 90% arginin! "i sunt lipsite de aminoacizi aromatici "i cu sulf. Alte tipuri de proteine cum ar fi histonele, con#in lizin! "i arginin!, aminoacizi aromatici "i cu sulf, leucin!, alanin!, glicin! "i acid glutamic. Ambele tipuri de proteine au caracter bazic "i formeaz! s!ruri cu acizii nucleici, de tipul nucleoproteinelor. Un alt tip de protein! care con#ine "i triptofan, l constituie proteina fibrilar! care intr! n constitu#ia fibrelor celulare. Proteinele sunt formate din aminoacizi care sunt lega#i prin leg!turi peptidice, alc!tuind lan#uri polipeptidice, avnd o structur! macromolecular!. Datorit! faptului c! proteinele con#in n molecula lor lan#uri "i catene mari, cu structuri interne diferite, pot ap!rea n spa#iu diferite configura#ii, grupate n mai multe niveluri de organizare: structura primar!, secundar!, ter#iar! "i cuaternar!. Structura primar! a proteinelor se refer! la constitu#ia chimic! a fiec!rui lan# polipeptidic ce intr! n alc!tuirea lor. Specificitatea unei proteine este dat! de num!rul lan#urilor polipeptidice, iar specificitatea unui lan# polipeptidic este dat! de num!rul, felul "i ordinea aminoacizilor ce l constituie. n lan#urile polipeptidice, particip! mai frecvent 20 de tipuri de aminoacizi, de"i num!rul aminoacizilor cunoscu#i se ridic! la aproximativ 100. Faptul c! fiecare protein! se caracterizeaz! printr-o anumit! secven#! de aminoacizi, orice schimbare a acestei secven#e va atrage modific!ri ale proteinei "i ca atare "i a fenotipului organismelor vii. Structura secundar! se refer! la orientarea spa#ial! a aminoacizilor, unii fa#! de al#ii n cadrul lan#ului polipeptidic. Datorit! unor for#e de atrac#ie necovalente sau covalente chiar, anumite por#iuni din lan#ul polipeptidic se atrag, rezultnd o serie de torsion!ri "i orient!ri n diferite direc#ii a lan#ului polipeptidic, dndu-i o anumit! configura#ie spa#ial!. Structura ter#iar! se formeaz! cnd ntre aminoacizi ndep!rta#i ai aceluia"i lan# polipeptidic se formeaz! leg!turi chimice, dnd moleculei proteice o configura#ie spa#ial! foarte neregulat!. Structura cuaternar! se ntlne"te la proteinele formate din mai multe lan#uri polipeptidice, ce por fi identice sau diferite ca structur!. Din cercet!rile efectuate de biochimi"ti se desprinde unul din cele mai importante principii ale biologiei moleculare: structura secundar!, ter#iar! "i cuaternar! a unei proteine este determinat! de structura primar! a lan#ului polipeptidic. Acest principiu a f!cut posibil! cunoa"terea modului cum se realizeaz! n celule sinteza enzimelor "i a proteinelor.
54

Natura "i structura proteinelor determin! specificitatea biologic! a organismelor, a fiec!rei specii n parte, a organelor "i #esuturilor. Num!rul mare de izomeri, succesiunea diferit! a aminoacizilor din macromoleculele proteice asigur! tocmai individualitatea biochimic! "i genetic! a organismelor. Acizii nucleici "i nucleoproteinele sunt componen#ii cei mai importan#i ai celulelor vegetale "i animale. Ei particip! la procesele de diviziune celular!, de cre"tere "i diferen#iere celular! "i determin! specificitatea materiei vii. Acizii nucleici au fost descoperi#i n anul 1871 cnd F. Miescher identific! n spermatozoizii pe"telui somon (Salmo salar) o substan#! denumit! nuclein$, format! dintr-o protein! "i un acid organic ce con#ine fosfor. Acest acid organic a fost identificat pentru prima dat! de c!tre R. Altmann n anul 1899 "i l-a denumit acid nucleic. Biochimistul Kossel a demonstrat c! nucleina este format! din doi acizi nucleici: acidul dezoxiribonucleic (ADN) "i acidul ribonucleic (ARN). Acidul dezoxiribonucleic se g!se"te n cea mai mare parte n nucleul celulelor vegetale "i animale, iar acidul ribonucleic se g!se"te att n nucleu, ct "i n citoplasm!. Acizii nucleici, respectiv nucleoproteinele, constituie, al!turi de alte proteine, substan#ele de baz! din care este alc!tuit cromozomul. Organismele cele mai simple, cum ar fi virusurile, sunt alc!tuite aproape numai din nucleoproteine.

3.2. DOVEZI PRIVIND ROLUL GENETIC AL ADN

Descoperirile care au avut loc la nivelul celulei au permis o grupare a structurilor care de#in func#ii ereditare. Ne referim la acele structuri care de#in o informa#ie ereditar! "i care au continuitate "i stabilitate celular!. Teoria cromozomic! a eredit!#ii a atribuit cromozomilor "i genelor rolul principal n ereditate, de"i nu se cuno"teau nc! prea multe despre structura chimic! a materialului genetic. Identificarea materialului genetic constituie imperativul geneticii n perioada de la mijlocul secolului nostru. Pentru aceasta trebuiau descoperite "i dovedite structurile chimice care de#in caracteristicile de baz! ale materialului genetic: de a stoca "i transmite informa#ia ereditar! "i de a-"i men#ine stabilitatea cantitativ! "i calitativ! pe parcursul diviziunii celulare. Cercet!rile care s-au f!cut la nceputul secolului XX privind proteinele "i enzimele, au demonstrat marea diversitate "i complexitate a acestora, considerndu-se c! "i genele ar fi tot de natur! proteic!. Problema care se pune n aceast! etap! era dac! genele, care ar avea o natur! proteic!, pot s! determine sinteza altor proteine "i respectiv enzime. Cercet!rile au demonstrat c! din punct de vedere chimic, un lan# polipeptidic nu poate servi pentru propria sintez!, n primul rnd datorit! faptului c! aminoacizii nu manifest! atrac#ie chimic! pentru aminoacizi identici.
55

Prima ipotez! a leg!turii dintre o gen! "i sinteza unei enzime a fost elaborat! n anul 1908 de c!tre medicul englez Garrod care a studiat maladiile ereditare umane ce afecteaz! metabolismul intermediar al fenilalaninei. Identificarea materialului genetic a fost posibil! datorit! descoperirii unor fenomene ereditare de maxim! importan#!: - transformarea bacterian! prin intermediul ADN; - transformarea la eucariote prin intermediul ADN; - recombinarea genetic! n cursul reproducerii sexuate la bacterii; - transduc#ia bacterian! cu ajutorul virusurilor; - transmiterea informa#iei ereditare de c!tre ARN viral.

3.2.1. Transformarea la procariote

n anul 1928, bacteriologul englez F. Griffith a efectuat mai multe experien#e cu pneumococi (Diplococcus pneumoniae), o bacterie care produce la mamifere boala numit! pneumonie. Virulen#a ei este determinat! de existen#a unei capsule format! din polizaharide care mpiedic! fenomenul de fagocitoz!. Coloniile acestor bacterii sunt netede "i vscoase, motiv pentru care s-au notat cu S (engl. smooth = neted). Dup! reac#ia imunologic!, determinat! de tipul de polizaharide ce alc!tuiesc capsula, exist! mai multe tipuri de pneumococi S: SI, SII, SIII etc. Tipul S poate da na"tere prin muta#ii spontane la forme lipsite de capsul!, a c!ror colonii au suprafa#a rugoas!, notat! cu R (engl. rough = aspru, rugos), care sunt nevirulente. Pneumococii de tip R pot fi: RI, RII, RIII, n func#ie de tipul S din care provin. F. Griffith a injectat la "oareci pneumococi nevirulen#i de tip RII mpreun! cu pneumococi virulen#i de tip SIII, ns! ace"tia din urm! fuseser! omor#i prin c!ldur!. Surprinz!tor a fost faptul c! "oarecii au murit de pneumonie, iar din ace"tia s-a separat att pneumococi de tip RII ct "i pneumococi de tip SIII. Concluzia care s-a desprins a fost c! pneumococii de tip RII s-au transformat n pneumococi de tip SIII. Muta#ia este exclus! n acest caz deoarece tipul RII ar fi trebuit s! muteze n tipul SII. Cauza transform!rii pneumococilor necapsula#i "i nevirulen#i n pneumococi capsula#i "i virulen#i a r!mas necunoscut! pn! n anul 1944, cnd un grup de cercet!tori americani, O. T. Avery, C. M. Mac Leod "i M. Mc. Carty, au reluat experien#ele f!cute de Griffith cu scopul de a identifica substan#a chimic! ce induce transformarea. Ei au extras ADN de la pneumococii de tip SIII "i l-au introdus n mediul de cultur! al pneumococilor de tip RII. n cultur!, pe lng! pneumococii de tip RII au ap!rut "i un num!r mic de pneumococi de tip SIII, dovedindu-se c! agentul transformator este ADN de la tipul donor. Aceast! experien#! poate fi redat! sintetic astfel:

RII + ADN de la SIII

nsu"irea de virulen#! sau nevirulen#! este legat! de prezen#a sau absen#a capsulei polizaharidice ce nconjoar! pneumococul. ADN transformator a indus
56

in vitro RII + SIII 24 ore

pneumococilor nevirulen#i, acapsula#i, nsu"irea de virulen#!, de formare a acestei capsule. Cu ajutorul ADN s-au realizat transform!ri genetice "i pentru alte nsu"iri la bacterii. Pneumococii sensibili la streptomicin! (Sts) au fost transforma#i n pneumococi rezisten#i la streptomicin! (Str) sub influen#a ADN extras de la pneumococii rezisten#i la acest antibiotic. Fenomenul de transformare genetic! s-a realizat "i la alte specii de bacterii: Bacillus subtilis, Hemophilus influenzae, Escherichia coli etc. Transformarea genetic! este posibil! numai dac! bacteriile receptoare prezint! o stare de competen%$, care le permite interac#iunea cu un fragment de ADN exogen, asigurnd nglobarea ireversibil! a acestuia. Competen#a este o stare fiziologic! tranzitorie care variaz! mult n cursul diferitelor faze ale ciclului de multiplicare celular!. Celulele bacteriene r!mn incompetente dac! sunt cultivate la pH mai mic de 7,4, n prezen#a unor enzime proteolitice sau la densit!#i celulare mici, condi#ii n care proteina activator, ce induce competen#a nu este sintetizat! sau este inactivat!. Proteina activator este un polipeptid endogen cu greutate molecular! mic!, cationic, bogat n aminoacizi bazici "i hidrofobi, sensibil la enzimele proteolitice "i extrem de aderent la toate suprafe#ele. Starea de competen#! presupune o serie de modific!ri ale peretelui celular bacterian. Proteina activator determin! o serie de alter!ri de suprafa#! prin ac#iunea murein-hidrolazei, peretele celular devenind mai poros "i cu o suprafa#! intens electropozitiv!, ceea ce favorizeaz! legarea fragmentelor de ADN exogen, nc!rcate electronegativ (Zarnea G., 1986). n ceea ce prive"te mecanismul de transformare genetic! se afirm! c! ADN exogen p!trunde n celula bacterian! printr-o regiune denumit! mezozom. Cromozomul bacterian este ata"at de membrana celular! tot n zona mezozomului. P!truns n celula bacteriei acceptor, ADN exogen realizeaz! o sinaps!, cu o zon! cu nucleotide complementare din cromozomul acesteia. n final, ADN exogen, se integreaz! n cromozomul bacteriei receptoare. ADN exogen este o secven#! de 900 de nucleotide, n medie, reprezentnd, frecvent, o singur! gen!, mai rar dou!, trei gene. Integrarea ADN exogen n cromozomul bacterian, formeaz! un ADN heteroduplex, deoarece nu se realizeaz! o complementaritate perfect! a nucleotidelor. n replicarea ulterioar! a acestui ADN, vor rezulta dou! molecule, una de tipul ADN receptor "i cealalt! de tip ADN transformat. (Raicu P., 1997).

3.2.2. Transfec%ia la procariote

Rolul genetic al ADN a fost pus n eviden#! "i printr-o serie de experien#e cu bacteriofagi (virusuri ce atac! "i distrug bacteriile). Importante n acest sens sunt experien#ele efectuate de A. Hershey "i M. Chase (1952) privind infec#ia viral!, constituind "i primele experien#e de transfec#ie, care const! n introducerea de ADN exogen n celule receptor. Ei au folosit bacteriofagii din
57

seria T "i n special bacteriofagul T2, unul din cei mai mari bacteriofagi (24002500 ). Bacteriofagul este constituit din cap "i coad!. Capul con#ine n interior ADN iar nveli"ul (capsida) "i coada sunt constituite din proteine (figura 3.1). Fagii se reproduc numai n celulele bacteriene cu ajutorul aparatului enzimatic al acestora. Infec#ia viral! are loc astfel: fagul se prinde cu filamentele codale de membrana bacteriei. Enzimele fagului dizolv! n acest punct membrana bacteriei, iar ADN fagic este introdus prin coada acestuia n celula bacterian!. ntr-un interval de timp destul de scurt, n interiorul bacteriei se formeaz! cteva sute de bacteriofagi, bacteria fiind distrus! (liza bacteriei) "i fagii sunt elibera#i putnd infecta alte celule. Faptul c! bacteriofagii se reproduc n interiorul bacteriei, denot! c! ADN fagic are capacitatea de a se autoreproduce (func#ia autocatalitic!) "i n acela"i timp de#ine informa#ia genetic! necesar! sintezei proteinelor proprii necesare constituirii capsidei pe baza aminoacizilor liberi din celula bacterian! (func#ia heterocatalitic!). Se pune ntrebarea dac!, pe lng! ADN fagic, n interiorul bacteriei nu p!trund "i proteinele virale. Pentru a clarifica acest aspect A. Hershey "i M. Chase au folosit izotopii radioactivi P32 "i S35. Fosforul radioactiv marcheaz! molecula de ADN iar sulful radioactiv marcheaz! proteinele. S-au cultivat bacterii E. coli pe un mediu la care s-a ad!ugat fosfor radioactiv (P32). Dac! se infecteaz! cultura cu bacteriofagi T2, vor rezulta bacteriofagi marca#i radioactiv, deoarece ADN fagic incorporeaz! izotopul P35. Cu ace"ti bacteriofagi marca#i s-au infectat alte bacterii neradioactive.

Fig. 3.1. Structura fagilor de tip T

ADN fagic radioactiv a p!truns n interiorul bacteriilor, n timp ce capsida fagilor, nemarcat!, a r!mas la nivelul peretelui celular bacterian. Dac! bacteriile au fost infectate cu bacteriofagi marca#i cu S35, bacteriile nu devin radioactive pentru c! n acest caz izotopul S35 s-a localizat numai la nivelul proteinei din capsid!. $i ntr-un caz "i n altul capsidele au r!mas aderente de suprafa#a bacteriei, putnd fi izolate prin agitare. n interiorul bacteriei p!trunde numai ADN fagic, care realizeaz! procesul de transfec#ie. La eucariote, transfec#ia s-a realizat prin mai multe metode: adi#ia de cromozomi metafazici la suspensii celulare, cu ADN exogen purificat sau prin folosirea unui vector retroviral care poart! o anumit! gen!. Introducerea ADN exogen realizeaz! modific!ri ale genomului receptor, n urma c!rora se realizeaz!
58

organisme modificate genetic, respectiv plante "i animale transgenice sau nlocuirea unor gene defective cu gene normale, ceea ce reprezint! terapia genic!.

3.2.3. Transformarea la eucariote

Transformarea genetic! la organismele superioare a eviden#iat rolul genetic al ADN. Primele experien#e de transformare genetic! la eucariote au fost realizate n anul 1959 de J. Benoit, P. Leroy, R. "i C. Vendrely. S-a extras ADN din spermatozoizii "i eritrocitele masculilor din rasa de ra#e Khaki Campbell "i s-a introdus intraperitoneal la bobocii de ra#e din rasa Pekin. Adul#ii din rasa Pekin, rezulta#i din bobocii trata#i au prezentat o serie de modific!ri morfologice privind culoarea penajului, a ciocului "i picioarelor, a taliei, realizndu-se o nou! ras! denumit! Blanche-neige. n anul 1971, C. R. Merril "i colab. au transferat gene de la Escherichia coli n celulele umane. Astfel, gena ce metabolizeaz! galactoza la E. coli a fost preluat! de fagul lambda "i apoi transferat! de acesta n celulele fibroblastice umane ce proveneau de la un bolnav de galactosemie (nu putea metaboliza galactoza). Fenomenul de transformare a fost realizat "i la alte organisme superioare: Drosophila melanogaster, Bombyx mori, Petunia hybrida, Hordeum vulgare ".a. La noi n #ar!, P. Raicu "i colab. (1963), au introdus prin vacuum infiltra#ie ADN de la Triticum durum n boabe de gru de la specia Triticum aestivum. Plantele rezultate din boabele tratate cu ADN exogen prezentau modific!ri privind culoarea "i ritmul de cre"tere.

3.2.4. Materialul genetic al ribovirusurilor

Ast!zi se consider! c! virusurile constituie sisteme complexe alc!tuite din dou! componente: nveli"ul proteic care nu are rol genetic "i ADN sau ARN ce de#in mesajul genetic. nveli"ul proteic denumit "i capsid! con#ine unit!#i mai simple denumite capsomere. Exist! dou! categorii de virusuri, unele au ca material genetic ADN "i sunt denumite dezoxiribovirusuri, iar altele con#in ARN "i sunt denumite ribovirusuri. Ribovirusurile cele mai cunoscute sunt: virusul mozaicului tutunului (VMT), virusul poliomielitei, al encefalitei, bacteriofagul F2, virusul gripal, virusul sarcomului Rous (RSV), multe virusuri tumorale etc. Rolul genetic al ARN a fost pus n eviden#! la virusul mozaicului tutunului de H. F. Conrat "i R. Williams (SUA, 1955) "i A. Gierer "i G. Schramm (Germania, 1956). Virusul mozaicului tutunului con#ine aproximativ 6% ARNv "i 94% proteine. Ei au izolat ARNv de proteina viral! "i au f!cut infec#ii cu ambele componente pe frunze s!n!toase de tutun. S-a constatat c! boala denumit! mozaicul sau arsura frunzelor de tutun s-a manifestat numai la frunzele infectate
59

cu ARNv. Se poate afirma c! la ribovirusuri, ARNv stocheaz! informa#ia genetic! necesar! sintezei proteinelor virale care vor constitui capsida viral!.

3.3. ACIZII NUCLEICI #I ROLUL LOR GENETIC 3.3.1. Structura molecular$ a acidului dezoxiribonucleic (ADN)
Studii detaliate asupra structurii moleculare a acizilor nucleici au fost efectuate mai ales dup! descoperirea rolului genetic, prin experien#ele de transformare genetic! efectuate la organismele procariote "i eucariote. Structura molecular! a acidului dezoxiribonucleic (ADN) a fost descoperit! n anul 1953 de cercet!torii J. D. Watson "i F. H. C. Crick care au studiat structura ADN prin difrac#ie n raze X. Cei doi cercet!tori au studiat ADN "in vitro" ne"tiindu-se dac! structura lui corespunde cu cea existent! n materia vie. Tot n anul 1953, M. Wilkins "i colab. au efectuat cercet!ri asupra ADN "in vivo" confirmnd structura stabilit! de Watson "i Crick. n anul 1962, cei trei cercet!tori Watson, Crick "i Wilkins au fost distin"i cu premiul Nobel pentru medicin! "i biologie, pentru contribu#iile aduse la elucidarea structurii moleculare a materialului purt!tor al informa#iei genetice. Structura chimic$ a moleculei de ADN Molecula de ADN este format! din unit!#i simple denumite nucleotide. n componen#a unei nucleotide intr! urm!toarele tipuri de molecule: o baz! azotat!, un zahar "i un radical fosforic (figura 3.2.).

Fig. 3.2. Bazele azotate, zaharurile "i radicalul fosforic din acizii nucleici 60

Bazele azotate ce intr! n alc!tuirea de ADN sunt de dou! tipuri: baze purinice "i pirimidinice. Purina este o baz! azotat! alc!tuit! dintr-un heterociclu ce cuprinde cinci atomi de C "i patru atomi de N, iar pirimidina este o baz! ce deriv! din inelul benzenic, cuprinznd patru atomi de C "i doi atomi de N. Bazele azotate purinice care intr! n constitu#ia moleculei de ADN sunt adenina (A) "i guanina (G), iar bazele pirimidinice sunt citozina (C) "i timina (T). Zaharul component al dezoxiribonucleotidului se nume"te dezoxiriboz$ ( - D - 2 dezoxiribofuranoz!), fiind o pentoz!. Radicalul fosforic are trei hidroxili liberi care pot fi esterifica#i. n cazul acizilor nucleici se esterific! doi hidroxili, deci acizii nucleici sunt fosfodiesteri: OH O=P OH OH Radical fosforic O=P OH OR2 OR1 Fosfodiester

Prin unirea unei baze azotate purinice sau pirimidinice cu un zahar rezult! un dezoxiribonucleosid iar prin ata"area la acesta a unui radical fosforic rezult! un dezoxiribonucleotid. Ata"area radicalului fosforic se face n mod obi"nuit prin intermediul carbonului 5' al dezoxiribozei, prin pierderea unei molecule de ap!. Radicalul fosforic al unui nucleotid, prin grup!rile acide libere, poate s! se lege fie cu al#i radicali fosforici, fie cu alte nucleotide prin carbonul 3' al dezoxiribonucleotidului. Dac! grup!rile libere ale radicalului fosforic se leag! de al#i radicali fosforici, dezoxiribonucleotidele pot apare sub form! de monofosfat, difosfat sau trifosfat, purtnd urm!toarele denumiri: adenozin 5'-fosfat (AMP), guanozin 5'-fosfat (GMP), citidin 5'-fosfat (CMP), timidin 5'-fosfat (TMP), ADP, GDP, CDP, TDP, ATP, GTP, CTP, TTP. Cnd nucleotidele (dezoxiribonucleotidele) se leag! unele de altele, aceast! leg!tur! se realizeaz! astfel: un nucleotid se leag! de nucleotidul vecin inferior prin C 3', iar de nucleotidul vecin superior prin C 5'. Se realizeaz! un lan# polidezoxiribonucleic, cu o form! de zig-zag, ce constituie structura primar! sau monocatenar! a moleculei de ADN. La majoritatea organismelor molecula de ADN este constituit! din dou! lan#uri (catene) polinucleotidice complementare, aceasta fiind structura secundar! a ADN stabilit! de c!tre J. D. Watson "i F. H. C. Crick. Una din premisele importante pentru stabilirea structurii secundare a ADN a fost deducerea experimental! a regulii lui E. Chargaff (1951), conform c!reia pot fi definite urm!toarele reguli cantitative: A+G = T+C; A+C = T+G; A = T "i C = G sau exprimat altfel, A/T = G/C = 1. Aceste rela#ii dintre nucleotide a dus la concluzia c! ADN este alc!tuit din 2 catene. R!sucirile pe care le sufer! o caten! sau
61

molecula bicatenar! alc!tuiesc structura ter#iar! iar interac#iunea dintre dou! sau mai multe molecule bicatenare alc!tuiesc structura cuaternar! a acizilor nucleici. Watson "i Crick au stabilit c! macromolecula de ADN este alc!tuit! din dou! catene polinucleotidice, paralele, nf!"urate elicoidal n jurul unui ax comun imaginar, o caten! avnd un sens ascendent (3' % 5') iar cealalt! un sens descendent (5' % 3'). Distan#a dintre dou! nucleotide succesive este de 3,4 iar pasul elicei este de 34 , ceea ce corespunde la 10 nucleotide. Diametrul macromoleculei de ADN este de 20 (figura 3.3.). Molecula de ADN are dimensiuni foarte mari fiind cea mai mare molecul! biologic!, cu o mas! molecular! ce poate ajunge la 12-16 x 106 daltoni (1 dalton = 1/12 din masa atomului de C). Cele dou! catene din molecula de ADN se leag! ntre ele prin pun#i de hidrogen ce se realizeaz! ntre o baz! azotat! purinic! de pe un lan# "i o baz! azotat! pirimidinic! de pe cel!lalt lan#. Prin urmare, n macromolecula de ADN exist! urm!toarele tipuri de leg!turi: adenin!-timin! (A-T), timin!-adenin! (T-A), guanin!citozin! (G-C) "i citozin!-guanin! Fig. 3.3. Modelul structurii bicatenare a (C-G). moleculei de ADN Cele dou! catene polinucleotidice din molecula de ADN sunt complementare, n sensul c! ordinea nucleotidelor de pe o caten! determin! ordinea nucleotidelor de pe cealalt! caten!. Leg!turile de hidrogen dintre bazele azotate, duble, ntre adenin! "i timin! (A = T) "i triple ntre guanin! "i citozin! (G & C), de"i sunt leg!turi slabe, sunt destul de numeroase de-a lungul macromoleculei de ADN pentru a-i asigura stabilitatea "i coeziunea. Leg!turile chimice slabe, cum sunt cele de hidrogen, sunt eficiente numai n cazul moleculelor complementare, cum este ADN "i anume cnd o protuberan#! a unei molecule intr! ntr-o cavitate a altei molecule. Luate separat, moleculele pirimidinice sunt mai mici dect cele purinice ns! cuplurile purin!-pirimidin! sunt de aceea"i dimensiune, conferind macromoleculei de ADN regularitate "i stabilitate. Macromolecula de ADN este stabil! la temperaturile fiziologice, datorit! num!rului mare de leg!turi chimice "i faptului c! moleculele de baze azotate se g!sesc n interiorul moleculei contactul lor cu apa fiind limitat.
62

3.3.2. Alte tipuri de ADN

Arhitectura molecular! a ADN stabilit! de Watson "i Crick a fost confirmat! printr-un mare num!r de m!sur!tori fizice. Modelul propus de cei doi autori presupune mperecherea A-T, C-G "i o r!sucire a celor dou! catene n sensul acelor de ceasornic, deci o dubl! elice de dreapta (dextrors!) (ADN - D). Cercet!rile recente bazate pe perfec#ionarea metodelor de analiz! (difrac#ia n raze X) "i a celor de sintez! "in vitro" a unor fragmente scurte de ADN, au dus la descoperirea mai multor tipuri conforma#ionale de ADN, determinate de mperecheri "nelegitime" dintre bazele azotate (C-C, A-G), nlocuirea bazelor azotate cu analogi ai acestora sau schimbarea modului de r!sucire a dublei elice. Tipurile de ADN ce au la baz! dubla elice de dreapta, dar se deosebesc prin unele propriet!#i fizice au fost notate cu A, B, C "i D, iar tipul de ADN ce posed! dou! catene cu r!sucire spre stnga s-a notat cu Z. ADN de tip A se apropie mult de structura ADN originar, bazele azotate avnd ns! o nclina#ie ntr-un unghi de 20 fa#! de axul moleculei, ceea ce determin! modificarea pasului elicei (2,8 n loc de 3,4 ) "i a num!rului de baze pe tur de elice (11 baze n loc 10). ADN de tip B este aproape identic cu modelul originar. Cea mai mare parte din ADN celular este de tipul B. ADN de tip C este tot o dubl! elice de dreapta n care for#ele de "mperechere" a bazelor azotate sunt mult mai slabe, ceea ce modific! conforma#ia moleculei de ADN n lungime. Este ntlnit! n unele genomuri virale. ADN de tip D mai pu#in cunoscut, este o dubl! elice dextrors! cu un unghi mare de r!sucire (45). ADN-Z a fost descris de Rich "i Itakura n 1980 (Zarnea, G., 1986). Acest ADN posed! dou! catene care afecteaz! o r!sucire elicoidal! spre stnga, datorit! att unor leg!turi ntmpl!toare ntre G-C, ct unei frecven#e mai mari n molecul! a acestui cuplu de baze. Diferen#ele dintre ADN-B "i ADN- Z nu sunt fixe, fiind posibil! transformarea reversibil! a celor dou! tipuri. Forma Z a ADN bicatenar a fost descris! la un num!r mic de specii: n cromozomii gigantici de la Drosophila melanogaster, Chironomidae "i n cromozomii umani. Analizndu-se fragmente de ADN s-a putut constata c! ntr-un ADN-Z pot exista scurte fragmente de ADN-B, diferen#ele dintre fragmente fiind u"or de depistat prin mijloace adecvate, de nalt! rezolu#ie, datorit! modific!rii pasului elicei, nclin!rii bazelor azotate "i a ordinii de succesiune a acestora. Aceasta face posibil! recunoa"terea acestor zone de c!tre sistemele enzimatice implicate n reglajul activit!#ii genelor: schimbarea direc#iei de r!sucire a ADN la nceputul unei gene ar determina ncetarea activit!#ii genei respective, controlul activit!#ii genelor fiind foarte riguros.
63

Exist! "i ipoteza c! n aceste zone de tranzi#ie se pot ata"a cu o mai mare frecven#! substan#ele mutagene "i cancerigene, fapt ce ar putea explica baza molecular! a mutagenezei cu o frecven#! mai mare. n celulele eucariote, pe lng! ADN nuclear, exist! n organitele citoplasmatice ADN specific acestora: ADN mitocondrial (ADN-mt) "i ADN cloroplastic (ADN-cl). ADN - mitocondrial (ADN - mt) este bicatenar "i de form! circular!, asem!n!tor ntr-o mare m!sur! cu ADN bacterian. ADN-mt nu este complexat cu histone, n electronografii ap!rnd ca ni"te fibrile cu un diametru de 25-30 . ADN-mt al metazoarelor este de tip A-T, con#inutul n G-C fiind variabil. Dublul helix de ADN-mt are o caten! grea, bogat! n resturi de A "i o caten! u"oar! bogat! n resturi de T. ADN-mt este singurul tip de ADN circular ce are n secven#a sa ribonucleotide covalent integrate, ceea ce-l face sensibil la uree "i ribonucleaz!, modificnd forma moleculei "i oferind locuri speciale de recunoa"tere pentru polimeraze. M!rimea moleculei de ADN-mt variaz! n func#ie de specie la organismele inferioare avnd n medie o greutate molecular! de 107 daltoni, ceea ce corespunde la 15.000-17.000 perechi de baze. La plantele superioare ADN-mt are o greutate molecular! mult mai mare 60-140 x 106 daltoni, iar con#inutul n G-C este uniform (45-47%). Informa#ia genetic! din ADN-mt este foarte compact!, neexistnd secven#e repetitive (introni). Se pare c! pe parcursul evolu#iei intronii au fost elimina#i din ADN-mt. ADN - cloroplastic (ADN-cl). Fiecare cloroplast con#ine cel pu#in o molecul! de ADN-cl localizat! n stroma cloroplastului (zona genofor!). Pot exista mai multe molecule de ADN-cl separate spa#ial, formnd zone genofore separate, ata"ate de un loc (situs) specific al membranei interne a cloroplastului. Cercet!rile efectuate la plantele superioare "i inferioare au ar!tat c! plastomul acestora este format din molecule de ADN-cl, dublu catenare, circulare, cu un perimetru de 40-50 corespunznd unei greut!#i moleculare de 92 x 106 daltoni, respectiv 130 Kilobaze. Un cloroplast are n medie aproximativ 10-14g ADN, ceea ce nseamn! aproximativ 50 copii ale plastomului (Sitte P. "i colab., 1991, dup! Toma N. "i Anghel I., 1985). Prin studii de denaturare "i renaturare sau analiz! biochimic! direct!, s-a constatat c! la plantele inferioare con#inutul n G+C este inferior celui de A+T, n timp ce la plantele superioare con#inutul de G+C poate fi egal sau pu#in mai ridicat fa#! de cel de A+T. Experien#ele de hibridare molecular! ADN-ADN au demonstrat c! ntre ADN nuclear "i cel cloroplastic exist! un anumit grad de omologie. n ceea ce prive"te replicarea ADN-cl, are loc dup! modelul semiconservativ, bidirec#ional, independent de replicarea ADN nuclear. ADN-cl se replic! o singur! dat!, att n timpul gametogenezei, n gametul femel, n timp ce ADN-cl con#inut de gametul mascul nu se replic!. n dezvoltarea ontogenetic!, ADN-cl provenit de la genitorul matern se replic! "i este deci men#inut, n timp ce
64

ADN-cl de provenien#! patern! (n cantit!#i foarte mici) este degradat enzimatic; n acest fel se explic! transmiterea pe linie matern! a genelor din ADN-cl. ADN-cl cuprinde cteva sute de gene, genomul cloroplastic fiind mult mai mare dect cel mitocondrial, avnd "i un rol mult mai complex n formarea "i metabolismul cloroplastului "i a celulei, existnd "i o cooperare complex! ntre acesta "i nucleu. ADN-satelitic (ADN-S). Acest tip de ADN formeaz! blocuri de unit!#i repetitive (cteva milioane) n zona centromerului "i a satelitului. Num!rul de secven#e repetitive variaz! de la o specie la alta de la 1% pn! la 5% per genom. ADN-satelitic de#ine func#ia de reglare a replic!rii ADN cromozomic, replicare ce presupune participarea proteinelor histonice. ADN-bicatenar-circular este caracteristic cromozomului bacterian "i unor plasmide prezente n celulele procariote, cum ar fi plasmidele F, R sau Col. Dimensiunile acestui ADN sunt variabile de la o specie la alta. Avantajele structurii circulare nu sunt cunoscute. Se presupune c! aceast! structur! asigur! protec#ia moleculei de ADN fa#! de degradarea enzimatic! prin exonucleaze care ac#ioneaz! asupra extremit!#ilor libere ale moleculei. ADN monocatenar. Exist! unele virusuri a c!ror material genetic este reprezentat de un ADN monocatenar. Astfel, la virusul x174, molecula de ADN monocatenar! are o greutate molecular! de 3 x 106 daltoni, are o form! circular! "i nu liniar!. Ulterior s-au descoperit "i al#i bacteriofagi a c!ror material genetic este reprezentat de un ADN monocatenar: bacteriofagul S13 "i bacteriofagul F1. Structura monocatenar! a ADN de la aceste virusuri constituie o excep#ie reprezentnd o adaptare la via#a specific parazitar! a acestora.

3.3.3. Acidul ribonucleic (ARN)

Structura chimic$ a moleculei de ARN. Acidul ribonucleic (ARN) are o structur! chimic! asem!n!toare cu cea a acidului dezoxiribonucleic (ADN). n structura chimic! a ARN intr! trei componente: bazele azotate, zaharul "i radicalul fosforic. Bazele azotate sunt: purinice, adenina (A) "i guanina (G) "i pirimidinice, citozina (C) "i uracilul (U). Deci o prim! deosebire structural! ntre ADN "i ARN este prezen#a uracilului n locul timinei. Uracilul are o structur! destul de apropiat! de cea a timinei. Zaharul care intr! n structura moleculei de ARN este riboza, care are o form! ciclic!. Combinarea unei baze azotate cu zaharul d! na"tere unui ribonucleosid, iar prin ad!ugarea unui radical fosfat rezult! un ribonucleotid. O alt! deosebire important! ntre ADN "i ARN este faptul c! macromolecula de ARN este monocatenar!, fiind format! dintr-un singur lan# poliribonucleotidic. Acest fapt face ca bazele azotate purinice s! nu fie n cantitate egal! cu cele piridimice. 'innd seama de rolul pe care l ndepline"te ARN se apreciaz! c! sunt dou! categorii: acidul ribonucleic viral (ARNv) "i acidul ribonucleic celular, implicat n sinteza proteinelor.
65

Acidul ribonucleic celular este de trei tipuri: acidul ribonucleic mesager (ARNm), acidul ribonucleic de transport sau solubil (ARNt) "i acidul ribonucleic ribozomal (ARNr). Acidul ribonucleic viral (ARNv) constituie materialul genetic al unor ribovirusuri cum ar fi: virusul mozaicului tutunului (VMT), virusul gripal, virusul poliomielitei, virusul stomatitei veziculare, bacteriofagii F2, R17, QB "i altele. Studiindu-se molecula de ARNv de la virusul mozaicului tutunului s-a determinat c! este alc!tuit! din aproximativ 6.000 ribonucleotide, ntr-o anumit! ordine, determinnd con#inutul mesajului genetic. La mai multe virusuri molecula de ARNv este format! din dou! catene complementare nf!"urate elicoidal n jurul unui ax imaginar. Molecula de ARNv este n general liniar!, cu excep#ia virusului encefalomielitei "oarecilor, la care molecula de ARNv este circular!. A"a cum s-a ar!tat ntr-o experien#! anterioar!, n momentul infec#iei virale, n interiorul celulei infectate p!trunde numai molecula de ARNv, care are capacitatea de a se multiplica, avnd rolul de matri#! pentru formarea unor molecule noi, de#innd "i informa#ia genetic! necesar! sintezei proteinei virale. Acidul ribonucleic mesager (ARNm). A fost descoperit n celulele bacteriene infectate cu bacteriofagi, apoi n toate celulele organismelor. A. D. Hershey "i colab. (1953) au ajuns la concluzia c! sinteza ARNm este dependent! de ADN. Ei au identificat ntr-o celul! bacterian! infectat!, pe lng! ADN "i o mic! cantitate de ARN, care era complementar ADN. Acest tip de ARN are rolul de a copia informa#ia ereditar! de pe o por#iune din molecula ADN "i de a o transmite n citoplasm! la ribozomi, organite citoplasmatice la nivelul c!rora are loc sinteza proteinelor. De aceea acest tip de acid ribonucleic a fost denumit ARN mesager (messenger ARN), prescurtat ARNm (F. Jacob "i J. Monod, 1961). Acidul ribonucleic mesager se sintetizeaz! n procesul de transcrip#ie a informa#iei genetice. Cercet!rile genetice au stabilit c! ARNm are o durat! foarte scurt!, fiind foarte repede sintetizat, dar "i foarte repede distrus. Molecula de ARNm se asociaz! cu ribozomii "i formeaz! complexe denumite poliribozomi. Se afirm! c! n perioada asocierii ARNm cu ribozomii, molecula nu este supus! degrad!rii. Lungimea catenei de ARNm este foarte variabil!, deci "i masa molecular! este variabil!, n func#ie de lungimea segmentului de ADN de pe care este copiat! informa#ia genetic!. Acidul ribonucleic solubil sau de transfer (ARNs sau ARNt). Acest tip de acid ribonucleic are o structur! chimic! asem!n!toare cu a celorlalte tipuri de ARN. Are o greutate molecular! mic! "i anume 25.000 daltoni, avnd 75-90 nucleotide, este solubil n solu#ie de NaCl, de aceea i s-a dat numele de ARN solubil. Rolul ARNs este de a transporta aminoacizii din citoplasm! la ribozomi, n procesul de sintez! a proteinelor. Molecula de ARNs are la un cap!t tripleta citozin!-citozin!-adenin! (CCA), iar la cel!lalt cap!t are un nucleotid ce con#ine guanina (G). Molecula
66

ARNs este monocatenar!, dar are "i por#iuni bicatenare datorit! leg!turilor de hidrogen dintre A-U "i G-C, dndu-i forma caracteristic! a unei frunze de trifoi. R. W. Holley de la Universitatea Cornell (SUA) a determinat, n anul 1965, ordinea nucleotidelor unui ARNs care transport! alanina la ribozomi, la drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae) (fig. 3.4.):

Fig. 3.4. Structura ARN-s ce transport! alanina la ribozomi la drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae)

Spre deosebire de celelalte tipuri de ARN, acidul ribonucleic solubil are o serie de particularit!#i chimice: con#ine o serie de nucleotide neobi"nuite, baze ce au gruparea metilic! cum ar fi: 1-metilguanina, N-dimetilguanina, 1metilhipoxantina, hipoxantina, pseudouracilul "i altele. Macromolecula de ARNs are trei regiuni distincte pentru recunoa"terea moleculelor sau structurilor celulare: a) Regiunea pentru recunoa"terea aminoacidului este situat! pe bra#ul cu codonul CCA de la un cap!t al moleculei. Aminoacidul se fixeaz! de aceast! regiune cu ajutorul enzimei aminoacil - ARNs - sintetaza, care are o structur! foarte variat! de la un organism la altul, existnd cte o enzim! pentru fiecare aminoacid. b) Regiunea anticodonului este format! dintr-o triplet! de nucleotide complementar! unui codon din ARNm. Num!rul anticodonilor este egal cu cel al codonilor. c) Regiunea pentru recunoa"terea ribozomului este alc!tuit! dintr-o secven#! de cinci nucleotide: G-T-P-C-G (P-pseudouracilul). Aceast! regiune realizeaz! leg!tura cu ribozomul n timpul procesului de sintez! a proteinelor.
67

Sinteza ARNs este determinat! de genele din cromozomi, gene care se g!sesc ntr-un num!r mare de copii. Teoretic ar trebui s! existe attea tipuri de ARNs cte tipuri de codoni exist!, dar n realitate num!rul lor este mai mic deoarece sunt "i codoni care servesc pentru punctua#ie sau sunt sinonimi. Acidul ribonucleic ribozomal (ARNr). Acidul ribonucleic ribozomal (ARNr) reprezint! aproximativ 85% din cantitatea total! a ARN din celul!, fiind localizat numai n ribozomi. O caracteristic! important! a ARNr este aceea c! se g!se"te ntotdeauna asociat cu proteinele. ARNr a fost izolat din ribozomii purifica#i de Escherichia coli "i s-a stabilit c! are o greutate molecular! de 5 x 106, nefiind purt!tor al informa#iei genetice. Ribozomii sunt structuri submicroscopice celulare, fixate pe reticulul endoplasmatic, constituind locul sintezei proteice. Structura ribozomului este foarte complex!, fiind alc!tuit la procariote din dou! subunit!#i: o subunitate mare de 50 S "i o subunitate mic! de 30 S. Subunitatea mare este alc!tuit! dintr-o molecul! foarte mare de ARNr, format! din aproximativ 3200 nucleotide, dintr-o molecul! mai mic! cu 120 nucleotide "i 34 proteine diferite. Subunitatea mic! este format! dintr-o molecul! mare de ARNr compus! din 1600 nucleotide "i 21 proteine diferite. La eucariote, ribozomul este mai mare "i anume 80 S, subunitatea mic! (40 S) are o molecul! de ARNr "i 30 de proteine diferite, iar subunitatea mare (60 S) are dou! frac#ii de ARNr "i 37 proteine. Acidul ribonucleic ribozomal are o structur! bicatenar! n propor#ie de 60-70% iar restul are o structur! monocatenar!. Sinteza ARNr se realizeaz! prin genele din ADN specializate n acest sens "i a c!ror num!r este foarte mare datorit! necesit!#ii de a se sintetiza o cantitate mare de ARNr ntr-un timp scurt. Astfel, la Drosophila melanogaster exist! 130 de gene ce r!spund de sinteza ARNr, la Xenopus laevis 450, la Zea mays 5200, la Triticum aestivum 12700, la Hyacinthus orientalis 32000 gene. Num!rul de ribozomi din celulele procariotelor este de aproape 15000 iar la eucariote chiar mai mare, explicndu-se astfel necesitatea unui num!r mare de gene ce r!spund de sinteza unor frac#ii de ARNr.

3.3.4. Denaturarea &i renaturarea ADN

nc!lzirea unei solu#ii de ADN la temperaturi de peste 65C, determin! ruperea leg!turilor de hidrogen dintre bazele azotate, cele dou! catene se separ! rezultnd un ADN monocatenar, iar fenomenul se nume"te denaturare. Temperatura la denaturare variaz! de la o specie la alta, de exemplu la Drosophila melanogaster este de 86C, la Escherichia coli 90C, Mycobacterium phlei 97C. Dac! solu#ia respectiv! este r!cit! brusc, ADN r!mne monocatenar, fiind numit ADN denaturat. Dac! solu#ia se r!ce"te treptat, leg!turile de hidrogen se refac, rezultnd un ADN renaturat, iar fenomenul se nume"te renaturare. Aceste dou! fenomene au o importan#! deosebit! pentru realizarea de hibrizi moleculari ADN-ADN sau ADN-ARN.
68

Hibrizii moleculari ADN-ADN, dar de la specii diferite, ne dau informa#ii despre gradul de nrudire al speciilor respective. Hibridarea ADN-ARN permite localizarea pe cromozomi a genelor ce intervin n sinteza diferitelor tipuri de ARN.

3.3.5. Specificitatea ADN

n urma determin!rii cantit!#ii de ADN din nucleul procariotelor "i eucariotelor s-a putut observa c! acesta variaz! foarte mult de la o specie la alta. n general, procariotele au o cantitate mai mic! de ADN fa#! de eucariote, deoarece organismele superioare au nevoie de o cantitate mai mare de informa#ie genetic! pentru cre"tere, dezvoltare "i reproducere. n molecula de ADN raportul dintre bazele azotate purinice "i bazele azotate pirimidinice A/T "i G/C este constant "i egal cu 1 (E. Chargaff, 1951). Deosebirile ce exist! ntre ADN de la diferite specii const! n faptul c! raportul dintre A+T/G+C este foarte variabil. La plantele "i animalele superioare acest raport este n favoarea bazelor A+T. La speciile nrudite "i raportul A+T/G+C este apropiat, ceea ce arat! c! la acestea succesiunea nucleotidelor este asem!n!toare. Diferen#ele privind secven#a de nucleotide asigur! deosebirile genetice dintre specii.

3.3.6. Replica%ia ADN

Una dintre nsu"irile de baz! ale macromoleculei de ADN este cea de replica#ie sau autoreplica#ie, constituind func#ia autocatalic! a materialului genetic. La eucariote, replicarea ADN "i deci a genelor care nu sunt dect segmente de ADN, are loc n timpul diviziunii mitotice, asigurndu-se transmiterea exact! de la o genera#ie la alta a caracterelor ereditare. Studiul ciclului mitotic a relevat existen#a unei varia#ii regulate a cantit!#ii de ADN iar pe aceast! baz! ciclul celular a fost mp!r#it n urm!toarele etape: M - mitoza, G1 - perioada anterioar! sintezei de ADN (gol sintetic), S perioada sintezei de ADN "i G2 - perioada de postsintez!. Dup! telofaz! n G1 cantitatea de ADN r!mne constant! "i egal! cu 2C (dou! catene). Biosinteza proteic! ce are loc n aceast! perioad! determin! cre"terea celulei, are loc sinteza de ADN "i deci a unor proteine specifice ce declan"eaz! mitoza. n perioada S se produce replicarea ADN, care se ncheie prin dublarea cantit!#ii de ADN, egal! cu 4 C (patru catene). n timpul profazei "i metafazei mitotice, cantitatea de ADN r!mne constant! iar n anafaz!, cnd cromozomii migreaz! spre cei doi poli, se mparte n dou!, fiecare celul! avnd o cantitate de ADN egal! cu cea din celula mam!. Diviziunea meiotic! determin! o reducere la jum!tate a cantit!#ii de ADN n game#i. Cantitatea dubl! de ADN se reface n momentul fecund!rii game#ilor, cnd rezult! zigotul diploid.
69

J. D. Watson "i F. H. Crick (1953) n urma elabor!rii modelului structural al moleculei de ADN au emis "i ipoteza replic!rii acestuia dup! tipul semiconservativ. Acest tip de sintez! const! n ruperea pun#ilor de hidrogen dintre cele dou! catene complementare. Fiecare caten! serve"te ca matri#! pentru sinteza unei catene noi. n final, dintr-o molecul! veche de ADN vor rezulta dou! molecule, dar care sunt noi numai pe jum!tate. Au mai fost emise "i alte ipoteze de replicare a macromoleculei de ADN. Un asemenea tip ar fi cel conservativ conform c!ruia molecula veche de ADN serve"te ca model pentru sinteza unei molecule complet noi. O alt! ipotez! consider! c! replicarea ADN se realizeaz! dup! tipul dispersiv. Conform acestui model, molecula de ADN se desface n p!r#ile componente "i mpreun! cu nucleotidele din celul! particip! la formarea a dou! molecule de ADN, care vor con#ine att nucleotide vechi ct "i nucleotide noi. Modelul replic!rii dup! tipul semiconservativ propus de Watson "i Crick, asigur! o mare fidelitate n sinteza noilor molecule de ADN. Termenul de replica#ie deriv! de la faptul c! n acest proces fiecare caten! serve"te ca matri#! pentru catenele noi sintetizate, informa#ia genetic! fiind transmis! fidel noilor molecule. Sinteza ADN dup! tipul semiconservativ se realizeaz! astfel: la o extremitate sau ntr-un punct oarecare al macromoleculei de ADN, pun#ile de hidrogen se rup, fenomen ce continu! pe toat! lungimea moleculei, asem!n!tor desfacerii unui fermoar. Fiecare caten! se r!suce"te n spa#iu cu 180, prin rotirea nucleotidelor n planul exterior, n jurul radicalului fosforic. n citoplasm! se g!sesc sintetizate cele patru tipuri de nucleotide care con#in bazele azotate purinice "i pirimidinice: adenin!, guanin!, citozin! "i timin!. Pe baza fenomenului de complementaritate dintre bazele azotate purinice "i pirimidinice, o nucleotid! care con#ine adenin! se va lega prin pun#i de hidrogen de una ce con#ine timin!, iar una ce con#ine guanin! se va lega de una ce con#ine citozin!. n final, paralel cu catenele vechi s-au sintetizat dou! catene noi, rezultnd dou! molecule fiice, identice cu molecula mam! (fig. 3.5.). Replicarea macromoleculei de ADN se realizeaz! n trei etape: n prima etap! are loc sinteza precursorilor nucleotidelor ce intr! n alc!tuirea ADN de tipul acidului uridilic "i acidului inosinic; n etapa a doua are loc sinteza nucleotidelor propriu-zise ce intr! n structura ADN: dezoxiadenozintrifosfat, dezoxiguanozintrifosfat, dezoxicitidintrifosfat "i dezoxitimidintrifosfat; n etapa a treia are loc polimerizarea nucleotidelor sub controlul Fig. 3.5. Modelul replic!rii enzimei ADN-polimeraza. semiconservative a un diametru de circa 65 , mult mai mare dect a moleculei Enzima are macromoleculei de " ADN de ADN (20 ) i este format! din circa 1000 aminoacizi. Enzima ADN70

polimeraza determin! esterificarea oxidrilului de la carbonul 3' al catenei polinucleotidice de c!tre fosfatul ce esterific! oxidrilul de la carbonul 5' al nucleotidei, a"a nct dac! catena veche are polaritatea 5 % 3', catena nou sintetizat! va avea polaritatea invers! 3' % 5'. S-au descoperit mai multe tipuri de polimeraze (I, II, III), unele din ele intervenind n procesul de reparare a macromoleculei de ADN, atunci cnd unele nucleotide au fost ncatenate n mod eronat. Pentru desf!"urarea procesului de replica#ie este necesar! o anumit! cantitate de energie. Aceast! energie provine din hidroliza acidului adenozintrifosforic (ATP) n acidul adenozindifosforic (ADP) "i un radical fosforic (P). O parte din energia rezultat! se pierde sub form! de c!ldur!. Pentru ca pierderile s! fie ct mai mici, n celul! exist! un grup de enzime denumite transferaze, care au rolul de a transfera grupe func#ionale de la o molecul! la alta. Astfel ATP transfer! energia sa c!tre GTP care este un precursor n sinteza acizilor nucleici, devenind o molecul! activat!. n celule exist! o enzim! puternic! denumit! pirofosfataz$, care rupe leg!tura de nalt! energie dintre radicalii de fosfor (P P) elibernd-o (P P % P + P + 7 kcal/mol). Pentru unirea a dou! nucleotide se consum! 0,5 kcal/mol, restul de 6,5 kcal/mol r!mne ca energie liber! ce p!streaz! echilibrul termodinamic al macromoleculei de ADN.

3.3.7. Replica%ia acizilor nucleici la bacterii &i virusuri

Celula bacterian! con#ine un singur cromozom circular format dintr-o macromolecul! de ADN cu o lungime de aproape 1000 . n timpul replica#iei la bacterii macromolecula de ADN "i p!streaz! forma circular!. Geneticienii M. Meselsohn "i F. W. Stahl (1958) au elucidat mecanismul de replica#ie al ADN de la bacterii prin marcarea acestuia cu izotopi radioactivi. Eu au folosit izotopul stabil al azotului N15, care se poate izola destul de u"or de azotul obi"nuit N14, prin ultracentrifugare. Bacteria Escherichia coli a fost cultivat! pe un mediu ce con#inea clorur! de amoniu marcat! cu N15. Dup! prima diviziune a bacteriilor, au fost trecute pe mediu ce con#inea N14 "i au fost l!sate s! se divid! de 1-3 ori. Dup! num!rul de bacterii din cultur! se poate determina num!rul de diviziuni. Dup! aceea bacteriile au fost lizate "i introduse ntr-o ultracentrifug!. Sa constatat c! bacteriile crescute pe mediu cu N15 aveau ADN marcat numai cu N15, iar dup! ce au fost trecute pe mediu cu N14, dup! prima diviziune exista o frac#ie de ADN hibrid, avnd o greutate molecular! intermediar!. Dup! cea de a doua diviziune celular!, 50% din ADN con#ine N14 "i 50% N15, iar dup! cea de a treia diviziune 75% con#inea N14 "i 25% hibrid. Aceste rezultate au demonstrat c! replicarea cromozomului bacterian se realizeaz! dup! modelul semiconservativ. Procesul de replica#ie a cromozomului bacterian ncepe ntr-un punct al acestuia denumit replicator, care este ata"at de membrana celular! ntr-o regiune denumit! mezozom.
71

La bacterii, fiecare diviziune a bacteriei este precedat! de o singur! derulare complet! a cromozomului circular. La virusuri s-a constatat c! acest proces de derulare a cromozomului se repet! de mai multe ori, rezultnd mai nti o forma#iune liniar!, lung!, care apoi se fragmenteaz! "i rezult! cromozomi circulari. Unele virusuri au ca material genetic o molecul! de ADN monocatenar (x174, S 13, F etc.). La aceste virusuri, procesul de replica#ie decurge astfel: n momentul n care ADN monocatenar notat cu (+) p!trunde n celula bacterian! infectat!, serve"te ca matri#! pentru sinteza unei catene complementare notat! cu (-). n interiorul bacteriei infectate a rezultat un ADN dublu catenar, dar numai catena (-) serve"te ca matri#! pentru sinteza catenelor (+) ale virusului. Exist! virusuri a c!ror material genetic este reprezentat de ARNv, care are o structur! monocatenar!. Replica#ia acestui ARN n cazul ribovirusurilor este asem!n!toare cu replica#ia ADN monocatenar de la virusul phi x 174. Studiindu-se, de exemplu, ciclul de via#! al ribovirusului F2, s-a constatat c! dup! p!trunderea ARNv monocatenar notat cu (+) n celula bacterian!, se ata"eaz! de ribozomi, pentru a declan"a sinteza enzimei necesare desf!"ur!rii procesului de replica#ie, ARN-polimeraza. Pe matri#a catenei (+) se formeaz! o caten! complementar! notat! cu (-), iar pe matri#a acesteia se formeaz! un num!r mare de molecule de ARNv (+). O parte din aceste molecule de ARNv (+) se ata"eaz! de ribozomi, sintetizndu-se proteinele virale dup! care are loc unirea ARNv cu acestea rezultnd un num!r foarte mare de fagi ce distrug celula gazd! (liza bacteriei).

3.3.8. Sinteza acizilor nucleici "in vitro"

Sinteza artificial! a acizilor nucleici a fost realizat! de A. Kornberg (1954) "i S. Ochoa "i M. Grnberg-Manago (1955). A. Kornberg a fost distins cu premiul Nobel (1959) pentru aceast! realizare. Pentru realizarea sintezei "in vitro" a macromoleculei de ADN sunt necesare urm!toarele componente: dezoxiribonucleotidele celor patru baze azotate, sistemul enzimatic format din ADN-polimeraza, ioni de magneziu (Mg2+) "i o cantitate mic! de ADN cu un grad nalt de polimerizare folosit ca amors! (primer) "i matri#! pentru ADN nou sintetizat. Ca amors! poate fi folosit un ADN monocatenar sau un ADN bicatenar, dar n al doilea caz, molecula bicatenar! trebuie denaturat! cu ajutorul c!ldurii. n condi#ii favorabile de reac#ie s-a sintetizat o cantitate mai mare de 10 ori de ADN dect cea folosit! drept amors!. ADN sintetizat artificial este identic cu cel folosit drept amors!, n privin#a raportului dintre bazele azotate, ns! aceste molecule au fost inactive biologic. Lipsa activit!#ii biologice a ADN sintetizat "in vitro" este pus! pe seama ADN-polimerazei, care con#ine mici cantit!#i de dezoxiribonucleaz!, enzim! ce degradeaz! par#ial molecula de ADN. n anul 1968 A. Kornberg a reu"it s! sintetizeze "in vitro" ADN monocatenar, activ biologic, "i anume o molecul! de ADN viral, identic! cu ADN monocatenar al virusului phi x 174. Pentru aceasta, n mediul de reac#ie s-au
72

introdus: ADN-polimeraza, ADN monocatenar izolat de la virusul phi x 174, ca amors!, precursorii dezoxiribonucleotidelor "i polinucleotidligaza, enzim! necesar! realiz!rii formei inelare a ADN viral. S-au ob#inut monocatene negative (-) complementare catenelor ini#iatoare (+), care formau un helix dublu, circular. Prin utilizarea unor enzime s-au izolat o serie de catene (-), care au fost utilizate apoi ca matri#e pe sinteza unor catene (+) biologic active, cu nsu"irea de a ini#ia multiplicarea virusului. n anul 1955 M. Grnberg-Manago "i S. Ochoa, au realizat sinteza "in vitro" "i a macromoleculei de ARN, dup! aceea"i metod! folosit! pentru sinteza ADN. Elementele mediului de reac#ie sunt: ribonucleotidele, enzima ADNfosforilaza "i ioni de magneziu. Ca matri#! pentru sinteza ADN "in vitro" s-a folosit o molecul! de ADN monocatenar. Sinteza artificial! a acizilor nucleici deschide perspective mari n nlocuirea unor "gene defecte", prin segmente de ADN nou sintetizate.

3.4. CODUL GENETIC

Dup! descoperirea structurii macromoleculei de ADN "i a nsu"irii ei de a se replica cu mare fidelitate, mul#i geneticieni "i-au pus ntrebarea dac! informa#ia genetic! nu este codificat! ntr-un anumit fel prin secven#a de nucleotide, ce rela#ii se stabilesc ntre cele patru tipuri de nucleotide "i aminoacizii din lan#urile polipeptidice. Ciberneticianul G. Gamow (1954) este primul care a descoperit leg!tura dintre secven#a de nucleotide din ADN "i ordinea aminoacizilor, emi#nd ipoteza c! n macromolecula de ADN se g!se"te codificat! biochimic informa#ia genetic!, necesar! sintezei moleculelor proteice. n general, prin informa#ie se n#elege un mesaj, mai mult sau mai pu#in cuprinz!tor, despre o serie de fenomene care au avut loc, au loc sau vor avea loc ntr-un sistem biologic sau tehnic. Aceste informa#ii sunt nregistrate, stocate "i apoi transmise printr-un sistem de codificare. De exemplu, codul Morse, folose"te un sistem de linii "i puncte pentru codificarea literelor "i cuvintelor. Proteinele sunt alc!tuite din lan#uri polipeptidice formate din 20 de aminoacizi a c!ror succesiune este specific! pentru fiecare protein!. Prin schem! teoretic! a unui cod genetic a fost elaborat! de G. Gamow (1954). Potrivit concep#iei acestuia, codificarea celor 20 de aminoacizi nu se poate realiza de un singur nucleotid (41=4) "i nici de grupe formate din cte dou! nucleotide (42=16), pentru c! n ambele cazuri num!rul total de combina#ii este mai mic dect num!rul aminoacizilor. Ca urmare, el a considerat c! numai secven#e de cte trei nucleotide (43=64) pot realiza codificarea celor 20 de aminoacizi (tabelul 3.1.). Grupul de trei nucleotide care codific! un aminoacid a primit denumirea de codon. n cazul codului de tip triplet, num!rul codonilor este 64, dep!"ind de trei ori num!rul aminoacizilor, fapt ce confer! o mare eficien#! "i plasticitate n recunoa"terea aminoacizilor.
73

n perioada care a urmat, o serie de geneticieni au adus numeroase dovezi experimentale privind codificarea informa#iei ereditare, deci a rela#iei nucleotide-aminoacizi, culminnd cu descifrarea n totalitate a codului genetic. Primele dovezi experimentale ale rela#iei nucleotide-aminoacizi, au fost aduse prin studiul unor muta#ii, induse cu acid nitros, la virusul mozaicului tutunului (VMT). La acest virus capsida este format! din 2150 catene polipeptidice identice, fiecare con#innd cte 158 aminoacizi. Acidul nitros induce muta#ii de tipul tranzi#iilor (nlocuirea unei baze purinice cu o baz! purinic! sau nlocuirea unei baze pirimidinice cu o baz! pirimidinic! n catena acizilor nucleici) "i anume A ( G sau C ( U. Tabelul 3.1. Diferite tipuri teoretice de coduri
Codul monotipic (4 combina#ii) A G C U Codul cu dublete (16 combina#ii) AA GA CA UA AG GG CG UG AC GC CC UC AU GU CU UU AAA AGA ACA AUA GAA GGA GCA GUA CAA CGA CCA CUA UUA UGA UCA UUA Codul cu triplete (64 combina#ii) AAG AGG ACG AUG* GAG GGG GCG GUG* CAG CGG CCG CUG UAG UGG UCG UUC AAC AGC ACC AUC GAC GGC GCC GUC CAC CGC CCC CUC UAC UGC UCC UUC AAU AGU ACU AUU GAU GGU GCU GUU CAU CGU CCU CUU UAU UGU UCU UUU

* codoni ini#iatori ai sintezei unei catene polipeptidice codoni nonsens, care nu codific! nici un aminoacid reprezentnd codonii terminali ai sintezei unei catene polipeptidice Apari#ia acestor muta#ii la nivelul nucleotidelor din ARNv al virusului, care ndepline"te rolul de ARNm, apar modific!ri n secven#a aminoacizilor din catena polipeptidic!. Aceste modific!ri sunt de tipul substitu#iei unor aminoacizi: Prolin! Serin! Fenilalanin! sau Prolin! Leucin! Fenilalanin! S-a dedus c! prolina este codificat! de un codon, la care cel pu#in dou! nucleotide sunt fie A fie C. Tranzi#ia A ( G sau C ( U a uneia din aceste nucleotide genereaz! codonul serinei "i respectiv al leucinei. n codonul fenilalaninei, ambele nucleotide trebuie s! fie G sau U.
74

Studiile efectuate la mutantele induse cu proflavin! la bacteriofagul T4, n cadrul genei rIIB, au demonstrat c! unitatea care codific! un aminoacid este o triplet! de nucleotide (codon). Descifrarea codului genetic a fost posibil! "i prin folosirea unor ARNm sintetiza#i artificial, care con#ineau o secven#! cunoscut! de nucleotide, pe baza c!rora au fost sintetizate proteine. Experien#e de acest fel au fost realizate de M. W. Nirenberg "i J. H. Matthaei (1961). Ei au reu"it s! sintetizeze o caten! de polifenilalanin!, folosind un ARNm artificial care con#inea numai nucleotide cu uracil (U), dovedind c! tripleta (UUU) codific! aminoacidul fenilalanin!. S-au folosit apoi ARNm artificiali ce con#ineau o secven#! de dou! nucleotide cunoscute. De exemplu, ARN artificial ce con#ine secven#a UGUGUG, determin! sinteza unui lan# polipeptidic n care alterneaz! cisteina "i valina, deci cisteina este codificat! de codonul UGU iar valina de GUG (figura 3.6.).
Prima nucleotid! a codonului 5' A treia nucleotid! a codonului 3' Cis Non 3 Tri Arg U C A G U C A G U C A G U C A G

A doua nucleotid! a codonului U UUU UUC UCU UCC UCA UCG CCU CCC CCA CCG ACU ACC ACA ACG GCU GCC GCA GCG Ser C UAU UAC UAA UAG CAU CAC CAA CAG AAU AAC AAA AAG GAU GAC GAA GAG A UGU UGC UGA UGG CGU CGC CGA CGG AGU AGC AGA AGG GGU GGC GGA GGG G

Fen Leu

Tir Non 2 Non 1 His Glu Asp Liz Ac.asp Ac.glu

UUA UUG CUU CUC CUA CUG AUU AUC AUA AUG GUU GUC GUA GUG

Leu

Pro

Ileu Met Val fMet

Ser Arg

Tre

Ala

Gli

Fig. 3.6. Codul genetic

75

Problema cea mai grea ce a trebuit rezolvat! a fost precizarea pozi#iei nucleotidelor n cadrul codonului, pentru c! cele dou! nucleotide pot forma trei combina#ii: GUU, UGU "i UUG. Exist! mai multe c!i pentru precizarea ordinii nucleotidelor n cadrul codonului, cea mai folosit! fiind studiul muta#iilor de substitu#ie a unor aminoacizi din unele proteine mai bine cunoscute: hemoglobina, proteina virusului mozaicului tutunului, triptofan-sintetaza din Escherichia coli ".a.

3.4.1. Caracteristicile codului genetic

Informa#ia genetic! este codificat! n acidul dezoxiribonucleic (ADN) sau n acidul ribonucleic viral (ARNv) la unele virusuri, sub forma unor secven#e de trei nucleotide (codoni). Informa#ia genetic! este copiat! prin procesul de transcrip#ie de c!tre ARNm iar apoi tradus!, prin procesul de transla#ie, ntr-o secven#! de aminoacizi, n catena polipeptidic!. n prezent sunt cunoscu#i to#i codonii din ARNm, care codific! diferi#i aminoacizi (fig. 3.6). Codul genetic cuprinde 64 de codoni. Doi codoni marcheaz! nceputul sintezei unei catene polipeptidice "i anume AUG "i GUG iar trei codoni sunt nonsens: UAA (ocru), UAG (ambr!) "i UGA (azur). Ace"ti codoni au rolul de a marca terminarea sintezei unei catene polipeptidice (codoni stop). Codul genetic are urm!toarele caracteristici: este universal, degenerat, lipsit de ambiguitate, neacoperit "i f!r! virgule. Prin universalitatea codului genetic se n#elege faptul c! un anumit codon, codific! acela"i aminoacid la orice organism, indiferent de gradul s!u de evolu#ie. Dovada cea mai evident! a universalit!#ii codului genetic a fost urm!toarea: s-a izolat ARNm ce r!spunde de sinteza hemoglobinei la iepure "i s-a injectat n ovocitele de broasc!. S-a constatat c! n ovocitele de broasc! se sintetizeaz! hemoglobina, de"i n mod normal, ovocitele nu sintetizeaz! niciodat! hemoglobin!. Codul genetic este degenerat, n sensul c! mai mul#i codoni codific! acela"i aminoacid. De exemplu, arginina este codificat! de urm!toarele triplete: GGU, GGC, GGA, AGA "i AGG. n ceea ce prive"te importan#a nucleotidelor din codon s-a constatat c! primele dou! sunt cele mai semnificative, n timp ce a treia poate fi u"or nlocuit!. Dac! cea de a treia nucleotid! este o baz! purinic! ea poate fi nlocuit! tot cu o baz! purinic! sau dac! este o baz! pirimidinic!, poate fi nlocuit! tot printr-o baz! pirimidinic!. Diferi#i codoni, care au primele dou! nucleotide identice, pot codifica acela"i aminoacid. Numai metionina "i triptofanul sunt codifica#i de cte un singur codon (AUG "i respectiv UGG). Caracteristica de degenerare a codului genetic, prin care mai mul#i codoni diferi#i codific! acela"i aminoacid, poart! numele de redundan%$, termen preluat din informatic!. Redundan#a const! ntrun exces de informa#ie, ntr-un sistem, pentru a asigura transmiterea corect! a informa#iei, chiar n cazul unor perturb!ri (Hartl D. L. "i colab., 1989).
76

n mod obi"nuit fiecare codon (triplet!) codific! un singur aminoacid. Sa constatat, n unele cazuri, c! un codon poate codifica mai mul#i aminoacizi. A"a este cazul codonilor GCG care codific! alanina "i arginina; CGG-prolina "i arginina; GGA-glicerina "i acidul glutamic; AGG-glicina "i fenilalanina. Se afirm! c! aceast! nsu"ire reprezint! un avantaj evolutiv, deoarece nlocuirea unui aminoacid cu altul printr-o muta#ie, ntr-o caten! polipeptidic! este mai pu#in d!un!toare, dac! cei doi aminoacizi au propriet!#i asem!n!toare. Codul genetic este neacoperit n sensul c! doi codoni vecini nu au nucleotide comune "i este f$r$ virgule, ntre doi codoni nu exist! spa#ii sau al#i codoni care s! joace rolul unor semne de punctua#ie. S-a demonstrat c! citirea mesajului genetic ncepe dintr-un punct fix, se realizeaz! ntr-un singur sens, astfel c!, absen#a unui nucleotid (dele#ie) sau ad!ugarea altuia (adi#ie), schimb! sensul mesajului. Universalitatea codului genetic n lumea vie demonstreaz! pe de o parte vechimea sa "i, totodat!, constan#a sa n timp.

3.5. BIOSINTEZA PROTEINELOR

Proteinele au un rol esen#ial n metabolismul celular, ns!"i func#iile materialului genetic sunt condi#ionate de o serie de enzime sau proteine cu rol structural. Enzimele particip! la replicarea ADN "i ARN, la transcrip#ia informa#iei genetice "i la sinteza proteinelor. Proteinele structurale intr! n alc!tuirea cromozomului, a membranelor celulare, a componentelor celulare, particip! la asamblarea ribozomilor. Procesul de biosintez! a proteinelor este mult mai complex dect cel de sintez! a acizilor nucleici "i cuprinde dou! etape importante: transcrip#ia informa#iei genetice "i transla#ia informa#iei genetice.

3.5.1. Transcrip%ia informa%iei genetice

Transcrip#ia constituie fenomenul prin care informa#ia genetic! de pe o por#iune din catena de ADN este transcris! (copiat!) ntr-o molecul! de ARNm. Transcrip#ia mesajului genetic din molecula de ADN pe cea din ARNm se face ntr-o form! care serve"te ca matri#! pentru sinteza proteinelor. Sinteza ARNm este catalizat! de enzima ARN-polimeraza, enzim! universal! ce a fost identificat! n celulele bacteriene, vegetale "i animale. Mecanismul propriu-zis al transcrip#iei informa#iei genetice din ADN n molecula de ARNm se realizeaz! astfel: enzima ARN-polimeraza se leag! specific ntr-o pozi#ie a moleculei de ADN, ce corespunde cu nceputul unei gene. Leg!turile de hidrogen se rup pe por#iunea genei respective, segmentul respectiv de caten! se rote"te cu 180 n spa#iu, servind ca matri#! pentru sinteza catenei de ARNm. ARN-polimeraza asigur! ncatenarea corect! a ribonucleotidelor existente n nucleu. Odat! cu naintarea ARN-polimerazei de-a lungul matri#ei ADN, se
77

elibereaz! treptat noua caten! n citoplasm!, unde se asociaz! cu ribozomii formnd complexe denumite poliribozomi. Dup! ce s-a realizat transcrip#ia, se refac leg!turile de hidrogen ntre catenele moleculei de ADN. De o foarte mare importan#! este descoperirea c! procesul de transcrip#ie la nivelul unei gene se realizeaz! pe o singur! caten! de ADN. A"a se explic! faptul c! o gen! de#ine informa#ia genetic! necesar! sintezei unei singure proteine. n ceea ce prive"te locul de pe catena de ADN unde se ini#iaz! procesul de transcrip#ie, J. D. Watson (1974) arat! c! ARN-polimeraza este cea care recunoa"te codonii de ini#iere. Spre deosebire de ADN-polimeraza care este format! dintr-un singur lan# polipeptidic, ARN-polimeraza este alc!tuit! din cinci lan#uri polipeptidice notate cu ', , , 2 "i W, fiecare cu o mas! molecular! diferit!. Enzima poate s! catalizeze formarea leg!turilor dintre nucleotide, chiar dac! lipse"te lan#ul , deci acest lan# nu are rol catalitic, ci acela de a recunoa"te catena matri#! "i secven#a de dezoxiribonucleotide, de unde se ini#iaz! transcrip#ia. Pozi#ia din molecula ADN unde se leag! ARN-polimeraza pentru a ini#ia transcrip#ia se nume"te promotor. ncheierea transcrip#iei ARNm este controlat! de o protein! specific! numit! factor . n sens mai larg, transcrip#ia se refer! "i la sinteza celorlalte dou! tipuri de ARN implicate n procesul de biosintez! a proteinelor. Acidul ribonucleic solubil sau de transfer (ARNs) se sintetizeaz! tot pe o matri#! de ADN. Fiecare tip de ARNs este codificat de cte o singur! secven#! de nucleotide din ADN, deci de cte o gen!. Acidul ribonucleic ribozomal (ARNr) este produsul direct al mai multor gene. Detalii despre ARNs "i ARNr au fost precizate ntr-un paragraf anterior.

3.5.2. Transla%ia informa%iei genetice

Transla#ia este mecanismul prin care secven#a codonilor din ARNm este tradus! ntr-o anumit! succesiune de aminoacizi ce intr! n constitu#ia unui lan# polipeptidic. Realizarea procesului de transla#ie implic! participarea mai multor componente celulare ce alc!tuiesc un aparat de transla#ie. Aparatul de transla#ie cuprinde urm!toarele elemente: diferite tipuri de ARNs corespunz!toare tipurilor de aminoacizi, aminoacizii, ribozomii, enzimele activatoare ale aminoacizilor, cofactorii energetici, ATP "i GTP, factori de ini#iere, alungire "i terminare a sintezei lan#ului polipeptidic. Pentru sinteza celular! a proteinelor este necesar! o anumit! cantitate de energie, formarea unei singure leg!turi peptidice necesitnd 0,5 kcal/mol. Aceast! energie este asigurat! de acidul adenozintrifosforic (ATP) care, prin hidroliz!, pune n libertate unul sau doi radicali fosforici elibernd energia corespunz!toare: ATP + H2O
78

AMP + P P + 8 kcal/mol

Sinteza proteic! se desf!"oar! concomitent cu hidroliza ATP n AMP "i doi radicali fosforici, rezultnd 8 kcal/mol, din care 0,5 kcal/mol sunt folosite pentru realizarea leg!turii peptidice iar restul de 7,5 kcal/mol pentru men#inerea echilibrului reac#iei n favoarea sintezei proteice "i nu a hidrolizei. O prim! etap! n sinteza proteinelor o constituie activarea aminoacizilor "i formarea complexului aminoacil-ARNs. Activarea aminoacizilor se realizeaz! cu ajutorul energiei rezultate din hidroliza ATP "i n prezen#a enzimei aminoacilsintetaza (E). Reac#ia de activare a aminoacizilor poate fi redat! astfel: AA1 + ATP + E AA1 AMP E + P P

Aminoacizii, dup! ce au fost activa#i, se pot ata"a de molecula unui ARNs specific: AA1 AMP E + ARNs1 + AMP + E Cele dou! reac#ii au loc succesiv, sunt catalizate de aceea"i enzim! (aminoacilsintetaza) "i ca atare se poate scrie reac#ia general!: aminoacilsintetaza AA1 + ATP + ARNs1 + AMP + P P n urm!toarea faz! complexul aminoacil-ARNs se ata"eaz! de poliribozomi, la nivelul c!rora are loc ini#ierea sintezei lan#ului proteic. Ribozomul asigur! de a"a manier! asocierea acestor elemente nct zona anticodon a ARNs s! poat! recunoa"te codonul corespunz!tor din ARNm, ducnd astfel la o descifrare corect! a mesajului genetic. Dup! fixarea aminoacidului, ARNs devine liber putnd transporta alte molecule de aminoacid la nivelul ribozomului. ncatenarea aminoacizilor se realizeaz! de c!tre enzima peptidiltransferaza "i const! n realizarea leg!turilor peptidice ntre gruparea carboxil a unui aminoacid "i gruparea aminic! a celuilalt (figura 3.7.). Reac#ia de ncatenare a aminoacizilor poate fi redat! astfel: peptidiltransferaza AA1 - ARNs1 + AA2 - ARNs2 + AA3 - ARNs3 + AA1 - AA2 - AA3 + ARNs1 + ARNs2 + ARNs3 + AA1 - ARNs1 + AA1 - ARNs1 +

79

Fig. 3.7. Reprezentarea schematic! a procesului de transla#ie (dup! Kimball, 1978)

ncheierea sintezei catenei polipeptidice se realizeaz! cu ajutorul a doi factori proteici care sunt activa#i n prezen#a codonilor de ncheiere UAA, UAG "i UGA. Ca urmare, catena polipeptidic! se deta"eaz! de ribozomi "i de ARNs care a adus ultimul aminoacid. n ceea ce prive"te viteza cu care se realizeaz! biosinteza proteic!, exist! o serie de date att la procariote ct "i la eucariote. Transcrip#ia genei ce determin! sinteza enzimei ce intervine n producerea triptofanului la Escherichia coli are loc cu o vitez! de 28 nucleotide/sec., iar transla#ia cu viteza de 7 aminoacizi/sec. O molecul! complet! de hemoglobin! uman! este sintetizat! n 35 secunde (gena ce determin! hemoglobina con#ine 670 nucleotide). n prezent s-a reu"it sinteza unor substan#e proteice ntr-un sistem celular liber (popula#ii de celule la care s-a distrus membrana celular!), folosind ARNm artificial (M. W. Niremberg, 1961).

3.6. REGLAJUL GENETIC AL ACTIVIT!"II GENELOR

Celula vie con#ine o cantitate mare de informa#ie genetic! iar procesele metabolice ce au loc func#ioneaz! cu o mare eficien#!, asigurnd economisirea la maximum a energiei. Cantitatea mare de informa#ie din celulele procariotelor "i eucariotelor permite func#ionarea acestora n cele mai variate condi#ii de mediu. n timp ce virusurile posed! n programul lor genetic 3-4 gene, bacteriile 2.000-3.000 gene, plantele "i animalele superioare au un program genetic foarte complex, constituit din cteva zeci de mii de gene. Genele ce alc!tuiesc programul genetic al vie#uitoarelor nu func#ioneaz! toate deodat!, ci intr! n func#ie n mod succesiv, n func#ie de tipul "i cantitatea de enzime "i proteine, pe m!sura dezvolt!rii individului. Mecanismele de reglare a activit!#ii genelor sunt foarte complexe att la procariote ct "i la eucariote. Func#ionarea celulei este dependent! de cele dou! laturi ale metabolismului: catabolismul (dezasimila#ia), prin care o serie de substan#e sunt descompuse "i se elibereaz! "i o anumit! cantitate de energie "i anabolismul (asimila#ia) n urma c!reia se sintetizeaz! substan#e complexe din substan#e simple. Fiecare etap! a asimila#iei "i dezasimila#iei este catalizat! de o anumit! enzim!, care la rndul ei este dependent! de informa#ia uneia sau a mai multor gene.
80

3.6.1. Reglajul activit$%ii genetice la procariote

Teoria reglajului genetic la procariote a fost elaborat de geneticienii francezi Francois Jacob, Andr Lwoff "i Jaques Monod, n anul 1961, realizare pentru care ei au fost distin"i, n anul 1965, cu premiul Nobel. n aceast! lucrare ei demonstreaz! experimental "i practic c! sinteza proteinelor "i a enzimelor variaz! n func#ie de necesit!#ile celulei "i este controlat! genetic. F. Jacob "i J. Monod au descoperit mai multe moduri de reglare genic! a sintezei proteice: - induc#ia enzimatic!; - represia enzimatic!; - retroinhibi#ia enzimatic!. Induc%ia enzimatic$ este fenomenul prin care celulele produc sistemul enzimatic necesar pentru metabolizarea substan#elor care de obicei nu sunt prezente n mediu. Propriet!#ile enzimatice ale bacteriilor sunt influen#ate de mediul n care cresc, fenomen denumit adaptare enzimatic$, ceea ce confer! acestor organisme posibilitatea de a cre"te n medii diferite. Enzimele ce intervin n catalizarea diferitelor laturi ale metabolismului au fost mp!r#ite n dou! categorii: enzime adaptive a c!ror cantitate "i activitate variaz! n func#ie de condi#iile de mediu "i enzime constitutive a c!ror cantitate nu depinde de mediu "i se sintetizeaz! continuu. J. Monod (1941) a descoperit fenomenul de diauxie prin care o bacterie ce cre"te pe un mediu de glucoz! "i lactoz!, cre"te "i se nmul#e"te pn! ce glucoza este epuizat!, iar dup! o perioad! de stagnare, cre"te din nou "i se nmul#e"te folosind ns! lactoza. Un exemplu de induc#ie enzimatic! a fost descoperit la drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae) care poate s! fermenteze lactoza din lapte cu ajutorul enzimei lactaza. Tulpinile de drojdie de bere, care au fost crescute mai multe genera#ii pe mediu de lactoz!, vor con#ine n cantitate mare enzima lactaza, iar n acest caz, fenomenul de fermenta#ie ncepe foarte repede (aproximativ o or! de la incuba#ie). n cazul unor tulpini care nu au fost crescute n prealabil pe mediu de lactoz!, fermenta#ia nu are loc pentru c! acestor tulpini le lipse"te lactaza. Dac! aceste tulpini sunt #inute n continuare n mediu de lactoz!, dup! aproximativ 14 ore, fermenta#ia se declan"eaz!, fapt ce arat! c! lactoza induce producerea lactazei de c!tre celulele drojdiei. n acest caz lactoza ce trebuie metabolizat! ac#ioneaz! ca un inductor. Induc#ia enzimatic! a fost ilustrat! de J. Monod "i colab. la bacteria Escherichia coli, prin studierea sistemului lactoz!. Acest mecanism va fi prezentat mai pe larg n cadrul modelului Jacob-Monod de reglaj genetic. n concluzie se poate afirma c! induc#ia enzimatic! este caracteristic! sistemelor de catabolism (dezasimila#ie) fiind declan"at! de substan#e denumite inductori. Represia enzimatic$ este un fenomen opus induc#iei enzimatice, prin care este inhibat! sinteza unei proteine datorit! unui produs final al unui lan#
81

metabolic denumit represor. Fenomenul de represie enzimatic! a fost pus n eviden#! la bacteria Escherichia coli. Astfel, s-a demonstrat c! sinteza aminoacidului triptofan este inhibat! atunci cnd n mediul de cultur! se adaug! cantit!#i mici de triptofan sau analogi ai acestuia. Represia enzimatic! este caracteristic! unor sisteme enzimatice ce intervin n anabolismul unor constituen#i cu rol esen#ial n organism (aminoacizi, nucleotide). Represia enzimatic! poate ac#iona asupra mai multor proteine ce fac parte din acela"i lan# metabolic, prin intermediul represorului. Dac! un metabolit ac#ioneaz! asupra represorului suprimndu-i activitatea, se deblocheaz! sinteza tuturor enzimelor din acela"i lan# metabolic. Efectul genetic al represorului const! n blocarea uneia sau a mai multor gene prin aceasta sistarea sintezei uneia sau a mai multor proteine specifice. Substan#ele capabile s! modifice efectul de represie al represorului se numesc efectori. Efectorii pot fi inductori, cnd inhib! activitatea represorului "i corepresori, cnd intensific! activitatea de represie a represorului. Retroinhibi%ia enzimatic$ denumit! "i inhibi#ia prin feed-back sau inhibi#ia prin produs final este un sistem de reglare a sintezei proteice prin cantitatea de produs final. n cazul unui lan# metabolic, exist! mai multe etape, fiecare fiind catalizat! de o anumit! enzim!, rezultnd un produs final. n cazul retroinhibi#iei enzimatice, produsul final, ntr-o cantitate mai mare dect cea normal!, ac#ioneaz! asupra enzimei din prima treapt! a lan#ului metabolic "i ntreg lan#ul metabolic este oprit. Fenomenul a fost studiat la bacteria Escherichia coli. Aminoacidul Ltreonin! se transform! ntr-un alt aminoacid, L-izoleucin! n cinci etape, fiecare fiind catalizat! de c!tre o enzim! (figura 3.8.).

