Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Celulele:
sunt unitile structurale ale lumii vii,
se afl permanent n relaie de echilibru dinamic cu mediul
nconjurtor,
transform elementele din mediu n elemente proprii:
o prin procese consumatoare de energie,
au ca principale proprieti: creterea, dezvoltarea, autoreproducerea.
Eucariotele:
sunt celule mai mari, cu diametrul peste 10 m,
sunt reprezentate de protozoare (ex. amoeba), celulele plantelor, animalelor, omului,
au o organizare complex, cu trei componente principale:
o membrana (suprafaa celular),
DIMENSIUNILE CELULELOR
La microscopul optic pot fi examinate structuri ale cror dimensiuni
sunt de ordinul micrometrilor. La microscopul electronic ns pot fi studiate i
cele de ordinul nanometrilor sau chiar al angstromilor.
De obicei este apreciat diametrul celulelor, iar suprafaa sau volumul
lor pot fi calculate.
Diametrul majoritii celulelor din organism este cuprins ntre 10-30
m:
cele mai mici celule la mamifere sunt considerate celulele granulare
(neuronii granulari) din cerebel, cu diametrul de 3-4 m,
cele mai mari sunt ovocitele care au aproximativ 200 m,
unele celule nervoase pot depi 100 m.
Nu exist o corelaie stns ntre mrimea celulei i mrimea corporal
a individului din aceeai specie dect numai pentru celulele foarte specializate
cum sunt celulele nervoase.
Lund n considerare vrsta, se constat c celulele tinere au un
diametru mai mare dect cele mbtrnite.
Volumul celulelor variaz ntre 200-1500 m3. Acelai tip celular are
un volum comparabil n seria animal.
COMPOZIIA CHIMIC A CELULEI EUCARIOTE
Glucidele sunt prezente sub form de glicogen, glicoproteine sau glicolipide. Ele intr n alctuirea membranei celulare i a unor organite.
Lipidele formeaz complexe lipoproteice care intr n structura citomembranelor, pot fi stocate ca rezerve i servesc drept substrat energetic.
Acizii nucleici dein informaia genetic.
Apa intr n alctuirea celulei n proporie de 60-90%, dar dei este indispensabil activitii celulare, ea nu constituie substratul acesteia.
DURATA VIEII CELULELOR
Durata vieii celulelor difer n funcie de tipul celular. Astfel, celulele
epitelului intestinal triesc 48-72 ore, dup care sunt nlocuite, iar pe de alt
parte celulele nervoase i cele musculare cardiace au durata de via egal cu
cea a individului.
Celulele epiteliale sunt elemente labile, cu o durat de via relativ
scurt. Celulele uzate sunt nlocuite n permanen cu celule tinere provenite
din diviziunea celulelor epiteliale din stratul bazal. Intensitatea procesului de
rennoire celular a diferitelor epitelii este variabil. Astfel epiteliul intestinului subire se rennoiete la 4-6 zile, epiteliul de suprafa al stomacului la
3-4 zile, iar cel glandular anual. Studiul caracterelor morfologice ale celulelor
descuamate st la baza citologiei exfoliative care permite depistarea precoce a
unor afeciuni neoplazice (ex. studiul frotiului vaginal permite depistarea precoce a cancerului de col uterin). Cheratinocitele au durata de via de aproximativ 28 de zile, dup care se descuameaz.
Problema duratei n timp se pune i pentru componentele structurale
ale celulei. Astfel, ADN (cromatina nuclear) persist tot timpul vieii celulei,
dar alte uniti structurale sunt n continu schimbare.
MEMBRANA CELULAR
.
Concepia actual privind structura membranei celulare a fost formulat pe baza informaiilor furnizate de teoriile precedente (modelul paucimolecular, teoria "unitii de membran", teoria mozaicului fluid), completate cu
date noi oferite n primul rnd de microscopia electronic.
S-a stabilit clar c structura fundamental a membranelor celulare este
reprezentat de un bistrat lipidic continuu, situat la periferia celulei, cu
grosimea a dou molecule lipidice, n care sunt interpuse molecule proteice
integrale i periferice.
n compozia chimic a membranelor celulare intr 30% ap, 70% substane organice i cantiti foarte mici de substane anorganice. Din masa uscat a membranelor, peste 90% o reprezint lipidele i proteinele (35-40%
lipide, 55-60% proteine), iar restul sunt glucide (1-9%).
Teaca de mielin conine 80% lipide i 20% proteine, n timp ce membrana intern a mitocondriei este alctuit n proporie de 75% din proteine.
n structura membranei celulare:
lipidele sunt localizate n totalitate n plasmalem,
glucidele sunt prezente doar n structura glicocalixului, pe frontul E
(extern) al plasmalemei,
proteinele se gsesc sub form de proteine globulare n plasmalem i
ca proteine fibrilare (ce formeaz reele fine) n glicocalix i mai ales
n citoscheletul membranei,
Plasmalema:
este componenta principal a membranei celulare,
are o structur lipoproteic trilaminat cu grosimea de 7,5 nm:
aspectul trilaminat este conferit de cele dou foie ntunecate
ntre care se afl o foi clar,
are permeabilitate selectiv dat de distribuia lipidelor i proteinelor.
Lipidele, localizate n totalitate n bistratul lipidic sunt reprezentate de:
fosfolipide: fosfatidilcolin, fosfatidiletanolamin, fosfatidilserin i
sfingomielin,
colesterol, mai abundent n stratul extern, mpreun cu acizii grai
saturai,
glicolipide, care predomin n stratul intern, mpreun cu acizii grai
nesaturai.
Moleculele lipidice din plasmalem au forma de cui, cu:
un cap, numit grup polar, hidrofil (solubil n ap), purttor de sarcini
electrice,
dou cozi, segmentul apolar, hidrofob (solubil doar n lipide), format
din acizi grai.
Bistratul lipidic:
prezint o asimetrie dat de compoziia chimic diferit a monostraturilor,
este fluid, iar moleculele sale pot efectua trei tipuri de micri:
o de condensare,
o de deplasare lateral,
o "flip-flop", adic sar dintr-un strat n altul.
Proteinele:
constituie cea de a doua component de baz a plasmalemei,
sunt de dou tipuri:
o extrinseci sau periferice,
o intrinseci sau integrale.
10
11
Glicocalixul intervine n:
controlul schimbului ionic transmembranar,
facilitarea recunoaterii i interaciunii intercelulare,
aderena intercelular, acionnd ca un ciment intercelular,
ataarea celulelor la componentele matricei extracelulare,
legarea i ataarea antigenelor i enzimelor la suprafaa celular.
CORTEXUL CELULAR
Cortexul celular:
este componenta cea mai subire a suprafeei celulare,
are grosimea de aproximativ 5-9 nm,
are aspect de reea:
o la microscopul electronic apare ca o reea anastomotic de microfilamente proteice (actin) orientate neregulat,
o nodurile reelei sunt reprezentate de proteine globulare,
legturile dintre diferitele tipuri de proteine sunt modulate prin
procese de fosforilare i prin intermediul gelsolinei, o protein
reglatoare calciu-dependent,
se ancoreaz de plasmalem prin intermediul captului intern al proteinelor extrinseci, iar pe de alt parte este n legtur cu citoscheletul,
confer membranei elasticitate i rezisten:
o elasticitatea este dat de dispoziia microfilamentelor proteice sub
form de reea,
o rezistena este asigurat de proteinele globulare ce se afl la nivelul
nodurilor reelei proteice,
intervine i n mecanismul de recepie-transducie care mediaz transferul prin membrana celular a unor semnale ajunse la celul din exterior.
RECEPTORII DE MEMBRAN
12
13
14
implicate n aderena structural sau prin capacitatea lor de a produce mesageri intracelulari, cum se ntmpl n cazul numeroaselor proteine implicate n
aderena funcional.
Moleculele de aderen sunt grupate n cinci familii principale: caderinele, imunoglobulinele, integrinele, selectinele, moleculele CD44.
Caderinele:
sunt o familie format din numeroase molecule, principalele sunt:
o caderina-E, prezent n toate epiteliile,
o caderina-N, caracteristic esuturilor nervos i muscular,
o caderina-P prezent n mezoteliu i epiderm,
sunt glicoproteine monomerice ce asegura prin:
o domeniul extracelular, aderena intercelular dependent de calciu,
o domeniul intracitoplasmatic asociere la microfilamentele de actin
ale citoscheletului.
Imunoglobulinele:
sunt caracterizate de prezena unuia sau mai multor domenii de structur molecular caracteristic (legturi antiparalele stabilizate prin
puni de sulf),
cuprind numeroase molecule cu funcii foarte diverse:.
o unele joac un rol major n rspunsul imun:
imunoglobuline,
moleculele HLA,
receptori antigenici ai limfocitelor T,
o altele sunt molecule de aderen care se pot grupa n:
familia N-CAM (neural cell adhesion molecule), care joac un
rol important n embriogenez i care sunt exprimate n esutul
nervos la adult,
familia antigenelor carcinoembrionare,
proteinele de aderen endotelial reprezentate de I-CAM1
(intercellular adhesion molecule 1), I-CAM2 (intercellular
adhesion molecule 2) i V-CAM (vascular cell adhesion
molecule),
proteinele de aderen leucocitar CD2.
15
Selectinele sunt:
glicoproteine monomerice transmembranare,
reprezentate de trei molecule:
o E-selectina i P-selectina exprimate la nivelul celulelor endoteliale,
o L-selectina, specific unei subpopulaii de limfocite.
implicate n aderena leucocitelor circulante la celulele endoteliale.
Jonciunile simple:
sunt legaturi foarte slabe,
se realizeaz atunci cnd ntre membranele a dou celule alturate
exist o distan de cel mult 30 nm:
rmne un spaiu intercelular ngust care nefiind nchis va permite circulaia lichidului intercelular,
sunt asigurate de fore fizice care in de atracia molecular sau de
legturi chimice realizate de anumitre substane prezente n glicocalixul celulelor:
o fore van der Waals,
o puni de hidrogen,
16
part n:
jonciuni ocludente, impermeabile sau "tight junction", care leag celulele ntre ele i oblitereaz spaiul intercellular,
jonciuni de ancorare, care leag celulele ntre ele, asigurndu-le rezisten la aciunea unor factori mecanici,
jonciuni de comunicare, gap sau nexus, care asigur trecerea unor molecule dintr-o celul n alta.
17
18
19
20
TRANSPORTUL PASIV
Transportul pasiv:
asigur traversarea membranei celulare de ctre unele molecule mici,
n sensul gradientului de concentraie sau al gradientului electrochimic
n cazul ionilor,
21
22
Difuziunea facilitat:
este un tip de transport transmembranar pasiv prin care unele substane
greu solubile n lipide i cu mas molecular relativ mare (ex. glucoz,
aminoacizi, purine, glicerol), strbat membrana celular mult mai
repede (de 100.000 ori) dect prin difuziune simpl,
se realizeaz cu ajutorul unor molecule proteice transmembranare cu
rol de "crui":
preiau substanele de pe o fa a membranei, le trec prin membran,
apoi le elibereaz pe faa opus.
23
Mecanismul prin care se realizeaz acest tip de transport transmembranar s-ar putea explica prin existena la nivelul canalului proteinei cru, a
unui situs de legare pentru molecula care urmeaz a fi transportat. Aceasta va
ptrunde n canal i va fi legat la nivelul situsului. Proteina cru va suferi o
modificare conformaional, iar canalul su se va deschide pe partea opus a
membranei celulare. Pentru c fora de legare a moleculei transportate de situs
este slab, aceasta va fi eliberat pe partea opus a membranei.
Prin difuziunea facilitat sunt transportate molecule, cum sunt glucoza
i unii aminoacizi. Molecula cru pentru glucoz poate transporta i alte
monozaharide cu structur asemntoare, cum este galactoza.
Transportul prin difuziune facilitat se efectueaz n sensul gradientului de concentraie, rata de difuziune crete pn atinge un maximum
(Vmax.), fiind limitat de rata modificrilor conformaionale a moleculelor
cru.
TRANSPORTUL ACTIV
Transportul activ asigur trecerea foartee rapid prin membran a unor
molecule i ioni, mpotriva gradientului de concentraie sau al celui electrochimic. Acest tip de transport se realizeaz cu consum de energie. Modul de
furnizarea a energiei utilizate a condus la descrierea a dou tipuri de transport
activ:
transport activ propriu-zis sau transportul activ primar, n care este
utilizat energia rezultat din hidroliza ATP;
cotransportul sau transportul activ secundar, n care energia necesar
transportului unor ioni sau molecule mpotriva gradientului este furnizat de transportul pasiv al altor ioni sau molecule.
