ENZIMELE

OBIECTIVELE:
Natura chimic i rolul biologic al enzimelor. Dovezile naturii
proteice a enzimelor. Diferena dintre aciunea enzimelor i
catalizatorilor nebiologici.
Structura enzimelor. Proenzimele (zimogenii). Noiune despre
centrul activ i centrul alosteric al enzimelor.
Izoenzimele i rolul lor.
Cofactorii enzimelor. Coenzimele i ionii metalici. Funciile de
coenzime a vitaminelor i microelementelor.
Natura chimic (structura) vitaminelor B1, B2, B6, PP i rolul lor
ca coenzime.
Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al enzimelor i
rolul lui n formarea i transformarea complecilor intermediari
dintre enzim i substrat. Rolul modificrilor conformaionale
reciproce ale moleculei enzimei i substratului la favorizarea
catalizei (reaciei).
Nomenclatura (denumirea) i clasificarea enzimelor. Caracteristica
general a claselor i subclaselor principale de enzime. Numrul de
cod al enzimei.
ENZIM de la grecescul
EN ZYME- n drojdii

Enzime catalizatori biologici de
natur proteic, ce mresc viteza
reaciilor chimice
E- acioneaz strict ntr-o anumit
consecutivitate i cu o anumit
specificitate

Enzimologie-
tiina,
ce se ocup
cu studierea E
Enzimodiagnostica
- este determinarea
activittii E,
care se pot modifica n
diferite patologii cu
scop de diagnoz.
Enzimoterapia
- este utilizarea E,
extrase i purificate sau
sintetizate n laborator,
n tratamentul
diferitor patologii.
Natura chimic a E
E- sunt proteine i posed toate proprietile
fizico-chimice specifice acestor molecule (solubilitate,
proprieti osmotice, sarcin electric net, denaturare
termic)
Dovezile experimentale:
1. Sunt alctuite din AA
2. Prezint macromolecule
3. n ap formeaz sol. coloidale cu propriet. sale
specifice
4. Prezint electrolii amfolii
5. Se supun denaturrii
6. Au fost sintetizate n condiii de laborator din AA
(ribonucleaza, lizozima)


Asemnrile E cu catalizatorii
neorganici
1. catalizeaz numai reaciile posibile
din punct de vedere energetic
2. nu modific echilibrul reaciilor
reversibile
3. nu modific direcia reaciei
4. nu se consum n procesul
reaciilor.
Deosebirile E de catalizatorii
neorganici
1. Viteza catalizei enzimatice este cu mult mai
mare dect a celei nebiologice (1 mg de Fe n
componena catalazei poate nlocui o ton de Fe
metalic).
2. E posed specificitate nalt.
3. E catalizeaz reaciile chimice n condiii blnde
(presiunea obinuit, temperatura 37C, pH
aproape neutru).
4. E catalizeaz reaciile fr formarea produselor
intermediare randamentul este de 100%
5. Activitatea E, de aici i reaciile enzimatice se
regleaz.
6. Viteza reaciilor este direct proporional cu
cantitatea E.
Structura enzimelor
Masa molecular a E e de mii de ori mai mare dect
masa molecular a substratului (S)
S - substana asupra creia acioneaz E
E acioneaz nu cu toat molecula dar cu un anumit
sector denumit centrul activ (CA)
CA - locul care asigur interaciunea E cu S i
transformarea ulterioar a acestuia.

Particularitile CA
1. Este o combinare unical n spaiu i n timp a anumitor
resturi de AA
2. E o structur tridimensional (AA aflai n locuri diferite)
3. Are form de adncitur sau cavitate, cptuit cu AA
hidrofobi,unde nu-i acces de ap (ex. cnd apa este un
reagent al reaciei)
4. Ocup o parte relativ mic din volumul E i majoritatea
resturilor de AA n molecula E nu contacteaz cu S
5. S relativ slab se leag cu E
6. CA este alctuit din 2 sectoare:
Sectorul de contact (de legare)
Sectorul catalitic
Centrul alosteric
Unele E posed i un alt centru (sau alte centre) dect
cel activ centru alosteric (allo stereos alt loc)
C alos - are o poziie spaial pentru fixarea
metabolitului reglator, numit efector sau modulator
Modulatorii se fixeaz necovalent i pot fi: activatori
sau inhibitori
E cu centrul alos se numesc E alosterice sau
reglatoare
La fixarea modulatorului, E alos i modific
conformaia. Modulatorii accelereaz sau inhib
utilizarea S de enzima respectiv.