Figura 3.8. - Represia enzimatic! "i retroinhibi#ia enzimatic! n cazul c!ii metabolice ce asigur! sinteza izoleucinei. 82

n acest exemplu, cantitatea de izoleucin! poate fi reglat! att prin retroinhibi#ie enzimatic! ct "i prin represie enzimatic!. Prin retroinhibi#ie enzimatic!, izoleucina n cantitate prea mare blocheaz! activitatea primei enzime din lan#ul metabolic, treonin! deaminaz! "i ntreg lan#ul metabolic este oprit. Prin represie enzimatic!, aminoacidul izoleucin! blocheaz! activitatea tuturor celor 5 enzime din lan#ul metabolic. Prin urmare sinteza izoleucinei este controlat! printrun sistem dublu, cele dou! sisteme fiind independente. Independen#a celor dou! sisteme a fost dovedit! prin faptul c! la E. coli s-au ob#inut dou! mutante, una la care izoleucina nu poate s! inhibe enzima treonin! deaminaz!, iar cealalt! la care izoleucina nu inhib! nici una din cele cinci enzime ale lan#ului metabolic. S-a demonstrat c! cele dou! muta#ii sunt situate n loci diferi#i pe cromozom. n cazurile de mai sus, produ"ii celulari sunt controla#i numai de produ"ii finali ai liniei metabolice respective. Sunt ns! "i cazuri cnd unii produ"i celulari sunt controla#i de produ"ii finali ai altei linii metabolice. De exemplu, bazele azotate purinice "i pirimidinice ce intr! n alc!tuirea acizilor nucleici sunt sintetizate de dou! linii metabolice paralele, dar cele dou! linii se regleaz! reciproc. Acest lucru are o mare importan#! deoarece cele dou! grupe de baze trebuie c! fie ntr-un anumit raport n momentul replic!rii acizilor nucleici. Experimental s-a demonstrat c! propor#ia bazelor pirimidinice este controlat! de produ"ii finali pirimidinele, dar "i de purine, astfel: pirimidinele n exces inhib! prima enzim! din lan#ul metabolic al pirimidinelor, iar purinele n exces stimuleaz! activitatea aceleia"i enzime. Prin acest proces, bazele azotate sunt sintetizate economic, exact n cantit!#ile necesare replic!rii acizilor nucleici. Modelul Jacob-Monod de reglare a activit!#ii genelor F. Jacob "i J. Monod (1961), pe baza experien#elor efectuate la Escherichia coli asupra locusului lac (lactaz!), privind fenomenele de induc#ie enzimatic! "i represie enzimatic!, au ajuns la concluzia c! reglarea sintezei proteice este de natur! genic!. n acest proces de reglaj sunt implicate trei categorii de gene: gene structurale, gene reglatoare "i gene operatoare. Genele structurale sunt segmente din macromolecula de ADN "i au rolul de a determina secven#a aminoacizilor n moleculele proteice sintetizate de celul!. Genele reglatoare sunt localizate tot pe ADN "i au rolul de a sintetiza represorii specifici ce controleaz! activitatea genelor structurale. Represorul nu interac#ioneaz! direct cu genele structurale, ci prin intermediul celui de-al treilea tip de gene, genele operatoare sau operator. Operatorul este o gen! adiacent! genelor structurale, care are posibilitatea de a se combina sau nu cu represorul, inducnd sau blocnd func#ionarea genelor structurale. Gena operatoare poate fi considerat! un receptor al represorului. Gena operatoare este un fel de comutator chimic care declan"eaz! sau nu intrarea n activitate a genelor structurale. naintea genelor operatoare "i structurale este localizat promotorul care ini#iaz! procesul de transcrip#ie a informa#iei genetice al genelor structurale. Ansamblul format din promotor, gena operatoare "i genele structurale se nume"te operon, ocup! un fragment de cromozom "i func#ioneaz! coordonat.
83

Schema modelului Jacob-Monod privind reglarea sintezei proteice prin induc#ie "i represie enzimatic! este dat! n figura 3.9. Interac#iunile dintre represor "i efector sau dintre represor "i operator (gena operatoare) are loc astfel: n sistemele represibile gena reglatoare determin! sinteza represorului R, activ, care interac#ioneaz! cu gena operatoare "i n acest caz, gena operatoare blocheaz! activitatea genelor structurale, fapt ce face ca ARN-polimeraza s! nu poat! sintetiza ARNm "i ca atare, nu se vor sintetiza proteine.

Figura 3.9. - Modelul Jacob-Monod privind reglarea sintezei proteice

n sistemele inductibile, un efector negativ sau inductor reac#ionnd cu represorul (R) l transform! ntr-o form! inactiv! (R') care nu poate reac#iona cu gena operatoare (O), fapt ce face ca ARN-polimeraza s! ini#ieze procesul de transcrip#ie a ARNm. n celule se pot forma molecule cu greutate molecular! mic!, denumite efectori pozitivi sau corepresori, care poate transforma represorul inactiv (R') ntr-o form! activ! (R), care reac#ionnd cu gena operatoare (O) opre"te transcrip#ia ARNm. n ceea ce prive"te modul de transmitere a informa#iei genetice de c!tre genele structurale dintr-un operon pentru sinteza unei proteine, s-au emis dou! ipoteze: una apar#ine lui Jacob "i Monod (1961) care sus#ine c! fiecare gen! dintrun operon "i transcrie un ARMm propriu (o gen! - un mesager) iar a doua ipotez! formulat! de S. Spiegelman "i R. G. Martin (1963) (cita#i de C. Panfil, 1974), sus#ine c! ntreaga informa#ie a unui operon este transmis! ntr-o singur! molecul! de ARNm (un operon - un mesager). Un exemplu concret privind modul de func#ionare al genelor n reglarea procesului de biosintez! a proteinelor l constituie cel al operonului lac de la Escherichia coli (figura 3.10). La aceast! bacterie se apreciaz! c! exist! ntre 100 "i 200 de operoni, dar numai activitatea unora este cunoscut!. La bacteria E. coli utilizarea lactozei
84

din mediu se realizeaz! cu ajutorul a trei enzime, a c!ror sintez! este determinat! de trei gene structurale ce alc!tuiesc operonul 1ac. Genele respective se g!sesc dispuse al!turat pe cromozomul bacterian: z+, determin! sinteza enzimei galactozidaza, care se g!se"te liber! n citoplasm! "i care desface lactoza n galactoz! "i glucoz!; y+ determin! sinteza - galactozid permeazei, care este localizat! n membrana celulei bacteriene "i permite intrarea lactozei n celul! "i gena a+ ce determin! sinteza enzimei galactozid trans-acetilaza a c!rei ac#iune este necunoscut!.

Figura 3.10. - Reglajul genetic al operonului lac la Escherichia coli

Dac! lactoza lipse"te din mediu, genele structurale ce determin! sinteza celor trei enzime sunt inactive. Cnd se adaug! lactoza n mediu, n cteva minute ncepe sinteza celor trei enzime, deci genele structurale sunt activate. Activitatea celor trei gene structurale (z+, y+ "i a+) este controlat! de o gen! reglatoare prin intermediul unui represor. Cnd lipse"te lactoza, gena structural! sintetizeaz! represorul care se cupleaz! cu gena operatoare ce se afl! naintea genelor structurale "i activitatea celor trei gene este inhibat!. Prin testul cis-trans s-a constatat c! gena reglatoare este independent! de operonul lac, plasat! ntr-o alt! regiune a cromozomului bacterian. Operonul lac este alc!tuit din urm!toarele subunit!#i dispuse n urm!toarea ordine: promotorul (P), gena operatoare (O) "i cele trei gene structurale z+, y+ "i a+. Promotorul are rolul de a recunoa"te enzima ARNpolimeraza, determinnd ini#ierea procesului de transcrip#ie, gena operatoare are rolul de a se combina cu represorul sintetizat de gena reglatoare. Cele dou! regiuni sunt formate din secven#e de cte 10-30 nucleotide fiind regiuni ale operonului. Operonul lac este, de obicei, nefunc#ional, ceea ce nseamn! c! n absen#a lactozei represorul este activ "i blocheaz! activitatea genelor structurale.
85

n prezen#a lactozei represorul "i modific! structura "i nu mai poate reac#iona cu gena operatoare "i ca atare ntreg operonul devine activ, lactoza putnd fi metabolizat!. n ceea ce prive"te m!rimea diferi#ilor operoni "i a genelor reglatoare exist! o serie de informa#ii la procariote, deoarece la eucariote nu au fost eviden#ia#i operoni. La E. coli operonul lactoz! (lac) este alc!tuit din 5.113 perechi de nucleotide, iar gena reglatoare din 1.020 perechi nucleotide, operonul triptofan con#ine 6.600 perechi de nucleotide iar operonul histidinei de la Salmonella are 13.000 perechi de nucleotide. M!rimea genei operatoare de la E. coli se pare c! este alc!tuit! din 30 perechi de nucleotide (cu o lungime de aproximativ 100 ). Nu se cunoa"te prea bine modul de cuplare al genelor operatoare cu represorul, dar se pare c! acesta din urm! nu se ata"eaz! dect de un ADN bacterian, deoarece denaturarea ADN blocheaz! activitatea represorului. Represorul operonului lac este o protein! format! din patru catene polipeptidice identice, cu o greutate molecular! de 150.000 daltoni.

3.6.2. Reglajul activit$%ii genelor la eucariote

Structura molecular! a cromozomului la eucariote este mult mai complex! dect la procariote. Cromozomii eucariotelor sunt alc!tui#i din: 13-16% ADN, 12-13% ARN "i 68-72% proteine histonice "i nehistonice. La eucariote, programul genetic este alc!tuit dintr-un num!r foarte mare de gene (cteva zeci de mii), gene care nu func#ioneaz! simultan, chiar mai mult, n unele celule diferen#iate, majoritatea genelor sunt inactive. Toate aceste aspecte fac ca reglajul genetic la eucariote s! fie mult mai complex, reglajul sintezei proteice realiznduse la nivelul genei "i nu la nivelul operonilor. Se poate spune c! ARNm la eucariote transcrie mesajul genetic al unei singure gene, deci pentru un singur lan# polipepidic. Acest fapt a fost demonstrat prin compararea m!rimii poliribozomilor angaja#i n sinteza miozinei, hemoglobinei sau gammaglobinei. Func#ionarea ADN al eucariotelor ca matri#! pentru sinteza ARNm este dependent! de conforma#ia spa#ial! tridimensional! a nucleohistonelor. Superspiralizarea nucleohistonelor face ca ADN s! nu poat! func#iona ca matri#! pentru ARNm. Ca regul!, cromatina condensat! nu poate fi transcris!, pe cnd cromatina difuz! permite ca ADN s! func#ioneze ca matri#! pentru ARNm, sinteza acestuia realizndu-se n interfaz!. La eucariote, reglajul activit!#ii genelor are loc la trei niveluri: a) Reglajul la nivelul transcrip#iei, care const! n cuplarea proteinelor cromozomice cu un segment din macromolecula de ADN de pe care trebuie s! se transcrie informa#ia genetic! "i n acest caz se blocheaz! sinteza ARNm. b) Reglajul la nivelul transla#iei, ce const! n degradarea ARNm format prin transcrip#ie de c!tre enzime denumite nucleaze, localizate de o parte "i de alta a membranei nucleare.
86

c) Reglajul posttransla#ional ce se manifest! la nivelul catenelor polipeptidice, unde intervin o serie de factori ce mpiedic! agregarea monocatenelor pentru a forma stucturi cuaternare, "tiindu-se c! aceast! structur! este func#ional!. n realizarea reglajului genetic la eucariote, un rol deosebit de important l au proteinele cromozomice, histonele "i nehistonele, care mpreun! cu catena ADN "i ARN cromozomic formeaz! cromatina. Histonele sunt proteine bazice deoarece sunt bogate n aminoacizii bazici, arginina, lizina "i histidina "i complet lipsite de triptofan. Histonele sunt lipsite de specificitate fiind grupate n cinci clase n func#ie de ponderea celor trei aminoacizi "i n func#ie de greutatea molecular!. Histonele ca "i ADN sunt sintetizate numai n faza S a interfazei, de c!tre o serie de gene cromozomice. Histonele se caracterizeaz! printr-o mare stabilitate n cursul evolu#iei "i o mare uniformitate de o specie la alta. De exemplu, histona H1 de la maz!re difer! numai prin doi aminoacizi fa#! de aceea"i histon! de la taurine. A"a cum s-a v!zut ntr-un capitol anterior, cromozomul eucariotelor este constituit din unit!#i denumite nucleosomi, n care molecula de ADN este asociat! cu histone "i nehistone, fapt ce explic! sinteza simultan! a celor dou! substan#e n faza S a ciclului mitotic. Histonele asigur! stabilitatea structurii cromozomului "i sunt implicate n transcrip#ia mesajului genetic, n mod nespecific. Nehistonele sunt proteine cromozomice foarte variate ca structur! "i func#ie, cu o greutate molecular! cuprins! ntre 10.000 "i 15.000 daltoni. Din grupul proteinelor nehistonice fac parte: ADN "i ARN polimerazele, enzimele ce intervin n sinteza "i degradarea proteinelor, proteinele cu rol structural "i reglator din cromozom. Proteinele nehistonice reac#ioneaz! n mod specific cu molecula de ADN, determinnd transcrip#ia diferen#iat! a genelor n func#ie de #esut "i de celule, determinnd ce gene vor fi transcrise, avnd un caracter reglator specific. Modelul de reglaj genetic la eucariote este prezentat n figura 3.11. Conform acestui model, proteinele nehistonice se ata"eaz! n mod specific la nivelul unei gene, care n mod obi"nuit este represat! de proteinele histonice. ntre cele dou! tipuri de proteine are loc o reac#ie de fosforilare, prin care se elibereaz! un radical fosforic, n urma c!reia complexul histon!-nehiston! r!mne nc!rcat negativ. Acest complex este respins de molecula de ADN a c!rei sarcini electrice sunt tot negative, n aceast! zon!, ADN eliberat de histone, putndu-se realiza transcrip#ia ARNm. n momentul n care gena respectiv! nceteaz! s! mai func#ioneze, se refac moleculele de histone pe segmentul respectiv de ADN. La organismele eucariote reglajul genetic se realizeaz! nu numai la nivelul genelor individuale ci la nivelul segmentelor cromozomice, a cromozomilor sau chiar a genomului. Astfel, reglajul genetic se poate realiza "i prin heterocromatinizare. Heterocromatina este de obicei localizat! n jurul centromerului "i n zona
87

satelitului cromozomului. n zona heterocromatic!, cromatina este puternic spiralizat! iar ADN are o func#ionalitate redus!. Heterocromatina este de dou! tipuri: constitutiv! "i facultativ!. Heterocromatina constitutiv! con#ine o cantitate mare de ADN repetitiv (redundant) formnd de obicei gene nefunc#ionale. Heterocromatina facultativ! rezult! din heterocromatinizarea unor regiuni eucromatice. Prin transferul unui segment eucromatic n apropierea heterocromatinei constitutive, acesta se heterocromatinizeaz! "i invers. Un alt fenomen este heterocromatinizarea unuia din cei doi cromozomi X de la sexul femel al mamiferelor, formnd cromatina sexual!, astfel nct, la ambele sexe func#ioneaz! numai cte un cromozom X din perechea de cromozomi ai sexului. Acest fapt a fost demonstrat la multe organisme la care sexul femel este homogametic.

Fig. 3.11. - Reglajul genetic la eucariote cu ajutorul proteinelor histonice "i nehistonice 88

La Drosophila melanogaster genele ce determin! culoarea galben deschis a ochilor este localizat! pe cromozomul X, dar s-a constatat c! ambele sexe produc aceea"i cantitate de pigment. La om, gena ce determin! sinteza enzimei glucoz!-6-fosfat dehidrogenaza (G-6-PD) este plasat! pe cromozomul X, ns! ambele sexe produc aceea"i cantitate de enzim!. Heterocromatinizarea unui cromozom X se realizeaz! numai n celulele somatice, n celulele sexuale ambii cromozomi X sunt func#ionali. Se poate constata c!, n cazul acesta, reglajul genetic se realizeaz! la nivelul ntregului cromozom, deoarece toate genele de pe cromozomul X sunt inactive. Reglajul genetic se poate realiza la unele organisme prin inactivitatea ntregului genom sau cu ajutorul unor hormoni. n ultim! instan#! diferen#ierea celular! la eucariote este tot un proces de reglaj genetic celular, deoarece n unele celule sunt activate numai anumite gene "i anume n celulele specializate.

3.7. NO"IUNEA DE GEN! #I EVOLU"IA EI

Rezolvarea complexelor aspecte ale eredit!#ii sunt legate n mod permanent de elucidarea structurii "i func#iei genei. Pentru aceasta s-au efectuat cercet!ri minu#ioase, care au implicat mai multe discipline: genetica, biochimia, fizica, fiziologia, care formeaz! o disciplin! complex!, biologia molecular!. Obiectivele biologiei moleculare fiind descifrarea proceselor de sintez! a produselor celulare "i dependen#a acestora de informa#ia ereditar! din molecula de ADN, au dus la modificarea concep#iilor despre gen!, de-a lungul timpului. Ideea de unitate ereditar! este foarte veche, astfel, Maupertius (16981759) o denume"te particul! seminal!, iar Buffon (1707-1788), molecul! organic! (cita#i de C. Maximilian, 1984). Darwin (1868) denume"te aceste particule gemule, Ngeli (1884) le denume"te micele, Hugo de Vries, pangene iar A. Weismann, determinante.

3.7.1. Gena n concep%ia geneticii clasice

G. Mendel arat! c! n celulele exist! factori ereditari care determin! caracterele ereditare perechi, n celulele somatice "i sub form! simpl!, n celulele sexuale. Termenul de gen! (gr. genos = urma") a fost introdus de W. Johannsen, n anul 1903, ns! nu l consider! ca pe o unitate fizic!, ci pe un corespondent al factorilor ereditari imagina#i de G. Mendel. n concep#ia clasic! gena prezint! trei caracteristici de baz!: unitate func#ional!, unitate muta#ional! "i unitate de recombinare. Ca unitate func#ional!, gena este cel mai scurt fragment dintr-un cromozom, n interiorul c!reia orice modificare afecteaz! acela"i caracter, deci
89

gena este cea mai mic! unitate care produce un anumit efect fenotipic. Ca unitate muta#ional!, gena este cea mai mic! parte dintr-un genom, care prin muta#ie d! na"tere la alela sau alelele sale, cu caracter modificat. Ca unitate de recombinare, gena este cel mai mic segment dintr-un cromozom, care se poate transfera prin crossing-over pe cromozomul omolog "i n interiorul c!ruia nu are loc crossing-over (unitate indivizibil! de crossing-over). Acest mod de a defini gena s-a dovedit a fi simplificat, deoarece chiar la nceputul secolului XX s-a demonstrat c! gena este o unitate genetic! mult mai complex!, format! din sublocusuri sau subgene. Existen#a subunit$%ilor de gen$ a fost dovedit! de E. B. Lewis n anul 1951 la locusul lozenge (lz) de la Drosophila melanogaster. Locusul lz se g!se"te pe cromozomul X n pozi#ia 27,7 unit!#i de recombinare "i determin! modific!ri n pigmenta#ia ochilor, structura fa#etelor "i fertilitatea femelelor. Heterozigo#ii ob#inu#i n urma ncruci"!rilor dintre mutante ale locusului lz, au avut fenotip mutant cu caractere intermediare. n urma analizei a peste 100.000 de indivizi, Lewis a g!sit "i 0,02% indivizi de tip normal (s!lbatic), nemutan#i, desprinznd concluzia c! ntre subgenele locusului lozenge a avut loc un crossing-over. Locusul lozenge cuprinde cel pu#in trei unit!#i ntre care apare un mic procent de recombinare. Fiecare din cele trei subunit!#i, cnd apare singur! n genom, este lz + + . Cnd individul recesiv! "i determin! un fenotip normal, cu genomul: 1 +++ heterozigot cuprinde doi factori (lz1 "i lz2), ei pot fi pe acela"i cromozom (pozi#ie lz 1 lz 2 + lz 1 + + sau cte unul de fiecare cromozom omolog (pozi#ie trans). cis): +++ + lz 2 + Fenotipurile sunt diferite, n primul caz este normal iar n al doilea caz este mutant. Acesta demonstreaz! c! locusul lozenge este un locus complex, alc!tuit din mai multe subunit!#i. Pe baza efectului cis-trans s-a ajuns s! se stabileasc! dac! dou! muta#ii foarte asem!n!toare apar#in unei serii alelice ale aceluia"i locus sau sunt nealele "i apar#in la doi loci diferi#i. Dou! gene sunt alele, cnd apar#in aceluia"i locus "i dac! heterozigotul n pozi#ie trans are un fenotip normal, nseamn! c! genele respective sunt nealele. Apogeul n concep#ia clasic! despre gen!, l-a constituit ipoteza "o gen! - o enzim!" elaborat! de G. W. Beadle "i E. L. Tatum (1941). Conform acestei ipoteze, sinteza fiec!rei enzime este determinat! de informa#ia unei gene, deci ntre gene "i enzime ar exista raportul de 1:1. Muta#ia unei gene determin! blocarea sintezei unei enzime, care la rndul ei, determin! oprirea ntregului lan# metabolic. Elaborarea ipotezei "o gen! - o enzim!" a fost posibil! n urma unor experien#e efectuate la ciuperca Neurospora crassa. La aceast! ciuperc! s-a elaborat o metod! rapid! de identificare a mutantelor biochimice. Metoda const!
90

n urm!toarele: se iradiaz! conidii ale ciupercii n scopul ob#inerii de mutante biochimice defective, care se cultiv! apoi pe un mediu minimal, ns! conidiile mutante nu vor putea cre"te pe acest mediu. Pentru ca mutantele s! creasc! pe mediu minimal trebuie ad!ugat n mediu substan#a pe care mutanta nu o poate sintetiza, deoarece la mutante s-a declan"at lan#ul proceselor metabolice care duc la sinteza acelui produs. Dac! se analizeaz! schema de mai jos, a unei c!i metabolice, ipoteza "o gen! - o enzim!" demonstreaz! c! fiecare enzim! care intervine ntr-un proces metabolic este controlat! de o gen!: Gena A Enzima A Substrat Produsul A Gena B Enzima B Produsul B Gena C Enzima C Produsul C

Studiul mutantelor de Neurospora, a bacteriilor "i algelor a dovedit c! blocarea unei etape dintr-un lan# metabolic este legat! de muta#ia unei gene care inactiveaz! o enzim!. De"i ipoteza "o gen! - o enzim!" nu poate fi n#eleas! n sensul strict c! o gen! determin! sinteza unei singure enzime, a constituit un pas important n evolu#ia conceptului de gen! "i pentru elucidarea func#iilor acesteia.

3.7.2. Gena n concep%ia geneticii moleculare

Studiile de genetic! molecular!, metodele moderne de cercetare, folosirea intens! a virusurilor "i bacteriilor, au permis o analiz! genetic! foarte fin! a genei, n urma c!reia s-a constatat c! gena este o unitate foarte complex!, alc!tuit! din subunit!#i ntre care pot avea loc recombin!ri intragenice "i pot fi modificate prin muta#ii. Structura fin$ a genei a fost realizat! de S. Benzer (1957) la gena rII a fagului T4 ce infecteaz! bacteria Escherichia coli. Gena rII este alc!tuit! din dou! regiuni denumite cistroni "i nota#i cu A "i B. Muta#iile dintr-un grup sunt complementare numai cu muta#iile din cel!lalt grup. Cnd ntre doi bacteriofagi cu cte o muta#ie n regiunile A "i B are loc recombinarea, apar indivizi de tip normal, r+, care produc distrugerea (liza) bacteriei. Metoda de detectare a recombin!rii este foarte sensibil! deoarece d! posibilitatea identific!rii unui recombinant, chiar dac! a ap!rut cu o frecven#! de numai 0,0001%. Acest fenomen permite identificarea recombin!rilor chiar ntre regiuni extrem de apropiate ale genei. Cercet!rile mai noi au demonstrat c! unitatea muta#ional! este perechea de nucleotide, care, n acela"i timp este "i cea mai mic! unitate de recombinare genetic!.
91

Prin numeroase cercet!ri s-a ajuns la concluzia c! secven#a nucleotidelor dintr-o gen! determin! secven#a aminoacizilor din catena polipeptidic!, fenomen denumit colinearitate. Gena, n concep"ia geneticii moleculare, este definit! drept un segment din macromolecula de ADN (sau ARN n cazul unor virusuri), format dintr-o secven"! anumit! de nucleotide, care ac"ioneaz! ca o unitate func"ional! #i care con"ine informa"ia genetic! ce determin! secven"a nucleotidelor dintr-o molecul! de ARN (transcrip"ie genetic!) #i, respectiv, a aminoacizilor ntr-o caten! polipeptidic! (transla"ie genetic!). S. Benzer (1958-1961) a denumit muton, cea mai mic! unitate a genei n care poate avea loc o muta#ie, independent! de alta, recon cea mai mic! unitate n care are loc recombinarea genetic! "i cistron cel mai mic segment de ADN (sau gen!) care poate func#iona unitar "i ale c!rui limite pot fi stabilite prin testul cis-trans (testul de complementaritate). Se poate afirma c! gena este identic! cu cistronul. n concep#ia geneticii moleculare, gena poate fi definit! succint astfel: o gen! sau cistron - o caten! polipeptidic!. Din punct de vedere func#ional, genele pot fi clasificate dup! Paigen "i Ganschow (1965) (cita#i de P. Raicu, 1980) n patru tipuri: gene structurale, ce determin! secven#a aminoacizilor ntr-o caten! polipeptidic!; gene reglatoare, ce controleaz! sinteza proteinelor prin intermediul unui represor; gene arhitecturale, care determin! integrarea proteinelor sintetizate n structuri celulare "i gene temporare, care activeaz! cele trei tipuri de gene, n timp, pe baza unui program genetic, pentru realizarea fenomenului de citodiferen#iere. Genetica molecular! a adus noi elemente de detaliu "i asupra structurii genei. La eucariote gena este constituit! dintr-o secven#! linear! de nucleotide, continu!, ce codific! o secven#! de nucleotide informa#ionale denumite exoni, separate prin segmente noninforma#ionale (ADN silen#ios) denumite introni. De exemplu, gena ovalbuminei la g!in! este format! din opt exoni "i "apte introni (figura 3.12).

Fig. 3.12. - Structura genei ovalbuminei, format! din exoni "i introni 92

Pentru a se realiza fenomenul de transcrip#ie a ARNm, se formeaz! mai nti un ARN precursor care determin! eliminarea segmentelor noninforma#ionale (introni), sintetizndu-se apoi un ARNm care copie informa#ia genetic! numai a exonilor (R. J. Roberts "i A. Ph. Sharp 1993). Se pare c! secven#ele noninforma#ionale au un rol important n evolu#ia materialului genetic. n genomul eucariotelor num!rul de gene este relativ mic, comparativ cu cantitatea de ADN. La om, n func#ie de m!rimea genelor "i de cantitatea de ADN, ar trebui s! existe un num!r de 3 x 106 gene. n realitate num!rul de gene este mult mai mic, 5 x 104, ceea ce nseamn! c! o mic! parte din ADN este informa#ional, iar restul este noninforma#ional, ndeplinind alte roluri n genom. Genele au dou! func#ii esen#iale: func#ia autocatalitic$ "i hetorocatalitic$. Func#ia autocatalitic! const! n capacitatea genelor, deci "i a macromoleculei de ADN, de a se replica cu mare fidelitate, dup! modelul semiconservativ, a"a nct celulele fiice vor mo"teni acelea"i gene ca celulele mam!. Func#ia heterocatalitic! a genelor, const! n capacitatea acestora de a determina, prin secven#a de nucleotide ce o posed!, sinteze specifice de proteine, enzime, biomolecule, informa#ia genetic! fiind deci decodificat! "i transformat! ntr-o secven#! de aminoacizi, n catene polipeptidice. Cele dou! func#ii ale materialului genetic au dus la formularea dogmei centrale a geneticii, care poate fi redat! sintetic prin urm!toarea rela#ie: ADN ARN proteine

n cazul unor ribovirusuri s-a descoperit c! poate fi un transfer de informa#ie de la ARN la ADN. Fenomenul a fost descoperit de Howard Temin (1972) la virusul ce provoac! sarcomul Rous la p!s!ri, care este un virus ARNADN, n sensul c! ARNv se replic! prin intermediul ADN. Descoperirea f!cut! de Temin constituie o excep#ie de la dogma central! a geneticii, prin care s-a dovedit c! ARN poate determina sinteza ADN.

3.7.3. Gene suprapuse &i gene s$ritoare

n cadrul cromozomului bacterian "i viral, genele sunt dispuse linear, ntr-o anumit! ordine, alc!tuind o singur! grup! de linkage. Destul de recent, la fagul x174 s-au descoperit a"a numitele gene suprapuse, ceea ce nseamn! c! o anumit! secven#! de codoni poate fi decodificat! de mai multe ori, realizndu-se sinteza a dou! catene polipeptidice diferite. Structura genomului fagului x174 a fost descifrat! integral, fiind constituit! din nou! gene, deoarece s-a constatat c! prin infec#ia bacteriei E. coli
93

sunt produse nou! proteine diferite. Identificarea tuturor nucleotidelor din genomul virusului a permis delimitarea celor nou! gene ce au fost notate astfel: A, B, C, D, E, J, F, G, H. Exist! por#iuni de ADN noninforma#ional care separ! aceste gene ntre ele. Genele A "i B determin! sinteza a dou! proteine diferite. S-a constatat c! gena B reprezint! partea terminal! a genei A care este mult mai mare, deci genele A "i B sunt suprapuse, gena B fiind translat! dintr-un punct de ini#iere intern. Genele D "i E sunt de asemenea gene suprapuse. Suprapunerea genelor nseamn!, pe de o parte economie de material genetic, dar pe de alt! parte poate fi "i un dezavantaj, deoarece apari#ia unei muta#ii ntr-o gen! determin! modificarea "i celorlalte gene suprapuse. Gene suprapuse s-au observat "i la al#i fagi: S13, G4, SV40 etc. Genele s$ritoare (jumping genes) sunt acele gene care se pot include n diferite regiuni ale cromozomului. Fenomenul a avut la baz! observa#ia c! fagul se poate integra ntr-un loc specific a cromozomului bacterian cu o frecven#! de 100%. Acest sistem s-a determinat "i pentru unele segmente de ADN, care nu au origine fagic!. De exemplu, la bacterii s-au identificat segmente de ADN alc!tuite din 800-2.000 nucleotide, care se pot insera n diferite regiuni ale cromozomului "i pot provoca muta#ii. Aceste segmente au fost denumite segmente de inser#ie (insertion sequences) "i au fost notate: IS1, IS2, IS3 "i IS4. Factorul de fertilitate F, precum "i unele plasmide, prezint! n structura lor normal! fragmente IS. De exemplu, factorul de fertilitate F are segmentele de inser#ie IS2 "i IS3, ce determin! capacitatea acestuia de a se integra n cromozomul bacterian. Unele segmente de ADN ce determin! rezisten#a la antibiotice pot "s!ri" dintr-un locus n altul, g!sindu-se la nivelul unui plasmid, apoi n genomul fagului, apoi n cromozomul bacterian "i apoi iar n plasmid. Aceste gene s!ritoare sunt denumite "i transpozoni, fiind unit!#i independente, n func#ie de rezisten#a pe care o determin! (streptomicin!, penicilin!, kanamicin!, tetraciclin!, cloramfenicol etc.). La eucariote, nc! din anul 1951, Barbara Mc Clintock, studiind culoarea boabelor de porumb de-a lungul mai multor genera#ii, a ar!tat c! anumite structuri din masa genetic! "sar" cte 1-2 genera#ii, ns! observa#ia respectiv! nu a atras aten#ia oamenilor de "tiin#!. Dup! aproape dou! decenii s-a descoperit c! este vorba de o gen! structural! ce de#inea informa#ia genetic! "i alte dou! tipuri de gene ce controlau strict elementele de disociere la nivel cromozomic. n anul 1983, Barbara Mc Clintock a primit laurii Premiului Nobel, iar pe baza descoperirii sale s-au formulat noi ipoteze privind geneza cancerului. n general, se consider! c! transpozonii (sau genele s!ritoare) determin! o mare frecven#! de rearanjamente moleculare la nivelul macromoleculei de ADN (inversii, dele#ii, duplica#ii, transpozi#ii, inser#ii etc.) cu un rol esen#ial n evolu#ia "i, se pare, c! "i n procesul de citodiferen#iere.

94

3.8. REPRODUCEREA #I RECOMBINAREA GENETIC! LA PROCARIOTE

Procariotele (gr. pro = nainte, karyon = nucleu) sunt organisme primitive extrem de simple, de obicei unicelulare, f!r! nucleu, cu o structur! genetic! simpl!, o singur! macromolecul! de ADN ce alc!tuiesc cromozomul. Principalele tipuri de procariote sunt: viroizii, virusurile, micoplasmele, bacteriile "i cianoficeele. Virusurile sunt agen#i infec#io"i considera#i fie organisme extrem de rudimentare, fie molecule foarte complexe, de aceea, n mod obi"nuit, nu sunt incluse n grupul procariotelor. Pentru genetica molecular!, bacteriile "i virusurile au constituit obiectele de studiu de mare importan#!, deoarece au o structur! foarte simpl! "i se reproduc ntr-un timp foarte scurt. Descoperirile structurii materialului genetic, a mecanismului a informa#iei genetice, au fost posibile datorit! folosirii ca material de cercetare a bacteriilor "i virusurilor.

3.8.1. Reproducerea bacteriilor &i virusurilor

Celula bacterian! este alc!tuit! din citoplasm! nconjurat! de o membran! citoplasmatic!, care la exterior are o membran! rigid!, iar la unele bacterii, de acest perete se ata"eaz! o capsul! format! din polizaharide sau polipeptide. n citoplasm! se g!se"te o regiune mai dens! denumit! nucleoid, un num!r mare de ribozomi (15-20.000), o forma#iune denumit! mezozom ce se formeaz! prin invaginarea membranei celulare, de care se ata"eaz! cromozomul circular bacterian. Dup! J. D. Watson (1965) n celula bacterian! ar exista ntre 3.000 "i 6.000 substan#e chimice, de la cele mai simple la cele mai complexe, pentru sinteza c!rora sunt necesare numeroase c!i metabolice, ce alc!tuiesc metabolismul celular al bacteriei. Bacteriile posed! un singur cromozom circular, format din ADN dublu catenar, cu o lungime de 700-900 , care formeaz! un singur grup de linkage. Bacteriile se reproduc amitotic, deci prin simpl! fisiune sau prin alte forme de reproducere asexuat!, uneori "i prin nmul#ire sexuat!. Ciclul celular cuprinde trei perioade: de preg!tire (cre"tere) pentru ini#ierea procesului de replica#ie a ADN, de replica#ie propriu-zis!, urmat! de diviziunea celulei. Bacteriile sunt haploide numai n stadiul de spori, n rest sunt par#ial diploide datorit! procesului de replica#ie, deoarece, uneori, naintea termin!rii unui ciclu de replica#ie ncepe un al doilea ciclu de replica#ie sau chiar al treilea. Pe lng! cromozomul bacterian exist! "i un alt material genetic reprezentat prin plasmide, alc!tuite tot din ADN, dar mult mai mici dect cromozomul propriu-zis. Principalele tipuri de plasmide sunt: factorul de fertilitate (F) ce creeaz! deosebiri de sex ntre indivizi, factorul colicinogenic
95

(Col), care se g!se"te la unele bacterii (Col+) ce elaboreaz! o substan#! toxic!, colicina, un grup mai mare de factori ai transferului de rezisten#! (RTF). Se consider! c! originea plasmidelor ar fi exogen! "i anume virusuri, care au dobndit un nalt grad de echilibru cu celula bacterian!, pe care nu o mai pot distruge. Virusurile sunt alc!tuite dintr-un nveli" proteic denumit capsid!, constituit! dintr-un num!r variabil (dar caracteristic pentru fiecare tip de virus) de unit!#i mai mici denumite capsomere. n interiorul capsidei se g!se"te macromolecula de ADN (dezoxiribovirusuri) sau ARN (ribovirusuri). Virusurile pot fi definite ca macromolecule nucleoproteice, care au capacitatea de a se autoreplica ntr-un sistem reprezentat de celula vie. Ciclul de via#! al virusurilor cuprinde urm!toarele etape: adsorb%ia la suprafa#a celulei, infectarea celulei prin p!trunderea acizilor nucleici virali n celul!, faza de eclips$ n care virusul este descompus n elementele sale devenind provirus. n faza de eclips! ADN al celulei gazd! este depolimerizat cu ajutorul dezoxiribonucleazei produs! de virus. ncepe sinteza acizilor nucleici virali "i a proteinelor virale, are loc asamblarea lor pe baza aparatului enzimatic al celulei gazd!, iar faza se nume"te virus vegetativ. n faza de virus matur, particulele virale p!r!sesc celula infectat! n mod activ, prin str!baterea porilor membranei celulare sau n mod pasiv, prin distrugerea sau liza celulei gazd!. Ciclul de via#! descris mai sus se nume"te ciclul litic. La bacteriofagi, virusuri ce infecteaz! celulele bacteriene, pe lng! ciclul litic, determinat de a"a numi#ii bacteriofagi virulen%i, exist! "i un ciclu lizogenic, produs de bacteriofagi tempera%i. n ciclul lizogenic materialul genetic al bacteriofagilor tempera#i se integreaz! n cromozomul bacterian, se replic! sincron cu acesta "i celula bacterian! nu mai este lizat!. Materialul genetic al fagului integrat n cromozomul bacteriei poarte numele de profag. Ciclul lizogenic poate s! se transforme n ciclul litic fie spontan, fie artificial prin iradieri cu raze X, ultraviolete sau tratamente cu azot-iperit!. Fenomenul de lizogenie prezint! urm!torul avantaj: celula bacterian! ce posed! un profag integrat n cromozomul s!u nu mai este distrus! de o nou! infec#ie a fagului respectiv. Acest fenomen a dus la descoperirea unui tip de recombinare genetic! la bacterii, realizat cu ajutorul bacteriofagilor tempera#i, denumit transduc%ie.

3.8.2. Recombinarea genetic$ la bacterii

Recombinarea genetic! la bacterii se realizeaz! pe urm!toarele c!i: transformare, conjugare, sex-duc#ie "i transduc#ie. Transformarea. Prin transformare se n#elege transferul intracelular al unui segment de ADN de la o bacterie donor, n genomul unei bacterii receptor. Frecven#a cu care se realizeaz! transformarea este foarte redus!, sub 1%, iar dimensiunea minim! a segmentului de ADN transformant este de 450 perechi de nucleotide.
96

Procesul de transformare se realizeaz! atunci cnd este o cantitate mare de ADN implicat! n proces "i n starea de competen%$ a celulelor bacteriene (modific!ri ale membranei ce permit p!trunderea ADN). Dup! ce ADN exogen de la tipul donator a p!truns n bacteria receptoare are loc un fenomen de sinaps$ ntre cele dou! molecule de ADN, n zona complementar!, apoi ADN exogen se integreaz! n cromozomul bacteriei receptor, n procesul de replica#ie al acestuia. Transformarea realizeaz! de obicei transferul unei singure gene, iar n cazuri mai rare, dou! sau trei gene linkage, n cel din urm! caz dovedindu-se c! genele respective sunt dispuse al!turat pe cromozom. Transformarea genetic! se realizeaz! cu o frecven#! mai mare la su"e diferite ale aceleia"i specii de bacterii "i mai rar ntre specii diferite, dar nrudite. Transformarea genetic! poate oferi informa#ii privind gradul de nrudire filogenetic! a unor specii. Tot cu ajutorul transform!rii genetice s-au putut localiza unele gene pe cromozomul bacterian. Conjugarea. Fenomenul de conjugare a fost descoperit n anul 1946 de J. Lederberg "i E. L. Tatum, fiind considerat un fenomen de parasexualitate, similar oarecum cu reproducerea sexuat! de la organismele eucariote. Conjugarea se realizeaz! numai ntre dou! bacterii de sex opus, iar sexul este determinat de o plasmid!, denumit! factor de fertilitate sau sex factor, notat cu F. Celulele care posed! acest factor sunt "mascule", notate cu F+ iar cele ce nu posed! acest factor sunt "femele", F-. Factorul de fertilitate se poate g!si liber n citoplasm! "i n acest caz se replic! independent de cromozomul bacteriei, dar n acest caz fenomenul de conjugare se produce cu o frecven#! destul de redus!, "i anume de 10-5. n unele cazuri, factorul de fertilitate poate fi integrat n cromozomul bacterian, iar aceste celule mascule au fost notate cu Hfr (high frequency of recombination). ntre celulele Hfr "i celulele F-, conjugarea are loc cu o frecven#! mult mai mare, "i anume 10-1. Factorul de fertilitate are o serie de caracteristici structurale "i func#ionale: - are o form! circular!, con#innd n jur de 100.000 perechi de nucleotide, fiind deci mult mai mic dect cromozomul bacterian; - factorul F are capacitatea de a se replica mai repede dect cromozomul bacterian, astfel c!, dac! ntr-o cultur! de celulele F- se introduce o singur! celul! F+, ntreaga cultur! devine ntr-un timp scurt F+; - prin conjugarea ntre celulele F+ "i F- se transmite de obicei numai factorul F+, dar frecven#a conjug!rii este redus!, n timp ce conjugarea ntre bacterii Hfr "i F- are loc cu o frecven#! mare, iar ntre cele dou! celule poate avea loc "i un transfer total sau par#ial al cromozomului de la bacteria donatoare; - n urma conjug!rii, factorul de fertilitate este cel care se transfer! ultimul n celula receptoare, el orientnd direc#ia de transfer al cromozomului, n func#ie de locul unde este integrat.
97

Conjugarea a fost studiat! la microscopul electronic, descoperindu-se c! bacteriile Hfr "i F+ posed! un apendice filamentos, denumit F-pilus care este absent n celulele femele (F-). Ace"ti F-pilus (sau sex-pili) realizeaz! leg!tura dintre dou! bacterii de sex opus, fiind un fel de tuburi prin care materialul genetic al unei bacterii (F+ sau Hfr) trece total sau par#ial n celulele F-. Fenomenul de conjugare a fost studiat "i printr-o alt! tehnic!: procesul de transfer al materialului genetic este ntrerupt prin agitare. Prin aceast! metod! s-a putut determina pozi#ia linear! a genelor pe cromozomul bacterian, precum "i corela#ia precis! ce exist! ntre frecven#a recombin!rilor "i timpul ct dureaz! conjugarea. F. Jacob "i E. L. Wollman (1961) studiind conjugarea la dou! su"e de E. coli, au determinat timpul necesar pentru transferul fiec!rui locus n parte, ajungnd la concluzia c! ntregul cromozom bacterian este transferat n 89 minute. Pe aceast! cale s-au alc!tuit la unele bacterii, harta genetic!, deoarece lungimea cromozomului poate fi m!surat! n unit!#i de timp, n care o unitate este egal! cu 1 minut. Fenomenul de conjugare este strns legat de sinteza ADN. Replicarea ADN bacterian ncepe ntr-un anumit locus pentru o anumit! su"!. Dup! ce celulele Hfr "i F- vin n contact, n celula Hfr ncepe sinteza ADN, astfel c!, n celula F- migreaz! un ADN dublu catenar, format dup! modelul semiconservativ. Ambii cromozomi ai bacteriei donator (Hfr), cel care r!mne n celula Hfr "i cel care se transfer! sunt ata"a#i de membrana bacterian! ntr-un punct denumit mezozom. n cursul transferului de material genetic, cromozomul circular de la bacteria Hfr devine linear "i migreaz! n aceast! form!. Ruperea cromozomului bacterian n vederea conjug!rii se realizeaz! ntr-un punct denumit replicator, care de cele mai multe ori este locul unde este inserat factorul de fertilitate F. La bacterii existnd diferite su"e Hfr, ruperea cromozomului se realizeaz! n diferite puncte, acest lucru constituind un avantaj n alc!tuirea h!r#ilor genetice, avnd n vedere c! genele localizate n jurul factorului F sunt transferate ultimele. Sex-duc%ia, denumit! "i F-duc#ia sau transduc#ia F-mediat!, este o alt! cale de recombinare genetic! la bacterii, descoperit! de F. Jacob "i E. L. Wollman (1960). Cercet!rile care au dus la descoperirea acestui tip de recombinare s-au f!cut la E. coli, la o su"! Hfr, care avea factorul de fertilitate inserat lng! gena lac+. n procesul de conjugare dintre o bacterie Hfr lac+ "i alta F-lac- ar fi trebuit s! apar! recombinan#i pentru gena lac+, foarte trziu, aproape de sfr"itul transferului de material genetic. S-a constatat c! au ap!rut c#iva recombinan#i lac+, foarte devreme. Concluzia a fost urm!toarea: factorul F este eliberat din cromozomul bacterian dar printr-un proces de crossing-over, ntre cromozom "i factorul F are un schimb de material genetic, rezultnd un factor de fertilitate recombinat, notat cu F' (figura 3.13). Prin trecerea factorului F' ntr-o celul! F-, el poate fi inclus n cromozomul bacterian ntr-o regiune omoloag! cu regiunea cromozomic! pe care o poart!, orientnd procesul de conjugare la fel ca n cazul bacteriei Hfr ini#iale.
98

Sex-duc#ia poate fi definit! ca fiind procesul prin care gene ale cromozomului bacterian sunt ncorporate n factorul de fertilitate F "i pe care le transfer! la celulele F- prin procesul de conjugare.

Fig. 3.13. - Formarea factorului de fertilitate recombinat F'

n factorul F pot fi incluse diferite gene, deoarece factorul F poate fi integrat n diferite regiuni ale cromozomului. Celulele bacteriene ce prezint! factorul F' pot fi transformate n celule Hfr, prin inser#ia factorului F' n cromozomul bacterian. Fenomenul de recombinare prin intermediul sex-duc#iei s-a realizat "i ntre specii diferite de bacterii. Astfel, factorul F este absent la speciile de Salmonella, Shigella, Pasteurella, dar poate fi transferat la acestea de la E. coli. Transduc%ia este procesul prin care bacteriofagii tempera#i realizeaz! transferul de informa#ie genetic! de la o bacterie la alta. Acest fenomen a fost descoperit de N. D. Zinder "i J. Lederberg n anul 1952, la bacteria Salmonella typhimurium, cu ajutorul bacteriofagului P32. Experien#a efectuat! de cei doi cercet!tori a constat n urm!toarele: ntr-un tub Davis, separat la mijloc printr-un filtru de sticl! poroas! ce permite trecerea bacteriofagilor, dar nu "i a bacteriilor, a introdus n cele dou! bra#e dou! su"e bacteriene diferite (figura 3.14).

Fig. 3.14. - Eviden#ierea transduc#iei bacteriene 99

Su"a LA22 este auxotrof!, dar cu genotipul fen-tri-met+hia+, deci prezint! concomitent dou! muta#ii biochimice, neputnd sintetiza aminoacizii fenilalanin! "i triptofan, iar su"a LA2 este tot auxotrof!, dar cu genotipul fen+tri+met-hispentru alte dou! gene, neputnd sintetiza aminoacizii metionin! "i histidin!. Su"a LA22 este lizogen!, n sensul c!, n cromozomul s!u era integrat profagul P22. Unii bacteriofagi sunt elibera#i din cromozomul bacteriei "i produc liza acesteia. Bacteriofagii pot trece prin filtrul de sticl!, produc liza bacteriei LA2, apoi pot reveni n tubul n care se g!se"te bacteria LA22 cu care pot stabili din nou rela#ii lizogene n urma c!rora pot apare indivizi recombina#i prototrofi (de tip s!lbatic) pentru toate cele patru gene, fen+tri+met+his+. Explica#ia acestui fenomen este urm!toarea: bacteriofagul P22 producnd liza bacteriei LA2 include, cu o mic! frecven#!, 1 la 105-107, segmentul de cromozom cu genele fen+tri+ de la aceast! su"!. Stabilind rela#ii lizogene cu su"a LA22, bacteriofagul P22 transfer! acest segment n cromozomul acestuia rezultnd recombinan#i genetici de tip s!lbatic (fen+tri+met+his+). Cercet!rile privind transduc#ia au ar!tat c! de obicei se transfer! o singur! gen!, n cazuri rare dou! gene "i niciodat! trei gene. n cazul transferului a dou! gene, se demonstreaz! c! cele dou! gene sunt foarte apropiate pe cromozomul bacteriei, servind la stabilirea precis! a locilor acestora, deci la alc!tuirea h!r#ilor genetice cu ajutorul transduc#iei. Transferul concomitent a dou! gene prin fenomenul de transduc#ie a fost denumit cotransduc%ie. Transduc#ia este de dou! tipuri: transduc#ie specializat$, cnd un bacteriofag transfer! numai o anumit! gen! "i generalizat$ cnd un bacteriofag poate transfera oricare gen! dintr-un cromozom bacterian. Transduc#ia specializat! a fost observat! la bacteriofagul ce infecteaz! E. coli. Acest bacteriofag este inclus sub form! de profag n cromozomul bacteriei numai al!turi de locusul gal (gena ce determin! metabolizarea galactozei). Bacteriofagul poate transfera numai gena gal+ de o su"! bacterian! la alta. Dac! o cultur! lizogen! cu bacteriofagul este tratat! cu raze UV, bacteriofagul se elibereaz! din cromozomul bacterian "i produce liza bacteriei, putnd infecta apoi bacterii gal-, care se transform! cu o anumit! frecven#! n bacterii gal+. n cazul transduc#iei generalizate se poate realiza transferul oric!rei gene de la o bacterie donor la o bacterie receptor, deci bacteriofagul transductant poate ncorpora oricare gen! "i o transfer! altei bacterii.

3.8.3. Recombinarea genetic$ la virusuri

Recombinarea genetic! la virusuri se realizeaz! n cazul unor infec#ii mixte, cu dou! sau mai multe tipuri de bacteriofagi. n urma lizei bacteriei pot apare fagi recombina#i. Primele cercet!ri care au pus n eviden#! recombinarea genetic! la virusuri au fost realizate de A. D. Hershey "i R. Rothman (1940) la bacteriofagul T2 de la E. coli.
100

S-au folosit dou! caractere ale acestui fag: forma plajelor de liz! (r) "i "irul de gazde (host range) notat cu h. Bacteriofagii de tip s!lbatic (r+) n momentul n care infecteaz! bacteria formeaz! zone sau plaje mici ce au un halou difuz. Apari#ia acestui halou se datoreaz! suprainfec#iei provocate de genera#iile succesive ale bacteriofagului T2, existnd un num!r mare de bacterii suprainfectate, dar nelizate, formnd pe marginea plajei un halou difuz. Bacteriofagii mutan#i r- determin! o liz! rapid! a bacteriilor, f!r! ca suprainfec#ia s! inhibe sau s! ntrzie liza, astfel c!, aceste plaje sunt mai mari "i f!r! halou, cu marginile clare. Tipul s!lbatic h+ poate liza su"a B de E.coli, dar nu poate liza su"a B2. Dac! un amestec de bacterii B "i B2 sunt infectate cu bacteriofagi h+ ntreaga cultur! apare tulbure din cauz! c! unele bacterii au fost lizate iar altele nu. Mutanta h- a bacteriofagului T2 lizeaz! ambele su"e B "i B2 ale bacteriei, producnd plaje de liz! obi"nuite, cu halou. Dac! se fac infec#ii mixte cu dou! su"e ale bacteriofagului T2, cu genotipurile h-r+ "i h+r- s-a constatat c! n cultur! apar "i bacteriofagi recombina#i h-r- "i h+r+ datorit! unui schimb de material genetic ntre genomurile fagilor. Dac! n experien#a respectiv! se introduce "i o a treia mutant!, poate fi stabilit! ordinea "i distan#a dintre genele bacteriofagului pe baza procentului de recombinare.

101

CAPITOLUL 4 NO!IUNI DE INGINERIE GENETIC"

Moto: E adev!rat c! misterul, nu este comod, te nelini"te"te. Dar dac! misterul ar fi absent, nelini"tea metafizic! a cunoa"terii ar disp!rea "i omul ar deveni mineral. Petre #u$ea

Aprofundarea cuno!tin"elor de genetic# molecular#, cunoa!terea structurii fine a genelor !i a cromozomilor, a deschis noi posibilit#"i de izolare !i sintez# a genelor, de transfer de la o specie la alta, uneori chiar ndep#rtate filogenetic, de cultur# in vitro a celulelor !i de hibridare a acestora. Ingineria genetic! poate fi definit! ca un ansamblu de metode "i tehnici moderne prin care este posibil! manipularea materialului genetic la nivel celular "i molecular. La nivel celular, ingineria genetic# a nsemnat extinderea hibrid#rilor celulare n afara grani"elor determinate de specie, ob"inndu-se hibrizi celulari ntre diferite specii de procariote !i eucariote, ntre celule vegetale !i animale. La nivel molecular, ingineria genetic# a nsemnat izolarea genei, sinteza artificial# a genei, realizarea ADN recombinat !i transferul de gene de la o specie la alta. n sens strict, ingineria genetic# const# n crearea de ADN hibrid sau ADN recombinat, derivat de la dou# specii diferite, integrarea !i clonarea acestuia ntr-o celul# bacterian#, unde poate func"iona normal, realizndu-se n felul acesta transferul de gene, nu pe cale sexuat#, ci pe baza ADN recombinat. n felul acesta se deschide calea transform#rii dirijate a eredit#"ii organismelor la nivel molecular, ac"ionndu-se direct asupra bazei moleculare a eredit#"ii. n sens mai larg, tot ingineriei genetice i apar"in !i tehnicile de modificare a structurii !i num#rului cromozomilor prin muta"ii, putndu-se transfera fie cromozomi ntregi de la o specie la alta, fie segmente de cromozomi, domeniu al ingineriei genetice denumit chirurgie cromozomic!. n acest domeniu, de remarcat sunt rezultatele ob"inute de J. G. O'Mara (1940), care a reu!it s# combine caracterele a dou# specii prin transferul unuia sau a ctorva cromozomi de la diferite specii. S-a reu!it transferul unor cromozomi n cadrul unor hibrid#ri intergenerice, gru x secar# sau gru x pir, transferndu-se gene ce confer# rezisten"a la rugina galben# !i neagr# de la secar# !i respectiv pir, la gru. Primul transfer de gene a fost realizat n 1928 de c#tre E. Griffith, prin experien"ele de transformare genetic#, urmat de transferul de gene cu ajutorul unui ADN purificat, realizat n 1944 de O. T. Avery !i colaboratorii, cu o eficien"# mult mai mare.
102

Din multitudinea de aspecte ale ingineriei genetice, vor fi prezentate aspecte privind sinteza artificial# a genei, hibridarea celular# la animale !i plante, haploidia prin androgenez#, importan"a cercet#rilor de inginerie genetic#.

4.1. SINTEZA ARTIFICIAL" A GENEI

Sinteza artificial# a genelor a fost precedat# de o alt# mare realizare !i anume sinteza artificial# a ADN de la virusul x174 de c#tre Arthur Kornberg, laureat al premiului Nobel (1959) fiind descris# n capitolul anterior. H. G. Khorana, genetician american de origine indian#, mpreun# cu o echip# de cercet#tori din Massachusetts, a realizat n 1970, prima sintez# artificial# a unei gene !i anume gena ce determin# sinteza unui ARNs ce transport# aminoacidul alanina la nivelul ribozomilor, la Saccharomyces cerevisiae. Aceast# gen# este destul de mic#, format# din 77 nucleotide, iar tehnica folosit# a fost urm#toarea: s-au sintetizat pe cale chimic#, segmente de ADN formate din 10-14 nucleotide. Cu ajutorul enzimei ligaza s-au asamblat aceste segmente rezultnd segmente bicatenare mai lungi. S-au ob"inut 3 segmente mai lungi cu ajutorul enzimei polinucleotid-kinaza, care au fost legate ntre ele rezultnd segmentul de ADN, corespunz#tor genei ARNs ce transport# aminoacidul alanina la ribozomi. Aceast# gen# nu era func"ional# biologic. n anul 1973, geneticianul D. Agarwal, a sintetizat artificial o gen# de la bacteria E.coli, ce determin# sinteza ARNs ce transport# aminoacidul tirozina la ribozomi. Aceast# gen# s-a dovedit a fi func"ional# biologic. n anul 1975 geneticianul A. Efstradiatis !i echipa sa de la Universitatea Harvard, au sintetizat artificial genele ce intervin n sinteza hemoglobinei la iepure, fiind prima sintez# artificial# a unei gene de la mamifere. n anul 1976 H. Kster, a sintetizat gena pentru hormonul angiotensina, care regleaz# tensiunea arterial# !i contrac"ia muscular# la om, fiind prima gen# uman# sintetizat# artificial. n ultimii ani s-au sintetizat artificial genele ce determin# sinteza hormonului de cre!tere, somatostatina !i a insulinei. n prezent tehnica de sintez# artificial# a genei utilizeaz# ARNm, care cu ajutorul enzimei reverstranscriptaza, determin# sinteza de ADN complementar !i deci de gene. Sinteza artificial# a genelor prezint# o importan"# deosebit#. Dac# genele sunt inserate n virusuri sau plasmide, acestea le pot transfera n celulele bacteriene. Celulele bacteriene vor putea sintetiza o serie de enzime, hormoni, antibiotice !i, deoarece bacteriile se pot cre!te u!or, va fi o cale foarte eficient# de producere a acestor substan"e. Genele sintetizate artificial vor putea fi integrate n cromozomii celulelor, n locul genelor cu defecte, comb#tndu-se astfel, cauza unor maladii ereditare !i nu efectul lor.

103

4.2. IZOLAREA GENEI

A fost efectuat# pentru prima dat# de J. Beckwith de la Universitatea Harvard din SUA, n anul 1969. Izolarea primei gene s-a realizat la bacteria E.coli, cu ajutorul fenomenelor de transduc"ie specializat# !i sex-duc"ie. Mai nti s-a izolat ntregul operon lac. Genele care constituie acest operon sunt: genele structurale (z, a !i y), gena reglatoare (i), promotorul (p) !i operatorul (o). Prin cartarea acestui operon s-a stabilit c# ordinea acestor gene n operon este: a y z o p i. Etapele mai importante ale izol#rii genei lac sunt redate n fig.4.1. n prima etap# prin transduc"ie specializat# fagul $ s-a deta!at de cromozomul bacteriei al#turi de gena gal, iar al#turi de acesta s-a ata!at un factor de fertilitate F ce con"inea gene ale operonului lac. n etapa a doua, operonul lac a fost inserat n cromozomul bacteriei, n mijlocul genei gal, iar fagul $ ntr-o regiune al#turat#, dar separat# printr-un segment din cromozom. n cea de a treia etap# s-au separat bacteriile la care s-a pierdut segmentul dintre gena lac !i fagul $ astfel c# fagul $ este plasat adiacent genei lac. Fagul $ cap#t# mai nti o form# circular#, avnd inclus !i operonul lac (etapa 5), iar n ultima etap# prin iradieri cu raze U.V. fagul s-a eliberat de cromozomul bacterian, !i-a rec#p#tat forma linear# avnd inclus n interiorul s#u operonul lac.

Fig.4.1. Etapele izol#rii operonului lac la bacteria Escherichia coli

104

Opera"iile descrise mai sus s-au efectuat !i cu un alt fag, 80, ce realizeaz# transduc"ia specializat#. ADN al fiec#rui fag are o caten# cu o greutate molecular# mai mare (caten# grea) !i o caten# cu o greutate molecular# mai mic# (caten# u!oar#). Prin denaturare, catenele fagilor s-au izolat una de alta, iar prin ultracentrifugare s-au separat catenele grele de cele u!oare. Catenele grele s-au pus mpreun# !i prin procesul de renaturare, ntre ele, se refac leg#turile de hidrogen, dar numai n zona operonului lac, acolo unde cele dou# catene au nucleotide complementare, n rest catenele r#mn distan"ate. Cu ajutorul enzimelor ce hidrolizeaz# ADN monocatenar, s-au eliminat catenele libere, r#mnnd doar operonul lac, bicatenar. Izolarea genelor a avut o importan"# deosebit# pentru c# a deschis calea spre studiul aprofundat al materialului genetic in vitro, dar mai ales spre transferul de gene de la un organism la altul.

4.3.TRANSFERUL DE GENE (TRANSGENEZA)

n natur# se realizeaz# pe mai multe c#i: la organismele superioare, n procesul de fecundare sau prin transduc"ie cu ajutorul virusurilor, iar la organismele inferioare (procariote) transferul de gene se realizeaz# prin intermediul fenomenelor de transformare, conjugare, sex-duc"ie !i transduc"ie. Transferul de gene ntre speciile ndep#rtate filogenetic are la baz# tehnica ADN recombinat, care const# n realizarea de hibrizi moleculari ADN, ce provin de la cele dou# specii. Perfec"ionarea tehnicii ADN recombinat nu a fost posibil# dect dup# descoperirea unor enzime care rup molecula de ADN n anumite puncte, denumite endonucleaze de restric$ie (restrictaze) !i a ADN-ligazelor care resudeaz# molecula de ADN, n vederea realiz#rii de ADN hibrid. Enzimele de restric"ie se g#sesc n num#r foarte mare, fiecare fiind specific# unei anumite secven"e de nucleotide, deci unei gene. Recunoscnd secven"a specific#, restrictazele determin# t#ieturi la nivelul ambelor catene de ADN, fragmentnd molecula. Restrictazele constituie adev#rate bisturie biologice, cu ajutorul c#rora se poate desprinde din molecula de ADN, o gen# ce urmeaz# a fi transferat#. Genele ce trebuiesc transferate pot fi sintetizate in vitro. n realizarea transferului interspecific al genelor, prima problem# ce trebuie rezolvat# este izolarea unei gene, prin una din tehnicile descrise !i g#sirea unui vector sau vehicul. Rolul de vehicul l poate avea att ADN plasmidial, ct !i ADN al unor virusuri cum ar fi, $, SV40. n general vehiculele sunt molecule de ADN circular. n anul 1973, A. Chang !i S. Cohen, au reu!it s# ob"in# plasmide hibride care con"ineau genele de la dou# bacterii !i anume gena pentru rezisten"a la tetraciclin#, de la E. coli !i gena pentru rezisten"a la penicilin# de la Staphylococcus aureus.
105

O alt# cale prin care se realizeaz# transferul de gene este folosirea ca vectori a virusurilor temperate, care la un moment dat se g#sesc integrate n cromozomul bacterian, sub form# de profagi. La un moment dat, profagii se elibereaz# din cromozomul bacterian !i produc liza bacteriei. n acest caz, bacteriofagii pot lua o gen# din cromozomul bacteriei !i la o nou# infec"ie o pot transfera ntr-o alt# bacterie. n anul 1971, geneticianul C. Merril a reu!it s# transfere gena ce r#spunde de metabolizarea galactozei de la bacteria E. coli n celulele umane. Pentru realizarea acestui transfer s-a procedat astfel: bacteriile E .coli au fost infectate cu bacteriofagul $, care se inser# adiacent genei gal din cromozomul bacterian. Se provoac# liza bacteriei !i se vor elibera fagi $ care posed# gena gal. Ace!ti fagi recombina"i au fost introdu!i ntr-o cultur# de celule umane, ce proveneau de la un individ ce prezenta maladia ereditar# galactosemia (lipsa genei ce determin# enzima necesar# metaboliz#rii galactozei, n glucoz#). Dup# un timp s-a constatat c# celulele umane au nceput s# metabolizeze galactoza. Se poate spune c# bacteriofagii se comport# n mod similar cu plasmidele, putnd ncorpora n cromozom gene str#ine, pe care le poate transfera n alte celule pe care le infecteaz#. Aceste transferuri de gene deschid mari perspective mai ales n cazul transferului de gene de la plante sau animale n celulele bacteriene, care ar putea s# produc# pe medii relativ simple, mari cantit#"i de enzime, hormoni, proteine, de care are nevoie omenirea. n acest sens se poate men"iona transferul genei ce determin# sinteza ovalbuminei, protein# din oul de g#in#, la E. coli K12 ($). S-a izolat mai nti ARNm ce codific# ovalbumina din ovocitul g#inilor. Folosind fenomenul de complementaritate s-a sintetizat ADN, respectiv gena ovalbuminei care a fost inclus# apoi ntr-un plasmid recombinat, care prin fenomenul de conjugare a fost transferat n celula bacterian#. n urma acestui transfer, celulele bacteriene au nceput s# produc# ntre 30000-90000 molecule de ovalbumin#, ceea ce reprezint# n jur de 0,5-1% din cantitatea total# de proteine a bacteriei. A. Riggs (citat de P. Raicu, 1980) a reu!it s# transfere gena ce determin# sinteza insulinei umane n pancreas, la o bacterie care a nceput s# sintetizeze insulina. Insulina uman# este format# din dou# catene polipeptidice alc#tuite din 21 !i 30 de aminoacizi. n experien"a amintit# A. Riggs a folosit o gen# sintetizat# artificial. n anul 1977 s-a reu!it s# se transfere gena ce determin# sinteza hormonului de cre!tere somatostatina, produs de hipotalamus, pancreas, stomac !i intestine, din celulele umane n celulele bacteriene care au nceput s# sintetizeze acest hormon. O alt# realizare a ingineriei genetice este transferul genelor ce determin# sinteza interferonului din celulele umane n celula bacteriei E.coli. Interferonul este o protein# cu rol antiviral !i este produs de leucocitele umane din snge. Cercet#rile Institutului de Oncologie !i Imunogenetic# din Villejuif arat# c# interferonul este capabil s# vindece !oarecii bolnavi de diferite tipuri de cancer, ce nu p#reau induse de virusuri, c# aceast# substan"# stimuleaz#
106

globulele albe, denumite NK (natural killers - celule uciga!e), o linie de ap#rare mpotriva celulelor canceroase. Producerea interferonului prin infectarea leucocitelor cu virusuri, pentru a stimula fabricarea de interferon, era foarte scump# !i se ob"ineau cantit#"i infime de substan"#. La nceputul anului 1980, Charles Weismann de la Institutul de biologie molecular# din Zurich, a realizat sinteza interferonului, cu ajutorul bacteriei E. coli. Ast#zi se !tie c# interferonul are urm#toarele func"ii: inhib# cre!terea celulelor n general, regleaz# activit#"ile imunitare, m#re!te activitatea celulelor albe (ce recunosc !i distrug celulele tumorale), stimuleaz# celulele macrofage ce distrug virusurile, bacteriile !i alte particule. Se poate spune c# interferonul este un mediator celular, deoarece ac"ioneaz# ca un activator al celulelor specializate n distrugerea virusurilor !i a celulelor canceroase !i nu un antibiotic antiviral. Transgeneza, transferul de gene sau fragmente de ADN de la un organism (donor) la altul (receptor) se poate realiza fie prin metoda direct# (introducerea moleculei de ADN n celule receptor), fie prin metode indirecte (ADN este introdus n receptor printr-un vector). Prin metoda direct#, ADN exogen poate fi transferat n celule gazd# prin mai multe tehnici: endocitoz#, electroporare, microinjec"ie, macroinjec"ie !i biolistic (Butnaru Gallia, 1999). Endocitoza presupune ob"inerea mai nti a protopla!tilor, celule vegetale c#rora li s-a ndep#rtat peretele celular rigid, pectocelulozic, cu ajutorul enzimelor (pectinaza, celulaza) sau pe cale mecanic#. ADN transformant este adsorbit la suprafa"a celulelor receptoare, iar apoi este inclus n celule. Aceast# metod# presupune protejarea moleculei de ADN prin includerea sa n lipozomi, prin tratare cu polietilenglicol !i fosfat de calciu !i existen"a a mai multor molecule de ADN transformant pentru ca transferul s# se realizeze cu o frecven"# ct mai mare. Electroporarea const# n transferul moleculelor de ADN n protopla!ti cu ajutorul unor impulsuri electrice de scurt# durat# sau cu ajutorul razelor laser (porare laser). Se apreciaz# c# eficien"a transform#rii genetice este destul de mic# fiind dependent# de greutatea molecular# a ADN, concentra"ia polietilenglicolului, durata !i intensitatea impulsului electric, starea fiziologic# a celulei receptor (Butnaru Gallia, 1999). Microinjec$ia este o metod# mult mai precis#, deoarece o molecul# cunoscut# (ADN, ARN, proteine) se introduce cu o microsering# din sticl# montat# pe un micromanipulator, ntr-un receptor (protoplast, celul# animal#), fixat pe o lam# de sticl#, n gel de agaroz#. Metodele biolistice constau n introducerea unui ADN exogen ntr-un receptor prin intermediul a!a numitului tun de particule sau cu ajutorul arcului electric. Cu ajutorul tunului de particule, microparticule de aur sau tungsten asociate cu molecule de ADN donor sunt direc"ionate ntr-o celul# sau grup de
107

celule. Celulele sau "esuturile bombardate cu aceste microparticule, crescute pe un mediu de cultur# vor regenera plante, transformate genetic. Transgeneza indirect# presupune izolarea unui segment de ADN (o gen#), clonarea genei respective !i transferul ntr-o celul# receptor prin intermediul unui vector (Butnaru Gallia, 1999). Gena ce trebuie transferat# a primit denumirea de pasager; de obicei pasagerul, p#truns ntr-o celul# receptor este degradat de sistemul enzimatic al acesteia. Pentru a evita aceast# degradare, gena (pasagerul) se asociaz# cu un vector, iar mpreun# constituie o macromolecul# complex#, de ADN recombinant. Izolarea ADN de la diferite organisme procariote sau eucariote se realizeaz# prin diferite metode fizico-chimice (centrifugare, tratare cu diferite enzime etc.). Deoarece fragmentul de ADN izolat poate con"ine mai multe gene este necesar# fragmentarea acestuia, pentru izolarea genei (pasagerului) ce trebuie transferat#. Pentru izolarea unei gene de interes se folose!te ARNm al genei respective, care n prezen"a reverstranscriptazei se va transforma ntr-o molecul# de ADN complementar (ADN-c) monocatenar. n prezen"a ADN-polimerazei I, ADN-c !i va sintetiza catena complementar#, devenind ADN bicatenar, care va avea nscris# informa"ia nucleotidic# din ARNm. Genele ce urmeaz# a fi transferate nu vor fi func"ionale dac# nu au ata!ate promotorul, intensificator sau atenuator ai transcrip"iei informa"iei genetice, care intr# n structura genelor !i regleaz# activitatea acestora. n procesul de transgenez# sunt absolut necesare enzimele de restric#ie (endonucleaze de restric#ie), produse n mod natural de bacterii, cu rol imunitar, respectiv de a distruge moleculele de ADN exogen ce p#trund n acestea. Sunt cunoscute n prezent peste 500 de tipuri de endonucleaze de restric"ie care ac"ioneaz# ca ni!te bisturie moleculare, sec"ionnd moleculele de ADN, n secven"e scurte ntre dou# baze azotate adiacente cunoscute ("int#). Cele mai cunoscute endonucleaze de restric"ie sunt: EcoR1 (izolat# de la Escherichia coli), Hpa I (din Haemophilus parainfluenzae), Alu I (din Arthriobacter luteus) etc. Aceste enzime ac"ioneaz# asupra unor secven"e de nucleotide constituite din 4, 5 sau 6 nucleotide, fie pe axul de simetrie al acestora sau de o parte !i de alta a acestuia. Astfel, EcoR1 sec"ioneaz# ADN n secven"# hexanucleotidic# 5GAATTC-3 ntre nucleotidele G !i A, pe ambele catene ale moleculei, n timp ce Alu I ac"ioneaz# la nivelul tetranucleotidului 5-AGCT-3 ntre nucleotidele A !i G (Crlan M., 1996). Fiecare enzim# are un mod particular, unic, de ac"iune, de aceia sunt nelipsite n opera"iunile de fragmentare a moleculelor de ADN. Transgeneza necesit# folosirea unui alt grup de enzime !i anume ADNligazele, care leag# fragmentele de ADN ce trebuie transferat, de ADN al unui vector. Trebuie avut n vedere !i receptorul n care trebuie transferat ADN exogen, care poate fi o bacterie, o celul# vegetal# sau animal#. ntre receptor !i vector trebuie s# fie o compatibilitate perfect#, a!a nct, un vector este func"ional numai la un anumit receptor.
108

4.3.1. Principalii vectori utiliza$i n transgenez#

Vectorii sunt molecule mici de ADN ce ncorporeaz# genele ce trebuie transferate (pasagerul). Vectorii trebuie s# aib# capacitatea de a p#trunde ntr-o celul# gazd#, iar gena ce trebuie transferat# s# fie marcat# genetic cu un marker specific, pentru a putea fi recunoscut#. Ingineria genetic# folose!te un num#r mare de vectori, func"ie de pasager !i de receptor. Plasmidele bacteriene, cromozomi miniaturali, care pot include gene str#ine sunt utilizate frecvent ca vectori: plasmida pBR322, plasmida pUC, plasmida Ti, plasmida Ri !.a. Ca vectori pentru celulele vegetale, n vederea ob"inerii plantelor transgenice se folosesc plasmidele Ti (tumor inducing) de la Agrobacterium tumefaciens !i Ri (root inducing) de la Agrobacterium rhizogenes. M#rimea plasmidelor, exprimat# n kilobaze (1000 de perechi de baze) este n jurul a 200 kb !i pot include !i transfera segmente de ADN de 8-10 kb. Un alt grup de vectori l reprezint# bacteriofagii. Fagul %, care con"ine 48500 pb poate transfera secven"e de ADN mai mari de 40 kb. Cosmidele sunt vectori hibrizi realiza"i ntre fagul $ !i plasmide, combinnd nsu!irile plasmidelor !i a fagului, n sensul c# sunt func"ionale, exprimndu-se fenotipic, f#r# s# se integreze n cromozomul celulelor gazd#. Se folosesc frecvent pentru clonarea !i transferul fragmentelor de ADN de la eucariote, fragmente de aproximativ 45 kb, care n mod normal nu pot fi incluse n fagul $. Fagii monocatenari au ca material genetic o singur# caten# de ADN notat# conven"ional cu (+). Aceast# caten# p#trunde n celula gazd#, n momentul infec"iei, constituind matricea pentru sinteza unei catene complementare, notat# cu (-). mpreun# cu catena (+) va forma o molecul# bicatenar# de ADN, care poate fi izolat# !i folosit# pentru clonarea ADN. Exist# !i al"i vectori, cum ar fi vectorii de expresie, a c#ror gene pot fi transcrise !i translate n proteine, virusul SV 40 (Simian Virus 40), vectorii YAC (Yeast Artificial Chromosome) cromozomi artificiali ai drojdiei de bere, vectorii BAC (Bacterial Artificial Chromosome) etc.

4.3.2. Realiz#ri ale transgenezei la plante

n ultimii ani s-au realizat plante transgenice, denumite !i plante modificate genetic. A!a cum s-a specificat anterior, la plantele superioare se folosesc ca vectori ai genelor de interes plasmidele Ti de la Agrobacterium tumefaciens, care n mod natural dau na!tere la tumori !i plasmidele Ri de la Agrobacterium rhizogenes, care dau na!tere la r#d#cini filiforme.
109

Plasmidele Ti, datorit# regiunii denumite ADN-T func"ioneaz# ca transpozoni (elemente genetice mobile). Numai aceast# regiune se integreaz# n cromozomul celulei gazd#. Bacteriile din genul Agrobacterium ofer# singurul exemplu de inginerie genetic# natural#, deoarece n urma infec"iei, bacteria transfer# n nucleul celulei vegetale o mic# por"iune din ADN al plasmidei, care determin# transformarea celulei infectate n celul# tumoral#. Prin eliminarea genelor tumorale (oncogenelor) !i asocierea acestei plasmide dezarmate cu o plasmid# ce con"ine gena de interes, clonat# n bacteria Escherichia coli se ob"ine un vector de transformare foarte eficient pentru dicotiledonate (n condi"ii naturale Agrobacterium nu atac# monocotiledonatele). Indiferent de metoda de transfer, frecven"a de integrare a genelor n genomul celulei vegetale este destul de redus#. Din aceast# cauz#, genei de interes i este asociat# o gen# marker, care permite selec"ia celulelor transformate. Se folosesc frecvent ca gene marker, genele care confer# rezisten"# la un antibiotic sau la un erbicid, care-i va permite celulei transformate s# supravie"uiasc# pe un mediu de cultur# ce posed# antibioticul sau erbicidul. Cele mai importante plante transgenice aflate deja n cultur# sunt soia Roundup Ready, tolerant# la erbicidul total Roundup (care are ca principiu activ glifosat) !i porumbul Bt, rezistent la atacul sfredelitorului (Ostrinia nubilalis), urmnd a se ob"ine plante tolerante la doi sau mai mul"i factori (rezisten"# la un erbicid asociat# cu rezisten"a la o insect#, androsterilitate asociat# cu rezisten"a la un erbicid etc.). O alt# realizare a ingineriei genetice o constituie tomatele, la care s-a modificat procesul de coacere a fructelor, denumite Flavr Savr, fructele men"inndu-!i prospe"imea timp ndelungat. n acest caz, s-a folosit tehnologia ARN antisens, blocndu-se sinteza uneia din enzimele ce degradeaz# pere"ii celulari ai fructului sau a hormonului etilen# (cel care accelereaz# procesul de coacere, aceasta fiind ntrziat#). O alt# direc"ie a ingineriei genetice este transferul genelor nif de la plantele leguminoase la plantele cerealiere.

