UNIVERSITATEA DIN BUCURETI

Nanomaterial
e
aplicai
i

n
biosenzori, surse de energie, medicin
biologie
Elemente de nanotehnologi
e













ioan stamatin 2008









Cuprins


Introducere in nanotehnologie 1
Biosenzorii in contextul transdisciplinaritatii stiintelor 7
2.1 De la chemosenzor la biosenzor 7
2.2 Biosenzorii i nanotehologiile 11
2.3 Biosenzori, biodiagnostic, nanobiotehnologie, nanomedicin 14
2.3.1 Biocipurile i tehnologiile actuale ale secolului XXI 14
2.3.2 Biocipuri, nanobiotehnologia, nanomedicina 15
2.3.3 Scurt istoric 18
2.3.4 Referine 23
3.Stadiul dezvoltrii actuale n domeniul biosenzorilor 25
3.1 Sisteme, arii de biosenzori, caracteristici de rspuns 27
3.1.1 Sisteme integrate 27
3.1.2 abloane 27
3.1.3 Sensibilitate 28
3.1.4 Stabilitate 29
3.1.5 Selectivitate 29
3.1.6 Parametrii de caracterizare a semnalelor biosenzorilor 30
3.1.7 Zgomot, rezoluie, drift 33
3.2 Componentele biologice ale biosenzorilor 34
3.2.1 Principiile recunoaterii moleculare 35
3.2.2 Imobilizarea moleculelor gazd 42
3.2.3 Transducia semnalului 42
3.2.4 Tipuri de componente biologice 43
3.2.5 Integrarea componentelor biologice n biosenzori 46
3.3 Traductori i electrozi 51
3.3.1 Electrozi 52
3.3.2 Electrozi n senzori electrochimici 53
3.4 Fenomene de transport 54
3.4.1 Cinetica Enzimelor 55
3.4.2 Fenomene de transport 56
Biosenzori electrochimici 59
4.1 Senzori chimici vs senzorii biochimici 59
4.2 Biosenzor electrochimic 62
4.3.Clasificare 62
4.4 Receptorul 63
4.5 Moduri de transducie electrochimic 65
4.6 Analii, reacii monitorizate. 67
4.7 Construirea unui biosenzor electrochimic. 67
4.8 Criterii de performan 69




4.9 Exemple de biosenzori electrochimici 73
4.10 Referine 85
Biosenzori microbieni 89
5.1 Principiu de funcionare 90
5.2 Rspunsul fiziologic al senzorului microbian 93
5.3 Referine 98
Senzori pe structuri semiconductoare FET 99
6.1 Tranzistori FET, ISFET, CHEMFET, REFET 99
6.2 Referine 104
Biosenzori cu fibra optica 105
7.1 Fibre optice, caracteristici generale 106
7.2 Fibre optice cu reele Bragg induse 109
7.3 FOBS n medicin 110
7.4 Referine 116
Celule de biocombustie 117
8.1 Necesitatea implementrii surselor alternative de energie 117
8.2 Celule de biocombustie-celule bioelectrochimice 118
8.3 Mecanisme n celulele bioelectrochimice 119
8.4 Clasificare 121
8.5 Celule de biocombustie microbiene (MFC) 122
8.6 Elemente de electrochimia MFC 125
8.7 Referine 128
Nanoparticule in medicina 131
9.1 Nanofbrile, Nanocarboni, rolul lor n microbiologia clinic 133
9.2 Nanocarboni 136
9.3 Puncte cuantice 147
9.4 Referine 162
10 Nanotuburi de carbon 165
10.1 Istoric 165
10.2 Structur, proprieti 167
10.3 Funcionalizare 169
10.3.1 Purificarea nanotuburilor 169
10.3.2 Evaluarea puritii CNT 170
10.3.3 Selectarea nanotuburilor dup lungime i diametru 172
10.3.4 Separarea CNT dup proprietile lor metalice sau semiconductoare 172

10.3.5 Ataarea de grupe funcionale 174
10.4 Referine 176
11 Nanofire, nanosenzori 179
11.1 Senzori FET cu nanofire 179
11.2 Limitele de detecie i rspuns pentru nanobiosenzori 183
11.3 Referine 186
















Aceeast carte este dedicat n primul rnd celor doi copii Ionu i erban
pentru nelegerea i sprijinul acordat, suportul spiritual al timpurilor grele,
a
c
e
l
o
r

O
a
m
e
n
i

c
a
r
e

m
a
i

c
r
e
d

n

a
d
e
v

i

l
u
i

N
i
n
i

P
o
p

p
r
i
e
t
e
n
u
l

d
e

o

v
i
a

Introducere in nanotehnologie


Discovery consists of seeing what everybody seen and thinking what nobody has
thought
A
l
b
e
r
t

v
o
n

S
z
e
n
t
-
G
y
o
g
y
i

T
h
e

S
c
i
e
n
t
i
s
t

S
p
e
c
u
l
a
t
e
s
,
1
9
6
2

If our small minds, for some convenience, divide thisUniverse into parts - physics,
biology, chemistry, geology, astronomy, and so on remember that nature does not know
it!
P
.

F
e
y
n
m
a
n
,

1
9
6
3

When nature finishes to produce its own species, man begins using natural things in harmony
with
this
very
natur
e to
create
an
infinit
y of
specie
s
L
e
o
n
a
r
d
o

d
a

V
i
n
c
i



Secolul XXI se confrunt cu transformri de anvergur att n tiinele naturii ct i la nivel
social, economic, uman. Societatea tinde spre informatizare i globalizare a schimburilor
comerciale datorit dezvoltrii i integrrii pe vertical respectiv pe orizon- tal a proceselor
de producie avansate ce nglobeaz ultimele inovaii ale tiinei i teh- nologiei. Ca orice
transformare impactul asupra mediului, dezvoltrii sociale, sntii, dezvoltrii demografice
respectiv a necesarului de energie este considerabil. Asistm la transformri i crize de
neimaginat altdat: reducerea considerabil a combustibililor fosili, noi tipuri de boli,
epidemii care altdat erau necunoscute, transformri ale naturii datorit nclzirii glo-bale,
creterea accelerat a stresului, modificri drastice n mediu datorit noxelor i deeurilor,
dispariii de specii naturale etc.
Cum acionm s prevenim? Cum monitorizm aceste fenomene? Ce soluii avem pentru
surse noi de energie i combustibili ecologici? Cum reintegrm deeurile? Cum prevenim
bolile sau le vindecm pe acelea incurabile?
Ce soluii ne ofer tiinele i tehnologiile actuale sau cele de viitor?
Un rspuns categoric nu exis iar lucrurile trebuiesc privite n dinamica dezvoltrii societii
care este o societate de consum adic lucrurile bune astzi devin neutilizabile mine datorit
apariiei altora mai performante.
Un rspuns actual este dezvoltarea i implementarea nanotehnologiilor la orice scal de
dezvoltare a societii n curs de globalizare.
Nanotehnologia este germinat de rezultatele tiinelor interdisciplinare din secolul XX i a
noilor instrumente de investigare la scal nanometric a materiei. Ea a generat ulterior o
larg intermixare a tiinelor altdat considerate fundamentale i a propulsat noi domenii de
cercetare de neimaginat cu cteva decenii n urm. n sens restrictiv este tiina materialelor
a cror proprieti depind de dimensiune i cuprinde:
1





Nanotiinele: fenomenele i legile fundamentale ale fizicii, chimiei,
biolo-
giei aplicate la scal nanometric.
Nanoinginerie: manipularea moleculelor pentru a construi noi tipuri
de
materiale; instrumentele i metodele prin care sunt proiectate i
realizate dispozitive la scal nanometric, asamblarea lor n
produse de larg consum i pentru noi cercetri avansate.
Nanotehnologia, tehnologia fabricaiei secolului 21, cuprinde ingineria de nalt precizie,
direcia principal n aplicaiile biomedicale din arii ca terapia genetic, tran- sportul dirijat
de medicamente, noi tipuri de medicamente, tehnici de sintez la scal na-
nometric sau mai concis arta manipulrii atomilor individuali i a moleculelor
pentru a
construi structuri cu proprieti dirijate.
Nanotehnologia reprezint abilitatea de a construi obiecte prin asamblarea de atomi n
secvene de timp bine precizate. A construi structuri pornind de la atomi i molecule este
necesar inventarea de dispozitive de asamblare la scal nanometric. Rolul lor este de a
asambla atomii i moleculele n miliarde de configuraii specifice unei structuri nano-
metrice. Capacitatea ansamblurilor de a se autoreplica este una din cerinele de baz a in-
strumentelor nanometrice. Fiecare nanoinstrument va trebui s opereze n mod propriu i s
fie programabil.
Materialele sintetizate a cror dimensiuni caracteristice se situeaz ntre 1nm i 100 nm au
proprieti dependente de dimensiune. Aceasta prezint un interes tiinific deosebit. Cu
ct dimensiunea unui material se reduce cu att fenomenele cuantice sunt mai pronunate iar
defectele sunt mai puin importante ca n procesele de sinterizare ca exemplu.
Interesele industriale sunt enorme: depirea limitrilor din litografie pentru tehnologia
semiconductorilor, cererea de control la nivel molecular, simplificarea pro- ceselor,
durificarea suprafeelor, aplicaii fotonice, controlul permeabilitii, biocompa- tibilitate
pentru a enumera cteva din ele
Nanotehnologia : este un domeniu multidisciplinar care aduce marile realizri
ti-
inifice din Fizic, Chimie, Biologie, Matematic i tiina materialelor spre aplicarea lor la a
construi cu atomi i molecule materiale la scal nanometric cu inteligen artificial,
structuri biocompatibile, surse de energie neconvenionale, nanoroboi pentru medicin,
cipuri cu densitate mare a componentelor i biomateriale auto-replicabile etc. Metoda de
construcie de jos n sus este astzi cunoscut ca building from bottom-up. Este
domeniul unde structurile biologice (ADN, proteine, oligomeri i bio-oligomeri) sunt
arhitecturate cu materiale sintetizate la scal nanometric utiliznd tehnici combinte din
fizic i chimie (microscopia de fore atomice, nanolitografia, fascicule mole-culare,
nanoelectrochimie, sol-gel) cu cele din genetic; domeniul unde moleculele i polimerii
devin dispozitive electronice (electronica molecular); domeniul unde proprietile
materialelor sunt exploatate la extrem pentru tehnica spaial; domeniul unde se dezvolt
ntrega tehnologie a informaiei.
Ramurile Nanotehnologiei: nanofabricaie, nanomecanic, nanorobotic,
nano-
compozite i compozite nanostructurate, nanobiotehnologie, nanomedicin, electronic 2




