Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
CURS 3
METODE UTILIZATE IN
BIOFIZICA
• I. METODE GENERALE
• II.METODE SPECIFICE
I.METODE GENERALE
- OBSERVATIA(STIINTIFICA)
- EXPERIMENTUL STIINTIFIC
- Hipocrate -fondatorul scolii medicale din Kos,
perioada de inceput a medicii stiintifice.
- Diagnosticele sale se bazau pe un rationamemt
logic dupa o atenta observatie clinica.
- Supranumit parintele medicinii- Juramantul lui
Hipocrate
- Actualmete- foaia de observatie- cu elemnetele
de observatie clinica continua sa fie una din
cele mai importante componente din evalauarea
medicala a uni pacient.
- Observatia stiintifica
• Natura raspunde celor care sunt pregatiti!
• metodele stiintifice presupun initial observarea si formarea unor
ipoteze.
• Intrebari in legatura cu un fenomen natural:
• Observarea fenomenului
• Initierea unor ipoteze in legatura cu fenomenul
• Predicitii logice, consecinte observabile pe baza ipotezelor
• Testarea predictiilor prin experimente sau studii observationale
• Formularea unor concluzii din datele adunate din experiment. Realizarea
unor noi ipoteze sau revizuirea celor vechi. Repetarea proceselor-
reproductibilitatea!
• Scrierea unei descrieri despre metoda, despre observatii si despre rezultate,
generarea unor concluzii. Revizuirea rezultatelor in relatie cu alte rezultate
din cadrul aceluiasi fenomen.
Observations play a role in the second and fifth steps of the scientific method.
Intrebari despre fenomenObservatii clinice in Testarea unor ipoteze Ipoteze si excplicatii.
(manisfestari clinice) (diagnostice partiale), Concluzii ( diagnostic final)
relatie cu
fenomenul (boala) predictii, studii observationale
case Intrebari despre pacient si suferinta sa ( boala)
Date paraclinice:
- WBC – 16.000/mL
- RBC- 400k /mL
- Hb- 12 g/L
- Creatinine- 1g/mL
- HGC- normal
Ecografie abdominala;
Ficat dimnesiuni si reflectivitate normala, omogen
Colecist: perete subtire, continut lichidian, fara
calculi
RD, RS- morfologie si topografie normala, fara
dilatatie pielocaliceala
Vezica urinara – semirepletie, perete regulat
In FID cu SPM:
Formatiune digestva in deget de manusa-
necopresibila, cu diametrul de ~ 8 mm, cu fina lama
de lichid adiacenta.
Ipoteza explicarii fenomenelor
noi medicamente.
Medicina umana
http://www.healthcare-in-europe.com/en/article/2136-
World%C2%92s_first_human_brain_images_scanned_with_
a_PET-MRI_hybrid_system.html
18F FDG PET/MRI prognostic markers in Cardiorenal Syndrome (CRS)
Ipoteza:
Sindromul cardio renal (SCR) este o condiție clinică în care Patologia Renală Cronică (PRC) și
Insuficiența Cardiacă (IC) coexistă, insuficienta unui organ accelerand-o pe a celuilalt organ. Model
de sobolan SCR dual, PRC și IC, prin nefrectomie subtotala renala 5/6 (ceea ce va induce afectarea
restului de parenchim renal restant) precedata de insuficiență cardiacă indusă prin administrarea
de 1mg/kg de doxorubicina de doua ori pe saptamana timp de 6 sapatamani (ceea ce va induce
cardiomiopatie dilatativa).
Obiective și activități conexe:
a.Validarea modelulul dual propus de Insuficiența Cardiacă și Renală
b.Statuarea metodei PET/MRI (utilizarea 18FDG) în evaluarea Sindromului Cardio-Rrenal (CRS)
Material:
Cohorta de 40 de sobolani Wistar distribuita în 4 loturi – 8 șobolani în lotul martor; 20 șobolani în
lotul cu insuficiență cardiaca din care 10 vor forma un nou grup, cu intentia de a modela sindromul
cardio-renal în forma acuta prin nefrectomie 5/6 la 6 saptamani dupa inducerea insuficientei
cardiace; lot de 12 șobolani la care se practică nefrectomie 5/6, iar după 12 luni se induce
insuficiența cardiaca, cu scopul de a modela forma cronica a sindromului cardio-renal.
Metoda:
Evaluarea modelului propus prin 18F FDG-PET va oferi informații în relație cu activitatea
metabolică a inimii, rinichilor sistemul digestiv, splinei - masuratori de tip semicantitativ - Standar
Uptake Value ( SUV), măsuratori care vor fi corelate cu parametrii biochimici specifici patologiilor
menționate. Astfel, prin aceste corelații să asociem un prognostic pe baza analizei imagistice, cat și
a parametrilor biochimici pentru evaluarea stadiilor terminale ale organelor țintă ( cord si rinichi)
din cadrul SCR.
