Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
BIOREACTOARE
BIOREACTOARE
Principalul scop al biotehnologiei este obinerea de produse sau servicii utile activitii
umane, cu ajutorul organismelor vii.
Procesul de baz n biotehnologie este procesul biologic", dup cum procesul de baz n
tehnologia chimic este procesul chimic". Spaiul n care se desfoar o reacie sau un proces
chimic se numete reactor chimic". In mod asemntor, spaiul n care se desfoar un proces
biologic se numete bioreactor.
'Dei procesul de baz din tehnologia de biosintez este procesul biologic", el aparine,
totui, domeniului ingineriei biochimice, care se ocup de studiul proceselor de fermentaie aerob
i anaerob, al reaciilor enzimatice, precum i de procese specifice industriei fermentative, cum ar
fi: sterilizarea, . pasteurizarea, liofilizarea, uscarea prin atomizare, izolarea i purificarea produselor
extrase din mediile biologice.
Descoperirile succesive i dezvoltarea spectaculoas a biotehnologiei au favorizat att
studiul aprofundat al proceselor implicate, ct i al aparaturii utilizate, n principal, al
bioreactoarelor. S-a nscut astfel bioingineria", care studiaz bioprocesele sub toate aspectele
(modul de desfurare, cinetic, transfer de mas i cldur), oferind soluii de optimizare a
procesului biotehnologie.
n bioreactor, transformarea materiilor prime este realizat de sistemul enzimatic al
microorganismelor vii, al celulelor animale i vegetale sau de enzimele izolate din acestea. Reuita
experimentului biotehnologie depinde n cea mai mare msur de condiiile optime de cretere a
microorganismelor create n bioreactor. Celulele se lupt continuu cu modificrile din mediul
nconjurtor, astfel nct s obin i s-i menin condiiile optime de cretere. ntr-un bioreactor,
aceast tendin a celulelor este asistat, este controlat n mod continuu. Reactorul trebuie s
asigure aprovizionarea continu a celulelor cu mijloacele necesare creterii sau producerii de
metabolii, asigurnd pe ct este posibil valorile optime pentru pH, temperatur, concentraia
substratului, concentraiile n sruri minerale, factorii de cretere i pentru concentraia n oxigen.
n legtur cu reactorul n care trebuie s aib loc procesul biologic sau biochimic, apar
urmtoarele probleme importante:
care este cel mai bun reactor pentru o transformare biochimic dat;
cum se calculeaz mrimea i volumul interior util, alte elemente constructive al bioreactorului;
care sunt condiiile optime de operare, astfel nct bioreactorul s realizeze performanele dorite.
1
2
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
Fenomenele care au loc n bioreactor au un caracter complex, datorit interdependenei
fenomenelor de transfer cu cele biochimice. Analiza procesului trebuie s ia n considerare, pe lng
reaciile biochimice propriu-zise, i fenomenele fizice cu care acestea interacioneaz i anume:
curgerea, transferul de mas i transferul de cldur, prezente n orice reactor industrial. Descrierea
cantitativ a acestor fenomene furnizeaz ecuaiile cu ajutorul crora bioreactorul poate fi analizat,
optimizat, dimensionat, reglat.
Pentru a micora riscul n procesul de realizare la scar industrial a unui proces
biotehnologic stabilit n laborator, este necesar construirea unei instalaii pilot care s furnizeze
informaii intermediare i foarte utile pentru proiectul industrial; trecerea de la model la producie
poate fi adesea uurat cu ajutorul teoriei similitudinii. Aceasta stabilete criterii care permit
calcularea mrimilor fizice ale sistemului la scar mare, bazat pe rezultatele obinute n modelul
experimental, la scar mic. Pentru fiecare proces elementar, factorii determinani pot fi inclui ntr-
un numr caracteristic, denumit criteriu de similitudine; acesta trebuie s rmn constant pentru ca
procesul la nivel industrial s se desfoare n mod similar cu procesele de laborator i pilot. Dac
aceast similitudine este asigurat, atunci, rezultatele care s-au obinut n laborator sau pilot pot fi
utilizate pentru proiectarea reactorului industrial.
