• MECANISMUL DE

ACȚIUNE AL ENZIMELOR
• Pentru decurgerea unei reacţii
este necesar ca molecula de S
şi E să contacteze între ele.
 Etapele acţiunii
enzimatice

E + S <——> ES <——> ES* <——> EP <——> E + P

I et. III et.

II et.

I et. – formarea complexului enzimă-substrat

(E-S)
II et. – cataliza – transformarea S în produsul
reacţiei (P) de către enzimă
III et. - eliberarea P de la E
 Mecanismul de acţiune al
enzimelor
Prima etapă:
Difuzia S spre E şi legarea cu CA al E -
formarea complexului ES
1. de scurtă durată
2. depinde de concentraţia substratului şi de
viteza lui de difuzie spre centrul activ al
enzimei.
 Mecanismul de acţiune al E
2. Transformarea complexului primar ES în unul sau
câeva complexe activate - ES*, ES** (este cea
mai lentă). Are loc dereglarea legăturilor S,
ruperea lor sau formarea noilor legături în urma
interacţiunii grupelor catalitice ale E.
3. Despărţirea produselor reacţiei de CA al E şi
difuzia lor în mediul ambiant (complexul EP
disociază în E şi P).
Ipoteza “lacăt-cheie” (Fischer) şi
“coincidenţa forţată” (Koshland)
• Modelul clasic (Emil Fischer) consideră că
potrivirea S cu CA al E este analog cu
potrivirea “lacăt-cheie”. Acest model
presupune o rigiditate a structurii enzimei în
zona CA.
• modelul Koshland, numit “centrul activ
indus”- potrivire indusă , presupune că
CA nu este rigid, că forma acestuia se
modifică în momentul legării S.
Teoria “cheie-lacăt” -
Fisher
Teoria “coincidenţei
induse” - Koshland
Conceptul clasic "lacăt-
cheie

E+S-- ES- E+P

Conceptul coencidenţei
inductive
“coincidenţa forţată”
(Kochland)
 Mecanismul de acţiune al E
• Din punct dce vedere energetic. Ce totuși
face E ca reacția să decurgă mai repede,
pentru a răspunde la această întrebare
aceasta e necesar de conştientizat
noţiunea de:

• Energia de activare – este energia

necesară tuturor moleculelor unui mol de
S, care la o anumită t pot să atingă starea
de tranziţie (corespunzătoare apixului
barierii energetice) (KJ/mol; kcal/mol)
 S + E ↔ E-S → E + P

Energia de activare a reactiei necatalizate

Energie

S Energia de activare a reactiei catalizate

G P

Progresul reactiei

Enzimele reduc energia de activare fara sa afecteze energia libera a

reactiei (G). Astfel, enzimele cresc viteza de reactie.
Enzymes
Lower a
Reaction’s
Activation
Energy
 Mecanismul de acţiune al E

• E - micşorează energia de activare

ale reacţiilor chimice.
• Cu cât mai mult scade energie de
activare, cu atât mai eficient acţionează
catalizatorul, şi cu atât mai mult se
accelerează reacţia.
 Mecanismele catalizei
• La nivel molecularenzimatice
acţiunea E poate fi lămurită prin
următoarele efecte:
1. Efectul de orientare a substratelor (CA al E fixează S şi le
orientează într-un mod convenabil pentru acţiunea gr.
catalitice)
2. Efectul de deformare a S (după unirea în CA molecula S se
întinde, se deformează –favorizând scindarea ei)
3. Cataliza acido-bazică (în procesul fixării S în CA asupra lui
acţionează grupele electrofile ale sectorului catalitic, are loc
redistribuirea densităţii electronice în S şi ruperea legăturilor
din S
4. Cataliza covalentă – formarea legăturilor covalente între CA
şi S, complexul ES e foarte instabil, uşor disociază eliberând P
reacţiei
CLASIFICAREA
ENZIMELOR
 NOMENCLATURA
ENZIMELOR
Denumirea istoric transmisă (pepsina,tripsina)
DENUMIREA COMUNĂ (de lucru ):
• Numele substratului (S) + sufixul «aza»
(glucozidaza, ureaza, lipaza, nucleaza)
sau
• DENUMIREA SISTEMATICĂ:denumirea atât a S
cât și tipului de reacție la care acestea participă
+ «aza» (lactatdehidrogenaza, alcool
dehidrogenaza, piruvatcarboxilaza)
Denumirea tuturor S + tipul reactiei chimice+
«aza» - D gliceraldehid 3 fosfat NAD
oxidoreductază
 Clasificarea actuală a
enzimelor
• Toate E se împart în:
• şapte clase,
• clasele în subclase,
• subclasele în subsubclase,
• numărul său de ordin.

