Lipoproteinele plasmatice

Lipidele absorbite din diet i lipidele sintetizate de ficat i esutul adipos trebuiesc transportate ntre diferite esuturii organe pentru utilizare i stocaj. Deoarece lipidele sunt insolubile n ap, se ridic problema cum pot fi transportate prin plasm care este un mediu apos. Aceast problem s-a rezolvat prin invelirea lipidelor n proteine, cu formarea de particule lipoproteice, miscibile n ap. Structural lipoproteinele (LP) conin un miez hidrofob, alctuit din trigliceride (TG) i esteri de colesterol (CE), iar ctre exterior se gsesc lipidele amfipatice fosfolipidele (FL) i colesterolul, care orienteaz partea polar a moleculei ctre exterior i partea hidrofob ctre interior (Fig1). Proteinele cu care se cupleaz lipidele plasmatice se numesc apoproteine sau apolipoproteine. Aporoteinele n nomenclatura internaional, sunt notate cu literele mari ale alfabetului i pe lng rolul lor n transportul lipidelor n plasm ntre diverse esuturi, unele intervin i ca activatori sau inhibitori ai unor enzime implicate n metabolismul lipoproteinelor (apoCII activeaz lipoprotein lipaza- LPL), altele sunt cofactori ai unor enzime (apo AI pentru lecitin colesterol acil transferaza LCAT), altele liganzi pentru receptori specifici de pe suprafaa celulelor.

Fig1. Lipoproteine. (a) structura LDL- aceasta conine apo B100, una dintre cele mai mari proteine ale organismului, coninnd 4636 de aminoacizi; (b) cele 4 clase de LP vizualizate la ME: chilomicronii au diametru intre 50- 200 nm, VLDL ntre 28 i 70 nm, LDL ntre 20 i 25 nm i HDL ntre 8 i 11 nm

LP se pot separa prin electroforez sau ultracentrifugare n 3- 4 mari clase, cu compoziie i densiti diferite. (tabel1). (De menionat c n seul recoltat dimineaa pe nemncate, dup un post de 12 ore se separ doar 3 fraciuni; chilomicronii CM transportnd lipidele alimentare, n mod normal nu apar n plasma recoltat a jeun). (fig2) Tabel 1. Clasele majore de lipoproteine i unele proprieti ale lor

Fig. 2. Aspectul plasmei dup un post comparativ cu al plasmei recoltate postprandial. CM dau aspectul lpros al plasmei

n plasm, n afara celor 4 fracii majore de lipoproteine, se gsesc i acizii grai liberi (AGL), care sunt acizi grai cu lan lung eliberai din adipocit i transportai n plasm legai (necovalent) de albumin. Metabolismul general al LP este redat n fig. 3.

Fig.3. Metabolismul general al lipoproteinelor. Lipidele sunt transportate n snge sub forma particuleleor lipoproteice, carese gsesc sub forma a mai multor clase si au roluri diferite. Astefel lipidele alimentare sunt mpachetate n chilomicroni iar TG din componena lor sunt hidrolizate de lipoprotein lipaza situat pe endoteliul capilarelor miocardului, muchiului scheletic i esutului adipos. Chilomicronii remaneni sunt preluai de ctre ficat. Lipidele endogene i colesterolul din ficat sunt exportate ctre esuturile extrahepatice prin mpachetare n VLDL. Extracia lipidelor din VLDL (i pierderea gradual a

unor apoproteine), duce la sinteza de LDL, care va transporta colesterolul esuturilor extrahepatuce sau va fi extrs de ctre ficat. Ficatul preia LDL, VLDL remanent i chilomicroni remaneni prin endocitoz mediat de receptori specifici. Excesul de colesterol extrahepatic este transportat napoi la ficat de ctre HDL. n ficat o parte din colesterol este convertit n acizi biliari, care mpreun cu cantiti mici de colesterol liber, sunt deversai n bil)