molecular, MEMS, NEMS (sisteme micro/ nanoelectromecanice), microfluidic, medi-
camente inteligente, textile inteligente, biosenzori, econanotehnologie.
Nanotehnologia a revigorat ntreaga industrie electronic; astzi dimensiunile unui tranzistor
nu depete 180 nm ntr-un procesor
Aceste domenii de cercetare vor profita de combinarea eforturilor teoretice i
experimentale din electronica molecular i materialele inteligente supramoleculare.
Conexiunea dintre ramurile nanotehnologiei o constiuie Sistemele Micro
i Nano-
electromecanice, d iscipline noi create o dat cu dezvoltrile rapide din nano i micro-
litografie, microelectronic, stereolitografie.
Dispozitive MEMS, NEMS, bioMEMS sunt aplicate la structuri complexe inteligente care
cu o decad n urm practic erau de domeniul science fiction. Domeniul este focalizat n
prezent pe crearea de micro/nanosisteme n efortul de combatere a terorismului, aplicaii
n securitatea domestic (protecia caselor, terenurilor etc), secu- ritatea electronic,
siguran n exploatare.
Aspectele multidiscipinare sunt extem de complexe pentru nelegerea ingineriei acestor
sisteme ce acoper arii extem de largi: nanostructuri, nanoelectronic, micro- fluidic,
senzori biochimici de nalt rezoluie, detecia substanelor chimice i a agenilor biologici
nocivi, microsenzori pentru radioactivitate, senzori cu consum redus de putere, aplicaii
medicale, investigri noninvazive, biomimetic, secvenierea rapid a ADN-ului, transportul
la int a medicamentelor, polimeri electronici, nanooptic, tehnici analitice la nivel
nanometric, nanoasamblare, nanointegrare, tehnologia informaiei la scal nano- metric,
nanosisteme multifuncionale, bionanointerfee.
Tehnologiile implicate n aceast ramur: microstereolitografie, microformri prin matriare
i extrudare la dimensiuni submironice.
Produse i servicii generate de nanotehnologie:
Dispozitive chimice inteligente, compatibilitate pentru microsisteme;
chimice, biocompatibilitate pentru bioMEMS;
Senzori i actuatori inteligeni;
Microsisteme MEMS inteligente pentru microanalize;
Nanosisteme utilizate n transportul la int a medicamentelor;
Electronica comunicaiilor: microantene cu autocontrol,
reconfigurabile;
tehnologia Bluetooth; RF-MEMS;
Laborator-pe un cip (lab on chip): compensare, autocalibrare, transmisie
de
date; cipuri hibride; interfee auto-adaptabile;
Materiale pentru electronic packaging;
Polimeri, biopolimeri autoasamblabili;
Sisteme CAD/CAM pentru structuri MEMS: modelare electro-termo-
mecanic, microfluidic;
Pentru medicin, farmacie, bioingieria dispozitivelor Lab- on cip,
biologie
molecular, inginerie genetic, proteomic, biomimetic:
nanoboi tran- sportori de medicamente reparatori de esuturi,
nanoboi cu proprieti de anticorpi, nanoboi sanepizi.
3





Tehnologie IT: dispozitive pe structuri CNT (nanotuburi de carbon),
nanofotonic, pile sau celule de combustie nanometrice,
dispozitive spintronice.
Practic este imposibil de a predicta implicaiile nanotehnologiei dar simplu am putea
considera c noile domenii ce apar se dezvolt ntr-un ritm alert. Oricum trebuie s
remarcm un lucru esenial despre nanotehnologie i produsele ei:
Primul lucru care trebuie a fi cunoscut despre tehnologie este acela c tehnologia prin ea
nsi nu creaz bogie, plus valoare i bunstare. Numai produsele i serviciile care sunt
create de tehnologie pot fi vndute sau comercializate. n timp ce este adevrat c
tehnologia poate conduce la procese care pot crea plus valoare prin mbuntirea
eficienei unor operaii existente, dezvoltarea i furnizarea acestor procese este frecvent
realizat de ctre o alt firm ce ofer acest tip de serviciu. Exist deasemeni o asociere
apropiat dintre un nou proces i un nou produs sau serviciu
Denzil J.
Doyle,
Making
Technology
Happen,20
01


ntruct capitolele ce trateaz diferite aspecte ale implicaiilor nanomaterialelor n
biosenzori i medicin, consider c este necesar a da unele definiii:
Nanobiotehnologie: tiin multidisciplinar care aplic instrumente i procese din nano
/microfabricaie pentru a construi dispozitive n vederea studierii biosistemelor, micro-
analiza biomoleculelor prin interfaarea unei singure celule, ridicarea profilului meta-
bolismului i biochimismului ei, analiza rspunsului la diferii analii; nanoparticule
inspirate din biologie; biosenzori, celule de combustie microbiene, noi tipuri de markeri etc
Nanomedicin: descrie un set de capabiliti a sistemelor de maini moleculare care
pot
fi utilizate n diagnostic, tratament i reparri de esuturi sau organe: dispozitive medicale
nanorobotice, abilitatea de a recunoate, sorta i transporta molecule, autogenerare, comu-
nicare cu medicul, abilitatea de a migra prin tot corpul de a manipula obiecte micro- scopice,
de a dezafecta celule i virui, evidenierea genelor responsabile de cancer eventual
repararea lor.
Econanotehnologie: nanotehnologia n protecia mediului i a polurii, epurarea mediu-
lui i soluii noi de energie regenerabil, recuperarea i meninerea biodiversitii, toxi-
citatea nanoparticulelor (nanonoxe).
Lucrarea de fa abordeaz teme i subiecte de mare actualitate fiecare capitol putnd fi
studiat separat. Ea este rezultatul leciilor de curs inute la seciile de master de Biofizic i
Fizic medical, Fizica Polimerilor dar mai ales al cercetrilor din diferite contracte
naionale i internaionale pe teme diverse ce au dezvoltat aceste subiecte:
FP-6, TOK, Biological and microbial fuel cells ( TOK-Marie Curie)
NATO-SfP 974214, Carbon-Ceramic composite materials for electrical
en-
gineering applications.
PN-II-2007, Dezvoltare de biosensori bazai pe acizi nucleici pentru
evalua-
rea i monitorizarea unor ageni toxici cu aplicaii n bioterorism.



4





CEEX-PD-3158, proiect postdoctoral, Celule de combustie stocare de
hi-
drogen.
CEEX- Ctr 25/2005, Impactul micotoxinelor produse de specii de fungi
ale
genului Fusarium, asupra lanului alimentar; investigarea unor
metode de contracarare a toxicitii acestora n scopul
mbuntirii calitii i securitii alimentare la nivelul
standardelor impuse de aderarea la UE.
CEEX-Ctr 88/2005, Materiale alternative multifuncionale cu cost
sczut,
pentru pile de combustie cu electrolit polimer (PEMFC) ce
opereaz la tem- peraturi mai mari de 180C.
CEEX-Ctr. 635/2005, Sticle ecologice obinute prin nanotehnologii,
pentru
atenuarea, adaptarea i reastaurarea factorilor de mediu naturali .
PCI 2006-Universitatea din Bucureti, Msurarea, caracterizarea i
manipu-
larea structurilor nanometrice cu microscopia de fore atomice
CEEX-Ctr 60/2006, Administrarea dirijat de medicamente prin
nanostruc-
turi procesate prin tehnici laser pulsate avansate
CEEX- Ctr. 110/2006, Model experimental pentru studiul
biodisponibilitii
unor factori nutriionali (Ca, B, fitosteroli) i influena lor asupra
mine- ralizrii osului la porc, suport tiinific n studiul
osteoporozei
MATNANTECH / PF 256 / 2004 Nanostructuri pe baz de
carbon sintetizate
prin tehnici avansate i aciunea lor asupra microorganismelor
patogene.
CERES / PED, 2004 , Acoperiri nanostructurate de biopolimeri
obinute prin
evaporare laser pulsat asistat de o matrice pentru aplicaii n
industria farmaceutic
Prin multitudinea subiectelor tratate cartea se adreseaz specialitilor din diferite domenii ale
fizicii, biologiei, chimiei, medicinei i ingineriei ncercnd s furnizeze instrumente utile
de investigare, concepere, design de dispozitive de senzare i de uti- lizare a nanomaterialeor
n diverse domenii. Este conceput n aa fel nct s furnizeze cunotinele necesare
pentru iniierea studenilor, tinerilor cercettori n a aborda domenii multidisciplinare dar i
pentru cercettori avansai care doresc s-i extind aria de in- vestigare spre
multidisciplinaritae.
Cartea include o serie de rezultate originale, idei i concepte de utilizare ale nano-
materialelor care sunt publicate pentru prima dat.
Fiind rezultatul multiplelor cercetri i experimentri n domenii diverse aduc pe aceast
cale mulumiri cercettorilor i profesorilor care au participat i sprijinit aceast iniiativ:
Profesor universitar dr Ioan Pnzaru, Rector al Universitii din Bucureti,
pentru sprijinul acordat n abordarea acestor cercetri multidisciplinare i de a
nfiina primul centru de cercetare n nanotiine i surse alternative de energie
Profesor universitar dr. Ion Mihilescu, pentru primul ajutor acordat de a iniia
i forma centrul de cercetare.
Profesor universitar dr. Emil Barna, Prorector al Universitii din Bucureti,
pentru nelegerea i ncrederea acordat.
5





Profesor universitar dr. Anton Ciucu, pentru discuiile i sugestiile n
elaborarea capitolelor de biosenzori
Profesor universitar dr Ion Mihailescu, INFLPR, pentru dezvoltarea de
cercetri i a aplicaiilor radiaiei laser n manipularea biopolimerilor
Dr. Ion Morjan i Dr. Ion Voicu, INFLPR, pentru discuiile fructuoase de
utilizare a nanocarbonilor
Dr. Luminia Stamatin, S.C Biolumimedica, pentru experimentele i
cercetrile dezvoltate pe bionanocompozite, aplicaii n parazitologie i
microbiologie me- dical
Dr. Ionela ranu, IBNA, pentru discuiile fructuoase de utilizare a punctelor
cuantice n detecia micotoxinelor.
Dr. Rmbu Gimi Aurelian i Dr Iulian Iordache, ICPE-CA, pentru multiplele
discuii i cercetri comune n domeniul celulelor de combustie respectiv bio-
combustie
Dr. Rodica Cristescu, INFLPR, pentru dezvoltarea de cercetri n metode de
tran- sport dirijat al medicamentelor la int.
Dr. Elisa Mihai, Dr. Bogdan Sava Alexandru, INOE, pentru de dezvoltarea de
cercetri n domeniul sticlelor ecologice.






























6







Biosenzorii in contextul transdisciplinaritatii stiintelor


2.1 De la chemosenzor la biosenzor
Lumea n care trim este rapid dominat de informaia digital i de necesitatea de a
investiga materia la scal din ce n ce mai mic cu instrumente aparent ultrasofisticate ce pot
vedea atomii i moleculele la lucru prin interacia i asamblarea lor pe diferite nivele de
organizare. Iniial, revoluia digital a implicat n principal computere autonome care
gradual s-au integrat n reele complexe practic globalizate.
Unirea calculatoarelor cu sistemele de telecomunicaii a dus la o cretere enorm a
accesibilitii la informaie i de aici creterea cerinei pentru aceasta. n prezent, aceast
cerin este dominat de un amestec de texte, audio i imagini structurate n baze de date
care astzi sunt omniprezente prin accesibilitatea la internet. Comunicaiile i internetul din
ultima decad va alimenta cererea pentru mai multe surse de informaii i date despre aspecte
importante din viaa noastr, sntatea, mediul nconjurtor, mncarea, munca noastr.
Corpul uman i n general toate fiinele vii i-au dezvoltat, n decursul evoluiei, senzorii
specifici care s menin echilibrul fiziologic i metabolic n raport cu inte- raciunea i
schimburile cu mediul nconjurtor. Din nefericire modificrile ambientale, societatea din
ce n ce mai tehnologizat, implicarea abuziv i neraional a omului asupra biosistemelor
regulatoare ale naturii a condus la dezechilibre pe care fiinele vii nu i le mai pot regla
prin sistemelor lor senzoriale proprii. Avem din ce n ce mai mult nevoie de senzori
artificiali care s fie interfaa monitorizrii i schimbrii.