• Ex: LDH - 1.1.1.27

 Clasificarea actuală a
enzimelor
• Ex: LDH - 1.1.1.27
• Clasa reprezintă tipul de reacţie, catalizat de
enzime
• Subclasa – precizează acţiunea E - indică
gruparea sau legătura chimică interesată în
reacţie
• Subsubclasa – precizează natura acceptorului
care participă la reacţii
• Numărul său de ordin - poziția E în
subsubclasa
 Clasificarea actuală a
enzimelor
1. Oxidoreductaze
2. Transferaze
3. Hidrolaze
4. Liaze
5. Izomeraze
6. Ligaze (sintetaze)
7. Translocaze (din 2018)
 Clasificarea enzimelor.

- catalizează reacţiii de oxido-

reducere;
-catalizează transferuri
grupelor funcţionale de la un S
la altul (metil, amino, acil,);

-catalizează scindări de
legături covalente cu
adiţionarea apei ;

-catalizează ruperea leg. C-C,

C-S şi C-N; fără adiţionarea
apei, adiţia la legături duble
şi reacţiile inverse.

-catalizează toate tipurile de

transformări în cadrul uneia
şi aceleaşi moleculă ;
- catalizează formarea de legături
între carbon şi O, S, N, cuplate cu
hidroliza legăturilor macroergice
(utilizarea ATP).
 7 clase de Enzime

1. Oxidoreductaze
• catalizează reacţiii de oxido-reducere

SUBCLASELE:
•Dehidrogenaze
•Reductaze
•Oxidaze,
•Peroxidaze,
•Hidroxilaze,
-
1. Oxidoreductaze
1. Oxidoreductaze
2. Transferaze
catalizează transferuri grupelor funcţionale de la
un substrat la altul (metil, amino, acil)

SUBCLASELE:

•Aciltransferaze
•Metiltransferaze
•Glicoziltransferaze
•aminotransferaze
•Kinaze
•
2. Transferaze
TRANSFERAZE:
 3. Hidrolaze
catalizează scindări de legături covalente cu
adiţionarea apei

SUBCLASELE:
• Esteraze
• Glicozidaze
• Peptidaze
• Fosfataze
• Tiolaze
• Ribonucleaze

•EXEMPLE: lipaza, proteaza, fosfolipaza, esteraza,

glicozidaza, fosfataza
 3. Hidrolaze
CH2OPO3H2 CH2OH
O O
OH OH
OH OH OH OH
OH H2O H3PO4 OH
Glucoza -6- fosfat Glucoză
3. Hidrolaze
 4. Liaze
catalizează ruperea leg. C-C, C-S şi C-N; fără
adiţionarea apei, adiţia la legături duble şi
reacţiile inverse.

-SUBCLASELE:

• Decarboxilaze
• Aldolaze
• Hidrataze
• Dehidrataze
4. Liaze
4. Liaze
4. Liaze
 5. Izomeraze
catalizează toate tipurile de transformări în cadrul
uneia şi aceleiaşi moleculă

SUBCLASELE:

• Racemaze
• Epimeraze
• Izomeraze
• Mutaze
5. Izomeraze
5. Izomeraze
5. Izomeraze
 6. Ligaze (sintetaze)
catalizează formarea de legături între carbon şi O, S,
N, cuplate cu hidroliza legăturilor macroergice
(utilizarea ATP).

SUBCLASELE:

•Sintetaze
•Carboxilaze
•
6. Ligaze (sintetaze)
 6. Ligaze (sintetaze)
COOH COOH
I I
C=O + CO2 C=О
I I
CH3 ADP CН2
ATP
Piruvat I
H3PO4
CООН
Oxaloacetat
 EC 7- translocaze.
• Suclasele desemnează tipurile de ioni sau molecule translocate:
• EC 7.1 catalizează translocarea hidronilor
ex:1) (ATPaza exportatoare de H+)
2) NADPH:NAD+ oxidoreductase (H+-transporting)
NADPH + NAD+ + H+[1 parte] = NADP+ + NADH + H+[a 2 parte]
• EC 7.2 catalizează translocarea cationilor anorganici și helații lor
Ex. , NADH + H+ + ubiquinon + n Na+[1 parte] = NAD+ + ubiquinol + n Na+[a 2 parte]
• EC 7.3 catalizează translocarea anionilor anorganici,
Ex: transportori de tip ABC pentru
fosfat EC 7.3.2.1
fosfonat EC 7.3.2.2
sulfat EC 7.3.2.3
nitrat EC 7.3.2.4
molibdat EC 7.3.2.5
EC 7.4 catalizează translocarea aminoacizilor și al peptidelor,
Ex: transportori tip ABC pentru aminoacizii polari EC 7.4.2.1
- transportori tip ABCpentru aminoacizii nepolarii -EC 7.4.2.2
- ATP ase transportoare de proteine mitochondriale - EC 7.4.2.3
 EC 7- translocaze.
• EC 7.5 catalizează translocarea
carbohidraților și a derivașilor lor
• EC 7.6 catalizează translocarea altor
compuși
EX: fosfolipide, xenobiotice,acyl-
CoA,heme,
guanine ,taurine ,vitamin B12
,glycerol 3-fosfat, diverse
poliamine transporter.
 Sub-subclasele
• Se referă la reacțiile, care au asigurat forța
motrice pentru transport :
• EC 7.x.1 translocaze dependente de reacțiile
de oxidoreducere
• EC 7.x.2 translocaze dependente de hidroliza
unui nucleozid trifosfat
• EC 7.x.3 translocaze dependente de hidroliza
unui difosfat
• EC 7.x.4 translocaze dependente de o
decarboxilare
 Specificitatea
-este capacitatea unei enzime de a selecta dintr-un
număr mare de S unul particular,