TRANSPORTUL ACTIV PROPRIU-ZIS
Pentru meninerea gradientului ionic intracelular este necesar trecerea
ionilor prin membrane, de cele mai multe ori mpotriva gradientului de concentraie sau al celui electrochimic. Acest tip de transport este realizat de unele
protein-enzime din plasmalem, numite pompe ionice, care au capacitatea de a
cupla transportul mpotriva gradientului de concentraie sau al celui
electrochimic, cu hidroliza ATP. Exist pompele ionice care transport un
singur ion (ex. pompa de Ca2, pompa de Mg2) sau concomitent doi ioni (ex.
pompa de Na - K ).
24
POMPELE IONICE
Pn n prezent se cunsc trei clase de protein-enzime care cupleaz
transportul unor ioni cu hidroliza ATP:
pompe ionice (ATP-aze) P,
pompe ionice (ATP-aze) V,
pompe ionice (ATP-aze) F.
Toate aceste trei clase de ATP-aze prezint la nivelul feei interne
(citosolice) a membranei, unul sau mai multe situsuri de legare a ATP-ului,
care ns va fi hidrolizat (cu producerea de ADP, fosfat anorganic i eliberarea
de energie), doar n prezena ionului transportat.
Pompele ionice din clasa P au structura cea mai simpl, constituit din
patru subuniti transmembranare, dou polipeptide i dou polipeptide .
Se crede c ionii transportai trec prin subunitatea .
n aceast clas de pompe ionice sunt incluse:
Na-K ATP-aza, care se gsete n membrana plasmatic;
Ca2 ATP-azele, care se gsesc:
n membrana plasmatic, unde transport ionii de calciu (Ca 2) afa-r
din celul;
n membrana reticulului sarcoplasmic (la nivelul fibrei musculare
striate), unde are rolul de a pompa ionii de calciu din citosol n lumenul acestui organit, urmat de relaxarea muscular;
pompe transportoare de protoni (ioni de H) care se gsesc n celulele
care secret acid, la nivelul mucoasei gastrice i a celulelor tubilor contori distali i colectori din rinichi. H-K ATP-aza care se gsete n
celulele epiteliale ale mucoasei gastrice are rolul de a transporta
protoni (H) n exteriorul celulei i ionii de potasiu (K) n citosol.
Activitatea pompei de protoni la nivelul celulelor parietale ale
mucoasei gastrice st la baza secreiei de acid clorhidric de la acest
nivel.
Pompele ionice din clasa V au structura constituit din aproximativ 7
subuniti (lanuri polipeptidice). Rolul lor este de a transporta mpotriva
gradientului electrochimic ionii de hidrogen (protonii). H ATP-azele se gsesc n membrana plasmatic a unor celule secretoare de acid (ex. osteoclastele din esutul osos), dar i n membrana lizozomilor i endozomilor, sau a
vacuolelor unor celule vegetale sau a unor fungi, unde au rolul de a menine
un pH acid n lumenul acestora.
Pompelele ionice din clasa F au o structur asemntoare cu cea a H
ATP-azelor, fiind constituite din 8 lanuri polipeptidice. Rolul lor este de a
25
26
poriune cu activitate ATP-azic, situat n poriunea intern, n vecintatea situsurilor pentru ionii de Na.
Legarea ionilor de Na la nivelul celor trei situsuri, va determina activarea funciei ATP-azice a pompei, cu producerea hidrolizei ATP. Va rezulta
astfel energia necesar modificrii conformaionale a pompei de sodiu-potasiu,
care va permite ieirea ionilor de Na i ptrunderea ionilor de K n
citoplasm.
Hidroliza unei molecule de ATP va furniza enegia necesar ptrunderii
n celul a doi ioni de K i expulzrii a trei ioni de Na.
27
sarcoplasmic, iar cantitate de energie necesar pentru pomparea lor din citosol
scade.
COTRANSPORTUL
Cotransportul este modalitatea de transport a unor substane (ex. glucoza, aminoacizii) n citosol, mpotriva gradientului de concentraie, utiliznd
pentru aceasta energia stocat n gradientul transmembranar al ionilor Na sau
H.
Transportul activ al ionilor de Na din citosol determin excesul
acestor ioni la nivelul spaiului extracelular. Ionii de Na, n exces n spaiul
extracelular, au tendina de a ptrunde n citosol (gradientul de concentraie
stocheaz energie), iar energia de difuziune a acestor ioni poate fi utilizat
pentru transportul n celul i a unor substane cum sunt glucoza sau aminoacizii. Ionii implicai n acest tip de transport poart numele de ioni cotransportai.
Exist dou tipuri de cotransport:
simportul, cnd moleculele se deplaseaz n aceeai direcie cu ionul
cotransportat,
antiportul n care moleculele se deplaseaz n direcie opus ionului
cotransportat.
SIMPORTUL
Prin simportul Na-glucoz i Na-aminoacizi se realizeaz transportul
mpotriva gradientului de concentraie a glucozei i aminoacizilor din lumenul intestinului subire n citoplasma enterocitelor i a glucozei din lumenul
tubilor uriniferi n citoplasma nefrocitelor.
Simportul Na-glucoz. La nivelul regiunii apicale, prevzut cu microvili a membranei plasmatice se afl o protein de transport ce realizeaz
simportul ionului de Na i al glucozei. Proteina de transport prezint un situs
de legare pentru ionul de Na i unul pentru glucoz, iar energia necesar
transportului este furnizat de diferena de concentraie a ionului de Na de-o
parte i de alta a membranei plasmatice. Dup ataarea ionului de Na i a
glucozei, proteina de transport va suferi o modificare conformaional, care va
permite ptrunderea Na i a glucozei n citosol.
Simportul Na-glucoz se realizeaz i la polul apical al membranei
plasmatice (cu microvili) a nefrocitelor din tubii uriniferi.
Simportul Na-aminoacizi se realizeaz printr-un mecanism identic, dar
cu participarea altor proteine de transport.
28
n citosolul enterocitelor se acumuleaz ioni de Na, glucoz i aminoacizi. n regiunea bazolateral a membranei plasmatice a enterocitului se
afl Na-K ATP-aza prin activitatea creia ionii de Na sunt pompai n spaiul extracelular. Tot n regiunea bazolateral a membranei enterocitului se afl
proteine transmembranare care transport moleculele de glucoz i aminoacizii care se concentreaz n citosolul enterocitelor prin procesul de simport. Astfel, prin cele dou procese desfurate la nivelul celor dou regiuni
(apical i bazolateral) ale membranei plasmatice a enterocitelor, ionii de
Na, glucoza i aminoacizii ajung din lumenul intestinului subire n circulaia
sanguin.
ANTIPORTUL
Antiportul este modalitatea de transport a unor ioni n celul, cuplat cu
ieirea n spaiul extracelular a unor ioni sau molecule. Exist dou mecanisme importante de antiport: antiportul Na-Ca2 i antiportul Na-H.
Antiportul Na-Ca2 este mecanismul prin care ionii de Na intr n
citosol, cuplat cu ieirea ionilor de Ca2 din citosol n spaiul extracelular.
Acest tip de transport este realizat de o protein de care se leag ambii ioni.
Antiportul Na-Ca2 constituie alturi de transportul activ prin pompa
de Ca2, un mecanism adiional de transport al acestor ioni. La nivelul fibrei
musculare cardiace, antiportul Na-Ca2 este principalul mecanism de reducere
a concentraiei ionilor de Ca2 din citosol, urmat de scderea frecvenei
cardiace.
Antiportul Na-H are o importan mare la nivelul tubilor contori proximali, unde prin participarea unei proteine de transport, ionii de Na ptrund
din lumenul tubular n citosolul nefrocitelor (n sensul gradientului de concentraie), n timp ce ionii de H trec prin antiport n lumenul tubilor uriniferi.
Prin acest mecanism este meninut la un nivel normal pH-ul citosolic necesar
desfurrii proceselor vitale.
TRANSPORTUL PRIN VEZICULE
Transportul prin vezicule este o form particular de transport, prin
care celula preia o serie de substane din mediul extracelular sau elimin
diferite particule n spaiul extracelular. Mecanismul de transport include
formarea la nivelul membranei celulare a unor vezicule care ncorporeaz
particulele ce urmeaz a fi transportate, npreun sau fr lichid interstiial. n
funcie de sensul n care particulele urmeaz a fi transportate deosebim:
29
exocitoza,
endocitoza,
transcitoza.
Prin exocitoz celula elimin la exteriorul ei diferii produi de secreie
sau substane rezultate din metabolism, fiind implicat n special n
mecanismul secreiei celulare.
Prin endocitoz celulele introduc n citoplasm particule din mediul
extracelular, prin vezicule formate din membrana celular. Dup modul n care
particulele sunt interiorizate, deosebim dou tipuri de endocitoz:
fagocitoza, procesul prin care particulele sunt endocitate fr fluid
intercelular;
pinocitoza, procesul de endocitare a unei cantiti oarecare de lichid interstiial mpreun cu particulele pe care le conine.
FAGOCITOZA
Fagocitoza este o modalitate de hrnire pentru anumite vieuitoare
inferioare (protozoare). La mamifere fagocitoza joac un rol important n procesele de aprare ale organismului, deoarece pe aceast cale sunt nglobate i
apoi distruse intracelular bacteriile, unii parazii, substane strine, resturi
celulare, celule degenerate sau mbtrnite, celule maligne, etc. Procesul de
fagocitoz este realizat la mamifere, n condiii normale i patologice de ctre
celulele specializate numite fagocite.
n funcie de dimensiunea particulelor pe care sunt capabile s le nglobeze, fagocitele sunt clasificate n:
microfage, reprezentate de granulocite, capabile s nglobeze numai
particule de dimensiuni mici;
macrofage, reprezentate de celulele din sistemul fagocitelor mononucleare (sistemul monocito-macrofagic), capabile s nglobeze i
particule de dimensiuni mai mari.
Microfagele reprezentate de granulocitele neutrofile i ntr-o msur
mai redus de granulocitele eozinofile, cnd ajung la nivelul esuturilor sunt
deja mature avnd imediat capacitatea de a fagocita. n mod normal, neutrofilul are capacitatea de a fagocita pn la 20 de bacterii, dup care se va inactiva i va fi distrus.
Macrofagele sunt prezente n toate tipurile de esut conjunctiv, cu o
densitate mai mare n zone apropiate mediului extern, cum sunt corionul mucoaselor, dermul pielii, stroma organelor parenchimatoase sau n jurul vaselor
sanguine. Ele aparin sistemului monocito-macrofagic. Originea lor este n
celulele stem existente n mduva hematogen, care prin difereniere dau
30
natere monocitelor. Acestea trec n snge pentru aproximativ 60 ore, apoi prin
diapedez trec n esutul conjunctiv, unde se transform n macrofage tisulare
(histiocite) care desfoar activiti specifice. Durata lor de via este de
cteva luni.
Macrofagele au form rotund sau ovalar, prezint prelungiri citoplasmatice scurte, iar nucleul lor este relativ mic, rotund sau reniform, dispus
central sau excentric i este heterocromatic. Nucleolii se disting greu. Citoplasma este abundent i conine organite celulare numeroase, dintre care se
evideniaz numrul mare de lizozomi (primari i secundari). Pe suprafaa lor
prezint receptori pentru regiunea Fc a imunoglobulinei G (RFc) i pentru cel
de-al treilea component al sistemului complementului (RC3).
Diferitele celule care sunt incluse n sistemul fagocitelor mononucleare
sunt urmtoarele:
monocitele din snge,
macrofagele (histiocitele) din esutul conjunctiv,
celulele Kupffer din ficat,
microgliile din sistemul nervos central,
macrofagele libere din fluidele pleurale, peritonele, sinoviale i cele
din alveolele pulmonare i splin,
osteoclastele din esutul osos,
celulele dendritice din epiderm (celule Langerhans) i celulele similare
ramificate din ganglionii limfatici, splin i timus, toate fiind celule
prezentatoare de antigene.
Macrofagele sunt celule mobile care se deplaseaz n esuturi cu ajutorul pseudopodelor. Prin activitatea fagocitar a macrofagelor sunt ndeprtate
din esuturi: microorganisme (pot fagocita mai mult de 100 de bacterii), resturi organice, complexe imune multimoleculare, hematii, ocazional parazii
(protozoarele din genul Plasmodium, care determin malaria).