Figura 2.1 - Schema tipic a unui instrument de control i msurare n senzor.
Semnalul
de la senzor trece ntr-un buffer- amplificator operaional-cu impedan mare
de
intrare i protecie. Semnalul este digitizat de ctre ADC transformndu-se
din analog n digital.n form digital poate fi procesat, stocat, afiat,
disponibil spre
alte locaii prin reeaua de comunicaii
Astfel senzorii ofer portale dintre lumea real sau analoag n care trim i
lum-
ea digital a computerelor i a sistemelor moderne de comunicaie prin care ne racordm 7




spre mediul ambiant. Senzorii fac posibil ca s se obin informaii n timp real despre
lucruri pe care le putem vedea, atinge, mirosi i auzi i despre alte lucruri care nu le putem
detecta lucruri care pot fi nocive sau folositoare pentru noi. Semnalul electronic colectat de
la senzor este trecut ntr-un circuit unde este digitizat de un convertor analog- digital (ADC)
(figura 2.1). Informaia digital poate fi apoi stocat n memorie, reprodus vizual pe un
monitor sau facut accesibil lumii reale printr-un port digital de comunicaie.
Din lumea extrem de diversificat a senzorilor ne vom ocupa de biosenzori, clas a
senzorilor chimici, ns pentru o descriere concis a problematicii biosenzorilor att de vast
i variat o definiie se impune de la nceput n contextul general a noiunii de
senzor aa cum figura 2.1 descrie conceptul de detecie i prelucrare a semnalului.


Senzorul n accepiune larg este un dispozitiv ce detecteaz un analit, A, prin
intermediul unui receptor, R, ce este cuplat la un traductor, T. Interacia analit-receptor
produce un schimb de electroni sau emite/absoarbe fotoni pe care traductorul l
transform ntr-un semnal electric sau fotonic, analogic sau digital


n figura 2.2 este prezentat schema de principiu a unui senzor.











Figura 2.2- Principiul general de construcie i funcionare a unui senzor. Interacia A-R
produce un semnal intern preluat de detector , aflat n contact intim cu transfer
spre traductor (figura 2.1)
Un senzor chimic sau biologic funcioneaz pe principiul descris n figura 2.2 prin emiterea
de semnal (tensiune sau curent electric, fotonic) ca rspuns la o reacie chimic cum ar fi
legtura dintre dou molecule. Acest eveniment implic un receptor chimic sau biologic, R
(ligand macrocilic, enzim anticorp etc) care se leag cu o molecul int specific dintr-o
prob de studiat, analitul, A. Transmiterea semnalului este realizat prin cuplarea cu un
traductor, T care interfaeaz procesele din senzor cu unitatea de pre- lucrare transformare
ntr-un semnal msurabil. Detaliu de funcionare i construcie pentru chemosenzor
/biosenzor este prezentat n figura 2.3. Conceptul descris n figura 2.3 arat c biosenzorii
sunt o clas, astzi extrem de vast cu particulariti specifice. Astfel putem s adncim
definiia de biosenzor spre particualaritile lui.
Biosenzor-dispozitiv sensibil la un stimul fizic sau chimic (cum ar fi cldura sau
aciditatea, metabolismul) care transmite informaii despre procesele vitale. Biosenzorii se 8




ocup cu detectarea semnalelor fiziologice i transformarea lor n semnale tehnice
standardizate, de cele mai multe ori electrice, pentru a fi cuantificate din analog n digital.











Figura 2.3 n chemosenzor, procesul chimic selectiv ce apare n sau
pe filmul
/membrana chemosenzitiv este cuplat cu traductorul de semnal .
Exemple
de mecanisme comune implicate includ legarea host-guest (reactant-
substrat reactiv), reacii catalitice sau redox. n senzorul biologic un
proces biologic selectiv este direct legat de membran care este cuplat
la tra- ductor pentru generarea semnalului
Analiza de semnale n medicin i biologie vizeaz prelucrarea semnalelor nregi- strate
prin msurtori n scopul extragerii maximului de informaie util n diagnosticare i
monitorizare. Pe baza acestei descrieri generale se observ c senzorii n particular bio-
senzorii pot fi clasificai dup natura traductorului sau a semnalului procesat, figura 2.4.
Figurile 2.1, 2.2, 2.3, 2.4 arat c un senzor este un instrument de msurare a mri-
milor fiziologice transformndu-le n semnale msurabile.
Acest aspect a parcurs n ultimii ani drumul de la simpli traductori i aparate de msur la
sisteme complexe care integreaz att electronica analogic, ct i digital.



















igura 2.4- Clasificarea senzorilor dup natura proceselor msurate de traductor


9





Stadiul actual de dezvoltare este cel din figura 2.1 unde totul este integrat i digitizat.
Operaiile care n mod tradiional se efectuau analogic (filtrare, sumare, scdere,
difereniere, integrare) tind s se fac n msur tot mai mare prin algoritmi de calcul im-
plementai n unitatea de achiziie i procesare de date devenind sisteme moderne de
msurare i transmitere a mrimilor fiziologice.
Efectul acestei tendine de miniaturizare i digitizare a aparaturii simultan cu cre- tearea
performanelor a condus la implementarea de funciuni mai complexe care la nivelul
analogic ar necesita un numr mare de componente liniare discrete (rezistori, con- densatori,
tranzistori, diode, amplificatoare operaionale).
Biosenzorii au o istorie recent. n a doua jumtate a secolului XX biosenzorii erau
considerai ca o ramur derivat a chemosenzorilor. Dezvoltarea ca tiin transdisciplina- r
s-a datorat succeselor curente ale biosenzorului de msurare a glucozei pentru diabetici o
metod convenabil, igienic, compact de automonitorizare. Cu acest eveniment bio-
senzorii au artat un potenial enorm de a detecta o varietate larg de analii n medicin,
industria alimentar, monitorizarea mediului, aprare, securitate. n tabela 2.1 sunt su-
marizate interferenele aplicaiilor chemosenzorilor -biosenzorilor n decursul evoluiei lor.
Aa cum este prezentat n tabela 2.1, exist multe domenii cu aplicaii importante pentru
senzorii chimici i biologici, de la monitorizare continu a proceselor chimice din industrie,
sesizarea monoxidului de carbon n case, din mediu ambiant la medicina curent, terapie
intensiv, telemedicin


Tabela 2.1: Aplicaii de uz comun ale chemo i biosenzorilor
Aplicaii Exemple
Automobile Sistemul de control al alimentrii cu combustibil,
monitorizarea emissilor de gaze i noxe
Aprare Aplicaii militare, contramsuri n armele biologice i
chimice
Industria aeronautic Sisteme de monitorizare a calitii aerului n carlinga
avionului,
Agricultur Detecia pH, ierbicide, pesticide
Industria Chimic Sisteme de monitorizare a emissilor de gaze toxice, testare
materiale
Securitate civil Detcia gazelor
Mediu, Protecia
mediului
Detecia poluanilor din aer, api sol, BOD, controlul
detergenilor
Medicin Diagnostice clinice in vivo sau in vitro, determinarea
concentraiei de gaze anestezice, telemedicin, terapie
intensiv
Control Vamal Detecia substanelor ilegale, periculoase, droguri,
explozivi, substane radioactive
Alimente, Buturi Determinarea compoziiei chimice, mirosuri, nivelul de
degradare, odorante, controlul fermentaiei, etc






1
0





2.2 Biosenzorii i nanotehologiile
Dezvoltarea impetuoas a biosenzorilor ca`o consecin a cerinelor din medicin, protecia
mediului, securitate alimentar a impulsionat tehnologiile actuale spre limite i performane
nebnuite. Noiunea de senzor, respectiv biosenzor, a evoluat pe msura creterii cerinelor
de diagnostic noninvaziv, de investigri i analize fr reactivi supli- mentari, de a fi utilizai
de nespecialiti, de a lucra on-line (regim continu de monitori- zare) sau de a fi de unic
folosin. Datorit evoluiilor actuale spre nanotehnologii bio-
senzorul i perfecioneaz definiia. Actual prin biosenzor se nelege ncorporarea sau
integrarea unui element biologic cu un traductor fizic i cu instrumentele i electronica
aferent. Se ateapt ca n urmtorii anii s includem n definiie termeni ca interfee hi-
bride alctuite din biocomponente i procesoare moleculare
n mileniul III biosenzorul nu mai poate fi disociat de tehnologiile avansate din
optoelectronic, tehnologia siliciului, procesarea de date, electronic molecular, tehno-
logia IT&C. Aa cum se va prezenta n urmtorul capitol clasele de biosenzori se extind i
se perfecioneaz odat cu noile avansri n nanotehnologie cu un impact asupra bio-
tehnologiei i medicinei, ecotehnologiilor care acum o decad era de neimaginat.
Domenii specifice ale biologiei i medicinei unde nanotehnologia se
implementea-
z cu o puternic vigurozitate a generat noi direcii astzi cunoscute sub denumiri de na-
nomedicin, nanobiotehnologie termeni deja consacrai (subdomeniul biosenzori deja este
privit ca interdisciplinar dintre nanobiotehnologie i nanomedicin).
Nanotehnologia i biosenzorii s-au impulsionat reciproc n dezvoltare. n etapele iniiale s-
au interferat reciproc prin implementarea unor algoritmi numerici mai puternici i mai
compleci (software) ce s-au realizat n cadrul structurii fizice de calcul numeric, (hardware)
existente. La acestea au concurat progresele tehnologice n termeni de redu- cere a
volumului fizic al componentelor discrete iar ulterior a circuitelor integrate digitale care au
continuat cu o integrare i ultraminiaturizare pn la nivelul de 1nm. n paralel dezvoltarea
n timp a medicinii a urmat, n mare, evoluia ncercrilor omului de a se cu- noate mai
bine, de a mpinge tot mai departe cunotinele n ceea ce privete mediul n care se
dezvolt.
Treptat, tehnologii avansate i nanotehnologii din ce n ce mai sofisticate au p- truns tot
mai mult n cercetarea medical i a mediului nconjurtor, realiznd o investi- gare tot mai
amnunit, mai riguroas, a fenomenelor vieii, a bolilor, a mediului. Secolul 21 aduce
disciplinele din tiinele naturii, anterior considerate independen- te, ntr-un context de
interdisciplinaritate nebnuit odat cu dezvoltarea acestui nou con- cept: nanotehnologia.
Nanotehnologia reprezint tiinele la scal nanometric, manipularea materiei na- nometrice
n realizarea de noi structuri i ansamble moleculare. Un nanometru reprezint a miliarda
parte dintr-un metru, aproximativ 1/80000 din diametrul firului de pr sau de 10 ori
diametrul atomului de hidrogen.


O definiie: Nanotehnologia este tehnologia bazat pe arta manipulrii atomilor individuali
i a moleculelor pentru a construi structuri cu proprieti dirijate.