Enzime alosterice
Moleculele enzimelor alosterice sunt mai mari, mai
complexe i sunt oligomere pare
Au cinetica lor viteza reaciilor n dependen de c%
S are form sigmoidal, dar nu hiperbolic, cauzat de
urmrile interaciunii ntre protomerii ce leag S n
mod cooperativ
Sunt 2 tipuri de E alosterice
1. Homotrope - modulatorul i S constituie aceeai
substan Acumularea S activeaz v reaciei catalizate
de aceast E (ex: alcoolul activeaz alcoolDH, E ce l
scindeaz)
2. Heterotrope - modulatorul se deosebete dup
structur de S.
Cofactorii enzimelor
Deosebim:
1. E simple alctuite numai din AA
2. E conjugate - sunt formate din:
a. partea proteic - apoenzim
b. partea neproteic - cofactor.
Cofactori molecule (sau ioni) mici, mai stabili la aciune
dect apoE (gr prostetic, Co; ioni metalici)
Cofactorul strns legat n structura E grupare
prostetic
Cofactorul slab legat, uor disociabil coenzim
n calitate de cofactori apar frecvent cationii unor
metale i, foarte rar, unii anioni
Rolul Co
1. stabilizeaz conformaia activ a moleculei
2. Prezint veriga de legtur ntre S i CA prin
leg. coordinative
3. Co pot ndeplini actul de cataliz
Ex. transportul electronilor

Clasificarea Co
Co vitaminice
1. Tiaminice
2. Flavinice
3. Nicotinamidice
4. Piridoxinice
5. Folice
6. Cobamidice
7. Biotinice
8. lipoice
Co nevitaminice
(nucleotidice; metaloporfirinice,peptidice)
Coenzimele tiaminice
Derivaii
vitaminei B1
TMP, TDP (TPP)-
cocarboxilaza, TTP
Rolul:
1. Decarboxilarea
oxidativ a
piruvatului
2. Decarboxilarea
oxidativ a
cetoglutaratului
3. Reacii de
transcetolare
Coenzimele flavinice
Derivai ai vitaminei
B2
FMN i FAD
Rolul:
1. Particip n reaciile
de oxido-reducere:
2. Dezaminarea AA
3. Degradarea
aldehidelor
(aldehidDH)
4. Degradarea
purinelor
(xantinoxidaza)
5. Ciclul Krebs
(succinatDH)
6. Oxidarea AG
7. DOP
(dihidrolipoilDH)
Coenzimele nicotinamidice
Sunt derivai ai
vitaminei PP niacina,
niacinamida, B5
se include n structura
a 2 Co- NAD i NADP
Rolul
Particip n reaciile
de oxido-reducere
(dehidrogenarea S
transferul unui hibrid
ion (H+ i 2 e). Alt
proton rmne n
soluie H+

Coenzimele nicotinamidice
Coenzimele piridoxinice
Derivai a vitaminei B6
Co piridoxalfosfat i
piridoxaminfosfat
Rolul:
1. Transaminarea AA
2. Decarboxilarea AA
3. Transsulfurarea

Ionii de metale cofactori ai E
Dup modul de legare i rolul ionului metalic E sunt:
Metaloenzime care conin n calitate de cofactori ioni
de metale, strns legai de apoE
Exemple:
1. Citocromi, peroxidaza, catalaza (Fe)
2. Citocromoxidaza (Cu)
3. alcoolDH; carboxipeptidaza (Zn)
E metaloactive a cror activitate crete n prezena
ionului metalic, care leag metalul slab (lipazele Ca;
amilaza salivar - Cl)
Metalele sunt fixate de apoenzim prin legturi
electrostatice la care particip resturile de AA acizi
(Asp, Glu) sau bazici (Arg, Lyz, His)

