Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Introducere
Ubiquitinarea este recunoscut de mult timp ca un factor determinant al evoluiei unei
proteine prin marcarea acesteia pentru degradare proteosomal. Recent a fost demonstrat
capacitatea lanurilor conjugate de ubiquitin de a conferi selectivitate pentru autofagie. Dei
autofagia a fost considerat iniial un proces degradativ non-selectiv de autodigestie, acum sunt
descoperite mecanismele moleculare de selecie. Odat cu descoperirea receptorilor autofagici,
care leag att substraturi ubiquitinate, ct i LC3 (ce modific lan ul uor 3 specific autofagiei)
de teaca intern a autofagosomului, o nou cale a autofagiei selective a fost descris. Semnalele
mediate de ubiquitin i receptorii autofagiei selective sunt implicai n sortarea unei varieti de
ncrcturi autofagice.
Ubiquitina este o protein format din 76 de aminoacizi i se gsete n toate esuturile
unui organism eukariot. Are o conservare a secvenei remarcabil de-a lungul scrii evolutive,
doar trei aminoacizi fiind diferii ntre mamifere, drojdii i plante. Ea modific proteinele
celulare, atandu-se covalent la acestea prin intermediul unei cascade enzimatice, care implic
trei clase de enzime: E1 (activare), E2 (conjugare) i E3 (ligare). Procesul de marcare a unei
proteine cu ubiquitin se numete ubiquitinare i este unul dintre cele mai versatile mecanisme
reglatorii celulare din cadrul controlului proceselor celulare fiziologice i patologice. Dei a fost
descoperit in anii 70, la cteva decenii distan s-a descoperit c ubiquitinarea este un semnal
de srut al morii pentru turnover-ul proteinelor. Recent, s-a demonstrat c aceasta regleaz
procese celulare cheie, cum ar fi transcrierea genelor, progresia n cadrul ciclului celular,
repararea ADN-ului, apoptoza, eliberarea virusurilor din celula gazd i endocitoza receptorilor.
Ubiquitinarea se numr printre cile majore de degradare a proteinelor la eukariote, marcnd
substratul pentru 1. proteasom; 2. lisosom i sistemul lisosomal; 3. autofagosom.
Autofagia este un proces degradativ catabolic ce livreaz componentele citoplasmatice
ctre lisosom. Este o cale foarte veche i nalt conservat, ce cuprinde trei tipuri distincte:
macroautofagia, microautofagia i autofagia mediat de proteinele chaperone (CMA).
Macroautofagia reprezint procesul de formare a fagoforului, ce conduce la autofagosom, o
vacuol care conine LC3. Ulterior, ncrctura este pstrat aici pn va urma degradarea
lisosomal. Spre deosebire de macroautofagie, n microautofagie i CMA componentele
citosolului sunt ncorporate direct n lisosomi. Acest articol descrie n principal macroautofagia,
la care se va face referire de acum ncolo ca autofagie.
Cnd autofagia a fost descoperit cu 50 de ani n urm, s-a presupus c reprezint o cale
degradativ neselectiv activat de cantitatea limitat de nutrieni. De atunci ns ea a fost
asociat cu patofiziologii umane, de exemplu cancer, neurodegenerare, rspuns imun i
mbtrnire. Prin autodigestia propriului coninut citoplasmatic, celula recicleaz nutrienii atunci
cnd aportul de energie este limitat. n condiii normale, autofagia bazal reprezint un sistem
1
intracelular de control al calitii: agregatele proteice, incluznd organite defecte sau n exces,
sunt eliminate selectiv. Comparativ cu autofagia indus de nfometare, acest tip de autofagie
trebuie s disting ntre coninutul celular normal i cel anormal. Autofagia este considerat
selectiv atunci cand o ncrctur anume este marcat specific i exclusiv pentru autofagosomi.
Dei mecanismul de recunoatere este nc neclar, este sigur c ubiquitinarea este implicat.
Caracteristicile moleculare ale proteinelor de legare a ubiquitinei precum p62 sau NRB1 au
demonstrat c un sistem de senzori dependent de ubiquitin este responsabil de specificitatea
substratului. nainte de clearance-ul realizat de autofage, aceti receptori trebuie s menin
proteinele ubiquitinate n autofagosom, care conine pe suprafaa lui proteine UBL precum LC3
sau GABARAP. De aceea, receptorii ce leag fie ubiquitin, fie LC3 sau GABARAP sunt
capabili s controleze degradarea proteinelor prin autofagie selectiv.
Ubiquitina degradeaz proteinele n dou moduri: prin intermediul UPS (sistemul
ubiquitin-proteosomal) sau al autofagiei selective
Toate celulele scaneaz dup proteine mpachetate incorect ca urmare a erorilor de
traducere sau a condiiilor de mediu vitrege, precum stres oxidativ sau oc termic. Aceste
proteine jeneaz fiziologia celular, resturile hidrofobe expuse conduc la formarea de oligomeri
insolubili, iar agregatele mai mari mpiedic interaciile protein-protein, toate acestea
conducnd la toxicitate celular. Acumularea de agregate proteice toxice este o trstur distinct
a unor boli umane numite proteinopatii.