1
1






Nanotehnologia reprezint abilitatea de a construi obiecte prin asamblarea de atomi la un
moment de timp n secvene bine precizate. n prezent cu instrumentele puse la dispoziie
de nanotehnologie, inginerie genetic, proteomic construim obiecte de jos n sus=bottom-
up adic ansamblm atomi i molecule n structuri.













Figura2.5- Dispunerea organizrii materiei pe scal nanometric-micrometric
Pentru a realiza aceasta este necesar de alte tipuri de instrumente i dispozitive de dimensiuni
nanometrice. Pentru a realiza obiecte macroscopice avem nevoie de miliarde
de aceste mici dispozitive (ansambleri).
A reproduce aceste tipuri de instrumente avem nevoie de o metod de a se
autore-
produce sau de instrumente de replicare ( replicatori). Noile instrumente nanometrice ne-
cesit a fi programabile pentru a realiza un anumit tip de operaie. n figura 2.5 sunt pre-
zentate diferite nivele de organizare ale materiei. la scal nanometric i micrometric.
Se constat imediat c instrumentele nanotehnologiei au dimensiuni sub acelea ale
virusurilor. Obsevm uor din figura 2.6 cum noile instrumente ale nanotehnologiei pot
manipula atomi i molecule la scal nanometric.
Iat c n acest context traductorii, componente eseniale ntr-o structur senzorial, capt
semnificaii cu totul deosebite datorit miniaturizrii i integrrii pe scar larg n circuitele
integrate devenind ele nsi cipuri cu o puternic interfaare a proceselor de reacie analit-
receptor.
Cnd receptorul conine componente biologice parial sau total integrate pe tra- ductor atunci
orice tip de senzor capt definiia de BIOSENZOR- ca un atribut generic. n acest context
i noiunea de biosenzor evolueaz mai ales privit ca domeniu de aplicaie. n ultima decad
termenul de biosenzor a fost n variate moduri aplicat la un numr de dispozitive fie pentru
monitorizarea sistemelor vii sau pentru acelea care au ncorporate elemente biotice. Recent
comitetul IUPAC [1] a ncercat o lmurire a defi- niiei termenului de biosenzor printr-o
sistematizare a literaturii de specialitate care n de- cursul timpului a fost utilizat pentru a
descrie termometre, spectrometre de mas, dispo-
zitivele de determinare a daphniei n ecosistemul apelor, echipamente
electrofiziologice,
identificri de elemente chimice prin electrozi ionselectivi.
1
2























Figura 2.6 - Manipulatoare al materiei de la scal micro (a) -implantri din
ingineria
genetic- la nanoscal (b) unde prin AFM ( microscopia de fore atomice) se
pot poziiona i asambla atomi sau molecule (mecanosinteza) sau lucra cu
fluide i transport de elemente bio( micro/nanofluidic) (c)
Prin consens s-a stabilit c termenul trebuie s fie rezervat pentru utilizarea n con- text
modern ca un senzor ce ncorporeaz elemente biologice cum ar fi, enzime, anticorpi, acizi
nucleici, microorganisme sau celule. IUPAC sugereaz ca acest termen s fie pe deplin
folosit n acest context. O dat cu dezvoltrile din nanotehnologie care au adus o extrem de
larg interdisciplinaritate iar materialele sunt n prezent manipulate la scal nanometric
noiunea de biosenzor capt o definiie mai larg:


Biosenzorul va fi definit ca un dispozitiv analitic compact ncorpornd un element
senzorial biologic sau derivat biologic integrat intim cu un traductor fizico-chimic. Scopul
biosenzorului este de a produce un semnal electronic analogic sau digital care este
proporional cu concentraia unui analit singular sau a unui grup de analii [2].


Actual, biosenzorii sunt utilizai n foarte multe domenii cum ar fi medicin,
indus-
tria chimic, alimentar, farmaceutic, tehnic militar i de aceea este necesar cunoa-
terea principiilor de construcie i funcionarea lor. Domeniul n care aceste dispozitive i-
au gsit o larg utilizare fiind cel medical se impune cunoaterea mecanismelor de reacie i
a afinitii enzimelor i microorganismelor pentru diferite substraturi de interes. Cercetrile
actuale au ca scop miniaturizarea de a crea arii de senzori, structuri in- tegrate, laboratoare de
analiz pe un singur cip, creterea sensibilitii i a timpului de via, scderea timpului de
rspuns, lrgirea plajei de utilizare i scderea costurilor de fa- bricaie a acestor dispozitive.




1
3





2.3 Biosenzori, biodiagnostic, nanobiotehnologie, nanomedicin
Astzi vorbim despre platforme de diagnostic, imagistic molecular i diagnostic molecular,
caracterizarea proceselor i structurilor biologice. Toate acestea au la baz fundametarea i
dezvoltarea biosenzorilor. Fr ei nu am putea astzi s dezvoltm do- menii ca: sisteme de
detecie i identificare, recunoatere molecular, nanoparticule fun- cionalizate cu sisteme
biologice, arii de senzori cu nalt sensibilitate i rspuns rapid, imagistic cu microscopia
de baleiaj prin fore atomice- SPM (scanning probe micro- scopy) a structurilor biologice,
detecia intracelular a biomoleculelor, ingineria nanobio- interfeelor.
Dup cum se observ ne apropiem de punctul unde detecia unei singure molecule,
determinarea in vivo cu precizie a proprietilor biologice i a interaciunilor specifice va fi
posibil. Atingerea acestui el va permite cercettorilor, medicilor, tehnicienilor de:
A obine o detecie sigur a biomoleculelor n volume de probe
minimale,
evaluarea i diagnoza rapid din materiale neprocesate, direct
prelevate- de exemplu diagnoza rapid a bolii sau detecia
incipient a contaminrii biolo- gice.
A studia ciclul de via n timp real a organismelor la nivel molecular,
de ex-
emplu pentru determinarea interaciei intracelulare a proteinelor
virale cu ce- lulele lor int conducnd astfel la o mai bun
nelegere a bolilor asociate.
Investigarea dinamicii proteomice i astfel diferenierea cilor i a rs-
punsului celular la schimbrile din mediul ambiant.
Astzi discutm i elaborm concepte despre:
Platforme de diagnostic : arii de biosenzori incluznd acelea de a
utiliza na-
noparticule imobilizate i metode de identificare rapid cu
cantiti minimale de probe de material.
Diagnostic imagistic la nivel molecular: utilizarea
nanoparticulelor ca solu-
ie alternativ de diagnostic n timp real a analizei intracelulare,
imagistic medical cu nanoparticule. (Un capitol special n
lucrare va fi acordat pun- ctelor cuantice fluorescente ca elemente
de identificare i analiz)
Caracterizarea structurilor i a proceselor biologice: utilizarea de
instru-
mente cum ar fi SPM- cu sond nanometric pentru investigarea
in situ a in- teraciilor biomoleculare i de aici mbuntirea,
perfecionarea nelegerii dinamicii celulare i a ciclurilor de
via.
Senzori: detecia n timp real de biomolecule sau organisme cu aplicaii
pen-
tru dispozitive de diagnostic fie la distan fie n sistem
ambulatoriu
2.3.1 Biocipurile i tehnologiile actuale ale secolului XXI
Ce este un Biocip?
Un biocip este un dispozitiv ce conine o structur de elemente senzoriale
indivi-
duale (biosenzori) interconectate dup funcii i specificiti de recunoatere, integrate pe 14




un cip. Numrul de biosenzori pe un cip poate fi de ordinul 106 uniti. n acest grad de
integrare se pot realiza un imens set de teste distincte extrem de rapid i eficient. Biocipurile
sunt adesea construite pe acelai principii ale microtehnologiei ca i microcipurile. n
contrast cu microcipurile, biocipurile nu sunt n general structuri elec- tronice ( dei ele pot
conine diferite structuri electronice cuplate la elementele biosen- zoriale). Premiza cheie a
biocipurilor este aceea c ele pot realiza reacii chimice/ bio- chimice la micro i nanoscal.
Fiecare biosenzor poate fi gndit ca un microreactor care realizeaz a reacie chimic
specific cu un analit. Biosenzorii din biocip pot fi realizai pentru a detecta o larg varietate
de analii incluznd ADN, anticorpi, proteine, biomo- lecule.
Biocipurile n contextul micro i nanotehnologiilor
Biocipurile n general sunt arii 2D de senzori plasai ntr-o reea specific cu coordonate
bine precizate. De exemplu (figura 2.7) un senzor la coordonatele x-y de
valoare (4,5) poate senza anticorpul pentru HIV, n timp ce senzorul la coordonatele
(7,3)
poate detecta anticorpul pentru virusul Influenza. Pentru a aranja senzorii n coordonate
precise sunt abordate tehnici sofisticate de microdepunere de construire a unui lan sau o
matrice de senzori. Tehnica microdepunerii este costisitoare i de randament sczut.
O alt tehnic recent angajeaz tehnica indexrii dup funcia ce o ndeplinete i forma
microbiosenzorului. Astfel senzorii pot fi plasai oriunde pe cip iar softurile de re- cunoatere
de imagini pot fi utilizate pentru a citi biocipul. Dispunerea i formarea bio- senzorilor pe cip
este realizat prin microlitografie sau tehnologia ink-printing sau de contact-printing.
Avantajele sunt multiple: 1. senzorii pot fi produi n loturi sau secvene care pot fi
asamblai n paralel sau serial furniznd un randament nalt de fabricaie. 2.Senzorii pot fi
asamblai pe arii foarte mici, cu distane reduse ntre ei. 3. Pot fi generate structuri 3D
furniznd semnale mari fa de structurile 2D . 4. Poate fi ncorporat orice tip de reacie
biochimic 5. Senzorii pot fi produi separat i asamblai ulterior dup spe- cificitate i
natura aplicaiei. Iat un concept avansat de platform de diagnostic tip biochip (figura
2.7) pentru a detecta o clas de virusuri.
2.3.2 Biocipuri, nanobiotehnologia, nanomedicina
Implementarea cuceririlor din biologie chimia supramolecular i biochimie pe suportul
nanotehnologiei i a instrumentelor de investigare la scal nanometric dezvol- tate n fizic
a generat noul domeniu, acela al nanobiotehnologiei, unde biosenzorii i bio- cipurile ocup
un loc preferenial. Inferarea lor n medicin a generat noul domeniu: nanomedicina
domeniul unde tehnicile non invazive i autoreparatorii sunt elementele eseniale ale
viitorului medicinei. Curnd vom asista la sisteme i nanoroboi care vor lua locul chirurgiei
i tratamentelor invazive: transportul dirijat al medicamentelor la int, nanoboi injectabili
cu informaii precise ce vor repara organe, generarea intern de celule de biocombustie
pentru ntreinerea activitii inimii sau a sistemelor pulmonare, neuro- nale, reglarea
glucozei din snge de ctre celulele de biocombustie miniaturizate etc.