4.3.3. Transferul genelor fixatoare de azot

Plantele din familia Leguminoase (maz#rea, fasolea, bobul, soia etc.) au capacitatea s# fixeze N atmosferic cu ajutorul unor bacterii cu care tr#iesc n simbioz#. Bacteriile fixatoare de azot p#trund n "esuturile r#d#cinilor, formnd a!a numitele nodozit#"i, iar din aceast# simbioz# beneficiaz# ambele specii: plantele ob"in azotul atmosferic iar bacteriile ob"in de la plante compu!ii organici de care au nevoie. Exist# !i alte plante, n afar# de cele leguminoase, care tr#iesc n simbioz# cu bacterii fixatoare de azot: unele graminee (Digitaria), chiar unii arbori cum ar fi aninul (Alnus).

110

Azotul atmosferic poate fi fixat de unele bacterii din genurile: Rhizobium, Azotobacter, Desulfovibrio, Hydrogenomonas etc. sau de unele alge verzi-albastre. Mecanismul fix#rii azotului atmosferic a fost descifrat n 1960, n laboratoarele Du Pont de Nemours (SUA). La bacteria Clostridium pasteurianum s-a izolat enzima nitrogenaza, care catalizeaz# fixarea azotului atmosferic. Aceast# enzim# este format# din dou# molecule proteice, una cu greutate molecular# mare (220.000 daltoni) !i cealalt# cu greutate molecular# mic# (55.000 daltoni). Molecula mare con"ine atomi de fier, sulf !i molibden, iar molecula mic# doar fier !i sulf. Cele dou# molecule sunt active mpreun# !i numai n absen"a oxigenului atmosferic. Protejarea moleculei de nitrogenaz# mpotriva oxigenului atmosferic este asigurat# de un pigment denumit leghemoglobin# care se combin# cu oxigenul !i protejeaz# astfel enzima. Sinteza enzimei nitrogenaza este determinat# de un grup de gene notate cu nif care sunt localizate pe cromozom al#turat de gena his, ce determin# metabolismul histidinei. Se pare c# este vorba de dou# gene nif: una ce determin# sinteza moleculei mari a nitrogenazei !i alta ce determin# sinteza moleculei mici. Transferul genelor nif de la bacteriile fixatoare de azot la altele nefixatoare se poate realiza pe c#ile cunoscute de recombinare la bacterii: transformare, conjugare, sex-duc"ie !i transduc"ie. Geneticianul R. Dixon de la Universitatea din Sussex (Anglia) a transferat genele nif !i his de la bacteria F+ de Klebsiella pneumoniae, la bacteria F- de E. coli. Tot Dixon n 1974 a ob"inut un factor de fertilitate recombinat care includea n el !i genele nif, denumite FN 68. Acest factor de fertilitate, introdus n mediul de cultur# a unor bacterii incapabile s# fixeze azotul atmosferic (ex. E.coli), a produs transformarea acestora n bacterii fixatoare de azot. Pentru transferul genelor nif se pot folosi ca vectori !i bacteriofagii n procesul de transduc"ie. S. Stroicher a folosit fagul P1 pentru transferul genelor nif. Transferul genelor nif de la o bacterie la alta a creat premisele realiz#rii unor simbioze a acestor bacterii nu numai cu leguminoasele, ci !i cu alte plante care nu au capacitatea de a fixa azotul atmosferic. n viitor se preconizeaz# transferul acestor gene nif n cromozomul plantelor sau n cromozomul cloroplastelor, situa"ie n care plantele nu ar mai avea nevoie de simbioze cu bacteriile, plantele fixndu-!i direct azotul atmosferic.

4.4. HIBRIDAREA CELULAR" LA ANIMALE

Hibridarea celular# in vitro a fost realizat# pentru prima dat# n 1960 de cercet#torul francez G. Barski. A cultivat pe un mediu artificial celule ce proveneau de la dou# specii de !oareci !i a observat c# unele celule au fuzionat rezultnd celule hibride, care nsumeaz# cromozomii de la celulele ini"iale !i au nsu!iri morfologice, fiziologice !i biochimice diferite de ale celulelor ini"iale.
111

Fuzionarea spontan# a celulelor se realizeaz# cu o frecven"# foarte mic#. Pentru a m#ri frecven"a celulelor hibride s-au c#utat o serie de agen"i inductori care s# favorizeze hibridarea celular#. Virusul Sendai inactivat s-a dovedit a fi un bun inductor, capabil s# m#reasc# foarte mult frecven"a celulelor hibride. S-au identificat o serie de substan"e chimice care stimuleaz# hibridarea celular#: un analog al isoleucinei, polietilenglicolul etc. O alt# problem# ce a condi"ionat hibridarea celular# a fost modul de separare sau selectare a celulelor hibride de restul celulelor din mediul de cre!tere. S-au elaborat a!a numitele medii selective, n care celulele hibride se nmul"esc n timp ce celulele parentale sunt eliminate. Folosind tehnicile prezentate mai sus, s-au reu!it hibrid#ri celulare ntre celule de la specii foarte diferite: celule de hamster chinezesc x celule de !oarece, celule umane x celule de !oarece, celule umane x celule de "n"ar, celule de !oarece x celule de g#in#. Celulele hibride nu pot regenera organisme hibride complet dezvoltate, dar se nmul"esc pn# la un anumit moment, rezultnd clone celulare hibride. Ob"inerea acestor clone celulare hibride are un rol foarte important n cercet#rile de genetic#. Dac# ne referim la hibrid#rile dintre celulele umane x celule de !oarece (fig.4.2.), s-a constatat c# celulele hibride con"in ini"ial to"i cromozomii (46 de la om + 40 de la !oarece). n momentul cnd ncep s# se divid#, celulele hibride pierd cte un cromozom ce apar"ine unei specii. n cazul hibrid#rii celule umane x celule de !oarece se pierd o parte din cromozomii umani.

Fig.4.2. Hibridarea celular# la animale 112

Aceast# particularitate a celulelor hibride, a fost folosit# n alc#tuirea h#r"ilor cromozomice, deoarece eliminarea a cte unui cromozom se manifest# prin lipsa sau prezen"a n plus a uneia sau a mai multor enzime, putndu-se localiza unele gene pe cromozomi. Pentru localizarea mai precis# a genelor n diferite regiuni ale cromozomului se folosesc pentru hibridare celule umane ce provin de la indivizi ce prezint# anumite restructur#ri cromozomice. S-au realizat hibrizi celulari ntre leucocitele ce produc interferon !i celulele tumorale, rezultnd celule de tip hibridoma, ce produc o cantitate mult mai mare de interferon.

4.5. HIBRIDAREA CELULAR" LA PLANTE

Hibridarea celular# la plante s-a putut realiza numai dup# ce s-au ob"inut a!a numi"ii protopla"ti, care sunt celule vegetale c#rora li s-a ndep#rtat membrana rigid# pecto-celulozic#. ndep#rtarea membranei pecto-celulozice s-a realizat la nceput pe cale mecanic# iar mai trziu, dup# anul 1960, prin metode chimice, folosind o serie de enzime cum ar fi: celulaza, pectinaza, macerozima. n anul 1971, francezul J. P. Nitsch a ob"inut o plant# complet dezvoltat#, prin regenerarea protopla!tilor (fig. 4.3.). n ultimii ani s-au izolat protopla!ti !i s-au regenerat plante ntregi la: soia, morcov, petunia, bob, maz#re, gru etc. (Raicu P., 1980).

Fig. 4. 3. Ob"inerea enzimatic# a protopla!tilor 113

Fuzionarea protopla!tilor ridic# acelea!i probleme ca !i fuzionarea celulelor animale: m#rirea frecven"ei celulelor hibride !i selectarea acestora. Pentru a m#ri frecven"a de fuzionare a protopla!tilor se folosesc: polietilenglicolul, nitratul de sodiu, ionii de Ca la un pH ridicat, ser proasp#t de iepure etc. Selectarea celulelor fuzionate se realizeaz# prin folosirea de medii selective, care elimin# celulele nefuzionate p#strndu-le pe cele hibride. La plante s-a constatat c# mediile de cultur# ce nu posed# substan"e de cre!tere (citochinin# !i auxin#) elimin# celulele parentale, n timp ce celulele hibride se pot dispensa de aceste substan"e. P. S. Carlson (1972) a ob"inut plante hibride ntregi, prin fuzionarea protopla!tilor de la speciile de tutun, Nicotiana glauca (2n=24) !i N. langsdorffii (2n=18). Plantele rezultate erau amfiploizi ce aveau 2n=42 cromozomi, identici cu hibrizii ob"inu"i pe cale sexuat# (fig.4.4.) Aceast# metod# de ob"inere a hibrizilor a permis ns# ob"inerea de hibrizi celulari ntre speciile ndep#rtate filogenetic care n mod obi!nuit nu se pot hibrida sexuat: morcov x tutun, porumb x ov#z, porumb x soia, morcov x petunia.

Fig. 4.4. Hibridarea celular# la plante 114

Un aspect foarte important este acela c# protopla!tii pot include molecule de ADN str#ine, existente n mediu, particule str#ine(virusuri) !i alte molecule. Fenomenul a fost numit transgenoz#, iar pe aceast# cale se pot transfera gene sau chiar organite citoplasmatice de la un organism la altul. Din punct de vedere genetic, protopla!tii prezint# o serie de avantaje: - permit nmul"irea rapid# a unor genotipuri valoroase; - se pot ob"ine hibrizi celulari ntre dou# specii ndep#rtate din punct de vedere filogenetic, care nu se pot ncruci!a sexuat; - se pot ob"ine forme cu grade diferite de poliploidie; - se pot induce muta"ii la nivelul protopla!tilor haploizi sau diploizi; - se pot transfera gene, cromozomi sau cloroplaste; - protopla!tii pot regenera plante libere de viroze. n ultimii ani cercet#rile privind hibridarea celular# a luat o mare amploare, reu!indu-se hibridarea unor celule animale cu celule vegetale. n anul 1976 A. Lima de Faria (Suedia) a reu!it fuzionarea unor celule tumorale umane de tip HeLa cu protopla!ti de morcov, folosind polietilenglicolul ca agent inductor. Aceste hibrid#ri urm#resc combinarea unor genotipuri extrem de diferite, dep#!indu-se limitele impuse de reproducerea sexuat#.

4.6. HAPLOIDIA PRIN ANDROGENEZ" LA PLANTE

Dezvoltarea partenogenetic# a unui embrion sau a unei plante dintr-un microspor haploid poart# numele de androgenez# iar dezvoltarea unui organism haploid dintr-o oosfer# sau un nucleu secundar al sacului embrionar se nume!te ginogenez#. n anul 1964 cercet#torii indieni S. Guha !i S. C. Maheswari au cultivat pe un mediu artificial, antere de Datura innoxia !i au ob"inut numero!i embrioizi. Cu doi ani mai trziu s-au ob"inut plante haploide complet dezvoltate la tutun (Nicotiana tabacum) (Raicu P., 1980). Androgeneza este de dou# tipuri: direct# !i indirect# (fig.4.5.). Androgeneza direct! const# n faptul c# programul normal al microsporului este deviat sub influen"a unor stimuli externi, avnd loc o evolu"ie particular# a nucleului haploid, care prin diviziuni mitotice devine embrioid !i apoi plant# matur#. n cazul androgenezei indirecte, se formeaz# mai nti un "esut nediferen"iat denumit calus, din care se pot diferen"ia apoi plante haploide cu diferite grade de poliploidie. Ob"inerea unor plante haploide prin androgenez# este condi"ionat# de numero!i factori, cum ar fi vrsta anterelor, temperatura, lumina, compozi"ia mediului de cultur#, fapt ce a f#cut ca numai la unele specii s# se poat# ob"ine haploizi pe aceast# cale. Pentru genetic#, haploizii ob"inu"i prin androgenez# prezint# o mare importan"#. n primul rnd se demonstreaz# c# n nucleul celulelor vegetale exist# toat# informa"ia ereditar# a organismului, inclusiv programul embriogenezei, deoarece dintr-o singur# celul# se regenereaz# un organism ntreg.
115

Plantele haploide sunt pure din puncte de vedere genetic, deoarece sunt hemizigote, existnd o coresponden"# complet# ntre genotip !i fenotip. Prin dublarea num#rului de cromozomi se ob"in plante diploide, complet homozigote, a!a numitele linii izogene, ntr-un timp foarte scurt, de o importan"# deosebit# pentru ameliorare. Dac# prin metodele clasice liniile homozigote la plantele alogame se ob"in n 8-9 genera"ii de consangvinizare, prin haploidie liniile homozigote se ob"in ntr-o singur# genera"ie. La plantele haploide se manifest# toate genele recesive iar muta"iile se pot detecta foarte u!or. Haploizii s-au dovedit utili n studiile de embriogenez# experimental#, de citologie, citogenetic#, de mutagenez#, de fiziologie !i biochimie, de citodiferen"iere, datorit# faptului c# expresivitatea genelor la plantele haploide, care sunt hemizigote, este total#, ntr-o singur# genera"ie.

Fig. 4.5. Haploidia prin androgenez# direct# !i indirect#

116

CAPITOLUL 5 EREDITATEA MENDELIAN!

Moto: "Gregor Mendel, o figur! cu care se poate mndri ntreaga omenire C. Sandu Aldea Odat cu Mendel, fenomenele biologiei au dobndit dintr-odat! rigoarea matematicienilor. Metodologia, tratarea statistic! "i reprezentarea simbolic!, impun eredit!#ii o ntreag! logic! intern! Francois Jacob

Apari!ia lucr"rii Versuche uber Pflanzenhybriden n 1866, a naturalistului #i matematicianului ceh Gregor Johann Mendel (1822-1884), a constituit un moment important n istoria biologiei. Gregor Mendel este considerat unul din fondatorii geneticii, datorit" teoriei factorilor ereditari, sintez" a celor dou" legi ale eredit"!ii: legea segreg"rii caracterelor (legea purit"!ii game!ilor) #i legea segreg"rii independente a perechilor de caractere (legea liberei combina!ii a factorilor ereditari). Unui prieten, Gregor Mendel i-a spus: Timpul meu va veni #i ntradev"r a venit, dup" redescoperirea legilor eredit"!ii, la nceputul secolului XX de Hugo de Vries (Olanda), Carl Correns (Germania) #i Erich Tschermack (Austria). Redescoperirea legilor lui Mendel a dus la retip"rirea lucr"rii #i traducerea ei n mai multe !"ri. n limba romn", lucrarea lui Mendel a fost tradus" n anul 1945 din ini!iativa doctorului A. Piescu.

5.1. TERMINOLOGIA FOLOSIT! N GENETICA MENDELIAN!

n cercet"rile sale, Gr. Mendel a folosit n mod deosebit maz"rea, Pisum sativum, plant" autogam", care prezint" caractere distincte de la o varietate la alta. Caracterele luate n studiu au fost urm"toarele: talia plantelor (nalt" sau pitic"), culoarea p"st"ilor nemature (galben" sau verde), culoarea cotiledoanelor (verde sau galben"), suprafa!a semin!elor (neted" sau zbrcit"), culoarea tegumentului boabelor (alb" sau cenu#ie), pozi!ia florilor (axial" sau terminal"), forma p"st"ilor (dreapt" sau gtuit" ntre semin!e). Aceste perechi de caractere au fost numite mai trziu alelomorfe (de W. Bateson #i E. R. Saunders, 1902), din care a rezultat termenul de alele. Determinan!ii ereditari au fost numi!i #i factori ereditari (indica!i ulterior prin no!iunea de gen").
117

nainte de a analiza mecanismul de transmitere a caracterelor n procesul de hibridare este necesar s" fie definite cteva no!iuni de baz" care vor servi pentru n!elegerea lui. Hibridarea este ncruci#area dintre doi indivizi care se deosebesc prin una sau mai multe perechi de caractere. Hibridul este rezultatul hibrid"rii. P"rin!ii (genitorii) se noteaz" cu P (lat. parentes = p"rin!i) iar urma#ii (descenden!ii) se noteaz" cu F (lat. fillii = copii). n func!ie de num"rul de perechi de caractere prin care se deosebesc p"rin!ii, exist" mai multe tipuri de hibridare: monohibridarea (o pereche de caractere), dihibridarea (dou" perechi de caractere) etc. n concep!ia lui Gregor Mendel, determinan!ii genetici au fost numi!i factori ereditari, n genetica modern" fiind nlocui!i prin termenul de gene. Gena este unitatea elementar" ce de!ine informa!ia genetic" a unui caracter ereditar, transmis de p"rin!i la urma#i. Gena ocup" un loc precis n cromozom (locus). n celulele somatice, cromozomii omologi, unul de origine matern", cel"lalt de origine patern", vor avea #i loci omologi, ocupa!i de gene alele. Dac" alelele sunt identice (AA sau aa) indivizii se numesc homozigo#i pentru aceast" pereche de gene, iar cnd alelele sunt diferite (Aa) indivizii sunt considera!i heterozigo#i. Ereditatea mendelian" presupune, n principal, interac!iunea dominan!"-recesivitate ntre genele alele; alela care se manifest" fenotipic la hibrizii F1 este dominant!, iar perechea sa, care nu se exteriorizeaz" prin caracterul respectiv, este recesiv!. Hibrid"rile, de orice nivel, ofer" posibilitatea unei duble analize: sub aspect genotipic #i sub aspect fenotipic. Genotipul reprezint" totalitatea genelor unui individ sau constitu!ia genetic" a acestuia. No!iunea de genotip se utilizeaz" ns" #i n sens restrns, numai pentru una sau cteva perechi de gene alele (AA, Aa, aa, AABB, AaBb etc.). Fenotipul reprezint" totalitatea caracterelor morfologice, fiziologice, biochimice #i comportamentale ale individului, care rezult" din interac!iunea genotipului cu mediul.

5.2. LEGILE MENDELIENE ALE EREDIT!"II

n lucr"rile #i manualele care s-au ocupat de opera lui Mendel, rezultatele la care a ajuns el, au fost prezentate de diferi!i autori n mod diferit. n leg"tur" cu legile lui Mendel sunt men!ionate diferite formul"ri: legea uniformit"!ii hibrizilor n prima genera!ie, legea dominan!ei, legea purit"!ii game!ilor, legea segreg"rii caracterelor, legea liberei combin"ri a caracterelor numit" #i legea independen!ei caracterelor. Dup" p"rerea noastr" din lectura lucr"rii lui Mendel Experien!e asupra hibrizilor de plante, se desprind dou" legi: 1. Legea segreg#rii sau a disjunc$iei caracterelor n genera$ia a doua hibrid# (F2) (datorit" separ"rii sau segreg"rii n meioza hibridului F1 a
118

alelelor dominante #i recesive #i unirii ntmpl"toare a game!ilor pentru formarea genera!iei F2). 2. Legea combin#rii libere a caracterelor sau a segreg#rii independente a acestora (apari!ia la ncruci#area polihibrid", n urma segreg"rii #i combin"rii libere a caracterelor, a unor noi combina!ii la descenden!i).

5.2.1. Legea segreg#rii caracterelor (legea purit#$ii game$ilor)

Gregor Mendel a efectuat un num"r impresionant de mono, di #i trihibrid"ri la maz"re (Pisum sativum L.) #i la alte specii din genurile: Phaseolus, Mirabilis, Cirsium, Melandrium, Zea, Antirrhinum, Hieracium etc. Segregarea caracterelor ereditare a fost formulat", n urma analizei fenotipice #i genotipice a unor monohibrid"ri, dar poate fi demonstrat" #i-n cazul celorlalte tipuri de hibridare. Gregor Mendel a ncruci#at o varietate de maz"re cu semin!e galbene, cu o varietate cu semin!e verzi, ambele homozigote (pure din punct de vedere genetic). n genera!ia F1, au rezultat numai plante cu semin!e galbene. Caracterul culoare galben" a fost numit dominant, iar perechea sa, culoare verde, recesiv (lat. recessere = ascuns). n urma autofecund"rii plantelor din genera!ia F1 a rezultat genera!ia F2, n care s-au ob!inut dou" grupe fenotipice: (75 %) semin!e galbene #i (25%) semin!e verzi, prin urmare un raport de segregare fenotipic" de 3:1. Notnd caracterul culoare galben" cu A, iar verde cu a, n figura 5.1. se pot analiza sub aspect fenotipic #i genotipic, p"rin!ii, genera!iile F1, F2 #i F3.

Fig. 5.1. Structura genotipurilor #i a fenotipurilor n cazul monohibrid"rii 119

Gregor Mendel a explicat segregarea factorilor ereditari astfel: n celulele somatice, factorii ereditari se g"sesc sub form" de pereche (AA, Aa, aa). n urma meiozei, factorii ereditari segreg", astfel c" game!ii vor avea numai cte un singur reprezentant din fiecare pereche (A sau a), deci sunt puri din punct de vedere genetic. P"rin!ii sunt homozigo!i (AA #i aa) #i vor produce cte un singur tip de game!i (A sau a). n genera!ia F1 to!i indivizii sunt identici fenotipic (semin!e galbene) #i genotipic (Aa). Indivizii genera!iei F1, heterozigo!i, vor forma dou" tipuri de game!i pentru fiecare sex: 50% A #i 50% a. Combinarea probabilistic" a game!ilor de sex diferit face ca n F2 s" rezulte trei combina!ii genotipice, 1/4 (25%) AA, 2/4 (50%) Aa #i 1/4 (25%) aa (raportul de segregare genotipic" 1:2:1) #i dou" grupe fenotipice (75%) semin!e galbene #i (25%) semin!e verzi (raportul de segregare fenotipic" 3:1). R. C. Punnett imagineaz" un #ah de combina!ii a game!ilor celor dou" sexe, dnd posibilitatea identific"rii rapide a tuturor genotipurilor #i fenotipurilor din genera!ia F2:
Game!i % 50% A 50% a Game!i $ 50% A 25% AA 25% Aa 50% a 25%Aa 25% aa

Gregor Mendel a efectuat monohibrid"ri #i cu alte perechi de caractere, constatnd acela#i lucru: n genera!ia F1 au rezultat indivizi asem"n"tori unui p"rinte, iar n genera!ia F2, segregarea s-a realizat ntr-un raport foarte apropiat de 3:1 (tabelul 5.1.). Tabelul 5.1. Rezultatele monohibrid"rilor la maz"re (ob!inute de Gregor Mendel)
nsu%iri Caracterul Forma semin!elor Culoarea cotiledoanelor Culoarea tegumentului Consisten!a p"st"ilor Culoarea p"st"ilor Dispozi!ia florilor Forma plantei Total Dominante (D) Neted" Galben" Colorat" Tare Verde Axilar" nalt" Recesive (r) Zbrcit" Verde Alb" Moale Galben" Terminal" Pitic" 120 Dominante 5.474 6.022 705 862 428 651 187 14.949 Recesive 1.850 2.001 224 299 152 207 277 5010 Raportul D/r 2,98:1,01 3,01:0,99 3,03:0,96 2,98:1,02 2,95:1,05 3,03:0,96 2,95:1,04 2,99:1,01

Monohibrid"rile efectuate de Gregor Mendel au fost denumite mai trziu monohibrid"ri de tip Pisum. Dup" redescoperirea legilor mendeliene, imediat dup" anul 1900, s-au realizat monohibrid"ri #i la diferite specii de animale. Ob!inndu-se rezultate asem"n"toare celor de la plante, s-a demonstrat universalitatea legilor mendeliene. n anul 1901, W. Bateson a ncruci#at diferite rase de g"ini, care se deosebeau prin forma crestei: maz"re, trandafir #i simpl". Formele de creast" maz"re #i trandafir sunt dominante fa!" de forma simpl", iar n genera!ia F2 segregarea s-a produs n raportul de 3:1 (Raicu P., 1980). Zoologul francez L. Cuenot (1902) a ncruci#at #oareci cu blan" de culoare gri cu #oareci de culoare alb", ob!innd n genera!ia F1 #oareci gri, iar n genera!ia F2 segregarea s-a produs n raportul de 3:1. Experien!e similare s-au f"cut apoi la foarte multe specii de animale, nt"rind ideea de universalitate a legilor mendeliene.

5.2.2. Legea segreg#rii independente a perechilor de caractere

Cea mai simpl" form" de polihibridare este dihibridarea, termen introdus n genetic" de c"tre Hugo de Vries (1900). n acest caz sunt urm"rite dou" perechi de caractere. La ncruci#area a dou" soiuri de maz"re: plante cu semin!e galbene #i netede cu plante cu semin!e verzi #i zbrcite, n F1, G. Mendel a ob!inut plante cu semin!e galbene #i netede. n F2 perechile de caractere analizate separat au segregat dup" raportul 3:1 #i anume: 75% semin!e galbene #i 25% semin!e verzi, #i 75% semin!e netede #i 25% semin!e zbrcite. Analiznd ns" modul cum apar mpreun" cele dou" perechi de caractere, G. Mendel a constatat c" raportul dintre ele este: 56,25% semin!e galbene #i netede; 18,75% semin!e galbene #i zbrcite; 18,75% semin!e verzi #i netede; 6,25% semin!e verzi #i zbrcite. Din aceast" analiz", ajunge la concluzia c" pentru fiecare pereche de caractere segregarea se produce independent, iar raportul fenotipic pentru ambele caractere este de 9:3:3:1. Caracterele s-au separat n timpul form"rii game!ilor #i s-au combinat n timpul fecund"rii n toate modurile posibile, formnd cele patru grupe fenotipice. Aceste rezultate i-au permis lui Mendel s" emit" legea independen!ei caracterelor sau a liberei combin"ri a factorilor ereditari. Dup" p"rerea lui, cei doi game!i care particip" la fecundare nu-#i contopesc caracterele n hibrid, ci ele stau al"turate unele de altele, pentru ca apoi s" se despart" din nou n meioz", producnd prin fecundare, genera!ia a doua (F2). Pe baza celor ar"tate la monohibridare se poate alc"tui, n mod analog, un #ah de combina!ii lund n considerare de data aceasta, dou" perechi de caractere care se pot nota dup" cum urmeaz":
121

A = neted B = galben a = zbrcit b = verde Mecanismul #ahului devine simplu dac" se are n vedere faptul c" n game!i num"rul de cromozomi, respectiv de caractere alele, este pe jum"tate dect n celulele somatice. Pentru ncruci#area maz"rii cu semin!e netede #i galbene cu maz"re cu semin!e zbrcite #i verzi, avnd n vedere c" individul este rezultatul fecund"rii a doi game!i, formula p"rin!ilor va fi: AABB x aabb. Game!ii p"rin!ilor forma!i prin reducerea cromatic" vor avea formula AB #i ab. Din combinarea lor se va na#te genera!ia F1, cu formula AaBb. Hibridul F1 formeaz" patru tipuri de game!i: AB, Ab, aB, ab, din combinarea c"rora, rezult" genera!ia F2. Game!ii se formeaz" n num"r egal att pentru sexul femel, ct #i pentru sexul mascul. Din combinarea ntmpl"toare a celor patru tipuri de game!i apar 16 combina!ii genotipice, 9 genotipuri #i 4 fenotipuri (fig. 5.2.). Fenotipurile apar n raportul de 9:3:3:1: 9/16 indivizi neted - galben (AABB, AABb, AaBb, AABb, AaBb, AaBB, AaBb, AaaBb); 3/16 indivizi neted verde - (AAbb, Aabb, Aabb); 3/16 indivizi zbrcit - galben (aaBB, aaBb, aaBb); 1/16 indivizi zbrcit - verde (aabb). Din analiza celor 16 combina!ii de caractere rezult" c" acestea reprezint" 9 genotipuri care segreg" n raportul: 1/16 AABB : 2/16 AABb : 2/16 AaBB : 4/16 AaBb : 1/16 AAbb : 2/16 Aabb : 1/16 aaBB : 2/16 aaBb : 1/16 aabb (sau 1:2:2:4:1:2:1:2:1). Ceea ce i atrage aten!ia lui G. Mendel n mod deosebit n aceast" experien!" este apari!ia combina!iilor noi de caractere AAbb si Aabb (semin!e netede #i verzi), precum #i aaBB #i aaBb (semin!e zbrcite #i galbene). Acesta este motivul care l conduce la formularea celei de a doua legi, cu privire la independen!a caracterelor sau combinarea liber" a caracterelor. Acelea#i constat"ri se pot face analiznd o trihibridare. Dac" se consider" c" p"rin!ii au genotipurile AABBCC #i aabbcc, hibridul din F1 cu genotipul AaBbCc va forma 8 tipuri de game!i: ABC, ABc, AbC, Abc, aBC, aBc, abC, abc. Grupnd combina!iile hibride n F2 se constat" c" cele 64 de combina!ii genotipice segreg" n opt grupe fenotipice, dup" cum urmeaz": 27 posed" trei caractere dominante (A, B, C) 9 posed" dou" caractere dominante #i unul recesiv (A, B, c) 9 posed" dou" caractere dominante #i unul recesiv (A, b, C) 9 posed" dou" caractere dominante #i unul recesiv (a, B, C) 3 posed" un caracter dominant #i dou" recesive (A, b, c) 3 posed" un caracter dominant #i dou" recesive (a, B, c) 3 posed" un caracter dominant #i dou" recesive (a, b, C) 1 posed" trei caractere recesive (a, b, c).
122

Rezult" deci opt fenotipuri, repartizate n raportul 27:9:9:9:3:3:3:1. Rezultatele ob!inute n urma trihibrid"rii de tip Pisum confirm" legea segreg"rii independente a caracterelor.

Fig. 5.2. Dihibridare ntre un soi de maz"re cu bobul galben-rotund #i unul cu bobul verde-zbrcit

5.3. PROBABILITATEA &I RAPORTURILE MENDELIENE DE SEGREGARE

Pe baza legilor eredit"!ii descoperite de Gregor Mendel se pot indica rezultatele care se ob!in ntr-o hibridare. Raporturile mendeliene de segregare depind de num"rul perechilor de caractere. Astfel, la monohibridare, raportul fenotipic n F2 este de 3:1; la dihibridare de 9:3:3:1; la trihibridare de 27:9:9:9:3:3:3:1 #.a.m.d. ncepnd cu genera!ia F3, aceste raporturi se calculeaz" !inndu-se seama de homozigo!ia #i heterozigo!ia indivizilor, heterozigo!ii fiind singurii care segreg" n descenden!". Dac" se analizeaz" termenii care alc"tuiesc raporturile de segregare se observ" c" ei se ob!in prin ridicarea binomului 3:1 la puterea num"rului perechilor de caractere: (3+1)1, (3+1)2, (3+1)3. Pentru n perechi de caractere, binomul se ridic" la puterea n, (3+1)n.
123

Rezultatele ob!inute n diferite tipuri de hibrid"ri pot fi anticipate, dac" se aplic" o regul" simpl" de calcul a probabilit"!ilor: #ansa apari!iei concomitente a dou" fenomene este egal" cu produsul probabilit"!ilor lor separate [P(A #i B) = P(A) x P(B)]. Dac" n mai multe monohibrid"ri raporturile mendeliene sunt 3:1, 3/4 (A) x 3/4 (B), deci 9/16 (AB). Calculul poate fi realizat pentru orice combina!ie de caractere ce segreg" independent. n exemplele analizate s-a urm"rit cum se comport" n hibrid"ri un num"r mic de factori alelomorfi. De exemplu, pentru o pereche de factori, num"rul de combina!ii n F2, a fost de (21)2=4, pentru dou" perechi de factori de (22)2=16, pentru trei perechi de factori de (23)2=64, #.a.m.d. Este u#or de n!eles c" n cazul n care se analizeaz" un num"r mare de perechi de caractere, num"rul acestor combina!ii este enorm. De exemplu, pentru 10 perechi de factori, num"rul combina!iilor hibride se ridic" la peste un milion. Cu att mai complicat" apare #i analiza genetic" privind formarea #i gruparea combina!iilor la un #ir de genera!ii. Tabelul 5.2. d" posibilitatea de a calcula num"rul combina!iilor ob!inute, n func!ie de num"rul perechilor de factori pe care i urm"rim. De asemenea, permite a se deduce #i num"rul tipurilor de game!i #i a genotipurilor ce se vor ob!ine. Num"rul mare de forme pe care l ntlnim la vie!uitoare asigur" ntr-o mare m"sur" diversificarea speciilor #i procesul de evolu!ie a acestora. Tabelul 5.2. Segregarea la hibrid"rile de tip Pisum n func!ie de num"rul perechilor de alele
Num"rul perechilor de caractere Num"rul tipurilor de game!i produ#i n F1 Num"rul combina!iilor de gene n F2 Num"rul genotipurilor n F2 Num"rul genotipurilor homozigote n F2 Num"rul grupelor fenotipice #i raporturi de segregare n F2

1 2 3 4 5 n

21=2 22=4 23=8 24=16 25=32 2n

41=4 42=16 43=64 44=256 45=1024 4n

31=3 32=9 33=27 34=81 35=243 3n

21=2 22=4 23=8 24=16 25=32 2n

3:1 9:3: 3:1 27:9:9:9:3:3:3:1 (3+1)4 (3+1)5 (3+1)n

n cercet"rile pe care le-a efectuat Gregor Mendel cu privire la dihibridare s-au urm"rit caracterele neted-zbrcit #i galben-verde, iar datele sunt prezentate n tabelul 5.3. Diferen!ele dintre valorile experimentale #i cele teoretice, deduse din calcul, pot fi mai mari sau mai mici. Pentru a stabili dac" ele nu dep"#esc pragul segreg"rii de tip mendelian, dac" segregarea are un caracter ntmpl"tor sau este urmarea unei legi, se calculeaz" testul &2 (chi p"trat).
124

Tabelul 5.3. Grupele fenotipice ob!inute de Mendel ntr-o dihibridare fa!" de grupele fenotipice rezultate din calcul
Valori Experimentale Calculate teoretic Diferen!a (d) Netedegalbene 315 312,75 -2,75 Num"rul de semin!e: NetedeZbrciteZbrciteverzi galbene verzi 108 101 32 104,25 104,25 34,75 -3,75 +3,75 +2,75

Total 556 556 0

Testul &2 (chi p"trat) permite compararea distribu!iei teoretice a grupelor fenotipice cu rezultatele experimentale el se calculeaz" dup" formula:
&2 =

d
e

, n care:

' este semnul nsum"rii; d diferen!a ntre valoarea teoretic" #i valoarea experimental" a fenomenului cercetat; e valoarea teoretic". Aplicnd formula pentru datele din tabelul privind estimarea probabilit"!ilor n cazul diferitelor valori ale lui &2 #i diferite grade de liberate se ob!ine:
2,25 2 3,75 2 3,25 2 2,75 2 + + + = 0,47 312,75 104,25 104,25 34,75

Pe baza unor tabele speciale se poate aprecia dac" raporturile de segregare se abat semnificativ sau nesemnificativ de la tipul mendelian de segregare. n tabelul 5.4. dup" R. A. Fisher, sunt redate datele necesare extinderii probabilit"!ilor n func!ie de valorile lui &2 #i gradele de libertate. Tabelul 5.4. Valorile de estimare a probabilit"!ii, dup" R. A. Fisher
GL 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0,99 0,0002 0,02 0,12 0,3 0,55 0,87 1,24 1,65 2,09 2,56 0,95 0,0004 0,10 0,35 0,71 1,14 1,63 2,17 2,73 3,32 3,94 0,90 0,016 0,21 0,58 1,06 1,61 2,20 2,83 3,49 4,17 4,87 Valorile P (n %) 0,80 0,70 0,50 0,064 0,15 0,46 0,45 0,71 1,39 1,01 1,42 2,37 1,65 2,20 3,36 2,34 3,00 4,35 3,07 3,83 5,35 3,82 4,67 6,35 4,59 5,53 7,4 5,38 6,39 8,35 6,18 7,27 9,34 0,30 1,1 2,4 3,7 4,9 6,1 7,2 8,4 9,5 10,6 11,8 0,10 2,7 4,6 6,3 7,8 9,2 10,6 12,0 13,4 14,7 16,0 0,05 3,8 6,0 7,8 9,5 11,1 12,6 14,1 15,5 16,9 18,3 0,01 6,6 9,2 11,3 13,3 15,1 16,8 18,5 20,1 21,7 23,2

125

Gradele de libertate (GL) se calculeaz" sc"znd 1 din num"rul claselor (grupelor) fenotipice. n exemplul dat, gradele de libertate vor fi 4-1=3. n tabelul 5.4. valoarea 0,47, pentru 3 grade de libertate este situat" ntre valorile 0,35 #i 0,58. Aceasta corespunde unei probabilit"!i P, de la 0,95% la 0,90%, adic" la repetarea ncruci#"rii, exist" #ansa de 90-95% de a se ob!ine raportul de segregare 9:3:3:1. n statistic" se consider" c" probabilitatea este semnificativ" cnd fenomenul se repet" la cel pu!in 95% din cazuri, cnd exist" diferen!e mici ntre valorile experimentale #i cele teoretice. n exemplul folosit, valoare de 0,47 este destul de apropiat" de valoarea 0,35 din dreptul lui P=0,95 pentru 3 grade de libertate.

5.4. MECANISMUL CITOLOGIC AL SEGREG!RII CARACTERELOR

Gregor Mendel a cercetat comportarea caracterelor n descenden!a hibrid", considernd factorii ereditari drept unit"!i materiale. n celulele somatice, ei se g"sesc sub form" de perechi, n timp ce n celulele sexuale sub form" simpl". Segregarea caracterelor era condi!ionat" de segregarea factorilor, odat" cu formarea celulelor sexuale, iar combinarea lor n diferite moduri se baza pe ntlnirea ntmpl"toare a game!ilor n procesul de fecundare. Cercet"torii care urmeaz" dup" Gregor Mendel caut" s" explice independen!a #i segregarea caracterelor f"cnd uz de cuno#tin!ele citologice. Din momentul n care s-a descoperit c" factorii ereditari sunt localiza!i n cromozomi, s-a n!eles c" segregarea caracterelor este determinat" de segregarea cromozomilor n meioz" #i recombinarea lor n procesul de fecundare. W. S. Sutton (1902) a stabilit c" o specie con!ine n fiecare cromozom cte un grup de factori ereditari #i c" fiecare factor dintr-un grup se comport" independent fa!" de factorii situa!i n celelalte grupe. Num"rul grupelor de caractere corespunde cu num"rul perechilor de cromozomi omologi. Se #tie c" celulele sexuale, nainte de a suferi reducerea cromozomal", au un num"r de 2n cromozomi (fiecare cromozom cu omologul s"u). n urma diviziunii meiotice, cromozomii se despart #i se formeaz" celule haploide (game!ii). n procesul de fecundare se reface num"rul normal de cromozomi pereche, a#a fel nct n fiecare pereche se repartizeaz" un cromozom de la mam" #i unul de la tat". n cazul cnd mama #i tata prezint" acela#i caracter, n ace#ti cromozomi exist" factori identici (n doz" dubl"), iar individul este homozigot; n cazul n care p"rin!ii prezint" caractere diferite, individul rezultat este heterozigot. Cnd individul heterozigot va forma celule sexuale, acestea vor diferi ntre ele, c"ci ntr-un gamet va trece un cromozom, iar n cel"lalt, perechea lui, care difer". n acest fel, gametul lund cu sine numai jum"tate din cromozomii omologi, pierde caracterul hibrid pe care l avea zigotul #i devine pur. Factorul ereditar, care st"tea al"turi de omologul s"u, devine independent, iar ntr-o nou"
126

fecundare se va ntlni fie cu unul identic, fie cu altul diferit, producnd n cel deal doilea caz segregarea caracterelor. n mod schematic, mecanismul cromozomic al disjunc!iei se poate vedea n figura 5.3. n cele de mai sus s-a dat o explica!ie mecanismului segreg"rii caracterelor mendeliene. n natur" ns", nu ntotdeauna asemenea procese se desf"#oar" exact conform celor ar"tate, iar cercet"torii au ob!inut date care nu se ncadreaz" n raporturile stabilite de Gregor Mendel. Explica!ia dat" mai sus este valabil" n cazul n care caracterele cercetate sunt produse de un singur locus (caractere monofactoriale), iar locii implica!i sunt situa!i n cromozomi diferi!i.

Fig. 5.3. Schema mecanismului cromozomic al disjunc!iei pentru o pereche de caractere

5.5. NCRUCI&AREA ANALIZATOARE

n experien!ele pe care le-a executat Gregor Mendel la ncruci#area maz"rei cu semin!e de culoare galben" cu maz"rea cu semin!e de culoare verde sau ob!inut n F2, a#a cum s-a ar"tat, semin!e de culoare galben" #i semin!e de culoare verde n raportul 3:1. Semin!ele de culoare galben" din F1 au produs, deci, n F2 plante cu semin!e att de culoare galben", ct #i de culoare verde. Aceasta
127

dovede#te c" ele aveau structur" genetic" heterozigot". Pentru a analiza structura genetic" a descenden!ilor hibrizi cu fenotip dominant se folose#te retroncruci"area sau backcrossarea cu p"rintele recesiv sau cu un tester recesiv, metod" care poart" numele de testcross. n fond, testcross-ul ajut" la descoperirea tipurilor de game!i forma!i de un individ dominant, precum #i dac" el este homozigot sau heterozigot pentru anumite caractere. Homozigo!ii dominan!i produc o descenden!" cu fenotipul parental, n timp ce heterozigo!ii dominan!i n descenden!a testcross segreg". n figura 5.4. sunt prezentate schematic rezultatele ob!inute n urma aplic"rii testcross-ului n func!ie de genotipul individului dominant testat. n cazul retroncruci#"rii indivizilor homozigo!i dominan!i (AA) cu p"rintele homozigot recesiv (aa) se ob!ine un singur tip de indivizi cu acela#i genotip (Aa) #i cu acela#i fenotip (culoare galben"). Prin retroncruci#area indivizilor heterozigo!i (Aa) cu p"rintele homozigot recesiv (aa) rezult" dou" tipuri de indivizi n propor!ii egale, 50% cu genotipul Aa de culoare galben" #i 50% cu genotipul aa de culoare verde. Deci, la retroncruci#are se pot ob!ine dou" tipuri de rezultate: 1) dac" raportul de segregare ntre cele dou" caractere este de 1:1, nseamn" c" ascendentul dominant testat a fost heterozigot, deoarece a produs dou" tipuri de game!i; 2) dac" to!i urma#ii sunt la fel, nseamn" c" ascendentul dominant testat a fost homozigot, deoarece a format un singur tip de game!i.

Fig. 5.4. Schema segreg"rii n cazul testcross-ului unor descenden!i hibrizi cu fenotip dominant (AA sau aa)

Testcross-ul unui hibrid const" n ncruci#area descenden!ilor dominan!i F1 cu un p"rinte dublu recesiv. Dac" hibridul F1 este heterozigot, AaBb, va da na#tere la patru tipuri de game!i #i n consecin!" prin testare rezult" genotipurile AaBb, Aabb, aaBb, aabb, care segreg" fenotipic n raport de 1:1:1:1. Testcross-ul este folosit #i n lucr"rile de ameliorare, atunci cnd se urm"re#te relevarea alelelor recesive. Prin retroncruci#"ri (backcrossuri) repetate se pot restabili n hibrid caracterele p"rintelui care a fost folosit la ncruci#are.
128

Cu fiecare genera!ie de retroncruci#are se reduc heterozigo!ii #i cre#te num"rul homozigo!ilor pentru caracterele p"rintelui cu care s-a ncruci#at. * * * A#a cum a reie#it, mendelismul a constituit o important" etap" n dezvoltarea geneticii. Cercet"rile ulterioare, la nivelul celular #i molecular, au confirmat deplina valabilitate a rezultatelor #i concluziilor lui Gregor Mendel. Legile eredit"!ii descoperite de el constituie fundamentul geneticii clasice, f"r" de care nu se pot n!elege cele mai noi probleme legate de studiul eredit"!ii din punct de vedere teoretic ct #i practic. Meritele deosebite pe care le are Mendel n fundamentarea geneticii ca #tiin!" l situeaz", pe drept cuvnt, la rangul de fondator al geneticii.

129

CAPITOLUL 6 INTERAC!IUNEA GENELOR

Moto: "Variabilitatea este o calitate inseparabil! de natura ns!"i a viului, de structura programului, de modul n care acesta este recopiat la fiecare genera#ie F. Jacob

Cercet!rile hibridologice efectuate dup! redescoperirea legilor mendeliene au relevat cazuri n care, ntre genele alele pot exista rela"ii de dominan"! incomplet!, diferite tipuri de interac"iuni dintre gene sau gene #i mediu #.a. Toate acestea duc la ob"inerea unor raporturi de segregare care se abat de la cele ob"inute de G. Mendel.

6.1. ABATERI APARENTE DE LA RAPORTURILE MENDELIENE DE SEGREGARE

Abaterile aparente, au fost astfel numite, deoarece la prima vedere raporturile fenotipice ob"inute n urma hibrid!rii nu se ncadreaz! n rezultatele ob"inute de G. Mendel (3:1, 9:3:3:1 etc.). Analiza genotipurilor #i fenotipurilor, folosind tabelele de combina"ii, explic! ns! n mod mendelian formarea lor. Abaterile aparente de la raporturile mendeliene de segregare se datoreaz! att interac"iunilor dintre genele alele (dominan"a incomplet#, supradominan"a, codominan"a, genele letale #i polialelia), ct #i interac"iunilor dintre genele nealele (epistazia, poligenia, gene cu interac"iune reciproc#, gene modificatoare) sau a efectului complex al unei gene (pleiotropia).

6.1.1. Abateri aparente datorate interac"iunilor alelice

6.1.1.1. Dominan"a incomplet# n cazul experien"elor lui G. Mendel, datorit! fenomenului de dominan"! complet! (total!), heterozigo"ii (Aa) prezentau acela#i fenotip ca #i organismele homozigote (AA). n alte cazuri, ns!, fenotipul organismelor heterozigote (Aa) se deosebe#te de cel al organismelor homozigote (AA). Monohibridarea de tip Zea. C. Correns, n ncruci#area Mirabilis jalapa alba (cu flori albe) cu Mirabilis jalapa rosea (cu flori ro#ii) ob"ine n F1 plante cu flori de culoare intermediar!, roz. ncruci#nd ntre ele, plantele din F1, ob"ine, n F2, 25% plante cu flori de culoare ro#ie, 25% plante cu flori de culoare alb! #i 50% plante cu flori de culoare roz. n cazul de fa"! raportul de dezbinare este de 1:2:1. Cultivnd separat, fiecare categorie de indivizi din F2, ob"ine n F3,
130

din cei 25% produ#i cu flori albe numai genera"ii cu flori albe, din cei 25% produ#i cu flori ro#ii numai genera"ii cu flori ro#ii, iar din cei 50% indivizi cu flori roz, o segregare identic! cu cea din F2, n raport de 1:2:1 (fig. 6.1).

Fig. 6.1. Schema monohibrid!rii de tip Zea

Situa"ii asem!n!toare cu acelea#i raporturi de segregare se ntlnesc #i la ncruci#!rile care fac la Zea mays (plante cu boabe albastre x plante cu boabe galbene produc n F1 plante cu boabe violete), de unde #i numele de ereditatea de tipul Zea. La animale s-au ob"inut rezultate analoge n experien"ele cu fluturi de m!tase. ncruci#ndu-se varietatea ce formeaz! gogo#i albe, cu fluturi ce formeaz! gogo#i galbene s-au ob"inut fluturi ce formeaz! gogo#i galben deschis #i care n F2 au produs o segregare a caracterelor de 1:2:1. La g!ini, prin ncruci#area unor rase cu penajul negru, cu rase cu penajul alb, se ob"in n F1 p!s!ri cu penajul albastru (g!ini andaluze). n F2 se produce segregarea indivizilor n raport de 25% cu penajul negru, 25% cu penajul alb #i 50% cu penajul albastru. Rezultatele se pot interpreta "innd cont tot de principiile stabilite de G. Mendel. n acest caz not!m cu $ caracterul culoare ro#ie #i cu a caracterul culoare alb! a florilor de Mirabilis jalapa. Indivizii cu flori de culoare ro#ie vor avea formula $$ Indivizii cu flori de culoare roz vor avea formula $a Indivizii cu flori de culoare alb! vor avea formula aa Se formeaz! n F2 trei genotipuri corespunz!toare cu trei fenotipuri diferite, n propor"iile 1:2:1. Segregarea caracterelor se datoreaz! separ!rii factorilor $ #i a n game"i diferi"i. n cazul monohibrid!rii de tipul Zea, caracterul intermediar se explic! prin rela"iile de dominan"! incomplet! a unui caracter fa"! de perechea lui de pe cromozomul omolog care #i manifest! numai par"ial dominan"a.
131

Indivizii din F1 formeaz! game"i $ #i game"i a. Din combinarea lor rezult! 25% indivizi homozigo"i cu flori de culoare ro#ie ($$), 50% heterozigo"i cu flori de culoare roz ($a) #i 25% heterozigo"i cu flori de culoare alb! (aa). Aceste rezultate sunt prezentate n #ahul de combina"ii de mai jos: Game"i & 50% $ 50% a 50% $ 25% $$ 25% $a Game"i % 50% a 25% $a 25% aa

Polihibridarea cu dominan"# incomplet#. Fenomenul de dominan"! incomplet! se poate manifesta #i n cazul dihibrid!rii, fie numai la una din perechile de caractere, fie la ambele. Un exemplu de dominan"! incomplet!, la o singur! pereche de caractere, l ntlnim la o experien"! a lui E. Baur. El a ncruci#at Antirrhinum majus cu flori de culoare ro#ie #i zigomorfe ( R R ZZ) cu alt! varietate cu flori de culoare alb! #i actinomorfe (rrzz). Ob"ine n F1, plante cu flori de culoare roz #i zigomorfe ( R rZz). Deci culoarea ro#ie ( R ) este par"ial dominant! fa"! de culoarea alb! (r), iar forma zigomorf! (Z) total dominant! fa"! de forma actinomorf! (z). n F2 se vor ob"ine urm!toarele posibilit!"i de combinare, conform #ahului din tabelul 6.1. Din cele 16 combina"ii posibile apar: 3/16 plante cu flori de culoare ro#ie #i zigomorfe ( R R ZZ, R R Zz, R R Zz); 6/16 plante cu flori de culoare roz #i zigomorfe ( R rZZ, R rZz, R rZz, R rZz R rZz, R rZz); 1/16 plante cu flori de culoare ro#ie #i actinomorfe ( R R zz); 2/16 plante cu flori de culoare roz #i actinomorfe ( R rzz, R rzz); 3/16 plante cu flori de culoare alb! #i zigomorfe (rrZZ, rrZz, rrZz); 1/16 plante cu flori de culoare alb! #i actinomorfe (rrzz); Tabelul 6.1. 'ah de combina"ii pentru dou! perechi de caractere dintre care una prezint! dominan"! incomplet! ( R ) #i alta (Z) complet!
Game"i & %

RZ R R ZZ R R Zz R rZZ R rZz

Rz R R Zz R R zz R rZz R rzz
132

rZ

rz

RZ Rz
rZ rz

R rZZ R rZz
rrZZ rrZz

R rZz R rzz
rrZz rrzz

Segregarea indivizilor n #ase clase fenotipice este o abatere de la raportul de 9:3:3:1 care, n cazul de fa"!, s-ar putea scrie (3+6):(1+2):3:1.Totalul de 16 ne arat! c! este vorba de dihibridare. Pentru a explica dominan"a incomplet! pentru ambele perechi de caractere vom recurge la experien"a privind ncruci#area dintre Fragaria vesca cu fructe de culoare ro#ie #i caliciu normal ( R R N N ) #i o varietate cu fructe de culoare alb! #i caliciu foliar (rrnn). n F1 se ob"in plante cu fructe roz #i caliciu intermediar ( R r N n). Caracterele par"iale dominante sunt culoarea ro#ie R #i caliciul normal N . n F2 se ob"ine o segregare conform #ahului de combina"ie din tabelul 6.2. Aceste 16 combina"ii se pot separa n urm!toarele grupe de plante: 1/16 plante cu fruct ro#u #i caliciu normal ( R R N N ); 2/16 plante cu fruct roz #i caliciu normal ( R r N N , R r N N ); 2/16 plante cu fruct ro#u #i caliciu intermediar ( R R N n, R R N n); 4/16 plante cu fruct roz #i caliciu intermediar ( R r N n, R r N n, R r N n, R r N n); 1/16 plante cu fruct ro#u #i caliciu foliar ( R R nn); 2/16 plante cu fruct roz #i caliciu foliar ( R rnn, R rnn); 1/16 plante cu fruct alb #i caliciu normal (rr N N ); 2/16 plante cu fruct alb #i caliciu intermediar (rr N n, rr N n); 1/16 plante cu fruct alb #i caliciu foliar (rrnn); Tabelul 6.2. 'ah de combina"ii pentru dou! perechi de caractere, ambele prezentnd dominan"! incomplet!
Game"i & %

R N R R NN R R Nn R rN N R rNn

Rn R R Nn R R nn R rNn R rnn

rN

rn

R N Rn rN
rn

R rN N R rNn rr N N rr N n

R rNn R rnn rr N n
rrnn

n acest exemplu, cele 9 clase fenotipice constituie o abatere de la raportul 9:3:3:1 #i care s-ar putea scrie: (1+2+2+4):(1+2):(1+2):1. Totalul de 16 ne arat! c! este vorba de o dihibridare. Dominan"a incomplet!, ca de astfel #i dominan"a complet!, se refer! la rela"iile alelice ale factorilor #i ea produce abaterile de la segregarea mendelian! pe care le-am analizat.
133

6.1.1.2. Supradominan"a Este interac"iunea dintre dou! gene alele, n urma c!reia indivizii heterozigo"i (Aa) sunt superiori celor homozigo"i (AA, aa) n privin"a unor caractere ereditare, fenomen cunoscut sub numele de heterozis. Teoria supradominan"ei a fost formulat! de G. H. Shull #i E. M. East (1908). Ei consider! c! cele dou! gene alele, A #i a, au func"ii oarecum diferite, iar n stare heterozigot! se completeaz! una pe alta, ceea ce poate fi redat astfel:

AA<Aa>aa
Cnd starea de heterozigo"ie este determinat! de o singur! pereche de gene (Aa) fenomenul se nume#te heterozigo"ie monogenic!, putnd exista ns! #i interac"iuni poligenice, cnd se nume#te heterozigo"ie poligenic! (Butnaru Gallia, 1985). Supradominan"a determin! un raport de segregare de 1:2:1 n mod deosebit la unele caractere ale plantelor (num!rul de ramifica"ii ale tulpinii, greutatea inflorescen"elor, produc"ia de semin"e) #i animalelor (robuste"e, vigoare, viabilitate, talie). 6.1.1.3. Codominan"a Este interac"iunea dintre dou! gene alele, care ns!, n stare heterozigot!, ambele sunt func"ionale, rezultnd un fenotip nou. Aceast! interac"iune poate fi considerat! un tip particular de dominan"! incomplet! n care genele A #i a, sintetizeaz! proteine diferite ca structur! #i func"ie, ns! la indivizii heterozigo"i vor fi prezente ambele proteine. Un exemplu clasic de codominan"! l ntlnim n cazul determinismului genetic al grupelor sangvine la om #i la alte mamifere. Cele patru tipuri de grupe sangvine la om (O, A, B, AB) sunt determinate de trei gene polialele notate LA, LB #i 1. Genele LA #i LB sunt dominante fa"! de gena 1, ns! cnd se g!sesc n acela#i genotip, ambele sunt func"ionale, rezultnd un nou fenotip, respectiv grupa sangvin! AB. Cunoscnd aceste aspecte, putem reprezenta fenotipurile #i genotipurile posibile astfel:
Fenotipul (grupa sangvin!) A B AB O Genotipurile LALA, LA1 LBLB,LB1 LALB 11

Modificarea raportului mendelian de segregare se poate observa dintr-un exemplu simplu: dac! ntr-o familie cei doi p!rin"i au grupele sangvine A #i respectiv B, homozigo"i, segregarea se realizeaz! astfel:
134

P(2n) G(n) F1(2n)

LALA x LBLB ' ( A LB L A B L L (grupa AB) F2(2n)

% & LA LB

LA LALA LALB

LB LALB LBLB

n genera"ia F2 au rezultat: 1/4 (gr. A) : 2/4 (gr. AB) : 1/4 (gr. B). Cunoa#terea modului de transmitere a grupelor sangvine la om, prezint! o importan"! deosebit! n realizarea transfuziilor sangvine #i n stabilirea paternit!"ii. Fenomenul de codominan"! este ntlnit #i la plante, n cazul pigment!rii frunzelor #i florilor, n acumularea unor frac"ii proteice (Cr!ciun T., 1981). 6.1.1.4. Genele letale Alele letale sunt mutante dominante sau recesive care, n stare homozigot!, provoac! moartea indivizilor. Fenomenul de letalitate schimb! propor"ia n care are loc disjunc"ia caracterelor n urma hibrid!rilor. La ncruci#area unor #oareci de culoare galben!, L. Cunot a ob"inut n F1, pe lng! indivizi de culoare galben! #i indivizi de culoare neagr!. Raportul de segregare a fost de 2:1. Explica"ia dat!, arat! c!, fa"! de raportul genotipic 1:2:1, lipsesc 1/4 din genotipuri, respectiv fenotipuri, a c!ror zigo"i au murit n uterul femelelor nainte de na#tere. Notnd cu Ay gena mutant! letal! #i cu a gena normal!, rezult! c! genotipul p!rin"ilor #i ale combina"iilor descendente este: P(2n) G(n) F1(2n) A a AYAY
y

Aya AYa

x AYa

Aya a aa

Genotipurile aa (1/4) produc culoarea neagr! #i indivizii sunt viabili, normali: genotipurile Aya (2/4) produc culoarea galben! #i sunt heterozigo"i; genotipurile AyAy (1/4) sunt letale. n cazul de fa"!, genele letale exercit! o ac"iune de dominan"! par"ial!, manifestndu-se numai n stare homozigot!. Ac"iunea letal! a genelor de acest fel s-a mai constatat la descenden"ii produ#i prin ncruci#area crapului cu solzi cu crapul f!r! solzi (crapul gali"ian); 1/4 din indivizii homozigo"i dominan"i nu sunt viabili, 2/4 sunt heterozigo"i, f!r! solzi #i viabili, iar 1/4 homozigo"i recesivi, cu solzi #i viabili. O problem! de letalitate ce preocup! pe zootehnicieni se refer! la oile brum!rii din rasele Karakul #i )urcan!. Din mperecherea ntre ei a indivizilor din oile brum!rii, ntotdeauna rezult! att miei de culoare brum!rie, ct #i miei de
135

culoare neagr!. Din mieii brum!rii o parte mor dup! na#tere, la diferite vrste, pn! la un an. Cercet!rile au ar!tat c! la ace#tia apar tulbur!ri ale aparatului digestiv. Este vorba de ac"iunea unei alele mutante letale (S) care, n stare homozigot!, duce la producerea acestor fenomene; 2/4 din descenden"i sunt heterozigo"i (Ss), 1/4 homozigo"i recesivi (ss), iar 1/4 homozigo"i dominan"i (SS) care mor (Crlan M., 1996). Al!turi de alelele mutante letale dominante pot exista #i alele mutante letale recesive care, de asemenea, provoac! moartea descenden"ilor. Acestea se pun n eviden"! mai greu, deoarece nu au un efect vizibil n stare heterozigot!. Ele se pot eviden"ia dup! na#tere. La plante se cunosc muta"ii letale recesive care, n stare homozigot!, mpiedic! formarea clorofilei, f!r! de care o plant! nu poate supravie"ui. Semin"ele acestor plante germineaz! #i dezvolt! o plantul! care tr!ie#te pn! n momentul cnd substan"ele de rezerv! din endosperm se epuizeaz!. Antirrhinum majus are unele variet!"i cu frunze de diferite culori. Formele aurea (cu frunzele verde-g!lbui) nu pot exista dect n stare heterozigot!. Aceasta se explic! prin faptul c! tipul aurea prezint! defecte clorofiliene. Letalitatea nu este totdeauna un fenomen absolut; el poate prezenta #i aspecte negative asupra organismului, dar nu mortale. Caracterul letal poate depinde #i de condi"iile de via"! ale indivizilor. Aceea#i gen!, care n condi"ii nefavorabile de via"! ac"ioneaz! ca letal!, n condi"ii bune, poate ac"iona ca semiletal!. ntre caracterul #i posibilitatea de a vie"ui pot exista #i trepte intermediare. Letalitatea sau semiletalitatea se manifest! la un anumit stadiu de dezvoltare a organismului, fie n func"ie numai de ac"iunea alelei mutante letale, fie n func"ie de ac"iunea ei, combinat! cu influen"a condi"iilor de mediu. Alelele letale apar datorit! unor muta"ii #i determin! defecte de structura morfofiziologic! a organismelor. Din aceast! cauz!, modific!rile mbrac! forme variate, variate fiind #i cauzele care pot provoca moartea organismelor: defecte n structura anatomic!, incapacitatea de a sintetiza sau folosi substan"ele energetice n procesul de metabolism, lipsa sau slaba dezvoltare a unor structuri celulare cu importan"! vital! #.a. 6.1.1.5. Polialelia (Alele multiple) Fenomenul de polialelie apare n cazul cnd trei sau mai multe gene alele sunt plasate n acela#i locus pe cromozom, la indivizi diferi"i #i determin! varia"ii ale aceluia#i caracter. Acest fenomen se nume#te #i alelomorfism multiplu sau alelism. Genele alele apar prin muta"ie din alela originar! sau tipul s!lbatic, cu care ocup! acela#i locus. Alela de tip s!lbatic se consider! dominant! #i se noteaz! cu A sau cu a+. n func"ie de aceast! notare, seria de alele care apare prin muta"ie se noteaz! cu acelea#i litere, la care se adaug! un indice de ordine numeric! sau alfabetic!, A1,A2,A3, respectiv a1, a2, a3. Genele alele pot fi notate cu prima liter! a caracterului pe care l determin! #i cu indicele de ordine n care au
136

ap!rut. S-a constatat c! ntr-o serie de alele raportul dominan"!/recesivitate este determinat de ordinea apari"iei lor. Seria de alele pentru culoarea ochilor la Drosophila melanogaster a fost pus! n eviden"! de T. Morgan #i colaboratorii s!i. Drosofila de tip s!lbatic are ochi de culoare ro#ie determinat! de alela normal! w+. S-a constatat ns! c! descenden"ii homozigo"i au ochi de culoare foarte diferit!, cu o intensitate care variaz! ntre ro#u #i alb. La formele heterozigote, gama culorilor se multiplic! prin nuan"e intermediare care apar ntre culorile formelor parentale. S-a ajuns astfel la concluzia c! genei de tip normal w+, i corespund mai multe gene alele care determin! culoarea diferit! a ochilor. Aceste alele constituie o serie. Fiecare se noteaz! cu simbolul genei de origine, la care se adaug! ca indice prima sau primele litere ale caracterului pe care l determin!: w+ ro#u nchis (tipul s!lbatic); ww-ro#u intens; wsat-rubiniu nchis; wco-rubiniu intens; wbl-galben rubiniu; we-rozg!lbui; wch-roz pu"in g!lbui; wcol-purpuriu; wa-roz apricot; wh-galben de miere; wbf-galben diluat; wt-roz foarte deschis; wp-alb perlat; wi-alb ivoriu; wec-alb ocru; w-alb. Prin ncruci#area indivizilor purt!tori ai acestor gene, s-a stabilit c! gena dominant! este cea de tip s!lbatic (w+), care determin! culoarea ro#ie, iar gena recesiv! este cea care determin! culoarea alb! (w). Seria alelelor R la porumb. Aceast! serie de alele a fost pus! n eviden"! de L. J. Stadler (1951) observnd c! o serie de alele plasate n locusul R de pe cromozomul 10 determin! culoarea ro#ie-purpurie (antocianic!) a diferitelor p!r"i ale plantei. Efectul fenotipic al genelor din seria polialel! se manifest! diferit, n diverse organe ale plantei: pericarpul #i aleurona semin"ei, tulpin!, frunze #i antere. Pentru acest considerent efectul seriei de alele de pe locusul R determin! dominan"a n mozaic sau mozaicismul. n locusul R a fost pus! n eviden"! o serie de peste 20 alele. Cele mai cunoscute sunt acelea care au o putere mai mare de manifestare #i concomitent! n mai multe organe ale plantei (tabelul 6.3.). Tabelul 6.3. Seria de alele de pe locusul R la porumb #i efectele fenotipice
Alela Rr Rg R Rmb Rsc rr rg
st

Expresia fenotipic! n: s!mn"! Culoare ro#ie nchis!, cnd este n 2 sau 3 doze #i mozaicat nchis!, cnd este ntr-o doz! Culoarea ro#ie nchis!, cnd este n 2 sau 3 doze #i mozaicat ntr-o doz! Pestri"! (stippled) Marmorat! (marbled) Autocolor (self-colored) Necolorat! Necolorat!

plantule ro#ii verzi verzi verzi verzi ro#ii verzi

antere verzi verzi verzi verzi verzi ro#ii verzi

137

Din datele cuprinse n tabelul de mai sus, reiese c!, alela rg este recesiv! #i controleaz! culoarea verde a plantelor #i anterelor #i celelalte alele determin! un grad diferit de pigmenta"ie. Intensitatea cu care este determinat! culoarea semin"ei depinde de doza n care se afl! genele Rr sau Rg n endosperm. Endospermul, fiind triploid, poate avea trei doze diferite ale alelei Rr care-i determin! culoarea #i anume: doz! tripl! (RrRrRr), cnd se ncruci#eaz! ntre ele dou! linii pure pentru factorul Rr, linia Rr ca mam! #i linia Rr ca tat!; doza dubl! (RrRrr),cnd se ncruci#eaz! o linie Rr ca mam! #i una r ca tat! #i doz! simpl! (Rrrr), cnd se ncruci#eaz! o linie r ca mam! #i una Rr ca tat!. Dominan"a va fi gradat!, n func"ie de num!rul de alele care particip! la determinarea caracterului. Comportarea diferit! a aceleia#i alele n diferite organe ale plantelor i-a determinat pe L. J. Stadler #i M. H. Emerling (1956) s! le considere ca fiind compuse din dou! p!r"i cu func"ii particulare. De exemplu, alela Rg este dominant! n bob, unde determin! formarea antocianului, dar este recesiv! n plant! #i antere, deoarece acestea r!mn verzi. De fapt, aceasta este explica"ia apari"iei mozaicului la plante.

6.1.2. Abateri aparente datorate interac"iunilor nealelice

6.1.2.1. Epistazia S-a ar!tat c! dominan"a poate s! se manifeste ntre alele perechi: A domin! pe a, B domin! pe b etc. Un tip aparte de rela"ii de dominan"!-recesivitate poate exista #i ntre gene nealele: AA domin! pe Bb, bb domin! pe A, aa domin! pe B etc. Acest fenomen a fost numit epistazie. Genele care inhib! ac"iunea unor gene nealele se numesc gene epistatice, iar genele inhibate se numesc gene hipostatice. Pot fi epistatice sau hipostatice att alelele dominante, ct #i alelele recesive. n func"ie de alela epistatic!, epistazia poate fi dominant!, de recesivitate, de dominan"! #i recesivitate etc. Prin epistazia de dominan#! att gena epistatic! ct #i gena hipostatic! sunt reprezentate de gene nealele dominante. Se cunosc asemenea exemple att din domeniul vegetal ct #i din cel animal. Raportul de segregare n cazul epistaziei de dominan"! este 12:3:1. Un exemplu l ofer! ncruci#area ntre ov!zul cu glume negre #i ov!zul cu glume albe. n F1 se ob"in indivizi care au glume negre, iar n F2 are loc segregarea astfel: 12/16 indivizi cu glume negre; 3/16 indivizi cu glume cenu#ii; 1/16 indivizi cu glume albe. Acest raport nu este tipic mendelian, dar amintindu-ne de raportul mendelian 9:3:3:1 se poate deduce c! grupa de 12 se compune din 9+3. Deducem, de asemenea, c! ov!zul cu glume negre con"ine dou! gene dominante, ov!zul cenu#iu o singur! gen! dominant!, iar cel alb nici una, fiind recesiv. Notnd cu N gena produc!toare a culorii negre (epistatic!), cu C gena produc!toare a culorii cenu#ii (hipostatic!), cu n #i c alelele lor, produc!toare a culorii albe, se pot scrie genotipurile p!rin"ilor, game"ilor #i ale hibridului din F1:
138

P(2n)..NNCC x nncc Game"i(n)..NC nc F1(2n)...NnCc Game"i(n)NC Nc nC nc Din #ahul de combina"ii rezult!: combina"iile care con"in pe N vor da boabe negre, cele ce con"in C cu n vor da boabe cenu#ii, iar cele care con"in nncc produc boabe albe. Deci raportul va fi:
(9 + 3) : 3 : 1 12 negre : 3 cenusii : 1 alb

Gena N are deci o ac"iune epistatic! asupra genei C. Epistazia de dominan#! "i recesivitate. Se manifest! la ncruci#area ntre rasele de g!ini albe, Leghorn x Wyandotte. n F1 se ob"in g!ini albe (cu unele pete negre), iar n F2 un raport de 13/16 indivizi albi: 3/16 indivizi negri. Totalul de 16 combina"ii indic! ac"iunea a dou! perechi de gene. Din analiza genera"iei F2 s-a dedus c! la rasa Leghorn, n genotip, al!turi de gena dominant! ce determin! culoarea, mai exist! o gen! epistatic! care inhib! manifestarea acesteia. Rasa Wyandotte posed! alela recesiv! c, care, la rndul ei este epistatic! asupra genei I ce produce culoarea. Culoarea neagr! apare numai n prezen"a genei dominante ce produce culoarea #i a genei recesive ii. Notnd cu I gena epistatic! #i cu C gena hipostatic!, rezult!: Leghorn x Wayndotte P.IICC iicc F1IiCc (alb) F2.12/16 indivizi de culoare alb! determinat! de gena epistatic! I 3/16 indivizi de culoare neagr! Aceste rezultate sunt prezentate n figura 6.2. Gena epistatic! I inhib! ac"iunea genei hipostatice C care determin! culoarea, iar gena cc inhib! ac"iunea genei ii care produce culoarea. Prin epistazia genei recesive se n"elege ac"iunea unei gene recesive n stare homozigot! ce inhib! ac"iunea genelor dominante sau recesive din alte perechi de alele; de exemplu, aa inhib! pe B sau aa inhib! pe bb. Fenomenul se poate eviden"ia la ncruci#area unor #oareci albi cu #oareci negri. Tipul albinotic este genetic de tip s!lbatic, deoarece posed! gena A, care ns! nu se manifest! din cauza prezen"ei genei epistatice recesive cc care inhib! formarea oric!rui pigment: P(2n) #oareci albi #oareci negri AAcc x aaCC #oareci agouti (AaCc) (cu blana de tip s!lbatic) F1 F2 9/16 indivizi agouti (AC); 3/16 indivizi negri (Caa); 4/16 indivizi albi (Acc #i aacc).
139

Deci, n acest caz, epistazia s-a manifestat din partea genei cc asupra genei A. 'oarecii cu genotipul Acc erau albi, deoarece gena c n stare homozigot! a mpiedicat manifestarea genei A, ce produce pigment.

Fig. 6.2. Epistazia genei dominante #i a genei recesive asupra culorii penajului.

6.1.2.2. Interac"iunea complementar# a genelor (Epistazia recesiv# reciproc#) Const! n ac"iunea unor gene nealele, care, n stare homozigot! sau heterozigot! dominant!, conlucreaz! pentru apari"ia unui caracter nou. Dac! una din aceste gene dominante lipse#te din genotip caracterul nu se exteriorizeaz! fenotipic. Acest tip de interac"iune a fost descoperit prima dat! la Lathyrus odoratus, plant! care are, n general, flori de culoare ro#ie, dar #i variet!"i cu flori albe. ncruci#ndu-se dou! variet!"i cu flori de culoare alb!, s-au ob"inut n F1 plante cu flori de culoare ro#ie, prin autopolenizarea c!rora n F2 au rezultat plante ce au segregat n raportul 9:7 (9/16 plante cu flori ro#ii :7/16 plante cu flori albe).
140

Raportul de segregare arat! c!, este vorba de o dihibridare. Explica"ia nu poate fi dect urm!toarea: culoarea ro#ie este condi"ionat! de prezen"a a dou! gene dominante A #i B. Dac! exist! numai o gen! din acestea, nu se produce culoarea ro#ie n F1. P!rin"ii vor trebui s! aib! genotipurile: AAbb #i aaBB, iar hibrizii din F1 sunt AaBb. n a doua genera"ie se produce segregarea genelor nealele, n raport de 9/16 AB; 3/16 Abb; 3/16 aaB; 1/16 aabb. Culoarea se manifest! numai n genotipul AB, care determin! elaborarea pigmen"ilor antocianici. Restul indivizilor (7/16), care nu con"in aceste dou! gene dominante sau con"in numai una din ele, au florile de culoare alb!. Din acest exemplu se poate constata c! genele aa inhib! ac"iunea genelor BB, iar genele bb, pe cea a genelor AA. Genotipurile aa #i bb se ajut! reciproc pentru realizarea fenotipului comun, corespunz!tor genotipului aabb. Acest tip de interac"iune se mai nume#te epistazie recesiv! reciproc!. Un raport de segregare diferit fa"! de cel mendelian rezult! #i n cazul ncruci#!rii unor forme de porumb cu boabe de culoare alb!. n F1 se ob"in plante cu boabe de culoare ro#ie, iar n F2 un raport de segregare de 27/64 plante cu boabe ro#ii; 37/64 plante cu boabe necolorate. n cazul de fa"!, producerea antocianului se datoreaz! interac"iunii dintre alelele dominante a trei perechi de gene nealele AACCRR. Boabele necolorate apar"in plantelor din al c!ror genotip lipse#te cel pu"in una din aceste gene dominante (aaCCRR, AaccRR #i AACCrr). De exemplu, din ncruci#area plantelor cu boabe necolorate cu genotipul aaCCRR, cu plante tot cu boabe necolorate AAccRR, vor rezulta plante cu boabele colorate, care con"in genele AaCcRR. n F2, aceste dou! caractere segreg! n raportul de 27 colorate : 37 necolorate. Rezultate identice se ob"in cnd se ncruci#eaz! plante cu genotipul AAccRR sau plante cu genotipul aaCCRR sau plante cu genotipul aaccRR cu plante cu genotipul AACCrr. Ac"iunea acestor gene a fost sesizat! #i n ereditatea culorilor la #oareci, la g!ini #.a. La g!ini, creasta de tip maz!re, ca #i creasta de tip trandafir, manifest! dominan"a fa"! de cresta simpl!, prezent! la rasa Leghorn. La ncruci#area rasei Wyandotte cu creasta tip trandafir (RRbb) cu rasa Brahma cu creasta tip maz!re (rrBB), n F1 indivizii aveau un nou tip de creast!, nuciform!, rezultat! din interac"iunea complementar! ntre cele dou! gene dominante (RrBb). ncruci#area indivizilor din F1 a determinat formarea genera"iei F2, n care 9/16 dintre indivizi aveau creast! nuciform!, iar 7/16 alte tipuri de creast! (3/16, trandafir Rbb; 3/16 tip maz!re rrB #i 1/16simpl! rrbb) (figura 6.3.). De aici se vede c! n prezen"a genelor dominante n sistemele de gene complementare, acestea func"ioneaz! producnd un caracter deosebit de cel manifestat la p!rin"i. n exemplele de mai sus (culoarea ro#ie a florilor la Lathyrus odoratus, culoarea boabelor la Zea mays, ct #i forma crestei de g!ini), caracterul nou este produs numai prin ac"iunea comun! a tuturor genelor dominante din genotip. Aceste gene nealele, n mod separat, nu pot determina apari"ia caracterului respectiv.
141

Fig. 6.3. Ac"iunea complementar! a genelor n cazul ncruci#!rii raselor de g!ini Wyandotte cu Brahma

Ac"iunea complementar! a genelor a fost pus! n eviden"! #i prin experien"e efectuate cu amestecuri de extracte de la microorganisme diferite. S-a constatat c! folosirea separat! a acestor extracte nu produce o activitate enzimatic!, ns! utilizarea lor n comun manifest! activitate enzimatic!. 6.1.2.3. Poligenia nc! din secolul XVIII, J. Klreuter a remarcat c! prin ncruci#area a dou! variet!"i de tutun, una pitic! iar cealalt! nalt!, n genera"ia F1, hibrizii au o talie intermediar! ntre genitori, iar n F2 are loc o segregare a indivizilor, cu o graduare continu! a n!l"imii, de la tipul pitic pn! la tipul nalt. Cercet!rile lui H. NilssonEhle n Suedia, la gru, #i ale lui E. M. East n S.U.A., la porumb, n perioada 1910-1913, au dus la descoperirea fenomenului de poligenie, care explic! modul de segregare a caracterelor cantitative. Poligenia (polimerie sau interac"iune aditiv!) const! n conlucrarea mai multor gene nealele, dar echivalente, dominante sau recesive, pentru exteriorizarea fenotipic! a unui caracter.
142

n general, se consider! c! n cazul fenomenului de poligenie, genele individuale au un efect redus asupra unui caracter #i ca atare, pot fi greu eviden"iate. Numai efectul cumulativ sau aditiv al poligenelor produce modific!ri cantitative evidente. Fenotipul unui caracter cantitativ, determinat de gene aditive, se manifest! cu att mai puternic, cu ct este determinat de mai multe gene nealele dominante. Cnd n genotipul unui individ, pentru un anumit caracter cantitativ, vor fi mai multe gene recesive, fenotipul va fi mai pu"in expresiv. H. NilssonEhle a demonstrat existen"a fenomenului de poligenie, ncruci#nd o varietate de gru cu boabe ro#ii (AABB), cu alta cu boabe albe (aabb). n genera"ia F1 au rezultat indivizi cu boabe de culoare intermediar! (AaBb). n genera"ia F2 segregarea s-a produs n raportul 15/16 boabe de diferite nuan"e de ro#u la 1/16 boabe albe. Prin urmare culoarea boabelor de gru este determinat! de dou! perechi de gene nealele. Cu ct n genotip se vor g!si mai multe alele dominante, cu att expresia fenotipic! va fi mai puternic!. Un exemplu de efect cumulativ al genelor n mo#tenirea caracterelor cantitative l constituie ereditatea culorii pielii la om, determinat! de pigmentul melanin!, care variaz! cantitativ la diferite rase (C. B. Davenport, dup! Raicu P., 1980). Cantitatea de pigment din piele este determinat! de efectul cumulativ al genelor P1 #i P2, care la negri se afl! n stare homozigot! (P1P1P2P2), la mulatri nchi#i exist! trei gene pentru pigmentare (P1p1P2P2, sau P1P1P2p2), la mulatri propriu-zi#i exist! dou! gene (P1p1P2p2, P1P1p2p2 sau p1p1P2P2), la mulatri deschi#i o singur! gen! pentru pigmentare (P1p1p2p2 sau p1p1P2p2), iar la rasa alb! exist! un genotip homozigot recesiv (p1p1p2p2). Exemple de ereditate poligenic! exist! la tot pasul, deoarece majoritatea caracterelor cantitative au acest determinism genetic. 6.1.2.4. Pleiotropia Analiza modalit!"ilor de ac"iune a genelor a scos n eviden"! #i fenomenul prin care una #i aceea#i gen! poate s! contribuie la formarea mai multor caractere. Aceste gene au fost denumite pleiotrope, iar fenomenul determinat de ele, pleiotropism. n cercet!rile pe care le-a executat G. Mendel la maz!re, a observat c! acela#i factor ereditar a afectat att culoarea florilor ct #i culoarea semin"elor #i a produs pete ro#ii pe nervurile frunzelor. H. NilssonEhle (1909) a dedus c!, modificarea formei aristelor, pilozitatea tulpinilor #i fragilitatea acestora, sunt datorate unei singure gene. Cercet!ri numeroase n aceast! privin"! au fost efectuate la Drosophila. Alela mutant! vestigial, (vg), care reduce m!rimea aripilor, mic#oreaz! n acela#i timp fecunditatea, reduce num!rul de ou!, modific! pozi"ia peri#orilor de pe corp #.a. Alela mutant! ivory, care r!spunde de culoarea deschis! a ochilor, are ac"iune negativ! asupra tuburilor lui Malpighi #i modific! forma spermateciilor.