Ionii metalici ce intr n componena
metaloenzimelor ndeplinesc urmtoarele
funcii:
1. Stabilizeaz structura E
2. Particip la legarea S
3. Particip nemijlocit la cataliz
4. Fixarea cofactorului la apoE (ex: Zn leag
NAD la alcoolDH)
Co pantotenice (B3)- HS-CoA
1. biosinteza AG
2. biosinteza Col
3. sinteza corpilor cetonici
4. Oxidarea AG
5. Ciclul Krebs
6. Sinteza aminolevulinatului
7. DOP
8. DO a alfa cetoglutaratului
Transferul grupelor acil
Co biotinice vitamina H
Gluconeogenez (I cale piruvatdecarboxilaza)
Sinteza AG (formarea lui malonil CoA)
Transformarea propionil-CoA n succinil CoA
(oxidarea AG cu numr impar)
Intervine n catabolismul Leu
Co cobamidice B12 -
ciancobalamina
Vitamin antipernicioas pentru om i factor
de cretere pentru microorganisme
n ficat sunt 3 compui cobalaminici: meti-;
hidroxo- i deoxiadenozil-cobalamin
Rolul:
1. Co pentru unele transmetilaze (homocistein
metionin)
2. Co pentru anumite mutaze (izomeraze)-
metilmalonil Co A---- succinil CoA
Co folice sau pteridinice
Bc-acidul folic
Forma activ- acidul tetrahidrofolic
Rol: transferul gruprilor cu un C: metil (CH3),
metilen(-CH2), formil (COH), formimino
(CH=NH)
Mecanismul de aciune al E
Pentru decurgerea unei reacii este necesar ca molecula
de S i E s contacteze ntre ele, pentru aceasta e
necesar de contientizarea unei noiuni ca:
Energia de activare este energia necesar tuturor
moleculelor unui mol de S, care la o anumit t pot s
ating starea de tranziie (corespunztoare apixului
barierii energetice )(KJ/mol; kcal/mol)
E - micoreaz energia de activare ale reaciilor chimice.
Cu ct mai mult scade energie de activare, cu att mai
eficient acioneaz catalizatorul, i cu att mai mult se
accelereaz reacia.
Enzymes
Lower a
Reactions
Activation
Energy
Mecanismul de aciune al enzimelor.
Procesul catalizei enzimatice poate fi divizat convenional
n trei stadii:
1. Difuzia S spre E i legarea cu CA al E - formarea
complexului ES. Prima etap de scurt durat depinde
de concentraia substratului i de viteza lui de difuzie
spre centrul activ al enzimei.
Mecanismul de aciune al E
2. Transformarea complexului primar ES n unul sau cteva complexe
activate - ES*, ES** ( este cea mai lent ) La aceast etap are loc
dereglarea legturilor S, ruperea lor sau formarea noilor legturi n
urma interaciunii grupelor catalitice ale E.
3. Desprirea produselor reaciei de CA al E i difuzia lor n mediul
ambiant (complexul EP disociaz n E i P).

Ipoteza lact-cheie (Fischer) i coincidena forat
(Kochland)
Modelul clasic (Emil Fischer)
consider c potrivirea S cu CA al E
este analog cu potrivirea lact-cheie.
Acest model presupune o rigiditate a
structurii enzimei n zona CA.
modelul Kochland, numit centrul
activ indus- potrivire indus ,
presupune c CA nu este rigid, c
forma acestuia se modific n
momentul legrii S.

Conceptul clasic "lact- cheie
E+S-- ES- E+P
Conceptul coencidenei inductive
coincidena forat (Kochland)
Mecanismul de aciune al E
La nivel molecular aciunea E poate fi lmurit prin urmtoarele
efecte:
1. Efectul de orientare a substratelor (CA al E fixeaz S i le
orienteaz ntr-un mod convenabil pentru aciunea gr. catalitice)
2. Efectul de deformare a S (dup unirea n CA molecula S se
ntinde, se deformeaz favoriznd scindarea ei)
3. Cataliza acido-bazic (n procesul fixrii S n CA asupra lui
acioneaz grupele electrofile ale sectorului catalitic, are loc
redistribuirea densitii electronice n S i ruperea legturilor din
S
4. Cataliza covalent formarea legturilor covalente ntre CA i
S, complexul ES e foarte instabil, uor disociaz elibernd P
reaciei
Clasificarea actual a enzimelor.

