DIAGNOSTICUL DE LABORATOR

AL INFECTIILOR MICROBIENE
ETAPELE INVESTIGARII DE LABORATOR A UNUI
PACIENT INFECTAT
 PREPARAREA MEDIILOR DE CULTURA

Mediul de cultivare reprezintă un substrat nutritiv, de complexitate diferită, care favorizează

creşterea şi dezvoltarea microorganismelor în condiţii artificiale, de laborator.

Cerinţe minime, obligatorii:

Să asigure cantităţi optime de apă şi substanţe nutritive necesare creşterii şi multiplicării

1.
microorganismelor;

2. Să asigure sursa de carbon şi energie;

3.Să asigure sursa de azot necesară biosintezei acizilor nucleici şi proteinelor;

Să conţină săruri minerale, cu rol în menţinerea echilibrului ionic al celulei (Na +, K+, Ca2+, Mg2+,
4.
Mn, Fe2+, Co2+);

Să asigure factori de creştere necesari pentru dezvoltarea unor microorganisme cu exigenţe

5.
de creştere;

6. Să ofere un pH optim pentru dezvoltarea microorganismelor;

Să ofere condiţii de aerare corespunzătoare tipului de metabolism respirator al

7.
microorganismului care urmează a fi cultivat;

8. Să fie steril şi repartizat în recipiente sterile.

- prepararea mediilor: din ingrediente de baza/pulberi deshidratate

- insotite de certificat de calitate (atesta cresterea si supravietuirea microorganismului

tinta si inhibarea/supresarea cresterii altora)

-aspecte care influenteaza prepararea unui mediu: calitatea materialelor utilizate,

calitatea apei, calitatea placilor Petri, calitatea aditivilor, sterilitatea sangelui

- stocarea mediilor: loc ferit de lumina si caldura

mediile cu sange, alte lichide biologice, antibiotice – la frigider

Controlul calitatii mediilor

- testare pH – sa nu depaseasca 0.2 unitati.
- sterilitate
- testarea performantelor de crestere microbiana
Tulpini de referinta recomandate pentru controlul mediilor (WHO, 2003)

CGP Enterobacterii Bacterii Gram negative

fastidioase
Enterococcus faecalis (ATCC Citrobacter freundii Moraxella catarrhalis
29212)
S. aureus (ATCC 25923) Enterobacter cloacae N. gonorhoeae
S. epidermidis K. pneumoniae N. meningitidis
Str. agalactiae Proteus mirabilis
Str. mitis E. coli (ATCC 25922)
S. typhimurium Sh. flexneri
Str. pneumoniae Yersinia enterocolitica

Str. pyogenes

Fungi Alti BGN Anaerobi

C. albicans Acinetobacter lwoffi Bacteroides fragilis

Ps. aeruginosa (ATCC 27853) Cl. perfringens

* Nota: Tulpina de referinta - orice microorganism caracterizat la nivel de gen si specie clasificat si descris
conform caracteristicilor si originii obtinut dintr-o colectie recunoscuta la nivel national sau international
Teste de performanta realizate pe mediile uzuale (WHO, 2003)

Mediu Tulpina testata Prezenta cresterii/aspectul

coloniilor sau mediului

Agar bila esculina 24h Enterococcus faecalis Da/innegrirea mediului

Streptococ alfa-hemolitic Nu

Geloza sange, 24h, CO2 Streptococcus pyogenes Da/ beta-hemoliza

Streptococcus pneumoniae Da/alfa-hemoliza
Gelatinaza 24h E. coli -
Serratia marcescens +
Uree 24h E. coli -
P. mirabilis + (roz)
 Surse de neconformitate privind calitatea mediilor de cultura
Neconformitate Sursa
Agar nesolidificat corespunzator Depasirea temperaturii de sterilizare, pH scazut care
poate determina hidroliza acida a agarului, eroare de
cantarire a ingredientului, omogenizare insuficienta,
calitate necorespunzatoare a agarului

pH necorespunzator Sticlarie contaminata chimic, apa impura,

supraincalzirea mediului la sterilizare, pH masurat
incorect, deteriorarea mediilor deshidratate