143

Genele pleiotrope determin!, n mare parte, corela"iile dintre diferite caractere #i men"in aceste corela"ii de-a lungul genera"iilor. Astfel de corela"ii, determinate de gene pleiotrope, poart! numele de corela"ii genotipice. n afar! de efectul lor, u#or de eviden"iat, ac"iunea lor este multipl! #i de o mare nsemn!tate, deoarece majoritatea genelor manifest!, ntr-o m!sur! mai mare sau mai mic!, influen"! asupra altor gene. 6.1.2.5. Ac"iunea modificatoare a genelor Exist! gene cu ac"iune de baz! n determinarea unui anumit caracter, altele, interac"ioneaz! cu alte gene, influen"nd ac"iunea acestora. Asemenea gene au primit numele de gene modificatoare. Atunci cnd o gen! sl!be#te expresia fenotipic! a altei gene nealele se nume#te reduc#toare, iar cnd nt!re#te expresia fenotipic! a altei gene nealele se nume#te amplificatoare. Ac"iunea acestor gene poate fi eviden"!, uneori, destul de discret!; de aceea #i studiu lor este anevoios. Dificult!"i se manifest! #i la distribuirea indivizilor n clase fenotipice distincte. Ori de cte ori ac"ioneaz!, ele modific! propor"iile mendeliene de segregare. Astfel, exist! o gen! la Drosophila (tetraptera) care poate s! transforme balansierele n aripi de dimensiuni mari. O alt! gen!, tot la Drosophila, numit! erupt, determin! dezvoltarea unui tars n ochi. 6.1.2.6. Influen"a factorilor externi asupra ac"iunii genelor Manifestarea ac"iunii genelor poate fi influen"at! #i de condi"iile de mediu, care modific! propor"iile fenotipice fa"! de cele teoretice. Influen"ele pot produce modific!ri foarte variate, att de ordin cantitativ, ct #i calitativ. Larvele de Drosophila cu aripi vestigiale, crescute la temperaturi ridicate, produc aripi aproape normale. Temperatura ridicat!, nu influen"eaz! genele respective dect la o anumit! vrst! a larvelor, care coincide cu perioada sensibil! pentru dezvoltarea aripilor. La porumb, exist! gene mutante, care determin! caracterul plant! pitic!. Dac! unei astfel de plante i se administreaz! acid giberelinic, planta se dezvolt! asem!n!tor cu cea normal!. La iepurele de Himalaia culoarea neagr! a extremit!"ilor este realizat! de alela ch. Acest tip de iepure crescut la temperaturi de peste 30C este complet alb; crescut la temperaturi n jurul a 25C cap!t! culoarea neagr! la extremitatea botului, picioarelor #i urechilor. Dac! se smulge o por"iune din p!rul alb #i iepurele este crescut la temperaturi sub 25C, pe acest loc va ap!rea p!r negru. Culoarea p!rului n cazul acestor experien"e depinde de anumite reac"ii biochimice care duc la elaborarea pigmentului. Temperatura interfer! cu ac"iunea genei, care, la rndul ei, dirijeaz! elaborarea acestor pigmen"i. La plante exist!, de asemenea, gene a c!ror ac"iune asupra culorii florilor poate fi modificat! de anumite temperaturi. Astfel, Primula, crescut! la temperatura de 30-35C #i umiditate mare produce flori albe, iar la temperaturi mai sc!zute produce flori ro#ii.
144

Interven"ia factorilor de mediu poate schimba raporturile de dominan"! dintre diferite gene, cnd acestea se g!sesc n stare heterozigot!. La tipul s!lbatic de Drosophila exist! o gen! dominant! ce determin! prezen"a unor benzi negre la limita dintre segmentele abdomenului. Dac! este crescut! ntr-un mediu umed, benzile negre dispar. Un tip de interac"iune dintre gene #i factorii de mediu l constituie fenocopiile. Individul normal, n timpul dezvolt!rii lui, supus unui tratament special cu factori fizici sau chimici, d! na#tere la unele anomalii specifice ac"iunii unor gene. Injectnd insulin!, n ou! de g!in! n stare de incuba"ie, se ob"in indivizi cu monstruozit!"i (polidactilism sau absen"a crupionului). Aceste anomalii pot fi produse #i de ac"iunea genotipului n condi"ii normale de dezvoltare a indivizilor. Exist! gene cu manifestare foarte variabil! la influen"a condi"iilor de mediu, dar care afecteaz! numai o parte din indivizi, aparent cu acela#i genotip. A#a este cazul genelor erupt sau tetraptera, care determin! un efect fenotipic numai la maximum 10% din indivizi. La cobai, o gen! recesiv! determin! pn! la 27,7% mon#tri cu cap mic, neviabili. Fenomenul poart! numele de penetran"#. Uneori gena afecteaz! numai o parte din organism. Gena eyeless care reduce suprafa"a ochiului la Drosophila, poate afecta numai un ochi la aceea#i musculi"!. Aceste accidente r!mn nc!, n mare parte, inexplicabile; alteori, influen"a mediului se poate resim"i n mod diferit, n ceea ce prive#te intensitatea de manifestare a caracterului. n cazul de fa"!, fenomenul poart! numele de expresivitate. Varietatea factorilor de mediu, intensitatea cu care ac"ioneaz! ei #i timpul cnd intervin n cursul dezvolt!rii organismului, constituie o gam! foarte complex! de influen"e asupra ac"iunii genelor. De la efectul primar al genei #i pn! la efectul ei aparent exist! un lan" ntreg de ac"iuni #i interac"iuni ntre gene #i ntre gene #i mediu.

6.2. ABATERI REALE DE LA RAPORTURILE MENDELIENE DE SEGREGARE

Principalele cauze ce determin! abaterile reale de la raporturile mendeliene de segregare sunt: segregarea preferen"ial! a cromozomilor n meioz!, non-disjunc"ia cromozomilor n meioz! #i formarea nerandomizat! a zigo"ilor. 1. Segregarea preferen"ial# a cromozomilor sau genelor n meioz# De obicei, n diviziunea meiotic!, cromozomii omologi se distribuie n mod ntmpl!tor n celulele-fiice, n raport de 1:1. Uneori, ns!, n ovogenez! sau macrosporogenez!, un cromozom sau un segment de cromozom trece cu preferin"! n ovul sau, respectiv, n oosfer!, n timp ce omologul lui trece n nucleii polari sau n nucleii din sacul embrionar. Ace#ti cromozomi nu particip! la formarea zigo"ilor.
145

Un caz de segregare preferen"ial! a fost studiat la porumb, de c!tre diferi"i autori: M. M. Rhoades (1942, 1952), A. E. Longley (1945), G. Y. Kikudome (1959), M. M. Rhoades #i M. H. Emerling (1959). S-a constatat c! la mai multe soiuri de porumb din America de Sud #i sud-estul Statelor Unite, cromozomul 10 se deosebe#te de omologul s!u din alte soiuri printr-o por"iune terminal! n plus, heterocromatic!, n care se g!se#te un knob. Segregarea cromozomilor n meioz! are loc n func"ie de felul cromozomilor 10. Cnd ace#tia 10n sunt normali , segregarea are loc n raport de 1:1. Cnd unul din 10n cromozomii 10 este normal, iar omologul s!u posed! knob
10n 10a

megasporogenez! are loc o segregare preferen"ial!, n favoarea cromozomului cu knob (aproximativ 70% game"i cu 10 a #i 30% game"i cu 10 n). Acest fenomen a fost pus n eviden"! urm!rindu-se cum se transmite la descenden"i gena R, care dicteaz! formarea pigmentului antocianic la semin"e #i la plante. S-a ncruci#at o linie de porumb cu cromozomii 10 a cu knob #i purt!tori al alelelor recesive rr, cu o linie de porumb cu cromozomii 10 n, dar purt!tori ai alelelor dominante RR. n F1 s-au ob"inut plante cu boabe de culoare ro#ie, cu genotipul Rr. Prin retroncruci#area hibridului cu p!rintele cu caracterul recesiv (rr) s-au ob"inut 70,2% indivizi cu boabe necolorate #i 29,8% indivizi cu boabe ro#ii. n mod normal ar fi trebuit s! se ob"in! indivizi cu boabe necolorate #i boabe de culoare ro#ie n propor"ie de 1:1. Din cauza segreg!rii preferen"iale a cromozomilor cu knob, procentul a fost modificat n favoarea acestuia. Fenomenul de segregare preferen"ial! a cromozomilor n meioz! a fost pus n eviden"! #i la Drosophila melanogaster. S-a observat c! la unele femele, cromozomii X sau cromozomii perechi a II-a #i a III-a nu sunt egali ca m!rime. S-a constatat o segregare preferen"ial! a cromozomilor mai scur"i, n sensul c! din ovule circa 70% dau na#tere la indivizii care posed! cromozomi mai scur"i (normali). 2. Nesepararea (non-disjunc"ia) cromozomilor n meioz# De obicei, n meioz! toate perechile de cromozomi se despart #i se repartizeaz! n celule haploide care se formeaz!. Uneori, prin nesepararea unor perechi de cromozomi n meioz!, la prima diviziune se formeaz! o celul! cu un cromozom n plus #i o celul! cu un cromozom n minus. Celulele sexuale care se formeaz! din acestea vor produce, n procesul fecund!rii, zigo"i cu 2n + 1 #i 2n - 1 cromozomi. La Drosophila melanogaster non-disjunc"ia afecteaz! mai mult perechile cromozomilor sexului sau perechi a IV-a (punctiformi). Aceste anomalii se ntlnesc mai frecvent la organismele triploide #i mai pu"in la organismele diploide.

146

3. Formarea nerandomizat# a zigo"ilor De regul!, n procesul fecund!rii, game"ii se ntlnesc ntre ei n mod ntmpl!tor, adic! randomizat. Uneori, game"ii nu se ntlnesc la ntmplare, ci dup! anumite preferin"e (nerandomizat). Acest fenomen este favorizat de viabilitatea inegal! a celulelor sexuale mascule #i de capacitatea de formare #i de maturizare inegal! a stigmatului. La porumb exist! gene care controleaz! cre#terea tubului polinic n stil. Polenul care con"ine alela dominant! a genei S dezvolt! tubul polinic mai repede #i formeaz! un num!r mare de zigo"i cu aceast! gen!.

147

CAPITOLUL 7 TEORIA CROMOZOMIC! A EREDIT!"II

Moto: "Biologia seam!n! mai mult cu istoria dect cu fizica; accidentele, erorile "i ntmpl!rile fericite din trecut prefigureaz! n mare m!sur! prezentul Carl Sagan

7.1. GENE #I CROMOZOMI

Elaborarea teoriei celulare de c!tre M. J. Schleiden "i T. Schwann (1838) a marcat nceputul unor noi descoperiri la nivel celular. Dup! descoperirea "i descrierea mecanismului mitozei (W. Fleming, 1882) "i a meiozei (E. van Beneden, 1883), W. Waldeyer (1888), descoper! c! n momentul diviziunii nucleului, acesta se mparte ntr-un anumit num!r de corpusculi pe care i-a numit cromozomi. Cercet!rile efectuate de W. S. Sutton (1902) la cosa" (Brachystola magna), aduc dovada localiz!rii factorilor ereditari mendelieni pe cromozomi, constatnd c! fiecare cromozom are o anumit! caracteristic!, care se p!streaz! constant! n timpul mitozei "i meiozei. Sutton a fost primul citolog care a atras aten#ia asupra asem!n!rii dintre disjunc#ia cromozomilor n meioz! "i segregarea caracterelor alelomorfe n procesul de formare a game#ilor. n 1902, T. Boveri face acelea"i constat!ri la ariciul de mare (Paracentrotus lividus). El studiaz! "i evolu#ia ovulelor fecundate concomitent de 2 spermatozoizi din care rezult! game#i triploizi (2n=54), constatnd c! numai indivizii diploizi (2n=36) sunt normali. Boveri ajunge la concluzia c! dezvoltarea normal! a indivizilor este condi#ionat! de prezen#a unor garnituri complete de cromozomi, pe care se afl! localiza#i factorii ereditari. Un alt fenomen descoperit de W. S. Sutton n anul 1903 a fost recombinarea cromozomilor materni "i paterni n timpul meiozei, fenomen care d! posibilitatea form!rii unui num!r enorm de combina#ii genotipice "i determin! o mare variabilitate genotipic! a indivizilor aceleia"i specii. Descoperirile referitoare la mecanismul cromozomic al determin!rii sexului au constituit noi dovezi a localiz!rii factorilor ereditari intui#i de Mendel. H. Henking (1891) a identificat la insecta Pirrochoris apterus dou! tipuri de game#i, unii care posedau un corpuscul necunoscut ce l-a notat cu X, iar al#ii lipsi#i de acest corpuscul, ar!tnd c! sexul ar putea fi determinat chiar de aceast! diferen#iere a game#ilor. E. B. Wilson (1905) studiind meioza la insectele din genul Protenor, constat! c! la masculi 2n=13 cromozomi, iar femelele posed! n celulele
148

somatice 2n=14 cromozomi. Femelele vor produce game#i identici cu n=7, n timp ce masculii vor avea dou! tipuri de game#i, cu n=7 "i n=6. Dac! un ovul va fi fecundat de un spermatozoid cu 7 cromozomi, va rezulta o femel!, iar cnd spermatozoidul are n=6 cromozomi va rezulta un mascul. Aceste constat!ri au dovedit c! sexul organismelor este determinat ereditar, de gene localizate n anumi#i cromozomi. Explica#iile date de Mendel, pentru segregarea factorilor ereditari constituie nc! un argument n sprijinul ipotezei c! genele sunt plasate n cromozomi. Mendel arat! c!, factorii ereditari se g!sesc sub form! de pereche n celulele somatice "i cte unul singur din fiecare pereche, n celulele sexuale. Prin descoperirile lor, W. S. Sutton (1902) "i T. Boveri (1902) au stabilit leg!tura dintre factorii ereditari mendelieni "i cromozomi ca purt!tori ai acestora. Ace"ti geneticieni formuleaz! aproape concomitent ipoteza localiz!rii genelor pe cromozomi, eviden#iind faptul c! num!rul caracterelor distincte ale unui organism este mult mai mare dect num!rul de cromozomi, astfel c!, pe o pereche de cromozomi sunt mai mul#i factori ereditari. T. H. Morgan (profesor la Universitatea Columbia din New York) "i "coala sa a preluat aceast! ipotez!, dezvoltnd-o "i aprofundnd-o, formulnd o teorie unitar! denumit! teoria cromozomic! a eredit!#ii pentru care a fost distins cu premiul Nobel, n anul 1933. T. H. Morgan "i colaboratorii s!i, C. B. Bridges, A. H. Sturtevant "i H. J. Mler au folosit ca material biologic, musculi#a de o#et (Drosophila melanogaster), insect! la care au descris peste 500 forme mutante. Prin numeroase ncruci"!ri ntre diferite mutante cu tipul s!lbatic, sau a mutantelor ntre ele, s-a stabilit modul de transmitere a genelor pe parcursul mai multor genera#ii. n concep#ia lui Morgan, genele sunt plasate n cromozomi n anumite pozi#ii denumite loci (singular locus), sub form! de pereche, determinnd nsu"iri contrastante ale aceluia"i caracter. Prin muta#ia unei gene normale (sau de tip s!lbatic) a ap!rut o gen! nou!, dar care ocup! acela"i locus n cromozomii omologi. Acest cuplu de gene ce determin! nsu"irea normal! "i cea mutant! a unui caracter, a primit denumirea de gene alele. Genele ce determin! caracterul normal se noteaz! cu liter! mare sau cu liter! mic! "i cu semnul + (de exemplu A sau a+ ) iar gena alel! cu liter! mic! (a). Gena este considerat! unitate ereditar! func#ional!, muta#ional! "i de recombinare genetic!. Studiind un num!r mare de masculi "i femele de Drosophila melanogaster, Morgan a ar!tat c! femelele au o pereche de cromozomi identici (XX) iar masculii, un singur cromozom X sub form! de bastona" "i unul neomolog numit cromozom Y sub forma unui bastona" frnt. Descoperirea cromozomilor sexului constituie o alt! dovad! c! genele sunt plasate n cromozomi. Tot la Drosophila melanogaster, s-a constatat c! la unii indivizi poate lipsi un cromozom sau poate exista un cromozom n plus. Aceasta fiind corelat!
149

cu absen#a unui caracter sau prezen#a unui caracter, constituie nc! un argument c! genele sunt plasate n cromozomi (C. B., Bridges, 1921). n urma acestor rezultate experimentale s-au elaborat cele trei teze ale teoriei cromozomice a eredit!#ii: 1. - plasarea liniar! a genelor n cromozomi; 2. - transmiterea nl!n#uit! a genelor( linkage); 3. - schimbul reciproc de gene ntre cromozomii omologi (crossing-over).

7.2. PLASAREA LINIAR! A GENELOR PE CROMOZOMI

n experien#ele sale, Mendel a analizat, n mod ntmpl!tor, caractere ce erau localizate n perechi diferite de cromozomi, fapt ce permite segregarea "i combinarea independent! a caracterelor. Morgan a urm!rit ntr-un num!r foarte mare de ncruci"!ri, transmiterea de la o genera#ie la alta a unor gene localizate n acela"i cromozom. S-a constatat c! exist! un num!r mult mai mare de gene dect cromozomi, chiar dac!, n unele cazuri, o gen! poate determina mai multe caractere. Rezultatele analizelor genetice nu se pot explica dect dac! se admite c! genele sunt plasate liniar n cromozomi, ocupnd un loc precis denumit locus.

7.3. TRANSMITEREA NL!N"UIT! A GENELOR (LINKAGE)

Segregarea independent! a caracterelor "i libera combinare a acestora rezult! din faptul c!, n timpul meiozei, cromozomii omologi se despart "i se distribuie ntmpl!tor, ntr-un gamet sau altul. Potrivit acestor legi, genele alele sunt localizate n perechi diferite de cromozomi. n anul 1906, W. Bateson "i R. C. Punnett vrnd s! confirme rezultatele mendeliene, au efectuat o dihibridare la planta Lathyrus odoratus (sngele voinicului). Ei au luat n studiu urm!toarele caractere: culoarea florilor "i forma polenului. ncruci"nd plante cu flori purpurii "i polen alungit cu plante cu flori ro"ii "i polen rotund, n genera#ia F1 hibrizii erau uniformi, cu flori purpurii "i polen alungit, aceste caractere fiind dominante. n genera#ia F2 segregarea nu s-a produs n raportul de 9:3:3:1, ci au rezultat ntr-o propor#ie mai mare plantele ce se asem!nau cu p!rin#ii (flori purpurii polen alungit, flori ro"ii polen rotund), fenomen pe care l-au denumit cuplare "i ntr-o mic! propor#ie indivizii recombina#i (flori purpurii polen rotund, flori ro"ii polen alungit) fenomen numit repulsie. T. H. Morgan "i colaboratorii s!i au efectuat o experien#! la Drosophila melanogaster (fig. 7.1). S-a ncruci"at o femel! cu corp gri "i aripi normale (b+vg+/b+vg+) cu un mascul ce prezenta caractere mutante, corp negru "i aripi vestigiale (bvg/bvg) n prima genera#ie au rezultat indivizi cu corp gri "i aripi normale. Dac! un mascul heterozigot din genera#ia F1 este retroncruci"at cu o femel! homozigot! dubl! mutant!, n genera#ia F2 au rezultat numai dou! grupe
150

fenotipice de indivizi, ca n cazul unei monohibrid!ri, n raport de 1:1 "i nu patru cte ar fi trebui sa apar!, n raport de 1:1:1:1. Rezultatele acestei experien#e au ar!tat c! genele ce determin! culoarea corpului "i forma aripilor sunt plasate pe acela"i cromozom "i se transmit mpreun! la descenden#i, fenomen pe care n denume"te linkage. n acest exemplu se poate vorbi de un linkage complet fenomen rar ntlnit n natur!. La Drosophila melanogaster, la mascul, fiind sexul heterogametic (XY), nu are loc recombinarea genetic! deoarece cromozomii X "i Y nu sunt omologi, iar ntre ceilal#i cromozomi somatici nu se realizeaz! n profaza meiozei chiasme (C. D. Darlington, 1935). Fenomenul acesta se mai ntlne"te "i la alte specii de diptere la care sexul mascul este heterogametic sau la unele specii de lepidoptere, la care sexul femel este heterogametic.

Fig. 7.1. nl!n#uirea complet! a genelor la Drosophila melanogaster

Cele peste 500 de mutante de la Drosophila, studiate de T. Morgan, manifest! tendin#a de a se grupa n patru grupe: grupa I 141 mutante; grupa II 228 mutante; grupa III 156 mutante "i grupa IV 12 mutante.
151

Existen#a a patru grupe de nl!n#uire este nc! o dovad! c! genele sunt plasate n cromozomi "i n plus, exist! o corela#ie evident! ntre lungimea cromozomilor "i num!rul de gene pe care le con#in. Linkage constituie o tez! de baz! a teoriei cromozomice a eredit!#ii, conform c!reia genele localizate pe acela"i cromozom se transmit la descenden#i n bloc, formnd o singur! grup! de linkage. Fenomenul linkage se manifest! numai pentru genele localizate n acela"i cromozom, n timp ce pentru genele ce se g!sesc n cromozomi diferi#i transmiterea lor se face conform legilor mendeliene. Transmiterea nl!n#uit! a genelor are o serie de implica#ii teoretice "i practice deosebit de importante n alc!tuirea h!r#ilor cromozomice, ameliorarea plantelor "i animalelor, sfaturile genetice "i ingineria genetic!.

7.4. SCHIMBUL RECIPROC DE GENE NTRE CROMOZOMII OMOLOGI (CROSSING-OVER)

Bateson "i Punnett au elaborat teoria cupl!rii "i repulsiei, prin care c!utau s! demonstreze c! n procesul de hibridare pot avea loc fenomene de cuplare "i recombinare a genelor. T. H. Morgan a nlocuit termenul de cuplare cu cel de linkage iar cel de repulsie cu termenul de crossing-over.

Fig.7.2.-Fenomenul crossing-over la Drosophila melanogaster 152

Fenomenul prin care se realizeaz! schimbul de gene alele sau segmente cromatidice nesurori ntre cromozomii omologi n timpul meiozei se nume"te crossing-over. Existen#a acestui fenomen dovede"te c! linkage nu este ntotdeauna complet, ca atare, crossing-over-ul este un linkage incomplet. Pentru a demonstra schimbul de gene ntre cromozomii omologi, Morgan a folosit urm!toarea experien#!: a ncruci"at un mascul de culoare neagr! "i cu aripi vestigiale cu o femel! cu corpul de culoare gri "i aripi normale (figura 7.2). n genera#ia F1 a ob#inut o descenden#! uniform! fenotipic, cu corpul de culoare gri "i aripi normale "i genotipic heterozigot!. Dac! se retroncruci"eaz! o femel! din genera#ia F1 cu un mascul cu ambele caractere mutante, rezult! n genera#ia F2 patru grupe fenotipice: dou! grupe fenotipice parentale "i dou! grupe fenotipice noi, n urm!toarele propor#ii: corp gri-aripi normale - 41,5%, corp negru-aripi vestigiale - 41,5%, corp gri-aripi vestigiale - 8,5%, "i corp negru-aripi normale - 8,5%. Se observ! c! raportul de segregare nu este cel a"teptat n urma unei retroncruci"!ri 1:1:1:1. Formele noi, rezultate n propor#ie mult mai mic! dect cele parentale, sunt determinate de schimbul de gene ntre cromatidele nesurori ale cromozomilor omologi, fiind denumite "i forme recombinate. Raportul de segregare, deosebit de cel mendelian, se datoreaz! faptului c! femela heterozigot! formeaz! patru tipuri de game#i, dou! de tip parental (b+vg+ "i bvg)"i dou! de tip nou (b+vg "i bvg+), care se fecundeaz! cu unicul tip de game#i ai masculului (bvg). Valoarea crossing-over-ului se exprim! n % "i ne arat! for#a de nl!n#uire a genelor. Cu ct aceasta este mai mic!, frecven#a crossing-over-ului este mai mare. Valoarea procentual! cu care se manifest! crossing-over-ul se mai nume"te "i valoare de schimb sau for#a nl!n#uirii.

7.5. MECANISMUL CITOLOGIC AL CROSSING-OVER-ULUI

Morgan a studiat efectele crossing-over-ului n func#ie de rezultatele ob#inute n urma hibrid!rilor . El a presupus c! la nivel citologic, n prima diviziune meiotic!, cnd cromozomii omologi se apropie "i se nf!"oar! unul n jurul celuilalt, se produc rupturi "i sud!ri ntre diferite segmente cromatidice. Dovezi citologice ale crossing-over-ului au fost aduse de C. Stern n 1931 la Drosophila melanogaster "i apoi de H. B. Creighton "i Barbara Mc. Clintock, la Zea mays, cnd s-a putut urm!ri trecerea unor segmente dintr-un cromozom n altul. C. Stern a ncruci"at dou! linii de Drosophila care aveau structura genetic! diferit!. El a ob#inut o femel! la care cromozomii X erau diferen#ia#i morfologic "i genetic: un cromozom X era fragmentat n dou! segmente aproximativ egale, din care un segment avea centromer iar al doilea cromozom X avea ata"at un segment din cromozomul Y. Pe segmentul f!r! centromer al
153

primului cromozom X sunt localizate genele c (carnation) "i B (bar). Gena c determin! culoarea ro"ie a ochilor iar gena B determin! reducerea suprafe#ei ochilor. Pe al doilea cromozom X de la femel! se g!sesc genele de tip normal, C (carnation), ce determin! culoarea ro"ie a ochilor "i b (bar), ce determin! forma normal! a ochilor (figura 7.3). Se observ! c! cromozomii X de la femel! erau foarte diferi#i morfologic "i genetic "i puteau fi urm!ri#i u"or n timpul diviziunii meiotice.

Fig. 7.3. Explica#ia citologic! a fenomenului crossing-over (dup! C. Stern, 1931)

Stern a ncruci"at o femel! de tipul descris mai sus cu un mascul pe a c!rui cromozom X se g!seau genele recesive c (ochi ro"ii) "i b (ochi de m!rime normal!). Femela produce dou! tipuri normale de game#i (cB "i Cb) "i dou! tipuri noi, recombinate, n procesul de crossing-over, (Cb "i cb). Din combinarea acestor patru tipuri de ovule cu spermatozoizi ce con#in cromozomul X cu genele cb ce proveneau de la mascul ns! cel!lalt cromozom X difer! de la o grup! la alta. Apari#ia indivizilor recombina#i se datoreaz! schimbului de gene ntre cromozomii X de la femel!. Pentru a cunoa"te mecanismul citologic al crossing-over-ului, este necesar s! analiz!m mai nti cnd "i unde se produce el. Studiul diviziunii meiotice u"ureaz! n#elegerea modului cum se produce crossing-over-ul.
154

n profaza I a meiozei, n stadiul de zigonema, cromozomii omologi se mperecheaz! "i formeaz! cromozomi bivalen#i. n diplonema fiecare cromozom cliveaz! longitudinal, rezultnd tetrada cromozomic!. ntre cromatidele celor doi cromozomi pot exista unele ntret!ieri realizndu-se unul sau mai multe puncte de contact denumite chiasmata (pluralul de la chiasm!). Cnd centromerii cromozomilor din tetrada cromozomic! se ndep!rteaz! unii de al#ii, la nivelul chiasmelor se poate realiza un schimb de segmente cromatidice, fenomen denumit crossing-over. Chiasma reprezint! modalitatea citologic! de producere a crossing-overului. Cercet!rile citologice au demonstrat c!, chiasmele se realizeaz! numai ntre cromatidele nesurori "i deci dou! din cele patru cromatide "i p!streaz! structura ini#ial!. A"a se explic! faptul c! num!rul de recombina#ii nu dep!"e"te frecven#a de 50% (fig. 7.4.).
Fig. 7.4. Chiasma afecteaz! dou! din cele patru cromatide. n urma meiozei doi game#i vor fi recombina#i iar doi nerecombina#i

Pentru explicarea mecanismului citologic al crossing-over-ului s-au elaborat dou! teorii: teoria chiasmatipiei "i teoria copierii selective a cromatidelor n timpul sintezei materialului cromozomic. Teoria chiasmatipiei a fost elaborat! de F. A. Jannsen (1909-1924) "i perfec#ionat! de C. D. Darlington "i Belling (1931, 1935). Aceast! teorie sus#ine c!, crossing-over-ul se realizeaz! naintea fazei de diplonema, n profaza diviziunii heterotipice, cnd ntre cromozomii omologi are loc un schimb de segmente egale. Acest schimb de segmente cromatidice se realizeaz! cu ajutorul chiasmelor. O chiasm! nu afecteaz! dect dou! din cele patru cromatide ale tetradei cromozomice. Acest aspect poate fi pus n eviden#! la Neurospora crassa, deoarece ascosporii acestei ciuperci pot fi studia#i individual. ntre cromatide se pot realiza mai multe chiasme, de aceea, pe lungimea unei perechi de cromozomi, se pot produce mai multe schimburi de segmente cromatidice, existnd din acest punct de vedere mai multe tipuri de crossing-over: crossing-over simplu, crossing-over dublu, crossing-over triplu etc. Teoria chiasmatipiei a fost completat! de K. Mather (1937), prin cercet!rile citologice efectuate la l!custele din genul Stenobothrus, la care cromozomii sunt foarte diferi#i ca m!rime. El a ajuns la concluzia c! exist! o corela#ie pozitiv! ntre lungimea cromozomului "i num!rul de chiasme ce se formeaz!. n ceea ce prive"te repartizarea chiasmelor de-a lungul cromozomului s-a constatat c! ntre centromer "i prima chiasm! este o distan#! mai mic! la cromozomii scur#i "i mai mare la cromozomii lungi, aceasta numindu-se distan#!
155

diferen!ial". Celelalte chiasme de pe bra#ele cromozomilor sunt separate de distan#e constante pentru o specie oarecare, denumite distan#e de interferen!". Teoria chiasmatipiei a fost verificat! cu ajutorul izotopilor radioactivi, de c!tre J. H. Taylor (1957, 1958, 1963) dar r!mne nel!murit! care este natura for#elor care determin! ruperea cromatidelor "i realizarea schimbului de segmente cromatidice. C. D. Darlington (1932) arat! c!, n stadiul de zigonema, cromozomii omologi sunt strns r!suci#i unul n jurul celuilalt, crendu-se o tensiune mai mare la cromatidele externe. Aceste cromatide se rup, se deruleaz! "i se resudeaz!, la nivelul aceleia"i cromatide (crossing-over-ul nu se produce) sau la cromatida pereche. M. J. D. White (1942), pentru a explica acela"i fenomen, arat! c! n timp ce are loc sinapsa cromozomilor omologi, ntre cromatidele acestora are loc o atrac#ie. Odat! cu clivarea cromozomilor, aceast! atrac#ie se transform! n repulsie. n stadiul de diachinez!, cnd cromozomii omologi se ndep!rteaz! mult unul de altul, prezint! o serie de bucle a c!ror fisurare este mpiedicat! de prezen#a chiasmelor. De aceea, se pot ntlni zone n care are loc atrac#ia, ce se suprapun cu zone n care are loc repulsia cromatidelor. De data aceasta cromatidele interne sunt supuse unor tensiuni mai mari, se pot rupe "i se ata"eaz! la cromatidele nesurori. Teoria copierii selective a cromatidelor, cunoscut! "i sub denumirea de copy choice theory sus#ine c!, fenomenul de crossing-over are loc n timpul replic!rii materialului genetic, n perioada S din ciclul celular. Pentru a n#elege mecanismul presupus, este necesar s! preciz!m c! procesul de sintez! replicativ! a macromoleculei de ADN, ct "i a cromozomului n ansamblu, se realizeaz! dup! modelul semiconservativ. Se presupune c! n timpul acestui proces, replica#ia cromozomului nu se face numai dup! propriul model, ci unele cromatide nou sintetizate copie secven#a nucleotidic! de pe un segment din cromatidele celuilalt cromozom. Aceast! teorie nu este acceptat! de geneticieni deoarece s-a demonstrat c! fenomenul de crossing-over are loc "i n afara perioadei S.

7.6. TIPURI DE CROSSING-OVER

Crossing-over-ul este un fenomen ntmpl!tor ce se produce cu o anumit! probabilitate n unul sau mai multe puncte de pe cromozomii omologi. n func#ie de num!rul segmentelor cromatidice ce se pot schimba ntre cromozomii pereche, crossing-over-ul poate fi: simplu, cnd se realizeaz! schimbul unui singur segment sau gene ntre cromozomii omologi; dublu, cnd se produc dou! schimburi de segmente sau gene, caz n care trebuie s! existe cel pu#in dou! chiasme ntre cromozomii omologi "i multiplu, cnd ntre cromozomii omologi se realizeaz! mai multe schimburi de gene sau segmente cromatidice (fig. 7.5). ncepnd cu crossing-over-ul dublu, exist! mai multe posibilit!#i de realizare a crossing-over-ului ntre cele patru cromatide ale tetradei cromozomice. A"a cum a fost prezentat fenomenul de crossing-over, se n#elege c! segmentele ce fac schimb ntre cromozomi omologi, sunt egale. Nu ntotdeauna procesul decurge astfel. Se poate ntmpla ca, cromatidele s! se rup! n puncte
156

diferite "i atunci segmentele ce se schimb! s! nu mai fie egale ca lungime. Acest fenomen se nume"te crossing-over inegal "i are drept consecin#! dublarea sau triplarea unei gene pe un cromozom iar la cel!lalt cromozom lipsa locusurilor respective (deficient). Efectul crossing-over-ului inegal a fost sesizat la Drosophila melanogaster, de c!tre Sturtevant "i Morgan (1923). Pe cromozomul X n regiunea 16 A este localizat! gena Bar, gen! mutant! care are ca efect reducerea suprafe#ei ochiului, prin diminuarea num!rului de omatidii. Mult! vreme s-a crezut c!, gena Bar, prin muta#ie de reversie poate reveni la forma normal! sau s! determine un nou fenotip dublu Bar. Dar fiindc! muta#ia de reversie "i apari#ia fenotipului dublu bar era nso#it! de un crossing-over n vecin!tatea regiunii 16 A s-a tras concluzia c! tipul Bar este efectul unei duplica#ii a regiunii 16 A, determinat! de un crossing-over inegal.
Fig. 7.5. Tipuri de crossing-over: 1-cromozomi normali; 2-crossing-over simplu; 3-crossing-over dublu 4-crossing-over multiplu

Odat! cu descoperirea cromozomilor gigantici din glandele salivare ale larvelor de Drosophila s-a constatat, ntr-adev!r, de c!tre Bridges c! mic"orarea suprafe#ei ochiului este corelat! pozitiv cu dublarea sau triplarea unor por#iuni de cromozom ca urmare a unui crossing-over inegal. Crossing-over-ul mitotic. Crossing-over-ul este un fenomen specific diviziunii meiotice. Destul de rar, acest fenomen poate avea loc "i n celulele somatice, n profaza mitozei, numindu-se n acest caz crossing-over mitotic sau somatic. Fenomenul apare foarte rar la plantele "i animalele superioare, ns! destul de frecvent la unele microorganisme, la care h!r#ile cromozomice s-au ntocmit pe baza crossing-over-ului mitotic. Bridges, a observat apari#ia unor caractere mozaicate la femelele de la Drosophila att pe corp ct "i pe ochi. Studiind mai detaliat cauzele acestor mozaicuri de la Drosophila de c!tre C. Stern (1936) "i la porumb de D. F. Jones (1937) s-a demonstrat c! fenomenul se datoreaz! unui crossing-over ntre cromatidele cromozomilor omologi n timpul diviziunii mitotice. La Drosophila s-au luat n studiu dou! caractere: culoarea galben! a corpului, produsa de gena Y "i caracterul peri ar"i determinat de gena Sn.
157

Femelele heterozigote pentru aceste caractere aveau urm!torul genotip: YSn+ / Y+Sn. Cele dou! gene se g!sesc pe cromozomul X, foarte apropiat una de alta. Petele ce se observ! pe corpul insectei pot fi simple sau duble, n func#ie de locul de pe cromozom unde se produce crossing-over-ul. Dac! crossing-over-ul se produce ntre centromer "i gena Sn, apar pete duble, iar dac! se produce ntre gena Sn "i Y, petele sunt simple. n anafaza mitozei cromozomii cu genele YSn+ vor migra la un pol al celulei, iar cromozomul cu genele Y+Sn la cel!lalt pol. Din cele dou! celule se dezvolt! dou! #esuturi unde genele recesive Y "i Sn vor fi homozigote, realizndu-se urm!toarele genotipuri: YSn+ / YSn+ "i Y+Sn / Y+Sn determinnd pe corpul cenu"iu al Drosophilei cele dou! pete: o pat! de culoare galben! "i cu peri"orii normali "i alta de culoare gri "i cu peri ar"i. Crossing-overul ntre genele Y "i Sn are loc foarte rar, deoarece cele dou! gene sunt localizate foarte aproape una de alta pe cromozomul X, n acest caz ap!rnd petele simple. Crossing-over-ul somatic poate avea loc att ntre cromozomii sexului ct "i ntre cromozomii autozomi. Crossing-over-ul mitotic a fost pus n eviden#! "i la unele microorganisme, cum ar fi la Aspergillus nidulans. La aceast! ciuperc! hifele sunt haploide ns!, uneori hifele a dou! su"e pot fuziona "i dau na"tere la un heterocarion, iar dup! unirea nucleilor rezult! spori diploizi care pot fi izola#i. Ace"ti spori diploizi pot fi heterozigo#i pentru o anumit! gen!, "i ca urmare, ntre anumite gene se poate produce fenomenul de crossing-over. De exemplu, la aceast! ciuperc! s-a identificat o mutant! care determin! rezisten#a la acriflavin! (Acr), substan#! ce provoac! moartea tipului s!lbatic. (acr+). Indivizii heterozigo#i (acr+/Acr) sunt par#ial rezisten#i la acriflavin!, deoarece gena mutant! Acr este semidominant! asupra tipului s!lbatic (acr+). Dac! a avut loc fenomenul de crossing-over mitotic (la indivizii diploizi), pot apare indivizi cu genotipul Acr/Acr, ce sunt rezisten#i la acriflavin!. n acest mod, dac! n mediul de cultur! se va ad!uga acriflavin!, se vor ndep!rta u"or toate celelalte tipuri, selectndu-se numai recombina#ii, orict de rar ar ap!rea. J. H. Taylor (1957) folosind metoda autoradiomicrografiei la planta Bellevalia romana (2n=8) a dovedit citologic existen#a crossing-over-ului mitotic. Pentru aceasta, a #inut r!d!cinile tinere ale acestei plante timp de 8 ore n solu#ie nutritiv! n care a ad!ugat timidin! marcat! cu tritiu (H3). Apoi, r!d!cinile au fost scoase "i puse ntr-un mediu f!r! timidin! marcat!, ad!ugndu-se colchicin!, care blocheaz! diviziunea celulelor, dar nu "i a cromozomilor. n felul acesta s-au determinat cte diviziuni ale cromozomilor au avut loc. J. H. Taylor a constatat c! n prima metafaz! dup! scoaterea r!d!cinilor din mediul marcat, ambii cromozomi ai unei perechi erau radioactivi. n a doua diviziune unul era marcat, iar perechea sa nu. La unii cromozomi care erau n ntregime radioactivi erau segmente terminale neradioactive, dovedind un schimb de segmente ntre cromozomi. Crossing-over-ul intragenic. n concep#ia geneticii clasice, genele sunt unit!#i elementare ale eredit!#ii, care sunt, n acela"i timp, unit!#i func#ionale "i de
158

recombinare. n acest caz, nu se poate pune problema subunit!#ilor de gen! care s! poat! fi schimbate prin crossing-over. Cercet!rile ulterioare, efectuate dup! anul 1950, au eviden#iat cazuri n care genele se comport! ca "i cum ar fi alc!tuite din mai multe subdiviziuni denumite subgene. La microorganisme s-a demonstrat c! crossing-over-ul poate avea loc "i n interiorul genei, n diferi#i subloci ai acesteia, numindu-se, n acest caz, crossing-over intragenic. Avantajul utiliz!rii n diferite cercet!ri a microorganismelor, deriv! din faptul c!, se pot studia ntr-un timp scurt un num!r enorm de indivizi, de ordinul milioanelor. Un caz bine studiat este bacteriofagul T4, fag ce paraziteaz! unele su"e ale bacteriei Escherichia coli (S. Benzer, 1955). La acest bacteriofag, genele mutante, adiacente, r II A "i r II B, determin! un ciclu de via#! mai scurt al acestuia determinnd plaje mai mari de liz! (zone cu bacterii distruse) dect tipul s!lbatic. Notarea cu r, arat! c! genele respective determin! liza rapid! a celulei gazd!. Bacteriofagul T4 de tip normal, poate parazita att pe su"a B ct "i pe su"a K.12 () de E. coli. Bacteriofagii cu genele mutante r II nu pot cre"te dect pe su"a B. n cazul unor infec#ii simultane ale su"ei K.12 () cu ambele mutante ale genei r II, numai tipul s!lbatic provenit din recombinarea celor dou! gene, poate infecta bacteria. n acest caz, chiar dac! frecven#a indivizilor recombina#i este de 1/10.000.000 ei pot fi u"or identifica#i. La genele r II A "i r II B s-au identificat peste 3000 de mutante, folosite pentru eviden#ierea crossing-over-ului intragenic. Pentru a determina existen#a crossing-over-ului intragenic se procedeaz! astfel: cu dou! mutante r II A ale fagului T4 se infecteaz! simultan su"a B de E. coli, iar ntre ele se produce crossing-over-ul intragenic. Bacteriofagii rezulta#i se folosesc pentru infectarea su"ei K.12 (). n urma acestei infec#ii se vor putea identifica bacteriofagii cu gene de tip normal, deoarece numai ei pot cre"te pe su"a K.12 (). Identificarea a 1000-1500 de recombina#ii a demonstrat existen#a crossing-over-ului intragenic, putndu-se alc!tui "i harta genetic! a regiunii r II. Se pune ntrebarea: de ce se consider! c! genele r II A "i r II B sunt diferite? Acest lucru poate fi dedus din urm!toarea experien#!: dac! se infecteaz! su"a K.12 () simultan cu T4 r II A "i T4 r II B, rezult! descenden#i, n timp ce, dac! aceast! su"! este infectat! separat cu dou! mutante T4 r II A sau T4 r II B, nu se produc descenden#i, din cauza frecven#ei foarte mici a recombin!rilor intragenice. n concluzie, genele r II A "i r II B determin! func#ii diferite, ambele ns! necesare pentru reproducerea bacteriofagului T4 pe su"a K.12 (). Testul prin care se dovede"te c! dou! mutante apar#in aceleia"i gene sau unor gene diferite, se nume"te test de complementa!ie. Crossing-over-ul intragenic s-a pus n eviden#! "i la organismele superioare: la Drosophila melanogaster s-a descoperit c! locii white, forked #i lozenge din cromozomul X, locusul star din cromozomul II, sunt complec"i, fiind
159

alc!tui#i din mai multe subgene. De asemenea, loci complec"i au fost identifica#i la porumb, bumbac, "oarece, om "i la alte specii.

7.7. FACTORII CARE INFLUEN"EAZ! CROSSING-OVER-UL

Stabilitatea structural! a cromozomilor "i a locilor ce ocup! pozi#ii bine definite fac ca linkage "i crossing-over-ul s! se manifeste ca fenomene constante de la o genera#ie la alta, putndu-se afirma c! cele dou! fenomene sunt controlate genetic. Ca orice proces genetic, crossing-over-ul este supus influen#ei a dou! categorii de factori: interni "i externi. Dintre factorii interni studia#i pn! acum sunt: sexul, structura cromozomilor, abera!iile cromozomice #i numerice, vrsta organismului, iar dintre factorii externi: temperatura, nutri!ia. Sexul. Cercet!rile efectuate de C. B. Bridges (1933) la Drosophila melanogaster, au eviden#iat faptul c! la masculi, fenomenul de crossing-over nu se produce sau este foarte rar. Lipsa crossing-over-ului a fost semnalat! "i la Bombyx mori, la sexul femel, care este heterogametic XY. Absen#a crossing-over-ului la sexul heterogametic al unor specii se datoreaz! faptului c!, n procesul de gametogenez! (spermatogenez! "i ovogenez!), de"i cromozomii omologi fac sinaps! formnd bivalen#i, ntre cele patru cromatide nu se formeaz! chiasme "i deci nu se poate realiza nici crossingover-ul. La alte specii, la care sexul se realizeaz! cu ajutorul heterozomilor (la mamifere), s-a constatat c! cromozomii se asociaz! cap-la-cap, n timp ce autozomii se asociaz! normal, latur!-pe-latur!. n acest caz ntre cromozomii somatici are loc crossing-over-ul, dar nu "i ntre cromozomii sexului. Chiar la organismele la care crossing-over-ul se produce la ambele sexe, s-au observat diferen#e privind frecven#! crossing-over-ului de la un sex la altul. n aceste organisme, de obicei, la sexul heterogametic, frecven#a crossing-overului este mai mic!. La unele plante monoice sau dioice s-au observat diferen#e ntre sexe, n ceea ce prive"te frecven#a crossing-over-ului. Astfel, la porumb, frecven#a acestuia este mai mare la game#ii masculi. n ceea ce prive"te structura cromozomilor, frecven#a crossing-overului este influen#at! de pozi#ia centromerului "i localizarea heterocromatinei. n regiunea centromerului frecven#a crossing-over-ului este redus!, datorit! interferen#ei manifestate de centromer asupra genelor din vecin!tatea sa "i datorit! faptului c! genele sunt foarte apropiate una de alta. Tot n zona centromerului sunt prezente zonele heterocromatice ale cromozomului, care reduc schimbul de gene ntre cromozomii omologi. Abera#iile cromozomice "i n special inversia "i transloca#ia, precum "i unele tipuri de poliploidie, determin! o modificare a frecven#ei crossing-over-ului. Procentul de crossing-over depinde "i de vrsta organismului. Astfel, la Drosophila, dup! ce femelele au atins maturitatea sexual!, n urm!toarele dou!
160

zile, frecven#a crossing-over-ului a atins valoarea maxim!, iar dup! 10-11 zile, frecven#a acestuia este minim!. Dintre factorii externi, un rol important n modificarea frecven#ei crossing-over-ului l are temperatura. Efectundu-se diferite hibrid!ri ntre diferite mutante la Drosophila "i crescndu-se descenden#ii n condi#ii diferite de temperatur!, s-a putut constata c! la unii cromozomi sau chiar la unele segmente cromozomice frecven#a crossing-over-ului se modific!. Astfel, dup! Grubard (1932) (citat de T. Cr!ciun, 1978), unele regiuni ale cromozomului II de la Drosophila formeaz! mai multe recombin!ri la temperatura 14-160C, iar n alte regiuni, la temperatura de 25-300C.

7.8. H!R"ILE CROMOZOMICE

Tezele teoriei cromozomice a eredit!#ii au constituit baza teoretic! "i practic! pentru elaborarea h!r#ilor cromozomice sau genetice. H"r!ile cromozomice constituie reprezentarea grafic" a cromozomilor #i a genelor care alc"tuiesc diferite grupe de linkage, genele fiind plasate pe cromozomi la distan!e relative exprimate n procente de crossing-over. Alc!tuirea h!r#ilor cromozomice presupune trei etape de lucru: - ob#inerea mutantelor de la caracterul normal sau s!lbatic; - stabilirea grupelor de linkage; - determinarea ordinii "i distan#elor dintre gene n cadrul fiec!rei grupe de linkage. Dup! ce s-au realizat un num!r ct mai mare de forme mutante, genele respective se repartizeaz! n grupe de nl!n#uire. Pentru a stabili aceste grupe se efectueaz! un num!r mare de ncruci"!ri "i retroncruci"!ri ntre indivizi normali "i mutan#i sau ntre indivizi mutan#i. Dac! segregarea se realizeaz! dup! raporturile mendeliene, se trage concluzia c! genele respective se g!sesc n grupe diferite de nl!n#uire, iar dac! n urma retroncruci"!rilor se ob#in n propor#ie mai mare fenotipurile parentale, ntre genele respective se manifest! linkage, complet sau incomplet, deci ele sunt plasate n acela"i cromozom. Pentru determinarea ordinii "i distan#ei dintre gene s-a plecat de la constatarea c! frecven#a crossing-over-ului este o func#ie direct propor#ional! cu distan#a dintre gene. Distan#ele dintre gene se exprim! n unit!#i de recombinare, denumite unit!#i Morgan sau morganide. Fiecare unitate de recombinare corespunde cu 1% crossing-over, iar 1% crossing-over este egal cu 1 unitate de pe harta cromozomic!. De exemplu, dac! la Drosophila melanogaster se consider! trei gene mutante recesive, b - corp negru, vg aripi vestigiale "i c aripi ndoite, pentru a stabili distan#a dintre ele "i ordinea lor pe cromozom, se fac urm!toarele ncruci"!ri: indivizii normali cu indivizi ce prezint! muta#iile b "i c, rezultnd un procent de 27% crossing-over, indivizi normali cu indivizi ce prezint! muta#iile c "i vg n urma c!reia au rezultat 8,5% indivizi recombina#i. Se poate afirma c! distan#a dintre locii b "i c este de 27 unit!#i iar ntre locii c "i vg distan#a este de
161

8,5 unit!#i. Pentru a determina pozi#ia genei vg fa#! de celelalte gene este obligatorie "i a treia ncruci"are, ntre indivizi normali "i indivizi cu genele b "i vg, caz n care frecven#a crossing-over-ului a fost de 18,5%, deci distan#a dintre ace"ti loci este de 18,5 unit!#i pe harta genetic!, ca n schema de mai jos:

n acest caz, gena vg este plasat! ntre genele b "i c, deoarece dac! ar fi fost plasat! dincolo de gena c ar fi trebuit s! se ob#in! un procent de crossing-over de 35,5%. Cnd dou! gene de pe acela"i cromozom sunt situate al distan#! mai mare, ntre ele poate apare crossing-over-ul dublu, care reduce frecven#a crossingover-elor simple. Atunci cnd ntr-un punct al cromozomului are loc un crossingover, n vecin!tatea sa, probabilitatea ca s! se produc! un alt crossing-over se reduce, iar fenomenul a primit denumirea de interferen!". S-a constatat c! dac! distan#a dintre dou! gene este de minimum 12 unit!#i de recombinare (morganide), n acest segment de cromozom nu mai are loc un alt crossing-over. n alc!tuirea h!r#ilor cromozomice s-a constat c! exist! o diferen#! ntre valoarea real! a crossing-over-ului "i cea calculat! statistic. Aceast! diferen#! se apreciaz! cu ajutorul coeficientului de coinciden!", care este raportul dintre valoarea experimental! a crossing-over-ului "i cea teoretic!. Coeficientul de coinciden#! are valori cuprinse ntre 0 "i 1 "i este o valoare invers! interferen#ei: are valoarea maxim! (1) cnd interferen#a este absolut! "i valoarea minim! (0) cnd interferen#a este mare. Prima hart! cromozomic! s-a ntocmit la Drosophila melanogaster iar apoi la Zea mays, Antirrhinum majus, Lathyrus odoratus, Hordeum vulgare etc. n figura 7.6. sunt redate par#ial h!r#ile cromozomice la Drosophila melanogaster "i Zea mays. Frecven#a crossing-over-ului nu poate dep!"i valoarea maxim! de 50%. Dac! se observ! cele dou! h!r#i cromozomice, se constat! c! pe hart! apar "i distan#e mai mari de 50 unit!#i. Acest lucru se explic! astfel: ntre genele ndep!rtate apar crossing-overe duble "i n acest caz distan#ele mari se calculeaz! prin nsumarea distan#elor mai mici dintre genele intermediare. n concluzie, distan#a dintre gene figurat! pe harta cromozomic! nu corespunde cu procentul de crossing-over dect n cazul genelor apropiate ntre care nu pot avea loc crossing-overe duble.

162

Fig. 7.6. H!r#i cromozomice: a-la Drosophila melanogaster (dup! Bridges); b-la Zea mays (dup! Rhoades)

7.9. H!R"ILE CITOLOGICE

Localizarea genelor pe cromozomi s-a putut stabili prin determinarea procentului de crossing-over, alc!tuindu-se h!r#ile cromozomice. Se pune ntrebarea dac! nu se pot localiza genele pe cromozom, folosind elementele de structur! ale acestuia, mai precis, diferen#ele de structur! ce apar de-a lungul lui "i care s! corespund! genelor. Acest lucru a devenit posibil prin descoperirea "i studierea cromozomilor gigantici din celulele glandelor salivare ale larvelor de Drosophila melanogaster, deoarece au dimensiuni mari "i pot fi studia#i u"or n interfaz!. La ace"ti cromozomi, s-au eviden#iat microscopic o serie de benzi transversale, unele heterocromatice (dense) "i altele eucromatice (clare). La nivel molecular, cromozomii gigantici pot fi privi#i ca o multiplicare de cteva sute sau mii de ori a macromoleculei de ADN, locii suprapunndu-se n paralel "i deci, un locus de pe ace"ti cromozomi reprezint! o amplificare a unicului locus de pe fibra de ADN din cromozomii somatici. Acest lucru a permis studierea am!nun#it! a
163

cromozomilor gigantici, la care s-au identificat peste 5000 de benzi transversale, iar fiecare fiind alc!tuit! din 16 puncte. Localizarea acestor benzi este constant! pe cei patru cromozomi, fapt ce a permis identificarea "i numerotarea lor. Lungimea total! a cromozomilor gigantici (1180 ) a fost mp!r#it! n 100 de diviziuni, repartizate astfel: cromozomul I, 0 20 diviziuni; cromozomul II, 20 60 diviziuni; cromozomul III, 60 100 diviziuni. Cromozomul IV fiind foarte mic nu a intrat n aceast! mp!r#ire. Fiecare diviziune a fost mp!r#it! n "ase subdiviziuni notate cu literele: A, B, C, D, E, F. Fiecare subdiviziune cuprinde un anumit num!r de benzi transversale. C. B. Bridges (1944) a stabilit o coresponden#! ntre genele localizate pe cromozomii obi"nui#i "i benzile transversale de pe cromozomii gigantici (figura 7.7.). Distan#a dintre genele de pe harta cromozomic! "i cea citologic! nu coincide ntotdeauna, mai ales n regiunile centromerice. H!r#ile genetice au o importan#! deosebit! din punct de vedere teoretic "i practic. Elaborarea h!r#ilor genetice a permis s! se cunoasc! o serie de aspecte cum ar fi: neomogenitatea func#ional! liniar! a cromozomilor, explicarea unor abera#ii cromozomice, importan#a genetic! a fiec!rui cromozom, n func#ie de tipul genelor "i num!rul lor. Cunoa"terea precis! a locilor genelor pe cromozomi deschide perspective mari n cunoa"terea modului de transmitere a unor caractere "i n modificarea constela#iei genetice a organismelor pin metode de manipulare a materialului genetic.

Fig. 7.7. Segment din harta citologic! a cromozomului x la Drosophila melanogaster

164

CAPITOLUL 8 DETERMINISMUL GENETIC AL SEXULUI

Moto: "Cei doi p!rin"i divor"eaz! n celulele sexuale ale copilului" Carl Sagan

8.1. GENERALIT!"I
Sexualitatea a ap!rut pe o anumit! treapt! a evolu"iei plantelor #i animalelor, prezentnd o serie de avantaje: asigur! reproducerea organismelor, recombinarea genetic!, vigoarea hibrid! a descenden"ei #i trecerea de la starea haploid! la cea diploid!. Aspectele pe care le ridic! acest domeniu al biologiei sunt pe ct de variate, pe att de complexe. Este vorba de biologia, de transmiterea #i diferen"ierea sexului, precum #i de posibilitatea de dirijare a raportului dintre sexe. Determinarea #i dirijarea sexelor prezint! un interes deosebit pentru practic!. De#i s-a lucrat mult n direc"ia g!sirii unor posibilit!"i pentru a putea dirija raportul dintre sexe, s-au f!cut pu"ine progrese. Ct de important ar fi pentru noi s! putem dirija raportul dintre sexe la plante sau animale, dup! necesit!"i de ordin economic? S! putem, de exemplu, reduce la animale num!rul de masculi, m!rind num!rul de femele n scopul nmul"irii mai rapide a acestui sex (pentru produc"ia de lapte, ou! #.a.). Pentru plantele de cultur! ar prezenta importan"!, de exemplu, transformarea unor plante dioice n plante monoice sau invers. Diferen"ierea sexelor, att n regnul vegetal ct #i animal este strns legat! de complementul cromozomic, existnd #i excep"ii. Din punct de vedere al modului de reproducere, organismele se pot clasifica n: - organisme unisexuate, cu diferen"e exclusiv masculin! #i feminin!; - organisme bisexuate (hermafrodite) cu diferen"iere ambigen!, care produc att game"i masculi ct #i femeli; - organisme pseudohermafrodite cu diferen"iere ambigen!, care, de#i posed! organe pentru reproducerea game"ilor de ambele sexe, produc game"i numai de un sex. Sub aspectul diferen"ierii sexuale, lumea vie este att de variat!, nct o ncercare de clasificare a lor nu este chiar att de u#oar!. Deosebirea dintre sexe se nume#te gonochorism, fiind implicate dou! categorii de caractere: caracterele sexuale primare #i caracterele sexuale secundare. Primele sunt datorate prezen"ei gonadelor, care produc un anumit tip de celule sexuale, diferite la mascul fa"! de femel! #i anexele glandelor sexuale (caractere legate de sex). Caracterele sexuale secundare sunt diferen"ierile morfologice #i fiziologice dintre sexe; sunt determinate de hormonii secreta"i de
165

glandele sexuale #i nu asigur! direct procesul gametogenezei, dar au un anumit rol n reproducerea sexuat!. Caracterele sexuale secundare, spre deosebire de cele primare, apar ntro anumit! perioad!, n cursul dezvolt!rii individuale. Totalitatea caracterelor sexuale care genereaz! deosebirile dintre cele dou! sexe, poart! numele de dimorfism sexual. Dimorfismul sexual este mai accentuat la organismele inferioare dect la cele superioare. Un caz interesant este viermele marin Bonellia viridis: femela are corpul de forma unui sac, cu o prelungire sub form! de tromp! #i o lungime de aproximativ 30 cm; masculul are forma unui filament de 1-2 mm #i tr!ie#te ca parazit n esofagul sau oviductul femelei. n general, la speciile inferioare #i la unele insecte, femela este mai bine dezvoltat! dect masculul. La pe#ti #i reptile, dimorfismul sexual este aproape imperceptibil. El se accentueaz! n favoarea masculului la vertebratele superioare. La p!s!ri, deosebirile sunt determinate de culoare, form!, m!rime etc.; la mamifere aceste deosebiri se refer! la m!rime, p!r, coarne etc.

8.2. TEORIA GENETIC! A DETERMIN!RII SEXULUI

Determinismul genetic al sexelor are loc n cursul ontogeniei organismului, n diferite faze ale ciclului de nmul"ire. Se cunosc trei tipuri de determinism: progamic, singamic #i epigamic. Tipul progamic are loc n organismul matern odat! cu procesul de maturare a ovulului. La unele animale, cum ar fi, de exemplu, Rotataria, Philoxera vastatrix #i Dinophylus, din ovule mari se dezvolt! femele, iar din cele mici masculi. Mai r!spndit este tipul singamic la care determinarea sexului are loc n momentul fecund!rii (pe#ti, p!s!ri, mamifere #.a.). La tipul epigamic determinarea sexului are loc dup! procesul de fecundare, n timpul dezvolt!rii individuale a organismelor (Bonellia viridis #.a.).

8.2.1. Determinismul cromozomic al sexelor

Observa"iile cu privire la propor"ia dintre sexe, att la plante ct #i la animale, au dus la acumularea de date, din care s-a dedus c! n natur! indivizii masculi #i femeli sunt n num!r aproximativ egal. Chiar din perioada mendelian! s-a ncercat stabilirea unei leg!turi ntre segregarea caracterelor #i segregarea indivizilor dup! sex. S-a constatat c! segregarea indivizilor dup! sex, care este aproape 1:1, corespunde cu segregarea de tip Zea, cnd se ncruci#eaz! o form! homozigot! recesiv! aa cu o form! heterozigot! Aa. ntr-adev!r, n experien"a lui C. Correns, cu plante din genul Mirabilis sau ob"inut urm!toarele rezultate: Mirabilis jalapa cu flori albe ncruci#at! cu Mirabilis jalapa cu flori ro#ii au dat n F1 plante cu flori de culoare roz!, care posed! cuplul de gene Aa. Aceste plante produc la rndul lor game"i de tipul A #i
166

a, n mod egal pentru ambele sexe. n F2 se ob"in indivizi homozigo"i pentru culoarea ro#ie #i alb! #i indivizi heterozigo"i pentru culoarea roz n propor"ie de 1 AA : 2 Aa: 1 aa. La ncruci#area dintre indivizii heterozigo"i Aa din F2 cu indivizii homozigo"i aa se ob"in 50% plante cu flori roze #i 50% plante cu flori albe. Segregarea se face deci dup! raportul de 1 Aa : 1 aa. Conform legilor mendeliene, genele A #i a trebuie s! se afle n aceea#i pereche de cromozomi, pentru ca s! aib! loc o astfel de segregare. Prin analogie, s-a dedus c! #i la segregarea indivizilor dup! sex, unul este heterogametic, iar altul homogametic. Cercet!rile lui C. Correns (1907) cu plante din genul Brionia #i ale lui D. Dankaster (1906) cu fluturele Abraxas grossulariata au confirmat aceast! presupunere. La sfr#itul secolului trecut, cercetndu-se meioza la unele insecte, s-a constatat c! exist! o distribuire neuniform! a cromozomilor (spermatozoizii aveau un num!r inegal de cromozomi). Aceast! reparti"ie inegal! a substan"ei cromatice n unele celule germinale a fost sesizat! de Henking (1891), Mac Clung (1901), Castle (1903) #i Wilson (1905-1940). Ei #i-au exprimat totodat! p!rerea c! cromozomul impar, deosebit ca form! #i m!rime, este implicat n determinarea sexelor. Reparti"ia inegal! a substan"ei cromatice duce la stabilirea raportului de 1:1 ntre sexe, iar mecanismul de distribuire inegal! a cromozomilor este o problem! ereditar!. Din cauza distribuirii inegale a cromozomilor, n meioz! nu to"i au pereche sinaptic!. Cromozomul unic migreaz! singur la unul din polii celulei f!r! ca la cel!lalt pol s! mearg! omologul s!u. Din aceast! cauz! se nasc celule sexuale cu un num!r par sau impar de cromozomi. Cromozomii sexului pot alc!tui n celulele somatice perechi n care unul s! fie diferit sau la fel cu cel!lalt: la Drosophila unul este drept, iar cel!lalt pu"in curbat. Cromozomii normali au fost nota"i cu litera X, iar cei curba"i cu Y (figura 8.1).
Fig. 8.1. Cariotipul la Drosophila melanogaster pentru ambele sexe

Sexul care are cei doi cromozomi sexuali identici s-a notat cu XX, iar cel!lalt, la care ei sunt inegali, cu XY sau XO cnd Y lipse#te. n procesul de gametogenez! sexul XX formeaz! un singur tip de game"i (cu cromozomul X) #i este denumit sex homogametic, iar sexul XY sau XO formeaz! dou! tipuri de game"i (cu cromozomul X sau Y sau cu cromozomul X #i f!r! cromozomul sexual Y) #i este denumit heterogametic. Se cunosc dou! tipuri principale de determinare cromozomic! a sexelor: tipul Drosophila #i tipul Abraxas. Tipul Drosophila. A#a cum arat! #i numele, acest tip cromozomic de determinare a sexului a fost studiat mai nti la Drosophila. El se ntlne#te ns! #i la alte insecte, viermi, molu#te, echinoderme, pe#ti, batracieni, mamifere #i la unele plante.
167

La organismele ce se ncadreaz! n acest tip de determinare a sexului, cnd are loc reducerea cromatic! n timpul matura"iei celulelor sexuale, toate ovulele primesc un cromozom X, pe cnd spermatozoizii, 50% primesc cromozomul X, iar 50% cromozomul Y. Oul ce va rezulta din fecundare cu un spermatozoid ce posed! cromozomul X va fi femel (XX), pe cnd din ovulul fecundat de un spermatozoid cu cromozomul Y va rezulta un mascul (XY). Schematic, aceasta se poate reprezenta n felul urm!tor: $ XX X % XY P1 Game"i X X #i Y $ XX #i % XY F1 Tipul Drosophila cuprinde trei subtipuri: - Subtipul Lygaeus, la care femela posed! doi cromozomi XX, iar masculul, unul X #i altul Y. Este de fapt tipul clasic, cunoscut sub numele de tipul Drosophila; - Subtipul Protenor, la care femela posed! cei doi cromozomi XX, iar masculul un singur X. Se ntlne#te la ortoptere, miriapode, la viermii nematozi #.a.; - Subtipul Ascaris, la care femelele posed! doi cromozomi XX, iar masculii un singur X care nu este independent ci ata#at autozomilor. Tipul Abraxas - numele vine de la genul de fluturi la care s-a descoperit #i studiat acest tip de determinare a sexului. n acest caz, sexul femel este heterogametic XY, iar cel mascul homogametic XX. Femelele (XY) formeaz! ovule cu X #i ovule cu Y, n timp ce masculii un singur fel de spermatozoizi care primesc cte un cromozom X. Dup! cum spermatozoidul, care posed! un cromozom X, va ntlni un ovul cu X sau Y va lua na#tere un mascul (XX) sau o femel! (XY). Determinarea schematic! a sexului se poate nota astfel: $ XY X % XX P1 Game"i X #i Y X $ XY #i % XX F1 Tipul Abraxas cuprinde #i el dou! subtipuri: - Subtipul clasic descris mai sus, la care femelele sunt heterogametice XY #i masculii homogametici XX; - Subtipul deficiens la sexul femel lipse#te cromozomul Y #i r!mne un singur X; masculii posed! cromozomii XX; Acest tip de determinare al sexului l ntlnim la p!s!ri, fluturi, frag #.a. #i este mult mai rar dect primul. Se mai nume#te #i tipul pas!re. Aceste dou! tipuri de determinare cromozomic! a sexului au fost studiate mai bine. n afar! de ele au mai fost descrise #i alte tipuri ntlnite mai rar. Astfel, la unele insecte au fost descrise pn! n prezent un num!r mare de subtipuri.

8.3. SEXUL N CAZUL NMUL"IRII PARTENOGENETICE

S-a ar!tat anterior ce se n"elege prin partenogenez!: dezvoltarea din ovul a unui individ, f!r! o fecundare prealabil!. S-a ar!tat, de asemenea, c! la
168

albin!, din ovulele nefecundate rezult! masculi, iar din cele fecundate regine (m!tci) #i albine lucr!toare. Determinarea sexului n cazul de fa"! se face prin ntreaga serie de cromozomi autozomi: n = %, 2n = $. n procesul de formare a celulelor sexuale, reducerea num!rului de cromozomi se face numai la femele, de la 32 la 16. Pentru partenogenez!, determinarea sexului pentru femele s-a numit diplogenotipic!, iar pentru masculi haplogenotipic!.

8.4. DETERMINISMUL GENETIC AL SEXULUI LA PLANTE

Majoritatea plantelor superioare sunt hermafrodite, iar formarea elementelor sexuale este dictat! de genele care se g!sesc pe cromozomii autozomi. La Zea mays, plant! tipic unisexuat monoic!, s-au identificat mai multe gene care determin! sexul. W. R. Singleton #i D. F. Jones (1930) au identificat gena ms1 situat! pe cromozomul 6, ce determin! androsterilitatea. Studiile ulterioare de genetic! a porumbului au avut ca rezultat descoperirea altor gene implicate n determinarea sexului: - gena normal! Ts determin! formarea paniculului normal n timp ce gena recesiv! mutant! ts n stare homozigot! (tsts), inhib! formarea florilor mascule, paniculul transformndu-se ntr-o inflorescen"! cu flori femele; - gena Sk, controleaz! formarea pistilului, alela sk n stare homozigot! (sksk) inhib! formarea acestuia; - gena Ba r!spunde de formarea #tiuletelui, iar alela sa, ba, n stare homozigot! (baba) supreseaz! formarea #tiuletelui. Prin combinarea acestor gene pot rezulta o serie de genotipuri #i fenotipuri, unele avnd importan"! deosebit! n procesul de ameliorare a porumbului. De exemplu, genotipul Ts2ts2sksk produce plant! mascul! cu panicul normal, #tiulete steril, f!r! pistile; genotipul Ts2Ts2baba, plant! mascul! cu panicul normal dar f!r! #tiulete; ts2ts2sksk, plant! femel! cu pistile n panicul #i #tiulete f!r! pistile; ts2ts2baba plant! femel! cu pistile n panicul #i f!r! #tiulete. Dioicizarea plantelor monoice poate avea o importan"! teoretic! #i practic! deosebit!. La plantele dioice ns!, mecanismul care asigur! determinarea sexelor, separate pe indivizi, deosebi"i, este asem!n!tor animalelor. La baza acestuia st! prezen"a cromozomilor sexului, descoperi"i pentru prima dat! de C. E. Allen (1917) la specia de mu#chi dioic! Sphaerocarpus donelli. Indivizii femeli posed! n celulele somatice 14 cromozomi autozomi #i cromozomii sexului XX, n timp ce masculii 14 cromozomi autozomi #i cromozomii sexului XY. Mai trziu, cromozomii sexului au fost pu#i n eviden"! #i la plantele superioare, cum sunt: Melandrium album, Humulus lupulus, Elodea gigantea, Rumex acetosella #.a. n ceea ce prive#te repartizarea cromozomilor sexului la cele dou! sexe, plantele se pot clasifica n mai multe categorii. Dup! Westergaard (1958) mecanismele determin!rii sexelor se pot ncadra n urm!toarele tipuri:
169

- Plante cu sexul mascul heterogametic (XY) #i sexul femel homogametic (XX), situa"ie ntlnit! la tipul Drosophila. Din acest tip fac parte specii ca: Melandrium album, Cannabis sativa, Humulus lupulus #.a.; - Plante cu sexul mascul heterogametic (XO) #i sexul femel homogametic (XX) ntlnit la speciile Discorea sinuata, Vallisneria spiralis #.a.; - Plante cu sexul mascul heterogametic, cu un cromozom n plus fa"! de cel femel, ntlnit la speciile Phoradendron villosum, Phoradendron flavescens #.a.; - Plante cu sexul femel heterogametic (XY) #i sexul mascul homogametic (XX) apar"innd speciei Fragaria elatior. - Plante cu sexul mascul heterogametic #i sexul femel homogametic cu un cromozom sexual compus din mai mul"i cromozomi lega"i sub form! de lan" cu formula XY1Y2 #i XX, ntlnit la speciile Humulus japonicus, Rumex hastatulus #.a.. Fa"! de cele ar!tate mai sus, trebuie men"ionat c! unisexualitatea plantelor superioare nu este absolut!. O analiz! n acest sens a fost f!cut! de C. Correns (1907) folosind dou! specii de Bryonia: B. dioica cu sexul femel XX #i sexul mascul XY #i B. alba, hermafrodit!, cu formula XX. Din ncruci#area intraspecific! a plantelor femele de Bryonia dioica cu plantele mascule de Bryonia dioica a ob"inut raportul de 1:1 (plante femele : plante mascule). Aceasta a dus la concluzia c! la Bryonia dioica un sex este homogametic #i altul heterogametic. ncruci#nd Bryonia alba (hermafrodit!) ca form! matern! cu Bryonia dioica, ca form! patern!, a ob"inut n descenden"! plante dioice n raport de 50% plante femele #i 50% plante mascule. Din ncruci#area invers!, folosind Bryonia dioica ca form! matern! #i Bryonia alba ca form! patern!, au rezultat aproape exclusiv numai plante femele. Rezultatele acestor ncruci#!ri demonstreaz! c! la Bryonia dioica sexul femel este homogametic, iar cel mascul heterogametic. Spre deosebire de animale, #i n special la animalele superioare, unde exist! o strict! determinare a sexelor, la plantele superioare exist! specii dioice la care raportul de segregare ntre sexe variaz! n limite relativ mari. A#a de exemplu, la Humulus japonicus sau la Humulus lupulus predomin! indivizii femeli. La cnep!, n anumite condi"ii, apare fenomenul de dubl! sexualitate. Raportul dintre sexe poate fi favorabil unuia sau altuia dintre ele. Analizndu-se inflorescen"ele la cnep! s-a constatat c! plantele mascule pot forma #i flori femele sau diferite forme tranzitorii ntre cele dou! sexe.

8.5. DETERMINISMUL GENETIC AL SEXULUI LA ORGANISMELE INFERIOARE

Organismele inferioare, vegetale sau animale, sunt supuse unor mecanisme diferite de determinare a sexelor, fie subordonate reproducerii sexuate sau asexuate, fie ambelor. Ca urmare, exist! diverse tipuri de sexualitate, ceea ce atest! faptul c! la aceste organisme mecanismul este mai pu"in specializat.
170

La Paramecium aurelia coexist! reproducerea asexuat! cu cea sexuat!. Conjugarea are loc prin formarea unei pun"i de citoplasm! ntre doi parameci, prin care se face schimbul de nuclei. La Paramecium bursaria exist! mai multe tipuri care se pot ncruci#a ntre ele prin conjugare, sexualitatea n cazul de fa"! fiind numit! sexualitate multipl!. La alga Chlamydomonas eugametos, ntre game"ii care sunt morfologic identici, exist! diferen"e din punct de vedere sexual. Aceste diferen"e sunt determinate de substan"a chimic! dimetilcrocetina, care are izomeri n diferite concentra"ii. Aceste concentra"ii duc la formarea a opt tipuri de game"i care se pot fecunda ntre ei, fenomen numit sexualitate relativ!. Tot la genul Chlamydomonas exist! #i specii la care game"ii sunt diferen"ia"i morfologic, cei masculi mobili #i cei femeli imobili. La plantele #i animalele inferioare exist! o ntreag! gam! de forme de sexualitate cu diferite forme de tranzi"ie ntre nmul"irea sexuat! #i asexuat!. La bacterii, fenomenul de conjugare care are loc ntre indivizi "masculi" nota"i cu F+ #i indivizii femele notate cu F-, F reprezint! factorul de fertilitate #i pentru conjugare trebuie s! fie prezent n mod obligatoriu n celulele mascule. Cromozomii sexului pot ndeplini urm!toarele func"ii genetice: - cromozomul X poate avea gene care se g!sesc localizate numai n zonele heterologe #i care nu conjug! cu cromozomul Y. Aceste gene pot fi considerate total nl!n"uite cu sexul. - cromozomul Y posed! gene care sunt localizate numai n por"iunile sale heterologe #i care nu conjug! cu cromozomul X. Aceste gene sunt total nl!n"uite cu sexul mascul #i se numesc holandrice, mo#tenindu-se numai pe linie mascul!. - cromozomii X #i Y pot avea gene care se g!sesc localizate n zonele lor omogene, zone care pot realiza sinapsa cromozomic! putnd fi par"ial nl!n"uite cu sexul.

8.6. TEORIA CANTITATIV! A DETERMIN!RII SEXULUI

Cercet!rile au ar!tat c! n determinarea sexului un rol important l pot avea #i autozomii. C. B. Bridges (1925) a descoperit ntmpl!tor o femel! triploid! de Drosophila melanogaster. ncruci#nd-o cu un mascul normal ob"ine n descenden"! o gam! de indivizi cu diferite raporturi ntre num!rul de autozomi (A) #i heterozomi (X). n tabelul 8.1. sunt redate aceste rezultate. Analiznd acest tabel, se constat! lipsa de importan"! a cromozomului Y n determinarea sexului la Drosophila melanogaster #i faptul c! raportul X/A constituie factorul ce determin! sexul. Femelele sunt determinate de raportul 1,0 iar masculii de raportul 0,5. ntre raportul de 1,0 #i 0,5 apar intersexe (indivizi cu caractere de mascul #i femel!). Valorile mai mici de 0,5 (0,33) determin! apari"ia supermasculilor, iar raportul mai mare (1,5), apari"ia superfemelelor (indivizi cu organele de reproducere foarte dezvoltate). Concluzia care se poate trage din aceste cercet!ri este c! la Drosophila melanogaster sexul este determinat de raportul dintre cromozomii sexului X #i autozomi.
171

Tabelul 8.1. Raportul X/A la Drosophila melanogaster #i determinarea sexului

Sexul Superfemel! Femel! Femel! Femel! Femel! Intersex Intersex Intersex Mascul Mascul Mascul Mascul Supermascul Cromozomi sexuali XXX XX XXY XXX XXXX XXX XX XXY X XY XYY XX X Cromozomi autozomi 2A 2A 2A 3A 4A 4A 3A 3A 2A 2A 2A 4A 3A Raportul X/A 1,5 1,0 1,0 1,0 1,0 0,75 0,67 0,67 0,5 0,5 0,5 0,5 0,33

La Melandrium album, specie dioic!, raportul dintre cromozomii X #i Y are importan"! pentru determinarea sexului. Plantele femele au formula 22A + XX, iar cele mascule 22A + XY. n cazul de fa"!, genele pentru determinarea sexului femel sunt plasate pe cromozomul X, iar cele pentru sexul mascul, pe cromozomul Y. Prin tratarea plantelor de Melandrium album cu colchicin!, pentru multiplicarea cromozomilor, s-au ob"inut diferite tipuri de plante din punct de vedere al sexului. n tabelul 8.2. sunt redate aceste tipuri de plante. Tabelul 8.2. Raportul X/Y la Melandrium album #i determinarea sexului
Sexul Femel Mascul Mascul Mascul Masculi ocazionali cu flori % #i $ Masculi ocazionali cu flori % #i $ Plante $ #i % ocazional cu flori % #i $ Cromozomi autozomi 2A 2A 2A 3A 4A 4A 2A 3A 4A 4A 3A 4A 4A Cromozomi X XX X X X X XXX XX XX XX XXXX XXX XXX XXXX Cromozomi Y YY Y Y Y YY Y Y Y YY Y Y Y Raportul X/Y 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0

3,0 4,0

n cazul de fa"!, sexul este determinat de prezen"a cromozomului Y care este aproximativ egal cu patru cromozomi X.
172

8.7. ANOMALII N EREDITATEA SEXULUI 8.7.1. Ginandromorfismul

Prin ginandromorfism se n"elege nsumarea unor caractere de mascul #i femel! la acela#i individ. Fenomenul se manifest! destul de rar #i este sesizabil cnd p!rin"ii prezint! un pronun"at dimorfism sexual. Dup! reparti"ia spa"ial! a caracterelor celor dou! sexe, ginandromorfismul se poate clasifica n mai multe tipuri: - lateral, cnd o jum!tate lateral! a corpului con"ine nsu#irile externe #i organele de reproducere ale sexului femel, iar cealalt! jum!tate, nsu#irile externe #i organele de reproducere a sexului mascul; - antero-posterior, caracterizat prin aceea c! partea anterioar! a corpului prezint! caracterele unui sex, iar partea posterioar!, caracterele celuilalt sex; - mozaicat, pe o mare parte din corp organismul prezint! nsu#irile unuia dintre sexe, #i pe mici por"iuni, nsu#irile celuilalt sex. Aceast! repartizare asimetric! poate avea loc n toate p!r"ile corpului: cap, aripi, trunchi etc. Ginandromorfismul se ntlne#te mai frecvent la Bombyx mori, pi"igoi, fazani, #oareci #.a. Poate s! apar! #i n unele ncruci#!ri artificiale la diferite specii. Astfel, din ncruci#area unor masculi de Drosophila cu ochi albi cu femele cu ochi ro#ii poate s! apar!, n rare cazuri, ginandromorfismul lateral; indivizi ce posed! jum!tate de corp cu caractere de femel! #i cu ochiul ro#u, iar cealalt! jum!tate de corp cu caractere de mascul #i cu ochiul alb (figura 8.2). Cercet!rile citologice la ace#ti indivizi dovedesc c! o jum!tate de corp posed! cromozomii XX, iar cealalt! jum!tate numai un singur X (XO). De aceea, pe o jum!tate de corp se g!sesc caractere de femel!, iar pe cealalt! caractere mascule (prezen"a unui singur cromozom X produce fenotip de mascul). Reparti"ia inegal! de substan"! cromatic! are loc dup! fecundare, n primele faze de diviziune ale oului. Datorit! unor condi"ii deosebite unul din cromozomii sexului X care poart! gena culorii ro#ii se pierde n una din celulele fiice. Ca urmare, se na#te o celul! cu un singur X, iar cea de a doua cu XX. Dac! eliminarea unuia dintre cromozomii sexului are loc n una din cele patru celule ale embrionului, atunci numai din corpul femelei va avea caractere de mascul. n procesul de diviziune al oului, cu ct aceast! pierdere se produce mai trziu, cu att mai pu"in va fi neprezentat! partea cu caractere mascule.