Recunoaterea fagocitar se realizeaz la dou niveluri: la nivel tisular,
cu ajutorul opsoninelor i la nivelul celular, prin receptorii de suprafa. Opsoninele pot fi neimunospecifice (fibronectina) i imunospecifice (IgG, C3).
Astfel, macrofagul poate realiza dou tipuri de fagocitoz:
fagocitoza neimunospecific mediat de opsonine neimunospecifice
(de tipul fibronectinei),
fagocitoza imunospecific mediat de opsonine imunospecifice (de tip
IgG i C3).
n anumite situaii patologice, ca rspuns la ptrunderea n organism a
unor microbi (bacilul tubeculos i bacilul leprei) sau a unor corpi strini macrofagele pot fuziona, dnd natere unor celule gigante multinucleate, cu 2050 de nuclei cuprini ntr-o mas citoplasmatic unic. Alteori ele se agreg i
se unesc prin jonciuni strnse, n jurul unor focare de infecie. Aceste celule
poart numele de celule epitelioide, datorit asemnrii cu celulele epiteliale.
31
Fagocitele trebuie s fie selective n ceea ce privete materialul fagocitat. Selectivitatea procesului se datoreaz faptului c:
multe structuri tisulare (proprii organismului) au suprafaa neted, care
le confer rezisten la fagocitoz,
multe structuri proprii organismului au un nveli proteic protector care
nu favorizeaz fagocitoza, n timp ce esuturile moarte i multe particule strine nu au un astfel de nveli,
organismul are capacitatea de a recunoate materialele strine, prin sistemul imun.
Fagocitele prezint la suprafaa lor receptori cu ajutorul crora ele
recunosc ceea ce este "self" de ceea ce este "non self" (antigeni). Fagocitele
sunt capabile s recunoasc componentele structurale proprii alterate, cum
sunt celule degenerate, mbtrnite, maligne, resturi celulare, etc.
Dup extravazare prin diapedez, leucocitele se vor deplasa la locul agresiunii, sub aciunea unor ageni chemotactici, n sensul gradientului chimic,
procesul numindu-se chemotaxie. Agenii chemotactici pot fi de natur endogen sau de natur exogen. Dintre substanele chemotactice de natur exogen, cele mai obinuite sunt produii bacterieni solubili (peptide i lipide), iar
cele de natur endogen sunt reprezentate de:
produii de metabolism ai acidului arahidonic, n special de leucotriena
B,
citokine, n special de cele din familia chemochinelor (IL-8),
componentele sistemului complementului, n special de C5a.
Legarea agenilor chemotactici la receptorii specifici de la nivelul
membranei celulare a fagocitelor va avea ca rezultat activarea fosfolipazei C,
care va conduce la hidroliza fosfatidilinozitolului-4,5-bifosfat, cu producerea
inozitolului-1,4,5-trifosfat i a diacilglicerolului, cu eliberarea ionilor de Ca 2.
Creterea concentraiei de ioni de Ca2 la nivelul citosolului, prin eliberarea
din depozitele intracelulare i prin influxul de Ca2 extracelular, va declana
asamblarea elementelor contractile, care face posibil micarea celular prin
emiterea de pseudopode. La nivelul acestora exist o reea ramificat,
constituit din actin i miozin. Micrile de locomoie implic asamblarea i
dezasamblarea rapid a monomerilor de actin. Aceste procese sunt controlate
de efectul ionilor de calciu i a inozitolilor asupra unor proteine reglatoare ale
actinei cum sunt: filamina, gelsolina, profilina, calmodulina. Mecanismul prin
care actina va interaciona cu miozina n interiorul pseudopodelor, n cursul
micrilor de locomoie, este insuficient cunoscut.
Agenii chemotactici induc i activarea fagocitelor, caracterizat prin:
producia de metabolii ai acidului arahidonic,
modularea moleculelor de adeziune leucocitar,
degranularea i secreia de enzime leucocitare,
activarea degradrilor oxidative.
32
ETAPELE FAGOCITOZEI
Recunoaterea i ataarea
Ocazional, neutrofilele i macrofagele pot recunoate i ngloba bacterii sau materiale de origine exogen cu ar fi granulele de latex. Majoritatea
microorganismelor ns, nu sunt recunoscute dect dup ce vor fi acoperite de
opsonine n procesul de opsonizare. Exist dou opsonine majore:
fragmentul Fc al imunoglobulinei G (IgG);
C3b (forma sa stabil fiind C3bi), fragmentul opsoninic al componentei C3 a sistemului complementului.
Complementul reprezint un sistem format din aproximativ 20 de proteine prezente n plasm, dintre care multe sunt precursori ai enzimelor. Aceti precursori sunt n mod normal inactivi, dar pot fi activai prin dou mecanisme: clasic i alternativ.
La nivelul membranei celulare a leucocitelor exist receptori corespunztori opsoninelor. Acetia sunt:
receptorul RFc, care recunoate fragmentul Fc al IgG,
receptorii complementului 1, 2 i 3 (RC1,2,3), care interacioneaz cu
C3b i C3bi.
Receptorul RC3, are o importan particular deoarece:
este identic cu integrina-2-Mac-1, implicat n adeziunea la endoteliul vascular;
recunoate lipopolizaharidele bacteriene fr intervenia anticorpilor
sau complementului, rezultnd fagocitoza nonopsonic;
leag unele componente ale matricei extracelulare, cum sunt fibronectina i laminina.
nglobarea
Legarea particulei opsonizate la receptorul RFc este suficient pentru a
declana nglobarea, care ns devine foarte intens n prezena receptorilor
pentru complement.
n timpul nglobrii pseudopodele emise de fagocite vor nconjura particula care urmeaz a fi nglobat pe toat suprafaa, printr-un mecanism numit "n fermoar", rezultnd n final internalizarea unei poriuni din membrana
plasmatic (a celulei fagocitare), cu constituirea fagozomului. Membrana li-
33
mitant a fagozomului va fuziona cu lizozomii (primari), cu constituirea fagolizozomilor (lizozomi secundari). Astfel coninutul granulelor lizozomale va fi
descrcat n interiorul fagolizozomului, granulocitele i monocitele degranulndu-se progresiv.
Multe dintre procesele implicate n fagocitoz i degranulare sunt similare celor ntlnite n cazul chemotaxiei, fiind asociate cu:
legtura ligand-receptor,
activarea fosfolipazei C,
producerea de diacilglicerol i inozitol-1,2,3-trifosfat,
activarea proteinkinazei C,
creterea concentraiei citosolice de calciu.
Degradarea
Reprezint ultima etap a procesului de fagocitoz. n cazul fagocitrii
bacteriilor, la nivelul fagozomilor (neutrofilelor sau macrofagelor), exist ageni bactericizi care omoar bacteriile nainte ca ele s fie digerate.
Omorrea bacteriilor se realizeaz printr-un mecanism dependent de
oxigen, care presupune intervenia unor ageni oxidani care se formeaz (sub
aciunea unor enzime) la nivelul membranelor fagozomilor, sau a peroxizomilor. Agenii oxidani sunt: superoxidul (O2-), peroxidul de hidrogen (H2O2)
i ionul hidroxil (OH-).
Astfel, fagocitoza stimuleaz:
arderile cu consum de oxigen,
glicogenoliza,
creterea oxidrii glucozei (pe calea untului hexozomonofosfat),
producerea de metabolii reactivi ai oxigenului.
Producerea metaboliilor de oxigen se realizeaz prin rapida activare a
NADPH oxidazei, care oxideaz NADPH (nicotinamidadenin dinucleotid
fosfatul). n acest proces se produce i reducerea oxigenului, cu generarea
ionului superoxid. Acesta va fi apoi convertit n H 2O2. Cantitatea de peroxid de
hidrogen (H2O2) produs la nivelul fagolizozomilor este suficient pentru a
omor bacteriile.
NADPH oxidaza este un sistem enzimatic complex, constituit din fosfoproteine citosolice i componente proteice ale citocromilor membranari.
Activarea NADPH oxidazei necesit translocarea componentelor citosolice
pentru a interaciona cu citocromii fixai la nivelul membranei, iar cnd
membrana este invaginat, la nivelul fagolizozomului. n aceast situaie
peroxidul de hidrogen este produs n interiorul lizozomilor.
Granulele azurofile ale neutrofilelor conin enzima numit mieloperoxidaz, care n prezena unui halogen, cum este clorul, transform peroxidul de hidrogen n HOCl. Acesta este un agent antibacterian care distruge
bacteriile prin halogenare, sau prin oxidarea lipidelor i proteinelor.
34
Importana mecanismului de distrugere a bacteriilor, dependent de oxigen, este demonstrat de existena unui grup de defecte congenitale privind
omorrea bacteriilor, care determin boala cronic granulomatoas caracterizat prin predispoziia unor pacieni pentru infecii bacteriene recurente.
Aceast afeciune se datoreaz unor defecte genetice privind codificarea unor componente ale NADPH oxidazei.
Omorrea bacteriilor se poate realiza n absena arderilor oxidative,
prin intervenia unor substane coninute n granulele leucocitelor. Aceste substane sunt: proteina creterii permeabilitii bactericide, lizozimul, lactoferina, proteina bazic major (la nivelul eozinofilelor), defensina.
Dup omorre, bacteriile vor fi degradate la nivelul fagolizozomilor de
ctre hidrolazele acide coninute de granulele azurofile.
Materialele nedigerabile sunt reinute n vacuole, constituind corpii reziduali. n citoplasma unor celule cu via lung, cum sunt neuronii sau celulele musculare cardiace, se acumuleaz cantiti mari de corpi reziduali care
conin lipofuscina numit i pigment de uzur.
PINOCITOZA
Pinocitoza reprezint procesul prin care se realizeaz ptrunderea n
celule a unor molecule mpreun cu fluid extracelular, sub forma unor vezicule
extrem de mici. Pinocitoza reprezint ingestia de substane aflate sub form de
dispersie n fluidul extracelular, proces stimulat de modificrile ionice.
Pinocitoza se realizeaz n mod continuu la nivelul membranei plasmatice a celor mai multe celule. n unele cazuri procesul se desfoar cu mare
rapiditate. Astfel, n cazul macrofagelor, pinocitoza se desfoar extrem de
rapid, n fiecare minut pn la 3% din membrana macrofagului fiind nglobat
sub form de vezicule.
Pinocitoza este singura modalitate prin care multe macromolecule (ex.
moleculele proteice) ptrund n celule.
Exist dou forme de pinocitoz:
pinocitoza independent de receptori, cu producerea de vezicule pinocitotice netede, proces relativ neselectiv;
pinocitoza mediat de receptori, cu producerea de vezicule acoperite,
prin care se realizeaz un proces selectiv de absorbie.
Pinocitoza independent de receptori este o modalitate de interiorizare
(nglobare) a substanelor existente n lichidul extracelular, cu ajutorul unor
vezicule formate prin internalizarea unei poriuni a membranei celulare, fr
ca particulele s fie fixate n prealabil de receptorii membranari specifici.
Procesul se desfoar la nivelul endoteliului vascular, n celulele musculare
netede, dar este prezent la aproape toate tipurile de celule.
35
Veziculele pinocitotice se formeaz prin invaginarea membranei plasmatice. Iniial, membrana plasmatic se va invagina pentru a forma mici depresiuni proiectate n interiorul celulei. Apoi membranele se apropie, deschiderea depresiunii create se ngusteaz, formnd un lumen ngust. n continuare membranele vor fuziona lund natere vezicule numite pinozomi.
Continuarea constriciei va determina separarea veziculei de membran. n faza urmtoare, pinozomii care se desprind de membrana celular
vor fi antrenai de curenii intracitoplasmatici. n citoplasm pinozomii se vor
uni cu lizozomii, iar particulele endocitate vor fi digerate pn la componente
simple.
Pinocitoza mediat de receptori se mai numete i absorbtiv, selectiv sau concentrativ i este o modalitate de nglobare a unor particule pe care
celula le recunoate cu ajutorul unor receptori existeni la suprafaa membranei celulare.
n acest proces receptorii specifici de la suprafaa membranei se leag
strns de macromoleculele extracelulare pe care le recunosc. Aceste molecule
poart numele de liganzi.
n mod uzual, moleculele proteice se ataeaz la membrana plasmatic
la nivelul unor receptori specializai, specifici pentru tipul de protein absorbit. n general, aceti receptori sunt concentrai n mici depresiuni la nivelul
suprafeei externe a membranei plasmatice. Acestea se numesc caveole acoperite, deoarece pe suprafaa lor citosolic se gsete o reea a crei component principal o constitue o protein fibrilar, clatrina.