Chilomicronii (CM)
Aceste particule se formeaz n enterocite care resintetizeaz TG, FL, CE din produii de digestie absorbii din lumenul intestinal. Lipidele nou sintetizate sunt nvelite n apoA i apo B48, iar particulele nou formate (CM nasceni) sunt exportate n limf, n chiliferul limfatic central de unde, pe cale limfatic, ajung n ductul toracic i apoi n circulaia sangvin producnd lactescena plasmei (fig. 4). n capilarele sangvine primesc apo CII i apo E de la particulele HDL devenind CM maturi. Ulterior sufer un proces de digestie sub aciunea unei enzime: lipoprotein lipaza (LPL), enzim sintetizat de celulele endoteliului capilar i depus pe suprafaa celulelor, spre lumen, fiind ancorat de membrana endoteliului prin intermediul lanurilor proteoglicanice, ncrcate negativ, de heparan sulfat. Sub aciunea LPL activat de apo CII, aproximativ 90% din TG din CM sunt hidrolizate la acizi grai i glicerol. Acizii grai sunt fie preluai de ctre celulele extrahepatice i utilizai ca material energetic (n miocard, muchi scheletic) sau depui sub form de TG (n esutul adipos), iar o cantitate mic se fixeaz pe albuminele plamatice, fiind transportai la alte esuturi. Prin scderea coninutului n TG (secundar aciunii LPL), particulele devin mai mici i mai dense, formndu-se CM remaneni, sau resturi de CM. Aceste particule remanente, avnd un diametru redus la jumtate fa de cel al CM, cedeaz particulelor HDL, att apoproteine apo A, apoC II, ct i lipide amfipatice (colesterol, FL) de pe suprafaa lor, rmnnd cu apo B48 i apo E. Sub aceast form sunt recunoscui de receptori specifici pentru apoE: receptorul pentru LDL (care recunoate apoB100, E) ct i LPR (LDL receptor-related protein),

Fig.4. Metabolismul chilomicronilor

care mediaz endocitoza particulelor remanente (fig.4). La nivelul polului sinusoidal al membranei hepatocitului este ancorat lipaza hepatic (HL) care are dublu rol: (1)acioneaz ca un ligand pentru lipoproteine i (2)- hidrolizeaz TG i FL nc prezente n CM remaneni. LPL este o enzim sintetizat de celulele endoteliului capilar i depus pe suprafaa celulelor, spre lumen, fiind ancorat de membrana endoteliului prin intermediul lanurilor negative, de heparan sulfat. A fost gsit n miocard, esut adipos, splin,plmn, medulara renal, aort, diafragm i glanda mamar n lactaie. Nu segsete n capilarele hepatice. Sngele nu contine LPL liber, dar injectarea de heparin determin desprinderea enzimei de heparan sulfat, cu trecerea acesteia n torentul circulator. Att FL ct i apo CII sunt cofactori ai enzimei, n timp ce apo AII, i apo CIII acioneaz ca inhibitori. Afinitatea enzimei pentru substratul su difer de la un esut la altul. Astfel Km pentru TG al enzimei localizate n inim este de aproximativ 10 ori mai mic dect cel al enzimei localizate n esutul adipos. Astfel se explic de ce n condiii de inaniie, cnd concentraia seric a TG este sczut, enzima din cord rmne saturat, pe cnd enzima din esutul adipos are activitate sczut, ceea ce permite furnizarea de acizi grai din TG redirecionate din esutul adipos ctre miocard. O direcionare asemntoare are loc n glanda mamar n lactaie, cnd Km glandei mamare pentru TG (din chilomicroni) este mult mai sczut dect n esutul adipos. Astfel prin hidroliza TG rezult AG care vor intra n compoziia laptelui. Enzima este reglat de insulin, care fiind secretat postprandial, stimuleaz sinteza enzimei la nivelul adipocitelor ct i translocarea acesteia pe faa luminal a endoteliului capilar. Postpartum, enzima din glanda mamar n lactaie este stimulat de prolactin. Deci rolul major al CM este de-a transporta lipidele absorbite din tubul digestiv, prin limf, snge, ctre ficat.