Fig. 8.2. Ginandromorfismul lateral la Drosophila melanogaster 173

n afar! de pierderea cromozomilor sexuali, mai exist! #i alte cauze ce pot determina apari"ia ginandromorfismului. Un exemplu a fost descris la fluturele Bombyx mori. Oul poate con"ine doi pronuclei, unul cu cromozomul X, iar cel!lalt cu cromozomul Y. Prin fecundarea lor cu spermatozoizi purt!tori ai cromozomului X, pot rezulta ginandromorfi laterali (XX/XY)

8.7.2. Intersexualismul
Prin intersexualism se n"elege reparti"ia mozaicat! a caracterelor sexuale primare, n descenden"a unor hibrizi. n unele cazuri, varia"iunile merg att de departe nct femelele seam!n! foarte mult cu masculii #i invers. La Drosophila se cunosc asemenea forme intersexuale, care sunt triploide. Spre deosebire de ginandromorfism, intersexualismul se caracterizeaz! prin nsumarea caracterului mozaicat #i nu n mod distinct sau simetric. Ginandromorfii alc!tuiesc un mozaic sexual dezvoltat n suprafa"!, caracterele sunt al!turate, pe cnd intersexualii alc!tuiesc mozaicuri sexuale dezvoltate n timp. Organismul #i ncepe dezvoltarea avnd caracterele unui sex dominant, dup! care, pe parcursul dezvolt!rii, #i-o continu! dobndind caracterul celuilalt sex. Observa"iile care s-au acumulat cu privire la cauzele care duc la apari"ia intersexelor au dus la presupunerea c! sexul organismelor poate fi determinat de mai multe gene ce se afl! att n cromozomii sexului ct #i n autozomi #i dezvoltarea lui poate fi influen"at! de condi"iile de mediu. De asemenea, s-a nt!rit #i ideea c! zigotul are o bisexualitate poten"ial! care poate evolua ntr-una din direc"iile celor dou! sexe. Intersexualitatea este explicat! prin dou! teorii: teoria cantitativ! (sau a echilibrului genetic), formulat! de C. B. Bridges #i teoria fiziologic! fundamentat! de R. Goldschmidt. Teoria cantitativ! a determin!rii sexului explic! apari"ia diferitelor forme sexuale la Drosophila. Intersexele se dezvolt! atunci cnd raportul X/A are valoare de 0,67, intermediar! raporturilor ce duc la formarea de masculi (0,5) #i de femele (1,0). Teoria fiziologic! a determin!rii sexului a fost formulat! de R. Goldschmidt. Punctul de plecare a fost ipoteza c! organismele, la nceputul dezvolt!rii lor, din punct de vedere genetic sunt bisexuate, posednd factorii ambelor sexe: M pentru sexul mascul #i F pentru sexul femel. Ace#ti factori ar apar"ine unor perechi de cromozomi diferi"i. Cercet!rile n aceast! direc"ie s-au bazat pe unele forme intersexuate ob"inute n urma unor ncruci#!ri reciproce ntre dou! specii de fluturi, ndep!rtate geografic: Lymantria dispar (european!) #i Lymantria japonica (japonez!). S-a folosit pe rnd ca mam! #i ca tat! cele dou! specii: 1. P1 $ Lymantria dispar F1 $ intersexuate raport 1 X :
174

% Lymantria japonica % normali 1

2. P2 $ Lymantria japonica X F1 $ normale raport 1 :

% Lymantria dispar % normali 1

Rezultatele ob"inute depind de modul n care cele dou! specii sunt folosite ca mam! #i ca tat!. Concluzia este c! specia european! este considerat! slab!, iar cea japonica puternic!. Aceasta se bazeaz! pe faptul c! femelele speciei europene cnd sunt ncruci#ate cu masculii speciei japoneze, n F1 se dezvolt! indivizi intersexua"i de tip femel.

8.8. EREDITATEA CARACTERELOR LEGATE DE SEX

La hibrid!ri, n general, nu are importan"! dac! un caracter homozigot urm!rit se g!se#te n autozomii mamei sau tat!lui. Autozomii nu afecteaz! ntr-un anumit mod segregarea caracterelor n descenden"!. n cazul n care aceste caractere (gene) se g!sesc n cromozomii sexului, caracterul eredit!"ii #i al segreg!rii este condi"ionat de modul de comportare al cromozomilor sexului n meioz! #i, mai apoi, n procesul fecund!rii. Deoarece cromozomul Y este aproape inert nu con"ine gene genele care se g!sesc n cromozomul X nu au pereche alelic!. Ca urmare, distribuirea lor este legat! de distribuirea acestor cromozomi. Mo#tenirea caracterelor care sunt localizate n cromozomii sexului se mai nume#te #i ereditate legat! de sex #i ea se comport! diferit dup! cum organismele se ncadreaz! n diferite tipuri de determinare a sexelor: Drosophila sau Abraxas.

8.8.1. Ereditatea legat# de sex n cazul heterogamiei sexului mascul (Drosophila)

Pentru a ilustra n ce const! la organismele care au sexul mascul heterogametic #i sexul femel homogametic, mecanismul de transmitere a caracterelor legate de sex, ne vom folosi de o experien"! efectuat! de Morgan la Drosophila. El ncruci#eaz! masculi cu ochi albi (o form! mutant!) cu femele cu ochi ro#ii (de tip s!lbatic) #i ob"ine n prima genera"ie n propor"ii egale, masculi #i femele cu ochi ro#ii, caracter dominant, culoarea alb! fiind recesiv!. ncruci#a"i ntre ei, indivizii din F1 produc n F2 o segregare, dup! sex, 50% femele #i 50% masculi, iar dup! caracterul studiat, la 3/4 indivizi cu ochi ro#ii se ob"ine 1/4 masculi cu ochi albi (raportul 3:1). Notnd cu w+ culoarea ro#ie a ochilor, cu w culoarea alb! a ochilor, iar cu linii verticale cromozomii sexului, rezultatele sunt redate n urm!toarea schem! (figura 8.3 A). Faptul c! n aceast! experien"! apar masculi att cu ochi ro#ii ct #i cu ochi albi, dovede#te c! ei sunt heterogametici #i formeaz! dou! tipuri de game"i.
175

S! vedem ce se ntmpl! cnd se ncruci#eaz! femelele cu ochi albi, cu masculii cu ochi ro#ii. Segregarea are loc deja n F1, unde se produc toate combina"iile posibile. Raportul ntre sexe pentru culoarea ochilor a fost de 1:1. Prin ncruci#area ntre ei a indivizilor din F1, apar n F2 femele #i masculi, 50% cu ochi ro#ii #i 50% cu ochi albi (figura 8.3 B). n experien"ele descrise se poate sesiza c! genele care determin! culoarea ochilor sunt situate n cromozomii X.

A B Fig. 8.3. Ereditatea caracterelor cuplate cu sexul (culoarea ochilor) n cazul heterogamiei sexului mascul (A-ncruci#area direct!; B-ncruci#area reciproc!)

Din schemele prezentate reiese c! dac! femela este homozigot! pentru gena dominant! a ochilor ro#ii aflat! n cromozomul X, atunci culoarea ro#ie a ochilor se transmite n F1 #i masculilor. Femelele din F1 primesc cromozomul X cu gena recesiv! a culorii albe a ochilor de la tat!, iar de la mam! al doilea cromozom ce con"ine gena dominant! a culorii ro#ii. Sub influen"a genei ce produce culoarea ro#ie a ochilor toate femelele au ochii ro#ii. n F2 prin combinarea diferit! a game"ilor apar combina"iile ar!tate la prima experien"!. n cazul celei de-a doua experien"e (ncruci#are reciproc!), femelele primesc de la tat! un cromozom cu gena dominant! a culorii ro#ii a ochilor #i de la mam! un cromozom cu gena recesiv! a culorii albe a ochilor. Din aceast! cauz! femelele din F1 au ochii ro#ii. Masculii din F1 au ochii albi, deoarece primesc de la tat! cromozomul Y care este inert, iar de la mam! un cromozom ce con"ine gena recesiv! a culorii albe a ochilor. Gena, de#i este recesiv!, se exteriorizeaz!, nefiind dominat! de alela sa. Ea se g!se#te ntr-o singur! doz!, stare numit! hemizigot!. Mo#tenirea caracterelor legate de sex, de la mam! la fiu #i de la tat! la fiic!, poart! denumirea de criss-cross. Schemele pentru ereditatea culorii
176

ochilor cuplate cu sexul la Drosophila, sunt valabile #i pentru alte caractere, #i la alte specii, a c!ror gene sunt situate pe cromozomul X, la organismele la care sexul heterogametic este masculul. Au fost studiate asemenea cazuri la insecte, pe#ti, p!s!ri, mamifere. La om se cunosc unele nsu#iri cuplate cu sexul: daltonismul, hemofilia #.a. Deoarece sexul mascul la om este heterogametic, aceste boli se manifest! frecvent la acest sex. S! consider!m cazul hemofiliei, boal! dat! de caracterul recesiv (h) situat pe cromozomul X. Femelele normale vor avea caracterul NN (normal), iar masculii hemofili, caracterul h n stare hemizigot!.

8.8.2. Ereditatea n cazul nondisjunc$iei cromozomilor sexului n meioz#

n cea de-a doua experien"! cu Drosophila, cnd s-au ncruci#at femelele cu ochi albi cu masculii cu ochi ro#ii raporturile din F2 de 50% femele cu ochi ro#ii #i 50% masculi cu ochi albi nu sunt perfecte. n experien"a lui C. B. Bridges (1913) la Drosophila, prin ncruci#area dintre femele cu ochi albi #i masculi cu ochi ro#ii., el ob"ine: $ 47,5% ochi ro#ii #i 2,5% ochi albi % 47,5% ochi albi #i 2,5% ochi ro#ii Raportul dintre sexe r!mne neschimbat, de 1:1, dar apar unele forme nea#teptate: 2,5% femele cu ochi albi #i 2,5% masculi cu ochi ro#ii. Care este explica"ia dat! de C.B. Bridges? n timpul meiozei, la unele femele cromozomii X nu se separ!. Ca urmare a acestui fenomen se formeaz! dou! tipuri de game"i: unii cu XX, iar al"ii f!r! cromozomii sexului. Nesepararea aceasta a fost denumit! de Bridges nondisjunc"ie primar!, iar rezultatul este apari"ia acelor procente de 2,5% femele cu ochi albi #i 2,5% masculi cu ochii ro#ii (figura 8.4.).

Fig. 8.4. Ereditatea caracterelor cuplate cu sexul la Drosophila melanogaster n cazul non-disjunc"iei cromozomilor x 177

Se constat! c! cromozomii X de origine patern! con"in gena pentru culoarea ro#ie a ochilor iar cromozomii X de origine matern! gena pentru culoarea alb! a ochilor. Se mai constat! de asemenea, c! indivizii ce con"in XXX sau numai Y, mor datorit! homozigot!rii genelor. Se mai constat! c!, n cazul de fa"!, nu numai prezen"a cromozomului Y este aceea care determin! sexul mascul ci #i num!rul cromozomilor X. n cazul a doi cromozomi X, sexul este femel, n cazul unui singur cromozom X, sexul este mascul #i steril. Dac! se continu! experien"a citat! mai sus #i se ncruci#eaz! o femel! cu ochi albi XXY (ob"inut! prin nondisjunc"ie primar!) cu un mascul cu ochi ro#ii, descenden"ele din F1, segreg! n ceea ce prive#te sexul #i culoarea ochilor, n raport de 1:1. Apar ns! #i forme nea#teptate, mascul cu ochi ro#ii, asemenea tat!lui #i fiice cu ochi albi, asemenea mamei. Femela poate forma game"i n dou! moduri: - prin disjunc"ia celor doi cromozomi XX care duce la formarea unor ovule cu formula XX sau XY, fenomen numit homeosinapsis. - prin segregarea cromozomilor XX sau a cromozomilor XY care duce la formarea a patru tipuri de ovule X, XX, XY sau Y, fenomen numit heterosinapsis. Apari"ia formelor nea#teptate se datoreaz!, dup! Bridges, fenomenului numit de el nondisjunc"ie secundar!.

8.8.3. Ereditatea legat# de sex n cazul heterogamiei sexului femel

Este cazul tipului Abraxas, femelele fiind heterogametice (XY) #i masculii homogametici (XX). Primii cercet!tori care s-au ocupat cu aceast! problem! au fost Dancaster #i Rayner. Ei au plecat de la unele observa"ii asupra fluturelui Abraxas. La acest fluture exist! foarte rar n natur! o varietate de culoare alb!, lacticolor, iar atunci cnd se ntlne#te, to"i indivizii sunt femele. Mai frecvent, se ntlne#te varietatea Abraxas grossulariata de culoare alb-cenu#ie, cu pete brune. n laborator se pot ob"ine att masculi ct #i femele de tipul lacticolor. S-au f!cut ncruci#!ri ntre aceste dou! variet!"i urm!rind raportul dintre sexe #i culoarea corpului n descenden"!. Rezultatele sunt prezentate schematic n figura 8.5. A. Din experien"a de mai sus reiese c! grossulariata este dominant, iar lacticolor recesiv. n F1 s-au ob"inut 50% femele de tip lacticolor #i 50% masculi de tip grossulariata, iar prin ncruci#are ntre ei s-a ob"inut n F2 o segregare ntre sexe #i culori de 1:1. Se constat! totodat!, c! tipul lacticolor este un caracter linkat cu sexul femel. Dac! se ncruci#eaz! reciproc aceste dou! tipuri, se ob"in rezultatele din figura 8.5. B.
178

Indivizii din F1, de ambele sexe, au fost de tipul grossulariata. ncruci#a"i ntre ei, n F2 raportul de segregare a fost de indivizi de tipul grossulariata #i indivizi de tipul lacticolor, numai de sex femel. Caracterul de culoare este cuplat cu sexul femel.

A B Fig. 8.5. Ereditatea caracterelor cuplate cu sexul (culoarea aripilor) la fluturele Abraxas (A-ncruci#area direct!; B-ncruci#area reciproc!)

Experien"e analoge s-au f!cut cu rase de g!ini, ce au culoarea penajului diferit!. Peral #i Surface ncruci#eaz! g!ini negre din rasa Indian-Same cu g!ini pestri"e din rasa Plymouth-Rock; Morgan #i Goodale ncruci#eaz! g!ini cu penaj negru din rasa Langsham cu g!ini pestri"e din rasa Plymouth-Rock. La ncruci#!rile dintre femele cu penajul negru cu masculii homozigo"i cu penaj pestri" (dominant) s-a ob"inut ntotdeauna genera"ia F1 cu penaj pestri". Din ncruci#!rile lor cu p!rintele cu caracter recesiv (culoare neagr!) se ob"ine raportul de segregare de 50% g!ini cu penaj negru #i 50% coco#i cu penaj pestri". De aici se observ! c! femelele pestri"e sunt heterozigote #i formeaz! dou! tipuri de ovule (ca la Abraxas), att pentru caracterul culoare, ct #i pentru sex. Masculii sunt homozigo"i pentru ambele caractere. Importan"a practic! a eredit!"ii legate de sex. Problema eredit!"ii legat! de sex prezint! importan"! pentru practic!, deoarece caracterele cuplate cu sexul pot s! ne dea indica"ii privind separarea indivizilor dup! sex, la o vrst! tn!r!. Trebuie ns! bine precizat mecanismul corela"iilor dintre sex #i caracter, la specia unde vrem s! aplic!m asemenea procedee. n avicultur! se folose#te procedeul separ!rii celor dou! sexe dup! unele caractere exterioare ale puilor de g!in! abia ecloza"i. La fluturele Bombyx mori, se pot separa cele dou! sexe chiar din stadiul de ou, dup! culoarea lui.

179

8.9. CARACTERELE INFLUEN"ATE DE SEX

Caracterele influen"ate de sex sunt caractere determinate de gene prezente la ambele sexe, dar care se manifest! n func"ie de sex. La oi #i capre, dimorfismul sexual se manifest! #i prin prezen"a coarnelor la masculi #i absen"a lor la femele. Rasa de oi Dorset prezint! coarne att la masculi ct #i la femele; n schimb la rasa de oi Suffolk, ambele sexe sunt f!r! coarne. S-a considerat c! rasa Dorset posed! o gen! dominant! C, n timp ce rasa Suffolk de"ine gena recesiv! c. Din ncruci#area celor dou! rase CC x cc, la indivizii din prima genera"ie, masculii au coarne, iar femelele nu. Prin ncruci#area ntre ei a heterozigo"ilor din prima genera"ie, se ob"in n F2 att masculi ct #i femele cu coarne #i f!r! coarne #i anume: masculi cu coarne (25% CC + 50% Cc) #i f!r! coarne (25% cc) #i femele cu coarne (25% CC) #i f!r! coarne (50% Cc + 25% cc). Din analiza acestor ncruci#!ri se poate trage concluzia c! gena C se manifest! n mod diferit la mascul #i femel!: la masculi ea este dominant!, iar la femele recesiv!. Aceast! constatare reiese din faptul c! heterozigo"ii Cc din F1, to"i cu aceea#i formul! genetic!, formeaz! coarne numai la mascul. Gena C este influen"at! n ac"iunea ei de hormonii secreta"i de glandele sexuale. Masculii heterozigo"i castra"i nu au coarne.

8.10. CARACTERELE LIMITATE DE SEX

Unele tr!s!turi care determin! dimorfismul sexual pot s! se manifeste numai la unul dintre sexe. Fenomenul poart! numele de sex-limitare. De exemplu, produc"ia de lapte sau de ou! prive#te numai sexul femel. De#i aceste caractere se manifest! numai la un sex, ele sunt purtate #i transmise de ambele sexe. Produc"ia de lapte este o nsu#ire ereditar! pe care o transmite #i taurul provenit din vaci cu produc"ie mare de lapte. Aceste caractere #i nsu#iri se realizeaz! prin genele situate pe cromozomii autozomi, dar se manifest! numai la un sex.

8.11. INVERSIUNEA SEXULUI

Prin inversiunea sexului se n"elege schimbarea sexului n cursul ontogeniei. Aceasta este o confirmare n plus asupra st!rii de bisexualitate a organismului n primele stadii de dezvoltare. Cazuri de inversiune sexual! se ntlnesc att n lumea plantelor ct #i a animalelor. Ele pot fi naturale ct #i artificiale, iar cauzele pot fi multiple: condi"iile de via"! (n special hrana), activitatea hormonal! (legat! de sex), vrsta #.a. Spre b!trne"e sexele tind s! capete unele caractere ale sexului opus. Femelele de fazan nceteaz! a mai oua, penajul are caracterele masculului. Sunt pe#ti care la tinere"e sunt masculi, iar la b!trne"e produc icre. Pe#tele sabie (Xiphophorus crescut n acvarii) are dimorfismul sexual distinct: masculul are o
180

prelungire a not!toarei codale n form! de sabie, care la femel! lipse#te. Uneori femelele b!trne se transform! n masculi #i le cre#te aripa codal! n form! de sabie. Unii batracieni, imediat dup! metamorfoz! sunt femele, iar mai trziu, la unele, ovarul se transform! n testicule, devenind masculi. S-a vorbit mai nainte de un caz evident de dimorfism sexual, la viermele marin Bonellia viridis. Baltzer a studiat ndeaproape via"a acestui vierme. El tr!ie#te n Mediterana, pe fundul apei, printre pietre. Masculii tr!iesc ca parazi"i n esofagul #i oviductul femelei. Cnd larvele acestui vierme tr!iesc libere n ap!, ele devin femele. Dac! ele se fixeaz! pe trompa unei femele adulte, n timp de cteva zile se transform! n masculi. n cazul fix!rii, ele primesc de la femel! substan"e chimice capabile s! diferen"ieze larvele n masculi. Aceasta a dovedit-o W. Nowinski (1934), "innd larvele de Bonellia viridis libere, n extract de tromp! sau intestin de femel!. Ele au devenit masculi. Fenomenul de inversiune poate apare la gemenii uterini, la animale care nasc de obicei un singur pui. Cercet!rile pe care le face F. R. Lillie (1916) la taurine au ar!tat c! n cazul gemenilor uterini de sexe diferite, sexul mascul este normal, iar cel femel este steril. Femelele cap!t! tuburi seminale sterile #i n plus #i canale deferente proprii organelor de reproducere a masculilor. Restul organelor genitale propriu-zise mpreun! cu glandele mamare sunt normale. Aceste rudimente ale sexului mascul exist! n mod normal la femele, dar ele nu se dezvolt! cnd exist! o sarcin! cu un singur embrion. n cazul gemenilor uterini de sexe opuse, dezvoltarea embrionar! a masculului decurge mai repede. Prin sistemul vascular ce leag! cei doi gemeni, secre"iile hormonale ale masculului stimuleaz! dezvoltarea rudimentelor de la organul genital mascul #i opre#te n acela#i timp dezvoltarea unor p!r"i ale organului genital propriu. Cazurile de inversiune sexual! se ntlnesc rar n natur!, ceva mai frecvent la organismele inferioare. Experimental ele se pot ob"ine, dar nu n toate cazurile. De multe ori, dup! ncetarea ac"iunii factorului pentru inversarea sexului, organismul revine la sexul ini"ial. Inversiunea sexului poate s! aib! loc #i la plante. S-au f!cut unele cercet!ri cu hormoni vegetali din grupa auxinelor sau chiar cu hormoni animali. V. Preda (1968) #i C. Panfil (1972) au reu#it s! feminizeze plantele de porumb, care produceau fructe n inflorescen"a mascul!, prin tratarea plantelor cu hormon animal gonadotrop corial.

8.12. RAPORTUL DINTRE SEXE

n general, n natur!, raportul dintre sexe este de 1:1. Segregarea dup! sex este asigurat! de mecanismul cromozomic de determinare a sexului #i se mai nume#te #i raport primar. Acest raport poate fi schimbat ntr-o m!sur! mai mare sau mai mic! n timpul ontogeniei, datorit! influen"ei mai multor factori, numindu-se raport secundar. n general, raportul secundar se schimb! mai frecvent n favoarea sexului femel, care este mai dotat cu calit!"i de rezisten"! fa"! de condi"iile nefavorabile de via"!.
181

Dup! datele statistice ale popula"iei umane, n diferite "!ri s-a constatat c! raportul ntre femei #i b!rba"i scade n favoarea femeilor pe m!sur! ce cre#te vrsta: la vrsta #colar! 103/100, la pubertate 100/100, la 50 de ani 100/85, iar la 85 de ani 100/50. Cauzele sunt att biologice ct #i sociale. La unele specii de Drosophila s-au descoperit femele monosexuate, care dau n descenden"! numai femele. Monosexualitatea n cazul de fa"! se datoreaz! incompatibilit!"ii dintre citoplasma ovulelor #i genele cromozomului Y. Mor astfel 50% dintre zigo"ii de sex masculin. Schimbarea raportului ntre sexe poate s! survin! #i n cazul cnd apar, prin muta"ii, gene letale n cromozomii sexului. Aceste muta"ii sunt legate de sex #i au permis elaborarea unor metode de detectare a muta"iilor. n problema determin!rii sexelor s-au ob"inut unele rezultate #i la plante. A. A. Avachian constat! c! unele soiuri de pepene galben, cultivat n condi"ii de zi lung!, formeaz! numai flori b!rb!te#ti, florile femeie#ti se scutur! #i se usuc!. De asemenea, el constat! c! dac! porumbul imediat dup! ce a r!s!rit este pus n condi"ii de zi scurt!, formeaz! inflorescen"e femele n locul celor mascule. Alte experien"e au ar!tat c! num!rul de flori femele poate fi m!rit la castrave"i prin afumarea plantelor sau tratarea lor cu oxid de carbon. La noi n "ar!, P. Raicu #i T. Cr!ciun au f!cut observa"ii privitoare la modificarea inflorescen"ei de porumb n raport cu intensitatea luminozit!"ii. V. Preda #i A. Ghi#a au efectuat experien"e de dirijarea sexului la Urtica dioica prin administrarea de hormon gonadotrop corial. S-a m!rit procentul de plante cu inflorescen"e femele. Schimbarea raportului dintre sexe nu se bazeaz! pe schimbarea mecanismului cromozomic sau a genelor care r!spund de determinarea sexului. Factorii interni sau externi despre care s-a vorbit modific! raportul, favoriznd ntr-un anumit mod ntlnirea lor n momentul fecund!rii. n cazul n care cromozomii sexuali lipsesc, influen"a factorilor interni sau externi se manifest! asupra anumitor gene de pe autozomi, care intervin n determinarea sexului.

182

CAPITOLUL 9 EREDITATEA EXTRANUCLEAR!

Moto: "Oul fecundat este cea mai specializat! celul! de sub soare. Ea con"ine toat! informa"ia necesar! pentru a produce via"a uman! Jerme Lejeune

nc! din secolul XIX, cercet!rile au ar!tat c! al!turi de nucleu "i citoplasma prezint! un rol important n transmiterea caracterelor ereditare. O serie de geneticieni ca: E. Baur "i C. Correns (1909), A. Winkler (1934), E. Wettstein (1937), J. M. Sirks (1938), T. M. Sonneborn (1950), P. Michaelis (1954), R. Hagemann (1959) ".a. au ntreprins cercet!ri n acest domeniu, eviden#iind multe aspecte legate de ereditatea citoplasmatic! sau extranuclear!. Prin fenomenul de ereditate extranuclear! se n#elege mo"tenirea caracterelor "i nsu"irilor organismului prin elementele citoplasmatice. Pentru a pune n eviden#! rolul citoplasmei n ereditate, trebuie s! ar!t!m ce structuri posed! aceste nsu"iri, dac! au sau nu proprietatea de a se reproduce, de a se modifica "i transmite aceste modific!ri la genera#ia urm!toare "i care sunt metodele de cercetare. S-a ar!tat ntr-un capitol anterior, c! n citoplasma celulei se g!sesc diferite structuri care au rol genetic, f!r! a analiza n ce const! acest rol "i cum poate fi pus n eviden#!. Vom c!uta s! l!murim aceste probleme n capitolul de fa#!.

9.1. METODE DE EVIDEN"IERE A EREDIT!"II EXTRANUCLEARE

Ereditatea extranuclear! se eviden#iaz! prin mai multe metode: - fecundarea unui ovul anucleat de la o specie, cu un spermatozoid de la alt! specie (merogonie); - hibridarea reciproc!; - prin intermediul incluziunilor "i organitelor citoplasmatice; - testul heterocarion; - segregarea nemendelian!;

183

9.1.1. Fenomenul merogoniei

Prin merogonie se n#elege formarea unui embrion prin fecundarea unui ovul anucleat cu un spermatozoid normal. Din fecundarea unui ovul anucleat cu un nucleu str!in, rezult! un zigot haploid, deoarece posed! nucleul patern, haploid "i citoplasm! matern!. n astfel de cazuri, nu se ob#in organisme mature deoarece zigo#ii, din cauza perturb!rii raportului dintre nucleu "i citoplasm!, mor ntr-un stadiu timpuriu. Primele indica#ii asupra existen#ei acestui fenomen au fost experien#ele embriologului T. Boveri (1899). El a folosit ovule de arici de mare pe care le-a centrifugat puternic, astfel nct membrana lor s-a rupt, nucleul fiind expulzat. Aceste ovule anucleate au fost fecundate cu spermatozoizi de la o specie nrudit! crinul de mare. Larvele ob#inute erau haploide "i con#ineau pe lng! caracterele tat!lui "i caracterele materne, transmise prin intermediul citoplasmei ovulului. n afar! de metoda centrifug!rii, nucleii din ovul pot fi ndep!rta#i "i cu ajutorul micromanipulatorului, prin opera#ii de microdisec#ie, sau cu ajutorul unei micropipete, prin aspirare. O alt! metod! folosit! este distrugerea nucleilor din celul! cu ajutorul "ocurilor de temperatur!, a radia#iilor ionizante, a razelor ultraviolete sau a unor substan#e chimice. Folosind unele din aceste metode I. Danielli "i colab. (1957) au nlocuit nucleii de la Amoeba discoides, cu nucleii de la Amoeba proteus. Nucleii transplanta#i au suferit influen#a citoplasmei str!ine, modificndu-"i forma n sensul nucleilor de la Amoeba discoides. Cercet!ri interesante de acest gen s-au efectuat "i cu specii din genul Triton (Triton palmatus "i Triton cristatus) de c!tre Paula Hertwig (1936, 1942), V. Curry (1931) ".a., n care nucleii din ovule au fost distru"i prin iradiere. Ereditatea citoplasmatic! a fost pus! n eviden#! la embrionii proveni#i prin fecundarea acestor ovule cu nucleii de la alt! specie. Embrionii ns! se dezvoltau numai pn! n faza de blastul!, apoi mureau. Elve#ianul E. Hadorn (1955) a reu"it s! nl!ture acest neajuns procednd n felul urm!tor: fecundeaz! ovule anucleate de Triton palmatus cu spermatozoizi de la specia Triton cristatus. Din embrionii rezulta#i a desprins o por#iune de epiderm! "i a transplantat-o pe embrionii speciei Triton alpestris. Indivizii rezulta#i aveau por#iunea de epiderm! transplantat! asem!n!toare ca aspect "i culoare cu cea de la Triton palmatus. Citoplasma ovulului de Triton palmatus "i-a imprimat deci caracterele epidermei transplantate, la embrionul nou format.

9.1.2. Ereditatea extranuclear# n hibridarea reciproc#

n ncruci"!rile formelor ndep!rtate (interspecifice "i intergenerice), apare foarte frecvent fenomenul de matroclinie, prin care se n#elege transmiterea evident! a unor caractere materne. De aceea, la astfel de hibrid!ri nu este indiferent care dintre cele dou! specii constituie forma matern! sau patern!.
184

Practica a demonstrat c! la hibridarea dintre Equus caballus "i Equus asinus se ob#in hibrizi a c!ror m!rime "i constitu#ie este asem!n!toare formei materne. Din hibridarea dintre $ Equus caballus "i % Equus asinus rezult! catrul (Equus mullus), de m!rimea "i conforma#ia lui Equus caballus, iar din hibridarea dintre $ Equus asinus "i % Equus caballus rezult! bardoul (Equus hinnus) de m!rimea "i conforma#ia lui Equus asinus. Cei doi hibrizi se deosebesc foarte mult ca m!rime, culoare, for#! ".a., de"i, n celulele somatice au acela"i num!r de cromozomi, (2n = 63).

9.1.3. Testul heterocarion

Prin heterocarion se n#elege o celul! n care, pe lng! nucleul propriu, mai exist! inclus un nucleu str!in. n urma includerii unui nucleu str!in se formeaz! un dicarion, o celul! cu doi nuclei. Fenomenul a fost pus n eviden#! la ciupercile inferioare, care se nmul#esc asexuat. Realiz!ri n aceast! direc#ie au fost ob#inute de c!tre R.E. Wright "i J. Lederberg (1957) la drojdia de bere, Saccharomyces cerevisiae. Dac! not!m, la o prim! celul! nucleul cu A "i citoplasma cu &, iar la a doua celul! nucleul cu B "i citoplasma cu ', dicarionul, format prin transferul nucleului B n celula & va deveni AB. n descenden#a acestuia vor rezulta celulele cu A & "i B '. Cu aceast! ocazie se constat! c! celulele B manifest! caracteristici ale celulei A. Rezult! c!, aceste caracteristici sunt transmise prin citoplasma & "i nu de nucleu (figura 9.1).

Fig. 9.1. Schema form!rii celulelor heterocarion

9.1.4. Segregarea nemendelian#

Exist! la drojdia de bere, Saccharomyces cerevisiae, o mutant! determinat! de o gen! recesiv! homozigot! petite "i care determin! formarea unor colonii mici autosterile. Prin fuzionarea unor celule haploide mutante cu celule haploide normale se formeaz! celule heterocarion, fertile, ce se nmul#esc prin nmugurire "i formeaz! colonii normale. n anumite condi#ii celulele haploide mutante "i normale pot fuziona pe cale sexuat! dnd na"tere unei asce cu patru ascospori haploizi, doi cu gene normale "i doi cu gene mutante. Cu toate acestea, to#i cei patru ascospori, prin nmul#ire sexuat!, au dat na"tere la colonii normale. Lipsa de segregare care ar fi trebuit s! se produc! n raport de 1:1 dovede"te c! expresia fenotipic! a celor patru ascospori este de natur! citoplasmatic!.
185

Tot la drojdia de bere B. Ephrussi, H. Hottingner "i H. Roman (1955) au studiat o alt! mutant! denumit! suppressive petite. Din fuzionarea unei celule mutante cu o celul! normal! s-au ob#inut n descenden#! asce cu ascospori normali "i mutan#i n propor#ie egal!, de"i ambele con#in acela"i genotip. Aceasta dovede"te c! segregarea nemendelian! a fost influen#at! de c!tre citoplasm!. Segregarea somatic! se manifest! n cazul nmul#irii vegetative "i se explic! prin distribuirea inegal! a structurilor citoplasmatice implicate n determinarea unor caractere. Aceast! situa#ie imprim! la organisme un aspect de pestri# sau v!rgat. Un exemplu ni-l ofer! segregarea plastidelor n cazul plantei Mirabilis jalapa var. albomaculatus la care, plante pestri#e con#in plastide verzi "i albe. Acestea se repartizeaz! prin mitoz! n mod ntmpl!tor n citoplasma celulelor fiice. Cnd din astfel de celule se formeaz! celulele mam! ale megasporilor "i n continuare celule sexuale, acestea vor con#ine proplastide verzi, albe sau de ambele tipuri. n urma fecund!rii se vor dezvolta plante verzi, albe sau pestri#e.

9.2. MANIFESTAREA EREDIT!"II EXTRANUCLEARE

Tipurile de manifestare a eredit!#ii extranucleare mbrac! diferite forme "i ele depind de structurile din citoplasm! care poart! "i transmit anumite caractere.

9.2.1. Ereditatea prin plastide

Primii cercet!tori care au pus n eviden#! ereditatea prin plastide au fost C. Correns (1909) "i E. Baur (1910). E. Baur a studiat ereditatea culorilor mozaicate, la Pelargonium zonale. Aceast! plant! posed! frunze pestri#e (alb-g!lbui cu verde). Observnd la microscop sec#iuni din aceste frunze, se constat! existen#a unor grupe de celule cu plastide necolorate n epiderma "i sub epiderma frunzei, n timp ce n partea central! a ei se g!sesc plastide verzi (cloroplaste). La aceast! plant! pot s! apar!, uneori, att ramuri cu frunzele pestri#e, ct "i ramuri cu frunze verzi sau albe. Executnd hibrid!ri ntre flori de pe ramuri cu frunze diferite, el ob#ine semin#e care produc n majoritatea cazurilor plante ce au caracterele frunzelor de la forma mam!. Aceste ncruci"!ri ne arat! c! transmiterea cloroplastelor la urma"i se realizeaz! prin citoplasma celulei ou "i ntr-o mic! m!sur! de c!tre spermatie, care are o cantitate mic! de citoplasm!. C. Correns, descrie un caz de ereditate citoplasmatic! la Mirabilis jalapa. Aceast! plant! are ramuri cu frunze verzi, albe "i mozaicate. El a efectuat polenizarea florilor de pe ramurile verzi, albe "i pestri#e, cu polenul de la florile acestor trei tipuri. Plantele pe care le-a ob#inut din semin#e au avut caracterul mamei n ceea ce prive"te culoarea frunzelor. Fenomene asem!n!toare au fost observate la Anthirrinum sp., Plantago sp., Humulus sp. ".a.
186

O dovad! cert! c! ntr-adev!r cloroplastele se transmit numai pe cale citoplasmatic! este faptul c! ele posed! un mecanism de autoreproducere "i continuitate celular!. Plantele la care au fost distruse plastidele dau urma"i f!r! plastide, nefiind capabile de a le sintetiza de novo.

9.2.2. Ereditatea prin intermediul incluziunilor citoplasmatice

n afar! de mitocondrii sau plastide, prin citoplasm! se transmit "i particule submicroscopice ce au proprietatea de a se reproduce odat! cu diviziunea celulei. Aceste particule nu sunt deocamdat! elemente separabile ale celulei vii, dar pot fi responsabile pentru transmiterea unor nsu"iri pe linie matern!. Un exemplu de acest fel este transmiterea din genera#ie n genera#ie a sensibilit!#ii Drosophilei la CO2. Cercet!torul francez Ph. L'Hritier "i colaboratorii (1937), au descoperit linii de Drosophila sensibile la CO2. De obicei, Drosophila care tr!ie"te n atmosfera de CO2 rezultat n urma fermenta#iilor (de fructe, struguri etc.) este rezistent! la acest gaz. Pentru a verifica ipoteza c! sensibilitatea la CO2 se transmite prin citoplasm!, autorii au nlocuit cromozomii de la aceste linii cu cromozomii normali de la mu"tele normale. Pentru aceasta, au efectuat ncruci"!ri ntre femelele sensibile la CO2, cu masculi rezisten#i la CO2. Au realizat indivizi sensibili la CO2. n cazul cnd s-au ncruci"at masculi sensibili la CO2 cu femele rezistente la CO2 au realizat indivizi normali. Femelele hibride sensibile la CO2 au fost din nou ncruci"ate cu masculi normali. Descenden#ii femeli au fost din nou ncruci"a#i cu masculi normali. Dup! mai multe retroncruci"!ri au rezultat forme materne cu nucleul de la forma patern!. Cu toate acestea, descenden#ele prezentau sensibilitate la CO2. nsu"irea de sensibilitate la CO2 s-a transmis prin citoplasm!. Concluzia acesta a fost verificat! prin metoda inject!rii de hemoglobin! de la Drosophila sensibil! la CO2 la femelele de Drosophila normale. Acestea au produs indivizi sensibili la CO2. Toate acestea demonstreaz! c! sensibilitatea la CO2 se transmite prin particule din citoplasm! care au fost denumite sigma. Alte experien#e efectuate de T. Sonneborn "i colaboratorii (1944, 1959) au pus n eviden#! ac#iunea unor particule citoplasmatice la Paramecium aurelia. Exist! dou! tipuri de indivizi n aceast! specie; unul secret! o substan#! specific! n jurul lui, denumit! paramecin# (tipul Killer). Paramecii ce produc aceast! substan#! nu sufer! de pe urma ei, dar paramecii din cel!lalt tip, n contact cu aceast! substan#!, mor (tipul non-killer). Capacitatea de a produce paramecin! se datoreaz! unor particule din citoplasm! denumite Kappa, prezente numai la tipul ce produce paramecin! "i care con#ine n nucleu gena dominant! K. Tipul nou-killer con#ine gena homozigot! kk. La un individ se g!sesc circa 400 particule Kappa vizibile la microscop, deoarece au diametrul de 0,2 0,8 . Aceste particule con#in ADN.
187

Prin diviziunea direct! a infuzorilor ce produc paramecin! apar ntotdeauna indivizi ce produc paramecin!. Prin aplicarea unei tehnici specifice, pot fi ncruci"ate cele dou! tipuri de infuzori (conjugare). Dac! conjugarea dureaz! un timp scurt, se produce schimbul numai ntre nucleii celor dou! tipuri "i prin nmul#ire asexuat! fiecare vor reproduce tipul ini#ial. Dac! conjugarea dureaz! mai mult, se realizeaz! n plus "i un schimb de citoplasm! ntre cei doi indivizi, astfel c! ambii vor con#ine particule Kappa. Prin nmul#irea asexuat! se produce n descenden#! o segregare de 50% indivizi ce con#in particule Kappa "i 50% care nu con#in aceste particule (figura 9.2).

Fig. 9.2. Ereditatea citoplasmatic! la Paramecium aurelia: a-2 tipuri de Paramecium dintre care numai A produce paramecin!; b-conjugarea f!r! schimb de citoplasm!; c-conjugarea cu schimb de citoplasm!

Cercet!rile acestea arat! c! un element citoplasmatic poate transmite o anumit! nsu"ire. Particulele Kappa con#in ADN, care asigur! autoreproducerea lor "i transmiterea n genera#iile ulterioare.

9.2.3. Ereditatea mitocondrial#

Primele dovezi asupra localiz!rii unor structuri ereditare la nivelul mitocondriilor de la Neurospora crassa apar#in lui Mitchell (1952), iar la Saccharomyces cerevisiae lui Ephrussi (1953) "i Slonimski (1953). Ulterior s-au descoperit "i alte mutante, cum ar fi cele ce confer! rezisten#! la antibiotice la Saccharomyces cerevisiae. Au fost studiate mai bine dou! mutante "i anume: petite la Saccharomyces "i poky la Neurospora. Aceste mutante se caracterizeaz! printro cre"tere insuficient! a coloniilor, din cauza unor alter!ri ale enzimelor din mitocondrii, implicate n procesul de respira#ie. Analiza genetic! a mutantelor de tip petite a dus la constatarea c! n cazul de fa#! ac#ioneaz! un factor citoplasmatic R (normal) sau r (deficien#! respiratorie) "i un factor nuclear P (normal) sau p (deficien#! respiratorie). Ace"ti
188

factori ac#ioneaz! mpreun!. n stare normal! o celul! haploid! va con#ine RP. Dup! constitu#ia lor genetic!, coloniile petite pot fi de dou! tipuri: petite vegetative (rP) "i "petite segregante" (Rp, rp). Primele, n stare diploid! nu formeaz! ascospori dar hibrizii forma#i din ncruci"area haploizilor normali "i haploizi de tipul petite vegetative se comport! normal "i dau ascospori f!r! a da prin segregare tipul petite. S-a explicat acest rezultat presupunndu-se c! n citoplasma celulelor normale se g!sesc factori ce lipsesc din citoplasma celulelor cu deficien#a respiratorie. Hibridul haploid prime"te ace"ti factori de la tipul normal; al doilea tip de colonii se nume"te petite segregante. n acest caz coloniile au fenotip identic cu acelea vegetative, dar ele s-au format prin muta#iile genei nucleare P "i au genotipul Rp sau rp. Prin ncruci"area unui haploid normal cu un haploid mutant petite prin formarea sporilor se produce o segregare de dou! celule normale la dou! celule petite. Fenomenul poate fi explicat presupunnd c! factorul Rp din citoplasma celulei respective n prezen#a genei nucleare p este nefunc#ional, iar n prezen#a genei dominante P devine func#ional. O gen! nuclear! influen#eaz! deci genele extranucleare.

9.2.4. Androsterilitatea citoplasmatic# $i nucleo-plasmatic#

Androsterilitatea (sterilitatea mascul!) este nsu"irea plantelor de a nu produce polen, sau de a produce polen steril. Fenomenul acesta a fost studiat foarte mult la porumb "i are importan#! pentru producerea hibrizilor simpli "i dubli, ob#inu#i din ncruci"area liniilor consangvinizate. Se cunosc trei tipuri de androsterilitate: nuclear!, citoplasmatic! "i nucleo-plasmatic!. Prima se cunoa"te de mult! vreme "i a fost sesizat! la multe plante. La porumb, Emerson, Beadle "i Frase (1935) comunicau existen#a a mai mult de 25 gene ce produc androsterilitatea. Aceast! sterilitate nu a putut fi folosit! n lucr!rile de ameliorare deoarece din cauza segreg!rii, n descenden#!, apar "i plante fertile. Androsterilitatea ce se mo"tene"te pe calea citoplasmei se transmite n descenden#! de c!tre partenerul femel "i ea se folose"te n lucr!rile de ameliorare. A fost descoperit! la o plant! steril! de porumb de Peru de c!tre Rhoades (1931, 1933). ncruci"nd descenden#ele cu aceea"i form! patern!, nu s-a modificat n descenden#! caracterul de androsterilitate. S-a ajuns la concluzia c! n acest caz, androsterilitatea este determinat! exclusiv de citoplasm!. Totu"i, Rhoades d! unele date care ne arat! c! n unele cazuri, n urma poleniz!rii libere la porumb, pot ap!rea n descenden#! "i plante fertile sau par#ial fertile. Deci acest caracter depinde "i de genele nucleare care intr! n ac#iune cu genele din citoplasm! (ereditatea nucleo-plasmatic!). Numeroase linii care posed! polen fertil, prin ncruci"are produc forme cu polen steril. n aceste cazuri, genotipul nu influen#eaz! caracterul de androsterilitate, mo"tenirea realizndu-se pe cale citoplasmatic!. Au fost totu"i g!site linii cu factori genotipici capabili de a restabili fertilitatea polenului n urma ncruci"!rii cu forme androsterile citoplasmatic.
189

Tipurile de androsterilitate se deosebesc dup! gradul de sterilitate "i dup! comportarea lor la ncruci"area cu diferite linii fertile. Se pot ob#ine descenden#e fertile, par#ial fertile sau sterile. Dintre numeroasele tipuri descrise de diferi#i autori, cit!m cteva mai importante: tipul 5 descris de Jenkins (1948); tipul F (jalap) descris de Rhoades (1950); tipul brazilian descris de Jones, Strinson "i Khoo (1957); tipul Kya descris de Schwartz (1951); tipul Vg descris de Edwardson (1956) "i Briggle (1957); tipul T (Texas) descris de Rogers "i Edwardson (1952); tipul M (moldovenesc) descris de sta#iunea experimental! din Kuban ".a. Dintre toate aceste tipuri mai bine studiate sunt tipurile T "i M. Restaurarea fertilit#%ii. Se ntlnesc rare cazuri cnd androsterilitatea la porumb se mo"tene"te numai prin citoplasm!, n mod independent fa#! de genotip. Exist! cazuri cnd genotipul inhib! ac#iunea citoplasmei ce produce sterilitatea polenului, precum "i cazuri cnd din contra, citoplasma poate influen#a genotipul provocnd androsterilitatea nuclear!. Caracterul de androsterilitate este condi#ionat deci de interac#iunea dintre genotip "i citoplasm!. Aceast! interac#iune este studiat! cel mai bine la tipul T (Texas). Cercet!torii Jones (1950), Rogers (1954), Eckardt (1954), Thomas "i Johnson (1956), au emis ipoteza c! restabilirea fertilit!#ii polenului la timpul Texas se datoreaz! prezen#ei a dou! gene dominante existente la linia care restabile"te fertilitatea.

Fig. 9.3. Cele trei tipuri de androsterilitate: nuclear! (I), citoplasmatic! (II) "i nucleo-citoplasmatic! (III) 190

Dup! comportarea lor fa#! de liniile sterile, liniile consangvinizate pot fi clasificate: 1. linii fixatoare de sterilitate; 2. linii restauratoare de fertilitate; 3. linii semirestauratoare de fertilitate (semifixatoare de sterilitate). Trebuie men#ionat c! liniile consangvinizate de porumb se comport! n mod deosebit fa#! de diferite tipuri de sterilitate. Uneori, aceea"i linie poate fi restauratoare pentru un tip de androsterilitate "i fixatoare pentru alt tip. Pentru a urm!ri comportarea plantelor fa#! de androsterilitate n func#ie de ac#iunea genelor din citoplasm! "i nucleu vom nota cu S gena ce produce sterilitatea, cu F gena ce asigur! fertilitatea "i cu R gena restauratoare de fertilitate (figura 9.3). n aceast! figur! se poate urm!ri modul de ac#iune a genelor la cele trei tipuri de androsterilitate. Folosirea androsterilit!#ii n producerea de hibrizi reduce lucr!rile de castrare a plantelor "i cheltuielile de produc#ie. Pentru produc#ie se lucreaz! la ob#inerea de linii consangvine, acestea se ncruci"eaz! "i formeaz! hibrizi simpli, iar ace"tia din urm! ncruci"a#i produc hibrizi dubli cultiva#i n produc#ie. n figura 9.4. este redat! schema pentru ob#inerea de hibrizi dubli pe baz! de androsterilitate.

Fig. 9.4. Schema pentru ob#inerea de hibrizi dubli pe baz! de androsterilitate

191

9.3. APARATUL GENETIC AL EREDIT!"II EXTRANUCLEARE

Existen#a unui aparat al eredit!#ii extranucleare a fost dovedit! n primul rnd prin prezen#a, rolul "i func#iile acizilor nucleici n organitele citoplasmatice, cloroplaste "i mitocondrii. S-a admis, n general, c! n citoplasm! se g!sesc plasmagene spre deosebire de genele nucleare numite cromogene. ADN din citoplasm! prezint! unele caracteristici care-i confer! proprietatea de a nmagazina "i transmite o informa#ie ereditar!. Pe lng! ADN, organitele celulare con#in "i ribozomi, enzime, ARNr "i ARNs. Acestea constituie un aparat genetic care poate func#iona relativ independent fa#! de cel nuclear. ADN din organite are o structur! bicatenar! ca "i cel nuclear, dar difer! prin greutate molecular! (60-70 x 106 dal cel din mitocondrii) "i este de 100 ori mai mult n cloroplaste. Diferen#e se constat! "i n ceea ce prive"te raportul de baze, timpul de denaturare "i renaturare. Din aceast! cauz! nu se pot ob#ine hibrizi moleculari ntre ADN citoplasmatic "i cel nuclear. ADN din organite se replic! independent de ADN nuclear. O alt! deosebire const! n faptul c! n cloroplaste "i mitocondrii ADN are form! circular!, se replic! dup! tipul semiconservativ, independent de ADN nuclear. Deosebirile ADN din cloroplaste "i mitocondrii fa#! de acel nuclear "i asem!narea lui cu ADN ntlnit la bacterii, alge albastre ".a., au dus la presupunerea c! aceste organite, cndva, au dus o via#! independent! ca procariote "i cu timpul, p!trunznd n celule, au realizat o simbioz!. Ele au stabilit unele rela#ii cu celula, n afara c!reia nu mai pot exista. Descoperirile din acest domeniu au dus la formularea unei teorii privind originea exogen! a organitelor citoplasmatice. Tot n celul! se mai g!sesc "i alte structuri cu rol genetic, cum ar fi particulele Kappa, sigma "i alte plasmagene, nc! nelocalizate. La unele din ele a fost pus! n eviden#! prezen#a ADN. (i pentru aceste structuri exist! p!rerea c! ar avea o origine exogen!, dar cercet!rile care s-au ntreprins nu au l!murit complet structura "i func#ia unui aparat genetic propriu.

9.4. FENOMENE CU CARE SE POATE CONFUNDA EREDITATEA EXTRANUCLEAR!

Pentru studiul cazurilor de ereditate extranuclear! este necesar s! se aib! n vedere diferite situa#ii care mimeaz! unele manifest!ri a acestui tip de ereditate.

9.4.1. Predeterminarea
Acest fenomen a fost pus n eviden#! la melcul de ap! dulce, Limnaea peregra. Acesta este hermafrodit "i se poate nmul#i att prin fecundare str!in! ct "i prin autofecundare.
192

Cuprinde dou! tipuri: unul care are cochilia r!sucit! spre dreapta (dextral) "i alta care are cochilia r!sucit! spre stnga (senestral). Caracterul dextral (D) este dominant, iar caracterul senestral (d) este recesiv. La ncruci"area: $DD x %dd hibridul F1 mo"tene"te caracterul matern al cochiliei (dextral). La ncruci"area $dd x %DD hibridul mo"tene"te tot caracterul matern al cochiliei (senestral) (fig. 9.5). nmul#ite pe cale asexuat!, ambele categorii de indivizi din F1 reproduc n continuare "i n F2 "i F3 caracterele materne. Cercetndu-se cauzele acestor fenomene s-a explicat c! r!sucirea cochiliei se datoreaz! r!sucirii fusului nuclear n prima diviziune a zigotului care, la rndul s!u, determin! distribuirea blastomerelor n spiral! la stnga sau la dreapta.

Fig. 9.5. ncruci"area ntre Limnaea peregra tipul dextral cu Limnaea peregra tipul senestral (dup! Plagge, 1938, modificat)

9.4.2. Modific#rile de durat#

Prin modific!ri de durat! n#elegem modificarea unor caractere sub influen#a unui anumit agent, care se men#in un num!r de genera#ii pn! cnd organismul recap!t! caracterul ini#ial. Jollos (1932, 1935) descrie un asemenea caz la Drosophila. Larvele crescute la temperaturi ridicate au avut dimensiuni foarte mici (nanism). ncruci"ate ntre ele modificarea se men#ine pn! n F5.
193

Hoffmann trateaz! semin#ele de fasole cu cloral hidrat "i ob#ine modificarea frunzelor. Aceast! modificare s-a men#inut numai "ase genera#ii dup! care forma frunzei a revenit la cea ini#ial!. Explica#ia modific!rilor de durat! se refer! la adaptarea enzimatic!, acestea fiind sintetizate n prezen#a unui anumit substrat care are rol de inductor. Dup! dispari#ia inductorului sinteza enzimei nceteaz! sau se mai prelunge"te un timp.

9.4.3. Ereditatea aparent#

n citoplasma celulelor unui organism se g!sesc diferi#i simbion#i sau parazi#i care produc modific!ri ale unor caractere sau nsu"iri. La "oareci, n descenden#a unor indivizi, s-a constatat apari#ia cancerului mamar "i transmiterea lui pe cale matern!. S-a crezut la nceput c! este vorba de o nsu"ire transmis! prin citoplasm!. Bittner (1938) a descoperit c! este vorba de un virus oncogen transmis prin laptele femelelor.

9.4.4. Alte surse de erori

n afar! de aceste cazuri, erori n interpretarea eredit!#ii citoplasmatice mai pot surveni "i n reproducerea partenogenetic! la care ereditatea este de tip matern, n cazul eredit!#ii legat! de sexul femel sau n cazul nmul#irii asexuate.

9.5. RAPORTURILE GENETICE DINTRE GENOM &I PLASMON

Nucleul "i citoplasma constituie un sistem genetic organizat, ntre ele existnd o foarte strns! leg!tur!. Este greu de stabilit care este partea de contribu#ie a fiec!reia. De multe ori acela"i caracter este determinat att de genele cromozomice, ct "i de genele citoplasmatice. Genele cromozomice pot influen#a ac#iunea unor componen#i citoplasmatici. A"a de exemplu, gena iojap din cromozomul VII al porumbului, n stare homozigot recesiv! produce caracterul dungat al frunzelor. Prin polenizarea unor plante cu frunze verzi, cu polen de la astfel de plante to#i descenden#ii au avut frunze de culoare verde. n cazul n care plante mam! de tip iojap au fost polenizate cu polen de la plante normale, n F1 au rezultat plante cu frunze de culoare verde, alb-verzuie "i dungate de"i genotipul a fost acela"i. n concluzie, gena iojap este o mutant! ce produce o modificare ireversibil! n citoplasm!. Un alt tip de rela#ii dintre genom "i plasmon se refer! la ac#iunea inhibitoare a muta#iilor genice asupra unor caractere mo"tenite pe cale citoplasmatic!. S-au dat exemple n acest sens cnd s-a analizat androsterilitatea nucleo-plasmatic!.

194

Ac#iunea citoplasmei asupra caracterului nucleului este o dovad! n plus a rela#iilor ntre cele dou! componente. Nucleul de form! sferic! de la Amoeba proteus, introdus n citoplasma unei amoebe din specia discoides cap!t! forma de disc. Dar att genele din nucleu ct "i cele din citoplasm! pot ac#iona pentru producerea acelora"i caractere (cazul aspectului pestri# al frunzelor, al androsterilit!#ii ".a. Aceste rela#ii dintre nucleu "i citoplasm! atest! interdependen#a genetic! care exist! ntre cele dou! componente celulare la eucariote. Elementul comun care dicteaz! aceast! interdependen#! o constituie acizii nucleici purt!tori de informa#ie genetic!, prezen#i att n nucleu, ct "i n citoplasm!.

9.6. CARACTERELE &I NSU&IRILE INFLUEN"ATE DE PLASMOTIP

Din cercet!rile multiple "i ndelungate s-a constatat c! aproape toate caracterele sufer! o influen#! mai mare sau mai mic! din partea genelor din citoplasm!. Dup! Hagemann (1964), aproape toate caracterele organismelor sunt determinate "i influen#ate n timpul ontogeniei (dezvolt!rii individuale) att de genom ct "i de plasmon. O influen#! mare exercit! genele citoplasmatice asupra urm!toarelor caractere: germina#ia semin#elor, cre"terea tubului polinic, cre"terea embrionului "i a plantei, ramificarea tulpinilor, perozitatea tulpinii "i a frunzei, forma "i nerva#iunea frunzei, forma, m!rimea "i culoarea florilor, formarea "i vitalitatea celulelor sexuale, formarea "i structura plastidelor ".a. La animale citoplasma influen#eaz! puternic greutatea corporal!, rezisten#a la unele boli (cum ar fi leucoza) ".a. n leg!tur! cu problemele mari ale evolu#iei lumii organice exist! ipoteza c! genele nucleare ar fi determinat, n mare m!sur!, variabilitatea intraspecific!, iar cele citoplasmatice, caracterele legate de gen "i specie.

195

CAPITOLUL 10 SISTEME GENETICE PENTRU CONTROLUL REPRODUCERII ORGANISMELOR

Moto: "Natura nu face nimic incorect. Orice form!, frumoas! sau urt!, "i are cauza ei: "i din cte fiin#e exist!, nici una m!car nu e a"a cum n-ar trebui s! fie D. Diderot

Comportarea !i transmiterea caracterelor ereditare la eucariote depind foarte mult de modul de reproducere al organismelor. Exist" dou" moduri, principale de reproducere: reproducerea asexuat", n care se poate include !i nmul#irea vegetativ" !i reproducerea sexuat".

10.1. EREDITATEA N CAZUL REPRODUCERII ASEXUATE !I SEXUATE

n cazul nmul#irii asexuate, n general, toate caracterele organismelor se transmit ca atare la descenden#i. Descenden#ele poart" numele de clone sau su!e. n rare cazuri, se pot produce !i modific"ri ereditare prin muta#ii de gen", genom sau restructur"rii cromozomale, care se transmit la urma!i. Acest mod de nmul#ire, prezint" unele avantaje pentru produc#ie, deoarece, pot perpetua la urma!i, caractere constante (pomi, vi#" de vie, cartof !.a.). Ereditatea n cazul reproducerii sexuate mbrac" forme mai complexe, deoarece indivizii rezulta#i pe aceast" cale, reprezint" organisme n care au loc, att o continuitate genetic" ct !i o recombinare de caractere. Reproducerea sexuat" se realizeaz" cu ajutorul game#ilor, produ!i de un singur organism (hermafrodite sau monoice), sau de organisme de sex diferit (bisexuate sau dioice). Hibridarea sexuat" constituie o important" metod" de analiz" genetic". Cu ajutorul acesteia, se eviden#iaz" modul de transmitere a caracterelor de la o genera#ie la alta. Pentru ameliorarea plantelor !i animalelor, constituie o important" metod" de ameliorare deoarece se pot ntruni ntr-un organism nou (hibrid), caracteristici ereditare, de la doi p"rin#i cu eredit"#i diferite. Hibridarea ca metod" de nmul#ire !i creare de forme noi, se practic" de mult timp. Cercet"ri n aceast" direc#ie, din partea oamenilor de !tiin#", se fac de abia de la sfr!itul secolului al XVII-lea. ncepnd cu a doua jum"tate a secolului
196

al XIX-lea, n urma descoperirii unor legi cu privire la modul de transmitere a caracterelor, hibrid"rile ncep s" se aplice n mod !tiin#ific, ntocmindu-se totodat", o eviden#" genealogic" a ascenden#ilor !i descenden#ilor. Exist" multe criterii de clasificare a hibrid"rilor; cele mai importante, fiind urm"toarele: 1. $innd seama de factorii care contribuie la realizarea hibrid"rii, deosebim: hibridarea natural" !i hibridarea artificial". 2. Din punct de vedere al gradului de nrudire a formelor parentale, deosebim: hibridarea apropiat", n care p"rin#ii apar#in unor soiuri sau variet"#i botanice apropiate !i hibridarea ndep"rtat", n care ele apar#in unor specii sau chiar genuri diferite. 3. Dup" num"rul formelor parentale care particip" la ncruci!are, deosebim o hibridare simpl" (A x B), dubl" (A x B) x (B x C), tripl" (A x B) x C sau complex" etc. n cele ce urmeaz" ne vom referi la diferite forme de hibridare, precum !i la unele forme de interes teoretic !i practic.

10.2. EREDITATEA N CAZUL UNOR FORME PARTICULARE DE REPRODUCERE

La unele plante !i animale embrionul nu este rezultatul unui proces de fecundare la care particip" cei doi game#i, ci el poate lua na!tere din elementele nefecundate ale sacului embrionar sau din celulele nucelei sau integumentelor, fenomen numit apomixie. Dintre formele apomictice fac parte partenogeneza !i apogamia. Partenogeneza poate fi accidental" sau permanent", haploid", cu n cromozomi sau diploid" atunci cnd celula din care ia na!tere embrionul este diploid". Embrionul poate s" se formeze dintr-un ovul nefecundat (ginogenez") sau dintr-o celul" mascul" (androgenez"). Partenogeneza duce la mo!tenirea caracterelor numai de la p"rintele din care a luat na!tere. Starea haploid" prezint" unele avantaje n cercet"rile de genetic" deoarece genele nu au pereche alelic", sunt hemizigote, ceea ce permite analiza lor !i, totodat", prin diploidizare se pot ob#ine organisme perfect homozigote. Asemenea caracteristici prezint" !i reproducerea apogamic" cnd embrionul se formeaz" dintr-o sinergid" sau antipod". Polispermia este fenomenul prin care o celul" sexual" femel" este fecundat" de mai mul#i geme#i masculi. Game#ii pot fecunda celula sexual" femel" sau se pot resorbi n citoplasm". Individul care se na!te poart" caracterele mai multor forme paterne. Poliembrionia ia na!tere prin dezvoltarea unor embrioni suplimentari, fie din celulele terminale ale proembrionului sau din sinergide !i antipode n interiorul sacului embrionar (poliembrionia de game#i), fie din celulele nucelei !i integumentelor care p"trund n sacul embrionar (poliembrionie de metamorfoz"). Fenomenul este mai frecvent la citrice, rosacee, trifoi !.a. Ereditatea lor depinde
197

att de forma matern" ct !i de forma patern", care au participat la formarea zigo#ilor. Xenia este fenomenul prin care nucleul spermatic care fecundeaz" nucleul secundar al sacului embrionar imprim" unele caractere ale formei paterne. Un exemplu l constituie formarea pe !tiuletele de porumb a unor boabe de alt" culoare dect cea a soiului matern.

10.3. SISTEME GENETICE PENTRU CONTROLUL REPRODUCERII

Plante autogame se polenizeaz" cu polen propriu, fenomen care nu afecteaz" vitalitatea plantelor !i determin" un grad avansat de homozigo#ie. Procentul de polenizare ntre plantele autogame, n mod natural, este foarte mic. Artificial, ele pot fi hibridate prin interven#ia omului. Plantele alogame !i unele plante sau animale hermafrodite pretind o polenizare sau fecundare str"in". Modul de reproducere alogam asigur" vigoarea descenden#ei. La microorganisme, cum ar fi la ciuperci, contopirea hifelor haploide genetic diferite are loc numai atunci cnd exist" ntre ele diferen#e notate cu + !i (sistem heterotalic). Diferen#ele sunt condi#ionate de o pereche de alele ce ocup" un singur locus (J.L. Brewbaker, 1964). La bacterii conjugarea nu poate s" aib" loc dect atunci cnd una din ele, con#ine un factor de fertilitate (F+) !i care lipse!te la cea de a doua (F-). La plantele superioare exist" mai multe sisteme de incompatibilitate ce mpiedic" autofecundarea: - Incompatibilitatea heteromorfic" depinde de structura florii (staminele ies mult n afar" corolei sau r"mn mult n interior, n timp ce, stilul se g"se!te la distan#" mare). O alt" cale const" n nflorirea nesincron" a inflorescen#elor mascule !i femele: protandrie cnd nfloresc mai nti inflorescen#ele mascule (porumb) sau protoginie cnd inflorescen#ele femele nfloresc primele. Al"turi de aceste c"i mai exist" diferite complexe, cum ar fi complexul entomofil (culoarea florii !i prezen#a parfumului !i a nectarului pentru a atrage insectele ce transport" polenul) sau complexul anemofil (prezen#a unor saci cu aer n polen, pentru a putea pluti n aer). - Incompatibilitatea genetic" este dictat" de o serie de gene alele care mpiedic" autofecundarea (genele autosterilit"#ii). Acesta poate fi gametofitic" sau sporofitic". - Incompatibilitatea gametofitic" - n acest caz polenul nu poate germina dac" n el !i n #esuturile ovarului, stilului !i stigmatului se g"sesc acelea!i alele, de exemplu S1S2 (figura 10.1.a). Cnd incompatibilitatea se refer" numai la unii gr"unciori de polen c"zu#i pe stigmat n timp ce al#ii, de pe acela!i stigmat, germineaz", ea poart" numele de semi-incompatibilitate. De exemplu, polenul are constitu#ia S1S3 iar ovarul, stilul !i stigmatul S1S2. n acest caz, numai polenul S3
198

germineaz" !i nucleul s"u spermatic produce fecundarea unindu-se cu S2 (figura 10.1.b). A treia situa#ie o formeaz" alelele compatibile care fiind heterozigote S1S2 n ovar !i S3S4 n polen, fecundarea este posibil" (figura 10.1.c). Sistemele genetice de incompatibilitate au fost studiate la Trifolium, Oenothera, Prunus, Gramineae, Solanaceae !.a - Incompatibilitatea sporofitic". Acest sistem este mai pu#in r"spndit la plante, la circa 1/3 din ele. %i n acest caz este implicat locusul S cu o serie de alele. Comportarea polenului nu depinde de constitu#ia genetic" a polenului ci de genotipul diploid al plantei care l produce. ntre alelele din polen !i stil exist" rela#ii de dominan#" !i recesivitate. De exemplu, dac" n polen S1 manifest" dominan#" fa#" de S2, polenul va avea reac#ia alelei S1 !i va fi capabil s" germineze !i s" str"bat" stilul cu reac#ia S2. Acest sistem a fost studiat la tutun, varz" !.a.

Fig. 10.1. Reprezentarea grafic" a reac#iei autoincompatibilitate-compatibilitate n sistemul gametofitic pentru controlul poleniz"rii: a-polenizare autoincompatibil"; b-polenizare semicompatibil" c-polenizare compatibil"

Sistemele de alele ale incompatibilit"#ii prezint" importan#" pentru crearea unor noi genotipuri. La plantele alogame, ce se reproduc prin semin#e nu se urm"re!te ob#inerea unor forme autocompatibile deoarece consangvinizarea reduce vigoarea plantelor. La speciile pomicole, care se nmul#esc vegetativ se urm"re!te crearea unor forme autocompatibile pentru a nu mai fi nevoie s" introducem n apropiere alte soiuri bune polenizatoare. Ob#inerea formelor autocompatibile se poate realiza prin muta#ii n locusul S, dele#ia (ndep"rtarea) acestui locus !i poliploidie (multiplicarea garniturilor de cromozomi).

199

10.4. VIGOAREA HIBRIZILOR (HETEROZIS)

Fenomenul vigorii hibride a fost observat !i descris nc" din secolul al XVIII-lea !i prima jum"tate a secolului al XIX-lea. Iosef Gottlieb Klreuter (1763) a executat printre primele hibrid"ri artificiale la plante. ncruci!nd diferite specii de Nicotiana semnaleaz" vigoarea sporit" a descenden#ilor fa#" de formele parentale. Andrew Knight (1787) constat" c" hibrizii ob#inu#i la diferite specii pomicole, soiuri de maz"re !i cartof, se caracterizeaz" prin vigoare, care ntrece pe aceea a p"rin#ilor !i c" ea scade treptat n genera#iile urm"toare. Charles Darwin studiaz" peste 10 ani autofecundarea !i fecundarea ncruci!at" la diferite soiuri de plante (Brassica, Dianthus, Pisum, Primula, Zea !.a) !i ajunge la concluzia c" fecundarea str"in" duce la o constitu#ie mai viguroas" (constitutional vigour). Observa#iile !i rezultatele le-a publicat n lucrarea Efectele ncruci!"rii !i autofecund"rii la plante (1876). Fenomenul de vigoare la hibrizi a fost sesizat !i la animale. Se cunoa!te din practic" c" hibrizii ob#inu#i ntre diferite rase se deosebesc prin unele calit"#i fa#" de p"rin#i. Darwin arat" c" animalele ob#inute prin ncruci!are sunt mai viguroase, au talie !i greutate mai mari. n perioada 19081914 cercet"torii americani G. H. Shull, E. M. East !i H. K. Hayes ntreprind studii asupra consangviniz"rii (autopoleniz"rii) !i hibrid"rii la porumb !i elaboreaz" metodele de consangvinizare !i hibridare la plantele agricole. Termenul de heterozis a fost introdus de G. H. Shull n 1914, n#elegnd prin el dezvoltarea luxuriant" a hibrizilor din F1. Heterozisul se ntlne!te att la plante autogame ct !i la plantele alogame. La plantele alogame vigoarea este mult mai puternic" dect la cele autogame. Acest fenomen difer" !i de la plant" la plant" !i este mai pronun#at la hibrid"rile n interiorul speciei dect ntre specii sau genuri. Exist" ns" !i excep#ii, cum ar fi de exemplu hibrizii ntre genurile Raphanus Brassica, Triticum Secale sau speciile Triticum dicoccum Triticum aestivum. Dup" clasificarea f"cut" de A. Gustafsson (1951) se deosebesc trei categorii de heterozis: a) heterozisul somatic, care se refer" la cre!terea evident" a p"r#ilor vegetative ale plantelor; b) heterozisul reproductiv, ce determin" o dezvoltare sporit" a organelor de reproducere, a fructelor !i a semin#elor; c) heterozisul adaptiv, caracterizat prin vitalitate mai mare !i rezisten#" mai bun" la condi#iile nefavorabile de via#". Pentru produc#ie, importan#" are a!a numitul transheterozis, care duce la un excedent de produc#ie. Fenomenul de heterozis prezint" o deosebit" importan#" att pentru cercet"rile de genetic" ct !i pentru lucr"rile de ameliorare la plante sau animale. O preocupare importan#" a geneticii este explicarea mecanismelor intime care stau la baza lui, n scopul fix"rii heterozisul din F1, pentru genera#iile urm"toare. S-au
200

l"murit multe aspecte n leg"tur" cu aceast" problem", dar multe din ele constituie nc" probleme de viitor.

10.4.1. Teorii care explic" fenomenul heterozis

Teoria dominan#ei. n anul 1910, n perioada de nflorire a mendelismului, A.B. Bruce emite o teorie asupra naturii heterozisului, bazat" pe calculele matematice, Teoria factorilor dominan#i. Conform acestei teorii, num"rul total de caractere dominante, cu ac#iuni favorabile, n popula#iile hibride este mai mare dect la formele parentale. Teoria demonstreaz" existen#a unei corela#ii pozitive, ntre num"rul de factori dominan#i din genotip !i gradul de manifestare a heterozisului fenotipic. Dac" de exemplu, cei doi p"rin#i ar con#ine cte trei perechi de factori dominan#i, AABBCCddeeff x aabbccDDEEFF, hibridul rezultat va de#ine !ase loci cu gene dominante AaBbCcDdEeFf. Ipoteza lui Bruce a fost mp"rt"!it" !i de al#i cercet"tori. Genele ce ac#ioneaz" favorabil sub influen#a selec#iei naturale devin dominante, iar genele nefavorabile, recesive. Prin autofecundare, genele recesive trec n stare homozigot". Prin ncruci!are ele devin heterozigote !i inhibate de alelele dominante favorabile. Aceast" ipotez" explic" consecin#ele nefavorabile ale consangviniz"rii !i restabilirea vigorii prin ncruci!are, ns" nu !i efectul heterozis n general. Nu toate nsu!irile recesive sunt d"un"toare. Uneori se g"sesc !i forme homozigote dominante, inferioare p"rin#ilor. Aceast" teorie nu poate explica fenomenul de heterozis n cazul poligeniei (polimeriei), care se caracterizeaz" prin lipsa de dominan#". Teoria heterozigo#iei. G. H. Shull (1909 1914) elaboreaz" o teorie a heterozisului, care se bazeaz" pe corela#ia pozitiv" dintre vigoarea hibridului !i gradul de diferen#iere ntre game#ii ce iau parte la fecundare. Diferen#ierea game#ilor ar fi un stimulent pentru o cre!tere mai intens". Din aceast" cauz", teoria lui a mai fost numit" ipoteza stimul"rii fiziologice. Ideile lui Shull au fost dezvoltate n lucr"rile altor cercet"tori: E. M. East !i H. K. Hayes (1912) au admis p"rerea lui Shull. Ei ar"tau c" vigoarea hibrizilor F1, se datoreaz" revenirii organismelor la starea heterozigot". Prin ncruci!area formelor homozigote se ob#ine hibridul F1 n care se acumuleaz" gene dominante ce anihileaz" ac#iunea d"un"toare a alelelor recesive. n F2 vigoarea scade n urma segreg"rii genelor. ncruci!area creeaz" heterozigo#ia iar consangvinizarea duce la homozigo#ie !i descre!terea vitalit"#ii. Sunt ns" !i cazuri cnd n F1 nu se manifest" fenomenul de heterozis sau mic!orarea heterozigo#iei nu este nso#it" totdeauna de sc"derea productivit"#ii. Hibrizii simpli pot dep"!i uneori hibrizii complec!i, de!i sunt mai pu#ini heterozigo#i. S-a mai constatat c", la autogame, de foarte multe ori, hibrizii
201

nu dep"!esc formele parentale, homozigote. Toate aceste fenomene nu pot fi explicate cu aceast" teorie. Urm"toarea etap" a dezvolt"rii ideilor lui Shull, East !i Hayes a fost apari#ia lucr"rii lui Castle (1926), care sus#ine c" ncruci!area duce la cre!terea metabolismului, iar heterozisul, ar fi urmarea diferen#ierii chimice din game#i. Teoria nl"n#uirii (factorilor dominan#i), a fost elaborat" de D.F. Jones, urmare a dezvolt"rii teoriei dominan#ei. Dup" aceast" teorie, heterozisul s-ar datora nl"n#uirii genelor dominante (grupe de gene nl"n#uite), localizate pe diferi#i cromozomi. Este ns" greu de admis r"mnerea n stare cuplat" a factorilor dominan#i, care presupune un schimb foarte mare de gene. De asemenea, deoarece genele dominante sunt nl"n#uite cu cele recesive, nefavorabile, este imposibil" eliminarea acestora f"r" ca, n acela!i timp, s" nu se elimine !i genele dominante. Teoria alelomorfismului multiplu. A fost elaborat" de E. M. East n anul 1936. Aceast" teorie sus#ine c" heterozisul s-ar datora influen#ei unor alele multiple ce determin" func#ii fiziologice favorabile. O alel" normal" A1 poate da na!tere prin muta#ii alelelor A2, A3, A4Cu ct o asemenea alel" este mai ndep"rtat" de alela normal", cu att !i efectul ei ar fi mai mare. Dar !i aceast" teorie prezint" dificultatea c" nu poate admite ac#iunea genelor normale !i neag" dominan#a !i recesivitatea. Teoria supradominan#ei a fost elaborat" de G. H. Shull (1945 1946). Aceast" teorie este o dezvoltare a teoriei privind efectul stimulator al heterozigo#iei. Din cauza aceasta, a mai fost numit" !i teoria heterozigo#iei propriu-zise. Autorul afirm" c", n unele combina#ii, interac#iunea ntre membrii acelea!i perechi de alele poate duce la faptul c" heterozigotul Aa va dep"!i ca vigoare ambii homozigo#i AA !i aa. Se presupune c" amndou" alelele heterozigote execut" func#iuni ntructva diferite, completndu-se una pe alta. Heterozigo#ia este determinat" de o singur" pereche de alele spre deosebire de vechea teorie a heterozigo#iei (a stimul"rii de azi) unde heterozigo#ia este determinat" de mai multe alele. Teoria heterozigo#iei structurale a fost elaborat" de Dobzhansky. Autorul sus#ine c" ac#iunea alelelor dominante favorabile asupra alelelor recesive nefavorabile poate fi nlocuit" de inversiuni. Drept argument se aduce existen#a a 70,3% de indivizi ce prezint" inversii heterozigote la Drosophila tropicalis, ce tr"ie!te n America Central". Efectul de heterozis produs de aceast" restructurare a fost denumit euheterozis balansat n sensul c" echilibreaz" polimorfismul biologic al popula#iei. Teoria homoplasmiei este sus#inut" de N.H. Nilson (1937). Depresiunea la linii consangvinizate s-ar datora omogenit"#ii citoplasmei. Prin ncruci!are se produce o diferen#iere biochimic" !i func#ional" a ei. Aceast" teorie nu are adep#i deoarece este greu de sus#inut c" numai citoplasma s" r"spund" de fenomenul de heterozis. Teoria echilibrului genetic. Ipoteza a fost elaborat" de C. Bridges (1922), K. Mather (1943) !i N. V. Turbin (1961), ncercnd o sintez" a celorlalte teorii.
202

Prin echilibru genetic se n#elege complexitatea de leg"turi ntre factori ereditari !i mediu. Dezvoltarea fiec"rui caracter ar fi determinat" de influen#a corelativ" asupra lui a numero!i factori cu ac#iune diferit": unii ac#ioneaz" n mod stimulator, al#ii n mod inhibitor. Caracterul apare ca o rezultant" a unor tendin#e opuse. Dup" aceast" ipotez", dezvoltarea caracterelor ar fi deci rezultatele echilibrului genetic realizat. n cadrul acestei ipoteze diferite forme de interac#iune a factorilor ereditari men#iona#i n ipotezele ar"tate mai nainte sunt termenii componen#i ai acestui echilibru. Realizarea echilibrului genetic difer" la plantele autogame de cele alogame. n cadrul plantelor autogame echilibrul se stabile!te n cadrul fiec"rui sortiment haploid de cromozomi. Game#ii sunt echilibra#i, fapt care asigur" vitalitatea la descenden#i. La speciile alogame echilibrul se stabile!te n rela#iile dintre organisme, a genotipurilor diferite. La aceste plante, n cazul consangviniz"rii, descenden#a nu men#ine echilibrul genetic, iar vitalitatea !i prolificitatea scade. Heterozisul este un fenomen opus consangviniz"rii !i el apare la organisme ca rezultat al unui echilibru genotipic optim ntre frecven#ele alelelor homo !i heterozigote. Cercetarea fenomenului de heterozis n cadrul concep#iei de echilibru genetic nu exclude posibilitatea studierii n mod izolat a diferitelor tipuri de interac#iuni a factorilor ereditari ce constituie componen#i ai echilibrului genetic !i care determin" heterozisul. n afar" de aceste componente ale bilan#ului genetic ce determin" m"rimea heterozisului, trebuie ad"ugat" !i interac#iunea dintre nucleu !i citoplasm" !i ntre gene !i mediu. Pentru a n#elege cum ac#ioneaz" diferitele cauze care duc la dezvoltarea caracterelor concrete ce manifest" heterozisul este nevoie clarificarea componentele echilibrului genetic de care depinde m"rimea acestor caractere. Teoria mitocondrial". A fost formulat" de D. F. Jones (1952) !i J. B. Hanson !i colab. (1960), (dup" Butnaru Gallia, 1985). Cercet"rile efectuate la porumb au eviden#iat o corelare pozitiv" ntre intensitatea heterozisului !i activitatea mitocondrial". Aceste corela#ii au fost sesizate !i la alte plante: sorg, gru, secar", triticale, maz"re, bumbac etc. Mitocondriile sunt implicate n men#inerea homeostaziei intracelulare, n felul acesta explicndu-se marea stabilitate fenotipic" a hibrizilor, n condi#ii foarte diferite de mediu. Nu se cunoa!te prea bine care este evolu#ia popula#iilor mixte de mitocondrii, n celulele organismelor hibride. Mic!orarea diversit"#ii mitocondriilor, dup" p"rerea speciali!tilor, ar explica declinul multor soiuri ob#inute prin hibridare dup" un anumit num"r de genera#ii. Dac" arunc"m o privire de ansamblu teoriilor expuse putem, desprinde urm"toarele concluzii: - heterozisul este un fenomen complex, la realizarea lui contribuind, n primul rnd genotipul organismului, iar n al doilea rnd, condi#iile de via#"; - diferitele teorii explic" numai unele laturi ale fenomenului de heterozis f"r" s" descopere toate cauzele;
203

- merit" s" ne oprim aten#ia, n primul rnd, asupra teoriei stimul"rii (heterozigo#iei) !i a teoriei dominan#ei, teorii care, de fapt, se pot completa una pe alta; cercet"ri multiple, confirm" prin date, cele sus#inute de aceste teorii. Nu trebuie neglijate nici celelalte teorii care explic" n parte sau n cazuri speciale manifestarea heterozisului. Importan#a practic" a heterozisului impune o intensificare a cercet"rilor teoretice !i practice n acest domeniu.

10.4.2. Manifestarea heterozisului

Sesizarea fenomenului heterozis a plecat de la constatarea c", n majoritatea cazurilor indivizii ob#inu#i din ncruci!"ri, se caracterizau printr-o vigoare sporit" fa#" de p"rin#ii din care au provenit. Faptul c" aceast" vigoare este nso#it" de o cre!tere a capacit"#ii de produc#ie la plantele agricole sau animalele domestice, a f"cut ca fenomenul s" fie amplu cercetat, att n ceea ce prive!te cauzele lui ct !i a efectelor ce le produce. Din cercet"rile de morfofiziologie s-a desprins concluzia c" hibrizii se deosebesc de formele parentale prin urm"toarele nsu!iri: au embrionii de dimensiuni mai mari; au o cre!tere a organelor vegetative mult mai rapid"; posed" o activitate mai intens" a #esuturilor meristematice; au o fotosintez" mai intens"; posibilit"#i mai bune de a absorbi substan#ele nutritive; capacitate mai mare de a sintetiza stimulatori de cre!tere. Manifestarea vigorii hibride depinde de ereditatea celor doi p"rin#i: este mai pronun#at" la hibrizii intraspecifici, la hibrizii ob#inu#i din linii consangvinizate (homozigote), dect la hibrizii dintre soiuri sau rase. Heterozisul se manifest" !i la animale, folosindu-se n produc#ie unii hibrizi, fie ntre rase, fie ntre linii consangvinizate (fluturele de m"tase, p"s"ri, porci !.a.). Produ!ii dovedesc o mai mare capacitate de produc#ie (lapte, carne, ou" etc.). Fenomenul de heterozis mbrac" manifest"ri foarte variate, el prezint" o importan#" covr!itoare pentru produc#ie, iar aspectele privind tehnica producerii lui vor fi tratate n cursul de ameliorarea plantelor.