Clatrina este o protein fibrilar, vizibil n microscopia electronic ca
o reea care acoper faa citosolic a caveolelor sau a veziculelor formate din
membrana plasmatic i a celor formate la nivelul compartimentului trans al
complexului Golgi. Clatrina purificat are forma unui triskelion cu trei brae,
fiecare lan fiind constituit dintr-un bra lung (greu) i un bra scurt (uor).
Polimerizarea spontan a acestor formaiuni determin extinderea
caveolelor i eventual formarea veziculelor acoperite.
Dup legarea moleculelor proteice la receptori se produce o modificare
a proprietilor membranei celulare, astfel c ntreaga depresiune se invagineaz, iar proteinele care o nconjoar ca o reea vor determina fuzionarea
marginilor acesteia, cuprinznd i o mic cantitate de fluid extracelular.
Imediat dup aceea poriunea invaginat a membranei se va desprinde
de suprafaa celulei, constituind vezicula acoperit. Veziculele acoperite cu
clatrin tipice au aspectul unor mingi de fotbal cu diametrul de 50-100 nm.
Dup endocitare veziculele acoperite pierd reeaua de clatrin, formnd
vezicule netede, numite receptozomi.
n afar de clatrin, care este componenta cea mai studiat a reelei
proteice care acoper veziculele, o alt protein este dinamina. Aceasta este o
protein citosolic, care leag i apoi hidrolizeaz GTP-ul. Perturbri ale ac-
36
37
38
0,08 m, localizate la polul apical al unor celule epiteliale, cum sunt enterocitele, nefrocitele, hepatocitele, celulele foliculilor tiroidieni.
Fig. 1. Enterocite cu platou striat
-microfotografie.
Rolul acestor prelungiri este de a mri de 10-20 de ori suprafaa de absorbie a celulelor, dar i de a pompa n interiorul celulei substanele absorbite.
n microscopia optic microvilii nu pot fi identificai separat, ci apar ca
o dung mai intens colorat, cu aspect striat, dispus la polul apical al celulelor, constituindu-se aspectul de platou striat la enterocite (fig. 1) i marginea n perie n cazul nefrocitelor.
La microscopul electronic se constat c microvilul este delimitat de
membrana plasmatic, iar n interiorul lui se gsesc 20-30 de filamente de
actin organizate n mnunchi (fascicul), care-i confer rigiditate.
Filamentele care constituie fasciculul sunt paralele i sunt legate transversal prin proteine asociate, cum sunt fimbrina i vilina. Rolul acestor proteine asociate este de a stabiliza filamentele n mnunchi.
Filamentele de actin au aceeai polaritate i se termin la polul apical
ntr-o zon amorf care conine o protein de acoperire neidentificat i care
realizeaz legarea filamentelor de membrana plasmatic. n regiunile laterale
ale microvilului, mnunchiul de filamente se leag de membrana plasmatic
prin calmodulin i printr-o protein similar miozinei de tip I. La polul bazal, filamentele de actin din microvil se ancoreaz n regiunea apical a
celulelor epiteliale de reeaua terminal (regiune specializat a citoscheletului) constituit din filamente de actin i proteine asociate.
Stereocilii sunt microvili foarte lungi, vizibili n microscopia optic.
Pot fi observai la nivelul tractului ge-nital masculin, n epididim (fig. 2), dar
i la nivelul urechii interne.
39
40
Fig. 4. Schema unui cil n seciune transversal. 1-membrana celular; 2dublete periferice de microtubuli; 3, 4-brae de dinein; 5-nexin; 6-teaca
central; 7-spie radiale, cu capul de legtur (8); 9-perechea central de
microtubuli.
La microscopul electronic, pe o seciune transversal, se constat c axonema cililor (Fig. 19) este constituit din:
20 de microtubuli cu configuraia 92, adic la periferie se afl 9
dublete de microtubuli, iar n centru doi microtubuli aezai mai
distanat;
braele de dinein, care pornesc unidirecional de la un dublet spre cel
nvecinat; dineina este o protein cu proprieti enzimatice (este o ATPaz) ce asigur energia necesar micrii cililor;
spiele radiale, care se ntind de la dubletele periferice, la teaca
central;
teaca central, care nconjoar cei doi microtubuli centrali; mpreun
cu spiele radiale intervin n reglarea micrilor ciliare;
nexina, care este o protein elastic ce conecteaz dubletele adiacente
de microtubuli, contribuind la meninerea formei cililor.
Dac seciunea transversal se face la nivelul corpusculului bazal (Fig.
20) se constat c aici cei doi tubuli centrali lipsesc, iar dubletele de la periferie devin triplete (configuraia 90), rezultnd o structur care se aseamn
pn la identitate cu centriolii.
Cilii se gsesc la nivelul unor celule epiteliale pe suprafaa crora
exist un strat de lichid. Funcia cililor este aceea de a deplasa lichidul care i
scald, ntr-un singur sens, de regul nspre exterior, datorit faptului c
micarea lor ordonat i succesiv ntr-o direcie este lent, iar n cealalt este
rapid. Prin deplasarea lichidului care i scald, cilii realizeaz curirea
epiteliului (ex. epiteliul traheal), fiind ndeprtate o serie de sub-stane sau
particule care au ptruns accidental sau care au rezultat din me-tabolismul sau
moartea unor celule. n cazul trompelor uterine, cilii faciliteaz deplasarea
ovocitului nspre uter.
Mecanismul micrii cililor. Sub aciunea dinein ATP-azei are loc eliberarea energiei ATP-ului, care imprim braelor de dinein o micare de
alunecare n lungul suprafeei perechilor adiacente de microtubuli. Cnd microtubulii frontali alunec n afar spre vrful cilului, iar cei posteriori rmn
nemicai, cilul se va nclina.
41
CITOPLASMA
Citoplasma reprezint spaiul aflat ntre membrana celular i nveliul
nuclear. Ea cuprinde dou componente majore:
matricea citoplasmatic;
organitele celulare.
Matricea citoplasmatic se mai numete citosol, matrice fundamental, substan fundamental a citoplasmei sau hialoplasm, toate semnificnd
ns aceeai realitate biologic. La microscopul optic, matricea citoplasmatic
apare astructurat, cu grade diferite de acidofilie sau bazofilie. Ea se prezint
ca o "reea" microtrabecular cu dou faze:
faza polimerizat sub form de reea bogat n proteine structurale i
protein-enzime;
faza fluid, bogat n ap, ce se afl n ochiurile reelei microtrabeculare.
n faza lichid se gsesc diferite molecule ca: glucoz, aminoacizi, ioni
sau gaze dizolvate (oxigen, dioxid de carbon, etc.).
Matricea citoplasmatic este sediul unor procese metabolice eseniale
pentru celul ca: glicoliza, calea pentozo-fosfatic, glicogenogeneza, glicogenoliza, metabolizarea aminoacizilor, biosinteza acizilor grai i a nucleotidelor.
La nivelul matricei citoplasmatice exist o serie de diferenieri care la
celula animal cuprind: filamentele de miozin, filamentele de actin, filamentele intermediare, microtubulii.
FILAMENTELE DE MIOZIN
Miozina este o protein rspndit n celulele eucariote. Pn n
prezent se cunosc dou specii moleculare ale acestei proteine. Miozina de tip I
42
43
actin-G. Vor rezulta astfel filamentele de actin, care la microscopul electronic apar ca structuri ale cror subuniti sunt dispuse n -helix.
Energia necesar procesului de polimerizare al monomerilor este furnizat de hidroliza ATP.
Lungimea filamentelor de actin este controlat de unele proteine care
influeneaz asamblarea i dezasamblarea monomerilor de actin. Aceste
proteine sunt: proteinele care leag actina, reprezentate de timozin i profilin i proteinele de acoperire care conserv lungimea filamentelor, reprezentate de proteina cap Z, tropomodulina, gelsolina.
Filamentele de actin formeaz:
fascicule alctuite din filamente paralele solidarizate de fimbrin la nivelul microvililor, sau de -actinin, n aceast situaie spaiile mai
mari dintre filamente permit interaciunea cu miozina n fasciculele
contractile;
reele alctuite din filamente de actin dispuse n zig-zag, legate printro protein numit filamin.
Rolul fasciculelor i reelelor de filamente de actin este de a susine
membrana celular, contribuind astfel la meninerea formei celulelor. La periferia celulelor, sub membrana plasmatic se afl cortexul celular, cu aspectul unei reele tridimensionale. De asemenea, la locul unde celulele stabilesc
legturi cu alte celule sau cu matricea extracelular, membranele celulare
prezint regiuni specializate numite plci de adeziune.
n celulele nemusculare filamentele de actin au un caracter tranzitoriu,
profilina fiind o protein ce influeneaz procesul de polimerizare al actinei.
Vilina i gelsolina sunt proteine care regleaz procesele de polimerizare a actinei prin ionii de Ca2, n acelai timp interconectnd filamentele de actin n
mnunchiuri.
MICROTUBULII
Microtubulii, formaiuni filamentoase formate din tubuline, sunt componente principale ale citoscheletului.
Tubulinele sunt de dou tipuri: -tubulina i -tubulina. Sunt proteine
globulare cu diametrul de aprox. 5 nm, ambele au aceeai mas molecular
(aprox. 50 kdal), dar cu secvene diferite ale aminoacizilor.
Cele dou subuniti formeaz dimeri, care prin polimerizare vor
alctui protofilamente (protomicrotubuli), iar apoi 13 protofilamente prin
aranjare sub form de cilindru cu interiorul aparent gol, vor forma un
microtubul cu diametrul de 24 nm (fig. 5).
Asamblarea i polimerizarea tubulinelor este controlat de unele proteine asociate
microtubulilor, cum sunt: proteina MAP
44
45
Funcii
citocheratin cu
cele 20 forme distincte (acide, bazice, neutre)
tonofilamentele
desmin
vimentin
celulele epiteliale
lamininele A, B, C
lamina nucler
formeaz o reea care leag miofibrilele/miofilamentele; marker pentru tumorile de origine muscular
sunt asociate cu nveliul nuclear i
cu porii nucleari; marker pentru
tumorile esutului conjunctiv
suport structural; marker pentru
tumorile gliale
suport structural pentru axon i
dendrite; faciliteaz starea de gel a
citosolului
organizarea cisternei perinucleare i
a cromatinei perinucleare
46
Interaciunea actin-miozin realizat de structuri specializate din muchii striai i netezi determin un tip particular de micare celular care poart
numele de contracie muscular.
Din punct de vedere histologic se pot recunoate trei tipuri distincte de
celule sau fibre musculare:
fibra muscular striat scheletal care intr n alctuirea musculaturii
scheletului, limbii, faringelui, diafragmului, muchilor extrinseci ai
globului ocular, prezint un aranjament ordonat al miofibrilelor responsabile de contracia muscular, sub forma unor benzi transversale
clare ce alterneaz cu benzi ntunecate ce-i confer acestui tip de fibr
muscular numele de striat (fig. 6); contracia fibrei musculare striate
scheletale este voluntar;
47
fibra muscular striat cardiac ce alctuiete musculatura involuntar a inimii; are aspect striat n microscopia optic i se afl sub controlul inervaiei vegetative;
48
49
50
i trimit axonii spre fibrele musculare scheletale unde vor stabili un tip special
de sinaps, denumit plac neuromotorie .
La acest nivel fibra nervoas i pierde teaca de mielin, fiind acoperit
numai de celula Schwan i lamina sa bazal, iar axonul se ramific ntr-un
numr de ramuri terminale, fiecare dintre acestea fiind situate n depresiuni ale
membranei celulei musculare.
Acetilcolina eliberat n spaiul sinaptic se leag de receptorii specifici
de la nivelul sarcolemei, care devine mai permeabil pentru ionii de sodiu i se
va depolariza.
Impulsul nervos ce determin depolarizarea membranei plasmatice se
propag de-a lungul celulei musculare i se continu, via sistemul "T" tubu-lar,
spre interiorul fibrei musculare.
La nivelul triadelor, unda de depolarizare propagat determin deschiderea canalelor de calciu din membrana reticulului sarcoplasmic i eliberarea
n citoplasm a ionilor de calciu stocai n cisternele reticulului sarcoplasmic
(Fig. 27).
Ionii de Ca2 difuzai se vor lega de subunitatea C a troponinei, iar
complexul troponinic va suferi o modificare conformaional ce va deplasa
tropomiozina n profunzime, elibernd astfel locurile de legare ale miozinei de
pe molecula de actin.