VLDL (pre--lipoproteine)
VLDL- lipoproteine cu densitate foarte mic, se sintetizeaz n hepatocit; se aeamn structural cu CM, n sensul c i aceste particule conin n principal TG i concentraii mici, CE i FL (tabel I). Conin apo B100 i apo E care, sintetizate n reticulul endoplasmatic rugos, se unesc cu TG sintetizate n reticulul endoplasmatic neted i trec apoi n aparatul Golgi, unde componentele proteice sunt glicozilate i ulterior prin exocitoz, trec n circulaia sistemic (fig.5). n mod normal TG sintetizate n ficat, nu se acumuleaz ci sunt exportate sub form de VLDL. Acumularea anormal de lipide n ficat se numete ficat gras i iniial este un proces reversibil, dac se corecteaz cauza ce aprodus aceast anomalie. Persistena lipidelor n ficat determin apariia focarelor de inflamaie i ulterior fibrozarea ficatului cu modificarea ireversibila a structurii histologice a acinului hepatic (afeciunea se numete ciroz hepatic). Ficatul gras poate avea mai multe cauze. O cauz a ficatului gras este un aflux crescut de acizi grai liberi (AGL) ctre ficat rezultai fie din hidroliza excesiv a TG din adipocite (raport glucagon/insulin crescut, aa cum se ntmpl de exemplu n diabetul zaharat netratat) sau a TG serice din esuturile extrahepatice sub aciunea LPL (exces alimentar de grsimi neutre). AGL n exces intr n hepatocit i prin esterificare, se sintetizeaz cantitai excesive de TG care depesc capacitatea ficatului de a le exporta. Astfel TG se depun anormal n ficat (fig 5). O alt

cauz de ficat gras o reprezint excesul alimentar de glucide i lipide, care sub aciunea insulinei, se transform n TG care depesc capacitatea ficatului de a le exporta (fig.5). O cauz major a ficatului gras o reprezint consumul cronic de alcool, care metabolizndu-se n ficat (sub aciunea alcool dehidrogenazei) la acetaldehid i ulterior la acetil-CoA, determin stimularea sintezei hepatice de acizi grai care se vor ncorpora n TG, ce vor depi capacitatea ficatului de a le exporta, depunndu-se astfel n ficat. De asemenea, toate cauzele care determin incapacitatea celulei hepatice de-a mpacheta lipidele n apoproteine i de a exporta VLDL, duc la acumularea anormal de lipide n ficat: blocarea sintezei apoproteinelor (lips de aminoacizi eseniali), blocarea sintezei fosfolipidelor (lipsa acizilor grai eseniali i a colinei a crei sintez e dependent de prezena metioninei) necesare formrii particulei lipoproteice, blocarea cuplrii lipidelor cu apoproteinele la nivelul reticulului endoplamatic neted (intoxicaia cu tetraclorur de carbon), blocarea glicozilrii apoproteinelor la nivelul aparatului Golgi (acidul orortic) (fig.5).

Fig.5. Sinteza i secreia VLDL. FFA acizi grai liberi; EFA- acizi grai eseniali

n snge particulele VLDL primesc apoA1 i apoE de la HDL, devenind particule VLDL mature. La fel ca i CM, la nivelul capilarelor diferitelor esuturi extrahepatice, TG din VLDL sunt hidrolizate de ctre LPL (fig.6.). Pierznd lipide hidrofobe, dimetrul lor se micoreaz i cednd apo C particulelor HDL, rezult particule mai mici i mai dense - VLDL remanent sau IDL (lipoproteine cu densitate intermediar). Particulule lipoproteice IDL au 2 posibiliti de metabolizare: fie sunt preluate de ctre ficat de aceeai receptori care recunosc apo E (aceeai receptori care preiau din snge i CM remaneni- receptorul pentru LDL (apoB100, E i LPR)), sau n spaiul Disse, sub aciunea lipazei hepatice (HL) mai sunt hidrolizate TG existente n IDL, transformndu-se ntr-o particul, mai desns, cu diametru mai mic i care conine preponderent esteri de colesterol (CE) LDL lipoproteine cu densitate mic. (Fig 6).

Fig.6. Metabolismul VLDL. TG- trigliceride, C-colesterol i esteri de colesterol; A, B100, C, E apoproteine; PC fosfolipide

Deci particulele VLDL, formate n ficat, transport TG endogne ctre alte esuturi, care le utilizeaz ca material energetic sau le stocheaz (esutul adipos).

