Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Generalitati
Cuprins
a. Stabilirea clar a obiectivelor experimentului
b. Alegerea modelului experimental
c. Stabilirea variabilelor independente i dependente
d. Alegerea designului i stabilirea programului experimental
e. Randomizarea i identificarea factorilor de variabilitate care ar putea influena procesul
investigat
f. Realizarea protocolului experimental
g. Efectuarea experimentului i colectarea datelor
h. Analiza statistic a rezultatelor experimentului
SISTEM (animalul de
laborator)
Variabilele care vor fi analizate se stabilesc nainte de efectuarea fiecrei experiene i nu este
recomandat modificarea lor (de ex. modificarea dozei n timpul experienei) sau introducerea de noi
variabile n timpul experienei.
n afar de variabilele independente i dependente definite de experimentator, n orice studiu
experimental intervine un anumit numr de variabile necontrolate (ritmul circadian, etc.) care trebuie
luate n considerare cnd se realizeaz designul experimental i analiza datelor (vezi randomizarea).
d. Alegerea designului i stabilirea programului experimental
- Designul paralel este cel mai folosit i presupune testarea mai multor loturi in paralel; pentru toate
loturile experiena ncepe i se termin n aceleai timp; succesiv, se folosete cte un subiect din fiecare
lot (nu se testeaz nti un lot apoi al doilea, etc ci primul subiect din primul lot, apoi primul subiect din
lotul 2, etc.). Analiza statistic a datelor obinute ntr-un experiment cu design paralel este simpl iar
rezultatele obinute pentru fiecare lot pot fi analizate mai nti independent i apoi comparate.
Lotul A
Lotul B
Lot control
Moment
iniial
Moment
final
- Designul in bloc presupune utilizarea unor criterii de grupare a animalelor n blocuri (de ex. vrsta,
sexul). n cadrul blocurilor se aplic designul paralel. Acest tip de design este simplu dar experimentele
sunt mai dificil de realizat i necesit un numr mare de animale pentru o bun randomizare.
- Designul de tip cross-over presupune ca animalul de laborator s fie supus succesiv mai multor
tratamente sau proceduri.
Lot A : C
Lot B : C
Lot B : T
Lot A : T
Perioada I
Wash-out
Perioada II
De exemplu, n prima perioad a experimentului lotul A este lotul control (A:C) iar lotul B este
lotul tratat (B:T). Dup o pauz (wash-out) n care se presupune c animalul de laborator revine la starea
iniial, anterioar perioadei I, (fapt care nu se prea ntmpl n cazul animalelor de laborator!) ncepe
perioada II n care lotul B devine lotul control (B:C) iar lotul A, lotul tratat (A:T).
Acest tip de design experimental prezint unele avantaje: sunt necesare mai puine animale de
laborator iar fiecare animal este propriul su martor, dar dezavantajele sunt importante: n perioada de
wash-out nu toate animalele revin la starea iniial, prelucrarea statistic a datelor este mai complicat
iar loturile trebuie s fie foarte omogene pentru obinerea unor rezultate fiabile.
- designul factorial permite testarea unor posibile interaciuni ntre diferite tratamente sau proceduri i
diferite caracteristici ale animalului de laborator. De exemplu testarea efectului a 3 substane asupra
oarecilor - 3 linii genetice diferite (vezi tabelul de mai jos). Numrul de oareci necesari pentru fiecare
lot va fi evaluat statistic (ecuaia Meads) pentru a se putea evalua corect rezultatele obinute.
Linia genetic
NMR1
C57B
CB6F
Substana 1
Substana 2
Substana 3
Control
4
7
gzduite n condiii de mediu standard pentru a evita stressul care reprezint un alt factor important de
variabilitate.
Pentru randomizare se folosesc programe statistice care atribuie numere aleatorii fiecrui subiect.
Loturile obinute dup randomizare trebuie s fie omogene i, ideal, s conin acelai numr de animale
de laborator.
Dup randomizarea animalelor utilizate ntr-un experiment ar trebui realizat secretizarea astfel
nct s fie evitat intervenia unor elemente subiective n msurarea rezultatelor. Secretizarea
presupune codificarea tratamentelor (substanelor) aplicate, animalelor folosite i a diferitor probe (cnd
este cazul) i necunoaterea acestei codificri de ctre persoanele care realizeaz efectiv experimentul.
Ulterior, dup nregistrarea rezultatelor i analiza lor, schema de codificare este dezvluit i are loc
interpretarea final a datelor.
Soarece
Greutate
8:00
X1
V1
8:05
X2
V2
8:10
X3
V3
..........
Ex. de orar de administrare: experiment cu design paralel realizat pe 2 loturi de oareci; administrarea
substanelor se efectueaz din 5 n 5 minute.
Ora
Soarece
9:00
9:05
9:10
Parametrul 1
Parametrul 2
..........
Ex. de orar de testare: experiment cu design paralel realizat pe 2 loturi de oareci; testarea oarecilor se
realizeaz la o or dup administrarea substanelor cu urmrirea a 2 parametri; testul dureaz 5 minute
ceea ce justific alegerea intervalului de 5 minute n cazul administrrii substanelor.
10
Pentru a obine rezultate corecte i pentru a reduce numrul factorilor care ar putea influena
desfurarea experimentului (experienelor), protocolul experimental trebuie s fie complet, riguros i s
corespund designului experimental stabilit. Toate persoanele implicate n efectuarea experimentului
trebuie s cunoasc protocolul experimental i sarcinile care le revin (pentru a evita ncurcturile !!! )
Conform definitiei, modelul experimental presupune inducerea unui proces patologic la animalul de
laborator. Cu ajutorul modelelor experimentale se testeaza diferite efecte ale medicamentelor.
Testul placii incalzite presupune inducerea durerii prin aplicarea unui stimul termic. Animalul este
plasat pe o plac nclzit la aproximativ 55C, temperatura ce trebuie meninut constant n timpul
experimentului. Timpul de reacie se msoar n momentul n care animalul atinge placa i pn cnd
ncepe s-i ling labele sau s sar. Un medicament analgezic creste timpul pana la aparitia primelor
semne de disconfort.
Medicamente sedative pentru testarea acestor medicamente se poate folosi un test care
permite masurarea activitatii locomotorii stiindu-se ca sedativele scad acest tip de activitate.
Testul de explorare simpla - permite msurarea activitii motrice in situaii libere a fiecarui
animal de laborator (oareci). Se foloseste o cutie de plexiglas, transparenta pe a carei podea sunt
marcate 20 de carouri cu latura de 8 cm (4 x 5 carouri). Fiecare soarece estet pus ntr-un col al cutiei
(acelai col pentru toi oarecii) i timp de 5 minute se numr carourile prin care oarecele trece cu
toate cele 4 lbue. Un medicament sedativ scade numarul de carouri parcurse de soarecele tratat.
Medicamente anxiolitice animalul de laborator este pus in situatii cunoscute a induce o stare
de anxietate.
Testul labirintului suspendat se bazeaza pe frica de inaltime si spatii deschise a soarecilor. Se
foloseste un dispozitiv alcatuit din 4 brate perpendiculare. 2 brate sunt inchise au o platforma
inconjurata de pereti, iar celelalte 2 brate sunt deschise sunt formate doar din platforma. In mod
normal un soarece va explora mult mai mult timp bratele inchise decat cele deschise. Un medicament
anxiolitic scade anxietate produse de spatiile deschise si inaltime astfel incat soarecele va petrece un
timp mai mare in bratele deschise.
12