1
5





















Figura 2.7 - Arii de senzori interconectai prin nanofire (NW)
ce pot detecta natura
virusului care trece prin structura de microcanale dintr-un fluid biologic
colectat. Fiecare arie de senzori detecteaz forma, dimensiunea tipul de toxin,
activitatea specific, prelund un semnal de prezen (S) i un semnal de
detecie specific
Cteva din perspective sunt sumarizate, ncepnd de la faimoasa publicaie a lui Feynman:
(Richard Feynman Plenary Lecture on Nanotechnology, 1963):
Electronica la scal molecular- manipularea electronilor pe structuri
ADN
i proteine, asamblarea lor n structuri cu proprieti electronice
Nanobioelectronica pentru biosenzori
Celule de biocombustie- sursa intern de energie ce consum glucoza
sau
alte polizaharide din snge genernd energie elec-tric pentru
biostimulatoare sau pentru reglarea dozelor din bolile de diabet.
Ele sunt surse de convertire a deeurilor i biomasei n materiale
rgenerabile ( agricultur, pesticide, etc). Celulele de biocombustie
sunt componentele de baz n designul bio- senzorilor
microbieni.
Circuite bioelectronice
Arhitecturi supramoleculare la interfaa electrod-electrolit, pentru
aplicaii
n biosenzori
Detecia electrochimic a acidului 2,4 diclorofenoxiacetic sau a altor
toxine,
mirosuri, odorizante etc. ( nasuri electronice)
Nanostructuri polimere,1D-2D-3D, elemete suport n biosenzori,
protezare
medical
Microarii ca pori de legtur cu sistemele biologice. Interfeele
neuronale
artificiale
Dispozitive de calcul nanometrice formate din biomolecule cuplate cu
inter-
fee clasice i biologice
Optica nanometric n biosenzori i biotehnologie
Materiale nanocompozite, nanostructurate
1
6





Biocipuri, componente n alte tipuri de arhitecturi
Asamblarea de peptide la interfee
Dinamica i fluctuaiile ADN-ului
Imprimare molecular
Investigarea sistemelor de polimerizare electrochimic n procese sol-
gel.
Modificarea electrozilor prin funcionalizarea xerogelurilor
anorganice
Biosenzori impedimetrici pe structuri de proteine i celule
Polimeri inteligeni: aplicaii la elaborarea de dispozitive bioanalitice
Investigri n timp real cu biosenzori n timpul operaiilor chi-rurgicale
Investigarea mediilor moleculare prin optica neliniar, lumi-niscen,
etc
Alte domenii transdisciplinare generate de biosenzori i nanotehnologii
Microarii, biocipuri, sisteme microbioanalitice
Neuroprocesoare- senzarea i procesarea In-Vivo i In-Vitro a
semnalelor ne-
uronale
Transportul electric prin ADN,
Cip genetic
Msurarea amperometric a exocitozei veziculare din
neurotransmitori:
descifrarea semnificaiei biologice i fizico-chimice
Nanobiotechnologie i NanoBiosisteme
Nanoimprintarea biomoleculelor i a biosuprafeelor cu microscopia de
fore
atomice
Studiul relaxrilor n ADN cu pensetele optice (optical tweezers)
Recunoaterea de mono/oligonucleotide pe monostraturi de filme
polimere.
Dinamica biopolimerilor, starea dinamic a motilitii pe baz de actin
Reglarea proteinelor motor, microtubule
Nanobiotehnologie i Biosenzori
Monitorizarea noninvaziv a glucozei prin biocipuri ce controleaz
ultrasonic pielea permeat
Arii de microace, cip-microfluidic pentru integrarea unei celule n
sistem
Senzori colorimetrici pentru analiza bacterial
Senzori bacterieni pentru detecia metalelor grele
Efectul biorecunoaterii (bioafinitatea) i implicaiile asupra vieii
cotidiene.
Monitorizarea genotoxicitii n timpul degradrii fotocatalitice a
paranitrofenolului.
Monitorizarea electrochimic a bacteriilor biotinilate denitri-ficatoare
Celule-biocip pentru detecia toxicitii
Iat numai cteva din domeniile unde biosenzorii au impulsionat cercetrile cu
rea-
lizri notabile. Biosenzorii au propulsat domenii de grani i au creat noi domenii i
tiine: chimia supramolecular; tehnici de autoasamblare; concepia de noi receptori sin- 17




tetici utiliznd metode combinatoriale; imprintri moleculare (molecular imprinting);
nanosisteme; ingineria proteinelor, acizilor nucleici i a zaharidelor ca receptori i siste- me
catalitice; ingineria biomoleculelor capabile de a avea funciuni suplimentare cum ar fi
transducia semnalelor (fire moleculare) sau transmiteri mecanice (motoare moleculare, brae
moleculare; senzori cu acizi nucleici, cipuri cu ADN; imunosenzori, senzori pe structuri
enzimatice; receptori naturali i sintetici; proteomica i analiza individual a ce- lulei;
bioelectronica, celule de biocombustie, sisteme nanoanalitice
Dei aceste cuceriri ale tiinelor de grani apreau ca lucruri de neimaginat acum 20 ani
totui avem cteva elemente cheie de control care indiferent de scala de lucru sunt de o
importan perpetu: selectivitatea, sensibilitatea, stabilitatea n proiectarea de siste- me
senzoriale integrate cu structuri i aranjamente de elemente senzitive.
Observm c indiferent ce concept se abordeaz n construcia i realizarea de bio- senzori
ne confruntm cu urmatoarele probleme:
Sterilizarea direct a biosenzorilor este imposibil;
Pentru calibrarea biosenzorilor sunt necesare msuratori discrete;
n majoritatea cazurilor, concentraiile compuilor depesc domeniile
de
rspuns liniar ale biosenzorilor;
Stabilitatea biosenzorilor este afectat de stresul mecanic i termic;
Sensibilitatea i reproductibilitatea: parametrii ce asigur bu-na
funcionare a
biosenzorilor, gradul de noninvazivitate.
Merit n acest context s sumarizm o scurt retrospectiv a dezvoltrii istorice a
biosenzorilor pentru a realiza conexiunea dintre fenomene fundamentale i tendinele ac-
tuale.
2.3.3 Scurt istoric
1986: ROYAL SOCIETY, Londra, s-au definit biosenzorii ca fiind dispozitive bazate pe cuplajul
spaial direct al unui compus biologic activ imobilizat cu un traductor i un
amplificator electronic.
as a compact analytical device incorporating a biological or biologically-derived sensing
element either integrated within or intimately associated with a physicochemical transducer. The
usual aim of a biosensor is to produce either discree or continuous digital electronic signals
which are proportional to a single analyte or a related
group of analytes .[2]
Succesul biosenzorului pentru determinarea de glucoz, a constituit placa turnant a
exploziei biosenzorilor. El s-a dezvoltat datorit cerinelor extraordinare a bolnavilor de
diabet i a abilitii biosenzorilor de a oferi o metod convenabil, igienic i compact de
moni-torizare personal. Biosenzorii ofer un mare potenial de a detecta o larg varietate de
analii n medicina curent specifice laboratorelor clinice sau tratamentelor n regim
ambulator; n industria alimentar, n monitorizarea factorilor poluani din mediu.


1950 -1960 Electrodul Clark
O problem deosebit de important in chimia analitic o constituia selecia i
n
particular, cea fcut la concentraii sczute i n prezena substanelor care interfereaz. 18




Determinarea sensibil i selectiv a unui mare numr de compui era i este n continuare
foarte util pentru cercetrile tiintifice, ca i pentru unele ramuri industriale (chimic i
alimentar). n domeniul snatii devenea indispensabil gsirea de metode pentru
diagnosticarea unor boli iar senzorii cu o fin selectivitate i uor de manevrat devenise o
problem cheie n perfecionarea analizelor de laborator. n aceast perioad o serie de
senzori pe structuri solide erau folosii la determinarea parametrilor fizici cum ar fi
temperatura, presiunea, energia sunetului dar analizele calitative i cantitative fcute asupra
compoziiei chimice rmneau dificile. Cele mai cunoscute n aceast etap erau pH-metrele
care sunt puin aplicabile msurtorilor unor substane fiziologice importante cum ar fi:
ureea, colesterolul. Ele au devenit utile n primele investigri n cazul macro- moleculelor
cum sunt: enzimele, anticorpii, sau microorganismele. Fiinele vii ns sunt capabile s se
adapteze la schimbrile propriului lor metabolism i la mediul inconjurator cu ajutorul aa
numiilor receptori care sunt alctuite din structuri proteice complexe i sunt, n mare parte,
legate de membranele celulare. Ele posed o mare afinitate pentru factorii specifici, cum ar
fi: hormoni, enzime sau anticorpii. Legtura dintre aceti factori determin activarea unor
cascade de enzime, care provoac schimbri n proteina receptoare i o amplificare a
semnalului. Aceste considerente erau oarecum bine statuate n aceast perioad dar pn n
1956 nu s-a realizat nici un progres semnificativ de a gsi o metod de msurare.
n 1956, pentru a simplifica msuratorile de glucoz s-a adoptat principiul hrtiei folosit la
determinarile de pH, [3]. Impregnnd o hrtie de filtru cu enzime de glucoz, Free a obinut
primul test-fie de enzime, care poate fi privit ca un predecesor al bio- senzorilor
optoelectronici.
n aceast perioad se ridica necesitatea de determinare a coninutului de oxigen din snge,
respectiv a glucozei. Leland C. Clark Jr., a inventat un electrod destinat a fi folosit pentru
msurarea oxigenului dizolvat n sngele bolnavilor operai. Acesta este format dintr-un
electrod de platin i un electrod cu o membran de plastic permeabil la gaze. Polaritatea
electrodului a fost astfel stabilit nct intensitatea curentului prin circuit s depind de
viteza de difuzie a oxigenului prin membran, vitez ce este direct propor- ional cu
concentraia extern a oxigenului. O dat cu electrodul Clark, considerat primul
biosenzor, ncepe i clarificarea scopului i definiiei conceptului de biosenzor ce continu
a fost modificat i reactualizat. Profesorul Leland C Clark Jr este considerat printele
domeniului biosenzori. n 1956, Clark public articolul su despre electrodul de oxigen
(discutat pe larg n [3]). Clark prin acumularea unei bogate experiene lanseaz n 1962 prin
conferina susinut la Academia de tiine din New York o viziune general asupra
conceptului de biosenzor i direciile de dezvoltare: "to make electrochemical
sensors
(pH, pola-rographic, potentiometric or conductometric) more intelligent" by adding
"enzyme tran-sducers as membrane enclosed sandwiches".[4]
1962 Electrodul enzimatic
Clark extinde folosirea acestui "electrod de msurare a oxigenului" la
determinarea
nivelului de glucoz in snge. El a mbrcat senzorul pentru oxigen cu un strat subire 19