LDL (-lipoproteine)
LDL- lipoproteine cu densitate mic, se sintetizeaz din VLDL via IDL, n urma aciunii combinate a lipoprotein lipazei extrahepatice i a lipazei hepatice, care hidroliznd mari cantiti de TG, duc la formarea unei particule mai mici, mai dense i bogat n CE, care conine doar apoB100. Particulele LDL au dou posibiliti de metabolizare: pot fi preluate de ficat prin intermediul receptorilor pentru LDL(B100, E) (care recunosc i preiau de asemenea, din plasm i CM remaneni i IDL) sau trec n

torentul circulator fiind preluate de celulele extrahepatice care conin receptor pentru LDL. De menionat c, dei i particulele VLDL au apoB100, aceste lipoproteine nu pot fi preluate de ctre receptorii pentru LDL, deoarece apoproteina B 100 de pe suprafaa particulelor VLDL este astfel mpachetat nct nu expune ctre exterior domeniul de fixare pe receptor. Conversia VLDL ctre LDL modific i configuraia apoproteinei B100, expunnd la exteriorul acesteia domeniul de recunoatere i implicit, de fixare pe receptorul pentru LDL. Astfel, LDL este preluat din snge de ctre celule printr-un mecanism de endocitoz mediat de receptor (fig. 7)

Fig.7. Endocitoza mediat de receptor a particulelor LDL.

Legarea particulei LDL de receptor iniiaz procesul de endocitoz, astfel nct complexul LDL-receptor este internalizat sub forma endozomilor. Ulterior endozomii fuzioneaz cu lizozomii formndu-se un endolizozom, iar enzimele hidrolitice din lizozomi atac i degradeaz particulele LDL: apoproteina este hidrolizat la aminoacizi, esterii de colesterol la colesterol liber i acizi grai. Receptorul pentru LDL este reciclat, pentru a prelua noi particule de LDL din plasm. Colesterolul ajuns intracelular pe aceast cale, este utilizat de celule pentru refacerea membranelor celulare i subcelulare,

iar n cortisuprarenal i gonade este precursorul hormonilor steroizi. De asemenea, colesterolul provenit din LDL inhib sinteza de novo a colesterolului n celul, inhibnd HMG-CoA reductaza (enzima limitant de vitez de pe calea de sintez a colesterolului). Cnd celula s-a saturat n colesterol, acesta activeaz o enzim- acilcolesterol aciltransferaz (ACAT), care esterificnd colesterolul, l depune sub form de picturi de grsime n citoplasm. Saturarea celulei cu colesterol i formarea de esteri de colestrol (CE) intracelulari va influena negativ reciclarea receptorilor pentru LDL. Numrul de receptori pentru LDL de pe suprafaa celulor va scdea, nepermind intrarea de noi molecule de LDL fenomen cunoscut sub denumirea de down regulation. Mai mult, colesterolul intracelular este i represor pentru gena ce codific receptorul pentru LDL. Astfel receptorul pentru LDL (B100, E) este un receptor de mare afinitate dar care este saturabil iar numrul acestor molecule pe suprafaa celulelor este dependent de concentraia intracelular a colesterolului. Pe suprafaa unor celule (monocite) exist i receptori pentru LDL de mic afinitate, care intr n categoria receptorilor scavanger i care pot prelua, particule LDL dar care nu sunt reglabili (numrul lor de pe suprafaa celulei nu este influenat de concentraia intracelular de colesterol). (fig. 8).

Fig.8. Metabolismul LDL. Preluarea particulelor LDL de ctre celule i metabolismul intracelular al colesterolului provenit din LDL Pre-HDL, prin intermediul receptorului ABC1, poate extrage din esuturi colesterol i cu ajutorul LCAT, l esterific, formandu-se particule HDL3.

Creterea nivelului seric al colesterolului, n special al LDL-colesterolului, reprezint factor de risc pentru ateroscleroz. Valorile crescute ale colesterolemiei determin saturarea tuturor celulelor cu colesterol i scderea numrului de receptori pentru LDL de pe suprafaa celulelor. Persistena particulelor LDL n plasm crete ansa acestora de-a fi oxidate de ctre radicalii liberi care atcnd dublele legturi ale acizilor grai nesaturai din componena particulelor LDL ct i resturile de lizin din structura