Culoare modificata Sticlarie murdara, apa impura, supraincalzirea

mediului la sterilizare, pH necorespunzator,
deteriorarea mediilor deshidratate

Precipitate Supraincalzirea mediului la sterilizare, apa impura,

sticlarie contaminata, deteriorarea mediilor
deshidratate
Inhibarea dezvoltarii microorganismelor/crestere Supraincalzirea mediului la sterilizare, sticlarie sau
redusa/selectivitate redusa apa contaminata, deteriorarea mediilor deshidratate,
erori de cantarire a ingredientelor si de omogenizare
a acestora
Clasificarea mediilor de cultura
După consistenţă: După provenienţă:
•medii lichide; •medii naturale (lichide: must de malţ, lapte;
•medii solide; solidificate: cartof glicerinat);
•medii semisolide (ex. mediu OMS, •medii artificiale sunt medii cu compoziţie chimică
mediu cu gelatina); semidefinită, care conţin o bază naturală (lichide: bulion,
•medii deshidratate. apă peptonată; solidificate: geloză, gelatină).

După complexitate şi scopul utilizării:

•Medii uzuale simple (ex. bulion simplu, agar nutritiv);
•Medii speciale (sunt medii cu grade diferite de complexitate care permit creşterea preferenţială a
anumitor specii dintr-un amestec heterogen de microorganisme dintr-o probă sau evidenţierea
anumitor caractere particulare de metabolism ale microorganismului cultivat):
•medii selective conţin unul sau mai mulţi agenţi inhibitori reprezentaţi de coloranţi,
antibiotice, săruri biliare care pot limita sau inhiba multiplicarea anumitor specii de
microorganisme dintr-o probă cu încărcătură microbiană mixtă (mediu BSA, mediu
MacConkey);
•medii de îmbogăţire -oferă condiţii preferenţiale de creştere pentru anumite specii bacteriene,
care se vor multiplica mai rapid decât microorganismele asociate (ex. geloză-sânge, geloză
chocolat);
•medii diferenţiale - evidenţiază anumite particularitaţi metabolice, utile în identificarea unei
anumite specii de microorganisme: sistemele multitest;
•medii de transport care asigură supravieţuirea tulpinilor microbiene în proba recoltată până în
momentul însămânţării (ex. mediu Cary-Blair);
•medii de conservare sau de întreţinere care asigură supravieţuirea microorganismelor în
laborator pe o anumită perioada de timp (ex. mediu OMS, mediu YPG).
 Medii de cultivare a bacteriilor
Denumire mediu Caracteristici Recomandare
Mediu Geloza nutritiva Mediu de cultura uzual care contine extract de - mediu de cultură de uz general pentru cultivarea
carne, peptona, NaCl si agar microorganismelor nepretenţioase
Mediu Geloză sange Mediu Geloza nutritiva cu adaos de sange de - mediu de imbogatire, care permite cresterea
berbec defibrinat majoritatii microorganismelor

Geloză Mueller-Hinton II Mediu geloza cu concentraţie foarte scăzută de - mediu folosit pentru
(NCCLS) tiamină şi timidină precum şi cu nivel corespunzător testarea sensibilităţii microorganismelor la
de Ca şi Mg antibiotice

Geloza chocolat geloză de bază suplimentată cu factori de Neisseria, Haemophilus

creştere, după adăugarea sângelui mediul
incalzeste la 80 °C timp de 10 min.
 Medii de cultivare a bacteriilor
Bila Esculina - contine esculina, azida de sodiu (inhibitor pt. specii Gram-
Azida agar negative) si bila de bou (inhibitori de Gram pozitive)
-este imbogatit cu hidrolizat enzimatic de cazeina,
proteoza-peptona si extract de vita
- hidroliza esculinei ajuta la detectarea streptococilor
apartinand grupului D.
-contine extract de drojdie suplimentat cu complex de
Baird Parker vitamine B care stimuleaza cresterea bacteriana, glicina si
Agar piruvat de sodiu pentru a stimula cresterea sp. de
Staphylococcus.
-telurit de potasiu si de clorura de litiu inhiba cresterea
altor specii bacteriene decat Staphylococcus.
Manitol Salt -Contine peptona, agar, continut mare de clorura de sodiu si
Agar (Mediu indicator de pH rosu fenol
Chapman)
-Continutul mare de sare inhiba dezvoltarea
microorganismelor, cu exceptia celor halofile
Izolarea speciilor de Enterococcus faecium si
E. faecalis capabile sa hidrolizeze esculina, cu
acumularea in mediu a unui precipitat negru
rezultat din combinarea esculetolului cu
citratul feric
Hidrolizeaza esculina in prezenta bilei
Izolarea stafilococilor coagulazo-pozitivi care
se vor dezvolta sub forma unor colonii de
culoare neagra prin reducerea teluritului de
potasiu. Sp. de Staphylococcus care prezinta
lecitinaza degradeaza mediu si se formeaza un
halou in jurul coloniilor. O zona opaca de
precipitat poate aparea datorita prezentei
lipazei
S. aureus coagulazo-pozitivi produc colonii
inconjurate de o zona galbena stralucitoare,
SCN produce colonie roz, fara zona de halou.
 Medii de cultivare a bacteriilor
Denumire Caracteristici Recomandare
mediu
Mac Contine saruri biliare ca inhibitori de Mediu de diferentiere a speciilor de
Conkey crestere pentru specii bacteriene de enterobacterii lactozo fermentative
Agar coci Gram pozitivi si cristal violet ca (virajul culorii mediului la rosu) de
indicator de pH cele non-fermentative (virajul culorii
mediului la galben)
 Medii de cultivare a bacteriilor
Denumire Caracteristici Recomandare
mediu