10.4.3. Consangvinizarea $i folosirea ei n crearea liniilor destinate ncruci$"rii

Organismele alogame, fie monoice, dioice sau hermafrodite se reproduc n mod natural prin fecundare str"in". Artificial, noi putem for#a aceast" categorie de organisme s" se autofecundeze prin polenizare cu polen propriu, fenomen numit consangvinizare. La animale, consangvinizarea are loc prin ncruci!area ntre indivizi cu grad de rudenie apropiat. Consangvinizarea nu este tot una cu autofecundarea de la plantele autogame, unde constituie un mod normal de reproducere. Asupra plantelor alogame, consangvinizarea are urm"toarele efecte:
204

1. Sc"derea vitalit"#ii organismelor. n urma consangviniz"rii, plantele alogame !i mic!oreaz" capacitatea de cre!tere. Dimensiunile lor se mic!oreaz" att n ceea ce prive!te n"l#imea, lungimea !i l"#imea frunzelor, diametrul tulpinii, ct !i m"rimea !i greutatea fructelor; de asemeni, prezint" !i o fertilitate sc"zut". La porumb, majoritatea liniilor consangvinizate dau o produc#ie cu mult sub cea a soiurilor din care au fost extrase. Aceast" depresiune biologic" se manifest" foarte intens n prima genera#ie consangvin", pentru ca n genera#iile urm"toare s" scad" !i s" se opreasc" la o anumit" limit" de stabilitate numit" !i minimum de consangvinizare. Nu toate plantele r"spund n acela!i mod la sc"derea vigorii n procesul de consangvinizare; fa#" de porumb la care este foarte accentuat", la secar", lucern", floarea-soarelui este numai accentuat", iar la dovleac !i mai pu#in. Depresiunea biologic" !i g"se!te explica#ia n faptul c", n popula#ia supus" consangviniz"rii cre!te procentul de genotipuri homozigote n defavoarea celor heterozigote. n stare homozigot", genele nefavorabile organismului !i eviden#iaz" ac#iunea. Aceste urm"ri pot fi explicate ntr-o oarecare m"sur" de teoria dominan#ei sau supradominan#ei. Gradul de homozigotare a indivizilor cre!te odat" cu repetarea consangviniz"rii la descenden#i !i el se poate afla calculndu-se coeficientul de consangvinizare (Cn); m 2 n 1 Cn = n , n care: 2

n reprezint" genera#iile de consangvinizare, iar m num"rul perechilor de alele care se homozigoteaz".

gg
Fig. 10.2. Reducerea heterozigo#iei !i cre!terea homozigo#iei

prin efectul consangviniz"rii

205

Fig. 10.3. Efectul consangviniz"rii asupra heterozigo#iei !i homozigo#iei n func#ie de num"rul perechilor de alele n diferite genera#ii de consangvinizare

n figura 10.2 este redat" cre!terea homozigo#iei !i sc"derea heterozigo#iei n func#ie de num"rul de genera#ii n care s-a aplicat consangvinizarea !i gradul de homo !i heterozigo#ie, n procente. n figura 10.3. curbele redau procentul de homo !i heterozigo#ie n func#ie de num"rul perechilor de alele !i num"rul de genera#ii de consangvinizare. Num"rul perechilor de alele homozigote sunt invers propor#ionale cu num"rul genera#iilor consangvinizate. 2. Desfacerea popula#iei n biotipuri. Plante alogame au o structur" ereditar" heterozigot". Caracterele !i nsu!irile lor se g"sesc n diferite raporturi, de dominan#" !i recesivitate. Multe din defecte sau calit"#i nu se pot manifesta prezentndu-se sub forma recesiv". Prin consangvinizare, acestea devin homozigote !i se manifest" producnd o desfacere a popula#iei n biotipurile (liniile) componente. Dintre nsu!irile recesive, ce se manifest" fenotipic, unele constituie defecte, altele din contra, sunt valoroase pentru practic" (unii indivizi posed" rezisten#" la boli, la ger, precocitate, un con#inut ridicat n protein", gr"simi !.a). n afar" de caracterele homozigote recesive favorabile sau defavorabile apar !i caractere homozigote dominante pozitive, care se pot folosi cu succes n ameliorare. 3. Sc"derea variabilit"#ii. n prima genera#ie consangvin" variabilitatea formelor ap"rute este foarte mare. Reproducndu-le prin autofecundare, fiecare form" n parte, mai multe genera#ii, variabilitatea lor n cadrul descenden#ilor scade pn" se ajunge la linii consangvinizate, care nu mai segreg", fiind foarte uniforme !i stabile. Acestea sunt liniile homozigote. La porumb se ob#in astfel de linii n genera#iile 7 8 de consangvinizare. Nu se poate afirma ns" c" s-a ajuns la o homozigo#ie absolut". Liniile consangvinizate ob#inute, sunt diferen#iate genetic !i destul de diferen#iate din punct de vedere fenotipic. Ele nu se utilizeaz" ca atare deoarece dau produc#ii mici. Prin ncruci!area lor se ob#in ns" hibrizi, foarte valoro!i, cu produc#ii mari fa#" de formele ini#iale din care au fost extrase. La porumb, astfel de hibrizi, aduc sporuri de 50 70%.
206

10.4.4. Consangvinizarea la animale

Prin consangvinizare la animale se n#elege mperecherea ntre indivizi cu grad de rudenie apropiat. Gradul de rudenie poate fi mai apropiat sau mai ndep"rtat, dup" cum str"mo!ii comuni sunt mai apropia#i sau mai ndep"rta#i. La animale, consangvinizarea este o veche metod" de reproduc#ie care s-a practicat !i se practic" pentru ameliorarea raselor. Dup" gradul de nrudire a indivizilor, consangvinizarea poate fi: - incest, n cazul n care la mperechere iau parte fra#i cu surori, p"rin#i cu copii, bunici cu nepo#i; - consangvinizare strns", n care se mperecheaz" rude ceva mai ndep"rtate: str"nepo#i cu str"nepo#i, veri cu veri; - consangvinizare moderat", cnd are loc mperecherea ntre rude !i mai ndep"rtate, pn" la limita cnd ea nceteaz". n figura 10.4 se pot observa efectele consangviniz"rii la animale n func#ie de genera#ia de consangvinizare !i gradul de nrudire. Ca !i la plante, consangvinizarea la animale se folose!te cu scopul de uniformizare a raselor, pentru reconstituirea caracterelor homozigote, mai ales a celor dominante, pentru fixarea unor calit"#i dorite sau pentru fixarea muta#iilor valoroase.

Fig. 10. 4. Efectul consangviniz"rii la animale n func#ie de genera#ia de consangvinizare !i gradul de nrudire a p"rin#ilor

%i la animale consangviniz"rile au urm"ri depresive: degenerare, sl"birea rezisten#ei la boli, infecunditate, albinism, anomalii !.a. Cauzele ce determin" aceste neajunsuri sunt n general acelea!i ca !i la plante. Pentru nl"turarea lor se folosesc: metoda mperecherii cu reproduc"tori str"ini, de aceea!i ras", cre!terea animalelor nrudite care urmeaz" a se ncruci!a n condi#ii ct mai diferite de mediu pentru a le provoca diferen#ieri biologice, asigurarea unor condi#ii optime de hran" !i ngrijire a produ!ilor ob#inu#i, aplicarea unei selec#ii att pentru reproduc"tori ct !i n cadrul descenden#ei.
207

Prin ncruci!area liniilor consangvinizate la diferite rase de animale se pot ob#ine hibrizi cu productivitate sporit" fa#" de cea a p"rin#ilor. Se aplic" acest sistem, cu succes, la g"ini, porci !i la alte animale domestice.

10.5. HIBRIDAREA SEXUAT% NDEP%RTAT%

Hibridarea ndep"rtat" are loc ntre specii sau chiar genuri diferite. Din cauza unor dificult"#i care nso#esc aceast" form" de hibridare, folosirea ei este mult mai restrns" fa#" de hibridarea n interiorul speciei. Mai poart" numele de hibridare interspecific". Hibridarea sexuat" ndep"rtat" se cunoa!te, de sute de ani, fie ca fenomen natural, fie ca metod" practic" folosit" de om pentru ob#inerea de forme noi de plante !i animale. J. Klreuter, la nceputul sec. XVIII, vorbea despre astfel de hibrizi la plante !i i numea catri vegetali dup" denumirea no#iunii de catr, hibrid animal ob#inut pe cale artificial" nainte de a se ob#ine astfel de hibrizi la plante. Hibridarea ndep"rtat" este !i un criteriu pentru determinarea speciilor. n cazul cnd nu se pot ob#ine indivizi n urma unei asemenea hibrid"ri sau, de!i se ob#in sunt sterili, se afirm" c" cei doi p"rin#i care au luat parte la hibridare apar#in unor specii diferite. Nu trebuie ns" s" consider"m c" hibridarea ndep"rtat" este singurul criteriu pentru determinarea speciilor. Ch. Darwin a observat c" n ob#inerea hibrizilor ndep"rta#i se ntmpin" greut"#i !i a c"utat s" analizeze am"nun#it unele condi#ii de care depinde u!urin#a ncruci!"rii ntre formele ndep"rtate. El descrie urm"toarele situa#ii: - apropierea sistematic" este ntr-adev"r un factor determinant n reu!ita ncruci!"rii, dar nu singurul; - sunt cazuri cnd dou" variet"#i apar#innd acelea!i specii nu se pot ncruci!a !i din contra, n alte cazuri cnd dou" specii diferite, se pot ncruci!a ntre ele. n cazul cnd nu se pot ncruci!a, Darwin arat" c": fecundarea nu poate avea loc n cazurile cnd tuburile polinice nu pot ajunge pn" la ovul din cauza stilului prea lung; tuburile polinice nu pot str"bate stigmatul de la plantele altei specii; gametul mascul ajunge la oosfer", dar dezvoltarea embrionului nu are loc; fecundarea poate avea loc, embrionul ncepe s" se formeze, dar piere n scurt timp. Observa#iile lui Darwin sunt juste, dar nivelul cuno!tin#elor din vremea lui nu i-au permis s" cerceteze !i din punct de vedere genetic cauzele ce ngreuiaz" realizarea hibrizilor interspecifici. Aceasta a fost posibil mai trziu, odat" cu dezvoltarea geneticii.

10.5.1. Ob#inerea $i comportarea primei genera#ii hibride

n general, hibrizii interspecifici se ob#in cu greutate, iar reu!ita depinde n mare m"sur" !i de speciile pe care le folosim. Exist" totu!i anumite specii de plante care, ncruci!ate, posed" facultatea de a produce hibrizi fertili. n schimb, la animale, aplicarea hibrid"rii ndep"rtate ntmpin" mai multe dificult"#i.
208

Delimitarea speciilor cu diferen#ieri de la una la alta, att din punct de vedere genetic, ct !i fenotipic a determinat izolarea lor sistematic" !i genetic" !i a creat dificult"#i la ncruci!area dintre ele. Aceste dificult"#i sunt datorate incompatibilit"#ii de ordin genetic sau morfologic, privind structura florii, a incompatibilit"#ii dintre embrion !i endosperm !i perturb"ri n formarea celulelor sexuate. La animale, atunci cnd se ob#in hibrizi, defectele se manifest" de obicei la unul din sexe, n special la sexul heterogametic. La ncruci!area dintre femele de Drosophila pseudoobscura cu masculi de Drosophila miranda, n F1, se ob#in femele sterile. n cazul cnd se inverseaz" p"rin#i, n F2 se ob#in ambele sexe, dar masculii sunt anormali. La ncruci!area dintre o femel" de Bos taurus !i un mascul de Bizon americanus, numai hibrizii femeli ajung la maturitate. Mecanismul genetic care duce la dezvoltarea numai a indivizilor de un singur sex este mai u!or de explicat dac" ne gndim la diferen#ele de ordin genetic ce se ntlnesc la cele dou" sexe. De!i genotipul celor dou" specii con#ine genele corespunz"toare, dispozi#ia acestor gene poate fi pe cromozomi diferi#i: la una din specii ele pot s" fie situate pe autozomi, la cealalt" pe cromozomii sexuali. n afar" de aceasta se pot ivi !i diferen#e n structura cromozomilor autozomi omologi sau ai sexului. Cnd se ob#in totu!i hibrizi interspecifici, aspectul lor fenotipic este n general intermediar ntre cei doi p"rin#i !i numai n unele cazuri se manifest" o dominan#" din partea unuia din p"rin#i. Fenomenul obi!nuit de vigoare, constatat la hibrizii intraspecifici caracterizeaz" uneori !i hibrizii interspecifici (hibridul ntre Raphanus sativum x Brassica oleracea sau hibridul Equus caballus x Equus asinus catrul). Adesea, o anumit" grupare a genelor pe cromozomii omologi favorizeaz" ac#iunea genelor letale sau semiletale !i atunci hibrizii sunt letali, sau prezint" fenomene de debilitate. Unii hibrizi interspecifici, prezint" !i anomalii sexuale (intersexuali). Ace!tia, au aspectul exterior al unui sex dar posed" organe sexuale, ale celuilalt sex. De obicei ei sunt sterili. Fenotipul hibrizilor interspecifici depinde !i de modul n care se folosesc ca mam" sau ca tat", cele dou" specii, la care exist" diferen#ele morfologice tran!ante ntre femele !i masculi. Catrul are conforma#ia foarte apropiat" de cea a mamei, Equus caballus, n timp ce bardoul (hibridul reciproc) are conforma#ia mamei de Equus asinus, Equus caballus fiind n acest caz tat". Este cazul influen#ei citoplasmei materne, a fenomenului de matroclinie. O caracteristic" principal", destul de frecvent" a hibrizilor interspecifici este sterilitatea lor. Ea se manifest" de obicei la sexul heterogametic, cu diferite intensit"#i !i se mparte n mai multe tipuri: - gonadele, n cazul animalelor sau florile plantelor nu se dezvolt" sau avorteaz", la hibrid. Aceast" situa#ie este mai frecvent" la animale; - dezvoltarea gonadelor !i a florilor este normal" dar, perturb"rile ncep odat" cu meioza. Cele dou" garnituri de cromozomi difer" prin structur" sau prin num"r. Aceste anomalii fac ca meioza s" nu se poat" desf"!ura normal sau
209

nceteaz" ntr-un stadiu timpuriu, iar n cazul n care se formeaz" game#i, ei sunt improprii pentru fecundare. Cnd ambii p"rin#i de#in genomuri omoloage, dar difer" prin num"rul de cromozomi, conjugarea cromozomilor n meioz" decurge normal, dar n loc de bivalen#i se formeaz" polivalen#i. n alte cazuri, p"rin#ii de#in o parte din genomuri omoloage, dar restul sunt omoloage numai par#ial. Cromozomii par#ial omologi r"mn ca univalen#i. n acest caz, celulele sexuale sunt sterile. Cnd p"rin#ii de#in genomuri neomoloage, cromozomii nu fac sinaps", reparti#ia la cei doi poli ai celulei este neregulat" !i ca atare, apar game#i sterili. Pentru nl"turarea sterilit"#ii pot fi folosite mai multe metode: retroncruci!area individului F1, cu unul din p"rin#i; multiplicarea num"rului de cromozomi prin tratamente cu colchicin" etc. Aceste metode asigur" genomuri care dau posibilitatea de conjugare a cromozomilor n meioz". Dificult"#ile de ob#inere a hibrizilor ndep"rta#i, pot fi de ordin cantitativ !i calitativ. Diferen#ele cantitative se refer" la num"rul de cromozomi ai celor doi p"rin#i. Atunci cnd ele depind de germinarea polenului !i cre!terea tubului polinic, hibridarea decurge mai bine, cnd forma matern" are un num"r mai mare de cromozomi dect forma patern" (de exemplu ntre speciile genului Datura, Galeopsis, Nicotiana). La o alt" categorie de plante, cre!terea tubului polinic decurge mai bine cnd forma matern" are un num"r mai mic de cromozomi dect forma patern" (de exemplu ntre speciile genului Helianthus, Triticum, Rosa). A treia categorie o reprezint" plantele indiferente privind raportul cromozomic (de exemplu, ntre speciile genului Brassica). Perturb"ri pot s" apar" !i odat" cu formarea semin#elor. La plantele angiosperme diploide, dezvoltarea normal" a embrionului are loc cnd n embrion exist" 2n cromozomi, n endosperm 3n cromozomi, iar n ovar 2n cromozomi. Cnd raportul acesta se schimb" din cauza num"rului modificat de cromozomi, perturb"rile apar mai nti n endosperm, n care are loc o sistare a fluxului de hran" care duce la sufocarea lui. Este vorba de o sterilitate somatoplastic" care duce la moartea embrionului. Acest fenomen poate fi evitat dac" n primele stadii de dezvoltare a embrionilor ei sunt deta!a#i !i cultiva#i pe medii nutritive. ntr-un stadiu mai trziu, perturb"rile pot ap"rea n procesul de dezvoltare a semin#elor, afectnd capacitatea lor de germinare. Diferen#ele calitative a genomurilor celor doi p"rin#i constituie cazuri mai frecvente. Ele se pot produce n cazul unui num"r egal de cromozomi !i genomuri omoloage (A x A sau AB x AB) sau un num"r diferit de cromozomi !i genomuri par#ial omoloage (A x AB). n sfr!it, se mai pot ntlni situa#ii n care num"rul de cromozomi a formelor parentale s" fie egal, dar genomurile neomoloage (A x B). Toate aceste diferen#e de ordin cantitativ !i calitativ dintre formele parentale, produc perturb"ri n procesul de fecundare sau de formare a semin#elor, de dezvoltare sau de formare a celulelor sexuale.
210

n meioz", n asemenea cazuri, conjugarea !i segregarea cromozomilor nu decurge normal !i nu se formeaz" celule sexuale sau acestea sunt sterile.

10.5.2. Comportarea celei de a doua genera#ii hibride

Se poate ob#ine a doua genera#ie la hibridarea ndep"rtat" numai atunci cnd hibridul F1 este cel pu#in par#ial fertil. Cnd numai unul din sexe este steril, cel fertil poate fi ncruci!at cu p"rintele de sex opus. Descenden#a hibrizilor ndep"rta#i se caracterizeaz" printr-o puternic" segregare, care n general nu se ncadreaz" n normele mendeliene. Pot s" apar" forme asem"n"toare tat"lui , mamei, intermediare sau aberante. n unele cazuri, n urma segreg"rii to#i indivizii seam"n" numai cu unul din p"rin#i. n genera#iile urm"toare, la hibrizii par#ial fertili se m"re!te procentul de fertilitate. Prin repetarea unui backcross se observ" o revenire evident" la formele parentale.

10.5.3. Rolul hibrid"rii ndep"rtate n evolu#ia speciilor

Hibridarea ndep"rtat" prezint" importan#", pentru apari#ia de specii noi de plante !i posibil, !i de animale inferioare. Se observ" n natur", existen#a unor forme ce au caractere comune pentru dou" genuri sau specii diferite, cum este hibridul dintre Sorbus sibirica !i Cotoneaster melanocarpa. Acesta a mo!tenit gustul !i colora#ia fructelor, forma frunzelor, culoarea argintie a frunzelor, forma mugurilor de la Sorbus sibirica, iar structura fructului, forma inflorescen#ei, caracterul pubescen#ei, de la Cotoneaster melanocarpa. Ca urmare a hibrid"rii ndep"rtate, apar uneori organisme amfidiploide (ce nsumeaz" num"rul de cromozomi somatici ai p"rin#ilor), cu genotipuri echilibrate, constante !i care prin ncruci!are pot reproduce tipul din care fac parte. Dac" noua form" se dovede!te adaptat" ea se r"spnde!te. O condi#ie pentru men#inerea ei o constituie izolarea reproductiv" de speciile nrudite. Orice individ ob#inut prin hibridarea ndep"rtat" este nceputul unei specii noi. Pe de o parte, trebuie s" #inem seama de unele tr"s"turi esen#iale ce caracterizeaz" specia autentic": specificul morfologic, lipsa indivizilor intermediari speciilor parentale, capacitatea de a se reproduce, fertilitatea deplin" n cazul ncruci!"rii !i izolarea reproductiv" total" de alte specii. Pe de alt" parte, acestor forme le lipsesc unele tr"s"turi esen#iale ce sunt caracteristice speciilor naturale: arealul geografic, locul ocupat n rela#iile biocenotice, num"rul de indivizi !.a. A!a c", asemenea hibrizi nu pot fi considera#i specii noi, ci mai degrab" forme specifice. O specie nou" se formeaz" ntr-un proces ndelungat, pe baza selec#iei naturale. Prin metoda hibrid"rii ndep"rtate au fost sintetizate multe forme, foarte asem"n"toare cu speciile r"spndite n natur". Mntzing (1930) a realizat prin hibrid"ri ndep"rtate sinteza unei forme asem"n"toare speciei Galeopsis tetrahit
211

(2n = 32 cromozomi). A ncruci!at Galeopsis pubescens cu Galeopsis speciosa. Hibridul, ncruci!at cu una din formele parentale, Galeopsis pubescens, era greu de deosebit de Galeopsis tetrahit. La plante, posibilitatea de o ob#ine hibrizi ndep"rta#i difer" de la un gen la altul. Exist" genuri ale c"ror specii se hibrideaz" destul de u!or (Dianthus, Triticum, Prunus, Pirus etc.) dar !i genuri a c"ror specii nu se hibrideaz", chiar dac" sunt destul de nrudite (Liliacee, Umbelifere, Leguminoase etc.). Exist" !i genuri care se hibrideaz" cu destul" u!urin#", cum ar fi: Triticum x Secale, Triticum x Aegilops, Raphanus x Brassica etc. Studiul citogenetic al hibrizilor ndep"rta#i, ofer" posibilitatea stabilirii cauzelor ce determin" sterilitatea total" sau par#ial" a acestora. n ameliorarea plantelor, hibrid"rile ndep"rtate, chiar dac" necesit" condi#ii de lucru deosebite, s-au extins, deoarece ofer" posibilitatea ob#inerii de hibrizi cu cromozomi de adi#ie (Triticale) sau cu cromozomi de substitu#ie, aceste recombin"ri genetice, permi#nd o diversificare mai mare a materialului biologic.

212

CAPITOLUL 11 MUTA!IILE "I MECANISMUL LOR MOLECULAR

Moto: Pentru producerea unui mare salt evolutiv sunt necesare ndeplinirea a trei exigen!e minimale: evenimentul, ireversibilitatea "i coeren!a Ilya Prigogine

No!iunea de muta!ie a fost introdus" de Hugo de Vries (1901), n!elegnd prin aceasta, o schimbare brusc" a nsu#irilor ereditare. E. Baur (1919) o define#te drept o modificare ereditar" care a ap"rut n afara hibrid"rii, iar E. Guyenot, o varia!ie brusc" #i ereditar" ce poate apare spontan sau sub influen!a unor factori experimentali. Muta!ia este o nsu#ire a materialului genetic #i este tot att de important" ca #i stabilitatea lui. Ea apare la toate organismele #i al"turi de recombinarea genetic" este principala surs" de variabilitate. Omul poate ob!ine muta!ii, ac!ionnd asupra organismelor cu diferi!i factori mutageni. Modific"rile ob!inute afecteaz" diferite caractere morfologice sau nsu#iri fiziologice #i biochimice. Muta!ia este una din metodele principale folosit" n ameliorare, pentru ob!inerea de soiuri sau linii noi. Apari!ia spontan" a muta!iilor a fost sesizat" de mult, iar concep!ia care s-a format asupra lor a avut un rol important n explicarea evolu!iei. Evolu!ia, n concep!ia de ast"zi, nu este altceva dect o rezultat" a procesului de modificare ereditar" a organismelor #i ac!iunea selectiv" a mediului. Muta!ia poate determina direc!ii de evolu!ie atunci cnd modificarea este util" organismului, reprezentnd un avantaj n perpetuarea speciei la care a ap"rut.

11.1. CLASIFICAREA MUTA!IILOR

Muta!iile se pot clasifica n mai multe tipuri, fiecare avnd un anumit criteriu. 1. Dup" modul de apari!ie, ele se mpart n muta!ii naturale #i muta!ii artificiale: - muta!iile naturale numite #i spontane apar n condi!iile din natur" f"r" interven!ia omului. Datorit" faptului c" mediul totalizeaz" o mare complexitate de factori ce influen!eaz" organismul este foarte greu de precizat care sunt cauzele ce determin" apari!ia acestor muta!ii; - muta!iile artificiale, numite #i induse, sunt provocate de om cu ajutorul diferi!ilor agen!i mutageni.
213

2. Dup" capacitatea de expresie fenotipic" ele pot fi: muta!ii mari (macromuta!ii) ce se deosebesc prin caracterul lor net vizibil, u#or sesizabile; muta!ii mici (micromuta!ii), care spre deosebire de primele, sunt greu perceptibile, dar mai frecvente #i cu rol important n evolu!ie. 3. Dup" ac!iunea genei mutante, muta!iile pot fi: morfologice, fiziologice sau biochimice; muta!iile morfologice afecteaz" caracterele morfologice ale organismelor (form", m"rime, culoare etc.) #i sunt u#or detectabile; muta!iile fiziologice produc schimb"ri n procesele fiziologice, (ritmul de cre#tere, perioada de vegeta!ie, rezisten!a la boli #.a.); muta!iile biochimice determin" modificarea cantitativ" sau calitativ" a componen!ilor chimici din organism, (substan!e de rezerv", principii activi, enzime etc.). 4. Dup" natura substratului material al eredit"!ii muta!iile sunt: genice, cromozomice, de genom, citoplasmatice; muta!iile genice (punctiforme) provoac" modificarea genei f"r" a produce o schimbare n morfologia cromozomului. Ele se refer" la schimb"rile de structur" chimic". O alel" se transform" n alta, f"r" a-#i schimba locus-ul n cromozom. Cea mai mic" unitate muta!ional", este perechea de nucleotide, muta!ie denumit" punctiform#, fiind o muta!ie intragenic". Muta!iile cromozomice se refer" la restructur"rile ce pot avea loc n cromozom (deficien!", dele!ie, inversie, transloca!ie, transla!ie). Muta!iile de genom afecteaz" ntregul genom sau numai un anumit num"r de cromozomi (poliploidia #i aneuploidia). Muta!iile citoplasmatice se refer" la modific"rile pe care le pot suferi cloroplastele #i mitocondriile #i odat" cu ele #i caracterele de care r"spund. 5. Dup" originea lor muta!iile pot fi: germinale #i somatice. Muta!iile germinale apar n celulele sexuale #i se manifest" n zigo!ii la a c"ror formare particip". Muta!iile somatice apar n celulele somatice. Cu ct apar mai devreme n ontogenez", vor afecta o por!iune mai mare din organism. La organismele cu nmul!ire vegetativ" ele se pot men!ine pe cale vegetativ" #i pe cale sexuat" cnd din !esuturile somatice afectate se dezvolt" celule sexuale. 6. Dup" direc!ia de manifestare a muta!iilor: muta!ia direct# (forward mutation) #i de reversie (back-mutation). Cnd o gen" normal" (de tip s"lbatic) se transform" ntr-o alel" diferit", muta!ia este direct", iar cnd o gen" se retransform" n tipul ini!ial, muta!ia este de reversie. Frecven!a acestor muta!ii este diferit", mai mare pentru cele directe, comparativ cu muta!iile de reversie. 7. n func!ie de locul de plasare a genelor, muta!iile pot fi: muta!ii autozomale plasate pe autozomi, muta!ii heterozomale plasate n cromozomii sexuali (manifestnd sex-linkage) #i muta!ii extranucleare, ale genelor din citoplasm". 8. Dup" modul de manifestare a genelor mutante, muta!iile pot fi dominante, codominante, semidominante sau recesive. La organismele diploide, mutageneza a creat rela!ii de alelism ntre gene, exprimndu-se fenotipic cele dominante, n timp ce la organismele haploide orice muta!ie se exteriorizeaz" fenotipic.
214

9. Func!ie de modul de reac!ie a indivizilor purt"tori ai unei muta!ii, muta!iile pot fi viabile, subletale #i letale. 10. Un tip special de gene mutante, sunt genele mutatoare, care m"resc frecven!a muta!iilor altor gene.

11.2. DETECTAREA MUTA!IILOR

Muta!iile pot fi identificate, dup" modific"rile fenotipice ereditare sau dup" schimb"rile suferite n structura sau num"rul cromozomilor, indiferent dac" acestea sunt sau nu nso!ite momentan de modific"ri fenotipice. Cel mai u#or pot fi descoperite muta!iile somatice sau cele germinale, dominante, vizibile, care de#i n stare heterozigot", apar chiar n prima genera!ie. Muta!iile recesive se pot eviden!ia mai greu #i este nevoie de o analiz" genetic" efectuat" n mai multe genera!ii. Numai n cazul cnd este homozigot", muta!ia recesiv" se eviden!iaz" n prima genera!ie. Majoritatea muta!iilor sunt recesive #i pentru determinarea lor se fac hibrid"ri #i autofecund"ri. Pentru Drosophila se folosesc cromozomi marca!i prin gene dominante #i purt"tori ai inversiilor ce mpiedic" crossing-over-ul. Muta!iile fiziologice se pot sesiza u#or atunci cnd sunt letale sau semiletale, deoarece organismele ce posed" astfel de muta!ii se dezvolt" slab sau pier. Exist" ns" multe muta!ii ce manifest" mici schimb"ri n procesele fiziologice sau biochimice #i sunt foarte greu de sesizat. Este imposibil de sesizat apari!ia tuturor muta!iilor naturale sau artificiale orict de minu!ios s-ar lucra. La organismele diploide muta!iile dominante, foarte rare, se manifest" imediat #i pot fi detectate. Muta!iile recesive se men!in n genotip mai multe genera!ii (perioad" de lag) pn" devin homozigote, moment cnd, se manifest" fenotipic. Cea mai eficient" metod" pentru depistarea lor este autofecundarea urmat" de depistarea lor, dup" un num"r de genera!ii (M1, M2, M3). Muta!iile care se produc n endosperm, cum ar fi cele care-i afecteaz" culoarea sau alte aspecte, se identific" u#or, prin polenizarea plantelor cu polen ce posed" mutanta respectiv" #i care, datorit" dublei fecund"ri, o va manifesta. Muta!iile recesive se pot men!ine numai prin autogamie #i consangvinizare. La plantele haploide, starea de hemizigo!ie face posibil" detectarea muta!iilor chiar din momentul apari!iei lor. Aceste muta!ii pot fi men!inute #i prin nmul!ire vegetativ". Cercet"ri multiple s-au efectuat la microorganisme, la care muta!iile pot fi detectate analizndu-se diferite caracteristici ale aspectului #i m"rimii plajelor, cerin!ele fa!" de factorii de cre#tere #.a. Metodele de detectare au fost elaborate de mai mul!i biochimi#ti, printre care mai importan!i sunt: S. W. Beadle #i E. L. Tatum (1941, 1945) pentru Neurospora crassa #i J. Lederberg (1952) pentru bacterii. Se folosesc metode de inducere a muta!iilor care perturb" sinteza unor anumi!i metaboli!i la bacterii, ciuperci inferioare #i alte microorganisme haploide. Formele parentale sunt supuse ac!iunii unui agent mutagen, sunt crescute apoi pe
215

medii minimale sau complete #i prin separarea indivizilor se ob!in descenden!e (clone), dintre care unele mutante. La bacteriofagi, mutantele afecteaz" morfologia plajelor din culturile de bacterii pe suportul c"rora se reproduc. Muta!iile cu efect letal n stare homozigot" pot fi detectate foarte u#or. Din ncruci#area a doi indivizi heterozigo!i, ce posed" o gen" letal" recesiv" raportul genetic de segregare nu va fi 1:2:1 ci, 2:1 deoarece din indivizii homozigo!i pentru aceast" gen" mor, fie n stadiul embrionar sau post embrionar. Pentru depistarea genelor mutante letale de pe cromozomii sexuali au fost elaborate diferite metode numite #i teste. A#a este metoda ClB elaborat" de H. J. Mller care permite recunoa#terea muta!iilor letale localizate pe cromozomul X la Drosophila melanogaster. Femelele ClB au un cromozom X normal #i unul la care regiunea central" a suferit o inversie care opre#te un eventual crossingover pe aceast" por!iune. Pe acest cromozom se g"se#te o alel" mutant" l #i o alel" dominant" B (ochi bar). Alela B ndepline#te rolul de marker (identificator). Femelele ClB au fost ncruci#ate cu masculi de tip normal. Dac" la mascul a ap"rut o muta!ie letal" recesiv", atunci femelele cu ochi bar vor prelua de la mam" #i tat" cte un factor letal. n genera!ia urm"toare to!i masculii vor muri fie c" au mo#tenit factorul letal ClB, fie muta!ia care a ap"rut la cromozomul X (figura 11.1). O alt" metod" pentru determinarea muta!iilor letale la Drosophila melanogaster este #i metoda Mller 5, n care se folosesc femele la care cromozomul X este marcat cu o alel" recesiv" pentru culoarea apricot a ochilor. Pentru tipul Abraxas aceast" metod" se poate folosi, dar n cazul de fa!" letalitatea se manifest" la sexul femel.

Fig. 11.1. Testul ClB de detectare a muta!iilor letale ce afecteaz" gene localizate n cromozomul sexului X la Drosophila melanogaster 216

11.3. MUTA!IILE SPONTANE

Apari!ia spontan" a unor indivizi deosebi!i n cadrul unei popula!ii, cu posibilit"!i de a transmite modificarea lor la urma#i, a fost sesizat" de foarte mult timp. Unele muta!ii mai deosebite au fost descrise n diferite lucr"ri. O muta!ie descoperit" n sec. XVI, de c"tre farmacistul german Sprenger, din Heidelberg, la planta Chelidonium majus avea frunzele #i petalele laciniate (spintecate); caracterul a ap"rut spontan #i s-a transmis ca atare la descenden!i. Noua form" a fost denumit" Chelidonium laciniatum #i a fost men!inut" prin autofecundare. La frag, exist" o muta!ie descoperit" de Duchesne (1763) care are frunza compus" dintr-o singur" foliol", numit" fragul monofil. Darwin, n lucrarea sa Varia!ia animalelor "i plantelor sub influen!a domesticirii (1868), descrie diferite muta!ii pe care le-a denumit sporturi. A descris piersicul cu fructe netede, prunul cu fructe de culoare galben" #.a. La animale, citeaz" numeroase muta!ii: rasa de vite Niatos, cu maxilarul superior mai scurt dect cel inferior, asem"n"tor cinilor buldogi, rasa de oi Ancona cu picioare foarte scurte, p"unul cu umeri, cu pene de culoare neagr" #.a. n afara acestor muta!ii, exist" foarte multe exemple acumulate n literatura de specialitate: cinii basse!i, cunoscu!i cu 3000 de ani naintea erei noastre, merinosul de Machamp cu lna pu!in ondulat", dispari!ia coarnelor la oi, taurine #i capre, porcii solipezi, care au o singur" copit" #i nu se mboln"vesc de febr" aftoas", rasa de oi chinez" Yang-ti, f"r" urechi, porumbeii rota!i, gulera!i, mo!a!i, fluturi de culoare neagr" #.a. Un studiu sistematic al muta!iilor spontane l-a realizat Hugo de Vries (1848 1936). El a pus bazele teoriei muta!ioniste. Teoria lui ncearc" s" explice c" evolu!ia se face exclusiv pe baza muta!iilor. Lucrarea sa de baz" este Teoria muta!iilor (1901 1903). Dup" De Vries, n via!a speciilor sunt anumite perioade sensibile, care fac s" apar" aceste muta!ii. El precizeaz" ns" c", nu mediul provoac" propriu-zis apari!ia acestor muta!ii. Muta!iile sunt determinate de cauze interne, iar mediul nu face altceva dect s" declan#eze apari!ia perioadei sensibile a speciei. Muta!iile nu substituie speciile vechi din care au ap"rut, ci continu" s" tr"iasc", mai departe, al"turi de ele. Transform"rile acestea, spune De Vries, nu au o direc!ie bine definit" fa!" de organism. Ele pot fi folositoare organismului dup" cum pot fi #i nefolositoare, putnd chiar periclita existen!a speciei nou ap"rute. De Vries a studiat am"nun!it speciile genului Oenothera, plant" caracterizat" printr-un polimorfism accentuat, originar" din America #i care fusese introdus" de curnd n Olanda, unde lucra De Vries. El a remarcat c" numeroase forme noi, erau ereditare. Unele experien!e p"reau s" demonstreze c" Oenothera lamarckiana, la origine provine din ncruci#area a dou" forme deosebite. Mai trziu, s-a demonstrat c" anumite specii, cum ar fi Oenothera gigas, sunt poliploide.
217

Teoria muta!iilor s-a dezvoltat prin lucr"rile lui T. H. Morgan. Mecanismele cromozomice descoperite de acesta privind transmiterea caracterelor, cuplarea #i recombinarea genelor, mecanismul de apari!ie a abera!iilor cromozomice, au constituit o baz" #tiin!ific" pentru fundamentarea procesului muta!ional. Procesul muta!ional se caracterizeaz" printr-o anumit" frecven!" a muta!iilor. Este rar, atunci cnd lu"m n considerare o singur" gen" #i mult mai frecvent atunci cnd se iau n considerare toate genele #i toate muta!iile posibile de la un anumit organism. n primul caz raritatea se explic" prin aceea c" din perechile de alele muteaz" de obicei numai una singur", iar n al doilea rnd ele sunt n majoritate recesive #i nu se exteriorizeaz" dect n stare homozigot". Exist" factori ce influen!eaz" frecven!a muta!iilor spontane. n primul rnd, frecven!a muta!iilor genice, depinde de specie #i de gena respectiv". Exist" unele aprecieri privind frecven!a lor, calculat" n raport cu num"rul de game!i studia!i. Dup" Wagner #i Mitchell (1955) muta!iile spontane la diferi!i loci la porumb, sunt cuprinse ntre 0,001 #i 0,110 la 10000 game!i, iar la Drosophila ntre 0,29 #i 1,5 la 10000 game!i. Dup" alte date ale unor autori, reiese c" una #i aceea#i gen" de la diferite linii de porumb muteaz" diferit. A#a de exemplu gena Rr formeaz" mutante rr cu frecven!e diferite la aceste linii: la una de 6,2 la 10000 game!i, la cealalt" de 18,2 la 10000 game!i. Se presupune c" aceste diferen!e se datoreaz" existen!ei unor gene speciale, care influen!eaz" frecven!a muta!iilor altor gene (gene mutatoare). Num"rul de muta!ii ce se acumuleaz" n celule este propor!ional cu vrsta lor. n semin!ele plantelor care sunt depozitate un num"r mai mare de ani, cre#te num"rul de muta!ii fa!" de semin!ele de curnd recoltate. H. Stubbe a constatat la semin!ele de Antirrhinum majus o cre#tere a procentului de muta!ii de la 1,5% la 14% pentru o perioad" de la 5 la 10 ani. Astfel de observa!ii s-au f"cut #i asupra muta!iilor letale spontane, nl"n!uite cu sexul, n spermatozoizii precoci #i tardivi de la Drosophila melanogaster. Aceste constat"ri au dus la formularea unei p"reri generale c", num"rul de muta!ii este propor!ional cu vrsta celulei de#i exist" #i excep!ii. Descoperirea muta!iilor naturale cu ajutorul unora dintre metodele #i tehnicile cunoscute face posibil calculul procentului de mutante n snul unei popula!ii de indivizi. Este ns" foarte greu de stabilit prin acest calcul n mod exact propor!ia muta!iilor, din mai multe motive: - n primul rnd, muta!iile au ap"rut n decursul timpului, odat" cu formarea popula!iilor #i multe din ele pot fi considerate caractere normale; - multiplicarea celulelor mutante poate fi mai lent" sau mai rapid" dect acea a celulelor nemodificate; - ac!iunea genelor sau a genotipurilor mutante poate fi favorabil" sau letal" organismelor; - toate acestea fac ca num"rul de muta!ii s" sufere mereu modific"ri. Num"rul de muta!ii, fiind foarte mare, este greu de determinat frecven!a fiec"reia n parte. De aceea, se poate face o apreciere cantitativ" a lor dup" num"rul de game!i care posed" muta!ii. Aceast" apreciere global" se refer" de fapt
218

numai la frecven!a unei singure gene mutante sau a unei clase oarecare de muta!ii. Mai trebuie ad"ugat c" muta!ia germinal" nu se produce ntotdeauna n game!i, ci #i n gonii, care n urma diviziunilor celulare produce game!i mutan!i. Dac" folosim metoda unei clase de muta!ii trebuie s" subliniem c" muta!iile letale nu reprezint" o clas" omogen"; ele pot s" apar" sub influen!a a mai multor cauze: muta!ii genice, cromozomice, efecte de pozi!ie etc. n afar" de factorii analiza!i mai sus, frecven!a muta!iilor este influen!at" #i de hibridare; la organismele hibride, fa!" de cele homozigote, pentru acela#i locus frecven!a muta!iilor este mai mare. De asemenea, procesul muta!ional spontan este influen!at #i de starea fiziologic" #i biochimic" a organismului.

11.4. MUTA!IILE ARTIFICIALE

Odat" cu descoperirea unor factori ce pot fi folosi!i de om n ob!inerea de muta!ii, interesul oamenilor de #tiin!" pentru studiul acestora #i a efectelor pe care le produc asupra organismelor a crescut foarte mult. Paralel cu aceste studii s-au elaborat #i s-au perfec!ionat metodele pentru producerea de muta!ii artificiale, denumite #i induse. Dintre factorii mutageni folosi!i de om pentru prima dat", au fost razele X. n anul 1925, G. A. Nadson iradiind ciupercile inferioare cu raze X a ob!inut muta!ii morfo-fiziologice. Ac!iunea mutagen" a razelor X a fost demonstrat" de H. J. Mller n 1927 #i 1928 la Drosophila. Rezultatele le public" n lucrarea Transmuta!ia artificial# a genei, (laureat Nobel n 1946). Tot n aceast" perioad", L. J. Stadler ntre 1927 #i 1929, ob!ine cu ajutorul radia!iilor, muta!ii la orz, porumb #i tutun.

Fig. 11.2. Indivizi normali de Drosophila melanogaster (a) #i diferite mutante (b, c, d)

219

Descoperirea efectului mutagen al radia!iilor a deschis calea unor ample cercet"ri #tiin!ifice, importante att din punct de vedere teoretic, ct #i practic. T. H. Morgan #i #coala sa, au ob!inut la Drosophila peste 500 de forme mutante (figura 11.2). Ulterior, metodele producerii experimentale a muta!iilor la plante, au fost folosite din plin de A. Gustafsson (1954), J. MacKey (1956), H. Stubbe (1959), C. F. Konzak (1957) #.a. Dintre agen!ii mutageni folosi!i de om #i mai bine studia!i fac parte: radia!iile, temperatura #i unele substan!e chimice.

11.4.1. Radia$iile mutagene

Radia!iile electromagnetice au o gam" de lungimi de und" foarte ntins", care variaz" de la 10-3 m ct au razele gamma pn" la peste 1 m, cazul undelor hertziene. ntre aceste limite se g"sesc razele X, razele ultraviolete, razele infraro#ii. Radia!iile mutagene sunt radia!iile care produc muta!ii #i din ele fac parte: 1) radia!ii ionizante electromagnetice (raze X #i gamma); 2) radia!ii ionizante corpusculare (radia!ii $, protoni, neutroni, raze %, diferite particule grele); 3) radia!ii neionizante (raze ultraviolete). Razele X #i gamma, prin energia absorbit", provoac" ioniz"ri n !esuturile plantei #i modific" metabolismul celular. Razele X sunt foarte mult folosite, deoarece aparatele Roentgen sunt u#or utilizabile. Pentru iradierea cu raze gamma se folose#te cobaltul radioactiv. Razele gamma sunt mai penetrante dect razele X. Razele Beta (%) sunt formate din electroni elibera!i de radioizotopii de P32 #i S35. Cu ace#tia se realizeaz" solu!ii radioactive, n care se introduc semin!e uscate sau germinate. Neutronii sunt particule neutre din punct de vedere electric, rezulta!i din dezintegrarea atomilor. Ei ac!ioneaz" prin curentul dens #i ionizant de protoni de hidrogen. Efectul iradierii cu neutroni este mai puternic, cu ct elementele celulei au o structur" mai dens" (plastide, nuclei #i cromozomi). Razele ultraviolete fac parte din spectrul solar invizibil, sunt constituite din fotoni, cu o lungime de und" ntre 136 #i 4.000 . Absorbite n organism, transform" energia lor n reac!ii chimice, provocnd diferite efecte genetice. Ele au o mai mic" putere de p"trundere #i sunt absorbite la suprafa!a !esuturilor. n lucr"rile de genetic" se folose#te mai frecvent ac!iunea mutagen" a razelor X, gamma #i a neutronilor termici. Studiul #i folosirea radia!iilor n genetic" a dus la fundamentarea unei noi ramuri a biologiei radiogenetica care n ultimul timp a c"p"tat o amploare foarte mare. Efectele iradierii asupra plantelor. Efectele produse de radia!ii sunt directe #i imediate. Semin!ele tratate cu doze maxime, de obicei nu supravie!uiesc, iar embrionii lor, cerceta!i la microscop con!in numeroase zone de !esut necrotic. Tratamentele cu doze mai mici duc la apari!ia de muta!ii.
220

Unele substan!e au o ac!iune de protec!ie a organismelor, diminund efectul distructiv al razelor X, cum sunt, de exemplu, substan!ele reduc"toare din grupul sulfhidrelor. Semin!ele uscate, iradiate cu raze X, ntr-un mediu de hidrogen sulfurat, nu manifest" perturb"ri n celulele lor, ntruct acest mediu anihileaz" ntr-o m"sur" oarecare, ac!iunea radicalilor oxidan!i produ#i de radia!ii. Spre deosebire de ac!iunea razelor X, iradierea cu neutroni provoac" tulbur"ri mai evidente #i o sterilitate pronun!at" a indivizilor n descenden!". S-a emis ipoteza conform c"reia, neutronii ar ac!iona direct asupra nucleului, iar razele X asupra celorlalte elemente din celul". De#i plantele provenite din iradierea semin!elor cu neutroni manifest" tulbur"ri profunde, dnd na#tere la por!iuni de !esuturi necrotice, r"s"ritul lor este mai uniform, cu un procent ridicat de plante, deoarece n urma iradierii cu neutroni, celulele semin!elor r"mn viabile ntr-o propor!ie mai mare #i au o turgescen!" normal". Razele ionizante au o influen!" d"un"toare asupra organismelor deoarece ele descompun apa din !esuturi n radicali liberi. n organismele care con!in o cantitate apreciabil" de ap", supuse tratamentului cu radia!ii, apa este descompus" n elemente componente. Acestea intr" n ac!iune cu restul substan!elor biologice din celule #i provoac" modific"ri oxidante pronun!ate. Bacteriile ce atac" plantele #i animalele, supuse iradierii ntr-un mediu cu o concentra!ie mai redus" de oxigen, devin mai rezistente dup" ac!iunea razelor ionizante. Perturb"rile din celulele iradiate sunt datorate #i sist"rii, ntr-o oarecare m"sur" a activit"!ii enzimelor, care sufer" o puternic" oxidare. Ac!iunea razelor ionizante modific" #i structura nucleo-proteinelor din organism. Vom vedea mai departe c" acizii nucleici, att ADN ct #i ARN sufer" modific"ri structurale importante #i determin" modific"ri fenotipice. Studiile citogenetice arat" c" n organismele iradiate, celulele #i modific" mersul diviziunii. Se produc ruperi la nivelul centromerilor, cromozomilor #i cromatidelor, perturb"ri n formarea fusului sau aglutinarea cromozomilor. Ruperile cromozomice duc la restructur"ri cromozomice, iar frecven!a acestora este propor!ional" cu doza de radia!ii. Acest lucru este valabil numai n cazul unei singure rupturi. n cazul a dou" rupturi frecven!a lor este propor!ional" cu p"tratul dozei. Ruperile cromozomice depind de faza n care se g"se#te celula. n ultimele stadii ale mitozei, cromozomii nu par s" sufere asemenea rupturi. n interfaz" #i nceputul profazei ruptura se produce la nivelul ambelor cromatide. n profaz", fiecare cromatid" poate s" sufere n mod independent ac!iunea radia!iilor. Num"rul de rupturi este propor!ional cu lungimea cromozomului. Regiunile heterocromatice sunt cele mai sensibile la rupturi. n urma tratamentului cu radia!ii sufer" nu numai cromozomii ci #i citoplasma celulei. Nucleul izolat de citoplasm" prin microdisec!ie #i supus unei doze maxime de iradiere (25.000 - 65.000 r), prezint" acelea#i propriet"!i chimice #i fizice ca #i nucleul extras dintr-o celul" neiradiat". Nucleul izolat de citoplasm"
221

devine radiorezistent. Dac" un nucleu neiradiat este inclus ntr-un mediu citoplasmic iradiat vor apare toate radioleziunile caracteristice, fapt ce justific" leg"tura dintre citoplasm" #i nucleu. Semin!ele uscate sau umectate, se supun diferitelor doze de iradiere cu raze X, n aparate speciale. Iradierea materialului biologic cu neutroni se face n reactori, ciclotroni #i betatroni nucleari. Iradierea plantelor n cursul vegeta!iei se face n cmpuri special amenajate n acest scop. Plantele sunt a#ezate n cercuri concentrice #i dup" distan!a fa!" de sursa de iradiere primesc diferite doze. Doza de iradiere exprim" num"rul perechilor de ioni ce se formeaz" ntr-un anumit volum de aer. Unitatea de iradiere, denumit" Roentgen (r) corespunde form"rii ntr-un cm3 de aer uscat, la o temperatur" de 0oC #i la presiunea de 760 mm coloan" mercur, a unui num"r de 2,1 x 109 perechi de ioni sau ntr-un gram de aer a unui num"r de 1,6 x 1012 perechi de ioni. Exist" deja stabilit" doza critic" de iradiere pentru semin!ele unor plante de cultur". Prin doza critic" (DL 50%), se n!elege doza la care supravie!uiesc 50% din indivizii trata!i (tabelul 11.1). Sensibilitatea organismelor fa!" de ac!iunea mutagen" a radia!iilor depinde de mai mul!i factori: starea fiziologic" a celulei, vrsta !esutului, temperatura mediului extern, specie, varietate, soi sau individ #.a. Deoarece sensibilitatea plantelor este diferit" de la specie la specie s-au stabilit pentru semin!ele diferitelor plante cultivate #i tratate cu raze X doza critic" de iradiere. Sau g"sit de exemplu 5.000 r pentru semin!ele de floarea soarelui, 9.000 r pentru semin!ele de mac #i mu#tar, 15.000 20.000 r pentru gru #i ov"z, 8.000 pentru fasole etc. Tabelul 11.1. Doza critic" pentru diferite specii de plante
Specia de plante Triticum aestivum Helianthus annuus Cannabis sativa Phaseolus vulgaris Hordeum vulgare Secale cereale Avena sativa Brassica napus Solanum lycopersicum Linum usitatissimum Sinapis alba Doza n r 15.000 20.000 2.000 5.000 7.000 8.000 10.000 15.000 10.000 15.000 15.000 20.000 25.000 35.000 30.000 40.000 40.000 50.000 100.000

Frecven!a muta!iilor induse este mai mare n cazul trat"rii semin!elor vechi, p"strate un interval de ani, dect la cele proaspete. Plantele tinere sunt mai sensibile dect cele mature, celulele n diviziunea meiotic" sunt mai sensibile
222

dect celulele n diviziunea mitotic", iar cele mai sensibile stadii din cursul meiozei sunt profaza avansat" #i metafaza. Poliploizii sunt mai rezisten!i la iradiere comparativ cu formele diploide nrudite. Astfel, apari!ia muta!ilor clorofiliene este mai mic" la speciile de gru #i orz cu un num"r mai mare de cromozomi. Organismele care au o structur" ereditar" heterozigot" tratat" cu radia!ii produc un num"r mai mare de muta!ii dect cele homozigote. Muta!ia este urmarea unor complicate procese morfofiziologice #i biochimice n organism, pentru care #i dau concursul o diversitate de factori interni #i externi. Pentru studiul complex al acestor factori s-au ntreprins multiple cercet"ri, dintre care vom men!iona pe cele care prezint" mai mult interes. S-a studiat ac!iunea radia!iilor ionizante, n func!ie de anumite temperaturi la care au fost !inute organismele nainte, n timpul #i dup" tratament. A#a de exemplu, sc"derea temperaturii de la 20 30oC la 4oC n perioada tratamentului cu radia!ii cre#te frecven!a muta!iilor (abera!iilor cromozomice) la Tradescantia #i a transloca!iilor #i muta!iilor letale la Drosophila. Aplicarea unei temperaturi ridicate (37oC) la o or" dup" iradiere, de asemeni cre#te frecven!a muta!iilor letale la Drosophila. Lipsa oxigenului sau diminuarea procentului de oxigen din aer n timpul expunerii organismului la iradia!ii reduce frecven!a muta!iilor letale #i a transloca!iilor la Drosophila, a muta!iilor la bacterii #i diferite abera!ii cromozomice la diferite plante (porumb, ricin #.a.). Tratamentul combinat al razelor X cu raze ultraviolete sau cu raze infraro#ii sau a substan!ei etilamina, duce la o cre#tere efectiv" a muta!iilor. Prin ac!iunea n complex a factorilor mutageni #i a factorilor de mediu, se poate dirija ntr-o m"sur" oarecare ob!inerea de muta!ii artificiale, cu valoare pentru practic". W.R. Kaplon (1953) a descoperit c" prin tratarea semin!elor de orz cu bioxid de carbon #i amoniac nainte de iradiere s-a redus procentul de plante sterile. Se #tie c" aplicarea colchicinei nainte de iradiere, spore#te frecven!a de muta!ii. F. D. Amato #i A. Gustafsson (1948) au tratat semin!e de orz cu colchicin", dup" care le-au supus tratamentului cu raze X. Prin acest procedeu au reu#it s" modifice frecven!a unor muta!ii clorofiliene. A sc"zut frecven!a muta!iilor de tip albino-viridis #i a crescut procentul muta!iilor de tip xantha alboviridis. De#i s-a cercetat ac!iunea multipl" a factorilor mutageni #i a celor externi, foarte multe rezultate r"mn nc" disparate f"r" prea multe posibilit"!i de generalizare. Aceasta se datoreaz" necunoa#terii n suficient" m"sur" a tuturor manifest"rilor care stau la baza procesului de apari!ie a muta!iilor. Pe lng" semin!e, se pot iradia polen, muguri, tuberculi, rizomi, buta#i etc. n toate aceste cazuri, se aplic" doze mai mici de iradiere, n func!ie de natura speciei de plante supuse iradierii. Prin experien!e s-a stabilit c", n medie, dintr-o 1000 spice de gru, apar 3-7 mai rezistente la c"dere, la boli sau mai precoce. n lucr"rile de genetic" #i selec!ie, prima genera!ie #i genera!iile urm"toare se noteaz" cu litera ini!ial" a sursei de iradiere, indicnd anul respectiv de studiu. Astfel, genera!iile semin!elor iradiate cu raze X se noteaz" X1, X2, X3
223

etc.; cele iradiate cu neutroni n1, n2, n3, etc.; n ultimul timp s-a admis notarea general" a genera!iilor cu litera M, care reprezint" ac!iunea oric"rei surse a factorilor mutageni (M1, M2, M3 etc.). Plantele din prima genera!ie, provenite din semin!ele iradiate prezint" uneori modific"ri teratologice, sunt sterile #i au o fertilitate redus". Modific"rile morfologice din prima genera!ie nu se mo#tenesc #i poart" denumirea de radiomorfoze. Varia!iile ereditare se observ" foarte rar n prima genera!ie, deoarece muta!iile sunt n cea mai mare parte recesive #i se manifest" numai n genera!iile ulterioare. Plantele primei genera!ii iradiate au un pronun!at caracter de himere, deoarece se dezvolt" din grupe de celule n care apar diferite leziuni #i modific"ri provocate de radia!ii. Experien!ele ntreprinse pentru ob!inerea unor mutante au dus la crearea de forme cu valoare agronomic" superioar" la orz, ov"z, maz"re, soia, in, mu#tar alb, rapi!" #i altele. Radia$iile ultraviolete sunt mai pu!in folosite n radiogenetic", deoarece #i modific"rile genetice pe care le produc sunt mai pu!in importante. Ele produc mai ales muta!ii genice #i foarte rar restructur"ri cromozomice. Provoac" toate tipurile de muta!ii. Ac!ioneaz" mai eficace atunci cnd lungimea lor de und" este n jur de 2.600 . Razele cu aceast" lungime de und" au o ac!iune mai mare asupra structurii moleculei de ADN, alternd structura normal" a bazelor azotate. S-a constatat c" bazele pirimidinice sunt mai sensibile fa!" de ac!iunea UV dect bazele purinice. Cu ct ne ndep"rt"m spre stnga sau spre dreapta acestei lungimi de und" eficacitatea lor scade. Eficacitatea razelor ultraviolete, n func!ie de lungimea de und" de 2.600 , coincide de fapt cu spectrul de absorb!ie al ADN. Razele ultraviolete au o ac!iune germicid" #i de aceea n doze mari, aplicate la microorganisme omoar" o parte din germeni. Microorganismele sunt ns" destul de sensibile la UV. Uneori numai simpla iradiere a mediului de cultur" nainte ca el s" fie ns"mn!at, provoac" muta!ii.

11.4.2. Temperatura
Temperatura este un agent mutagen slab. Ac!iunea ei a fost sesizat" n special la Drosophila. Odat" cu ridicarea temperaturii la care sunt men!inute mu#tele, frecven!a muta!iilor cre#te. Cre#terea sau sc"derea treptat" a temperaturii determin" o cre#tere nesemnificativ" a frecven!ei muta!iilor. Mult mai eficace sunt #ocurile de temperatur", aplicate pentru o perioad" scurt" de timp. Prin tratarea larvelor de Drosophila cu temperaturi de 36380C, timp de 12 14 ore, frecven!a muta!iilor letale cre#te de dou" ori fa!" de cea a larvelor crescute la temperaturi normale. Dac" #ocul termic este de 6oC timp de 25' - 40', frecven!a muta!iilor cre#te de trei ori fa!" de cea a larvelor crescute la temperaturi normale. S-au f"cut ncerc"ri pentru a pune n eviden!" efectul varia!iilor de temperatur" asupra mutabilit"!ii diferitelor specii de plante #i animale, dar nu s-au putut formula concluzii generale.
224

11.4.3. Substan$ele chimice mutagene

Ac!iunea mutagen" a unor substan!e a fost pus" n eviden!" mai ales n ultimele decenii. Oehlkers, n 1943 (dup" Serra A. J., 1968) descoper" ac!iunea de dezintegrare a cromozomilor de Oenothera prin tratarea acesteia cu uretan. Cercet"ri sistematice fuseser" ini!iate nc" din 1940 de c"tre C. Auerbach #i J. M. Robson Primele rezultate s-au ob!inut prin tratarea Drosophilei cu iperit" (gaz mu#tar), ob!inndu-se peste 24% muta!ii letale sex-linkate. Ulterior s-au ob!inut rezultate #i la plantele superioare, la ciuperci #i microorganisme. n prezent, se cunosc un num"r foarte mare de substan!e chimice cu efect mutagen. Dat fiind structura lor, de la cea mai simpl", la cea mai complex", este greu de clasificat dup" un anumit criteriu. Modific"rile produse de ele sunt asem"n"toare cu cele ale muta!iilor spontane. Nici una nu posed" specificitate pentru inducerea unui anumit tip de muta!ie (tabelul 11.2.). Tabelul 11.2. Substan!e mutagene #i eficacitatea lor la cteva specii
Nr crt

Substan$a mutagen# Iperita Apa oxigenat" Oxizi organici Formaldehid" Diazometan Propiolacton" Cazein" Uretan Fenoli Etilenimin" Ceton" Epoxizi #i diepoxizi Penicilin" Carcinogene Dezoxicolat de Na Acriflavin" Clorur" de fier Clorur" de mangan Clorur" de aluminiu

Drosophila + ? + + + ? ? + + + + + ? ? ? ? ? ?

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19

Cromozomi plante + + + + + + + + ? + + ? ? + ? ? +

Bacterie + + ? + ? ? + + + ? ? ? ? + + + + + ?

Neurospora + + + + + + + + + ? ? ? ? ?

Substan!ele chimice se administreaz" n raport cu specia de plant" sau animal. De exemplu, la Drosophila s-a ac!ionat asupra larvelor prin solu!ii administrate sub form" de aerosoli. Substan!ele p"trund n trahee #i de aici ajung n gonade. Substan!ele se pot introduce direct, n c"ile genitale a femelei. Prin contact direct cu solu!ia se pot trata sporii de ciuperci, polenul, meristemele vegetale.

225

Ac!iunea acestor substan!e provoac" n organismul n care au p"truns modific"ri biochimice #i fiziologice. La nivelul cromozomilor, se produc ruperi cromozomice #i ca urmare reconstruc!ii de diferite tipuri, corelate cu modific"ri fenotipice. La nivelul genei se produc muta!ii genice. ntreaga ac!iune a substan!elor depinde de foarte mul!i factori pe care-i vom analiza n cele ce urmeaz". n primul rnd, o anumit" substan!" poate avea o influen!" mutagen" asupra unei specii, iar asupra alteia s" nu exercite nici un fel de influen!". A#a de exemplu, apa oxigenat" exercit" o influen!" mutagen" la bacterii sau Neurospora, dar nu are nici un efect asupra plantelor. Penicilina constituie factor mutagen numai pentru plante. Tabelul 11.3. Factorii mutageni care blocheaz" sinteza bazelor azotate (dup" Freese, 1963)
Factorii mutageni 5 aminouracil azaserina benzimidazol cofeina 8 etoxicofeina etiluretan 6 merkaptopurina 5 nitroxinoxalina paraxantina acid tetrametiluric teobromina teofilina insuficien!a timinei excesul de uracil Bazele azotate a c#ror sintez# este blocat# timina adenina guanina adenina guanina adenina guanina timina adenina guanina adenina guanina adenina guanina adenina guanina adenina guanina adenina guanina adenina guanina Speciile la care s-a observat efectul mutagen Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Drosophila melanogaster Oenothera lamarckiana Drosophila melanogaster Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli Escherichia coli

Ac!iunea mutagen" a substan!elor depinde #i de stadiul de dezvoltare a celulelor sexuate sau embrionare. De exemplu, uretanul are ac!iune numai asupra celulelor sexuate mascule de Drosophila deja formate #i nu influen!eaz" spermatogoniile.
226

Formaldehida ac!ioneaz" numai asupra game!ilor masculi, cnd ei se g"sesc n stadiu timpuriu de dezvoltare. Asupra femelelor, indiferent de stadiul n care se g"sesc, aceast" substan!" nu are nici o influen!" asupra genelor din ovule. n afar" de factorii men!iona!i mai sus, pot exista #i diferi!i factori exteriori, care n combina!ie cu agen!ii mutageni pot m"ri sau diminua eficacitatea lor. Substan!ele chimice mutagene care provoac" modific"ri n structura acizilor nucleici sunt foarte variate. Variat" este #i ac!iunea lor. Ne vom opri asupra unora dintre ele. Exist" o gam" de substan!e, precursori ai ADN, care au o structur" analog" bazelor azotate, care blocheaz" formarea nucleotidelor #i n consecin!" sinteza ADN. n tabelul 11.3 sunt men!ionate cteva cu aceast" nsu#ire. Dintre ele, azaserina s-a dovedit eficient" n blocarea bazelor purinice. Adenina induce abera!ii cromozomice att la plante ct #i la animale, producnd rupturi #i schimburi cromatidice. Unii analogi ai bazelor purinice #i pirimidinice pot fi ncorpora!i n molecula acizilor nucleici n locul bazelor azotate normale. Ei au constitu!ia nucleilor purinici sau pirimidinici la care s-a ad"ugat sau substituit anumite grup"ri func!ionale sau atomi. Cei mai frecvent folosi!i sunt deriva!ii halogena!i ai uracilului (5-bromuracil, 5-cloruracil, 5-floruracil, 5-ioduracil) sau deriva!i amina!i ai purinei (2 amino-purina #i 2,6 diamino-purina). Deriva!ii halogena!i ai uracilului nlocuiesc timina, un analog al acestuia. Aceasta se vede #i din constitu!ia lor (figura 11.3.).

Fig. 11.3. Formula structural" a timinei #i a unui derivat halogenat al uracilului

Bacteria Escherichi coli, fiind cultivat" pe un mediu ce con!ine 5-bromuracil a produs mutante, la care perechea de baze adenina-timina a fost nlocuit" cu perechea guanina-citozina, n felul urm"tor: adenina-timina-adenina5-bromuracil-guanina-5-bromuracil-guanina-citozina. Mai nti, adenina se leag" de 5-bromuracil n loc de timin", dintr-o eroare 5-bromuracil se leag" de guanin" n locul adeninei, iar, n final, guanina se leag" n mod normal de citozin". n mod analog, 2 amino-purina nlocuie#te adenina n ncorporare, prin mperechere cu timina: adenina-timina-2-amono-purina-timina-aminopurinacitozina-guanina-citozina. ncorporarea analogilor bazici a fost studiat" la fagi #i bacterii demonstrndu-se c" ncorporarea analogilor are loc numai ntr-o singur" caten". O alt" categorie de substan!e (acidul nitros, hidroxilamina, hidrazina #.a.) au o ac!iune primar" asupra acizilor nucleici ac!ionnd fie numai asupra
227

bazelor azotate f"r" a modifica lan!ul glucido-fosforic, sau modific" att bazele azotate ct #i lan!ul glucido-fosforic (alkilan!ii, peroxizii organici, clorura feroas" #.a.). Agen$ii alkilan$i, dintre care face parte #i iperita (gaz mu#tar) se numesc astfel, deoarece con!in un radical numit alkil (metil, etil, propil), care poate fi transferat nucleotidelor. Majoritatea lor opresc diviziunea mitotic", de aceea sunt folosi!i #i n tratamentul cancerului. Ei intr" n reac!ie cu molecula de ADN unde pot produce modific"rile urm"toare: ruperea coloanei glucidofosforice, alkilarea bazelor purinice #i pirimidinice, depurinizarea moleculei de ADN, blocarea mitozei prin formarea unei leg"turi transverse intercatenare. Efectul mutagen al agen!ilor alkilan!i a fost pus n eviden!" la bacterii, Drosophila melanogaster, Neurospora crassa, Vicia faba #.a. Substan!ele alkilante ac!ioneaz" n perioada S a ciclului mitotic. Acidul nitros (HNO2) este un agent mutagen care ac!ioneaz" asupra bazelor purinice #i pirimidinice, dezaminndu-le. Prin tratarea ARN din virusul mozaicului tutunului cu acid nitros, se produce dezaminarea bazelor azotate #i adenina a trecut n hipoxantin", guanina n xantin" iar citozina n uracil (figura 11.4.). Aceste treceri au repercusiuni asupra bloc"rii biosintezei unei enzime #i n consecin!" asupra unei proteine. Acidul nitros produce muta!ii #i la fagii T4, la Escherichia coli, la stafilococi #.a. Hidroxilamina (NH2OH) ac!ioneaz" n special asupra citozinei care face parte din bazele pirimidinice. Ea provoac" o dezaminare a citozinei #i transformarea ei n uracil. A fost experimentat" asupra virusului mozaicului tutunului, asupra fagului T4. Acridinele sunt coloran!i bazici care produc muta!ii, ac!ionnd asupra moleculelor de ADN, dar ale c"ror mecanisme nu sunt ns" bine elucidate. n afar" de substan!ele ar"tate mai sus se mai cunosc #i altele cu ac!iune mutagen": hidrazina, formaldehida, clorura de mangan, peroxizi organici, ap" oxigenat", clorur" feroas" #.a.
Fig. 11.4. Dezaminarea bazelor azotate prin ac!iunea acidului nitros

228

11.4.4. Factorii mutageni biologici

Cercet"rile care s-au efectuat n ultimii ani la microorganisme au scos n eviden!" c" virusurile #i micoplasmele produc muta!ii la plante #i animale. Se cunosc ribovirusurile care produc sarcomul la g"ini #i leucemia la p"s"ri #i mamifere. Dintre dezoxiribovirusuri pot fi men!ionate: virusul poliomei sau virusul oncogen. Teoria virotic" a cancerului uman c#tig" tot mai mult teren. Este vorba de ribovirusuri defective care se integreaz" n cromozomii umani. Dar p"trunderea virusurilor n celul" determin" restructur"ri cromozomice, pulveriz"ri cromozomice. Sunt citate chiar #i apari!ii de muta!ii genice. Micoplasmele, cele mai mici organisme, de dimensiuni cuprinse ntre cele mai mici virusuri #i cele mai mici bacterii, capabile #i de via!" independent", introduse n culturi de celule produc restructur"ri #i pulveriz"ri cromozomice. La nivel molecular, sinteza ADN micoplasmic opre#te sinteza ADN n celula gazd".

11.4.5. Mecanismul molecular al muta$iilor

Deoarece un anumit tip de secven!" nucleotidic" este purt"toarea unei anumite informa!ii ereditare, orice schimbare a acesteia schimb" #i con!inutul informa!iei. n procesul de diviziune celular", aceast" schimbare se va transmite #i celulelor fiice. Se cunosc ast"zi unele substan!e chimice, care venind n contact cu organismele sau numai cu acizii nucleici extra#i din ele, modific" structura acestora #i fac s" apar" muta!ii. Schimb"rile se produc n anumite regiuni ale moleculei #i nu au nimic comun cu restructur"rile cromozomice ce se produc n cromozomi. Schimbarea secven!ei nucleotidelor se refer" de fapt la schimbarea bazelor azotate, acestea constituind elementul mobil. Exist" mai multe modalit"!i de schimbare a lor: substitu!ia, dele!ia, adi!ia #i inversia. Prin substitu$ie, se n!elege nlocuirea unei baze purinice sau pirimidinice printr-o alt" baz" purinic" sau pirimidinic". Dac" aceast" nlocuire are loc numai ntr-o caten", odat" cu replicarea moleculei, nlocuirea se va transmite #i n catena complementar". nlocuirea este #i ea de dou" tipuri: a) cnd o baz" purinic" este nlocuit" cu o baz" purinic", iar una pirimidinic" tot cu una pirimidinic", ea poart" numele de tranzi$ie (de exemplu se nlocuie#te adenina cu guanina sau timina cu citozina); b) cnd o baz" purinic" este nlocuit" cu o baz" pirimidinic" sau invers, poart" numele de transversie. Dele$ia este pierderea uneia sau mai multor nucleotide, modificnd mesajul genetic. Adi$ia este ad"ugirea uneia sau mai multor nucleotide n cadrul secven!ei ini!iale. Inversia este schimbarea ordinii unui num"r de baze ntr-un segment al catenei din molecula ADN.
229

Schematic, cele patru tipuri de schimb"ri a secven!ei bazelor din molecula de ADN se pot prezenta astfel (figura 11.5.).

Fig. 11.5. Diferite tipuri de schimb"ri ale bazelor azotate din ADN

Pentru a da o explica!ie diferitelor tipuri de modific"ri structurale a ADN, Watson #i Crick au emis teoria copierii gre#ite n procesul de replica!ie a ADN. Schimbarea de secven!" a unei baze va comanda n procesul de sintez" baza corespunz"toare cu care se va lega catena nou", complementar". Aceast" nou" ordine va fi copiat" #i la o nou" replica!ie a moleculei de ADN. Muta!ii ale acizilor nucleici s-au ob!inut prin ac!iunea cu diferi!i agen!i mutageni, fie asupra organismului, fie direct asupra acizilor nucleici. n cazul radia!iilor ionizante, mecanismul de ob!inere a muta!iilor la nivel molecular nu este nc" complet elucidat. Exist" ipoteze, care sus!in c" acestea produc ruperi ale moleculei de ADN, urmate de realipirea fragmentelor n diferite pozi!ii. Razele ultraviolete cu lungimea de und" de 2600 ac!ioneaz" asupra bazelor purinice #i pirimidinice. S-a demonstrat acest lucru ac!ionndu-se direct asupra acestor baze. S-a constatat c" acestea sunt sensibile la tratamentul cu raze ultraviolete #i se descompun n mod diferen!iat. Temperaturi anormale pot produce alter"ri n molecule de ADN: disocierea catenelor #i depurinizarea catenelor de ADN.

230

11.5. MECANISME DE REPARARE A ADN

Molecula de ADN are o mare stabilitate datorit" modului s"u de replicare #i a sistemului enzimatic, care repar" eventualele erori de ncatenare a nucleotidelor. Prin repara$ie genetic#, se refac unele leziuni la nivelul moleculei de ADN, integritatea materialului genetic fiind protejat". Sistemele de reparare a ADN, sunt destul de diverse, grupndu-se n dou" categorii: reparare prereplicativ# #i reparare postreplicativ#. Repararea prereplicativ# are loc naintea replic"rii macromoleculei de ADN realizndu-se fie pe cale fotoenzimatic#, fie prin excizie (Butnaru Gallia, 1999). Repararea fotoenzimatic# se realizeaz" n prezen!a unei fotoenzime care poate desface dimerii pirimidinici, forma!i n urma iradierii cu raze U.V., f"r" eliminarea de nucleotide. Aceast" enzim" ac!ioneaz" la ntuneric, ata#ndu-se de molecula de ADN, n jurul dimerului timin", iar energia necesar" pentru catalizarea cliv"rii ambelor leg"turi ale dimerului provine de la radia!ia albastr", din spectrul vizibil. De aceea, cnd se utilizeaz" radia!iile U.V. ca agent mutagen, frecven!a muta!iilor se reduce, datorit" procesului reparator. Repararea prin excizie const" n nl"turarea unor nucleotide lezate #i sintetizarea unui nou segment de ADN, proces care are loc att la ntuneric ct #i la lumin" #i presupune participarea mai multor enzime, ce ac!ioneaz" succesiv. Endonucleaza, recunoa#te leziunile existente #i hidrolizeaz" leg"turile fosfodiesterice 5' -3'. Repararea ADN se realizeaz" cu ajutorul enzimelor de tipul polimerazelor care nlocuiesc nucleotidele excizate #i a ligazelor care sudeaz" lan!ul glucido fosforic. Acest proces a fost descris att la procariote, ct #i la eucariote. Reparti$ia postreplicativ#, are loc dup" replicarea macromoleculei de ADN , afectat de radia!iile UV. La bacterii, cnd n furca de replicare se ntlne#te un dimer neexcizat, se formeaz" o lacun" n molecula de ADN la una dintre catene, iar cealalt" cuprinde dimerul. Aceste lacune sunt completate postreplicativ printr-un proces de recombinare genetic", prin care, ntre catenele nou sintetizate se pot produce schimburi reciproce de nucleotide. Pentru repararea postreplicativ" prin recombinare este necesar" prezen!a a cel pu!in dou" molecule de ADN identice, pentru ca repararea s" se fac" cu mare fidelitate (Raicu P., 1997). Un alt sistem de reparare este cunoscut sub numele de sistem SOS. Acest sistem intr" n func!ie, atunci cnd n molecula de ADN s-au format un num"r mare de leziuni, care nu pot fi reparate prin celelalte mecanisme. n acest caz, are loc sinteza unei ADN polimeraze speciale, care tolereaz" leziunile #i permite replicarea ADN modificat. De aceea, numero#i agen!i carcinogeni fizici #i chimici, sunt #i mutageni datorit" inducerii sistemului de reparare SOS.
231

Procesele de reparare a ADN sunt foarte complexe #i ele au ap"rut foarte timpuriu n procesul de evolu!ie a speciilor, atunci cnd organismele erau supuse unor doze mari de radia!ii UV. Se afirm" c" aceste procese reparatorii au ap"rut chiar n cursul trecerii de la genele de tip ARN la cele de tip ADN, fapt ce a permis cre#terea dimensiunilor moleculei de ADN, implicit a cantit"!ii de informa!ie genetic".

11.6. IMPORTAN!A MUTA!IILOR

n natur", supravie!uiesc formele mutante care favorizeaz" individul #i deci #i specia c"reia i apar!ine. Ele pot constitui puncte de plecare pentru formarea de noi specii. Muta!ia are, deci, rol n evolu!ie. Muta!iile artificiale se ob!in cu ajutorul unor metode ce depind de specie, factorul cu care se ac!ioneaz", momentul n care se aplic" tratamentul #.a. Dat fiind efectul foarte variat, pu!ine muta!ii prezint" interes pentru amelioratorul de plante sau animale. De aceea, este necesar pentru ob!inerea de muta!ii valoroase la plantele de cultur" s" se foloseasc" un num"r foarte mare de indivizi. De multe ori se opresc drept genitori, mutante care posed" multe caractere #i nsu#iri defectuoase, dar care con!in una, dou" nsu#iri valoroase. Prin hibridare #i selec!ie, aceste calit"!i pot fi transmise la descenden!i, realizndu-se noi soiuri. La animalele de produc!ie, s-au folosit #i se folosesc pu!in muta!iile artificiale deoarece formele mutante, cu defecte letale cer cheltuieli care ntrec beneficiile. n general, foarte rar s-a reu#it s" se ob!in" mutante valoroase. O importan!" deosebit" o constituie ob!inerea de muta!ii la microorganisme. Muta!ia #i recombinarea, dup" p"rerea unor microbiologi, sunt singurele mecanisme prin care bacteriile pot deveni rezistente sau sensibile la antibiotice. Microorganismele ofer" multiple posibilit"!i de studiu al procesului muta!ional, la diferite niveluri de organizare a materiei vii, de la individ pn" la molecul". Una din direc!iile actuale de cercetare a muta!iilor este de a g"si posibilit"!ile de a induce muta!ii dup" dorin!a omului. Problema nu va putea fi rezolvat" prin studierea muta!iilor cromozomice, care nseamn" schimbarea unor segmente mari, de cele mai multe ori cu caracter letal, ci prin muta!iile punctiforme ce se produc n structura moleculelor de acizi nucleici. Aceste schimb"ri modific" biosinteza proteinei #i n consecin!" fenotipul.