Toate E se mpart n ase clase,
clasele n subclase,
subclasele n subsubclase,
numrul su de ordin.
Ex: LDH - 1.1.1.27
Clasa reprezint tipul de reacie, catalizat de enzime
Subclasa precizeaz aciunea E, deoarece indic natura
gruprii chimice a S, atacat de E
Subsubclasa precizeaz natura legturii S atacat sau natura
acceptorului care particip la reacii
Denumirea E denumirea S +tipul reaciei catalizate +aza

Clasificarea actual a enzimelor
1. Oxidoreductaze, catalizeaz reaciii de oxido-
reducere;
2. Transferaze, catalizeaz transferuri grupelor
funcionale de la un S la altul (metil, amino, acil,);
3. Hidrolaze catalizeaz scindri de legturi covalente cu
adiionarea apei ;
4. Liaze, catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr
adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile
inverse.
5. Izomeraze, catalizeaz toate tipurile de transformri
n cadrul uneia i aceleai molecul ;
6. Ligaze (sintetaze), catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu hidroliza
legturilor macroergice (utilizarea ATP).

Clasificarea enzimelor.
- catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu
hidroliza legturilor macroergice
(utilizarea ATP).
- catalizeaz reaciii de oxido-
reducere;
-catalizeaz transferuri
grupelor funcionale de la un S
la altul (metil, amino, acil,);
-catalizeaz scindri de
legturi covalente cu
adiionarea apei ;
-catalizeaz ruperea leg. C-C,
C-S i C-N; fr adiionarea
apei, adiia la legturi duble
i reaciile inverse.
-catalizeaz toate tipurile de
transformri n cadrul uneia
i aceleai molecul ;
Izoenzimele
forme moleculare multiple ale E (la aceeai specie, n
acelai esut, n aceeai celul), ce se deosebesc prin
structura chimic i proprietile cinetice, dar catalizeaz
aceeai reacie chimic
Sunt E cu structur cuaternar, alctuite din cel puin 2
protomeri diferii
Ex. LDH (lactat piruvat)
Prezint un tetramer, alctuit din 2 tipuri de subuniti (H
inim; M- muchi) n diferite raporturi; codificate de gene
diferite.
HHHH inim; HHHM;HHMM; HMMM; MMMM
muchi
Izoenzimele difer ntre ele prin V max de cataliz, prin
sensibilitatea fa de modulatorii alosterici



Raportul dintre aceste catene este
diferit in fiecare izoenzima. La
electroforeza se separa 5 izoenzime:
HHHH; HHHM; HHMM; HMMM;
MMMM;
Rolul acestor E consta in aceia ca ele
faciliteaza adaptarea metabolismului in
diferite tesuturi.
Ex: in miocard predomina HHHH
aceasta izoenzima este inhibata de ctre
piruvat deaceea orienteaz oxidarea
piruvatului pe cale aeroba. Pe cind
fracia M4 este activat de catre piruvat
i orienteaz transformarea piruvatului
pe cale anaerob spre lactat.

Proprietile generale
ale enzimelor
Obiectivele:
1. Proprietile generale ale E (termolabilitatea, specificitatea), aciunea pH-ului
asupra activitii enzimatice.
2. Activarea i inhibarea enzimelor:
a) mecanismele de activare (proteoliza parial, activarea alosteric,
autostructurarea cuaternar, fosforilarea i defosforilarea, reactivarea).
b) mecanismele de inhibiie (specific i nespecific, reversibil i ireversibil,
alosteric i competitiv).
3. Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice,
compartimentalizarea). Reglarea activitii enzimatice n celul
importana principiului de retroinhibitie.
4. Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele
organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni
(enzimodiagnosticul).
5. Metodele de obinere i purificare ale enzimelor. Cromatografia de afinitate.
6. Utilizarea enzimelor n practica medical. ntrebuinarea enzimelor imobilizate
n medicin.
7. Unitile de activitate ale enzimelor.
8. Metodele de determinare a activitii enzimelor.
Factorii care influieniaz activitatea E
Temperatura
PH
Concentraia S
Concentraia E
electroliii
Termolabilitatea (t)

E sunt termolabile
t optim a majoritii E se afl n
limitele 20- 40 grade
odat cu creterea t cu 10 grade
(dac lum punctul de plecare 0
grade) - V reaciei enzimatice
sporete de 1,5 ori, atingnd max la
t 40grade.
Majorarea de mai departe duce la
micorarea activitii enzimatice
ceea ce mrturisete despre
denaturarea proteinei. La 100 grade
toate E organismului sunt inactive.
Unele E a microorganismelor
termofile sunt active la t de 80
grade.
La t joase E se inactiveaz
(excepii: catalaza: activitate max la
t=0 grade)
Termolabilitatea (t)

Creterea vitezei reaciei odat
cu creterea t este nterpretat prin
prisma "energiei de activare".
Pentru fiecare E se poate stabili o
t optim la care V atinge valoarea
max, mai departe V scade din
cauza denaturrii.
Aciunea pH asupra activitii enzimatice