de gel ce contine un biocatalizator, enzima glucozoxidaza, urmat de o membran
semi- permeabil de dializ ce permite glucozei s difuzeze n senzor, dar oprete enzima s
difuzeze. Cu ct intr mai mult glucoz, cu att mai mult oxigen este consumat de enzi- m.
Deci, o cantitate mic de oxigen existent se traduce prin existena unui nivel ridicat de
glucoz. Clark i Lyons [4] introduc termenul de electrod enzimatic, adeseori greit atribuit
de muli autori de recenzii ca fiind introdus de Updike i Hicks [5] care au avut meritul de a
descrie experimental detaliile necesare de a construi un electrod cu enzim pentru glucoz.
Prima descriere a unui biosenzor a fost realizat de Clark i Lyons n anul
unde era prezentat de fapt un electrod de platina cu enzima oxidoreductaza, intr-o
construcie de sandwich. Anodul de platin polarizat la +0,6V, rspunde la peroxidul produs
de enzim n reacie cu substratul. Acest tip de biosenzor deschide calea pentru msurarea
glucozei din snge.
1969 Senzori enzimatici, traductori poteniometrici
Guilbault i Montalvo [6] descriu un electrod-enzim poteniometric. Autorii des- criu un
senzor de uree folosind ureaza imobilizat pe un electrod-membran, selectiv la amoniac.
G.Guilbault a in-ventat un sistem de masur pentru uree n fluidele corpului uman.
Dispozitivul lui folosete enzima ureaza ce transform urea n bioxid de carbon i amoniac.
Electrodul sesizeaz schimbrile concentra-iei ionilor de amoniu. Acest dispozitiv a
constituit o mbuntire pentru c se bazeaz pe o detecie poteniometric (senzor
poteniometric). n timp ce senzorii de tip Clark msoar trecerea curentului prin electrod
(senzor amperometric), senzorul poteniometric msoar tensiunea cerut pentru meninerea
curentului la zero. Electrodul nu consum nici un fel de reactani de aceea este mai puin
susceptibil la erori cauzate de schimbrile survenite n mediul extern. n plus, sistemul
poteniometric are o curb logaritmic de rspuns astfel nct poate urmri o concentraie de
peste 100 de ori mai mare n raport cu alte tipuri. Ulterior au fost folosite n construcia de
biosenzori peste 100 de enzime. Cercettorii n domeniu au realizat c
nu numai enzimele singulare se pot folosi, ci i esuturi ce reacioneaz la aminoacizi i
la alte bio-molecule. De exemplu, folosirea pulpei de banan pentru msurarea dopaminei,
miezul de porumb pentru piruvat, frunza de castravete pentru cistein, sfecla de zahr pentru
tirozina, ficatul de iepure pentru guanina i pudra de muschi de iepure
pentru monofosfat de adenozina. Rechnitz [7, 8] a mers i mai departe n folosirea unor

pri din sisteme biologice; unul din senzorii si conine o antenul, un mic organ de sim, de
la un crab albastru, supus diseciei pentru a folosi fibrele nervoase conectate la un electrod.
Acest dispozitiv poate msura concen-traia unor droguri, precum i a toxinelor din mediu.
1970 Miniaturizarea electrozilor.
La nceputul anilor 70 au fost perfecionai primii senzori enzimatici, cu indicaii
calorimetrice iar ulterior s-au folosit indicatori optici [2]. Noile descoperiri din bio-
tehnologie au perfecionat biosenzorii. n 1970, s-au construit multielectrozi
miniatu-
rizai pe un cip de siliciu [2, 8] ce poate realiza msurtori pe esuturi neuronale. Toate 20




cercetrile n acest sens au condus la adoptarea unei tehnici generale de combinare a
componentelor chimice cu circuitele integrate intr-un singur sistem. Unii cercettori au
miniaturizat biosenzorii electronici, alii au dezvoltat un ntreg sistem bazat pe sensibi- litate
optic - n 1969, G.Vurek si R.Bowman [9] au demonstrat primii senzori pe fibre optice
folosit la analize clinice.1970- Yellow Springs Instrument Co. (Yellow Springs, OH)
comercializeaz primul senzor pentru monitorizarea glucozei
1974 Traductorii termici . Termometrele n variate forme, termorezistenele i ter-
mistorii au fost propui ca biosenzori prin imobilizarea de enzime pe suportul traductor i
msurarea efectului termic datorit efectelor termice induse de reacia enzimatic.
Biosenzorii cu traductori termici propui n 1974 au devenit termeni uzuali astzi
ca sonde termice enzimatice [10] sau termistori enzimatici [11].
1975 Bioanalizoare de glucoz, senzori microbieni, optici
In anul 1975, DIVIES [12] a folosit o bacterie ntr-un senzor de alcool n timp ce
GUILBAULT a construit n 1976, un NADH-senzor folosind o mitocondrie. Aplicarea
modelelor enzimatice de mare stabilitate n biosenzori a oferit o nou alternativ enzi-
melor. n 1975 JANATA (citat n [7]) a realizat un imunoelectrod. Ideile lui Clark devin
realitate n 1975 prin lansarea de succes de compania Yellow Springs Instrument Company
(Ohio) a analizorului de glucoz pe principiul deteciei amperometrice a
peroxidului de hidrogen. Este perioada lansrii, n lume, a primului analizor de laborator.
Biosenzori microbieni . n 1975 biosenzorii iau o nou rut evoluionar
cnd
Divies [12] sugereaz c bacteriile pot fi utilizate ca element biologic ntr-un electrod
microbian pentru msurarea concentraiei de alcool. Articolul marcheaz nceputurile
eforturilor de cercetare din Japonia i ulterior n toate rile a aplicaiilor biosenzorilor n
protecia mediului i biotehnologie.
Optode. Lubbers i Opitz [13] introduc termenul de optod n 1975 pentru a
des-
crie senzorul cu fibroptic ce are imobilizat un indicator pentru msurarea bioxidului de
carbon i a oxigenului. Autorii extind conceptul dezvoltnd un biosenzor optic pentru alcool
prin imobilizarea alcooloxidazei la o terminaie a senzorului cu fibr optic pentru oxigen
[14]. Optodele comerciale au n prezent performane excelente pentru msurarea

in vivo de pH, pCO
si pO2, insa optodele enzimatice inca sunt sub lupa cercetarii fara a

primi o larg audien comercial.
1976 Implementri noninvazive, mediatori pentru transferul de electroni
n 1976, Clemens i colab.[15] ncorporeaz un biosenzor electrochimic de
glucoz
la un pancreas artificial marcnd implementarea comercial de ctre compania Miles
(Elkhart) a Biostatorului. Biostatorul nu a fost comercializat pe scar larg el fiind nlo- cuit
de un analizor de glucoz cu cateter continu - VIA Medical (San Diego). n acelai an La
Roche (Elveia) introduce Lactate Analyser LA 640 n care mediatorul solubil hexa-
cianoferatul este utilizat pentru transferul mediat de electroni de la lactat dehidrogenaza
spre electrod. Cu toate c nu a cptat un uz comercial s-a deschis generaia biosenzorilor 21




cu mediatori n transferul de electroni cu aplicaii n analizorii de lactate pentru domeniul
sportiv i aplicaii chimice. Un important avans pentru aplicaii in vivo a senzorului de
glucoz a fost raportat de Shichiri i colabl. [16] ce descrie un electrod
enzim tip ac
pentru implantri subcutanate, 1982, un succes tiinific ns fr o valorificare comercial.
2000-2007
Imunosenzori, efectul SPR.
Ideia construirii de imunosenzori cu fixare direct de anticorpi pe un traductor piezoelectric
sau poteniometric a fost explorat din anii 70. ns pavarea drumului spre
un succes comercial este realizat de Liedberg et al. [17] descriind aplicarea
fenomenului
de rezonan a plasmonilor (SPR) pentru a monitoriza afinitatea reaciilor n timp real.
MediSense (Cambridge, MA) introduce primul biosenzor pentru moni- torizarea glucozei
n regim ambulatoriu. BIAcore ( Pharmacia, Suedia), lansat n 1990 utilizeaz tehnologia
SPR
Ferocenii ca mediatori n electrozii enzim, aplicaii n ambulatoriu, microminiatu-
rizarea
n 1984, una din cele mai citate publicaii [18] anun un electrod enzim cu utilizarea
ferocenilor i a derivailor si ca un mediator de imobilizare pentru oxido- reductaz. Acest
principiu st la baza electrozilor enzim lansat de MediSense (Cambridge, USA) n 1987 ca
un instrument de msur n form de creion pentru moni- torizarea glucozei din snge a
pacienilor n regim ambulatoriu. ntreaga sa electronic a fost proiectat pe modelul de
credit card n formatul unui mouse-computer. MediSense a atins o cretere exponenial
n vnzri (US$175 milioane) fiind ulterior adsorbit de Abbott. Companiile Boehringer,
Mannheim i Bayer au n prezent biosenzori cu media- tori deinnd 85% din totalul pieei
internaionale. Interesant c cele trei companii dez- volt tehnologii pe baza fotometriei de
reflexie convenionale pentru diagnosticul ambu- latoriu. Jurnalele academice conin
descrieri de largi varieti de dispozitive exploatnd enzime, acizi nucleici, celule receptor,
anticorpi, celule n combinaie cu traductori electrochimici, optici, piezoelectrici i termici
[19]. n cadrul oricrei permutri n teh- nicile traductorilor alte mirade de posibiliti apar
n concepte de proiectare ale senzorilor rezolvnd diverse probleme din medicin [20],
alimente i buturi [21], procese indus- triale [22], monitorizarea mediului [23], aprare i
securitate (detecia drogurilor, explo- zivilor). Biosenzorii au nceput s fie folosii cu succes
i n alte domenii dect cele medicale de exemplu msurarea necesarului de oxigen
biochimic, ce reprezint un indiciu al prezenei materiilor organice din apa uzat.
Biosenzorul bazat pe drojdie, realizeaz o citire a rezultatelor n 30 minute fa
de
zile pentru a obtine rezultatele prin metode conventionale. Biosenzorii sunt folositi si pentru
a determina calitatea hranei i prospeimea ei. Cu mare succes sunt folosii n pro- cesele
industriale, pentru a determina compoziia chimic a materialelor. Aceste msu-
rtori sunt importante n special n biotehnologie unde n mod curent nu se pot monitoriza
culturile de microorganisme procese de fermentaie ce produc proteine active i alte pro- 22




duse ca interferon sau insulina. O larg gam de aplicaii sunt cuprinse ntr-o serie de
monografii ce au condus la un important impuls al dezvoltrii biosenzorilor [24, 25, 26, 27 -
34].


