CROMATOGRAFIA

Tehnică de separare a compuşilor chimici

IUPAC - o metodă utilizată în principal pentru separarea componentelor unei probe,
probă în care componentele sunt distribuite între două faze
din care una este staţionară iar cealaltă este mobilă

• Analiza
separare
• Identificare
• Purificare

amestec Componente
• Cuantificare

clorofila
 Aplicaţiile cromatografiei
• Analiză – examinarea amestecului, a componentelor sale şi a
relaţiilor dintre acestea
• Identificare – determinarea unui amestec sau componente pe baza
unor componente deja cunoscute
• Purificare – separarea componentelor pentru a izola unul dintre ele
ce prezintă interes pentru studii ulterioare
• Cuantificare – determinarea cantităţii amestecului şi/sau a
componentelor prezente în probă
 Explicaţii
• Amestecul este plasat în faza fixă
• Faza mobilă
• trece prin faza fixă
• solubilizează componentele
• deplasează individual componentele
amestecului pe o anumită distanţă în faza fixa,
în funcţie de atracţia lor specifică faţă de cele
două faze
 Exemple
• Companii farmaceutice – determinarea cantităţii fiecărui component
chimic din noile produse
• Spitale – depistarea drogurilor sau a nivelului de alcool din sângele
pacienților
• Medicină legală – compararea unei probe găsite la locul crimei cu
proba prelevată de la suspect
• Protecţia mediului – determinarea nivelului de poluare din sursele
de apă
• Aplicaţii industriale – pentru a purifica un precursor
Ilustrare Faza fixa

Separare

Faza mobila
Amestec Componente separate
Componente Afinitate pentru faza staţionară Afinitate pentru faza mobilă

Albastru ---------------- Insolubil in faza mobila

Negru  

Rosu  

Galben          
Cromatografia

ECHIPAMENTE
- rezervor solvent
- pompa
- sistem injectare probă
- coloană în mediu izoterm (cuptor)
- detector
- sistem de înregistrare
Cromatografia

ECHIPAMENTE

Coloana
- zona de separare a componentelor probei
- tub metalic/sticlă rezistent la presiune
- conţine faza staţionară
- prin ea circulă faza mobilă din care
componentele probei sunt adsorbite/absorbite
în faza solidă
- cu umplutură
- conţine faza staţionară granulară, ca o
umplutură omogenă
- capilare
- faza staţionară = film depus pe pereţii
coloanei
- centrul coloanei - gol
Cromatografia

CLASIFICARE

funcţie de componentele probei din faza mobilă:

- cromatografie în fază gazoasă

- faza mobilă = gaz inert
- faza staţionară
- adsorbent solid
- adsorbent lichid – pe suport inert

- cromatografie în fază lichidă

- faza mobilă = lichid de viscozitate redusă
- faza staţionară – suport staţionar
- lichid nemiscibil pe suport poros
- solid cu dimensiune controlată a porilor
Cromatografia

CLASIFICARE
- cromatografie în fază lichidă
- faza mobilă = lichid de viscozitate redusă
- faza staţionară – suport staţionar
- lichid nemiscibil pe suport poros
- solid cu dimensine controlată a porilor
- tehnici pe suport PLAN
- tehnici pe COLOANĂ – mai performante

tehnici pe suport PLAN

1.TLC – thin layer chromatography

- Proba aplicată punctiform
-Faza staţionară – strat subţire de particule fixare
pe o lamă de sticlă
-Faza mobilă – solvent care difuzează în stratul
particular uscat al fazei solide
Cromatografia

CLASIFICARE
- cromatografie în fază lichidă
- faza mobilă = lichid de viscozitate redusă
- faza staţionară – suport staţionar
- lichid nemiscibil pe suport poros
- solid cu dimensiune controlată a porilor
- tehnici pe suport PLAN
- tehnici pe COLOANĂ – mai performante

tehnici pe suport PLAN

2. Cromatografia pe hârtie
- Proba aplicată punctiform
-Faza staţionară – bandă sau rondelă hârtie filtru
-Faza mobilă – solvent aplicat central pe rondelă
sau periferic pe bandeletă (similar TLC)
Cromatografia

CLASIFICARE
- cromatografie în fază lichidă
- faza mobilă = lichid de viscozitate redusă
- faza staţionară – suport staţionar
- lichid nemiscibil pe suport poros
- solid cu dimensine controlată a porilor
- tehnici pe suport PLAN
- tehnici pe COLOANĂ – mai performante

tehnici pe COLOANĂ
- Proba aplicată pe o coloană umplută cu faza
staţionară
-Faza staţionară – material particulat
-Faza mobilă – solvent particularizat pentru
diferite tipuri de extracţie
- Fluxul se realizează
- Gravitaţional
- Presiune controlată
- Presiune înaltă – HPLC -
Ppt – part per trilion 1/1018
Cromatografia
- de adsorbţie
CLASIFICARE ÎN FUNCŢIE DE MECANISMUL DE RETENŢIE - de partiţie
- pe schimbători de ioni
- de filtrare
- de afinitate

- faza fixă – solidă

- faza mobilă – lichidă sau gazoasă
- separarea depinde de adsorbţia diferenţială a
componentelor cu grupări polare pe faza fixă polară
sau a componentelor cu grupări nepolare pe faza
fixă nepolară.