apoB100 determin modificarea ireversibil a structurii LDL rezultnd particule cunoscute sub denumirea de LDL oxidate. Acestea nu mai sunt recunoscute de receptorii pentru LDL de pe suprafaa hepatocitului sau a altor celule extrahepatice i vor fi preluate de ctre receptorii scavanger, de joas afinitate, de pe suprafaa monocitelor, receptori care nu sunt reglabili (nu sufer fenomenul de down regulation). Astfel aceste celule se incarc cu mari cantiti de esteri de colesterol, transformndu-de n celule spumoase (foam cell). Aceste celule se acumuleaz n spaiul subendotelial, unde stimuleaz apariia i intreinerea unui focar inflamator, cu atragerea de noi monocite, limfocite, trombocite. Aceste celule inflamatorii i materialul lipidic se organizeaz ducnd la apariia unei leziuni numite plac de aterom, care prezint n interior un miezul lipidic i celulele inflamatorii, iar la exterior este invelit n esut fibros (fig.9). n timp, aceast placdetermin rigidizarea peretelui vascular, cu ngustarea lumenului i scderea

Fig.9. Organizarea plcii de aterom. Miezul este format din lipide i celule inflamatorii. La exterior placa este nvelit n esut fibros.

oxigenrii esuturilor irigate de aceste vase. n anumite condiii capionul fibros al plcii se poate rupe iar contactul materialului lipidic cu sngele iniiaz coagularea acestuia, formarea unui trombus (fig10) care dac ocup n totalitate vasul determin necroza esutului irigat de vasul respectiv, boala numindu-se infarct (n funcie de localizare poate fi infarct miocardic, cerebral i mai rar, mezenteric).

Fig.10. Fisurarea plcii de aterom cu apariia unui trombus

Procesul de aterogenez este accelerat la diabetici, unde hiperglicemia cronic determin glicozilarea neenzimatic a apoB100, cu modificarea ireversibil a ntregii structuri a particulelor LDL. Aceste particule LDL glicate nefiind recunoscute de receptorii de nalt afinitate pentru LDL, sunt preluate de receptorii scavanger de pe sistemul monocite macrofage, iniiind apariia i dezvoltarea plcii de aterom. Aterocleroza se accentueaz cu vrsta i depinde i de cantitatea de colesterol ingerat: cantitii de colesterol din alimente prin intermediul CM ajunge n ficat exportat n cantiti mari sub form de VLDL LDL crete ansa de-a fi oxidat LDL oxidate plac de aterom. Oxidarea lipidelor poate fi prevenit de consumul de vitamin E, care circulnd n snge n LDL i avnd rol antioxidant, previne peroxidarea lipidelor. n consecin rolul particulelor LDL este de-a transporta esterii de colesterol ctre esuturi, iar creterea fraciunii LDL-colesterol crete riscul pentru ateroscleroz i boli cardiovasculare.

HDL (-lipoproteine)
HDL- lipoproteine cu densitate mare, se sintetizeaz att n ficat (apo A1, C i E) ct i in intestin (apoA1). ApoE i apoC sintetizate doar n ficat vor fi ulterior transferate de pe particulele HDL de origine hepatic pe HDL de origine intestinal cnd acestea ajung n plasm. HDL transfer, de asemenea, apoC i apoE CM i VLDL, aporoteine cu rol major n metabolismul acestor lipoproteine. Particulele de HDL nascent au form discoidal, fiind alctuite dintr-un dublu strat format din fosfolipide i colesterol. Pe suprafa aceste particule au ataate apo A1 i enzima LCAT (lecitin colesterol acil transferaza) (fig.11)

Fig.11. Metabolismul HDL. C- colesterol; CE- esteri de colesterol; PL- fosfolipide

ApoA1 este cofacotor al LCAT i activnd-o, aceast enzim va transfera un rest de acid gras din structura fosfolipidelor- cel mai frecvent este lecitina (din dublul strat discolidal al HDL) pe o molecula de colesterol (afalt de asemenea, tot n structura HDl nascent), cu formare de esteri de colesterol (CE) i lizofosfolipid(lizolecitin):