2.3.4 Referine



Theavenot Daniel R., Toth Klara,. Durst Richard A,. Wilson George S, Electrochemical
Biosensors: Recommended Definitions and Classification Pure Appl. Chem., Vol.
12, pp. 2333-2348, (1999)
2.Turner, A.P.F., Karube, I. and Wilson, G.S. Biosensors: Fundamentals and Appli-
cations. Oxford University Press, Oxford. 770p. (1987)
Clark, L.C. Jnr. Trans. Am. Soc. Artif. Intern. Organs 2, 41-48 (1956).
Clark L.C. and Lyons C., Ann. N.Y.Acad. Sci., 102, 29-45 (1962)
Updike, S.J. and Hicks, J.P. Nature 214, 986-988 (1967).
Guilbault, G.G. and Montalvo, J. JACS 91, 2164-2569 (1969).
Ho MYK, and Rechnitz GA, "An Introduction to Biosensors," in Immunochemical Assays
and Biosensor Technology for the 1990s, Nakamura RM, Kasahara Y, and Rechnitz GA
(eds), Washington, DC, American Society for Microbiology, pp 275-
(1992).
Rechnitz GA, Chem Eng News, 5:2436, (1988)
Vurek G. si Bowman R ,Scientific American, August pag 48 (1991).
10 Cooney, C.L., Weaver, J.C., Tannebaum, S.R., Faller, S.R., Shields, D.V. and Jahnke,
In: "Enzyme Engineering" (Eds. E.K. Pye and L.B. Wingard Jnr.) 2, 411-417.
Plenum, New York. (1974).
11 Mosbach, K. and Danielsson, B. Biochim. Biophys. Acta. 364, 140-145 (1974).
12 Divies, C. Annals of Microbiology 126A, 175-186 (1975).
13 Lubbers, D.W. and Opitz, N. Z. Naturforsch. C: Biosci. 30c, 532-533 (1975).
14 Voelkl, K.P., Opitz, N. and Lubbers, D.W. Fres. Z. Anal. Chem. 301, 162-163 (1980).
15 Clemens, A.H., Chang, P.H. and Myers, R.W. Proc. Journes Ann. de Diabetologie, Paris
(1976).
16 Shichiri, M., Kawamori, R., Yamaski, R., Hakai, Y. and Abe, H. Lancet, 1129-1131
(1982).
17 Liedberg, B., Nylander, C. and Lundstrm, I. Sensors and Actuators 4, 299-304
(1983).
18 Cass, A.E.G., Francis, D.G., Hill, H.A.O., Aston, W.J., Higgins, I.J., Plotkin, E.V.,
Scott, L.D.L. and Turner, A.P.F. Anal. Chem. 56, 667-671 (1984).
19 Turner, A.P.F. "Advances in Biosensors", I; II; Suppl. I; III. JAI Press,
London, UK,
1992; 1993; (1995).
20 Alcock, S.J. and Turner, A.P.F. IEEE Engineering in Medicine and Biology, June/July,
319 (1994).
21 Kress-Rogers, E. "Handbook of Biosensors and Electronic Noses: Medicine, Food and
the Environment", CRC Press, Boca Raton, USA, (1996).

2
3






22 White, S.F. and Turner, A.P.F. In: "Encyclopedia of Bioprocess Technology:
Fermentation, Biocatalysis and Bioseparation"(Eds. M C Flickinger and S W Drew). Wiley,
New York, USA, (1997)
23 Dennison, M.J. and Turner, A.P.F. Biotechnol. Adv., 13, 1 (1999)
24 Kress-Rogers E, Handbook of Biosensors and Electronic Noses, Boca Raton, USA: CRC
Press (1997)
25 Scheller F, Schmid R D, Biosensors:Fundamentals, Technologies and Applications, GBF-
Monograph, vol 17, Germany, VCH, (1992)
26 Schmid R D, Scheller F, Biosensors Applicationsin Medicine, Environmental
protection and Process Control, GBF-Monograph, vol 13, Germany, VCH, (1989)
27 Wagner G, Guilbault G G, Food Biosensors Analysis, New York, USA, Marcel Dekker
Inc, (1994)
Cooper Jon M., Cass A. E. G., Cass Tony (Eds), Biosensors, Oxford Univ Press, pp268
(2004)
Marc Lambrechts & Willy Sansen,(Eds) Biosensors, Taylor&Francis, pp360, (2006)
Stamatin Ioan Berlic C. Vaseashta A., Thin Solid Films 495,1-2 pp 312-315, (2006) 30
Vaseashta A, Gallios G, Miroslava Vaclavikova, Brumfield James, Vaseashta Sherri,
Ornprapa Pummakarnchana, Stamatin Ioan , Nanostructures in
Environmental Pol-
lution Detection, Monitoring, And Remediation, International Symposium on
Na- notechnology in Environmental Protection and Pollution, ISNEPP2006,
June 18 -
2006 , The Hong Kong University of Science & Technology International
Conference Center, China (http://www.isnepp.org/)
Vaseashta A., Irudayaraj J., Vaseashta S., Stamatin I., Erdem A. Approach To An In-
terdisciplinary Bionanotechnology Education Program: International Network Perspective,
MRS-spring meeting 2006, symp KK, 0931-KK05-04, (2006)
Vaseashta A., Erdem A., Stamatin I., Nanobiomaterials For Controlled Release Of Drugs &
Vaccine Delivery, MRS-spring meeting, symp S Smart Nanotextiles,
MRS Proceedings Volume 920, 0920-S06-06 (2006)
Ciucu Anton, Biosensors For Environmental Monitoring. Ed Niculescu, Bucuresti, pg. 352,
(2000)
Ciucu Anton, Aplicatiile Analitice ale Biosenzorilor in Controlul Poluarii Mediului, Editura
Ars Docendi, Bucureti, pg 175, (2000)












2
4







3.Stadiul dezvoltrii actuale n domeniul biosenzorilor










Componente i terminologie Lanul de comand

Analit(A): Elementul necunoscut ce trebuie
determinat
Receptor(R): Molecula de biorecunoatere,
elementul biologic/ biochimic care interac- ioneaz cu analitul printr-o reacie specific.
Traductor: Elementul care detecteaz
semnalul de la interacia analit-receptor
Procesare de semnale: Preluarea de date
credibile, eliminarea zgomotului, parametrizare.
Recunoaterea specific a analitului
Transducia- transformarea efectului
fizico-chimic a interaciei A-R ntr-un semnal msurabil
Procesarea semnalului i amplificarea

Trstura unic a biosenzorului este aceea c ncorporeaz un
element biologic n proximitate sau este integrat cu traductorul de
semnal pentru a da un sistem de investigare specific pentru un analit
int fra a fi necesar reactivi suplimentari




















2
5
























































2
6





3.1 Sisteme, arii de biosenzori, caracteristici de rspuns
Cinci arii cheie de dezvoltare a tiinei i tehnologiei sunt identificate ce au con- tribuit la
facilitarea implementrii pe scar larg a biosenzorilor: sensibilitatea, selec- tivitatea,
stabilitatea, sisteme integrate, paterningul (modelarea i multiplicarea ca arii de senzori cu
funciuni i aplicaii multiple). Vom descrie acestea n ordine invers lund n considerare
stadiul actual i metodele moderne de analiz a semnalelor rezultate din inte- racia analit-
receptor conform cu figurile 2.1, 2.2, 2.3.
3.1.1 Sisteme integrate
Succesele notabile atinse cu senzorii individuali prin soluii pragmatice au implicat
dezvoltarea de sisteme care s integreze o gam larg i variat de senzori cu performane
optimizate i suportate de electronic i software sofisticate. n procesele de monitorizare
sistemele integrate au nglobat i multe elemente din fluidic i tehnologia separrilor/
fracionrilor. Unul din sistemele integrate cuprinznd modul rotaional aseptic de pre-
levare probe, sistem de injecie de fluide robotizat i electrozi reutilizabil formai prin
metoda ink-jet printing a fost descris n [1]. Sistemul conine electrod enzimatic cu GOX
imobilizat n gel iar detecia de ap oxigenat se realizeaz pe un electrod de carbon
rodinizat (acoperire cu Rh). Dei electrodul enzim are bune caracteristici de stabilitate i
eficien, problema monitorizrii i prelevrii automate de probe ntr-un sistem integrat cere
optimizarea de muli parametri datorit interferenelor reciproce. Exist o cerin crescnd
pe domenii specifice (mediu i analize medicale) de sisteme integrate ultraper-
formante care s funcioneze n condiii in vivo cum ar fi cele de dializ iar mai recent s
utilizeze biointerfee, tehnici evanescente, microscopie de fore atomice pentru a senza n
adncimea fenomenelor biologice (de exemplu identificarea i nelegerea interaciei pro-
teinelor) [2]. Exploatarea in vivo a sistemelor de detecie att pentru glucoz i
lactat a
fost confirmat prin eficacitatea utilizrii de copolimeri fosfolipidici i mbuntirea he-
mocompatibilitii [3]. Imunosenzorii ofer un alt exemplu pentru dezvoltarea de sisteme
integrate unde sunt nglobate microseparrile, metodele cromatografice, cuplaje electro-
chimice cu detectorii optici care n final conduc la un sistem miniaturizat. Sunt c-teva din
exemple prin care nivelul de integrare i miniaturizare devine din ce mai accen-tuat. n
seciunile urmtoare se va prezenta unele dintre exemple de tipul ADN-nanotub, sau
biocipuri-biointerfee care arat direciile de evoluie ale domeniului.
3.1.2 abloane
Succesul senzorilor analitici individuali a continuat dup cum s-a prezentat n sec- iunea
anterioar cu sistemele integrate astzi larg utilizate n laboratoarele clinice medi- cale.
Necesitatea integrrii i diversificrii parametrilor investigai impune crearea de arii de
senzori ntr-o singur unitate de msur. Astfel a aprut necesitatea realizrii de mo- dele de
senzori dispuse pe arii i geometrii sofisticate utiliznd tehnologii avansate de fotolitografie,
autoasamblare, ink-jet printing denumite tipare sau abloane (templates) ce ndeplinesc o
serie de funcii predeterminate.


2
7





Metoda de asamblare de arii de senzori cu funciuni diversificate dar specifice pen- tru un set
ct mai larg de analii se numete ablonare sau simplu astzi prin termenul asi- milat de
patterning. Tipare sau abloane de senzori ofer meniuri relevante pentru locaii i situaii
specifice. Un exemplu n acest sens l constituie situaiile critice din medicina ambulatorie.
Clinicianul are la dispoziie instrumente portabile de la care poate obine in- formaii asupra
concentraiilor a ase analii cheie din probele de snge: iar n seciile medicale / spitale
instrumentele pot msura pn la 4 parametrii. Aceste instrumente sunt configurate pentru
glucoz, lactat, uree, creatinin. Multiplicarea numrului de analii pentru investigare
necesit instrumente cu senzori cu un mare grad de miniaturizare, in- tegrare pn la arii
nanometrice. Aceste solicitri vin acum nu numai din domeniul me- dical, industria
farmaceutic solicit intens senzori de evaluare medicamente produse n regim de producie
de serie cu nalt productivitate i care necesit analiza fiecrui produs pentru anumite
caracteristici bine precizate cum ar fi dozarea relativ la funciunea i rolul lor n organism.
Ariile de nanosanzori sunt preconizate a fi larg utilizate n condiii de ambulatoriu i
medicina de urgen unde trebuiesc identificai para-metrii fiziologici/ biochimici i stabilit
medicaia de urgen. n prezent sunt dezvoltate tipuri de arii de senzori optici utiliznd 12
canale de interferometre de tip Mach-Zhender [4] construite pe 1cm2 de siliciu cu 244
electrozi adresabili individual.
Tehnologia avansat ink-jet a dezvoltat metode de a analiza fracii de nanolitri pe o suprafa
de senzori tridimensional la o vitez de 6m/sec [5]. Este de ateptat ca n viitor s se
produc arii de 1 milion senzori/cm2 utiliznd fotolitografie, imprintarea prin contact sau
tehnici de autoasamblare, adsorpie/desorpie sub fascicul laser ce va permite s scriem
proteine pe suprafaa de analizat cu foarte mare precizie. Tehnici laser, MAPLE (Matrix
Assisted Pulsed Laser Evaporation) sau DW (direct writting) abordate pentru imobilizarea
materialelor biologice pe substraturi sunt nc n stadiul de laborator dar au mari perspective
de utilizare ca metode de imprintare molecular.
3.1.3 Sensibilitate
Fie c sunt senzori individuali, sisteme integrate sau arii de senzori toi sunt caracterizai
prin parametrii unici iar unul din acetia este sensibilitatea i limita de detec- ie pentru o
gam de analii. Detecia de urme a diferiilor analii (indicatori, aditivi, con- taminani) cu o
suficient sensivitate i siguran sunt criteriile de baz a unui biosenzor pentru a fi utilizat.
Desigur astzi limita de detecie n laborator este mpins pn la un atom atunci cnd este
folosit microscopia de fore atomice. ns n cazul biosenzorilor aceasta este pe departe
dect un deziderat. De exemplu electrozii enzimatici, larg studiai i continu perfecionai
utilizeaz nc paleative cum ar fi concentrarea analitului de interes ceea ce conduce la
dificulti majore de proiectare i miniaturizare [6]. S-au rapor- tat pe acest principiu
microbiosenzori pentru vapori de fenol unde fenoloxidaza s-a imo- bilizat pe gel de glicerol
cu o arie de electrozi interdigitizai [7].
Vaporii de fenol sunt direct partiionai n gel i oxidai la chinon.
Amplificarea
semnalului pentru a obine o sensibilitate rezonabil s-a mbuntit prin amplificare
redox a cuplului chinon/catechol rezultnd o limit de detecie de 30 ppb fenol. Acest 28