- de adsorbţie
Cromatografia
- de adsorbţie
CLASIFICARE ÎN FUNCŢIE DE MECANISMUL DE RETENŢIE - de partiţie
- pe schimbători de ioni
- de filtrare
- de afinitate

- faza fixă – matrice fluidă fixată pe solid

- faza mobilă – lichidă sau gazoasă
- separarea depinde de diferenţele dintre coeficienţii de
partiţie între faza mobilă şi faza fixă (matricea fluidă)

- de partiţie
Cromatografia
- de adsorbţie
CLASIFICARE ÎN FUNCŢIE DE MECANISMUL DE RETENŢIE - de partiţie
- pe schimbători de ioni
- de filtrare
- de afinitate

- faza fixă – solidă = răşină schimbătoare de ioni

- faza mobilă – lichidă
- separarea – anionii sunt reţinuţi în faza solidă, cationii
rămân liberi

- de schimb ionic
Cromatografia
- de adsorbţie
CLASIFICARE ÎN FUNCŢIE DE MECANISMUL DE RETENŢIE - de partiţie
- pe schimbători de ioni
- de filtrare
- de afinitate

- faza fixă – solidă = gel

- faza mobilă – lichidă
- separarea – moleculele mici sunt întârziate, cele mari
trec prin coloană cu viteză mai mare

- de filtrare
Cromatografia
- de adsorbţie
CLASIFICARE ÎN FUNCŢIE DE MECANISMUL DE RETENŢIE - de partiţie
- pe schimbători de ioni
- de filtrare
- de afinitate

- faza fixă – solidă cu molecule imobilizate

- faza mobilă – lichidă
- separarea – moleculele complementare specific pentru
cele din faza fixă vor fi reţinute

- de afinitate
 Principiile cromatografiei pe hârtie
• Fenomenul de capilaritate – miscarea lichidului printre spatiile unui
material poros datorita fortelor de adeziune,coeziune si tensiunii superficiale.
Lichidul poate ascensiona pe foaia de filtru deoarece atractia fata de sine
este mai mare decat forta gravitationala.

• Solubilitatea – gradul cu care un material (solvit) se dizolva intr-un

solvent. Solvitii se dizolva in solventi cu proprietati similare. Acest lucru
permite solvitilor sa fie separati prin diferite combinatii de solventi.

Separarea componentelor depinde atat de solubilitatea lor in faza mobila cat

si de afinitatea specifica fata de faza mobila si cea fixa.
Experimentul cromatografiei pe hârtie
Ce culoare are markerul?
 Rezumatul experimentului
Scop:
Pentru a initia studentii in principiile si terminologia cromatografiei si pentru a
demonstra separarea colorantilor din markere cu metoda cromatografiei pe
hartie.

Timpul necesar:
Timpul de pregatire: 10 minute
Durata experimentului: 45 minute

Costuri:
< 30RON
 Materiale necesare
• 6 pahare Berzelius
• 6 capace
• Apa distilata
• Izopropanol
• Cilindre gradate
• 6 filtre de hatie
• Marker de diferite culori
• Creion
• Rigla
• Foarfece
• Banda adeziva
 Prepararea solutiei de izopropanol
• Se prepara 15ml din fiecare concentratie de izopropanol din fiecare pahar etichetat

- 0%, 5%, 10%, 20%, 50%, si 100%

 Prepararea benzilor de cromatografie
• Se taie 6 benzi de hartie de filtru.
• Se traseaza o linie cu creionul la 1cm deasupra
marginei inferioare.
• Se eticheteaza fiecare banda conform solutiei
corespunzatoare.
• Se deseneaza un punc cu fiecare marker pe linia
trasata anterior.
 Developarea cromatogramelor
• Plasarea benzilor in paharele Berzelius
• Se asigura ca solutia nu depaseste linia de start
• Paharele Berzelius se tin acoperite
• Se lasa benzile in pahare pana cand faza mobila
migreaza pana la 2 cm de marginea superioara a
fazei stationare.
• Se scot benzile si se lasa la uscat.
Developarea cromatogramelor
Developarea cromatogramelor
Interpretarea cromatogramelor

0% 20% 50% 70% 100%

Concentratiile de izopropanol
 Colorantul negru
1. Colorantul separat – mov si negru
2. Insolubil in concentratii mici de izopropanol
3. Partial solubil in concentratii de izopropanol
>20%

0% 20% 50% 70% 100%

Concentratii de izopropanol
 Colorantul albastru
1. Colorantul separat – albastru
2. Putin solubil in contratii scazute de
izopropanol
3. Solubilitate maxima in contratii mari
de izopropanol

0% 20% 50% 70% 100%

Concentratiile de izopropanol
 Colorantul verde
1. Colorantul separat– albastru si galben
2. Albastru – solubil in concentratii de
izopropanol >20%
3. Galben –solubil in concentratii de
izopropanol >0%

0% 20% 50% 70% 100%

Concentratiile de izopropanol
 Colorantul rosu
1. Colorantul separat – rosu si galben
2. Galben –solubil in concentratii scazute de izopropanol si cu o
solubilitate mai scazuta in concentratii mari de izopropanol

3. Rosu – putin solubil in

concentratii mici de
izopropanol, si solubil in
concentratii de
izopropanol >20%

0% 20% 50% 70% 100%

Concentratiile de izopropanol