Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor

Laborator Igiena
1

A
AAP
PPR
RRE
EEC
CCI
IIE
EER
RRE
EEA
AA G
GGR
RRA
AAD
DDU
UUL
LLU
UUI
II D
DDE
EE C
CCO
OON
NNT
TTA
AAM
MMI
IIN
NNA
AAR
RRE
EE M
MMI
IIC
CCR
RRO
OOB
BBI
II A
AAN
NN
A
AA
S
SSU
UUP
PPR
RRA
AAF
FFE
EE
E
EEL
LLO
OOR
RR D
DDE
EE L
LLU
UUC
CCR
RRU
UU

Consideraii generale
Controlul eficienei dezinfeciilor se bazeaz pe stabilirea prezenei sau absenei
unor microorganisme.
Pentru controlul eficienei dezinfeciei suprafeelor se utilizeaz dou procedee de
control bacteriologic, care mai sunt numite i teste de sanitaie: testul bacteriilor
coliforme i testul stafilococilor.
n ultimii ani au aprut numeroase propuneri de teste simplificate i mai rapide
pentru aprecierea gradului de contaminare a suprafeelor: Hygicult (Enterobacteriaceae;
Yeast & Fungi; Total Bacterial Count); Hycheck; Petrifilm (E. coli Count Plates; Coliform
Count Plates), Chromocult Coliformen Agar, Envirocheck Rodac, TMT etc. (Sala, 2000).
Hygicult se prezint sub form de lamele, din material plastic, acoperite pe o parte
cu mediu de cretere i nchise ntr-o fiol. Petrifilmul este o pelicul din material plastic
acoperit cu un mediu de cultur deshidratat i un agent de gelificare care este solubil n
ap rece. Se poate utiliza pentru determinarea numrului total de microorganisme
aerobe mezofile, a bacteriilor coliforme i a E. coli din lapte, produse lactate, dar i de
pe suprafee. Petrifilmele pentru determinarea bacteriilor coliforme conine sruri biliare,
rou violet, lactoz. Este destinat pentru determinarea numrului total de
microorganisme, a enterobacteriaceelor, drojdiilor i a mucegaiurilor). Citirea
rezultatelor se face prin compararea cu o scar etalonat.
n ultimii ani au fost realizate mai multe tipuri de aparate pentru detecia prezenei
microorganismelor pe suprafeele controlate. Dintre acestea sunt utilizate mai ales trusa
LIGHTNING (Ehrenfeld, 1997) i trusa HY LITE (Merck), care se bazeaz pe
fenomenul de bioluminescen.
Bioluminescena permite evaluarea indirect a cantitii de ATP n prezena unei
enzime substrat specifice i anume sistemul luciferin luciferaz. Luciferina
reacioneaz cu ATP n prezena ionilor de Mg
2+
i a luciferazei. n urma reaciei rezult
o emisie luminoas proporional cu concentraia n ATP. Metoda este eficient, dar
extrem de costisitoare, fiind recomandat pentru industria farmaceutic i unele
sectoare de industrie alimentar.
Pentru aprecierea strii de igien a suprafeelor de lucru, ustensilelor, ambalajelor,
etc., se folosete examenul microbiologic aplicnd tehnici de lucru bazate pe recoltri
fcute prin metoda tamponului, Hygiene SwabCheck i nsmnri n medii nutritive.


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor
Laborator Igiena
2

M
MMa
aat
tte
eer
rri
iia
aal
lle
ee n
nne
eec
cce
ees
ssa
aar
rre
ee
Tampon de vat
Tamponul de vat se pregtete nfurnd o bucat de vat pe o lungime de 2
cm, la captul unei tije metalice cu lungimea de 20 25 cm ca n figur.






Tija se poate confeciona din srm, lemn i material plastic. Tamponul se
sterilizeaz ntr-o eprubet.
abloane
Se confecioneaz din tabl cu partea decupat sub form de ptrat de cu latura
de 5 cm. abloanele se sterilizeaz mpachetate n hrtie, sau n anumite situaii cnd
se fac recoltri de multe probe i nu se dispune de multe abloane, acestea pot fi
refolosite n urma unei sterilizri efectuate atent direct la flacr.
Medii de cultur
Ca medii de cultur se folosesc PCA (Plate Count Agar) pentru cultivarea
bacteriilor i MEA (Malt Extract Agar) pentru drojdii i mucegaiuri.
M
MMo
ood
ddu
uul
ll d
dde
ee l
llu
uuc
ccr
rru
uu
Se umezete tamponul de vat n lichid de umectare steril, ndeprtnd excesul
prin presarea tamponului pe peretele eprubetei. Apoi dup ce ablonul a fost aezat pe
suprafaa luat n analiz, se terge cu tamponul suprafaa delimitat de ablon att pe
direcie longitudinal ct i transversal.
n acelai timp tamponul se rsucete astfel ca recoltarea s se fac pe toate
feele acestuia. Dup recoltarea probei, se introduce tamponul n ser fiziologic i se
agit pentru a se favoriza trecerea celulelor microbiene n lichid.
Apoi se pot face inoculri, prin metoda ncorporrii microorganismelor n medii
nutritive. Dup o termostatare corespunztoare, se numr coloniile dezvoltate n cutiile
Petri i se stabilete numrul de microorganisme pe 1 cm
2
suprafaa luat n analiz.
Rezultatul obinut se interpreteaz n raport cu normele n vigoare. O suprafa
bine splat i dezinfectat n condiiile unei fabrici nu trebuie s prezinte mai mult de 1
microorganism/cm
2
.


Tampon pentru
recoltare


Suprafaa
delimitat de
ablon (sgeile
indic direcia de
tergere)


Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor
Laborator Igiena
3

Teste de sanitaie - Hygiene SwabCheck
Sunt compuse din beior de recoltare si tub
cu mediu special cu indicator de culoare, totul in
ambalaj individual steril. Dup recoltare de pe
suprafaa de cercetat, beiorul se introduce in tub
si se termostateaz dup prescripia fiecruia (24-
48 ore).
Chiar si o singura bacterie este suficienta
pentru a provoca schimbarea culorii mediului
(asta nseamn ca SwabCheck-urile sunt aproape
de 1000 de ori mai sensibile dect metoda
convenionala
ATP).
Sunt uor de utilizat. Testele arat o evidenta
schimbare de culoare de la rou la galben. Timpul scurs
pentru aceasta schimbare este o indicaie a nivelului de
contaminare.
Aceasta metod trebuie utilizata adiional.
Testul rapid de igiena este un test rapid care va
detecta contaminarea grosiera cu bacterii si fungi a
suprafeelor de lucru, echipamentelor si a altor locuri de
unde se iau probe.
Similar exista teste specifice pentru Listeria, E. coli, Numr Total Microorganisme,
Drojdii si Mucegaiuri. Se incubeaz si acestea dar timpul este mai scurt dect
determinarea cantitativa clasica, informaia se poate percepe mai repede dect 24-48
ore (timp prevzut pentru fiecare tip de test).













Facultatea tiina i Ingineria Alimentelor
Laborator Igiena
4

ANEXA

Rezultatele unei operaii corecte de splare i dezinfecie a unui echipament

Rezultatele unei operaii incorecte de splare i dezinfecie a unui echipament