Dei factorii care direcioneaz un substrat specific pe calea degradrii nu sunt complet
nelei, ubiquitina joac un rol esenial prin conjugarea unui monomer ( monoubiquitinare) sau
prin conjugarea secvenial a mai multor molecule de ubiquitin de diferite lungimi
(poliubiquitinare). n funcie de restul de Lys (K) de care se leag monomerul de ubiquitin,
lanurile sunt numite K6, K11, K27, K29, K33, K48 i K63. Conjugarea la Met de la captul Nterminal (M1) conduce la formarea de lanuri lineare. Lanurile de ubiquitin K48 au fost pentru
prima dat identificate n cadrul marcrii proteinelor pentru degradare proteosomal. Pe de alt
parte, lanurile de tip K63, K11 sau M1 semnalizeaz n principal pentru funcii neproteolitice.
Acest tip de lanuri este implicat in controlul diferitelor procese, cum ar fi transportul
receptorilor, repararea ADN-ului i semnalizare. Recent s-a descoperit c proteinele reglatoare
ale ciclului celular modificate cu lanuri K11 sunt marcate pentru degradare proteosomal, iar
lanurile K63 pot marca substraturi pentru degradare prin autofagie.
Familia proteinelor chaperone de oc termic (HSP) iniiaz primul mecanism protectiv
pentru a preveni toxicitatea i a asigura clearance-ul mediat de controlul intracelular al calit ii.
HSP asist mpachetarea proteinelor sintetizate de novo n timp ce acestea circul n diferite
compartimente celulare i favorizeaz rempachetarea proteinelor denaturate sau lezate. n caz de
insucces, ubiquitin ligaza E3, cum ar fi HSC70 protein de interac iune CHIP, induce
ubiquitinizarea i astfel selecteaz proteinele nefoldate sau lezate pentru degradare preferen ial
prin UPS. Acest sistem are un rol major n meninerea calit ii celulare, degradnd substan ele
2
ntr-un mod nalt selectiv cu ajutorul legturilor covalente realizate de lanurile de ubiquitin,
servind ca motive de recunoatere pentru proteosomii 26S. Dac aceste mecanisme sunt
suprasolicitate, poate aprea agregarea proteinelor. Astfel se formeaz corpii de incluziune,
numii i agresomi, care sunt livrai lisosomilor pentru degradare autofagic. Agresomii
ubiquitinai pot fi degradai i prin UPS. Importana biologic a agregatelor nu a fost elucidat,
dei poate avea un rol protector prin ndeprtarea activ a monomerilor mpachetai greit, toxici
i prevenirea toxicitii la nivel intracelular. Pe de alt parte pot bloca degradarea proteosomal i
crete citotoxicitatea.
Legturile moleculare ntre mecanismul proteosomal i cel autofagic
Dei pentru mult timp s-a presupus c aceste dou sisteme degradative sunt
complementare, dar separate, cu inte specifice, exist din ce n ce mai multe dovezi care
sugereaz numeroase puncte comune. Modul n care o protein greit foldat este degradat este
determinat de activitatea relativ a fiecrui sistem. De exemplu, s-a demonstrat c activarea
factorului de transcripie O3 induce ambele tipuri de degradri. nc nu se tie dac autofagia
este un sistem de degradare strict separat sau compensatoriu atunci cnd UPS este implicat. O
legtur molecular ntre aceste sisteme poate fi HDAC6, o deacetilaz asociat microtubulilor
care interacioneaz cu proteinele poliubiquitinate i poate rezolva defectele UPS prin creterea
autofagiei. Inhibarea pe termen lung a autofagiei poate crete numrul substratelor proteosomale
cu compromiterea UPS ca o consecin a acumulrii de p62. Proteinele chaperone Bag1 i Bag3
au un important rol reglator n recunoaterea proteinelor greit mpachetate n vederea degradrii.
Ca urmare a mbtrnirii celulei, cantitatea acestora crete progresiv. n acest caz, se trece de la
exprimarea Bag1 la Bag3 pentru a controla recunoaterea proteinelor defecte i acumularea n
agregate cu p62. Bag1 este nalt exprimat n celulele tinere i favorizeaz degradarea
proteosomal, pe cnd Bag3 se gsete n celulele mbtrnite i este corelat cu creterea
activitii autofagice i formarea de p62. Raportul Bag1/Bag3 decide ntre cele dou tipuri de
degradri. Bag3 a fost gsit n acelai complex cu p62 i interac ioneaz cu Hsp/Hsp70.
p97/VCP, o protein chaperone ce interacioneaz cu HDAC6, este legat de ambele sisteme de
degradare: dezasambleaz complexele proteice pentru degradarea prin UPS i interacioneaz cu
agregatele proteice destinate autofagiei. Mutaiile n p97 determin un defect al maturrii
autofagosomale prin prevenirea fuziunii lisosom-autofagosom. Aceasta duce la proteinopatii,
miopatii de corpi de incluziune asociate cu boala Paget a oaselor i demena fronto-temporal.