Fiecare E are un pH optim propriu la care i
manifest activitatea maximal.
Majoritatea E celulare au pH-ul optim- 7,4
(excepii: hidrolazele acide lizozomale pH= 5;
monoaminooxidaza din membrana mitocondrial
externa pH= 10).
La E digestive pH-lui optim este cel al sediului lor
de aciune:
Pepsina pH 1,5 2,
Amilaza pancreatic - pH 6,4-7,2,
Tripsina - pH 7,8
Arginaza- pH 9,5-10 etc.
In CA al E se afl grupri ionizabile, acide sau
bazice. Acestea interacioneaz direct cu ionii H+ si
OH-, rezultatul fiind creterea sau scderea gradului
lor de disociere
Dependena activitii E de variaia pH-ului este
deseori descris de o curb n forma de clopot.
Deci mrind sau micorind pH-ul mediului, se poate
regla activitatea catalitica a E.
pH optim e dependent de: gradul de ionizare a
grupelor functionale, afinitii E fa de S, stabilitii
E.

De [E] n condiii standard 2 mol
de E ntr-o anumit perioad de
timp vor transforma de 2 ori mai
multe molecule dect 1 mol de E
(relaie direct proporional).
De [S] n perioada iniial a
reaciei V crete pe msur ce
crete [S]. La un moment dat cnd
CA al E se ocup de S V nu mai
crete. Ea rmne constant i
corespunde V max a reaciei.

Specificitatea

este capacitatea unei E de a selecta dintr-un
numr de compui S particular.
este o proprietate a E, care instituie eficien i
ordine n metabolism, prevenind desfurarea lui
haotic.
este condiionata de complimentaritatea
conformaional i electrostatic ntre CA al E i
S.
Deci fiecare E catalizeaz un anumit tip de reactii
sau transformarea unui anumit S.

Specificitatea:
Specificitatea de reacie: E-catalizeaz un anumit tip de reacie
ce st la baza clasificrii enzimelor: o hidroliza, o reacie redox, formarea unei
legturi, etc.
Specificitate de substrat: stereochimic,
absolut i relativ :
Specificitate stereochimic - E catalizeaz transformarea
numai a unuia din stereoizomerii posibili. Ex: Amilaza scindeaz legturile 1-
4 glucozidice din amidon sau glicogen i nu influenteaz asupra legturilor
din celuloza.
specificitate de S absolut - E catalizeaz transformarea doar a
unui S (anhidraza carbonica, ureaza).
specificitate de S relativ
E acioneaz nu asupra unor grupe din mol S ci asupra anumitor
legturi a anumitei grupe de S (proteazele: chimotripsina - legatura
peptidica, formata de COOH a Phe, Tyr, Trp; tripsina - de COOH a
Lyz si Arg).
E catalizeaz transformarea grupei de substane asemntoare
(alcoolDH)
E catalizeaz transformarea substanelor care aparin diferitor grupe de
compui organici (cit. P450)


Mecanismele de activare a E
Sunt : 1. nespecifice: temperatura , iradierea
2. specifice
- Se activeaz la:
1. majorarea concentraiei S cnd este insuficient
2. majorarea cantitii E
3. introducerea coenzimelor cnd sunt insuficiente
4. Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu
- Se cunosc urmtoarele tipuri de reglare a activitii enzimatice:
- proteoliza limitata
- Reglare covalent fosforilare/ defosforilare
- Autostructurarea cuaternar
- Alosteric
- Reactivare
Proteoliz limitat
Unele enzime (proteine) se sintetizeaz n forma neactiv de precursor proenzime
(zimogeni)
Exemplu:
1) enzimele digestiei: pepsinogenul, himotripsinogenul, tripsinogenul, proelastaza,
procarboxipeptidaza - scindeaza proteinele in stomac i duoden.
2) coagularea singelui e determinat de cascada de reacii cu activitate proteolitic;
3) hormonii proteici (insulina);
4) proteinele fibrilare (colagenul).
Mecanismele de activare a proenzimelor este proteoliza limitata.
Proteoliza limitata - este scindarea (nlturarea) unui sector al catenei n rezultat enzima se
restructureaz i se formeaz CA.
H+
Pepsinogen ------pepsin
-42AA
Importanla biologic a prezenei
formelor neactive .