nainte de alegerea modului de operare (discontinuu, continuu, semicon-tinuu), a tipului, a
mrimii i a condiiilor de operare, este necesar o alegere preliminar a tipului de reactor n funcie
de microorganismul utilizat, mediul de cultur i de caracteristicile procesului biochimic. Alegerea
tipului de bioreactor se efectueaz n momentul n care bioprocesul se afl nc n faza de cercetare,
de obicei n perioada de experimentare la nivel pilot.
n cazul acestui tip de operare avem regimul de circulaie amestecare perfect, caracteristic
fiind n aceast situaie uniformitatea valorilor concentraiei, temperaturii n spaiul bioreactorului
i, n general, a tuturor parametrilor care influeneaz bioprocesul.
Operarea n sistem semicontinuu (extended culture operation"). n acest caz, reactorul
este astfel operat nct concentraia substratului limitativ este pstrat constant prin aprovizionarea
sa continu (fed batch"). Se noteaz SC i se reprezint grafic astfel:
omogene: L-L
heterogene:
unde:
L-L: lichid - lichid]- monofazice
L-S: lichid-solid - multifazice
G - L - S: gaz - lichid solid - multifazice
In sistemele omogene, compoziia mediului de fermentaie este uniform pe tot parcursul
bioprocesului. n sistemele heterogene, n mediul de fermentaie exist gradiente de celule sau de
substrat. n sistemul omogen, n orice moment, microorganismele din diferite zone ale sistemului au
aceeai stare fiziologic (acelai stadiu de dezvoltare). n sistemul heterogen, microorganismele din
diferite zone ale sistemului sunt expuse la diferite condiii de mediu i, n consecin, vor avea
diferite stri fiziologice (adic se vor afla n diferite stadii de dezvoltare).
ALEGEREA BIOREACTOARELOR
Alegerea bioreactorului potrivit pentru un anumit proces biotehnologic se realizeaz n
funcie de o serie de factori predeterminai cum ar fi: natura microorganismului folosit, proprietile
mediului de cultur, parametrii biochimici ai procesului, amplasamentul bioreactorului.
Caracteristici determinate de natura microorganismului folosit n bioproces. Modul de operare
al unui reactor depinde n mod esenial de stabilitatea tulpinii productive. De exemplu, numai
10
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
tulpinile care sunt suficient de stabile pot fi utilizate n operarea continu [Aiba .a., 1973].
Condiiile de operare sunt afectate n mod hotrtor fiind complet diferite dac microorganismul
este aerob sau anaerob.
n creterea organismelor aerobe este necesar s existe o cantitate disponibil de oxigen
dizolvat, tot timpul n mediul de cultur.
Deoarece solubilitatea oxigenului n mediul de cultur este mic, este necesar alimentarea
continu cu oxigen.. Aceasta se realizeaz, de obicei, prin dispersia aerului n mediu. Un grad de
dispersie ct mai mare n mediile cu vscozitate mare conduce la un transfer mai bun al oxigenului
i celulele sunt aprovizionate cu oxigen mai bine.
Mrimea i forma celulelor. Acestea au, de asemenea, o influen considerabil asupra tipului de
reactor necesar i a modului de operare. Celulele sferice sunt, de obicei, mai mici i mai puin
sensibile la forfecare dect microorganismele filamentoase.
Formarea celulelor sferice necesit un grad de dispersie mai mare a aerului dect organismele
filamentoase. Dimensiunile mici asigur un raport mare ntre suprafa i volum, un consum mai
mare al substratului i, de asemenea, o cretere rapid. Celulele aerobe cu vitez mare de cretere
necesit un consum al oxigenului mai mare.