-este condiţionată de complimentaritatea

conformaţională şi electrostatică între CA al E şi S.

S4

S2
Deci fiecare E catalizează un anumit tip de
reactii sau transformarea unui anumit S
 SPECIFICITATEA
1. De reacție
2. De substrat:
• A. Absolută
De reacție
• B. Relativă
• C. stereospecificitate
Specificitate

DEE Substrat
 Specificitatea:

1.Specificitatea de reacţie:
enzimele catalizează un anumit tip de
reacţie ce stă la baza clasificării lor: o
reacţie redox, un transfer a unei grupe
funcționale, formarea unei legături, etc.
 2. Specificitatea de substrat a
enzimelor
I. Specificitatea absolută de substrat –
enzima catalizează transformarea
doar a unui singur substrat
(ureaza, arginaza, carbanhidraza)
 Specificitatea de substrat
a enzimelor
II. Specificitatea relativă de substrat –
enzima catalizează transformarea
unei grup numeros de substanţe cu
diferită structură chimică în acelaşi
mod
Ex. citocromul P450 – hidrolizează
câteva mii de substanţe
•Specificitatea
- asigura transformarea deunui
substrat
grup de
relativa
substanțe a enzimelor
înrudite chimic şi se
intâlneşte în diferite ipostaze:
I
II
III
 Specificitatea relativă de
substrat a enzimelor
I. Specificitatea cu arie largă, față de
numărul substratelor –
enzima catalizează transformarea unei
anumite grupe sau legături chimice din
diverse substanţe chimice
Ex. pepsina hidrolizează legăturile peptidice
formate de grupările carboxilice ale
aminoacizilor aromatici – Phe, Tyr şi Trp
Specificitatea relativă de
grupă
 Specificitatea relativă de
substrat a enzimelor
II cu o arie mai îngustă
E catalizează transformarea unui grup de
substrate analogice structural (ADH - unui
grup de alcooli monohidroxilici, recunoscind
gruparea OH)
 Specificitatea relativă de substrat a enzimelor

III specificitatea corelează cu poziția legărurii în compușii înrudiți structutal

PLA1 Fosfolipazele
O
PLA2
O C(CH 2) 14 CH3
H2 C O

DAG HC O C(CH 2) 7CH=CH(CH 2) 7CH3

O H OPO3 2-
H2 C
O P O H

HO H
O- IP3
PLC OH OH

H OPO3 2-

H H
PLD

PI45BP
 Specificitate
stereochimică
- E catalizează transformarea numai a
unuia din stereoizomerii posibili (D sau L;
sau numai a izomerului cis- sau trans-).
- Ex: Amilaza scindează legăturile α 1-4
glucozidice din amidon sau glicogen şi nu
influenţează asupra legăturilor β din
celuloză.
 Specificitate
stereochimică

Hexokinaza – specificitate la D- glucoză

Oxidazele – specificitate la L-AA
Fumaraza – specificitate la izomerii trans-cis
PROPRIETĂŢILE
ENZIMELOR
 Obiectivele:
1. Cinetica enzimatică. Influenţa concentraţiei enzimei şi a substratului, a pH-ului
şi a temperaturii asupra activităţii enzimatice.
2. Principiul determinării activităţii enzimelor. Unităţile de activitate a enzimelor.
3. Inhibiţia activităţii enzimelor (specifică şi nespecifică, reversibilă şi ireversibilă,
competitivă, necompetitivă şi noncompetitivă).
4. Reglarea activităţii enzimelor (proteoliză parţială, reglarea alosterică,
autostructurarea cuaternară, reglarea covalentă).
5. Organizarea enzimelor în celulă (ansamblurile enzimatice,
compartimentalizarea). Reglarea activităţii enzimelor în celulă. Importanţa
principiului de retroinhibiţie.
6. Izoenzimele – particularitățile structurale și funcționale, valoarea lor
biomedicală.
7. Deosebirile în componenţa enzimatică a organelor şi ţesuturilor. Enzimele
organospecifice. Modificarea activităţii enzimatice în diferite afecţiuni
(enzimodiagnosticul).
8. Metodele de obţinere şi purificare a enzimelor. Cromatografia de afinitate.
9. Utilizarea enzimelor în practica medicală. Întrebuinţarea enzimelor imobilizate
în medicină.
10.
 CINETICA ENZIMATICĂ