232

CAPITOLUL 12 MUTA!II N STRUCTURA CROMOZOMILOR

Moto: A manipula natura este privilegiul nostru !i va fi poate sfr!itul nostru. Dar dac" noi nu suntem produsul unei muta#ii letale, gloria noastr" va r"mne prin substituirea hazardului cu ra#iunea. Pn" n prezent, evolu#ia noastr" a fost dominat" de hazard. Cristian de Duve

Modific!rile de structur!, restructur!rile sau abera"iile cromozomice constituie obiectul unor importante cercet!ri citogenetice, ele fiind strns legate de modific!rile eredit!"ii. La nceput, existen"a lor a fost numai presupus!. C. B. Bridges a b!nuit c! la Drosophila ar exista o gen! recesiv! legat! de sex, care s-a manifestat numai n momentul cnd por"iunea din cromozomul omolog ce con"inea alela dominant! a fost ndep!rtat!. Acest fenomen, al!turi de alte rearanjamente ale por"iunilor din interiorul cromozomilor sau ntre cromozomi diferi"i au fost considerate de c!tre Bridges #i A. H. Sturtevant, drept ipoteze pentru a explica diferite manifest!ri genetice. Prima dovad! a unor astfel de restructur!ri cromozomice a fost adus! n anul 1930 prin cercet!rile Barbarei Mc. Clintock asupra cromozomilor de porumb n stadiul de pachiten. Cromozomii de la aceast! plant! au avantajul c! prezint! n lungul lor ni#te noduli ce se coloreaz! foarte intens (cromozomi heteropicnotici). Cu ajutorul lor au putut fi identificate por"iunile de cromozomi restructurate. Autoarea a demonstrat existen"a a patru feluri de modific!ri: deficien"!, dedublare, inversiune #i transloca"ie. O confirmare a existen"ei restructur!rilor cromozomice s-a putut face #i prin cercetarea cromozomilor gigantici din glandele salivare de la Drosophila. Starea n care se g!sesc ace#ti cromozomi, n perechi #i continu! sinaps! somatic!, face posibil! sesizarea modific!rilor suferite de un membru al unei perechi. Diferen"ele de structur! pe lungimea acestor cromozomi sunt figurate prin prezen"a unor discuri (benzi) corespunz!toare ntr-o oarecare m!sur! localiz!rii genelor. Restructur!rile cromozomice apar sub influen"a radia"iilor ionizante, substan"elor chimice mutagene #i a unor factori de mediu, fie c! ac"ioneaz! liber n natur!, fie c! sunt dirija"i de om. Ele au fost descoperite mai nti la Drosophila, Zea mays, Datura, p!s!ri, #obolani. Mecanismul lor de formare pare s! fie universal.
233

12.1. TIPURI DE RESTRUCTUR"RI CROMOZOMICE #I COMPORTAREA LOR N MITOZ"

Restructur!rile cromozomice pot avea loc n dou! etape: - declan#area uneia sau mai multor rupturi cromozomice; - pierderea sau realipirea fragmentelor rupte, fie la locul unde s-a produs, fie ntr-un alt loc, care schimb! ordinea locilor de pe cromozomi. n primul caz fenomenul trece neobservat, deoarece realipirea realizeaz! integritatea ini"ial! a cromozomului; n cel de al doilea caz se produce o restructurare a cromozomului, cu un nou aranjament de gene. Posibilit!"ile de restructurare a cromozomilor ce au suferit una sau mai multe rupturi se pot clasifica n diferite tipuri pe care urmeaz! s! le descriem: Deficien$a este pierderea sau inactivitatea unei por"iuni terminale (apicale) din cromozom. Unii geneticieni o mai numesc #i dele"ie terminal!. Partea de cromozom r!mas!, care posed! centromerul, poate participa la mitoz! ca un cromozom normal, centromerul fiind elementul activ n migrarea lui spre unul din cei doi poli ai fusului. El devine n acest caz un cromozom stabil #i se comport! ca atare #i n mitozele urm!toare. n alte cazuri, la cap!tul cromozomului unde s-a produs ruptura, cele dou! cromatide se pot uni formnd un izocromozom cu doi centromeri. n anafaz!, centromerii se ndep!rteaz! spre polii fusului, iar cromozomul este ntins formnd o a#a zis! punte cromatic%. Aceast! punte poate mpiedica formarea celor doi nuclei #i n consecin"! celula moare. Adesea, puntea se rupe #i anafaza #i urmeaz! cursul normal. Ace#ti cromozomi repet! acest fenomen #i n diviziunile urm!toare. Dar cu ct cre#te num!rul de diviziuni, cu att ace#ti cromozomi devin din ce n ce mai anormali. n alte cazuri extremit!"ile rupte #i pierd puterea de adeziune, iar cromozomul se comport! normal. Ruptura poate s! se produc! n diferite puncte ale izocromozomului. n figura 12.1. a, b, c, d, se pot vedea diferite tipuri de deficien"e. Fenomenul de rupere a izocromozomului a fost observat n celulele din albumenul bobului de porumb. Interpretarea definitiv! a procesului de realipire a cromatidelor la nivelul la care s-a produs ruptura, s-a observat la unii cromozomi ce au suferit un num!r de asemenea cicluri n gametofit, dup! care, n urma fecunda"iei intr! n componen"a nucleului diploid a sporofitului. O astfel de structur! devine deci stabil! #i se transmite ca atare de-a lungul mitozelor. Fragmentele de cromozomi f!r! centromeri, cnd nu se realipesc unui cromozom oarecare, r!mn dezorientate n placa ecuatorial! #i nu pot fi incluse n nici unul din cei doi nuclei ce se formeaz! spre sfr#itul mitozei. Ele r!mn n citoplasm! unde, prin dezagregare, dispar.

234

Fig. 12.1. Diferite tipuri de deficien"e

Pierderi de fragmente terminale se pot produce la ambele capete ale cromozomului. Foarte adesea, n aceste cazuri, capetele cromozomului se pot suda ntre ele, formnd n timpul mitozei un cromozom inelar. Dup! m!rimea fragmentului pierdut, deficien"ele se clasific! n mari #i mici. Deficien!ele mici se pot sesiza numai n cromozomii gigantici. Ele se p!streaz! de obicei n stare homozigot! #i produc efecte asem!n!toare muta"iei genelor. Deficien!ele mari ac"ioneaz! ca letale dominante atunci cnd se g!sesc n stare heterozigot!. n aceast! stare se pot p!stra. Cromozomii cu deficien"e care posed! centromeri, #i p!streaz! proprietatea de autoreproducere. Deficien"e mari au fost puse n eviden"!, att pe cale citologic!, ct #i prin metode de analiz! genetic!. Ele au fost constatate pentru prima dat! la Drosophila de c!tre Bridges (1916). El ncruci#eaz! un mascul cu ochi albi #i de form! bar cu femele cu ochi ro#ii #i de form! normal!. Culoarea alb! a ochilor #i forma normal! sunt nsu#iri recesive. n F1 ob"ine indivizi ce posedau nsu#irile dominante, ochi ro#ii si de form! bar, dar #i un individ cu ochi ro#ii #i de form! normal!. Autorul consider! c! forma normal! s-a mo#tenit fenotipic n lipsa sau inactivitatea unei por"iuni ce con"inea alela dominant! a genei bar. O astfel de manifestare poart! numele de pseudodominan"!. Tot la Drosophila se mai cunoa#te un caz analog, n care s-a urm!rit ac"iunea de trei perechi alele: culoarea galben! sau cenu#ie a corpului produs! de gena Y #i Y+, culoarea alb! sau ro#ie a ochilor, produs! de gena w #i w+ #i prezen"a sau absen"a perilor bifurca"i produ#i de gena f sau f+. Prin ncruci#area femelelor de tip s!lbatic cu mascul ce poart! cele trei gene men"ionate mai sus au ap!rut n F1 indivizi la care, pe lng! caracterele dominante, a ap!rut culoarea alb! a ochilor #i caracterul p!r bifurcat. Explica"ia este c! gena w #i gena din imediata apropiere a ei, care produc bifurcarea p!rului, se g!seau pe un segment din cromozomul omolog ce a fost suprimat. S-au eviden"ia n acest caz, alelele recesive. Exist! o gen! (rv) la #oarece care, n stare homozigot!, produce mi#c!ri de rotire n jurul unui picior posterior (#oareci dansatori sau valseuri). Prin
235

ncruci#area unei femele purt!toare a acestei gene n stare homozigot! cu un mascul normal, se ob"in indivizi normali, dar #i unii care valseaz!. Analiza citologic! la ace#ti indivizi a ar!tat c! este vorba de o deficien"! cromozomic!. Dele$ia este tot o deficien"!, dar a unui fragment cromozomic din interiorul lui. Ea se mai nume#te #i deficien"! intercalar!. (fig. 12.1. e). Pentru producerea ei sunt necesare dou! rupturi n cromozom. Eliminarea fragmentului atrage dup! sine scurtarea cromozomului. Dac! cromozomul nu pierde #i centromerul, poate deveni stabil #i se multiplic! ca un cromozom normal. Fragmentul f!r! centromer #i sudeaz! capetele lund forma unui inel, care n cele din urm! dispare. Dac! fragmentul posed! centromer, el ia forma unui inel cu posibilit!"i de perpetuare a acestui fenomen n cursul mitozelor urm!toare. n diviziune, cele dou! cromatide ale inelului se pot uni. Cei doi centromeri, avnd tendin"a de a se ndep!rta la poli, n anafaz! formeaz! o punte ce mpiedic! formarea celor doi nuclei. Dac! ea se rupe, cromatidele surori vor reconstitui inelele n diviziunea urm!toare #i fenomenul se va repeta fie pn! la moartea celulei, fie pn! la dispari"ia total! a cromozomului. Dac! asemenea rupturi se produc la doi cromozomi diferi"i restructurarea ce poate s! apar! are loc prin schimbul de fragmente ntre cei doi cromozomi. Cnd sunt implica"i trei cromozomi, combina"iile care pot s! apar! prin schimb sunt din ce n ce mai complexe. Duplica$ia este dublarea unei por"iuni din cromozom cu un stoc de gene identice fig. (12.1. f.). Odat! cu pierderea unui fragment dintr-un cromozom poate apare prin alipirea acestuia la omologul s!u, o duplica"ie. Fenomenul provoac! schimb!ri fenotipice oarecum u#or de sesizat, dar greu de pus n eviden"! din punct de vedere cariologic. Duplica"ia poate s! apar! #i n urma unui crossing-over inegal. Bridges (1919) a ob"inut asemenea restructur!ri prin tratarea drosofilei cu raze X. Reducerea suprafe"ei ochilor la Drosophila (forma bar) este urmarea multiplic!rii por"iunii de cromozomi care r!spunde de num!rul de omatidii ale ochiului. Exist! o rela"ie cantitativ! ntre m!rimea ochiului #i multiplicarea segmentului 16A din cromozomul gigantic. Cnd este n cantitate dubl! produce fenotipul bar, iar cnd este n cantitate tripl!, fenomenul ultrabar (fig. 12.2.). Apari"ia de aripi p!roase la Drosophila este urmarea dubl!rii por"iunii terminale a celui de-al doilea cromozom. Inversia const! n ruperea unui segment netelomeric din cromozom #i realipirea fragmentului dup! o rota"ie de 1800. Fragmentul apar"ine unei por"iuni din interiorul cromozomului, separat prin dou! rupturi. Inversii terminale nu pot s! apar! deoarece partea terminal! a cromozomului nu are proprietatea de a se suda la nivelul unei rupturi. Inversiile pot fi homozigote #i heterozigote (fig. 12.3.). Cnd sunt homozigote #i au un caracter recesiv letal nu se p!streaz! #i de aceea pot fi descoperite numai n stare heterozigot!. Pot fi de asemenea observate n cromozomii gigantici sau n studiul de pachiten al meiozei. Se ntlnesc la plantele #i animalele din natur! #i se pot ob"ine artificial prin tratamente cu radia"ii ionizante sau substan"a chimice.
236

Fig. 12.2. Diferite tipuri de ochi la Drosophila n func"ie de multiplicarea segmentului 16A din cromozomul X

Fig. 12.3. Inversia: a)-cromozomi omologi normali b)-inversie heterozigot! c)-inversie homozigot!

Inversia poate constitui un criteriu de determinare a variet!"ilor din interiorul speciilor. De exemplu la Drosophila pseudoobscura variet!"ile se pot deosebi dup! o inversie. Geneticienii consider! c! fenomenul inversiei are un rol important n geneza speciilor. La porumb, inversia prezint! importan"! pentru crearea de linii cu polen steril. Sterilitatea este urmarea perturb!rilor ce apar n meioz! datorit! unor restructur!ri #i despre acest fenomen vom vorbi cnd se va descrie comportarea cromozomilor restructura"i n meioz!.
237

Transloca$ia este fenomenul de transferare a unor segmente cromozomice ntre cromozomi neomologi. Acest tip de restructurare este destul de frecvent #i cuprinde mai multe tipuri: - transloca!ia simpl", cnd segmentul deta#at de la un cromozom se intercaleaz! n ruptura unui cromozom neomolog, - transloca!ia reciproc" este prezen"a a dou! rupturi n doi cromozomi diferi"i #i schimbul de segmente lipsite de centromeri. Dac! cele dou! rupturi se produc la doi cromozomi omologi, n puncte omoloage, atunci schimbul de segmente este echivalent cu schimbul produs prin crossing over. Cnd unul din cele dou! segmente posed! centromer iar cel!lalt nu, se formeaz! doi cromozomi, unul cu doi centromeri, iar cel!lalt lipsit de centromer. Acesta din urm! nu este viabil #i se pierde, cel!lalt n schimb poate s! participe la un num!r oarecare de mitoze, formnd pun"i cromatice ca #i n cazurile descrise anterior. n figura 12.4. se poate vedea o transloca"ie heterozigot! #i alta homozigot! ntre dou! perechi de cromozomi.

Fig. 12.4. Transloca"ia: a)-cromozomi omologi normali b)-transloca"ia heterozigot! c)-transloca"ia homozigot!

Transloca"ia are drept urmare schimbarea ordinii genelor n grupele de linkage. Aceast! particularitate ne ajut! la descoperirea fenomenului. Se fac ncruci#!ri ntre indivizi care au bine precizate grupele de gene cuplate #i pe care noi le putem identifica prin anumite gene. Prima dovad! citologic! a transloca"iei a fost adus! de C. Stern (1931) care a urm!rit n paralel aspectul genetic #i citologic al transloca"iei reciproce la Drosophila. Este vorba de o transloca"ie ntre cromozomii sexului X #i Y. Transloca"ia este nso"it! de modific!ri fenotipice #i de aceea prezint! un rol important n evolu"ia natural! a speciilor. O putem induce #i pe cale artificial!, cu ajutorul factorilor mutageni. Prin selec"ie, putem separa #i nmul"i formele de plante #i animale utile. Exist! genuri de plante n care, transloca"ia are loc foarte frecvent: Oenothera, Datura, Campanula #. a.
238

Transla$ia (transpozi$ia) este transferul unui segment dislocat, ntr-o alt! pozi"ie (fisur!), a aceluia#i cromozom. Segmentul translat, se poate intercala, n pozi"ie normal! sau inversat!. Aceast! restructurare nu modific! num!rul genelor/genom, modificndu-se ns!, ordinea (pozi"ia) genelor. n mitoz!, citogenetic, este dificil de eviden"iat.

12. 2. RESTUCTUR"RILE CROMOZOMICE #I MECANISMUL MEIOZEI

Restructur!rile, numite #i abera"ii cromozomice apar n anumite celule, se pot multiplica odat! cu multiplicarea acestora, prin mitoz!. n general, numai unul din cromozomii omologi ai celulelor somatice este afectat #i ca urmare, ele au o structur! heterozigot!. Important de #tiut este comportarea acestor cromozomi n procesul de formare a celulelor sexuale. Studiind comportarea cromozomilor n meioz!, putem identifica diferite tipuri de restructur!ri. Absen"a unui fragment (deficien"! sau dele"ie) atunci cnd este homozigot! nu mpiedic! conjugarea cromozomilor n meioz!, dar organismele cu astfel de deficien"e nu sunt viabile dect dac! segmentele respective aveau un num!r mic de gene #i de mic! importan"! pentru via"a individului. Deficien"a sau dele"ia sunt fenomene greu de sesizat. Numai n cazul n care, fragmentul pierdut este destul de mare, se poate determina prin m!sur!tori. Cromozomii gigantici din glandele salivare de la Drosophila constituie un material propice pentru studiul citologic al acestora. Se #tie c! ace#ti cromozomi omologi sunt conjuga"i n celulele somatice (conjugare somatic!). Sa observat la ei prezen"a unor dele"ii care oblig! cromozomul complet s! descrie un fel de bucl! n dreptul unde partenerul este lipsit de un fragment (figura 12.5.). Aceasta are loc numai n cazul st!rii heterozigote, cnd por"iunea cromozomilor normali nu are por"iune omoloag! corespunz!toare. Fenomenul dovede#te n plus exactitatea sinapsei omologilor n zigonema.

Fig. 12.5. Conjugarea a doi cromozomi omologi n meioz! cnd unul dintre ei a suferit o dele"ie

239

Dele"ia heterozigot!, chiar dac! sufer! sau nu un crossingover n timpul meiozei, va duce la formarea a dou! tipuri de game"i n propor"ii egale: unii cu cromozomi normali #i al"ii purt!tori ai dele"iei. La organismele autogame, prin autofecundare se ob"in homozigo"i normali, heterozigo"i #i homozigo"i pentru dele"ie, dar care nu sunt viabili. Spre deosebire de dele"ie, duplica"ia homozigot! produce modific!ri, care ns! nu afecteaz! dect n unele cazuri via"a individului. Ea se transmite la urma#i f!r! a produce perturb!ri n meioz!. Duplica"ia heterozigot! duce ns! la perturb!ri n conjugarea cromozomilor n meioz!, iar game"ii forma"i pot deveni sterili. Inversia heterozigot! n zigonema face ca ambii omologi s! formeze cte o bucl! n care cromozomii parcurg sensuri diferite pentru asigurarea omologiei genelor alele. S! urm!rim cum decurge meioza n cazul cnd chiasma este situat! n interiorul buclei de inversie. Se pot ivi dou! situa"ii: bucla con"ine sau nu centromerul. n prima situa"ie, cnd bucla include centromerul, n meioz! se formeaz! patru tipuri de game"i: doi dintre ei con"in cromozomi normali, iar ceilal"i doi cu structuri modificate #i neviabili (fig. 12.6.).

Fig. 12.6. Conjugarea cromozomilor n cazul unei inversii heterozigote cnd centromerul este situat n interiorul buclei

n cea de-a doua situa"ie, crossing-over-ul produs n interiorul buclei duce la formarea a dou! cromatide aberante, dintre care una posed! doi centromeri, iar cealalt! nici unul (figura 12.7.). $i n cazul acesta singurii game"i viabili sunt cei cu cromozomi nerecombina"i. Se poate trage concluzia c! inversia heterozigot! poate avea ca urmare blocarea crossing-over-ului la fragmentul respectiv #i nu #i la cel!lalt bra" al cromozomului. Nu trebuie ns! s! consider!m c! inversia este singura cauz! a bloc!rii crossing-over-ului. Mai pot exista #i muta"ii genice ce pot mpiedica crossing-over-ul.

240

Fig. 12.7. Conjugarea cromozomilor n cazul unei inversii heterozigote cnd centromerul se g!se#te n afara buclei

La inversiile homozigote viabile, meioza decurge normal deoarece #i conjugarea cromozomilor este normal!. De asemenea #i crossing-over-ul, n acest caz, decurge normal. n func"ie de lungimea segmentului inversat #i de num!rul de crossingovere ce au loc, apar direct propor"ional mai mul"i sau mai pu"ini game"i neviabili. Transloca$iile complic! #i mai mult mersul meiozei. S! urm!rim cum decurge meioza la un organism heterozigot pentru o transloca"ie reciproc! dintre doi cromozomi neomologi. Conjugarea segmentelor omoloage n profaza meiozei duce la aranjamentul cromozomilor n form! de cruce (fig. 12.8.). Evolu"ia mai departe a cromozomilor va depinde de localizarea chiasmelor n diferite p!r"i ale cromozomului: - dac! cele dou! segmente translocate vor fi foarte scurte, ntre perechile omoloage ale acestora nu se vor forma chiasme, iar n metafaz! cei patru cromozomi vor segrega #i vor forma grupe de cte doi. Ei vor conduce la formarea a patru tipuri de game"i, din care doi sunt dezechilibra"i, posednd cromozomi cu por"iuni translocate (fig. 12.8. a #i b), zigo"ii rezulta"i din astfel de game"i nefiind viabili. - dac! cele dou! segmente translocate vor fi lungi, ntre perechile omoloage ale acestora se vor forma chiasme care, deplasndu-se spre capetele cromozomului, vor forma n metafaz! o figur! n form! de inel (fig. 12.8. b), care poate lua #i forma de 8 (opt), a#a cum reiese din figur!.

241

Fig. 12.8. Conjugarea #i comportarea ulterioar! a cromozomilor n meioz!, n cazul unei transloca"ii heterozigote: a). por"iunile translocate sunt scurte; b). por"iunile translocate sunt lungi.

n primul caz, n anafaz!, cromozomii se despart, migrnd la fiecare pol cte un cromozom normal #i unul translocat. Game"ii care se vor forma vor fi dezechilibra"i, neviabili, deoarece prezint! duplica"ii sau deficien"e. n cel de-al doilea caz, cnd cromozomii se dispun n form! de 8, jum!tate dintre ei cei normali migreaz! c!tre un pol, iar cealalt! jum!tate cei transloca"i c!tre cel!lalt pol. Dup! cum este firesc, n primul caz se vor forma game"i fertili, iar n cel de-al doilea caz, game"i sterili. Forma de inel sau de 8 depinde de lungimea segmentelor translocate, de pozi"ia centromerului, precum #i de dispozi"ia chiasmelor. Unele transloca"ii heterozigote au devenit stabile #i constituie elemente ce diferen"iaz! structural cromozomii speciilor apropiate. Ele constituie o stare normal! n genotip la genurile Oenothera, Datura, Campanula #. a. Dup! num!rul perechilor de cromozomi ce au suferit transloca"ie, se formeaz!: inele din patru elemente - cnd exist! o transloca"ie reciproc!, inele cu #ase elemente cnd exist! o transloca"ie ntre trei perechi de cromozomi. Asemenea forma"ii perturb! combina"ia liber! a cromozomilor #i segregarea genelor. Analiza cromozomilor n meioz! ne ajut! la identificarea transloca"iilor. Cnd se observ! dispozi"ia n cercuri a patru cromozomi vom #ti c! este vorba de o transloca"ie homozigot!. Ea se ob"ine ncruci#nd indivizi heterozigo"i #i homozigo"i prin transloca"ie #i analiznd apoi meioza la hibrizii ob"inu"i. Prin ncruci#area ntre ei a indivizilor heterozigo"i prin transloca"ie se va produce trei
242

categorii de indivizi: homozigo"i normali, heterozigo"i prin transloca"ie, homozigo"i prin transloca"ie reciproc!. Indivizii heterozigo"i prin transloca"ie reciproc! la plante se mai pot identifica analiznd viabilitatea polenului. Exist! o transloca"ie cnd numai 50% din polen este viabil. S! analiz!m acum influen"a pe care o are transla"ia asupra mersului meiozei. Vom considera o pereche de cromozomi la care unul din ei a suferit o transla"ie. mperecherea locilor omologi face ca cei doi cromozomi s! fac! dou! bucle situate la niveluri diferite. Dup! pozi"ia centromerilor se pot ivi dou! situa"ii. (figura 12.9.). S! consider!m c! n una din situa"ii centromerii se g!sesc n por"iunea dintre dou! bucle, a#a cum arat! fig. 12.9. a. n meioz! vor ap!rea patru tipuri de cromozomi. Dac! nu se produce nici un crossing-over n regiunea cuprins! ntre bucle, apar dou! tipuri de cromozomi normali. Dac! crossing-over-ul are loc n aceast! regiune, apar dou! tipuri de cromozomi, dintre care unul poart! o duplica"ie #i altul o dele"ie. A doua situa"ie corespunde prezen"ei centromerilor n interiorul celor dou! bucle(fig. 12.9. b). Un crossing-over, ce s-ar produce n regiunea dintre bucle va da na#tere la cromozomi nefunc"ionali, deoarece unul va con"ine doi centromeri, iar cel!lalt nici unul. n caz contrar vor ap!rea cromozomi func"ionali. O transla"ie poate mpiedica crossing-over-ul ntr-un segment ce a suferit aceast! deplasare.

Fig. 12.9. Conjugarea cromozomilor cu structur! heterozigot! n cazul unei transloca"ii: a- centromerul se g!se#te ntre cele dou! bucle; b- centromerul se g!se#te n interiorul buclei. 243

12.3. EFECTUL DE POZI!IE

n cursul ac"iunii lor, genele se influen"eaz! una pe alta. ntr-un capitol anterior s-a studiat tocmai aceast! interac"iune dintre gene. Este logic s! admitem c! schimbarea ordinii de cuplare a genelor, datorit! restructur!rilor cromozomice modific! ac"iunea genelor #i, n consecin"!, #i fenotipul. Efectul pe care-l produce o gen! n func"ie de pozi"ia ei pe cromozom s-a numit efect de pozi$ie. Termenul a fost introdus de A. Sturtevant (1925) #i tot el a fost cel care l-a demonstrat. Este vorba de o form! mutant! de Drosophila ce prezint! o reducere a num!rului de omatidii (fa"ete), nsu#ire numit! bar. nsu#irea bar este legat! de o gen! semidominant! B, localizat! pe cromozomul X. Cercet!rile de ast!zi pun la ndoial! prezen"a, n cazul de fa"!, a unui efect de pozi"ie. Efectul bar este datorat unor duplica"ii a regiunii 16A, notat! astfel pentru cromozomii uria#i din glandele salivare la Drosophila. Un crossing-over n aceast! regiune produce o triplare a segmentului, iar efectul de reducere ochiului este #i mai puternic #i se nume#te ultrabar. S-ar p!rea c! num!rul de doze a genei pot s! m!reasc! intensitatea fenomenului. Dar la acela#i num!r de doze, cteodat!, efectul nu este exact acela#i. Diferen"ele sunt puse pe seama efectului de pozi"ie a genei. Dac! exemplul de mai sus a pus unele semne de ntrebare, fiind greu s! se delimiteze efectul duplic!rii de efectul de pozi"ie al genei, exista la Drosophila alte exemple, unde efectul de pozi"ie este mai sigur: efectul mpestri"!rii (pana#urii). La Drosophila, prin ncruci#area dintre femele homozigote pentru gena white (ochi albi) cu masculi ce posed! alela normal! w+ (ochi ro#ii), dar supu#i unui tratament cu raze X, se ob"in indivizi cu ochi normali (ro#ii). Genera"iile ce se ob"in din ace#tia prezint! ns! omatidii ce au diferite nuan"e de ro#u. nsu#irea aceasta este nso"it! ntotdeauna de restructur!ri cromozomice n apropierea locusului genei white. Explica"ia fenomenului s-a f!cut cu ajutorul a dou! ipoteze: a) odat! cu restructurarea cromozomului s-a produs o muta"ie genic!; b) pozi"ia genei white #i p!streaz! locusul, dar este influen"at! de genele din apropiere, nou venite odat! cu restructurarea cromozomului. A doua ipotez! pare mai verosimil!. O dovad! #i mai conving!toare l ofer! exemplul clasic ce prive#te ac"iunea genei recesive hairy (h), localizat! n bra"ul stng al cromozomului 3 la Drosophila. n stare homozigot!, aceast! gen! determin! apari"ia peri#orilor numai pe unele p!r"i ale corpului, mai ales pe scutelum. Ea ac"ioneaz! n stare heterozigot! numai cnd are loc o transloca"ie ntre cromozomii III #i IV. n cazul revenirii n cromozomul III, unde este localizat! normal, ea #i restabile#te ac"iunea ini"ial!. Aceast! constatare a eviden"iat, n plus, faptul c! efectul de pozi"ie poate fi reversibil.
244

Efectul de pozi"ie este mai bine cunoscut pentru ac"iunea unor gene la Drosophila #i mai pu"in cunoscut pentru alte organisme. Fenomenul mpestri"!rii (pana#urii) la Oenothera blandina (ob"inut! de De Vries prin muta"ie din O. lamarckiana) sau Zea mays se pare c! nu este str!in de efectul de pozi"ie a genei ce r!spunde de aceast! nsu#ire. La Zea mays, efectul de pozi"ie a fost semnalat de Barbara Mc Clintock (1950-1955), identificnd doi loci care pot dirija efectul unor gene. Locusul Ac este activator #i se comport! dominant, locusul Ds de disociere este recesiv, nefiind func"ional. n absen"a lui Ac, B. Mc Clintock a demonstrat experimental c! activitatea genelor depinde de tipul de cromatin! a cromozomului. La porumb multe gene cu expresie fenotipic! diferit! sunt limitate de ac"iunea genelor Ac #i Ds, schimbndu-#i penetran"a #i expresivitatea. Genele Ac #i Ds, dar #i altele, #i pot schimba locusul n interiorul cromozomului, dar #i ntre cromozomi neomologi, fenomen denumit transpozi$ie, iar genele respective, gene transpozabile sau transpozoni. Lumea #tiin"ific! a privit cu nencredere existen"a elementelor transpozabile (mobile) n genom, dar timpul a demonstrat realitatea, B. Mc Clintock fiind laureat! a Premiului Nobel n anul 1983.

12.4. RESTRUCTUR"RILE CROMOZOMICE #I IMPORTAN!A LOR PENTRU EVOLU!IE

Restructur!rile cromozomice sunt determinate n majoritatea cazurilor de influen"a agen"ilor externi, fizici sau chimici, precum #i de o anumit! stare fiziologic! a organismelor. Ele se produc n dou! etape: ruperea unor fragmente din cromozomi #i reunirea lor ntr-un anumit mod, la acela#i sau la al"i cromozomi. Atunci cnd au loc n interfaz!, se numesc cromozomice, iar cnd au loc n timpul diviziunii, n stadiul de dou! cromatide ale cromozomului, cromatidice. Dup! modul de fragmentare #i alipire, exist! mai multe tipuri de restructur!ri (abera"ii) pe care le-am descris anterior. Oricare ar fi tipul de restructur!ri, ele stau la baza schimb!rii ordinii genelor n grupele de cupare, modific! transmiterea normal! a genelor la urma#i #i modific! fenotipul organismelor. Restructur!rile cromozomice, avnd rol n mecanismele de recombinare a genelor, contribuie la evolu"ia speciilor n natur! #i la formarea unor forme de plante #i animale cu nsu#iri valoroase. Selec"ia natural!, n lupt! pentru existen"!, #i selec"ia artificial!, de interes economic, va alege #i va perpetua indivizii care poseda reconstruc"ii cromozomice, fie n interesul individului din natur!, fie n interesul omului. Reconstruc"iile cromozomice produc varia"ii n cadrul speciei. Noua succesiune a genelor n grupele de linkage aduce modific!ri n ac"iunea lor, iar imposibilitatea conjug!rii cromozomilor n meioz!, asigur! izolarea noilor forme.
245

Binen"eles c! nu toate aceste forme supravie"uiesc #i c! este vorba numai de cele viabile #i adaptabile la condi"iile de existen"!. Se #tie c!, spre deosebire de autozomi, cromozomii sexului nu sunt omologi, dect n unele mici por"iuni. Cromozomul Y este de obicei mai mic #i aproape inert din punct de vedere genetic. Neomologia acestor cromozomi este atribuit! ast!zi restructur!rilor cromozomice, care au avut loc n interiorul genomului pe parcursul evolu"iei. Concluzia logic! ar fi c!, prin transloca"ie au fost transportate por"iuni din autozomi n cromozomii sexului. De aceea, la unele specii, num!rul cromozomilor sexului se m!re#te. Cromozomii sexului mpiedic! ncruci#area indivizilor din specii sau variet!"i str!ine.

246

CAPITOLUL 13 MUTA!IILE DE GENOM

Moto: "Natura nu are nici un respect pentru via!". Natura trateaz" via!a ca #i cum ar fi lucrul cel mai nensemnat din lume. Produs" de milioane de ori, ea este n cea mai mare parte anihilat" rapid sau aruncat" ca o prad", pentru ca o alt" via!" s" se poat" hr"ni. <S" nu chinui, s" nu pedepse#ti>. Natura ignor" aceast" porunc". F"pturile sale depind de torturile pe care #i le aplic" reciproc n lupta etern"" Erwin Schrdinger

Speciile de plante !i animale posed" n mod obi!nuit un num"r constant de cromozomi, n celulele somatice 2n, iar n cele sexuale, n. Num"rul de cromozomi a speciilor eucariote variaz" n limite foarte mari: Ascaris megalocephala var. univalens are 2n = 2, n timp ce radiolarul Aulacantha 2n = 1600. n cadrul unor genuri, s-a constatat c" unele specii au un num"r de cromozomi ce reprezint" un multiplu al unui num"r de cromozomi de baz" sau genom, care se noteaz" cu x. De exemplu, n cadrul genului Triticum, exist" specii ce posed" 14, 21 !i 42 de cromozomi, deci, un multiplu al genomului x = 7; n cadrul genului Rosa, speciile pot avea 14, 21, 28, 35, 42, 56 cromozomi, genomul n acest caz fiind x = 7 !.a. Celulele sexuale, con#innd cte un set cromozomic, sunt haploide. Num"rul haploid de cromozomi (n) nu corespunde ntotdeauna cu num"rul de cromozomi de baz" (x). De exemplu, la Triticum monococcum x = 7 !i n = 7, pe cnd la Triticum aestivum, x = 7 dar n = 21. Cnd num"rul haploid de cromozomi corespunde cu num"rul de cromozomi de baz" (genomul sau num"rul monoploid), num"rul cromozomilor din celulele somatice corespunde cu starea diploid! a organismului, iar cnd n celulele somatice exist" un multiplu al num"rului monoploid, determin" starea poliploid". Fenomenul de multiplicare a num"rului de genomuri se nume!te poliploidie. Poliploidia este considerat" o muta#ie de genom. Exist" cazuri cnd varia#ia num"rului de cromozomi se manifest" chiar la nivelul unor #esuturi diferite ale aceluia!i individ. Astfel, n cazul spanacului (Spinacea oleracea) care are 2n = 12, n celulele meristematice ale r"d"cinilor sau identificat n celule cu 2n = 24, 48 !i 96 cromozomi, iar la mamifere, n ficat, sunt celule cu num"r dublu sau quadruplu de cromozomi.

247

13.1. CLASIFICAREA VARIA!IILOR NUMERIC CROMOZOMICE

$innd seama de multitudinea de tipuri de varia#ii numeric cromozomiale, este necesar" clasificarea acestora, folosindu-se nomenclatura din literatura de specialitate. Aceast" clasificare este redat" n figura 13.1. Euploidia se mparte n: monoploidie, cnd celulele somatice ce posed" un num"r de cromozomi egal cu cel al genomului (x) !i poliploidie, cnd celulele somatice au un multiplu al num"rului de genomuri. monoploidia Euploidia poliploidia alopoliploidia (amphiploidia) Varia#ii numeric cromozomice nulisomia (2n-2) hipoploidia monosomia (2n-1) Aneuploidia trisomia (2n+1) hiperploidia tetrasomia (2n+2)
Fig.13.1 Clasificarea varia#iilor numeric cromozomice

perisoploidia autopoliploidia artioploidia

n func#ie de num"rul garniturilor cromozomice poliploizii pot fi triploizi (3x), tetraploizi (4x), pentaploizi (5x), hexaploizi (6x) etc., observndu-se c" unii con#in un num"r par de genomuri !i se numesc artioploizi (4x, 6x, 8x etc.), iar al#ii un num"r impar de genomuri, denumi#i perisoploizi (3x, 5x, 7x, 9x etc.). n func#ie de originea garniturilor cromozomice poliploidia poate fi de mai multe tipuri: autopoliploidia, cnd organismele posed" mai multe garnituri omoloage, rezultate prin multiplicarea genomului propriu; alopoliploidia, cnd organismul are mai multe garnituri cromozomice, dar de origine diferit", rezultate n urma hibrid"rilor interspecifice. Organismele care nglobeaz" genomurile a dou" sau mai multe specii, urmat" de o dublare a num"rului de cromozomi, se numesc amphiploide. Poliploidia este urmat" de o m"rire a cantit"#ii de ADN per nucleu. Exist" specii la care, de!i are loc o multiplicare a num"rului de genomuri, cantitatea de ADN nu se modific" acestea fiind denumite pseudopoliploide. Modificarea num"rului de cromozomi dintr-o garnitur" cromozomic", prin absen#a unuia sau a mai multor cromozomi sau prezen#a n plus a unuia sau
248

mai multor cromozomi, se nume!te aneuploidie. M"rirea num"rului de cromozomi n cadrul genomului se nume!te hiperploidie, iar mic!orarea num"rului de cromozomi, hipoploidie. Aneuploidia este nso#it" de modificarea cantit"#ii de ADN per nucleu, exist" ns" !i fenomenul de pseudoaneuploidie, cnd num"rul de cromozomi din genom variaz", ns" cantitatea de ADN r"mne constant".

13.2. EUPLOIDIA 13.2.1. Monoploidia

Denumit" !i haploidia adev"rat" sau euhaploidie, const" n faptul c" organismele posed" n celulele somatice un num"r de cromozomi egal cu num"rul de cromozomi de baz" sau un genom (2n = x). Avnd un singur genom n celulele somatice, monoploizii au o serie de caracteristici morfologice !i biologice, cum ar fi: sunt aproape complet sterili, ceea ce i face inutilizabili n practic". Avantajul monoploizilor const" n faptul c", n urma studiilor genetice, dac" prezint" caracteristici avantajoase, num"rul cromozomilor poate fi dublat, ob#inndu-se linii complet homozigote. Dup" testarea capacit"#ii combinative a liniilor respective, unele pot fi folosite ca genitori n ob#inerea de hibrizi. Utilizarea monoploizilor scurteaz" foarte mult timpul de ob#inere a liniilor total homozigote, de la 6-8 ani dup" metoda clasic", la numai doi ani. n mod natural, monoploizii apar cu o frecven#" redus", de la 0,01% pn" la 6%, pe urm"toarele c"i: a) ginogenez", cnd embrionii se dezvolt" din oosfere nefecundate; b) androgenez", cnd embrionii rezult" din celule mascule (f"r" fecundare); c) apogamie, cnd embrionii rezult" din sinergide sau antipode. Avnd n vedere importan#a monoploizilor, monoploidia a fost indus" prin iradierea polenului cu raze X sau UV, pentru a distruge unul din cei doi nuclei spermatici !i n felul acesta, reducndu-se posibilitatea fecund"rii oosferei, cre!te !ansa apari#iei monoploizilor sau inactivarea ambilor nuclei spermatici cu diferite substan#e chimice, caz n care, oosfera nefecundat" poate forma un embrion monoploid. Din punct de vedere morfo-fiziologic, monoploizii, comparativ cu formele normale din care au provenit, au o vigoare redus", cre!tere lent", grad ridicat de sterilitate. Diviziunea mitotic" la organismele monoploide prezint" mari modific"ri, dar mai ales meioza, pe parcursul c"reia, nerealizndu-se sinapsa cromozomilor, deoarece nu exist" omologie ntre cromozomi, nu se formeaz" celule sexuale sau cele ce se formeaz" sunt neechilibrate genetic, ceea ce determin" sterilitatea monoploizilor. Haploidia este fenomenul de reducere la jum"tate a num"rului de cromozomi n celulele somatice. Dup" modul cum rezult" din diploizi, tetraploizi,
249

hexaploizi etc., haploizii pot fi: monoploizi, diploizi, triploizi etc. Haploidia corespunde numai ntr-un singur caz cu monoploidia, atunci cnd reducerea la jum"tate a num"rului de cromozomi are loc la organismele diploide (2n = 2x). Haploidia poate fi ntlnit" ca fenomen natural, la unele Bryophitae !i Talophitae, la masculii unor insecte (albine, viespi, termite), la unele metazoare !i ciuperci (Aspergillus, Fusarium etc.) !i n gametofitul plantelor superioare. Cnd haploidia este util", este provocat" prin androgenez! sau prin eliminarea de cromozomi. Haploizii !i monoploizii au o deosebit" importan#" teoretic" !i practic": - avnd un singur set de cromozomi, studiul fiec"rui cromozom a furnizat informa#ii asupra valorii genetice a unui genom; - din punct de vedere citologic, monoploizii ofer" posibilitatea cunoa!terii modului de segregare a cromozomilor neperechi, n meioz", realizarea sau nu a sinapsei, arat" gradul de nrudire dintre specii; - diploidizarea monoploizilor duce la realizarea liniilor complet homozigote, ntr-un timp scurt; - monoploizii androgeni ofer" posibilitatea studiului efectului citoplasmei str"ine asupra genotipului, transformarea ntr-un timp scurt a liniilor consangvine normale n linii androsterile. n ultimul timp, studiul acestor forme preocup" colective mari de geneticieni !i amelioratori, deoarece ob#inerea de hibrizi pe calea monoploidiei este simplificat" !i de scurt" durat".

13.2.2. Poliploidia
Primele cercet"ri referitoare la fenomenul de poliploidie au fost efectuate de I. I. Gherasimov (1889) care a dublat num"rul de cromozomi la alga Spyrogira, prin sc"derea temperaturii n timpul metafazei. Denumirea de poliploidie a fost introdus" de G. Winkler (1916), pentru a desemna plantele ce posedau un num"r multiplicat de genomuri. n func#ie de originea garniturilor cromozomice, poliploidia poate fi de dou" feluri: autopoliploidia (autoploidia) !i alopoliploidia (aloploidia). 13.2.2.1. Autopoliploidia este multiplicarea garniturilor de cromozomi pe seama aceluia!i num"r de baz" al unei specii. Multiplicarea este cauzat" de tulbur"ri n procesele de diviziune mitotic" sau meiotic" !i anume: - n diviziunea meiotic", din cauza nereducerii cromatice se formeaz" game#i cu acela!i num"r de cromozomi, egal cu cel din celulele somatice. Un asemenea gamet diploid, n procesul de fecundare cu un al doilea gamet, normal, haploid, va forma un zigot, respectiv un organism triploid (2n = 3x). Dac" ambii game#i sunt diploizi se va forma un organism tetraploid (2n = 4x). - n diviziunea mitotic" pot interveni cauze care s" opreasc" formarea fusului nuclear, migrarea cromozomilor spre cei doi poli ai celulei ne mai avnd loc. Ca urmare, nu se mai formeaz" celulele fiice, cromozomii, n num"r dublu, r"mn n aceea!i celul". Dac" fenomenul are loc la nceputul form"rii zigotului,
250

organismul devine tetraploid iar game#ii pe care i va forma vor fi diploizi. Ace!tia vor men#ine mai departe autotetraploidia. - n diviziunea mitotic" ntr-un singur organ, de exemplu al unei plante, se va produce la o celul" fenomenul de dublare a num"rului de cromozomi. Dintr-o astfel de celul", cu un num"r dublu de cromozomi, poate lua na!tere o forma#iune vegetativ", o ramur", care va forma n flori game#i diploizi. Prin autofecundare vor ap"rea forme tetraploide. Mai recent J. A. Serra (1968) consider" ca prim factor al form"rii autopoliploizilor endomitoza, n care nu se formeaz" fusul de diviziune, membrana nuclear" nu se fragmenteaz", astfel c" un nucleu diploid devine 4n, 8n, 16n etc. Se ntlnesc dou" tipuri de plante autopoliploide: Perisoploide, cu un num"r impar de garnituri cromozomice (3x, 5x, 7x). Din cauza num"rului impar de genomuri reparti#ia echilibrat" a cromozomilor n game#i nu este posibil", astfel de plante vor produce game#i sterili, supravie#uind numai prin reproducerea vegetativ". Artioploide, cu un num"r par de garnituri cromozomice (2x, 4x, 6x). La aceste plante meioza decurge normal. Cu toate acestea, cromozomii omologi, n profaza meiozei, se asociaz" n mod diferit, formnd univalen#i. Dac" polivalen#ii au un num"r impar de cromozomi, reparti#ia regulat" a cromozomilor la cei doi poli ai celulei devine imposibil" !i, ca urmare, game#ii forma#i sunt sterili. Prezen#a sterilit"#ii la un num"r mare de plante autopoliploide a determinat pe unii autori s" considere c" exist" o corela#ie ntre autopoliploide, sterilitate !i nmul#irea vegetativ" a plantelor. La genurile Chrysanthemum, Polygonum !i Discorea, formele diploide nu au rizomi, n timp ce cele tetraploide, hexaploide !i octoploide au. Din cauza sterilit"#ii ele s-au men#inut pe cale vegetativ". Meioza la autotetraploizi este variabil", putnd decurge normal, dar existnd !i posibilitatea apari#iei multor anomalii. Aceste anomalii se datoreaz" prezen#ei n profaza I a cte patru cromozomi omologi, deci n stadiul de zigonem" vor forma sinaps" patru monovalen#i, nu doi (bivalen#i). n zigonema pot rezulta urm"toarele asocieri: tetravalen#i, trivalen#i + univalent, bivalen#i + doi univalen#i, patru univalen#i. n meioza autotetraploizilor, datorit" asocierii ntmpl"toare a cromozomilor, are loc o segregare fenotipic" !i genotipic", diferit" de cea a diploizilor. La un diploid heterozigot Aa, n F2 segregarea genotipic" este 1/4 AA : 2/4 Aa : 1/4 aa, iar cea fenotipic", dominant, recesiv. n descenden#a autogam" a unui tetraploid AAaa, n func#ie de reparti#ia alelelor n cei patru cromozomi, pentru acela!i locus pot apare cinci genotipuri: AAAA (quadruplex), AAAa (triplex), AAaa (duplex), Aaaa (simplex), aaaa (nulliplex). Game#ii produ!i de un autotetraploid duplex AAaa (n lipsa crossingover-ului), pot avea urm"toarea structur" genotipic" !i frecven#": 1 AA : 4 Aa : 1 aa. ntlnirea ntmpl"toare a acestor game#i, n cazul autopoleniz"rii, n F2 segregarea genotipic" va fi: 1 AAAA : 8 AAAa : 18 AAaa : 8 aaaA : 1 aaaa, iar cea fenotipic", 35 A : 1 a.
251

Din cauza deficien#elor ce apar n meioz", autopoliploizii nu au, n general, !anse de a supravie#ui, a!a c" rolul lor n evolu#ie este mai pu#in important. Exist" specii ale unor genuri care au ap"rut totu!i pe calea autopoliploidiei: n genul Chrysanthemum, specii ce au 18, 36, 54, 72, !i 90 de cromozomi, n genul Solanum, specii ce au 24, 36, 48, 60, 72, 96, 108, 120 !i 144 cromozomi precum !i alte specii ale genurilor Medicago, Arachis, Phleum, Festuca, Poa !.a. 13.2.2.2. Alopoliploidia (amphipoliploidia) este tipul de poliploidie care apare n urma hibrid"rii ntre specii, prin adi#ia de garnituri cromozomice str"ine. Diferen#a dintre genomuri face ca ntre garniturile de cromozomi a alopoliploizilor s" nu existe omologie. Acestea sunt diferite att ca num"r de cromozomi ct !i ca tip de gene. Cnd alopoliploidul nsumeaz" cele dou" garnituri cromozomice somatice ale p"rin#ilor, el se nume!te amphidiploid. Alopoliploizii sunt n majoritatea cazurilor sterili. Din cauza neomologiei dintre cromozomi, n profaza meiozei fiecare cromozom se comport" independent, ca univalent. n anafaza meiozei, ei se distribuie n mod neregulat la cei doi poli, a!a nct n game#i va ap"rea un num"r diferit de cromozomi. Game#ii vor fi sterili, n afar" de cazul unei omologii par#iale, cnd fertilitatea lor va fi sc"zut". Alopoliploizii care nsumeaz" cele dou" garnituri diploide de cromozomi a celor dou" specii parentale se numesc amphidiploizi. Ei sunt fertili deoarece fiecare cromozom avnd omologul s"u, are cu cine s" se conjuge n meioz" !i formeaz" bivalen#i pentru cromozomii fiec"rei specii n parte.

Fig. 13.2. Fructul !i cromozomii de la Raphanus sativum (A) !i Brassica oleracea (B) !i a ctorva poliploizi (C,D,E,F,G) ob#inu#i prin ncruci!area dintre A !i B. 252

Dac" din game#ii care particip" la fecundare unul este haploid iar cel"lalt diploid, se va forma un alotriploid. Acesta este steril deoarece cromozomii unei specii va forma bivalen#i, dar a celeilalte vor r"mne univalen#i !i se vor distribui neuniform n meioz" la polii celulei. Amphidiploidia prezint" importan#" att pentru men#inerea ei n natur" ct !i pentru activitatea practic" a omului. Sunt citate n literatura de specialitate numeroase exemple privind apari#ia spontan" sau dirijat" de om a amphidiploizilor. L. Dicby (1912) descrie apari#ia unui amphidiploid, Primula kevensis (cu 2n = 36) prin ncruci!area dintre Primula floribunda (2n = 18) cu Primula verticillata (2n = 18). G. D. Karpecenko (1927) ob#ine un amphidiploid Raphanobrassica (2n = 36) prin ncruci!area dintre Raphanus sativus (2n = 18) cu Brassica oleracea (2n = 18) (figura 13.2.). J. Gregar !i F. Sansome (1930) ob#in un amphidiploid Phleum pratense hexaploidum (2n = 42) ncruci!nd Phleum pratense (2n = 14) cu Phleum alpinum (2n = 28). A. Mntzing (1932) ob#ine amphiploidul Galeopsis tetrahit (2n = 32) din ncruci!area lui Galeopsis pubescens (2n = 16) cu Galeopsis speciosa (2n = 16). H. A. Jones !i A. E. Clarke (1942) ncruci!nd Allium cepa (2n = 16) cu Allium fistulosum (2n = 16) au ob#inut amphidiploidul cu 2n = 32 (fig. 13.3.).

Fig. 13.3. Amphiploidia la Allium cepa: A-cromozomii la Allium cepa; B-cromozomii la amphiploid; C-cromozomii la Allium fistulosum (dup" Jones !i Clarke, 1942)

Acestea constituie cteva exemple prin care omul, folosind amphidiploidia poate ob#ine forme noi de plante. Dac" formele noi prezint" avantaje pentru produc#ie, ele pot fi utilizate ca soiuri. Amphidiploidia natural" poate constitui puncte de plecare n geneza unor specii noi, dar numai n cazul n care ea modific" ereditatea n avantajul perpetu"rii lor. n caz contrar, dispar f"r" a l"sa urme. Alopoliploizii se pot ob#ine din ncruci!area a dou", dar !i a mai multor specii de plante. De obicei, hibrizii dintre dou" specii sunt sterili, numai cei amphidiploizi sunt fertili. Ace!tia, ncruci!a#i cu o alt" specie diploid" produc un hibrid alotriploid, care de asemenea este steril. Hibridul alotriploid poate deveni
253

fertil n cazul n care reu!im s"-i dubl"m garnitura de cromozomi prin autopoliploidie. n func#ie de modul cum ia na!tere, amphidiploidia poate fi de trei tipuri: amphidiploidie genomic", amphidiploidie segmental", autoalopoliploidia. Amphiploidia genomic" sau clasic" este rezultatul hibrid"rii ntre specii cu genomuri diferite (ex. AA x BB) !i ca urmare, cromozomii uneia nu realizeaz" sinapse cu cromozomii celeilalte, planta fiind steril". Prin dublarea num"rului de cromozomi a hibridului din genera#ia F1 se ob#in amphidiploizi fertili. Amphidiploidia segmental" este tipul de amphidiploidie care provine din hibridarea unor specii cu genomuri par#ial sau complet omoloage, astfel c", dup" ce se realizeaz" dublarea num"rului de cromozomi, n meioz" cromozomii nu se mperecheaz" normal, ci formeaz" tetravalen#i, trivalen#i !i univalen#i, determinnd un anumit grad de sterilitate. Autoalopoliploidia este fenomenul prin care se dubleaz" num"rul de cromozomi la un amphidiploid. De exemplu, amphidiploidul AABB poate deveni un autoalooctoploid, AAAABBBB. Alopoliploidia poate determina diferite grade de sterilitate, deoarece tipurile de abateri de la mersul normal al meiozei sunt foarte variate. Pentru a putea n#elege mai bine cum decurge meioza la alopoliploizi este necesar s" descriem dou" fenomene: autosindeza !i alosindeza. Prin autosindez! sau autoconjugare se n#elege procesul de conjugare, ntre ei, a cromozomilor de la fiecare p"rinte n parte. S" presupunem c" un aloploid ar poseda un genom format din garniturile celor doi p"rin#i, AA !i BB. La o autosindez" A se conjug" cu A !i B cu B. Prin alosindez! se n#elege conjugarea cromozomilor care provin de la p"rin#i deosebi#i. Folosindu-ne de genomul notat mai sus AABB, o parte din cromozomii speciei A se conjug" cu cromozomii speciei B.

13.3. MODIFIC"RILE MORFOLOGICE #I FIZIOLOGICE ALE POLIPLOIZILOR

Poliploidia atrage modific"ri fenotipice foarte variate. Variate ca propor#ie, ncepnd cu unele foarte discrete, greu de sesizat !i terminnd cu altele foarte vizibile, pn" la gigantism; variate ca efect vital, producnd debilitatea organismului sau vigoarea lui sporit". Modific"rile pot afecta ntregul organism sau numai o parte din el. La plante, tetraploizii prezint" foarte frecvent organe vegetative !i de reproducere mult mai mari n compara#ie cu diploizii din care sau format. n unele cazuri efectul este ns" invers a!a cum este la tomate unde tetraploizii sunt de dimensiuni mai mici dect plantele diploide. O caracteristic" general" a poliploizilor este cre!terea n dimensiune a celulelor. Este un caracter dup" care se poate pune n eviden#" gradul de poliploidie al plantelor. Stomatele, n general, sunt mai mari la plantele tetraploide dect la cele diploide. La Crepis capilaris (2n = 6) exist" o corela#ie direct" ntre
254

m"rimea celulelor !i num"rul de garnituri cromozomice ce se g"sesc n nucleul acestora. Cre!terea n dimensiune a celulelor atrage dup" sine, n unele cazuri, sc"derea num"rului de celule din #esutul respectiv. Acest fapt s-a observat, de exemplu, n frunzele mu!chiului Funaria. M"rirea volumului celulelor atrage dup" sine !i modificarea raportului dintre substan#ele care se g"sesc n celule !i de aici !i modific"ri de ordin fiziologic. Frunzele plantelor poliploide pot prezenta modific"ri vizibile n ceea ce prive!te forma lor, m"rimea sau culoarea. La tetraploizi, n general, frunzele sunt mai groase, mai late !i de o culoare mai nchis". Cre!terea n dimensiuni a frunzei este nso#it" foarte adesea de sc"derea num"rului de frunze pe plant". Cre!terea n m"rime a ligulei la graminee, face posibil" distingerea plantelor poliploide de cele diploide normale. Exist" de asemenea, o corela#ie direct" ntre gradul de poliploidie a plantei !i dimensiunea gr"unciorilor de polen !i a num"rului porilor germinativi ai polenului. Pe aceast" constatare se bazeaz" !i una din metodele de determinare a gradului de poliploidie la plante. Tulpinile plantelor poliploide prezint" de asemenea n numeroase cazuri dimensiuni mai mari !i o ramificare mai abundent". O alt" caracteristic", poate cea mai des ntlnit" a plantelor poliploide, este cre!terea dimensiunilor florilor !i semin#elor. Paralel cu aceasta, scade num"rul lor pe plant". Toate modific"rile morfologice observate la poliploizi sunt corelate de modific"ri fiziologice !i genetice. Faptul c" poliploizii apar n natur" n condi#ii neobi!nuite, la limitele de r"spndire a arealului ocupat de diferite genuri, ei sunt dota#i cu anumite nsu!iri de rezisten#" la factorii nefavorabili.

13.4. POLIPLOIDIA NATURAL" #I ROLUL EI N EVOLU!IE

Hugo de Vries (1901) a studiat ndeaproape specia Oenothera lamarckiana !i a constatat c" ea se caracterizeaz" printr-un polimorfism accentuat. Una dintre aceste forme, cu dimensiuni foarte mari a denumit-o Oenothera gigas. Gates, n 1909 a constatat c" aceast" form" avea un num"r dublu de cromozomi (28) fa#" de specia ini#ial". H. Nilsson Ehle (1935) descoper" un plop gigantic, care un an mai trziu este determinat de Mntzing ca triploid. Scherz a observat un caz de poliploidie la vi#a de vie, Riesling de Mosela cu 4n = 76 cromozomi fa#" de soiul Riesling, ce avea 2n = 38 cromozomi. Noul soi se prezint" ca o mutant" cu struguri cu boabe mari, cu coacere mai timpurie !i cu procent de zah"r mai mare. Navasin (1929) face o leg"tur" ntre fenomenul de poliploidie !i arealul ocupat de anumite specii !i ajunge la concluzia c" poliploizii apar mai frecvent la
255

indivizii care au dep"!it arealul speciei. Unii autori au c"utat s" stabileasc" cu aproxima#ie procentul de plante poliploide, r"spndite n natur". Astfel, Tischler sus#ine c" formele poliploide sunt foarte r"spndite n natur". Studiind aproape 90% din flora Europei centrale, constat" c", din 652 de genuri, erau diploide 35,8% iar 64,2% genuri erau poliploide. Tot Tischler ajunge la concluzia c" poliploizii au o r"spndire geografic" mai frecvent" n regiunile nordice, regiunile arctice, de!erturi, regiuni alpine. Socolovscaia !i Strecova, cercetnd flora alpin" a Pamirului !i Arcticei observ" c" 85% din plante sunt forme poliploide pentru zona alpin" a Pamirului !i 92,4% pentru condi#iile din Arctica. Prin determinarea num"rului de cromozomi, s-a constatat c" diferite specii ale unor genuri, nu sunt altceva dect serii poliploide care au ap"rut n mod natural. La genul Triticum, se observ" c" speciile au ca num"r de cromozomi un multiplu de 7: Triticum monococcum 2n = 14 cromozomi Triticum durum 2n = 28 cromozomi Triticum aestivum 2n = 42 cromozomi La genul Rumex, speciile au un multiplu de 10 cromozomi: Rumex alpinus 2n = 10 cromozomi Rumex domesticus 2n = 20 cromozomi Rumex patientia 2n = 30 cromozomi Rumex cardifolius 2n = 40 cromozomi Rumex hymenosepalus 2n = 50 cromozomi. La genul Aegilops !i Hordeum g"sim specii cu un num"r de 7, 14, 21 cromozomi, la genul Agropyron 7, 14, 21, 28, 35, la genul Solanum 12, 24, 36, 48, 60, 72 etc. Poliploidia este deci foarte frecvent" n natur". Totu!i plantele de cultur" prezint" mai des cazuri de poliploidie dect cele s"lbatice. Aceast" constatare i-a f"cut pe unii cercet"tori s" trag" concluzia c" evolu#ia plantelor de cultur" de la formele s"lbatice s-a f"cut prin multiplicarea num"rului de cromozomi. Apari#ia procesului sexual a f"cut ca primul zigot s" constituie prima celul" poliploid" (diploid"), iar endospermul angiospermelor este un triploid. A. Mntzing arat" c", n general, la speciile perene exist" un num"r mai mare de cromozomi dect la speciile anuale ale aceluia!i gen. De aici, trage concluzia c" un num"r mare de specii au provenit din forme anuale, cu un num"r mai mic de cromozomi. De asemenea, el trage concluzia c" exist" o corela#ie pozitiv" ntre num"rul de cromozomi !i durata vie#ii unei plante. De exemplu, porumbul autotetraploid ob#inut pe cale experimental" este peren, n timp ce formele anuale sunt diploide. Sorgul anual (Sorgum sudanensis) are n = 10 cromozomi, pe cnd sorgul peren (Sorgum hallepense) are n = 20 cromozomi. Formele anuale de Taraxacum sunt diploide, n timp ce formele perene sunt
256

poliploide. Sunt ns" !i excep#ii, cnd la speciile perene num"rul de cromozomi este egal sau chiar mai mic dect la speciile anuale. n evolu#ia plantelor autogame !i a animalelor care se nmul#esc asexuat, un rol important l-a jucat autopoliploidia. La plantele alogame sau la animalele ce se reproduc sexuat, acest rol l-a jucat alopoliploidia. Tranzi#iile ntre auto !i alopoliploidie sunt continui !i de aceea este greu s" le descoperim originea. Numai autopoliploidia poate fi absolut", n timp ce la alopoliploidie genomurile nu pot fi ntotdeauna complet diferite. Indica#ii pentru descoperirea lor le poate da analiza meiozei: dac" la o specie tetraploid" exist" quadrivalen#i n meioz", este vorba de autopoliploidie, dac" exist" numai bivalen#i, este prezent" alopoliploidia. Alopoliploidia a jucat n evolu#ie un rol mult mai mare dect autopoliploidia. O dovad" c" ntr-adev"r unele specii noi !i au originea n alopoliploidizarea unor specii vechi sunt resintezele de specii, pe care omul le poate face pe cale artificial". A. Mntzing (1932) a resintetizat, pe cale artificial", specia Galeopsis tetrahit (2n = 32), ncruci!nd Galeopsis pubescens (2n = 16), cu Galeopsis speciosa (2n = 16). Hibridul a fost numit Galeopsis pseudotetrahit !i este un alotetraploid. E. S. Mac Fadden !i E. R. Sears (1944) ncruci!nd Triticum dicoccoides (2n = 28) cu Aegylops squarrosa (2n = 14) au resintetizat specia Triticum spelta (2n = 42). H. Kihara !i F. Lilienfeld (1949) au resintetizat specia Triticum aestivum (2n = 42), ncruci!nd speciile Triticum persicum (2n = 28) cu Aegylops squarrosa (2n = 14). n literatura de specialitate se ntlnesc numeroase exemple de acest fel.

13.5. POLIPLOIDIA ARTIFICIAL"

Cunoa!terea fenomenului de poliploidie a contribuit la elaborarea unor metode speciale pentru ob#inerea pe cale artificial" a poliploizilor. Oricare ar fi metoda, scopul este de a ac#iona asupra diviziunii celulelor sau prin procesul de hibridare, pentru a provoca multiplicarea garniturilor de cromozomi. Nu toate plantele se comport" la fel la poliploidizare. Acesta depinde de metod", specie, soi sau chiar individ. Dau rezultate mai bune: - plantele cu un num"r mic de cromozomi; - plantele alogame; - plantele folosite mai mult pentru mas" verde, dect pentru fructe; - plantele ce se nmul#esc pe cale vegetativ"; Poliploizii ob#inu#i pe cale experimental" prezint" inconvenientul de a nu putea fi folosi#i imediat n produc#ie. De obicei, au o fertilitate sc"zut", produc fructe pu#ine. Mul#i nu sunt rezisten#i la condi#iile adverse ale mediului, la atacul d"un"torilor sau au un ritm de cre!tere lent. Unii, din contra, prezint" modific"ri valoroase !i utile pentru practica agricol" !i horticol", cum ar fi de exemplu un procent ridicat de morfin" la mac, de mentol la ment", un procent mai mare de mas" verde la trifoiul ro!u tetraploid sau un procent ridicat de zah"r la sfecla triploid".
257

Metode de inducere a poliploidiei. Exist" ast"zi diferite metode pentru producerea poliploizilor: metode chimice, fizice !i biologice. - Metoda altoirii, cost" n altoirea a dou" plante din genuri sau specii deosebite !i apoi sec#ionarea locului de concre!tere. Din sec#iune apar muguri !i apoi l"stari, din care unii sunt tetraploizi. Metoda a fost elaborat" de H. Winkler (1916), W. A. Greenleaf (1938) la genul Nicotiana !i E.W. Lindstrom !i K. Koos (1931) la tomate (dup" Raicu P., 1980). - Metoda centrifug"rii plantelor a fost elaborat" de D. Kostoff (1937). Ea se bazeaz" pe ac#iunea for#ei de centrifugare asupra celulelor n diviziune, fiind mpiedica#i cromozomii s" migreze la polii celulei. Se aplic" pe cale restrns" deoarece este greoaie !i d" rezultate slabe. - Metoda ac#ion"rii cu unele insecte parazite asupra vrfurilor de cre!tere a plantelor. Se folosesc diferite insecte care se hr"nesc prin n#eparea vrfurilor vegetative a plantelor. Ac#iunea mecanic", n#ep"turile, produc perturb"ri n diviziunea celulelor din #esuturi. Metoda se aplic" pe cale restrns". - Metoda !ocurilor de temperatur" se folose!te cu scopul de a influen#a zigotul plantelor n primele stadii ale diviziunii. A fost elaborat" de L. F. Randolph (1932) !i aplicat" la porumb. Imediat dup" fecundare, planta de porumb a fost #inut" circa 24 ore la temperaturi de 440 C. Nici aceast" metod" nu se folose!te pe scar" larg". Folosirea substan#elor chimice (alcaloizi, narcotice etc.) a dus la elaborarea metodelor chimice folosite !i ast"zi intens la ob#inerea poliploizilor. Acestea !i manifest" ac#iunea, fie blocnd cromozomii n metafaz", fie oprind formarea membranelor ce ar trebui s" separe celulele aflate n diviziune. Din prima categorie fac parte n primul rnd colchicina, acenaftenul, monobromnaftenul !.a.; din a doua categorie fac parte, paradiclorbenzen, monoclorbenzen !.a. Dintre toate, cea mai folosit" este colchicina. A. F. Blakeslee !i A. S. Avery (1937) au elaborat diferite tehnici de aplicare a tratamentului cu colchicin" la plante !i au ob#inut rezultate remarcabile la genurile Nicotiana, Mirabilis, Trifolium !.a. n general se folosesc solu#ii foarte slabe de colchicin", administrate la diferite organe sau p"r#i din acestea. Se pot trata semin#e, prin mbibarea lor n solu#ii de colchicin" 0,02% 0,05%, timp de 24-48 ore. Solu#ia de diferite concentra#ii poate fi administrat" pe vrfurile vegetative de tulpin" sau r"d"cin". Cu solu#ie de colchicin", se pot trata !i plante mici, tuberculi, buta!i etc. Cu ajutorul metodelor chimice, n diferite #"ri, s-au ob#inut forme foarte valoroase care se folosesc n cultur"; n Suedia s-au ob#inut dou" soiuri de trifoi. n Germania au fost create linii poliploide la Galega !i Seradela (plante de nutre#). n Japonia se cultiv" un pepene verde triploid; n diferite #"ri, !i la noi, se cultiv" sfecl" pentru zah"r triploid"; de asemenea, exist" n cultur" forme valoroase poliploide de secar", hri!c", bumbac; la plante horticole rezultate bune s-au ob#inut la plante ornamentale (narcise, stnjenei, dalii, cyclamen !.a), pomi (m"r, p"r, l"mi !.a) !i vi#" de vie.
258

13.6. POLIPLOIDIA LA ANIMALE

Spre deosebire de regnul vegetal, n regnul animal poliploidia e mai pu#in r"spndit". Ea se observ" mai ales la animale ce se nmul#esc pe cale partenogenetic" sau asexuat". La animalele cu nmul#ire sexuat", poliploizii care apar prin ncruci!are cu formele diploide revin la forma diploid". Analizndu-se num"rul de cromozomi la speciile unor genuri de animale s-a demonstrat evolu#ia lor prin poliploidie. La mamifere (!oareci sau iepuri de cas"), cu ajutorul !ocurilor de temperatur" se pot ob#ine ovule diploide. Zigo#ii ce se formeaz" sunt triploizi, se dezvolt" pn" n stadiul de blastul", dup" care mor. La hrciog, speciile Cricetus !i Cricetulus griseus au 2n = 22 cromozomi, iar Mezocricetus euratus 2n = 44. Aceasta din urm" nu este altceva dect un tetraploid care a ap"rut pe cale natural" din primele. La crustacee, exist" la aceea!i specie Daphnia pulex forme sexuate cu 2n = 8 cromozomi !i forme partenogenetice cu 2n = 24 cromozomi. La Philopode, Artemia salina prezint" forme partenogenetice facultative cu 42 !i 48 cromozomi !i alt" form" numai partenogenetic" cu 2n = 168 cromozomi. La fluturi, s-au ob#inut amphidiploizi la genul Bombyx prin ncruci!area speciilor Bombyx mori cu Bombyx mandarina. Mai nti s-au ob#inut autopoliploizi partenogenetici femeli la Bombyx mori care au fost apoi ncruci!a#i cu masculi din specia Bombyx mandarina. La genul Ascaris exist" specii diploide univalens !i tetraploide bivalens: Ascaria megalocephala univalens are 2n = 2, iar specia bivalens 2n = 4; specia Ascaris lumbricoides univalens are 2n = 24, iar specia bivalens 2n = 48. n prezent, cercet"rile privind poliploidia la animale ocup" o extindere mare. Se lucreaz" la elaborarea unor tehnici corespunz"toare pentru ob#inerea poliploizilor. Mul#i cercet"tori se ocup" de animale inferioare cum sunt de exemplu infuzorii !.a.

13.7. ANEUPLOIDIA
Aneuploidia numit" !i heteroploidie sau polisomie este modificarea num"rului diploid de cromozomi prin ad"ugarea sau lipsa unuia sau a mai mul#i cromozomi. Dup" num"rul de cromozomi n plus sau n minus, ea se clasific" astfel: - nulisomie - monosomie - trisomie - tetrasomie - dubl" trisomie
259

2n-2 2n-1 2n+1 2n+2 2n+1+1

Apari#ia de celule aneuploide se explic" prin abateri de la segregarea normal" a perechilor de cromozomi n timpul diviziunii. Ele apar att n celulele somatice ct !i n cele sexuale, de aceea aneuploidia poate fi att mitotic" ct !i meiotic". Mai frecvent" este aceea meiotic", bivalen#ii putnd fi repartiza#i numai ntr-o celul", iar n alta lipsind. Cnd garnitura diploid" are un cromozom n plus, aneuploidul va avea formula 2n+1, cnd va avea un cromozom n minus va avea formula 2n-1. n alte cazuri aneuploidul 2n+1 (trisom) mai poate primi un cromozom suplimentar !i atunci va avea formula 2n+2 (tetrasomi). Dac" ad"ugarea de cromozomi suplimentari se face n dou" perechi de cromozomi atunci se formeaz" un dublu trisom 2n+1+1. Cnd se pierde o pereche de cromozomi omologi se formeaz" un nulisom 2n-2. Primul studiu de aneuploidie la plante a fost f"cut n 1924 de c"tre Blakeslee !i Belling la Datura stramonium. Aceast" plant" are 2n = 24 cromozomi, deci un trisom, cu 24 + 1 cromozomi. Spre deosebire de plantele obi!nuite, avea capsulele mai mici, !i #epi mai mici. Executnd diferite ncruci!"ri au ob#inut 12 tipuri de trisomi, ad"ugnd pe rnd cte un trisom pentru fiecare pereche de cromozomi. Toate aveau fenotipuri bine distincte. La animale, aneuploidia a fost descoperit" la Drosophila de c"tre Bridges. Cazul a fost citat la capitolul referitor la ereditatea sexului, unde s-a prezentat un caz de aneuploidie datorat nondisjunc#iei primare n meioz" a cromozomilor sexului. Din ncruci!area drosofilei femele cu ochi albi cu masculi cu ochi ro!ii, au ap"rut forme nea!teptate, femele cu ochi ro!ii !i masculi cu ochi albi. Aceasta din cauz" c" n urma nondisjunc#iei cromozomilor X au ap"rut ovule ce aveau XX !i altele nici unul. Primele, fecundate cu spermatozoizi normali, au produs trisomi XXX !i XXY. Zigo#ii cu autosomi normali dar cu un singur X sau Y au fost monosomi, primii, masculi sterili, ultimii neviabili. n aceste cercet"ri, Bridges a ar"tat c" se pot ad"uga cromozomi suplimentari !i la cromozomii autosomi. Lipsa cromozomilor mari II !i III determin" letalitatea, a celor din perechea a IV-a, foarte mici, influen#eaz" n sens negativ insecta, f"r" a provoca neap"rat moartea. Dup" cum se adaug" un cromozom la autosomii IV sau lipsesc, aneuploidul se nume!te triplo IV sau haplo IV. Modific"rile acestea atrag modific"ri fenotipice: Drosophila haplo IV este de dimensiuni mai mici dect tipul s"lbatec !i cu fertilitate sc"zut"; Drosophila triplo IV, din contra, are dimensiunile corpului mai mari. Astfel de forme aneuploide au fost studiate !i la alte organisme, n special la plante: cium"faie, tutun, porumb, tomate, cereale. Foarte multe forme aneuploide nu sunt viabile sau, unele viabile sunt mai greu de sesizat. Cercet"rile din domeniul aneuploidiei au o mare importan#" teoretic" !i deschid perspective largi pentru ameliorarea plantelor. nlocuirea unor cromozomi duce la cunoa!terea importan#ei lor ereditare !i a genelor ce le con#in. Prin aneuploidie se schimb" num"rul de cromozomi dar nu !i grupele de nl"n#uire. Modificarea genomului, corelat" cu modific"rile fenotipice constituie o cale de ob#inere a unor noi soiuri.
260

Aneuploidia ajut" !i la nlocuirea sau ad"ugarea unor cromozomi de la unele soiuri de plante de cultur", cu cromozomi de la alte soiuri ce con#in gene valoroase. S-au ob#inut n acest sens diferite forme de cereale superioare unora existente n cultur". La gru, s-au transmutat cromozomi de la alte specii ce con#ineau gene r"spunz"toare de anumite nsu!iri (rezisten#" la boli, secet" !.a.) de la secar", Aegilops !.a. La tutun s-au transferat cromozomi de la alte specii apropiate pentru a imprima rezisten#a la viroza tutunului. n general, se folosesc forme monosomice sau nulisomice care se ncruci!eaz" cu formele ce de#in calit"#ile ce ne intereseaz" din punct de vedere economic. Pseudoaneuploidia. Este o varia#ie a num"rului de cromozomi ce se realizeaz" cu ajutorul unui mecanism de fuzionare-fisionare a cromozomilor nso#it de un proces de transloca#ie reciproc", f"r" s" se modifice cantitatea de ADN per nucleu. Prin fisionarea centromerului unui cromozom metacentric, submetacentric sau subtelocentric se formeaz" cromozomi acrocentrici. Prin fuzionarea a doi cromozomi acrocentrici rezult" cromozomi metacentrici, submetacentrici sau subtelocentrici. Fenomenul a fost pus n eviden#" de W.R. Robertson n anul 1916. Speciile nrudite, care au un num"r variat de cromozomi, dar acela!i num"r fundamental (NF) de bra#e cromozomice formeaz" o serie robertsonian". Un exemplu bine studiat este n cadrul genului Drosophila, la care cariotipul primar de la Drosophila virilis (2n=12) s-a transformat prin transloca#ia !i fuzionarea centromerilor, dnd na!tere la mai multe specii: D. texana (2n=10) la care au fuzionat perechile 2 !i 3 de cromozomi, D. littoralis (2n=10) la care au fuzionat perechile 3 !i 4, D. americana (2n=10) la care au fuzionat perechile 2 !i 3 !i cromozomii X cu perechea a IV-a. Fenomenul aneuploidiei se poate manifesta chiar n cadrul acelea!i specii, ducnd la apari#ia a!a-numitului polimorfism cromozomial. Acest fenomen a fost semnalat la Spalax leucodon (orbetele), specie cu posibilit"#i reduse de migrare. La indivizii r"spndi#i n Caucaz, 2n=48, cei din Bulgaria au 2n=54, iar la noi n #ar", n Transilvania au 2n=50, iar cei din Dobrogea !i Moldova 2n=56. Aceste serii robertsoniene sugereaz" existen#a unui proces de evolu#ie a cariotipului, proces favorizat de posibilit"#ile reduse de migrare !i deci formarea de popula#ii distincte.

13.8. PSEUDOPOLIPLOIDIA
Fenomenul de pseudopoliploidie este descoperit relativ recent, iar denumirea lui propus" pentru prima dat" de E. Bataglia n anul 1956. Este vorba de o multiplicare a num"rului de genomuri f"r" dublarea cantit"#ii de cromatin"respectiv ADN. Fenomenul de pseudopoliploidie a fost sesizat la unele specii care posed" cromozomi ce au mai mul#i centromeri sau ace!tia sunt localiza#i difuz, pe toat" lungimea lor. Apari#ia pseudopoliploizilor se datoreaz" regrup"rii substan#ei
261

cromatice ntr-un alt num"r de cromozomi f"r" o multiplicare a ei, din punct de vedere cantitativ. Exist" specii pseudopoliploidie la genul plantei Luzula: Luzula purpurea cu 2n=6, Luzula glabrata cu 2n=12, Luzula campestris cu 2n=12, Luzula parviflora cu 2n=24, Luzula sudetica cu 2n=48; la genul Tatera: Tatera brantsii draco cu 2n=26, Tatera indica ceylonica cu 2n=72. Mai ntlnim pseudopoliploizi !i la genurile de plante Spirogyra, Carex, !.a. sau la cele de animale Ascaris, Thyanta (hemipter) !.a. Identificarea pseudopoliploizilor se poate face folosindu-se mai multe c"i: - ncruci!ndu-se speciile pseudopoliploide ale aceluia!i gen se pot urm"ri la hibrizii F1 cromozomii att n diviziunea somatic" ct !i n cea meiotic": n diviziunea somatic" apare un num"r de cromozomi 2n + 2n fiecare garnitur" p"strndu-!i m"rimea !i forma cromozomilor respectivi. De exemplu, ncruci!nd Luzula sudetica cu 2n = 48 cromozomi, mici, cu Luzula campestris cu n = 12 cromozomi, ob#inem n F1 un hibrid cu 2n = 30 cromozomi dintre care 24 cromozomi sunt mici !i 6 mari. n meioza plantelor din F1 cei 30 de cromozomi se conjug" n felul urm"tor: la cromozomii mari se asociaz" cei 24 cromozomi mici formnd 6 cromozomi mari. - Lungimea total" a cromozomilor de la speciile diploide trebuie s" fie egal" cu cea a speciilor pseudopoliploide, deoarece cromozomii formelor pseudopoliploide s-au format prin fragmentarea cromozomilor speciilor diploide. Cea mai sigur" metod" pentru identificarea pseudopoliploizilor este determinarea cantit"#ii de ADN din celulele acestora. Multiplicarea num"rului de cromozomi trebuie s" fie corespunz"toare multiplic"rii cantit"#ii de ADN. n figura 13.4. este reprezentat" schematic lungimea cromozomilor unor specii diploide (a) !i lungimea cromozomilor de la dou" specii pseudopoliploide (b !i c), provenite prin fragmentarea cromozomilor speciei diploide (a).

Fig. 13.4. Pseudopoliploidia: a-specie diploid" cu 6 cromozomi; b-specie pseudopoliploid" cu 12 cromozomi; c-specie pseudopoliploid" cu 24 cromozomi (Specia b a provenit din specia a !i specia c a provenit din specia b) 262

CAPITOLUL 14 ELEMENTE DE GENETICA POPULA!IILOR

Moto: Natura nu poate fi nvins! dect supunndu-ne ei F. Bacon

14.1. NO!IUNEA DE POPULA!IE

n ncerc!rile sale, Mendel "i cei care au urmat imediat dup! el au urm!rit reparti#ia "i transmiterea genelor alele pe genera#ii, referindu-se la grupe mici de indivizi. Dup! expresia fenotipic! a genelor "i structura genotipurilor au stabilit diferite rapoarte de segregare genotipic! "i fenotipic!. Cnd vrem s! analiz!m structura genetic! la grupe mari de indivizi, la care nmul#irea indivizilor are loc nedirijat "i unde pot s! apar! factori care modific! mereu tipul "i frecven#a genelor "i a genotipurilor metodele de studiu sunt altele. Acestea constituie obiectul unui domeniu aparte al geneticii, genetica popula"iilor. n primul rnd este necesar s! se precizeze ce se n#elege prin no#iunea de popula#ie. Termenul de popula#ie a fost introdus de W. Johannsen n 1903. n lucrarea sa Uber Erblichkeit in Populationem und in reinen Linien el analizeaz! structura genetic! la o popula#ie de fasole lund n considerare m!rimea semin#elor. Separnd dup! m!rime trei categorii de semin#e, reproducndu-le genera#iei de genera#ie, ajunge la a"a-numitele linii pure cu boabe uniforme "i care n descenden#! "i p!streaz! acest caracter. A descompus deci popula#ia ini#ial!, heterogen!, n componentele sale. Popula#iile apar#in, din punct de vedere sistematic, diferitelor specii de plante sau animale. No#iunea de specie nu trebuie confundat! cu cea de popula#ie. Specia este o no#iune abstract! "i ea nsumeaz! tr!s!turile generale n care trebuie s! se ncadreze diferite grupe de indivizi, popula#iile. n natur! nu exist! specii ci indivizi. Popula#ia este forma concret! de existen#! a speciei. Este o unitate natural! a structurii ecologice a speciei. Popula#iile r!spndite n natura spontan! sunt formate din grupe de indivizi heterogeni din punct de vedere ereditar, care au aceea"i origine, se aseam!n! "i se nmul#esc ntre ei f!r! amestecul altor indivizi "i ocup! un areal cu condi#ii ecologice comune. n condi#iile de cultur! a plantelor "i de cre"tere a animalelor, soiurile de plante "i rasele de animale sunt considerate tot popula#ii. Pentru genetic!, au importan#! popula#iile mendeliene sau panmictice. Acestea sunt popula#ii care se nmul#esc sexuat, fiecare individ avnd posibilitatea s! se ncruci"eze cu oricare altul din popula#ia respectiv!. n felul acesta, se realizeaz! o circula#ie a informa#iilor genetice ntre indivizi "i se men#ine un
263

oarecare echilibru n genofondul popula#iei. Nu acela"i lucru se ntmpl! n popula#iile care se reproduc asexuat sau partenogenetic, unde nu este posibil! circula#ia informa#iei genetice, chiar dac! descenden#ii cu ascenden#! comun! sau apropiat!, evolueaz! paralel. Popula#iile pot s! aib! dimensiuni foarte variabile. Cele care con#in sub 100 de indivizi se numesc popula#ii mici, cu cteva sute de indivizi, popula#ii mijlocii, cu cteva mii, popula#ii mari, iar peste 10.000 de indivizi, popula#ii foarte mari. Num!rul de indivizi al unei popula#ii are o deosebit! importan#! pentru cercet!rile de genetic!, deoarece datele folosite n asemenea cercet!ri au un caracter probabilistic. Cu ct num!rul lor este mai mare "i datele ob#inute prin calcule sunt mai exacte. Dup! fenotipul "i genotipul indivizilor, popula#iile se pot clasifica n: - popula#ii polimorfe, n care, pe lng! tr!s!turile comune, indivizii manifest! diferen#e vizibile fenotipic (ex. specia uman!, specii de ortoptere); - popula#ii criptopolimorfe, alc!tuite din indivizi cu diferen#e fenotipice foarte mici, dar cu diferen#e n ceea ce prive"te con#inutul genelor (ex. popula#iile de Drosophila melanogaster). Aceasta se explic! prin structura lor heterozigot! "i cu un genofond mare de gene recesive; - popula#ii aparent uniforme, n care indivizii prezint! mici deosebiri fenotipice "i genotipice, a"a cum sunt rasele de animale "i unele soiuri de plante.

