Reacia sumar.

Bilanul
energetic
CH3COSCoA +3NAD+FAD+GDP+Pi+2H2O
2CO2 +3NADH+H +FADH2+GTP+2H
+HSCoA
+
+
Reglarea ciclului Krebs
Citrat sintaza:
Inhibat - succinil CoA; AG; NADH; citrat
Activat: S- OA, Acetil CoA
IzocitratDH:
Activat: ADP, Mg, Mn
Inhibat: NADH2 i NADPH2, ATP
Alfa cetoglutaratDH
Inhibat: succinil CoA; NADH2; Se mare
Reaciile anaplerotice
Reaciile ce furnizeaz produii intermediari ai ciclului
Krebs
1. Formarea de OA
Piruvat +CO2+ATPOA+ADP+Pi
E- piruvatcarboxilaza (biotin dependent)
Asp+cetoglutarat OA+Glu
n miocard i muchi:
Fosfoenolpiruvat +CO2+GDP OA +GTP
E- fosfoenolpiruvatcarboxikinaza

Reaciile anaplerotice
2. Formarea alfa cetoglutaratului:
Glu+Piruvat Ala + cetoglutarat + Ala
3. Formarea lui succinil CoA din propionil CoA
(1. din oxidarea AG cu numr impar de atomi de
C; 2. din catabolismul Val, Ile, Met)
4. Formarea fumaratului (din catabolismul Fen i
Tyr)
Oxidarea biologic
Lanul respirator
Fosforilarea oxidativ
OBIECTIVELE
Oxidarea biologic. Dehidrogenarea substratelor - sursa energetic pentru sinteza ATP - ului.
Enziniele dehidrogenni.
Lanul respirator (schema). Complexele enzimatice. Acceptorii principali de electroni i
protoni, structura lor chimic.
Potenialul de oxido-reducere a componentelor lanului respirator. Fosforilarea oxidativ.
Locurile de fosforilare. Produsele finale ale oxidrii.
Reglarea intensitii funcionrii lanului respirator. Coeficientul P/O, controlul
respirator.
Decuplarea produselor de oxidare i fosforilare, principalii ageni decuplani. Rolul biologic al
produsului de decuplare, respiraia liber.
Mitocondriile, structura i permeabilitatea selectiv a membranelor pentru diferii cumpui..
Sistemele-navet de transport al echivalenilor de reducere.
Ipotezele principale, care explic procesele fosforilrii oxidative. Ipoteza lui Mitchell.
Oxidarea microzomal, rolul citocromului P450 n reaciile de oxido-reducere.
Vitaminele i rolul lor n procesele de oxidare biologic.
Noiune de radicali liberi. Oxidarea peroxidic a acizilor grai nesaturai din membrane.
Sistemele de protecie a celulei de acumilarea radicalilor liberi.
Oxidarea biologic. Dehidrogenarea substratelor.
Enzimele dehidrogenrii.
Oxidarea biologic (OB) reprezint
totalitatea reaciilor de oxido-reducere ce
decurg n celule i esuturi.
Rolul: asigur organismul cu energie
accesibil n form de ATP.
OB are loc prin reacii de dehidrogenare
donarea atomilor de H2 sub form de
protoni i electroni: H22H +2 .
Are loc sub aciunea enzimelor
dehidrogenaze, ale cror Co sunt NAD+ i
FAD

SUBSTRATELE NAD
1. Izocitrat +NAD alfa-cetoglutarat +NADH+H
E- izocitratDH
2. Alfa-cetoglutarat +NAD succinil Coa
+NADH+H
E-alfacetoglutaratDH
3.Malat +NAD OA+NADH+H
E-malatDH
4.Lactat +NAD Piruvat +NADH+H
E-lactatDH
5. Gliceraldehidfosfat +NAD +H3PO41,3
difosfoglicerat +NADH+H
E- GAP DH
6. Hidroxiacil CoA +NAD cetoacil Co-A +NADH+H
E-hidroxiacil -CoA DH