• Studiază viteza reacției

enzimatice, luând în considerație
factorii fizico-chimici ce o
influențează
•
VITEZA REACȚIEI ENZIMATICE

• reprezintă numărul moleculelor de substrat

transformate în produs final pe unitatea de
timp (de regulă - µmoli de produs format
pe minut)
Factorii care influenţiază viteza
reacției enzimatice

• Concentraţia S
• Concentraţia E
• Temperatura
• pH
 Influența [S] asupta vitezei
reacției enzimatice
• Grafic se reprezintă sub
formă de o curbă de tip
hiperbolic.
• în perioada iniţială a reacţiei
V creşte pe măsură ce creşte
[S].
• La un moment dat cînd CA al
E se ocupă de S – V nu mai
creşte. Ea rămîne constantă
şi corespunde V max a
reacţiei.
• În cazul E alosterice – curba
reprezintă un aspect sigmoid
Influența [S] asupta vitezei
reacției enzimatice
• Analiza curbei
arată 3 zone:
Enzime michaeliene
• Zona “a”- v
c creste
proportional cu
b [s]

• Zona “b” –
cresterea v cu
[s] nu este
a proportionala

• Zona “c” – este

atins Vmax la
[s] infinita
• Această curbă este numită curba lui Michaelis-
Menten şi se exprimă prin ecuaţia:
[S]
V0=Vmax x _________
Km +[S]

unde:
V0 - V reacţiei inițiale
Vmax- viteza max
Km-constanta lui Michaelis Menten
[S] –C% S
Această ecuație descrie modul în care viteza
reacției variază in funcție de [S]
 Semnificația lui Km și
V max

Km-constanta lui Michaelis Menten

- este acea concentraţie de S pentru care
V de reacţie este jumătate din Vmax.
Km reflectă afinitatea E pentru S şi anume
cu cât Km este mai mică cu atât afinitatea
este mai mare şi invers.
V max- reflectă capacitatea catalitică
maximă a E
 Ecuaţia lui Lineweawer-
Burk:
• Din curba lui
Michaelis Menten nu
poate fi determinată V
max (deoarece nu se
pot atinge c% infinite
ale substratului).
• Se recurge la
linearizarea ecuaţiei,
obţinându-se ecuaţia
lui Lineweawer-
Burk:
Diagrama lui Lineweawer-
Burk:

Reciproca ecuatiei
Michaelis-Menten
 Influența [E] asupta
vitezei reacției
• în condiţii standard 2 mol de E într-o anumită
perioadă de timp vor transforma de 2 ori mai
multe molecule de S decât 1 mol de E (relaţie
direct proporţională).
Influența t° asupta vitezei
reacției
 Termolabilitatea (t°)

• Unele E a
microorganismelor
termofile sunt active la t
de 80°C
• La t joase E se
inactivează (excepţii:
catalaza: activitate max la
t=0 °C)
 Influența pH asupta vitezei
• Fiecare E are pH reacției
optim propriu
(manifestă activitate
max).
• Majoritatea E celulare
au pH-ul optim- 6-8
(7,4)
• excepţii: hidrolazele
acide lizozomale pH=
5;
• MAO din membrana
MC externa pH= 10.
 Acţiunea pH asupra activităţii
enzimatice
• La E digestive pH
optim este cel al
sediului lor de
acţiune:
1. Pepsina – pH 1,5 –
2,
2. Amilaza
pancreatică - pH
7,2,
3. Tripsina - pH 7,8-
8,0
 Acţiunea pH asupra
activităţii enzimatice
 Acţiunea pH asupra
activităţii enzimatice
• pH optim e dependent
de:
1. gradul de ionizare a
grupelor funcţionale,
2. afinităţii E faţă de S,
3. stabilităţii E.
 Acţiunea pH asupra
activităţii enzimatice
Centrul activ al
enzimelor contine
grupe ionizabile,
acide sau bazice,
deci modificarea pH-
ului are ca efect
modificarea gradului
de disociere si,
implicit, modificarea
vitezei de reactie.