Un alt tip de suprapunere ntre degradarea proteosomal i cea lisosomal se gsete la
nivelul substratului. Anumite lanuri de ubiquitin favorizeaz un sistem de degradare sau altul.
Principalii factori ai acestui proces sunt ligazele E3, care, mpreun cu enzimele specifice E2,
sunt responsabile de conjugarea diferitelor lanuri de ubiquitin. Proteinele greit mpachetate
rezistente la rempachetare cu ajutorul proteinelor chaperone sunt ubiquitinate cu lanuri K48 de
ligaza E3 CHIP i degradate de proteosomi. Cu ajutorul E2, CHIP este capabil s fac lan uri
K63 i s marcheze substratul pentru autofagie. De exemplu, -sinucleina este degradat att de
proteosomi, ct i prin autofagie dup ubiquitinarea cu CHIP. Un studiu recent a artat c
3
expresia proteinelor predispuse la agregare cu diferite mutaii ale ubiquitinei n culturi celulare
duce la formarea de corpi de incluziune. La biogeneza acestor incluziuni au contribuit modificri
ale poliubiquitinrii lanurilor K48 i K63 i ale monouibiquitinrii, dar numai lan urile K63 au
indus degradarea autofagic a corpilor de incluziune. Ligaza E3 Parkin este capabil s lege
diferite lanuri de ubiquitin, dei mecanismul nu este elucidat. Multe proteine pot suferi
ubiquitinare Parkin-dependent a lanurilor K48, urmat de degradare proteosomal. Ligaza
Parkin poate forma lanuri de poliubiquitin K63 pe proteinele DJ-1 defecte, marcndu-le pentru
formarea de agresomi via HDAC6. Studii recente au artat c aceast ligaz favorizeaz
autofagia selectiv a mitocondriilor disfuncionale. Interacionnd cu diferiti cofactori n condiii
specifice, ligazele E3 precum CHIP i Parkin funcioneaz ca ligaze de ubiquitin cu func ie
dual, marcnd substratul pentru cile de degradare proteosomal sau autofagic.
Modificatorii autofagiei au funcii ale UBL (sistemul ubiquitin-like)
Autofagia este divizat n mai muli pai:
1. iniierea ncepe cu formarea unei membrane n form de semilun, numit fagofor
2. elongarea fagoforului cu nglobarea componentelor citoplasmatice, inclusiv organite i
nchiderea acestuia cu formarea unei vacuole cu membran dubl, numit autofagosom
3. fuziunea membranei externe a fagosomului cu un lisosom cu formare de autolisosom
Mai mult de 30 de gene legate de autofagie (ATG) sunt implicate n formarea
autofagosomului. Principalele proteine ATG au o mare omologie funcional i au fost ncadrate
n 4 subgrupuri. Sistemele UBL de conjugare ATG12 i LC3 sunt nalt conservate de la drojdii la
om i funcioneaz n autofagia selectiv i neselectiv n timpul formrii autofagosomului. Dei
Atg 12 i LC3, ce fac parte din familiile de proteine LC3 i GABARAP, nu au omologie de
secven evident cu ubiquitina de la drojdii pn la om, ele au un superdomeniu ubiquitin-like i
prezint similariti cu sistemul de conjugare al ubiquitinei. Cele dou sisteme folosesc o enzim
E1-like n prima etap a activrii, numit Atg7 n sistemul UBL. Enzima E2-like Atg10 conjug
Atg12 la Atg5 pentru a forma un complex cu Atg16. n final, similar cu ligaza E3, acest complex
asist ligarea LC3 la PE (folfatidiletanolamin) cu ajutorul Atg3, o enzim E2-like. Cistein
proteaza Atg4 are un rol dual: proceseaz LC3 naintea activrii lor i apoi ndeprteaz LC3 de
pe PE autofagosomului dup formarea veziculei. Speciile reactive de oxigen (ROS) sunt
implicate n reglarea activrii Atg4 n aceast etap. Resturile de glicin expuse ale LC3 pot fi
conjugate la PE, cu formare de LC3-II. n forma conjugat, LC3 pare s fie indispensabil pentru
hemifuziunea membranelor lipidice, contribuind la expansiunea autofagosomului. Mai mult, LC3
poate controla dimensiunea autofagosomilor.
Rolul ubiquitinei n diferite tipuri de autofagie selectiv i implicaiile ei n maladii
Moleculele de ubiquitin sunt recunoscute de proteinele ce conin domenii de legare a
ubiquitinei (UBD). LC3 interacioneaz cu o secven scurt, hidrofob, numit motiv LIR (LC3
interacting region). Motivele LIR au fost identificate n proteinele adaptor, unde au i capacitatea
4