Organismele filamentoase cresc numai la captul hifelor. Aceasta conduce la viteze mici de
cretere i la cereri mici n oxigen. Deoarece astfel de celule sunt, de cele mai multe ori, sensibile la
forfecare, fore mari de dispersie pot cauza ruperea. De fapt, este de dorit s se disperseze nu numai
faza gazoas ci i microorganismul nsui.
Formarea de micelii i aglomerri are un efect considerabil asupra alegerii reactorului. Aglomerrile
de celule au un raport mic ntre suprafa i volum, o vitez mic de consum a substratului i o
vitez mic de cretere.
Viteza mic de consum a oxigenului permite folosirea reactoarelor care disperseaz aerul ntr-un
grad mic sau moderat.
Celulele care formeaz aglomerri sunt uor de separat din mediile de cultur i reintroduse n
reactor n scopul ridicrii densitii celulare. n multe reactoare, densitatea celular se diminueaz
considerabil cu creterea nlimii (de exemplu, reactoarele turn). Cnd ieirea mediului este plasat
la captul reactorului, numai o cantitate mic de celule sunt ndeprtate din turn. n acest fel, timpul
de staionare a celulelor n reactor poate fi extins considerabil, fr creterea timpului de staionare
n mediu. Deci, aglomerarea de celule permite operarea n sistem continuu a reactorului de
producere a metaboliilor, fr o separare special a celulelor (de exemplu, prin centrifugare sau
filtrare).
11
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
Aglomerrile de celule pot avea diferite morfologii. Acestea depind nu numai de tulpina
productoare, ci i de condiiile unui stres mecanic din reactor. n condiiile unui stres mecanic mic,
multe organisme filamentoase (de exemplu, fungii) formeaz aglomerri voluminoase,
interacionnd unele cu altele, care conduc la vscoziti mari ale mediului. Aceste aglomerri sunt
adesea sensibile la stresul de forfecare, care poate conduce la ruperea filamentelor.
Multe microorganisme au tendina de a crete pe suprafee. Aceste proprieti pot Fi dorite dac se
dorete operarea continu, cum ar fi n cazul tratamentului apelor de canal.
Dac aceste proprieti sunt foarte pronunate, pot Fi utilizate reactoarele de suprafa. n general,
formarea de film nu este dorit. Dac celulele au tendina s creasc la suprafa, formarea
regiunilor de stagnare la suprafa poate fi evitat prin utilizarea unui reactor potrivit.
Caracteristici ale reactoarelor determinate de proprietile mediului de cultur.
Caracteristicile mediilor de cultur determin alegerea unui anumit tip de bioreactor.
Proprietile fizice ale substratului folosit difer: gazos (de exemplu, metan, dioxid de carbon, la
fotosintez), lichid i solubil n ap (de exemplu, glucoza, lactoz), lichid i insolubil n ap (de
exemplu, parafine), solid i insolubil n ap (de exemplu, amidon, celuloz). Fiecare stare fizic
exercit o influen considerabil n alegerea bioreactorului. De aceea, de exemplu, metanul i aerul
pot forma un amestec exploziv i reactoarele cu acest amestec nu pot fi folosite.
n cazul substraturilor volatile, se alege un reactor cu debit n contracurent, cu agitare uoar axial
sau un sistem de reactoare cu mai multe stagii pentru a micora pierderile de gaz. S-a studiat, de
asemenea, aeraia emulsiilor de ulei n ap. Prezena parafinelor reduce viteza de transfer a
oxigenului. n general, reactoarele de suprafa nu sunt potrivite pentru fermentaia emulsiilor
uleioase.