1. Protejaz de proteoliz proteinele celulelor
productoare de E.
2. Este o forma de rezerv a E, care rapid pot fi
activate i interven n reacie.

Reglarea covalent
(fosforilare-defosforilare)
Activitatea unor E se modific prin
fosforilare. Fosforilarea se face prin
transferul unui rest fosfat de la ATP
pe gruprile hidroxil ale unor resturi
de Ser, Tre; Tyr din componena lor.
Reaciile de fosforilare sunt catalizate
de kinaze specifice.
Este un proces reversibil
E-OH + ATP -------- E-O-P +ADP
Defosforilarea are loc sub
aciunea fosfotazei specifice
E-OP +H2O------- E-OH +H3PO4

unele enzime snt active n forma
fosforilat, iar altele n forma
defosforilat.
Ex.: glicogen fosforilaza activ n
forma fosforilat; glicogen sintaza
este activ n forma defosforilat
Autostructurarea cuaternar
E caracteristic E ce posed structur
cuaternar
Fiecare protomer n parte nu posed
activitate enzimatic
La asamblarea lor se modific conformaia
fiecrui protomer i corespunztor se
modific i conformaia CA, devenind astfel
favorabil pentru fixarea i transformarea S
Inhibiia activitii enzimelor
Deosebim:
1. inhibiie nespecific (T, pH, agenii denaturrii )
2. inhibiie specific
Inhibiiia st la baza aciiunii substanielor medicamentoase, agenilor toxici.
Inhibiia poate fi reversibil i ireversibil.
La inhibiiia ireversibil inhibitorul covalent se fixeaz de enzim sau se leag att de
puternic nct disociaia are loc foarte incet.
Exemple: cianurile se fixeaz cu Fe 3+ din citocromoxidaz ---se ntrerupe LR; ionii
metalelor grele (mercur, plumb) inhib gruparea SH a multor E
La o inhibiiie reversibil - inhibitori se fixeaza slab, necovalent de E
Deosebim:
1. Inhibiie competitiv
2. Inhibiie necompetitiv
3. Inhibiie prin exces de S
4. Inhibiie alosteric

Inhibiia competitiv
Inhibitorul se aseamn dup structur
cu S. Apare o competiie dintre I i S
pentru CA. Nu e posibil simultan fixarea
S i a I. E va fixa pe acel competitor care
se afl intr-o concentraie mai mare.
E+I ---- EI
Inhibiia competitiv diminueaz viteza
catalizei, micornd cota moleculelor de
enzim fixatoare a substratului.
Exemplu: inhibiia enzimei
succinatdehidrogenazei (SDH) cu malonat
(SDH -oxideaza succinatul in fumarat).
Malonatul inhib aceasta E datorit
asemnrii cu S.
Particularitatea principal a acestui tip de
inhibiie este ca poate fi inlturat cu
adugarea in exes a S.
Inhibiia necompetitiv
inhibitorul nu se aseamn ca structura cu S
I i S se leag simultan cu E dar locusurile sint diferite
E+S+I--------- ESI
Acest tip de inhibiie nu se nltur prin exces de
substrat.
Activitatea I const n micorarea numrului turnover al E,
dar nu i numrul de molecule de S.
Cei mai de vaza inhibitori de acest tip n celulele vii sint
produsele intermediare ale metabolismului, care reversibil se
fixeaza cu locusuri specifice pe suprafata unor enzime
reglatoare i modific activitatea lor.
I poate fi nlturat de substane care l leag numite
reactivatori


Inhibiia noncompetetiv I se leag la
complexul ES, inhib activitatea E
E+S----ES +I-----ESI
Inhibiie alosteric - inhibitorul (efectorul) se
leag n centrul alosteric al enzimei, modificnd
conformaia moleculei (structura teriar) ce are ca
consecin deformarea centrului activ.
inhibiia prin modificarea covalent a
moleculei enzimei - prin fosforilare pe baza ATP-ului.
Unele enzime fosforilate pierd activitatea de exemplu
enzima glicogensintetaza
Inhibiia prin exces de S n CA se fixeaz
simultan surplus de S ce nu poate fi transformat. Este
o inhibiie reversibil nlturarea S.
Retroinhibiie -