Mecanismul molecular al contraciei musculare const n glisarea filamentelor groase de miozin de-a lungul filamentelor subiri, cu scurtarea sarcomerelor prin apropierea discurilor Z, proces care se realizeaz cu consum de
energie metabolic furnizat prin hidroliza legturilor macroergice din molecula de ATP.
Premergtor contraciei, capetele globuloase ale moleculei de miozin
vor fixa ATP; datorit activitii lor ATP-azice vor hidroliza imediat ATP-ul,
energia rezultat va fi nmagazinat, iar produii de clivaj ADP i Pi vor rmne ataai de cap, care n aceast etap este perpendicular pe filamentul de
actin, fr a se leaga nc de acesta.
Eliberarea situsurilor active de pe filamentul de actin (prin legarea ionului Ca2 la troponina C) va permite legarea complexului miozin-ATP de
subunitatea G a filamentului de actin. Interaciunea dintre capul moleculei de
miozin i situsul activ al filamentului de actin determin eliberarea fosfatului anorganic care genereaz o for ce rotete capul miozinei cu 45 i
mpinge filamentele subiri printre cele groase, spre centrul sarcomerului.
La sfritul ciclului, pe locul eliberat se va lega o nou molecul de
ATP, care va provoca detaarea capului miozinei de pe monomerul filamentului de actin.
Noua molecul de ATP care a fost legat, va fi la rndul su descompus, iar energia degajat va fi nmagazinat i va aeza capul miozinei n
poziia sa iniial, gata pentru a ncepe un nou ciclu.
51
52
53
54
55
NUCLEUL
Nucleul este o component celular prezent n toate celulele
eucariote, cu excepia hematiilor adulte i a trombocitelor. El a fost descoperit
n urm cu peste dou secole (1781) de ctre Fontana, dar conceptul de celule
nucleate a fost enunat abia n secolul urmtor (1833) de ctre Brown.
Nucleul are un rol primordial n viaa celulei, ndeplinind n esen
dou funcii foarte importante:
stocarea codului genetic i transmiterea (perpetuarea) informaiei genetice de-a lungul generaiilor, la nivelul su aflndu-se marea majoritate
a ADN-ului celular, care reprezint aprox. 20% din masa nucleului;
reglarea i controlul tuturor proceselor vitale care au loc la nivel
celular.
Structura nucleului difer n funcie de fazele ciclului celular. Astfel, n
interfaz (perioada dintre dou diviziuni) se descrie nucleul interfazic sau
metabolic, alctuit din:
nveliul nuclear, care separ coninutul nucleului de cel al citoplasmei;
matricea nuclear, care conine ncorporate n ea alte dou componente ale nucleului: nucleolul i cromatina.
n timpul diviziunii celulare nveliul nuclear dispare, nucleolul de asemenea, iar cromatina se organizeaz sub form de cromozomi.
56
Marea majoritate a celulelor eucariote prezint un singur nucleu, dar exist i celule binucleate cum ar fi hepatocitele, dintre care 7-10% prezint doi
nuclei. Exist i celule care n mod normal sunt multinucleate. Unele dintre
acestea prezint zeci de nuclei, ca osteoclastele, care au pn la 60 de nuclei,
sau chiar sute, cum sunt fibrele musculare striate, ce au pn la 200 de nuclei.
Celule multinucleate pot apare ns n diferite situaii patologice, cum
ar fi celulele Langhans din infecia tuberculoas sau celulele de corp strin.
Celule pot deveni multinucleate prin unul din cele dou mecanisme:
nucleul unei celule se divide de mai multe ori fr ca aceste diviziuni
s fie urmate de diviziunea citoplasmei i separarea n celule fiice,
rezultnd astfel un plasmodiu;
mai multe celule uninucleate pot fuziona formnd un sinciiu.
Forma nucleului este adaptat n funcie de forma celulei, astfel:
celulele sferice, cubice, poliedrice au nucleul sferic;
celulele prismatice au nucleul oval;
celulele pavimentoase au nucleul aplatizat;
celulele fusiforme au nucleul alungit.
Exist ns i excepii de la aceast regul. Astfel, leucocitele granulare
din snge sunt celule sferice i au un nucleu lobat, format din mai muli lobi
unii ntre ei.
n cele mai multe cazuri, nucleul este dispus central n celul, dar n anumite stri funcionale el poate ocupa i alte poziii. Astfel, n celulele glandulare, n care la nivelul polului apical se acumuleaz granule de secreie,
nucleul este mpins nspre polul bazal, iar n celulele adipoase nucleul este
mpins la periferie de ctre lipidele acumulate n citoplasm.
Dimensiunile nucleului difer n funcie de tipul celular, vrsta celulei,
activitatea sa metabolic, etc. n medie, nucleul celulelor eucariote are diametrul cuprins ntre 5-25 m. Celulele tinere, cu metabolism activ au nucleu
mare, eucromatic, iar celulele mbtrnite au nucleu mic, heterocromatic.
ntre volumul nucleului i volumul citoplasmei se stabilete un raport
cunoscut sub numele de raport nucleo-citoplasmatic, care poate varia n limite
largi, de la 1/3 la 1/10. Cu ct celula este mai tnr i mai activ, cu att
nucleul este mai mare. n anumite situaii patologice, cum ar fi cazul
formaiunilor tumorale (n care toate celulele sunt tinere), determinarea acestui raport reprezint un test cu valoare de diagnostic.
Valoarea raportului nucleo-citoplasmatic (RNC) se determin dup formula:
Vn
RNC ----------Vc - Vn
n care: Vn volumul nucleului; Vc volumul celulei.
57
Cnd raportul nucleo-citoplasmatic al unei celule atinge valoarea maxim, celula intr n diviziune, n urma creia se restabilete RNC normal.
58
59
60
61
62
63
unesc poart numele de centromer sau constricie primar. Aceast zon este
mai puin colorabil i la microscopul elctronic s-a constatat c este constituit
din dou formaiuni cilindrice numite kinetocori, respectiv cte unul pentru
fiecare cromatid.
Dup poziia centromerului deosebim patru tipuri de cromozomi:
metacentrici, cu centromerul situat n, sau imediat lng centrul
cromozomului, ca urmare braele unui astfel de cromozom sunt
aproape egale,
submetacentrici, cnd centromerul este plasat excentric i mparte cromozomul n dou brae scurte i dou lungi,
subtelocentrici (acrocentrici), cu centromerul astfel dispus nct braele
scurte sunt puin vizibile,
telocentrici, cu centromerul dispus la unul dintre capetele cromozomului, deci nu exist brae scurte.
La nivelul telomerelor pot s mai existe strangulri care poart
denumi-rea de constricii secundare.
CICLUL CELULAR
Prin ciclul celular se nelege perioada de timp scurs din momentul ncheierii diviziunii prin care a luat natere o celul i pn n momentul ncheierii propriei sale diviziuni.
Ciclul celular cuprinde dou mari faze:
interfaza (perioada dintre dou diviziuni),
mitoza (perioada diviziunii celulare).
Interfaza nu este o perioad de repaus ci o perioad de activitate metabolic intens n care celula i realizeaz funciile specifice i n acelai timp
se fac i pregtirile pentru o nou mitoz.
Interfaza cuprinde trei perioade distincte:
perioada G1 sau presintetic, n care ADN-ul cromozomial are o
funcie heterocatalitic, adic n aceast perioad particip la sinteza
tuturor tipurilor de ARN i prin aceasta la sinteza diferitelor tipuri de
proteine la nivelul ribozomilor,
perioada S sau sintetic, n care ADN-ul cromozomial are o funcie autocatalitic, adic are loc fenomenul de duplicare semiconservativ a
ADN-ului cromozomial (2C4C),
perioada G2 sau postsintetic n care ADN-ul i reia funcia heterocatalitic, masa citoplasmatic crete, se acumuleaz substane energetice
necesare procesului de mitoz i se sintetizeaz proteinele aparatului
mitotic.
64
Astfel, exist:
celule cu ciclul celular scurt, de aproximativ 72 ore, cum sunt enterocitele,
celule cu ciclul mediu, cum sunt celulele epidermului, cu ciclul celular
de 30 zile, sau hepatocitele cu un ciclu de aproximativ 100 zile,
celule au ciclul lung de mai multe luni de zile, cum sunt celulele
cartilaginoase,
celule perpetue, cum ar fi neuronii sau fibrele musculare cardiace, a cror ciclu dureaz ct viaa individului.
65
66
67
68
69
70
71
72
INCLUZIUNILE CELULARE
Dac organismul dispune la un moment dat de anumii produi metabolici n exces, exist posibilitatea stocrii (depozitrii) lor temporare sau definitive la nivelul citosolului unor celule. Aceste depozite intracitoplasmatice
poart numele de incluziuni celulare. Pot fi depozitate intracitoplasmatic
substane diferite: glucide, lipide, proteine, pigmeni, cristale, cristaloizi, etc.
Dac acest fenomen depete anumite limite se poate ajunge n situaii patologice, unele cu un caracter reversibil, altele fiind ireversibile.
Glucidele sunt depozitate n citoplasma celulelor animale sub form de
glicogen. Depozite intracelulare de glicogen pot fi evideniate n hepatocite i
celulele musculare prin metoda PAS sau prin colorarea cu carmin Best.
Lipidele sunt stocate n citoplasma celulelor ca trigliceride, sub form
de picturi sferice de diferite mrimi. Celulele care stocheaz lipide sunt celulele corticosuprarenalei, celulele corpului galben din ovar, nefrocitele, hepatocitele.
Proteinele sunt depozitate aproape n exclusivitate sub forma granulelor secretorii.
Pigmenii pot apare n mod normal sub form de pigment brun-negru
(granulele de melanin) n celulele pigmentare, sau pigment galben (lipofuscin) n celulele nervoase, celulele corticosuprarenalei, etc. Pe msur ce organismul mbtrnete, lipofuscina poate apare ca pigment de uzur n celulele musculare cardiace i n neuroni.
Cristalele i cristaloizii pot apare, n mod normal, n citoplasma unor
celule cum ar fi celulele Leydig din testicul sau chiar n nucleul unor hepatocite.
n unele situaii patologice, la nivelul citoplasmei pot apare i ali pigmeni cum ar fi: pigmenii biliari, hemosiderina. Atunci cnd nevoile celulei
(sau organismului) o impun, unele dintre aceste incluziuni pot fi mobilizate i
utilizate pn la epuizarea lor.
73
zozomii, peroxizomii, vacuolele, veziculele de exo- i endocitoz i chiar nveliul nuclear, deoarece acesta comunic cu reticulul endoplasmic.
Subcompartimentele celulare care alctuesc sistemul de endomembrane prezint urmtoarele trsturi:
membranele care delimiteaz subcompartimentele sunt asimetrice (asemntor plasmalemei),
legtura structural (de cele mai multe ori temporar) dintre compartimente este asigurat prin intermediul veziculelor, care pot fuziona fie
cu alte subcompartimente ale sistemului, fie cu membrana plasmatic
sau cu veziculele de endocitoz, fie pot fuziona ntre ele,
prin intermediul veziculelor se realizeaz un flux al membranelor care
poate s fie orientat fie de la reticulul endoplasmic spre membrana
plasmatic, fie invers,
prin intermediul veziculelor de exocitoz, subcompartimentele sistemului de endomembrane comunic cu mediul extracelular, dar aceste
vezicule nu comunic cu matricea nucleoplasmic (numai accidental).
Majoritatea organitelor celulare delimitate de membrane sunt cuprinse
n acest sistem de endomembrane (reticulul endoplasmic, aparatul Golgi, lizozomii, peroxizomii). Exist ns i organite celulare delimitate de membrane, mitocondriile, care nu fac parte din acest sistem.
RETICULUL ENDOPLASMIC
Reticulul endoplasmic este un organit celular cavitar, rspndit n ntreaga citoplasm, fiind format din saci, cisterne, tubi, vezicule, anastomozate
ntre ele. Formaiunile reticulului sunt delimitate de o endomembran cu
grosime de aprox. 6 nm.
Reticulul endoplasmic, observat iniial la microscopul optic, a fost descris sub diferite denumiri: substan tigroid sau corpi Nissl n pericarion,
corpi Berg n hepatocit i ergastoplasm n celula pancreasului exocrin. Denumirea actual i prima descriere electronomicroscopic au fost fcute de
ctre Porter i Kallman (1952). Organitul este prezent n toate celulele eucariote cu excepia hematiei adulte.