SUBSTRATELE FAD dependente
Succinat +FAD Fumarat +FADH2
E- succinat DH
Acil CoA + FAD enoil-CoA+FADH2
E- acil CoA DH
NADH+H+ i FADH2 rezultai n
reaciile de oxidare a acestor
substrate transfer p i n lanul
respirator.
Lanul respirator (LR). Rolul. Structura.
LR - un ansamblu (complex) de enzime
i sisteme de oxido-reducere, ce
particip la transferul H+ i de la Co
reduse (NADH, FADH2) la O2 cu
formarea H2O.
Este ultima etap a degradrii aerobe.
Este localizat n membrana intern a MC
Funcia LR:
1. Prin transferul protonilor i electronilor
Co se reoxideaz, putnd asigura
dehidrogenri n continuare.
2. Cnd Co se reoxideaz, se elibereaz
energie ce servete la sinteza ATP.
Componentele LR
1. NADH+H sau FADH2
2. Flavoproteinele FP: preiau p i e
-
de la NADH+H sau FADH2
FPN (NADH DH) - ca Co FMN - preia H2 de la NADH+H
FPs (succinatDH)- ca Co FAD- preia H2 de la FADH2
3. CoQ-ubichinona pn la CoQ sunt transportai att p ct i e
-

4. Sistemul de citocromi: b, c1, c, a i a3
- Sunt compui heteroproteici,a cror grupare prostetic este hemul
1. Transport doar e Fe
+++
+ e
-
Fe
++

2. 1 citocrom transport doar 1e
-
- 2 e
-
sunt transportai de 2 citocromi
5. Fe-S proteinele sunt localizate :
a. ntre FP i CoQ
b. ntre cit b i citc1
Schema LR

Structura componentelor LR


O
O
CH
3
O
CH
3
CH
3
O
(CH
2
CH C CH
2
)
n
H
CH
3
OH
OH
CH
3
O
CH
3
CH
3
O
(CH
2
CH C CH
2
)
n
H
CH
3
2 e

+ 2 H
+

coenzyme Q
coenzyme QH
2


N
N
N
N
CH
3
HC
CH
3
S CH
2
CH
3
CH S CH
2
CH
3
CH
2
CH
2
COO

CH
3
H
3
C
CH
2
CH
2

OOC
protein
protein
Fe
Heme c
Potenialul de O/R
Transferul p i de la NADH sau FADH2 pn
la O2 se face prin intermediul mai multor
sisteme redox.
Fiecare sistem redox (O/R) este alctuit
dintr-un donor i acceptor de echivaleni
reductori.
Fiecare sistem redox din LR posed un potenial
de oxido-reducere (potenial redox), care se
msoar n voli.
Potenialul redox standard E0 mrime egal
cu fora electromotoare exprimat n voli, ce
apare n semiconductor, n care donorul de e
-
i
acceptorul acioneaz n concentraie de 1,0
mol, la t =25 *c, i pH 7,0 formnd un echilibru
cu elecrodul ce adiioneaz e
-
de la donor i-i
transfer la acceptor.
Cu ct potenialul redox este mai electronegativ cu att este mai
nalt capacitatea de a ceda , i invers, cu ct potenialul este mai
electropozitiv, cu att este mai nalt capacitatea sistemului de a
adiiona electroni.
Sistemele redox sunt aranjate n ordinea creterii potenialului de
oxido-reducere.
transferul n trepte permite eliberarea energiei n
pachete a crei valoare este n jurul lui 7,3
kcal/mol (ct necesit sinteza unui mol de ATP
din ADP i H3PO4).
Torentul de e orientat n direcia micorrii
energiei libere a sistemului
Cu ct e mai mare diferena potenialului dintre 2
redox perechi cu att mai mare e diminuarea
energiei libere la transferul .
tiind potenialul redox al fiecrei perechi se
pot calcula modificarea energiei libere standard.
G = -nFE
n-numrul de
F-constanta lui Faraday (23062 cal/Vmol)
E0-diferena de potenial
G = -223062[+0,82-(-0,32)] = -52,6 kcal
7,3 x 3 = 21,9 cal
Randamentul utilizrii energiei libere 42%
FOSFORILAREA OXIDATIV
reprezint sinteza ATP din ADP i Pi (cuplat
cu LR), pe seama energiei eliberate la transferul
echivalenilor reductori n LR de la coenzimele
reduse la O2.
Deoarece transferul de are loc treptat, energia
se elibereaz n pachete n trepte . Pentru a
se forma ATP diferena de potenial trebuie s
fie nu mai mic de 0,22V.
Funcionarea cuplat a LR i FO este asigurat
de 5 complexe