Salmonella contine lactoza, saruri biliare, citrat feric si
Shigella indicator de pH- rosu neutru. Sarurile
agar selecteaza bacteriile Gram –negative.
Celelalte componente diferentiaza intre
speciile Gram-negative.
E. coli fermenteaza lactoza din mediu,
rezultand colonii roz.  (Nu produce
hidrogen sulfurat).
Membrii genului Salmonella nu
fermenteaza lactoza, dar produc
hidrogen sulfurat, rezultand colonii
clare, cu centru negru.
Membrii genului Shigella, nu
fermenteaza lactoza, nu produc hidrogen
sulfurat, deci vor determina aparitia unor
colonii incolore.
 Medii de cultivare a bacteriilor
Denumire Caracteristici Recomandare
mediu
Mediu mediu fara inhibitori, lactozat si cu indicator de pH- -pentru diferenţierea coloniilor
A.A.B.T.L albastru de brom timol. lactozo-pozitive de cele
(Bromothy lactozo-negative
mol-blue
Lactose -folosit mai ales pentru
Agar) Enterobacteriaceae (lactoza
degradată în acid determină
indicatorul de pH, albastru de
bromothymol, să-şi schimbe
culoarea în galben.
Alcalinizarea produce o
colorare albastră).

Mediu utilizat pentru evidentierea

cromogen simultana a tuturor
diferential microorganismelor ce cauzeaza
infectii de tract urinar.
 Medii de cultivare a bacteriilor
Mediul Löwenstein-Jensen (ou, cartof, verde malachit, asparagină, glicerină)

mediu pt. cultivarea

micobacteriilor
 Medii de cultivare a bacteriilor
Mediile multitest
Permit evidentirea simultana a mai multor caractere biochimice

TSI – Triple Sugar Iron + indicator de pH

Fermentarea Detectarea
zaharurilor tiosulfat-
Rosu fenol
Glucoza reductazei

Lactoza Fe SO4

Zaharoza

Alte aspecte
 Medii de cultivare a bacteriilor
Mediile multitest
MIU – Mobilitate Indol Ureaza

Opacizarea uniforma a Metabolizarea triptofanului Metabolizarea ureei

mediului cu producere de indol volatil inrosirea mediului
Inrosirea benzii de hartie de
filtru
 Medii de cultivare a bacteriilor
Mediile multitest
MILF – Mobilitate Indol Lizin-decarboxilaza Fenil-alanin-dezaminaza

Opacizarea uniforma a Adaugarea 1-2 pic FeCl3

mediului
Aparitia unui inel verde
Fermentarea glucozei – acumulare de acizi
Metabolizarea
triptofanului cu
producere de indol Virajul culorii la galben (R -)
volatil LDC determina acumularea de cadaverina
Inrosirea benzii de
hartie de filtru
Virajul culorii la violet (R+)
 Medii de cultivare a bacteriilor

Mediu Agar Simmons Citrate:

unica sursa de C (citrat de Na) +
indicator de pH (albastru de brom
fenol)

Citrat - Citrat +
 Medii de cultivare a fungilor

Mediu Sabouraud - mediu selectiv utilizat pentru cultivarea drojdiilor, mucegaiurilor si a

unor microorganisme acidurice