Deoarece el a fost observat la nceput n partea intern a citoplasmei a
primit denumirea de reticul endoplasmic. Morfologia reticulului endoplasmic
difer de la o celul la alta. Astfel, celulele embrionare au un reticul endoplasmic rudimentar, care se dezvolt pe msura diferenierii celulei. De asemenea, celulele aflate n interfaz au un reticul endoplasmic mai bine dezvoltat dect celulele aflate n diviziune.
Exist dou tipuri de reticul endoplasmic:
reticul endoplasmic rugos sau granular (RE rugos sau RE granular);
reticul endoplasmic neted (RE neted).
74
Membranele celor dou tipuri de reticul endoplasmic sunt n continuitate, lumenele lor comunic, de aceea apar ca o unitate.
Reticulul endoplasmic rugos este format n principal din saci aplatizai
sau cisterne i mai rar din canalicule. Pe suprafaa plasmatic a membranei,
aceste formaiuni prezint ribozomi ataai (de aici denumirea de rugos sau
granular). Reticulul endoplasmic rugos este dispus preferenial n jurul nucleului i are legtur structural direct cu cisterna perinuclear. Membranele
RE rugos sunt n relaie de continuitate cu membrana nuclear extern, iar
lumenul n continuitate cu spaiul cisternei. Lumenul reticulului este ocupat de
reticuloplasm, o mas fluid amorf mai puin dens dect hialoplasma.
Reticulul endoplasmic rugos, datorit ribozomilor ataai, este specializat n primul rnd n sinteza proteinelor, motiv pentru care este mai dezvoltat
n celulele angajate n procese intense de sintez, cum sunt celulele glandulare exo- i endocrine.
Membranele reticulului endoplasmic rugos conin riboforine (proteine
specifice) care:
faciliteaz ataarea ribozomilor la membranele reticulului endoplasmic
rugos;
asigur transferul prin membran a lanului polipeptidic nou format la
nivelul ribozomilor;
contribuie la meninerea formei caracteristice a cisternelor, deoarece riboforinele formeaz o reea extins n membran.
Reticulul endoplasmic neted este format n principal din tubi, canaliculi sau vezicule i nu are ribozomi ataai.
Din punct de vedere topografic, reticulul endoplasmic neted este dispus
spre periferia citoplasmei, fr s vin n contact cu membrana plasmatic. El
este mai bine dezvoltat n celulele care secret hormoni steroizi (celulele
glandelor suprarenale, celule interstiiale din testicul i ovar) precum i n cele
care produc glucide (celulele hepatice).
n celula muscular exist un organit asemntor reticulului endoplasmic neted, care are rolul de a stoca ionii de calciu, de a-i elibera n citosolul
fibrei musculare cu producerea contraciei i de a-i restoca prin intervenia
pompei de Ca2 din membranele sale, cu inducerea relaxrii musculare. Acest
organit este reticulul sarcoplasmic, ce reprezint un tip special de re-ticul
endoplasmic neted. Studiul electronomicroscopic al acestuia a evideniat c
este dispus sub forma unei reele de tubuli sau cisterne orientate de-a lungul
sarcomerului ntre i n jurul miofibrilelor (sistemul tubular L). La nivelul
fiecrei zone H, aceti tubuli orientai longitudinal trimit anastomoze laterale,
iar la nivelul jonciunii dintre banda A i I formeaz nite saci sau cisterne
terminale unde sunt stocai ionii de calciu. Dou asemenea cisterne terminale
se altur la nivelul jonciunii dintre banda I i banda A, dar rmn separate de
sistemul tubular T (transvesal) cu origine n plasmalem. Aceast dispoziie
75
76
fucie de baz, RE rugos mai are rol n sinteza unor fosfolipide (lecitina) sau a
unor glicoproteine integrale din membran.
Reticulul endoplasmic neted are ca principal funcie sintetiza i metabolizarea acizilor grai i a fosfolipidelor. Este implicat de asemenea i n biosinteza colesterolului i a hormonilor steroizi. De aceea, reticulul endoplasmic neted este mai dezvoltat n celulele specializate n aceste procese de sintez, din ficat, corticosuprarenal, gonade.
O alt funcie important a reticulului endoplasmic neted o reprezint
aceea de detoxifiere, adic de inactivare i metabolizare a unor substane cum
sunt pesticidele, medicamentele, etc. Prin enzimele pe care le conine
(citocromii P-450, glutation S-transferaze) reticulul endoplasmic neted determin metabolizarea acestor substane i eliminarea lor prin urin. Pentru o
detoxifiere eficient cantitatea i activitatea enzimatic cresc. Astfel administrarea unor doze mari de fenobarbital determin dublarea suprafeei reticulului endoplasmic neted din hepatocite i revine la normal (prin autofagie)
dup aproximativ 5 zile de la ncetarea adimistrrii acestei substane.
COMPLEXUL GOLGI
Acest organit a fost descris prima dat de medicul italian Camillo
Golgi n anul 1898, ca o reea de filamente fine pe care le-a observat n
citoplasma unor celule nervoase. El a denumit aceast formaiune cu numele
de aparat reticular intern. n 1910 elevul lui Golgi, Aldo Peroncito a observat
c n timpul diviziunii celulei are loc o fragmentare a elementelor acestui
aparat i a denumit aceste fragmente cu numele de "dictiozomi". Acetia apar
la microscopul optic sub diferite aspecte: bastonae, tubi anastomozai,
cisterne, etc. n cinstea descoperitorului su, oamenii de tiin au denumit
ulterior organitul cu numele de aparat Golgi.
Numrul complexelor Golgi ntr-o celul difer mult, de la unu la cteva sute, n funcie de tipul, vrsta sau de activitatea funcional a celulei.
Astfel, celulele tinere sau aflate n plin proces secretor au de regul un nu-mr
mare de asemenea organite.
Poziia organitului n celul difer dup tipul i activitatea acesteia.
Astfel, n neuroni complexul Golgi este dispus perinuclear, iar n celulele secretorii exocrine apare supranuclear.
La microscopul electronic s-a constatat c n structura lui intr trei
componente de baz (fig. 7):
pachete de saci turtii sau cisterne aplatizate,
microvezicule,
macrovezicule.
Cisternele aplatizate sau sacii turtii au form curbat i se dispun sub
form de pachete. Numrul sacilor ntr-un pachet este variabil, n majoritatea
77
cazurilor fiind ntre 5 i 11. Fiecare sac poate fi comparat cu o farfurie care are
partea central mai subire i periferiile mai dilatate.
n ansamblu, complexul Golgi are o polaritate morfofuncional distinct, prezentnd:
compartimentul "cis" orientat spre nucleu, reprezentat de faa convex,
numit i fa formatoare sau imatur, deoarece prin aceast fa
organitul primete veziculele de transport a proteinelor sau lipidelor
sintetizate de reticulul endoplasmic;
compartimentul "median", la nivelul cruia se realizeaz glicozilarea
lipidelor i proteinelor;
compartimentul "trans" orientat spre membrana plasmatic, reprezentat
de faa concav, numit i faa de elaborare sau matur, deoarece la acest nivel are loc elaborarea granulelor de secreie.
78
Grosimea endomembranelor care delimiteaz formaiunile complexului Golgi este de aprox. 6-8 nm, mai mic la microvezicule i mai mare la macrovezicule.
Alte vezicule eliberate de pe faa trans sunt de dimensiuni mai mici dect cele ale veziculelor de secreie. Ele conin hidrolaze acide i reprezint lizozomi primari care prin enzimele pe care le conin vor participa la procesul
de digestie intracelular.
Complexele Golgi sunt structuri dinamice care prezint o mare labilitate, o permanent modificare i o permanent regenerare. Astfel, paralel cu
"dispariia" cisternelor prin formarea de macrovezicule (pe faa trans), noi
cisterne se formeaz pe faa cis (faa formatoare), din microveziculele venite
de la reticulul endoplasmic. Se apreciaz c o cistern sau sac golgian se formeaz n 2-3 minute, iar ansamblul sacilor dintr-un complex Golgi se rennoiete n aproximativ 30 minute pe seama microveziculelor care vin de la
reticulul endoplasmic i care fuzioneaz cu membranele compartimentului cis.
FUNCIILE COMPLEXULUI GOLGI
79
LIZOZOMII
Lizozomii sunt organite n form de vezicule, sferice sau ovale, au diametrul cuprins ntre 0,2-1 m, sunt formai de aparatul Golgi i conin enzimele hidrolitice necesare digestiei intracelulare a materialelor nglobate de
ctre celul. Au fost descoperii de ctre Christian de Duve (1952) prin metode biochimice i apoi au fost vizualizai la microscopul electronic de ctre
Nivikoff (1956). Lizomii sunt prezeni n citoplasma tuturor celulelor animale, cu excepia hematiei adulte. La microscopul electronic s-a observat c ei
sunt alctuii din:
membrana lizozomal,
matricea lizozomal.
Membrana lizozomal are grosimea de 7-8 nm i structura asemntoare cu a celorlalte endomembrane.
Matricea lizozomal poate apare omogen, fin granular, sau heterogen, ceea ce determin un polimorfism lizozomal n fiecare celul. n matricea
lizozomal exist aprox. 50-60 enzime hidrolitice ca: proteaze, lipaze, nucleaze, fosfataze, sulfataze, etc., capabile s digere proteine, carbohidrai, lipide
sau derivate ale acestora. Toate aceste enzime sunt hidrolaze acide, active la
un pH situat n jurul valorii de 5. Membrana lizozomal este n mod normal
impermeabil pentru aceste enzime, prevenind astfel contactul i digestia altor
structuri celulare. Ruperea din diverse motive a membranei lizozomale, va
determina eliberarea enzimelor, care vor produce liza citoplasmei nvecinate.
Prin observaii la microscopul electronic s-a stabilit c lizozomii pot fi
mprii n trei categorii:
lizozomi primari,
lizozomi secundari,
lizozozmi teriari.
Lizozomii primari se prezint sub forma unor vezicule sferice care au
la interior un coninut bogat n hidrolaze acide. Enzimele lizozomale sunt sintetizate n ribozomii ataai membranelor reticulului endoplasmic, unde sunt
glicozilate cu manoz. Trec apoi n compartimentul cis al complexului Golgi,
unde moleculele de manoz sunt fosforilate n poziia 6 (manozo-6-fosfat).
80
FUNCIILE LIZOZOMILOR
81
PEROXIZOMII
Peroxizomii au fost descoperii la microscopul electronic de ctre
Rhodin (1954) n celulele renale, dar o descriere detaliat a lor a fost fcut
abia n 1966 de ctre Wattiaux. Peroxizomii sunt organite mici, sferice, cu
diametrul de 0,5-1,5 m i se aseamn fizic cu lizozomii. Se deosebesc ns
de acetia prin urmtoarele:
se presupune c se formeaz prin autoreplicare sau prin nmugurirea
reticulului endoplasmic neted,
conin n special oxidaze.
Peroxizomii sunt delimitai de o membran lipoproteic, iar n interior
prezint o matrice proteic mai dens dect cea a lizozomilor.
Matricea peroxizomilor conine enzime implicate n oxidarea anumitor
substane, n special n -oxidarea unor lanuri lungi de aminoacizi (care conin mai mult de 18 atomi de carbon). Dintre enzimele cele mai importante
amintim: urat-oxidaza, D-aminoacid-oxidaza i catalaza.
Peroxizomii se gsesc n cantitate mai mare n celulele ficatului i rinichiului. n unele cazuri, peroxizomii prezint n matricea lor un miez
electronodens ce are o structur paracristalin i care a fost numit cristaloid.
82
FUNCIILE PEROXIZOMILOR
Peroxizomii intervin n metabolismul apei oxigenate (H2O2 sau peroxidul de hidrogen) n dou etape astfel:
iniial urat-oxidaza i D-aminoacid-oxidaza catalizeaz diferite reacii
oxidativ-catalitice, reacii care utilizeaz oxigenul molecular i produc
peroxid de hidrogen,
Urat-oxidaz sau D-aminoacid-oxidaz
RH2 O2 -------------------------------------- R H2O2
Surplusul de peroxid de hidrogen va fi oxidat de ctre catalaz, deoarece el este toxic pentru celul, rezultnd n final ap i oxigen.
catalaz
2H2O2 --------------------- 2H2O O2
Peroxizomii joac un rol important n procesele de detoxifiere, funcie
facilitat de permeabilitatea foarte mare a membranei peroxizomilor pentru
ioni i molecule mici. Catalaza peroxizomilor oxideaz alcoolul, fenolul, acidul formic, formaldehida, etc.