Composition of Respiratory Chain
Complexes

Complex


denumirea

No. of
Proteins

Gruprile
prostetice
Complexul I

NADH
Dehidrogenaza

46

FMN,
Fe-S

Complexul
II

Succinat-CoQ
Reductaza

5

FAD, cit b
560
,
Fe-S

Complexul
III

CoQ-cit c
Reductaza

11

cit b562, cit b566,
Fe-S, cit c
1
,
Complexul
IV

Citochrom
Oxidaza

13

cit a, cit a
3
, Cu

Complexul I- NADH CoQ reductaz

Cderea de potenail 0,42V
G0 = -19,4 kcal/mol - 1mol ATP, restul se degaj sub
form de cldur
Inhibat: rotenon(otrav pentru peti), Na amital
(barbiturat); pericidin (antibiotic)
Complexul II- succinat - CoQ-reductaza
Variaia de potenial este de 0,07V;
G0 = -3,2 kcal/mol nu se sintetizeaz ATP
Inhibat malonat (inhibiie competitiv)
Complexul III- CoQ- citocrom c reductaza
Variaia de potenial este de 0,21V;
G0 = -7,75 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP.
Inhibat antimicina A
Complexul IV- citocromoxidaz
Catalizeaz adiia a 4 la O2 molecular (a 2 la O).
O2 + 4 + 4H+ 2H2O
Cderea de potenial de 0,54V.
G = -24,8 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP
Inhibat: CO, ozide, cianide.
Complexul V ATP-sintetaz
alctuit din:
1. F0 strbate membrana intern a MC, const din 4 tipuri de
protein ce formeaz un sistem de pori transmembranari prin
care trec protonii- canal de protoni
2. F1- partea catalitic - factor de cuplare 1:
a. se afl n intregime n matrixul mitocondrial (form de sfer).
b. e alctuit din cinci tipuri de proteine (3), (3), , ,
.
c. la acest nivel are loc reacia de condensare a ADP + Pi
ATP+H2O
Inhibat: oligomicin, atractilatul (glicozid)
Mitochondrial ATP Synthase E. coli ATP Synthase
These images depicting models of ATP Synthase subunit
structure were provided by John Walker. Some equivalent
subunits from different organisms have different names.
Toate componentele LR sunt dispuse n membrana intern a
mitocondriilor.
CoQ i cit c funcioneaz individual, iar celelalte componente
se grupeaz n complexe.

Locusurile unde are loc sinteza ATP se numesc
puncte de fosforilare.
n LR (lanul respirator) deosebim 3 puncte
de fosforilare:
1. NADH+H----CoQ
2. Cit b----citc
3. cita--cita3

Lanul respirator
ATPase
Cyt c ox
C IV C I
NADHDH
C II
SDH
C III
Cyt bc
1

matrix
membrana
intern

spaiul
intermembranar
NADH
OAA

NAD
+
Mal

MDH

Fum

FADH
2

Suc

FAD

cyt c
ox
cyt c
red

H
2
O O
2

2H
+
2H
+
2H
+
2H
+
2H
+
2H
+
2H
+
H
+
H
+
3H
+
3H
+
ATP

ATP

10H
+
ims
/4H
+
m
= 2.5H
+
per ATP

2e
-
QH
2

2H
+
2H
+
Bilanul general n procesele LR-FO.

NADH + H+ + O2 + 3ADP + 3Pi NAD+ + 3ATP +
4H2O
FADH + H+ + O2 + 2ADP + 2Pi FAD + 2ATP +
3H2O
Raportul ntre numrul de moli de ATP produi i O2 consumat
este numit ct de fosforilare P/O.
De la NADH+H pn la O2 - P/O = 3/1 ramura lung,
De la FADH2 pn la O2 - P/O = 2/1 ramura medie.
P/O reflect cuplarea transportului H+ i (respiraia) i
fosforilarea (sinteza ATP). Coeficient indic ce cantitate de P
anorganic (H3PO4) se transform n P organic (ATP) la
transportul unei perechi de H+ i n LR.