14.2. METODELE FOLOSITE N STUDIUL GENETICII POPULA!IILOR

n studiul popula#iilor genetice se folosesc dou! metode: metoda descriptiv# "i metoda genetic#. Metoda descriptiv# const! n caracterizarea fenotipic! a indivizilor din cadrul unei popula#ii "i stabile"te raporturile care exist! ntre diferitele clase de indivizi. Pentru a cunoa"te structura genetic! a indivizilor este necesar s! urm!rim la descenden#ii lor modul cum se transmit caracterele. Aceasta se poate realiza prin urm!rirea unui num!r mic de indivizi, ceea ce contravine celor ar!tate mai sus. Un al doilea aspect negativ al metodei este faptul c! n popula#ie exist! mul#i indivizi ce manifest! acelea"i caractere, de"i structura lor genetic! poate fi diferit!. Aceast! metod! nu satisface dect n parte cercet!rile de acest gen. Metoda genetic# se bazeaz! pe cunoa"terea fondului genetic al popula#iei. Ea se sprijin! pe marile descoperiri ale lui Gr. Mendel cu privire la legile eredit!#ii. Primul om de "tiin#! care a f!cut un studiu "tiin#ific asupra popula#iilor, folosind metode statistice a fost W. Johannsen (1903). Cercet!rile care au fost efectuate de c!tre matematicianul G. Hardy n Anglia (1908) "i de medicul W. Weinberg n Germania, pe baza calculelor statistice, au deschis un drum nou n acest domeniu. La acestea s-au ad!ugat "i cercet!rile lui R. A. Fischer (1918), J. B. Haldane (1924 1932) "i S. Wright (1921). Pe baza unor metode de calcul se poate aprecia ast!zi structura genetic! a unei popula#ii, precum "i modificarea acesteia n urma ac#iunii unor factori.
264

Aceasta are o importan#! enorm! pentru explicarea unor aspecte legate de genetica popula#iilor "i evolu#ia lor n timp. Foarte important este studiul popula#iilor n activitatea de ameliorare a plantelor "i animalelor, n urma c!ruia putem crea sau ameliora soiuri de plante "i rase de animale.

14.3. STRUCTURA GENETIC$ A UNEI POPULA!II

O popula#ie de indivizi nsumeaz! un num!r enorm de gene care constituie genofondul ei. Dac! ne referim la indivizi, la con#inutul de gene a fiec!reia n parte, deosebim diferite genotipuri. Ele s-au format prin ntlnirea genelor din popula#ie n procesul de fecundare. A analiza structura genetic! a popula#iei nseamn! a determina tipul "i frecven#a genelor precum "i tipul "i frecven#a genotipurilor. De exemplu, pentru un cuplu de alele Aa, se pot forma trei genotipuri (31): AA, Aa, aa; pentru dou! cupluri, nou! genotipuri (32); pentru zece cupluri 60.000 genotipuri (310) ".a.m.d. Dar aceste cifre sunt foarte mici fa#! de num!rul de cupluri de alele existente n popula#ii "i o analiz! a tuturor este imposibil de realizat. n afar! de aceasta, trebuie s! ar!t!m c! sub influen#a unor factori, frecven#a lor se modific! nencetat. n cercet!rile care se fac, se iau de obicei un num!r mic de gene "i se calculeaz! frecven#a celor dou! alele pentru fiecare locus. n ceea ce prive"te tipul "i frecven#a genotipurilor dintr-o popula#ie, ele depind de tipul "i frecven#a genelor, de modul cum segreg! n game#i "i de modul cum se ntlnesc n procesul de fecundare. n consecin#! "i num!rul "i tipul lor sunt enorm de mari. n cazul genelor "i a genotipurilor pot interveni factori care s! modifice frecven#a lor.

14.4. PANMIXIA %I STRUCTURA GENETIC$ A POPULA!IILOR LEGEA HARDY WEINBERG

Se poate considera, n mod teoretic, c! n procesul reproducerii fiecare individ formeaz! acela"i num!r de game#i, iar ntlnirea dintre ei s! se fac! n mod ntmpl!tor. Cu alte cuvinte, n acest caz, fiecare individ ar participa n mod egal la procrearea descenden#ilor n genera#iile urm!toare. Acestui mod de reproducere i s-a dat numele de panmixie, iar popula#iei respective, popula#ie panmictic#. Desigur c! aceast! situa#ie nu este n natur!, dar ea se poate apropia n anumite limite de cazurile reale. A"a este cazul popula#iilor care ocup! o arie geografic! restrns! "i izolat!, cum ar fi de exemplu o popula#ie de p!s!ri sau insecte de pe o insul! oceanic!. Panmixia nu poate fi perfect! deoarece este afectat! de numero"i factori care vor fi trata#i ulterior. S! analiz!m structura genetic! a unei popula#ii panmictice. Mai nti ne vom referi la cazul simplu al unei popula#ii homozigote pentru dou! alele (A, a) ale unei gene. Aceast! popula#ie va produce un num!r egal de game#i masculi "i femeli cu alelele respective: 0,5% A "i 0,5% a.
265

Indivizii purt!tori ai acestor alele ncruci"ndu-se la ntmplare vor produce n F1 combina#iile (figura 14.1):
$ % 0,5% A 0,5% a 0,5% A 0,25% AA 0,25% aA 0,5% a 0,25% Aa 0,25% aa

Fig.14.1 Frecven#a genelor ntr-o popula#ie panmictic!

n cadrul acestor combina#ii din F1 remarc!m c! homozigo#ii dominan#i AA apar cu o frecven#! de 0,25%, homozigo#ii recesivi aa cu frecven#! de 0,25%, iar heterozigo#ii Aa cu o frecven#! de 0,5%. Considernd n genera#ia urm!toare acela"i mod de formare a game#ilor "i ntlnirea lor liber!, se ob#ine frecven#a genotipurilor prezentat! n "ahul de combina#ie urm!tor (figura 14.2). n acest tablou frecven#ele genotipurilor sunt urm!toarele: Genotipul AA nsumeaz! 8/32; Genotipul Aa nsumeaz! 16/32; Genotipul aa nsumeaz! 8/32. Aceste cifre reprezint! de fapt aceea"i propor#ie ntre frecven#a genelor pe care am ntlnit-o mai sus: 0,25% AA, 0,50% Aa, 0,25% aa. ntr-o popula#ie panmictic! frecven#a genotipurilor este propor#ional! cu aceea a game#ilor care particip! la formarea lor. Game#ii, n cazul de fa#! se produc n mod egal, pentru fiecare sex, att pentru alela A ct "i pentru alela a. Aceast! situa#ie face s! presupunem c!, de la o genera#ie la alta, structura genetic! a popula#iei nu se schimb! att timp ct nu intervin factori ce pot modifica frecven#a genelor, S! not!m cu p frecven#a alelei A "i q frecven#a alelei a. Frecven#ele p "i q reprezint! n mod egal, propor#iile homozigo#ilor "i heterozigo#ilor a"a cum urmeaz! n tabelul din figura 14.3. Structura genotipic! a popula#iilor de fa#! se mai poate scrie: AA p2 Aa 2pq aa q2

Nu este greu de observat c! frecven#ele n cazul de fa#!, se ob#in prin dezvoltarea binomului (p+q)2. Aceast! distribu#ie privind frecven#a genelor "i a genotipurilor ntr-o popula#ie panmictic! este cunoscut! sub denumirea de legea Hardy Weinberg, dup! numele celor doi cercet!tori, G. Hardy din Anglia "i W. Weinberg din Germania, care n anul 1908, independent unul de altul, au ajuns la aceea"i concluzie.

266

$ % 0,25 AA 0,25 Aa 0,25 aA 0,25 aa

0,25 AA AA AA Aa AA aA AA aa AA aa

0,25 Aa AA Aa Aa Aa aA Aa aa Aa

0,25 aA AA aA Aa aA aA aA aa aA aA Aa

0,25 aa AA aa aa aa aa

Fig. 14.2. Frecven#a genotipurilor ntr-o popula#ie panmictic!

alela Game#i femeli A a

Game#i masculi alela A frecven#a p AA p p2 Aa q pq

a q Aa pq aa q2

Fig. 14.3. Frecven#a genelor (p "i q) ntr-o popula#ie panmictic!

Propor#ia p2, 2pq, q2, n cazul unei popula#ii panmictice, se men#ine constant! de-a lungul genera#iilor "i reprezint! a"a numita stare de echilibru a ei. Un astfel de calcul exist! numai ca ipotez! teoretic! "i se folose"te cu succes ca punct de orientare la aprecierea structurii genetice a popula#iilor n care indivizii se nmul#esc sexuat, alogam. Conform legii Hardy Weinberg, frecven#a unei alele se calculeaz! dup! formula: p=1-q sau q=1-p, deoarece p+q = 1. Presupunnd c! s-a stabilit pentru o gen! A frecven#a de 75%, frecven#a alelei perechi a va fi de p = 1-0, 75 = 0,25 adic! de 25%. J. Rendel (1952) constat! c! dintr-un efectiv de 2681 vi#ei de ras! Shorthorn, 1234 au avut culoarea ro"ie (aa), 1215 culoarea galben! (Aa) iar 232 culoarea alb! (AA). &innd seama c! fiecare vi#el purta cte dou! alele, cte una pe fiecare cromozom omolog, se poate spune c! cei 2681 vi#ei purtau n total 5362 alele. Dintre acestea 1215 + (2 x 232) = 1679 au fost A, iar restul 1215 + (2 1679 = 0,31, iar a x 1234) = 3683 au fost a. Frecven#a alelei A, (notat! p) este de 5362 3683 alelei a, (notat! q) este de = 0,69 sau cu 1-0,31 = 0,69. 5362
267

Introducnd aceste date n formula pentru calcularea genotipurilor rezultate din libera combinare a celor dou! gene vom ob#ine structura celor trei genotipuri: (0,31 + 0,69)2 = 0,0961 AA + 0,4278 Aa + 0,4761 aa = 1 Cifrele ob#inute prin dezvoltarea binomului exprim! raportul ntre cele trei fenotipuri de vi#ei din popula#ia analizat!. n cazul popula#iilor cu reproducere autogam! echilibrul genetic se modific!, n sensul descre"terii heterozigo#iei n favoarea homozigo#iei. Ritmul sc!derii heterozigo#ilor "i a cre"terii homozigo#ilor n procente n func#ie de o pereche de alele se poate observa n tabelul 14.1.

14.5. FRECVEN!A GENELOR LEGATE DE SEX

Structura genetic! analizat! mai sus se refer! la unele perechi de alele plasate n cromozomii omologi. Cu totul alta este comportarea genelor legate de sex, care nu dispun dect de un locus la sexul heterogametic. Dac! frecven#a celor dou! alele A "i a este aceea"i la ambele sexe, atunci la sexul homogametic vor apare trei genotipuri corespunz!tor formulei p2 + 2pq + q2. La sexul heterogametic vor apare numai dou! genotipuri, iar frecven#ele p "i q vor coincide cu frecven#ele celor dou! alele care se ntlnesc n popula#ie. Tabelul 14.1. Descre"terea heterozigo#iei "i a cre"terii homozigo#iei n func#ie de num!rul de genera#ii
Genera#ia 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 n AA 0,00 25,00 37,50 43,75 46,88 48,44 49,22 49,60 49,80 49,90 49,95 50,00 Autofecundare Aa 100,00 50,00 25,00 12,50 6,25 3,12 1,56 0,80 0,40 0,20 0,10 0,00 Aa 0,00 25,00 37,50 43,75 46,88 48,44 49,22 49,60 49,80 49,90 49,95 50,00 AA 0,00 25,00 25,00 31,25 34,38 37,50 39,85 41,80 43,36 44,63 45,65 50,00 Fra#i x surori Aa 100,00 50,00 50,00 37,25 31,24 25,00 20,30 16,40 13,28 10,74 8,70 0,00 aa 0,00 25,00 25,00 31,25 34,38 37,50 39,85 41,80 43,36 44,63 45,65 50,00

Situa#ia este mai complex! cnd frecven#a celor dou! alele difer!, la mascul "i femel!. Echilibrul nu se stabile"te la fiecare genera#ie a"a cum se ntmpl! cu alelele situate pe autozomi, ci dup! un oarecare num!r de genera#ii. Dac! not!m cu p1 frecven#a unei alele A pentru sexul heterogametic "i cu p2 frecven#a aceleia"i alele pentru sexul homogametic, iar cu q1 "i q2 frecven#ele
268

pentru alelele corespunz!toare a, se poate alc!tui "ahul de combina#ie din figura 14.4. Din acest "ah se vede c! la sexul heterogametic alelele A "i a reiau valorile p2 "i q2 ca "i n genera#ia precedent!. La sexul homogametic alelele A "i a se distribuie la fel ca "i la alelele situate pe autozomi ("ahul precedent), dar p p intervalul de timp ntre cele dou! sexe este redus la jum!tate 1 2 . 2 Distribuirea genelor din cromozomi se face dup! tipul criss cross, adic! de la mam! la fiu "i de la tat! la fiic!. Ph. L. Hritier (1954) consider! un caz extrem, cnd sexul heterogametic ar fi omogen pentru alela A, p1 = 100%, iar cel!lalt sex pentru alela a, p2 = 0%. n tabelul dat de autor sunt necesare opt genera#ii pentru a ajunge la starea de echilibru a popula#iei pentru aceste gene la ambele sexe (tabelul 14.2.).
Gena Sexul homogametic Sexul heterogametic A a Gena Frecven#a p1 q1 A p2 AA p1p2 Aa p2q1 A p2 a q2 Aa p 1q 2 aa q 1q 2 a q2

Fig.14.4. Frecven#a genelor legate de sex ntr-o popula#ie panmictic!

Tabelul 14.2. Realizarea echilibrului genetic pentru o pereche de gene legate de sex la cele dou! sexe n opt genera#ii
Genera#ia 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Sexul homogametic 0,0 50,0 25,0 37,0 31,0 34,3 32,7 33,5 33,1 Sexul heterogametic 100,0 0,0 50,0 25,0 37,0 31,2 34,3 32,7 33,5 Diferen#a 100,0 50,0 25,0 12,5 6,2 3,1 1,6 0,8 0,4

269

14.6. FRECVEN!A GENELOR N CAZUL A MAI MULTOR LOCI

Realizarea unui echilibru n frecven#a genotipurilor, dup! o genera#ie de hibridare la ntmplare prive"te to#i locii de pe cromozomii autozomi considera#i separat. Atunci cnd se consider! simultan doi sau mai mul#i loci, echilibrul nu mai poate fi realizat. Drept exemplu, s! consider!m o popula#ie format! dintr-un num!r egal de indivizi pentru genele A1A1B1B1 "i A2A2B2B2. Frecven#a genei considerat! pentru ambii loci este de . Din mperecherea lor la ntmplare, n prima descenden#! nu vor apare toate genotipurile. Genotipurile absente vor apare n descenden#ele ulterioare ref!cnd echilibrul. Li (1955) ia n considerare doi loci fiecare cu cte dou! alele "i frecven#a celor patru tipuri de game#i forma#i n popula#ia ini#ial! dup! cum urmeaz!: game#i frecven#a A1B1 r A1B2 s A2B1 t A2B2 u

Dup! combina#ia alelelor popula#ia va fi n echilibru cnd ru = st. Dep!rtarea fa#! de echilibru este dat! de ru st. Ea scade, njum!t!#indu-se cu fiecare genera#ie succesiv!. Dac! num!rul de loci lua#i n considerare este mai mare de doi, apropierea de echilibru are loc cu att mai lent, cu ct num!rul locilor este mai mare.

14.7. FRECVEN!A GENELOR N CAZUL NL$N!UIRII LOCILOR

nl!n#uirea genelor ncetine"te realizarea echilibrului n condi#iile hibrid!rii la ntmplare "i ea este cu att mai lent! cu ct for#a de nl!n#uire este mai mare. Echilibrul se realizeaz! cnd cuplarea "i schimbul dintre loci sunt la fel de frecvente. Apropierea de echilibru a genelor a doi loci nl!n#ui#i poate fi demonstrat! ca "i n cazul anterior: d = ru st, n care: ru este frecven#a heterozigo#ilor cu gene nl!n#uite, iar st frecven#a heterozigo#ilor n care genele au suferit crossing-over. Dac! not!m "i cu c frecven#a de recombinare ntre cei doi loci "i cu t genera#ia respectiv! se poate scrie: dt = (1-c) x dt 1 Dac! n urma ncruci"!rii se ob#in 20% indivizi recombina#i pentru doi loci, aceasta nseamn! c! diferen#a se reduce cu 1/5 (20%) pentru fiecare genera#ie pentru a se ajunge la echilibru pentru genele din ace"ti loci.
270

14.8. FRECVEN!A GENELOR N CAZUL ALELELOR MULTIPLE

Aplicarea legii pentru dou! alele se poate extinde "i cnd la un locus exist! mai mult dect dou!. n asemenea situa#ie se ia n considerare o singur! alel!, iar toate celelalte alele de la acest locul pot fi considerate ca "i cnd ar constitui o singur! grup! o singur! alel!. Dac! intereseaz! diferite alele de la acela"i locus, atunci se ia n considerare fiecare alel! pe rnd, celelalte formnd o grup! corespunz!toare celei de a doua alel!. Echilibrul frecven#elor acestor alele este realizat dup! o genera#ie de hibridare. Un exemplu privind frecven#ele unor alele multiple poate fi dat de grupele sangvine la om. Vom considera genele A, B "i O referitoare la stabilirea grupelor sangvine din sistemul A.B.O. Frecven#a acestor trei gene le vom nota p, q "i r, iar conform legii Hardy-Weinberg p+q+r=1 Din componen#a diferitelor grupe sangvine fac parte diferite genotipuri, figurate n tabelul care va urma. Race "i Sanger (1954) au f!cut observa#ii la 190177 aviatori din Anglia. Repartizarea lor pe grupe se poate vedea tot n tabelul 14.3. Tabelul 14.3. Grupele sangvine, genotipurile care le determin! "i frecven#a lor
Genotipul Grupa sangvin! Frecven#a a"teptat! Frecven#a observat! % AA A p2 + 2pr 41,716 AO BB B q2 + 2qr 8,560 BO O O r2 46,684 O AB AB 2pq 3,040

Calcularea frecven#ei genelor se poate face n felul urm!tor: - Frecven#a genei O este r!d!cina p!trat! a frecven#ei grupului O, de unde r = ', ' fiind grupul O. - Suma frecven#elor grupelor B "i O este q2 + 2qr + r2 = (q + r)2 = (1 2 p) , iar p = 1 B + ', B "i ' fiind frecven#ele grupelor sangvine B "i O. - Suma frecven#elor A "i O este p2 + 2pr + r2 = (p + r)2 = (1 q)2 iar q = 1 ( + ', ( "i ' fiind grupele sangvine A "i O. Calcularea frecven#ei celor trei gene prin aceast! metod! a dus la urm!toarele rezultate: gena A = 0,2567 gena B = 0,0598 gena O = 0,6833 ______________ Total = 0,9998
271

Pe baza lui p "i q se poate calcula "i frecven#a pentru grupa sangvin! AB. Rezultatul este 3,070%, propor#ia care se apropie foarte mult de aceea men#ionat! n tabelul de mai sus (3,040).

14.9. FACTORII CARE MODIFIC$ STRUCTURA GENETIC$ A POPULA!IILOR

Constatarea faptului c! n snul popula#iilor se manifest! o iner#ie n men#inerea structurii genetice (homeostazie) nu nseamn! c! popula#iile nu pot fi modificate. Modific!rile sunt ndreptate spre g!sirea unui nou echilibru, util organismului sau omului, dup! cum selec#ia o face natura sau omul. )tiin#a care se ocup! cu modificarea structurii genetice a popula#iilor n interesul omului, poart! numele de ameliorare. Exist! dou! categorii de factori ce contribuie la modificarea structurii genetice a popula#iei: prima categorie se refer! la modificarea frecven#ei genelor (selec#ia, migra#ia, muta#ia, ac#iunea ntmpl!rii) "i a doua categorie, la modificarea frecven#ei genotipurilor (homogamia "i consangvinizarea).

14.9.1. Selec"ia
Selec#ia este procesul de supravie#uire a indivizilor ce prezint! unele calit!#i "i de eliminare a acelora mai pu#in nzestra#i. Deoarece selec#ia este de dou! tipuri, natural! sau artificial! "i sensul no#iunii de calitate difer!. Efectul pe care l are selec#ia asupra frecven#ei genelor se exprim! prin doi indicatori: coeficientul de selec#ie, care se noteaz! cu S "i valoarea selectiv!. S! presupunem c! la efectuarea unei analize genetice s-au g!sit la 100 de indivizi cu alele dominante AA "i Aa, 99 de indivizi cu alelele recesive aa. Valoarea selectiv! a alelelor dominante se noteaz! cu 1. n acest caz valoarea alelei recesive va fi de 0,99, iar coeficientul de selec#ie S = 1,00 0,99 = 0,01. Dac! n aceast! situa#ie introducem unele valori extreme putem ob#ine urm!toarele rezultatele: a) cnd genotipurilor con#in alelele dominante sau recesive ce produc sterilitatea sau moartea indivizilor S = 1-0 = 1; b) cnd raportul dintre cele dou! genotipuri este egal, la cele dou! categorii de indivizi S = 1 1 = 0. Selec#ia este n acest caz nul!. Valoarea selectiv! este sinonim! cu valoarea adaptiv! "i se apreciaz! prin num!rul de descenden#i pe care-l realizeaz! fa#! de genotipurile normale. Referindu-ne n continuare la genele A "i a, n care gena A este dominant! "i gena a recesiv! "i la coeficientul de selec#ie notat mpotriva lui aa va fi s, contribu#ia genotipurilor mpotriva c!rora ac#ioneaz! selec#ia va fi s-1 (tabelul 14.4).

272

Tabelul 14.4 Situa#ia genotipurilor "i a frecven#ei genelor n urma ac#iunii selec#iei
Genotipurile Frecven#ele ini#iale Capacitatea Contribu#ia genetic! AA p p
2

Aa 2pq 1 2pq
2

aa q
2

Total 1 1-sq2

1
2

1-s q (1-s)

Genele nefavorabile duc la ndep!rtarea indivizilor ce le posed!, din snul popula#iei. Odat! cu aceasta, num!rul genelor favorabile cre"te. Viteza cu care sunt ndep!rtate genele dominante "i recesive din popula#ie este diferit!. Unele gene, care au caracter letal sau de sterilitate pot elimina indivizii chiar din prima genera#ie n care au ap!rut. Alteori ele, de"i mic"oreaz! vitalitatea sau prolificitatea se pot men#ine mai multe genera#ii. Unele muta#ii recesive, prin acumulare ndelungat! pot constitui mari rezerve de gene. De"i unele muta#ii recesive cu efect letal sunt ndep!rtate din popula#ie, indivizii heterozigo#i pentru aceste gene, le pot men#ine timp de zeci "i sute de genera#ii. Studiul factorilor de selec#ie n leg!tur! cu modificarea frecven#ei genelor ntr-o popula#ie are o mare importan#! pentru ameliorare. Se va urm!ri multiplicarea descenden#elor cu gene care intereseaz!. Trebuie ns! s! #inem seama de diferitele tipuri de rela#ii ntre aceste gene (dominan#!, epistazie, aditivitate ".a). Pentru caracterele cantitative se fac studii statistice, iar selec#ia se face prin deplasarea valorii medii a caracterului studiat spre una din valorile extreme.

14.9.2. Migra"ia
Migra#ia este procesul de ndep!rtare sau introducere a unui fond genetic str!in, ntr-o anumit! popula#ie. n primul caz se nume"te emigra"ie, iar n cel de al doilea imigra"ie. Gradul de modificare a frecven#ei genelor prin migra#ie depinde de num!rul de indivizi ce au emigrat sau imigrat "i de num!rul de gene native a popula#iei respective. Not!m cu: m gene imigrante n fiecare genera#ie 1-m restul indivizilor din popula#ie qm frecven#a unei gene imigrante q0 - frecven#a unei gene native (existente n popula#ie) q1 frecven#a acestei gene n ntreaga popula#ie, care va fi urm!toarea: q1 = mqm + (1 m) q0 = m (qm q0) + q0 Modificarea frecven#ei dup! o genera#ie (Dq) va fi: Dq = q1 q0 = m (qm q0)

273

Reiese c! ritmul de schimb a genei supus! imigr!rii este corelat cu ritmul de imigrare "i de diferen#a dintre genele imigrante "i cele existente ini#ial n popula#ie. n ameliorare, imigr!rile au importan#! "i ele constau n ncruci"area indivizilor dintr-o popula#ie cu indivizi str!ini, pentru formarea de soiuri sau rase noi.

14.9.3. Muta"ia
Muta#ia modific! structura genetic! a popula#iilor n m!sura n care ea este izolat! sau repetat!, recesiv! sau dominant!, folositoare sau nefolositoare organismelor, direct! sau reversibil!. Muta#iile izolate prezint! o mai mic! importan#! pentru evolu#ie. Dac! sunt recesive se pot men#ine mult timp n popula#ie "i fiind n stare heterozigot! foarte rar se eviden#iaz! sub aspect fenotipic. Dac! sunt dominante, ceea ce se ntmpl! foarte rar, produc modific!ri, adeseori evidente "i soarta lor depinde de avantajul sau neajunsul pe care l prezint! n perpetuarea individului. De obicei, alelele de tip s!lbatic produc muta#ii recesive. Din aceast! cauz!, acestea din urm! se acumuleaz! n popula#ie "i sunt mai greu de eliminat prin selec#ie, doar cnd devin homozigote. Frecven#a lor scade atunci cnd au o ac#iune d!un!toare "i cre"te atunci cnd, din contra, au o ac#iune favorabil!. R!spndirea muta#iilor n popula#ie este condi#ionat! "i de efectul pe care-l produc asupra vitalit!#ii "i prolificit!#ii individului mutant. S! presupunem c! gena A sufer! un proces de muta#ie "i se transform! n gena a cu o frecven#! u pe genera#ie. S! not!m frecven#a ei cu p0, iar frecven#a noilor gene mutante cu up0. Frecven#a nou! a genei A devine p0-up0. S! urm!rim acum ce se ntmpl! cnd muta#ia se produce n ambele sensuri: de la A la a "i de la a la A. Pentru frecven#a muta#iei inverse, de la a la A s! folosim nota#ia v iar a genei a ini#iale q0. n primul caz, atunci cnd gena A trece n gena a se va produce un c"tig de gene a egal cu up0 "i o pierdere, datorit! muta#iei inverse egal! cu vq0. Cele afirmate mai sus se pot nota Ritmul de muta#ie: u A a v Frecven#a ini#ial! a genelor p0 q0 Frecven#a celor dou! gene se va modifica pn! se va ajunge la un echilibru: pu = qv sau p v u = sau q = q u u+v Dac! muta#ia invers! nu se produce, se poate observa din formul! c! echilibrul nu se realizeaz! dect dac! gena A este eliminat! din popula#ie.
274

Tot din formula de mai sus se poate observa c! frecven#a genelor mutante directe este mai mare dect frecven#a genelor mutante inverse. Aceasta ar nsemna c! alelele mutante ar deveni, cu timpul, mai numeroase dect cele de tip s!lbatic. n realitate, situa#ia este tocmai invers!, deoarece majoritatea alelelor mutante sunt eliminate din popula#ie prin ac#iunea selec#iei. Posibilitatea genei mutante de a r!mne n stare heterozigot! sau de a deveni homozigot! depinde "i de num!rul de indivizi din popula#ia care particip! la ncruci"!ri. Cu ct acest num!r este mai mic, cu att exist! "anse mai mari ca gena recesiv! s! devin! homozigot! "i s! se eviden#ieze.

14.9.4. Drift-ul genetic

Drift-ul genetic numit "i deriv# genetic# este modificarea frecven#ei genelor la popula#iile mici, datorit! unor factori ntmpl!tori. A"a dup! cum o corabie lipsit! de crm! "i motor este dus! de valuri "i vnt (mers n deriv!), tot astfel "i indivizii unor popula#ii mici "i modific! structura genetic! n direc#ii neprev!zute, f!r! o ac#iune a factorilor despre care s-a vorbit anterior. Din num!rul mare de game#i produ"i de un organism, nu to#i particip! la fecundare. Din aceast! cauz! frecven#a genelor care se afl! ntmpl!tor n game#ii ce particip! la fecundare cre"te, n timp ce cele din game#ii care se pierd o face s! scad!. Evolu#ia organismului n func#ie de prezen#a unor anumite gene, n acest caz este ntmpl!toare. n popula#iile mari acest fenomen nu prezint! importan#! deoarece exist! "anse mai mari ca genele s! fie repartizate n toate combina#iile posibile. S-a ar!tat c! pentru o pereche de alele ntr-o popula#ie panmictic! 25% au genotipul AA, 25% aa "i 50% Aa. La un num!r mic de indivizi s-ar putea s! apar! numai genotipul AA sau aa. Drift-ul genetic prezint! o importan#! mare pentru amelioratorii de animale care se ocup! de un num!r redus de indivizi. Acest grup evolueaz! n diferite direc#ii, dup! cum are loc o cre"tere a frecven#ei unor gene, care se g!sesc n game#ii care au contribuit la formarea indivizilor, sau o pierdere a altor gene, de la game#ii care nu au participat la formarea lor. Intrarea unui efectiv de animale n drift poate fi pus! n eviden#! calculnd Ne, adic! num!rul efectiv de indivizi ce se mperecheaz! liber "i nu dirijat. 4Nm x Nf Ne = 4Nm + Nf S-a notat cu Nm num!rul de masculi "i cu Nf num!rul de femele.

275

14.9.5. Factorii care modific# frecven"a genotipurilor ntr-o popula"ie

ncruci"!rile libere, ntmpl!toare ntre indivizi, contribuie la men#inerea structurii genetice constante a popula#iilor. Orice factor care ar dirija ncruci"!rile ntr-un anumit sens, modific! schimbul de gene "i formeaz! fenotipuri noi. Unii factori geografici (mun#i sau ape), ecologici (pedoclimatici, macro sau microclimatici), biologici (genetici sau fiziologici) asigur! izolarea reproductiv!, oprind total sau par#ial schimbul de gene ntre popula#ii. Dou! mari categorii de factori sunt capabili s! modifice structura genotipic! a popula#iilor: - ncruci"area consangvin! la animale, n care indivizii ce se mperecheaz! sunt nrudi#i; - autopolenizarea for#at! a plantelor alogame. Pentru a ne da seama de efectele genetice al consangviniz!rii, s! consider!m mai nti cazul unei popula#ii panmictice care este supus! autofecund!rii. Prin autofecundare formele homozigote se men#in mai departe tot homozigote, iar acele heterozigote segreg! n raport de 0,25 AA : 0,5 Aa : 0,25 aa. Num!rul de heterozigo#i se njum!t!#e"te la fiecare genera#ie. n acest timp cre"te num!rul homozigo#ilor. Autofecundarea, ntr-un timp foarte scurt, face ca genotipurile s! fie homozigote pentru toate genele componente. Oricare ar fi sistemul de reproducere consangvin! ce ac#ioneaz! n popula#ie, efectul este desfacerea ei n linii homozigote "i sc!derea heterozigo#ilor. Homozigo#ii recesivi ce formeaz! fenotipuri cu defecte sunt elimina#i de selec#ie. Cnd prezint! totu"i unele calit!#i pentru amelioratori asemenea homozigo#i pot fi re#inu#i, iar prin ncruci"area liniilor se ob#ine efectul de heterozis.

14.9.6. Homeostazia genetic# &i evolu"ia popula"iilor

Oricare ar fi nivelul de organizare a materiei vii, celular, individual "i popula#ional exist! o capacitate a acesteia de a-"i men#ine ntre anumite limite, constante, structurile "i func#iile. Popula#iile "i men#in echilibrul genetic prin heterozigo#ie, polimorfism "i o anumit! direc#ie a procesului mutagen. Acest echilibru, care le imprim! o relativ! stabilitate genetic! poart! numele de homeostazie genetic#. n popula#iile panmictice, de"i indivizii par foarte asem!n!tori, ei ascund o mare diversitate genetic!. Heterozigo#ia asigur! adaptarea organismelor la diferite condi#ii de mediu, imprim! organismului plasticitate ecologic!. Prin polimorfism se n#elege existen#a n popula#ie a unor forme ce se deosebesc dup! unele caractere "i func#ii ce le ndeplinesc n colectivitate. Aici se pot ncadra mp!r#irea n sexe, heterostilia, diviziunea func#iilor n colectivitate (furnici, albine ".a).
276

ntr-o popula#ie, exist! un num!r enorm de mutan#i recesivi, a c!ror frecven#! se modific!, n func#ie de num!rul de indivizi, condi#iile externe "i interne. Aceste muta#ii constituie mari rezerve de variabilitate genetic!. O anumit! schimbare a condi#iilor de via#! permite organismului s! foloseasc! din aceast! rezerv!, unele nsu"iri, care n vechile condi#ii nu s-au manifestat. n capitolul de fa#! s-au ar!tat care sunt factorii ce modific! structura genetic! a popula#iilor "i cum ac#ioneaz! ei. Muta#ia "i recombinarea constituie surse de variabilitate; selec#ia este for#a care dirijeaz! evolu#ia "i men#ine formele cele mai bine adaptate; izolarea geografic! separ! popula#iile "i face posibil! izolarea reproductiv! "i formarea de noi specii. Aspectele complexe pe care le mbrac! mecanismul de evolu#ie a popula#iilor naturale, a animalelor domestice "i plantelor de cultur!, fac s! r!mn! n prezent nc! multe probleme nerezolvate. Sarcina de viitor const! n a g!si modalit!#i noi, prin care interac#iunea dintre factorii genetici "i mediu determin! schimbarea organismelor, evolu#ia lor. Aceasta are o importan#! deosebit! att pentru studierea procesului de evolu#ie din natur!, ct "i pentru producerea de forme noi de plante cultivate sau animale domestice.

277

GLOSAR de termeni !tiin"ifici

Abera"ie (anomalie) cromozomic! - modificare a num!rului de cromozomi, caracteristic fiec!rei specii (a. numeric!) sau a structurii unuia sau mai multor cromozomi (a. structural!). Adaptare (lat. adaptare-a potrivi) - proces de schimb!ri evolutive prin care un organism sau o specie supravie"uiesc #i se reproduc ntr-o ni#! ecologic!. Adenin# (6-aminopurin!) - baz! azotat! pirimidinic! prezent! n acizii nucleici. Adenozin-trifosfat (ATP) nucleotid alc!tuit dintr-o baz! azotat! (adenina), un zahar (riboza) #i trei grup!ri fosfat, ata#ate de carbonul 5 al zaharului; desfacerea leg!turilor de fosfor, prin hidroliz! elibereaz! cantit!"i mari de energie. Albinism (lat. albus) tulburare metabolic!, caracterizat! prin deficien"a tirozinazei, care intervine n transformarea tirozinei n melanin!, ceea ce face ca p!rul, pielea, irisul, s! fie albe, la animale; la plante, albinismul se datoreaz! unei deficien"e a cromoplastelor. Albomaculatus (lat. albus - alb; maculatus p!tat)- pe frunzele plantelor alterneaz! zone cu pigmenta"ie normal! cu altele cu pigmenta"ie anormal! (alb! sau galben!). Alchilan"i substan"e care nlocuiesc un atom de hidrogen, cu o grupare alchil, ntr-un compus organic. Alel# (prescurtare de la alelomorf; gr. allelon dintr-una n alta; morphe form!) fiecare din formele sub care poate exista o gen! de pe un locus dat, ap!rnd prin muta"ie #i ndeplinind aceea#i func"ie. Cnd cele dou! alele de pe cromozomii omologi sunt identice, individul este homogametic (homozigot), iar cnd alelele sunt diferite, individul este heterogametic (heterozigot). Alofenic (gr. allos altul; phainen a ap!rea) animal rezultat din fuziunea a doi embrioni #i a c!rui "esuturi sunt diferite genetic. Alogamie (gr. allos altul; gamos c!s!torie) - ncruci#are ntre indivizi diferi"i genetic, un mascul #i o femel!, care produc game"i masculini #i
278

respectiv feminini. Numeroase plante porumb, ceap!, morcov, secar! - #i majoritatea animalelor, sunt alogame. Amber (arab. ambar - chihlimbar) nume dat codonului UAG, unul din codonii STOP, denumit #i codon non-sens. Amfidiploid (gr. amphi amndoi; diploos dublu; eidos form!) poliploid rezultat prin dublarea num!rului de cromozomi a unui hibrid interspecific diploid. Aminoacid compus organic ce con"ine o grupare amino (NH2), un grup carboxil (O=C-OH), un atom de hidrogen #i un radical care-i confer! specificitate. Aminoacil ARNt-sintetaza enzim! care catalizeaz! activarea aminoacizilor printr-o reac"ie cu adenozin-5-trifosfat. Amitoza (gr. a f!r!; mitos filament; osis condi"ie) diviziune celular! direct!, caracterizat! prin fragmentarea nucleului #i apoi a citoplasmei, f!r! participarea fusului nuclear. Amplificare genic# - m!rirea num!rului de copii a unei gene. Androgenez# (gr. andros b!rbat; genesis na#tere) dezvoltarea unui organism care con"ine numai genomul patern. Androsterilitate (gr. andros b!rbat; lat. sterilitas sterilitate) sterilitate masculin!, determinat! de absen"a game"ilor, sau formarea game"ilor nefunc"ionali. Aneuploid (gr. an f!r!; eu bine; haploos odat!; eidos form!) organism cu unul sau mai mul"i cromozomi n plus sau la care lipsesc unul sau mai mul"i cromozomi (2n+1, 2n+2, 2n-1, 2n-2 etc.). unui codon. Anticodon secven"! de trei nucleotide din ARNt ,complementar!

Antigen (gr. anti - mpotriva; genos gen, familie) substan"! capabil! s! induc! formarea de anticorpi, dup! p!trunderea sa n organism. Aparat mitotic complex de structuri(asterii #i fusul nuclear), care asigur! migrarea cromozomilor, n timpul diviziunii celulare.

279

Apogamie (gr. apo f!r!; gamos c!s!torie) dezvoltare a embrionului dintr-o alt! celul! a sacului embrionar, exceptnd oosfera. Apoptoza moarte celular! programat! genetic, ntr-un "esut sau organ n dezvoltare. Autofecundare (gr. autos - nsu#i; lat. fecundare a fertiliza) fuziune a doi game"i de sex diferit, produ#i de acela#i individ (ex. plantele hermafrodite). Autopoliploidie (gr. autos - nsu#i; polys mul"i; haploos odat!; eidos form!) multiplicarea num!rului de genomuri, pe baza unui genom propriu. Autotrof (gr. autos - nsu#i; trophe hran!) organism care folose#te drept surs! de carbon, bioxidul de carbon, nefiind dependent de substan"ele organice din mediul extern. Autozom.(gr. autos - nsu#i; soma corp) oricare din cromozomi, n afara celor ce determin! sexul. Autoradiografia tehnic! fotografic! ce permite detectarea substan"elor radioactive ntr-o structur! celular! sau ntr-o macromolecul!. Imaginea este produs! pe o emulsie fotografic!, ca urmare a emisiei de raze beta , de c!tre materialul radioactiv. Auxotrof (gr. auxein a cre#te; trophe hran!) form! mutant! a unui microorganism, care cre#te numai ntr-un mediu suplimentat cu factori de cre#tere specifici.

***
Backcross (engl. back - napoi; cross - ncruci#are) - ncruci#area unui individ cu structur! genetic! necunoscut!, cu un p!rinte homozigot (de obicei, recesiv pentru una sau mai multe perechi de gene). Se mai nume#te retroncruci#are sau ncruci#are analizatoare. Bacteriofag (gr. bacterion bastona#; phagein a mnca) virus ce se multiplic! n celula bacterian!. Baze minore baze azotate prezente n ADN sau ARN, n cantit!"i foarte mici (ex. 5-metil-citozina, 6-aminopurina, N-dimetil-guanozina etc.).

280

Bivalent (lat. bis de dou! ori; valens tare, puternic) complex format din doi cromozomi omologi, fiecare cu cte dou! cromatide (tetrad! cromozomic!).

***
Capsid# (lat. capsa cutie) - nveli#ul proteic al unui virus (sin. anvelop! viral!). Cariotip (gr. karyon nucleu; typos tip) totalitatea cromozomilor unei specii, clasifica"i n func"ie de form!, m!rime #i alte particularit!"i. Centimorgan unitate de m!sur! a distan"ei dintre gene, egal! cu 1% recombin!ri prin crossing over. Chiasma (gr. chiasma - n form! de cruce) zon! de suprapunere a cromatidelor nesurori ale cromozomilor omologi, n stadiile zigonema pachinema, fiind expresia citologic! a crossing-over-ului. Chinetocor (gr. kinein a mi#ca; chorion loc) structur! localizat! la nivelul constric"iei primare, prin care, cromozomul se ata#eaz! de fibrele fusului nuclear. Citochinine (gr. kytos cavitate; kinein a mi#ca) factori de cre#tere vegetali, ce stimuleaz! diviziunea celular!. Clon (gr. klon ramur! mic!) popula"ie de dimensiuni variabile, rezultat! dintr-un singur organism (bacterii) sau dintr-o singur! celul! avnd aceea#i structur! genetic!. Cloroplast (gr. chloros verde; plastos forma"iune) organit citoplasmatic delimitat de o membran! dubl!, cu rol n fotosintez!. Cod genetic triplete de nucleotide din ADN sau ARNm ce codific! aminoacizii existen"i ntr-un lan" polipeptidic. Codon secven"! de trei nucleotide din ARNm ce codific! unul sau mai mul"i aminoacizi. Colinearitate (lat. cum cu; linea linie) coresponden"a dintre succesiunea nucleotidelor dintr-un lan" polinucleotidic #i succesiunea aminoacizilor unui lan" polipeptidic.
281

Consangvinizare (lat. consangvineus - nrudit prin snge; engl. inbreeding reproducere prin c!s!torie ntre rude) - ncruci#are ntre indivizi nrudi"i. Corepresor (lat. cum cu; repressus oprit) produs final al unui lan" metabolic, de natur! proteic!, care intervine n sistarea propriei sinteze, prin combinarea sa cu un represor, codificat de o gen! reglatoare. Cromatid# (gr. chroma culoare) una din subunit!"ile longitudinale ale cromozomului, rezultat! n urma replic!rii acestuia, rezultnd dou! cromatide surori, respectiv, doi cromozomi monocromatidici. Cromatin# (gr. chroma culoare; tainia filament) agregarea macromoleculei de ADN cu proteinele histonice, mici cantit!"i de ARN, constituind structuri ale cromozomilor interfazici la eucariote. Cromocentru (gr. chroma culoare; kentron centru) corpuscul, rezultat prin fuzionarea centromerului #i a regiunii heterocromatice a mai multor cromozomi. Cromomer# (gr. chroma culoare; meros parte) nume dat benzilor mai intens sau mai slab colorate, dispuse succesiv, n cromozomi. Cromonema, pl. chromonemata (gr. chroma culoare; nema filament) subdiviziune longitudinal! a cromatidei. Cromozom (gr. chroma culoare; soma corp) structur! nuclear!, nucleoproteic!, purt!tor al informa"iei genetice prin genele sale. Crossing-over (gr. crossing - ncruci#are; over peste) schimb reciproc de segmente omoloage ntre cromatidele nesurori ale cromozomilor omologi.

***
Degenerare (lat. de lipsit de; generare a genera) caracteristic! a codului genetic, prin care, un aminoacid este codificat de mai mul"i codoni (triplete). Dele"ie (lat. deletio pierdere) tip de abera"ie cromozomic!, determinat! de pierderea unui segment dintr-un cromozom, iar la nivel molecular, pierderea unui nucleotid sau a unui grup de nucleotide din ADN.

282

Diachinez# (gr. dia prin; kinesis mi#care) subfaz! a profazei I a meiozei, n care bivalen"ii sunt condensa"i, chiasmele localizate spre capetele acestora, conferindu-le un aspect caracteristic. Diada (gr. dias doi) cele dou! celule fiice rezultate n urma meiozei primare(heterotipic!). Diauxie (gr. di dublu; auxein a cre#te) capacitatea microorganismelor de a se dezvolta n medii de cultur! ce con"in doi carbohidra"i diferi"i. Dihaploid (gr. dis de dou! ori; haploos simplu; eidos form!) organism cu dou! seturi de cromozomi, rezultat prin reducerea la jum!tate a num!rului de cromozomi ai unui organism tetraploid. Dihibridare (gr. dis de dou! ori; hybrida metis) - ncruci#are ntre p!rin"i (genitori) ce se deosebesc prin dou! perechi de caractere. Dimorfism (gr. dis de dou! ori; morphe form!) dou! forme diferite morfo-fiziologic, n cadrul aceleia#i specii. Dioic# (gr. dis de dou! ori; oikos cas!) plant! unisexuat!, cu florile mascule #i femele, pe indivizi diferi"i. Diploid (gr. diploos dublu; eidos form!) celul! sau organism cu dou! seturi de cromozomi, 2n, caracteristic! celulelor somatice. Diplonema (gr. diploos dublu; nema fir) stadiu din profaza I a meiozei, cnd la fiecare bivalent, se disting cele patru cromatide (tetrad! cromozomic!). Disjunc"ie (lat. disjunctio separare) separarea cromozomilor omologi sau a cromatidelor unui cromozom n urma cliv!rii longitudinale a acestuia. Dominan"# (lat. dominare a domina) manifestarea fenotipic! a unei gene sau a caracterului fenotipic corespondent, n stare heterozigot!. Duplica"ie (lat. duplicare a dubla) abera"ie cromozomic! n care, un segment cromozomic sau o gen! se g!sesc n dou! exemplare, n acela#i cromozom.

***
283

Endomitoz# (gr., endon - n!untru; mitos filament) tip particular de diviziune, pe parcursul c!reia, replicarea cromozomilor, nu este nso"it! de diviziunea nucleului #i citoplasmei. Endonucleaz# - enzim! care desface leg!turile fosfo-diesterice din cadrul unui lan" polinucleotidic, intervenind n procesele de repara"ie, n rupturile monocatenare, fiind specifice pentru ADN #i ARN . Enucleare (lat. enucleare a scoate smburi) - ndep!rtarea experimental! a nucleului. Enzim# de restric"ie enzim! care sec"ioneaz! macromolecula de ADN, ntr-un loc specific. Epistasia (gr. epi pe; stasis stare, pozi"ie) interac"iunea dintre dou! gene nealele, prin care una inhib! activitatea celeilalte. Eucariot (gr. eu adev!rat; karyon nucleu) organism unicelular sau pluricelular, cu nucleu delimitat de membran! nuclear!, n interiorul c!ruia se g!se#te materialul genetic. Eucromatina (gr. eu adev!rat; chroma culoare) regiune a cromozomului, care n interfaz! este nespiralizat!, cu gene structurale active. Exon (engl. expressed exprimat) - segment informa"ional al unei gene, transcris #i translat ntr-o secven"! de aminoacizi. Explant (lat. explantare a s!di n afar!) fragment de "esut vegetal sau animal, transferat pe un mediu artificial de cre#tere.

***
Fenocopie (gr. phaino apari"ie; copia abunden"!) modificare morfo-fiziologic! produs! de un factor de mediu, care imit! o modificare similar!, condi"ionat! genetic. Fenotip (gr. phaino apari"ie; typos model) totalitatea caracterelor morfologice, fiziologice, biochimice #i comportamentale, rezultate din interac"iunea genotipului cu mediul. Filogenie (gr. phylon ras!; genesis na#tere) totalitatea rela"iilor evolutive dintre grupe sistematice de plante sau animale, stabilite pe criterii genetice.
284

Fragmoplast (gr. phragmos gard; plastos format) membran! separatoare a celor dou! celule fiice, ce rezult! n urma mitozei.

***
Gamet (gr. gamete so"ie; gametes so") celul! sexual! matur!, ce poate fi fecundat! de alta de sex opus, rezultnd celula ou sau zigotul. Gametogenez# (gr. gametes so"; genesis na#tere) procesul de formare a game"ilor. Gen# (gr. genos urma#) secven"! nucleotidic! din ADN sau ARNv, ce de"ine informa"ia genetic! pentru sinteza unui lan" polipeptidic, a unei molecule de ARNt sau a unei molecule de ARNr la nivel cromozomic, ocupnd un loc bine definit, denumit locus. Genofond (gr. genos urma#; fr. fond fond) totalitatea genelor unei popula"ii vegetale sau animale. Genom (gr. genos urma#) - totalitatea genelor dintr-o celul! sau dintr-un virus; la eucariote, totalitatea genelor dintr-un set haploid de cromozomi. Genotip (gr. gennaein a produce; typos tip, model) constitu"ia (structura) genetic! a unui organism; n sens restrns, genotipul, se refer! la tipul alelelor, uneia sau mai multor gene luate n studiu. Gonocorism (gr. gonos urma#; chorisma separare) separarea indivizilor unei specii, n cele dou! sexe, pe baza caracterelor sexuale primare #i secundare. Guanin# (2- amino 6- oxipurin!) baz! azotat! purinic!, prezent! n unul din cele patru tipuri de nucleotide din ADN #i ARN.

***
Haploid (gr. haploos odat!; eidos form!) stare n care o celul! sau un organism posed! un singur set de cromozomi(n); n game"i, haploidia este o caracteristic! normal!, n urma fecund!rii , restabilindu-se structura diploid! (2n), caracteristic! speciei. Hemizigot (gr. hemi jum!tate; zygotos - njugat, mperecheat) individ diploid care ntr-un anumit locus, a unei perechi de cromozomi, poseda numai una din cele dou! alele, cum este cazul sexului heterogametic XY.
285

Heritabilitate (engl. heritability ereditar) indice statistic, care exprim! m!sura n care un caracter ereditar este determinat de genotip sau de factorii de mediu. Heterocarion (gr. heteros altul; karyon nucleu) celul! cu doi sau mai mul"i nuclei diferi"i. Heterocromatin# (gr. heteros altul; chroma culoare; tainia filament) regiune a cromozomului , adiacent! centromerului #i telomerelor, intens condensat! n interfaz!, inactiv! genic, fiind alc!tuit! din ADN repetitiv. Heterocromozom (gr. heteros altul; chroma culoare; soma corp) unul din cei doi cromozomi X , ai unui organism homogametic XX, care n interfaz! formeaz! cromatina sexual!. Heterozigot (gr. heteros altul; zygotos - mpreun!) individ diploid sau poliploid, care, ntr-un locus sau mai mul"i , posed! gene alele diferite. Heterozis (gr. heterosis schimbare) superioritatea hibrizilor fa"! de fiecare genitor, privind unul sau mai multe caractere ereditare (vigoare hibrid!). Hexaploid (gr. hexa #ase; haploos simplu; eidos form!) celul! sau organism, cu #ase seturi complete de cromozomi (2n=6x). Hfr (engl. high frequency of recombination nalt! frecven"! de recombinare) su#! bacterian! cu factorul de fertilitate integrat n cromozomul propriu zis, care realizeaz! procesul de conjugare cu o frecven"! foarte mare. Hibridoma (lat. hybrida metis; gr. oma sufix cu sensul de tumor!) cultur! de celule hibride care produc anticorpi monoclonali. Histone proteine bazice ce realizeaz! cu ADN, complexul nucleohistonic; cele cinci tipuri principale de histone sunt: H1, H2A, H2B, H3 #i H4. Holandric (gr. holos tot; ander b!rbat) caracter determinat de o gen! localizat! pe cromozomul Y, sex-linkat! cu sexul heterogametic XY. Homeostazie (gr. homoios asem!n!tor; stasis stare) - nsu#ire adaptativ! a unui organism, de a-#i men"ine integritatea genetic!, ntre anumite limite, n condi"ii de mediu variabile. Homozigot (gr. homos acela#i; zygotos - mpreunat) individ diploid sau poliploid, avnd acelea#i gene alele la un anumit locus, n cromozomi omologi.
286

***
Idiogram# (gr. idios propriu; gramma desen) reprezentare grafic! a cromozomilor unei specii, la o anumit! scar!, ce red! num!rul, forma, m!rimea #i alte particularit!"i ale acestora. Incompatibilitate (fr. incompatibilite incompatibilitate) incapacitatea game"ilor de sex diferit de a se fecunda, pentru a da na#tere la un zigot viabil. Inductor (lat. inducere a duce la ) substan"! care inactiveaz! un represor, care la rndul s!u, nu mai blocheaz! gena operatoare, operonul este func"ional #i genele structurale fiind activate, determin! sinteza enzimelor catabolizante. Induc"ie enzimatic# - sinteza unei enzime n prezen"a unui metabolit, de obicei, a propriului substrat ce trebuie catabolizat Interferen"# (lat. interferire - a se mpotrivi) tendin"a unui crossing-over, ca pe o anumit! distan"!, exprimat! n unit!"i de recombinare, s! modifice frecven"a cu care se produce un alt crossing-over. Intron (engl. intragene - n gen!) secven"! nucleotidic! noninforma"ional!, de 100-1000 nucleotide, care poate fi situat! la capetele unei gene sau n interiorul acesteia, separnd exonii. Inversie (lat. inversio r!sturnare) abera"ie cromozomic!, constnd n ruperea unui segment cromozomic, r!sucirea lui cu 180o #i reata#area n acela#i loc, ducnd la inversarea ordinii unui grup de gene. In vitro (lat. vitrum sticl!) experien"! efectuat! n condi"ii de laborator(n afara organismului). In vivo (lat. vivum viu) procese #i experien"e ce se realizeaz! n organisme vii. IS (engl. insertion sequence segmente de inser"ie) secven"e scurte de ADN, con"innd 800-2000 nucleotide, care se pot integra n diferite locuri ale genomului, fiind denumite #i transpozoni.

***
287

Kilobaz# (kb) unitate de m!sur!, egal! cu 1000 de nucleotide, din molecula de ADN sau ARN. Kilodalton (Kdal) unitate de mas!, egal! cu 1000 de daltoni (dal.). Knob (engl. knob nod) zon! heterocromatic! prezent! la unii cromozomi ai unor specii vegetale sau animale, detectabil! n interfaz! #i folosit! ca marker genetic.

***
Leptonema (gr. leptos sub"ire; nema fir) stadiu din profaza primar! a meiozei, cnd cromozomii, n num!r diploid(2n), au aspectul unor filamente extrem de sub"iri #i foarte lungi, datorit! gradului maxim de despiralizare a comatinei. Linkage (engl. linkage leg!tur!, nl!n"uire) asocierea a dou! sau mai multe gene nealele, situate n acela#i cromozom, care se transmit cu o frecven"! mai mare n aceast! stare, dect s! segrege independent Liz# (gr. lysis dizolvare) distrugere sau dizolvare a unei celule de un agent fizic, chimic sau biologic. Lizogenizare (gr. lysis dizolvare; gennaein a produce) multiplicarea materialului genetic al fagilor, n urma integr!rii cromozomului fagic, n cromozomul bacterian. Lizozom (gr. lysis dizolvare; soma corp) organit citoplasmatic, specific celulei animale, produs de aparatul Golgi, ce con"ine enzime denumite hidrolaze. Locus pl. loci (lat. locus loc) pozi"ia unei gene ntr-un cromozom.

***
Marker (engl. marker care indic!) secven"! nucleotidic! din ADN, gen! cu efect fenotipic detectabil, al c!rui locus este cunoscut, folosit pentru localizarea altor gene; un cromozom cu o anumit! particularitate morfologic!(ex. cromozomii cu knob). Meioz# (gr. meion mai pu"in; osis condi"ie) diviziune specific! celulelor sexuale, pe parcursul c!reia, dintr-o celul! cu 2n cromozomi, rezult! patru celule fiice cu n cromozomi.
288

Merogonie (gr. meros parte; gone descendent) formarea unui embrion, prin fecundarea unui ovul anucleat, de un spermatozoid normal. Mitoz# (gr. mitos filament; osis condi"ie) diviziune caracteristic! celulelor somatice, n urma c!reia, dintr-o celul! celul! ini"ial! cu 2n cromozomi, rezult! dou! celule fiice identice, cu acela#i num!r de cromozomi #i aceea#i structur! genetic!. Modifica"ie (lat. modificatio m!surare) caracter a c!rui modificare a fost determinat! de mediu, nefiind ereditar!. Monoploid (gr. monos singur; haploos simplu; eidos form!) individ care posed! n celulele somatice, un num!r haploid de cromozomi, provenind dintr-o specie diploid! (2n=2x); sin. haploid adev!rat. Monosomie (gr. monos singur; soma corp) absen"a unui cromozom dintr-o pereche (2n-1), la o celul! sau la un individ. Muta"ie (lat. mutatio schimbare) orice modificare n structura materialului genetic, la orice nivel de organizare a acestuia (subgen!, gen!, cromozom, genom), care se transmite ereditar. Muton cea mai mic! unitate din molecula de ADN, ce poate suferi o muta"ie, echivalent! unei perechi de nucleotide.

***
Nucleoid (lat. nucleus smbure) zon! mai dens! n celula procariot!, format! din ADN spiralizat, nconjurat de mici cantit!"i de proteine. Nulisomie (lat. nullus nici unul; gr. soma corp ) absen"a unei perechi de cromozomi dintr-o celul! sau din celulele unui organism (2n-2).

***
Okazaki fragmente Okazaki secven"e de 400 2000 nucleotide ale ADN mpreun! cu scurte secven"e de ARN la un cap!t (50 100 ribonucleotide), care particip! la sinteza replicativ! a ADN. Existen"a lor a permis explicarea modului n care are loc sinteza a dou! lan"uri polinucleotidice, cu polaritate opus! (3-5; 5-3), de c!tre o singur! enzim!, ADN polimeraza III, care ac"ioneaz! ntr-o singur! direc"ie

289

Operon (lat. operare a opera) unitate func"ional! din genomul bacterian, alc!tuit! din promotor, gena operatoare #i mai multe gene structurale, ce intervine n reglajul activit!"ii genice. Ovogenez# (lat. ovum ou; gr. genesis na#tere) procesul n urma c!ruia se formeaz! celulele sexuale femele.

***
Pachiten (gr. pachys gros; tainia filament) stadiu din profaza primar! a meiozei, n care cromozomii bivalen"i sunt ntr-o sinaps! complet!, puternic r!suci"i unul n jurul celuilalt nct, aparent, num!rul lor este haploid. Panmixie (gr. pan tot; mixis amestec) caracteristic! ce presupune c! un individ dintr-o popula"ie are aceea#i #ans! de a se ncruci#a cu oricare individ de sex opus din popula"ia respectiv!. Partenogenez# (gr. parthenos virgin; genesis na#tere) formarea unui embrion, dintr-o celul! sexual! femel! (ginogenez!) sau dintr-o celul! sexual! mascul! (androgenez!). Pericentric (gr. peri - n jur; kentron centru) restructurare cromozomic!, care implic! un segment ce include centromerul. Perisoploid (gr. perissos impar; haploos simplu; eidos form!) poliploid cu num!r impar de garnituri cromozomice (3x, 5x, 7x etc. ) Poliploidie (gr. polys mul"i; haploos odat!; eidos form!) multiplicarea num!rului de seturi cromozomice. Polizom (gr. polys mul"i; soma corp) complex structural, format prin asocierea mai multor ribozomi cu o molecul! de ARNm, a c!rei informa"ie genetic! urmeaz! a fi tradus! (translat!) ntr-o secven"! polipeptidic!. Primer (engl. primer primul) secven"! scurt! de nucleotide (ADN sau ARN), cu care ncepe sinteza lan"urilor polinucleotidice. Procariote (gr. pro - nainte; karyon nucleu) organisme simple, unicelulare, care nu au nucleu, materialul genetic, fiind n contact direct cu citoplasma. Profag (gr. pro - nainte; phagein a mnca) bacteriofag integrat n cromozomul bacteriei infectate, replicndu-se odat! cu replicarea cromozomului bacteriei gazd!.
290

Protoplast (gr. protos primul; plastos format) celul! procariot! sau eucariot!, a c!rei membran! extern!, de obicei rigid! (peretele celular), a fost ndep!rtat!. Puf (engl. puff puf de pudrier!) modificare structural! a cromozomilor politeni, n care se sintetizeaz! ARN #i proteine.

***
Rad (prescurtare de la Radiation absorbed dose doz! de radia"ie absorbit!) doza de radia"ii echivalent! cu o energie de 100 de ergi, absorbit! de 1g de substan"! iradiat!. Radiogenetic# (lat. radius raz!; gr. gennaein a na#te) ramur! a geneticii care studiaz! efectele mutagene ale radia"iilor electromagnetice (razele X, gamma) #i corpusculare (raze beta, protoni, neutroni etc.). Receptor (lat. receptor care prime#te) protein! localizat! pe membrana celular! sau n citoplasm!, care se poate lega specific de o protein! din afara celulei. Recombinare (lat. re din nou; combinare a uni dou! lucruri) apari"ia genotipurilor noi la descenden"i, comparativ cu genotipurile p!rin"ilor (recombinare cromozomic!, recombinare genic!, conversie genic!). Replicare semiconservativ# (lat. replicare a ndoi, a mp!turi) formarea a dou! molecule bicatenare de ADN, dintr-o molecul! bicatenar! ini"ial!; dup! ruperea pun"ilor de hidrogen dintre catenele moleculei ini"iale, fiecare devine matri"! pentru sinteza unei catene noi, complementare. Ribozom (gr. ribos boab!; soma corp) organit citoplasmatic, la nivelul c!ruia are loc sinteza proteinelor.

***
Segregare (lat. segregare a separa) separarea cromozomilor omologi n meioz! #i implicit segregarea genelor alele. Semidominan"# (lat. semi jum!tate; dominans dominant) interac"iune ntre genele alele, n urma c!reia, indivizii heterozigo"i (Aa) manifest! un fenotip intermediar ntre fenotipurile parentale (AA #i aa).

291

Sex duc"ie (lat. sexus sex; ducere a duce) transferul unei gene de la o bacterie la alta, cu ajutorul factorului de fertilitate recombinat, F. Sex ratio (lat. sexus sex; ratio raport) raportul dintre num!rul de masculi #i num!rul de femele. Sex linkage (lat. sexus sex; engl. linkage leg!tur!) tip special de transmitere a caracterelor, determinate de gene localizate pe heterozomi (X sau Y). Sinaps# (gr. synapsis unire) gruparea cromozomilor omologi n profaza I a meiozei prin complexul sinaptinemal. Sinergid# (gr. synergos colaborator) una din cele dou! celule haploide din apropierea oosferei, prezent! la plante n sacul embrionar. Singamie (gr. syn - mpreun!; gamos c!s!torie) fuzionarea complet! a game"ilor de la cele dou! sexe, rezultnd celula ou sau zigotul. Soma (gr. soma corp) totalitatea celulelor unui organism, cu excep"ia celulelor sexuale (game"i). Spermatocit (gr. sperma s!mn"!; kytos cavitate) celul! animal!, rezultat! prin mitoza unei spermatogonii. Spermatogenez# (gr. sperma s!mn"!; genesis na#tere) procesul de formare a game"ilor masculi. Statmochinez# (gr. stathmos oprire; kinesis mi#care) mitoz! anormal!, determinat! de blocarea form!rii fusului nuclear, ceea ce determin! dublarea num!rului de cromozomi (nucleu de restitu"ie).

***
Telofaz# (gr. telos cap!t; phasis faz!) ultima faz! a mitozei sau meiozei, ce coincide cu formarea celor doi nuclei fii #i a celulelor fiice. Telomer (gr. telos cap!t; meros parte) segment terminal al cromatidei unui cromozom. Test cross (engl. ncruci#are de prob!) metod! de hibridare ce permite stabilirea structurii genetice a unui individ cu genotip necunoscut, prin ncruci#are cu un individ homozigot recesiv (tester).
292

Tetrad# (gr. tetras patru) tetrad! cromozomic! - cele patru cromatide ale cromozomilor bivalen"i din meioz!; tetrad! celular! - grup de patru celule haploide ce rezult! n urma meiozei. Tetraploid (gr. tetras patru; haploos simplu; eidos form!) celul! sau organism, cu patru seturi haploide de cromozomi (2n = 4x). Tetrasomie (gr. tetras patru; soma corp) prezen"a a doi cromozomi suplimentari la una din perechile de cromozomi omologi (2n+2). Timina ( 2,6oxi 5- metil pirimidina) baz! pirimidinic! prezent! n dezoxiribonucleotide. Transcrip"ie (lat. transcriptio transcriere) copierea informa"iei genetice de pe o por"iune a unei catene de ADN, ntr-o molecul! de ARNm, n prezen"a enzimei ARN polimeraza. Transduc"ie (lat. transducere a transfera) transferul uneia, rar dou! #i foarte rar trei gene, de la o bacterie la alta, cu ajutorul unui fag temperat. Transgresie (lat. transgressio trecere dincolo de.) - apari"ia n genera"ia a doua sau mai trziu, a unor fenotipuri ce se abat de la limitele de varia"ie ale genitorilor #i a celor din genera"ia F1. Transla"ie (lat. trans de cealalt! parte; locus loc) traducerea secven"ei ribonucleotidice din ARNm, ntr-o secven"! de aminoacizi, la nivelul polizomilor. Transloca"ie (lat. trans dincolo de; locatio - nchiriere) trecerea unui segment dintr-un cromozom, ntr-o ruptur! a altui cromozom neomolog. Transpozon (lat. trans dincolo de; positio pozi"ie) secven"! nucleotidic! de ADN care-#i poate schimba pozi"ia n genom. Triploid (gr. triploos triplu; haploos simplu; eidos form!) celul! sau organism cu trei seturi de cromozomi (2n=3x). Trivalent (gr. tria trei; lat. valens puternic) asocierea a trei cromozomi omologi n meioz!.

***
Unisexuat (lat. unus unul; sexus sex) animal sau plant! care produc numai game"ii unui sex.
293

Unitate Morgan m!sura distan"ei relative dintre genele aceluia#i cromozom, exprimat! prin frecven"a recombin!rilor dintre cromozomii omologi. Uracil (2 dioxipirimidina) baz! pirimidinic!, component! a ribonucleotidelor (ARN).

***
Variabilitate (lat. variabilis variabil) deosebirile dintre indivizii unei popula"ii sau specii, ce nu sunt determinate de sex sau vrst!. Varian"# - gradul de dispersie a valorilor individuale n jurul mediei aritmetice, ce exprim! gradul de variabilitate al unui caracter ereditar. Viroid (lat. virus otrav!; oid asem!n!tor) agent infec"ios subviral, format dintr-o molecul! de ARN, cu greutatea molecular! de 75-100.000 daltoni, f!r! capsid!. Virus (lat. virus otrav!) procariot extrem de simplu, ce con"ine o molecul! de ADN (dezoxiribovirus) sau ARNv (ribovirus), nconjurate de un nveli# proteic (capsid!).

***
Xenie (gr. xenos str!in) prezen"a unor caractere paterne n endospermul semin"elor.

***
Zigot (gr. zygotos - mpreunat) celul! diploid! ce rezult! n urma fecund!rii game"ilor haploizi, a celor dou! sexe. Zigonema (gr. zygon - mperecheat; nema fir) stadiu din profaza I a meiozei, n care are loc sinapsa cromozomilor omologi, rezultnd cromozomi bivalen"i.

294

BIBLIOGRAFIE SELECTIV!
1. ANTOHI, St., GAVRILA, L., 1981, Progrese n genetica molecular!. Edit. "tiin#ific! $i enciclopedic!, Bucure$ti. 2. B%RA, I., CORNEANU, G., 1989, Elemente de radiobiologie vegetal!, Edit. Ceres, Bucure$ti. 3. BECKWITH, J.R., ZIPSER, D., 1970, The lactose Operon. New Zork. Cold Spring Harbor Laboratory. 4. BENOIT, J., LEROY, P., VENDRELY, R., VENDRELY, C., 1959, Modification des caractres raciaux du canard Pkin par l'DNA du canard Kaki Campbell et leur transmission a la descendence. Lige, Col. Int. DNA. 5. BENZER, S., 1962, The structure of the gene. In: Sci. Amer. 6. BRESCH, C., 1965, Klassische und molekulare Genetik. Berlin, Springer Verlag, Heiselberg, New-York. 7. BREWBAKAR, J.L., 1964, Agricultural Genetics. Englewood Cliffs N.J.: Prentice-Hall. 8. BUTNARU, GALLIA, 1985, Genetica, vol. I $i II, Lito., Inst. Agronomic, Timi$oara. 9. BUTNARU, GALLIA., NICOLAE, I., T%MAS, ELENA, 1999, Genetica molecular!, Edit. Mirton, Timi$oara. 10. CEAPOIU, N., 1976, Genetica $i evolu#ia popula#iilor biologice. Edit. Academiei R.S.R., Bucure$ti. 11. CELIS, E.J., 1994, Cell Biology, a laboratory handbook, vol.1, Academic Press, London 12. COLES, N., 1974, Genetica. Craiova, Lito universitate. 13. CR%CIUN, T., 1970, Genetica. Edit. Didactic! $i pedagogic!, Bucure$ti. 14. CR%CIUN, T., 1972, Haploidia n cercet!rile de genetic! $i n ameliorarea plantelor. Probleme de genetic! teoretic! $i aplicat!, I.C.C.P.T., Fundulea, vol. IV,b. 15. CR%CIUN, T., CR%CIUN, V., 1976, Mic dic#ionar de biologie. Edit.Albatros, Bucure$ti. 16. CR%CIUN, T., PATRASCU, MINODORA, 1978, Mecanismele eredit!#ii. Edit. Albatros, Bucure$ti. 17. CR%CIUN, T., TOMOZEI, I., COLES, N., NASTA, A., 1978, Genetica. Edit. Didactic! $i pedagogic!, Bucure$ti. 18. CR%CIUN, T., 1981, Genetica plantelor horticole. Edit. Ceres, Bucure$ti. 19. CR%CIUN, T., TOMOZEI, I., COLES, N., BUTNARU, GALLIA, 1991, Genetica, Edit. didactic! $i pedagogic!, Bucure$ti. 20. CRLAN, M., 1996, Elemente de genetic! animal! normal!. Edit. Polirom, Ia$i.
295

21. CRLAN, M., CREANG%, "T., 2001, Evolu#ia determinismului genetic al sexelor, Edit. Sedcom Libris, Ia$i. 22. CORNEANU, MIHAELA, 2001, Genetic!. Edit. Sitechi, Craiova. 23. CRICK, F.H.C., 1962, The genetic code. Sci. Am. 10. 24. DARVASI, A., SOLLER, M., 1993, A Simple Method to Calculate Resolving Power and Confidence Interval of QTL Map Location Behavior Genetics, vol. 27, No. 2 25. DARVASI, A., SOLLER, M., 1994, Selectiv DNA Pooling for Determination of Linkage Between a Molecular Marker and a Quantitative Trait Locus, Genetics 138, 1365-1373 26. DIACONU, P., 1971, Ereditatea $i factorii mutageni. Edit. Ceres, Bucure$ti. 27. DIACONU, P., 1974, De la factorii ereditari la codul genetic. Edit. Ceres, Bucure$ti. 28. DRACEA, I., 1972, Genetica. Edit. Didactic! $i pedagogic!, Bucure$ti. 29. DRACEA, I., 1973, Genetica. Edit. Didactic! $i pedagogic!, Bucure$ti. 30. DUBININ, N.P., 1965, Genetica molecular! $i ac#iunea radia#iilor asupra eredit!#ii. Edit. Agro-Silvic!, Bucure$ti. 31. DUBININ, N.P., 1977, Mi$carea etern!. Edit. Politic!, Bucure$ti. 32. DUDLEY, J.W., 1993, Molecular Markers in Plant Improvement: Manipulation of Genes Affecting Quantitative Traits, Crop Sci. 33: 660-668 33. DU PRAW, E.J., 1970, DNA and Chromosomes. New York Holt. Rinehart and Winston. 34. FREIFELDER, D., 1987, Microbial genetics, Jones and Barlett Publishers, Boston, London. 35. GARDNER, E.J., 1967, Principles of Genetics. New York, John Wiley and Sons. Inc. 36. GAVRIL%, L., DABALA, I., 1975, Genetica diviziunii celulare. Edit. Dacia, Cluj-Napoca. 37. GAVRIL%, L., DABALA, I., 1981, Descifrnd tainele eredit!#ii. Edit. Dacia, Cluj-Napoca. 38. GIOSAN, N., S%ULESCU, N., 1972, Principii de genetic!. Edit.$tiin#ific!, Bucure$ti. 39. GRIFFITHS, J.F.A., $i colab., 1999, Modern Genetic Analysis, W.H. Freeman and Co, New York. 40. HAGGIS, G.H., MICHIE, D., MUIR, A.R., ROBERTS, K.B., WALKER, P.M.B., 1967, Introducere n biologia molecular!. Edit. "tiin#ific!, Bucure$ti. 41. HARTL, L.D., FREIFELDER, D., SNYDER, A.L., 1994, Basic Genetics, Jones and Bartlett, Publishers, Boston. 42. JACOB, F., MONOD, J., 1961, Genetic regulator mechanism in the synthesis of proteins. In rev. J. Mol. Biol. nr.3. 43. JACOB, F., 1970, Logica viului. Edit. "tiin#ific! $i enciclopedic!, Bucure$ti. 44. JONES, N., OUGHAM, HELEN, THOMAS, H., 1997, New Phytol., 137, 165-177 45. KEARSEY, M.J., FARQUHAR, A.G.L., 1998, QTL Analyses in Plants; where are we now? Heredity, 80, 137-142
296

46. KING, R.C., 1962, Genetics. Oxford University Press, New York 47. KNAPP, S.J., 1991, Using molecular markers to map multiple quantitative trait loci: model for backcross, recombinant inbred and doubled haploid progeny, Theor. Appl. Genet., 81; 333-338 48. LANDER, E.S., BOTSTEIN, D., 1989, Mapping Mendelian Factors Underlying Quantitative Traits Using RFLP Linkage Maps, Genetics, 121, 185-199 49. LEVINE, R.P., 1962, Genetics. New York, Holt, Rinehart and Winston. 50. LEWIN, B., 1994, Genes V, Oxford University Press, New York. 51. LIU, Z.W., BIYASHER, R.M., SAGHAI MAROOF, M.A., 1996, Theor. Appl. Genet., 93: 869-876 52. LINTS, F., 1991, Genetique 3, Office International de Librairie Bruxelles, Technique et Documentation, Paris. 53. MANLY, K.F., OLSON, M. JANE, 1999, Manager QT, Mammalian Genom, 10, 327-334 54. MAXIMILIAN, C., 1982, Genetica uman!. Edit. "tiin#ific! $i enciclopedic!, Bucure$ti. 55. MAXIMILIAN, C., IOAN, DOINA MARIA, 1984, Dic#ionar enciclopedic de genetic!. Edit. "tiin#ific! $i enciclopedic!, Bucure$ti. 56. MENDEL, GR., 1945, Experien#e asupra hibrizilor de plante. Buletinul cultiv!rii $i fecund!rii tutunului. Nr. 3-4. 57. MORARU, I., ANTOHI, ST., 1966, Introducerea n genetica molecular!. Edit. Medical!, Ed. a. 2-a, Bucure$ti. 58. MORGAN, T.H., 1938, Bazele $tiin#ifice ale evolu#iei. Bucure$ti, Imp. central!. 59. NEGRU&IU, E., PETRE, A., PIPERNEA, A., 1969, Genetica $i ameliorarea animalelor. Edit. Didactic! $i pedagogic!, Bucure$ti. 60. NICOLAE, I., 1978, Mutageneza experimental!, Edit. Ceres, Bucure$ti. 61. OPRESCU, S., 1983, nainta$i ai geneticii n Romnia. Edit. Ceres, Bucure$ti. 62. PANFIL, C., 1974, Genetica. Edit. Didactic! $i pedagogic!, Bucure$ti. 63. PANFIL, C., 1980, ntreb!ri $i r!spunsuri din genetic!. Edit. Dacia, ClujNapoca. 64. PATERSON, A.H., LANDER, E.S., HEWITT, J.D., PETERSON, SUSAN, LINCOLN, S.E., TANKSLEY, S.D., 1988, Resolution of quantitative traits into Mendelian factors by using a complete linkage map of restriction fragment length polymorphisms, Nature, vol. 335. 65. PETIT, C., PREVOST, G., 1967, Gntique et evolution. Hermann Collection, Paris. 66. POPA, L., REPANOVICI, RODICA, 1982, Tehnologia ADN recombinat. Edit. "tiin#ific! $i enciclopedic!, Bucure$ti. 67. POPESCU, St., 1947, Genetic!, Edit. Politehnicii Gh. Asachi, Ia$i. 68. POPESCU VIFOR, St., PIPERNEA, N., PETRE, A., VINTIL%, I., 1979, Genetica animal!. Edit. Didactic! $i pedagogic!, Bucure$ti. 69. PORTOCALA, R., POPA, L., 1966, Acizii ribonucleici celulari $i virali. Edit. Academiei R.S.R., Bucure$ti.
297

70. RAICU, P., 1980, Genetica. Edit. Didactic! $i pedagogic!, Bucure$ti. 71. RAICU, P., GORENFLOT, R., 1980, Cytogntique et evolution. Edit. Academiei R.S.R., Bucure$ti. 72. RAICU, P., STOIAN, VERONICA, 1989, Gene $i cromozomi. Edit. $tiin#ific! $i enciclopedic!, Bucure$ti. 73. RAICU, P., 1997, Genetic! general! $i uman!, Edit. Humanitas, Bucure$ti. 74. RIEGER, R., MICHAELIS, A., GREEN, M.M., 1976, Glossary of genetics and cytogenetics. Gustav Fischer Verlag, Jena. 75. RUSU, V., 1996, Nobel, retrospectiv! 1901-1995, Edit. Omnia, Ia$i. 76. SERRA, J.A., 1965, Modern Genetics, vol.1, vol.2, 1968, vol.3. Academic Press, London, New York. 77. SINGLETON, R.W., 1967, Elementary genetics, 2nd Editions, Van Nostrand Regional Offices, New York. 78. SRB, A.M., OWEN, R.D., EDGAR, R.S., 1965, General Genetics. Freeman and Co., San Francisco and London. 79. STR%JERU, SILVIA, MURARIU, DANELA, POPA, MIRELA, PL%CINT%, DOMNICA, 2001, Conservarea $i utilizarea resurselor genetice vegetale, Tipogr. Univ. Suceava 80. TANKSLEY, S.D., 1993, Mapping Polygenes, Annu. Rev. Genet, 27, 205233 81. TAYLOR, J.H., 1963, The replication and organisation of DNA in chomosomes. In Molecular genetics, Academic Press, New York. 82. TAYLOR, J.H., 1967, Molecular Genetics, Part II, Academic Press, New York. 83. TINKER, N.A:, MATHER, D.E., Methods for QTL analysis with progeny replicated in multiple environments 84. TOMA, C., NI&%, MIHAELA, 1995, Celula vegetal!. Edit. Universit!#ii Al. I. Cuza, Ia$i. 85. TOMOZEI, I., 1967, Curs de genetic!. Lito Ins. Agron. Ia$i. 86. TOMOZEI, I., &RDEA, GH., 1985, Genetica. Lito inst. Agron. Ia$i. 87. TUDOSE, I. GH., 1992, Genetica, vol.1, Edit. Univ. Al. I. Cuza, Ia$i. 88. TUDOSE, I. GH., 1993, Genetica, vol.2, Edit. Univ. Al. I. Cuza, Ia$i. 89. &RDEA, GH., 1996, Genetica, Lito, UAMV Ia$i. 90. WATSON, J.D., CRICK, F.H.C., 1953, The structure of DNA. Cold Spring Harbor Symp., Quant. Biol., 18. 91. WATSON, J.D., 1974, Biologia molecular! a genei. Edit. $tiin#ific!, Bucure$ti. 92. WILKINS, M.H.F., 1961, The molecular structure of DNA. J. Chim. Phys. 58. 93. WILKINS, M.H.F., 1963, Molecular configuration of nucleic acids. Science, 140. 94. ZARNEA, G., 1986, Tratat de microbiologie general!, vol. III, Edit. Academiei R.S.R., Bucure$ti. 95. ZOLYNEAK, C.C., 1967, Radiogenetica. Fasc. I. ndrum!tor de laborator. Lito., Ia$i.
298

96. ZOLYNEAK, C.C., 1968, Radiogenetica. Fasc. a II-a ndrum!tor de laborator. Lito., Ia$i. 97. ZOLYNEAK, C.C., 1968, Genetica. Lito. Universitatea Ia$i. 98. ZOLYNEAK, C.C., 1978, Dic#ionar de genetic!. Xerox, Univ. Al.I. Cuza Ia$i. 99. ZOLYNEAK, C.C., 1982, Genetica $i ameliorarea plantelor $i animalelor. Partea I. Xerox, Univ. Al.I. Cuza Ia$i.

299