Peroxizomii conin de asemenea un sistem enzimatic capabil de -oxidarea acizilor grai, apreciindu-se c 1/4 din totalul acestor oxidri au loc n
peroxizomi, iar restul n mitocondrii.
MITOCONDRIILE
Pentru desfurarea complexelor activiti ce se desfoar la nivelul
celulelor eucariote este nevoie n permanen de energie. Aceasta este asigurat de sistemele generatoare de energie. n cazul eucariotelor, sursa de energie o reprezint unii metabolii, iar energia metaboliilor este convertit n energia chimic a legturilor de ATP (adenozin-trifosfat). Aceste legturi sunt
83
84
Membrana extern are grosimea de aprox. 6 nm i o structur lipoproteic. n compoziia ei chimic intr 50% proteine i 50% lipide, structura acestei membrane fiind asemntoare cu cea a reticulului endoplasmic. Membrana extern conine aproape tot colesterolul existent n mitocondrie. Ea es-te
relativ rigid i foarte permeabil. La nivelul ei se realizeaz schimburile
dintre organit i citosol i se desfoar o serie de activiti enzimatice, dar
nici una dintre acestea nu are legtur cu producerea de ATP.
Membrana intern are i ea structur lipoproteic i grosimea de 6
nm. Caracteristic este faptul c aceast membran este plisat, formnd numeroase creste (criste) mitocondriale care proemin n interiorul matricei mitocondriale, mrindu-i de peste cinci ori suprafaa, comparativ cu membrana
extern. Forma cristelor poate fi lamelar, aa cum este n cazul majoritii
mitocondriilor, sau poate fi tubular n celulele care secret hormoni steroizi
(celulele corticosuprarenalei, celulele interstiiale din ovar i testicul).
Compoziia chimic a membranei interne se deosebete de cea a membranei externe. Ea conine 80% proteine i 20% lipide, funcia ei fiind preponderent metabolic. Membrana mitocondrial intern este strbtut de
proteine integrale. Ea prezint un coninut ridicat de cardiolipin ceea ce face
ca aceast membran s aib o permeabilitate foarte redus (inclusiv pentru
ioni). Transportorii proteici existeni n grosimea ei o fac s prezinte permeabilitate selectiv pentru acele molecule ce urmeaz s fie metabolizate n
spaiul matricei mitocondriale sau pentru intermediari metabolici care urmeaz s fie expulzai din mitocondrie.
n general, membrana mitocondrial intern conine trei mari grupe de
proteine:
proteinele lanului respirator (respectiv lanul transportor de electroni),
proteine de transport specific (care regleaz trecerea metaboliilor sau a
ionilor spre interiorul sau exteriorul mitocondriei),
un complex enzimatic responsabil de producerea i eliberarea n matricea mitocondrial a ATP-ului:
aceste complexe enzimatice sunt dispuse pe faa matriceal a
membranei interne,
la microscopul electronic apar ca mici sfere cu diametrul de 10
nm, numite F1-ATP-az, prinse cu un peduncul de o pies
inclus n membrana intern, numit particul F0,
ntregul complex poart numele de ATP-sintetaz sau F0F1 ATPaz.
85
Enzima marker a membranei mitocondriale interne este citocromoxidaza. Alte enzime specifice sunt: succinat-dehidrogenaza, acil-carnitintransferaza, enzimele -oxidrii acizilor grai, etc.
Spaiul intermembranar mitocondrial are n medie grosimea de 8 nm.
La microscopul electronic, coninutul acestui spaiu apare clar i omogen, fiind
constituit din soluii apoase ce conin ioni i diferite molecule. Ca enzim
marker este considerat adenilat-kinaza, care catalizeaz reacia:
adenilat-kinaza
ATP AMP ----------------------------- 2 ADP
Aceast reacie este necesar pentru recuperarea AMP-ului, deoarece
membrana mitocondrial intern este permeabil numai pentru ADP i ATP, nu
i pentru AMP. Cele dou molecule de ADP rezultate n urma reaciei, vor
trece n matricea mitocondrial i vor fi fosforilate la ATP. n afar de adenilatkinaz, la acest nivel se mai gsesc i alte enzime ca: nucleozid-difosfatkinaza
i nucleozid-monofosfatkinaza.
Matricea mitocondrial este compartimentul delimitat de membrana
mitocondrial intern i se mai numete substana fundamental a mitocondriei. Datorit faptului c ea conine o cantitate mare de proteine (60% din
substana uscat) starea ei fizic este apropiat de gel. La microscopul electronic, matricea mitocondrial apare fin granular datorit prezenei ribozomilor mitocondriali, care pot fi liberi sau grupai n polizomi, dar pot fi i
ataai pe faa matriceal a membranei interne.
Poriunea central a matricei apare ceva mai electronodens i aici este
localizat ADN-ul mitocondrial. Acest ADN este nfurat elicoidal i dispus
circular. ADN-ul mitocondrial are aprox. 5 m lungime, fiind capabil s sintetizeze aprox.35 de molecule, ceea ce i confer mitocondriei o autonomie
maxim de 35% fa de materialul genetic nuclear. Acest lucru face ca
mitocondriile s fie organite semiautonome.
Matricea mitocondrial conine dou tipuri de proteine: proteine structurale i protein-enzime (aproximativ 200). Pe lng acestea mai exist: nucleotide, aminoacizi, glucide etc.
n general, cele mai importante proteine din matrice sunt:
enzimele oxidrii piruvatului i acizilor grai cu producere de
coenzim A (CoA);
enzimele ciclului Krebs (ciclul acidului citric) responsabile de oxidarea
acetil coenzimei A;
enzimele necesare replicrii i expresiei genelor mitocondriale.
86
87
CODUL GENETIC
Prin separarea celor dou lanuri ale ADN, baze purinice i pirimidinice proemin pe marginea fiecrei catene constituind codul genetic.
Fiecare caten a moleculei de ADN posed cte un cod genetic propriu. Prin
intermediul su, ADN controleaz procesele de sinteza de la nivel celular.
88
Codul genetic cuprinde cuvinte de cod care sunt constituite din tripletele succesive de baze. Cuvintele de cod controleaz secvena aminoacizilor n
procesul de sintez a proteinelor.
ACIDUL RIBONUCLEIC (ARN)
Majoritatea ADN-ului celulei se afl n nucleu, iar cea mai mare parte
a funciilor celulare se desfoar n citoplasm. Controlul reaciilor chimice
din citoplasm se realizeaz prin intermediul ARN. Sinteza acestuia este
controlat de ADN. Astfel, prin procesul numit transcripie codul genetic este
transferat ARN-ului, care trece n citoplasm prin porii nucleari.
Sinteza ARN necesit separarea temporar a celor dou catene de ADN,
rezultnd:
o caten, folosit ca matri pentru sinteza ARN (transcripia); tripletele codului ADN determinnd formarea tripletelor (codoni) codului
complementar al ARN, care controleaz secvena aminoacizilor din
proteinele sintetizate;
o caten inactiv.
Fiecare caten de ADN a fiecrui cromozom conine codul pentru
aproximativ patru mii de gene.
Structura elementar a ARN este similar cu a ADN, cu dou diferene: riboza nlocuiete dezoxiriboza, iar uracilul nlocuiete timina.
Sinteza moleculei de ARN se realizeaz n dou etape:
sinteza nucleotidelor ARN (ca la ADN), pentru care sunt utilizate patru
nucleotide diferite care conin bazele adenina, guanina, citozina, uracilul (n locul timinei din ADN).
activarea nucleotidelor, prin adiia a cte doi radicali fosfat, cu
formarea trifosfailor.
Cei doi radicali fosfat se combin cu nucleotidul prin legturi fosfat
ma-croergice provenite de la ATP-ul celular. Astfel, fiecare nucleotid dispune
de o mare cantitate de energie, necesar n urmtoarele etape ale sintezei ARN.
Nucleotidele activate vor fi asamblate folosind ca matri catena de
ADN. n acest proces este implicat enzima ARN polimeraza.
Aceat enzim are urmtoarele proprieti funcionale:
recunoate i se fixeaz pe o secven de nucleotide numit promotor,
din catena ADN, situat imediat naintea genei iniiale, aceasta fiind
eta-pa esenial n sinteza ARN;
dup fixarea la promotor, determin "despletirea" a aproximativ dou
ture din spirala helix a ADN cu separarea acestor poriuni;
se deplaseaz n lungul catenei ADN, nucleotidele complementare ale
ARN vor fi legate la catena ADN; iar prin legarea ntre ele a nucleotidelor succesive ale ARN se va forma molecula de ARN.
89
Baza ADN
guanina
citozina
adenina
timina
Baza ARN
citozina
guanina
uracil
adenina
90
91
MATRICEA EXTRACELULAR
Matricea extracelular realizeaz interaciunea dintre celule i ali constitueni. Ea este alctuit din fibre incluse ntr-o substan fundamental alctuit din glicozaminoglicani i glicoproteine structurale.
Matricea extracelular ocup spaiul interstiial i prezint o component fluid reprezentat de ap i de molecule solubile i o component solid
alctuit din molecule insolubile i macromolecule ordonate n structuri.
Componentele matricei extracelulare sunt secretate de ctre celulele conjunctive.
Pn nu demult se considera c matricea extracelular este alctuit din
proteine structurale pasive. n prezent, ca urmare a progreselor din biochimia
i biologia celular i molecular a esutului conjunctiv, s-a schimbat concepiei privind matricea extracelular. Acum este clar c matricea extracelular este implicat ntr-un numr tot mai mare de procese. Astfel, matricea
extracelular stabilizeaz structura fizic a esuturilor, asigurnd elasticitatea
92
93
94
FIBRELE CONJUNCTIVE
n substana fundamental a esuturilor conjunctive se deosebesc trei
categorii de fibre: de colagen, elastice i de reticulin. La microscopul optic
ele au aspect diferit, dar studiile biochimice i cele de microscopie electronic
au scos n eviden faptul c ntre ele exist asemnare ultrastructural i de
compoziie n aminoacizi.
FIBRELE DE COLAGEN
95
96
97
Fibrele de reticulin sunt formate din reticulin, substan asemntoare colagenului, denaturat de colagenaz i pepsin, dar rezistent la
aciunea tripsinei. Diferenele fa de colagen sunt legate de compoziia n
aminoacizi, concentraia mai mare de glucide i prezena unei importante
fraciuni lipidice (absente din colagen). Fibrele reticulare sunt mai numeroase
la tineri, aspect care pledeaz pentru transformarea lor n fibre colagene la btrni.
Fibrele de reticulin sunt foarte subiri, cu diametrul cuprins ntre 0,52 m; se ramific i se anastomozeaz formnd reele. Nu se evideniaz n
coloraii uzuale, dect prin impregnaie argentic i sunt PAS+. Argirofilia i
reacia PAS+ sunt date de concentraia mare de glicoproteine asociate acestor
fibre. Fibrele de reticulin conin 6-12% hexoze fa de numai 1% n fibrele de
colagen. Imunocitochimia i histochimia evideniaz c fibrele de reticulin
sunt alctuite n principal de colagen de tip III n asociere cu alte tipuri de
colagen, glicoproteine i proteoglicani. Ultrastructural, fibrele de reticulin
prezint fibrile cu periodicitate axial specific colagenului, dar cu o dispoziie
particular ce explic absena birefringenei. Fibrele de reticulin sunt
sintetizate de fibroblaste, condroblaste, celule endoteliale, ca molecule de
colagen tip III, care exocitate vor polimeriza n spaiul extracelular.
PROLIFERAREA I DIFERENIEREA
98
CELULAR
Dezvoltarea organismului se realizeaz prin dou procese fundamentale:
Diferenierea celular:
se desfoar pe tot parcursul vieii (ncepe n momentul concepiei i
nceteaz la moartea individului).
are intensitate maxim n timpul dezvoltrii embrionare,
este un proces ireversibil la om, deoarece nici o celul difereniat nu
mai poate, n condiii normale s-i recapete caracterele embrionare
avute la nceputul diferenierii.
99
sunt celule cap de serie pentru celulele epiteliale. Celulele care se formeaz
din celulele stem nu mai au posibiliti de difereniere, ele numindu-se celule
adulte specializate. nlocuirea acestora se poate face doar pe baza celulelor
stem.
Organismul adult la mamifere nu posed celule pluripotente sau celule
orientate, dar are rezerve de celule stem n toate esuturile care se autontrein
prin diviziune. Excepie fac esutul muscular cardiac i esutul nervos ale cror
celule nu se mai divid.