Ipoteze principale cu privire la procesele de FO.
Ipoteza lui Mitchell
Prin ce mecanism energia eliberat n LR este cuplat
cu formarea ATP?
Teoria chimic, numit i a intermediatorilor comuni
(produi intermediatori macroergici, precursori de
ATP).
Teoria conformaional (energia este preluat de o
protein ntr-o conformaie activ, ce stimuleaz ATP).
Teoria chemiosmotic (Mitchell, 1961).
Ipoteza lui Mitchell
Ce postuleaz c starea intermediar energetic care
determin sinteza ATP din ADP+Pi e reprezentat de
gradientul de protoni, ce se stabilete ntre faa
interioar i cea exterioar a membranei interne a MC n
timpul transferului de electroni.
la transferul unei perechi de (energia eliberat)
pompeaz 3 perechi de H2+ din interiorul MC spre
exterior(spaiu intermembranar).
Astfel partea extern a membranei interne a MC
pozitiv, dar cea intern negativ
apare gradient de c%/ potenialul transmembranar
Gradientul protonilor are 2 componente :
1. Electric (potenial de membran -
2 de pH ( pH)gradientul H+
Protonii revin din spaiu intermembranar n mitocondrii prin
partea F0 (deoarece restul membranei este impermiabil).
Acest flux de protoni este fora morice care determin la
nivelul subunitii F1 sinteza de ATP din ADP+Pi
Unul din postulatele teoriei chemiosmotice prevede c apa rezultat
n reacia de formare a ATP din ADP i Pi se ionizeaz spontan,
ionii H+fiind dirijati spre interiorul mitocondriei (ei urmnd s
creeze gradientul protonic) n timp ce ionii OH
-
snt dirijati spre
spapul intermembranar

Datele experimentale ce confirm:
S-a confirmat generarea gradientului de protoni n
cele 3 puncte ale LR. Anume gradientul de protoni
se utilizeaz la sinteza ATP.
S-a demonstrat ca pH matrixului mitocondrial crete,
iar cel al mediului extern al membranei MC scade
(acid).
S-a argumentat c transferul H+ din MC n timpul
transportului de i revenirii lor prin ATP-sintetaza
sunt comparabile cu viteza lor din cadrul FO n MC
intacte.
Transportul mitocondrial al ATP i
ADP
ATP/ADP-translocazei-
asigur transferul ADP
din citozol n MC n
schimbul ATP din MC-
citozol.
Fosfattranslocaza
transfer Pi n MC,
nsoit de deplasarea
ionilor de H2.
ADP + P
i
ATP matrix
lower [H
+
]
_ _
3 H
+
ATP
4
ADP
3
H
2
PO
4

H
+
higher [H
+
]
ADP + P
i
cytosol
energy
requiring
reactions
ATP
4
+ +
Controlul respirator

Organismele vii sintetizeaz ATP n raport cu necesititatea lui
de aceea FO cuplat cu LR este riguros controlat.
Deoarece LR i FO etapa final a degradrii G, L, P
controlul respirator se poate efectua att prin compui direct
implicai n LR i FO, ct i prin intermediatorii degradrii
celor 3 clase.
Rolul primordial i revine ADP.
1. F1 din ATP - sintetaz rmne blocat n lips de ADP.
2. Intensitatea transferului de protoni prin F0 deasemenea e
determinat de nivelul ADP.
3. ADP reglator alosteric (+) pentru mai multe E ce sunt
implicate n degradarea G, L i P.
Controlul respirator
Controlul respiraiei se nfptuiete prin
intermediul acceptorului - ADP.
Lipsa de ADP - inhib respiraia i stopeaz
fosforilarea. La adugarea de ADP crete brusc
consumul de 0
2
---- se activeaza lantul respirator
i ADP se fosforileaz la ATP.

Decuplarea produselor de oxidare i fosforilare, principalii
ageni decuplani.
La FO contribue:
1. Integritatea membranei interne a MC orice leziune duce la
perderea capacitii de FO (n timp ce transferul de poate
continua).
2. Impermeabilitatea membranei interne pentru ionii H+ OH-
K+ Cl-.
FO poate fi decuplat cu ajutorul unor substane chimice, ce
inhib sinteza ATP dar neafectnd decuplani ageni
decuplani. La aciunea lor respiraia crete, iar FO este
inhibat.
protonofori
AD
ionoforele
Protonoforii mresc permeabilitatea membranei
pentru protoni(H+), lichidnd potenialul
transmembranar.
1. a.g. liberi
2. 2,4 dinitrofenol
3. salicilaii (antiinflamatoare)
4. dicumarol (anticoagulant)
5. T3 i T4 (h.gl.tiroide)
Ionoforele ei leag i transfer ionii prin membran:
- valinomicina ( K+) , nigericina ( K+), gramicidina A
Na+, K+; H+.
Decuplanii
2,4-
Dinitrophenol
H
+