Sistemele polienzimatice Tipurile de
organizare a sistemelor polienzimatice
Fiecare celul a organismului conine setul su specific de E. Unele se
gsesc n toate celulele, altele sunt prezente doar n anumite celule sau
anumite compartimente celulare. Funcia fiecrei E, nu este izolat, ci
strins legat de funcia altor enzime. Astiel din E aparte se formeaza
sisteme polienzimatice sau conveiere.
Funcia sistemelor polienzimatice depinde de particularitile de
organizare a lor in celule.
Se cunosc urmatoarele tipuri de organizare a sistemelor polienzimatice:
1. - funcional,
2. - structural-funcional
3. - mixt.
Organizarea funcional
enzimele sunt asociate n sistemul polienzimatic
cu ajutorul metaboliilor, care difuzeaz de la o
enzim la alta.
produsul reaciei primei enzime servete drept
substrat pentru enzima urmtoare etc.
Ex.: glicoliza. Toate enzimele participante la
glicoliza sunt n stare solubil, legtura se face
doar prin intermediarii metabolici.
E1 E2 E3 E4
A---------------- B------------- C---------- D---------- P
Organizarea structural-funcional
E sunt fixate prin legturi slabe, ntr-o ordine corespunztoare ntrrii lor n aciune, pe
o protein central, care poate fi chiar una din enzime.
Proteina central dispune de un bra care fixeaz S i l duce la E1, care l transform
n P1;
P1devine n acest caz S2 , braul l preia i l duce la E2, care l transform n P2.
La nivelul fiecrei E braul ndeplinete rol similar asigurnd formarea produsului unic al
tuturor enzimelor complexului.
Avantajul este c braul duce de fiecare dat S la E corespunztoare, potrivindu-l cu
mare exactitate pe CA, ceea ce asigur n ansamblu o vitez mai mare dect cea
corespunztoare aciunii enzimelor neasociate.
Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit din 3 E i 5 Co
sau sintetaza acizilor grai constituit din apte enzime legate structural, care n
ansamblu ndeplinesc funcia de sinteza a acizilor grasi.
Afar de complexele multienzimatice e posibila i o alt varianta de organizare
structural-funcional. Astfel E se pot aranja n lan, fixndu-se de membrana biologic.
Ex.enzimele lanului respirator mitocondrial, care particip la transferul de electroni i
protoni i la generarea de energie.

Tipul mixt de organizare
reprezint o mbinare a ambelor tipuri de organizare,
adic o parte din sistemul polienzimatic are organizare
structurala, iar cealalta parte - organizare funcional.
Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime sunt asociate
n complex structural (complexul 2-
oxoglutaratdehidrogenazic), ar alt parte se leag
funcional prin metaboliii de legtur.

Unitile de activitate ale
enzimelor
Unitatea Internaional (U.I.) cantitatea de E
care catalizeaz transformarea 1mol de S ntr-un
minut n condiii standard
Katal (kat) cantitatea de E care asigur
transformarea unui mol de S ntr-o secund n
condiii standard (1U.I.=16,67 nkat)
Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor.
Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite
afeciuni (enzimodiagnosticul).

Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular:
n citoplasm (lactatdehidrogenaza, aldolaza),
n mitocondrii glutamatdehidrogenaza),
n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza alcalin).
Acestea enzime n norm n plasm se gsesc n
concentraii foarte mici. La afeciunile celulare
activitatea acestor enzime n plasm este brusc mrit.
Terapia cu enzime
Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte importante i specifice.
Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca medicaie e natura
protC:IC6:legat de natura proteic:
- distribuie redus n organism dependena de dimensiuni, sarcina i de
fenomenele de glicozilare (prin glicozilare proteinele sunt recunoscute de
receptori i fixate n anumite locuri
- posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd tendin de a cptta i
reine proteinele strine;
- inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul administrarii orale, iar
proteazele tisulare le scurteaza de asemeni actiunea;
- potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera reacii de
hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva enzima.
Tehnici propuse pentru optimizarea
proprietilor terapeutice ale enzimelor.
- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie
- S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate.
De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici
ori prin ataare covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii.
Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi
alterate proprietaisile farmacocinetice. Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol
(PEG) ai arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii, enzime cu efect
antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a fost imobilizarea enzimelor din ciclul
ureogenetic pe un suport de fibrina.
S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in lipozomi -
microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in hematii umane, in fantome
eritrocitare sau in alti transportori celulari. Noile forme obinute prezint un potenial de ntire
tisular. De ex. in cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se impune
o terape de substitutie, enzima trebuind tintita direct in lizozomi.