Dac se utilizeaz un substrat solubil n ap, n operarea discontinu, se obine, de obicei, un mediu
mult mai vscos dect cel iniial. Pentru acest caz se folosesc reactoare speciale cu agitatoare
elicoidale. Prezena solidelor grele (de exemplu carbonatul de calciu n mediul de cultur pentru
Penicillum chrysogenum) ori a substraturilor fibroase (de exemplu, paie pretratate) limiteaz
alegerea tipului de bioreactor. Fibrele lungi din suspensiile diluate micoreaz debitul i particulele
mari blocheaz intrrile. n acest caz este necesar introducerea de restricii la prepararea mediilor;
se prevd faze speciale de nlturare a neajunsurilor.
O alt component a mediului care poate influena tipul de bioreactor ce urineaz a fi utilizat este
concentraia de substrat sau de produs finit.
Efectul biocinetic al substratului sau al produsului pot s afecteze alegerea bioreactorului. n cazul
n care substratul prezint inhibiie sau represie asupra creterii microorganismului, procesul este
12
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
condus n sistem semicontinuu, cu alimentare continu de substrat (fermentaie cu adaosuri).
n cazul n care produsul de biosintez induce inhibiie sau represie cnd sunt n concentraie mare
(de exemplu, glucoza i celobioza la Trichoderma viride, etanolul la Sacharomyces cerevisiae),
este de dorit s se foloseasc aranjamentul n mai multe trepte.
O alt caracteristic, ce influeneaz alegerea unui anumit tip de bioreactor sau a unui anumit sistem
de operare, o constituie prezena n mediul de cultur a unei componente care se degradeaz n
timpul operaiei de sterilizare (termolabile). n acest caz este necesar sterilizarea separat a acestor
materiale.
O alt proprietate a mediului de cultur care influeneaz procesul de fermentaie este tendina de
coalescen, adic formarea de bule de gaz care micoreaz transferul de oxigen n mediul de
cultur. n acest caz se introduc n bioreactor sisteme de disipare a bulelor, cu efect local (mijloace
mecanice).
Comportarea reologic a mediului are o mare influen asupra unui bioproces. Mediile cu
vscozitate mic nu creeaz probleme de agitare i de vitez de transfer a oxigenului. O cretere a
vscozitii mediului poate avea diferite cauze:
-concentraia mare n substrat (n particular la operarea n sistem batch", la nceputul cultivrii);
-secreia de produse vscoase pe parcursul biosintezei, cum ar fi pullulanul i xantanul;
-morfologia microorganismului.
O caracteristic a mediului important, care implic alegerea unui anumit tip de bioreactor, este
spumarea n timpul cultivrii. Formarea de spum conduce de cele mai multe ori la blocarea ieirii
aerului, inundarea filtrelor de aer, scderea volumului de mediu n bioreactor, infecia mediului de
cultur i, deci, compromiterea procesului de biosintez.
Exist mai multe metode pentru prevenirea fenomenului de spumare:
-conducerea procesului astfel nct s nu se formeze spum; de exemplu o vitez mare de transfer a
oxigenului (printr-o agitare corespunztoare, variabil n funcie de nivelul concentraiei de oxigen
dizolvat msurat continuu) transform procesul ntr-unui cu limitare de substrat; n acest caz
concentraia oxigenului nu mai este un factor limitativ i nu este necesar mrirea debitului de aer
care conduce la spumare excesiv. Aceast metod se poate aplica n cazul n care spumarea se
datoreaz proteinelor dizolvate, eliberate din celulele lizate;
-adugarea de antispumani, care schimb coalescena mediului. Agentul antispumant se
acumuleaz la interfaa gaz-lichid i mpiedic formarea spumei.
Antispumanii utilizai n industria de biosinteze sunt:
-uleiuri naturale: de soia, de floarea-soarelui;
13
FUNDAMENTELE BIOTEHNOLOGIEI
-uleiuri sintetice, care pot fi de natur siliconic sau polimeri organici;
-mijloace mecanice: agitatoare cu turaie mare, icane, tuburi interioare.
Spumarea poate fi combtut i prin alegerea tipului de bioreactor potrivit care s permit o
circulaie rapid a lichidului fr s formeze spum (bioreactor cu draft" interior).