H
+

H
+

X
+ H
+

NO
2
NO
2

O

-

NO
2
NO
2

OH
Inhibitorii ai fosforilrii acioneaz asupra ATP-
sintetazei. Oligomicina blocheaz ptrunderea H+ prin
FO (nchide canalul) cu ncetul slbete respiraia
ntrerupere.
Inhibitorii
Fosorilrii de
ADP

X
Oligomycin
Atractyloside
X
Fosforilarea oxidativ este influenat de o serie de
ageni clasai n 3 grupe :
- agenti de decuplare- permit transportul electronilordar
blocheaz fosforilarea. Ex.2,4 dinitrofenolul faciliteaz
trecerea prin membran a H+
- inhibitorii fosforilrii oxidative Ex Oligomicina -
mpedic i transportul i fosforilarea oxidativ.
- Ionoforii - formeaz complexe liposolubile cu cationi
specifici trecndui prin membran.

Respiraia liber
are loc decuplarea FO de LR i toat energia este
convertit n cldur, care nu se utilizeaz la executarea
funciilor celulare.
Astfel MC devin o sob, ce produc cldur. E necesar
n situaii, cnd necesitatea cldurii este mai mare dect
ATP.
n esutul adipos brun MC sunt specializate la
producerea cldurii (nou-nscui, animale n hibernare)
termogenina.

Oxidarea microsomal

Un alt tip de reacii de OB este cel oxigenazic. Acestea sunt
catalizate de monooxigenaze.
Lanurile monooxigenazice de oxidare sunt lanuri scurte de
transport al H+ i a cror surs sunt NADPH+H
SH + O2 +NADPH + H+ S-OH + H2O + NADP+
reducerea O2 i incorporarea lui n anumii compui chimici
(include un atom de O, cellalt este redus la H2O).
un asemenea lan este microsomial - localizat n RE al
celulelor hepatice i suprarenale. Rol esenial l are cit P450
(activatorul O2). El cuprinde o FP (FAD) la nivelul creia H2
este disproporionat n H+ i .
Rolul OM
Rolul: plastic i dezintoxicare.
n ficat hidroxilarea medicamentelor,
neutralizarea toxinelor, hormonilor (sunt
eliminai).
n medulosuprarenale sinteza noradrenalinei i
adrenalinei.
n corticosuprarenale sinteza colesterolului,
hormonilor gluco- i mineralocorticoizi.
Noiune de radicali liberi. Oxidarea peroxidic a AG
nesaturai. Sistemul de protecie.
La reducerea incomplet a O2 se formeaz
forme reactogene i agresive ale substanei cum
ar fi: superoxidanionul, peroxid; hidroxil sau
peroxidul de hidrogen.

Aceti produi iniiaz OPL, ce se petrece n lan cu generarea
de peroxizi a AG nesaturai.
n condiii fiziologice ORL i OPL sunt implicate n
rennoirea membranelor biologice, degradarea substanelor
fagocitare; biosinteza icosanoizilor.
Amplificarea lor poate condiiona moartea celulei (lezarea
membranelor).
SAO sistem de protecie AO (enzimatic, neenzimatic)
SOD transformarea O2- n H2O2
2 O2- +2H+ O2- + H2O2
Catalaza 2H2O2 2H2O + O2
Glutation reductaza
glutationperoxidaza
Mitochondrion
Peroxisome
Alcohol Metabolism
Eric Niederhoffer
SIU-SOM
EtOH
Acetaldehyde
Acetate
Cytosol
ER
ADH
NAD
+

NADH
CAT
H
2
O
2

H
2
O
AlDH
NAD
+

NADH
MEOS
NADP
+

NADPH
O
2

P450
Extra-hepatic tissue
Oh my!
Now what?
Pyrazole
Disulfiram
(antabuse)
Chlorpropamide
(diabetes)
Aminotriazole