12.

Reacii de precipitare ireversibil

n reaciile de precipitare ireversibil se produc modificri profunde n conformaia i organizarea spaial a moleculelor proteice, nsoite de pierderea proprietilor fizice, chimice i biologice iniiale. Precipitarea ireversibil induce denaturarea acestora, deoarece dup nlturarea agentului de precipitare, proteinele i pierd solubilitatea i, n consecin, nu mai manifest proprietatea de a trece n soluie, rmnnd n stare denaturat. n cazul denaturrii proteinelor, acestea sufer o dezorganizare, ca rezultat al desfacerii diferitelor legturi ce stabilizeaz structura secundar i teriar i, n primul rnd, a legturilor disulfurice. Consecinele denaturrii proteinelor sunt urmtoarele: pierderea activitii biologice; diminuarea solubilitii; creterea numrului de grupe SH libere; modificarea vscozitii i a presiunii osmotice; creterea susceptibilitii la hidroliza enzimatic. Agenii care provoac denaturarea proteinelor sunt: ageni fizici: agitarea, cldura, ultrasunetele, radiaiile bogate n energie (raze ultraviolete, raze X); ageni chimici: acizi minerali, unii acizi organici, sruri ale metalelor grele, reactivi ai alcaloizilor Aplicaiile reaciilor de precipitare ireversibil. Reaciile de denaturare a proteinelor sunt curent folosite n laborator pentru: separarea proteinelor din extractele i lichidele biologice n care urmeaz s se dozeze o serie de compui cum ar fi ozele reductoare, produii finali ai metabolismului proteic, elementele minerale; stoparea reaciilor enzimatice; - identificarea proteinelor urinare. 11. 1. Fracionarea proteinelor dintr-un extract proteic prin precipitare cu sruri neutre Pentru o anumit protein, solubilitatea ei crete cu concentraia unei sri neutr, atinge o valoare maxim, dup care scade treptat pn cnd precipit din soluie. Se poate spune c, n funcie de structur, fiecrei proteinei i corespunde o anumit concentraie de sare la care precipit, astfel fiind posibil separarea treptat a proteinelor dintr-un amestec proteic. Aceast precipitare a proteinelor la concentraii mari de sare se datoreaz faptului c ionii srii acioneaz ca ageni de deshidratare, ndeprtnd moleculele de ap ce hidrateaz proteinele 2. Fracionarea proteinelor prin precipitare cu solveni organici nepolari Solvenii organici de tipul acetonei, etanolului, cloroformului, etc., precipit proteinele din soluie datorit scderii constantei dielectrice a mediului, mrind astfel fora de atracie dintre moleculele cu sarcini electrice diferite. precipitare reversibil Proteinele existente sub form dizolvat n soluie trec sub form de precipitat, fr s-i modifice structura primar i implicit proprietile chimice i biologice, sub aciunea unor factori chimici. Dup nlturarea agentului de precipitare reversibil, proteinele revin la proprietile chimice i biologice iniiale, adic la starea lor nativ