CROMATOGRAFIA

1. Cromatografia este o metoda de separare de mare performanta a componentilor unei probe ,

prin mecabismul de migrare intre doua faze , una mobile si una stationara.

2. Migrarea diferentiata este o consecita a vitezelor diferite amestecului antrenati de faza mobile
care se deplaseaza de-a lungul fazei stationate in coloanal cromatografica , hartie cromatocarfica
sau o placa subtire

3. Cacracteristicile metodei sunt : este universala , simpla , rapida , accesibila si are o capacitate de
rezolutie foarte mare putand separa compusi asemanatori .

4. In functie de mecanismul care sta la baza procesului si dupa natura celor doua faze :
crmatografia de absorbtie : lichid-solid , gaz-solid , de repartitie : lichid-lichid , gaz-lichid , prin
schimb ionic , de excludere difuzie.

5. Fractionarea proteinelor (cromatografia de coloanal )este o metoda cu mare utilizare ce implica

cromatografia . Se poate folosii pentru fractionarea compusilor cu greutate moleculara mica
precum zaharidele si aminoacizii .(molecule mici= cromatocrafie de transpozitie), pe hartie

6. Moleculele se deplaseaza in solventii care urca sub actiunea capilara in functie de solubilitatea
lor relativa

7. Proteinele din coloane se deplaseaza printr-o rasina(matriceacum ar di dietilamicoceluloza

incarcata pozitiv )(faza stationara) si interactioneaza diferit cu ea, poate fi separata pe baza
afinitatii , pe baza schimbului ionic , pe baza marimii , prezentei sau nu de anticorpi, agaroza   
9de afinitate) .Se pot colecta jos .

8. Coloanele cu schimb ionic contin saruri incarcate negative sau pozitiv ., depinde de gradul ionic si
de pH , matricea este insolubila

9. Cromatografia de filtrare pe gel in functie de marimea lor si contin paturi poroase minuscule

10. Se foloseste o matrice insolubila care este legata covalent de un ligand specific : molecule
anticorp sau un substrat enzymatic care va lega o proteina specifica : “purificari intr-un singur
pas”

Y
CROMATOGRAFIA

1.Cromatografia reprezinta o metoda complexa de separare a compusilor unei substante , prin

mecanismul lor de migrare intre doua faza una stationara si una mobila

2. Diferentierea cromatografieie consta in viteza specifica de deplasare a compusilor in faza

stationara care poate fi pe hartie cromatica sau coloana.

3.Cromatografia se clasifica in functie de mecanismul de separare al procesului sau de natura

substantelor in:

4.Moleculele mici cum ar fi zaharidele sau aminoacizii se separa cel mai des pe hartia cromatica care
actioneaza ca faza stationara . In faza mobile se pune hartia intr-un solvent si prin forta capilara
solventul se ridica . Compusii functie de solubilitatea lor fata de compusi au o viteza diferita de
deplasare .

5.Pentru fractionarea proteinelor se foloseste cromatografia pe coloanal , in care se pune o matrice

insolubila (faza stationara) , proteinele sun puse la capatul de sus al coloanei si acestea migreaja in
jos in functie de viteza lor, afectate de interactiunile cu matricea, unde pot fi colectate .

6.Interactiunile cu matricea pot fi : de afinitate ,   

ELECTROFOREZA

1. Electroforeza este o metoda de separare care se bazeaza pe migrarea diferentiala a unor

particule sau ansambluri de particule incarcate electric , sub actiunea unui camp electrostatic
uniform extern .

2. Prin technicile de electroforeza se realizeaza purificarea su fractionarea macromoleculara , in

functie de abilitatea moleculelor cu sarcina electrica de a migra catre un camp electric continuu.

3. In functie de natura sarcinii : pozitiva sau negative , ele migreaza catre un catod sau anod .

4. Lungimea deplasarii depinde de : masa moleculara , sarcina ei electrica , temparatura , pH-ul

mediului , campul electric , timpul de migrare si tipul suportului . Se poate folosii molecule nierte
ca hartia de filtru , silicagel , celuloza microcristalina sau active geluri de agar , agaroza (cele mai
folosite pentru protein    si acizi nucleici).

5. Avantajele folosirii gelului de agar sunt : reproductibilitatea , puterea de rezolutie , posibilitatea

de control a marimii porilor , inertia si stabilitatea chimica la variatii mari de pH , temp ,
concentratie ionica , transparente perfecta , rezistenta mecanica si flexibiliatea .

6. Gelul de poliacrilamida cel mai efficient mediu stabilizat , se obtine prin copolimerizarea
acrilamidei si a N’N metilenbisacrilamidei. Pot fi sub forma de straturi sau placi netede sau
coloane cilindrice

7. In cazul placilor se folosesc doua tipuri de gel : unul de concentrare cu pH acid si porozitate mare
si unul de separare cu ph alcalin si porozitate mica , care se intorduce ulterior in partea
superioara ,

8. Concentratia solutiei din tuburi sau placi , detm marimea porilor in gel , respective marimea
efectiva a porilor scade pe masur ace concentratia de acrilamida creste , facilitand astfel
traversarea moleculelor prin mediul poliacrilamidic .

9. Se poate obtine un film autoradiografic prin plasarea unui film radiogarafic pe gelul uscat si
expunerea la radiatii X , astfel apar benzi colorate in nuante gr ice reprezinta diferse tipuri de
molecule

10. Agaroza furnizeaza rezolutii superioare , se prepara usor dar rezultatele nu sunt intotdeauna
reproductibile , necesita purificarea .
DIFRACTIA CU RAZE X

1. Prin difractia cu raze x se poate genera imaginea difractata a unui cristal si sa se deduca
pozitiile individuale ale atomilor unei molecule , ca unitate de structura cristalina

2. Razele X au o putere de penetrare mult mai mare decat electronii , deci permit analiza unei
probe stratificate , iar imaginea nu mai este distorsionata

3. Laticea , care este cel mai mic element al unei retele cu simetrie cubica a unui cristal ,
reprezinta unitatea periodica fundamentala de difractie .

4. Studiile referitoare la directiile fasciculelor de raze X difractetae , fac posibila gasirea

simetriei de baza a unui cristal .