FACTORII DE CRETERE
100
Factor de
cretere
PDGF
EGF
TGF-
Sursa principal
trombocitele, celulele endoteliale, placenta
glandele submaxilare, glandele Brunner
celule tumorale (carcinoame), macrofage, cheratinocite activate
FGF
NGF
Eritropoetina
rinichii
TGF-
IGF-I
ficatul
IGF-II
diverse celule
Activitate primar
stimuleaz proliferarea: esutului
conjunctiv, celulor glialele, celulelor musculare netede
stimuleaz proliferarea celulelor
mezenchimale, gliale i epiteliale
important n procesele de vindecare
stimuleaz proliferarea diferitelor
celule, inhib unele celule stem,
induce dezvoltarea mesodermului
n fazele embrionare precoce
stimuleaz creterea neuritului i
supravieuirea celulelor nervoase
stimuleaz proliferarea i diferenierea eritrocitelor
efect antiinflamator, stimuleaz
procesele de vindecare, inhib
proliferarea macrofagelor i limfocitelor
stimuleaz proliferarea diferitelor
tipuri celulare
stimuleaz proliferarea diferitelor
tipuri celulare de origine fetal
101
Receptor afectat
Sindrom produs
FGFR1
Pfeiffer
102
FGFR2
FGFR2
FGFR2
FGFR2
FGFR2
FGFR3
Apert
Beare-Stevenson
Crouzon
Jackson-Weiss
Pfeiffer
Crouzon
103
semnificativ. De aceea se consider c este un factor de cretere fetal. Receptorii IGF-II sunt identici cu receptorii pentru manoz-6-fosfat, responsabili pentru integrarea enzimelor n lizozomi.
Factorul de necroz tumoral- (TNF-) este produs de ctre macrofagele activate. Ca i IL-1, TNF- induce expresia altor factori de cretere autocrini, intensificnd rspunsul celular la aciunea factorilor de cretere. TNF acioneaz sinergic ce EGF i PDGF asupra unor tipuri celulare. Ca ali
factori de cretere, TNF- induce expresia unor proto-oncogene nucleare i a
unor interleukine.
Factorul de necroz tumoral- (TNF-) se caracterizeaz prin capacitatea de a omor diferite tipuri celulare i de capacitatea de a induce diferenierea terminal n altele. Un rspuns semnificativ non-proliferativ ca rs-puns
la TNF- este inhibarea lipoprotein lipazei prezent pe suprafaa clulelor
endoteliale. Sinteza TNF- se realizeaz n principal n limfocitele T
citotoxice. Inducerea expresiei TNF- rezult dup creterea nivelului IL-2, ca
i prin interaciunea antigenelor cu receptorii de pe celulele T.
Citokinele:
reprezint un grup de molecule cu rol regulator ce funcioneaza ca
mediatori ai comunicrii intercelulare, n condiii normale ct i n
condiii patologice,
sunt glicoproteine solubile, cu greutate molecular mic,
i exercit efectele prin intermediul interaciunii cu receptori specifici
de pe suprafaa celulelor circulante sau a celor tisulare,
sunt secretate primar de ctre leucocito i stimuleaz rspunsul imun
umoral i celular i celulele fagocitare:
o citokinele secretate de limfocite se numesc limfokine,
o cele secretate de monocite sau macrofage sunt numite monokine.
O mare familie de citokine sunt produse de diferite celule ale organismului. Multe dintre limfokine sunt cunoscute ca interleukine, care nu sunt
secretate doar de leucocite, dar sunt capabile s afecteze rspunsul celular al
leucocitelor. n mod specific interleukinele sunt factori de cretere orientai
spre celule de origine hematopoietic.
104
IL-6
IL-7
IL-8
Activitate primar
macrofagele i alte
celule prezentatoare
de antigene
limfocitele TH1 i
NK
limfocitele T activate
limfocitele TH2
mastocitele
limfocitele TH2 i
mastocitele
limfocitele TH2 activate, celulele prezentatoare de antigene i alte celulele
somatice
celulele stromale timice i din mduva
osoas
macrofagele i alte
celule somatice
IL-9
limfocitele T
IL-10
IL-11
celulele stromale
IL-12
limfocitele B, macrofagele
IL-13
limfocitele TH2
105
106
107
Activitate primar
efect antiviral, activarea
INF-
celulelor i macrofagelor
limfocitele TH1
activate i celule
NK
activarea macrofagelor,
neutrofilelor, limfocitelor NK,
stimuleaz imunitatea mediat
celular, efect antiviral
108
109
MBTRNIREA CELULAR
mbtrnirea este rezultatul modificrilor continue acumulate n organismele vii, de la natere pn la moarte. Odat cu naintarea n vrst se
produc o serie de modificri morfologice i funcionale, iar alterrile celulare
reprezint o component important a mbtrnirii organismului.
O serie de funcii celulare sufer un declin progresiv, odat cu
naintarea n vrst. Fosforilarea oxidativ la nivelul mitocondriei se reduce,
ca i sinteza proteinelor structurale i a enzimelor, sau a receptorilor celulari.
Celulele senescente au o sczut capacitate de a prelua nutrieni, sau de
a repara defectele cromozomiale.
Fiecare celul mbtrnete specific, printr-un mecanism mai mult sau
mai puin diferit de acela al altor tipuri celulare. Astfel, n cazul celulelor
difereniate i care mai au capacitate de diviziune, se consider c n cursul
vieii lor, acestea sunt capabile de un numr precis de diviziuni programate
genetic. Pentru acest tip de celule, mbtrnirea nseamn n primul rnd
scderea sau chiar oprirea procesului de diviziune. Pentru celulele care nu se
divid (neuroni, celule musculare cardiace) mbtrnirea nseamn acumularea
de macromolecule cu proprieti diferite fa de cele specifice acestor celule,
sau acumularea de substane nedegradabile n citoplasma lor, paralel cu scderea capacitii metabolice.
n procesul de mbtrnire celular apar o serie de modificri
morfologice ale celulelor, cum sunt:
scaderea volumului celulei,
scaderea volumului nucleului,
scaderea raportului nucleu/citoplasm,
scaderea raportului nucleu/nucleol,
scaderea ratei diviziunilor,
hipercromia nucleului,
nuclei neregulai i anormal lobai,
110
111
genetic o anumit perioad de via, dup care celula moare. Moartea celular
programat poart numele de apoptoz.
Apoptoza este o form natural de moarte celular, care se produce n
procesele de dezvoltare a esuturilor i organelor
Apoptoza este responsabil pentru numeroase evenimente fiziologice
i patologice, dintre care amintim:
distrugerea programat a celulelor n cursul embriogenezei;
involuia hormon dependent la adult (ex. distrugerea celulelor endometrului n timpul ciclului menstrual, atrezia foliculilor ovarieni la
menopauz, regresia glandei mamare dup lactaie);
eliminarea celulelor n proliferarea populaiilor celulare;
moartea:
celulelor tumorale;
celulelor imune, a limfocitelor T i B, dup depleia limfochinelor;
eliminarea celulelor T autoreactive n timpul dezvoltrii timusului;
atrofia patologic a:
esuturilor hormono-dependente (ex. prostata dup castrare, scderea limfocitelor din timus dup administrarea de glucocorticoizi);
organelor parenchimatoase dup obstrucia ductelor (ex. tiroid,
pancreas, rinichi);
lezarea celulelor n unele boli virale (ex. hepatita viral, n care la nivelul ficatului apar corpii apoptoici Councilman);
moartea celular produs de stimuli capabili s produc necroz (ex.
radiaii, medicamente, hipoxia) dar care dac acioneaz n doz redus
determin apoptoz.
Modificrile morfologice ale celulelor n apoptoz sunt urmtoarele:
scderea volumului celular, citoplasma devine dens, iar organitele
relativ normale apar ngrmdite;
condensarea cromatinei este cea mai caracteristic trstur a apoptozei, agregate de cromatin apar dispuse periferic sub membrana
nuclear; nucleul se poate fragmenta;
formarea corpilor apoptoici, iniial pe suprafaa celulei se observ
invaginri, se vor forma vezicule, apoi celula se fragmenteaz, rezultnd numeroi corpi apoptoici delimitai de membrane, care conin
citoplasm, organite strns mpachetate, cu sau fr fragmente nucleare;
fagocitarea celulelor sau corpilor apoptoici de ctre macrofage i vor fi
rapid degradate la nivelul lizozomilor secundari.
n coloraia cu hematoxilin-eozin, celulele apoptoice apar rotunde
sau ovalare, intens eozinofile, cu fragmente de cromatin dense.
112
MECANISMELE APOPTOZEI
113
Unele virusuri care cauzeaz cancere utilizeaz mijloace care previn apoptoza celulelor transformate. Unele papiloma virusuri sunt implicate n
producerea cancerului de col uterin. Unele dintre ele produc proteina E6 care
leag i apoi inactiveaz un promotor al apoptozei, numit p53. Virusul
Epstein-Barr, cauza mononucleozei i a limfomului Burkitt, produce o protein similar Bcl-2, sau produce alte proteine care cresc producia celular de
Bcl-2. Aceste aciuni vor face ca celulele s fie mai rezistente la apoptoz, iar
celulele canceroase vor putea prolifera.
Chiar i celulele canceroase care apar fr implicarea virusurilor au ci
prin care evit apoptoza.
n unele leucemii i limfoame celulele B prezint un nivel crescut de
Bcl-2, care blocheaz semnalele ce induc apoptoza.
Celulele neoplazice ale melanoamelor evit apoptoza, prin inhibarea
expreziei genei proteinei Apaf-1.
Unele celule neoplazice, din cancerul pulmonar i din cancerul de
colon, secret la un nivel crescut unele molecule care leag FasL, ce determin
blocarea legrii acestuia la Fas. Astfel, celulele T citotoxice nu vor putea
distruge celulele maligne.
Alte celule canceroase au o expresie crescut a Fasl i pot distruge
orice celul T citotoxic care va ncerca s le omoare.
Apoptoza n SIDA
Caracteristic pentru pacienii cu SIDA este declinul numrului de
celule T CD4+ responsabile direct sau indirect pentru rspunsul imun. Cnd
numrul lor scade n jur de 200/l, pacientul nu va mai avea un rspuns imun
eficient, cu producerea unor infecii periculoase.
Apoptoza este cea care cauzeaz dispariia celulelor T CD4 +. Virusul
HIV invadeaz celulele T CD4+ ceea ce va determina distrugerea acestora. Dar
mai puin de 1 din 100.000 de celule T CD4 + din sngele pacienilor cu SIDA
sunt infectate cu virusul HIV. Apoptoza este cea care omoar i celulele CD4 +
neinfectate. Dei mecanismele apotozei n aceast situaie nu sunt clare, exist
mai multe posibiliti. Toate celulele T, att cele infectate ct i cele
neinfectate au crescut expresia Fas. Expresia genei HIV, numit Nef n
celulele infectate va cauza creterea expresiei FsaL pe suprafaa lor i va fi
prevenit interaciunea cu Fas care s cauzeze distrugerea.
Pe de alt parte, cnd o celul T infectat va ntlni una neinfectat (ex.
n ganglionii limfatici) interaciunea FasL cu Fas la nivelul celulelor
neinfectate va determina moartea acestora prin apoptoz.
Apoptoza n transplantul de organe
Se cunoate de mult timp c unele pri ale corpului, cum sunt camera
anterioar a ochiului sau testiculul, sunt locuri privilegiate imunologic.
Antigenele din aceste spaii nu reuesc s induc un rspuns imun. Celulele
114
din aceste locuri difer de celulele din alte zone ale corpului prin faptul c un
nivel crescut al expresiei FasL tot timpul. Astfel, celulele T antigen reactive
care au expresie crescut a Fas vor fi omorte cnd ajung n aceste spaii. n
acest mod ar fi posibil o nou cale de prevenire a rejeciei. Dac la unele
celule ale rinichilor, ficatului sau cordului transplantat ar crete nivelul
expresiei FasL, ar putea fi protejat rejecia grefelor de atacul celulelor T ale
imunitii mediate celular.
Cunoaterea mecanismelor intime ale acestui important proces de
apoptoz ar deschide perspective pentru modularea lui. Modularea apoptozei
ar putea servi pentru inhibarea apoptozei n celulele normale i inducerea ei n
celulele tumorale. Clarificarea mecanismelor biochimice ale procesului de
apoptoz ar putea schimba conceptul actual privind tratamentul bolilor n
general i al neoplasmelor n special.
115