principiu este fezabil a fi extins i la ali compui carbonici pn la limite de pri per tri-
lion.
Limite de detecie ultrajoase pot fi atinse cu senzorii de afinitate cuplat cu detecia
electrochimic [8] pentru a obine dispozitive senzoriale performante.
Structurile ADN au fost studiate ca posibili receptori. Structuri sandwich de dis- persii de
cristal lichid i compleci ADN-polication au fost studiate cu relativ succes pen- tru
identificarea a diferii analii [9]. Policationul cu rol de a menine integritatea struc- tural a
ADN-ului iar complecii formai de ADN-protamine permit detectarea hidroli- tic a enzimei
tripsin la limita de detecie de 10-14 M. Eliminarea policationului conduce la creterea
distanei dintre cele dou lanuri ADN rezultnd apariia unei benzi intense n spectrul de
dicroism circular ca urmare a modificrii texturii.
3.1.4 Stabilitate
Practic este cel mai mare dezavantaj al complexelor biologice-instabilitatea lor ine- rent. S-
au abordat diferite strategii de a mbunti longevitatea i a prezerva structura receptorilor
biologici. Imobilizarea n matrici prin tehnica sol-gel n optode pentru sen- zorii de glucoz
este una din strategii. n acest caz se utilizeaz doi indicatori de fluores- cen: clorura
hexahidratat de (2,2'-bipiridil) rutenium(II) i 1-hdroxipirene-3,6,8 acid trisulfonic. Pe
lng proprieti optice bune ale gelului s-a mbuntit i stabilitatea enzimei GOX
[10].Alte exemple cu succese limitate este cazul monooxigenazei utilizat n detecia
hidrocarbonilor; detecia halogenurilor organice cu metaloporfirine; tetraclo- rura de carbon,
haloalchene (percloretilena) i insecticide (DDT) [11]
3.1.5 Selectivitate
mbuntirea selectivitii unui biosenzor poate fi abordat pe dou nivele: inter- faare
direct traductor-receptor biologic pentru reducerea interferenelor (figurile 2.1- 2.4) i noi
receptori cu afinitate mbuntit sau cu noi capaciti de afinitate. De notat c
selectivitatea este un parametru cheie care impune performanele unui senzor. Sunt cteva
strategii de mbuntire a acestui parametru.
Utilizarea mediatorilor pentru mbuntirea performanelor unui biosenzor ampe- rometric
a devenit o strategie comun. n [12] se descrie utilizarea pirolochinonei ca me- diator ntr-
un electrod enzim cu glucozoxidaz pentru msurarea glucozei din buturi. Alternativ
detecia electrocatalitic a produilor de reacie rezultai din reaciile en- zimatice poate fi
mbuntit prin electrozi modificai chimic ca de exemplu electrozi rodinizai [13] sau
electrozi de carbon modificai cu hexacianoferat [14]. De exemplu folosirea albastrului de
prusia pentru modificarea suprafeei electrodului la detecia am- perometric a apei
oxigenate la ambele poteniale de oxidare i reducere pentru electrodul enzimatic n detecia
lactatului [15] i a glucozei [14].
O soluie mult mai elegant este de a cuta centrii redox a enzimei via un fir mole- cular
pentru a se realiza transferul de electroni spre electrod. n acest sens s-a publicat mult
despre enzime legate prin fire moleculare dar n general preocuprile s-au axat pe
mediatori imobilizai pe diferite lanuri polimerice. Firele moleculare sunt privite ca
intermediari n transferul de electroni pe distane lungi fiind alctuite din grupuri de dou 29




piridine legate de tiofene cu lungimi diferite (tienoviolagen). Firele de acest tip pot fi fo-
losite n conjucie cu tehnici de autoasamblare pentru a produce un electrod izolat care
transfer electroni pe ci moleculare predeterminate [16]. Aceasta ar conduce la electrozi
enzimatici liberi de interferene electrochimice. Modelarea i proiectarea asistat de
calculator ne permite de a modela reaciile cu transfer de electroni, legarea receptorilor i
interaciile acestora cu o mare acuratee. Aceasta mbuntete nelegerea noastr a in-
terfeei receptor/traductor permindu-ne astfel s dezvoltm noi tipuri de receptori cu se-
lectivitate mare.
Pentru a obine liganzi mbuntii pentru utilizri n optosenzori cum ar fi glico-
hemoglobina (HbA1c), o nou peptid sintetic, aceasta a fost construit pe baz de librrie
combinatorial chemometric format din 1 milion L-amino acid hexapeptid por- nind de la
10 aminoacizi [17]. Librria de hexapeptide a fost selectat si analizat n ra- port cu
HbA1c, HbA1b, HbAF, HbA0, i gsii liganzii secvenai. Liganzii individuali sau arii de
liganzi n conjuncie cu tehnica de recunoatere a formelor sunt domenii ce vor contribui la
cresterea selectivitii i stabilitii.
3.1.6 Parametrii de caracterizare a semnalelor biosenzorilor
Paragrafele precedente au introdus calitativ parametrii de care depinde rspunsul senzorilor
n particular a biosenzorilor pentru a atinge performanele dorite. Interacia analit-receptor
este preluat de traductor i transformat ntr-un semnal fizic. Figura 3.1 prezint tipurile de
semnale ce pot fi preluate de la suprafaa unui biosenzor ca rspuns al interaciei A-R
conform cu figurile 2.1-2.6. Semnalul fizic preluat de traductor este tran- smis spre lanul
electronic de msur. Se observ din figura 3.1 c exist o varietate foarte larg de mrimi ce
pot fi colectai de la traductorii biosenzorilor i transformate n sem- nale fizice. Procesarea
semnalelor n general este adaptat din tehnicile standard acu- mulate din tehnologia
siliciului. Pentru msurarea parametrilor chimici i fizici ( mas, concentraie, temperatur,
indice refracie, cmp electromagnetic, cureni, poteniale etc) ca rezultat al transferului
interaciei A-R este necesar un traductor specific. Acesta este interfaa transmiterii procesele
fizice, chimice i biologice care le transform n semnale spre procesare electronic, optic,
stocare, comunicaii, integrare n sisteme web sau de supra-veghere.
Orice interacie A-R implic un rspuns iar pentru fiecare set de valori rezult o curb de
rspuns specific. Curba de rspuns este un rspuns calibrat a unui senzor ca funcie de
msurandul respectiv aplicat la intrare (ceea ce rezult din interacia A-R). Mrimea
msurat poate fi de orice natur dar pentru cei mai muli biosenzori unde interfaa este
electrochimic sau electrooptic vom lua n considerare unul din parametrii: rezistena
electric R sau inversul ei conductana (G=1/R), frecvena (f)-mult utilizat n fenomenele
de rezonan; n cazul optosenzorilor, absorbana, deplasarea frecvenei, ran- damentul
cuantic, etc.
Pentru fiecare biosenzor vor fi analizai aceti parametrii n paragrafele destinate lor.



3
0





























Figura 3.1 Tipuri de mrimi ce pot fi transformate de ctre traductori n semnale fizice
msurabile


Este recomandat conform normelor dezvoltate n micro i nanoelectronic s utilizm
urmtoarele notaii pentru rspunsul la ieire [18]:
G (conductan);
G/G0 (conductan relativ);
(G - G0) (conductan, variaia absolut);

(G - G
0)/G0 (conductan, variaia relativ).

n cazul n care semnalul la ieire este frecvena, reprezentarea semnalului la ieire este:
f (frecven);

f/f
(frecventa relativa);

(f - f0) (variaia absolut a frecven);

(f - f
0)/f0 (frecven ,variaia relativ).

Pentru comunicaii i integrarea sistemelor senzoriale spre telemedicin, securitatea i
controlul de la distan a modificrilor mediului sau controlul degradrii mediului, n lanul
de msur trebuiesc introduse sensibilitile blocurilor electronice sau a altor mrimi,
figura 3.2



3
1

























Figura3.2 - Schema unui senzor complex. M- mrimea rezultat din interacia (msu-
randul) A-R, Y1- semnalul electric obinut la traductor, Yi- semnalele rezultate din
lanul de msur. S-sensibilitile pentru fiecare verig din lanul de msur
Cu definiiile din figura 3.1 i 3.2 sensibilitatea, introdus calitativ n paragraful 3.1.3,
capt semnificaii msurabile. Sensibilitatea, S, este definit ca derivata rspun- sului ( ce
este o funcie de punctul i momentul de msur) n raport cu msurandul M. Pentru cazul
conductanei G avem patru cazuri de definiie a sensibilitii:


dG
S = ; dM

dG/G
()
0

S = ;

dG-
G
dM
1

()
0
S = ;
d
M


Cazul ideal pentru care rspunsul senzorului este liniar expresia sensibilitii se simplific,
relaiile 3.1 lund forme uor prelucrabile i adaptabile la o larg serie de con- vertori analog
digitali (ADC). n tabelul 3.1 sunt prezentate expresii des utilizate n eva- luarea
biosenzorilor n condiii de offset nul. Pentru ali parametrii msurabili de un bio- senzor
cum ar fi frecvena sau absorbana expresiile din tabela 3.1 se modific doar prin nlocuirea
mrimii msurate de traductor.





3
2





Tabela 3.1- Expresii ale sensibilitii pentru biosenzori cu rspuns liniar
n conductn electric

Rspuns liniar cu offset nul
Rspuns liniar pe poriuni a curbei de rspuns

G

G

S
=
S
=
;

M
;

M

GG


()
GG

S
=
0
0

;
S
=
;

M
M

GG G


/
T

G
G

G
/

()
()


00
s
00

S
=
]

;
S
=
M
;

Cu referire la figura 3.2 se observ c introducerea n lanul de msur a o serie de
componente electronice acestea la rndul lor contribuie cu sensibilitatea i nivelul de am-
plificare specific. Propagarea sensivittii n lanul de msur se descrie simplu ca un pro-
dus de sensibiliti.

i
dY
1

S


T
S
=
dM dY
2
S interna;

=
dY
1
S traductor;

A
dY
3

S
=
dY
S- amplificator (I,V,G,R,etc);
S- filtru;
3. 2
FS
2