Moleculele de CE, fiind hidrofobe, vor migra n interiorul particulei HDL, acumulndu-se n miezul acesteia i modificndu-i forma particula HDL devine sferic i se transform n HDL3 (fig.11). Lifosfolipidul rezultat n urma aciunii LCAT, va trece n plasm, fiind preluat de albumin. n acest fel concentraia de colesterol liber, neesterificat, de pe suprafaa particulelor HDL este sczut i aceste particule, prin aciunea LCAT, sunt implicate n extragerea i ndeprtarea colesterolului aflat n exces n diferite esuturi extrahepatice. n ficat, glandele corticosuprarenale i gonade s-a indentificat o protein din clasa SR-B1 (scavanger receptor B1) care a fost identificat ulterior cu receptor pentru HDL. Particule HDL se fixeaz de acest receptor prin intermediul apo A1, iar CE din interiorul particulei sunt extrai selectiv. De remarcat c fixarea particulei HDL de SR-B1 nu determin internalizarea particulei lipoproteice (aa cum se intpl de exemplu dup fixarea particulei LDL de receptorul su specific). Particulele sferice de HDL3 vor extrage colesterol din esuturi cu ajutorul unei proteine transportaoare din clasa ABC-1 (ATP-binding cassette transporter -1). Aceast protein ABC-1 este un membru al unei familii de proteine transportoare care cupleaz hidroliza ATP-ului cu fixarea substratului, permind transportul transmembranar al acestuia. HDL3, vor esterifica cu ajutorul LCAT- colesterolul extras din diferite esuturi, CE

acumulndu-se n miezul particulei de HDL, care i mrete diametrul, formnd particule mai puin dense, HDL2. Ciclul se nchide fie prin preluarea CE din HDL2 de ctre receptorul hepatic SR-B1, cu reformarea HDL3, sau prin hidroliza TG i parial a fosfolipidelor din structura HDL2 sub aciunea lipazei hepatice (HL). n urma aciunii HL, apo A1 este eliberat i se ataez de resturile de fosfolipide nehidrolizate ct i cantiti mici de colesterol care nu a fost preluat de ctre ficat, formnd particulele preHDL. Aceste particule preHDL reprezint clasa de HDL cu cea mai mare capacitate de-a induce efluxul de colesterol (prin intermediul proteinei ABC-1) din esuturi i de-a forma HDL nascent, discolidal. Surplusul de apo A1 Este excretat renal. Acest transport al colesterolului de la esuturile extrahepatice, inapoi la ficat este cunoscut sub denumirea de transport revers al colesterolului i este mediat de ciclul HDL-ului. Asociat cu particula HDL se mai gsete o protein CETP (cholesteryl ester transfer protein) care faciliteaz transortul lipidelor hidrofobe ntre lipoproteinele plasmatice. Astfel preia CE din particulele HDL i le cedeaz VLDL, IDL i LDL, prelund de la aceste lipoproteine molecule de TG. Extrgnd CE din HDL, previne inhibarea LCAT prin produs final. Astfel, cantiti importante de CE produi sub aciunea LCAT ajung la ficat pe calea particulelor VLDL remanente (IDL). (fig.12)

Fig. 12. Transportul colesterolului ntre diferite esuturi.

Acizii grai liberi (AGL)

n plasm, alturi de cele 4 clase de lipoproteine se gsesc n tranzit i cantiti mici de AGL (nesterificai), care sunt transportai de albumine. Dei n mod normal sunt n concentraie mic, din punct de vedere funcional sunt cei mai importani deoarece sunt uor de extras de ctre esuturi unde sunt fie degradai pentru a se obine energie (n special n muchiul strait scheletic i miocard) sau sunt depui sub form de TG (n esutul adipos). Provin din liza TG din esutul adipos (sub aciunei lipazei hormon sensibile) sau din liza TG din structura CM i VLDL sub aciunea lipoprotein lipazei (LPL). n condiii normale nivelul lor seric este foarte sczut. n diabetul zaharat necontrolat sau n inaniie, raportul insulin/glucagon scade (se secret n exces glucagon sau secreia/funcia insulinei este deficitar) i activndu-se lipoliza, nivelul AGL crete foarte mult. La nivel membranar AG se disociaz de albumin (care rmne n torentul circulator) i se fixeaz de o protein membranar specific (membrane fatty acid transport protein) care, legnd i un ion Na+ i transport transmembranar printr-un (mecanism de cotransport). n citoplasm acizii grai sunt preluai de ctre o alt protein specific FABP (fatty acid binding protein) fiind transportai la locul de metabolizare. FABP joac rolul albuminei din ser.