PET/MRI
https://www.mun.ca/biology/scarr/Hemoglobin_Electro
phoresis.html
Electroforeza = migrare diferenţială în câmp electric, deci posibilitate de
separare a:
- AMINOACIZILOR
- PEPTIDELOR
- PROTEINELOR
- ACIZILOR NUCLEICI
Electroforeza proteinelor serice
Electroforegrama normala
separarea proteinelor în 5 fracţiuni
Sindromul nefrotic -leziuni morfologice din cadrul unor
nefropatii glomerulare (proteinurie mai mare de 3,5
g/24 de ore)
-hipoalbuminemie si cresterea alfa 2 si beta globulinelor.
(compensare sintezelor proteice a ficataului in
contextul pierderi rapide prin urina)
Ciroza hepatica
- scaderea albuminelor serice
- scaderea proteinelor totale din cauza deficitului de
sinteza
- hipergammaglobulinemie importanta (sdr. cronic Agammaglobulinemie- boala genetica X-linkata
inflamator)
alfa1-antitripsină este o proteină sintetizată în
ficat, care inhibă proteaza eliberată de celule
în lichidele biologice ale organismului ca urmare
a apoptozei
- Deficitul de alfa1-antitripsină se asociază cu
emfizem pulmonar (distructie parenchim
pulmonar) şi ciroză hepatică (inlocuirea
hepatocitelor cu celule fibroase) , debutate
la vârste tinere
- nivel scăzut de alfa1-globuline sau prezenţa a
2 benzi in regiunea alfa1
Electroforegrama urinara- diagnoticare
proteine Bence- Jones
- Cromatografie de adsorbtie
Interactiuni
- Cromatografie de afinitate electorstatice-Sarcini
- Cromatografie prin schimb ionic electrice
- Cromatografie de permeatie
Filtrare prin pori-
dimensiunea particule
Cromatografia de
permeaţie se poate
folosi pentru estimarea
masei moleculare
Ff
G
Ff Fc
Ff
G Fc
Forţa centrifugă
Eprubeta cu proba in procesul
de sedimenatre
𝑭𝒇 + 𝑭𝑨 = 𝑭𝒄; 𝑭𝒇 = 𝑭𝒄 − 𝑭𝑨
𝑭𝒇 = fv;𝑭𝑨 = 𝝆𝒍 𝑽𝒔 𝒈; 𝑭𝒄 = mω2R=𝝆𝒔 𝑽𝒔 ω2R
𝟏
v= 𝑽𝒔 ω2R 𝝆𝒔 − 𝝆𝒍
Forta centrifuga 𝒇
Fc = m ω2R
ω- viteza unghiulara Forta de frecare
Forta Arhimedica
ω = 2πν, ν-frecventa de rotatie Ff = -6πηrv
FA = m0 g
R- raza traiectoriei circulare v- viteaza de sedimentare
m0: masa volumului de
r- raza particulei
lichid dislocuit
η- indice viscozitate
Forta relativa de Centrifugare
(Factor de eficienta a unei instalatii de centrifugare)
𝑭𝒄 𝒎𝝎𝟐 𝑹 𝒎 𝟒𝝅𝟐 𝝑𝟐 𝑹 𝟒𝝅𝟐 𝝑𝟐 𝑹
• RCF (I) = = = =
𝑮 𝒎𝒈 𝒎𝒈 𝒈
m: masa particulei v = frecventa de rotatie
R: raza traiectoriei circulare de
rotatie
ω :viteza unghiulara
Microcentrifuga:
- Volum 0,5-1,5 cm3
- pentru determinari uzuale
(concentrarea probelor serice- 10.000 g)
Centrifuga de capacitate ridicata:
- Volum pana la 250 cm3
- 3-7.000 g
Centrifuga cu sistem de racire si viteza de
rotatie ridicata:
- Volum pana la 250 cm3
- 100.000 g-centrifugare diferentiata-
separare nuclee, mitocondrii, precipitate
proteice, oarganele celulare mari
Ultracentrifuga:
-Volum pana la 250 cm3
- 600.000 g- separare mitocondrii, ribozomi
- sitem de racire + sistem de vacumpentru
reducerea frecarii
Tehnici de centrifugare
Centrifugarea in gradient de densitate
Doua tipuri:
- In functie de gradientul zonal-
gradient de densitate redus-
separare in funcfie de
dimensiuni
- In functie de punctul
isopycnic- gradient de
Theodor Svedberg (1884-1971), densitate inalt- separare in
Chemist Suedez -1926 Nobel prize functie de diferenta de O substanta cu un
1908– a descris prima data tehnica de densitatea (isopycnic- aceasi coeficient de
densitate) sedimentare de 26
ultracentrifugre si a adus astfel argumnete folosite in
S (26 x 10-3) se va
teoria miscarii Browniene
deplasa cu o viteza
- Coeficientul de sedimentare prin centrifugare se
de 26μm/s sub
exprima in Svedberg ; 1 S = 10-3
actiunea a 10 6 g
Tehnici de centrifugare
Centrifugarea diferentiala- izolarea componentelor subcelulare
1. Viteză mică
(1.000gX 10 min):
Homogenization
celule întregi, Tissue
cells
nuclee, citoschelet 1000 g Homogenate
lizozomi 20,000 g
3. Viteză mare
20 min
macromolecule.
(and chloro-
plasts if cells
are from a Pellet rich in
plant) “microsomes”
(pieces of
plasma mem-
branes and Pellet rich in
cells’ internal ribosomes
membranes)